CN1530107A - 用生长激素促分泌素治疗胰岛素抗性 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及治疗哺乳动物的胰岛素抗性的方法，所述方法包括对所述哺乳动物给入有效量的通式I化合物，其中可变量的定义见说明书，或其立体异构混合物、非对映体富集、非对映体纯、对映体富集或对映体纯的异构体，或其可药用盐以及前药。通式I化合物为生长激素促分泌素，并用于提高内源生长激素水平。此外，本发明还提供了在上述化合物的合成中使用的某些中间体以及合成该中间体和通式I化合物的一些方法。本发明进一步涉及将以α－2肾上腺素能激动剂为例的功能性生长抑素拮抗剂与通式I化合物联合给入人或其它动物的方法。

Description

用生长激素促分泌素治疗胰岛素抗性
本发明是1998年6月5日递交的申请号为98805923.1、发明名称为“用生长激素促分泌素治疗胰岛素抗性”的中国专利申请的分案申请。
                       技术领域
本发明涉及治疗需要治疗的胰岛素抗性状况的方法以及治疗和预防处于需要状态的哺乳动物的充血性心力衰竭、肥胖和与老化有关的虚弱的方法，其中所应用的化合物及其制备中间体。
                       背景技术
由垂体分泌的生长激素(GH)刺激身体上所有具有生长能力的组织生长，此外，已知生长激素对于身体代谢过程还具有以下基本作用：
1、增大蛋白质在几乎所有身体细胞中的合成率；
2、降低碳水化合物在身体细胞中的利用率；
3、促进游离脂肪酸的代谢和脂肪酸在提供能量方面的作用。
生长激素的缺乏导致各种各样的疾病，对于儿童，它引起矮小；而对于成年人，后天GH缺乏的后果包括瘦弱身体质量的深度减少并伴发全身，特别是在躯干部位的脂肪增多。骨胳和心脏肌肉质量的减少和肌肉力量的降低导致运动能力的明显降低；而骨密度也同样降低。已经表明用外源生长激素给药可以逆转多种代谢变化，进行治疗的有益之处还包括能够降低LDL胆固醇和促进心理上的良好状态。
在需要提高生长激素水平的情况下，通常采取提供外源生长激素或者给入刺激生长激素产生和/或释放的药剂的方法来解决上述问题。在上述两种情况下，化合物的肽性质都迫使其要通过注射给药。最初生长激素的来源为尸体垂体的提取物，这导致产品的价格昂贵，并且，还要冒着与垂体来源有关的疾病可能被传染给生长激素接受者的这种风险(如Jacob-Crentzfeld疾病)。近来，已经可以获得重组的生长激素，它不再带有任何疾病传染的风险，但是，仍然是必须通过注射或鼻喷雾给入的非常昂贵的产品。
大多数GH缺乏都是由GH释放缺陷，而不是由GH垂体合成的初始缺陷造成的；因此，可供选择的使血清GH水平标准化的策略就是刺激GH从生长激素细胞中释放，通过刺激或抑制在脑和下丘脑中的各种神经递质系统可以达到增强GH分泌的目的；从而致使对用以刺激垂体GH分泌的合成生长激素-释放剂的研究正在继续进行之中，并且，与价格昂贵和不便的GH替代治疗相比该项研究具有不少优点。通过沿着生理调节途径起作用，大多数所需试剂将刺激搏动性GH分泌，并借助于完整的负反馈环将能够避免与给入外源GH的不良副作用有关的GH水平过量。
GH分泌的生理学和药理学刺激剂包括精氨酸、L-3，4-二羟基苯丙氨酸(L-DOPA)、胰高血糖素、加压素、和胰岛素诱导的低血糖，以及活动(如睡眠和运动)；上述物质间接引起生长激素通过在下丘脑以某些方式起作用而从垂体释放出来，它既可能降低促生长素抑制素的分泌，也可能增强已知的促分泌生长激素释放因子(GHRF)或未知的内源生长激素-释放激素或所有这些的分泌。
已经研制出的其它刺激内源生长激素释放的化合物例如与GRF有关的肽基化合物的类似物或US专利4411890所述的肽化合物。上述肽类化合物尽管比生长激素小很多，但仍然对各种蛋白酶敏感。正如大多数肽一样，其口服生物可利用率低。WO94/13696涉及某些促进生长激素分泌的螺哌啶及其同系物。
据报道WO94/11012和WO94/13696公开的化合物与甲状旁腺激素或双膦酸酯结合对于治疗骨质疏松症有效。
一方面，本发明涉及治疗需要治疗的胰岛素抗性状况(例如非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)和与哺乳动物肥胖和老化有关的糖血控制能力降低)的方法，所述方法包括对所述哺乳动物给入有效量的定义如下的通式I化合物或其可药用盐。
本发明涉及生长激素分泌剂，特别是定义如下的式I生长激素释放肽(GHRP)或拟GHRP(GHRP mimetic)在改善糖血控制方面的应用。上述提高生长激素(GH)水平的试剂并未被预计具有此种作用是因为在动物身上和在人身上GH导致糖尿病这是早已达成的共识。对于肢端肥大来说，葡萄糖的利用和抑制肝葡萄糖产生的能力是减弱的(参见Hansen，I.，等人，Am J Physiol，250：E269(1986))。在上述GH过剩的疾病中，采用降低GH水平的垂体手术或化学疗法能够逆转葡萄糖处理能力减弱和血胰岛素增多(参见Levin S.R.，等人，Am J Med，57：526(1974)；Feek，C.M.，等人，J Clin Endocrinol 22：532(1981))。此外，在多数研究中发现，对年龄较大的受治疗者给入GH将引起高血糖、对葡萄糖不耐受和血胰岛素增多(参见Aloia，J.F.，等人，J ClinEndocrinol Metab，43：992(1976)；Binnerts等人，J ClinEndocrinol Metab，67：1312(1988)；Marcus，R.，等人，J ClinEndocrinol Metab，70：519(1990))。因此，GH治疗对于糖尿病患者或有患糖尿病危险的个体来说是一种禁忌。
肥胖是糖尿病的主要危险因素，且大部分NIDDM患者是肥胖的；两种情况具有的特性是循环的胰岛素水平升高和GH水平被抑制。已经表明对成年GH缺乏的GH治疗(Jorgensen，J.O.L.，等人，Lancet1：1221(1989))、肥胖妇女(Richelsen，B.，等人，Am J Physiol，266：E211(1994))和年龄较大的男人(Rudman，D.，等人，Horm Res 36(Suppl 1)：73(1991))进行的GH治疗在降低脂肪质量的同时增大了瘦弱身体上的肝和肌肉质量。于是，若没有GH的致糖尿病作用的话，对糖尿病进行GH治疗将似乎变得具有吸引力了。
代替外源GH给药的是刺激内源GH分泌的治疗，已经表明的是，在垂体完整GH缺乏患者和年龄较大的患者身上都存在大量GH垂体储备，因此，血清GH水平的降低是归因于分泌过少。
GH分泌过少的几个临床表现(肥胖、老化、糖皮质激素抑制)对于GHRH刺激相当有耐受力(Gertz，B.J.，等人，J Clin EndocrinolMetab，79：745(1994)；Arvat，E.，等人，J Clin Endocrinol Metab，79：1440(1994)；Maccario，M.，等人，Metabolism，44：134(1995))。相反，对这些患者给入GHRP或联合给入GHRH和GHRP可以引起健康的GH反应(Aloi，J.A.，等人，J Clin Endocrinol Metab，79：943(1994))。GHRP的单个剂量研究证实对于循环胰岛素或葡萄糖水平没有产生急性效应；除了记载过没有什麽不良变化(Jacks，T.，等人，J Endocrinol，143：399(1993))以外，一般在慢性研究中尚未对胰岛素和葡萄糖进行监测。
本发明之前，从未特别地探究GHRP或拟GHRP在改善糖血控制方面的用途。治疗哺乳动物胰岛素抗性的方法包括对患者给入通式I化合物，所述患者为具有对GHRP能够产生GH应答性分泌的功能性下丘脑-垂体轴的患者和糖尿病患者(I型或II型)，或胰岛素抗性患者，或表现出对葡萄糖的耐受力减弱的患者。
另一方面，本发明涉及治疗和预防处于需要状态的哺乳动物的充血性心力衰竭、肥胖和与老化有关的虚弱的方法，所述方法包括对所述哺乳动物将功能性生长抑素拮抗剂(例如α-2肾上腺素能激动剂，如可乐定、赛拉嗪或美托咪定)与定义如下的通式I化合物同时、按照任何顺序、或结合在一起给药。又一方面，本发明提供了对于处于需要状态的哺乳动物加速骨折恢复和创伤愈合、减弱大手术后蛋白质的分解代谢反应、和降低慢性疾病造成的恶病质和蛋白质损失的方法，所述方法包括对所述哺乳动物将α-2肾上腺素能激动剂(如可乐定、赛拉嗪或美托咪定)与定义如下的通式I化合物同时、按照任何顺序、或结合在一起给药。可乐定公开于US专利3202660，特此引入以为参考；赛拉嗪公开于US专利3235550，特此引入以为参考；以及美托咪定公开于US专利4544664，特此引入以为参考。已经表明α-2肾上腺素能激动剂在人类和犬身上引起内源生长激素的释放(Cella等人，Life Sciences(1984)，34：447-454；Hampshire J，AltszulerN.American Journal of Veterinary Research(1981)，42：6，1073-1076；Valcavi等人，Clinical Endocrinology(1988)，29：309-316；Morrison等人，American Journal of Veterinary Research(1990)，51：1，65-70；)，并且，α-2肾上腺素能激动剂和生长激素释放因子的共同给药在年老的狗身上对已不健全的生长激素分泌起恢复作用(Arce等人，Brain Research(1990)，537：359-362；Cella等人，Neuroendocrinology(1993)，57：432-438)。
再一方面，本发明提供合成通式Z化合物的方法
该方法描述见下文
此外，本发明涉及在通式Z化合物的合成中使用的某些中间体(如下所示)的制备方法。
在1996年12月4日提出的申请号为PCT/IB 96/01353的共同悬而未决的PCT申请中公开和要求保护了本发明所利用的通式I化合物和通式Z化合物，该申请与本发明是同一申请人，在其中公开了上述化合物具有提高内源生长激素水平的生长激素促分泌素活性。
                       发明内容
本发明所述方法中应用的化合物为通式I化合物、
Figure A20041003341800222
或立体异构混合物、非对映体富集、非对映体纯、对映体富集或对映体纯的异构体，或其可药用盐以及前药，
其中
e是0或1；
n和w各自独立是0，1或2；
条件是w和n不同时都是0；
Y是氧或硫；
R1是氢，-CN，-(CH2)qN(X6)C(O)X6，-(CH2)qN(X6)C(O)(CH2)t-A1，
-(CH2)qN(X6)SO2(CH2)t-A1，-(CH2)qN(X6)SO2X6，-(CH2)qN(X6)C(O)N(X6)(CH2)t-A1，
-(CH2)qN(X6)C(O)N(X6)(X6)，-(CH2)qC(O)N(X6)(X6)，-(CH2)qC(O)N(X6)(CH2)t-A1，
-(CH2)qC(O)OX6，-(CH2)qC(O)O(CH2)t-A1，-(CH2)qOX6，-(CH2)qOC(O)X6，
-(CH2)qOC(O)(CH2)t-A1，-(CH2)qOC(O)N(X6)(CH2)t-A1，-(CH2)qOC(O)N(X6)(X6)，
-(CH2)qC(O)X6，-(CH2)qC(O)(CH2)t-A1，-(CH2)qN(X6)C(O)OX6，
-(CH2)qN(X6)SO2N(X6)(X6)，-(CH2)qS(O)mX6，-(CH2)qS(O)m(CH2)t-A1，-(C1-C10)烷基，-(CH2)t-A1，-(CH2)q-(C3-C7)环烷基，-(CH2)q-Y1-(C1-C6)烷基，
-(CH2)q-Y1-(CH2)t-A1或-(CH2)q-Y1-(CH2)t-(C3-C7)环烷基；
其中R1定义中的烷基和环烷基任选被(C1-C4)烷基，羟基，(C1-C4)烷氧基，羧基，-CONH2，-S(O)m(C1-C6)烷基，-CO2(C1-C4)烷基酯，1H-四唑-5-基或1、2或3个氟取代；
Y1是O，S(O)m，-C(O)NX6-，-CH＝CH-，-C≡C-，-N(X6)C(O)-，-C(O)NX6-，-C(O)O-，-OC(O)N(X6)-或-OC(O)-；
q是0，1，2，3或4；
t是0，1，2或3；
所述(CH2)q和(CH2)t可以各自任选被羟基，(C1-C4)烷氧基，羧基，-CONH2，-S(O)m(C1-C6)烷基，-CO2(C1-C4)烷基酯，1H-四唑-5-基，1、2或3个氟，或1或2个(C1-C4)烷基取代；
R2是氢，(C1-C8)烷基，-(C0-C3)烷基-(C3-C8)环烷基，-(C1-C4)烷基-A1或A1；
其中R2定义中的烷基和环烷基任选被羟基，-C(O)OX6，-C(O)N(X6)(X6)，-N(X6)(X6)，-S(O)m(C1-C6)烷基，-C(O)A1，-C(O)(X6)，CF3，CN或1、2或3个卤素取代；
R3是A1，(C1-C10)烷基，-(C1-C6)烷基-A1，-(C1-C6)烷基-(C3-C7)环烷基，-(C1-C5)烷基-X1-(C1-C5)烷基，-(C1-C5)烷基-X1-(C0-C5)烷基-A1或-(C1-C5)烷基-X1-(C1-C5)烷基-(C3-C7)环烷基；
其中R3定义中的烷基任选被-S(O)m(C1-C6)烷基，-C(O)OX3，1、2、3、4或5个卤素，或1、2或3个OX3取代；
X1是O，S(O)m，-N(X2)C(O)-，-C(O)N(X2)-，-OC(O)-，-C(O)O-，-CX2＝CX2-，-N(X2)C(O)O-，-OC(O)N(X2)-或-C≡C-；
R4是氢，(C1-C6)烷基或(C3-C7)环烷基；或者R4与R3和它们所连接的碳原子一起形成(C5-C7)环烷基，(C5-C7)环烯基，具有独立选自氧、硫和氮的1至4个杂原子的部分饱和或完全饱和的4-至8-元环，或者是双环体系，该双环体系是由与部分饱和、完全不饱和或完全饱和的5-或6-元环稠和的部分饱和或完全饱和的5-或6-元环组成，且所述环任选含有独立选自氮、硫和氧的1至4个杂原子；
X4是氢或(C1-C6)烷基；或X4与R4和X4所连接的氮原子和R4所连接的碳原子一起形成5至7元环；
R6是键或
其中a和b独立是0，1，2或3；
X5和X5a各自独立选自氢，三氟甲基，A1和任选取代的(C1-C6)烷基；其中X5和X5a定义中的任选取代的(C1-C6)烷基是任选被选自A1，OX2，-S(O)m(C1-C6)烷基，-C(O)OX2，(C3-C7)环烷基，-N(X2)(X2)和-C(O)N(X2)(X2)的取代基取代；
或者带有X5或X5a的碳原子与带有R7和R8的氮原子形成1或2个亚烷基桥，其中每个亚烷基桥含有1至5个碳原子，条件是当形成1个亚烷基桥时，X5或X5a，而不是二者都可在碳原子上，且R7或R8，而不是二者都可在氮原子上；再一个条件是当形成2个亚烷基桥时，X5和X5a不能在碳原子上，且R7和R8不能在氮原子上；
或者X5与X5a和它们所连接的碳原子一起形成部分饱和或完全饱和的3-至7-元环，或含有独立选自氧、硫和氮的1至4个杂原子的部分饱和或完全饱和的4-至8-元环；
或者X5与X5a和它们所连接的碳原子一起形成双环体系，该双环体系是由与任选含有独立选自氮、硫和氧的1至4个杂原子的部分饱和、完全饱和或完全不饱和的5-或6-元环稠和的任选含有独立选自氮、硫和氧的1或2个杂原子的部分饱和或完全饱和的5-或6-元环组成；
Z1是键，O或N-X2，条件是a和b都是0时Z1不是N-X2或O；R7和R8独立是氢或任选取代的(C1-C6)烷基；
其中R7和R8定义中任选取代的(C1-C6)烷基是任选独立被A1，-C(O)O-(C1-C6)烷基，-S(O)m(C1-C6)烷基，1至5个卤素，1至3个羟基，1至3个-O-C(O)(C1-C10)烷基或1至3个(C1-C6)烷氧基取代；或者
R7和R8可以一起形成-(CH2)r-L-(CH2)r-；
其中L是C(X2)(X2)，S(O)m或N(X2)；
在每一种情形下的A1独立是(C5-C7)环烯基，苯基，或任选含有独立选自氧、硫和氮的1至4个杂原子的部分饱和、完全饱和或完全不饱和的4-至8-元环，双环体系，该双环体系是由与任选含有独立选自氮、硫和氧的1至4个杂原子的部分饱和、完全饱和或完全不饱和的5-或6-元环稠和的任选含有独立选自氮、硫和氧的1至4个杂原子的部分饱和、完全不饱和或完全饱和的5-或6-元环组成；
在每种情形下的A1独立地任选被取代，所述取代发生在1个环上，或者在A1是双环体系的情况下任选发生在两个环上，取代基的数量多至3个，且每个取代基独立选自F，Cl，Br，I，OCF3，OCF2H，CF3，CH3，OCH3，-OX6，-C(O)N(X6)(X6)，-C(O)OX6，氧代，(C1-C6)烷基，硝基，氰基，苄基，-S(O)m(C1-C6)烷基，1H-四唑-5-基，苯基，苯氧基，苯基烷氧基，卤代苯基，亚甲二氧基，-N(X6)(X6)，-N(X6)C(O)(X6)，-SO2N(X6)(X6)，-N(X6)SO2-苯基，-N(X6)SO2X6，-CONX11X12，-SO2NX11X12，-NX6SO2X12，-NX6CONX11X12，-NX6SO2NX11X12，-NX6C(O)X12，咪唑基，噻唑基和四唑基，条件是如果A1被亚甲二氧基取代，那么此时它只能被1个亚甲二氧基取代；
其中X11是氢或任选取代的(C1-C6)烷基；
X11定义中任选取代的(C1-C6)烷基是任选独立被苯基，苯氧基，(C1-C6)烷氧羰基，-S(O)m(C1-C6)烷基，1至5个卤素，1至3个羟基，1至3个(C1-C10)烷酰氧基或1至3个(C1-C6)烷氧基；X12是氢，(C1-C6)烷基，苯基，噻唑基，咪唑基，呋喃基或噻吩基，条件是当X12不是氢时，X12任选被1至3个独立选自Cl，F，CH3，OCH3，OCF3和CF3的取代基取代；
或者X11和X12一起形成-(CH2)r-L1-(CH2)r-；
其中L1是C(X2)(X2)，O，S(O)m或N(X2)；
在每种情形下的r独立是1，2或3；
在每种情形下的X2独立是氢，任选取代的(C1-C6)烷基或任选取代的(C3-C7)环烷基；其中在X2定义中的任选取代的(C1-C6)烷基或任选取代的(C3-C7)环烷基是任选独立被-S(O)m(C1-C6)烷基，-C(O)OX3，1至5个卤素或1至3个OX3取代；
在每种情形下的X3独立是氢或(C1-C6)烷基；
X6独立是氢，任选取代的(C1-C6)烷基，(C2-C6)卤代烷基，任选取代的(C3-C7)环烷基，(C3-C7)卤代环烷基，其中在X6定义中的任选取代的(C1-C6)烷基和任选取代的(C3-C7)环烷基是任选独立被1或2个(C1-C4)烷基，羟基，(C1-C4)烷氧基，羧基，-CONH2，-S(O)m(C1-C6)烷基，甲酸(C1-C4)烷基酯或1H-四唑-5-基取代；或者
当在1个原子上有2个X6且2个X6都独立地是(C1-C6)烷基时，所述的2个(C1-C6)烷基可以与和这2个X6所连接的原子任选连接在一起形成任选含有氧、硫或NX7的4-至9-元环；
X7是氢或任选被羟基取代的(C1-C6)烷基；以及
在每种情形下的m独立是0，1或2；
条件是：
在C(O)X6，C(O)X12，SO2X6或SO2X12中，当X6和X12是与C(O)或SO2连接之时，它们不能是氢；和
当R6是化学键时，L是N(X2)且在-(CH2)r-L-(CH2)r-定义中的每个r独立是2或3。
一方面，本发明提供治疗哺乳动物的胰岛素抗性的方法，所述方法包括对所述哺乳动物给入有效量的定义如上的通式I化合物，或其立体异构混合物、非对映体富集、非对映体纯、对映体富集或对映体纯的异构体，或其可药用盐以及前药。
在上述方法的优选方法中，与胰岛素抗性有关的疾病是I型糖尿病、II型糖尿病、高血糖、葡萄糖耐受力不足或者胰岛素抗性综合征或状态。
上述方法的另一种优选方法中，与胰岛素抗性有关的疾病与肥胖或老龄有关。
上述方法的优选方法中，所述通式I化合物是下式所示化合物
或其立体异构混合物、非对映体富集、非对映体纯、对映体富集或对映体纯的异构体，或其可药用盐以及前药，其中
R1是-CH2-苯基，R2是甲基，和R3是-(CH2)3-苯基；
R1是-CH2-苯基，R2是甲基，和R3是3-吲哚基-CH2-；
R1是-CH2-苯基，R2是乙基，和R3是3-吲哚基-CH2-；
R1是-CH2-4-氟-苯基，R2是甲基，和R3是3-吲哚基-CH2-；
R1是-CH2-苯基，R2是甲基，和R3是-CH2-O-CH2-苯基；
R1是-CH2-苯基，R2是乙基，和R3是-CH2-O-CH2-苯基；
R1是-CH2-苯基，R2是-CH2CF3，和R3是-CH2-O-CH2-苯基；
R1是-CH2-4-氟-苯基，R2是甲基，和R3是-CH2-O-CH2-苯基；
R1是-CH2-苯基，R2是叔丁基，和R3是-CH2-O-CH2-苯基；或者
R1是-CH2-苯基，R2是甲基，和R3是-CH2-O-CH2-3，4-二氟-苯基。
上述方法的另一种优选方法中，所述通式I化合物是下式所示化合物
或其立体异构混合物、非对映体富集、非对映体纯、对映体富集或对映体纯的异构体，或其可药用盐以及前药，其中
R2是甲基，A1是2-吡啶基，和R3是-CH2-O-CH2-苯基；
R2是-CH2CF3，A1是2-吡啶基，和R3是-CH2-O-CH2-3-氯-苯基；
R2是-CH2CF3，A1是2-吡啶基，和R3是-CH2-O-CH2-4-氯-苯基；
R2是-CH2CF3，A1是2-吡啶基，和R3是-CH2-O-CH2-2，4-二氯-苯基；
R2是-CH2CF3，A1是2-吡啶基，和R3是-CH2-O-CH2-3-氯-噻吩；或者
R2是-CH2CF3，A1是2-吡啶基，和R3是-CH2-O-CH2-2，4-二氟-苯基。
上述方法的又一种优选方法中，所述通式I化合物或其立体异构混合物、非对映体富集、非对映体纯、对映体富集或对映体纯的异构体，或其可药用盐以及前药是选自下列的化合物的3a(R，S)，1(R)非对映体混合物、3a(R)，1(R)非对映体或3a(S)，1(R)非对映体：
2-氨基-N-[1-(3a-苄基-2-甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-羰基)-4-苯基丁基]异丁酰胺；
2-氨基-N-[2-(3a-苄基-2-甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-1-(1H-吲哚-3-基甲基)-2-氧代-乙基]异丁酰胺；
2-氨基-N-[2-(3a-苄基-2-乙基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并
[4，3-c]吡啶-5-基)-1-(1H-吲哚-3-基甲基)-2-氧代-乙基]异丁酰胺；
2-氨基-N-[2-[3a-(4-氟-苄基)-2-甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基]-1-(1H-吲哚-3-基甲基)-2-氧代-乙基]异丁酰胺；
2-氨基-N-[2-(3a-苄基-2-甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-1-苄氧基甲基-2-氧代-乙基]异丁酰胺；
2-氨基-N-[2-(3a-苄基-2-乙基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-1-苄氧基甲基-2-氧代-乙基]异丁酰胺；
2-氨基-N-{2-[3a-苄基-3-氧代-2-(2，2，2-三氟-乙基)-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基]-1-苄氧基甲基-2-氧代-乙基}异丁酰胺；
2-氨基-N-{1-苄氧基甲基-2-[(3a-(4-氟-苄基)-2-甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-2-氧代-乙基]异丁酰胺；
2-氨基-N-[2-(3a-苄基-2-叔丁基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-1-苄氧基甲基-2-氧代-乙基]异丁酰胺；
2-氨基-N-[2-(3a-苄基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]并吡啶-5-基)-1-苄氧基甲基-2-氧代-乙基]异丁酰胺。
上面刚刚描述的方法的优选方法中，所述通式I化合物是2-氨基-N-[2-(3a-(R)-苄基-2-甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-1-(R)-苄氧基甲基-2-氧代-乙基]异丁酰胺L-酒石酸盐。
上述方法的再一种优选方法中，所述通式I化合物或其立体异构混合物、非对映体富集、非对映体纯、对映体富集或对映体纯的异构体，或其可药用盐以及前药是选自下列的化合物的3a-(R，S)，1-(R)非对映体混合物、3a-(R)，1-(R)对映体或3a-(S)，1-(R)对映体：
2-氨基-N-[1-苄氧基甲基-2-(2-甲基-3-氧代-3a-吡啶-2-基甲基-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-2-氧代-乙基]-2-甲基-丙酰胺；
2-氨基-N-{1-(3-氯-苄氧基甲基)-2-氧代-2-[3-氧代-3a-吡啶-2-基甲基-2-(2，2，2-三氟-乙基)-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基]乙基}-2-甲基-丙酰胺；
