CN1390853A - 一种制备胸腺肽的工艺方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于药品制备技术领域,涉及一种制备胸腺肽的工艺方法,包括以下步骤:对新鲜的胸腺均浆液加入pH2.0-4.0的缓冲溶液,以抑制酶活性;在10℃以下用超声波,匀质机或超细技术对新鲜的胸腺组织进行处理,以破碎细胞;冷冻离心,得离心液经截流分子量为6000-10000的超滤柱进行超滤,得粗制品;应用纳滤技术,将超滤液浓缩10倍以上。本发明具有可提高胸腺肽的得率,提高胸腺肽中天然多肽的比例,增高活性,并可减少工艺的时间,降低生产成本等诸多优点。

Description

一种制备胸腺肽的工艺方法
技术领域
本发明属于药品制备技术领域,特别涉及胸腺肽的制备工艺的改良技术。
背景技术
胸腺肽是从动物胸腺中提取制备的含有多种肽的复合物药品。是动物免疫系统中T淋巴细胞成熟、分化和功能化的必需因子,作为药物是一种免疫调节剂。胸腺肽的一般制备工艺包括以下步骤:
1、用绞肉机和匀浆器将新鲜的胸腺匀浆,并进行反复冻融,以破碎细胞;
2、用水提取破碎细胞;
3、将提取液加热到85℃,并维持10分钟,离心去除蛋白质沉淀;
4、离心液经截流分子量为1万的超滤柱进行超滤;
5、超滤液加赋型剂,无菌过滤后,冻干得到产品。
上述制备方法中用绞肉机和匀浆器并进行反复冻融,不能完全破碎胸腺中的细胞,中性条件下胸腺肽易被组织蛋白酶水解,过长时间的加热亦会破坏胸腺肽,结果不但胸腺肽的得率低,而且天然多肽的活性降低;此外,该工艺的时间长,生产成本较高。
发明内容
本发明的目的是为克服已有技术的不足之处,提出一种新的制备胸腺肽的工艺方法,具有可提高胸腺肽的得率,提高胸腺肽中天然多肽的比例,增高活性,并可减少工艺的时间,降低生产成本等诸多优点。
本发明提出的一种制备胸腺肽的工艺方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)对新鲜的胸腺均浆液加入PH2.0-4.0的缓冲溶液,以抑制酶活性;
2)在10℃以下用超声波,匀质机或超细技术对新鲜的胸腺组织进行处理,以破
  碎细胞;
3)冷冻离心,得离心液经截流分子量为6000-10000的超滤柱进行超滤,得粗制品;
4)应用纳滤技术,将超滤液浓缩10倍以上。
本发明还提出一种制备胸腺肽的工艺方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)鲜的胸腺组织加入PH2.0-4.0的缓冲溶液,以抑制酶活性;
2)在10℃以下用超声波,匀质机或超细技术对新鲜的胸腺组织进行处理,以破
  碎细胞;
3)将提取的胸腺肽用微波加热至70-85℃,在5-15分钟内完成,并迅速冷却
  至10℃以下;
4)冷冻离心,得离心液经截流分子量为6000-10000的超滤柱进行超滤;
5)对超滤液进行纳滤浓缩得到产品。
本发明工艺的特点:
1、用超声波、匀质机或超细技术对胸腺进行处理。使胸腺中的细胞完全破碎,不留任何完整细胞,从而缩短了生产时间,提高了胸腺肽的得率。
2、用PH2.0-4.0的缓冲液提取胸腺匀浆中的胸腺肽,可以抑制大部分胸腺中的蛋白酶,防止酶对天然多肽的分解和破坏,提高了胸腺肽中天然多肽的比例,增高了活性,提取时间10-30分钟。
3、用微波加热提取液,5-10分钟内加热至70-85℃后,迅速冷却至10℃以下。以保证多肽的稳定,从而提高了胸腺肽的得率和活性。
4、离心液进行超滤,超滤膜的截流分子量为6000(注射用胸腺肽)或10000(口服用胸腺肽),保证了产品的安全性,也提高了活性多肽的比例,使其胸腺素α1的含量从一般产品中的不足1%提高到3-4%。
5、超滤液进行纳滤,提高胸腺肽原料中胸腺肽的浓度,以利于不同规格胸腺肽制剂的配制,并减少冻干的时间,降低了冻干成本。
具体实施方式
实施例一:
1kg新鲜小牛胸腺,加PH2.5的缓冲液2000ml,在10℃以下用超声破碎3分钟×3次检查无完整细胞,提取胸腺肽并搅拌15分钟,用微波加热至80℃(5分钟),迅速用冰盐水冷却至10℃以下,冷冻离心,得离心液2500ml,用截流分子量为6000的进行超滤,滤液再纳滤浓缩至300ml,测定胸腺肽含量为10mg/ml,胸腺素α1含量为3%,活性ERFC增加30%。
实施例二:
1kg新鲜猪胸腺,加PH3.5的缓冲液3000ml,10℃以下用匀质机破碎,迅速加热至80℃,5分钟,迅速冷却至10℃以下提取胸腺肽并搅拌25分钟,冷冻离心得离心液3500ml,用截流分子量为10000的膜进行超滤,滤液经纳滤,得胸腺肽原料350ml,测胸腺肽含量为16mg/ml,胸腺素α1含量2.95%,活性为ERFC增加35%。

Claims (2)

1、一种制备胸腺肽的工艺方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)对新鲜的胸腺均浆液加入PH2.0-4.0的缓冲溶液,以抑制酶活性;
2)在10℃以下用超声波,匀质机或超细技术对新鲜的胸腺组织进行处理,以破碎细胞;
3)冷冻离心,得离心液经截流分子量为6000-10000的超滤柱进行超滤,得粗制品;
4)应用纳滤技术,将超滤液浓缩10倍以上。
2、一种制备胸腺肽的工艺方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)对新鲜的胸腺组织加入PH2.0-4.0的缓冲溶液,以抑制酶活性;
2)在10℃以下用超声波,匀质机或超细技术对新鲜的胸腺组织进行处理,以破碎细胞;
3)将提取的胸腺肽用微波加热至70-85℃,在5-15分钟内完成,并迅速冷却至10℃以下;
4)冷冻离心,得离心液经截流分子量为6000-10000的超滤柱进行超滤;
5)对超滤液进行纳滤浓缩得到产品。
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