CN1324051C - 一种羊栖菜多糖sfp-i及其分离纯化方法与应用 - Google Patents
一种羊栖菜多糖sfp-i及其分离纯化方法与应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1324051C CN1324051C CNB2004100777308A CN200410077730A CN1324051C CN 1324051 C CN1324051 C CN 1324051C CN B2004100777308 A CNB2004100777308 A CN B2004100777308A CN 200410077730 A CN200410077730 A CN 200410077730A CN 1324051 C CN1324051 C CN 1324051C
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- sfp
- hijiki polysaccharide
- polysaccharide
- solution
- reduced pressure
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 title claims abstract description 49
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 title claims abstract description 49
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 title claims abstract description 49
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 12
- 238000000746 purification Methods 0.000 title claims description 12
- 238000000926 separation method Methods 0.000 title claims description 9
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims abstract description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 6
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N Fucose Natural products C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 claims abstract description 5
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 241000264279 Sargassum fusiforme Species 0.000 claims description 18
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 17
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 14
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 13
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 10
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 8
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 claims description 7
- 229960004756 ethanol Drugs 0.000 claims description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 7
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims description 6
- 229960000935 dehydrated alcohol Drugs 0.000 claims description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 5
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 5
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 claims description 4
- GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N DEAE-cellulose Chemical compound OC1C(O)C(O)C(CO)O[C@H]1O[C@@H]1C(CO)OC(O)C(O)C1O GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N 0.000 claims description 3
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 3
