CN1353753A - 用于检测和鉴定分枝杆菌的寡聚核苷酸 - Google Patents

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Abstract

本发明是用于检测和鉴定分枝杆菌的寡聚核苷酸。更具体地说,是用来鉴定非结核分枝杆菌的ITS(内转录间隔区)的核苷酸序列,这些非结核分枝杆菌包括:偶发分枝杆菌,龟分枝杆菌,脓肿分枝杆菌,牝牛分枝杆菌,变黄分枝杆菌,亚洲分枝杆菌,猪分枝杆菌,阿加普尔分枝杆菌和迪氏分枝杆菌。通过这些分枝杆菌的寡聚核苷酸引物或探针。本发明的寡聚核苷酸探针(结合到固相基质中),它们只能与特异的分枝杆菌中的ITS核苷酸序列进行杂交,因此它们能敏感地检测和鉴定特异的分枝杆菌。通过PCR放大,与上述探针有相同核苷酸序列的寡聚核苷酸引物也能检测和鉴定特异的分枝杆菌。应用这些依据分枝杆菌ITS制备的寡聚核苷酸引物或探针,便能够准确而有效地检测分枝杆菌,鉴别结核菌与NTM,和鉴定分枝杆菌的种类。

Description

用于检测和鉴定分枝杆菌的寡聚核苷酸
技术领域
本发明所涉及的是用于检测和鉴定分枝杆菌的寡聚核苷酸。更具体地说,本发明用来鉴定非结核分枝杆菌的ITS(Internal TranscribedSpacer Region,内转录间隔区)的核苷酸序列,这些非结核分枝杆菌包括:偶发分枝杆菌(Mycobacterium fortuitum),龟分枝杆菌(Mycobacterium chelonae),脓肿分枝杆菌(Mycobactetiumabscessus),牝牛分枝杆菌(Mycobacterium vaccae),变黄分枝杆菌(Mycobacterium flavescens),亚洲分枝杆菌(Mycobacteriumasiaticum),猪分枝杆菌(Mycobacterium porcinum),阿加普尔分枝杆菌(Mycobacterium acapulcensis)和迪氏分枝杆菌(Mycobacteriumdiernhoferi)。通过这些分枝杆菌的寡聚核苷酸引物或探针。
背景技术
尽管结核病人数近年来稳步地减少,但每年仍有约8,000,000人患结核病,且有3,000,000患者死亡。在不发达国家,由于不适当的治疗和缺少用于治疗结核病的药物,使患耐药菌的慢性病人数增加。在20世纪80年代,甚至在发达国家,由于爱滋病的传播,也使患结核病的人数增加。因此在这种情况下,可以预测,在2001年将会有约12,000,000新结核病患者出现(《结核与肺病》J.P.Natain,M.C.Raviglione,和A.Kochi,73:311-321,1992;《全球疾病负担》《全球疾病与损伤的负担系列从书》第一卷,Murray CJL.和Lopez AD著,剑桥,马萨诸塞,哈佛大学出版社,1996,P349-350;.《世界结核病计划:抗结核病药物的耐药性》世界卫生组织1997年报告)。
在20世纪50年代曾报道非结核病分枝杆菌(NTM)能使人致病。在1980年又有报道,鸟分枝杆菌(MAC)能引起爱滋病患者全身性疾病,从此,非结核分枝杆菌引起了人们的关注。非结核分枝杆菌所引起的疾病在临床症状和体症以及一般病理方面与结核病相似。非结核分枝杆菌广泛地分布于有生命的环境中,而且在临床实验样本中很难判断它们是否能致病。由于它们对于很多抗结核的药物具有耐药性,它们所引起的感染病很难治愈,复发率也高。非结核分枝杆菌所引起传染病应该用不同于结核病的方法治疗。因此需要建立准确而快速的检测和鉴定非结核分枝杆菌的方法。同时也需要建立准确而快速的检测和鉴别结核菌(TB complex)和NTM的方法以便于结核病的有效治疗。
到目前为止,已有很多用于诊断分枝杆菌感染和用于检测、鉴定分枝杆菌菌株的方法。其中,下面的方法目前仍在应用:
第一为微生物学方法,也就是,涂片、染色和培养试验。然而,这种方法不适于分枝杆菌,因为它们的繁殖周期长又需要很长的培养时间。象分枝杆菌这样的致病菌也能传染给培养室内的工作人员。
第二为PCR(聚合酶链式反应)方法。这种方法不仅对分枝杆菌有高敏感性和特异性,而且非常适用于需要长时间培养的分枝杆菌。特别是,这种方法不需要培养过程,但需要能用于放大的小量DNA,因此,只需要实验样品中的小量病原体DNA就足以检测和鉴定分枝杆菌。很多PCR实验需要彼此不同的靶DNA引导。IS6110和16SrRNA经常用作靶DNA(《spoligotyping(字典未收录)的用途,用于鉴别IS6110低拷贝量的结核分枝杆菌(丹麦培养)》Bauer J,Andersen AB,Kremer K和Miorner H,1999,《临床微生物学杂志》37:2602-2606;《以高密度DNA探针系列鉴定分枝杆菌和实验利福平抗药性》Troesch,A.,H.Nguyen,C.G.Miyada,S.Desvarenne,T.R.Gingeras,P.M.Kaplan,P.Cros and C.Mabilat,1999《临床微生物学杂志》37:49-55)
第三为物理化学方法。在实验中用HPLC(高效液相色谱),GC(气相色谱)或质谱来检测分枝杆菌的脂类成分。这种方法特异性好,但需要昂贵的设备。
第四为用血清学方法检测分枝杆菌成份。这种方法是基于带有抗体的胶乳颗粒或血细胞与分枝杆菌抗原的凝固反应或酶与抗体相连的酶联免疫反映。但这种方法只是在有限的位置上高度敏感,且很难区别是以前感染还是现在感染。
下一个检测分枝杆菌的方法是用插入了荧光素酶基因的分枝杆菌噬菌体L5感染分枝杆菌,然后检查介质中的荧光素所引起的发光现象(W.R.Jacobs,R.G.Barletta,R.Udani,J.Chan,G.Kalkut,G.Sosne,T.Kieser,G.J.Sarkis,G.F.Hatful,and B.R.Bloom.1993,《科学260》:819-822)
最后一个方法为通过寡聚核苷酸杂交来检测和鉴定分枝杆菌(A.Troesch,H.Nguyen,C.G.Miyada,S.Desvarenne,T.R.Gingeras,P.M.Kaplan,P.Cros和C.Mabilat.1999《临床微生物学杂志》37:49-55
除了上面提到的鸟分枝杆菌(MAC)外,偶发分枝杆菌,龟分枝杆菌,地分枝杆菌和牝牛分枝杆菌也称作非结核分枝杆菌。其中,龟分枝杆菌又分成龟分枝杆菌和脓肿分枝杆菌,目前还没有区分它们的方法。
发明内容
本发明的目的是为了解决上述分枝杆菌检测和鉴定方法中存在的问题,本发明意在提供作为PCR引物或探针的特异寡聚核苷酸。这些寡聚核苷酸用于检测分枝杆菌,鉴别结核菌(TBcomplex)和NTM以及准确而有效地鉴定分枝杆菌的种类。
为此本发明提供了一些分枝杆菌基因ITS(内转录间隔区)的DNA,列于SEQ ID NOs(序列辨认号码):1至9中。这些分枝杆菌包括,偶发分枝杆菌,龟分枝杆菌,脓肿分枝杆菌,牝牛分枝杆菌,变黄分枝杆菌,亚洲分枝杆菌,猪分枝杆菌,阿加普尔分枝杆菌和迪氏分枝杆菌。
本发明还提供了作为PCR引物或杂交探针的寡聚核苷酸,用来检测分枝杆菌的,列于SEQ ID NOs:10至14中;
用来鉴别结核菌和分枝杆菌中的NTB的,列于SEQ ID NOs:15至23中;
用来检测和鉴定MAC(鸟分枝杆菌)和胞内分枝杆菌的列于SEQ IDNOs:24至27中;
用于检测和鉴定偶发分枝杆菌的,列于SEQ ID NOs:28至38中;
用于检测和鉴定龟分枝杆菌的,列于SEQ ID NOs:39至46中;
用于检测和鉴定脓肿分枝杆菌的,列于SEQ ID NOs:47至52中;
用于检测和鉴定牝牛分枝杆菌的,列于SEQ ID NOs:53至64中;
用于检测和鉴定变黄分枝杆菌的,列于SEQ ID NOs:65至72中;
用于检测和鉴定戈氏分枝杆菌的,列于SEQ ID NOs:73至77中;
用于检测和鉴定地分枝杆菌的,列于SEQ ID NOs:78至100中;
用于检测和鉴定瘰疬分枝杆菌的,列于SEQ ID NOs:101至108中;
用于检测和鉴定堪萨斯分枝杆菌的,列于SEQ ID NOs:109至112中;
用于检测和鉴定斯氏分枝杆菌的,列于SEQ ID NOs:113至116中;
用于检测和鉴定海分枝杆菌和溃疡分枝杆菌的,列于SEQ ID NOs:117至119中;
用于检测和鉴定胃分枝杆菌的,列于SEQ ID NOs:120至123中;
用于检测和鉴定蟾分枝杆菌的,列于SEQ ID NOs:124至133中;
用于检测和鉴定日内瓦分枝杆菌的,列于SEQ ID NOs:134至141中;
用于检测和鉴定玛尔摩分枝杆菌的,列于SEQ ID NOs:142至146中;
用于检测和鉴定猿分枝杆菌的,列于SEQ ID NOs:147至153中;
用于检测和鉴定耻垢分枝杆菌的,列于SEQ ID NOs:154至165中;
用于检测和鉴定石氏分枝杆菌的,列于SEQ ID NOs:166至172中;
用于检测和鉴定哈瓦那分枝杆菌的,列于SEQ ID NOs:173至180中;
用于检测和鉴定鼻疽分枝杆菌的,列于SEQ ID NOs:181至189中;
用于检测和鉴定亚洲分枝杆菌的,列于SEQ ID NOs:190至193中;
用于检测和鉴定猪分枝杆菌的,列于SEQ ID NOs:194至205中;
用于检测和鉴定阿加普尔分枝杆菌的,列于SEQ ID NOs:206至215中;
用于检测和鉴定迪氏分枝杆菌的,列于SEQ ID NOs:216至227中;
用于检测和鉴定副结核分枝杆菌的,列于SEQ ID NOs:228至240中;
最后,用于检测酒精分枝杆菌的,列于SEQ ID N0:241
以往用PCR检测和鉴定分枝杆菌的方法,只能检测一或二个菌种。而本发明能检测和鉴定几乎所有的分枝杆菌,这是由于本发明的引物和探针是根据分枝杆菌的ITS的DNA序列设计的。ITS比16S rRNA有更多的多态区而且ITS也有保守区,因此作为一种靶DNA,它(ITS)能非常有效地鉴别基因型(Gurtler,V.,和V.A.Stanisich,1996,《一种用16S-23SrDNA间隔区分类和鉴定细菌的新方法》《微生物》142:3-16)
发明者对一些还没有对DNA测序的非结核分枝杆菌的ITS DNA序列进行测定,这些非结核分枝杆菌包括象偶发分枝杆菌,龟分枝杆菌,脓肿分枝杆菌,牝牛分枝杆菌,变黄分枝杆菌,亚洲分枝杆菌,猪分枝杆菌,阿家谱尔分枝杆菌和迪氏分枝杆菌。通过这些DNA序列设计引物或探针的寡聚核苷酸以检测和鉴定分枝杆菌。并且进一步参考基因库中的另一些分枝杆菌的DNA序列,并通过多序列对比和未成熟细胞检查(Multialignment and Blast)分析这些DNA序列,从而选择有特色的多态区,来设计用于检测和鉴定分枝杆菌的引物和探针的寡聚核苷酸。最后通过种特异性和属特异性PCR引物放大和特异杂交实验确证这些寡聚核苷酸对分枝杆菌的检测和鉴定效果。
也就是说,本发明的寡聚核苷酸探针(结合到固相基质中),它们只能与特异的分枝杆菌中的ITS核苷酸序列进行杂交,因此它们能敏感地检测和鉴定特异的分枝杆菌。通过PCR放大,与上述探针有相同核苷酸序列的寡聚核苷酸引物也能检测和鉴定特异的分枝杆菌。应用这些依据分枝杆菌ITS制备的寡聚核苷酸引物或探针,便能够准确而有效地检测分枝杆菌,鉴别结核菌与NTM,和鉴定分枝杆菌的种类。
附图说明
关于本发明的上述和其他方面的目的、其特点和优势是明显的,这可从下列的较实例和附图中得到详细阐述,其中,
图1为图解,图中为分枝杆菌ITS和通过PCR放大ITS的引物;
图2为PCR后的电泳结果照片,PCR用了几个分枝杆菌种株和一对用于ITS放大的引物,包括分枝杆菌中16SrRNA和23SrRNA的一部分;
图3为PCR后的电泳结果照片,PCR用了几个分枝杆菌种株和用于检测分枝杆菌的一对引物(ITSF和MYC2);
图4为多重PCR图解,多重PCR用于检测分枝杆菌,同时鉴别结核菌与NTM;
图5为多重PCR后的电泳结果照片,多重PCR采用了一对检测分枝杆菌的引物(ITS和MYC2)以及一对鉴别结合菌和NTM的引物(MTB2和MYC2);
图6为PCR后的电泳结果照片,PCR用了每一种分枝杆菌和每一对种特异性引物,这些引物是依据每一种NTM的多态区核苷酸序列设计的。
图7为PCR后的电泳结果照片,PCR用了几种分枝杆菌和一对种特异性引物,这些引物是根据每种NTM的多态区核苷酸序列设计的。
具体实施方式
下面将通过实施例介绍本发明的一些较好的例子和其参考附图。例1.分枝杆菌培养和基因组DNA分离
分枝杆菌标准菌种来源于KCTC(韩国模式菌种收藏)和ATCC(美国模式菌种收藏),临床菌种来源于韩国国家结核协会,国家Masan结核病医院以及Pusan国立大学医院的临床微生物学专家管理菌种的储藏和培养。例中所用的分枝杆菌和病原体列于表8中。
分枝杆菌DNA的提取过程如下:以Ogawa培养基培养分枝杆菌。然后将一铂环培养后的菌种置于微量离心管中,并与200μl的InstaGene基质(Bio-Rad Co.)混合,56℃孵育30分。再经过10分钟的涡流混合,混合物放于100℃,8分钟。再经过10分钟涡流混合后,将混合物于12,000rPM离心3分钟。取其上清放于另一试管中,并放于-20℃保存。在下面的PCR中,将用每个菌种的DNA溶液2μl。例2.放大分枝杆菌ITS制造引物
分枝杆菌ITS及通过PCR放大ITS所用的引物列于图1中。依据分枝杆菌16SrRNA和23SrRNA保守区的几个片断来构建用于放大分枝杆菌ITS地引物。并通过多序列对比和未成熟细胞检查分析基因库分枝杆菌16SrRNA和23SrRNA的DNA序列。然后,通过16SrRNA和23SrRNA的一部分DNA设计引物,从而能选择性地放大约500bp的ITS区,这些引物的DNA序列列于SEQ ID NOs:242(IT SF)和243(ITSR)中。本例中所用的所有引物是通过Derkin-Elmer DNA合成仪(BioBasic,加拿大)制备,浓度达50nmol。例3.PCR和产品鉴定
在PCR中使用例1中的2μl DNA溶液。反应液包括:500mM KCl,100mM Tris HCl(pH9.0),1%Triton X-100,0.2mM dNTP(dATP,dGTP,dTTP和dCTP),1.5mM MgCl2,1pmol引物,1μ Tag DNA聚合酶(Bio Basic Inc.)。94℃变性5分钟后,溶液在94℃变性1分钟,60℃退火1分钟和72℃延长1分钟条件下循环30次。再进一步72℃延长10分钟,确保延长结束。反应完毕后,通过1.5%琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物。象从GenBank(基因库)资料所预测的那样,通过16S rRNA和23S rRNA的保守区所制备的引物所放大的ITS为约500bP。
图2是PCR后的电泳结果照片。PCR采用了几个分枝杆菌种株和一对ITS放大引物,包括分枝杆菌16S rRNA和23S rRNA的一部分。图中,M是分子量标准,间隔100bP,C为对照组,泳道1至9分别是偶发分枝杆菌、龟分枝杆菌、胞内分枝杆菌、鸟分枝杆菌、结核分枝杆菌、田野分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌、戈氏分枝杆菌和结核分枝杆菌H37Rv。可以看到除对照C外,泳道1至9的所有分枝杆菌皆有ITS基因放大现象。例4.分枝杆菌ITS DNA序列测定
PCR产品鉴定后,分枝杆菌(其ITS的DNA没有测序)反应物将通过PCR放大,这些分枝杆菌包括:偶发分枝杆菌、龟分枝杆菌、脓性分枝杆菌、牝生分枝杆菌、变黄分枝杆菌、亚洲分枝杆菌、猪分枝杆菌、阿加普尔分枝杆菌和迪氏分枝杆菌。PCR产品则直接用于测定ITS的DNA序列。
DNA的测定浓度为200μmol。DNA序列测定采用染料终止法,同时应用通用引物M13和DNA自动测序仪(Perkin-Elmer,ABI prim 377sequencer)。
序列鉴别号码(SEQ ID Nos)1至9分别指下列分枝杆菌ITS的DNA序列:偶发分枝杆菌、龟分枝杆菌、脓肿分枝杆菌、牝牛分枝杆菌、变黄分枝杆菌、亚洲分枝杆菌、猪分枝杆菌、阿加普尔分枝杆菌和迪氏分枝杆菌。例5.寡聚核苷酸引物的设计及合成
每一个引物,大约20bp,依据例4中分枝杆菌的ITS的DNA序列设计,这些分枝杆菌包括:偶发分枝杆菌、龟分枝杆菌、脓肿分枝杆菌、牝牛分枝杆菌、变黄分枝杆菌、亚洲分枝杆菌、猪分枝杆菌、阿加普尔分枝杆菌和迪氏分枝杆菌。并且通过多序列对比和未成熟细胞检查,比GenBank(基因库)的其它分枝杆菌ITS的DNA序列比较。
根据需要,分枝杆菌ITS保守区DNA序列设计成检测分枝杆菌的引物或探针,而高多态区的DNA序列则设计成种特异性的引物或探针。表1至7描述了所设计的引物或探针以及它们的位置和序列鉴别号码。表1
    菌种   探针名称 ITS中的位置 序列鉴别号码
分枝杆菌     MYC1MYC2MYC3MYC4MYC5 (随菌种而不同)     1011121314
结核菌     MTB1MTB2MTB3MTB4MTB5MTB6MTB7MTB8MTB9     166-18565-8420-3941-6060-7981-100125-144139-158203-222     151617181920212223
鸟分枝杆菌—胞内分枝杆菌     MAC1MAC2MAC3MAC4     241-260142-16192-111117-136     24252627
偶发分枝杆菌     FOR1FOR2FOR3FOR4FOR5FOR6FOR7FOR8FOR9FOR10FOR11     40-5944-6364-8378-9789-108109-128114-133134-153157-176246-265289-308     2829303132333435363738
龟分枝杆菌     CHE1CHE2CHE3CHE4CHE5CHE6CHE7CHE8     11-3029-4858-7778-97109-128132-151171-190246-265     3940414243444546
表2
    菌种   探针名称 ITS中的位置 序列鉴别号码
脓肿分枝杆菌     ABC1ABC2ABC3ABC4ABC5ABC6     37-5655-74247-266263-282270-289261-280     474849505152
牝牛分枝杆菌     VZC1VAC2VAC3VAC4VAC5VAC6VAC7VAC8VAC9VAC10VAC11VAC12     18-3738-5758-77118-137138-157158-177178-197199-218219-238265-284298-317321-340     535455565758596061626364
变黄分枝杆菌     FIA1FLA2FLA3FLA4FLA5FLA6FLA7FIA8     12-3132-5152-7172-91105-124125-144173-192278-297     6566676869707172
戈氏分枝杆菌     COR1COR2COR3COR4COR5     84-103249-268216-235201-220223-242     7374757677
表3
    菌种   探针名称   ITS中的位置   序列鉴别号码
地分枝杆菌     TER1TER2TER3TER4TER5TER6TER7TER8TER9TER10TER11TER12TER13TER14TER15TER16TER17TER18TER19TER20TER21TER22TER23     178-197237-25624-4370-8989-108102-121122-141142-161162-181182-201202-221222-241238-257307-326322-341342-361362-381382-40112-2131-5052-7172-9182-101     78798081828384858687888990919293949596979899100
瘰疬分枝杆菌     SCO1SCO2SCO3SCO4SCO5SCO6SCO7SCO8     118-137131-150210-22984-103152-171200-219221-240241-260     101102103104105106107108
堪萨斯分枝杆菌     KAN1KAN2KAN3KAN4     35-54238-25783-102214-233     109110111112
表4
    菌种   探针名称 ITS中的位置 序列鉴别号码
斯氏分枝杆菌(苏加分枝杆菌)     SZU1SZU2SZU3SZU4     124-143209-228227-246247-166     113114115116
海分枝杆菌和溃疡分枝杆菌   MAR-ULC1MAR-ULC2MAR-ULC3     85-104128-147224-243     117118119
胃分枝杆菌     GAS1GAS2GAS3GAS4     85-104145-164133-152239-258     120121122123
蟾分枝杆菌     XEN1XEN2XEN3XEN4XEN5XEN6XEN7XEN8XEN9XEN10     190-2091-2021-4041-6061-8081-100121-140141-160201-220221-240     124125126127128129130131132133
日内瓦分枝杆菌     GEN1GEN2GEN3GEN4GEN5GEN6GEN7GEN8     190-20985-104131-150147-166186-205206-225226-245240-265     134135136137138139140141
玛尔摩分枝杆菌     MAL1MAL2MAL3MAL4MAL5     203-22229-48136-155222-241242-261     141143144145146
猿分枝杆菌     SIM1SIM2SIM3SIM4SIM5SIM6SIM7     83-102129-148208-22722-4180-99136-155241-260     147148149150151152153
表5
菌种   探针名称   ITS中的位置 序列鉴别号码
耻垢分枝杆菌     SMEG1SMEG2SMEG3SMEG4SMEG5SMEG6SMEG7SMEG8SMEG9SMEG10SMEG11SMEG12      17-3637-5657-7677-9697-116117-136137-156157-176177-196193-21261-80112-131     154155156157158159160161162163164165
石氏分枝杆菌     SH11SH12SH13SH14SH15SH16SH17      89-10820-3970-8997-116135-154224-243244-263     166167168169170171172
哈瓦那分枝杆菌     HAB1HAB2HAB3HAB4HAB5HAB6HAB7HAB8      86-10517-3651-7081-100134-153175-194200-219242-261     173174175176177178179180
产鼻疽分枝杆菌     FAR1FAR2FAR3FAR4FAR5FAR6FAR7FAR8FAR9      122-141111-13022-4148-6776-95108-127114-133275-294295-314     181182183184185186187188189
表6
    菌种   探针名称 ITS中的位置 序列鉴别号码
亚洲分枝杆菌     ASI1ASI2ASI3ASI4     82-101145-164189-208274-293     190191192193
猪分枝杆菌     POR1POR2POR3POR4POR5POR6POR7POR8POR9POR10POR11POR12     45-6413-3267-8691-110115-134137-156164-183194-213221-240273-292298-317325-344     194195196197198199200201202203204205
阿加普尔分枝杆菌     ACA1ACA2ACA3ACA4ACA5ACA6ACA7ACA8ACA9ACA10     66-85112-131132-151178-197198-217219-238242-261262-281318-337350-369     206207208209210211212213214215
迪氏分枝杆菌     DIE1DIE2DIE3DIE4DIE5DIE6DIE7DIE8DIE9DIE10DIE11DIE12     16-3536-5562-81103-122154-173175-194195-214232-251261-280282-301304-323344-363     216217218219220221222223224225226227
表7
    菌种   探针名称 ITS中的位置 序列鉴别号码
副结核分枝杆菌     PARA1PARA2PARA3PARA4PARA5PARA6PARA7PARA8PARA9PARA10PARA11PARA12PARA13     7-2630-4940-5950-6971-9083-102103-122135-154157-176178-197198-217219-238241-260     228229230231232233234235236237238239240
    酒精分枝杆菌     SP1     225-244     241
例6.用于检测分枝杆菌的引物的PCR结果
通过分枝杆菌保守区DNA序列所设计的属特异性引物,可用于检测分枝杆菌。依据270-350bp所组成的ITS序列所制备的引物当中,一对引物,ITSF(序列鉴别号242)和MYC2(序列鉴别号11)被用于PCR。结果得到时了分枝杆菌的约350bp的放大了的核苷酸,同时在金黄色葡萄球菌、尿肠球菌和粘质沙雷氏菌中没有放大现象。因此说明这种引物可用于检测分枝杆菌。
表3是PCR后电泳结果的照片,PCR采用了几个分枝杆菌种株和一对用于检测分枝杆菌的引物(ITSF和MYC2)。图中M为100bp梯度分子量标准;C为阴性对照;泳道1为脓肿分枝杆菌ATCC19977;泳道2为田野分枝杆菌ATCC27406;泳道3为亚洲分枝杆菌ATCC25276;泳道4为南非分枝杆菌ATCC33464;泳道5为鸟分枝杆菌ATCC25291;泳道6为牛分枝杆菌ATCC19210;泳道7为龟分枝杆菌ATCC35752;泳道8为变黄分枝杆菌ATCC14474;泳道9为偶发分枝杆菌ATCC6841;泳道10为戈氏分枝杆菌ATCC14470;泳道11为胞内分枝杆菌ATCC13950;泳道12为堪萨斯分枝杆菌ATCC12478;泳道13为草分枝杆菌ATCC354;泳道14为瘰疬分枝杆菌ATCC19981;泳道15为耻垢分枝杆菌ATCC21701;泳道16为斯氏分枝杆菌ATCC35799;泳道17为地分枝杆菌ATCC15755;泳道18为次要分枝杆菌ATCC23292;泳道19为结核分枝杆菌H37Rv;以及泳道20为牝牛分枝杆菌ATCC15483。从图中可见,除阴性对照外,从泳道1至20的所有分枝杆菌皆呈ITS放大现象。
表8为通过一对检测分枝杆菌的引物(ITSF和MYC2)的PCR结果。表中,+表示放大出现;-表示没有放大现象。可见,除分枝杆菌外的其他菌种皆无放大现象出现。表8
    菌种名称    结果     菌种名称 结果
结核分枝杆菌H37Rv     + 草分枝杆菌ATCC354     +
牛分枝杆菌ATCC19210     + 嗜水气单胞菌     -
鸟分枝杆菌ATCC25291     + 洋葱伯克霍尔德氏菌     -
胞内分枝杆菌ATCC13950     + 稍白链霉菌     -
脓肿分枝杆菌ATCC19977     + 弗氏柠檬酸杆菌     -
龟分枝杆菌ATCC35752     + 产气肠杆菌     -
变黄分枝杆菌ATCC14474     + 阴沟肠杆菌     -
偶发分枝杆菌ATCC6841     + 粪肠球菌     -
胃分枝杆菌ATCC15754     + 屎肠球菌     -
日内瓦分枝杆菌ATCC51233     + 棉子糖肠球菌     -
戈氏分枝杆菌ATCC14470     + 大肠埃希氏菌     -
堪萨斯分枝杆菌ATCC12478     + 肺炎克雷伯氏菌     -
玛尔摩分枝杆菌ATCC29571     + 类志贺邻单胞菌     -
瘰疬分枝杆菌ATCC19981     + 奇异变形菌     -
猿分枝杆菌ATCC25275     + 普通变形菌     -
耻垢分枝杆菌ATCC21701     + 雷氏普罗威登斯菌     -
斯氏分枝杆菌ATCC35799     + 铜绿假单胞菌     -
地分枝杆菌ATCC15755     + 水生拉恩氏菌     -
牝牛分枝杆菌ATCC15483     + 沙门氏菌     -
蟾分枝杆菌ATCC19250     + 粘质沙雷氏菌     -
海分枝杆菌ATCC927     + 腐改希瓦氏菌     -
溃疡分枝杆菌ATCC19423     + 弗氏志贺氏菌 -
猪分枝杆菌ATCC33776     + 索氏志贺氏菌 -
亚洲分枝杆菌ATCC25276     + 表皮葡萄球菌 -
阿加普尔分枝杆菌ATCC14473     + 金黄色葡萄球菌 -
迪氏分枝杆菌ATCC19340     + 无乳链球菌 -
田野分枝杆菌ATCC27406     + 中间链球菌 -
南非分枝杆菌ATCC33464     + 肺炎链球菌 -
次要分枝杆菌ATCC23292     + 副溶血弧菌 -
例7.用于结核菌的引物的PCR结果
前面例子中制备的寡聚核苷酸引物,被用来鉴定每一个菌种,并且通过PCR放大实验证实了这些实验的可靠性。为了鉴定结核菌(TBCOMPLEX),采用了多重PCR,应用一对检测分枝杆菌的引物(ITSF和MYC2)和一对鉴别结核菌(TB COMPLEX)和NTM的引物(MTB2和MYC2,序列鉴别号:16和11)
图4为多重PCR图解,多重PCR用于检测分枝杆菌,同时也用于鉴别结核菌(TB COMPLEX)和NTM。
图5为多重PCR后的电泳结果照片。多重PCR用一对引物(ITSF和MYC2)检测分枝杆菌,另一对引物(MTB2和MYC2)鉴别结核菌(TBCOMPLEX)和NTM。图中,M为100bp梯度的分子量标准;C为阴性对照;泳道1和2分别为结核菌(TB COMPLEX),结核分枝杆菌H37Rv和牛分枝杆菌;泳道3至10分别为鸟分枝杆菌、胞内分枝杆菌、偶发分枝杆菌、龟分枝杆菌、戈氏分枝杆菌、斯氏分枝杆菌、地分枝杆菌和瘰疬分枝杆菌ATCC19981。泳道1和2的结核菌,由于2次放大而形成2条带,这2次放大分别是由检测分枝杆菌的引物和鉴别结核菌引物引发。而在其它泳道的NTM菌株只形成一条带,这说明只有一次放大。例8.用于鉴定NTM种株的引物的PCR结果
应用鉴定NTM种株的种特异性的引物进行PCR,这种引物依据每一菌株的多态区DNA序列制备。
每一个分枝杆菌应用一对引物进行PCR,其中第一个为有义链,第二个为反义链。具体如下:选用序列鉴别号16和21鉴定结核分枝杆菌H37Rv和牛分枝杆菌;序列鉴别号24和27鉴别鸟分枝杆菌和胞内分枝杆菌;序列鉴别号29和39鉴别偶发分枝杆菌;序列鉴别号41和44鉴别龟分枝杆菌;序列鉴别号48和49鉴别脓肿分枝杆菌;序列鉴别号55和63鉴别牝牛分枝杆菌;序列鉴别号66和72鉴别变黄分枝杆菌;序列鉴别号73和75鉴别戈氏分枝杆菌;序列鉴别号88和96鉴别地分枝杆菌;序列鉴别号102和103鉴别瘰疬分枝杆菌;序列鉴别号109和110鉴别堪萨斯分枝杆菌;序列鉴别号113和114鉴别斯氏分枝杆菌;序列鉴别号117和119鉴别海分枝杆菌和溃疡分枝杆菌;序列鉴别号120和123鉴别胃分枝杆菌;序列鉴别号128和132鉴别蟾分枝杆菌;序列鉴别号135和141鉴别日内瓦分枝杆菌;序列鉴别号143和145鉴别玛尔摩分枝杆菌;序列鉴别号147和149鉴别猿分枝杆菌以及序列鉴别号154和159鉴别耻垢分枝杆菌。PCR完成后,指每一个反应产物进行电泳分析。
图6为PCR后的电泳结果照片。PCR采用每一种分枝杆菌和每一对种特异的引物,这种引物依照每一个NTM的多态区核苷酸序列设计的。图中,M为100bp梯度分子量标准;C为阴性对照,泳道1和2分别为结核菌,结核分枝杆菌H37Rv和牛分枝杆菌ATCC19210;泳道3和4分别为鸟分枝杆菌ATCC25291和胞内分枝杆菌ATCC13950;泳道5为偶发性分枝杆菌ATCC6841;泳道6为龟分枝杆菌ATCC35752;泳道7为脓肿分枝杆菌ATCC19977;泳道8为牝牛分枝杆菌ATCC15483;泳道9为变黄分枝杆菌ATCC14474;泳道10为戈氏分枝杆菌ATCC14470;泳道11为地分枝杆菌ATCC15755;泳道12为瘰疬分枝杆菌ATCC19981;泳道13为堪萨斯分枝杆菌ATCC12478;泳道14为斯氏分枝杆菌ATCC35799;泳道15为海分枝杆菌ATCC927;泳道16为溃疡分枝杆菌ATCC19423;泳道17为胃分枝杆菌ATCC15754;泳道18为蟾分枝杆菌ATCC19250;泳道19为日内瓦分枝杆菌ATCC1233;泳道20为玛尔摩分枝杆菌ATCC29571;泳道21为猿分枝杆菌ATCC25275;以及泳道22为耻垢分枝杆菌ATCC21701。种特异放大现象可见于泳道1至22。
图7为PCR后的电泳结果照片。PCR采用几种分枝杆菌和一对依每一种NTM多态区核苷酸序列所设计的种特异性引物。图中,第一张照片采用一对对结核菌特异的引物(ITSF和MYC2),泳道1和2的结核分枝杆菌H37Rv和牛分枝杆菌呈放大现象;第二张照片采用一对对鸟分枝杆菌和胞内分枝杆菌特异的引物(MAC1和MAC4),泳道3和4的鸟分枝杆菌和胞内分枝杆菌呈放大现象;第三张照片采用一对对偶发分枝杆菌特异的引物(FOR2和FOR10),泳道5的偶发分枝杆菌呈放大现四张采用一对对龟分枝杆菌特异的引物(CHE3和CHE6),泳道6的龟分枝杆菌呈放大现象;第五张采用一对对戈氏分枝杆菌特异的引物(GOR1和GOR2),泳道7的戈氏分枝杆菌呈放大现象;第六张采用一对对斯氏分枝杆菌特异的引物(SZU1和SZU2),泳道8的斯氏分枝杆菌呈放大现象;第七张采用一对对瘰疬分枝杆菌特异的引物(SCO1和SCO2),泳道10的瘰疬分枝杆菌呈放大现象。泳道9为地分枝杆菌,与上述的种特异引物比较,无放大现象出现。
因此,采用每一对种特异性引物时,PCR可以检测和特异性地鉴定每一种株的分枝杆菌。
如上所述,首先测定非结核分枝杆菌的ITS(内转录间隔区)的DNA序列,然后在通过这些DNA序列,设计寡聚核苷酸引物或探针,来检测和鉴定分枝杆菌,这些非结核分枝杆菌包括:偶发分枝杆菌、龟分枝杆菌、脓肿分枝杆菌、牝牛分枝杆菌、变黄分杆枝菌、亚洲分枝杆菌、猪分枝杆菌、阿加普尔分枝杆菌和迪氏分枝杆菌。所以应用PCR引物或杂交探针,可以检测分枝杆菌,鉴别结核菌和NTM以及快速而有效地鉴定分枝杆菌种株。这种检测和鉴别方法能有效地诊断复杂的感染,因此能够准确地治疗分枝杆菌感染,包括结核病。
通过这些目前被认为是最实用和有效的例子来阐述本发明时,应该注意到本发明的权力要求不限于这些例子。恰恰相反,本发明不仅覆盖附加权力要求的范围和宗旨,还覆盖对它们的各种修改和相同的构思。
SP2001067KR
                               序列表<110>    KIM,Jeong Joon;SJ HIGHTECH Co.,Ltd.
     KIM.Cheol Min
     PARK,Hee Kyung<120>    (Oligonucleotide for detection and identification of Mycobacteria)
     用于检测和检定分枝杆菌的寡聚核苷酸<130>    PP05020/PCT<150>    KR 10-1999-0019631<151>    1999-05-29<150>    KR 10-1999-0019632<151>    1999-05-29<150>    KR 10-1999-0019633<151>    1999-05-29<150>    KR 10-1999-0019634<151>    1999-05-29<150>    KR 10-1999-0019635<151>    1999-05-29<150>    KR 10-2000-0018189<151>    2000-04-07<160>    243<170>    KopatentIn 1.71<210>    1<211>    386<212>    DNA<213>    (Mycobacterium fortuitum)偶发分枝杆菌<400>    1aggagcacca cgaaaagggt tgagacactg ggtcttaccc gagccgtgag gaaccggttg     60cctgtagtgg gcacggtttg gtgcacaaca aacttttttg actgccagac acactattgg    120gctttgagac aacaggcccg tgcccctttt ggggggtggc atccggttgc gggtgtcggc    180gtgttgttgc ctcactttgg tggtggggtg tggtgtttga tttgtggata gtggttgcga    240gcatctagca cgcagaatcg tgtggtctca ctccttgtgg gtggggctgg ttttgtgtgt    300tgatgtgcaa tttcttttga aactcatttt tggtttttgt gttgtaagtg tttaagggcg    360catggtggat gccttggcag gatcca                                         386<210>    2<211>    338<212>    DNA<213>    (Mycobacterium chelonae)龟分枝杆菌<400>    2aggagcacca tttcccagcc gaatgagctt gggaacataa agcgagtttc tgtagtggtt     60actcgcttgg tgaatatgtt ttataaatcc tgtccacccc gtggataggt agtcggcaaa    120acgtcggact gtcaatagaa ttgaaacgct ggcacactgt tgggtcctga ggcaacacat    180tgtgttgtca ccctgcttgg tggtggggtg tggtctttga cttatggata gtggttgcga    240gcatctaaca aacctcgctc gtttacgagt gaggttagtt tttgcaattt attagctaag    300ttcttaaggg cacatggtgg atgccttggc aggatcca                            338<210>    3<211>    317<212>    DNA<213>    (Mycobacterium abscessus)脓肿分枝杆菌<400>    3aaggagcacc atttcccagt cgaatgaact agggaacata aagtaggcat ctgtagtgga     60tatctacttg gtgaatatgt tttgtaaatc ctgtccaccc cgtggatggg tagtcggcaa    120aacgtcggac tgtcataaga attgaaacgc tggcacactg ttgggtcccg aggcaacacg    180ttgtgttgtc accctgcttg gtggtggggt gtggactttg acttctgaat agtggttgcg    240agcatctaaa catagcctcg ctcgttttcg agtggggctg gtttttgcaa ttttattagc    300taagttctta agggcgc                                                   317<210>    4<211>    429<212>    DNA<213>    (Mycobacterium vaccae)牝牛分枝杆菌<400>    4aaggagcacc acgagaatca ggcccgccca catcgtgtgg gggttcggtg atctgatcga     60ttcgttggat ggcctttcat ctgtagtgga tgggggtctg gtgcacatga caaacttggc    120cgagccggta gggaatgccg gcgagggaaa tcatcagaca cactattggg ctttgagaca    180acaagcccgt gccccttttt ttgggggtgg ctctgcgttg gcagggtcgg cgtgttgttg    240ccccgctttg gtggtggggt gtggtgtttg attcgtggat agtggttgcg agcatctgaa    300tgcacagcgc ttgtggtgtt gtgtgttcgg tgtaatgcaa atttttctga tactcgcatg    360cagtcccttt ttgggggtgt gtgtgggtga ctcatttttt ggttttgtgt tgtaagtgtt    420taagggcgc                                                            429<210>    5<211>    379<212>    DNA<213>    (Mycobacterium flavescens)变黄分枝杆菌<400>    5aaggagcacc atttattgtt cccccgtccc cacgtgtgtg ggatcagtgc ggttgggaga     60tcagtgccgg gcctgtagtg ggtttccggt gggtgcacaa caaacgtgag aagtggtgtg    120ggaacactgc tttgaggaat catcagacac actattgggc tttgaggcaa caggcccgtt    180gtttccctgg ccactgtgtg tggtgggggg tctggtgtcg ccctgtcttt ggtggtgggg    240tgtggtgttt gattcgtgga tagtggttgc gagcatctga acaggtggct cccttttggg    300ggttgcttgt tttgataatg caatttttta ttcttccgag aatatttttc tgttttgtgt    360tgtaagtgtt taagggcgc                                                 379<210>    6<211>    364<212>    DNA<213>    (Mycobacterium asiaticum)亚洲分枝杆菌<400>    6tggatccgac gaagtcgtaa caaggtagcc gtaccggaag gtgcggctgg atcacctcct     60ttctaaggag caccacgaaa gcatcccaat tggtgggatg caggccgtgt ggagttctcg    120tctgtagtgg acgagggctg ggtgcacaac aacaagcaag ccagacacac tattgggtcc    180tgagacaaca ctcgggcgct agcacgaagt gttgtccctc catcttggtg gtggggtgtg    240gtgtttgaga actggatagt ggttgcgagc atcaactgat cgcgtcgccg ttcgcggtgg    300cgtgttcttt tgtgcaattt taaattcttt ggtttttgta gtgtttgtaa gtgtctaagg    360gcgc                                                                 364<210>    7<211>    402<212>    DNA<213>    (Mycobacterium porcinum)猪分枝杆菌<400>    7aaggagcacc gattcgattc ccccgccgtc cgcgtagtcg tgggcagtag tgcggttggg     60atatttcagc caggacctgt agtgggtgtc tggtgggtgc aaatgacaaa cgttgagccg    120gcgcgggaaa gcgttggtga tggaactgct gaacacacta ttgggctttg agacaacagg    180cccgtgcccc tttcgggggg tggcattccg ttgggagtgt cggcgtgttg ttgctccgct    240ttggtggtgg ggtgtggtgt ttgatttgtg gatagtggtt gcgagcatct agcacgcagt    300gtggctgggg gccttcgggt ttccggtctt gttgtgtgtt gatgtgcaat ttcttttgaa    360actcattttt ggtttttgtg ttgtaagtgt ttaagggcgc at                       402<210>    8<211>    459<212>    DNA<213>    (Mycobacterium acapulcensis)阿加普尔分枝杆菌<400>    8aaggagcacc agttattttc ccccgccccc acgcctgtgg gatcagttgc ggttgggata     60tttagtgcca gcacctgtag tgggtgtttc ggccggtgca cagcaaacgt tgatcgtctg    120gtggggaaag ccgggcgtga aagattgcca gacacactat tgggctttga gacaacaagc    180ccgtcgcctc tttgtcccga gtgtgggata tcggagaagg agcaccacga gacctgttgc    240ccgcccacat cgtgtgggag ttcggtgact caggcgattc gggggttggt tgtggttgtc    300gccctgcttt ggtggtgggg tgtggtgttt gatttgtgga tagtggttgc gagcatctga    360acgcagagac ctgtgtgggt ttttgtgttc tgataatgca atttttattc ttccgagaat    420attttttgat ctgttttgtg tgtaagtgtt taagggcgc                           459<210>    9<211>    418<212>    DNA<213>    (Mycobacterium diernhoferi)迪氏分枝杆菌<400>    9aaggagcacc acgagacctg ttgcccgccc acatcgtgtg ggagttcggt gactcaggcg     60attcgttgga tggcctcaca cctgtagtgg gtgggggtct ggtgcacaac aaactttgag    120aaactgccag acacactatt gggctttgag acaacaggcc ctgcggtgcc ggactcgttg    180gagtcctggt tgccggccgc gagtcccgga agcgattctg gttcggacgg tgtctgttgt    240tgctccatct ttggtggtgg ggtgtggtgt ttgatttgtg gatagtggtt gcgagcatct    300agcacgcaag aggagtctgg gtttccttcg ggagcccggg tttttgttgt gtgtgtttga    360tgtgcaattt ttttcttcta tttggtttta tctgtgttgt aagtgtttaa gggcgcat      418<210>    10<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacteria(<400>    10tggtggggtg tggtgtttga                                                20<210>    11<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacteria)
     用于检测分枝杆菌的探针或引物序列<400>    11tggatagtgg ttgcgagcat                                                20<210>    12<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacteria)
用于检测分枝杆菌的探针或引物序列<400>    12ccatcttggt ggtggggtgt                                                20<210>    13<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacteria)
     用于检测分枝杆菌的探针或引物序列<400>    13cacactattg ggccctgagg                                                20<210>    14<211>    10<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacteria)
用于检测分枝杆菌的探针或引物序列<400>    14aaggagcacc                                                           10<210>    15<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting TB complex)
用于检测结核菌的探针或引物序列<400>    15cactcggact tgttccaggt                                                20<210>    16<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting TB complex)
用于检测结核菌的探针或引物序列<400>    16tggtggggcg taggccgtga                                                20<210>    17<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting TB complex)
用于检测结核菌的探针或引物序列<400>    17ccccaactgg tggggcgtag                                                20<210>    18<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting TB complex)
用于检测结核菌的探针或引物序列<400>    18ccgtgagggg ttcttgtctg                                                20<210>    19<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting TB complex)
     用于检测结核菌的探针或引物序列<400>    19gtagtgggcg agagccgggt                                                20<210>    20<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting TB complex)
     用于检测结核菌的探针或引物序列<400>    20catgacaaca aagttggcca                                                20<210>    21<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting TB complex)
     用于检测结核菌的探针或引物序列<400>    21caacactcgg acttgttcca                                                20<210>    22<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting TB complex)
     用于检测结核菌的探针或引物序列<400>    22gttccaggtg ttgtcccacc                                                20<210>    23<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting TB complex)
用于检测结核菌的探针或引物序列<400>    23cgagcatcaa tggatacgct                                                20<210>    24<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium avium)
     complex(MAC)
     用于检测鸟分枝杆菌的探针或引物序列<400>    24gttcatcgaa atgtgtaatt                                                20<210>    25<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium avium)
     complex(MAC)
     用于检测鸟分枝杆菌的探针或引物序列<400>    25gtgtggagtc cctccatctt                                                20<210>    26<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium avium)
     complex(MAC)
     用于检测鸟分枝杆菌的探针或引物序列<400>    26aaatgattgc cagacacact                                                20<210>    27<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium avium)
     complex(MAC)
     用于检测鸟分枝杆菌的探针或引物序列<400>    27ccctgagaca acactcggtc                                                20<210>    28<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium fortuitum)
     用于检测偶发分枝杆菌的探针或引物序列<400>    28cgagccgtga ggaaccggtt                                                20<210>    29<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium fortuitum)
     用于检测偶发分枝杆菌的探针或引物序列<400>    29ccgtgaggaa ccggttgcct                                                20<210>    30<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium fortuitum)
     用于检测偶发分枝杆菌的探针或引物序列<400>    30gtagtgggca cggtttggtg                                                20<210>    31<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium fortuitum)
     (用于检测偶发分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    31ttggtgcaca acaaactttt                                                20<210>    32<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium fortuitum)
     用于检测偶发分枝杆菌的探针或引物序列<400>    32caaacttttt tgactgccag                                                20<210>    33<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium fortuitum)
     用于检测偶发分枝杆菌的探针或引物序列<400>    33acacactatt gggctttgag                                                20<210>    34<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium fortuitum)
     用于检测偶发分枝杆菌的探针或引物序列<400>    34ctattgggct ttgagacaac                                                20<210>    35<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium fortuitum)
     用于检测偶发分枝杆菌的探针或引物序列<400>    35aggcccgtgc cccttttggg                                                20<210>    36<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium fortuitum)
     用于检测偶发分枝杆菌的探针或引物序列<400>    36tggcatccgg ttgcgggtgt                                                20<210>    37<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium fortuitum)
     用于检测偶发分枝杆菌的探针或引物序列<400>    37tagcacgcag aatcgtgtgg                                                20<210>    38<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium fortuitum)
     用于检测偶发分枝杆菌的探针或引物序列<400>    38ggttttgtgt gttgatgtgc                                                20<210>    39<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium chelonae)
     用于检测龟分枝杆菌的探针或引物序列<400>    39tttcccagcc gaatgagctt                                                20<210>    40<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium chelonae)
     用于检测龟分枝杆菌的探针或引物序列<400>    40ttgggaacat aaagcgagtt                                                20<210>    41<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium chelonae)
     用于检测龟分枝杆菌的探针或引物序列<400>    41gttactcgct tggtgaatat                                                20<210>    42<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium chelonae)
     用于检测龟分枝杆菌的探针或引物序列<400>    42gttttataaa tcctgtccac                                                20<210>    43<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium chelonae)
     用于检测龟分枝杆菌的探针或引物序列<400>    43gtagtcggca aaacgtcgga                                                20<210>    44<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium chelonae)
     用于检测龟分枝杆菌的探针或引物序列<400>    44tcaatagaat tgaaacgctg                                                20<210>    45<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium chelonae)
     用于检测龟分枝杆菌的探针或引物序列<400>    45ggcaacacat tgtgttgtca                                                20<210>    46<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium chelonae)
     用于检测龟分枝杆菌的探针或引物序列<400>    46taacaaacct cgctcgttta                                                20<210>    47<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium abscessus)
     用于检测脓肿分枝杆菌的探针或引物序列<400>    47cataaagtag gcatctgtag                                                20<210>    48<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium abscessus)
     用于检测脓肿分枝杆菌的探针或引物序列<400>    48agtggatatc tacttggtga                                                20<210>    49<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium abscessus)
     用于检测脓肿分枝杆菌的探针或引物序列<400>    49taaacatagc ctcgctcgtt                                                20<210>    50<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium abscessus)
     用于检测脓肿分枝杆菌的探针或引物序列<400>    50cgttttcgag tggggctggt                                                20<210>    51<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium abscessus)
     用于检测脓肿分枝杆菌的探针或引物序列<400>    51gagtggggct ggtttttgca                                                20<210>    52<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium abscessus)
     用于检测脓肿分枝杆菌的探针或引物序列<400>    52ctcgttttcg agtggggctg                                                20<210>    53<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium vaccae)
     用于检测牝牛分枝杆菌的探针或引物序列<400>    53tcaggcccgc ccacatcgtg                                                20<210>    54<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium vaccae)
     用于检测脓肿分枝杆菌的探针或引物序列<400>    54tgggggttcg gtgatctgat                                                20<210>    55<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium vaccae)
     用于检测脓肿分枝杆菌的探针或引物序列<400>    55cgattcgttg gatggccttt                                                20<210>    56<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium vaccae)
     用于检测脓肿分枝杆菌的探针或引物序列<400>    56ggccgagccg gtagggaatg                                                20<210>    57<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium vaccae
     (用于检测脓肿分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    57ccggcgaggg aaatcatcag                                                20<210>    58<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium vaccae
     (用于检测脓肿分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    58acacactatt gggctttgag                                                20<210>    59<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium vaccae)
     用于检测脓肿分枝杆菌的探针或引物序列<400>    59acaacaagcc cgtgcccctt                                                20<210>    60<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium vaccae)
     用于检测脓肿分枝杆菌的探针或引物序列<400>    60ttttgggggt ggctctgcgt                                                20<210>    61<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium vaccae)
     用于检测脓肿分枝杆菌的探针或引物序列<400>    61tggcagggtc ggcgtgttgt                                                20<210>    62<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium vaccae)
     用于检测脓肿分枝杆菌的探针或引物序列<400>    62tgtttgattc gtggatagtg                                                20<210>    63<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium vaccae)
     用于检测脓肿分枝杆菌的探针或引物序列<400>    63gaatgcacag cgcttgtggt                                                20<210>    64<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium vaccae)
     用于检测脓肿分枝杆菌的探针或引物序列<400>    64gtgtgttcgg tgtaatgcaa                                                20<210>    65<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     flavescens
     (用于检测变黄分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    65tttattgttc ccccgtcccc                                                20<210>    66<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     flavescens
     (用于检测变黄分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    66acgtgtgtgg gatcagtgcg                                                20<210>    67<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     flavescens
     (用于检测变黄分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    67gttgggagat cagtgccggg                                                20<210>    68<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     flavescens
     (用于检测变黄分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    68cctgtagtgg gtttccggtg                                                20<210>    69<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     flavescens
     (用于检测变黄分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    69cgtgagaagt ggtgtgggaa                                                20<210>    70<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium)
     flavescens
     用于检测变黄分枝杆菌的探针或引物序列<400>    70cactgctttg aggaatcatc                                                20<210>    71<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     flavescens
     (用于检测变黄分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    71ggcccgttgt ttccctggcc                                                20<210>    72<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     flavescens
     (用于检测变黄分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    72tgaacaggtg gctccctttt                                                20<210>    73<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium gordonae
     (用于检测戈氏分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    73cgacaacaag ctaagccaga                                                20<210>    74<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium gordonae)
     用于检测戈氏分枝杆菌的探针或引物序列<400>    74tgttcttttt gtgcaatttt                                                20<210>    75<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium gordonae)
     用于检测戈氏分枝杆菌的探针或引物序列<400>    75gcatcaaaat gtatgcgttg                                                20<210>    76<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium gordonae)
     用于检测戈氏分枝杆菌的探针或引物序列<400>    76aaaatgtatg cgttgtcgtt                                                20<210>    77<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium gordonae)
     用于检测戈氏分枝杆菌的探针或引物序列<400>    77cggcaacgtg ttctttttgt                                                20<210>    78<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium terrae)
     用于检测地分枝杆菌的探针或引物序列<400>    78ttgagttgtg gatagtggtt                                                20<210>    79<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium terrae)
     用于检测地分枝杆菌的探针或引物序列<400>    79gtcgagtgtt tagagagtaa                                                20<210>    80<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium terrae)
     用于检测地分枝杆菌的探针或引物序列<400>    80cgcactgggc gcattccgag                                                20<210>    81<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium terrae)
     用于检测地分枝杆菌的探针或引物序列<400>    81gtgggggctg ggtgcacaac                                                20<210>    82<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium terrae)
     用于检测地分枝杆菌的探针或引物序列<400>    82caacgttgaa aacaagatcg                                                20<210>    83<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium terrae)
     用于检测地分枝杆菌的探针或引物序列<400>    83aattacgaac aacaacaagc                                                20<210>    84<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium terrae)
     用于检测地分枝杆菌的探针或引物序列<400>    84ttgcgagatc atcaactgcc                                                20<210>    85<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium terrae)
     用于检测地分枝杆菌的探针或引物序列<400>    85aggagtcctt gggggtttct                                                20<210>    86<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium terrae)
     用于检测地分枝杆菌的探针或引物序列<400>    86ggtggccggc ttttgtgctg                                                20<210>    87<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium terrae)
     用于检测地分枝杆菌的探针或引物序列<400>    87ggcacactgt tgggtcctga                                                20<210>    88<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium terrae)
     用于检测地分枝杆菌的探针或引物序列<400>    88ggcaacaggc ccgtttgtgc                                                20<210>    89<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium terrae)
     用于检测地分枝杆菌的探针或引物序列<400>    89ccccgggtgg gggtgggtgt                                                20<210>    90<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium terrae)
     用于检测地分枝杆菌的探针或引物序列<400>    90gtgttgttgt cgcctcacac                                                20<210>    91<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium terrae)
     用于检测地分枝杆菌的探针或引物序列<400>    91taacaagcag atttttggtc                                                20<210>    92<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium terrae)
     用于检测地分枝杆菌的探针或引物序列<400>    92tggtctgttt gttttgcaat                                                20<210>    93<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium terrae)
     用于检测地分枝杆菌的探针或引物序列<400>    93ttttgtttct tggtttttgt                                                20<210>    94<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium terrae)
     用于检测地分枝杆菌的探针或引物序列<400>    94gtttgtaagt gtttaagggc                                                20<210>    95<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium terrae)
     用于检测地分枝杆菌的探针或引物序列<400>    95gcatggtgga tgccttggca                                                20<210>    96<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium terrae)
     用于检测地分枝杆菌的探针或引物序列<400>    96ctttttcccc cgtgcctcac                                                20<210>    97<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium terrae)
     用于检测地分枝杆菌的探针或引物序列<400>    97atgggtgagg gtttttgcgg                                                20<210>    98<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium terrae)
     用于检测地分枝杆菌的探针或引物序列<400>    98ttgggacagt gtttgccggt                                                20<210>    99<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium terrae)
     用于检测地分枝杆菌的探针或引物序列<400>    99gcctgtagtg ggtggccggt                                                20<210>    100<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium terrae)
     用于检测地分枝杆菌的探针或引物序列<400>    100ggtggccggt ggtgcagagg                                                20<210>    101<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     scrofluceum
     (用于检测瘰疬分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    101cctgaggcaa cactcggctc                                                20<210>    102<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     scrofluceum
     (用于检测瘰疬分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    102tcggctcgtt ctgagtggtg                                                20<210>    103<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     scrofluceum
     (用于检测瘰疬分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    103taaacggatg cgtggccgaa                                                20<210>    104<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     scrofluceum
     (用于检测瘰疬分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    104caacagcaaa tgattgccag                                                20<210>    105<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probeor primer for detecting Mycobacterium
     scrofluceum
     (用于检测瘰疬分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    105ccctccatct tggtggtggg                                                20<210>    106<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     scrofluceum
     (用于检测瘰疬分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    106tgcgagcatc taaacggatg                                                20<210>    107<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     scrofluceum
     (用于检测瘰疬分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    107gtggccgaac ggtggcgtgt                                                20<210>    108<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     scrofluceum
     (用于检测瘰疬分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    108tcgttgaaat gtgtaatttc                                                20<210>    109<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium kansasii)
      用于检测堪萨斯分枝杆菌的探针或引物序列<400>    109gtggggtgca agccgtgagg                                                20<210>    110<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium kansasii)
     用于检测堪萨斯分枝杆菌的探针或引物序列<400>    110gcgtgttctt ttgtgcaatt                                                20<210>    111<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium kansasii)
     用于检测堪萨斯分枝杆菌的探针或引物序列<400>    111gcaactgtaa atgaatcacc                                                20<210>    112<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium kansasii)
     用于检测堪萨斯分枝杆菌的探针或引物序列<400>    112ctggatgcgc tgccgttcgt                                                20<210>    113<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium szulgai)
     用于检测斯氏分枝杆菌的探针或引物序列<400>    113aacactcagg cttggccaga                                                20<210>    114<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium szulgai)
     用于检测斯氏分枝杆菌的探针或引物序列<400>    114caattggatg cgctgccctc                                                20<210>    115<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium szulgai)
     用于检测斯氏分枝杆菌的探针或引物序列<400>    115tcgtggtggc gtgttctttt                                                20<210>    116<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium szulgai)
     用于检测斯氏分枝杆菌的探针或引物序列<400>    116gtgcaatttt aattctttgg                                                20<210>    117<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium marinum
     and Mycobacterium ulcerans
     (用于检测海分枝杆菌和溃疡分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    117aacaacaagc aagccagaca                                                20<210>    118<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium marinum
     and Mycobacterium ulcerans
     (用于检测海分枝杆菌和溃疡分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    118atctctgttg gtttcgggat                                                20<210>    119<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium marinum
     and Mycobacterium ulcerans
     (用于检测海分枝杆菌和溃疡分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    119ccttttggtg gcgtgttctg                                                20<210>    120<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium gastri)
     用于检测胃分枝杆菌的探针或引物序列<400>    120aacagcaagc aagccagaca                                                20<210>    121<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium gastri)
     用于检测胃分枝杆菌的探针或引物序列<400>    121ctcgtccaag agtgttgtcc                                                20<210>    122<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium gastri)
     用于检测胃分枝杆菌的探针或引物序列<400>    122gcttgtcttg gactcgtcca                                                20<210>    123<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium gastri)
     用于检测胃分枝杆菌的探针或引物序列<400>    123cagggtagcg tgttcttttg                                                20<210>    124<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium xenopi)
     用于检测蟾分枝杆菌的探针或引物序列<400>    124catctggcaa agactgtggt                                                20<210>    125<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium xenopi)
     用于检测蟾分枝杆菌的探针或引物序列<400>    125agggagcacc gtaaacgcat                                                20<210>    126<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium xenopi)
     用于检测蟾分枝杆菌的探针或引物序列<400>    126cccgcgtggg gtggggtgtg                                                20<210>    127<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium xenopi)
     用于检测蟾分枝杆菌的探针或引物序列<400>    127ggttcggcgt gttgtggcgt                                                20<210>    128<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium xenopi)
     用于检测蟾分枝杆菌的探针或引物序列<400>    128cgggccgagg tgttgggcag                                                20<210>    129<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium xenopi)
     用于检测蟾分枝杆菌的探针或引物序列<400>    129caggcagtaa ccgccggcac                                                20<210>    130<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium xenopi)
     用于检测蟾分枝杆菌的探针或引物序列<400>    130caggcagtaa ccgccggcac                                                20<210>    131<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium xenopi)
     用于检测蟾分枝杆菌的探针或引物序列<400>    131tccgcgtggt ggcggggtgt                                                20<210>    132<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium xenopi)
     用于检测蟾分枝杆菌的探针或引物序列<400>    132agactgtggt aagcggtttt                                                20<210>    133<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium xenopi)
     用于检测蟾分枝杆菌的探针或引物序列<400>    133tgttgagtgt tttctggtgt                                                20<210>    134<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium genavense)
     用于检测日内瓦分枝杆菌的探针或引物序列<400>    134cattgaatag tggttgcgag                                                20<210>    135<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium genavense)
     用于检测日内瓦分枝杆菌的探针或引物序列<400>    135aacaacaggc aatcgccgga                                                20<210>    136<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium genavense)
     用于检测日内瓦分枝杆菌的探针或引物序列<400>    136tcggccgact gaggtcgacg                                                20<210>    137<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>     (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium genavense)
      用于检测日内瓦分枝杆菌的探针或引物序列<400>    137gacgtggtgt ccctccatct                                                20<210>    138<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium genavense)
     用于检测日内瓦分枝杆菌的探针或引物序列<400>    138ttgagcattg aatagtggtt                                                20<210>    139<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium genavense)
     用于检测日内瓦分枝杆菌的探针或引物序列<400>    139gcgagcatct agacggatgc                                                20<210>    140<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium genavense)
     用于检测日内瓦分枝杆菌的探针或引物序列<400>    140gttccccagt ggtgcgcgtt                                                20<210>    141<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium genavense)
     用于检测日内瓦分枝杆菌的探针或引物序列<400>    141cgtcaaaaat gtgtaatttt                                                20<210>    142<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium malmoense)
     用于检测玛尔摩分枝杆菌的探针或引物序列<400>    142agcatctaaa cggatgcgct                                                20<210>    143<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium malmoense)
     用于检测玛尔摩分枝杆菌的探针或引物序列<400>    143tggtggggtg caagccgtga                                                20<210>    144<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium malmoense)
     用于检测玛尔摩分枝杆菌的探针或引物序列<400>    144ccagtccgcg tggtgtcccc                                                20<210>    145<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium malmoense)
     用于检测玛尔摩分枝杆菌的探针或引物序列<400>    145tgcccgtaga cgcgtattcg                                                20<210>    146<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium malmoense)
     用于检测玛尔摩分枝杆菌的探针或引物序列<400>    146tttgtgtaat ttcttctttg                                                20<210>    147<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium simiae)
     用于检测猿分枝杆菌的探针或引物序列<400>    147acaacaacag gcaatcgcca                                                20<210>    148<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium simiae)
     用于检测猿分枝杆菌的探针或引物序列<400>    148actcggccga cttcggttga                                                20<210>    149<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium simiae)
     用于检测猿分枝杆菌的探针或引物序列<400>    149gagcatctaa atgaacgcgt                                                20<210>    150<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium simiae)
     用于检测猿分枝杆菌的探针或引物序列<400>    150tccaattggt ggggtgtgag                                                20<210>    151<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium simiae)
     用于检测猿分枝杆菌的探针或引物序列<400>    151tgcacaacaa caggcaatcg                                                20<210>    152<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium simiae)
     用于检测猿分枝杆菌的探针或引物序列<400>    152cgacttcggt tgaagtggtg                                                20<210>    153<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium simiae)
     用于检测猿分枝杆菌的探针或引物序列<400>    153tacgtgttcg ttttgtgtaa                                                20<210>    154<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium smegmatis)
     用于检测耻垢分枝杆菌的探针或引物序列<400>    154gacactctcc gttggggagg                                                20<210>    155<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium smegmatis)
     用于检测耻垢分枝杆菌的探针或引物序列<400>    155gtgtgagccg tgaggagctg                                                20<210>    156<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium smegmatis)
     用于检测耻垢分枝杆菌的探针或引物序列<400>    156gagcgctgta gtggcgccgg                                                20<210>    157<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium smegmatis)
     用于检测耻垢分枝杆菌的探针或引物序列<400>    157cttggtgcac agcaaacgtt                                                20<210>    158<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium smegmatis)
     用于检测耻垢分枝杆菌的探针或引物序列<400>    158gagatgcggt gtgggaaacg                                                20<210>    159<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium smegmatis)
     用于检测耻垢分枝杆菌的探针或引物序列<400>    159ctgtttcgat ggactgccag                                                20<210>    160<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium smegmatis)
     用于检测耻垢分枝杆菌的探针或引物序列<400>    160acacactatt gggccctgag                                                20<210>    161<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium smegmatis)
     用于检测耻垢分枝杆菌的探针或引物序列<400>    161acaacaggcc cgcgttcccg                                                20<210>    162<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium smegmatis)
     用于检测耻垢分枝杆菌的探针或引物序列<400>    162tcccgttggg ggcggggggt                                                20<210>    163<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium smegmatis)
     用于检测耻垢分枝杆菌的探针或引物序列<400>    163gggtgtgttg ttgccctgct                                                20<210>    164<21l>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium smegmatis)
     用于检测耻垢分枝杆菌的探针或引物序列<400>    164gctgtagtgg cgccggcttg                                                20<210>    165<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium smegmatis)
     用于检测耻垢分枝杆菌的探针或引物序列<400>    165aaacgctgtt tcgatggact                                                20<210>    166<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium shimoidei)
     用于检测石氏分枝杆菌的探针或引物序列<400>    166aacaacaagc gagaagccga                                                20<210>    167<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium shimoidei)
     用于检测石氏分枝杆菌的探针或引物序列<400>    167ggcttccgca gtgggcggaa                                                20<210>    168<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium shimoidei)
     用于检测石氏分枝杆菌的探针或引物序列<400>    168gggcgcgggc tgggtgcaca                                                20<210>    169<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium shimoidei)
     用于检测石氏分枝杆菌的探针或引物序列<400>    169gcgagaagcc gagcacactg                                                20<210>    170<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium shimoidei)
     用于检测石氏分枝杆菌的探针或引物序列<400>    170cccgggccct ttggggttgg                                                20<210>    171<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium shimoidei)
     用于检测石氏分枝杆菌的探针或引物序列<400>    171aagcaaaact tggttgtttt                                                20<210>    172<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium shimoidei)
     用于检测石氏分枝杆菌的探针或引物序列<400>    172gtttgtcgag ttgttttctt                                                20<210>    173<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium habana)
     用于检测哈瓦那分枝杆菌的探针或引物序列<400>    173aacaacaggc aatcgccaga                                                20<210>    174<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium habana)
     用于检测哈瓦那分枝杆菌的探针或引物序列<400>    174aacactccaa ttgggtgggg                                                20<210>    175<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium habana)
     用于检测哈瓦那分枝杆菌的探针或引物序列<400>    175ggttctcgtc tgtagtggac                                                20<210>    176<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium habana)
     用于检测哈瓦那分枝杆菌的探针或引物序列<400>    176tgcacaacaa caggcaatcg                                                20<210>    177<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium habana)
     用于检测哈瓦那分枝杆菌的探针或引物序列<400>    177ggccgacttc ggttgaagtg                                                20<210>    178<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium habana)
     用于检测哈瓦那分枝杆菌的探针或引物序列<400>    178ggggtgtggt gtttgagtat                                                20<210>    179<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium habana)
     用于检测哈瓦那分枝杆菌的探针或引物序列<400>    179gagcatctaa atgaacgcgt                                                20<210>    180<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium habana)
     用于检测哈瓦那分枝杆菌的探针或引物序列<400>    180tacgtgttcg ttttgtgtaa                                                20<210>    181<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     farcinogen
     (用于检测产鼻疽分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    181gttggtgatg gactgccaga                                                20<210>    182<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     farcinogen
     (用于检测产鼻疽分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    182cgcgggaaag cgttggtgat                                                20<210>    183<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     farcinogen
     (用于检测产鼻疽分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    183cgatgtcgtg ggcagtagtg                                                20<210>    184<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     farcinogen
     (用于检测产鼻疽分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    184ggatatttca gccagcatct                                                20<210>    185<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     farcinogen
     (用于检测产鼻疽分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    185tgtctggtgg gtgcaaatga                                                20<210>    186<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     farcinogen
     (用于检测产鼻疽分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    186cggcgcggga aagcgttggt                                                20<210>    187<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     farcinogen
     (用于检测产鼻疽分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    187gggaaagcgt tggtgatgga                                                20<210>    188<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     farcinogen
     (用于检测产鼻疽分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    188tctagcacgc agagtgtggc                                                20<210>    189<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     farcinogen
     (用于检测产鼻疽分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    189tgggggcctt cgggtttctt                                                20<210>    190<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium asiaticum)
     用于检测亚洲分枝杆菌的探针或引物序列<400>    190catcccaatt ggtgggatgc                                                20<210>   191<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium asiaticum)
     用于检测亚洲分枝杆菌的探针或引物序列<400>    191cacaacaaca agcaagccag                                                20<210>    192<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium asiaticum)
     用于检测亚洲分枝杆菌的探针或引物序列<400>    192cactcgggcg ctagcacgaa                                                20<210>    193<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium asiaticum)
     用于检测亚洲分枝杆菌的探针或引物序列<400>    193aactgatcgc gtcgccgttc                                                20<210>    194<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium porcinum)
     用于检测猪分枝杆菌的探针或引物序列<400>    194cagtagtgcg gttgggatat                                                20<210>    195<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium porcinum)
     用于检测猪分枝杆菌的探针或引物序列<400>    195ttcgattccc ccgccgtccg                                                20<210>    196<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium porcinum)
     用于检测猪分枝杆菌的探针或引物序列<400>    196cagccaggac ctgtagtggg                                                20<210>    197<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium porcinum)
     用于检测猪分枝杆菌的探针或引物序列<400>    197tggtgggtgc aaatgacaaa                                                20<210>    198<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium porcinum)
     用于检测猪分枝杆菌的探针或引物序列<400>    198gagccggcgc gggaaagcgt                                                20<210>    199<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium porcinum)
     用于检测猪分枝杆菌的探针或引物序列<400>    199gtgatggaac tgctgaacac                                                20<210>    200<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium porcinum)
     用于检测猪分枝杆菌的探针或引物序列<400>    200ggctttgaga caacaggccc                                                20<210>    201<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium porcinum)
     用于检测猪分枝杆菌的探针或引物序列<400>    201cggggggtgg cattccgttg                                                20<210>    202<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium porcinum)
     用于检测猪分枝杆菌的探针或引物序列<400>    202cggcgtgttg ttgctccgct                                                20<210>    203<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium porcinum)
     用于检测猪分枝杆菌的探针或引物序列<400>    203tagtggttgc gagcatctag                                                20<210>    204<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium porcinum)
     用于检测猪分枝杆菌的探针或引物序列<400>    204agtgtggctg ggggccttcg                                                20<210>    205<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    (sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium porcinum)
     用于检测猪分枝杆菌的探针或引物序列<400>    205ggtcttgttg tgtgttgatg                                                20<210>    206<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     acapulcensis
     (用于检测阿加普尔分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    205tgccagcacc tgtagtgggt                                                20<210>    207<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     acapulcensis
     (用于检测阿加普尔分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    207gatcgtctgg tggggaaagc                                                20<210>    208<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     acapulcensis
     (用于检测阿加普尔分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    208cgggcgtgaa agattgccag                                                20<210>    209<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     acapulcensis
     (用于检测阿加普尔分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    209agcccgtcgc ctctttgtcc                                                20<210>    210<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     acapulcensis
     (用于检测阿加普尔分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    210cgagtgtggg atatcggaga                                                20<210>    211<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     acapulcensis
     (用于检测阿加普尔分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    211ggagcaccac gagacctgtt                                                20<210>    212<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     acapulcensis
     (用于检测阿加普尔分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    212cgcccacatc gtgtgggagt                                                20<210>    213<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     acapulcensis
     (用于检测阿加普尔分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    213tcggtgactc aggcgattcg                                                20<210>    214<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probeor primer for detecting Mycobacterium
     acapulcensis
     (用于检测阿加普尔分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    214gggtgtggtg tttgatttgt                                                20<210>    215<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     acapulcensis
     (用于检测阿加普尔分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    215cgagcatctg aacgcagaga                                                20<210>    216<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     diernhoferi
     (用于检测迪氏分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    216acctgttgcc cgcccacatc                                                20<210>    217<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     diernhoferi
     (用于检测迪氏分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    217gtgtgggagt tcggtgactc                                                20<210>    218<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     diernhoferi
     (用于检测迪氏分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    218ttcgttggat ggcctcacac                                                20<210>    219<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     diernhoferi
     (用于检测迪氏分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    219tgcacaacaa actttgagaa                                                20<210>    220<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     diernhoferi
     (用于检测迪氏分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    220acaggccctg cggtgccgga                                                20<210>    221<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     dieruhoferi
     (用于检测迪氏分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    221tcgttggagt cctggttgcc                                                20<210>    222<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     diernhoferi
     (用于检测迪氏分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    222ggccgcgagt cccggaagcg                                                20<210>    223<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     diernhoferi
     (用于检测迪氏分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    223gtctgttgtt gctccatctt                                                20<210>    224<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     diernhoferi
     (用于检测迪氏分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    224ggtgtggtgt ttgatttgtg                                                20<210>    225<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     diernhoferi
     (用于检测迪氏分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    225atagtggttg cgagcatcta                                                20<210>    226<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     diernhoferi
     (用于检测迪氏分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    226acgcaagagg agtctgggtt                                                20<210>    227<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     diernhoferi
     (用于检测迪氏分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    227ttgttgtgtg tgtttgatgt                                                20<210>    228<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     paratuberculosis
     (用于检测副结核分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    228gagcaccacg aaaagcaccc                                                20<210>    229<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     paratuberculosis
     (用于检测副结核分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    229ctggtggggt gcgagccgtg                                                20<210>    230<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     paratuberculosis
     (用于检测副结核分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    230gcgagccgtg aggggttccc                                                20<210>    231<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     paratuberculosis
     (用于检测副结核分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    231aggggttccc gtctgtagtg                                                20<210>    232<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     paratuberculosis
     (用于检测副结核分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    232acgggggccg ggtgcgcaac                                                20<210>    233<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     paratuberculosis
     (用于检测副结核分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    233caaatgattg ccagacacac                                                20<210>    234<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     paratuberculosis
     (用于检测副结核分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    234tattgggcct gagacaacac                                                20<210>    235<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     paratuberculosis
     (用于检测副结核分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    235cggtccgtcc gtgtggagtc                                                20<210>    236<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     paratuberculosis
     (用于检测副结核分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    236tccatcttgg tggtggggtg                                                20<210>    237<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     paratuberculosis
     (用于检测副结核分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    237ggtgtttgag tattggatag                                                20<210>    238<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     paratuberculosis
     (用于检测副结核分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    238tggttgcgag catctagatg                                                20<210>    239<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     paratuberculosis
     (用于检测副结核分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    239gcgcatggtc tccgtggccg                                                20<210>    240<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacterium
     paratuberculosis
     (用于检测副结核分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    240gttcatcgaa atgtgtaatt                                                20<210>    241<211>    20<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of probe or primer for detecting Mycobacteria sp.
     (用于检测酒精分枝杆菌的探针或引物序列)<400>    241aaaagctgtt gtttgacggt                                                20<210>    242<211>    25<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of primer for amplifying Mycobacteria ITS selected from
     the sequence of 16S rRNA in Mycobacteria
     (用于放大从分枝杆菌16S rRNA序列中选择出来的分枝杆菌ITS的引物序列)<400>    242tggatccgac gaagtcgtaa caagg                                          25<210>    243<211>    25<212>    DNA<213>    (Artificial Sequence)人工序列<220><223>    sequence of primer for amplifying Mycobacteria ITS selected from
     the sequence of 23S rRNA in Mycobacteria
     (用于放大从分枝杆菌23S rRNA序列中选择出来的分枝杆菌ITS的引物序列)<400>    243tggatcctgc caaggcatcc accat                                          25

Claims (38)

1、一种用于检测和鉴定分枝杆菌的寡聚核苷酸,其特征是内转录间隔区的偶发分枝杆菌基因ITS的DNA,列于序列鉴别号1中。
2、一种用于检测和鉴定分枝杆菌的寡聚核苷酸,其特征是内转录间隔区的龟分枝杆菌基因ITS的DNA,列于序列鉴别号2中。
3、一种用于检测和鉴定分枝杆菌的寡聚核苷酸,其特征是内转录间隔区的脓肿分枝杆菌基因ITS的DNA,列于序列鉴别号3中。
4、一种用于检测和鉴定分枝杆菌的寡聚核苷酸,其特征是内转录间隔区的牝牛分枝杆菌基因ITS的DNA,列于序列鉴别号4中。
5、一种用于检测和鉴定分枝杆菌的寡聚核苷酸,其特征是内转录间隔区的变黄分枝杆菌基因ITS的DNA,列于序列鉴别号5中。
6、一种用于检测和鉴定分枝杆菌的寡聚核苷酸,其特征是内转录间隔区的亚洲分枝杆菌基因ITS的DNA,列于序列鉴别号6中。
7、一种用于检测和鉴定分枝杆菌的寡聚核苷酸,其特征是内转录间隔区的猪分枝杆菌基因ITS的DNA,列于序列鉴别号7中。
8、一种用于检测和鉴定分枝杆菌的寡聚核苷酸,其特征是内转录间隔区的阿加普尔分枝杆菌基因ITS的DNA,列于序列鉴别号8中。
9、一种用于检测和鉴定分枝杆菌的寡聚核苷酸,其特征是内转录间隔区的迪氏分枝杆菌基因ITS的DNA,列于序列鉴别号9中。
10、一种用于检测和鉴定分枝杆菌的寡聚核苷酸,其特征是检测分枝杆菌的寡聚核苷酸,列于序列鉴别号10至14中。
11、一种用于检测和鉴定分枝杆菌的寡聚核苷酸,其特征是鉴别分枝杆菌中的结核菌和NTB的寡聚核苷酸,列于序列鉴别号15至23中。
12、一种用于检测和鉴定分枝杆菌的寡聚核苷酸,其特征是检测和鉴定鸟分枝杆菌MAC和胞内分枝杆菌的寡聚核苷酸,列于序列鉴别号24至27中。
13、一种用于检测和鉴定分枝杆菌的寡聚核苷酸,其特征是检测和鉴定偶发分枝杆菌的寡聚核苷酸,列于序列鉴别号28至38中。
14、一种用于检测和鉴定分枝杆菌的寡聚核苷酸,其特征是用于检测和鉴定龟分枝杆菌的寡聚核苷酸,列于序列鉴别号39至46中。
15、一种用于检测和鉴定分枝杆菌的寡聚核苷酸,其特征是检测和鉴定脓肿分枝杆菌的寡聚核苷酸,列于序列鉴别号47至52中。
16、一种用于检测和鉴定分枝杆菌的寡聚核苷酸,其特征是检测和鉴定牝牛分枝杆菌的寡聚核苷酸,列于序列鉴别号53至64中。
17、一种用于检测和鉴定分枝杆菌的寡聚核苷酸,其特征是检测和鉴定变黄分枝杆菌的寡聚核苷酸,列于序列鉴别号65至72中。
18、一种用于检测和鉴定分枝杆菌的寡聚核苷酸,其特征是检测和鉴定戈氏分枝杆菌的寡聚核苷酸,列于序列鉴别号73至77中。
19、一种用于检测和鉴定分枝杆菌的寡聚核苷酸,其特征是检测和鉴定地分枝杆菌的寡聚核苷酸,列于序列鉴别号78至100中。
20、一种用于检测和鉴定分枝杆菌的寡聚核苷酸,其特征是检测和鉴定瘰疬分枝杆菌的寡聚核苷酸,列于序列鉴别号101至108中。
21、一种用于检测和鉴定分枝杆菌的寡聚核苷酸,其特征是检测和鉴定堪萨斯分枝杆菌的寡聚核苷酸,列于序列鉴别号109至112中。
22、一种用于检测和鉴定分枝杆菌的寡聚核苷酸,其特征是检测和鉴定斯氏分枝杆菌的寡聚核苷酸,列于序列鉴别号113至116中。
23、一种用于检测和鉴定分枝杆菌的寡聚核苷酸,其特征是检测和鉴定海分枝杆菌和溃疡分枝杆菌的寡聚核苷酸,列于序列鉴别号117至119中。
24、一种用于检测和鉴定分枝杆菌的寡聚核苷酸,其特征是检测和鉴定胃分枝杆菌的寡聚核苷酸,列于序列鉴别号120至123中。
25、一种用于检测和鉴定分枝杆菌的寡聚核苷酸,其特征是检测和鉴定蟾分枝杆菌的寡聚核苷酸,列于序列鉴别号124至133中。
26、一种用于检测和鉴定分枝杆菌的寡聚核苷酸,其特征是检测和鉴定日内瓦分枝杆菌的寡聚核苷酸,列于序列鉴别号134至141中。
27、一种用于检测和鉴定分枝杆菌的寡聚核苷酸,其特征是检测和鉴定玛尔摩分枝杆菌的寡聚核苷酸,列于序列鉴别号142至146中。
28、一种用于检测和鉴定分枝杆菌的寡聚核苷酸,其特征是检测和鉴定猿分枝杆菌的寡聚核苷酸,列于序列鉴别号147至153中。
29、一种用于检测和鉴定分枝杆菌的寡聚核苷酸,其特征是检测和鉴定耻垢分枝杆菌的寡聚核苷酸,列于序列鉴别号154至165中。
30、一种用于检测和鉴定分枝杆菌的寡聚核苷酸,其特征是检测和鉴定石氏分枝杆菌的寡聚核苷酸,列于序列鉴别号166至172中。
31、一种用于检测和鉴定分枝杆菌的寡聚核苷酸,其特征是检测和鉴定哈瓦那分枝杆菌的寡聚核苷酸,列于序列鉴别号173至180中。
32、一种用于检测和鉴定分枝杆菌的寡聚核苷酸,其特征是检测和鉴定产鼻疽分枝杆菌的寡聚核苷酸,列于序列鉴别号181至189中。
33、一种用于检测和鉴定分枝杆菌的寡聚核苷酸,其特征是检测和鉴定亚洲分枝杆菌的寡聚核苷酸,列于序列鉴别号190至193中。
34、一种用于检测和鉴定分枝杆菌的寡聚核苷酸,其特征是检测和鉴定猪分枝杆菌的寡聚核苷酸,列于序列鉴别号194至205中。
35、一种用于检测和鉴定分枝杆菌的寡聚核苷酸,其特征是检测和鉴定阿加普尔分枝杆菌的寡聚核苷酸,列于序列鉴别号206至215中。
36、一种用于检测和鉴定分枝杆菌的寡聚核苷酸,其特征是检测和鉴定迪氏分枝杆菌的寡聚核苷酸,列于序列鉴别号216至227中。
37、一种用于检测和鉴定分枝杆菌的寡聚核苷酸,其特征是检测和鉴定副结核分枝杆菌的寡聚核苷酸,列于序列鉴别号228至240中。
38、一种用于检测和鉴定分枝杆菌的寡聚核苷酸,其特征是检测酒精分枝杆菌的寡聚核苷酸,列于序列鉴别号241中。
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