CN1870984A - 1－氨基环己烷衍生物用于调节淀粉样病变中原纤维生成Aβ肽的沉积的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及NMDA受体拮抗剂例如1－氨基环己烷衍生物用于调节淀粉样病变中具有潜在毒性和原纤维生成Aβ肽的沉积的用途。具体地说，本发明涉及美金刚干扰APP加工和降低原纤维生成Aβ肽水平的能力。

Description

1-氨基环己烷衍生物用于调节 淀粉样病变中原纤维生成Aβ肽的沉积的用途
                       发明领域
本发明涉及N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体拮抗剂例如1-氨基环己烷衍生物用于调节淀粉样病变中原纤维生成Aβ肽的沉积的用途。
                        发明背景
阿尔茨海默氏病(AD)是日益盛行的神经变性形式，其占到65岁以上人群中痴呆总病例的大约50％-60％。AD的临床特征在于进行性地丧失记忆力、认知力、推理力、判断力和情绪稳定能力，从而逐步导致深度的精神衰退乃至最终死亡。AD是一种渐进式障碍，在出现临床症状至死亡之间平均期限大约8.5年。据信在美国，AD代表了第四种最常见的医疗死亡原因，影响着大约4百万人。在65岁以上的人群中，AD的患病率随着年龄每增加5岁而加倍(National Institute onAging：Prevalence and costs of Alzheimer′s disease.ProgressReport on Alzheimer′s Disease.NIH Publication No.99 3616，1998年11月；Polvikoski等人，Neurology，2001，56：1690-1696)。AD目前在世界范围内影响着大约1500万人(包括所有种族和人种)，同时由于老年人群占总人口的比例相对增加，故其患病率在接下来的二三十年内可能会增加。目前AD是不能治愈的。目前没有任何已知的有效预防AD或逆转其症状和病程的治疗措施。
人类中AD的临床信号是因为大脑区域中与高级精神功能例如记忆力、认知性能和个性相关的神经元发生选择性变性而引起的(Francis等人，1999，J.Neurol.Neurosurg.Psychiatry，66：137-147)。这些神经元出现功能障碍和死亡将导致其目标区域中的突触标记数目减少；突触通讯的中断通过精神损害加以证实，最终导致严重的痴呆。
患有AD的个体在大脑中出现有被称作老年斑(或淀粉样蛋白斑)、淀粉样血管病变(血管中的淀粉样沉积)以及神经原纤维缠结的特征性损伤。在未患有临床性AD的大部分老年人的大脑中也发现少数具有更受限的解剖学分布的上述损伤。淀粉样蛋白斑和淀粉样血管病变其特征也在于个体大脑出现三体性21(唐氏综合征)和荷兰型遗传性脑出血伴淀粉样变(HCHWA-D)。
AD的病理标志为在大脑中发现两类蛋白质聚集体：细胞内神经原纤维缠结和细胞外淀粉样蛋白斑(参见最新综述Wong等人，NatureNeurosci.，2002，5：633-639)。缠结和蛋白斑均优先集中在皮层、海马和扁桃腺。神经原纤维缠结被内含在细胞体内部和邻近的树突以及远端的轴突和突触末端的丝状膨胀物中。聚集在溶解性较差的成对螺旋状细丝中的微管相关蛋白tau的高磷酸化同种型是这些神经原纤维缠结的中心特征(Goedert等人，Curr.Opin.Neurobiol.，1998，8：619-632)。
由具有大约39-43个氨基酸的大约4.2千道尔顿(kD)蛋白质的水平升高而引起的细胞外蛋白斑命名为β-淀粉样肽(Aβ)，或者有时是指βAP、AβP或β/A4(参见例如Glenner and Wong，Biochem.Biophys.Res.Commun.，120：885-890，1984；，美国专利号4,666,829)。分子生物学和蛋白质化学分析显示，Aβ是数量更多的被称作β-淀粉样前体蛋白(APP)的前体蛋白的小片段(参见例如Lahiri等人，Drug Dev.Res.，56：267-281，2002；Selkoe，Physiol.Rev.，81：741-766，2001)。APP是通常表达于很多不同细胞类型中的I型跨膜蛋白质，但是在神经元中特别丰富。Aβ单体形成低聚体和多聚体，它们聚集形成原细丝，再聚集成为原纤维。最后，Aβ原纤维作为神经炎性或老年斑(淀粉样变)的淀粉样核心被沉积下来，其为还含有营养不良的轴突、星形胶质细胞和小胶质细胞的复合结构。通过三种被称作α-、β-和γ-分泌酶的不同蛋白酶将APP裂解而生成淀粉样肽。β-分泌酶在Aβ的氨基侧裂解APP，生成大量的分泌衍生物sAPPβ和携带有Aβ的膜联合C-末端衍生物CTFβ，其随后通过第二活性γ-分泌酶裂解释放出Aβ。或者，第三活性α-分泌酶在Aβ内部裂解APP得到分泌衍生物sAPPα和膜相关CTFα。在大多数细胞类型中，主要的分泌APP衍生物是sAPPα。大部分分泌的Aβ的长度为40个残基(Aβ40)，尽管存在小百分比的42个残基的长度(Aβ42)。然而，更长的Aβ42聚集更容易，因此被认为是病理学上的重要形式(参见最新综述Sambamurti等人，Neuromolecular Med.，1：1-31，2002)。前面所概述的APP-加工事件是完全正常的，并且会不同程度地发生在遍布体内的所有神经和非神经细胞中。某些引起常染色体显性AD的遗传缺陷例如APP中的突变或早老素(PS)基因PS1和PS2，以某种方式扩大了在所有细胞中APP加工的淀粉样生成途径，相对于稍短且疏水性稍差的Aβ40形式而言，这种方式有利于高度自身聚集Aβ42变体的生成。Aβ42通常仅仅含有大约5-10％的总分泌Aβ肽，但是当APP或PS发生突变时，这部分将升高至大约15-40％(Selkoe，J.Clin.Invest.，110：1375-81，2002)。
如果Aβ肽特别是Aβ42过度生成或者未被充分清除，它们很容易聚集成稳定的低聚体和更大的聚合体，明显地在成熟的淀粉样原纤维中达到极点。Aβ的低聚中间体而不是成熟的淀粉样原纤维可以反过来成为主要形式，从而使这些肽发挥其不良效应。Aβ低聚体可能对周围的神经元、小胶质细胞和星形胶质细胞产生复杂的作用，其积累的效应将细微地改变突触功能，从而改变信息贮存和恢复。如最近有关同时携带有人类Aβ和人类tau的小鼠研究所指出的那样，形成AD大脑中的“思想”部分的含有tau的营养不良的轴突和神经原纤维缠结可能是Aβ积累的结果(Selkoe，2002，同上，在本文中引入作为参考)。
目前AD的治疗策略之一是降低毒性Aβ的水平。其中包括通过升高α-分泌酶或降低β-或γ-分泌酶活性或生成量(例如使用小分子抑制剂)，从而降低或防止Aβ肽的释出。其它的策略包括减少Aβ肽的聚集、提高Aβ肽的清除率、减少Aβ肽的生成或者降低Aβ肽聚集和沉积的细胞效应(参见例如Sabbagh等人，Alzheimer′s Disease Rev.，3：1-19，1997；美国专利号6,080,778)。这些措施包括由老鼠研究得出的主动或被动的“Aβ接种”，其中发现，反复地非肠道施用合成Aβ肽可以诱导降低脑Aβ水平的抗体响应(Schenk等人，Nature，400：173-177，1999)。另外，该发明人和合作者还发现，胆碱能分解代谢酶乙酰胆碱酯酶抑制剂(AChEI)他克林(tacrine)能够诱导在人成神经瘤细胞中释出APP的分泌形式sAPPα以及总Aβ、Aβ40和Aβ42，同时不会出现任何可检测得到的细胞损伤或毒性(Lahiri等人，Mol.BrainRes.1998，62：131-140)。
最新结果可与以下事实相关联，AD与迈内特氏基底核中的胆碱能神经元出现明显损失有关(Perry等人，Br.Med.J.，1978，2：1456-1459；Geula和Mesulam，Cholinergic systems and relatedneuropathological predilection patterns in Alzheimer disease；In：Alzheimer′s Disease；Terry等人编辑，Raven Press，New York，1994，第263-291页)。
据信，在构成AD患者大脑中的胆碱能细胞的变性基础的过程中，已经牵涉到谷氨酸受体特别是那些受N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)选择性活化的谷氨酸受体的过度或者病态性活化(Greenamyre等人，Neurobiol.Aging，1989，10：593-602；Francis等人，J.Neurochem.，1993，60：263-291；Li等人，J.Neuropathol.Exp.Neurol.，1997，56：901-911；Wu和Rowan，Neuroreport，1995，6：2409-2413)。另外还有证据表明，Aβ能够增强谷氨酸盐的毒性反应，同时还增加由NMDA受体介导的神经毒性。实际上，NMDA受体已经被牵涉到既可能影响APP加工也可以受APP加工影响的信号级联中。因此，在培养的海马神经元中，已经显示sAPPα可以选择性抑制NMDA-介导的电流(Furukawa和Mattson，Neuroscience，1998，83：429-438)。
基于他们早期的资料显示的AchEIs具有减少人成神经细胞瘤细胞中Aβ释出的能力，本发明人已经假设NMDA受体拮抗剂还可用于降低毒性Aβ的水平，因而可用于治疗和/或预防AD以及其它的淀粉样病变。
通过作用于NMDA受体复合物中的不同识别位点，可以实现对NMDA受体的功能性抑制，这些位点例如：主递质位点(竞争性)、位于阳离子通道内的苯环利定位点(非竞争性)、多胺调节位点以及对士的宁非敏感的共同对抗性甘氨酸位点(甘氨酸B)(Parsons等人，1999，同上)。由于NMDA受体在各种形式例如涉及学习和记忆的突触可塑性中具有重要的生理作用(参见例如Collingridge和Singer，TrendsPharmacol.Sci.，1990，11：290-296)，因此对NMDA受体具有高度亲和力的神经保护剂可能会损害正常的突触传递，从而引起诸多副作用。实际上经鉴定，迄今为止很多NMDA受体拮抗剂在其公认治疗剂量范围内都会产生相当不期望的副作用。因此临床试验显示，对于这类NMDA受体拮抗剂而言，由于具有诸多副作用，导致它们的整体治疗利用性(不论效能)大打折扣，所述NMDA受体拮抗剂例如地佐环平((+)MK-801；(+)-5-甲基-10，11-二氢-5H-二苯并环庚烯-5，10-亚胺马来酸盐)、Cerestat(CNS-1102)、利可替奈(ACEA 1021)、塞福太(CGS-19755)和D-CPP-ene(Leppik，Epilepsia，1998，39(增卷5)：2-6；Sveinbjornsdottir等人，Epilepsia，1993，34：493-521；SCRIP 2229/30，1997，第21页)。因此，本领域的挑战在于开发出既可以防止NMDA受体被病理性活化、但同时又可以接受其生理活性的NMDA受体拮抗剂。
美金刚(memantine)(1-氨基-3，5-二甲基金刚烷)是1-氨基-环己烷的类似物(公开于例如美国专利号4,122,193；4,273,774；5,061,703中)。尼拉密山(neramexane)(1-氨基-1，3，3，5，5-五甲基环己烷)也是1-氨基环己烷的衍生物(公开于例如美国专利号6,034,134中)。美金刚、相关的金刚烷衍生物、尼拉密山以及某些其它的1-氨基烷基-环己烷是对NMDA受体具有低至中等亲和性的系统活性非竞争性NMDA受体拮抗剂。它们具有强烈的电压依赖受体阻断特性和快速的受体阻断/去阻断动力学(Parsons等人，1999，同上；Gortelmeyer等人，Arzneim-Forsch/Drug Res.，1992，42：904-913；Winblad等人，Int.J.Geriat.Psychiatry，1999，14：135-146；Rogawski，Amino Acids，2000，19：133-49；Danysz等人，Curr.Pharm.Des.，2002，8：835-43；Jirgensons等人，Eur.J.Med.Chem.，2000，35：555-565)。这些化合物从NMDA受体通道解离的速度比高亲和性NMDA受体拮抗剂例如(+)MK-801快得多，同时削弱通过声音过度刺激NMDA受体而产生的神经元可塑性的破裂。由于这些化合物对受体具有相对较低的亲和性和强烈的电压依赖快速受体去阻断动力学，因此它们在治疗剂量范围内基本上不具有其它NMDA受体拮抗剂的副作用(Kornhuber等人，Eur.J.Pharmacol.，1991，206：297-311)。实际上，美金刚在临床上已被应用超过15年，其显示出良好的耐受性，治疗患者人数超过200,000(Parsons等人，1999，同上)。
已提议，美金刚、尼拉密山以及其它1-氨基烷基环己烷可用于缓解各种渐进式神经变性障碍，例如AD中的痴呆、帕金森氏病和痉挛状态(参见例如美国专利号5,061,703；5,614,560，和6,034,134；Parsons等人，1999，同上；Mbius，ADAD，1999，13：S172-178；Danysz等人，Neurotox.Res.，2000，2：85-97；Winblad和Poritis，Int.J.Geriatr.Psychiatry，1999，14：135-146；Grtelmeyer等人，1992，同上；Danysz等人，Curr.Pharm.Des.，2002，8：835-843；Jirgensons等人，Eur.J.Med.Chem.，2000，35：555-565)。据认为这些疾病的发病与谷氨酸能递质失调有关(在某些情形中是密切相关)，也就是通过NMDA受体通道过量地流入钙导致特定大脑区域中的大脑细胞被破坏(Choi，J.Neurobiol.，23：1261-1276，1992；Rothman和Olney，Trends Neurosci.，10：299，1987；Kemp等人，Trends Pharmacol.Sci.，8：414，1987)。已显示，使用美金刚长期治疗老年大鼠可以促进海马长期增强效应的形成，增强神经突触可塑性的耐久性、改善空间记忆能力以及逆转由NMDA受体激动剂产生的记忆力减弱(Barnes等人，Eur.J.Neurosci.，1996；8：65-571；Zajaczkowski等人，Neuropharm.，1997，36：961-971)。
尽管对于NMDA受体拮抗剂的临床效果已经有了大量资料，但是尚未提出过NMDA受体拮抗剂直接影响原纤维生成Aβ肽的沉积的能力。另外，本领域也存在更有效地治疗患有淀粉样病变的哺乳动物的需求。本发明人第一次通过构思和论证NMDA受体拮抗剂例如1-氨基环己烷衍生物(如美金刚或尼拉密山)能够降低分泌的sAPP和Aβ40(以及可能的Aβ42)水平、并因而可以调节原纤维生成Aβ肽的沉积从而满足了上述需要。这些结果表明，除了在患者体内提供缓解症状的效果之外，NMDA受体拮抗剂例如1-氨基环己烷衍生物的NMDA受体拮抗剂还可以直接调节淀粉样沉积物的基础病理过程。
                       附图简述
图1示出了不同剂量的美金刚(0μg/ml、0.25μg/ml、0.5μg/ml和1μg/ml)在第3天对人类成神经瘤细胞SK-N-SH的条件培养基(conditioned media)中的sAPP水平的影响(通过蛋白质印迹分析法测量，使用对抗总APP(mAb22C11)或sAPPα(mAb6E10)的特异性mAb)。
图2示出了不同剂量的美金刚(0μg/ml、0.25μg/ml、0.5μg/ml和1μg/ml)在第6天对人类成神经瘤细胞SK-N-SH的条件培养基中的sAPP水平的影响(通过蛋白质印迹分析法测量，使用对抗总APP(mAb22C11)或sAPPα(mAb6E10)的特异性mAb)。
图3示出了不同剂量的美金刚(0μg/ml、0.25μg/ml、0.5μg/ml和1μg/ml)在不同时期(第3、6、12天)对人类成神经瘤细胞SK-N-SH的条件培养基中的sAPP水平的影响(通过蛋白质印迹分析法测量，使用对抗总APP(mAb22C11)或sAPPα(mAb6E10)的特异性mAb)。
图4示出了不同剂量的美金刚(0μg/ml、0.25μg/ml、0.5μg/ml和1μg/ml)在第3天对人类成神经瘤细胞SK-N-SH的条件培养基中的Aβ40水平的影响(通过ELISA测量，使用抗人类Aβ(35-40)兔IgG作为俘获Ab以及HRP缀合的抗人类Aβ(11-28)兔IgG Fab作为检测Ab)。
图5示出了不同剂量的美金刚(0μg/ml、0.25μg/ml、0.5μg/ml和1μg/ml)在第6天对人类成神经瘤细胞SK-N-SH的条件培养基中的Aβ40水平的影响(通过ELISA测量，使用抗人类Aβ(35-40)兔IgG作为俘获Ab以及HRP缀合的抗人类Aβ(11-28)兔IgG Fab作为检测Ab)。
图6示出了不同剂量的美金刚(0μg/ml、0.25μg/ml、0.5μg/ml和1μg/ml)在第9天对人类成神经瘤细胞SK-N-SH的条件培养基中的Aβ40水平的影响(通过ELISA测量，使用抗人类Aβ(35-40)兔IgG作为俘获Ab以及HRP缀合的抗人类Aβ(11-28)兔IgG Fab作为检测Ab)。
图7示出了不同剂量的美金刚(0μg/ml、0.25μg/ml、0.5μg/ml和1μg/ml)对人类成神经瘤细胞SK-N-SH的细胞存活力的影响，通过MTT(四唑盐染料3-[4，5-二甲基噻唑-2-基]-2，5-而苯基四唑盐溴化物)分析法测量。
图8示出了不同剂量的美金刚(0μg/ml、0.25μg/ml、0.5μg/ml和1μg/ml)对人类成神经瘤细胞SK-N-SH的细胞毒性的影响，通过LDH(乳酸脱氢酶)分析法测定。
图9示出了记录密闭透明笼中的探测性活动10分钟时间的测量结果。(A)水平活动(距离移动)，(B)垂直活动(直立次数)。实心和空心柱分别表示第1天和第3天的平均±SEM。***APP/PS1小鼠在总的ANOVA方面明显不同于NT同胞仔(p＜0.001)。
图10示出了由隔离诱导的聚集测试。柱表示居住小鼠攻击入侵小鼠的平均±SEM潜伏期(实心柱代表NT小鼠，并且空心柱代表APP/PS1小鼠)。*APP/PS1小鼠在总的ANOVA方面明显不同于NT同胞仔(p＜0.05)。
图11示出了用美金刚和安慰剂治疗的NT和APP/PS1小鼠的莫里斯水迷宫测试。针对不同的测试日给出平均逃离潜伏期(A、B、C)和群(D、E、F)在外围地带中的平均％时间。第1-5天：隐藏平台测试；第7-8天：可见平台测试。星号表示指定两组在全部测试日过程中的差异(5只用于隐藏平台，2只用于可见平台)：*p＜0.05、**p＜0.01、***p＜0.001(重复测量的ANOVA)。
