CN1259340C - 作为免疫原治疗过敏症的肽组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了肽，它们含有与IgEε重链第三恒定区的一部分同源的一端序列，该序列共价连接(1)一种载体蛋白质，或(2)一种辅助T细胞表位，以及任选的其它免疫刺激序列。本发明提供了该肽作为免疫原的应用，用于在哺乳动物中诱导产生高效价多克隆抗体，其特异于IgEε重链上的目标效应位点。该肽期望在药物组合物中有用，提供对IgE-介导的过敏症的免疫治疗。

Description

作为免疫原治疗过敏症的肽组合物
                        发明领域
本发明涉及肽结合组合物作为免疫原的应用，其中包含的每种肽偶合物包括一种位于IgEε重链的第三恒定区(CH3)的目标抗原位点，所述目标抗原位点共价连接(1)通过化学偶联的一种载体蛋白质，或(2)通过化学偶联或通过直接合成的一种辅助T细胞表位和其他免疫刺激序列，用于治疗过敏。
更具体地说，本发明涉及应用该肽结合组合物作为免疫原在哺乳动物包括人中诱导产生高效价的特异于IgEε重链结构域上的目标效应物的多克隆抗体，还涉及该组合物作为药物的应用，为IgE-介导的过敏症提供免疫治疗。
                        发明背景
在人和其他哺乳动物的免疫系统中，IgE介导I型超敏反应。它是对某些食物、药物和环境过敏原产生的过敏应答，其表现为以下症状，过敏性鼻粘膜炎、哮喘、过敏性皮炎、和过敏反应。目前治疗过敏症的方法仅存在有限的应用，即试图用已鉴定的过敏原使遗传性过敏症个体脱敏或者试图用治疗性化合物改善正发作的过敏反应。基于过敏原的脱敏免疫治疗的缺陷包括难以鉴定相关过敏原和应用已鉴定过敏原常导致不利反应(世界卫生组织和国际免疫学联合会工作组，柳叶刀，1989；i：259-261)。缓解过敏症的其他治疗为应用治疗化合物阻断导致过敏反应的急性炎性级联反应。这些化合物包括抗-组胺剂、解充血剂、β2拮抗剂和皮质类固醇。抗-组胺剂、解充血剂、和β2拮抗剂在过敏性级联反应中作用于IgE活动的下游，使它们成为针对过敏症状的缓解性治疗，而不是必须作用于更靠近IgE介导的过敏反应的初始活动的预防性治疗。这些缓解治疗提供短期和部分缓解，且常伴随不利副作用。一些患严重过敏症的患者用皮质类固醇治疗有效。类固醇治疗减轻炎症，但存在广泛的免疫抑制。
为了避免已知治疗药物的缺点，更值得通过选择靶向IgE的干扰因素防止过敏应答。与其他免疫球蛋白一样，IgE具有两个重链和两个轻链。ε重链具有五个结构域，一个可变VH区和恒定区CH1到CH4。IgE分子的两条ε链的恒定区联合起来包括IgE的恒定区或Fc区。IgE循环并通过IgE Fc区上的位点吸附于效应细胞例如嗜碱细胞和巨细胞，结合在细胞表面的高亲合性FcεRI受体。在一种过敏应答中，过敏原(例如，花粉、灰尘螨虫蛋白质、跳蚤抗原)结合于巨细胞或嗜碱细胞-结合IgE可变区上的抗原结合位点。该作用使IgE分子和FcεRI受体交联。IgE-抗原复合物由此发出信号使巨细胞和嗜碱细胞脱粒，同时释放组胺和其它炎性介质。这些介质产生过敏症状，上调IgE的产生，同时加深对过敏原的敏感性(Davis等，Springer Semin Immunopathol，1993；15：51-73)。
曾有报道可以通过给予抑制IgE与巨细胞和嗜碱细胞结合的干扰，可以治疗过敏性疾病。例如，已经研究将相应于IgE Fc上各种位点的合成肽作为IgE与FcεRI受体结合的竞争性抑制物。研究者已经假定该肽作为影响IgE与FcεRI受体结合的IgE上位点的拮抗剂，并作为结合位点的图谱部分。
竞争性抑制IgE肽和下面包括非-人IgE肽类似物的所有IgE肽的氨基酸残基按照Dorrington和Bennich给出的对人IgE的编号索引(免疫学综述(Immunol Rev)，1978；41：3-25，还可以从国际互联网站点http：/www.pdb.bnl.gov/pdb.bin/pdbids得到)。人序列在本文SEQ IDNO：1中列出，编号入表1所示。狗、大鼠和小数序列的IgE同源物也在表1中列出，分别列为SEQ ID NOS：2、3、和4。动物序列与人IgE对照显示。人IgE中以及来自其它物种的同源物的各氨基酸位置在本文中按照表1所示的氨基酸序列的编号系统确定，除非领有说明。
Helm等(自然，1988：331：180-183)显示一种跨越人IgE的C-末端CH2和N-末端CH3区、IgE的氨基酸301-376、长度为76个氨基酸的重组多肽通过竞争性抑制降低IgE与人巨细胞的结合。其它研究报道，仅CH3区参与结合FcεRI。例如，相应于人序列氨基酸401-415的大鼠序列肽(表1)抑制大鼠IgE与大鼠巨细胞的结合(Burt和Stanworth，欧洲免疫学杂志，1987；17：437-440)。来自人IgE残基419-463的肽防止大鼠巨细胞敏感(Nio等，FEBS Lett，1992，314：229-231)。Jardieu和Presta(WO 93/04173)报道CH3和CH4区的肽同源物，其可以包括氨基酸373-390，420-428，446-453，及邻近区，其差别性结合FcεRI受体。然而，这些肽需要高浓度，以获得对IgE结合的有效抑制。这些高浓度会因有造成剂量过高而导致明显的生理反应，不具治疗实用性。
抗-IgE抗体也已应用于对IgE上参与结合FcεRI受体的位点作图的方法。用针对各种IgE Fc结构域的小鼠单克隆抗体的研究揭示特异于CH3结构域的抗-IgE单克隆抗体抑制IgE与其高度亲合受体的结合(Baniyash等，分子免疫学，1988；25：705-711；和Stadler等，ImmunolCell Biol，1996；74：195-200)。这些单克隆抗体研究与早先应用多克隆抗肽抗体对可能参与受体结合的位点作图的研究一致。例如，特异于IgE氨基酸401-415的兔抗体(Burt等，分子免疫学，1987；24：379-389)，和氨基酸355-368(Robertson和Liu，分子免疫学，1988；25：103-113)显示对未结合的IgE具有特异性，但与受体-结合IgE的反应性很差。
含有来自狗IgE氨基酸356-479的至少五个连续氨基酸的大类IgE肽片段对于制备用于诊断狗体内过敏症的抗体是有用的(JP9179795，1997)。这些结果提示了狗ε链CH3结构域中表面暴露的效应位点，但没有该效应位点的指教，也没有公开抗-IgE抗体的治疗应用。
这些表位作图研究证明十分一致地证明ε重链的CH3结构域可以作为抑制IgE与嗜碱细胞和巨细胞结合的作用的目标。然而，各种研究对于CH3上最有用位点的精确定位非常不一致。用位点特异性抗体对IgE的交叉抑制研究(例如，Burt等，1987)结果通常被牵强地解释为ε链上FcεRI结合位点的精确位置。这些交叉抑制研究的解释是有限制的，因为它不能假定抗体识别位点等于配体结合位点。抗体可能通过直接与所需目标位点结合而抑制，但他们也可以战局非连续效应位点，通过空间障碍或引入构象改变来抑制配体结合。
因此，表位作图研究提供了经验观察，但没有解决CH3结构域中高亲合受体的结合位点。在缺乏明确定义的结合位点的情况下，没有方法可用于可靠的预期具有对效应位点(其直接或不直接参与结合至FcεRI)具免疫交叉反应的潜在治疗性合成免疫原。
而且，在缺乏IgE的X-衍射晶体图谱数据的情况下，IgE的可利用的结构模型不足以用来可靠地预测适合抗-IgE的干扰作用的IgE上的位点。基于IgG的经暴露的三维结构的分歧结构已作为IgE、以及与IgE和其高亲合受体之间相互作用有关的IgE的CH2/CH3区的模型。这些模型推测了涉及与IgE分子的线性非-邻接残基接触位点的各种构象依赖性结构。位点的某些模型提示了同一ε链上非连续位点之间由分子间二硫键结合环(Helm等，欧洲免疫学杂志，1991，21：1543-1548)或通过静电作用力维持的分子间环(Presta等，生物化学杂志(J BiolChem)1994，269：26368-26373)介导的相互作用。其它模型推测IgE分子的二聚体ε链的片段之间分子内相互作用。事实上，实验观察表明潜在接触点包括ε链CH3结构域上的几个散在和不连续位点，其明白地指出FcεRI结合位点的三级结构不能用模型来容易地解决(Helm等，1988；Baniyash等，1988；和Presta等，1994)。因此，关于有用的合成肽拮抗剂和模拟IgE上效应位点的免疫原还没有理论模型公开。在缺乏X-射线结晶图谱确定的IgE的结构的情况下，该有用的肽位点仅能通过经验实验得到。
用特异性抑制IgE与嗜碱细胞和巨细胞上的高亲和受体结合的抗-IgE抗体治疗过敏症的概念已有报道(Stadler等，1996；Davis等1993)。该抗-IgE抗体为致过敏性的(交叉联结)或是非致过敏性的(非交叉联结)。大部分这类抗IgE抗体为致过敏性的。它们将IgE结合和交联到嗜碱细胞和巨细胞表面，引发过敏症的药物介质的释放。该交联可能导致过敏反应和死亡。
因此，以抗IgE抗体治疗过敏性疾病是具决定性的。某些非致敏性抗体保留对ε链CH3区域的特异性，不会交联细胞-结合IgE，因而显示对IgE-介导组胺释放的抑制活性(Davis等，1993；Stadler等，1996)。Rup和Kahn(U.S.4940782)报道该非致敏性单克隆抗体可与游离的大鼠IgE反应，但不与结合至大鼠巨细胞FcεRI受体的IgE反应。更显著的是，其抑制大鼠巨细胞的致敏作用。这些对人IgE具同源特异性的非致敏性抗体也抑制相同作用模式的致敏作用。这些抗-人IgE抗体结合游离的血清IgE，结合B细胞结合IgE，但不能结合与嗜碱细胞和巨细胞高亲合受体结合的IgE，并且防止人细胞的致敏作用。推测这些抗体通过对结合受体的IgE上的位点的特异性发生作用(Rup和Kahn，US4940782；Davis等，1993；Chang，US5420251；Presta等，免疫学杂志，1993；151：2623-2632)。另外，还发现一种具有不同特异性的非致敏性抗-人IgE单克隆抗体也中和游离IgE(Rudolf等，免疫学杂志，1996；157：5646-5652)。该抗-IgE不直接与受体结合位点结合，因为它也识别FcεRI-结合IgE。看起来它的作用在于通过改变受体对游离IgE结合的热力学平衡降低嗜碱细胞的致敏作用。
因此，直接结合FcεRI结合位点的抗-IgE抗体和在其它效应位点干扰与FcεRI结合的抗-IgE抗体均可阻断游离IgE导致的巨细胞和嗜碱细胞的致敏作用。这些潜在的免疫治疗抗体将CH3看作是与高亲合IgE Fc受体相互作用的IgE结构域，这与以前作图研究结果抑制。然而，结合位点的更精确鉴定，以及可选择的有用效应位点例如Rudolf等描述的效应位点仍然不很清楚。Rudolf等也应用了一种噬菌体表现文库鉴定了结合它们的抗-IgE单克隆抗体的mimotope肽；然而，肽mimotope与人IgE的一级氨基酸序列不具有同源性(Rudolf等，免疫学杂志，1998；160：3315-3321)。
对FeεRI受体位点具有表观特异性的人源化单克隆抗-IgE抗体正处于通过被动免疫治疗人过敏症的临床研究中(MacGlashan等，免疫学杂志，1997；158：1438-1445)。已经发现，注入抗体，rhuMAb-E25，降低患者IgE血清浓度，下调效应细胞上IgE受体的表达，降低过敏原激发的过敏性致敏作用，并改善哮喘合过敏性鼻粘膜炎的症状。该抗体表现良好的安全曲线。临床实验结果证实了抗-IgE研究用于治疗过敏症的可靠性。但该治疗模式还存在下述问题：通过抗-IgF进行的免疫治疗通过被动免疫实现，即通过注入抗体实现。该抗体必须以足够高的剂量和足够高的频率经不方便的静脉内或皮下途径施用，以获得抗体的连续药理有效浓度。该有效剂量由患者体重、循环中游离IgE的基础水平、和给药途径确定。在最近的临床实验中，治疗效果所需的稳态浓度通过两周剂量获得，通过随后的双周剂量维持。对于一个典型过敏症患者，治疗全过程总共耗费2000-3000mg的人源化抗体，需要七到十次不方便的静脉内给药(MacGlashan等，1997；155：1835-1840)。在医院环境中该抗体量的耗费和花销以及多次注入的不方便，说明该治疗对于大多数患者是太昂贵了。
单克隆抗体rhuMAb-E25临床有效性证实了通过被动施用抗-IgE的免疫治疗的可靠性。还提供了一种替换的经主动免疫进行的抗-IgE研究的基本原理，不管该免疫原是否和何时可以被设计出来。
用IgE免疫原主动免疫进行的抗-IgE治疗，即通过抗内源性IgE的“接种”，将在花费和方便程度是优选的。抗IgE的“接种”提供了超越被动免疫的优点：少量低价免疫原，不频繁施用，以及通过肌肉注射方便施用，并且不必定制与受体物种相容的鼠抗体，即当应用于人时去“人源化”抗体，因为该程序应用患者自身的免疫系统产生抗体。然而，虽然上述脱敏单克隆抗体可能暗示了IgE免疫原的期望，但他们没有公开安全有效免疫原的特性。该免疫原必须模拟相关IgE效应位点，具有足以诱导交叉抑制抗体的相似性，同时保留足以避免诱导非致敏性抗体的位点特异性。而且，有效的IgE免疫原必须具备高度免疫刺激性。有必要研制一种相关、安全的位点特异性、和足够免疫效力的上述免疫原。
用于过敏症免疫治疗的IgE免疫原必须是免疫刺激物，以便诱导足以降低IgE-介导的致敏作用水平的抗-IgE。该免疫原必须设计成能够克服对自身分子表现的强烈耐受。Haba和Nisnonoff(美国国家科学院科学进展1990；87：3363-3367)仅通过在从出生到第10天的很短新生时段内用IgE免疫小鼠产生有效的抗-IgE应答。超过该时间段的接种不能产生所需的自主免疫应答，除非用于免疫小鼠的IgE已经共价偶联于外源载体蛋白质，匙孔帽贝血蓝蛋白(KLH)。同时，包含融合日本血吸虫(Schistosoma japonicum)的谷胱甘肽-S-转移酶蛋白质的CH2-CH3ε链区的重组蛋白质诱导大鼠脱敏抗-IgE应答(Hellman，欧洲免疫学杂志，1994；24：415-420)。
其它研究者关心通过寻找良好位点特异性的肽IgE免疫原，使诱发非致敏性抗-IgE抗体的风险降至最低，而该IgE抗体交叉连接至已和巨细胞和嗜碱细胞表面联结的IgE。例如，将对应于IgECH4区中的位点的肽(SEQ ID NO：1的残基497-506)与KLH联结，用于诱导多克隆抗体，其有效地抑制大鼠巨细胞中IgE-介导的信号传导。然而，该肽-KLH结合物表现较差的免疫刺激能力，其必须以含高峰期免疫的兔抗血清的被动免疫大鼠疫苗来说明功效(Stanworth等，柳页刀，1990；336：1279-1281)。Stanworth等人的CH4免疫原是本发明人在那之后的工作得到的，该免疫原为一系列经合成的合成免疫原，其共价联结至混杂人T辅助细胞抗原表位。这类肽的免疫原性为经改良的，因而优越于原来的KLH-肽偶合物，但是没有提供证据显示所得的抗IgE抗体的功效(Wang，WO95/26365)。而且，如本文实施例1所示(表2，第34项)，对以前揭示的CH4效应位点具有特异性的抗肽抗体(Stanworth等，1990)对人IgE不具交叉反应性。Burt和Stanworth(1987)针对IgE-CH3 401-415肽的早期抗肽研究也提供了引发脱敏交叉反应的证据，但这也需要筛选高峰期的兔血清，并使用定义不完全的肽-载体蛋白质结合物，以通过在大鼠模型中被动免疫观察效果。还未曾证明合成肽在诱导免疫宿主产生能够抑制组胺释放的多克隆抗血清方面有效。
在得到效果和安全性足够的免疫原性和特异性合成肽免疫原之前，对上述现有技术免疫原的改进是必要的。本发明通过组合若干鉴定和设计合成肽免疫原的其它方法，实现了上述改进。这些方法包括：(1)鉴定有效目标表位的有效方法；(2)通过将B细胞目标表位于含有广泛反应性的混杂T辅助细胞(Th)表位的肽结合，增强B细胞目标表位的免疫原性的方法；(3)应用组合肽化学增强T细胞表位功能的方法，以及由此进一步适应远亲后代种群的可变免疫应答；和(4)通过引入环状限制，稳定构象特征，从而使对自身分子的交叉反应最大化。
合成肽已经被用于“表位作图”，以鉴定蛋白质表面的免疫区决定簇或表位，用于研制新疫苗和诊断试剂。表位作图应用一系列目标蛋白质上对应区域的重叠肽，以鉴定参与抗体-免疫原决定簇相互作用的位点。通常，表位作图应用长度相对较短的肽，以精确检测线性决定簇。已知最快的表位作图法是PEPSC AN，它是基于同时合成数百个偶联到固体支持物上的长度为8-14个氨基酸的重叠肽。检测偶联肽的结合抗体的能力。PEPSCAN研究在定位线性连续决定簇方面有效，但对于鉴定模拟不连续效应子位点所需的表位无效，例如HIV受体/共同-受体结合位点(Meloen等，Ann Biol.Clin.，1991，49：231-242)。一种替代方法依赖于一系列长度范围从15-60个残基不等的嵌套重叠肽合成物。这些较长的肽是可靠的，但需要通过一系列独立的固相肽合成法繁琐地合成，而不是通过快速和同步PEPSCAN合成。得到的一系列嵌套重叠肽然后可以用于在例如实验免疫和中和感染系统中分析抗体结合，以便鉴定包括简单不连续表位的最佳呈递的免疫结构域决定簇。该方法通过Wang等关于来自HTLV I/II(US 5476765)和HCV(US5106726)的免疫结构域位点作图研究示例说明。它被用于选择gp120序列上HIV中和表位最佳出现的精确位置(Wang等，科学，1991，254：285-288)。
肽免疫原通常比蛋白质更柔韧，不易保持任何优选结构。因此通过引入环形限制来稳定肽免疫原是有用的。一种准确环化的肽免疫原可以模拟和保守目标表位的构象，由此诱导真正分子上与该位点具有交叉反应性的抗体(Moore，合成肽第二章：用户指南，ed.Grant，WHFreeman and Company：New York，1992，pp/63-67)。
影响来源于受体/共同受体复合物的肽免疫原的免疫原性的另一个重要因素是通过与宿主T-辅助细胞受体和第II类MHC分子反应的T辅助细胞表位将该肽呈递给免疫系统(Babbitt等，自然，1985，317：359-361)。T-辅助表位(Th)通常由载体蛋白质提供，由于难于生产准确限定的肽-载体结合物、大多数抗体对载体应答的错误指向、以及载体诱导的表位抑制使所述载体蛋白质同时存在缺点(Cease，InternRev Immunol，1990，7：85-107；Schutze等，免疫学杂志，1985，135：2319-2322)。或者，T细胞辅助可以通过含有Th位点的合成肽提供。因此，被称为混杂Th的Th表位诱导有效的T细胞辅助，并能够与自身具备很低免疫原性的合成B细胞表位混合，以产生强效肽免疫原(US5759551)。设计良好的混杂Th/B细胞表位嵌合肽能够在表现多样性MHC单倍体的遗传多样性种群的大多数成员中诱导Th应答以及随之而来的抗体应答。混杂Th可以通过来源于强效外源性抗原的特异性序列提供，例如麻疹病毒F蛋白、乙型肝炎病毒表面抗原、和沙眼衣原体主要外膜蛋白(MOMP)。一些已知的混杂Th已经显示在强化相当于十肽激素的低免疫原性肽方面是有效的(US 5759551)。
来源于外源病原体的混杂Th表位包括例如，但不限于，乙肝表面抗原和核心抗原辅助T细胞表位(HBsTh和HBcTh)，百日咳毒素辅助T细胞表位(PT Th)，破伤风毒素辅助T细胞表位(TT Th)、麻疹病毒F蛋白辅助T细胞表位(MVF Th)、沙眼衣原体主要外膜蛋白辅助T细胞表位(CT Th)、白喉毒素辅助T细胞表位(DT Th)、镰状疟原虫环孢子体辅助T细胞表位(PF Th)、曼森氏血吸虫三糖磷酸盐异构酶辅助T细胞表位(SM Th)，及大肠杆菌TraT辅助T细胞表位(TraT Th)。病原体衍生的Th在US 5759551中的SEQ ID NOS：2-9和42-52列出；衣原体辅助位点P11在Stagg等，免疫学，1993，79：1-9中列出；HBc肽50-69在Ferrari等，临床研究杂志，1991，88：214-222中列出。
混杂Th表位长度范围为约15约50个氨基酸残基(US 5759551)，通常具有共同的结构特征，可以含有特异性标志序列。例如，共同特征是两性分子螺旋，它是疏水氨基酸残基占据螺旋一面，带电荷和极性残基占据周围面的α-螺旋结构(Cease等，美围国家科学院科学进展，1987，84：4249-4253)。表位通常含有其它的一级氨基酸模式，例如一个Gly或带电荷残基后跟随两到三个疏水残基，其后依次跟随一个带电荷或极性残基。该模式描述了一种被称为Rothbard序列的模式。另外，表位通常遵循1、4、5、8原则，其中一个带阳性电荷的残基后第四位、第五位和第八位跟随疏水残基，与1、4、5、8位定位在同一侧上的两性螺旋一致。因为所有这些结构由共同的疏水、带电荷和极性氨基酸构成，所以各结构能够在同一个Th表位中同时存在(Partidos等，遗传病毒学杂志(J Gen Virol)，1991，72：1293-99；Alexander等，免疫学，1994，1：751-761)。即使不是全部，但大多数混杂T细胞表位含有至少一个上述周期性。这些特征可以被插入“理想化人Th位点”的设计。
有用的Th位点还可以包括组合的Th，其将选择的简并位点插入理想化的Th位点的设计中。在Wang等(WO 95/11998)中，一类特别组合表位被称之为“构建的合成抗原文库”或SSAL。构建如SSAL表位的Th由组织围绕一种不变残基的结构框架的位置取代物组成。SSAL的序列通过排列混杂Th的一级氨基酸序列确定，在构成Th肽独特结构的位置上保留相对不变的残基，并在与识别多变性MHC限制元件有关的位置上提供简并性。MHC-结合基因座的不变和可变位置以及优选氨基酸列表已有公开(Meister等，疫苗，1995，13：581-591；Alexander等，免疫学，1994，1：751-761)。
SSAL的所有成员在一个单一固相肽合成中与目标B细胞表位和其它序列同时产生。Th文库序列保留了混杂Th的结构基因座并提供对广泛单倍体的反应性。例如，从麻疹病毒F蛋白质中得到一种混杂表位之后，模拟被描述为SSAL1TH1的简并Th表位(Partidos等，1991)。SSAL1TH1与LHRH目标肽一同应用。象麻疹表位一样，SSAL1TH1遵循Rothbard序列和1、4、5、8规则：
