CN1335854A - 控制植物病虫害的组合物及方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及表现杀昆虫、抗真菌和抗细菌活性的产抗生素和产代谢物的新枯草芽孢杆菌菌株。此新菌株的上清液中含有有效的杀昆虫、抗真菌和抗细菌剂。本发明也包括上清液中产生的溶剂可提取的小分子量(<10,000道尔顿)的具黄瓜十一星叶甲活性的代谢物。本发明还包含保护或治疗植物免受真菌和细菌侵染及黄瓜十一星叶甲侵袭的方法,包括给植物施用有效量的产抗生素/代谢物的新枯草芽孢杆菌菌株、由该新枯草芽孢杆菌菌株产生的抗生素/代谢物或其组合物,并选择性地进一步包括另一种产抗生素的细菌菌株和/或化学杀虫剂。本发明还包括单独使用从此新枯草芽孢杆菌菌株培养物获得的全肉汤培养物或上清液、或与化学杀虫剂和/或其它生物防治剂联合使用以预防或治疗真菌和细菌侵染的方法。本发明还包括命名为agrastatin的新型抗真菌和抗细菌化合物以及含有A型伊枯草菌素、制磷脂菌素、枯草菌表面活性剂和agrastatin的新型组合物。本发明还提供治疗或保护植物免受真菌和细菌侵染以及黄瓜十一星叶甲侵袭的方法,包括施用新型的agrastatin及包含A型伊枯草菌素、制磷脂菌素、枯草菌表面活性剂和agrastatin的新型组合物。本发明还进一步提供了从AQ713菌株分离的具杀虫活性的脂肽提取物以及从AQ713菌株分离的具杀昆虫活性的枯草菌表面活性剂脂肽。

Description

控制植物病虫害的组合物及方法
发明领域
本发明属于生物杀虫剂领域。更具体地讲，本发明涉及能够抑制广谱真菌和细菌性植物疾病并具有抗昆虫活性的枯草芽孢杆菌新菌株AQ713的发现。本发明也涉及仅包含此新枯草芽孢杆菌菌株和由此菌株产生的抗生素及代谢物、或还包含其它化学和生物杀虫剂的杀真菌、杀细菌和杀虫的组合物。
发明背景
多年来，已知多种微生物具有生物学活性，由此可用于控制植物疾病。尽管在鉴定和发展具有农学和园艺意义的控制多种植物疾病的生物杀虫剂领域已取得进展，但现在所用的大多数杀虫剂仍然是合成化合物，许多这些化学杀真菌剂被EPA划分为致癌剂，对野生生物和其它非靶标物种有毒。另外，病原体也可逐渐产生对化学杀虫剂的抗性(见例如：Schwinn等，第244页，植物病理学进展(ADVANCES IN PLANT PATHOLOGY)：致病疫霉，马铃薯晚疫病的病因(PHYTOPHTHORA INFESTANS THE CAUSE OFLATE BLIGHT OF POTATO)(Academic Press，San Diego 1991))。
每年有价值2.5亿-3亿美元的化学杀虫剂用于控制黄瓜十一星叶甲的侵袭。许多这些化学杀虫剂对人类、野生生物和其它非靶标物种是有毒的。并且一些已在地下水中发现。开发新的化学杀虫剂需花费1亿美元。
生物控制为合成化学杀真菌剂提供了一种具有吸引力的替代方法。生物杀虫剂(活的生物和由这些生物天然产生的化合物)更为安全、更容易生物降解并且开发成本更低。
从微生物发展而来的生物杀虫剂对农业、公众健康及城镇环境的害虫综合治理来说是非常理想的。一种常用的生物杀虫剂是革兰氏阳性菌苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)。已知杀虫的苏云金芽孢杆菌菌株在孢子形成过程中产生对某些目和种的昆虫和线虫有特异毒性的晶体蛋白(见例如，美国专利4,999,192和美国专利5,208,017)。由苏云金芽孢杆菌产生的蛋白内毒素也可作为针对黄瓜十一星叶甲和其它甲虫类的杀虫剂(见例如，美国专利5,187,091；Johnson，T.J.等(1993)，经济昆虫学杂志(J.Economic Entomology)86：330-333)。已证明苏云金芽孢杆菌内毒素作为纯化的晶体、洗涤的细胞沉淀和表达的蛋白是有效的。Warren等(WO96/10083)公开了在蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)和苏云金芽孢杆菌的营养阶段产生的非内毒素蛋白。这些称为Vip1和Vip2的营养蛋白对黄瓜十一星叶甲(northern和western)有很强的活性。Estruch等(1997)，自然生物技术(Nature Biotechnology)15：137-141和Mullins等(1997)，Appl.Environ.Microbiol.63。
已证明一种称为β外毒素的苏云金芽孢杆菌热稳定代谢物也具有杀虫特性。Burgjeron和Biache(1979)(食虫动物(Entomophaga)11：279-284)报道了对马铃薯叶甲(Leptinotarsa decemlineata)有活性的β外毒素。另外，已知的苏云金芽孢杆菌β外毒素表现出非特异性的杀虫活性，不仅杀死线虫，也杀死蝇、粘虫、螨和黄瓜十一星叶甲。σ外毒素与β外毒素结构相似，并对马铃薯叶甲有活性(Agrauer等(1991)，J.Entomol.Sci 26：206-213)。α外毒素对家蝇(Musca Domestica)的幼虫有毒性(Cluthy(1980)FEMS Microbiol.Lett.8：1-7)。γ外毒素是多种蛋白水解酶、壳多糖酶和蛋白酶。γ外毒素的毒性作用只有与β外毒素或δ内毒素相联合才得以表现。Forsberg等(1976)，“苏云金芽孢杆菌：其在环境质量中的作用”(Bacillus thuringiensis：Its effects inEnvironmental Quality)National Research Council of Canada。Stonard等(1994)ACS Symposium Series 551：25报道了在蜡状芽孢杆菌菌株上清液中对黄瓜十一星叶甲具有活性的水溶性次生代谢物。
未见具广谱杀虫活性的枯草芽孢杆菌菌株的记载。
筛选程序已经鉴定了一些表现抗真菌活性的芽孢杆菌属(Bacillusspp.)(芽孢杆菌属包括枯草芽孢杆菌(B.subtilis)、蜡状芽孢杆菌、蕈状芽孢杆菌(Bacillus mycoides)、苏云金芽孢杆菌)的菌株(见例如，Stabb等(1990)，Appl.Environ.Microb.60：4404-4412)。已证明这些菌株产生对由苜蓿疫霉(Phytophthora medicaginis)、烟草疫霉(P.nicotianae)、瓜果疫霉(P.aphanidermatum)或小核盘菌(Sclerotinia minor)(见Stabb等，同上)引起的土传猝倒病有效的两种抗生素兼性霉素A和/或Kanosamine(Milner等(1996)，Appl.Environ.Microb.62：3061-3066)。兼性霉素A是一种水溶性的、酸稳定的线性氨基多元醇分子(见He等(1994)，Tetra.Lett.35(16)：2499-2502)。
授予Handelsman等的美国专利5,049,379描述了兼性霉素A如何在苜蓿和大豆中对猝倒病起作用。当用蜡状芽孢杆菌ATCC 53522包被种子时，根腐真菌的致病活性受到抑制。同样，将某些蜡状芽孢杆菌菌株的孢子制剂施用于大豆种子或种子周围的土壤在一些田间可提高大豆产量。(见Osburne等(1995)，Am.Phytopathol.Soc.79(6)：551-556)。施用生物杀虫剂的方法在本领域众所周知，包括如可湿性粉剂、dryflowable、有效制剂的微囊化及来自合适培养物的抗生素组分的液体或固体制剂。(见例如，授予Rossall的美国专利5,061,495或授予Handelsman的美国专利5,049,379)。
Smith等(1993)(植物疾病(Plant Disease)77(2)：139-142)报道了用产生兼性霉素的蜡状芽孢杆菌菌株UW85可抑制引起CottonyCucumber Leak的土传真菌瓜果疫霉的活性。Leifert等(1995)(应用细菌学杂志(J.Appl.Bacteriol.)78：97-108)报道了用两个芽孢杆菌菌株，枯草芽孢杆菌CL27和短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)CL45制备抗葡萄孢(Botrytis)和抗链格孢(Alternaria)的抗生素。全肉汤培养物和无细胞滤液在体外测试中对葡萄孢和链格孢有活性，在Astilbe上的体内小植物测试中对葡萄孢有活性。Leifert等(1997)的美国专利5,597,565公开了枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌和多粘芽孢杆菌(Bacilluspolymyxa)在抑制引起收获后疾病的真菌方面特别有效。他们还公开了无细胞培养物滤液中产生的抗生素的存在及它们在不同pH值时的活性，但他们未鉴定这些化合物。
Rossall(1994)的美国专利5,344,647公开了具有广泛抗真菌活性的枯草芽孢杆菌菌株。Sholberg等(1995)Can.J.Microbiol.41：247-252、Swinburne等(1975)Trans.Brit.Mycol.Soc.65：211-217、Singh和Deverall(1984)Trans.Br.Mycol.Soc.83：487-490、Ferreira等(1991)植物病理学(Phytopathology)81：283-287及Baker等(1983)(植物病理学73：1148-1152)公开了芽孢杆菌属和枯草芽孢杆菌作为真菌植物病原体的生物防治剂的用途。Baker等(1983)植物病理学73：1148-1152也报道了将抗真菌的枯草芽孢杆菌用于植物病原体。Pusey等(1998)(植物疾病(Plant Dis.)72：622-626)，Pusey和Robins(美国专利5,047,239)以及McKeen等(1986)植物病理学76：136-139公开了用枯草芽孢杆菌控制收获后果腐病。McKeen等，同上，也表明与低分子量的伊枯草菌素环肽相似的抗生素参与了枯草芽孢杆菌的杀真菌活性。
Liu等(1995)的美国专利5,403,583公开了巨大芽孢杆菌(Bacillusmegaterium)ATCC 55000和控制真菌植物病原体立枯丝核菌(Rhizoctoniasolani)的方法。Islam和Nandi(1985)(植物疾病和保护杂志(J.PlantDiseases and Protection)92(3)：241-246)公开了对稻胡麻斑病的致病因子Drechslera oryzae有拮抗作用的巨大芽孢杆菌。相同作者Islam和Nandi(1985)(植物疾病和保护杂志92(3)233-240)也公开了巨大芽孢杆菌对Drechslera oryzae、链格孢和粉红镰孢的体外拮抗作用。他们讨论了培养物滤液中的三种成分。活性最强的抗生素在水和甲醇中高度可溶，在255nm处有紫外吸收峰，260nm处有肩，证明它是多氧菌素样脂肽。Cook((1987)Proceedings Beltwide Cotton Production-机械化研究会议，Cotton Council，Memphis，第43-45页)公开了用巨大芽孢杆菌的悬浮液降低由棉根腐病的致病因子多主瘤梗孢(Phymatotrichumomnivorum)杀死的棉株数量。
Berdy记录了巨大芽孢杆菌的抗生素制备(CRC抗生素化合物手册，第I-XIV卷，(CRC Press，Inc.，Boca Raton，FL 1980-87))，他报道了低哺乳动物毒性肽抗生素如安丝菌素-PDM-O、巨大杆菌素、巨杆菌素、五肽及同型肽(homopeptide)的制备。
已知芽孢杆菌可产生抗真菌和抗细菌的次生代谢物。Wisconsin大学和Cornell大学的研究者已鉴定了由芽孢杆菌种产生的新杀真菌化合物兼性霉素A(He等(1994)，Tetra.Lett.35(16)：2499-2502)。由同种菌株产生的第二种杀真菌代谢物最近被鉴定为已知的氨基糖Kanosamine(Milner等(1996)，Appl. Environ.Microb.62：3061-3065)。
