CN104004109B - 海洋硫酸酯化糖胺聚糖se-3及其制备方法 - Google Patents
海洋硫酸酯化糖胺聚糖se-3及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104004109B CN104004109B CN201410251864.0A CN201410251864A CN104004109B CN 104004109 B CN104004109 B CN 104004109B CN 201410251864 A CN201410251864 A CN 201410251864A CN 104004109 B CN104004109 B CN 104004109B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- glycosaminoglycans
- sulfation
- ocean
- ink
- mol
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 title claims abstract description 25
- 230000019635 sulfation Effects 0.000 title claims abstract description 18
- 238000005670 sulfation reaction Methods 0.000 title claims abstract description 18
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 11
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 20
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 claims abstract description 19
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 16
- AEMOLEFTQBMNLQ-AQKNRBDQSA-N D-glucopyranuronic acid Chemical compound OC1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-AQKNRBDQSA-N 0.000 claims abstract description 15
- 229940097043 glucuronic acid Drugs 0.000 claims abstract description 14
- PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N Fucose Natural products C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- -1 acetylamino galactosamine Chemical compound 0.000 claims abstract description 11
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 9
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 claims abstract description 8
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L sulfate group Chemical group S(=O)(=O)([O-])[O-] QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 7
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 5
- 239000000976 ink Substances 0.000 claims description 38
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims description 29
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims description 29
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims description 28
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 20
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 14
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 241000238370 Sepia Species 0.000 claims description 10
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 10
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 8
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 8
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 8
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 claims description 7
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 7
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 7
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 7
- XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N Melanin Chemical compound O=C1C(=O)C(C2=CNC3=C(C(C(=O)C4=C32)=O)C)=C2C4=CNC2=C1C XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 5
