JP2002530290A

JP2002530290A - 植物の害虫を制御するための組成物および方法

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Publication number: JP2002530290A
Application number: JP2000582413A
Authority: JP
Inventors: シェリーディー．ヘインズ，; デニスシー．マンカー，; デズモンドアール．ジムネッツ，; ランディージェイ．マッコイ，; パメラジー．マロン，; ジミーイー．オージャラ，
Original assignee: アグラクエストインコーポレイテッド
Priority date: 1998-11-12
Filing date: 1999-10-21
Publication date: 2002-09-17
Also published as: SK6562001A3; WO2000029426A1; AU1223300A; CA2350782A1; US20030186852A1; PL348637A1; US6103228A; NO20012344L; CN1335854A; MXPA01004814A; BR9915339A; EP1131342A4; US6638910B2; NO20012344D0; IL143037A0; KR20010075707A; EP1131342A1; US6417163B1; HUP0104242A2; CZ20011620A3

Abstract

(57)【要約】本発明は、殺虫性、抗真菌性および抗細菌性の活性を示す、新規な抗生物質産生および代謝産物産生Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ株に関する。本発明はまた、この新規なＢａｃｉｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ株の全ブロス培養物または培養物から得た上清単独を使用してか、あるいは化学殺虫剤および／または生体制御因子と組み合わせて使用して、真菌感染または細菌感染を予防または処理する方法を、包含する。本発明はまた、アグラスタチンと命名された新規な抗真菌化合物および抗細菌化合物、ならびにＡ型イツリン、プリパスタチン、サーファクチン、およびアグラスタチンを含む新規な組合せを含む。新規なアグラスタチン、ならびにＡ型イツリン、プリパスタチン、サーファクチンおよびアグラスタチンを含む新規な組合せを投与する工程を包含する、真菌感染および細菌感染ならびにトウモロコシルートワーム侵襲から植物を処理または保護する方法が、提供される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】（発明の分野）本発明は、バイオ農薬の分野にある。より具体的には、本発明は、Ｂａｃｉｌ
ｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ，ＡＱ７１３の新規な株が、幅広い範囲の真菌性およ
び細菌性の植物病を阻害し得、そして昆虫に対して活性をまた有し得ることを見
出したことに関する。本発明はまた、この新規なＢａｃｉｌｌｕｓ株および抗生
物質を含む真菌殺傷性組成物、殺菌性組成物、および殺虫性組成物、ならびにこ
の株のみ、または他の化学物質および生物学的農薬と組み合わせてのいずれかに
よって生成される代謝産物に関する。

【０００２】（発明の背景）長年の間、植物病を制御するのに有用となるような生物活性を示す種々の微生
物が知られている。農学および園芸学で重要な種々の植物病を制御するための進
歩が、生物学的農薬を帰属および発展させる分野で成されてきたが、使用される
大多数の農薬はまだ、合成化合物である。ＥＰＡによって発癌物質として分類さ
れるこれらの化学農薬の多くは、野生生物および他の非標的種に対して毒性があ
る。さらに、病原体は、化学農薬に対する耐性を発生し得る（例えば、Ｓｃｈｗ
ｉｎｎら、２４４頁、ＡＤＶＡＮＣＥＳＩＮＰＬＡＮＴＰＡＴＨＯＬＯＧ
Ｙ：ＰＨＹＴＯＰＨＴＨＯＲＡＩＮＦＥＳＴＡＮＳＴＨＥＣＡＵＳＥＯ
ＦＬＡＴＥＢＬＩＧＨＴＯＦＰＯＴＡＴＯ（ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅ
ｓｓ，ＳａｎＤｉｅｇｏ１９９１を参照のこと）。

【０００３】毎年、２億５千万〜３億ドルの価値の化学農薬が、トウモロコシルートワーム
（ｃｏｒｎｒｏｏｔｗｏｒｍ）寄生虫を制御するために使用される。これらの
化学農薬の多くは、ヒト、野生生物および他の非標的種に対して毒性がある。ま
た、いくつかは、地下水中で見つけだされている。新しい化学殺虫剤は、開発す
るのに１億ドルコストがかかる。

【０００４】生物学的制御により、合成化学農薬に対する魅力的な代替物を提供する。バイ
オ農薬（生きた生物およびこれらの生物により生成される天然で生成される化合
物）は、より安全で、より生分解可能で、そして開発するのに費用がより少なく
てすみ得る。

【０００５】微生物から開発されるバイオ農薬が、農業、公衆衛生、および都会の環境にお
いて完全な害毒管理プログラムのたに高く所望される。一般に、バイオ農薬に使
用されるものは、グラム陽性細菌であるＢａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅ
ｎｓｉｓである。殺虫性のＢ．ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ株は、胞子形成中に
結晶性タンパク質を生成することが公知であり、この株は、特定の目（ｏｒｄｅ
ｒ）および種の昆虫および線虫に対して特異的に毒性がある（例えば、米国特許
第４，９９９，１９２号および同５，２０８，０１７号を参照のこと）。Ｂ．ｔ
ｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓによって生成されるタンパク質様エンドトキシンはま
た、トウモロコシルートワームおよび他のカブトムシに対する農薬として作用す
る（例えば、米国特許第５，１８７，０９１号；Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｔ．Ｊ．ら、
（１９９３）、Ｊ．ＥｃｏｎｏｍｉｃＥｎｔｏｍｏｌｏｇｙ、８６：３３０−
３３３を参照のこと）。Ｂ．ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓエンドトキシンは、精
製された結晶、洗浄された細胞ペレット、および発現されたタンパク質として有
効であることが示されている。Ｗａｒｒｅｎら（ＷＯ９６／１００８３）は、Ｂ
ａｃｉｌｌｕｓｃｅｒｅｕｓおよびＢ．ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓの栄養成
長期の間に産生される非エンドトキシンタンパク質を開示する。Ｖｉｐ１および
Ｖｉｐ２と呼ばれるこれらの植物性タンパク質は、トウモロコシルートワームに
対して強力な活性を有する（ノーザンおよびウエスタン）。Ｅｓｔｒｕｃｈら（
１９９７）ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ１５：１３７−１４１
およびＭｕｌｌｉｎｓら（１９９７），Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏ
ｂｉｏｌ．６３。

【０００６】 β−エキソトキシンと呼ばれる１種のＢ．ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ熱安定
性代謝産物はまた、殺虫特性を有することが示されている。Ｂｕｒｇｊｅｒｏｎ
およびＢｉａｃｈｅ（１９７９）、Ｅｎｔｏｍｏｐｈａｇａ１１：２７９−２８
４では、コロラドポテトカブトムシ（Ｌｅｐｔｉｏｎｏｔａｒｓａｄｅｃｅｍ
ｌｉｎｅａｔａ）に対して活性であるβ−エキソトキシンが報告される。さらに
、公知のＢ．Ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ β−エキソトキシンは、線虫だけで
なくハエ、アワヨトウの幼虫、ダニ、およびトウモロコシルートワームを殺傷す
る非特異的殺虫活性を示す。σ−エキソトキシンは、β−エキソトキシンと類似
の構造を有し、そしてコロラドポテトカブトムシに対して活性である。（Ａｒｇ
ａｕｅｒら、（１９９１）Ｊ．Ｅｎｔｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．２６：２０６−２１３
）。α−エキソトキシンは、Ｍｕｓｃａｄｏｍｅｓｔｉｃａの幼虫に対して毒
性がある（Ｃｌｕｔｈｙ（１９８０）ＦＥＭＳＭｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｌｅｔｔ
．８：１−７）。γ−エキソトキシンは、種々のタンパク分解性酵素、キチナー
ゼおよびプロテアーゼである。γ−エキソトキシンの毒性効果は、β−エキソト
キシンまたはδ−エンドトキシンと組み合わせてのみ発現される。Ｆｏｒｓｂｅ
ｒｇら（１９７６）「Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ：Ｉｔｓ
ｅｆｆｅｃｔｓｉｎＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＱｕａｌｉｔｙ」，Ｎ
ａｔｉｏｎａｌＲｅｓｅａｒｃｈＣｏｕｎｃｉｌｏｆＣａｎａｄａ。Ｓ
ｔｏｎａｒｄら（１９９４）ＡＣＳＳｙｍｐｏｓｉｕｍＳｅｒｉｅｓ５５１
：２５では、Ｂａｃｉｌｌｕｓｃｅｒｅｕｓ株の上清において、トウモロコシ
ルートワームに対する水溶性二次代謝産物活性を報告する。

【０００７】幅広いスペクトルの殺虫性活性を有するＢａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ
の株は、実証されていない。

【０００８】スクリーニングプログラムによって、抗真菌活性を示す特定のＢａｃｉｌｌｕ
ｓｓｐｐ．（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｐｐ．としては、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ、
Ｂ．ｃｅｒｅｕｓ、Ｂ．ｍｙｃｏｉｄｅｓ、Ｂ．ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓが
挙げられる）株を同定した。（Ｓｔａｂｂら（１９９０）ＡｐｐｌｉｅｄＥｎ
ｖｉｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．６０：４４０４−４４１２を参照のこと）。こ
れらの株により、ツイタマイシン（ｚｗｉｔｔｅｍｉｃｉｎ）−Ａおよび／また
はカノサミン（ｋａｎｏｓａｍｉｎｅ）（Ｍｉｌｎｅｒら（１９９６）Ａｐｐｌ
．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂ．６２：３０６１−３０６６）（Ｐｈｙｔｏｐ
ｈｔｈｏｒａｍｅｄｉｃａｇｉｎｉｓ、Ｐ．ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ、Ｐ．ａｐ
ｈａｎｉｄｅｒｍａｔｕｍまたはＳｃｌｅｒｏｔｉｎｉａｍｉｎｏｒによって
引き起こされる土壌関係病である立枯病に対して有効である、２種の抗生物質で
ある）を産生することが示されている（Ｓｔａｂｂら、前出を参照のこと）。ツ
イタマイシン−Ａは、水溶性の酸安定性直鎖アミノポリオール分子である（Ｈｅ
ら（１９９４）ＴｅｔｒａＬｅｔｔ．３５（１６）：２４９９−２５０２を参
照のこと）。