另一类以前描述过的芽孢杆菌代谢物是伊枯草菌素类的环状脂肽，其中一些是有效的杀真菌剂。这些制剂是由具有7个α氨基酸和一个具脂肪族侧链的β氨基酸的环形八肽组成。有几类氨基酸序列顺序和组成不同的伊枯草菌素。它们列于下文表l中。总的来说，产生了一套脂肪族氨基酸残基的长度和分支不同的相关分子。当针对酿酒酵母进行实验时，发现抗霉枯草菌素是活性最强的制剂(LC50＝10μg/ml)，其次是伊枯草菌素A和芽孢霉素L(LC50均为30μm/ml)(Beeson等(1979)，抗生素杂志(J.Antibiotics)32(8)：828-833)。据报道这些环状脂肽的作用方式是由于与真菌膜相互作用而产生允许必需离子释放的跨膜通道(Latoud等(1986)，Biochem.Biophys.Acta 856：526-535)。伊枯草菌素C对包括产黄青霉(Penicillium chrysogenum)在内的真菌无活性(Peypoux等(1978)，Tetrahedron Lett.  34：1147-1152)。
                                      表1  伊枯草菌素家族抗生素的结构
    抗生素    L-Asz(X1)     X4     X5     X6     X7
  伊枯草菌素A     L-Asn   L-Gln   L-Pro   D-Asn   L-Ser
  伊枯草菌素C     L-Asp   L-Gln   L-Pro   D-Asn   L-Ser
  芽孢菌霉素D     L-Asn   L-Pro   L-Glu   D-Ser   L-Thr
  芽孢菌霉素L     L-Asp   L-Ser   L-Gln   D-Ser   L-Thr
  芽孢菌霉素F     L-Asn   L-Gln   L-Pro   D-Asn   L-Thr
  抗霉枯草菌素     L-Asn   L-Gln   L-Pro   D-Ser   L-Asn
一个USDA的研究小组通过合成许多氨基酸链长度不同的类似物研究了伊枯草菌素的结构与活性关系。研究者报道了伊枯草菌素活性随着脂肪酸侧链长度和异＞正常＞反异顺序的末端分支而升高(Bland等(1995)Proc.Plant Growth Regulation Soc.Am.第22期：105-107)。根据对多种产生伊枯草菌素的芽孢杆菌菌株的研究，他们也认为：“从天然产物获得的伊枯草菌素的量不足以有商业可行性”。
从蜡状芽孢杆菌中分离出的另一类环状脂肽是制磷脂菌素。这些化合物属于酰化的十肽家族，其结构示于图1(Nishikiori等(1986)，抗生素杂志39(6)：755-761)。这些化合物最初是作为猪胰磷脂酶A2的抑制剂被分离的(Umezawa等(1986)抗生素杂志39(6)：737-744)，但后来发现它可抑制包括葡萄孢(Botrytis)、瘟病菌(Pyricularia)和链格孢(Alternaria)在内的一些植物致病真菌(Yamada等(1990)Nippon NoyakuGakkaishi 15(1)：95-96)。Yamada也报道了由相同枯草芽孢杆菌菌株产生的伊枯草菌素A和制磷脂菌素之间的协同作用。
已进行了发酵改进方面的工作以提高在液态(Phae和Shoda(1991)，发酵生物工程杂志(J.Ferment.Bioeng.)71：118-121；Ohno等(1993)，发酵生物工程杂志75：463-465)和固态发酵(Ohno等(1992)，生物技术快报(Biotech.Lett.)14(9)：817-822；Ohno等(1995)，发酵生物工程杂志5：517-519)中伊枯草菌素的产量。也有紧密关联而本身无活性的枯草菌表面活性剂与由相同枯草芽孢杆菌菌株产生的伊枯草菌素之间的协同作用的报道(Hiraoka等(1992)，普通应用微生物学杂志(J.Gen.Appl.Microbiol.)38：635-640)。共同调节伊枯草菌素A和枯草菌表面活性剂生物合成的基因的核苷酸序列已经发表(Huang等(1993)，发酵生物工程杂志76(6)：445-450)。对产生伊枯草菌素的菌株的田间工作集中于土壤处理以控制丝核菌(Rhizoctonia)(Asaka和Shoda(1996)，应用环境微生物学(Appl.Environ.Microb.)62：4081-4085)；未见伊枯草菌素田间叶面施用的报道。
由枯草芽孢杆菌产生的另一个具有独特的表面活性剂活性的环状脂肽化合物是枯草菌表面活性剂(Kaninuma等(1969)，Agric.Biol.Chem.33：973-976)。枯草菌表面活性剂含有通过内酯环与具有LLDLLDL(SEQ IDNO：1)序列的七肽部分连接的C14或C15β-羟基脂肪酸(Arima等(1968)，Biochem.Biophys.Res.Commun 31：488-494)。Sandrin等(1990)Biotechnol.Appl.Biochem 12：370-375发现既产生枯草菌表面活性剂又产生伊枯草菌素A、芽孢菌霉素F和L以及抗霉枯草菌素的枯草芽孢杆菌菌株。
由本发明人发现的新微生物AQ713原来认为是巨大芽孢杆菌的菌株，现在被鉴定为枯草芽孢杆菌的一个菌株，其产生A伊枯草菌素、制磷脂菌素和枯草菌表面活性剂。以前未曾报道有微生物产生此种脂肽组合。另外，本发明人还发现AQ713也产生近来描述的称为“agrastatin”的化合物。所有上述三种已知化合物与新化合物agrastatin的组合也是新型的。
本发明的公开
本发明提供原先鉴定为巨大芽孢杆菌的新的产抗生素和产代谢物的枯草芽孢杆菌菌株，此菌株表现广泛的杀真菌和杀细菌活性，并且也表现抗虫活性。本发明还提供来自此新枯草芽孢杆菌的对叶及地下昆虫具有活性的新代谢物。本发明还提供治疗或保护植物免受真菌、细菌及昆虫侵染的方法，包括施用有效量的产抗生素枯草芽孢杆菌的步骤。产抗生素枯草芽孢杆菌可作为全肉汤培养物中的悬浮液或作为从产抗生素芽孢杆菌菌株的全肉汤培养物得到的含抗生素的上清液提供。本发明还提供治疗或保护植物根免受地下侵袭(如：黄瓜十一星叶甲)的方法，包括施用有效量的这种新产代谢物枯草芽孢杆菌、其全肉汤培养物或培养物上清液的步骤。此新产代谢物枯草芽孢杆菌可作为全肉汤培养物中的悬浮液或作为从该微生物的全肉汤培养物得到的含代谢物的上清液或纯化的代谢物提供。本发明还提供了由新菌株AQ713产生的新化合物agrastatin及含伊枯草菌素A、制磷脂菌素、枯草菌表面活性剂和agrastatin的组合物。
附图简述
图1表示制磷脂菌素抗生素的结构(SEQ ID NO：2)
图2表示AQ713代谢物的HPLC层析谱
实施本发明的方式
本发明提供了原先鉴定为巨大芽孢杆菌、具有广泛抗真菌、杀虫和抗细菌活性的新枯草芽孢杆菌菌株AQ713或其突变体。此新菌株被命名为AQ713并且为专利程序的目的在布达佩斯条约关于微生物保藏国际认可的规定下于1997年3月7日以保藏号B-21661保藏于NRRL。随后它被美国典型培养物保藏中心(ATCC)鉴定为枯草芽孢杆菌。
本发明还包括用AQ713的细菌悬浮液或含代谢物的AQ713培养物上清液或来自AQ713菌株的纯化代谢物处理植物根或土壤以控制昆虫侵袭的方法。
本发明还包括用此细菌菌株或从此细菌菌株获得的含抗生素的上清液或纯抗生素预防和治疗植物真菌、细菌和昆虫疾病的方法。本发明还包括用AQ713的细菌悬浮液或含代谢物的AQ713培养物上清液或来自AQ713菌株的纯化代谢物处理植物叶、根或植物周围的土壤以控制昆虫及昆虫幼虫的方法。本发明还包括溶剂可提取的、对昆虫有活性的、分子量小于10,000道尔顿的代谢物。本发明进一步包括由此新微生物产生的新化合物agrastatin。本发明也包括含A型伊枯草菌素、制磷脂菌素、枯草菌表面活性剂和agrastatin的新组合物。定义
如本文所用的，“生物防治”定义为用第二种生物控制病原体或昆虫。已知的生物防治机制包括通过与真菌竞争根表面空间以控制根腐病的肠细菌。细菌毒素如抗生素已用于控制病原体。可分离毒素并将其直接用于植物，或施用细菌物种使其原位产生毒素。
术语“细菌”包括不具有明显核的任何原核生物。
术语“真菌(单数)”或“真菌(复数)”包括多种无叶绿素的具核产孢子生物。真菌的例子包括酵母、霉菌、霉、锈菌和蘑菇。
“杀真菌的”指物质提高真菌死亡率或抑制真菌生长速率的能力。
“突变体”指携带在生物表型上表达的突变基因的生物体。
“抗生素”包括任何能够杀死或抑制微生物的物质。可由微生物或通过合成方法或半合成方法产生抗生素。因此，该术语包括抑制或杀死真菌的物质，例如兼性霉素A或Kanosamine。
“抗真菌剂”包括任何能够杀死或抑制真菌生长的物质。
术语“培养”指生物在各种培养基上或各种培养基中的繁殖。“全肉汤培养物”指包括细胞和培养基的液体培养物。“上清液”指当细胞通过离心、过滤、沉降或其它本领域熟知的方法被去除后剩余的液体肉汤培养液。
“有效量”是足以获得有益或期望结果的量。有效量可以以一次或多次施用。就治疗和保护而言，“有效量”指足以减轻、稳定、逆转、减缓或延迟真菌或细菌疾病状态的量。
此处所用的术语“昆虫”包括“昆虫纲”中的所有生物。“成年前的”昆虫指成年阶段前的生物的任何形式，包括例如卵、幼虫和若虫。“杀昆虫的”指物质提高昆虫死亡率或抑制其生长速率的能力。“杀线虫”指物质提高线虫死亡率或抑制其生长速率的能力。“杀虫”指物质提高昆虫、线虫和螨死亡率或抑制其生长速率的能力。
“阳性对照”指已知具有杀虫活性的化合物。“阳性对照”包括但不限于商业上可得到的化学杀虫剂。术语“阴性对照”指已知无杀虫活性的化合物。阴性对照的例子是水或乙酸乙酯。
术语“溶剂”包括在溶液中保留另一种物质的任何液体。“溶剂可提取的”指在溶剂中溶解的，然后可从溶剂中分离的任何化合物。溶剂的例子包括但不限于诸如乙酸乙酯的有机溶剂。
术语“代谢物”指任何具有杀虫活性的微生物发酵的化合物、物质或副产品。上文定义的抗生素是对微生物有特异性活性的代谢物。
术语“agrastatin”指具有下列结构的一组新化合物(SEQ ID NO：3)：
Figure A9981507500131
其中R1是支链或直链脂肪族侧链C8-C20；X为Ala或Val；R2为乙酸或酯衍生物；Glx为Gln或Glu。这些化合物具有广谱抗细菌、抗虫及抗真菌活性。
我们描述了原先鉴定为巨大芽孢杆菌的具有广泛抗真菌和抗细菌活性并且也杀死或抑制昆虫及其幼虫的产生代谢物和抗生素的新枯草芽孢杆菌菌株。另一方面，本发明提供治疗或保护植物免受真菌、昆虫和细菌侵染的方法，包括施用有效量的从本发明枯草芽孢杆菌AQ713的全肉汤培养物获得的上清液。该上清液可通过本领域熟知的方法包括离心、过滤、沉降等获得。
另一方面，本发明提供治疗或保护植物免受真菌、昆虫和细菌侵染的方法，包括施用有效量的此新枯草芽孢杆菌菌株的全肉汤培养物。
另一方面，本发明含治疗或保护植物免受真菌、昆虫和细菌疾病侵染的方法，包括施用有效量的由此新枯草芽孢杆菌菌株产生的抗生素。
另一方面，本发明包含治疗或保护植物和植物根免受昆虫和幼虫侵袭的方法，包括施用有效量的从本发明枯草芽孢杆菌AQ713的全肉汤培养物获得的上清液。该上清液可通过本领域熟知的方法包括离心、过滤、沉降等获得。
另一方面，本发明包含治疗或保护植物和植物根免受昆虫和幼虫侵袭的方法，包括施用有效量的此新枯草芽孢杆菌菌株的全肉汤培养物。
另一方面，本发明含治疗或保护植物根免受昆虫侵袭的方法，包括施用有效量的由该新枯草芽孢杆菌菌株产生的代谢物。
为达到本发明组合物的良好分散和粘附，用有助于分散和粘附的成分配制所述全肉汤培养物、上清液和/或代谢物/抗生素是有利的。合适的配方为本领域技术人员所熟知。
本发明的组合物可配制成可湿性粉剂、颗粒等，或在合适的介质中胶囊化等。其它制剂的例子包括但不限于可溶性粉末、可湿性颗粒、dryflowables、aqueous flowable、可湿性可分散颗粒、可乳化的浓缩液和水悬浮液。其它适当制剂为本领域技术人员熟知。