- 238000007667 floating Methods 0.000 claims description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 3
- -1 semi-lactosi Chemical compound 0.000 claims description 3
- SRBFZHDQGSBBOR-LECHCGJUSA-N alpha-D-xylose Chemical compound O[C@@H]1CO[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-LECHCGJUSA-N 0.000 claims description 2
- 229960003487 xylose Drugs 0.000 claims description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 abstract description 2
- 150000002772 monosaccharides Chemical group 0.000 abstract description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 abstract 4
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 2
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 2
- 150000008195 galaktosides Chemical class 0.000 abstract 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 10
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 5
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 3
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 239000003298 DNA probe Substances 0.000 description 2
- LPQOADBMXVRBNX-UHFFFAOYSA-N ac1ldcw0 Chemical compound Cl.C1CN(C)CCN1C1=C(F)C=C2C(=O)C(C(O)=O)=CN3CCSC1=C32 LPQOADBMXVRBNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000002290 gas chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000000452 restraining effect Effects 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000000419 Chronic Hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- LTMHDMANZUZIPE-AMTYYWEZSA-N Digoxin Natural products O([C@H]1[C@H](C)O[C@H](O[C@@H]2C[C@@H]3[C@@](C)([C@@H]4[C@H]([C@]5(O)[C@](C)([C@H](O)C4)[C@H](C4=CC(=O)OC4)CC5)CC3)CC2)C[C@@H]1O)[C@H]1O[C@H](C)[C@@H](O[C@H]2O[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](O)C2)[C@@H](O)C1 LTMHDMANZUZIPE-AMTYYWEZSA-N 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 1
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 1
- 241000123069 Ocyurus chrysurus Species 0.000 description 1
- 241001416149 Ovis ammon Species 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000702488 Rattus norvegicus High affinity cationic amino acid transporter 1 Proteins 0.000 description 1
- 241000195475 Sargassaceae Species 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000002155 anti-virotic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000001311 chemical methods and process Methods 0.000 description 1
