KR20140053026A

KR20140053026A - 폴리엔 살진균제와 비-리보솜 펩티드의 상승작용적 조합물 및 관련된 사용 방법

Info

Publication number: KR20140053026A
Application number: KR20137033766A
Authority: KR
Inventors: 마갈리 귈라베르-고야; 조너선 에스. 마르골리스
Original assignee: 바이엘 크롭사이언스 엘피
Priority date: 2011-05-24
Filing date: 2012-05-23
Publication date: 2014-05-07
Also published as: JP2014518878A; US8623813B2; WO2012162412A3; US20120302494A1; AU2012258776B2; ZA201308820B; CL2013003349A1; US20130331311A1; MX347345B; RU2013157207A; AR090019A1; MX2013013709A; BR112013029912A2; CA2836131A1; CO6811811A2; CN103732064A; EP2713729A2; WO2012162412A2

Abstract

본 발명은 폴리엔 살진균제와 적어도 1종의 리포펩티드의 상승작용적 살진균 조합물을 포함하는 조성물, 및 이같은 조성물을 진균 병원체 방제에 사용하는 방법을 포함한다.

Description

폴리엔 살진균제와 비-리보솜 펩티드의 상승작용적 조합물 및 관련된 사용 방법 {SYNERGISTIC COMBINATIONS OF POLYENE FUNGICIDES AND NON-RIBOSOMAL PEPTIDES AND RELATED METHODS OF USE}

본 발명은 두 성분의 살진균 활성을 개선하기 위한, 폴리엔 살진균제와 항생 비-리보솜 펩티드, 예컨대 친양쪽성 고리형 리포펩티드의 상승작용적 조합물에 관한 것이다.

살진균제는 작물 보호용 용도; 식품, 먹이 및 화장품 방부제로서의 용도; 및 인간 및 수의학 용도 양쪽 모두를 위한 약제로서의 용도가 포함되는 무수한 용도가 있다. 작물 수율 감소, 식품-매개 질환 및 인간 및 동물 양쪽 모두의 진균 감염이 선진국 및 개발 도상국 양쪽 모두에서 문제이다. 따라서, 기존 살진균제, 특히 환경 친화적이고 진균 저항성 발달에 대해 감수성이지 않은 것의 효능을 개선하는 것이 고도로 바람직하다.

폴리엔 살진균제는 상기 언급된 분야 모두에서 사용된 항진균 항생제이다. 토양에서 통상적으로 발견되는 스트렙토마이세스(Streptomyces) 종, 예컨대 스트렙토마이세스 나탈렌시스(Streptomyces natalensis)의 발효를 통해 이를 수득할 수 있다. 폴리엔 살진균제의 활성은, 부분적으로, 에르고스테롤과 복합체를 형성함으로써 세포막을 손상시키는 능력에서 유래된다. 나타마이신(natamycin)에 대한 진균 저항성이 발달될 가능성이 매우 낮다는 것이 수많은 연구에서 확인되었다. 추가로, 폴리엔 살진균제는 포유동물 세포 내에 존재하는 콜레스테롤에 영향을 미치지 않기 때문에, 독성이 무시할만하다.

고리형 친양쪽성 리포펩티드, 예컨대 서팩틴(surfactin), 이투린(iturin) 및 펜기신(fengycin)이 포함되는 비-리보솜 펩티드가 이들의 항균 성질에 대해 잘 인정되어 있고, 작물 보호 분야에서 사용되었다. 이들의 작용 방식으로 인해, 이들은 생물제약 및 기타 생물공학 용도에서 또한 잠재적인 용도가 있다. 리포펩티드는 바실루스 서브틸리스(Bacillus subtilis) 및 바실루스 아밀로리퀘파시엔스(Bacillus amyloliquefaciens)가 포함되는 다양한 토양 박테리아의 발효를 통해 수득될 수 있다. 리포펩티드는, 폴리엔 살진균제와 유사하게, 세포막을 파괴함으로서 진균을 사멸시킨다. 이러한 화합물에 대한 진균 저항성이 발달될 가능성은 매우 낮은 것으로 예상되는데, 이들이 막 지질에 직접적으로 작용하고 단일 부위 단백질 표적 상에서는 그렇지 않기 때문이다. 추가로, 리포펩티드는 환경 친화적이고, 작업자 및 소비자에 대한 위험이 낮다; 실제로, 리포펩티드-함유 바실루스(Bacillus) 균주로 처리된 작물을 처리일에 수확할 수 있다. 출원인은 폴리엔 살진균제와 리포펩티드의 조합물이 진균과 같은 미생물에 대한 효능에서 부가적이기보다는 상승작용적인 증가를 야기한다는 것을 발견하였다. 어떠한 이론에 의해서도 한정되기를 원치 않으면서, 출원인은 각각의 유형의 화합물이 별개의 작용 방식을 통해 진균 세포막을 파괴하기 때문에 본 발명의 리포펩티드 및 폴리엔 살진균제가 상승작용적 살진균 방식으로 작용할 것으로 가정하였다.

본 발명은 다수의 전통적인 합성 살진균제보다 덜 독성이고 어느 한 화합물을 개별적으로 적용하는 것보다 더 낮은 비율로 적용되는 성분들을 포함하는, 독성이 낮고, 낮은 저항성을 유도하며, 효능이 증가된 살진균 조성물을 제공한다. 이러한 살진균 조성물은 하나 이상의 폴리엔 살진균제와 적어도 1종의 리포펩티드의 상승작용적 살진균 조합물로 구성된다. 한 실시양태에서, 폴리엔 살진균제는 나타마이신, 니스타틴(nystatin), 암포테리신(amphotericin) B, 오레오펀긴(aureofungin), 필리핀(filipin) 및 루센소마이신(lucensomycin) 및/또는 이러한 폴리엔 살진균제 각각의 유도체 중 하나 이상이다. 또 다른 실시양태에서, 조성물은 하나를 초과하는 폴리엔 살진균제를 포함한다.

이러한 상승작용적 살진균 조합물의 리포펩티드 성분은 리포펩티드-생산 미생물에 의해 생산된 발효 생성물일 수 있거나, 이같은 살진균 발효 생성물의 조 추출물일 수 있거나, 이같은 발효 생성물로부터 정제 또는 반정제될 수 있다. 다른 실시양태에서, 리포펩티드는 합성 또는 반합성일 수 있다 (즉, 모 리포펩티드가 미생물로부터 수득되고 유도체화된다). 일부 실시양태에서, 리포펩티드-생산 미생물은 바실루스 종 박테리아이다. 다른 실시양태에서, 이는 스트렙토마이세트(Streptomycete)이다. 또 다른 실시양태에서, 이는 파에니바실루스(Paenibacillus) 종 박테리아이다.

특정 예에서, 리포펩티드-생산 박테리아는 바실루스 서브틸리스, 바실루스 아밀로리퀘파시엔스 또는 하나 이상의 리포펩티드를 생산하는 임의의 기타 바실루스 종이다. 또 다른 예에서, 이같은 바실루스 종에 의해 생산된 리포펩티드는 하기의 패밀리 중 하나 이상으로부터의 것이다: 서팩틴-유형 화합물, 이투린-유형 화합물 및 펜기신-유형 화합물. 리포펩티드를 생산하는 일부 바실루스 종이 본 발명의 상세한 설명에서 기술된다 (예를 들어, 아밀로리퀘파시엔스, 세레우스(cereus), 투린기엔시스(thuringiensis), 코아굴란스(coagulans), 푸밀루스(pumilus), 리케니포르미스(licheniformis)); 기타 바실루스 종이 당업자에게 공지되어 있을 것이다. 특정 예에서, 리포펩티드-생산 박테리아는 바실루스 서브틸리스 QST713이다. 한 실시양태에서, 조성물은 폴리엔 살진균제 성분 및 리포펩티드-함유 발효 생성물로 구성된다. 한 예에서, 리포펩티드-함유 발효 생성물은 바실루스 종 박테리아, 예컨대 상기 언급된 것들로부터의 것이다.

일부 실시양태에서, 본 발명의 조성물의 리포펩티드 성분은 하기 화합물 중 하나 이상으로 구성된다: 서팩틴-유형 화합물, 펜기신-유형 화합물, 이투린-유형 화합물 및 푸자리시딘(fusaricidin). 본 발명에 적절한 이투린-유형 화합물에는 하기 화합물 중 하나 이상이 포함된다: 바실로마이신(bacillomycin) D, 바실로마이신 F, 바실로마이신 L, 바실로마이신 LC (바실로펩틴(bacillopeptin)으로 또한 공지됨), 마이코서브틸린(mycosubtilin), 이투린 A, 이투린 A_L, 및 이투린 C (마지막 3개의 화합물은 본원에서 총괄적으로 이투린으로 지칭됨). 본 발명에 적절한 펜기신-유형 화합물은 펜기신 A, 펜기신 B, 플리파스타틴(plipastatin) A, 플리파스타틴 B, 플리파스타틴 및 아그라스타틴 (미국 특허 번호 6,291,426에 기술된 바와 같음)이다 (마지막 4개의 목록은 본원에서 총괄적으로 플리파스타틴으로 지칭됨). 본 발명에 적절한 서팩틴-유형 화합물은 에스페린(esperin), 리케나이신(lichenysin), 푸밀라시딘(pumilacidin) 및 서팩틴이다. 특정 실시양태에서, 리포펩티드 성분에는 이투린-유형 화합물, 예컨대 이투린 A, 마이코서브틸린 및/또는 바실로마이신, 펜기신-유형 화합물 및 서팩틴 중 하나 이상이 포함된다. 또 다른 실시양태에서, 리포펩티드 성분에는 하기 화합물 중 적어도 2종이 포함된다: 이투린, 펜기신-유형 화합물 및 서팩틴.

일부 실시양태에서, 상승작용적 살진균 조합물은 폴리엔 살진균제 및 하나 이상의 리포펩티드로 구성된다. 또 다른 실시양태에서, 상승작용적 살진균 조합물은 폴리엔 살진균제 및 둘 이상의 리포펩티드로 구성된다. 리포펩티드는 하기 화합물 패밀리 중 하나 이상으로부터의 하나 이상의 화합물일 수 있다: 서팩틴-유형 화합물, 이투린-유형 화합물 및/또는 펜기신-유형 화합물. 한 예에서, 리포펩티드는 하나 이상의 이투린 및/또는 하나 이상의 펜기신-유형 화합물 및/또는 서팩틴으로 구성된다. 한 실시양태에서, 조성물의 폴리엔 살진균제 성분은 나타마이신 또는 니스타틴이고, 리포펩티드 성분은 개별적인 또는 조합된 이투린 (A, B 및/또는 C), 바실로마이신, 서팩틴, 푸자리시딘, 및/또는 펜기신-유형 화합물로 구성된다. 한 특정 예에서, 리포펩티드는 리포펩티드-생산 바실루스 종 박테리아의 발효 생성물로부터 반정제 또는 정제된다. 이러한 실시양태의 또 다른 예에서, 폴리엔 살진균제는 나타마이신 또는 이의 유도체 또는 니스타틴 또는 이의 유도체이다.

조성물의 폴리엔 살진균제 성분 대 리포펩티드 성분 (예를 들어, 리포펩티드-함유 발효 브로스(broth), 리포펩티드를 함유하는 조 추출물; 정제 또는 반정제된 리포펩티드 추출물; 또는 화학적으로 합성 또는 유도체화된 순수한 리포펩티드(들))의 중량 대 중량 비는 약 500:1 내지 1:500이다. 한 실시양태에서, 나타마이신 또는 이의 유도체 또는 니스타틴 또는 이의 유도체 대 리포펩티드 성분 (하기 화합물 패밀리 중 하나 이상으로부터의 하나 이상의 화합물로 구성됨: 서팩틴-유형 화합물, 이투린-유형 화합물, 펜기신-유형 화합물, 및/또는 푸자리시딘)의 중량 대 중량 비는 약 500:1 내지 약 1:500이다. 한 특정 실시양태에서, 나타마이신 또는 이의 유도체 또는 니스타틴 또는 이의 유도체 대 이투린-유형 화합물, 서팩틴-유형 화합물 및/또는 펜기신-유형 화합물의 조합물을 포함하는 리포펩티드 성분의 중량 대 중량 비는 약 500:1 내지 약 1:500이다. 일부 실시양태에서, 나타마이신 또는 이의 유도체 또는 니스타틴 또는 이의 유도체 대 하나 이상의 이투린-유형 화합물, 예컨대 이투린 A 및/또는 바실로마이신을 함유하는 리포펩티드 성분의 중량 대 중량 비는 약 500:1 내지 약 1:500이다; 다른 실시양태에서, 나타마이신 또는 이의 유도체 또는 니스타틴 또는 이의 유도체 대 펜기신-유형 화합물을 함유하는 리포펩티드 성분의 중량 대 중량 비는 약 500:1 내지 약 1:500이다; 또 다른 실시양태에서, 나타마이신 또는 이의 유도체 또는 니스타틴 또는 이의 유도체 대 서팩틴-유형 화합물, 예컨대 서팩틴을 함유하는 리포펩티드 성분의 중량 대 중량 비는 약 500:1 내지 약 1:500이다. 한 실시양태에서, 나타마이신 또는 이의 유도체 또는 니스타틴 또는 이의 유도체 대 펜기신-유형 화합물, 이투린-유형 화합물 및/또는 서팩틴-유형 화합물을 함유하는 발효 브로스가 포함되는 발효 브로스로부터의 리포펩티드의 조 추출물의 중량 대 중량 비는 약 1:500 내지 약 500:1이다. 일부 실시양태에서, 폴리엔 살진균제 및 리포펩티드 성분의 상기 기술된 조합물 중 임의의 것의 중량 대 중량 비는 약 100:1 내지 약 1:100이다; 다른 실시양태에서, 이는 약 10:1 내지 약 1:10이다; 또 다른 실시양태에서, 이는 약 5:1 내지 약 1:5이다; 또 다른 실시양태에서, 이는 약 2:1 내지 약 1:2이다; 또 다른 실시양태에서, 이는 1:1이다.

한 실시양태에서, 폴리엔 살진균제 성분은 나타마이신 또는 이의 유도체 또는 니스타틴 또는 이의 유도체이고, 리포펩티드 성분은 하기의 것들 중 하나 이상을 포함한다: (i) 이투린, (ii) 바실로마이신, (iii) 마이코서브틸린, (iv) 에스페린, (v) 리케나이신, (vi) 푸밀라시딘, (vii) 서팩틴, (viii) 펜기신 A, (ix) 펜기신 B, (x) 플리파스타틴 A, (xi) 플리파스타틴 B, 및/또는 (xii) 아그라스타틴. 상기 언급된 실시양태의 또 다른 예에서, 서팩틴이 조성물로부터 배제된다. 또 다른 실시양태에서, 폴리엔 살진균제 성분은 나타마이신 또는 이의 유도체 또는 니스타틴 또는 이의 유도체이고, 리포펩티드 성분은 하기 중 하나 이상을 포함한다: (i) 이투린, (ii) 서팩틴, (iii) 펜기신 및/또는 (v) 플리파스타틴. 이러한 실시양태의 또 다른 예에서, 나타마이신 또는 니스타틴의 유도체는 모 화합물과 비교하여 살진균 활성이 동등하거나 더 양호하다.

본 발명의 조성물은 다양한 진균 방제 용도에서 유용하다. 상기 기술된 조성물을 진균 식물병원체, 수확-후 진균 병원체, 식품 또는 먹이의 진균 병원체 및 인간 진균 병원체를 방제하는데 사용할 수 있다.

한 실시양태에서, 조성물을 식물, 식물 주변 영역, 또는 식용 재배 버섯, 버섯 균사(spawn) 또는 버섯 퇴비(compost)에 적용하는 것에 의해 상기 기술된 조성물 중 임의의 것이 표적 병원체, 예컨대 푸사리움(Fusarium) 종, 보트리티스(Botrytis) 종, 베르티실리움(Verticillium) 종, 리족토니아(Rhizoctonia) 종, 트리코더마(Trichoderma) 종 및 피티움(Pythium) 종을 방제하는데 사용된다. 한 실시양태에서, 이같은 병원체를 방제하는데 사용된 본 발명의 조성물의 폴리엔 살진균제 성분은 나타마이신 또는 이의 유도체이다. 또 다른 실시양태에서, 이는 니스타틴 또는 이의 유도체이다.

또 다른 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 수확-후 병원체, 예컨대 페니실리움(Penicillium), 게오트리쿰(Geotrichum), 아스페르길루스 니게르(Aspergillus niger), 및 콜레토트리쿰(Colletotrichum) 종을 방제하는데 사용된다. 한 실시양태에서, 이같은 병원체를 방제하는데 사용된 조성물의 폴리엔 살진균제 성분은 나타마이신 또는 이의 유도체이다. 또 다른 실시양태에서, 이는 니스타틴 또는 이의 유도체이다.

또 다른 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 식품 또는 먹이에서 발생하는 진균 병원체, 예컨대 페니실리움 종, 아스페르길루스(Aspergillus) 종 및 푸사리움 종을 방제하는데 사용된다. 한 실시양태에서, 이같은 병원체를 방제하는데 사용된 조성물의 폴리엔 살진균제 성분은 나타마이신 또는 이의 유도체이다. 또 다른 실시양태에서, 이는 니스타틴 또는 이의 유도체이다. 또 다른 실시양태에서, 리포펩티드 성분은 하나 이상의 리포펩티드의 정제된 추출물이다.

또 다른 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 폴리엔 살진균제 및 적어도 1종의 폴리펩티드를 포함하는 조성물을 대상체에게 투여함으로써 대상체에서 진균 감염을 치료 또는 예방하는데 사용된다. 한 실시양태에서, 진균 감염은 칸디다에 의해 야기되고, 조성물에서 사용된 폴리엔 살진균제는 니스타틴 또는 이의 유도체이다. 또 다른 실시양태에서, 진균 감염은 칸디다에 의해 야기되고, 조성물에서 사용된 폴리엔 살진균제는 나타마이신 또는 이의 유도체이다. 또 다른 실시양태에서, 진균 감염은 푸사리움 또는 아스페르길루스에 의해 야기되고, 각막 감염일 수 있다. 이같은 예에서, 조성물에서 사용된 폴리엔 살진균제 성분은 나타마이신 또는 이의 유도체이다. 조성물이 각막 감염을 치료하는데 사용되는 또 다른 예에서, 폴리엔 살진균제 성분은 니스타틴 또는 이의 유도체이다. 또 다른 예에서, 조성물의 리포펩티드 성분은 하나 이상의 리포펩티드의 정제된 추출물이다.

본 발명은 하나 이상의 폴리엔 살진균제와 하나 이상의 리포펩티드의 조합물을 제조하고, 조합물을 표적 진균에 대한 상승작용적 효능에 대해 테스트하고, 조합물 및 담체를 포함하는 살진균 조성물을 생산하는 것에 의해 살질균 조성물을 생산하는 방법을 또한 포함한다. 한 실시양태에서, 하나 이상의 리포펩티드는 바실루스 종 박테리아, 예컨대 상기 및 본 발명의 상세한 설명에서 기술된 것들로부터의 발효 생성물의 일부분이거나 또는 이의 추출물이다. 이러한 실시양태의 또 다른 예에서, 조합물을 제조하기 전에, 리포펩티드-생산 박테리아, 예컨대 바실루스 종 균주 또는 파에니바실루스 종 균주를 선택하고, 리포펩티드를 함유하는 발효 생성물을 이러한 리포펩티드-생산 박테리아를 사용하여 생산하고, 이같은 발효 생성물 또는 이의 추출물을 조합물을 제조하는데 사용한다. 한 예에서, 이같은 발효 생성물은 하기의 리포펩티드 중 하나 이상을 포함할 것이다: 서팩틴-유형 화합물, 펜기신-유형 화합물, 이투린-유형 화합물 및/또는 푸자리시딘. 더욱 특정한 예에서, 이같은 발효 생성물은 하기의 리포펩티드 중 하나 이상을 포함할 것이다: 서팩틴, 플리파스타틴, 펜기신, 이투린 및/또는 바실로마이신. 또 다른 실시양태에서, 조합물을 제조하기 전에 폴리엔 살진균제 성분 및 리포펩티드 성분 각각을 표적 병원체에 대한 살진균 활성에 대해 스크리닝할 것이고, 적어도 약간의 살진균 활성이 있는 폴리엔 살진균제 및 리포펩티드 성분만 조합물을 제조하는데 사용할 것이다. 다른 실시양태에서, 표적 진균은 식물병원체, 예컨대 푸사리움, 보트리티스 및 베르티실리움; 수확-후 병원체, 예컨대 페니실리움 및 게오트리쿰; 식품 또는 먹이의 진균 병원체, 예컨대 아스페르길루스, 푸사리움 및 페니실리움; 및 인간 진균 병원체, 예컨대 칸디다, 아스페르길루스 및 푸사리움이다. 사카로마이세스 세레비지아에(Saccharomyces cerevisiae) 또한 칸디다에 대한 모델로서 상기 방법에서 표적 병원체로서 사용될 수 있다. 한 예에서, 테스트된 조합물의 폴리엔 살진균제 성분은 나타마이신 또는 이의 유도체 또는 니스타틴 및 이의 유도체이다. 또 다른 예에서, 테스트된 리포펩티드는 서팩틴-유형 화합물, 이투린-유형 화합물, 펜기신-유형 화합물 및/또는 푸자리시딘 중 하나 이상이다.

도 1은 (i) 바실루스 서브틸리스 QST713로부터의 리포펩티드의 조 추출물 및 나타마이신, (ii) 리포펩티드 단독, 또는 (iii) 나타마이신 단독의 존재 하에서의 음성 대조군 (처리를 받지 않음)에 비교된 사카로마이세스 세레비지아에의 성장 백분율을 나타낸다.
도 2는 (i) 리포펩티드의 조 추출물, (ii) 나타마이신, 및 (iii) 리포펩티드 및 나타마이신의 존재 하에서의 음성 대조군에 비교된 페니실리움 엑스판숨(Penicillium expansum)의 성장 백분율을 나타낸다.
도 3은 (i) 나타마이신, (ii) 조 리포펩티드 추출물, (iii) 다양한 반정제 또는 정제 리포펩티드, (iv) 나타마이신 및 조 리포펩티드 추출물의 조합물 및 (v) 나타마이신 및 각각의 반정제 또는 정제 리포펩티드 또는 모든 반정제 또는 정제 리포펩티드의 조합물의 존재 하에서의 음성 대조군에 비교된 페니실리움 엑스판숨의 성장 백분율을 나타낸다. 도면에서 사용된 경우에, "N"은 나타마이신을 지칭하고; "조 리포"는 조 리포펩티드 추출물을 지칭하고; "I"는 반정제 이투린-유형 화합물을 지칭하고; "F"는 반정제 펜기신-유형 화합물을 지칭하며; "S"는 정제 서팩틴-유형 화합물을 지칭한다.
도 4는 (i) 나타마이신, (ii) 조 리포펩티드 추출물, (iii) 다양한 반정제 또는 정제 리포펩티드, (iv) 나타마이신 및 조 리포펩티드 추출물의 조합물 및 (v) 나타마이신 및 각각의 반정제 또는 정제 리포펩티드의 조합물의 존재 하에서의 음성 대조군에 비교된 게오트리쿰 칸디둠(Geotrichum candidum)의 성장 백분율을 나타낸다. 도면에서 사용된 경우에, "N"은 나타마이신을 지칭하고; "L"은 조 리포펩티드 추출물을 지칭하고; "I"는 반정제 이투린-유형 화합물을 지칭하고; "F"는 반정제 펜기신-유형 화합물을 지칭하며; "S"는 정제 서팩틴-유형 화합물을 지칭한다.
도 5는 (i) 니스타틴, (ii) 조 리포펩티드 추출물, (iii) 다양한 반정제 또는 정제 리포펩티드, (iv) 니스타틴 및 조 리포펩티드 추출물의 조합물, 및 (v) 니스타틴 및 각각의 반정제 또는 정제 리포펩티드의 조합물의 존재 하에서의 음성 대조군에 비교된 게오트리쿰 칸디둠의 성장 백분율을 나타낸다. 도면에서 사용된 경우에, "Ny"는 니스타틴을 지칭하고; "L"은 조 리포펩티드 추출물을 지칭하고; "I"는 반정제 이투린-유형 화합물을 지칭하고; "F"는 반정제 펜기신-유형 화합물을 지칭하며; "S"는 정제 서팩틴-유형 화합물을 지칭한다.
도 6은 (i) 나타마이신, (ii) 조 리포펩티드 추출물, (iii) 다양한 반정제 또는 정제 리포펩티드, (iv) 나타마이신 및 조 리포펩티드 추출물의 조합물; 및 (v) 나타마이신 및 각각의 반정제 또는 정제 리포펩티드의 조합물의 존재 하에서의 음성 대조군에 비교된 게오트리쿰 시트리-오란티이(Geotrichum citri -aurantii)의 성장 백분율을 나타낸다. 도면에서 사용된 경우에, "N"은 나타마이신을 지칭하고; "L"은 조 리포펩티드 추출물을 지칭하고; "I"는 반정제 이투린-유형 화합물을 지칭하고; "F"는 반정제 펜기신-유형 화합물을 지칭하며; "S"는 정제 서팩틴-유형 화합물을 지칭한다.
도 7은 (i) 니스타틴, (ii) 조 리포펩티드 추출물, (iii) 다양한 반정제 또는 정제 리포펩티드, (iv) 니스타틴 및 조 리포펩티드 추출물의 조합물, 및 (v) 니스타틴 및 각각의 반정제 또는 정제 리포펩티드의 조합물의 존재 하에서의 음성 대조군에 비교된 게오트리쿰 시트리-오란티이의 성장 백분율을 나타낸다. 도면에서 사용된 경우에, "Ny"는 니스타틴을 지칭하고; "L"은 조 리포펩티드 추출물을 지칭하고; "I"는 반정제 이투린-유형 화합물을 지칭하고; "F"는 반정제 펜기신-유형 화합물을 지칭하며; "S"는 정제 서팩틴-유형 화합물을 지칭한다.
도 8은 (i) 나타마이신, (ii) 조 리포펩티드 추출물, (iii) 다양한 반정제 또는 정제 리포펩티드, (iv) 나타마이신 및 조 리포펩티드 추출물의 조합물, 및 (v) 나타마이신 및 각각의 반정제 또는 정제 리포펩티드의 조합물의 존재 하에서의 음성 대조군에 비교된 사카로마이세스 세레비지아에의 성장 백분율을 나타낸다. 도면에서 사용된 경우에, "N"은 나타마이신을 지칭하고; "L"은 조 리포펩티드 추출물을 지칭하고; "I"는 반정제 이투린-유형 화합물을 지칭하고; "F"는 반정제 펜기신-유형 화합물을 지칭하며; "S"는 정제 서팩틴-유형 화합물을 지칭한다.
도 9는 (i) 니스타틴, (ii) 조 리포펩티드 추출물, (iii) 다양한 반정제 또는 정제 리포펩티드, (iv) 니스타틴 및 조 리포펩티드 추출물의 조합물, 및 (v) 니스타틴 및 각각의 반정제 또는 정제 리포펩티드의 조합물의 존재 하에서의 음성 대조군에 비교된 사카로마이세스 세레비지아에의 성장 백분율을 나타낸다. 도면에서 사용된 경우에, "Ny"는 니스타틴을 지칭하고; "L"은 조 리포펩티드 추출물을 지칭하고; "I"는 반정제 이투린-유형 화합물을 지칭하고; "F"는 반정제 펜기신-유형 화합물을 지칭하며; "S"는 정제 서팩틴-유형 화합물을 지칭한다.

모든 간행물, 특허 및 특허 출원 (그 안의 임의의 도면 및 부록 포함)은 각각의 개별적인 간행물 또는 특허 출원이 참고로 포함되는 것으로 구체적으로 및 개별적으로 지시된 것과 동일한 정도로 참고로 포함된다.

하기의 설명은 본 발명을 이해하는데 유용할 수 있는 정보를 포함한다. 이는 본원에서 제공된 정보 중 임의의 것이 선행 기술이거나 현재 청구된 발명에 관련된다는 것 또는 구체적으로 또는 은연 중에 언급된 임의의 간행물이 선행 기술이라는 것을 인정하는 것이 아니다.

본 발명은 미생물 병원체, 예컨대 진균, 난균 및/또는 박테리아의 방제를 위한, 폴리엔 살진균제와 효소 이외의 항생 비-리보솜 펩티드의 상승작용적 조합물을 포함한다.

본 발명의 폴리엔 살진균제는 (i) 단단한 친지성 폴리엔 부분 및 유연한 친수성 히드록실화 부분 및 (ii) 대두분의 진균의 세포막 내의 스테롤, 주로 에르고스테롤에 결합하는 능력이 있는 거대고리형 락톤 환이 있는 항진균 항생제이다. 거대고리형 락톤 환은 탄소가 12-40개, 히드록실 기가 6-14개 있을 수 있고, 탄수화물에 연결될 수 있거나 또는 그렇지 않을 수 있다. 이러한 환은 하나 이상의 당, 예컨대 탄소 단위가 5개 이상 있는 단순당, 데옥시 당, 아미노 당 등에 연결될 수 있고, 이들은 산소화 결합이 포함되는 환에 부착된 치환기를 함유한다. 본 발명의 폴리엔 살진균제는 스트렙토마이세스 박테리아 종으로부터 수득될 수 있다. 이같은 살진균제에는 나타마이신, 니스타틴, 암포테리신 B, 오레오펀긴, 필리핀 및 루센소마이신, 뿐만 아니라 이들의 유도체가 포함된다. 유도체의 예로는, 예를 들어, 미국 특허 번호 5,606,038에 기술된 암포테리신 B 유도체, 또는 니스타틴 유도체/유사체, 예컨대 S44HP, NYST1068, 및 옥타엔 니스타틴 (문헌 [Bruheim et al., ANTIMICROBIAL AGENTS AND CHEMOTHERAPY, Nov. 2004, pp. 4120-4129]에 기술됨)이 포함된다. 유도체는 모 분자에 비교하여 적어도 일부 살진균 활성을 유지하는, 모 분자의 천연 발생 유사체 또는 모 분자로부터 유도체화된 합성 또는 반합성 화합물이다. 일부 실시양태에서, 유도체는 모 분자에 비교하여 살진균 활성이 적어도 동일하거나 또는 더 크다. 유도체에는 염 및 용매화물, 및 모 분자에 비교하여 용해도가 강화된 기타 변형 형태가 포함된다.

본 발명의 항생 비-리보솜 펩티드 (NRP)는 효소를 제외한, 세포막 또는 세포벽 파괴 비-리보솜 펩티드이다. 이같은 항생 NRP는 리보솜에 의해서라기 보다는 비-리보솜 펩티드 신테타제(synthetase)로 칭해지는 대형 효소 복합체에 의해 합성된다. "항생"이라는 용어는, 본원에서 사용되는 경우에, 미생물 병원체, 예컨대 진균, 난균 및/또는 박테리아를 사멸시키거나 이의 성장을 느리게 하는 능력을 지칭한다. 노린(Norine)으로 칭해지는 비-리보솜 펩티드의 데이터베이스가 인터넷 상에서 제공되고, 문헌 [Caboche, S., et al., "NORINE: A Database of Nonribosomal Peptides", Nucleic Acids Research, 36:D326-D331, (2008)]에 기술되어 있다. 본 발명의 항생 NRP는 세포막 (세포소기관 막 포함), 또는 세포벽을 파괴한다. 세포 막 또는 벽 성분의 합성을 억제하는 것; 막 가용화 또는 삼투 교란에 의한 세포막 성분의 물리적 파괴, 예컨대 인지질 막을 투과성이게 하는 것을 통한 파괴; 또는 세포막 내의 소형 분자에 결합하는 것이 포함되는 다양한 수단을 통해 막 또는 벽이 파괴될 수 있다.

본 발명의 세포 벽-파괴 항진균 NRP에는 에키노칸딘(echinocandin)이 포함되고, 이는 다양하게 배열된 지질 측쇄에 연결된 고리형 헥사펩티드 코어(core)로 구성된 반합성 친양쪽성 리포펩티드이다. 에키노칸딘은 세포의 삼투 통합성을 유지시키고 세포 분열 및 성장에서 수반되는 아스코마이세트(ascomycete) 세포벽의 주요 다당류 성분인 1,3-β-글루칸의 합성을 억제한다. 에키노칸딘에는 카스포펀긴(caspofungin), 미카펀긴(micafungin) 및 아니둘라펀긴(anidulafungin)이 포함된다.

본 발명의 세포 막-파괴 항진균 NRP에도 바실루스 종, 파에니바실루스 종 및 스트렙토마이세스 종이 포함되는 다양한 박테리아로부터 수득가능한 친양쪽성 고리형 펩티드와 같은 리포펩티드가 포함된다. 본원에서 사용되는 경우에, "리포펩티드"라는 용어는 친양쪽성 고리형 펩티드를 지칭한다.

일부 실시양태에서, 펜기신-유형 화합물, 이투린-유형 화합물, 서팩틴-유형 화합물 및 푸자리시딘과 같이, 이러한 친양쪽성 고리형 펩티드는 β-아미노 또는 β-히드록시 지방산에 연결된 6개 내지 10개의 α-아미노산으로 구성된다. 이투린-유형 화합물은 7개의 아미노산으로 구성되고, β-아미노 지방산에 연결된다. 지방산 사슬의 길이는 C14 내지 C17로 다양할 수 있다. 서브틸리스 및 아밀로리퀘파시엔스가 포함되는 다양한 바실루스 종으로부터 이러한 화합물이 수득가능하다. 문헌 [Ongena, M., et al., "Bacillus Lipopeptides: Versatile Weapons for Plant Disease Biocontrol", Trends in Microbiology, 16(3):115-125, (2007)]에 이투린 및 이의 변이체가 기술되어 있다. 본 발명의 이투린-유형 화합물에는 하기 화합물 중 하나 이상이 포함된다: 바실로마이신 D, 바실로마이신 F, 바실로마이신 L, 바실로마이신 LC (바실로펩틴으로 또한 공지됨), 마이코서브틸린, 이투린 A, 이투린 A_L 및 이투린 C (마지막 3개의 화합물은 본원에서 총괄적으로 이투린으로 지칭됨).

펜기신-유형 화합물은 길이가 C14 내지 C18로 다양한 사슬이 있는 β-히드록시 지방산에 연결된 10개의 아미노산으로 구성된다. 서브틸리스, 아밀로리퀘파시엔스, 세레우스 및 투린기엔시스가 포함되는 다양한 바실루스 종 및 스트렙토마이세스 종으로부터 이러한 화합물이 수득가능하다. 문헌 [Ongena, 상기 문헌]에 펜기신-유형 화합물이 기술되어 있다. 본원에 기술된 조성물에 적절한 펜기신-유형 화합물에는 펜기신 A, 펜기신 B, 플리파스타틴 A, 플리파스타틴 B, 문헌 [Kimura, et al., "SNA 60-367 - New Peptide Enzyme Inhibitors against Aromatase", Journal of Antibiotics, 50(6): 529-531, (1997)]에 기술된 스트렙토마이세스 종으로부터의 플리파스타틴, 및 아그라스타틴 (미국 특허 번호 6,291,426에 기술된 바와 같음)이 포함된다 (마지막 4개의 목록은 본원에서 총괄적으로 플리파스타틴으로 지칭됨).

서팩틴-유형 화합물은 길이가 C13 내지 C16으로 다양한 사슬이 있는 β-히드록시 지방산에 연결된 7개의 아미노산으로 구성된다. 이러한 화합물은 서브틸리스, 아밀로리퀘파시엔스, 코아굴란스, 푸밀루스 및 리케니포르미스가 포함되는 다양한 바실루스 종으로부터 수득가능하다. 문헌 [Ongena, 상기 문헌]에 서팩틴 패밀리의 화합물이 기술되어 있다. 본 발명의 서팩틴-유형 화합물에는 하기 화합물 중 하나 이상이 포함된다: 에스페린, 리케나이신, 푸밀라시딘 및 서팩틴.

푸자리시딘은 15-구아니디노-3-히드록시펜타데칸산에 연결된 6개의 아미노산으로 구성된다. 푸자리시딘은 폴리믹사(polymyxa)가 포함되는 파에니바실루스 종으로부터 수득가능하다. 문헌 [Choi, S-K, et al., "Identification and Functional Analysis of the Fusaricidin Biosynthetic Gene of Paenibacillus polymyxa E681", Biochemical 및 Biophysical Research Communications, 365:89-95, (2008)]에 푸자리시딘 패밀리의 화합물이 기술되어 있다. 본 발명의 푸자리시딘에는 하기 화합물 중 하나 이상이 포함된다: 푸자리시딘 A-D 및 푸자리시딘 LI-F03, LI-F04, LI-F05, LI-F06, LI-F07 및 LI-F08.

특정 박테리아가 하나 이상의 리포펩티드를 생산하고, 다양한 리포펩티드의 조합물이 상승작용적 살진균 활성이 있는 것으로 공지되어 있다. 한 실시양태에서, 조성물의 리포펩티드 성분은 하기 리포펩티드 부류 중 적어도 2종으로부터의 리포펩티드의 조합물을 함유한다: 서팩틴-유형 화합물, 이투린-유형 화합물, 및 펜기신-유형 화합물. 또 다른 실시양태에서, 조합물은 하기 화합물 중 둘 이상을 함유한다: 이투린 A, 플리파스타틴 A 및 B, 펜기신 A 및 B 및 서팩틴. 또 다른 실시양태에서, 조성물은 하기 화합물 중 하나 이상을 함유한다: 이투린 A, 플리파스타틴 A 및 B, 펜기신 A 및 B, 서팩틴 및 아그라스타틴.

본 발명의 리포펩티드는 하나 이상의 박테리아, 예컨대 상기 기술된 것들에 의해 생산되거나, 또는 화학적으로 합성된다. "발효 브로스"라는 용어는, 본원에서 사용되는 경우에, 미생물 발효 이후에 생성된 발효 배지를 지칭하고, 미생물 및 이의 성분 부분, 미사용 원료 기질, 및 발효 동안 미생물이 생산한 대사산물을 특히 포함한다. "발효 고체"라는 용어는, 본원에서 사용되는 경우에, 농축 및/또는 건조된 발효 브로스를 지칭한다. "발효 생성물"이라는 용어는, 본원에서 사용되는 경우에, 발효 브로스 및/또는 발효 고체를 지칭한다. "리포펩티드"라는 용어는, 본원에서 사용되는 경우에, 화학적으로 합성되었든지 또는 생물학적으로 생산되었든지, 발효 생성물의 일부인 리포펩티드 및 적어도 어느 정도 정제된 리포펩티드를 지칭한다.

박테리아를 배양하는 방법은 당업계에 주지되어 있다. 통상적인 대규모 미생물 배양 공정에는 액침 발효, 고체 상태 발효, 또는 액체 표면 배양이 포함된다. 바실루스의 경우에, 발효가 끝나갈 때, 영양소가 고갈됨에 따라, 세포가 성장기에서 포자형성기로의 전이를 시작하여, 최종 발효 생성물은 주로 포자, 대사산물, 및 잔류 발효 배지이다. 포자형성은 다수의 바실루스의 천연 생활사의 일부이고, 일반적으로 영양소 제한에 반응하여 세포가 이를 개시한다. 본 발명을 위해, 높은 수준의 리포펩티드를 수득하도록, 그리고 포자형성을 촉진하도록 발효가 구상된다.

발효로부터 생성된 배양 배지 (즉, 발효 브로스) 내의 박테리아 세포, 포자 및 대사산물을 직접적으로 사용할 수 있거나, 또는 통상적인 공업 방법, 예컨대 원심분리, 접선 유동 여과, 심층 여과 및 증발에 의해 (발효 고체가 제조되도록) 농축시킬 수 있다. 일부 실시양태에서, 예를 들어, 투석여과 공정을 통해, 농축된 발효 고체를 세정하여 잔류 발효 브로스 및 대사산물을 제거한다.

발효 브로스 또는 발효 고체를 담체를 첨가하면서 또는 그렇지 않으면서 통상적인 건조 공정 또는 방법, 예컨대 분무 건조, 동결 건조, 트레이 건조, 유동층 건조, 드럼 건조, 또는 증발을 사용하여 건조시킬 수 있다. 예컨대 제분 또는 과립화에 의해, 생성된 건조 발효 고체를 추가로 가공하여 특정 입자 크기 또는 물리적 형태를 달성할 수 있다. 원하는 사용 방법에 적합하게, 하기에 기술된 담체를 건조 후에 첨가할 수도 있다.

박테리아에 의해 생산된 리포펩티드를 박테리아 세포로부터 분리할 수 있거나 또는 다른 박테리아 성분들로부터, 일부 실시양태에서는 서로로부터 추가로 정제할 수 있다. "무세포 제제"라는 용어는 당업자에게 주지된 수단을 통해 세포가 제거되었거나 실질적으로 제거된 발효 브로스를 지칭한다. 무세포 제제를 생성시키는 일부 방법이 하기에서 기술된다. 당업계에 공지된 임의의 수단, 예컨대 발효 브로스의 추출, 원심분리 및/또는 여과에 의해 발효 브로스의 무세포 제제를 수득할 수 있다. 당업자는 세포를 제거하는데 사용된 기술 (예를 들어, 원심분리 속도)에 따라, 소위 무세포 제제가 세포가 없지 않을 수 있고, 그보다는 대부분 무세포이거나 또는 실질적으로 무세포이라는 것을 이해할 것이다. 생성된 무세포 제제는 이의 특정 용도를 돕는 성분과 함께 건조 및/또는 제형될 수 있다. 발효 브로스에 대해 상기 기술된 농축 방법 및 건조 기술이 무세포 제제에 또한 적용가능하다.

일부 실시양태에서, 발효 브로스의 원심분리에 의해 무세포 제제를 제조한 후, 리포펩티드가 800 달톤 내지 1600 달톤임에 따라, 약 2000 달톤 미만, 약 1500 달톤 미만, 약 1000 달톤 미만 등의 분자량과 같은 분자량 차단값을 기초로 대사산물을 여러 분획으로 분류하는 LH-20, G10, 및 G15 및 G25가 포함되는 세파덱스(Sephadex) 수지와 같은 크기 배제 여과에 의해 대사산물을 정제할 수 있다.

"조 추출물"이라는 용어는, 본원에서 사용되는 경우에, 발효 브로스의 유기 추출물, 예컨대 에틸 아세테이트 추출물을 지칭하고, 이때 추출물은 리포펩티드에 대해 강화된다. 박테리아 배양물로부터 리포펩티드의 조 추출물을 수득하는 한 방법이 실시예 1에서 기술된다.

"반정제"라는 용어는, 본원에서 사용되는 경우에, 약 50％ 내지 약 90％ 순수한, 발효 브로스로부터 단리된 리포펩티드를 지칭한다. "정제"라는 용어는, 본원에서 사용되는 경우에, 약 91％ 내지 약 100％ 순수한, 발효 브로스로부터 단리된 리포펩티드를 지칭한다. 본 발명의 리포펩티드는 정제 또는 반정제될 수 있다.

한 실시양태에서, 바실루스 서브틸리스 QST713으로부터 본 발명의 리포펩티드가 수득되거나, 또는 바실루스 서브틸리스 QST713의 발효 생성물이 조성물의 리포펩티드-함유 성분으로서 사용된다. 바실루스 서브틸리스 QST713, 이의 돌연변이체, 이의 상청액, 및 이의 리포펩티드 대사산물, 및 식물 병원체 및 곤충을 방제하기 위한 이의 사용 방법이 미국 특허 번호 6,060,051; 6,103,228; 6,291,426; 6,417,163 및 6,638,910에 충분히 기술되어 있다. 이러한 특허들에서, 이러한 균주는 AQ713로 지칭된다. 바실루스 서브틸리스 QST713은 특허 절차 상 미생물 기탁의 국제적 승인에 관한 부다페스트 조약의 규정 하에 1997년 5월 7일에 NRRL에 등록 번호 B21661 하에 기탁되었다. QST713에 대한 본 명세서에서의 임의의 언급은 바실루스 서브틸리스 QST713을 지칭한다. 본 발명에 또한 적절할 바실루스 서브틸리스 QST713의 특정 변이체 (예를 들어, 등록 번호 NRRL B-50421 및 NRRL B-50455 하에 기탁된 바실루스 서브틸리스 AQ30002 및 AQ30004)가 미국 특허 출원 번호 13/330,576에 기술되어 있다.

다른 실시양태에서, 리포펩티드를 생산할 수 있는 다른 바실루스 균주가 본 발명을 위한 리포펩티드 공급원으로서 사용된다. 상기 기술된 바와 같이, 발효 브로스 또는 발효 브로스로부터의 추출물이 본 발명의 상승작용적 살진균 조합물의 리포펩티드-함유 성분으로서 사용될 수 있다. QST713의 발효 브로스로부터 리포펩티드를 수득하는 방법이 실시예에서 기술된다. 일반적으로 바실루스 박테리아의 발효 브로스로부터 리포펩티드를 수득하고, 발효 브로스를 리포펩티드의 존재에 대해 분석하는 것이 당업자에게 주지되어 있어서, 당업자는 본 발명에 적절한 다른 박테리아 균주를 쉽게 확인할 수 있다. 다양한 리포펩티드를 생산하는 바실루스 균주가 상기에서 언급된 옹기나(Ongena)의 리뷰 논문 (문헌 [Trends in Microbiology (2007) Vol. 16, No. 3])에 기술되어 있다. 무수한 기타 논문에 리포펩티드-생산 바실루스 균주, 및 이같은 균주의 발효 브로스로부터 리포펩티드를 추출하는 방법이 기술되어 있다: 예를 들어, 문헌 [Alvarez, F., et al. "The plant-associated Bacillus amyloliquefaciens strains MEP₂18 및 ARP₂3 capable of producing the cyclic lipopeptides iturin or surfactin and fengycin are effective in biocontrol of sclerotinia stem rot disease", Journal of Applied Microbiology (2011) 112: 159-174]; [Ongena, M. et al., "Involvement of fengycin-type lipopeptides in the multifaceted biocontrol potential of Bacillus subtilis", Applied Microbiology Biotechnology (2005) 69: 29-38]; [Wang, Y., et al., "Separation and extraction of antimicrobial lipopeptides produced by Bacillus amyloliquefaciens ES-2 with macroporous resin", Eur. Food Res. Technol. (2010) 231: 189-196] 참조.

본 발명의 조성물은 담체를 포함할 수 있고, 이는 회수, 효능, 또는 물리적 성질을 개선하고/하거나 포장 및 투여를 돕기 위해 리포펩티드-함유 발효 생성물, 리포펩티드의 무세포 제제 또는 리포펩티드의 정제, 반정제 또는 조 추출물을 포함하는 조성물에 첨가된 불활성 제형 성분이다. 이같은 담체들은 개별적으로 또는 조합되어 첨가될 수 있다.

본 발명의 조성물은 작물 및 수확-후 열매, 채소 및 식물의 보호가 포함되는 다양한 목적을 위해; 화장품, 가공 식품, 동물 먹이 또는 목재용 방부제로서; 그리고, 제약 및 수의학 용도를 위해 사용될 수 있다. 특정 용도에 따라, 조성물은 이의 적용 또는 투여를 돕는 적합한 담체와 함께 제형될 것이다. 일부 실시양태에서, 담체는 케이크(cake) 방지제, 항산화제, 벌크화제, 및/또는 보호제이다. 유용한 담체의 예로는 다당류 (전분, 말토덱스트린, 메틸셀룰로스, 단백질, 예컨대 유장 단백질, 펩티드, 검(gum)), 당 (락토스, 트레할로스, 수크로스), 지질 (레시틴, 식물성 오일, 미네랄 오일), 염 (염화나트륨, 탄산칼슘, 시트르산나트륨), 실리케이트 (점토, 무수 실리카, 훈증/침전 실리카, 실리케이트 염), 왁스, 오일, 알콜 및 계면활성제가 포함된다.

적절한 동물 먹이 첨가제용 담체가 매년 발행되는 문헌 [American Feed Control Officials, Inc.'s Official Publication]에 기재되어 있다. 예를 들어, 문헌 [Official Publication of American Feed Control Officials, Sharon Krebs, editor, 2006 edition, ISBN 1-878341-18-9] 참조.

제약 또는 수의학 용도용으로 사용되는 조성물은 투여 방식을 기초로 변하는 제약상 허용되는 담체와 조합된다.

본 발명의 조성물은 처리를 필요로 하는 장소(locus)에 병원체를 방제하는데 효과적인 양으로 적용될 수 있다. "방제"라는 용어는, 본원에서 사용되는 경우에, 병원체를 사멸시키거나 이의 성장을 억제하는 것을 의미한다. 한 실시양태에서, 병원체는 진균이다. 또 다른 실시양태에서, 병원체는 난균이다.

한 실시양태에서, 폴리엔 살진균제 및 리포펩티드-함유 성분 (예를 들어, 정제 또는 반정제 리포펩티드, 조 추출물, 발효 생성물, 또는 화학적으로 합성되거나 유도체화된 생성물)은 1:1 비 (w/w)로 적용된다. 또 다른 실시양태에서, 폴리엔 살진균제 대 리포펩티드-함유 성분 비는 약 2:1, 약 3:1, 약 4:1, 약 5:1, 약 10:1, 약 15:1, 약 20:1, 또는 약 50:1이다. 또 다른 실시양태에서, 폴리엔 살진균제 대 리포펩티드-함유 성분 비는 약 1:2, 약 1:3, 약 1:4, 약 1:5, 약 1:10, 약 1:15, 약 1:20, 또는 약 1:50이다.

특정 실시양태에서, 폴리엔 살진균제 및 하나 이상의 리포펩티드가 포함되는 리포펩티드-함유 성분은 조성물에서 다양한 중량 대 중량 (w/w) 비로 제공될 수 있다. 한 실시양태에서, 폴리엔 살진균제 및 리포펩티드-함유 성분의 중량 대 중량 비는 약 500:1 내지 약 1:500이다. 또 다른 실시양태에서, 폴리엔 살진균제 및 리포펩티드-함유 성분의 중량 대 중량 비는 약 100:1 내지 약 1:100이다. 또 다른 실시양태에서, 폴리엔 살진균제 및 리포펩티드-함유 성분의 중량 대 중량 비는 약 10:1 내지 약 1:10이다. 또 다른 실시양태에서, 폴리엔 살진균제 및 리포펩티드-함유 성분의 중량 대 중량 비는 약 5:1 내지 약 1:5이다. 또 다른 실시양태에서, 폴리엔 살진균제 및 리포펩티드-함유 성분의 중량 대 중량 비는 약 2:1 내지 약 1:2이다. 또 다른 실시양태에서, 폴리엔 살진균제 및 리포펩티드-함유 성분의 중량 대 중량 비는 약 1:1이다.

한 실시양태에서, 조성물은 식물 또는 식용 재배 버섯에 적용된다. 식물 용도에서, 조성물은 식물의 뿌리, 잎 또는 열매가 포함되는 식물의 임의의 부분에, 또는 식물 주변의 토양이 포함되는 식물 주변 영역에 적용될 수 있다. 버섯 용도에서, 조성물은 버섯에 또는 버섯 균사에 또는 버섯 퇴비에 적용될 수 있다. 식재 전에, 식재 시에 및/또는 식재 후에 적용될 수 있다. 예시적인 표적 병원체는 푸사리움 종, 보트리티스 종, 베르티실리움 종, 리족토니아 종, 트리코더마 종 (녹색 곰팡이), 피티움종 및 피토프토라(Phytophthora) 종이다. 본 발명의 조성물에 대한 적용률을 결정하는 것은 당업자에게 주지되어 있다. 본 발명의 조성물은 일반적으로 0.005 g/ℓ 내지 100 g/ℓ의 각각의 폴리엔 살진균제 및 비-리보솜 단백질(들), 예컨대 리포펩티드를 구성할 것이다. 상승작용적 조성물이 식물, 식물 일부분 또는 식물 주변 영역, 또는 식용 재배 버섯, 버섯 균사 또는 버섯 퇴비에 적용되는 한 실시양태에서, 폴리엔 살진균제 성분은 나타마이신 또는 이의 유도체이다.

또 다른 실시양태에서, 이러한 장소는 수확-후 식품 및 수확-후 비-식용 식물 물질, 예컨대 생물연료용 공급 재료이다. 수확-후 식품은, 본원에서 사용되는 경우에, 산지로부터 수확한 후이지만 포장하기 전인 열매, 채소, 알곡, 지방 종자, 및 임의의 기타 식용 식물 및 견과를 지칭한다. 예시적인 수확-후 병원체에는 보트리티스 시네레아(Botrytis cinerea) (회색 곰팡이), 병원체성 콜레토트리쿰 종, 예컨대 콜레토트리쿰 아쿠타툼(Colletotrichum acutatum), 콜레토트리쿰 코코데스(Colletotrichum coccodes), 콜레토트리쿰 무사(Colletotrichum musa), 및 콜레토트리쿰 캅시시(Colletotrichum capsici), 에르위니아 카로토보라 아종 카로토보라(Erwinia carotovora subsp. carotovora), 게오트리쿰 칸디둠, 게오트리쿰 시트리-오란티이 (시큼 썩음병(sour rot)), 헬민토스포리움 솔라니(Helminthosporium solani) (감자의 은무늬병), 모닐리니아 프룩티콜라(Monilinia fructicola) (갈색 썩음병), 디기타툼(digitatum) (감귤류의 녹색 곰팡이) 및 엑스판숨(expansum) (이과 열매의 푸른 곰팡이)이 포함되는 페니실리움 종, 리조푸스(Rhizopus) 종 (리조푸스 썩음병 또는 리크(leak)), 아스페르길루스 니게르 (흑색 곰팡이), 티엘라비옵시스 바시콜라(Thielaviopsis basicola) (당근의 검은 뿌리 썩음병), 열매의 털곰팡이 썩음병 (예를 들어, 배의 무코르 피리포르미스(Mucor piriformis)), 및 알테르나리아(Alternaria) 썩음병 (당근, 브로콜리, 감자, 고추, 사과, 키위, 배, 모과 및 토마토를 주로 감염시킴)이 포함되지만, 이에 한정되지는 않는다. 수확-후 식품 및 수확-후 비식용 식물 물질에 대한 본 발명의 조성물의 적용률을 결정하는 것은 당업자에게 주지되어 있다. 조성물이 수확-후 식품 및 수확-후 비식용 식물 물질, 예컨대 생물연료용 공급재료에 적용되는 한 실시양태에서, 폴리엔 살진균제 성분은 나타마이신 또는 이의 유도체이다.

또 다른 실시양태에서, 이러한 장소는 식품 또는 먹이이다. 식품이라는 용어는, 본원에서 사용되는 경우에, 가공 식품, 예컨대 유제품, 빵, 토르티야, 조제 육류, 및 제과 제품; 반가공 또는 최소 가공 식품, 예컨대 육류 및 절단 과일 및 채소; 및 포장 식품, 예컨대 포장 양상추, 시금치 및 기타 채소를 포함한다. 먹이라는 용어는 가공된 동물 사료 및 목초를 포함한다. 이같은 용도에서, 표적 병원체는 손상-유도 및 진균독소(mycotoxin)-생산 병원체이다. 예시적인 병원체는 아스페르길루스 종, 페니실리움 종 및 푸사리움 종이다. 본 발명의 조성물의 적용률을 결정하는 것은 당업자에게 주지되어 있다. 문헌 [Davidson, P. Michael, et al., eds., Antimicrobials in Food, 3^rd ed. CRC Press 2005, Ch. 8, pp. 275-289]이 포함되는 다수의 참고문헌에 용량 수준 및 권장 적용 방법이 상세하게 기술되어 있다. 본 발명의 상승작용적 조성물이 식품 또는 먹이에 적용되는 한 실시양태에서, 폴리엔 살진균제 성분은 나타마이신 또는 이의 유도체이다.

또 다른 실시양태에서, 이러한 장소는 인간 또는 동물이다. 인간 및 수의학 용도에서, 칸디다 알비칸스(Candida albicans) 및/또는 푸사리움 종을 방제하기 위해 조성물이 피부 및 점막에 국소적으로 적용된다. 한 실시양태에서, 조성물은 질 감염, 특히 칸디다 알비칸스에 의해 야기되는 것을 예방 또는 치료하는데 사용되지만, 씨. 글라브라타(C. glabrata), 씨. 파랍실로시스(C. parapsilosis), 씨. 귈리에르몬디이(C. guilliermondii), 및 씨. 트로피칼리스(C. tropicalis)에 의해 야기되는 것에도 사용된다. 상승작용적 조성물이 칸디다를 치료하는데 적용되는 한 실시양태에서, 폴리엔 살진균제 성분은 니스타틴이다. 인간에서, 본 발명의 조성물은 신체의 각질 구조 (피부, 손톱 및 모발)에 국소화된 다양한 질환 징후를 담당하는, 트리코피톤(Trichophyton), 에피더모피톤(Epidermophyton) 및 마이크로스포룸(Microsporum)과 같은 피부사상균(dermatophytes)을 방제하기 위해 손톱, 두피 및 피부에 또한 적용될 수 있다. 인간에서, 조성물은 약용 사탕(lozenge)으로서, 구강 칸디다증을 치료하기 위해, 또는 경구적으로 장 칸디다증을 치료 또는 예방하기 위해 투여될 수 있다. 본 발명의 조성물은 아스페르길루스 및 푸사리움 각막 감염을 치료하는데 또한 사용될 수 있다. 조성물이 각막 감염을 치료하는데 사용되는 한 실시양태에서, 조성물의 폴리엔 살진균제 성분은 나타마이신 또는 이의 유도체이다. 본 발명의 조성물에 대한 적합한 투여율을 결정하는 것은 충분히 당업자의 지식 내에 속할 것이다.

일부 실시양태에서, 조성물을 적용 또는 투여하기 전에 처리를 필요로 하는 장소가 확인된다.

한 실시양태에서, 조성물이 하나 이상의 제약상 허용되는 담체를 포함할 수 있다. 제약상 허용되는 담체는 다양한 투여 형태에 대한 이의 적절성에 따라 변할 수 있다. 한 실시양태에서, 조성물은 국소 조성물로서 하나 이상의 제약상 허용되는 담체를 포함할 수 있다. 국소 조성물은 크림, 겔, 오일, 스프레이, 분말, 페이스트, 클레이, 또는 조성물을 피부 또는 대상체 (인간이든 동물이든)에게 투여하기 위해 당업계에 공지되어 있는 임의의 기타 형태, 방식 또는 방법의 형태일 수 있다. 국소 조성물 내에 함유된 허용되는 담체는 제형의 유형에 따라 변할 수 있다. 예를 들어, 연고, 페이스트, 크림 또는 겔 제형은 동물성 및 식물성 지방, 왁스, 파라핀, 전분, 트래거캔스, 셀룰로스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화아연, 또는 이러한 물질들의 혼합물을 포함할 수 있다.

한 실시양태에서, 조성물은 경구 조성물로서 하나 이상의 제약상 허용되는 담체를 포함할 수 있다. 경구 투여 형태는 고체 분말, 캐플릿(caplet), 정제, 약용 사탕, 알약, 캡슐, 연질 겔 또는 액체의 형태일 수 있고, 이는 단독으로 또는 다른 성분과 적절하게 조합되어 투여될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 조성물은 투여를 용이하게 하기 위해 실용적으로 하나 이상의 캐플릿 또는 약용 사탕으로 투여될 수 있다. 경구 투여 형태의 조성물을 제조하는 것에서, 일반적인 매질 중 임의의 것을 이용할 수 있다. 액체 제제 (예를 들어, 현탁액, 엘릭서(elixir) 및 용액)의 경우, 물, 오일, 알콜, 풍미제, 방부제, 착색제 등을 예를 들어 함유하는 매질을 사용할 수 있다. 전분, 당, 희석제, 과립화제, 윤활제, 결합제, 붕해제 등과 같은 제약상 허용되는 담체가 경구 고체 (예를 들어, 분말, 캐플릿, 알약, 정제, 캡슐 및 약용 사탕)를 제조하는데 사용될 수 있다. 제어 방출 형태를 또한 사용할 수 있다. 투여가 용이하기 때문에, 캐플릿, 정제, 알약 및 캡슐이 가장 유리한 경구 투여 단위 형태를 나타내고, 이러한 경우 고체 담체가 사용된다. 원한다면, 정제를 표준 기술에 의해 당의 코팅 또는 장용 코팅할 수 있다. 모든 이러한 제약 담체 및 제형은 당업자에게 주지되어 있다. 예를 들어, 문헌 [WADE & WALLER, HANDBOOK OF PHARMACEUTICAL EXCIPIENTS (2nd ed. 1994)] 참조.

특정 실시양태에서, 본 발명은 연질 겔 투여 형태의 조성물을 포함할 수 있다. 연질 겔은 용액, 현탁액 또는 반고체 페이스트를 함유하는 단일 조각의 밀봉된 연질 젤라틴 껍질이다. 주로 연질 겔은 활성 성분이 용해 또는 현탁 상태로 존재하는 액체를 함유하도록 사용된다. 연질 겔은 광범위하게 공지되어 있고, 수년 동안 다양한 목적으로 사용되었다. 연질 겔은 성질이 2조각의 경질 껍질 캡슐과 상당히 상이하기 때문에, 연질 겔은 액체 충전 물질을 유지할 수 있다. 연질 겔은 액체 비히클 또는 담체 내의 비타민, 식이 보충물, 제약 등이 포함되는 소비성 물질을 캡슐화하는데 종종 사용된다. 연질 겔은 정제, 경질-껍질 캡슐, 및 액체와 같은 더욱 전통적인 투여 형태에 비해 뚜렷한 장점을 제공할 수 있는 독특한 투여 형태이다. 이러한 장점에는 환자 순응 및 소비자 선호, 개선된 생체이용률, 다수의 경우에서의 제품 개발 속도, 제작 시간 단축, 활성 성분이 산소에 덜 노출되는 것으로 인한 약물 안정성 강화, 우수한 용량 균일성, 및 제품 차별화가 포함된다.

한 실시양태에서, 본 발명의 조성물 및 방법은 기분 좋은 또는 맛있는 풍미를 지닌다. 맛있는 풍미는 감미제 및/또는 풍미제를 포함하는 것에 의해 달성될 수 있다. 본 발명의 조성물에 포함될 수 있는 감미제에는, 예를 들어 비제한적으로, 수크로스, 프룩토스, 고-프룩토스 옥수수 시럽, 덱스트로스, 사카린 나트륨, 말토덱스트린, 아스파탐, 포타슘 아세술팜, 네오헤스페리딘 디히드로칼콘, 수크랄로스, 모노암모늄 글리시리지네이트, 및 당업자에게 공지된 기타 물질이 포함된다.

용해를 촉진하기 위해 붕해제가 본 발명의 조성물 내에 또한 포함될 수 있다. 투과성이게 만드는 작용제 및 위킹제(wicking agent)가 포함되는 붕해제는 물 또는 타액을 조성물 내로 끌어당길 수 있고, 이는 조성물의 내부, 뿐만 아니라 외부로부터의 용해를 촉진한다. 본 발명에서 사용될 수 있는 이같은 붕해제, 투과성이게 만드는 작용제 및/또는 위킹제에는, 예를 들어 비제한적으로, 전분, 예컨대 옥수수 전분, 감자 전분, 이의 예비-젤라틴화 및 변형 전분, 셀룰로스성 작용제, 예컨대 Ac-di-sol, 몬트모릴로나이트 점토, 가교 PVP, 감미제, 벤토나이트, 미세결정질 셀룰로스, 크로스카르멜로스 나트륨, 알기네이트, 나트륨 스타치 글리콜레이트, 검, 예컨대 한천, 구아(guar), 로커스트 빈(locust bean), 카라야(karaya), 펙틴, 아라빅(Arabic), 잔탄 및 트래거캔스, 수성 용매에 대한 친화력이 높은 실리카, 예컨대 콜로이드성 실리카, 침전 실리카, 말토덱스트린, 베타-시클로덱스트린, 중합체, 예컨대 카르보폴, 및 셀룰로스성 작용제, 예컨대 히드록시메틸셀룰로스, 히드록시프로필셀룰로스 및 히드록시프로필메틸셀룰로스가 포함된다.

상기 기술된 것들에 더하여, 본원에 기술된 목표들과 모순되지 않는 한 임의의 적합한 충전제 및 부형제가 본 발명의 조성물을 제조하는 것에서 이용될 수 있다. 예를 들어, 결합제는 과립화에서 분말 입자들의 부착을 야기하는데 사용되는 물질이다. 본 발명에서 사용하기에 적합한 이같은 화합물에는, 예를 들어 비제한적으로, 아카시아, 압축성 당, 젤라틴, 수크로스 및 이의 유도체, 말토덱스트린, 셀루로스성 중합체, 예컨대 에틸셀룰로스, 히드록시프로필셀룰로스, 히드록시프로필메틸 셀룰로스, 카르복시메틸셀룰로스 나트륨 및 메틸셀룰로스, 아크릴계 중합체, 예컨대 불용성 아크릴레이트 암모니오메타크릴레이트 공중합체, 폴리아크릴레이트 또는 폴리메타크릴계 공중합체, 포비돈, 코포비돈, 폴리비닐알콜, 알긴산, 알긴산나트륨, 전분, 예비-젤라틴화 전분, 구아 검, 폴리에틸렌 글리콜, 및 당업자에게 공지된 기타 물질이 포함된다.

조성물의 과립화를 강화하기 위해 희석제가 본 발명의 조성물 내에 또한 포함될 수 있다. 희석제에는, 예를 들어 비제한적으로, 미세결정질 셀룰로스, 수크로스, 인산2칼슘, 전분, 락토스 및 탄소수 13 미만의 폴리올, 예컨대 만니톨, 자일리톨, 소르비톨, 말티톨, 및 제약상 허용되는 아미노산, 예컨대 글리신, 및 이들의 혼합물이 포함된다.

윤활제는 조성물 제형에서 사용된, 조성물 압축 동안 마찰을 감소시키는 물질이다. 본 발명에서 사용될 수 있는 윤활제에는, 예를 들어 비제한적으로, 스테아르산, 스테아르산칼슘, 스테아르산마그네슘, 스테아르산아연, 탈크, 미네랄 및 식물성 오일, 벤조산, 폴리(에틸렌 글리콜), 글리세릴 베헤네이트, 스테아릴 푸마레이트, 및 당업자에게 공지된 기타 물질이 포함된다.

활택제(glidant)는 제작 동안 분말 블렌드의 유동을 개선시키고, 조성물 중량 변동을 최소화한다. 본 발명에서 사용될 수 있는 활택제에는, 예를 들어 비제한적으로, 이산화규소, 콜로이드성 또는 훈증 실리카, 스테아르산마그네슘, 스테아르산칼슘, 스테아르산, 옥수수 전분, 탈크 및 당업자에게 공지된 기타 물질이 포함된다.

착색제가 본 발명의 조성물 내에 또한 포함될 수 있다. 본원에서 사용되는 경우에, "착색제"라는 용어는 제약 제제에 색을 부여하는데 사용되는 화합물을 포함한다. 이같은 화합물에는, 예를 들어 비제한적으로, FD&C 적색 3호, FD&C 적색 20호, FD&C 황색 6호, FD&C 청색 2호, D&C 녹색 5호, FD&C 주황색 5호, D&C 적색 8호, 캐러멜, 및 적색 산화철 및 당업자에게 공지된 기타 물질이 포함된다. 착색제에는 안료, 염료, 틴트(tint), 이산화티탄, 천연 착색제, 예컨대 포도 껍질 추출물, 비트 적색 분말, 베타 카로틴, 아나토(annato), 카르민(carmine), 심황, 파프리카 및 당업자에게 공지된 기타 물질이 또한 포함될 수 있다.

수성 주사 현탁액은 현탁액의 점도를 증가시키는 물질, 예컨대 나트륨 카르복시메틸 셀룰로스, 소르비톨, 또는 덱스트란을 함유할 수 있다. 추가적으로, 활성 화합물의 현탁액이 적합한 유성 주사 현탁액으로서 제조될 수 있다. 적절한 친지성 용매 또는 비히클에는 지방유, 예컨대 참기름, 또는 합성 지방산 에스테르, 예컨대 에틸 올레에이트 또는 트리글리세리드, 또는 리포솜이 포함된다. 비-지질 다가양이온성 아미노 중합체가 또한 전달용으로 사용될 수 있다.

조성물은 살진균제 및/또는 리포펩티드와 같은 활성 성분의 양호한 가용화 및/또는 용해를 확실하게 하도록 가용화제를 또한 포함할 수 있다. 살진균제 및/또는 리포펩티드 및/또는 기타 성분, 예컨대 계면활성제의 용해도를 증가시키기 위해, 또는 조성물을 안정적이거나 균질한 용액 또는 분산액으로서 유지시키기 위해서 가용화제가 또한 첨가될 수 있다.

적절한 가용화제의 예로는 하기의 것들이 포함되지만, 이에 한정되지는 않는다: 알콜 및 폴리올, 예컨대 에탄올, 이소프로판올, 부탄올, 벤질 알콜, 에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 부탄디올 및 이의 이성질체, 글리세롤, 펜타에리트리톨, 소르비톨, 만니톨, 트랜스큐톨, 디메틸 이소소르비드, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜, 폴리비닐알콜, 히드록시프로필 메틸셀룰로스 및 기타 셀룰로스 유도체, 시클로덱스트린 및 시클로덱스트린 유도체; 평균 분자량이 약 200 내지 약 6000인 폴리에틸렌 글리콜의 에테르, 예컨대 테트라히드로푸르푸릴 알콜 PEG 에테르 (글리코푸롤) 또는 메톡시 PEG; 아미드 및 기타 질소-함유 화합물, 예컨대 2-피롤리돈, 2-피페리돈, ε-카프로락탐, N-알킬피롤리돈, N-히드록시알킬피롤리돈, N-알킬피페리돈, N-알킬카프로락탐, 디메틸아세트아미드 및 폴리비닐피롤리돈; 에스테르, 예컨대 에틸 프로피오네이트, 트리부틸시트레이트, 아세틸 트리에틸시트레이트, 아세틸 트리부틸 시트레이트, 트리에틸시트레이트, 에틸 올레에이트, 에틸 카프릴레이트, 에틸 부티레이트, 트리아세틴, 프로필렌 글리콜 모노아세테이트, 프로필렌 글리콜 디아세테이트, 엡실론-카프로락톤 및 이의 이성질체, δ-발레로락톤 및 이의 이성질체, β-부티로락톤 및 이의 이성질체; 및 당업계에 공지된 기타 가용화제, 예컨대 디메틸 아세트아미드, 디메틸 이소소르비드, N-메틸피롤리돈, 모노옥타노인, 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르, 및 물.

가용화제들의 혼합물을 또한 사용할 수 있다. 예로는 트리아세틴, 트리에틸시트레이트, 에틸 올레에이트, 에틸 카프릴레이트, 디메틸아세트아미드, N-메틸피롤리돈, N-히드록시에틸피롤리돈, 폴리비닐피롤리돈, 히드록시프로필 메틸셀룰로스, 히드록시프로필 시클로덱스트린, 에탄올, 폴리에틸렌 글리콜 200-100, 글리코푸롤, 트랜스큐톨, 프로필렌 글리콜, 및 디메틸 이소소르비드가 포함되지만, 이에 한정되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 소르비톨, 글리세롤, 트리아세틴, 에틸 알콜, PEG-400, 글리코퓨롤 및 프로필렌 글리콜이 가용화제에 포함된다.

포함될 수 있는 가용화제의 양은 특별히 한정되지 않는다. 소정의 가용화제의 양은 생체에서 허용가능한 양으로 한정될 수 있고, 이는 당업자에 의해 쉽게 결정될 수 있다. 일부 경우에, 예를 들어, 약물의 농도를 최대화하기 위해, 생체에서 허용가능한 양을 훨씬 초과하는 양의 가용화제를 포함하고, 통상적인 기술, 예컨대 증류 또는 증발을 사용하여 대상체에게 조성물을 제공하기 전에 과량의 가용화제가 제거되는 것이 유리할 수 있다. 따라서, 존재하는 경우에, 가용화제는 약물 및 기타 부형제의 합친 중량을 기초로 약 10 중량％, 25 중량％, 50 중량％, 100 중량％, 또는 약 200 중량％까지의 중량 비로 있을 수 있다. 원한다면, 매우 소량의 가용화제, 예컨대 약 5％, 2％, 1％ 또는 심지어 이보다 낮은 백분율이 또한 사용될 수 있다. 전형적으로, 가용화제는 약 1 중량％ 내지 약 100 중량％, 더욱 전형적으로는 약 5 중량％ 내지 약 25 중량％의 양으로 존재할 수 있다.

하기의 실시예는 단지 설명을 위해서만 제공되고, 본 발명의 목적을 제한하려는 목적이 아니다.

실시예

실시예 1: 사카로마이세스 세레비지아에에 대한 리포펩티드 및 나타마이신의 상승작용적 효과

진균에 대한 활성을 테스트하기 위한 모델 생물로서 일반적으로 인정되고 칸디다에 밀접하게 관련된 사카로마이세스 세레비지아에에 대한 효능에 대해 리포펩티드 및 나타마이신의 조합물을 테스트하였다. 문헌 [Smits, GJ, et al., "Stress Tolerance in Fungi - To Kill a Spoilage Yeast", Current Opin Biotechnol., 16(2): 225-30, (2005)] 및 [Castrillo, JI, et al., "Yeast as a Touchstone in Post-Genomic Research: Strategies for Integrative Analysis in Functional Genomics", J Biochem Mol Biol., 37(1): 93-106, (2004)] 참조.

사용된 리포펩티드는 바실루스 서브틸리스 QST713의 발효 브로스로부터 부분적으로 정제된 이투린-유형 화합물, 플리파스타틴-유형 화합물 및 서팩틴의 복합 혼합물이었다. 루리아 브로스(Luria Broth) (LB)를 함유하는 시드(seed) 플라스크에 QST713 균주를 접종하고, 이러한 플라스크를 30℃에서 철야로 성장시켰다. 다음 날, 시드 플라스크로부터의 분취량을 콩을 기초로 하는 배지 내로 접종하고, 포자형성까지 성장시켰다. 비. 서브틸리스(B. subtilis) QST713 발효 브로스를 pH 2로 산성화시키고, 원심분리하여 고체 물질을 상청액에서 분리시켰다. 리포펩티드가 펠릿에서 농축되었다. 상청액을 따라 내고, 펠릿을 수성 유기 용매 혼합물 (바람직하게는 80/20 아세토니트릴/물)로 추출하였다. 리포펩티드가 수성 유기 분획 내에 농축되었다. 혼합물을 원심분리하고, 상청액을 제거하였다. 세포 펠릿을 수성 유기 용매 혼합물 (바람직하게는 80/20 아세토니트릴/물)로 2회 더 재추출하였다. 각각의 추출로부터의 상청액을 합치고, 용매를 진공에서 제거하였다. 건조된 추출물은 강화된 형태의 비. 서브틸리스 QST713에서 발견되는 3가지 리포펩티드 부류 모두를 함유하였다: 이투린 A2, 이투린 A3, A4, 또는 A5, 이투린 A6, 이투린 A7이 포함되는 이투린-유형 화합물; 플리파스타틴 A1, 플리파스타틴 A2, 플리파스타틴 B1, 플리파스타틴 B2, 아그라스타틴 A, 아그라스타틴 B, 펜기신 A, 펜기신 B가 포함되는 펜기신-유형 화합물; 서팩틴 A1, A2, 또는 A3, 서팩틴 B1 또는 B2 및 서팩틴 C1 또는 C2. 건조된 추출물을 수성 유기 용매 혼합물 (바람직하게는 80/20 아세토니트릴/물)에 재현탁시킬 수 있다.

사카로마이세스 세레비지아에 야생형 균주 BY4742를 (1) 나타마이신 (하오루이 파마-켐 인크(Haorui Pharma-Chem Inc)), (2) 상기에 기술된 리포펩티드 추출물, (3) 나타마이신 + 리포펩티드 추출물, 및 (4) 리포펩티드 또는 나타마이신 없음 (대조군)의 존재 하에 액체 YPD에서 성장시켰다. 액체 배양물에 첨가되기 전의 나타마이신의 초기 농도는 1 ppm이었고, 리포펩티드 추출물의 초기 농도는 15 ppm이었다. 액체 배양물 내의 나타마이신의 최종 농도는 0.08 ppm이었고, 리포펩티드 추출물의 최종 농도는 1.12 ppm이어서, 양쪽 모두를 함유하는 샘플 내의 나타마이신 대 리포펩티드의 중량 대 중량 비가 1:14였다.

30℃에서의 16시간 배양 후에, 나타마이신 및/또는 리포펩티드를 함유하는 액체 배양물의 광학 밀도 (OD)를 대조군의 것과 비교하였다. 비교를 위해, 미처리 대조군 배양물의 OD를 100％로 설정하였고, 처리된 배양물을 이러한 값에 표준화하였다.

하기와 같이, 고윙 방정식(Gowing's Equation)을 적용하여, 리포펩티드와 나타마이신의 상승작용을 결정하였다.

고윙 방정식: E_xp = X + [Y × (100 - X)]/100

E_ob >> E_xp이면, 상승작용이 존재한다.

주: 상기 방정식에서의 E_ob, E_xp, X 및 Y는 성장 억제를 나타낸다. 따라서, X 및 Y는, 하기에 제시된 바와 같이, 처리된 플레이트 상에서의 성장량을 100에서 차감함으로써 계산된다.

X = 100 - 77.89 = 22.11, Y = 100 - 93.87 = 6.13

E_ob = 100 - 8.51 = 91.49

E_xp = 22.11 + [6.13 × (100 - 22.11)]/100 = 26.88

E_ob >> E_xp

결과가 도 1에서 또한 제시된다.

실시예 2: 시판되는 제품으로부터 수득된 리포펩티드를 사용한, 에스 . 세레비지아 에에 대한 나타마이신 및 리포펩티드의 상승작용적 효과

실시예 1에 기술된 것과 유사한 이러한 연구는 (바실루스 서브틸리스 QST713의 제형되지 않은 발효 브로스가 아니라) SERENADE^® MAX 살진균제 또는 SERENADE^® ASO 살진균제로부터 수득된 리포펩티드의 조 추출물을 출발점으로서 사용하여 수행되었다. SERENADE^® 제품은 시판되고, 이들의 활성 성분은 바실루스 서브틸리스 QST713이다. SERENADE^® ASO (또는 SERENADE^® MAX, 물에 용해됨)를 pH 2로 산성화시키고, 원심분리하고, 생성된 펠릿을 유기 용매 혼합물로 추출함으로써 리포펩티드의 조 추출물을 수득하였다. 생성된 리포펩티드를 상기 기술된 바와 같이 나타마이신과 합치고, 이러한 혼합물을 에스. 세레비지아에에 대한 활성에 대해 테스트하였다. 상기에서 수득된 것과 동일한 결과가 예상되었다.

실시예 3: 페니실리움 엑스판숨에 대한 나타마이신 및 리포펩티드의 조 추출물의 상승작용적 효과

페니실리움 엑스판숨에 대한 (i) 나타마이신 (하오루이 파마-켐 인크.), (ii) 바실루스 서브틸리스 QST713로부터의 리포펩티드의 조 추출물 (실시예 1에 기술된 바와 같이 제조됨), 및 (iii) 나타마이신 및 리포펩티드의 조 추출물의 조합물의 효과를 조사하였다. 액체 진균 성장 검정법을 96웰 플레이트에서 수행하여, 리포펩티드 및 나타마이신의 조합물이 진균 성장 억제에서 상승작용적인지 여부를 결정하였다. 모든 절차는 무균 상태로 수행되었다.

각각의 96웰 플레이트에 대해, 3회의 분리된 첨가가 각각의 웰에 이루어졌다. 먼저, 100 ㎕의 감자 덱스트로스 브로스 + 100 ppm 클로람페니콜을 첨가하였다. 그 후, 25 ㎕의 각각의 샘플 (리포펩티드, 나타마이신, 또는 조합물 (희석 플레이트로부터의 것))을 보충하였다. 마지막으로, 50 ㎕의 DI H₂O를 공백 플레이트 (OD 기준용으로 공백으로 남겨지도록 의도되는 플레이트)에 첨가하거나, 또는 50 ㎕의 10⁵개의 진균 접종원을 각각의 플레이트(들) 내의 각각의 웰에 첨가하였다. 따라서, 각각의 웰 내의 리포펩티드의 최종 농도는 1.1 ppm이었고, 각각의 웰 내의 나타마이신의 최종 농도는 1.1 ppm이었다. 그 후, 플레이트에 뚜껑을 덮고, 인큐베이션을 위해 3일 동안 20℃에 놓았다.

플레이트 평가 및 데이터 해석

인큐베이션 기간 후, 각각의 플레이트 내의 각각의 웰의 성장을 퍼킨엘머(PerkinElmer)의 빅터(Victor) 플레이트 판독기를 사용하여 왈락(Wallac)^® 빅터(Victor)^® 소프트웨어에서 확인할 수 있는 "MIC Settings @ 600 (0.1s)" 설정을 사용하여 600 nm에서의 광학 밀도에 의해 평가하였다. 샘플이 활성 면에서 떨어진 경우에 뿌연 웰 (부분적인 성장)이 희석 시리즈에서 나타남에 따라 결과가 또한 대략적으로 가시적으로 평가되었다.

각각의 웰에 대해 OD가 수득된 후, 하기의 계산에 의해 상대 성장을 결정하였다: [(박테리아 존재 하의 처리) - (박테리아 부재 하의 처리) / (박테리아 존재 하의 희석제 대조군) - (박테리아 부재 하의 희석제 대조군)] × 100. 600 nm에서의 OD 판독값의 평균 및 표준 편차가 비-접종 OD 기준 웰의 범위보다 크게 높으면 박테리아 성장에 대한 양성 대조군 웰이 허용가능한 것으로 간주되었다. (양호한 성장이 수득되었음을 확실히 하기 위해, 미접종 희석제 대조군과 접종 희석제 대조군 웰의 판독값 사이에 큰 차이가 있어야 한다).

그 후, 이러한 백분율 성장을 테스트된 희석물에 대한 샘플에 대해 그래프화하였고, 80％ 이상의 성장 억제를 제공한 마지막 희석물을 최소 억제 농도 (MIC)로 취하였다.

그 후, 상기에 기재된 고윙 방정식에 의해 상승작용을 결정하였다.

이러한 예에서, 1.1 ppm 리포펩티드의 성장 백분율은 113％였다. 1.1 ppm 나타마이신의 성장 백분율은 102％였다. 1.1 ppm 리포펩티드 + 1.1 ppm 나타마이신의 성장 백분율은 20.4％였다.

X = 100-102.1

Y = 100-112.9

Exp = -2.1 + (-12.9(102.1))/100

Exp = -15.3

별법적으로, 100을 초과하는 성장 백분율에 대해서는, 100으로 잘라냈다. 본 발명가들의 예에서, 이는 Exp = 0이게 할 것이다.

Eob = 100-20.4

Eob = 79.6

79.6 >> -15.3

Eob >> Exp; 따라서, 도 2에 도해된 바와 같이, 상승작용이 관찰되었다.

실시예 4: 페니실리움 엑스판숨에 대한 반정제 및 정제 플리파스타틴 , 이투린 및 서팩틴, 및 나타나마이신의 상승작용적 효과

페니실리움 엑스판숨을 표적 병원체로서 사용하여, 상기 기술된 것들과 유사한 실험을 하기와 같이 (i) 나타마이신 및 바실루스 서브틸리스 QST713으로부터의 리포펩티드의 조 추출물 (상기 기술된 바와 같이 수득됨) 및 (ii) 나타마이신 및 바실루스 서브틸리스 QST713으로부터 수득된 반정제 및 정제 리포펩티드의 조합물로 수행하였다. 이투린 A가 포함되는 이투린-유형 화합물, 및 플리파스타틴 (A, B 및 아그라스타틴) 및 펜기신이 포함되는 펜기신-유형 화합물을 산성화에 이어지는 유기 용매로의 추출을 사용하여 비. 서브틸리스 QST713 발효 브로스로부터 침전시키고 추출하였다. 이러한 리포펩티드들을 역상 크로마토그래피를 통해 추가로 정제하고 분리하여, 약 83％ 순수한 펜기신-유형 화합물 및 약 88％ 순수한 이투린을 수득하였다. 유기 용매를 사용하여 서팩틴을 추출한 후, 크기 배제 컬럼 크로마토그래피를 사용하여 95％ 순도로 추가로 정제하였다. 고성능 액체 크로마토그래피 트레이스(trace)를 사용하여 각각의 리포펩티드 부류의 순도를 결정하였다.

각각의 테스트 웰 내의 나타마이신의 최종 농도는 2.23 ppm이었다; 각각의 웰 내의 조 리포펩티드 추출물의 최종 농도는 2.23 ppm이었다; 각각의 웰 내의 이투린-유형 화합물, 서팩틴 또는 펜기신-유형 화합물의 반정제 또는 정제 리포펩티드 추출물 각각의 최종 농도는 2.23 ppm이었다. 따라서, 조합물을 함유하는 웰 내의 각각의 성분의 중량 대 중량 비는 1:1이었다.

다양한 조합 간의 상승작용을 나타내는 결과가 도 3 및 표 1에서 기술된다. 표 1은 상기 기술된 바와 같은 고윙 방정식을 사용한 상승작용 계산을 나타낸다.

실시예 5: 게오트리쿰 칸디둠에 대한 반정제 및 정제 이투린 , 펜기신 및 서팩틴 , 및 나타나마이신의 상승작용적 효과

게오트리쿰 칸디둠을 표적 병원체로서 사용하여, 상기 기술된 것들과 유사한 실험을 (i) 나타마이신, (ii) 바실루스 서브틸리스 QST713으로부터의 리포펩티드의 조 추출물 (실시예 1에 기술된 바와 같이 수득됨), (iii) 나타마이신 및 조 추출물의 조합물, 및 (iv) 나타마이신 및 바실루스 서브틸리스 QST713으로부터의 반정제 및 정제 리포펩티드 (즉, 이투린-유형 화합물, 펜기신-유형 화합물, 및 서팩틴-유형 화합물)의 조합물로 수행하였다.

이투린-유형 화합물 및 서팩틴을 상기 설명된 바와 같이 비. 서브틸리스 QST713으로부터 추출 및 정제하였다. 펜기신-유형 화합물을 이투린-유형 화합물에 대한 것과 동일한 방식으로 추출하였지만, 추가로 저압 역상 크로마토그래피로 90％ 이상의 순도로 정제하였다.

다양한 조합 간의 상승작용을 나타내는 결과가 도 4 및 표 2에서 기술된다.

실시예 6: 게오트리쿰 칸디둠에 대한 반정제 및 정제 이투린 , 펜기신 및 서팩틴 , 및 니스타틴의 상승작용적 효과

게오트리쿰 칸디둠을 표적 병원체로서 사용하여, 상기 기술된 것들과 유사한 실험을 (i) 니스타틴 (폴리엔 살진균제의 또 다른 예), (ii) 바실루스 서브틸리스 QST713으로부터의 리포펩티드의 조 추출물 (실시예 1에 기술된 바와 같이 수득됨), (iii) 니스타틴 및 조 추출물의 조합물, 및 (iv) 니스타틴 및 바실루스 서브틸리스 QST713으로부터의 반정제 및 정제 리포펩티드 (즉, 이투린, 펜기신, 및 서팩틴)의 조합물로 수행하였다.

이투린-유형 화합물, 서팩틴-유형 화합물, 및 펜기신-유형 화합물을 상기 설명된 바와 같이 비. 서브틸리스 QST713으로부터 추출 및 정제하였다. 각각의 테스트 웰 내의 니스타틴의 최종 농도는 1.12 ppm이었다; 각각의 웰 내의 조 리포펩티드 추출물의 최종 농도는 1.12 ppm이었다; 각각의 웰 내의 이투린-유형 화합물, 서팩틴 또는 펜기신-유형 화합물의 반정제 또는 정제 리포펩티드 추출물 각각의 최종 농도는 1.12 ppm이었다. 따라서, 조합물을 함유하는 웰 내의 각각의 성분의 중량 대 중량 비는 1:1이었다.

다양한 조합 간의 상승작용을 나타내는 결과가 도 5 및 표 3에서 기술된다. 출원인은 이러한 실험에 사용된 농도에서 서팩틴과 니스타틴 간에 상승작용이 체험되지 않았음을 주지하였다. 최종 농도가 변하면 상승작용이 초래될 것으로 예상되었다. 실시예 9의 끝부분에서의 유사한 상황에 대한 주석을 참조한다.

실시예 7: 게오트리쿰 시트리- 오란티이에 대한 반정제 및 정제 이투린 , 펜기신 및 서팩틴, 및 나타마이신의 상승작용적 효과

게오트리쿰 시트리-오란티이를 표적 병원체로 사용하여, 상기 기술된 것들과 유사한 실험을 (i) 나타마이신, (ii) 바실루스 서브틸리스 QST713으로부터의 리포펩티드의 조 추출물 (실시예 1에 기술된 바와 같이 수득됨), (iii) 나타마이신 및 조 추출물의 조합물, 및 (iv) 나타마이신 및 바실루스 서브틸리스 QST713으로부터의 반정제 및 정제 리포펩티드 (즉, 이투린-유형 화합물, 펜기신-유형 화합물, 및 서팩틴-유형 화합물)의 조합물로 수행하였다.

이투린-유형 화합물, 서팩틴, 및 펜기신-유형 화합물을 상기 설명된 바와 같이 비. 서브틸리스 QST713으로부터 추출 및 정제하였다. 각각의 테스트 웰 내의 나타마이신의 최종 농도는 2.23 ppm이었다; 각각의 웰 내의 조 리포펩티드 추출물의 최종 농도는 2.23 ppm이었다; 각각의 웰 내의 이투린-유형 화합물, 서팩틴 또는 펜기신-유형 화합물의 반정제 또는 정제 리포펩티드 추출물 각각의 최종 농도는 2.23 ppm이었다. 따라서, 조합물을 함유하는 웰 내의 각각의 성분의 중량 대 중량 비는 1:1이었다.

다양한 조합 간의 상승작용을 나타내는 결과가 도 6 및 표 4에서 기술된다.

실시예 8: 게오트리쿰 시트리- 오란티이에 대한 반정제 및 정제 이투린 , 펜기신 및 서팩틴, 및 니스타틴의 상승작용적 효과

게오트리쿰 시트리-오란티이를 표적 병원체로서 사용하여, 상기 기술된 것들과 유사한 실험을 (i) 니스타틴 (폴리엔 살진균제의 또 다른 예), (ii) 바실루스 서브틸리스 QST713으로부터의 리포펩티드의 조 추출물 (실시예 1에 기술된 바와 같이 수득됨), (iii) 니스타틴 및 조 추출물의 조합물, 및 (iv) 니스타틴 및 바실루스 서브틸리스 QST713으로부터의 반정제 및 정제 리포펩티드 (즉, 이투린-유형 화합물, 펜기신-유형 화합물, 및 서팩틴-유형 화합물)의 조합물로 수행하였다.

이투린-유형 화합물, 서팩틴, 및 펜기신-유형 화합물을 상기 설명된 바와 같이 비. 서브틸리스 QST713으로부터 추출 및 정제하였다. 각각의 테스트 웰 내의 니스타틴의 최종 농도는 2.23 ppm이었다; 각각의 웰 내의 조 리포펩티드 추출물의 최종 농도는 2.23 ppm이었다; 각각의 웰 내의 이투린-유형 화합물, 서팩틴 또는 펜기신-유형 화합물의 반정제 또는 정제 리포펩티드 추출물 각각의 최종 농도는 2.23 ppm이었다. 따라서, 조합물을 함유하는 웰 내의 각각의 성분의 중량 대 중량 비는 1:1이었다.

다양한 조합 간의 상승작용을 나타내는 결과가 도 7 및 표 5에서 기술된다.

실시예 9: 사카로마이세스 세레비지아에에 대한 반정제 및 정제 이투린 , 펜기신 및 서팩틴, 및 나타마이신의 상승작용적 효과

사카로마이세스 세레비지아에를 표적 병원체로서 사용하여, 상기 기술된 것들과 유사한 실험을 (i) 나타마이신, (ii) 바실루스 서브틸리스 QST713으로부터의 리포펩티드의 조 추출물 (실시예 1에 기술된 바와 같이 수득됨), (iii) 나타마이신 및 조 추출물의 조합물, 및 (iv) 나타마이신 및 바실루스 서브틸리스 QST713으로부터의 반정제 및 정제 리포펩티드 (즉, 이투린-유형 화합물, 펜기신-유형 화합물, 및 서팩틴-유형 화합물)의 조합물로 수행하였다.

전과 같이, 액체 진균 성장 검정법을 96웰 플레이트에서 수행하여, 리포펩티드 및 나타마이신의 조합물이 진균 성장 억제에서 상승작용적인지 여부를 결정하였다. 플레이트의 각각의 웰에서 3회의 분리된 첨가가 있었다. 먼저, 효모 펩톤 덱스트로스 배지 (YPD)를 사용하였다. 그 후, 25 ㎕의 각각의 샘플 (리포펩티드, 나타마이신, 또는 2가지의 조합물 (희석 플레이트로부터의 것))을 첨가하였다. 마지막으로, 50 ㎕의 효모 접종원 또는 50 ㎕의 DI H₂O를 첨가하였다 (후자 선택권은 공백을 구축할 때 사용된다). 단일 콜로니를 5 ㎖ YPD에 접종함으로써 효모 접종원을 제조하였고, 진탕하면서 30℃에서 철야로 인큐베이션하였다. 아침에, 200 ㎕의 철야 접종원을 5 ㎖ YPD에 하위-배양하고, 30℃에서 진탕하면서 4 내지 5시간 동안 인큐베이션하였다. 이를 0.015의 광학 밀도로 희석하였다. 3회 모두의 첨가 후, 플레이트에 뚜껑을 덮고, 30℃에서 철야로 인큐베이션하여, 다음날 분석하였다.

이투린-유형 화합물, 서팩틴, 및 펜기신-유형 화합물을 상기 설명된 바와 같이 비. 서브틸리스 QST713으로부터 추출 및 정제하였다. 각각의 테스트 웰 내의 나타마이신의 최종 농도는 1.12 ppm이었다; 각각의 웰 내의 조 리포펩티드 추출물의 최종 농도는 1.12 ppm이었다; 각각의 웰 내의 이투린-유형 화합물, 서팩틴 또는 펜기신-유형 화합물의 반정제 또는 정제 리포펩티드 추출물 각각의 최종 농도는 1.12 ppm이었다. 따라서, 조합물을 함유하는 웰 내의 각각의 성분의 중량 대 중량 비는 1:1이었다.

다양한 조합 간의 상승작용을 나타내는 결과가 도 8 및 표 6에서 기술된다. 더 높은 농도에서 상승작용을 확인할 것으로 예상하고, 출원인은 각각 1.12 ppm의 최종 농도에서 에스. 세레비지아에에 대한 나타마이신 및 서팩틴 간의 상승작용의 결여를 조사하기 위해 추가적인 실험을 수행하였다. 서팩틴의 최종 농도를 증가시킨 한편, 나타마이신의 최종 농도는 1.12 ppm에서 유지시켰다. 예상대로, 더 높은 농도, 즉, 17.86 ppm의 서팩틴으로 상승작용이 체험되었다.

실시예 10: 사카로마이세스 세레비지아에에 대한 반정제 및 정제 이투린 , 펜기신 및 서팩틴 , 및 니스타틴의 상승작용적 효과

사카로마이세스 세레비지아에를 표적 병원체로서 사용하여, 상기 기술된 것과 유사한 실험을 (i) 니스타틴, (ii) 바실루스 서브틸리스 QST713으로부터의 리포펩티드의 조 추출물 (실시예 1에 기술된 바와 같이 수득됨), (iii) 니스타틴 및 조 추출물의 조합물, 및 (iv) 니스타틴 및 바실루스 서브틸리스 QST713으로부터의 반정제 및 정제 리포펩티드 (즉, 이투린-유형 화합물, 펜기신-유형 화합물, 및 서팩틴-유형 화합물)의 조합물로 수행하였다.

이투린-유형 화합물, 서팩틴, 및 펜기신-유형 화합물을 상기 설명된 바와 같이 비. 서브틸리스 QST713으로부터 추출 및 정제하였다. 각각의 테스트 웰 내의 나타마이신의 최종 농도는 0.56 ppm이었다; 각각의 웰 내의 조 리포펩티드 추출물의 최종 농도는 0.56 ppm이었다; 각각의 웰 내의 이투린-유형 화합물, 서팩틴 또는 펜기신-유형 화합물의 반정제 또는 정제 리포펩티드 추출물 각각의 최종 농도는 0.56 ppm이었다. 따라서, 조합물을 함유하는 웰 내의 각각의 성분의 중량 대 중량 비는 1:1이었다.

다양한 조합 간의 상승작용을 나타내는 결과가 도 9 및 표 7에서 기술된다.

실시예 11: 상이한 중량 대 중량 비에서의 페니실리움 엑스판숨에 대한 나타마이신 및 리포펩티드의 조 추출물의 상승작용적 효과

다양한 중량 대 중량 비의 나타마이신 대 리포펩티드의 조 추출물로 상승작용이 관찰되었는지를 결정하기 위해 연구를 수행하였다. 상기 실시예 1에 기술된 바와 같이 바실루스 서브틸리스 QST713으로부터 리포펩티드를 추출하였다. 다양한 조합물의 효능을 실시예 3에 기술된 다중 웰 플레이트 검정법을 사용하여 페니실리움 엑스판숨에 대해 테스트하였다. 나타마이신 대 조 리포펩티드 추출물의 중량 대 중량 비는 1:500 내지 500:1로 다양하였고, 표 8에 요약된 바와 같이 모든 경우에 상승작용이 관찰되었다. 표 8의 농도는 웰 당 각각의 성분의 최종 농도를 나타낸다.

Claims

폴리엔 살진균제와 적어도 1종의 리포펩티드의 상승작용적 살진균 조합물을 포함하는 조성물.
제1항에 있어서, 적어도 1종의 리포펩티드가 이투린(iturin)-유형 화합물, 서팩틴(surfactin)-유형 화합물, 펜기신(fengycin)-유형 화합물 및 푸자리시딘(fusaricidin)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 조성물.
제1항에 있어서, 적어도 1종의 리포펩티드가 하나 이상의 이투린-유형 화합물인 조성물.
제1항에 있어서, 적어도 1종의 리포펩티드가 하나 이상의 펜기신-유형 화합물인 조성물.
제1항에 있어서, 적어도 1종의 리포펩티드가 하나 이상의 서팩틴인 조성물.
제3항에 있어서, 이투린-유형 화합물이 이투린 A인 조성물.
제3항에 있어서, 이투린-유형 화합물이 바실로마이신(bacillomycin)인 조성물.
제1항에 있어서, 적어도 1종의 리포펩티드가 푸자리시딘인 조성물.
제1항에 있어서, 적어도 2종의 리포펩티드를 포함하는 조성물.
제9항에 있어서, 적어도 2종의 리포펩티드가 이투린-유형 화합물, 서팩틴-유형 화합물, 및 펜기신-유형 화합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 조성물.
제10항에 있어서, 적어도 2종의 리포펩티드가 이투린, 서팩틴 및 펜기신-유형 화합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 조성물.
제1항에 있어서, 적어도 1종의 리포펩티드가 리포펩티드-함유 발효 생성물의 일부분 또는 추출물인 조성물.
제12항에 있어서, 리포펩티드-함유 발효 생성물이 바실루스(Bacillus) 종 박테리아로부터의 것인 조성물.
제13항에 있어서, 바실루스 종 박테리아가 바실루스 서브틸리스(Bacillus subtilis) 또는 바실루스 아밀로리퀘파시엔스(Bacillus amyloliquefaciens)로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 조성물.
제14항에 있어서, 바실루스 서브틸리스가 바실루스 서브틸리스 QST713 및 이의 변이체로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 조성물.
제2항에 있어서, 폴리엔 살진균제가 나타마이신(natamycin) 또는 이의 유도체인 조성물.
제2항에 있어서, 폴리엔 살진균제가 니스타틴(nystatin) 또는 이의 유도체인 조성물.
제2항에 있어서, 폴리엔 살진균제가 암포테리신(amphotericin) B 또는 이의 유도체인 조성물.
제2항에 있어서, 폴리엔 살진균제가 오레오펀긴(aureofungin) 또는 이의 유도체인 조성물.
제2항에 있어서, 폴리엔 살진균제가 필리핀(filipin) 또는 이의 유도체인 조성물.
제2항에 있어서, 폴리엔 살진균제가 루센소마이신(lucensomycin) 또는 이의 유도체인 조성물.
제1항에 있어서, 폴리엔 살진균제 및 적어도 1종의 리포펩티드의 중량 대 중량 비가 약 500:1 내지 약 1:500인 조성물.
제1항에 있어서, 폴리엔 살진균제 및 적어도 1종의 리포펩티드의 중량 대 중량 비가 약 100:1 내지 약 1:100인 조성물.
제1항에 있어서, 폴리엔 살진균제 및 적어도 1종의 리포펩티드의 중량 대 중량 비가 약 10:1 내지 약 1:10인 조성물.
제1항에 있어서, 폴리엔 살진균제 및 적어도 1종의 리포펩티드의 중량 대 중량 비가 약 5:1 내지 약 1:5인 조성물.
제1항에 있어서, 폴리엔 살진균제 및 적어도 1종의 리포펩티드의 중량 대 중량 비가 약 2:1 내지 약 1:2인 조성물.
제1항에 있어서, 폴리엔 살진균제 및 적어도 1종의 리포펩티드의 중량 대 중량 비가 약 1:1인 조성물.
처리를 필요로 하는 장소(locus)에 폴리엔 살진균제와 적어도 1종의 리포펩티드의 상승작용적 조합물을 포함하는 조성물을 유효량으로 적용하는 것을 포함하는, 진균 병원체를 방제하는 방법.
제28항에 있어서, 적어도 1종의 리포펩티드가 이투린-유형 화합물, 서팩틴-유형 화합물, 펜기신-유형 화합물 및 푸자리시딘으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
제29항에 있어서, 적어도 1종의 리포펩티드가 하나 이상의 이투린인 방법.
제29항에 있어서, 적어도 1종의 리포펩티드가 하나 이상의 서팩틴인 방법.
제29항에 있어서, 적어도 1종의 리포펩티드가 하나 이상의 펜기신-유형 화합물인 방법.
제29항에 있어서, 폴리엔 살진균제가 나타마이신 또는 이의 유도체인 방법.
제29항에 있어서, 폴리엔 살진균제가 니스타틴 또는 이의 유도체인 방법.
제29항에 있어서, 폴리엔 살진균제가 암포테리신 B 또는 이의 유도체인 방법.
제29항에 있어서, 폴리엔 살진균제가 오레오펀긴 또는 이의 유도체인 방법.
제29항에 있어서, 폴리엔 살진균제가 필리핀 또는 이의 유도체인 방법.
제29항에 있어서, 폴리엔 살진균제가 루센소마이신 또는 이의 유도체인 방법.
제28항에 있어서, 폴리엔 살진균제 및 적어도 1종의 리포펩티드의 중량 대 중량 비가 약 500:1 내지 약 1:500인 방법.
제28항에 있어서, 폴리엔 살진균제 및 적어도 1종의 리포펩티드의 중량 대 중량 비가 약 100:1 내지 약 1:100인 방법.
제28항에 있어서, 폴리엔 살진균제 및 적어도 1종의 리포펩티드의 중량 대 중량 비가 약 10:1 내지 약 1:10인 방법.
제28항에 있어서, 폴리엔 살진균제 및 적어도 1종의 리포펩티드의 중량 대 중량 비가 약 5:1 내지 약 1:5인 방법.
제28항에 있어서, 폴리엔 살진균제 및 적어도 1종의 리포펩티드의 중량 대 중량 비가 약 2:1 내지 약 1:2인 방법.
제28항에 있어서, 폴리엔 살진균제 및 적어도 1종의 리포펩티드의 중량 대 중량 비가 약 1:1인 방법.
제28항에 있어서, 적어도 1종의 리포펩티드가 리포펩티드-함유 발효 생성물의 일부분 또는 추출물인 방법.
제28항에 있어서, 리포펩티드-함유 발효 생성물이 바실루스 종 박테리아로부터의 것인 방법.
제46항에 있어서, 바실루스가 바실루스 서브틸리스 QST713 또는 이의 변이체인 방법.
제28항에 있어서, 장소가 수확-후 식품이고, 진균 병원체가 수확-후 병원체인 방법.
제48항에 있어서, 수확-후 병원체가 페니실리움(Penicillium) 종 또는 게오트리쿰(Geotrichum) 종인 방법.
제48항 또는 제49항에 있어서, 폴리엔 살진균제가 나타마이신이고, 적어도 1종의 리포펩티드가 이투린-유형 화합물, 서팩틴-유형 화합물 및 펜기신-유형 화합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
제28항에 있어서, 장소가 식물, 뿌리, 종자 또는 식물 주변의 토양이고, 진균 병원체가 진균 식물병원체인 방법.
제28항에 있어서, 장소가 식품 또는 먹이이고, 폴리엔 살진균제가 나타마이신인 방법.
제28항에 있어서, 장소가 인간 또는 동물이고, 진균 병원체가 칸디다(Candida)인 방법.
제53항에 있어서, 폴리엔 살진균제가 니스타틴인 방법.
제28항에 있어서, 장소가 인간 또는 동물이고, 진균 병원체가 아스페르길루스(Aspergillus) 종 또는 푸사리움(Fusarium) 종이고, 폴리엔 살진균제가 나타마이신인 방법.
대상체에게 폴리엔 살진균제와 적어도 1종의 리포펩티드의 상승작용적 조합물을 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 진균 감염을 치료 또는 예방하는 방법.
제56항에 있어서, 대상체가 인간 또는 동물이고, 진균 감염이 칸디다에 의해 야기되는 것인 방법.
제57항에 있어서, 폴리엔 살진균제가 니스타틴인 방법.
제56항에 있어서, 진균 감염이 푸사리움 종 또는 아스페르길루스 종에 의해 야기되는 것인 방법.
제59항에 있어서, 폴리엔 살진균제가 나타마이신인 방법.
폴리엔 살진균제 및 리포펩티드-함유 발효 생성물을 포함하는 조성물.
제61항에 있어서, 리포펩티드-함유 발효 생성물이 바실루스 종 박테리아로부터의 것인 조성물.
처리를 필요로 하는 장소에 폴리엔 살진균제 및 리포펩티드-함유 발효 생성물을 포함하는 조성물을 적용하는 것을 포함하는, 진균 병원체를 방제하는 방법.