在本发明的另一方面中，本发明提供了一组命名为“agrastatin”的新化合物。这些化合物表现出抗细菌和抗真菌活性以及抗昆虫活性。
在本发明的另一方面中，本发明提供了含有A型伊枯草菌素、制磷脂菌素、枯草菌表面活性剂和agrastatin的新型组合。
在本发明的另一方面中，本发明提供了治疗或保护植物免受昆虫、真菌和细菌疾病侵害的方法，包括施用有效量的含有A型伊枯草菌素、制磷脂菌素、枯草菌表面活性剂和agrastatin的新型化合物组合。
本文进一步提供了从AQ713菌株分离的具有杀虫活性的脂肽提取物及从AQ713菌株分离的具杀昆虫活性的枯草菌表面活性剂脂肽。因此，本发明也提供了通过对叶、根、或植物或根周围的土壤施用有效量的分离的lipofectin或分离的枯草菌表面活性剂来治疗或保护植物和/或果实免受昆虫侵袭的方法。这些分离的成分可和其它已知的杀虫剂(pesticide或insecticide)联合，并可按以上对AQ713的描述配制，以可湿性粉剂、颗粒、flowables或微囊化的形式施用。
在此引用的所有专利和公开文献作为整体以参考文献形式并入本文。提供下面的实施例详细说明本发明。这些实施例不构成限制。
                       实施例实施例1  AQ713菌株的特征分析
根据Bochner(1989)(自然(Nature)338：157-158)描述的以利用Biolog微量培养板系列(Biolog，Inc，Hayward，CA)为基础鉴定分离物。Biolog微量培养板由革兰氏阳性和革兰氏阴性菌可利用的95种不同碳底物板的预先填充和干燥的系列孔组成。分离物于28℃在液体培养基中生长，24小时后将洗涤的细胞悬浮液(0.85％盐溶液)接种在GP Microplate(Biolog，Inc.)的每个系列孔中。在28℃经过24小时后，评估碳利用反应。将底物利用模式与Biolog革兰氏阳性数据库(release 3.50)比较并根据最近似物种分离。Biolog结果得出其与巨大芽孢杆菌的相似性指数为0.883。
美国典型培养物保藏中心(ATCC，10801 University Blvd.，Manassas.VA，20220-2209)对AQ713进行了更为广泛的鉴定。送交的分离物为：未知；菌株AQ713分离物鉴定为：根据可得到的生理和生化数据，此菌株与枯草芽孢杆菌最近似。细胞形态：发现游动细胞为单个，具有在中间或近端区形成的一个内在孢子。细胞为革兰氏阳性均匀染色。菌落形态：菌落不透明和不规则，有凸形隆起、粗糙暗淡表面和锯齿形边缘。
           菌株AQ713的特征数据：
杆 + 菌落不透明 +
杆直 + 菌落边缘光滑 -
杆弯曲 - 菌落锯齿形 +
细胞单个 + 菌落裂片形 -
细胞链 - 菌落圆形 -
末端尖形 - 菌落不规则 +
末端圆形 + 菌落根状 -
末端方形 - 菌落低凸起 +
内生孢子形成 + 菌落高凸起 -
孢子囊膨大 - 菌落扁平 -
一个孢子/细胞 + 菌落隆起 -
孢子圆形 - 菌落闪光 -
孢子圆柱状 + 菌落暗淡 +
孢子卵形 + 菌落干燥 -
孢子中间 + 菌落平滑 -
孢子末端 - 菌落粗糙 +
孢子近末端 + 可溶性棕色色素 -
革兰氏染色 + 可溶性黑色色素 -
革兰氏阳性 + 可溶性黄色色素 -
革兰氏阴性 - 不溶性棕色色素 -
革兰氏可变 - 不溶性黑色色素 -
液泡存在 - 不溶性黄色色素 -
菌落半透明 - 不溶性桔黄色色素 -
菌落透明 - 不溶性红色色素 -
细胞游动 + 乳糖产酸 -
在15℃生长 + 乳糖产气 -
在20℃生长 + 甘露醇产酸 -
在26℃生长 + 甘露醇产气 -
在30℃生长 + 甘露糖产酸 -
在37℃生长 + 甘露糖产气 -
在45℃生长 + 蔗糖产酸 弱
在50℃生长 弱 酸延迟＞14天 弱
在55℃生长 - 蔗糖产气 -
在60℃生长 - 海藻糖产酸 -
在65℃生长 - 海藻糖产气 -
过氧化氢酶 + 木糖产酸 -
氧化酶 + 木糖产气 -
酪蛋白水解 + 需氧菌 -
明胶液化 + 兼性 -
马尿酸盐水解 - 微需氧细菌 +
卵磷酯酶降解 - 厌氧菌 -
淀粉水解 + 密闭硝酸盐产气 -
Tween 80水解 + 密闭葡萄糖产气 -
酪氨酸分解 - 吲哚 -
在2％NaCl中生长 + 硝酸盐转变成亚硝酸盐 +
在5％NaCl中生长 + 硝酸酸转变成气体 -
在7％NaCl中生长 + 亚甲蓝还原 +
在10％NaCl生长 + 亚甲蓝再氧化 -
在0.2％叠氮钠中生长 V 石蕊牛奶酸 -
在pH4.5中生长 + 石蕊牛奶凝结 -
在pH6.0中生长 + 石蕊牛奶碱 +
阿拉伯糖产酸 - 石蕊牛奶还原 +
阿拉伯糖产气 - 石蕊牛奶胨化 +
纤维二糖产酸 弱 VP(5198)阳性 +
酸延迟＞14天 弱 VP(5331)阳性 +
纤维二糖产气 - pH VP5198 6.0或更低 -
果糖产酸 + pH VP5198 6.5-7.5 +
酸延迟＞14天 - pH VP5198 8.0或更高 -
果糖产气 + 柠檬酸利用 +
葡萄糖产酸 + 丙酸盐利用 -
酸延迟＞14天 - 苯丙氨酸脱氨作用 -
葡萄糖产气 -
意见：根据可得到的生理和生物化学数据，此菌株与枯草芽孢杆菌最近似。
                      主要特征结果
    特征鉴定测试     菌株AQ713     枯草芽孢杆菌
    膨胀大的孢子囊     -     -
    厌氧生长     微需氧     微需氧
    VP反应     +     +
    VP的pH     7.0     5.0-8.0
    最高生长温度     55℃     45-55℃
    7％NaCl生长     +     +
    葡萄糖产酸     +     +
    阿拉伯糖产酸     -     +
    木糖产酸     -     +
    甘露醇产酸     -     +
    酪蛋白分解     +     +
    酪氨酸分解    -    -
    柠檬酸利用    +    +
    丙酸盐利用    -    -
参考文献：Gordon，R.E.，W.C.Haynes和C.H.IV.Pang，1973，芽孢杆菌属，美国农业部427号手册，Washington D.C.。实施例2  AQ713针对黄瓜十一星叶甲的活性
在芽孢杆菌培养基中培养芽孢杆菌样品。培养基2含5％蛋白胨、5％葡萄糖、3％酵母提取物、3％麦芽提取物、1.5％proflo棉籽提取物(59％蛋白、4.26％脂肪、6.73％灰分、3.19％纤维和痕量的棉酚；用水平衡)、10％大豆粉和0.5％ MgSO4x7H2O。培养基3除另含20％蛋白胨和3.4％KH2PO4和4.3％K2HPO4外其它成分相同。将生长一天的划线培养物接种于250ml带挡板的摇瓶中。于29℃以200rpm振荡摇瓶5天。为测定杀昆虫活性，以5,200rpm离心35ml肉汤培养物20分钟，上清用于下文所述的微量测定。
在96孔微量培养板上进行测定。每个孔中含固体琼脂基质、检测生物和阳性对照或阴性对照或按照实施例1所述从新芽孢杆菌菌株获得的上清液。
为了测定杀昆虫活性，根据Marrone等(1985)(J.Econ.Entomol.78：290-293)制备用于微量培养板孔的琼脂基质。为分析杀线虫活性，在孔中以普通琼脂(1.5％)替代。
用1ppm的Avid(除虫菌素)溶液作为阳性对照。用去离子水作为阴性对照。每个分析中使用相同的两份测试样品或对照。将在培养基1、2或3中培养的40μl上清液样品或全培养物分装在每个样品孔中。将平板放在通风厨中干燥约2-3小时直到琼脂溶液干燥。
测试生物是成年前的黄瓜十一星叶甲(Diabroticaundecimpunctata)、成年前的德国小蠊(Blatella germanica)、成年前的贪夜蛾(Spodoptera exigua)、成年前的黑尾果蝇(Drosophilamelanogaster)或线虫Caenorhabditis elegans的N2株。将检测生物于0.1％琼脂中稀释至浓度为每25μl分装在每孔中的琼脂含5个生物。用不透气物质如Mylar密封微量培养板并且用针式压力器对每个孔通气。平板于27℃培养最多7天。
培养后，通过观察线虫死亡率或幼虫发育程度记录孔情况。对含全部死亡或生长障碍幼虫的样品孔给出分值1，对含一些死亡和其它严重生长障碍幼虫的样品孔给出分值2，对含存活但生长障碍幼虫的孔给出分值3，对不含死幼虫的样品孔给出分值4，每个样品内计算重复实验的平均值。结果总结于表2和表3。
表2：AQ713抗昆虫害虫的分值等级(全肉汤培养物实验)
C.elegans  黄瓜十一星叶甲  贪夜蛾  果蝇  阳性对照  阴性对照
培养基2培养基3   NT        1.0             4.0    4.0     1.0      4.0NT        2.0             4.0    4.0     1.0      4.0
NT＝未检测
表3A：AQ713抗昆虫害虫的分值等级(上清液实验1)
C.elegans 黄瓜十一星叶甲 贪夜蛾 果蝇 德国小蠊 阳性对照 阴性对照
培养基2培养基3   4.0         3.0         4.0    4.0    4.0     1.0     4.04.0         4.0         4.0    4.0    4.0     1.0     4.0
这些实验表明AQ713作为全肉汤培养物在两种培养基中都有活性，在培养基2中活性最高。AQ713只有在培养基2中生长时，上清液才有活性。二号检验
在摇瓶或10升发酵罐中以第三种培养基即培养基4对AQ713再次进行针对贪夜蛾及黄瓜十一星叶甲的实验。培养基4包含培养基3中除proflo棉籽提取物外的相同成分。其它所有程序均与以上一样。实验重复了2-3次。
表3B：AQ713抗昆虫害虫的分值等级(上清液实验)
  黄瓜十一星叶甲   贪夜蛾   阳性对照   阴性对照
  上清液培养基4   1.0，  1.0，  1.0   1.0，  2.0 1.0，  1.0，  1.0 4.0，  4.0，  4.0
  全肉汤培养基4   1.0，  1.0   2.0，  1.0 1.0，  1.0 4.0，  4.0
在培养基4中AQ713上清液及全肉汤具有抗黄瓜十一星叶甲及贪夜蛾的高活性。实施例3  AQ713抗桃蚜的活性
在培养基4中使用在两个不同的10升发酵罐内两次和在一个400升发酵罐内两次生长48小时的分批次AQ713进行检验。除对黄瓜十一星叶甲及贪夜蛾进行测试外，还对桃蚜(Myzus persicae)进行了测试。对400升的其中一批次既进行全肉汤培养物(WB)测试又进行上清液(S)测试。在96孔平板8个孔每一个的底部小滤纸圆片上滴加40μl的AQ713样品以测试桃蚜。然后将平板置于通风橱中干燥1-2小时。轻轻拍落甘蓝叶片上的蚜虫使其加入到每个孔中。孔底部为蚜虫覆盖。孔柱填充后，用盖片将平板盖住以将蚜虫固定。测试板在20-22℃下孵育。48小时后利用显微镜对死、活的蚜虫记数以对测试进行等级鉴定。象对其它昆虫一样，然后为这些孔给出l至4级尺度上的分值(4为无死亡昆虫，1为100％被杀死)。
     表4：AQ713抗桃蚜的分值等级--上清液(S)
             及全肉汤培养物(WB)实验
              桃蚜    阳性对照  阴性对照10升(1)     S       2.0     1.0      4.010升(2)     S       2.0     1.0      4.0400升(1)    S       1.0     1.0      4.0400升(2)    WS      1.0     1.0      4.0400升(2)    S       1.0     1.0      4.0
针对AQ713小量及大规模发酵的测试显示全肉汤培养物与上清液均对杀灭桃蚜高度有效。实施例4  AQ713抗桃蚜的植物检验
在温室内的6个容器中栽植有6英寸高的胡椒植物(Yolo Wonder)。允许胡椒植物被寄居在温室内的桃蚜虫口自然侵染。以手提式喷雾器喷洒胡椒植物至溢出。被检验的AQ713样品为全肉汤培养物和生长于400升发酵罐内培养基4中的全肉汤培养物喷雾干燥粉剂。3天后，经AQ713处理的胡椒植物上75％的蚜虫被杀死。在未处理或以水处理的胡椒植物上无死亡蚜虫。实施例5：具有抗黄瓜十一星叶甲活性的AQ713代谢物的化学特性
在培养基2中培养50ml AQ713。向每一培养物添加50ml乙酸乙酯，混合物在分液漏斗中摇动2分钟。移去水层，将有机层收集在含有硫酸镁的瓶中。然后将有机滤液过滤到圆底烧瓶中，将溶剂移到rotovap上。
为了进行生物测定，将干燥的有机提取物重新溶解在2.5ml丙酮中。取出40μl等分试样，以70％丙酮/水稀释至800μl。这是有机提取物的10x浓缩液。进行系列稀释以获得作用于新生黄瓜十一星叶甲的样品，7天后记录新生幼虫(根据上文制备的微量培养板中每孔1个)死亡百分率。结果记录在表5中。
表5：AQ713乙酸乙酯提取物对黄瓜十一星叶甲的活性
       样品            死亡百分率AQ713： 有机提取物10X        89
    有机提取物5X         93
    有机提取物1X         65
    全肉汤培养物         100
    70％丙酮/水          27
        水               59这些结果表明AQ713产生杀死黄瓜十一星叶甲的溶剂可提取的代谢物。
为了测定活性代谢物的分子量，将50ml AQ713培养物在培养基2中生长。取1ml放在微量离心管中，并以12,000rpm离心15分钟。回收上清液。将500微升上清液放在10,000道尔顿分子量Centricon滤器上面。根据厂商说明(12,000rpm，35分钟)离心。收集滤液，通过离心和洗涤滤器回收存留物。测定样品上清液、滤液和存留物对新生黄瓜十一星叶甲幼虫(含昆虫食物的96孔板，Marrone等，见上文；每孔40μl样品，每个样品8个孔，1只幼虫/孔)的活性。实验结果示于表6。
            表6：AQ713的分子量截流
                        死亡百分数
                    针对黄瓜十一星叶甲
    AQ713        上清液             43
                 滤液               63
                 存留物             17
这些结果表明上清液和滤液有活性，因此代谢物的分子量小于10,000道尔顿。实施例6  对植物病原体有活性的AQ713代谢物的化学特性
在培养基2中培养50ml AQ713。向每一培养物添加50ml乙酸乙酯，混合物在分液漏斗中摇动2分钟。移去水层，将有机层收集在含有硫酸镁的瓶中。然后将有机滤液过滤到圆底烧瓶中，将溶剂移到rotovap上。
为了进行生物测定，将干燥的有机提取物重新溶解在2.5ml丙酮中。取出40μ1等分试样，以70％丙酮/水稀释至800μl。这是有机提取物的10X浓缩液。用终极腐霉(Pythium ultimum)和灰葡萄孢(Botrytiscinerea)进行96孔板植物病原体分析(下述)以测定有机提取物的活性。全肉汤培养物为100％控制(分值1)，但10X有机提取物对此两种植物病原体无控制(分值4)。这表明活性抗生素，与AQ713产生的对黄瓜十一星叶甲有活性的代谢物不同，在诸如乙酸乙酯的有机溶剂中是不可提取的。
为提取活性抗生素组分和分离新化合物agrastatin A，通过首先用等体积的乙酸乙酯抽提肉汤培养物两次并分层来制备发酵肉汤培养物的丁醇提取物。然后用等体积的丁醇抽提水相组分两次。合并丁醇提取物，用旋转蒸发器去除溶剂。冷冻干燥所得到的提取物获得粉末。
将粉末溶解在80％乙腈/水溶液中并进行超声处理。将此溶液上样到用甲醇活化并用80％乙腈/水溶液平衡过的C-18固相提取(SPE)柱上。用80％ACN/水洗脱SPE柱，收集洗脱液并去除溶剂。用HPLC进一步纯化洗脱液。采用具有如下乙腈+0.05％TFA/水+0.05％TFA溶剂梯度的C-18 HPLC柱(1cm×25cm)(210nm处紫外检测)：0-20分钟，33％ACN；20-30分钟，40％ACN；30-45分钟，45-55％ACN；以及45-63分钟，55％ACN。
AQ713的HPLC层析谱表明了伊枯草菌素、伊枯草菌素样化合物(制磷脂菌素和agrastatin)及枯草菌表面活性剂的存在，见图1。结合NMR数据和LC质谱学数据并与文献中的数值比较，鉴定伊枯草菌素A2、A3、A4、A7和A6。通过用HPLC和LC质谱学与购买的枯草菌表面活性剂标准品比较鉴定枯草菌表面活性剂。
经氨基酸分析和LC质谱学结合鉴定伊枯草菌素样化合物是制磷脂菌素和新agrastatin的混合物。也收集了命名为agrastatin A的新化合物之一(HPLC峰20)的广泛NMR数据。发现agrastatin A含下列氨基酸：Thr；3个Glu；Ala；Val；2个Tyr和Orn。Val的存在和Ile的缺失使它的组成与制磷脂菌素不同。测定agrastatin A的分子量为1448，与如下结构一致(SEQ ID NO：4)：
Figure A9981507500241
通过1H NMR证实了脂肪酸部分的直链性质。通过TOCSY和ROESY数据详细分析确定环肽中氨基酸的位置。
Agrastatin B(HPLC峰26)的质谱学和氨基酸分析表明其结构与制磷脂菌素B2相似，但Val替换了Ala残基。结构如下所示(SEQ ID NO：5)：实施例7  体外培养物(96孔板)中AQ713针对植物病原体的活性
为测定AQ713是否对真菌致病疫霉、终极腐霉、灰葡萄孢、立枯丝核菌、马铃薯早疫病链格孢(Alternaria solani)有效，进行下列实验。用琼脂培养基(马铃薯葡萄糖琼脂(PDA，Difco))填充96孔板(平底，每孔400微升，Nunc brand)。在液体YPG-1培养基(0.4g酵母、0.1％KH2PO4、0.5％MgSO4×7H2O、1.5％葡萄糖)中培养致病疫霉培养物3天。对于其它真菌来说，从培养皿表面刮下孢子，将0.1-0.2ml去离于水和病原体孢子悬浮液(浓度约为2×106孢子/ml)的等分试样涂在琼脂上。
如实施例2所述，在培养基2或3中培养AQ713 72小时。以5,200rpm离心全肉汤培养物20分钟以获得上清液。将真菌植物病原体吸到96孔板中(8孔/病原体)。记录所有8个孔中真菌生长的有无。向每孔中加入约40μl AQ713上清液或20μl全肉汤培养物。分值“1”表示真菌生长的完全抑制。分值“4”表示没有真菌生长的抑制。结果示于表7。表7：真菌生长的体外抑制(96孔板)AQ71.3上清液                         培养基2   培养基3
                                 分值      分值致病疫霉                               1        1终极腐霉                               1        1灰葡萄孢                               1        1立枯丝核菌                             4        1马铃薯早疫病链格孢                     1        1AQ713全肉汤培养物Colletotrichum cocodes                 1        NT甘蓝链格孢(Alternaria brassicicola)    1        NT灰葡萄孢                               1        NT瓜枝孢(Cladosporium cucumerinum)       1        NTMonilinia fructicola                   1        NT梨黑星菌(Venturia pyrina)              1        NT立枯丝核菌                             1        NT马铃薯早疫病链格孢                     1        NTNT：未测试
结果表明AQ713具有广泛的体外杀真菌范围而且全肉汤培养物和上清液活性都很高。在培养基3中而不是在培养基2中的上清液对立枯丝核菌有活性。实施例8  体外培养物中AQ713针对植物病原体的活性(区域分析)
为了测定AQ713在琼脂扩散(区域)分析中的活性，将植物病原体孢子涂布在10cm培养皿的土豆葡萄糖脂表面。从琼脂上去除7.0mm的孔并将100μl在培养基2中生长的AQ713上清液放在该孔中。通过以4200rpm离心40分钟制备上清液。然后将上清液以4200rpm再离心40分钟。典型的结果为在孔的周围无病原体生长的区域和/或病原体生长降低的区域。以毫米测量并记录区域大小。结果示于表8。
    表8：真菌植物病原体生长的体外抑制(区域实验)
甘蓝链格孢 灰葡萄孢 Moniliniafructicola
  区域大小(mm)     AQ713上清液     16     23     14
  AQ713全肉汤培养物     22     15     18
实施例9  AQ713针对细菌植物病原体的活性
如实施例6建立标准的琼脂扩散实验。将每种细菌病原体的菌苔涂布在培养皿的表面。在每个孔中放入100μl在培养基2中生长的AQ713全肉汤培养物。以毫米测量区域的大小。表9：细菌植物病原体的体外抑制(区域实验)AQ713全肉汤培养物：                      抑制区域(mm)燕麦食酸菌西瓜亚种                           18(Acidovorax avenae subsp.citrulli)丁香假单胞菌蕃茄致病变种                     11(Pseudomonas syringae pv.Tomato)野油菜黄单胞菌野油菜致病变种                 18(Xanthomonas campestris pv.Campestris)胡萝卜软腐欧文氏菌胡萝卜软腐亚种             11(Erwinia carotovora subsp.Carotovora)密执安棍状杆菌密执安亚种                     22(Clavibacter michiganense subsp.Michiganense)AQ713对所有体外测试的细菌植物病原体都有活性。实施例10  植物测试中AQ713针对植物病原体的活性
测试了AQ713在菜豆和天竺葵叶上针对灰霉病(灰葡萄孢)的活性，在蕃茄幼苗上针对马铃薯早疫病链格孢的活性以及针对莴苣霜霉病(Bremialactucae)的活性。
对于马铃薯早疫病链格孢，用AQ713全肉汤培养物(培养基2)喷洒种在6盆中的2-3叶阶段蕃茄幼苗至流出。喷洒后，令幼苗干燥(约1.5小时)。然后用5.0×104孢子/ml喷洒幼苗。用塑料圆顶覆盖幼苗并在Percival培养箱中于28℃放置。无AQ713、有和无病原体孢子的水作为阴性对照和阳性病原体对照。四天后读取测试结果。在马铃薯早疫病链格孢和水对照上，整个叶片上有均匀损伤，子叶脱离并受到严重侵染(5级＝完全侵染，无控制)。AQ713处理的植物在真叶上散布着几处轻微损伤。子叶连接但有一些小的损伤(1级)。阴性对照未受侵染。
用置于圆顶下的装有水并按上述方式放置的瓦罐中的脱离蕃茄幼苗(茎从地面处折断)进行第二次测试。如上所述喷洒植物，四天后记录马铃薯早疫病链格孢引起的症状。阴性对照上没有症状。在阳性对照上，幼苗上遍布均匀的损伤。对AQ713处理评为1级(很少或没有损伤)。两天后，阳性对照中的植物遭到破坏，而经AQ713处理的幼苗是基本上干净的，与阴性对照(水喷洒的植物)看上去相同。
对于针对灰葡萄孢的测试，通过用13×100培养管的口挤压每个叶片损伤菜豆的第一片真叶。每个叶片受到两次损伤/叶。用AQ713全肉汤培养物(培养基2)或仅用水或仅用病原体喷洒叶片。当干燥时，再用灰葡萄孢孢子(0.8×106孢子/ml)喷洒。将叶片放在覆盖有塑料圆顶的平板上，在Percival培养箱中于18-20℃放置。五天后，阳性对照(仅用病原体处理)在直径约25mm的区域内腐烂。阴性对照(仅用水处理)没有腐烂。AQ713在叶受损伤的8个圆圈中7个没有侵染。受到侵染的圆圈周围有两个位置受轻微侵染。
对于盘梗霉(Bremia)的测试，将莴苣种子种植在8厘米高和宽的干净小塑料植物共生器(Condominium)中的含有泥碳、珍珠岩和蛭石的灭菌盆栽混合层中。莴苣发芽后(一星期)，用AQ713肉汤培养物或上清液样品喷洒莴苣幼苗。令植物干燥，然后将从受侵染的莴苣幼苗中得到的霜霉孢于喷洒到幼苗上。将塑料覆盖物放在植物上并在Percival培养箱中于18-20℃培养。一星期后，评估测试。AQ713不能阻止由盘梗霉引起的莴苣幼苗霜霉病。实施例11  AQ713针对植物疾病的效力(温室测试)葡萄霜霉病
AQ713在400L发酵罐中的以大豆为基础的培养基中生长48小时。用手提式喷雾器将用无菌水稀释成0.5X和0.25X浓度的400L发酵的全肉汤培养物喷酒葡萄(栽培品种Chardonnay)至流出。当叶干燥时，第二次喷洒植物。干燥后，用引起葡萄霜霉病的葡萄生单轴霉(Plasmoparaviticola)病原体接种植物。每一剂量处理三株植物。基于0至100％控制的等级估计疾病控制百分率，从而评估每株植物。100％控制是没有可见损伤的植物。使用化学杀真菌剂氨丙灵作为比较。结果如下：
AQ713 0.5X全肉汤培养物     97.7％控制
AQ713 0.25X全肉汤培养物    100％控制
氨丙灵  30ppm              100％控制
氨丙灵  10ppm              98.3％控制
氨丙灵  1ppm               80％控制
结果显示AQ713与化学杀真菌剂同样有效地控制葡萄霜霉病。实施例12  AQ713针对南瓜白粉病的效力
AQ713在400L发酵罐中的以大豆为基础的培养基中生长48小时。用手提式喷雾器将用无菌水稀释成0.5X浓度的400L发酵全肉汤培养物喷洒南瓜(Crookneck和Acorn)至流出。干燥后，用南瓜白粉病病原体单丝壳(Sphaerothecafuligininea)接种植物。每一剂量处理两株植物。还测试全肉汤培养物喷雾干燥的粉末。将400L发酵肉汤培养物喷雾干燥以去除水分。如上所述，将10％和2.5％喷雾干燥粉末溶液喷洒到植物上至流出。以从0至5的评分对白粉病的发病进行评估。5级是100％疾病而0级为无疾病。结果示于下面表10中。
                             表10
  检测的悬浮液     Acorn南瓜植物1     Acorn南瓜植物2   Crookneck南瓜植物1   Crookneck南瓜植物2
    AQ713 1X全肉汤培养物     0     0     0     0
    AQ713 0.5X全肉汤培养物     0     0     0     0
    AQ713 10％喷雾干燥粉末     0     0     0     0
    AQ713 2.5％喷雾干燥粉末     0     0     0.5     1
AQ713全肉汤培养物和喷雾干燥粉末提供对南瓜白粉病几乎完全的控制。实施例13  温室中AQ713对晚疫病、灰霉病、葡萄白粉病、谷物白粉病、纹枯病(Sheath Blight)和稻瘟病的效力
AQ713在250ml摇瓶中的以大豆为基础的培养基中生长72小时。疾病、致病病原体和寄主列在下面表11中。该全肉汤培养物在下文表11中所示的植物上进行检测。
                          表11
疾  病 植物病原体   寄主
晚疫病 致病疫霉   蕃茄
灰霉病 灰葡萄孢   胡椒
纹枯病 立丝核菌   水稻
稻瘟病 稻瘟病菌(Pyricularia oryzae)   水稻
白粉病 葡萄钩丝壳(Uncinula necator)   葡萄
白粉病 禾白粉病菌(Drysiphe graminis)f.sp.Graminis   水麦
用手提式喷雾器将每种肉汤培养物以1X浓度喷洒至检测植物上，使其干燥，然后再喷洒一次。每种疾病和处理有三株植物被处理。干燥后，用病原体接种植物。基于0至100％控制的等级估价疾病控制百分率，从而评估每株植物。100％控制是指没有可见损伤的植物。使用化学杀真菌剂作为比较。疾病指数是未处理对照上疾病的严重性。
                           表12
致病疫霉  灰葡萄孢 禾白粉病菌  葡萄钩丝壳  稻瘟病菌  立枯丝核菌
    AQ713     70     100     84     100     100     100
氨丙灵30ppm     100
氨丙灵10ppm     77
丙环唑10ppm     87
丙环唑5ppm     57
丙环唑0.5ppm     100
丙环唑0.2ppm     54
腈菌唑30ppm     100
腈菌唑10ppm     100
戊菌隆50ppm     100
戊菌隆10ppm     100
苯菌灵100ppm     100
苯菌灵40ppm     77
疾病指数％     80     95     70     50     60     80
AQ713针对所有检测的病原体表现与化学杀真菌剂相当的活性。实施例14  AQ713针对芸苔属(Brassica)霜霉病的效力
芽孢杆菌菌株AQ713在10L发酵罐中的以大豆为基础的培养基中生长48小时。用以压缩空气推动的工艺气刷将1X强度的全肉汤培养物喷洒在三周龄的花椰菜和全子叶期的孢子甘蓝植物上。每种处理喷洒15-25个幼苗/盆的三份。还以250ppm和125ppm的比率将来自Zeneca的azoxystrobin杀真菌剂QuadrisTM喷洒在植物上(每种处理三株)。在AQ713和Quadris喷洒物干燥后，将寄生霜霉(Peronospora parasitica)的孢子悬浮液以1-5×104孢子/ml喷洒在芸苔植物上。将植物于15-17℃放置24小时进行侵染，然后将幼苗于20-24℃培养6天。将盆放回到15-17℃过夜以使病原体的孢子形成，直到对测试进行分级。基于0至100％控制的等级估计疾病控制百分率，从而评估每株植物。100％控制指没有孢子形成损伤的植物。重复花盆之间的平均结果示于下面的表14。
                           表14
   12月23日得到的读数    12月30日得到的读数   1月6日得到的读数
  AQ713全肉汤培养物     100     90     75
  Quadris 250ppm     100     NT     NT
  Quadris 125ppm     NT     100     100
  水对照     0     0     0
NT＝未测试AQ713有效控制霜霉持续三周。实施例15  AQ713和商业化杀真菌剂的协同作用
AQ713在10L发酵罐中的以大豆为基础的培养基中生长72小时。用无菌水将细菌培养物稀释为0.5X和0.25X浓度。用以压缩空气推动的工艺气刷将1X、0.5X和0.25X浓度的培养物喷洒到三周龄的胡椒上。每种处理喷洒三株植物。还将来自Zeneca的azoxystrobin杀真菌剂QuadrisTM以500ppm、250ppm和125ppm的浓度喷洒在植物上(每种处理三株)。另外，将Quadris和AQ713他肉汤培养物以1∶1比率组合喷洒在胡椒植物上(每种处理三株)。含和不含Quadris的处理列于下文表15中。在AQ713和Quadris喷洒物干燥后，将灰葡萄孢以1×106孢子/ml的孢子悬浮液喷洒在胡椒上。将植物在20-22℃放置3天，然后对测试进行分级。灰霉病的发病率以0至5分级。5级表示100％疾病而0级表示没有疾病。结果示于下面表15。
                                  表15
处理   分级重复1   分级重复2   分级重复3   分级平均值
AQ713 1X     0.5     0.5     1.5     0.8
AQ713 0.5X     2.0     2.5     2.0     2.2
AQ713 0.25X     3.0     3.0     2.0     2.7
Quadris 500ppm     4.0     3.5     4.0     3.8
Quadris 250ppm     2.5     3.5     3.0     3.0
AQ713 1X+Quadris 500ppm     0.5     1.0     1.0     0.8
AQ713 1X+Quadris 250ppm     1.0     1.0     0.5     0.8
AQ713 0.5X+Quadris 250ppm     0.5     1.0     1.0     0.8
AQ713 0.25X+Quadris 250ppm     0.5     1.0     2.5     1.3
水对照     4.0     5.0     5.0     4.7
水对照2     5.0     5.0     5.0     5.0
结果清楚地表明使用Quadris和AQ713的结合控制灰霉病显著优于单独使用Quadris或AQ713。实施例16  AQ713杀虫成分的确定
按如下提取脂肽组分(伊枯草菌素、制磷脂菌素、agrastatins及枯草菌表面活性剂)用于在昆虫上实验：
对全肉汤培养物进行涡旋后用HCl将dH值调至1.5，再次涡旋，然后于10,500rpm离心15分钟。倒掉并弃去上清液。沉淀用80％的乙腈/水(ACN/H20)悬浮，然后超声处理30分钟。将此样品再次离心15分钟，沉淀再次用80％的ACN/H2O涡旋悬浮。再次离心15分钟后沉淀于快速真空装置内干燥过夜，然后将样品重新溶解于80％的ACN/H2O中。
单独检验枯草菌表面活性剂(一种脂肽)。枯草菌表面活性剂购于Sigma Chemicals(ST.Louis，MO)并且经HPLC检验证实与AQ713中的枯草菌表面活性剂相同。因此，Sigma公司枯草菌表面活性剂被用于抗昆虫实验。
                  表16：抗昆虫害虫脂肽的活性
                 C.elegans  黄瓜十一  贪夜蛾    桃蚜       阳性    阴性星叶甲                         对照    对照
  脂肽提取物      4.0       NT        4.0        2.0       1.0     4.0枯草菌表面活性剂  4.0       2.0       4.0   2.0，3.0，2.0  1.0     4.0
NT＝未检测
菌株AQ713的脂肽提取物具有杀虫效果。单独使用枯草菌表面活性剂显示出抗蚜虫及黄瓜十一星叶甲的活性，但不抗贪夜蛾。因此，菌株AQ713的杀虫活性可用菌株AQ713中的脂肽部分解释。
尽管本发明在这里已经进行了详细描述并有具体的实施方案作为参考，但本领域技术人员将明了，可在不偏离本发明实质和范围的前提下对本发明进行变更与修改。
                    序列表<110> AgraQuest，Inc.
  Heins，Sherry D.
  Manker，Denise C.
  Jimenez，DeSmond R.
  McCoy，Randy J.
  Marrone，Pamela G.
  Orjala，Jimmy E.<120>控制植物害虫的组合物和方法<130>127384200966<140>待定<141><150>09/223,587<151>1998-12-30<150>09/074,870<151>1998-05-08<150>08/853,753<151>1997-05-09<150>60/108,266<151>1998-11-12<160>5<1/0>PatentIn Ver. 2.0<210>1<211>7<212>PRT<213>枯草芽孢杆菌<400>1Leu Leu Asp Leu Leu Asp Leu1                   5<210>2<211>10<212>PRT<213>枯草芽孢杆菌<220><221>变体<222>(1)<223>Glu具有一个脂肪酸侧链。<220><221>变体<222>(6)<223>Xaa是Ala或Val。<220><221>MOD_RES<222>(2)<223>Orn<400>2Glu Xaa Tyr Thr Glu Xaa Pro Gln Tyr Ile1               5                  10<210>3<211>10<212>PRT<213>枯草芽孢杆菌<220><221>变体<222>(1)<223>Gln或Glu<220><221>MOD_RES<222>(2)<223>Orn<220><221>变体<222>(5)<223>Gln或Glu<220><221>变体<222>(6)<223>Ala或Val<220><221>变体<222>(1)<223>连接脂肪酸<400>3Xaa Xaa Tyr Thr Xaa Xaa Pro Xaa Tyr Val1               5                  10<210>4<211>10<212>PRT<213> 枯草芽孢杆菌<220><221>MOD_RES<222>(2)<223>Orn<220><221>变体<222>(1)<223>连接脂肪酸<400>4Glu Xaa Tyr Thr Glu Ala Pro Gln Tyr Val1               5                  10<210>5<211>10<212>PRT<213>枯草芽孢杆菌<220><221>MOD_RES<222>(2)<223>Orn<220><221>变体<222>(1)<223>连接脂肪酸<400>5Glu Xaa Tyr Thr Glu Val Pro Gln Tyr Val1               5                  10

Claims (25)

1.一种保护或治疗植物和果实免受昆虫侵袭的方法，包括向所述植物和果实施用有效量的枯草芽孢杆菌菌株AQ713，NRRL保藏号B-21661，或其具有所述菌株所有鉴别特征的突变体。
2.权利要求1的方法，其中昆虫侵袭为叶昆虫侵袭或地下昆虫侵袭。
3.一种保护或治疗植物和果实免受昆虫侵袭的方法，包括向所述植物和果实施用权利要求1之枯草芽孢杆菌菌株产生的有效量的表现抗昆虫活性、溶剂可提取、分子量小于10,000道尔顿的代谢物。
4.权利要求3的方法，其中昆虫侵袭为叶昆虫侵袭。
5.权利要求3的方法，其中昆虫侵袭为地下昆虫侵袭。
6.一种保护或治疗植物和果实免受昆虫侵袭的方法，包括施用有效量的从枯草芽孢杆菌菌株AQ713培养物得到的表现抗昆虫活性的上清液。
7.权利要求6的方法，其中昆虫侵袭为叶昆虫侵袭。
8.权利要求7的方法，其中昆虫侵袭为地下昆虫侵袭。
9.权利要求1至7之任一项的方法，进一步包括施用有效量的生物或化学杀虫剂。
10.权利要求1的方法，其中枯草芽孢杆菌菌株AQ713以全肉汤培养物的形式施用。
11.权利要求1的方法，其中枯草芽孢杆菌菌株AQ713以上清液的形式施用。
12.权利要求6的方法，其中枯草芽孢杆菌菌株AQ713以可湿性粉剂、颗粒、flowable或微胶囊的形式施用。
13.权利要求1至7之任一项的方法，其中植物的根或根周围的土壤得到处理。
14.权利要求13的方法，其中处理植物的根或根周围的土壤。
15.一种从菌株AQ713分离的具有杀昆虫活性的脂肽提取物。
16.一种从菌株AQ713分离的具有杀昆虫活性的枯草菌表面活性剂脂肽。
17.一种保护或治疗植物和果实免受昆虫侵袭的方法，包括施用有效量的具以下结构式的化合物：
Figure A9981507500031
其中R1是C8-C20的支链或直链脂肪族侧链；X为Ala或Val；R2为乙酸或酯衍生物；Glx为Gln或Glu。
18.一种保护或治疗植物和果实免受昆虫侵袭的方法，包括施用有效量的具以下结构式的化合物(SEQID NO：4)：
Figure A9981507500032
或(SEQ ID NO：5)
19.一种保护或治疗植物和果实免受昆虫侵袭的方法，包括施用有效量的含有A型伊枯草菌素、制磷脂菌素和枯草菌表面活性剂的组合物。
20.权利要求20的方法，进一步包括施用有效量的agrastatin.
21.一种从菌株AQ713分离的具有杀昆虫活性的脂肽提取物。
22.一种从菌株AQ713分离的具有杀昆虫活性的枯草菌表面活性剂脂肽。
23.一种治疗或保护植物或果实免受昆虫侵袭的方法，包括施用有效量的含有权利要求22之提取物的组合物。
24.一种治疗或保护植物或果实免受昆虫侵袭的方法，包括施用有效量的含有权利要求23之枯草菌表面活性剂的组合物。
25.权利要求24或25的方法，其中将所述组合物施用于植物根周围的土壤，或处理所述根。
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Cited By (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1311067C (zh) * 2004-04-14 2007-04-18 北京天地绿园农业科学研究院 一种防治土壤病虫害的复合菌剂与有机菌肥的发酵与制备
CN101870959A (zh) * 2010-06-11 2010-10-27 河北省科学院生物研究所 一种枯草芽孢杆菌、其菌剂、以及其制剂在水果保鲜领域的应用
CN102361551A (zh) * 2009-03-26 2012-02-22 巴斯夫欧洲公司 合成的杀真菌剂和生物杀真菌剂组合用于控制有害真菌的用途
CN102458130A (zh) * 2009-05-06 2012-05-16 巴斯夫欧洲公司 用于在基本上不存在病原体压力下增加农业植物的生长势和/或作物产量的方法
TWI507133B (zh) * 2007-09-20 2015-11-11 巴地斯顏料化工廠 包含殺真菌菌株及活性化合物之組合物
CN105142405A (zh) * 2013-03-20 2015-12-09 巴斯夫公司 包含枯草芽孢杆菌菌株和农药的协同增效组合物
CN107568247A (zh) * 2012-05-30 2018-01-12 拜耳农作物科学股份公司 包含生物防治剂和杀虫剂的组合物
CN107711889A (zh) * 2012-05-30 2018-02-23 拜耳作物科学股份公司 包含生物防治剂和杀虫剂的组合物
CN108271776A (zh) * 2017-12-25 2018-07-13 武汉科诺生物科技股份有限公司 芽孢杆菌脂肽类代谢产物用作微生物菌剂助剂的用途
CN108289455A (zh) * 2016-05-22 2018-07-17 爱贝克斯生态学有限责任公司 用于农用化学品的增强剂组合物和农用化学品组合物
US10076119B2 (en) 2012-11-22 2018-09-18 Basf Corporation Pesticidal mixtures
US10251400B2 (en) 2014-05-23 2019-04-09 Basf Se Mixtures comprising a Bacillus strain and a pesticide
CN110312425A (zh) * 2016-12-30 2019-10-08 利波法布里克公司 用于植物生长的包含脂肽的生物刺激剂组合物
US10779536B2 (en) 2014-11-07 2020-09-22 Basf Se Pesticidal mixtures
US10905122B2 (en) 2016-03-16 2021-02-02 Basf Se Use of tetrazolinones for combating resistant phytopathogenic fungi on cereals
CN113100237A (zh) * 2021-04-25 2021-07-13 河北省科学院生物研究所 丰原素家族脂肽在害虫防治中的应用
CN113115777A (zh) * 2021-04-25 2021-07-16 河北省科学院生物研究所 伊枯草素家族脂肽在防治害虫中的应用
CN113142213A (zh) * 2021-04-25 2021-07-23 河北省科学院生物研究所 表面活性素家族脂肽在防治害虫中的应用
US11241012B2 (en) 2016-03-16 2022-02-08 Basf Se Use of tetrazolinones for combating resistant phytopathogenic fungi on soybean
US11425909B2 (en) 2016-03-16 2022-08-30 Basf Se Use of tetrazolinones for combating resistant phytopathogenic fungi on fruits
CN115428808A (zh) * 2022-09-22 2022-12-06 西昌学院 一种马铃薯晚疫病防治药剂及其应用

Families Citing this family (84)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL145291A0 (en) * 1999-03-30 2002-06-30 Agraquest Inc A strain of bacillus pumilus for controlling plant diseases
US6245551B1 (en) 1999-03-30 2001-06-12 Agraquest, Inc. Strain of Bacillus pumilus for controlling plant diseases caused by fungi
US6808917B1 (en) 2001-02-02 2004-10-26 Thomas D. Johnson Controlling plant pathogens with fungal/bacterial anatagonist combinations
US20050032677A1 (en) * 2001-08-10 2005-02-10 Eiichi Kitakuni Fungicidal and/or bactericidal composition, production process thereof and sterilization method using the composition
JP4071036B2 (ja) * 2001-11-26 2008-04-02 クミアイ化学工業株式会社 バシルスｓｐ．Ｄ７４７菌株およびそれを用いた植物病害防除剤および害虫防除剤
US6589524B1 (en) 2002-02-07 2003-07-08 Ecomicrobials, Llc Strains of Bacillus for biological control of pathogenic fungi
JP4313980B2 (ja) * 2002-04-10 2009-08-12 社団法人農林水産先端技術産業振興センター 共生菌を用いたイネ科植物の病虫害防除方法、防除剤および防除剤を結合した種子
AU2003246614A1 (en) * 2002-06-28 2004-01-19 Faculte Universitaire Des Sciences Agronomiques De Gembloux Novel use of lipopeptide preparations
JP4189224B2 (ja) * 2003-01-14 2008-12-03 株式会社カンサイ バチルス属に属する微生物及びそれを用いる防除剤
US7244607B2 (en) * 2003-10-01 2007-07-17 The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture Chromobacterium subtsugae sp. nov. for control of insect pests
US7994138B2 (en) * 2004-06-01 2011-08-09 Agscitech Inc. Microbial biosurfactants as agents for controlling pests
US20060033091A1 (en) * 2004-07-23 2006-02-16 Lmt Mercer Group Inc. Thermoplastic fencing construction and method of assembly thereof
KR20090111336A (ko) 2007-01-19 2009-10-26 바스프 에스이 1-메틸피라졸-4-일카르복실산 아닐리드 및 아졸로피리미디닐아민의 살진균 혼합물
US7981685B2 (en) * 2007-04-16 2011-07-19 Modular Genetics, Inc. Generation of acyl amino acids
AU2014203689B2 (en) * 2007-09-20 2016-02-04 Bayer Cropscience Lp Combinations comprising a fungicidal strain and an active compound
CL2008000602A1 (es) * 2008-02-27 2008-06-27 Univ Austral De Chile Cepa de bacillus subtilis con deposito pta-8805 con actividad antagonista sobre rhizoctonia solani; formulacion de bioproductos encapsulado y liquido concentrado que comprende dicha bacteria; uso de los bioproductos para reducir y controlar biologica
EP2179652B1 (de) 2008-09-10 2019-05-08 ABiTEP GmbH Gesellschaft für AgroBioTechnische Entwicklung und Produktion Verwendung eines antibakteriellen Mittels zur Behandlung von bakteriellen Infektionen bei Kulturpflanzen
CN107047934A (zh) * 2008-09-17 2017-08-18 拜尔作物科学有限合伙公司 利用枯草芽孢杆菌菌株以增强动物健康的方法
WO2011099878A2 (en) 2010-02-12 2011-08-18 Grecilda Sanchez Zaballero Organic pesticide
US8951585B2 (en) 2010-02-25 2015-02-10 Marrone Bio Innovations, Inc. Compositions and methods for modulating plant parasitic nematodes
AU2011227226B2 (en) * 2010-03-17 2017-02-16 Bayer Cropscience Lp Method for using a Bacillus subtilis strain for prophylaxis and treatment of gastro-intestinal conditions
CN101892176B (zh) * 2010-03-23 2012-07-04 天津科技大学 产生抗真菌脂肽的微生物及其抗真菌脂肽制备方法与应用
US20120088719A1 (en) 2010-09-20 2012-04-12 Jerald Coleman Ensign Mosquitocidal Xenorhabdus, Lipopeptide And Methods
TW201225844A (en) 2010-10-25 2012-07-01 Marrone Bio Innovations Inc Chromobacterium bioactive compositions and metabolites
AU2011349461A1 (en) 2010-12-21 2013-06-27 Bayer Cropscience Lp Sandpaper mutants of Bacillus and methods of their use to enhance plant growth, promote plant health and control diseases and pests
DE102011015803A1 (de) 2011-04-01 2012-10-04 Abitep Gmbh Mittel zur Behandlung von mikrobiellen Erkrankungen bei Kulturpflanzen
KR20140053026A (ko) 2011-05-24 2014-05-07 바이엘 크롭사이언스 엘피 폴리엔 살진균제와 비-리보솜 펩티드의 상승작용적 조합물 및 관련된 사용 방법
CN103703120B (zh) * 2011-05-26 2015-04-15 Sds生物技术株式会社 属于芽孢杆菌属的菌株、微生物制剂及植物的栽培方法
EP2736340B1 (en) 2011-07-25 2017-12-20 Bayer Cropscience LP Biocontrol of nematodes
ES2613806T3 (es) 2011-07-26 2017-05-26 The Medicines Company Ensayo de difusión con disco para oritavancina
FR2980802B1 (fr) 2011-10-03 2014-12-26 Univ Lille 1 Sciences Et Technologies Ustl Procede de production de biosurfactants et dispositif de mise en œuvre
PL2770836T3 (pl) 2011-10-25 2018-12-31 Marrone Bio Innovations, Inc. Frormulacje, kompozycje i metabolity z Chromobacterium i ich zastsowanie
ES2402726B1 (es) * 2011-10-28 2014-03-13 Investigaciones Y Aplicaciones Biotecnologicas, S.L. Nueva cepa de bacillus subtilis destinada a luchar contra las enfermedades de las plantas.
PL2773214T3 (pl) 2011-11-04 2018-10-31 Bayer Cropscience Lp Kontrola biologiczna nicieni
MX2014010020A (es) * 2012-02-21 2014-12-05 Dupont Nutrition Biosci Aps Composicion que comprende productos de fermantacion de bacillus subtilis.
WO2013152353A1 (en) 2012-04-06 2013-10-10 Bayer Cropscience Lp Biocontrol of nematodes
US9017442B2 (en) 2012-04-20 2015-04-28 Novozymes Bioag A/S Use of synergistic microorganisms and nutrients to produce signals that facilitate the germination and plant root colonization of mycorrhizal fungi in phosphorus rich environments
EP2854549B1 (en) 2012-05-30 2018-08-01 Bayer Cropscience AG Composition comprising a biological control agent and fluopicolide
US9364006B2 (en) 2012-05-30 2016-06-14 Bayer Cropscience Ag Composition comprising a biological control agent and a fungicide
PT2854546T (pt) 2012-05-30 2018-10-31 Bayer Cropscience Ag Composição compreendendo um agente de controlo biológico e um fungicida selecionado a partir de inibidores da biossíntese de ergosterol
WO2013178653A1 (en) 2012-05-30 2013-12-05 Bayer Cropscience Ag Composition comprising a biological control agent and a fungicide selected from inhibitors of amino acid or protein biosynthesis, inhibitors of atp production and inhibitors of the cell wall synthesis
AR091197A1 (es) * 2012-05-30 2015-01-21 Bayer Cropscience Ag Composicion que comprende un agente de control biologico y un fungicida
US9386773B2 (en) 2012-05-30 2016-07-12 Bayer Cropscience Ag Compositions comprising a biological control agent and a fungicide from the group consisting of inhibitors of the respiratory chain at complex I or II
CA2891661A1 (en) 2012-11-29 2014-06-05 Bayer Cropscience Lp Methods of controlling fungal pathogens using polyene fungicides
EP2925137A1 (en) * 2012-11-30 2015-10-07 Bayer CropScience AG Binary fungicidal or pesticidal mixture
US8808719B1 (en) 2013-03-15 2014-08-19 Marrone Bio Innovations, Inc. Use of Chromobacterium substugae formulations, compostions and compounds to modulate cornworm rootworm larvae infestation
WO2014151837A1 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Bayer Cropscience Lp A bacillus subtilis strain for use in maintaining or improving the paw health of poultry
US20160073642A1 (en) 2013-05-03 2016-03-17 Universidad Eafit Production process for biomass and fengycin metabolites of bacillus species and compositions thereof for biological pest control
EP2871245A1 (en) * 2013-11-08 2015-05-13 Symborg, S.L. A bacillus subtilis strain deposited under deposit number CECT 8258 and method for protecting or treating plants
RU2016136350A (ru) * 2014-02-10 2018-03-15 АЙБЕКС БАЙОНОМИКС, ЭлЭлСи Композиции биологического происхождения для применения в сельском хозяйстве
CN106793781B (zh) 2014-05-28 2020-07-28 拜耳作物科学有限合伙公司 用于防治植物中的真菌性病害和细菌性病害的组合物和方法
AU2015304820B2 (en) * 2014-08-16 2018-07-19 DCM Shriram Ltd. Novel bacterium of bacillus genus and uses thereof
US20160174567A1 (en) 2014-12-22 2016-06-23 Bayer Cropscience Lp Method for using a bacillus subtilis or bacillus pumilus strain to treat or prevent pineapple disease
AR103287A1 (es) 2014-12-29 2017-04-26 Fmc Corp Composiciones microbianas y métodos para usar para beneficiar el crecimiento de las plantas y tratar la enfermedad de las plantas
JP2018508472A (ja) * 2014-12-29 2018-03-29 エフ エム シー コーポレーションＦｍｃ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ バチルス・アミロリケファシエンス（ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）ｒｔｉ４７２組成物および植物成長に利益を与えかつ植物病害を処置するための使用方法
US11371066B2 (en) 2015-07-13 2022-06-28 Modular Genetics, Inc. Generation of acyl alcohols
US10986842B2 (en) 2015-11-10 2021-04-27 Chr. Hansen A/S Microbial pesticidal composition and production thereof
EP3205209A1 (en) 2016-02-09 2017-08-16 Basf Se Mixtures and compositions comprising paenibacillus strains or metabolites thereof and other biopesticides
EP3205208A1 (en) 2016-02-09 2017-08-16 Basf Se Mixtures and compositions comprising paenibacillus strains or fusaricidins and chemical pesticides
WO2017186543A2 (en) 2016-04-24 2017-11-02 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Use of fluopyram and/or bacillus subtilis for controlling fusarium wilt in plants of the musaceae family
EP3400801A1 (en) 2017-05-10 2018-11-14 Bayer CropScience Aktiengesellschaft Plant health effect of purpureocillium lilacinum
MX2019008811A (es) 2017-01-26 2019-09-16 Bayer Cropscience Lp Metodo para promover la germinacion de esporas de bacillus.
WO2018183978A1 (en) * 2017-03-30 2018-10-04 Advanced Biological Marketing, Inc. Alleviation of corn rootworm damage with microbial seed treatments
WO2018226971A1 (en) * 2017-06-07 2018-12-13 Cedars-Sinai Medical Center Peptide compositions for immuno-oncology molecular imaging and targeted drug delivery
CA3092099A1 (en) 2018-02-26 2019-08-29 Locus Agriculture Ip Company, Llc Materials and methods for control of insect pests using entomopathogenic fungi
PE20211204A1 (es) 2018-05-08 2021-07-05 Locus Agriculture Ip Co Llc Productos a base de microbio para mejorar la raiz de la planta y la salud inmune
CN109161506A (zh) * 2018-09-20 2019-01-08 宁国市百立德生物科技有限公司 一株枯草芽孢杆菌及其应用
WO2020069148A1 (en) * 2018-09-27 2020-04-02 Locus Ip Company, Llc Compositions and methods for controlling pathogens in livestock production operations
WO2020084609A1 (en) * 2018-10-21 2020-04-30 Grace Breeding Ltd. Dual-route administration of composition for improved protection of plants against pathogens
JP2022509508A (ja) * 2018-10-30 2022-01-20 アグバイオーム， インコーポレイテッド 植物有害生物を制御するおよび植物の健康状態を改善するための細菌組成物および方法
US11807862B2 (en) 2019-01-15 2023-11-07 Seminis Vegetable Seeds, Inc. Green bean plants with improved disease resistance
WO2020200959A1 (en) 2019-03-29 2020-10-08 Bayer Aktiengesellschaft Method for controlling ganoderma disease in oil palm
CN113950248A (zh) 2019-04-12 2022-01-18 轨迹Ip有限责任公司 用于增强碳封存和减少牲畜产生的温室气体排放物的牧场处理
AU2020288624A1 (en) 2019-06-04 2022-02-03 Cocoon Biotech Inc. Silk-based products, formulations, and methods of use
CA3149206A1 (en) 2019-08-01 2021-02-04 Bayer Cropscience Lp Method of improving cold stress tolerance and crop safety
AU2021204717A1 (en) 2020-07-15 2022-02-03 Seminis Vegetable Seeds, Inc. Green Bean Plants with Improved Disease Resistance
BR112023002946A2 (pt) 2020-08-18 2023-03-21 Bayer Cropscience Lp Composições e métodos para comtrole de doenças fúngicas em plantas
CN114703078B (zh) * 2020-12-16 2023-08-29 沈阳恩柽研究院有限公司 产吲哚金黄杆菌及其应用
WO2022128812A1 (en) 2020-12-17 2022-06-23 Basf Se Spore compositions, production and uses thereof
EP4337796A1 (en) * 2021-05-13 2024-03-20 Bayer CropScience LP Compositions and methods for use in identifying or quantifying microorganisms
CN118804924A (zh) 2021-09-10 2024-10-18 巴斯夫欧洲公司 产生胞外多糖的微生物及其用途
WO2023144351A1 (en) 2022-01-28 2023-08-03 Acies Bio D.O.O. Control of plant pests by microbial agents
WO2024088886A1 (en) 2022-10-26 2024-05-02 Bayer Aktiengesellschaft Use for delaying greening and/or formation of solanine in potatoes
WO2024104643A1 (en) 2022-11-17 2024-05-23 Bayer Aktiengesellschaft Use of isotianil for controlling plasmodiophora brassica

Family Cites Families (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR7981M (zh) * 1967-10-21 1970-06-08
US5047239A (en) * 1984-05-01 1991-09-10 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Biological control of fruit rot
JPS6151504A (ja) * 1984-08-21 1986-03-14 Yasushi Ishii ねじり角計
US4743689A (en) * 1984-11-20 1988-05-10 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha Antibiotic derivative of adenine
JPS62210996A (ja) 1986-03-11 1987-09-17 Nippon Kayaku Co Ltd 抗生物質エミマイシンの製造法
US5049379A (en) * 1987-07-27 1991-09-17 Wisconsin Alumni Research Foundation Fungicidal toxin and method and inoculum for controlling root rot and damping off
GB8701234D0 (en) * 1987-01-21 1987-02-25 Agricultural Genetics Co Strain of microorganism
US4999192A (en) * 1988-02-12 1991-03-12 Mycogen Corporation Novel coleopteran-active bacillus thuringiensis isolate
GB8805394D0 (en) * 1988-03-07 1988-04-07 Agricultural Genetics Co Antibiotic
US5055293A (en) * 1988-03-09 1991-10-08 Purdue Research Foundation Biological pesticide
US5045314A (en) * 1989-11-14 1991-09-03 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Control of parasitic nematode ova/larvae with a bacillus laterosporus
CA2035738C (en) * 1990-02-07 2001-04-24 Zongling Liu Biological agent for control of crop fungal disease
US5187091A (en) * 1990-03-20 1993-02-16 Ecogen Inc. Bacillus thuringiensis cryiiic gene encoding toxic to coleopteran insects
US5208017A (en) * 1991-02-21 1993-05-04 Mycogen Corporation Biologically active Bacillus thuringiensis isolates
JP2948936B2 (ja) * 1991-03-14 1999-09-13 森永製菓株式会社 フザリウム属に属するカビが産生するカビ毒の防除方法
GB9206645D0 (en) * 1992-03-26 1992-05-06 Mini Agriculture & Fisheries Biological control of post harvest pests
JP3237240B2 (ja) * 1992-10-27 2001-12-10 昭和電工株式会社 植物病害防除剤
US5849870A (en) * 1993-03-25 1998-12-15 Novartis Finance Corporation Pesticidal proteins and strains
US5733355A (en) * 1994-09-29 1998-03-31 Susumu Hibino Bacterial Preparation for agricultural use
US5552138A (en) * 1995-06-06 1996-09-03 Wisconsin Alumni Research Foundation Bacillus cereus strain AS4-12
US5645831A (en) * 1996-03-22 1997-07-08 Biodiscovery New Zealand Ltd. Bacillus thuringiensis strain and metabolite which are active against corn rootworm
US5733544A (en) * 1996-11-18 1998-03-31 University Of Saskatchewan Nematicidal bacillus strain and metabolite and methods of use thereof
US5753222A (en) * 1996-11-18 1998-05-19 Agritope, Inc. Antibiotic-producing strain of bacillus and methods for controlling plant diseases
PT981540E (pt) * 1997-05-09 2006-09-29 Agraquest Inc Nova estripe de bacillus para controlo de doencas de plantas e lagarta da raiz do milho

Cited By (35)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1311067C (zh) * 2004-04-14 2007-04-18 北京天地绿园农业科学研究院 一种防治土壤病虫害的复合菌剂与有机菌肥的发酵与制备
TWI507133B (zh) * 2007-09-20 2015-11-11 巴地斯顏料化工廠 包含殺真菌菌株及活性化合物之組合物
CN102361551B (zh) * 2009-03-26 2015-09-16 拜尔作物科学有限公司 合成的杀真菌剂和生物杀真菌剂组合用于控制有害真菌的用途
CN102361551A (zh) * 2009-03-26 2012-02-22 巴斯夫欧洲公司 合成的杀真菌剂和生物杀真菌剂组合用于控制有害真菌的用途
CN104663722A (zh) * 2009-05-06 2015-06-03 巴斯夫欧洲公司 用于在基本上不存在病原体压力下增加农业植物的生长势和/或作物产量的方法
CN102458130B (zh) * 2009-05-06 2015-02-11 巴斯夫欧洲公司 用于在基本上不存在病原体压力下增加农业植物的生长势和/或作物产量的方法
CN102458130A (zh) * 2009-05-06 2012-05-16 巴斯夫欧洲公司 用于在基本上不存在病原体压力下增加农业植物的生长势和/或作物产量的方法
CN101870959B (zh) * 2010-06-11 2012-06-06 河北省科学院生物研究所 一种枯草芽孢杆菌、其菌剂、以及其制剂在水果保鲜领域的应用
CN101870959A (zh) * 2010-06-11 2010-10-27 河北省科学院生物研究所 一种枯草芽孢杆菌、其菌剂、以及其制剂在水果保鲜领域的应用
CN107568247A (zh) * 2012-05-30 2018-01-12 拜耳农作物科学股份公司 包含生物防治剂和杀虫剂的组合物
CN107711889A (zh) * 2012-05-30 2018-02-23 拜耳作物科学股份公司 包含生物防治剂和杀虫剂的组合物
US10076119B2 (en) 2012-11-22 2018-09-18 Basf Corporation Pesticidal mixtures
US11284623B2 (en) 2012-11-22 2022-03-29 Basf Corporation Pesticidal mixtures
CN105142405A (zh) * 2013-03-20 2015-12-09 巴斯夫公司 包含枯草芽孢杆菌菌株和农药的协同增效组合物
CN105142405B (zh) * 2013-03-20 2018-04-20 巴斯夫公司 包含枯草芽孢杆菌菌株和农药的协同增效组合物
US10251400B2 (en) 2014-05-23 2019-04-09 Basf Se Mixtures comprising a Bacillus strain and a pesticide
US11083202B2 (en) 2014-05-23 2021-08-10 Basf Se Mixtures comprising a bacillus strain and a pesticide
US10779536B2 (en) 2014-11-07 2020-09-22 Basf Se Pesticidal mixtures
US11425909B2 (en) 2016-03-16 2022-08-30 Basf Se Use of tetrazolinones for combating resistant phytopathogenic fungi on fruits
US10905122B2 (en) 2016-03-16 2021-02-02 Basf Se Use of tetrazolinones for combating resistant phytopathogenic fungi on cereals
US11241012B2 (en) 2016-03-16 2022-02-08 Basf Se Use of tetrazolinones for combating resistant phytopathogenic fungi on soybean
CN108289455A (zh) * 2016-05-22 2018-07-17 爱贝克斯生态学有限责任公司 用于农用化学品的增强剂组合物和农用化学品组合物
CN110312425B (zh) * 2016-12-30 2022-05-03 利波法布里克公司 用于植物生长的包含脂肽的生物刺激剂组合物
CN114668009A (zh) * 2016-12-30 2022-06-28 利波法布里克公司 用于植物生长的包含脂肽的生物刺激剂组合物
CN110312425A (zh) * 2016-12-30 2019-10-08 利波法布里克公司 用于植物生长的包含脂肽的生物刺激剂组合物
CN108271776A (zh) * 2017-12-25 2018-07-13 武汉科诺生物科技股份有限公司 芽孢杆菌脂肽类代谢产物用作微生物菌剂助剂的用途
CN108271776B (zh) * 2017-12-25 2021-06-11 武汉科诺生物科技股份有限公司 芽孢杆菌脂肽类代谢产物用作微生物菌剂助剂的用途
CN113142213A (zh) * 2021-04-25 2021-07-23 河北省科学院生物研究所 表面活性素家族脂肽在防治害虫中的应用
CN113115777A (zh) * 2021-04-25 2021-07-16 河北省科学院生物研究所 伊枯草素家族脂肽在防治害虫中的应用
CN113100237B (zh) * 2021-04-25 2021-11-12 河北省科学院生物研究所 丰原素家族脂肽在害虫防治中的应用
CN113100237A (zh) * 2021-04-25 2021-07-13 河北省科学院生物研究所 丰原素家族脂肽在害虫防治中的应用
WO2022228057A1 (zh) * 2021-04-25 2022-11-03 河北省科学院生物研究所 丰原素家族脂肽在害虫防治中的应用
WO2022228058A1 (zh) * 2021-04-25 2022-11-03 河北省科学院生物研究所 伊枯草素家族脂肽在防治害虫中的应用
US11963534B2 (en) 2021-04-25 2024-04-23 Institute Of Biology, Hebei Academy Of Sciences Fengycin family lipopeptides in pest control
CN115428808A (zh) * 2022-09-22 2022-12-06 西昌学院 一种马铃薯晚疫病防治药剂及其应用

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