CN113388657A - 扫频超声耦合酶解制备食源性ace抑制肽的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种扫频超声耦合酶解制备食源性ACE抑制肽的方法，属于食源性ACE抑制肽制备技术领域。本发明扫频超声耦合酶解制备食源性ACE抑制肽的方法是对玉米醇溶蛋白进行扫频超声处理后，再进行蛋白酶酶解；最终制备的食源性ACE抑制肽具有较高的ACE抑制活性，最高可达81.77％；与传统酶解相比较，ACE抑制肽活性提高42.35％，与传统超声辅助酶解方法相比较，ACE抑制肽活性提高26.20％。因而，本发明方法制备的食源性ACE抑制肽在具有降压功效的药品、保健品、食品或制剂的制备中有广泛的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于食源性ACE抑制肽制备技术领域，具体涉及一种扫频超声耦合酶解制备食源性ACE抑制肽的方法。
背景技术
血管紧张素转换酶抑制肽(ACE抑制肽)是血压调节的关键肽，临床上使用的大部分是化学合成ACE抑制肽，长期使用对健康有不同程度的影响。从食物蛋白中获取ACE抑制肽以减少化学合成ACE抑制肽的副作用越来越受到研究人员的关注。与现有化学合成ACE抑制肽类降血压药物相比，食源性ACE抑制肽具有降血压效果温和、安全无副作用、对正常血压无影响等显著优点，且是理想的天然降血压功能性成分。玉米醇溶蛋白中含有Pro及Leu，且Pro含量高，是ACE抑制肽的良好来源。
传统的酶解方法存在产品转化率低、酶解时间长、产品活性低等问题。且玉米醇溶蛋白结构的固有特性给功能性ACE抑制肽的释放造成了障碍，降低了玉米醇溶蛋白的利用率，开发更有效的技术来解决这个问题迫在眉睫。因此，如果能将ACE抑制肽从玉米醇溶蛋白中高效释放出来，对于提高玉米醇溶蛋白的综合价值具有重要理论与实践意义。
许多研究表明，超声波可以显著促进酶水解。扫频超声是近年来发展起来的一种高效超声加工技术。超声波的频率在中心频率附近的设定范围内以一定的扫描周期上下波动。以往的研究发现，与定频超声的恒频相比，扫频超声可以激发蛋白质溶液产生与其固有频率相匹配的共振频率，达到更好的蛋白质预处理效果。例如Ren等人(Ren X,Ma H,Mao S,et al.Effects of sweeping frequency ultrasound treatment on enzymaticpreparations of ACE-inhibitory peptides from zein[J].European Food Research&Technology,2014,238(3):435-442.)采用40±2kHz的扫频超声(SFU)处理玉米醇溶蛋白制备的玉米蛋白水解物具有42.9％的ACE抑制活性，比对照增加了116.7％；毛舒云等人(毛舒云,马海乐,任晓峰,等.扫频超声处理对玉米醇溶蛋白酶解特性的影响[J].食品工业科技,2013,34(014):142-147,155.)采用双频扫频模式(40±2)kHz/(68±2)kHz结合酶解处理的玉米醇溶蛋白的ACE抑制率为48.48％；目前，虽然采用扫频超声或双频扫频超声结合酶解处理玉米醇溶蛋白已经显著提高了制备ACE抑制肽的ACE抑制率，但抑制率仍在较低水平，为了促进玉米醇溶蛋白在降血压药物及保健品制备领域的研究价值，迫切需要能将ACE抑制肽从玉米醇溶蛋白中高效释放出来方法。
发明内容
针对现有技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种扫频超声耦合酶解制备食源性ACE抑制肽的方法。
