EA008863B1

EA008863B1 - Комбинированная терапия с использованием производных 1-аминоциклогексана и ингибиторов ацетилхолинэстеразы

Info

Publication number: EA008863B1
Application number: EA200500699A
Authority: EA
Inventors: Ханс-Йорг Мебиус
Original assignee: Мерц Фарма Гмбх Унд Ко. Кгаа
Priority date: 2002-10-24
Filing date: 2003-10-23
Publication date: 2007-08-31
Also published as: TW200418446A; EA200500699A1; US20140371260A1; EP1556019A2; US20100227852A1; US20160136144A1; EP2260839A2; WO2004037234A3; GEP20094759B; CA2502432A1; EP2260839A3; ZA200503204B; JP2011246491A; AU2003274353A1; US20210169864A1; CN1720035A; KR100777904B1; WO2004037234A2; AU2003274353B2; NO20052462D0

Abstract

Лекарственная комбинированная терапия, применимая в лечении деменции, связанной с нарушениями центральной нервной системы, например для задержки появления или прогрессирования болезни Альцгеймера, цереброваскулярного заболевания или синдрома Дауна, включает комбинацию производного 1-аминоциклогексана, такого как мемантин или нерамексан, и ингибитора ацетилхолинэстеразы, такого как галантамин, такрин, донепезил или ривастигмин.

Description

Область техники, к которой относится изобретение

Данное изобретение относится к комбинациям производных 1-аминоциклогексана и ингибиторов ацетилхолинэстеразы и их применению в лечении деменции.

Предшествующий уровень техники

Деменция является серьезным нарушением, поражающим 10% (что много) индивидуумов старше 65 лет и более чем 24% индивидуумов старше 85 лет (НоГтап с1 а1., ΙπΙ. 1. Ер1бетю1., 1991, 20:736-748; 1огт апб Ло11еу, №ито1оду, 1998, 51:728-733; ЬоЬо е1 а1., Ыеиго1оду, 2000, 54 (8ирр1. 5):84-89). Болезнь Альцгеймера (АО) является все более преобладающей формой нейродегенерации, которая ответственна за приблизительно 50-60% всех случаев деменции среди людей в возрасте старше 65 лет. АО характеризуется клинически прогрессирующей потерей памяти, познания, мышления, здравого смысла и эмоциональной стабильности, что постепенно приводит к полному умственному расстройству и в конечном счете к смерти. АО является прогрессирующим нарушением со средней продолжительностью приблизительно 8,5 лет между появлением клинических симптомов и смертью. Считается, что АО представляет собой четвертую из наиболее распространенных медицинских причин смерти и поражает приблизительно 2-3 млн людей в Соединенных Штатах. Преобладание АО удваивается каждые 5 лет после возраста 65 лет (№шопа1 1пкШи1е оп Адтд: Ргеуа1епсе апб сок1к оГ А1х11еппег'к б1кеаке. Ргодгекк Керой оп А1хНеипег'к О1кеаке. ΝΙΗ РиЫюайоп Ыо. 993616, ЫоуетЬет 1998; РоМкоккт е1 а1., №ито1оду, 2001, 56:16901696). АО поражает в настоящее время приблизительно 15 млн людей по всему миру (в том числе все расы и этнические группы), и вследствие относительного увеличения пожилых людей в населении ее широкое распространение должно, по-видимому, увеличиться на протяжении следующих 2-3 десятилетий. В настоящее время АО является неизлечимой. В настоящее время неизвестно лечение, которое эффективно предупреждает АО или обращает ее симптомы и течение.

АО связана со смертью пирамидальных нейронов коры головного мозга и потерей нейронных синапсов в участках мозга, связанных с высшими умственными функциями (Етапак е1 а1., 1999, 1. №ито1. Ыеитокитд. РкусЫайу, 66:137-147). Головной мозг индивидуумов с АО проявляет характерные повреждения, называемые сенильными (или амилоидными) бляшками, амилоидную ангиопатию (отложения амилоида в кровеносных сосудах) и нейрофибриллярные сплетения. Меньшие количества этих повреждений в более ограниченном анатомическом распределении найдены также в мозге большинства стареющих людей, которые не имеют клинической АО. Амилоидные бляшки и амилоидная ангиопатия отличают также головной мозг индивидуумов с трисомией 21 (синдромом Дауна) и наследственным внутримозговым кровоизлиянием с амилоидозом голландского типа (НСНАА-О). В настоящее время окончательный диагноз АО обычно требует наблюдения вышеупомянутых повреждений в ткани головного мозга пациентов, которые умерли от этого заболевания или, в редких случаях, в небольших пробах биопсии из ткани головного мозга, взятых во время инвазивной нейрохирургической процедуры.

АО ассоциирована с абсолютной потерей холинергических нейронов в базальном ядре Мейнерта (Репу е1 а1., Вг. Меб., 1978, 2:1456-1459; Сеи1а апб Меки1ат, СйоНпетдю кукЮтк апб ге1а1еб пеигора11ю1одюа1 ртебйесбоп райетпк ш А1х11еппег б1кеаке. 1п: А1х11еипег'к б1кеаке. Теггу е1 а1. ебк.; Ые\у Уогк; Кауеп Ргекк; 1994, рр. 263-291). Передача сигнала в этих нейронах опосредована внеклеточно высвобождаемым нейротрансмиттером ацетилхолином (АС1 ). Выяснение роли дисфункции системы передачи сигнала АС1 в когнитивных расстройствах, связанных с АО, а также рядом других неврологических и психиатрических нарушений, в том числе болезни Паркинсона, шизофрении, эпилепсии, депрессии, навязчивых компульсивных расстройствах и биполярных расстройствах, привели к развитию лекарственных средств, которые селективно усиливают холинергическую функцию ингибированием холинергического катаболического фермента ацетилхолинэстеразы (АС1Е), который разрушает АС1 после его секреции в синаптические клетки (СоГГ апб Соу1е, Ат. 1. РкусЫайу, 2001, 158:1367-1377). В настоящее время наиболее широко используемыми клинически ингибиторами ацетилхолинэстеразы (АС1Е1) являются такрин (ТНА; гидрохлорид 1,2,3,4-тетрагидро-9-аминоакридина), ОЕР (диизопропилфторфосфат), физостигмин, донепезил, галантамин и ривастигмин. Многие из АС1Е1 селективно ингибируют АС1Е, но агенты, которые нацелены также на бутирилхолинэстеразу (ВиС1Е), могут обеспечивать дополнительные преимущества по мере прогрессирования АО, и регуляция АС1 может становиться все более зависимой от ВиС1Е. Двойное ингибирование может также способствовать замедлению образования амилоидогенных соединений (Ва11агб, Еиг. Ыеиго1., 2002, 47:6470).

Донепезил ([(К,8)-1-бензил-4-[(5,6-диметокси-1-инданон)-2-ил]метилпиперидин гидрохлорид]; АК1СЕРТ, ранее Е-2020) является обратимым, неконкурентным АС1Е1 пилеридинового типа, который является селективным в отношении АС1Е, а не ВиС1Е (8ид1то1о е1 а1., Сигг. Меб. С1ет., 2000, 7:303-39). Ооо1еу е1 а1., (Огидк Адтд, 2000, 16:199-226) показали, что донепезил, вводимый при дозах 5 и 10 мг/день, значимо улучшал когнитивную функцию и общую клиническую функцию в сравнении с плацебо в краткосрочных испытаниях (14-30 недель) у 161-818 пациентов со слабой умеренной АО (см. также Кодегк е1 а1., Агс1. ΙπΙ. Меб., 1998; 158:1021-1031). Результаты относительно долгосрочной эффективности, полученные в этих исследованиях, предполагают, что улучшения когнитивной функции, общей деятельности или активности повседневной жизни (АОЬ) поддерживаются в течение приблизительно 21-81 недель и что донепезил обычно хорошо переносится, причем большинство вредных побоч

- 1 008863 ных эффектов являются слабыми и преходящими.

Галантамин (КЕМ ШУБ) является обратимым, конкурентным третичным алкалоидным ЛС11Е1. который является селективным в отношении АС11Е. а не ВиСНЕ. Как показано 8соК е! а1. (Эгидк, 2000; 60:1095-122), 285-978 пациентов со слабой - умеренной АО, получавших галантамин в дозах 16 или 24 мг/день, достигали значимых улучшений в когнитивных и общих симптомах в сравнении с реципиентами плацебо в испытаниях с продолжительностью 3-6 месяцев. Вредные побочные события, ассоциированные с галантамином в этих исследованиях, были обычно слабыми умеренными по интенсивности и преходящими. Сходные результаты получали Соу1е е! а1., (Вю1. РкусЫайу, 2001, 49:289-99).

Ривастигмин (ЕХЕЬОЫ) является двойным ингибитором АСНЕ и ВиСНЕ, который продемонстрировал преимущества по всему спектру тяжести ЛЭ (Ва11агб, Еиг. №ито1., 2002, 47:64-70). В отличие от такрина и донепезила, которые классифицируются как кратковременно действующие и обратимые агенты, ривастигмин является промежуточно-действующим или псевдонеобратимым агентом, который ингибирует АСНЕ в течение времени до 10 ч. Преклинические биохимические испытания показали, что ривастигмин имеет селективность в отношении центральной нервной системы (ЦНС) относительно периферического ингибирования. Было показано, что ривастигмин снижает интенсивность нарушения памяти у крыс с повреждениями переднего мозга; и в двух больших многоцентровых клинических испытаниях (всего 1324 пациента) при дозах 6-12 мг/день он превосходил плацебо на трех шкалах когнитивной способности и функционирования Цапп, РйаттасоШетару, 2000, 20:1-12).

Предполагали также, что избыточная или патологическая активация рецепторов глутамата, в частности рецепторов, которые селективно активируются Ν-метил-Э-аспартатом (ЦМОА), также участвует в процессах, которые лежат в основе дегенерации холинергических клеток в головном мозге пациентов АО (Стеепатуге е! а1., №шоЫю1. Адтд, 1989, 10:593-602; ЕтапсЦ е! а1., 1. №игосйет., 1993, 60:263-291; Ь1 е! а1., 1. №итора!йо1. Ехр. №ито1., 1997, 56:901-911; XVи апб Котап, №игогероп, 1995, 6:2409-2413). Очень хорошо доказано, что NМ^А-рецеπтор является определяющим для нескольких физиологических процессов синаптической пластичности, например памяти и научения (СоШипбде апб Бтдет, Тгепбк Рйагтасо1. 8сЕ, 1990, 11: 290-296). Функционирование NМ^А-рецеπтора требует активации как сайта связывания агониста для глутамата, так и аллостерического сайта коагониста, который активируется глицином и Ό-серином (К1ескпег апб Птд1ебте, 8с1епсе, 1988, 241:835-837; МсВаш е! а1., Мо1. Рйаттасок, 1989, 36:556-565; Иапу^ апб Рагкопк, Рйагтасо1. Кеу., 1998, 50:597-664). Было показано, что активация Ό-серинчувствительного модуляторного сайта на NМ^А-рецепторе является необходимым условием для индукции долгосрочного потенциирования (ВакЫт е! а1., №итокс1 Ье!!., 1990, 108:261-266), корреляции ш уйто памяти и научения. Кроме того, было показано, что дефициты познания, ассоциированные с психиатрическими нарушениями, такими как шизофрения, ослабляются пероральным введением Ό-серина (Тка1 е! а1., Вю1 Ркусй1а!гу, 1948, 44:1081-1089). Было обнаружено, что даже хотя активация NМ^А-рецептора является критической для научения, неконкурентные антагонисты NМ^А-рецептора умеренной аффинности корректируют/обращают когнитивное нарушение как в человеке с АО, так и в мышиной модели деменции Альцгеймера. Пока избыточная глутаматергическая функция способствует АО, эффективный фармакологический антагонизм NМ^А-рецептора, в частности, блокаторами открытых каналов, может быть способным замедлять прогрессирование АО (Рагкопк е! а1., №игорйагтасо1., 1999, 38: 735-767; Эапук/ апб МоЫшк, 2002, Акйетет'к Э^еаке №игорго!ес1юп-Тйегареи!1с Ро!епйа1 оГ 1опо1тор1с С1и!ата!е Кесер!ог Ап!адошк!к апб Моби1а!огк, 1п: Тйегареийс Ро!епйа1 оГ 1опо1тор1с С1и!ата!е Кесер!ог Ап1адошк!к апб Моби1а!огк, Ьобде е! а1., ебк., 2002, ш ргекк, Е.Р. Стайат РиЫШЫпд Со., Νον Уотк).

Потенциально антагонисты NМ^Л-рецеπторов имеют широкий диапазон терапевтических применений при многочисленных нарушениях ЦНС, таких как острая нейродегенерация (например, связанная с инсультом и травмой), хроническая нейродегенерация (например, связанная в болезнью Паркинсона, АО, болезнью Гентингтона (Хантингтона) и боковым амиотрофическим склерозом [АБЗ]), эпилепсия, наркотическая зависимость, депрессия, тревожность и хроническая боль (в отношении обзоров см.: Рагкопк е! а1., Эгид №\тк Регкрес!., 1998, 11:523-533; Рагкопк е! а1., 1999, кирга; 1еп!ксй апб Ко!й, №иторкусйорйагтасо1оду, 1999, 20: 201-205; ОоЫ1е, Тйетар1е, 1995, 50: 319-337). Функциональное ингибирование NМ^Л-рецеπторов может быть достигнуто посредством действий в различных сайтах узнавания в комплексе NМ^Л-рецептора, таких как: сайт первичного трансмиттера (конкурентный), сайт фенциклидина, расположенный в катионном канале (неконкурентный), модуляторный сайт полиамина и не чувствительный к стрихнину, коагонистический сайт глицина (глицина В) (Рагкопк е! а1., 1999, кирга). Поскольку NМ^Л-рецепторы играют также решающую роль в различных формах синаптической пластичности, таких как формы, участвующие в обучении и памяти (см., например, СоШпдпбде апб 8шдег, Тгепбк Рйагтасо1. 8ск, 1990, 11: 290-296), нейропротективные агенты, обладающие высокой аффинностью в отношении NМ^Л-рецепторов, нарушают, по-видимому, нормальную синаптическую трансмиссию нервного импульса и посредством этого вызывают многочисленные побочные эффекты. Действительно, многие антагонисты NМ^Л-рецепторов, идентифицированные до сих пор, вызывают в высокой степени нежелательные побочные эффекты при дозах, находящихся в их предположительном терапевтическом диапазоне. Таким образом, клинические испытания не смогли подтвердить хорошую терапевтическую

- 2 008863 применимость вследствие многочисленных побочных эффектов для таких антагонистов ΝΜΌΑрецепторов, как дизоцилпин ((+)МК-801; малеат (+)-5-метил-10,11-дигидро-5Н-дибензоциклогептен5,10-имина), церестат (ΟΝ8-1102), ликостинел (АСЕА 1021), селфотел (СС8-19755) и Ό-СРР-еп (Ьерр1к, Ерйеря1а, 1998, 39 (8ирр1 5):26; 8уетк)отяйо!1п· е! а1., Ерйеря1а, 1993, 34:493-521; 8СК1Р 2229/30, 1997, р. 21). Таким образом, задачей в данной области было развитие антагонистов ΝΜΌΑ-рецепторов, которые предотвращают патологическую активацию ΝΜΌΑ-рецепторов, но делают возможной их физиологическиую активность.

Мемантин (1-амино-3,5-диметиладамантин) является аналогом 1-аминоциклогексана (описанный, например, в патентах США № 4122193; 4273774; 5061703). Нерамексан (1-амино-1,3,3,5,5пентаметилциклогексан) является также производным 1-аминоциклогексана (описанный, например, в патенте США № 6034134). Мемантин, нерамексан, а также некоторые другие 1-аминоалкилциклогексаны являются системно активными неконкурентными антагонистами ΝΜΌΑ-рецепторов, имеющими умеренную аффинность в отношении этого рецептора. Они проявляют свойства, сильно зависимые от разности потенциалов, и быструю кинетику блокирования/разблокирования (Рагяопя е! а1., 1999, яирга; Оойе1теует е! а1., Аг/пепп-Еогясй/Опщ Кея., 1992, 42:904-913; ХУшЫай е! а1., 1п!. I. СепаГ РяусЫайу, 1999, 14:135-146; Кода\\'якг Атшо Ас1йя, 2000, 19:133-49; Оапуях е! а1., Сигг. Ркагт. Оея., 2002, 8:835-43; Лтдепяопя е! а1., Еиг. I. Мей. Скет., 2000, 35:555-565). Эти соединения диссоциируют из каналов ΝΜΌΑ-рецепторов гораздо более быстро, чем высокоаффинные антагонисты ΝΜΌΑрецепторов, такие как (+)МК-801, и аттенуируют разрушение нейронной пластичности, вызываемой тонической сверхстимуляцией ΝΜΌΑ-рецепторов, вызывая, возможно, увеличение отношения сигналшум. Вследствие их относительно низкой аффинности в отношении этого рецептора, сильной зависимости от напряжения и быстрой кинетики разблокирования рецептора, эти соединения, по существу, лишены побочных действий других антагонистов ΝΜΌΑ-рецепторов при дозах, находящихся в терапевтическом диапазоне (КотпкиЬет е! а1., Еиг. 1. Ркагтасо1., 1991, 206:297-311). Действительно, мемантин применялся клинически в течение более 15 лет, при этом обнаруживалась хорошая переносимость подвергнутых лечению пациентов, число которых превысило 200 тыс. (Рагяопя е! а1., 1999, яирга).

Было сделано предположение, что мемантин, нерамексан, а также другие 1-аминоалкилциклогексаны являются полезными в ослаблении различных прогрессирующих нейродегенеративных нарушениях, таких как деменция в ΑΌ, болезнь Паркинсона и мышечная спастичность (см., например, патенты США № 5061703; 5614560 и 6034134; Рагяопя е! а1., 1999, яирга; ΜоЬ^ия, ΑΌΑΌ, 1999, 13:8172178; Оапуях е! а1., №ито!ох. Кея., 2000, 2:85-97; ХУшЫай апй РотШя, 1п!. I. Сепа1г. РяусЫайу, 1999, 14:135146; Оойе1теует е! а1., 1992, яирга; Оапуях е! а1., Сигг. Ркагт. Оея., 2002, 8:835-843; Лтдепяопя е! а1., Еиг. I. Μей. Скет., 2000, 35:555-565). Эти заболевания происходят из нарушений глутаматергической трансмиссии, т.е. избыточного вхождения кальция через каналы ΝΜΌΑ-рецептора, приводящего к деструкции клеток головного мозга в специфических участках головного мозга (Ско1, 1. №игоЬю1., 23: 1261-1276, 1992; Ко!ктап апй О1пеу, Тгепйя №игоясг, 10: 299, 1987; Кетр е! а1., Тгепйя Ркагтасо1. 8ск, 8: 414, 1987). Было показано, что продолжительное лечение взрослых крыс мемантином усиливает образование долговременного потенциирования гиппокампа, увеличение продолжительности синаптической пластичности, улучшает способности пространственной памяти и обращает нарушение памяти, вызываемое агонистами ΝΜΌΑ-рецепторов (Вагпея е! а1., Еиг. 1. Ыеигояск, 1996; 8:65-571; 2а)асхко\\'як| е! а1., Неигоркагт., 1997, 36:961-971). Было сделано предположение, что производные 1-аминоциклогексана, и в частности мемантин, также применимы в лечении деменции при СПИДе (патент США № 5506231), невропатической боли (патент США № 5334618), церебральной ишемии (патент США № 5061703), эпилепсии, глаукомы, печеночной энцефалопатии, рассеянного склероза, инсульта и поздней дискинезии (Рагяопя е! а1., 1999, яирга). Кроме того, было показано, что относительно высокие дозы мемантина и нерамексана селективно блокируют термическую гипералгезию и механическую аллодинию в некоторых моделях хронической и невропатической боли без видимых воздействий на двигательные рефлексы. Было также показано, что производные 1-аминоциклогексана имеют иммуномодуляторную и противомалярийную активности, активность против вируса Вогпа и активность против гепатита С (см., например, патент США № 6034134 и цитируемые в нем ссылки).

Было сделано предположение, что производные 1-аминоциклогексана, такие как мемантин и нерамексан (см. заявку на патент США № 09/597102 и соответствующую ей международную заявку РСТ ЕР 01/06964, опубликованную в виде \¥О 01/98253 27 декабря 2001 г.; патент США № 6034134), функционируют через неопосредованные ΝΜΌΑ пути. Так, было показано, что мемантин ингибирует 5НТ3опосредованный ток (в нативных клетках И1Е-115 и гетерологичных клетках НЕК-293) и ΝΜΌΑрецептор-опосредованные токи (в срезах гиппокампа крысы) с приблизительно равной аффинностью (Рагяопя е! а1., 1999, яирга, Каттея е! а1., 2001, Ыеигояск Ье!!., 306:81-84). Известно, что антагонисты 5НТ3-рецепторов улучшают обучение и память у животных (Сатк е! а1., 1997, Векау. №аш Кея., 82:185194; Вехшк апй 8!аиЬ11, 1997, I. Ыеигоркуяюк, 77:517-521).

Как описано выше, потеря холинергических нейронов в базальном переднем мозге, которая лежит в основе различных аспектов деменции, может происходить из нарушения Αск-опосредованной передачи сигнала и/или избыточной активации ΝΜΌΑ-рецепторов. Накапливающиеся экспериментальные доказа

- 3 008863 тельства указывают на то, что АСЬ-опосредованная и ΝΜΟΑ-рецептор-опосредованная системы передачи сигнала являются взаимосвязанными, т.е. блокада ΝΜΌΑ-рецепторов может увеличивать внеклеточное высвобождение АСЬ. Так, было показано, что системное введение антагониста ΝΜΌΑ-рецептора, (+)МК-801 производит зависимое от дозы увеличение внеклеточного высвобождения АСЬ в теменной и лобной коре головного мозга (Накеда^а с1 а1., 1993, №игоксг ЬсИ.. 150-53-56; Асщак е! а1., 1998, №итокс1епсе, 85:73-83). Подобным образом было показано, что интрацеребровентрикулярное введение (Ес.у.) другого антагониста ХМЭА-рецептора, СРР увеличивает высвобождение АСЬ в теменной коре головного мозга крысы и гиппокампе (Сюуапшш е! а1., 1994, №игосЬст. 1п!1., 25:23-26; Сюуапшш е! а1., 1994, 1. №игоксг, 14:1358-1365). Было сделано предположение, что глутамат, действуя через NΜ^Α-рецепторы на ГАМК-эргические и норадренергические нейроны, поддерживает тонический ингибиторный контроль над холинергическими нейронами, холинергическими нейронами базального переднего мозга, выступающими в кору головного мозга (К1т е! а1., 1999, Мо1. РкусЫа!., 4:344-352). На основе этой цепи, кроме возможного блокирования сверхактивации ХМЭА, можно было бы ожидать, что антагонист ХМЭАрецептора уменьшает ингибирующий контроль ГАМК на АСЬ-нейроны, приводя к увеличеннию высвобождения АСЬ в коре головного мозга.

Хотя лекарственные терапии были предназначены для повышения холинергической функции либо ингибированием АСЬЕ (например, с использованием галантамина, такрина, донепезила или ривастигмина), либо аттенуированием функции ХМЭА-рецепторов (например, с использованием производных 1-аминоциклогексана, таких как мемантин или нерамексан), не было выяснено или не предполагалось, что комбинация этих двух терапевтических подходов может быть даже более полезной в замедлении прогрессирования деменции (например, связанной с АО).

Напротив, ряд исследовательских групп опубликовали результаты, указывающие на то, что мемантин мог бы потенциально элиминировать полезные эффекты, обеспечиваемые АС11ЕЕ Так, сообщалось, что мемантин может аттенуировать ингибирование АСЬЕ обратимыми АС11Е1 карбофураном (Спр1а е! а1., 1. Тох1со1. Епуйоп. Н1!Ь., 1989, 28:111-122) и алдикарбом (Сир1а е! а1., Эгид Όον. Кек., 1991, 24:329341) и необратимым АС11Е1 соманом (Мс1еап е! а1., Тох1со1. Арр1. РЬагтасо1., 1992, 112:95-103).

Автор по данному изобретению понял и впервые продемонстрировал, что клиническая комбинация производного 1-аминоциклогексана, такого как мемантин или нерамексан, с АСЬЕ1, таким как галантамин, такрин, донепезил или ривастигмин, является неожиданно ценным фармакотерапевтическим подходом к деменции. Автор по данному изобретению высказал гипотезу и продемонстрировал, что при введении в комбинации субъектам с АО эффекты производных 1-аминоциклогексана и АС11Е1 могут быть неожиданно полезными и, по меньшей мере, на протяжении некоторого периода времени приводят к неожиданному сверхсуммарному эффекту облегчения симптомов, проявляющемуся обратным развитием симптомов и, таким образом, могут быть особенно полезными в лечении деменции.

Краткое описание фигур

Фиг. 1 показывает анализ Батареи тестов тяжелого нарушения познавательной способности, демонстрирующий превосходную эффективность комбинированного лечения мемантином/донепезилом в сравнении с одним донепезилом. Изменение от базовой линии (фона) до конечной точки (ЬОСЕ): среднее изменение Ь8 (8Е) равно -2,5 (0,69) для группы плацебо и 0,9 (0,67) для группы мемантина; величина р<0,001.

Фиг. 2 показывает оценку повседневных функций с использованием опросника кооперированного исследования болезни Альгеймера - повседневной жизнедеятельности (АОСЗ-АПЬ), демонстрирующую превосходную эффективность комбинированного лечения мемантином/донепезилом в сравнении с одним донепезилом. Изменение от базовой линии (фона) до конечной точки (10СЕ): среднее изменение Ь8 (ЗЕ) равно -3,4 (0,51) для группы плацебо и 2,0 (0,50) для группы мемантина; величина р<0,028.

Фиг. 3 показывает общую (глобальную) оценку впечатления об изменении, которое основано на интервью врача в отношении версии плюс, (С1В1С-Р1ик), демонстрирующую превосходную эффективность комбинированного лечения мемантином/донепезилом в сравнении с одним донепезилом. Изменение от базовой линии (фона) до конечной точки (ЬОСЕ): среднее изменение Ь8 (8Ό) равно 4,7 (1,05) для группы плацебо и 4,4 (1,05) для группы мемантина; величина р<0,027.

Сущность изобретения

Данное изобретение включает новую комбинацию лекарственных средств, полезную для лечения, предупреждения, остановки, задержки появления и/или уменьшения риска развития деменции, связанной с нарушением центральной нервной системы (ЦНС) у млекопитающего. В другом аспекте, данное изобретение включает способ выполнения одного или более из предыдущих действий, предусматривающий введение указанному млекопитающему производного 1-аминоциклогексана и ингибитора ацетилхолинэстеразы (АСЬЕ1) в количествах, эффективных для этой цели. В конкретном варианте осуществления производным 1-аминоциклогексана, применимым в комбинированной терапии по данному изобретению, является мемантин или нерамексан, а ингибитором ацетилхолинэстеразы (АСЬЕ1) - галантамин, такрин, донепезил, ривастигмин, гуперзин А, занапезил, ганстигмин, фенсерин, фенетилнорцимсерин (ΡΒΝΟ), цимсерин, тиацимсерин, 8РН 1317 (галантамин плюс), ЕК 127528, КЗ 1259 или Е3796. Предпочтительно млекопитающим является человек, а нарушением ЦНС - болезнь Альцгеймера (АО),

- 4 008863 цереброваскулярное заболевание (УаО) или синдром Дауна. В более конкретном варианте осуществления данное изобретение включает в себя способ задержки когнитивного расстройства или деменции, или уменьшения риска дополнительного когнитивного ухудшения или расстройства, или остановки, или обращения, или уменьшения когнитивного ухудшения или расстройства, происходящего в результате деменции. Таким образом, одной из задач по данному изобретению является введение вышеописанной комбинации субъектам-людям, у которых либо еще не обнаружены клинические симптомы когнитивного расстройства или АО, но которые имеют риск развития АО (например, вследствие того, что они являются гомозиготными или гетерозиготными мутантами в изоформе 4 аполипопротеина Е; см. также генетический скрининг и клинический анализ, описанные в Соа1с. 1991, Ыа1иге, 349:704-706), или индивидуумам, у которых уже могут быть обнаружены сипмтомы умеренного когнитивного расстройства, или могут иметь риск такого нарушения (например, индивидуумам, имеющим повышенные уровни βамилоидного пептида [βАР], как описано ниже в примере 2, см. также цитированные в указанной работе ссылки). Определением комбинации, содержащей производное 1-аминоциклогексана и АСИЕ1, данное изобретение представляет композиции и способы для уменьшения риска развития ΑΌ или задержки появления ΑΌ у таких индивидуумов. Кроме того, как описано здесь, такая комбинированная терапия будет останавливать или уменьшать скорость дальнейшего когнитивного ухудшения и на протяжении некоторого периода времени обращать когнитивное ухудшение, как измерено с использованием по меньшей мере одного маркера или способа.

Другой задачей по данному изобретению является предоставление вышеописанной комбинации лицам, которые уже имеют клинические симптомы когнитивного расстройства или клинически проявляют АО. Предоставлением комбинированной терапии, предусматривающей введение производного 1-аминоциклогексана и АСИЕ1, данное изобретение обеспечивает композиции и способы для остановки или замедления прогрессирования АО у таких лиц и на протяжении некоторого периода времени обращения ухудшения по меньшей мере в одном маркере или одном симптоме АО у таких лиц. Примерами таких симптомов или маркеров является оценки в баллах АОЬ, 8ΙΒ или С1В1С.

Как описано здесь, предпочтительно, производное 1-аминоциклогексана и АС11Е1 вводят вместе, наиболее предпочтительно, одновременно и, даже еще более предпочтительно, в одной композиции. Предпочтительно, эти лекарственные средства вводят в терапевтически эффективных количествах, которые составляют 1-200 мг/день для каждого лекарственного средства. Наиболее предпочтительно, АС11Е1 будет вводиться в количестве 1-40 мг/день и, в частности, 5-24 мг/день. Наиболее предпочтительно, производное 1-аминоциклогексана будет вводиться в количестве 50-60 мг/день и, в частности, 10-40 мг/день.

Здесь включены также фармацевтические композиции, содержащие терапевтически эффективные количества производного 1-аминоциклогексана и АСНЕ1, а также, необязательно, по меньшей мере один носитель или эксципиент (фармацевтически приемлемые). Кроме того, включены способы приготовления таких композиций, предусматривающие смешивание каждого активного ингредиента с фармацевтически приемлемым носителем или эксципиентом. Включены также наборы, содержащие первую композицию, содержащую производное 1-аминоциклогексана, в первом количестве, и вторую композицию, содержащую АСИЕ1, во втором количестве, причем указанные количества в комбинации являются терапевтически эффективными для лечения деменции, связанной с нарушением ЦНС. В предпочтительном варианте количество одного или другого активного ингредиента или обоих является субоптимальным или субпороговым. В другом предпочтительном варианте осуществления количество каждого ингредиента является достаточным для вызывания обращения по меньшей мере одного симптома или маркера при совместном введении этих двух активных ингредиентов.