2-氨基-N-{1-(4-氯-苄氧基甲基)-2-氧代-2-[3-氧代-3a-吡啶-2-基甲基-2-(2，2，2-三氟-乙基)-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基]乙基}-2-甲基-丙酰胺；
2-氨基-N-{1-(2，4-二氯-苄氧基甲基)-2-氧代-2-[3-氧代-3a-吡啶-2-基甲基-2-(2，2，2-三氟-乙基)-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基]乙基}-2-甲基-丙酰胺；
2-氨基-N-{1-(4-氯-噻吩-2-基甲氧基甲基)-2-氧代-2-[3-氧代-3a-吡啶-2-基甲基-2-(2，2，2-三氟-乙基)-2，3，3a，4，5，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-6-基]乙基}-2-甲基-丙酰胺；以及
2-氨基-N-{1-(2，4-二氟-苄氧基甲基)-2-氧代-2-[3-氧代-3a-吡啶-2-基甲基-2-(2，2，2-三氟-乙基)-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基]乙基}-2-甲基-丙酰胺。
在上述方法的更优选方法中，还包括对处于需要状态的哺乳动物给入生长激素释放激素或其功能类似物，所述激素或其功能类似物是通过现有技术中已知的方法制备的并且其中的一些实例公开于欧洲专利EP511003中。
另一方面，本发明提供用于治疗哺乳动物胰岛素抗性的药物组合物，所述组合物含有可药用载体和有效量的上述通式I化合物或其立体异构混合物、非对映体富集、非对映体纯、对映体富集或对映体纯的异构体，或其可药用盐以及前药。
又一方面，本发明提供提高内源生长激素水平的方法，所述方法包括对处于需要状态的人或其它哺乳动物给入有效量的功能性生长抑素拮抗剂和上述的通式I化合物，或其立体异构混合物、非对映体富集、非对映体纯、对映体富集、对映体纯的异构体，或其可药用盐以及前药。
再一方面，本发明提供治疗和预防充血性心力衰竭、肥胖或与老化有关的虚弱的方法，所述方法包括对处于需要状态的哺乳动物给入有效量的功能性生长抑素拮抗剂和上述通式I化合物，或其立体异构混合物、非对映体富集、非对映体纯、对映体富集或对映体纯的异构体，或其可药用盐以及前药。上述方法中，所述功能性生长抑素拮抗剂优选是α-2肾上腺素能激动剂；而刚刚所述方法中，所述α-2肾上腺素能激动剂优选自可乐定、赛拉嗪和美托咪定；此外，上述方法中，所述通式I化合物优选是2-氨基-N-[2-(3a-(R)-苄基-2-甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-1-(R)-苄氧基甲基-2-氧代-乙基]异丁酰胺L-酒石酸盐。
本发明还涉及药物组合物，所述组合物含有可药用载体和α-2肾上腺素能激动剂和定义如上的通式I化合物或其立体异构混合物、非对映体富集、非对映体纯、对映体富集或对映体纯的异构体，或其可药用盐以及前药。
本发明更涉及治疗哺乳动物胰岛素抗性的方法，所述方法包括对处于需要状态的哺乳动物给入有效量的生长激素释放肽或拟生长激素释放肽或其可药用盐。
一方面，本发明涉及下述方法，其中“★”表示立体化学中心。
制备通式k化合物的方法，
Figure A20041003341800311
所述方法包括在有机碱、肽偶联剂和反应惰性溶剂存在下，在大约-78℃至大约-20℃温度下，使通式g化合物
Figure A20041003341800312
                       游离碱
                         (g)
与通式j化合物反应生成通式k化合物，
Figure A20041003341800321
其中Prt是氨基保护基。
上述方法优选的是，其中所述肽偶联剂是1-丙烷膦酸环酐，以及通式g化合物具有R构型，通式j化合物具有R构型，且通式k化合物具有3a-(R)，1-(R)构型。
制备通式Z化合物的方法，
Figure A20041003341800322
所述方法包括在有机碱、肽偶联剂和反应惰性溶剂存在下，在大约-78℃至大约-20℃温度下，使通式g化合物
                        游离碱
                          (g)
与通式j化合物反应
Figure A20041003341800331
生成通式k化合物；
通式k化合物脱保护生成通式I化合物；
然后，在醇溶剂中，使通式I化合物与L-酒石酸反应生成通式Z化合物。
上述方法优选的是，其中所述肽偶联剂是1-丙膦酸环酐，以及通式g化合物具有R构型，通式j化合物具有R构型，且通式k、I和Z化合物都具有3a-(R)，1-(R)构型。
通式g化合物的制备方法，
游离碱(g)
所述方法包括在惰性溶剂中，在大约-50℃至大约-10℃温度下，通式f化合物
                L-酒石酸盐
                    (f)
与碱反应生成通式g化合物，其中保持了苄基的手性。
通式c化合物的制备方法，
Figure A20041003341800342
所述方法包括在反应惰性溶剂中，使通式b化合物
Figure A20041003341800343
其中Prt是氨基保护基，与无机或有机碱和苄基溴反应生成通式c化合物。
通式f化合物的制备方法，
                L-酒石酸盐
                    (f)
所述方法包括在反应惰性有机溶剂中，式通式e化合物
Figure A20041003341800352
与L-酒石酸反应。
本发明还提供下式所示化合物的R，S-对映体混合物、R-对映体或S-对映体，
Figure A20041003341800353
其中Prt是氢或氨基保护基。
                       发明详述
一般来说，可以采用多种方法，其中包括化学现有技术中已知的方法制备出本发明方法所利用的通式I化合物，或其立体异构混合物、非对映体富集、非对映体纯、对映体富集、对映体纯的异构体，或其可药用盐以及前药。
在上述结构式中且贯穿于本申请中，除非另有说明，以下术语具有下文所指出的含义。
烷基包括可以选择性地含有双键或三键的的指定长度的直链或支链的烷基，其实例是甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、己基、异己基、烯丙基、乙炔基、丙烯基、丁二烯基、己烯基等等。
当定义中出现C0-烷基时，代表单的共价键。
烷氧基包括可以选择性地含有双键或三键的的指定长度的直链或支链烷氧基，其实例是甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、异戊氧基、己氧基、异己氧基、烯丙氧基、2-丙炔氧基、异丁烯氧基、己烯氧基等等。
术语“卤素”或“卤代”包括卤素原子：氟、氯、溴和碘。
术语“卤代烷基”包括被1个或多个定义如上的卤素原子取代的定义如上的烷基。
术语“卤代环烷基”包括被1个或多个定义如上的卤素原子取代的环烷基。
术语“芳基”包括苯基和萘基，以及带有1至4个杂原子的芳香5和6元环或带有1至4个选自氮、硫或氧的杂原子的稠和的5或6元双环，所述芳香杂环的实例是吡啶、噻吩、呋喃、苯并噻吩、四唑、吲哚、N-甲基吲哚、二氢吲哚、吲唑、N-甲酰基吲哚、苯并咪唑、噻唑、嘧啶和噻二唑。
化学领域普通技术人员公认的是，本发明列出的含杂原子的取代基的某些组合方式定义出的化合物在生理条件下(例如在含有缩醛或缩醛胺键的条件下)将较不稳定，因此，较少优选这些化合物。
“前药”这种表达方式是指作为药物的前体，并在给药后，经过一些化学或生理过程在体内释放出该药物(如在达到生理pH值时前药被转化为所需的药物)的化合物；典型的前药在裂解时释放出相应的游离酸，且本发明化合物的上述可水解的成酯残基包括而不仅限于羧酸取代基(例如R1是-(CH2)qC(O)2X6，其中X6是氢；或者R2或A1含有羧酸)其中的游离氢被(C1-C4)烷基、(C2-C12)烷酰氧基甲基、(C4-C9)1-(烷酰氧基)乙基、含有5至10个碳原子的1-甲基-1-(烷酰氧基)-乙基、含有3至6个碳原子的烷氧羰基-氧基甲基、含有4至7个碳原子的1-(烷氧羰基氧基)乙基、含有5至8个碳原子的1-甲基-1-(烷氧羰基氧基)乙基、含有3至9个碳原子的N-(烷氧羰基)氨基甲基、含有4至10个碳原子的1-(N-(烷氧羰基)氨基)乙基、3-苯并[c]呋喃酮基、4-巴豆酸内酯基、γ-丁内酯-4-基、二-N，N-(C1-C2)烷基氨基(C2-C3)烷基(如β-二甲基氨基乙基)、氨基甲酰基-(C1-C2)烷基、N，N-二(C1-C2)烷基氨基甲酰基-(C1-C2)烷基和哌啶子基-、吡咯烷子基-或吗啉代(C2-C3)烷基取代。
其它典型的释放出通式I醇的前药，其中羟基取代基(如R1含有羟基)的游离氢被(C1-C6)烷酰氧基甲基、1-((C1-C6)烷酰氧基)乙基、1-甲基-1-((C1-C6)烷酰氧基)乙基、(C1-C6)烷氧羰基氧基甲基、N-(C1-C6)烷氧羰基氨基甲基、琥珀酰基、(C1-C6)烷酰基、α-氨基(C1-C4)烷酰基、芳基乙酰基和α-氨基酰基或α-氨基酰基-α-氨基酰基〔其中所述α-氨基酰基部分独立为任何天然存在的蛋白质的L-氨基酸或P(O)(OH)2、-P(O)(O(C1-C6)烷基)2或糖基(碳水化物的半缩醛上的羟基脱离后生成的基团)〕取代。
通式I羧酸的羧基被酯替代的通式I化合物的前药的制备是通过所述羧酸与合适的烷基卤化物在碱(如碳酸钾)存在下，在惰性溶剂(如DMF)中，在温度为大约0℃至大约100℃下反应大约1至大约24小时完成的。或者，是通过所述羧酸与作为溶剂的合适的醇在催化量的酸(如浓硫酸)存在下，在温度大约20℃至大约120℃下(优选在回流下)反应大约1至大约24小时完成的。再一种方法是所述酸在惰性溶剂(如THF)中反应，该反应伴随着除去通过物理(如迪安斯塔克设备捕集器)或化学(如分子筛)方式生成的水。
通式I的醇官能团被衍生为醚的通式I化合物的前药是通过所述醇与合适的烷基溴或烷基碘在碱(如碳酸钾)存在下，在惰性溶剂(如DMF)中，在温度为大约0℃至大约100℃下反应大约1至大约24小时完成的。烷酰基氨基甲基醚可以按照US4997984所述方法，通过醇与双-(烷酰基氨基)甲烷在催化量的酸存在下，在惰性溶剂如THF中反应制得；或者，可以采用Hoffman等人在J.Org.Chem.1994，59，p.3530中所述的方法制备上述化合物。
在上式中，某些定义术语可以出现不只一次，且其出现的每个场合的定义是彼此独立的。
贯穿于说明书和权利要求始末，使用具有下文含义的以下缩写：
BOC            叔丁氧羰基
BOP            苯并三唑-1-基氧基三(二甲氨基)六氟磷酸鏻
CBZ            苄氧羰基
CDI            N，N′-羰基二咪唑
CH2Cl         二氯甲烷
CHCl3         氯仿
DCC            二环己基碳化二亚胺
DMF            二甲基甲酰胺
EDC            1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐
EtOAc          乙酸乙酯
FMOC           9-芴基甲氧羰基
h              小时
Hex            己烷
HOAT           1-羟基-7-氮杂苯并三唑
HOBT           羟基苯并三唑水合物
HPLC           高压液相色谱
MHz            兆赫
MS             质谱
NMR            核磁共振
PTH            甲状旁腺激素
TFA            三氟乙酸
THF            四氢呋喃
TLC            薄层色谱
TRH            促甲状腺激素释放激素
TROC           2，2，2-三氯乙氧羰基
正如在上述结构式I中用星号标记的那样，本发明方法所利用的化合物都具有至少1个不对称中心。由分子中的各种取代基的性质决定了在该分子中还可以存在其它的不对称中心。每个这种不对称中心将产生2个旋光异构体，并且，所有这些旋光异构体作为分离后的、纯化的或部分纯化的旋光异构体、外消旋混合物或非对映体混合物都将被包括中本发明的范围内。在不对称中心用星号表示出来的情况下，已经发现更具活性、从而更优选的绝对立体化学以通式IA表示。同样，上述优选的绝对构型也适用于通式I。
Figure A20041003341800391
其中R4取代基是氢，不对称中心的空间构型与D-氨基酸对应；并且，在大多数情况下，它都被指定为R构型，尽管根据用以确定R-或S-立体化学排布的R3和R4的值，上述构型会有所改变。
本发明方法所利用的化合物通常以其可药用酸加成盐，例如使用无机和有机酸生成的盐的形式中被分离出来。所述酸的实例是盐酸、硝酸、硫酸、磷酸、甲酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、马来酸、琥珀酸、D-酒石酸、L-酒石酸、丙二酸、甲磺酸等等。此外，某些含有酸性官能团，如羧基的化合物可以其无机酸盐的形式分离出来，其中的平衡离子可以选自钠、钾、锂、钙、镁等等，以及来自有机碱。
取大约1当量通式I化合物并使其与大约1当量与所需盐对应的合适的酸接触，就可以形成可药用盐。对于本领域普通技术人员而言，生成的盐的后处理和分离方法是已知的。
在其范围内，本发明包括药物组合物，该组合物中包括作为活性成分的胰岛素抗性治疗量的至少一种通式I化合物，连同可药用赋形剂；此外，在其范围内，本发明还包括药物组合物，该组合物中包括作为活性成分的至少一种α-2肾上腺能激动剂和至少一种通式I化合物，连同可药用赋形剂；选择性地，上述药物组合物还可以进一步包括除至少一种通式I化合物以外的合成代谢剂，或显示出不同活性的其它化合物(如抗生的生长许可剂(permittant))，或者其与上述物质的组合能够提高功效和减小副作用的其它可药用活性物质。
刺激大鼠垂体释放GH的试验
使用以下方案鉴定具有从培养的大鼠垂体细胞刺激GH分泌的能力的化合物。该试验还用来与标准作比较以确定剂量水平。从6周雄性Wistar大鼠的垂体中分离细胞。断头后，将垂体前叶除去放入不含钙或镁的冷的无菌Hank’s平衡盐溶液(HBSS)中。将组织切碎，然后在HBSS中，用10U/mL细菌蛋白酶(EC 3.4.24.4 Sigma P-6141，St.Louis，Missouri)进行两轮机械辅助的酶化分散过程。将组织-酶混合物在大约37℃的旋转器中，在5％CO2气体中，以30rpm搅拌约30分钟；在大约15分钟和大约30分钟后使用10ml移液管进行人工研磨。以200xg离心上述混合物约5分钟。将马血清(最终浓度35％)加入上清液中以中和过量蛋白酶。将沉淀重新悬浮在新鲜的蛋白酶(10U/mL)中，在上文所述的条件下搅拌大约30多分钟，并进行人工研磨直至最终可以通过23号针的程度。再次加入马血清(最终浓度35％)，然后将来自两次消化处理的细胞合并，使其沉淀(以200xg进行约15分钟)，再重新悬浮在培养基(添加了4.5g/L葡萄糖、10％马血清、2.5％胎牛血清、1％非必需氨基酸、100U/mL制霉菌素和50mg/mL硫酸庆大霉素的Dulbecco改良Eagle培养基(D-MEM)，Gibco，Grand Island，New York)中并计数。将细胞以6.0-6.5×104细胞/cm2放置于48孔CostarTM(Cambridge，Massachusetts)平皿中并在培养基中培养3至4天。
开始GH分泌试验之前，用释放培养基漂洗培养孔两遍，然后在释放培养基(37℃的用25mM Hepes缓冲的D-MEM，pH7.4并含有0.5％牛血清白蛋白)中平衡大约30分钟。将受试化合物溶于DMSO，然后稀释到预热的释放培养基中。按照一式四份进行试验。通过向各个培养孔中加入0.5mL释放培养基(带有赋形剂或受试化合物)开始试验。在大约37℃下培养约15分钟，而后除去释放培养基使培养终止，将该培养基以2000xg离心约15分钟以除去细胞物质。通过下述标准放射免疫试验方法测定上清液中的大鼠生长激素浓度。
大鼠生长激素的测定
大鼠生长激素浓度是通过使用大鼠生长激素对照制备物(NIDDK-rGH-RP-2-)和从得自Dr.A.Parlow(Harbor-UCLA医学中心，Torrence，CA)的猴子身上提取的大鼠生长激素抗血清(NIDDK-抗-rGH-S-5)的双抗体放射免疫试验方法测得的。通过氯胺T法将另外的大鼠生长激素(1.5U/mg，#G2414，Scripps Labs，San Diego，CA)碘化至比活大约为30μCi/μg以用作示踪物。通过将羊抗血清加入猴IgG(ICN/Cappel，Aurora，OH)(加有聚乙二醇，MW10000-20000)直至最终浓度为4.3％获得免疫复合物；再通过离心完成回收。在基础水平上，本试验操作范围为0.08-2.5μg大鼠生长激素/管。
静脉给入受试化合物后的大鼠外源刺激生长激素的释放试验
在化合物试验之前，使21天龄的雌性Sprague-Dawley大鼠(Charles River Laboratory，Wilmington，MA)适应局部的动物园条件(24℃，12小时光照，12小时黑暗周期)约1周。所有的大鼠可以随意获得水和市售的丸状饲料(Agway Country Food，Syracuse NY)。按照试验动物的饲养和使用NIH指南进行试验。
试验之日，将受试化合物溶于含有1％乙醇、1mM乙酸和0.1％牛血清白蛋白的赋形剂盐溶液中。每个试验用三只大鼠进行。将大鼠称重和通过腹膜内注射戊巴比妥钠(Nembutol_，50mg/kg体重)进行麻醉。麻醉14分钟后，通过插入尾尖获取血样，并将血滴入微离心管(基线血样，约100μl)。麻醉15分钟后，将受试化合物以总注射体积为1mL/kg体重的量静脉注射至尾静脉中。在给入化合物的5、10和15分钟后从尾部获取另一血样。将血样保存在冰中直至通过离心(10℃下，以1430xg离心10分钟)分离出血清。在-80℃下储存血清直至通过上述放射免疫试验方法测定血清生长激素。
口服给药后的狗外源刺激的生长激素释放试验
在给药当天，称取合适剂量的受试化合物并将其溶于水。每个剂量方案，都是通过管饲法以0.5-3mL/kg体重的体积将所述剂量施于2至4只狗。在给药前和给药0.17、0.33、0.5、0.75、1、2、4、6、8和24小时后，用含肝素锂的5mL vacutainer从颈静脉通过直接的静脉穿刺收集血样(5mL)。将制得的血浆在-20℃下储存直至进行分析。
狗生长激素的测定
通过标准放射免疫试验方法，使用狗生长激素(用于碘化的抗原和对照制备物AFP-1983B)和从得自Dr.A.Parlow(Harbor-UCLA医学中心，Torrence，CA)的猴子(AFP-21452578)身上提取的狗生长激素抗血清测定狗生长激素的浓度。通过氯胺T-碘化法使狗生长激素的比活为20至40μCi/μg而制成示踪物。通过将羊抗血清加入猴IgG(ICN/Cappel，Aurora，OH)(加有聚乙二醇，MW10000-20000)直至最终浓度为4.3％获得免疫复合物；再通过离心完成回收。本试验操作范围为0.08-2.5μg狗GH/管。
对狗慢性口服给药后的狗生长激素和类胰岛素生长因子-1水平评价
每日对狗给入受试化合物，进行7或14天。在给药的每一天，称取合适剂量的受试化合物并将其溶于水。每个剂量方案，都是通过管饲法以0.5-3mL/kg体重的体积将所述剂量施于5只狗。在第0、3、7、10、和14天收集血样。在第0、7和14天的给药前和给药0.17、0.33、0.5、0.754、1、2、3、6、8、12和24小时后，用含肝素锂的5mL vacutainer从颈静脉通过直接的静脉穿刺收集血样(5mL)。此外，在第3和10天的给药前和8小时之时抽血。将制得的血浆在-20℃下储存直至进行分析。
雌性大鼠研究
本研究评价用拟GHRP进行慢性治疗对于雌激素不足的和雌激素充足的雌性大鼠体重、躯体组成以及葡萄糖、胰岛素、乳酸和脂质的未禁食血浆浓度所产生的作用。在给药的最后一天评价对于静脉给入GH释放剂所产生的血清GH水平的急性应答能力。在整个治疗期中每周对体重进行监测；此外，在治疗结束时评价躯体组成以及葡萄糖、胰岛素、乳酸、胆固醇和甘油三酸酯的血浆水平。
从Charles River Laboratories(Wilmington，MA)得到未交配过的雌性Sprague-Dawley大鼠，并在大约12周龄时进行两侧卵巢切除术(Ovx)或假手术(Sham)。假手术是将卵巢从腹内取出又放回腹腔。手术后，在标准动物园条件(24℃，12小时光照，12小时黑暗周期)下，将大鼠在20cm×32cm×20cm的笼中单独饲养。所有的大鼠可以随意获得水和市售的丸状饲料(Agway Prolab 3000，Agway CountryFood，Inc.，Syracuse NY)。按照试验动物的饲养和使用NIH指南进行试验。
手术后大约7个月时，将Sham和Ovx大鼠称重和自由编组。每日通过管饲法口服给入大鼠1mL赋形剂(1％乙醇的蒸馏-去离子水溶液)、0.5mg/kg或5mg/kg生长激素释放剂，进行90天。在整个研究中以每周间隔对大鼠进行称重。最后一次口服给药24小时后，通过以下步骤评价血浆生长激素(GH)对试验药剂产生的急性应答。用戊巴比妥钠50mg/kg麻醉大鼠。将麻醉后的大鼠称重和从尾静脉采集基线血样(约100μl)。然后，将受试药剂(生长激素释放剂或赋形剂)以1mL体积的量静脉内给药入尾静脉中。注射后大约10分钟时，从尾部采集第二个100μl血样。使血在大约4℃下凝块，而后以2000xg离心大约10分钟。在大约-70℃下贮存血清。通过如上所述的放射免疫试验方法测定血清生长激素浓度。此步骤之后，用双重能量X-射线吸光计(DEXA，Hologic QDR 1000/W，Waltham MA)对每个麻醉的大鼠进行整个躯体扫描。通过心脏穿刺将最后的血样采集入肝素化试管。离心分离血浆并按照上述方法进行冷冻贮存。
使用得自Binax Corp.(Portland，Maine)的试剂盒以放射免疫试验方法测定血浆胰岛素。差异的交互试验系数≤10％。分别使用AbbottVPTM和VP Super System_自动分析仪(Abbott Laboratories，Irving，Texas)，A-GentTM甘油三酸酯、胆固醇和葡萄糖测试试剂系统和乳酸试剂盒(Sigma)测量血浆甘油三酸酯、总胆固醇、葡萄糖和乳酸水平。通过统计分析方法(未配对t-试验)以赋形剂治疗组为对照测定生长激素释放肽(GHRP)或以通式I化合物为例的拟GHRP降低血浆胰岛素、甘油三酸酯、总胆固醇和乳酸的活性。
本发明方法应用的通式I化合物可以通过口服，胃肠外(如肌肉内、腹膜内、静脉内或皮下注射或植入)，鼻内，阴道内，直肠内、舌下或皮肤途径给药；并且可以与可药用赋形剂一起配制成适于每种给药途径的剂型。
用于口服的固体剂型包括胶囊、片剂、丸剂、粉剂和颗粒剂。在上述固体剂型中，活性化合物与至少一种可药用惰性赋形剂，如蔗糖、乳糖或淀粉混合。通常，这些剂型中还包括除这些惰性稀释剂外的附加的物质，如以硬脂酸镁为例的润滑剂。对于胶囊、片剂和丸剂而言，剂型中还包括缓冲剂。还可以把片剂和丸剂制成带有肠溶衣的。
用于口服给药的液体剂型包括可药用乳液/溶液、悬浮液、糖浆、含有以水为例的本领域常用惰性稀释剂的酏剂。除上述惰性稀释剂外，组合物中还包括助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂，以及甜味剂、调味剂和香味剂。
本发明的用于胃肠外给药的制剂包括无菌含水或不含水的溶液、悬浮液或乳液。不含水的溶剂或赋形剂的实例是丙二醇、聚乙二醇、植物油(如橄榄油和玉米油)、明胶和可注射的有机酯(如油酸乙酯)。上述剂型还可含有助剂，如保存剂、润湿剂、乳化剂和分散剂。可以通过以下方式灭菌，例如，用使细菌滞留的滤器过滤，在组合物中加入杀菌剂，照射组合物或加热组合物等等。它们同样可以被制成固体无菌组合物的形式，该组合物在使用前可被立即溶解在无菌水或某些其它无菌可注射的介质中。
用于直肠或阴道给药的组合物优选除活性物质外还包括以可可酯或栓剂蜡为例的赋形剂的栓剂。
用于鼻内或舌下给药的组合物同样可用本领域公知的标准赋形剂制备。
本发明组合物中的活性成分的剂量是可变的；但是，活性成分的量必须是可以获得合适剂型所需的量。剂量的选择取决于所需的治疗效果、给药途径和治疗的持续时间。通常，对人或其它动物，如哺乳动物给入0.0001至100mg/kg体重/日的剂量以获取生长激素的有效释放。
对于人来说，优选剂量范围为0.01至5.0mg/kg体重/日，并可以单剂或分成多剂的形式给入。
对于除人以外的动物来说，优选剂量范围为0.01至10.0mg/kg体重/日，并可以单剂或分成多剂的形式给入。而对于除人以外的动物来说，更加优选的剂量范围为0.1至5.0mg/kg体重/日，并可以单剂或分成多剂的形式给入。
本发明方法中应用的通式I化合物可以顺序或集中的合成路线完成其制备。以顺序方式制备通式I化合物的详细合成方法示于下文中的反应流程中。
许多被保护的氨基酸衍生物为市售商品，其中保护基Prt、Z100和Z200是以BOC、CBZ、苄基、乙氧羰基、CF3C(O)-、FMOC、TROC、三苯甲游基或甲苯磺酰基等为例的基团。其它被保护的氨基酸衍生物可通过文献方法制备。一些3-氧代-2-羧基吡咯烷和4-氧代-3-羧基哌啶烷是市售商品，而其它许多涉及到的吡咯烷和4-取代哌啶在文献中是已知的。
下文所述的许多流程中描述了含有保护基Prt、Z100或Z200的化合物。其中，苄氧羰基可以通过许多方法除去，包括在有钯或铂存在的以甲醇为例的质子溶剂中用氢进行催化氢化。优选的催化剂为氢氧化钯/碳或钯/碳；可采用的氢气压力为1-1000psi，优选10-70psi。或者，还可通过转移氢化除去苄氧羰基。