- 238000005336 cracking Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 238000013016 damping Methods 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- LTMHDMANZUZIPE-PUGKRICDSA-N digoxin Chemical compound C1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](C)O[C@@H](O[C@@H]2[C@H](O[C@@H](O[C@@H]3C[C@@H]4[C@]([C@@H]5[C@H]([C@]6(CC[C@@H]([C@@]6(C)[C@H](O)C5)C=5COC(=O)C=5)O)CC4)(C)CC3)C[C@@H]2O)C)C[C@@H]1O LTMHDMANZUZIPE-PUGKRICDSA-N 0.000 description 1
- 229960005156 digoxin Drugs 0.000 description 1
- LTMHDMANZUZIPE-UHFFFAOYSA-N digoxine Natural products C1C(O)C(O)C(C)OC1OC1C(C)OC(OC2C(OC(OC3CC4C(C5C(C6(CCC(C6(C)C(O)C5)C=5COC(=O)C=5)O)CC4)(C)CC3)CC2O)C)CC1O LTMHDMANZUZIPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- AZHSSKPUVBVXLK-UHFFFAOYSA-N ethane-1,1-diol Chemical compound CC(O)O AZHSSKPUVBVXLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N isoamylol Chemical compound CC(C)CCO PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N periodic acid Chemical compound OI(=O)(=O)=O KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000005211 surface analysis Methods 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
Abstract
本发明公开了一种羊栖菜多糖SFP-I。本发明的羊栖菜多糖SFP-I,是一种以岩藻糖为主的杂多糖,单体组成含有岩藻糖、半乳糖、木糖,这三种单糖的摩尔比为1∶0.4∶0.39,不含蛋白质,其分子量为1.2×105。糖链化学结构以-3-α-L-Fuc-(1,4)-α-L-Fuc-(1-残基形成主链,平均每6个单糖残基中含有2个α1→2分支。本发明同时公开了其制备方法和应用。本发明的羊栖菜多糖SFP-I在制备用于抗乙肝病毒药物或保健食品中有着重要的应用。
Description
技术领域
本发明涉及生物化学领域,具体地说涉及一种多糖。
背景技术
羊栖菜(Sargassum Fusiforme,SF)属褐藻门马尾藻科植物,是我国丰富的经济海藻资源,藻体呈黄褐色,干时发黑,高30~200cm,肉质,主轴圆柱形,直立,基部具短分枝,又名玉茜、胡须泡、海大麦等,系多年生的暖温性海藻。在我国主要分布在广东、山东、福建、浙江等沿海地区,并出口到日本等国,而我国的羊栖菜开发才刚刚起步,几乎处于空白。
乙型肝炎是一种由乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)引起的、流行久远、传播广泛、严重危害人类健康的传染性疾病。据估计目前全球范围内大约有3.5亿的HBV慢性携带者。我国是乙型肝炎主要的流行区域,有超过10%的感染过HBV,HBV慢性携带者的人数几乎占全球的一半,现患慢性乙型肝炎的病人已达到1000万。对HBV的防治已成为我国乃至世界传染病控制的首要问题之一。
藻类多糖具有较好的抗病毒作用已被大量的科学家所认可。多糖作为羊栖菜的最主要成分,含量占细胞干重的40%左右,这就为利用羊栖菜开发新型抗病毒药品或食品提供了必要条件。本发明从羊栖菜中分离纯化获得一种多糖,经化学方法分析确定出化学结构,并通过药理实验证明该化学结构的多糖具有明显的抗乙肝病毒作用,可应用于药品或保健食品中。
发明内容
本发明目的是针对现有乙型肝炎治疗存在的问题,提供一种从羊栖菜中分离的羊栖菜多糖SFP-I。
本发明的另一个目的是提供该羊栖菜多糖SFP-I分离纯化的方法。
本发明的另一个目的是提供该羊栖菜多糖SFP-I在制备抗乙肝病毒药物或保健食品中的应用。
一种羊栖菜多糖SFP-I,经SepharoseCL-6B凝胶色谱柱层析,谱图出现单一对称峰,如图1所示,表明纯度已达到对其进行结构、药理研究的要求。SFP-I经HPLC体系测定其分子量为1.2×105,经气相色谱图分析,如图2,SFP-I的单体组成含有岩藻糖、半乳糖、木糖,各单糖之间的摩尔比为1∶0.4∶0.39。经紫外扫描图谱,如图3所示,除蛋白后的SFP-I在260nm和280nm附近均无蛋白质和氨基酸的特征吸收峰,表明其不含蛋白质。SFP-I的13C-NMR谱图中,如图4,端基碳的化学位移δ均在102ppm以下,其中δ97-102ppm信号峰为C1讯号,表明其构型为α,这与IR谱图(如图5)、GC-MS谱图(如图6)分析结果是一致的。根据13C-NMR谱峰的指派,结合二糖、寡糖的化学位移表及文献,以及高碘酸氧化和Smith降解结果,证明SFP-I多糖的一级结构是以-3-α-L-Fuc-(1,4)-α-L-Fuc-(1-残基形成糖链,平均每6个单糖残基中含有2个α1→2分支,其重复单元可表示如下:
上述羊栖菜多糖SFP-I的分离纯化方法,其步骤如下所示:
(1)取羊栖菜加水浸提,超滤水浸提液,收集被截留部分,减压浓缩、用无水乙醇沉淀,冷冻干燥得羊栖菜粗多糖;