Подробное описание изобретения

Комбинация по изобретению

Как указано выше, в одном аспекте данное изобретение включает в себя новую комбинацию лекарственных средств, применимую для лечения, предупреждения, остановки, задержки появления и/или уменьшения риска развития или обращения по меньшей мере одного симптома деменции, связанной с нарушением центральной нервной системы (ЦНС), в частности болезнью Альцгеймера, цереброваскулярного заболевания (УаО) или синдрома Дауна у млекопитающего, предусматривающего введение указанному млекопитающему 1-аминоциклогексана и ингибитора ацетилхолинэстеразы (АСИЕ1). Предпочтительно, производное 1-аминоциклогексана и АС11Е1 вводят в терапевтически эффективных дозах, которые при комбинировании обеспечивают полезное действие.

Определения

Термин комбинация, примененный к активным ингредиентам, используется здесь для определения единой фармацевтической композиции (готовой формы), содержащей оба лекарственных средства по данному изобретению (т.е. производное 1-аминоциклогексана и АСИЕ1), или двух раздельных фармацевтических композиций (готовых форм), каждая из которых содержит единственное лекарственное средство по данному изобретению (т.е. производное 1-аминоциклогексана или АС11Е1) для совместного введения.

- 5 008863

В контексте по данному изобретению термин совместное введение используется для обозначения введения производного 1-аминоциклогексана и АСНЕ1 одновременно в одной композиции или одновременно в разных композициях, или последовательно. Однако, чтобы последовательное введение могло рассматриваться как совместное, производное 1-аминоциклогексана и ΛΟιΕΙ должны вводиться разделенным временным интервалом, который все еще обеспечивает получение полезного действия для лечения, предупреждения, остановки, задержки появления и/или уменьшения риска развития деменции, связанной с нарушением центральной нервной системы (ЦНС) у млекопитающего. Например, производное 1-аминоциклогексана и ΛΟιΕΙ должно вводиться в один и тот же день (например, каждое - один или два раза в день), предпочтительно в пределах 1 ч один от другого и наиболее предпочтительно одновременно.

Термин лечит в данном контексте обозначает облегчение или ослабление по меньшей мере одного симптома заболевания у субъекта. Например, в отношении деменции термин лечит может обозначать облегчение или ослабление когнитивного расстройства (например, нарушение памяти и/или ориентации) или нарушения общего функционирования (повседневных активностей жизни, АЭЬ) и/или замедление или обращение прогрессирующей деградации в АЭЬ или когнитивном расстройстве. В контексте по данному изобретению термин «лечит» обозначает также остановку, задержку появления (т.е. периода до клинической манифестации заболевания) и/или уменьшение риска развития или ухудшения течения заболевания. Термин «защищает» в данном контексте обозначает: предупреждает, задерживает или лечит либо все это соответственно развитие или продолжительность, или обострение заболевания у субъекта. В контексте по данному изобретению деменция ассоциирована с нарушением ЦНС, в том числе без ограничения нейродегенеративными заболеваниями, такими как болезнь Альцгеймера (АО), синдром Дауна и цереброваскулярная деменция (УаЭ). Предпочтительно, эта деменция связана с болезнью Альцгеймера (АО).

Например, как описано здесь, профилактическое введение производного 1-аминоциклогексана в комбинации с ΛΟιΕΙ может защищать субъекта-реципиента, имеющего риск развития деменции (например, индивидуумов, имеющих повышенные уровни β-амилоидного пептида [βАР], как описано ниже в примере 2, индивидуумов, которые являются гомозиготными или гетерозиготными мутантами в изоформе 4 аполипопротеина Е; см. также генетический скрининг и клинический анализ, описанные в Соа1с. 1991, ЫаГиге, 349:704-706). Подобным образом в соответствии с данным изобретением терапевтическое введение производного 1-аминоциклогексана совместно с ΛΟιΕΙ может приводить к замедлению развития клинических симптомов или даже к регрессии симптомов.

Термин ингибитор ацетилхолинэстеразы или ΛΟιΕΙ относится в данном контексте к лекарственному средству, которое усиливает функцию холинергических нейронов ингибированием катаболического фермента ацетилхолинэстеразы (ΛΟ1Ε). Этот термин включает в себя обратимые, псевдообратимые и необратимые ΛΟιΕΙ, а также ΛΟιΕΙ, которые селективно ингибируют АСЬЕ, и ΛΟιΕΙ, которые являются менее селективными (например, действуют также на ΒιιΟιΕ). Предпочтительно, ΛΟιΕΙ, применимые в способах и композициях по данному изобретению, являются обратимыми или псевдообратимыми. Конкретные примеры ΛΟιΕΙ, применимые в способах и композициях по данному изобретению, включают в себя, но не ограничиваются ими, такрин (ТНА; гидрохлорид 1,2,3,4-тетрагидро-9аминоакридина), донепезил, галантамин, ривастигмин, гуперзин А, занапезил, ганстигмин, фенсерин, фенетилнорцимсерин (ΡΕNС), цимсерин, тиацимсерин, 8РН 1317 (галантамин плюс), ΕΡ 127528, КБ 1259 или Е3796.

Термин «лекарственные средства-антагонисты ΝΜΩΛ в данном контексте используется для обозначения лекарственных средств, которые могут подавлять нормальный запуск ΝΜΩΛ-рецепторопосредованной нейронной импульсации. Предпочтительными лекарственными средствамиантагонистами ΝΜΩΛ по данному изобретению являются производные 1-аминоциклогексана, такие как мемантин и нерамексан. Эти соединения имеют также 5НТ₃-антагонистическую активность и/или антагонистическую активность в отношении нейронного никотинового рецептора.

Термин аналог или производное используется в данном контексте в общепринятом фармацевтическом смысле для обозначения молекулы, которая структурно напоминает ссылочную молекулу (такую как 1-аминоциклогексан), но была модифицирована нацеленным и контролируемым образом для замены одного или нескольких заместителей этой ссылочной молекулы другим заместителем с получением посредством этого молекулы, которая является структурно сходной со ссылочной молекулой. Синтез и скрининг аналогов (например, с использованием структурного и/или биохимического анализа) для идентификации слегка модифицированных версий известного соединения, которые могут иметь улучшенные или неоднозначные признаки (такие как более высокая активность и/или селективность при специфическом типе рецептора-мишени, большая способность пересечения гематоэнцефалических барьеров, меньшие побочные эффекты и т.д.), являются подходом к созданию лекарственных средств, который хорошо известен в фармацевтической химии.

Термин производное 1-аминоциклогексана используется здесь для описания соединения, которое произведено из 1-аминоциклогексана (или его доступного производного, такого как нерамексан или мемантин) в способе, используемом для создания сходного, но слегка отличающегося лекарственного средства.

- 6 008863

Производные 1-аминоциклогексана по данному изобретению могут быть представлены общей формулой (I)

где К* обозначает (Λ)_η-(0Κ¹Κ²)_ο-ΝΚ³Κ⁴;

Ы+т=0, 1 или 2;

А выбран из группы, состоящей из линейного или разветвленного низшего алкила С₁-С₆, линейного или разветвленного низшего алкенила С₂-С₆ и линейного или разветвленного низшего алкинила ^С2^-С61^; 2

К¹ и К² независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, линейного или разветвленного низшего алкила С₁-С₆, линейного или разветвленного низшего алкенила С₂-С₆, линейного или разветвленного низшего алкинила С2-С6, арила, замещенного арила и арилалкила,

К³ и К⁴ независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, линейного или разветвленного низшего алкила С1-С6, линейного или разветвленного низшего алкенила С2-С6 и линейного или разветвленного низшего алкинила С2-С6 или вместе образуют алкилен С2-С10 или алкенилен С2-С10, или вместе с N образуют 3-7-членный азациклоалкан или азациклоалкен, в том числе замещенный (алкил С1-С6, алкенил С2-С6) 3-7-членный азациклоалкан или азациклоалкен; или независимо К³ или К⁴ могут соединяться с К^р, К^д, К^г или К⁸ с образованием алкиленовой цепи -СН(К⁶)-(СН2)_Г, где ΐ=0 или 1, левая сторона которой присоединена к и или Υ, правая сторона - к Ν, а К⁶ выбран из группы, состоящей из водорода, линейного или разветвленного низшего алкила С1-С6, линейного или разветвленного низшего алкенила С2-С6, линейного или разветвленного низшего алкинила С2-С6, арила, замещенного арила и арилалкила; или независимо К³ или К⁴ могут соединяться с К⁵ с образованием алкиленовой цепи, представленной формулой -СН2-СН₂-СН₂-(СН₂)_Г, или алкениленовой цепи, представленной формулами -СН=СН-СН₂(СН2)₄-, -СН=С=СН-(СН2)_Г или -СН2-СН=СН-(СН2)1-, где ΐ=0 или 1, и левая сторона этой алкиленовой или алкениленовой цепи присоединена к а правая часть алкиленового кольца - к Ν;

К⁵ независимо выбран из группы, состоящей из водорода, линейного или разветвленного низшего алкила С₁-С₆, линейного или разветвленного низшего алкенила С₂-С₆ и линейного или разветвленного низшего алкинила С₂-С₆, или К⁵ объединяется с углеродом, к которому он присоединен, и следующим соседним углеродом кольца с образованием двойной связи,

К^р, К^д, К^г и К⁸ независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, линейного или разветвленного низшего алкила С1-С6, линейного или разветвленного низшего алкенила С2-С6, линейного или разветвленного низшего алкинила С2-С6, циклоалкила С3-С6 и арила, замещенного арила и арилалкила, или К^р, К^д, К^г и К⁸ независимо могут образовывать двойную связь с и или с Υ, к которому он присоединен, или К^р, К^д, К^г и К⁸ могут соединяться вместе для представления низшего алкиленового -(СН2)_Х- или низшего алкениленового мостика, где х равно 2-5 включительно, причем алкиленовый мостик может, в свою очередь, объединяться с К⁵ с образованием дополнительного низшего алкиленового -(СН₂)_у- или низшего алкениленового мостика, где у равно 1-3 включительно, символы и, V, ^, X, Υ, Ζ представляют атомы углерода и включают в себя оптические изомеры, диастереомеры, полиморфы, энантиомеры, гидраты, фармацевтически приемлемые соли и смеси соединений в пределах формулы (I).

Кольцо, определяемое И-ν-^-Χ-Υ-Ζ, предпочтительно выбрано из группы, состоящей из циклогексана, циклогекс-2-ена, циклогекс-3-ена, циклогекс-1,4-диена, циклогекс-1,5-диена, циклогекс-2,4-диена и циклогекс-2,5-диена.

Репрезентативные С₁-С₆алкильные группы включают в себя метильные, этильные, пропильные и бутильные группы, тогда как репрезентативные С₂-С₆алкенильные и алкинильные группы включают в себя этенил, пропенил, этинил и пропинил. Арильные группы, которые могут присутствовать, включают в себя С₆-С₁₂группы, такие как фенил или нафтил, необязательно замещенные, например, одним или несколькими заместителями, выбранными из С₁-С₆алкильных групп, таких как метил или этил, С₁С6алкоксигрупп, таких как метокси или этокси, гидроксигрупп и атомов галогена, таких как хлор или бром. Аралкильные группы, которые могут присутствовать, включают в себя С₆-С₁₂арил-С₁-С₄алкильные группы, такие как бензил или фенетил.

Неограничивающие примеры производных 1-аминоциклогексана, используемых в соответствии с данным изобретением, включают в себя производные 1-аминоциклогексана, выбранные из группы, включающей в себя

1-амино-1,3,5-триметилциклогексан,

1-амино-1(транс),3(транс),5-триметилциклогексан,

1-амино-1(цис),3(цис),5-триметилциклогексан,

1-амино-1,3,3,5-тетраметилциклогексан,

- 7 008863

1-амино-1,3,3,3,5-пентаметилциклогексан (нерамексан),

1-амино -1,3,5,5 -тетраметил-3 -этилциклогексан,

1-амино -1,5,5-триметил-3,3-диэтилциклогексан, 1-амино-1,5,5-триметил-цис-3 -этилциклогексан, 1-амино(18,58)цис-3 -этил-1,5,5-триметилциклогексан, 1-амино-1,5,5-триметилтранс-3 -этилциклогексан, 1-амино-(1Я,58)транс-3 -этил- 1,5,5-триметилциклогексан, 1-амино-1 -этил-3,3,5,5-тетраметилциклогексан, 1-амино-1 -пропил-3,3,5,5-тетраметилциклогексан, Ы-метил-1 -амино -1,3,3,5,5-пентаметилциклогексан, Ы-этил-1 -амино -1,3,3,5,5 -пентаметилциклогексан, Ы-(1,3,3,5,5-пентаметилциклогексил)пирроллидин,3,3,5,5-тетраметилциклогексилметиламин, 1-амино-1 -пропил-3,3,5,5-тетраметилциклогексан,

1-амино-1,3,3,5(транс)тетраметилциклогексан (аксиальная аминогруппа), полугидрат 3-пропил-1,3,5,5-тетраметилциклогексиламина,

1-амино -1,3,5,5 -тетраметил-3 -этилциклогексан, 1-амино-1,3,5-триметилциклогексан, 1-амино-1,3-диметил-3 -пропилциклогексан, 1-амино-1,3(транс),5(транс)триметил-3(цис)пропилциклогексан, 1-амино-1,3-диметил-3 -этилциклогексан,

1-амино-1,3,3-триметилциклогексан, цис-3-этил-1(транс)-3(транс)-5-триметилциклогексамин, 1-амино-1,3(транс)диметилциклогексан, 1,3,3-триметил-5,5-дипропилциклогексиламин, 1-амино-1 -метил-3(транс)пропилциклогексан, 1-метил-3 (цис)пропилциклогексиламин,

1-амино-1 -метил-3(транс)этилциклогексан, 1-амино-1,3,3-триметил-5(цис)этилциклогексан, 1-амино-1,3,3-триметил-5(транс)этилциклогексан, цис-3-пропил-1,5,5 -триметилциклогексиламин, транс-3 -пропил- 1,5,5-триметилциклогексиламин, Ы-этил-1,3,3,5,5-пентаметилциклогексиламин, Ν-метил-1 -амино -1,3,3,5,5-пентаметилциклогексан,

1- амино-1 -метилциклогексан, ^№диметил-1-амино-1,3,3,5,5-пентаметилциклогексан,

2- (3,3,5,5-тетраметилциклогексил)этиламин, 2-метил-1-(3,3,5,5-тетраметилциклогексил)пропил-2-амин, полугидрат 2-(1,3,3,5,5-пентаметилциклогексил)-1 -этиламина, №(1,3,3,5,5-пентаметилциклогексил)пирролидин, 1-амино-1,3(транс),5(транс)триметилциклогексан, 1-амино-1,3(цис),5(цис)триметилциклогексан,

1-амино-(1Я,8 8)транс-5 -этил- 1,3,3-триметилциклогексан, 1-амино-( 18,8 8)цис-5 -этил-1,3,3 -триметилциклогексан, 1-амино-1,5,5-триметил-3 (цис)изопропилциклогексан, 1-амино-1,5,5-триметил-3 (транс)изопропилциклогексан, 1-амино-1 -метил-3(цис)этилциклогексан,

1-амино-1 -метил-3(цис)метилциклогексан, 1-амино-5,5-диэтил-1,3,3-триметилциклогексан, 1-амино -1,3,3,5,5 -пентаметилциклогексан, 1-амино-1,5,5-триметил-3,3-диэтилциклогексан, 1-амино-1 -этил-3,3,5,5-тетраметилциклогексан, №этил-1 -амино -1,3,3,5,5 -пентаметилциклогексан, №(1,3,5-триметилциклогексил)пирролидин или пиперидин, №[1,3(транс),5(транс)триметилциклогексил]пирролидин или пиперидин, №[1,3(цис),5(цис)триметилциклогексил]пирролидин или пиперидин, №(1,3,3,5-тетраметилциклогексил)пирролидин или пиперидин, №(1,3,3,5,5-пентаметилциклогексил)пирролидин или пиперидин, №(1,3,5,5-тетраметил-3-этилциклогексил)пирролидин или пиперидин, №(1,5,5-триметил)-3,3-диэтилциклогексил)пирролидин или пиперидин, №(1,3,3-триметил-цис-5-этилциклогексил)пирролидин или пиперидин, №[(18,88)цис-5-этил-1,3,3-триметилциклогексил]пирролидин или пиперидин, №(1,3,3-триметил-транс-5-этилциклогексил)пирролидин или пиперидин,

- 8 008863

Ы-[(1К,88)транс-5-этил-1,3,3-триметилциклогексил] пирролидин или пиперидин, Ы-(1-этил-3,3,5,5-тетраметилциклогексил)пирролидин или пиперидин, N-(1 -пропил-3,3,5,5-тетраметилциклогексил)пирролидин или пиперидин, Ы-(1,3,3,5,5-пентаметилциклогексил)пирролидин, и их оптические изомеры, диастереомеры, энантиомеры, гидраты, их фармацевтически приемлемые соли и их смеси.

Нерамексан (1-амино-1,3,3,5,5-пентаметилциклогексан) описан, например, в зявке на патент США № 09/597102 и в патенте США № 6034134.

Некоторые производные 1-аминоциклогексана общей формулы (I) включают в себя случай, когда три аксиальных алкильных заместителя, например К^р, К^г и К⁵, вместе образуют головную часть мостика с образованием соединений (так называемых 1-аминоадамантанов), иллюстрированных формулами ИЪ и 116:

Некоторые производные 1-аминоциклогексана формулы (I), где п+т=0, и, V, №, X, Υ и Ζ образуют циклогексановое кольцо и один или оба из К³ и К⁴ независимо соединены с указанным циклогексановым кольцом через алкиленовые мостики, образованные посредством К^р, К⁴, К^г, К⁸ или К⁵, представлены следующими формулами 111а-111с:

где К^р, К⁴, К^г, К⁸ и К⁵ имеют указанные выше для формулы (I) значения;

К⁶ обозначает водород, линейный или разветвленный низший алкил С₁-С₆, линейный или разветвленный низший алкенил С2-С6, линейный или разветвленный низший алкинил С2-С6, арил, замещенный арил или арилалкил;

Υ является насыщенным или может объединяться с К⁶ с образованием связи углерод-водород с углеродом кольца, к которому он присоединен;

1=0 или 1 и к=0, 1 или 2;

----- обозначает простую или двойную связь.

Неограничивающие примеры производных 1-аминоциклогексана, используемых в соответствии с данным изобретением, включают в себя 1-аминоадамантан и его производные, выбранные из группы, включающей в себя

1-амино-3-фениладамантан,

1-аминометиладамантан,

1-амино-3,5-диметиладамантан (мемантин),

1-амино-3 -этиладамантан,

1-амино-3 -изопропиладамантан,

1-амино-3 -н- бутиладамантан,

1-амино-3,5-диэтиладамантан, 1-амино-3,5-диизопропиладамантан, 1-амино-3,5-ди-н-бутиладамантан, 1-амино-3-метил-5-этиладамантан, 1-№метиламино-3,5-диметиладамантан, 1-№этиламино-3,5-диметиладамантан, 1-№изопропиламино-3,5-диметиладамантан, 1-Ν,Ν-диметиламино-3,5-диметиладамантан, 1-№метил-№изопропиламино-3-метил-5-этиладамантан,

- 9 008863

1-амино-3 -бутил-5-фениладамантан,

1-амино-3 -пентиладамантан,

1-амино-3,5-дипентиладамантан,

1-амино-3 -пентил-5-гексиладамантан,

1-амино-3 -пентил-5-циклогексиладамантан,

1-амино-3 -пентил-5-фениладамантан,

1-амино-3 -гексиладамантан,

1-амино-3,5-дигексиладамантан,

1-амино-3 -гексил-5-циклогексиладамантан,

1-амино-3 -гексил-5-фениладамантан,

1-амино-3 -циклогексиладамантан,

1-амино-3,5-дициклогексиладамантан,

1-амино-3 -цикло гексил-5-фениладамантан,

1-амино-3,5-дифениладамантан, 1-амино-3,5,7-триметиладамантан, 1-амино -3,5 -диметил-7-этиладамантан, 1-амино-3,5-диэтил-7-метиладамантан, 1-Ы-пирролидино- и 1-Ы-пиперидино-производные, 1-амино-3 -метил-5-пропиладамантан,

1-амино-3 -метил-5-бутиладамантан,

1-амино-3 -метил-5-пентиладамантан,

1-амино-3 -метил-5-гексиладамантан,

1-амино-3 -метил-5-циклогексиладамантан,

1-амино-3 -метил-5-фениладамантан,

1-амино-3 -этил-5-пропиладамантан,

1-амино-3 -этил-5-бутиладамантан,

1-амино-3 -этил-5-пентиладамантан,

1-амино-3 -этил-5-гексиладамантан,

1-амино-3 -этил-5-циклогексиладамантан,

1-амино-3 -этил-5-фениладамантан,

1-амино-3 -пропил-5 -бутиладамантан,

1-амино-3 -пропил-5 -пентиладамантан,

1-амино-3 -пропил-5 -гексиладамантан,

1-амино-3 -пропил-5 -циклогексиладамантан,

1-амино-3 -пропил-5 -фениладамантан,

1-амино-3 -бутил-5-пентиладамантан,

1-амино-3 -бутил-5-гексиладамантан,

1-амино-3 -бутил-5-циклогексиладамантан, их оптические изомеры, диастереомеры, энантиомеры, гидраты, Ν-метил-, Ν,Ν-диметил-, Ν-этил-, Νпропилпроизводные, их фармацевтически приемлемые соли и их смеси.

Мемантин (1-амино-3,5-диметиладамантан), например, описан в патентах США № 4122193 и 4273774.

Производные 1-аминоадамантана формул 1ГЬ и ГИ, в том числе мемантин, получают обычно алкилированием галогенированных адамантанов, предпочтительно бром- или хлорадамантанов. Ди- и тризамещенные адамантаны получают дополнительными процедурами галогенирования и алкилирования. Аминогруппу вводят либо окислением триоксидом хрома и бромированием НВг, либо бромированием бромом и реакцией с формамидом с последующим гидролизом. Аминогруппа может быть алкилирована в соответствии с общепринятыми способами. Метилирование может, например, выполняться реакцией с хлорметилформиатом и последующим восстановлением. Этильная группа может быть введена восстановлением соответствующего ацетамида. Более подробное описание синтеза см., например, в патентах США № 5061703 и 6034134. Дополнительные способы синтеза для предыдущих соединений могут быть найдены в предварительных заявках с регистрационными номерами 60/350974, поданной 7 ноября 2001 г., 60/337858, поданной 8 ноября 2001 года и 60/366386, поданной 21 марта 2002 года, которые включены здесь в качестве ссылки, а также в примерах синтеза, приведенных ниже.

В соответствии с данным изобретением производные 1-аминоциклогексана формулы (Г) могут быть применены или использованы в форме их фармацевтически приемлемых солей, в том числе, например, кислотно-аддитивных солей, таких как гидрохлориды, гидробромиды, сульфаты, ацетаты, сукцинаты или тартраты, или их кислотно-аддитивных солей с фумаровой, малеиновой, лимонной или фосфорной кислотами.

Кроме того, с использованием способов, известных квалифицированным специалистам в данной области, могут быть созданы аналоги и производные соединений по данному изобретению, которые имеют улучшенную терапевтическую эффективность в контроле деменции, т.е. более высокую актив

- 10 008863 ность и/или селективность при специфическом типе рецептора-мишени, либо более высокую, либо более низкую способность проникать через гематоэнцефалические барьеры млекопитающих (например, либо более высокую, либо более низкую скорость проникновения через гематоэнцефалический барьер), меньшие побочные действия и т.д.

Могут быть использованы различные соли и изомеры (в том числе стереоизомеры и энантиомеры) лекарственных средств, перечисленных здесь. Термин соли может включать в себя аддитивные соли свободных кислот или свободных оснований. Примеры кислот, которые могут быть использованы для образования фармацевтически приемлемых кислотно-аддитивных солей, включают в себя неорганические кислоты, такие как хлористоводородная, серная или фосфорная кислота, и органические кислоты, такие как уксусная, малеиновая, янтарная или лимонная кислота, и т.д. Все эти соли (или другие подобные соли) могут быть получены общепринятыми способами. Природа соли или изомера не является решающей при условии, что она является нетоксичной и, по существу, не препятствует желаемой фармакологической активности.

Термин «терапевтически эффективные», применяемый к дозе или количеству, обозначает количество соединения или фармацевтической композиции, которое является достаточным для получения желаемой активности после введения млекопитающему, нуждающемуся в этом. При использовании в отношении фармацевтических композиций, содержащих производное 1-аминоциклогексана и/или АС11Е1. термин терапевтически эффективное количество/терапевтически эффективная доза используется взаимозаменяемо с термином неврологически эффективное количество/неврологически эффективная доза и обозначает количество/дозу соединения или фармацевтической композиции, которые являются достаточными для получения эффективной неврологической реакции после введения млекопитающему. Следует также обратить внимание на то, что при введении комбинации активных ингредиентов, эффективное количество этой комбинации может включать в себя или может не включать в себя количества каждого ингредиента, которые являются индивидуально эффективными.

Термин субпороговое, относящийся к количеству активного ингредиента, обозначает количество, недостаточное для получения реакции, т. е. количество ниже минимального эффективного количества. Термин субоптимальное в том же самом контексте обозначает количество активного ингредиента, которое вызывает реакцию, но не до ее полной степени, которая могла бы быть достигнута с более высоким количеством.

Фраза фармацевтически приемлемые, в контексте с композициями по данному изобретению, обозначает молекулярные частицы и другие ингредиенты таких композиций, которые являются физиологически переносимыми и обычно не вызывают неблагоприятных реакций при введении млекопитающему (например, человеку). Предпочтительно, в данном контексте термин фармацевтически приемлемые обозначает одобренные регулирующим учреждением Федерального правительства или правительства штата или находящиеся в списках фармакопеи США или других общепризнанных фармакопей для использования у млекопитающих и, более конкретно, у людей.

Термин носитель, в применении к фармацевтическим композициям по данному изобретению, обозначает разбавитель, эксципиент или наполнитель, с которыми вводят активное соединение (например, производное 1-аминоциклогексана и/или ЛС11Е1). Такими фармацевтическими носителями могут быть стерильные жидкости, такие как вода, солевые растворы, водные растворы декстрозы, водные растворы глицерина, и масла, в том числе масла на основе нефтяного сырья, масла животного, растительного или синтетического происхождения, такие как арахисовое масло, минеральное масло, кунжутное масло и т.п. Подходящие фармацевтические носители описаны в Кетшд1оп'8 Рйагтасеийса1 Ьшепсек Е.^. Майш, 18'¹' Εάίίίοη.

Термин «субъект» в данном контексте относится к млекопитающему (например, грызуну, такому как мышь или крыса). В частности, этот термин относится к людям.

Термин «около» или «приблизительно» обычно означает в пределах 20%, более предпочтительно в пределах 10% и наиболее предпочтительно в пределах 5% указанной величины или указанного диапазона. Альтернативно, в частности, в биологических системах термин «около» означает в пределах около 1од (т.е. порядка (степени) величины)), предпочтительно в пределах фактора два указанной величины. Фармацевтические композиции

Вместе со способами по данному изобретению обеспечены также фармацевтические композиции, содержащие терапевтически эффективное количество производного 1-аминоциклогексана (такого как мемантин или нерамексан) и/или терапевтически эффективное количество ингибитора ацетилхолинэстеразы (ЛС11Е1) (такого как галантамин, такрин, донепезил или ривастигмин), а также дополнительный носитель или эксципиент (все фармацевтически приемлемые). Указанные производное 1-аминоциклогексана и АС11Е1 могут быть приготовлены либо в виде единой композиции, либо в виде двух отдельных композиций, которые могут вводиться совместно. Предпочтительно их готовят в виде единой композиции или в виде двух отдельных композиций, которые предпочтительно вводят одновременно. Эти композиции могут быть приготовлены для введения 1 или 2 раза в день. Таким образом, производное аминоциклогексана может вводиться 2 раза в день и АС11Е1 может вводиться 2 раза в день в виде одной или двух различных композиций для каждого введения или производное аминоциклогексана

- 11 008863 может вводиться 2 раза в день, а ЛС11Е1 может вводиться 1 раз в день (или наоборот), или каждый из них может вводиться 1 раз в день в виде одной или в виде двух различных композиций.

Предпочтительно, в описанных композициях как производное 1-аминоциклогексана, так и АС11Е1 присутствуют в терапевтически эффективных количествах. Оптимальное терапевтически эффективное количество должно определяться экспериментально, с учетом точного способа введения, формы, в которой вводят лекарственное средство, показания, на которое нацелено это введение, участвующего субъекта (например, массы тела, здоровья, возраста, пола и т.д. этого субъекта) и предпочтения и опыта лечащего врача или ветеринара. Как описано здесь, для введения человеку как производное 1-аминоциклогексана, так и АС11Е1 вводят в подходящей форме в дозах в диапазоне приблизительно 1 - приблизительно 200 мг в день для каждого лекарственного средства. Более конкретно, производные 1-аминоциклогексана предпочтительно вводят в дозах 5-60 мг/день и, в частности, 10-40 мг/день; АС11Е1 предпочтительно вводят в дозах 1-40 мг/день и, в частности, 5-24 мг/день. В определенных случаях может быть желательным введение одного или другого из активных ингредиентов в субоптимальных или субпороговых количествах, и такое введение также находится в пределах по данному изобретению.

Данное изобретение включает также способ приготовления фармацевтических композиций, предусматривающий смешивание производного 1-аминоциклогексана и/или АС11Е1 в терапевтически приемлемых количествах и необязательно одного или нескольких физиологически приемлемых носителей и/или эксципиентов, и/или вспомогательных веществ.

Введение

Активные агенты по данному изобретению могут быть введены перорально, местно, парентерально или через слизистую оболочку (мукозно) (например, буккально, ингаляцией или ректально) в дозированных унифицированных формах, содержащих общепринятые нетоксичные фармацевтически приемлемые носители. Обычно желательным является пероральный способ введения. Активные агенты могут быть введены перорально в форме капсулы, таблетки или т.п. (см. Кетшд!оп'5 Рйагтасеи!1са1 8с1еиее5, Маск 5 РиЫ15Ыид Со., ЕаЧоп. РА). Перорально вводимые лекарственные средства могут быть введены в форме носителя, регулирующего время высвобождения, в том числе систем с регулируемой диффузией, осмотических устройств, регулирующих растворение матриц и разрушаемых/деградируемых матриц.