1                 5                  10                  15
Asp-Leu-Ser-Asp-Leu-Lys-Gly-Leu-Leu-Leu-His-Lys-Leu-Asp-Gly-Leu
Glu Ile     Glu Ile Arg     Ile Ile Ile     Arg Ile Glu     Ile
    Val         Val         Val Val Val         Val         Val
    Phe         Phe         Phe Phe Phe         Phe         Phe
将带电荷残基Glu或Asp加在位置1，以增加Th疏水侧周围的电荷。然后在两性螺旋疏水侧的2、5、8、9、10、13和16位保留疏水残基，2、5、8、9、10、13和16位的可变性提供了一种具有结合广泛MHC限制元件能力的表面。SSAL特征的静作用在于增大了人工Th的免疫抑制的范围(WO 95/11998)。
用上述肽技术和肽设计元件，即精确的表位图谱、环状限制、插入混杂Th表位或理想化的混杂Th、以及理想化的SSAL Th表位设计的肽免疫原是本发明的有效合成肽IgE免疫原的基础。由于通过优化定位和环化作用提供IgE效应位点的有效呈递，使得这种肽的适当靶向作用和安全性是优选的，并且由于广泛反应性Th应答，使得它们的免疫效力是优选的。
                        发明概述
本发明提供了新的合成肽结合组合物，用于通过主动免疫治疗IgE-介导的过敏症。该免疫在接种宿主中诱导产生高效价特异于IgE效应位点的非-致敏性多克隆抗体。随后防止巨细胞/嗜碱细胞的激发和活化，下调IgE合成。
用肽组合物接种宿主进行治疗，其中包含的每种肽含有一个从人IgEε重链CH3区片段(例如，SEQ ID NO：1的氨基酸413-435或SEQID NO：5)或其它物种的同源序列(例如SEQ ID NOS：6-8HE 84)修饰得到的目标抗原肽序列(本发明称为“IgE-CH3区抗原”或“IgE-CH3区抗原肽”)。
通常，IgE-CH3区抗原是一种长度约为25至约29个氨基酸之间的肽序列，其基本上与上述哺乳动物IgE抗体ε重链CH3区的片段同源，含有由约23个氨基酸残基分隔开来的两个半胱氨酸残基。在本发明重，基本上同源意味着除了两个半胱氨酸残基，还可以插入或取代高达约四个其它氨基酸取代(优选保守取代)。
优选，目标位点从下面的天然IgE序列修饰得到：
(1)将一个半胱氨酸残基插入413位或同源位置的N-端侧，除非天然序列的413位或414位已经存在半胱氨酸；
(2)将天然目标序列415位到434位的所有肽天然半胱氨酸进行保守取代(优选取代为丝氨酸)；
(3)在435位或同源位置的C-端一侧插入半胱氨酸，除非天然序列的435位或436位已经存在半胱氨酸；和
(4)在保留的半胱氨酸之间形成二硫键，从而产生环状结构。该结构还可以含有来自IgE413-435片段任意末端的1-5个附加氨基酸，只要保留单一二硫键环形结构。
本发明提供了一种人IgE的优化的IgE-CH3区抗原肽，其具有如下序列：
Cys-Gly-Glu-Thr-Tyr-Gln-Ser-Arg-Val-Thr-His-Pro-His-Leu-Pro-Arg-Ala-Leu-Met-Arg-Ser-Thr-Thr-Lys-Cys(SEQ ID NO：5)。人IgE目标位点通过一个非天然末端半胱氨酸和由天然序列的丝氨酸残基取代成的一个半胱氨酸残基环化而成。由含有该IgE-CH3区抗原的肽免疫原诱导的抗体与人IgE交叉反应，并通过人IgE抑制人嗜碱细胞的致敏作用。
或者，可以从相关物种的同源ε链片段衍生其它物种IgE的相应目标位点。例如，该目标序列可以来自于狗、大鼠和小鼠的ε序列，如表1所示(SEQ ID NOS：2、3和4)，或者Navarro等(分子免疫学，1995，32：1-8)提供的马的IgE-CH3序列。可以从这些序列得到其它IgE-CH3区抗原肽(SEQ ID NOS：6、7、8、和84)。
优选地，本发明的IgE-CH3区抗原共价联结一种化学偶联的载体蛋白质，或者经共价联结一种直接合成的合成免疫刺激元件，例如混杂Th表位而变得更具免疫原性。已经公开了载体蛋白质和免疫刺激元件的具体实例，例如，匙孔帽贝血蓝蛋白(KLH)载体，人工Th(SEQID NO：9)、人工SSAL Th(SEQ ID NOS：10和11)、病原体来源的Th(SEQ ID NO：12)、以及来自耶尔森氏鼠疫杆菌的免疫刺激侵染素肽(Inv)(SEQ ID NO：13)。
本发明的完全合成肽偶合物可以由于式表示：
(A)n-(IgE-CH3区抗原)-(B)o-(Th)m-X
               或
  (A)n-(Th)m-(B)o-(IgE-CH3区抗原)-X
                或
(A)n-(B)o-(Th)m-(B)o-(IgE-CH3区抗原)-X
                或
   (IgE-CH3区抗原)-(B)o-(Th)m-(A)n-X
                或
   (Th)m-(B)o-(IgE-CH3区抗原)-(A)n-X
其中：
各A独立地为一种氨基酸，或一种一般性免疫刺激肽；
各B选自氨基酸，
-NHCH(X)CH2SCH2CO-、-NHCH(X)CH2SCH2CO(ε-N)Lys-、
-NHCH(X)CH2S-琥珀酰亚胺基(ε-N)Lys-、和
-NHCH(X)CH2S-(琥珀酰亚胺基)-；
各Th独立地为一个构成辅助T细胞表位的氨基酸序列，或其免疫增强类似物或其片段；
IgE-CH3区抗原是一种长度约为25到约29个氨基酸之间的肽，其基本上与由SEQ ID NOS：5-8和84表示的哺乳动物IgE抗体ε重链CH3区的片段之一同源，并含有由约23个氨基酸残基分隔开来的两个半胱氨酸残基；
X为一个氨基酸的α-COOH或α-CONH2；
n为从0到约10；
m为从1到约4；和
o为从0到约10的数。
更具体地说，IgE-CH3区抗原选自SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQID NO：8、来自哺乳动物IgE-CH3抗体ε重链的同源序列、及其交联反应性和免疫功能类似物。
本发明的肽组合物包括长度约为25-约100个氨基酸残基，优选约25约80个氨基酸残基，更优选约45到约65个氨基酸残基的肽免疫原。
还提供了佐剂和/或传送载体和常规加入疫苗制剂的其它成分，以及给要说明，以便产生针对目标IgE效应位点的免疫治疗抗体。其随后抑制循环IgE对嗜碱细胞和巨细胞的致敏作用，由此防止IgE-过敏原复合物对巨细胞/嗜碱细胞的激发和活化。该由抗体介导、由本发明的肽组合物诱导的抑制机制将特异性地减少或消除IgE-介导的病理作用，同时使免疫系统的防御成分，例如IgG，不被影响。
                        发明详述
本发明涉及一种新的肽和肽结合组合物，用于产生特异于IgE Fc部分第三区，即ε链的CH3区上目标效应位点的高效价多克隆抗体。
为了方便起见，本文使用的术语“肽偶合物”指含有Th表位共价连接于IgE-CH3区抗原肽的分子，其通过常规肽键从而形成一个较人肽，或通过共价连接其它形式的分子。
本发明组合物的高度位点特异性使能够交联结合于嗜碱细胞/巨细胞表面FcεR1的二价IgE的抗-IgE抗体的产生最小化，由此诱导非致敏性抗-IgE抗体的产生。因此，本发明进一步涉及一种治疗哺乳动物包括人IgE-介导的过敏症的安全方法。
通过全程筛选人IgE CH2和CH3区上有用的免疫反应性候选位点确定目标抗原序列。Helm等(1988)和Presta等(1994)公开：从IgECH2区羧基端区域开始，通过CH3区的一段长区域含有潜在的效应位点，在其基础上选择CH2和CH3位点用于合成肽免疫原。按照Brookhaven国家实验室在国际互联网上的地址http：//www.pdb.bnl.gov/pdv.bin/pdbids和Helm等的报道(欧洲免疫学杂志，1991：21：1543-1548)提供的人IgE的三维结构理论模型推测在IgE构象中存在潜在的环结构。将二硫键合环整合到选择的肽免疫原的设计中，从而模拟预测环的状况，以使设计出的目标抗原肽和自身IgE分子之间的交叉反应性的可能性变为最大。合成潜在的目标抗原位点，通过固相肽合成化学偶联于KLH赋予其免疫原性，或者通过连续合成共价连接于混杂Th表位和其它免疫刺激序列(表2)。将几个位点合成为整合有特定二硫键的环状肽，从而将可变肽稳定成为组装了预测的IgE环结构的构象。然后制备超免疫血清，检测抗血清与人IgE的交叉反应性，鉴定潜在有用的效应目标位点。从血清中纯化对人IgE具有高度交叉反应性的抗体，并在体外分析组胺释放，评价所述抗体抑制IgE介导的人嗜碱细胞的致敏作用的能力。由包含SEQ ID NO：5的肽诱导的抗-肽抗体表现对IgE的强烈交叉反应性(表2)，与在组胺释放分析中表现的高度抑制活性大部分一致(表3)。SEQ ID NOS：14和15的肽共有的目标表位对应于表1所示的IgE CH3区的片段。表1排列显示了人IgEε重链的CH2、CH3、和CH4区与来自狗、大鼠、和小鼠同源序列的氨基酸序列。确定对于本发明的IgE-CH3区抗原有用的人ε链序列上的目标位点在表1中以下划线表示，包括人ε链残基413-435。在表1中狗、大鼠、和小鼠蛋白质的同源目标序列也以下划线表示。马的同源序列为Navarro等(分子免疫学，1995，32：1-8)氨基酸序列的残基296-318。
本发明的下划线的目标IgE CH3效应位点、和衍生的IgE-CH3区抗原肽是短肽序列，当合成它们本身时，通常免疫原性较差活没有免疫原性，远不能作为自身抗原。可以将这些短肽化学偶联于一种载体蛋白质，例如匙孔帽贝血蓝蛋白(KLH)以使其免疫增强。该基于“IgE-CHE区抗原-载体蛋白质”的免疫原的不利之处在于，与大载体蛋白质相比抗原的免疫原性较差，这是一个与肽-载体蛋白质结合物有关的固有问题。该结合物产生的大部分抗体是针对载体蛋白质的无功能抗体。本发明的优选免疫原是完全合成肽，其使无关抗体的产生最小化，由此诱导更集中针对目标IgE-CH3区抗原，例如SEQ ID NOS：5-8和84的免疫应答。
然而，因为本发明的短IgE-CH3区抗原肽(例如，SEQ ID NOS：5-8和84)是非-免疫原性T细胞-依赖性表位，它们依赖于非固有Th表位的免疫原性。本发明提供的优选肽共价连接于混杂Th表位。本发明的免疫原诱导位点特异性免疫反应，从而精确地靶向效应位点，由此产生非-交联性抗-IgE抗体。得到的位点特异性抗体抑制致敏作用和过敏性应答，但不诱导同时进行的脱粒作用。
本发明提供了作为本发明免疫原性肽偶合物的实施方式的具体实施例。这些实施例提供了合成的免疫刺激元件与IgE-CH3区抗原肽(例如SEQ ID NOS：5-8和84)的连接，从而在遗传多样性宿主种群中产生针对IgE CH3区目标位点的广泛的强效交叉反应性抗体。这些抗-IgE抗体是非致敏性的，特异性地针对IgE(实施例2和3)。这些抗体，随后导致组胺释放的抑制，减小IgE-介导的应答，从而产生对IgE-介导的过敏症的有效治疗和/活预防。
对于主动免疫，本发明所说的术语“免疫原”涉及肽结合组合物，其能够诱导抗IgE ε重链第三区上存在的效应位点(例如，SEQ IDNOS：5-8和84)的抗体，导致IgE-介导的嗜碱细胞和巨细胞脱粒的抑制。本发明的肽组合物包括IgE-CH3区抗原肽，优选经化学偶联连接于载体蛋白质，更优选IgE-CH3区抗原肽经化学偶联连接混杂辅助T细胞表位(Th表位)，最优选含有IGE-CH3区抗原序列和混杂辅助T细胞表位(Th表位)序列的完全合成肽。
优选通过一种间隔区(例如，Lys-Lys-Lys)经化学偶联将载体蛋白质共价连接于IgE-CH3区抗原肽。优选用一种间隔区(例如，Gly-Gly)将Th肽(例如，SEQ ID NOS：9-12)通过化学偶联或优选通过直接合成共价连接于IgE-CH3区抗原肽(例如，SEEQ ID NOS：5-8和84)，从而使其连接于IgE-CH3区抗原序列的N-或C-末端，以便诱导有效的抗体应答。免疫原任选地还可以包括一种一般性免疫刺激氨基酸序列，例如，一种对应于来自耶尔森氏鼠疫杆菌属(Brett等，欧洲免疫学杂志，1993，23：1608-1614)(SEQ ID NO：2)侵染素蛋白质区域的序列。该一般性免疫刺激序列可以含有一种任选的间隔区，通过它与Th肽结合。
本发明的完全合成肽可以由下式表示：
(A)n-(IgE-CH3区抗原)-(B)o-(Th)m-X
                或
(A)n-(Th)m-(B)o-(IgE-CH3区抗原)-X
                或
(A)n-(B)o-(Th)m-(B)o-(IgE-CH3区抗原)-X
                或
(IgE-CH3区抗原)-(B)o-(Th)m-(A)n-X
                或
(Th)m-(B)o-(IgE-CH3区抗原)-(A)n-X
其中：
各A独立地为一种氨基酸，或一种一般性免疫刺激肽；
各B选自氨基酸，-NHCH(X)CH2SCH2CO-、-NHCH(X)CH2SCH2CO(ε-N)Lys-、-NHCH(X)CH2S-琥珀酰亚胺基(ε-N)Lys-、和-NHCH(X)CH2S-(琥珀酰亚胺基)-；
各Th独立地为一个构成辅助T细胞表位的氨基酸序列，或其免疫增强类似物或其片段；
IgE-CH3区抗原代表本发明定义的IgE-CH3抗原肽序列(或其交叉反应性和免疫功能类似物)；
X为一个氨基酸的α-COOH或α-CONH2；
n为从0到约10；
m为从1到约4；和
o为从0到约10的数。
本发明的肽免疫原含有约25至约100个氨基酸残基，优选约25约至80个氨基酸残基，更优选约25至约65个氨基酸残基。
如果A为一种氨基酸，它可以是任何非天然或任何天然氨基酸。非天然氨基酸包括但不限于D-α-氨基酸、β-丙氨酸、鸟氨酸、正亮氨酸、正缬氨酸、羟脯氨酸、甲状腺氨酸、γ-氨基丁酸、高丝氨酸、瓜氨酸等。天然氨基酸包括丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、和缬氨酸。而且，如果n大于1，二个或三个A基团为氨基酸，那么每个氨基酸可以独立地相同或不同。
如果A为一种侵染素区，则它可以是来自耶尔森氏鼠疫杆菌种侵染素蛋白的免疫刺激表位。这种免疫刺激特性来源于这种侵染素结构域与T细胞上存在的β1整联蛋白分子相互作用的能力。发现与β1整联蛋白相互作用的侵染素结构域的特定序列已经由Brett等描述(欧洲免疫学杂志，1993；23：1608)。在US 5759551中已经描述过用于连接混杂Th表位的侵染素结构域(Inv)的一种优选实施方式，其经参考插入本文。Inv结构域具有如下序列：
Thr-Ala-Lys-Ser-Lys-Lys-Phe-Pro-Ser-Tyr-Thr-Ala-Thr-Tyr-Gln-Phe(SED IDNO：13)或为来源于另一种耶尔森氏鼠疫杆菌种侵染素蛋白相应区域的其免疫刺激类似物。这种类似物还可以含有取代、删除或株系变异，只要类似物保留免疫刺激特性。免疫刺激类似物还可以含有一种任选的间隔区，通过它结合于Th表位。
在一个优选实施方式中，n为3，(A)3依次为一种侵染素结构域(Inv)、甘氨酸和甘氨酸。
(B)o任选为一种间隔区，包括上述天然或非天然氨基酸。每个B独立地相同或不同。载体蛋白质通过间隔区(例如，Lys-Lys-Lys)经化学偶联与肽共价结合。B氨基酸还可以为一种位于混杂Th表位(例如，SEQ ID NO：9)与IgE-CH3肽(例如，SEQ ID NO：5)和其交叉反应性和功能性免疫类似物之间的间隔区，例如Gly-Gly或(ε-N)Lys。除了使Th表位与B细胞表位即物理分隔，该间隔区还还可以破坏Th表位与IgE-CH3肽(例如SEQ ID NO：5)和其免疫类似物结合产生的所有人工二级结构，因此减弱了Th和/或B细胞应答之间的干扰。B的氨基酸还可以构成一种作为增强Th和IgE结构域分隔作用的柔韧性绞链的间隔区。在免疫球蛋白重链绞链区中发现了编码柔韧性绞链的序列的实例。柔韧性绞链序列通常富含脯氨酸。一种特别有用的柔韧性绞链为序列Pro-Pro-Xaa-Pro-Xaa-Pro(SEQ ID NO：9)，其中Xaa为任意氨基酸，优选为天冬氨酸。由B氨基酸提供的构象间隔使本发明的肽免疫原和合适Th细胞和B细胞之间的相互作用更为有效，由此增强了对Th表位和抗体-诱导性表位以及它们的交叉反应性和免疫功能类似物的免疫应答。
Th是一种含有Th表位的氨基酸序列(天然或非天然氨基酸)。Th表位可以由连续或不连续表位构成，因此不是Th的每一个氨基酸一定是表位的一部分。因此，Th表位，包括Th表位的类似物和片段，能够增强或刺激对IgE-CH3抗原肽(例如，SEQ ID NOS：5-8和84，及其免疫功能类似物)的免疫应答。表现为免疫结构域和混杂的Th表位在表现广泛分歧型MHC的动物和人群中具有高度和广泛的反应性(Partidos等，1991；US 5759551)。本发明肽的Th结构域约具有10到50个氨基酸，优选约具有10到30个氨基酸。当出现多重Th表位(即m≥2)，则每个Th表位独立地相同或不同。Th片段是Th表位的连续部分，其足以增强或刺激对IgE-CH3抗原肽(例如，SEQ ID NOS：5)及其免疫功能类似物的免疫应答。
本发明的表位包括，例如但不限于病原体来源的乙肝病毒表面和核心抗原辅助T细胞表位(HBs TH和HBc Th )、百日咳毒素辅助T细胞表位(PT Th)、破伤风毒素辅助T细胞表位(TT Th)、麻疹病毒F蛋白辅助T细胞表位(MVF Th)、沙眼衣原体主要外膜蛋白辅助T细胞表位(CT Th)、白喉毒素辅助T细胞表位(DT Th)、镰状疟原虫环孢子体辅助T细胞表位(PF Th)、曼森氏血吸虫三糖磷酸盐异构酶辅助T细胞表位(SM Th)，及大肠杆菌TraT辅助T细胞表位(TraT Th)。病原体来源的Th在US 5759551的SEQ ID NOS：2-9和42-52中列出；衣原体辅助位点P11在Stagg等，免疫学，1993，79：1-9中列出；HBc肽50-69在Ferrari等，临床研究杂志，1991，88：214-222中列出，它们经参考插入本文。
本发明举例的Th位点还包括称之为“Syn Th(1、2、4)”的人工Th位点(SEQ ID NO：9)，人工SSALTh位点“(1、4、9PALINDROMIC)Th”、“IS(1、4、9PALINDROMIC)LF Th”和“IS(1、4、9PALINDROMIC)LF简化Th”(SEQ ID NOS：10、11和60)、及其免疫功能类似物。功能性Th类似物包括免疫增强类似物、交叉反应性类似物和任何这些Th表位的片段。功能性Th类似物进一步包括在Th表位中的保守取代、附加、删除、和插入一到10个氨基酸残基，而基本上不改变Th表位的Th刺激功能。
本发明的合成肽通常含约50到约90个氨基酸，包括：
(a)一种免疫刺激侵染素区，
(b)一种辅助T细胞(Th)表位，和
(c)一种IgE-CH3区抗原肽。
更具体地说，本发明的合成肽免疫原由下式描述：
(A)n-(Th)m-(B)o-(IgE-CH3区抗原)-X，
(A)n-(B)o-(Th)m-(B)o-(IgE-CH3区抗原)-X，
(A)n-(IgE-CH3区抗原)-(B)o-(Th)m-X，
(IgE-CH3区抗原)-(B)o-(Th)m-(A)n-X，和
(Th)m-(B)o-(IgE-CH3区抗原)-(A)n-X。
Th表位任选地通过间隔区B连接于IgE-CH3肽和其交叉反应性和功能性免疫类似物的N端或C端。本发明的优选肽免疫原是含有IgE-CH3抗原肽(例如，SEQ ID NO：5)(或其免疫类似物)和Th表位，以及任选地Inv(SEQ ID NO：13)的肽。在一个更优选的实施方式中，Th表位是HBs Th、HBc Th、MVF Th、PT Th、TT Th、CT Th(例如，SEQID NO：12)、或人工Th(SEQ ID NOs：9-11和60)、或其功能性免疫类似物，任选地，A是通过(B)o间隔区，例如Gly-Gly或(ε-N)Lys结合的Inv(SEQ ID NO：13)。
IgE-CH3区抗原的结构包括一种来自人IgE CH3区域的肽序列(SEQID NO：1的氨基酸413-435)或其它物种的同源序列(例如，SEQ ID NOS：6-8和84)，然后进行下列修饰：
在天然IgE序列的基础上修饰得到目标位点，即将一个半胱氨酸残基插入413位或同源位置的N端侧，除非天然序列的413或414位已经存在半胱氨酸，
将位置418或同源非人序列的相应位置的天然半胱氨酸或天然目标序列的任意其它半胱氨酸取代为丝氨酸(除非位置413或414和435或436已经存在所述天然半胱氨酸)，
在位置435或同源位置的C端侧插入半胱氨酸，除非天然序列的位置435湖436已经存在半胱氨酸，和
在保留的半胱氨酸之间形成一个二硫键，从而产生一个环状结构。
所述环状结构还含有来自IgE413-435片段任意末端的1至5个附加氨基酸，只要保持单二硫键环状结构。本发明提供了一种序列如下的优化的人IgE目标抗原Cys-Gly-Glu-Thr-Tyr-Gln-Ser-Arg-Val-Thr-His-Pro-HisLeu-Pro-Arg-Ala-Leu-Met-Arg-Ser-Thr-Thr-Lys-Cys(SEQ ID NO：5)。人IgE目标抗原通过非天然末端半胱氨酸环化，第一个丝氨酸残基取代天然序列的半胱氨酸残基。由含有该IgE-CH3区抗原的肽免疫原诱导的抗体与人IgE交叉反应，通过人IgE抑制入嗜碱细胞的致敏作用。
同样，其它物种IgE的相应IgE-CH3区抗原序列可以从相关物种的同源ε链片段得到。例如，该目标序列可以来自狗、大鼠、和小鼠ε链序列，如表1中SEQ ID NOS：2、3和4所示，可以得到Navarro等公开的马序列和IgE-CH3区抗原序列。
按照本发明，IgE-CH3区抗原肽(例如，SEQ ID NOS：5-8和84)的交叉反应性和免疫功能类似物可以进一步含有保守取代、附加、缺失、或插入一到约四个氨基酸残基，只要得到的肽类似物能够诱导与IgE-CH3肽(的免疫应答交叉反应。保守取代、附加、和插入可以用本发明定义的天然或非天然氨基酸实现。
含有两种或多种Th表位的本发明肽免疫原混合物的肽组合物可以增强更广泛种群的免疫效力，并因此提供对IgE-CH3区抗原(例如，SEQ IDNOS：5-8和84)的改进的免疫应答。
本发明的肽免疫原可以通过本领域普通技术人员公知的化学合成法制备。参见，例如，Fields等，《合成肽：用户指南》第三章，Grant，W.H.编，Freeman和Co.，New York，NY，1992，p.77。如果一种肽免疫原包括一种SSAL Th，则通过提供专属于该位置的氨基酸混合物，将选择氨基酸偶联到一个特定可变位置上。因此，可以应用固相合成法——自动Merrifield技术，用t-Boc或Fmoc化学保护α-NH2，并应用侧链保护的氨基酸，在例如，430A或431型应用生物系统肽合成仪(the Applied Biosystems肽Synthesizer Models 430A或431)上合成肽。
完成所需肽免疫原的组装后，按照标准程序处理树脂，以从树脂上切除肽，并使氨基酸侧链上的功能基团脱封闭。通过例如HPLC纯化游离肽，通过例如氨基酸分析、质谱、和/或测序鉴定生化特征。肽的纯化和特征鉴定方法对于本领域技术人员是公知的。
其它产生本发明的含有IgE和Th位点的合成肽构建物的化学方法包括通过形成一种“硫醚”键连接卤族乙酰化和半胱氨酰化肽。例如，可以将一个半胱氨酸加到含Th肽的C末端，半胱氨酸的巯基可以用于与结合到IgE-CH3肽(例如SEQ ID NO：5)或其交叉反应性和功能性免疫类似物N-末端的亲电基团(例如，赖氨酸残基的N-氯乙酰-修饰的或马来酰亚胺衍生的α-或ε-NH2基)形成一个共价键。在该模式中，可以得到Th-(IgE-CH3区抗原)或其逆向物的构建体。
本发明的免疫原还可以是聚合的。可以应用常规方法，通过，例如免疫原与交联剂的反应，例如通过戊二醛和赖氨酸残基的-NH2之间的反应实现。通过另一种方法，即通过将一个附加的半胱氨酸加到合成免疫原的N末端，使“A-Thm-间隔区-(IgE-CH3区抗原)聚合或与另一种免疫原共聚合。半胱氨酸N-端的巯基可以用于与赖氨酸残基的氯乙酰-修饰氨基酸或马来酰亚胺衍生的α-NH2基或ε-NH2基形成一种“硫醚”键，所述赖氨酸残基结合于分支多聚-赖胺酰核心分子(例如K2K、K4K2K或K8K4K2K)的N-末端。还可以在一种分支的多聚赖氨酰核心树脂上直接合成所需肽构建物，制备本发明免疫原的分支聚合物(Wang等，科学，1991；254：285-288)。
或者，较长的合成肽免疫原可以通过公知的重组DNA技术合成。一些有关分子可龙技术的标准手册提供了详细的通过表达重组DNA和RNA制备本发明肽的方法。为了构建编码本发明肽(例如，含有SEQ IDNOS：5-8和84的免疫原性肽，和其它的物种-特异性同源物)的基因，将氨基酸序列逆向翻译成一种核酸序列，优选利用应用于基因将在其中表达的有机体的优化密码子。接着，制备编码肽的基因，通常通过合成编码肽和一些必要的调控元件的重叠寡核苷酸。将合成基因组装起来插入所需的表达载体。本发明涵盖的合成核酸序列包括编码本发明肽、免疫功能类似物的核酸序列，以及特征在于非编码序列发生改变，但没有改变由其编码的肽的免疫原性的核酸构建体。还提供了含有编码本发明肽的序列的核酸。将合成基因插入适当的克隆载体，得到重组体，并进行鉴定。然后在选择的表达系统和宿主适合的条件下表达肽。利用标准方法纯化和鉴定肽。
本发明的核酸自身可以用作称之为“DNA疫苗”的成分。在本发明的所述实施方式中，通过将编码所述肽的核酸导入患者自身细胞，诱导本发明的免疫原性肽在那些细胞中表达。制备和应用DNA疫苗的方法公开于US专利5580859，5589466，和5703055；同时参见WO97/02840和W.McKonnell和F.Askari，新英格兰医学杂志，1996，334：2-45，它们均经被参考插入本文。认为制备和应用本发明的肽和肽偶合物的方法在本发明的范围内。
本发明所有肽组合物的效果可以通过体外分析证实，其中用本发明的肽组合物接种宿主动物，得到的抗体显示通过IgE抑制嗜碱细胞和巨细胞的致敏作用，如实施例2和6所示。效果还可以在体内证实，即用物种-适当的肽组合物(例如用含有SEQ ID NOS：24和/或25的免疫原制剂免疫小鼠)注射宿主，然后监测对IgE-CH3肽和其交叉反应性和功能性免疫类似物的激素免疫应答，如实施例5的详细描述。
本发明的另一方面提供了一种在一种药物可接受的传送系统中含有一种免疫有效量的一种或多种本发明的肽免疫原的药物组合物。因此，可以应用佐剂、药物可接受载体或其它疫苗组合物中提供的其它常规成分将本发明的肽配制成一种药物组合物。可以用于本发明的佐剂或乳化剂包括明矾、不完全弗氏佐剂、liposyn、皂甙、角鲨烯、L121、emulsigen、单磷脂酰脂类A(MPL)、QS21、ISA51、ISA35、ISA206和ISA 720，以及其它的有效佐剂和乳化剂。所述制剂包括速释和/或缓释制剂，以及诱导系统免疫和/或诱导局部粘膜免疫的制剂，其可以通过，例如，用微粒包封免疫原或将免疫原与微粒共同给药实现。本领域普通技术人员能够容易地确定所述制剂。制备、保存、和灭菌该制剂的方法是本领域技术人员已知的。
本发明的免疫原可以通过任何常规途径给药，包括皮下、口服、肌内、或其它非肠道或肠道途径给药。同样，免疫原可以作为单剂量或多剂量给药。本领域普通技术人员能够容易地确定免疫方案。
本发明的肽组合物含有一种有效量的一种或多种本发明的肽免疫原和一种药物可接受的载体。在一种适当剂量单位剂型中的组合物通常含有每公斤体重约0.5μg到约1mg的免疫原。如果以多剂量给药，可以方便地分成每剂量单位制剂适当量。例如，初始剂量，例如0.2-2.5mg；优选1mg由本发明的肽组合物表示的免疫原通过注射，优选肌肉内注射给药，然后施用重复剂量(增强量)。剂量将根据患者的年龄、体重和一般健康状况而定，正如疫苗和治疗领域公知的那样。
对合成的IgE-CH3肽免疫原的免疫应答可以通过捕获在O’Hagan等(疫苗，1991；9：768)描述的生物可降解微粒中或其上传送来改进。可以将免疫原与或不与佐剂包封入生物可降解微粒，以强化免疫应答，包括可能特别应用于粘膜过敏反应的局部粘膜免疫，并提供用于口服给药和用于局部给药的延时或周期应答的时间控制释放(O’Hagan等，1991；和Eldridge等，1991；28：287-294)。
本发明的药物组合物以与预防遗传性过敏反应包括过敏性鼻粘膜炎、食物过敏症、哮喘、过敏反应、跳蚤过敏性皮炎、和其它IgE-介导的超敏反应的疫苗类似的方式使用。
本发明前面引证的所有专利和参考文献被参考插入本文。
下面实施例中提供了具体的肽和肽偶合物免疫原，用来举例说明本发明。这些实施例仅为了说明，而不以任何方式构成对本发明范围的限制。
                    实施例1
        人IgE分子上潜在效应位点的鉴定
肽的设计
按照Helm等(1988)和Presta等(1994)公开，即覆盖人IgEε重链CH2和CH3区的较长片段参与IgE与FcεRI受体的结合，选择人IgEε重链CH2和CH3区中的位点用于肽模拟。合成这些位点的序列作为目标位点肽，通过(1)通过化学偶联将它们与较大载体蛋白质例如KLH连接，或(2)将含有混杂Th和Inv(SEQ ID NO：13)的构建肽连接于目标位点的氨基末端，使它们成为抗原。选择这些区中的特定位点作为用于环化的肽，所述环化基于Brookhaven关于人IgE表面暴露环的三维模型(http：www.pdb.bnl.gov/pdb.bin/pdbids)的预测。将特定环状限制引入这些肽的设计中，从而使抗原与自身IgE分子之间的交叉反应最大化。因此，引入天然序列中没有发现的半胱氨酸合成了几种合成构建体，以便在模拟Brookhaven模型预测的环结构中形成特定位置的二硫键合环。在某些情况下，天然半胱氨酸被丝氨酸取代，以防止形成不利于该模型的构象。
构建体在表2中列出。表2描述栏中，标“*”的肽被半胱氨酸二硫键环化。为了环化插入天然序列的半胱氨酸残基在表2的氨基酸序列中用括号表示，其它的插入残基，取代天然残基的残基，或参与形成二硫键的天然半胱氨酸在表2的氨基酸序列中用下划线表示。其它肽是线形的。在第三栏中标“a”的肽代表IgE-CH2/3或-CH3抗原肽，通过常规戊二醛或MBS(m-马来酰亚胺苯甲酰-N-羟琥珀酰亚胺酯，Pierce Chemical Co.，分类号No.22510)的偶联反应化学连接于KLH载体蛋白质。第三栏中标“b”的肽合成为所示的IgE抗原肽与Th位点串联。使用的Th位点包括来自乙肝B病毒的HBs19-32Th、来自麻疹病毒的MVF Th、和来自百日咳毒素的PT149-146 Th(如US 5759551中的参考)、称之为P11的CT Th(Stagg等，1993)和称之为“1、4、9PALINDROMIC Th”(SEQ ID NO：10)、“IS(1、4、9PALINDROMIC)LF Th”(SEQ ID NO：11)、“IS(1、4、9PALINDROMIC)LF简化Th”(SEQ ID NO：60)、和“Syn Th(1、2、4)”(SEQ ID NO：9)的新的人工Th位点。标“c”的肽是与Inv区免疫刺激肽(SEQ IDNO：13)串联合成的“b”构建体的变异体。
“b”和“c”构建体还合成为具有Gly-Gly间隔区，用来分隔IgE-CH2/3或-CH3目标抗原位点与Th位点，以及分隔Th与Inv免疫刺激位点。表2中的“b”和“c”构建体具有连接到IgE目标位点氨基末端的Th和/或Inv区。通过超免疫动物，随后检查与人IgE交叉反应的超免疫血清，从表2的肽免疫原中筛选用于治疗过敏症的侯选目标抗原肽。
筛选候选目标抗原肽的具体方法：
1.IgE-CH3区抗原肽和结合物的合成
表2中列出肽通过Merrifield固相合成技术在应用型生物系统自动肽合成仪上应用Fmoc化学合成。如果一种肽免疫原包括一种SSALTh，则通过提供等摩尔比的氨基酸混合物在一个特定可变位置偶联一种选择氨基酸。完成所需肽的组装后，按照标准程序应用三氟乙酸处理树脂，以从树脂上切除肽，并使氨基酸侧链上的保护基团脱封闭。对于环状肽，将切除下来的肽溶解于15％ DMSO水溶液中静置48小时，以促进链内半胱氨酸之间二硫键的形成。
2.实验性免疫
用实验肽免疫原肌肉内接种大鼠或豚鼠。剂量为100μg肽悬浮于0.5ml体积。第一剂量与完全弗氏佐剂一同给药。以后的剂量在不完全弗氏佐剂中给药。动物在第0、3、6、和10周或0、2、4、和8周接受注射。以两周间隔取血，通过IgE肽ELISA确定反应性，通过人IgEELISA确定交叉反应性。
3.ELISA分析
在用100μL 0.5μg/ml无载体的适当“a”目标抗原位点肽的10mM NaHCO3缓冲液(pH 9.5)于37℃保温1小时涂布的96孔微滴度平板进行确定抗-IgE肽反应性的肽ELISA。为了确定抗-人IgE交叉反应性，在用5μg/ml人IgE骨髓瘤蛋白质以类似方式涂布的人IgE-涂布的96-孔微滴平板上进行人IgE ELISA(American Biosystems，Inx.cat.no.A113)。肽或人IgE-涂布孔用250μL 3％明胶/PBS液于37℃保温1小时，以封闭非特异性蛋白质结合位点。用含体积百分比0.05％TWEEEN20的PBS冲洗三次，然后干燥。将400μL稀释样品加入各孔，使其于37℃反应1小时。然后用含体积百分比0.05％ TWEEN 20的PBS冲洗各孔六次，除去未结合的标记抗体。向各孔中加入100μL以预先确定的优化稀释度在1％体积正常山羊血清、0.05％体积TWEEN 20的PBS液中稀释的辣根过氧化物酶标记的山羊-抗-大鼠IgG山羊抗体或抗-豚鼠IgG山羊抗体，于37℃保温30分钟。用含体积百分比0.05％TW EEN20的PBS冲洗各孔六次，除去未结合的标记抗体结合物，然后与100μL含有0.04％重量间苯二胺(OPD )和0.12％体积过氧化氢的柠檬酸钠缓冲液(pH 5.0)的底物混合物反应15分钟。加入100μL 1M H2SO4中止反应，测定A492的吸收度。基于吸收度的线性回归分析，将截止A492置于0.5，计算以吸收度倒数的Log10显示的ELISA效价。该截止值是精确的，因为进行每次分析稀释正常豚鼠对照样品的值均少于0.15。
结果
候选目标抗原位点在表2中描述。它们表示为结合KLH载体的“a”肽或结合合成Th位点的“b”肽，或者结合合成Th和Inv的“c”肽。大鼠或豚鼠如上述具体方法免疫，在第8周收集的超免疫抗血清通过抗-肽ELISA和抗-人IgE ELISA如具体方法所述分析。
一些CH2/3和CH3肽免疫原是免疫原性的，因为它们诱导效价在log102-5范围内的抗-肽抗体。含有人ε链301-376(表1的编号机制)的长片段的CH2/3抗原目标位点均强烈地与人IgE交叉反应，如所示在抗-人IgE ELISA上的log10效价大于3。从342位开始和超过该位置(例如，第21和22个)的一些CH3肽丧失交叉反应性。然而，对于包括一个含354-372相对较短区域的CH3肽，交叉反应性很大程度地恢复(例如，第27、28、和29个)，除了第31个(354-368)。在第20个(跨越374-385位的环状肽)中看到另一个交叉反应的短区域。
如第14、17、23、24、25、和26个缺乏交叉反应性所证明，从365延伸到413的延长序列没有交叉反应性，尽管与交叉反应性354-372区和20号(374-385)代表的交叉反应区有重叠。有趣的是，以27、28、29(354-372)和20(374-385)号作为例子的短交叉反应片段丢失了长环状肽17号(365-398)的构象，尽管它们在那些交叉反应区有重叠。重叠非交叉反应位点的交叉反应位点再次发现超过了从399位开始延伸到445位的区域，如15和30号的交叉反应性，以及19(432-445)和23(404-435)号的弱交叉反应所示。显然两个包括位置418的相似环状肽，15(413-435)和18(404-434)，仅15号(SEQID NO：5)418位的半胱氨酸由丝氨酸取代的，与人IgE交叉反应。Stanworth(Stanworth等，柳叶刀，1990；336：1279-1281)描述的相应于IgE效应位点的CH4位点不表现交叉反应性(34号)。
这些结果证明，IgE肽的交叉反应性是一种由构象特征影响的综合现象，不能从重叠的线形肽的直接分析推测。从表2与人IgE表现交叉反应性的结合物中选择IgE-CH3区抗原，用于进一步分析。
                    实施例2
            人IgE分子上效应位点的鉴定
从表2表现对人IgE具高亲合交叉反应性的肽偶合物(如它们各自抗血清的抗-IgE效价高于log10＝3所证明)中筛选IgE-CH3区抗原肽。如上述制备豚鼠超免疫血清。通过蛋白质A亲合色谱从超免疫血清纯化豚鼠IgG抗体，通过功能分析确定抗-IgE通过过敏原-特异性IgE抑制人嗜碱细胞殖民作用的能力。分析端点表示为IgE-街道的组胺释放的百分抑制率。
通过蛋白质A亲合色谱(ImmunoPure Immobilized RecombProtein A，Pierce)从血清纯化豚鼠IgG抗体，将洗脱的抗体制备成25mM PIPES缓冲液，0.15M NaCl，pH 7.2中8mg/ml标准浓度。从用一种无关肽免疫原接种豚鼠收集到的血清，制备对照抗体制剂。将这些抗体用于测定IgE-介导的人嗜碱细胞致敏作用降低的分析。利用Percoll密度梯度离心从志愿者的静脉血制备人嗜碱细胞(MacGlashan，过敏症临床免疫学杂志(J Allergy Clin Immunol)，1993；91：605-615)。收集分带的白细胞，冲洗，悬浮于所述的0.1ml PAGCM缓冲液(MacGlashan，1993)，除了用于悬浮细胞的PAGCM缓冲液用含有44％ D2O的水配制。用于分析的IgE是过敏原特异性的，为人BPO-特异性IgE或特异于HIV糖蛋白gpl20的嵌合人IgE。用于以0.25μg/ml浓度致敏的过敏原-特异性IgE与8mg/ml等体积纯化豚鼠抗体(总体积为0.1ml)在37℃预保温15分钟，然后加入嗜碱细胞。将抗体混合物加入细胞，保温20分钟，使细胞被未结合IgE致敏。然后加入过敏原，如所述为BPO21-HAS或gp120多肽(MacGlashan，1993)刺激致敏细胞。
适当保温后，使细胞与上清液分离，用自动荧光测定技术分析上清液种的组胺含量(Siraganian，Anal Biochem，1974：57：383-394)。所有反应进行两次。从样品和总组胺中扣除自发释放后，从二者的比值计算组胺释放百分率。结果表示为组胺释放百分抑制率，其通过实验抗体的组胺释放与无关特异性对照抗体的组胺释放比值所确定。对人嗜碱细胞的组胺释放分析由Johns Hopkins大学医学院，Johns Hopkins哮喘和过敏中心，Baltimore的Donald W.MacGlashan博士友情操作。
结果
表3显示了对人IgE的交叉反应性表现为log10＞3的豚鼠抗-肽抗体抑制组胺释放的结果。用第8周采集血液纯化的抗体进行测定，除了同样被鉴定的抗肽15b和15c的抗体从第12周收集的血清进行测定。从分别于第8周和12周采血纯化的抗-15b和抗-15c抗体得到的抑制结果显示为61％和71％。各动物用15b和15c接种，但收集来自两组动物的第8和12周抗体的结果，显示于表3。(这些组的豚鼠在第10周接受附加一次的肽偶合物注射，以便保证在第12周采血时的高抗体水平)。与由表3所示的其余肽诱导的IgE交叉反应性抗体的反应性相比，抗-15抗体的显著抑制反应性是出乎意料的。其它那些IgE-CH3区抗原肽不能产生抑制作用，或者出现抑制组胺释放的水平，其是可忽略或不可重复的。
比较了与肽15b(SEQ ID NO：14)和15c(SEQ ID NO：15)的抗原位点(SEQ ID NO：5)重叠的IgE-CH3区抗原肽诱导的抗体的组胺释放抑制结果和IgE交叉反应性。由肽19、23、24、和33代表的IgE抗原含有与15肽抗原序列(SEQ ID NO：5)重叠的短序列。它们对IgE的交叉反应性与15相比较差，并且缺乏抑制活性。18肽的IgE抗原序列(SEQ ID NO：44)含有15号肽的完全抗原序列，除了(1)羧基末端赖氨酸缺失，(2)418位天然半胱氨酸保留，和(3)存在九各附加N-末端氨基酸。它不具有对IGE的交叉反应性，不能抑制组胺释放。相比较而言，具有抗原SEQ ID NO：5的15号免疫原提供出乎意料的反应性。15号的IgE-CH3区抗原序列具有通过引入末端半胱氨酸形成的环状结构，不存在418位半胱氨酸的作用(其已被取代)，它表现为一种与IgE交叉反应和诱导抑制IgE致敏作用抗体的抗原。
在13周分别取血制备15b(SEQ ID NO：14)和15c(SEQ ID NO：15)诱导的抗体，并进行测试。到第13周，IgE ELISA所确定的IgE的交叉反应性和组胺释放抑制百分率比第12周的值减小。而且，发现两组制备品的抗体在降低组胺释放方面个别地有效：分别为抗-15b抑制28％，抗-15c抑制20％。
这两种抗体抑制组胺释放的程度是剂量依赖性的，如抗体稀释作用所证明的那样。当分析全浓度(8mg/ml)的第13周抗-15b制品，然后分析1∶3和1∶9稀释度的制品时，组胺释放的百分抑制率分别为28％、21％和14％。
豚鼠抗-15b制品在无过敏原的情况下直接激发IgE-敏感性嗜碱细胞测试，作为其交联受体-结合IgE能力和诱导脱离能力的评价。抗-15b导致的组胺释放等于供体细胞自发组胺释放的水平。这表明SEQ IDNO：5的IgE抗原的特异性抗体是非致敏性的。因此，用含有IgE-CH3区抗原SEQ ID NO：5的肽结合免疫原(SEQ ID NOS：14和15)进行的主动免疫诱导抑制IgE-介导的致敏作用而其自身不引起组胺释放的非致敏性抗-IgE抗体。这些主动诱导的多克隆抗体对以前研究，包括意图通过主动免疫治疗过敏症的治疗性和非致敏性抗-IgE单克隆抗体的已有研究(US 4940782，US5420251，和Presta等，1993)未曾描述的IgE效应位点表现特异性。
                        实施例3
            同种型的免疫抑制特异性和潜力
检查了SEQ ID NOS：14和15的主动免疫应答诱导的多克隆抗体对IgE和对IgG的特异性比较。将实施例2描述的从12周血样制备的抗-15b豚鼠抗体，通过实施例1描述的IgE ELISA和类似的IgG ELISA进行对IgE和IgG交叉反应性的平行比较。对于IgE ELISA，用5μg/ml人IgE骨髓瘤涂布平板。对于IgG ELISA，用5μg/ml纯化的人IgG(Sigma试剂级人IgG)涂布平板。在上述两个ELISA中测试浓度为0.5和0.1μg/ml的纯化豚鼠抗-15b的反应性。结果与从对照豚鼠血清纯化的抗体和“无抗体”对照比较。当抗-15b抗体浓度为0.5μg/ml时，在IgE中的A490值为1.126，在浓度为0.1μg/ml时为0.344。抗-15b抗体在IgG中的A490值等于对照抗体和背景值。豚鼠抗-15b抗体对人IgG没有交叉反应性。本发明的肽组合物不诱导识别IgG抗体的抗体，因此是特异于IgE的同种型。它们将抑制IgE-介导的过敏反应，不产生对IgG保护性抗体应答的不期望的免疫抑制。
                    实施例4
            本发明的代表性肽偶合物
表4A所示的完全合成的本发明的免疫原性肽偶合物，通过实施例列出的固相法合成。表中的各肽均可以由下式表示：(A)n-(Th)m-(B)o-(IgE-CH3区抗原)-X，但前面公开的其它通式表示的肽可以理解在本发明的范围内。IgE-CH3区抗原序列是表4A肽中的SEQ ID NO：5、6、或8，但应当理解来自其它哺乳动物物种的同源IgE-CH3区抗原序列在本发明肽的范围内。该免疫原性肽含有来自外源病原体(例如，SEQ IDNO：20、87)的Th位点，还含有人工Th(例如，SEQ ID NOS：14、18、21和90)。除了表4A所示的例子，可以从表5举例说明的混杂Th位点中选择其它病原体-相关Th，可以从表6举例说明的Th位点中选择人工Th。该实施例的各肽在免疫原性元件之间有Gly-Gly或(ε-N)Lys间隔区，但本发明的肽还可以含有其它间隔区(例如，SEQ IDNO：16)或没有间隔区。
这些实施例的肽还包括一种任选的Inv免疫刺激位点(例如，SEQ IDNOS：15-19和22)。然而应当理解，本发明不限于Inv作附加的免疫刺激元件。如KLH结合物所示，本发明的肽偶合物还包括一种偶联于一种载体蛋白质的IgE-CH3区抗原。
材料和方法
如实施例1所述合成、切除、环化和纯化表4A所列出的本发明的代表性肽构建体(SEQ ID NOS：18、85、87、88、90和91)。配制所述肽构建体，免疫小动物例如豚鼠或大动物例如猪或狒狒，用于评价它们的免疫原性。将肽悬浮于0.5ml包含代表性乳化剂或佐剂例如ISA51、ISA720、DDA或单磷脂酰脂类A(MPL)中液体。对于豚鼠肽剂量为100μg，对于猪或狒狒为300μg，肌肉内接种动物。
如表4A的说明，动物在0、3和6周或0、2、和4周接受注射。如实施例1所述通过人IgE或狗IgE ELISA评价初始免疫后8后取血的实验血样对IgE的交叉反应性，除了对于狗IgE ELISA，使用1μg/ml狗IgE骨髓瘤蛋白质(Bethyl Laboratories Inc.，Montgomery TX)涂布平板，使用以预先确定的优化稀释度稀释的辣根过氧化酶标记的蛋白质A/G试剂(Pierce Chemical Co.，Rockford IL)作为检测狗IgE的示踪物。还评价了肽诱导的交叉反应物抑制IgE-介导的组胺释放的能力。如实施例2中的详细描述，利用蛋白A亲合色谱从代表性免疫血清纯化豚鼠、猪、或狒狒的IgG，进行功能分析确定通过过敏原-特异性IgE对人嗜碱细胞致敏作用的抑制能力。分析端点表示为，与用特异于无关抗原的抗原诱导的同一物种的对照抗体相比，IgE-介导的组胺释放的抑制百分率，如表4B所示。
结果
代表性肽构建体均具有相关的免疫原性，所有被测试的肽均诱导对相应的入IgE或狗IgE的强烈位点-指向交叉反应性，如抗-人IgE或抗-狗IgE ELISA中Log10效价超过3所示(表4A)。通过抗-IgE肽抗体通过嗜碱细胞抑制组胺释放的能力评价所示，豚鼠、猪、和狒狒抗体均观察到抑制IgE-介导的致敏作用。狒狒抗体的该功能性交叉反应性非常显著，因为狒狒IgG对人IgE的中和作用非常类似于人系统。因此，本发明肽构建体作为通过主动免疫治疗过敏症的试剂的效果在肽物种和目标物种高度同源的模型中说明。
                    实施例5
            对小鼠的免疫和体内效果评价
用5组16只小鼠，通过下面列出的免疫和致敏方案评价SEQ IDNOS：24和25(37b和38b)肽的效果。
16只小鼠组(Balb/c)，雌性，8-10周龄，用本发明指示的肽组合物皮下接种。在第0、3、6、和11周给小鼠20μg/0.2ml剂量。第一个剂量用完全弗氏佐剂制备，随后的剂量用不完全弗氏佐剂制备。用一种半抗原结合物——二苯基化KLH(DNP-KLH)在第7和10周使小鼠致敏。通过腹膜内施用DNP-KLH的0.4％明矾液，5μg/0.2ml/剂量，完成致敏。通过施用佐剂和磷酸盐缓冲的生理盐水在对照组中进行模拟免疫和致敏。
各组如下：
1.免疫/模拟致敏，用肽37b和0.4％明矾
2.免疫/致敏，用肽37b和DNP-KLH
3.模拟免疫/致敏，用弗氏佐剂和DNP-KLH
4.免疫/模拟致敏，用肽38b和0.4％明矾
5.免疫/致敏，用肽38b和DNP-KLH
在第0、5、7、9、10、11、13、16、和20周收集血清。在第10和11周从各组取两只小鼠制备脾细胞。
应用一种抗-小鼠IgG辣根过氧化酶结合物，用未结合肽37(小鼠IgE-CH3取抗原肽，SEQ ID NO：8)涂布孔的微滴平板进行肽ELISA，用DNP-BSA结合物涂布的微滴平板进行DNP ELISA，通过常规ELISA分析监测对肽抗原和对DNP的IgG应答。通过常规IgG ELISA在用小鼠单克隆IgE SPE 7(Sigma)涂布的平板上监测抗-37b抗体与小鼠IgE的交叉反应性。在20周的全程中，比较各组对肽免疫原产生的IgG应答对小鼠IgE的交叉反应性，通过本发明肽组合物的抗体应答的可逆性和安全性证据确定10-20周中1)一级和二级应答，2)是否存在不期望的IgG应答的免疫抑制，和3)是否发生所需的抗-IgE反应性的降低。
在第7、9、10、11、13、和16周，通过完全IgE ELISA和DNP-特异性ELISA监测IgE应答。在第10和11周，通过DNA-特异性ELISPOT分析记录分泌对DNP具特异性的IgE的脾细胞B细胞数。同时，因为血清IgE水平不能完全推定过敏反应，即，IgE测定可能错过对体内致敏性的显著影响，通过在大鼠中(异源PCA)小鼠血清的被动经皮过敏反应分析测定小鼠的致敏作用。异源PCA优选为小鼠中固有PCA分析，因为小鼠IgE与小鼠IgG相反，其选择性地使大鼠皮肤巨细胞交叉致敏。因此，异源小鼠/大鼠PCA反应是是IgE-特异性的，不会被可能在自体固有的小鼠PCA分析中发生的IgG-介导的过敏反应混淆(Maekawa和Ovary，免疫学方法杂志，1984，71：229-239)。
比较各组IGE应答的免疫抑制和免疫抑制的同种型特异性的ELISA、ELISPOT、和PCA结果。实验方法描述如下。
完全IgE ELISA
对于测定小鼠血清中总IgE的ELISA，用1μg/ml单克隆大鼠抗-小鼠IgE，R35-72(Pharmingen)涂布微滴平板，如所述冲洗和封闭。将连续稀释的小鼠血清加入平板并保温。通过与生物素酰化单克隆大鼠抗-小鼠IgE，R35-118(Pharmingen)反应，然后连续加入抗生蛋白链菌素-辣根过氧化酶(Pierce)和OPD，检测捕获的IgE。测定A492的值。
DNP-特异性IgE ELISA
对于测定用DNP-KLH致敏的小鼠血清中DNP半抗原-特异性小鼠IgE的ELISA，用5μg/ml DNP-BSA结合物(Molecular Probes，Inc)涂布微滴平板的孔。如上述检测对DNP半抗原具特异的捕获的IgE。
DNP-特异性ELISPOT
对于测定分泌DNP半抗原-特异性小鼠IgE的B细胞的ELISPOT分析，用5μg/ml DNP-BSA结合物涂布用0.45μm硝基纤维素滤纸串接起来的无菌微滴平板的孔，例如MULTISCREEN HA平板(MilliporeInc.，cat.no.MAHAS4510)。将从致敏和对照小鼠中制备的连续稀释的脾细胞加入孔中，在5％ CO2下于37℃保温过夜。将细胞从平板中冲洗出来，记录作为滤纸上固定点的DNP半抗原具特异性的IgE-分泌细胞，然后用碱式磷酸酶结合的-大鼠单克隆抗体R35-118染色，利用5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸盐(Sigma)作为显色底物。
异源PCA
将来自免疫/致敏和对照小鼠的连续稀释血清皮内注射到背部剃光毛的雄性Sprague-Dawley大鼠中。将稀释血清分10-12次注射给三组平行麻醉动物的背部皮肤(50μl/部位)。各注射模式重复两只动物。24小时潜伏期后，为了有效致敏皮肤巨细胞，静脉内注射1mg DNP-BSA的1％Evans蓝染料的PBS液激发大鼠。30分钟到1小时后，使大鼠窒息并剥皮，以便可以在背部皮肤侧观察到呈蓝色的反应。从产生容易确定斑点的最高血清稀释度确定PCA效价。
                    实施例6
        小鼠的免疫和被动皮肤过敏反应的抑制
为了研究本发明免疫原性肽接种对IgE-介导的炎症反应的影响，通过用本发明的肽接种小鼠诱导对小鼠IgE-CH3目标抗原位点，SEQID NO：8的抗体应答。然后用得到的小鼠抗血清抑制由结合大鼠巨细胞的小鼠IgE的交叉反应引发的被动皮肤过敏反应(PCA)。
材料和方法
用本发明的肽组合物，SEQ ID NO：25如实施例5所述接种Balb/c小鼠，除了仅在0、3、和6周给小鼠皮下注射，同时不对小鼠致敏。在第8周，收集小鼠血清，通过小鼠IgE ELISA评价对IgE的交叉反应性。小鼠IgE ELISA与实施例1中人IgE ELISA所述相同，除了微滴平板的孔用1μg/ml小鼠抗-DNP IgE单克隆抗体SPE7(Sigma ChemicalCo.，St.Louis MO)涂布，并使用辣根过氧化酶(HRP)-标记的山羊抗-小鼠IgG(Kirkegaard和Perry Laboratories，Gaithersburg MD)检测捕获的小鼠IgG。20只接种小鼠中的13只具有对小鼠IgE的交叉反应性抗体。从抗小鼠IgE的ELISA效价≥2.3的7个小鼠中收集血清，用作位点特异性-抗-IgE。
用10只Balb/c小鼠的另一组制备鼠IgE。该组接受单次腹膜内施用1.0μg/0.2ml卵清蛋白(Oa)的0.4％明矾液。通过实施例5描述的完全IgE ELISA，除了用Binding Site Inc.(San Diego，CA)提供的HRP-标记的绵羊抗-小鼠IgE检测捕获的IgE，在第20天测定小鼠血清中的IgE含量。在10只小鼠中，7只具有明显的IgE应答，效价≥log101.6。收集这些血清用作抗-Oa IgE工作储备液。
IgE血清浓缩液用PBS连续稀释为1∶62，1∶124，和1∶248，然后用等体积的位点特异性抗-IgE血清进一步稀释。因此，小鼠IgE的最终稀释度为1∶124，1∶248，和1∶496，而小鼠抗-IgE的稀释度为1∶2。制备的IgE的对照稀释液仅用PBS作为稀释液。
具有或不具有抗-IgE血清的IgE稀释液在37℃保温1小时，各取50μl用于评价异源PCA反应。
结果
将稀释的小鼠IgE的50μl样品以每组两排四次注射的方式皮下注射到大鼠脱毛背部。一排是仅在PBS中稀释到1∶124；1∶248；和1∶496的IgE的三个对照，平行的一排是与位点特异性抗-IgE保温的连续稀释IgE。每排的第四次注射为单独PBS，作为观察组织损伤的对照。该方式在两只大鼠上重复。
24小时后，静脉内注射1mg DNP-Oa结合物的1％Evans蓝染料诱导PCA反应。1小时后，使大鼠窒息并剥皮。DNP-Oa过敏原交联大鼠巨细胞上的受体结合的小鼠抗-Oa IgE。由交联引发的脱粒增强Evans蓝染料的渗透力，然后在与脱粒范围成比例的大鼠皮下侧出现兰色区。然而，当游离IgE被位点-特异性鼠抗-IgE减少后，就几乎不能使大鼠巨细胞致敏，从而PCA反应被抑制。测量正确角度的两个方向上大鼠皮下侧蓝色区的直径，然后取平均值，评价PCA反应。两只大鼠上测定的两次PCA抑制结果在表7中显示。
按照对小鼠IgE固有敏感性的不同，区分大鼠，以便抑制PCA反应的对照和抗-IgE能够在同一只大鼠中比较出来。对小鼠IgE上的目标抗原位点具特异性的鼠抗血清在两只大鼠中均抑制小鼠IgE-介导的PCA反应。因此，通过特异于非-人IgE的目标抗原位点的肽组合物免疫获得的抗体应答导致相似非-人IgE介导的炎症反应的抑制。
                                                      表1
  Sequence   224        230                 240                     250     253b          260
  Humanε(Seq ID No：1)Dogε(Seq ID No：2)Ratε(Seq ID No：3)Mouseε(Seq ID No：4) V C S R D F T P P T V K I L Q S S - C D G G G H F - P P T I Q L L C L V S G Y T P G T I N IA C A L N F I P P T V K L F H S S - C N - P V G D T H T T I Q L L C L I S G Y V P G D M E VA R P V N I T K P T V D L L H S S - C D - P N A F - H S T I Q L Y C F V Y G H I Q N D V S IV R P V T H S L S P P W S Y S I H R C D - P N A F - H S T I Q L Y C F I Y G H I L N D V S V
       270                   280                   290                 300                 310
  Humanε(Seq ID No：1)Dogε(Seq ID No：2)Ratε(Seq ID No：3)Mouseε(Seq ID No：4) T W L E D G Q - V M D V D L S T A - S T T Q E G E L A S T Q S E L T L S Q K H W L S D R T YI W L V D G Q K A T N I F P Y T A P G T K - E G N V T S T H S E L N I T Q G E W V S Q K T YH W L M D D R K I Y D T H A Q N V - L I K E E G K L A S T Y S R L N I T Q Q Q W M S E S T FS W L M D D R E I T D T L A Q T V - L I K E E G K L A S T C S K L N I T E Q Q W M S E S T F
                     320                 330                 340                 350
  Humanε(Seq ID：No：1)Dogε(Seq ID：No：2)Ratε(Seq ID：No：3)Mouseε(Seq ID：No：4) T C Q V - T Y Q G H T F E D S T K K C A D S N P R G V S A Y L S R P S P F D L F I R K S P TT C Q G F T F K D E A R K - - - - - C S E S D P R G V T S Y L S P P S P L D L Y V H K A P KT C K V - T S Q G E N Y W A H T R R C S D D E P R G V I T Y L I P P S P L D L Y E N G T P KT C R V - T S Q G C D Y L A H T R R C P D H E P R G A I T Y L I P P S P L D L Y Q N G A P K
                                                  表1(续)
         360                 370                 380                   390
  Human ε(Seq ID：No：1)Dogε(Seq ID：No：2)Ratε(Seq ID：No：3)Mouseε(Seq ID：No：4) I T C L V V D L A P S K G T V N L T W S R A S G K P - V N H S T R K E E K Q R - N G T L TI T C L V V D L A T M E G M - N L T W Y R E S K E P - V N P G P L N K - K D H F N G T I TL T C L V L D L E S E E -N  I T V T W V R E R K K S I G S A S Q R S T - K H H - N A T T SL T C L V V D L E S E - K N V N V T W N Q E - K K T S V S A S Q W Y T - K H H N N A T T S
   400                 410                 420                 430                   440
  Humanε(Seq ID：No：1)Dogε(Seq ID：No：2)Rat ε(Seq ID：No：3)Mouseε(Seq ID：No：4) V T S T L P V G T R D W I E  G F T Y O C R V T H P H L P R A L M R S T T K T - S G P R A A PV T S T L P V N T N D W I E  G E T Y Y C R V T H P H L P K D I V R S I A K A - P G K R A P PI T S I L P V D A K D W I E  G E G Y O C R V D H P H F P K P I V R S I T K A - L G L R S A PI T S I L P V V A K D W I E  G Y G Y O C I V D R P D F P K P I V R S I T K T Q P G Q R S A P
             450                   460                   470                 480
  Humanε(Seq ID：No：1)Dogε(Seq ID：No：2)Ratε(Seq ID：No：3)Mouseε(Seq ID：No：4) E V Y A F A T P E W P G S R D K - R - T L A C L I Q N F M P E D I S V Q W L H N E V Q L P DD V Y L F L P P E - E E Q G T K D R V T L T C L I Q N F F P A D I S V Q W L R N D S P I Q TE V Y V F L P P E - E E E K N K - R - T L T C L I Q N F F P E D I S V Q W L Q D S K L I P KE V Y V F P P P E - E E S E D K - R - T L T C L I Q N F F P E D I S V Q W L G D G K L I S N
                                               表1(续)
   490                     500                     510                   520
  Humanε(Seq ID：No：1)Dogε(Seq ID：No：2)Ratε(Seq ID：No：3)Mouseε(Seq ID：No：4) A R H S T T Q - P R K T K G S - - G F F V F S R L E V T R A E W - Q E K D E F I C R A V H ED Q Y - T T T G P H K V S G s R P A F F I F s R L E V s R V D W E Q - K N K F T C Q V V H ES Q H S T T T - P L K T N G S N Q R F F I F S R L E V T K A L W T Q T K Q - F T C R V I H ES Q H S T T T - P L K S N G - N Q G F F I F S R L E V A K T L W T Q R K Q - F T C Q V I H E
  530                540
  Humanε(Seq ID：No：1)Dogε(Seq ID：No：2)Ratε(Seq ID：No：3)Mouseε(Seq ID：No：4) A A S P S Q T V Q R A V S V N P G KA L S G S RA L R E P RA L Q K P R
“Human”表示“人类”；“Dog”表示“狗”；“Rat”表示“大鼠”；“Mouse”表示“小鼠”。
                                                   表2
                                  筛选IgE CH2/3肽，用于选择候选IgE抗原
IgE来源的目标抗原位点 连接于目标抗原位点的免疫刺激序列   与人IgE的交叉反应性
编号；描述↑ 氨基酸序列  Log10 ELISA效价对HuIgE
  1   CH2/3(328-376)(C358→S)   CADSNPRGVSAYLSRPSPFDLFIRKSPTIT SLVVDLAPSKGTVNLTWSR(SEQ ID NO：28)   a   KLH   3.66
  CH2/3(317-376)(C358→S)   QGHTFEDSTKKCADSNPRGVSAYLSRPSPFDLFIRKSPTIT SLVVDLAPSKGTVNLTWSR(SEQ ID NO：29)   a   KLH   5.08
b 1，4，9PalindromicTh lib-GG 3.77
  3   CH2/3(313-376)(C358→S)   QVTYQGHTFEDSTKKCADSNPRGVSAYLSRPSPFDLFIRKSPTIT SLVVDLAPSKGTVNLTWSR(SEQ ID NO：30)   a   KLH   3.12
  4   CH2/3(301-376)(C358→S)   QKHWLSDRTYT SQVTYQGHTFEDSTKKCADSNPRGVSAYLSRPSPFDLPIRKSPTIT SLVVDLAPSKGTVNLTWSR(SEQ ID NO：31)   a   KLH   4.04
  5   CH2/3(328-362)(C358→S)   CADSNPRGVSAYLSRPSPFDLFIRKSPTIT SLVVD(SEQ ID NO：32)   a   KLH   4.40
  6   CH2/3(317-362)(C358→S)   QGHTFEDSTKKCADSNPRGVSAYLSRPSPFDLFIRKSPTIT SLVVD(SEQ ID NO：33)   a   KLH   4.30
                                                            表2(续)
IgE来源的目标抗原位点 连接于目标抗原位点的免疫刺激序列   与人IgE的交叉反应性
编号；描述↑ 氨基酸序列   Log10 ELISA效价对HuIgE
  7   CH2/3(313-362)(C358→S)   QVTYQGHTFEDSTKKCADSNPRGVSAYLSRPSPFDLFIRKSPTIT SLVVD(SEQ ID NO：34)   a   KLH   3.92
  8   CH2/3(301-362)(C358→S)   QKHWLSDRTYT SQVTYQGHTFEDSTKKCADSNPRGVSAYLSRPSPFDLFIRKSPTIT SLVVD(SEQ ID NO：35)   a   KLH   3.37
  9   CH2/3(328-356)   CADSNPRGVSAYLSRPSPFDLFIRKSPTI(SEQ ID NO：36)   a   KLH   3.49
  10   CH2/3(317-356)   QGHTFEDSTKKCADSNPRGVSAYLSRPSPFDLFIRKSPTI(SEQ ID NO：37)   a   KLH   4.71
  b   HBs19-32Th-GG   3.76
  c   Inv-GG-HBs19-32Th-GG   2.94
  11   CH2/3(313-356)   QVTYQGHTFEDSTKKCADSNPRGVSAYLSRPSPFDLFIRKSPTI(SEQ ID NO：38)   a   KLH   4.31
  12   CH2/3(301-356)(C312→S)   QKHWLSDRTXT SQVTYQGHTFEDSTKKCADSNPRGVSAYLSRPSPFDLFIRKSPTI(SEQ ID NO：39)   a   KLH   2.79
  13   CH2/3(301-376)   QKHWLSDRTYTCQVTYQGHTFEDSTKKCADSNPRGVSAYLSRPSPFDLFIRKSPTITCLVVDLAPSKGTVNLTWSR(SEQ ID NO：40)   a   KLH   3.77
  14   (C)CH3(391-398)(C)*   (C)KQRNGTLT(C)(SEQ ID NO：41)   b   HBs19-32Th-GG   1.47
  c   Inv-GG-HBs19-32Th-GG   0.77
                                               表2(续)
IgE来源的目标抗原位点 连接于目标抗原位点的免疫刺激序列   与人IgE的交叉反应性
  编号；描述↑   氨基酸序列 Log10 ELISA效价对HuIgE
  c   Inv-GG-HBs19-32Th-GG   0.77
  15   (C)CH3(413-435)(C)*(C418→S)   (C)GETYQSRVTHPHLPRALMRSTTK(C)(SEQ ID NO：5)   b   Syn Th(1，2，4)-GG   4.24
  c   Inv-GG-Syn Th(1，2，4)-GG   4.17
  16   CH2/3(301-345)   QKHWLSDRTYTCQVTYQGHTFEDSTKKCADSNPRGVSAYLSRPSP(SEQ ID NO：42)   b   HBs19-32Th-GG   2.31
  17   (C)CH3(365-396)(C)*   (C)PSKGTVNLTWSRASGKPVNHSTRKEEKQRNGT(C)(SEQ ID NO：43)   b   HBs19-32Th-GG   ＜1.0
  18   (C)CH3(404-434)(C)*   (C)PVGTRDWIEGETYQCRVTHPHLPRAILMRSTT(C)(SEQ ID NO：44)   b   HBs19-32Th-GG   ＜1
  19   CH3(432-445)   STTKTSGPRAAPEV(SEQ ID NO：45)   b   HBs19-32Th-GG   2.725
  20   (C)CH3(374-382-(C)-383-385)*   (C)WSRASGKPV(C)NHS(SEQ ID NO：46)   b   HBs19-32Th-GG   3.976
  21   CH3(345-357)*   (C)PSPFDLFIRKSPT(C)(SEQ ID NO：83)   b   HBs19-32Th-GG ＜1Δ
  c   Inv-GG-HBs19-32Th-GG
  22   (C)CH3(343-360)*   (C)SRPSPFDLFIRKSPTITC(SEQ ID NO：47)   b   HBs19-32Th-GG ＜1Δ
  c   Inv-GG-HBs19-32Th-GG
  23   (C)CH3(404-417)(P)(C)*   (C)VGTRDWIEGE(P)(C)(SEQ ID NO：48)   b   HBs19-32Th-GG ＜1Δ
                                               表2(续)
IgE来源的目标抗原位点 连接于目标抗原位点的免疫刺激序列   与人IgE的交叉反应性
编号；描述↑ 氨基酸序列   Log10 ELISA效价对HuIgE
  c   Inv-GG-HBs19-32Th-GG
  24   (C)(P)CH3(403-413)(P)(C)*   (C)(P)PVGTRDWIEGE(P)(C)(SEQ ID NO：49)   b   HBs19-32Th-GG   ＜1Δ
c Inv-GG-HBs19-32Th-GG
  25   (C)CH3(387-400)(C)*   (C)KEEKQRNGTLTVTS(C)(SEQ ID NO：50)   b   HBs19-32Th-GG   ＜1Δ
  c   Inv-GG-HBs19-32Th-GG
  26   CH3(387-394)   KEEKQRNG(SEQ ID NO：51)   b   HBs19-32Th-GG   ＜1
  c   Inv-GG-HBs19-32Th-GG
  27   (C)CH3(373-381)(C)*   (C)WSRASGKPV(C)(SEQ ID NO：52)   b   HBs19-32Th-GG   2.40Δ
  c   Inv-GG-HBs19-32Th-GG
  28   CH3(354-373)(C)*   PTIT CLVLDLAPSKGTVNLT( C)(SEQ ID NO：53)   b   HBs19-32Th-GG   2.59
  29   CH3(354-369)   PTIT CLVLDLAPSKGT(SEQ ID NO：54)   b   HBs19-32Th-GG   2.39
  30   CH3(399-424)   TSTLPVGTRDWIEGETYQ CRVTHPH(SEQ ID NO：55)   b   HBs19-32Th-GG   4.01
                                               表2(续)
IgE来源的目标抗原位点 连接于目标抗原位点的免疫刺激序列   与人IgE的交叉反应性
编号；描述↑ 氨基酸序列  Log10 ELISA效价对HuIgE
  31   CH3(354-368)(C)*(C358→S)(D362→C)   PTIT SLVLVL CLAPSKG(C)(SEQ ID NO：56)  b   HBs19-32Th-GG   ＜1
  32   (C)CH3(370-390)(C)*   (C)VNLTWSRASGKPVNHSTRKEE(C)(SEQ ID NO：57)  b   HBs19-32Th-GG   3.45
  33   (C)CH3(373-424)*   (C)TWSRASGKPVNHSTRKEEKQRNGTLTVTSTLPVGTRDWIEGETYQ CRVIHPH(SEQ ID NO：58)  b   HBs19-32Th-GG   2.33
  34   CH4(497-506)   KTKGSGFFVF(SEQ ID NO：59)  b   HBs19-32Th-GG+MVF288-302Th-GG+PT149-176Th-GG   ＜1
*＝环化肽
↑＝表1，SEQ ID NO.1的氨基酸残基编号
Δ＝″b″和″c″肽的混合物的交叉反应结果
(C)＝导入天然序列用于环化的半胱氨酸
C→S＝取代半胱氨酸的丝氨酸，D→C＝取代天冬氨酸的半胱氨酸
                                              表3
                                 抑制组胺释放的抗-IgE抗体的评价
  IgE抗原编号   IgE抗原描述(SEQ ID NO)   连接于IgE抗原的免疫源性元件   组胺释放抑制百分率
  1   CH2/3(328-376)(C353→S)(SEQ ID NO：28)   a   KLH   0
  2   CH2/3(317-376)(C358→S)(SEQ ID NO：29)   a   KLH   14％
  b   1，4，9 PALINDROMIC Th-GG-   17％ and 0
  5   CH2/3(328-362)(C358→S)(SEQ ID NO：32)   a   KLH   0
  6   CH2/3(317-362)(C358→S)(SEQ ID NO：33)   a   KLH   0
  7   CH2/3(313-362)(C358→S)(SEQ ID NO：34)   a   KLH   6％
  8   CH2/3(301-362)(C358→S)(SEQ ID NO：35)   a   KLH   6％
  11   CH2/3(313-356)(SEQ ID NO：38)   a   KLH   6％
  15   (C)CH3(413-435)(C)*(C416→S)(SEQ ID NO：S )   b   Syn Th(1，2，4)-GG 58％ and71％-
  c   Inv-GG-Syn Th(1，2，4)-GG-
  20   (C)CH3(374-382-(C)-383-385)*(SEQ ID NO：46)   b   HBs19-32Th-GG   0
  30   CH3(399-424)(SEQ ID NO：55)   b   HBs19-32Th-GG-   9％ and 0
  32   (C)CH3(370-390)(C)*(SEQ ID NO：57)   b   HBs19-32Th-GG-   0
*环化肽
(C)引入天然序列用于环化的半胱氨酸
(C→S)取代半胱氨酸残基的丝氨酸
合并的抗-15b和抗-15c IgG显示的结果
从8周收集的血清纯化的抗肽抗体对组胺释放的抑制，除了注的例外
12周收集的抗肽抗体对组胺释放的抑制
                                                     表4A
                                              本发明的代表性肽
  IgE-CH3抗原SEQ ID NO   描述，免疫刺激序列的SEQ ID NO(S) 肽的氨基酸序列和SEQ ID NO
  SEQ ID NO：5   Syn Th(1，2，4)-SEQ ID NO：9   KKKIITITRIITIITTIDGGCGETYQSRVTHPHLPRALMRSTTKC(SEQ ID NO：14)
  SEQ ID NO：5   Inv-SynTh(1，2，4)-SEQ ID NOS：13，9   TAKSKKFPSYTATYQFGGKKKIITITRIITIITTIDGGCGETYQSRVIHPHLPRALMRSTTKC(SEQ ID NO：15)
  SEQ ID NO：5   CT P11 Th--SynTh(1，2，4)1-SEQ ID NOS：12，9   TINKPKGYVGKEGGKKKIITITRIITIITTIDGGCGETYQSRVTHPHLPRALMRSTTKC(SEQ ID NO：17)
  SEQ ID NO：5   IS(1，4，9PAL)LF简化的Th-SEQ ID NO：60   ISISEIKGVIVHKIEGILFGGCGETYQSRVTHPHLPRALMRSTTKCT  RT   TR  T(SEQ ID NO：18)
  SEQ ID NO：5   Inv-IS(1，4，9PAL)LF简化的Th-SEQ ID NOS：13，60 TAKSKKFRSYTATYQFGGISISEIKGVIVHKIEGILFGGCGETYQSRVTHPHLPRALMRSTTKCT  RT   TR  T----(SEQ ID NO：19)
  SEQ ID NO：5   (CT P11 Th)-IS(1，4，PAL)LF简化的Th-SEQ ID NOS：12，60 TINKPKGYVGKEGGISISEIKGVIVHKIEGILFGGCGETYQSRVTHPHLPRALMRSTTKCT  RT   TR  T--(SEQ ID NO：20)
                                               表4A(续)
  SEQ ID NO：5   (1，4，9PAL)Th-SEQ ID NO：10   ISEIKGVIVHKIEGIGGCGETYQSRVTHPHLPRALMRSTTKCMT  RT   TRM TML          L  V  (SEQ ID NO：21)
  SEQ ID NO：5   Inv-(1，4，9 PAL)Th--SEQ ID NOS：13，10   TAKSKKFRSYTATYQFGGISEIKGVIVHKIEGIGGCGETYQSRVTHPHLPRALMRSTTKCMT  RT   TRM TML          L  V    (SEQ ID NO：22)
  SEQ ID NO：5   (CT P11 Th)-(1，4，9PAL)Th-SEQ IDNOS：12，10   TINKPKGYVGKEGGISEIKGVIVHKIEGIGGCGETYQSRVTHPHLPRALMRSTTKCMT  RT   TRM TML          L  V    (SEQ ID NO：23)
  SEQ ID NO：5   CTR11Th-IS(1，4，9，PAL)LF简化的Th-SEQ ID NOS：12，60   TINKPKGYVGKEGGISISEIKGVIVHKIEGILFGGCGETYQSRVTHPHLPRALMRSTTKCT  RT   TR  T(SEQ ID NO：85)
  SEQ ID NO：5   klh*-KKK-   [klh*]-KKKCGETYQSRVTHPHLPRALMRSTTKC
  SEQ ID NO：8   klh*-KKK-   [klh*]-KKKCGYGYQSIVDRPDFPKPIVRSITKC
  SEQ ID NO：8   IS(1，4，9PAL)LF简化的 Th-SEQ ID NO：60   ISISEIKGVIVHKIEGILFGGCGYGYQSIVDRPDFPKPIVRSITKCT  RT   TR  T(SEQ ID NO：24)
  SEQ ID NO：8   Syn Th(1，2，4)-SEQ ID NO：9   KKKIITITRIITIITTIDGGCGYGYQSIVDHPDFPKPIVRSITKC(SEQ ID NO：25)
  SEQ ID NO：6   klh*-KKK-   [klh*]-KKKCGETYYSRVTHPHLPKDIVRSIAKC
  SEQ ID NO：6   Syn Th(1，2，4)-SEQ ID NO：9   KKKIITITRIITIITTIDGGCGETYYSRVTHPHLPKDIVRSIAKC(SEQ ID NO：26)
                                               表4A(续)
  SEQ ID NO：6   IS(1，4，PAL)LF Th--SEQ ID NO：11   ISISEIKGVIVHKIEGILFGGCGETYYSRVTHPHLPKDIVRSIAKCMT  RT   TRM TML          L  V    (SEQ.ID.NO.27)
  SEQ ID NO：6   SMTPITh-K-Syn Th(1，2，3)-K-SEQ IDNOS：86，60   KWFKTNAPNGVDEKIRIεKKKKIITITRIITIITTIDεKCGETYYSRVTHPHLPKDIVRSIAKC(SEQ ID NO：87)
  SEQ ID NO：6   CTP11Th-εK-SynTh(1，2，4)-εK-SEQ IDNOS：12，9   TINKPKGYVGKEεKKKKIITITRIITIITTIDεKCGETYYSRVTHPHLPKDIVRSIAKC(SEQ ID NO：88)
  SEQ ID NO：6   ArtMVFTh-εK-SEQ ID NO：89   ISLTEIRTVIVTRLETVLFεKCGETYYSRVTHPHLPKDIVRSIAKC(SEQ ID NO：90)
  SEQ ID NO：6   SMTPITh-εK-ArtMVFTh-εK-SEQ ID NOS：86，89   KWFKTNAPNGVDEKIRIεKISLTEIRTVIVTRLETVLFεKCGETYYSRVTHPHLPKDIVRSIAKC(SEQ ID NO：91)
*klh＝匙孔冒贝血蓝蛋白，化学连接(参见实施例1)
＝复发的(palindromic)
                                          表4(B)
                                本发明的肽构建体的免疫原性
  肽构建体的SEQ ID NO 免疫的物种   对IgE的位点-指向交叉反应性(Log10滴度) ％HRc   ％HRc抑制
  人IgEgE目标物   SEQ ID NO：18   GPa   4.4e   1   96
  SEQ ID NO：85   GPa   4.2e   3   87
  SEQ ID NO：18   Piga   4.1e   3   84
  SEQ ID NO：18   Baboona   4.8e   8   53
  狗IgE目标物   SEQ ID NO：87   GPb   3.4f   NT   NT
  SEQ ID NO：88   GPb   3.2f   NT   NT
  SEQ ID NO：90   GPb   3.2f   NT   NT
  SEQ ID NO：91   GPb   3.2f   NT   NT
a豚鼠，猪和狒狒用人IgE肽构建体在0，3和6周接种，第8周收集的血清进行人IgEELISA检测和HR抑制。
b豚鼠用狗IgE肽构建体在0，2和4周接种，第6周收集血清，进行狗IgE ELISA。
c平均％HR
d％HR抑制＝对照-％HR/对照×100
GP：豚鼠
NT：未检测
                                    表5
                      外源病原体来源的Th表位的氨基酸序列
  Th描述   SEQ ID NO   氨基酸序列
  MVF288-302Th   61   LSEIKGVIVHRLEGV
  MVF258-277Th   62   GILESRGIKARITHVDTESY
  TT830-844Th   63   KKQYIKANSKFIGITEL
  TT947-966Th   64   KKFNNFTVSFWLRVPKVSASHL
  PT149-126Th   65   KKLRRLLYMIYMSGLAVRVHVSKEEQYYDY
  TT73-99Th   66   YDPNYLRTDSDKDRFLQTMVKLFNRIK
  PT18-41Th   67   GAYARCPNGTRALTVAELRGNAEL
  HBs19-32Th   68   FFLLTRILTIPQSLD
  HBc120-140Th   69   VSFGVWIRTPPAYRPPNAPIL
  HBc21-40Th   70   SDFFPSVRDLLDTASALYRE
  HBc50-69Th   71   PHHTALRQAILCWGELMTLA
  TT615-631Th   72   WVRDIIDDFTNESSQKT
  HIV gp41 Th6(N-)   73   RAGRAILHIPTRIRQGLER
  HIV gp41 Th6(C-)   74   AVAEGTDRVIEVLQRAGRAIL
  CT A8106-130 Th   75   ALNIWDRFDVFTLGATSGYLKGNS
  CT P11 Th   12   TINKPKGYVGKE
  DT1 Th   76   DSETADNLEKTVAALSILPGHG
  DT4 Th   77   EEIVAQSIALSSLMVAQAIPLVGELVDIGFAATNFVESC
  PF Th   78   DIEKKIAKMEKASSVFNVVNS
  SM Th   79   KWFKTNAPNGVDEKIRI
  TraT1 Th   80   GLQGKIADAVKAKG
  TraT4 Th   81   GLAAGLVGMAADAMVEDVN
  TraT6 Th   82   STETGNQHHYQTRVVSNANK
  SMTPITh   86   KWFKTNAPNGVDEKIRI
                                表6
                  代表性人工Th表位和SSAL的氨基酸序列
  Th描述   SEQ ID NO：   氨基酸序列
  (1，4，9PALINDROMIC)Th   10   ISEIKGVIVHKIEGIMT  RT   TRM TML          L  V
  Syn Th(1，2，4)   9   KKKIITITRIITIITTID
  IS(1，4，9PALINDROMIC)LF简化的Th   60   ISISEIKGVIVHKIEGILFT  RT   TR  T
  IS(1，4，9PALINDROMIC)LF Th   11   ISISEIKGVIVHKIEGTLFMT  RT   TRM TML          L  V
  ArtMVF Th   89   ISLTEIRTVIVTRLETVLF
                          表7
                     PCA反应的抑制
  IgE稀释度   大鼠#5   大鼠#6
  没有抗-IgE(mm)   抗-IgE1∶2(mm)   没有抗-IgE(mm)   抗-IgE1∶2(mm)
  0   0   0   0   0
  1∶496   0   0   4.3   0
  1∶248   0   0   7.0   6.0
  1∶124   11   4*   13.0   12.7
*极浅的蓝
                            序列表
(1)一般信息：
(i)申请人：UNITED BIOMEDICAL INC.，ET AL.
(ii)发明名称：作为免疫原治疗过敏症的肽组合物
(iii)序列数目：91
(iv)通讯地址：
    (A)地址：Morgan & Finnegan
    (B)街道：345 Park Avenue
    (C)城市：New York
    (D)州NY
    (E)国家：USA
    (F)邮政编码：10154-0054
(v)计算机可读形式：
    (A)媒体类型：软盘
    (B)计算机：IBM PC兼容机
    (C)操作系统PC-DOS/MS-DOS
    (D)软件WORD 80
(vi)在先申请数据：
    (A)申请号：US 09/100,287
    (B)申请日：20 JUNE 1998
    (C)分类号：514
(vii)当前申请数据：
    (A)申请号：待定
    (B)申请日：21-JUN-1999
    (C)分类号：
(viii)律师/代理人资料：
    (A)姓名：MARIA C.H.LIN
    (B)注册号：29,323
    (C)参考/案卷号：1151-4155PC1
(ix)电讯信息：
    (A)电话：212-758-4800
    (B)传真：212-751-6849
(2)SEQ ID NO：1的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：325氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：蛋白质
(ix)特征：
    (A)名称/要点：人IgE的ε链
(x)参考文献：Dorrington和Bennich，免疫学综述(Immunol Rev)，1978，41 3-25
(xi)序列描述：SEQ ID NO：1：
Val Cys Ser Arg Asp Phe Thr Pro Pro Thr Val Lys
  1               5                  10
Ile Leu Gln Ser Ser Cys Asp Gly Gly Gly His Phe
         15                  20
Pro Pro Thr Ile Gln Leu Leu Cys Leu Val Ser Gly
 25                  30                  35
Tyr Thr Pro Gly Thr Ile Asn Ile Thr Trp Leu Glu
             40                  45
Asp Gly Gln Val Met Asp Val Asp Leu Ser Thr Ala
     50                  55                  60
Ser Thr Thr Gln Glu Gly Glu Leu Ala Ser Thr Gln
                 65                  70
Ser Glu Leu Thr Leu Ser Gln Lys His Trp Leu Ser
         75                  80
Asp Arg Thr Tyr Thr Cys Gln Val Thr Tyr Gln Gly
 85                  90                  95
His Thr Phe Glu Asp Ser Thr Lys Lys Cys Ala Asp
            100                 105
Ser Asn Pro Arg Gly Val Ser Ala Tyr Leu Ser Arg
    110                 115                 120
Pro Ser Pro Phe Asp Leu Phe Ile Arg Lys Ser Pro
                125                 130
Thr Ile Thr Cys Leu Val Val Asp Leu Ala Pro Ser
        135                 140
Lys Gly Thr Val Asn Leu Thr Trp Ser Arg Ala Ser
145                 150                 155
Gly Lys Pro Val Asn His Ser Thr Arg Lys Glu Glu
            160                 165
Lys Gln Arg Asn Gly Thr Leu Thr Val Thr Ser Thr
    170                 175                 180
Leu Pro Val Gly Thr Arg Asp Trp Ile Glu Gly Glu
                185                 190
Thr Tyr Gln Cys Arg Val Thr His Pro His Leu Pro
        195                 200
Arg Ala Leu Met Arg Ser Thr Thr Lys Thr Ser Gly
205                 210                 215
Pro Arg Ala Ala Pro Glu Val Tyr Ala Phe Ala Thr
            220                 225
Pro Glu Trp Pro Gly Ser Arg Asp Lys Arg Thr Leu
    230                 235                 240
Ala Cys Leu Ile Gln Asn Phe Met Pro Glu Asp Ile
                245                 250
Ser Val Gln Trp Leu His Asn Glu Val Gln Leu Pro
        255                 260
Asp Ala Arg His Ser Thr Thr Gln Pro Arg Lys Thr
265                 270                 275
Lys Gly Ser Gly Phe Phe Val Phe Ser Arg Leu Glu
            280                 285
Val Thr Arg Ala Glu Trp Gln Glu Lys Asp Glu Phe
    290                 295                 300
Ile Cys Arg Ala Val His Glu Ala Ala Ser Pro Ser
                305                 310
Gln Thr Val Gln Arg Ala Val Ser Val Asn Pro Gly
        315                 320
Lys
325
(2)SEQ ID NO：2的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：312氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：蛋白质
(ix)特征：
    (A)名称/要点：狗IgE的ε链
(x)参考文献Patel等，免疫遗传学(Immunogenetics)，1995，41 282-286
(xi)序列描述：SEQ ID NO 2
Ala Cys Ala Leu Asn Phe Ile Pro Pro Thr Val Lys
  1               5                 10
Leu Phe His Ser Ser Cys Asn Pro Val Gly Asp Thr
         15                  20
His Thr Thr Ile Gln Leu Leu Cys Leu Ile Ser Gly
 25                  30                  35
Tyr Val Pro Gly Asp Met Glu Val Ile Trp Leu Val
             40                  45
Asp Gly Gln Lys Ala Thr Asn Ile Phe Pro Tyr Thr
     50                  55                  60
Ala Pro Gly Thr Lys Glu Gly Asn Val Thr Ser Thr
                 65                  70
His Ser Glu Leu Asn Ile Thr Gln Gly Glu Trp Val
         75                  80
Ser Gln Lys Thr Tyr Thr Cys Gln Gly Phe Thr Phe
 85                  90                  95
Lys Asp Glu Ala Arg Lys Cys Ser Glu Ser Asp Pro
            100                 105
Arg Gly Val Thr Ser Tyr Leu Ser Pro Pro Ser Pro
    110                 115                 120
Leu Asp Leu Tyr Val His Lys Ala Pro Lys Ile Thr
                125                 130
Cys Leu Val Val Asp Leu Ala Thr Met Glu Gly Met
        135                 140
Asn Leu Thr Trp Tyr Arg Glu Ser Lys Glu Pro Val
145                 150                 155
Asn Pro Gly Pro Leu Asn Lys Lys Asp His Phe Asn
            160                 165
Gly Thr Ile Thr Val Thr Ser Thr Leu Pro Val Asn
    170                 175                 180
Thr Asn Asp Trp Ile Glu Gly Glu Thr Tyr Tyr Cys
                185                 190
Arg Val Thr His Pro His Leu Pro Lys Asp Ile Val
        195                 200
Arg Ser Ile Ala Lys Ala Pro Gly Lys Arg Ala Pro
205                 210                 215
Pro Asp Val Tyr Leu Phe Leu Pro Pro Glu Glu Glu
            220                 225
Gln Gly Thr Lys Asp Arg Val Thr Leu Thr Cys Leu
    230                 235                 240
Ile Gln Asn Phe Phe Pro Ala Asp Ile Ser Val Gln
                245                 250
Trp Leu Arg Asn Asp Ser Pro Ile Gln Thr Asp Gln
        255                 260
Tyr Thr Thr Thr Gly Pro His Lys Val Ser Gly Ser
265                 270                 275
Arg Pro Ala Phe Phe Ile Phe Ser Arg Leu Glu Val
            280                 285
Ser Arg Val Asp Trp Glu Gln Lys Asn Lys Phe Thr
    290                 295                 300
Cys Gln Val Val His Glu Ala Leu Ser Gly Ser Arg
                305                 310
(2)SEQ ID NO：3的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：313氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：蛋白质
(iX)特征：
    (A)名称/要点：大鼠IgE的ε链
(x)参考文献：Steen等，分子生物学杂志，1984，177：19-32
(xi)序列描述：SEQ ID NO：3：
Ala Arg Pro Val Asn Ile Thr Lys Pro Thr Val Asp
  1               5                  10
Leu Leu His Ser Ser Cys Asp Pro Asn Ala Phe His
         15                  20
Ser Thr Ile Gln Leu Tyr Cys Phe Val Tyr Gly His
 25                  30                  35
Ile Gln Asn Asp Val Ser Ile His Trp Leu Met Asp
             40                  45
Asp Arg Lys Ile Tyr Asp Thr His Ala Gln Asn Val
     50                  55                  60
Leu Ile Lys Glu Glu Gly Lys Leu Ala Ser Thr Tyr
                 65                  70
Ser Arg Leu Asn Ile Thr Gln Gln Gln Trp Met Ser
         75                  80
Glu Ser Thr Phe Thr Cys Lys Val Thr Ser Gln Gly
 85                  90                  95
Glu Asn Tyr Trp Ala His Thr Arg Arg Cys Ser Asp
            100                 105
Asp Glu Pro Arg Gly Val Ile Thr Tyr Leu Ile Pro
    110                 115                 120
Pro Ser Pro Leu Asp Leu Tyr Glu Asn Gly Thr Pro
                125                 130
Lys Leu Thr Cys Leu Val Leu Asp Leu Glu Ser Glu
        135                 140
Glu Asn Ile Thr Val Thr Trp Val Arg Glu Arg Lys
145                 150                 155
Lys Ser Ile Gly Ser Ala Ser Gln Arg Ser Thr Lys
            160                 165
His His Asn Ala Thr Thr Ser Ile Thr Ser Ile Leu
    170                 175                 180
Pro Val Asp Ala Lys Asp Trp Ile Glu Gly Glu Gly
                185                 190
Tyr Gln Cys Arg Val Asp His Pro His Phe Pro Lys
        195                 200
Pro Ile Val Arg Ser Ile Thr Lys Ala Leu Gly Leu
205                 210                 215
Arg Ser Ala Pro Glu Val Tyr Val Phe Leu Pro Pro
            220                 225
Glu Glu Glu Glu Lys Asn Lys Arg Thr Leu Thr Cys
    230                 235                 240
Leu Ile Gln Asn Phe Phe Pro Glu Asp Ile Ser Val
                245                 250
Gln Trp Leu Gln Asp Ser Lys Leu Ile Pro Lys Ser
        255                 260
Gln His Ser Thr Thr Thr Pro Leu Lys Thr Asn Gly
265                 270                 275
Ser Asn Gln Arg Phe Phe Ile Phe Ser Arg Leu Glu
            280                 285
Val Thr Lys Ala Leu Trp Thr Gln Thr Lys Gln Phe
    290                 295                 300
Thr Cys Arg Val Ile His Glu Ala Leu Arg Glu Pro
                305                 310
Arg
(2)SEQ ID NO：4的信息
(i)序列特征
    (A)长度：313氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：蛋白质
(ix)特征
    (A)名称/要点：小鼠IgE的ε链
(x)参考文献：Ishida等，EMBC，1982，1 1117-1123.
(xi)序列描述：SEQ ID NO：4：
Val Arg Pro Val Thr His Ser Leu Ser Pro Pro Trp
  1               5                  10
Ser Tyr Ser Ile His Arg Cys Asp Pro Asn Ala Phe
         15                  20
His Ser Thr Ile Gln Leu Tyr Cys Phe Ile Tyr Gly
 25                  30                  35
His Ile Leu Asn Asp Val Ser Val Ser Trp Leu Met
             40                  45
Asp Asp Arg Glu Ile Thr Asp Thr Leu Ala Gln Thr
     50                  55                  60
Val Leu Ile Lys Glu Glu Gly Lys Leu Ala Ser Thr
                 65                  70
Cys Ser Lys Leu Asn Ile Thr Glu Gln Gln Trp Met
         75                  80
Ser Glu Ser Thr Phe Thr Cys Arg Val Thr Ser Gln
 85                  90                  95
Gly Cys Asp Tyr Leu Ala His Thr Arg Arg Cys Pro
            100                 105
Asp His Glu Pro Arg Gly Ala Ile Thr Tyr Leu Ile
    110                 115                 120
Pro Pro Ser Pro Leu Asp Leu Tyr Gln Asn Gly Ala
                125                 130
Pro Lys Leu Thr Cys Leu Val Val Asp Leu Glu Ser
        135                 140
Glu Lys Asn Val Asn Val Thr Trp Asn Gln Glu Lys
145                 150                 155
Lys Thr Ser Val Ser Ala Ser Gln Trp Tyr Thr Lys
            160                 165
His His Asn Asn Ala Thr Thr Ser Ile Thr Ser Ile
    170                 175                 180
Leu Pro Val Val Ala Lys Asp Trp Ile Glu Gly Tyr
                185                 190
Gly Tyr Gln Cys Ile Val Asp Arg Pro Asp Phe Pro
        195                 200
Lys Pro Ile Val Arg Ser Ile Thr Lys Thr Pro Gly
205                 210                 215
Gln Arg Ser Ala Pro Glu Val Tyr Val Phe Pro Pro
            220                 225
Pro Glu Glu Glu Ser Glu Asp Lys Arg Thr Leu Thr
    230                 235                 240
Cys Leu Ile Gln Asn Phe Phe Pro Glu Asp Ile Ser
                245                 250
Val Gln Trp Leu Gly Asp Gly Lys Leu Ile Ser Asn
        255                 260
Ser Gln His Ser Thr Thr Thr Pro Leu Lys Ser Asn
265                 270                 275
Gly Asn Gln Gly Phe Phe Ile Phe Ser Arg Leu Glu
            280                 285
Val Ala Lys Thr Leu Trp Thr Gln Arg Lys Gln Phe
    290                 295                 300
Thr Cys Gln Val Ile His Glu Ala Leu Gln Lys Pro
                305                 310
Arg
(2)SEQ ID NO：5的信息
(i)序列特征：
    (A)长度：25氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型 肽
(xi)序列描述SEQ ID NO：5
Cys Gly Glu Thr Tyr Gln Ser Arg Val Thr His Pro
  1               5                  10
His Leu Pro Arg Ala Leu Met Arg Ser Thr Thr Lys
         15                 20
Cys
25
(2)SEQ ID NO：6的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：25氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：6：
Cys Gly Glu Thr Tyr Tyr Ser Arg Val Thr His Pro
1                 5                  10
His Leu Pro Lys Asp Ile Val Arg Ser Ile Ala Lys
         15                  20
Cys
 25
(2)SEQ ID NO：7的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：25氨基酸
    (B)类型 氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO 7
Cys Gly Glu Gly Tyr Gln Ser Arg Val Asp His Pro
  1               5                  10
His Phe Pro Lys Pro Ile Val Arg Ser Ile Thr Lys
         15                  20
Cys
 25
(2)SEQ ID NO：8的信息
(i)序列特征：
    (A)长度：25氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：8：
Cys Gly Tyr Gly Tyr Gln Ser Ile Val Asp Arg Pro
1                 5                  10
Asp Phe Pro Lys Pro Ile Val Arg Ser Ile Thr Leu
         15                  20
Cys
 25
(2)SEQ ID NO：9的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：18氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述SEQ ID NO 9
Lys Lys Lys Ile Ile Thr Ile Thr Arg Ile Ile Thr
  1               5                  10
Ile Ile Thr Thr Ile Asp
         15
(2)SEQ ID NO：10的信息
(i)序列特征：
    (A)长度：15氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：1
    (D)其它信息：/注＝″Ile，Met或Leu″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：2
    (D)其它信息：/注＝″Ser或Thr″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：5
    (D)其它信息：/注＝″Lys或Arg″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：6
    (D)其它信息：/注＝″Gly或Thr″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：10
    (D)其它信息：/注＝″His或Thr″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：11
    (D)其它信息：/注＝″Lys或Arg″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：12
    (D)其它信息：/注＝″Ile，Met或Leu″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：14
    (D)其它信息：/注＝″Gly或Thr″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：15
    (D)其它信息：/注＝″Ile，Met或Val″
(xi)序列描述：SEQ ID NO：10：
Xaa Xaa Glu Ile Xaa Xaa Val Ile Val Xaa Xaa Xaa
  1               5                  10
Glu Xaa Xaa
        15
(2)SEQ ID NO：11的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：19氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：3
    (D)其它信息：/注＝″Ile，Met或Leu″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：4
    (D)其它信息：/注＝″Ser或Thr″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：7
    (D)其它信息：/注＝″Lys或Arg″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：8
    (D)其它信息：/注＝″Gly或Thr″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：12
    (D)其它信息：/注＝″His或Thr″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：13
    (D)其它信息：/注＝″Lys或Arg″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：14
    (D)其它信息：/注＝″Ile，Met或Leu″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：16
    (D)其它信息：/注＝″Gly或Thr″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：17
    (D)其它信息：/注＝″Ile，Met或Val″
(xi)序列描述：SEQ ID NO：11：
Ile Ser Xaa Xaa Glu Ile Xaa Xaa Val Ile Val Xaa
  1               5                  10
Xaa Xaa Glu Xaa Xaa Leu Phe
         15
(2)SEQ ID NO：12的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：12氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(Xi)序列描述：SEQ ID NO：12：
Thr Ile Asn Lys Pro Lys Gly Tyr Val Gly Lys Glu
  1               5                  10
(2)SEQ ID NO：13的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：16氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：13：
Thr Ala Lys Ser Lys Lys Phe Pro Ser Tyr Thr Ala
  1               5                  10
Thr Tyr Gln Phe
         15
(2)SEQ ID NO：14的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：45氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO 14：
Lys Lys Lys Ile Ile Thr Ile Thr Arg Ile Ile Thr
  1               5                  10
Ile Ile Thr Thr Ile Asp Gly Gly Cys Gly Glu Thr
         15                  20
Tyr Gln Ser Arg Val Thr His Pro His Leu Pro Arg
 25                  30                  35
Ala Leu Met Arg Ser Thr Thr Lys Cys
             40                  45
(2)SEQ ID NO：的信息15：
(i)序列特征：
    (A)长度：63氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO.15
Thr Ala Lys Ser Lys Lys Phe Pro Ser Tyr Thr Ala
  1               5                  10
Thr Tyr Gln Phe Gly Gly Lys Lys Lys Ile Ile Thr
         15                  20
Ile Thr Arg Ile Ile Thr Ile Ile Thr Thr Ile Asp
 25                  30                  35
Gly Gly Cys Gly Glu Thr Tyr Gln Ser Arg Val Thr
             40                  45
His Pro His Leu Pro Arg Ala Leu Met Arg Ser Thr
     50                  55                  60
Thr Lys Cys
(2)SEQ ID NO：的信息16
(i)序列特征：
    (A)长度：6氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO 16
Pro Pro Xaa Pro Xaa Pro
  1                   5
(2)SEQ ID NO：17的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：59氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：17
Thr Ile Asn Lys Pro Lys Gly Tyr Val Gly Lys Glu
  1               5                  10
Gly Gly Lys Lys Lys Ile Ile Thr Ile Thr Arg Ile
         15                  20
Ile Thr Ile Ile Thr Thr Ile Asp Gly Gly Cys Gly
 25                  30                  35
Glu Thr Tyr Gln Ser Arg Val Thr His Pro His Leu
             40                  45
Pro Arg Ala Leu Met Arg Ser Thr Thr Lys Cys
     50                  55
(2)SEQ ID NO：18的信息
(i)序列特征
    (A)长度：46氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：4
    (D)其它信息：/注＝″Ser或Thr″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：7
    (D)其它信息：/注＝″Lys或Arg″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：8
    (D)其它信息：/注＝″Gly或Thr″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：12
    (D)其它信息：/注＝″His或Thr″
(ix)特征：
    (A)名称/要点 修饰位点
    (B)位置：13
    (D)其它信息/注＝″Lys或Arg″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：16
    (D)其它信息：/注＝″Gly或Thr″
(xi)序列描述：SEQ ID NO 18
Ile Ser Ile Xaa Glu Ile Xaa Xaa Val Ile Val Xaa
  1               5                  10
Xaa Ile Glu Xaa Ile Leu Phe Gly Gly Cys Gly Glu
         15                  20
Thr Tyr Gln Ser Arg Val Thr His Pro His Leu Pro
 25                  30                  35
Arg Ala Leu Met Arg Ser Thr Thr Lys Cys
             40                  45
(2)SEQ ID NO：19的信息
(i)序列特征：
    (A)长度：63氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：21
    (D)其它信息：/注＝″Ser或Thr″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：24
    (D)其它信息：/注＝″Lys或Arg″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：25
    (D)其它信息：/注＝″Gly或Thr″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置29
    (D)其它信息：/注＝″His或Thr″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：30
    (D)其它信息：/注＝″Lys或Arg″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：33
    (D)其它信息：/注＝″Gly或Thr″
(xi)序列描述：SEQ ID NO.19：
Thr Ala Lys Ser Lys Lys Phe Pro Ser Tyr Thr Ala
  1               5                  10
Thr Gln Phe Gly Gly Ile Ser Ile Xaa Glu Ile Xaa
         15                  20
Xaa Val Ile Val Xaa Xaa Ile Glu Xaa Ile Leu Phe
 25                  30                  35
Gly Gly Cys Gly Glu Thr Tyr Gln Ser Arg Val Thr
             40                  45
His Pro His Leu Pro Arg Ala Leu Met Arg Ser Thr
     50                  55                  60
Thr Lys Cys
(2)SEQ ID NO：20的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：60氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：18
    (D)其它信息：/注＝″Ser或Thr″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：21
    (D)其它信息：/注＝″Lys或Arg″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：22
    (D)其它信息：/注＝″Gly或Thr″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：26
    (D)其它信息：/注＝″His或Thr″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：27
    (D)其它信息：/注＝″Lys或Arg″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：30
    (D)其它信息：/注＝″GLy或Thr″
(xi)序列描述：SEQ ID NO：20
Thr Ile Asn Lys Pro Lys Gly Tyr Val Gly Lys Glu
  1               5                  10
Gly Gly Ile Ser Ile Xaa Glu Ile Xaa Xaa Val Ile
         15                  20
Val Xaa Xaa Ile Glu Xaa Ile Leu Phe Gly Gly Cys
 25                  30                  35
Gly Glu Thr Tyr Gln Ser Arg Val Thr His Pro His
             40                  45
Leu Pro Arg Ala Leu Met Arg Ser Thr Thr Lys Cys
     50                  55                  60
(2)SEQ ID NO：21的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：42氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：1
    (D)其它信息：/注＝″Ile，Met或Leu″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：2
    (D)其它信息：/注＝″Ser或Thr″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：5
    (D)其它信息：/注＝″Lys或Arg″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：6
    (D)其它信息：/注＝″Gly或Thr″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：10
    (D)其它信息：/注＝″His或Thr″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：11
    (D)其它信息：/注＝″Lys或Arg″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：12
    (D)其它信息：/注＝″Ile，Met或Leu″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：14
    (D)其它信息：/注＝″Gly或Thr″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：15
    (D)其它信息：/注＝″Ile，Met或Val″
(xi)序列描述：SEQ ID NO：21：
Xaa Xaa Glu Ile Xaa Xaa Val Ile Val Xaa Xaa Xaa
  1               5                  10
Glu Xaa Xaa Gly Gly Cys Gly Glu Thr Tyr Gln Ser
         15                  20
Arg Val Thr His Pro His Leu Pro Arg Ala Leu Met
 25                  30                  35
Arg Ser Thr Thr Lys Cys
             40
(2)SEQ ID NO：22的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：60氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：19
    (D)其它信息：/注＝″Ile，Met或Thr″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：20
    (D)其它信息：/注＝″Ser或Thr″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：23
    (D)其它信息：/注＝″Lys或Arg″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：24
    (D)其它信息：/注＝″Gly或Thr″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：28
    (D)其它信息：/注＝″His或Thr″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：29
    (D)其它信息：/注＝″Lys或Arg″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：30
    (D)其它信息：/注＝″Ile、Met或Leu″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：32
    (D)其它信息：/注＝″Gly或Thr″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：33
    (D)其它信息：/注＝″Ile、Met或Val″
(xi)序列描述：SEQ ID NO：22：
Thr Ala Lys Ser Lys Lys Phe Pro Ser Tyr Thr Ala
  1                   5              10
Thr Tyr Gln Phe Gly Gly Xaa Xaa Glu Ile Xaa Xaa
         15                  20
Val Ile Val Xaa Xaa Xaa Glu Xaa Xaa Gly Gly Cys
 25                  30                  35
Gly Glu Thr Tyr Gln Ser Arg Val Thr His Pro His
             40                  45
Leu Pro Arg Ala Leu Met Arg Ser Thr Thr Lys Cys
     50                  55                  60
(2)SEQ ID NO：23的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：56氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：15
    (D)其它信息：/注＝″Ile，Met或Leu″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：16
    (D)其它信息：/注＝″Ser或Thr″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：19
    (D)其它信息：/注＝″Lys或Arg″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：20
    (D)其它信息：/注＝″Gly或Thr″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：24
    (D)其它信息：/注＝″His或Thr″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：25
    (D)其它信息：/注＝″Lys或Arg″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：26
    (D)其它信息：/注＝″Ile、Met或Leu″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：28
    (D)其它信息：/注＝″Gly或Thr″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：29
    (D)其它信息：/注＝″Ile、Met或Val″
(xi)序列描述：SEQ ID NO：23：
Thr Ile Asn Lys Pro Lys Gly Tyr Val Gly Lys Glu
  1               5                  10
Gly Gly Xaa Xaa Glu Ile Xaa Xaa Val Ile Val Xaa
         15                  20
Xaa Xaa Glu Xaa Xaa Gly Gly Cys Gly Glu Thr Tyr
 25                  30                  35
Gln Ser Arg Val Thr His Pro His Leu Pro Arg Ala
             40                  45
Leu Met Arg Ser Thr Thr Lys Cys
     50                  55
(2)SEQ ID NO：24的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：46氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：4
    (D)其它信息：/注＝″Ser或Thr″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：7
    (D)其它信息：/注＝″Lys或Arg″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：8
    (D)其它信息：/注＝″Gly或Thr″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：12
    (D)其它信息：/注＝″His或Thr″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：13
    (D)其它信息：/注＝″Lys或Arg″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：16
    (D)其它信息：/注＝″Gly或Thr″
(xi)序列描述：SEQ ID NO：24
Ile Ser Ile Xaa Glu Ile Xaa Xaa Val Ile Val Xaa
  1               5                  10
Xaa Ile Glu Xaa Ile Leu Phe Gly Gly Cys Gly Tyr
         15                  20
Gly Tyr Gln Ser Ile Val Asp His Pro Asp Phe Pro
 25                  30                  35
Lys Pro Ile Val Arg Ser Ile Thr Lys Cys
             40                  45
(2)SEQ ID NO：25的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：45氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：25：
Lys Lys Lys Ile Ile Thr Ile Thr Arg Ile Ile Thr
  1               5                  10
Ile Ile Thr Thr Ile Asp Gly Gly Cys Gly Tyr Gly
         15                  20
Tyr Gln Ser Ile Val Asp His Pro Asp Phe Pro Lys
 25                  30                  35
Pro Ile Val Arg Ser Ile Thr Lys Cys
             40                  45
(2)SEQ ID NO：26的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：45氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：26：
Lys Lys Lys Ile Ile Thr Ile Thr Arg Ile Ile Thr
  1               5                  10
Ile Ile Thr Thr Ile Asp Gly Gly Cys Gly Glu Thr
         15                  20
Tyr Tyr Ser Arg Val Thr His Pro His Leu Pro Lys
 25                  30                  35
Asp Ile Val Arg Ser Ile Ala Lys Cys
             40                  45
(2)SEQ ID NO：27的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：46氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：1
    (D)其它信息：/注＝″Met或Leu″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：2
    (D)其它信息：/注＝″Thr″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：7
    (D)其它信息：/注＝″Arg″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：8
    (D)其它信息：/注＝″Thr″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：12
    (D)其它信息：/注＝″Thr″
(ix)特征
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：13
    (D)其它信息：/注＝″Arg″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：14
    (D)其它信息：/注＝″Met或Leu″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：16
    (D)其它信息：/注＝″Thr″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：17
    (D)其它信息：/注＝″Met或Val″
(xi)序列描述：SEQ ID NO：27：
Ile Ser Ile Ser Glu Ile Lys Gly Val Ile Val His
  1               5                  10
Lys Ile Glu Gly Ile Leu Phe Gly Gly Cys Gly Glu
         15                  20
Thr Tyr Tyr Ser Arg Val Thr His Pro His Leu Pro
 25                  30                  35
Lys Asp Ile Val Arg Ser Ile Ala Lys Cys
             40                  45
(2)SEQ ID NO：28的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：49氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：28：
Cys Ala Asp Ser Asn Pro Arg Gly Val Ser Ala Tyr
  1               5                  10
Leu Ser Arg Pro Ser Pro Phe Asp Leu Phe Ile Arg
         15                  20
Lys Ser Pro Thr Ile Thr Ser Leu Val Val Asp Leu
 25                  30                  35
Ala Pro Ser Lys Gly Thr Val Asn Leu Thr Trp Ser
             40                  45
Arg
(2)SEQ ID NO：29的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：60氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：29：
Gln Gly His Thr Phe Glu Asp Ser Thr Lys Lys Cys
  1               5                  10
Ala Asp Ser Asn Pro Arg Gly Val Ser Ala Tyr Leu
         15                  20
Ser Arg Pro Ser Pro Phe Asp Leu Phe Ile Arg Lys
 25                  30                  35
Ser Pro Thr Ile Thr Ser Leu Val Val Asp Leu Ala
             40                  45
Pro Ser Lys Gly Thr Val Asn Leu Thr Trp Ser Arg
     50                  55                  60
(2)SEQ ID NO：30的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：64氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：30：
Gln Val Thr Tyr Gln Gly His Thr Phe Glu Asp Ser
  1               5                  10
Thr Lys Lys Cys Ala Asp Ser ASn Pro Arg Gly Val
         15                  20
Ser Ala Tyr Leu Ser Arg Pro Ser Pro Phe Asp Leu
 25                  30                  35
Phe Ile Arg Lys Ser Pro Thr Ile Thr Ser Leu Val
             40                  45
Val Asp Leu Ala Pro Ser Lys Gly Thr Val Asn Leu
     50                  55                  60
Thr Trp Ser Arg
(2)SEQ ID NO：31的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：76氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：31：
Gln Lys His Trp Leu Ser Asp Arg Thr Tyr Thr Ser
  1               5                  10
Gln Val Thr Tyr Gln Gly His Thr Phe Glu Asp Ser
         15                  20
Thr Lys Lys Cys Ala Asp Ser Asn Pro Arg Gly Val
 25                  30                  35
Ser Ala Tyr Leu Ser Arg Pro Ser Pro Phe Asp Leu
             40                  45
Phe Ile Arg Lys Ser Pro Thr Ile Thr Ser Leu Val
     50                  55                  60
Val Asp Leu Ala Pro Ser Lys Gly Thr Val Asn Leu
                 65                  70
Thr Trp Ser Arg
         75
(2)SEQ ID NO：32的信息
(i)序列特征：
    (A)长度：35氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：32
Cys Ala Asp Ser Asn Pro Arg Gly Val Ser Ala Tyr
  1               5                  10
Leu Ser Arg Pro Ser Pro Phe Asp Leu Phe Ile Arg
         15                  20
Lys Ser Pro Thr Ile Thr Ser Leu Val Val Asp
 25                  30                  35
(2)SEQ ID NO：33的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：46氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：33：
Gln Gly His Thr Phe Glu Asp Ser Thr Lys Lys Cys
  1               5                  10
Ala Asp Ser Asn Pro Arg Gly Val Ser Ala Tyr Leu
         15                  20
Ser Arg Pro Ser Pro Phe Asp Leu Phe Ile Arg Lys
 25                  30                  35
Ser Pro Thr Ile Thr Ser Leu Val Val Asp
             40                  45
(2)SEQ ID NO：34的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：50氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：34：
Gln Val Thr Tyr Gln Gly His Thr Phe Glu Asp Ser
  1               5                  10
Thr Lys Lys Cys Ala Asp Ser Asn Pro Arg Gly Val
         15                  20
Ser Ala Tyr Leu Ser Arg Pro Ser Pro Phe Asp Leu
 25                  30                  35
Phe Ile Arg Lys Ser Pro Thr Ile Thr Ser Leu Val
             40                  45
Val Asp
     50
(2)SEQ ID NO：35的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：62氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：35：
(xi)序列描述：SEQ ID NO：35：
Gln Lys His Trp Leu Ser Asp Arg Thr Tyr Thr Ser
  1               5                  10
Gln Val Thr Tyr Gln Gly His Thr Phe Glu Asp Ser
         15                  20
Thr Lys Lys Cys Ala Asp Ser Asn Pro Arg Gly Val
 25                  30                  35
Ser Ala Tyr Leu Ser Arg Pro Ser Pro Phe Asp Leu
             40                  45
Phe Ile Arg Lys Ser Pro Thr Ile Thr Ser Leu Val
     50                  55                  60
Val Asp
(2)SEQ ID NO：36的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：29氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：36：
Cys Ala Asp Ser Asn Pro Arg Gly Val Ser Ala Tyr
  1               5                  10
Leu Ser Arg Pro Ser Pro Phe Asp Leu Phe Ile Arg
         15                  20
Lys Ser Pro Thr Ile
 25
(2)SEQ ID NO：37的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：40氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：37：
Gln Gly His Thr Phe Glu Asp Ser Thr Lys Lys Cys
  1               5                  10
Ala Asp Ser Asn Pro Arg Gly Val Ser Ala Tyr Leu
         15                  20
Ser Arg Pro Ser Pro Phe Asp Leu Phe Ile Arg Lys
 25                  30                  35
Ser Pro Thr Ile
             40
(2)SEQ ID NO：38的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：44氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：38
Gln Val Thr Tyr Gln Gly His Thr Phe Glu Asp Ser
  1               5                  10
Thr Lys Lys Cys Ala Asp Ser Asn Pro Arg Gly Val
         15                  20
Ser Ala Tyr Leu Ser Arg Pro Ser Pro Phe Asp Leu
 25                  30                  35
Phe Ile Arg Lys Ser Pro Thr Ile
             40
(2)SEQ ID NO：39的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：56氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：39：
Gln Lys His Trp Leu Ser Asp Arg Thr Tyr Thr Ser
  1               5                  10
Gln Val Thr Tyr Gln Gly His Thr Phe Glu Asp Ser
         15                  20
Thr Lys Lys Cys Ala Asp Ser Asn Pro Arg Gly Val
 25                  30                  35
Ser Ala Tyr Leu Ser Arg Pro Ser Pro Phe Asp Leu
             40                  45
Phe Ile Arg Lys Ser Pro Thr Ile
     50                  55
(2)SEQ ID NO：40的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：76氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：40
Gln Lys His Trp Leu Ser Asp Arg Thr Tyr Thr Cys
  1               5                  10
Gln Val Thr Tyr Gln Gly His Thr Phe Glu Asp Ser
         15                  20
Thr Lys Lys Cys Ala Asp Ser Asn Pro Arg Gly Val
 25                  30                  35
Ser Ala Tyr Leu Ser Arg Pro Ser Pro Phe Asp Leu
             40                  45
Phe Ile Arg Lys Ser Pro Thr Ile Thr Cys Leu Val
     50                  55                  60
Val Asp Leu Ala Pro Ser Lys Gly Thr Val Asn Leu
                 65                  70
Thr Trp Ser Arg
         75
(2)SEQ ID NO：41的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：10氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：41：
Cys Lys Gln Arg Asn Gly Thr Leu Thr Cys
  1               5                  10
(2)SEQ ID NO：42的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：45氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：42
Gln Lys His Trp Leu Ser Asp Arg Thr Tyr Thr Cys
  1               5                  10
Gln Val Thr Tyr Gln Gly His Thr Phe Glu Asp Ser
         15                  20
Thr Lys Lys Cys Ala Asp Ser Asn Pro Arg Gly Val
 25                  30                  35
Ser Ala Tyr Leu Ser Arg Pro Ser Pro
             40                  45
(2)SEQ ID NO：43的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：34氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：43：
Cys Pro Ser Lys Gly Thr Val Asn Leu Thr Trp Ser
  1               5                  10
Arg Ala Ser Gly Lys Pro Val Asn His Ser Thr Arg
         15                  20
Lys Glu Glu Lys Gln Arg Asn Gly Thr Cys
 25                  30
(2)SEQ ID NO：44的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：33氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO 44：
Cys Pro Val Gly Thr Arg Asp Trp Ile Glu Gly Glu
  1               5                  10
Thr Tyr Gln Cys Arg Val Thr His Pro His Leu Pro
         15                  20
Arg Ala Leu Met Arg Ser Thr Thr Cys
 25                  30
(2)SEQ ID NO：45的信息
(i)序列特征：
    (A)长度：14氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：45：
Ser Thr Thr Lys Thr Ser Gly Pro Arg Ala Ala Pro Glu Val
  1               5                  10
(2)SEQ ID NO：46的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：14氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：46：
Cys Trp Ser Arg Ala Ser Gly Lys Pro Val Cys Asn His Ser
  1               5                  10
(2)SEQ ID NO：47的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：19氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：47：
Cys Ser Arg Pro Ser Pro Phe Asp Leu Phe Ile Arg
  1               5                  10
Lys Ser Pro Thr Ile Thr Cys
         15
(2)SEQ ID NO：48的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：13氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：48：
Cys Val Gly Thr Arg Asp Trp Ile Glu Gly Glu Pro Cys
  1               5                  10
(2)SEQ ID NO：49的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：15氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：49：
Cys Pro Pro Val Gly Thr Arg Asp Trp Ile Glu Gly
  1               5                  10
Glu Pro Cys
         15
(2)SEQ ID NO：50的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：16氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：50：
Cys Lys Glu Glu Lys Gln Arg Asn Gly Thr Leu Thr
  1               5                  10
Val Thr Ser Cys
         15
(2)SEQ ID NO：51的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：8氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：51：
Lys Glu Glu Lys Gln Arg Asn Gly
  1               5
(2)SEQ ID NO：52的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：11氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：52：
Cys Trp Ser Arg Ala Ser Gly Lys Pro Val Cys
  1               5                  10
(2)SEQ ID NO：53的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：21氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：53
Pro Thr Ile Thr Cys Leu Val Leu Asp Leu Ala Pro
  1               5                  10
Ser Lys Gly Thr Val Asn Leu Thr Cys
         15                  20
(2)SEQ ID NO：54的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：16氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：54：
Pro Thr Ile Thr Cys Leu Val Leu Asp Leu Ala Pro
  1               5                  10
Ser Lys Gly Thr
         15
(2)SEQ ID NO：55的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：25氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：55：
Thr Ser Thr Leu Pro Val Gly Thr Arg Asp Trp Ile
  1               5                  10
Glu Gly Glu Thr Tyr Gln Cys Arg Val Thr His Pro
         15                  20
His
 25
(2)SEQ ID NO：56的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：16氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：56：
Pro Thr Ile Thr Ser Leu Val Leu Cys Leu Ala Pro
  1               5                  10
Ser Lys Gly Cys
         15
(2)SEQ ID NO：57的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：23氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：57
Cys Val Asn Leu Thr Trp Ser Arg Ala Ser Gly Lys
  1               5                  10
Pro Val Asn His Ser Thr Arg Lys Glu Glu Cys
         15                  20
(2)SEQ ID NO：58的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：53氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO 58
Cys Thr Trp Ser Arg Ala Ser Gly Lys Pro Val Asn
  1               5                  10
His Ser Thr Arg Lys Glu Glu Lys Gln Arg Asn Gly
         15                  20
Thr Leu Thr Val Thr Ser Thr Leu Pro Val Gly Thr
 25                  30                  35
Arg Asp Trp Ile Glu Gly Glu Thr Tyr Gln Cys Arg
             40                  45
Val Thr His Pro His
     50
(2)SEQ ID NO：59的信息：
(i)序列特征
    (A)长度：10氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：59：
Lys Thr Lys Gly Ser Gly Phe Phe Val Phe
  1               5                  10
(2)SEQ ID NO：60的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：19氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：4
    (D)其它信息：/注＝″Ser或Thr″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：7
    (D)其它信息：/注＝″Lys或Arg″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：8
    (D)其它信息：/注＝″Gly或Thr″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：12
    (D)其它信息：/注＝″His或Thr″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：13
    (D)其它信息：/注＝″Lys或Arg″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：16
    (D)其它信息：/注＝″Gly或Thr″
(xi)序列描述：SEQ ID NO：60：
Ile Ser Ile Xaa Glu Ile Xaa Xaa Val Ile Val Xaa
  1               5                  10
Xaa Ile Glu Xaa Ile Leu Phe
         15
(2)SEQ ID NO：61的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：15氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：61：
Leu Ser Glu Ile Lys Gly Val Ile Val His Arg Leu
  1               5                  10
Glu Gly Val
         15
(2)SEQ ID NO：62的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：20氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：62
Gly Ile Leu Glu Ser Arg Gly Ile Lys Ala Arg Ile
  1               5                  10
Thr His Val Asp Thr Glu Ser Tyr
         15                  20
(2)SEQ ID NO：63的信息
(i)序列特征
    (A)长度：17氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO 63
Lys Lys Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile
  1               5                  10
Gly Ile Thr Glu Leu
         15
(2)SEO ID NO：64的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：22氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：64
Lys Lys Phe Asn Asn Phe Thr Val Ser Phe Trp Leu
  1               5                  10
Arg Val Pro Lys Val Ser Ala Ser His Leu
         15                  20
(2)SEQ ID NO：65的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：30氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO.65
Lys Lys Leu Arg Arg Leu Leu Tyr Met Ile Tyr Met
  1               5                  10
Ser Gly Leu Ala Val Arg Val His Val Ser Lys Glu
         15                  20
Glu Gln Tyr Tyr Aso Tyr
 25                  30
(2)SEQ ID NO：66的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：27氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO 66
Tyr Asp Pro Asn Tyr Leu Arg Thr Asp Ser Aso Lys
  1               5                  10
Asp Arg Phe Leu Gln Thr Met Val Lys Leu Phe Asn
         15                  20
Arg Ile Lys
 25
(2)SEQ ID NO：67的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：24氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO 67
Gly Ala Tyr Ala Arg Cys Pro Asn Gly Thr Arg Ala
  1               5                  10
Leu Thr Val Ala Glu Leu Arg Gly Asn Ala Glu Leu
         15                  20
(2)SEQ ID NO：68的信息
(i)序列特征：
    (A)长度：15氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：68
Phe Phe Leu Leu Thr Arg Ile Leu Thr Ile Pro Gln
  1               5                  10
Ser Leu Asp
         15
(2)SEQ ID NO：69的信息
(i)序列特征：
    (A)长度：21氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：69：
Val Ser Phe Gly Val Trp Ile Arg Thr Pro Pro Ala
  1               5                  10
Tyr Arg Pro Pro Asn Ala Pro Ile Leu
         15                  20
(2)SEQ ID NO：70的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：20氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：70：
Ser Asp Phe Phe Pro Ser Val Arg Asp Leu Leu Asp
  1               5                  10
Thr Ala Ser Ala Leu Tyr Arg Glu
         15                  20
(2)SEQ ID NO：71的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：20氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：71
Pro His His Thr Ala Leu Arg Gln Ala Ile Leu Cys
  1               5                  10
Trp Gly Glu Leu Met Thr Leu Ala
         15                  20
(2)SEQ ID NO：72的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：17氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：72：
Trp Val Arg Asp Ile Ile Asp Asp Phe Thr Asn Glu
  1               5                  10
Ser Ser Gln Lys Thr
         15
(2)SEQ ID NO：73的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：19氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：73：
Arg Ala Gly Arg Ala Ile Leu His Ile Pro Thr Arg
  1               5                  10
Ile Arg Gln Gly Leu Glu Arg
         15
(2)SEQ ID NO：74的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：21氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：74：
Ala Val Ala Glu Gly Thr Asp Arg Val Ile Glu Val
  1               5                  10
Leu Gln Arg Ala Gly Arg Ala Ile Leu
         15                  20
(2)SEQ ID NO：75的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：25氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：75：
Ala Leu Asn Ile Trp Asp Arg Phe Asp Val Phe Ser
  1               5                  10
Thr Leu Gly Ala Thr Ser Gly Tyr Leu Lys Gly Asn
         15                  20
Ser
 25
(2)SEQ ID NO：76的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：22氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：76：
Asp Ser Glu Thr Ala Asp Asn Leu Glu Lys Thr Val
  1               5                  10
Ala Ala Leu Ser Ile Leu Pro Gly His Gly
         15                  20
(2)SEQ ID NO：77的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：39氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：77：
Glu Glu Ile Val Ala Gln Ser Ile Ala Leu Ser Ser
  1               5                  10
Leu Met Val Ala Gln Ala Ile Pro Leu Val Gly Glu
         15                  20
Leu Val Asp Ile Gly Phe Ala Ala Thr Asn Phe Val
 25                  30                  35
Glu Ser Cys
(2)SEQ ID NO：78的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：21氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：78：
Asp Ile Glu Lys Lys Ile Ala Lys Met Glu Lys Ala
  1               5                  10
Ser Ser Val Phe Asn Val Val Asn Ser
         15                  20
(2)SEQ ID NO：79的信息
(i)序列特征
    (A)长度：17氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO 79
Lys Trp Phe Lys Thr Asn Ala Pro Asn Gly Val Asp
  1               5                  10
Glu Lys Ile Arg Ile
         15
(2)SEQ ID NO：80的信息
(i)序列特征
    (A)长度：14氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：80
Gly Leu Gln Gly Lys Ile Ala Asp Ala Val Lys Ala
  1               5                  10
Lys Gly
(2)SEQ ID NO：81的信息
(i)序列特征：
    (A)长度：19氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：81
Gly Leu Ala Ala Gly Leu Val Gly Met Ala Ala Asp
  1               5                  10
Ala Met Val Glu Asp Val Asn
         15
(2)SEQ ID NO：82的信息
(i)序列特征：
    (A)长度：20氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：82
Ser Thr Glu Thr Gly Asn Gln His His Tyr Gln Thr
  1               5                  10
Arg Val Val Ser Asn Ala Asn Lys
         15                  20
(2)SEQ ID NO：83的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：15氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：83：
Cys Pro Ser Pro Phe Asp Leu Phe Ile Arg Lys Ser
  1               5                  10
Pro Thr Cys
         15
(2)SEQ ID NO：84的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：25氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：84：
Cys Gly Glu Thr Tyr Lys Ser Thr Val Ser His Pro
  1               5                  10
Asp Leu Pro Arg Glu Val Val Arg Ser Ile Ala Lys
         15                  20
Cys
 25
(2)SEQ ID NO：85的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：60氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：18
    (D)其它信息：/注＝″Thr″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：21
    (D)其它信息：/注＝“Arg″
(ix)特征：
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：22
    (D)其它信息：/注＝″Thr″
(ix)特征
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：26
    (D)其它信息：/注＝″Thr″
(ix)特征：
    (A)名称/要：点修饰位点
    (B)位置：27
    (D)其它信息：/注＝″Arg″
(ix)特征
    (A)名称/要点：修饰位点
    (B)位置：30
    (D)其它信息：/注＝″Thr″
(xi)序列描述：SEQ ID NO 85
Thr Ile Asn Lys Pro Lys Gly Tyr Val Gly Lys Glu
  1               5                  10
Gly Gly Ile Ser Ile Ser Glu Ile Lys Gly Val Ile
         15                  20
Val His Lys Ile Glu Gly Ile Leu Phe Gly Gly Cys
 25                  30                  35
Gly Gly Thr Tyr Gln Ser Arg Val Thr His Pro His
             40                  45
Leu Pro Arg Ala Leu Met Arg Ser Thr Thr Lys Cys
     50                  55                  60
(2)SEQ ID NO：86的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：17氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO 86
Lys Trp Phe Lys Thr Asn Ala Pro Asn Gly Val Asp
  1               5                  10
Glu Lys Ile Arg Ile
         15
(2)SEQ ID NO：87的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：62氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO.87
Lys Trp Phe Lys Thr Asn Ala Pro Asn Gly Val Asp
  1               5                  10
Glu Lys Ile Arg Ile Lys Lys Lys Lys Ile Ile Thr
         15                  20
Ile Thr Arg Ile Ile Thr Ile Ile Thr Yhr Ile Asp
 25                  30                  35
Lys Cys Gly Glu Thr Tyr Tyr Ser Arg Val Thr His
             40                  45
Pro His Leu Pro Lys Asp Ile Val Arg Ser Ile Ala
     50                  55                  60
Lys Cys
(2)SEQ ID NO：88的信息
(i)序列特征：
    (A)长度：57氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：88：
Thr Ile Asn Lys Pro Lys Gly Tyr Val Gly Lys Glu
  1               5                  10
Lys Lys Lys Lys Ile Ile Thr Ile Thr Arg Ile Ile
         15                  20
Thr Ile Ile Thr Tyr Ile Asp Lys Cys Gly Glu Thr
 25                  30                  35
Tyr Tyr Ser Arg Val Thr His Pro His Leu Pro Lys
             40                  45
Asp Ile Val Arg Ser Ile Ala Lys Cys
     50                  55
(2)SEQ ID NO：89的信息
(i)序列特征
    (A)长度：19氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NQ：89
Ile Ser Leu Thr Glu Ile Arg Thr Val Ile Val Thr
  1               5                  10
Arg Leu Glu Thr Val Leu Phe
         15
(2)SEQ ID NO：90的信息
(i)序列特征：
    (A)长度：45氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：90
Ile Ser Leu Thr Glu Ile Arg Thr Val Ile Val Thr
 1               5                  10
Arg Leu Glu Thr Val Leu Phe □Lys Cys Gly Glu Thr
        15                  20
Tyr Tyr ser Arg Val Thr His Pro His Leu Pro Lys
25                   30                   35
Asp Ile Val Arg Ser Ile Ala Lys Cys
             40                  45
(2)SEQ ID NO：91的信息
(i)序列特征：
    (A)长度：63氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑构型：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：91
Lys Trp Phe Lys Thr Asn Ala Pro Asn Gly Val Asp
  1               5                  10
Glu Lys Ile Arg Ile □Lys Ile Ser Leu Thr Glu Ile
         15                    20
Arg Thr Val Ile Val Thr Arg Leu Glu Thr Val Leu
 25                  30                  35
Phe □Lys Cys Gly Glu Thr Tyr Tyr Ser Arg Val Thr
              40                  45
His Pro His Leu Pro Lys Asp Ile Val Arg Ser Ile
     50                  55                  60
Ala Lys Cys

Claims (25)

1.一种长度为25至29个氨基酸的IgE-CH3区抗原肽，其含有由23个氨基酸残基分隔开来的两个半胱氨酸残基，通过两个半胱氨酸残基形成环状结构，选自SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：84、及其其中的一到四个氨基酸被保守地取代的交叉反应类似物。
2.权利要求1的IgE-CH3区抗原肽，选自SEQ ID NO：5、SEQ IDNO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、和SEQ ID NO：84。
3.一种有50至90个氨基酸的合成肽，包括
(a)一种辅助T细胞(Th)表位，
(b)一种按照权利要求1的IgE-CH3区抗原肽；和
(c)一种免疫刺激侵染素区。
4.一种含有共价连接于权利要求1的IgE-CH3区抗原肽的辅助T细胞表位序列(Th)的肽偶合物。
5.一种由下列通式表示的肽偶合物：
(A)n-(IgE-CH3区抗原)-(B)o-(Th)m-X
                或
(A)n-(Th)m-(B)o-(IgE-CH3区抗原)-X
其中：
A为Inv结构域，SEQ ID NO：13或甘氨酸；
B是G，K或εK；
各Th独立地为一个构成选自SEQ ID NOS：9-12和61-82的辅助T细胞表位和其中的序列已经遵循Rothbard序列和1、4、5、8规则修饰的Th表位的免疫增强类似物的氨基酸序列；
IgE-CH3区抗原代表权利要求1的IgE-CH3区抗原肽的序列；
X为一个氨基酸的α-COOH或α-CONH2；
n为0或1；
m为从1到4；和
o为从0到3。
6.一种由下列通式表示的肽偶合物：
(IgE-CH3区抗原)-(B)o-(Th)m-(A)n-X
               或
(Th)m-(B)o-(IgE-CH3区抗原)-(A)n-X
其中：
A为Inv结构域，SEQ ID NO：13或甘氨酸；
B是G，K或εK；
各Th独立地为一个构成选自SEQ ID NOS：9-12和61-82的辅助T细胞表位和其中的序列已经遵循Rothbard序列和1、4、5、8规则修饰的Th表位的免疫增强类似物的氨基酸序列；
IgE-CH3区抗原代表权利要求1的IgE-CH3区抗原肽的序列；
X为一个氨基酸的α-COOH或α-CONH2；
n为0或1；
m为从1到4；和
o为从0到3。
7.权利要求4-6之一的肽偶合物，其中所述Th是SSAL。
8.权利要求4-6之一的肽偶合物，其中所述IgE-CH3区抗原肽具有选自SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、和SEQ ID NO：84的氨基酸序列。
9.权利要求7的肽偶合物，其中所述IgE-CH3区抗原肽具有选自SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、和SEQ ID NO：84的氨基酸序列。
10.权利要求4-6之一的肽偶合物，其所述Th具有选自SEQ IDNOS：9-12和SEQ ID NOS：61-82和86的氨基酸序列。
11.权利要求7的肽偶合物，其中所述Th具有选自SEQ ID NOS：9-12和SEQ ID NOS：61-82和86的氨基酸序列。
12.权利要求8的肽偶合物，其中所述Th具有选自SEQ ID NOS：9-12和SEQ ID NOS：61-82和86的氨基酸序列。
13.权利要求9的肽偶合物，其中所述Th具有选自SEQ ID NOS：9-12和SEQ ID NOS：61-82和86的氨基酸序列。
14.一种肽，选自SEQ ID NOS：14、15、17-27、85、87、88、90、91。
15.权利要求14的肽，选自SEQ ID NOS：14、15、26、90。
16.权利要求5或6的肽偶合物，其中至少一个A是一种侵染素区。
17.权利要求5或6的肽偶合物，其中n是3，(A)3是侵染素区-Gly-Gly。
18.权利要求16的肽偶合物，其中所述侵染素区具有SEQ ID NO：13的氨基酸序列。
19.权利要求17的肽偶合物，其中所述侵染素区具有SEQ ID NO：13的氨基酸序列。
20.一种肽偶合物，含有一种共价结合于一种或多种权利要求1的IgE-CH3区抗原肽的载体蛋白质。
21.权利要求20的肽偶合物，其中载体蛋白质是匙孔帽贝血蓝蛋白。
22.一种药物组合物，含有免疫有效量的权利要求4-6或14所述的肽或肽偶合物，和一种药学上可接受的载体。
23.按照权利要求22所述的药物组合物，其中，所说的肽或肽偶合物的免疫有效量为每剂量每公斤体重0.5μg和1mg之间。
24.权利要求22的药物组合物在制备用于在哺乳动物中诱导抗-IgE抗体产生的的药物的用途。
25.权利要求23的药物组合物在制备用于在哺乳动物中诱导抗-IgE抗体产生的的药物的用途。
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