                       发明概述
本发明提供了一种降低至少一种由表达淀粉样前体蛋白的哺乳动物细胞产生的淀粉样肽例如sAPPα、Aβ40或Aβ42的水平的新方法，所述方法包括向所述细胞递送1-氨基环己烷衍生物。优选所述1-氨基环己烷衍生物如通式(I)所示：
Figure A20048003110800331
其中：
-R*是-(A)n-(CR1R2)m-NR3R4，
n+m＝0、1或2，
A选自直链或支链低级烷基(C1-C6)、直链或支链低级链烯基(C2-C6)和直链或支链低级炔基(C2-C6)，
R1和R2独自地选自氢、直链或支链低级烷基(C1-C6)、直链或支链低级链烯基(C2-C6)、直链或支链低级炔基(C2-C6)、芳基、被取代的芳基和芳烷基，
R3和R4独立地选自氢、直链或支链低级烷基(C1-C6)、直链或支链低级链烯基(C2-C6)和直链或支链低级炔基(C2-C6)，或者一起形成亚烷基(C2-C10)或亚链烯基(C2-C10)或者与N一起形成3-7元氮杂环烷或氮杂环烯，包括被取代的(烷基(C1-C6)、链烯基(C2-C6))3-7-元氮杂环烷或氮杂环烯；或者R3或R4可以独立地与Rp、Rq、Rr或Rs联合形成亚烷基链-CH(R6)-(CH2)t-，其中t＝0或1，同时该亚烷基链的左侧与U或Y相连，该亚烷基链的右侧与N相连，并且R6选自氢、直链或支链低级烷基(C1-C6)、直链或支链低级链烯基(C2-C6)、直链或支链低级炔基(C2-C6)、芳基、被取代的芳基和芳烷基；或者R3或R4可以独立地与R5相连形成式-CH2-CH2-CH2-(CH2)t-所示的亚烷基链、或式-CH＝CH-CH2-(CH2)t-、-CH＝C＝CH-(CH2)t-或-CH2-CH＝CH-(CH2)t-所示的亚链烯基链，其中t＝0或1，同时该亚烷基或亚链烯基链的左侧与W相连，该亚烷基环的右侧与N相连；
-R5独立地选自氢、直链或支链低级烷基(C1-C6)、直链或支链低级链烯基(C2-C6)和直链或支链低级炔基(C2-C6)，或者R5和与其相连的碳以及下一个相邻的环碳联合形成双键，
-Rp、Rq、Rr和Rs独立地选自氢、直链或支链低级烷基(C1-C6)、直链或支链低级链烯基(C2-C6)、直链或支链低级炔基(C2-C6)、环烷基(C3-C6)和芳基、被取代的芳基和芳烷基，或者Rp、Rq、Rr和Rs可以独立地和与其相连的U或Y形成双键，或者Rp、Rq、Rr和Rs可以一起联合表示低级亚烷基-(CH2)x-或低级亚链烯基桥，其中x是2-5，包括端点值，所述亚烷基桥反过来还可以与R5联合形成另外的低级亚烷基-(CH2)y-或低级亚链烯基桥，其中y是1-3，包括端点值，
-符号U、V、W、X、Y、Z表示碳原子，
并且包括落入式(I)的化合物的光学异构体，非对映异构体，多晶型物，对映异构体，水合物，可药用盐以及混合物。
用于本发明中的最优选NMDA受体拮抗剂是美金刚(memantine)和尼拉密山。另外还优选所述细胞来源于神经元。
根据第一方法，本发明提供了一种调节哺乳动物中原纤维生成β-淀粉样(Aβ)肽的潜在沉积的新方法，该方法包括向所述哺乳动物施用有效用于此目的的量的1-氨基环己烷衍生物。优选以0.1-150μM、更优选1-25μM、最优选1-4μM的量施用所述1-氨基环己烷衍生物。在一具体实施方案中，所述哺乳动物是鼠或人类。
本发明进一步提供了一种可潜在治疗、预防、阻止、延迟哺乳动物除与阿尔茨海默氏病(AD)有关的淀粉样病变之外的淀粉样病变发作和/或降低向其发展风险的方法，该方法包括向所述哺乳动物施用有效用于此目的的量的1-氨基环己烷衍生物。在一具体实施方案中，所述淀粉样病变包括但不限于唐氏综合征、弥漫性刘易斯体疾病(diffuseLewis body disease)、进行性核上性麻痹、克罗伊茨费尔特-雅各布病(Creutzfeldt-Jakob disease)、芬兰型家族性淀粉样变性、家族性淀粉样变多神经病、具有荷兰型淀粉样变的遗传性脑出血以及Gerstmann-Straussler Scheinker综合征。根据一具体实施方案，以治疗有效疾病施用所述1-氨基环己烷衍生物，其为1-100mg/天、最优选5-60mg/天，并且特别是10-40mg/天。
因此，本发明目的之一在于将1-氨基环己烷衍生物施用至那些尚未表现出淀粉样病变的临床征兆但具有发展成为提高水平的潜在毒性和原纤维生成的Aβ风险的人类患者、或者那些已经显示出认知缺损征兆或由于具有提高水平的Aβ而具有这类缺损风险的个体。通过提供该1-氨基环己烷衍生物，本发明提供了用于可能降低发展成为淀粉样病变的风险或者延迟这样的个体中淀粉样病变发作的组合物和方法。另外如本文所公开，通过至少一种指标或方法测量，这种治疗可以在一段时间内停止或降低认知力进一步衰减的速率、逆转认知力下降。这类症状或指标的实例是患者的ADL、SIB、MMSE、CIBIC或ADAScog分数。
在一具体实施方案中，本发明涉及一种治疗患有除与阿尔茨海默氏病有关的淀粉样病变之外的淀粉样病变的哺乳动物的方法，该方法包括通过向所述哺乳动物施用含有治疗有效量的1-氨基环己烷衍生物的组合物以降低哺乳动物大脑、脑脊液或血浆中的Aβ肽含量。降低大脑中的Aβ肽含量可以包括影响APP的加工。
在另一实施方案中，本发明涉及一种治疗患有淀粉样病变的哺乳动物的方法，该方法包括通过向所述哺乳动物施用含有治疗有效量的1-氨基环己烷衍生物的组合物以提高Aβ肽在哺乳动物大脑、脑脊液或血浆中的清除率。在优选实施方案中，提高了哺乳动物大脑中的Aβ肽清除率。
在又一实施方案中，本发明涉及一种治疗患有除与阿尔茨海默氏病有关的淀粉样病变之外的淀粉样病变的哺乳动物的方法，该方法包括通过向所述哺乳动物施用含有治疗有效量的1-氨基环己烷衍生物的组合物以防止或减少Aβ肽在哺乳动物大脑中聚集或斑形成。
在另一实施方案中，本发明涉及一种治疗显示出除与阿尔茨海默氏病有关的淀粉样病变之外的淀粉样病变客观症状的哺乳动物的方法，该方法通过向所述哺乳动物施用含有治疗有效量的1-氨基环己烷衍生物的组合物以在哺乳动物中减少Aβ肽的形成、提高Aβ肽的清除率、调节APP的加工、或者减少斑形成。
在某些实施方案中，检测的Aβ水平降低了大约10-70％或者更多。
根据一个独立实施方案，将所述1-氨基环己烷衍生物与另一种1-氨基环己烷衍生物、乙酰胆碱酯酶抑制剂(AChEI)、分泌酶调节剂(例如β-和/或γ-分泌酶抑制剂、β-片层破坏剂(β-sheet breaker)或α-分泌酶增强剂)或其组合(同时或先后)给药。用于本发明方法中的乙酰胆碱酯酶抑制剂(AChEI)包括但不限于加兰他敏、他克林、多奈哌齐、毒扁豆碱和利伐斯的明(rivastigmine)。
在其它相关的实施方案中，本发明提供了一种管理使用1-氨基环己烷衍生物治疗淀粉样病变患者的方法。优选地，本发明提供了一种监测正在接受1-氨基环己烷衍生物治疗的患者所取得治疗效果的方法。所述方法包括按照适宜的时间间隔测量体液中Aβ浓度的数量。可以判断Aβ含量所出现的任何变化或者未出现变化，这与患者的治疗效果有关。在某些优选实施方案中，本发明涉及在1-氨基环己烷衍生物治疗以及相应调节治疗中，检测Aβ水平是否出现变化。所测得的Aβ含量可以与基线水平对比。优选所述Aβ浓度的基线水平为1-氨基环己烷衍生物治疗之前存在于患者体内的水平。在某些实施方案中，基线水平为在正处于1-氨基环己烷衍生物治疗的患者中测得的水平。
根据本发明的方法，本文提供了含有治疗有效量的至少一种1-氨基环己烷衍生物(例如美金刚或尼拉密山)以及任选的可药用载体或赋型剂的药物组合物和给药剂量。另外还提供了可溶性β-淀粉样肽的检测手段(例如抗-Aβ抗体)以及含有用于在筛选和治疗性评价本发明的1-氨基环己烷衍生物治疗方法中所使用的上述检测手段的检测分析方法和试剂盒。
                       发明详述
                       发明方法
本发明者发现，NMDA受体拮抗剂例如1-氨基环己烷衍生物(如美金刚或尼拉密山)降低了分泌Aβ肽的水平(例如通过防止或减少Aβ形成、提高Aβ清除率、防止或减少Aβ聚集或其联合情形)。
因此，本发明提供了一种降低至少一种由哺乳动物细胞产生的淀粉样肽的新方法，所述方法包括向所述细胞递送1-氨基环己烷衍生物。在具体实施方案中，所述淀粉样肽是sAPPα或Aβ(如Aβ40或Aβ42)。优选该1-氨基环己烷衍生物是美金刚或尼拉密山。另外还优选该细胞是神经细胞。
根据第一方法，本发明提供了一种潜在降低哺乳动物中原纤维生成β-淀粉样(Aβ)肽的沉积的新方法，该方法包括向所述哺乳动物施用有效用于此目的的量的1-氨基环己烷衍生物。优选以0.1-150μM、更优选1-25μM、最优选1-4μM的量施用所述1-氨基环己烷衍生物。在一具体实施方案中，所述哺乳动物是鼠或人类。
本发明进一步提供了一种可能治疗、预防、阻止、延迟哺乳动物淀粉样病变的发作和/或降低向其发展的风险的方法，该方法包括向所述哺乳动物施用有效用于此目的的量的1-氨基环己烷衍生物。在一具体实施方案中，所述淀粉样病变包括但不限于唐氏综合征、弥漫性刘易斯体疾病、进行性核上性麻痹、克罗伊茨费尔特-雅各布病、芬兰型家族性淀粉样变变性、家族性淀粉样变多神经病、具有荷兰型淀粉样变的遗传性脑出血以及Gerstmann-Straussler Scheinker综合征。根据一具体实施方案，以治疗有效剂量施用所述1-氨基环己烷衍生物，其为1-100mg/天、最优选5-60mg/天、特别是10-40mg/天。
因此，本发明目的之一在于将1-氨基环己烷衍生物施用至那些尚未表现出淀粉样病变的临床征兆但其有发展成为提高水平的潜在毒性和原纤维生成的Aβ风险的人类患者、或者那些已经显示出认知缺损征兆或由于具有提高水平的Aβ而有可能出现这类缺损风险的个体。通过提供该1-氨基环己烷衍生物，本发明提供了用于降低发展成为淀粉样病变的风险或者延迟在这样的个体中淀粉样病变发作的组合物和方法。另外如本文所公开，通过至少一种指标或方法测量，这种治疗可以在一段时间内停止或降低认知力进一步衰减的速率、逆转认知力下降。这类症状或指标的实例是患者的ADL、SIB、MMSE、CIBIC或ADAScog分数。
在一具体实施方案中，本发明涉及一种治疗患有淀粉样病变的哺乳动物的方法，该方法包括通过向所述哺乳动物施用含有治疗有效量的1-氨基环己烷衍生物的组合物以降低哺乳动物大脑、脑脊液或血浆中的Aβ肽含量。降低大脑中的Aβ肽含量可以包括影响APP的加工。在一优选实施方案中，降低了哺乳动物大脑中的Aβ肽含量。
在另一实施方案中，本发明涉及一种治疗患有淀粉样病变的哺乳动物的方法，该方法包括通过向所述哺乳动物施用含有治疗有效量的1-氨基环己烷衍生物的组合物以提高Aβ肽在哺乳动物大脑、脑脊液或血浆中的清除率。在优选实施方案中，提高了哺乳动物大脑中的Aβ肽的清除率。
在又一实施方案中，本发明涉及一种治疗患有淀粉样病变的哺乳动物的方法，该方法包括通过向所述哺乳动物施用含有治疗有效量的1-氨基环己烷衍生物的组合物以防止或减少Aβ肽在哺乳动物大脑中聚集或斑形成。
在另一实施方案中，本发明涉及一种治疗显示淀粉样病变的客观症状的哺乳动物的方法，该方法通过向所述哺乳动物施用含有治疗有效量的1-氨基环己烷衍生物的组合物以在哺乳动物中减少Aβ肽的形成、提高Aβ肽的清除率、调节APP的加工、或者减少斑形成。
在某些实施方案中，检测到的Aβ水平降低了大约10-70％或者更多。
根据一个独立实施方案，将所述1-氨基环己烷衍生物与另一种1-氨基环己烷衍生物、乙酰胆碱酯酶抑制剂(AChEI)、分泌酶调节剂(例如β-和/或γ-分泌酶抑制剂、β-片层破坏剂或α-分泌酶增强剂)或其组合(同时或先后)给药。用于本发明方法中的乙酰胆碱酯酶抑制剂(AChEI)包括但不限于加兰他敏、他克林、多奈哌齐、毒扁豆碱和利伐斯的明(rivastigmine)。
在其它相关的实施方案中，本发明提供了一种管理使用1-氨基环己烷衍生物治疗淀粉样病变患者的方法。优选地，本发明提供了一种监测已经接受1-氨基环己烷衍生物治疗的患者所取得治疗效果的方法。所述方法包括按照适宜的时间间隔测量体液中Aβ浓度的数量。可以判断Aβ含量所出现的任何变化或者未出现变化，这与患者的治疗效果有关。在某些优选实施方案中，本发明涉及在使用1-氨基环己烷衍生物相应治疗以及相庆调节治疗中，检测Aβ水平是否出现变化。所测得的Aβ含量可以与基线水平对比。优选所述Aβ的基线水平(浓度)为1-氨基环己烷衍生物治疗之前存在于患者体内的水平。在某些实施方案中，基线水平为在正处于1-氨基环己烷衍生物治疗的患者中测得的水平。
在某些实施方案中，本发明包括将在哺乳动物体液中检测到的Aβ水平与至少一种在前面检测到的Aβ水平进行对比，以确定施用1-氨基环己烷衍生物的效力。所检测到的水平还可以与被本领域接受为正常或疾病状态指示的数值进行对比。在其它实施方案中，本发明包括根据上述对比来调节1-氨基环己烷衍生物的重复给药剂量。
本领域已知的用于测量淀粉样肽水平的各种方法均可用于本发明实践。这些方法包括但不限于竞争性和非竞争性测定体系，使用例如放射性免疫测定法、ELISA(酶联免疫吸附测定法)、“三明治”免疫测定法、沉淀素反应、凝胶扩散沉淀素反应法、免疫扩散测定法、凝集反应测定法、补体结合测定法、免疫放射测定法、荧光免疫测定法、蛋白印迹法、蛋白质A免疫测定法和免疫电泳测定法、及其联合测定方法等。通常来说，用于定量测量淀粉样肽的方法涉及用第一俘获抗体俘获淀粉样肽、洗涤除去所有未结合组分、然后用第二检测抗体检测残余的复合物。优选上述免疫测定设计是基于数个“俘获和检测-抗体”组合，同时可以涉及各种抗体的组合，条件在于每种抗体可以与单独的抗原表位反应。
在一具体实施方案中，本发明方法包括使用Aβ肽抗体俘获和检测体液中Aβ的存在。因此，在一个具体方面，本发明提供了可用于测量液体样本中Aβ浓度的特异性结合测定法，并且该方法可用于本发明的筛选性和诊断性方法中。本发明的特异性结合测定法能够检测到极低浓度的可溶性Aβ(Aβ是患者体液和条件培养基的特征)，通常能够测量的阈浓度为大约1ng/ml至10ng/ml或者更低。根据本发明的特异性结合测定法使用至少一种对Aβ分子上的抗原表位或决定簇部位具有特异性的结合物质，所述部位通常不会出现在β-淀粉样前体蛋白(APP)的其它片段或降解产物中。尤其有用的是能够识别Aβ结合域的抗体，其中该结合域位于残基介于Lys16和Leu17之间的APP正常蛋白水解裂解部位附近(Esch等人，Science，248：1122-1124，1990；Anderson等人，Neuroscience Lett.，128：126-128，1991)，通常跨越了氨基酸残基13和28。示例性特异性结合测定法包括双位(三明治)测定法，如前所述，其中俘获抗体对Aβ的结合域具有特异性，并且标记的第二抗体对除了被俘获抗体识别的抗原表位之外的抗原表位具有特异性。特别有用的是能够结合Aβ氨基末端的第二抗体，它通常识别氨基酸残基1-16中的抗原表位。在另一方面，本发明提供了一种用于检测体液中的可溶性Aβ的体系。该体系包括如上所述的对Aβ结合域中的抗原表位具有特异性的第一结合物质(通常是抗体)以及对除被第一结合物质结合的抗原表位之外的Aβ的表位具有特异性的第二结合物质(通常是抗体)。第一和第二结合物质之一与固相结合，而另一个被标记，其中第一结合物质优选为与固相结合的俘获抗体，第二结合物质优选为标记抗体，更优选为酶标记的抗体。该体系可以进一步包括酶底物，所述体系可用于进行对体液样本中Aβ的检测具有高度特异性和灵敏性的酶联免疫吸附测定法(ELISA)。
在本发明某些优选实施方案中，使用蛋白质印迹(Westernblotting)Aβ检测法。在其它优选实施方案中，使用ELISA(酶联免疫吸附测定)Aβ检测法。关于这类实施方案的描述例如：将直接对抗可溶性抗原的单克隆抗体(俘获抗体mAb 1)吸附在固体基质上。存在于样本中的可溶性抗原与抗体结合，洗涤除去未反应的样本组分。将直接对抗抗原第二表位的酶联单克隆抗体(检测抗体，mAb 2)与被mAb1俘获的抗原结合，从而形成“三明治”。洗涤除去未结合mAb 2之后，将底物溶液加入至滴定孔中。在某些实施方案中，根据存在于样本中的抗原的量按比例形成有色产品。反应通过加入终止溶液结束，可以通过分光光度计测量吸收度，或者在某些实施方案中，可以通过荧光分析检测产品。
在优选实施方案中，用于本发明中的抗体仅仅对Aβ肽具有特异性。
在某些实施方案中，本发明的测定方法可以以试剂盒的形式提供，例如含有进行该测定的说明、俘获抗体以及下文所述的用于固化的固体载体的包装组合。另外，还可以包括检测手段，例如对于Aβ肽的抗体(可以是标记或未标记的)以及其它添加剂，例如稳定剂、洗涤剂和温育缓冲液等。
本发明的试剂盒通常还可以包括将试剂包含在密闭空间中用于商业销售的工具，例如注射或吹铸塑料容器。还可以提供其它适合于实施公开方法中的某些步骤的容器。
                         定义
本文中使用的术语“β-淀粉样肽”(Aβ)是指存在于例如患有阿尔茨海默氏病(AD)、唐氏综合征、或HCHWA-D的患者以及部分正常老年患者大脑中的大约4.2kD蛋白质，它在小脑和脑膜血管(淀粉样病变)中形成含有老年(淀粉样)斑和淀粉样沉积的淀粉样丝的亚单元。Aβ可以以丝状聚合形式出现(当以这种形式出现时，它显示出在本文相关部分描述的淀粉样的刚果红和硫磺素-S染料-结合特性)。Aβ还可以以非丝状形式出现在组织中(″前淀粉样″或″无定形″或″扩散性″沉积物)，在这种形式中不出现可检测到的被刚果红染色的双折射。一部分由脑膜血管获得的不可溶形式的这种蛋白质描述在美国专利号4,666,829中。当用于本发明中时，Aβ具体指大约39-43氨基酸肽，它可以在体外生长的培养细胞中的细胞外液(培养基)中找到或者纯化得到，或者由人和其它动物包括正常个体和患有Aβ-相关病症的体液中纯化得到。然而，截去氨基的Aβ肽被称作AβX-0，也可以通过本文所使用的测定方法在细胞外液(培养基)中检测到。因此，Aβ还指由正常基因中的Aβ区域突变得到的相关Aβ序列。无论以哪种形式，Aβ均是指跨膜大的糖蛋白(被称作β-淀粉样前体蛋白(APP))中的大约39-43氨基酸片段、或AβX-40，由人染色体21的长臂上的基因编码。Aβ其进一步的特征在于在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法或者高效液相色谱法(HPLC)中的相对迁移率。其43-氨基酸序列为：
AspAlaGluPheArgHisAspSerGlyTyrGluVaIHisHisGlnLysLeuValPhePheAlaGluAspValGlySerAsnLysGlyAlaIleIleGlyLeuMetValGlyGlyValValIleAlaThr(SEQ ID NO：1)或者基本上与其同源的序列。
