JP3742643B2 - 成長ホルモン分泌促進化合物の中間体の製造方法 - Google Patents

成長ホルモン分泌促進化合物の中間体の製造方法 Download PDF

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Description

発明の背景
下垂体から分泌される成長ホルモン（ＧＨ）は、成長可能なすべての身体組織の成長を刺激する。さらに、成長ホルモンは身体の代謝プロセスに対し下記の基本的作用をもつことが分かっている：
１．実質的にすべての身体細胞においてタンパク質合成速度を高める；
２．身体細胞において炭水化物利用速度を低下させる；および
３．遊離脂肪酸の移動度、およびエネルギーとしての脂肪酸利用度を高める。
成長ホルモンが欠乏すると、さまざまな医学的障害が起きる。小児では小人症を引き起こす。成人では、後天性ＧＨ欠乏症の結果には、脂肪なし体重の著しい低下と同時に、特に神経幹領域の総体脂肪増加が含まれる。骨格筋および心筋の質量減少ならびに筋力低下により、運動能力が著しく低下する。骨密度も低下する。外来性成長ホルモン投与はこれらの代謝変化の多くを逆行させることが示されている。この療法の利点にはさらに、ＬＤＬコレステロールの減少および精神状態の改善が含まれる。
成長ホルモン濃度を高めたい場合、外来性成長ホルモンの供給、あるいは成長ホルモンの産生および／または放出を刺激する薬剤の投与により、この問題は一般に解決された。いずれの場合も、化合物がペプチジル性であるため、注射により投与する必要があった。最初は成長ホルモンの供給源は死体の下垂体の抽出であった。このため製品が高価になり、下垂体源に付随する疾病（たとえばヤコブ-クロイツフェルト病）が成長ホルモンのレシピエントに伝達されるというリスクが伴った。最近、組換え成長ホルモンが得られるようになり、もはや疾病伝達のリスクはないが、なおきわめて高価な製品であり、かつ注射または鼻スプレーにより投与しなければならない。大部分のＧＨ欠乏症は、下垂体のＧＨ合成という一次欠損ではなく、ＧＨ放出の欠損により起きる。したがって、血清ＧＨを正常にするための代替方策は、成長ホルモン分泌細胞からのＧＨの放出を刺激することによる。ＧＨ分泌増加は、脳および視床下部のさまざまな神経伝達系を刺激または阻害することにより達成できる。その結果、下垂体ＧＨ分泌を刺激するための合成による成長ホルモン放出薬の開発が行われており、これらは高価で煩雑なＧＨ置換療法より優れた幾つかの利点をもつであろう。最も望ましい薬剤は生理学的調節経路に作用することにより拍動性ＧＨ分泌を刺激するものであり、外来性ＧＨ投与による望ましくない副作用を伴う過剰濃度のＧＨは、無傷の負のフィードバックループにより避けられるであろう。
生理学的および薬理学的なＧＨ分泌刺激薬には、アルギニン、Ｌ−３，４−ジヒドロキシフェニルアラニン（Ｌ−ＤＯＰＡ）、グルカゴン、バソプレシンが含まれる。インスリン誘発低血糖症、および睡眠や運動などの活動は、何らかの様式で視床下部に作用して、おそらくソマトスタチン分泌を低下させるか、または既知の分泌促進物質である成長ホルモン放出因子（ＧＨＲＦ）もしくは未知の内因性分泌促進物質である成長ホルモン放出ホルモンの分泌を高めることにより、またはこれらすべてにより、間接的に下垂体から成長ホルモンを放出させる。
内因性成長ホルモンの放出を刺激する他の化合物、たとえばＧＲＦ関連の類似ペプチジル化合物、または米国特許第４，４１１，８９０号のペプチドが開発された。これらのペプチドは成長ホルモンよりかなり小さいが、同様に種々のプロテアーゼに感受性である。大部分のペプチドと同様に、経口によるそれらの生物学的利用能は低い。国際特許出願公開第ＷＯ９４／１３６９６号は、成長ホルモンの放出を促進する特定のスピロピペリジンおよび同族体について述べている。
国際特許出願公開第ＷＯ９４／１１０１２号およびＷＯ９４／１３６９６号の化合物は、副甲状腺ホルモンまたはビスホスホナートと組み合わせて骨粗鬆症の治療に有用であると報告されている。
１態様において本発明は、インスリン耐性状態、たとえば非インスリン依存性糖尿病（ＮＩＤＤＭ）、ならびに肥満症および老化に伴う血糖制御低下を処置する必要のある哺乳動物においてそれらを処置する方法であって、その哺乳動物に有効量の後記に定義する式Ｉの化合物またはその医薬的に許容しうる塩を投与することを含む方法に関する。
本発明は、血糖制御のための、成長ホルモン分泌促進薬、詳細には式Ｉの成長ホルモン放出ペプチド（ＧＨＲＦ）またはＧＨＲＦ模倣薬の使用に関する。成長ホルモン（ＧＨ）濃度を高める薬剤はこの効果をもつとは期待できない。ＧＨは動物およびヒトにおいて糖尿病誘発性であることが広く認められているからである。先端巨大症では、グルコース利用および肝グルコース産生抑制が損なわれている（Ｈａｎｓｅｎ，Ｉ．ら，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，２５０：Ｅ２６９（１９８６）参照）。このＧＨ過剰疾患では、下垂体の外科処置またはＧＨ濃度を低下させる化学療法により、グルコース処理の障害および高インスリン血症が後退した（Ｌｅｖｉｎ，Ｓ．Ｒ．ら，Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．，５７：５２６（１９７４）；Ｆｅｅｋ，Ｃ．Ｍ．ら，Ｊ．Ｃｌｉ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．，２２：５３２（１９８１）参照）。さらに、高齢者にＧＨを投与すると、多数の研究で高血糖症、グルコース不耐症および高インスリン血症が起きた（Ａｌｏｉａ，Ｊ．Ｆ．ら，Ｊ．Ｃｌｉ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．，４３：９９２（１９７６）；Ｂｉｎｎｅｒｔｓら，Ｊ．Ｃｌｉ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．，６７：１３１２（１９８８）；Ｍａｒｃｕｓ，Ｒ．ら，Ｊ．Ｃｌｉ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．，７０：５１９（１９９０）参照）。したがって、ＧＨ療法は糖尿病を伴う個体または糖尿病のリスクをもつ個体には禁忌である。
肥満は糖尿病の主リスク因子であり、大部分のＮＩＤＤＭ患者が肥満症である。両状態とも、循環インスリン濃度増大およびＧＨ濃度低下を特徴とする。ＧＨ欠乏症の成人（Ｊｏｒｇｅｎｓｅｎ，Ｊ．Ｏ．Ｌ．ら，Ｌａｎｃｅｔ，１：１２２１（１９８９）、肥満症の女性（Ｒｉｃｈｅｌｓｅｎ，Ｂ．ら，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，２６６：Ｅ２１１（１９９４））、および高齢の男性（Ｒｕｄｍａｎ，Ｄ．ら，Ｈｏｒｍ．Ｒｅｓ．，３６（Ｓｕｐｐｌ．１）：７３（１９９１））のＧＨ療法は、脂肪なし体重、肝および筋肉質量を増加させ、一方では脂肪質量を減少させることが示された。したがって、ＧＨの糖尿病誘発作用以外では、肥満症のＧＨ療法は魅力的に思われる。
外来性ＧＨ投与に代わる方法は、内因性ＧＨ分泌を刺激する療法である。下垂体無傷のＧＨ欠乏症患者および高齢者に下垂体の実質的なＧＨ後退がみられ、したがって血清ＧＨ濃度低下は分泌低下によるものであることが示された。
幾つかの臨床状態（肥満症、老化、グルココルチコイド抑制）でのＧＨ分泌低下は、ＧＨＲＨによる刺激に対し比較的抵抗性である（Ｇｅｒｔｚ，Ｂ．Ｊ．ら，Ｊ．Ｃｌｉ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．，７９：７４５（１９９４）；Ａｒｖａｔら，Ｊ．Ｃｌｉ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．，７９：１４４０（１９９４）；Ｍａｃｃａｒｉｏ，Ｍ．ら，Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，４４：１３４（１９９５））。これに対し、これらの患者にＧＨＲＰを投与するか、またはＧＨＲＨとＧＨＲＰを併用投与すると、活発なＧＨ応答を誘発することができる（Ａｌｏｉ，Ｊ．Ａ．ら，Ｊ．Ｃｌｉ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．，７９：９４３（１９９４））。ＧＨＲＰの１回投与試験で、循環インスリンまたはグルコース濃度に対する短期効果はないことが証明された。インスリンおよびグルコースは一般に、好ましくない変化がなかったという記載（Ｊａｃｋｓ，Ｔ．ら，Ｊ．Ｃｌｉ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．，１４３：３９９（１９９３））以外は、長期試験で監視されたことがない。
本発明以前には、血糖制御を改善するためにＧＨＲＰまたはＧＨＲＰ模倣薬を用いることは特に探索されてはいない。哺乳動物において式Ｉの化合物を投与することを含むインスリン耐性の治療方法は、ＧＨＲＰに対しＧＨ分泌応答しうる機能性視床下部−下垂体軸をもつ患者、および糖尿病（Ｉ型またはＩＩ型）患者、またはインスリン耐性患者、またはグルコース耐性障害を示す患者で優先的に実施される。
他の態様において本発明は、うっ血性心不全、肥満症、および老化に伴う体力低下（ｆｒａｉｌｔｙ）を処置する必要のある哺乳動物においてそれを処置する方法であって、その哺乳動物に、機能性ソマトスタチンアンタゴニスト、たとえばα−２アドレナリン作動性アゴニスト（たとえばクロニジン（ｃｌｏｎｉｄｉｎｅ）、キシラジン（ｘｙｌａｚｉｎｅ）またはメデトミジン（ｍｅｄｅｔｏｍｉｄｉｎｅ））、および後記に定義する式Ｉの化合物を、同時に、任意の順序で連続して、または組み合わせて投与することを含む方法に関する。他の態様において本発明は、骨折修復および創傷治癒を促進し、大手術後のタンパク質異化応答を減衰させ、ならびに慢性疾患による悪液質およびタンパク質損失を減少させる必要のある哺乳動物においてその処置を行う方法であって、その哺乳動物に、α−２アドレナリン作動性アゴニスト、たとえばクロニジン、キシラジンまたはメデトミジン、および後記に定義する式Ｉの化合物を、同時に、任意の順序で連続して、または組み合わせて投与することを含む方法に関する。クロニジンは米国特許第３，２０２，６６０号（開示内容を本明細書に援用する）に開示され、キシラジンは米国特許第３，２３５，５５０号（開示内容を本明細書に援用する）に開示され、メデトミジンは米国特許第４，５４４，６４４号（開示内容を本明細書に援用する）に開示されている。α−２アドレナリン作動性アゴニストは、ヒトおよびイヌ被験体において内因性成長ホルモンを放出させることが示された（Ｃｅｌｌａ，ら，Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９８４），３４：４４７−４５４；Ｈａｍｐｓｈｉｒｅ，Ｊ．，Ａｌｔｓｚｕｌｅｒ，Ｎ．，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（１９８１）４２：６，１０７３−１０７６；Ｖａｌｃａｖｉら，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ（１９８８），２９：３０９−３１６；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（１９９０），５１：１，６５−７０）。またα−２アドレナリン作動性アゴニストと成長ホルモン放出因子の同時投与は、老齢のイヌで成長ホルモン分泌欠損を回復させることが示された（Ａｒｃｅら，Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（１９９０）５３７：３５９−３６２；Ｃｅｌｌａら，Ｎｅｕｒｏｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ（１９９３），５７：４３２−４３８）。
さらに他の態様において本発明は、後記の方法で式Ｚの化合物を合成する方法を提供する。
Figure 0003742643
さらに本発明は、後記に示すように、式Ｚの化合物の合成に有用な特定の中間体の製造方法に関する。
本発明に用いる式Ｉの化合物および式Ｚの化合物は、出願中の国際特許出願第ＩＢ ９６／０１３５３号（１９９６年１２月４日出願、本出願の譲受人に譲渡）に開示および権利請求されている。その出願に、これらの化合物は成長ホルモン分泌促進薬としての活性をもち、内因性成長ホルモン濃度を高めることが開示されている。
発明の概要
本発明方法に用いる化合物は、式Ｉの構造：
Figure 0003742643
をもち、またはその立体異性体混合物であるか、ジアステレオマーに富む、ジアステレオマーとして純粋な、鏡像異性体に富む、もしくは鏡像異性体として純粋な異性体であるか、あるいはその医薬的に許容しうる塩類およびプロドラッグである。
式中、
ｅは０または１であり；
ｎおよびｗは、それぞれ独立して０、１または２であり；
ただしｗとｎが両方とも同時に０であることはできず；
Ｙは酸素または硫黄であり；
Ｒ１は、水素、
Figure 0003742643
−（Ｃ１〜Ｃ１０）アルキル、−（ＣＨ２）ｔ−Ａ１、−（ＣＨ２）ｑ−（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキル、−（ＣＨ２）ｑ−Ｙ１−（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−（ＣＨ２）ｑ−Ｙ１−（ＣＨ２）ｔ−Ａ１、または−（ＣＨ２）ｑ−Ｙ１−（ＣＨ２）ｔ−（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキルであり；
Ｒ１の定義においてアルキル基およびシクロアルキル基は、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、ヒドロキシル、（Ｃ１〜Ｃ４）アルコキシ、カルボキシル、−ＣＯＮＨ２、−Ｓ（Ｏ）ｍ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−ＣＯ２（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルエステル、１Ｈ−テトラゾール−５−イル、または１、２もしくは３個のフルオロで置換されていてもよく；
Ｙ１は、Ｏ、Ｓ（Ｏ）ｍ、−Ｃ（Ｏ）ＮＸ６−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ≡Ｃ−、−Ｎ（Ｘ６）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＸ６−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｘ６）−、または−ＯＣ（Ｏ）−であり；
ｑは０、１、２、３または４であり；
ｔは０、１、２または３であり；
（ＣＨ２）ｑ基および（ＣＨ２）ｔ基はそれぞれ、ヒドロキシル、（Ｃ１〜Ｃ４）アルコキシ、カルボキシル、−ＣＯＮＨ２、−Ｓ（Ｏ）ｍ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−ＣＯ２（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルエステル、１Ｈ−テトラゾール−５−イル、１、２もしくは３個のフルオロ、または１もしくは２個の（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルで置換されていてもよく；
Ｒ２は、水素、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、−（Ｃ０〜Ｃ３）アルキル−（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル、−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル−Ａ１、またはＡ１であり；
Ｒ２の定義においてアルキル基およびシクロアルキル基は、ヒドロキシル、−Ｃ（Ｏ）ＯＸ６、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｘ６）（Ｘ６）、−Ｎ（Ｘ６）（Ｘ６）、−Ｓ（Ｏ）ｍ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ａ１、−Ｃ（Ｏ）（Ｘ６）、−ＣＦ３、ＣＮ、または１、２もしくは３個のハロゲンで置換されていてもよく；
Ｒ３は、Ａ１、（Ｃ１〜Ｃ１０）アルキル、−（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル−Ａ１、−（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル−（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキル、−（Ｃ１〜Ｃ５）アルキル−Ｘ１−（Ｃ１〜Ｃ５）アルキル、−（Ｃ１〜Ｃ５）アルキル−Ｘ１−（Ｃ０〜Ｃ５）アルキル−Ａ１、または−（Ｃ１〜Ｃ５）アルキル−Ｘ１−（Ｃ１〜Ｃ５）アルキル−（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキルであり；
Ｒ３の定義においてアルキル基は、−Ｓ（Ｏ）ｍ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＯＸ３、１、２、３、４もしくは５個のハロゲン、または１、２もしくは３個のＯＸ３で置換されていてもよく；
Ｘ１は、Ｏ、Ｓ（Ｏ）ｍ、−Ｎ（Ｘ２）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｘ２）−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＣＸ２＝ＣＸ２−、−Ｎ（Ｘ２）Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｘ２）−または−Ｃ≡Ｃ−であり；
Ｒ４は、水素、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルもしくは（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキルであるか、またはＲ４は、Ｒ３およびそれらが結合している炭素原子と一緒になって、（Ｃ５〜Ｃ７）シクロアルキル、（Ｃ５〜Ｃ７）シクロアルケニル、酸素、硫黄および窒素よりなる群から独立して選択される１〜４個の異種原子を有する部分飽和もしくは完全飽和の４〜８員環を形成し、または窒素、硫黄および酸素よりなる群から独立して選択される１〜４個の異種原子を有してもよい部分飽和、完全不飽和もしくは完全飽和の５もしくは６員環に縮合した、部分飽和もしくは完全飽和の５もしくは６員環からなる二環式環系であり；
Ｘ４は、水素もしくは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであるか、またはＸ４は、Ｒ４、およびＸ４が結合している窒素原子、およびＲ４が結合している炭素原子と一緒になって５〜７員環を形成し；
Ｒ６は、結合または
Figure 0003742643
であり；
ａおよびｂは独立して０、１、２または３であり；
Ｘ５およびＸ５ａはそれぞれ独立して、水素、トリフルオロメチル、Ａ１および置換されていてもよい（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルよりなる群から選択され；
Ｘ５およびＸ５ａの定義において、置換されていてもよい（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルは、Ａ１、ＯＸ２、−Ｓ（Ｏ）ｍ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＯＸ２、（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキル、−Ｎ（Ｘ２）（Ｘ２）および−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｘ２）（Ｘ２）よりなる群から選択される置換基で置換されていてもよく；
あるいはＸ５またはＸ５ａを保有する炭素は、Ｒ７およびＲ８を保有する窒素原子を含む１または２個のアルキレン橋を形成し、その際、各アルキレン橋は１〜５個の炭素原子を含み、ただし１個のアルキレン橋を形成する場合は、Ｘ５またはＸ５ａ（両方ではない）は炭素原子上にあってもよく、かつＲ７またはＲ８（両方ではない）は窒素原子上にあってもよく、さらに、２個のアルキレン橋を形成する場合は、Ｘ５およびＸ５ａはこの炭素原子上にあることはできず、かつＲ７およびＲ８はこの窒素原子上にあることはできず；
あるいはＸ５は、Ｘ５ａおよびそれらが結合している炭素原子と一緒になって部分飽和もしくは完全飽和３〜７員環、または酸素、硫黄および窒素よりなる群から独立して選択される１〜４個の異種原子を有する部分飽和もしくは完全飽和の４〜８員環を形成し；
あるいはＸ５は、Ｘ５ａおよびそれらが結合している炭素原子と一緒になって、窒素、硫黄および酸素よりなる群から独立して選択される１〜４個の異種原子を有してもよい部分飽和、完全飽和または完全不飽和の５または６員環に縮合した、窒素、硫黄および酸素よりなる群から独立して選択される１または２個の異種原子を有してもよい部分飽和または完全飽和の５または６員環からなる二環式環系を形成し；
Ｚ１は、結合、ＯまたはＮ−Ｘ２であり、ただしａおよびｂが両方とも０である場合、Ｚ１はＮ−Ｘ２またはＯではなく；
Ｒ７およびＲ８は独立して、水素、または置換されていてもよい（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり；
Ｒ７およびＲ８の定義において、置換されていてもよい（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルは独立して、Ａ１、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−Ｓ（Ｏ）ｍ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、１〜５個のハロゲン、１〜３個のヒドロキシ、１〜３個の−Ｏ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１〜Ｃ１０）アルキル、または１〜３個の（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシで置換されていてもよく；あるいは
Ｒ７とＲ８は一緒になって−（ＣＨ２）ｒ−Ｌ−（ＣＨ２）ｒ−を形成することができ；
Ｌは−Ｃ（Ｘ２）（Ｘ２）、Ｓ（Ｏ）ｍまたは−Ｎ（Ｘ２）であり；
Ａ１は、それぞれの場合独立して、（Ｃ５〜Ｃ７）シクロアルケニル、フェニルであるか、または酸素、硫黄および窒素よりなる群から独立して選択される１〜４個の異種原子を有してもよい部分飽和、完全飽和もしくは完全不飽和の４〜８員環であるか、窒素、硫黄および酸素よりなる群から独立して選択される１〜４個の異種原子を有してもよい部分飽和、完全飽和もしくは完全不飽和の５もしくは６員環に縮合した、窒素、硫黄および酸素よりなる群から独立して選択される１〜４個の異種原子を有してもよい部分飽和、完全不飽和もしくは完全飽和の５もしくは６員環からなる二環式環系であり；
Ａ１は（Ａ１が二環式環系である場合は、一方の環において、または両方の環においてであってもよい）、それぞれの場合独立して、最高３個の置換基で置換されていてもよく、各置換基は独立してＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＣＦ３、ＯＣＦ２Ｈ、ＣＦ３、ＣＨ３、ＯＣＨ３、−ＯＸ６、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｘ６）（Ｘ６）、−Ｃ（Ｏ）ＯＸ６、オキソ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、ニトロ、シアノ、ベンジル、−Ｓ（Ｏ）ｍ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、１Ｈ−テトラゾール−５−イル、フェニル、フェノキシ、フェニルアルキルオキシ、ハロフェニル、メチレンジオキシ、−Ｎ（Ｘ６）（Ｘ６）、−Ｎ（Ｘ６）Ｃ（Ｏ）（Ｘ６）、−ＳＯ２Ｎ（Ｘ６）（Ｘ６）、−Ｎ（Ｘ６）ＳＯ２−フェニル、−Ｎ（Ｘ６）ＳＯ２Ｘ６、−ＣＯＮＸ１１Ｘ１２、−ＳＯ２ＮＸ１１Ｘ１２、−ＮＸ６ＳＯ２Ｘ１２、−ＮＸ６ＣＯＮＸ１１Ｘ１２、−ＮＸ６ＳＯ２ＮＸ１１Ｘ１２、−ＮＸ６Ｃ（Ｏ）Ｘ１２、イミダゾリル、チアゾリルおよびテトラゾリルよりなる群から選択され、ただしＡ１がメチレンジオキシで置換されていてもよい場合、それは１個のメチレンジオキシで置換されているだけであってもよく；
Ｘ１１は、水素または置換されていてもよい（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり；
Ｘ１１につき定義したこの置換されていてもよい（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルは独立して、フェニル、フェノキシ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシカルボニル、−Ｓ（Ｏ）ｍ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、１〜５個のハロゲン、１〜３個のヒドロキシ、１〜３個の（Ｃ１〜Ｃ１０）アルカノイルオキシ、または１〜３個の（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシで置換されていてもよく；
Ｘ１２は、水素、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、フェニル、チアゾリル、イミダゾリル、フリルまたはチエニルであり、ただしＸ１２が水素でない場合、Ｘ１２はＣｌ、Ｆ、ＣＨ３、ＯＣＨ３、ＯＣＦ３およびＣＦ３よりなる群から独立して選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく；
あるいはＸ１１とＸ１２は一緒になって−（ＣＨ２）ｒ−Ｌ１−（ＣＨ２）ｒ−を形成し；
Ｌ１は−Ｃ（Ｘ２）（Ｘ２）、Ｏ、Ｓ（Ｏ）ｍまたは−Ｎ（Ｘ２）であり；
ｒはそれぞれの場合独立して１、２または３であり；
Ｘ２はそれぞれの場合独立して、水素、置換されていてもよい（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、または置換されていてもよい（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキルであり、Ｘ２の定義において、置換されていてもよい（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、および置換されていてもよい（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキルは、独立して−Ｓ（Ｏ）ｍ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＯＸ３、１〜５個のハロゲン、または１〜３個のＯＸ３で置換されていてもよく；
Ｘ３はそれぞれの場合独立して、水素または（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり；
Ｘ６は独立して、水素、置換されていてもよい（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）ハロゲン化アルキル、置換されていてもよい（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキル、（Ｃ３〜Ｃ７）ハロゲン化シクロアルキルであり、Ｘ６の定義において、置換されていてもよい（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、および置換されていてもよい（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキルは独立して、１もしくは２個の（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、ヒドロキシル、（Ｃ１〜Ｃ４）アルコキシ、カルボキシル、ＣＯＮＨ２、−Ｓ（Ｏ）ｍ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、カルボキシラート（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルエステル、または１Ｈ−テトラゾール−５−イルで置換されていてもよく；あるいは
１個の原子上に２個のＸ６基があり、かつ両Ｘ６基が独立して（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルである場合、これら２個の（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルは連結し、かつこれら２個のＸ６基が結合している原子と一緒に、酸素、硫黄またはＮＸ７を有してもよい４〜９員環を形成してもよく；
Ｘ７は、水素、またはヒドロキシルで置換されていてもよい（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり；
ｍはそれぞれの場合独立して０、１または２であり；
ただし：
Ｘ６およびＸ１２は、Ｃ（Ｏ）Ｘ６、Ｃ（Ｏ）Ｘ１２、ＳＯ２Ｘ６またはＳＯ２Ｘ１２の形でＣ（Ｏ）またはＳＯ２に結合している場合、水素ではあり得ず；
Ｒ６が結合である場合、定義−（ＣＨ２）ｒ−Ｌ−（ＣＨ２）ｒ−においてＬはＮ（Ｘ２）であり、各ｒは独立して２または３である。
１態様において本発明は、哺乳動物においてインスリン耐性を処置する方法であって、哺乳動物に前記に定義した有効量の式Ｉの化合物、またはその立体異性体混合物、ジアステレオマーに富む、ジアステレオマーとして純粋な、鏡像異性体に富む、もしくは鏡像異性体として純粋な異性体、あるいはその医薬的に許容しうる塩類およびプロドラッグを投与することを含む方法を提供する。
上記方法においてもう一つの好ましい方法は、インスリン耐性を伴う状態がＩ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、高血糖症、グルコース耐性障害またはインスリン耐性症候群もしくは状態である方法である。
上記方法において好ましい方法は、インスリン耐性を伴う状態が肥満症または高齢である方法である。
上記方法において好ましい方法は、式Ｉの化合物が次式のもの：
Figure 0003742643
またはその立体異性体混合物、ジアステレオマーに富む、ジアステレオマーとして純粋な、鏡像異性体に富む、もしくは鏡像異性体として純粋な異性体、あるいはその医薬的に許容しうる塩類およびプロドラッグである方法であり、式中
Ｒ１は−ＣＨ２−フェニル、Ｒ２はメチル、かつＲ３は−（ＣＨ２）３−フェニルである；
Ｒ１は−ＣＨ２−フェニル、Ｒ２はメチル、かつＲ３は３−インドリル−ＣＨ２−である；
Ｒ１は−ＣＨ２−フェニル、Ｒ２はエチル、かつＲ３は３−インドリル−ＣＨ２−である；
Ｒ１は−ＣＨ２−４−フルオロ−フェニル、Ｒ２はメチル、かつＲ３は３−インドリル−ＣＨ２−である；
Ｒ１は−ＣＨ２−フェニル、Ｒ２はメチル、かつＲ３は−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−フェニルである；
Ｒ１は−ＣＨ２−フェニル、Ｒ２はエチル、かつＲ３は−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−フェニルである；
Ｒ１は−ＣＨ２−フェニル、Ｒ２は−ＣＨ２ＣＦ３、かつＲ３は−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−フェニルである；
Ｒ１は−ＣＨ２−４−フルオロ−フェニル、Ｒ２はメチル、かつＲ３は−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−フェニルである；
Ｒ１は−ＣＨ２−フェニル、Ｒ２はｔ−ブチル、かつＲ３は−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−フェニルである；または
Ｒ１は−ＣＨ２−フェニル、Ｒ２はメチル、かつＲ３は−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−３，４−ジ−フルオロ−フェニルである。
上記方法において他の好ましい方法は、式Ｉの化合物が次式のもの：
Figure 0003742643
またはその立体異性体混合物、ジアステレオマーに富む、ジアステレオマーとして純粋な、鏡像異性体に富む、もしくは鏡像異性体として純粋な異性体、あるいはその医薬的に許容しうる塩類およびプロドラッグである方法であり、式中
Ｒ２はメチル；Ａ１は２−ピリジル；かつＲ３は−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−フェニルである；
Ｒ２はＣＨ２ＣＦ３；Ａ１は２−ピリジル；かつＲ３は−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−３−クロロ−フェニルである；
Ｒ２はＣＨ２ＣＦ３；Ａ１は２−ピリジル；かつＲ３は−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−４−クロロ−フェニルである；
Ｒ２はＣＨ２ＣＦ３；Ａ１は２−ピリジル；かつＲ３は−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−２，４−ジ−クロロ−フェニルである；
Ｒ２はＣＨ２ＣＦ３；Ａ１は２−ピリジル；かつＲ３は−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−３−クロロ−チオフェンである；または
Ｒ２はＣＨ２ＣＦ３；Ａ１は２−ピリジル；かつＲ３は−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−２，４−ジ−フルオロ−フェニルである。
上記方法のうちさらに他の好ましい方法は、式Ｉの化合物、またはその立体異性体混合物、ジアステレオマーに富む、ジアステレオマーとして純粋な、鏡像異性体に富む、もしくは鏡像異性体として純粋な異性体、あるいはその医薬的に許容しうる塩類およびプロドラッグが下記よりなる群から選択される化合物の３ａ（Ｒ，Ｓ），１（Ｒ）ジアステレオマー混合物、３ａ（Ｒ），１（Ｒ）ジアステレオマー、または３ａ（Ｓ），１（Ｒ）ジアステレオマーである方法である：
２−アミノ−Ｎ−［１−（３ａ−ベンジル−２−メチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−カルボニル）−４−フェニル−ブチル］−イソブチルアミド、
２−アミノ−Ｎ−［２−（３ａ−ベンジル−２−メチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−２−オキソ−エチル］−イソブチルアミド、
２−アミノ−Ｎ−［２−（３ａ−ベンジル−２−エチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−２−オキソ−エチル］−イソブチルアミド、
２−アミノ−Ｎ−［２−（３ａ−（４−フルオロ−ベンジル）−２−メチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−２−オキソ−エチル］−イソブチルアミド、
２−アミノ−Ｎ−［２−（３ａ−ベンジル−２−メチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１−ベンジルオキシメチル−２−オキソ−エチル］−イソブチルアミド、
２−アミノ−Ｎ−［２−（３ａ−ベンジル−２−エチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１−ベンジルオキシメチル−２−オキソ−エチル］−イソブチルアミド、
２−アミノ−Ｎ−｛２−［３ａ−ベンジル−３−オキソ−２−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル］−１−ベンジルオキシメチル−２−オキソ−エチル｝−イソブチルアミド、
２−アミノ−Ｎ−｛１−ベンジルオキシメチル−２−［３ａ−（４−フルオロ−ベンジル）−２−メチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル］−２−オキソ−エチル｝−イソブチルアミド、
２−アミノ−Ｎ−［２−（３ａ−ベンジル−２−ｔ−ブチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１−ベンジルオキシメチル−２−オキソ−エチル］−イソブチルアミド、および
２−アミノ−Ｎ−［２−（３ａ−ベンジル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１−ベンジルオキシメチル−２−オキソ−エチル］−イソブチルアミド。
この方法において好ましい方法は、式Ｉの化合物が２−アミノ−Ｎ−［２−（３ａ−（Ｒ）−ベンジル−２−メチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−オキソ−エチル］−イソブチルアミドＬ−酒石酸塩である方法である。
上記方法のうちさらに他の好ましい方法は、式Ｉの化合物、またはその立体異性体混合物、ジアステレオマーに富む、ジアステレオマーとして純粋な、鏡像異性体に富む、もしくは鏡像異性体として純粋な異性体、あるいはその医薬的に許容しうる塩類およびプロドラッグが下記よりなる群から選択される化合物の３ａ（Ｒ，Ｓ），１（Ｒ）ジアステレオマー混合物、３ａ（Ｒ），１（Ｒ）鏡像異性体、または３ａ（Ｓ），１（Ｒ）鏡像異性体である方法である：
２−アミノ−Ｎ−［１−ベンジルオキシメチル−２−（２−メチル−３−オキソ−３ａ−ピリジン−２−イルメチル−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−２−オキソ−エチル］−２−メチル−プロピオンアミド；
２−アミノ−Ｎ−｛１−（３−クロロ−ベンジルオキシメチル）−２−オキソ−２−［３−オキソ−３ａ−ピリジン−２−イルメチル−２−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−エチル｝−２−メチル−プロピオンアミド；
２−アミノ−Ｎ−｛１−（４−クロロ−ベンジルオキシメチル）−２−オキソ−２−［３−オキソ−３ａ−ピリジン−２−イルメチル−２−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−エチル｝−２−メチル−プロピオンアミド；
２−アミノ−Ｎ−｛１−（２，４−ジクロロ−ベンジルオキシメチル）−２−オキソ−２−［３−オキソ−３ａ−ピリジン−２−イルメチル−２−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−エチル｝−２−メチル−プロピオンアミド；
２−アミノ−Ｎ−｛１−（４−クロロ−チオフェン−２−イルメトキシメチル）−２−オキソ−２−［３−オキソ−３ａ−ピリジン−２−イルメチル−２−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン−６−イル）−エチル｝−２−メチル−プロピオンアミド；および
２−アミノ−Ｎ−｛１−（２，４−ジフルオロ−ベンジルオキシメチル）−２−オキソ−２−［３−オキソ−３ａ−ピリジン−２−イルメチル−２−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−エチル｝−２−メチル−プロピオンアミド。
上記方法のうちさらに他の好ましい方法は、処置を必要とする哺乳動物に、当技術分野で既知の方法により製造された成長ホルモン放出ホルモンまたはその機能性類似体をさらに投与することを含む前記方法であり、その若干例が欧州特許出願公開第５１１ ００３号に記載されている。
他の態様において本発明は、医薬的に許容しうるキャリヤー、ならびに有効量の前記式Ｉの化合物、またはその立体異性体混合物、ジアステレオマーに富む、ジアステレオマーとして純粋な、鏡像異性体に富む、もしくは鏡像異性体として純粋な異性体、あるいはその医薬的に許容しうる塩類およびプロドラッグを含む、哺乳動物においてインスリン耐性を処置するのに有用な医薬組成物を提供する。
さらに他の態様において本発明は、内因性成長ホルモン濃度を高める方法であって、それを必要とするヒトまたは他の動物に、有効量の機能性ソマトスタチンアンタゴニスト、ならびに前記式Ｉの化合物、またはその立体異性体混合物、ジアステレオマーに富む、ジアステレオマーとして純粋な、鏡像異性体に富む、もしくは鏡像異性体として純粋な異性体、あるいはその医薬的に許容しうる塩類およびプロドラッグを投与することを含む方法を提供する。
さらに他の態様において本発明は、うっ血性心不全、肥満症または老化に伴う体力低下を治療または予防する方法であって、それを必要とするヒトまたは他の動物に、有効量の機能性ソマトスタチンアンタゴニスト、ならびに前記式Ｉの化合物、またはその立体異性体混合物、ジアステレオマーに富む、ジアステレオマーとして純粋な、鏡像異性体に富む、もしくは鏡像異性体として純粋な異性体、あるいはその医薬的に許容しうる塩類およびプロドラッグを投与することを含む方法を提供する。この方法において好ましいものは、ソマトスタチンアンタゴニストがα−２アドレナリン作動性アゴニストである方法である。この方法において好ましいものは、α−２アドレナリン作動性アゴニストがクロニジン、キシラジンおよびメデトミジンよりなる群から選択される方法である。この方法において好ましいものは、式Ｉの化合物が２−アミノ−Ｎ−［２−（３ａ−（Ｒ）−ベンジル−２−メチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−オキソ−エチル］−イソブチルアミドＬ−酒石酸塩である方法である。
本発明は、医薬的に許容しうるキャリヤー、ならびにある量のα−２アドレナリン作動性アゴニストおよびある量の前記式Ｉの化合物、またはその立体異性体混合物、ジアステレオマーに富む、ジアステレオマーとして純粋な、鏡像異性体に富む、もしくは鏡像異性体として純粋な異性体、あるいはその医薬的に許容しうる塩類およびプロドラッグを含む、医薬組成物を提供する。
本発明はさらに、インスリン耐性を処置する方法であって、それを必要とする哺乳動物に、有効量の成長ホルモン放出ペプチドもしくは成長ホルモン放出ペプチド模倣薬またはその医薬的に許容しうる塩を投与することを含む方法に関する。
１態様において本発明は、下記の方法に関する。以下において“＊”は立体化学中心を示す。
式ｋの化合物：
Figure 0003742643
の製造方法であって、式ｇの化合物：
Figure 0003742643
と式ｊの化合物：
Figure 0003742643
（式中、Ｐｒｔはアミン保護基である）を、有機塩基、ペプチド結合剤、および反応不活性溶媒の存在下に約−７８〜約−２０℃の温度で反応させて、式ｋの化合物を得ることを含む方法。
上記方法のうち好ましいものは、ペプチド結合剤が１−プロパンホスホン酸環状無水物であり、式ｇの化合物がＲ−立体配置をもち、式ｊの化合物がＲ−立体配置をもち、式ｋの化合物が３ａ−（Ｒ），１−（Ｒ）立体配置をもつ方法である。
式Ｚの化合物：
Figure 0003742643
の製造方法であって、式ｇの化合物：
Figure 0003742643
と式ｊの化合物：
Figure 0003742643
を、有機塩基、ペプチド結合剤、および反応不活性溶媒の存在下に約−７８〜約−２０℃の温度で反応させて、式ｋの化合物：
Figure 0003742643
となし、式ｋの化合物を脱保護して式ｌの化合物：
Figure 0003742643
となし、式ｌの化合物とＬ−酒石酸をアルコール性溶媒中で反応させて、式Ｚの化合物を得ることを含む方法。
上記方法のうち好ましいものは、ペプチド結合剤が１−プロパンホスホン酸環状無水物であり、式ｇの化合物がＲ−立体配置をもち、式ｊの化合物がＲ−立体配置をもち、式ｋ、ｌおよびＺの化合物がそれぞれ３ａ−（Ｒ），１−（Ｒ）立体配置をもつ方法である。
式ｇの化合物：
Figure 0003742643
の製造方法であって、式ｆの化合物：
Figure 0003742643
と塩基を、ベンジル基のキラリティーを維持した状態で、不活性溶媒中、約−５０〜約−１０℃の温度で反応させて、式ｇの化合物を得ることを含む方法。
式ｃの化合物：
Figure 0003742643
の製造方法であって、式ｂの化合物：
Figure 0003742643
（式中、Ｐｒｔはアミン保護基である）と、無機または有機塩基、および臭化ベンジルを、反応不活性溶媒中で反応させて、式ｃの化合物を得ることを含む方法。
式ｆの化合物：
Figure 0003742643
の製造方法であって、式ｅの化合物：
Figure 0003742643
とＬ−酒石酸を、反応不活性溶媒中で反応させることを含む方法。
本発明は、次式の化合物：
Figure 0003742643
（式中、Ｐｒｔは水素またはアミン保護基である）のＲ，Ｓ−鏡像異性体混合物、Ｒ−鏡像異性体またはＳ−鏡像異性体をも提供する。
発明の詳細な説明
一般に、本発明方法に用いる式Ｉの化合物、またはその立体異性体混合物、ジアステレオマーに富む、ジアステレオマーとして純粋な、鏡像異性体に富む、もしくは鏡像異性体として純粋な異性体、あるいはその医薬的に許容しうる塩類およびプロドラッグは、化学技術分野で既知の方法を含めた方法で製造できる。
上記構造式および本明細書全体を通して、別途明記しない限り以下の用語は下記の意味をもつ。
アルキル基は、表示した長さの直鎖または分枝鎖構造をもつアルキル基であって、二重結合または三重結合を含んでいてもよいものとする。そのようなアルキル基の例は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ヘキシル、イソヘキシル、アリル、エチニル、プロペニル、ブタジエニル、ヘキセニルなどである。
定義中にＣ０−アルキルがある場合、それは共有単結合を意味する。
前記のアルコキシ基は、表示した長さの直鎖または分枝鎖構造をもつアルコキシ基であって、二重結合または三重結合を含んでいてもよいものとする。そのようなアルコキシ基の例は、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、イソブトキシ、ｔ−ブトキシ、ペントキシ、イソペントキシ、ヘキソキシ、イソヘキソキシ、アリルオキシ、２−プロピニルオキシ、イソブテニルオキシ、ヘキセニルオキシなどである。
“ハロゲン”または“ハロ”という用語は、ハロゲン原子であるフッ素、塩素、臭素およびヨウ素を含むものとする。
“ハロゲン化アルキル”という用語は、１個またはそれ以上の上記ハロゲン原子で置換された、前記アルキル基を含むものとする。
“ハロゲン化シクロアルキル”という用語は、１個またはそれ以上の上記ハロゲン原子で置換されたシクロアルキル基を含むものとする。
“アリール”という用語は、フェニルおよびナフチル、ならびに１〜４個の異種原子（窒素、硫黄または酸素）を含む芳香族５および６員環、または１〜４個の異種原子を含む５または６員の縮合二環式環を含むものとする。そのような複素環式芳香環の例は、ピリジン、チオフェン（チエニルとしても知られる）、フラン、ベンゾチオフェン、テトラゾール、インドール、Ｎ−メチルインドール、ジヒドロインドール、インダゾール、Ｎ−ホルミルインダゾール、ベンゾイミダゾール、チアゾール、ピリミジンおよびチアジアゾールである。
本明細書に挙げる異種原子含有置換基の特定の組合わせが、生理学的条件下で、より安定性の低い化合物を生じること（たとえばアセタール結合またはアミナール結合を含むもの）は、当業者に認識されるであろう。したがって、このような化合物はあまり好ましくはない。
“プロドラッグ”という表現は、薬物の前駆物質であって、投与後にインビボで何らかの化学的または生理学的プロセスを経てその薬物を放出する化合物を表す（たとえば、プロドラッグは生理的ｐＨになると目的の薬物形態に変化する）。開裂すると対応する遊離酸を放出するプロドラッグ、および本発明化合物の加水分解性エステル形成残基の例には以下のものが含まれるが、これらに限定されない：カルボン酸置換基（たとえばＲ１が−（ＣＨ２）ｑＣ（Ｏ）２Ｘ６であるか｛Ｘ６は水素｝、またはＲ２もしくはＡ１がカルボン酸を含む）において遊離水素が（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルで置換されたもの、（Ｃ２〜Ｃ１２）アルカノイルオキシメチル、（Ｃ４〜Ｃ９）１−（アルカノイルオキシ）エチル、５〜１０個の炭素原子をもつ１−メチル−１−（アルカノイルオキシ）エチル、３〜６個の炭素原子をもつアルコキシカルボニル−オキシメチル、４〜７個の炭素原子をもつ１−（アルコキシカルボニルオキシ）エチル、５〜８個の炭素原子をもつ１−メチル−１−（アルコキシカルボニルオキシ）エチル、３〜９個の炭素原子をもつＮ−（アルコキシカルボニル）アミノメチル、４〜１０個の炭素原子をもつ１−（Ｎ−（アルコキシカルボニル）アミノ）エチル、３−フタリジル、４−クロトノラクトニル、γ−ブチロラクトン−４−イル、ジ−Ｎ，Ｎ−（Ｃ１〜Ｃ２）アルキルアミノ（Ｃ２〜Ｃ３）アルキル（たとえばβ−ジメチルアミノエチル）、カルバモイル−（Ｃ１〜Ｃ２）アルキル、Ｎ，Ｎ−ジ（Ｃ１〜Ｃ２）アルキルカルバモイル−（Ｃ１〜Ｃ２）アルキル、およびピペリジノ−、ピロリジノ−またはモルホリノ（Ｃ２〜Ｃ３）アルキル。
他のプロドラッグの例は、式Ｉのアルコール類を放出し、そのヒドロキシル置換基（たとえばＲ１がヒドロキシルを含む）の遊離水素が以下のもので置換されている：（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイルオキシメチル、１−（（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイルオキシ）エチル、１−メチル−１−（（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイルオキシ）エチル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシカルボニルオキシメチル、Ｎ−（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシカルボニルアミノメチル、スクシノイル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイル、α−アミノ（Ｃ１〜Ｃ４）アルカノイル、アリールアセチルおよびα−アミノアシル、またはα−アミノアシル−α−アミノアシル（α−アミノアシル部分は独立して、タンパク質中にみられる任意の天然Ｌ−アミノ酸）、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２、−Ｐ（Ｏ）（Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル）２、またはグリコシル（炭水化物のヘミアセタールのヒドロキシルが離脱することにより生成した基）。
式Ｉの化合物において式Ｉのカルボン酸のカルボキシル基がエステルで交換されたプロドラッグは、このカルボン酸と適切なハロゲン化アルキルを塩基（たとえば炭酸カリウム）の存在下に、不活性溶媒（たとえばＤＭＦ）中、約０〜１００℃の温度で約１〜約２４時間、混和することにより製造できる。あるいは、この酸と溶媒として適切なアルコール類を、触媒量の酸（たとえば濃硫酸）の存在下に、約２０〜１２０℃の温度で（好ましくは還流）約１〜約２４時間、混和する。他の方法は、この酸を不活性溶媒（たとえばＴＨＦ）中で、生成水を物理的手段（たとえばディーン・スタークトラップ）または化学的手段（たとえばモレキュラーシーブ）により同時に除去しながら反応させるものである。
アルコール官能基がエーテルとして誘導体化された式Ｉの化合物のプロドラッグは、このアルコールと適切な臭化またはヨウ化アルキルを塩基（たとえば炭酸カリウム）の存在下に、不活性溶媒（たとえばＤＭＦ）中、約０〜１００℃の温度で約１〜約２４時間、混和することにより製造できる。アルカノイルアミノメチルエーテルは、このアルコールとビス−（アルカノイルアミノ）メタンを触媒量の酸の存在下に、不活性溶媒（たとえばＴＨＦ）中で、米国特許第４，９９７，９８４号に記載の方法で反応させることにより製造できる。あるいは、これらの化合物はＨｏｆｆｍａｎら，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９４，５９，ｐ．２５３０に記載の方法で製造できる。
前記に定義した用語が前記式中に１回より多く現れる場合があり、そのような場合、各用語は互いに独立して定めるべきである。
本明細書および請求の範囲全体を通して、略号は以下の意味で用いられる：
ＢＯＣ ｔ−ブトキシカルボニル
ＢＯＰ ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）
ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート
ＣＢＺ ベンジルオキシカルボニル
ＣＤＩ Ｎ，Ｎ′−カルボニルジイミダゾール
ＣＨ２Ｃｌ２ 塩化メチレン
ＣＨＣｌ３ クロロホルム
ＤＣＣ ジシクロヘキシルカルボジイミド
ＤＭＦ ジメチルホルムアミド
ＥＤＣ １−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイ
ミド塩酸塩
ＥｔＯＡｃ 酢酸エチル
ＦＭＯＣ ９−フルオレニルメトキシカルボニル
ｈ 時間
Ｈｅｘ ヘキサン
ＨＯＡＴ １−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール
ＨＯＢＴ ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物
ＨＰＬＣ 高圧液体クロマトグラフィー
ＭＨｚ メガヘルツ
ＭＳ 質量分析
ＮＭＲ 核磁気共鳴
ＰＨＴ 副甲状腺ホルモン
ＴＦＡ トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ テトラヒドロフラン
ＴＬＣ 薄層クロマトグラフィー
ＴＲＨ 甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン
ＴＲＯＣ ２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル
本発明方法に用いる化合物はすべて、前記式Ｉに星印で示したように、少なくとも１つの不斉中心をもつ。分子上の各種置換基の性質に応じて、不斉中心が分子上にさらに存在する可能性がある。そのような不斉中心は２つの光学異性体を生じ、それらの光学異性体は、分離した、純粋な、もしくは部分精製した異性体、そのラセミ混合物またはジアステレオマー混合物のすべてが本発明の範囲に含まれるものとする。星印で表した不斉中心において、より活性が高く、したがってより好ましいことが認められた異性体の絶対立体化学構造を式ＩＡに示す。この好ましい絶対立体配置は式Ｉにも適用される。
Figure 0003742643
Ｒ４置換基が水素である場合、不斉中心の空間配置はＤ−アミノ酸のものに対応する。大部分の場合、これはＲ−立体配置とも表示される。ただしこれはＲ−またはＳ−立体化学的帰属を行うのに用いたＲ３およびＲ４の基に応じて異なるであろう。
本発明方法に用いる式Ｉの化合物は、一般にそれらの医薬的に許容しうる酸付加塩、たとえば無機酸および有機酸を用いて誘導した塩類の形で単離される。そのような酸の例は、塩酸塩、硝酸塩、硫酸塩、リン酸塩、ギ酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、プロピオン酸塩、マレイン酸塩、コハク酸塩、Ｄ−酒石酸塩、Ｌ−酒石酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩である。さらに、カルボキシなどの酸性官能基を含む特定の化合物は、それらの無機塩の形で単離でき、その際対イオンはナトリウム、カリウム、リチウム、カルシウム、マグネシウムなど、および有機塩基から選択できる。
医薬的に許容しうる塩類は、約１当量の式Ｉの化合物をとり、それを目的塩に対応する約１当量の適切な酸と接触させることにより形成される。得られた塩の仕上げ処理および単離法は当業者に周知である。
本発明の範囲には、有効成分としてインスリン耐性を処置する量の式Ｉの化合物少なくとも１種類を、医薬的に許容しうるキャリヤーと共に含む医薬組成物が含まれる。さらに本発明の範囲には、有効成分としてα−２アドレナリン作動性アゴニスト少なくとも１種類および式Ｉの化合物少なくとも１種類を、医薬的に許容しうるキャリヤーと共に含む医薬組成物が含まれる。医薬組成物は、式Ｉの化合物少なくとも１種類のほかに、同化作用薬、または異なる活性を示す他の化合物（たとえば抗生物質系の成長誘導薬（ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ ｇｒｏｗｔｈ ｐｅｒｍｉｔｔａｎｔ））、またはその組合わせにより有効性が高まり、副作用が少なくなる他の有効薬剤を、さらに含むことができる。
ラット下垂体細胞からのＧＨ放出刺激のアッセイ
培養ラット下垂体細胞からのＧＨ分泌を刺激しうる化合物を、以下のプロトコルにより同定する。この試験法は、投与量を決定するために基準薬と比較するのにも有用である。６週齢の雄ウィスターラットの下垂体から細胞を摘出する。断頭後、下垂体前葉を取り出して、カルシウムまたはマグネシウムを含有しない低温の無菌ハンクス液（ＨＢＳＳ）中へ入れる。組織を細かく刻み、次いで機械的に補助しながらＨＢＳＳ中１０Ｕ／ｍＬの細菌プロテアーゼ（ＥＣ ３．４．２４．４、シグマＰ−６１４１、ミズーリ州セントルイス）を用いる酵素分散を２サイクル行う。この組織−酵素混合物を、撹拌フラスコ内で５％ＣＯ２中、３０ｒｐｍ、約３７℃において約３０分間撹拌し、約１５分後と約３０分後に１０ｍＬのピペットにより手動で摩砕処理する。この混合物を２００×ｇで約５分間遠心分離する。ウマ血清（最終濃度３５％）を上清に添加して、過剰のプロテアーゼを中和する。ペレットを新鮮なプロテアーゼ（１０Ｕ／ｍＬ）に再懸濁し、前記条件下でさらに約３０分間撹拌し、最後に２３ゲージの注射針により手動で摩砕処理する。再びウマ血清（最終濃度３５％）を添加し、次いで両方の消化物からの細胞を合わせてペレット化し（２００×ｇで約１５分）、培地（ダルベッコの修正イーグル培地（Ｄ−ＭＥＭ）；グルコース４．５ｇ／Ｌ、ウマ血清１０％、ウシ胎仔血清２．５％、非必須アミノ酸１％、ナイスタチン１００Ｕ／ｍＬおよび硫酸ゲンタマイシン５０ｍｇ／ｍＬを補充；ギブコ、ニューヨーク州グランドアイランド）に再懸濁し、計数する。細胞を６．０〜６．５×１０４／ｃｍ２で４８ウェルのコスター（Ｃｏｓｔｅｒ、商標、マサチュセッツ州ケンブリッジ）皿に接種し、培地中で３〜４日間培養する。
ＧＨ分泌アッセイ直前に、培養ウェルを放出用培地で２回すすぎ、次いで放出用培地（Ｄ−ＭＥＭを２５ｍＭヘペス（ｐＨ７．４）で緩衝化し、０．５％ウシ血清アルブミンを添加したもの、３７℃）中で３０分間平衡化する。被験化合物をＤＭＳＯに溶解し、予め加温した放出用培地中へ希釈する。アッセイを四重試験法で行う。各培養ウェルに０．５ｍＬの放出用培地（ビヒクルまたは被験化合物を含有）を添加することにより、アッセイを開始する。約３７℃で約１５分間インキュベーションを行い、次いで放出用培地の分離により停止し、これを２０００×ｇで約１５分間遠心分離して細胞性物質を除去する。下記の標準ラジオイムノアッセイプロトコルにより、上清中のラット成長ホルモン濃度を測定する。
ラット成長ホルモンの測定
ラット成長ホルモン基準製剤（ＮＩＤＤＫ−ｒＧＨ−ＲＰ−２）、およびサルにおいて形成させたラット成長ホルモン抗血清（ＮＩＤＤＫ−抗ｒＧＨ−Ｓ−５）（ドクターＡ．Ｐａｒｌｏｗから入手、ハーバー−ＵＣＬＡメディカル・センター、カリフォルニア州トレンス）を用いて、二重抗体ラジオイムノアッセイによりラット成長ホルモン濃度を測定した。他のラット成長ホルモン（１．５Ｕ／ｍｇ、＃Ｇ２４１４、スクリップス・ラボズ、カリフォルニア州サンディエゴ）を、トレーサーとして用いるために、クロラミンＴ法により約３０μＣｉ／μｇの比放射能になるようにヨウ素化する。サルＩｇＧに対するヤギ抗血清（ＩＣＮ／カッペル、オハイオ州オーロラ）およびポリエチレングリコール（分子量１０，０００〜２０，０００）を最終濃度４．３％になるように添加することにより、免疫複合体を得る。遠心分離により回収を行う。このアッセイ法は、試験管当たり基準濃度より０．０８〜２．５μｇ高いラット成長ホルモン作動範囲をもつ。
ラットにおいて被験化合物を静脈内投与した後の外部刺激による成長ホルモン放出のアッセイ
２１日齢の雌スプラーク・ドーレイラット（チャールズ・リバー・ラボラトリー、マサチュセッツ州ウィルミントン）を、化合物試験前に約１週間、局地的なビバリウム条件（２４℃、１２時間明、１２時間暗のサイクル）に順応させる。すべてのラットに水とペレット状の市販飼料（アグウェイ・カントリー・フード、ニューヨーク州シラキュース）を任意に摂取させる。実験は、実験動物の飼育と使用に関するＮＩＨ指針に従って行われる。
実験当日、塩類溶液中にエタノール１％、酢酸１ｍＭおよびウシ血清アルブミン０．１％を含有するビヒクルに被験化合物を溶解する。各試験を３匹のラットにおいて行う。ラットを秤量し、ペントバルビタールナトリウム（ネンブトール（Ｎｅｍｂｕｔｏｌ、登録商標）５０ｍｇ／ｋｇ体重）の腹腔内注射により麻酔する。麻酔薬投与の１４分後、尾の先に傷をつけ、血液をミクロ遠心管に滴下させることにより採血する（ベースライン血液試料、約１００μｌ）。麻酔薬投与の１５分後、尾静脈への静注（全注射容量１ｍＬ／ｋｇ体重）により被験化合物を送達する。化合物投与の５、１０および１５分後、尾からさらに血液試料を採取する。遠心（１４３０×ｇ、１０分間、１０℃）により血清を分離するまで、血液試料を氷上に保存する。前記のラジオイムノアッセイにより血清中の成長ホルモンを測定するまで、血清を−８０℃に保存する。
イヌにおける経口投与後の外部刺激による成長ホルモン放出の評価
投与当日、被験化合物を適量秤量し、水に溶解する。各投与方式につき２〜４匹のイヌに０．５〜３ｍＬ／ｋｇの容量で強制胃管投与する。投与前、ならびに投与後０．１７、０．３３、０．５、０．７５、１、２、４、６、８および２４時間目に、リチウムヘパリンを入れた５ｍＬのバキュテイナー（ｖａｃｕｔａｉｎｅｒ）を用いて、頚静脈から直接静脈穿刺により血液試料（５ｍＬ）を採取する。調製した血漿を分析まで−２０℃に保存する。
イヌ成長ホルモンの測定
イヌ成長ホルモン（ヨウ素化および基準調製のための抗原、ＡＦＰ−１９８３Ｂ）、およびサルにおいて形成させたイヌ成長ホルモン抗血清（ＡＦＰ−２１４５２５７８）（ドクターＡ．Ｐａｒｌｏｗから入手、ハーバー−ＵＣＬＡメディカル・センター、カリフォルニア州トレンス）を用いて、標準ラジオイムノアッセイによりイヌ成長ホルモン濃度を測定する。イヌ成長ホルモンを２０〜４０μＣｉ／μｇの比放射能になるようにクロラミンＴ−ヨウ素化することにより、トレーサーを調製する。サルＩｇＧに対するヤギ抗血清（ＩＣＮ／カッペル、オハイオ州オーロラ）およびポリエチレングリコール（分子量１０，０００〜２０，０００）を最終濃度４．３％になるように添加することにより、免疫複合体を得る。遠心分離により回収を行う。このアッセイ法は、試験管当たりイヌＧＨ０．０８〜２．５μｇの作動範囲をもつ。
イヌにおける長期経口投与後のイヌ成長ホルモンおよびインスリン様成長因子−１濃度の評価
イヌに被験化合物を１日１回、７日間または１４日間投与する。各投与日に被験化合物を適量秤量し、水に溶解する。各投与方式につき５匹のイヌに０．５〜３ｍＬ／ｋｇの容量で強制胃管投与する。投与後０、３、７、１０および１４日目に血液試料を採取する。０、７および１４日目に、投与前、投与後０．１７、０．３３、０．５、０．７５４、１、２、３、６、８、１２および２４時間目に、リチウムヘパリンを入れた５ｍＬのバキュテイナーを用いて、頚静脈から直接静脈穿刺により血液試料（５ｍＬ）を採取する。さらに、３および１０日目の投与前および８時間目に血液を採取する。調製した血漿を分析まで−２０℃に保存する。
雌ラット試験
この試験は、エストロゲン欠乏およびエストロゲン貯蜜あり（ｅｓｔｒｏｇｅｎ ｒｅｐｌｅｔｅ）雌ラットにおいて、ＧＨＲＰ模倣薬による長期処置が体重、身体組成、ならびにグルコース、インスリン、乳酸および脂質の非空腹時血漿濃度に与える影響を評価する。投与最終日に、ＧＨ放出薬の静脈内投与に対する血清ＧＨの短期応答性を評価した。処置期間中、週１回、体重を監視し；さらに処置終了時に、身体組成、ならびにグルコース、インスリン、乳酸、コレステロールおよびトリグリセリドの血漿濃度を評価した。
処女雌スプラーク・ドーレイラットをチャールズ・リバー・ラボラトリー（マサチュセッツ州ウィルミントン）から入手し、約１２週齢時に両側卵巣切除（Ｏｖｘ）または見かけの手術（Ｓｈａｍ）を行った。Ｓｈａｍ手術については卵巣を体外に取り出して腹腔に入れ替えた。手術後、ラットを個々にビバリウム条件下で（約２４℃、約１２時間明／１２時間暗サイクル）２０ｃｍ×３２ｃｍ×２０ｃｍのケージに収容した。すべてのラットに水とペレット状の市販飼料（アグウェイ・プロラボ（Ａｇｗａｙ ＰｒｏＬａｂ）３０００、アグウェイ・カントリー・フード、ニューヨーク州シラキュース）を自由に摂取させた。実験は実験動物の飼育と使用に関するＮＩＨ指針に従って行われた。
手術の約７カ月後、ＳｈａｍおよびＯｖｘラットを秤量し、ランダムに各群に帰属させた。ラットに１日１回、１ｍＬのビヒクル（蒸留脱イオン水中１％エタノール）、０．５ｍｇ／ｋｇまたは５ｍｇ／ｋｇの成長ホルモン放出薬を９０日間、経口強制胃管投与した。試験期間中、隔週にラットを秤量した。最終経口投与の２４時間後、下記の方法で被験薬剤に対する血清中成長ホルモン（ＧＨ）の短期応答を評価した。ラットをペントバルビタールナトリウム５０ｍｇ／ｋｇで麻酔した。麻酔したラットを秤量し、尾静脈からベースライン血液試料（約１００μｌ）を採取した。次いで被験薬剤（成長ホルモン放出薬またはビヒクル）を１ｍＬ中で尾静脈から静脈内投与した。注射の約１０分後、２回目の約１００μｌ血液試料を尾から採取した。血液を約４℃で凝固させ、次いで２０００×ｇで約１０分間遠心分離した。血清を約−７０℃で保存した。前記に従ってラジオイムノアッセイにより血清中成長ホルモン濃度を測定した。この処置後、麻酔ラットそれぞれを2エネルギーＸ線吸光光度法（ｄｕａｌ−ｅｎｅｒｇｙ Ｘ−ｒａｙ ａｂｓｏｒｐｔｉｏｍｅｔｒｙ，ＤＥＸＡ、ホロジック（Ｈｏｌｏｇｉｃ）ＱＤＲ １０００／Ｗ、マサチュセッツ州ワルサム）により全身走査した。心臓穿刺により最終血液試料をヘパリン添加試験管中へ採取した。遠心により血漿を分離し、前記に従って凍結保存した。
バイナックス社（メイン州ポートランド）から入手したキットを用いて、ラジオイムノアッセイにより血漿インスリンを測定する。アッセイ間変動係数は≦１０％である。トリグリセリド、全コレステロール、グルコースおよび乳酸の血漿濃度は、アボットＶＰ（Ａｂｂｏｔｔ ＶＰ、商標）およびスーパー・システム（Ｓｕｐｅｒ Ｓｙｓｔｅｍ、登録商標）自動分析計（アボット・ラボラトリーズ、テキサス州イルビング）により、それぞれＡ−Ｇｅｎｔ（商標）トリグリセリド、コレステロールおよびグルコース試験試薬系、ならびに乳酸キット（シグマから）を用いて測定される。成長ホルモン放出ペプチド（ＧＨＲＰ）またはＧＨＲＰ模倣薬、たとえば式Ｉの化合物が示す、インスリン、トリグリセリド、全コレステロールおよび乳酸の血漿濃度低下活性は、ビヒクル処置対照群を用いる統計分析（不対ｔ−検定）により判定される。
本発明方法に用いる式Ｉの化合物は、経口、非経口（たとえば筋肉内、腹腔内、静脈内もしくは皮下注射、または埋込み）、鼻内、膣内、舌下または局所投与経路で投与でき、医薬的に許容しうるキャリヤーと共に配合して各投与経路に適した剤形を得ることができる。
経口投与用固体剤形には、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤および顆粒剤が含まれる。そのような固体剤形においては、有効化合物を少なくとも１種類の医薬的に許容しうる不活性キャリヤー、たとえばショ糖、乳糖またはデンプンと混合する。そのような剤形は、常法により、これらの不活性希釈剤以外の追加物質、たとえばステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤を含むこともできる。カプセル剤、錠剤および丸剤の場合、これらの剤形は緩衝剤を含むこともできる。錠剤および丸剤はさらに腸溶コーティングをもつ形で製造できる。
経口投与用液体剤形には、当技術分野で慣用される水などの不活性希釈剤を含有する、医薬的に許容しうる乳剤、液剤、懸濁液剤、シロップ剤、エリキシル剤が含まれる。そのような不活性希釈剤のほか、組成物は佐剤、たとえば湿潤剤、乳化剤および沈殿防止剤、ならびに甘味剤、香味剤および香料を含有してもよい。
経口投与のための本発明製剤には、無菌の水性液剤、非水性液剤、懸濁液剤または乳剤が含まれる。非水性の溶剤またはビヒクルの例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、たとえばオリーブ油およびトウモロコシ油、ゼラチン、ならびに注射用有機エステル、たとえばオレイン酸エチルである。そのような剤形は、保存剤、湿潤剤、乳化剤および沈殿防止剤などの佐剤を含有してもよい。それらをたとえば細菌が保持されるフィルターで濾過することにより、殺菌薬を組成物に装入することにより、組成物を照射することにより、または組成物を加熱することにより、殺菌できる。それらを無菌固体組成物の形で調製し、これを使用直前に無菌水または他のいずれかの注射用無菌媒質に溶解することもできる。
直腸または膣投与のための組成物は、好ましくは坐剤であり、これは有効物質のほか、カカオ脂または坐剤用ろうなどの賦形剤を含有してもよい。
鼻内または舌下投与のための組成物も、当技術分野で周知の標準賦形剤を用いて調製される。
本発明組成物中の有効成分の量は広範に変更できるが、有効成分の量は適切な剤形が得られる量とすべきである。選択される投与量は、目的とする療法効果、投与経路、および処置期間に依存する。一般にヒトおよび他の動物、たとえば哺乳動物に、有効な成長ホルモン方法効果を得るために、１日０．０００１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重の投与量で投与する。
ヒトに好ましい投与範囲は１日０．０１〜５．０ｍｇ／ｋｇ体重であり、これを１回量として、または多数回量に分割して投与できる。
ヒト以外の動物に好ましい投与範囲は１日０．０１〜１０．０ｍｇ／ｋｇ体重であり、これを１回量として、または多数回量に分割して投与できる。ヒト以外の動物において、より好ましい投与範囲は１日０．１〜５ｍｇ／ｋｇ体重であり、これを１回量として、または多数回量に分割して投与できる。
本発明方法に用いる式Ｉの化合物の製造は逐次または収束合成経路で実施できる。逐次様式による式Ｉの化合物の製造を詳述する合成法を下記の反応経路に示す。
保護された多数のアミノ酸誘導体が市販されており、これらにおいて保護基Ｐｒｔ、Ｚ１００およびＺ２００は、たとえばＢＯＣ、ＣＢＺ、ベンジル、エトキシカルボニル基、ＣＦ３Ｃ（Ｏ）−、ＦＭＯＣ、ＴＲＯＣ、トリチルまたはトシルである。他の保護されたアミノ酸誘導体は文献方法で製造できる。ある種の３−オキソ−２−カルボキシルピロリジン類および４−オキソ−３−カルボキシルピロリジン類は市販されており、他の多数の関連ピロリジンおよび４−置換ピロリジンが文献中に知られている。
下記の反応経路の多くが保護基Ｐｒｔ、Ｚ１００またはＺ２００を含む化合物につき記載する。ベンジルオキシカルボニル基は、パラジウムまたは白金触媒の存在下にプロトン溶媒（たとえばメタノール）中で水素による接触水素化を含めた多数の方法により除去できる。好ましい触媒はカーボン上−水酸化パラジウム、またはカーボン上パラジウムである。１〜１０００ｐｓｉの水素圧を採用でき、１０〜７０ｐｓｉの圧力が好ましい。あるいは、ベンジルオキシカルボニル基は転移水素化により除去できる。
ＢＯＣ保護基の除去は、トリフルオロ酢酸または塩酸などの強酸を用い、ジクロロメタン、酢酸エチル、エーテルまたはメタノールなどの補助溶媒の存在下または不存在下に、約−３０〜７０℃、好ましくは約−５〜約３５℃の温度で実施できる。
アミンのベンジルエステルは、パラジウム触媒の存在下にメタノールなどのプロトン溶媒中で水素による接触水素化を含めた多数の方法で除去できる。１〜１０００ｐｓｉの水素圧を採用でき、１０〜７０ｐｓｉの圧力が好ましい。これらおよび他の保護基の付加および除去についてはＴ．ＧｒｅｅｎがＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、ジョン・ワイリー・アンド・サンズ、ニューヨーク、１９８１に述べている。
反応経路１
Figure 0003742643
反応経路１： 保護されたアミノ酸誘導体１は多くの場合市販されており、保護基ＰｒｔはたとえばＢＯＣ、ＦＭＯＣまたはＣＢＺである。他のアミノ酸は文献方法で製造できる。
反応経路１に示すように、式２のアミンと式１の保護されたアミノ酸（Ｐｒｔは適切な保護基）との結合は、不活性溶媒、たとえばジクロロメタンまたはＤＭＦ中、結合試薬、たとえばＥＤＣまたはＤＣＣにより、ＨＯＢＴまたはＨＯＡＴの存在下で行うのが好都合である。アミンが塩酸塩として存在する場合、１または２当量の適切な塩基、たとえばトリエチルアミンを反応混合物に添加するのが好ましい。あるいは、ＢＯＰなどの結合試薬を用い、メタノールなどの不活性溶媒中で結合を行うことができる。そのような結合反応は、一般に約−３０〜約８０℃、好ましくは−１０〜約２５℃の温度で行われる。ペプチドの結合に用いる他の条件の考察については、Ｈｏｕｂｅｎ−Ｗｅｙｌ，Ｖｏｌ．ＸＶ，ｐａｒｔ ＩＩ，Ｅ．Ｗｕｎｓｃｈ編、Ｇｅｏｒｇｅ Ｔｈｅｉｍｅ出版社、１９７４（シュツットガルト）を参照されたい。目的外副生物の分離および中間体の精製は、シリカゲル上でのクロマトグラフィーにより、フラッシュクロマトグラフィーを用いて（Ｗ．Ｃ．Ｓｔｉｌｌ，Ｍ．ＫａｈｎおよびＡ．Ｍｉｔｒａ，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，４３，２９２３，１９７８）、結晶化または摩砕処理により行われる。
化合物３から式４の中間体への変換は、前記のように保護基Ｐｒｔの除去により実施できる。式４の中間体を前記に従って式５のアミノ酸に結合させると、式６の中間体が得られる。アミン６の脱保護により、式７の化合物が得られる。
反応経路２
Figure 0003742643
反応経路２： あるいは、式７の化合物は反応経路２に示す収束経路で製造できる。式８の中間体エステルは、アミノ酸１（Ｐｒｔは適切な保護基）を塩基、たとえば炭酸カリウムで処理し、続いてハロゲン化アルキル、たとえばヨードメタンにより、適切な溶媒、たとえばＤＭＦ中で処理することによって製造できる。アミンの脱保護により８を９に変換する。あるいは、式９の多くのアミノ酸が市販されている。９をアミノ酸５に結合させることにより、中間体１０が生成する。中間体エステル１０を当技術分野で既知の多数の方法で中間体酸１１に変換できる。たとえばメチルおよびエチルエステルを、プロトン溶媒、たとえば水性メタノールまたは水性ＴＨＦ中、約−２０〜１２０℃、好ましくは約０〜５０℃の温度で水酸化リチウムにより加水分解できる。さらにベンジル基の除去は、白金またはパラジウム触媒の存在下で、プロトン溶媒、たとえばメタノール中での水素化を含めた多数の還元法により行うことができる。次いで酸１１をアミン２に結合させると、式６の中間体が得られる。６から７への変換は保護基Ｚ２００の除去により行うことができる。
反応経路３
Figure 0003742643
反応経路３： 式６のエステルを当技術分野で既知の多数の方法で式１３の中間体酸に変換できる。たとえばメチルおよびエチルエステルを、プロトン溶媒、たとえば水性メタノールまたは水性ＴＨＦ中、約−２０〜１２０℃、好ましくは約０〜５０℃の温度で水酸化リチウムにより加水分解できる。さらにベンジル基の除去は、白金またはパラジウム触媒の存在下で、プロトン溶媒、たとえばメタノール中での水素化を含めた多数の還元法により行うことができる。次いで酸１３をアミン１６に結合させると、式１４の中間体が生成する。１４から１５への変換は保護基Ｚ２００の除去により行うことができる。
反応経路４
Figure 0003742643
反応経路４： 式１７のエステルは、反応経路４に示すように、式５の酸を結合剤、たとえばＥＤＣの存在下に、不活性溶媒、たとえば塩化メチレン中で、ヒドロキシスクシンイミドにより処理することによって製造できる。エステル１７を溶媒、たとえばジオキサン、ＴＨＦまたはＤＭＦ中、塩基、たとえばジイソプロピルエチルアミンの存在下に式１のアミノ酸で処理すると、１１が生成する。
反応経路５
Figure 0003742643
反応経路５： 反応経路５に示すように式１８のジフェニルオキサジノンをナトリウムビス（トリメチルシリル）アミドの存在下に臭化シンナミルでアルキル化すると１９が生成し、次いでこれを保護基（Ｐｒｔ）の除去およびＰｄＣｌ２触媒上での水素化により、目的の（Ｄ）−２−アミノ−５−フェニルペンタン酸２０に変換する。
反応経路６
Figure 0003742643
反応経路６： 式２１のエステルを反応経路６に示すように、溶媒、たとえばＤＭＦ中、塩基、たとえば水素化ナトリウムで処理し、続いてハロゲン化アルキル２２で処理すると、式２３の化合物が生成する。式２３の化合物を溶媒、たとえば還流エタノール中、式２４のヒドラジン類、たとえばヒドラジンまたはメチルヒドラジンで処理し、続いて濃縮し、残留物をトルエン中、還流温度またはその付近の温度に加熱すると、式２５の化合物が得られる。あるいは、２３を酢酸ナトリウムの存在下に還流エタノール中でヒドラジン類の塩により処理して、２５を得ることができる。このアミンの脱保護により、式２８の化合物が生成する。２５を還流トルエンまたはベンゼン中、ローソン試薬（Ｌａｗｅｓｓｏｎ‘ｓ ｒｅａｇｅｎｔ）で処理することにより、式２６のチオアミドを得ることができる。保護基の除去により２６が２７に変換される。
反応経路７
Figure 0003742643
反応経路７： 式２１の化合物を溶媒、たとえば還流エタノール中、式２４のヒドラジン類で処理し、続いて濃縮し、残留物をトルエン中、還流温度またはその付近の温度に加熱すると、式２９の化合物が得られる。あるいは、２１を酢酸ナトリウムの存在下に還流エタノール中でヒドラジン類の塩により処理して、２９を得ることができる。式２９のアミドを溶媒、たとえばＤＭＦ中、塩基、たとえば水素化ナトリウムで処理し、続いてハロゲン化アルキルで処理すると、２５が得られる。このアミンの脱保護により、式２８の化合物が生成する。
反応経路８
Figure 0003742643
反応経路８： 式３０のケトエステルとキラルアミン、たとえばα−メチルベンジルアミンを、適切なアルデヒド、たとえばホルムアルデヒドにより反応させるか、または式３１のビニルケトエステルとキラルアミン、たとえばα−メチルベンジルアミンを、適切なアルデヒド、たとえばホルムアルデヒドにより反応させると、二重マンニッヒ反応により式３２の化合物が得られる。３２とヒドラジン類の反応により、式３３のキラル化合物が生成する。窒素を水素、および適切な触媒、たとえばパラジウムで脱保護すると、式３４の化合物が得られる。
反応経路９
Figure 0003742643
反応経路９： 式８１の化合物を還元剤、たとえば水素化ホウ素ナトリウムで処理し、窒素を保護すると、式８２の化合物が得られる。このアルコールの保護により８３を得る。このエステルをけん化すると、式８４の化合物が得られる。８４と塩化チオニルを反応させ、続いてジアゾメタンで処理して、式８５の同族体酸を得る。８５のエステル化により式８６の化合物が得られ、これをＯ−脱保護すると、８７が得られる。８７の酸化により、式８８のケトンを得る。８８とヒドラジン類を反応させ、続いて窒素を脱保護すると、式４４の化合物が得られる。
反応経路１０
Figure 0003742643
反応経路１０： 式３５の化合物を、溶媒、たとえばＤＭＦ中、塩基、たとえば水素化ナトリウムで処理し、続いて炭酸ジエチルで処理すると、エチルエステル化合物３６が生成する。このアミンの脱保護により、３６が３７に変換される。
反応経路１１
Figure 0003742643
反応経路１１： 式３８のマロン酸エステルを溶媒、たとえばＤＭＦ中、塩基、たとえば水素化ナトリウムで処理し、次いで適切な溶媒、たとえばメタノール中でベンジル基を水素、および触媒、たとえばパラジウムにより水素化分解すると、式３９のエステルが生成する。このアミンの脱保護により、式４０の化合物が生成する。
反応経路１２
Figure 0003742643
反応経路１２： 式４１のケトンを適切な溶媒、たとえばベンゼン中、水を除去しながら、第二級アミン、たとえばピペリジンで処理すると、式４２のエナミンが得られる。このエナミンを適切な溶媒、たとえばベンゼンまたはＴＨＦ中、適切な塩基、たとえばＬＤＡまたはＮａＮ（ＳｉＭｅ３）２を用いて、α−ハロエステル、たとえばブロモ酢酸エチルでアルキル化すると、式４３のケトエステルが得られる。式２４のヒドラジン類と反応させて、式４４の化合物を得る。窒素の脱保護により、式４５の化合物が得られる。
反応経路１３
Figure 0003742643
反応１３： 式３７のケトエステルを、適切な溶媒、たとえばｔ−ブタノール中、ヨードニウム塩、たとえばトリフルオロ酢酸ジフェニルヨードニウムで処理すると、式４６のケトエステルが生成する。４６をヒドラジン類で処理すると、式４７の化合物が生成する。窒素の脱保護により、式４８の化合物が得られる。詳細についてはＳｙｎｔｈｅｓｉｓ，（９），１９８４，ｐ．７０９を参照されたい。
反応経路１４
Figure 0003742643
反応経路１４： 式３７のケトエステルをオレフィン、たとえばアクリロニトリルで処理すると、式４９のケトエステルが生成する。４９をヒドラジン類と反応させると、式５０の化合物が生成する。窒素の脱保護により、式５１の化合物が得られる。
反応経路１５
Figure 0003742643
反応経路１５： 式３７のケトエステルを、適切な溶媒、たとえばＤＭＦ中で、臭化アリルおよび適切な塩基、たとえば水素化ナトリウムで処理すると、式５２のケトエステルが得られる。５２とヒドラジン類を反応させると、式５３の化合物が生成する。５３を適切な溶媒、たとえば塩化メチレン中でオゾン分解し、続いて還元剤、たとえば硫化ジメチルで処理すると、式５４のアルデヒドが得られる。５４の酸化により式５５のカルボン酸を得る。５５をクルチウス転位させ、続いて中間体イソシアナートを加水分解すると、式５６の第一級アミンが得られる。式５６の化合物をイソシアナートまたはカルバメートで処理して、式５７の尿素化合物を得る。窒素の脱保護により、式５８の化合物が得られる。
反応経路１６
Figure 0003742643
反応経路１６： 式５４の化合物を第一級アミンで処理すると、式５９のイミンが得られる。式５９の化合物を還元して、式６０の化合物を得る。式６０の化合物をアシル化剤で処理すると、式６１の化合物が得られる。窒素の脱保護により、式６２の化合物が得られる。
反応経路１７
Figure 0003742643
反応経路１７： 式５４の化合物を還元剤、たとえば水素化ホウ素ナトリウムで処理すると、式６３の化合物が得られる。６３とアシル化剤、たとえばイソシアナートまたはカルバメートの反応により、式６４の化合物が得られる。窒素の脱保護により、式６５の化合物が得られる。
反応経路１８
Figure 0003742643
反応経路１８： 式６３の化合物を、ホスフィン、たとえばトリフェニルホスフィン、およびアゾ化合物、たとえばアゾジカルボン酸ジエチル、およびオキシインドールで処理すると、式６６の化合物が得られる。窒素の脱保護により、式６７の化合物が得られる。
反応経路１９
Figure 0003742643
反応経路１９： 式３７のケトエステルを適切な溶媒、たとえばベンゼン中、水を除去しながら、キラルジオールおよび酸触媒で処理すると、式６８のキラルケタールが得られる。６８を、塩基、たとえばＬＤＡの存在下にハロゲン化アルキルでアルキル化し、続いてこのケタールを酸触媒加水分解して、式６９のケトエステルを得る。６９とヒドラジン類の反応により式７０の化合物が生成する。窒素の脱保護により、式７１の化合物が得られる。
反応経路２０
Figure 0003742643
反応経路２０： 式３７のケトエステルをキラルアミノ酸、たとえばバリンｔ−ブチルエステルで処理すると、式７２のキラルエナミンが得られる。７２を塩基、たとえばＬＤＡの存在下にハロゲン化アルキルでアルキル化し、続いてこのエナミンを酸触媒加水分解して、式６９のキラルケトエステルを得る。６９とヒドラジン類の反応により、式７０のキラル化合物が生成する。窒素の脱保護により、式７１の化合物が得られる。
反応経路２１
Figure 0003742643
反応経路２１： 式２５の窒素を脱保護して、式２８の化合物を得る。２８とキラル酸の塩形成により、式７３のジアステレオマー塩混合物が得られる。これらのジアステレオマー塩を結晶化して、式７０のキラル化合物酸塩を得る。塩７０を塩基で分解すると、式７１のキラル化合物が遊離する。
反応経路２２
Figure 0003742643
反応経路２２： 式２５の化合物を適切な触媒、たとえばパラジウムテトラキス（トリフェニルホスフィン）の存在下に酢酸アリルでアルキル化すると、式７４の化合物が得られる。窒素の脱保護により、式７５の化合物が得られる。詳細な考察についてはＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ（５０）ｐ．５１５，１９９４を参照されたい。
反応経路２３
Figure 0003742643
反応経路２３： 式７６のケトジエステルを塩基、たとえば水素化ナトリウムの存在下にハロゲン化アルキルで処理し、続いて酸触媒加水分解および脱カルボキシルし、次いでヨウ化メチルおよび適切な塩基でエステル化すると、式７７の化合物が得られる。化合物７７と適切なアルデヒド、たとえばホルムアルデヒド、およびベンジルアミンの反応により、式７８の化合物を得る。式７８の化合物とヒドラジン類の反応により、式７９のキラル化合物が生成する。窒素の脱保護により、式８０の化合物が得られる。
反応経路２４
Figure 0003742643
反応経路２４： 式２３のアミンを不活性溶媒、たとえばジクロロメタンまたはＤＭＦ中、結合試薬、たとえばＥＤＣまたはＤＣＣにより、ＨＯＢＴの存在下に式１１の酸で処理すると、式８９の化合物が得られる。式８９の化合物とヒドラジン類の反応により、式６の化合物が生成する。窒素の脱保護により、式７の化合物が得られる。
反応経路２５
Figure 0003742643
反応経路２５： 式９０のアセト酢酸エステルを、適切な塩基、たとえば水素化ナトリウムの存在下にハロゲン化アルキルで処理すると、式９１の化合物が得られる。９１とヒドラジン類の反応により式９２の化合物が生成する。９２のカルボニル酸素をＯ−アルキル化すると、９３が得られ、これをハロゲン化物９４に変換する。ハライドイオンＸをシアニドイオンで置換して、ニトリル９５を得る。９５の還元により第一級アミン９６が得られ、これをホルムアルデヒドの存在下で脱保護および環化して、２８を得る。
反応経路２６
Figure 0003742643
反応経路２６： ９７のようなβ−ケト保護アミノ吉草酸エステルを、適切な塩基、たとえば水素化ナトリウムの存在下にハロゲン化アルキルでアルキル化すると、式９８の化合物が得られる。式９８の化合物とヒドラジン類の反応により、式９９の化合物が生成する。式９９の化合物の脱保護により、式１００の第一級アミンが得られる。式１００の化合物をホルムアルデヒドの存在下に環化して、式２８の化合物を得る。
反応経路２７
Figure 0003742643
反応経路２７： 式２３ａのアミンを、ＥＤＣおよびＨＯＡＴの存在下に適切な溶媒中において１のような酸で処理すると、式２３ｂのケトエステルが得られる。ケトエステル２３ｂを酢酸エチルの存在下に還流エタノール中、ヒドラジン類の塩で処理して、式２３ｃのヒドラジン類を得ることができる。適切な条件下での脱保護により、式４のアミンが得られる。式４の中間体を前記に従って式５のアミノ酸に結合させて、式６の中間体を得ることができる。アミン６の脱保護により、式７の化合物が得られる。
反応経路２８
Figure 0003742643
反応経路２８： Ｐｒｔは当業者に既知のアミン保護基である。好ましい保護基を示すためにＰｒｔとしてＢＯＣを用いたが、ＢＯＣの使用が本発明の範囲を限定すると解釈すべきではない。さらに、この反応経路は特定の異性体を用いた式ｍの化合物の合成を示すが、他の異性体および／または異性体混合物も本発明の範囲に含まれる。
工程Ａ．
補助溶媒としての水を含有する、または含有しない反応不活性有機溶媒、たとえばＩＰＥ、ＴＨＦ、塩化メチレンおよびＥｔＯＡｃ（好ましくはＩＰＥおよび水）中における４−オキソ−ピペリジン−３−カルボン酸エチルエステル塩酸塩の溶液に、無機または有機塩基、たとえばＴＥＡ、ＤＭＡＰ、ヒドロキシドまたはカーボネート（好ましくはＴＥＡ）を添加し、続いてアミン保護基、好ましくは（Ｂｏｃ）２Ｏを添加する。混合物を約１〜２４時間（好ましくは一夜）、好ましくは窒素下で撹拌する。有機相を分離し、当業者に既知の標準法で仕上げ処理し、濃縮して、目的生成物を結晶として得る。
工程Ｂ．
有機溶媒、たとえばＴＨＦ、ＩＰＥ、アルコール類、ＤＭＦまたはＤＭＳＯ（好ましくはＤＭＦ）中における４−オキソ−ピペリジン−１，３−ジカルボン酸１−ｔ−ブチルエステル３−エチルエステルの溶液に、無機または有機塩基、たとえばＴＥＡ、ＤＭＡＰ、ヒドロキシドまたはカーボネート（好ましくは炭酸リチウム）を添加し、続いて臭化ベンジルを添加する。混合物を約２５〜１００℃、好ましくは６０℃に加熱し、約１〜２４時間、好ましくは２０時間撹拌する。次いで反応混合物を室温に冷却し、有機溶媒、たとえばＩＰＥ、トルエン、ＴＨＦまたはＥｔＯＡｃで抽出し、当業者に既知の標準法で仕上げ処理して、目的化合物を得る。
工程Ｃ．
有機溶媒、たとえばアルコール類、ＴＨＦまたはトルエン中における３−ベンジル−４−オキソ−ピペリジン−１，３−ジカルボン酸１−ｔ−ブチルエステル３−エチルエステルの溶液に、メチルヒドラジンを添加し、続いて酸、たとえば硫酸、ＨＣｌ、ＡｃＯＨまたはＴｓＯＨ（好ましくは酢酸）を約０℃ないし室温で添加する。反応混合物を徐々に約４０〜１００℃、好ましくは約６５℃に加熱し、約３〜１０時間、好ましくは約７．５時間撹拌する。室温に冷却した後、有機層を１０％炭酸水素ナトリウムで洗浄し、当業者に既知の標準法で仕上げ処理し、濃縮して、目的化合物を得る。
工程Ｄ．
工程Ｃで得た濃縮溶液を有機溶媒、たとえばＩＰＥと混合し、約−１０〜１０℃、好ましくは０℃に冷却し、酸、たとえばＭｅＳＯ３Ｈ、ＴＦＡまたはＨＣｌ（好ましくはＨＣｌガス）を繰り返し導入し、加水分解が完了するまで室温で撹拌する。混合物を濃縮し、有機溶媒、たとえば塩化メチレン、ＩＰＥまたはＴＨＦを添加し、続いて塩基、たとえばヒドロキシド、カーボネート、好ましくはＮＨ４ＯＨを添加する。次いで混合物を塩化メチレン、ＩＰＥまたはＴＨＦで抽出し、濃縮して、目的化合物を得る。
工程Ｅ．
アセトン／水（アセトン中、水１〜１１％、好ましくは５％）の混合物中における３ａ−ベンジル−２−メチル−２，３ａ，４，５，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３ｃ］ピリジン−３−オンの溶液に、Ｌ−酒石酸を添加する。混合物を２５〜６０℃、好ましくは約５０℃に加熱し、好ましくは一夜、撹拌する。反応混合物を好ましくは約１０〜１５℃に冷却し、沈殿を濾過し、冷アセトン／水で洗浄し、乾燥させて、目的化合物を得る。
工程Ｇ．
２−アミノイソ酪酸、塩基、たとえばヒドロキシド（好ましくは１Ｎ ＮａＯＨ）、（Ｂｏｃ）２Ｏ、および有機溶媒、たとえばＴＨＦ、ＩＰＥまたはジオキサンを混和し、室温で一夜撹拌する。反応混合物を有機溶媒、たとえば酢酸エチルで希釈し、水性酸、たとえばＨＣｌの添加により約ｐＨ３〜７に調整する。有機相を分離し、当業者に既知の標準法で仕上げ処理して、目的化合物を得る。
工程Ｈ．
水および無機または有機塩基（好ましくはＴＥＡ）中における２−アミノ−３−ベンジルオキシ−プロピオン酸の溶液に、有機溶媒（たとえばＴＨＦ）の２−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−メチル−プロピオン酸２，５−ジオキソ−ピロリジン−１−イルエステルを添加する。この混合物を、好ましくは一夜、好ましくは室温で、好ましくは窒素下に、撹拌する。水性酸、たとえば１０％クエン酸溶液を混合物に添加する。混合物を数分間撹拌し、次いで有機溶媒、たとえば酢酸エチルで希釈する。有機相を混合物から分離し、当業者に既知の標準法で仕上げ処理し、次いで濃縮して、目的生成物を得る。
工程ＦおよびＩ．
有機溶媒、たとえば酢酸エチル中における３ａ−（Ｒ）−ベンジル−２−メチル−２，３ａ，４，５，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３ｃ］ピリジン−３−オン・Ｌ−酒石酸塩の溶液に、約−７８〜−２０℃、好ましくは約−６６℃で、塩基、たとえばＴＥＡを添加する。混合物を１〜２４時間、好ましくは約１．５時間撹拌する。沈殿した塩を除去した後、３−ベンジルオキシ−２−（２−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−メチル−プロピオニルアミノ）−プロピオン酸および塩基、たとえばＴＥＡを、約−５０〜０℃、好ましくは約−３５℃で添加し、続いて酢酸エチル中のペプチド結合剤、好ましくは５０％１−プロパンホスホン酸環状無水物（ＰＰＡＡ）を添加する。混合物を約１〜６時間、好ましくは約２時間、−５０〜０℃、好ましくは−２０〜−２７℃で撹拌し、次いで温度を好ましくは約０℃に徐々に高める。反応混合物を水に注入し、有機溶媒、たとえばＩＰＥで抽出し、有機相を分離し、当業者に既知の標準法で仕上げ処理して、目的化合物を得る。
工程Ｊ．
有機溶媒、たとえば塩化メチレン中における｛１−［２−（３ａ−（Ｒ）−ベンジル−２−メチル−３−オキソ−２，３ａ，４，５，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３ｃ］ピリジン−５−イル）−１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−オキソ−エチルカルバモイル］−１−メチル−エチル｝−カルバミン酸ｔ−ブチルエステルの溶液に、約−１０〜１０℃、好ましくは約０〜５℃で、ＴＦＡを添加する。好ましくは温度を約５℃より低く維持する。次いで温度を室温に高める。混合物を約１〜６時間、好ましくは約３時間撹拌する。塩化メチレンを他の有機溶媒、たとえば酢酸エチルと交換する。次いで混合物を水性塩基、たとえば飽和炭酸水素ナトリウム溶液でｐＨ７〜９、好ましくはｐＨ８に調整し、次いで当業者に既知の標準法で仕上げ処理して、目的化合物を得る。
工程Ｋ．
アルコール類、たとえばメタノール中における２−アミノ−Ｎ−［２−（３ａ−（Ｒ）−ベンジル−２−メチル−３−オキソ−２，３ａ，４，５，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３ｃ］ピリジン−５−イル）−１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−オキソ−エチル］−２−メチル−プロピオンアミド（工程Ｉより）の溶液に、Ｌ−（＋）−酒石酸を添加し、混合物を一夜撹拌する。得られた溶液を濾過および濃縮する。有機溶媒、たとえばＩＰＥまたは酢酸エチルを添加し、残留アルコールを共沸除去する。単離した固体を酢酸エチルに溶解し、この溶液を還流し、次いで室温にまで放冷して、目的生成物の結晶を得る。
以下の実施例は本発明をさらに説明するために示したものであり、限定するためのものではない。
全般的実験法：
カラムクロマトグラフィーにはアミコン、シリカ３０μＭ、細孔サイズ６０Åを用いた。融点はブチ（Ｂｕｃｈｉ）５１０装置で測定され、未補正である。プロトンおよびカーボンＮＭＲスペクトルは、バリアンＸＬ−３００、ブルーカーＡＣ−３００、バリアン・ユニティー４００またはブルーカーＡＣ−２５０により２５℃で記録された。化学シフトは、トリメチルシランから下方領域のｐｐｍで表される。粒子ビーム質量スペクトルは、ヒューレット・パッカード５９８９Ａ分光計により、アンモニアを化学イオン化源として用いて得られた。最初の試料溶解にはクロロホルムまたはメタノールを用いた。液体二次イオン質量スペクトル（ＬＳＩＭＳ）は、クレイトス、コンセプト−１Ｓ（Ｃｏｎｃｅｐｔ−１Ｓ）高分解能分光計で、セシウムイオン衝撃により、ジチオエリトリトールおよびジチオトレイトールの１：５混合物中、またはチオグリセロールマトリックス中に溶解した試料につき得られた。最初の試料溶解にはクロロホルムまたはメタノールを用いた。報告したデータは、ヨウ化セシウムに対し検量した３〜２０回の走査の和である。ＴＬＣ分析は、Ｅ．メルク、キーゼルゲル６０ Ｆ２５４シリカプレートを用いて行われ、１５％エタノール性ホスホモリブデン酸で染色し、ホットプレート上で加熱することにより視覚化された（指示した溶媒で溶離した後）。
一般法Ａ（ＥＤＣを用いるペプチド結合）： ジクロロメタン中の０．２〜０．５Ｍ第一級アミン溶液（１．０当量）（または第一級アミン塩酸塩および１．０〜１．３当量のトリエチルアミン）を、１．０〜１．２当量のカルボン酸結合パートナー、１．５〜１．８当量のヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（ＨＯＢＴ）またはＨＯＡＴ、および１．０〜１．２当量（カルボン酸の量と化学量論的に当量）の１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）で逐次処理し、混合物を氷浴中で一夜撹拌する（氷浴の温度を自然に高め、これにより反応混合物は一般に約０〜２０℃に約４〜６時間、２０〜２５℃に残りの期間保持される）。混合物を酢酸エチルまたは記載した他の溶媒で希釈し、得られた混合物を１Ｎ ＮａＯＨで２回、１Ｎ ＨＣｌで２回（生成物が塩基性でない場合）、ブラインで１回洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮すると、粗生成物が得られる。これを記載した方法で精製する。カルボン酸成分は、第一級アミンまたはこれの塩酸塩に結合させる場合はジシクロヘキシルアミン塩として使用できる。この場合、トリエチルアミンを用いない。
実施例１
２−アミノ−Ｎ−｛１（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−［３ａ−（Ｒ）−（４−フルオロ−ベンジル）−２−メチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル］−２−オキソ−エチル｝−イソブチルアミド塩酸塩および
２−アミノ−Ｎ−｛１（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−［３ａ−（Ｓ）−（４−フルオロ−ベンジル）−２−メチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル］−２−オキソ−エチル｝−イソブチルアミド塩酸塩
Ａ． ４−オキソ−ピペリジン−１，３−ジカルボン酸１−ｔ−ブチルエステル３−エチルエステル
１５０ｍＬのＴＨＦ中における８．００ｇ（３８．５ｍｍｏｌ）の４−オキソ−ピペリジン−３−ジカルボン酸エチルエステル塩酸塩、９．２３ｇ（４２．４ｍｍｏｌ）のジ−ｔ−ブチルジカーボネートおよび３．８９ｇ（３８．５ｍｍｏｌ）のトリエチルアミンの混合物を、室温で約７２時間撹拌した。混合物を濃縮し、残留物を酢酸エチルに溶解し、１０％ＨＣｌ水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液およびブラインでそれぞれ３回洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、１０．０ｇの１Ａを白色固体として得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）２７２（ＭＨ＋）．
Ｂ． ３ａ−（Ｒ，Ｓ）−（４−フルオロ−ベンジル）−４−オキソ−ピペリジン−１，３−ジカルボン酸１−ｔ−ブチルエステル３−エチルエステル
１０ｍＬのＤＭＦ中における２．００ｇ（７．４ｍｍｏｌ）の１Ａの溶液に、２８２ｍｇ（７．４ｍｍｏｌ）の水素化ナトリウム（６０％油分散液）を添加し、混合物を室温で約１５分間撹拌した。この撹拌溶液に、７ｍＬのＤＭＦ中における１．３９ｇ（７．４ｍｍｏｌ）の臭化４−フルオロベンジルの溶液を添加し、混合物を室温で約７２時間撹拌した。混合物を酢酸エチルで希釈し、水で１回、ブラインで４回洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、２．８ｇの１Ｂを得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）３８０（ＭＨ＋）．
Ｃ． ３ａ−（Ｒ，Ｓ）−（４−フルオロ−ベンジル）−２−メチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−カルボン酸ｔ−ブチルエステル
１００ｍＬのエタノール中における２．５４ｇ（６．７ｍｍｏｌ）の１Ｂおよび３０９ｍｇ（６．７ｍｍｏｌ）のメチルヒドラジンの混合物を、約８時間加熱還流した。混合物を濃縮し、残留物を１００ｍＬのトルエンに溶解し、約１７時間加熱還流した。混合物を濃縮し、残留物をシリカゲルクロマトグラフィーにより溶離濃度勾配（１８：８２ ｖ／ｖ 酢酸エチル：ヘキサン）から（７５：２５ ｖ／ｖ 酢酸エチル：ヘキサン）までを用いて精製し、１．０ｇの１Ｃを無色透明な油として得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）３６２（ＭＨ＋）．
Ｄ． ３ａ−（Ｒ，Ｓ）−（４−フルオロ−ベンジル）−２−メチル−２，３ａ，４，５，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−３−オン−トリフルオロ酢酸塩
１．００ｇ（２．８ｍｍｏｌ）の１Ｃに、１０ｍＬのトリフルオロ酢酸を約０℃で添加し、混合物を約１時間撹拌した。酢酸エチルを添加し、混合物を濃縮して１．０ｇの１Ｄを得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）２６３（ＭＨ＋）．
Ｅ． （Ｒ）−３−ベンジルオキシ−２−（２−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−メチル−プロピオニルアミノ）−プロピオン酸
３５ｍＬのＤＭＦ中における１．８３ｇ（６．２ｍｍｏｌ）のＮ−ｔ−ＢＯＣ−Ｏ−ベンジル−Ｄ−セリンに、１．０２ｇ（７．４ｍｍｏｌ）の炭酸カリウム、続いて０．９２ｇ（６．５ｍｍｏｌ）のヨードメタンを添加した。混合物を約２４℃で窒素雰囲気下に一夜撹拌した。反応混合物を２００ｍＬの水で希釈し、酢酸エチルで３回抽出した。有機相を合わせて水で５回、ブラインで１回洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。粗製（Ｒ）−３−ベンジルオキシ−２−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−プロピオン酸メチルエステルを１５ｍＬの冷トリフルオロ酢酸に０℃で溶解し、混合物を約２時間撹拌した。混合物を濃縮し、残留物を１Ｎ ＮａＯＨで希釈し、酢酸エチルで３回抽出した。有機抽出液を合わせてブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させると、０．８４ｇ（４．０２ｍｍｏｌ）の（Ｒ）−２−アミノ−３−ベンジルオキシ−プロピオン酸メチルエステルが生成した。これを０．８１ｇ（４．０２ｍｍｏｌ）のＮ−ｔ−ＢＯＣ−α−メチルアラニンと結合させて、１．８０ｇの（Ｒ）−３−ベンジルオキシ−２−（２−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−メチル−プロピオニルアミノ）−プロピオン酸メチルエステルを得た。この粗生成物を２０ｍＬの４：１ ＴＨＦ：水に溶解し、この溶液に１ｍＬの水中における３３５ｍｇ（７．９８ｍｍｏｌ）の水酸化リチウム水和物の溶液を添加し、混合物を室温で一夜撹拌した。混合物を濃縮し、残留物を酢酸エチルで希釈し、ＨＣｌ水溶液で酸性にし、酢酸エチルで３回抽出した。有機抽出液を合わせてブラインで１回洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、１．６０ｇの１Ｅを油として得た。これは放置すると凝固した。
Figure 0003742643
Ｆ． （１−｛１（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−［３ａ−（Ｒ，Ｓ）−（４−フルオロ−ベンジル）−２−メチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル］−２−オキソ−エチルカルバモイル｝−１−メチル−エチル）−カルバミン酸ｔ−ブチルエステル
一般法Ａに概説した方法に従って、１９３ｍｇ（０．５１ｍｍｏｌ）の１Ｄと１９６ｍｇ（０．５１ｍｍｏｌ）の１Ｅを結合させて、ジアステレオマー混合物を得た。残留物をシリカゲルクロマトグラフィーにより溶離濃度勾配（１：１ ｖ／ｖ 酢酸エチル：ヘキサン）から１００％酢酸エチルまでを用いて精製し、極性が低い方の１Ｆ異性体１を６０ｍｇ、極性が高い方の１Ｆ異性体２を１００ｍｇ得た。両異性体につきＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）６２４（ＭＨ＋）．
Ｇ． ２−アミノ−Ｎ−｛１（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−［３ａ−（Ｒ）−（４−フルオロ−ベンジル）−２−メチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル］−２−オキソ−エチル｝−イソブチルアミド塩酸塩
１０ｍＬのエタノール中における６０ｍｇ（０．１０ｍｍｏｌ）の１Ｆ異性体１に、４ｍＬの濃ＨＣｌを添加し、室温で約２時間撹拌した。混合物を濃縮し、残留物をエタノール／ヘキサンから沈殿させて、５０ｍｇの１Ｇ異性体１を白色粉末として得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）５２４（ＭＨ＋）．１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：（部分）
Figure 0003742643
Ｈ． ２−アミノ−Ｎ−｛１（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−［３ａ−（Ｓ）−（４−フルオロ−ベンジル）−２−メチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル］−２−オキソ−エチル｝−イソブチルアミド塩酸塩
１０ｍＬのエタノール中における１００ｍｇ（０．１６ｍｍｏｌ）の１Ｆ異性体２に、４ｍＬの濃ＨＣｌを添加し、室温で約２時間撹拌した。混合物を濃縮し、残留物をエタノール／ヘキサンから沈殿させて、６０ｍｇの１Ｈ異性体２を白色粉末として得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）５２４（ＭＨ＋）．１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：（部分）
Figure 0003742643
実施例２
２−アミノ−Ｎ−［２−（３ａ−（Ｒ，Ｓ）−（４−フルオロ−ベンジル）−２−メチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１（Ｒ）−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−２−オキソ−エチル］−イソブチルアミド塩酸塩
Ａ． （Ｒ）−２−アミノ−３−［（１Ｈ−インドール−３−イル）−プロピオン酸メチルエステル
１００ｍＬのＤＭＦ中における４．９２ｇ（１６．２ｍｍｏｌ）のＮ−α−ｔ−ＢＯＣ−Ｄ−トリプトファンに、２．４６ｇ（１７．８ｍｍｏｌ）の炭酸カリウム、続いて２．４１ｇ（１７．０ｍｍｏｌ）のヨードメタンを添加した。混合物を約２４℃で窒素雰囲気下に一夜撹拌した。反応混合物を水で希釈し、酢酸エチルで３回抽出した。有機相を合わせて５００ｍＬの水で５回、ブラインで１回洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、４．６７ｇの白色固体を得た。この粗製（Ｒ）−２−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロピオン酸メチルエステルに、１５ｍＬの冷トリフルオロ酢酸を約０℃で添加し、混合物を約２時間撹拌した。混合物を濃縮し、残留物を１Ｎ ＮａＯＨで希釈し、酢酸エチルで３回抽出した。有機抽出液を合わせてブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させて、（Ｒ）−２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−プロピオン酸メチルエステルを橙色の油として定量的収率で得た。
Ｂ． （Ｒ）−２−（２−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−メチル−プロピオニルアミノ）−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−プロピオン酸メチルエステル
方法Ａに従って、２Ａからの粗生成物１．５５ｇ（７．１ｍｍｏｌ）を１．４４ｇ（７．１ｍｍｏｌ）のＮ−ｔ−ＢＯＣ−α−メチルアラニンに結合させて、油を得た。これをヘキサン中１０％、２０％、３０％、４０％および５０％酢酸エチルの濃度勾配を用いて溶離するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製した。１．３２ｇの（Ｒ）−２−（２−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−メチル−プロピオニルアミノ）−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−プロピオン酸メチルエステルを回収した。
Ｃ． （Ｒ）−２−（２−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−メチル−プロピオニルアミノ）−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−プロピオン酸
１０ｍＬのＴＨＦ中における１．０３ｇ（２．６４ｍｍｏｌ）の２Ｂの溶液に、水２ｍＬ中における水酸化リチウム水和物３８１ｍｇ（９．１ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で一夜撹拌した。過剰のＴＨＦを蒸発により除去し、塩基性の水性混合物を酢酸エチルで３回抽出した。次いで希酢酸または塩酸でｐＨ４の酸性にした。生成物を酢酸エチルで抽出し、有機抽出液を合わせてブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、蒸発させて、１．０３ｇの２Ｃを橙色泡状物として得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）３９０（ＭＨ＋）．
Figure 0003742643
Ｄ． ｛１−［２−［３ａ−（Ｒ，Ｓ）−（４−フルオロ−ベンジル）−２−メチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル］−１（Ｒ）−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−２−オキソ−エチルカルバモイル］−１−メチル−エチル｝−カルバミン酸ｔ−ブチルエステル
一般法Ａに概説した方法に従って、１９３ｍｇ（０．５１ｍｍｏｌ）の１Ｄと２００ｍｇ（０．５１ｍｍｏｌ）の２Ｃを結合させ、残留物をシリカゲルクロマトグラフィーにより溶離濃度勾配（１：１ ｖ／ｖ 酢酸エチル：ヘキサン）から１００％酢酸エチルまでを用いて精製し、２３０ｍｇの２Ｄを得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）６３３（ＭＨ＋）．
Ｅ． ２−アミノ−Ｎ−［２−（３ａ−（Ｒ，Ｓ）−（４−フルオロ−ベンジル）−２−メチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１（Ｒ）−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−２−オキソ−エチル］−イソブチルアミド塩酸塩
１０ｍＬのエタノール中における２３０ｍｇ（０．３６ｍｍｏｌ）の２Ｄに、４ｍＬの濃ＨＣｌを添加し、混合物を室温で約２時間撹拌した。混合物を濃縮し、残留物をエタノール／ヘキサンから沈殿させて、１３０ｍｇの２Ｅを白色粉末として得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）５３３（ＭＨ＋）．１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：（部分）
Figure 0003742643
実施例３
２−アミノ−Ｎ−［２−（３ａ−（Ｒ，Ｓ）−ベンジル−２−メチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１Ｒ−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−２−オキソ−エチル］−イソブチルアミド
Ａ． ４−オキソ−ピペリジン−１，３−ジカルボン酸１−ｔ−ブチルエステル３−エチルエステル
２００ｍＬの塩化メチレン中における７．００ｇ（３６．２ｍｍｏｌ）の４−オキソ−ピペリジン−３−カルボン酸メチルエステルおよび８．８２ｇ（７２．３ｍｍｏｌ）の４，４−ジメチルアミノピリジンの混合物に０℃で、１５０ｍＬの塩化メチレン中における７．８８ｇ（３６．２ｍｍｏｌ）のジ−ｔ−ブチルジカーボネートの溶液を、３０分かけて添加した。混合物を室温にまで高め、次いで約１７時間撹拌した。混合物を濃縮し、残留物をクロロホルムで希釈し、１０％ＨＣｌ水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液およびブラインでそれぞれ３回洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、９．１８ｇの透明な黄色の油を得た。
Ｂ． ３ａ−（Ｒ，Ｓ）−ベンジル−４−オキソ−ピペリジン−１，３−ジカルボン酸１−ｔ−ブチルエステル３−メチルエステル
１０ｍＬのＤＭＦ中における５．００ｇ（１９．４ｍｍｏｌ）の３Ａの溶液に、７４５ｍｇ（７．４ｍｍｏｌ）の水素化ナトリウム（６０％油分散液）を添加し、混合物を室温で約１５分間撹拌した。この撹拌溶液に、１５ｍＬのＤＭＦ中における３．３２ｇ（１９．４ｍｍｏｌ）の臭化ベンジルの溶液をカニューレで添加し、混合物を室温で約４２時間撹拌した。混合物を酢酸エチルで希釈し、水で１回、ブラインで４回洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、６．０ｇの３Ｂを黄色の油として得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）３４８（ＭＨ＋）．
Ｃ． ３ａ−（Ｒ，Ｓ）−ベンジル−２−メチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−カルボン酸ｔ−ブチルエステル
１００ｍＬのエタノール中における４．００ｇ（１１．５ｍｍｏｌ）の３Ｂおよび５３０ｍｇ（１１．５ｍｍｏｌ）のメチルヒドラジンの混合物を、約８時間加熱還流した。混合物を濃縮し、残留物を１００ｍＬのトルエンに溶解し、約１７時間加熱還流した。混合物を濃縮し、残留物をシリカゲルクロマトグラフィーにより溶離濃度勾配（１５：８５ ｖ／ｖ 酢酸エチル：ヘキサン）から（７５：２５ ｖ／ｖ 酢酸エチル：ヘキサン）までを用いて精製し、２．６ｇの３Ｃを無色透明な油として得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）３４４（ＭＨ＋）．
Ｄ． ３ａ−（Ｒ，Ｓ）−ベンジル−２−メチル−２，３ａ，４，５，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−３−オン
２．６０ｇ（７．６ｍｍｏｌ）の３Ｃに、２０ｍＬのトリフルオロ酢酸を約０℃で添加し、混合物を約２．５時間撹拌した。酢酸エチルを添加し、溶液を６Ｎ ＮａＯＨで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、１．８ｇの３Ｄを得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）２４４（ＭＨ＋）．
Ｅ． ｛１−［２−［３ａ−（Ｒ，Ｓ）−ベンジル−２−メチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル］−１Ｒ−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−２−オキソ−エチルカルバモイル］−１−メチル−エチル｝−カルバミン酸ｔ−ブチルエステル
一般法Ａに概説した方法に従って、１２５ｍｇ（４．６ｍｍｏｌ）の３Ｃと１．７５ｇ（０．５１ｍｍｏｌ）の２Ｃを結合させ、残留物をシリカゲルクロマトグラフィーにより溶離濃度勾配（６：４ ｖ／ｖ 酢酸エチル：ヘキサン）から酢酸エチル中７％メタノールまでを用いて精製し、１５０ｍｇの３Ｅを得た。
Ｆ． ２−アミノ−Ｎ−［２−（３ａ−（Ｒ，Ｓ）−ベンジル−２−メチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１Ｒ−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−２−オキソ−エチル］−イソブチルアミド塩酸塩
１５ｍＬのエタノール中における１５０ｍｇ（０．２４ｍｍｏｌ）の３Ｅに、５ｍＬの濃ＨＣｌを添加し、混合物を室温で約３時間撹拌した。混合物を濃縮し、残留物をエタノール／ヘキサンから結晶化して、１００ｍｇの３Ｆを得た。
Figure 0003742643
実施例４
２−アミノ−Ｎ−［２−（３ａ−（Ｒ）−ベンジル−２−メチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−オキソ−エチル］−イソブチルアミド塩酸塩および
２−アミノ−Ｎ−［２−（３ａ−（Ｓ）−ベンジル−２−メチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−オキソ−エチル］−イソブチルアミド塩酸塩
Ａ． ｛１−［２−［３ａ−（Ｒ，Ｓ）−ベンジル−２−メチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル］−１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル）−２−オキソ−エチルカルバモイル］−１−メチル−エチル｝−カルバミン酸ｔ−ブチルエステル
一般法Ａに概説した方法に従って、１．１２ｇ（４．６ｍｍｏｌ）の３Ｃと１．７５ｇ（０．５１ｍｍｏｌ）の１Ｅを結合させてジアステレオマー混合物を得た。残留物をシリカゲルクロマトグラフィーにより溶離濃度勾配（１：１ ｖ／ｖ 酢酸エチル：ヘキサン）から１００％酢酸エチルまでを用いて精製し、極性が低い方の４Ａ異性体１を３５０ｍｇ、極性が高い方の４Ａ異性体２を２５０ｍｇ得た。両異性体につきＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）６０６（ＭＨ＋）．
Ｂ． ２−アミノ−Ｎ−［２−（３ａ−（Ｒ）−ベンジル−２−メチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−オキソ−エチル］−イソブチルアミド塩酸塩
１５ｍＬのエタノール中における２５０ｍｇ（０．４１ｍｍｏｌ）の４Ａ異性体１に、５ｍＬの濃ＨＣｌを添加し、混合物を室温で約５時間撹拌した。混合物を濃縮し、残留物をエタノール／ヘキサンから沈殿させ、真空下で乾燥させて、１３０ｍｇの４Ｂ異性体１を得た。
Figure 0003742643
Ｃ． ２−アミノ−Ｎ−［２−（３ａ−（Ｓ）−ベンジル−２−メチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−オキソ−エチル］−イソブチルアミド塩酸塩
１５ｍＬのエタノール中における２５０ｍｇ（０．４１ｍｍｏｌ）の４Ａ異性体２に、５ｍＬの濃ＨＣｌを添加し、混合物を室温で約５時間撹拌した。混合物を濃縮し、残留物をエタノール／ヘキサンから沈殿させ、真空下で乾燥させて、１２０ｍｇの４Ｃ異性体２を得た。
Figure 0003742643
Ｄ． ２−アミノ−Ｎ−［２−（３ａ−（Ｒ）−ベンジル−２−メチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−オキソ−エチル］−イソブチルアミドメタンスルホン酸塩
飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を３．６０ｇ（６．６ｍｍｏｌ）の４Ｂ異性体１に添加し、混合物を酢酸エチルで抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。残留物を酢酸エチルに溶解し、約０℃に冷却し、０．４３ｍＬ（６．６ｍｍｏｌ）のメタンスルホン酸を添加し、混合物を約０．５時間撹拌した。この溶液にヘキサン（２００ｍＬ）を添加し、混合物を約１時間撹拌し、濾過して３．４０ｇの白色固体を得た。この固体を３％酢酸エチル水溶液から再結晶して、２．５５ｇの４Ｄ異性体１を白色結晶質固体として得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）５０６（ＭＨ＋）．
実施例５
２−アミノ−Ｎ−［１−（３ａ−（Ｒ）−ベンジル−２−メチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−カルボニル）−４−フェニル−（Ｒ）−ブチル］−イソブチルアミド塩酸塩および
２−アミノ−Ｎ−［１−（３ａ−（Ｓ）−ベンジル−２−メチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−カルボニル）−４−フェニル−（Ｒ）−ブチル］−イソブチルアミド塩酸塩
Ａ． ２−オキソ−５，６−ジフェニル−３−（３−フェニル−アリル）−モルホリン−４−カルボン酸ｔ−ブチルエステル
３５０ｍＬの無水ＴＨＦ中における１３．８ｇ（７０．０ｍｍｏｌ）の臭化シンナミルおよび４．９４ｇ（１４．０ｍｍｏｌ）の（２Ｓ，３Ｒ）−（＋）−６−オキソ−２，３−ジフェニル−４−モルホリンカルボン酸ｔ−ブチルの溶液に約−７８℃で、ＴＨＦ中の１Ｍナトリウムビストリメチルシリルアミド溶液２８ｍＬ（２８ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を約−７８℃で約１．５時間撹拌し、次いで７５０ｍＬの酢酸エチルに注入した。混合物をブラインで２回洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮して黄色の油を得た。この油を１５０ｍＬのヘキサン中で一夜撹拌し、次いで沈殿した固体を濾取して、３．２ｇの５Ａを白色固体として得た。
Ｂ． ５（Ｓ），６（Ｒ）−ジフェニル−３（Ｒ）−（３−フェニル−アリル）−モルホリン−２−オン
２．９７ｇ（６．３３ｍｍｏｌ）の５Ａに、２０ｍＬのトリフルオロ酢酸を約０℃で添加し、混合物を約２時間撹拌し、次いで濃縮した。残留物を水に溶解し、ｐＨ１０が維持されるまでＮａＯＨ水溶液で塩基性にした。混合物を酢酸エチルで３回抽出し、有機抽出液を合わせてブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮して橙色の油を得た。これをシリカゲルクロマトグラフィー（１０：９０ ｖ／ｖ 酢酸エチル：ヘキサン）により精製して、８８０ｍｇの５Ｂを白色固体として得た。
Ｃ． ２−（Ｒ）−アミノ−５−フェニル−ペンタン酸
２０ｍＬのエタノールおよび１０ｍＬのＴＨＦ中における４４０ｍｇ（１．１９ｍｍｏｌ）の５Ｂおよび１２０ｍｇの塩化パラジウムの混合物を、４５ｐｓｉで約１６時間水素化した。この混合物をけいそう土により濾過し、濃縮し、残留物をエーテルで摩砕処理して、２４０ｍｇの５Ｃを白色固体として得た。
Ｄ． ２−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−メチル−プロピオン酸２，５−ジオキソ−ピロリジン−１−イルエステル
１３．５ｍＬの塩化メチレン中における５．０ｇ（２４．６ｍｍｏｌ）のＮ−ｔ−ＢＯＣ−α−メチルアラニンのスラリーに、３．４０ｇ（２９．６ｍｍｏｌ）のＮ−ヒドロキシスクシンイミドおよび５．６５ｇ（２９．６ｍｍｏｌ）のＥＤＣを添加した。このスラリーを室温で約１７時間撹拌した。混合物を酢酸エチルで希釈し、水、飽和炭酸水素ナトリウム溶液およびブラインでそれぞれ２回洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（１：１ ｖ／ｖ 酢酸エチル：ヘキサン）により精製して、このＤ部の表題化合物５．２ｇを白色固体として得た。
Ｅ． （Ｒ）−２−（２−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−メチル−プロピオニルアミノ）−５−フェニル−ペンタン酸
２ｍＬのＤＭＦ中における２０３ｍｇ（１．０５ｍｍｏｌ）の５Ｄ、３７８ｍｇ（１．２６ｍｍｏｌ）の５Ｃおよび４３４ｍｇ（３．３６ｍｍｏｌ）のジイソプロピルエチルアミンの混合物を、一夜撹拌した。混合物を酢酸エチルで希釈し、１Ｎ ＨＣｌで２回抽出した。水相を酢酸エチルで１回抽出した。プールした有機抽出液を水で３回、ブラインで１回洗浄した。混合物をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィーにより、ヘキサン中８０％クロロホルム、続いて１００％クロロホルム、続いてクロロホルム中１０％メタノールで溶離して精製し、１２７ｍｇの５Ｅを得た。
Ｆ． ｛１−［１−［３ａ−（Ｒ，Ｓ）−ベンジル−２−メチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−カルボニル］−４−フェニル−（Ｒ）−ブチルカルバモイル］−１−メチル−エチル｝−カルバミン酸ｔ−ブチルエステル
一般法Ａに概説した方法に従って、１３０ｍｇ（０．５３ｍｍｏｌ）の３Ｃと２００ｍｇ（０．５３ｍｍｏｌ）の５Ｅを結合させてジアステレオマー混合物を得た。残留物をシリカゲルクロマトグラフィーにより溶離濃度勾配（１：１ ｖ／ｖ 酢酸エチル：ヘキサン）から１００％酢酸エチルまでを用いて精製し、極性が低い方の５Ｆ異性体１を４０ｍｇ、極性が高い方の５Ｆ異性体２を４０ｍｇ得た。両異性体につきＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）６０４（ＭＨ＋）．
Ｇ． ２−アミノ−Ｎ−［１−（３ａ−（Ｒ）−ベンジル−２−メチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−カルボニル］−４−フェニル−（Ｒ）−ブチル］−イソブチルアミド塩酸塩
１０ｍＬのエタノール中における４０ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）の５Ｆ異性体１に、４ｍＬの濃ＨＣｌを添加し、混合物を室温で約４時間撹拌した。混合物を濃縮し、残留物を塩化メチレン／ヘキサンから沈殿させ、真空下で乾燥させて、３０ｍｇの５Ｇ異性体１を得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）５０４（ＭＨ＋）．１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：（部分）
Figure 0003742643
Ｈ． ２−アミノ−Ｎ−［１−（３ａ−（Ｓ）−ベンジル−２−メチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−カルボニル］−４−フェニル−（Ｒ）−ブチル］−イソブチルアミド塩酸塩
１０ｍＬのエタノール中における４０ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）の５Ｆ異性体２に、４ｍＬの濃ＨＣｌを添加し、混合物を室温で約４時間撹拌した。混合物を濃縮し、残留物を塩化メチレン／ヘキサンから沈殿させ、真空下で乾燥させて、３０ｍｇの５Ｈ異性体２を得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）５０４（ＭＨ＋）．１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：（部分）
Figure 0003742643
実施例６
２−アミノ−Ｎ−［２−（３ａ−（Ｒ，Ｓ）−ベンジル−２−メチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−オキソ−エチル］−イソブチルアミド塩酸塩
Ａ． ｛１−［２−［３ａ−（Ｒ，Ｓ）−ベンジル−２−メチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル］−１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−オキソ−エチルカルバモイル］−１−メチル−エチル｝−カルバミン酸ｔ−ブチルエステル
一般法Ａに概説した方法に従って、２００ｍｇ（０．８２ｍｍｏｌ）の３Ｃと３２０ｍｇ（０．８２ｍｍｏｌ）の１Ｅを結合させてジアステレオマー混合物を得た。残留物をシリカゲルクロマトグラフィーにより溶離濃度勾配（１：１ ｖ／ｖ 酢酸エチル：ヘキサン）から酢酸エチル中１０％メタノールまでを用いて精製し、１７０ｍｇの６Ａを得た。
Ｂ． ２−アミノ−Ｎ−［２−（３ａ−（Ｒ，Ｓ）−ベンジル−２−メチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−オキソ−エチル］−イソブチルアミド塩酸塩
２０ｍＬのエタノール中における１７０ｍｇ（０．２８ｍｍｏｌ）の６Ａに、５ｍＬの濃ＨＣｌを添加し、混合物を室温で約２．５時間撹拌した。混合物を濃縮し、残留物をエタノール／ヘキサンから沈殿させて、７０ｍｇの６Ｂを得た。
Figure 0003742643
実施例７
２−アミノ−Ｎ−［２−（３ａ−ベンジル−２−エチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−２−オキソ−エチル］−イソブチルアミド塩酸塩
Ａ． ３ａ−（Ｒ，Ｓ）−ベンジル−２−エチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−カルボン酸ｔ−ブチルエステル
２７ｍＬのエタノール中における５５５ｍｇ（１．６０ｍｍｏｌ）の３Ｂに、２４０ｍｇ（１．６０ｍｍｏｌ）のエチルヒドラジンオキサレートを添加し、混合物を約４時間加熱還流した。混合物を濃縮し、残留物をシリカゲルクロマトグラフィーにより溶離濃度勾配（１０：１ ｖ／ｖ ヘキサン：酢酸エチル）から（３：７ ｖ／ｖ ヘキサン：酢酸エチル）までを用いて精製し、３５７ｍｇの７Ａを得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）３５８（ＭＨ＋）．
Ｂ． ３ａ−（Ｒ，Ｓ）−ベンジル−２−エチル−２，３ａ，４，５，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−３−オン
３ｍＬのエタノール中における３５０ｍｇ（０．９８ｍｍｏｌ）の７Ａに、１．５ｍＬの濃ＨＣｌを添加し、混合物を室温で約２時間撹拌した。混合物を濃縮して、２５７ｍｇの７Ｂを得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）２５８（ＭＨ＋）．
Ｃ． ｛１−［２−（３ａ−（Ｒ，Ｓ）−ベンジル−２−エチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１−（Ｒ）−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−２−オキソ−エチルカルバモイル］−１−メチル−エチル｝−カルバミン酸ｔ−ブチルエステル
一般法Ａに概説した方法に従って、８２ｍｇ（０．２８ｍｍｏｌ）の７Ｂと１００ｍｇ（０．２６ｍｍｏｌ）の２Ｃを結合させ、残留物をシリカゲルクロマトグラフィーにより１００％塩化メチレンから塩化メチレン中２％メタノールまでの溶離濃度勾配を用いて精製し、１１０ｍｇの７Ｃを得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）６２９（ＭＨ＋）．
Ｄ． ２−アミノ−Ｎ−［２−（３ａ−（Ｒ，Ｓ）−ベンジル−２−エチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１−（Ｒ）−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−２−オキソ−エチル］−イソブチルアミド塩酸塩
２ｍＬのエタノール中における１００ｍｇ（０．１５ｍｍｏｌ）の７Ｃに、１ｍＬの濃ＨＣｌを添加し、室温で約２時間撹拌した。混合物を濃縮して、７２ｍｇの７Ｄを無色泡状物として得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）５２９（ＭＨ＋）．
実施例８
２−アミノ−Ｎ−［２−（３ａ−（Ｒ）−ベンジル−２−エチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−オキソ−エチル］−イソブチルアミド塩酸塩および
２−アミノ−Ｎ−［２−（３ａ−（Ｓ）−ベンジル−２−エチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−オキソ−エチル］−イソブチルアミド塩酸塩
Ａ． ｛１−［２−（３ａ−ベンジル−２−エチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−オキソ−エチルカルバモイル］−１−メチル−エチル｝−カルバミン酸ｔ−ブチルエステル
一般法Ａに概説した方法に従って、８５ｍｇ（０．２９ｍｍｏｌ）の７Ｂと１００ｍｇ（０．２６ｍｍｏｌ）の１Ｅを結合させて、ジアステレオマー混合物を得た。残留物をシリカゲルクロマトグラフィーにより１００％塩化メチレンから塩化メチレン中２％メタノールまでの溶離濃度勾配を用いて精製し、極性が低い方の８Ａ異性体１を６ｍｇ、極性が高い方の８Ａ異性体２を１１ｍｇ得た。両異性体につきＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）６２０（ＭＨ＋）．
Ｂ． ２−アミノ−Ｎ−［２−（３ａ−（Ｒ）−ベンジル−２−エチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−オキソ−エチル］−イソブチルアミド塩酸塩
１ｍＬのエタノール中における５．７ｍｇ（０．００９ｍｍｏｌ）の８Ａ異性体１に、０．４ｍＬの濃ＨＣｌを添加し、混合物を室温で約３時間撹拌した。混合物を濃縮して、４．７ｍｇの８Ｂ異性体１を得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）５２０（ＭＨ＋）．１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：（部分）
Figure 0003742643
Ｃ． ２−アミノ−Ｎ−［２−（３ａ−（Ｓ）−ベンジル−２−エチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−オキソ−エチル］−イソブチルアミド塩酸塩
２ｍＬのエタノール中における１０ｍｇ（０．０１６ｍｍｏｌ）の８Ａ異性体２に、０．４ｍＬの濃ＨＣｌを添加し、混合物を室温で約３時間撹拌した。混合物を濃縮して、８ｍｇの８Ｃ異性体２を得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）５２０（ＭＨ＋）．１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：（部分）
Figure 0003742643
実施例９
２−アミノ−Ｎ−［２−（２−ベンジル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−オキソ−エチル］−イソブチルアミド塩酸塩
Ａ． ２−ベンジル−３−ヒドロキシ−２，４，６，７−テトラヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−カルボン酸ｔ−ブチルエステル
１５ｍＬのエタノール中における８００ｍｇ（３．１１ｍｍｏｌ）の３Ｂおよび４９５ｍｇ（３．１１ｍｍｏｌ）のベンジルヒドラジン・ジ塩酸塩および４２３ｍｇ（３．１１ｍｍｏｌ）の酢酸ナトリウム３水和物の混合物を、約１７時間加熱還流した。混合物を濃縮し、残留物を１００ｍＬのトルエンに溶解し、約４８時間加熱還流した。混合物を酢酸エチルで希釈し、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィーにより、１００％酢酸エチル、続いて塩化メチレン中５％メタノールを用いて精製し、５３０ｍｇの９Ａを淡褐色固体として得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）３３０（ＭＨ＋）．
Ｂ． ２−ベンジル−２，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−３−オール
３０ｍＬのエタノール中における４１１ｍｇ（１．２４ｍｍｏｌ）の３Ｅに、１０ｍＬの濃ＨＣｌを添加し、混合物を室温で約３０分間撹拌した。混合物を濃縮し、残留物をメタノール／酢酸エチルから結晶化して、３５３ｍｇの９Ｂを得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）２３０（ＭＨ＋）．
Ｃ． ｛１−［２−（２−ベンジル−３−ヒドロキシ−２，４，６，７−テトラヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１−Ｒ−ベンジルオキシメチル−２−オキソ−エチルカルバモイル］−１−メチル−エチル｝−カルバミン酸ｔ−ブチルエステル
一般法Ａに概説した方法に従って、１００ｍｇ（０．３８ｍｍｏｌ）の９Ｂと１４５ｍｇ（０．３８ｍｍｏｌ）の１Ｅを結合させ、残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（９５：５ ｖ／ｖ メタノール：塩化メチレン）により精製して、４２ｍｇの９Ｃを白色固体として得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）５９２（ＭＨ＋）．
Ｄ． ２−アミノ−Ｎ−［２−（２−ベンジル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−オキソ−エチル］−イソブチルアミド塩酸塩
２０ｍＬのエタノール中における４２ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）の９Ｄに、６ｍＬの濃ＨＣｌを添加し、混合物を室温で約３０分間撹拌した。混合物をエタノールで希釈し、濃縮し、残留物をメタノール／酢酸エチルから沈殿させて、３５ｍｇの９Ｄを白色固体として得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）４９２（ＭＨ＋）．１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：（部分）
Figure 0003742643
実施例１０
２−アミノ−Ｎ−｛２−［３ａ−（Ｒ）−ベンジル−３−オキソ−２−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル］−１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−オキソ−エチル｝−イソブチルアミド塩酸塩および
２−アミノ−Ｎ−｛２−［３ａ−（Ｓ）−ベンジル−３−オキソ−２−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル］−１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−オキソ−エチル｝−イソブチルアミド塩酸塩
Ａ． ３ａ−（Ｒ，Ｓ）−ベンジル−３−オキソ−２−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−カルボン酸ｔ−ブチルエステル
２０ｍＬのエタノール中における８４０ｍｇ（２．４２ｍｍｏｌ）の３Ｂおよび２７６ｍｇ（２．４２ｍｍｏｌ）の２，２，２−トリフルオロエチルヒドラジン（水中７０％）の混合物を約５時間加熱還流し、次いで濃縮した。残留物を４０ｍＬのトルエンに溶解し、約１７時間加熱還流した。混合物を濃縮し、残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（９：１ ｖ／ｖ ヘキサン：酢酸エチル）により精製して、７０３ｍｇの１０Ａを黄色の油として得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）４１２（ＭＨ＋）．
Ｂ． ３ａ−（Ｒ，Ｓ）−ベンジル−２−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−３−オン
６００ｍｇ（１．４６ｍｍｏｌ）の１０Ａに、３ｍＬの冷トリフルオロ酢酸を約０℃で添加し、混合物を約３時間撹拌し、溶液を自然に室温にまで高めた。混合物を濃縮し、残留物を水に溶解し、溶液をｐＨ１１になるまで５Ｎ ＮａＯＨ水溶液で塩基性にし、次いで炭酸カリウムで飽和した。この溶液を酢酸エチルで３回抽出し、有機抽出液を合わせてブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、３４５ｍｇの１０Ｂを不透明な油として得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）３１２（ＭＨ＋）．
Ｃ． （１−｛２−［３ａ−（Ｒ，Ｓ）−ベンジル−３−オキソ−２−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル］−１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−オキソ−エチルカルバモイル｝−１−メチル−エチル）−カルバミン酸ｔ−ブチルエステル
一般法Ａに概説した方法に従って、１３７ｍｇ（０．４４ｍｍｏｌ）の１０Ｂと１６７ｍｇ（０．４４ｍｍｏｌ）の１Ｅを結合させて、ジアステレオマー混合物を得た。残留物をシリカゲルクロマトグラフィーにより１００％塩化メチレンから塩化メチレン中５％メタノールまでの溶離濃度勾配を用いて精製し、極性が低い方の１０Ｃ異性体１を１２８ｍｇ、極性が高い方の１０Ｃ異性体２を６３ｍｇ得た。両異性体につきＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）６７４（ＭＨ＋）．
Ｄ． ２−アミノ−Ｎ−｛２−［３ａ−（Ｒ）−ベンジル−３−オキソ−２−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル］−１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−オキソ−エチル｝−イソブチルアミド塩酸塩
３．５ｍＬのエタノール中における１２０ｍｇ（０．１８ｍｍｏｌ）の１０Ｃ異性体１に、１．５ｍＬの濃ＨＣｌを添加し、混合物を室温で約２時間撹拌した。混合物を濃縮して、９４ｍｇの１０Ｄ異性体１を灰白色粉末として得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）５７４（ＭＨ＋）．１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：（部分）δ 7.31 ( m,5H )
Figure 0003742643
Ｅ． ２−アミノ−Ｎ−｛２−［３ａ−（Ｓ）−ベンジル−３−オキソ−２−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル］−１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−オキソ−エチル｝−イソブチルアミド塩酸塩
３．５ｍＬのエタノール中における５３ｍｇ（０．０７９ｍｍｏｌ）の１０Ｃ異性体２に、１．５ｍＬの濃ＨＣｌを添加し、混合物を室温で約２時間撹拌した。混合物を濃縮して、４１ｍｇの１０Ｅ異性体２を淡黄色固体として得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）５７４（ＭＨ＋）．１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：（部分）
Figure 0003742643
実施例１１
２−アミノ−Ｎ−［２−（３ａ−（Ｒ）−ベンジル−２−ｔ−ブチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−オキソ−エチル］−イソブチルアミドメタンスルホン酸塩および
２−アミノ−Ｎ−［２−（３ａ−（Ｓ）−ベンジル−２−ｔ−ブチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−オキソ−エチル］−イソブチルアミドメタンスルホン酸塩
Ａ． ３ａ−（Ｒ，Ｓ）−ベンジル−２−ｔ−ブチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−カルボン酸ｔ−ブチルエステル
４０ｍＬのエタノール中における２．０７ｇ（５．９５ｍｍｏｌ）の１４Ｂに、０．９７ｇ（７．７ｍｍｏｌ）のｔ−ブチルヒドラジン塩酸塩および０．６３ｇ（７．７ｍｍｏｌ）の酢酸ナトリウムを添加し、混合物を約７０℃に約１７時間加熱した。混合物を冷却し、溶液を沈殿からデカントし、濃縮した。残留物を８０ｍＬのトルエンに溶解し、約６時間加熱還流した。この混合物を濃縮し、残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（９：１ ｖ／ｖ ヘキサン：酢酸エチル）により精製して、１．７ｇの１１Ａを得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）３８６（ＭＨ＋）．
Ｂ． ３ａ−（Ｒ，Ｓ）−ベンジル−２−ｔ−ブチル−２，３ａ，４，５，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−３−オン
２０ｍＬの塩化メチレン中における５３５ｍｇ（１．３９ｍｍｏｌ）の１１Ａに、２２５μＬのメタンスルホン酸を添加し、混合物を室温で約１．５時間撹拌した。混合物を酢酸エチルで希釈し、１Ｎ ＮａＯＨで１回、ブラインで１回洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、２４６ｍｇの１１Ｂを得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）２８６（ＭＨ＋）．
Ｃ． ｛１−［２−（３ａ−（Ｒ，Ｓ）−ベンジル−２−ｔ−ブチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−オキソ−エチルカルバモイル］−１−メチル−エチル｝−カルバミン酸ｔ−ブチルエステル
一般法Ａに概説した方法に従って、２４６ｍｇ（０．８６ｍｍｏｌ）の１１Ｂと３２８ｍｇの１４Ｆを結合させて、ジアステレオマー混合物を得た。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（６：４ ｖ／ｖ ヘキサン：酢酸エチル）により精製して、極性が低い方の１１Ｃ異性体１を２５０ｍｇ、極性が高い方の１１Ｃ異性体２を９０ｍｇ得た。両異性体につきＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）６４８（ＭＨ＋）．
Ｄ． ２−アミノ−Ｎ−［２−（３ａ−（Ｒ）−ベンジル−２−ｔ−ブチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−オキソ−エチル］−イソブチルアミドメタンスルホン酸塩
１５ｍＬの塩化メチレン中における２１０ｍｇ（０．３２ｍｍｏｌ）の１１Ｃ異性体１に、約０℃で２８μＬ（０．４４ｍｍｏｌ）のメタンスルホン酸を添加した。氷浴を取り除き、混合物を約３時間撹拌し、１５ｍＬのジエチルエーテルで希釈し、沈殿した固体を濾取して、１００ｍｇの１１Ｄ異性体１を得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）５４８（ＭＨ＋）．１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：（部分）
Figure 0003742643
Ｅ． ２−アミノ−Ｎ−［２−（３ａ−（Ｓ）−ベンジル−２−ｔ−ブチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−オキソ−エチル］−イソブチルアミドメタンスルホン酸塩
１０ｍＬの塩化メチレン中における８５ｍｇ（０．１３ｍｍｏｌ）の１１Ｃ異性体２に、約０℃で２１μＬ（０．３２ｍｍｏｌ）のメタンスルホン酸を添加した。氷浴を取り除き、混合物を約３時間撹拌し、２０ｍＬのジエチルエーテルで希釈し、沈殿した固体を濾取して、４６ｍｇの１１Ｅ異性体１を得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）５４８（ＭＨ＋）．１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：（部分）
Figure 0003742643
実施例１２
２−アミノ−Ｎ−［１−（Ｒ）−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−２−（２−メチル−３−オキソ−３ａ−（Ｒ，Ｓ）−ピリジン−２−イルメチル−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−２−オキソ−エチル］−イソブチルアミド・ジ塩酸塩
Ａ． ４−オキソ−３−（Ｒ，Ｓ）−ピリジン−２−イルメチル−ピペリジン−１，３−ジカルボン酸１−ｔ−ブチルエステル３−メチルエステル
３２ｍＬのＴＨＦ中における２．００ｇ（７．８ｍｍｏｌ）の３Ａの溶液に、４６８ｍｇ（１１．７ｍｍｏｌ）の水素化ナトリウム（６０％油分散液）を０℃で添加し、混合物を約３０分間撹拌した。この撹拌溶液に、５ｍＬのＴＨＦ中における７６２ｍｇ（６．０ｍｍｏｌ）の２−ピコリルクロリドの溶液を約５分かけて添加し、続いてヨウ化カリウム４３２ｍｇ（２．６ｍｍｏｌ）を添加した。氷浴を取り除き、混合物を約１７時間加熱還流した。混合物を酢酸エチルで希釈し、水で１回およびブラインで１回洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィーにより（６：４ ｖ／ｖ エーテル：ヘキサン）、続いて（６：４ ｖ／ｖ 酢酸エチル：ヘキサン）を用いて精製し、１．２ｇの１２Ａを得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）３４９（ＭＨ＋）．
Ｂ． ２−メチル−３−オキソ−３ａ−（Ｒ，Ｓ）−ピリジン−２−イルメチル−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−カルボン酸ｔ−ブチルエステル
２０ｍＬのエタノール中における１．２０ｇ（３．４５ｍｍｏｌ）の１２Ａおよび１５９ｍｇ（３．４５ｍｍｏｌ）のメチルヒドラジンの混合物を約６．５時間加熱還流した。混合物を濃縮し、残留物を２５ｍＬのトルエンに溶解し、約１７時間加熱還流した。混合物を濃縮し、残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（６５：３５ ｖ／ｖ 酢酸エチル：ヘキサン）により精製し、４５０ｍｇの１２Ｂを得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）３４５（ＭＨ＋）．
Ｃ． ２−メチル−３ａ−（Ｒ，Ｓ）−ピリジン−２−イルメチル−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−３−オン・ジ塩酸塩
２ｍＬの４Ｍ ＨＣｌ／ジオキサン中における４５０ｍｇ（１．３０ｍｍｏｌ）の１２Ｂの混合物を室温で約４．５時間撹拌した。混合物を濃縮して、４５０ｍｇの１２Ｃを得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）２４５（ＭＨ＋）．
Ｄ． ｛１−［１−（１−（Ｒ）−Ｈ−インドール−３−イルメチル）−２−（２−メチル−３−オキソ−３ａ−（Ｒ，Ｓ）−ピリジン−２−イルメチル−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−２−オキソ−エチルカルバモイル］−１−メチル−エチル｝−カルバミン酸ｔ−ブチルエステル
一般法Ａに概説した方法に従って、１０８ｍｇ（０．３１ｍｍｏｌ）の１２Ｃと１２２ｍｇ（０．３１ｍｍｏｌ）の２Ｃを結合させ、残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（９５：５ ｖ／ｖ 酢酸エチル：メタノール）により精製して、１１８ｍｇの１２Ｄを得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）６１６（ＭＨ＋）．
Ｅ． ２−アミノ−Ｎ−［１−（Ｒ）−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−２−（２−メチル−３−オキソ−３ａ−（Ｒ，Ｓ）−ピリジン−２−イルメチル−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−２−オキソ−エチル］−イソブチルアミド・ジ塩酸塩
１ｍＬの４Ｍ ＨＣｌ／ジオキサン中における１１０ｍｇ（０．１８ｍｍｏｌ）の１２Ｄの混合物を、室温で１７時間撹拌した。混合物を濃縮して、５１ｍｇの１２Ｅを得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）５１６（ＭＨ＋）．１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：（部分）
Figure 0003742643
実施例１３
２−アミノ−Ｎ−［１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−（２−メチル−３−オキソ−３ａ−（Ｒ，Ｓ）−ピリジン−２−イルメチル−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−２−オキソ−エチル］−イソブチルアミド・ジ塩酸塩
Ａ． ｛１−［１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−（２−メチル−３−オキソ−３ａ−（Ｒ，Ｓ）−ピリジン−２−イルメチル−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−２−オキソ−エチルカルバモイル］−１−メチル−エチル｝−カルバミン酸ｔ−ブチルエステル
一般法Ａに概説した方法に従って、８６ｍｇ（０．２７ｍｍｏｌ）の１２Ｃと１０３ｍｇ（０．２７ｍｍｏｌ）の１Ｅを結合させ、残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（９５：５ ｖ／ｖ 酢酸エチル：メタノール）により精製して、８２ｍｇの１３Ａを得た。
Ｂ． ２−アミノ−Ｎ−［１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−（２−メチル−３−オキソ−３ａ−（Ｒ，Ｓ）−ピリジン−２−イルメチル−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−２−オキソ−エチル］−イソブチルアミド・ジ塩酸塩
１ｍＬの４Ｍ ＨＣｌ／ジオキサン中における７５ｍｇ（０．１２ｍｍｏｌ）の１３Ａの混合物を室温で約１７時間撹拌した。混合物を濃縮して、８０ｍｇの１３Ｂを得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）５０７（ＭＨ＋）．１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：（部分）δ 8.78 ( m,1H ),8.46
Figure 0003742643
実施例１４
２−アミノ−Ｎ−［２−（３ａ−（Ｒ）−ベンジル−２−メチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１−（Ｒ）−（ベンジルオキシメチル）−２−オキソ−エチル］−イソブチルアミド
Ａ． ４−オキソ−ピペリジン−１，３−ジカルボン酸１−ｔ−ブチルエステル３−メチルエステル
１Ｌの塩化メチレン中における１００．０ｇ（５１６．４ｍｍｏｌ）の４−オキソ−ピペリジン−３−カルボン酸メチルエステルおよび６３ｇ（５１６．４ｍｍｏｌ）の４，４−ジメチルアミノピリジンの混合物に約０℃で、１００ｍＬの塩化メチレン中における１１３．０ｇ（５１６．４ｍｍｏｌ）のジ−ｔ−ブチルジカーボネートの溶液を約９０分かけて添加した。混合物を徐々に室温にまで高め、次いで約１９時間撹拌した。混合物を１０％ＨＣｌ水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液およびブラインでそれぞれ３回洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、１３０．５ｇの１４Ａを無定形固体として得た。
Figure 0003742643
Ｂ． ３−（Ｒ）−ベンジル−４−オキソ−ピペリジン−１，３−ジカルボン酸１−ｔ−ブチルエステル３−メチルエステル
１００ｍＬのＤＭＦ中における１１．７ｇ（２９３ｍｍｏｌ）の水素化ナトリウム（６０％油分散液、１００ｍＬのヘキサンで２回洗浄）の撹拌懸濁液に、１５０ｍＬのＤＭＦ中における６５．４ｇ（２５４ｍｍｏｌ）の１４Ａの溶液を約０℃で約４５分かけて添加した。氷浴を取り除き、混合物を室温で約４５分間撹拌した。混合物を約０℃に再冷却し、この撹拌溶液に、２００ｍＬのＤＭＦ中における３５．２ｍＬ（２９６ｍｍｏｌ）の臭化ベンジルを滴加し、混合物を室温で約２３時間撹拌した。この溶液に５５０ｍＬの水を慎重に添加し、混合物を約３０分間撹拌した。混合物を酢酸エチルで３回抽出し、有機抽出液を合わせて水で５回、ブラインで１回洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮すると、黄色の油９８ｇが得られた。この油をヘキサンから結晶化して、７１ｇの１４Ｂを白色固体として得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）３４８（ＭＨ＋）．１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：（部分）
Figure 0003742643
Ｃ． ３ａ−（Ｒ）−ベンジル−２−メチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−カルボン酸ｔ−ブチルエステル
９００ｍＬのエタノール中における４７．０ｇ（１３５ｍｍｏｌ）の１４Ｂ、３８．９ｇ（２７０ｍｍｏｌ）の硫酸メチルヒドラジンおよび４４．３ｇ（５４０ｍｍｏｌ）の酢酸ナトリウムの混合物を、窒素下で約１７時間加熱還流した。混合物を濃縮し、残留物を酢酸エチルに溶解し、水で３回、ブラインで１回洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮すると、黄色の油が得られた。この油を７５０ｍＬのヘキサン中で約３時間撹拌して、４１．１７ｇの１４Ｃを白色固体として得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）３４４（ＭＨ＋）．１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：（部分）
Figure 0003742643
Ｄ． ３ａ−（Ｒ，Ｓ）−ベンジル−２−メチル−２，３ａ，４，５，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−３−オン塩酸塩
無水ＨＣｌを、８００ｍＬのジエチルエーテル中における２４．５５ｇ（７１．５ｍｍｏｌ）の１４Ｃの溶液に、約０℃で約１２分間吹き込んだ。混合物を約３時間撹拌すると、その間に白色沈殿が生じた。沈殿した固体を濾取して、１９．２ｇの１４Ｄを得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）２４４（ＭＨ＋）．１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：（部分）
Figure 0003742643
Ｅ． ２−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−メチル−プロピオン酸２，５−ジオキソ−ピロリジン−１−イルエステル
２Ｌの塩化メチレン中における１００．０ｇ（４９２ｍｍｏｌ）のＢｏｃ−α−メチルアラニンおよび９４．０ｇ（４９２ｍｍｏｌ）のＥＤＣの撹拌溶液に、約０℃で５６．６３ｇ（４９２ｍｍｏｌ）のＮ−ヒドロキシスクシンイミドを少量ずつ添加し、次いで反応物を室温にまで高めた。混合物を約２４時間撹拌し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液およびブラインでそれぞれ２回洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、１２４．０ｇの１４Ｅを白色固体として得た。
Figure 0003742643
Ｆ． ３−（Ｒ）−ベンジルオキシ−（２−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−メチル−プロピオニルアミノ）−プロピオン酸
４００ｍＬのジオキサン中における５０．５ｇ（１６８ｍｍｏｌ）の１４Ｅ、３３．５ｇ（１６８ｍｍｏｌ）のＯ−ベンジル−Ｄ−セリンおよび５１．０５ｇ（５０５ｍｍｏｌ）のトリエチルアミンの混合物を、約４５℃に約１６時間加熱した。混合物を酢酸エチルで希釈し、酢酸でｐＨ２の酸性にした。層を分離し、有機相をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、６５０ｇの１４Ｆを白色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：（部分）δ
Figure 0003742643
Ｇ． ３ａ−（Ｒ）−ベンジル−２−メチル−２，３ａ，４，５，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−３−オンＬ−酒石酸塩
８０ｍＬのアセトン中における５．００ｇ（２０．６ｍｍｏｌ）の１４Ｄ遊離塩基および３．０９ｇ（２０．６ｍｍｏｌ）のＬ−酒石酸の混合物に、窒素下で約７０℃に約７０時間加熱した。その間に反応混合物は濃厚な懸濁液になり、さらに２０ｍＬのアセトンを添加した。反応混合物を徐々に室温にまで放冷し、次いで濾過した。採集した固体をアセトンで洗浄し、真空乾燥させて、７．０３ｇの１４Ｇを白色固体として得た。
Ｈ． ３ａ−（Ｒ）−ベンジル−２−メチル−２，３ａ，４，５，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−３−オン
８０ｍＬの塩化メチレン中における５．００ｇ（１２．７ｍｍｏｌ）の１４Ｇの懸濁液に約０℃で、１．７２ｍＬ（２５．４ｍｍｏｌ）の水酸化アンモニウムを添加し、混合物を約１５分間撹拌した。この冷溶液を濾過し、直ちに次の工程に用いた。
Ｉ． ｛１−［２−（３ａ−（Ｒ）−ベンジル−２−メチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１−（Ｒ）−（ベンジルオキシメチル）−２−オキソ−エチルカルバモイル］−１−メチル−エチル｝−カルバミン酸ｔ−ブチルエステル
４．８３ｇ（１２．７ｍｍｏｌ）の１４Ｆ、１４Ｈで得た溶液、２．６０ｇ（１９．１ｍｍｏｌ）のＨＯＡＴおよび２．４５ｇ（１２．８ｍｍｏｌ）のＥＤＣの混合物を、窒素下に約０℃で約１時間加熱し、次いで室温にまで高め、約１６時間撹拌した。混合物を濾過し、濾液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、７．３５ｇの１４Ｉを白色固体として得た。
Ｊ． ２−アミノ−Ｎ−［２−（３ａ−（Ｒ）−ベンジル−２−メチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１−（Ｒ）−（ベンジルオキシメチル）−２−オキソ−エチル］−イソブチルアミド
７ｍＬの塩化メチレン中における７５５ｍｇ（１．２５ｍｍｏｌ）の１４Ｉに、約０℃で３．５ｍＬの冷トリフルオロ酢酸を添加し、混合物を約０℃で約１時間撹拌した。混合物を室温にまで高め、約２時間撹拌した。混合物を濃縮し、トルエンと共に２回蒸発させた。残留物をクロロホルムに溶解し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で２回、水およびブラインでそれぞれ１回洗浄した。混合物をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、５９４ｍｇの１４Ｊを油として得た。
実施例１５
２−アミノ−Ｎ−［１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−（２−メチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−２−オキソ−エチル］−イソブチルアミド塩酸塩
Ａ． ２−メチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−カルボン酸ｔ−ブチルエステル
１００ｍＬのエタノール中における３．００ｇ（１１．６６ｍｍｏｌ）の３Ａおよび５３７ｍｇ（１１．６６ｍｍｏｌ）のメチルヒドラジンの混合物を、約１７時間加熱還流した。混合物を濃縮し、残留物を１００ｍＬのトルエンに溶解し、約１７時間加熱還流した。混合物を酢酸エチルで希釈し、ブラインで２回洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィーにより１００％酢酸エチルから塩化メチレン中５％メタノールまでの溶離濃度勾配を用いて精製し、２．２８ｇの１５Ａを白色固体として得た。
Figure 0003742643
Ｂ． ２−メチル−２，３ａ，４，５，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−３−オン塩酸塩
３０ｍＬのエタノール中における５１０ｍｇ（２．０１ｍｍｏｌ）の１５Ａに１０ｍＬの濃ＨＣｌを添加し、混合物を室温で約３５分間撹拌した。混合物を濃縮し、残留物をメタノール／酢酸エチルから結晶化して、４２５ｍｇの１５Ｂを黄色固体として得た。
Figure 0003742643
Ｃ． ｛１−［１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−（２−メチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−２−オキソ−エチルカルバモイル］−１−メチル−エチル｝−カルバミン酸ｔ−ブチルエステル
一般法Ａに概説した方法に従って、１００ｍｇ（０．５３ｍｍｏｌ）の１５Ｂと２０２ｍｇ（０．５３ｍｍｏｌ）の１Ｅを結合させ、残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（９５：５ ｖ／ｖ 塩化メチレン：メタノール）により精製して、５４ｍｇの１５Ｃを白色固体として得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）５１６（ＭＨ＋）．
Ｄ． ２−アミノ−Ｎ−［１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−（２−メチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−２−オキソ−エチル］−イソブチルアミド塩酸塩
３０ｍＬのエタノール中における５４ｍｇ（０．１０ｍｍｏｌ）の１５Ｃに１０ｍＬの濃ＨＣｌを添加し、混合物を室温で約４０分間撹拌した。混合物を濃縮し、残留物をメタノール／酢酸エチルから沈殿させて、５０ｍｇの１５Ｄを得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）４１６（ＭＨ＋）．１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：（部分）
Figure 0003742643
実施例１６
２−アミノ−Ｎ−［２−（２−ベンジル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１−（Ｒ）−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−２−オキソ−エチル］−イソブチルアミド塩酸塩
Ａ． ２−ベンジル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−カルボン酸ｔ−ブチルエステル
１５ｍＬのエタノール中における８００ｍｇ（３．１１ｍｍｏｌ）の３Ａおよび４９５ｍｇ（３．１１ｍｍｏｌ）のベンジルヒドラジン・ジ塩酸塩の混合物を約１７時間加熱還流した。混合物を濃縮し、残留物を１００ｍＬのトルエンに溶解し、約４８時間加熱還流した。混合物を酢酸エチルで希釈し、ブラインで２回洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィーにより１００％酢酸エチルから塩化メチレン中５％メタノールまでの溶離濃度勾配を用いて精製して、５３０ｍｇの１６Ａを黄褐色固体として得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）３３０（ＭＨ＋）．
Ｂ． ２−ベンジル−２，３ａ，４，５，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−３−オン塩酸塩
３０ｍＬのエタノール中における４１１ｍｇ（１．２４ｍｍｏｌ）の１６Ａに１０ｍＬの濃ＨＣｌを添加し、混合物を室温で約３０分間撹拌した。混合物を濃縮し、残留物をメタノール／酢酸エチルから結晶化して、３５３ｍｇの１６Ｂを黄色固体として得た。
Figure 0003742643
Ｃ． （Ｒ）−２−（２−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−メチル−プロピオニルアミノ）−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−プロピオン酸
４５０ｍＬのジオキサン：水中における３０．６ｇ（０．１５ｍｍｏｌ）のＤ−トリプトファン、３０．４ｇ（０．３０ｍｍｏｌ）のＮ−メチルモルホリンの撹拌溶液に、４５．０ｇ（０．１５ｍｍｏｌ）の１４Ｅを添加し、混合物を約７２時間撹拌した。過剰のジオキサンを蒸発除去し、水および酢酸エチルを混合物に添加した。濃ＨＣｌにより溶液のｐＨを３に調整し、層を分離した。有機層を水およびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。残留物を酢酸エチル／ヘキサンから結晶化して、３７．０ｍｇの灰白色固体を得た。
Ｄ． ｛１−［２−（２−ベンジル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１−（Ｒ）−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−２−オキソ−エチルカルバモイル］−１−メチル−エチル｝−カルバミン酸ｔ−ブチルエステル
一般法Ａに概説した方法に従って、１００ｍｇ（０．３８ｍｍｏｌ）の１６Ｂと２０２ｍｇ（０．５３ｍｍｏｌ）の１６Ｃを結合させ、残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（９５：５ ｖ／ｖ 塩化メチレン：メタノール）により精製して、４５ｍｇの１６Ｄを白色固体として得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）６０１（ＭＨ＋）．
Ｅ． ２−アミノ−Ｎ−［２−（２−ベンジル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１−（Ｒ）−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−２−オキソ−エチル］−イソブチルアミド塩酸塩
６０ｍＬのエタノール中における４５ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）の１６Ｄに２０ｍＬの濃ＨＣｌを添加し、混合物を室温で３５分間撹拌した。混合物を濃縮し、残留物をメタノール／酢酸エチルから沈殿させて、３０ｍｇの１６Ｅを得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：（部分）
Figure 0003742643
実施例１７
２−アミノ−Ｎ−［１−ベンジルオキシメチル−２−（２，３ａ−ジメチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−２−オキソ−エチル］−イソブチルアミド塩酸塩
Ａ． ３−メチル−４−オキソ−ピペリジン−１，３−ジカルボン酸１−ｔ−ブチルエステル３−（Ｒ，Ｓ）−メチルエステル
３０ｍＬのＤＭＦ中における２．００ｇ（７．７７ｍｍｏｌ）の３Ａの溶液に、３０８ｍｇ（７．７７ｍｍｏｌ）の水素化ナトリウム（６０％油分散液）を添加し、混合物を室温で約２５分間撹拌した。この撹拌溶液に０．５０ｍＬ（７．７７ｍｍｏｌ）のヨウ化メチルを添加し、混合物を室温で約１７時間撹拌した。混合物を酢酸エチルで希釈し、水で１回、ブラインで４回洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（７：３ ｖ／ｖ ヘキサン：酢酸エチル）により精製して、１．７５ｇの１７Ａを透明な油として得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）２７２（ＭＨ＋）．
Ｂ． ２，３ａ−（Ｒ，Ｓ）−ジメチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−カルボン酸ｔ−ブチルエステル
３０ｍＬのエタノール中における１．６２ｇ（９．５０ｍｍｏｌ）の１７Ａおよび４３５ｍｇ（９．５０ｍｍｏｌ）のメチルヒドラジンの混合物を、約４時間加熱還流した。混合物を濃縮し、残留物を５０ｍＬのトルエンに溶解し、約１４時間加熱還流した。混合物を酢酸エチルで希釈し、ブラインで２回洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（７：３ ｖ／ｖ ヘキサン：酢酸エチル）により精製して、１．００ｇの１７Ｂを白色固体として得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）２６８（ＭＨ＋）．
Ｃ． ２，３ａ−（Ｒ，Ｓ）−ジメチル−２，３ａ，４，５，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−３−オン塩酸塩
４０ｍＬのエタノール中における１．００ｇ（３．７４ｍｍｏｌ）の１７Ｂに８ｍＬの濃ＨＣｌを添加し、混合物を室温で約３５分間撹拌した。混合物を濃縮し、残留物をメタノール／酢酸エチルから結晶化して、８５０ｍｇの１７Ｃを白色固体として得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）１６８（ＭＨ＋）．
Ｄ． ｛１−［１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−（２，３ａ−（Ｒ，Ｓ）−ジメチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−２−オキソ−エチルカルバモイル］−１−メチル−エチル｝−カルバミン酸ｔ−ブチルエステル
一般法Ａに概説した方法に従って、１５０ｍｇ（０．７４ｍｍｏｌ）の１７Ｃと５１４ｍｇ（１．３５ｍｍｏｌ）の１Ｅを結合させ、残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（８５：１５ ｖ／ｖ ヘキサン：酢酸エチル）により精製して、１８５ｍｇの１７Ｄを白色固体として得た。
Ｅ． ２−アミノ−Ｎ−［１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−（２，３ａ−（Ｒ，Ｓ）−ジメチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−２−オキソ−エチル］−イソブチルアミド塩酸塩
４０ｍＬのエタノール中における１７３ｍｇ（０．３３ｍｍｏｌ）の１７Ｂに１５ｍＬの濃ＨＣｌを添加し、混合物を室温で約１時間撹拌した。混合物を濃縮し、残留物をクロロホルムで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。残留物をシリカゲルクロマトグラフィーにより１００％酢酸エチルから酢酸エチル中１０％ジメチルアミンまでの溶離濃度勾配を用いて精製した。残留物をエタノールに溶解し、ＨＣｌ水溶液で酸性にした。混合物を濃縮し、残留物をメタノール／酢酸エチルから結晶化して、６５ｍｇの１７Ｅを白色固体として得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）５０２（ＭＨ＋）．１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：（部分）
Figure 0003742643
実施例１８
２−アミノ−Ｎ−［２−（３ａ−（Ｒ）−ベンジル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−オキソ−エチル］−イソブチルアミド塩酸塩および
２−アミノ−Ｎ−［２−（３ａ−（Ｓ）−ベンジル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−オキソ−エチル］−イソブチルアミド塩酸塩塩
Ａ． ３−ベンジル−４−オキソ−ピペリジン−３−カルボン酸メチルエステル
２００ｍｇ（０．５８ｍｍｏｌ）の３Ｂに約０℃で５ｍＬの冷トリフルオロ酢酸を添加し、混合物を約１時間撹拌した。混合物を濃縮し、残留物を酢酸エチルおよびヘキサンと共に蒸発させた。残留物に２Ｎ ＮａＯＨを添加して塩基性にし、混合物をクロロホルムで抽出した。有機抽出液を合わせてＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、１８Ａを定量的収率で得た。
Ｂ． ３−（Ｒ，Ｓ）−ベンジル−１−［３−ベンジルオキシ−２−（Ｒ）−（２−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−メチル−プロピオニルアミノ）−プロピオニル］−４−オキソ−ピペリジン−３−カルボン酸メチルエステル
一般法Ａに概説した方法に従って、１．７７ｇ（７．１６ｍｍｏｌ）の１８Ａと３．０４ｇ（８．０ｍｍｏｌ）の１４Ｆを結合させて、ジアステレオマー混合物を得た。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（７：３ ｖ／ｖ ヘキサン：酢酸エチル）により精製して、極性が低い方の１８Ｂ異性体１を８２０ｍｇ、極性が高い方の１８Ｂ異性体２を１．１４ｇ得た。両異性体につきＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）６１１（ＭＨ＋）．
Ｂ． ｛１−［２−（３ａ−（Ｒ，Ｓ）−ベンジル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−オキソ−エチルカルバモイル］−１−メチル−エチル｝−カルバミン酸ｔ−ブチルエステル
１３ｍＬのエタノール中における８２０ｍｇ（１．３２ｍｍｏｌ）の１８Ｂ異性体１の溶液に、３４２ｍｇ（２．６３ｍｍｏｌ）の硫酸ヒドラジンおよび４３１ｍｇ（５．２６ｍｍｏｌ）の酢酸ナトリウムを添加し、混合物を約１７時間加熱還流した。混合物を濃縮し、残留物を酢酸エチルで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液およびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィーによりヘキサン中７５％酢酸エチルから１００％酢酸エチルまでの溶離濃度勾配を用いて精製し、５５０ｍｇの１８Ｃ異性体１を得た。
２０ｍＬのエタノール中における１．１４ｇ（１．８６ｍｍｏｌ）の１８Ｂ異性体２の溶液に、４８５ｍｇ（３．７３ｍｍｏｌ）の硫酸ヒドラジンおよび６１３ｍｇ（７．４８ｍｍｏｌ）の酢酸ナトリウムを添加し、混合物を約１７時間加熱還流した。混合物を濃縮し、残留物を酢酸エチルで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液およびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（７５：２５ ｖ／ｖ 酢酸エチル／ヘキサン）により精製して、７１０ｍｇの１８Ｃ異性体２を得た。
Ｄ． ２−アミノ−Ｎ−［２−（３ａ−（Ｒ）−ベンジル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−オキソ−エチル］−イソブチルアミド塩酸塩
１２ｍＬのエタノール中における２００ｍｇ（０．３４ｍｍｏｌ）の１８Ｃ異性体１に６ｍＬの濃ＨＣｌを添加し、混合物を室温で約２．５時間撹拌した。混合物を濃縮し、残留物をエタノールと共に３回蒸発させて、２０ｍｇの１８Ｄ異性体１を得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）４９２（ＭＨ＋）．１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：（部分）δ
Figure 0003742643
Ｅ． ２−アミノ−Ｎ−［２−（３ａ−（Ｓ）−ベンジル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−オキソ−エチル］−イソブチルアミド塩酸塩
２０ｍＬのエタノール中における２００ｍｇ（０．３４ｍｍｏｌ）の１８Ｃ異性体２に１０ｍＬの濃ＨＣｌを添加し、混合物を室温で約２．５時間撹拌した。混合物を濃縮し、残留物をエタノールと共に３回蒸発させて、３０ｍｇの１８Ｅ異性体２を得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）４９２（ＭＨ＋）．１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：（部分）δ
Figure 0003742643
実施例１９
２−アミノ−Ｎ−［１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−（２−メチル−３−オキソ−３ａ−（Ｒ，Ｓ）−チアゾール−４−イルメチル−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−２−オキソ−エチル］−イソブチルアミド・ジ塩酸塩
Ａ． ４−オキソ−３ａ−（Ｒ，Ｓ）−チアゾール−４−イルメチル−ピペリジン−１，３−ジカルボン酸１−ｔ−ブチルエステル３−メチルエステル
５ｍＬのＴＨＦ中における３００ｍｇ（１．１０ｍｍｏｌ）の１Ａの溶液に約０℃で、６７ｍｇ（１．６６ｍｍｏｌ）の水素化ナトリウム（６０％油分散液）を添加し、混合物を約３０分間撹拌した。５ｍＬのＴＨＦ中における２０４ｍｇ（１．２１ｍｍｏｌ）の４−クロロメチルチアゾール（Ｈｓｉａｏ，Ｃ．Ｎ．；Ｓｙｎｔｈ．Ｃｏｍｍ．２０，ｐ．３５０７（１９９０））の溶液を上記の冷溶液に添加し、続いて８７ｍｇ（０．５３ｍｍｏｌ）のヨウ化カリウムを添加し、混合物を約１７時間加熱還流した。この混合物を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機抽出液を合わせてＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（７：３ ｖ／ｖ ヘキサン：酢酸エチル）により精製して、９０ｍｇの表題化合物を得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）６４８（ＭＨ＋）．
Ｂ． ２−メチル−３−オキソ−３ａ−（Ｒ，Ｓ）−チアゾール−４−イルメチル−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−カルボン酸ｔ−ブチルエステル
２ｍＬのエタノール中における９０ｍｇ（０．２４ｍｍｏｌ）の１９Ａに、１１．２ｍｇ（０．２４ｍｍｏｌ）のメチルヒドラジンを添加し、混合物を約１７時間加熱還流した。３３．６ｍｇ（０．７２ｍｍｏｌ）のメチルヒドラジンを追加し、混合物を約７時間加熱還流した。混合物を濃縮し、残留物を３ｍＬのトルエンに溶解し、約１７時間加熱還流した。混合物を濃縮し、残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（６：４ ｖ／ｖ ヘキサン：酢酸エチル）により精製して、４４ｍｇの１９Ｂを得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）６４８（ＭＨ＋）．
Ｃ． ２−メチル−３ａ−（Ｒ，Ｓ）−チアゾール−４−イルメチル−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−３−オン・ジ塩酸塩
１ｍＬの４Ｍ ＨＣｌ（ジオキサン中）中における４４ｍｇ（０．１０ｍｍｏｌ）の１９Ｂの混合物を、室温で約４時間撹拌した。混合物を濃縮し、塩化メチレンと共に蒸発させて、４０ｍｇの１９Ｃを得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）２５１（ＭＨ＋）．
Ｄ． ｛１−［１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−メチル−３−オキソ−３ａ−（Ｒ，Ｓ）−チアゾール−４−イルメチル−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−２−オキソ−エチルカルバモイル］−１−メチル−エチル｝−カルバミン酸ｔ−ブチルエステル
一般法Ａに概説した方法に従って、４０ｍｇ（０．１２ｍｍｏｌ）の１９Ｃと３９ｍｇ（０．１２ｍｍｏｌ）の１４Ｆを結合させ、残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（９：１ ｖ／ｖ 酢酸エチル：ヘキサン）により精製して、４０ｍｇの１９Ｄを得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）６１３（ＭＨ＋）．
Ｅ． ２−アミノ−Ｎ−［１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−（２−メチル−３−オキソ−３ａ−（Ｒ，Ｓ）−チアゾール−４−イルメチル−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−２−オキソ−エチル］−イソブチルアミド・ジ塩酸塩
１ｍＬの４Ｍ ＨＣｌ（ジオキサン中）中における４０ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）の１９Ｄの混合物を、室温で約５時間撹拌した。混合物を濃縮し、塩化メチレンと共に蒸発させて、４０ｍｇの１９Ｅを得た。ＭＳ（Ｃｌ，ＮＨ３）５１３（ＭＨ＋）．
実施例２０
２−アミノ−Ｎ−［２−（３ａ−（Ｒ）−ベンジル−２−メチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１−（Ｒ）−（ベンジルオキシメチル）−２−オキソ−エチル］−イソブチルアミドＬ−酒石酸塩
２０ｍＬのメタノール中における実施例１４の表題化合物４．６ｇに、２０ｍＬのメタノール中における１．３６ｇのＬ−酒石酸の溶液を約０℃で添加した。混合物を室温に高め、約４０分間撹拌し、真空中で濃縮した。残留物を２２０ｍＬの酢酸エチルで希釈し、約１．５時間加熱還流し、次いで約７２℃で約１８時間撹拌した。混合物を室温にまで冷却し、濾過して、５．７８ｇの表題化合物を無色結晶質固体として得た。
実施例２１
３−ベンジル−３−メトキシカルボニルメチル−４−オキソ−ピペリジン−１−カルボン酸ｔ−ブチルエステル
Ａ． ３−ベンジル−４−オキソ−ピペリジン−１−カルボン酸ｔ−ブチルエステル
β−ケトエステル（４４８０ｍｇ，１２．９ｍｍｏｌ）およびＬｉＣｌ（１１００ｍｇ，２５．８ｍｍｏｌ）の混合物を、ＤＭＦ（２．０ｍＬ）中で約１２０℃に約１７時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬで３回）抽出した。抽出液を合わせて乾燥させ、真空中で濃縮した。粗生成物をＳｉＯ２上で２０％酢酸エチル／ヘキサンによりクロマトグラフィー処理して、１３２０ｍｇの目的生成物を黄色の油として得た。
Figure 0003742643
Ｂ． ３−ベンジル−３−メトキシカルボニルメチル−４−オキソ−ピペリジン−１−カルボン酸１−ｔ−ブチルエステル
ベンゼン（３０ｍＬ）中における、前記実施例２１の工程Ａで得た生成物（１３２０ｍｇ，４．５６ｍｍｏｌ）、ピロリジン（９７２ｍｇ，１３ｍｍｏｌ）およびｐ−トルエンスルホン酸（３３ｍｇ）の溶液を、３Åのモレキュラーシーブを通して約１７時間還流した。反応混合物を室温に冷却し、真空中で濃縮した。残留物をベンゼン（１０ｍＬ）に溶解し、約０℃に冷却した。ブロモ酢酸メチル（１５３０ｍｇ，１０ｍｍｏｌ）を滴加した。反応混合物を徐々に室温にまで高め、次いで約１７時間加熱還流し、この時点でＨ２Ｏ（５ｍＬ）を添加した。さらに２時間還流した後、反応混合物を室温に冷却し、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬで３回）抽出した。有機抽出液を合わせて乾燥させ、真空中で濃縮した。粗製残留物をＳｉＯ２ゲル上で１５％酢酸エチル／ヘキサンによりクロマトグラフィー処理して、２８０ｍｇの生成物を得た。
Figure 0003742643
実施例２２
６−オキソ−１−フェニル−シクロヘキサン−１，３−ジカルボン酸３−ｔ−ブチルエステル１−メチルエステル
ＣＨＣｌ３（４ｍＬ）中におけるジフェニル水銀（８９０ｍｇ，２．５ｍｍｏｌ）の溶液を、Ｎ２下で約４０℃に加熱した。次いで四酢酸鉛（１１１０ｍｇ，２．５ｍｍｏｌ）を少量ずつ添加し、この緑黄色溶液を４０℃で約０．５時間撹拌した。次いでβ−ケトエステル（５２０ｍｇ，２．０ｍｍｏｌ）を添加し、続いてピリジン（０．２ｍＬ，２．５ｍｍｏｌ）を添加した。４０℃で約５時間後、反応混合物を真空中で濃縮し、残留物をエーテル（１００ｍＬ）に溶解し、濾過した。濾液を３Ｎ Ｈ２ＳＯ４（３回）で洗浄し、乾燥させ、濃縮すると６１６ｍｇの黄色固体が得られた。ＳｉＯ２ゲル上で２５％酢酸エチル／ヘキサンによりフラッシュクロマトグラフィー処理して、３６８ｍｇの目的生成物を得た。
Figure 0003742643
実施例２３
（Ｄ）−２−アミノ−３−（２，４−ジクロロ−ベンジルオキシ）−プロピオン酸塩酸塩
Ａ． （Ｄ）−２−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−３−（２，４−ジクロロ−ベンジルオキシ）−プロピオン酸
ＤＭＦ（７５ｍＬ）中におけるＢｏｃ−Ｄ−セリン（８．２ｇ，４０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に約０℃で、ＮａＨ（６０％分散液，３．２ｇ，８０ｍｍｏｌ）を約１０分かけて添加した。反応混合物を約０℃で約１．７５時間、次いで室温で約０．２５時間撹拌した。約０℃に冷却した後、ＤＭＦ（５ｍＬ）中における２，４−ジクロロトルエン（５．５６ｍＬ，４０ｍｍｏｌ）の溶液を滴加した。反応混合物を約２３℃に高め、約１７時間撹拌し、次いでジイソプロピルエーテルと１０％ＨＣｌの間で分配した。水溶液をジイソプロピルエーテル（２回）で抽出した。抽出液を合わせて飽和ブライン水溶液で洗浄し、乾燥させ、濃縮すると１４．７５ｇの粗生成物が得られ、これをさらに精製せずに用いた。
Figure 0003742643
Ｂ． （Ｄ）−２−アミノ−３−（２，４−ジクロロ−ベンジルオキシ）−プロピオン酸塩酸塩
上記実施例２３の工程Ａの生成物（１４．７ｇ，４０ｍｍｏｌ）を、４Ｍ ＨＣｌ／ジオキサン（１００ｍＬ）中で約１７時間撹拌した。反応混合物を真空中で濃縮して、１２ｇの黄色固体を得た（１００％）。ＭＳ（ＡＰＣＩ）２６５（Ｍ＋１）．
実施例２４
下記に示す式をもつ実施例２４
Figure 0003742643
（式中、Ｒ１は−ＣＨ２−フェニル、Ｒ２はメチル）を、実施例３Ｃ〜３Ｆに記載した方法と同様な様式で、出発物質として実施例２１の表題化合物を用いて合成した。Ｒ，ＲおよびＳ，Ｒの両ジアステレオマー（＊が上記構造式のＣ−３炭素における他方の立体異性体中心を示す）を単離した。質量スペクトル（Ｍ＋１）＝５２０；ＭＳ法＝粒子衝突．
実施例２５および２６
下記に示す式をもつ実施例２５および２６
Figure 0003742643
（式中、実施例２５および２６の両方ともＲ１はフェニル、Ｒ２はメチル；実施例２５はＲ，Ｒ異性体、実施例２６はＳ，Ｒ異性体）。実施例２５および２６を、実施例３Ｃ〜３Ｆに記載した方法と同様な方法で、出発物質として実施例２２の表題化合物を用いて合成し、続いて２種類の別個の異性体をクロマトグラフィーにより分離した。各実施例について質量スペクトル（Ｍ＋１）＝４９３；ＭＳ法＝粒子衝突．
実施例２７〜１５９
次表に挙げた実施例２７〜１５９を、下記に示す反応経路に従って、適切に置換された式Ｉ（下記の反応経路）のピラゾロン−ピペリジンと（Ｄ）−ＯＢｎＳｅｒ誘導体ＩＩ（下記の反応経路）を実施例３Ｅおよび３Ｆに記載した方法と同様な方法で結合させることにより製造した。
Figure 0003742643
式Ｉのピラゾロン−ピペリジンは、実施例３Ｂおよび３Ｃに記載した方法で適切なアルキル化剤とアルキルヒドラジンから出発して製造された；（Ｄ）−ＯＢｎＳｅｒ誘導体ＩＩは、実施例２３Ａ、実施例２３Ｂおよび実施例５Ｆに記載した方法と同様に３工程で製造された。
Figure 0003742643
Figure 0003742643
Figure 0003742643
Figure 0003742643
脚注：上記の表において、異性体の表示はピラゾロン−ピペリジン基のＣ−３位（構造式中に“＊”で示した）における立体化学構造に関する；ｄ１およびｄ２はクロマトグラフィーにより分離した異性体を表す；ｄ１，２は異性体混合物を表す。表中で用いた略号は下記のとおりである：Ｐｈはフェニル；ＰＢは粒子衝突；ＡＰＣＩは気圧化学イオン化である。上記表の化合物に関するＮＭＲデータを以下に示す。
Figure 0003742643
実施例１６０〜１７９
次表に挙げた実施例１６０〜１７９を、下記に示す反応経路に従って、適切に置換されたピラゾロン−ピペリジンＩ（下記の反応経路）と（Ｄ）−Ｔｒｐ誘導体（ＩＩＩ）（実施例２Ｃ参照）を実施例３Ｅおよび３Ｆに記載した方法と同様な方法で結合させることにより製造した。
Figure 0003742643
脚注：上記の表において、異性体の表示はピラゾロン−ピペリジン基のＣ−３位（構造式中に“＊”で示した）における立体化学構造に関する；ｄ１およびｄ２はクロマトグラフィーにより分離した異性体を表す；ｄ１，２は異性体混合物を表す。
実施例１８０〜１８３
次表に挙げた実施例１８０〜１８３を、下記に示す反応経路に従って、適切に置換されたピラゾロン−ピペリジンＩ（下記の反応経路）と酸中間体ＩＶを実施例３Ｅおよび３Ｆに記載したものと同様な方法で結合させることにより製造した。
Figure 0003742643
酸中間体（ＩＶ）は、実施例５Ｆに記載した確立されている方法によりアミノ酸を実施例５Ｄの生成物で処理することによって製造された。
Figure 0003742643
脚注：上記の表において、異性体の表示はピラゾロン−ピペリジン基のＣ−３位（構造式中に“＊”で示した）における立体化学構造に関する；ｄ１およびｄ２はクロマトグラフィーにより分離した異性体を表す；ｄ１，２は異性体混合物を表す。
実施例１８４
２−アミノ−Ｎ−［２−（３ａ−（Ｒ）−ベンジル−２−メチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−オキソ−エチル］−２−メチル−プロピオンアミドＬ−酒石酸塩
Ａ． ４−オキソ−ピペリジン−１，３−ジカルボン酸１−ｔ−ブチルエステル３−エチルエステル
ＩＰＥ（７２５ｍＬ）および水（３６０ｍＬ）中における４−オキソ−ピペリジン−３−カルボン酸エチルエステル塩酸塩（１００ｇ，０．４８２ｍｏｌ）の溶液に、ＴＥＡ（６３．５ｇ，０．６２７ｍｏｌ）、続いて（Ｂｏｃ）２Ｏ（１１５．７ｇ，０．５３ｍｏｌ）を徐々に添加した。混合物を窒素下で一夜撹拌した。有機相を分離し、水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空濃縮して、目的生成物を結晶として得た（１４２．９ｇ，収率１０９％，少量のＩＰＥを含有）。
Ｂ． ３−ベンジル−４−オキソ−ピペリジン−１，３−ジカルボン酸１−ｔ−ブチルエステル３−エチルエステル
ＤＭＦ（７３４ｍＬ）中における４−オキソ−ピペリジン−１，３−ジカルボン酸１−ｔ−ブチルエステル３−エチルエステル（７３．３６ｇ，０．２７ｍｏｌ）の溶液に、炭酸リチウム（５０ｇ，０．６７６ｍｏｌ）、続いて臭化ベンジル（５５．４４ｇ，０．３２４ｍｏｌ）を添加した。混合物を約６０℃に加熱し、約２０時間撹拌した。次いで反応混合物を室温に冷却し、ＩＰＥで抽出し、水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。濾過および真空濃縮後、固体が得られた。この粗生成物をヘキサン中で再結晶して、白色固体を得た（３３．６ｇ，収率３８．２％）。
Ｃ． ３ａ−ベンジル−２−メチル−２，３ａ，４，５，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−３−オン
トルエン（９７００ｍＬ）中における３−ベンジル−４−オキソ−ピペリジン−１，３−ジカルボン酸１−ｔ−ブチルエステル３−エチルエステル（１９３５．９７ｇ，５．３６ｍｏｌ）の溶液に、メチルヒドラジン（２９９．２ｍＬ，５．６３ｍｏｌ）、続いて酢酸（３２５ｍＬ，５．６８ｍｏｌ）を約８℃で徐々に添加した。反応混合物を徐々に約６５℃に加熱し、約７．５時間撹拌した。室温に冷却した後、有機相を１０％炭酸水素ナトリウム、水および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、真空濃縮して低体積にした。この反応を同じ規模で２回繰り返した。３回の反応で得た濃縮生成物溶液を合わせてＩＰＥ（５０Ｌ）と混合し、約０℃に冷却し、ＨＣｌガスを繰り返し導入し、脱保護が完了するまで室温で一夜撹拌した。混合物を元の体積の約半分になるまで真空濃縮し、塩化メチレン（２４Ｌ）、続いてＮＨ４ＯＨ（２２Ｌ）を添加した。次いで混合物を塩化メチレンで抽出し、濃縮して低体積にした（６〜７Ｌ）。ヘキサン（２０Ｌ）を添加し、混合物を約１５〜２０℃に冷却した。遊離塩基生成物が結晶として得られ、これを真空乾燥させた（合計２９８５ｇ，収率８４．８％）。
Ａ． ３ａ−（Ｒ）−ベンジル−２−メチル−２，３ａ，４，５，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−３−オンＬ−酒石酸塩
アセトン／水混合物（９７０ｍＬ／１２０ｍＬ）中における３ａ−ベンジル−２−メチル−２，３ａ，４，５，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−３−オン（１００ｇ，０．４１ｍｏｌ）の溶液に、Ｌ−酒石酸（６７．５５ｇ，０．４５ｍｏｌ）を添加した。混合物を約５０℃に加熱し、一夜撹拌した。反応混合物を約１０〜１５℃に冷却し、沈殿を濾過し、冷アセトン／水で洗浄し、真空乾燥させた。生成物を白色固体として得た（１５７．８ｇ，収率９７．８３％，９９％ｅｅ）。
Ｅ． ２−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−メチル−プロピオン酸
２−アミノイソ酪酸（１４０ｇ，１．３６ｍｏｌ）、１Ｎ ＮａＯＨ（１６２０ｍＬ，１．６３ｍｏｌ）、（Ｂｏｃ）２Ｏ（３７５ｍＬ，１．６３ｍｏｌ）およびＴＨＦ ４２０ｍＬを混和し、室温で一夜撹拌した。反応混合物を酢酸エチル（７００ｍＬ）で希釈し、６Ｎ ＨＣｌの添加により約ｐＨ３．０に調整した。有機相を分離し、飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、元の体積の約１／４にまで濃縮した。ヘキサンで処理した後、白色固体生成物を単離採集した（１２５．８ｇ，収率４５．４４％）。母液からさらに７．８ｇの生成物を回収した。
Ｆ． ２−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−メチル−プロピオン酸２，５−ジオキソ−ピロリジン−１−イルエステル
塩化メチレン（１０００ｍＬ）中における２−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−メチル−プロピオン酸（１００ｇ，０．４１ｍｏｌ）および無水コハク酸（６０．０２ｇ，０．５２２ｍｏｌ）の溶液に、ＥＤＣ（１００．０９ｇ，０．５２２ｍｏｌ）を撹拌しながら窒素下に添加した。混合物を窒素下に一夜撹拌した。次いで反応混合物を酢酸エチル（１Ｌ）で希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液および水で洗浄し、次いで真空濃縮して低体積にした。白色結晶が溶液から沈殿し、これを濾取し、真空乾燥させて、生成物を得た（１０４．９ｇ＋２７．３ｇ，収率８９．５％）。
Ｇ． ３−（Ｒ）−ベンジルオキシ−２−（２−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−メチル−プロピオニルアミノ）−プロピオン酸
水（１０１．８ｍＬ）およびＴＥＡ（２８．５３ｇ，０．２８２ｍｏｌ）中における２−アミノ−３−ベンジルオキシ−プロピオン酸（２６．２ｇ，０．１１３ｍｏｌ）の溶液に、ＴＨＦ（４０７ｍＬ）中における２−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−メチル−プロピオン酸２，５−ジオキソ−ピロリジン−１−イルエステル（３３．９４ｇ，０．１１３ｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で一夜、窒素下に撹拌した。この混合物に１０％クエン酸溶液（５００ｍＬ）を添加した。混合物をさらに１０分間撹拌し、次いで酢酸エチル（５００ｍＬ）で希釈した。有機相を混合物から分離し、水および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、次いで真空濃縮すると粘稠な油が得られた。この粗製の油をＩＰＥ／ヘキサン（５０／５０）で処理し、約１０℃に冷却して、白色固体生成物を得た（４３．２ｇ，収率９８．４％）。
Ｈ． ｛１−［２−（３ａ−（Ｒ）−ベンジル−２−メチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−オキソ−エチルカルバモイル］−１−メチル−エチル｝−カルバミン酸ｔ−ブチルエステル
酢酸エチル（２１６．２ｍＬ）中における３ａ−（Ｒ）−ベンジル−２−メチル−２，３ａ，４，５，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−３−オンＬ−酒石酸塩（１０．８１ｇ，０．０２７５ｍｏｌ）の溶液に、約−６６℃でＴＥＡ（８．４３ｍＬ，０．０６０５ｍｏｌ）を添加した。混合物を約１．５時間撹拌した。沈殿した塩を濾去した後、３−ベンジルオキシ−２−（２−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−メチル−プロピオニルアミノ）−プロピオン酸（８．７ｇ，０．０２２９ｍｏｌ）およびＴＥＡ（１９．１５ｍＬ，０．１３７４ｍｏｌ）を約−３５℃で添加し、続いて酢酸エチル中５０％ＰＰＡＡ（２７．５ｍＬ，０．０４５８ｍｏｌ）を滴加した。混合物を約−２０〜約−２７℃で約２時間撹拌し、次いで温度を徐々に約０℃に高めながら１．５時間撹拌した。反応混合物を水に注入し、ＩＰＥで抽出し、７％ＮａＣｌ溶液で洗浄し、真空濃縮した。得られた粗製の油をＩＰＥ／ヘキサン（５０／５０）で処理して結晶化させた。生成物を白色固体として得た（１０．３ｇ，収率７４．３％）。
Ｉ． ２−アミノ−Ｎ−［２−（３ａ−（Ｒ）−ベンジル−２−メチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−オキソ−エチル］−２−メチル−プロピオンアミド
塩化メチレン（６８．６ｍＬ）中における｛１−［２−（３ａ−（Ｒ）−ベンジル−２−メチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−オキソ−エチルカルバモイル］−１−メチル−エチル｝−カルバミン酸ｔ−ブチルエステル（１０．３ｇ，０．０１７ｍｏｌ）の溶液に約０〜５℃で、ＴＦＡ（３５ｍＬ）を添加し、温度を約５℃より低く維持した。次いで温度を室温にまで高めた。混合物を約３時間撹拌した。塩化メチレンを溶媒としての酢酸エチルと交換した。次いで混合物を飽和炭酸水素ナトリウム溶液でｐＨ８に調整し、次いで飽和ＮａＣｌで洗浄し、真空濃縮して低体積にした。混合物をＩＰＡ、次いでヘキサンで処理した後、白色固体生成物を得た（７．４ｇ，収率８６．１％）。ＨＰＬＣは生成物が０．２％のジアステレオマーを含有することを示した。
Ｊ． ２−アミノ−Ｎ−［２−（３ａ−（Ｒ）−ベンジル−２−メチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−オキソ−エチル］−２−メチル−プロピオンアミドＬ−酒石酸塩
メタノール（４０００ｍＬ）中における工程Ｉで得た２−アミノ−Ｎ−［２−（３ａ−（Ｒ）−ベンジル−２−メチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−オキソ−エチル］−２−メチル−プロピオンアミド（３８５ｇ，０．７６１ｍｏｌ）の溶液に、Ｌ−（＋）−酒石酸（１１４．５ｇ，０．７６１ｍｏｌ）を添加し、混合物を一夜撹拌した。得られた混濁溶液を濾過すると透明な溶液が得られ、これを濃縮して大部分の溶媒を除去した。酢酸エチル（合計１２Ｌ）を添加し、残留メタノールを６３〜７２℃で共沸除去した。単離した固体を酢酸エチルに溶解し、この溶液を約１６時間還流し、次いで一夜で室温にまで放冷した。生成物を白色固体として採集した（４８２．３ｇ，収率９６．８％）。融点１７４〜１７６℃。
実施例１８５
２−アミノ−Ｎ−｛１−（２，４−ジフルオロ−ベンジルオキシメチル）−２−オキソ−２−［３−オキソ−３ａ−ピリジン−２−イルメチル−２−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル］−エチル｝−２−メチル−プロピオンアミドＬ−（＋）酒石酸塩
Ａ． ４−オキソ−３−ピリジン−２−イルメチル−ピペリジン−１，３−ジカルボン酸１−ｔ−ブチルエステル３−エチルエステル
ＤＭＦ（４０ｍＬ）中における４−オキソ−ピペリジン−１，３−ジカルボン酸１−ｔ−ブチルエステル３−エチルエステル（１０．３４ｇ，３８．２ｍｍｏｌ）の溶液に、約０℃でピコリルクロリド塩酸塩（５．７ｇ，３４．７ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（１４．４ｇ，１０４．１ｍｍｏｌ）およびヨウ化カリウム（５．７６ｇ，３４．７ｍｍｏｌ）を添加した。約０℃で約２時間撹拌した後、氷浴を取り除き、ＤＡＢＣＯ、（９７３ｍｇ，８．６８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を約３０分間撹拌し、水とＩＰＥの混合物に注入した。有機層を分離し飽和ＮａＨＣＯ３水溶液および飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空濃縮した。粗製残留物をヘキサンから結晶化して、白色固体を得た（８．１９ｇ，収率６５％）。
Figure 0003742643
Ｂ． ３−オキソ−３ａ−ピリジン−２−イルメチル−２−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−カルボン酸ｔ−ブチルエステル
ＣＦ３ＣＨ２ＮＨＮＨ２（３２５ｍＬ，１．９８６ｍｏｌ）（アルドリッチから入手）の７０％水溶液を、トルエン（１２００ｍＬで３回）で抽出した。トルエン（９００ｍＬ）中における工程Ａの生成物（６００ｇ，１．６５５ｍｏｌ）の溶液に、まず無水２，２，２−トリフルオロエチルヒドラジンを含有するトルエン抽出液を合わせたものを添加し、続いて酢酸（１２１．４ｇ，１．９８６ｍｏｌ）を添加した。反応混合物を約７０℃に約２時間加熱し、次いでさらに７０％２，２，２−トリフルオロエチルヒドラジン水溶液のトルエン抽出液（５０ｇ）を添加した。反応混合物を約８０℃に約３．５時間加熱し、室温に冷却し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２Ｌ）で希釈した。トルエン層を分離し、飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空濃縮すると、油（７５４．８ｇ）が得られた。メタノール／水から結晶化して、目的生成物を白色固体として得た（６０９．５ｇ）。
Figure 0003742643
Ｃ． ３ａ−ピリジン−２−イルメチル−２−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−２，３ａ，４，５，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−３−オン
メタンスルホン酸（１１．６ｇ，１２１ｍｍｏｌ）を、ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）中における工程Ｂの生成物（１０ｇ，２４．２ｍｍｏｌ）の溶液に３０分かけて滴加した。反応混合物を約１時間撹拌し、次いで約０℃に冷却し、次いでトリエチルアミン（１８．６ｍＬ，１３３．１ｍｍｏｌ）を滴下漏斗から添加した。混合物を約１時間かけて室温にまで高め、さらにＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過および真空濃縮して、生成物を白色固体として得た（７．２ｇ）。
Figure 0003742643
Ｄ． ３ａ−ピリジン−２−イルメチル−２−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−２，３ａ，４，５，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−３−オン（Ｄ）−酒石酸塩
機械的撹拌機を備えた乾燥および窒素パージした５Ｌの丸底フラスコ内で、（Ｄ）−（−）−酒石酸（１２９ｇ，０．８６ｍｏｌ）を、アセトン／水（９：１，２４３０ｍＬ）中における工程Ｃの生成物（２４３ｇ，０．７８ｍｏｌ）に約１７℃で添加した。混合物を室温で一夜撹拌し、濾過し、固体を採集して冷アセトンで洗浄し、真空乾燥させた。生成物を黄色固体として得た（２８４ｇ，収率７８．８％）。
Ｅ． ２−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−３−（２，４−ジフルオロ−ベンジルオキシ）−プロピオン酸
ＴＨＦ（７Ｌ）およびＤＭＦ（３Ｌ）中におけるＮ−Ｂｏｃ−（Ｄ）−セリン（４５２ｇ，２．２０２６ｍｏｌ）の溶液に約０℃で、カリウムｔ−ブトキシド溶液（５１５．８ｇ，４．５９６３ｍｏｌ）を添加した。反応混合物を約０℃で約３０分間撹拌し、次いで臭化２，４−ジフルオロベンジル（４５６．５ｇ，２．２０５１ｍｏｌ）を添加した。室温にまで高めた後、反応混合物を真空濃縮して、ＴＨＦを除去した。反応混合物を４．５ＬのＨ２Ｏと４．５ＬのＩＰＥの間で分配した。層を分離し、１Ｎ ＨＣｌで水層のｐＨを約３に調整した。水層を各４ＬのＩＰＥで２回抽出した。有機溶液をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空濃縮して、黄色固体を得た（５１８．０ｇ，収率７０．９％）。
Figure 0003742643
Ｆ． ２−アミノ−３−（２，４−ジフルオロ−ベンジルオキシ）−プロピオン酸メタンスルホン酸塩
ＣＨ２Ｃｌ２／ＩＰＥ（１：１，１２ｍＬ）中における工程Ｅの生成物（１．１９ｇ，３．５９ｍｍｏｌ）の溶液に、メタンスルホン酸（１．７２ｇ，１７．９５ｍｍｏｌ）を、約１０分かけて注射器から添加した。直ちに固体が溶液から沈殿した。約１時間後、固体を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２／ＩＰＥ混合物（１：１）で洗浄して、９３９ｍｇ（収率８０％）の生成物を得た。
Ｇ． ２−（ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−メチル−プロピオニルアミノ）−３−（２，４−ジフルオロ−ベンジルオキシ）−プロピオン酸
ＴＨＦ／水（４：１，１０ｍＬ）中における工程Ｆの生成物（５２０ｍｇ，１．４６ｍｍｏｌ）の溶液に、２−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−プロピオン酸２，５−ジオキソ−ピロリジン−１−イルエステル（４３８ｍｇ，１．４６ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（３６９ｍｇ，３．６５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で約１時間撹拌し、１０％クエン酸水溶液（１０ｍＬ）で反応停止した。約１５分後、酢酸エチル（５０ｍＬ）を添加し、有機層を分離し、飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空濃縮して、泡状物を得た（５３４．１ｍｇ，収率８８％）。
Figure 0003742643
Ｈ． （１−｛１−（２，４−ジフルオロ−ベンジルオキシメチル）−２−オキソ−２−［３−オキソ−３ａ−ピリジン−２−イルメチル−２−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル］−エチルカルバモイル］−１−メチル−エチル｝−カルバミン酸ｔ−ブチルエステル
（ａ）機械的撹拌機を備えた乾燥および窒素パージした１２Ｌの丸底フラスコ内において、工程Ｄの生成物（５１７ｇ，１．１２ｍｏｌ）を約−６℃で酢酸エチル（５１７０ｍＬ）に添加した。この溶液を約−４０℃に冷却し、次いでトリエチルアミン（３９８ｍＬ，２．８６ｍｏｌ）を約４５分かけて添加した。反応混合物を約−５０〜約−４０℃の温度で約９０分間撹拌し、窒素パージおよび酢酸エチル（２０６８ｍＬ，約−５０℃に予冷）洗浄した２２Ｌの丸底フラスコ内へ濾過して、遊離塩基を白色固体として得た。
（ｂ）工程Ｇの生成物（４２５ｇ，１．０２ｍｏｌ）を約−３０℃で、工程Ｈ（ａ）の生成物、トリエチルアミン（７５４ｍＬ，４．６９ｍｏｌ）およびＰＰＡＡ（酢酸エチル中５０％，９１６ｍＬ，１．５３ｍｏｌ）を含有する酢酸エチル溶液に添加した。反応混合物を約１時間撹拌し、水および飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空濃縮して、生成物を油として得た（６３６ｇ，収率８７．８％）。
Ｉ． ２−アミノ−Ｎ−｛１−（２，４−ジフルオロ−ベンジルオキシメチル）−２−オキソ−２−［３−オキソ−３ａ−ピリジン−２−イルメチル−２−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル］−エチル｝−２−メチル−プロピオンアミド
機械的撹拌機を備えた乾燥および窒素パージした２２Ｌの丸底フラスコ内において、メタンスルホン酸（２５８．３ｍＬ，３．９８ｍｏｌ）を約１５℃で約５５分かけて、ＣＨ２Ｃｌ２（１１，３２０ｍＬ）中における工程Ｈの生成物（５６６ｇ，０．７９６ｍｏｌ）に滴加した。混合物を約２０℃で約４０分間撹拌し、次いでｐＨ７．８になるまで飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（８，４９０ｍＬ）を添加した。有機層を分離し、水および飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空濃縮して、油状生成物を得た（３８８．８ｇ，収率８０％）。
Ｊ． ２−アミノ−Ｎ−｛１−（２，４−ジフルオロ−ベンジルオキシメチル）−２−オキソ−２−［３−オキソ−３ａ−ピリジン−２−イルメチル−２−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル］−エチル｝−２−メチル−プロピオンアミドＬ−（＋）酒石酸塩
機械的撹拌機を備えた１２Ｌの丸底フラスコ内で、メタノール（４，０７０ｍＬ）中における工程Ｉの生成物（３７０ｇ，０．６ｍｏｌ）にＬ−（＋）酒石酸（９０ｇ，０．６ｍｏｌ）を添加した。反応混合物を約２２℃で約９０分間撹拌し、濾過および濃縮した。粗製残留物を酢酸エチル（４，５６０ｍＬ）で希釈し、約７０℃に加熱し、約１７時間かけて徐々に室温にまで放冷した。固体を濾過し、乾燥させて、白色結晶を得た。融点１８８〜１８９℃（３４８．４６ｇ，収率７６％）。
Figure 0003742643
実施例Ａ
以下は、ラットにＧＨ分泌促進化合物２−アミノ−Ｎ−［２−（３ａ−（Ｒ）−ベンジル−２−メチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１−（Ｒ）−（ベンジルオキシメチル）−２−オキソ−エチル］−イソブチルアミドＬ−酒石酸塩を投与した、前記の“雌ラット試験”の結果である。
表１
ＧＨＲＰ模倣薬を１日１回、３カ月間投与した後の、平均血漿インスリンおよび代謝産物濃度
ラットから屠殺時に非空腹時血液試料を採取した。星印（＊）は、対応するビヒクル処置群から有意差のある数値を示す（ｐ＜０．０５）。
Figure 0003742643
表１のデータはこの処置が用量関連の血漿グルコースおよび／またはインスリン濃度低下を伴うことを示し、これはこの処置による血糖制御およびインスリン感受性の改善と一致する。この処置は血漿乳酸、コレステロールおよびトリグリセリド濃度の低下傾向も伴い、これもこの処置によって生じるインスリン感受性改善の結果として脂質プロフィルおよび代謝制御が改善されることと一致する。

Claims (9)

  1. 式ｋの化合物：
    Figure 0003742643
     の製造方法であって、式ｇの化合物：
    Figure 0003742643
     と式ｊの化合物：
    Figure 0003742643
     （式中、Ｐｒｔはアミン保護基である）を、有機塩基、ペプチド結合剤、および反応不活性溶媒の存在下に−７８〜−２０℃の温度で反応させて、式ｋの化合物を得ることを含む方法。
  2. ペプチド結合剤が１−プロパンホスホン酸環状無水物であり、式ｇの化合物がＲ−立体配置をもち、式ｊの化合物がＲ−立体配置をもち、式ｋの化合物が３ａ−（Ｒ），１−（Ｒ）立体配置をもつ、請求項１に記載の方法。
  3. 式Ｚの化合物：
    Figure 0003742643
     の製造方法であって、式ｇの化合物：
    Figure 0003742643
     と式ｊの化合物：
    Figure 0003742643
     を、有機塩基、ペプチド結合剤、および反応不活性溶媒の存在下に−７８〜−２０℃の温度で反応させて、式ｋの化合物：
    Figure 0003742643
     となし、式ｋの化合物を脱保護して式ｌの化合物：
    Figure 0003742643
     となし、式ｌの化合物とＬ−酒石酸をアルコール性溶媒中で反応させて、式Ｚの化合物を得ることを含む方法。
  4. ペプチド結合剤が１−プロパンホスホン酸環状無水物であり、式ｇの化合物がＲ−立体配置をもち、式ｊの化合物がＲ−立体配置をもち、式ｋ、ｌおよびＺの化合物がそれぞれ３ａ−（Ｒ），１−（Ｒ）立体配置をもつ、請求項３に記載の方法。
  5. 式ｇの化合物：
    Figure 0003742643
     の製造方法であって、式ｆの化合物：
    Figure 0003742643
     と塩基を、ベンジル基のキラリティーを維持した状態で、不活性溶媒中、−５０〜−１０℃の温度で反応させて、式ｇの化合物を得ることを含む方法。
  6. 式ｃの化合物：
    Figure 0003742643
     の製造方法であって、式ｂの化合物：
    Figure 0003742643
     （式中、Ｐｒｔはアミン保護基である）と、無機または有機塩基、および臭化ベンジルを、反応不活性溶媒中で反応させて、式ｃの化合物を得ることを含む方法。
  7. 式ｆの化合物：
    Figure 0003742643
     の製造方法であって、式ｅの化合物：
    Figure 0003742643
     とＬ−酒石酸を、反応不活性有機溶媒中で反応させることを含む方法。
  8. 式ｄの化合物：
    Figure 0003742643
     の製造方法であって、（ａ）式ｃの化合物：
    Figure 0003742643
     （式中、Ｐｒｔはアミン保護基である）を、メチルヒドラジン、次に酸と、有機溶媒中、０℃〜室温で反応させること、及び（ｂ）工程（ａ）の反応混合物を４０〜１００℃に加熱して式ｄの化合物を得ることを含む方法。
  9. 式ｅの化合物：
    Figure 0003742643
     の製造方法であって、式ｄの化合物：
    Figure 0003742643
     （式中、Ｐｒｔはアミン保護基である）を、有機溶媒中、酸と反応させて、式ｅの化合物を得ることを含む方法。
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