Для перорального введения в форме таблетки или капсулы активный лекарственный компонент может быть объединен с нетоксичными, фармацевтически приемлемыми эксципиентами, такими как связывающие агенты (например, предварительно желатинированный кукурузный крахмал, поливинилпирролидон или гидроксипропилметилцеллюлоза); наполнителями (например, лактозой, сахарозой, глюкозой, маннитом, сорбитом и другими редуцирующими и нередуцирующими сахарами, микрокристаллической целлюлозой, сульфатом кальция или гидрофосфатом кальция); смазывающими веществами (например, стеаратом магния, тальком или диоксидом кремния, стериновой кислотой, стеарилфумаратом натрия, глицерилбегенатом, стеаратом кальция и т.п.); дезинтегрирующими агентами (например, картофельным крахмалом или натрий-крахмалгликолатом); или смачивающими агентами (например лаурилфосфатом натрия), красителями или ароматизаторами, желатином, подсластителями, натуральными и синтетическими камедями, такими как аравийская камедь, трагакантовая камедь или альгинаты), буферными солями, карбоксиметилцеллюлозой, полиэтиленгликолем, восками и т.п. Для перорального введения в жидкой форме лекарственные компоненты могут быть объединены с нетоксичными, фармацевтически приемлемыми инертными носителями (например, этанолом, глицерином, водой), суспендирующими агентами (например, сиропом из сорбита, производными целлюлозы или гидрогенизированными годными в пищу жирами), эмульгирующими агентами (например, лецитином или аравийской камедью), неводными носителями (например, минеральным маслом, маслообразными сложными эфирами, этиловым спиртом или фракционированными растительными маслами), консервантами (например, метил- или пропил-п-гидроксибензоатами или сорбиновой кислотой) и т. п. Для стабилизации этих дозированных форм могут быть также добавлены стабилизирующие агенты, такие как антиоксиданты (ВНА, ВНТ, пропилгаллат, аскорбат натрия, лимонная кислота).

Таблетки могут иметь покрытие, нанесенное способами, хорошо известными в данной области. Композиции по данному изобретению могут быть также введены в микросферах или микрокапсулах, например, изготовленных из полимера полигликолевой кислоты/молочной кислоты (РОБА) (см., например, патенты США № 5814344; 5100669 и 4849222; публикации РСТ № АО 05/11010 и АО 93/078 61). Жидкие препараты для перорального введения могут также иметь форму, например, растворов, сиропов, эмульсий или суспензий, или они могут быть представлены в виде сухого продукта для восстановления водой или другим подходящим растворителем перед использованием. Препараты для перорального введения могут быть приготовлены подходящим образом с получением регулируемого или задержанного высвобождения активного соединения. Конкретный пример пероральной фармацевтической композиции с регулируемым временем высвобождения описан в патенте США № 5366738.

Эти активные лекарственные средства могут быть также введены в форме систем липосомальной доставки, таких как малые однослойные везикулы, большие однослойные везикулы и многослойные везикулы. Липосомы могут быть образованы из разнообразных фосфолипидов, таких как холестерин, стеариламин или фосфатидилхолины, как это хорошо известно.

- 12 008863

Лекарственные средства по данному изобретению могут также доставляться с использованием моноклональных антител в качестве индивидуальных носителей, с которыми связаны молекулы соединений. Активные лекарственные средства могут быть также связаны с растворимыми полимерами в качестве носителей нацеливаемого лекарственного средства. Такие полимеры могут также включать в себя поливинилпирролидон, сополимер пирана, полигидроксипропилметакриламидфенол, полигидроксиэтиласпартамидфенол или полиэтиленоксидполилизин, замещенный пальмитоильными остатками. Кроме того, активное лекарственное средство может быть связано с классом биодеградируемых полимеров, применимых в достижении регулируемого высвобождения лекарственного средства, например, полимолочной кислотой, полигликолевой кислотой, сополимерами полимолочной и полигликолевой кислоты, полиэпсилонкапролактоном, полигидроксимасляной кислотой, полиортозфирами, полиацеталями, полигидропиранами, полицианоакрилатами и сшитыми или амфипатическими блок-сополимерами гидрогелей.

Для введения ингаляцией терапевтические средства в соответствии с данным изобретением могут удобным образом доставляться в форме предоставления в виде аэрозольного спрея из находящихся под давлением упаковок или распылителя с использованием подходящего пропеллента, например, дихлордифторметана, трихлорфторметана, дихлортетрафторэтана, диоксида углерода или другого подходящего газа. В случае находящегося под давлением аэрозоля дозированная единица может определяться посредством обеспечения клапана для доставки отмеренного количества. Могут быть приготовлены капсулы и картриджи, например из желатина, для применения в ингаляторе или инсуффляторе, содержащие порошкообразную смесь соединения и подходящей порошкообразной основы, такой как лактоза или крахмал.

Готовые формы по данному изобретению могут доставляться парентерально, т.е. внутривенным (ί.ν.), интрацеребровентрикулярным (ί.ε.ν.), подкожным (8.с), внутрибрюшинным (ί.ρ.), внутримышечным (1.т.), субдермальным (8.6.) или интрадермальным (ί.ά.) введением, прямой инъекцией, например болюсной инъекцией или непрерывным вливанием. Композиции для инъекции могут быть представлены в унифицированной дозированной форме, например в ампулах или многодозовых контейнерах, с добавленным консервантом. Эти композиции могут принимать такие формы, как эксципиенты, суспензии, растворы или эмульсии в масляных или водных носителях, и могут содержать используемые для приготовления лекарственных средств агенты, такие как суспендирующие, стабилизирующие и/или диспергирующие агенты. Альтернативно, активные ингредиенты могут быть в порошкообразной форме для восстановления подходящим носителем, например, апирогенной водой, перед использованием.

Композиции по данному изобретению могут быть также приготовлены для ректального введения, например, в виде суппозиториев или удерживающих клизм (например, содержащих общепринятые основы для суппозиториев, такие как какао-масло или другие глицериды).

Как описано здесь, производное 1-аминоциклогексана и АС11Е1 могут быть смешаны с эксципиентами, которые являются фармацевтически приемлемыми и совместимыми с этими активными ингредиентами. Кроме того, если желательно, эти препараты могут также включать в себя минорные количества вспомогательных веществ, таких как увлажняющие или эмульгирующие агенты, рН-буферные агенты и/или агенты, которые усиливают эффективность этой фармацевтической композиции. Эти вспомогательные молекулы могут доставляться системно или местно в виде белков или посредством экспрессии вектора, который кодирует экспрессию данной молекулы. Приведенные выше способы для доставки производных 1-аминоциклогексана и АС11Е1 могут быть также использованы для доставки вспомогательных молекул.

Хотя активные агенты по данному изобретению могут вводиться в разделенных дозах, например, два или три раза в день, предпочтительной является единственная доза в день каждого из производного 1-аминоциклогексана и АС11ЕЕ причем наиболее предпочтительной является единственная доза в день обоих агентов в одной композиции или в двух отдельных композициях, вводимых одновременно.

Данное изобретение включает в себя также способ приготовления фармацевтических композиций, предусматривающий объединение производного 1-аминоциклогексана и/или АС11Е1 с фармацевтически приемлемым носителем и/или эксципиентом.

Предпочтительные конкретные количества производного 1-аминоциклогексана, которые могут быть использованы в унифицированных дозированных количествах по данному изобретению, включают в себя, например, 5, 10, 15 и 20 мг для мемантина и 5, 10, 20, 30 и 40 мг для нерамексана. Предпочтительные конкретные количества АС11ЕЕ которые могут быть использованы в унифицированных дозированных количествах по данному изобретению, включают в себя, например, 1,5, 3, 4,5 и 6 мг для ривастигмина, 4, 8 и 12 мг для галантамина и 5 и 10 мг для донепезила.

Данное изобретение включает также фармацевтическую упаковку или набор, содержащий один или несколько контейнеров, содержащих один или несколько ингредиентов композиций по данному изобретению. В родственном варианте осуществления данное изобретение включает набор для приготовления фармацевтических композиций по данному изобретению, причем указанный набор содержит в первом контейнере производное 1-аминоциклогексана, а во втором контейнере АС11Е1 и, необязательно, инструкции для смешивания этих двух лекарственных средств и/или для введения этих композиций. Каждый

- 13 008863 контейнер этого набора включает в себя также один или несколько физиологически приемлемых носителей и/или эксципиентов и/или вспомогательных веществ. К такому контейнеру (контейнерам) может прилагаться уведомление в форме, предписанной правительственным учреждением, регулирующим приготовление, применение или продажу фармацевтических веществ или биологических продуктов, причем это уведомление отражает одобрение этим учреждением приготовления, применения или продажи для введения человеку.

Эти композиции могут быть, если желательно, представлены в упаковке или распределительном устройстве, которые могут содержать одну или несколько унифицированных дозированных форм, содержащих активный ингредиент. Эта упаковка может, например, содержать металлическую фольгу или пластиковую пленку, такую как блистерная упаковка. Эта упаковка или распределительное устройство могут быть снабжены инструкциями для введения. Композиции по данному изобретению, приготовленные в совместимом фармацевтическом носителе, могут быть также приготовлены, помещены в подходящий контейнер и снабжены ярлыками для лечения указанного состояния.

Эффективная доза и оценки безопасности

В соответствии со способами по данному изобретению фармацевтические композиции, описанные здесь, вводят пациенту в терапевтически эффективных дозах, предпочтительно с минимальной токсичностью. В разделе «Определения» даны определения для терминов «неврологически эффективная доза» и «терапевтически эффективная доза». Предпочтительно, каждый из производного 1-аминоцикло гексана и ЛС11Е1 используют в дозах, которые при объединении обеспечивают усиленное действие, наиболее предпочтительно - действие, не наблюдаемое при введении каждого агента отдельно.

Эффективность производных 1-аминоциклогексана по данному изобретению может быть определена с использованием таких фармакологических тестов ίη νίΐτο, как измерения вытеснения связывания [³Н]МК-801 в ткани головного мозга крысы или человека, блокирования каналов ΝΜΟΆ-рецепторов в культивируемых нейронах и гетерологичных системах экспрессии, противосудорожных эффектов ίη νίνο, корреляции между блокированием каналов и противосудорожным действием, защиты против церебральной ишемии, защиты против ΝΜΌΆ-индуцируемой смертности и т.д. (см., например, патент США № 5061703).

Эффективность ЛС11Е1 по данному изобретению может быть определена ίη νίΐτο с использованием таких хорошо известных способов, как спектрофотометрический анализ активности АСКЕ, описанный Е11тап е1 а1., (Вюсйет. Рйагтасо1., 7:86-95, 1961; см. также \Успк е1 а1., Ь1£е 8ск, 2000, 66:1079-1083).

С использованием методологий, хорошо разработанных в данной области, эффективные дозы и токсичность соединений и композиций по данному изобретению, которые работали хорошо в тестах ίη νίΐτο, определяют затем в преклинических исследованиях с использованием моделей небольших животных (например, мышей или крыс), в которых было обнаружено, что как производные 1-аминоциклогексана, так и АСКЕ1 являются терапевтически эффективными, и в которых эти лекарственные средства могут вводиться способом, предполагаемым для клинических испытаний на человеке. Предпочтительными моделями-животными по данному изобретению являются трансгенные модели АО, описанные ниже в примере 2.

Для любой фармацевтической композиции, используемой в способах по данному изобретению, терапевтически эффективная доза может быть приближенно определена сначала из животных-моделей для получения диапазона циркулирующей концентрации в плазме, который включает в себя 1С₅₀(т.е. концентрацию тест-соединения, которая дает полумаксимальное ингибирование активности ΝΜΟΑрецептора и/или ферментативной активности АСКЕ в релевантных зонах головного мозга). Затем кривые доза-ответ, полученные из систем-животных, используют для определения тест-доз для начальных клинических испытаний на людях. В определении безопасности для каждой композиции доза и частота введения должна удовлетворять или превосходить дозу и частоту, допустимые для использования в этом клиническом испытании.

Как описано здесь, дозу компонентов в композициях по данному изобретению определяют для гарантии того, что эта доза, вводимая непрерывно или периодически, не будет превышать количество, определенное после рассмотрения результатов, полученных в тест-животных, и индивидуальных обстоятельств пациента. Разумеется, конкретная доза варьируется в зависимости от возраста, массы тела, пола, чувствительности, питания, периода введения дозы, лекарственных средств, используемых в комбинации, тяжести заболевания. Подходящая доза и количество введений дозы в определенных условиях могут быть определены при помощи теста, основанного на вышеуказанных показаниях, но могут быть уточнены и в конечном счете установлены в соответствии с оценкой лечащего врача и обстоятельствами каждого пациента (возрастом, общим состоянием, тяжестью симптомов, полом и т.д.) в соответствии со стандартными клиническими способами. Как описано здесь, подходящая доза производного 1-аминоциклогексана находится обычно в диапазоне 0,05-1,00 мг/кг массы тела, а подходящая доза АС11Е1 - в диапазоне 0,015-0,57 мг/кг массы тела.

Токсичность и терапевтическая эффективность композиций по данному изобретению могут быть определены стандартными фармацевтическими процедурами в экспериментальных животных, например, определением ЬО₅₀ (дозы, летальной для 50% популяции) и ЕЭ₅₀ (дозы, терапевтически эффективной в

- 14 008863

50% популяции). Отношение доз между терапевтическим и токсическим действием является терапевтическим индексом, и он может быть выражен как отношение ЕЭ₅₀/ГЭ₅₀. Предпочтительными являются композиции, которые обнаруживают большие терапевтические индексы.

Результаты, полученные из исследований на животных, могут быть использованы в приготовлении диапазона доз для применения в людях. Терапевтически эффективные дозы производных 1-аминоциклогексана и АСЬЕ1 в людях лежат приблизительно в диапазоне циркулирующих концентраций, которые включают в себя ЕЭ₅₀ и имеют низкую токсичность или являются нетоксичными. Например, такой терапевтически эффективной циркулирующей концентрацией для мемантина является 1 мкМ, а для такрина (АСЬЕ1) 8-30 нМ (КоЬег1§ е! а1., Еиг. I. СИп. РГагшасо1., 1998, 54:721-724). Эта доза может варьироваться в пределах этого диапазона в зависимости от используемой дозированной формы и используемого способа введения. В идеале, должна использоваться единственная доза каждого лекарственного средства в день.

Комбинации лекарственных средств по данному изобретению не только являются высокоэффективными в относительно низких дозах, но также обладают низкой токсичностью и производят мало побочных эффектов. Действительно, единственным обычным побочным эффектом для АСЬЕ1, используемым в данном изобретении, является небольшое раздражение кишечника (выражающегося, например, в тошноте, диарее или рвоте), тогда как наиболее обычным побочным эффектом, наблюдаемым при использовании производных 1-аминоциклогексана в данном изобретении, являются минорное двигательное и когнитивное нарушение (выражающееся, например, в тошноте, рвоте, головокружении или спутанном сознании).

Примеры

А. Примеры синтеза

Следующие примеры синтеза приведены только в качестве иллюстрации и не должны рассматриваться как ограничение изобретения.

Примеры синтеза 1 и 2

Схема

Пример синтеза 1

Гидрохлорид 3,3,5,5-тетраметил-1-винилциклогексанамина (5).

a) Этил-2-(3,3,5,5-тетраметилциклогексилиден)ацетат (2).

К перемешиваемому раствору триэтилфосфоноацетата (49,32 г, 222 ммоль) в сухом ТГФ (180 мл) в атмосфере аргона добавляли №11 (8,8 г, 222 ммоль, 60% суспензия в минеральном масле) небольшими порциями при охлаждении ледяной водой. Перемешивание продолжали в течение 1 ч при комнатной температуре, затем добавляли раствор 3,3,5,5-тетраметилциклогексанона (30,85 г, 200 ммоль) на протяжении 10 мин и полученную смесь нагревали с обратным холодильником при дефлегмации в течение 22 ч. Затем ее выливали на лед (400 г), и продукт экстрагировали диэтиловым эфиром (4х 150мл), и экстракты сушили над М§8О₄. После выпаривания растворителя в вакууме масляный остаток дистиллировали при 145°С (11 мм рт.ст.) с получением 36,8 г (86%) 2 в виде масла.

'Н ЯМР (СЭС1₃, ТМС) δ: 0,96 и 0,98 (всего 12Н, оба с, 3,5-СН₃); 1,27 (3Н, т, СН₃-этил); 1,33 (2Н, м, 4-СН2); 1,95 и 2,65 (всего 4Н, оба с, 2,6-ОД); 4,14 (2Н, кв, СН2-этил) и 5,69 м.д. (1Н, с, =С-Н).

b) 2-(3,3,5,5-Тетраметилциклогексилиден)этанол (3).

К перемешиваемому раствору Ь1А1Н₄ (1,7 г, 4 5 ммоль) в сухом эфире (60 мл) добавляли по каплям раствор ацетата 2 (3,2 г, 15 ммоль) в эфире (20 мл) при охлаждении ледяной водой. Перемешивание

- 15 008863 продолжали в течение 1 ч и оставшийся Ь1Л1Н₄ разрушали водой. Водный слой отделяли и дважды экстрагировали эфиром (30 мл). Объединенные экстракты промывали солевым раствором (50 мл) и сушили над Мд§0₄. После концентрирования в вакууме масляный остаток очищали перегонкой с коротким шариковым холодильником (150-170°С, 11 мм рт.ст.) с получением 3 (2,3 г, 89%) в виде масла. М., ¹Н ЯМР (СЭС1₃, ТМС) δ: 0,92 (6Н, с, 3,5-СН₃); 1,10 (1Н, ушир. с, ОН); 1,28 (2Н, с, 4-СН₂); 1,87 и 1,94 (всего 4Н, оба с, 2,6-СН₂); 4,16 (2Н, д, 7 Гц, СН₂0) и 5,50 м.д. (1Н, т, 7 Гц, =С-Н).

с) 2,2, 2-Трихлор-Ы-(3,3,5, 5-тетраметил-1-винилциклогексил)ацетамид (4).

К раствору спирта 3 (0,8 г, 4,7 ммоль) в диэтиловом эфире (5 мл) добавляли ΝαΗ (0,22 г, 55% дисперсия в минеральном масле, 0,22 ммоль). Реакционную смесь охлаждали до -10°С и добавляли по каплям раствор трихлорацетонитрила (0,68 г, 4,7 ммоль) в диэтиловом эфире (3 мл). Раствору давали нагреться до комнатной температуры и растворитель выпаривали. К этому остатку добавляли пентан (8 мл), содержащий метанол (0,016 мл). Полученную смесь фильтровали через подушку целлита и упаривали. Оставшееся масло растворяли в ксилоле (10 мл) и нагревали с обратным холодильником при дефлегмации в течение 10 ч. Основное количество ксилола отгоняли при пониженном давлении (11 мм рт. ст.) и остаток очищали флеш-хроматографией на силикагеле (гексан, гексан-этилацетат, 10:1) с получением 4 (0,98 г, 66) в виде масла.

Ή ЯМР (СЭС1₃, ТМС) δ: 0,95 (6Н, с, 3,5-СН₃); 1,18 (6Н, с, 3,5-СН₃); 1,1-1,5 (2Н, м, 4-СН₂); 1,32 (2Н, д, 15 Гц, 2,6-СН₂); 2,15 (2Н, д, 15 Гц, 2,6-СН₂); 5,08 (1Н, д, 11 Гц, =СН₂); 5,13 (1Н, д, 18 Гц, =СН₂); 5,85 (1Н, дд, 18 и 11 Гц, -НО=) и 6,7 м.д. (1Н, ушир. с, ΝΗ).

б) Гидрохлорид 3,3,5,5-тетраметил-1-винилциклогексанамина (5).

Смесь амида 4 (0,32 г, 1 ммоль) и порошкообразного ΝαΟΗ (0,4 г, 10 ммоль) в ДМСО (3 мл) перемешивали в течение 7 дней при комнатной температуре. Реакционную смесь разбавляли Н20 (20 мл) и перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Продукт экстрагировали гексаном (3x10 мл). Объединенные экстракты промывали солевым раствором (20 мл), сушили над ΝαΟΗ и фильтровали через подушку целита. К полученному раствору добавляли 4 М НС1 в сухом этиловом эфире (0,5 мл) и растворитель выпаривали. Остаток обрабатывали ацетонитрилом (10 мл) и осадок собирали на фильтре и сушили над Р₂0₅ в вакууме с получением 5 (0,12 г, 53%) в виде бесцветного твердого вещества.

Ή ЯМР (СЭС1₃, ТМС) δ: 0,98 и 1,01 (всего 12Н, оба с, 3,5-СН₃); 1/19 и 1,29 (всего 2Н, оба д, 14 Гц, 4-СН₂); 1,62 (2Н, д, 13,5 Гц, 2, 6-СН₂); 1,72 (2Н, ушир. с, Н₂0); 2,16 (2Н, д, 13,5 Гц, 2,6-СН₂); 5,46 и 5,73 (2Н, оба д, 18 и 11 Гц, =СН₂); 6,16 (1Н, дд, 18 и 11 Гц, =СН) и 8,24 м.д. (3Н, ушир. с, ΝΗ₃+).

Пример синтеза 2

Гидрохлорид Ν, 3,3,5,5-пентаметил-1-винилциклогексиламина (7).

a) Метил-3, 3, 5,6-тетраметил-1-винилциклогексилкарбамат (6).

Смесь гидрохлорида амина 5 (0,25 г, 1,2 ммоль) и Ыа₂СО₃ (0,73 г, 6,9 ммоль) в ТГФ (6 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Добавляли метилхлорформиат (0,27 мл, 3,45 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 ч. Эту смесь разбавляли диэтиловым эфиром (20 мл), фильтровали и упаривали досуха. Неочищенный продукт очищали флешхроматографией на силикагеле (легкий петролейный эфир-этилацетат, 10:1) с получением 6 (0,24 г, 87%) в виде бесцветного твердого вещества с т. пл. 61-63 °С.

Ή ЯМР (СЭС1₃, ТМС) δ: 0,92 и 1,15 (всего 12Н, оба с, 3,5-СН₃); 1,00-1,40 (4Н, м, 4-СН₂ и 2,6-СН); 2,00 (2Н, д, 14 Гц, 2,6-СН); 3,62 (3Н, с, СНА'); 4,72 (1Н, ушир. с, ΝΗ); 5,00 и 5,06 (всего 2Н, оба д, 10,5 и 17 Гц, =СН₂) и 5,83 м.д. (1Н, дд, 10,5 и 17 Гц, =СН).

b) Гидрохлорид М,3,3,5,5-пентаметил-1-винилциклогексиламина (7).

Смесь Ь1Л1Н₄ (0,28 г, 7,44 ммоль) и карбамата 6 (0,22 г, 0,92 ммоль) в ТГФ (22 мл) нагревали с обратным холодильником при дефлегмации в течение 12 ч. Затем ее охлаждали на бане со льдом и добавляли по каплям воду (20 мл). Полученную суспензию экстрагировали гексаном (3x20 мл) и объединенные экстракты промывали солевым раствором (20 мл). Экстракт сушили над Να0Η, фильтровали и обрабатывали 2,4 М раствором НС1 в диэтиловом эфире (1 мл). Полученную суспензию упаривали досуха. Обрабатывали диэтиловым эфиром (10 мл) и ацетонитрилом (1 мл). Осадок собирали на фильтре и сушили в вакууме над Р₂0₅ с получением 7 (0,11 г, 52%) в виде бесцветного твердого вещества.

Ή ЯМР (СЭС1₃, ТМС) δ: 1,00 и 1,02 (всего 12Н, оба с, 3,5-СН₃); 1,23 и 1,32 (всего 2Н, оба д, 15 Гц, 4-СН₂); 1,72 (2Н, д, 13 Гц, 2,6-СН); 2,15 (2Н, д, 13 Гц, 2,6-СН); 2,45 (3Н, т, 5 Гц, СНА'); 5,64 и 5,69 (всего 2Н, оба д, 11 и 17 Гц, =СН); 5,98 (1Н, дд, 11 и 17 Гц, =СН) и 9,30 м.д. (2Н, ушир. с, ΝΗ₃+).

- 16 008863

Примеры синтеза 3 и 4

Схема

Пример синтеза 3

Гидрохлорид 1-аллил-3,3,5,5-тетраметилциклогексанамина (11).

a) 1-Аллил-3,3,5,5-тетраметилциклогексанол (8).

К перемешиваемому 1М эфирному раствору аллилмагнийбромида (60 мл, 60 ммоль) добавляли по каплям раствор 3,3,5,5-тетраметилциклогексанона (3,86 г, 25 ммоль) в сухом эфире (20 мл). Эту смесь перемешивали в течение 1 ч при температуре окружающей среды и кипятили с обратным холодильником при дефлегмации в течение 10 мин. Затем ее охлаждали ледяной водой и осторожно обрабатывали насыщенным водным ΝΗ₄Ο (40 мл). Органический слой отделяли и промывали водой и солевым раствором. После сушки над безводным М§80₄ этот раствор концентрировали в вакууме. Остаток фракционно перегоняли при пониженном давлении с получением 3,5 г (72%) 8 с т. кип. 98-100°С/12 мм рт. ст.

Ή ЯМР (СЭС13, ТМС) δ: 0,88 (6Н, с, 3,5-СН₃е_Ч); 1,20 (6Н, с, 3,5-СН₃а_Х); 0,95-1,60 (6Н, м, 2, 4, 6-СН2); 2,15 (2Н, д, 7,5 Гц, СН₂С=); 4,95-5,30 (2Н, м, =СН₂ и 5,65-6,20 м.д. (1Н, м, =СН).

b) 1-Аллил-1-азидо-3,3,5,5-тетраметилциклогексан (9) и 1-метил-2-(3,3,5,5-тетраметилциклогексилиден)этилазид (10).

К раствору циклогексанола 8 (1,96 г, 10 ммоль) в сухом бензоле (20 мл) в атмосфере аргона добавляли азидотриметилсилан (12 ммоль). К нему медленно добавляли охлажденный (5°С) раствор ΒΕ₃*0Εΐ₂(12 ммоль) через шприц в пределах 20 мин. Эту смесь перемешивали в течение 6 ч, затем медленно добавляли воду. Органический слой отделяли и промывали насыщенным водным ΝαΙ 1С0₃ и солевым растворами и сушили над М§80₄. Фильтрование и упаривание растворителя при поддержании температуры ниже 25°С давало масло, которое разделяли колоночной хроматографией на силикагеле (легкий петролейный эфир). Фракцию с КТ 0,85 (гексан) собирали. Упаривание растворителя давало бесцветное масло (0,26 г, 11,7%).

Ή ЯМР (СПС1₃, ТМС) δ: 0,89 (6Н, с, 3,5-СН₃е_Ч), 0,90 (1Н, д, 14 Гц, 4-СН_ах); 1,05 (2Н, д, 14 Гц, 2,6СН_ах); 1,18 (6Н, с, 3,5-СН_3ах); 1,37 (1Н, д, 14 Гц, 4-СН_еч); 1-60 (2Н, д, 14 Гц, 2,6-СН_еч), 2,29 (2Н, д, 7 Гц, СН₂С=); 4,95-5,25 (2Н, м, =СН₂) и 5,65-6,15 м.д. (1Н, м, =СН).

Упаривание дополнительной фракции (КТ 0,65 (гексан)) давало 0,425 г (20,3%) азида 10 в виде бесцветного масла.

Ή ЯМР (СПС1₃, ТМС) δ: 0,91 (6Н, с), 0,94 (3Н, с) и 0,96 (3Н, с, 3',5'-СН₃); 1,23 (3Н, д, 6,5 Гц, 1-СН₃); 1,26 (2Н, с, 4'-СН₂); 1,89 (2Н, с) и 1,96 (2Н, с, 2',6'-СН₂); 4,31 (1Н, дкв, 6,5 и 9,5 Гц, 1-СН) и 5,21 м.д. (1Н, дм, 9,5 Гц, =СН).

c) Гидрохлорид 1-аллил-3,3,5,5-тетраметилциклогексанамина (11).

Раствор азида 9 (0,221 г, 1,0 ммоль) в сухом эфире (4 мл) добавляли по каплям к перемешиваемой суспензии литийалюминийгидрида (0,152 г, 4 ммоль) в эфире (10 мл в пределах 10 мин.). Эту смесь перемешивали в течение 4 ч, затем ее обрабатывали 20% водным Να0Η (8 мл). Водный слой отделяли и экстрагировали диэтиловым эфиром (2x15 мл). Комбинированный органический экстракт промывали солевым раствором и сушили над Να0Η. Отфильтрованный раствор обрабатывали раствором сухой НС1 в диэтиловом эфире и упаривали. Сухой диэтиловый эфир добавляли к твердому остатку, собирали на

- 17 008863 фильтре и промывали сухим эфиром с получением 11 (0,105 г, 47%) в виде бесцветного твердого вещества.

'Н ЯМР (СПС1₃, ТМС) δ: 1,03 (6Н, с, 3,5-СН_3еч); 1 06 (6Н, с, 3,5-СН_3ах); 1,29 (2Н, с, 4-СН₂); 1,63 (2Н, д, 13 Гц, 2,6-СН_ах); 1,80 (2Н, д, 13 Гц, 2,6-СН_еч), 2,71 (2Н, д, 7 Гц, СН₂С=); 5,10-5,40 (2Н, м, =СН₂); 5,75-

6,25 (1Н, м, =СН) и 8,25 м.д. (3Н, ушир. с, ΝΠ₃ ⁺).

Пример синтеза 4

Г идрохлорид 1-(3,3,5,5-тетраметилциклогексилиден)-2-пропанамина (24).

Раствор 1-метил-2-(3,3,5,5-тетраметилциклогексилиден)этилазида (10) (0,33 г, 1,5 ммоль) в сухом диэтиловом эфире (4 мл) добавляли по каплям к перемешиваемой суспензии литийалюминийгидрида (0,152 г, 4 ммоль) в эфире (15 мл) на протяжении 10 мин. Эту смесь перемешивали в течение 4 ч, затем ее обрабатывали 20% водным №ОН (8 мл). Водный слой экстрагировали эфиром (2x15 мл). Органические экстракты объединяли, промывали солевым раствором и сушили над №ОН. Отфильтрованный раствор обрабатывали сухим раствором НС1 в эфире и упаривали в вакууме. К твердому остатку добавляли сухой эфир и его собирали на фильтре и промывали сухим эфиром с получением 24 (0,18 г, 54%) в виде бесцветного твердого вещества.

'Н ЯМР (СОС1₃, ТМС) δ: 0,89 (6Н, с), 0,92 (3Н, с) и 0,98 (3Н, с, 3',5'-СН₃); 1,27 (2Н, с, 4'-СН₂); 1,47 (3Н, д, 6,5 Гц, 3-СН₃); 1,84 (1Н, д, 13,5 Гц, 2'-СН); 1,87 (2Н, с, 6'-СН₂), 2,06 (1Н, д, 13,5 Гц, 2'-Сн); 4,17 (1Н, дкв, 6,5 и 9,5 Гц, 2-Сн); 5,35 (1Н, д, 9,5 Гц, =СН) и 8,25 м.д. (3Н, ушир. с, ΝΠ₃ ⁺).

Примеры синтеза 5, 6 и 7

Схема

Пример синтеза 5

Г идрохлорид 1-(1 -аллил-3,3,5,5-тетраметилциклогексил)пиперидина (13).

a) 1-(3,3,5,5-Тетраметил-1-циклогексенил-1)пиперадин (12).

Получали конденсацией пиперидина (1,2 экв.) и 3,3,5,5-тетраметилциклогексанона нагреванием в бензоле с азеотропным удалением воды. Неочищенный продукт получали удалением исходных материалов в условиях вакуумной перегонки (100°С/10 мм рт.ст.). Масло янтарного цвета.

'Н ЯМР (СПС1₃, ТМС) δ: 0,94 (6Н, с) и 0,97 (6Н, с, 3',5'-СН₃); 1,25 (2Н, с, 4'-СН₂); 1,40-1,70 (6Н, м, пиперидин 3,4,5-СН₂); 1,76 (2Н, с, 6'-СН₂); 2,60-2,85 (4Н, м, пиперидин 2,6-СН₂) и 4,40 м.д. (1Н, с,=СН).

b) Гидрохлорид 1-(1-аллил-3,3,5,5-тетраметилциклогексил)пиперидина (13).

К раствору енамина 12 (2,1 г, 9 ммоль) в ТГФ (20 мл) добавляли уксусную кислоту (0,675 г,

11,25 ммоль). Эту смесь перемешивали в течение 5 мин, и добавляли порошок цинка (0,74 г,

11,25 ммоль). Затем добавляли по каплям раствор аллилбромида (1,63 г, 13,5 ммоль) в ТГФ (5 мл), и эту смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 6 ч. Добавляли водный №₂СО₃, и полученную смесь экстрагировали эфиром. Экстракт промывали солевым раствором, сушили над безводным Мд§О₄ и концентрировали в вакууме. Остаток разделяли колоночной хроматографией на силикагеле (гексан, 5% ЕЮАС в гексане). Фракцию с КТ 0,85 (гексан-БЮАС, 13:2) собирали, упаривали и обрабатывали сухим раствором НС1 в эфире. Осадок фильтровали и промывали смесью гексан-ЕЮАС с получением 13 (0,79 г, 29%) в виде бесцветного твердого вещества.

'Н ЯМР (СПС1₃, ТМС) δ: 1,07 (6Н, с, 3', 5'-СН_3еД, 1,10 (6Н, с, 3',5'-СН_3ах); 1,34 (1Н, д, 12,2 Гц) и 1,45 (1Н, д, 12,2 Гц, 4'-СН₂); 1,70-1,95 (6Н, м, 2',6'-СН_ах и пиперидин 3,5-СН, 4-СН₂,); 2,37 (2Н, д, 13,4 Гц, 2',6'СН_еч); 2,40-2,70 (2Н, м, пиперидин 3,5-СН); 2,76 (2Н, д, 7,2 Гц, СН₂С=); 2,75-3,00 (2Н, м, пиперидин 2,6СН); 3,64 (2Н, д, 11,6 Гц, пиперидин 2,6-СН); 5,13 (1Н, д, 9,6 Гц) и 5,24 (1Н, д, 17,8 Гц, =СН₂); 5,85-6,15 (1Н, м, =СН) и 10,72 м.д. (1Н, ушир. с, ΝΉ).

- 18 008863

Пример синтеза 6

Гидрохлорид 1-[3,3,5,5-тетраметил-1-(3-метил-2-бутенил)циклогексил]пиперидина (14).

Получали из пиперидина 12 в соответствии с процедурой для соединения 13 (пример синтеза 5Ь) с использованием 4-бром-2- метил-2-бутена вместо аллилбромида. Выход: 20%.

¹Н ЯМР (ΟϋΟ1₃, ТМС) δ: 1,07 и 1,08 (всего 12Н, оба с, 3',5'-СН₃), 1,32 и 1,44 (2Н, оба д, 14,2 Гц, 4'-СН₂); 1,69 и 1,76 (6Н, оба с, =С(СН₃)₂); 1,68-1,96 (4Н, м, 3,5-СН и 4-СН₂₎); 1,84 (2Н, д, 13,4 Гц, 2',6'- СН_ах); 2,31 (2Н, д, 13,4 Гц, 2',6' -СН_ед); 2,40-2,80 (4Н, м, Ν(0Η)₂, 3,5-СН); 2,60 (2Н, д, 7,2 Гц, СН₂С=); 3,63 (2Н, д, 10,4 Гц, ^СН)₂); 5,31 (1Н, т, 6,8 Гц, =СН) и 10,55 м.д. (1Н, ушир. с, ΝΗ).

Пример синтеза 7

Гидрохлорид 1-[3,3,5,5-тетраметил-1-(2-пропинил)циклогексил]пиперидина (15).

Получали из пиперидина 12 в соответствии с процедурой для соединения 13 (пример синтеза 5Ь) с использованием 3-бромпропина вместо аллилбромида. Выход: 6%.

¹Н ЯМР (СОС1₃, ТМС) δ: 1,07 (6Н, с, 3',5'-СН_3ед), 1,11 (6Н, с, 3',5'-СН_3ах); 1,23 и 1,44 (всего 2Н, оба д, 14,3 Гц, 4'-СН₂); 1,75-2,00 (4Н, м, пиперидин 3,5-СН, 4-СН₂); 1,91 (2Н, д, 13,2 Гц, 2',6'-СН_ах); 2,28 (1Н, с, НСС); 2,34 (2Н, д, 13,2 Гц, 2',6'-СН_ед); 2,40-2,70 (2Н, м, пиперидин 3,5-СН); 2,81 (2Н, с, СН₂СС); 2,85-3,10 (2Н, м, пиперидин 2,6-СН); 3,69 (2Н, д, 10,2 Гц, пиперидин 2,6-СН) и 11,12 м.д. (1Н, ушир.с, ХН).

Примеры синтеза 8 и 9

Схема

Гидрохлорид 2-(3,3,5,5-тетраметил-1-винилциклогексил)этанамина (19).

a) Этил-2-(3,3,5,5-тетраметил-1-винилциклогексил)ацетат (16).

Смесь триэтилортоацетата (18,6 мл, 102 ммоль), 2-(3,3,5,5-тетраметилциклогексилиден)этанола (3) (4,63 г, 25,4 ммоль) и пропионовой кислоты (0,19 мл, 2,5 ммоль) нагревали при 145°С в течение 10 ч. Этанол отгоняли из этой смеси в ходе реакции. Реакционную смесь охлаждали и выливали в воду (100 мл). Водную фазу экстрагировали гексаном (2x50 мл) и объединенные органические фазы промывали 5% водным КН8О₄ (50 мл). Экстракт сушили над Мд8О₄, фильтровали и упаривали. Остаток очищали флеш-хроматографией на силикагеле (легкий петролейный эфир и смесь легкий петролейный эфирэтилацетат, 100:2) с получением 16 (4,64 г, 73%) в виде масла.

¹Н ЯМР (СОС1₃, ТМС) δ: 0,91 (6Н, с, 3,5-СН₃); 1,01 (6Н, с, 3,5-СН₃); 1,23 (3Н, т, 7 Гц, этил СН₃); 1,00-1,30 (4Н, м, 4-СН₂ и 2,6-СН); 1,86 (2Н, д, 13 Гц, 2,6-СН); 2,22 (2Н, с, СН₂С=0); 4,08 (2Н, кв, 7 Гц, этил СН₂); 5,06 и 5,07 (всего 2Н, оба д, 11 и 17,5 Гц, =СН₂) и 5,95 м.д. (1Н, дд, 11 и 17,5 Гц, -СН=).

b) 2-(3,3,5,5-Тетраметил-1-винилциклогексил) уксусная кислота (17).

Раствор \аО11 (1,03 г, 25,8 ммоль) и ацетат 16 (1,3 г, 5,15 ммоль) в метаноле (26 мл) нагревали с обратным холодильником при дефлегмации в течение 3 ч. Эту смесь охлаждали до комнатной температуры и выливали в воду (100 мл). Водную фазу подкисляли концентрированной водной НС1 и экстрагировали гексаном (3x30). Объединенные органические фазы промывали солевым раствором и сушили над СаС1₂, фильтровали и упаривали. Остаток очищали флеш-хроматографией на силикагеле (легкий петролейный эфир-этилацетат, 10:1) с получением 17 (0,7 г, 71%) в виде бесцветного твердого вещества с т. пл. 92-94°С.

¹Н ЯМР (СОС1₃, ТМС) δ: 0,92 (6Н, с, 3,5-СН₃); 1,02 (6Н, с, 3,5-СН₃); 1,00-1,30 (4Н, м, 4-СН₂ и 2,6СН); 1,90 (2Н, д, 14 Гц, 2,6-СН); 2,27 (2Н, с, СН₂С=0); 5,11 и 5,13 (всего 2Н, оба д, 11 и 18 Гц, =СН₂); 5,99 (1Н, дд, 18 и 11 Гц, =СН) и 10,80 м.д. (1Н, ушир. с, СООН).

- 19 008863

с) 2-(3,3,5,5-Тетраметил-1-винилциклогексил)ацетамид (18).

Ν-Гидроксисукцинимид (0,25 г, 2,2 ммоль) и Ν,Ν'-дициклогексилкарбодиимид (0,45 г, 2,2 ммоль) добавляли к раствору циклогексилуксусной кислоты 17 (0,45 г, 2 ммоль) в ТГФ (5 мл). Эту смесь перемешивали в течение 18 ч при комнатной температуре и охлаждали на бане со льдом. Добавляли 25% водный N11₄С1 (2 мл) в виде одной порции и эту смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Осадок отфильтровывали и промывали диэтиловым эфиром (30 мл). Органическую фазу фильтрата отделяли и промывали 5% водным КН8О₄ (10 мл) и солевым раствором. Экстракт сушили над М§8О₄, фильтровали и упаривали. Остаток очищали флеш-хроматографией на силикагеле (легкий петролейный эфир-этилацетат, 4:1-1:1) с получением 18 (0,34 г, 76%) в виде бесцветного твердого вещества с т. пл. 44-46°С.

¹Н ЯМР (СЭС13, ТМС) δ: 0,91 (6Н, с, 3,5-СЩ); 1,02 (6Н, с, 3,5-СЩ); 1,00-1,30 (4Н, м, 4-СН₂ и 2,6СН); 1,85 (2Н, д, 14 Гц, 2,6-СН); 2,13 (2Н, с, СН₂С=0); 5,18 и 5,19 (всего 2Н, оба д, 18 и 11 Гц, =СН₂); 5,40 и 5,60 (всего 2Н, оба ушир. с, ΝΗ₂) и 6,03 м.д. (1Н, дд, 18 и 11 Гц, =СН).

ά) Гидрохлорид 2-(3,3,5,5-тетраметил-1-винилциклогексил)этанамина (19).

Смесь Ь1А1Н₄ (0,41 г, 11 ммоль) и амида 18 (0,30 г, 1,4 ммоль) в ТГФ (18 мл) нагревали с обратным холодильником при дефлегмации в течение 17 ч. Затем ее охлаждали на бане со льдом и добавляли по каплям воду (30 мл). Полученную суспензию экстрагировали гексаном (3x30 мл) и объединенные органические фазы промывали солевым раствором. Экстракт сушили над \аО11, фильтровали и концентрировали до объема ~10 мл. 4,8 М раствор НС1 в диэтиловом эфире (1 мл) добавляли и полученную суспензию упаривали досуха. Осадок обрабатывали ацетонитрилом (5 мл) и осадок собирали на фильтре и сушили в вакууме над \аО11 с получением 19 (0,16 г, 50%) в виде бесцветного твердого вещества.

¹Н ЯМР (СЭС13, ТМС) δ: 0,89 (6Н, с, 3,5-СЩ); 1,02 (6Н, с, 3,5-СЩ); 0,90-1,80 (8Н, м, протоны кольца и этанамин -2-СН₂); 2,92 (2Н, ушир. с, СН₂К); 5,05 и 5,15 (2Н, оба д, 18 и 11 Гц, =СН₂); 5,77 (1Н, дд, 18 и 11 Гц, =СН) и 8,10 м.д. (3Н, ушир. с, ΝΗ₃ ⁺).

Пример синтеза 9

Гидрохлорид 3-(3,3,5,5-тетраметилциклогексилиден)пропанамина 32.

Триэтиламин (0,25 мл, 1,76 ммоль) и дифенилфосфорилазид (0,38 мл, 1,76 ммоль) добавляли к раствору кислоты 17 (0,36 г, 1,6 ммоль) в бензоле (6 мл). Эту смесь нагревали с обратным холодильником при дефлегмации в течение 2 ч, охлаждали до комнатной температуры и упаривали досуха. К остатку добавляли холодную (~5°С) концентрированную водную НС1 (3 мл). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч и делали сильнощелочной добавлением 10% водного \аО11. К этой смеси добавляли гексан (20 мл) и обе фазы фильтровали. Осадок промывали гексаном (2x5 мл) и водой (2x5 мл). Органическую фазу фильтрата отделяли. Водную фазу промывали гексаном (2x10 мл). Объединенные органические фазы промывали солевым раствором (10 мл), сушили над \аО11 и фильтровали. 4,8 М раствор НС1 в диэтиловом эфире (1 мл) добавляли и полученную суспензию упаривали. Осадок перекристаллизовывали из ацетонитрила и сушили в вакууме над Р₂О₅ с получением 32 (0,1 г, 43%) в виде бесцветного твердого вещества.

¹Н ЯМР (СЭС1₃, ТМС) δ: 0,90 и 0,92 (всего 12Н, оба с, с-Нех-3,5-СН₃); 1,23 (2Н, с, с-Нех-4-СН₂); 1,86 и 1,92 (всего 4Н, оба с, с-Нех-2,6 -СН₂); 2,49 (2Н, кв, 7 Гц, пропанамин-2-СН₂); 2,98 (2Н, т, 7 Гц, пропанамин-1-СН₂); 5,15 (1Н, т, 7 Гц, =СН-) и 8,30 м.д. (3Н, ушир. с, ΝΗ₃+).

Примеры синтеза 10 и 11

Пример синтеза 10

Гидрохлорид 2-(3,3,5,5-тетраметилциклогексилиден) этамина (22).

а) 3,3,5,5-Тетраметилциклогексилиденацетонитрил (20).

60% дисперсию \а11 в минеральном масле (0,96 г, 24 ммоль) добавляли к раствору диэтилцианометилфосфоната (4,25 г, 24 ммоль) в ТГФ (30 мл) при охлаждении ледяной водой. Эту смесь перемешивали

- 20 008863 в течение 30 мин и добавляли по каплям раствор 3,3,5,5-тетраметилциклогексанона (3,08 г, 20 ммоль) в ТГФ (10 мл). Охлаждающую баню удаляли и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 72 ч. Ее выливали в ледяную воду (100 мл) и экстрагировали диэтиловым эфиром (3x50 мл). Объединенные органические фазы промывали солевым раствором, сушили над Мд§О₄, фильтровали и упаривали. Неочищенный продукт очищали флеш-хроматографией на силикагеле (легкий петролейный эфирэтилацетат, 10:1) с получением 20 (2,38 г, 71%) в виде бесцветного масла.

Ή ЯМР (СБС1₃, ТМС) δ: 0,97 и 1,01 (всего 12Н, оба с, 3',5'-СН₃); 1,36 (2Н, с, 4'-СН₂); 2,01 (2Н, с, 2'СН₂); 2,26 (2Н, с, 6'-СН₂) и 5,14 м.д. (1Н, с, =СН).

Ъ) Гидрохлорид 2-(3,3,5,5-тетраметилциклогексилиден)этанамина (22).

Суспензию Ь1Л1Н₄ (0,68 г, 18 ммоль) в диэтиловом эфире (30 мл) охлаждали на бане со льдом и добавляли 1 М раствор Ζπί’Ε в диэтиловом эфире (9 мл, 9 ммоль). Полученную смесь перемешивали в течение 15 мин и добавляли по каплям раствор нитрила 20 (1 г, 6 ммоль) в диэтиловом эфире (30 мл) при поддержании температуры 0-5°С. Затем баню со льдом удаляли, и эту смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч. Добавляли воду (30 мл) и 20% водный ΝαΟΗ (20 мл) при охлаждении на бане со льдом. Водную фазу экстрагировали диэтиловым эфиром (4x50 мл). Объединенные органические фазы промывали солевым раствором (50 мл) и сушили над ΝαΟΗ, фильтровали и упаривали. Осадок очищали перегонкой с коротким шариковым холодильником при 160°С/20 мм рт. ст. Дистиллят разбавляли диэтиловым эфиром и добавляли 4,8 М раствор НС1 в диэтиловом эфире (3 мл). Полученный осадок собирали на фильтре, промывали диэтиловым эфиром (3x5 мл) и сушили в вакууме над ΝαΟΗ с получением 22 в виде бесцветного твердого вещества.

Ή ЯМР (СБС1₃, ТМС) δ: 0,91 и 0,92 (всего 12Н, оба с, 3',5'-СН₃); 1,28 (2Н, с, 4'-СН₂); 1,89 и 1,93 (всего 4Н, оба с, 2',6'-СН₂); 3,62 (2Н, д, 7 Гц, СН₂Щ; 5,41 (1Н, т, 7 Гц, -С=СН) и 8,3 м.д. (3Н, ушир. с, ΝΗ₃+).

Пример синтеза 11

Гидрохлорид 2-(3,3,5,5-тетраметилциклогексилиден)пропанамина (23).

a) 2-(3,3,5,5-Тетраметилциклогексилиден)пропионитрил (21).

Получали в соответствии с процедурой для соединения 20 (пример синтеза 10а) с использованием диэтил(1-цианоэтил)фосфоната. Нитрил 21 получали в виде бесцветного масла с выходом 41%.

Ή ЯМР (СБС1₃, ТМС) δ: 0,96 и 1,00 (всего 12Н, оба с, с-Нех-3,5-СН₃); 1,34 (2Н, с, с-Нех-4-СН₂); 1,91 (3Н, с, пропионитрил -3-СН₃); 2,04 и 2,28 м.д. (всего 4Н, оба с, с-Нех-2,6-СН₂).

b) Гидрохлорид 2-(3,3,5,5-тетраметилциклогексилиден)пропанамина (23).

Получали из нитрила 21 в соответствии с процедурой для соединения 22 (пример синтеза 10 Ъ). Гидрохлорид амина 23 получали в виде бесцветного твердого вещества.

Ή ЯМР (СБС1₃, ТМС) δ: 0,92 и 0,93 (всего 12Н, оба с, с-Нех-3,5-СН₃); 1,27 (2Н, с, с-Нех-4-СН₂); 1,89 (3Н, с, пропанамин-3-СН₃); 1,99 и 2,01 (всего 4Н, оба с, с-Нех-2,6-СН₂); 3,64 (2Н, ушир. с, пропанамин 4-СН₂) и 8,40 м.д. (3Н, ушир. с, ΝΗ₃+).

Пример синтеза 12

- 21 008863

Пример синтеза 12

Гидрохлорид (Е, 2)-1-(3,3-диэтил-5,5-диметилциклогексилиден)-2-пропанамина (28).

a) 1-аллил-3,3-диэтил-5,5-диметилциклогексанол (26).

К перемешиваемому 1 М эфирному раствору аллилмагнийбромида (20 мл, 20 ммоль) добавляли по каплям раствор 3,3-диэтил-5,5-диметилциклогексанона (25) (1,47 г, 8,06 ммоль) в сухом эфире (5 мл). Эту смесь перемешивали в течение 1 ч при температуре окружающей среды и кипятили с обратным холодильником при дефлегмации в течение 10 мин. Затем ее охлаждали ледяной водой и обрабатывали насыщенным водным N11₄С1 (40 мл). Органический слой отделяли и промывали водой и солевым раствором. После сушки над безводным М§8О₄ раствор концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (легкий петролейный эфир). Фракцию с КТ 0,7 (гексан :Е1ОАС, 13:2) собирали. Выпаривание растворителя давало 26 (1,35 г, 74%) в виде бесцветного масла.

¹Н ЯМР (СВС1₃, ТМС) δ: 0,74 (6Н, т, 7 Гц, 2СН₃ этил); 0,88 (3Н, с, 5-СН_3еч); 1,19 (3Н, с, 5-СН_3ах); 0,80-2,05 (10Н, м, 2,4,6-СН2 и 2СН2 этил); 2,14 (2Н, д, 7 Гц, С^С=); 4,95-5,30 (2Н, м, =СН₂) и 5,65-6,20 м.д. (1Н, м, =СН).

b) (Е,2)-1-Метил-2-(3,3-диэтил-5,5-диметилциклогексилиден)этилазид (27).

Получали из циклогексанола 26 в соответствии с процедурой для соединений 9 и 10 (пример синтеза 3, Ь). Азид 27 получали в виде бесцветного масла с выходом 15%.

¹Н ЯМР (СОС1₃, ТМС) δ: 0,73 и 0,74 (всего 6Н, оба т, 7 Гц, 2СН₃ этил); 0,91, 0,94 и 0,97 (всего 6Н, все с, 5',5'-СН₃); 1,10-1,45 (4Н, м, 2СН₂ этил); 1,22 (3Н, д, 6,5 Гц, 1-СН₃); 1,26 (2Н, с, 4'-СН₂); 1,89 (2Н, с) и 1,97 (2Н, м, 2',6'-СН2); 4,08-4,48 (1Н, м, 1-СН) и 5,18 м.д. (1Н, дм, 9,5 Гц, =СН).

c) Гидрохлорид (Е,2)-1-(3,3-диэтил-5,5-диметилциклогексилиден)-2-пропанамина (28).

Получали из азида 27 в соответствии с процедурой для соединения 24 (пример синтеза 4). Гидрохлорид амина 28 получали в виде бесцветного твердого вещества с выходом 16%.

¹Н ЯМР (СВС1₃, ТМС) δ: 0,72 (6Н, ушир. т, 7 Гц, 2СН₃ этил), 0,90, 0,92 и 0,98 (всего 6Н, все с, 5',5'СН₃); 1,25 (6Н, м, 4' -СН₂ и 2СН₂ этил); 1,47 (3Н, д, 6,5 Гц, 2-СН₃); 1,70-2,25 (2Н, ушир. АВ кв, 13 Гц, 2'СН₂); 1,87 (2Н, с, 6'-СН₂), 4,18 (1Н, м, 2-СН); 5,34 (1Н, ушир. д, 9,5 Гц, =СН) и 8,38 м.д. (3Н, ушир. с, ΝΗ3⁺).

Гидрохлорид 2-метил-1-(3,3,5,5-тетраметилциклогексилиден)-2-пропанамина (31).

a) 2-метил-1-(3,3,5,5-тетраметилциклогексилиден)-2-пропанол (29).

Раствор ацетата 2 (2,14 г, 10 ммоль) в диэтиловом эфире (20 мл) добавляли к 1,6 М раствору \1е1а в диэтиловом эфире (26 мл, 40 ммоль) при охлаждении на бане со льдом. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Затем ее охлаждали на бане со льдом и добавляли по каплям насыщенный водный ХН₄С1 (20 мл). Водную фазу экстрагировали диэтиловым эфиром (2x30 мл). Объединенные органические фазы промывали солевым раствором (30 мл), сушили над М§8О₄, фильтровали и упаривали. Остаток очищали перегонкой с коротким шариковым холодильником (100°С/4 мм рт. ст.) с получением 29 (1,86 г, 86%) в виде бесцветного масла.

¹Н ЯМР (СВС1₃, ТМС) δ: 0,91 и 0,96 (всего 12Н, оба с, с-Нех-3,5-СН₃); 1,25 (2Н, с, с-Нех-4-СН₂); 1,38 (6Н, с, -С(СН₃)₂О); 1,79 и 2,23 (оба 2Н, оба с, с-Нех- 2,6-СН₂) и 5,39 м.д. (1Н, с, =СН-).

b) 2-Азидо-2-метил-1-(3,3,5,5-тетраметилциклогексилиден)пропан (30) ВЕ₃Е1₂О (0,3 мл, 2,4 ммоль) добавляли к раствору спирта 29 (0,42 г, 2 ммоль) и ТМ8Х₃ (0,31 мл, 2,4 ммоль) в бензоле (4,5 мл) в течение 3 мин при охлаждении на бане со льдом. Реакционную смесь перемешивали при 5-10°С в течение 1 ч и фильтровали через короткую колонку с силикагелем. Раствор упаривали и остаток очищали флешхроматографией на силикагеле (легкий петролейный эфир) с получением 30 (0,30 г, 64%) в виде бесцветного масла.

¹Н ЯМР (СВС1₃, ТМС) δ: 0,92 и 0,98 (всего 12Н, оба с, с-Нех-3, 5-СН₃); 1,27 (2Н, с, с-Нех- 4-СН₂); 1,40 (6Н, с, -С(СН₃)₂Х₃); 1,85 и 2,23 (оба 2Н, оба с, с-Нех-2, 6-СН₂) и 5, 27 м.д. (1Н, с, =СН-).

c) Гидрохлорид 2-метил-1-(3,3,5,5-тетраметилциклогексилиден)-2-пропанамина (31).

Получали из азида 30 с использованием процедуры для амина 24 (пример синтеза 14). Гидрохлорид амина 31 получали в виде бесцветного твердого вещества с выходом 69%.

- 22 008863 ¹Н ЯМР (СЭС1₃, ТМС) δ: 0,91 и 0,98 (всего 12Н, оба с, с-Нех-3,5-СН₃); 1,26 (2Н, с, с-Нех- 4-СН₂); 1,68 (6Н, с, -С(СН₃)₂Х); 1,84 и 2,10 (оба 2Н, оба с, с-Нех-2, 6-СН₂); 5,15 (1Н, с, =СН-) и 8,5 м.д. (3Н, ушир. с, ΝΗ3+).

Пример синтеза 14 и 15

Схема

Пример синтеза 14

Гидрохлорид 3,5,5-триметил-2-циклогексен-1-амина (35).

a) 3-Азидо-1,5,5-триметил-1-циклогексен (34).

К охлажденной (0°С) суспензии азида натрия (0,81 г, 12,5 ммоль) в СН₂С1₂ (5 мл) добавляли по каплям 53% водную Н₂8О₄ (8 мл). Смесь перемешивали в течение 10 мин, затем добавляли раствор 3,5,5-триметил-2-циклогексанола (33) (0,70 г, 5 ммоль) в СН₂С1₂ (8 мл). Эту смесь перемешивали в течение 20 ч, выливали в ледяную воду, нейтрализовали водным ΝΗ₄ΟΗ и экстрагировали СН₂С1₂. Экстракт промывали солевым раствором и сушили над М§8О₄. Фильтрование и выпаривание растворителя при поддержании температуры ниже 25 °С давали масло, которое разделяли колоночной хроматографией на силикагеле (легкий петролейный эфир). Фракцию с КГ 0,8 (гексан) собирали. Выпаривание растворителя давало 34 в виде бесцветного масла (0,365 г, 44%).

¹Н ЯМР (СЭС1₃, ТМС) δ: 0,89 и 1,01 (всего 6Н, оба с, 5,5-СН₃); 1,34 (1Н, м, с-4-СН); 1,55-1,95 (3Н, м, 4-СН, 6-СН2); 1,71 (3Н, с, 1-СН₃); 3,90 (1Н, м, 3-СН) и 5,39 м.д. (1Н, с, ОСН).

b) Гидрохлорид 3,5,5-триметил-2-циклогексен-1-амина (35). Получали из азида 34 в соответствии с процедурой для соединения 11 (пример синтеза 13с). Гидрохлорид амина 35 получали в виде бесцветного твердого вещества с выходом 57%.

¹Н ЯМР (СЭС1₃, ТМС) δ: 0,89 и 1,03 (всего 6Н, оба с, 5,5-СН₃); 1,25-2,15 (4Н, м, 4,6-СН₂); 1,72 (3Н, с, 3-СН3); 3,88 (1Н, м, 1-СН); 5,41 (1Н, с, С=СН) и 8,40 м.д. (3Н, ушир. с, Ν^+).

Пример синтеза 15

Гидрохлорид 1,3,5,5-тетраметил-2-циклогексен-1-амина (40).

a) Смесь 1,3,5,5-тетраметил-1,3-циклогексадиена (37) и 1,5,5-триметил-3-метилен-1-циклогексена (38).

К перемешиваемому 2 М эфирному раствору метилмагнийиодида (15 мл, 30 ммоль) добавляли по каплям раствор 3,5,5-триметил-2-циклогексен-1-она (36) (1,38 г, 10 ммоль) в сухом эфире (15 мл). Эту смесь перемешивали в течение 1 ч, охлаждали ледяной водой и осторожно обрабатывали 15% водной СН3СООН (15 мл). Смесь перемешивали в течение дополнительного часа. Органический слой отделяли и промывали водой и насыщенным водным \а11СО₃. После сушки над М§8О₄ раствор концентрировали в вакууме. Остаток очищали флеш-хроматографией (легкий петролейный эфир, КГ 0,95 (гексан)) с получением смеси 37 и 38 (0,955 г, 70%) (7:10, в расчете на ОС) в виде масла.

¹Н ЯМР (СЭС1₃, ТМС) δ: 0,89, 0,98 и 1,03 (всего 10,2Н, все с, 5,5-СН₃); 1,55-2,20 (всего 12, 6Н, м, СН2С= и СН3С=); 4,69 (2Н, дм, 4 Гц, =СН₂); 5,06 (0,7Н, м, =СН); 5,50 (0,7Н, серт, 1,5 Гц, =СН) и 5,92 м.д. (1 Н, м, =СН).

b) 3-Азидо-1,5,5,5-тетраметил-1-циклогексен (39).

Получали из смеси 37 и 38 в соответствии с процедурой для соединения 34 (пример синтеза 14а). Азид 39 получали в виде бесцветного масла с выходом 43%.

¹Н ЯМР (СЭС1₃, ТМС) δ: 0,93 и 0,99 (всего 6Н, оба с, 5,5-СН₃); 1,31 (3Н, с, 1-СН₃); 1,36 и 1,62 (всего 2Н, оба д, 13 Гц, 4-СН₂); 1,72 (5Н, с, 1-СН₃, 6-СН2); 5,32 (1Н, с, С=СН).

c) Гидрохлорид 1,3,5,5-тетраметил-2-циклогексен-1-амина (40)

Получали из азида 39 в соответствии с процедурой для соединения 11 (пример синтеза 13с).

Гидрохлорид амина 40 получали в виде бесцветного твердого вещества с выходом 60%.

¹Н ЯМР (СЭС1₃, ТМС) δ: 0,96 и 1,07 (всего 6Н, оба с, 5,5-СН₃); 1,56 (3Н, с, 1-СН₃); 1,73 (3Н, с, 3СН3); 1,60-2,05 (4Н, м, 4,6-СН2); 5,49 (1Н, с, С=СН) и 8,27 м.д. (3Н, ушир. с, №₃+).

- 23 008863

Пример синтеза 16

Схема

Пример синтеза 16

Гидрохлорид 1,3,транс-5-триметил-цис-3-винилциклогексанамина (45).

a) 3,5-Диметил-3-винилциклогексанон (42).

М раствор винилмагнийбромида в ТГФ (90 мл, 90 ммоль) охлаждали на бане со смесью ледацетон до -20°С в инертной атмосфере и добавляли в виде одной порции СиС1 (4,45 г, 45 ммоль). Смесь перемешивали в течение 30 мин, и добавляли по каплям раствор 3,5-диметил-2-циклогексен-1-она (41) (3,73 г, 30 ммоль) в ТГФ (40 мл) при поддержании температуры реакции при -20°С. Охлаждающую баню удаляли и реакционной смеси давали достичь комнатной температуры в течение 2 ч. Добавляли осторожно насыщенный водный ΝΗ |С1 (50 мл) при охлаждении на бане со льдом. Затем добавляли гексан (150 мл) и водный слой отделяли и экстрагировали гексаном (2х100 мл). Объединенные органические экстракты промывали 20% водной уксусной кислотой (100 мл) и насыщенным водным №НСО₃(3х200 мл). Экстракт сушили над М§8О₄, фильтровали и упаривали. Неочищенный продукт очищали флеш-хроматографией на силикагеле (легкий петролейный эфир-этилацетат, 20:1) с получением 42 (2,4 г, 52%) в виде бесцветного масла.

¹Н ЯМР (СЭС1₃, ТМС) δ: 0,99 (3Н, д, 6 Гц, 5-СН₃); 1,11 (3Н, с, 3-СН₃); 1,2-2,6 (7Н, м, протоны кольца); 4,94 и 5,01 (всего 2Н, оба д, 17 и 10,5 Гц, СН₂=) и 5,64 м.д. (1Н, дд, 17 и 11 Гц, =СН).

b) 1,3,транс-5-Триметил-цис-3-винилциклогексанол (43).

Раствор кетона 42 (1 г, 6,6 ммоль) в диэтиловом эфире (10 мл) добавляли к 1,6 М раствору метиллития в диэтиловом эфире (12 мл, 19,6 ммоль) при охлаждении на бане со льдом. Полученную смесь перемешивали в течение 1 ч при 0-5°С и осторожно добавляли насыщенный водный \Н.|С1 (10 мл). Водный слой отделяли и экстрагировали диэтиловым эфиром (2х15 мл). Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором (20 мл) и сушили над М§8О₄. Экстракт фильтровали и упаривали. Неочищенный продукт очищали флеш-хроматографией на силикагеле (3% этилацетат в легком петролейном эфире). Циклогексанол 43 (0,82 г, 74%) получали в виде бесцветного масла, которое использовали в следующей стадии без его характеристики.

c) 1-Азидо-1,3, транс-5-триметил-цис-3-винилциклогексан (44).

Получали из циклогексанола 43 в соответствии с процедурой для соединения 9 (пример синтеза 13Ь). Азид 44 получали в виде бесцветного масла с выходом 17%. М., ¹Н ЯМР (СЭС13, ТМС) δ: 0,94 (3Н, д, 6,5 Гц, 5-СН3); 0,97 (3Н, с, 3-СН3); 1,27 (3Н, с, 1-СН3); 0,7-2,0 (7Н, м, протоны кольца); 4,95 и 4,97 (всего 2Н, оба д, 18 и 11 Гц, =СН₂) и 5,77 м.д. (1Н, дд, 18 и 11 Гц, =СН).

ά) Гидрохлорид 1,3,транс-5-триметил-цис-3-винилциклогексанамина (45).

Получали из азида 44 в соответствии с процедурой для соединения 11 (пример синтеза 13с). Гидрохлорид амина 45 получали в виде бесцветного твердого вещества с выходом 32%.

¹Н ЯМР (СЭС1₃, ТМС) δ: 0,92 (3Н, д, 6,5 Гц, 5-СН₃); 0,96 (3Н, с, 3-СН₃); 1,45 (3Н, с, 1-СН₃); 0,8-2,1 (9Н, м, 2,4,6-СН₂, 5-СН и Н₂О); 4,94 и 4,97 (2Н, оба д, 18 и 11 Гц, =СН₂), 5,76 (1Н, дд, 18 и 11 Гц, =СН) и 8,26 м.д. (3Н, ушир. с, ΝΗ₃ ⁺).

- 24 008863

Пример синтеза 17

Схема

Пример синтеза 17

Г идрохлорид 2-(1,3,3,5,5-пентаметилциклогексил)-4-пентениламина(49).

a) Этил-2-циано-2-(1,3,3,5,5-пентаметилциклогексил) ацетат (47).

Хлорид меди (I) (0,05 г, 0,5 ммоль) добавляли к охлажденному (-10°С) в атмосфере аргона 1 М метилмагнийиодиду в этиловом эфире (15 мл, 15 ммоль) и перемешивали в течение 5 мин. Затем добавляли по каплям раствор ацетата 46 (2,5 г, 10 ммоль) в ТГФ (25 мл) на протяжении 20 мин при поддержании температуры ниже 0°С. Смесь перемешивали в течение 1 ч, реакцию гасили насыщенным водным N11₄С1 и экстрагировали диэтиловым эфиром. Экстракт промывали солевым раствором, сушили над безводным \1дЗО.|, фильтровали и упаривали. Остаток очищали флеш-хроматографией на силикагеле (легкий петролейный эфир-этилацетат, 20:1) с получением 47 (1,5 г, 56,5%) в виде бесцветного масла.

¹Н ЯМР (СЭС13, ТМС) δ: 1,01, 1,07 и 1,09 (всего 12Н, с, 3',5'-СНэ); 1,00-1,85 (6Н, м, СН кольца); 1,30 (3Н, с, 1-СНэ); 1,33 (3Н, т, 7 Гц, СНэ-этил); 3,44 (1Н, с, 2-СН) и 4,27 м.д. (2Н, кв, 7 Гц, ОСН₂).

b) Этил-2-циано-2-(1,3,3,5,5-пентаметилциклогексил)-4-пентеноат (48).

К раствору цианоацетата 47 (1,25 г, 4,71 ммоль) в безводном ДМСО (10 мл) добавляли гидрид натрия (0,284 г, 7,09 ммоль; 60% дисперсия в минеральном масле). Смесь перемешивали в течение 30 мин при 50°С и охлаждали до 20°С.

Добавляли аллилбромид (0,86 г, 7,1 ммоль) и эту смесь перемешивали в течение 3 ч при комнатной температуре, затем 30 мин при 50°С. Смесь охлаждали, обрабатывали водой и экстрагировали диэтиловым эфиром. Экстракт промывали водой и солевым раствором, сушили над безводным МдЗОд, фильтровали и упаривали. Остаток очищали флеш-хроматографией на силикагеле (легкий петродейный эфирэтилацетат, 20:1) с получением 48 (0,92 г, 63,7%) в виде бесцветного масла.

¹Н ЯМР (СЭС13, ТМС) δ: 0,98 (6Н, с, 3',5'-СН3екв); 1,11 (6Н, с, 3',5'-СН3ах); 1,00-1,85 (6Н, м, СН кольца); 1,31 (3Н, т, 7 Гц, СН₃-этил); 1,33 (3Н, с, 1'-СН₃); 2,42 и 2,86 (всего 2Н, оба дд, 13 и 7 Гц, 3-СН₂); 4,02 (2Н, кв, 7 Гц, ОСН₂); 5,05-5,37 (2Н, м, =СН₂) и 5,55-6,05 м.д. (1Н, м, =СН).

c) Гидрохлорид 2-(1,3,3,5,5-пентаметилциклогексил)-4-пентениламина (49).

К раствору эфира 48 (0,9 г, 2,95 ммоль) в ДМСО (10 мл) добавляли воду (0,53 мл, 2,95 ммоль) и хлорид лития (0,25 г, 5,9 ммоль). Смесь перемешивали в течение 3 ч при 175-180°С, затем ее охлаждали и добавляли воду (30 мл). Смесь экстрагировали диэтиловым эфиром. Экстракт промывали водой и солевым раствором, сушили над безводным МдЗОд, фильтровали и концентрировали до объема 10 мл. Полученный раствор добавляли по каплям к суспензии литийалюминийгидрида (0,25 г, 6,6 ммоль) в диэтиловом эфире (15 мл) и перемешивали с обратным холодильником при дефлегмации в течение 3 ч. Смесь охлаждали и обрабатывали 20% водным \аО11 и экстрагировали диэтиловым эфиром. Экстракт промывали солевым раствором, сушили над \аО11, фильтровали и обрабатывали безводным раствором НС1 в диэтиловом эфире. После выпаривания растворителя остаток очищали хроматографией на силикагеле (хлороформ-метанол, 20:1) с получением 49 (0,24 5 г, 31%) в виде бесцветного твердого вещества.

¹Н ЯМР (ДМСО-Й6, ТМС) δ: 0,92, 0,96 и 1,04 (всего 15Н, все с, 3',5'-СН3 и Г-СН3), 1,00-1,65 (всего 6Н, м, СН₂ кольца); 1,85-2,40 (3Н, м, 3-СН₂, 4-СН); 2,60-3,10 (2Н, м, СН₂К); 4,90-5,25 (2Н, м, =СН₂); 5,626,10 (1Н, м, =СН) и 7,92 м.д. (3Н, ушир. С, ΝΠ₃ ⁺).

Пример синтеза 18

Гидрохлорид 1,экзо-3,5-триметил-6-азабицикло[3.2.1]октана (1-1).

а) 1,экзо-3,5-Триметил-6-азабицикло[3.2.1]окт-6-ен (5-1).

Смесь 1,3,3,транс-5-тетраметилциклогексанамина (4-1) (3,88 г, 25 ммоль), К₂СО₃ (28 г, 0,2 ммоль) и тетраацетата свинца (22,2 г, 50 ммоль) в сухом бензоле (125 мл) перемешивали в течение 3 ч при кипячении с обратным холодильником при дефлегмации. Затем смесь охлаждали ледяной водой и фильтровали. Осадок промывали диэтиловым эфиром и фильтрат упаривали при пониженном давлении. Маслянистый остаток разделяли колоночной хроматографией на силикагеле (дихлорметан-изопропиловый спирт, 20:1, 10:1). Фракцию с КГ 0,7 (Е1ОАС) собирали с получением после концентрирования при пониженном дав

- 25 008863 лении 1,0 г (26%) имина 5-1 в виде масла янтарного цвета.

'Н ЯМР (СОС1₃, ТМС) δ: 0,86 (3Н, д, 6 Гц, 3-СН₃), 0,90-1,80 (7Н, м, СН кольца); 1,12 (3Н, с, 1-СН₃); 1,34 (3Н, с, 5-СН₃) и 7,36 м.д. (1Н, с, НС=).

Ь) Гидрохлорид 1,экзо-3,5-триметил-6-азабицикло[3.2.1]октана (1-1).

Раствор имина 5-1 (0,8 г, 5,3 ммоль) в МеОН (2 мл) добавляли по каплям к суспензии боргидрида натрия (0,4 г, 10,6 ммоль) в МеОН (6 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч, затем добавляли 10 мл 5% водного №1ОН. Смесь экстрагировали диэтиловым эфиром. Органическую фазу промывали насыщенным водным №1С1 и сушили над шариками №1ОН. Отфильтрованный раствор обрабатывали сухим раствором НС1 в диэтиловом эфире, упаривали при пониженном давлении и остаток перекристаллизовывали из сухого ΟΗ^Ν с получением соединения 1-1 в виде бесцветного твердого вещества (0,33 г, 35%).

'Н ЯМР (СОС1₃, ТМС) δ: 0,96 (3Н, д, 6 Гц, 3-СН₃), 0,95-1,15 (1Н, м, 2-СН); 1,11 (3Н, с, 1-СН₃); 1,41 (1Н, д, 12,4 Гц, 8-СН); 1,55-1,70 (1Н, м, 2-СН); 1,57 (3Н с, 5-СН₃); 1,70-1,90 (2Н, м, 4-СН и 8-СН); 2,002,30 (2Н, м, 3-СН и 4-СН); 3,00-3,25 (2Н, м, 7-СН₂) и 9,30-9,85 м.д. (2Н, ушир. с, ΝΗ₂+).

Пример синтеза 19

Гидрохлорид 5-этил-1,экзо-3-диметил-6-азабицикло[3.2.1]октана (1-2).

a) 1-Азидо-1-этил-3,3,транс-5-триметилциклогексан (7).

Охлажденную (~0°С) смесь 1-этил-3,3,транс-5-триметилциклогексанола (6) (3,3 г, 18,1 ммоль), азида натрия (2,36 г, 36,3 ммоль) и трифторуксусной кислоты (10,7 мл) в хлороформе (50 мл) перемешивали в течение 24 ч. Затем смесь делали щелочной добавлением разбавленного водного аммиака. Органическую фазу отделяли, промывали водой и сушили над К₂СО₃. Фильтрование и выпаривание растворителя при пониженном давлении давали маслянистый остаток, которые разделяли флеш-хроматографией на силикагеле с элюцией легким петролейным эфиром с получением азида 7 (2,0 г, 56%) в виде бесцветного масла.

Ή ЯМР (СОС1₃, ТМС) δ: 0,64 (1Н, д, 14 Гц, СН кольца); 0,85-2,15 (8Н, м, СН кольца и ЕГСН₂); 0,90 (3Н, д, 7 Гц, 5-СН₃); 0,92 (3Н, с, 3-СН_3еч); 0,97 (3Н, т, 7,5 Гц, ЕГСН₃) и 1,10 м. д. (3Н, с, 3-СН_3ах).

b) 1-Этил-3,3,транс-5-триметилциклогексанамин (4-2).

Раствор азида 7 (1,97 г, 10 ммоль) в диэтиловом эфире (10 мл) добавляли по каплям к суспензии литийалюминийгидрида (1,13 г, 30 мл) в диэтиловом эфире (30 мл). Смесь перемешивали в течение 20 ч при комнатной температуре. Затем реакцию осторожно гасили 10% водным №1ОН. Органическую фазу отделяли и водную фазу экстрагировали диэтиловым эфиром. Объединенные органические фазы промывали насыщенным водным №1С1 и сушили над №1ОН. Фильтрование и выпаривание растворителя при пониженном давлении давали амин 4-2 (1,36 г, 80%) в виде масла.

Ή ЯМР (СОС1₃, ТМС) δ: 0,55-2,15 (9Н, м, СН кольца и ЕГСН₂); 0,88 (3Н, с, 3-СН_3еч); 0,89 (3Н, д,

6,5 Гц, 5-СН₃); 0,89 (3Н, т, 7 Гц, ЕГСН₃) и 1,12 м.д. (3Н, с, 3-СН_3ах).

c) Гидрохлорид 5-этил-1,экзо-3-диметил-6-азабицикло[3.2.1]октана (1-2)

Получали с 30% выходом из имина 5-2 в соответствии с процедурой, описанной в примере 18Ь. Бесцветное твердое вещество.

'Н ЯМР (СОС1₃, ТМС) δ: 0,95-1,15 (7Н, м, СН кольца, 3-СН₃ и СН₃-ЕЦ; 1,12 (3Н, с, 1-СН₃); 1,48 (1Н, д, 13,6 Гц, 8-СН); 1,55-1,76 (3Н, м, СН кольца и СН₂Ер; 1,84-2,04 (2Н, м, СН кольца) и 2,04-2,28 (2Н, м, 4,8-СН); 3,14 (2Н, м, 7-СН₂) и 9,40 м.д. (2Н, ушир. с, ΝΗ₂ ⁺).

ά) 5-Этил-1,экзо-3-диметил-6-азабицикло[3.2.1]окт-6-ен (5-2).

Получали с 32% выходом из амина 4-2 в соответствии с процедурой, описанной в примере 18а. Масло.

Ή ЯМР (СОС1₃, ТМС) δ: 0,82-0,95 (1Н, м, СН кольца); 0,91 (3Н, д, 6 Гц, 3-СН₃), 0,94 (3Н, т, 7,5 Гц, Е1-СН₃); 1,15-1,75 (6Н, м, СН кольца); 1,15 (3Н, с, 1-СН₃); 1,71 (2Н, кв, 7,5 Гц, ЕБСН₂) и 7,38 м.д. (1Н, с, НС=).

Пример синтеза 20

Гидрохлорид экзо-3-этил-1,5-диметил-6-азабицикло [3.2.1] октана (1-3).

а) Трет-бутил-транс-5-этил-1,3,3-триметилциклогексилкарбамат (8-1).

К раствору гидрохлорида 1, 3,3-триметил-транс-5-этилциклогексанамина (4-3) (1,54 г, 7,5 ммоль) в ТГФ (20 мл) добавляли №ьСО₃ (3,18 г, 30 ммоль) и смесь перемешивали в течение 30 мин. Затем ее охлаждали ледяной водой, добавляли ди-трет-бутилдикарбонат (1,7 г, 7,65 ммоль) и перемешивание продолжали в течение 20 ч. Добавляли воду и смесь дважды экстрагировали диэтиловым эфиром. Объединенные экстракты промывали насыщенным водным №С1, сушили над Мд§О₄ и упаривали. Твердый остаток обрабатывали гексаном, фильтровали и промывали гексаном с получением карбамата 8-1. Дополнительное количество 8-1 выделяли после упаривания фильтрата и обработки ацетонитрилом. Карбамат 8-1 (1,18 г, 57%) получали в виде бесцветного твердого вещества с т. пл. 70-71°С.

Ή ЯМР (СОС1₃, ТМС) δ: 0,65-1,65 (7Н, м, ϋΗ₂-Εΐ и СН кольца); 0,88 (3Н, т, 6,5 Гц, СН₃-ЕЦ; 0,88 и 0,99 (оба 3Н, с, 3,3-СН₃); 1,42 (9Н, с, ΐ-Ви); 1,85 (1Н, дкв, 13,5 и 2,5 Гц, 6-С1Е); 2,24 (1Н, д, 14 Гц, 2-СН_е) и 4,30 м.д. (1Н, ушир.с, ΝΗ).

- 26 008863

b) Трет-бутил-экзо-3-этил-1,5-диметил-6-азабицикло[3.2.1]октан-6-карбоксилат (9-1).

К смеси карбамата 8-1 (1,05 г, 3,85 ммоль) и иода (1,95 г, 7,7 ммоль) в сухом бензоле (35 мл) добавляли тетраацетат свинца (3,92 г, 8,85 ммоль) в виде одной порции. Смесь перемешивали при кипячении с обратным холодильником при дефлегмации в течение 4 ч, затем охлаждали ледяной водой и фильтровали. Осадок промывали диэтиловым эфиром и фильтрат осторождно промывали насыщенным водным метабисульфитом калия и затем насыщенным водным ЫаНСО₃. Органическую фазу промывали насыщенным водным ЫаС1, сушили над Мд8О₄ и упаривали. Остаток очищали флеш-хроматографией на силикагеле (легкий петролейный эфир-этилацетат, 20:1) с получением соединения 9-1 (0,76 г, 73%) в виде бесцветного масла.

Ή ЯМР (СОС1₃, ТМС) δ: 0,86 (3Н, т, 6,5 Гц, СН₃-Е!); 1,00 (3Н, с, 1-СН₃); 1,00-1,80 (7Н, м, СН₂-Е! и СН кольца); 1,46 (12Н, с, ΐ-Ви и 5-СН₃); 1,95-2,45 (2Н, м, СН кольца); 3,06 и 3,36 м.д. (оба 1Н, д, 11 Гц, 7СН2).

c) Гидрохлорид экзо-3-этил-1,5-диметил-6-азабицикло[3.2.1]октана (1-3).

Карбамат 9-1 (0,73 г, 2,7 ммоль) добавляли к раствору трифторуксусной кислоты (3 мл) в дихлорметане (15 мл) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 ч. Раствор упаривали при пониженном давлении и остаток обрабатывали 10% водным ЫаОН (5 мл) и экстрагировали диэтиловым эфиром. Экстракт промывали насыщенным водным ЫаС1 и сушили над ЫаОН. Отфильтрованный раствор обрабатывали безводным раствором НС1 в диэтиловым эфире. Отфильтрованный раствор упаривали при пониженном давлении и остаток обрабатывали сухим ацетонитрилом с получением гидрохлорида амина 1-3 в виде бесцветного твердого вещества (0,34 г, 62%).

Ή ЯМР (СОС1₃, ТМС) δ: 0,85-2,45 (9Н, м, 2,4,8-СН₂, 3-СН и СН₂-Е!); 0,90 (3Н, т, 7 Гц, СН₃-Е!); 1,12 (3Н, с, 1-СН₃); 1,59 (3Н, с, 5-СН₃); 3,13 (2Н, т, 6 Гц, 7 -СН₂) и 9,55 м.д. (2Н, ушир. с, ЫН).

Пример синтеза 21

Гидрохлорид 1,3,3,5-тетраметил-6-азабицикло[3.2.1]октана (1-4).

a) трет-Бутил-1,3,3,5,5-пентаметилциклогексилкарбамат (8-2).

Получали с 70% выходом из гидрохлорида 1,3,3,5,5-пентаметилциклогексанамина (4-4) в соответствии с процедурой, описанной в примере 20а. Очищали флеш-хроматографией на силикагеле (легкий петролейный эфир-этилацетат, 20:1). Бесцветное масло.

Ή ЯМР (СОС1₃, ТМС) δ: 0,87 (6Н, с, 3,5-СН_3еч); 0,90-1,45 (4Н, м, 4-СН₂ и 2,6-СН_ах); 1,12 (6Н, с, 3,5СН_3ах); 1,27 (3Н, с, 1-СН₃); 1,42 (9Н, с, ΐ-Ви); 2,24 (2Н, д, 15 Гц, 2,6-СН_еч) и 4,30 м.д. (1Н, ушир. с, ЫН).

b) трет-Бутил-1,3,3,5-тетраметил-6-азабицикло[3.2.1]октан-6-карбоксилат (9-2).

Получали с 48% выходом из карбамата 8-2 в соответствии с процедурой, описанной в примере 20Ь. Бесцветное масло.

Ή ЯМР (СОС1₃, ТМС) δ: 0,91, 0,94 и 0,99 (всего 9Н, все с, 1,3,3-СН₃); 0,80-1,75 (5Н, м, СН кольца); 1,34 и 1,52 (всего 3Н, оба с, 5-СН₃); 1,41 и 1,44 (всего 9Н, оба с, ΐ-Ви); 1,91 и 2,09 (всего 1Н, оба д, 1 14,5 Гц, 6-СН); 3,00 и 3,28 (один ротамер); и 3,03 и 3,33 (другой ротамер; всего 2Н, все дд, 11 и 2 Гц, 7-СН₂).

c) Гидрохлорид 1,3,5,5-тетраметил-6-азабицикло[3.2.1]октана (1-4).

Получали с 68% выходом из карбамата 9-2 в соответствии с процедурой, описанной в примере 20с. Бесцветное твердое вещество.

Ή ЯМР (СОС1₃, ТМС) δ: 1,00, 1,13 и 1,29 (всего 9Н, с, 1,3,3-СН₃); 1,25-1,65 (4Н, м, 2-СН₂ и 4,8-СН); 1,64 (3Н, с, 5-СН₃); 1,81 (1Н, дт, 12,4 и 2,3 Гц, 4-СН); 2,21 (1Н, д, 14,5 Гц, 8-СН); 3,10-3,40 (2Н, м, 7-СН₂); 9,10 и 9,90 м.д. (всего 2Н, оба ушир. с, ЫН₂ ⁺).

Пример синтеза 22

Гидрохлорид 1,3,3,5,5-пентаметил-6-азабицикло[3.2.1]октана (1-5).

a) Метил 1,3,3,5,5-тетраметил-6-азабицикло[3.2.1]октан-6-карбоксилат (11).

Получали с 50% выходом из метил-1,3,3,5,5-пентаметилциклогексилкарбамата (10) в соответствии с процедурой, описанной в примере 20Ь. Бесцветное масло.

Ή ЯМР (СОС1₃, ТМС) δ: 0,87 и 0,96 (всего 9Н, оба с, 1,3,3-СН₃); 1,00-1,70 (4Н, м, 2-СН₂ и 4,8-СН); 1,33 и 1,46 (всего 3Н, оба с, 1-СН₃); 1,70-1,20 (2Н, м, 4,8-СН); 3,04 и 3,34 (основной ротамер) и 3,10 и 3,39 (минорный ротамер; всего 2Н, все дд, 11,5 и 1,5 Гц, 7-СН₂); 3,59 (основной) и 3,64 (всего 3Н, оба с, ОСН3).

b) Гидрохлорид 1,3,3,5,5-пентаметил-6-азабицикло[3.2.1]октана (1-5).

Раствор карбамата 11 (1,0 г, 4,44 ммоль) в диэтиловом эфире (10 мл) добавляли к суспензии литийалюминийгидрида (0,34 г, 9 ммоль) в диэтиловом эфире (25 мл). Смесь перемешивали в течение 20 ч при комнатной температуре. Затем ее охлаждали ледяной водой и реакцию осторожно гасили 10% водным ЫаОН. Органическую фазу отделяли и водную фазу экстрагировали диэтиловым эфиром. Объединенные органические фазы промывали насыщенным водным ЫаС1 и сушили над ЫаОН. Отфильтрованный раствор обрабатывали избыточным количеством сухого раствора НС1 в диэтиловом эфире. Растворитель выпаривали при пониженном давлении, и остаток обрабатывали сухим ацетонитрилом и диэтиловым эфиром (2:1) и охлаждали в холодильнике в течение 24 ч. Осадок фильтровали и промывали диэтиловым эфиром с получением гидрохлорида амина 1-5 (0,25 г, 26%) в виде бесцветного твердого вещества.

- 27 008863

Ή ЯМР (СЦС1₃, ΤΜϋ) δ: 1,03, 1,09, 1,16 и 1,22 (всего 9Н, все с, 1,3,3 -СН₃); 1,44 (3Н, с, 5-СН₃); 1,502,50 (6Н, м, 2,4,8-СН₂); 2,73 (д, 5 Гц) и 2,80 (всего 3Н, д, 5,5 Гц, Ы-СН₃); 2,55 (м) и 2,94 (всего 1Н, дд, 12 и 6 Гц, 7-СН); 3,73 (дд, 12 и 8,5 Гц) и 4,07 (всего 1Н, дд, 13 и 7 Гц, 7-СН); 9,50 и 10,80 м.д. (всего 1Н, ушир. с, ΝΗ⁺).

Пример синтеза 23

Гидрохлорид 5-этил-1,3,3-триметил-6-азабицикло[3.2.1]октана (1-6).

a) 5-Этил-1,3,3-триметил-6-азабицикло[3.2.1]окт-6-ен (5-3).

Получали с 28% выходом из 1-этил-3,3,5,5-тетраметилциклогексанамина (4-5) в соответствии с процедурой, описанной в примере 18а. Масло.

Ή ЯМР (СОС1₃, ТМС) δ: 0,93 (3Н, с, 3-СН₃); 0,94 (3Н, т, 7,4 Гц, Е!-СН₃); 0,98 (3Н, с, 3 -СН₃); 1,15 (3Н, с, 1-СН₃); 1,20-1,50 (5Н, м, СН кольца); 1,57 (1Н, дт, 12,4 и 2 Гц, СН кольца); 1,69 (2Н, дкв, 7,5 и 2,8 Гц, Е!-СН₂) и 7,47 м.д. (1Н, с, НС=).

b) Гидрохлорид 5-этил-1,3,3-триметил-6-азабицикло[3.2.1]октана (1-6).

Получали с 33% выходом из имина 5-3 в соответствии с процедурой, описанной в примере 18Ь. Бесцветное твердое вещество.

Ή ЯМР (СОС1₃, ТМС) δ: 1,01 (3Н, с, 3-СН₃); 1,03 (3Н, т, 7,5 Гц, СН₃-Е!); 1,13 и 1,31 (оба 3Н, с, 1,3СН₃); 1,25-1,35 (1Н, м, СН кольца); 1,35-1,65 (4Н, м, СН₂-Е! и СН кольца); 1,69 (1Н, д, 12 Гц, 2-СН); 1,922,12 (2Н, м, 4,8-СН); 3,05-3,45 (2Н, м, 7-СН₂): 9,05 и 9,65 м.д. (оба 1Н, ушир. с, ΝΗ₂ ⁺).

Пример синтеза 24

Гидрохлорид 1,экзо-3,5,экзо,эндо-7-тетраметил-6-азабицикло[3.2.1]октана (1-7).

a) трет-Бутил-цис-3-этил-1,3,транс-5-триметилциклогексилкарбамата (8-3).

Получали с 81% выходом из гидрохлорида 1,3,5-триметил-цис-3-этилциклогексанамина (4-6) в соответствии с процедурой, описанной в примере 20а. Очищали флеш-хроматографией на силикагеле (легкий петролейный эфир-этилацетат, 20:1). Бесцветное масло.

Ή ЯМР (СОС1₃, ТМС) δ: 0,63 (1Н, д, 12,5 Гц, СН кольца); 0,70-0,90 (1Н, м, СН кольца); 0,79 (3Н, т,

7,5 Гц, СН₃-Е!); 0,86 (3Н, д, 6,4 Гц, 5-СН₃); 1,28 (3Н, с, 3-СН₃); 1,25-1,85 (6Н, м, СН кольца и СН₂-Е!); 1,41 (9Н, с, !-Ви); 1,52 (3Н, с, 1-СН₃); 2,35 (1Н, д, 12,5 Гц, 2-СН) и 4,31 м.д. (1Н, ушир. с, ΝΉ).

b) трет-Бутил-1,экзо-3,5,экзо,эндо-7-тетраметил-6-азабицикло[3.2.1]октана (9-3).

Получали с 57% выходом из карбамата 8-3 в соответствии с процедурой, описанной в примере 20Ь. Бесцветное масло.

Ή ЯМР (СОС1₃, ТМС) δ: 0,60-1,85 (6Н, м, СН кольца); 0,85-1,15 (6Н, м, 1,3-СН₃); 1,35-1,55 (6Н, м, 5,7-СН₃); 1,45 (9Н, с, !-Ви); 2,06 и 2,27 (всего 1Н, м, СН кольца); 3,36 и 3,51 м.д. (всего 1Н, м, 7-СН).

c) Гидрохлорид 1,экзо-3,5,экзо,эндо-7-тетраметил-6-азабицикло[3.2.1]октана (1-7).

Получали с 70% выходом из карбамата 9-3 в соответствии с процедурой, описанной в примере 20с. Бесцветное твердое вещество.

Ή ЯМР (СОС1₃, ТМС) δ: 0,96 (3Н, д, 5,8 Гц, 3-СН₃); 1,00 (3Н, с, 1-СН₃); 1,00-1,15 (1Н, м, 2-СН); 1,36 (1Н, д, 12 Гц, 8-СН); 1,43 (3Н, д, 7,4 Гц, 7-СН₃); 1,55-1,75 (2Н, м, 2-СН и 4-СН); 1,62 (3Н, с, 5-СН₃); 1,90 (1Н, д, 12,6 Гц, 8-СН); 2,15-2,35 (2Н, м, 3-СН и 4-СН); 3,65 (1Н, м, 7-СН); 9,00 и 9,95 м.д. (всего 2Н, оба ушир. с, ΝΉ₂ ⁺).

Пример синтеза 25

Гидрохлорид 1,экзо-3,5-триметил-экзо,эндо-7-фенил-6-азабицикло[3. 2.1]октана (1-8).

a) 3-Бензил-3,5-диметилциклогексанон (13).

К охлажденному (-20°С) 1 М раствору бензилмагнийбромида в диэтиловом эфире (50 мл) в атмосфере аргона добавляли СиС1 (0,52 г, 5,3 ммоль) и смесь перемешивали в течение 5 мин. Затем добавляли по каплям раствор 3,5-диметил-2-циклогексен-1-она (12) (4,4 г, 35,1 ммоль) в диэтиловом эфире (15 мл) при поддержании температуры ниже -10°С. Смесь перемешивали в течение 2 ч и реакцию гасили 10% водной уксусной кислотой (40 мл). Органический слой отделяли, промывали водой, насыщенным водным ЫаНСО и насыщенным водным ЫаС1 и сушили над Μ§80₄. Фильтрование и концентрирование в вакууме давали маслянистый осадок, который разделяли флеш-хроматографией на силикагеле (легкий петролейный эфир-этилацетат, 10:1). Циклогексанон 13 (4,0 г, 53%) получали в виде бесцветного масла.

Ή ЯМР (СЦС1₃, ТМС) δ: 0,92 (3Н, с, 3-СН₃); 1,06 (3Н, д, 6 Гц, 5-СН₃), 1,10-2,45 (7Н, м, СН кольца); 2,42 и 2,56 (всего 2Н, оба д, 13 Гц, СН₂Рк) и 7,05-7,35 м.д. (5Н, м, Рк).

b) цис-3-Бензил-1,3,транс-5-триметилциклогексанол (14).

Раствор кетона 13 (3,9 г, 18,1 ммоль) в диэтиловом эфире (10 мл) добавляли по каплям к 1 М ΜеΜдI в диэтиловом эфире (40 мл). Смесь перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Полученный эфирный экстракт после обычной обработки для реакций Гриньяра сушили над №ь8О₊ фильтровали и упаривали с получением маслянистого остатка, который очищали флеш-хроматографией на силикагеле (легкий петролейный эфир-этилацетат). Циклогексанол 14 (3,2 г, 76%) получали в виде бесцветного масла.

- 28 008863

Ή ЯМР (СЭС1₃, ТМС) δ: 0,75 (3Н, с, 3-СН₃); 0,95-1,25 (3Н, м, СН кольца); 0,92 (3Н, д, 6,6 Гц, 5-СН₃), 1,23 (3Н, с, 1-СН₃); 1,45-1,75 (3Н, м, СН кольца); 2,05-2,25 (1Н, м, 5-СН); 2,77 и 3,04 (оба 1Н, д, 13 Гц, СН₂Рй) и 7,05-7,35 м.д. (5Н, м, СН арила).

с) №(цис-3-Бензил-1,3,транс-5-триметилциклогексил)-2-хлорацетамид (15).

Серную кислоту (2,1 мл, 3,83 г, 39 ммоль) добавляли по каплям к перемешиваемому раствору циклогексанола 14 (3,0 г, 13 ммоль) и хлорацетонитрила (4,0 г, 52 ммоль) в уксусной кислоте (2,1 мл) при охлаждении ледяной водой. Смесь перемешивали в течение 24 ч при комнатной температуре и затем выливали в ледяную воду (10 мл). Смесь нейтрализовали 20% водным ΝαΟΗ и экстрагировали диэтиловым эфиром (3x15 мл). Объединенные органические фазы промывали насыщенным водным №1С1 и сушили над Мд8О₄. Этот экстракт фильтровали и растворитель выпаривали. Остаток очищали флешхроматографией на силикагеле с элюцией смесью легкого петролейного эфира и этилацетата (10:1) с получением амида 15 (1,32 г, 33%) в виде бесцветного масла.

Ή ЯМР (СЭС1₃, ТМС) δ: 0,73 (3Н, с, 3-СН₃); 0,90-1,40 (3Н, м, СН кольца); 0,98 (3Н, д, 6,6 Гц,

5- СН₃), 1,42 (3Н, с, 1-СН₃); 1,63 (1Н, м, СН кольца); 1,80-2,05 (1Н, м, 5-СН); 2,12 (1Н, дкв, 13,8 и 3 Гц,

6- СН); 2,33 (1Н, д, 12,7 Гц, СН₂Рй); 2,51 (1Н, дт, 15 и 2,2 Гц, 2-СН); 3,17 (1Н, д, 12,7 Гц, СН₂Рй); 3,95 и

3.96 (всего 2Н, оба с, СН₂СО); 6,52 (1Н, ушир. с, ΝΉ) и 7,00-7,35 м.д. (5Н, м, СН арила).

ά) Гидрохлорид цис-3-бензил-1,3,транс-5-триметилциклогексанамина (4-7).

Раствор амида 15 (0,62 г, 2 ммоль) и тиомочевины (0,18 г, 2,4 ммоль) в смеси с этанолом (5 мл) и уксусной кислотой (1 мл) нагревали с обратным холодильником при дефлегмации в течение 10 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и добавляли 20 мл 10% водного №ОН при перемешивании. Полученную смесь экстрагировали диэтиловым эфиром (3x10 мл). Объединенные экстракты промывали насыщенным водным №С1, сушили над №1ОН. фильтровали и обрабатывали сухим раствором НС1 в диэтиловом эфире. Растворитель выпаривали при пониженном давлении и остаток обрабатывали сухим диэтиловым эфиром с получением гидрохлорида амина 4-7 (0,33 г, 35%) в виде бесцветного твердого вещества.

Ή ЯМР (СЭС1₃, ТМС) δ: 0,68 (3Н, д, 6,5 Гц, 5-СН₃); 0,70-1,30 (3Н, м, СН кольца); 0,73 (3Н, с, 3-СН₃); 1,28 (3Н, с, 1-СН₃); 1,50 (1Н, д, 15,4 Гц, СН кольца); 1,60-1,85 (1Н, м, СН кольца); 2,05 (1Н, д, 16 Гц, СН кольца); 2,15-2,50 (1Н, м, 5-СН); 2,47 и 3,33 (оба 1Н, д, 12,8 Гц, СН₂Рй); 7,00-7,35 (5Н, м, СН арила) и 8,42 м.д. (3Н, ушир. с, ΝΉ₃+).

е) 1,экзо-3,5-Триметил-7-фенил-6-азабицикло[3.2.1]окт-6-ен (5-4).

Получали с 40% выходом из свободного амина 4-7 в соответствии с процедурой, описанной в примере 18а. Масло.

Ή ЯМР (СЭС1₃, ТМС) δ: 0,94 (3Н, д, 6,6 Гц, 3-СН₃); 0,90-1,15 (2Н, м, СН кольца); 1,26 (3Н, с, 1-СН₃); 1,30-1,90 (5Н, м, СН кольца); 1,43 (3Н, с, 5-СН₃) и 7,30-7,62 м.д. (5Н, м, СН арила).

Б) Гидрохлорид 1,экзо-3,5-триметил-экзо,эндо-7-фенил-6-азабицикло[3.2.1]октана (1-8).

Получали с 33% выходом из имина 5-4 в соответствии с процедурой, описанной в примере 18Ь. Бесцветное твердое вещество.

Н ЯМР (СЭС1₃, ТМС) δ: 0,75-1,95 (4Н, м, СН кольца); 0,86 (3Н, д, 5,8 Гц, 3-СН₃); 1,20 (3Н, с, 1-СН₃);

1.56 (3Н, с, 5-СН₃); 1,99 (1Н, д, 14,4 Гц, 8-СН); 2,05-2,15 (1Н, м, СН кольца); 2,20-2,30 (1Н, м, СН кольца);

4.57 (1Н, м, 7-СН); 7,24 и 7,65 (всего 5Н, оба ушир. с, Рй); 9,15 и 10,40 м.д. (всего 2Н, оба ушир. с, ΝΉ₂ ⁺).

Пример синтеза 26

Гидрохлорид 1,5,экзо-7-триметил-2-азабицикло[3.3.1]нонана (1-9).

a) 3-{цис-3-[(2-Хлорацетил)амино]-1,3,транс-5-триметилциклогексил} уксусная кислота (16).

К раствору 1,5 г (4,9 ммоль) №(цис-3-бензил-1,3,транс-5-триметилциклогексил)-2-хлорацетамида (полученного из фракции с КБ 0,7-8 (гексаны-ЕЮЛС, 2:1), отделенному после синтеза соединения 15 в примере 25с) в смеси ацетонитрила (16 мл), тетрахлорметана (16 мл) и воды (23 мл) добавляли периодат натрия (10,5 г, 49 ммоль) и диоксид рутения (7 мг, 0,06 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 72 ч, затем ее фильтровали и фильтровальный осадок промывали дихлорметаном. Органическую фазу фильтрата отделяли и водную фазу экстрагировали дихлорметаном. Объединенные органические фазы сушили над СаС12, фильтровали и упаривали. Остаток очищали флешхроматографией на силикагеле с элюцией хлороформом с получением кислоты 16 (0,55 г, 41%) в виде масла.

Ή ЯМР (ДМСО-б₆, ТМС) δ: 0,8-2,6 (7Н, м, СН кольца); 0,84 и 0,85 (всего 3Н, д, 6 Гц, 5-СН₃); 0,92 и 1,01 (всего 3Н, с, 1-СН₃); 1,21 и 1,22 (всего 3Н, с, 3-СН₃); 2,19 и 2,39 (всего 2Н, оба д, 13,5 Гц, СН₂СО);

3.97 м.д. (2Н, с, СН₂С1); 7,57 и 7,70 (всего 1Н, оба ушир. с, ΝΉ) и 12,05 м.д. (1Н, ушир. с, СООН).

b) Этил-2-{цис-3-[(2-хлорацетил)амино]-1,3,транс-5-триметилциклогексил}ацетат (17).

Тионилхлорид (0,73 г, 10 ммоль) добавляли по каплям к раствору кислоты 16 (0,55 г, 1,99 ммоль) в сухом этаноле (5 мл) при охлаждении ледяной водой. Полученный раствор перемешивали в течение 15 ч при комнатной температуре, затем упаривали при пониженном давлении. Остаток очищали флешхроматографией на силикагеле с элюцией смесью петролейного эфира и этилацетата (6:1) с получением этилового эфира 17 (0,32 г, 54%) в виде масла.

- 29 008863 ¹Н ЯМР (СБС1₃, ТМС) δ: 0,7-1,6 (4Н, м, СН кольца); 0,88-0,94 (3Н, м, 5-СН₃); 1,04 и 1,14 (всего 3Н, с, 1-СН₃); 1,25 (2Н, т, 7 Гц, СН₃-этил); 1,35 и 1,36 (всего 3Н, с, 3-СН₃); 1,6-1,8 (1Н, м, 5-СН); 2,05-2,35 (2Н, м, СН кольца); 2,16 и 2,79 (всего 2Н, д, 13 Гц, СН₂СО); 3,92 и 3,95 (всего 2Н, с, СН₂С1); 4,12 (2Н, кв, 7 Гц, СН₂0); 6,42 и 7,28 м.д. (всего 1Н, ушир. с, N4).

с) 1,5,экзо-7-Триметил-2-азабицикло[3.3.1]нонан-3-он (18).

Раствор этилового эфира 17 (0,32 г, 1,07 ммоль) и тиомочевины (0,0 98 г, 1,3 ммоль) в смеси этанола (5 мл) и уксусной кислоты (1,2 мл) нагревали с обратным холодильником при дефлегмации в течение 20 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и растворители выпаривали. Добавляли 10% водный №10Н и смесь экстрагировали хлороформом (3x10 мл). Объединенные органические экстракты сушили над СаС12, фильтровали и упаривали. Остаток очищали флеш-хроматографией на силикагеле с элюцией смесью петролейного эфира и этилацетата (6:1, 3:1). Фракцию с КТ 0,4 (гексан-БЮАС, 2:1) собирали с получением лактама 18 (0,12 г, 39%) в виде бесцветного твердого вещества с т. пл. 176177°С.

¹Н ЯМР (СОС1₃, ТМС) δ: 0,89 (3Н, д, 5,8 Гц, 7-СН₃); 0,75-1,05 (3Н, м, СН кольца); 0,99 (3Н, с, 5СН₃); 1,20 (3Н, с, 1-СН₃); 1,24-1,36 (1Н, м, СН кольца); 1,45-1,60 (2Н, м, СН кольца); 1,60-1,84 (1Н, м, 7СН); 2,14 (2Н, с, 4-СН₂) и 5,40 м.д. (1Н, ушир. с, ЫН).

ά) Гидрохлорид 1, 5, 7-триметил-2-азабицикло [3.3.1]нонана (1-9).

М раствор борана в тетрагидрофуране (2 мл, 2 ммоль) добавляли к раствору лактама 18 (0,07 г, 0,38 5 ммоль) в тетрагидрофуране (2 мл) и нагревали с обратным холодильником при дефлегмации в течение 15 ч. Смесь охлаждали до комнатной температуры и подкисляли до кислой реакции концентрированной водной НС1. Растворители выпаривали при пониженном давлении и к остатку добавляли гексан (10 мл) и 20% водный №10Н (10 мл). Органическую фазу отделяли и водную фазу экстрагировали гексаном (2x5 мл). Объединенные органические фазы промывали насыщенным водным №1С1 (10 мл) и сушили над №0Н. Экстракт фильтровали, и добавляли раствор сухой НС1 в диэтиловом эфире. Растворитель выпаривали и остаток обрабатывали диэтиловым эфиром (5 мл). Осадок собирали на фильтре с получением гидрохлорида амина 1-9 (0,02 г, 25%) в виде бесцветного твердого вещества.

'Н ЯМР (СОС1₃, ТМС) δ: 0,80-1,85 (7Н, м, СН кольца); 0,88 (3Н, д, 6,5 Гц, 7-СН₃); 0,96 (3Н, с, 5СН3); 1,50 (3Н, с, 1-СН₃); 2,10-2,40 (2Н, м, 7-СН и 8-СН); 3,15-3,35 и 3,30-3,55 (оба 1Н, м, 3-СН₂); 9,15 и 9,55 м.д. (оба 1Н, ушир. с, ЯН₂+).

Пример синтеза 27

Гидрохлорид 7,7,9,9-тетраметил-1-азаспиро [4.5]декана (3-1).

a) 3,3,5,5-тетраметил-1-(2-фенилэтил)циклогексанол (20-1).

Раствор 3,3,5,5-пентаметилциклогексанона (19) (1,54 г, 10 ммоль) в диэтиловом эфире (10 мл) добавляли к 0,85 М раствору фенилэтилмагнийбромида в диэтиловом эфире (25 мл, 20 ммоль) при охлаждении на бане со льдом. Полученную смесь перемешивали в течение 0,5 ч, и добавляли осторожно насыщенный водный №Н₄С1 (30 мл). Органическую фазу отделяли и водную фазу промывали диэтиловым эфиром (2x20 мл). Объединенные органические фазы промывали насыщенным водным №1С1 (20 мл) и сушили над Мд§0₄. Фильтрование и упаривание раствора давало остаток, который очищали флешхроматографией на силикагеле с элюцией смесью легкого петролейного эфира и этилацетата (10:1) с получением циклогексанола 20-1 (2,1 г, 82%) в виде масла.

'Н ЯМР (СПС1₃, ТМС) δ: 0,91 (6Н, с, 3,5-СН₃); 1,23 (6Н, с, 3,5-СН₃); 1,0-1,6 (7Н, м, кольца протонов и ОН); 1,6-1,8 (2Н, м, РЬСН₂СН₂); 2,6-2,8 (2Н, м, РЬСН₂СН₂) и 7,0-7,4 м.д., (5Н, м, РЬ).

b) 2-хлор-Ы-[3,3,5,5-тетраметил-1 -(2-фенилэтил)циклогексил]ацетамид (21-1).

Получали с 96% выходом из циклогексанола 20-1 в соответствии с процедурой, описанной в примере 25с. Бесцветное масло.

'Н ЯМР (СПС1₃, ТМС) δ: 0,93 (6Н, с, 3,5-СН₃); 1,17 (6Н, с, 3,5-СН₃); 1,0-1,5 (4Н, м, 4-СН₂, 2,6-СН); 2,0-2,2 (2Н, м, РЬСН₂СН₂); 2,24 (2Н, д, 14 Гц, 2,6-СН); 2,5-2,6 (2Н, м, РЬСН₂СН₂), 3,90 (2Н, с, СН₂С1); 6,60 (1Н, ушир. с, N4) и 7,1-7,3 ррт (5Н, м, РЬ).

c) 3-{1-[(2-хлорацетил)амино]-3,3,5,5-тетраметилциклогексил}пропановая кислота (22-1).

Получали с 53% выходом из амина 21-1 в соответствии с процедурой, описанной в примере 26а. Бесцветные кристаллы с т. пл. 130-131°С.

'Н ЯМР (СПС1₃, ТМС) δ: 0,92 (6Н, с, 3,5-СН₃); 1,17 (6Н, с, 3,5-СН₃); 1,0-1,5 (4Н, м, 4-СН₂, 2,6-СН,); 2,0-2,4 (6Н, м, ОССН₂СН₂, 2,6-СН); 3,97 (2Н, с, СН₂С1) и 6,6 м.д.. (1Н, ушир. с, ЫН).

ά) Этил-3-{ 1-[(2-хлорацетил)амино]-3,3,5,5-тетраметилциклогексил}пропаноат (23-1).

Получали с 82% выходом из кислоты 22-1 в соответствии с процедурой, описанной в примере 26Ь. Масло.

'Н ЯМР (СОС1₃, ТМС) δ: 0,91 (6Н, с, 3,5-СН₃); 1,14 (6Н, с, 3,5-СН₃); 1,25 (3Н, т, 7 Гц, СН₃СН₂0); 0,8-1,6 (4Н, м, 4-СН₂, 2,6-СН); 2,0-2,4 (6Н, м, ОССН₂СН₂, 2,6-СН); 3,95 (2Н, с, СН₂С1); 4,11 (2Н, кв, 7 Гц, СН₃СН₂0) и 6,50 м.д. (1Н, ушир. с, N4).

е) 7,7,9,9-Тетраметил-1-азаспиро[4.5]декан-2-он (24-1).

- 30 008863

Получали с 54% выходом из эфира 23-1 в соответствии с процедурой, описанной в примере 26с. Бесцветное твердое вещество с т. пл. 158-160°С.

Ή ЯМР (СПС1₃, ТМС) δ: 1,01 (12Н, с, 7,9-СН₃); 1,19 (1Н, Д, 14 Гц, 8-СН); 1,27 (1Н, д, 14 Гц, 8-СН); 1,45 (4Н, с, 6,10-СН₂); 2,02 (2Н, т, 7,5 Гц, 4-СН₂); 2,36 (2Н, т, 7,5 Гц, 3-СН₂) и 5,8 м.д. (1Н, ушир. с, ΝΗ).

ί) Гидрохлорид 7,7,9,9-тетраметил-1-азаспиро[4.5]декана (3-1).

Получали с 76% выходом из спиролактама 24-1 в соответствии с процедурой, описанной в примере 26б. Бесцветное твердое вещество.

Ή ЯМР (СБС1з, ТМС) δ: 1,01 (6Н, с, 7,9-СН₃); 1,08 (6Н, с, 7,9-СН₃); 1,23 (1Н, д, 14 Гц, 8СН); 1,35 (1Н, д, 14 Гц, 8-СН); 1,8 (4Н, ушир. с, 6,10-СН₂); 2,0-2,2 (4Н, м, 3,4-СН₂); 3,3 (2Н, ушир. с, 2-СН₂) и 9,4 м.д. (2Н, ушир. с, ΝΗ₂ ⁺).

Пример синтеза 28

Гидрохлорид 8,8,10,10-тетраметил-1-азаспиро[5.5]ундекана (3-2).

a) 3,3,5,5-Тетраметил-1-(3-фенилпропил)циклогексанол (20-2).

Получали с 90% выходом из кетона 19 в соответствии с процедурой, описанной в примере 27а. Бесцветное масло.

Ή ЯМР (СБС1з, ТМС) δ: 0,86 (6Н, с, 3,5-СН₃); 1,19 (6Н, с, 3,5-СН₃); 1,0-1,8 (11Н, м, кольца протонов, ОН и РЬСН₂СН₂СН₂); 2,60 (2Н, т, 7,5 Гц, РЬСН₂СН₂СН₂) и 7,1-7,4 м.д. (5Н, м, РЬ).

b) 2-Хлор-Ы-[3,3,5,5-тетраметил-1-(3-фенилпропил)циклогексил]ацетамид (21-2).

Получали с 37% выходом из циклогексанола 20-2 в соответствии с процедурой, описанной в примере 25с. Бесцветное твердое вещество с т. пл. 83-85°С.

Ή ЯМР (СБС1з, ТМС) δ: 0,89 (6Н, с, 3,5-СН₃); 1,13 (6Н, с, 3,5-СН₃); 0,9-1,9 (8Н, м, 4-СН₃, 2,6-СН и РЬСН₂СН₂СН₂); 2,15 (2Н, д, 14,5 Гц, 2,6-СН); 2,56 (2Н, т, 8 Гц, РЬСН₂Н₂СН₂); 3,93 (2Н, с, СН₂С1); 6,5 (1Н, ушир. с, N4) и 7,1-7,4 м.д. (5Н, м, РЬ).

c) 4-{1-[(2-Хлорацетил)амино]-3,3,5,5-тетраметилциклогексил}бутановая кислота (22-2). Получали с 74% выходом из амида 21-2 в соответствии с процедурой, описанной в примере 26а.

Бесцветное твердое вещество с т. пл. 140-141°С.

Ή ЯМР (СПС1₃, ТМС) δ: 0,91 (6Н, с, 3,5-СН₃); 1,15 (6Н, с, 3,5 СН₃); 0,9-1,8 (8Н, м, 4-СН₃, 2,6-СН, ОССН₂СН₂СН₂); 2,17 (2Н, д, 14,2 Гц, 2,6 СН); 2,33 (2Н, т, 7,2 Гц, ОССН₂Н₂СН₂); 3,97 (2Н, с, СН₂С1) и

6,6 м.д. (1Н, ушир. с, N4).

б) Этил-4-{ 1-[(2-хлорацетил)амино]-3,3,5,5-тетраметилциклогексил}бутаноат (23-2)

Получали с 98% выходом из кислоты 22-2 в соответствии с процедурой, описанной в примере 26Ъ. Бесцветное масло.

Ή ЯМР (СОС1₃, ТМС) δ: 0,91 (6Н, с, 3,5-СН₃); 1,14 (6Н, с, 3,5-СН₃); 1,25 (3Н, т, 7 Гц, СН₃СН₂О); 0,9-1,8 (4Н, м, 4-СН₂, 2,6-СН, ОССН₂СН₂СН₂); 2,18 (2Н, д, 15 Гц, 2,6-СН); 2,26 (2Н, т, 8,4 Гц, ОССН₂СН₂СН₂); 3,95 (2Н, с, СН₂С1); 4,13 (2Н, кв, 7 Гц, СН₃СН₂О) и 6,52 м.д., (1Н, ушир. с, ΝΚ).

е) 8,8,10,10-Тетраметил-1-азаспиро[5.5]ундекан-2-он (24-2).

Получали с 76% выходом из эфира 23-2 в соответствии с процедурой, описанной в примере 26с.

Бесцветное твердое вещество с т. пл. 126-128°С. М.,

Ή ЯМР (СБС1з, ТМС) δ: 1,01 (6Н,с, 8,10-СН₃); 1,09 (6Н,с, 8,10-СН₃); 1,19 и 1,30 (оба 1Н, д, 14 Гц,

9- СН₂); 1,39 и 1,46 (оба 2Н, д, 14 Гц, 7,11-СН₂); 1,63-1,90 (4Н, м, 4,5-СН₂); 2,33 (2Н, т, 6 Гц, 3-СН₂) и 5,8 м.д., (1Н, ушир. с, Ν4).

ί) Гидрохлорид 8,8,10,10-тетраметил-1-азаспиро[5.5]ундекана (3-2).

Получали с 45% выходом из спиролактама 24-2 в соответствии с процедурой, описанной в примере 26б. Бесцветное твердое вещество.

Ή ЯМР (СПС1₃, ТМС) δ: 1,01 (6Н, с, 8,10-СН₃); 1,09 (6Н, с, 8,10-СН₃); 1,0-2,1 (12Н, м, 3,4,5,7,9,11СН₂); 3,1 (2Н, ушир. с, 2-СН₂) и 9,1 м.д., (2Н, ушир. с, Ν^+Χ

Пример синтеза 29

Гидрохлорид 8,10,10-триметил-6-азатрицикло[6.3.1.0^1,6]додекана (2).

a) 8,10,10-Триметил-6-азатрицикло[6.3.1.0^1,6]додекан-5-он (25).

Получали с 20% выходом из спиролактама 24-2 в соответствии с процедурой, описанной в примере 20,Ъ. Масло.

Ή ЯМР (СБС1з, ТМС) δ: 0,95 (3Н, с, 10-СН₃); 1,00 (3Н, с, 10-СН₃); 1,08 (3Н, с, 8-СН₃); 1,20 (1Н, д, 12 Гц) и 1,25-1,70 (5Н, м, 9, 11, 12-СН₂); 1,75-1,90 (4Н, м, 2,3-СН₂); 2,25-2,40 (2Н, м, 4-СН₂); 3,14 и 3,43 м.д. (оба 1Н, д, 12,0 Гц, 7-СН₂).

b) Гидрохлорид 8,10,10-триметил-6-азатрицикло[6.3.1.0^1,6)додекана (2).

Получали с 36% выходом из лактама 25 в соответствии с процедурой, описанной в примере 26б. Бесцветное твердое вещество.

Ή ЯМР (СБС1з, ТМС) δ: 0,85-2,45 (12Н, м, 2,3,4,9,11,12-СН₂); 0,99 (3Н, с, 10-СН₃); 1,05 (3Н, с,

10- СН₃); 1,19 (3Н, с, 8-СН₃); 3,12 (2Н, м, 5-СН₂); 3,20-3,75 (2Н, м, 7-СН₂) и 9,05 м.д., (1Н, ушир. с, Ν^).

- 31 008863

В. Примеры терапии

Следующие примеры терапии иллюстрируют данное изобретение без ограничения его объема.

Пример терапии 1. Мемантин в комбинации с ингибиторами ацетилхолинэстеразы является хорошо переносимым и эффективным в крупномасштабных клинических испытаниях на человеке.

Автор по данному изобретению проводил исследование среди немецких врачей. В это исследование были включены 158 пациентов с деменцией со средним возрастом 74 года, которых лечили мемантином в комбинации с АСЬЕГ. Мемантин предписывали в широком диапазоне доз (5-60 мг/день, в среднем 20 мг/день) и комбинировали с ЛСЬЕГ, в 84% случаев с донепезилом. Комбинированная терапия хорошо переносилась почти всеми пациентами (98%), в пределах среднего периода наблюдения 4 месяца при стабильных дозах. Большинство пациентов не испытывали серьезных вредных побочных событий или изменений в химии крови (96 и 80% соответственно); все 6 сообщенных побочных событий прекращались без последствий и без прекращения приема любого из лекарственных средств. Общее клиническое состояние большинства пациентов улучшалось (54%) или оставалось стабильным (39%). Эти результаты показывают, что совместное лечение мемантином с АСЬЕГ является безопасным, хорошо переносимым и эффективным.

Способы

В этих исследованиях использовали следующие лекарственные средства: Мемантин (ΑΧϋΕΑ®, Мег/ РЬагшасеийсаЕ, СшЬН, Егапккиг!, Сегшапу; прежнее товарное название ΑΚΑΤΙΝΟΕ®; Донепезил (АКГСЕРТ®, Е1§а1 СшЬН, Ргапккш! апд Рйсег СшЬН, КагЕшЬе, Сегшапу); Ривастигмин (ΕΧΕΕΟΝ®, Νοуагйз РЬагта СтЬН, ШтЬегд, Сегшапу); Такрин (ί,ΌΟΝΕΧ®, ОТЕ РЬагта, РагЕ, Егапсе).

Данное исследование проводили в соответствии с применимым регулирующим законом в Германии. Данное исследование совершалось через частные практики и клиники, занимающиеся памятью, в Германии. Требуемая информация включала в себя базовую демографию, схему введения доз, общую клиническую оценку, переносимость, лабораторную химию и изменения в сопутствующем лечении. Результаты собирали только для пациентов, для которых была подобрана их наилучшая индивидуальная доза обоих лекарственных средств и которые находились на стабильных суточных дозах в течение по меньшей мере 4 недель. Для большинства этих пациентов 4-месячный период наблюдения начинался с начала совместного введения лекарственных средств. Переменные, собранные в начале и в конце этого интервала наблюдения, оценивали статистически посредством анализов клинического впечатления и оценки перед изменением и после изменения.

Из 158 выживших пациентов 81 (51%) были женщинами и 69 (44%) были мужчинами; информация относительно пола отсутствовала для 8 пациентов. Возраст составлял от 26 до 100 лет, в среднем 74 года. 26-летнего пациента лечили в отношении органического когнитивного нарушения, не указанного более подробно. Диагнозы [также приведенные в виде 10 кодов Международной классификации болезней (ВОЗ)] включали в себя болезнь Альцгеймера (АО) [Е 00 и С 30] (121 пациент, 77%), васкулярную деменцию [Е 01] (14 пациентов, 9%), ^охарактеризованную деменцию [Е 03] (14 пациентов, 9%), дегенеративное заболевание нервной системы [С 31] (2 пациента, 1%) и деменцию, вторичную относительно других заболеваний [Е 02 и С 04] (2 пациента, 1%); диагноз был не определенный точно для 5 пациентов (3%). Многие пациенты не имели сопутствующего заболевания (43 пациента, 27%), но обычно сообщалось заболевание кровеносной системы (58 пациентов, 37%).

Суточные дозы мемантина составляли 5-60 мг; доза-медиана - 20 мг/день, как рекомендовано (72, 46%). Существенное большинство пациентов (132, 84%) получали одновременно донепезил; ривастигмин и такрин были другими вводимыми АСЬЕГ; галантамин не был свободно продаваемым на рынке в это время; АСЬЕГ не был охарактеризован точно врачом для 2 пациентов (табл. 1).

Таблица 1

Суточные дозы мемантина и АсЬЕГ

Мемантин (мг/день)	п%	АСНЕ1	п%	Доза (мг/день)/диапазон
5	7(4)	Донепезил	132 (84)	10,0/2,5-10
10	47(30)	Ривастигмин	23(15)	4,5/1,5-12
15	13(8)	Не определен точно	2 (1)	10,0/10-10
20	72 (46)	Такрин	1«1)	160,0/160-160
30	12(8)
40	6(4)
60	1 (<1)

Дозы АСЬЕГ представляют медиану; п=число пациентов.

При ссылочной дате, фиксированной для статистических анализов, продолжительность лечения рассчитывали в виде медианы; мемантин вводили в течение медианы 0,5 лет (0,09-7,27, п=157) и АСЬЕГ в течение медианы 0,6 лет (0,1-4,99, п=141). Для 240 пациентов приводили начальную последовательность для терапии мемантином и АСЬЕГ соответственно (табл. 2).

- 32 008863

Таблица 2

Последовательность терапии

Последовательность терапии	η (N=140)	О. Т
Мемантин после АСЕЕ1	70	50
Одновременное начало мемантина и АСЕЕ1	11	8
Мемантин перед АСЕЕ1	59	42

Результаты

Оценка врачом переносимости совместного лечения была «очень хорошая» для большинства (89, 56%) пациентов и «хорошая» для большинства остальных пациентов (66, 42%). Две оценки переносимости отсутствовали и переносимость была оценена как «слабая» для 1 пациента.

Из 158 пациентов на комбинированной терапии 6 испытывали побочные события; все побочные события прекращались без последствий и без прекращения приема лекарственных средств. Пять из этих шести побочных событий сообщались во время комбинации мемантина и донепезила, тогда как одно имело место после совместного лечения мемантином и ривастигмином. Из этих 6 побочных событий 2 рассматривались как возможно и вероятно связанные с мемантином (слабая тяжесть); одно рассматривалось как возможно связанное с донепезилом (умеренная тяжесть), а для остальных не была дана оценка причинной связи. Ни одно из побочных событий не оценивалось как тяжелое или неожиданное.

Для определения эффективности комбинированной терапии форма документации включала в себя категоризованную шкалу из 4 баллов для оценки общего клинического впечатления, даваемой врачом (очень хорошее/хорошее/плохое/худшее). Эту оценку устанавливали для 155 пациентов. Огромное большинство пациентов были оценены либо как улучшенные (84, 54%), либо как стабилизированные (60, 39%). Для остальных 11 пациентов клиническое состояние ухудшалось (9, 6%) или их состояние не было точно определенным (2, >1%). В разделе неоперационализованных свободных комментариев этой формы наблюдения врачи часто добавляли описания, касающиеся улучшенных коммуникативных способностей и повышенного настроения.

Обсуждение

В настоящее время имеются два одобренных терапевтических принципа, доступных для АО: ингибирование АС НЕ или антагонизм в отношении При условии природы действия АО на различные системы нейротрансмиттеров и с подтверждающими результатами из данного исследования авторы по данному изобретению сделали предположение, что оптимальная фармакотерапия и клиническая эффективность могут быть усилены комбинированием нескольких подходов. До этого исследования эффективность, безопасность и переносимость комбинированного вмешательства в состояние людей с использованием обоих терапевтических агентов были неизвестными.

АСНЕ1 усиливают холинергическое проведение нервных импульсов и некоторые из них одобрены для слабой - умеренной АО (Еаг1о\х е! а1., Агсй. №иго1., 2001, 58:417-422; Кпарр е! а1., 1АМА, 1994, 271:985-991; Мойк е! а1., №иго1оду, 2001, 14:481-488; /игас!, Эгид Вепей! Тгепбк, 2001, 13:27-40). Предполагается, что мемантин уменьшает глутамат-индуцируемую нейронную эксцитотоксичность и является симптоматически эффективным также и в прогрессирующей АЭ (АХлпЫас! апб Ропйк, 1999, выше). Недавно было получено одобрение СРМР для Европейского союза. Мемантин был ранее на рынке Германии в течение многих лет в показании для так называемого «синдрома деменции», который включает в себя болезнь Альцгеймера и другие деменции.

Данное исследование обеспечивает первую рациональную комбинированную фармакотерапию в АО демонстрацией впервые благоприятного действия комбинирования мемантина с АСНЕ1. Более половины наблюдаемых пациентов были оценены их врачами как имеющие клиническое улучшение. Этот тип результата никогда не наблюдали прежде. Прежние терапии достигали только замедления деградации. Терапия по данному изобретению достигала значимо более медленного прогрессирования в некоторых симптомов и улучшение (т.е. обращение деградации) в других. Кроме того, сообщенные здесь клинические результаты показывают отсутствие каких-либо тяжелых побочных событий или реакции на лекарственные средства: огромная доля пациентов хорошо переносила эту комбинацию. В отличие от регулируемых условий эксперимента, данные открытия основываются на условиях реальной жизни со значительным расширением диапазона доз мемантина, в некоторых случаях значительно превышающих рекомендуемую суточную дозу 20 мг; с другой стороны, фактически предписываемые суточные дозы АСНЕ1, по-видимому, находятся в более низкой части диапазонов доз для этих веществ, в частности, для ривастигмина.

Воодушевленные этими результатами, авторы по данному изобретению решили, что терапия мемантином, комбинированным с АСНЕ1, может замедлять прогрессирование этого заболевания обеспечением нейропротекции от эксцитотоксичности и усиливать когнитивную функцию посредством улучшения как глутаматергической, так и холинергической нейротрансмиссии (1асоЫкоп, Еу1бепсе Вакеб Меп!а1 Неа1!Н, 1999, 2:112-113; Рагкопк е! а1., 1999, выше, Оапук/ е! а1., 2000, кирга).

- 33 008863

Пример терапии 2. Применение культур клеток и животных-моделей болезни Альцгеймера в оценивании различных параметров комбинированной терапии с использованием производного 1аминоциклогексана/АСЕЕ1.

Клинические симптомы АО у человека происходят из селективной дегенерации нейронов в участках головного мозга, критических для памяти, когнитивной функции и свойств личности. Дисфункция и смерть этих нейронов приводят к уменьшенным количествам синаптических маркеров в их областяхмишенях; нарушение синаптической связи проявляется психическими нарушениями и, наконец, тяжелой деменцией.

Два типа белковых агрегатов, обнаруженных в головном мозге, являются патологическим признаком АО: внутриклеточные нейрофибриллярные сплетения (клубки) и внеклеточные амилоидные бляшки (в отношении недавнего обзора см. \Уопд е! а1., №11иге ΝοιιΐΌ8θί.. 2002, 5:633-639). Как сплетения, так и бляшки локализованы преимущественно в коре головного мозга, гиппокампе и в миндалине. Нейрофибриллярные клубки являются включениями, расположенными в клеточных телах и проксимальных дендритах и в нитеобразных набуханиях в дистальных аксонах и синаптических окончаниях (терминалях). Гиперфосфорилированные изоформы связанного с микротрубочками белка !аи, которые собираются в слаборастворимые спаренные спиральные филаменты, являются центральным признаком этих нейрофибриллярных сплетений (клубков) (Соебей е! а1., Сигг. Орш. №игоЬю1., 1998, 8:619-632). Внеклеточные бляшки происходят из повышенных уровней белка из приблизительно 39-43 аминокислот 4,2 килодальтон (кДа), называемого β-амилоидным пептидом (РАР) или иногда Ав, АвР или в/А4 (см., например, С1еппег апб ^опд, Вюсйет. Вюрйу8. Ке8. Соттип., 120:885-890, 1984; патент США № 4666829). Молекулярно-биологический и белковый химический анализ показал, что РАР является малым фрагментом гораздо большего белка-предшественника, называемого в-амилоидным белком-предшественником (АРР). АРР является трансмембранным белком типа I, нормально экспрессируемым во многих различных типах клеток, но особенно представленным в нейронах. Мономеры вАР образуют олигомеры и мультимеры, которые собираются в протофиламенты и затем в фибриллы. В конце концов фибриллы вАР располагаются в виде амилоидных сердцевин нейритных или сенильных бляшек (амилоидоз), которые являются сложными структурами, содержащими дистрофические нейриты, астроциты и микроглию.

Патогенные вАР-пептиды образуются расщеплением АРР тремя различными протеазами, называемыми α-, в- и γ-секретазами. А-секретаза расщепляет АРР в Ав с образованием секретируемого производного, 8АРРа, который предотвращает образование Ав. В противоположность этому, расщепления АРР в- и γ-секретазами приводит к образованию в АР, приводящему к отложениям амилоида (см. \Уопд е! а1., 2002, выше).

У некоторых индивидуумов с ранним возникновением АО эта болезнь может наследоваться в виде аутосомной доминанты (т.е. только единственная копия мутантного гена необходима для вызывания этой болезни). Такие мутации идентифицированы по меньшей мере в трех различных генах: АРР, гене пресенилина 1 (Р81) и пресенилина 2 (Р82) (Рпсе е! а1., Аппи. Ке8. Сепе!., 1998, 32: 461-493; Нагбу е! а1., 8с1епсе, 1998, 282:1075-1079; Тапхг №игоп, 2001, 32:181-184; 8е1кое, 1Ь1б., рр. 177-180; 8йеглпд!оп е! а1., №!иге, 1995, 375:754-760; Ееуу-Ьайаб е! а1., 8с1епсе, 1995, 269:973-977; Кодаеу е! а1., №!иге, 1995, 376:775-778).

Большое количество мутаций, сообщаемых в случаях РАО (семейной АО), являются близлежащими сайтами расщепления, участвующими в образовании вАР (см., например, Соа!е е! а1., 1991, №!иге, 349:704-706; Наг1ап е! а1., 1991, №!иге, 353:844-846; Мште1 е! а1. , 1991, 8с1епсе, 254:97-99 и Ми11ап е! а1., 1992, №11иге Сепе!., 1:345-347). Мутация 717 АРР расположена вблизи С-конца вАР и способствует всекретазной активности, приводящей к увеличенной секреции более длинного и более токсичного вАРпептида, вАР42. Считается, что этот более длинный пептид вАР42 усиливает образование агрегатов вАР и амилоидных бляшек. Мутация АРР8^е, двойная мутация на Ν-конце вАР усиливает расщепление ВАСЕ1 и ассоциирована с повышенными уровнями пептидов вАР, в том числе вАР₄₂. В отличие от этого мутации АРР внутри пептидного домена вАР (например, АРР-Е693Р, А692С или Е693С) не повышают уровня вАР, но могут вызывать амилоидоз посредством увеличения образования олигомера или протофибриллы вАР.

Р81 и Р82 кодируют высокогомологичные мультипроходные трансмембранные белки 43-50 кДа, которые процессируются до стабильных Ν-концевых и С-концевых фрагментов и широко экспрессируются, но находятся при низкой представленности в центральной нервной системе. Р81 влияет на процессинг АРР (Вогсйе1! е! а1., №игоп, 1997, 19:939-945; \Уопд е! а1., 2002, 8ирга). Сообщалось, что ген Р81 несет более чем 80 различных мутаций РАО (см. базу данных мутаций АО, ййр://то1деп-^етте. ша.ас.Ье), тогда как в Р82-связанных семействах было обнаружено только небольшое число мутаций. Огромное большинство аномалий в генах Р8 являются миссенс-мутациями, которые приводят к заменам отдельных аминокислот, которые, по-видимому, обычно влияют на активность секретаз и увеличивают генерирование пептида вАР42.

Одной из существующих терапевтических стратегий в АО является уменьшение уровней токсичного вАР.

- 34 008863

Имеется увеличивающаяся информация, подтверждающая, что ЛС11Е1 могут влиять на процессинг АРР. Например, было показано, что такрин уменьшает высвобождение секретируемой формы АРР, κΑΡΡα, и общего βΑΡ, вАР₄₀ и вАР₄₂ в клетках нейробластомы человека в отсутствие какого-либо клеточного повреждения или токсичности (Ьайт е! а1., Мо1. Вгат Век. 1998, 62:131-140).

Предполагалось, что ΝΜΌΑ-рецепторы участвуют в каскадах передачи сигналов, влияющих на процессинг АРР или подвергаемых влиянию АРР. Так, было показано, что в культивируемых нейронах гиппокампа κΑΡΡα селективно подавляет ΝΜΌΑ-опосредованные токи (Ригика^а апб Майкоп, Ыеигкс1епсе, 1998, 83:429-438). Автор по данному изобретению и сотрудники исследовали действие мемантина (антагониста NΜ^Α-рецептора) на процессинг АРР в культивируемых клетках δΚ-Ν-δΗ нейробластомы человека. Клетки обрабатывали мемантином (1-4 мкМ) или носителем и уровни κΑΡΡ и вАР₄₀ в кондиционированной среде и общий внутриклеточный АРР измеряли Вестерн-иммуноблоттингом или ΕΟδΑ с использованием специфических антител. Результаты указывают на то, что обработка клеток нейробластомы человека терапевтическими концентрациями мемантина (1-4 мкМ) приводит к уменьшению уровней κΑΡΡ и вАР₄₀ в кондиционированной среде без влияния на уровни общего внутриклеточно го АРР. При вышеуказанных концентрациях мемантин не влиял на жизнеспособность и токсичность клеток, как определено с использованием МТТ- и ЕЭН-анализов. Наблюдаемое уменьшение уровней κΑΡΡ и в АР₄₀, происходящее без сопутствующего увеличения клеточных уровней АРР мемантином, предполагает, что мемантин может потенциально ингибировать амилоидогенный путь (т.е. путь образования амилоида). Таким образом, представляется, что мемантин имеет потенциал уменьшения депонирования фибрилогенных пептидов Ав в головном мозге.

Авторы по данному изобретению решили также определить действия введения различных концентраций комбинации производного 1-аминоциклогексана (например, мемантина или нерамексана) и ЛС11Е1 (например, галантамина, такрина, донерезила или ривастигмина) на секрецию и процессинг различных производных АРР. (κΑΡΡα и общих вАР, β АР₄₀ и вАР₄₂) ίη νίνο в культуре клеток.

Подходящие клеточные линии включают в себя клеточные линии человека и животных, такие как линии клеток нейробластомы человека (например, 8Κ-Ν-8Η), линии клеток нейроглиомы человека, клетки НеЬа человека, клеточную линию НЕК-293 почек человека, первичные (эмбриональные) эндотелиальные клетки человека (например, клетки НИУЕС), первичные фибробласты или лимфобласты человека, первичные смешанные клетки головного мозга человека (в том числе нейроны, астроциты и нейроглия), клетки яичника китайского хомячка (СНО) и т. п.

Предпочтительными для применения в соответствии с данным изобретением являются клеточные линии человека, которые экспрессируют варианты АРР или которые сверхпродуцируют вАР, например, варианты АРР, имеющие одну или несколько аминокислотных замен непосредственно при Ν-конце сайта расщепления вАР (например, клетки К293, которые экспрессируют ДНК АРР, несущую двойную мутацию [Ьук⁵⁹⁵ Ακη⁵⁹⁵ и Ме!⁵⁹⁶ Ьеи⁵⁹⁶], обнаруженную в шведском семействе ΡΑΌ, которые продуцируют приблизительно в 6-8 раз больше вАР, чем клетки, экспрессирующие нормальное количество АРР, как описано в патенте США № 6284221).

Концентрации производного 1-аминоциклогексана и ΑСйΕI, приводящие к терапевтически значимому уменьшению в процессинге и/или секреции амилоидогенного вАР в клеточных культурах, дополнительно испытывали ίη νίνο мониторингом уровней вАР в трансгенных животных-моделях ΑΌ, таких как мышиные животные-модели, экспрессирующие минигены АРР, которые кодируют ΡΑΌ-связанные мутанты АРР (например, κ\\Ό или 717, как описано, например, в патенте США № 5912410), или мышиная модель двойного мутанта, описанная Вогсйей е! а1. (Ыеигоп, 19:939-945, 1997). Последние трансгенные мыши коэкспрессируют вариант (А246Е) ΡΑΌ-связанного пресенилина 1 (Ρ81) человека рано появляющейся семейной болезни Альцгеймера (ΑΌ) и химерный «мышь/человек» АРР, несущий мутации, связанные с родословными Шведской ΡΑΌ (ΑΡΡκ\\Ό). Эти мыши развивают многочисленные амилоидные депо гораздо раньше, чем мыши того же возраста, экспрессирующие ΑΡΡκ\\Ό и Ρ81 человека дикого типа. Экспрессия минигенов АРР, которые кодируют ΡΑΌ-связанные мутанты АРР, и, в частности, коэкспрессия мутантных Ρ81 А246Е и ΑΡΡκλλΌ. повышает уровни вАР в головном мозге, и эти мыши развивают многочисленные диффузные депо вАР и бляшки в гиппокампе и коре головного мозга (СаШоип е! а1., Ριό^ №111. Αсаб. 8сЕ ϋδΑ, 1999, 96:14088-14093). Эти бляшки содержат нейриты (аксоны) (некоторые из них обнаруживают иммунореактивность гиперфосфорилированного белка !аи), астроциты и микроглию; однако, нейрофибриллярные клубки не присутствуют. Для получения мышей, которые могут быть скрещены с мышами, экспрессирующими как бляшки, так и клубки, мутантные АРР-трансгенные мыши могут быть скрещены с мышами, экспрессирующими мутант Ρ301Ε 1аи (Ό^χνίκ е! а1., 8с1епсе, 2001, 293:1487-1491), имеющий мутацию, связанную с семейной лобно-височной деменцией с паркинсонизмом (ΡΤΌΡ). Эти и другие модели ΑΌ трансгенных животных характеризуются различными когнитивными дефектами, такими как потеря нейронов, дефициты научения, проблемы памяти узнавания объектов и проблемы с изменением/пространственной отнесенностью и рабочей памятью (Сйеп е! а1., ЫаШге, 2000, 408:975-979). Улучшения таких дефектов также используются для оценки эффективности комбинированной терапии по данному изобретению (в том числе для определения аддитивных и синергиче

- 35 008863 ских эффектов).

Конкретно, исследуются четыре группы трансгенных животных: контрольная группа I не получает лечения, контрольная группа II получает производное 1-аминоциклогексана (такое как мемантин или нерамексан), контрольная группа III получает АСИЕ1 (такой как галантамин, такрин, донепезил или ривастигмин) и экспериментальная группа IV получает комбинированное лечение производного 1аминоциклогексана и АСИЕЕ Введение лекарственных средств проводят на протяжении определенных периодов времени и сопровождают тестированием, например, (1) способностей к научению, (ίί) памяти, (ш) уровня вАР₄₀- или вАР₄₂-фрагмента в жидкостях тела, (ίν). количества β-амилоидных бляшек в головном мозге и (ν) иммунореактивности гиперфосфорилированного 1аи в головном мозге. Улучшение в любом из первых двух критериев и уменьшение в любом из последних трех критериев в экспериментальной группе IV (в сравнении с контрольными группами) используют как меру эффективности комбинированной терапии согласно данному изобретению. Эти модели трансгенных животных используют дополнительно для определения оптимальных доз, эффективности, токсичности, а также побочных действий, связанных с комбинированной терапией по данному изобретению.

Пример терапии 3. Исследование фармакокинетического взаимодействия мемантина и АК1СЕРТ® в здоровых молодых субъектах.

Введение.

Было показано, что после перорального приема человеком мемантин полностью абсорбируется (абсолютная биодоступность приблизительно 100%). После введения ¹⁴С-мемантина извлекали 84% этой дозы, в основном в моче. Время максимальных концентраций в плазме (Т_макс) после пероральных доз 10-40 мг мемантина находится между 3 и 8 ч. Максимальные концентрации в плазме (С_макс) после единственной дозы 20 мг находятся между 22 и 46 нг/мл. Величины АИС и С_макс мемантина увеличиваются пропорционально дозе на протяжении диапазона доз 5-40 мг. Полупериод существования в организме мемантина составляет приблизительно 60-80 ч. Исследования ίη νίΐτο показали низкий потенциал лекарственного взаимодействия между мемантином и лекарственными средствами, метаболизируемыми через систему цитохрома Р450.

Донепезил-НС1 (АК1СЕРТ®) является специфическим ингибитором на основе пиперидина ацетилхолинэстеразы (АСИЕ), который в настоящее время одобрен в Соединенных Штатах и в других местах для лечения слабой - умеренной болезни Альцгеймера (АИ). Фармакокинетика донепезила после перорального введения является линейно пропорциональной дозе. После дозы 5 мг/день донепезила в течение 28 дней в здоровых субъектах максимальные концентрации в плазме (С_макс=34,1 нг/мл) получают при приблизительно 3 ч (Тщео е1 а1., Вг. 1. С1т. РИагтасо1., 46 (8ирр1. 1): 13-18, 1998). Донепезил имеет полупериод существования в организме приблизительно 70 ч.

Авторы по данному изобретению решили определить, (ί) имеется ли ίη νίνο фармакокинетическое взаимодействие между мемантином и донепезилом и (ίί) влияет ли совместное введение мемантина на способность донепезила ингибировать активность АС11Е.

План исследования.

Популяция субъектов.

Это испытание было предпринято после информированного письменного согласия. В него были включены двадцать четыре (24) молодых здоровых субъекта, (16 мужчин и 8 женщин). Средние возраст, масса и рост были 27,6 лет (18-35 лет), 73,6 кг и 171,4 см, соответственно. Шесть субъектов были белыми и 18 не являлись членами Индо-Европейской группы населения (были черными). Обычное физическое обследование, жизненноважные признаки (диастолическое и систолическое кровяное давление, скорость пульса, скорость дыхания, температура и масса тела), химия сыворотки, гематология, анализ мочи, отрицательные тесты на анти-ВИЧ 1 и 2-антитела, поверхностный антиген гепатита В, анти-НСV-антитела и νΌΚΕ/КРВ были необходимы для внесения в списки и завершения иследования. Женщины должны были иметь отрицательный сывороточный тест на беременность перед началом исследования и отрицательный тест на беременность с взятием мочи в день 1 и должны были использовать приемлемый в медицине способ ограничения рождаемости (не включающий в себя применение пероральных контрацептивов) в течение по меньшей мере 30 дней перед отбором и должны были продолжать использование его на протяжении этого исследования. Эти субъекты были некурящими (и не курили в пределах последних 2 лет).

Исследование завершили 19 субъектов. Субъекты 8, 12 и 21 отозвали согласие, субъект 9 был исключен из-за несоблюдения схемы лечения и субъект 22 был потерян для последующего врачебного наблюдения.

Процедуры исследования.

Субъекты получали одну таблетку 10 мг мемантина в 1-й день исследования. Профиль взятия проб на мемантин получали начиная с 1-го дня с последующим 14-дневным периодом выведения. Начиная с 15-го дня субъекты получали одну таблетку 5 мг АК1СЕРТ® один раз в день в течение 7 дней. Начиная с 22-го дня субъекты получали по две таблетки АК1СЕРТ®, (10 мг донепезила) один раз в день в течение 22 дней. На 42-й день у субъектов проводили сбор крови перед введением дозы донепезила. Пробы крови собирали для получения фармакокинетического профиля концентрации донепезила и активности АС11Е

- 36 008863 эритроцитов (КВС). На 43-й день субъекты получали утром 10 мг мемантина вместе с последней дозой 10 мг донепезила. Пробы крови для получения фармакокинетического профиля концентраций донепезила и мемантина и получения фармакодинамического профиля АСЬЕ-активности ВВС собирали начиная с 43-го дня исследования.

Сбор и обработка проб крови.

Сорок три (43) пробы плазмы собирали во время исследования для фармакокинетических и фармакодинамических анализов. Пробы крови для определения концентрации мемантина собирали после введения дозы в день 1 при 0 ч (перед введением дозы), а также при 1, 2, 3, 4, 6, 8, 12, 24, 48, 72, 96, 120, 144, 168 и 192 ч после введения дозы. Пробы крови для определения концентрации донепезила перед введением дозы собирали из каждого субъекта при 0 ч в дни 15, 40 и 41. Пробы крови для определения концентрации донепезила собирали на 42-й день при: 0 ч (перед введением дозы), 1, 2, 3, 4, 6, 8 и 12 ч после введения дозы. Пробы крови для определения концентраций донепезила и мемантина собирали на 43-й день при 0 ч (перед введением дозы), а также при 1, 2, 3, 4, 6, 8, 12 и 24 чх после введения дозы. Дополнительные пробы крови для определения концентраций мемантина после введения дозы на 43-й день собирали при 48, 72, 96, 120, 144, 168 и 192 ч после введения дозы. Пробы крови, взятые в день 15 (0 ч), день 42 (при 0, 1, 2, 3, 4, 6, 8 и 12 ч) и день 43 (при 0, 1, 2, 3, 4, 6, 8 и 12 ч), также использовали для определения АСЬЕ-активности в ВВС.

Обработка проб крови для анализа на мемантин и донепезил.

Приблизительно 7 мл крови собирали непосредственно в предварительно охлажденные пробирки Уаси1а1иег® на 7 мл или 10 мл (содержащие натрий-гепарин). Пробы крови центрифугировали в пределах 30 мин от момента сбора при 2500 д в течение 10 мин при 4°С и плазму собирали и переносили в предварительно охлажденные подписанные кодами полипропиленовые пробики. Затем эти пробы быстро замораживали на бане со смесью изопропиловый спирт/сухой лед и хранили в морозильнике при 70°С.

Обработка проб крови для анализа на активность АСЬЕ ВВС.

Из остатка крови, оставшейся после сбора плазмы в дни 15, 42 и 43, часть лейкоцитной пленки (верхнюю часть центрифугированной крови, которая остается между ВВС и плазмой) удаляли и выбрасывали. Остальные ВВС помещали в пропиленовые пробирки с завинчивающимися пробками, быстро замораживали в изопропиловом спирте и помещали в морозильник при -70°С. Пробы ВВС должны были быть заморожены в пределах 20 мин после собирания крови.

Аналитические процедуры.

Мемантин.

Концентрации мемантина в плазме измеряли с использованием высокоэффективного жидкостного хроматографического разделения с использованием способа масс-спектрометрического детектирования (ЬС/М8/М8). В качестве внутреннего стандарта использовали [²Н6]мемантин. Пробы плазмы подкисляли 70 мкл 0,01 н хлористоводородной кислоты. Добавляли 0,5 М натрийбикарбонатный буфер и соединения экстрагировали этилацетатом. Органический слой упаривали в вакууме при комнатной температуре. Сухой остаток анализировали после восстановления в подвижной фазе. Компоненты восстановленных проб разделяли на колонке ΖοΛηχ 8ВС8 (4,6x150 мкм, 3,5 гм) и детектировали химической ионизацией при атмосферном давлении (АРС1) с мониторингом выбранной реакции (8ВМ). 8ВМ-мониторинг использовал положительные ионы-предшественники продукта т/ζ 180^163 и т/ζ 186^169 для мониторинга мемантина и его внутреннего стандарта соответственно. Эти протонированные молекулярные ионы мемантина и [²Н6] мемантина являются ионами-предшественниками для режима 8ВМ. Отношение высоты пика иона продукта мемантина к высоте пика его внутреннего стандарта было ответом, используемым для количественного определения. Прецизионность и точность для проб качественного контроля мемантина в плазме человека были в пределах 7,7% и находились в диапазоне 0,4-6,9% соответственно (включительно). Нижний предел количественного определения был равен 0,5 нг/мл.

Донепезил.

Аналитический способ для определения донепезила в плазме человека включал в себя экстракцию в системе жидкость/жидкость и ЬС/М8/М8.

Анализ ингибирования ацетилхолинэстеразы.

Радиоферментный анализ использовали для определения активности АСЬЕ в эритроцитах (ВВС) и для определения ингибирования активности АСЬЕ в ВВС. Аликвоты гомогенатов контрольной пробы ВВС и пробы исследования ВВС инкубировали с [³Н]ацетилхолиниодидом, который гидролизовали АСЬЕ в пробе ВВС. Ферментную реакцию останавливали добавлением хлоруксусной кислоты и продукт гидролиза, [³Н]ацетат, экстрагировали в жидкую сцинтилляционную смесь и считали. Активность АСЬЕ (нмоль ацетилхолина, гидролизованного в минуту) рассчитывали на основе имп/мин. Измерения активности на 15-й день (перед первой дозой донепезила) принимали за 100% активность.

Анализ фармакокинетических и фармакодинамических результатов.

Фармакокинетический анализ.

Следующие параметры определяли из концентраций в плазме мемантина после введения единственной дозы мемантина отдельно или в комбинации с донепезилом: площадь под кривой зависимости концен

- 37 008863 трации в плазме от времени (АИС_0-1 и АИС_0-ОТ), максимальную концентрацию в плазме (С_макс), время максимальной концентрации в плазме (Т_макс), полупериод выведения (Т_1/2), среднее время пребывания в сыворотке (МКТ), пероральный клиренс (СЬ/Е) и видимый объем распределения (νζ/Ρ).

После введения множественных доз одного донепезила или в комбинации с мемантином следующие параметры определяли из данных по концентрации донепезила в плазме: С_макс, Т_макс, АИС_0-24 и СЬ/Е.

Максимальные концентрации в плазме (Смакс) и время максимальной концентрации (Тмакс) для мемантина и донепезила определяли наблюдением.

Фармакодинамический анализ.

Активность АСЬЕ КВС определяли при базовой линии (фоне) до введения донепезила и после введения донепезила одного (день 42) и с мемантином (день 43). Следующие фармакодинамические параметры определяли из данных по активности АСЬЕ: А_макс, А_мин, АИС_а, % ингибирование, 1_макс и АИСь

Активность АСЬЕ, измеренная в день 15, перед первым введением дозы донепезила, представляла величины базовой активности (фона) и ее принимали за 100% активность.

Амакс является максимальной активностью АСЬЕ, выраженной в виде процента от базовой линии (контроля), наблюдаемой во время интервала 0-24 ч в дни 42 и 43.

Амин является минимальной активностью АСЬЕ, выраженной в виде процента от базовой линии (контроля), наблюдаемой во время интервала 0-24 ч в дни 42 и 43.

АИС_а обозначает площадь под кривой зависимости активности АСЬЕ (% от базовой линии) от времени, от 0 до 24 ч.

%-ное ингибирование является ингибированием активности АСЬЕ донепезилом, выраженным в виде процентного изменения от величин перед введением дозы.

1_макс является максимальным процентным ингибированием, наблюдаемым во время интервала 0-24 ч в дни 42 и 43.

АИС1 обозначает площадь под кривой зависимости %-ного ингибирования от времени, рассчитанная с использованием линейной формулы трапеций.

Статистические оценки.

Субъекты, которые не завершили это исследование, не были включены в оценку фармакокинетических и фармакодинамических параметров.

Статистические сравнения между способами лечения (лекарственное средство в комбинации в сравнении с лекарственным средством, вводимым отдельно) в отношении всех фармакокинетических параметров и фармакодинамических параметров, за исключением Тмакс, выполняли с использованием вариационного анализа (АNОVА). Параметр Т_макс сравнивали с использованием критерия Уилкоксона.

Возможность фармакокинетического и фармакодинамического взаимодействия между мемантином и донепезилом оценивали конструированием двух односторонних, 90% доверительных интервалов для следующих первичных фармакокинетических и фармакодинамических параметров:

параметров мемантина С_макс, АИС_0-1 и АИС_0-ОТ после введения мемантина совместно с донепезилом против мемантина, вводимого отдельно;

параметров донепезила Смакс и АИС0-₂4 после введения донепезила совместно с мемантином против донепезила, вводимого отдельно;

параметров АСЬЕ1_макс и АИС1 после введения донепезила совместно с мемантином против донепезила, вводимого отдельно.

Статистические заключения для параметров РК и РН основывались на логарифмически (1од)преобразованных величинах. Сравнения для Т_1/2 МКТ и Т_макс основывались на исходных данных.

Вывод об отсутствии фармакокинетического и фармакодинамического взаимодействия между мемантином в виде единственной дозы и донепезилом в виде множественных доз делали, если 90% доверительные интервалы для 1од-преобразованных первичных параметров РК и РН находились в диапазоне 80125%.

Оценку состояния равновесия для донепезила выполняли линейной регрессией концентраций донепезила перед введением дозы в дни 40, 41 и 42. Вывод о достижении состояния равновесия делали, если величина р для наклона линии регрессии была более чем 0,05.

Результаты

Таблица 3 Степень подвергания действию мемантина и донепезила

Лекарственное	Количество	Всего	Среднее
средство	субъектов	субъект-дней	(дни)
Мемантин	24	43	1,8
Донепезил	22	601	27, 3

Неблагоприятные события.

Ни один субъект не прекращал участие в этом исследовании из-за неблагоприятного события. Не сообщались серьезные побочные события; 20 (83,3%) из 24 субъектов сообщили всего 27 побочных со

- 38 008863 бытий. Большинство этих побочных событий имели место, когда субъекты получали только донепезил. Эти события были обычно слабыми - умеренными по тяжести. Наиболее обычными неблагоприятными событиями (т. е. встречающимися в 3 или более субъектах) были головная боль, тошнота, усталость, слабость, головокружение, диарея, рвота и спутанное сознание.

Фармакокинетические параметры мемантина.

Скорость абсорбции мемантина после введения единственной дозы в виде пероральной таблетки 10 мг была умеренной, с максимальными концентрациями в плазме, достигаемыми при 6,5 ч с донепезилом или без донепезила. Максимальная концентрация мемантина (С_макс) была сходной при введении одного мемантина (12,8 нг/мл) и во время совместного введения с донепезилом (13,0 нг/мл). Величины терминального полупериода существования в организме, МКТ и объема распределения были сходными после введения мемантина отдельно и с донепезилом. Средний пероральный клиренс мемантина уменьшался на 5,6% во время совместного введения мемантина с донепезилом. 90% доверительные интервалы для сравнения 1од-преобразованных С_макс, АиС_0-| и АИС_0-„ находились в диапазоне 80-125%, что свидетельствовало о том, что введение множественных доз по 10 мг донепезила не изменяло значимо скорость или степень абсорбции единственной дозы 10 мг мемантина.

Фармакокинетические параметры донепезила.

Достижение стационарного состояния после введения множественных доз донепезила оценивали линейным регрессионным анализом концентраций донепезила перед введением дозы в дни 40, 41 и 42. На основании р-величины для наклона линии регрессии, стационарное состояние достигалось во всех 15 субъектах (р>0,05), но не в 4 из субъектов, которые завершили это исследование (р<0,05). Субъекты 1, 5, 6 и 17 имели значимые ненулевые наклоны (р<0,05). Скорость абсорбции донепезила после множественного введения доз 10 мг донепезила один раз в день была умеренной, с максимальными концентрациями в плазме, достигаемыми при 3,4 и 3,3 ч без мемантина или с мемантином, соответственно. Средняя максимальная концентрация донепезила (С_макс) была выше на 13% после введения донепезила с мемантином в сравнении с одним донепезилом. Средние АиС_0-24 увеличивались на 9%, а СЬ/Р увеличивался на 15% при введении донепезила с мемантином в сравнении с введением отдельно. 90% доверительный интервал для 1од-преобразованной АИС_0-24 находился в диапазоне 80-125%, что свидетельствовало о том, что введение единственной дозы 10 мг мемантина не изменяло степень абсорбции множественных доз донепезила. 90% доверительный интервал для 1од-преобразованного С_макс был слегка вне диапазона 80-125% (104,2-126,5%).

После удаления из этого статистического сравнения данных фармакокинетических параметров из 4 субъектов (субъектов 1, 5, 6 и 17), которые не достигли стационарного состояния (р<0,05), 90% доверительные интервалы для сравнения этих 1од-преобразованных С_макс и АИС_0-24 находились в диапазоне 80-125%.

Измерения АСЬЕ.

Процент максимального ингибирования активности АСЬЕ от величины базовой линии (фона) (1_макс) был в среднем 77,8 и 81,1% с одним донепезилом и с донепезилом вместе с мемантином соответственно. 90% доверительные интервалы для сравнения 1од-преобразованных 1_макс и АИС находились в диапазоне 80-125%, что свидетельствовало о том, что ингибирование активности АСЬЕ КВС не изменялось значимо совместным введением донепезила и мемантина в сравнении с введением только донепезила.

Заключение

В данном исследовании было обнаружено, что отдельные дозы 10 мг одного мемантина и в комбинации со множественными суточными дозами 10 мг донепезила являются безопасными и хорошо переносимыми. Не наблюдали фармакокинетического или фармакодинамического взаимодействия между мемантином и донепезилом, что предполагает, что эти два лекарственных средства могут вводиться без риска.

Пример терапии 4. Оценка терапевтического потенциала в лечении болезни Альцгеймера комбинированной терапии, содержащей мемантин и донепезил (АК1СЕРТ®).

Задачами лечения пациентов с болезнью Альцгеймепа (АИ) было улучшение или, по меньшей мере, замедление потери памяти и когнитивной функции, а также и сохранение независимой деятельности. Симптоматическое лечение АИ фокусировалось на увеличении холинергической нейротрансмиссии, когда деградация холинергических путей происходит рано и коррелирует с нарушением памяти. Одобренная в настоящее время лекарственная терапия для слабой - умеренной АИ включает в себя несколько АС11Е1 (такрин, донепезил, ривастигмин и галантамин), которые увеличивают холинергическую нейротрансмиссию ингибированием метаболизма ацетилхолина посредством АСЬЕ. Однако в настоящее время нет одобренных способов терапии для более тяжелых больных с АИ в Соединенных Штатах. Эффективная фармакология для более прогрессирующих стадий АИ посредством замедления скорости связанной с болезнью когнитивной, функциональной и общей деградации, не только улучшило бы самочувствие и качество жизни пациента, но также привело бы к улучшенному качеству жизни людей, ухаживающих за больными, и уменьшению экономической коллизии этой болезни посредством более позднего помещения в дом для престарелых с медицинским обслуживанием.

- 39 008863

Мемантин продавался ранее для лечения деменции, мышечной спастичности и болезни Паркинсона в Германии и 41 другой стране и недавно был одобрен для лечения умеренно-тяжелой - тяжелой АО во всех странах Европейского союза. В настоящее время единственной терапией, одобренной для слабой умеренной АО, доступной в США, является монотерапия с использованием АС11ЕЕ Мемантин, неконкурентный антагонист умеренной активности NΜ^Α-рецепторов, обеспечивает дополнительную возможность для лечения этого заболевания.

План исследования

Данное исследование направлено на оценку терапевтического потенциала в лечении АО комбинированной терапии, включающей в себя мемантин и донепезил (АТ1СЕРТ®). Конкретно, безопасность и эффективность мемантина (относительно плацебо) оценивали в амбулаторных больных с возможной умеренной - тяжелой деменцией типа Альцгеймера, которые уже получали совместную терапию со стабильной дозой донепезила.

Данное исследование является многоцентровым, рандомизированным, двусторонне слепым, параллельным и контролируемым плацебо. Критериями включения участников были: диагноз возможной АО посредством критериев NINС^3-Α^К^Α, оценки миниобследования психического состояния М1ш Меп!а1 3!а!е Ехат (ММ3Е) 5-14, МК1- или СТ-сканирование, согласующееся с диагнозом возможной АО, и ежедневная терапия донепезилом в течение последних 6 месяцев (стабильная доза в течение последних 3 месяцев).

Данное исследование состояло из 1 недели односторонне слепого контролируемого плацебо периода скрининга (массового обследования) с последующими 24 неделями двусторонне слепого лечения. Пациентов рандомизировали для 6-месячного лечения либо 20 мг/день мемантина (10 мг Ъл.й.; подобранных на протяжении 4-недельного периода) или плацебо, наряду с их терапией с использованием донепезила. Для оценки действия лечения на когнитивную функцию в деменции пациентам назначали батарею тестов для тяжелого нарушения 3еуеге 1тра1гтеп! Вайегу (31В) (ЗсЬтй! е! а1., АкЬетег Όίκ. Аккос. Όίκ., 11[3ирр1. 2]: 351-356, 1997), инструмент объективной оценки когнитивной функции на основе работоспособности с установленной чувствительностью и валидностью, и модифицированный Опросник кооперированного исследования болезни Альцгеймера - активностей повседневной жизни (АОСЗ-АПЬ) (Са1акко е! а1., АкЬетег Όίκ. Аккос. Όίκ., 11[3ирр1. 2]: 333-339, 1997), критерия повседневной работоспособности. Выполнялась также общая оценка врачом, С1шюа1'к 1п!егу1ете-Вакей 1тргеккюп оГ СЬапде-Р1ик (С1В1СР1ик) (Впечатление по поводу изменений на основе интервью врача) (3сЬпе1йег е! а1., АкЬешег ЭВ. Аккос. ϋΐδ., 11 [3ирр1. 2]: 322-332, 1997).

Популяция исследования.

403 пациента были внесены в списки в этом исследовании, причем каждая из двусторонне слепых групп лечения (мемантин или плацебо) содержала приблизительно 200 пациентов. Популяция данного исследования состояла из амбулаторных пациентов мужского и женского пола, которые имели возраст по меньшей мере 50 лет. Тяжесть АО была в диапазоне от умеренной до тяжелой, оцениваемой на основе оценки миниобследования психического состояния Μίπί Меп!а1 3!а!е Ехашта!юп (ММ3Е) (>5 и <14). Для приемлемых пациентов, во время визита для скрининга, результаты физического обследования, лабораторные оценки и ЭКГ были нормальными (или отклоняющиеся параметры можно было оценить как клинически незначимые). Все приемлемые пациенты получали продолжающуюся терапию с ежедневным введением донепезила (АК1СЕРТ®) в течение по меньшей мере последних 6 месяцев и при стабильной дозе (5-10 мг/день) в течение последних 3 месяцев.

Процедура исследования

Оценки эффективности.

Испытание с использованием батареи тестов для тяжелого расстройства (3еуеге 1траптеп! Вайегу (31В)) проводили при каждом визите в клинику, начиная от базовой линии (фона). Тест 31В оценивал когнитивную способность, т.е. память, речь, поведение, ориентацию и внимание. Тест оценивался по шкале 0-100 (где 100 является наихудшим результатом).

Опросник кооперированного исследования АО - повседневной жизнедеятельности (АОС3-АПЬ) использовали для измерения функциональных способностей субъектов исследования. Он состоял из 19 пунктов, подходящих для пациентов с умеренной - тяжелой деменцией, выбранных из полного опросника, состоящего из 42 пунктов. Са1акко е! а1., АкЬетег'к Э^еаке апй Аккоаа1ей Обогйегк 11[3ирр1. 2]: 333, 1997. АОС3-АОЕ использовали при каждом визите в клинику, начиная с базовой линии.

СйшсаТк 1п!егу1ете-Вакей 1тргеккюп оГ СЬапде-Р1ик (С1В1С-Р1ик) (Версия-плюс впечатления по поводу изменений, основанного на интервью врача) является общей оценкой функций, которую осуществляют посредством независимого всеобъемлющего интервью с пациентом и лицом, ухаживающим за ним, врача, который не знает всех других психометрических тест-оценок, проводимых в виде части этого протокола. Используя результаты базовой линии для ссылки, врач интервьюирует пациента и лицо, ухаживающее за ним, в конце недель 4, 8, 12, 18 и 24 (или после раннего прекращения исследования) для получения оценки «впечатления об изменении». Формат для этой шкалы был произведен из кооперированного исследования болезни Альцгеймера - общего впечатления врача об изменении (АЭС3-СС1С) (3сЬпе1йег е! а1., АкЬетег ΌΕ. Аккос. ΌΑ, 11 [3ирр1. 2]: 322-332, 1997).

- 40 008863

Оценка использования ресурсов медико-санитарной помощи в деменции (Кекоигсе и11Пха11оп ш Оетепйа (КИО) Еуа1иа1юп) предназначена для оценки нагрузки лица, ответственного за пациентов с АО (Айно е1 а1., Еуа1иайоп оГ Ле ЕеаИЪсаге гекоигсе иНКхаиоп апб сагед|уег бте ш апб-бетепйа бгид 1г1а1к: а с.|иапШашуе Ьайегу. 1п: Т1е Неа111 Есопотюк оГ Оетепба., ебк. А1то е1 а1., АПеу ргекк Ьопбоп, 1988). Эта оценка состояла из формализованного интервью с лицом, ответственным за пациента данного исследования. Оценка КИО имеет две части: часть А была опросником, который использовали при базовой линии, а часть В была опросником последующего наблюдения. Кроме основной демографической информации, КИО просил лицо, ответственное за пациента, вспомнить значимые события, касающиеся здоровья, которые происходили с момента предыдущего опросника. Задавался также вопрос о времени, проводимом с пациентом, об изменении статуса работы наблюдающего лица и изменениях в медикосанитарной помощи. КИО проводили при базовой линии и в конце недели 24 (или после раннего прекращения исследования).

Тест оценки функциональной стадии (Еипсйопа1 Аккектеп! 81адтд (ЕА8Т)) предназначен для оценки прогрессирующей функциональной деградации в пациентах с АО (КеЕЬегд, Ркус1юрНагтасо1. Ви11., 24:653-659, 1988). Он оценивает способность пациента выполнять повседневные и необходимые жизненные активности. ЕА8Т разделен на семь основных стадий от «нормальной» (стадия 1) до «тяжелой» (стадия 7). Стадии 6 и 7 дополнительно подразделены на 11 субстадий (6а-6е и 7а-7Г). Каждая стадия основана на специфических дефицитах в функциональной способности. ЕА8Т проводят при базовой линии и в конце недели 24 (или после раннего прекращения исследования).

Шкала поведенческих оценок для гериатрических пациентов (ВСР) является шкалой наблюдения, которая выполняется наблюдающим лицом. Эта шкала адаптирована из гериатрической шкалы 81оскЮп. и она оказалась надежным и валидным способом для измерения функциональных и поведенческих расстройств в гериатрических пациентах с деменцией (О1екГе1б1, Сегоп1о1од1е, 11:205-212, 1980). Эта шкала состоит из 35 пунктов. ВСР проводили при базовой линии и в конце недели 24 (или после раннего прекращения исследования).

Схема лечения и приема лекарственных средств.

Мемантин (таблетки 5 мг) и плацебо предоставляли в виде покрытых пленкой таблеток идентичного вида. Приемлемых пациентов распределяли при базовой линии для двусторонне слепого лекарственного лечения. Во время первой недели лечения пациентов рандомизировали для активного лечения с получением 5 мг/день мемантина, а затем 10 мг/день во время второй недели и 15 мг/день во время третьей недели. Начиная с недели 4 ежедневное лечение состояло либо из таблеток плацебо, либо из таблеток мемантина. Вводили исследуемую дозу 20 мг/день (два раза по 10 мг), начиная с четвертой недели двусторонне слепого лечения, и продолжали это введение во всем этом исследовании.

Во время всего этого периода двусторонне слепого лечения пациенты продолжали принимать указанные лекарственные средства по четыре таблетки в день.

Статистическая оценка

Первичными параметрами эффективности были изменения от базовой линии в оценках 81В и опросника АОС8-АОЬ при неделе 24.

Вторичными целями для оценок эффективности были сравнения эффективности мемантина с плацебо. Этим параметром была оценка С1В1С-р1ик при неделе 24.

Сравнения между группами мемантина и плацебо для первичных параметров эффективности выполняли с использованием двухфакторного ковариационного анализа (АЫСОУА). Первичные анализы эффективности фокусировались на баллах, полученных в конце недели 24, с исследованием изменения от базовой линии для 81В и АОС8-ЛПЬ. Для балла С1В1С-РЬи8 использовали статистику СосЬгапМап1е1-Наепкхек применяющую модифицированные пбй-баллы (тест ван Элтерена) для сравнения распределений между группами мемантина и плацебо.

Все анализы эффективности основывались на рандомизированных пациентах, которые принимали по меньшей мере одну дозу лекарства исследования и которые имели по меньшей мере одну первичную оценку после базовой линии. Все статистические тесты были двусторонними и р-величину <0,05 считали статистически значимой. Первичные анализы выполняли на популяции 1ТТ с использованием подхода Ьак1 ОЬкегуайоп Сатеб Еогоагб (ЬОСЕ) при неделе 24 (возобновляемого последнего наблюдения). В этих анализах последнюю наблюдаемую величину перед недостающей величиной продвигали для привнесения недостающей величины. Подход наблюдаемых случаев (ОС) использовали для вспомогательных анализов, когда для анализов использовали только наблюдаемые величины, получаемые при каждом визите. Этот ЬОСЕ-подход использовали также при каждом визите для подтверждающих анализов.

Для изменения от базовой линии в общих баллах 81В и опросника А^С8-А^^ при неделе 24 сравнение между мемантином и плацебо выполняли с использованием двухфакторного ковариационного анализа (АЫСОУА), причем группа обработки и центр являются двумя факторами, а баллы базовой линии являются ковариацией. Описательные статистики рассчитывали на визит. Оценку С1В1С-р1ик анализировали с использованием СМН-критерия, контролирующего центр исследования. Описательные статистики рассчитывали на визит.

- 41 008863

Статистические анализы проводили с использованием 8А8 (с версией 6.12 или более новой версией) при помощи операционной системы ΗΝΙΧ.

Результаты

Группа исследования.

Из 403 пациентов с умеренной - тяжелой АО, которые были рандомизированы и лечились в 37 центрах 10 мг Ь.1.д. мемантина (п=202) или плацебо (п=201) в дополнение к их базовой терапевтической схеме с донепезилом (АКГСЕРТ®), 85% получавших мемантин пациентов и 75% получавших плацебо пациентов завершили это испытание. Наиболее обычной причиной прекращения испытания, сопровождающегося взятием назад письменного согласия, были побочные действия.

Средняя оценка психического состояния (ММ8Е) при вступлении в исследование была 10. Не было клинически важных различий в демографических характеристиках пациентов между этими рандомизированными группами лечения.

Таблица 4

Демографические характеристики и характеристики базовой линии (фона) пациентов

	Плацебо (N=201)	Мемантин (N=202)	Всего (N=403)
Средний возраст, лет (стандартное отклонение, 30)	75,5 (8,7)	75,5 (8,5)	75,5 (8,6)
Пол
Число мужчин (%)	67 (33,3)	74 (36,6)	141 (35,0)
Число женщин (%)	134 (66,7)	128 (63,4)	262 (65,0)
Этничность
Число членов ИндоЕвропейской группы населения (%)	186 (92,5)	182 (90,1)	368 (91,3)
Число членов не- Индо-Европейской	15 (7,5)	20 (9,9)	35 (8,7)
группы населения (%)
Среднее ММЗЕ при базовой линии (3ϋ, стандартное отклонение)	10,2 (3,0)	9,9 (3,1)	10,1 (3,1)

Эффективность.

При неделе 24 была продемонстрирована клинически и статистически значимая превосходная эффективность для комбинированного лечения мемантин/донепезил в сравнении с одним донепезилом во всех трех основных конечных пунктах исследования. Таким образом, пациенты, получавшие мемантил и донепезил, обнаруживали клинически и статистически значимое улучшение (р<0,001) в когнитивной функции (8ГВ) в сравнении с донепезилом и плацебо (фиг. 1) и обнаруживали значимо меньшее снижение (р=0,028) в повседневной деятельности (АПС8-АПЬ) (фиг. 2). Значимое различие в пользу комбинации мемантин/донепезил наблюдали также в общей оценке (СГВГС-Р1из) (р=0,027; фиг. 3).

Безопасность.

Комбинированная терапия с использованием 20 мг/день мемантина (10 мг Ь.Ы.) и донепезила была безопасной и хорошо переносимой. Обычно встречаемость появляющихся при лечении побочных событий была сходной у пациентов, получавших мемантин/донепезил или плацебо/донепезил.

- 42 008863

Таблица 5

Побочные события (АЕ) (>3% с мемантином).

Диапазон суточных доз донепезила 5-10 мг и мемантина 5-20 мг.

Поддерживающая доза мемантина 20 мг/день

Побочное событие	Донепезил+мемантин п=202	Донепезил+плацебо п=201
П	О. О	П	о. о
Пациенты с любым АЕ	158	(78,2)	144	(71, 6)
Возбуждение	19%	(9,4)	24	(11,9)
Спутанное сознание	16	(7,9)	4	(2,0)
Падение	15	(7,4)	14	(7,0)
Симптомы, подобные гриппу	15	(7,4)	13	(6,5)
Головокружение	14	(6,9)	16	(8,0)
Головная боль	13	(6,4)	5	(2,5)
Инфекция мочевых путей	12	(5,9)	10	(5,0)
Недержание мочи	11	(5,4)	б	(3,0)
Причиненное повреждение	10	(5,0)	16	(8,0)
Периферический отек	10	(5,0)	8	(4,0)
Инфекция верхних дыхательных	10	(5,0)	13	(6,5)
путей
Диарея	9	(4,5)	17	(8,5)
Гипертензия	9	(4,5)	3	(1,5)
Депрессия	8	(4,5)	6	(3,0)
Сонливость	7	(3,5)	7	(3,5)
Рвота	7	(3,5)	6	(3,0)
Усталость	б	(3,0)	1	(3,5)
Боль	б	(3,0)	1	(0,5)
Нарушенная походка	б	(3,0)	2	(1,0)
Констипация	6	(3,0)	3	(1,5)
Кашель	б	(3,0)	2	(1,0)

Таблица 6 Более часто встречающиеся события с различием >3% донепезил+мемантин против донепезил+плацебо, не зависящие от связи с исследуемым лекарственным лечением в пациентах с умеренной - тяжелой болезнью Альцгеймера.

Диапазон суточных доз донепезила 5-10 мг и мемантина 5-20 мг. Поддерживающая доза мемантина 20 мг/день

Побочные события	Донепезил+мемантин п=202	Донепезил+плацебо п=201
η	О. о	η	О, о
Спутанное сознание	16	(7,9)	4	(2,0)
Головная боль	13	(6,4)	5	(2,5)
Причиненное повреждение	10	(5,0)	16	(8,0)
Диарея	9	(4,5)	17	(8,5)
Гипертензия	9	(4,5)	3	(1,5)

На основании обычного минимального 3% различия между процентом пациентов на мемантине и донепезиле против пациентов на донепезиле и плацебо, были только пять типов побочных событий (спутанное сознание, головная боль, причиненное повреждение, диарея и гипертензия) с встречаемостью >3% между группой с комбинацией и группой с донепезилом и плацебо.

Из них только для трех типов побочных событий (спутанного сознания, головной боли, гипертензии) наблюдали более высокую встречаемость с добавленным мемантином в сравнении с одним донепезилом. Они являются ожидаемыми побочными эффектами мемантина в пределах диапазона <10%. Для двух побочных событий (причиненное повреждение и диарея) наблюдали более высокую встречаемость с донепезилом плюс плацебо в сравнении с комбинацией донепезилмемантин.

В общем и целом комбинированное лечение, по-видимому, не увеличивает ни один из известных побочных эффектов этих двух лекарственных средств, рассматриваемых по отдельности. Кроме того,

- 43 008863 комбинация с мемантином, по-видимому, понижает желудочно-кишечные побочные действия холинергического лекарственного средства донепезила, как установлено в очень больших количествах пациентов. Диарея и наблюдаемая иногда фекальное недержание являются известными причинами необходимого перевода в дом для престарелых с медицинским обслуживанием этих тяжело больных пациентов.

Таким образом, результаты по данному изобретению не обнаруживают пропорционального аддитивного возникновения неблагоприятных событий на основе известных профилей неблагоприятных событий каждого лекарственного средства, вводимого отдельно. В противоположность этому, скорее модулируются неблагоприятные события АСЬЕ1, тогда как известные побочные события мемантина остаются, по существу, теми же самыми как по характеру, так и по частоте встречаемости. Кроме того, результаты, описанные в данном примере, предполагают улучшенную переносимость известных желудочно-кишечных побочных эффектов АСЬЕ1, которая может быть приписана комбинации с мемантином. Кроме того, характер и эффект пользы для когнитивной функции является новым и неожиданным и подтверждает терапевтическое превосходство этого комбинированного подхода.

Обсуждение

Представленные выше результаты подтверждают безопасность и эффективность терапии с использованием мемантина для пациентов с умеренной - тяжелой АО и демонстрируют, что лечение мемантином, комбинированным с донепезилом превосходит лечение одним донепезилом. Полезные эффекты добавления мемантина к схеме лечения донепезилом наблюдали на критериях когнитивной функции, повседневной деятельности и клинического общего состояния. Превосходство этого комбинированного лечения наблюдали так рано, как при 4 неделях после рандомизации, и оно было очевидным для всех критериев при визите в конце 6 месяцев исследования. Мемантин, предоставляемый в виде дозы 20 мг/день совместно с донепезилом, был безопасным и хорошо переносился пациентами с умеренной - тяжелой АО.

Заключение

Лечение мемантином/донепезилом приводило к улучшенной когнитивной деятельности относительно базовой линии, тогда как лечение только донепезилом было связано с непрерывным когнитивным ухудшением. Другими словами, в противоположность используемым в настоящее время лечениям АО, все из которых продемонстрировали в лучшем случае замедление ожидаемого прогрессирующего ухудшения в когнитивной функции, эта комбинированная терапия, описанная в данном исследовании, показывает, что уже в пределах шестимесячного периода исследования мемантин в комбинации с АСЬЕ1 обеспечивает улучшение когнитивной функции. Такие результаты не наблюдались при монотерапии с использованием мемантина. Таким образом, они являются удивительными и неожиданными.

Данное изобретение не ограничивается в его объеме конкретными описанными здесь вариантами. Действительно, специалистам с квалификацией в данной области из предыдущего описания будут очевидны разнообразные модификации по данному изобретению, в дополнение к описанным здесь модификациям. Предполагается, что такие модификации находятся в объеме прилагаемой формулы изобретения.

Все патенты, заявки, публикации, тест-способы, литература и другие цитируемые здесь материалы включены тем самым в качестве ссылки.

Claims

1. Фармацевтический продукт для лечения деменции, связанной с нарушением центральной нервной системы, где лечение индуцирует улучшение когнитивной функции, содержащий терапевтически эффективные дозы производного 1-аминоциклогексана, выбранного из мемантина, нерамексана и их пролекарств, солей, изомеров, аналогов и производных, и ингибитора ацетилхолинэстеразы, выбранного из донепезила, ривастигмина, такрина, галантамина и физостигмина.

2. Продукт по п.1, где указанные дозы для производного 1-аминоциклогексана и ингибитора ацетилхолинэстеразы находятся, каждая, в диапазоне 1-200 мг.

3. Продукт по п.2, где указанная доза для производного 1-аминоциклогексана находится в диапазоне 10-40 мг, а указанная доза для ингибитора ацетилхолинэстеразы - в диапазоне 5-24 мг.

4. Продукт по любому из пп.1-3, где производное 1-аминоциклогексана выбрано из мемантина и его пролекарств, солей, изомеров, аналогов и их производных.

5. Продукт по любому из пп.1-3, где производным 1-аминоциклогексана является мемантин.

6. Продукт по любому из пп.1-3, где производное 1-аминоциклогексана выбрано из нерамексана и его пролекарств, солей, изомеров, аналогов и производных.

7. Продукт по любому из пп.1-3, где производным 1-аминоциклогексана является нерамексан.

8. Продукт по любому из пп.1-7, где ингибитор ацетилхолинэстеразы выбран из галантамина, такрина, донепезила и ривастигмина.

9. Продукт по любому из пп.1-8 в форме единой композиции.

10. Продукт по п.9, где производное 1-аминоциклогексана и ингибитор ацетилхолинэстеразы объединены по меньшей мере с одним фармацевтически приемлемым носителем или эксципиентом.

- 44 008863

11. Продукт по п.9 или 10, который находится в твердой дозированной форме для перорального введения.

12. Применение производного 1-аминоциклогексана, выбранного из мемантина, нерамексана и их пролекарств, солей, изомеров, аналогов и производных, и ингибитора ацетилхолинэстеразы, выбранного из донепезила, ривастигмина, такрина, галантамина и физостигмина, в приготовлении лекарственного средства для задержки появления или прогрессирования деменции, связанной с нарушением центральной нервной системы, где указанная задержка индуцирует улучшение когнитивной функции.

13. Применение по п.12, где указанным нарушением является цереброваскулярное заболевание или синдром Дауна.

14. Применение по п.12, где указанным нарушением является болезнь Альцгеймера.

15. Применение по любому из пп.12-14, где лекарственное средство изготовлено для совместного введения указанного производного 1-аминоциклогексана и указанного ингибитора ацетилхолинэстеразы.

16. Применение по любому из пп.12-14, где лекарственное средство изготовлено для комбинированного введения указанного производного 1-аминоциклогексана и указанного ингибитора ацетилхолинэстеразы в виде единой композиции, необязательно содержащей дополнительно по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент.

17. Способ задержки появления или прогрессирования деменции, связанной с нарушением центральной нервной системы, где указанная задержка индуцирует улучшение когнитивной функции, включающий введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, фармацевтического продукта по любому из пп.1-11.

18. Способ по п.17, где этим нарушением является цереброваскулярное заболевание или синдром Дауна.

19. Способ по п.17, где этим нарушением является болезнь Альцгеймера.

20. Способ по п.19, где количества производного 1-аминоциклогексана и ингибитора ацетилхолинэстеразы являются такими, чтобы они были эффективными в комбинации для улучшения результата по меньшей мере одной оценки, выбранной из батареи тестов для тяжелого расстройства (81В), опросника кооперированного исследования болезни Альцгеймера повседневной жизнедеятельности (Α^С8-Α^^) и версии плюс впечатления об изменении, основанного на интервью врача (С1В1С-Р1ия Уегяюп).