在大约-30至70℃，优选-5至35℃下，在有或没有共溶剂(如二氯甲烷、乙酸乙酯、乙醚或甲醇)存在的条件下，使用以三氟乙酸或盐酸为例的强酸可以除去BOC保护基团。
胺的苄酯可以通过许多方法除去，包括在以甲醇为例的质子溶剂中，在钯催化剂存在下，用氢进行催化氢化。可采用的氢气压力为1-1000psi，优选10-70psi。T.Greene在有机合成的保护基(JohnWiley & Sons，New York，1981)中对于上述保护基或其它保护基的加上和除去进行过讨论。
                     流程1
流程1：上述被保护的氨基酸衍生物1在许多情况下是市售商品，其中的保护基Prt是以BOC、FMOC或CBZ为例的基团；其它氨基酸可以通过文献记载的方法制备。
如流程1所述，通式2胺与通式1被保护的氨基酸(其中Prt是合适的保护基)的偶联反应易于在惰性溶剂(如二氯甲烷或DMF)中，采用以EDC或DCC为例的偶联剂，在HOBT或HOAT存在下进行。在上述胺以盐酸盐形式存在的情况下，优选在反应混合物中加入1或2当量合适的碱；或者，上述偶联反应在以BOP为例的偶联剂存在下，在以甲醇为例的惰性溶剂中完成。上述偶联反应进行的温度通常是大约-30℃至大约80℃，优选-10℃至大约25℃。有关用于偶联肽的其它条件的讨论见Houben-Weyl，Vol.XV，II部分，E.Wunsch，Ed.，GeorgeTheime Verlag，1974，Stuttgart。通过使用快速色谱法的硅胶层析(W.C.Still，M.Kahn和A.Mitra，有机化学杂志(J.Org.Chem.)43 2923 1978)、通过结晶或通过研制完成不需要的副产物的分离和中间体的纯化。
通过如上所述除去保护基Prt可以将通式3化合物转化为通式4中间体。如上所述，将通式4中间体偶联到通式5氨基酸上可以生成通式6中间体。将通式6胺脱保护得到通式7化合物。
                     流程2
Figure A20041003341800481
流程2：另外，通式7化合物可以通过流程2所示的渐进路线制备。通过在合适的溶剂(如DMF)中，用碱(例如碳酸钾)，而后用烷基卤(例如碘代甲烷)处理氨基酸1(其中Prt是合适的保护基)可以制备通式8酯中间体；将胺脱保护可以使8转化为9；或者，直接购得作为商品的许多通式9氨基酸。通过将9偶联到氨基酸5上生成中间体10。按照许多现有技术中已知的方法可以将酯中间体10转化为酸中间体11，例如在大约-20℃至120℃，优选大约0℃至50℃下，在质子溶剂(如甲醇水溶液或THF水溶液)中，用氢氧化锂可以水解甲酯和乙酯。此外，通过许多还原方法，其中包括在铂或钯催化剂存在下在质子溶剂(如甲醇)中进行氢化，可以除去苄基。然后，可以将酸11偶联到胺2上生成通式6中间体。通过除去保护基Z200可以完成6到7的转化。
                         流程3
Figure A20041003341800501
流程3：按照许多现有技术中已知的方法可以将通式6酯转化为酸中间体13，例如，在大约-20℃至120℃，优选大约0℃至50℃下，在质子溶剂(如甲醇水溶液或THF水溶液)中，用氢氧化锂可以水解甲酯和乙酯。此外，通过许多还原方法，其中包括在铂或钯催化剂存在下，在质子溶剂(如甲醇)中进行氢化，可以除去苄基。将酸13偶联到胺16上生成通式14中间体。通过除去保护基Z200可以完成14到15的转化。
                     流程4
Figure A20041003341800511
流程4：如流程4所述，在惰性溶剂(如二氯甲烷)中，在偶联剂(如EDC)存在下，用羟基琥珀酰亚胺处理通式5酸可以制备通式17酯。在碱(例如二异丙基乙胺)存在下，在溶剂(如二噁烷、THF或DMF)中，用通式1氨基酸处理酯17可以生成11。
                         流程5
流程5：如流程5所述，在双(三甲基甲硅烷基)氨化钠存在下，用肉桂酰溴烷基化通式18二苯基噁嗪酮生成19；然后，通过除去保护基(Prt)和在PdCl2催化剂上进行氢化将19转化为所需的(D)-2-氨基-5-苯基戊酸20。
                         流程6
Figure A20041003341800521
流程6：如流程6所述，在溶剂(如DMF)中，用碱(如氢化钠)，而后再用烷基卤22处理通式21酯，生成通式23化合物。在溶剂(如回流的乙醇)中，用通式24肼(例如肼或甲基肼)处理通式23化合物，而后浓缩，并在回流或接近回流温度下的甲苯中加热残余物，得到通式25化合物；或者，在乙酸钠存在下，在回流的乙醇中，用肼的盐处理23也可以得到25。使胺脱保护生成通式28化合物。在回流的甲苯或苯中，用Lawesson试剂处理25形成通式26硫代酰胺。除去保护基可以完成从26到27的转化。
                         流程7
Figure A20041003341800531
流程7：在溶剂(如回流的乙醇)中，用通式24肼处理通式21化合物，而后浓缩，并在回流或接近回流温度下加热甲苯中的残余物，得到通式29化合物；或者，在乙酸钠存在下，在回流的乙醇中，用肼的盐处理21也可以得到29。在溶剂(如DMF)中用碱(例如氢化钠)，而后再用烷基卤处理通式29酰胺，得到25。使胺脱保护生成通式28化合物。
                         流程8
Figure A20041003341800541
流程8：通式30酮酯与手性胺(例如α-甲基苄基胺)和合适的醛(例如甲醛)，或者通式31乙烯基酮酯与手性胺(例如α-甲基苄基胺)和合适的醛(例如甲醛)，经过双曼尼希反应生成通式32化合物。32与肼反应生成通式33手性化合物。用氢和合适的以钯为例的催化剂脱去氮上的保护，得到通式34化合物。
                         流程9
流程9：用以硼氢化钠为例的还原剂处理通式81化合物，并对氮进行保护，得到通式82化合物。对醇进行保护得到83。将酯皂化得到通式84化合物。使84与亚硫酰氯反应，而后用重氮甲烷处理，得到通式85所确认的酸。将85酯化得到通式86，再将86的氧脱保护得到87。氧化87得到通式88酮。88与肼反应后，将氮脱保护，得到通式44化合物。
                         流程10
流程10：将通式35化合物先在溶剂(如DMF)中用碱(如氢化钠)处理，而后用碳酸二乙酯处理，生成乙酯化合物36。脱去氨基的保护使36转化为37。
                         流程11
Figure A20041003341800581
流程11：在溶剂(如DMF)中，用碱(如氢化钠)处理通式38丙二酸酯；随后，在合适的溶剂(如甲醇)中，用氢和以钯为例的催化剂使苄基氢解，生成通式39酯。脱去氨基的保护生成通式40化合物。
                         流程12
Figure A20041003341800582
流程12：在除去水的情况下，用以哌啶为例的仲胺在合适溶剂(如苯)中处理通式41酮，得到通式42烯胺。在使用合适的碱(如LDA或NaN(SiMe3)2)的条件下，用α-卤代酯(例如溴代乙酸乙酯)在合适溶剂(如苯或THF)中使烯胺烷基化，得到通式43酮酯。然后，与通式24肼反应得到通式44化合物。最后，脱去氮的保护得到通式45化合物。
                     流程13
Figure A20041003341800591
流程13：在合适溶剂(如叔丁醇)中，用碘鎓盐(如二苯基碘鎓三氟乙酸盐)处理通式37酮酯，生成通式46酮酯。46与肼反应生成通式47化合物。脱去氮的保护得到通式48化合物，详细说明见Synthesis(合成)，(9)，1984 p709。
                     流程14
Figure A20041003341800601
流程14：用以丙烯腈为例的烯烃处理通式37酮酯，生成通式49酮酯。49与肼反应生成通式50化合物。脱去氮的保护得到通式51化合物。
                     流程15
流程15：在合适的溶剂(如DMF)中，用烯丙基溴和合适碱(如氢化钠)处理通式37酮酯，得到通式52酮酯。52与肼反应生成通式53化合物。在合适的溶剂(如二氯甲烷)中，将53臭氧分解；而后，用以甲硫醚为例的还原剂处理，得到通式54醛。将54氧化得到通式55羧酸。将55进行库尔提斯重排，而后水解异氰酸酯中间体，得到通式56伯胺。用异氰酸酯或氨基甲酸酯处理通式56化合物，得到通式57脲。脱去氮上的保护基，得到通式58化合物。
                         流程16
流程16：用伯胺处理通式54化合物，得到通式59亚胺。还原通式59化合物，得到通式60化合物。用酰化剂处理通式60化合物，得到通式61化合物。脱去氮上的保护基，得到通式62化合物。
                         流程17
Figure A20041003341800631
流程17：用以硼氢化钠为例的还原剂处理通式54化合物，得到通式63化合物。63与以异氰酸酯或氨基甲酸酯为例的酰化剂反应，得到通式64化合物。脱去氮上的保护基，得到通式65化合物。
                         流程18
Figure A20041003341800641
流程18：用以三苯膦为例的膦、以偶氮羧酸二乙酯为例的偶氮化合物和羟吲哚处理通式63化合物，得到通式66化合物。脱去氮上的保护基，得到通式67化合物。
                         流程19
Figure A20041003341800651
流程19：在除去水的情况下，用手性二醇和酸催化剂在合适溶剂(如苯)中处理通式37酮酯，得到通式68手性酮缩醇。在碱(如LDA)存在下，用烷基卤将68烷基化，而后进行酮缩醇的酸-催化水解，得到通式69手性酮酯。69与肼反应生成通式70手性化合物。脱去氮上的保护基，得到通式71化合物。
                         流程20
Figure A20041003341800661
流程20：用以缬氨酸叔丁酯为例的手性氨基酸酯处理通式37酮酯，得到通式72手性烯胺。在以LDA为例的碱存在下，用烷基卤将72烷基化；而后，使烯胺进行酸催化水解，得到通式69手性酮酯。69与肼反应生成通式70手性化合物。脱去氮上的保护基，得到通式71化合物。
                         流程21
流程21：脱去25的氮上的保护基，得到通式28化合物。用手性酸使28形成盐，得到通式73的非对映体盐混合物。结晶非对映体盐，得到通式70手性化合物的酸盐。用碱使盐70分解，释放出通式71手性化合物。
                         流程22
流程22：在合适的催化剂(如四(三苯膦)钯)存在下，用乙酸烯丙酯使通式25化合物烷基化，得到通式74化合物。脱去氮上的保护基，得到通式75化合物，具体讨论参见Tetrahedron(50)p.515，1994。
                         流程23
Figure A20041003341800691
流程23：在以氢化钠为例的碱存在下，用烷基卤使通式76酮二酯烷基化；而后，进行酸催化水解和脱羧反应；接着，用甲基碘和合适的碱进行酯化反应，得到通式77化合物。通式77化合物与以甲醛为例的合适的醛和苄胺反应，得到通式78化合物。通式78化合物与肼反应，生成通式79手性化合物。脱去氮上的保护基，得到通式80化合物。
                         流程24
流程24：在惰性溶剂(如二氯甲烷或DMF)中，在HOBT存在下，用偶联剂(如EDC或DCC)处理与通式11酸在一起的通式23胺，得到通式89化合物。通式89化合物与肼反应，生成通式6化合物。脱去氮上的保护基，得到通式7化合物。
                         流程25
流程25：在以氢化钠为例的合适的碱存在下，用烷基卤处理通式90羟基乙酰乙酸酯，得到通式91化合物。91与肼反应，生成通式92化合物。将92的羰基氧原子O-烷基化，得到93；再将93转化为卤化物94。用氰离子取代卤素X，得到腈95。还原95，得到伯胺96；再将96在甲醛存在下进行脱保护和环化反应，得到28。
                         流程26
Figure A20041003341800721
流程26：在以氢化钠为例的合适的碱存在下，用烷基卤处理如通式97的β-酮基-保护的氨基戊酸酯，得到通式98化合物。通式98化合物与肼反应，生成通式99化合物。将通式99化合物脱保护，得到通式100伯胺。在甲醛存在下进行通式100化合物的环化反应，得到通式28化合物。
                         流程27
流程27：在EDC或HOAT存在下，在合适溶剂中，用以1为例的酸处理通式23a胺，生成通式23b酮酯。在乙酸钠存在下的回流的乙醇中，用肼盐处理酮酯23b，可得到通式23c肼。在合适的条件下脱保护，得到通式4胺。如上所述，将通式4中间体偶联到通式5氨基酸上，得到通式6中间体。将胺6脱保护，得到通式7化合物。
                         流程28
Figure A20041003341800751
流程28：Prt代表本领域普通技术人员已知的氨基保护基。尽管在本发明中将BOC用作Prt以举例说明优选的保护基，但是，本发明的范围并不只限于使用BOC。此外，尽管流程说明的是使用了特定异构体的通式m化合物合成方法，但是，其它异构体和/或异构体混合物同样在本发明的范围之内。
步骤A
先将无机或有机碱(如TEA、DMAP、氢氧化物或碳酸盐，优选TEA)，再将氨基保护基(优选(Boc)2O)加入4-氧代-哌啶-3-甲酸乙酯盐酸盐在有或没有作为助溶剂的水存在的反应惰性有机溶剂(例如IPE、THF、二氯甲烷和EtOAc，优选IPE和水)中形成的溶液中。搅拌上述混合物大约1至24小时，优选过夜，且最好在氮气下进行。将有机相分离出来，并按照本领域技术人员公知的标准方法进行后处理，而后，浓缩得到晶状的所需产物。
步骤B
向4-氧代-哌啶-1，3-二甲酸1-叔丁酯3-乙酯的有机溶剂(如THF、IPE、醇、DNF或DMSO，优选DMF)溶液中，加入无机或有机碱(如TEA、DMAP、氢氧化物或碳酸盐，优选碳酸锂)，而后，再加入苄基溴。将该混合物加热至大约25至100℃，优选60℃；并搅拌大约1至24小时，优选20小时。然后，将反应混合物冷却至室温，并用有机溶剂(如IPE、甲苯、THF或EtOAc)萃取和按照本领域技术人员公知的标准方法进行后处理，得到所需化合物。
步骤C
在大约0℃至室温下，向3-苄基-4-氧代-哌啶-1，3-二甲酸1-叔丁酯3-乙酯的有机溶剂(如醇、THF或甲苯)溶液中，加入甲基肼，而后，再加入酸(例如硫酸、盐酸、乙酸或TsOH，优选乙酸)。将反应混合物缓慢加热至大约40至100℃，优选大约65℃，并搅拌大约3至10小时，优选大约7.5小时。冷却至室温后，将有机层用10％碳酸氢钠洗涤，并按照本领域技术人员公知的标准方法进行后处理和浓缩，得到所需化合物。
步骤D
将得自步骤C的浓缩溶液与以IPE为例的有机溶剂混合后，冷却至大约-10至10℃(优选0℃)，重复引入酸(例如MeSO3H、TFA或HCl，优选HCl气)，并在室温下搅拌直至水解完全。将该混合物浓缩后，加入有机溶剂(如二氯甲烷、IPE或THF)，而后，再加入碱(例如氢氧化物、碳酸盐，优选NH4OH)。然后，将混合物用二氯甲烷、IPE或THF萃取，并浓缩，得到所需化合物。
步骤E
将L-酒石酸加入3a-苄基-2-甲基-2，3a，4，5，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-3-酮在丙酮/水的混合物(1％至11％水，优选5％水/丙酮)中形成的溶液。将该混合物加热至25至60℃，优选大约50℃，并搅拌，优选搅拌过夜。冷却反应混合物至优选的大约10至15℃，并将沉淀过滤出来，用冷丙酮/水洗涤和干燥，得到所需化合物。
步骤G
将2-氨基异丁酸、碱(例如氢氧化物，优选1N NaOH)、(Boc)2O和有机溶剂(如THF、IPE或二噁烷)混合在一起，并在室温下搅拌过夜。用有机溶剂(如乙酸乙酯)稀释上述反应混合物，并通过加入以HCl为例的酸的水溶液将pH调节到大约3至7。将有机相分离出来，并按照本领域技术人员公知的标准方法进行后处理，得到所需化合物。
步骤H
向2-氨基-3-苄氧基-丙酸在水和无机或有机碱(优选TEA)的溶液中，加入2-叔丁氧羰基氨基-2-甲基-丙酸2，5-二氧代吡咯烷-1-基酯的有机溶剂(如THF)溶液。搅拌反应混合物，上述过程优选持续过夜，且优选在室温下，在氮气下进行。将以10％柠檬酸溶液为例的酸的水溶液加入混合物。将混合物搅拌数分钟，然后，用以乙酸乙酯为例的有机溶剂稀释。将有机相分离出来，并按照本领域技术人员公知的标准方法进行后处理，而后，浓缩得到晶状的所需化合物。
步骤F和I
在大约-78至20℃，优选大约-66℃下，将以TEA为例的碱加入3a-(R)-苄基-2-甲基-2，3a，4，5，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-3-酮，L-酒石酸盐的有机溶剂(如乙酸乙酯)溶液中。搅拌化合物1至24小时，优选大约1.5小时。将沉淀出的盐除去后，在大约-50至0℃，优选大约-35℃下，加入3-苄氧基-2-(2-叔丁氧羰基氨基-2-甲基丙酰氨基)丙酸和以TEA为例的碱；而后，加入肽偶联剂，优选50％1-丙膦酸环酐(PPAA)的乙酸乙酯溶液。在大约-50至0℃，优选大约-20℃至大约-27℃下，搅拌反应混合物大约1至6小时，优选大约2小时；然后，将温度缓慢升至优选的大约0℃。将反应混合物倒入水中，并用以IPE为例的有机溶剂萃取，然后，将有机相分离出来，并按照本领域技术人员公知的标准方法进行后处理，得到所需化合物。
步骤J
在大约-10至10℃，优选0至5℃下，将TFA加入{1-[2-(3a-(R)-苄基-2-甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-1-(R)-苄氧基甲基-2-氧代-乙基氨基甲酰基]-1-甲基-乙基}氨基甲酸叔丁酯的有机溶剂(如二氯甲烷)溶液中，并优选将温度保持在低于大约5℃。然后，升温至室温。搅拌该混合物大约1至6小时，优选大约3小时。用其它有机溶剂，如乙酸乙酯替换二氯甲烷。然后，用碱的水溶液，如饱和碳酸氢钠溶液将混合物的pH调节到大约为7至9，优选8，再按照本领域技术人员公知的标准方法进行后处理，得到所需化合物。
步骤K
将L-(+)-酒石酸加入得自步骤I的2-氨基-N-[2-(3a-(R)-苄基-2-甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-1-(R)-苄氧基甲基-2-氧代-乙基]-2-甲基-丙酰胺的醇(如甲醇)溶液中，并搅拌混合物过夜。将生成的溶液过滤和浓缩。加入有机溶剂，如IPE或乙酸乙酯，并以共沸的方式除去剩下的醇。将分离出的固体溶于乙酸乙酯，并将溶液回流，然后冷却至室温，得到所需产物晶体。
下文的实施例仅仅用于举例说明，而非限制本发明的范围。
                       具体实施方式
常规试验步骤：
柱层析使用60_孔径的30μM Amicon硅胶。熔点是在Buchi 510设备上测出的，且未校正。质子和碳NMR谱是在25℃下在VarianXL-300、Bruker AC-300、Varian Unity 400或Bruker AC-250上记录的。化学位移以距三甲硅烷的百万分之几的低磁场表示。粒子束质谱是用氨作化学电离源在Hewlett-Packard 5989A光谱仪上测得的。用氯仿或甲醇溶解初始的样品。在样品溶解在二硫赤藓糖醇和二硫苏糖醇的1∶5混合物中或溶于硫代甘油基质的情况下，使用铯离子轰击，在Kratos Concept-1S高分辨率光谱仪上测得液相次级离子质谱(LSIMS)。用氯仿或甲醇溶解初始样品。所报告的数据是对碘化铯校准的3至20次扫描的总和。通过用15％乙醇合磷钼酸染色并在电热板上加热，对E.Merck Kieselgel 60 F254硅胶板进行目测检验(用所指出的一种或多种溶剂洗脱后)完成TLC分析。
常规步骤A(用EDC的肽偶联)：顺序用1.0-1.2当量羧酸偶联对象、1.5-1.8当量羟基苯并三唑水合物(HOBT)或HOAT和1.0-1.2当量(与羧酸量在化学计算上等价)的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(EDC)处理0.2-0.5M伯胺(1.0当量)的二氯甲烷溶液(或伯胺盐酸盐和1.0-1.3当量三乙胺)，将混合物在冰浴中搅拌过夜(所述冰浴可被加热，于是，典型的是，反应混合物在大约0至20℃下保持大约4至6小时，且在剩余期间保持在大约20至25℃下)。用乙酸乙酯或其它指定的溶剂稀释，并将生成的混合物用1N氢氧化钠洗涤2次，用1N盐酸洗涤2次(如果该产物不是碱性的)，用盐水洗涤1次，在硫酸钠上干燥，并浓缩，得到粗产物，该粗产物按照指定方式纯化。羧酸成分可以在与伯胺或其盐酸盐偶联的过程中用作二环己基胺盐，在此种情况下，不必使用三乙胺。
                      实施例1
2-氨基-N-{1(R)-苄氧基甲基-2-[3a-(R)-(4-氟-苄基)-2-甲基-3-氧 代-2，3，3a，4，6，7-六氢吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基]-2-氧代-乙基}异 丁酰胺盐酸盐和
2-氨基-N-{1(R)-苄氧基甲基-2-[3a-(S)-(4-氟-苄基)-2-甲基-3-氧 代-2，3，3a，4，6，7-六氢吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基]-2-氧代-乙基}异 丁酰胺盐酸盐
A. 4-氧代-哌啶-1，3-二甲酸1-叔丁酯3-乙酯
在室温下，将由8.00g(38.5mmol)4-氧代-哌啶-3-甲酸乙酯盐酸盐、9.23g(42.4mmol)二碳酸二叔丁酯和3.89g(38.5mmol)三乙胺组成的在150ml THF中混合物搅拌大约72小时。浓缩混合物后，将残余物溶于乙酸乙酯和洗涤三次(每次分别用10％盐酸水溶液、饱和碳酸氢钠溶液和盐水)，用硫酸镁干燥和浓缩，得到10.0g 1A白色固体MS(Cl，NH3)272(MH+)。
B. 3-(R，S)-(4-氟-苄基)-4-氧代-哌啶-1，3-二甲酸1-叔丁酯3-乙酯
将282mg(7.4mmol)氢化钠(60％油分散物)加入2.00g(7.4mmol)1A在10mL DMF中的溶液，并将混合物在室温下搅拌大约15分钟。在搅拌着的溶液中加入1.39g(7.4mmol)4-氟苄基溴在7mL DMF中的溶液，并将混合物在室温下搅拌大约72小时。将混合物用乙酸乙酯稀释，并用水洗涤一次，用盐水洗涤四次，用硫酸镁干燥和浓缩，得到2.8g 1BMS(Cl，NH3)380(MH+)。
C. 3a-(R，S)-(4-氟-苄基)-2-甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑 并[4，3-c]吡啶-5-甲酸叔丁酯
将由2.54g(6.7mmol)1B和309mg(6.7mmol)甲基肼组成的混合物在100mL乙醇中的溶液在回流情况下加热大约8小时。浓缩该混合物，并将残余物溶解在100mL甲苯中和在回流情况下加热大约17小时。浓缩上述混合物后，在洗脱梯度为(18∶82 v/v乙酸乙酯∶己烷)至(75∶25v/v乙酸乙酯∶己烷)的条件下，将残余物采用硅胶层析纯化，得到1.0g1C透明无色油状物MS(Cl，NH3)362(MH+)。
D. 3a-(R，S)-(4-氟-苄基)-2-甲基-2，3a，4，5，6，7-六氢-吡唑并[4，3- c]吡啶-3-酮三氟乙酸盐
在大约0℃下，将10mL三氟乙酸加入1.00g(2.8mmol)1C中，并搅拌混合物约1小时。加入乙酸乙酯后，浓缩该混合物，得到1.0g 1DMS(Cl，NH3)263(MH+)。
E. (R)-3-苄氧基-2-(2-叔丁氧羰基氨基-2-甲基-丙酰氨基)丙酸
先将1.02g(7.4mmol)碳酸钾，再将0.92g(6.5mmol)碘代甲烷加入1.83g(6.2mmol)N-t-BOC-O-苄基-D-丝氨酸在35mL DMF中形成的溶液。在氮气氛中，将该混合物在大约24℃下搅拌过夜。将反应混合物用200mL水稀释，并用乙酸乙酯萃取三次。将合并后的有机相用水洗涤5次和用盐水洗涤一次，用硫酸镁干燥和浓缩。在大约0℃下，将(R)-3-苄氧基-2-叔丁氧羰基氨基-丙酸甲酯粗品溶于15mL冷三氟乙酸中，并搅拌该混合物大约2小时。浓缩混合物后，将残余物用1N氢氧化钠稀释和用乙酸乙酯萃取三次。将合并后的有机萃取物用盐水洗涤和用硫酸钠干燥，得到0.84g(4.02mmol)(R)-2-氨基-3-苄氧基-丙酸甲酯；在将其偶联到0.81g(4.02mmol)N-t-BOC-α-甲基丙氨酸上，得到1.80g(R)-3-苄氧基-2-(2-叔丁氧羰基氨基-2-甲基丙酰氨基)丙酸甲酯。将上述粗产物溶于20mL 4∶1的THF∶水中，并在该溶液中加入335mg(7.98mmol)氢氧化锂水合物在1mL水中的溶液，然后，在室温下搅拌混合物过夜。浓缩混合物后，将残余物用乙酸乙酯稀释，用盐酸水溶液酸化，和用乙酸乙酯萃取三次。合并有机萃取物，并将其用盐水洗涤一次，用硫酸钠干燥和浓缩，得到1.60g 1E油状物，该物质在静置条件下可固化。
1H NMR(CDCl3 300MHz)δ7.30(m，5H)，7.10(d，1H)，5.07(bs，1H)，4.68(m，1H)，4.53(q，2H)4.09(m，1H)，3.68(m，1H)，1.3-1.5(m，15H).
F. (1-{1(R)-苄氧基甲基-2-[3a-(R，S)-(4-氟-苄基)-2-甲基-3-氧代 -2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基]-2-氧代乙基氨基甲 酰基}-1-甲基乙基)氨基甲酸叔丁酯
按照常规步骤A概括的方法，使193mg(0.51mmol)1D和196mg(0.51mmol)1E偶联，得到非对映体混合物。在洗脱梯度为(1∶1v/v乙酸乙酯∶己烷)至100％乙酸乙酯的条件下，将残余物采用硅胶层析纯化，得到60mg极性较低的1F异构体1和100mg极性较高的1F异构体2，MS(Cl，NH3)624(MH+)(上述二异构体)。
G. 2-氨基-N-{1(R)-苄氧基甲基-2-[3a-(R)-(4-氟-苄基)-2-甲基-3- 氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基]-2-氧代乙基} 异丁酰胺盐酸盐
将4mL浓盐酸加入60mg(0.10mmol)1F异构体1在10mL乙醇中的溶液，并在室温下搅拌该混合物大约2小时。浓缩混合物后，将残余物从乙醇/己烷中沉淀出来，得到50mg 1G异构体1白色粉末。
MS(Cl，NH3)
524(MH+).1HNMR(CD3OD)：(部分)δ7.32(m，5H)，7.12(m，2H)，6.91(m，2H)，5.15(m，1H)，4.54(s，2H)，3.78(m，2H)3.02(m，7H)，2.66(m，2H)，1.57(s，6H).
H. 2-氨基-N-{1(R)-苄氧基甲基-2-[3a-(S)-(4-氟-苄基)-2-甲基-3- 氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基]-2-氧代乙基} 异丁酰胺盐酸盐
将4mL浓盐酸加入100mg(0.16mmol)1F异构体2在10mL乙醇中的溶液，并在室温下搅拌该混合物大约2小时。浓缩混合物后，将残余物从乙醇/己烷中沉淀出来，得到60mg 1H异构体2白色粉末。
MS(Cl，NH3)
524(MH+).1HNMR(CD3OD)：(部分)δ7.32(m，5H)，7.08(m，2H)，6.95(m，2H)，6.80(m，2H)，5.30(m，1H)，4.61(m，3H)，3.80(m，2H)，2.58(m，3H)，1.58(s，6H).
                          实施例2
2-氨基-N-[2-[3a-(R，S)-(4-氟-苄基)-2-甲基-3-氧代- 2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基]-1(R)-(1H-吲哚-3- 基甲基)-2-氧代-乙基}异丁酰胺盐酸盐
A. (R)-2-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)丙酸甲酯
先将2.46g(17.8mmol)碳酸钾，再将2.41g(17.0mmol)碘代甲烷加入4.92g(16.2mmol)N-α-t-BOC-D-色氨酸在100mL DMF中形成的溶液；并且，在氮气氛中，将该混合物在大约24℃下搅拌过夜。将反应混合物用水稀释，并用乙酸乙酯萃取三次。将合并后的有机相用500mL水洗涤5次和用盐水洗涤一次，用硫酸镁干燥和浓缩，得到4.67g白色固体。在大约0℃下，将15mL冷三氟乙酸加入(R)-2-叔丁氧羰基氨基-3-(1H-吲哚-3-基)丙酸甲酯粗品中，并搅拌该混合物大约2小时。浓缩混合物后，将残余物用1N氢氧化钠稀释和用乙酸乙酯萃取三次。将合并后的有机萃取物用盐水洗涤和用硫酸钠干燥，以定量的收率得到(R)-2-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)丙酸甲酯橙色油状物。
B. (R)-2-(2-叔丁氧羰基氨基-2-甲基丙酰氨基)-3-(1H-吲哚-3-基) 丙酸甲酯
按照步骤A所述方法，将得自2A的粗产物1.55g(7.1mmol)偶联到1.44g(7.1mmol)N-t-BOC-α-甲基丙氨酸上，得到油状物；在将上述油状物通过硅胶层析纯化，并用10％、20％、30％、40％和50％乙酸乙酯/己烷进行梯度洗脱，回收到1.32g(R)-2-(2-叔丁氧羰基氨基-2-甲基丙酰氨基)-3-(1H-吲哚-3-基)丙酸甲酯。
C. (R)-2-(2-叔丁氧羰基氨基-2-甲基丙酰氨基)-3-(1H-吲哚-3-基) 丙酸
将381mg(9.1mmol)氢氧化锂在2mL水中的溶液加入1.03g(2.64mmol)2B在10mL THF中的溶液，并在室温下搅拌该混合物过夜。通过蒸发除去过量的THF，并将碱性含水混合物用乙酸乙酯除去3次，然后，用稀乙酸或盐酸酸化至pH为4。用乙酸乙酯萃取上述产物，并将合并后的有机相用盐水洗涤，用硫酸镁干燥和蒸发，得到1.03g 2C橙色泡沫状物。
MS(Cl，NH3)390(MH+).1H NMR(CDCl3 300MHz)δ7.61(d，1H)，7.48(d，1H)，7.27(t，1H)，7.10(t，1H)，4.81(bs，1H)，3.35(m，1H)，1.49(s，6H)，1.32(s，9H).
D. {1-[2-[3a-(R，S)-(4-氟-苄基)-2-甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六 氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基]-1-(R)-(1H-吲哚-3-基甲基)-2-氧代- 乙基氨基甲酰基]-1-甲基乙基}氨基甲酸叔丁酯
按照常规步骤A概括的方法，使193mg(0.51mmol)1D和200mg(0.51mmol)2C偶联；并且，在洗脱梯度为(1∶1 v/v乙酸乙酯∶己烷)至100％乙酸乙酯的条件下，将残余物采用硅胶层析纯化，得到230mg 2DMS(Cl，NH3)633(MH+)。
E. 2-氨基-N-[-2-[3a-(R，S)-(4-氟-苄基)-2-甲基-3-氧代- 2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基]-1(R)-(1H-吲哚-3- 基甲基)-2-氧代乙基]异丁酰胺盐酸盐
将4mL浓盐酸加入230mg(0.36mmol)2D在10mL乙醇中的溶液，并在室温下搅拌该混合物大约2小时。浓缩混合物后，将残余物从乙醇/己烷中沉淀出来，得到130mg 2E白色粉末。
MS(Cl，NH3)533(MH+).1HNMR(CD3OD)：(部分)δ7.79(d，1H)，7.48(m，1H)，7.33(m，2H)，7.19-6.77(m，7H)，6.54(m，1H)，5.17(m，1H)，4.02(m，1H)，3.11-2.68(m，6H)，2.47(m，2H)，2.03(m，2H)，1.59(m，6H).
                          实施例3
2-氨基-N-[2-(3a-(R，S)-苄基-2-甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢- 吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基]-1(R)-(1H-吲哚-3-基甲基)-2-氧代-乙基} 异丁酰胺
A. 4-氧代-哌啶-1，3-二甲酸1-叔丁酯3-甲酯
在大约0℃下，在大约30分钟期间，向在200mL二氯甲烷中的7.00g(36.2mmol)4-氧代-哌啶-3-甲酸甲酯和8.82g(72.3mmol)4，4-二甲氨基吡啶的混合物中加入7.88g(36.2mmol)二碳酸二叔丁酯在150mL二氯甲烷中的溶液。将混合物加热至室温，然后搅拌大约17小时。浓缩该混合物后，将残余物用氯仿稀释并洗涤三次(每次分别用10％盐酸水溶液、饱和碳酸氢钠水溶液和盐水)，再用硫酸镁干燥和浓缩，得到9.18g澄清的黄色油状物。
B. 3-(R，S)-苄基-4-氧代-哌啶-1，3-二甲酸1-叔丁酯3-甲酯
将745mg(7.4mmol)氢化钠(60％油分散物)加入5.00g(19.4mmol)3A在10mLDMF中的溶液，然后，在室温下搅拌混合物大约15分钟。向正在搅拌着的上述溶液中通过套管加入3.32g(19.4mmol)苄基溴在15mL DMF中的溶液，并在室温下搅拌混合物大约42小时。将混合物用乙酸乙酯稀释，用水洗涤一次和用盐水洗涤四次，用硫酸镁干燥和浓缩，得到6.0g 3B黄色油状物。MS(Cl，NH3)348(MH+)。
C. 3a-(R，S)-苄基-2-甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3- c]吡啶-5-甲酸叔丁酯
将在100mL乙醇中的由4.00g(11.5mmol)3B和530mg(11.5mmol)甲基肼组成的混合物在回流情况下加热大约8小时。浓缩该混合物，并将残余物溶解在100mL甲苯中和在回流情况下加热大约17小时。浓缩上述混合物后，在洗脱梯度为(15∶85 v/v乙酸乙酯∶己烷)至(75∶25v/v乙酸乙酯∶己烷)的条件下，将残余物采用硅胶层析纯化，得到2.6g3C澄清无色油状物MS(Cl，NH3)344(MH+)。
D. 3a-(R，S)-苄基-2-甲基-2，3a，4，5，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶- 3-酮
在大约0℃下，将20mL三氟乙酸加入2.60g(7.6mmol)3C中，并搅拌混合物约2.5小时。加入乙酸乙酯后，将溶液用6N氢氧化钠洗涤，用硫酸镁干燥和浓缩，得到1.8g 3D。MS(Cl，NH3)244(MH+)。
E. {1-[2-(3a-(R，S)-苄基-2-甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑 并[4，3-c]吡啶-5-基)-1R-(1H-吲哚-3-基甲基)-2-氧代-乙基氨基甲 酰基]-1-甲基乙基}氨基甲酸叔丁酯
按照常规步骤A概括的方法，使125mg(4.6mmol)3C和1.75g(0.51mmol)2C偶联；并且，在洗脱梯度为(6∶4 v/v乙酸乙酯∶己烷)至7％甲醇/乙酸乙酯的条件下，将残余物采用硅胶层析纯化，得到150mg 3E。
F. 2-氨基-N-[2-(3a-(R，S)-苄基-2-甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六 氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-1R-(1H-吲哚-3-基甲基)-2-氧代乙基] 异丁酰胺盐酸盐
将5mL浓盐酸加入150mg(0.24mmol)3E在15mL乙醇中的溶液，并在室温下搅拌该混合物大约3小时。浓缩混合物后，将残余物从乙醇/己烷中结晶出来，得到100mg 3F白色粉末。
MS(Cl，NH3)515(MH+).1HNMR(CD3OD)：δ7.20-6.91(m，9H)，6.56(m，1)，5.17(m，1H)，4.05(m，1H)，2.96(s，3H)，2.62(m，1H)，2.38(m，1H)，2.06(m，2H)，1.61(m，8H).
                              实施例4
2-氨基-N-[2-(3a-(R)-苄基-2-甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢吡 唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-1-(R)-苄氧基甲基-2-氧代-乙基]异丁酰胺 盐酸盐和
2-氨基-N-[2-(3a-(S)-苄基-2-甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢吡 唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-1-(R)-苄氧基甲基-2-氧代-乙基]异丁酰胺 盐酸盐
A. {1-[2-(3a-(R，S)-苄基-2-甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑 并[4，3-c]吡啶-5-基)-1-(R)-苄氧基甲基-2-氧代-乙基氨基甲酰 基]-1-甲基乙基}氨基甲酸叔丁酯
按照常规步骤A概括的方法，使1.12g(4.6mmol)3C和1.75g(0.51mmol)1E偶联得到非对映体混合物；并且，在洗脱梯度为(1∶1 v/v乙酸乙酯∶己烷)至100％乙酸乙酯的条件下，将残余物采用硅胶层析纯化，得到350mg极性较低的4A异构体1和250mg极性较高的4A异构体2，MS(Cl，NH3)606(MH+)(上述二异构体)。
B. 2-氨基-N-[2-(3a-(R)-苄基-2-甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢- 吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-1-(R)-苄氧基甲基-2-氧代乙基]异丁酰胺 盐酸盐
将5mL浓盐酸加入250mg(0.41mmol)4A异构体1在15mL乙醇中的溶液，并在室温下搅拌该混合物大约5小时。浓缩混合物后，将残余物从乙醇/己烷中沉淀出来并真空干燥，得到130mg 4B异构体1。
MS(Cl，NH3)506(MH+).1HNMR(CD3OD)：δ7.33(m，5H)，7.14(m，5H)，5.22(m，1H)，4.57(m，3H)，3.80(m，2H)3.14(m，1H)，3.04(s，3H)，2.96(m，2H)，2.61(m，2H)，1.63(m，7H).
C. 2-氨基-N-[2-(3a-(S)-苄基-2-甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢- 吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-1-(R)-苄氧基甲基-2-氧代乙基]异丁酰胺 盐酸盐
将5mL浓盐酸加入250mg(0.41mmol)4A异构体2在15mL乙醇中的溶液，并在室温下搅拌该混合物大约5小时。浓缩混合物后，将残余物从乙醇/己烷中沉淀出来并真空干燥，得到120mg 4C异构体2。
MS(Cl，NH3)506(MH+).1HNMR(CD3OD)：δ7.31(m，5H)，7.13(m，5H)，6.78(m，1H)，5.28(m，1H)，4.62(m，3H)，3.81(M，2H)，3.14(m，1H)，2.62(m，3H)，1.58(m，7H).
D. 2-氨基-N-[2-(3a-(R)-苄基-2-甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢 吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-1-(R)-苄氧基甲基-2-氧代-乙基]异丁酰 胺甲磺酸盐
将饱和碳酸氢钠水溶液加入3.60g(6.6mmol)4B异构体1中，并用乙酸乙酯萃取上述混合物。将有机层用硫酸镁干燥和浓缩。再将残余物溶于乙酸乙酯中，冷却至大约0℃，然后，加入0.43mL(6.6mmol)甲磺酸并搅拌混合物大约0.5小时。将己烷(200mL)加入溶液中，并将混合物搅拌大约1小时，过滤得到3.40g白色固体。将上述固体从3％乙酸乙酯水溶液中重结晶，得到2.55g 4D异构体1白色晶状固体MS(Cl，NH3)506(MH+)。
                                实施例5
2-氨基-N-[1-(3a-(R)-苄基-2-甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢吡 唑并[4，3-c]吡啶-5-羰基)-4-苯基-(R)-丁基]异丁酰胺盐酸盐和
2-氨基-N-[1-(3a-(S)-苄基-2-甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢吡 唑并[4，3-c]吡啶-5-羰基)-4-苯基-(R)-丁基]异丁酰胺盐酸盐
A. 2-氧代-5，6-二苯基-3-(3-苯基-烯丙基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
向大约-78℃的由13.8g(70.0mmol)肉桂酰溴和4.94g(14.0mmol)(2S，3R)-(+)-6-氧代-2，3-二苯基-4-吗啉甲酸叔丁酯在350mL无水THF中形成的溶液中，加入28mL(28mmol)1M双三甲基甲硅烷基氨化钠的THF溶液。将混合物在大约-78℃下搅拌大约1.5小时，而后倒入750mL乙酸乙酯中。再将混合物用盐水洗涤两次，用硫酸镁干燥和浓缩，得到黄色油状物。在150mL己烷中搅拌上述油状物过夜，然后，将沉淀的固体通过过滤收集起来，得到3.2g5A白色固体。
B. 5(S)，6(R)-二苯基-3(R)-(3-苯基烯丙基)吗啉-2-酮
在大约0℃下，将20mL三氟乙酸加入2.97g(6.33mmol)5A中，并将混合物搅拌大约2小时，接着浓缩。将残余物溶于水中，并用氢氧化钠水溶液进行碱化直至pH保持在10。用乙酸乙酯萃取混合物三次后，将合并后的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸镁干燥和浓缩，得到橙色油状物；再将其用硅胶层析纯化(10∶90 v/v乙酸乙酯∶乙烷)，得到880mg5B白色固体。
C. 2-(R)-氨基-5-苯基戊酸
在45psi下，将在20mL乙醇和10mLTHF中的由440mg(1.19mmol)5B和120mg氯化钯组成的混合物氢化大约16小时。将混合物通过硅藻土过滤和浓缩，并将残余物用乙醚研制，得到240mg 5C白色固体。
D. 2-叔丁氧羰基氨基-2-甲基丙酸2，5-二氧代吡咯烷-1-基酯
向5.0g(24.6mmol)N-t-BOC-α-甲基丙氨酸在13.5mL二氯甲烷中形成的浆状物中加入3.40g(29.6mmol)N-羟基琥珀酰亚胺和5.65g(29.6mmol)EDC。在室温下搅拌浆状物大约17小时。将混合物用乙酸乙酯稀释和每次用水、饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤两次；再用硫酸镁干燥和浓缩。通过硅胶层析(1∶1 v/v乙酸乙酯∶己烷)纯化产物，得到5.2g D部分标题化合物白色固体。
E. (R)-2-(2-叔丁氧羰基氨基-2-甲基丙酰氨基)-5-苯基戊酸
将由203mg(1.05mmol)5D、378mg(1.26mmol)5C和434mg(3.36mmol)二异丙基乙胺在2mL DMF中形成的混合物搅拌过夜。将混合物用乙酸乙酯稀释和用1N盐酸萃取2次。再用乙酸乙酯萃取水相一次。将汇合后的有机萃取物用水洗涤三次和用盐水洗涤一次。将所得混合物用硫酸镁干燥和浓缩。通过硅胶层析纯化残余物，并先用80％氯仿/己烷，再用100％氯仿，而后用10％甲醇/氯仿洗脱，得到127mg5E。
F. {1-[1-(3a-(R，S)-苄基-2-甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑 并[4，3-c]吡啶-5-羰基)-4-苯基-(R)-丁基氨基甲酰基]-1-甲基乙基} 氨基甲酸叔丁酯
按照常规步骤A概括的方法，使130mg(0.53mmol)3C和200mg(0.53mmol)5E偶联得到非对映体混合物；并且，在洗脱梯度为(1∶1 v/v乙酸乙酯∶己烷)至100％乙酸乙酯的条件下，将残余物采用硅胶层析纯化，得到40mg极性较低的5F异构体1和40mg极性较高的5F异构体2，MS(Cl，NH3)604(MH+)(上述二异构体)。
G. 2-氨基-N-[1-(3a-(R)-苄基-2-甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢 吡唑并[4，3-c]吡啶-5-羰基)-4-苯基-(R)-丁基]异丁酰胺盐酸盐
将4mL浓盐酸加入40mg(0.07mmol)5F异构体1在10mL乙醇中的溶液，并在室温下搅拌该混合物大约4小时。浓缩混合物后，将残余物从二氯甲烷/己烷中沉淀出来并真空干燥，得到30mg 5G异构体1。
MS(Cl，NH3)504(MH+).1HNMR(CD3OD)：(部分)δ7.19(m，10H)，4.37(m，1H)，3.02(m，6H)，2.67(m，4H)，1.83(m，4H)，1.62(s，6H)，1.28(m，1H).
H. 2-氨基-N-[1-(3a-(S)-苄基-2-甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢 吡唑并[4，3-c]吡啶-5-羰基)-4-苯基-(R)-丁基]异丁酰胺盐酸盐
将4mL浓盐酸加入40mg(0.07mmol)5F异构体2在10mL乙醇中的溶液，并在室温下搅拌该混合物大约4小时。浓缩混合物后，将残余物从二氯甲烷/己烷中沉淀出来并真空干燥，得到30mg 5H异构体2。
MS(Cl，NH3)504(MH+).1HNMR(CD3OD)：(部分)7.25(m，9H)，6.88(m，1H)，3.04(s，3H)，2,71(m，4H)，2.48(m，2H)，1.75(m，4H)，1.62(m，6H)，1.28(m，1H).
                               实施例6
2-氨基-N-[2-(3a-(R，S)-苄基-2-甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢 吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-1(R)-苄氧基甲基-2-氧代-乙基]异丁酰胺 盐酸盐
A. {1-[2-(3a-(R，S)-苄基-2-甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑 并[4，3-c]吡啶-5-基)-1-(R)-苄氧基甲基-2-氧代-乙基氨基甲酰 基]-1-甲基乙基}氨基甲酸叔丁酯
按照常规步骤A概括的方法，使200mg(0.82mmol)3C和320mg(0.82mmol)1E偶联得到非对映体混合物；并且，在洗脱梯度为(1∶1 v/v乙酸乙酯∶己烷)至10％甲醇/乙酸乙酯的条件下，将残余物采用硅胶层析纯化，得到170mg6A。
B. 2-氨基-N-[2-(3a-(R，S)-苄基-2-甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六 氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-1(R)-苄氧基甲基-2-氧代乙基]异丁酰 胺盐酸盐
将5mL浓盐酸加入170mg(0.28mmol)6A在20mL乙醇中的溶液，并在室温下搅拌该混合物大约2.5小时。浓缩混合物后，将残余物从乙醇/己烷中沉淀出来并真空干燥，得到70mg 6B。
MS(Cl，NH3)506(MH+).1HNMR(CD3OD)：δ7.32(m，5H)；7.16(m，5H)，5.22(m，1H)，4.67(m，1H)，4.55(m，2H)，3.79(m，2H)，3.12(m，2H)，3.00(m，6H)，2.71(m，3H)，1.56(m，8H).
                                实施例7
2-氨基-N-[2-(3a-苄基-2-乙基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并 [4，3-c]吡啶-5-基]-1-(1H-吲哚-3-基甲基)-2-氧代-乙基}异丁酰胺 盐酸盐
A. 3a-(R，S)-苄基-2-乙基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3- c]吡啶-5-甲酸叔丁酯
向27mL乙醇中的555mg(1.60mmol)3B加入240mg(1.60mmol)乙基肼草酸盐，将上述混合物在回流情况下加热大约4小时。浓缩该混合物后，在洗脱梯度为(10∶1 v/v己烷∶乙酸乙酯)至(3∶7 v/v己烷∶乙酸乙酯)的条件下，将残余物采用硅胶层析纯化，得到357mg 7AMS(Cl，NH3)358(MH+)。
B. 3a-(R，S)-苄基-2-乙基-2，3a，4，5，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶- 3-酮
将1.5mL浓盐酸加入350mg(0.98mmol)7A在3mL乙醇中的溶液，并在室温下搅拌该混合物大约2小时。浓缩混合物，得到257mg 7BMS(Cl，NH3)258(MH+)。
C. {1-[2-(3a-(R，S)-苄基-2-乙基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑 并[4，3-c]吡啶-5-基)-1-(R)-(1H-吲哚-3-基甲基)-2-氧代-乙基氨 基甲酰基]-1-甲基乙基}氨基甲酸叔丁酯
按照常规步骤A概括的方法，使82mg(0.28mmol)7B和100mg(0.26mmol)2C偶联；并且，在洗脱梯度为100％二氯甲烷至2％甲醇/二氯甲烷的条件下，将残余物采用硅胶层析纯化，得到110mg 7CMS(Cl，NH3)629(MH+)。
D. 2-氨基-N-[-2-(3a-(R，S)-苄基-2-乙基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六 氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-1(R)-(1H-吲哚-3-基甲基)-2-氧代乙 基]异丁酰胺盐酸盐
将1mL浓盐酸加入100mg(0.15mmol)7C在2mL乙醇中的溶液，并在室温下搅拌该混合物大约2小时。浓缩混合物，得到72mg 7D无色泡沫状物MS(Cl，NH3)529(MH+)。
                         实施例8
2-氨基-N-[2-(3a-(R)-苄基-2-乙基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢吡 唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-1-(R)-苄氧基甲基-2-氧代-乙基]异丁酰胺 盐酸盐和
2-氨基-N-[2-(3a-(S)-苄基-2-乙基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢吡 唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-1-(R)-苄氧基甲基-2-氧代-乙基]异丁酰胺 盐酸盐
A. {1-[2-(3a-苄基-2-乙基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢吡唑并[4，3- c]吡啶-5-基)-1-(R)-苄氧基甲基-2-氧代-乙基氨基甲酰基]-1-甲基 乙基}氨基甲酸叔丁酯
按照常规步骤A概括的方法，使85mg(0.29mmol)7B和100mg(0.26mmol)1E偶联得到非对映体混合物；并且，在洗脱梯度为100％二氯甲烷至2％甲醇/二氯甲烷的条件下，将残余物采用硅胶层析纯化，得到6mg极性较低的8A异构体1和11mg极性较高的8A异构体2，MS(Cl，NH3)620(MH+)(上述二异构体)。
B. 2-氨基-N-[2-(3a-(R)-苄基-2-乙基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢 吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-1(R)-苄氧基甲基-2-氧代乙基]异丁酰胺 盐酸盐
将0.4mL浓盐酸加入5.7mg(0.009mmol)8A异构体1在1mL乙醇中的溶液，并在室温下搅拌该混合物大约3小时。浓缩混合物，得到4.7mg 8B异构体1。
MS(Cl，NH3)520(MH+).1HNMR(CD3OD)：(部分)δ7.41-7.05(m，10H)，5.20(m，1H)，4.61(m，1H)，4.52(s，2H)，3.71(m，1H)，3.60(m，1H)，2.61(m，3H)，1.39(m，9H).
C. 2-氨基-N-[2-(3a-(S)-苄基-2-乙基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢- 吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-1(R)-苄氧基甲基-2-氧代乙基]异丁酰胺 盐酸盐
将0.4mL浓盐酸加入10mg(0.016mmol)8A异构体2在1mL乙醇中的溶液，并在室温下搅拌该混合物大约3小时。浓缩混合物，得到8mg8C异构体2。
MS(Cl，NH3)520(MH+).1HNMR(CD3OD)：(部分)δ7.43-7.00(m，10H)，6.81(m，1H)，5.32(m，1H)，4.63(m，2H)，4.53(m，1H)，3.72(m，1H)，1.37(m，9H).
                            实施例9
2-氨基-N-[2-(2-苄基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c] 吡啶-5-基]-1-(R)-苄氧基甲基-2-氧代-乙基}异丁酰胺盐酸盐
A. 2-苄基-3-羟基-2，4，6，7-四氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-甲酸叔丁酯
将800mg(3.11mmol)3B和495mg(3.11mmol)苄基肼二盐酸盐和423(3.11mmol)乙酸钠三水合物在15mL乙醇中形成的混合物在回流情况下加热大约17小时。浓缩该混合物后，将残余物溶于100mL甲苯，并在回流情况下加热大约48小时。将混合物用乙酸乙酯稀释，和用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并浓缩；然后，将残余物通过硅胶层析纯化，先用100％乙酸乙酯，而后用5％甲醇/二氯甲烷洗脱得到530mg9A浅棕色固体MS(Cl，NH3)330(MH+)。
B. 2-苄基-4，5，6，7-四氢-2H-吡唑并[4，3-c]吡啶-3-醇
将10mL浓盐酸加入411mg(1.24mmol)3E在30mL乙醇中的溶液，并在室温下搅拌该混合物大约30分钟。浓缩混合物后，将残余物从甲醇/乙酸乙酯中结晶出来，得到353mg 9B MS(Cl，NH3)230(MH+)。
C. {1-[2-(2-苄基-3-羟基-2，4，6，7-四氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5- 基)-1-(R)-苄氧基甲基-2-氧代-乙基氨基甲酰基]-1-甲基乙基}氨基 甲酸叔丁酯
按照常规步骤A概括的方法，使100mg(0.38mmol)9B和145mg(0.38mmol)1E偶联；并且，将残余物采用硅胶层析(95∶5 v/v甲醇∶二氯甲烷)纯化，得到42mg 9C白色固体MS(Cl，NH3)592(MH+)。
D. 2-氨基-N-[2-(2-苄基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c] 吡啶-5-基)-1(R)-苄氧基甲基-2-氧代乙基]异丁酰胺盐酸盐
将6mL浓盐酸加入42mg(0.07mmol)9C在20mL乙醇中的溶液，并在室温下搅拌该混合物大约30分钟。将混合物用乙醇稀释后，浓缩，然后将残余物从甲醇/乙酸乙酯中沉淀出来，得到35mg 9D白色固体。
MS(Cl，NH3)492(MH+).1HNMR(CD3OD)：(部分)7.41-7.16(m，10H)，5.19(m，3H)，4.48(m，4H)，3.88(m，1H)，3.74(m，2H)，2.68(m，2 )，1.58(m，6H).
                          实施例10
2-氨基-N-{2-[3a-(R)-苄基-3-氧代-2-(2，2，2-三氟-乙基)- 2，3，3a，4，6，7-六氢吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基]-1(R)-苄氧基甲基-2- 氧代-乙基}异丁酰胺盐酸盐和
2-氨基-N-{2-[3a-(S)-苄基-3-氧代-2-(2，2，2-三氟-乙基)- 2，3，3a，4，6，7-六氢吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基]-1(R)-苄氧基甲基-2- 氧代-乙基}异丁酰胺盐酸盐
A. 3a-(R，S)-苄基-3-氧代-2-(2，2，2-三氟-乙基)-2，3，3a，4，6，7-六 氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-甲酸叔丁酯
将840mg(2.42mmol)3B和276mg(2.42mmol)2，2，2-三氟乙基肼(70％在水中)在20mL乙醇中形成的混合物在回流情况下加热大约5小时，然后浓缩。将残余物溶于40mL甲苯，并在回流情况下加热大约17小时。浓缩混合物后，将残余物通过硅胶层析(9∶1 v/v己烷∶乙酸乙酯)纯化，得到703mg10A黄色油状物MS(Cl，NH3)412(MH+)。
B. 3a-(R，S)-苄基-2-(2，2，2-三氟-乙基)-2，3a，4，5，6，7-六氢-吡唑 并[4，3-c]吡啶-3-酮
在大约0℃下，将3mL冷三氟乙酸加入600mg(1.46mmol)10A，并搅拌该混合物大约3小时，并使得溶液温度达到室温。浓缩混合物后，将残余物溶于水，再将溶液用5N氢氧化钠碱化至pH为11，然后用碳酸钾饱和。用乙酸乙酯萃取上述溶液三次，并将合并后的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸镁干燥和浓缩，得到345mg 10B不透明油状物MS(Cl，NH3)312(MH+)。
C. (1-{2-[3a-(R，S)-苄基-3-氧代-2-(2，2，2-三氟-乙基)- 2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基]-1-(R)-苄氧基甲基- 2-氧代-乙基氨基甲酰基}-1-甲基乙基)氨基甲酸叔丁酯
按照常规步骤A概括的方法，使137mg(0.44mmol)10B和167mg(0.44mmol)1E偶联得到非对映体混合物；并且，在洗脱梯度为100％二氯甲烷至5％甲醇/二氯甲烷的条件下，将残余物采用硅胶层析纯化，得到128mg极性较低的10C异构体1和63mg极性较高的10C异构体2，MS(Cl，NH3)674(MH+)(上述二异构体)。
D. 2-氨基-N-{2-[3a-(R)-苄基-3-氧代-2-(2，2，2-三氟-乙基)- 2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基]-1(R)-苄氧基甲基- 2-氧代乙基]异丁酰胺盐酸盐
将1.5mL浓盐酸加入120mg(0.18mmol)10C异构体1在3.5mL乙醇中的溶液，并在室温下搅拌该混合物大约2小时。浓缩混合物，得到94mg 10D异构体1灰白色粉末。
MS(Cl，NH3)574(MH+).1HNMR(CD3OD)：(部分)δ7.31(m，5H)，7.18(m，5H)，5.21(m，1H)，4.57(m，3H)，4.26(m，1H)，4.08(m，1H)，3.79(m，2H)，3.09(m，4H)，2.65(m，2H)，1.63(m，6H).
E. 2-氨基-N-{2-[3a-(S)-苄基-3-氧代-2-(2，2，2-三氟-乙基)- 2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基]-1(R)-苄氧基甲基- 2-氧代乙基}异丁酰胺盐酸盐
将1.5mL浓盐酸加入53mg(0.079mmol)10C异构体2在3.5mL乙醇中的溶液，并在室温下搅拌该混合物大约2小时。浓缩混合物，得到41mg 10E异构体2浅黄色固体。
MS(Cl，NH3)574(MH+).1HNMR(CD3OD)：(部分)δ7.33(m，5H)，7.15(m，4H)，6.81(m，1H)，5.30(m，1H)，4.67(m，4H)，4.15(m，2H)，3.77(m，2H)，3.09(m，3H)，2.64(m，3H)，1.58(m，6H).
                               实施例11
2-氨基-N-[2-(3a-(R)-苄基-2-叔丁基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢 吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-1-(R)-苄氧基甲基-2-氧代-乙基]异丁酰 胺甲磺酸盐和
2-氨基-N-[2-(3a-(S)-苄基-2-叔丁基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢 吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-1-(R)-苄氧基甲基-2-氧代-乙基]异丁酰 胺甲磺酸盐
A. 3a-(R，S)-苄基-2-叔丁基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并 [4，3-c]吡啶-5-甲酸叔丁酯
向40mL乙醇中的2.07g(5.95mmol)14B中，加入0.97g(7.7mmol)叔丁基肼盐酸盐和0.63g(7.7mmol)乙酸钠，并在大约70℃下，加热混合物大约17小时。冷却该混合物，并将溶液滗去沉淀，然后浓缩。将残余物溶于80mL甲苯，并在回流情况下加热大约6小时。浓缩混合物后，将残余物通过硅胶层析(9∶1 v/v己烷∶乙酸乙酯)纯化，得到1.7g11A MS(Cl，NH3)386(MH+)。
B. 3a-(R，S)-苄基-2-叔丁基-2，3a，4，5，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡 啶-3-酮
将225μl甲磺酸加入535mg(1.39mmol)11A在20mL二氯甲烷中的溶液，并在室温下搅拌该混合物大约1.5小时。将混合物用乙酸乙酯稀释和用1N氢氧化钠洗涤两次，用盐水洗涤一次，再用硫酸钠干燥和浓缩，得到246mg 11B MS(Cl，NH3)286(MH+)。
C. {1-[2-(3a-(R，S)-苄基-2-叔丁基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡 唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-1-(R)-苄氧基甲基-2-氧代-乙基氨基甲酰 基]-1-甲基乙基}氨基甲酸叔丁酯
按照常规步骤A概括的方法，使246mg(0.86mmol)11B和328mg14F偶联得到非对映体混合物；并且，将残余物采用硅胶层析(6∶4 v/v己烷/乙酸乙酯)纯化，得到250mg极性较低的11C异构体1和90mg极性较高的11C异构体2，MS(Cl，NH3)648(MH+)(上述二异构体)。
D. 2-氨基-N-[2-(3a-(R)-苄基-2-叔丁基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六 氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-1-(R)-苄氧基甲基-2-氧代乙基]异丁 酰胺甲磺酸盐
在大约0℃下，将28μl(0.44mmol)甲磺酸加入210mg(0.32mmol)11C异构体1在15mL二氯甲烷中的溶液。除去冰浴后，将混合物搅拌大约3小时，再用15mL乙醚稀释，通过过滤收集起沉淀，得到100mg11D异构体1。
MS(Cl，NH3)548(MH+).1H NMR(CD3OD)：(部分)δ7.33(m，5H)，7.27-7.07(m，5H)，5.21(m，1H)，4.54(m，3H)，3.86(m，3H)，3.10(m，4H)，2.61(s，3H)，1.62(m，6H)，1.18(s，9H).
E. 2-氨基-N-[2-(3a-(S)-苄基-2-叔丁基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六 氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-1(R)-苄氧基甲基-2-氧代乙基]异丁酰 胺甲磺酸盐
在大约0℃下，将21μl(0.32mmol)甲磺酸加入85mg(0.13mmol)11C异构体2在10mL二氯甲烷中的溶液。除去冰浴后，将混合物搅拌大约3小时，再用20mL乙醚稀释，通过过滤收集起沉淀，得到46mg 11E异构体2。
MS(Cl，NH3)548(MH+).1H NMR(CD3OD)：(部分)δ8.28(br d，1H)，7.32(m，5H)，7.18(m，4H)，6.84(m，1H)，5.31(m，1H)，4.60(m，3H)，3.70(m，3H)，3.18-2.92(m，3H)，2.68(s，3H)，1.57(m，6H)，1.13(s，9H).
                           实施例12
2-氨基-N-[1-(R)-(1H-吲哚-3-基甲基)-2-(2-甲基-3-氧代-3a- (R，S)-吡啶-2-基甲基-2，3，3a，4，6，7-六氢吡唑并[4，3-c]吡啶-5- 基)-2-氧代-乙基]异丁酰胺二盐酸盐
A. 4-氧代-3-(R，S)-吡啶-2-基甲基-哌啶-1，3-二甲酸1-叔丁酯3-甲 酯
在大约0℃下，将468mg(11.7mmol)氢化钠(60％油分散物)加入2.00g(7.8mmol)3A在32mL THF中形成的溶液，并搅拌混合物大约30分钟。在5分钟期间，向正在搅拌着的上述溶液中加入762mg(6.0mmol)2-吡啶甲酰氯在5mL THF中的溶液；而后，加入432mg(2.6mmol)碘化钾。除去冰浴后，将混合物在回流情况下加热大约17小时。将该混合物用乙酸乙酯稀释和用水洗涤一次，用盐水洗涤一次，再用硫酸镁干燥和浓缩。将残余物通过硅胶层析纯化，先用(6∶4 v/v乙醚∶己烷)，后用(6∶4 v/v乙酸乙酯∶己烷)洗脱，得到1.2g 12AMS(Cl，NH3)349(MH+)。
B. 2-甲基-3-氧代-3a-(R，S)-吡啶-2-基甲基-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡 唑并[4，3-c]吡啶-5-甲酸叔丁酯
将由1.20g(3.45mmol)12A和159mg(3.45mmol)甲基肼在20mL乙醇中形成的混合物在回流情况下加热大约6.5小时。浓缩混合物后，将残余物溶于25mL甲苯中，并在回流情况下加热大约17小时。浓缩该混合物后，将残余物通过硅胶层析(65∶35 v/v乙酸乙酯∶己烷)纯化，得到450mg12B MS(Cl，NH3)345(MH+)。
C. 2-甲基-3a-(R，S)-吡啶-2-基甲基-2，3a，4，5，6，7-六氢-吡唑并 [4，3-c]吡啶-3-酮二盐酸盐
在室温下，将450mg(1.30mmol)12B在2mL 4M HCl/二噁烷中形成的混合物搅拌大约4.5小时。浓缩混合物后，得到450mg 12CMS(Cl，NH3)245(MH+)。
D. {1-[1-(1-(R)-H-吲哚-3-基甲基)-2-(2-甲基-3-氧代-3a-(R，S)- 吡啶-2-基甲基-2，3，3a，4，6，7-六氢吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-2-氧 代-乙基氨基甲酰基]-1-甲基-乙基}氨基甲酸叔丁酯
按照常规步骤A，使108mg(0.31mmol)12C和122mg(0.31mmol)2C偶联；并且，将残余物采用硅胶层析(95∶5 v/v乙酸乙酯∶甲醇)纯化，得到118mg 12D MS(Cl，NH3)616(MH+)。
E. 2-氨基-N-[1-(R)-(1H-吲哚-3-基甲基)-2-(2-甲基-3-氧代-3a- (R，S)-吡啶-2-基甲基-2，3，3a，4，6，7-六氢吡唑并[4，3-c]吡啶-5- 基)-2-氧代-乙基]异丁酰胺二盐酸盐
在室温下，将110mg(0.18mmol)12D在1mL 4M HCl/二噁烷中形成的混合物搅拌大约17小时。浓缩混合物后，得到51mg 12E。
MS(Cl，NH3)516(MH+).1HNMR(CD3OD)：(部分)δ8.91-8.52(m，2H)，8.04(m，2H)，7.76-7.50(m，3H)，6.82(m，1H)，4.62(m，1H)，3.36(s，3H)，1.63(s，6H).
                              实施例13
2-氨基-N-[1-(R)-苄氧基甲基-2-(2-甲基-3-氧代-3a-(R，S)-吡啶- 2-基甲基-2，3，3a，4，6，7-六氢吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-2-氧代-乙 基]异丁酰胺二盐酸盐
A. {1-[1-(R)-苄氧基甲基-2-(2-甲基-3-氧代-3a-(R，S)-吡啶-2-基 甲基-2，3，3a，4，6，7-六氢吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-2-氧代-乙基氨 基甲酰基]-1-甲基-乙基}氨基甲酸叔丁酯
按照常规步骤A，使86mg(0.27mmol)12C和103mg(0.27mmol)1E偶联；并且，将残余物采用硅胶层析(95∶5 v/v乙酸乙酯∶己烷)纯化，得到82mg 13A。
B. 2-氨基-N-[1-(R)-苄氧基甲基-2-(2-甲基-3-氧代-3a-(R，S)-吡啶 -2-基甲基-2，3，3a，4，6，7-六氢吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-2-氧代- 乙基]异丁酰胺二盐酸盐
在室温下，将75mg(0.12mmol)13A在1mL 4M HCl/二噁烷中形成的混合物搅拌大约17小时。浓缩混合物后，得到80mg 13B。
MS(Cl，NH3)507(MH+).1HNMR(CD3OD)：(部分)δ8.78(m，1H)，8.46(m，1H)，8.13-7.82(m，2H)，7.32(m，5H)，4.57(m，3H)，3.96(m，1H)，3.82(m，2H)，1.63(m，6H).
                            实施例14
2-氨基-N-[2-(3a-(R)-苄基-2-甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡 唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-1-(R)-(苄氧基甲基)-2-氧代-乙基]异丁酰 胺
A. 4-氧代-哌啶-1，3-二甲酸1-叔丁酯3-甲酯
在大约0℃下，在90分钟期间，向100.0g(516.4mmol)4-氧代-哌啶-3-甲酸甲酯和63g(516.4mmol)4，4-二甲氨基吡啶在1L二氯甲烷中形成的混合物中加入113.0g(516.4mmol)二碳酸二叔丁酯在100mL二氯甲烷中形成的溶液。将混合物缓慢加热至室温，而后搅拌大约19小时。再将混合物洗涤三次(每次分别用10％盐水水溶液、饱和碳酸氢钠水溶液和盐水)，用硫酸镁干燥和浓缩，得到130.5g 14A无定形固体。
1HNMR(CDCl3)：δ4.03(br，2H)；3.74(s，3H)，3.56(t，2H)，2.36(t，2H)，1.42(s，9H).
B. 3-(R)-苄基-4-氧代-哌啶-1，3-二甲酸1-叔丁酯3-甲酯
在大约0℃下，在大约45分钟期间，向正在搅拌着的由11.7g(293mmol)氢化钠(用100mL己烷洗过两次的60％油分散物)在100mLDMF中形成的悬浮液中，加入65.4g(254mmol)14A在150mL DMF中的溶液。除去冰浴后，将混合物在室温下搅拌大约45分钟。再次将混合物冷却至大约0℃后，向正在搅拌着的上述溶液中逐滴加入35.2mL(296mmol)苄基溴在200mL DMF中的溶液，并在室温下搅拌混合物大约23小时。仔细地将550mL水加入溶液中，并搅拌该混合物大约30分钟。将混合物用乙酸乙酯萃取三次后，将合并后的有机萃取物用水洗涤五次，用盐水洗涤一次，用硫酸镁干燥和浓缩，得到98g黄色油状物。将上述油状物从己烷中结晶，得到71g 14B白色固体。
MS(Cl，NH3)348(MH+) 1HNMR(CDCl3)：(部分)δ7.23(m，3H)，7.13(m，2H)，4.58(br m，1H)，4.18(br，1H)，3.63(s，3H)，3.28-2.96(m，4H)，2.72(m，1H)，2.43(m，1H)，1.44(s，9H).
C. 3a-(R)-苄基-2-甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c] 吡啶-5-甲酸叔丁酯
在氮气下，将由47.0g(135mmol)14B，38.9g(270mmol)甲基肼硫酸盐和44.3g(540mmol)乙酸钠在900mL乙醇中形成的混合物在回流情况下加热大约17小时。浓缩混合物后，将残余物溶于乙酸乙酯，并用水洗涤三次和用盐水洗涤一次，再用硫酸镁干燥和浓缩，得到黄色油状物。在750mL己烷中搅拌上述油状物大约3小时，得到41.17g 14C白色固体。
MS(Cl，NH3)344(MH+).1HNMR(CDCl3)：(部分)δ7.19(m，3H)，7.05(m，2H)，4.61(br m，2H)，3.24(m，1H)，3.09(s，3H)，3.01(m，1H)，2.62(m，4H)，1.52(s，9H).
D. 3a-(R，S)-苄基-2-甲基-2，3a，4，5，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶- 3-酮盐酸盐
在大约0℃下，在24.55g(71.5mmol)14C在800mL乙醚中的溶液中用无水HCl鼓泡约12分钟。搅拌混合物大约3小时，在此期间形成白色沉淀。通过过滤收集起沉淀的固体，得到19.2g 14D。
MS(Cl，NH3)244(MH+).
1HNMR(CD3OD)：(部分)δ7.25(m，3H)，7.05(m，2H)，3.77(m，2H)，3.51(d，1H)，3.25(m，1H)，3.17(m，3H)，3.03(s，3H)，2.81(m，1H).
E. 2-叔丁氧羰基氨基-2-甲基-丙酸2，5-二氧代吡咯烷-1-基酯
在大约0℃下，向正在搅拌着的100.0g(492mmol)Boc-α-甲基丙氨酸和94.0g(492mmol)EDC在2L二氯甲烷中形成的溶液中分批加入56.63g(492mmol)N-羟基琥珀酰亚胺；然后，使反应升温至室温。将混合物搅拌大约24小时后，洗涤两次(每次分别用饱和碳酸氢钠水溶液和盐水)，再用硫酸钠干燥和浓缩，得到124.0g 14E白色固体。
1HNMR(CDCl3)：δ4.96(br，1H)，2.82(s，4H)，1.66(s，6H)，1.48(s，9H).
F. 3-(R)-苄氧基-2-(2-叔丁氧羰基氨基-2-甲基-丙酰氨基)丙酸
在大约45℃下，加热由50.5g(168mmol)14E、33.5g(168mmol)O-苄基-D-丝氨酸和51.05g(505mmol)三乙胺在400mL二噁烷中形成的混合物大约16小时。将混合物用乙酸乙酯稀释后，用乙酸酸化至pH为2。进行层分离后，将有机相用盐水洗涤，用硫酸钠干燥和浓缩，得到650g14F白色固体。
1HNMR(CD3OD)：(部分)δ7.55(d，1H)，7.29(m，5H)，4.52(m，1H)，4.48(s，2H)，3.84(d of d，1H)，3.69(dof d，1H)，1.42(s，6H)，1.38(s，9H).
G. 3a-(R)-苄基-2-甲基-2，3a，4，5，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-3- 酮L-酒石酸盐
在氮气中，将由5.00g(20.6mmol)14D游离碱和3.09g(20.6mmol)L-酒石酸在80mL丙酮和3.2mL水中形成的混合物在大约70℃下加热约70小时；在此期间反应混合物变为稠的悬浮液，且在加入20mL丙酮。将反应混合物缓慢冷却至室温，然后过滤。将收集到的固体用丙酮洗涤和真空干燥，得到7.03g 14G白色固体。
H. 3a-(R)-苄基-2-甲基-2，3a，4，5，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-3- 酮
在大约0℃下，将1.72mL(25.4mmol)氢氧化铵加入5.00g(12.7mmol)14G在80mL二氯甲烷中形成的悬浮液；并将混合物搅拌大约15分钟。将冷溶液过滤并立即在下一步骤中使用。
I. {1-[2-(3a-(R)-苄基-2-甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢吡唑并 [4，3-c]吡啶-5-基)-1-(R)-(苄氧基甲基)-2-氧代-乙基氨基甲酰 基]-1-甲基-乙基}氨基甲酸叔丁酯
在氮气中，将由4.83g(12.7mmol)14F、得自14H的溶液、2.60g(19.1mmol)HOAT和2.45g(12.8mmol)EDC组成的混合物在大约0℃下搅拌大约1小时，加热到室温并搅大约16小时。过滤混合物后，将滤液用饱和碳酸氢钠水溶液和水洗涤，用硫酸镁干燥和浓缩，得到7.35g14I白色固体。
J. 2-氨基-N-[2-(3a-(R)-苄基-2-甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢- 吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-1-(R)-(苄氧基甲基)-2-氧代-乙基]异丁 酰胺
在大约0℃下，将3.5mL冷三氟乙酸加入755mg(1.25mmol)14I在7mL二氯甲烷中的溶液；并在大约0℃下，搅拌混合物大约1小时。将混合物加热到室温并搅拌大约2小时。将混合物浓缩，并与甲苯一起共蒸发两次。将残余物溶于氯仿，并用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次，用水和盐水各洗涤一次。再将混合物用硫酸镁干燥和浓缩，得到594mg14J油状物。
                          实施例15
2-氨基-N-[1-(R)-苄氧基甲基-2-(2-甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六 氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-2-氧代-乙基]异丁酰胺盐酸盐
A. 2-甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-甲酸 叔丁酯
将3.00g(11.66mmol)3A和537mg(11.66mmol)甲基肼在100mL乙醇中形成的混合物在回流情况下加热大约17小时。浓缩混合物后，将残余物溶于100mL甲苯中，并在回流情况下加热大约17小时。将混合物用乙酸乙酯稀释，和用盐水洗涤两次，再用硫酸镁干燥和浓缩。将残余物通过硅胶层析纯化，用100％乙酸乙酯至5％甲醇/二氯甲烷进行梯度洗脱，得到2.28g 15A白色固体。
1HNMR(CD3OD)：δ4.20(s，2H)，3.67(t，2H)，3.43(s，3H)，2.58(t，2H)，1.48(s，9H).
B. 2-甲基-2，3a，4，5，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-3-酮盐酸盐
将10mL浓盐酸加入510mg(2.01mmol)15A在30mL乙醇中的溶液，并在室温下搅拌混合物约35分钟。浓缩混合物后，将残余物从甲醇/乙酸乙酯中结晶，得到425mg 15B黄色固体。
1HNMR(CD3OD)：δ4.27(S，2H)，3.71(S，3H)，3.56(T，2H)，3.05(T，2H).
C. {1-[1(R)-苄氧基甲基-2-(2-甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡 唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-2-氧代-乙基氨基甲酰基]-1-甲基乙基}氨基 甲酸叔丁酯
按照常规步骤A概括的方法，使100mg(0.53mmol)15B和202mg(0.53mmol)1E偶联；并且，将残余物采用硅胶层析(95∶5 v/v二氯甲烷∶甲醇)纯化，得到54mg 15C白色固体MS(Cl，NH3)516(MH+)。
D. 2-氨基-N-[1-(R)-苄氧基甲基-2-(2-甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7- 六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-2-氧代乙基]异丁酰胺盐酸盐
将10mL浓盐酸加入54mg(0.10mmol)15C在30mL乙醇中的溶液，并在室温下搅拌该混合物大约40分钟。将混合物浓缩后，将残余物从甲醇/乙酸乙酯中沉淀出来，得到50mg 15D。
MS(Cl，NH3)416(MH+).1HNMR(CD3OD)：(部分)δ7.28(m，5H)，5.18(m 1H)，4.69-4.38(m，4H)，3.88(m，1H)，3.73(m，2H)，3.68(s，2H)，3.61(m，1H)，2.67(m，1H)，1.57(s，6H).
                                实施例16
2-氨基-N-[2-(2-苄基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c] 吡啶-5-基]-1-(R)-(1H-吲哚-3-基甲基)-2-氧代-乙基}异丁酰胺盐 酸盐
A. 2-苄基-3-羟基-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-甲酸 叔丁酯
将800mg(3.11mmol)3A和495mg(3.11mmol)苄基肼二盐酸盐在15mL乙醇中形成的混合物在回流情况下加热大约17小时。浓缩该混合物后，将残余物溶于100mL甲苯，并在回流情况下加热大约48小时。将混合物用乙酸乙酯稀释，和用盐水洗涤两次，用硫酸钠干燥并浓缩；然后，将残余物通过硅胶层析纯化，用100％乙酸乙酯至5％甲醇/二氯甲烷进行梯度洗脱，得到530mg 16A褐色固体MS(Cl，NH3)330(MH+)。
B. 2-苄基-2，3a，4，5，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-3-酮盐酸盐
将10mL浓盐酸加入411mg(1.24mmol)16A在30mL乙醇中的溶液，并在室温下搅拌该混合物大约30分钟。浓缩混合物后，将残余物从甲醇/乙酸乙酯中结晶出来，得到353mg 16B黄色固体。
MS(Cl，NH3)230(MH+).1HNMR(CD3OD)：δ7.26-7.40(m，5H)，5.22(s，2H)，4.12(s，2H)，3.53(t，2H).3.00(t，2H).
C. (R)-2-(2-叔丁氧羰基氨基-2-甲基-丙酰氨基)-3-(1H-吲哚-3-基) 丙酸
向正在搅拌着的由30.6g(0.15mol)D-色氨酸、30.4g(0.30mol)N-甲基吗啉在450mL(4∶1)二噁烷∶水中形成的溶液中加入45.0g(0.15mol)14E，并搅拌混合物大约72小时。通过蒸发除去过量的二噁烷，并在混合物中加入乙酸乙酯和水。用浓盐酸将溶液的pH调节至3，并进行层分离。将有机层用水和盐水洗涤，用硫酸镁干燥和浓缩；再将残余物从乙酸乙酯/己烷中结晶出来，得到37.0g灰白色固体。
D. {1-[2-(2-苄基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶- 5-基)-1-(R)-(1H-吲哚-3-基甲基)-2-氧代-乙基氨基甲酰基]-1-甲 基乙基}氨基甲酸叔丁酯
按照常规步骤A概括的方法，使100mg(0.38mmol)16B和202mg(0.53mmol)16C偶联；并且，将残余物采用硅胶层析(95∶5 v/v二氯甲烷∶甲醇)纯化，得到45mg 16D白色固体MS(Cl，NH3)601(MH+)。
E. 2-氨基-N-[2-(2-苄基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c] 吡啶-5-基)-1-(R)-(1H-吲哚-3-基甲基)-2-氧代乙基]异丁酰胺盐酸 盐
将20mL浓盐酸加入45mg(0.07mmol)16D在60mL乙醇中的溶液，并在室温下搅拌该混合物大约35分钟。将混合物浓缩后，将残余物从甲醇/乙酸乙酯中沉淀出来，得到30mg 16E。
1HNMR(CD3OD)：(部分)δ7.40(m，4H)，7.25(m，3H)，7.11(m，2H)，6.96(m，2H)，6.81(m，1H)，5.38-4.93(m，3H)，4.46(m，1H)，4.22(m，1H)，3.96(m，1H)，3.69(m，1H)，3.18(m，1H)，2.28(m，1H)，1.57(m，6H)，1.38(m，1H).
                            实施例17
2-氨基-N-[1-苄氧基甲基-2-(2，3a-二甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7- 六氢吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-2-氧代-乙基]异丁酰胺盐酸盐
A. 3-甲基-4-氧代-哌啶-1，3-二甲酸1-叔丁酯3-(R，S)-甲酯
将308mg(7.77mmol)氢化钠(60％油分散物)加入2.00g(7.77mmol)3A在30mL DMF中形成的溶液，并在室温下搅拌混合物大约25分钟。向正在搅拌着的上述溶液中加入0.50mL(7.77mmol)碘化甲烷，并在室温下搅拌混合物大约17小时。然后，将该混合物用乙酸乙酯稀释和用水洗涤一次，用盐水洗涤四次，再用硫酸镁干燥和浓缩。将残余物通过硅胶层析(7∶3 v/v己烷∶乙酸乙酯)纯化，得到1.75g 17A澄清油状物MS(Cl，NH3)272(MH+)。
B. 2，3a-(R，S)-二甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c] 吡啶-5-甲酸叔丁酯
将由1.62g(9.50mmol)17A和435mg(9.50mmol)甲基肼在30mL乙醇中形成的混合物在回流情况下加热大约4小时。浓缩混合物后，将残余物溶于50mL甲苯中，并在回流情况下加热大约14小时。将混合物用乙酸乙酯稀释，用盐水洗涤两次，用硫酸钠干燥和浓缩。而后，将残余物通过硅胶层析(7∶3 v/v己烷∶乙酸乙酯)纯化，得到1.00g17B白色固体MS(Cl，NH3)268(MH+)。
C. 2，3a-(R，S)-二甲基-2，3a，4，5，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-3- 酮盐酸盐
将8mL浓盐酸加入1.00g(3.74mmol)17B在40mL乙醇中形成的溶液中，并在室温下搅拌混合物大约35分钟。浓缩混合物后，将残余物从甲醇/乙酸乙酯中结晶，得到850mg 17C白色固体MS(Cl，NH3)168(MH+)。
D. {1-[1-(R)-苄氧基甲基-2-(2，3a-(R，S)-二甲基-3-氧代-2，3，3a， 4，6，7-六氢吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-2-氧代-乙基氨基甲酰基]-1- 甲基-乙基}氨基甲酸叔丁酯
按照常规步骤A概括的方法，使150mg(0.74mmol)17C和514mg(1.35mmol)1E偶联；并且，将残余物采用硅胶层析(85∶15 v/v己烷∶乙酸乙酯)纯化，得到185mg 17D白色固体。
E. 2-氨基-N-[1-(R)-苄氧基甲基-2-(2，3a-(R，S)-二甲基-3-氧代- 2，3，3a，4，6，7-六氢吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-2-氧代-乙基]异丁酰 胺盐酸盐
将15mL浓盐酸加入173mg(0.33mmol)17B在40mL乙醇中的溶液中，并在室温下将混合物搅拌大约1小时。浓缩混合物后，将残余物用氯仿稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤，用硫酸钠干燥；再将残余物通过硅胶层析纯化，并用100％乙酸乙酯至10％二乙胺/乙酸乙酯进行梯度洗脱。然后，将所得的残余物溶于乙醇并用盐酸水溶液酸化。浓缩混合物后，使残余物从甲醇/乙酸乙酯中结晶，得到65mg 17E白色固体。
MS(Cl，NH3)502(MH+).1HNMR(CD3OD)：(部分)δ7.32(m，5H)，5.14(m，1H)，4.53(m，3H)，3.71(m，3H)，2.97(m，1H)，2.83(m，1H)，2.57(m，1H)，1.98(m，2H)，1.61(m，6H)，1.38(s，3H).
                           实施例18
2-氨基-N-[2-(3a-(R)-苄基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢吡唑并 [4，3-c]吡啶-5-基)-1-(R)-苄氧基甲基-2-氧代-乙基]异丁酰胺盐酸 盐和
2-氨基-N-[2-(3a-(S)-苄基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢吡唑并 [4，3-c]吡啶-5-基)-1-(R)-苄氧基甲基-2-氧代-乙基]异丁酰胺盐酸 盐
A. 3-苄基-4-氧代-哌啶-3-甲酸甲酯
在大约0℃下，向200mg(0.58mmol)3B中加入5mL冷三氟乙酸，并搅拌混合物大约1小时。浓缩该混合物后，将残余物与乙酸乙酯和己烷一起共蒸发。将残余物中加入2N氢氧化钠使其为碱性，并用氯仿萃取混合物。将合并后的有机萃取物用硫酸镁干燥和浓缩，以定量收率得到18A。
B. 3-(R，S)-苄基-1-[3-苄氧基-2-(R)-(2-叔丁氧羰基氨基-2-甲基- 丙酰氨基)丙酰基]-4-氧代-哌啶-3-甲酸甲酯
按照常规步骤A概括的方法，使1.77g(7.16mmol)18A和3.04g(8.0mmol)14F偶联得到非对映体混合物；并且，将残余物采用硅胶层析(7∶3 v/v己烷∶乙酸乙酯)纯化，得到820mg极性较低的18B异构体1和1.14g极性较高的18B异构体2，MS(Cl，NH3)611(MH+)(上述二异构体)。
C. {1-[2-(3a-(R，S))-苄基-3-氧代-2，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3- c]吡啶-5-基)-1-(R)-苄氧基甲基-2-氧代-乙基氨基甲酰基]-1-甲基 乙基}氨基甲酸叔丁酯
将342mg(2.63mmol)硫酸肼和431mg(5.26mmol)乙酸钠加入820mg(1.32mmol)18B异构体1在13mL乙醇中的溶液，并将混合物在回流情况下加热大约17小时。浓缩混合物后，将残余物用乙酸乙酯稀释，用饱和碳酸氢钠和盐水洗涤，用硫酸镁干燥和浓缩。然后，将所得残余物通过硅胶层析纯化，用75％乙酸乙酯/己烷至100％乙酸乙酯进行梯度洗脱，得到550mg18C异构体1。
将485mg(3.73mmol)硫酸肼和613mg(7.48mmol)乙酸钠加入1.14g(1.86mmol)18B异构体2在20mL乙醇中的溶液，并将混合物在回流情况下加热大约17小时。浓缩混合物后，将残余物用乙酸乙酯稀释，用饱和碳酸氢钠和盐水洗涤，用硫酸镁干燥和浓缩。然后，将所得残余物通过硅胶层析(75∶25 v/v乙酸乙酯∶己烷)纯化，得到710mg18C异构体2。
D. 2-氨基-N-[2-(3a-(R)-苄基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并 [4，3-c]吡啶-5-基)-1-(R)-苄氧基甲基-2-氧代-乙基]异丁酰胺盐酸 盐
将6mL浓盐酸加入200mg(0.34mmol)18C异构体1在12mL乙醇中的溶液，并在室温下搅拌该混合物大约2.5小时。将混合物浓缩和与乙醇一起共蒸三遍，得到20mg 18D异构体1。
MS(Cl，NH3)492(MH+).1HNMR(CD3OD)：(部分)δ8.42(br d，1H)，7.35(m，5H)，7.18(m，5H)，5.23(m，2H)，4.91(m，1H)，4.54(m，4H)，3.80(m，2H)，3.63(m，1H)，3.12(m，1H)，3.07(m，3H)，2.61(m，3H)，1.62(m，6H)，1.39(m，1H).
E. 2-氨基-N-[2-(3a-(S)-苄基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并 [4，3-c]吡啶-5-基)-1-(R)-苄氧基甲基-2-氧代-乙基]异丁酰胺盐酸 盐
将10mL浓盐酸加入200mg(0.34mmol)18C异构体2在20mL乙醇中的溶液，并在室温下搅拌该混合物大约2.5小时。将混合物浓缩和与乙醇一起共蒸三遍，得到30mg 18E异构体2。
MS(Cl，NH3)492(MH+).1HNMR(CD3OD)：(部分)δ8.29(br d，1H)，7.30(m，5H)，7.11(m，4H)，6.88(m，1H)，5.29(m，1H)，4.92(m，1H)，4.62(m，3H)，3.91-3.70(m，3H)，3.22-2.95(m，3H)，2.66(m，3H)，1.57(m，6H)，1.30(m，1H)，0.89(m，1H).
                           实施例19
2-氨基-N-[1-(R)-苄氧基甲基-2-(2-甲基-3-氧代-3a-(R，S)-噻唑- 4-基甲基-2，3，3a，4，6，7-六氢吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-2-氧代-乙 基]异丁酰胺二盐酸盐
A. 4-氧代-3-(R，S)-噻唑-4-基甲基-哌啶-1，3-二甲酸1-叔丁酯3-乙 酯
在大约0℃下，将67mg(1.66mmol)氢化钠(60％油分散物)加入300mg(1.10mmol)1A在5mL THF中形成的溶液，并搅拌混合物大约30分钟。向上述冷溶液中加入204mg(1.21mmol)4-氯甲基噻唑(Hsiao，C.N；Synth.Comm.(合成通讯)20，p.3507(1990))在5mL THF中的溶液；而后，加入87mg(0.53mmol)碘化钾，并将混合物在回流情况下加热大约17小时。将该混合物用水稀释和用乙酸乙酯萃取；在将合并后的有机萃取物用硫酸钠干燥和浓缩，将残余物通过硅胶层析(7∶3 v/v己烷∶乙酸乙酯)纯化，得到90mg标题化合物MS(Cl，NH3)648(MH+)。
B. 2-甲基-3-氧代-3a-(R，S)-噻唑-4-基甲基-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡 唑并[4，3-c]吡啶-5-甲酸叔丁酯
将11.2mg(0.24mmol)甲基肼加入90mg(0.24mmol)19A在2mL乙醇中形成的溶液中，并将混合物在回流情况下加热大约17小时。再加入33.6mg(0.72mmol)甲基肼后，将混合物在回流情况下加热大约7小时。浓缩混合物后，将残余物溶于3mL甲苯中，并在回流情况下加热大约17小时。浓缩该混合物后，将残余物通过硅胶层析(6∶4 v/v己烷∶乙酸乙酯)纯化，得到44mg19B MS(Cl，NH3)648(MH+)。
C. 2-甲基-3a-(R，S)-噻唑-4-基甲基-2，3a，4，5，6，7-六氢-吡唑并 [4，3-c]吡啶-3-酮二盐酸盐
在室温下，将44mg(0.10mmol)19B在1mL 4M HCl/二噁烷中形成的混合物搅拌大约4小时。将混合物浓缩并与二氯甲烷一起共蒸，得到40mg 19C MS(Cl，NH3)251(MH+)。
D. {1-[1-(R)-苄氧基甲基-2-(2-甲基-3-氧代-3a-(R，S)-噻唑-4-基 甲基-2，3，3a，4，6，7-六氢吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-2-氧代-乙基氨 基甲酰基]-1-甲基-乙基}氨基甲酸叔丁酯
按照常规步骤A概括的方法，使40mg(0.12mmol)19C和39mg(0.12mmol)14F偶联；并且，将残余物采用硅胶层析(9∶1 v/v乙酸乙酯∶己烷)纯化，得到40mg 19D MS(Cl，NH3)613(MH+)。
E. 2-氨基-N-[1-(R)-苄氧基甲基-2-(2-甲基-3-氧代-3a-(R，S)-噻唑 -4-基甲基-2，3，3a，4，6，7-六氢吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-2-氧代- 乙基]异丁酰胺二盐酸盐
在室温下，将40mg(0.06mmol)19D在1mL 4M HCl/二噁烷中形成的混合物搅拌大约5时。将混合物浓缩并与二氯甲烷一起共蒸，得到40mg 19E MS(Cl，NH3)513(MH+)。
                        实施例20
2-氨基-N-[2-(3a-(R)-苄基-2-甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡 唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-1-(R)-(苄氧基甲基)-2-氧代-乙基]异丁酰 胺L-酒石酸盐
在大约0℃下，将1.36g L-酒石酸在20mL甲醇中的溶液加入4.6g实施例14标题化合物在20mL甲醇中的溶液。使混合物升温至室温，搅拌大约40分钟，并在真空条件下浓缩。将残余物用220mL乙酸乙酯稀释，在回流情况下加热大约1.5小时，接着在大约72℃下搅拌约18小时。将化合物冷却至室温并过滤，得到5.78g标题化合物无色晶状固体。
                        实施例21
3-苄基-3-甲氧羰基甲基-4-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯
A. 3-苄基-4-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯
在大约120℃下，在DMF(2.0mL)中加热由β-酮酯(4480mg，12.9mmol)和LiCl(1100mg，25.8mmol)组成的混合物约17小时。将反应混合物冷却至室温，并用乙酸乙酯萃取(3×100mL)。将合并后的有机萃取物干燥并在真空条件下浓缩。将粗产物在二氧化硅上进行层析，用20％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到1320mg黄色油状的所需产物。
1H NMR(250MHz，CDCl3)：d：7.4(m，5H)，4.2(m，1H)，3.4(m，1H)，3.3(dd，1H)，3.05(dd，1H)，2.7(m，1H)，2.55(m，4H)，1.5(s，9H)；MS(APCI)：190(M+1-BOC).
B. 3-苄基-3-甲氧羰基甲基-4-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯
将由上述实施例21步骤A的产物(1320mg，4.56mmol)、吡咯烷(972mg，13mmol)和对甲苯磺酸(33mg)在苯(30mL)中形成的溶液通过3_分子筛回流大约17小时。将反应混合物冷却至室温，并在真空条件下浓缩。再将残余物溶于苯(10mL)，并冷却至大约0℃。逐滴加入溴代乙酸甲酯(1530mg，10mmol)，将反应混合物缓慢加热至室温，接着在回流情况下加热大约17小时，此刻加入水(5mL)。再进行回流2小时后，将反应混合物冷却至室温，并用乙酸乙酯萃取(3×100mL)。合并有机萃取物，将其干燥和在真空条件下浓缩。将残余物粗品在硅胶上层析，用15％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到280mg产物。
1H NMR(250MHz，CDCl3)：d 7.35(m，5H)，4.5(m，1H)，3.8(s，3H)，3.4(dd，1H)，3.1(m，1H)，2.85(m，4H)，2.6(m，1H)，2.4(m，1H)，1.5(s，9H)；MS(APCI)：362(M+1).
                            实施例22
6-氧代-1-苯基-环己烷-1，3-二甲酸3-叔丁酯1-甲酯
在氮气中，在大约40℃下加热二苯基汞(890mg，2.5mmol)的CHCl3(4mL)溶液。将四乙酸铅(1110mg，2.5mmol)分成小份加入，并将黄绿色溶液在大约40℃下搅拌0.5小时。然后，加入β-酮酯(520mg，2.0mmol)；接着加入吡啶(0.2mL，2.5mmol)。在约40℃下过大约5小时后，真空浓缩反应混合物，并将残余物溶于乙醚(100mL)并过滤。将滤液用3N硫酸(3x)洗涤，干燥和浓缩，得到616mg黄色固体。在硅胶上进行快速色谱，用25％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到368mg所需产物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：d 7.15(m，5H)，4.4(s，2H)，3.7(s，5H)，2.6(s，2H)，1.5(s，9H)；MS(APCI)：334(M+1)
                               实施例23
(D)-2-氨基-3-(2，4-二氯-苄氧基)丙酸盐酸盐
A. (D)-2-叔丁氧羰基氨基-3-(2，4-二氯-苄氧基)丙酸
在大约0℃下，向正在搅拌的Boc-D-丝氨酸(8.2g，40mmol)的DMF(75mL)溶液中加入氢化钠(60％分散物，3.2g，80mmol)，加料过程持续约10分钟。将反应混合物在大约0℃下搅拌约1.75小时，然后在室温下搅拌约0.25小时。冷却至大约0℃后，逐滴加入2，4-二氯甲苯(5.56mL，40mmol)的DMF(5mL)溶液。将反应混合物加热至大约23℃并搅拌大约17小时，然后，分配在二异丙基醚和10％盐酸之间。将得到的水溶液用二异丙基醚萃取(2x)，再将合并后的有机萃取物用饱和盐水洗涤，干燥和浓缩，得到14.75g粗产物，该粗产物无需进一步纯化就可使用。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：d 7.6-7.2(m，3H)，5.4(d，1H)，4.6(s，2H)，4.0(d，1H)，3.8(dd，2H)，1.1(s，9H)；MS(APCI)：264，266(M+1，M+2).
B. (D)-2-氨基-3-(2，4-二氯-苄氧基)丙酸盐酸盐
在4M HCl/二噁烷(100mL)中搅拌上述实施例23步骤A的产物(14.7g，40mmol)大约17小时。将反应混合物在真空条件下浓缩，得到12g浅黄色固体(100％)。MS(APCI)：265(M+1)。
                    实施例24
用类似实施例3C至3F所述的方法，使用实施例21的标题混合物作为起始原料合成具有以下所示通式结构的实施例24化合物：
Figure A20041003341801131
其中R1是-CH2-苯基和R2是甲基。分离R，R和S，R非对映体(★表示上面结构中的C-3碳的其它立体异构体中心)。质谱(M+1)＝520；质谱法＝粒子轰击。
                    实施例25和26
实施例25和26化合物具有以下所示通式结构：
Figure A20041003341801132
对于实施例25和26而言，其中R1是苯基和R2是甲基；实施例25为R，R异构体，而实施例26为S，R异构体。以类似实施例3C至3F所述的方法，使用实施例22的标题混合物作为起始原料合成实施例25和26化合物，接着通过色谱分离出两个单独的异构体。每种样品的质谱(M+1)＝493；质谱法＝粒子轰击。
                    实施例27至159
列于下表的实施例27至159按照以下所述流程制备，即以类似于实施例3E和3F所述的方法，将被适当取代的式I吡唑酮-哌啶(在下面流程中)与(D)-OBnSer衍生物II(在下面流程中)偶联。
Figure A20041003341801141
按照类似于实施例3B和3C所述的方法，以合适的烷基化试剂和烷基肼为起始物可以制备通式I所示吡唑酮-哌啶；按照与实施例23A、实施例23B和实施例5F所述方法中类似的三个步骤可以制备(D)-OBnSer衍生物II。
Figure A20041003341801151
实施  异构体 R2   R1＝-CH2-A1  Ar                  MS          MS
例号               A1                                              法
27    d1     H     2-吡啶基        苯基                 493         PB
28    d1     H     4-噻唑基        苯基                 499         PB
29    d2     H     4-噻唑基        苯基                 499         PB
30    d1     H     5-噻唑基        苯基                 499         APCI
31    d1     Me    苯基            2，4-di-Cl-Ph        574.5       APCI
32    d1     Me    苯基            2，4-di-F-Ph         542         PB
33    d1     Me    苯基            [2，3-O-CH2-O]苯基  550.2       PB
34    d1     Me    苯基            2-CF3-Ph            575         PB
35    d1     Me    苯基            2-Me-Ph              520         PB
36    d1     Me    苯基            2-吡啶基             507         PB
37    d1     Me    苯基            3，4-di-F-Ph         542         PB
38    d1，2  Me    苯基            3，5-di-CF3-Ph      642         PB
39    d1     Me    苯基            3，5-di-Cl-Ph        576         APCI
40    d2      Me    苯基            3-CF3-Ph          575            APCI
41    d1      Me    苯基            3-Cl-Ph            540            APCI
42    d1      Me    苯基            3-Cl-噻吩          546，548       APCI
43    d1      Me    苯基            3-F-4-Cl-Ph        560            APCI
44    d1      Me    苯基            3-Me-Ph            520            PB
45    d1      Me    苯基            4-Cl-Ph            540            PB
46    d1      Me    苯基            4-吡啶基           507            PB
47    d1      Me    苯基            4-噻唑基           513            PB
48    d1      Me    苯基            5-噻唑基           513            APCI
49    d1，2   Me    苯基            苯并异噁唑基       547            PB
50    d1      Me    苯基            4-嘧啶基           508            PB
51    d1，2   Me    4-Ph-Ph         4-噻唑基           589            APCI
52    d1，2   Me    4-Ph-Ph         2-吡啶基           583            APCI
53    d1      Me    4-F-Ph          苯基               524            PB
54    d2      Me    4-F-Ph          苯基               524            PB
55    d1      Me    4-F-Ph          3-Cl-Ph            558            PB
56    d2      Me    4-F-Ph          3-Cl-Ph            558            PB
57    d1      Me    4-F-Ph          3，4-di-F-Ph       560            APCI
58    d2      Me    4-F-Ph          3，4-di-F-Ph       560            APCI
59    d1，2   Me    4-F-Ph          2-吡啶基           525            APCI
60    d1，2   Me    4-F-Ph          2-CF3-Ph          592            APCI
61    d1      Me    4-CF3-Ph       4-Cl-Ph            609            APCI
62    d1，2   Me    4-CF3-Ph       4-Cl-Ph            609            APCI
63    d1，2   Me    3-吡啶基        苯基               508            PB
64    d1      Me    苯基            3-吡啶基           508            PB
65    d1      Me    2-喹啉基        苯基               594            PB
66    d2      Me    2-喹啉基        苯基               594            PB
67    d1      Me    2-吡啶基        苯基               506            PB
68    d2      Me    2-吡啶基        苯基               506            PB
69    d1，2   Me    2-吡啶基        3-F-4-Cl-Ph        559，561       APCI
70    d1      Me    2-吡啶基        3-Cl-噻吩          547，549       APCI
71    d1      Me    2-吡啶基        3-CF3-Ph          575            PB
72    d1，2   Me    2，4-di-F-Ph    3，4-di-F-Ph       579            APCI
73    d1，2   Me    2，4-di-F-Ph    2-吡啶基           544            PB
74    d1      Me    4-噻唑基        苯基               513            APCI
75    d2      Me    4-噻唑基        苯基               513            PB
76     d1      Me        5-噻唑基        苯基              513        PB
77     d1      Et        2-吡啶基        苯基              521        PB
78     d1，2   Et        苯基            4-噻唑基          541        APCI
79     d1      Et        苯基            3，5-di-CF3-Ph   656        PB
80     d1，2   Et        苯基            3，4-di-F-Ph      556        PB
81     d1      Et        2，4-di-F-Ph    2，4-di-F-Ph      593        APCI
82     d2      Et        2，4-di-F-Ph    2，4-di-F-Ph      593        APCI
83     d1      Et        2，4-di-F-Ph    2-CF3-Ph         625        APCI
84     d2      Et        2，4-di-F-Ph    2-CF3-Ph         625        APCI
85     d1      Et        2，4-di-F-Ph    3，4-di-F-Ph      593        APCI
86     d2      Et        2，4-di-F-Ph    3，4-di-F-Ph      593        APCI
87     d1      Et        2-吡啶基        3，4-di-F-Ph      607        PB
88     d2      Et        2-吡啶基        3，4-di-F-Ph      607        PB
89     d1      Et        4-CF3-Ph       2，4-di-F-Ph      625        APCI
90     d2      Et        4-CF3-Ph       2，4-di-F-Ph      625        APCI
91     d1      Et        4-CF3-Ph       3-Cl-Ph           623        APCI
92     d1      Et        4-CF3-Ph       4-Cl-Ph           623        APCI
93     d2      Et        4-CF3-Ph       4-Cl-Ph           623        APCI
94     d1      Et        4-CH3-Ph       3-Cl-Ph           568        APCI
95     d2      Et        4-CH3-Ph       3-Cl-Ph           568        APCI
96     d1      Et        4-Cl-Ph         3，4-di-F-Ph      590        PB
97     d2      Et        4-Cl-Ph         3，4-di-F-Ph      590        PB
98     d1      Et        4-Cl-Ph         3-5-di-Cl-Ph      622        PB
99     d2      Et        4-Cl-Ph         3-5-di-Cl-Ph      622        PB
100    d1      Et        4-Cl-Ph         3-Cl-Ph           589        PB
101    d2      Et        4-Cl-Ph         3-Cl-Ph           589        PB
102    d1      Et        4-F-Ph          3，4-di-F-Ph      574        PB
103    d2      Et        4-F-Ph          3，4-di-F-Ph      574        PB
104    d1      Et        4-F-Ph          3-Cl-Ph           572        APCI
105    d2      Et        4-F-Ph          3-Cl-Ph           572        APCI
106    d1，2   Et        4-Me-Ph         2-CF3-Ph         602        APCI
107    d1，2   Et        4-Me-Ph         3，4-di-F-Ph      570        APCI
108    d1，2   CF3CH2  苯基            4-噻唑基          595        APCI
109    d1      CF3CH2  苯基            3-CF3-Ph         642.3      APCI
110    d1      CF3CH2  苯基            3，5-di-Cl-Ph     643        APCI
111    d2      CF3CH2  苯基            3，5-di-Cl-Ph     644        APCI
112    d1      CF3CH2      苯基             3，4-di-F-Ph        610.2        APCI
113    d2      CF3CH2      苯基             3，4-di-F-Ph        610.2        APCI
114    d1      CF3CH2      苯基             3，5-di-Cl-Ph       643          APCI
115    d2      CF3CH2      苯基             3，5-di-Cl-Ph       644          APCI
116    d1      CF3CH2      苯基             3-CF3-Ph           642.3        APCI
117    d1      CF3CH2      苯基             3，4-di-F-Ph        610.2        APCI
118    d2      CF3CH2      苯基             3，4-di-F-Ph        610.2        APCI
119    d1，2   CF3CH2      苯基             4-噻唑基            595          APCI
120    d1，2   CF3CH2      2，4-di-Cl-Ph    2-吡啶基            643          APCI
121    d1，2   CF3CH2      2，4-di-Cl-Ph    4-噻唑基            649          APCI
122    d1      CF3CH2      2，4-F-Ph        2-CF3-Ph           679          APCI
123    d2      CF3CH2      2，4-F-Ph        2-CF3-Ph           679          APCI
124    d1      CF3CH2      2，4-F-Ph        3，4-di-F-Ph        647          APCI
125    d2      CF3CH2      2，4-F-Ph        3，4-di-F-Ph        647          APCI
126    d1，2   CF3CH2      2，4-F-Ph        4-噻唑基            617          PB
127    d1      CF3CH2      2-吡啶基         2，4-di-Cl-Ph       643          APCI
128    d2      CF3CH2      2-吡啶基         2，4-di-Cl-Ph       643          APCI
129    d1      CF3CH2      2-吡啶基         2，4-di-F-Ph        611          PB
130    d2      CF3CH2      2-吡啶基         2，4-di-F-Ph        611          PB
131    d1      CF3CH2      2-吡啶基         2-CF3-4-F-Ph       661          APCI
132    d1      CF3CH2      2-吡啶基         2-CF3-Ph           643          PB
133    d2      CF3CH2      2-吡啶基         2-CF3-Ph           643          PB
134    d1      CF3CH2      2-吡啶基         3，4-di-F-Ph        611          PB
135    d2      CF3CH2      2-吡啶基         3，4-di-F-Ph        611          PB
136    d1      CF3CH2      2-吡啶基         3，5-di-Cl-Ph       643          APCI
137    d1      CF3CH2      2-吡啶基         3-Cl-Ph             609          PB
138    d1      CF3CH2      2-吡啶基         3-Cl-噻吩           615，617     APCI
139    d1，2   CF3CH2      2-吡啶基         3-F-4-Cl-Ph         627，629     APCI
140    d1      CF3CH2      2-吡啶基         3-OCF3-Ph          659          APCI
141    d1      CF3CH2      2-吡啶基         4-Cl-Ph             609          PB
142    d2      CF3CH2      2-吡啶基         4-Cl-Ph             609          PB
143    d1，2   CF3CH2      3-吡啶基         2，4-di-F-Ph        612          APCI
144    d1，2   CF3CH2      3-吡啶基         2-CF3-Ph           644          APCI
145    d1，2   CF3CH2      3-吡啶基         4-Cl-Ph             610          APCI
146    d1      CF3CH2      4-CH3-Ph        3-Cl-Ph             622          APCI
147    d2      CF3CH2      4-CH3-Ph        3-Cl-Ph             622          APCI
148    d1     CF3CH2   4-Cl-Ph        3，4-di-F-Ph         644        PB
149    d2     CF3CH2   4-Cl-Ph        3，4-di-F-Ph         644        PB
150    d1     CF3CH2   4-Cl-Ph        3，5-di-Cl-Ph        675        PB
151    d2     CF3CH2   4-Cl-Ph        3，5-di-Cl-Ph        675        PB
152    d2     CF3CH2   4-Cl-Ph        3-Cl-Ph              642        PB
153    d1     CF3CH2   4-Cl-Ph        3-Cl-Ph              642        PB
154    d1     CF3CH2   4-F-Ph         3，4-di-F-Ph         628        PB
155    d2     CF3CH2   4-F-Ph         3，4-di-F-Ph         628        PB
156    d1     CF3CH2   4-F-Ph         3-Cl-Ph              626        PB
157    d2     CF3CH2   4-F-Ph         3-Cl-Ph              626        PB
158    d1，2  CF3CH2   4-Me-Ph        2-CF3-Ph            656        APCI
159    d1，2  CF3CH2   4-Me-Ph        3，4-di-F-Ph         624        APCI
注意：在上表中，异构体定义指在吡唑啉酮-哌啶基团的C-3位置(在结构中以“*”表示)的立体化学；d1和d2指经色谱分离的异构体；d1，2指异构体混合物，在上表所用的缩写为：Ph为苯基；PB为粒子轰击；和APCI为常压化学电离。下面是上表所示化合物的NMR数据。
实施例37：1H NMR(400MHz，d4-MeOH)：d 7.2(m，5H)，5.2(t，1H)，4.6(m，3H)，3.8(d，2H)，3.1(d，1H)，3.0(s，3H)，2.6(dd，2H)，1.6(s，6H).
实施例67&68：1H NMR(300MHz，d4-MeOH)：d 8.85(s，1H)，8.6(t，1H)，8.1(d，1H)，8.0(t，1H)，7.35(s，5H)，5.15(s，1H)，4.6(bs，3H)，3.85(m，2H)，3.65(m，2H)，3.2(s，3H)，2.75(m，2H)，1.65(s，6H).
实施例128：1H NMR(400MHz，d4-MeOH)：d 8.8(s，1H)，8.6(s，1H)，8.5(t，1H)，7.96(t，1H)，7.9(d，1H)，7.45(d，1H)，7.33(d，1H)，5.2(s，1H)，4.6(s，3H)，4.4(m，1H)，4.2(m，2H)，3.9(m，4H)，3.5(m)，3.2(m，2H)，2.8(dd，2H)，1.6(s，6H).
实施例129&130：1H NMR(400MHz，d4-MeOH)：d 8.76(s，1H)，8.50(t，1H)，7.92(dt，2H)，7.43(q，1H)，6.90(t，1H)，5.20(m，1H)，4.90(m)，4.30(m，1H)，4.20(m，1H)，3.7-3.4(m)，3.30(s，2H)，3.20(m，1H)，2.80(dd，2H)，1.60(s，6H).
实施例137：1H NMR(300MHz，d4-MeOH)：d 8.7(1，1H)，8.45(t，1H)，7.9(t，2H)，7.25(m，4H)，5.2(m，1H)，4.95(d，1H)，4.6(s，2H)，4.3(m，1H)，3.8(t，2H)，3.5(dd，2H)，2.8(m，1H)，2.8(dd，2H)，1.6(s，6H).
实施例138：1H NMR(400MHz，d4-MeOH)：d 8.8(dd，1H)，8.6(s，1H)，8.5(t，1H)，7.95(t，1H)，7.9(s，1H)，7.3(s，1H)，7.0(s，1H)，5.2(s，1H)，4.85(s，3H)，4.4(m，1H)，4.18(m，1H)，3.8(m，2H)，3.5(dd，2H)，3.2(d，2H)，2.8(dd，2H)，1.6(s，6H).
实施例141&142：1H NMR(300MHz，d4-MeOH)：d 8.75(m，1H)，8.5(m，1H)，7.9(m，2H)，7.3(s，2H)，5.2(m，1H)，4.65(m，1H)，4.55(s，2H)，4.35(m，1H)，4.20(m，1H)，3.8(t，1H)，3.5(dd，2H)，3.15(d，1H)，2.8(dd，2H)，1.6(s，2H).
实施例160-179
根据下面所示路线，以类似于实施例3E和3F中描述的方法，通过将适宜的取代的吡唑啉酮-哌啶(I)(在路线中)与(D)-Trp衍生物(III)(参见实施例2C)偶联来制备示于下表的实施例160-179。
Figure A20041003341801211
Figure A20041003341801212
实施
例号   异构体  R2   R1＝-CH2-A1  MS         MS法
160    d1      Me    4-CF3-Ph        584        APCI
161    d1，2   Me    4-CF3-Ph        584        APCI
162    d1      Me    4-F-Ph           533        PB
163    d2      Me    4-F-Ph           533        PB
164    d1      Me          4-Ph-Ph            591        APCI
165    d1，2   Et          2，4-di-Cl-Ph      597        APCI
166    d1，2   Et          2，4-F-Ph          566        APCI
167    d1      Et          4-CF3-Ph          598        APCI
168    d1，2   Et          4-CF3-Ph          598        APCI
169    d1      Et          4-Cl-Ph            563        PB
170    d2      Et          4-Cl-Ph            563        PB
171    d1，2   Et          4-F-Ph             547        APCI
172    d1，2   Et          4-Me-Ph            543        APCI
173    d1，2   CF3CH2    2，4-di-Cl-Ph      651.5      APCI
174    d1，2   CF3CH2    2，4-di-F-Ph       620        APCI
175    d1      CF3CH2    4-Cl-Ph            617        PB
176    d2      CF3CH2    4-Cl-Ph            617        PB
177    d1      CF3CH2    4-F-Ph             601        APCI
178    d2      CF3CH2    4-F-Ph             601        APCI
179    d1，2   CF3CH2    4-Me-Ph            597        APCI
注意：在上表中，异构体定义指吡唑啉酮-哌啶基团的C-3位置(在结构中用“*”表示)的立体化学；d1和d2指色谱分离的异构体；d1，2指异构体混合物。
实施例180-183
根据下面所示路线，以类似于实施例3E和3F中描述的方法，通过将适宜的取代的吡唑啉酮-哌啶I与酸中间体IV偶联来制备示于下表的实施例180-183。
使用实施例5F中描述的建立的方法，通过将氨基酸用来自实施例5D的产物处理来制备酸中间体(IV)。
Figure A20041003341801232
实施                    A1
例号    异构体    R2   (R1＝-CH2-A1)Ar                MS          法
180     d1，2     Me    苯基           (CH2)2Ph        504            PB
181     d1，2     Me    苯基           SCH2Ph           559            PB
182     d1        Me    苯基           2-萘基            527            APCI
183     d1，2     Me    苯基           CH2O-(4-F-Ph)    524            PB
注意：在上表中，异构体定义指吡唑啉酮-哌啶基团的C-3位置(在结构中有“*”表示)的立体化学；d1和d2指色谱分离的异构体；d1，2指异构体混合物。
                          实施例184
2-氨基-N-[2-(3a-(R)-苄基-2-甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡 唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-1-(R)-苄氧基甲基-2-氧代-乙基]-2-甲基 丙酰胺L-酒石酸盐
A. 4-氧代-哌啶-1，3-二甲酸1-叔丁酯3-乙酯
向4-氧代-哌啶-3-甲酸乙酯盐酸盐(100g，0.482mol)的IPE(725mL)和水(360mL)溶液中先缓慢加入TEA(63.5g，0.627mol)，而后加入(Boc)2O(11 5.7g，0.53mol)。在氮气中搅拌混合物过夜。分离出有机相，将其用水洗涤和用硫酸钠干燥，并真空浓缩，得到晶状的所需产物(142.9g，收率109％，含有少量IPE)。
B. 3-苄基-4-氧代-哌啶-1，3-二甲酸1-叔丁酯3-乙酯
向4-氧代-哌啶-1，3-二甲酸1-叔丁酯3-乙酯(73.36g，0.27mol)的DMF(734mL)溶液中加入碳酸锂(50g，0.676mol)，接着加入苄基溴(55.44g，0.324mol)。将混合物加热至大约60℃并搅拌大约20小时。然后，再将反应混合物冷却至室温并用IPE萃取，用水洗涤和用硫酸镁干燥。过滤和真空浓缩后得到固体粗产物。将上述粗产物在己烷中重结晶，得到白色固体(33.6g，收率38.2％)。
C. 3a-苄基-2-甲基-2，3a，4，5，6，7-六氢吡唑并[4，3-c]吡啶-3-酮
在大约8℃下，向3-苄基-4-氧代-哌啶-1，3-二甲酸1-叔丁酯3-乙酯(1935.97g，5.36mol)的甲苯(9700mL)溶液中缓缓地先加入甲基肼(299.2mL，5.63mol)，后加入乙酸(325mL，5.68mol)。将混合物慢慢加热至大约65℃，并搅拌大约7.5小时。冷却至室温后，将有机层用10％碳酸氢钠、水和饱和氯化钠溶液洗涤，并真空干燥至小的体积。以同样规模重复反应两次，将得自上述三次反应的浓缩的产物溶液合并和与IPE(50L)混合，再冷却至大约0℃，重复引入氯化氢气体，并在室温下搅拌过夜直至完全脱保护。将混合物真空浓缩至大约初始体积的一半，加入二氯甲烷(24L)，接着加入NH4OH(22L)。然后，将混合物用二氯甲烷萃取，并浓缩至小体积(6至7L)。加入己烷(20L)后，将混合物冷却至大约15至20℃。以晶体形式收集到游离碱产物，而后将其真空干燥(共计2985g，收率84.8％)。
D. 3a-(R)-苄基-2-甲基-2，3a，4，5，6，7-六氢吡唑并[4，3-c]吡啶-3- 酮L-酒石酸盐
将L-酒石酸(67.55g，0.45mol)加入3a-苄基-2-甲基-2，3a，4，5，6，7-六氢吡唑并[4，3-c]吡啶-3-酮(100g，0.41mol)在丙酮/水的混合物(970mL/120mL)中形成的溶液中。将混合物加热至大约50℃并搅拌过夜。而后，再将反应混合物冷却至大约10至15℃，将生成的沉淀滤出，用冷丙酮/水洗涤和在真空条件下干燥，得到白色固体状的产物(157.8g，收率97.83％，99％ee)。
E. 2-叔丁氧羰基氨基-2-甲基-丙酸
将2-氨基异丁酸(140g，1.36mol)、1N氢氧化钠(1620mL，1.63mol)、(Boc)2O(375mL，1.63mol)和THF(420mL)混合在一起并在室温下搅拌过夜。将反应混合物用乙酸乙酯(700mL)稀释，通过加入6N盐酸将pH调节到3.0。分离出有机相，将其用饱和氯化钠溶液洗涤和浓缩至大约初始体积的1/4。用己烷处理后，分离和收集到白色固体产物(125.8g，收率45.44％)。从母液中回收到另外7.8g产物。
F. 2-叔丁氧羰基氨基-2-甲基丙酸2，5-二氧代-吡咯烷-1-基酯
在氮气中，伴随着搅拌将EDC(100.09g，0.522mol)加入2-叔丁氧羰基氨基-2-甲基-丙酸(100g，0.492mol)和琥珀酸酐(60.02g，0.522mol)在二氯甲烷(1000mL)中形成的溶液。然后，将反应混合物用乙酸乙酯(1L)稀释，用饱和碳酸氢钠溶液和水洗涤，接着在真空条件下浓缩至小体积。从溶液中沉淀出白色晶体，将其通过过滤收集起来并真空干燥，得到产物(104.9g+27.3g，收率89.5％)。
G. 3-(R)-苄氧基-2-(2-叔丁氧羰基氨基-2-甲基-丙酰氨基)丙酸
将2-叔丁氧羰基氨基-2-甲基丙酸2，5-二氧代-吡咯烷-1-基酯(33.94g，0.113mol)的THF(407mL)溶液加入2-氨基-3-苄氧基-丙酸(26.2g，0.113mol)在水(101.8mL)和TEA(28.53g，0.282mol)中形成的溶液中。室温下，在氮气中搅拌上述混合物过夜，而后，加入10％柠檬酸溶液(500mL)。再搅拌混合物10分钟后，将其用乙酸乙酯(500mL)稀释。从混合物中分离出有机相，将其用水和饱和氯化钠溶液洗涤，接着真空浓缩，得到稠的油状物。将油状物粗品用IPE/己烷(50/50)处理和冷却至大约10℃，得到白色固体产物(42.3g，收率98.4％)。
H. {1-[2-(3a-(R)-苄基-2-甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并 [4，3-c]吡啶-5-基)-1-(R)-苄氧基甲基-2-氧代-乙基氨基甲酰基]- 1-甲基-乙基}氨基甲酸叔丁酯
在大约-66℃下，将TEA(8.43mL，0.0605mol)加入3a-(R)-苄基-2-甲基-2，3a，4，5，6，7-六氢吡唑并[4，3-c]吡啶-3-酮，L-酒石酸盐(10.81g，0.0275mol)的乙酸乙酯(216.2mL)溶液中。搅拌混合物大约1.5小时。通过过滤除去沉淀的盐后，在大约-35℃下，加入3-苄氧基-2-(2-叔丁氧羰基氨基-2-甲基-丙酰氨基)丙酸(8.7g，0.0229mol)和TEA(19.15mL，0.1374mol)；而后，逐滴加入50％PPAA的乙酸乙酯溶液(27.5mL，0.0458mol)。将混合物在大约-20至-27℃之间搅拌大约2小时；接着，再搅拌1.5小时，其间温度缓慢回升至大约0℃。将反应混合物倒入水中，并用IPE萃取，用7％氯化钠溶液洗涤和在真空条件下浓缩。将所得油状物粗品用IPE/己烷(50/50)处理使其结晶，得到白色固体状的产物(10.3g，收率74.3％)。
I. 2-氨基-N-[2-(3a-(R)-苄基-2-甲基-3-氧代-2， 3，3a，4，6，7-六氢- 吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-1-(R)-苄氧基甲基-2-氧代-乙基]-2-甲 基丙酰胺
在大约0至5℃下，将TFA(35mL)加入{1-[2-(3a-(R)-苄基-2-甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-1-(R)-苄氧基甲基-2-氧代-乙基氨基甲酰基]-1-甲基-乙基}氨基甲酸叔丁酯(10.3g，0.017mol)的二氯甲烷(68.6mL)溶液以使其温度保持在低于大约5℃；然后，将温度升至室温。搅拌混合物大约3小时，用二氯甲烷代替乙酸乙酯作溶剂。接着，用饱和碳酸氢钠溶液将混合物的pH调节至大约为8，再将其用饱和氯化钠溶液洗涤和在真空条件下浓缩至小体积。先用IPA，而后用己烷处理上述混合物之后，得到白色固体产物(7.4g，收率86.1％)。HPLC显示产物中含有0.2％非对映体。
J. 2-氨基-N-[2-(3a-(R)-苄基-2-甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢- 吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-1-(R)-苄氧基甲基-2-氧代-乙基]-2-甲 基丙酰胺L-酒石酸盐
将L-(+)-酒石酸(114.5g，0.761mol)加入得自步骤I的2-氨基-N-[2-(3a-(R)-苄基-2-甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-1-(R)-苄氧基甲基-2-氧代-乙基]-2-甲基丙酰胺(385g，0.761mol)的甲醇(4000mL)溶液，并搅拌混合物过夜。将由此生成的浑浊溶液过滤得到澄清溶液，再浓缩除去大部分溶剂。加入乙酸乙酯(共计12L)后，在大约63至72℃之间共沸除去剩余的甲醇。将分离出来的固体溶于乙酸乙酯，并将所得溶液回流约16小时，然后冷却至室温过夜。收集到白色固体状产物(482.3g，收率96.8％)。M.P.174-176℃。
                          实施例185
2-氨基-N-{1-(2，4-二氟-苄氧基甲基)-2-氧代-2-[3-氧代-3a-吡啶- 2-基甲基-2-(2，2，2-三氟-乙基)-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c] 吡啶-5-基]-乙基}-2-甲基丙酰胺L-(+)酒石酸盐
A. 4-氧代-3-吡啶-2-基甲基-哌啶-1，3-二甲酸1-叔丁酯3-乙酯
在大约0℃将吡啶甲基氯盐酸盐(5.7g，34.7mmol)、碳酸钾(14.4g，104.1mmol)和碘化钾(5.76g，34.7mmol)加入4-氧代-哌啶-1，3-二甲酸1-叔丁酯3-乙酯(10.34g，38.2mmol)的DMF(40mL)溶液中。在大约0℃搅拌约2小时后，除去冰浴，再加入DABCO(973mg，8.68mmol)。将反应混合物搅拌大约30分钟后，倒入水和IPE的混合物中。分离出有机层，将其用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗涤和用硫酸钠干燥，并真空浓缩。将残余物粗品从己烷中结晶，得到白色固体(8.19g，收率65％)。
1H-NMR(CDCl3)δ1.17(t，3H)，1.48(s，9H)，1.55(s，2H)，2.61(m，1H)，2.71(m，1H)，3.31-3.50(m，3H)，4.11(d，2H)，4.49(d，1H)，7.06(br s，1H)，7.17(d，1H)，7.54(m，1H)，8.40(s，1H).
B. 3-氧代-3a-吡啶-2-基甲基-2-(2，2，2-三氟-乙基)-2，3，3a，4，6，7- 六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-甲酸叔丁酯
用甲苯(3×1200mL)萃取70％CF3CH2NHNH2(325mL，1.986mol)(购自Aldrich)水溶液。向步骤A产物(600g，1.655mol)的甲苯(900mL)溶液中，首先加入合并后的含有无水2，2，2-三氟乙基肼的甲苯萃取物，而后加入乙酸(121.4g，1.986mol)。在大约70℃下加热反应混合物大约2小时后，加入剩下的70％2，2，2-三氟乙基肼水溶液的甲苯萃取物(50g)。将反应混合物在大约80℃下加热大约3.5小时后，冷却至室温，并用饱和碳酸氢钠水溶液(2L)稀释。分离出甲苯层，将其用饱和氯化钠水溶液洗涤，用硫酸钠干燥和真空浓缩，得到油状物(754.8g)。从甲醇/水中结晶得到白色固体状的所需产物(609.5g)。
1H-NMR(CDCl3)δ1.50(s，9H)，2.53(d，1H)，2.70(br s，2H)，2.88(br s，1H)，3.31(m，2H)，3.97(m，1H)，4.19(m，1H)，4.46(brs，1H)，4.63(br s，1H)，7.06(m，2H)，7.51(m，1H)，8.34(m，1H).
C. 3a-吡啶-2-基甲基-2-(2，2，2-三氟乙基)-2，3a，4，5，6，7-六氢吡唑 并[4，3-c]吡啶-3-酮
用大约30分钟，将甲磺酸(11.6g，120mmol)逐滴加入步骤B产物(10g，24.2mmol)的二氯甲烷(100mL)溶液中。将反应混合物搅拌大约1小时，而后冷却至大约0℃，接着通过加料漏斗加入三乙胺(18.6mL，133.1mmol)。使反应混合物经过大约1小时升温至室温，再用额外加入的二氯甲烷稀释和用饱和氯化钠水溶液洗涤，用硫酸钠干燥和真空浓缩，得到白色固体状的所需产物(7.2g)。
1H-NMR(CDCl3)δ：2.51-2.72(m，4H)，3.35(m，2H)，3.49(m，2H)，4.03(m，1H)，4.25(m，1H)，7.08(d，2H)，7.51(t，1H)，8.37(d，1H).
D. 3a-吡啶-2-基甲基-2-(2，2，2-三氟乙基)-2，3a，4，5，6，7-六氢吡唑 并[4，3-c]吡啶-3-酮(D)-酒石酸盐
在大约17℃下，在装有机械搅拌器的干燥和用氮气净化的5L圆底烧瓶中，将D-(-)-酒石酸(129g，0.86mol)加入步骤C产物(243g，0.78mol)的丙酮/水(9∶1，2430mL)溶液中。将混合物在室温下搅拌过夜，过滤，再将生成的固体收集起来，用冷丙酮洗涤和在真空条件下干燥，得到黄色固体产物。(284g，收率78.8％)。
E. 2-叔丁氧羰基氨基-3-(2，4-二氟-苄氧基)-丙酸
在大约0℃下，将叔丁醇钾溶液(515.8g，4.5963mol)加入在THF(7L)和DMF(3L)的混合物中形成的N-Boc-(D)-丝氨酸(452g，2.2026mol)溶液中。将反应混合物在大约0℃下搅拌约30分钟，然后加入2，4-二氟苄基溴(456.5g，2.2051mol)。温度升至室温后，在真空条件下浓缩反应混合物以除去THF。将反应混合物在4.5L水和4.5L IPE间分配。进行层分离后，用1N盐酸将水层的pH调节到大约为3。再将水层用每次4L IPE萃取两次。然后，将有机溶液用硫酸钠干燥，和真空浓缩，得到黄色蜡状固体(518.0g，收率70.9％)。
1H-NMR(CDCl3)δ1.44(s，9H)，3.73(m，1H)，3.94(d，1H)，4.44(br s，1H)，4.54(s，2H)，5.34(m，1H)，6.78(m，1H)，6.84(m，1H)，7.30(m，1H).
F. 2-氨基-3-(2，4-二氟-苄氧基)丙酸甲磺酸盐
通过注射器将甲磺酸(1.72g，17.95mmol)用大约10分钟加入步骤E产物(1.19g，3.59mmol)的二氯甲烷/IPE(1∶1，12mL)溶液中，立即有固体从溶液中沉淀出来。大约1小时后，将固体滤出，并用二氯甲烷/IPE混合物(1∶1)洗涤，得到939mg产物(收率80％)。
G. 2-(2-叔丁氧羰基氨基-2-甲基-丙酰氨基)-3-(2，4-二氟-苄氧基)- 丙酸
将2-叔丁氧羰基氨基-2-甲基丙酸-2，5-二氧代-吡咯烷-1-基酯(438mg，1.46mmol)和三乙胺(369mg，3.65mmol)加入步骤F产物(520mg，1.46mmol)的THF/水(4∶1，10mL)溶液中。室温下，搅拌上述反应混合物大约1小时并用10％柠檬酸水溶液(10mL)骤冷。大约15分钟后，加入乙酸乙酯(50mL)，分离出有机层，将其用饱和氯化钠水溶液洗涤，用硫酸钠干燥和真空浓缩，得到泡沫状物。(534.1mg，收率88％)。
1H-NMR(CD3OD)：δ1.38(br s，15H)，3.77(d，1H)，3.92(d，1H)，4.52(m，3H)，6.92(m，1H)，7.41(m，1H)，7.58(d，1H).
H. (1-{1-(2，4-二氟-苄氧基甲基)-2-氧代-2-[3-氧代-3a-吡啶-2-基 甲基-2-(2，2，2-三氟-乙基)-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡 啶-5-基]-乙基氨基甲酰基}-1-甲基-乙基)氨基甲酸叔丁酯
(a)在大约-6℃下，在装有机械搅拌器的干燥和用氮气净化的12L圆底烧瓶中，将步骤D的产物(517g，1.12mol)加入乙酸乙酯(5170mL)。将溶液冷却至大约-40℃后，用大约45分钟加入三乙胺(398mL，2.86mol)。将反应混合物在-50℃和-40℃间搅拌大约90分钟，并滤入干燥和用氮气净化的22L圆底烧瓶中，再用乙酸乙酯(2068mL，预先冷却至大约-50℃)洗涤，得到白色固体状的游离碱。
(b)在大约-30℃下，将步骤G产物(425g，1.02mol)加入含有步骤H(a)产物、三乙胺(654mL，4.69mol)和PPAA(50％乙酸乙酯溶液，916mL，1.53mol)的乙酸乙酯溶液中。将反应混合物搅拌大约1小时，用水和饱和氯化钠水溶液洗涤，用硫酸钠干燥和在真空条件下浓缩，得到油状的产物(636g，收率87.8％)。
I. 2-氨基-N-{1-(2，4-二氟-苄氧基甲基)-2-氧代-2-[3-氧代-3a-吡 啶-2-基甲基-2-(2，2，2-三氟-乙基)-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并 [4，3-c]吡啶-5-基]-乙基]-2-甲基丙酰胺
在大约15℃下，在装有机械搅拌器的干燥和用氮气净化的22L圆底烧瓶中，用大约55分钟逐滴将甲磺酸(258.3mL，3.98mol)加入步骤H产物(566g，0.796mol)的二氯甲烷(11320mL)溶液中。在约20℃下，将混合物搅拌大约40分钟，然后加入饱和碳酸氢钠水溶液(8490mL)直至pH大约为7.8。将有机层分离出来，用水和饱和氯化钠水溶液洗涤，用硫酸钠干燥和在真空条件下浓缩，得到油状产物(388.8g，收率80％)。
J. 2-氨基-N-{1-(2，4-二氟-苄氧基甲基)-2-氧代-2-[3-氧代-3a-吡 啶-2-基甲基-2-(2，2，2-三氟-乙基)-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并 [4，3-c]吡啶-5-基]乙基}-2-甲基丙酰胺L-(+)酒石酸盐
在装有机械搅拌器的干燥和用氮气净化的12L圆底烧瓶中，将L-(+)-酒石酸(90g，0.6mol)加入步骤I产物(370g，0.6mol)的甲醇(4070mL)溶液中。将反应混合物在大约22℃下搅拌大约90分钟，过滤和浓缩。再将粗产物用乙酸乙酯(4560mL)稀释，在大约70℃下加热，而后，经过大约17小时缓缓冷却至室温。将生成的固体滤出并干燥，得到白色晶体。mp188-189℃(348.46g，收率76％)。
1H NMR(MeOH，d4)δ：8.28(d，1H)，7.59(t，1H)，7.41-7.39(m，1H)，7.18-7.13(m，1H)，6.92(t，1H)，5.2(t，1H)，4.56(bs，3H)，4.36(s，2H)，4.31-4.25(m，1H)，4.13-4.06(m，1H)，3.78(d，2H)，3.21(t，1H)，3.18-2.96(m，2H)，2.65-2.55(m，2H)，1.57(d，6H).MS：MH+611.
[a]589+22.03(c＝11.9，MeOH).
                       实施例A
以下是上文中描述的“雌性大鼠研究”的结果，其中将GH促分泌化合物2-氨基-N-[2-(3a-(R)-苄基-2-甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-1-(R)-(苄氧基甲基)-2-氧代-乙基]异丁酰胺L-酒石酸盐给入大鼠。
表1
每日给入拟GHRP，三月后的平均血浆胰岛素和代谢产物水平
收集被处死大鼠的未禁食血样。星号(*)是指与对应的赋形剂-治疗组明显不同的数值。
(p＜0.05)
剂量 胰岛素 葡萄糖 乳酸 胆固醇 甘油三酸酯
手术 (mg/kg)   (uU/mL)   (mg/dl)     (mg/dl)     (mg/dl)     (mg/dl)
Sham 赋形剂   118.8   181.7     4.6     97.9     254.8
Sham 0.5   94.9   *142.7     3.7     95.4     219.6
Sham 5.0   95.7   *139.9     *3.2     *80.6     227.2
0vx 赋形剂   112.8   194.0     3.9     106.8     182.7
0vx 0.5   *78.7   179.7     3.6     92.5     181.9
0vx 5.0   *84.1   177.2     3.1     102.2     158.4
表1数据显示上述治疗与和剂量有关的血浆葡萄糖和/或胰岛素水平的降低有关，这与通过上述治疗对糖血控制和胰岛素敏感度产生改善作用相一致；上述治疗同样与血浆乳酸、胆固醇和甘油三酸酯的降低趋势有关，这同样与作为通过上述治疗引起的胰岛素敏感度提高的结果的对脂质结构和代谢控制产生改善作用相一致。

Claims (24)

1、有效量的通式I化合物或其立体异构混合物、非对映体富集、非对映体纯、对映体富集或对映体纯的异构体、或其可药用盐以及前药用于制备治疗哺乳动物的胰岛素抗性的药物的用途：
Figure A2004100334180002C1
其中
e是0；
n和w各自独立是1；
Y是氧；
R1是氢，-(C1-C10)烷基或-(CH2)t-A1，
其中t是0，1，2或3；
R2是氢或(C1-C8)烷基，
其中R2定义中的烷基任选被CF3取代；
R3是-(C1-C6)烷基-A1或-(C1-C5)烷基-X1-(C0-C5)烷基-A1，
其中X1是O；
R4是氢或(C1-C6)烷基；
X4是氢或(C1-C6)烷基；
R6是
Figure A2004100334180002C2
其中a和b独立是0；
X5和X5a各自独立地是(C1-C6)烷基；
Z1是键；
R7和R8独立是氢或(C1-C6)烷基；
在每一种情形下的A1独立是苯基，或任选含有独立选自氧、硫和氮的1至4个杂原子的部分饱和、完全饱和或完全不饱和的4-至8-元环，双环体系，该双环体系是由任选含有独立选自氮、硫和氧的1至4个杂原子的部分饱和、完全饱和或完全不饱和的5-或6-元环组成；
在每种情形下的A1独立地任选被取代，取代基的数量多至3个，且
每个取代基独立选自F，Cl，Br，I，CF3，CH3或苯基。
2、根据权利要求1所述用途，其中的通式I化合物是下式所示化合物，或其立体异构混合物、非对映体富集、非对映体纯、对映体富集或对映体纯的异构体，或其可药用盐以及前药，
Figure A2004100334180003C1
其中
R2是甲基，A1是2-吡啶基，和R3是-CH2-O-CH2-苯基；
R2是-CH2CF3，A1是2-吡啶基，和R3是-CH2-O-CH2-3-氯-苯基；
R2是-CH2CF3，A1是2-吡啶基，和R3是-CH2-O-CH2-4-氯-苯基；
R2是-CH2CF3，A1是2-吡啶基，和R3是-CH2-O-CH2-2，4-二氯-苯基；
R2是-CH2CF3，A1是2-吡啶基，和R3是-CH2-O-CH2-3-氯-噻吩；或者
R2是-CH2CF3，A1是2-吡啶基，和R3是-CH2-O-CH2-2，4-二氟-苯基。
3、根据权利要求1所述用途，其中的通式I化合物或其立体异构混合物、非对映体富集、非对映体纯、对映体富集或对映体纯的异构体，或其可药用盐以及前药是选自下列的化合物的3a(R，S)，1(R)非对映体混合物、3a(R)，1(R)非对映体或3a(S)，1(R)非对映体：
2-氨基-N-[1-(3a-苄基-2-甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-羰基)-4-苯基丁基]异丁酰胺；
2-氨基-N-[2-(3a-苄基-2-甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-1-(1H-吲哚-3-基甲基)-2-氧代-乙基]异丁酰胺；
2-氨基-N-[2-(3a-苄基-2-乙基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-1-(1H-吲哚-3-基甲基)-2-氧代-乙基]异丁酰胺；
2-氨基-N-[2-[3a-(4-氟-苄基)-2-甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基]-1-(1H-吲哚-3-基甲基)-2-氧代-乙基]异丁酰胺；
2-氨基-N-[2-(3a-苄基-2-甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-1-苄氧基甲基-2-氧代-乙基]异丁酰胺；
2-氨基-N-[2-(3a-苄基-2-乙基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-1-苄氧基甲基-2-氧代-乙基]异丁酰胺；
2-氨基-N-{2-[3a-苄基-3-氧代-2-(2，2，2-三氟-乙基)-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基]-1-苄氧基甲基-2-氧代-乙基}异丁酰胺；
2-氨基-N-{1-苄氧基甲基-2-[(3a-(4-氟-苄基)-2-甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-2-氧代-乙基]异丁酰胺；
2-氨基-N-[2-(3a-苄基-2-叔丁基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-1-苄氧基甲基-2-氧代-乙基]异丁酰胺；
2-氨基-N-[2-(3a-苄基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-1-苄氧基甲基-2-氧代-乙基]异丁酰胺。
4、根据权利要求3所述用途，其中所述化合物是2-氨基-N-[2-(3a-(R)-苄基-2-甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-1-(R)-苄氧基甲基-2-氧代-乙基]异丁酰胺L-酒石酸盐。
5、根据权利要求1所述用途，其中的通式I化合物或其立体异构混合物、非对映体富集、非对映体纯、对映体富集或对映体纯的异构体，或其可药用盐以及前药是选自下列的化合物的3a-(R，S)，1-(R)非对映体混合物、3a-(R)，1-(R)对映体或3a-(S)，1-(R)对映体：
2-氨基-N-[1-苄氧基甲基-2-(2-甲基-3-氧代-3a-吡啶-2-基甲基-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-2-氧代-乙基]-2-甲基-丙酰胺；
2-氨基-N-{1-(3-氯-苄氧基甲基)-2-氧代-2-[3-氧代-3a-吡啶-2-基甲基-2-(2，2，2-三氟-乙基)-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基]乙基}-2-甲基-丙酰胺；
2-氨基-N-{1-(4-氯-苄氧基甲基)-2-氧代-2-[3-氧代-3a-吡啶-2-基甲基-2-(2，2，2-三氟-乙基)-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基]乙基}-2-甲基-丙酰胺；
2-氨基-N-{1-(2，4-二氯-苄氧基甲基)-2-氧代-2-[3-氧代-3a-吡啶-2-基甲基-2-(2，2，2-三氟-乙基)-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基]乙基}-2-甲基-丙酰胺；
2-氨基-N-{1-(4-氯-噻吩-2-基甲氧基甲基)-2-氧代-2-[3-氧代-3a-吡啶-2-基甲基-2-(2，2，2-三氟-乙基)-2，3，3a，4，5，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-6-基]乙基}-2-甲基-丙酰胺；以及
2-氨基-N-{1-(2，4-二氟-苄氧基甲基)-2-氧代-2-[3-氧代-3a-吡啶-2-基甲基-2-(2，2，2-三氟-乙基)-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基]乙基}-2-甲基-丙酰胺。
6、根据权利要求1所述有效量的通式I化合物或其立体异构混合物、非对映体富集、非对映体纯、对映体富集或对映体纯的异构体、或其可药用盐以及前药，再加上生长激素释放激素或其功能类似物，用于制备治疗哺乳动物胰岛素抗性的药物的用途。
7、用于治疗哺乳动物胰岛素抗性的药物组合物，所述组合物含有可药用载体和有效量的通式I化合物或其立体异构混合物、非对映体富集、非对映体纯、对映体富集或对映体纯的异构体，或其可药用盐以及前药，
其中
e是0；
n和w各自独立是1；
Y是氧；
R1是氢，-(C1-C10)烷基或-(CH2)t-A1，
其中t是0，1，2或3；
R2是氢或(C1-C8)烷基，
其中R2定义中的烷基任选被CF3取代；
R3是-(C1-C6)烷基-A1或-(C1-C5)烷基-X1-(C0-C5)烷基-A1，
其中X1是O；
R4是氢或(C1-C6)烷基；
X4是氢或(C1-C6)烷基；
R6是
Figure A2004100334180006C2
其中a和b独立是0；
X5和X5a各自独立地是(C1-C6)烷基；
Z1是键；
R7和R8独立是氢或(C1-C6)烷基；
在每一种情形下的A1独立是苯基，或任选含有独立选自氧、硫和氮的1至4个杂原子的部分饱和、完全饱和或完全不饱和的4-至8-元环，双环体系，该双环体系是由任选含有独立选自氮、硫和氧的1至4个杂原子的部分饱和、完全饱和或完全不饱和的5-或6-元环组成；
在每种情形下的A1独立地任选被取代，取代基的数量多至3个，且每个取代基独立选自F，Cl，Br，I，CF3，CH3或苯基。
8、有效量的功能性生长抑素拮抗剂和通式I化合物，或其立体异构混合物、非对映体富集、非对映体纯、对映体富集或对映体纯的异构体，或其可药用盐以及前药，用于制备提高人或其它哺乳动物内源生长激素水平的药物的用途：
Figure A2004100334180007C1
其中
e是0；
n和w各自独立是1；
Y是氧；
R1是氢，-(C1-C10)烷基或-(CH2)t-A1，
其中t是0，1，2或3；
R2是氢或(C1-C8)烷基，
其中R2定义中的烷基任选被CF3取代；
R3是-(C1-C6)烷基-A1或-(C1-C5)烷基-X1-(C0-C5)烷基-A1，
其中X1是O；
R4是氢或(C1-C6)烷基；
X4是氢或(C1-C6)烷基；
R6是
Figure A2004100334180008C1
其中a和b独立是0；
X5和X5a各自独立地是(C1-C6)烷基；
Z1是键；
R7和R8独立是氢或(C1-C6)烷基；
在每一种情形下的A1独立是苯基，或任选含有独立选自氧、硫和氮的1至4个杂原子的部分饱和、完全饱和或完全不饱和的4-至8-元环，双环体系，该双环体系是由任选含有独立选自氮、硫和氧的1至4个杂原子的部分饱和、完全饱和或完全不饱和的5-或6-元环组成；
在每种情形下的A1独立地任选被取代，取代基的数量多至3个，且每个取代基独立选自F，Cl，Br，I，CF3，CH3或苯基。
9、有效量的功能性生长抑素拮抗剂和通式I化合物，或其立体异构混合物、非对映体富集、非对映体纯、对映体富集或对映体纯的异构体，或其可药用盐以及前药，用于制备治疗或预防哺乳动物充血性心力衰竭、肥胖或与老化有关的虚弱的药物的用途：
其中
e是0；
n和w各自独立是1；
Y是氧；
R1是氢，-(C1-C10)烷基或-(CH2)t-A1，
其中t是0，1，2或3；
R2是氢或(C1-C8)烷基，
其中R2定义中的烷基任选被CF3取代；
R3是-(C1-C6)烷基-A1或-(C1-C5)烷基-X1-(C0-C5)烷基-A1，
其中X1是O；
R4是氢或(C1-C6)烷基；
X4是氢或(C1-C6)烷基；
R6是
Figure A2004100334180009C1
其中a和b独立是0；
X5和X5a各自独立地是(C1-C6)烷基；
Z1是键；
R7和R8独立是氢或(C1-C6)烷基；
在每一种情形下的A1独立是苯基，或任选含有独立选自氧、硫和氮的1至4个杂原子的部分饱和、完全饱和或完全不饱和的4-至8-元环，双环体系，该双环体系是由任选含有独立选自氮、硫和氧的1至4个杂原子的部分饱和、完全饱和或完全不饱和的5-或6-元环组成；
在每种情形下的A1独立地任选被取代，取代基的数量多至3个，且每个取代基独立选自F，Cl，Br，I，CF3，CH3或苯基。
10、根据权利要求9所述用途，其中的功能性生长抑素拮抗剂是α-2肾上腺素能激动剂。
11、根据权利要求10所述用途，其中的α-2肾上腺素能激动剂选自可乐定、赛拉嗪和美托咪定。
12、根据权利要求11所述用途，其中的通式I化合物是2-氨基-N-[2-(3a-(R)-苄基-2-甲基-3-氧代-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5-基)-1-(R)-苄氧基甲基-2-氧代-乙基]异丁酰胺L-酒石酸盐。
13、药物组合物，所述组合物含有可药用载体和α-2肾上腺素能激动剂和通式I化合物或其立体异构混合物、非对映体富集、非对映体纯、对映体富集或对映体纯的异构体，或其可药用盐以及前药，
Figure A2004100334180010C1
其中
e是0；
n和w各自独立是1；
Y是氧；
R1是氢，-(C1-C10)烷基或-(CH2)t-A1，
其中t是0，1，2或3；
R2是氢或(C1-C8)烷基，
其中R2定义中的烷基任选被CF3取代；
R3是-(C1-C6)烷基-A1或-(C1-C5)烷基-X1-(C0-C5)烷基-A1，
其中X1是O；
R4是氢或(C1-C6)烷基；
X4是氢或(C1-C6)烷基；
R6是
其中a和b独立是0；
X5和X5a各自独立地是(C1-C6)烷基；
Z1是键；
R7和R8独立是氢或(C1-C6)烷基；
在每一种情形下的A1独立是苯基，或任选含有独立选自氧、硫和氮的1至4个杂原子的部分饱和、完全饱和或完全不饱和的4-至8-元环，双环体系，该双环体系是由任选含有独立选自氮、硫和氧的1至4个杂原子的部分饱和、完全饱和或完全不饱和的5-或6-元环组成；
在每种情形下的A1独立地任选被取代，取代基的数量多至3个，且每个取代基独立选自F，Cl，Br，I，CF3，CH3或苯基。
14、根据权利要求1所述用途，其中与胰岛素抗性有关的疾病是I型糖尿病、II型糖尿病、高血糖、葡萄糖耐受力不足或者胰岛素抗性综合征或状态。
15、根据权利要求1所述用途，其中与胰岛素抗性有关的疾病与肥胖或老龄有关。
16、制备通式k化合物的方法，
所述方法包括在有机碱、肽偶联剂和反应惰性溶剂存在下，在大约-78℃至大约-20℃温度下，使通式g化合物
Figure A2004100334180012C2
与通式j化合物反应生成通式k化合物，
Figure A2004100334180012C3
其中Prt是氨基保护基。
17、根据权利要求16所述方法，其中的肽偶联剂是1-丙膦酸环酐，以及通式g化合物具有R构型，通式j化合物具有R构型，且通式k化合物具有3a-(R)，1-(R)构型。
18、制备通式Z化合物的方法，
所述方法包括在有机碱、肽偶联剂和反应惰性溶剂存在下，在大约-78℃至大约-20℃温度下，使通式g化合物
与通式j化合物反应
Figure A2004100334180013C3
生成通式k化合物；
通式k化合物脱保护生成通式I化合物；
Figure A2004100334180014C1
然后，在醇溶剂中，使通式I化合物与L-酒石酸反应生成通式Z化合物。
19、根据权利要求18所述方法，其中的肽偶联剂是1-丙膦酸环酐，以及通式g化合物具有R构型，通式j化合物具有R构型，且通式k、I和Z化合物都具有3a-(R)，1-(R)构型。
20、通式g化合物的制备方法，
所述方法包括在惰性溶剂中，在大约-50℃至大约-10℃温度下，使通式f化合物
与碱反应生成通式g化合物，其中保持了苄基的手性。
21、通式c化合物的制备方法，
所述方法包括在反应惰性溶剂中，使通式b化合物
Figure A2004100334180015C2
其中Prt是氨基保护基，与无机或有机碱和苄基溴反应生成通式c化合物。
22、通式f化合物的制备方法，
Figure A2004100334180015C3
所述方法包括在反应惰性有机溶剂中，使通式e化合物
与L-酒石酸反应。
23、下式所示化合物的R，S-对映体混合物、R-对映体或S-对映体，
Figure A2004100334180016C2
其中Prt是氢或氨基保护基。
24、有效量的通式I化合物，或其立体异构混合物、非对映体富集、非对映体纯、对映体富集或对映体纯的异构体，或其可药用盐以及前药，用于制备治疗哺乳动物睡眠障碍的药物的用途：
其中
e是0；
n和w各自独立是1；
Y是氧；
R1是氢，-(C1-C10)烷基或-(CH2)t-A1，
其中t是0，1，2或3；
R2是氢或(C1-C8)烷基，
其中R2定义中的烷基任选被CF3取代；
R3是-(C1-C6)烷基-A1或-(C1-C5)烷基-X1-(C0-C5)烷基-A1，
其中X1是O；
R4是氢或(C1-C6)烷基；
X4是氢或(C1-C6)烷基；
R6是
Figure A2004100334180017C1
其中a和b独立是0；
X5和X5a各自独立地是(C1-C6)烷基；
Z1是键；
R7和R8独立是氢或(C1-C6)烷基；
在每一种情形下的A1独立是苯基，或任选含有独立选自氧、硫和氮的1至4个杂原子的部分饱和、完全饱和或完全不饱和的4-至8-元环，双环体系，该双环体系是由任选含有独立选自氮、硫和氧的1至4个杂原子的部分饱和、完全饱和或完全不饱和的5-或6-元环组成；
在每种情形下的A1独立地任选被取代，取代基的数量多至3个，且每个取代基独立选自F，Cl，Br，I，CF3，CH3或苯基。
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