本文中使用的术语“Aβ肽”是指完整或全长Aβ以及由哺乳动物细胞生成的低浓度Aβ片段和降解产物。具体的Aβ片段具有大约3kD的分子量，目前被认为其构成了Aβ的氨基酸残基11-40和17-40。
本文中使用的术语“Aβ结合域”是指位于氨基酸残基16和17(Lys16和Leu17)之间的位置中心上的Aβ区域，它是APP正常蛋白分解加工的目标。这种正常加工得到各种APP片段，它们与按照本发明方法识别出来的完整Aβ分子和Aβ片段具有潜在的免疫交叉反应活性。结合域的各种抗体跨越氨基酸残基10-35，优选跨越氨基酸残基15-30，并有对抗由被发现显示出所需特异性的氨基酸残基13-28组成的合成肽的抗体产生。
本文中使用的术语“β-淀粉样前体蛋白”是指由位于人染色体长臂21中的相同名称的基因编码的多肽，在其第三羧基中包括Aβ。APP是表达在很多哺乳动物组织各种细胞中的糖基化单跨膜蛋白。目前已知的存在于人体中的APP的具体同型实例是Kang等人描述的695-氨基酸多肽(Nature，325：733-736，1987)，其被命名为″nonnal″APP；Ponte等人(Nature，331：525-527，1988)和Tanzi等人(Nature，331：528-530，1988)描述的751-氨基酸多肽；以及Kitaguchi等人描述的770-氨基酸多肽(Nature，331：530-532，1988)。APP的具体变异体实例包括在位置和表型方面均有所区别的基因点突变(有关已知变异体突变的综述参见Hardy，Nature Genet.，1：233-234，1992)。
本文中使用的术语“APP片段”是指APP的片段而不是那些仅由Aβ或Aβ片段组成的片段。也就是说，APP片段除了包括形成完整Aβ或Aβ片段的那些片段之外，还包括APP的氨基酸序列。
本文中使用的术语“与Aβ相关的病症”或“淀粉样病变”是指包括阿尔茨海默氏病(包括家族性阿尔茨海默氏病)、帕金森氏病、唐氏综合征、弥漫性刘易斯体疾病、进行性核上性麻痹、克罗伊茨费尔特-雅各布病、芬兰型家族性淀粉样变性、家族性淀粉样变多神经病、荷兰型遗传性脑出血伴淀粉样病变和Gerstmann-Straussler Scheinker综合征。
本文中使用的术语“条件培养基”和“培养基”是指生长于组织培养液(体外)中的细胞周围的含水细胞外液，在其它组分中包含由细胞分泌的蛋白质和肽。
本文中使用的术语“体液”是指预期含有可测定量的Aβ和Aβ片段的哺乳动物宿主的那些体液，具体包括血液、脑脊液(CSF)、尿液和腹膜液。术语“血液”是指全血以及血浆和血清。根据本发明，Aβ和Aβ片段可以在各种生物和生理样本中检测和/或测量，包括体外样本例如来自培养细胞包括转染细胞系和内源性细胞系的条件培养基和患者体内样本，通常是体液和大脑组织提取液。可以通过任何一种能够将Aβ和Aβ片段与样本中可能发现的其它APP片段区别开的技术来完成Aβ肽的检测和测量。通常可以采取免疫检测技术，利用对Aβ具有特异性的结合物质，例如抗体、抗体片段、重组抗体等，它们与Aβ的结合具有特异性和灵敏性。具体地说，发现对Aβ结合域具有单一特异性的抗体能够将Aβ与其它APP片段区别开来。Aβ的结合域位于氨基酸残基16和17中心，通常跨越了氨基酸残基13-28，并且这类结合特异性抗体可以利用具有作为免疫原序列的合成肽制备。特别适宜的检测技术包括ELISA、蛋白质印迹法、放射性免疫测定法等。
优选的免疫测定技术是双位或“三明治”测定法，它使用结合特异性抗体作为俘获抗体(与固相结合)以及与抗原表位而不是与俘获抗体结合的第二标记抗体。第二标记抗体优选能够识别Aβ的氨基端，并且可以方便地对抗主要由Aβ的氨基酸残基1-16组成的合成肽。
还可以采用不需要使用Aβ特异性抗体的其它非免疫学技术来检测Aβ和Aβ片段。例如，可以使用二维凝胶电泳分离存在于液体样本中的密切相关的可溶性蛋白质。然后在Aβ存在下使用可与APP的多个片段包括Aβ交叉反应的抗体探测凝胶，其中根据Aβ在凝胶中的精确位置将其识别出来。对于培养细胞的情形，可以将细胞蛋白代谢性标记，通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离，同时任选使用免疫沉淀作用作为最初的分离步骤。
体内检测患者样本中的Aβ可用于监控根据本发明方法所述的使用1-氨基环己烷衍生物治疗阿尔茨海默氏病(AD)以及其它与Aβ相关病症。适宜的患者样本包括体液，例如血液、CSF、尿液和腹膜液。与正常个体、即没有患有Aβ或者任何其它的与Aβ相关的病症的个体中的Aβ水平值相比，存在与Aβ相关的病症通常与液体中Aβ水平升高有关。血液中Aβ的诊断性浓度为0.1ng/ml至10ng/ml或者更高，更通常为0.1ng/ml至3ng/ml。CSF中Aβ的诊断性浓度为0.1ng/ml至25ng/ml或者更高，更通常为0.1ng/ml至5ng/ml。
可以对所测得的Aβ浓度进行监测，以追踪使用1-氨基环己烷衍生物治疗的有效性。根据本发明，Aβ水平将会随有效的1-氨基环己烷衍生物治疗方案而降低。
对来自适宜细胞培养物的条件培养基中的Aβ水平进行体外监测可用于筛选本发明的方法。通过将细胞在导致Aβ聚集在条件培养基中的条件下生长，并且将该培养细胞暴露于1-氨基环己烷衍生物下，可以观察到这些1-氨基环己烷衍生物对Aβ生成的影响。
适宜的细胞系包括人和动物细胞系，例如293人肾细胞系、人神经胶质瘤细胞系、人HeLa细胞、原发性人内皮细胞(如HUVEC细胞)、原发性人成纤维细胞或成淋巴细胞、原发性人混合脑细胞(包括神经元、星形胶质细胞和神经胶质)、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞等。优选用于筛选本发明方法的是能够表达过度产生Aβ的APP变异体的细胞系。“过度产生”是指由变异体APP产生的Aβ量高于由任意一种或所有正常APP同种型例如先前描述过的695、751和770氨基酸同种型产生的量。特别优选的是具有一个或几个直接位于Aβ裂解部位的氨基末端上的氨基酸取代基的APP变异体。例如在瑞典FAD家族中发现的K293细胞表达携带有双重突变的APP DNA(Lys595-Asn595和Met596→Leu596)，其产生比表达正常APP的细胞高大约6-8倍的Aβ(参见美国专利号5,593,846)。残基596上发生突变似乎是引起这种增加的主要原因。
类似地，对在动物模型例如公开于WO91/19810中的小鼠模型以及表达其它APP同型和/或变异体的动物模型中体内监测Aβ也可用于测试1-氨基环己烷衍生物的不同剂量和给药方案的治疗有效性(通常由在先前通过体外筛选例如上述的体外筛选中确定的剂量开始)。降低某种体液中Aβ水平的1-氨基环己烷衍生物剂量被认为是供进一步评价的候选。
本文中使用的术语“治疗”是指减轻或缓解治疗对象的至少一种疾病症状。例如对于与淀粉样病变相关的痴呆，术语“治疗”可能是指减轻或缓解认知缺损(例如记忆力和/或定向力缺损)或者整体功能的缺损(日常作息活动，ADL)和/或减缓或逆转ADL或认知缺损的渐进式恶化。在本发明的定义范围内，术语“治疗”还指阻止、延迟疾病的发作(即在疾病表现出临床症状之前的时期)和/或降低疾病发展或恶化的风险。本文中使用的术语“保护”是指预防、延迟或治疗或者在适当时机预防、延缓及治疗对象中疾病的发生或持续或加重。在本发明的定义范围内，所述疾病是淀粉样病变，其包括但不限于阿尔茨海默氏病(AD)、帕金森氏病、唐氏综合征、弥漫性刘易斯体疾病、进行性核上性麻痹、克罗伊茨费尔特-雅各布病、芬兰型家族性淀粉样变性、家族性淀粉样变多神经病、荷兰型遗传性脑出血伴淀粉样病变和Gerstmann-Straussler Scheinker综合征。
例如，如本文所述，预防性施用1-氨基环己烷衍生物可以保护具有提高水平的原纤维生成β-淀粉样肽(Aβ)的接受对象(例如在几种基因中的一种为纯合或杂合突变体的个体，例如β-淀粉样前体蛋白(APP)、早老素(PS1、PS2)、分泌酶如β-淀粉样分裂酶(BACE)和载脂蛋白E；还可参见描述在Goate，1991，Nature，349：704-706中的基因筛选和临床分析)。类似地根据本发明，治疗性施用1-氨基环己烷衍生物可以导致减缓临床症状的发展或者甚至使症状消退。
在本发明定义范围内，所使用的术语“NMDA拮抗剂药物”是指可以抑制正常触发由NMDA受体介导的神经元激发的药物。优选的NMDA拮抗剂药物是1-氨基环己烷衍生物，例如美金刚和尼拉密山。这些化合物还具有5HT3拮抗剂活性和/或神经元烟碱性受体拮抗剂活性。
本文中以惯用药物意义使用的术语“类似物”或“衍生物”是指在结构上类似于参照分子(例如1-氨基环己烷)的分子，但是该分子已经经过靶向和受控的方式修饰以利用供替换的取代基置换该参照分子的一个或多个特定取代基，借以产生在结构上类似于所指分子的分子。对类似物进行合成和筛选(例如使用结构和/或生化分析)以确认可具有改进或偏斜的已知化合物的轻微修饰形式(例如在特定的靶向受体类型中具有较高的效力和/或选择性、穿透哺乳动物血-脑屏障的能力更大、较小的副作用等)是药物化学领域所熟知的药物设计途径。
本文中使用的术语“1-氨基环己烷衍生物”是指在用于建立类似但稍微不同的药物的过程中由1-氨基环己烷(或其可得到的衍生物例如尼拉密山或美金刚)衍生得到的化合物。
本发明的1-氨基环己烷衍生物可由通式(I)所示：
Figure A20048003110800461
其中：
-R*是-(A)n-(CR1R2)m-NR3R4，
n+m＝0、1或2，
A选自直链或支链低级烷基(C1-C6)、直链或支链低级链烯基(C2-C6)、和直链或支链低级炔基(C2-C6)，
R1和R2独自地选自氢、直链或支链低级烷基(C1-C6)、直链或支链低级链烯基(C2-C6)、直链或支链低级炔基(C2-C6)、芳基、被取代的芳基和芳烷基，
R3和R4独立地选自氢、直链或支链低级烷基(C1-C6)、直链或支链低级链烯基(C2-C6)、和直链或支链低级炔基(C2-C6)，或者一起形成亚烷基(C2-C10)或亚链烯基(C2-C10)或者与N一起形成3-7元氮杂环烷或氮杂环烯，包括被取代的(烷基(C1-C6)、链烯基(C2-C6))3-7-元氮杂环烷或氮杂环烯；或者R3或R4可以独立地与Rp、Rq、Rr或Rs联合形成亚烷基链-CH(R6)-(CH2)t-，其中t＝0或1，同时该亚烷基链的左侧与U或Y相连，该亚烷基链的右侧与N相连，并且R6选自氢、直链或支链低级烷基(C1-C6)、直链或支链低级链烯基(C2-C6)、直链或支链低级炔基(C2-C6)、芳基、被取代的芳基和芳烷基；或者R3或R4可以独立地与R5联合形成式-CH2-CH2-CH2-(CH2)t-所示的亚烷基链、或式-CH＝CH-CH2-(CH2)t-、-CH＝C＝CH-(CH2)t-或-CH2-CH＝CH-(CH2)t-所示的亚链烯基链，其中t＝0或1，同时该亚烷基或亚链烯基链的左侧与W相连，该亚烷基环的右侧与N相连；
-R5独立地选自氢、直链或支链低级烷基(C1-C6)、直链或支链低级链烯基(C2-C6)、和直链或支链低级炔基(C2-C6)，或者R5和与其相连的碳以及下一个相邻的环碳联合形成双键，
-Rp、Rq、Rr和Rs独立地选自氢、直链或支链低级烷基(C1-C6)、直链或支链低级链烯基(C2-C6)、直链或支链低级炔基(C2-C6)、环烷基(C3-C6)和芳基、被取代的芳基和芳烷基，或者Rp、Rq、Rr和Rs可以独立地和与其相连的U或Y形成双键，或者Rp、Rq、Rr和Rs可以一起联合表示低级亚烷基-(CH2)x-或低级亚链烯基桥，其中x是2-5，包括端点值，所述亚烷基桥反过来还可以与R5联合形成另外的低级亚烷基-(CH2)y-或低级亚链烯基桥，其中y是1-3，包括端点值，
-符号U、V、W、X、Y、Z表示碳原子，
并且包括落入式(I)的化合物的光学异构体，非对映异构体，多晶型物，对映异构体，水合物，可药用盐以及混合物。
由U-V-W-X-Y-Z定义的环优选选自环己烷、环己-2-烯、环己-3-烯、环己-1，4-二烯、环己-1，5-二烯、环己-2，4-二烯和环己-2，5-二烯。
本发明所使用的1-氨基环己烷衍生物的非限制性实例包括选自下述的1-氨基烷基环己烷衍生物：
1-氨基-1，3，5-三甲基环己烷、
1-氨基-1(反式)，3(反式)，5-三甲基环己烷、
1-氨基-1(顺式)，3(顺式)，5-三甲基环己烷、
1-氨基-1，3，3，5-四甲基环己烷、
1-氨基-1，3，3，5，5-五甲基环己烷(尼拉密山)、
1-氨基-1，3，5，5-四甲基-3-乙基环己烷、
1-氨基-1，5，5-三甲基-3，3-二乙基环己烷、
1-氨基-1，5，5-三甲基-顺式-3-乙基环己烷、
1-氨基-(1S，5S)顺式-3-乙基-1，5，5-三甲基环己烷、
1-氨基-1，5，5-三甲基-反式-3-乙基环己烷、
1-氨基-(1R，5S)反式-3-乙基-1，5，5-三甲基环己烷、
1-氨基-1-乙基-3，3，5，5-四甲基环己烷，
1-氨基-1-丙基-3，3，5，5-四甲基环己烷，
N-甲基-1-氨基-1，3，3，5，5-五甲基环己烷，
N-乙基-1-氨基-1，3，3，5，5-五甲基环己烷，
N-(1，3，3，5，5-五甲基环己基)吡咯烷、
3，3，5，5-四甲基环己基甲基胺、
1-氨基-1-丙基-3，3，5，5-四甲基环己烷、
1-氨基-1，3，3，5(反式)-四甲基环己烷(轴向氨基)、
3-丙基-1，3，5，5-四甲基环己基胺半水合物、
1-氨基-1，3，5，5-四甲基-3-乙基环己烷、
1-氨基-1，3，5-三甲基环己烷、
1-氨基-1，3-二甲基-3-丙基环己烷、
1-氨基-1，3(反式)，5(反式)-三甲基-3(顺式)-丙基环己烷、
1-氨基-1，3-二甲基-3-乙基环己烷、
1-氨基-1，3，3-三甲基环己烷、
顺式-3-乙基-1(反式)-3(反式)-5-三甲基环己胺、
1-氨基-1，3(反式)-二甲基环己烷、
1，3，3-三甲基-5，5-二丙基环己基胺、
1-氨基-1-甲基-3(反式)-丙基环己烷、
1-甲基-3(顺式)-丙基环己基胺、
1-氨基-1-甲基-3(反式)-乙基环己烷、
1-氨基-1，3，3-三甲基-5(顺式)-乙基环己烷、
1-氨基-1，3，3-三甲基-5(反式)-乙基环己烷、
顺式-3-丙基-1，5，5-三甲基环己基胺、
反式-3-丙基-1，5，5-三甲基环己基胺、
N-乙基-1，3，3，5，5-五甲基环己胺、
N-甲基-1-氨基-1，3，3，5，5-五甲基环己烷、
1-氨基-1-甲基环己烷、
N，N-二甲基-1-氨基-1，3，3，5，5-五甲基环己烷、
2-(3，3，5，5-四甲基环己基)乙基胺、
2-甲基-1-(3，3，5，5-四甲基环己基)丙基-2-胺、
2-(1，3，3，5，5-五甲基环己基-1)-乙基胺半水合物、
N-(1，3，3，5，5-五甲基环己基)-吡咯烷、
1-氨基-1，3(反式)，5(反式)-三甲基环己烷、
1-氨基-1，3(顺式)，5(顺式)-三甲基环己烷、
1-氨基-(1R，SS)反式-5-乙基-1，3，3-三甲基环己烷、
1-氨基-(1S，SS)顺式-5-乙基-1，3，3-三甲基环己烷、
1-氨基-1，5，5-三甲基-3(顺式)-异丙基-环己烷、
1-氨基-1，5，5-三甲基-3(反式)-异丙基-环己烷、
1-氨基-1-甲基-3(顺式)-乙基-环己烷、
1-氨基-1-甲基-3(顺式)-甲基-环己烷、
1-氨基-5，5-二乙基-1，3，3-三甲基-环己烷、
1-氨基-1，3，3，5，5-五甲基环己烷、
1-氨基-1，5，5-三甲基-3，3-二乙基环己烷、
1-氨基-1-乙基-3，3，5，5-四甲基环己烷、
N-乙基-1-氨基-1，3，3，5，5-五甲基环己烷、
N-(1，3，5-三甲基环己基)吡咯烷或哌啶、
N-[1，3(反式)，5(反式)-三甲基环己基]吡咯烷或哌啶、
N-[1，3(顺式)，5(顺式)-三甲基环己基]吡咯烷或哌啶、
N-(1，3，3，5-四甲基环己基)吡咯烷或哌啶、
N-(1，3，3，5，5-五甲基环己基)吡咯烷或哌啶、
N-(1，3，5，5-四甲基-3-乙基环己基)吡咯烷或哌啶、
N-(1，5，5-三甲基-3，3-二乙基环己基)吡咯烷或哌啶、
N-(1，3，3-三甲基-顺式-5-乙基环己基)吡咯烷或哌啶、
N-[(1S，SS)顺式-5-乙基-1，3，3-三甲基环己基]吡咯烷或哌啶、
N-(1，3，3-三甲基-反式-5-乙基环己基)吡咯烷或哌啶、
N-[(1R，SS)反式-5-乙基，3，3-三甲基环己基]吡咯烷或哌啶、
N-(1-乙基-3，3，5，5-四甲基环己基)吡咯烷或哌啶、
N-(1-丙基-3，3，5，5-四甲基环己基)吡咯烷或哌啶、
N-(1，3，3，5，5-五甲基环己基)吡咯烷、
它们的光学异构体，非对映异构体，对映异构体，水合物，可药用盐，及其混合物。
尼拉密山(1-氨基-1，3，3，5，5-五甲基环己烷)公开在例如美国专利申请号09/597,102和美国专利号6,034,134中。
某些通式(I)的1-氨基环己烷衍生物包括下述情形：其中三个轴向烷基取代基例如Rp、Rr和R5一起形成桥头，得到如下式IIb-IId所示的化合物(所谓的1-氨基金刚烷类)：
Figure A20048003110800511
其中n+m＝0，U、V、W、X、Y和Z形成环己烷环、并且R3和R4中的一个或两个独立与所述环己烷环通过由Rp、Rq、Rr、Rs或R5形成的亚烷基桥相连的某些式(I)的1-氨基环己烷衍生物由下式IIIa-IIIc所示：
其中Rq、Rr、Rs、Rr和R5如式(I)中定义，R6是氢、直链或支链低级烷基(C1-C6)、直链或支链低级链烯基(C2-C6)、直链或支链低级炔基(C2-C6)、芳基、被取代的芳基或者芳烷基，Y是饱和的或者可以和R6结合与其相连的环碳形成碳-氢键，1＝0或1，同时k＝0、1或2，并且------表示单键或双键。
本发明所使用的1-氨基环己烷衍生物的非限制性实施例包括选自下述的1-氨基金刚烷类及其衍生物：
1-氨基-3-苯基金刚烷、
1-氨基-甲基金刚烷、
1-氨基-3，5-二甲基金刚烷(美金刚)、
1-氨基-3-乙基金刚烷、
1-氨基-3-异丙基金刚烷、
1-氨基-3-正丁基金刚烷、
1-氨基-3，5-二乙基金刚烷、
1-氨基-3，5-二异丙基金刚烷、
1-氨基-3，5-二-正丁基金刚烷、
1-氨基-3-甲基-5-乙基金刚烷、
1-N-甲氨基-3，5-二甲基金刚烷、
1-N-乙氨基-3，5-二甲基金刚烷、
1-N-异丙基-氨基-3，5-二甲基金刚烷、
1-N，N-二甲基-氨基-3，5-二甲基金刚烷、
1-N-甲基-N-异丙基-氨基-3-甲基-5-乙基金刚烷、
1-氨基-3-丁基-5-苯基金刚烷、
1-氨基-3-戊基金刚烷、
1-氨基-3，5-二戊基金刚烷、
1-氨基-3-戊基-5-己基金刚烷、
1-氨基-3-戊基-5-环己基金刚烷、
1-氨基-3-戊基-5-苯基金刚烷、