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 4
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 claims description 3
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 claims description 3
- 238000013019 agitation Methods 0.000 claims description 3
- 230000008021 deposition Effects 0.000 claims description 3
- 238000011033 desalting Methods 0.000 claims description 3
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims description 3
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 3
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 claims description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 3
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 claims description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 2
- 125000000311 mannosyl group Chemical group C1([C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 claims 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 claims 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 abstract description 13
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 abstract description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 230000002607 hemopoietic effect Effects 0.000 abstract description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 abstract description 3
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 abstract description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 abstract description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 abstract description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 18
- 238000011160 research Methods 0.000 description 10
- PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N L-rhamnose Natural products CC(O)C(O)C(O)C(O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N N-acetyl-D-galactosamine Natural products CC(=O)NC(C=O)C(O)C(O)C(O)CO MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 6
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 5
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 5
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- 241001441745 Sepia esculenta Species 0.000 description 4
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 4
- 230000006870 function Effects 0.000 description 4
- 241000238366 Cephalopoda Species 0.000 description 3
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 3
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 3
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 3
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 3
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 3
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 description 2
- 101100165177 Caenorhabditis elegans bath-15 gene Proteins 0.000 description 2
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 description 2
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AEMOLEFTQBMNLQ-YMDCURPLSA-N D-galactopyranuronic acid Chemical compound OC1O[C@H](C(O)=O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-YMDCURPLSA-N 0.000 description 2
- SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N L-rhamnopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N 0.000 description 2
- OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N N-Acetyl-D-Galactosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N 0.000 description 2
- 241000238371 Sepiidae Species 0.000 description 2
- 230000010100 anticoagulation Effects 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 229910052788 barium Inorganic materials 0.000 description 2
- DSAJWYNOEDNPEQ-UHFFFAOYSA-N barium atom Chemical compound [Ba] DSAJWYNOEDNPEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 229940098363 cuttle fish ink Drugs 0.000 description 2
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 2
- 238000009795 derivation Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 description 2
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 2
- 239000001117 sulphuric acid Substances 0.000 description 2
- 235000011149 sulphuric acid Nutrition 0.000 description 2
- JCZPMGDSEAFWDY-MGCNEYSASA-N (2r,3s,4s,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanamide Chemical compound NC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO JCZPMGDSEAFWDY-MGCNEYSASA-N 0.000 description 1
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000965254 Apostichopus japonicus Species 0.000 description 1
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical class [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 206010013908 Dysfunctional uterine bleeding Diseases 0.000 description 1
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 description 1
- 241000237852 Mollusca Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 239000007832 Na2SO4 Substances 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000031481 Pathologic Constriction Diseases 0.000 description 1
- 239000012564 Q sepharose fast flow resin Substances 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 241001663378 Sepiella maindroni Species 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 125000000218 acetic acid group Chemical group C(C)(=O)* 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- 230000000202 analgesic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 229940069428 antacid Drugs 0.000 description 1
- 239000003159 antacid agent Substances 0.000 description 1
- 230000008485 antagonism Effects 0.000 description 1
- 230000001458 anti-acid effect Effects 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003064 anti-oxidating effect Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 1
- 229910001626 barium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001934 delay Effects 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 238000010612 desalination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 230000032050 esterification Effects 0.000 description 1
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 150000002337 glycosamines Chemical class 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 235000013402 health food Nutrition 0.000 description 1
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 description 1
- 238000004192 high performance gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 239000002655 kraft paper Substances 0.000 description 1
- TWNIBLMWSKIRAT-VFUOTHLCSA-N levoglucosan Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]2CO[C@@H]1O2 TWNIBLMWSKIRAT-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- 230000037356 lipid metabolism Effects 0.000 description 1
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 description 1
- 230000015654 memory Effects 0.000 description 1
- 239000012982 microporous membrane Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000003020 moisturizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- OQUKIQWCVTZJAF-UHFFFAOYSA-N phenol;sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O.OC1=CC=CC=C1 OQUKIQWCVTZJAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 150000004804 polysaccharides Polymers 0.000 description 1
- 229910052939 potassium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 230000004223 radioprotective effect Effects 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 239000011435 rock Substances 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 238000010025 steaming Methods 0.000 description 1
- 230000036262 stenosis Effects 0.000 description 1
- 208000037804 stenosis Diseases 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 235000012976 tarts Nutrition 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 150000004043 trisaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 238000004879 turbidimetry Methods 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Abstract
本发明涉及一种海洋硫酸酯化糖胺聚糖SE‑3，其单糖组分含有甘露糖：葡萄糖胺：葡萄糖醛酸：乙酰氨基半乳糖：半乳糖：岩藻糖的质量比例为1:1.5:0.92:3:1.8:2；该海洋硫酸酯化糖胺聚糖SE‑3的分子量为10kDa至16kDa，硫酸基团的含量为10%至14%之间。本发明还提供了一种相应的提取方法，与现有技术相比，本发明的优点在于：提取、纯化工艺较简单，提取纯度好、易于操作，增加脾脏指数、造血功能活性显著，安全无毒，对不良反应有抑制作用。
Description
技术领域
本发明涉及一种从乌贼墨中提取分离纯化的具有新颖结构的胺聚糖及其提取方法，尤其涉及一种海洋硫酸酯化糖胺聚糖及其制备方法。
背景技术
随着复杂的生物学功能被不断揭示，多糖在免疫调节、抗凝血、抗肿瘤和调节血脂等方面得到了应用。海洋生物处于高盐、高压寡营养等独特的环境中，使得很多海洋来源的多糖具有独特的结构和生物功能，使得开发海洋多糖资源成为目前海洋药物学是研究的一大热点。
对海洋生物多糖研究比较多的集中在了海洋藻类多糖，目前随着资源的进一步开发，海洋动物来源的多糖也越来也受到关注。鲍鱼中含有硫酸化杂多糖，由半乳糖（Gal）、葡萄糖（Glc）、木糖（Xyl）、岩藻糖(Fuc)和葡萄糖醛酸(GlcUA)组成，含有11%左右的硫酸基，在免疫调节、抗肿瘤、改善记忆、抗凝血和抗炎等方面均具有显著的活性。海参中富含由乙酰氨基半乳糖（Gal-NAc）、葡萄糖醛酸（GlcUA）和岩藻糖(Fuc)组成的粘多糖和硫酸酯化的岩藻聚糖对神经元的保护作用和心血管疾病方面均具有保护作用。
乌贼又称墨鱼，海洋软体动物，属头足类。广泛分布于我国沿海，尤以浙江省产量最高, 是舟山市的四大经济海产之一，乌贼墨是乌贼科动物墨囊内提取物质，因其颜色和来源而得名。由细小黑色颗粒构成的粘稠状的混悬液，蛋白多糖复合物，含有多种活性成分，具有较高药用价值。通常乌贼墨会作为废弃物被扔掉，自从日本学者发现其抗肿瘤活性后，乌贼墨的研究逐渐与日俱增，很多日本食品企业也开始将乌贼墨用于食品中。研究表明，蛋白多糖复合物是乌贼墨重要的活性成分，也是海洋特征寡糖的一大来源。对乌贼墨来源的海洋多糖的研究将有助于进一步利用乌贼产品加工的废弃物，变废为宝，为海洋多糖糖在医药等领域的利用提供物质基础，提高了乌贼的应用价值和产值。乌贼墨是乌贼加工过程中的废弃物，研究表明新鲜乌贼墨中含有水分、色素、蛋白质、脂肪、糖类等物质。乌贼墨也可作为一种中药，文献上早有记载。《本草拾遗》中有：“腹中墨，主治血刺心痛”。在《本经》中有记载：“可收敛止血，固精止带，制酸定痛， 除湿敛疮”。乌贼墨制剂临床上主要作为止血剂，治疗出血性疾病如：功能性子宫出血、胃出血等。中国海洋药物辞典也收录了乌贼墨。20 世纪90 年代，日本青森产业技术中心和弘前大学发现乌贼墨具有抗肿瘤作用，并从中提取得到一种具有高效抗癌活性的多糖－蛋白复合体，掀起了开发乌贼墨生物功能的热潮，目前在日本主要是作为一种保健食品。