为了达到上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种扫频超声耦合酶解制备食源性ACE抑制肽的方法，步骤如下：
(1)将玉米醇溶蛋白分散于蒸馏水中，形成玉米醇溶蛋白悬浊液；
(2)对步骤(1)的玉米醇溶蛋白悬浊液进行扫频超声处理；
(3)向步骤(2)扫频超声处理后的玉米醇溶蛋白悬浊液加入蛋白酶，并调节pH值至蛋白酶的适宜pH；调节酶解温度为40～50℃，进行酶解，反应趋向于饱和时停止反应，将pH调至中性，灭酶；
(4)将步骤(3)酶解后的水解液冷却至室温，离心去沉淀，然后利用分子截留量为5kDa的超滤膜对上清液超滤；收集透过液，得到富含ACE抑制肽的料液；
(5)将步骤(4)得到的富含ACE抑制肽的料液经真空冷冻干燥后，制得富含ACE抑制肽的水解物冻干粉。
在一个具体的实施例中，所述步骤(1)中的玉米醇溶蛋白悬浊液是由玉米醇溶蛋白按1:25(g/mL)的比例加入蒸馏水，充分搅拌使其均匀分散获得。
所述步骤(2)的扫频超声处理可以为单频超声处理、双频超声处理、三频超声处理、四频超声处理中的一种。其中，所述单频超声处理的频率可以为25kHz、33kHz、40kHz、59kHz中的一种。所述双频超声处理的频率为25/33kHz、25/40kHz、25/59kHz、33/40kHz、33/59kHz、40/59kHz中的一种，两个频率反复循环，扫频循环周期4min。所述三频超声处理的频率为25/33/40kHz、25/33/59kHz、25/40/59kHz、33/40/59kHz中的一种，三个频率反复循环，扫频循环周期6min。所述四频超声处理的频率为25/33/40/59kHz，四个频率反复循环，扫频循环周期8min。在一个具体的实施例中，所述步骤(2)的扫频超声处理的时间为30min，温度为25℃。
所述步骤(3)中的蛋白酶为可以胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶和胃蛋白酶中的一种；其酶解的最适酶解pH分别为8.0、6.0、9.0及1.8；优选的为碱性蛋白酶。
在几个具体实施例中，所述步骤(3)中的蛋白酶的添加量为2800～3600U/g玉米醇溶蛋白。
在几个具体实施例中，所述步骤(3)酶解最优选时间为40～60min，酶解反应趋近饱和时停止反应。
为了酶解反应的更好进行，在步骤(3)酶解的同时可以配合600-700r/min的搅拌速度。
在一个具体的实施例中，所述步骤(4)中的离心为3000r/min离心15min，离心温度为室温。
在一个具体的实施例中，所述步骤(5)中的真空冷冻干燥为-80℃超低温预冷4小时，进一步真空冷冻干燥3天。
上述方法制备的食源性ACE抑制肽具有较高的ACE抑制活性，最高可达81.77％；与传统酶解相比较，ACE抑制肽活性提高42.35％，与传统超声辅助酶解方法相比较，ACE抑制肽活性提高26.20％。因而，该方法制备的食源性ACE抑制肽在具有降压功效的药品、保健品、食品或制剂的制备中有广泛的应用前景。
本发明与现有技术相比，具有以下优点和有益效果：
本发明充分利用了扫频超声的优势，扫频超声可以激发蛋白质溶液产生与其固有频率相匹配的共振频率，达到更好的蛋白质预处理及分散效果。同时利用玉米醇溶蛋白易溶于碱性溶液的特点，在碱性条件下利用碱性蛋白酶将其水解为可溶性的多肽片段。另外，扫频超声可以加速蛋白质内部结构的改变，使蛋白质内部的活性部位暴露出来，增加了与碱性蛋白酶的结合位点，在酶解中促进了蛋白质与酶的结合及ACE抑制肽的高效释放，显著提高了ACE抑制肽的活性，活性高达81.77％。与传统的酶解相比较，ACE抑制肽的活性提高42.35％，与传统的定频超声辅助酶解相比较，ACE抑制肽的活性提高26.20％，有效解决了食源性ACE抑制肽提取率低，ACE抑制活性不高的问题。