1-氨基-3-己基金刚烷、
1-氨基-3，5-二己基金刚烷、
1-氨基-3-己基-5-环己基金刚烷、
1-氨基-3-己基-5-苯基金刚烷、
1-氨基-3-环己基金刚烷、
1-氨基-3，5-二环己基金刚烷、
1-氨基-3-环己基-5-苯基金刚烷、
1-氨基-3，5-二苯基金刚烷、
1-氨基-3，5，7-三甲基金刚烷、
1-氨基-3，5-二甲基-7-乙基金刚烷、
1-氨基-3，5-二乙基-7-甲基金刚烷、
1-N-吡咯烷子基和1-N-哌啶衍生物、
1-氨基-3-甲基-5-丙基金刚烷、
1-氨基-3-甲基-5-丁基金刚烷、
1-氨基-3-甲基-5-戊基金刚烷、
1-氨基-3-甲基-5-己基金刚烷、
1-氨基-3-甲基-5-环己基金刚烷、
1-氨基-3-甲基-5-苯基金刚烷、
1-氨基-3-乙基-5-丙基金刚烷、
1-氨基-3-乙基-5-丁基金刚烷、
1-氨基-3-乙基-5-戊基金刚烷、
1-氨基-3-乙基-5-己基金刚烷、
1-氨基-3-乙基-5-环己基金刚烷、
1-氨基-3-乙基-5-苯基金刚烷、
1-氨基-3-丙基-5-丁基金刚烷、
1-氨基-3-丙基-5-戊基金刚烷、
1-氨基-3-丙基-5-己基金刚烷、
1-氨基-3-丙基-5-环己基金刚烷、
1-氨基-3-丙基-5-苯基金刚烷、
1-氨基-3-丁基-5-戊基金刚烷、
1-氨基-3-丁基-5-己基金刚烷、
1-氨基-3-丁基-5-环己基金刚烷、
它们的光学异构体，非对映异构体，对映异构体，水合物，N-甲基、N，N-二甲基、N-乙基、N-丙基衍生物，可药用盐，及其混合物。
              本发明的其它优选化合物
本发明所使用的优选1-氨基环己烷衍生物包括下式的-1氨基环己烷衍生物：
Figure A20048003110800541
其中R*是-(CH2)n-(CR6R7)m-NR8R9
其中n+m＝0、1、或2
其中R1-R7独立地选自氢和低级烷基(1-6C)，至少R1、R4和R5是低级烷基，并且其中R8和R9独立地选自氢和低级烷基(1-6C)或者一起表示低级亚烷基-(CH2)x-，其中x是2-5，包括端点值，其对映异构体、光学异构体、水合物和可药用盐。
本发明所使用的优选1-氨基环己烷衍生物还包括下式的1-氨基环己烷衍生物：
Figure A20048003110800542
其中R1和R2相同或不同，且表示氢或具有1-6个C原子的直链或支链烷基，或者与N联合表示具有5或6个环C原子的杂环基团；
其中R3和R4相同或不同，选自氢、具有1-6个C原子的直链或支链烷基、具有5或6个C原子的环烷基和苯基；
其中R5是氢或直链或支链C1-C6烷基；
或其可药用盐。
本发明所使用的优选1-氨基环己烷衍生物还包括下式的1-氨基环己烷衍生物：
其中R*是-(CH2)n-(CR6R7)m-NR8R9
其中n+m＝0、1或2
其中R1-R7独立地选自氢、直链或直链低级烷基(1-6C)、-CH2-和低级环烷基(1-6C)，至少R1、R4和R5是低级烷基或-CH2-，并且
其中R8和R9独立地选自氢、直链或支链低级烷基(1-6C)和低级环烷基(1-6C)，或者一起表示低级亚烷基-(CH2)x-，其中x是2-5，包括端点值，或者与N联合表示具有5或6个环C原子的杂环基团；
条件是当R1、R4和R5各自独立地是-CH2-时，
R1、R4和R5各自与单独的CRa基团键合形成桥，其中Ra选自氢、直链或直链低级烷基(1-6C)、环烷基(5-6C)和苯基；
R2选自氢、直链或支链低级烷基(1-6C)、环烷基(5-6C)和苯基；
R3是氢或直链或支链低级烷基(1-6C)；并且
R*是-(CH2)n-(CR6R7)m-NR8R9，其中n+m＝0，并且R8和R9相同或不同且表示氢或直链或支链低级烷基(1-6C)，或者与N联合表示具有5或6个环C原子的杂环基团；以及
其对映异构体，光学异构体，水合物和可药用盐。
美金刚(1-氨基-3，5-二甲基金刚烷)是例如美国专利号4,122,193和4,273,774的主题。
通常通过将卤代金刚烷类优选溴-或氯代金刚烷类烷基化，制备得到式IIb和IId的1-氨基金刚烷衍生物，包括美金刚。通过另外的卤代和烷基化步骤获得二-或三-取代的金刚烷类。通过用三氧化铬氧化再用HBr溴化或者用溴进行溴化再与甲酰胺反应接着水解引入氨基。氨基官能团可以根据常用方法烷基化。例如通过与甲酸氯甲酯反应和随后的还原可以实现甲基化。通过将相应的乙酰胺还原可以引入乙基。关于更多的合成细节参见例如美国专利号5,061,703和6,034,134。前述化合物的其它合成技术可以参见临时申请序列号60/350,974(登记于2001年11月7日)、序列号60/337,858(登记于2001年11月8日)、序列号60/366,386(登记于2002年3月21日)，在此全部引入作为参考，以及下面的合成实施例。
根据本发明，可以使用式(I)的1-氨基环己烷衍生物本身或者其可药用盐形式，包括例如酸加成盐如盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、乙酸盐、琥珀酸盐或酒石酸盐、或者与富马酸、马来酸、柠檬酸或磷酸的酸加成盐。
此外，使用本领域技术人员已知的方法，可以获得本发明化合物的各种类似物和衍生物，它们在控制痴呆方面具有改善的疗效即对特定靶向的受体类型更高的效力和/或选择性、穿透哺乳动物血-脑屏障的能力更大或者更小(例如具有更高或更低的血-脑屏障渗透速率)、更少的副作用等。
可以使用本文所列举药物的各种盐和异构体(包括立体异构体和对映异构体)。术语“盐”可以包括游离酸或游离碱的加成盐。可用于形成可药用酸加成盐的酸实例包括无机酸例如盐酸、硫酸或磷酸，和有机酸例如乙酸、马来酸、琥珀酸或柠檬酸等。所有的这些盐(或其类似盐)可以按照常规方法制备。盐或异构体的性质并不重要，条件是其不具有毒性，同时基本上不会干扰预期的药理活性。
适用于剂量或用量的术语“治疗有效的”是指在向有此需要的哺乳动物施用后足以引起预期活性的化合物或药物组合物的量。本文中关于含有1-氨基环己烷衍生物的药物组合物所使用的术语“治疗有效用量/剂量”可与“神经学有效用量/剂量”互换使用，并且是指在向哺乳动物施用后足以产生有效的神经学响应的化合物或药物组合物的用量/剂量。值得注意的是，当施用各种活性成分的联合物时，所述联合物的有效用量可以包括也可以不包括每种成分各自有效的用量。
涉及活性成分用量的术语“亚阈值量”是指不足以产生响应的用量，即低于最小有效量的用量。在同一上下文中使用的术语“亚最佳量”是指产生响应但是未达到更大用量可达到的完全程度的活性成分的用量。
与本发明组合物结合使用的短语“可药用的”是指在向哺乳动物(例如人)给药时，在生理学上可耐受的并且通常不会产生不希望的反应的分子实体以及这些组合物的其它成分。本文中使用的术语“可药用的”优选代表联邦或美国政府的监管机构所批准的或者在美国药典或其它一般公认的药典中的所列举适用于哺乳动物，更特别是适用于人。
用于本发明药物组合物的术语“载体”是指与活性化合物(例如1-氨基环己烷衍生物和/或AChEI)一起施用的稀释剂、赋形剂或载体。这类药物载体可以是无菌液体例如水、盐水溶液、右旋糖水溶液、甘油水溶液，和油类包括石油、动物、植物或合成来源的油类，例如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。适宜的可药用载体描述在E.W.Martin的第18版″Remington′s Pharmaceutical Sciences″中。
本文中使用的术语“对象/患者”是指哺乳动物(例如啮齿类如小鼠或大鼠)。该术语特别是指人类。
本文中使用的术语“体液”是指含Aβ肽液体的生物样本。这类液体包括含水体液例如血清、血浆、淋巴液、滑液、滤泡液、精液、羊水、奶、全血、尿液、脑脊液、唾液、痰、眼泪、汗水、粘液、组织培养液、组织提取液以及细胞提取液。
术语“大约”或“接近”通常是指在给定数值或范围的20％内，优选在其10％、最优选在5％之内。或者，特别是在生物体系中，术语“大约”是指在给定数值的约一个对数(即一个数量级)的范围内，优选在两倍以内。
                  抗体和免疫检测方法
本文中使用的术语“抗体”包括各种类型的免疫球蛋白分子、单克隆抗体、多克隆抗体、亲和力纯化的多克隆抗体、Fab和(Fab)2、单链(SC)抗体、或者其它特异性结合Aβ上表位的分子。这样的抗体根据本领域已知的技术制备。通常，本发明用于检测Aβ的抗体可以用可检测的标记进行标记，例如放射标记、荧光标记、对Aβ抗体上分离表位具有特异性的第二抗体，其中第二抗体与用于催化可检测标记生成的酶缀合。
特异性结合Aβ表位的任何抗体均可潜在性地用于本发明的测定方法中。这样的抗体的实例非限制性地包括例如由QualityControlled Biochemicals Inc.(Hopkinton，Mass.)生产的双抗体(pAb 1-17和pAb 17-28)至Aβ的残基1-17和17-28、和可由Senetek商购得到的Ab 6E10至Aβ1-17和mAb 4G8至Aβ17-24，以及描述在Suzuki等人的美国专利号5,955,317中的抗体，在此将其公开内容引入作为参考。使用这样的抗体检测Aβ表位的很多适宜技术对于本领域技术人员而言都是显而易见的，包括荧光激活细胞分选术(FACS)、三明治测定法、竞争性免疫测定法、ELISA测定法、蛋白质印迹法、斑点印迹法、ouchterlony盘法、免疫电泳法、荧光测定法、显微法、荧光显微法、超过滤法(使用免疫标记的抗体)以及其它方法。
在优选实施方案中，使用对Aβ上的表位具有特异性的抗体通过ELISA分析体液。ELISA装置通常包括96孔微孔滴定板，其内表面用一种Aβ-特异性抗体涂布。这种抗体与固相的结合或附着的涂布并不是化学反应，而据信是由微孔滴定板的聚苯乙烯基质与抗体之间的物理或非共价相互作用的结果。将怀疑含有目标分子Aβ的样本放置与包衣的微孔滴定板接触，使得样本中的配体Aβ与抗体发生结合。然后通过数次洗涤步骤除去样本液体中任何未结合的组分。然后加入第二抗体，第二抗体特异性地识别目标分子并与信号产生酶结合。作为样本中是否存在目标分子的标志的酶通常通过加入产生可检测的信号例如荧光或变色的试剂进行检测。
根据本发明，优选将体液用固定的俘获抗体接触并培养。用于固定的固相可以是任意的惰性支持物或优选为不溶于水且可用于免疫测定中的载体，包括例如表面、颗粒、多孔基质等形式的载体。常用载体的实例包括小片层、葡聚糖凝胶、聚氯乙稀、弹性珠以及由聚乙烯、聚丙烯、聚苯乙烯等制造的测定盘或测试管，包括96-孔微孔滴定板以及微粒材料例如滤纸、琼脂糖、交联葡聚糖以及其它多糖。或者具有反应活性且不溶于水的基质例如溴化氰-活化的糖类和描述在美国专利号3,969,287、3,691,016、4,195,128、4,247,642、4,229,537和4,330,440中的活性的底物均适合用于俘获试剂的固定化。优选使用的固相是一次可分析数个样本的多孔微孔滴定板。最优选的是微试验96-孔ELISA滴定板，例如以Nunc Maxisorb或Immulon销售的滴定板。将固相按照上述方法用俘获试剂涂布，如果需要的话，它们可以通过非共价或共价相互作用或物理性连接。如果使用96-孔板的话，优选将其用俘获抗体涂布后温育至少大约10小时，更优选至少过夜。
然后涂布后的滴定板通常用非特异性结合并饱和结合部位的阻断剂处理以防止检测抗体与滴定板孔表面上的过量非特异性部位发生不希望的结合。用于上述目的的适宜阻断剂的实例包括例如凝胶、牛血清白蛋白、卵清蛋白、酪蛋白和脱脂奶。涂布并阻断后，将待分析的体液适当稀释后加入至固定化的相中。
选择适当的温育样本的条件和固定化的俘获试剂以优化测定方法的灵敏性。在温育期间保持常用的恒定温度不变。在该步骤过程中可以使用各种缓冲液来获得所希望的pH，包括硼酸盐、磷酸盐、碳酸盐、Tris-HCl或Tris-磷酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、巴比妥酸盐等。所使用的具体缓冲液对于本发明并不重要，但是在单独的测试中，某种缓冲也可能比另一种更优选。
由固定化的俘获抗体中分离体液(优选通过洗涤)以除去未俘获的体液。用于洗涤的溶液通常是具有一定pH的缓冲液(″洗涤缓冲液″)，其取决于所用的俘获试剂。可以洗涤一次或多次。
在测定方法的最后一步，测量此时与俘获抗体结合的Aβ。上述测量可以通过各种技术完成，例如萃取从俘获试剂中除去结合的Aβ后再进行生物测定、放射性受体测定法或放射性免疫测定法。
然而，更优选使用标准ELISA方法作为检测方法，在同一滴定板上分析游离配体的含量，这样就不再需要萃取或者其它的累赘操作。在该操作中，优选将相对于Aβ的最大浓度而言摩尔过量的抗体加入至洗涤后的滴定板中。
加入至固定化的俘获抗体中的检测抗体可以直接进行标记，也可以通过在洗涤除去过量的第一抗体之后加入摩尔过量的直接对抗第一检测抗体的第二标记抗体间接进行检测。
用于第一或第二检测抗体的标记可以为不干扰游离配体与抗体之间的结合的任意可检测官能团。适宜标记的实例是那些适用于免疫测定法的已知标记，包括可以直接检测的基团，例如荧光、化学荧光和放射活性标记，以及各种基团例如能够反应或衍生化以被检测的酶类。这类标记的实例包括放射性同位素32P、14C、125I、3H和131I，荧光团例如稀土螯合物或荧光素及其衍生物、玫瑰精及其衍生物、丹酰基、伞形酮、荧光素酶例如萤火虫荧光素酶和细菌荧光素酶(美国专利号4,737,456)、荧光素、2，3-二氢酞嗪二酮、辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酯酶、β-半乳糖苷酶、葡萄糖淀粉酶、溶菌酶、糖类氧化酶例如葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、杂环氧化酶例如尿素酶和黄嘌呤氧化酶，与利用过氧化氢的酶偶联从而氧化染料前体例如HRP、乳过氧化物酶或微过氧化物酶、生物素/抗生物素蛋白、旋转标记、抗菌素标记、稳定的游离基等。
可以采用常规方法将这些标记与蛋白质或多肽进行共价结合。本文中优选的标记是酶类例如辣根过氧化物酶和碱性磷酸酯酶。
在加入最后标记的抗体后，通过洗涤除去过量的未结合标记抗体，然后利用适合于该标记的检测方法测量附着标记的含量，从而测得结合抗体的含量，然后将所测得的含量与体液中的Aβ含量联系起来。
为了方便，本发明的测定方法可以以试剂盒的形式提供，也就是一种包装组合，它含有用于进行该测定的说明、上述的俘获试剂、抗体、用于Aβ的标准、上述的用于固定化的固体载体。此外，还可以包括上述的检测手段，例如对Aβ具有特异性的抗体(它可以是标记或未标记的)，以及其它添加剂例如稳定剂、洗涤剂和培养缓冲剂等。
                    细胞系测定
适合本发明测定方法的适宜细胞系包括各种合成、加工以及分泌淀粉样肽的人类和动物细胞系，例如人成神经瘤细胞系(如SK-N-SH)、人神经胶质瘤细胞系、人Hela细胞、人肾脏细胞系HEK-293、原发性人内皮细胞(如HUVEC细胞)、原发性人成纤维细胞和成淋巴细胞、原发性人混合脑细胞(包括神经元、星形胶质细胞、和神经胶质)、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞等。优选用于本发明的是表达APP变异体或过度产生Aβ的人类细胞系，例如在Aβ裂解部位的N-末端直接具有一个或数个氨基酸取代基的APP变异体(如发现于瑞典FAD家族中的表达具有双重突变[Lys595→Asn595和Met596→Leu596]的APP DNA的K293细胞，其产生比表达正常APP的细胞高大约6-8倍的Aβ，公开在美国专利号6,284,221中)。
在用1-氨基环己烷衍生物处理前后的细胞系产生的淀粉样肽可以使用上述的免疫检测方法检测。
为了测量细胞外sAPP及其片段，可以使用细胞温育物的上清液。为了测量全长细胞外APP及其片段，可以使用细胞溶解产物。例如，为了测量与细胞相关的全长APP或者测量APP的羧基-末端片段，可以将细胞溶解产物用能够识别APP的羧基-末端的抗体温育(参见例如Buxbaum等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，87：6003-6，1990)。为了测量Aβ肽或者测量sAPP(其为分泌的羧基-末端截顶形式)，可以将细胞上清液用能够识别Aβ的第一个15氨基酸(对应于sAPP的COOH-末端氨基酸)的抗体温育(参见例如Buxbaum等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，91：4489-93，1994)。
可以将细胞外Aβ肽的含量和细胞外sAPP的含量标准化至细胞中所发现的总APP含量。这种标准化提供了说明培养物之间所存在的任何差异以及由于使用1-氨基环己烷衍生物处理的细胞内改变的APP合成或成熟的任何差异的有效手段。
                    治疗学评价
阿尔茨海默氏病(AD)的诊断标准是众所周知的，并且在NationalInstitute of Neurological and Communicative Disorders andAlzheimer′s Disease and Related Disorders Association的指南(McKhann等人，Neurology，34：939-944，1984)、和AmericanPsychiatric Association，Diagnostic and Statistical Manual ofMental Disorders(Diagnostic and Statistical Manual IV)中有过阐述，在此将其全部引入作为参考。一般来说，诊断AD的客观标准包括：渐进式的记忆缺陷以及逐渐发生至少一种下述症状：失语症、运动不能、认识不能或者执行功能障碍。
可以一直持续治疗直到AD症状有所减轻，同时根据哺乳动物个体的响应情况可对剂量进行调节。通常，持续治疗90-365天的最短期限后，预期将会出现阳性响应。
                    药物组合物
根据本发明的方法，还提供了药物组合物，该药物组合物含有治疗有效量的1-氨基环己烷衍生物(例如美金刚或尼拉密山)以及任选的其它载体或赋形剂(均是可药用的)。该组合物可以配制成一天给药一次或者一天给药两次。
在所公开的组合物中，1-氨基环己烷衍生物优选以治疗有效量存在。最佳治疗有效量应当通过反复试验加以确定，需要考虑给药的准确模式、药物施用的形式、给药所针对的适应症、涉及的对象(例如体重、健康状态、年龄、性别等)、负责医师或兽医师的偏好和经验。对于本文所公开的向人类给药，可以将1-氨基环己烷衍生物以适宜的形式按照大约1-100mg/天的剂量给药。更具体地说，优选将1-氨基环己烷衍生物按照5-60mg/天、特别是10-40mg/天的剂量给药。在某些情形下，也希望将活性成分以亚最佳量和亚阈值量给药，因此这种给药也应该被包括在本发明范围之内。
本发明还提供了一种制备药物组合物的方法，它包括将1-氨基环己烷衍生物与任选的一种或多种生理学上可接受的载体和/或赋形剂和/或辅助物质混合。
在治疗性应用中，将该药物组合物施用至已经患有该疾病的寄主。所述药物组合物应当以足以抑制Aβ斑的进一步沉积的用量给药。将足以实现上述目的的用量定义为“治疗有效剂量”。
对于预防性应用，将本发明药物组合物施用至即将但尚未患有与Aβ相关的疾病的寄主。这类寄主可以通过如相关医学文献(例如Goate，Nature，349：704-706，1991)中描述的基因筛选和临床分析加以识别。该药物组合物能够在出现症状的早期抑制或预防Aβ斑的沉积，优选甚至可以预防β-淀粉样疾病的最初阶段。这种预防性治疗所需的化合物用量被称作预防有效剂量，通常与治疗性处理所述的相同。
                        给药
可以将本发明的活性剂以含有常规无毒可药用载体的剂量单元形式通过口服、局部、非肠道或粘膜给药(例如颊、通过吸入或直肠给药)。通常希望使用口服途径。活性剂可以以胶囊剂、片剂等形式口服给药(参见Remington′s Pharmaceutical Sciences，Mack 5 PublishingCo.，Easton，PA)。口服给药药物可以以时间控制释出载体的形式给药，包括扩散控制系统、渗透装置、溶出控制基质和可侵蚀/可降解基质。
对于以片剂或胶囊剂形式口服给药，可以将活性药物组分与无毒可药用的赋型剂混合，例如粘合剂(如预糊化的玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羟丙基甲基纤维素)；填充剂(如乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇、山梨醇以及其它还原性和非还原性糖、微晶纤维素、硫酸钙或磷酸氢钙)；润滑剂(如硬脂酸镁、滑石、或二氧化硅、硬脂酸、硬脂酰基富马酸钠、山嵛酸甘油酯、硬脂酸钙等)；崩解剂(如马铃薯淀粉或淀粉乙醇酸钠)；或者润湿剂(如月桂基硫酸钠)、着色剂和芳香剂、明胶、甜味剂、天然和合成树胶(如阿拉伯树胶、黄蓍树胶或藻酸盐)、缓冲盐、羧甲基纤维素、聚乙二醇、蜡等。对于液体形式的口服给药，药物组分可以与无毒可药用的惰性载体混合(例如乙醇、甘油、水)、助悬剂(例如山梨醇糖浆、纤维素衍生物或氢化可食用脂肪)、乳化剂(例如卵磷脂或阿拉伯树胶)、无水载体(例如杏仁油、油性酯、乙醇或分馏植物油)、防腐剂(例如对羟基苯甲酸甲基酯或对羟基苯甲酸丙基酯或者山梨酸)等。还可以加入稳定剂例如抗氧化剂(BHA、BHT、没食子酸丙酯、抗坏血酸钠、柠檬酸)以稳定剂型。
片剂可以通过本领域熟知的方法包衣。还可以将本发明的组合物引入例如由聚乙醇酸/乳酸(PGLA)形成的微球或微囊中(参见例如美国专利号5,814,344、5,100,669和4,849,222、PCT公开号WO95/11010和WO93/07861)。用于口服给药的液体制剂可以采取例如溶液剂、糖浆剂、乳剂或混悬剂的形式，或者它们以干产品的形式呈现，用于在使用之前用水或其它适宜的载体进行复水。可以适当地配制口服给药制剂，使得活性化合物控制或延时释出。口服时间控制释出药剂的具体实例描述在美国专利号5,366,738中。
活性药物还可以以脂质体递送系统的形式给药，例如小单层囊泡、大单层囊泡和多层囊泡。众所周知，脂质体可以由各种磷脂例如胆固醇、硬脂酰胺或磷脂酰胆碱形成。
本发明的药物还可以通过使用与化合物分子偶联的单克隆抗体(作为单独载体)递送。也可以将活性药物与作为目标药物载体的可溶性聚合物偶联。这些聚合物可以包括聚乙烯-吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羟丙基甲基丙烯酰胺-苯酚、聚羟乙基天冬酰胺-苯酚、或被棕榈酰基残基取代的聚氧乙烯-聚赖氨酸。另外，还可以将活性药物与一类可用于实现药物控释的可生物降解聚合物偶联，例如聚乳酸、聚乙醇酸、聚乳酸和聚乙醇酸的共聚物、聚ε己内酯、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚氢化吡喃、聚氰基丙烯酸酯以及水凝胶的交联或两性嵌段共聚物。
对于吸入给药，本发明的治疗剂可以方便地以来自加压包装或喷雾器中的气雾剂形式递送，同时使用适宜的推进剂，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳、或者其它的适宜气体。在加压气雾剂的情形中，可以通过提供阀门递送指定的量来确定剂量单位。可以将含有用于吸入器或吹入器中的例如明胶的胶囊剂和药筒配制成含有化合物的粉末混合物和适宜的粉末基质例如乳糖或淀粉。
本发明的制剂可以通过非肠道递送，也就是使用一次性推注或连续输注直接注射进行静脉内(i.v.)、脑室内(i.c.v.)、皮下(s.c.)、腹膜内(i.p.)、肌内(i.m.)、经皮(s.d.)或皮内(i.d.)给药。注射用制剂可以以加入防腐剂的单位剂量形式制备，例如安瓿或多剂量容器。组合物可以采取在油性或含水载体中的例如赋型剂、混悬剂、溶液剂、或乳剂形式，同时还可以含有调配剂例如助悬剂、稳定剂和/或分散剂。或者，活性成分还可以为散剂形式，其在使用之前用适当的载体例如无菌无热原的水进行复水。
本发明的组合物还可以配制成直肠给药，例如栓剂或滞留型灌肠剂的形式(例如含有惯用的栓剂基质如可可脂或者其它的甘油酯)。
如本文所示，1-氨基环己烷衍生物可以与可药用的且可与该活性成分配伍的赋形剂混合。另外，如果需要的话，制剂还可以包括少量的辅助物质，例如增湿剂或乳化剂、pH缓冲剂、和/或增强药物组合物效力的药剂。这些辅助分子可以作为蛋白质通过全身或局部递送或者通过由编码分子表达的载体表达。上述用于递送1-氨基环己烷衍生物的技术还可用于递送辅助分子。
尽管本发明的活性剂可以以分剂量的形式给药，例如每天二次或三次，但是优选单一日剂量的1-氨基环己烷衍生物。
可用于本发明单位剂量中的1-氨基环己烷衍生物的优选具体用量包括例如5mg、10mg、15mg和20mg美金刚和5mg、10mg、20mg、30mg和40mg尼拉密山。
根据具体的实施方案，为了获得不能通过传统即时释出给药获得的增强效果，使用了1-氨基环己烷衍生物的控释制剂(在下文中也称作“控释组合物”)。控释剂型可以具体用于获得恒定水平的1-氨基环己烷衍生物，从而避免在那些在不规律时间点上进食或者在进食之间频繁吃零食的哺乳动物中出现剂量峰和谷。
美国专利号4,615,698中描述了一种基于渗透剂型的控释剂型，其被设计为当药物通过该剂型的半渗透性壁中的通道递送出去时，渗透剂型崩解(collapse)并引起面对的表面形成密闭的接触排列。另外，美国专利号4,503,030中公开了一种具有通道和半渗透性膜的渗透性剂型，所述半渗透性膜由特殊的纤维素聚合物和对pH敏感的材料(其可以是肠包衣材料)组成。该专利描述了使用pH敏感材料和纤维素聚合物的1∶1混合物，基于渗透性片芯片剂和包衣材料的总重量，使用大约7重量％的上述混合物。
本发明还提供了含有一个或多个容器的药物包装或试剂盒，所述容器含有一种或多种本发明制剂中的成分。在相关的实施方案中，本发明提供了用于制备本发明药物组合物的试剂盒，所述试剂盒在第一容器中含有1-氨基环己烷衍生物以及任选的用于混合1-氨基环己烷衍生物和/或用于施用该组合物的说明。试剂盒中的每个容器还可以包括一种或多种生理学上可接受的载体和/或赋形剂和/或辅助物质。上述容器可以是经管理药品或生物制品的生产、使用或销售的政府机构允许的形式通告，该通告反映了生产、使用或销售机构批准其用于人类给药。
如果需要的话，组合物可以为含有一个或多个含活性成分的单位剂量形式的包装或分配装置形式。该包装可以含有例如金属或塑料箔，例如泡罩包装。该包装或分配装置可以附加以给药说明。还可以在可配伍的药物载体中配制本发明的组合物，将其置于适当的容器中，然后进行标记用于指定病症的治疗。
                有效剂量和安全性评价
根据本发明的方法，向患者以治疗有效的剂量、优选具有最小的毒性施用本文所述的药物组合物。在标题为“定义”的部分中提供了术语“神经学上有效剂量”和“治疗有效剂量”的定义。
本发明1-氨基环己烷衍生物的效力可以利用体外测定在培养细胞(已知其分泌进入条件APP肽)中测得。适宜的细胞系包括人和动物细胞系，例如人成神经瘤细胞系(如SK-N-SH[ATCCHTB-11]、SK-N-MC[ATCC HTB-10]、IMR-32[ATCC CCL-127]、MC-IXC[ATCC CRL-2270])、人神经胶质瘤细胞系、人海Hela胞系、人肾脏细胞系HEK-293、原发性人内皮细胞(如HUVEC细胞)、原发性人类成纤维细胞或成淋巴细胞、原发性人混合脑细胞(包括神经元、星形胶质细胞和神经胶质)、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞等。优选用于本发明的是表达APP变异体或过度产生Aβ的人类细胞系，例如在Aβ裂解部位的N-末端直接具有一个或数个氨基酸取代基的APP变异体(如发现于瑞典FAD家族中的表达具有双重突变[Lys595→Asn595和Met596→Leu596]的APP DNA的K293细胞，其产生比表达正常APP的细胞高大约6-8倍的Aβ，公开在美国专利号6,284,221中)。这些APP的分泌衍生物(即sAPPα、总Aβ、Aβ40或Aβ42)可以使用各种特异性多克隆和单克隆抗体通过例如免疫检测(例如蛋白质印迹法或免疫沉淀法)进行评价。
另外，还可以使用诸如下述的体外药理测试来测定本发明1-氨基环己烷衍生物的效力：测量大鼠和人大脑组织中的[3H]MK-801结合的置换、阻断培养神经元和异源表达系统中的NMDA受体通道、体内抗惊厥效果、通道阻断和抗惊厥作用之间的关系、防止大脑局部出血、防止由NMDA诱导的死亡率等(参见例如美国专利号5,061,703)。
根据本领域已充分建立的方法，利用小动物模型(例如大鼠或小鼠)在临床前研究中继续测定本发明化合物和组合物(其在体外测试中表现良好)的有效剂量和毒性反应，该研究发现1-氨基环己烷衍生物在治疗上是有效的，并且这些药物可通过相同的途径用于人类临床试验。本发明优选的动物模型是公开于下文实施例2中的AD转基因模型。
对于本发明方法中使用的任何一种药物组合物都可以根据动物模型预先估计其治疗有效剂量，从而获得包括IC50(即在脑相关区域获得对NMDA受体活性的最大抑制作用的一半时的测试化合物的浓度)循环血浆浓度范围。然后该由动物体系得到的剂量-响应曲线可用于确定适合于人类初期临床研究的试验剂量。在针对各组合物的安全性评价中，给药剂量和频率应当满足或超过临床试验中使用的预期值。
如本文所公开的，为了保证连续或者间断施用的剂量不会超过在考虑测试动物结果和患者的个体病症之后所确定的用量，需要确定本发明组合物中各组分的剂量。具体的剂量当然是取决于给药步骤、患者或动物患者的情况例如年龄、体重、性别、敏感性、进食、给药时间、组合物中所使用的药物、疾病的严重程度。特定状况下的合适剂量和给药时间可以通过基于上述指标的测试来确定，但是也可以根据从业医师的判断以及每位患者的情况(年龄、整体状况、症状的严重程度、性别等)、借助于标准临床实践来最终确定。本文所公开的1-氨基环己烷衍生物的适宜剂量通常为0.016-1.66mg/kg体重。
本发明组合物的毒性反应和治疗效果可以通过在试验动物中采取常规的药学步骤加以确定，例如通过确定LD50(使50％群体致死的剂量)和ED50(对50％群体治疗有效的剂量)。治疗效果与毒性反应之间的剂量比值为治疗指数，其可以表达为比值ED50/LD50。优选显示出大治疗指数的组合物。
由动物研究获得的相关数据可用于配制一系列适用于人的剂量。1-氨基环己烷衍生物在人中的治疗有效剂量优选落入包括具有少量或者没有毒性反应的ED50的循环浓度范围内。例如美金刚的这种治疗有效循环浓度为大约1μM(参见例如Kornhuber和Quack，.NeurosciLett.195(2)：137-139，1995)。剂量可以在上述范围内根据所使用的剂型和所使用的给药途径有所变化。理想的是应该每天使用各药物的单一剂量。
本发明的药物不仅在相对较低的剂量下具有高的有效性，而且具有较低的毒性反应，同时产生较少的副作用。实际上，由使用本发明的1-氨基环己烷衍生物引起的最常见的副作用是轻微震颤和认知损伤(表现为例如恶心、呕吐、头晕或意识错乱)。
                     实施例
下述实施例对本发明进行了示例性说明，但并不对其范围构成限制。
实施例1：测量治疗浓度的美金刚对于人成神经瘤细胞中
           分泌的APP衍生物的水平的影响
                      背景
美金刚是一种具有中等亲和性、非竞争性(开放通道)的NMDA受体拮抗剂。它具有强烈的电压依赖型通道阻断特性和快速的通道阻断/解阻断动力学。美金刚在几种动物模型中已经显示出能够提供神经保护作用和提高认知和记忆。在临床上，美金刚降低了由中等的认知功能衰退至成为严重的阿尔茨海默氏病(AD)患者的趋势(相关综述参见Lahiri等人，Curr.Drug Targets 2003，4(2)：97-112)。患有淀粉样病变例如阿尔茨海默氏病(AD)、唐氏综合征或HCHWA-D的患者大脑其特征在于存在以淀粉样纤维或无定形聚集物的形式沉积的Aβ的细胞外聚集物，Aβ的细胞外聚集物被认为在疾病发病机理中起着关键作用。淀粉样β肽的两种主要高度原纤维生成形式是在第40个残基终止的短形式(Aβ40)和在第42个残基终止的长形式(Aβ42)。这些高度原纤维生成Aβ肽出现细胞外沉积的原因在于全长β-淀粉样前蛋白由于各种蛋白水解酶(被称作分泌酶)出现异常加工。在本文上下文中，识别出能够影响原纤维生成和具有潜在毒性的Aβ肽水平的药物非常重要。
可以在细胞培养物中检测APP的加工。例如，已知成神经瘤细胞在条件培养基中分泌出长度短于全长的细胞外APP的APP衍生物。测量这些APP分泌衍生物的水平可以利用对APP具有特异性的抗体，按照蛋白质印迹法或ELISA(酶联免疫吸附测定法)对条件培养基进行评价。
在本实施例中，发明人研究了治疗浓度的美金刚(1-4μM)对于人成神经瘤细胞(SK-N-SH)在条件培养基中的分泌淀粉样肽、sAPPα、Aβ40和Aβ42的水平的影响。将SK-N-SH细胞用1-4μM美金刚处理长达12天，然后分别通过蛋白质印迹法和ELISA测定法测定条件培养基中的sAPP和Aβ40水平。美金刚(2-4μM，持续6-12天)显著降低了条件培养基中的sAPP水平。较低浓度的美金刚(1μM，持续6-12天)具有降低sAPP水平的趋势。测定了Aβ40水平，显示出其水平也有所降低。细胞存活力和毒性反应不受测试浓度下的美金刚影响。这些数据表明，治疗浓度的美金刚影响了APP加工，同时可以潜在地抑制原纤维生成Aβ肽的聚集。
                     试验设计
细胞培养和药物治疗。将人成神经瘤细胞(SK-N-SH，ATCC HTB-11，Biedler等人，Cancer Res.1973，33(11)：2643-52)以大约2×106细胞/孔接种在6-孔滴定板中。此后，最初的美金刚在补充有1％FBS和1x抗生素的MEM介质中的药物浓度为0μg/ml(对照组)、0.25μg/ml(1μM)、0.5μg/ml(2μM)和1.0μg/m l(4μM)。治疗时间为12天，同时每隔三天收集一次条件培养基(CM)。收集后，加入新鲜的美金刚介质，重复上述步骤直到在第12天进行采集。按照下述方法同时测定sAPP和Aβ40的水平。
通过蛋白质印迹法分析sAPP水平。先后通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)和蛋白质免疫印迹法，使用mAb22C11抗体测定CM中的总sAPP水平。将样本以等于条件培养基的体积装填在凝胶上(30μg蛋白质/样本)。使用NIH图象软件量化印迹中的特异性APP带的密度。APP水平以对照组的百分比表示。平行测定构成的表达的β-肌动蛋白的水平作为内部对照组。
通过ELISA分析Aβ水平。使用定量固相三明治ELISA(酶联免疫吸附测定法)测定条件培养基样本中的Aβ40水平。具体地说，亲和纯化后的抗人Aβ(35-40)兔IgG被用作俘获抗体，亲和纯化后的HRP-缀合抗人Aβ(11-28)兔IgG Fab被用作检测抗体(两种试剂均来自IBL(日本))。由于抗Aβ的抗体(11-28)被用作第二缀合抗体，因此在ELISA测定中也可以检测到在N-末端部位裂解的人Aβ40变异体。使用TMB作为着色剂(色原体)。测定范围为15.6～1,000pg/ml(3.6～230.9pmol/l)。
细胞毒性和存活力测定。使用MTT(四唑染料3-[4，5-二甲基噻唑-2-基]-2，5-二苯基四唑溴化物)测量对照组和美金刚治疗样本中的细胞存活力。使用乳酸脱氢酶(LDH)(Sigma，St.Louis，MO)测定法测量细胞毒性。
数据分析。对来自3-6组独立细胞培养试验的数据进行分析。使用SPSS程序(Statistical Products and Services Solutions，Chicago，IL)进行统计学分析(例如用于多重比较的方差分析和post-hoc测试)，同时包括平均值以及平均值的标准误差。
                       结果
使人成神经瘤细胞(SK-N-SH)在0μg/ml(对照组)、0.25μg/ml(1μM)、0.5μg/ml(2μM)和1.0μg/ml(4μM)美金刚存在下生长12天。按照三天的间隔收集一次培养基样本，分别通过蛋白质印迹法和ELISA测定sAPP和Aβ40的水平。尽管在第三天观察到的sAPP水平无显著变化(图1)，但是在第六天观察到sAPP水平出现剂量依赖型降低(图2)，在第九天和第十二天继续或进一步降低(图3)。与sAPP一样，在第三天观察到Aβ40水平也没有出现显著变化(图4)。值得注意的是，在第六天(图5)和第九天(图6)Aβ40水平出现显著降低(相对于阴性对照组而言)。
还测定了美金刚对细胞存活力和毒性的影响。细胞存活力使用色度MTT测定法评价。如图7所示，在美金刚治疗组和未治疗(对照组)滴定板中观察到细胞存活力有所增加，这使得sAPP和Aβ40水平的降低显著性更加明显(标准化至细胞存活力)。毒性的LDH测试表明，使用任意剂量的美金刚均不显示出毒性反应(图8)。
总的来说，在治疗有效的无毒性反应(1-4μM)剂量的美金刚存在下，观察到人成神经瘤细胞(SK-N-SH)培养基中的sAPP和Aβ40水平均逐渐降低。
本发明人目前正在使用相同的试验手段测量治疗浓度的美金刚对于Aβ42水平的影响。通过使用NMDA受体的各种不相关非竞争性和竞争性拮抗剂以及非-NMDA受体(如AMPA受体)拮抗剂，本发明人还测量了美金刚是否通过作用于NMDA受体降低了条件培养基中的sAPPα、Aβ40和Aβ42水平。
                        结论
这些数据表明，使用治疗剂量的美金刚(1-4μM)治疗人成神经瘤细胞SK-NSH导致条件培养基中的sAPP和Aβ40水平的降低。分别通过MTT和LDH测定法测得的细胞存活力和毒性不受上述浓度下的美金刚的影响。由治疗浓度的美金刚观察到的sAPP和Aβ40水平降低表明，美金刚可以减少大脑中原纤维生成Aβ肽的沉积。
实施例2：测量施用治疗剂量的美金刚以及其它1-氨基环己烷衍生物对于患有阿尔茨海默氏病的小鼠模型脑中的Aβ40和Aβ42水平的影响
AD似乎具有不同的发病原因，其带有由未知因素引起的大比例被称作偶尔发生的AD以及小部分由于几种基因之一例如β-淀粉样前体蛋白(APP)和早老素(PS1、PS2)发生突变引起的早期发作的家族性AD(FAD)。这些蛋白质连同tau、各种分泌酶例如β-淀粉样裂解酶(BACE)和脂载蛋白E一起在AD的病理学中具有重要作用(相关综述参见Lahiri等人，Curr.Drug Targets，4：97-112，2003)。
在某些患有早期发作AD的个体中，所述疾病可能作为常染色体显性被遗传(即仅需要单拷贝突变基因就可以引起上述疾病)。这种突变被鉴定为至少三种不同基因：APP、早老素1(PS1)和早老素2(PS2)(Price等人，Annu.Rev.Genet.，1998，32：461-493；Hardy等人，Science，1998，282：1075-1079；Tanzi，Neuron，2001，32：181-184；Selkoe，同上，第177-180页；Sherrington等人，Nature，1995，375：754-760；Levy-Lahad等人，Science，1995，269：973-977；Rogaev等人，Nature，1995，376：775-778)。
在FAD(家族性AD)病例中报道的各种APP突变是涉及形成Aβ形成的近裂解部位(参见例如Goate等人，1991，Nature，349：704-706；Harlan等人，1991，Nature，353：844-846；Murrell等人，1991，Science，254：97-99；以及Mullan等人，1992，Nature Genet.，1：345-347)。APP 717突变位于Aβ的C-末端附近，促进了β-分泌酶的活性，导致增加了更长和更具毒性的Aβ肽、Aβ42的分泌。这种更长的Aβ42肽被认为促进了Aβ聚集物和淀粉样蛋白斑的形成。位于Aβ的N-末端上的双重突变即APPswe突变促进了BACE1的裂解，因而与Aβ肽包括Aβ42水平的升高有关。相反，在Aβ肽区域发生的APP突变(例如APP-E693Q、A692G或E693G)不会提高Aβ水平，但是可以通过提高Aβ低聚物或初原纤维的形成而引起淀粉样变性病。
PS1和PS2编码高度同源的43-至50-kD多道跨膜蛋白质，后者进一步加工得到稳定的N-末端和C-末端片段，同时它被广泛但低丰度表达在中枢神经系统中。PS1影响APP加工(Borchelt等人.Neuron，1997，19：939-945；Wong等人，2002，同上)。据报道PS1基因包含了多于80种不同FAD突变(参见AD突变数据库，http：//molgen-www.uia.ac.be)，而在PS2相关家族中仅发现少数突变。PS基因中出现的大多数异常情形是导致单个氨基酸取代基的错义突变，这通常似乎影响了分泌酶活性，同时提高了Aβ42肽的生成。
通过监测转基因动物模型例如表达编码FAD-关联APP突变的APP微基因的小鼠动物模型(例如swe或717，公开在如美国专利号5,912,410中)或者Borchelt等人描述的双重突变小鼠模型(Neuron，19：939-945，1997)中的Aβ水平，进一步测试了导致细胞培养物中淀粉样生成Aβ的加工和/或分泌出现治疗意义上降低的1-氨基环己烷衍生物(例如美金刚或尼拉密山)浓度。后面的转基因小鼠共表达早期发作的家族性AD(FAD)关联人早老素1(PS1)变异体(A246E)以及与瑞典FAD家族(APPswe)关联的嵌合体小鼠/人APP隐匿突变。相对于年龄相当的表达APPswe和野生型人类PS1的小鼠而言，这些小鼠更早就形成了很多的淀粉样沉积物。编码FAD关联APP突变的APP微基因的表达、特别是突变人类PS1 A246E和APPswe的共表达提高了脑中的Aβ水平，同时这些小鼠在海马和皮质中形成了很多弥散性Aβ沉积物和斑(Calhoun等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1999，96：14088-14093)。与患有AD的人类似，这些以及其它转基因动物模型其特征在于出现各种认知缺损，例如丧失神经元、学习能力缺失、目标识别记忆出现问题以及因空间参照物和工作记忆变化出现的问题(Chen等人，Nature，2000，408：975-979)。
具体地说，研究了两组转基因动物：不接受治疗的对照组、接受1-氨基环己烷衍生物(例如美金刚或尼拉密山)的试验组。在指定的时间内施用药物，随后测试(使用例如免疫检测和组织化学)(i)各种APP肽(例如sAPPα、Aβ40或Aβ42)在体液中的水平以及(ii)β-淀粉样蛋白斑在脑中的含量。在试验组中观察到的降低(相对于对照组而言)被用作评价本发明1-氨基环己烷衍生物治疗的有效性的衡量标准。进一步使用转基因模型来测定最佳剂型、效力、毒性以及与本发明1-氨基环己烷衍生物治疗有关的副作用。
基于涉及APP加工的细胞培养物数据，预期美金刚可以降低Aβ40和Aβ42在上述AD转基因小鼠模型中的沉积。
实施例3：测定施用治疗剂量的美金刚对于患有阿尔茨海默氏病
        的转基因小鼠模型的空间学习能力的影响
                        背景
在哺乳动物大脑中，NMDA受体涉及重要的生理功能例如突触可塑性和突触形成，它们在记忆、学习和发育中的和神经网络的形成中的起着重要作用(Mayor和Westbrook，1987)。既然NMDA受体在学习和记忆中具有关键作用(Morris，1989；Tsien等人，1996)，因此NMDA受体拮抗剂能够改善阿尔茨海默氏病(AD)症状似乎有违直觉。已经发现几种对NMDA受体具有高亲和力的NMDA受体拮抗剂[例如(+)MK-801]可以引起神经行为副反应，例如幻觉和认知缺损(Benvenga和Spaulding，1988；Abi-Saab等人，1998)。这些不良事件大大地限制了高亲和性NMDA受体拮抗剂的临床开发。避免上述副作用的替代途径是实现部分而不是完全阻断NMDA受体。通过例如借助于具有低亲和性NMDA受体拮抗剂(其通常具有优于高亲和性NMDA受体拮抗剂的治疗窗)可以实现部分受体阻断(Rogawski，2000)。美金刚是一种具有低度至中等亲和性的NMDA受体拮抗剂，在学习和记忆受损的几种药理模型(Zajaczkowski等人，1996；Wenk等人，1997)、具有受损的基线记忆功能的年老大鼠(Barnes等人，1996)以及患有中等至严重AD的患者(Reisberg等人，2003；Tariot等人，2004)中已经显示出改善效果。
AD最明显的病理标志之一是在选定脑区域中出现有β-淀粉样(Aβ)蛋白斑的细胞外沉积。某些AD病例显示早期发作性，同时还具有家族性(FAD)。FAD是由早老素1(PS1)、早老素2(PS2)或者淀粉样前体蛋白(APP)基因发生突变而引起的。这种突变导致高度原纤维生成Aβ1-42肽的生成增加(Borchelt等人，1997；Holcomb等人，1998)。几条线索的证据表明，Aβ毒性与谷氨酸水平升高和/或NMDA受体的过度活性有关。例如，APP通过谷氨酸神经元表达(Ouimet等人，1994)，因此AD患者脑中出现的细胞损伤主要发生在显示谷氨酸突触可塑性的区域内(Arendt等人，1998)。向鼠大脑中输注Aβ导致学习和记忆缺陷(Sweeney等人，1997)以及长程增强效应受损(LTP)，后者是可以成为学习和记忆的某些形式基础的活性依赖型突触可塑性模型(Stephan等人，2001；Walsh等人，2002)。过度表达Aβ和APP的转基因小鼠还表现出年龄依赖型的认知下降(Chapman等人，1999；Puolivli等人，2002)，同时已知谷氨酸可以恶化Aβ诱导的LTP受损(Nakagami和Oda，2002)。此外，在最新的研究中，美金刚可以防止大鼠海马细胞出现Aβ诱导的细胞凋亡(Miguel-Hidalgo等人，2002)。甚至在不存在Aβ或APP的情形下，NMDA受体的过度活化可以降低突触可塑性和学习能力。例如，LTP的生成可以被高浓度的NMDA削弱(Katagiri等人，2001)，已发现系统性施用非惊厥剂量的NMDA可以削弱大鼠被动逃避学习能力(Zajaczkowski等人，1997)。
有关AD患者中出现的神经胶质的谷氨酸递质、GLT-1(EAAT-2)的下调节作用的发现还映证了下述观点：谷氨酸的触突水平及因此NMDA受体活性在AD中可以提高(Masliah等人，1996)。有趣的是，缺乏GLT-1的大鼠还显示出升高的谷氨酸触突水平以及受损的海马LTP，通过使用低剂量的NMDA受体拮抗剂可以将其部分恢复至正常水平(Katagiri等人，2001)，同时APP转基因小鼠显示出削弱的神经胶质递质活性(Masliah等人，2000)。综上所述，这些发现表明，过度活化NMDA受体和/或突触中提高的谷氨酸水平可能加剧Aβ和APP的神经毒性和记忆损伤效应。
在本研究中，在携带有突变的人类APP(swe)和PS1(A246E)基因的小鼠中测定了亚慢性口服美金刚对于以海马为基础的空间学习及其它一般行为的影响。这些小鼠出现了与依赖年龄的记忆损伤，同时几个大脑区域中的Aβ水平显示了与年龄相关的升高(Liu等人，2002；Puolivli等人，2002)。
                     试验设计
将表达人类PS1(隐匿有家族性AD-关联A246E突变)或者嵌合体小鼠/人类APP695(隐匿有人类Aβ域以及与瑞典家族性AD血统(APPswe)(Borchelt等人，1997)相关联的突变(K595N，M596L))的转基因小鼠回交(back-crossed)至C57BL/6J持续16代，然后再一起杂交得到共表达两种转基因的双重转基因小鼠。在所有测试中，使用八个月大的双重突变型小鼠(APP/PS1；n＝45)及其非转基因同胞仔(NT；n＝36)。在该年龄段，APP/PS1小鼠的脑中显示出β-淀粉样肽水平提高(Wang等人，2003)。将治疗剂量的美金刚定义为获得稳态血浆药物水平为～1μM的剂量，并且在八个月大的雄性C57BL/6J小鼠(转基因小鼠的背景品种)中测定。
整个试验过程中，将动物单独寄养在控制环境下(温度21±1℃、湿度50±10％、光照期07:00-19:00点)。随意摄取食物和水。根据欧洲委员会(Directive 86/609)和由State Provincial Office ofEastern Finland通过的芬兰指南进行试验。
寻找剂量的试验性研究：首先进行试验性研究以确定用于随后的转基因试验中的美金刚的治疗剂量[即获得稳态血浆药物水平达到大约1μM的美金刚剂量，几项临床前和临床研究显示所述稳态血浆药物水平在治疗上是有效的(Kornhuber和Quack，1995；Zajaczkowski等人，1996)]。将美金刚(Forest Research Institute，新泽西，NJ)口服给药(通过饮用水)至雄性C57BL/6J小鼠，剂量为10mg/kg/天(n＝10)、30mg/kg/天(n＝10)和100mg/kg/天(n＝10)，持续4周。安慰剂组(n＝10)饮用不含美金刚的水。在开始药物治疗4周后从股静脉采集血液样本，测量美金刚的稳态血浆浓度。血浆样本在MerzPharmaceuticals GmbH(Frankfurt am Main，德国)分析，使用与质量选择性检测器偶联的气相色谱系统(Kornhuber和Quack.，1995)。
美金刚治疗：根据试验性研究，选择30mg/kg/天的剂量(详见结果部分)进行行为研究，并在饮水中给药3周。向23只APP/PS1小鼠和19只NT小鼠施用美金刚。安慰剂组(APP/PS1：n＝22；NT：n＝17)服用不含美金刚的饮用水。在启动治疗2周后开始进行行为测试，并持续1周。治疗2周后，测试小鼠的探测性活动、隔离诱导的攻击行为以及在莫里斯水迷宫中的行为。
探测性活动：使用基于红外相片检测的TruScan(CoulboumInstruments，CO，USA)自动化活动监控器监测探测性活动。该系统由透明观察笼(26×26×39cm)和两环能够独立监测水平(随着时间进行的XY-运动)和垂直活动(后腿站立(rearing))的照片监测器组成。在两段间隔48小时的期间测定在10分钟内的活动。
由隔离诱导的攻击行为：在开始此测试之前，所有的测试小鼠(′居住者′)在单独的笼中至少寄养3周。′侵入者′为NT雄性C57B1/J6小鼠，测试时为16-20周龄，断奶后分成4-8只/组寄养。将随机选择的侵入者放置于居住者笼中，通过测定攻击潜伏期即向笼中引入侵入者至居住者发起第一次攻击之间的时间(秒)来评价居住者的攻击行为。本试验不考虑基因类型和药物治疗。
莫里斯水迷宫：使用莫里斯水迷宫测量空间学习能力和记忆能力。该装置为黑色塑料池，直径120cm。将黑色逃离平台(正方形，14×14cm)置于水表面以下1.0cm(隐藏)。水温在整个试验过程中保持恒定(20±0.5℃)，每次训练试验之间允许有10分钟的恢复期。首先，使用引向位于水下1cm的平台的通道(1m×14cm×25cm)预训练小鼠两天，使其能够找到并爬上平台。训练由八天的连续测试日组成，每天5次。如果小鼠在最大时间内(60秒钟)不能找到逃离平台，那么通过试验人员将其放置到平台上持续10秒钟。在测试的前五天，小鼠用隐藏的平台训练。平台位置保持固定，开始的位置在池边的四个固定位置之间变化。将小鼠放置在水中，按照随机方式在每次开始的时间点上使它们的鼻子朝向池壁。在第六天，除去平台，让小鼠游动60秒以测定其寻找的偏好。在测试的第7和8天，在游泳池周围挂上黑色幕布以隐藏所有迷宫外的视觉线索。训练小鼠以发现可见的平台，该平台具有杆高为10cm的白旗，每次试验调整一个新位置。发现浸没平台的潜伏期的计时由试验人员开始和终止。利用与影像分析器相连的计算机(HVS Imagez Hampton，UK)来监测游泳图像。在水迷宫训练期间，我们测定了游泳速度和寻找平台的潜伏期。通过将水池分成3组等表面积的同心环区域，然后计算消耗在外围地带中的时间来评价壁游泳趋势(趋触性)。通过计算小鼠消耗在平台最初位置附近的时间，测定得到小鼠在整个探测试验期间的搜寻偏好。我们将其定义为集中在平台中心、直径为30cm的目标区域。该目标区域由6.25％的总表面积组成，因此在该水池中随意游泳60秒钟，那么在整个探测试验期间，小鼠在目标区域中的停留时间则为3.75秒钟。
统计学分析：所有的统计学分析使用Windows软件的11.5.1版中的SPSS(SPSS，芝加哥，IL)完成。通过重复测量进行方差分析(ANOVA)，评价基因型、治疗、训练天数的影响以及它们与探测性活动的行为参数和在莫里斯水迷宫中的行为之间的相互作用。由隔离-攻击测试得到的攻击潜伏期通过以基因型和治疗作为影响因子的双道ANOVA分析。
                         结果
美金刚血浆浓度：口服10、30和100mg/kg/天的美金刚后的稳态血浆水平分别为0.49±0.06、1.14±0.07和5.54±0.40μM(平均值±SEM)。根据这些数据，选择获得大约1μM的治疗稳态血浆水平的30mg/kg/天的剂量进行全部行为研究。
探测性活动：首先在自动化活动监测器中测试APP/PS1和NT小鼠，以检测基因型和药物对于运动源和探测性活动的影响。ANOVA显示出显著性的基因型影响。相对于NT小鼠而言，APP/PS1小鼠表现出更少的水平活动(图9，F(1，77)＝13.0，p＝0.001)和更少的后腿站立行为(图9，F(1，77)＝35.0，p＜0.001)。美金刚也没有显著性地影响探测性活动的测定结果。
由隔离诱导的攻击行为：在面临入侵小鼠时，APP/PS1小鼠具有比NT对照小鼠更短的攻击潜伏期(图10；F(1，56)＝3.9，p＝0.05)。在APP/PS1小鼠中观察到的增加的攻击行为没有通过美金刚显著性地得到缓解(图10)。
莫里斯水迷宫：整个ANOVA表明了在空间学习中基因型(F(1，77)＝12.5，p＝0.001)和药物(F(1，77)＝8.0，p＝0.006)对于的影响。在寻找隐藏平台方面，使用安慰剂治疗的APP/PS1小鼠慢于NT对照组(图11A；F(1，40)＝8.9，p＝0.005)。相对于使用安慰剂治疗的APP/PS1小鼠而言，使用美金刚治疗缩短了APP/PS1小鼠的逃避潜伏期(图11B；F(1，43)＝6.0，p＝0.02)。实际上，使用美金刚治疗的APP/PS1小鼠的行为水平与使用安慰剂治疗的NT小鼠的行为水平没有区别(使用四组进行单道ANOVA，再接着Tukey′s post-hoc测试，p＝0.96)。使用美金刚治疗的NT小鼠还具有行为改善的趋势；然而，这种影响却不具显著性(图11C；F(1，34)＝3.0，p＝0.09)。在寻找可见平台方面，APP/PS1小鼠也慢于其NT同胞仔(图11A；F(1，77)＝15.8，p＜0.001)。然而，美金刚在该实例中没有显示出显著性的改善(图11B)。游泳速度不受基因型(F(1，77)＝0.27，p＞0.6)或者药物治疗(F(1，77)＝0.94，p＞0.3)的影响。
最初，小鼠的自然趋势是保持靠近池壁以从水中逃出。然而，它们很快意识到通过池壁不可能逃出，因此开始寻找位于水池中央的平台。为了进一步分析图像，单独测定了它们消耗在水池外围地带中的时间。APP/PS1小鼠消耗在外围地带中的总时间远远大于NT小鼠(图11D；F(1，77)＝18.3，p＜0.001)。美金刚显著降低了消耗在外围地带中的时间(F(1，77)＝11.7，p＝0.001)，并且这种影响对于APP/PS1小鼠(图11E；F(1，43)＝4.7，p＝0.04)和NT小鼠(图11F；F(1，34)＝9.8，p＝0.004)都是显著的。
在没有平台的第六天，对整个探测试验过程中学习空间搜寻偏好的强度进行了评价。所有组中的小鼠在平台位置附近消耗了比通过随机游泳预期的时间更多的时间(在60秒钟有3.75秒钟；参见方法部分)。不同组消耗在目标区域中的时间为：NT(安慰剂)：36.0±2.0秒(平均值±sem)、NT(美金刚)：36.1±2.6秒、APP/PS1(安慰剂)：35.5±2.3秒、APP/PS1(美金刚)：39.0±2.0s。组间差异不明显。
                       结论
在以治疗血浆浓度口服3-4周后，美金刚明显改善了显示出依赖于年龄的空间学习能力受损的APP/PS1小鼠空间导航的学习状态(learning phase)(图11B)。美金刚没有影响自发活动能力或者水迷宫中的特殊运动模式例如游泳。
在使用美金刚治疗的APP/PS1或者NT小鼠中，没有观察到自发的后腿站立或者水平运动。在啮齿动物中(+)MK-801的某些特征性影响表现为剂量依赖型活动过度(French等人，1991；Hargreaves andCain，1995)、水迷宫行为受损以及粘壁行为(趋触性)增加(Cain等人，1996)。相反，美金刚治疗改善了APP/PS1小鼠的水迷宫学习能力，同时降低了趋触性。美金刚的上述影响符合其在临床试验中观察到的高度耐受性曲线。
美金刚治疗导致APP/PS1小鼠的水迷宫获取能力显著改善。在早期关于费希尔344大鼠的研究中，已经报道指出使用30mg/kg/天的美金刚治疗8周可以改善水迷宫学习能力(Barnes等人，1996)。然而在该研究中，通过改善探测测试中的搜寻偏好，美金刚的效果在水迷宫晚期是显而易见的，而在本实施例中，其对于学习早期的影响是最明显的。由于NMDA受体的活化在快速学习复杂任务(例如莫里斯水迷宫)的几个同时发生的方面具有重要作用(例如认识到存在一平台提供从水中出逃的途径、通过池壁不可能逃离、以及根据迷宫外的空间线索确定平台的位置)，相对于未接受治疗的转基因小鼠而言，在使用美金刚治疗的APP/PS1小鼠中观察到水迷宫获取早期状态有所改善，这表明美金刚在病理条件下使NMDA受体的生理功能得以恢复。
在本实施例中，美金刚没有增强APP/PS1或NT小鼠的攻击行为。
因此，亚慢性口服美金刚(模拟性临床应用)改善了APP/PS1转基因小鼠受损的空间学习能力，但不会影响在这些小鼠中观察到的攻击行为增加或者探测性活动减少。
                       ***
本文中描述的具体实施方案并不对本发明范围构成限制。实际上，根据前述说明，除了上述实施方案之外，本发明的其它各种变型方案对于本领域技术人员而言都是显而易见的。这些变型方案也应该落入附录权利要求书的范围之内。
本文中引用的所有专利、申请、出版物、测试方法、文献以及其它资料均在此引入作为参考。

Claims (59)

1.降低至少一种由哺乳动物细胞产生的淀粉样肽水平的方法，该方法包括向所述细胞施用1-氨基环己烷衍生物。
2.权利要求1的方法，其中所述淀粉样肽是sAPPα、Aβ40或Aβ42。
3.权利要求1的方法，其中所述淀粉样肽是Aβ40。
4.权利要求1的方法，其中所述细胞是神经细胞。
5.权利要求1的方法，其中所述1-氨基环己烷衍生物如通式(I)所示：
Figure A2004800311080002C1
其中：
-R*是-(A)n-(CR1R2)m-NR3R4，
n+m＝0、1或2，
A选自直链或支链低级烷基(C1-C6)、直链或支链低级链烯基(C2-C6)、和直链或支链低级炔基(C2-C6)，
R1和R2独自地选自氢、直链或支链低级烷基(C1-C6)、直链或支链低级链烯基(C2-C6)、直链或支链低级炔基(C2-C6)、芳基、被取代的芳基和芳烷基，
R3和R4独立地选自氢、直链或支链低级烷基(C1-C6)、直链或支链低级链烯基(C2-C6)、和直链或支链低级炔基(C2-C6)，或者一起形成亚烷基(C2-C10)或亚链烯基(C2-C10)或者与N一起形成3-7元氮杂环烷或氮杂环烯，包括被取代的(烷基(C1-C6)、链烯基(C2-C6))3-7-元氮杂环烷或氮杂环烯；或者R3或R4可以独立地与Rp、Rq、Rr或Rs联合形成亚烷基链-CH(R6)-(CH2)t-，其中t＝0或1，同时该亚烷基链的左侧与U或Y相连，该亚烷基链的右侧与N相连，并且R6选自氢、直链或支链低级烷基(C1-C6)、直链或支链低级链烯基(C2-C6)、直链或支链低级炔基(C2-C6)、芳基、被取代的芳基和芳烷基；或者R3或R4可以独立地与R5联合形成式-CH2-CH2-CH2-(CH2)t-所示的亚烷基链、或式-CH＝CH-CH2-(CH2)t-、-CH＝C＝CH-(CH2)t-或-CH2-CH＝CH-(CH2)t-所示的亚链烯基链，其中t＝0或1，同时该亚烷基或亚链烯基链的左侧与W相连，该亚烷基环的右侧与N相连；
-R5独立地选自氢、直链或支链低级烷基(C1-C6)、直链或支链低级链烯基(C2-C6)、和直链或支链低级炔基(C2-C6)，或者R5和与其相连的碳以及下一个相邻的环碳联合形成双键，
-Rp、Rq、Rr和Rs独立地选自氢、直链或支链低级烷基(C1-C6)、直链或支链低级链烯基(C2-C6)、直链或支链低级炔基(C2-C6)、环烷基(C3-C6)和芳基、被取代的芳基和芳烷基，或者Rp、Rq、Rr和Rs可以独立地和与其相连的U或Y形成双键，或者Rp、Rq、Rr和Rs可以一起联合表示低级亚烷基-(CH2)x-或低级亚链烯基桥，其中x是2-5，包括端点值，所述亚烷基桥反过来还可以与R5联合形成另外的低级亚烷基-(CH2)y-或低级亚链烯基桥，其中y是1-3，包括端点值，
-符号U、V、W、X、Y、Z表示碳原子，
并且包括落入式(I)的化合物的光学异构体，非对映异构体，多晶型物，对映异构体，水合物，可药用盐以及混合物。
6.权利要求5的方法，其中所述1-氨基环己烷衍生物是选自下述的1-氨基金刚烷或其衍生物之一：
1-氨基-3-苯基金刚烷、
1-氨基-甲基金刚烷、
1-氨基-3，5-二甲基金刚烷(美金刚)、
1-氨基-3-乙基金刚烷、
1-氨基-3-异丙基金刚烷、
1-氨基-3-正丁基金刚烷、
1-氨基-3，5-二乙基金刚烷、
1-氨基-3，5-二异丙基金刚烷、
1-氨基-3，5-二-正丁基金刚烷、
1-氨基-3-甲基-5-乙基金刚烷、
1-N-甲氨基-3，5-二甲基金刚烷、
1-N-乙氨基-3，5-二甲基金刚烷、
1-N-异丙基-氨基-3，5-二甲基金刚烷、
1-N，N-二甲基-氨基-3，5-二甲基金刚烷、
1-N-甲基-N-异丙基-氨基-3-甲基-5-乙基金刚烷、
1-氨基-3-丁基-5-苯基金刚烷、
1-氨基-3-戊基金刚烷、
1-氨基-3，5-二戊基金刚烷、
1-氨基-3-戊基-5-己基金刚烷、
1-氨基-3-戊基-5-环己基金刚烷、
1-氨基-3-戊基-5-苯基金刚烷、
1-氨基-3-己基金刚烷、
1-氨基-3，5-二己基金刚烷、
1-氨基-3-己基-5-环己基金刚烷、
1-氨基-3-己基-5-苯基金刚烷、
1-氨基-3-环己基金刚烷、
1-氨基-3，5-二环己基金刚烷、
1-氨基-3-环己基-5-苯基金刚烷、
1-氨基-3，5-二苯基金刚烷、
1-氨基-3，5，7-三甲基金刚烷、
1-氨基-3，5-二甲基-7-乙基金刚烷、
1-氨基-3，5-二乙基-7-甲基金刚烷、
1-N-吡咯烷子基和1-N-哌啶衍生物、
1-氨基-3-甲基-5-丙基金刚烷、
1-氨基-3-甲基-5-丁基金刚烷、
1-氨基-3-甲基-5-戊基金刚烷、
1-氨基-3-甲基-5-己基金刚烷、
1-氨基-3-甲基-5-环己基金刚烷、
1-氨基-3-甲基-5-苯基金刚烷、
1-氨基-3-乙基-5-丙基金刚烷、
1-氨基-3-乙基-5-丁基金刚烷、
1-氨基-3-乙基-5-戊基金刚烷、
1-氨基-3-乙基-5-己基金刚烷、
1-氨基-3-乙基-5-环己基金刚烷、
1-氨基-3-乙基-5-苯基金刚烷、
1-氨基-3-丙基-5-丁基金刚烷、
1-氨基-3-丙基-5-戊基金刚烷、
1-氨基-3-丙基-5-己基金刚烷、
1-氨基-3-丙基-5-环己基金刚烷、
1-氨基-3-丙基-5-苯基金刚烷、
1-氨基-3-丁基-5-戊基金刚烷、
1-氨基-3-丁基-5-己基金刚烷、
1-氨基-3-丁基-5-环己基金刚烷、
它们的光学异构体，非对映异构体，对映异构体，水合物，N-甲基、N，N-二甲基、N-乙基、N-丙基衍生物，可药用盐、及其混合物。
7.权利要求1的方法，其中所述1-氨基环己烷衍生物选自美金刚及其前药、盐、异构体、类似物和衍生物。
8.权利要求1的方法，其中所述1-氨基环己烷衍生物是美金刚。
9.权利要求1的方法，其中所述1-氨基环己烷衍生物是选自下述的1-氨基烷基环己烷衍生物：
1-氨基-1，3，5-三甲基环己烷、
1-氨基-1(反式)，3(反式)，5-三甲基环己烷、
1-氨基-1(顺式)，3(顺式)，5-三甲基环己烷、
1-氨基-1，3，3，5-四甲基环己烷、
1-氨基-1，3，3，5，5-五甲基环己烷(尼拉密山(neramexane))、
1-氨基-1，3，5，5-四甲基-3-乙基环己烷、
1-氨基-1，5，5-三甲基-3，3-二乙基环己烷、
1-氨基-1，5，5-三甲基-顺式-3-乙基环己烷、
1-氨基-(1S，5S)顺式-3-乙基-1，5，5-三甲基环己烷、
1-氨基-1，5，5-三甲基-反式-3-乙基环己烷、
1-氨基-(1R，5S)反式-3-乙基-1，5，5-三甲基环己烷、
1-氨基-1-乙基-3，3，5，5-四甲基环己烷，
1-氨基-1-丙基-3，3，5，5-四甲基环己烷，
N-甲基-1-氨基-1，3，3，5，5-五甲基环己烷，
N-乙基-1-氨基-1，3，3，5，5-五甲基环己烷，
N-(1，3，3，5，5-五甲基环己基)吡咯烷、
3，3，5，5-四甲基环己基甲基胺、
1-氨基-1-丙基-3，3，5，5-四甲基环己烷、
1-氨基-1，3，3，5(反式)-四甲基环己烷(轴向氨基)、
3-丙基-1，3，5，5-四甲基环己基胺半水合物、
1-氨基-1，3，5，5-四甲基-3-乙基环己烷、
1-氨基-1，3，5-三甲基环己烷、
1-氨基-1，3-二甲基-3-丙基环己烷、
1-氨基-1，3(反式)，5(反式)-三甲基-3(顺式)-丙基环己烷、
1-氨基-1，3-二甲基-3-乙基环己烷、
1-氨基-1，3，3-三甲基环己烷、
顺式-3-乙基-1(反式)-3(反式)-5-三甲基环己胺、
1-氨基-1，3(反式)-二甲基环己烷、
1，3，3-三甲基-5，5-二丙基环己基胺、
1-氨基-1-甲基-3(反式)-丙基环己烷、
1-甲基-3(顺式)-丙基环己基胺、
1-氨基-1-甲基-3(反式)-乙基环己烷、
1-氨基-1，3，3-三甲基-5(顺式)-乙基环己烷、
1-氨基-1，3，3-三甲基-5(反式)-乙基环己烷、
顺式-3-丙基-1，5，5-三甲基环己基胺、
反式-3-丙基-1，5，5-三甲基环己基胺、
N-乙基-1，3，3，5，5-五甲基环己胺、
N-甲基-1-氨基-1，3，3，5，5-五甲基环己烷、
1-氨基-1-甲基环己烷、
N，N-二甲基-1-氨基-1，3，3，5，5-五甲基环己烷、
2-(3，3，5，5-四甲基环己基)乙基胺、
2-甲基-1-(3，3，5，5-四甲基环己基)丙基-2-胺、
2-(1，3，3，5，5-五甲基环己基-1)-乙基胺半水合物、
N-(1，3，3，5，5-五甲基环己基)-吡咯烷、
1-氨基-1，3(反式)，5(反式)-三甲基环己烷、
1-氨基-1，3(顺式)，5(顺式)-三甲基环己烷、
1-氨基-(1R，SS)反式-5-乙基-1，3，3-三甲基环己烷、
1-氨基-(1S，SS)顺式-5-乙基-1，3，3-三甲基环己烷、
1-氨基-1，5，5-三甲基-3(顺式)-异丙基-环己烷、
1-氨基-1，5，5-三甲基-3(反式)-异丙基-环己烷、
1-氨基-1-甲基-3(顺式)-乙基-环己烷、
1-氨基-1-甲基-3(顺式)-甲基-环己烷、
1-氨基-5，5-二乙基-1，3，3-三甲基-环己烷、
1-氨基-1，3，3，5，5-五甲基环己烷、
1-氨基-1，5，5-三甲基-3，3-二乙基环己烷、
1-氨基-1-乙基-3，3，5，5-四甲基环己烷、
N-乙基-1-氨基-1，3，3，5，5-五甲基环己烷、
N-(1，3，5-三甲基环己基)吡咯烷或哌啶、
N-[1，3(反式)，5(反式)-三甲基环己基]吡咯烷或哌啶、
N-[1，3(顺式)，5(顺式)-三甲基环己基]吡咯烷或哌啶、
N-(1，3，3，5-四甲基环己基)吡咯烷或哌啶、
N-(1，3，3，5，5-五甲基环己基)吡咯烷或哌啶、
N-(1，3，5，5-四甲基-3-乙基环己基)吡咯烷或哌啶、
N-(1，5，5-三甲基-3，3-二乙基环己基)吡咯烷或哌啶、
N-(1，3，3-三甲基-顺式-5-乙基环己基)吡咯烷或哌啶、
N-[(1S，S S)顺式-5-乙基-1，3，3-三甲基环己基]吡咯烷或哌啶、
N-(1，3，3-三甲基-反式-5-乙基环己基)吡咯烷或哌啶、
N-[(1R，SS)反式-5-乙基，3，3-三甲基环己基]吡咯烷或哌啶、
N-(1-乙基-3，3，5，5-四甲基环己基)吡咯烷或哌啶、
N-(1-丙基-3，3，5，5-四甲基环己基)吡咯烷或哌啶、
N-(1，3，3，5，5-五甲基环己基)吡咯烷、
它们的光学异构体，非对映异构体，对映异构体，水合物，它们的可药用盐，及其混合物。
10.权利要求1的方法，其中所述1-氨基环己烷衍生物选自尼拉密山及其前药、盐、异构体、类似物和衍生物。
11.权利要求1的方法，其中所述1-氨基环己烷衍生物是尼拉密山。
12.调节哺乳动物中原纤维生成β-淀粉样(Aβ)肽的沉积的方法，该方法包括向所述哺乳动物施用有效用于此目的量的1-氨基环己烷衍生物。
13.权利要求12的方法，其中所述1-氨基环己烷衍生物以0.1-150μM的量施用。
14.权利要求12的方法，其中所述1-氨基环己烷衍生物以1-25μM的量施用。
15.权利要求12的方法，其中所述1-氨基环己烷衍生物以1-4μM的量施用。
16.权利要求12的方法，其中所述哺乳动物是小鼠。
17.权利要求12的方法，其中所述哺乳动物是人。
18.治疗、预防、阻止、延迟哺乳动物淀粉样病变的发作和/或降低向其发展的风险的方法，该方法包括向所述哺乳动物施用含有1-氨基环己烷衍生物的组合物，其用量可以有效地降低哺乳动物大脑、脑脊液或血浆中Aβ肽的含量。
19.权利要求18的方法，其中所述淀粉样病变选自唐氏综合征、弥漫性刘易斯体疾病、进行性核上性麻痹、克罗伊茨费尔特-雅各布病、芬兰型家族性淀粉样变性、家族性淀粉样变多神经病、具有荷兰型淀粉样变的遗传性脑出血以及Gerstmann-Straussler Scheinker综合征。
20.权利要求18的方法，其中所述哺乳动物是人。
21.权利要求18的方法，其中所述1-氨基环己烷衍生物如通式(I)所示：
其中：
-R*是-(A)n-(CR1R2)m-NR3R4，
n+m＝0、1或2，
A选自直链或支链低级烷基(C1-C6)、直链或支链低级链烯基(C2-C6)、和直链或支链低级炔基(C2-C6)，
R1和R2独自地选自氢、直链或支链低级烷基(C1-C6)、直链或支链低级链烯基(C2-C6)、直链或支链低级炔基(C2-C6)、芳基、被取代的芳基和芳烷基，
R3和R4独立地选自氢、直链或支链低级烷基(C1-C6)、直链或支链低级链烯基(C2-C6)、和直链或支链低级炔基(C2-C6)，或者一起形成亚烷基(C2-C10)或亚链烯基(C2-C10)或者与N一起形成3-7元氮杂环烷或氮杂环烯，包括被取代的(烷基(C1-C6)、链烯基(C2-C6))3-7-元氮杂环烷或氮杂环烯；或者R3或R4可以独立地与Rp、Rq、Rr或Rs联合形成亚烷基链-CH(R6)-(CH2)t-，其中t＝0或1，同时该亚烷基链的左侧与U或Y相连，该亚烷基链的右侧与N相连，并且R6选自氢、直链或支链低级烷基(C1-C6)、直链或支链低级链烯基(C2-C6)、直链或支链低级炔基(C2-C6)、芳基、被取代的芳基和芳烷基；或者R3或R4可以独立地与R5联合形成式-CH2-CH2-CH2-(CH2)t-所示的亚烷基链、或式-CH＝CH-CH2-(CH2)t-、-CH＝C＝CH-(CH2)t-或-CH2-CH＝CH-(CH2)t-所示的亚链烯基链，其中t＝0或1，同时该亚烷基或亚链烯基链的左侧与W相连，该亚烷基环的右侧与N相连；
-R5独立地选自氢、直链或支链低级烷基(C1-C6)、直链或支链低级链烯基(C2-C6)、和直链或支链低级炔基(C2-C6)，或者R5和与其相连的碳以及下一个相邻的环碳联合形成双键，
-Rp、Rq、Rr和Rs独立地选自氢、直链或支链低级烷基(C1-C6)、直链或支链低级链烯基(C2-C6)、直链或支链低级炔基(C2-C6)、环烷基(C3-C6)和芳基、被取代的芳基和芳烷基，或者Rp、Rq、Rr和Rs可以独立地和与其相连的U或Y形成双键，或者Rp、Rq、Rr和Rs可以一起联合表示低级亚烷基-(CH2)x-或低级亚链烯基桥，其中x是2-5，包括端点值，所述亚烷基桥反过来还可以与R5联合形成另外的低级亚烷基-(CH2)y-或低级亚链烯基桥，其中y是1-3，包括端点值，
-符号U、V、W、X、Y、Z表示碳原子，
并且包括落入式(I)的化合物的光学异构体，非对映异构体，多晶型物，对映异构体，水合物，可药用盐以及混合物。
22.权利要求21的方法，其中所述1-氨基环己烷衍生物是选自下述的1-氨基金刚烷或其衍生物之一：
1-氨基-3-苯基金刚烷、
1-氨基-甲基金刚烷、
1-氨基-3，5-二甲基金刚烷(美金刚)、
1-氨基-3-乙基金刚烷、
1-氨基-3-异丙基金刚烷、
1-氨基-3-正丁基金刚烷、
1-氨基-3，5-二乙基金刚烷、
1-氨基-3，5-二异丙基金刚烷、
1-氨基-3，5-二-正丁基金刚烷、
1-氨基-3-甲基-5-乙基金刚烷、
1-N-甲氨基-3，5-二甲基金刚烷、
1-N-乙氨基-3，5-二甲基金刚烷、
1-N-异丙基-氨基-3，5-二甲基金刚烷、
1-N，N-二甲基-氨基-3，5-二甲基金刚烷、
1-N-甲基-N-异丙基-氨基-3-甲基-5-乙基金刚烷、
1-氨基-3-丁基-5-苯基金刚烷、
1-氨基-3-戊基金刚烷、
1-氨基-3，5-二戊基金刚烷、
1-氨基-3-戊基-5-己基金刚烷、
1-氨基-3-戊基-5-环己基金刚烷、
1-氨基-3-戊基-5-苯基金刚烷、
1-氨基-3-己基金刚烷、
1-氨基-3，5-二己基金刚烷、
1-氨基-3-己基-5-环己基金刚烷、
1-氨基-3-己基-5-苯基金刚烷、
1-氨基-3-环己基金刚烷、
1-氨基-3，5-二环己基金刚烷、
1-氨基-3-环己基-5-苯基金刚烷、
1-氨基-3，5-二苯基金刚烷、
1-氨基-3，5，7-三甲基金刚烷、
1-氨基-3，5-二甲基-7-乙基金刚烷、
1-氨基-3，5-二乙基-7-甲基金刚烷、
1-N-吡咯烷子基和1-N-哌啶衍生物、
1-氨基-3-甲基-5-丙基金刚烷、
1-氨基-3-甲基-5-丁基金刚烷、
1-氨基-3-甲基-5-戊基金刚烷、
1-氨基-3-甲基-5-己基金刚烷、
1-氨基-3-甲基-5-环己基金刚烷、
1-氨基-3-甲基-5-苯基金刚烷、
1-氨基-3-乙基-5-丙基金刚烷、
1-氨基-3-乙基-5-丁基金刚烷、
1-氨基-3-乙基-5-戊基金刚烷、
1-氨基-3-乙基-5-己基金刚烷、
1-氨基-3-乙基-5-环己基金刚烷、
1-氨基-3-乙基-5-苯基金刚烷、
1-氨基-3-丙基-5-丁基金刚烷、
1-氨基-3-丙基-5-戊基金刚烷、
1-氨基-3-丙基-5-己基金刚烷、
1-氨基-3-丙基-5-环己基金刚烷、
1-氨基-3-丙基-5-苯基金刚烷、
1-氨基-3-丁基-5-戊基金刚烷、
1-氨基-3-丁基-5-己基金刚烷、
1-氨基-3-丁基-5-环己基金刚烷、
它们的光学异构体，非对映异构体，对映异构体，水合物，N-甲基、N，N-二甲基、N-乙基、N-丙基衍生物，可药用盐，及其混合物。
23.权利要求18的方法，其中所述1-氨基环己烷衍生物选自美金刚及其前药、盐、异构体、类似物和衍生物。
24.权利要求18的方法，其中所述1-氨基环己烷衍生物是美金刚。
25.权利要求18的方法，其中所述1-氨基环己烷衍生物是选自下述的1-氨基烷基环己烷衍生物：
1-氨基-1，3，5-三甲基环己烷、
1-氨基-1(反式)，3(反式)，5-三甲基环己烷、
1-氨基-1(顺式)，3(顺式)，5-三甲基环己烷、
1-氨基-1，3，3，5-四甲基环己烷、
1-氨基-1，3，3，5，5-五甲基环己烷(尼拉密山)、
1-氨基-1，3，5，5-四甲基-3-乙基环己烷、
1-氨基-1，5，5-三甲基-3，3-二乙基环己烷、
1-氨基-1，5，5-三甲基-顺式-3-乙基环己烷、
1-氨基-(1S，5S)顺式-3-乙基-1，5，5-三甲基环己烷、
1-氨基-1，5，5-三甲基-反式-3-乙基环己烷、
1-氨基-(1R，5S)反式-3-乙基-1，5，5-三甲基环己烷、
1-氨基-1-乙基-3，3，5，5-四甲基环己烷，
1-氨基-1-丙基-3，3，5，5-四甲基环己烷，
N-甲基-1-氨基-1，3，3，5，5-五甲基环己烷，
N-乙基-1-氨基-1，3，3，5，5-五甲基环己烷，
N-(1，3，3，5，5-五甲基环己基)吡咯烷、
3，3，5，5-四甲基环己基甲基胺、
1-氨基-1-丙基-3，3，5，5-四甲基环己烷、
1-氨基-1，3，3，5(反式)-四甲基环己烷(轴向氨基)、
3-丙基-1，3，5，5-四甲基环己基胺半水合物、
1-氨基-1，3，5，5-四甲基-3-乙基环己烷、
1-氨基-1，3，5-三甲基环己烷、
1-氨基-1，3-二甲基-3-丙基环己烷、
1-氨基-1，3(反式)，5(反式)-三甲基-3(顺式)-丙基环己烷、
1-氨基-1，3-二甲基-3-乙基环己烷、
1-氨基-1，3，3-三甲基环己烷、
顺式-3-乙基-1(反式)-3(反式)-5-三甲基环己胺、
1-氨基-1，3(反式)-二甲基环己烷、
1，3，3-三甲基-5，5-二丙基环己基胺、
1-氨基-1-甲基-3(反式)-丙基环己烷、
1-甲基-3(顺式)-丙基环己基胺、
1-氨基-1-甲基-3(反式)-乙基环己烷、
1-氨基-1，3，3-三甲基-5(顺式)-乙基环己烷、
1-氨基-1，3，3-三甲基-5(反式)-乙基环己烷、
顺式-3-丙基-1，5，5-三甲基环己基胺、
反式-3-丙基-1，5，5-三甲基环己基胺、
N-乙基-1，3，3，5，5-五甲基环己胺、
N-甲基-1-氨基-1，3，3，5，5-五甲基环己烷、
1-氨基-1-甲基环己烷、
N，N-二甲基-1-氨基-1，3，3，5，5-五甲基环己烷、
2-(3，3，5，5-四甲基环己基)乙基胺、
2-甲基-1-(3，3，5，5-四甲基环己基)丙基-2-胺、
2-(1，3，3，5，5-五甲基环己基-1)乙基胺半水合物、
N-(1，3，3，5，5-五甲基环己基)-吡咯烷、
1-氨基-1，3(反式)，5(反式)-三甲基环己烷、
1-氨基-1，3(顺式)，5(顺式)-三甲基环己烷、
1-氨基-(1R，SS)反式-5-乙基-1，3，3-三甲基环己烷、
1-氨基-(1S，SS)顺式-5-乙基-1，3，3-三甲基环己烷、
1-氨基-1，5，5-三甲基-3(顺式)-异丙基-环己烷、
1-氨基-1，5，5-三甲基-3(反式)-异丙基-环己烷、
1-氨基-1-甲基-3(顺式)-乙基-环己烷、
1-氨基-1-甲基-3(顺式)-甲基-环己烷、
1-氨基-5，5-二乙基-1，3，3-三甲基-环己烷、
1-氨基-1，3，3，5，5-五甲基环己烷、
1-氨基-1，5，5-三甲基-3，3-二乙基环己烷、
1-氨基-1-乙基-3，3，5，5-四甲基环己烷、
N-乙基-1-氨基-1，3，3，5，5-五甲基环己烷、
N-(1，3，5-三甲基环己基)吡咯烷或哌啶、
N-[1，3(反式)，5(反式)-三甲基环己基]吡咯烷或哌啶、
N-[1，3(顺式)，5(顺式)-三甲基环己基]吡咯烷或哌啶、
N-(1，3，3，5-四甲基环己基)吡咯烷或哌啶、
N-(1，3，3，5，5-五甲基环己基)吡咯烷或哌啶、
N-(1，3，5，5-四甲基-3-乙基环己基)吡咯烷或哌啶、
N-(1，5，5-三甲基-3，3-二乙基环己基)吡咯烷或哌啶、
N-(1，3，3-三甲基-顺式-5-乙基环己基)吡咯烷或哌啶、
N-[(1S，SS)顺式-5-乙基-1，3，3-三甲基环己基]吡咯烷或哌啶、
N-(1，3，3-三甲基-反式-5-乙基环己基)吡咯烷或哌啶、
N-[(1R，SS)反式-5-乙基，3，3-三甲基环己基]吡咯烷或哌啶、
N-(1-乙基-3，3，5，5-四甲基环己基)吡咯烷或哌啶、
N-(1-丙基-3，3，5，5-四甲基环己基)吡咯烷或哌啶、
N-(1，3，3，5，5-五甲基环己基)吡咯烷、
它们的光学异构体，非对映异构体，对映异构体，水合物，可药用盐，及其混合物。
26.权利要求18的方法，其中所述1-氨基环己烷衍生物选自尼拉密山及其前药、盐、异构体、类似物和衍生物。
27.权利要求18的方法，其中所述1-氨基环己烷衍生物是尼拉密山。
28.权利要求18的方法，其中所述1-氨基环己烷衍生物以治疗有效量施用。
29.权利要求18的方法，其中所述用量为1-100mg/天。
30.权利要求18的方法，其中所述用量为5-60mg/天。
31.权利要求18的方法，其中所述用量为10-40mg/天。
32.权利要求18的方法，其中所述1-氨基环己烷衍生物以有效降低哺乳动物大脑中的Aβ肽含量的量施用。
33.权利要求18的方法，其中所述Aβ水平降低至少10-70％。
34.权利要求18的方法，其中所述药物组合物进一步含有可药用载体或赋形剂。
35.权利要求18的方法，其中所述1-氨基环己烷衍生物与另一种1一氨基环己烷衍生物、乙酰胆碱酯酶抑制剂(AChEI)、分泌酶调节剂、或其组合同时或先后施用。
36.权利要求35的方法，其中所述乙酰胆碱酯酶抑制剂(AChEI)选自加兰他敏、他克林、多奈哌齐和利伐斯的明。
37.管理患有淀粉样病变或者具有发展为淀粉样病变风险的患者的方法，该方法包括：向所述患者提供可以降低Aβ水平量的1-氨基环己烷衍生物，并且检测所述患者体液中的Aβ水平，从而测定所述1-氨基环己烷衍生物的效力。
38.权利要求37的方法，该方法进一步包括反复检测体液中的Aβ水平。
39.权利要求37的方法，其中所述体液是血浆或血清。
40.权利要求37的方法，其中使用选自下述的测定法检测所述体液中的所述Aβ水平：放射性免疫测定法、ELISA(酶联免疫吸附测定法)、“三明治”免疫测定法、沉淀素反应、凝胶扩散沉淀素反应法、免疫扩散测定法、凝集反应测定法、补体结合测定法、免疫放射测定法、荧光免疫测定法、蛋白印迹法、蛋白质A免疫测定法和免疫电泳测定法、及其联合测定方法。
41.权利要求40的方法，其中所述测定法是ELISA。
42.权利要求37的方法，该方法进一步包括在提供所述1-氨基环己烷衍生物之前检测Aβ基线水平。
43.权利要求37的方法，该方法进一步包括根据所述Aβ水平调整所述1-氨基环己烷衍生物治疗。
44.1-氨基环己烷衍生物在制备用于降低患者体液或大脑中的Aβ水平的药物中的用途。
45.权利要求1的方法，其中所述1-氨基环己烷衍生物具有下式
Figure A2004800311080016C1
其中R*是-(CH2)n-(CR6R7)m-NR8R9
其中n+m＝0、1或2
其中R1-R7独立地选自氢和低级烷基(1-6C)，至少R1、R4和R5是低级烷基，并且其中R8和R9独立地选自氢和低级烷基(1-6C)或者一起表示低级亚烷基-(CH2)x-，其中x是2-5，包括端点值，以其对映异构体、光学异构体、水合物和可药用盐。
46.权利要求12的方法，其中所述1-氨基环己烷衍生物具有下式
Figure A2004800311080017C1
其中R*是-(CH2)n-(CR6R7)m-NR8R9
其中n+m＝0、1或2
其中R1-R7独立地选自氢和低级烷基(1-6C)，至少R1、R4和R5是低级烷基，同时其中R8和R9独立地选自氢和低级烷基(1-6C)或者一起表示低级亚烷基-(CH2)x-，其中x是2-5，包括端点值，及其对映异构体，光学异构体，水合物和可药用盐。
47.权利要求18的方法，其中所述1-氨基环己烷衍生物具有下式
其中R*是-(CH2)n-(CR6R7)m-NR8R9
其中n+m＝0、1或2
其中R1-R7独立地选自氢和低级烷基(1-6C)，至少R1、R4和R5是低级烷基，并且其中R8和R9独立地选自氢和低级烷基(1-6C)或者一起表示低级亚烷基-(CH2)x-，其中x是2-5，包括端点值，及其对映异构体，光学异构体，水合物和可药用盐。
48.权利要求37的方法，其中所述1-氨基环己烷衍生物具有下式
其中R*是-(CH2)n-(CR6R7)m-NR8R9
其中n+m＝0、1或2
其中R1-R7独立地选自氢和低级烷基(1-6C)，至少R1、R4和R5是低级烷基，并且其中R8和R9独立地选自氢和低级烷基(1-6C)或者一起表示低级亚烷基-(CH2)x-，其中x是2-5，包括端点值，及其对映异构体，光学异构体，水合物和可药用盐。
49.权利要求44的用途，其中所述1-氨基环己烷衍生物具有下式
其中R*是-(CH2)n-(CR6R7)m-NR8R9
其中n+m＝0、1或2
其中R1-R7独立地选自氢和低级烷基(1-6C)，至少R1、R4和R5是低级烷基，并且其中R8和R9独立地选自氢和低级烷基(1-6C)或者一起表示低级亚烷基-(CH2)x-，其中x是2-5，包括端点值，及其对映异构体，光学异构体，水合物和可药用盐。
50.权利要求1的方法，其中所述1-氨基环己烷衍生物具有下式
Figure A2004800311080018C3
其中R1和R2相同或不同，且表示氢或具有1-6个C原子的直链或支链烷基，或者与N联合表示具有5或6个环C原子的杂环基团；
其中R3和R4相同或不同，选自氢、具有1-6个C原子的直链或支链烷基、具有5或6个C原子的环烷基和苯基；
其中R5是氢或直链或支链C1-C6烷基；
或其可药用盐。
51.权利要求12的方法，其中所述1-氨基环己烷衍生物具有下式
Figure A2004800311080019C1
其中R1和R2相同或不同，且表示氢或具有1-6个C原子的直链或支链烷基，或者与N联合表示具有5或6个环C原子的杂环基团；
其中R3和R4相同或不同，选自氢、具有1-6个C原子的直链或支链烷基、具有5或6个C原子的环烷基和苯基；
其中R5是氢或直链或支链C1-C6烷基；
或其可药用盐。
52.权利要求18的方法，其中所述1-氨基环己烷衍生物具有下式
Figure A2004800311080019C2
其中R1和R2相同或不同，且表示氢或具有1-6个C原子的直链或支链烷基，或者与N联合表示具有5或6个环C原子的杂环基团；
其中R3和R4相同或不同，选自氢、具有1-6个C原子的直链或支链烷基、具有5或6个C原子的环烷基和苯基；
其中R5是氢或直链或支链C1-C6烷基；
或其可药用盐。
53.权利要求37的方法，其中所述1-氨基环己烷衍生物具有下式
Figure A2004800311080020C1
其中R1和R2相同或不同，且表示氢或具有1-6个C原子的直链或支链烷基，或者与N联合表示具有5或6个环C原子的杂环基团；
其中R3和R4相同或不同，选自氢、具有1-6个C原子的直链或支链烷基、具有5或6个C原子的环烷基和苯基；
其中R5是氢或直链或支链C1-C6烷基；
或其可药用盐。
54.权利要求44的用途，其中所述1-氨基环己烷衍生物具有下式
Figure A2004800311080020C2
其中R1和R2相同或不同，且表示氢或具有1-6个C原子的直链或支链烷基，或者与N联合表示具有5或6个环C原子的杂环基团；
其中R3和R4相同或不同，选自氢、具有1-6个C原子的直链或支链烷基、具有5或6个C原子的环烷基和苯基；
其中R5是氢或直链或支链C1-C6烷基；
或其可药用盐。
55.权利要求1的方法，其中所述1-氨基环己烷衍生物具有下式
其中R*是-(CH2)n-(CR6R7)m-NR8R9
其中n+m＝0、1或2
其中R1-R7独立地选自氢、直链或直链低级烷基(1-6C)、-CH2-和低级环烷基(1-6C)，至少R1、R4和R5是低级烷基或-CH2-，并且
其中R8和R9独立地选自氢、直链或支链低级烷基(1-6C)和低级环烷基(1-6C)，或者一起表示低级亚烷基-(CH2)x-，其中x是2-5，包括端点值，或者与N联合表示具有5或6个环C原子的杂环基团；
条件是当R1、R4和R5各自独立地是-CH2-时，
R1、R4和R5各自与单独的CRa基团键合形成桥，其中Ra选自氢、直链或直链低级烷基(1-6C)、环烷基(5-6C)和苯基；
R2选自氢、直链或支链低级烷基(1-6C)、环烷基(5-6C)和苯基；
R3是氢或直链或支链低级烷基(1-6C)；并且
R*是-(CH2)n-(CR6R7)m-NR8R9，其中n+m＝0，并且R8和R9相同或不同且表示氢或直链或支链低级烷基(1-6C)，或者与N联合表示具有5或6个环C原子的杂环基团；以及
其对映异构体，光学异构体，水合物和可药用盐。
56.权利要求12的方法，其中所述1-氨基环己烷衍生物具有下式
其中R*是-(CH2)n-(CR6R7)m-NR8R9
其中n+m＝0、1或2
其中R1-R7独立地选自氢、直链或直链低级烷基(1-6C)、-CH2-和低级环烷基(1-6C)，至少R1、R4和R5是低级烷基或-CH2-，并且
其中R8和R9独立地选自氢、直链或支链低级烷基(1-6C)和低级环烷基(1-6C)，或者一起表示低级亚烷基-(CH2)x-，其中x是2-5，包括端点值，或者与N联合表示具有5或6个环C原子的杂环基团；
条件是当R1、R4和R5各自独立地是-CH2-时，
R1、R4和R5各自与单独的CRa基团键合形成桥，其中Ra选自氢、直链或直链低级烷基(1-6C)、环烷基(5-6C)和苯基；
R2选自氢、直链或支链低级烷基(1-6C)、环烷基(5-6C)和苯基；
R3是氢或直链或支链低级烷基(1-6C)；并且
R*是-(CH2)n-(CR6R7)m-NR8R9，其中n+m＝0，并且R8和R9相同或不同且表示氢或直链或支链低级烷基(1-6C)，或者与N联合表示具有5或6个环C原子的杂环基团；以及
其对映异构体，光学异构体，水合物和可药用盐。
57.权利要求18的方法，其中所述1-氨基环己烷衍生物具有下式
Figure A2004800311080022C1
其中R*是-(CH2)n-(CR6R7)m-NR8R9
其中n+m＝0、1或2
其中R1-R7独立地选自氢、直链或直链低级烷基(1-6C)、-CH2-和低级环烷基(1-6C)，至少R1、R4和R5是低级烷基或-CH2-，并且
其中R8和R9独立地选自氢、直链或支链低级烷基(1-6C)和低级环烷基(1-6C)，或者一起表示低级亚烷基-(CH2)x-，其中x是2-5，包括端点值，或者与N联合表示具有5或6个环C原子的杂环基团；
条件是当R1、R4和R5各自独立地是-CH2-时，
R1、R4和R5各自与单独的CRa基团键合形成桥，其中Ra选自氢、直链或直链低级烷基(1-6C)、环烷基(5-6C)和苯基；
R2选自氢、直链或支链低级烷基(1-6C)、环烷基(5-6C)和苯基；
R3是氢或直链或支链低级烷基(1-6C)；并且
R*是-(CH2)n-(CR6R7)m-NR8R9，其中n+m＝0，并且R8和R9相同或不同且表示氢或直链或支链低级烷基(1-6C)，或者与N联合表示具有5或6个环C原子的杂环基团；以及
其对映异构体，光学异构体，水合物和可药用盐。
58.权利要求37的方法，其中所述1-氨基环己烷衍生物具有下式
Figure A2004800311080023C1
其中R*是-(CH2)n-(CR6R7)m-NR8R9
其中n+m＝0、1或2
其中R1-R7独立地选自氢、直链或直链低级烷基(1-6C)、-CH2-和低级环烷基(1-6C)，至少R1、R4和R5是低级烷基或-CH2-，并且
其中R8和R9独立地选自氢、直链或支链低级烷基(1-6C)和低级环烷基(1-6C)，或者一起表示低级亚烷基-(CH2)x-，其中x是2-5，包括端点值，或者与N联合表示具有5或6个环C原子的杂环基团；
条件是当R1、R4和R5各自独立地是-CH2-时，
R1、R4和R5各自与单独的CRa基团键合形成桥，其中Ra选自氢、直链或直链低级烷基(1-6C)、环烷基(5-6C)和苯基；
R2选自氢、直链或支链低级烷基(1-6C)、环烷基(5-6C)和苯基；
R3是氢或直链或支链低级烷基(1-6C)；并且
R*是-(CH2)n-(CR6R7)m-NR8R9，其中n+m＝0，并且R8和R9相同或不同且表示氢或直链或支链低级烷基(1-6C)，或者与N联合表示具有5或6个环C原子的杂环基团；以及
其对映异构体，光学异构体，水合物和可药用盐。
59.权利要求44的用途，其中所述1-氨基环己烷衍生物具有下式
Figure A2004800311080024C1
其中R*是-(CH2)n-(CR6R7)m-NR8R9
其中n+m＝0、1或2
其中R1-R7独立地选自氢、直链或直链低级烷基(1-6C)、-CH2-和低级环烷基(1-6C)，至少R1、R4和R5是低级烷基或-CH2-，并且
其中R8和R9独立地选自氢、直链或支链低级烷基(1-6C)和低级环烷基(1-6C)，或者一起表示低级亚烷基-(CH2)x-，其中x是2-5，包括端点值，或者与N联合表示具有5或6个环C原子的杂环基团；
条件是当R1、R4和R5各自独立地是-CH2-时，
R1、R4和R5各自与单独的CRa基团键合形成桥，其中Ra选自氢、直链或直链低级烷基(1-6C)、环烷基(5-6C)和苯基；
R2选自氢、直链或支链低级烷基(1-6C)、环烷基(5-6C)和苯基；
R3是氢或直链或支链低级烷基(1-6C)；并且
R*是-(CH2)n-(CR6R7)m-NR8R9，其中n+m＝0，并且R8和R9相同或不同且表示氢或直链或支链低级烷基(1-6C)，或者与N联合表示具有5或6个环C原子的杂环基团；以及
其对映异构体，光学异构体，水合物和可药用盐。
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