近年来国内外对乌贼墨进行了一系列研究和开发，研究表明乌贼墨具有止血、抗肿瘤、抗氧化、抗辐射等多种生理活性，特别是对乌贼墨多糖的提取纯化、结构及生物结构进行了深入研究。对乌贼墨多糖的研究表明，其多糖部分主要是由等摩尔比的葡萄糖醛酸（GlcUA）、N-乙酰半乳糖胺（GalNAc）和岩藻糖（Fuc）构成的一种全新结构的类糖胺聚糖。该多糖结构特异，含有等比例的酸性糖、碱性糖和六碳甲基糖组成的三糖线性重复单元，中国海洋大学的研究人员也从鱿鱼墨中分离得到类似的但具有分支结构的非硫酸酯化的类糖胺聚糖[→3)-β-GlcA(1→4)-α-GalNAc(1→3)-α-Fuc(1→]n，山东大学从无针乌贼墨中分离得到一种主要由岩藻糖（Fuc）、N-乙酰半乳糖胺（GalNAc）和甘露糖（Man）组成的杂多糖。这些头足动物来源的杂多糖作为一种天然生物活性物质，能够抑制突变，显著促进机体的粒系造血机能，抑制S180肉瘤生长，增强小鼠的特异性免疫和非特异性免疫功能，调节机体血脂代谢，提高机体抗氧化能力。可缓解环磷酰胺所致大鼠骨髓造血功能抑制作用乌贼墨多糖对环磷酰胺所致的免疫系统及抗氧化能力损伤具有显著的拮抗作用和促进其快速恢复的功效。
发明内容
本发明的目的在于提供一种能增加脾脏指数、造血功能并且对不良反应有抑制作用的海洋硫酸酯化糖胺聚糖及其相应的具有提取、纯化工艺较简单，提取纯度好、易于操作的制备方法。
本发明为解决上述问题所采取的技术方案为：一种海洋硫酸酯化糖胺聚糖SE-3，其单糖组分含有甘露糖：葡萄糖胺：葡萄糖醛酸：乙酰氨基半乳糖：半乳糖：岩藻糖的质量比例为1:1.5:0.92:3:1.8:2；该海洋硫酸酯化糖胺聚糖SE-3的分子量为10kDa至16kDa，硫酸基团的含量为10%至14%之间。
本发明为解决上述第二个技术问题所采取的技术方案为：一种海洋硫酸酯化糖胺聚糖SE-3的制备方法，其包括以下步骤：
1）乌贼墨多糖的提取：取新鲜乌贼墨囊中乌贼墨浓缩后冻干后，采用酶解法处理后，沉淀烘干，再重新溶解后使用截留分子量为3500的透析袋对蒸馏水进行透析脱盐和除去小分子物质，得到乌贼墨多糖；
2）分离纯化：采用离子交换层析柱依次采用0.05mol/L、0.25mol/L、0.5mol/L的NaCl溶液三个梯度浓度的NaCl溶液进行梯度洗脱，收集0.01至0.1 mol/L、0.1至0.5 mol/L、0.2至1 mol/L的NaCl溶液洗脱，并收集0.2至1 mol/L的NaCl溶液洗脱产物；洗脱产物分子量为10kDa至16kDa。
梯度洗脱的截留相对分子质量为3500，流速为0.5至3 mL/min。
酶解法为两步酶解法，具体为按料液质量体积比1:10至1：30加入蒸馏水，40℃下磁力搅拌2 h，使墨汁均匀分散后首先采用木瓜蛋白酶提取3 h，加酶量2%，提取温度60℃，pH 7，接着采用胰蛋白酶水解3 h，提取温度60℃，pH 10，加酶量0.5%。提取完后调pH至中性后100℃水浴加热15 min灭酶。最后调节pH至弱酸性，静置使黑色素沉淀后6000 rpm 离心15 min，取上清调节pH至中性后浓缩至原体积的1/20，使用终浓度为80%的乙醇进行沉淀。
与现有技术相比，本发明的优点在于：提取、纯化工艺较简单，提取纯度好、易于操作，增加脾脏指数、造血功能活性显著，安全无毒，对不良反应有抑制作用。
附图说明
图1是本发明实施例乌贼墨多糖Q sepharose Fast Flow梯度洗脱硫酸苯酚检测图，其中横轴为接收试管数，纵向轴是490nm吸光度；
图2是本发明实施例SE-3的PMP柱前衍生液相色谱图，其中横轴为洗脱时间（min），纵向轴是245nm吸光度（mAU）；
图3是本发明实施例单糖标准品的PMP柱前衍生液相色谱图，其中横轴为洗脱时间（min），纵向轴是245nm吸光度（mAU）；
图4是本发明实施例分子量标准曲线，其中保留时间为横坐标，分子量对数值为纵坐标；
图5是本发明实施例SE-3的高效凝胶色谱图，其中纵轴为单位折光率，保留时间为横坐标。
具体实施方式
以下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。
实施例: 参照图1至图5，本发明所涉及的乌贼墨来源于舟山附近海域的金乌贼(Sepia esculenta Hoyle)。本发明的新颖硫酸化类糖胺聚糖就是一金乌贼墨为原料制备得到，其制备和结构鉴定包括以下步骤：
(1)乌贼墨多糖的提取：
乌贼墨存在于乌贼墨消化道末端的墨囊中，为黑色固体悬浮颗粒。取新鲜乌贼墨囊中乌贼墨浓缩后冻干备用。采用两步酶解法提取乌贼墨多糖。具体为按料液比1:20(质量体积比)加入蒸馏水，40℃下磁力搅拌2 h，使墨汁均匀分散后首先采用木瓜蛋白酶提取3h，加酶量2%，提取温度60℃，pH 7，接着采用胰蛋白酶水解3 h，提取温度60℃，pH 10，加酶量0.5%。提取完后调pH至中性后100℃水浴加热15 min灭酶。最后调节pH至弱酸性，静置使黑色素沉淀后6000 rpm 离心15 min，取上清调节pH至中性后浓缩至原体积的1/20，使用终浓度为80%的乙醇进行沉淀。沉淀烘干后重新溶解后使用截留分子量为3500的透析袋对蒸馏水进行透析两天脱盐和除去小分子物质。最终对袋内溶液进行浓缩后冷冻干燥得到乌贼墨多糖粗品。乌贼墨多糖为淡黄色粉末状，得率为3.0%。
(2)乌贼墨类糖胺聚糖的提取分离纯化：
色谱条件：色谱柱：Q Sepharose 4 Fast Flow 离子交换层析柱；不同浓度 NaCl溶液梯度洗脱；流速：1.0 mL/min，自动部分收集器收集洗脱液。
用硫酸-苯酚法在490 nm处进行糖的跟踪检测，收集含糖组分，旋转蒸发浓缩，以截留相对分子质量为3500的透析袋进行透析脱盐，冻干。其中0.5 mol/L NaCl 洗脱组分SE-3既为目标组分。
(3)乌贼墨类糖胺聚糖的理化性质分析：
3.1 单糖组成分析
单糖标准品溶液：分别精确称取等摩尔干燥至恒重的甘露糖（Man）、氨基葡萄糖（GlcN）、鼠李糖（Rha）、葡萄糖醛酸（GlcUA）、半乳糖醛酸（GalUA）、乙酰氨基半乳糖（GalNAc）、葡萄糖（Glc）、半乳糖（Gal）、木糖（Xyl）、阿拉伯糖（Ara）和岩藻糖（Fuc）12种单糖标准品，加水充分溶解，配制成1.0 mL·min-1。
样品的全水解：取适量样品，用2 mol·L-1 TFA(三氟乙酸)在110 ℃进行全水解6h，反复加甲醇旋转蒸发除去TFA至无酸味，用适量蒸馏水洗出。
衍生条件：取100 μL 上述标准品溶液置1.5 mL的EP管中，加入100 μL 0.3 mol·L-1 NaOH溶液，120 μL 0.5 mol·L-1 PMP溶液，70 ℃衍生1 h，反应完加入100 μL 0.3mol·L-1 HCl溶液中和，加500 μL氯仿反复萃取离心，上清用0.22 μm微孔滤膜过滤，采用高效液相色谱分析。
色谱条件： Agilent XDB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相：磷酸盐缓冲液(pH 6.7)/CH3CN(82:18，V/V)；流速：1.0 mL·min-1；柱温：30 ℃；进样量：20 μL；检测器：DAD(245 nm)。
全水解完的样品与标准品在相同条件下衍生，进样20 μL，高效液相色谱分析，记录色谱图。与各单糖标准品的出峰时间对照，确定样品单糖组成。
和单糖组成标准图谱比对可知，SE-3主要含有乙酰氨基半乳糖（GalNAc）、半乳糖（Gal）和岩藻糖（Fuc），还含有甘露糖（Man）、葡萄糖胺（GlcN）和葡萄糖醛酸（GlcUA）。Man ：GlcN ：GlcUA ：GalNAc ：Gal ：Fuc=1.0:1.5:0.92:3.0:1.8:2.0. 由单糖组成可知乌贼墨多糖SE-3为一种具有多种单糖组成的类糖胺聚糖。其最大的特征在于同时含有两种碱性单糖（GlcN和GalNAc）并以GalNAc为主要含量，含有一种糖醛酸（GlcUA），含有在很多海洋糖胺聚糖中都存在的岩藻糖（Fuc），同时还含有甘露糖（Man）和半乳糖（Gal），由该单糖组成的类糖胺聚糖还未见报道。
3.2 相对分子量分析
采用高效凝胶渗透色谱法测定。
色谱条件：Shodex Ohpak SB-804HQ凝胶色谱柱（300 mm × 7.8 mm）；柱温：
35℃；流动相：0.1 mol·L-1的Na2SO4；流速：0.5 mL·min-1；检测器：示差检测器(RID)。
标准曲线制作
以系列标准葡聚糖为分子量标准品，分别取6个不同分子量的标样，加流动相溶解制成5 mg·mL-1的标准溶液，分别进样20 μL，记录色谱图及保留时间TR，以保留时间为横坐标，以分子量对数值为纵坐标绘制标准曲线。
样品分子量测定：称取适量样品，加流动相溶解成5 mg·mL-1的溶液，用0.22 μm微孔滤膜过滤，进样20 μL，高效液相色谱分析，记录色谱图。将样品的保留时间代入标准曲线方程计算多糖组分的分子量。
由SE-3的高效凝胶色谱图可知，SE-3呈单一对称狭窄的峰，表明其纯度高，保留时间代入标准曲线计算得到其分子量为14 kDa。
3.3 硫酸基含量测定
采用明胶-比浊法测定各多糖的硫酸根含量。
溶液配制
0.5%明胶溶液： 1.25 g明胶在60～70℃溶解于10 mL水中，定容至250 mL，4℃冰箱静置过夜。
氯化钡-明胶溶液：0.5 g BaCl2溶解于100 mL 0.5%明胶溶液中，4℃冰箱静置过夜。
K2SO4溶液：称105℃干燥恒重的K2SO4 108.75 mg，以水定容至100 mL，即得硫酸基标准液(硫酸根质量浓度)600 μg·mL-1。
稀盐酸配制：1 mL浓盐酸加水稀释至30 mL。
标准曲线的绘制
分别取上述标准硫酸盐溶液0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mL，补水至1.0 mL。加入稀盐酸1.0 mL，再加入氯化钡-明胶溶液0.5 mL，混匀，25 ℃放置20 min，在500 nm处测定其吸光值。以硫酸基标准液的质量数为横坐标，相应的吸光值为纵坐标绘制标准曲线。
样品的测定：准确称取5 mg样品溶于4 mL ，1 mol·L-1 HCl中，封管，于105℃的烘箱中反应12 h，使硫酸根游离。准确移取上述溶液适量，按标准曲线的测定方法平行三次，测定其吸光值，代入线性回归方程计算各多糖样品的硫酸基含量的平均值。最后，换算成百分含量。最后计算得到SE-3硫酸基团的含量为12%。
通过对SE-3理化性质进行鉴定，最终确定SE-3为分子量为14 kDa的硫酸酯化的类糖胺聚糖。和很多海洋动物来源的糖胺聚糖类似，SE-3含有硫酸取代，并含有氨基糖、糖醛酸和岩藻糖。但是SE-3新颖性体现在以乙酰氨基半乳糖为主，还含有氨基葡萄糖，并且还含有大量的半乳糖和甘露糖。该单糖组成的类糖胺聚糖在头足动物乃至整个海洋动物中均为首次发现。本发明详细介绍金乌贼墨来源的硫酸酯化的新型类糖胺聚糖的制备工艺，描述了其理化性质。
Claims (4)
1.海洋硫酸酯化糖胺聚糖SE-3，其特征在于该海洋硫酸酯化糖胺聚糖SE-3单糖组分含有甘露糖：葡萄糖胺：葡萄糖醛酸：乙酰氨基半乳糖：半乳糖：岩藻糖的质量比例为1:1.5:0.92:3:1.8:2；该海洋硫酸酯化糖胺聚糖SE-3的分子量为10kDa至16kDa，硫酸基团的含量为10%至14%之间。
2.根据权利要求1所述的海洋硫酸酯化糖胺聚糖SE-3的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
1）乌贼墨多糖的提取：取新鲜乌贼墨囊中乌贼墨浓缩后冻干后，采用酶解法处理后，沉淀烘干，再重新溶解后使用截留分子量为3500的透析袋对蒸馏水进行透析脱盐和除去小分子物质，得到乌贼墨多糖；
2）分离纯化：采用离子交换层析柱依次采用0.05mol/L、0.25mol/L、0.5mol/L的NaCl溶液三个梯度浓度的NaCl溶液进行梯度洗脱，收集0.01至0.1 mol/L、0.1至0.5 mol/L、0.2至1 mol/L的NaCl溶液洗脱，并收集所述的0.2至1 mol/L的NaCl溶液洗脱产物；所述的洗脱产物分子量为10kDa至16kDa。
3.根据权利要求2所述的海洋硫酸酯化糖胺聚糖SE-3的制备方法，其特征在于所述的梯度洗脱的截留相对分子质量为3500，流速为0.5至3 mL/min。
4.根据权利要求2所述的海洋硫酸酯化糖胺聚糖SE-3的制备方法，其特征在于所述的酶解法为两步酶解法，具体为按料液质量体积比1:10至1：30加入蒸馏水，40℃下磁力搅拌，使墨汁均匀分散后先采用木瓜蛋白酶提取1h～3h，加酶量1%～2%，提取温度55～65℃，pH为6.5～7.5；接着采用胰蛋白酶水解1h～3h，提取温度55～65℃，pH8～10，加酶量0.1～0.5%；提取完后调pH至中性后加热灭酶；后调节pH至5～6.8，静置使黑色素沉淀后3000～10000 rpm 离心10～20min，取上清调节pH至中性后浓缩至原体积的1/10～1/20，使用终浓度为70～80%的乙醇进行沉淀。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410251864.0A CN104004109B (zh) | 2014-06-09 | 2014-06-09 | 海洋硫酸酯化糖胺聚糖se-3及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410251864.0A CN104004109B (zh) | 2014-06-09 | 2014-06-09 | 海洋硫酸酯化糖胺聚糖se-3及其制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104004109A CN104004109A (zh) | 2014-08-27 |
| CN104004109B true CN104004109B (zh) | 2016-08-31 |
Family
ID=51365035
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201410251864.0A Active CN104004109B (zh) | 2014-06-09 | 2014-06-09 | 海洋硫酸酯化糖胺聚糖se-3及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104004109B (zh) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105372193A (zh) * | 2015-12-02 | 2016-03-02 | 西南科技大学 | 一种铬酸酐中硫酸根检测方法 |
| CN111320707B (zh) * | 2020-03-31 | 2021-09-24 | 大连工业大学 | 一种虾夷扇贝裙边多糖及其提取方法和应用 |
| CN115919890A (zh) * | 2022-07-08 | 2023-04-07 | 南方医科大学顺德医院(佛山市顺德区第一人民医院) | 乌贼墨多糖在制备治疗皮肤光老化的药物中的应用 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0491028A (ja) * | 1990-08-07 | 1992-03-24 | Aomori Pref Gov | 抗腫瘍剤 |
| CN101077891A (zh) * | 2007-06-26 | 2007-11-28 | 山东大学 | 一种乌贼墨多糖硫酸化衍生物及其制备方法 |
| CN103012615A (zh) * | 2013-01-08 | 2013-04-03 | 广东海洋大学 | 一种高效提取乌贼墨酸性多糖的方法 |
-
2014
- 2014-06-09 CN CN201410251864.0A patent/CN104004109B/zh active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0491028A (ja) * | 1990-08-07 | 1992-03-24 | Aomori Pref Gov | 抗腫瘍剤 |
| CN101077891A (zh) * | 2007-06-26 | 2007-11-28 | 山东大学 | 一种乌贼墨多糖硫酸化衍生物及其制备方法 |
| CN103012615A (zh) * | 2013-01-08 | 2013-04-03 | 广东海洋大学 | 一种高效提取乌贼墨酸性多糖的方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 乌贼墨多糖提取工艺优化;吴金龙等;《食品工业科技》;20110731;第32卷(第7期);第289-292页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN104004109A (zh) | 2014-08-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN105001352B (zh) | 一种β‑1,3/1,6‑葡聚糖及其制备方法和在制备免疫增强和抗肿瘤的药物和功能性食品中的应用 | |
| CN102336840B (zh) | 一种三股螺旋银耳多糖及其制备方法和应用 | |
| CN108727509B (zh) | 一种毛竹笋壳阿拉伯半乳聚糖及其制备和用途 | |
| CN104498564A (zh) | 一种低分子量硫酸软骨素的制备方法 | |
| CN105985451B (zh) | 一种当归酸性多糖组分及其提取方法与应用 | |
| CN104004109B (zh) | 海洋硫酸酯化糖胺聚糖se-3及其制备方法 | |
| CN101445565A (zh) | 一种杜氏盐藻多糖的分离纯化方法 | |
| CN105924544A (zh) | 一种高硫酸化硫酸软骨素及其制备方法与应用 | |
| CN110916198A (zh) | 一种利用黄秋葵发酵酒酒渣同时制备果胶多糖和黏性糖蛋白的方法 | |
| CN114591448A (zh) | 一种桑树桑黄子实体甘露半乳聚糖及其制备和用途 | |
| CN113717296B (zh) | 一种杜仲酸性多糖、提取方法及其在制备抗结肠癌药物中的应用 | |
| CN109400741A (zh) | 一种灵芝孢子多糖的分离纯化方法 | |
| CN107987179B (zh) | 一种低硫酸化岩藻半乳聚糖在制备免疫增强剂中的应用 | |
| CN103382229A (zh) | 一种具有免疫调节作用的新型海胆黄多糖的制备方法及结构鉴定 | |
| CN111607010B (zh) | 一种具有免疫调节活性的浒苔多糖及其制备方法 | |
| CN103193895A (zh) | 一种具有α-1,3-葡聚糖主链的毛蚶多糖及其制备方法和用途 | |
| CN103275237A (zh) | 一种茄枝多糖的制备方法及其应用 | |
| CN104055702B (zh) | 一种皮肤抗敏保湿剂 | |
| CN112794925B (zh) | 一种阳春砂多糖及其制备方法和应用 | |
| Thu et al. | Effect of sulfation on the structure and anticoagulant activity of ulvan extracted from green seaweed Ulva reticulata | |
| CN1560086A (zh) | 一种高硫酸根含量岩藻聚糖硫酸酯的制备方法 | |
| CN103755828A (zh) | 灵芝孢子多糖、制备方法和应用 | |
| Li et al. | Study on the chemical composition analysis from green pine algae | |
| CN116854835B (zh) | 高免疫活性的乙酰化龙眼水溶性葡聚糖及制备方法和用途 | |
| Dong et al. | Comparative studies on fucoidan yield, monosaccharide and hypolipidemic activity from complex enzymes and water method |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant |