JP2022509508A - 植物有害生物を制御するおよび植物の健康状態を改善するための細菌組成物および方法 - Google Patents

植物有害生物を制御するおよび植物の健康状態を改善するための細菌組成物および方法 Download PDF

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Abstract

植物において植物有害生物を制御するおよび/または少なくとも1つの目的の農学上の形質を改善するための組成物および方法が、提供される。このような組成物および方法は、植物用の接種物として使用され得る細菌株を含む。従って、植物有害生物および/または植物有害生物によって引き起こされる植物の病気に感受性である植物を生長させるための方法、ならびに植物有害生物および/または植物の病気に感受性である植物に対して上記植物有害生物および/または植物の病気を制御する方法がまた、提供される。

Description

発明の分野
本発明は、植物において植物有害生物を制御するおよび/または目的の農学上の形質を改善するための細菌株および集団に関する。
背景
植物有害生物によって引き起こされる損傷および病気は、顕著な農業損失の原因である。影響は、軽度の症状から破滅的な植物の損傷までの範囲に及び得、そして大きな経済的かつ社会的結果をもたらし得る。植物有害生物を有効に制御する方法が必要とされる。
要旨
植物において植物有害生物を制御するおよび/または 少なくとも1つの目的の農学上の形質を改善するための組成物および方法が、提供される。このような組成物および方法は、1種もしくはこれより多くの植物有害生物を制御するおよび/または少なくとも1つの目的の農学上の形質を改善する細菌株を含む。上記細菌株は、植物用の接種物として使用され得る。植物有害生物または植物有害生物によって引き起こされる植物の病気に感受性である植物を生長させるための方法、ならびに植物有害生物によって引き起こされる植物の病気または損傷を処理または防止するための方法および組成物がまた、提供される。目的の殺生物剤に対して抵抗性を有する改変された細菌株を作製するための方法および組成物が、さらに提供される。
詳細な説明
I.全体像
1種もしくはこれより多くの植物有害生物を制御するおよび/または少なくとも1つの目的の農学上の形質を改善するための組成物および方法が、提供される。生物学的因子、生物防除因子、細菌株、改変された細菌株、改変された生物学的因子、または改変された生物防除因子もしくはその活性改変体は、植物有害生物を制御するおよび/または少なくとも1つの目的の農学上の形質を改善するために使用される微生物を記載するために、本明細書で使用される。
II.細菌株
種々の生物防除因子または細菌株が提供され、これらは、1種もしくはこれより多くの植物有害生物を制御するおよび/または少なくとも1つの目的の農学上の形質を改善するために使用され得る。このような細菌株は、以下を包含する:AIP045885(Pseudomonas chlororaphis株)、AIP075655(Pseudomonas chlororaphs株)、AIP009474(Bacillus subtilis株)、AIP0024525(Bacillus thurinigiensis株)、AIP033287(Bacillus subtilis株)、AIP0093798(Bacillus subtilis株)、AIP061639(Pseudomonas chlororaphis株)、AIP082862(Pseudomonas chlororaphis株)、AIP058187(Pseudomonas chlororaphis株)、AIP059286(Pseudomonas chlororaphis株)、およびAIP036706(Pseudomonas chlororaphis株)。AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、およびAIP036706のうちの1種もしくはこれより多くを含む細胞集団、ならびにこれらの株の各々に由来する胞子の集団、またはこれらの任意の調製物が、提供される。
従って、本明細書で提供される種々の細菌株および/または農薬組成物は、活性成分として、AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、およびAIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの1種もしくはこれより多くを含む細胞集団を含む。
AIP045885を、Patent Depository of the National Center for Agricultural Utilization Research Agricultural Research Service, U.S. Department of Agriculture(1815 North University Street, Peoria, Illinois 61604 U.S.A.)に2018年8月3日に寄託し、NRRL No. B-67650が割り当てられた。
AIP075655を、Patent Depository of the National Center for Agricultural Utilization Research Agricultural Research Service, U.S. Department of Agriculture(1815 North University Street, Peoria, Illinois 61604 U.S.A.)に2018年8月3日に寄託し、NRRL No. B-67651が割り当てられた。
AIP009474を、Patent Depository of the National Center for Agricultural Utilization Research Agricultural Research Service, U.S. Department of Agriculture(1815 North University Street, Peoria, Illinois 61604 U.S.A.)に2018年8月3日に寄託し、NRRL No. B-67657が割り当てられた。
AIP024525を、Patent Depository of the National Center for Agricultural Utilization Research Agricultural Research Service, U.S. Department of Agriculture(1815 North University Street, Peoria, Illinois 61604 U.S.A.)に2018年8月3日に寄託し、NRRL No. B-67661が割り当てられた。
AIP033287を、Patent Depository of the National Center for Agricultural Utilization Research Agricultural Research Service, U.S. Department of Agriculture(1815 North University Street, Peoria, Illinois 61604 U.S.A.)に2018年8月3日に寄託し、NRRL No. B-67659が割り当てられた。
AIP093798を、Patent Depository of the National Center for Agricultural Utilization Research Agricultural Research Service, U.S. Department of Agriculture(1815 North University Street, Peoria, Illinois 61604 U.S.A.)に2018年8月3日に寄託し、NRRL No. B-67660が割り当てられた。
AIP061639を、Patent Depository of the National Center for Agricultural Utilization Research Agricultural Research Service, U.S. Department of Agriculture(1815 North University Street, Peoria, Illinois 61604 U.S.A.)に2018年8月3日に寄託し、NRRL No. B-67654が割り当てられた。
AIP082862を、Patent Depository of the National Center for Agricultural Utilization Research Agricultural Research Service, U.S. Department of Agriculture(1815 North University Street, Peoria, Illinois 61604 U.S.A.)に2018年8月3日に寄託し、NRRL No. B-67656が割り当てられた。
AIP058187を、Patent Depository of the National Center for Agricultural Utilization Research Agricultural Research Service, U.S. Department of Agriculture(1815 North University Street, Peoria, Illinois 61604 U.S.A.)に2018年8月3日に寄託し、NRRL No. B-67655が割り当てられた。
AIP059286を、Patent Depository of the National Center for Agricultural Utilization Research Agricultural Research Service, U.S. Department of Agriculture(1815 North University Street, Peoria, Illinois 61604 U.S.A.)に2018年8月3日に寄託し、NRRL No. B-67653が割り当てられた。
AIP036706を、Patent Depository of the National Center for Agricultural Utilization Research Agricultural Research Service, U.S. Department of Agriculture(1815 North University Street, Peoria, Illinois 61604 U.S.A.)に2018年8月3日に寄託し、NRRL No. B-67652が割り当てられた。
上記で同定される寄託物の各々は、特許手続上の微生物の寄託の国際的承認に関するブダペスト条約の条項の下で維持される。各寄託物は、当業者の便宜として行われたに過ぎず、寄託が米国特許法第112条の下で要求されるという承認ではない。
用語「単離される(isolated)」とは、(1)最初に生産される(天然であろうと、実験的状況であろうと)場合に関連付けられていた成分のうちの少なくともいくつかから分離されている、ならびに/または(2)ひとの手によって生産、調製、精製、および/もしくは製造されている、細菌、胞子、または他の実体もしくは物質を包含する。単離された細菌は、これらが最初に関連付けられていた他の成分のうちの少なくとも約10%、約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%、もしくはこれより多くから分離されていてもよい。
本明細書で使用される場合、物質は、これが他の成分を実質的に含まない場合に「純粋(pure)」である。用語「精製する(purify)」、「精製する(purifying)」および「精製された(purified)」とは、最初に生産されたかまたは起こった(例えば、天然であろうと、実験的状況であろうと)とき、またはその最初の生産後の任意の時間の間のいずれかで関連付けられていた成分のうちの少なくともいくつかから分離されている細菌、胞子、または他の物質に言及する。細菌または胞子または細菌集団または胞子集団は、これらが生産時もしくは生産後に(例えば、細菌または細菌集団または胞子を含む物質または環境から)単離されている場合に精製されていると見做され得、そして精製された細菌または細菌集団または胞子は、約10%、約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%、または約90%を超えるまで他の物質を含み得、そしてなお精製されていると見做され得る。いくつかの実施形態において、精製された細菌または胞子または細菌集団または胞子集団は、約80%より高く、約85%、約90%、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%、または約99%より高く純粋である。具体的実施形態において、細菌の培養物は、通常の細菌学的手順によって検出されるべき量において他の細菌種を含まない。
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、細菌株AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、またはAIP036706の実質的に純粋な培養物を含む。本発明の組成物はまた、細菌株AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、またはAIP036706の実質的に純粋な培養物の子孫であって、ここで上記培養物は、それぞれ、AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、またはAIP036706の生理学的および形態的特徴の全てを有する。「集団(population)」とは、所定の細菌株の2もしくはこれより多くの個体(すなわち、10、100、1,000、10,000、1×10、1×10、もしくは1×10またはこれより多く)を含む、意図された群またはコレクションである。少なくとも1種の細菌株の集団または1種より多くの細菌株の個体の混合集団を含む種々の組成物が、本明細書で提供される。具体的実施形態において、細菌株(すなわち、AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、およびAIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体の細胞、またはAIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、およびAIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちのいずれか1種もしくはこれより多くから形成される、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせ)のうちの少なくとも1種の集団は、少なくとも約10 CFU/ml~約1011 CFU/ml、約10CFU/ml~約1010 CFU/ml、約10 CFU/ml~約1012 CFU/ml、約10 CFU/ml~約10 CFU/ml、約10 CFU/ml~約10 CFU/ml、約10 CFU/ml~約10 CFU/ml、約10 CFU/ml~約10 CFU/ml、約10 CFU/ml~約1010 CFU/ml、約1010 CFU/ml~約1011 CFU/ml、約1011 CFU/ml~約1012 CFU/mlの濃度を含む。他の実施形態において、本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体の濃度は、少なくとも約10CFU/ml、少なくとも約10 CFU/ml、少なくとも約10 CFU/ml、少なくとも約10 CFU/ml、少なくとも約10 CFU/ml、少なくとも約1010 CFU/ml、少なくとも約1011 CFU/ml、または少なくとも約1012 CFU/mlを含む。
「胞子(spore)」とは、細菌種の少なくとも1種の休眠している(適用時には)が、生存可能な生殖単位に言及する。胞子が、AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、およびAIP036706(またはこれらのうちのいずれかの改変体)の各々から形成される非限定的な方法は、本明細書で他の箇所に開示される。本明細書で開示される集団が、栄養細胞および前胞子(forespore)(胞子形成の中間段階にある細胞)の組み合わせ;前胞子および胞子の組み合わせ;または前胞子、栄養細胞および/または胞子の組み合わせを含み得ることは、さらに認識される。
本明細書で使用される場合、「に由来する(derived from)」とは、特定の供給源から直接単離もしくは得られるか、または代わりに特定の供給源から単離もしくは得られる物質もしくは生物の同定特徴を有することを意味する。「供給源(source)」が生物である事象では、「由来する」は、それは、生物自体もしくは培養ブロス、懸濁物、または上記生物を培養または成長させるために使用される培地から単離または得られ得ることを意味する。「に由来する」または「から得られる(obtained from)」化合物または組成物は、上記化合物または組成物が、細胞培養物もしくは全細胞ブロス、または懸濁物、濾液、上清、画分、または細胞培養物もしくは全細胞ブロスに由来する抽出物から単離され得るか、またはそれらによって生産され得ることを意味する。
本明細書で使用される場合、「全ブロス培養物(whole broth culture)」または「全細胞ブロス(whole cell broth)」とは、細胞および培地の両方を含む液体培養物に言及する。細菌がプレート上で成長される場合、上記細胞は、水または他の液体、全培養物中で採取され得る。用語「全ブロス培養物」および「全細胞ブロス」は、交換可能に使用される。
本明細書で使用される場合、「上清」とは、細胞がブロス中で成長するか、またはアガープレートから別の液体中で採取され、遠心分離、濾過、沈降、もしくは当該分野で周知の他の手段によって除去される場合に残っている液体に言及する。いくつかの実施形態において、上記上清は、別の組成物(例えば、水、緩衝液、新鮮な培地、および/または製剤)で希釈され得る。上記希釈された上清は、本発明の上清となおも考えられる。
本明細書で使用される場合、「濾液」とは、膜を通過した全ブロス培養物からの液体に言及する。上記濾液は、上記全ブロス培養物または上清中の有効な化合物または代謝産物の濃度と比較して、濃縮された量の上記有効な化合物または代謝産物を含み得る。本明細書で使用される場合、「抽出物」とは、溶媒(例えば、水、界面活性剤、緩衝液、および/または有機溶媒)によって細胞から除去され、遠心分離、濾過、または当該分野で公知野他の方法によって細胞から分離された液体物質に言及する。上記抽出物は、抽出する前の細胞中の有効な化合物または代謝産物の濃度と比較して、濃縮された量の有効な化合物または代謝産物を含み得る。あるいは、上記濾液または抽出物は、次いで、別の組成物(例えば、水、緩衝液、新鮮な培地、および/または製剤)で希釈され得る。このような希釈された濾液または抽出物は、本発明の濾液および抽出物となおも考えられる。
本明細書で使用される場合、「代謝産物」とは、細菌株(すなわち、AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つ)の発酵の化合物、物質、または副生産物に言及する。有効な化合物または代謝産物は、有効量において目的の植物に適用される場合、植物の目的の任意の農学上の形質を改善し得るか、または植物有害生物または植物の病気を引き起こす植物病原体を制御する、上清、全細胞ブロス、または細菌株に存在する化合物である。
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、細菌株の発酵に由来する濾液または抽出物を含み、ここで上記組成物は、上記細菌株の全細胞ブロスまたは上清における量と比較して、濃縮された量の有効な化合物または代謝産物を含み、ここで上記細菌は、AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つである。他の実施形態において、本発明の組成物は、細菌株の発酵に由来する希釈された濾液、希釈された抽出物、または希釈された上清を含み、ここで上記組成物は、上記細菌株の全細胞ブロスまたは希釈されていない上清の量と比較して、希釈された量の有効な化合物または代謝産物を含み、ここで上記細菌は、AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つである。上記希釈された濾液、希釈された抽出物、または希釈された上清は、上記有効な化合物または代謝産物の有効量をなおも含み得る。
本明細書で記載される組成物および方法は、細菌株(すなわち、AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つ、あるいはAIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちのいずれか1種に由来する、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせ)を含むかまたは由来する。方法は、これらの細菌株のうちの少なくとも1つを培養する工程を包含する。いくつかの実施形態において、これらの細菌株のうちの少なくとも1つは、培養され、化合物および/または組成物は、これらの化合物および/または組成物を、これらの細菌株のうちの少なくとも1つの培養物から単離することによって得られる。
いくつかの実施形態において、少なくとも1種の細菌株は、当該分野で公知の方法を使用して、栄養培地中で培養される。上記細菌株は、適切な培地中で、および細菌細胞成長を可能にする条件下で、振盪フラスコ培養によって、または実験用もしくは産業用の発酵器の中で行われる小スケールもしくは大スケールの発酵(連続発酵、バッチ発酵、流加発酵、または固体状態の発酵が挙げられるが、これらに限定されない)によって培養され得る。培養は、当該分野で公知の手順を使用して、炭素源および窒素源ならびに無機塩を含む適切な栄養培地中で起こり得る。適切な培地は、市販の供給源から入手可能であるか、または当該分野で周知の刊行物に従って調製される。
培養後に、化合物、代謝産物、および/または組成物が、培養ブロスから抽出され得る。上記抽出物は、クロマトグラフィーによって分画され得る。上記抽出物は、当該分野で周知の方法を使用してさらに精製され得る。上記抽出物はまた、当該分野で周知の方法を使用して希釈され得る。
細菌株(すなわち、AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、およびAIP036706またはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つ、あるいはAIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、およびAIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちのいずれか1種に由来する、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせ、ならびに/または組成物)の細胞を含む組成物は、農業的に受容可能なキャリアをさらに含み得る。用語「農業的に受容可能なキャリア(agriculturally acceptable carrier)」とは、意図された被験体(すなわち、植物有害生物によって引き起こされる損傷もしくは病気に感受性である植物もしくは植物部分、または目的の農学上の形質を改善するための植物もしくは植物部分)への組成物の適用を容易にする任意の物質を含むことが意図される。植物および植物部分への適用のために組成物中で使用されるキャリアは、好ましくは、非植物毒性またはごく軽度に植物毒性である。適切なキャリアは、望ましい製剤化に依存して、固体、液体もしくは気体であり得る。一実施形態において、キャリアとしては、極性もしくは非極性の液体キャリア(例えば、水、鉱油および植物性油)が挙げられる。さらなるキャリアが、本明細書中の他の箇所で開示される。
A.細菌株の活性改変体
AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、およびAIP036706の活性改変体が、さらに提供される。このような改変体は、植物において、1種もしくはこれより多くの植物有害生物を制御するか、または目的の1もしくはこれより多くの農学上の形質を改善する能力を保持する。従って、いくつかの実施形態において、本明細書で提供される細菌株の活性改変体は、植物有害生物に対して農薬活性を保持する。本明細書で使用される場合、「農薬活性(pesticidal activity)」とは、有害生物が死滅させられるかまたは制御されるように、1種またはこれより多くの有害生物(昆虫、真菌、細菌、線虫、ウイルスまたはウイロイド、原生動物病原体などが挙げられる)に対する活性に言及する。いくつかの実施形態において、改変体は、1種またはこれより多くの昆虫有害生物または線虫有害生物を制御する能力を保持する。特定の実施形態において、改変体は、甲虫類の昆虫有害生物(コーンルートワーム(例えば、ウェスタンコーンルートワーム)、コロラドハムシ、ゾウムシ(例えば、アリモドキゾウムシ)、または半翅類の昆虫有害生物が挙げられる)を制御する能力を保持する。
本明細書で提供される種々の細菌株の活性改変体としては、例えば、AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、およびAIP036706の任意の単離体(isolate)または変異体(mutant)が挙げられる。
用語「変異体」とは、親株の改変体ならびに農薬活性が上記親株によって発現されるものより大きい変異体または改変体を得るための方法に言及する。「親株」は、変異誘発する前の元の株である。このような変異体を得るために、上記親株は、N-メチル-N’-ニトロ-N-ニトロソグアニジン、エチルメタンスルホン(EMS)のような化学物質で、またはγ線、x線、もしくはUV照射を使用する照射によって、または当該分野で周知の他の手段によって、処理され得る。
いくつかの実施形態において、上記活性改変体は、寄託された株に対して、少なくとも1つの遺伝子において変異を少なくとも含む。上記遺伝子は、例えば、バイオフィルム形成、運動性、化学走性、細胞外分泌、輸送(例えば、ABCトランスポータータンパク質)、ストレス応答、揮発性、転写(例えば、代替のシグマ因子および全体の転写調節因子)、根定着、植物における誘導性全身応答(induced systemic resistance)を刺激する能力、および/または二次代謝(リポペプチド、ポリケチド、高分子ヒドロラーゼ(例えば、プロテアーゼおよび/またはカルボヒドラーゼ)、および/または抗微生物化合物(抗生物質が挙げられる)の合成が挙げられる)において役割を有し得る。二次代謝とは、抗微生物化合物(環式リポペプチド、ポリケチド、イツリン、バクテリオシン(例えば、プランタゾリシンおよびアミロサイクリシン(amylocyclicin))およびジペプチド(例えば、バシリシン)が挙げられる)の非リボソームおよびリボソーム合成の両方に言及する。
活性改変体の例は、細菌株AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、またはAIP036706の細胞であり、ここで上記細胞は、機能喪失を生じるswrA遺伝子における変異をさらに含む。上記swrA変異(これは、バイオフィルム形成に影響を与える(Kearnsらら, Molecular Microbiology (2011) 52(2): 357-369))は、植物有害生物を制御するか、または植物の目的の農学上の形質を改善する増強された能力を有する本発明の株の活性改変体を生じ得る。バイオフィルム形成に関与する他の遺伝子(例えば、sfp、epsC、degQ、およびrapPといわれるプラスミド遺伝子(例えば、McLoonら, J of Bacteriology, (2011) 193(8): 2027-2034を参照のこと))はまた、本発明の細菌株の活性改変体において変異され得る。
具体的実施形態において、上記細菌株は、殺生物剤と適合性である。殺生物剤は、化学的または生物学的手段によって生物に対して制御効果を発揮し得る化学物質である。殺生物剤としては、農薬(例えば、殺真菌剤または殺虫剤;除草剤;他の農作物保護化学物質など)が挙げられる。このような化合物は、本明細書中の他の箇所で詳細に考察される。細菌株は、この細菌株が目的の殺生物剤の有効量の存在下で生存および/または生殖する能力がある場合に、殺生物剤と適合性である。その細菌株が目的の殺生物剤に関して適合性でない場合には、望ましい場合、その細菌株を改変して、目的の適合性を付与するための方法が企図され得る。改変された細菌株を生産するためのこのような方法は、選択技術および/または形質転換技術の両方を含む。
「改変された細菌株(modified bacterial strain)」とは、この株が改変されて(選択および/または形質転換によって)、目的の1種もしくはこれより多くのさらなる形質を有する集団を意図する。場合によっては、その改変された細菌株は、AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、およびAIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちのいずれか1種を含む。具体的実施形態において、その改変された細菌株は、目的の殺生物剤と適合性である(除草剤、殺真菌剤、農薬、もしくは他の農作物保護化学物質への抵抗性が挙げられるが、これらに限定されない)。その改変された殺生物剤抵抗性株は、これらが特定の除草剤、殺真菌剤、農薬、もしくは他の農作物保護化学物質に対して有意により抵抗性であることを除いて、元の感受性株と同じ同定特徴を有する。それらの同定は、公知の感受性株の特徴と比較することによって、容易に可能である。従って、改変された細菌株の単離された集団が提供される。
殺生物剤への抵抗性(例えば、除草剤、殺虫剤、殺真菌剤、農薬、または他の農作物保護化学物質への抵抗性)の増大は、生物(すなわち、細菌細胞もしくは胞子)が、その改変されていない生物に通常は致死的であるかまたは改変されていない生物の成長を実質的に低減する殺生物剤(例えば、除草剤、殺虫剤、殺真菌剤、農薬、もしくは他の農作物保護化学物質)の用量への曝露後に、生存および生殖する能力に言及する。具体的実施形態において、殺生物剤への抵抗性の増大は、その殺生物剤の農業上有効な量の存在下で示される。
このような場合に、1種もしくはこれより多くの殺生物剤への抵抗性を有するその改変された細菌株は、特に、除草剤、殺虫剤、殺真菌剤、農薬、または他の農作物保護化学物質に対して抵抗性のない他の微生物因子を超える細菌株の競争力を増強するために有用である。従って、本明細書で提供される組成物は、選択もしくは操作された細菌株および細菌株の改変された集団を含む。これらの細菌株または改変された細菌株は、植物用の接種物として使用され得る。それらはまた、植物の地上部に直接スプレー適用として適用され得るか、または種子コーティングとして適用され得、それらが改変されて耐性になった除草剤もしくは他の化学物質と混合され得る。
従って、本明細書で開示される細菌株の活性改変体は、その活性改変体が植物有害生物を制御しかつさらに、少なくとも1種の殺生物剤の存在下で成長し得るように、例えば、改変された株を含む。除草剤、殺虫剤、殺真菌剤、農薬、または他の農作物保護化学物質への抵抗性を有する組換え細菌株は、遺伝子工学技術を通じて作製され得、このように操作されたまたは組換えの細菌株は、細菌株の改変された集団を生産するために成長させられる。組換え細菌株は、ポリヌクレオチドを、形質転換によって細菌宿主細胞の中に導入することによって、生産される。微生物を形質転換するための方法は公知であり、当該分野で利用可能である。一般には、Hanahan, D. (1983) Studies on transformation of Escherichia coli with plasmids J. Mol. Biol. 166, 557-77; Seidman, C.E. (1994) In: Current Protocols in Molecular Biology, Ausubel, F.M. et al. eds., John Wiley and Sons, NY; Choi et al. (2006) J. Microbiol. Methods 64:391-397; Wang et al. 2010. J. Chem. Technol. Biotechnol. 85:775-778を参照のこと。形質転換は、実験室において、コンピテント細胞によるそれらの環境からの裸のDNAの天然の取り込みによって起こり得る。あるいは、細胞は、冷たい条件下での二価カチオンへの曝露によって、エレクトロポレーションによって、ポリエチレングリコールへの曝露によって、線維性ナノ粒子での処理、または当該分野で周知の他の方法によって、コンピテントにされ得る。
組換え細菌株を形質転換するにあたって使用するための除草剤抵抗性遺伝子としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない:フモニシン解毒遺伝子(米国特許第5,792,931号);除草剤抵抗性(特に、スルホニルウレアタイプの除草剤)をもたらすアセトラクテートシンターゼ(ALS)変異体(例えば、S4および/もしくはHra変異);グルタミンシンターゼのインヒビター(例えば、ホスフィノスリシンもしくはバスタ(例えば、bar遺伝子));ならびにグリホサート抵抗性(EPSPS遺伝子));グルホシネート(gluphosinate)およびHPPD抵抗性(WO96/38576、米国特許第6,758,044号;同第7,250,561号;同第7,935,869号;および同第8,124,846号)、または当該分野で公知の他のこのような遺伝子。WO96/38576、米国特許第5,792,931号、米国特許第6,758,044号、米国特許第7,250,561号、米国特許第7,935,869号および米国特許第8,124,846号の開示は、本明細書で参考として援用される。bar遺伝子は、除草剤バスタに対する抵抗性をコードし、nptII遺伝子は、抗生物質カナマイシンおよびジェネティシンに対する抵抗性をコードし、ALS遺伝子変異体は、スルホニルウレア除草剤(クロルスルフロン、メトスルフロン、スルホメツロン、ニコスルフロン、リムスルフロン、フラザスルフロン、スルホスルフロン、およびトリアスルフロンが挙げられる)ならびにイミダゾリノン(imadizolinone)除草剤(イマゼタピル、イマザキン、イマザピル、およびイマザメタベンズが挙げられる)に対する抵抗性をコードする。
選択を通じて細菌株の改変された集団を同定および生産するために、上記細菌株は、選択圧としての除草剤、殺虫剤、殺真菌剤、農薬、または他の農作物保護化学物質の存在下で成長させられる。感受性の因子は死滅する一方で、抵抗性の因子は競合なしに生存して生殖する。上記細菌株は、除草剤、殺虫剤、殺真菌剤、農薬、もしくは他の農作物保護化学物質の存在下で成長させられるので、抵抗性の細菌株は、成功裡に生殖し、集団の中で優勢になり、細菌株の改変された集団になる。抵抗性株を選択するための方法は公知であり、米国特許第4,306,027号および同第4,094,097号(本明細書に参考として援用される)を含む。細菌株の改変された集団を含む細菌株の活性改変体は、これらが特定の除草剤、殺虫剤、殺真菌剤、農薬、もしくは他の農作物保護化学物質に対して顕著により耐性であることを除いて、その元の感受性株と同じ同定特徴を有する。従って、それらの同定は、公知の感受性株の特徴との比較によって容易に可能である。
本明細書で提供される種々の細菌のさらなる活性改変体は、例えば、16SリボソームRNA間の配列同一性の関連性を決定する方法、導出されかつ機能的に同一もしくはほぼ同一の株の群を同定する方法を使用して同定され得、多座配列タイピング法(Multi-locus sequence typing)(MLST)、連接された連鎖状遺伝子ツリー(concatenated shared genes tree)、全ゲノムアラインメント法(Whole Genome Alignment)(WGA)、平均ヌクレオチド同一性法(Average Nucleotide Identity)、およびMinHash(Mash)距離測定法が挙げられる。
一局面において、細菌株AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、およびAIP036706の活性改変体は、Bishopら (2009) BMC Biology 7(1)1741-7007-7-3において定義されるとおりの生物分類のBishop MLST法を使用することによって、開示される株のうちのいずれかに密接に関連する株を含む。従って、具体的実施形態において、本明細書で開示される細菌株の活性改変体は、Bishopら (2009) BMC Biology 7(1)1741-7007-7-3(これは、その全体において本明細書に参考として援用される)に示されるとおりの生物分類のBishop法を使用して、少なくとも80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%. 94%、95%、96%、97%、98%、98.5%、98.8%、99%、99.1%、99.2%、99.3%、99.4%、99.5%、99.6%、99.7%、99.8%、または99.9%の配列カットオフ内に入る細菌株を含む。このような方法によって同定される細菌の活性改変体は、有効量において、植物、植物部分、または栽培地に適用される場合に、少なくとも1種の植物有害生物を制御するおよび/または少なくとも1種の農学上の形質を改善する能力を保持する(例えば、植物有害生物を低減する、植物有害生物の外寄生を低減するおよび/または有害生物への抵抗性(昆虫有害生物への抵抗性(例えば、ウェスタンコーンルートワーム、コロラドハムシ、および/またはアリモドキゾウムシのような甲虫類の昆虫)を含む)を増大させることが挙げられる)。
別の局面において、本明細書で開示される細菌株の活性改変体は、生物分類の平均ヌクレオチド同一性(ANI)法に基づいて、開示される株のうちのいずれかに密接に関連する株を含む。ANI(例えば、Konstantinidis, K.T.,ら, (2005) PNAS USA 102(7):2567-72;およびRichter, M.,ら, (2009) PNAS 106(45):19126-31)を参照のこと)および変法(例えば、Varghese, N.J.,ら, Nucleic Acids Research (July 6, 2015): gkv657を参照のこと)は、WGAにおいて整列させる株のゲノムの間で共有される平均ヌクレオチドを合計することに基づく。従って、具体的実施形態において、本明細書で開示される細菌株AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、およびAIP036706の活性改変体は、Konstantinidis, K.T.,ら, (2005) PNAS USA 102(7):2567-72(これは、その全体において本明細書に参考として援用される)に示されるとおりの生物分類のANI法を使用して、少なくとも90%、95%、96%、97%、97.5%、98%、98.5%、98.8%、99%、99.5%、または99.8%の配列カットオフ内に入る細菌株を含む。このような方法によって同定される細菌の活性改変体は、有効量において、植物、植物部分、または栽培地に適用される場合、少なくとも1種の植物有害生物を制御するおよび/または少なくとも1種の農学上の形質を改善する能力を保持する(例えば、植物有害生物を低減する、植物有害生物の外寄生を低減するおよび/または有害生物への抵抗性(昆虫有害生物への抵抗性(例えば、ウェスタンコーンルートワーム、コロラドハムシ、および/またはアリモドキゾウムシのような甲虫類の昆虫)を含む)を増大させることが挙げられる)。
別の局面において、本明細書で開示される単離された細菌株の活性改変体は、16S rDNA配列同一性に基づいて、上記の株のうちのいずれかに密接に関連する(例えば、AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、またはAIP036706に密接に関連する)株を含む。細菌における関連性を決定するための16S rDNA配列同一性の使用に関しては、Stackebrandt E,ら, 「Report of the ad hoc committee for the re-evaluation of the species definition in bacteriology」,Int J Syst Evol Microbiol.52(3):1043-7 (2002)を参照のこと。ある実施形態では、上記活性改変体は、16S rDNAの配列同一性に基づいて上記の株のいずれかに少なくとも95%同一、16S rDNAの配列同一性に基づいて上記の株のいずれかに少なくとも96%同一、16S rDNAの配列同一性に基づいて上記の株のいずれかに少なくとも97%同一、16S rDNAの配列同一性に基づいて上記の株のいずれかに少なくとも98%、16S rDNAの配列同一性に基づいて上記の株のいずれかに少なくとも98.5%同一、16S rDNAの配列同一性に基づいて上記の株のいずれかに少なくとも99%同一、16S rDNAの配列同一性に基づいて上記の株のいずれかに少なくとも99.5%または16S rDNAの配列同一性に基づいて上記の株のいずれかに少なくとも100%である。このような方法によって同定される細菌の活性改変体は、有効量において、植物、植物部分、または栽培地に適用される場合、少なくとも1種の植物有害生物を制御するおよび/または少なくとも1種の農学上の形質を改善する能力を保持する(例えば、植物有害生物を低減する、植物有害生物の外寄生を低減するおよび/または有害生物への抵抗性(昆虫有害生物への抵抗性(例えば、ウェスタンコーンルートワーム、コロラドハムシ、および/またはアリモドキゾウムシのような甲虫類の昆虫)を含む)を増大させることが挙げられる)。
MinHash(Mash)距離測定法は、高分解能で微生物の階層的分類のための閾値を規定しかついくつかのパラメーターおよび工程を要する比較法である(Ondovら (2016) Genome Biology 17:132)。Mash距離は、それらのMinHashスケッチから直接、2つの配列間の変異率を推測する(Ondovら (2016) Genome Biology 17:132)。Mash距離は、階層的分類に関して平均ヌクレオチド同一性法(ANI)と強く対応する(Konstantinidis, K.T.ら (2005) PNAS USA 102(7):2567-72(その全体において本明細書に参考として援用される)を参照のこと)。すなわち、ANI 97%は、Mash距離 0.03におよそ等しく、その結果、ANI文献中での有用な分類閾値として示される値は、Mash距離で直接適用され得る。
本明細書で開示される細菌株の活性改変体は、完全ゲノムDNA配列間のMinhash(Mash)距離に基づいて、AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、またはAIP036706に密接に関連する株を含む。従って、具体的実施形態において、本明細書で開示される細菌株の活性改変体は、その開示される株に対してMash距離 約0.015未満以内のゲノムを有する細菌株を含む。他の実施形態において、本明細書で開示される細菌株の活性改変体は、約0.001、0.0025、0.005、0.010、0.015、0.020、0.025、または0.030未満の距離測定値(distance metric)を含む。ゲノムは、これがMash距離に関連する場合、細菌染色体DNAおよび細菌プラスミドDNAの両方を含む。他の実施形態において、細菌株の活性改変体は、技術的な分散によって引き起こされる相違点より大きい、開示される株に対するMash距離閾値を上回っているゲノムを有する。さらなる場合には、細菌株の活性改変体は、技術的な分散によって引き起こされる相違点より大きい、開示される株に対するMash距離閾値を上回っており、かつMash距離 約0.015未満を有するゲノムを有する。他の場合には、細菌株の活性改変体は、技術的な分散によって引き起こされる相違点より大きい、開示される株に対するMash距離閾値を上回っており、かつMash距離 約0.001、0.0025、0.005、0.010、0.015、0.020、0.025、または0.030未満を有するゲノムを有する。
本明細書で使用される場合、「技術的な変動を上回る(above technical variation)」とは、比較されているゲノムがIllumina HiSeq 2500 DNA配列決定技術での少なくとも20×カバレッジ(coverage)で配列決定した各DNAでありかつそのゲノムが汚染に関して2%未満という証拠を伴って少なくとも99%完全であるとすれば、ゲノムアセンブリにおける誤差によって引き起こされる2つの株間のMash距離を上回ることを意味する。20×カバレッジは当該分野で認識されている用語であるが、明瞭性のために、20×カバレッジの例は、以下のとおりである:ゲノムサイズ5メガベース(MB)に関しては、所定のゲノムから100MBのDNA配列決定が、そのゲノムに沿った各位置で、平均して20×配列決定カバレッジを有するために必要とされる。Campbellら(2013) PNAS USA 110(14):5540-45, Dupontら(2012) ISMEJ 6:1625-1628、およびCheckM framework (Parksら (2015) Genome Research 25:1043-1055)(これらの参考文献の各々は、それらの全体において本明細書に参考として援用される)に見出されるセットを含め、ゲノム完全性計算のために使用するマーカー遺伝子の多くの適切なコレクションが存在する。汚染は、所定のゲノム配列中の複数のコピー中に見出される代表的には単一コピーのマーカー遺伝子のパーセンテージとして定義される(例えば、Parksら (2015) Genome Research 25:1043-1055)(これらの参考文献の各々は、それらの全体において本明細書に参考として援用される)。完全性および汚染は、マーカー遺伝子の同じコレクションを使用して計算される。別段述べられなければ、完全性および汚染アッセイにおいて使用されるコレクションマーカーのセットは、Campbellら (2013) PNAS USA 110(14):5540-45(本明細書に参考として援用される)に示されるものである。
問題のゲノム間で距離概算値を得るための例示的工程は、以下のとおりである:(1)比較のために十分な品質のゲノムが、生産されなければならない。十分な品質のゲノムは、Illumina HiSeq 2500技術を使用して、少なくとも20×ゲノムカバレッジに達するために十分なDNA配列で作製されるゲノムアセンブリとして定義される。そのゲノムは、特許請求される微生物のゲノムと比較されるために、2%未満の汚染を伴って少なくとも99%完全でなければならない。(2)ゲノムは、Ondovら(2016) Genome Biology 17:132(その全体において本明細書に参考として援用される)に示されるように、Minhashワークフローを使用して比較されるべきである。別段述べられなければ、使用されるパラメーターは、以下のとおりである:「スケッチ(sketch)」サイズ 1000、および「k-merー長」 21。(3)2つのゲノム間のMash距離が、0.001、0.0025、0.005、0.010、0.015、0.020、0.025、もしくは0.030未満であることを確認する。上記で述べられたパラメーターおよび方法を使用すると、2つのゲノム間のMash距離 0.015は、予測される変異率が、相同な位置あたり0.015変異であることを意味する。このような方法によって同定される細菌の活性改変体は、有効量において、植物、植物部分、または栽培地に適用される場合、少なくとも1種の植物有害生物を制御するおよび/または少なくとも1種の農学上の形質を改善する能力を保持する(例えば、植物有害生物を低減する、植物有害生物の外寄生を低減するおよび/または有害生物への抵抗性(昆虫有害生物への抵抗性(例えば、ウェスタンコーンルートワーム、コロラドハムシ、および/またはアリモドキゾウムシのような甲虫類の昆虫)を含む)を増大させることが挙げられる)。
III.製剤化
本明細書で提供される細菌株(すなわち、AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体の細胞、またはAIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちのいずれか1種に由来する、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせ、ならびに/または組成物)は、細胞ペースト、水和剤、細胞ペレット、粉剤(dust)、粒剤(granule)、スラリー、乾燥粉末、水性もしくは油ベースの液体生産物などとして製剤化され得る。このような製剤は、キャリアおよび他の因子に加えて、本明細書で提供される細菌もしくはその活性改変体、および/またはこれらに由来する組成物を含む。その製剤は、本明細書の他の箇所で開示されるように、種々の方法で使用され得る。
本明細書で開示される細菌株およびその活性改変体は、増量剤、溶媒、自発性増進因子(spontaneity promoter)、キャリア、乳化剤、分散剤、防霜剤(frost protectant)、濃化剤、および/またはアジュバントのうちの少なくとも1種もしくはこれより多くを含むように製剤化され得る。いくつかの実施形態において、上記増量剤、溶媒、自発性増進因子、キャリア、乳化剤、分散剤、防霜剤、濃化剤、および/またはアジュバントは、非天然のまたは合成の増量剤、溶媒、自発性増進因子、キャリア、乳化剤、分散剤、防霜剤、濃化剤、および/またはアジュバントである。特定の実施形態において、本明細書で開示される細菌株およびその活性改変体は、少なくとも1種またはこれより多くの天然の増量剤、溶媒、自発性増進因子、キャリア、乳化剤、分散剤、防霜剤、濃化剤、および/またはアジュバントを含むように製剤化され得る。
代表的な製剤の例としては、水溶性液剤(water-soluble liquid)(SL)、乳剤(emulsifiable concentrate)(EC)、EW剤(emulsion in water)(EW)、SC剤(suspension concentrate)(SC)、SE剤(suspo-emulsion)(SE)、種子処理用フロアブル剤(flowable concentrate for seed treatment)(FS)、OD剤(oil dispersion)(OD)、水和性粒剤(water-dispersible granule)(WG)、粒剤(GR)、カプセル剤(capsule concentrate)(CS)、水和性粒剤(WG)、粒剤(GR)、ブロックベイト剤(block bait)(BB)、水溶剤(water-soluble granule)(SG)、ならびにCSとSCとの混合製剤(ZC)が挙げられる。これらおよび他の考えられる製剤タイプは、例えば、Crop Life Internationalによって、およびPesticide Specifications, Manual on development and use of FAO and WHO specifications for pesticides, FAO Plant Production and Protection Papers - 173(FAO/WHO Joint Meeting on Pesticide Specifications, 2004作成、ISBN: 9251048576)に記載される。その製剤は、1種もしくはこれより多くの本発明の活性化合物以外の活性農薬化合物(agrochemical compound)を含み得る。
種々の細菌株またはその活性改変体の製剤形態または適用形態は、補助物質、例えば、増量剤、溶媒、自発性増進因子、キャリア、乳化剤、分散剤、防霜剤、殺生物剤、固体キャリア、界面活性剤、濃化剤、および/または他の補助物質(例えば、アジュバント)を含み得るが、これらに限定されない。この状況でのアジュバントは、その成分自体が生物学的効果を有することなく、製剤の生物学的効果を増強する成分である。アジュバントの例は、葉表面に留まる、拡がる、付着する、または浸透することを増進する因子である。
非限定的な増量剤は、例えば、水、極性および非極性の有機化学的液体(例えば、芳香族炭化水素および非芳香族炭化水素のクラスに由来するもの(例えば、パラフィン、アルキルベンゼン、アルキルナフタレン、クロロベンゼン))、アルコールおよびポリオール(これはまた、適切であれば、置換、エーテル化および/またはエステル化されていてもよい)、ケトン(例えば、アセトン、シクロヘキサノン)、エステル(脂肪および油を含む)ならびに(ポリ)エーテル、置換されていないおよび置換されているアミン、アミド、ラクタム(例えば、N-アルキルピロリドン)ならびにラクトン、スルホンおよびスルホキシド(例えば、ジメチルスルホキシド)である。使用される増量剤が水である場合、例えば、補助的溶媒として有機溶媒を使用することも可能である。本質的には、非限定的な液体溶媒は、以下である:芳香族(例えば、キシレン、トルエンもしくはアルキルナフタレン)、塩素化芳香族および塩素化脂肪族炭化水素(例えば、クロロベンゼン、クロロエチレンもしくは塩化メチレン)、脂肪族炭化水素(例えば、シクロヘキサンもしくはパラフィン)、例えば、石油画分、鉱油および植物性油、アルコール(例えば、ブタノールもしくはグリコール)、ならびにまた、それらのエーテルおよびエステル、ケトン(例えば、アセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトンもしくはシクロヘキサノン)、高極性溶媒(例えば、ジメチルホルムアミドおよびジメチルスルホキシド)、ならびにまた、水。原則として、任意の適切な溶媒を使用することも可能である。非限定的な溶媒は、以下である:例えば、芳香族炭化水素(例えば、キシレン、トルエンもしくはアルキルナフタレン)、例えば、塩素化芳香族もしくは塩素化脂肪族炭化水素(例えば、クロロベンゼン、クロロエチレンもしくは塩化メチレン)、例えば、脂肪族炭化水素(例えば、シクロヘキサン)、例えば、パラフィン、石油画分、鉱油および植物性油、アルコール(例えば、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ブタノールもしくはグリコール)、例えば、ならびにまた、それらのエーテルおよびエステル、ケトン(例えば、アセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトンもしくはシクロヘキサノン)、例えば、高極性溶媒(例えば、ジメチルホルムアミド)、ならびに水。
適切なキャリアの非限定的な例としては、例えば、アンモニウム塩および土壌の天然ミネラル(例えば、カオリン、クレイ、タルク、白亜、石英、アタパルジャイト、モンモリロナイトもしくは珪藻土)、および土壌の合成ミネラル(例えば、微粉化シリカ、アルミナおよび天然もしくは合成のシリケート、樹脂、ワックスならびに/または固形肥料が挙げられる。このようなキャリアの混合物は、同様に使用され得る。粒剤に適したキャリアとしては、以下が挙げられる:例えば、粉砕されかつ分画された天然のミネラル(例えば、方解石、大理石、軽石、海泡石、苦灰石)、そしてまた、無機物および有機物のあらびき粉(meal)の合成粒、そしてまた、有機物質(例えば、おがくず、紙、ヤシ殻、軸付トウモロコシ、およびタバコの茎)の粒。
液化ガスの増量剤または溶媒がまた、使用され得る。非限定的な例は、標準的な温度でおよび標準的な圧力下でガスである増量剤またはキャリアであり、例は、エアロゾル噴霧体(例えば、ハロゲン化炭化水素)、そしてまた、ブタン、プロパン、窒素および二酸化炭素である。イオン性もしくは非イオン性の特性を有する乳化剤および/または泡沫形成剤(foam-former)、分散剤もしくは湿潤剤、またはこれら表面活性物質の混合物の例は、ポリアクリル酸の塩、リグノスルホン酸の塩、フェノールスルホン酸もしくはナフタレンスルホン酸の塩、エチレンオキシドと脂肪アルコールまたは脂肪酸もしくは脂肪アミンとの、置換されたフェノール(好ましくは、アルキルフェノールもしくはアリールフェノール)との多重縮合物(polycondensates)、スルホコハク酸エステルの塩、タウリン誘導体(好ましくは、アルキルタウレート(alkyltaurate))、ポリエトキシル化アルコールもしくはフェノールのリン酸エステル、ポリオールの脂肪酸エステル、ならびにスルフェート、スルホネートおよびホスフェートを含む化合物の誘導体であり、例は、アルキルアリールポリグリコールエーテル、アルキルスルホネート、アルキルスルフェート、アリールスルホネート、タンパク質加水分解物、リグニン-スルファイト廃棄物リカーおよびメチルセルロースである。表面活性物質の存在は、活性化合物のうちの1種および/または不活性キャリアのうちの1種が、水に可溶性でない場合に、および適用が水の中で行われる場合に、有利である。
製剤中におよびそれらから導出される適用形態に存在し得るさらなる補助物質としては、着色剤(例えば、無機顔料(例は、酸化鉄、二酸化チタン、プルシアンブルーである)および有機染料(例えば、アリザリン染料、アゾ染料および金属フタロシアニン染料)、ならびに栄養素および微量栄養素(例えば、鉄、マンガン、ホウ素、銅、コバルト、モリブデン、および亜鉛の塩)が挙げられる。
安定化剤(例えば、低温安定化剤、保存剤、抗酸化剤、光安定化剤、または化学的および/もしくは物理的安定性を改善する他の因子)がまた、存在し得る。泡沫形成剤または消泡剤がさらに存在し得る。
さらに、製剤およびこれらから導出される適用形態はまた、さらなる補助物質として、増粘剤(sticker)(例えば、カルボキシメチルセルロース)、粉末、顆粒もしくはラテックス形態にある天然および合成のポリマー(例えば、アラビアガム、ポリビニルアルコール、ポリビニルアセテート)、そしてまた天然のリン脂質(例えば、セファリンおよびレシチン)、ならびに合成リン脂質を含み得る。さらなる可能な補助物質としては、鉱油および植物性油が挙げられる。
さらなる補助物質が、製剤およびこれらから導出される適用形態におそらく存在し得る。このような添加剤の例としては、芳香物質(fragrance)、保護コロイド、結合剤、接着剤、濃化剤、チキソトロピック物質(thixotropic substance)、浸透剤、保持増進因子(retention promoter)、安定化剤、金属イオン封鎖剤、錯化剤、湿潤剤(humectant)および展着剤(spreader)が挙げられる。概して、活性化合物は、製剤化目的で一般に使用される任意の固体もしくは液体の添加剤と合わせられ得る。
適切な保持増進因子としては、例えば、動的表面張力を低下させる物質(例えば、ジオクチルスルホスクシネート)、または粘弾性を増大させる物質(例えば、ヒドロキシプロピルグアールポリマー(hydroxypropylguar polymer))が全て挙げられ得る。
本発明の状況において適切な浸透剤としては、植物への活性農薬化合物の浸透を増強するために代表的には使用される物質の全てが挙げられる。この状況での浸透剤は、(一般には、水性の)適用リカーから、および/またはスプレーコーティングから、それらが植物のクチクラに浸透し得、それによって、活性化合物のクチクラ中での移動性を増大させ得るという点で定義される。この特性は、文献中で記載される方法(Baurら, 1997, Pesticide Science 51: 131-152)を使用して決定され得る。例としては、例えば、アルコールアルコキシレート(例えば、ヤシ脂肪エトキシレート(coconut fatty ethoxylate)(10)またはイソトリデシルエトキシレート(12))、脂肪酸エステル(例えば、菜種油もしくはダイズ油のメチルエステル)、脂肪アミンアルコキシレート(例えば、獣脂アミンエトキシレート(15))、あるいはアンモニウム塩および/またはホスホニウム塩(例えば、硫酸アンモニウムまたはリン酸水素二アンモニウム)が挙げられる。
本明細書で開示される種々の組成物および製剤は、細菌株(例えば、AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体、または胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせ)の細胞のある量を含み得る、ならびに/またはAIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちのいずれか1つに由来する組成物のある量を含み得る。このような量は、少なくとも約10~約1011、少なくとも約10 CFU/g~約1011 CFU/g、約10CFU/g~約1010 CFU/g、約10 CFU/g~約1012 CFU/g、約10 CFU/g~約10 CFU/g、約10 CFU/g~約10 CFU/g、約10 CFU/g~約10 CFU/g、約10 CFU/g~約10 CFU/g、約10 CFU/g~約1010 CFU/g、約1010 CFU/g~約1011 CFU/g、または約1011 CFU/g~約1012 CFU/gの細菌株の濃度を含み得る。他の実施形態において、上記細菌株の濃度は、少なくとも約10 CFU/g、少なくとも約10CFU/g、少なくとも約10 CFU/g、少なくとも約10 CFU/g、少なくとも約10 CFU/g、少なくとも約10 CFU/g、少なくとも約1010 CFU/g、少なくとも約1011 CFU/g、少なくとも約1012 CFU/gを含む。上記細菌株のこのような濃度は、任意の目的の製剤タイプにおいて(例えば、液体製剤、水和剤(wettable power)、噴霧乾燥製剤において、細胞ペースト、顆粒水和剤(wettable granule)、または凍結乾燥製剤において、が挙げられる)起こり得る。
いくつかの実施形態において、上記細菌株は、液体製剤中に存在し得る。液体製剤は、細菌株(例えば、AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体、またはAIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちのいずれか1つに由来する、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせ)の細胞、ならびに/またはこれらに由来する組成物のある量を含み得る。液体製剤において、本明細書で開示される、細菌株もしくはその活性改変体、および/またはこれらに由来する組成物の量は、少なくとも約10~約1011 CFU/ml、少なくとも約10 CFU/ml~約1011 CFU/mL,約10CFU/mL~約1010 CFU/mL、約10 CFU/mL~約1012 CFU/mL、約10 CFU/mL~約10 CFU/mL、約10 CFU/mL~約10 CFU/mL、約10 CFU/mL~約10 CFU/mL、約10 CFU/mL~約10 CFU/mL、約10 CFU/mL~約1010 CFU/mL、約1010 CFU/mL~約1011 CFU/mL、または約1011 CFU/mL~約1012 CFU/mLまたは少なくとも約10 CFU/mL、少なくとも約10CFU/mL、少なくとも約10 CFU/mL、少なくとも約10 CFU/mL、少なくとも約10 CFU/mL、少なくとも約10 CFU/mL、少なくとも約1010 CFU/mL、少なくとも約1011 CFU/mL、少なくとも約1012 CFU/mLの濃度を含み得る。
乾燥製剤(例えば、細胞ペースト、水和剤、および噴霧乾燥製剤)は、細菌株(例えば、AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体、またはこれらのうちのいずれかの、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせ)の細胞を含み得る、ならびに/またはAIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちのいずれか1つに由来する組成物を含み得る。上記乾燥製剤(例えば、細胞ペースト、水和剤、および/または噴霧乾燥製剤)における上記細菌株の量は、少なくとも約10 CFU/g~約1011 CFU/g、約10 CFU/g~約1010 CFU/g、約10 CFU/g~約1011 CFU/g、約10 CFU/g~約1010 CFU/g、約10 CFU/g~約1011 CFU/g、約1011 CFU/g~約1012 CFU/g、約10CFU/g~約1010 CFU/g、約10 CFU/g~約1012 CFU/g、約10 CFU/g~約10 CFU/g、約10 CFU/g~約10 CFU/g、約10 CFU/g~約10 CFU/g、約10 CFU/g~約10 CFU/g、約10 CFU/g~約1010 CFU/g、約1010 CFU/g~約1011 CFU/g、または約1011 CFU/g~約1012 CFU/gの上記細菌株の濃度を含み得る。いくつかの実施形態において、上記細菌株の濃度は、少なくとも約10CFU/g、少なくとも約10 CFU/g、少なくとも約10 CFU/g、少なくとも約10 CFU/g、少なくとも約10 CFU/g、少なくとも約1010 CFU/g、少なくとも約1011 CFU/g、少なくとも約1012 CFU/g、または少なくとも約1013 CFU/gを含む。
本明細書で使用される場合、「細胞ペースト(cell paste)」は、遠心分離および/もしくは濾過されているか、または別の方法で濃縮されている細胞の集団を含む。種子および種子上のコーティングを含むコーティングされた種子がさらに提供され、ここで、コーティングは、少なくとも1種の細菌株、例えば、AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体の細胞、またはこれらのうちのいずれかの、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせを含む、ならびに/またはAIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちのいずれか1つに由来する組成物を含み得、ここで上記細菌株もしくはその活性改変体は、種子上に、約10 CFU/種子~約10CFU/種子で、約10 CFU/種子~約10CFU/種子で、約10 CFU/種子~約10 CFU/種子で、約10 CFU/種子~約10 CFU/種子で、約10 CFU/種子~約10 CFU/種子で、または約10 CFU/種子~約10 CFU/種子で存在する。種々の目的の植物が、本明細書中の他の箇所で開示される。
特定の実施形態において、種子上に異種コーティングを含む種子が提供され、ここで上記異種コーティングは、少なくとも1種の細菌株、例えば、AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体の細胞、または胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせを含む、ならびに/またはAIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちのいずれか1種に由来する組成物を含み得、ここで上記細菌株もしくはその活性改変体は、種子上に、約10 CFU/種子~約10CFU/種子で、約10 CFU/種子~約10CFU/種子で、約10 CFU/種子~約10 CFU/種子で、約10 CFU/種子~約10 CFU/種子で、約10 CFU/種子~約10 CFU/種子で、または約10 CFU/種子~約10 CFU/種子で存在する。本明細書で使用される場合、コーティングに関連して「異種(heterologous)」とは、種子上では天然に見出されない、または種子状で天然に見出される場合には、計画的なヒトの介入によって、組成物および/または濃縮物においてその天然の形態から実質的に改変される細菌株を含む種子コーティングに言及する。特定の実施形態において、コーティングに関連して「異種」とは、上記細菌株が天然には見出されない溶液中に懸濁された細菌株を含む種子コーティングに言及し得る。異種コーティング用の懸濁溶液は、天然または非天然であり得、上記株が通常は有しない特性を伴う細菌株を提供し得る。例えば、異種コーティングの懸濁溶液は、上記細菌が、種子の貯蔵および発芽の間に活性を保持するような様式で、上記細菌株が上記種子に接着することを可能にし得る。
種子コーティングは、少なくとも1種の栄養素、少なくとも1種の殺生物剤(例えば、除草剤もしくは農薬)をさらに含み得る。例えば、米国特許公開20040336049、同第20140173979、および同第20150033811を参照のこと。
細菌株AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つに由来する、全細胞ブロス、上清、濾液、または抽出物を含む組成物が、さらに提供され、ここで有効量の組成物は、植物の目的の農学上の形質を改善するか、または病気を引き起こす植物有害生物もしくは植物病原体を制御する。上記組成物は、植物の目的の農学上の形質を改善するか、または病気を引き起こす植物有害生物もしくは植物病原体を制御する、有効な化合物、代謝産物、および/またはタンパク質を含む。上清とは、細胞がブロス中で成長させられるか、またはアガープレートから別の液体において採取され、遠心分離、濾過、沈降、または当該分野で周知の他の手段によって除去される場合に残っている液体に言及する。上記上清は、濾液を生産するためにさらに濃縮され得る。上記濾液は、上記上清または全細胞ブロスにおける有効な化合物または代謝産物の濃度と比較して、濃縮された量の有効な化合物または代謝産物を含み得る。いくつかの実施形態において、上記上清、濾液、または抽出物は、水和剤および/または噴霧乾燥製剤へと処理され得る。他の実施形態において、上記上清、濾液、または抽出物は、濃縮され得る(例えば、水が除去される)が、液体製剤の中に残る。上記で記載される組成物は、植物有害生物を制御するか、または植物の目的の農学上の形質を改善するために有効量において、単独でまたは別の物質と組み合わせて適用され得る。
本明細書で開示される種々の製剤は、少なくとも30日間、40日間、50日間、60日間、70日間、80日間、90日間、100日間、125日間、150日間、200日間、225日間、250日間、275日間、300日間、325日間、350日間、1.5年間、2年間またはこれより長く安定であり得る。安定は、その製剤が、生きている細菌を保持する、および/または生物学的に活性な細菌集団の有効量を保持することを意図する。生物学的活性とは、本明細書で使用される場合、その製剤が目的の農学上の形質を改善するか、または植物有害生物を制御する能力に言及する。一実施形態において、その安定な製剤は、製剤の調製直後にもたらされるCFU/gと比較した場合に、所定の貯蔵の時点で、製剤中のCFU/gのうちの少なくとも約1%、約10%、約20%、約30% 約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、または約90%を保持する。別の実施形態において、その安定な製剤は、生産直後に製剤中で見出される生物学的活性と比較した場合に、所定の貯蔵の時点で、製剤中の生物学的活性のうちの少なくとも約30%~80%、約50%~約80%、約60%~約70%、約70%~約80%、約40%~約50%、約50%~約60%、約60%~約70%を保持する。別の実施形態において、所定の貯蔵の時点での安定な製剤は、生産直後に製剤中で見出される生物学的活性と比較した場合に、生物学的活性のうちの少なくとも約30%、45%、50%、60%、70%、80%、90%を保持する。さらに別の実施形態において、その安定な製剤は、上記で示した生存度および生物学的活性の任意の組み合わせを保持する。
その製剤は、好ましくは、その製剤の重量に基づいて、0.00000001重量%~98重量%の間の活性化合物、または特に好ましくは、0.01重量%~95重量%の間の活性化合物、より好ましくは、0.5重量%~90重量%の間の活性化合物を含む。
その製剤から調製される適用形態の活性化合物含有量は、広い範囲内で変動し得る。その適用形態の活性化合物濃度は、その適用形態の重量に基づいて、代表的には、0.00000001重量%~95重量%の間の活性化合物、好ましくは0.00001重量%~1重量%の間にあり得る。適用は、その適用形態に適合した慣習的な様式で起こる。
さらに、本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体、および/またはこれらに由来する組成物は、その活性または上記化学物質(これに上記細菌株もしくはその活性改変体、および/またはこれらに由来する組成物が添加されている)の活性を増強するために、殺生物剤(例えば、殺真菌剤、殺虫剤、または除草剤)と混合され得る。ある場合には、その細菌株(またはこれに由来する組成物)および化学物質の組み合わせは、その2種の混合物がそれらの単純な相加効果から予測されるものを超える相乗効果的な活性を示し得る。他の実施形態において、本明細書で記載される生物防除因子は、他の生物防除因子と混合され得る。
具体的実施形態において、上記細菌株、その活性改変体、および/またはこれらに由来する組成物は、殺生物剤の性能を改善するために使用される農業的化学物質と適合性である。このような農業的化学物質としては、毒性緩和剤(safener)、界面活性剤、増粘剤、展着剤、UV保護剤、ならびに懸濁および分散補助物質(suspension and dispersal aid)が挙げられる。毒性緩和剤は、除草剤の性能を改善または改変する化学物質である。界面活性剤、展着剤、および増粘剤は、スプレーの機械的特性を変化させる(例えば、表面張力を変化させることによって、または葉のクチクラへの浸透を改善することによって)農業的スプレー調製物中に含まれる化学物質である。UV保護剤は、紫外線による分解を低減することによって、農業的殺生物剤の性能を改善する。懸濁および分散補助物質は、スプレータンク中での殺生物剤の挙動を変化させることによって、それら殺生物剤の性能を改善する。細菌株または活性改変体が目的の農業的化学物質と適合性でない場合、望ましいのであれば、その細菌株を改変して、目的の適合性を付与する方法が企図され得る。改変された細菌株を生産するためのこのような方法は、選択技術および/または形質転換技術の両方を含む。
本明細書で提供される細菌株、その活性改変体、および/またはこれらに由来する組成物は、少なくとも1つの目的の農学上の形質を有意に改善する(例えば、植物有害生物(例えば、昆虫および線虫有害生物)に対する感受性を低減する)ために使用され得る。本明細書で提供される細菌株、その活性改変体、および/またはこれらに由来する組成物は、有効な統合された有害生物管理プログラムのために他の農薬とともに使用され得る。一実施形態において、上記生物防除集団は、WO 94/10845(本明細書中に参考として援用される)に記載される様式で公知の農薬と混合され得る。
製剤に添加され得る化合物および組成物の非限定的な例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない:アセチルトリブチルシトレート[クエン酸、2-(アセチルオキシ)-、トリブチルエステル];アガー;アーモンド外皮(Almond hull);アーモンドの殻(Almond shell);α-シクロデキストリン;酸化アルミニウム/二酸化ケイ素(Aluminatesilicate);ケイ酸アルミニウムマグネシウム[ケイ酸、アルミニウムマグネシウム塩];ケイ酸アルミニウムカリウムナトリウム[ケイ酸、アルミニウムカリウムナトリウム塩];ケイ酸アルミニウム;ケイ酸アルミニウムナトリウム[ケイ酸、アルミニウムナトリウム塩];ケイ酸アルミニウムナトリウム(1:1:1)[ケイ酸(HSiO)、アルミニウムナトリウム塩(1:1:1)];安息香酸アンモニウム[安息香酸、アンモニウム塩];ステアリン酸アンモニウム[オクタデカン酸、アンモニウム塩];アミロペクチン、酸加水分解、1-オクテニルブタンジオエート;アミロペクチン、水素 1-オクタデセニルブタンジオエート;動物性膠(Animal glue);パルミチン酸アスコルビル;アタパルジャイトタイプクレイ;蜜蝋;ベントナイト;ベントナイト、sodian;β-シクロデキストリン;骨粉;ふすま;パンくず(Bread crumb);(+)-ブチルラクテート;[乳酸、n-ブチルエステル、(S)];ブチルラクテート[乳酸、n-ブチルエステル];ステアリン酸ブチル[オクタデカン酸、ブチルエステル];石灰質頁岩;方解石(Ca(Co));酢酸カルシウム;酢酸カルシウム一水和物[酢酸、カルシウム塩、一水和物];安息香酸カルシウム[安息香酸、カルシウム塩];炭酸カルシウム;クエン酸カルシウム[クエン酸、カルシウム塩];オクタン酸カルシウム;ケイ酸酸化カルシウム(Calcium oxide silicate)(CaO(SiO));ケイ酸カルシウム[ケイ酸、カルシウム塩];ステアリン酸カルシウム[オクタデカン酸、カルシウム塩];硫酸カルシウム;硫酸カルシウム二水和物(Calcium sulfate dehydrate);硫酸カルシウム0.5水和物;カナリーシード(Canary seed);炭素;二酸化炭素;カルボキシメチルセルロース[セルロース、カルボキシメチルエーテル];厚紙;カルナウバ蝋;カロブガム(Carob gum)[ローカストビーンガム];カラギーナン;カゼイン;ヒマシ油;ヒマシ油、水素化;キャットフード;セルロース;酢酸セルロース;セルロース、セルロースカルボキシメチルエーテルとの混合物、ナトリウム塩;セルロース、パルプ;セルロース、再生;チーズ;クロロフィルa;クロロフィルb;シトラスあらびき粉(Citrus meal);クエン酸;クエン酸、一水和物;シトラスペクチン;シトラスパルプ;二枚貝の殻(Clam shell);カカオ(Cocoa);カカオ殻粉(Cocoa shell flour);カカオ殻;タラ肝油;コーヒーの出し殻(Coffee grounds);クッキー;コルク;軸付トウモロコシ;ワタ;綿実あらびき粉;挽き割りコムギ(Cracked wheat);デカン酸、1,2,3-プロパントリオールとのモノエステル;デキストリン;モノオレイン酸ジグリセリル[9-オクタデセン酸、1,2,3-プロパントリオールとのエステル];モノステアリン酸ジグリセリル[9-オクタデカン酸、オキシビス(プロパンジオール)とのモノエステル(monoester with xybis(propanediol))];ジラウリン[ドデカン酸、1,2,3-プロパントリオールとのジエステル];ジパルミチン[ヘキサデカン酸、1,2,3-プロパントリオールとのジエステル];クエン酸二カリウム[クエン酸、二カリウム塩];クエン酸二ナトリウム[クエン酸、二ナトリウム塩];硫酸ナトリウム十水和物;珪藻土(1%未満の結晶性シリカ);ドデカン酸、1,2,3-プロパントリオールとのモノエステル;苦灰石;ダグラスファー樹皮;卵殻;卵;(+)-エチルラクテート[乳酸、エチルエステル、(S)];エチルラクテート[乳酸、エチルエステル];長石;魚粉;魚油(40 CFR 180.950に従わない);フーラー土;フマル酸;γ-シクロデキストリン;ゼラチン;ゲランガム;膠(脱重合動物性コラーゲンとして(as depolymd. animal collagen));グリセリン[1,2,3-プロパントリオール];モノオレイン酸グリセロール[9-オクタデセン酸(Z)-, 2,3-ジヒドロキシプロピルエステル];ジカプリル酸グリセリル[オクタン酸、1,2,3-プロパントリオールとのジエステル];ジミリスチン酸グリセリル[テトラデカン酸、1,2,3-プロパントリオールとのジエステル];ジオレイン酸グリセリル[9-オクタデセン酸(9Z)-、1,2,3-プロパントリオールとのジエステル];ジステアリン酸グリセリル;モノミリスチン酸グリセリル[テトラデカン酸、1,2,3-プロパントリオールとのモノエステル];モノオクタン酸グリセリル[オクタン酸、1,2,3-プロパントリオールとのモノエステル];モノオレイン酸グリセリル[9-オクタデセン酸(9Z)-、1,2,3-プロパントリオールとのモノエステル];モノステアリン酸グリセリル[オクタデカン酸、1,2,3-プロパントリオールとのモノエステル];ステアリン酸グリセリル[オクタデカン酸、1,2,3-プロパントリオールとのエステル];花崗岩;グラファイト;グアールガム;アラビアガム;トラガカントガム;石膏;赤鉄鉱(Fe);フミン酸;水素化綿実油;水素化菜種油;水素化ダイズ油;ヒドロキシエチルセルロース[セルロース、2-ヒドロキシエチルエーテル];ヒドロキシプロピルセルロース[セルロース、2-ヒドロキシプロピルエーテル];ヒドロキシプロピルメチルセルロース[セルロース、2-ヒドロキシプロピルメチルエーテル];酸化鉄マグネシウム(Iron magnesium oxide)(FeMgO);酸化鉄(Fe);酸化鉄(Fe);酸化鉄(Fe);酸化鉄(FeO);イソプロピルアルコール[2-プロパノール];ミリスチン酸イソプロピル;カオリン;ラクトース;ラクトース一水和物;ラノリン;ラテックスゴム;ラウリン酸;レシチン;甘草抽出物;ドロマイト石灰(化学的苦灰石)(Lime (chemical) dolomitic);石灰石;亜麻仁油;炭酸マグネシウム[炭酸、マグネシウム塩(1:1)];安息香酸マグネシウム;酸化マグネシウム;ケイ酸酸化マグネシウム(Magnesium oxide silicate)(MgO(Si)、一水和物;ケイ酸マグネシウム;ケイ酸マグネシウム水和物;酸化マグネシウムケイ素(Magnesium silicon oxide)(MgSi);ステアリン酸マグネシウム[オクタデカン酸、マグネシウム塩];硫酸マグネシウム;硫酸マグネシウム七水和物;リンゴ酸;麦芽抽出物;麦芽フレーバー;マルトデキストリン;メチルセルロース[セルロース、メチルエーテル];マイカ;マイカ群のミネラル;ミルク;N/A キビの種;鉱油(米国薬局方);1-モノラウリン[ドデカン酸、2,3-ジヒドロキシプロピルエステル];1-モノミリスチン[テトラデカン酸、2,3-ジヒドロキシプロピルエステル];モノミリスチン[デカン酸、1,2,3-プロパントリオールとのジエステル];モノパルミチン[ヘキサデカン酸、1,2,3-プロパントリオールとのモノエステル];クエン酸一カリウム[クエン酸、一カリウム塩];クエン酸一ナトリウム[クエン酸、一ナトリウム塩];モンモリロナイト;ミリスチン酸;霞石閃長岩;窒素;ヌートリアミート(Nutria meat);ナイロン;オクタン酸、カリウム塩;オクタン酸、ナトリウム塩;油、アーモンド;油、コムギ;オレイン酸;蛎殻;パーム油;パーム油、水素化;パルミチン酸[ヘキサデカン酸];パラフィンワックス;ピーナッツバター(Peanut butter);ラッカセイ殻;ラッカセイ;ピートモス;ペクチン;パーライト;パーライト、膨張;焼石膏;ポリエチレン;オレイン酸ポリグリセリル;ステアリン酸ポリグリセリル;酢酸カリウム[酢酸、カリウム塩];ケイ酸カリウムアルミニウム(Potassium aluminum silicate)、無水物;安息香酸カリウム[安息香酸、カリウム塩];炭酸水素カリウム[炭酸、一カリウム塩];塩化カリウム;クエン酸カリウム[クエン酸、カリウム塩];フミン酸カリウム[フミン酸、カリウム塩];ミリスチン酸カリウム[テトラデカン酸、カリウム塩];オレイン酸カリウム[9-オクタデセン酸(9Z)-、カリウム塩];リシノール酸カリウム[9-オクタデセン酸、12-ヒドロキシ、一カリウム塩、(9Z,12R)-];ソルビン酸カリウム[ソルビン酸、カリウム塩];ステアリン酸カリウム[オクタデカン酸、カリウム塩];硫酸カリウム;硫酸カリウム[硫酸、一カリウム塩];1,2-プロピレンカーボネート[1,3-ジオキソラン-2-オン、4-メチル-];軽石;紫キャベツ色素(Red cabbage color)(酸性化した水のみを使用する加圧プロセスを介して食用紫キャベツ頭花(red cabbage head)から絞り出される);レッドシダーチップ;質の悪い小麦粉(Red dog flour);ゴム;おがくず;頁岩;シリカ、無定形、フュームド(結晶性遊離);シリカ、無定形、沈殿およびゲル;シリカ(結晶性遊離);シリカゲル;シリカゲル、沈殿、結晶性-遊離;シリカ、水和物;シリカ、ガラス質;ケイ酸(HSiO)、マグネシウム塩(1:1);石鹸(脂肪および油の鹸化、または脂肪酸の中和のいずれかによって生産される脂肪酸の水溶性ナトリウムもしくはカリウム塩);セッケンボク[Quillaja saponin];ソープストーン;酢酸ナトリウム[酢酸、ナトリウム塩];アルギン酸ナトリウム;安息香酸ナトリウム[安息香酸、ナトリウム塩];炭酸水素ナトリウム;カルボキシメチルセルロースナトリウム[セルロース、カルボキシメチルエーテル、ナトリウム塩];塩化ナトリウム;クエン酸ナトリウム;フミン酸ナトリウム[フミン酸、ナトリウム塩];オレイン酸ナトリウム;リシノール酸ナトリウム[9-オクタデセン酸、12-ヒドロキシ-、一ナトリウム塩、(9Z,12R)-];ステアリン酸ナトリウム[オクタデカン酸、ナトリウム塩];硫酸ナトリウム;ソルビトール;[D-グルシトール];ダイズタンパク質;ダイズレシチン[レシチン、ダイズ];ダイズ外皮;ダイズあらびき粉;ダイズ、粉;ステアリン酸[オクタデカン酸];硫黄;シロップ、加水分解デンプン、水素化;モノオレイン酸テトラグリセリル[9-オクタデセン酸 (9Z)-、テトラグリセロールとのモノエステル];クエン酸三カルシウム[クエン酸、カルシウム塩(2:3)];クエン酸トリエチル[クエン酸、トリエチルエステル];クエン酸三カリウム[クエン酸、三カリウム塩];クエン酸三カリウム一水和物[クエン酸、三カリウム塩、一水和物];クエン酸三ナトリウム[クエン酸、三ナトリウム塩];クエン酸三ナトリウム二水和物(Trisodium citrate dehydrate)[クエン酸、三ナトリウム塩、二水和物];クエン酸三ナトリウム五水和物[クエン酸、三ナトリウム塩、五水和物];ウルトラマリンブルー[C.I. Pigment Blue 29];尿素;バニラ;バーミキュライト;酢(溶液中最大8% 酢酸);ビタミンC[L-アスコルビン酸];ビタミン;胡桃粉(Walnut flour);胡桃殻;コムギ;小麦粉;コムギ胚芽
油;ホエー;流動パラフィン(White mineral oil)(石油);ウインターグリーン油;珪灰石(Ca(SiO));ウール;キサンタンガム;酵母;ゼオライト(エリオナイトを除く(CAS登録番号66733-21-9));ゼオライト、NaA;酸化亜鉛鉄(Zinc iron oxide);酸化亜鉛(ZnO);およびステアリン酸亜鉛[オクタデカン酸、亜鉛塩]。
IV.使用法
本明細書で提供される細菌株もしくは改変された細菌株、その活性改変体、および/またはこれらに由来する組成物は、植物有害生物を制御するか、または目的の農学上の形質を改善するために、任意の植物種とともに使用され得る。目的の農学上の形質としては、植物の健康状態または商業的価値を改善する任意の形質が挙げられる。目的の農学上の形質の非限定的な例としては、以下が挙げられる:バイオマスの増大、旱魃耐性の増大、熱耐性、除草剤耐性、旱魃抵抗性、有害生物抵抗性(例えば、線虫抵抗性、昆虫抵抗性、真菌抵抗性、ウイルス抵抗性、細菌抵抗性)、雄性不稔性、低温耐性、塩耐性、増大した収量、増強された栄養素利用効率、増大した窒素利用効率、窒素ストレスへの増大した耐性、増大した発酵性炭水化物含有量、低減したリグニン含有量、増大した抗酸化物質含有量、増強された水利用効率、増大した生長力、増大した発芽効率、より速いもしくは増大した開花、増大したバイオマス、変化した根 対 苗条バイオマス比(root-to-shoot biomass ratio)、増強された土壌水分保持、またはこれらの組み合わせ。他の場合には、上記目的の農学上の形質としては、変化した油含有量、変化したタンパク質含有量、変化した種子炭水化物組成、変化した種子油組成、および変化した種子タンパク質組成、化学物質耐性、低温耐性、遅延した老化、病気抵抗性、旱魃耐性、穂重、生長改善、健康状態の増強、熱耐性、除草剤耐性、改善された窒素固定、改善された窒素利用、改善された根の構造、改善された水利用効率、増大したバイオマス、増大した根の長さ、増大した種子重量、増大した苗条の長さ、増大した収量、水を制限した条件下での増大した収量、穀粒の重量(kernel mass)、穀粒の水分含有量、金属耐性、穂の数、穂1本あたりの穀粒の数、莢の数、栄養増強、光合成能力改善、塩分耐性、青々したままでいる(stay-green)、生長力改善、成熟種子の増大した乾燥重量、成熟種子の増大した新鮮重量(increased fresh weight of mature seeds)、1植物体あたりの成熟種子の増大した数、増大したクロロフィル含有量、1植物体あたりの増大した莢の数、1植物体あたりの増大した莢の長さ、1植物体あたりのしおれた葉の低減した数、1植物体あたりのひどくしおれた葉の低減した数、および1植物体あたりのしおれていない葉の増大した数、代謝産物のレベルでの検出可能な調節、転写物のレベルでの検出可能な調節、または参照植物に対するプロテオームでの検出可能な調節。
1つの非限定的な実施形態において、本明細書で提供される細菌株、その活性改変体および/もしくはこれらに由来する組成物は、植物有害生物に感受性であるか、または植物有害生物によって引き起こされる植物の病気もしくは損傷を発生させるリスクにある任意の植物種とともに使用され得る。「有害生物抵抗性(pest resistance)」とは、本明細書で提供される細菌株、その活性改変体および/もしくはこれらに由来する組成物が、有害生物(例えば、昆虫有害生物)を阻害し得る(成長、摂食、生産力、または生存度を阻害し得る)、抑制し得る(成長、摂食、生産力、または生存度を抑制し得る)、低減し得る(特定の植物に対して、有害生物外寄生を低減し得る、有害生物摂食活動を低減し得る)、または死滅させ得る(疾病率、死滅率、または低減した生産力を引き起こし得る)ことが意図される。「有害生物に感受性である植物(a plant susceptible to a pest)」とは、有害生物が上記植物に感染し得るまたは損傷を与え得ることを意味する。例えば、有害生物に感受性である植物は、本明細書中の他の箇所で開示されるとおりの真菌、昆虫、または線虫有害生物によって引き起こされる損傷に感受性であり得る。
改変された生物防除因子は、任意の植物種(単子葉植物および双子葉植物が挙げられるが、これらに限定されない)とともに使用され得る。目的の植物種の例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない:トウモロコシ(Zea mays)、Brassica sp.(例えば、B.napus、B.rapa、B.juncea)、特に、種子油の供給源として有用なそれらBrassica種、アルファルファ(Medicago sativa)、コメ(Oryza sativa)、ライ(Secale cereale)、ソルガム(Sorghum bicolor、Sorghum vulgare)、雑穀(例えば、トウジンビエ(Pennisetum glaucum)、キビ(Panicum miliaceum)、アワ(Setaria italica)、シコクビエ(Eleusine coracana))、ヒマワリ(Helianthus annuus)、ベニバナ(Carthamus tinctorius)、コムギ(Triticum aestivum)、ダイズ(Glycine max)、タバコ(Nicotiana tabacum)、ジャガイモ(Solanum tuberosum)、ラッカセイ(Arachis hypogaea)、ワタ(Gossypium barbadense、Gossypium hirsutum)、サツマイモ(Ipomoea batatus)、キャッサバ(Manihot esculenta)、コーヒー(Coffea spp.)、ココヤシ(Cocos nucifera)、パイナップル(Ananas comosus)、柑橘類の木(Citrus spp.)、カカオ(Theobroma cacao)、チャ(Camellia sinensis)、バナナ(Musa spp.)、アボカド(Persea americana)、イチジク(Ficus casica)、グアバ(Psidium guajava)、マンゴー(Mangifera indica)、オリーブ(Olea europaea)、パパイヤ(Carica papaya)、ブドウ(Vitus spp.)、イチゴ(Fragaria x ananassa)、サクランボ(Prunus spp.)、リンゴ(Malus domestica)、オレンジ(Citrus × sinensis)、カシュー(Anacardium occidentale)、マカダミア(Macadamia integrifolia)、アーモンド(Prunus amygdalus)、テンサイ(Beta vulgaris)、サトウキビ(Saccharum spp.)、エンバク、オオムギ、野菜、観賞植物、および球果植物。
野菜としては、トマト(Lycopersicon esculentum)、レタス(例えば、Lactuca sativa)、サヤインゲン(Phaseolus vulgaris)、ライマメ(Phaseolus limensis)、エンドウ(Lathyrus spp.)、およびCucumis属のメンバー、例えば、キュウリ(C.sativus)、カンタロープ(C.cantalupensis)、およびマスクメロン(C.melo)が挙げられる。観賞植物としては、アザレア(Rhododendron spp.)、アジサイ(Macrophylla hydrangea)、ハイビスカス(hibiscus)(Hibiscus rosasanensis)、バラ(Rosa spp.)、チューリップ(Tulipa spp.)、スイセン(Narcissus spp.)、ペチュニア(Petunia hybrida)、カーネーション(Dianthus caryophyllus)、ポインセチア(Euphorbia pulcherrima)、およびキクが挙げられる。
本発明を実施するにあたって使用され得る球果植物としては、以下が挙げられる:例えば、マツ(例えば、テーダマツ(Pinus taeda)、スラッシュパイン(Pinus elliotii)、ポンデローサマツ(Pinus ponderosa)、ロッジポールパイン(Pinus contorta)、およびラジアータパイン(Pinus radiata));ベイマツ(Pseudotsuga menziesii);アメリカツガ(Tsuga canadensis);シトカスプルース(Picea glauca);セコイア(Sequoia sempervirens);モミ(true firs)(例えば、ヨーロッパモミ(Abies amabilis)およびバルサムモミ(Abies balsamea));ならびにシダー(例えば、ベイスギ(Thuja plicata)およびアラスカイエローシダー(Alaska yellow-cedar)(Chamaecyparis nootkatensis)。具体的実施形態において、本発明の植物は、農作物植物(例えば、トウモロコシ、アルファルファ、ヒマワリ、Brassica、ダイズ、ワタ、ベニバナ、ラッカセイ、ソルガム、コムギ、雑穀、タバコなど)である。他の実施形態において、トウモロコシおよびダイズ植物が最適であり、なお別の実施形態では、トウモロコシ植物が最適である。
他の目的の植物としては、目的の種子を提供する穀物植物、脂肪種子植物、およびマメ科植物が挙げられる。目的の種子としては、穀物種子(例えば、トウモロコシ、コムギ、オオムギ、イネ、ソルガム、ライなど)が挙げられる。脂肪種子植物としては、ワタ、ダイズ、ベニバナ、ヒマワリ、アブラナ属、トウモロコシ、アルファルファ、ヤシ、ココナツなどが挙げられる。マメ科植物としては、豆類(beans)、エンドウ、および乾燥豆類(dry pulses)が挙げられる。豆類としては、グアール、イナゴマメ、コロハ、ダイズ、ガーデンビーンズ(garden beans)、ササゲ、緑豆、リママメ、ソラマメ、レンズマメ、ヒヨコマメなどが挙げられる。
A.非限定的な植物有害生物
具体的実施形態において、本明細書で提供される細菌株は、1種もしくはこれより多くの植物有害生物を標的とするものである。用語「有害生物」としては、昆虫、真菌、細菌、線虫、ウイルスもしくはウイロイド、原生動物病原体などが挙げられるが、これらに限定されない。
具体的実施形態において、本明細書で提供される細菌株は、1種もしくはこれより多くの昆虫もしくは昆虫有害生物を標的とするものである。用語「昆虫」または「昆虫有害生物」とは、本明細書で使用される場合、昆虫および他の類似の有害生物に言及する。用語「昆虫」は、昆虫の卵、幼虫、幼若形態および成熟形態を包含する。昆虫は、任意の発生ステージにおいて標的とされ得る。例えば、昆虫は、一齢後に、二齢、三齢、四齢、五齢、または任意の他の発生ステージもしくは成体成長ステージの間に、標的とされ得る。本明細書で使用される場合、用語「齢(instar)」は、昆虫の幼虫形態または若虫形態の発生ステージを示すために使用される。昆虫有害生物としては、鞘翅目、鱗翅目、半翅目、双翅目、膜翅目、鱗翅目、食毛目、同翅目、半翅目、直翅目、総翅目、ケダニ亜目、革翅目、等翅目、シラミ目、ノミ目、毛翅目などから選択される昆虫が挙げられる。
鞘翅目の昆虫有害生物としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない:Agriotes spp.、Anthonomus spp.、Atomaria linearis、Chaetocnema tibialis、Cosmopolites spp.、Curculio spp.、Dermestes spp.、Epilachna spp.、Eremnus spp.、Leptinotarsa decemlineata、Lissorhoptrus spp.、Melolontha spp.、Orycaephilus spp.、Otiorhynchus spp.、Phlyctinus spp.、Popillia spp.、Psylliodes spp.、Rhizopertha spp.、Scarabeidae、Sitophilus spp.、Sitotroga spp.、Tenebrio spp.、Tribolium spp.、およびTrogoderma spp.。具体的実施形態において、甲虫類の昆虫としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない:ヒゲナガゾウムシ科、マメゾウムシ科、およびゾウムシ科(例えば、アリモドキゾウムシ(Cylas formicarius (Fabricius))、ワタノミゾウムシ(boll weevil)(Anthonomus grandis Boheman)、イネミズゾウムシ(Lissorhoptrus oryzophilus Kuschel)、コクゾウムシ(Sitophilus oryzae L.))のゾウムシ;ハムシ科におけるノミハムシ(flea beetle)、キューカンバービートル(cucumber beetle)、ルートワーム、ハムシ(leaf beetle)、ジャガイモノミハムシ(potato beetle)、およびリーフマイナー(leafminer)(例えば、コロラドハムシ(Leptinotarsa decemlineata Say)、Diabrotica spp(ウェスタンコーンルートワーム(Diabrotica virgifera virgifera LeConte)が挙げられる));コガネムシ科のコガネムシ類および他の甲虫(例えば、マメコガネ(Popillia japonica Newman)およびヨーロッパコガネムシ(European chafer)(Rhizotrogus majalis Razoumowsky));コメツキムシ科のコメツキムシの幼虫およびキクイムシ科のキクイムシ。
本明細書で開示されるように、昆虫有害生物としては、コーンルートワーム複合体(corn rootworm complex)の鞘翅目有害生物: ウェスタンコーンルートワーム、Diabrotica virgifera virgifera;ノーザンコーンルートワーム、D. barberi;サザンコーンルートワームまたはジュウイチホシウリハムシ、Diabrotica undecimpunctata howardi;およびメキシココーンルートワーム、D.virgifera zeaeが挙げられる。具体的実施形態において、上記昆虫有害生物は、ウェスタンコーンルートワーム、Diabrotica virgifera virgiferaである。
本明細書で開示される組成物および方法で制御され得る昆虫有害生物としては、鱗翅目の昆虫、例えば、以下がさらに挙げられる:Achoroia grisella、Acleris gloverana、Acleris variana、Adoxophyes orana、Agrotis ipsilon、Alabama argillacea、Alsophila pometaria、Amyelois transitella、Anagasta kuehniella、Anarsia lineatella、Anisota senatoria、Antheraea pernyi、Anticarsia gemmatalis、Archips spp.、Argyrotaenia spp.、Athetis mindara、Bombyx mori、Bucculatrix thurberiella、Cadra cautella、Choristoneura sp.、Cochylls hospes、Colias eurytheme、Corcyra cephalonica、Cydia latiferreanus、Cydia pomonella、Datana integerrima、Dendrolimus sibericus、Desmiafeneralis spp.、Diaphania hyalinata、Diaphania nitidalis、Diatraea grandiosella、Diatraea saccharalis、Ennomos subsignaria、Eoreuma loftini、Esphestia elutella、Erannis tilaria、Estigmene acrea、Eulia salubricola、Eupocoellia ambiguella、Eupoecilia ambiguella、Euproctis chrysorrhoea、Euxoa messoria、Galleria mellonella、Grapholita molesta、Harrisina americana、Helicoverpa subflexa、Helicoverpa zea、Heliothis virescens、Hemileuca oliviae、Homoeosoma electellum、Hyphantia cunea、Keiferia lycopersicella、Lambdina fiscellaria fiscellaria、Lambdina fiscellaria lugubrosa、Leucoma salicis、Lobesia botrana、Loxostege sticticalis、Lymantria dispar、Macalla thyrisalis、Malacosoma spp.、Mamestra brassicae、Mamestra configurata、Manduca quinquemaculata、Manduca sexta、Maruca testulalis、Melanchra picta、Operophtera brumata、Orgyia spp.、Ostrinia nubilalis、Paleacrita vernata、Papilio cresphontes、Pectinophora gossypiella、Phryganidia californica、Phyllonorycter blancardella、Pieris napi、Pieris rapae、Plathypena scabra、Platynota flouendana、Platynota stultana、Platyptilia carduidactyla、Plodia interpunctella、Plutella xylostella、Pontia protodice、Pseudaletia unipuncta、Pseudoplasia includens、Sabulodes aegrotata、Schizura concinna、Sitotroga cerealella、Spilonta ocellana、Spodoptera spp.、Thaurnstopoea pityocampa、Tinsola bisselliella、Trichoplusia hi、Tuta absoluta、Udea rubigalis、Xylomyges curiails、およびYponomeuta padella。
本明細書で提供される方法および組成物はまた、Lygus spp.(Lygus hesperus、Lygus lineolaris、Lygus pratensis、Lygus rugulipennis、およびLygus pabulinusが挙げられる)、Calocoris norvegicus、Orthops compestris、Plesiocoris rugicollis、Cyrtopeltis modestus、Cyrtopeltis notatus、Spanagonicus albofasciatus、Diaphnocoris chlorinonis、Labopidicola allii、Pseudatomoscelis seriatus、Adelphocoris rapidus、Poecilocapsus lineatus、Blissus leucopterus、Nysius spp.(Nysius ericaeおよびNysius raphanusが挙げられる)、Nezara viridula、Acrosternum hilare、Euschistus spp.(Euschistus servusおよびEuschistus herosが挙げられる)、Dichelops spp.(Dichelops melacantusおよびDichelops furcatusが挙げられる)、Halyomorpha halys、Lipaphis erysimi、Aphis gossypii、Macrosiphum avenae、Myzus persicae、Acyrthosiphon pisum、Aphidoidea spp、Eurygaster spp.、Coreidae spp.、Pyrrhocoridae spp.、Blostomatidae spp.、Reduviidae spp.、Cimicidae spp. Aleurocanthus woglumi、Aleyrodes proletella、Bemisia spp.(Bemisia argentifoliiおよびBemisia tabaciが挙げられる)、およびTrialeurodes vaporariorumが挙げられるが、これらに限定されない半翅目の昆虫有害生物に対して使用され得る。
本明細書で提供される方法および組成物はまた、アザミウマの種(Frankliniella spp.、例えば、ミカンキイロアザミウマ(Frankliniella occidentalis (Pergande));Thrips spp.、例えば、Thrips tabaci;Scirtothrips spp.、例えば、Scirtothrips dorsalis; Klambothrips spp.、例えば、Klambothrips myopori;Echinothrips spp.、例えば、Echinothrips americanus;およびMegalurothrips spp.、例えば、Megalurothrips usitatusが挙げられる)が挙げられるが、これらに限定されないThysenoptera目の昆虫有害生物に対して使用され得る。
本明細書で提供される方法および組成物はまた、植物摂食ダニ(plant feeding mite)(ナミハダニ(six-spooted spider mite)(Eutetranychus sexmaculatus)、テキサスミカンダニ(Texas citrus mite)(Eutetranychus banksi)、ミカンハダニ(Citrus red mite)(Panonychus citri)、リンゴハダニ(Panonychus ulmi)、マクダニエルダニ(McDaniel mite)(Tetranychus mcdanieli)、パシフィックハダニ(Pacific spider mite)(Tetranychus pacificus)、イチゴハダニ(Strawberry spider mite)(Tetranychus urticae)、トドマツノハダニ(Oligonychus ununguis)、スギノハダニ(Oligonychus nondonensisi)、およびTetranychus evansiが挙げられる)が挙げられるが、これらに限定されないケダニ亜目の昆虫有害生物に対して使用され得る。
目的の昆虫有害生物としてはまた、以下が挙げられる:Araecerus fasciculatus、ワタミヒゲナガゾウムシ;Acanthoscelides obtectus、マメゾウムシ;Bruchus rufmanus、ソラマメゾウムシ;Bruchus pisorum、エンドウゾウムシ;Zabrotes subfasciatus、メキシコマメゾウムシ;Diabrotica balteata、バンデッドキューカンバービートル(banded cucumber beetle);Cerotoma trifurcata、ヒメキバネサルハムシ;Diabrotica virgifera、メキシココーンルートワーム;Epitrix cucumeris、ジャガイモノミハムシ(potato flea beetle);Chaetocnema confinis、サツマイモノミハムシ(sweet potato flea beetle);Hypera postica、アルファルファゾウムシ;Anthonomus quadrigibbusリンゴシギゾウムシ(apple curculio);Sternechus paludatus、マメクキゾウムシ(bean stalk weevil);Hypera brunnipennis、エジプトアルファルファゾウムシ(Egyptian alfalfa weevil);Sitophilus granaries、グラナリアコクゾウムシ(granary weevil);Craponius inaequalis、ブドウシギゾウムシ(grape curculio);Sitophilus zeamais、コクゾウムシ;Conotrachelus nenuphar、プラムシギゾウムシ(plum curculio);Euscepes postfaciatus、イモゾウムシ;Maladera castanea、アカビロウドコガネ;Rhizotrogus majalis、ヨーロッパコガネムシ;Macrodactylus subspinosus、コフキコガネムシ(rose chafer);Tribolium confusum、ヒラタコクヌストモドキ;Tenebrio obscurus、コメノゴミムシダマシ;Tribolium castaneum、コクヌストモドキ;Tenebrio molitor、チャイロコメノゴミムシダマシならびにショウジョウバエ科(Drosophila suzukii、オウトウショウジョウバエを含む)。
昆虫有害生物はまた、双翅目、膜翅目、食毛目、同翅目、半翅目、直翅目、総翅目、革翅目、等翅目、シラミ目、ノミ目、および毛翅目から選択される昆虫を含む。本発明の昆虫有害生物は、ダニ目のもの(ダニ類(mite)およびマダニ類(tick)が挙げられるが、これらに限定されない)をさらに含み得る。具体的実施形態において、甲虫有害生物としては、ウェスタンコーンルートワーム、コロラドハムシ、および/またはアリモドキゾウムシが挙げられる。
主要作物に関する本発明の組成物および方法で制御され得る昆虫有害生物としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない:トウモロコシ:Ostrinia nubilalis、ヨーロッパアワノメイガ;Agrotis ipsilon、タマナヤガ;Helicoverpa zeae、アメリカタバコガ;Spodoptera frugiperda、ツマジロクサヨトウ;Diatraea grandiosella、南西部アワノメイガ(southwestern corn borer);Elasmopalpus lignosellus、モロコシマダラメイガ(lesser cornstalk borer);Diatraea saccharalis、サトウキビメイガ(surgarcane borer);ウェスタンコーンルートワーム、例えば、Diabrotica virgifera virgifera;ノーザンコーンルートワーム、例えば、Diabrotica longicornis barberi;サザンコーンルートワーム、例えば、Diabrotica undecimpunctata howardi;Melanotus spp.、コメツキムシの幼虫;Cyclocephala borealis、ノーザンコガネカブト(northern masked chafer)(コガネムシ類の幼虫);Cyclocephala immaculata、サザンコガネカブト(コガネムシ類の幼虫);Popillia japonica、マメコガネ;Chaetocnema pulicaria、ノミハムシ;Sphenophorus maidis、トウモロコシゾウムシ(maize billbug);Rhopalosiphum maidis、トウモロコシアブラムシ;Anuraphis maidiradicis、コーンルートアブラムシ(corn root aphid);Myzus persicae、モモアカアブラムシ;Nezara viridula、ミナミアオカメムシ;Blissus leucopterus leucopterus、アメリカコバネナガカメムシ;Melanoplus femurrubrum、レッドレッグドグラスホッパー(redlegged grasshopper);Melanoplus sanguinipes、渡りグラスホッパー(migratory grasshopper);Hylemya platura、タネバエ;Agromyza parvicornis、コーンブロッチリーフマイナー(corn blotch leafminer);Anaphothrips obscrurus、グラススリップス(grass thrips);Solenopsis milesta、盗賊アリ(thief ant);Tetranychus urticae、ナミハダニ・黄緑型(two spotted spider mite);ソルガム:Chilo partellus、ソルガムメイガ(sorghum borer);Spodoptera frugiperda、ツマジロクサヨトウ;Helicoverpa zea、アメリカタバコガ;Elasmopalpus lignosellus、モロコシマダラメイガ;Feltia subterranea、グラニュレートカットワーム(granulate cutworm);Phyllophaga crinita、コガネムシ類の幼虫;Eleodes、Conoderus、およびAeolus spp.、コメツキムシの幼虫;Oulema melanopus、シリアルリーフビートル(cereal leaf beetle);Chaetocnema pulicaria、ノミハムシ;Sphenophorus maidis、トウモロコシゾウムシ;Rhopalosiphum maidis;トウモロコシアブラムシ;Sipha flava、黄色サトウキビアブラムシ(yellow sugarcane aphid);アメリカコバネナガカメムシ、例えば、Blissus leucopterus leucopterus;Contarinia sorghicola、ソルガムミッジ(sorghum midge);Tetranychus cinnabarinus、ナミハダニ・赤色型(carmine spider mite);Tetranychus urticae、ナミハダニ・黄緑型;コムギ:Pseudaletia unipunctata、アーミーワーム(army worm);Spodoptera frugiperda、ツマジロクサヨトウ;Elasmopalpus lignosellus、モロコシマダラメイガ;Agrotis orthogonia、ペールウェスタンカットワーム(pale western cutworm);Elasmopalpus lignosellus、モロコシマダラメイガ;Oulema melanopus、シリアルリーフビートル;Hypera punctata、オオタコクゾウムシ(clover leaf weevil);サザンコーンルートワーム、例えば、Diabrotica undecimpunctata howardi;ロシアコムギアブラムシ(Russian wheat aphid);Schizaphis graminum、グリーンバグ(greenbug);Macrosiphum avenae、コムギアブラムシ(English grain aphid);Melanoplus femurrubrum、レッドレッグドグラスホッパー;Melanoplus differentialis、ディファレンシャルグラスホッパー(differential grasshopper);Melanoplus sanguinipes、渡りグラスホッパー;Mayetiola destructor、ヘシアンバエ;Sitodiplosis mosellana、ムギアカタマバエ;Meromyza americana、ムギキモグリバエ;Hylemya coarctata、コムギハナアブ(wheat bulb fly);Frankliniella fusca、ウスグロアザミウマ;Cephus cinctus、コムギクキバチ(wheat stem sawfly);Aceria tulipae、チューリップサビダニ;ヒマワリ:Cylindrocupturus adspersus、ヒマワリクキゾウムシ(sunflower stem weevil);Smicronyx fulus、赤ヒマワリクキゾウムシ(red sunflower seed weevil);Smicronyx sordidus、灰色ヒマワリ種子ゾウムシ(gray sunflower seed weevil);Suleima helianthana、ヒマワリハマキガ(sunflower bud moth);Homoeosoma electellum、ヒマワリガ(sunflower moth);Zygogramma exclamationis、ヒマワリ甲虫(sunflower beetle);Bothyrus gibbosus、キャロットビートル(carrot beetle);Neolasioptera murtfeldtiana、サンフラワーシードミッジ(sunflower seed midge);ワタ:Heliothis virescens、ニセアメリカタバコガ(tobacco budworm);Helicoverpa zea、アメリカタバコガ(cotton bollworm);Spodoptera exigua、シロイチモジヨトウ;Pectinophora gossypiella、ピンクボールワーム(pink bollworm);ワタノミゾウムシ、例えば、Anthonomus grandis;Aphis gossypii、ワタアブラムシ;Pseudatomoscelis seriatus、ワタノミハムシ(cotton fleahopper);Trialeurodes abutilonea、バンデッドウイングドホワイトフライ(banded winged whitefly);Lygus lineolaris、サビイロカスミカメ;Melanoplus femurrubrum、レッドレッグドグラスホッパー;Melanoplus differentialis、ディファレンシャルグラスホッパー;Thrips tabaci、ネギアザミウマ;Frankliniella fusca、ウスグロアザミウマ;Tetranychus cinnabarinus、ナミハダニ・赤色型;Tetranychus urticae、ナミハダニ・黄緑型;イネ:Diatraea saccharalis、サトウキビメイガ;Spodoptera frugiperda、ツマジロクサヨトウ;Helicoverpa zea、アメリカタバコガ;Colaspis brunnea、ブドウハムシ(grape colaspis);Lissorhoptrus oryzophilus、イネミズゾウムシ;Sitophilus oryzae、コクゾウムシ;Nephotettix nigropictus、ツマグロヨコバイ(rice leafhopper);アメリカコバネナガカメムシ、例えば、Blissus leucopterus leucopterus;Acrosternum hilare、ミドリカメムシ(green stink bug);ダイズ:Pseudoplusia includens、ダイズシャクトリムシ(soybean looper);Anticarsia gemmatalis、ハッショウマメキャタピラー(velvetbean caterpillar);Plathypena scabra、グリーンクローバーアオムシ(green cloverworm);Ostrinia nubilalis、ヨーロッパアワノメイガ;Agrotis ipsilon、タマナヤガ;Spodoptera exigua、シロイチモジヨトウ;Heliothis virescens、ニセアメリカタバコガ;Helicoverpa zea、アメリカタバコガ;Epilachna varivestis、インゲンテントウ;Myzus persicae、モモアカアブラムシ;Empoasca fabae、ジャガイモヒメヨコバイ;Acrosternum hilare、ミドリカメムシ;Melanoplus femurrubrum、レッドレッグドグラスホッパー;Melanoplus differentialis、ディファレンシャルグラスホッパー;Hylemya platura、タネバエ;Sericothrips variabilis、ダイズアザミウマ;Thrips tabaci、ネギアザミウマ;Tetranychus turkestani、イチゴハダニ;Tetranychus urticae、ナミハダニ・黄緑型;オオムギ:Ostrinia nubilalis、ヨーロッパアワノメイガ;Agrotis ipsilon、タマナヤガ;Schizaphis graminum、グリーンバグ;アメリカコバネナガカメムシ、例えば、Blissus leucopterus leucopterus;Acrosternum hilare、ミドリカメムシ;Euschistus servus、クサギカメムシ;Jylemya platura、タネバエ;Mayetiola destructor、ヘシアンバエ;Petrobia latens、ホモノハダニ;アブラナ:Vrevicoryne brassicae、ダイコンアブラムシ;Phyllotreta cruciferae、アブラナノミハムシ(crucifer flea beetle);Phyllotreta striolata、キスジノミハムシ;Phyllotreta nemorum、カブスジノミハムシ(striped turnip flea beetle);Meligethes aeneus、菜種
甲虫(rapeseed beetle);およびチビケシキスイ(pollen beetles)、Meligethes rufimanus、Meligethes nigrescens、Meligethes canadianus、およびMeligethes viridescens;ジャガイモ:Leptinotarsa decemlineata、コロラドハムシ;サツマイモ:Spartocera batatas、ジャイアントスイートポテトバグ(giant sweet potato bug);Charidotella(=Metriona) bicolor、ゴールデントータスビートル(golden tortoise beetle);Cylas formicarius、アリモドキゾウムシ;Cylas puncticollis、アリモドキゾウムシ;Cylas brunneus、アリモドキゾウムシ、Naupactus(=Graphognathus) spp.、シロヘリクチブトゾウムシ(whitefringed beetle);Conoderus rudis、コメツキムシの幼虫;Conoderus scissus、ラッカセイコメツキムシ(peanut wireworm);Blosyrus spp.、イモゾウムシ(rough sweet potato weevil);Acraea acerata、スイートポテトバタフライ(sweet potato butterfly);Agrius convolvuli、エビガラスズメ;Spodoptera exigua、アーミーワーム;Spodoptera eridania、アーミーワーム;Synanthedon spp.、スカシバ(clearwing moth);ケダニ(Hairiness mite)およびフシダニ(eriophyid mite);Euscepes postfasciatus,イモゾウムシ;Peloropus batatae、Peloropusゾウムシ(Peloropus weevil);Omphisia anastomasalis、サツマイモノメイガ、およびコガネムシ類の幼虫-オサムシ科昆虫(scarabid beetle)の種々の種の幼虫。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供される組成物および方法は、線虫植物有害生物を制御する。線虫としては、以下を含む、寄生性線虫(例えば、ネコブセンチュウ、シストセンチュウ、およびネグサレセンチュウ(lesion nematodes):サツマイモネコブセンチュウ(Meloidogyne incognita)、ジャワネコブセンチュウ(Meloidogyne javanica)、キタネコブセンチュウ(Meloidogyne hapla)およびアレナリアネコブセンチュウ(Meloidogyne arenaria)のようなMeloidogyne種の線虫;Ditylenchus destructorおよびDitylenchus dipsaciのようなDitylenchus種の線虫;キタネグサレセンチュウ(Pratylenchus penetrans)、キクネグサレセンチュウ(Pratylenchus fallax)、Pratylenchus coffeae、Pratylenchus loosiおよびクルミネグサレセンチュウ(Pratylenchus vulnus)のようなPratylenchus種の線虫;Globodera rostochiensisおよびGlobodera pallidaのようなGlobodera種の線虫;Heterodera glycines(ダイズシストセンチュウ);Heterodera schachtii(テンサイシストセンチュウ);Heterodera avenae(ムギシストセンチュウ)のようなHeterodera種の線虫;イネシンガレセンチュウ(Aphelenchoides besseyi)、Aphelenchoides ritzemabosiおよびAphelenchoides fragariaeのようなAphelenchoides種の線虫;Aphelenchus avenaeのようなAphelenchus種の線虫;バナナネモグリセンチュウ(Radopholus similis)のようなRadopholus種の線虫;Tylenchulus semipenetransのようなTylenchulus種の線虫;Rotylenchulus reniformisのようなRotylenchulus種の線虫;Bursaphelenchus xylophilusおよびレッドリングセンチュウ(Red Ring Nematode)(Bursaphelenchus cocophilus)などのような木の中で生活するセンチュウ、ならびにGlobodera spp.;特に、シストセンチュウのメンバー(Globodera rostochiensisおよびGlobodera pailida(ジャガイモシストセンチュウ)が挙げられるが、これらに限定されない);ラセンセンチュウ(Spiral)(Helicotylenchus spp.);バナナネモグリセンチュウ(Burrowing)(Radopholus similis);ナミクキセンチュウ(Ditylenchus dipsaci);ニセフクロセンチュウ(Rotylenchulus reniformis);オオハリセンチュウ(Dagger)(Xiphinema spp.);花芽および葉センチュウ(Bud and leaf)(Aphelenchoides spp.);ならびにマツノザイセンチュウ(Bursaphelenchus xylophilus)が挙げられる。ネグサレセンチュウとしては、Pratylenchus spp.が挙げられる。用語「線虫」とは、卵、幼虫、幼若形態および成熟形態の線虫を包含する。
細菌株もしくはその活性改変体および/またはこれらに由来する組成物は、有害生物に対して、任意の発生ステージ(発生初期段階を含む)に、例えば、幼虫もしくは他の未成熟形態として、農薬活性に関して試験され得る。例えば、昆虫有害生物の幼虫は、約20℃~約30℃および約30%~約70%の相対湿度において、完全に遮光して飼育され得る。バイオアッセイは、Czapla and Lang (1990) J. Econ. Entomol. 83 (6): 2480-2485に記載されるとおりに行われ得る。昆虫の幼虫を飼育し、バイオアッセイを行うための方法は、当業者に周知である。
具体的実施形態において、本明細書で提供される細菌株は、1種もしくはこれより多くの昆虫または昆虫有害生物を標的とするものである。例えば、本明細書で提供される種々の細菌株は、植物に損傷を引き起こす1種もしくはこれより多くの昆虫有害生物を標的とする。例えば、本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体のうちのいずれかは、1種、2種、3種、4種、5種、またはこれより多くの本明細書で記載される昆虫有害生物に対して殺昆虫活性を有し得る。
具体的実施形態において、細菌株AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体の細胞、または胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせは、昆虫または線虫有害生物を制御する。従って、いくつかの実施形態において、本明細書で開示される植物有害生物は、鞘翅目の昆虫有害生物である。例えば、細菌株AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体の細胞、または胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせは、コーンルートワーム、コロラドハムシ、およびゾウムシを制御し得る。具体的実施形態において、細菌株AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体の細胞は、ウェスタンコーンルートワーム、コロラドハムシ、および/またはアリモドキゾウムシに対して活性を有し得る。特定の実施形態において、AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体は、ネコブセンチュウおよびミナミアオカメムシに対して活性を有し得る。
本明細書で開示される方法および組成物は、1種もしくはこれより多くの細菌病原体を制御するために使用され得る。細菌病原体は、Erwinia spp.(例えば、Erwinia amylovora)、Pseudomonas spp.(例えば、Pseudomonas syringae pv. phaseolicola)、Ralstonia spp.(例えば、Ralstonia solanacearum)、Xanthomonas spp.(例えば、Xanthomonas vesicatoria)、およびStreptomyces spp.(例えば、Streptomyces scabies)からなる群より選択される細菌種であり得るが、これらに限定されない。本明細書で開示される方法および組成物はまた、Salmonella spp.(例えば、Salmonella enterica)および/またはEscherichia spp.(例えば、Escherichia coli)を制御するために使用され得る。
本明細書で開示される方法および組成物は、1種もしくはこれより多くの真菌有害生物を制御するために使用され得る。真菌有害生物、以下からなる群より選択される真菌であり得るが、これらに限定されない:Aspergillus spp.、Botrytis spp.、Botrytis cinerea、Cersospora spp.、Cercospora sojina、Cercospora beticola、Alternaria spp.、Alternaria solani、Rhizoctonia spp.、Rhizoctonia solani、Blumeria graminis f. sp. Tritici、Erysiphe necator、Podosphaera xanthii、Golovinomyces cichoracearum、Erysiphe lagerstroemiae、Sphaerotheca pannosa、Colletotrichum cereale、Apiognomonia errabunda、Apiognomonia veneta、Colletotrichum spp、Colletotrichum gloeosporiodes、Discula fraxinea、Mycosphaerella spp.、Phomopsis spp.、Plasmopara viticola、Pseudoperonospora cubensis、Peronospora belbahrii、Bremia lactucae、Peronospora lamii、Plasmopara obduscens、Pythium spp.、Pythium cryptoirregulare、Pythium aphanidermatum、Pythium irregulare、Pythium sylvaticum、Pythium myriotylum、Pythium ultimum、Phytophthora spp.、Phytophthora capsici、Phytophthora nicotianae、Phytophthora infestans、Phytophthora tropicalis、Phytophthora sojae、Fusarium spp.、Fusarium graminearum、Fusarium solani、Fusarium oxysporum、Fusarium graminicola、Fusarium virguliforme、Gibberella zeae、Colletotrichum graminicola、Penicillium spp.、Phakopsora spp.、Phakopsora meibomiae、Phakopsora pachyrizi、Puccinia triticina、Puccinia recondita、Puccinia striiformis、Puccinia graminis、Puccinia spp.、Sclerotium spp.、Sclerotinia spp.、Venturia inaequalis、Verticillium spp.、Erwinia amylovora、Monilinia spp.、Monilinia fructicola、Monilinia lax、およびMonilinia fructigena。
いくつかの実施形態において、上記真菌有害生物は、Botrytis cinerea、Cercospora sojina、Alternaria solani、Rhizoctonia solani、Erysiphe necator、Podosphaera xanthii、Colletotrichum cereale、Plasmopara viticola、Peronospora belbahrii、Pythium aphanidermatum、Pythium sylvaticum、Pythium myriotylum、Pythium ultimum、Phytophthora nicotianae、Phytophthora infestans、Phytophthora tropicalis、Phytophthora sojae、Fusarium graminearum、Fusarium solani、Phakopsora pachyrizi、およびVenturia inaequalisからなる群より選択される。
さらなる実施形態において、上記真菌病原体は、Phakopsora sp.(Phakopsora pachyrhiziおよび/またはPhakopsora meibomiaeを含む)である。
真菌有害生物によって引き起こされる真菌の植物状態および病気の例としては、アジア型ダイズさび病(ASR)、灰色カビ病、斑点病、ダイズ斑点病、夏疫病、立ち枯れ病(Damping off complex)、ブラウンパッチ、黒あざ病、根腐れ、ベリーロット(belly rot)、紋枯れ病、うどんこ病、炭疽病(Anthracnose leaf spot)、ベト病、ピシウム病、疫病(Late Blight)、赤カビ病(Fusarium Head Blight)、急性枯死症(SDS)、萎凋病(Fusarium Wilt)、腰折れ病(Corn Stalk Rot)、赤さび病、黒さび病、黄さび病、コムギさび病(Wheat Rust)、さび病、リンゴ黒星病、バーティシリウム萎凋病、火傷病、および灰星病が挙げられるが、これらに限定されない。
B.植物有害生物を制御する方法、および植物の病気を処理または防止する方法
植物有害生物を制御するための方法が、本明細書で提供され、上記方法は、有効量の、少なくとも1種の本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体、および/またはこれらに由来する組成物を植物に適用する工程であって、ここで上記細菌株および/またはこれらに由来する組成物は、上記植物有害生物(例えば、昆虫または線虫有害生物)を制御する工程を包含する。植物有害生物に対する感受性を低減する、および/または植物有害生物への抵抗性を増大させる方法がまた、本明細書で提供され、上記方法は、植物有害生物、植物有害生物によって引き起こされる植物の病気もしくは損傷を有するか、または植物有害生物によって引き起こされる植物の病気もしくは損傷を発生させるリスクにある植物に、有効量の、少なくとも1種の本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体、および/またはこれらに由来する組成物を適用する工程であって、ここで上記細菌株および/またはこれらに由来する組成物は、上記植物有害生物を制御する工程を包含する。植物の病気または損傷を処理または防止する方法が、本明細書で提供され、上記方法は、植物の病気もしくは損傷を有するか、または植物の病気もしくは損傷を発生させるリスクにある植物に、有効量の、少なくとも1種の本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体、および/またはこれらに由来する組成物を適用する工程であって、ここで上記細菌株および/またはこれらに由来する組成物は、上記植物の病気もしくは損傷を引き起こす植物有害生物を制御する工程を包含する。特定の実施形態において、上記植物の損傷は、昆虫有害生物(例えば、甲虫類有害生物)によって引き起こされる。ある特定の実施形態において、本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体は、AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つの細胞;あるいはAIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちのいずれか1つに由来する、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせを含み得る。いくつかの実施形態において、上記細菌株もしくはその活性改変体の有効量は、少なくとも約1012~1016 CFU/ヘクタールまたは少なくとも約10~1016 CFU/ヘクタール、または少なくとも約10~1011 CFU/ヘクタールを含む。いくつかの実施形態において、上記組成物は、AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つの細胞;あるいはAIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちのいずれか1つに由来する、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせを含み得る、本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体に由来する。
本明細書で提供される細菌株、その活性改変体、またはこれらに由来する組成物のうちのいずれかは、本明細書で記載される1種、2種、3種、4種、5種、もしくはこれより多くの植物有害生物を制御し得る。いくつかの方法において、上記細菌株は、1種、2種、3種、4種、5種、もしくはこれより多くの昆虫有害生物(例えば、甲虫類有害生物)を制御する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体のうちのいずれかは、昆虫有害生物および他の植物有害生物(真菌、ウイルスもしくはウイロイド、細菌、昆虫、線虫、および原生動物有害生物を含む)の組み合わせに対して活性を有し得る。本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体は、目的の植物有害生物に対して感受性である任意の植物種とともに使用され得る。
例示的な植物有害生物によって引き起こされる病気の例は、表1に提供される。上記有害生物によって引き起こされる植物の病気に感受性である非限定的な例示的作物種もまた、提供される。例えば、表1は、Bortrytis cinereaが、全ての開花作物に対して灰色カビ病を引き起こすことを示す。従って、Bortrytis cinereaを制御する、本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体は、植物における灰色カビ病を処理または防止するために、灰色カビ病を有するかまたは灰色カビ病を発生させるリスクのある植物に適用され得る。同様に、表1は、Rhizoctonia solaniが、トウモロコシにおいて立ち枯れ病を、ダイズにおいて立ち枯れ病を、芝においてブラウンパッチを、および観賞植物において立ち枯れ病を引き起こすことを示す。従って、Rhizoctonia solaniを制御する本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体は、植物において立ち枯れ病および/もしくはブラウンパッチを処理または防止するために、立ち枯れ病および/もしくはブラウンパッチを有するか、または立ち枯れ病および/もしくはブラウンパッチを発生させるリスクのある植物に適用され得る。さらに別の例において、表1は、Colletotrichum cereale、Apiognomonia errabunda、Apiognomonia veneta、Colletotrichum gloeosporiodes、Discula fraxineaが炭疽病を引き起こすことを示す。従って、Colletotrichum cereale、Apiognomonia errabunda、Apiognomonia veneta、Colletotrichum gloeosporiodes、Discula fraxineaのうちの1種もしくはこれより多くを制御する本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体は、植物において、炭疽病を処理または防止するために、炭疽病を有するかまたは炭疽病を有するリスクのある植物に適用され得る。
表1
Figure 2022509508000001
Figure 2022509508000002
Figure 2022509508000003
具体的実施形態において、本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体は、1種もしくはこれより多くの線虫有害生物を制御する。例えば、上記細菌株もしくはその活性改変体は、ネコブセンチュウ(Meloidogyne spp.)を制御または処理し得る。植物寄生性線虫は、植物の根、茎、葉および花を攻撃し得る。全ての植物寄生性線虫は、口針といわれる穿刺用口器を有する。口針の存在は、植物寄生性線虫を全ての他のタイプの線虫から区別する重要な診断上のしるしである。線虫の攻撃を示す代表的な根の症状は、根瘤または虫こぶ、根腐れ、過剰な根の分枝、傷害された根端および発育が妨げられた根系である。根の感染を示す地上の植物部分に関する症状は、植物全体の緩慢な衰弱、十分な土壌水分があるにもかかわらずしおれる、葉の黄変および葉が少なく小さくなる、である。これらは、実際に、適切に機能している根系が奪われた植物において出現する症状である。クキセンチュウは、茎の腫脹および節間の短縮化を生じる。花芽および葉センチュウ(Bud and leaf nematodes)は、花芽および葉組織をゆがめ、死滅させる。SCNに伴うようないくつかの場合には、目に見える症状なしに、収量喪失が起こり得る。
用語「処理する(treat)」または「処理すること(treating)」またはその派生語は、ある状態の進行を実質的に阻害するか、遅らせるかまたは逆転させる(reverse)こと、ある状態の症状を実質的に改善すること、あるいは植物の病気を引きおこす、昆虫有害生物、または病原体もしくは有害生物によってもたらされる症状もしくは状態の出現を実質的に防止することを包含する。
用語植物有害生物を「制御すること(controlling)」とは、植物有害生物の成長、摂食、生産力、生殖、および/もしくは増殖を阻害するかもしくは低減する;または植物有害生物を死滅させる(例えば、疾病率もしくは死滅率、または生産力の低減の原因となる)、のうちの1もしくはこれより多くをいう。よって、本明細書で提供される細菌株および/またはこれらに由来する組成物で処理した植物は、統計的に有意な量が低減した有害生物の外寄生、または有害生物によって引き起こされる低減した損傷を示し得る。特定の実施形態において、有害生物から植物を「制御する」および「防御する(protecting)」とは、有害生物の成長、発芽、生殖、および/もしくは増殖を阻害するかまたは低減する;ならびに/または有害生物を死滅させる、除去する、破壊する、もしくは別の方法で有害生物の存在および/もしくは活性を減少させる、のうちの1もしくはこれより多くをいう。よって、本明細書で提供される細菌株および/またはこれらに由来する組成物で処理した植物は、統計的に有意な量で、植物有害生物の存在下で低減した病気もしくは損傷の重篤度または低減した病気もしくは損傷の発生を示し得る。
用語「防止する」およびそのバリエーションは、細菌、真菌、ウイルス、昆虫もしくは他の有害生物の成長、増殖、外寄生、胞子発芽、および菌糸成長に先だって阻止することを意味する。この場合に、上記組成物は、その植物有害生物に曝露される前に適用される。
用語「改善する(ameliorate)」および「改善(amelioration)」とは、本明細書で提供される組成物および方法によってもたらされる処理された植物の状態における改善(improvement)に関する。上記改善は、有害生物の成長の減少および/または損傷したもしくは罹患した植物の高さ、重量、葉の数、根系、もしくは収量の改善という形態において現れ得る。一般に、上記用語は、損傷したもしくは罹患した植物の生理学的状態の改善をいう。
用語「阻害する(inhibit)」およびこの用語の全てのバリエーションは、細菌、真菌、ウイルス、線虫、昆虫、または任意の他の有害生物の成長、ならびに胞子発芽の制限もしくは禁止を包含することが意図される。
用語「排除する」とは、本発明の組成物と接触させることによって、必要に応じて、以下で記載される本の方法に従って、細菌、真菌、ウイルス、線虫、昆虫、または任意の他の有害生物の実質的な根絶または除去に関連する。
用語「遅らせる(delay)」、「遅延させる(retard)」、およびこれらの全てのバリエーションは、細菌、真菌、ウイルス、線虫、昆虫、または任意の他の有害生物の成長、ならびに胞子発芽の進行を遅くすることを包含することが意図される。表現「開始を遅らせる(delaying the onset)」とは、細菌、真菌、ウイルス、線虫、昆虫、または任意の他の有害生物の成長、外寄生、感染、胞子発芽、および菌糸成長が、本発明に従う処理の非存在下で、発生に沿ってほぼ進行していないか、またはより遅く現れるように、上記細菌、真菌、ウイルス、線虫、昆虫、または任意の他の有害生物の成長、外寄生、感染、胞子発芽、および菌糸成長の進行をある期間にわたって防止するかまたは遅くすると解釈される。
本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体で処理される植物、植物部分、または栽培地は、統計的に有意な量で、植物有害生物の存在下で低減した病気もしくは損傷の重篤度または低減した病気もしくは損傷の発生を示し得る。低減した病気もしくは損傷の重篤度または低減した病気もしくは損傷の発生は、非処理コントロール植物と比較した場合に、約10%~約20%、約20%~約30%、約30%~約40%、約40%~約50%、約50%~約60%、約60%~約70%、約70%~約80%、約80%~約90%、または約90%~約100%の低減であり得る。他の場合では、本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体で処理される植物は、植物有害生物の存在下で、非処理コントロール植物と比較した場合に、少なくとも約10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または約100%多く、低減した病気もしくは損傷の重篤度または低減した病気もしくは損傷の発生を示し得る。植物の損傷もしくは病気の重篤度を評価するための方法は公知であり、損傷もしくは罹患した葉の面積のパーセンテージを測定すること(Godoyら (2006) Fitopatol. Bras. 31(1) 63-68)または夏胞子層の数を測定することを含む。
本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体で処理される植物、植物部分、または栽培地は、昆虫および/または線虫有害生物を含む植物有害生物の低減を示し得る。植物有害生物の低減は、非処理コントロール植物と比較した場合に、約10%~約20%、約20%~約30%、約30%~約40%、約40%~約50%、約50%~約60%、約60%~約70%、約70%~約80%、約80%~約90%、または約90%~約100%の低減であり得る。他の場合では、本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体で処理される植物は、非処理コントロール植物と比較した場合に、少なくとも約10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または約100%多い、植物有害生物の低減を示し得る。植物有害生物の数を測定するための方法は公知であり、有害生物の数を計数すること、または植物と1種もしくはこれより多くの有害生物とを接触させること、ならびに上記植物が生存するおよび/または上記有害生物の死滅を引き起こす能力を決定することを含む。例えば、Czapla and Lang, (1990) J. Econ. Entomol. 83:2480-2485; Andrews,ら, (1988) Biochem. J. 252:199-206; Marrone,ら, (1985) J. of Economic Entomology 78:290-293および米国特許第5,743,477号(これらは全て、それらの全体において本明細書に参考として援用される)を参照のこと。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供される細菌株およびその活性改変体、ならびに/またはこれらに由来する組成物は、昆虫有害生物に対して農薬活性(すなわち、殺昆虫活性)を有する。これらの実施形態のうちのいくつかにおいて、上記殺昆虫活性は、甲虫類の種に対する活性である。1つの実施形態において、上記殺昆虫活性は、鱗翅類昆虫に対するものである。1つの実施形態において、上記殺昆虫活性は、半翅類の種に対するものである。いくつかの実施形態において、上記殺昆虫活性は、1種もしくはこれより多くの昆虫有害生物(例えば、ウェスタンコーンルートワーム、サザンコーンルートワーム、ノーザンコーンルートワーム、メキシココーンルートワーム、コロラドハムシ、アリモドキゾウムシ、またはミナミアオカメムシ)に対するものである。
具体的実施形態において、本明細書で提供される細菌株、その活性改変体、および/またはこれらに由来する組成物は、植物有害生物から生じる損傷または病気の症状を、統計的に有意な量(例えば、少なくとも約10%~少なくとも約20%、少なくとも約20%~約50%、少なくとも約10%~約60%、少なくとも約30%~約70%、少なくとも約40%~約80%、もしくは少なくとも約50%~約90%またはこれより多くを含む)低減する。よって、本発明の方法は、植物有害生物によって引き起こされる病気または損傷から植物を防御するために利用され得る。
有害生物の外寄生後の損傷または病気の抵抗性を定量するアッセイは、当該分野で一般に公知である。例えば、米国特許第5,614,395号(本明細書に参考として援用される)を参照のこと。このような技術は、経時的に、平均病変部直径、有害生物バイオマス、および衰えた植物組織の全体的なパーセンテージを測定することを含む。例えば、農薬性ポリペプチドを発現するかまたは農薬組成物がその表面に適用されているかのいずれかである植物は、上記農薬組成物に曝されなかったコントロール植物と比較した場合に、有害生物チャレンジ後の組織壊死(すなわち、病変部直径)の減少または植物の死滅の減少を示す。あるいは、農薬活性は、有害生物バイオマスの減少によって測定され得る。例えば、農薬性ポリペプチドを発現するかまたは農薬組成物に曝された植物は、目的の有害生物でチャレンジされる。経時的に、その有害生物が外寄生した組織に由来する組織サンプルが得られ、RNAが抽出される。植物特異的転写物のレベルに対する特異的有害生物RNA転写物のパーセンテージは、有害生物バイオマスのレベルを決定することを可能にする。例えば、Thommaら (1998) Plant Biology 95:15107-15111(本明細書に参考として援用される)を参照のこと。
さらに、インビトロ農薬アッセイは、例えば、種々の濃度の農薬組成物を紙のディスクに添加すること、およびそのディスクを目的の有害生物の懸濁物を含むアガー上に配置することを含む。インキュベーションの後、透明な阻害ゾーンが、上記農薬組成物の有効濃度を含むディスクのまわりに発生する(Liuら (1994) Plant Biology 91:1888-1892(本明細書に参考として援用される))。さらに、顕微分光測光法による分析が、組成物のインビトロ農薬特性を測定するために使用され得る(Huら (1997) Plant Mol. Biol. 34:949-959およびCammueら (1992) J. Biol. Chem. 267: 2228-2233(その両方が、本明細書に参考として援用される))。
C.植物において有害生物および/もしくは病気の抵抗性を誘導ならびに/または目的の農学上の形質を改善するための方法
植物において有害生物および/または病気の抵抗性を誘導するための組成物および方法であって、ここで上記病気は、植物有害生物によって引き起こされるものがまた、提供される。よって、上記組成物および方法はまた、真菌有害生物、ウイルス、線虫、および昆虫を含む、任意のタイプの植物有害生物に対して植物を防御するにあたって有用である。植物有害生物による感染もしくは外寄生、または植物有害生物によって引きおこされる植物の病気に感受性である植物に、少なくとも1種の本明細書で提供される細菌株、その活性改変体、および/またはこれらに由来する組成物の有効量を適用する工程を包含する、植物有害生物に対する抵抗性を誘導するための方法が、本明細書で提供される。ある特定の実施形態において、本明細書で提供される細菌株、その活性改変体、および/またはこれらに由来する組成物は、AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つの細胞;あるいはAIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちのいずれか1つに由来する、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせを含み得る。ある特定の実施形態において、本明細書で提供される細菌株、その活性改変体、および/またはこれらに由来する組成物は、植物の病気または損傷を引き起こす有害生物への防御応答を増進する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体の有効量は、少なくとも約10~1012 CFU/ヘクタールを含む。いくつかの実施形態において、本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体の有効量は、少なくとも約1012~1016 CFU/ヘクタールを含む。
植物における防御応答は、本明細書で提供される細菌株、その活性改変体、および/またはこれらに由来する組成物を上記植物に適用した後であるが、有害生物チャレンジ前および/または本明細書で提供される細菌株、その活性改変体、および/またはこれらに由来する組成物で処理した植物の有害生物チャレンジ後に、誘発され得る。
いくつかの方法では、本明細書で提供される細菌株、その活性改変体、および/またはこれらに由来する組成物は、1種、2種、3種、4種、5種もしくはこれより多くの本明細書で記載される植物有害生物への抵抗性を誘導する。他の方法では、本明細書で提供される細菌株、その活性改変体、および/またはこれらに由来する組成物は、1種、2種、3種、4種、5種もしくはこれより多くの本明細書で記載される昆虫有害生物、真菌植物有害生物、または線虫有害生物への抵抗性を誘導する。
「病気の抵抗性(disease resistance)」とは、植物が、植物-有害生物相互作用から生じる病気の症状を回避することを意図される。すなわち、有害生物は、植物の病気およびその関連する病気の症状を引きおこすことを防止されるか、または代わりに、上記有害生物によって引きおこされる病気の症状が、コントロ-ルと比較して、最小限にされるかまたは低減される。「有害生物抵抗性(pest resistance)」とは、植物が、有害生物による植物の感染または外寄生から生じる症状を回避することを意図され得る。すなわち、有害生物は、植物の病気およびその関連する病気の症状を引きおこすことを防止されるか、または代わりに、上記有害生物によって引きおこされる病気の症状が、コントロ-ルと比較して、最小限にされるかまたは低減される。さらに提供されるのは、少なくとも1種の本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体またはその活性誘導体の有効量を植物に適用する工程を包含する、植物の健康状態を改善するおよび/または目的の農学上の形質を改善するための方法である。ある特定の実施形態において、本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体は、AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つの細胞;あるいはAIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちのいずれか1つに由来する、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせを含み得る。いくつかの実施形態において、本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体の有効量は、少なくとも約10~1012 CFU/ヘクタールを含む。いくつかの実施形態において、本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体の有効量は、少なくとも約1012~1016 CFU/ヘクタールを含む。いくつかの実施形態において、上記組成物は、AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つの細胞;あるいはAIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちのいずれか1つに由来する、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせを含み得る、本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体に由来する。
特定の実施形態において、本明細書で記載される細菌株もしくはその活性改変体によって改善される目的の農学上の形質は、改善された植物の健康状態である。「改善された植物の健康状態(improved plant health)」とは、いくつか挙げると、植物の増大した生長および/もしくは収量、増大したストレス耐性および/もしくは低下した除草剤抵抗性を意味する。増大したストレス耐性とは、植物が1種もしくはこれより多くのストレスと関連する症状を低減または防止する能力の増大をいう。上記ストレスは、有害生物(例えば、細菌、ウイルス、真菌、寄生生物)、昆虫、線虫、雑草、栽培されたもしくは自生の植物のような他の生きている生物によって植物に与えられる損傷の結果として起こる生物的ストレスであり得る。上記ストレスはまた、極端な温度(高いまたは低い)、強風、旱魃、塩分、化学毒性、酸化的ストレス、洪水、トルネード、野火、放射線および重金属への曝露のような非生物的ストレスであり得る。改善された農学上の形質の非限定的な例は、本明細書中の他の箇所で開示される。具体的実施形態において、上記細菌株、その活性改変体、および/またはこれらに由来する組成物の有効量は、植物の健康状態を改善するかまたは統計的に有意な量で、例えば、少なくとも約10%~少なくとも約20%、少なくとも約20%~約50%、少なくとも約10%~約60%、少なくとも約30%~約70%、少なくとも約40%~約80%、もしくは少なくとも約50%~約90%もしくはこれより高くを含め、目的の農学上の形質を改善する。
D.植物もしくは植物部分への適用方法
本明細書で提供される細菌株、その活性改変体、および/またはこれらに由来する組成物は、有効量で適用される。本明細書で提供される細菌株、その活性改変体、および/またはこれらに由来する組成物の有効量は、有害生物(例えば、昆虫有害生物)を制御、処理、防止、阻害する、および/あるいは目的の農学上の形質を改善するために十分な量である。具体的実施形態において、本明細書で提供される細菌株、その活性改変体、および/またはこれらに由来する組成物の有効量は、植物の病気もしくは損傷を引き起こす有害生物を制御、処理、防止、阻害する、および/あるいは植物の病気の重篤度を低減するかまたは植物の病気の発生を低減するために十分な量である。他の実施形態において、本明細書で提供される細菌株、その活性改変体、および/またはこれらに由来する組成物の有効量は、目的の農学上の形質を改善するならびに/または植物の健康状態、病気、植物有害生物による感染もしくは植物有害生物(例えば、昆虫有害生物)による外寄生に感受性である植物の生長もしくは収量を増進もしくは増大させるために十分な量である。本明細書で提供される細菌株、その活性改変体、および/またはこれらに由来する組成物の適用の割合は、標的とされている病原体、防御すべき作物、本明細書で提供される細菌株、その活性改変体、および/またはこれらに由来する組成物の有効性、上記病気の重篤度、気候条件、改善すべき目的の農学上の形質などに従って変動し得る。本明細書で提供される方法は、少なくとも1種の本明細書で提供される細菌株、もしくはその活性改変体および/またはこれらに由来する組成物の、植物、植物部分、または栽培地への1回の適用、あるいは少なくとも1種の本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体の、植物、植物部分、または栽培地への多数回の適用を含み得る。
一般に、本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体の割合は、10~1016コロニー形成単位(CFU)/ヘクタールである。他の実施形態において、圃場接種に関しては、本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体の適用の割合は、3×10~1×1011 コロニー形成単位(CFU)/ヘクタールである(これは、約1Kg~10kgの製剤化物質/ヘクタールに相当する)。別の実施形態では圃場接種に関しては、本明細書で提供される細菌株またはその活性改変体の適用の割合は、3x10~1x1016コロニー形成単位(CFU)/ヘクタール;約1x1012~約1x1013コロニー形成単位(CFU)/ヘクタール、約1x1013~約1x1014コロニー形成単位(CFU)/ヘクタール、約1x1014~約1x1015コロニー形成単位(CFU)/ヘクタール、約1x1015~約1x1016コロニー形成単位(CFU)/ヘクタール、約1x1016~約1x1017コロニー形成単位(CFU)/ヘクタール;約1x10~約1x1014コロニー形成単位(CFU)/ヘクタール;約1x10~約1x1013コロニー形成単位(CFU)/ヘクタール;約1x10~約1x1012コロニー形成単位(CFU)/ヘクタール;約1x10~約1x1011コロニー形成単位(CFU)/ヘクタール;または約1x10~約1x1011コロニー形成単位(CFU)/ヘクタールである。別の実施形態では、圃場接種に関しては、本明細書で提供される細菌株またはその活性改変体の適用の割合は、少なくとも約1x10、約1x10、約1x10、約1x10、約1x10、約1x10、約1x1010、約1x1011、約1x10121x1013、約1x1014、1x1015、約1x1016、または約1x1017コロニー形成単位(CFU)/ヘクタールである。他の実施形態において、圃場接種に関しては、本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体の適用の割合は、少なくとも1×10~少なくとも約1×1012 CFU/ヘクタールである。具体的実施形態において、適用される、本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体は、AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706として寄託された株、またはこれらのうちのいずれかの活性誘導体、あるいはAIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、またはこれらのうちのいずれかの活性誘導体のうちのいずれか1つに由来する、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせを含む。
いくつかの実施形態において、適用される組成物は、AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706として寄託された株、またはこれらのうちのいずれかの活性誘導体を含む細菌株もしくはその活性改変体、あるいはAIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、またはこれらのうちのいずれかの活性誘導体のうちのいずれか1つに由来する、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせに由来する。いくつかの実施形態において、適用される組成物は、本発明の細菌株もしくはその活性改変体に由来する、実質的に純粋な培養物、全細胞ブロス、上清、濾液、抽出物、または化合物であり得る。適用される組成物は、植物有害生物を制御するか、または植物において目的の農学上の形質を改善するために有効な量において、単独で、または別の物質との組み合わせにおいて適用され得る。
適用される組成物の有効量は、微生物細胞、上清、全細胞ブロス、濾液、細胞画分もしくは抽出物、代謝産物、および/または化合物単独、または植物有害生物外寄生または植物において目的の農学上の形質の性能を調節するために十分な別の農薬物質との組み合わせにおける量である。有効な範囲内にある量は、当業者によって実験的な試験または圃場試験によって決定され得る。
いくつかの実施形態において、上記組成物が種子に直接適用される場合、有効量は、種子100gあたり、約0.05~25%、または約0.1~20%、または約0.5~15%、または約1~10%、または約2~5%の活性成分の濃度である。いくつかの実施形態において、上記有効量は、種子100gあたり、約0.5~1%の活性成分の量である。
いくつかの実施形態において、上記組成物が土壌に、例えば、畝において適用される場合、有効量は、1000フィードの列あたり、約0.1~50オンスの活性成分である。別の実施形態において、土壌適用のための有効量は、1000フィートの列あたり約1~25オンスの活性成分である。別の実施形態において、上記有効量は、1000フィートの列あたり、約2~20オンス、または約3~15オンス、または約4~10オンス、または約5~8オンスの活性成分である。なお別の実施形態において、上記有効量は、1000フィードの列あたり、約14または28オンスの活性成分である。
殺生物剤に関する任意の適切な農業的適用割合は、本明細書で提供される細菌株もしくは本明細書で開示されるその活性改変体と組み合わせて適用され得る。本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体の有効量に関してアッセイするための方法は、例えば、上記細菌株、その活性改変体、および/またはこれらに由来する組成物によって標的化される有害生物の制御の任意の統計的に有意な増大を含む。このような制御に関してアッセイするための方法は公知である。さらに、本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体の有効量の適用に際して起こり得る植物の健康状態、収量および/または生長は、本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体が適用されない場合に起こる植物の健康状態、収量および/または生長と比較すると、統計的に有意に増大する。
本明細書で提供される細菌株もしくは本明細書で提供されるその活性改変体(すなわち、AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つの細胞、あるいはAIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちのいずれか1つに由来する、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせ)を含む組成物ならびに/または上記で記載される細菌株もしくは活性改変体に由来する組成物を適用することによって、植物有害生物(例えば、植物の病気を引き起こすもの)の成長を制御または阻害するための方法が、さらに提供される。「適用すること(applying)」とは、本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体の有効量を、植物、栽培地、および/もしくは種子に、本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体のうちの1種もしくはこれより多くと所望の効果が達成されるように接触させることを意図する。さらに、本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体の適用は、作物を植える前に(例えば、土壌、種子、もしくは植物に)起こり得る。具体的実施形態において、本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体および/またはこれらに由来する組成物の適用は、葉面適用である。従って、本発明のさらなる実施形態は、本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体の集団および/またはこれらに由来する組成物を、植物有害生物が成長し得る環境に適用することによって、植物有害生物の成長を制御または阻害するための方法を提供する。上記適用は、植物に、植物の一部に、上記防御されるべき植物の種子に、または上記防御されるべき植物が生長しつつあるかまたは生長する土壌に対して行われ得る。上記植物または植物部分への適用は、収穫前または収穫後に行われ得る。種子への適用は、種子を蒔く前に行われる。
いくつかの実施形態において、少なくとも1種の本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体および/または本明細書で提供されるこれらに由来する組成物の有効量は、サツマイモネコブセンチュウ(Meloidogyne incognita)、ジャワネコブセンチュウ(Meloidogyne javanica)、キタネコブセンチュウ(Meloidogyne hapla)およびアレナリアネコブセンチュウからなる群より選択される1種もしくはこれより多くの線虫病原体の成長を制御または阻害するために、葉面適用として使用される。
いくつかの実施形態において、少なくとも1種の本明細書で提供される細菌株もしくは本明細書で提供されるその活性改変体および/またはこれらに由来する組成物の有効量は、1種もしくはこれより多くの昆虫有害生物の成長を制御または阻害するために葉面適用または土壌適用または種子適用として使用される。例えば、少なくとも1種の本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体の有効量は、コーンルートワーム、ウェスタンコーンルートワーム、コロラドハムシ、ゾウムシ、およびアリモドキゾウムシを含む甲虫類の昆虫の成長を制御または阻害するために葉面適用として使用され得る。他の実施形態において、少なくとも1種の本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体および/または本明細書で提供されるこれらに由来する組成物の有効量は、1種もしくはこれより多くの線虫または線虫有害生物の成長を制御または阻害するために、上記防御されるべき植物が生長しつつあるかまたは生長する土壌に対して適用される。具体的実施形態において、少なくとも1種の本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体および/または本明細書で提供されるこれらに由来する組成物の有効量は、植物有害生物(例えば、昆虫有害生物、例えば、甲虫類の昆虫有害生物)を阻害する(成長、摂食、生産力、または生存度を阻害する)、抑制する(成長、摂食、生産力、または生存度を抑制する)、低減する(有害生物外寄生を低減する、特定の作物に対して有害生物摂食活動を制限する)または死滅させる(疾病率、死滅率、低減した生産力の原因となる)ために、植物種子に適用される。
他の実施形態において、少なくとも1種の本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体および/または本明細書で提供されるこれらに由来する組成物の有効量は、1種もしくはこれより多くの植物有害生物の成長を制御または阻害するために、防御されるべき植物が生長しつつあるかまたは生長する植物栄養分体(すなわち、種子、接ぎ穂、挿し枝(stem cutting)、穀粒(corn)など)に適用される。例えば、少なくとも1種の本明細書で提供される細菌株、もしくはその活性改変体、および/またはこれらに由来する組成物の有効量は、昆虫有害生物(例えば、コーンルートワーム、ウェスタンコーンルートワーム、コロラドハムシ、ゾウムシ、およびアリモドキゾウムシを含む甲虫類)の成長を制御または阻害するために、植物栄養分体に適用され得る。具体的実施形態において、少なくとも1種の本明細書で提供される細菌株、もしくはその活性改変体、および/またはこれらに由来する組成物の有効量は、植物有害生物(例えば、昆虫有害生物、例えば、コーンルートワーム、ウェスタンコーンルートワーム、コロラドハムシ、ゾウムシ、およびアリモドキゾウムシを含む甲虫類の昆虫)の成長を制御または阻害するために、収穫前または収穫後に植物組織(果実を含む)に適用され得る。いくつかの実施形態において、本明細書で提供される細菌株、もしくはその活性改変体、および/または本明細書で提供されるこれらに由来する組成物の有効量は、1種もしくはこれより多くの線虫有害生物の成長を制御または阻害するために、収穫後に植物組織(果実を含む)に適用され得る。
他の実施形態において、少なくとも1種の本明細書で提供される細菌株、もしくはその活性改変体、および/または本明細書で提供されるこれらに由来する組成物の有効量は、サツマイモネコブセンチュウ(Meloidogyne incognita)、ジャワネコブセンチュウ(Meloidogyne javanica)、キタネコブセンチュウ(Meloidogyne hapla)およびアレナリアネコブセンチュウからなる群より選択される1種もしくはこれより多くの有害生物の成長を制御または阻害するために、防御されるべき植物が生長しつつあるかまたは生長する土壌に適用される。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体および/または本明細書で提供されるこれらに由来する組成物の有効量は、サツマイモネコブセンチュウ(Meloidogyne incognita)、ジャワネコブセンチュウ(Meloidogyne javanica)、キタネコブセンチュウ(Meloidogyne hapla)およびアレナリアネコブセンチュウからなる群より選択される1種もしくはこれより多くの有害生物の成長を制御または阻害するために、収穫後に植物に適用される。
本明細書で使用される場合、用語、植物は、植物細胞、植物プロトプラスト、植物細胞組織培養物(これらから植物が再生され得る)、植物カルス、植物凝集塊(plant clump)、および植物または植物の部分(例えば、胚、花粉、胚珠、種子、葉、花、枝、果実、穀粒、穂、穂軸、殻、茎、根、根端、葯など)の中で無傷である植物細胞を含む。子実(grain)は、種(species)を生長または生殖する以外の目的で、商業栽培者によって生産される成熟種子を意味することが意図される。
具体的実施形態において、本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体(すなわち、AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つの細胞、あるいはAIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちのいずれか1つに由来する、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせ)、および/またはこれらに由来する組成物の適用は、植物の種子(例えば、トウモロコシ(corn)(トウモロコシ(maize))植物の種子)に適用される。トウモロコシ種子への上記細菌株もしくはその活性改変体の適用は、約10 CFU/g~約1011 CFU/g、約10 CFU/g~約1010 CFU/g、約10 CFU/g~約1011 CFU/g、約10 CFU/g~約1010 CFU/g、約10 CFU/g~約1011 CFU/g、約1011 CFU/g~約1012 CFU/g、約10CFU/g~約1010 CFU/g、約10 CFU/g~約1012 CFU/g、約10 CFU/g~約10 CFU/g、約10 CFU/g~約10 CFU/g、約10 CFU/g~約10 CFU/g、約10 CFU/g~約10 CFU/g、約10 CFU/g~約1010 CFU/g、約1010 CFU/g~約1011 CFU/g、または約1011 CFU/g~約1012 CFU/gの濃度を含み得る。いくつかの実施形態において、上記細菌株の濃度は、少なくとも約10CFU/g、少なくとも約10 CFU/g、少なくとも約10 CFU/g、少なくとも約10 CFU/g、少なくとも約10 CFU/g、少なくとも約1010 CFU/g、少なくとも約1011 CFU/g、少なくとも約1012 CFU/g、または少なくとも約1013 CFU/gを含む。具体的実施形態において、上記トウモロコシ種子に適用される上記細菌株、もしくはその活性改変体、および/またはこれらに由来する組成物は、本明細書中の他の箇所に記載されるとおりの異種種子コーティングの形態において適用される。適用の濃度およびタイミングは、その状態および地理上の位置に依存して変動し得る。
具体的実施形態において、本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体(すなわち、AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つの細胞、あるいはAIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちのいずれか1つに由来する、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせ)および/またはこれらに由来する組成物の適用は、ダイズ植物の葉に適用される。適用のタイミングは、その状態および地理上の位置に依存して変動し得る。
種々の方法が、植物有害生物または植物有害生物によって引き起こされる植物の病気に感受性である植物を含む栽培地において、植物有害生物(例えば、植物の病気を引き起こすもの)を制御するために提供される。上記方法は、上記栽培地に、上記植物の病気または有害生物に感受性である種子または植物を植える工程;ならびに上記病気または有害生物に感受性である植物、上記植物の病気または有害生物に感受性である植物の種子または栽培地に、少なくとも1種の本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体(すなわち、AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、またはこれらのうちのいずれかの活性誘導体のうちの少なくとも1つの細胞、あるいはAIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちのいずれか1つに由来する、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせ)、および/またはこれらに由来する組成物の有効量を適用する工程を包含し、ここで、本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体の上記有効量は、上記作物に有意に罹患することなく、植物有害生物を御する。具体的実施形態において、上記有効量は、少なくとも約1012~1016 コロニー形成単位(CFU)/ヘクタールを含む。植物有害生物または植物有害生物によって引き起こされる植物の病気に感受性である植物を生長させるための方法がさらに提供される。上記方法は、上記病気または有害生物に感受性である植物、上記病気または有害生物に感受性である植物の種子もしくは栽培地に、少なくとも1種の本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体を含む組成物の有効量を適用する工程を包含する。ある特定の実施形態において、本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体は、AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つの細胞;あるいはAIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちのいずれか1つに由来する、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせを含み得る。少なくとも1種の本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体の種々の有効量は、本明細書の他の箇所で開示され、1つの非限定的例において、本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体の有効量は、少なくとも約1012~1016 コロニー形成単位(CFU)/ヘクタールを含む。いくつかの実施形態において、上記組成物は、本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体に由来し、AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つの細胞;あるいはAIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちのいずれか1つに由来する、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせを含み得る。
植物収量を増大させるための方法が、提供される。植物の「収量(yield)」とは、上記植物によって生産されるバイオマスの質および/または量に言及する。「バイオマス(biomass)」とは、任意の測定される植物生産物が意図される。バイオマス生産の増大は、測定される植物生産物の収量の任意の改善である。収量の増大は、本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体に曝されていない植物と比較して、少なくとも1%増大、少なくとも3%増大、少なくとも5%増大、少なくとも10%増大、少なくとも20%増大、少なくとも30%、少なくとも50%、少なくとも70%、少なくとも100%もしくはこれより大きな収量の増大が挙げられるが、これらに限定されない任意の統計的に有意な増大を含み得る。植物において収量を増大させるための方法がまた、提供され、上記方法は、作物または栽培地に、AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体を含む少なくとも1種の細菌株、AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちのいずれか1つに由来する、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせを含む組成物の有効量を適用する工程を包含し、ここで上記有効量は、少なくとも約1012~1016 コロニー形成単位(CFU)/ヘクタールを含み、そしてここで上記組成物は、植物有害生物を制御し、それによって、収量を増大させる。植物において収量を増大させるための方法がまた、提供され、上記方法は、作物または栽培地に、AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体を含む少なくとも1種の細菌株、AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちのいずれか1つに由来する、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせに由来する組成物の有効量を適用する工程を包含し、ここで上記組成物は、植物有害生物を制御し、それによって、収量を増大させる。
本明細書で使用される場合、「栽培地(area of cultivation)」とは、植物を生長させることが望まれる任意の領域を含む。このような栽培地としては、植物が栽培される圃場(例えば、農地(crop field)、芝生地、植林地(tree field)、保安林(managed forest)、果実および野菜栽培の圃場など)、温室、生育チャンバなどが挙げられるが、これらに限定されない。
他の実施形態において、目的の植物(すなわち、植物有害生物または植物有害生物によって引き起こされる植物の病気に感受性である植物)および/または上記植物を含む栽培地は、本明細書で提供される細菌株、その活性改変体、および/またはこれらに由来する組成物の有効量、ならびに殺生物剤または他の生物防除因子の有効量の組み合わせで処理され得る。本明細書で提供される細菌株、その活性改変体、これらに由来する組成物、および殺生物剤もしくは他の生物防除因子「の組み合わせで処理される」または植物、栽培地もしくは圃場に本明細書で提供される細菌株、その活性改変体、これらに由来する組成物、および殺生物剤もしくは他の殺生物剤「の組み合わせを適用する」は、特定の圃場、植物、および/もしくは雑草のうちの1種もしくはこれより多くが、所望の効果が達成されるように、本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体のうちの1種もしくはこれより多くおよび1種もしくはこれより多くの殺生物剤もしくは他の生物防除因子の有効量で処理されることが意図される。さらに、本明細書で提供される細菌株、その活性改変体、および/またはこれらに由来する組成物、ならびに上記殺生物剤もしくは他の生物防除因子のうちの一方の適用は、作物を(例えば、土壌に)植える前に(または植物に)起こり得る。さらに、本明細書で提供される細菌株、その活性改変体、および/またはこれらに由来する組成物、ならびに上記殺生物剤もしくは他の生物防除因子の適用は、同時であってもよいし、上記適用は、所望の効果が達成される限りにおいて、異なる時間(逐次的)であってもよい。
1つの非限定的実施形態において、上記活性改変体は、1種もしくはこれより多くの殺生物剤に抵抗性である本明細書で提供される細菌株を含む。具体的実施形態において、本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体(すなわち、AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つの細胞、あるいはAIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちのいずれか1つに由来する、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせ)は、グリホサートに対して抵抗性である。このような方法において、植物、作物、または栽培地は、グリホサートに対して抵抗性である本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体の有効量およびグリホサートの有効量の組み合わせで処理され、ここでグリホサートの上記有効量は、例えば、選択的に雑草を制御すると同時に、上記作物が有意に損傷されないようなものである。
別の非限定的実施形態において、上記活性改変体は、グルホシネートに対して抵抗性である本明細書で提供される細菌株を含む。このような方法において、植物、作物、または栽培地は、グルホシネートに対して抵抗性である本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体の有効量およびグルホシネートの有効量の組み合わせで処理され、ここでグルホシネートの上記有効量は、選択的に雑草を制御すると同時に、上記作物が有意に損傷されないようなものである。このような実施形態において、本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体の有効量は、グルホシネートに対して抵抗性であるように改変されなかった本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体の同じ濃度が、グルホシネートもしくはその活性誘導体の上記有効量と組み合わせて適用される場合に起こる植物の健康状態、収量、および/または生長と比較して、植物の健康状態、収量、および/または生長の統計的に有意な増大を生じるために十分である。さらなる実施形態において、本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体は、AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つの細胞、あるいはAIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちのいずれか1つに由来する、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせの有効量を含む。
V.本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体と組み合わせて使用するための殺生物剤
本明細書中の他の箇所で考察されるように、本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体、および/またはこれらに由来する組成物は、殺生物剤(すなわち、除草剤、殺虫剤、殺真菌剤、農薬、もしくは他の農作物保護化学物質)と組み合わせて使用され得る。このような場合には、本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体は、目的の殺生物剤と適合性である。
「除草剤、殺虫剤、殺真菌剤、農薬、殺虫剤もしくは他の農作物保護化学物質への耐性または除草剤、殺真菌剤、農薬、殺虫剤もしくは他の農作物保護化学物質への抵抗性」とは、生物(すなわち、上記植物および/または本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体など)が野生型生物には通常致死的である除草剤、殺虫剤、殺真菌剤、農薬、殺虫剤、もしくは他の農作物保護化学物質の用量への曝露後に、生存および生殖する能力が意図される。
本明細書に開示の種々の方法および組成物において使用され得る除草剤としては、グリホサート、ACCaseインヒビター(アリールオキシフェノキシ(Arloxyphenoxy)プロピオネート(FOPS));ALSインヒビター(スルホニルウレア(SU))、イミダゾリノン(Imidazonlinone)(IMI)、ピリミジン(PM));微小管タンパク質インヒビター(ジニトロアニリン(DNA));合成オーキシン(フェノキシ(P))、安息香酸(BA)、カルボン酸(CA));光合成系IIインヒビター(トリアジン(TZ))、トリアジノン(TN)、ニトリル(NT)、ベンゾチアジアジノン(BZ)、ウレア(US));EPSPシンターゼインヒビター(グリシン(GC));グルタミン合成インヒビター(ホスフィン酸(PA));DOXPシンターゼインヒビター(イソオキサゾリジノン(IA));HPPDインヒビター(ピラゾール(PA))、トリケトン(TE));PPOインヒビター(ジフェニルエーテル(DE)、N-フェニルフタルイミド(NP)(アリールトリアジノン(Ary triazinone)(AT));VLFAインヒビター(クロロアセトアミド(CA))、オキシアセトアミド(OA));光合成系Iインヒビター(ビピリジリウム(Bipyridyliums)(BP));などが挙げられる。
本明細書に開示の種々の方法および組成物において使用され得る農薬としては、イミダクロプリドクロチアニジン、アリールピラゾール化合物(WO2007103076);有機リン、フェニルピラゾール、ピレスロイド(pyrethoids)カラモイルオキシム(caramoyloximes)、ピラゾール、アミジン、ハロゲン化炭化水素、カルバメートおよびその誘導体、テルブホス、クロルピリホス(chloropyrifos)、フィプロニル、クロルエトキシホス、テフルトリン(telfuthrin)、カルボフラン、イミダクロプリド、テブピリムホス(米国特許第5,849,320号)が挙げられる。
本明細書に開示の種々の方法および組成物において使用され得る殺虫剤としては、以下が挙げられる:イミダクロプリド、β-シフルトリン、シアントラニリプロール、ダイアジノン、ラムダシハロトリン、メチオカルブ、ピメトロジン、ピリフルキナゾン、スピネトラム、スピロテトラマト、チオジカルブ、およびTi-435、カルバメート、ナトリウムチャネル調節因子/電位依存性ナトリウムチャネルブロッカー、ピレスロイド(例えば、DDT)、オキサジアジン(例えば、インドキサカルブ)、アセチルコリンレセプターアゴニスト/アンタゴニスト、アセチルコリンレセプター調節因子、ニコチン、ベンスルタップ、カルタップ、クロロニコチニル(chloronicotyinyl)(例えば、アセタミプリド、ビフェントリン、クロチアニジン、ジノテフラン(dinotefuran)、イミダクロプリド、ニテンピラム、ニチアジン、チアクロプリド、およびチアメトキサム)、スピノシン(例えば、スピノサド)、シクロジエン有機塩素化合物(例えば、カンフェクロル、クロルデン、エンドスルファン、γ-HCH、HCH、ヘプタクロル、リンデン、メトキシクロル、フィプロール(fiprole)(例えば、アセトプロール、エチプロール、フィプロニル、バニリプロール、塩化物チャネル、6.1メクチン(6.1 mectin)(例えば、アベルメクチン、エマメクチン、エマメクチン安息香酸塩、イベルメクチン、およびミルベマイシン)、幼若ホルモン模倣物(例えば、ジオフェノラン、エポフェノナン、フェノキシカルブ、ヒドロプレン、キノプレン、メトプレン、ピリプロキシフェン、およびトリプレン)、エクジソンアゴニスト/破壊因子(disruptor)、ジアシルヒドラジン、クロマフェノジド、ハロフェノジド、メトキシフェノジド、テブフェノジド、キチン生合成インヒビター、ベンゾイルウレア(例えば、ビストリフルロン、クロルフルアズロン、ジフルベンズロン、フルアズロン、フルシクロクスロン(flucycloxuron)、フルフェノクスロン、ヘキサフルムロン、ルフェヌロン、ノバルロン、ノビフルムロン、ペンフルロン(penfluron)、テフルベンズロン、トリフルムロン、ブプロフェジン、シロマジン、酸化的リン酸化インヒビター、ATP破壊因子、ジアフェンチウロン、有機スズ化合物(例えば、アゾシクロチン、シヘキサチン、酸化フェンブタスズ)、ピロール(例えば、クロルフェナピル)、ジニトロフェノール(例えば、ビナパクリル)、ジノブトン(dinobuton)、ジノカップ、DNOC、サイトI電子伝達系インヒビター(site-I electron transport inhibitor)、METI(例えば、フェナザキン、フェンピロキシメート、ピリミジフェン、ピリダベン、テブフェンピラド、トルフェンピラド、ヒドラメチルノン(hydramethyinon)、ジコホル、ロテノン、アセキノシル、フルアクリピリム、スピロジクロフェン、スピロメシフェン、テトラミン酸)、カルボキサミド(例えば、フロニカミド)、オクトパミン作動性アゴニスト(例えば、アミトラズ)、マグネシウム刺激性ATPaseインヒビター(例えば、プロパルギット)、BDCA(例えば、N2-[1,1-ジメチル-2-(メチルスルホニル)エチル]-3-ヨード-N1-[2-メチル-4-[1,2,2,2--テトラフルオロ-1-(トリフルオロメチル)エチル]フェニル]-1,2-ベンゼン、ネライストキシンアナログ(nereistoxin analogue)(例えば、チオシクラムシュウ酸塩(thiocyclam hydrogen oxalate)、ならびにチオスルタップナトリウム。好ましくは、上記殺虫剤は、クロルピリホスおよびテフルトリンのうちの1つまたはこれより多くである。
本明細書で開示される種々の方法および組成物において使用され得る殺線虫剤としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない:アシベンゾラルSメチル、アベルメクチン(例えば、アバメクチン)、カルバメート殺線虫剤(例えば、アルジカルブ、チオジカルブ(thiadicarb)、カルボフラン、カルボスルファン、オキサミル、アルドキシカルブ、エトプロップ(ethoprop)、メソミル、ベノミル、アラニカルブ)、有機リン系殺線虫剤(例えば、フェナミホス(phenamiphos)(フェナミホス(fenamiphos))、フェンスルホチオン、テルブホス、ホスチアゼート、ジメトエート、ホスホカルブ(phosphocarb)、ジクロフェンチオン、イサミドホス(isamidofos)、フォスチエタン(fosthietan)、イサゾホス エトプロホス、カズサホス、テルブホス、クロルピリホス、ジクロフェンチオン、ヘテロホス(heterophos)、イサミドホス、メカルホン(mecarphon)、ホレート(phorate)、チオナジン(thionazin)、トリアゾホス、ジアミダホス(diamidafos)、フォスチエタン(fosthietan)、ホスファミドン)、ならびにある種の殺真菌剤(例えば、キャプタン、チオファネートメチルおよびチアベンダゾール)。
本明細書に開示の種々の方法および組成物において使用され得る殺真菌剤としては、以下が挙げられる:脂肪族窒素殺真菌剤(ブチルアミン、シモキサニル、ドジシン、ドジン、グアザチン、イミノクタジン);アミド殺真菌剤(ベンゾビンジフルピル、カルプロパミド、クロラニホルメタン、シフルフェナミド、ジクロシメット、ジクロシメット、ジモキシストロビン、フェナミンストロビン、フェノキサニル、フルメトベル、フラメトピル、イソフェタミド、イソピラザム、マンデストロビン、マンジプロパミド、メトミノストロビン、オリサストロビン、ペンチオピラド、プロクロラズ、キナザミド、シルチオファム、トリホリン);アシルアミノ酸殺真菌剤(ベナラキシル、ベナラキシルM、フララキシル、メタラキシル、メタラキシルM、ペフラゾエート、バリフェナレート);アニリド殺真菌剤(ベナラキシル、ベナラキシルM、ビキサフェン、ボスカリド、カルボキシン、フェンヘキサミド、フルキサピロキサド、イソチアニル、メタラキシル、メタラキシルM、メトスルホバックス、オフレース、オキサジキシル、オキシカルボキシン、ペンフルフェン、ピラカルボリド、セダキサン、チフルザミド、チアジニル、バンガード(vanguard));ベンズアニリド殺真菌剤(ベノダニル、フルトラニル、メベニル、メプロニル、サリチルアニリド、テクロフタラム);フルアニリド(furanilide)殺真菌剤(フェンフラム、フララキシル、フルカルバニル、メトフロキサム);スルホンアニリド殺真菌剤(フルスルファミド);ベンズアミド殺真菌剤(ベンゾヒドロキサム酸、フルオピコリド、フルオピラム、チオキシミド、トリクラミド、ザリラミド、ゾキサミド);フラミド殺真菌剤(シクラフラミド、フルメシクロックス);フェニルスルファミド殺真菌剤(ジクロフルアニド、トリルフルアニド);スルホンアミド殺真菌剤(アミスルブロム、シアゾファミド);バリンアミド殺真菌剤(ベンチアバリカルブ、イプロバリカルブ);抗生物質殺真菌剤(オーレオファンギン(aureofungin)、ブラストサイジンS、シクロヘキシミド、グリセオフルビン、カスガマイシン、モロキシジン、ナタマイシン、ポリオキシン、ポリオキソリム(polyoxorim)、ストレプトマイシン、バリダマイシン);ストロビルリン殺真菌剤(フルオキサストロビン、マンデストロビン);メトキシアクリレートストロビルリン殺真菌剤(アゾキシストロビン、ビフジュンチ(bifujunzhi)、クモキシストロビン、エノキサストロビン、フルフェノキシストロビン、ジアシアンジュンチ(jiaxiangjunzhi)、ピコキシストロビン、ピラオキシストロビン);メトキシカルバニレート(methoxycarbanilate)ストロビルリン殺真菌剤(ピラクロストロビン、ピラメトストロビン、トリクロピリカルブ);メトキシイミノアセトアミドストロビルリン殺真菌剤(ジモキシストロビン、フェナミンストロビン、メトミノストロビン、オリサストロビン);メトキシイミノアセテートストロビルリン殺真菌剤(クレソキシムメチル、トリフロキシストロビン);芳香族殺真菌剤(ビフェニル、クロロジニトロナフタレン、クロロネブ、クロロタロニル、クレゾール、ジクロラン、フェンジュントン(fenjuntong)、ヘキサクロロベンゼン、ペンタクロロフェノール、キントゼン、ナトリウムペンタクロロフェノキシド、テクナゼン、トリクロロトリニトロベンゼン);ヒ素を含む殺真菌剤(アソメート、ウルバシド(urbacide));アリールフェニルケトン殺真菌剤(メトラフェノン、ピリオフェノン);ベンゾイミダゾール殺真菌剤(アルベンダゾール、ベノミル、カルベンダジム、クロルフェナゾール、シペンダゾール、デバカルブ、フベリダゾール、メカルビンジド、ラベンザゾール、チアベンダゾール);ベンゾイミダゾール前駆体殺真菌剤(フロファネート、チオファネート、チオファネートメチル);ベンゾチアゾール殺真菌剤(ベンタルロン、ベンチアバリカルブ、ベンチアゾール(benthiazole)、クロベンチアゾン、プロベナゾール);植物性殺真菌剤(アリシン、ベルベリン、カルバクロール、カルボン、オストール、サンギナリン、サントニン);架橋ジフェニル殺真菌剤(ビチオノール、ジクロロフェン、ジフェニルアミン、ヘキサクロロフェン、パリノール);カルバメート殺真菌剤(ベンチアバリカルブ、フロファネート、ヨードカルブ(iodocarb)、イプロバリカルブ、ピカルブトラゾクス、プロパモカルブ、ピリベンカルブ、チオファネート、チオファネートメチル、トルプロカルブ);ベンゾイミダゾリルカルバメート殺真菌剤(アルベンダゾール、ベノミル、カルベンダジム、シペンダゾール、デバカルブ、メカルビンジド);カルバニレート殺真菌剤(ジエトフェンカルブ、ピラクロストロビン、ピラメトストロビン、トリクロピリカルブ);コナゾール殺真菌剤、コナゾール殺真菌剤(イミダゾール)(クリンバゾール、クロトリマゾール、イマザリル、オキスポコナゾール、プロクロラズ、トリフルミゾール);コナゾール殺真菌剤(トリアゾール)(アザコナゾール、ブロムコナゾール、シプロコナゾール、ジクロブトラゾール、ジフェノコナゾール、ジニコナゾール、ジニコナゾールM、エポキシコナゾール、エタコナゾール、フェンブコナゾール、フルキンコナゾール、フルシラゾール、フルトリアホール、フルコナゾール、フルコナゾール・シス、ヘキサコナゾール、イミベンコナゾール、イプコナゾール、メトコナゾール、ミクロブタニル、ペンコナゾール、プロピコナゾール、プロチオコナゾール、キンコナゾール、シメコナゾール、テブコナゾール、テトラコナゾール、トリアジメホン、トリアジメノール、トリチコナゾール、ウニコナゾール、ウニコナゾールP);銅殺真菌剤(アシペタックス-銅、ボルドー液(Bordeaux mixture)、バーガンディー液(Burgundy mixture)、チェスハント液(Cheshunt mixture)、酢酸銅、炭酸銅、塩基性、水酸化銅、ナフテン酸銅、オレイン酸銅、オキシ塩化銅(copper oxychloride)、ケイ酸銅、硫酸銅、硫酸銅、塩基性、クロム酸銅亜鉛(copper zinc chromate)、クフラネブ、クプロバム、酸化銅(I)、マンカッパー、オキシン銅、サイセントン(saisentong)、チオジアゾール銅(thiodiazole-copper));シアノアクリレート殺真菌剤(ベンザマクリル、フェナマクリル(phenamacril));ジカルボキシイミド殺真菌剤(ファモキサドン、フルオロイミド);ジクロロフェニルジカルボキシイミド殺真菌剤(クロゾリネート、ジクロゾリン、イプロジオン、イソバレジオン、ミクロゾリン、プロシミドン、ビンクロゾリン);フタルイミド殺真菌剤(カプタホール、キャプタン、ジタリムホス、ホルペット、チオクロルフェンヒム);ジニトロフェノール殺真菌剤(ビナパクリル、ジノブトン、ジノカップ、ジノカップ-4、ジノカップ-6、メプチルジノカップ、ジノクトン、ジノペントン、ジノスルホン、ジノテルボン、DNOC);ジチオカルバメート殺真菌剤(アモバム、アソメート、アジチラム、カルバモルフ、クフラネブ、クプロバム、ジスルフィラム、フェルバム、メタム、ナバム、テコラム、チウラム、ウルバシド(urbacide)、ジラム);環式ジチオカルバメート殺真菌剤(ダゾメット、エテム、ミルネブ);ポリマージチオカルバメート殺真菌剤(マンカッパー、マンコゼブ、マネブ、メチラム、ポリカルバメート、プロピネブ、ジネブ);ジチオラン殺真菌剤(イソプロチオラン、サイジュンマオ(saijunmao));燻蒸用殺真菌剤(二硫化炭素、シアン、ジチオエーテル、臭化メチル、ヨウ化メチル、テトラチオ炭酸ナトリウム);ヒドラジド殺真菌剤(ベンキノックス、サイジュンマオ(saijunmao));イミダゾール殺真菌剤(シアゾファミド、フェナミドン、フェナパニル、グリオジン、イプロジオン、イソバレジオン、ペフラゾエート、トリアゾキシド);コナゾール殺真菌剤(イミダゾール)(クリンバゾール、クロトリマゾール、イマザリル、オキスポコナゾール、プロクロラズ、トリフルミゾール);無機性殺真菌剤(アジ化カリウム、チオシアン酸カリウム、アジ化ナトリウム、硫黄、銅殺真菌剤もまた参照のこと、無機水銀殺真菌剤もまた参照のこと);水銀殺真菌剤;無機水銀殺真菌剤(塩化水銀(II)、酸化水銀(II)、塩化水銀(I));有機水銀殺真菌剤(臭化(3-エトキシプロピル)水銀(II)、酢酸エチル水銀(II)、臭化エチル水銀(II)、塩化エチル水銀(II)、エチル水銀2,3-ジヒドロキシプロピルメルカプチド(ethylmercury 2,3-dihydroxypropyl mercaptide)、エチル水銀ホスフェート、N-(エチル水銀)-p-トルエンスルホンアニリド、ヒドラルガフェン、塩化2-メトキシエチル水銀、安息香酸メチル水銀、メチル水銀ジシアンジアミド、メチル水銀ペンタクロロフェノキシド、8-フェニル水銀オキシキノリン(8-phenylmercurioxyquinoline)、フェニル水銀ウレア(phenylmercuriurea)、酢酸フェニル水銀、塩化フェニル水銀、ピロカテコールのフェニル水銀誘導体、硝酸フェニル水銀、サリチル酸フェニル水銀、チメロサール(thiomersal)、トリル水銀アセテート);モルホリン殺真菌剤(アルジモルフ、ベンザモルフ、カルバモルフ、ジメトモルフ、ドデモルフ、フェンプロピモルフ、フルモルフ、トリデモルフ);有機リン殺真菌剤(アンプロピルホス、ジタリムホス、EBP、エジフェンホス、ホセチル、ヘキシルチオホス、イネジン、イプロベンホス、イゾパムホス(izopamfos)、ケジュンリン(kejunlin)、ホスダイフェン、ピラゾホス、トルクロホスメチル、トリアミホス);有機スズ殺真菌剤(デカフェンチン、フェンチン、酸化トリブチルスズ);オキサチイン(oxathiin)殺真菌剤(カルボキシン、オキシカルボキシン);オキサゾール殺真菌剤(クロゾリネート、ジクロゾリン、ドラゾキソロン、ファモキサドン、ヒメキサゾール、メタゾキソロン、ミクロゾリン、オキサジキシル、オキサチアピプロリン、ピリソキサゾール、ビンクロゾリン);ポリスルフィド殺真菌剤(多硫化バリウム(barium polysulfide)、多硫化カルシウム(calcium polysulfide)、多硫化カリウム(potassium polysulfide)、多硫化ナトリウム(sodium polysulfide));ピラゾール殺真菌剤(ベンゾビンジフルピル、ビキサフェン、フェンピラザミン、フルキサピロキサド、フラメトピル、イソピラザム、オキサチアピプロリン、ペンフルフェン、ペンチオピラド、ピラクロストロビン、ピラメトストロビン、ピラオキシストロビン、ラベンザゾール、セダキサン);ピリジン殺真菌剤(ボスカリド、ブチオベート、ジピリチオン、フルアジナム、フルオピコリド、フルオピラム、パリノール、ピカルブトラゾクス、ピリベンカルブ、ピリジニトリル、ピリフェノックス、ピリソキサゾール、ピロキシクロル、ピロキシフル、トリクロピリカルブ);ピリミジン殺真菌剤(ブピリメート、ジフルメトリム、ジメチリモール、エチリモール、フェナリモール、フェリムゾン、ヌアリモール、トリアリモール);アニリノピリミジン殺真菌剤(シプロジニル、メパニピリム、ピリメタニル);ピロール殺真菌剤(ジメタクロン(dimetachlone)、フェンピクロニル、フルジオキソニル、フルオロイミド);四級アンモニウム殺真菌剤(ベルベリン、サンギナリン);キノリン殺真菌剤(エトキシキン、ハラクリネート、8-ヒドロキシキノリンスルフェート、キナセトール、キノキシフェン、テブフロキン);キノン殺真菌剤(クロラニル、ジクロン、ジチアノン);キノキサリン殺真菌剤(キノメチオネート、クロルキノックス、チオキノックス);チアジアゾール殺真菌剤(エトリジアゾール、サイセントン(saise
ntong)、チアジアゾール銅(thiodiazole-copper)、亜鉛チアゾール(zinc thiazole));チアゾール殺真菌剤(エタボキサム、イソチアニル、メトスルホバックス、オクチリノン、オキサチアピプロリン、チアベンダゾール、チフルザミド);チアゾリジン殺真菌剤(フルチアニル、チアジフルオール);チオカルバメート殺真菌剤(メタスルホカルブ、プロチオカルブ);チオフェン殺真菌剤(エタボキサム、イソフェタミド、シルチオファム);トリアジン殺真菌剤(アニラジン);トリアゾール殺真菌剤(アミスルブロム、ビテルタノール、フルオトリマゾール、トリアズブチル);コナゾール殺真菌剤(トリアゾール)(アザコナゾール、ブロムコナゾール、シプロコナゾール、ジクロブトラゾール、ジフェノコナゾール、ジニコナゾール、ジニコナゾールM、エポキシコナゾール、エタコナゾール、フェンブコナゾール、フルキンコナゾール、フルシラゾール、フルトリアホール、フルコナゾール、フルコナゾール・シス、ヘキサコナゾール、フアンジュンズオ(huanjunzuo)、イミベンコナゾール、イプコナゾール、メトコナゾール、ミクロブタニル、ペンコナゾール、プロピコナゾール、プロチオコナゾール、キンコナゾール、シメコナゾール、テブコナゾール、テトラコナゾール、トリアジメホン、トリアジメノール、トリチコナゾール、ウニコナゾール、ウニコナゾールP);トリアゾロピリミジン殺真菌剤(アメトクトラジン);ウレア殺真菌剤(ベンタルロン、ペンシクロン、キナザミド);亜鉛殺真菌剤(アシペタックス亜鉛、クロム酸銅亜鉛、クフラネブ、マンコゼブ、メチラム、ポリカルバメート、ポリオキソリム-亜鉛、プロピネブ、ナフテン酸亜鉛、亜鉛チアゾール(zinc thiazole)、亜鉛トリクロロフェノキシド(zinc trichlorophenoxide)、ジネブ、ジラム);未分類殺真菌剤(アシベンゾラル、アシペタックス、アリルアルコール、塩化ベンザルコニウム、ベトキサジン、ブロモタロニル(bromothalonil)、キトサン、クロロピクリン、DBCP、デヒドロ酢酸、ジクロメジン、ジエチルピロカーボネート、エチリシン(ethylicin)、フェナミノスルフ、フェニトロパン、フェンプロピジン、ホルムアルデヒド、フルフラール、ヘキサクロロブタジエン、メチルイソチオシアネート、ニトロスチレン、ニトロタル-イソプロピル、OCH、ペンタクロロフェニルラウレート、2-フェニルフェノール、フタリド、ピペラリン、プロパミジン、プロキナジド、ピロキロン、ナトリウムオルトフェニルフェノキシド、スピロキサミン、スルトロペン、チシオフェン、トリシクラゾール)またはメフェノキサム。
本発明のいくつかの実施形態において、本明細書で提供される細菌株もしくはその活性改変体、および/またはこれらに由来する組成物、ならびに少なくとも1種の殺生物剤を、空間的に別個にした配置において含むパーツのキットが、提供される。いくつかの実施形態において、上記殺生物剤は、除草剤、殺真菌剤、殺虫剤、農薬、または他の農作物保護化学物質である。
本発明の非限定的実施形態は、以下を包含する:
1. 以下:
(a)細菌株AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体の少なくとも1つであって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含み、そしてここで前記細菌株もしくはその活性改変体は、約10 CFU/g~約1012 CFU/gまたは約10 CFU/ml~約1012 CFU/mlで存在する、細菌株またはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つ;
(b)AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちのいずれか1つに由来する、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせのうちの少なくとも1つであって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含み、そしてここで前記胞子、前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせ、またはこれらのうちのいずれかの活性改変体は、約10 CFU/g~約1012 CFU/gまたは約10 CFU/ml~約1012 CFU/mlで存在する、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせのうちの少なくとも1つ;ならびに/あるいは
(c)細菌株AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つの全細胞培養物に由来する上清、濾液、または抽出物であって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含む、上清、濾液、または抽出物、
を含む組成物。
2. 前記植物有害生物は、真菌有害生物を含む、実施形態1に記載の組成物。
3. 前記真菌有害生物は、Aspergillus spp.、Aspergillus flavus、Botrytis cinerea、Cersospora spp、Cercospora sojina、Cercospora beticola、Alternaria solani、Rhizoctonia solani、Blumeria graminis、Bremia lactucae、Erysiphe necator、Podosphaera spp.、Podosphaera xanthii、Golovinomyces cichoracearum、Erysiphe lagerstroemiae、Sphaerotheca pannosa、Colletotrichm spp.、Colletotrichum sublineolum、Colletotrichum cereale、Colletotrichum gloeosporiodes、Apiognomonia errabunda、Apiognomonia veneta、Discula fraxinea、Plasmopara viticola、Pseudoperonospora cubensis、Peronospora spp.、Peronospora belbahrii、Peronospora lamii、Plasmopara obduscens、Pythium cryptoirregulare、Pythium aphanidermatum、Pythium irregulare、Pythium sylvaticum、Pythium myriotylum、Pythium ultimum、Phytophthora spp.、Phytophthora capsici、Phytophthora nicotianae、Phytophthora infestans、Phytophthora tropicalis、Phytophthora sojae、Fusarium spp.、Fusarium virguliforme、Fusarium graminearum、Fusarium solani、Fusarium oxysporum、Fusarium graminicola、Gibberella zeae、Colletotrichum graminicola、Phakopsora spp.、Phakopsora meibomiae、Phakopsora pachyrizi、Puccinia triticina、Puccinia recondita、Puccinia striiformis、Puccinia graminis、Puccinia spp.、Venturia inaequalis、Verticillium spp、Mycosphaerella spp.、Mycosphaerella fijiensis、Monilinia fructicola、Monilinia lax、およびMonilinia fructigenaからなる群より選択される1種もしくはこれより多くの真菌病原体を含む、実施形態2に記載の組成物。
4. 前記有害生物は、昆虫有害生物である、実施形態1に記載の組成物。
5. 前記昆虫有害生物は、甲虫類、鱗翅類、または半翅類の昆虫である、実施形態4に記載の組成物。
6. 前記細胞、胞子、前胞子、または細胞、胞子、および/もしくは前胞子の組み合わせ、またはこれらのうちのいずれかの活性誘導体は、約10CFU/g~約1010 CFU/gでまたは約10CFU/ml~約1010 CFU/mlで存在する、実施形態1~5のいずれかに記載の組成物。
7. 前記組成物は、細胞ペーストを含む、実施形態1~6のいずれかに記載の組成物。
8. 前記組成物は、水和剤を含む、実施形態1~7のいずれか1つに記載の組成物。
9. 細菌株AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つの細胞、胞子、前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせを含む細胞ペーストを含む組成物であって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する、細胞、胞子、前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせを含み;
ここで有効量の前記組成物は、植物有害生物を制御するか、または植物の目的の農学上の形質を改善する、
組成物。
10. 前記植物有害生物は、真菌有害生物を含む、実施形態9に記載の組成物。
11. 前記真菌有害生物は、Aspergillus spp.、Aspergillus flavus、Botrytis cinerea、Cersospora spp、Cercospora sojina、Cercospora beticola、Alternaria solani、Rhizoctonia solani、Blumeria graminis、Bremia lactucae、Erysiphe necator、Podosphaera spp.、Podosphaera xanthii、Golovinomyces cichoracearum、Erysiphe lagerstroemiae、Sphaerotheca pannosa、Colletotrichm spp.、Colletotrichum sublineolum、Colletotrichum cereale、Colletotrichum gloeosporiodes、Apiognomonia errabunda、Apiognomonia veneta、Discula fraxinea、Plasmopara viticola、Pseudoperonospora cubensis、Peronospora spp.、Peronospora belbahrii、Peronospora lamii、Plasmopara obduscens、Pythium cryptoirregulare、Pythium aphanidermatum、Pythium irregulare、Pythium sylvaticum、Pythium myriotylum、Pythium ultimum、Phytophthora spp.、Phytophthora capsici、Phytophthora nicotianae、Phytophthora infestans、Phytophthora tropicalis、Phytophthora sojae、Fusarium spp.、Fusarium virguliforme、Fusarium graminearum、Fusarium solani、Fusarium oxysporum、Fusarium graminicola、Gibberella zeae、Colletotrichum graminicola、Phakopsora spp.、Phakopsora meibomiae、Phakopsora pachyrizi、Puccinia triticina、Puccinia recondita、Puccinia striiformis、Puccinia graminis、Puccinia spp.、Venturia inaequalis、Verticillium spp、Mycosphaerella spp.、Mycosphaerella fijiensis、Monilinia fructicola、Monilinia lax、およびMonilinia fructigenaからなる群より選択される1種もしくはこれより多くの真菌病原体を含む、実施形態10に記載の組成物。
12. 前記植物有害生物は、昆虫有害生物である、実施形態9に記載の組成物。
13. 前記昆虫有害生物は、甲虫類、鱗翅類、または半翅類の昆虫である、実施形態12に記載の組成物。
14. 以下:
(a)細菌株AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つであって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含み、そしてここで前記細菌株もしくはその活性改変体は、約10 CFU/g~約1012 CFU/gまたは約10 CFU/ml~約1012 CFU/mlで存在する、細菌株またはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つ;
(b)AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちのいずれかに由来する、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせのうちの少なくとも1つであって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含み、そしてここで前記胞子、前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせ、またはこれらのうちのいずれかの活性改変体は、約10 CFU/g~約1012 CFU/gまたは約10 CFU/ml~約1012 CFU/mlで存在する、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせのうちの少なくとも1つ;ならびに/または
(c)細菌株AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つの全細胞培養物に由来する上清、濾液、または抽出物であって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含む、上清、濾液、または抽出物;
を含む水和剤を含む組成物であって、
ここで有効量の前記組成物は、植物有害生物を制御するか、または植物の目的の農学上の形質を改善する、
組成物。
15. 前記植物有害生物は、少なくとも1種の真菌有害生物を含む、実施形態14に記載の組成物。
16. 前記真菌有害生物は、Aspergillus spp.、Aspergillus flavus、Botrytis cinerea、Cersospora spp、Cercospora sojina、Cercospora beticola、Alternaria solani、Rhizoctonia solani、Blumeria graminis、Bremia lactucae、Erysiphe necator、Podosphaera spp.、Podosphaera xanthii、Golovinomyces cichoracearum、Erysiphe lagerstroemiae、Sphaerotheca pannosa、Colletotrichm spp.、Colletotrichum sublineolum、Colletotrichum cereale、Colletotrichum gloeosporiodes、Apiognomonia errabunda、Apiognomonia veneta、Discula fraxinea、Plasmopara viticola、Pseudoperonospora cubensis、Peronospora spp.、Peronospora belbahrii、Peronospora lamii、Plasmopara obduscens、Pythium cryptoirregulare、Pythium aphanidermatum、Pythium irregulare、Pythium sylvaticum、Pythium myriotylum、Pythium ultimum、Phytophthora spp.、Phytophthora capsici、Phytophthora nicotianae、Phytophthora infestans、Phytophthora tropicalis、Phytophthora sojae、Fusarium spp.、Fusarium virguliforme、Fusarium graminearum、Fusarium solani、Fusarium oxysporum、Fusarium graminicola、Gibberella zeae、Colletotrichum graminicola、Phakopsora spp.、Phakopsora meibomiae、Phakopsora pachyrizi、Puccinia triticina、Puccinia recondita、Puccinia striiformis、Puccinia graminis、Puccinia spp.、Venturia inaequalis、Verticillium spp、Mycosphaerella spp.、Mycosphaerella fijiensis、Monilinia fructicola、Monilinia lax、およびMonilinia fructigenaからなる群より選択される1種もしくはこれより多くの真菌病原体を含む、
実施形態15に記載の組成物。
17. 前記植物有害生物(plant plest)は、少なくとも1種の昆虫有害生物を含む、実施形態14に記載の組成物。
18. 前記昆虫有害生物は、甲虫類、鱗翅類、および/または半翅類の昆虫である、実施形態16に記載の組成物。
19. 前記活性改変体は、少なくとも1つの除草剤、殺線虫剤、殺真菌剤、農薬、殺虫剤、または他の農作物保護化学物質に対して抵抗性である、実施形態14~18のいずれか1つに記載の組成物。
20. 前記活性改変体は、除草剤、殺真菌剤、農薬、殺虫剤、または他の農作物保護化学物質の圧の下で選択され、前記除草剤、殺真菌剤、農薬、殺虫剤、または他の農作物保護化学物質に対して抵抗性である、実施形態19に記載の組成物。
21. 前記活性改変体は、前記細胞、胞子、前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせを除草剤抵抗性にする、除草剤抵抗性遺伝子で形質転換されている、実施形態14~20のいずれか1つに記載の組成物。
22. 前記除草剤は、グリホサート、グルホシネート(グルタミンシンターゼインヒビター)、スルホニルウレアおよびイミダゾリノン除草剤(分枝鎖アミノ酸合成インヒビター)からなる群より選択される、実施形態21に記載の組成物。
23. AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体の細胞、胞子、前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせを含む細菌株の単離された生物学的に純粋な培養物であって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細胞、胞子、前胞子、または細胞、胞子、および/もしくは前胞子の組み合わせを含み;
ここで有効量の前記細胞、胞子、前胞子、または細胞、胞子、および/もしくは前胞子の組み合わせは、植物有害生物を制御するか、または植物の目的の農学上の形質を改善する、
単離された生物学的に純粋な培養物。
24. 前記細菌株は、除草剤、殺真菌剤、農薬、殺虫剤、または農作物保護化学物質から選択される殺生物剤に対して抵抗性であり、ここで前記培養物は、前記殺生物剤の存在下で成長させることによって生産される、実施形態23に記載の単離された生物学的に純粋な培養物。
25. 前記生物学的に純粋な培養物は、グリホサートの存在下で成長できる、実施形態24に記載の単離された生物学的に純粋な培養物。
26. 前記植物有害生物は、真菌有害生物を含む、実施形態23~25のいずれか1つに記載の単離された生物学的に純粋な培養物。
27. 前記真菌有害生物は、Aspergillus spp.、Aspergillus flavus、Botrytis cinerea、Cersospora spp、Cercospora sojina、Cercospora beticola、Alternaria solani、Rhizoctonia solani、Blumeria graminis、Bremia lactucae、Erysiphe necator、Podosphaera spp.、Podosphaera xanthii、Golovinomyces cichoracearum、Erysiphe lagerstroemiae、Sphaerotheca pannosa、Colletotrichm spp.、Colletotrichum sublineolum、Colletotrichum cereale、Colletotrichum gloeosporiodes、Apiognomonia errabunda、Apiognomonia veneta、Discula fraxinea、Plasmopara viticola、Pseudoperonospora cubensis、Peronospora spp.、Peronospora belbahrii、Peronospora lamii、Plasmopara obduscens、Pythium cryptoirregulare、Pythium aphanidermatum、Pythium irregulare、Pythium sylvaticum、Pythium myriotylum、Pythium ultimum、Phytophthora spp.、Phytophthora capsici、Phytophthora nicotianae、Phytophthora infestans、Phytophthora tropicalis、Phytophthora sojae、Fusarium spp.、Fusarium virguliforme、Fusarium graminearum、Fusarium solani、Fusarium oxysporum、Fusarium graminicola、Gibberella zeae、Colletotrichum graminicola、Phakopsora spp.、Phakopsora meibomiae、Phakopsora pachyrizi、Puccinia triticina、Puccinia recondita、Puccinia striiformis、Puccinia graminis、Puccinia spp.、Venturia inaequalis、Verticillium spp、Mycosphaerella spp.、Mycosphaerella fijiensis、Monilinia fructicola、Monilinia lax、およびMonilinia fructigenaからなる群より選択される1種もしくはこれより多くの真菌病原体を含む、実施形態26に記載の単離された生物学的に純粋な培養物。
28. 前記植物有害生物は、少なくとも1種の昆虫有害生物を含む、実施形態23~25のいずれか1つに記載の単離された生物学的に純粋な培養物。
29. 前記昆虫有害生物は、甲虫類、鱗翅類、および/または半翅類の昆虫である、実施形態28に記載の単離された生物学的に純粋な培養物。
30. AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体の細胞、胞子、前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせから成長される、細菌培養物であって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細胞、胞子、前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせを含み;
ここで前記細菌培養物は、グルホシネートの存在下で成長でき;そして
ここで有効量の前記細菌培養物は、植物有害生物を制御するか、または植物の目的の農学上の形質を改善する、細菌培養物。
31. 前記植物有害生物は、真菌有害生物を含む、実施形態30に記載の細菌培養物。
32. 前記真菌有害生物は、Aspergillus spp.、Aspergillus flavus、Botrytis cinerea、Cersospora spp、Cercospora sojina、Cercospora beticola、Alternaria solani、Rhizoctonia solani、Blumeria graminis、Bremia lactucae、Erysiphe necator、Podosphaera spp.、Podosphaera xanthii、Golovinomyces cichoracearum、Erysiphe lagerstroemiae、Sphaerotheca pannosa、Colletotrichm spp.、Colletotrichum sublineolum、Colletotrichum cereale、Colletotrichum gloeosporiodes、Apiognomonia errabunda、Apiognomonia veneta、Discula fraxinea、Plasmopara viticola、Pseudoperonospora cubensis、Peronospora spp.、Peronospora belbahrii、Peronospora lamii、Plasmopara obduscens、Pythium cryptoirregulare、Pythium aphanidermatum、Pythium irregulare、Pythium sylvaticum、Pythium myriotylum、Pythium ultimum、Phytophthora spp.、Phytophthora capsici、Phytophthora nicotianae、Phytophthora infestans、Phytophthora tropicalis、Phytophthora sojae、Fusarium spp.、Fusarium virguliforme、Fusarium graminearum、Fusarium solani、Fusarium oxysporum、Fusarium graminicola、Gibberella zeae、Colletotrichum graminicola、Phakopsora spp.、Phakopsora meibomiae、Phakopsora pachyrizi、Puccinia triticina、Puccinia recondita、Puccinia striiformis、Puccinia graminis、Puccinia spp.、Venturia inaequalis、Verticillium spp、Mycosphaerella spp.、Mycosphaerella fijiensis、Monilinia fructicola、Monilinia lax、およびMonilinia fructigenaからなる群より選択される1種もしくはこれより多くの真菌病原体を含む、実施形態31に記載の細菌培養物。
33. 前記植物有害生物は、昆虫有害生物である、実施形態30に記載の細菌培養物。
34. 前記昆虫有害生物は、甲虫類、鱗翅類、および/または半翅類の昆虫である、実施形態33に記載の細菌培養物。
35. 植物有害生物集団を制御するための方法であって、前記方法は、前記集団と、有効量の、実施形態1~22のいずれか1つに記載の組成物、実施形態23~29のいずれか1つに記載の単離された生物学的に純粋な培養物、または実施形態30~34のいずれか1つに記載の細菌培養物とを接触させる工程を包含し、ここで前記細菌株は、前記植物有害生物を制御する、方法。
36. 植物有害生物もしくは植物有害生物によって引き起こされる植物の病気に感受性である植物を成長させるか、または植物において目的の農学上の形質を改善するための方法であって、前記方法は、前記植物に、
(a)有効量の、細菌株AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1種であって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含み、前記有効量は、少なくとも約1012~1016 コロニー形成単位(CFU)/ヘクタールを含む、少なくとも1種;
(b)有効量の、AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706またはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちのいずれか1つに由来する、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせのうちの少なくとも1種であって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含み、前記有効量は、少なくとも約1012~1016 コロニー形成単位(CFU)/ヘクタールを含む、少なくとも1種;ならびに/あるいは
(c)有効量の、細菌株AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つの全細胞培養物に由来する上清、濾液、または抽出物であって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含む、上清、濾液、または抽出物;
を適用する工程を包含し、
ここで前記有効量は、前記植物有害生物を制御するか、または前記目的の農学上の形質を改善する、方法。
37. 前記方法は、前記植物有害生物に対して感受性である植物の収量を増大させる、実施形態36に記載の方法。
38. 前記植物は、ダイズである、実施形態36または37に記載の方法。
39. 前記植物有害生物は、真菌有害生物を含む、実施形態36~38のいずれか1つに記載の方法。
40. 前記真菌有害生物は、Aspergillus spp.、Aspergillus flavus、Botrytis cinerea、Cersospora spp、Cercospora sojina、Cercospora beticola、Alternaria solani、Rhizoctonia solani、Blumeria graminis、Bremia lactucae、Erysiphe necator、Podosphaera spp.、Podosphaera xanthii、Golovinomyces cichoracearum、Erysiphe lagerstroemiae、Sphaerotheca pannosa、Colletotrichm spp.、Colletotrichum sublineolum、Colletotrichum cereale、Colletotrichum gloeosporiodes、Apiognomonia errabunda、Apiognomonia veneta、Discula fraxinea、Plasmopara viticola、Pseudoperonospora cubensis、Peronospora spp.、Peronospora belbahrii、Peronospora lamii、Plasmopara obduscens、Pythium cryptoirregulare、Pythium aphanidermatum、Pythium irregulare、Pythium sylvaticum、Pythium myriotylum、Pythium ultimum、Phytophthora spp.、Phytophthora capsici、Phytophthora nicotianae、Phytophthora infestans、Phytophthora tropicalis、Phytophthora sojae、Fusarium spp.、Fusarium virguliforme、Fusarium graminearum、Fusarium solani、Fusarium oxysporum、Fusarium graminicola、Gibberella zeae、Colletotrichum graminicola、Phakopsora spp.、Phakopsora meibomiae、Phakopsora pachyrizi、Puccinia triticina、Puccinia recondita、Puccinia striiformis、Puccinia graminis、Puccinia spp.、Venturia inaequalis、Verticillium spp、Mycosphaerella spp.、Mycosphaerella fijiensis、Monilinia fructicola、Monilinia lax、and Monilinia fructigenaからなる群より選択される1種もしくはこれより多くの真菌病原体を含む、実施形態39に記載の方法。
41. 前記植物有害生物は、昆虫有害生物である、実施形態36~38のいずれか1つに記載の方法。
42. 前記昆虫有害生物は、甲虫類、鱗翅類、および/または半翅類の昆虫である、実施形態41に記載の方法。
43. 栽培地において植物有害生物を制御する方法であって、前記方法は、
(a)前記栽培地に、前記植物有害生物に感受性である種子または植物を植える工程;および
(b)前記植物有害生物に感受性である種子または植物に、以下:
(i)有効量の、AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体を含む少なくとも1種の細菌株であって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含み、そしてここで前記有効量は、少なくとも約1012~1016 コロニー形成単位(CFU)/ヘクタールを含む、少なくとも1種の細菌株;
(ii)有効量の、AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちのいずれか1つに由来する、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせを含む少なくとも1種の細菌株であって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含み、そしてここで前記有効量は、少なくとも約1012~1016 コロニー形成単位(CFU)/ヘクタールを含む、少なくとも1種の細菌株;あるいは
(iii)有効量の、細菌株AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1種の全細胞培養物に由来する上清、濾液、または抽出物であって、ここで活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含む、上清、濾液、または抽出物;
を適用する工程を包含し、
ここで前記有効量は、栽培地において植物有害生物を制御する、方法。
44. 前記種子または植物は、ダイズである、実施形態43に記載の方法。
45. 前記植物有害生物は、真菌有害生物を含む、実施形態43または44に記載の方法。
46. 前記真菌有害生物は、Aspergillus spp.、Aspergillus flavus、Botrytis cinerea、Cersospora spp、Cercospora sojina、Cercospora beticola、Alternaria solani、Rhizoctonia solani、Blumeria graminis、Bremia lactucae、Erysiphe necator、Podosphaera spp.、Podosphaera xanthii、Golovinomyces cichoracearum、Erysiphe lagerstroemiae、Sphaerotheca pannosa、Colletotrichm spp.、Colletotrichum sublineolum、Colletotrichum cereale、Colletotrichum gloeosporiodes、Apiognomonia errabunda、Apiognomonia veneta、Discula fraxinea、Plasmopara viticola、Pseudoperonospora cubensis、Peronospora spp.、Peronospora belbahrii、Peronospora lamii、Plasmopara obduscens、Pythium cryptoirregulare、Pythium aphanidermatum、Pythium irregulare、Pythium sylvaticum、Pythium myriotylum、Pythium ultimum、Phytophthora spp.、Phytophthora capsici、Phytophthora nicotianae、Phytophthora infestans、Phytophthora tropicalis、Phytophthora sojae、Fusarium spp.、Fusarium virguliforme、Fusarium graminearum、Fusarium solani、Fusarium oxysporum、Fusarium graminicola、Gibberella zeae、Colletotrichum graminicola、Phakopsora spp.、Phakopsora meibomiae、Phakopsora pachyrizi、Puccinia triticina、Puccinia recondita、Puccinia striiformis、Puccinia graminis、Puccinia spp.、Venturia inaequalis、Verticillium spp、Mycosphaerella spp.、Mycosphaerella fijiensis、Monilinia fructicola、Monilinia lax、およびMonilinia fructigenaからなる群より選択される1種もしくはこれより多くの真菌病原体を含む、実施形態45に記載の方法。
47. 前記植物有害生物は、昆虫有害生物である、実施形態43または44に記載の方法。
48. 前記昆虫有害生物は、甲虫類、鱗翅類、および/または半翅類の昆虫である、実施形態46に記載の方法。
49. 前記方法は、有効量の殺生物剤を適用する工程をさらに包含し、ここで前記有効量の殺生物剤は、目的の生物を選択的に制御すると同時に、前記種子または植物に有意に損傷を与えない、実施形態43~48のいずれか1つに記載の方法。
50. 前記細胞、胞子、前胞子、または細胞、胞子、および/もしくは前胞子の組み合わせ、またはこれらのうちのいずれかの活性改変体ならびに前記殺生物剤は、同時に適用される、実施形態49に記載の方法。
51. 前記細胞、胞子、前胞子、または細胞、胞子、および/もしくは前胞子の組み合わせ、またはこれらのうちのいずれかの活性改変体ならびに前記殺生物剤は、逐次的に適用される、実施形態49に記載の方法。
52. 前記殺生物剤は、殺線虫剤である、実施形態49~51のいずれか1つに記載の方法。
53. 改変された細菌株を作製する方法であって、前記方法は、
(a)AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体を含む少なくとも1種の細菌株の細胞、胞子、前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせの集団を提供する工程であって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細胞、胞子、前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせを含み、ここで前記集団は、目的の殺生物剤に感受性である、工程;
(b)前記集団を、前記目的の殺生物剤の存在下で培養する工程;ならびに
(c)前記目的の殺生物剤に対して増大した抵抗性を有する改変された細菌株を選択する工程、
を包含する、方法。
54. 前記培養する工程は、前記殺生物剤の濃度を経時的に増大させる工程を包含する、実施形態53に記載の方法。
55. 前記殺生物剤は、グリホサートまたはグルホシネートである、実施形態53または54に記載の方法。
56. 植物有害生物によって引き起こされる植物の病気または損傷を処理または防止する方法であって、前記方法は、前記植物有害生物、前記植物の病気、前記損傷を有し、前記植物有害生物に感受性であるか、または前記植物の病気もしくは損傷を発生させるリスクにある植物に、以下:
(a)細菌株AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つであって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含み、前記有効量は、少なくとも約1012~1016 CFU/ヘクタールを含む、少なくとも1つ;
(b)AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちのいずれか1種に由来する、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせのうちの少なくとも1つであって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含み、ここで前記有効量は、少なくとも約1012~1016 CFU/ヘクタールを含む、少なくとも1つ;ならびに/あるいは
(c)有効量の、細菌株AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つの全細胞培養物に由来する上清、濾液、または抽出物であって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含む、上清、濾液、または抽出物;
を適用する工程を包含し、ここで前記有効量は、前記植物の病気を引き起こす前記植物有害生物を制御する、方法。
57. 前記植物は、ダイズである、実施形態56に記載の方法。
58. 前記細菌株もしくはその活性改変体は、1種もしくはこれより多くの植物の病気を処理または防止する、実施形態56または57に記載の方法。
59. 前記1種もしくはこれより多くの植物の病気は、真菌有害生物によって引き起こされる、実施形態58に記載の方法。
60. 前記真菌有害生物は、Aspergillus spp.、Aspergillus flavus、Botrytis cinerea、Cersospora spp、Cercospora sojina、Cercospora beticola、Alternaria solani、Rhizoctonia solani、Blumeria graminis、Bremia lactucae、Erysiphe necator、Podosphaera spp.、Podosphaera xanthii、Golovinomyces cichoracearum、Erysiphe lagerstroemiae、Sphaerotheca pannosa、Colletotrichm spp.、Colletotrichum sublineolum、Colletotrichum cereale、Colletotrichum gloeosporiodes、Apiognomonia errabunda、Apiognomonia veneta、Discula fraxinea、Plasmopara viticola、Pseudoperonospora cubensis、Peronospora spp.、Peronospora belbahrii、Peronospora lamii、Plasmopara obduscens、Pythium cryptoirregulare、Pythium aphanidermatum、Pythium irregulare、Pythium sylvaticum、Pythium myriotylum、Pythium ultimum、Phytophthora spp.、Phytophthora capsici、Phytophthora nicotianae、Phytophthora infestans、Phytophthora tropicalis、Phytophthora sojae、Fusarium spp.、Fusarium virguliforme、Fusarium graminearum、Fusarium solani、Fusarium oxysporum、Fusarium graminicola、Gibberella zeae、Colletotrichum graminicola、Phakopsora spp.、Phakopsora meibomiae、Phakopsora pachyrizi、Puccinia triticina、Puccinia recondita、Puccinia striiformis、Puccinia graminis、Puccinia spp.、Venturia inaequalis、Verticillium spp、Mycosphaerella spp.、Mycosphaerella fijiensis、Monilinia fructicola、Monilinia lax、およびMonilinia fructigenaからなる群より選択される1種もしくはこれより多くの真菌病原体を含む、実施形態59に記載の方法。
61. 前記1種もしくはこれより多くの植物の病気は、昆虫有害生物によって引き起こされる、実施形態58に記載の方法。
62. 前記昆虫有害生物は、甲虫類、鱗翅類、および/または半翅類の昆虫である、実施形態61に記載の方法。
63. 殺生物剤ならびに以下:
(a)細菌株AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つであって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含む、少なくとも1つ、
(b)AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちのいずれか1つに由来する、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせのうちの少なくとも1つであって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含む、少なくとも1つ;ならびに/あるいは
(c)細菌株AIP045885、AIP075655、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP059286、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つの全細胞培養物に由来する上清、濾液、または抽出物であって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含む、上清、濾液、または抽出物、
のうちの少なくとも1つを含むパーツのキット。
64. 前記殺生物剤は、除草剤、殺真菌剤、殺虫剤、殺線虫剤、または農薬である、実施形態63に記載のキット。
以下の実施例は、例証のために提供されるのであって、限定のために提供されるのではない。
実施例1.微生物株および培養方法
表2: 有害生物活性の阻害を評価するために選択された細菌株
Figure 2022509508000004
表2に示される細菌株を、培地中で培養した。表3Aは、インキュベーション時間および達成される細菌濃度(CFU/ml)をまとめる。表3Bは、培地配合表を提供する。
表3A: 培養条件
Figure 2022509508000005
表3B: 培地配合表
Figure 2022509508000006
実施例2:アジア型ダイズさび病に対する細菌株の評価
植物材料: 感受性ダイズ品種Williams 82を、切断葉(detached-leaf)技術(Twizeyimana and Hartman, 2010)を使用して、および生育チャンバ中の全植物体を使用して、株評価において使用した。簡潔には、ダイズ種子を、18セルプラスチック挿入物中に蒔き、これにソイルレスミックス(Sunshine Mix, LC1; Sun Gro Horticulture Inc., Bellevue, WA)を満たし、平箱の中に置いた。セルに、蒔いたときに、遅延放出ペレット(Osmocote 19-6-12; 2ペレット/cm)を施肥した。平箱を、70% 相対湿度(RH)で、14時間明および10時間暗の毎日のサイクルで、それぞれ24℃および20℃において維持した生育チャンバ(Percival Scientific, Inc., Boone, IA)の中で維持した。
細菌株:表2に示される細菌株を、Luria Bertani培地上に、または液体培養(1Lあたり、NaCl(5g)、トリプトン(10g)、栄養ブロス(8g)、CaCl(0.14mM)、MgCl・6HO(0.2mM)、およびMnCl・4HO(0.01mM)からなるCHA培地)において、プレートし、精製して、単一のコロニーを得た。単一のコロニーを形態学的にまたは分子技術を使用して特徴付けた。
Phakopsora pachyrhizi単離体:単離体FL07-1を、全ての接種において使用した。その単離体は、2007年にGadseden County(Florida)から集めたダイズ感染葉から得た単一の胞子単離体であった。
株評価:
切断葉に対する評価: 簡潔には、葉のディスク(各3cm直径)に、120μlのP. pachyrhiziの細菌株(1×10 胞子/ml 水)を噴霧した。葉のディスクに、細菌株の適用の1日後に、120μl P. pachyrhiziの胞子懸濁物(1×10 胞子/ml 滅菌蒸留水)を接種した。上記細菌株およびP.pachyrhizi接種物の適用の両方を、空気コンプレッサーに取り付けた噴霧器を使用して行った(Twizeyimana and Hartman, 2010)。葉のディスクを、プラスチック容器(Blister Box 20×20cm, Placon, Madison, WI)中で、飽和20×20cm 濾紙(Whatman International Ltd., Kent, England)上に向軸面を下にして置いた;2枚の濾紙を1箱あたり使用した。葉のディスクの入った箱を、遮光して12時間インキュベートし、続いて、23℃および95% RHで維持した組織チャンバ(Percival Scientific, Inc.)の中で13時間明(380umol m-2s-1)および11時間暗のサイクルでインキュベートした。インキュベーションの前に、箱をジップバッグ(Webster Industries, Peabody, MA)の中に入れた。その実験設計は、2つの複製を伴う完全乱塊法(randomized complete block design)であり、1回反復した。
全植物体に対する評価: 細菌株を、それらの夏胞子層の計数に基づいて初期スクリーニング(葉のディスクを使用して行った)から選択し、生育チャンバ中での全植物体に対して評価した。この評価では、植物がV2ステージ(Fehrら 1971)にあるときに、第1の完全に拡がった三つ葉に、上記細菌株を噴霧し、P.pachyrhiziでの接種を、切断葉評価において記載されるように1日後に行った。噴霧した植物を、それぞれ、22℃および24℃において、75% RHでの生育チャンバ中、14時間および10時間の明暗の1日サイクルで維持した。その実験設計は、3つの複製を伴う完全乱塊法であり、1回反復した。
データ収集および結果:両方の評価において、記録したデータは、接種後14日間記録した1cm直径の円の中の夏胞子層の数(夏胞子層の計数)であった。1cm直径の円の中で<10 夏胞子層を有する9個の細菌株を、生育チャンバ中の全植物体に対する評価後に、圃場で試験するために選択した。
表4:Phakopsora pachyrhiziに対する細菌株の活性
Figure 2022509508000007
実施例3:トマトに対する疫病に対する細菌株の評価
トマト品種Money Makerを、剥離葉アッセイにおいて使用して、目的の細菌株を評価した。4~5週齢のトマト植物の完全に拡がった葉を切除し、3.5cm直径コルクボーラーを使用して、等しいサイズのディスクにした。接種物を調製するために、P.infestans(遺伝子型US-23)を、ノースカロライナのトマトから単離した(North Carolina State UniversityのRistaino博士の研究室から得た)。2週齢の活発に成長している培養物を、滅菌蒸留水で水浸しにし、菌糸体をそぎ落とした。次いで、菌糸体懸濁物を一貫性のために破断した。
目的の細菌株の各々を、Luria Bertani(LB)アガーペトリプレートに画線培養した。1個のコロニーを拾い上げ、50mlのLB液体培地中に、または250ml フラスコ中の液体培養(CHA培地;1Lあたり、NaCl(5g)、トリプトン(10g)、栄養ブロス(8g)、CaCl(0.14mM)、MgCl・6HO(0.2mM)、およびMnCl・4HO(0.01mM))に配置した。細胞をペレット化し、滅菌脱イオン水中で元の容積に再懸濁することによって、48時間後に培養物を採取した。各培養物を滴定して、標準的な希釈プレート計数法を使用してCFU/mLを決定し、プレートを夾雑の徴候に関して検査した。滅菌蒸留水を添加して、株の評価に必要とされる最終濃度を達成した。
葉のディスク(各3.5cm直径)に、15mLコニカル遠心分離チューブ(Fisher Scientific, Cat No.14-59-53A)に取り付けたリブ付きスカート微細ミストフィンガーチップ噴霧器(ribbed skirt fine mist fingertip sprayer)(ID-S009, Container & Packaging Supply, Eagle, ID)を使用して、120μLの細菌株(1×10 CFU/mL、塩化マグネシウム緩衝液中に懸濁)を噴霧した。葉のディスクに、細菌株の適用の24時間後に、30μL液滴のP.infestans菌糸懸濁物を接種した。その葉のディスクを、プラスチック容器(BlisterBox P5887, 20×20cm, Placon, Madison, WI)の中で、背軸面をWhatmanTM 3MM クロマトグラフィー紙、20×20cm(Fisher Scientific Cat No. 3030-861)の飽和させた二重層と接触させて置いた。葉のディスクの入った箱を、二重ジッパー付きガロンサイズ保存バッグ(ZIP IGS250-448632, AEP Industrial Inc. Montvale NJ)の内側に入れ、13時間明および11時間暗のサイクルに設定し、18℃および95% RHに維持した生育チャンバ(Percival Scientific, Inc)においてインキュベートした。実験設計は、2つの複製を伴う完全乱塊法であり、実験を1回反復した。
疫病重篤度を、7日後に評価した。病気の制御のパーセントは、病原体による感染をどの程度十分に防止したかを示す。結果を表5に示す。
表5: Phytophthora infestansに対する細菌株の活性
Figure 2022509508000008
実施例4:Colletotrichum sublineolum(ソルガム炭疽病)に対する細菌株の評価)
ソルガム品種12-GS9016-KS585を、細菌株評価用の葉組織を安定して供給するために、温室の中で生長させた。4~6週齢の植物の完全に拡がったソルガムの葉を切除し、2.5cm幅の等しい小片に切断した。Colletotrichum sublineolum(Texas A&M UniversityのIsakeit博士の研究室から得た)を、20% オートミールアガー上で14日間成長させた。活発に成長している培養物を、滅菌蒸留水で水浸しにして、胞子を追い出した。次いで、懸濁物の濃度を、1×10 胞子/mLに調節した。次いで、Tween(登録商標) 20を0.05%になるようにその懸濁物に添加した。
目的の細菌株の各々を、Luria Bertani(LB)アガーペトリプレートに画線培養した。1個のコロニーを拾い上げ、50mlのLB液体培地中に、または250ml フラスコ中の液体培養(CHA培地;1Lあたり、NaCl(5g)、トリプトン(10g)、栄養ブロス(8g)、CaCl(0.14mM)、MgCl・6HO(0.2mM)、およびMnCl・4HO(0.01mM))に配置した。細胞をペレット化し、滅菌脱イオン水中で元の容積に再懸濁することによって、48時間後に培養物を採取した。各培養物を滴定して、標準的な希釈プレート計数法を使用してCFU/mLを決定し、プレートを夾雑の徴候に関して検査した。滅菌蒸留水を添加して、株の評価に必要とされる最終濃度を達成した。
葉片に、15mLコニカル遠心分離チューブ(Fisher Scientific, Cat No.14-59-53A)に取り付けたリブ付きスカート微細ミストフィンガーチップ噴霧器(ID-S009, Container & Packaging Supply, Eagle, ID)を使用して、120μLの各細菌株(1×10 CFU/mL、塩化マグネシウム緩衝液中に懸濁)を噴霧した。次いで、その処理した葉片を、6-ベンジルアミノプリン(BAP)改変1%素寒天(water agar)上にプレートし、室温において暗所でインキュベートした。処理の24時間後、その葉片に、中間リブの各側に適用した、30μL液滴のC.sublineolum胞子懸濁物を接種した。次いで、そのプレートを、12時間明期に設定し、25℃および95%相対湿度において維持した生育チャンバ(Percival Scientific, Inc)の中でインキュベートした。実験設計は、2つの複製を伴う完全乱塊法であり、実験を2回反復した。
炭疽病重篤度を、Promら,2016(Plant Path J. 15(1): 11-16)に従ってわずかに改変して、7日後に0~4のスケールで評価した。0=症状または斑紋(chlorotic flecks)なし;1=分生子層を伴わない過敏反応;2=微小のおよび数個の分生子層を伴う病変;3=葉組織のうちの≦25%に微小のおよび数個の分生子層を伴う病変;ならびに4=葉表面のうちの≧25%を覆う分生子層を伴う病変。結果(表6)を、JMP(登録商標)(バージョン13.2.1; SAS Institute Inc., Cary, NC)の中の分散分析(ANOVA)を使用して分析し、有意差(P<0.05)を、細菌株間で観察した。
表6:ソルガムの剥離葉アッセイでの細菌株による炭疽病制御(%)
Figure 2022509508000009
Figure 2022509508000010
実施例5: Podosphaera xanthii(ウリ科植物に対するうどんこ病)に対する細菌株の評価
健康な押しつぶした葉のディスクを切除し、大型コルクボーラーを使用して、直径35mmの均一な葉のディスクへと切断した。実験ユニットは、1枚の葉ディスク(各々、選択した細菌の懸濁物で処理)からなった。処理は、AgBiome株AIP061382、AIP075655、およびAIP029105、ならびにコントロール処理を含んだ。コントロールは、非接種のおよび接種した葉のディスク、ならびに陽性コントロールとして10ppmの合成殺真菌剤テブコナゾールであった。細菌株を、実施例2に記載されるように調製した。各葉のディスクに、200μLの処理(細菌懸濁物または合成殺真菌剤)を向軸面に、病原体Podosphaera xanthii(McGrath博士の研究室(Cornell University)から得た株)を接種する24時間前に噴霧した。上記殺真菌剤での処理後、葉のディスクを、23℃において24時間暗所でインキュベートした。
葉のディスクに、上記処理した葉の表面にP.xanthii分生子の1×10 懸濁物を噴霧することによって接種した。処理したものを、密封した透明なブラスチック箱の中に入れ、25℃において、相対湿度80%および12時間明期で6日間インキュベートした。各処理を、0~4の病気の重篤度スケールで評価した。0は症状なしであり、4は、葉ディスクのうちの50%超がコロニーで覆われている。うどんこ病コロニーの数をまた、各処理に対して記録した。この実験を、各処理を2~3回複製して1回行った。データをSAS JMPバージョン14.0において分析した。結果を表7に示す。
表7: 剥離し、押しつぶした葉のディスクでの細菌株によるうどんこ病の制御
Figure 2022509508000011
Figure 2022509508000012
実施例6: Mycosphaerella fijiensis(シガトカ病)に対する細菌株の評価
感受性バナナ品種Grand Nainを使用した。植物を、病気のない葉を絶えず供給するために、温室の中で維持した。この評価において使用した接種物は、International of Tropical Agriculture(IITA)(Ibadan, Nigeria)から得たM.fijiensis培養物であり、V8ジュースアガー上で維持した。
小さな葉片(4cm長×3cm幅)を、切除した葉から切断した。2枚の葉片を、プラスチックペトリ皿の中に、向軸側を5mg/リットル ジベレリン酸改変アガー上に接するようにして入れた。葉片に、フィンガーチップ噴霧器を使用して、120μLの細菌株(1×10 CFU/mL 滅菌蒸留水)を噴霧した。葉片の入ったペトリ皿を、室温において暗所で24時間インキュベートした。次いで、葉片に、M.fijiensisの菌糸体懸濁物を接種した。成長している培養物からそぎ落とした菌糸体断片を、ホモジナイザー(Omni International, Kennesaw, GA)を使用して、滅菌蒸留水(50ml コニカルチューブ中)の中でより小さな菌糸体先端部に切断した。その懸濁物を、2層のチーズクロスを通して濾過し、次いで、撹拌した。Tween(登録商標) 20(0.05%)および0.05% Silwet L-77(Loveland Industries Inc., Greeley, CO)を添加し、血球計算板を使用して、その懸濁物を、滅菌蒸留水で1×10 菌糸体断片/mlの濃度へと調節した。接種の1日後、プレートを、14時間明期に設定し、25℃および90%相対湿度に維持した生育チャンバ(Percival Scientific, Inc)の中でインキュベートした。
記録したデータは、データ収集の日付での接種した葉上で最も進行したステージであった(シガトカ病症状発生には6つの認識されたステージが存在する)。データを、SAS(バージョン9.4; SAS Institute Inc., Cary, NC)のPROC GLMの中の分散分析(ANOVA)を使用して分析し、有意差(P<0.05)を処理間で観察した。結果を表8に示す。
表8: Grand Nain葉片上での細菌株によるシガトカ病の制御
Figure 2022509508000013
実施例7: 昆虫種に対する細菌株の評価
実施例7.1: 微生物成長:
出発培養物を、96ウェルブロックに1ml(1ウェルあたり)LB培地を満たすことによって調製する。冷凍庫ストックのスクリーンメイト(screenmate)から、ピペットチップまたは白金耳を使用して、ブロックの各ウェルに細菌株を接種する。この出発培養物を、30℃において、225rpmで24時間振盪しながら成長させる。アッセイ培養物を、2つの48ウェルブロックに約1.7ml(1ウェルあたり)の培地を満たすことによって調製する。その出発培養物の各ウェルから25μlをアッセイ培養ブロックに添加する。アッセイブロックを、30℃で、24時間、48時間または72時間のいずれかにわたって、225rpmにおいて成長させる。
成長させた後、そのアッセイブロックをインキュベーター/振盪機から外し、20分間、4000rpmにおいて遠心分離して、微生物内容物をペレット化する。次いで、そのペレットのみが残るように、その上清を外に注ぐ。次いで、ペレットを0.5ml緩衝液中で再懸濁し、それらをアッセイにおいて使用するまで氷上に置く。全ての微生物調製物を、調製の12時間以内に適用する。
実施例7.2:コロラドハムシの葉ディスクアッセイ:
出発培養物を、96ウェルブロックに1ml(1ウェルあたり)LB培地を満たすことによって調製した。そのブロックの各ウェルに、細菌株を接種した。その出発培養物を、30℃において、225rpmで24時間振盪しながら成長させた。アッセイ培養物を、2つの48ウェルブロックに約1.7ml(1ウェルあたり)の培地を満たすことによって調製した。その出発培養物の各ウェルから25μlをアッセイ培養ブロックに添加した。アッセイブロックを、30℃で、24時間、48時間または72時間のいずれかにわたって、225rpmにおいて成長させた。全ての微生物調製物を、調製の12時間以内に適用した。
1枚のプレフィルターを、24ウェルプレートの各ウェルの中に配置した。50μl ddHOを各フィルターに適用して、実験の間中、相対湿度を維持した。ジャガイモ植物の損傷されておらずまた丸まっていないジャガイモの葉を、使用するのに選択した。#8 コルクボーラーを使用して、葉のディスクを作製した。1枚の葉のディスクを、葉の上側が、24ウェルプレートの各ウェルに上を向くように配置した。100μlの界面活性剤の1%ストック溶液(Silwet ECO spreader)を、微生物調製物を含む各ウェルに添加した。上記培養物を徹底的に混合し、40μlを、ジャガイモの葉のディスク上にピペットで移した。処理を、葉全体に拡げさせた。このプロセスを、あらゆる細菌処理が2枚の葉のディスクに適用されるように反復した。
処理したものが乾燥した後、5~6匹の2齢コロラドハムシ(CPB)幼虫を、各ウェルに添加した。CPB卵を、AgBiome研究室において飼育し、University of Maineから購入した昆虫に由来する。5~6匹の幼虫を各ウェルに添加した後、上記プレートを、感圧式接着カバーで密封し、4個の小さな穴を各ウェルに上に追加した。次いで、プレートを、Percivalインキュベーターの中に入れ、26℃および55% RHにおいて12/12 明:暗期で24時間、維持した。24時間後、プレートを、CPB幼虫が消費した各葉のディスクのパーセントについて評価した。次いで、プレートを、インキュベーターに戻した。処理の48時間後、そのプレートをインキュベーターから取り出し、CPB死滅率を、<20%推定葉消費が24時間読み取りで起こった任意のウェルに関して記録した。微生物を、葉のディスクのうちの20%未満が消費されたおよび/または3回またはこれより多くの独立した反復において80%超の死滅率が存在した場合に、CPBに対して活性であるとみなした。結果を表9に示す。「nt」は、細菌株がCPB葉ディスクアッセイにおいて試験されなかったことを示す。
実施例7.3: ウェスタンコーンルートワームアッセイ:
ウェスタンコーンルートワーム(WCR)の卵を、Crop Characteristics(Farmington, MN)から購入した。60μl容積の全培養微生物懸濁物を、24ウェルプレート(Cellstar, 24-well, Greiner Bio One)のウェルの中の食餌の一番上の表面に接種し、乾燥させた。各ウェルは、500μl 食餌(Marroneら, 1985から改変)を含む。15~20匹の孵化幼虫を、先端が細い絵筆を使用して各ウェル中に導入し、上記プレートを、膜(Viewseal, Greiner Bio One)で覆った。バイオアッセイを周囲温度において保存し、4日目に、死滅率、成長阻害、および/または摂食阻害に関してスコア付けした。微生物を、3回またはこれより多くの独立した反復において70%超の死滅率が存在した場合に、WCRに対して活性とみなした。結果を表9に示す。
表9: 細菌株による昆虫の制御
Figure 2022509508000014
Figure 2022509508000015
実施例8. Rhizoctonia立ち枯れ病アッセイ-- ダイズモック種子処理/畝間(In-Furrow)
11~14日齢のRhizoctonia solani感染子実をすり潰す。そのすり潰した接種物を、#10スクリーンを通してふるいにかけて、十分にすり潰されていないいかなる子実をも除去する。そのすり潰してふるいにかけた感染子実を、容積で1リットルの土壌ミックスに対してすり潰した接種物を1.5グラムで、Fafardスーパーファイン発芽培地に添加する。発芽ミックス、接種物、および75リットルの発芽培地あたり1リットルの水を、セメントミキサーに添加し、全てが十分に一体化するまで混合する。その十分に一体化した培地-接種物材料を、第2のふた付き保持容器の中に入れ、アッセイにおいて使用する前に20℃において18時間保持する。
606セルの植え付けトレイに、接種された発芽培地を堅く詰め込みすぎないように確認して、その培地を満たす。1粒のダイズ種子を、606セルごとに蒔いて、1.5~2cmの深さに埋め、処理を液体製剤として適用する場合には、植え穴を開いたままにする。個々の植え付けセルを、セル/種子あたり3mlにおいて、表2に示される再懸濁した株で処理する。種子処理は、その種子の上部に対して直接行う。一旦処理を適用した後に、その振盪平箱を軽く振盪して、植え穴を閉じる。その植え付けトレイに軽く水を遣り、平箱上の育苗ドーム(humidity dome)内に置く。3~4日後に、平箱を水分に関してチェックし、必要に応じて軽く水を遣って、セルが一様に湿っていることを確実にする。その育苗ドームを、水遣りの後に交換する。
データ収集および結果: 10~12日後、そのアッセイを評価して、発芽した種子の数を決定する。データを、1処理あたり合計6粒の種子の中で発芽した種子のパーセントとして報告する。
実施例9. 種々の細菌株もしくはその活性改変体についての圃場試験
表2に記載される種々の細菌株を、圃場のダイズに適用する。処理を、ASR処理に関する一般処理ガイドラインに従って均一な植物カバレッジを達成するために処理を適用するようにして、16.8ガロン/エーカーで適用する。第1の処理を、R1で適用し、追跡処理を、第1の処理の14日後および28日後に適用する。その具体的処理を以下に概説する。
処理:
1. 非処理チェック
2. 接種チェック
3. 6.2オンス/エーカーでQuadris
4. 2.1オンス/エーカーでQuadris
5. 7.5g/LでAIP045885
6. 7.5g/LでAIP075655
7. 7.5g/LでAIP009474
8. 7.5g/LでAIP024525
9. 7.5g/LでAIP033287
10. 7.5g/LでAIP093798
11. 7.5g/LでAIP061639
12。 7.5g/LでAIP082862
13. 7.5g/LでAIP058187
14. 7.5g/LでAIP059286
15. 7.5g/LでAIP036706
実施例10. 種々の細菌株に関する種々の真菌有害生物に対する圃場試験
表2に記載される種々の細菌株を、表6に列挙される現在の農耕法の下で圃場において表6に列挙される作物に適用して、均一な植物カバレッジを達成し、適切な農耕法に従う。病気につき適切なタイミングで、処理を防止的におよび/または治癒的に適用する。
表6
Figure 2022509508000016
Figure 2022509508000017
その具体的処理を以下に概説する:
葉面有害生物処理リスト:夏疫病
6~10処理
処理容積:100ガロン/エーカー
処理リスト:
1. 非接種、非処理チェック
2. 接種チェック
3. ラベル説明書に適用された協力者が選択した化学物質制御
4. ラベル説明書に適用された生物学的制御Serenade
5. 5g/Lでの実験的生物学的葉面処理+3オンス/100ガロンでのCapsil
実施例11. 種子処理を使用する、種々の細菌株もしくはその活性改変体に関する種々の真菌有害生物に対する圃場試験
表2に記載される種々の細菌株を、圃場に植える前に種子処理として表7に列挙される作物に適用する。細菌株処理を、病気の防止的制御のためにそして表8中の適用割合で適用する。その具体的処理を以下に概説する。
表7
Figure 2022509508000018
種子処理試験処理リスト:
1. 非接種チェック
2. 接種チェック
3. 協力者が選択しかつ適用した病気の適切な種子処理化学チェック
5. 生物学的実験の種子処理
表8
Figure 2022509508000019
実施例12. 畝間処理を使用する、種々の細菌株もしくはその活性改変体に関する種々の真菌有害生物に対する圃場試験
表2に記載される種々の細菌株もしくはその活性改変体を、病気の防止的制御としておよび表9に列挙される処理割合で、植えるときに畝間処理として表8に列挙される作物に適用する。その具体的処理を以下に概説する:
畝間試験処理リスト:
1. 非接種チェック
2. 接種チェック
3. 畝間生物学的処理 5g/L+15ガロン/エーカーにおいて6オンス/100ガロンでのCapsil
4. 協力者が選択しかつ適用したとおりの病気の適切な畝間化学チェック
表9
Figure 2022509508000020
実施例13. 生物学的制御株種子処理プロトコル
種子処理製剤を、10g製剤化株+30ml水+15ml Unicoat Polymerを混合することによって作製する。秤量した種子を滅菌したメイソンジャーの中に入れる。種子重量に基づく種子処理溶液の適切な量(.05ml/25g 種子)を、混合物を60秒間振盪するかまたは種子が視覚的に十分にコーティングされるまで振盪する。その種子を、ホイルローストパン(foil roasting pan)の中に単層にして入れ、1時間、または種子が乾燥するまで、層流フードの下に置く。種子が一旦乾燥した後、それらを気密容器の中に入れて、室温で貯蔵する。
実施例14. 水和剤製剤
表2中で以下に示した株の各々の100gの細胞ペーストを、5gのグリセロールおよび20gの合成ケイ酸カルシウムと、フードプロセッサーを使用して混合する。この材料を、水分活性が0.30未満になるように40℃で乾燥させる。その乾燥粉末製剤を、真空封入したマイラーパウチの中に22℃で貯蔵する。その乾燥粉末製剤は、農薬活性を保持する。
実施例15. Pythium圃場試験
表2に記載される細菌株を、種子処理としてダイズ変種W3103に適用する。その細菌株を、実施例14に記載されるように、水和剤として製剤化し、次いで、10gの製剤化細菌株と30ml水および15ml Seed Coating Polymer(Unicoat)とを合わせ、次いで、均一な溶液が作製されるまで振盪することによって、種子処理に使用する。その完成した溶液を、1kgのダイズ種子に適用し、層流フードの下で12時間乾燥させた。
Pythium接種物を、雑穀の子実上で成長させ、畝間適用を介して1.25g/ftで適用し、1日目に130,000種子/エーカーで蒔いた処理済みダイズを植えたときに、適用した。全列の立っている数を17日後に数えた。その具体的処理を以下に概説する。
処理:
1. 非接種チェック
2. 接種チェック
3. 0.4液量オンス/エーカーでQuadris
4. AIP045885 種子処理
5. AIP075655 種子処理
6. AIP009474 種子処理
7. AIP024525 種子処理
8. AIP033287 種子処理
9. AIP093798 種子処理
10. AIP061639 種子処理
11. AIP082862 種子処理
12. AIP058187 種子処理
13. AIP059286 種子処理
14. AIP036706 種子処理
実施例16. Rhizoctonia solani圃場試験
表2に記載される細菌株を、種子処理としてダイズ変種W3103に適用する。その細菌株を、実施例10に注記されるように、水和剤として各々製剤化し、次いで、10gの製剤化細菌株と30ml 水および15ml Seed Coating Polymer(Unicoat)とを合わせ、次いで、均一な溶液が作製されるまで振盪することによって、種子処理に使用する。その完成した溶液を、1kgのダイズ種子に適用し、層流フードの下で12時間乾燥させる。
Rhizoctonia solani接種物を、ソルガム子実で成長させ、畝間適用を介して1.25g/ftで適用し、1日目に130,000種子/エーカーで蒔いた処理済みダイズを植えたときに、適用する。全列の立っている数を、17日後に数えた。その具体的処理を以下に概説する:
処理:
1. 非接種チェック
2. 接種チェック
3. 0.4液量オンス/エーカーでQuadris
4. AIP045885 種子処理
5. AIP075655 種子処理
6. AIP009474 種子処理
7. AIP024525 種子処理
8. AIP033287 種子処理
9. AIP093798 種子処理
10. AIP061639 種子処理
11. AIP082862 種子処理
12. AIP058187 種子処理
13. AIP059286 種子処理
14. AIP036706 種子処理
Rhizoctonia solani接種物を、ソルガム子実で成長させ、畝間適用を介して1.25g/ftで適用し、1日目に130,000種子/エーカーで蒔いた処理済みダイズを植えたときに、適用する。全列の立っている数を、17日後に数えた。その具体的処理を以下に概説する:
処理:
1. 非接種チェック
2. 接種チェック
3. 0.4液量オンス/エーカーでQuadris
4. AIP045885 種子処理
5. AIP075655 種子処理
6. AIP009474 種子処理
7. AIP024525 種子処理
8. AIP033287 種子処理
9. AIP093798 種子処理
10. AIP061639 種子処理
11. AIP082862 種子処理
12. AIP058187 種子処理
13. AIP059286 種子処理
14. AIP036706 種子処理
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
(項目1)
以下:
(a)細菌株AIP075655、AIP059286、AIP045885、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つであって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含み、そしてここで前記細菌株もしくはその活性改変体は、約10 CFU/g~約10 12 CFU/gまたは約10 CFU/ml~約10 12 CFU/mlで存在する、細菌株またはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つ;
(b)AIP075655、AIP059286、AIP045885、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちのいずれか1種に由来する、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせのうちの少なくとも1つであって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含み、そしてここで前記胞子、前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせ、またはこれらのうちのいずれかの活性改変体は、約10 CFU/g~約10 12 CFU/gまたは約10 CFU/ml~約10 12 CFU/mlで存在する、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせのうちの少なくとも1つ;ならびに/あるいは
(c)細菌株AIP075655、AIP059286、AIP045885、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つの全細胞培養物に由来する上清、発酵産物、濾液または抽出物であって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含む、上清、発酵産物、濾液または抽出物;を含む組成物であって、
ここで有効量の前記組成物は、植物の目的の農学上の形質を改善するか、または植物有害生物もしくは植物の病気を引き起こす植物病原体を制御する、組成物。
(項目2)
前記組成物は、細胞ペースト、水和剤、噴霧乾燥製剤、安定な製剤、または種子処理剤(seed treatment)を含む、項目1に記載の組成物。
(項目3)
以下:
(a)AIP075655、AIP059286、AIP045885、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体であって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含む、細菌株またはこれらのうちのいずれかの活性改変体;あるいは
(b)AIP075655、AIP059286、AIP045885、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちのいずれか1種に由来する、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせであって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含む、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせ;
を含む細菌株の単離された生物学的に純粋な培養物であって、ここで有効量の前記培養物は、植物有害生物を制御するか、または植物の目的の農学上の形質を改善する、単離された生物学的に純粋な培養物。
(項目4)
前記細菌株は、除草剤、殺真菌剤、農薬、殺虫剤、または農作物保護化学物質から選択される殺生物剤に対して抵抗性であり、前記組成物または培養物は、前記殺生物剤の存在下で成長させることによって生産され、前記細菌株は、植物有害生物または植物の病気を引き起こす植物病原体を制御する、項目1もしくは2に記載の組成物、または項目3に記載の単離された生物学的に純粋な培養物。
(項目5)
前記殺生物剤は、グリホサートまたはグルホシネートを含む、項目4に記載の組成物または単離された生物学的に純粋な培養物。
(項目6)
前記植物有害生物は、昆虫有害生物である、項目1,2、4、および5のいずれか1項に記載の組成物または項目3~5のいずれか1項に記載の単離された生物学的に純粋な培養物。
(項目7)
前記昆虫有害生物は、甲虫類の昆虫有害生物、半翅類の昆虫有害生物、または鱗翅類の昆虫有害生物を含む、項目6に記載の組成物または単離された生物学的に純粋な培養物。
(項目8)
前記植物病原体は、少なくとも1種の真菌病原体を含む、項目1,2、4、および5のいずれか1項に記載の組成物または項目3~5のいずれか1項に記載の単離された生物学的に純粋な培養物。
(項目9)
植物有害生物集団を制御するための方法であって、前記方法は、前記集団と、有効量の、項目1、2、もしくは4~8のいずれか1項に記載の組成物または項目3~8のいずれか1項に記載の単離された生物学的に純粋な培養物とを接触させる工程を包含し、ここで細菌株は、前記植物有害生物を制御する、方法。
(項目10)
植物有害生物もしくは植物の病気に感受性である植物を生長させるか、または植物において目的の農学上の形質を改善するための方法であって、前記方法は、前記植物に、
(a)有効量の、細菌株AIP075655、AIP059286、AIP045885、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つであって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含み、前記有効量は、少なくとも約10 12 ~10 16 コロニー形成単位(CFU)/ヘクタールを含む、細菌株もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つ;
(b)有効量の、AIP075655、AIP059286、AIP045885、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちのいずれか1種に由来する、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせのうちの少なくとも1つであって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含み、前記有効量は、少なくとも約10 12 ~10 16 コロニー形成単位(CFU)/ヘクタールを含む、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせのうちの少なくとも1つ;ならびに/あるいは
(c)有効量の、細菌株AIP075655、AIP059286、AIP045885、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つの全細胞培養物に由来する上清、発酵産物、濾液または抽出物であって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含む、上清、発酵産物、濾液または抽出物、
を適用する工程を包含し;
ここで前記有効量は、植物有害生物もしくは前記植物の病気を引き起こす植物病原体を制御するか、または前記目的の農学上の形質を改善する、
方法。
(項目11)
前記方法は、前記植物の病気に感受性である前記植物の収量を増大させる、項目10に記載の方法。
(項目12)
栽培地において植物有害生物または植物の病気を引き起こす植物病原体を制御する方法であって、前記方法は、
(a)前記栽培地に、前記植物有害生物または植物の病気に感受性である種子または植物を植える工程;および
(b)前記植物有害生物または植物の病気に感受性である前記植物に、以下:
(i)有効量の、AIP075655、AIP059286、AIP045885、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体を含む少なくとも1種の細菌株であって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含み、そしてここで前記有効量は、少なくとも約10 12 ~10 16 コロニー形成単位(CFU)/ヘクタールを含む、少なくとも1種の細菌株;
(ii)有効量の、AIP075655、AIP059286、AIP045885、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちのいずれか1種に由来する、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせを含む少なくとも1種の細菌株であって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含み、そしてここで前記有効量は、少なくとも約10 12 ~10 16 コロニー形成単位(CFU)/ヘクタールを含む、少なくとも1種の細菌株;あるいは
(iii)有効量の、細菌株AIP075655、AIP059286、AIP045885、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つの全細胞培養物に由来する上清、発酵産物、濾液または抽出物であって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含む、上清、発酵産物、濾液または抽出物;
を含む、有効量の組成物を適用する工程を包含し、
ここで前記有効量は、栽培地において植物有害生物または植物の病気を引き起こす植物病原体を制御する、
方法。
(項目13)
植物の病気を処理または防止する方法であって、前記方法は、植物有害生物もしくは植物の病気を有するか、または植物有害生物もしくは植物の病気を発生させるリスクにある植物に、有効量の、以下:
(a)細菌株AIP075655、AIP059286、AIP045885、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つであって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含み、前記有効量は、少なくとも約10 12 ~10 16 CFU/ヘクタールを含む、細菌株もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つ;ならびに/あるいは
(b)AIP075655、AIP059286、AIP045885、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちのいずれか1種に由来する、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせのうちの少なくとも1つであって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含み;ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含み、前記有効量は、少なくとも約10 12 ~10 16 CFU/ヘクタールを含む、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせのうちの少なくとも1つ;ならびに/あるいは
(c)有効量の、細菌株AIP075655、AIP059286、AIP045885、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つの全細胞培養物に由来する上清、発酵産物、濾液または抽出物であって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含む、上清、発酵産物、濾液または抽出物、
を適用する工程を包含し、ここで前記有効量は、前記植物有害生物または前記植物の病気を引き起こす植物病原体を制御する、
方法。
(項目14)
前記植物有害生物は、昆虫有害生物である、項目9~13のいずれか1項に記載の方法。
(項目15)
前記昆虫有害生物は、甲虫類の昆虫有害生物、半翅類の昆虫有害生物、または鱗翅類の昆虫有害生物を含む、項目14に記載の方法。
(項目16)
前記植物有害生物または植物病原体は、1種またはこれより多くの真菌病原体である、項目9~13のいずれか1項に記載の方法。
(項目17)
前記方法は、有効量の殺生物剤を適用する工程をさらに包含し、ここで前記有効量の殺生物剤は、目的の生物を選択的に制御すると同時に、作物に有意に損傷を与えない、項目9~16のいずれか1項に記載の方法。
(項目18)
改変された細菌株を作製する方法であって、前記方法は、
(a)AIP075655、AIP059286、AIP045885、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体を含む少なくとも1種の細菌株の集団を提供する工程であって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含み、前記細菌株は、目的の殺生物剤に感受性である、工程;
(b)前記細菌株を、前記目的の殺生物剤の存在下で培養する工程;ならびに
(c)前記目的の殺生物剤に対して増大した抵抗性を有する改変された細菌株を選択する工程、
を包含する、方法。
(項目19)
殺生物剤、ならびに:
(a)細菌株AIP075655、AIP059286、AIP045885、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つであって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含み、ここで有効量は、少なくとも約10 12 ~10 16 コロニー形成単位(CFU)/ヘクタールを含む、細菌株もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つ;
(b)AIP075655、AIP059286、AIP045885、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちのいずれか1種に由来する、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせのうちの少なくとも1つであって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含み、ここで有効量は、少なくとも約10 12 ~10 16 コロニー形成単位(CFU)/ヘクタールを含む、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせのうちの少なくとも1つ;ならびに/あるいは
(c)細菌株AIP075655、AIP059286、AIP045885、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つの全細胞培養物に由来する上清、発酵産物、濾液または抽出物であって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含む、上清、発酵産物、濾液または抽出物、を含むパーツのキット。
(項目20)
前記殺生物剤は、除草剤、殺真菌剤、殺虫剤、殺線虫剤、および/または農薬である、項目19に記載のキット。

Claims (20)

  1. 以下:
    (a)細菌株AIP075655、AIP059286、AIP045885、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つであって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含み、そしてここで前記細菌株もしくはその活性改変体は、約10 CFU/g~約1012 CFU/gまたは約10 CFU/ml~約1012 CFU/mlで存在する、細菌株またはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つ;
    (b)AIP075655、AIP059286、AIP045885、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちのいずれか1種に由来する、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせのうちの少なくとも1つであって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含み、そしてここで前記胞子、前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせ、またはこれらのうちのいずれかの活性改変体は、約10 CFU/g~約1012 CFU/gまたは約10 CFU/ml~約1012 CFU/mlで存在する、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせのうちの少なくとも1つ;ならびに/あるいは
    (c)細菌株AIP075655、AIP059286、AIP045885、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つの全細胞培養物に由来する上清、発酵産物、濾液または抽出物であって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含む、上清、発酵産物、濾液または抽出物;
    を含む組成物であって、
    ここで有効量の前記組成物は、植物の目的の農学上の形質を改善するか、または植物有害生物もしくは植物の病気を引き起こす植物病原体を制御する、組成物。
  2. 前記組成物は、細胞ペースト、水和剤、噴霧乾燥製剤、安定な製剤、または種子処理剤(seed treatment)を含む、請求項1に記載の組成物。
  3. 以下:
    (a)AIP075655、AIP059286、AIP045885、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体であって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含む、細菌株またはこれらのうちのいずれかの活性改変体;あるいは
    (b)AIP075655、AIP059286、AIP045885、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちのいずれか1種に由来する、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせであって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含む、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせ;
    を含む細菌株の単離された生物学的に純粋な培養物であって、ここで有効量の前記培養物は、植物有害生物を制御するか、または植物の目的の農学上の形質を改善する、単離された生物学的に純粋な培養物。
  4. 前記細菌株は、除草剤、殺真菌剤、農薬、殺虫剤、または農作物保護化学物質から選択される殺生物剤に対して抵抗性であり、前記組成物または培養物は、前記殺生物剤の存在下で成長させることによって生産され、前記細菌株は、植物有害生物または植物の病気を引き起こす植物病原体を制御する、請求項1もしくは2に記載の組成物、または請求項3に記載の単離された生物学的に純粋な培養物。
  5. 前記殺生物剤は、グリホサートまたはグルホシネートを含む、請求項4に記載の組成物または単離された生物学的に純粋な培養物。
  6. 前記植物有害生物は、昆虫有害生物である、請求項1,2、4、および5のいずれか1項に記載の組成物または請求項3~5のいずれか1項に記載の単離された生物学的に純粋な培養物。
  7. 前記昆虫有害生物は、甲虫類の昆虫有害生物、半翅類の昆虫有害生物、または鱗翅類の昆虫有害生物を含む、請求項6に記載の組成物または単離された生物学的に純粋な培養物。
  8. 前記植物病原体は、少なくとも1種の真菌病原体を含む、請求項1,2、4、および5のいずれか1項に記載の組成物または請求項3~5のいずれか1項に記載の単離された生物学的に純粋な培養物。
  9. 植物有害生物集団を制御するための方法であって、前記方法は、前記集団と、有効量の、請求項1、2、もしくは4~8のいずれか1項に記載の組成物または請求項3~8のいずれか1項に記載の単離された生物学的に純粋な培養物とを接触させる工程を包含し、ここで細菌株は、前記植物有害生物を制御する、方法。
  10. 植物有害生物もしくは植物の病気に感受性である植物を生長させるか、または植物において目的の農学上の形質を改善するための方法であって、前記方法は、前記植物に、
    (a)有効量の、細菌株AIP075655、AIP059286、AIP045885、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つであって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含み、前記有効量は、少なくとも約1012~1016 コロニー形成単位(CFU)/ヘクタールを含む、細菌株もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つ;
    (b)有効量の、AIP075655、AIP059286、AIP045885、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちのいずれか1種に由来する、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせのうちの少なくとも1つであって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含み、前記有効量は、少なくとも約1012~1016 コロニー形成単位(CFU)/ヘクタールを含む、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせのうちの少なくとも1つ;ならびに/あるいは
    (c)有効量の、細菌株AIP075655、AIP059286、AIP045885、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つの全細胞培養物に由来する上清、発酵産物、濾液または抽出物であって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含む、上清、発酵産物、濾液または抽出物、
    を適用する工程を包含し;
    ここで前記有効量は、植物有害生物もしくは前記植物の病気を引き起こす植物病原体を制御するか、または前記目的の農学上の形質を改善する、
    方法。
  11. 前記方法は、前記植物の病気に感受性である前記植物の収量を増大させる、請求項10に記載の方法。
  12. 栽培地において植物有害生物または植物の病気を引き起こす植物病原体を制御する方法であって、前記方法は、
    (a)前記栽培地に、前記植物有害生物または植物の病気に感受性である種子または植物を植える工程;および
    (b)前記植物有害生物または植物の病気に感受性である前記植物に、以下:
    (i)有効量の、AIP075655、AIP059286、AIP045885、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体を含む少なくとも1種の細菌株であって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含み、そしてここで前記有効量は、少なくとも約1012~1016 コロニー形成単位(CFU)/ヘクタールを含む、少なくとも1種の細菌株;
    (ii)有効量の、AIP075655、AIP059286、AIP045885、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちのいずれか1種に由来する、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせを含む少なくとも1種の細菌株であって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含み、そしてここで前記有効量は、少なくとも約1012~1016 コロニー形成単位(CFU)/ヘクタールを含む、少なくとも1種の細菌株;あるいは
    (iii)有効量の、細菌株AIP075655、AIP059286、AIP045885、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つの全細胞培養物に由来する上清、発酵産物、濾液または抽出物であって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含む、上清、発酵産物、濾液または抽出物;
    を含む、有効量の組成物を適用する工程を包含し、
    ここで前記有効量は、栽培地において植物有害生物または植物の病気を引き起こす植物病原体を制御する、
    方法。
  13. 植物の病気を処理または防止する方法であって、前記方法は、植物有害生物もしくは植物の病気を有するか、または植物有害生物もしくは植物の病気を発生させるリスクにある植物に、有効量の、以下:
    (a)細菌株AIP075655、AIP059286、AIP045885、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つであって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含み、前記有効量は、少なくとも約1012~1016 CFU/ヘクタールを含む、細菌株もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つ;ならびに/あるいは
    (b)AIP075655、AIP059286、AIP045885、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちのいずれか1種に由来する、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせのうちの少なくとも1つであって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含み;ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含み、前記有効量は、少なくとも約1012~1016 CFU/ヘクタールを含む、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせのうちの少なくとも1つ;ならびに/あるいは
    (c)有効量の、細菌株AIP075655、AIP059286、AIP045885、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つの全細胞培養物に由来する上清、発酵産物、濾液または抽出物であって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含む、上清、発酵産物、濾液または抽出物、
    を適用する工程を包含し、ここで前記有効量は、前記植物有害生物または前記植物の病気を引き起こす植物病原体を制御する、
    方法。
  14. 前記植物有害生物は、昆虫有害生物である、請求項9~13のいずれか1項に記載の方法。
  15. 前記昆虫有害生物は、甲虫類の昆虫有害生物、半翅類の昆虫有害生物、または鱗翅類の昆虫有害生物を含む、請求項14に記載の方法。
  16. 前記植物有害生物または植物病原体は、1種またはこれより多くの真菌病原体である、請求項9~13のいずれか1項に記載の方法。
  17. 前記方法は、有効量の殺生物剤を適用する工程をさらに包含し、ここで前記有効量の殺生物剤は、目的の生物を選択的に制御すると同時に、作物に有意に損傷を与えない、請求項9~16のいずれか1項に記載の方法。
  18. 改変された細菌株を作製する方法であって、前記方法は、
    (a)AIP075655、AIP059286、AIP045885、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体を含む少なくとも1種の細菌株の集団を提供する工程であって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含み、前記細菌株は、目的の殺生物剤に感受性である、工程;
    (b)前記細菌株を、前記目的の殺生物剤の存在下で培養する工程;ならびに
    (c)前記目的の殺生物剤に対して増大した抵抗性を有する改変された細菌株を選択する工程、
    を包含する、方法。
  19. 殺生物剤、ならびに:
    (a)細菌株AIP075655、AIP059286、AIP045885、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つであって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含み、ここで有効量は、少なくとも約1012~1016 コロニー形成単位(CFU)/ヘクタールを含む、細菌株もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つ;
    (b)AIP075655、AIP059286、AIP045885、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちのいずれか1種に由来する、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせのうちの少なくとも1つであって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含み、ここで有効量は、少なくとも約1012~1016 コロニー形成単位(CFU)/ヘクタールを含む、胞子、もしくは前胞子、または細胞、前胞子および/もしくは胞子の組み合わせのうちの少なくとも1つ;ならびに/あるいは
    (c)細菌株AIP075655、AIP059286、AIP045885、AIP09474、AIP024525、AIP033287、AIP093798、AIP061639、AIP082862、AIP058187、AIP036706、もしくはこれらのうちのいずれかの活性改変体のうちの少なくとも1つの全細胞培養物に由来する上清、発酵産物、濾液または抽出物であって、ここで前記活性改変体は、Mash距離 約0.015以内のゲノムを有する細菌株を含む、上清、発酵産物、濾液または抽出物、
    を含むパーツのキット。
  20. 前記殺生物剤は、除草剤、殺真菌剤、殺虫剤、殺線虫剤、および/または農薬である、請求項19に記載のキット。
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