(2)将羊栖菜粗多糖加水复溶,然后加入CaCl2溶液,离心,收集上清液;
(3)上清液经减压浓缩,再加入乙醇,离心;
(4)离心后取上清液,上清液中再加入乙醇,离心取沉淀物;
(5)将沉淀物溶于水,按Sevag法脱游离蛋白,以DEAE-cellulose为载体柱层析,依次用0.3mol/L NaCl、0.6mol/LNaCl、0.9mol/LNaCl和1.2mol/L NaCl溶液线性梯度洗脱,收集各洗脱液,各洗脱液透析、减压浓缩、冷冻干燥得固体物;
(6)将上述经0.9mol/LNaCl洗脱所得的固体物溶于水,再进一步用SepharoseCL-6B柱层析纯化,流动相为0.05mol/LNaCl溶液,流出液经透析、减压浓缩、冷冻干燥后得白色粉末状羊栖菜多糖SFP-I。
上述步骤(1)所述的超滤水浸提液是用分子量为100000的超滤膜超滤水浸提液。
上述步骤(1)所述无水乙醇的用量是减压浓缩后物体体积的3~8倍。
上述步骤(2)所述CaCl2溶液的浓度为4mol/L。
上述步骤(3)中上清液经减压浓缩,再加入乙醇,使溶液中乙醇浓度为30~40%。
上述步骤(4)中,离心后取上清液,上清液中再加入乙醇使溶液中乙醇浓度为85~90%。
上述步骤(5)所述的Sevag法中,氯仿和正丁醇的体积比为4∶1。
上述步骤(6)中所述的固体物用量为80~100mg。
本发明的有益效果:本发明从羊栖菜中提取了一种羊栖菜多糖SFP-I,该多糖能够有效抑制乙肝病毒,在制备用于预防和治疗乙肝的药物及保健食品中有着重要的应用,其市场前景广阔,价值高。
附图说明
图1为羊栖菜多糖SFP-I在SepharoseCL-6B凝胶色谱柱上的层析图;
图2为糖腈乙酸酯衍生物的气相色谱图;
图3为羊栖菜多糖SFP-I除蛋白后的紫外扫描图谱;
图4为羊栖菜多糖SFP-I的13C-NMR谱图;
图5为羊栖菜多糖SFP-I的IR谱图;
图6为羊栖菜多糖SFP-I的GC-MS谱图;
其中,在图2中,A为标准单糖;B为SFP-I水解物。
具体实施方式
实施例1 羊栖菜多糖SFP-I的分离纯化
(1)取1kg羊栖菜干品加水浸提,经响应面分析法优化条件为:提取温度85℃、自然pH值、水料重量比为28∶1、浸提1次的条件下,外加40W超声波,每次10min,间隔10min,浸提1h,羊栖菜粗多糖的得率可达21.09%(占原羊栖菜干品重量)。
(2)用100000分子量的超滤膜超滤水浸提液,选取2.0MPa为操作进口压力,室温25℃作为超滤温度。收集被截留部分,减压浓缩至最小体积、用3~8倍无水乙醇沉淀,冷冻干燥得羊栖菜粗多糖,得率为15.01%。
(3)羊栖菜粗多糖用适量水复溶,然后加入4mol/L CaCl2溶液,离心,收集上清液。上清液经减压浓缩至最小体积,加入乙醇至溶液中乙醇浓度为30~40%,静置后离心。离心后去沉淀,上清液中再加入乙醇使溶液中乙醇浓度为85~90%,离心得到沉淀,得率为3.63%。(4)取沉淀0.15g溶于水,按Sevag法(氯仿∶正丁醇=4∶1)脱游离蛋白,重复5次后,以DEAE-cellulose为载体柱层析,依次用0.3mol/LNaCl、0.6mol/L NaCl、0.9mol/LNaCl和1.2mol/L NaCl溶液线性梯度洗脱,收集各洗脱液,各洗脱液透析、减压浓缩、冷冻干燥得固体物。
(5)将上述经0.9mol/LNaCl洗脱所得的固体物80-100mg溶于水,再进一步用SepharoseCL-6B柱层析纯化,流动相为0.05mol/LNaCl溶液,流出液经透析、减压浓缩、冷冻干燥后得白色粉末状羊栖菜多糖SFP-I,得率为0.22%。
实施例2 羊栖菜多糖SFP-I对2215细胞内HBV-DNA的抑制作用2215细胞内HBV-DNA提取:在25cm2培养瓶中培养2215细胞,接种后24h加入羊栖菜多糖,设5mg/ml、2.5mg/ml、1.25mg/ml及细胞对照各1瓶。加药后培养12d(每4d换药液1次),取细胞对照及羊栖菜多糖各浓度处理细胞各1瓶,每瓶加细胞裂解液600μL,经37℃、2d裂解,11000g离心10min,吸取上清,加蛋白酶K至终浓度100μg/ml,56℃保存2h,收取上清,加等体积苯酚∶氯仿∶异戊醇=25∶24∶1(V/V),抽提2次,每次10min,10000g离心2min后,取上清,加两倍体积无水乙醇沉淀DNA,真空抽干,重溶于TE缓冲液中作为样品。将提取得到的DNA稀释成6个稀释度,即:1/2、1/4、1/8、1/16、1/32、1/64,用HBV-DNA探针作斑点杂交,用酶标仪测定各点OD(570nm)值,计算不同浓度羊栖菜多糖对2215细胞内HBV-DNA的抑制率。HBV-DNA全基因探针的制备及膜的杂交、显色均使用地高辛试剂盒。HBV-DNA全基因由大肠杆菌Am12经EcoR酶切获得。
用羊栖菜多糖SFP-I的3个稀释浓度5.0mg/ml、2.5mg/ml和1.25mg/ml处理2215细胞,第12d分别提取DNA,稀释成6个稀释度,即:1/2、1/4、1/8、1/16、1/32、1/64,用HBV-DNA探针作斑点杂交,用酶标仪测定各点OD(570nm)值,分析比较每批实验结果,结果如表1所示。
表1 斑点杂交结果
HBV-DNA稀释倍数 | 检测项目 | 多糖浓度(mg/ml) | 细胞对照 | ||||||
5 | 2.5 | 1.25 | |||||||
1/21/4 | OD抑制率OD | 0.3660.900.25 | 0.4455.710.33 | 0.6537.600.40 | 0.5642.300.40 | 0.6817.580.45 | 0.7019.900.56 | 0.86-0.61 | 0.79-0.73 |
1/81/161/321/64 | 抑制率OD抑制率OD抑制率OD抑制率OD抑制率x | 59.700.2361.300.1165.140.1248.900.0962.7159.78 | 57.980.2468.700.1659.220.0964.200.0572.8063.10 | 43.000.2838.800.1247.150.1322.200.1347.6239.39 | 49.080.3147.500.1550.190.1261.300.0564.3052.45 | 31.800.4521.600.2712.140.1427.800.17-15.57 | 29.700.5316.530.31-0.2132.300.0922.9020.23 | -0.46-0.340.22-0.14-- | -0.52-0.210.31-0.16-- |
由表1可知,羊栖菜多糖SFP-I5mg/ml组HBV-DNA与细胞对照组HBV-DNA比较,平均抑制率达61.44%;2.5mg/ml组抑制率达45.92%;1.25mg/ml组抑制率为17.9%。由此说明羊栖菜多糖在2215细胞中无毒浓度条件下可抑制HBV-DNA的复制,抑制作用呈明显的剂量-效应关系。
Claims (5)
1、一种羊栖菜多糖SFP-I,其特征在于含有岩藻糖、半乳糖、木糖,其摩尔比为1∶0.4∶0.39,不含蛋白质,分子量为1.2×105,糖链化学结构以-3-α-L-Fuc-(1,4)-α-L-Fuc-(1-残基形成糖链,其重复单元结构为:
2、权利要求1所述羊栖菜多糖SFP-I的分离纯化方法,其步骤如下所示:
(1)取羊栖菜加水浸提,超滤水浸提液,收集被截留部分,减压浓缩、用无水乙醇沉淀,冷冻干燥得羊栖菜粗多糖;所述的超滤水浸提液是用分子量为100000的超滤膜超滤水浸提液;所述无水乙醇的用量是减压浓缩后物体体积的3~8倍;
(2)将羊栖菜粗多糖加水复溶,然后加入CaCl2溶液,离心,收集上清液;
(3)上清液经减压浓缩,再加入乙醇,使溶液中乙醇浓度为30~40%,离心;
(4)离心后取上清液,上清液中再加入乙醇使溶液中乙醇浓度为85~90%,离心取沉淀物;
(5)将沉淀物溶于水,按Sevag法脱游离蛋白,氯仿和正丁醇的体积比为4∶1,以DEAE-cellulose为载体柱层析,依次用0.3mol/L NaCl、0.6mol/L NaCl、0.9mol/LNaCl和1.2mol/L NaCl溶液线性梯度洗脱,收集各洗脱液,各洗脱液透析、减压浓缩、冷冻干燥得固体物;
(6)将上述经0.9mol/LNaCl洗脱所得的固体物溶于水,再进一步用SepharoseCL-6B柱层析纯化,流动相为0.05mol/LNaCl溶液,流出液经透析、减压浓缩、冷冻干燥后得白色粉末状羊栖菜多糖SFP-I。
3、根据权利要求2所述羊栖菜多糖SFP-I的分离纯化方法,其特征在于步骤(2)所述CaCl2溶液的浓度为4mol/L。
4、根据权利要求2所述羊栖菜多糖SFP-I的分离纯化方法,其特征在于步骤(6)中所述的固体物用量为80~100mg。
5、权利要求1所述的羊栖菜多糖SFP-I在制备用于抗乙肝病毒的药物或保健食品中的应用。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CNB2004100777308A CN1324051C (zh) | 2004-12-29 | 2004-12-29 | 一种羊栖菜多糖sfp-i及其分离纯化方法与应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CNB2004100777308A CN1324051C (zh) | 2004-12-29 | 2004-12-29 | 一种羊栖菜多糖sfp-i及其分离纯化方法与应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN1651469A CN1651469A (zh) | 2005-08-10 |
CN1324051C true CN1324051C (zh) | 2007-07-04 |
Family
ID=34869101
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CNB2004100777308A Expired - Fee Related CN1324051C (zh) | 2004-12-29 | 2004-12-29 | 一种羊栖菜多糖sfp-i及其分离纯化方法与应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN1324051C (zh) |
Families Citing this family (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1962699B (zh) * | 2006-11-25 | 2012-02-01 | 中国烟草总公司郑州烟草研究院 | 羊栖菜多糖及其在烟草中的应用 |
CN101250232B (zh) * | 2008-03-27 | 2010-06-23 | 钱国英 | 一种羊栖菜活性多糖的提取工艺 |
CN103536622B (zh) * | 2012-07-17 | 2015-10-28 | 上海海洋大学 | 羊栖菜硫酸多糖在制备抗衰老药品及保健品中的应用 |
CN105519961B (zh) * | 2014-09-29 | 2018-05-18 | 华仁药业股份有限公司 | 一种用于透析患者的肠内营养制剂及其制备方法 |
CN105906733B (zh) * | 2016-04-30 | 2019-04-30 | 山东大学(威海) | 一种羊栖菜多糖提取液及其制备方法和应用 |
CN106046191B (zh) * | 2016-07-01 | 2019-08-23 | 温州大学 | 一种羊栖菜多糖在制备用于抗炎的片剂、胶囊或功能性食品中的应用 |