本发明的技术方案对于开发新型食源性降血压肽、提高玉米醇溶蛋白的高值化利用具有重要的理论及实践意义；且得到的水解物降血压功效明确、市场化前景更好。
附图说明
图1不同蛋白酶对玉米醇溶蛋白水解度的影响；
图2不同蛋白酶对玉米醇溶蛋白水解产物ACE抑制活性的影响；
图3不同底物浓度对玉米醇溶蛋白水解度的影响；
图4单频超声频率对玉米醇溶蛋白水解度的影响；
图5双频超声频率对玉米醇溶蛋白水解产物ACE抑制活性的影响；
图6三频及四频超声处理对玉米醇溶蛋白水解产物ACE抑制活性的影响；
图7不同超声处理条件对蛋白结构影响的电镜照片。
具体实施方式
在本发明中所使用的术语，除非有另外说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。
下面结合具体实施例，并参照数据进一步详细的描述本发明。以下实施例只是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。
以下实施例及试验方法中采用的：
玉米醇溶蛋白 购自亿发生物科技有限公司，CAS号：9010-66-6；
胰蛋白酶 购自索莱宝 NO.T8150；
木瓜蛋白酶 购自索莱宝 G8430；
胃蛋白酶 购自BBI Life Scirnces 9001-75-6；
碱性蛋白酶 购自索莱宝NO.1008S022。
实施例1
一种扫频超声耦合酶解制备食源性ACE抑制肽的方法，步骤如下：
(1)玉米醇溶蛋白悬浊液的配置：将4g玉米醇溶蛋白溶于100mL蒸馏水中，充分搅拌使其均匀分散，得到玉米蛋白粉悬浊液。
(2)扫频超声处理：设置超声温度25℃，将玉米醇溶蛋白悬浊液置于扫频超声清洗机中，以25/33kHz双频超声频率对玉米醇溶蛋白悬浊液进行处理，超声时间为30min，两个频率反复循环，扫频循环周期为4min。
(3)酶解：向超声处理后的玉米醇溶蛋白悬浊液中加入碱性蛋白酶，添加量为2800U/g玉米醇溶蛋白，碱性蛋白酶的活力200000U/g，在50℃水浴条件下以700r/min的转速搅拌反应，利用0.1mol/L的NaOH滴定样品溶液使pH值始终保持在9.0，酶解60min停止反应。将pH值调至7.0，沸水浴灭酶10min，得到富含ACE抑制活性的水解液，水解度为25.8％。
(4)将所述水解液冷却至室温，设置离心温度为室温，3000r/min离心15min，保留上清液。然后利用分子截留量为5kDa的超滤膜进行超滤，超滤时间为1h，收集透过液，得到富含ACE抑制肽的料液，ACE抑制肽活性为78.1％。
(5)富含ACE抑制肽的水解物冻干粉的制备：将超滤得到的富含ACE抑制肽的料液-80℃超低温预冷4小时，进一步真空冷冻干燥3天，获得富含ACE抑制肽的水解物冻干粉。
实施例2
一种扫频超声耦合酶解制备食源性ACE抑制肽的方法，步骤如下：
(1)玉米醇溶蛋白悬浊液的配置：将4g玉米醇溶蛋白溶于100mL蒸馏水中，充分搅拌使其均匀分散，得到玉米蛋白粉悬浊液。
(2)扫频超声处理：设置超声温度25℃，将玉米醇溶蛋白悬浊液置于扫频超声清洗机中，以25/40kHz双频超声频率对玉米醇溶蛋白悬浊液进行处理，超声时间为30min，两个频率反复循环，扫频循环周期为4min。
(3)酶解：向超声后的玉米醇溶蛋白悬浊液中加入碱性蛋白酶，添加量为3000U/g玉米醇溶蛋白，碱性蛋白酶的活力200000U/g，在48℃水浴条件下，以680r/min的转速搅拌反应，利用0.1mol/L的NaOH滴定样品溶液使pH值始终保持在9.0，酶解55min停止反应。将pH值调至7.0，沸水浴灭酶10min，得到富含ACE抑制活性的水解液，水解度为25.6％。
(4)将所述水解液冷却至室温，设置离心温度为室温，3000r/min离心15min，保留上清液。然后利用分子截留量为5kDa的超滤膜进行超滤，超滤时间为1h，收集透过液，得到富含ACE抑制肽的料液，ACE抑制肽活性为80.11％。
(5)富含ACE抑制肽的水解物冻干粉的制备：将超滤得到的富含ACE抑制肽的料液-80℃超低温预冷4小时，进一步真空冷冻干燥3天，获得富含ACE抑制肽的水解物冻干粉。
实施例3
一种扫频超声耦合酶解制备食源性ACE抑制肽的方法，步骤如下：
(1)玉米醇溶蛋白悬浊液的配置：将4g玉米醇溶蛋白溶于100mL蒸馏水中，充分搅拌使其均匀分散，得到玉米蛋白粉悬浊液。
(2)扫频超声处理：设置超声温度25℃，将玉米醇溶蛋白悬浊液置于扫频超声清洗机中，以33/40kHz双频超声频率对玉米醇溶蛋白悬浊液进行处理，超声时间为30min，两个频率反复循环，扫频循环周期为4min。
(3)酶解：向超声后的玉米醇溶蛋白悬浊液中加入碱性蛋白酶，添加量为3200U/g玉米醇溶蛋白，碱性蛋白酶的活力200000U/g，在46℃水浴条件下，以660r/min的转速搅拌反应，利用0.1mol/L的NaOH滴定样品溶液使pH值始终保持在9.0，酶解50min停止反应。将pH值调至7.0，沸水浴灭酶10min，得到富含ACE抑制活性的水解液，水解度为25.22％。
(4)将所述水解液冷却至室温，设置离心温度为室温，3000r/min离心15min，保留上清液。然后利用分子截留量为5kDa的超滤膜进行超滤，超滤时间为1h，收集透过液，得到富含ACE抑制肽的料液，ACE抑制肽活性为79.56％。
(5)富含ACE抑制肽的水解物冻干粉的制备：将超滤得到的富含ACE抑制肽的料液-80℃超低温预冷4小时，进一步真空冷冻干燥3天，获得富含ACE抑制肽的水解物冻干粉。
实施例4
一种扫频超声耦合酶解制备食源性ACE抑制肽的方法，步骤如下：
(1)玉米醇溶蛋白悬浊液的配置：将4g玉米醇溶蛋白溶于100mL蒸馏水中，充分搅拌使其均匀分散，得到玉米蛋白粉悬浊液。
(2)扫频超声处理：设置超声温度25℃，将玉米醇溶蛋白悬浊液置于扫频超声清洗机中，以33/59kHz双频超声频率对玉米醇溶蛋白悬浊液进行处理，超声时间为30min，两个频率反复循环，扫频循环周期为4min。
(3)酶解：向超声后的玉米醇溶蛋白悬浊液中加入碱性蛋白酶，添加量为3400U/g玉米醇溶蛋白，碱性蛋白酶的活力200000U/g，在44℃水浴条件下，以640r/min的转速搅拌反应，利用0.1mol/L的NaOH滴定样品溶液使pH值始终保持在9.0，酶解45min停止反应。将pH值调至7.0，沸水浴灭酶10min，得到富含ACE抑制活性的水解液，水解度为24.3％。
(4)将所述水解液冷却至室温，设置离心温度为室温，3000r/min离心15min，保留上清液。然后利用分子截留量为5kDa的超滤膜进行超滤，超滤时间为1h，收集透过液，得到富含ACE抑制肽的料液，ACE抑制肽活性为78.75％。
(5)富含ACE抑制肽的水解物冻干粉的制备：将超滤得到的富含ACE抑制肽的料液-80℃超低温预冷4小时，进一步真空冷冻干燥3天，获得富含ACE抑制肽的水解物冻干粉。
实施例5
一种扫频超声耦合酶解制备食源性ACE抑制肽的方法，步骤如下：
(1)玉米醇溶蛋白悬浊液的配置：将4g玉米醇溶蛋白溶于100mL蒸馏水中，充分搅拌使其均匀分散，得到玉米蛋白粉悬浊液。
(2)扫频超声处理：设置超声温度25℃，将玉米醇溶蛋白悬浊液置于扫频超声清洗机中，以40/59kHz双频超声频率对玉米醇溶蛋白悬浊液进行处理，超声时间为30min，两个频率反复循环，扫频循环周期为4min。
(3)酶解：向超声后的玉米醇溶蛋白悬浊液中加入碱性蛋白酶，添加量为3600U/g玉米醇溶蛋白，碱性蛋白酶的活力200000U/g，在42℃水浴条件下，以620r/min的转速搅拌反应，利用0.1mol/L的NaOH滴定样品溶液使pH值始终保持在9.0，酶解40min停止反应。将pH值调至7.0，沸水浴灭酶10min，得到富含ACE抑制活性的水解液，水解度为24.3％。
(4)将所述水解液冷却至室温，设置离心温度为室温，3000r/min离心15min，保留上清液。然后利用分子截留量为5kDa的超滤膜进行超滤，超滤时间为1h，收集透过液，得到富含ACE抑制肽的料液，ACE抑制肽活性为78.36％。
(5)富含ACE抑制肽的水解物冻干粉的制备：将超滤得到的富含ACE抑制肽的料液-80℃超低温预冷4小时，进一步真空冷冻干燥3天，获得富含ACE抑制肽的水解物冻干粉。
实施例6
一种扫频超声耦合酶解制备食源性ACE抑制肽的方法，步骤如下：
(1)玉米醇溶蛋白悬浊液的配置：将4g玉米醇溶蛋白溶于100mL蒸馏水中，充分搅拌使其均匀分散，得到玉米蛋白粉悬浊液。
(2)扫频超声处理：设置超声温度25℃，将玉米醇溶蛋白悬浊液置于扫频超声清洗机中，以25/40kHz双频超声频率对玉米醇溶蛋白悬浊液进行处理，超声时间为30min，两个频率反复循环，扫频循环周期为4min。
(3)酶解：向超声后的玉米醇溶蛋白悬浊液中加入碱性蛋白酶，添加量为2800U/g玉米醇溶蛋白，碱性蛋白酶的活力200000U/g，在45℃水浴条件下，以700r/min的转速搅拌反应，利用0.1mol/L的NaOH滴定样品溶液使pH值始终保持在9.0，酶解60min停止反应。将pH值调至7.0，沸水浴灭酶10min，得到富含ACE抑制活性的水解液，水解度为25.93％。
(4)将所述水解液冷却至室温，设置离心温度为室温，3000r/min离心15min，保留上清液。然后利用分子截留量为5kDa的超滤膜进行超滤，超滤时间为1h，收集透过液，得到富含ACE抑制肽的料液，ACE抑制肽活性为81.77％。
(5)富含ACE抑制肽的水解物冻干粉的制备：将超滤得到的富含ACE抑制肽的料液-80℃超低温预冷4小时，进一步真空冷冻干燥3天，获得富含ACE抑制肽的水解物冻干粉。
一、不同蛋白酶对玉米醇溶蛋白水解度及ACE抑制活性的影响
将4g玉米醇溶蛋白溶于100mL蒸馏水中，充分搅拌使其均匀分散，得到玉米蛋白粉悬浊液；在单频40kHz超声条件下，25℃，超声处理30min，超声处理完成后，分别加入相同加酶量(3200U/g玉米醇溶蛋白)的胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶和胃蛋白酶，分别在所采用酶的最适pH条件下酶解(胰蛋白酶最适pH为8.0，木瓜蛋白酶最适pH为6.0，碱性蛋白酶最适pH为9.0，胃蛋白酶最适pH为1.8)，酶解温度41℃，酶解时间60min，转速640r/min，分别采用pH-start法和FAPGG底物法测定不同酶解的玉米醇溶蛋白水解液的水解度(图1)和ACE抑制活性(图2)。结果显示，碱性蛋白酶水解玉米醇溶蛋白的水解度和ACE抑制活性显著高于其它三种酶。因此，在玉米醇溶蛋白制备ACE抑制肽中碱性蛋白酶为最优酶。
二、底物浓度对玉米醇溶蛋白水解度的影响
将不同量的玉米醇溶蛋白溶于蒸馏水中，配制成不同浓度(g/mL：1％、2％、3％、4％)的玉米醇溶蛋白悬浊液；在单频40kHz超声条件下，25℃，超声处理30min，超声处理完成后，添加碱性蛋白酶对不同浓度的玉米醇溶蛋白悬浊液进行酶解，添加量为2800U/g玉米醇溶蛋白，调节pH为9.0，酶解温度44℃，酶解时间60min，转速640r/min，最后通过测定玉米醇溶蛋白水解液的水解度(结果如图3所示)可以看出3％(3:100g/mL)和4％(1:25g/mL)的水解度显著高于其它底物浓度，且采用4％(1:25g/mL)的水解度最优，可作为最适玉米醇溶蛋白悬浊液的底物浓度。
三、扫频超声处理对玉米醇溶蛋白水解度及ACE抑制活性的影响
1)单频超声预处理
将4g玉米醇溶蛋白溶于100mL蒸馏水中，充分搅拌使其均匀分散，得到玉米蛋白粉悬浊液；设置超声温度25℃，分别以25kHz、33kHz、40kHz以及59kHz四种频率对玉米蛋白粉悬浊液进行超声处理，其中，超声温度25℃，超声时间30min，并以未经超声处理的玉米蛋白粉悬浊液作为对照组；超声处理完成后，按2800U/g玉米醇溶蛋白的比例，向上述样品中添加碱性蛋白酶进行酶解，调节pH为9.0，酶解温度45℃，酶解时间60min，转速700r/min，通过测定玉米醇溶蛋白水解液的水解度(图4)可以看出，25kHz和40kHz两种超声频率处理的样品水解度显著高于其它样品。
2)双频超声预处理
将4g玉米醇溶蛋白溶于100mL蒸馏水中，充分搅拌使其均匀分散，得到玉米蛋白粉悬浊液；设置超声温度25℃，将玉米醇溶蛋白悬浊液置于扫频超声清洗机中，分别以25/33kHz，25/40kHz，25/59kHz，33/40kHz，33/59kHz和40/59kHz六种双频超声频率对玉米醇溶蛋白悬浊液进行预处理，超声时间为30min，两个频率反复循环，扫频循环周期为4min。同时以未超声预处理及单频超声预处理(40kHz)作为双对照。
超声处理完成后，按2800U/g玉米醇溶蛋白的比例，向上述样品中添加碱性蛋白酶进行酶解，调节pH为9.0，酶解温度45℃，酶解时间60min，转速700r/min，测定ACE抑制率，结果如图5所示。
分别测定不同双频超声酶解的玉米醇溶蛋白水解液的ACE抑制活性(图5)，结果显示，单频及双频超声预处理处理后玉米醇溶蛋白水解液的ACE抑制活性均显著高于未经超声预处理的玉米醇溶蛋白水解液的ACE抑制活性。以25/33kHz，25/40kHz，33/40kHz，33/59kHz和40/59kHz五种双频超声频率预处理的玉米醇溶蛋白水解液的ACE抑制活性均显著高于单频超声处理及25/59kHz预处理的玉米醇溶蛋白水解液的ACE抑制活性，ACE抑制活性均达到75.6％～81.77％。
3)三频及四频超声预处理
将4g玉米醇溶蛋白溶于100mL蒸馏水中，充分搅拌使其均匀分散，得到玉米蛋白粉悬浊液；设置超声温度25℃，将玉米醇溶蛋白悬浊液置于扫频超声清洗机中，分别以25/33/40kHz，25/33/59kHz，25/40/59kHz，33/40/59kHz四种三频及一种四频25/33/40/59kHz超声频率对玉米醇溶蛋白悬浊液进行预处理，超声时间为30min，其中三频处理中三个频率反复循环，扫频循环周期6min；四频超声处理中四个频率反复循环，扫频循环周期8min。同时以未超声预处理及单频超声预处理(40kHz)作为双对照。
超声处理完成后，按2800U/g玉米醇溶蛋白的比例，向上述样品中添加碱性蛋白酶进行酶解，调节pH为9.0，酶解温度45℃，酶解时间60min，转速700r/min，测定ACE抑制率，结果如图6所示。
分别测定不同三频级四频超声酶解的玉米醇溶蛋白水解液的ACE抑制活性(图6)，结果表明四种三频超声预处理的玉米醇溶蛋白水解液的ACE抑制活性均显著高于未经超声预处理及四频超声预处理的玉米醇溶蛋白水解液的ACE抑制活性。4种三频超声预处理的玉米醇溶蛋白水解液的ACE抑制活性为64.5～66.1％，但是显著低于所示的5种双频超声预处理的玉米醇溶蛋白水解液的ACE抑制活性。
四、扫频超声处理对玉米醇溶蛋白特性的影响
将4g玉米醇溶蛋白溶于100mL蒸馏水中，充分搅拌使其均匀分散，得到玉米蛋白粉悬浊液；设置超声温度25℃，将玉米醇溶蛋白悬浊液置于扫频超声清洗机中，以双频超声25/40kHz进行处理，并以未经超声处理的玉米醇溶蛋白悬浊液作为对照。
将上述超声后(未经酶解)的玉米醇溶蛋白悬浊液以及对照组以11000r/min离心10min，离心温度为室温。将沉淀物进行冷冻干燥，在-80℃超低温中预冷4小时，进一步真空冷冻干燥3天，得到玉米醇溶蛋白冻干粉，保存在干燥器中，用于分析蛋白质特性(电镜图如图7所示)。
扫描电镜可以清晰的反应了不同处理对玉米蛋白微观结构的影响，从图7可以看出，未经超声处理(a)的玉米醇溶蛋白颗粒在扫描电镜下呈块状结构，表面较为光滑，而经扫频超声处理(b)后的玉米醇溶蛋白颗粒尺寸变小，表面变得粗糙，粒径均匀，且经过超声后蛋白颗粒表面出现了小凹陷及褶皱。双频超声使蛋白质更加分散，增加了与碱性蛋白酶的结合位点，促进了酶解反应及ACE抑制肽的高效释放。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。
Claims (10)
1.一种扫频超声耦合酶解制备食源性ACE抑制肽的方法，其特征在于，步骤如下：
(1)将玉米醇溶蛋白分散于蒸馏水中，形成玉米醇溶蛋白悬浊液；
(2)对步骤(1)的玉米醇溶蛋白悬浊液进行扫频超声处理；
(3)向步骤(2)扫频超声处理后的玉米醇溶蛋白悬浊液加入蛋白酶，并调节pH值至蛋白酶的适宜pH；调节酶解温度为40～50℃，进行酶解，反应趋向于饱和时停止反应，将pH调至中性，灭酶；
(4)将步骤(3)酶解后的水解液冷却至室温，离心去沉淀，然后利用分子截留量为5kDa的超滤膜对上清液超滤；收集透过液，得到富含ACE抑制肽的料液；
(5)将步骤(4)得到的富含ACE抑制肽的料液经真空冷冻干燥后，制得富含ACE抑制肽的水解物冻干粉。
2.根据权利要求1所述扫频超声耦合酶解制备食源性ACE抑制肽的方法，其特征在于，所述步骤(2)的扫频超声处理为单频超声处理、双频超声处理、三频超声处理、四频超声处理中的一种。
3.根据权利要求2所述扫频超声耦合酶解制备食源性ACE抑制肽的方法，其特征在于，所述单频超声处理的频率为25kHz、33kHz、40kHz、59kHz中的一种。
4.根据权利要求2所述扫频超声耦合酶解制备食源性ACE抑制肽的方法，其特征在于，所述双频超声处理的频率为25/33kHz、25/40kHz、25/59kHz、33/40kHz、33/59kHz、40/59kHz中的一种，两个频率反复循环，扫频循环周期4min。
5.根据权利要求2所述扫频超声耦合酶解制备食源性ACE抑制肽的方法，其特征在于，所述三频超声处理的频率为25/33/40kHz、25/33/59kHz、25/40/59kHz、33/40/59kHz中的一种，三个频率反复循环，扫频循环周期6min。
6.根据权利要求2所述扫频超声耦合酶解制备食源性ACE抑制肽的方法，其特征在于，所述四频超声处理的频率为25/33/40/59kHz，四个频率反复循环，扫频循环周期8min。
7.根据权利要求1所述扫频超声耦合酶解制备食源性ACE抑制肽的方法，其特征在于，所述步骤(3)中的蛋白酶为胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶和胃蛋白酶中的一种。
8.根据权利要求1所述扫频超声耦合酶解制备食源性ACE抑制肽的方法，其特征在于，所述步骤(3)中的蛋白酶的添加量为2800～3600U/g；优选的，酶解时间为40～60min；优选的，酶解的同时配合600-700r/min的搅拌。
9.权利要求1-8任一项所述方法制备的食源性ACE抑制肽。
10.权利要求9所述的食源性ACE抑制肽在制备具有降压功效的药品、保健品、食品或制剂中的应用。
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114350734A (zh) * | 2021-12-31 | 2022-04-15 | 江苏大学 | 一种补铁降血压的玉米ace抑制肽-铁粉剂制备方法及其应用 |
| CN114656548A (zh) * | 2022-04-13 | 2022-06-24 | 练文飞 | 一种降血压肽及其制备方法和应用 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1786183A (zh) * | 2004-12-10 | 2006-06-14 | 天津商学院 | 一种高效酶解玉米蛋白制备生物活性短肽的技术 |
| CN103695517A (zh) * | 2013-12-26 | 2014-04-02 | 江苏大学 | 扫频超声波预处理玉米醇溶蛋白制备功能性多肽的方法 |
| CN108624645A (zh) * | 2018-05-03 | 2018-10-09 | 华南农业大学 | 一种超声波辅助酶法制备茶渣ace抑制肽的方法及其应用 |
| CN111269286A (zh) * | 2020-02-02 | 2020-06-12 | 江苏大学 | 同步三频超声场下的酶膜耦合制备玉米肽的方法 |
-
2021
- 2021-07-20 CN CN202110816424.5A patent/CN113388657A/zh active Pending
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Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1786183A (zh) * | 2004-12-10 | 2006-06-14 | 天津商学院 | 一种高效酶解玉米蛋白制备生物活性短肽的技术 |
| CN103695517A (zh) * | 2013-12-26 | 2014-04-02 | 江苏大学 | 扫频超声波预处理玉米醇溶蛋白制备功能性多肽的方法 |
| CN108624645A (zh) * | 2018-05-03 | 2018-10-09 | 华南农业大学 | 一种超声波辅助酶法制备茶渣ace抑制肽的方法及其应用 |
| CN111269286A (zh) * | 2020-02-02 | 2020-06-12 | 江苏大学 | 同步三频超声场下的酶膜耦合制备玉米肽的方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 毛舒云等: "扫频超声处理 对玉米醇溶蛋白酶解特性的影响", 《食品工业科技》 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114350734A (zh) * | 2021-12-31 | 2022-04-15 | 江苏大学 | 一种补铁降血压的玉米ace抑制肽-铁粉剂制备方法及其应用 |
| CN114656548A (zh) * | 2022-04-13 | 2022-06-24 | 练文飞 | 一种降血压肽及其制备方法和应用 |
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| Publication number | Publication date |
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