【０００９】Ｈａｎｄｅｌｓｍａｎらの米国特許第５，０４９，３７９号は、ツイタマイシ
ン−Ａがどのようにアルファルファおよびダイズにおいて立枯病を引き起こすか
を記載する。この種子が、Ｂ．ｃｅｒｅｕｓＡＴＣＣ５３５２２でコートさ
れた場合、根腐れ菌の病原体活性が阻害される。同様に、ダイズの種子またはこ
の種子を取り囲む土壌に対して特定のＢ．ｃｅｒｅｕｓ株の胞子ベースの処方物
の適用により、畑でのダイズの収穫が改良されることが示されている（Ｏｓｂｕ
ｒｎｅら（１９９５）Ａｍ．Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌ．Ｓｏｃ．７９（６）：５
５１−５５６を参照のこと）。バイオ農薬を適用する方法は、当該分野で周知で
あり、そして例えば、湿潤性粉末、乾燥流動物、有効試薬のマイクロカプセル化
、適切な培養物からの抗菌性画分の液体または固体処方物が挙げられる。（例え
ば、Ｒｏｓｓａｌｌの米国特許第５，０６１，４９５号、またはＨａｎｄｅｌｓ
ｍａｎの米国特許第５，０４９，３７９号を参照のこと）。

【００１０】Ｓｍｉｔｈら（１９９３）ＰｌａｎｔＤｉｓｅａｓｅ７７（２）：１３９−
１４２では、柔らかいキュウリリーク（ｃｏｔｔｏｎｙｃｕｃｕｍｂｅｒｌ
ｅａｋ）を引き起こす土壌関係真菌であるＰｈｙｔｈｉｕｍａｐｈａｎｉｄｅ
ｒｍａｔｕｍの活性が、ツイタマイシン産生Ｂ．ｃｅｒｅｕｓ株ＵＷ８５を使用
して抑制され得ることが報告される。Ｌｅｉｆｅｒｔら（１９９５）Ｊ．Ａｐｐ
ｌ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．７８：９７−１０８では、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓＣ
Ｌ２７およびＢ．ｐｕｍｉｌｕｓＣＬ４５の２種のＢａｃｉｌｌｕｓ株による
抗−Ｂｏｔｒｙｔｉｓおよび抗−Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ抗生物質の産生が報告さ
れる。この全ブロスおよび無細胞濾液は、インビトロ試験においてＢｏｔｒｙｔ
ｉｓおよびＡｌｔｅｒｎａｒｉａに対して活性であり、そしてＡｓｔｉｌｂｅ上
でのインビボ小規模実地試験でＢｏｔｒｙｔｉｓに対して活性であった。Ｌｅｉ
ｆｅｒｔら（１９９７）米国特許第５，５９７，５６５号は、ポストハーベスト
病を引き起こす真菌の阻害に特定の有効性を有するＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｂ．
ｐｕｍｉｌｕｓ、およびＢ．ｐｏｌｙｍｙｘａを開示する。これらはまた、無細
胞培養物での濾液中の産生される抗生物質の存在および異なるｐＨ値での抗生物
質の活性を開示するが、これらの化合物を同定はしていない。

【００１１】Ｒｏｓｓａｌｌ（１９９４）米国特許第５，３４４，６４７号は、幅広い抗−
真菌活性を有するＢａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ株を開示する。Ｓｈｏｌ
ｂｅｒｇら（１９９５）ＣａｎＪＭｉｃｒｏｂｉｏｌ．４１：２４７−２５
２、Ｓｗｉｎｂｕｒｎｅら（１９７５）Ｔｒａｎｓ．Ｂｒｉｔ．Ｍｙｃｏｌ．Ｓ
ｏｃ．６５：２１１−２１７、ＳｉｎｇｈおよびＤｅｖｅｒａｌｌ（１９８４）
Ｔｒａｎｓ．Ｂｒ．Ｍｙｃｏｌ．Ｓｏｃ．８３：４８７−４９０、Ｆｅｒｒｅｉ
ｒａら（１９９１）Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ８１：２８３−２８７、およ
びＢａｋｅｒら（１９８３）Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ７３：１１４８−１
１５２は、真菌植物病原体のバイオコントロール試薬としてＢａｃｉｌｌｕｓ
ｓｐｐ．およびＢａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓの使用を開示する。Ｂａｋ
ｅｒら（１９８３）Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ７３：１１４８−１１５２は
また、抗真菌Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓでの植物の病原体の使用につ
いて報告する。Ｐｕｓｅｙら（１９８８）ＰｌａｎｔＤｉｓ．７２：６２２−
６２６、ＰｕｓｅｙおよびＲｏｂｉｎｓ（米国特許第５，０４７，２３９号）お
よびＭｃＫｅｅｎら（１９８６）Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ７６：１３６−
１３９は、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓを使用するポストハーベスト果実の腐食の制御
を開示する。ＭｃＫｅｅｎら（前述）は、低分子量のイツリン（ｉｔｕｒｉｎ）
環状ポリペプチドに類似した抗生物質が、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓの真菌殺傷活性
に寄与することを示した。

【００１２】Ｌｉｕら（１９９５）の米国特許第５，４０３，５８３号は、Ｂａｃｉｌｌｕ
ｓｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ、ＡＴＣＣ５５０００および真菌植物病原体（Ｒｈｉ
ｚｏｃｔｏｎｉａｓｏｌａｎｉ）を制御するための方法を開示する。Ｉｓｌａ
ｍおよびＮａｎｄｉ（１９８５）Ｊ．ＰｌａｎｔＤｉｓｅａｓｅｓａｎｄ
Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ９２（３）：２４１−２４６は、Ｄｒｅｃｈｓｌｅｒａ
ｏｒｚａｅ（ライスブラウンスポット（ｒｉｃｅｂｒｏｗｎｓｐｏｔ）の病
原）に対して拮抗作用を有するＢｉｃｉｌｌｕｓｍｅｇａｔｅｒｉｕｍを開示
する。同著者であるＩｓｌａｍおよびＮａｎｄｉ（１９８５）Ｊ．Ｐｌａｎｔ
ＤｉｓｅａｓｅｓａｎｄＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎ９２（３）２３３−２４０は
また、Ｄｒｅｃｈｓｌｅｒａｏｒｙｚａｅ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａａｌｔｅ
ｒｎａｔａおよびＦｕｓａｒｉｕｍｒｏｓｅｕｍに対するＢ．ｍｅｇａｔｅｒ
ｉｕｍのインビトロ拮抗作用を開示する。これでは、培養物の濾液中の３つの成
分を議論している。ほとんどの活性な抗生物質は、ＵＶにおいて２５５ｎｍにピ
ークおよび２６０ｎｍにショルダーを有する水とメタノールに非常に可溶性であ
り、これらは、ポリオキシン様リポペプチドであることが判明された。Ｃｏｏｋ
（（１９８７）ＰｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓＢｅｌｔｗｉｄｅＣｏｔｔｏｎＰ
ｒｏｄｕｃｔｉｏｎ−ＭｅｃｈａｎｉｚａｔｉｏｎＲｅｓｅａｒｃｈＣｏｎ
ｆｅｒｅｎｃｅ，ＣｏｔｔｏｎＣｏｕｎｃｉｌ（Ｍｅｍｐｈｉｓ）、４３〜４
５頁）は、Ｐｈｙｍａｔｏｔｒｉｃｈｕｍｏｍｎｉｖｏｒｕｍ（綿の根腐れの
原因）によって枯れる綿の木の数を減少させるためのＢａｃｉｌｌｕｓｍｅｇ
ａｔｅｒｉｕｍの懸濁物の使用を開示する。

【００１３】Ｂ．ｍｅｇａｔｅｒｉｍｕの抗生物質産物が、Ｂｅｒｄｙ（ＣＲＣＨａｎｄ
ｂｏｏｋｏｆＡｎｔｉｂｉｏｔｉｃＣｏｍｐｏｕｎｄら、第Ｉ−ＸＩＶ巻
、（ＣＲＣＰｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．、ＢｏｃａＲａｔｏｎ、ＦＬ１９８０−
８７））（アンサミトシン（ａｎｓａｍｉｔｏｃｉｎ）−ＰＤＭ−０、バシメト
リン（ｂａｃｉｍｅｔｈｒｉｎ）、メガシン（ｍｅｇａｃｉｎ）、ペンタペプチ
ドおよびホモペプチドのような哺乳動物の毒性低級ペプチド抗生物質の産生を報
告する）によって記録されている。

【００１４】Ｂａｃｉｌｌｉは、抗真菌および抗菌二次謝産物を産生することが公知であり
、ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＷｉｓｃｏｎｓｉｎおよびＣｏｒｎｅｌｌＵ
ｎｉｖｅｒｓｉｔｙの調査により、新規な真菌殺傷性化合物（Ｂａｃｉｌｌｕｓ
ｓｐ．によって産生されるツイタマイシンＡ）が同定された（Ｈｅら（１９９
４）Ｔｅｔｒａ．Ｌｅｔｔ．３５（１６）：２４９９−２５０２）。同じ株から
産生される第２真菌殺傷性代謝産物は、最近、公知のアミノ−糖（カノサミン）
として同定された（Ｍｉｌｎｅｒら（１９９６）Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍ
ｉｃｒｏｂ．６２：３０６１−３０６５）。

【００１５】上記のＢａｃｉｌｌｕｓ代謝産物の別の群は、イツリンクラスの環状リポペプ
チドであり、これらのいくらかは、強力な真菌殺傷性試薬である。これらの試薬
は、７種のα−アミノ酸および脂肪性側鎖を有する１種のβ−アミノ酸を有する
環状オクタペプチドからなる。アミノ酸配列の目（ｏｒｄｅｒ）および含有量が
異なるイツリンのいくつかの群が存在する。これらは、以下の表１に示される。
一般に、一連の関連分子は、脂肪性アミノ酸残基の長さおよび枝分かれが異なっ
て産生される。Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅについて試
験される場合、ｍｙｃｏｓｕｂｔｉｌｉｎが、最も活性の試薬であり（ＬＣ５０
＝１０μｇ／ｍＬ）、イツリン−ＡおよびバシロマイシンＬ（これらの両方はＬ
Ｃ５０＝３０μ／ｍＬを有する）に続くことが見出された（Ｂｅｅｓｏｎら、（
１９７９）Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ３２（８）：８２８−８３３）。これら
の環状リポペプチドの作用様式は、重要なイオンの放出を可能にする膜貫通チャ
ネルを生成する真菌性膜と相互作用するためであると報告されている（Ｌａｔｏ
ｕｄら（１９８６）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ８５６：５２６
−５３５）。イツリン−Ｃは、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍｃｈｒｙｓｏｇｅｎｕ
ｍを含む真菌に対して不活性である（Ｐｅｙｐｏｕｘら（１９７８）Ｔｅｔｒａ
ｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔ．３４：１１４７−１１５２）。

【００１６】

【表１】ＵＳＤＡの研究グループは、アミノ酸の鎖長が異なる多数のアナログを合成す
ることによって、イツリン（ｉｔｕｒｉｎ）の構造／活性関係を研究してきた。
研究者らは、イツリンの活性が、脂肪酸側鎖および末端分枝鎖の長さと共に、イ
ソ＞ノルマル＞アンチイソの順に増加することを報告した（Ｂｌａｎｄら（１９
９５）Ｐｒｏｃ．ＰｌａｎｔＧｒｏｗｔｈＲｅｇｕｌａｔｉｏｎＳｏｃ．
Ａｍ．２２版：１０５〜１０７）。この研究者らはまた、Ｂａｃｉｌｌｕｓの多
数のイツリン産生株を用いる彼らの研究に基づいて、「天然産物から得られるイ
ツリンの量は、商業的に実用可能であるには不十分である」ことを示す。

【００１７】Ｂ．ｃｅｒｅｕｓから単離された環状リポペプチドの別の群はプリパスタチン
（ｐｌｉｐａｓｔａｔｉｎ）である。これらの化合物はアシル化デカペプチドの
ファミリーであり、その構造は図１に示される（Ｎｉｓｈｉｋｉｏｒｉら（１９
８６）Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ３９（６）：７５５〜７６１）。これらの
化合物は、もともと、ブタ膵臓ホスホリパーゼＡ₂のインヒビターとして単離さ
れた（Ｕｍｅｚａｗａら（１９８６）Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ３９（６）
：７３７〜７４４）が、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ、ＰｙｒｉｃｕｌａｒｉａおよびＡｌ
ｔｅｒｎａｒｉａを含むいくつかの植物病原性真菌を阻害することが見出された
（Ｙａｍａｄａら（１９９０）ＮｉｐｐｏｎＮｏｙａｋｕＧａｋｋａｉｓｈ
ｉ１５（１）：９５〜９６）。Ｙａｍａｄａはまた、イツリンＡとプリパスタ
チンとの間（両方、同一のＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ株により産生される）で観察さ
れる相乗効果を報告した。

【００１８】液体状態発酵（ＰｈａｅおよびＳｈｏｄａ（１９９１）ＪＦｅｒｍｅｎｔ．
Ｂｉｏｅｎｇ．７１：１１８〜１２１；Ｏｈｎｏら（１９９３）Ｊ．Ｆｅｒｍｅ
ｎｔ．Ｂｉｏｅｎｇ７５：４６３〜４６５）および固体状態発酵（Ｏｈｎｏら
（１９９２）Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｌｅｔｔ．１４（９）：８１７〜８２２；Ｏｈｎ
ｏら（１９９５）Ｊ．Ｆｅｒｍｅｎｔ．Ｂｉｏｅｎｇ．５：５１７〜５１９）の
両方における、イツリンの産生を増加するための発酵改良について、研究が行わ
れた。それ自体は不活性である密接に関連したスルファクチン（ｓｕｒｆａｃｔ
ｉｎ）と、同じＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ株により産生されるイツリンとの間の相乗
作用の報告がある（Ｈｉｒａｏｋａら（１９９２）Ｊ．Ｇｅｎ．Ａｐｐｌ．Ｍｉ
ｃｒｏｂｉｏｌ．３８：６３５〜６４０）。イツリンＡおよびスルファクチンの
生合成を同時調節する遺伝子のヌクレオチド配列が公表された（Ｈｕａｎｇら（
１９９３）Ｊ．Ｆｅｒｍｅｎｔ．Ｂｉｏｅｎｇ．７６（６）：４４５〜４５０）
。イツリン産生株の野外研究は、Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａを制御するための土壌
処理に集中し（ＡｓａｋａおよびＳｈｏｄａ（１９９６）Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒ
ｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．６２：４０８１〜４０８５）、そしてイツリンの葉
の分野への適用は報告されなかった。

【００１９】Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓにより産生される別の環状リポペプチド化合物はスルフ
ァクチンであり、これは並外れた界面活性物質活性を有する（ｋａｎｉｎｕｍａ
ら（１９６９）Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．３３：９７３〜９７６）。ス
ルファクチンは、ラクトン環によってＬＬＤＬＬＤＬ（配列番号１）配列を有す
るヘプタペプチド部分に連結された、Ｃ１４またはＣ１５β−ヒドロキシ脂肪酸
を含む（Ａｒｉｍａら（１９６８）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．
Ｃｏｍｍｕｎ３１：４８８〜４９４）。Ｓａｎｄｒｉｎら（（１９９０）Ｂｉ
ｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１２：３７０〜３７５）は、ス
ルファクチンおよびイツリンＡの両方、バシロマイシン（ｂａｃｉｌｌｏｍｙｃ
ｉｎ）ＦおよびＬ、ならびにマイコサブチリン（ｍｙｃｏｓｕｂｔｉｌｉｎ）を
産生するＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ株を発見した。

【００２０】本発明者らによって発見された新規の微生物ＡＱ７１３は、以前はＢａｃｉｌ
ｌｕｓｍｅｇａｔｅｒｉｕｍの株と考えられ、そして現在、Ａイツリン、プリ
パスタチンおよびスルファクチンを産生する、Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌ
ｉｓの株として同定される。微生物によるこの組み合わせのリポペプチドの産生
は、以前には報告されていない。さらに、本発明者らは、ＡＱ１７３がまた、「
アグラスタチン（ａｇｒａｓｔａｔｉｎ）」と命名される化合物の新たに記載さ
れる群を産生することを発見した。上記の３つ全ての公知化合物と新規なアグラ
スタチンとの組み合わせもまた新規である。

【００２１】（発明の開示）Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓの新規な抗生物質産生株および代謝産物
産生株（以前は、Ｂａｃｉｌｌｕｓｍｅｇａｔｅｒｉｕｍとして同定された）
が提供され、これは広範な殺真菌活性および殺菌活性を示し、そしてまた殺虫活
性も示す。また、葉昆虫および土中昆虫に対して活性を有する、新規のＢ．ｓｕ
ｂｔｉｌｉｓ由来の新規の代謝産物が提供される。植物の真菌、細菌および昆虫
感染を処置する方法または植物をこれらから保護する方法もまた提供され、この
方法は、有効量の抗生物質産生Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓを塗布する
工程を包含する。抗生物質産生Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓは、Ｂａｃ
ｉｌｌｕｓの抗生物質産生株の、完全ブロス培養液中の懸濁液としてか、または
完全ブロス培養液から得られる抗生物質含有上清として提供され得る。植物の根
から土中侵入（例えば、トウモロコシルートワーム）を処置または予防する方法
もまた提供され、この方法は有効量の新規の代謝産物産生Ｂａｃｉｌｌｕｓｓ
ｕｂｔｉｌｉｓ、完全培養液または培養上清を適用する工程を包含する。この新
規の代謝産物産生Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓは、完全ブロス培養液中
の懸濁液としてか、または微生物の完全ブロス培養液から得られる代謝産物含有
上清もしくは精製代謝産物として提供され得る。新規の株ＡＱ７１３により産生
される新規な化合物である、アグラスタチン、ならびにイツリンＡ、プラスタチ
ン、スルファクチンおよびアグラスタチンを含有する化合物の新規の組み合わせ
もまた提供される。

【００２２】（発明の実施の形態）本発明は、広範な抗真菌活性、殺虫活性および抗菌活性を有する、Ｂａｃｉｌ
ｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓの新規な株、ＡＱ７１３（以前にＢａｃｉｌｌｕｓ
ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍとして同定された）またはその変異体を提供する。この新
規な株は、ＡＱ７１３と命名され、そして１９９７年３月７日に、特許手続きの
ための微生物の寄託の国際認定におけるブダペスト条約の規定により、受託番号
Ｂ−２１６６１でＮＲＲＬに寄託された。これはその後、ＡｍｅｒｉｃａｎＴ
ｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）によって、Ｂａｃ
ｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓと同定された。

【００２３】本発明はまた、植物の根または土壌を処理して、ＡＱ７１３の細菌懸濁液、ま
たはＡＱ７１３の培地の代謝産物含有上清、または株ＡＱ７１３由来の精製代謝
産物を用いて昆虫侵入を制御する方法を包含する。

【００２４】本発明はまた、このような細菌株、またはこのような細菌株から得られる抗生
物質含有上清もしくは純粋な抗生物質を使用して、植物における真菌性疾患、細
菌性疾患および昆虫疾患を予防および処置する方法を包含する。本発明はまた、
ＡＱ７１３の細菌懸濁液、またはＡＱ７１３の培養液の代謝産物含有上清、また
は株ＡＱ７１３由来の精製代謝産物を用いて、植物の葉、根、またはその植物を
取りまく土壌を処置して、昆虫および昆虫の幼虫を制御する方法を包含する。本
発明はまた、１０，０００ダルトン未満の分子量を有する、昆虫に対して活性を
有する溶媒抽出可能な代謝産物を包含する。本発明は、新規な微生物によって産
生される新規な化合物である、アグラスタチンをさらに包含する。Ａ型イツリン
、プリパスタチン、スルファクチンおよびアグラスタチンを含む新規な組み合わ
せもまた包含される。

【００２５】（定義）本明細書中で使用される、「生物的制御」は、第二の生物の使用による病原体
または昆虫の制御と定義される。生物的制御の既知のメカニズムは、根の表面上
の空間に真菌が対抗しないようにすることによって、根腐れを制御する腸内細菌
を含む。抗生物質のような細菌性の毒素は、病原体を制御するために使用されて
きた。この毒素が単離され、植物に直接適用され得るか、または細菌種が、それ
らがインサイチュで毒素を産生するように投薬され得る。

【００２６】用語「細菌」は、明確な核を有さない任意の原核生物を含む。

【００２７】用語「真菌（単数または複数）」は、葉緑素を欠く広範な種の有核芽胞生物を
含む。真菌の例には、酵母、糸状菌、白カビ、錆菌類およびキノコ類が挙げられ
る。

【００２８】「殺真菌性」とは、真菌の死亡率を増加するか、または真菌の増殖速度を阻害
する物質の能力を意味する。

【００２９】「変異体」は、生物の表現型において、それ自体を発現する変異体遺伝子を有
する生物である。

【００３０】「抗生物質」は、微生物を殺すかまたは阻害し得る任意の物質を含む。抗生物
質は、微生物によってか、または合成プロセスもしくは半合成プロセスによって
産生され得る。従ってこの用語は、真菌を阻害するかまたは殺す物質（例えば、
ツイッターマイシン（ｚｗｉｔｔｅｒｍｉｃｉｎ）−Ａまたはカノサミン（ｋａ
ｎｏｓａｍｉｎｅ））を包含する。

【００３１】「抗真菌剤」は、真菌を殺すかまたは真菌の増殖を阻害し得る任意の物質を含
む。

【００３２】用語「培養」とは、様々な種類の培地上または培地中での生物の増殖をいう。
「完全ブロス培養液」とは、細胞および培地の両方を含有する液体培養液をいう
。「上清」とは、ブロス中で増殖した細胞が、遠心分離、濾過、沈殿、または当
該分野で公知の他の手段によって除去された場合に残る液体ブロスをいう。

【００３３】「有効量」は、有利なまたは所望の結果を達成するのに十分な量である。有効
量は１回以上の投与で投与され得る。処置および予防の点において、「有効量」
は、真菌性または細菌性疾患状態の進行を、改善する、安定化する、反転する、
遅らせるまたは遅延するのに十分な量である。

【００３４】本明細書中で使用される場合、用語「昆虫」は、分類「昆虫綱」の全ての生物
を含む。「成体前」昆虫は、成体段階の前の生物の任意の形態を示し、これには
例えば、卵、幼虫、および若虫が挙げられる。「殺虫（性）」は、昆虫の死亡率
を増加するかまたは増殖速度を阻害する物質の能力をいう。「線虫殺傷性」は、
線虫の死亡率を増加するかまたは増殖速度を阻害する物質の能力をいう。「農薬
」は、昆虫、線虫およびダニの死亡率を増加するかまたは増殖速度を阻害する物
質の能力をいう。

【００３５】「陽性コントロール」は、農薬活性を有することが公知の化合物を意味する。
「陽性コントロール」には、市販の化学物質の農薬が挙げられるが、これらには
限定されない。用語「陰性コントロール」は、農薬活性を有さないことが公知の
化合物を意味する。陰性コントロールの例は、水または酢酸エチルである。

【００３６】用語「溶媒」は、別の物質を溶液中に保持する任意の液体を含む。「溶媒抽出
可能」は、溶媒中に溶解する任意の化合物をいい、次いで、これは、この溶媒か
ら単離し得る。溶媒の例には、酢酸エチルのような有機溶媒が挙げられるが、こ
れらには限定されない。

【００３７】用語「代謝産物」は、農薬活性を有する微生物の発酵の任意の化合物、物質ま
たは副生成物をいう。上に定義される抗生物質は、微生物に対して特異的に活性
な代謝産物である。

【００３８】用語「アグラスタチン」は、以下の構造（配列番号３）を有する新規化合物の
群をいう：

【００３９】

【化４】ここで、Ｒ₁は、分枝鎖または直鎖の脂肪族側鎖、Ｃ８−Ｃ２０であり；Ｘは
、ＡｌａまたはＶａｌのいずれかであり；Ｒ₂は、アセテートまたはエステル誘
導体であり；そしてＧｌｘは、ＧｌｎまたはＧｌｕである。これらの化合物は、
幅広い範囲の抗細菌活性、抗昆虫−殺虫活性、および抗真菌活性を有する。

【００４０】本発明者らは、新規代謝産物およびＢａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ（以
前にＢａｃｉｌｌｕｓｍｅｇａｔｅｒｉｕｍとして同定されていた）の抗生物
質産生株を記載し、これは、幅広い抗真菌活性および抗細菌活性を有し、そして
また、昆虫およびそれらの幼虫を殺傷するかまたは発育阻止する。別の局面にお
いて、本発明は、真菌感染、昆虫感染および細菌感染から植物を処置または保護
する方法を提供し、これは、本発明の範囲内のＢａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌ
ｉｓＡＱ７１３の全ブロス培養物から得られる有効量の上清を適用する工程を
包含する。この上清は、遠心分離、濾過、沈降などを含む当該分野で周知の方法
で得られ得る。

【００４１】別の局面において、本発明は、真菌感染、昆虫感染および細菌感染から植物を
処置または保護する方法を包含し、これは、新規株Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔ
ｉｌｉｓの全ブロスの有効量を適用する工程を包含する。

【００４２】さらなる局面において、本発明は、真菌性疾患、昆虫性疾患および細菌性疾患
から植物を処置または保護する方法を包含し、これは、新規株のＢａｃｉｌｌｕ
ｓｓｕｂｔｉｌｉｓによって産生される抗生物質の有効量を適用する工程を包
含する。

【００４３】別の局面において、本発明は、昆虫の侵襲（ｉｎｆｅｓｔａｔｉｏｎ）および
幼生の侵襲から植物および植物の根を処置または保護する方法を提供し、これは
、本発明の範囲内のＢａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓＡＱ７１３の全ブロ
ス培養物から得られる有効量の上清を適用する工程を包含する。この上清は、遠
心分離、濾過、沈降などを含む当該分野で周知の方法で得られ得る。

【００４４】別の局面において、本発明は、昆虫の侵襲および幼生の侵襲から植物および植
物の根を処置または保護する方法を包含し、これは、新規株Ｂａｃｉｌｌｕｓ
ｓｕｂｔｉｌｉｓの全ブロスの有効量を適用する工程を包含する。

【００４５】さらなる局面において、本発明は、昆虫侵襲から植物の根を処置または保護す
る方法を包含し、これは、新規株のＢａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓによっ
て産生される代謝産物の有効量を適用する工程を包含する。

【００４６】本発明の組成物の良好な分散および接着を達成するために、全ブロス培養物、
上清および／または代謝産物／抗性物質を、分散および接着を補助する成分と共
に処方することが有利であり得る。適切な処方物は、当業者に公知である。

【００４７】本発明の組成物は、湿潤性の粉末、顆粒などとして処方され得るか、または適
切な媒体中でマイクロカプセル化され得る。他の処方物の例には、可溶性粉末、
湿潤性顆粒、乾燥流動性剤、水性流動剤、湿潤性分散可能顆粒、乳化可能濃縮物
および水性懸濁物が挙げられるが、これらには限定されない。他の適切な処方物
は、当業者に公知である。

【００４８】本発明のなおさらなる局面において、「アグラスタチン」と指定される化合物
の新規な群が提供される。これらの化合物は、抗昆虫活性に加えて、抗細菌活性
および抗真菌活性を示す。

【００４９】本発明のなおさらなる局面において、Ａ型イツリン、プリパスタチン、サーフ
ァクチンおよびアグラスタチンを含む新規な組み合わせが提供される。

【００５０】本発明の別の局面において、Ａ型イツリン、プリパスタチン、サーファクチン
およびアグラスタチンを含む化合物の新規な組み合わせの有効量を適用する工程
を包含する、昆虫性疾患、真菌性疾患および細菌性疾患から植物を処置または保
護する方法が提供される。

【００５１】さらに、本明細書中において、殺虫活性を有する株ＡＱ７１３から単離された
リポペプチド抽出物、および殺虫活性を有する株ＡＱ７１３から単離されたサー
ファクチンリポペプチドが提供される。従って、本発明はまた、単離されたリポ
フェクチンまたは単離されたサーファクチンの有効量を、葉、根またはこの植物
または根を取り囲む土壌に適用することによって、植物および／または果実を昆
虫侵襲から処置または保護する方法を提供する。これらの単離された組成物は、
他の公知の農薬または殺虫剤と組み合わせられ得、そしてＡＱ７１３について上
記したように処方され得、そして湿潤性の粉末、顆粒、流動性剤またはマイクロ
カプセルとして適用され得る。

【００５２】本明細書中に引用される全ての特許および刊行物は、本明細書によってその全
体が参考として援用される。以下の実施例は、本発明を説明するために提供され
る。これらの実施例は、限定として解釈されるべきではない。

【００５３】（実施例）（実施例１）（株ＡＱ７１３の特徴付け）単離物を、Ｂｏｃｈｎｅｒ（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ３３９：１５７−１５
８に記載されるように、Ｂｉｏｌｏｇマイクロプレートパネル（Ｂｉｏｌｏｇ，
Ｉｎｃ．，Ｈａｙｗａｒｄ，ＣＡ）の使用に基づいて同定した。このＢｉｏｌｏ
ｇマイクロプレートは、グラム陽性細菌およびグラム陰性細菌に対して利用可能
な９５個の異なる炭素基質プレートを有する予備充填されそして乾燥されたパネ
ルウェルから構成される。単離物を、液体媒地中で２８℃で増殖させ、そして２
４時間後、洗浄した細胞懸濁液（０．８５％生理食塩水）を、ＧＰＭｉｃｒｏ
ｐｌａｔｅ（Ｂｉｏｌｏｇ，Ｉｎｃ．）の各パネルウェルに播種した。２８℃で
２４時間後、炭素利用反応を評価した。次いで、基質利用プロフィールを、Ｂｉ
ｏｌｏｇＧｒａｍ−ＰｏｓｉｔｉｖｅＤａｔａＢａｓｅ（リリース３．５
０）と比較し、最も近い類似種に分離した。Ｂｉｏｌｏｇの結果は、Ｂａｃｉｌ
ｌｕｓｍｅｇａｔｅｒｉｕｍに対して０．８８３の類似性指数を与えた。

【００５４】ＡＱ７１３のより広範な特徴付けは、ＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＣｕｌｔ
ｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、（ＡＴＣＣ）１０８０１Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔ
ｙＢｌｖｄ．，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ，２０１１０−２２０９によって行っ
た。

【００５５】単離物は、以下として提出された：未知；株ＡＱ７１３．単離物は、以下として同定された：利用可能な生理学的データおよび生化学的
データを使用して、この株は、Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓに最も近く
類似する。

【００５６】細胞形態：運動性細胞が、中心領域または末端近くの領域に形成される１つの
内性胞子を有して、単一で見出された。

【００５７】コロニー形態：コロニーは、不透明で、凸型隆起を有して不規則であり、粗い
鈍な表面で、凹凸のある縁である。

【００５８】

【表２】コメント：利用可能な生理学的および生物化学的データを使用すると、この菌
は、Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓに最も近く類似する。

【００５９】

【表３】参考文献：Ｇｏｒｄｏｎ，Ｒ．Ｅ．，Ｗ．Ｃ．ＨａｙｎｅｓおよびＣ．Ｈ．Ｎ．Ｐａｎｇ
．１９７３。ＴｈｅＧｅｎｕｓＢａｃｉｌｌｕｓ．Ｈａｎｄｂｏｏｋ第４２
７号。Ｕ．Ｓ，ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｗａｓ
ｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ。

【００６０】（実施例２）（トウモロコシルートワーム（ｃｏｒｎｒｏｏｔｗｏｒｍ）に対するＡＱ７
１３の活性）Ｂａｃｉｌｌｕｓサンプルを、Ｂａｃｉｌｌｕｓ培養培地で増殖した。培地２
は、５％ペプトン、５％デキストロース、３％酵母抽出物、３％麦芽抽出物、１
．５％プロフロ（ｐｒｏｆｌｏ）綿種子抽出物（５９％タンパク質、４．２６％
脂肪、６．７３％灰分、３．１９％繊維および微量のゴシポール；バランスは水
である）、１０％大豆粉末、および０．５％ＭｇＳＯ₄×７Ｈ₂Ｏを含んだ。培地
３は、２０％ペプトンおよび３．４％ＫＨ₂ＰＯ₄および４．３％Ｋ₂ＨＰＯ₄を除
いて、同じ成分を含んだ。１日齢の画線培養物を使用して、２５０ｍＬバッフル
付き振盪フラスコに播種した。フラスコを、５日間、２９℃で２００ｒｐｍで振
盪した。殺虫活性をアッセイするために、３５ｍＬの培養物ブロスを、２０分間
、５，２００ｒｐｍで遠心分離し、そして上清を以下に記載されるマイクロアッ
セイに使用した。

【００６１】アッセイを、９６ウェルマイクロプレート中で行った。各ウェルは、固体寒天
基剤、試験生物、および陽性コントロール、陰性コントロールまたは新規なＢａ
ｃｉｌｌｕｓ株由来の実施例１に記載されるように得られた上清のいずれかを含
んだ。

【００６２】殺虫剤活性をアッセイするために、寒天基剤を、Ｍａｒｒｏｎｅら、（１９８
５），Ｊ．Ｅｃｏｎ．Ｅｎｔｏｍｏｌ．７８：２９０−２９３に従ってマイクロ
プレートのウェルのために調製した。線虫殺傷性活性をアッセイするために、単
純な寒天（１．５％）を、ウェル中で代わりに使用した。

【００６３】Ａｖｉｄ（登録商標）（アベルメクチン）の１ｐｐｍ溶液を、陽性コントロー
ルとして使用した。脱イオン水を、陰性コントロールとして使用した。試験サン
プルまたはコントロールの２つの複製物を各アッセイのために使用した。培地１
、２または３において増殖された４０μＬの上清サンプルまたは全ブロスを、各
サンプルウェルに分散した。次いで、プレートを、寒天溶液が乾燥するまで、換
気フード中において約２〜３時間乾燥した。

【００６４】試験生物は、成体前トウモロコシルートワーム（Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａｕｎ
ｄｅｃｉｍｐｕｎｃｔａｔａ）、成体前Ｇｅｒｍａｎゴキブリ（Ｂｌａｔｅｌｌ
ａｇｅｒｍａｎｉｃａ）、成体前シロイチモンジヨトウガの幼虫（ｂｅｅｔ
ａｒｍｙｗｏｒｍ）（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａｅｘｉｇｕａ）、成体前ハエ（Ｄ
ｒｏｓｏｐｈｉｌａｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ）、または線虫Ｃａｅｎｏｒｈ
ａｂｄｉｔｉｓｅｌｅｇａｎｓのＮ２株のいずれかであった。試験生物を、各
ウェルに分散された２５μＬの寒天当たり約５匹の生物の濃度まで、０．１％寒
天中で希釈した。マイクロプレートを、Ｍｙｌａｒ（登録商標）のような気密物
質でシールし、そして各ウェルをピンで押して通気した。このプレートを７日ま
で２７℃でインキュベートした。

【００６５】インキュベーション後に、ウェルを、線虫死亡率または幼生発達の程度を記録
することによって得点付けした。全て死亡または発達阻害された幼生を含むサン
プルウェルに１の得点を与え、いくらか死亡し、そして他が重度に発達阻害され
た幼生を含むウェルに２の得点を与え、生存しているが発達阻害された幼生に３
と得点付けし、そして死亡、発達阻害幼生を含まないサンプルウェルに４の得点
を与えた。得点を各サンプルの複製物で平均した。結果を表２および３に要約す
る。

【００６６】

【表４】

【００６７】

【表５】（試験番号２）ＡＱ７１３を振盪フラスコまたは１０リッターの発酵槽において、第３の培地
（培地４と呼ばれる）中のシロイチモンジヨトウガの幼虫およびトウモロコシル
ートワームに対して、再び試験した。培地４は、プロフロ（ｐｒｏｆｌｏ）綿実
抽出物を含まない培地３と同じ成分を含んでいた。他の全ての手順は、上記と同
様であった。この試験を、２回または３回繰り返した。

【００６８】

【表６】ＡＱ７１３上清およびブロス全体は、培地４においてトウモロコシルートワー
ムおよびアワヨトウの幼虫に対して高度に活性であった。

【００６９】（実施例３）（モモアカアブラムシに対するＡＱ７１３の活性）ＡＱ７１３を、４８時間で、２つの異なる１０リットルの発酵槽において２回
および４００リットルの発酵槽において２回増殖したＡＱ７１３のバッチを使用
して、培地４において試験した。モモアカアブラムシ（Ｍｙｚｕｓｐｅｒｓｉ
ｃａｅ）を、トウモロコシルートワームおよびアワヨトウの幼虫とは別に試験し
た。４００リットルのバッチの１つに由来するブロス全体（ＷＢ）および上清（
Ｓ）の両方を試験した。モモアカアブラムシを試験するために、ＡＱ７１３の４
０マイクロリットルのサンプルを、９６ウエルプレートにおいて８ウェルの各々
の底部にて、小さなろ紙ディスク上にピペットで移した。次いで、このプレート
をヒュームフード下で、１〜２時間乾燥した。キャベツの葉からアブラムシを穏
やかにたたきおとすことによりアブラムシを各ウェルに添加した。そのウェルの
底部をアブラムシで覆った。ウェルのカラムが満たされると、そのプレートは、
そのアブラムシをそこに留めておくためにキャップ片を用いて栓をされる。この
試験プレートは、２０〜２２℃にてインキュベートされる。この試験は、生きて
いるアブラムシおよび死んでいるアブラムシの数を計数するために顕微鏡を使用
し、４８時間で評価される。次いで、そのウェルは、他の昆虫と同様に１〜４の
スケールで得点が与えられる（４は、死んだ昆虫はおらず、１は、１００％殺虫
される）。

【００７０】

【表７】ＡＱ７１３の小規模な発酵物および大規模な発酵物に対するこの試験は、ブロ
ス全体および上清の両方が、モモアカアブラムシを殺虫する際にかなり有効であ
ることを示す。

【００７１】（実施例４）（モモアカアブラムシに対するＡＱ７１３の植物試験）高さ６インチのコショウ植物（ＹｏｌｏＷｏｎｄｅｒ）を温室において、６
パックで生長させた。このコショウは、温室において、常在のモモアカアブラム
シの集団から自然に寄生されることが許容された。そのコショウを携帯型噴霧器
を用いて、洗い流すように噴霧した。試験したＡＱ７１３サンプルは、培地４の
４００リットル発酵槽において増殖したブロス全体およびブロス全体の噴霧乾燥
された粉末であった。３日後、ＡＱ７１３処理コショウ上の７５％のアブラムシ
が殺虫された。未処理コショウでも水処理されたコショウでも死んだアブラムシ
はいなかった。

【００７２】（実施例５）（トウモロコシルートワームに対するＡＱ７１３代謝産物活性の化学特性）５０ｍＬのＡＱ７１３を培地２において増殖させた。各培養物に５０ｍＬの酢
酸エチルを添加し、そしてその混合物を分液漏斗中で２分間振盪した。水層を除
去し、そして有機層を硫酸マグネシウムを含むビンに収集した。次いでその有機
濾液を濾過して丸底フラスコに入れ、そして溶媒をｒｏｔｏｖａｐで除去した。

【００７３】バイオアッセイのために、乾燥した有機抽出物を２．５ｍＬアセトン中に再溶
解した。４０μＬアリコートを取り出し、そして７０％アセトン／水を用いて８
００μＬになるまで希釈した。これは、有機抽出物の１０×濃度である。連続希
釈を実施して、トウモロコシルートワームの新生幼虫に対するサンプルを得て、
７日後に新生幼虫（上記で調製されたようなマイクロタイタープレートにおいて
ウェル毎に１）パーセント死亡率を記録した。その結果は表５に記録される。

【００７４】

【表８】この結果は、ＡＱ７１３は、トウモロコシルートワームを殺虫する溶媒抽出可能
な代謝産物を産生することを示す。

【００７５】この活性代謝産物の分子量の範囲を決定するために、ＡＱ７１３の５０ｍＬ培
養物を培地２において増殖させた。１ｍＬを微量遠心管に置き、１２,０００ｒ
ｐｍで１５分間回転させた。その上清を取り出した。５００マイクロリットルの
上清を１０,０００ダルトン分子量セントリコン（ｃｅｎｔｒｉｃｏｎ）フィル
ターの頂部に置いた。これらを製造業者の指示に従って遠心分離した（１２,０
００ｒｐｍ、３５分間）。濾液を収集し、そして残留物（ｒｅｔｅｎｔａｔｅ）
を、フィルターを遠心分離し、そして洗浄することにより回収した。上清、濾液
および残留物のサンプルをトウモロコシルートワームの新生幼虫に対して試験し
た（昆虫の食餌を有する９６ウェルプレート、Ｍａｒｒｏｎｅら、上記に前出：
１ウェル毎に４０μＬのサンプルおよび各サンプルについて８ウェル、１幼虫／
ウェル）。この試験の結果は、表６に示される。

【００７６】

【表９】この結果は、上清および濾液が活性であり、従って代謝産物の分子量は、１０,
０００ダルトン未満であることを示す。

【００７７】（実施例６）（植物病原体に対するＡＱ７１３代謝産物活性の化学特性）５０ｍＬのＡＱ７１３を培地２において増殖させた。各培養物に５０ｍＬの酢
酸エチルを添加し、そしてその混合物を分液漏斗中で２分間振盪した。水層を除
去し、そして有機層を硫酸マグネシウムを含むビンに収集した。次いでその有機
濾液を濾過して丸底フラスコに入れ、そして溶媒をｒｏｔｏｖａｐで除去した。

【００７８】バイオアッセイのために、乾燥した有機抽出物を２．５ｍＬアセトン中に再溶
解した。４０μＬアリコートを取り出し、そして７０％アセトン／水を用いて８
００μＬになるまで希釈した。これは、有機抽出物の１０×濃度である。９６ウ
ェルプレートアッセイ（以下に記載される）である、Ｐｙｔｈｉｕｍｕｌｔｉ
ｍｕｍおよびＢｏｔｒｙｔｉｓｃｉｎｅｒｅａを用いる植物病原体アッセイを
実施し、その有機抽出物の活性を決定した。ブロス全体は１０％コントロールを
与えたが（１の得点）、１０×有機抽出物は、２つの植物病原体のコントロール
を与えなかった（４の得点）。これは、この活性な抗生物質は、ＡＱ７１３によ
り産生されるトウモロコシルートワームに活性な代謝産物とは異なり、酢酸エチ
ルのような有機溶媒では抽出し得ないことを示す。

【００７９】活性な抗生物質画分を抽出し、そして新規の化合物（アグラスタチンＡ（ａｇ
ｒａｓｔａｉｎＡ））を単離するために、ブタノール抽出物を、初めに発酵ブ
ロスを、等量の酢酸エチルを用いて２回抽出して、層を分離することによってこ
の発酵ブロスから作製した。次いで、水画分を、等量のブタノールを用いて２回
抽出した。このブタノール抽出物を合わせ、そして溶媒を、回転式エバポレータ
ーを用いて除去した。粉末を、生じた抽出物を凍結乾燥することにより得た。

【００８０】この粉末を８０％アセトニトリル／水に溶解し、そして超音波処理した。この
溶液を、メタノールを用いて活性化され、そして８０％アセトニトリル／水を用
いて平衡化されたＣ−１８固相抽出（ＳＰＥ）カートリッジに適用した。このＳ
ＰＥカートリッジを８０％ＡＣＮ／水を用いて溶出させ、この溶離液を収集し、
溶媒を除去した。この溶離液をＨＰＬＣによってさらに精製した。Ｃ−１８Ｈ
ＰＬＣカラム（１ｃｍ×２５ｃｍ）を、以下のようなアセトニトリル＋０．０５
％ＴＦＡ／水＋０．０５％ＴＦＡ溶媒勾配とともに使用した（２１０ｎｍでＵＶ
検出）：０〜２０分間、３３％ＡＣＮ；２０〜３０分間、４０％ＡＣＮ；３０〜
４５分間、４５〜５５％ＡＣＮ；および４５〜６３分間、５５％ＡＣＮ。

【００８１】ＡＱ７１３のＨＰＬＣクロマトグラムは、イツリン（ｉｔｕｒｉｎ）、イツリ
ン様化合物（プリパスタチン（ｐｌｉｐａｓｔａｔｉｎ）およびアグラスタチン
（ａｇｒａｓｔａｔｉｎ））ならびにサーファクチン（ｓｕｒｆａｃｔｉｎ）の
存在を示す（図１を参照のこと）。イツリンＡ２、Ａ３、Ａ４、Ａ７およびＡ６
はＮＭＲデータとＬＣ質量分析データとの組み合わせおよび文献の値との比較に
よって同定された。サーファクチンを、ＨＰＬＣおよびＬＣ質量分析によって、
購入したサーファクチン標準品との比較により同定した。

【００８２】このイツリン様化合物を、アミノ酸分析およびＬＣ質量分析の組み合わせによ
って、プリパスタチンおよび新規なアグラスタチンの混合物であると決定した。
また、広範なＮＭＲデータを、この新規な化合物のうちの１つ（ＨＰＬＣピーク
２０）（アグラスタチンＡと称される）について収集した。アグラスタチンＡは
、以下のアミノ酸：Ｔｈｒ；３Ｇｌｕ；Ｐｒｏ；Ａｌａ；Ｖａｌ；２Ｔｙｒ
；およびＯｒｎを含むことが見出された。この組成は、Ｖａｌの存在およびＩｌ
ｅの欠失によってプリパスタチンＡと異なる。アグラスタチンＡの分子量は、以
下の構造（配列番号４）に対応して１４４８であると決定された：

【００８３】

【化５】脂肪酸部分の直鎖の性質は、¹ＨＮＭＲにより確認された。環状ペプチドに
おけるアミノ酸の位置をＴＯＣＳＹおよびＲＯＥＳＹデータセットの詳細な分析
によって決定した。

【００８４】アグラスタチンＢ（ＨＰＬＣピーク２６）の質量分析およびアミノ酸分析は、
その構造は、Ａｌａ残基をＶａｌ残基で置換したプリパスタチンＢ２と類似する
ことを示唆する。その構造は、以下に示される（配列番号５）。

【００８５】

【化６】（実施例７）（インビトロ培養における植物病原体に対するＡＱ７１３の活性（９６ウェル
プレート））ＡＱ７１３が真菌Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａｉｎｆｅｓｔａｎｓ、Ｐｙｔｈ
ｉｕｍｕｌｔｉｍｕｍ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓｃｉｎｅｒｅａ、Ｒｈｉｚｏｃｔ
ｏｎｉａｓｏｌａｎｉ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａｓｏｌａｎｉに対して有効で
あるか否かを決定するために、以下の実験を実施した。９６ウェルプレート（平
底、１ウェルあたり４００マイクロリットル、Ｎｕｎｃｂｒａｎｄ）を、寒天
培地（ポテトデキストロース寒天）（ＰＤＡ，Ｄｉｆｃｏ）で充填した。Ｐｈｙ
ｔｏｐｈｔｈｏｒａｉｎｆｅｓｔａｎｓ培養物を、液体ＹＰＧ−１培地（０．
４ｇ酵母、０．１％ＫＨ₂ＰＯ、０．５％ＭｇＳＯ₄×７Ｈ₂Ｏ、１．５％
グルコース）中で３日間増殖した。他の真菌について、芽胞を、ペトリプレート
の表面からすくい取り、そして０．１〜０．２ｍＬアリコートの脱イオン水およ
び芽胞懸濁液（濃度約２×１０⁶芽胞／ｍＬ）の病原体を、この寒天上に広げた
。

【００８６】ＡＱ７１３を、実施例２に記載されるように、培地２または３中で７２時間増
殖した。上清を得るために、全ブロス培養物を、５，２００ｒｐｍで２０分間遠
心分離した。真菌性植物病原体を、９６ウェルプレート上にピペッティングした
（８ウェル／病原体）。真菌の増殖の存在または非存在を、各々８ウェルについ
て記録した。約４０μＬのＡＱ７１３上清または２０μＬの全ブロスを、各ウェ
ルに添加した。「１」のスコアは、真菌の増殖の完全な阻害を意味する。「４」
のスコアは、真菌の増殖が全く阻害されないことを意味する。結果を、表７に示
す。

【００８７】

【表１０】この結果は、ＡＱ７１３がインビトロで広い真菌殺傷性スペクトルを有すること
、および全ブロスおよび上清の両方が非常に活性であることを示す。この上清は
、培地３においてＲｈｉｚｏｃｔｏｎｉａｓｏｌａｎｉに対して活性であった
が、培地２においては活性でなかった。

【００８８】（実施例８）（インビトロ培養における植物病原体に対するＡＱ７１３の活性（ゾーンアッ
セイ（ｚｏｎｅａｓｓａｙ）））寒天拡散（ゾーン）アッセイにおけるＡＱ７１３の活性を決定するために、植
物病原体の芽胞を、１０ｃｍペトリ皿中のポテトデキストロース寒天の表面上に
広げた。７．０ｍｍウェルを、この寒天から取り出し、そして培地２中で増殖し
たＡＱ７１３の上清の１００μＬサンプルを、このウェルに置いた。上清を、４
２００ｒｐｍで４０分間遠心分離することによって調製した。次いで、この上清
を、４２００ｒｐｍでさらに４０分間スピン（ｓｐｉｎ）させた。代表的な結果
は、増殖なしのゾーンからなり、そして／またはこのウェルの周りでこの病原体
の増殖を減少した。このゾーンサイズをミリメートルで測定し、そして記録した
。この結果を、表８に示す。

【００８９】

【表１１】（実施例９）（細菌性植物病原体に対するＡＱ７１３の活性）標準的な寒天拡散アッセイを、実施例６における通りに設定した。各細菌性病
原体のローンを、ペトリプレートの表面上に広げた。培地２中で増殖したＡＱ７
１３全ブロスの１００μＬを、各ウェルに置いた。このゾーンのサイズを、ミリ
メートルで測定した。

【００９０】

【表１２】ＡＱ７１３は、インビトロで試験された全ての種の細菌性植物病原体に対して活
性であった。

【００９１】（実施例１０）（植物試験における植物病原体に対するＡＱ７１３の活性）ＡＱ７１３の活性を、マメおよびゼラニウム葉に対して灰色かび病、Ｂｏｔｒ
ｙｔｉｓｃｉｎｅｒｅａについて、トマト実生に対してＡｌｔｅｒｎａｒｉａ
ｓｏｌａｎｉについて、ならびにレタスべと病に対してＢｒｅｍｉａｌａｃ
ｔｕｃａｅについて、試験した。

【００９２】Ａ．ｓｏｌａｎｉについて、６パックで植えた２〜３葉段階のトマト実生に、
ＡＱ７１３全ブロス（培地２）で流し出す（ｒｕｎｏｆｆ）ように噴霧した。噴
霧後、この実生を乾燥させた（約１．５時間）。次いで、この実生に、５．０×
１０⁴芽胞／ｍＬを用いて噴霧した。実生を、プラスチックのドームで覆い、そ
してＰｅｒｃｉｖａｌインキュベーター中２８℃で保存した。ＡＱ７１３を有さ
ずかつ病原体の芽胞を有する水、およびＡＱ７１３を有さずかつ病原体の芽胞を
有さない水を、陰性病原体コントロールおよび陽性病原体コントロールとして使
用した。４日後、この試験を読み取った。水のＡ．ｓｏｌａｎｉコントロールに
ついて、全ての葉にわたって均一な病変が存在し、そしてその子葉は剥離され、
そして重度に感染された（５の評点＝完全な感染、コントロールなし）。ＡＱ７
１３で処理した植物は、本葉に対して散乱した数個の軽度の病変を有した。この
子葉を付着したが、いくつかの小さな病変を有した（１の評点）。陰性コントロ
ールは、感染されなかった。

【００９３】第２の試験を、ドーム下に置いた水で充填した石工のジャーに配置した、剥離
したトマト実生（地表面で折られた幹）を使用して設定し、そして上記のように
スコア付けした。この植物に上記のように噴霧し、そしてＡ．ｓｏｌａｎｉの病
状を、４日後に記録した。陰性コントロールに対して病状は存在しなかった。陽
性コントロールに対して、この実生にわたって均一な病変が存在した。ＡＱ７１
３処理を、１と評価した（ほとんどまたは全く病変なし）。２日後、陽性コント
ロールにおける植物を破壊したが、ＡＱ７１３で処理した実生は、実質的にきれ
いであり、そして陰性コントロール（水を噴霧された植物）と同じように見えた
。

【００９４】Ｂｏｔｒｙｔｉｓｃｉｎｅｒｅａに対する試験について、マメ植物の第１の
本葉を、各葉上に１３×１００培養チューブの口を押し付けることによって傷つ
けた。各葉は、２つの創傷／葉を受けた。この葉に、ＡＱ７１３全ブロス（培地
２）または水単独もしくは病原体単独を用いて噴霧した。乾燥した場合、これら
に、Ｂ．ｃｉｎｅｒｅａ芽胞を再び噴霧した（０．８×１０⁶芽胞／ｍＬ）。こ
の葉を、プラスチックドームで覆われた平地に置き、そしてＰｅｒｃｉｖａｌイ
ンキュベーター中１８〜２０℃で保存した。５日後、この陽性コントロール（病
原体単独）は、約２５ｍｍ直径の領域において腐敗した。この陰性コントロール
（水単独）は、腐敗を有さなかった。ＡＱ７１３は、この葉が傷つけられた７ま
たは８つのサークル上で感染を示さなかった。感染されたものは、このサークル
の周りに２つの位置で軽度の感染を有した。

【００９５】Ｂｒｅｍｉａ試験について、レタス種子を、約８センチメートルの高さおよび
幅の、小さなきれいなプラスチック性の植物コンドミニアム中で、ピート、パー
ライトおよびバーミキュライトを含む滅菌した苗床用の土の混合物（ｐｏｔｔｉ
ｎｇｍｉｘ）の層中に植えた。レタスが出芽した後（１週間）、このレタス実
生に、ＡＱ７１３ブロスまたは上清サンプルを用いて噴霧した。この植物を乾燥
させ、次いで、感染したレタス実生からのべと病芽胞懸濁液を、この実生上に噴
霧した。このプラスチックカバーを、この植物上に置き、そしてＰｅｒｃｉｖａ
ｌインキュベーター中１８〜２０℃でインキュベートした。１週間後、この試験
を評価した。ＡＱ７１３は、レタス実生上でＢｒｅｍｉａ由来のべと病を予防し
なかった。

【００９６】（実施例１１）（植物病害に対するＡＱ７１３の効力（温室試験））（ブドウべと病）ＡＱ７１３を、４００リットル発酵槽中で４８時間、ダイズに基づく培地中で
増殖した。ブドウ植物（品種Ｃｈａｄｏｎｎａｙ）に、滅菌水を用いて０．５×
濃度および０．２５×濃度まで希釈した、この４００リットル発酵槽からの全ブ
ロスを用いて流し出すように、手持ち用の（ｈａｎｄ−ｈｏｌｄ）噴霧器を用い
て噴霧した。葉が乾燥した場合、この植物に２回目を噴霧した。乾燥後、この植
物に、ブドウべと病を生じる病原体、Ｐｌａｓｍｏｐａｒａｖｉｔｉｃｏｌａ
を接種した。３つの植物を、各用量で処理した。各植物を、０〜１００％コント
ロールのスケールに基づいて、パーセント病害コントロールを推定することによ
って評価した。１００％コントロールは、可視的な病変を有さない植物である。
化学的殺真菌薬メタラキシル（ｍｅｔａｌａｘｌ）を、比較のために使用した。
この結果は、以下の通りであった：ＡＱ７１３０．５× 全ブロス９７．７％コントロールＡＱ７１３０．２５× 全ブロス１００％コントロールメタラキシル３０ｐｐｍ１００％コントロールメタラキシル１０ｐｐｍ９８．３％コントロールメタラキシル１ｐｐｍ８０％コントロールこの結果は、ＡＱ７１３がブドウべと病のコントロールならびに化学的殺真菌薬
をもたらしたことを実証する。

【００９７】（実施例１２）（カボチャうどんこ病に対するＡＱ７１３の効力）ＡＱ７１３を、４００リットル発酵槽中で４８時間、ダイズに基づく培地中で
増殖した。カボチャ植物（ＣｒｏｏｋｎｅｃｋおよびＡｃｏｍ）に、滅菌水を用
いて０．５×濃度まで希釈したサンプルおよびこの４００リットル発酵槽からの
全ブロスを用いて流し出すように、手持ち用の噴霧器を用いて噴霧した。乾燥後
、この植物に、カボチャうどんこ病を生じる病原体、Ｓｐｈａｅｒｏｔｈｅｃａ
ｆｕｌｉｇｉｎｅａを接種した。２つの植物を、各用量で処理した。全ブロスの
噴霧乾燥した粉末もまた試験した。４００リットル発酵ブロスを、噴霧乾燥して
水を除去した。１０％および２．５％の噴霧乾燥した粉末溶液を、上記の通りに
流し出すようにこの植物上に噴霧した。うどんこ病病害の発生率を、０〜５のス
コアで評価した。５の評点は１００％病害であり、それに対し、０の評点は病害
なしである。この結果を、以下の表１０に示す：

【００９８】

【表１３】ＡＱ７１３全ブロスおよび噴霧乾燥した粉末は、カボチャうどんこ病のほぼ完全
なコントロールを提供した。

【００９９】（実施例１３）（温室における、疫病、灰色かび病、ブドウうどんこ病、穀類うどんこ病、紋
枯病（ｓｈｅａｔｈｂｌｉｇｈｔ）およびイネいもち病に対するＡＱ７１３の
効力）ＡＱ７１３を、２５０ｍＬの振盪フラスコ中で７２時間、ダイズに基づく培地
中で増殖した。病害、原因となる病原体および宿主を、以下の表１１に列挙する
。この全ブロス培養物を、以下の表１１に示されるような植物に対して試験した
。

【０１００】

【表１４】各ブロスを、手持ち用の噴霧器を用いて試験植物に対して１×濃度で流し出す
ように噴霧し、乾燥させ、次いで、２回目を噴霧した。３つの植物を、各病害お
よび処理のために処理した。乾燥後、この植物を、病原体を用いて接種した。各
植物を、０〜１００％コントロールのスケールに基づいて、パーセント病害コン
トロールを推定することによって評価した。１００％コントロールは、可視的な
病変を有さない植物である。化学的殺真菌薬を比較のために使用し、病害指標は
、未処理コントロールに対するこの病害の重症度である。

【０１０１】

【表１５】ＡＱ７１３は、試験した全ての病原体に対する化学的殺真菌薬に等価である活性
を示した。

【０１０２】（実施例１４）（Ｂｒａｓｓｉｃａべと病に対するＡＱ７１３の効力）Ｂａｃｉｌｌｕｓ株ＡＱ７１３を、ダイズベースの培地にて１０リットルの発
酵槽中で、４８時間増殖させた。１×強度のブロス培養物全体を、圧縮空気によ
り動力が供給される画家の空気ブラシを用いて、完全な子葉期（ｆｕｌｌｃｏ
ｔｙｌｅｄｏｎｓｔａｇｅ）にて３週齢のカリフラワーおよびメキャベツ植物
上に噴霧した。１処理あたり３つの反復実験（ｒｅｐｌｉｃａｔｅ）の１５〜２
５実生／ポットに、１処理毎に噴霧した。Ｑｕａｄｒｉｓ^TM（Ｚｅｎｅｃａから
のアゾキシストロビン（ａｚｏｘｙｓｔｒｏｂｉｎ）抗真菌薬）もまた、２５０
ｐｐｍおよび１２５ｐｐｍの割合にて、植物（処理ごとに３つ）上に噴霧した。
べと病のＰｅｒｏｎｏｓｐｏｒａｐａｒａｓｉｔｉｃａの胞子懸濁液（１〜５
×１０₄胞子／ｍＬ）を、ＡＱ７１３およびＱｕａｄｒｉｓ噴霧が乾燥した後に
Ｂｒａｓｓｉｃａ植物上に噴霧した。これらの植物を、感染のために１５〜１７
℃で２４時間維持し、次いで、実生を、２０〜２４℃で６日間インキュベートし
た。ポットを、一晩１５〜１７℃に戻して、試験が評価されるまで病原体の胞子
形成を可能にした。各植物を、０〜１００％コントロールのスケールに基づいて
病害コントロールパーセントを見積もることによって評価した。１００％コント
ロールは、胞子形成障害を有さない植物である。反復実験のポットを平均化した
結果を、以下の表１４に示す。

【０１０３】

【表１６】ＡＱ７１３は、三週間の持続期間にわたってべと病を効果的に制御した。

【０１０４】（実施例１５）（ＡＱ７１３および商業的な抗真菌薬の相乗作用）ＡＱ７１３を、ダイズベースの培地にて１０リットルの発酵槽中で、７２時間
増殖させた。この細菌培養物を、滅菌水で０．５×濃度および０．２５×濃度に
希釈した。１×濃度、０．５×濃度および０．２５×濃度の培養物を、圧縮空気
により動力を供給される画家の空気ブラシを用いて３週齢のコショウ植物上に噴
霧した。１処理あたり３つの植物に噴霧した。Ｑｕａｄｒｉｓ^TM（Ｚｅｎｅｃａ
からのアゾキシストロビン（ａｚｏｘｙｓｔｒｏｂｉｎ）抗真菌薬）もまた、５
００ｐｐｍ、２５０ｐｐｍおよび１２５ｐｐｍの濃度にて植物（処理ごとに３つ
）に噴霧した。さらに、ＱｕａｄｒｉｓおよびＡＱ７１３の全ブロス培養物の組
合せ（１：１の比）を、コショウ植物上（処理ごとに３つ）に噴霧した。Ｑｕａ
ｄｒｉｓを用いる処理およびＱｕａｄｒｉｓを用いない処理を、以下の表１５に
概説する。１×１０⁶胞子/ｍＬにてＢｏｔｒｙｔｉｓｃｉｎｅｒｅａ（灰色カ
ビ病）の胞子懸濁液を、ＡＱ７１３およびＱｕａｄｒｉｓ噴霧が乾燥した後に、
コショウ植物上に噴霧した。この植物を、試験が評価されるまで、２０〜２２℃
で３日間維持した。灰色カビ病病害の発生率を、０〜５のスコアに評価した。５
の評価は、１００％の病害を示し、一方、０の評価は、病害を示さない。これら
の結果を、以下の表１５に示す。

【０１０５】

【表１７】この結果は、明らかに、ＱｕａｄｒｉｓおよびＡＱ７１３の組合せがＱｕａｄｒ
ｉｓ単独またはＡＱ７１３単独のいずれかよりも有意により良好に灰色カビ病を
制御することを示す。

【０１０６】（実施例１６）（株Ａ７１３の殺虫性成分の決定）昆虫に対して試験するためのリポペプチド画分（イツリン、プリパスタチン、
アグラスタチンおよびサーファクチン）の抽出を、以下のとおりに行った：ブロス全体をボルテックスし、そしてｐＨを、ＨＣｌで１．５に調製し、再度
ボルテックスし、次いで１０，５００ｒｐｍで１５分間遠心分離した。上清を注
ぎ出し、そして廃棄した。ペレットを８０％アセトニトリル／水（ＡＣＮ／Ｈ₂
Ｏ）中に懸濁し、次いで３０分間超音波処理した。サンプルを１５分間再度遠心
分離し、次いでこのペレットを、ボルテックスによって８０％ＡＣＮ／Ｈ₂Ｏ
中に再度懸濁した。これを再度、１５分間遠心分離し、次いで、スピード減圧器
（ｓｐｅｅｄｖａｃｃｕｍ）において一晩乾燥させた。次いで、このサンプル
を、８０％ＡＣＮ／Ｈ₂Ｏ中に再溶解した。

【０１０７】サーファクチン（リポペプチドのうちの１つ）を、単独で試験した。サーファ
クチンは、ＳｉｇｍａＣｈｅｍｉｃａｌｓ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）から購
入し、そしてＨＰＬＣにより検証されるように、ＡＱ７１３におけるサーファク
チンと同一である。従って、Ｓｉｇｍａサーファクチンを、昆虫に対する試験に
おいて使用した。

【０１０８】

【表１８】株ＡＱ７１３のリポペプチド抽出物は、殺虫性である。サーファクチンは、単
独で、アブラムシおよびトウモロコシルートワームに対して活性を示すが、アワ
ヨトウの幼虫（ａｒｍｙｗｏｒｍ）に対する活性は示さない。従って、株ＡＱ７
１３の殺虫活性は、株ＡＱ７１３におけるリポペプチドによって部分的に説明さ
れ得る。

【０１０９】本発明は、本明細書中に、そしてその特定の実施形態に関して、詳細に記載さ
れているが、種々の変化および改変が、本発明の精神および範囲から逸脱するこ
となく上記のような発明になされ得ることが、当業者に明らかである。

【配列表】

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、プリパスタチン抗生物質（配列番号２）の構造を示す。

【図２】図２は、ＡＱ７１３代謝産物のＨＰＬＣクロマトグラムを示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者ジムネッツ，デズモンドアール．アメリカ合衆国カリフォルニア 95695，ウッドランド，ペンドガストストリート９ (72)発明者マッコイ，ランディージェイ．アメリカ合衆国カリフォルニア 95616，デイビス，ブレトンアベニュー 3212 (72)発明者マロン，パメラジー．アメリカ合衆国カリフォルニア 95616，デイビス，ビクトリア 3333 (72)発明者オージャラ，ジミーイー．アメリカ合衆国カリフォルニア 95616，デイビス，リラードドライブ 2905 Ｆターム(参考） 4B065 AA19X AC20 BD01 BD06 CA13 CA48 4H011 AC01 AC06 DA14 DD03 DD04 DE15 4H045 AA10 AA30 BA55 CA11 DA83 EA06 FA73

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】昆虫侵襲から植物および果実を保護または処理するための方
法であって、有効量のＢａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ株ＡＱ７１３（ＮＲ
ＲＬ登録番号Ｂ−２１６６１）または該株を同定する全ての特徴を有するその変
異体を、該植物および該果実に適用する工程を包含する、方法。
【請求項２】前記昆虫侵襲が葉の昆虫侵襲または地下の昆虫侵襲である、
請求項１に記載の方法。
【請求項３】昆虫侵襲から植物および果実を保護または処理するための方
法であって、昆虫に対して活性を示す、請求項１に記載のＢａｃｉｌｌｕｓｓ
ｕｂｔｉｌｉｓ株により産生され、溶媒抽出可能であり、そして１０，０００ダ
ルトン未満の分子量を有する、有効量の代謝産物を、該植物および該果実に適用
する工程を包含する、方法。
【請求項４】前記昆虫侵襲が葉の昆虫侵襲である、請求項３に記載の方法
。
【請求項５】前記昆虫侵襲が地下の昆虫侵襲である、請求項３に記載の方
法。
【請求項６】昆虫侵襲から植物および果実を保護または処理するための方
法であって、昆虫に対する活性を示すＢａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ株Ａ
Ｑ７１３の培養物から得られた、有効量の上清を、適用する工程を包含する、方
法。
【請求項７】前記昆虫侵襲が葉の昆虫侵襲である、請求項６に記載の方法
。
【請求項８】前記昆虫侵襲が地下の昆虫侵襲である、請求項７に記載の方
法。
【請求項９】有効量の生物学的農薬または化学農薬を適用する工程をさら
に包含する、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】前記Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ株ＡＱ７１３が
ブロス培養物全体として適用される、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】前記Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ株ＡＱ７１３が
上清として適用される、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】前記Ｂａｃｉｌｌｓｓｕｂｔｉｌｉｓ株ＡＱ７１３が、
湿潤性粉末、顆粒、流動物または微小カプセル物として適用される、請求項６に
記載の方法。
【請求項１３】植物の根または該根の周囲の土壌が処理される、請求項１
〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】植物の根または該根の周囲の土壌が処理される、請求項１
３に記載の方法。
【請求項１５】殺虫活性により株ＡＱ７１３から単離された、リポペプチ
ド抽出物。
【請求項１６】殺虫活性により株ＡＱ７１３から単離された、サーファク
チンリポペプチド。
【請求項１７】昆虫侵襲から植物および果実を保護または処理するための
方法であって、以下の式：【化１】を有する、有効量の化合物を適用する工程を包含し、ここでＲ₁は、分岐しているかまたは直線状のＣ８〜Ｃ２０の脂肪族側鎖であ
り；Ｘは、ＡｌａまたはＶａｌのいずれかであり、Ｒ２は、酢酸誘導体またはエ
ステル誘導体であり、そしてＧｌｘは、ＧｌｎまたはＧｌｎである、方法。
【請求項１８】昆虫侵襲から植物および果実を保護または処理するための
方法であって、以下の式：（配列番号４）【化２】を有する化合物、または（配列番号５）【化３】を有する化合物を有効量適用する工程を包含する、方法。
【請求項１９】昆虫侵襲から植物および果実を保護または処理するための
方法であって、Ａ型イツリン、プリパスタチン、および界面活性剤を含む、有効
量の組成物を適用する工程を包含する、方法。
【請求項２０】有効量のアグラスタチンを適用する工程をさらに包含する
、請求項２０に記載の方法。
【請求項２１】殺虫活性により株ＡＱ７１３から単離された、リポペプチ
ド抽出物。
【請求項２２】殺虫活性により株ＡＱ７１３から単離された、サーファク
チンリポペプチド。
【請求項２３】昆虫侵襲から植物または果実を処理または保護するための
方法であって、請求項２２に記載の抽出物を含む、有効量の組成物を投与する工
程を包含する、方法。
【請求項２４】昆虫侵襲から植物または果実を処理または保護するための
方法であって、請求項２３に記載のサーファクチンを含む、有効量の組成物を投
与する工程を包含する、方法。
【請求項２５】前記組成物が前記植物の根の周辺の土壌に適用されるか、
または該根が処理される、請求項２４または２５に記載の方法。