CN106046193B (zh) * | 2016-07-26 | 2019-02-19 | 东北师范大学 | 一种海藻多糖p155及其制备工艺 |
CN106309470B (zh) * | 2016-08-30 | 2021-05-18 | 闫滨 | 一种羊栖菜多糖的应用 |
CN109879982A (zh) * | 2019-03-29 | 2019-06-14 | 温州大学 | 一种羊栖菜中岩藻聚糖硫酸酯组分的制备及活性检测方法 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS58174329A (ja) * | 1982-04-06 | 1983-10-13 | Wakamoto Pharmaceut Co Ltd | 海藻由来抗腫瘍性硫酸化多糖体 |
CN1389476A (zh) * | 2002-07-09 | 2003-01-08 | 暨南大学 | 海藻的提取方法 |
-
2004
- 2004-12-29 CN CNB2004100777308A patent/CN1324051C/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS58174329A (ja) * | 1982-04-06 | 1983-10-13 | Wakamoto Pharmaceut Co Ltd | 海藻由来抗腫瘍性硫酸化多糖体 |
CN1389476A (zh) * | 2002-07-09 | 2003-01-08 | 暨南大学 | 海藻的提取方法 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
海洋药物羊栖菜中多糖的分离和结构分析 陈帆,高央央,温州师范学院学报,第25卷第2期 2004 * |
海洋药物羊栖菜中多糖的分离和结构分析 陈帆,高央央,温州师范学院学报,第25卷第2期 2004;羊栖菜多糖体外抗病毒作用研究 岑颖洲,王凌云,中国病理生理杂志,第20卷第5期 2004 * |
羊栖菜多糖体外抗病毒作用研究 岑颖洲,王凌云,中国病理生理杂志,第20卷第5期 2004 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN1651469A (zh) | 2005-08-10 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN1324051C (zh) | 一种羊栖菜多糖sfp-i及其分离纯化方法与应用 | |
US10835552B2 (en) | Method for preparing linseed polysaccharide having antiviral activity and immunological activity, and use of the linseed polysaccharide | |
CN105695545A (zh) | 一种海参岩藻聚糖硫酸酯和海参糖蛋白的制备方法 | |
CN108164614B (zh) | 一种具有免疫调节作用的大石花菜多糖的制备方法及结构部分表征及其应用 | |
CN107163162A (zh) | 一种枸杞多糖精制的方法 | |
CN107541533A (zh) | 一种药食真菌菌丝多糖多肽免疫增强剂的制备方法 | |
CN101445565A (zh) | 一种杜氏盐藻多糖的分离纯化方法 | |
CN104357332B (zh) | 黑曲霉jh‑2及在生物转化合成积雪草酸中应用 | |
CN111607010B (zh) | 一种具有免疫调节活性的浒苔多糖及其制备方法 | |
CN111138558B (zh) | 一种天然免疫增强多糖pcp及其制备方法和用途 | |
CN103275237B (zh) | 一种茄枝多糖的制备方法及其应用 | |
CN104072630A (zh) | 一种黄山石耳冷致凝胶多糖及其制备方法 | |
CN108359021B (zh) | 一种快速制备具有抗病毒和免疫调节活性的亚麻籽多糖的方法 | |
CN108424469B (zh) | 一种芡实种仁多糖及其分离提取方法和用途 | |
CN113105567B (zh) | 一种蝉拟青霉甘露聚糖及其制备和用途 | |
CN104004109B (zh) | 海洋硫酸酯化糖胺聚糖se-3及其制备方法 | |
CN114712416B (zh) | 一种水媒法高效同步提取荷叶中黄酮、生物碱和多酚的方法 | |
CN103183740B (zh) | 一种北五味子多糖的生产方法 | |
CN112794925B (zh) | 一种阳春砂多糖及其制备方法和应用 | |
CN109400743B (zh) | 一种从海葡萄中提取硫酸半乳聚糖的方法 | |
CN110229244B (zh) | 一种枝瑚菌多糖及其制备方法和应用 | |
CN103484392A (zh) | 用Pseudomonas fluorescens PGM37菌株生产葡甘聚糖 | |
CN107936133B (zh) | 一种月见草叶多糖及其制备方法 | |
CN114752641B (zh) | 一种樟芝菌硒多糖的制备方法 | |
CN113801249B (zh) | 一种熟地黄多糖的制备方法、产品及其应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
C19 | Lapse of patent right due to non-payment of the annual fee | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |