JP2003047482A - 非アナフィラキシー誘発性ＩｇＥワクチン - Google Patents
非アナフィラキシー誘発性ＩｇＥワクチンInfo
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- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
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- C12N2799/021—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid
- C12N2799/026—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid where the vector is derived from a baculovirus
Abstract
(57)【要約】
【課題】本発明はＩｇＥ媒介アレルギー性疾患の治療お
よび予防のためのワクチンとしての、２つの関係のない
種のＩｇＥ分子のイプシロン重鎖のＦｃ部分由来の抗原
性ペプチドの組成物および使用法を提供する。特に、本
発明は１以上の抗原性ペプチドの免疫原性量を含む、Ｉ
ｇＥ媒介アレルギー性疾患の治療および予防のための組
成物を提供する。 【課題を解決するための手段】以下のものを含む単離さ
れた抗原性ペプチド： （ｉ）第１の種由来のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメインのア
ミノ酸残基； （ｉｉ）第２の関連性のない種のＩｇＥ分子のＣＨ３ド
メインのアミノ酸残基、ここで、第１の種由来のＩｇＥ
分子のＣＨ３ドメインのアミノ酸残基は第２の種のＩｇ
Ｅ分子のＣＨ３ドメインに保存され、第２の種由来のＩ
ｇＥ分子のＣＨ３ドメインのアミノ酸残基は第１の種の
ＩｇＥ分子のＣＨ３ドメインに保存されず、そして抗原
性ペプチドは動物に投与するとき、アナフィラキシーを
引き起こさない抗‐ＩｇＥ免疫反応を誘発する。
よび予防のためのワクチンとしての、２つの関係のない
種のＩｇＥ分子のイプシロン重鎖のＦｃ部分由来の抗原
性ペプチドの組成物および使用法を提供する。特に、本
発明は１以上の抗原性ペプチドの免疫原性量を含む、Ｉ
ｇＥ媒介アレルギー性疾患の治療および予防のための組
成物を提供する。 【課題を解決するための手段】以下のものを含む単離さ
れた抗原性ペプチド： （ｉ）第１の種由来のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメインのア
ミノ酸残基； （ｉｉ）第２の関連性のない種のＩｇＥ分子のＣＨ３ド
メインのアミノ酸残基、ここで、第１の種由来のＩｇＥ
分子のＣＨ３ドメインのアミノ酸残基は第２の種のＩｇ
Ｅ分子のＣＨ３ドメインに保存され、第２の種由来のＩ
ｇＥ分子のＣＨ３ドメインのアミノ酸残基は第１の種の
ＩｇＥ分子のＣＨ３ドメインに保存されず、そして抗原
性ペプチドは動物に投与するとき、アナフィラキシーを
引き起こさない抗‐ＩｇＥ免疫反応を誘発する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明はＩｇＥ媒介アレルギ
ー性疾患の治療および予防のためのＩｇＥ分子のイプシ
ロン重鎖のＦｃ部分由来の抗原性ペプチドの組成物およ
び使用法に関する。特に、本発明はＩｇＥ媒介アレルギ
ー性疾患の治療および予防のための２つの異なる種のＩ
ｇＥ分子のＣＨ３ドメイン由来のアミノ酸配列を含む少
なくとも１抗原性ペプチドを含む組成物に関する。本発
明は異種キャリア蛋白質に結合した抗原性ペプチドを含
み、そしてさらにアジュバントを含んでいてもよい組成
物に関する。本発明の組成物はまた、血清および他の体
液中の可溶性（遊離）ＩｇＥに結合する抗ＩｇＥ抗体を
誘発し、肥満細胞および好塩基球上の高親和性受容体に
ＩｇＥが結合することを妨げ、そして受容体結合ＩｇＥ
に交差結合しない。本発明はさらに、ＩｇＥ媒介アレル
ギー性疾患の治療および予防のために動物、好ましくは
哺乳動物そして最も好ましくはヒトに本発明の組成物を
投与する方法に関する。
ー性疾患の治療および予防のためのＩｇＥ分子のイプシ
ロン重鎖のＦｃ部分由来の抗原性ペプチドの組成物およ
び使用法に関する。特に、本発明はＩｇＥ媒介アレルギ
ー性疾患の治療および予防のための２つの異なる種のＩ
ｇＥ分子のＣＨ３ドメイン由来のアミノ酸配列を含む少
なくとも１抗原性ペプチドを含む組成物に関する。本発
明は異種キャリア蛋白質に結合した抗原性ペプチドを含
み、そしてさらにアジュバントを含んでいてもよい組成
物に関する。本発明の組成物はまた、血清および他の体
液中の可溶性（遊離）ＩｇＥに結合する抗ＩｇＥ抗体を
誘発し、肥満細胞および好塩基球上の高親和性受容体に
ＩｇＥが結合することを妨げ、そして受容体結合ＩｇＥ
に交差結合しない。本発明はさらに、ＩｇＥ媒介アレル
ギー性疾患の治療および予防のために動物、好ましくは
哺乳動物そして最も好ましくはヒトに本発明の組成物を
投与する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】免疫媒介アレルギー（過敏症）反応はア
レルギー症状の発現を導くための基礎となる機序に従っ
て４つの型（Ｉ−ＩＶ）に分類される。Ｉ型アレルギー
反応は肥満細胞および好塩基球からのヒスタミンのよう
な血管作用性物質のＩｇＥ媒介遊離により特徴付けられ
る。これらの物質の遊離およびその後のアレルギー症状
の発現は、肥満細胞および好塩基球の表面上の受容体へ
のアレルゲン結合ＩｇＥの交差結合により開始される。
レルギー症状の発現を導くための基礎となる機序に従っ
て４つの型（Ｉ−ＩＶ）に分類される。Ｉ型アレルギー
反応は肥満細胞および好塩基球からのヒスタミンのよう
な血管作用性物質のＩｇＥ媒介遊離により特徴付けられ
る。これらの物質の遊離およびその後のアレルギー症状
の発現は、肥満細胞および好塩基球の表面上の受容体へ
のアレルゲン結合ＩｇＥの交差結合により開始される。
【０００３】ＩｇＥ抗体はジスルフィド結合により
“Ｙ”型構造中に一緒に含まれる２つの同一の重鎖およ
び２つの同一の軽鎖からなる複雑な分子である。各軽鎖
は不変ドメイン（ＣL）に結合した可変（ＶL）ドメイン
からなり、各重鎖は１可変ドメイン（ＶH）および４不
変ドメイン（それぞれＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、および
ＣＨ４であり、Cε４、Cε２、Cε３およびCε４として
も知られる）からなる。ＩｇＥ抗体の２つのアームはＩ
ｇＥ抗体がその特異的抗原（アレルゲン）に結合する部
位を含み、各アームはＦａｂ（フラグメント‐抗体‐結
合）フラグメントと呼ばれる。ＩｇＥ抗体の尾部は、適
切な実験条件下で、抗体のＦａｂフラグメントから分離
されると結晶を形成することができることからＦｃ（フ
ラグメント‐結晶質）と呼ばれる。ＩｇＥ抗体のＦｃフ
ラグメントはＣＨ２、ＣＨ３およびＣＨ４ドメインから
なり、ＩｇＥ抗体の生物学的に活性な構造（例えば、受
容体結合部位）を含む。
“Ｙ”型構造中に一緒に含まれる２つの同一の重鎖およ
び２つの同一の軽鎖からなる複雑な分子である。各軽鎖
は不変ドメイン（ＣL）に結合した可変（ＶL）ドメイン
からなり、各重鎖は１可変ドメイン（ＶH）および４不
変ドメイン（それぞれＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、および
ＣＨ４であり、Cε４、Cε２、Cε３およびCε４として
も知られる）からなる。ＩｇＥ抗体の２つのアームはＩ
ｇＥ抗体がその特異的抗原（アレルゲン）に結合する部
位を含み、各アームはＦａｂ（フラグメント‐抗体‐結
合）フラグメントと呼ばれる。ＩｇＥ抗体の尾部は、適
切な実験条件下で、抗体のＦａｂフラグメントから分離
されると結晶を形成することができることからＦｃ（フ
ラグメント‐結晶質）と呼ばれる。ＩｇＥ抗体のＦｃフ
ラグメントはＣＨ２、ＣＨ３およびＣＨ４ドメインから
なり、ＩｇＥ抗体の生物学的に活性な構造（例えば、受
容体結合部位）を含む。
【０００４】ＩｇＥ抗体の産生には３種の細胞；抗原提
示細胞(ＡＰＣ)、Ｔリンパ球（Ｔヘルパー細胞；Ｔｈ）
および抗体産生細胞（Ｂリンパ球；Ｂ細胞）の相互作用
と協力を必要とする。異物、アレルゲンが被験者の体内
に（例えば、環境アレルゲンの吸入、ある食物の摂取、
または皮膚経由により）初めて導入されると、アレルゲ
ンはＡＰＣ（例えば、マクロファージ）に取り込まれ
て、消化されるか、またはより小さなフラグメント（エ
ピトープ）に処理される。これらのフラグメントは主要
組織適合複合体蛋白質として知られる特異的な分子と一
緒にＡＰＣの表面に表示される。特異的Ｔリンパ球表面
上の受容体は、ＡＰＣの表面に表示されたアレルゲン／
ＭＨＣ複合体を認識し、結合する。この認識と結合がＴ
リンパ球を活性化し、続いてインターロイキン‐４（Ｉ
Ｌ‐４）のようなサイトカインの発現および分泌が起こ
る。これらのサイトカインは問題のアレルゲンに特異的
なＢ細胞（すなわち、表面上にアレルゲンに結合可能な
イムノグロブリン受容体を発現するＢ細胞）の増殖、ク
ローン拡大、および分化を誘導し、最終的にこれらのＢ
細胞にＩｇＥ抗体を産生させる。活性化されたＴリンパ
球およびＩｇＥ産生Ｂ細胞の一部は結局、その後のアレ
ルゲン暴露時に、より速くアレルゲンを認識することが
できるＴおよびＢ記憶細胞と呼ばれる細胞のプールに送
られる。
示細胞(ＡＰＣ)、Ｔリンパ球（Ｔヘルパー細胞；Ｔｈ）
および抗体産生細胞（Ｂリンパ球；Ｂ細胞）の相互作用
と協力を必要とする。異物、アレルゲンが被験者の体内
に（例えば、環境アレルゲンの吸入、ある食物の摂取、
または皮膚経由により）初めて導入されると、アレルゲ
ンはＡＰＣ（例えば、マクロファージ）に取り込まれ
て、消化されるか、またはより小さなフラグメント（エ
ピトープ）に処理される。これらのフラグメントは主要
組織適合複合体蛋白質として知られる特異的な分子と一
緒にＡＰＣの表面に表示される。特異的Ｔリンパ球表面
上の受容体は、ＡＰＣの表面に表示されたアレルゲン／
ＭＨＣ複合体を認識し、結合する。この認識と結合がＴ
リンパ球を活性化し、続いてインターロイキン‐４（Ｉ
Ｌ‐４）のようなサイトカインの発現および分泌が起こ
る。これらのサイトカインは問題のアレルゲンに特異的
なＢ細胞（すなわち、表面上にアレルゲンに結合可能な
イムノグロブリン受容体を発現するＢ細胞）の増殖、ク
ローン拡大、および分化を誘導し、最終的にこれらのＢ
細胞にＩｇＥ抗体を産生させる。活性化されたＴリンパ
球およびＩｇＥ産生Ｂ細胞の一部は結局、その後のアレ
ルゲン暴露時に、より速くアレルゲンを認識することが
できるＴおよびＢ記憶細胞と呼ばれる細胞のプールに送
られる。
【０００５】Ｉ型アレルギー反応を起こすヒトでは、２
度目にアレルゲンに曝されるとＩｇＥ産生に必要な３細
胞の相互作用でのＢおよびＴ記憶細胞の関与の結果、ア
レルゲンに特異的なＩｇＥ抗体が高濃度で産生される。
産生された高濃度のＩｇＥ抗体は、アレルゲン結合Ｉｇ
Ｅと肥満細胞および好塩基球上のＩｇＥ受容体との交差
結合を増加させ、続いてこれらの細胞を活性化させてＩ
型アレルギー疾患の臨床的徴候に関与する薬理学的メデ
ィエーターを遊離させる。
度目にアレルゲンに曝されるとＩｇＥ産生に必要な３細
胞の相互作用でのＢおよびＴ記憶細胞の関与の結果、ア
レルゲンに特異的なＩｇＥ抗体が高濃度で産生される。
産生された高濃度のＩｇＥ抗体は、アレルゲン結合Ｉｇ
Ｅと肥満細胞および好塩基球上のＩｇＥ受容体との交差
結合を増加させ、続いてこれらの細胞を活性化させてＩ
型アレルギー疾患の臨床的徴候に関与する薬理学的メデ
ィエーターを遊離させる。
【０００６】ＩｇＥに異なる親和性を持つ２種の受容体
が同定され、性状が決定されている。高親和性受容体
（ＦｃεＲＩ）は肥満細胞および好塩基球の表面に発現
される。低親和性受容体（ＦｃεＲＩＩ／ＣＤ２３）は
Ｂ細胞、Ｔ細胞、マクロファージ、好酸球およびランゲ
ルハンス細胞を含む多くの細胞型上に発現される。高親
和性ＩｇＥ受容体は３サブユニット（アルファ、ベータ
およびガンマ鎖）からなる。いくつかの研究は、アルフ
ァ鎖のみがＩｇＥの結合に関与し、ベータおよびガンマ
鎖（それらは経膜または細胞質蛋白質のいずれかであ
る）は細胞情報伝達に必要であることを示唆する。肥満
細胞および好塩基球上のＦｃεＲＩへの結合に必要なＩ
ｇＥ構造の同定は、ＩｇＥ媒介アレルギーの治療および
予防の対策をたてる上で最も重要である。例えば、Ｉｇ
Ｅ‐受容体結合部位の解明が、ｉｎｖｉｖｏで受容体産
生細胞へのＩｇＥの結合を阻害するペプチドまたは小分
子の同定につながる。
が同定され、性状が決定されている。高親和性受容体
（ＦｃεＲＩ）は肥満細胞および好塩基球の表面に発現
される。低親和性受容体（ＦｃεＲＩＩ／ＣＤ２３）は
Ｂ細胞、Ｔ細胞、マクロファージ、好酸球およびランゲ
ルハンス細胞を含む多くの細胞型上に発現される。高親
和性ＩｇＥ受容体は３サブユニット（アルファ、ベータ
およびガンマ鎖）からなる。いくつかの研究は、アルフ
ァ鎖のみがＩｇＥの結合に関与し、ベータおよびガンマ
鎖（それらは経膜または細胞質蛋白質のいずれかであ
る）は細胞情報伝達に必要であることを示唆する。肥満
細胞および好塩基球上のＦｃεＲＩへの結合に必要なＩ
ｇＥ構造の同定は、ＩｇＥ媒介アレルギーの治療および
予防の対策をたてる上で最も重要である。例えば、Ｉｇ
Ｅ‐受容体結合部位の解明が、ｉｎｖｉｖｏで受容体産
生細胞へのＩｇＥの結合を阻害するペプチドまたは小分
子の同定につながる。
【０００７】過去１５年間にわたり、各種の方法がＩｇ
Ｅ上のＦｃεＲＩ結合部位を決定するために使用されて
きた。これらの方法は５つの異なるカテゴリーに分類す
ることができる。１つ目の方法では、ＩｇＥ分子のＦｃ
部分の一部に対応する小ペプチドを産生し、受容体から
ＩｇＥを阻害する能力を分析した。例えば、Ｎａｋａｍ
ｕｒａ ｅｔ ａｌ．，ヨーロッパ特許０２６３６５
５、１９８８年４月１３日発行、Ｂｕｒｔ ｅｔ ａ
ｌ．，１９８７，Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１７：４３７−４４０；Ｈｅ
ｌｍ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ ３３
１：１８０−１８３；Ｈｅｌｍ ｅｔ ａｌ．，１９８
９，ＰＮＡＳ ８６：９４６５−９４６９；Ｖｅｒｃｅ
ｌｌｉ ｅｔａｌ．，１９８９，Ｎａｔｕｒｅ ３３
８：６４９−６５１；Ｎｉｏ ｅｔ ａｌ．，１９９
０，Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２：２０３
−２０８；Ｎｉｏ ｅｔ ａｌ．，１９９３，ＦＥＢＳ
Ｌｅｔｔ．３１９：２２５−２２８；およびＮｉｏ
ｅｔ ａｌ．，１９９２，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．３１
４：２２９−２３１を参照されたい。これらの研究に記
載されたペプチドの多くが、ＩｇＥの受容体への結合を
阻害することが示されたが、種々の研究がＩｇＥ結合に
関与するものとして、種々の配列を報告した。
Ｅ上のＦｃεＲＩ結合部位を決定するために使用されて
きた。これらの方法は５つの異なるカテゴリーに分類す
ることができる。１つ目の方法では、ＩｇＥ分子のＦｃ
部分の一部に対応する小ペプチドを産生し、受容体から
ＩｇＥを阻害する能力を分析した。例えば、Ｎａｋａｍ
ｕｒａ ｅｔ ａｌ．，ヨーロッパ特許０２６３６５
５、１９８８年４月１３日発行、Ｂｕｒｔ ｅｔ ａ
ｌ．，１９８７，Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１７：４３７−４４０；Ｈｅ
ｌｍ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ ３３
１：１８０−１８３；Ｈｅｌｍ ｅｔ ａｌ．，１９８
９，ＰＮＡＳ ８６：９４６５−９４６９；Ｖｅｒｃｅ
ｌｌｉ ｅｔａｌ．，１９８９，Ｎａｔｕｒｅ ３３
８：６４９−６５１；Ｎｉｏ ｅｔ ａｌ．，１９９
０，Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２：２０３
−２０８；Ｎｉｏ ｅｔ ａｌ．，１９９３，ＦＥＢＳ
Ｌｅｔｔ．３１９：２２５−２２８；およびＮｉｏ
ｅｔ ａｌ．，１９９２，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．３１
４：２２９−２３１を参照されたい。これらの研究に記
載されたペプチドの多くが、ＩｇＥの受容体への結合を
阻害することが示されたが、種々の研究がＩｇＥ結合に
関与するものとして、種々の配列を報告した。
【０００８】Ｈｅｌｍ ｅｔ ａｌ．，（１９８８，Ｎ
ａｔｕｒｅ ３３１：１８０−１８３）はＩｇＥのＣＨ
２およびＣＨ３ドメイン間の接合部にわたる７５アミノ
酸ペプチドを同定し、このペプチドが天然のＩｇＥ分子
の親和性に近い親和性でＩｇＥ受容体に結合することを
示した。一方、Ｂａｓｕ ｅｔ ａｌ．，（１９９３，
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅ
ｍｉｓｔｒｙ ２６８：１３１１８−１３１２７）はＩ
ｇＥ分子由来の各種フラグメントを明示し、ＣＨ３およ
びＣＨ４ドメインを共に含むフラグメントのみがＩｇＥ
に結合可能で、ＣＨ２ドメインは必ずしも結合に必要で
ないことを発見した。Ｖａｎｇｅｌｉｓｔａ ｅｔ ａ
ｌ．，（１９９９，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉ
ｃａｌＩｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ １０３：１５７１
−１５７８）はＩｇＥのＣＨ３ドメインのみを明示し、
このドメインのみがＩｇＥ受容体に結合し、ＩｇＥの受
容体への結合を阻害することができることを示した。Ｂ
ａｓｕ ｅｔ ａｌ．，およびＶａｎｇｅｌｉｓｔａ
ｅｔ ａｌ．，の結果は先に引用したＨｅｌｍｅｔ ａ
ｌ．，の結果と矛盾する。
ａｔｕｒｅ ３３１：１８０−１８３）はＩｇＥのＣＨ
２およびＣＨ３ドメイン間の接合部にわたる７５アミノ
酸ペプチドを同定し、このペプチドが天然のＩｇＥ分子
の親和性に近い親和性でＩｇＥ受容体に結合することを
示した。一方、Ｂａｓｕ ｅｔ ａｌ．，（１９９３，
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅ
ｍｉｓｔｒｙ ２６８：１３１１８−１３１２７）はＩ
ｇＥ分子由来の各種フラグメントを明示し、ＣＨ３およ
びＣＨ４ドメインを共に含むフラグメントのみがＩｇＥ
に結合可能で、ＣＨ２ドメインは必ずしも結合に必要で
ないことを発見した。Ｖａｎｇｅｌｉｓｔａ ｅｔ ａ
ｌ．，（１９９９，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉ
ｃａｌＩｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ １０３：１５７１
−１５７８）はＩｇＥのＣＨ３ドメインのみを明示し、
このドメインのみがＩｇＥ受容体に結合し、ＩｇＥの受
容体への結合を阻害することができることを示した。Ｂ
ａｓｕ ｅｔ ａｌ．，およびＶａｎｇｅｌｉｓｔａ
ｅｔ ａｌ．，の結果は先に引用したＨｅｌｍｅｔ ａ
ｌ．，の結果と矛盾する。
【０００９】ＩｇＥ上のＦｃεＲＩ結合部位を同定する
２つ目の方法において、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイ
ンまたはＣＨ４ドメインの一部に対応するペプチドに対
するポリクローナル抗体を産生し、ＩｇＥ上の受容体結
合部位を証明するために使用した（Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ
ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍ
ｍｕｎｏｌ．，２５：１０３−１１８）。Ｒｏｂｅｒｔ
ｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，はＣＨ４ドメイン由来のペプチ
ドにより定義されたアミノ酸残基は受容体結合に関与し
ないが、ＩｇＥのＣＨ３ドメイン由来のペプチドにより
定義されたアミノ酸残基（アミノ酸３８７−４０１）が
もっともＩｇＥ受容体‐結合部位に近いらしいと結論し
た。しかし、ＣＨ３ペプチドに反応して誘導された抗‐
ＣＨ３ペプチド抗体はＩｇＥ負荷肥満細胞からヒスタミ
ンを遊離し、ＣＨ３ペプチドにより定義されたアミノ酸
は真のＩｇＥ受容体‐結合部位を定義しないこと、およ
び抗‐ＣＨ３ペプチド抗体がアナフィラキシーを引き起
こすことを示した。
２つ目の方法において、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイ
ンまたはＣＨ４ドメインの一部に対応するペプチドに対
するポリクローナル抗体を産生し、ＩｇＥ上の受容体結
合部位を証明するために使用した（Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ
ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍ
ｍｕｎｏｌ．，２５：１０３−１１８）。Ｒｏｂｅｒｔ
ｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，はＣＨ４ドメイン由来のペプチ
ドにより定義されたアミノ酸残基は受容体結合に関与し
ないが、ＩｇＥのＣＨ３ドメイン由来のペプチドにより
定義されたアミノ酸残基（アミノ酸３８７−４０１）が
もっともＩｇＥ受容体‐結合部位に近いらしいと結論し
た。しかし、ＣＨ３ペプチドに反応して誘導された抗‐
ＣＨ３ペプチド抗体はＩｇＥ負荷肥満細胞からヒスタミ
ンを遊離し、ＣＨ３ペプチドにより定義されたアミノ酸
は真のＩｇＥ受容体‐結合部位を定義しないこと、およ
び抗‐ＣＨ３ペプチド抗体がアナフィラキシーを引き起
こすことを示した。
【００１０】ＩｇＥ上のＦｃεＲＩ結合部位を同定する
３つ目の方法において、何人かの研究者はＩｇＥ変異体
を作成し、受容体結合に関与するアミノ酸残基の同定を
試みた（例えば、Ｓｃｈｗａｒｚｂａｕｍ ｅｔ ａ
ｌ．，１９８９，Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １９：１０１５−１０２
３；Ｗｅｅｔａｌｌ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｊｏｕ
ｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １４５：３８
４９−３８５４；およびＰｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．，
１９９４，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａ
ｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２６９：２６３６８−２６３
７３を参照されたい）。Ｓｃｈｗａｒｚｂａｕｍ ｅｔ
ａｌ．，はＣＨ４ドメインのアミノ酸残基４４２のヒ
スチジンのかわりに点突然変異プロリンを持つＩｇＥ抗
体はＩｇＥ抗体への１／２に低下した親和性を持つこと
を示した。Ｓｃｈｗａｒｚｂａｕｍ ｅｔ ａｌ．，は
ＩｇＥ抗体のＣＨ４ドメインがＩｇＥの受容体への結合
に関与すると結論した。しかし、Ｓｃｈｗａｒｚｂａｕ
ｍの結論はＩｇＥ高親和性受容体へのＩｇＥの結合はＩ
ｇＥ抗体のＣＨ２およびＣＨ３ドメインが関与し、ＣＨ
４ドメインは関与しないというＷｅｅｔａｌｌ ｅｔ
ａｌ．，の結論と矛盾する。さらに、Ｓｃｈｗａｒｚｂ
ａｕｍ ｅｔ ａｌ．，の結論は、ＦｃεＲＩへの結合
に重要なＩｇＥ抗体のアミノ酸残基はＣＨ３ドメインに
あるというＰｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．，の結論と矛盾
する。
３つ目の方法において、何人かの研究者はＩｇＥ変異体
を作成し、受容体結合に関与するアミノ酸残基の同定を
試みた（例えば、Ｓｃｈｗａｒｚｂａｕｍ ｅｔ ａ
ｌ．，１９８９，Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １９：１０１５−１０２
３；Ｗｅｅｔａｌｌ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｊｏｕ
ｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １４５：３８
４９−３８５４；およびＰｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．，
１９９４，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａ
ｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２６９：２６３６８−２６３
７３を参照されたい）。Ｓｃｈｗａｒｚｂａｕｍ ｅｔ
ａｌ．，はＣＨ４ドメインのアミノ酸残基４４２のヒ
スチジンのかわりに点突然変異プロリンを持つＩｇＥ抗
体はＩｇＥ抗体への１／２に低下した親和性を持つこと
を示した。Ｓｃｈｗａｒｚｂａｕｍ ｅｔ ａｌ．，は
ＩｇＥ抗体のＣＨ４ドメインがＩｇＥの受容体への結合
に関与すると結論した。しかし、Ｓｃｈｗａｒｚｂａｕ
ｍの結論はＩｇＥ高親和性受容体へのＩｇＥの結合はＩ
ｇＥ抗体のＣＨ２およびＣＨ３ドメインが関与し、ＣＨ
４ドメインは関与しないというＷｅｅｔａｌｌ ｅｔ
ａｌ．，の結論と矛盾する。さらに、Ｓｃｈｗａｒｚｂ
ａｕｍ ｅｔ ａｌ．，の結論は、ＦｃεＲＩへの結合
に重要なＩｇＥ抗体のアミノ酸残基はＣＨ３ドメインに
あるというＰｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．，の結論と矛盾
する。
【００１１】ＩｇＥ上のＦｃεＲＩ結合部位を同定する
４つ目の方法において、キメラＩｇＥ分子を構築し、Ｆ
ｃεＲＩに結合する能力を分析した。先のＷｅｅｔａｌ
ｌｅｔ ａｌ．，は一連のキメラマウスＩｇＥ‐ヒトＩ
ｇＧ分子を構築し、ＩｇＥ受容体へのそれらの結合を試
験した。先のＷｅｅｔａｌｌ ｅｔ ａｌ．，は、ＣＨ
４ドメインは受容体結合に関与せず、ＣＨ２およびＣＨ
３ドメインは共に肥満細胞上の高親和性受容体への結合
に必要であると結論した。別の研究において、Ｎｉｓｓ
ｉｍ ｅｔ ａｌ．，（１９９３，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏ
ｆ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：１３６５−１３７４）は
一連のヒトＩｇＥ‐マウスＩｇＥキメラがＦｃεＲＩに
結合する能力を分析し、ＣＨ３ドメインのみがＦｃεＲ
Ｉへの結合に必要であると結論した。Ｎｉｓｓｉｍ ｅ
ｔ ａｌ．，の結論はＩｇＥのＣＨ３ドメインのみがＦ
ｃεＲＩに結合するというＶａｎｇｅｌｉｓｔａ ｅｔ
ａｌ．，の結論を確証した。しかし、Ｎｉｓｓｉｍ ｅ
ｔ ａｌ．，およびＶａｎｇｅｌｉｓｔａ ｅｔ ａ
ｌ．，の結論はＷｅｅｔａｌｌ ｅｔ ａｌ．，および
Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，の結論と矛盾す
る。
４つ目の方法において、キメラＩｇＥ分子を構築し、Ｆ
ｃεＲＩに結合する能力を分析した。先のＷｅｅｔａｌ
ｌｅｔ ａｌ．，は一連のキメラマウスＩｇＥ‐ヒトＩ
ｇＧ分子を構築し、ＩｇＥ受容体へのそれらの結合を試
験した。先のＷｅｅｔａｌｌ ｅｔ ａｌ．，は、ＣＨ
４ドメインは受容体結合に関与せず、ＣＨ２およびＣＨ
３ドメインは共に肥満細胞上の高親和性受容体への結合
に必要であると結論した。別の研究において、Ｎｉｓｓ
ｉｍ ｅｔ ａｌ．，（１９９３，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏ
ｆ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：１３６５−１３７４）は
一連のヒトＩｇＥ‐マウスＩｇＥキメラがＦｃεＲＩに
結合する能力を分析し、ＣＨ３ドメインのみがＦｃεＲ
Ｉへの結合に必要であると結論した。Ｎｉｓｓｉｍ ｅ
ｔ ａｌ．，の結論はＩｇＥのＣＨ３ドメインのみがＦ
ｃεＲＩに結合するというＶａｎｇｅｌｉｓｔａ ｅｔ
ａｌ．，の結論を確証した。しかし、Ｎｉｓｓｉｍ ｅ
ｔ ａｌ．，およびＶａｎｇｅｌｉｓｔａ ｅｔ ａ
ｌ．，の結論はＷｅｅｔａｌｌ ｅｔ ａｌ．，および
Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，の結論と矛盾す
る。
【００１２】先のＰｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．，はＣγ
Ｈ２をヒトＩｇＥ由来のＣＨ３と置換したキメラヒトＩ
ｇＧを作成した。受容体結合の試験では、このキメラは
天然のＩｇＥと比べて１／４に低下した親和性でＦｃε
ＲＩに結合した。Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．，の結果
はＮｉｓｓｉｍ ｅｔ ａｌ．，の結果を確証するよう
に見えるが、先に引用したＷｅｅｔａｌｌ ｅｔ ａ
ｌ．，Ｈｅｌｍ ｅｔａｌ．，およびＢａｓｕ ｅｔ
ａｌ．，の結果と矛盾する。ＩｇＥの受容体への結合に
関与する的確なアミノ酸残基を定義するための別の試み
において、Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．，はＣＨ２−Ｃ
Ｈ３ヒンジ部およびヒトＩｇＥのＣＨ３ドメイン由来の
３ループに対応する特異的なアミノ酸残基をヒトＩｇＧ
内のそれらに類似した位置に挿入し、これらの変異体を
ＩｇＧＥＬと呼んだ。あいにく、これらのＩｇＧＥＬ変
異体の受容体への結合を調べたとき、全長ＩｇＥＣＨ３
ドメインが全長ＣγＨ２ドメインにとってかわった天然
のＩｇＥまたはＩｇＧに比べて、それらは極小の結合を
示した。ＩｇＥ上のＦｃεＲＩ結合部位を同定する５つ
目の方法において、モノクローナル抗体を作製し、Ｆｃ
εＲＩへのＩｇＥ結合を阻害するそれらの能力を分析し
た。例えば、Ｄｅｌ Ｐｒａｄｏ ｅｔ ａｌ．，１９
９１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２
８：８３９−８４４；Ｋｅｅｇｅｎ ｅｔ ａｌ．，１
９９１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ
２８：１１４９−１１５４；Ｈｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，
１９９１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ
２８：６３１−６３９；Ｔａｋｅｍｏｔｏ ｅｔ ａ
ｌ．，１９９４，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄＩ
ｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ３８：６３−７１；およびＢａｎ
ｉｙａｓｈ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｍｏｌｅｃｕｌ
ａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２５：７０５−７１１を
参照されたい。多くのモノクローナル抗体が作製されて
きたが、それらは真のＩｇＥ受容体‐結合部位に関する
情報をほとんど提供しなかった。なぜなら、多くの場
合、これらのモノクローナル抗体によって認識されるア
ミノ酸配列は同定されなかったか、または同定できなか
ったからである。さらに、作製されたモノクローナル抗
体は、結合および直接受容体結合に関与するＩｇＥ残基
のマスキングによるよりむしろ、立体障害またはＩｇＥ
分子の著しいコンフォメーション変化の誘導によりＩｇ
Ｅがその受容体に結合することを阻害するのかもしれな
い。
Ｈ２をヒトＩｇＥ由来のＣＨ３と置換したキメラヒトＩ
ｇＧを作成した。受容体結合の試験では、このキメラは
天然のＩｇＥと比べて１／４に低下した親和性でＦｃε
ＲＩに結合した。Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．，の結果
はＮｉｓｓｉｍ ｅｔ ａｌ．，の結果を確証するよう
に見えるが、先に引用したＷｅｅｔａｌｌ ｅｔ ａ
ｌ．，Ｈｅｌｍ ｅｔａｌ．，およびＢａｓｕ ｅｔ
ａｌ．，の結果と矛盾する。ＩｇＥの受容体への結合に
関与する的確なアミノ酸残基を定義するための別の試み
において、Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．，はＣＨ２−Ｃ
Ｈ３ヒンジ部およびヒトＩｇＥのＣＨ３ドメイン由来の
３ループに対応する特異的なアミノ酸残基をヒトＩｇＧ
内のそれらに類似した位置に挿入し、これらの変異体を
ＩｇＧＥＬと呼んだ。あいにく、これらのＩｇＧＥＬ変
異体の受容体への結合を調べたとき、全長ＩｇＥＣＨ３
ドメインが全長ＣγＨ２ドメインにとってかわった天然
のＩｇＥまたはＩｇＧに比べて、それらは極小の結合を
示した。ＩｇＥ上のＦｃεＲＩ結合部位を同定する５つ
目の方法において、モノクローナル抗体を作製し、Ｆｃ
εＲＩへのＩｇＥ結合を阻害するそれらの能力を分析し
た。例えば、Ｄｅｌ Ｐｒａｄｏ ｅｔ ａｌ．，１９
９１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２
８：８３９−８４４；Ｋｅｅｇｅｎ ｅｔ ａｌ．，１
９９１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ
２８：１１４９−１１５４；Ｈｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，
１９９１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ
２８：６３１−６３９；Ｔａｋｅｍｏｔｏ ｅｔ ａ
ｌ．，１９９４，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄＩ
ｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ３８：６３−７１；およびＢａｎ
ｉｙａｓｈ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｍｏｌｅｃｕｌ
ａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２５：７０５−７１１を
参照されたい。多くのモノクローナル抗体が作製されて
きたが、それらは真のＩｇＥ受容体‐結合部位に関する
情報をほとんど提供しなかった。なぜなら、多くの場
合、これらのモノクローナル抗体によって認識されるア
ミノ酸配列は同定されなかったか、または同定できなか
ったからである。さらに、作製されたモノクローナル抗
体は、結合および直接受容体結合に関与するＩｇＥ残基
のマスキングによるよりむしろ、立体障害またはＩｇＥ
分子の著しいコンフォメーション変化の誘導によりＩｇ
Ｅがその受容体に結合することを阻害するのかもしれな
い。
【００１３】ＩｇＥ上の受容体結合部位を同定するため
に考えられた方法が矛盾する結果を生じてきたことは、
先の説明から明らかである。受容体結合に関与するＩｇ
Ｅのアミノ酸残基の同定が困難なことは、受容体結合に
使用されるＩｇＥ上の部位が合成ペプチドが模倣可能な
直線配列のアミノ酸でなくてもよいという可能性により
さらに複雑化された。それどころか、結合部位は天然の
ＩｇＥの３次元構造においてのみ近接し、ＩｇＥ蛋白質
配列ではかなり離れている多数のアミノ酸により形成さ
れるコンフォメーション決定因子であるかもしれない。
ＩｇＥ変異体、ＩｇＥキメラ、およびモノクローナル抗
‐ＩｇＥ抗体に関する研究は、結合部位がコンフォメー
ション決定因子であることを強く示唆する。
に考えられた方法が矛盾する結果を生じてきたことは、
先の説明から明らかである。受容体結合に関与するＩｇ
Ｅのアミノ酸残基の同定が困難なことは、受容体結合に
使用されるＩｇＥ上の部位が合成ペプチドが模倣可能な
直線配列のアミノ酸でなくてもよいという可能性により
さらに複雑化された。それどころか、結合部位は天然の
ＩｇＥの３次元構造においてのみ近接し、ＩｇＥ蛋白質
配列ではかなり離れている多数のアミノ酸により形成さ
れるコンフォメーション決定因子であるかもしれない。
ＩｇＥ変異体、ＩｇＥキメラ、およびモノクローナル抗
‐ＩｇＥ抗体に関する研究は、結合部位がコンフォメー
ション決定因子であることを強く示唆する。
【００１４】現在、ＩｇＥ媒介アレルギー反応は、肥満
細胞および好塩基球から遊離される血管作用物質の作用
を阻害することによりアレルギー反応に関連する症状を
緩和するために、抗ヒスタミン薬およびコルチコステロ
イドのような薬物で処置される。高用量の抗ヒスタミン
薬およびコルチコステロイドは腎および胃腸毒性のよう
な有害作用を及ぼす。従って、Ｉ型アレルギー反応を処
置するための他の方法が必要である。
細胞および好塩基球から遊離される血管作用物質の作用
を阻害することによりアレルギー反応に関連する症状を
緩和するために、抗ヒスタミン薬およびコルチコステロ
イドのような薬物で処置される。高用量の抗ヒスタミン
薬およびコルチコステロイドは腎および胃腸毒性のよう
な有害作用を及ぼす。従って、Ｉ型アレルギー反応を処
置するための他の方法が必要である。
【００１５】Ｉ型アレルギー性疾患の治療の一つの方法
は、血清中の可溶性（遊離）ＩｇＥと反応して、肥満細
胞および好塩基球上の受容体にＩｇＥが結合するのを阻
害し、そして受容体結合ＩｇＥに結合しないモノクロー
ナル抗体の産生であった（すなわち、それらは非‐アナ
フィラキシー誘発性である）。２種のそのようなモノク
ローナル抗体（ｒｈｕＭａｂ Ｅ２５およびＣＧＰ５６
９０１）はＩｇＥ‐媒介アレルギー反応治療のための臨
床開発の進行した段階にある（例えば、Ｃｈａｎｇ，
Ｔ．Ｗ．，２０００，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎ
ｏｌｏｇｙ １８：１５７−６２を参照されたい）。こ
れらのモノクローナル抗体により認識されたＩｇＥ分子
のアミノ酸残基の同一性はまだ未知であり、これらのモ
ノクローナル抗体はＩｇＥ上のコンフォメーション決定
因子を認識していると考えられている。
は、血清中の可溶性（遊離）ＩｇＥと反応して、肥満細
胞および好塩基球上の受容体にＩｇＥが結合するのを阻
害し、そして受容体結合ＩｇＥに結合しないモノクロー
ナル抗体の産生であった（すなわち、それらは非‐アナ
フィラキシー誘発性である）。２種のそのようなモノク
ローナル抗体（ｒｈｕＭａｂ Ｅ２５およびＣＧＰ５６
９０１）はＩｇＥ‐媒介アレルギー反応治療のための臨
床開発の進行した段階にある（例えば、Ｃｈａｎｇ，
Ｔ．Ｗ．，２０００，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎ
ｏｌｏｇｙ １８：１５７−６２を参照されたい）。こ
れらのモノクローナル抗体により認識されたＩｇＥ分子
のアミノ酸残基の同一性はまだ未知であり、これらのモ
ノクローナル抗体はＩｇＥ上のコンフォメーション決定
因子を認識していると考えられている。
【００１６】治療用の抗‐ＩｇＥモノクローナル抗体に
よる臨床試験の初期の結果は、これらの療法がアトピー
性アレルギーに効果的であるが、アレルギーの長期治療
にモノクローナル抗体を使用するといくつか重大な欠点
があるということを示唆する。第１に、これらのモノク
ローナル抗体は初めにマウスで産生されたため、マウス
の配列を相当するヒトＩｇＧ配列と置き換えるために再
設計しなければなかった（Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａ
ｌ．，１９９３，Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆＩｍｍ
ｕｎｏｌｏｇｙ １５１：２６２３−２６３２）。この
“ヒト化”処理は９５％のヒト配列をもつモノクローナ
ル抗体を産生したが、部分的にマウス配列が残ってい
る。これらの抗‐ＩｇＥ抗体療法は長期間にわたる抗体
の頻繁な投与を必要とするため、何人かのアレルギー患
者はこれらの治療用抗体内にまだ残っているマウス配列
に対する抗体反応を起こした。治療用抗‐ＩｇＥに対す
る抗体の誘導は、少なくとも何人かの患者におけるこれ
らの抗‐ＩｇＥ抗体の治療的影響を無効にする。第２
に、これらのモノクローナル抗体は治療効果を誘発する
ために高用量が必要であるため、これらの抗体による治
療の経費が非常に高い。さらに、これらの抗体の投与頻
度および投与経路は不便である。ＩｇＥ媒介疾患の治療
のためのより魅力的な方法は抗‐ＩｇＥ抗体の産生を誘
発するペプチドの投与である。
よる臨床試験の初期の結果は、これらの療法がアトピー
性アレルギーに効果的であるが、アレルギーの長期治療
にモノクローナル抗体を使用するといくつか重大な欠点
があるということを示唆する。第１に、これらのモノク
ローナル抗体は初めにマウスで産生されたため、マウス
の配列を相当するヒトＩｇＧ配列と置き換えるために再
設計しなければなかった（Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａ
ｌ．，１９９３，Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆＩｍｍ
ｕｎｏｌｏｇｙ １５１：２６２３−２６３２）。この
“ヒト化”処理は９５％のヒト配列をもつモノクローナ
ル抗体を産生したが、部分的にマウス配列が残ってい
る。これらの抗‐ＩｇＥ抗体療法は長期間にわたる抗体
の頻繁な投与を必要とするため、何人かのアレルギー患
者はこれらの治療用抗体内にまだ残っているマウス配列
に対する抗体反応を起こした。治療用抗‐ＩｇＥに対す
る抗体の誘導は、少なくとも何人かの患者におけるこれ
らの抗‐ＩｇＥ抗体の治療的影響を無効にする。第２
に、これらのモノクローナル抗体は治療効果を誘発する
ために高用量が必要であるため、これらの抗体による治
療の経費が非常に高い。さらに、これらの抗体の投与頻
度および投与経路は不便である。ＩｇＥ媒介疾患の治療
のためのより魅力的な方法は抗‐ＩｇＥ抗体の産生を誘
発するペプチドの投与である。
【００１７】ＩｇＥ‐媒介アレルギー反応の最も有望な
治療の一つは、内因性ＩｇＥ上の適切な非アナフィラキ
シー誘発性エピトープに対する能動免疫である。Ｓｔａ
ｎｗｏｒｔｈ ｅｔ ａｌ．，（米国特許第５，６０
１，８２１号）はアレルギーワクチンとしての異種キャ
リア蛋白質に結合したヒトＩｇＥのＣＨ４ドメイン由来
のペプチドの使用を含む方法を記載した。しかし、この
ペプチドは天然の可溶性ＩｇＥと反応する抗体の産生を
誘発しないことが示された。さらに、Ｈｅｌｌｍａｎ
（米国特許第５，６５３，９８０号）は異種キャリア蛋
白質への全長ＣＨ２−ＣＨ３ドメイン（約２２０アミノ
酸長）の融合に基づいた抗‐ＩｇＥワクチン組成物を提
案した。しかし、ＩｇＥ分子のＣＨ２およびＣＨ３ドメ
インの一部に対する抗体は肥満細胞および好塩基球表面
上のＩｇＥ受容体と交差結合し、アナフィラキシーのメ
ディエーターの産生を起こすことが示されているため、
Ｈｅｌｌｍａｎが提案した抗‐ＩｇＥワクチン組成物に
より誘発される抗体はアナフィラキシーを起こす可能性
が高い（例えば、Ｓｔａｄｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９
９３，Ｉｎｔ．Ａｒｃｈ．Ａｌｌｅｒｇｙ ａｎｄ Ｉ
ｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １０２：１２１−１２６を産生さ
れたい）。従って、アナフィラキシー性抗体を誘発しな
いＩｇＥ‐媒介アレルギー反応治療用のワクチンの必要
性は依然としてある。
治療の一つは、内因性ＩｇＥ上の適切な非アナフィラキ
シー誘発性エピトープに対する能動免疫である。Ｓｔａ
ｎｗｏｒｔｈ ｅｔ ａｌ．，（米国特許第５，６０
１，８２１号）はアレルギーワクチンとしての異種キャ
リア蛋白質に結合したヒトＩｇＥのＣＨ４ドメイン由来
のペプチドの使用を含む方法を記載した。しかし、この
ペプチドは天然の可溶性ＩｇＥと反応する抗体の産生を
誘発しないことが示された。さらに、Ｈｅｌｌｍａｎ
（米国特許第５，６５３，９８０号）は異種キャリア蛋
白質への全長ＣＨ２−ＣＨ３ドメイン（約２２０アミノ
酸長）の融合に基づいた抗‐ＩｇＥワクチン組成物を提
案した。しかし、ＩｇＥ分子のＣＨ２およびＣＨ３ドメ
インの一部に対する抗体は肥満細胞および好塩基球表面
上のＩｇＥ受容体と交差結合し、アナフィラキシーのメ
ディエーターの産生を起こすことが示されているため、
Ｈｅｌｌｍａｎが提案した抗‐ＩｇＥワクチン組成物に
より誘発される抗体はアナフィラキシーを起こす可能性
が高い（例えば、Ｓｔａｄｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９
９３，Ｉｎｔ．Ａｒｃｈ．Ａｌｌｅｒｇｙ ａｎｄ Ｉ
ｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １０２：１２１−１２６を産生さ
れたい）。従って、アナフィラキシー性抗体を誘発しな
いＩｇＥ‐媒介アレルギー反応治療用のワクチンの必要
性は依然としてある。
【００１８】アナフィラキシー誘発についての高い関心
が、動物に投与したとき抗‐ＩｇＥポリクローナル抗体
の産生を誘発できるミモトープからなるＩ型アレルギー
性疾患の治療のための別の方法を開発させた（例えば、
Ｒｕｄｏｌｆ，ｅｔ ａｌ．，１９９８，Ｊｏｕｒｎａ
ｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １６０：３３１５−
３３２１を参照されたい）。Ｋｒｉｃｅｋ ｅｔ ａ
ｌ．，（国際公開公報ＷＯ／９７／３１９４８）は、Ｉ
ｇＥ受容体結合のコンフォメーションを模倣できるペプ
チドミモトープを同定するために、モノクローナル抗体
ＢＳＷ１７によりファージディスプレイペプチドライブ
ラリーをスクリーニングした。これらのミモトープはお
そらく、ＩｇＥの受容体への結合を阻害するだけでな
く、遊離した天然のＩｇＥと反応するが、受容体結合Ｉ
ｇＥとは反応しないポリクローナル抗体を誘発するため
に使用される。Ｋｒｉｃｅｋ ｅｔ ａｌ．，はＩｇＥ
分子の任意の部分に相同性でなく、従って本発明で開示
したペプチドとは異なるペプチドミモトープを開示し
た。
が、動物に投与したとき抗‐ＩｇＥポリクローナル抗体
の産生を誘発できるミモトープからなるＩ型アレルギー
性疾患の治療のための別の方法を開発させた（例えば、
Ｒｕｄｏｌｆ，ｅｔ ａｌ．，１９９８，Ｊｏｕｒｎａ
ｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １６０：３３１５−
３３２１を参照されたい）。Ｋｒｉｃｅｋ ｅｔ ａ
ｌ．，（国際公開公報ＷＯ／９７／３１９４８）は、Ｉ
ｇＥ受容体結合のコンフォメーションを模倣できるペプ
チドミモトープを同定するために、モノクローナル抗体
ＢＳＷ１７によりファージディスプレイペプチドライブ
ラリーをスクリーニングした。これらのミモトープはお
そらく、ＩｇＥの受容体への結合を阻害するだけでな
く、遊離した天然のＩｇＥと反応するが、受容体結合Ｉ
ｇＥとは反応しないポリクローナル抗体を誘発するため
に使用される。Ｋｒｉｃｅｋ ｅｔ ａｌ．，はＩｇＥ
分子の任意の部分に相同性でなく、従って本発明で開示
したペプチドとは異なるペプチドミモトープを開示し
た。
【００１９】抗‐ＩｇＥワクチンの開発が直面する主な
障害は、アレルギー被験者の免疫に安全に使用できて、
非アナフィラキシー誘発性ポリクローナル抗体を誘発す
る、非アナフィラキシー誘発性ＩｇＥ決定因子を表す明
確なアミノ酸に関する情報の欠如である（すなわち、受
容体‐結合ＩｇＥに結合しないポリクローナル抗ＩｇＥ
‐抗体）。本発明のペプチド組成物は非アナフィラキシ
ー誘発性であるように選択される；すなわち、ペプチド
組成物が肥満細胞または好塩基球に結合したＩｇＥに結
合または交差結合する抗‐ＩｇＥ抗体の産生を起こさな
い。従って、本発明のペプチドは優れた安全性を持ち、
全長ＣＨ２−ＣＨ３ドメインに基づく開示されたワクチ
ン由来の配列組成物により識別される。
障害は、アレルギー被験者の免疫に安全に使用できて、
非アナフィラキシー誘発性ポリクローナル抗体を誘発す
る、非アナフィラキシー誘発性ＩｇＥ決定因子を表す明
確なアミノ酸に関する情報の欠如である（すなわち、受
容体‐結合ＩｇＥに結合しないポリクローナル抗ＩｇＥ
‐抗体）。本発明のペプチド組成物は非アナフィラキシ
ー誘発性であるように選択される；すなわち、ペプチド
組成物が肥満細胞または好塩基球に結合したＩｇＥに結
合または交差結合する抗‐ＩｇＥ抗体の産生を起こさな
い。従って、本発明のペプチドは優れた安全性を持ち、
全長ＣＨ２−ＣＨ３ドメインに基づく開示されたワクチ
ン由来の配列組成物により識別される。
【００２０】
【発明が解決しようとする課題】本発明はＩｇＥ‐媒介
アレルギー性疾患の治療および予防のためのワクチンと
してのＩｇＥ分子のイプシロン重鎖のＦｃ部分由来の抗
原性ペプチドの組成物および使用法を提供する。一態様
において、本発明はＩｇＥ‐媒介アレルギー性疾患の治
療および予防に有効な２つの関連のない種のＩｇＥ分子
のＣＨ３ドメイン由来の１以上の抗原性ペプチドの免疫
原性量を含む、ＩｇＥ‐媒介アレルギー性疾患の治療お
よび予防のための組成物を提供する。好ましくは、本発
明の組成物はＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：２，３，１０，１
１，１２，１３もしくは１４または抗原性フラグメント
のアミノ酸配列を含む１以上の抗原性ペプチド、その誘
導体もしくは変異体の免疫原性量を含む。
アレルギー性疾患の治療および予防のためのワクチンと
してのＩｇＥ分子のイプシロン重鎖のＦｃ部分由来の抗
原性ペプチドの組成物および使用法を提供する。一態様
において、本発明はＩｇＥ‐媒介アレルギー性疾患の治
療および予防に有効な２つの関連のない種のＩｇＥ分子
のＣＨ３ドメイン由来の１以上の抗原性ペプチドの免疫
原性量を含む、ＩｇＥ‐媒介アレルギー性疾患の治療お
よび予防のための組成物を提供する。好ましくは、本発
明の組成物はＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：２，３，１０，１
１，１２，１３もしくは１４または抗原性フラグメント
のアミノ酸配列を含む１以上の抗原性ペプチド、その誘
導体もしくは変異体の免疫原性量を含む。
【００２１】抗原性ペプチドは体細胞遺伝子療法を使用
して“プロドラッグ”として直接投与または間接的に供
給することができる。好ましい態様において、本発明は
部分的に、第２の関連のない種のＩｇＥ分子のＣＨ３ド
メインの可変アミノ酸残基が隣接した第１の種のＩｇＥ
分子のＣＨ３ドメインの保存されたアミノ酸残基を含む
抗原性ペプチドが、動物に投与したときにアナフィラキ
シーを起こさずに高力価の抗‐ＩｇＥ抗体を誘導するこ
とができるという発見に基づく。出願者は例えばラット
ＩｇＥおよびイヌＩｇＥのような異なる種のＩｇＥ分子
の一次アミノ酸配列を比較し、異なる種のＩｇＥ分子の
ＣＨ３ドメインに保存されたアミノ酸残基を同定した。
出願者は、異なる種のＩｇＥ分子ＣＨ３ドメインの保存
されたアミノ酸残基に、種毎に異なるアミノ酸残基が隣
接していることも発見した（“可変アミノ酸残基”と呼
ぶ）。
して“プロドラッグ”として直接投与または間接的に供
給することができる。好ましい態様において、本発明は
部分的に、第２の関連のない種のＩｇＥ分子のＣＨ３ド
メインの可変アミノ酸残基が隣接した第１の種のＩｇＥ
分子のＣＨ３ドメインの保存されたアミノ酸残基を含む
抗原性ペプチドが、動物に投与したときにアナフィラキ
シーを起こさずに高力価の抗‐ＩｇＥ抗体を誘導するこ
とができるという発見に基づく。出願者は例えばラット
ＩｇＥおよびイヌＩｇＥのような異なる種のＩｇＥ分子
の一次アミノ酸配列を比較し、異なる種のＩｇＥ分子の
ＣＨ３ドメインに保存されたアミノ酸残基を同定した。
出願者は、異なる種のＩｇＥ分子ＣＨ３ドメインの保存
されたアミノ酸残基に、種毎に異なるアミノ酸残基が隣
接していることも発見した（“可変アミノ酸残基”と呼
ぶ）。
【００２２】従って、一態様において、本発明は第２の
関連のない種のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメインのアミノ酸
残基が隣接した、第１の種のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメイ
ンのアミノ酸残基を含む抗原性ペプチドを包含する。抗
原性ペプチドを含む、第１の種のＩｇＥ分子のＣＨ３ド
メインのアミノ酸残基は、第２の関連のない種のＩｇＥ
分子のＣＨ３ドメインに保存されている。しかし、抗原
性ペプチドを含む、第２の関連のない種のＩｇＥ分子の
ＣＨ３ドメインのアミノ酸残基は第１の種のＩｇＥ分子
のＣＨ３ドメインに保存されない（すなわち、可変であ
る）。従って、例えば、本発明の抗原性ペプチドはラッ
トＩｇＥ分子のＣＨ３ドメインのアミノ酸残基が隣接し
たイヌＩｇＥ分子のＣＨ３ドメインの保存されたアミノ
酸残基を含んでいてもよい。そのような抗原性ペプチド
は好ましくはＩｇＥ‐媒介アレルギー性疾患の治療また
は予防のためにイヌに投与されるであろう。本発明はさ
らに動物に投与したときにアナフィラキシーを起こさな
い、単一種由来の抗原性融合蛋白質を提供する。好まし
くは、そのような抗原性融合蛋白質は配列ＳＥＱＩＤ
ＮＯ：２７を持つ。
関連のない種のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメインのアミノ酸
残基が隣接した、第１の種のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメイ
ンのアミノ酸残基を含む抗原性ペプチドを包含する。抗
原性ペプチドを含む、第１の種のＩｇＥ分子のＣＨ３ド
メインのアミノ酸残基は、第２の関連のない種のＩｇＥ
分子のＣＨ３ドメインに保存されている。しかし、抗原
性ペプチドを含む、第２の関連のない種のＩｇＥ分子の
ＣＨ３ドメインのアミノ酸残基は第１の種のＩｇＥ分子
のＣＨ３ドメインに保存されない（すなわち、可変であ
る）。従って、例えば、本発明の抗原性ペプチドはラッ
トＩｇＥ分子のＣＨ３ドメインのアミノ酸残基が隣接し
たイヌＩｇＥ分子のＣＨ３ドメインの保存されたアミノ
酸残基を含んでいてもよい。そのような抗原性ペプチド
は好ましくはＩｇＥ‐媒介アレルギー性疾患の治療また
は予防のためにイヌに投与されるであろう。本発明はさ
らに動物に投与したときにアナフィラキシーを起こさな
い、単一種由来の抗原性融合蛋白質を提供する。好まし
くは、そのような抗原性融合蛋白質は配列ＳＥＱＩＤ
ＮＯ：２７を持つ。
【００２３】本発明は、同じ種または２以上の関連のな
い種のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメイン由来の免疫原的有効
量の１以上の抗原性ペプチドを含む医薬組成物および１
以上の薬剤的に受容できるキャリアも提供する。一態様
において、本発明の医薬組成物は２つの関連のない種の
ＩｇＥ分子のＣＨ３ドメイン由来の、免疫原的有効量の
１以上の抗原性ペプチドおよび１以上の薬剤的に受容で
きるキャリアを含む。別の態様において、本発明の医薬
組成物は１以上の薬剤的に受容できるキャリアおよび２
つの関連のない種のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメイン由来の
免疫原的有効量の１以上の抗原性ペプチド（ＳＥＱ Ｉ
Ｄ ＮＯＳ：２，３，および１０−１４）のおよびＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯＳ：９および２３のような異種キャリア
蛋白質を含む。
い種のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメイン由来の免疫原的有効
量の１以上の抗原性ペプチドを含む医薬組成物および１
以上の薬剤的に受容できるキャリアも提供する。一態様
において、本発明の医薬組成物は２つの関連のない種の
ＩｇＥ分子のＣＨ３ドメイン由来の、免疫原的有効量の
１以上の抗原性ペプチドおよび１以上の薬剤的に受容で
きるキャリアを含む。別の態様において、本発明の医薬
組成物は１以上の薬剤的に受容できるキャリアおよび２
つの関連のない種のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメイン由来の
免疫原的有効量の１以上の抗原性ペプチド（ＳＥＱ Ｉ
Ｄ ＮＯＳ：２，３，および１０−１４）のおよびＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯＳ：９および２３のような異種キャリア
蛋白質を含む。
【００２４】本発明は２つの関連のない種のＩｇＥ分子
のＣＨ３ドメイン由来の免疫原的有効量の１以上の抗原
性ペプチド、薬剤的に受容できるキャリア、およびアジ
ュバントも提供する。アジュバントは抗原に対する免疫
反応を促進することができる任意の化合物を包含する。
効果的と推察されるアジュバントの例としては以下のも
のを含むがこれらに限定されない：水酸化アルミニウ
ム、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬＡ）−アセチル−ム
ラミル−Ｌ−トレオニル−Ｄ−イソグルタミン（ｔｈｒ
−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチル−ノル−ムラミル−Ｌ−アラ
ニル−Ｄ−イソグルタミン、Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ
−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２
−（１′−２′−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３
−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミン、単純
免疫刺激性オリゴヌクレオチド、ＩＬ−１２，ＩＬ−２
またはＩＬ−１のようなサイトカイン、サポニン、およ
びコレラ毒素のような微生物毒素、熱不安定性毒素およ
び遺伝的に変化したそれらの誘導体。
のＣＨ３ドメイン由来の免疫原的有効量の１以上の抗原
性ペプチド、薬剤的に受容できるキャリア、およびアジ
ュバントも提供する。アジュバントは抗原に対する免疫
反応を促進することができる任意の化合物を包含する。
効果的と推察されるアジュバントの例としては以下のも
のを含むがこれらに限定されない：水酸化アルミニウ
ム、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬＡ）−アセチル−ム
ラミル−Ｌ−トレオニル−Ｄ−イソグルタミン（ｔｈｒ
−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチル−ノル−ムラミル−Ｌ−アラ
ニル−Ｄ−イソグルタミン、Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ
−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２
−（１′−２′−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３
−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミン、単純
免疫刺激性オリゴヌクレオチド、ＩＬ−１２，ＩＬ−２
またはＩＬ−１のようなサイトカイン、サポニン、およ
びコレラ毒素のような微生物毒素、熱不安定性毒素およ
び遺伝的に変化したそれらの誘導体。
【００２５】他の態様において、本発明の医薬組成物は
薬剤的キャリア、アジュバントおよび２つの関連のない
種のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメイン由来の抗原性ペプチド
および異種キャリア蛋白質を含む免疫原的有効量の１以
上の抗原性融合蛋白質を含む。好ましい態様において、
本発明の医薬組成物は薬剤的キャリア、アジュバントお
よびＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：２，３，および１０−１４
のアミノ酸配列を含む免疫原的有効量の１以上の抗原性
ペプチドを含む。
薬剤的キャリア、アジュバントおよび２つの関連のない
種のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメイン由来の抗原性ペプチド
および異種キャリア蛋白質を含む免疫原的有効量の１以
上の抗原性融合蛋白質を含む。好ましい態様において、
本発明の医薬組成物は薬剤的キャリア、アジュバントお
よびＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：２，３，および１０−１４
のアミノ酸配列を含む免疫原的有効量の１以上の抗原性
ペプチドを含む。
【００２６】他の好ましい態様において、本発明の医薬
組成物は薬剤的キャリア、アジュバント、およびＳＥＱ
ＩＤ ＮＯＳ：２，３，および１０−１４のアミノ酸
配列を含む免疫原的有効量の１以上の融合蛋白質を含
む。
組成物は薬剤的キャリア、アジュバント、およびＳＥＱ
ＩＤ ＮＯＳ：２，３，および１０−１４のアミノ酸
配列を含む免疫原的有効量の１以上の融合蛋白質を含
む。
【００２７】本発明はＩｇＥ‐媒介アレルギー性疾患の
治療および予防のために、本発明の組成物を動物、好ま
しくは哺乳動物そして最も好ましくはヒトに投与する方
法も提供する。本発明の組成物は、動物、好ましくはペ
ット（例えば、イヌ、ネコおよびウマ）および家畜（例
えば、ウシおよびブタ）のような哺乳動物、そして最も
好ましくはヒトに投与するのに適した製剤中にある。本
発明の組成物は、ＩｇＥ分子に特異的なポリクローナル
抗体の産生のような、免疫反応を引き起こすために有効
な量で投与される。一態様において、本発明の組成物
は、ＩｇＥが受容体（すなわちＩｇＥ分子のＣＨ３ドメ
イン）に結合するために必要なＩｇＥ分子のＦｃ部分に
特異的なポリクローナルまたはモノクローナル抗体の産
生を誘発するのに有効な量を投与する。好ましい態様に
おいて、本発明の組成物は血清および他の体液中の可溶
性（遊離）ＩｇＥに結合し、肥満細胞および好塩基球上
の高親和性受容体にＩｇＥが結合するのを阻害し、そし
て受容体‐結合ＩｇＥに交差結合しない抗‐ＩｇＥ抗体
の産生を誘発するために有効な量が投与される。従っ
て、本発明の組成物はＩｇＥ‐媒介アレルギー性疾患の
治療または予防のために、アナフィラキシーを誘発しな
いポリクローナル抗体の産生を誘発するために有効な量
が投与される。
治療および予防のために、本発明の組成物を動物、好ま
しくは哺乳動物そして最も好ましくはヒトに投与する方
法も提供する。本発明の組成物は、動物、好ましくはペ
ット（例えば、イヌ、ネコおよびウマ）および家畜（例
えば、ウシおよびブタ）のような哺乳動物、そして最も
好ましくはヒトに投与するのに適した製剤中にある。本
発明の組成物は、ＩｇＥ分子に特異的なポリクローナル
抗体の産生のような、免疫反応を引き起こすために有効
な量で投与される。一態様において、本発明の組成物
は、ＩｇＥが受容体（すなわちＩｇＥ分子のＣＨ３ドメ
イン）に結合するために必要なＩｇＥ分子のＦｃ部分に
特異的なポリクローナルまたはモノクローナル抗体の産
生を誘発するのに有効な量を投与する。好ましい態様に
おいて、本発明の組成物は血清および他の体液中の可溶
性（遊離）ＩｇＥに結合し、肥満細胞および好塩基球上
の高親和性受容体にＩｇＥが結合するのを阻害し、そし
て受容体‐結合ＩｇＥに交差結合しない抗‐ＩｇＥ抗体
の産生を誘発するために有効な量が投与される。従っ
て、本発明の組成物はＩｇＥ‐媒介アレルギー性疾患の
治療または予防のために、アナフィラキシーを誘発しな
いポリクローナル抗体の産生を誘発するために有効な量
が投与される。
【００２８】
【課題を解決するための手段】ＩｇＥ‐媒介アレルギー
性疾患の治療および予防のためのワクチンとしてＩｇＥ
分子のイプシロン重鎖のＦｃ部分由来の抗原性ペプチド
の組成物および使用のための方法を提供する。特に、本
発明はＩｇＥ‐媒介アレルギー性疾患の治療および予防
に有効な２つの関連のない種のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメ
イン由来の免疫原性量の抗原性ペプチドを含む組成物を
提供する。好ましくは、本発明の組成物は、ＳＥＱ Ｉ
Ｄ ＮＯＳ：１−６および１０−１４のアミノ酸配列を
含む免疫原性量の１以上の抗原性ペプチドを含む。
性疾患の治療および予防のためのワクチンとしてＩｇＥ
分子のイプシロン重鎖のＦｃ部分由来の抗原性ペプチド
の組成物および使用のための方法を提供する。特に、本
発明はＩｇＥ‐媒介アレルギー性疾患の治療および予防
に有効な２つの関連のない種のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメ
イン由来の免疫原性量の抗原性ペプチドを含む組成物を
提供する。好ましくは、本発明の組成物は、ＳＥＱ Ｉ
Ｄ ＮＯＳ：１−６および１０−１４のアミノ酸配列を
含む免疫原性量の１以上の抗原性ペプチドを含む。
【００２９】本発明の抗原性ペプチドは２つの関連のな
い種のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメインのアミノ酸配列を含
み、アナフィラキシー性でない、抗‐ＩｇＥ抗体の産生
を誘発する。特に、本発明の抗原性ペプチドは血清およ
び他の体液中の可溶性（遊離）ＩｇＥに結合する抗‐Ｉ
ｇＥ抗体の産生を誘発し、肥満細胞および好塩基球上の
高親和性受容体にＩｇＥが結合するのを妨げ、そして受
容体‐結合ＩｇＥと交差結合しない。本発明の抗原性ペ
プチドは体細胞遺伝子療法を使用して“プロドラッグ”
として直接投与または間接的に供給することができる。
い種のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメインのアミノ酸配列を含
み、アナフィラキシー性でない、抗‐ＩｇＥ抗体の産生
を誘発する。特に、本発明の抗原性ペプチドは血清およ
び他の体液中の可溶性（遊離）ＩｇＥに結合する抗‐Ｉ
ｇＥ抗体の産生を誘発し、肥満細胞および好塩基球上の
高親和性受容体にＩｇＥが結合するのを妨げ、そして受
容体‐結合ＩｇＥと交差結合しない。本発明の抗原性ペ
プチドは体細胞遺伝子療法を使用して“プロドラッグ”
として直接投与または間接的に供給することができる。
【００３０】一態様において、本発明の抗原性ペプチド
は第２の、好ましくは関連のない種のＩｇＥ分子のＣＨ
３ドメインのアミノ酸残基が隣接した第１の種のＩｇＥ
分子のＣＨ３ドメインのアミノ酸残基を含む、アミノ酸
配列を含む。本発明の抗原性ペプチドは少なくとも第１
の種のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメインのアミノ酸残基を少
なくとも１０，第１の種のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメイン
のアミノ酸残基を少なくとも１５，第１の種のＩｇＥ分
子のＣＨ３ドメインのアミノ酸残基を少なくとも２０，
または第１の種のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメインのアミノ
酸残基を少なくとも２５含む。さらに、本発明の抗原性
ペプチドは第２の種のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメインのア
ミノ酸残基を少なくとも１０，第２の種のＩｇＥ分子の
ＣＨ３ドメインのアミノ酸残基を少なくとも１５，第２
の種のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメインのアミノ酸残基を少
なくとも２０、または第２の種のＩｇＥ分子のＣＨ３ド
メインのアミノ酸残基を少なくとも２５含む。
は第２の、好ましくは関連のない種のＩｇＥ分子のＣＨ
３ドメインのアミノ酸残基が隣接した第１の種のＩｇＥ
分子のＣＨ３ドメインのアミノ酸残基を含む、アミノ酸
配列を含む。本発明の抗原性ペプチドは少なくとも第１
の種のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメインのアミノ酸残基を少
なくとも１０，第１の種のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメイン
のアミノ酸残基を少なくとも１５，第１の種のＩｇＥ分
子のＣＨ３ドメインのアミノ酸残基を少なくとも２０，
または第１の種のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメインのアミノ
酸残基を少なくとも２５含む。さらに、本発明の抗原性
ペプチドは第２の種のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメインのア
ミノ酸残基を少なくとも１０，第２の種のＩｇＥ分子の
ＣＨ３ドメインのアミノ酸残基を少なくとも１５，第２
の種のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメインのアミノ酸残基を少
なくとも２０、または第２の種のＩｇＥ分子のＣＨ３ド
メインのアミノ酸残基を少なくとも２５含む。
【００３１】具体的な態様において、本発明の抗原性ペ
プチドは少なくとも１０アミノ酸残基長、少なくとも１
５アミノ酸残基長、少なくとも２０アミノ酸残基長、ま
たは少なくとも２５アミノ酸残基長、または少なくとも
３０アミノ酸残基長である。好ましい態様において、本
発明の抗原性ペプチドは第２の関連のない種のＩｇＥ分
子のＣＨ３ドメインのアミノ酸残基が隣接した第１の種
のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメインのアミノ酸残基を含むア
ミノ酸配列を含み、そして前記抗原性ペプチドは２８お
よび３１アミノ酸残基の間である。本発明は、抗原性ペ
プチドおよび異種キャリア蛋白質を含む抗原性融合蛋白
質も提供する。具体的な態様において、抗原性融合蛋白
質は、第２の関連のない種のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメイ
ンのアミノ酸残基が隣接した第１の種のＩｇＥ分子のＣ
Ｈ３ドメインのアミノ酸残基、および異種キャリア蛋白
質を含む。好ましい態様において、本発明の抗原性ペプ
チドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：２，３および１０−１４
のアミノ酸配列を含む。
プチドは少なくとも１０アミノ酸残基長、少なくとも１
５アミノ酸残基長、少なくとも２０アミノ酸残基長、ま
たは少なくとも２５アミノ酸残基長、または少なくとも
３０アミノ酸残基長である。好ましい態様において、本
発明の抗原性ペプチドは第２の関連のない種のＩｇＥ分
子のＣＨ３ドメインのアミノ酸残基が隣接した第１の種
のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメインのアミノ酸残基を含むア
ミノ酸配列を含み、そして前記抗原性ペプチドは２８お
よび３１アミノ酸残基の間である。本発明は、抗原性ペ
プチドおよび異種キャリア蛋白質を含む抗原性融合蛋白
質も提供する。具体的な態様において、抗原性融合蛋白
質は、第２の関連のない種のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメイ
ンのアミノ酸残基が隣接した第１の種のＩｇＥ分子のＣ
Ｈ３ドメインのアミノ酸残基、および異種キャリア蛋白
質を含む。好ましい態様において、本発明の抗原性ペプ
チドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：２，３および１０−１４
のアミノ酸配列を含む。
【００３２】本発明は、１以上のアミノ酸置換、付加ま
たは欠失が導入されている、本発明の抗原性ペプチドま
たは抗原性融合蛋白質も含む。突然変異は、当業者に既
知の標準技術により導入することができる。例えば、１
以上のアミノ酸突然変異を起こすヌクレオチドレベルで
の１以上の突然変異は、部位特異的突然変異またはＰＣ
Ｒ‐媒介変異誘発により導入することができる。好まし
くは、保存的アミノ酸置換は１以上の予想された非必須
アミノ酸残基で行う。“保存的アミノ酸置換”は、アミ
ノ酸残基を類似した側鎖を持つアミノ酸残基で置き換え
たものである。類似した側鎖を持つアミノ酸残基のファ
ミリーは当技術分野で定義されてきた。これらのファミ
リーには塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒ
スチジン）、酸性側鎖（例えばアスパラギン酸、グルタ
ミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパ
ラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、
システイン）、非極性側鎖、（例えば、アラニン、バリ
ン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラ
ニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ‐分枝側
鎖（例えばトレオニン、バリン、イソロイシン）および
芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、ト
リプトファン、ヒスチジン）が含まれる。あるいは、例
えば飽和突然変異により、突然変異をコーディング配列
のすべてまたは一部にランダムに導入することができ、
そして得られた突然変異がアナフィラキシーを誘発しな
い抗‐ＩｇＥ抗体を誘発する能力をスクリーニングする
ことができる。
たは欠失が導入されている、本発明の抗原性ペプチドま
たは抗原性融合蛋白質も含む。突然変異は、当業者に既
知の標準技術により導入することができる。例えば、１
以上のアミノ酸突然変異を起こすヌクレオチドレベルで
の１以上の突然変異は、部位特異的突然変異またはＰＣ
Ｒ‐媒介変異誘発により導入することができる。好まし
くは、保存的アミノ酸置換は１以上の予想された非必須
アミノ酸残基で行う。“保存的アミノ酸置換”は、アミ
ノ酸残基を類似した側鎖を持つアミノ酸残基で置き換え
たものである。類似した側鎖を持つアミノ酸残基のファ
ミリーは当技術分野で定義されてきた。これらのファミ
リーには塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒ
スチジン）、酸性側鎖（例えばアスパラギン酸、グルタ
ミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパ
ラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、
システイン）、非極性側鎖、（例えば、アラニン、バリ
ン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラ
ニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ‐分枝側
鎖（例えばトレオニン、バリン、イソロイシン）および
芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、ト
リプトファン、ヒスチジン）が含まれる。あるいは、例
えば飽和突然変異により、突然変異をコーディング配列
のすべてまたは一部にランダムに導入することができ、
そして得られた突然変異がアナフィラキシーを誘発しな
い抗‐ＩｇＥ抗体を誘発する能力をスクリーニングする
ことができる。
【００３３】本発明は、アナフィラキシーを誘発しな
い、医薬組成物を投与することを含む、動物、好ましく
は哺乳動物そして最も好ましくはヒトのＩｇＥ‐媒介ア
レルギー性疾患の治療または予防のための方法も提供す
る。本発明の方法に従って投与される医薬組成物は２つ
の関連のない種のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメイン由来抗原
性ペプチドを包含する。本発明の方法に従って投与され
る医薬組成物は以下のものも含む：（ｉ）第２の種のＩ
ｇＥ分子のＣＨ３ドメインのアミノ酸残基が隣接した第
１の種のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメインのアミノ酸残基を
含むアミノ酸配列を持つ、組換え型抗原性ペプチド；
（ｉｉ）第２の種のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメインのアミ
ノ酸残基が隣接した第１の種のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメ
インのアミノ酸残基および異種キャリア蛋白質を含む、
組換え型抗原性融合蛋白質；（ｉｉｉ）第２の種のＩｇ
Ｅ分子のＣＨ３ドメインのアミノ酸残基が隣接した第１
の種のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメインのアミノ酸残基を含
むアミノ酸配列を持つ、抗原性ペプチドをコードするポ
リヌクレオチドを含むプラスミド組成物；および（ｉ
ｖ）第２の種のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメインのアミノ酸
残基が隣接した第１の種のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメイン
のアミノ酸残基および異種キャリア蛋白質を含む抗原性
融合蛋白質をコードするポリヌクレオチドを含むプラス
ミド組成物。
い、医薬組成物を投与することを含む、動物、好ましく
は哺乳動物そして最も好ましくはヒトのＩｇＥ‐媒介ア
レルギー性疾患の治療または予防のための方法も提供す
る。本発明の方法に従って投与される医薬組成物は２つ
の関連のない種のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメイン由来抗原
性ペプチドを包含する。本発明の方法に従って投与され
る医薬組成物は以下のものも含む：（ｉ）第２の種のＩ
ｇＥ分子のＣＨ３ドメインのアミノ酸残基が隣接した第
１の種のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメインのアミノ酸残基を
含むアミノ酸配列を持つ、組換え型抗原性ペプチド；
（ｉｉ）第２の種のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメインのアミ
ノ酸残基が隣接した第１の種のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメ
インのアミノ酸残基および異種キャリア蛋白質を含む、
組換え型抗原性融合蛋白質；（ｉｉｉ）第２の種のＩｇ
Ｅ分子のＣＨ３ドメインのアミノ酸残基が隣接した第１
の種のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメインのアミノ酸残基を含
むアミノ酸配列を持つ、抗原性ペプチドをコードするポ
リヌクレオチドを含むプラスミド組成物；および（ｉ
ｖ）第２の種のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメインのアミノ酸
残基が隣接した第１の種のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメイン
のアミノ酸残基および異種キャリア蛋白質を含む抗原性
融合蛋白質をコードするポリヌクレオチドを含むプラス
ミド組成物。
【００３４】一態様において、第２の種のＩｇＥ分子の
ＣＨ３ドメインのアミノ酸残基が隣接した第１の種のＩ
ｇＥ分子のＣＨ３ドメインのアミノ酸残基を含むアミノ
酸配列を持つ１以上の抗原性ペプチドを含む。好ましい
態様において、本発明の医薬組成物は第２の関連のない
種のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメインのアミノ酸残基が隣接
した第１の種のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメインのアミノ酸
残基を含むアミノ酸配列を持つ２８および３１アミノ酸
残基長間の１以上の抗原性ペプチドを含む。これらの態
様に従って、医薬組成物はさらにアジュバントを含んで
いてもよい。
ＣＨ３ドメインのアミノ酸残基が隣接した第１の種のＩ
ｇＥ分子のＣＨ３ドメインのアミノ酸残基を含むアミノ
酸配列を持つ１以上の抗原性ペプチドを含む。好ましい
態様において、本発明の医薬組成物は第２の関連のない
種のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメインのアミノ酸残基が隣接
した第１の種のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメインのアミノ酸
残基を含むアミノ酸配列を持つ２８および３１アミノ酸
残基長間の１以上の抗原性ペプチドを含む。これらの態
様に従って、医薬組成物はさらにアジュバントを含んで
いてもよい。
【００３５】本発明は１以上の抗原性融合蛋白質を含む
医薬組成物も提供する。具体的な態様において、本発明
の医薬組成物は本発明の抗原性ペプチドおよび異種キャ
リア蛋白質を含む１以上の抗原性融合蛋白質を含む。こ
の態様に従って、医薬組成物はさらにアジュバントを含
んでいてもよい。
医薬組成物も提供する。具体的な態様において、本発明
の医薬組成物は本発明の抗原性ペプチドおよび異種キャ
リア蛋白質を含む１以上の抗原性融合蛋白質を含む。こ
の態様に従って、医薬組成物はさらにアジュバントを含
んでいてもよい。
【００３６】本明細書で使用する“異種キャリア蛋白
質”という用語は、本発明の組成物を投与されて免疫反
応を引き起こす種で見られる蛋白質と高い相同性を持た
ない蛋白質を表す。２つのアミノ酸配列の比較のために
使用される任意の既知の数学的アルゴリズムにより決定
されるように、ある蛋白質に少なくとも７５％以上同
一、より好ましくは８５％以上同一、または少なくとも
９０％以上同一以上であるとき、ある蛋白質は高い相同
性を有する（例えば、Ｋａｒｌｉｎ ａｎｄ Ａｌｔｓ
ｃｈｕｌ、１９９０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．
Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：２２６４−２２６８；Ｋａｒｌ
ｉｎ ａｎｄ Ａｌｔｓｃｈｕｌ、１９９３，Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：５８７
３−５８７７；Ｔｏｒｅｌｌｉｓ ａｎｄ Ｒｏｂｏｔ
ｔｉ，１９９４，Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃ
ｉ．１０：３−５；ａｎｄ Ｐｅａｒｓｏｎ ａｎｄ
Ｌｉｐｍａｍ，１９８８，Ｐｒｏｃ，Ｎａｔｌ，Ａｃａ
ｄ，ｃｉ．８５：２４４４−８を参照されたい）。好ま
しくは、２つのアミノ酸配列の同一性の割合は、ＸＢＬ
ＡＳＴプログラム、スコア＝５０，語長＝３をもつＢＬ
ＡＳＴ蛋白質探索により決定される。異種キャリア蛋白
質の例としてはＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：７，８または
９，ＫＬＨ、ＰｈｏＥ、およびｒｍＬＴが挙げられる
が、これらに限定されない。
質”という用語は、本発明の組成物を投与されて免疫反
応を引き起こす種で見られる蛋白質と高い相同性を持た
ない蛋白質を表す。２つのアミノ酸配列の比較のために
使用される任意の既知の数学的アルゴリズムにより決定
されるように、ある蛋白質に少なくとも７５％以上同
一、より好ましくは８５％以上同一、または少なくとも
９０％以上同一以上であるとき、ある蛋白質は高い相同
性を有する（例えば、Ｋａｒｌｉｎ ａｎｄ Ａｌｔｓ
ｃｈｕｌ、１９９０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．
Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：２２６４−２２６８；Ｋａｒｌ
ｉｎ ａｎｄ Ａｌｔｓｃｈｕｌ、１９９３，Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：５８７
３−５８７７；Ｔｏｒｅｌｌｉｓ ａｎｄ Ｒｏｂｏｔ
ｔｉ，１９９４，Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃ
ｉ．１０：３−５；ａｎｄ Ｐｅａｒｓｏｎ ａｎｄ
Ｌｉｐｍａｍ，１９８８，Ｐｒｏｃ，Ｎａｔｌ，Ａｃａ
ｄ，ｃｉ．８５：２４４４−８を参照されたい）。好ま
しくは、２つのアミノ酸配列の同一性の割合は、ＸＢＬ
ＡＳＴプログラム、スコア＝５０，語長＝３をもつＢＬ
ＡＳＴ蛋白質探索により決定される。異種キャリア蛋白
質の例としてはＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：７，８または
９，ＫＬＨ、ＰｈｏＥ、およびｒｍＬＴが挙げられる
が、これらに限定されない。
【００３７】異種キャリア蛋白質は本発明の抗原性ペプ
チドのＮ−末端、Ｃ−末端または両末端に融合すること
ができる。本発明の抗原性融合蛋白質は当業者に既知の
技術、例えば、標準組換えＤＮＡ技術により産生するこ
とができる。例えば、抗原性融合蛋白質をコードするヌ
クレオチド配列は自動ＤＮＡシンセサイザーを含む慣用
の技術により合成することができる。あるいは、遺伝子
フラグメントのＰＣＲ増幅は２つの連続した遺伝子フラ
グメント間の相補的オーバーハングを引き起こすアンカ
ープライマーを使用して行うことが可能で、それらはそ
の後アニーリングされ、再増幅されて抗原性融合蛋白質
をコードする遺伝子配列を生成することができる（例え
ば、以下のＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，を参照され
たい）。さらに、融合部分をすでにコードする多くの発
現ベクターが市販されている（例えば、ＧＳＴポリペプ
チド）。本発明の抗原性ペプチドをコードする核酸は、
そのような発現ベクター中にクローニングし、融合部分
を本発明の抗原性ペプチドに対しインフレーム（ｉｎ
ｆｌａｍｅ）に結合させることができる。
チドのＮ−末端、Ｃ−末端または両末端に融合すること
ができる。本発明の抗原性融合蛋白質は当業者に既知の
技術、例えば、標準組換えＤＮＡ技術により産生するこ
とができる。例えば、抗原性融合蛋白質をコードするヌ
クレオチド配列は自動ＤＮＡシンセサイザーを含む慣用
の技術により合成することができる。あるいは、遺伝子
フラグメントのＰＣＲ増幅は２つの連続した遺伝子フラ
グメント間の相補的オーバーハングを引き起こすアンカ
ープライマーを使用して行うことが可能で、それらはそ
の後アニーリングされ、再増幅されて抗原性融合蛋白質
をコードする遺伝子配列を生成することができる（例え
ば、以下のＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，を参照され
たい）。さらに、融合部分をすでにコードする多くの発
現ベクターが市販されている（例えば、ＧＳＴポリペプ
チド）。本発明の抗原性ペプチドをコードする核酸は、
そのような発現ベクター中にクローニングし、融合部分
を本発明の抗原性ペプチドに対しインフレーム（ｉｎ
ｆｌａｍｅ）に結合させることができる。
【００３８】具体的な態様において、本発明の医薬組成
物はＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：２，３および１０−１４の
アミノ酸残基を含むアミノ酸配列を持つ抗原性ペプチド
を含む。
物はＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：２，３および１０−１４の
アミノ酸残基を含むアミノ酸配列を持つ抗原性ペプチド
を含む。
【００３９】別の態様において、本発明の医薬組成物は
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：２，３および１０−１４のアミ
ノ酸配列を含むアミノ酸配列を持つ抗原性融合蛋白質を
含む。これらの態様に従って、本発明の医薬組成物はさ
らにアジュバントを含んでいてもよい。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：２，３および１０−１４のアミ
ノ酸配列を含むアミノ酸配列を持つ抗原性融合蛋白質を
含む。これらの態様に従って、本発明の医薬組成物はさ
らにアジュバントを含んでいてもよい。
【００４０】本発明の医薬組成物はペット（例えば、イ
ヌおよびネコ）および家畜（例えば、ブタ、ウシおよび
ウマ）のような動物およびＩｇＥ‐媒介アレルギー性疾
患の治療または予防のためにヒトに投与するのに適した
製剤である。
ヌおよびネコ）および家畜（例えば、ブタ、ウシおよび
ウマ）のような動物およびＩｇＥ‐媒介アレルギー性疾
患の治療または予防のためにヒトに投与するのに適した
製剤である。
【００４１】ＩｇＥ‐媒介アレルギー性疾患はアレルギ
ー性鼻炎／枯草熱、喘息、アトピー性皮膚炎、ノミアレ
ルギー、食物および吸入性アレルギーを含む。好ましく
は、本発明の抗原性ペプチドを含む本発明の医薬組成物
は、ＩｇＥ‐媒介アレルギー性疾患を治療または予防す
るために第１の種のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメイン由来の
アミノ酸残基として同じ種に投与される。ＩｇＥ‐媒介
アレルギー性疾患は喘息、アレルギー性鼻炎、食物アレ
ルギーのような消化管アレルギー、好酸球増加症、およ
び結膜炎を含むが、これらに限定されない。
ー性鼻炎／枯草熱、喘息、アトピー性皮膚炎、ノミアレ
ルギー、食物および吸入性アレルギーを含む。好ましく
は、本発明の抗原性ペプチドを含む本発明の医薬組成物
は、ＩｇＥ‐媒介アレルギー性疾患を治療または予防す
るために第１の種のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメイン由来の
アミノ酸残基として同じ種に投与される。ＩｇＥ‐媒介
アレルギー性疾患は喘息、アレルギー性鼻炎、食物アレ
ルギーのような消化管アレルギー、好酸球増加症、およ
び結膜炎を含むが、これらに限定されない。
【００４２】本発明の医薬組成物は、ＩｇＥ‐媒介アレ
ルギー性疾患の治療、予防または阻害に有効な量、また
はアナフィラキシー性でない抗‐ＩｇＥ反応を誘発する
ために有効な量、またはヒスタミンのような血管作用性
物質の遊離を阻害または抑制するために有効な量、また
はＩｇＥ‐媒介アレルギー性疾患に関連した１以上の症
状を軽減するために有効な量が被験者（動物）に投与さ
れる。
ルギー性疾患の治療、予防または阻害に有効な量、また
はアナフィラキシー性でない抗‐ＩｇＥ反応を誘発する
ために有効な量、またはヒスタミンのような血管作用性
物質の遊離を阻害または抑制するために有効な量、また
はＩｇＥ‐媒介アレルギー性疾患に関連した１以上の症
状を軽減するために有効な量が被験者（動物）に投与さ
れる。
【００４３】本発明の医薬組成物は、ＩｇＥ‐媒介アレ
ルギー性疾患を治療するための任意の既知の方法により
使用することができる。一態様において、１以上の本発
明の医薬組成物および１以上の抗ヒスタミン剤はＩｇＥ
‐媒介アレルギー性疾患の治療または予防のために動物
に投与される。別の態様において、１以上の本発明の医
薬組成物および１以上のコルチコステロイドはＩｇＥ‐
媒介アレルギー性疾患の治療または予防のために動物に
投与される。さらに別の態様において、１以上の本発明
の医薬組成物および１以上の抗ＩｇＥ‐モノクローナル
抗体（例えば、ＢＳＷ１７）はＩｇＥ‐媒介アレルギー
性疾患の治療または予防のために動物に投与される。
ルギー性疾患を治療するための任意の既知の方法により
使用することができる。一態様において、１以上の本発
明の医薬組成物および１以上の抗ヒスタミン剤はＩｇＥ
‐媒介アレルギー性疾患の治療または予防のために動物
に投与される。別の態様において、１以上の本発明の医
薬組成物および１以上のコルチコステロイドはＩｇＥ‐
媒介アレルギー性疾患の治療または予防のために動物に
投与される。さらに別の態様において、１以上の本発明
の医薬組成物および１以上の抗ＩｇＥ‐モノクローナル
抗体（例えば、ＢＳＷ１７）はＩｇＥ‐媒介アレルギー
性疾患の治療または予防のために動物に投与される。
【００４４】本発明は、本発明の抗原性ペプチド（ＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯＳ：２，３および１０−１４）、キャリ
ア蛋白質（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：７，８および９）ま
たは抗原性融合蛋白質（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：２，３
および１０−１４）をコードするポリヌクレオチド配列
を包含する。本発明は、同一の抗原性ペプチドおよび抗
原性融合蛋白質をコードする遺伝子コードの縮退によ
り、異なるポリヌクレオチド配列を含む核酸分子を提供
する。ＩｇＥ分子のＣＨ３ドメインのポリヌクレオチド
配列は科学文献、Ｇｅｎｂａｎｋ、または当業者に既知
のクローニング技術の使用から得ることができる。特
に、本発明は、それぞれ参照として本明細書に援用し
た、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号 Ｓ５３４９７、Ｘ００９
２３、およびＬ３６８７２に開示されたヒト、ラットお
よびイヌのＩｇＥ分子のＣＨ３ドメインをコードするポ
リヌクレオチド配列を包含する。
Ｑ ＩＤ ＮＯＳ：２，３および１０−１４）、キャリ
ア蛋白質（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：７，８および９）ま
たは抗原性融合蛋白質（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：２，３
および１０−１４）をコードするポリヌクレオチド配列
を包含する。本発明は、同一の抗原性ペプチドおよび抗
原性融合蛋白質をコードする遺伝子コードの縮退によ
り、異なるポリヌクレオチド配列を含む核酸分子を提供
する。ＩｇＥ分子のＣＨ３ドメインのポリヌクレオチド
配列は科学文献、Ｇｅｎｂａｎｋ、または当業者に既知
のクローニング技術の使用から得ることができる。特
に、本発明は、それぞれ参照として本明細書に援用し
た、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号 Ｓ５３４９７、Ｘ００９
２３、およびＬ３６８７２に開示されたヒト、ラットお
よびイヌのＩｇＥ分子のＣＨ３ドメインをコードするポ
リヌクレオチド配列を包含する。
【００４５】本発明は２つの異なる種のポリヌクレオチ
ド配列によりコードされた本発明の抗原性ペプチドおよ
び異なる種のポリヌクレオチド配列によりコードされた
異種キャリア蛋白質を含む抗原性融合蛋白質も包含す
る。異種キャリア蛋白質のポリヌクレオチド配列は科学
文献、Ｇｅｎｂａｎｋ、または当業者に既知のクローニ
ング技術の使用から得ることができる。
ド配列によりコードされた本発明の抗原性ペプチドおよ
び異なる種のポリヌクレオチド配列によりコードされた
異種キャリア蛋白質を含む抗原性融合蛋白質も包含す
る。異種キャリア蛋白質のポリヌクレオチド配列は科学
文献、Ｇｅｎｂａｎｋ、または当業者に既知のクローニ
ング技術の使用から得ることができる。
【００４６】本発明の抗原性ペプチドまたは抗原性融合
蛋白質をコードするポリヌクレオチド配列は、挿入した
蛋白質コーディング配列の転写および翻訳に必要なエレ
メントを含む、適切な発現ベクター中に挿入することが
できる。必要な転写および翻訳シグナルは天然のＩｇＥ
遺伝子または隣接領域により供給されてもよい。各種宿
主‐ベクター系は、蛋白質‐コーディング配列を発現す
るために使用してもよい。これらはウイルス感染哺乳動
物細胞系（例えば、ワクシニアウイルス、アデノウイル
ス、など）；ウイルス感染昆虫細胞系（例えば、バキュ
ロウイルス）；イーストベクターを含むイーストのよう
な微生物、またはバクテリオファージ、ＤＮＡ、プラス
ミドＤＮＡ、もしくはコスミドＤＮＡにより形質転換さ
れた細菌を含むが、それらに限定されない。ベクターの
発現エレメントは強度および特異性が多様である。使用
する宿主‐ベクター系に依存して、任意の適切な転写お
よび翻訳エレメントの一つを使用してもよい。
蛋白質をコードするポリヌクレオチド配列は、挿入した
蛋白質コーディング配列の転写および翻訳に必要なエレ
メントを含む、適切な発現ベクター中に挿入することが
できる。必要な転写および翻訳シグナルは天然のＩｇＥ
遺伝子または隣接領域により供給されてもよい。各種宿
主‐ベクター系は、蛋白質‐コーディング配列を発現す
るために使用してもよい。これらはウイルス感染哺乳動
物細胞系（例えば、ワクシニアウイルス、アデノウイル
ス、など）；ウイルス感染昆虫細胞系（例えば、バキュ
ロウイルス）；イーストベクターを含むイーストのよう
な微生物、またはバクテリオファージ、ＤＮＡ、プラス
ミドＤＮＡ、もしくはコスミドＤＮＡにより形質転換さ
れた細菌を含むが、それらに限定されない。ベクターの
発現エレメントは強度および特異性が多様である。使用
する宿主‐ベクター系に依存して、任意の適切な転写お
よび翻訳エレメントの一つを使用してもよい。
【００４７】ベクターへのＤＮＡフラグメントの挿入の
ために先に記載された方法のいずれかを、抗原性ペプチ
ドまたは抗原性融合蛋白質をコードするポリヌクレオチ
ドを含む発現ベクター、および適切な転写および翻訳制
御シグナルを構築するために使用してもよい。これらの
方法はｉｎ ｖｉｔｒｏ組換え型ＤＮＡおよび合成法お
よびｉｎ ｖｉｖｏ組換え体（遺伝子組換え）を含んで
いてもよい。本発明の抗原性ペプチドまたは抗原性融合
蛋白質をコードする核酸配列の発現は第２の核酸配列に
より調節され、その結果組換え型ＤＮＡ分子により形質
転換された宿主に抗原性ペプチドまたは抗原性融合蛋白
質が発現されてもよい。例えば、本発明の抗原性ペプチ
ドまたは抗原性融合蛋白質の発現は当技術分野で既知の
任意のプロモーターまたはエンハンサーにより制御され
ていてもよい。本発明の抗原性ペプチドまたは抗原性融
合蛋白質の発現を制御するために使用してもよいプロモ
ーターは、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）極初期プロ
モーター領域、ＳＶ４０初期プロモーター領域（Ｂｅｒ
ｎｏｉｓｔ ａｎｄ Ｃｈａｍｂｏｎ，１９８１，Ｎａ
ｔｕｒｅ ２９０：３０４−３１０）、ラウス肉腫ウイ
ルスの３′長反復配列に含まれるプロモーター（Ｙａｍ
ａｍｏｔｏ，ｅｔ ａｌ．，１９８０，Ｃｅｌｌ ２
２：７８７−７９７）、ヘルペスチミジンキナーゼプロ
モーター（Ｗａｇｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８１，Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７８：
１４４１−１４４５）、メタロチオネイン遺伝子の調節
配列（Ｂｒｉｎｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８２，Ｎ
ａｔｕｒｅ ２９６：３９−４２）；β‐ラクタマーゼ
プロモーター（Ｖｉｌｌａ−Ｋａｍａｒｏｆｆ ｅｔ
ａｌ．，１９７８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ．ＵＳＡ ７５：３７２７−３７３１）またはｔａ
ｃプロモーター（ＤｅＢｏｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８
３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ
８０：２１−２５）のような原核細胞発現ベクター；Ｓ
ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ａｍｅｒｉｃａｎ，１９８０，２
４２：７４−９４の“Ｕｓｕｆｕｌ ｐｒｏｔｅｉｎｓ
ｆｒｏｍｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｂａｃｔｅｒｉ
ａ”も参照されたい；ノパリンシンセターゼプロモータ
ー領域（Ｈｅｒｒｅｒａ−Ｅｓｔｒｅｌｌａ ｅｔ ａ
ｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３０３：２０９−２１３）または
カリフラワーモザイクウイルス３５Ｓ ＲＮＡプロモー
ター（Ｇａｒｄｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８１，Ｎｕ
ｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．９：２８７１）を含む植物
発現ベクター、および光合成酵素リブロースビスリン酸
カルボキシラーゼのプロモーター（Ｈｅｒｒｅｒａ−Ｅ
ｓｔｒｅｌｌａ ｅｔ ａｌ．，１９８４，Ｎａｔｕｒ
ｅ ３１０：１１５−１２０）；Ｇａｌ４プロモーター
のようなイーストまたは他の菌類のプロモーターエレメ
ント、ＡＤＣ（アルコールデヒドロゲナーゼ）プロモー
ター、ＰＧＫ（ホスホグリセロールキナーゼ）プロモー
ター、アルカリ性ホスファターゼプロモーター、および
組織特異性を示し、トランスジェニック動物に使用され
てきた以下の動物転写制御領域：膵臓腺房細胞で活性な
エラスターゼＩ遺伝子制御領域（Ｓｗｉｆｔ ｅｔ ａ
ｌ．，１９８４，Ｃｅｌｌ ３８：６３９−６４６；Ｏ
ｒｎｉｔｚ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｃｏｌｄ Ｓｐ
ｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｓｙｍｐ．Ｑｕａｎｔ．Ｂｉ
ｏｌ．５０：３９９−４０９；ＭａｃＤｏｎａｌｄ、１
９８７，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ ７：４２５−５１
５）；膵臓ベータ細胞で活性なインシュリン遺伝子制御
領域（Ｈａｎａｈａｎ，１９８５，Ｎａｔｕｒｅ ３１
５：１１５−１２２）；リンパ細胞で活性なイムノグロ
ブリン遺伝子制御領域（Ｇｒｏｓｓｃｈｅｄｌ ｅｔ
ａｌ．，１９８４，Ｃｅｌｌ ３８：６４７−６５８；
Ａｄａｍｅｓ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｎａｔｕｒｅ
３１８：５３３−５３８；およびＡｌｅｘａｎｄｅｒ
ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏ
ｌ．７：１４３６−１４４４）；精巣、乳房、リンパお
よび肥満細胞で活性なマウス乳ガンウイルス制御領域
（Ｌｅｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｃｅｌｌ ４
５：４８５−４９５）；肝で活性なアルブミン遺伝子制
御領域（Ｐｉｎｋｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｇ
ｅｎｅｓ ａｎｄＤｅｖｅｌ．１：２６８−２７６）ア
ルファ‐フェト蛋白質遺伝子制御領域（Ｋｒｕｍｌａｕ
ｆ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉ
ｏ．５：１６３９−１６４８；およびＨａｍｍｅｒ ｅ
ｔ ａｌ．，１９８７，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３５：５３
−５８）；肝で活性なアルファ１‐アンチトリプシン遺
伝子制御領域（Ｋｅｌｓｅｙ ｅｔ ａｌ．，１９８
７，Ｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌ．１：１６１−１
７１）；骨髄細胞で活性なベータ‐グロブリン遺伝子制
御領域（Ｍｏｇｒａｍ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｎａ
ｔｕｒｅ ３１５：３３８−３４０；およびＫｏｌｌｉ
ａｓ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｃｅｌｌ ４６：８９
−９４）；脳のオリゴデンドログリアで活性なミエリン
塩基性蛋白質遺伝子制御領域（Ｒｅａｄｈｅａｄ ｅｔ
ａｌ．，１９８７，Ｃｅｌｌ ４８：７０３−７１
２）；骨格筋で活性なミオシン軽鎖‐２遺伝子制御領域
（Ｓａｎｉ，１９８５，Ｎａｔｕｒｅ ３１４：２８３
−２８６）；筋肉で活性なブタアルファ‐骨格アクチン
制御領域（Ｒｅｅｃｙ ｅｔ ａｌ．，１９９８，Ａｎ
ｉｍａｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：１０１−
１２０）；および性腺刺激ホルモン放出ホルモン（Ｍａ
ｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２
３４：１３７２−１３７８）を含むがこれらに限定され
ない。
ために先に記載された方法のいずれかを、抗原性ペプチ
ドまたは抗原性融合蛋白質をコードするポリヌクレオチ
ドを含む発現ベクター、および適切な転写および翻訳制
御シグナルを構築するために使用してもよい。これらの
方法はｉｎ ｖｉｔｒｏ組換え型ＤＮＡおよび合成法お
よびｉｎ ｖｉｖｏ組換え体（遺伝子組換え）を含んで
いてもよい。本発明の抗原性ペプチドまたは抗原性融合
蛋白質をコードする核酸配列の発現は第２の核酸配列に
より調節され、その結果組換え型ＤＮＡ分子により形質
転換された宿主に抗原性ペプチドまたは抗原性融合蛋白
質が発現されてもよい。例えば、本発明の抗原性ペプチ
ドまたは抗原性融合蛋白質の発現は当技術分野で既知の
任意のプロモーターまたはエンハンサーにより制御され
ていてもよい。本発明の抗原性ペプチドまたは抗原性融
合蛋白質の発現を制御するために使用してもよいプロモ
ーターは、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）極初期プロ
モーター領域、ＳＶ４０初期プロモーター領域（Ｂｅｒ
ｎｏｉｓｔ ａｎｄ Ｃｈａｍｂｏｎ，１９８１，Ｎａ
ｔｕｒｅ ２９０：３０４−３１０）、ラウス肉腫ウイ
ルスの３′長反復配列に含まれるプロモーター（Ｙａｍ
ａｍｏｔｏ，ｅｔ ａｌ．，１９８０，Ｃｅｌｌ ２
２：７８７−７９７）、ヘルペスチミジンキナーゼプロ
モーター（Ｗａｇｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８１，Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７８：
１４４１−１４４５）、メタロチオネイン遺伝子の調節
配列（Ｂｒｉｎｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８２，Ｎ
ａｔｕｒｅ ２９６：３９−４２）；β‐ラクタマーゼ
プロモーター（Ｖｉｌｌａ−Ｋａｍａｒｏｆｆ ｅｔ
ａｌ．，１９７８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ．ＵＳＡ ７５：３７２７−３７３１）またはｔａ
ｃプロモーター（ＤｅＢｏｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８
３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ
８０：２１−２５）のような原核細胞発現ベクター；Ｓ
ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ａｍｅｒｉｃａｎ，１９８０，２
４２：７４−９４の“Ｕｓｕｆｕｌ ｐｒｏｔｅｉｎｓ
ｆｒｏｍｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｂａｃｔｅｒｉ
ａ”も参照されたい；ノパリンシンセターゼプロモータ
ー領域（Ｈｅｒｒｅｒａ−Ｅｓｔｒｅｌｌａ ｅｔ ａ
ｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３０３：２０９−２１３）または
カリフラワーモザイクウイルス３５Ｓ ＲＮＡプロモー
ター（Ｇａｒｄｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８１，Ｎｕ
ｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．９：２８７１）を含む植物
発現ベクター、および光合成酵素リブロースビスリン酸
カルボキシラーゼのプロモーター（Ｈｅｒｒｅｒａ−Ｅ
ｓｔｒｅｌｌａ ｅｔ ａｌ．，１９８４，Ｎａｔｕｒ
ｅ ３１０：１１５−１２０）；Ｇａｌ４プロモーター
のようなイーストまたは他の菌類のプロモーターエレメ
ント、ＡＤＣ（アルコールデヒドロゲナーゼ）プロモー
ター、ＰＧＫ（ホスホグリセロールキナーゼ）プロモー
ター、アルカリ性ホスファターゼプロモーター、および
組織特異性を示し、トランスジェニック動物に使用され
てきた以下の動物転写制御領域：膵臓腺房細胞で活性な
エラスターゼＩ遺伝子制御領域（Ｓｗｉｆｔ ｅｔ ａ
ｌ．，１９８４，Ｃｅｌｌ ３８：６３９−６４６；Ｏ
ｒｎｉｔｚ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｃｏｌｄ Ｓｐ
ｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｓｙｍｐ．Ｑｕａｎｔ．Ｂｉ
ｏｌ．５０：３９９−４０９；ＭａｃＤｏｎａｌｄ、１
９８７，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ ７：４２５−５１
５）；膵臓ベータ細胞で活性なインシュリン遺伝子制御
領域（Ｈａｎａｈａｎ，１９８５，Ｎａｔｕｒｅ ３１
５：１１５−１２２）；リンパ細胞で活性なイムノグロ
ブリン遺伝子制御領域（Ｇｒｏｓｓｃｈｅｄｌ ｅｔ
ａｌ．，１９８４，Ｃｅｌｌ ３８：６４７−６５８；
Ａｄａｍｅｓ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｎａｔｕｒｅ
３１８：５３３−５３８；およびＡｌｅｘａｎｄｅｒ
ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏ
ｌ．７：１４３６−１４４４）；精巣、乳房、リンパお
よび肥満細胞で活性なマウス乳ガンウイルス制御領域
（Ｌｅｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｃｅｌｌ ４
５：４８５−４９５）；肝で活性なアルブミン遺伝子制
御領域（Ｐｉｎｋｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｇ
ｅｎｅｓ ａｎｄＤｅｖｅｌ．１：２６８−２７６）ア
ルファ‐フェト蛋白質遺伝子制御領域（Ｋｒｕｍｌａｕ
ｆ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉ
ｏ．５：１６３９−１６４８；およびＨａｍｍｅｒ ｅ
ｔ ａｌ．，１９８７，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３５：５３
−５８）；肝で活性なアルファ１‐アンチトリプシン遺
伝子制御領域（Ｋｅｌｓｅｙ ｅｔ ａｌ．，１９８
７，Ｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌ．１：１６１−１
７１）；骨髄細胞で活性なベータ‐グロブリン遺伝子制
御領域（Ｍｏｇｒａｍ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｎａ
ｔｕｒｅ ３１５：３３８−３４０；およびＫｏｌｌｉ
ａｓ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｃｅｌｌ ４６：８９
−９４）；脳のオリゴデンドログリアで活性なミエリン
塩基性蛋白質遺伝子制御領域（Ｒｅａｄｈｅａｄ ｅｔ
ａｌ．，１９８７，Ｃｅｌｌ ４８：７０３−７１
２）；骨格筋で活性なミオシン軽鎖‐２遺伝子制御領域
（Ｓａｎｉ，１９８５，Ｎａｔｕｒｅ ３１４：２８３
−２８６）；筋肉で活性なブタアルファ‐骨格アクチン
制御領域（Ｒｅｅｃｙ ｅｔ ａｌ．，１９９８，Ａｎ
ｉｍａｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：１０１−
１２０）；および性腺刺激ホルモン放出ホルモン（Ｍａ
ｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２
３４：１３７２−１３７８）を含むがこれらに限定され
ない。
【００４８】具体的な態様において、抗原性ペプチドを
コードする核酸に操作可能な結合をしたプロモーター、
１以上の複製起源、および場合によっては１以上の選択
可能なマーカー（例えば、抗生物質耐性遺伝子）を含む
ベクターが使用される。別の具体的な態様において、抗
原性融合蛋白質をコードする核酸に操作可能な結合をし
たプロモーター、１以上の複製起源、および場合によっ
ては１以上の選択可能なマーカー（例えば、抗生物質耐
性遺伝子）を含むベクターが使用される。
コードする核酸に操作可能な結合をしたプロモーター、
１以上の複製起源、および場合によっては１以上の選択
可能なマーカー（例えば、抗生物質耐性遺伝子）を含む
ベクターが使用される。別の具体的な態様において、抗
原性融合蛋白質をコードする核酸に操作可能な結合をし
たプロモーター、１以上の複製起源、および場合によっ
ては１以上の選択可能なマーカー（例えば、抗生物質耐
性遺伝子）を含むベクターが使用される。
【００４９】遺伝子挿入物を含む発現ベクターは３種の
一般的方法により同定することができる；（ａ）核酸ハ
イブリダイゼーション；（ｂ）“マーカー”遺伝子機能
の有無；および（ｃ）挿入された配列の発現。第１の方
法では、発現ベクターに挿入された抗原性ペプチドをコ
ードするポリヌクレオチドまたは抗原性融合蛋白質をコ
ードするポリヌクレオチドの存在を、挿入されたポリヌ
クレオチド配列に相同性である配列を含むプローブを使
用して核酸ハイブリダイゼーションにより検出すること
ができる。第２の方法では、組換え型ベクター／宿主系
を、ベクター中の遺伝子の挿入により引き起こされる、
ある“マーカー”機能（例えば、チミジンキナーゼ活
性、抗生物質耐性、形質転換表現型、バキュロウイルス
における閉塞体形成など）の有無に基づいて同定および
選択することができる。例えば、抗原性ペプチドまたは
抗原性融合蛋白質をコードする核酸をベクターのマーカ
ー遺伝子配列内に挿入すると、抗原性ペプチドまたは抗
原性融合蛋白質挿入物をコードする核酸分子を含む組換
え体は、マーカー遺伝子機能の欠如により同定できる。
第３の方法では、組換え体により発現される遺伝子産物
をアッセイすることにより組換え体発現ベクターを同定
することができる。そのようなアッセイは、例えば、抗
‐ＩｇＥ抗体と抗原性ペプチドまたは抗原性融合蛋白質
の結合のようなｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ系における抗
原性ペプチドまたは抗原性融合蛋白質の物理的または機
能的性質に基づいていてもよい。
一般的方法により同定することができる；（ａ）核酸ハ
イブリダイゼーション；（ｂ）“マーカー”遺伝子機能
の有無；および（ｃ）挿入された配列の発現。第１の方
法では、発現ベクターに挿入された抗原性ペプチドをコ
ードするポリヌクレオチドまたは抗原性融合蛋白質をコ
ードするポリヌクレオチドの存在を、挿入されたポリヌ
クレオチド配列に相同性である配列を含むプローブを使
用して核酸ハイブリダイゼーションにより検出すること
ができる。第２の方法では、組換え型ベクター／宿主系
を、ベクター中の遺伝子の挿入により引き起こされる、
ある“マーカー”機能（例えば、チミジンキナーゼ活
性、抗生物質耐性、形質転換表現型、バキュロウイルス
における閉塞体形成など）の有無に基づいて同定および
選択することができる。例えば、抗原性ペプチドまたは
抗原性融合蛋白質をコードする核酸をベクターのマーカ
ー遺伝子配列内に挿入すると、抗原性ペプチドまたは抗
原性融合蛋白質挿入物をコードする核酸分子を含む組換
え体は、マーカー遺伝子機能の欠如により同定できる。
第３の方法では、組換え体により発現される遺伝子産物
をアッセイすることにより組換え体発現ベクターを同定
することができる。そのようなアッセイは、例えば、抗
‐ＩｇＥ抗体と抗原性ペプチドまたは抗原性融合蛋白質
の結合のようなｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ系における抗
原性ペプチドまたは抗原性融合蛋白質の物理的または機
能的性質に基づいていてもよい。
【００５０】一旦、具体的な組換えＤＮＡ分子が同定，
単離されるとそれを増殖させるために当技術分野で既知
のいくつかの方法を使用することができる。一旦、適切
な宿主系および成長条件を確立すれば、組換え体発現ベ
クターを増殖させ、たくさん調製することができる。先
に説明したように、使用することができる発現ベクター
は、ほんの２−３例をあげると以下のベクターまたはそ
れらの誘導体であるが、それらに限定されない：ワクシ
ニアまたはアデノウイルスのようなヒトまたは動物ウイ
ルス；バキュロウイルスのような昆虫ウイルス；イース
トベクター；バクテリオファージ（例えば、ラムダ）、
およびプラスミドおよびコスミドＤＮＡベクター。
単離されるとそれを増殖させるために当技術分野で既知
のいくつかの方法を使用することができる。一旦、適切
な宿主系および成長条件を確立すれば、組換え体発現ベ
クターを増殖させ、たくさん調製することができる。先
に説明したように、使用することができる発現ベクター
は、ほんの２−３例をあげると以下のベクターまたはそ
れらの誘導体であるが、それらに限定されない：ワクシ
ニアまたはアデノウイルスのようなヒトまたは動物ウイ
ルス；バキュロウイルスのような昆虫ウイルス；イース
トベクター；バクテリオファージ（例えば、ラムダ）、
およびプラスミドおよびコスミドＤＮＡベクター。
【００５１】本明細書で使用する“宿主細胞”という用
語は組換えＤＮＡが導入される具体的な対象細胞だけで
なく、そのような細胞の後代または潜在的な後代を表
す。突然変異または環境の影響により後継世代に何らか
の変異が起こることがあるため、実際はそのような後継
世代は親細胞と同一でなくてもよいが、依然として本明
細書で使用される用語の範囲内に含まれる。
語は組換えＤＮＡが導入される具体的な対象細胞だけで
なく、そのような細胞の後代または潜在的な後代を表
す。突然変異または環境の影響により後継世代に何らか
の変異が起こることがあるため、実際はそのような後継
世代は親細胞と同一でなくてもよいが、依然として本明
細書で使用される用語の範囲内に含まれる。
【００５２】所望する具体的な様式で、挿入された配列
の発現を調節、または遺伝子産物を修飾および処理する
宿主細胞系を選択してもよい。あるプロモーターからの
発現は、ある誘導物質の存在下で上昇させることができ
る；従って、遺伝子工学的に発現を制御してもよい。さ
らに、異なる宿主細胞は翻訳および翻訳後処理および修
飾（例えば、蛋白質のグリコシル化、リン酸化）のため
の特徴的で特異的な機序を有する。発現された異種蛋白
質の所望する修飾および処理を保証するために、適切な
細胞系または宿主系を選択することができる。例えば、
細菌系での発現を非グリコシル化コア蛋白質産物を産生
するために使用することができる。イーストにおける発
現はグリコシル化産物を生成する。哺乳動物における発
現は本発明の抗原性ペプチドまたは抗原性融合蛋白質の
“天然”のグリコシル化を保証するために使用すること
ができる。さらに、異なるベクター／宿主発現系が異な
る程度にプロセシング反応を実行してもよい。
の発現を調節、または遺伝子産物を修飾および処理する
宿主細胞系を選択してもよい。あるプロモーターからの
発現は、ある誘導物質の存在下で上昇させることができ
る；従って、遺伝子工学的に発現を制御してもよい。さ
らに、異なる宿主細胞は翻訳および翻訳後処理および修
飾（例えば、蛋白質のグリコシル化、リン酸化）のため
の特徴的で特異的な機序を有する。発現された異種蛋白
質の所望する修飾および処理を保証するために、適切な
細胞系または宿主系を選択することができる。例えば、
細菌系での発現を非グリコシル化コア蛋白質産物を産生
するために使用することができる。イーストにおける発
現はグリコシル化産物を生成する。哺乳動物における発
現は本発明の抗原性ペプチドまたは抗原性融合蛋白質の
“天然”のグリコシル化を保証するために使用すること
ができる。さらに、異なるベクター／宿主発現系が異な
る程度にプロセシング反応を実行してもよい。
【００５３】組換え蛋白質を長期間、高収率で得るため
には、安定な発現が好ましい。例えば、本発明の抗原性
ペプチドまたは抗原性融合蛋白質を安定して発現する細
胞系を設計してもよい。ウイルス起源の複製物を持つ発
現ベクターを使用するよりむしろ、宿主細胞は適切な発
現制御エレメント（例えば、プロモーター、エンハンサ
ー、配列、転写ターミネーター、ポリアデニル化部位な
ど）および選択可能なマーカーにより制御されたＤＮＡ
により形質転換されてもよい。異種蛋白質の導入に続い
て、設計された細胞は栄養強化培地で１−２日間培養し
てもよく、その後選択的培地に交換する。組換えプラス
ミド中の選択可能なマーカーは選択物に耐性を与え、細
胞がクロモソーム中にプラスミドを安定して統合し、中
心を形成して増殖し、その後クローニングして細胞系に
拡大できるようにする。この方法は好都合には、本発明
の抗原性ペプチドまたは抗原性融合蛋白質を発現する細
胞系を設計するために使用してもよい。そのように設計
した細胞はＩｇＥ分子の受容体への結合に影響を与える
抗‐ＩｇＥ抗体または他の因子（例えば、有機分子、無
機分子、有機／無機複合体、ポリペプチド、ペプチド、
ペプチド類似体、多糖、糖、糖蛋白質、核酸、ＤＮＡお
よびＲＮＡ鎖およびオリゴヌクレオチドなど）のスクリ
ーニングおよび評価に特に有用であってもよい。
には、安定な発現が好ましい。例えば、本発明の抗原性
ペプチドまたは抗原性融合蛋白質を安定して発現する細
胞系を設計してもよい。ウイルス起源の複製物を持つ発
現ベクターを使用するよりむしろ、宿主細胞は適切な発
現制御エレメント（例えば、プロモーター、エンハンサ
ー、配列、転写ターミネーター、ポリアデニル化部位な
ど）および選択可能なマーカーにより制御されたＤＮＡ
により形質転換されてもよい。異種蛋白質の導入に続い
て、設計された細胞は栄養強化培地で１−２日間培養し
てもよく、その後選択的培地に交換する。組換えプラス
ミド中の選択可能なマーカーは選択物に耐性を与え、細
胞がクロモソーム中にプラスミドを安定して統合し、中
心を形成して増殖し、その後クローニングして細胞系に
拡大できるようにする。この方法は好都合には、本発明
の抗原性ペプチドまたは抗原性融合蛋白質を発現する細
胞系を設計するために使用してもよい。そのように設計
した細胞はＩｇＥ分子の受容体への結合に影響を与える
抗‐ＩｇＥ抗体または他の因子（例えば、有機分子、無
機分子、有機／無機複合体、ポリペプチド、ペプチド、
ペプチド類似体、多糖、糖、糖蛋白質、核酸、ＤＮＡお
よびＲＮＡ鎖およびオリゴヌクレオチドなど）のスクリ
ーニングおよび評価に特に有用であってもよい。
【００５４】単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ
（Ｗｉｇｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９７７，Ｃｅｌｌ
１１：２２３）、ヒポキサンチン‐グアニンホスホリボ
シルトランスフェラーゼ（Ｓｚｙｂａｌｓｋａ＆Ｓｚｙ
ｂａｌｓｋａ，１９６２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ ４８：２０２６）およびアデニン
ホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｌｏｗｙ ｅｔ
ａｌ．，１９８０，Ｃｅｌｌ ２２：８１７）を含む
が、それらに限定されない多数の選択系を使用してもよ
いが、遺伝子はそれぞれｔｋ-、ｈｇｐｒｔ-、またはａ
ｐｒｔ-細胞に使用してもよい。また、メトトレキセー
トに対する抵抗性を与えるｄｈｆｒ（Ｗｉｇｌｅｒ ｅ
ｔ ａｌ．，１９８０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．ＳｃｉＵＳＡ ７７：３５６７；Ｏ′Ｈａｒｅ ｅ
ｔ ａｌ．，１９８１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ ７８：１５２７）、ミコフェノー
ル酸に抵抗性を与えるｇｐｔ（Ｍｕｌｌｉｇａｎ＆Ｂｅ
ｒｇ，１９８１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ ＵＳＡ ７８：２０７２）；アミノグリコシドＧ−
４１８に抵抗性を与えるｎｅｏ（Ｃｏｌｂｅｒｒｅ−Ｇ
ａｒａｐｉｎ ｅｔ ａｌ．，１９８１，Ｊ．Ｍｏｌ．
Ｂｉｏｌ．１５０：１）；およびヒグロマイシンに抵抗
性を与えるｈｙｇｒｏ（Ｓａｎｔｅｒｒｅ ｅｔ ａ
ｌ．，１９８４，Ｇｅｎｅ ３０：１４７）遺伝子の選
択の基礎として、代謝拮抗物質抵抗性を使用することが
できる。
（Ｗｉｇｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９７７，Ｃｅｌｌ
１１：２２３）、ヒポキサンチン‐グアニンホスホリボ
シルトランスフェラーゼ（Ｓｚｙｂａｌｓｋａ＆Ｓｚｙ
ｂａｌｓｋａ，１９６２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ ４８：２０２６）およびアデニン
ホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｌｏｗｙ ｅｔ
ａｌ．，１９８０，Ｃｅｌｌ ２２：８１７）を含む
が、それらに限定されない多数の選択系を使用してもよ
いが、遺伝子はそれぞれｔｋ-、ｈｇｐｒｔ-、またはａ
ｐｒｔ-細胞に使用してもよい。また、メトトレキセー
トに対する抵抗性を与えるｄｈｆｒ（Ｗｉｇｌｅｒ ｅ
ｔ ａｌ．，１９８０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．ＳｃｉＵＳＡ ７７：３５６７；Ｏ′Ｈａｒｅ ｅ
ｔ ａｌ．，１９８１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ ７８：１５２７）、ミコフェノー
ル酸に抵抗性を与えるｇｐｔ（Ｍｕｌｌｉｇａｎ＆Ｂｅ
ｒｇ，１９８１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ ＵＳＡ ７８：２０７２）；アミノグリコシドＧ−
４１８に抵抗性を与えるｎｅｏ（Ｃｏｌｂｅｒｒｅ−Ｇ
ａｒａｐｉｎ ｅｔ ａｌ．，１９８１，Ｊ．Ｍｏｌ．
Ｂｉｏｌ．１５０：１）；およびヒグロマイシンに抵抗
性を与えるｈｙｇｒｏ（Ｓａｎｔｅｒｒｅ ｅｔ ａ
ｌ．，１９８４，Ｇｅｎｅ ３０：１４７）遺伝子の選
択の基礎として、代謝拮抗物質抵抗性を使用することが
できる。
【００５５】具体的な態様において、本発明の抗原性ペ
プチドをコードするポリヌクレオチド配列を含む１以上
の核酸分子は、遺伝子療法によりＩｇＥ‐媒介アレルギ
ー性疾患を治療または予防するために投与される。別の
具体的な態様において、本発明の抗原性融合蛋白質をコ
ードするポリヌクレオチド配列を含む１以上の核酸分子
は、遺伝子療法によりＩｇＥ‐媒介アレルギー性疾患を
治療または予防するために投与される。さらに別の態様
において、本発明の抗原性ペプチドをコードするポリヌ
クレオチド配列を含む１以上の核酸分子、および本発明
の抗原性融合蛋白質をコードするポリヌクレオチド配列
を含む１以上の核酸分子は、遺伝子療法によりＩｇＥ‐
媒介アレルギー性疾患を治療または予防するために投与
される。遺伝子療法は、発現された、または発現可能な
核酸を被験者に投与することにより行われる療法を表
す。本発明のこの態様において、核酸は抗‐ＩｇＥ抗体
の産生のような免疫反応を引き起こすことにより治療効
果を媒介する、コードされた抗原性ペプチドまたは抗原
性融合蛋白質を産生する。
プチドをコードするポリヌクレオチド配列を含む１以上
の核酸分子は、遺伝子療法によりＩｇＥ‐媒介アレルギ
ー性疾患を治療または予防するために投与される。別の
具体的な態様において、本発明の抗原性融合蛋白質をコ
ードするポリヌクレオチド配列を含む１以上の核酸分子
は、遺伝子療法によりＩｇＥ‐媒介アレルギー性疾患を
治療または予防するために投与される。さらに別の態様
において、本発明の抗原性ペプチドをコードするポリヌ
クレオチド配列を含む１以上の核酸分子、および本発明
の抗原性融合蛋白質をコードするポリヌクレオチド配列
を含む１以上の核酸分子は、遺伝子療法によりＩｇＥ‐
媒介アレルギー性疾患を治療または予防するために投与
される。遺伝子療法は、発現された、または発現可能な
核酸を被験者に投与することにより行われる療法を表
す。本発明のこの態様において、核酸は抗‐ＩｇＥ抗体
の産生のような免疫反応を引き起こすことにより治療効
果を媒介する、コードされた抗原性ペプチドまたは抗原
性融合蛋白質を産生する。
【００５６】当技術分野で利用できる遺伝子療法のいず
れかの方法を本発明に従って使用することができる。以
下に代表的な方法を記載する。遺伝子療法の方法の一般
的な総説としては、Ｇｏｌｄｓｐｉｅｌ ｅｔ ａ
ｌ．，１９９３，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｙ
１２：４８８−５０５；Ｗｕ ａｎｄ Ｗｕ，１９９
１，Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ３：８７−９５；Ｔｏｌｓ
ｔｏｓｈｅｖ、１９９３，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍ
ａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３２：５７３−５９６；Ｍ
ｕｌｌｉｇａｎ，１９９３，Ｓｃｉｅｎｃｅ２６０：９
２６−９３２；およびＭｏｒｇａｎ ａｎｄ Ａｎｄｅ
ｒｓｏｎ，１９９３，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ．６２：１９１−２１７；Ｍａｙ，１９９３，ＴＩＢ
ＴＥＣＨ １１（５）：１５５−２１５を参照された
い。当技術分野でよく知られた、使用することができる
組換えＤＮＡ技術の方法は、Ａｕｓｕｂｌｅ ｅｔ ａ
ｌ．，（編），１９９３，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏ
ｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇ
ｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ；およびＫ
ｒｉｅｇｌｅｒ，１９９０，Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅ
ｒａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔ
ｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓ
ｓ，ＮＹに記載されている。
れかの方法を本発明に従って使用することができる。以
下に代表的な方法を記載する。遺伝子療法の方法の一般
的な総説としては、Ｇｏｌｄｓｐｉｅｌ ｅｔ ａ
ｌ．，１９９３，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｙ
１２：４８８−５０５；Ｗｕ ａｎｄ Ｗｕ，１９９
１，Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ３：８７−９５；Ｔｏｌｓ
ｔｏｓｈｅｖ、１９９３，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍ
ａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３２：５７３−５９６；Ｍ
ｕｌｌｉｇａｎ，１９９３，Ｓｃｉｅｎｃｅ２６０：９
２６−９３２；およびＭｏｒｇａｎ ａｎｄ Ａｎｄｅ
ｒｓｏｎ，１９９３，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ．６２：１９１−２１７；Ｍａｙ，１９９３，ＴＩＢ
ＴＥＣＨ １１（５）：１５５−２１５を参照された
い。当技術分野でよく知られた、使用することができる
組換えＤＮＡ技術の方法は、Ａｕｓｕｂｌｅ ｅｔ ａ
ｌ．，（編），１９９３，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏ
ｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇ
ｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ；およびＫ
ｒｉｅｇｌｅｒ，１９９０，Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅ
ｒａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔ
ｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓ
ｓ，ＮＹに記載されている。
【００５７】好ましい側面において、医薬組成物は本発
明の抗原性ペプチドをコードする核酸配列を含み、前記
核酸配列は適切な宿主に抗原性ペプチドを発現する発現
ベクターの部分である。特に、そのような核酸配列は抗
原性ペプチドコーディング領域に操作可能な結合をして
いるプロモーターを持ち、前記プロモーターは誘発性ま
たは構成性で、場合によっては組織特異的である。別の
好ましい側面において、医薬組成物は本発明の抗原性融
合蛋白質をコードする核酸配列を含み、前記核酸配列は
適切な宿主に抗原性融合蛋白質を発現する発現ベクター
の部分である。特に、そのような核酸配列は抗原性融合
蛋白質コーディング領域に操作可能な結合をしているプ
ロモーターを持ち、前記プロモーターは誘発性または構
成性で、場合によっては組織特異的である。別の具体的
な態様において、本発明の抗原性ペプチドのコーディン
グ配列および任意の他の所望する配列とゲノムの所望す
る部位での相同性組換えを促進する領域が隣接する核酸
が使用され、抗原性ペプチドをコードする核酸の染色体
内発現が提供される（Ｋｏｌｌｅｒ ａｎｄ Ｓｍｉｔ
ｈｉｅｓ，１９８９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．
Ｓｃｉ ＵＳＡ８６：８９３２−８９３５；およびＺｉ
ｊｌｓｔａ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｎａｔｕｒｅ
３４２：４３５−４３８）。別の具体的な態様におい
て、本発明の抗原性融合蛋白質のコーディング配列およ
び任意の他の所望する配列とゲノムの所望する部位での
相同性組換えを促進する領域が隣接する核酸が使用さ
れ、抗原性蛋白質をコードする核酸の染色体内発現が提
供される。
明の抗原性ペプチドをコードする核酸配列を含み、前記
核酸配列は適切な宿主に抗原性ペプチドを発現する発現
ベクターの部分である。特に、そのような核酸配列は抗
原性ペプチドコーディング領域に操作可能な結合をして
いるプロモーターを持ち、前記プロモーターは誘発性ま
たは構成性で、場合によっては組織特異的である。別の
好ましい側面において、医薬組成物は本発明の抗原性融
合蛋白質をコードする核酸配列を含み、前記核酸配列は
適切な宿主に抗原性融合蛋白質を発現する発現ベクター
の部分である。特に、そのような核酸配列は抗原性融合
蛋白質コーディング領域に操作可能な結合をしているプ
ロモーターを持ち、前記プロモーターは誘発性または構
成性で、場合によっては組織特異的である。別の具体的
な態様において、本発明の抗原性ペプチドのコーディン
グ配列および任意の他の所望する配列とゲノムの所望す
る部位での相同性組換えを促進する領域が隣接する核酸
が使用され、抗原性ペプチドをコードする核酸の染色体
内発現が提供される（Ｋｏｌｌｅｒ ａｎｄ Ｓｍｉｔ
ｈｉｅｓ，１９８９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．
Ｓｃｉ ＵＳＡ８６：８９３２−８９３５；およびＺｉ
ｊｌｓｔａ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｎａｔｕｒｅ
３４２：４３５−４３８）。別の具体的な態様におい
て、本発明の抗原性融合蛋白質のコーディング配列およ
び任意の他の所望する配列とゲノムの所望する部位での
相同性組換えを促進する領域が隣接する核酸が使用さ
れ、抗原性蛋白質をコードする核酸の染色体内発現が提
供される。
【００５８】患者への核酸の送達は、直接（その場合、
患者は直接、核酸または核酸運搬ベクターに曝され
る）、または間接（その場合、細胞は初めにｉｎ ｖｉ
ｔｒｏで核酸により形質転換され、その後患者に移植さ
れる）のいずれであってもよい。これらの２つの方法は
それぞれ、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏ遺伝
子療法として知られている。
患者は直接、核酸または核酸運搬ベクターに曝され
る）、または間接（その場合、細胞は初めにｉｎ ｖｉ
ｔｒｏで核酸により形質転換され、その後患者に移植さ
れる）のいずれであってもよい。これらの２つの方法は
それぞれ、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏ遺伝
子療法として知られている。
【００５９】具体的な態様において、核酸は直接ｉｎ
ｖｉｖｏで投与され、そこでコードされた産物を産生す
るように発現される。このことは以下のような当技術分
野で既知の多数の方法により行うことができる：例え
ば、それらを適切な核酸発現ベクターの一部として構築
し、例えば、欠損または弱毒化レトロウイルスもしくは
他のウイルスベクターを使用した感染（米国特許第４，
９８０，２８６号を参照されたい）、または裸核ＤＮＡ
の直接注入、または微粒子衝撃（例えば遺伝子銃；Ｂｉ
ｏｌｉｓｔｉｃ，Ｄｕｐｏｎｔ）、または脂質もしくは
細胞表面受容体もしくはトランスフェクション物質によ
るコーティング、リポソームへの封入、微粒子、もしく
はマイクロカプセルの使用により、それらが細胞内にな
るように投与する、または核に入ることが既知のペプチ
ドと結合させてそれらを投与する、受容体媒介エンドサ
イトーシスを受けるようにリガンドと結合させて投与す
る（例えば、Ｗｕ ａｎｄ Ｗｕ，１９８７，Ｊ．Ｂｉ
ｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９−４４３２を参照さ
れたい）（受容体を特異的に発現する細胞型を標的にす
るために使用することができる）などの方法がある。別
の態様において、核酸リガンド複合体は、リガンドがエ
ンドソームを破壊するためのフソジェニック（ｆｕｓｏ
ｇｅｎｉｃ）ウイルスペプチドを含み、核酸がリソソー
ム分解を避けられるように形成することができる。さら
に別の態様において、核酸は特異的受容体を標的にする
ことにより、ｉｎ ｖｉｖｏでの細胞特異的取り込みお
よび発現の標的となることができる（例えば、ＰＣＴ公
開公報ＷＯ９２／０６１８０ １９９２年４月１６日発
行（Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，）；ＷＯ９２／２２６３５
１９９２年１２月２３日発行 （Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ
ａｌ．，）；ＷＯ９２／２０３１６ １９９２年１１月
２６日発行（Ｆｉｎｄｅｉｓ ｅｔ ａｌ．，）；ＷＯ
９３／１４１８８ １９９３年７月２日発行（Ｃｌａｒ
ｋｅ ｅｔ ａｌ．，）；およびＷＯ９３／２０２２１
１９９３年１０月１４日発行（Ｙｏｕｎｇ）を参照さ
れたい）。あるいは、相同性組み換えにより核酸を細胞
に導入して、発現のために宿主細胞ＤＮＡ内に取り込ま
せることができる（Ｋｏｌｌｅｒ ａｎｄ Ｓｍｉｔｈ
ｉｅｓ、１９８９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉＵＳＡ ８６：８９３２−８９３５；Ｚｉｊｌｓｔ
ａ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｎａｔｕｒｅ ３４２：
４３５−４３８）。 具体的な態様において、抗原性ペ
プチドまたは抗原性融合蛋白質をコードする核酸配列を
含むウイルスベクターが使用される。例えば、抗原性ペ
プチドまたは抗原性融合蛋白質をコードする核酸配列を
含むレトロウイルスベクターを使用することができる
（例えば、Ｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｍ
ｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：５８１−５９９を参
照されたい）。これらのレトロウイルスベクターは、ウ
イルスゲノムパッケージングおよび宿主細胞ＤＮＡへの
統合に必要でないレトロウイルス配列を欠失している。
遺伝子療法に使用される抗原性ペプチドまたは抗原性融
合蛋白質をコードする核酸配列は１以上のベクターにク
ローニングし、患者への遺伝子の送達を促進する。レト
ロウイルスベクターについてのより詳細はＢｏｅｓｅｎ
ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ
６：２９１−３０２から得られ、そこでは造血幹細胞が
化学療法に、より抵抗性を持つように、幹細胞にｍｄｒ
１遺伝子を送達するためのレトロウイルスベクターの使
用を記載している。遺伝子療法でのレトロウイルスベク
ターの使用を説明する他の参考文献としては以下のもの
が挙げられる：Ｃｌｏｗｅｓ ｅｔ ａｌ．，１９９
４，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９３：６４４−６５
１；Ｋｉｅｍ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｂｌｏｏｄ
８３：１４６７−１４７３；Ｓａｌｍｏｎｓ ａｎｄ
Ｇｕｎｚｂｅｒｇ，１９９３，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ
Ｔｈｅｒａｐｙ ４：１２９−１４１；およびＧｒｏｓ
ｓｍａｎ ａｎｄ Ｗｉｌｓｏｎ，１９９３，Ｃｕｒ
ｒ．Ｏｐｉｎ．ｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｄｅ
ｖｅｌ．３：１１０−１１４。
ｖｉｖｏで投与され、そこでコードされた産物を産生す
るように発現される。このことは以下のような当技術分
野で既知の多数の方法により行うことができる：例え
ば、それらを適切な核酸発現ベクターの一部として構築
し、例えば、欠損または弱毒化レトロウイルスもしくは
他のウイルスベクターを使用した感染（米国特許第４，
９８０，２８６号を参照されたい）、または裸核ＤＮＡ
の直接注入、または微粒子衝撃（例えば遺伝子銃；Ｂｉ
ｏｌｉｓｔｉｃ，Ｄｕｐｏｎｔ）、または脂質もしくは
細胞表面受容体もしくはトランスフェクション物質によ
るコーティング、リポソームへの封入、微粒子、もしく
はマイクロカプセルの使用により、それらが細胞内にな
るように投与する、または核に入ることが既知のペプチ
ドと結合させてそれらを投与する、受容体媒介エンドサ
イトーシスを受けるようにリガンドと結合させて投与す
る（例えば、Ｗｕ ａｎｄ Ｗｕ，１９８７，Ｊ．Ｂｉ
ｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９−４４３２を参照さ
れたい）（受容体を特異的に発現する細胞型を標的にす
るために使用することができる）などの方法がある。別
の態様において、核酸リガンド複合体は、リガンドがエ
ンドソームを破壊するためのフソジェニック（ｆｕｓｏ
ｇｅｎｉｃ）ウイルスペプチドを含み、核酸がリソソー
ム分解を避けられるように形成することができる。さら
に別の態様において、核酸は特異的受容体を標的にする
ことにより、ｉｎ ｖｉｖｏでの細胞特異的取り込みお
よび発現の標的となることができる（例えば、ＰＣＴ公
開公報ＷＯ９２／０６１８０ １９９２年４月１６日発
行（Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，）；ＷＯ９２／２２６３５
１９９２年１２月２３日発行 （Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ
ａｌ．，）；ＷＯ９２／２０３１６ １９９２年１１月
２６日発行（Ｆｉｎｄｅｉｓ ｅｔ ａｌ．，）；ＷＯ
９３／１４１８８ １９９３年７月２日発行（Ｃｌａｒ
ｋｅ ｅｔ ａｌ．，）；およびＷＯ９３／２０２２１
１９９３年１０月１４日発行（Ｙｏｕｎｇ）を参照さ
れたい）。あるいは、相同性組み換えにより核酸を細胞
に導入して、発現のために宿主細胞ＤＮＡ内に取り込ま
せることができる（Ｋｏｌｌｅｒ ａｎｄ Ｓｍｉｔｈ
ｉｅｓ、１９８９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉＵＳＡ ８６：８９３２−８９３５；Ｚｉｊｌｓｔ
ａ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｎａｔｕｒｅ ３４２：
４３５−４３８）。 具体的な態様において、抗原性ペ
プチドまたは抗原性融合蛋白質をコードする核酸配列を
含むウイルスベクターが使用される。例えば、抗原性ペ
プチドまたは抗原性融合蛋白質をコードする核酸配列を
含むレトロウイルスベクターを使用することができる
（例えば、Ｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｍ
ｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：５８１−５９９を参
照されたい）。これらのレトロウイルスベクターは、ウ
イルスゲノムパッケージングおよび宿主細胞ＤＮＡへの
統合に必要でないレトロウイルス配列を欠失している。
遺伝子療法に使用される抗原性ペプチドまたは抗原性融
合蛋白質をコードする核酸配列は１以上のベクターにク
ローニングし、患者への遺伝子の送達を促進する。レト
ロウイルスベクターについてのより詳細はＢｏｅｓｅｎ
ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ
６：２９１−３０２から得られ、そこでは造血幹細胞が
化学療法に、より抵抗性を持つように、幹細胞にｍｄｒ
１遺伝子を送達するためのレトロウイルスベクターの使
用を記載している。遺伝子療法でのレトロウイルスベク
ターの使用を説明する他の参考文献としては以下のもの
が挙げられる：Ｃｌｏｗｅｓ ｅｔ ａｌ．，１９９
４，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９３：６４４−６５
１；Ｋｉｅｍ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｂｌｏｏｄ
８３：１４６７−１４７３；Ｓａｌｍｏｎｓ ａｎｄ
Ｇｕｎｚｂｅｒｇ，１９９３，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ
Ｔｈｅｒａｐｙ ４：１２９−１４１；およびＧｒｏｓ
ｓｍａｎ ａｎｄ Ｗｉｌｓｏｎ，１９９３，Ｃｕｒ
ｒ．Ｏｐｉｎ．ｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｄｅ
ｖｅｌ．３：１１０−１１４。
【００６０】アデノウイルスベクターは遺伝子療法で使
用できる他のウイルスベクターである。アデノウイルス
ベクターは呼吸上皮に遺伝子を送達するために特に魅力
的なベヒクルである。アデノウイルスは自然に呼吸上皮
に感染し、そこで軽度の疾患を起こす。アデノウイルス
を基にした送達系の他の標的は肝、中枢神経系、内皮細
胞、および筋肉である。アデノウイルスは非分割細胞に
感染できるという利点を持つ。Ｋｏｚａｒｓｋｙ ａｎ
ｄ Ｗｉｌｓｏｎ，１９９３，ＣｕｒｒｅｎｔＯｐｉｎ
ｉｏｎ ｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌ
ｏｐｍｅｎｔ３：４９９−５０３はアデノウイルスを基
にした遺伝子療法についての総説である。Ｂｏｕｔ ｅ
ｔ ａｌ．，１９９４，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅ
ｒａｐｙ ５：３−１０は、アカゲザルの呼吸上皮に遺
伝子を導入するためのアデノウイルスの使用を示した。
遺伝子療法におけるアデノウイルスの使用の他の例は、
Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｓｃｉ
ｅｎｃｅ ２５２：４３１−４３４；Ｒｏｓｅｎｆｅｌ
ｄ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｃｅｌｌ ６８：１４３
−１５５；Ｍａｓｔｒａｎｇｅｌｉ ｅｔ ａｌ．，１
９９３，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ ９１：２２５−
２３４；ＰＣＴ公開公報ＷＯ９４／１２６４９；および
Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅ
ｒａｐｙ２：７７５−７８３に見ることができる。好ま
しい態様において、アデノウイルスベクターが使用され
る。アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）も遺伝子療法への使
用を提案されてきた（例えば、Ｗａｌｓｈ ｅｔ ａ
ｌ．，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｓｏｃ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏ
ｌ．Ｍｅｄ．２０４：２８９−３００；および米国特許
第５，４３６，１４６号を参照されたい）。
用できる他のウイルスベクターである。アデノウイルス
ベクターは呼吸上皮に遺伝子を送達するために特に魅力
的なベヒクルである。アデノウイルスは自然に呼吸上皮
に感染し、そこで軽度の疾患を起こす。アデノウイルス
を基にした送達系の他の標的は肝、中枢神経系、内皮細
胞、および筋肉である。アデノウイルスは非分割細胞に
感染できるという利点を持つ。Ｋｏｚａｒｓｋｙ ａｎ
ｄ Ｗｉｌｓｏｎ，１９９３，ＣｕｒｒｅｎｔＯｐｉｎ
ｉｏｎ ｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌ
ｏｐｍｅｎｔ３：４９９−５０３はアデノウイルスを基
にした遺伝子療法についての総説である。Ｂｏｕｔ ｅ
ｔ ａｌ．，１９９４，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅ
ｒａｐｙ ５：３−１０は、アカゲザルの呼吸上皮に遺
伝子を導入するためのアデノウイルスの使用を示した。
遺伝子療法におけるアデノウイルスの使用の他の例は、
Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｓｃｉ
ｅｎｃｅ ２５２：４３１−４３４；Ｒｏｓｅｎｆｅｌ
ｄ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｃｅｌｌ ６８：１４３
−１５５；Ｍａｓｔｒａｎｇｅｌｉ ｅｔ ａｌ．，１
９９３，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ ９１：２２５−
２３４；ＰＣＴ公開公報ＷＯ９４／１２６４９；および
Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅ
ｒａｐｙ２：７７５−７８３に見ることができる。好ま
しい態様において、アデノウイルスベクターが使用され
る。アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）も遺伝子療法への使
用を提案されてきた（例えば、Ｗａｌｓｈ ｅｔ ａ
ｌ．，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｓｏｃ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏ
ｌ．Ｍｅｄ．２０４：２８９−３００；および米国特許
第５，４３６，１４６号を参照されたい）。
【００６１】遺伝子療法の他の方法には、エレクトロポ
レーション、リポフェクション、リン酸カルシウム媒介
トランスフェクション、またはウイルス感染のような方
法により、組織培養中の細胞へ核酸分子を導入すること
を含む。通常、導入には細胞への選択可能なマーカーの
導入を含む。その後、導入された遺伝子を取り込み、発
現している細胞を単離するために、細胞の選択を行う。
次にそれらの細胞を患者に送達する。
レーション、リポフェクション、リン酸カルシウム媒介
トランスフェクション、またはウイルス感染のような方
法により、組織培養中の細胞へ核酸分子を導入すること
を含む。通常、導入には細胞への選択可能なマーカーの
導入を含む。その後、導入された遺伝子を取り込み、発
現している細胞を単離するために、細胞の選択を行う。
次にそれらの細胞を患者に送達する。
【００６２】この態様において、核酸分子は、結果とし
て生じる組換え細胞のｉｎ ｖｉｖｏでの投与の前に細
胞に導入される。そのような導入は、トランスフェクシ
ョン、エレクトロポレーション、マイクロインジェクシ
ョン、核酸配列を含むウイルスまたはバクテリオファー
ジベクター、細胞融合、染色体媒介遺伝子導入、ミクロ
セル媒介遺伝子導入、スフェロプラスト融合などを含
む、当技術分野で既知の任意の方法により行うことがで
きるが、それらの方法に限定されない。細胞への異種核
酸分子の導入のための多数の方法が当技術分野で既知で
あり（例えば、Ｌｏｅｆｆｌｅｒ ａｎｄ Ｂｅｈｒ，
１９９３，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：５９９
−６１８；Ｃｏｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｍｅ
ｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：６１８−６４４；Ｃｌ
ｉｎｅ，１９８５，Ｐｈａｒｍａｃ．Ｔｈｅｒ．２９：
６９−９２を参照されたい）、受容細胞の必要な発達お
よび生理的機能が破壊されていなければ、本発明に従っ
て使用することができる。かかる技術は細胞に核酸の安
定導入を提供するべきであり、その結果核酸は細胞によ
り発現され、好ましくはその細胞後代に遺伝、発現可能
である。
て生じる組換え細胞のｉｎ ｖｉｖｏでの投与の前に細
胞に導入される。そのような導入は、トランスフェクシ
ョン、エレクトロポレーション、マイクロインジェクシ
ョン、核酸配列を含むウイルスまたはバクテリオファー
ジベクター、細胞融合、染色体媒介遺伝子導入、ミクロ
セル媒介遺伝子導入、スフェロプラスト融合などを含
む、当技術分野で既知の任意の方法により行うことがで
きるが、それらの方法に限定されない。細胞への異種核
酸分子の導入のための多数の方法が当技術分野で既知で
あり（例えば、Ｌｏｅｆｆｌｅｒ ａｎｄ Ｂｅｈｒ，
１９９３，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：５９９
−６１８；Ｃｏｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｍｅ
ｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：６１８−６４４；Ｃｌ
ｉｎｅ，１９８５，Ｐｈａｒｍａｃ．Ｔｈｅｒ．２９：
６９−９２を参照されたい）、受容細胞の必要な発達お
よび生理的機能が破壊されていなければ、本発明に従っ
て使用することができる。かかる技術は細胞に核酸の安
定導入を提供するべきであり、その結果核酸は細胞によ
り発現され、好ましくはその細胞後代に遺伝、発現可能
である。
【００６３】結果として生じる組換え細胞は、当技術分
野で既知の各種の方法により被験者に送達することがで
きる。組換え血液細胞（例えば、造血幹または前駆細
胞）は好ましくは静脈内に投与される。使用のために予
想される細胞量は所望する効果、被験者の状態などに依
存し、当業者が決定することができる。
野で既知の各種の方法により被験者に送達することがで
きる。組換え血液細胞（例えば、造血幹または前駆細
胞）は好ましくは静脈内に投与される。使用のために予
想される細胞量は所望する効果、被験者の状態などに依
存し、当業者が決定することができる。
【００６４】遺伝子療法の目的のために核酸を導入する
ことができる細胞は、任意の所望された、利用可能な細
胞型を包含し、そして上皮細胞、内皮細胞、ケラチン細
胞、線維芽細胞、筋肉細胞、肝細胞；Ｔリンパ球、Ｂリ
ンパ球、単球、マクロファージ、好中球、好酸球、巨核
球、顆粒球のような血液細胞；例えば、骨髄、臍帯血、
末梢血、胎児肝から得られるような各種幹または前駆細
胞、特に造血幹または前駆細胞などを含むが、それらに
限定されない。
ことができる細胞は、任意の所望された、利用可能な細
胞型を包含し、そして上皮細胞、内皮細胞、ケラチン細
胞、線維芽細胞、筋肉細胞、肝細胞；Ｔリンパ球、Ｂリ
ンパ球、単球、マクロファージ、好中球、好酸球、巨核
球、顆粒球のような血液細胞；例えば、骨髄、臍帯血、
末梢血、胎児肝から得られるような各種幹または前駆細
胞、特に造血幹または前駆細胞などを含むが、それらに
限定されない。
【００６５】好ましい態様において、遺伝子療法に使用
される細胞は患者本人由来のものである。組換え細胞が
遺伝子療法で使用される態様において、本発明の抗原性
ペプチドまたは抗原性融合蛋白質をコードする核酸配列
は、細胞またはそれらの後代によって発現可能なように
細胞に導入され、そして組換え細胞は治療効果のために
ｉｎ ｖｉｖｏで投与される。具体的な態様において、
幹または前駆細胞が使用される。単離し、ｉｎ ｖｉｔ
ｒｏで維持することができる任意の幹および／または前
駆細胞は本発明のこの態様に従って潜在的に使用するこ
とができる（例えば、ＰＣＴ公開公報ＷＯ９４／０８５
９８，１９９４年４月２８日発行；Ｓｔｅｍｐｌｅ ａ
ｎｄ Ａｎｄｅｒｓｏｎ，１９９２，Ｃｅｌｌ ７１：
９７３−９８５；Ｒｈｅｉｎｗａｌｄ，１９８０，Ｍｅ
ｔｈ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．２１Ａ：２２９；およびＰ
ｉｔｔｅｌｋｏｗ ａｎｄ Ｓｃｏｔｔ，１９８６，Ｍ
ａｙｏＣｌｉｎｉｃ Ｐｒｏｃ．６１：７７１を参照さ
れたい）。
される細胞は患者本人由来のものである。組換え細胞が
遺伝子療法で使用される態様において、本発明の抗原性
ペプチドまたは抗原性融合蛋白質をコードする核酸配列
は、細胞またはそれらの後代によって発現可能なように
細胞に導入され、そして組換え細胞は治療効果のために
ｉｎ ｖｉｖｏで投与される。具体的な態様において、
幹または前駆細胞が使用される。単離し、ｉｎ ｖｉｔ
ｒｏで維持することができる任意の幹および／または前
駆細胞は本発明のこの態様に従って潜在的に使用するこ
とができる（例えば、ＰＣＴ公開公報ＷＯ９４／０８５
９８，１９９４年４月２８日発行；Ｓｔｅｍｐｌｅ ａ
ｎｄ Ａｎｄｅｒｓｏｎ，１９９２，Ｃｅｌｌ ７１：
９７３−９８５；Ｒｈｅｉｎｗａｌｄ，１９８０，Ｍｅ
ｔｈ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．２１Ａ：２２９；およびＰ
ｉｔｔｅｌｋｏｗ ａｎｄ Ｓｃｏｔｔ，１９８６，Ｍ
ａｙｏＣｌｉｎｉｃ Ｐｒｏｃ．６１：７７１を参照さ
れたい）。
【００６６】具体的な態様において、遺伝子療法のため
に導入される核酸はコーディング領域に操作可能に結合
した誘導プロモーターを含み、そのため核酸の発現は適
切な転写誘導物質の有無を制御することにより制御可能
である。
に導入される核酸はコーディング領域に操作可能に結合
した誘導プロモーターを含み、そのため核酸の発現は適
切な転写誘導物質の有無を制御することにより制御可能
である。
【００６７】本発明はまた、適切な培地中で本発明の細
胞の培養物を増殖させ、そして培養物から蛋白質を精製
することを含む、本発明の抗原性ペプチドまたは抗原性
融合蛋白質を産生するための方法に関する。例えば、本
発明の方法は、抗原性ペプチドまたは抗原性融合蛋白質
をコードするポリヌクレオチドを含む適切な発現ベクタ
ーを含む宿主細胞（すなわち、原核細胞または真核細
胞）が、コードされた抗原性ペプチドまたはコードされ
た抗原性融合蛋白質の発現が可能な条件下で培養され
る、本発明の抗原性ペプチドまたは抗原性融合蛋白質を
産生するための過程を含む。抗原性ペプチドまたは抗原
性融合蛋白質は培養物、好都合には培地から回収し、さ
らに精製することができる。精製された抗原性ペプチド
または抗原性融合蛋白質は、抗原性ペプチドまたは抗原
性融合蛋白質に結合する抗‐ＩｇＥ抗体を同定するため
に、当技術分野でよく知られたｉｎ ｖｉｔｒｏイムノ
アッセイで使用することができる。
胞の培養物を増殖させ、そして培養物から蛋白質を精製
することを含む、本発明の抗原性ペプチドまたは抗原性
融合蛋白質を産生するための方法に関する。例えば、本
発明の方法は、抗原性ペプチドまたは抗原性融合蛋白質
をコードするポリヌクレオチドを含む適切な発現ベクタ
ーを含む宿主細胞（すなわち、原核細胞または真核細
胞）が、コードされた抗原性ペプチドまたはコードされ
た抗原性融合蛋白質の発現が可能な条件下で培養され
る、本発明の抗原性ペプチドまたは抗原性融合蛋白質を
産生するための過程を含む。抗原性ペプチドまたは抗原
性融合蛋白質は培養物、好都合には培地から回収し、さ
らに精製することができる。精製された抗原性ペプチド
または抗原性融合蛋白質は、抗原性ペプチドまたは抗原
性融合蛋白質に結合する抗‐ＩｇＥ抗体を同定するため
に、当技術分野でよく知られたｉｎ ｖｉｔｒｏイムノ
アッセイで使用することができる。
【００６８】蛋白質はまた、１以上の昆虫発現ベクター
の適切な制御配列に本発明の単離されたポリヌクレオチ
ドを操作可能に結合させること、および昆虫発現系を使
用することにより産生することができる。バキュロウイ
ルス／昆虫細胞発現系のための材料と方法は、例えば、
Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉ
ｆ．Ｕ．Ｓ．Ａ．（ｔｈｅ ＭａｘＢａｔ．ＲＴＭ．キ
ット）からキット型として市販されていて、そのような
方法はＳｕｍｍｅｒｓ ａｎｄ Ｓｍｉｔｈ，Ｔｅｘａ
ｓ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
ａｌ Ｓｔａｔｉｏｎ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ 第１５５５
号（１９８７）（参照として本明細書に援用する）に記
載されたように、当技術分野でよく知られている。本明
細書で使用するような、本発明のポリヌクレオチドの発
現が可能な昆虫細胞は“形質転換”されている。
の適切な制御配列に本発明の単離されたポリヌクレオチ
ドを操作可能に結合させること、および昆虫発現系を使
用することにより産生することができる。バキュロウイ
ルス／昆虫細胞発現系のための材料と方法は、例えば、
Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉ
ｆ．Ｕ．Ｓ．Ａ．（ｔｈｅ ＭａｘＢａｔ．ＲＴＭ．キ
ット）からキット型として市販されていて、そのような
方法はＳｕｍｍｅｒｓ ａｎｄ Ｓｍｉｔｈ，Ｔｅｘａ
ｓ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
ａｌ Ｓｔａｔｉｏｎ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ 第１５５５
号（１９８７）（参照として本明細書に援用する）に記
載されたように、当技術分野でよく知られている。本明
細書で使用するような、本発明のポリヌクレオチドの発
現が可能な昆虫細胞は“形質転換”されている。
【００６９】あるいは、本発明の抗原性ペプチドまたは
抗原性融合蛋白質は精製を促進する形状で発現されても
よい。例えば、抗原性ペプチドは、精製を促進するマル
トース結合蛋白質（ＭＢＰ）グルタチオン−Ｓ−トラン
スフェラーゼ（ＧＳＴ）またはチオレドキシン（ＴＲ
Ｘ）のような異種蛋白質を含む融合蛋白質として発現さ
れてもよい。そのような融合蛋白質の発現および精製の
ためのキットはＮｅｗＥｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂ
（Ｂｅｖｅｒｌｙ，Ｍａｓｓ．）Ｐｈａｒｍａｃｉａ
（Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）およびＩｎ Ｖｉ
ｔｒｏｇｅｎからそれぞれ市販されている。蛋白質はエ
ピトープで標識し、その後そのようなエピトープに対す
る特異的抗体の使用により精製することができる。その
ようなエピトープ（“フラッグ”）の一つはＫｏｄａｋ
（Ｎｅｗ Ｈａｖｅｎ，Ｃｏｎｎ．）から市販されてい
る。
抗原性融合蛋白質は精製を促進する形状で発現されても
よい。例えば、抗原性ペプチドは、精製を促進するマル
トース結合蛋白質（ＭＢＰ）グルタチオン−Ｓ−トラン
スフェラーゼ（ＧＳＴ）またはチオレドキシン（ＴＲ
Ｘ）のような異種蛋白質を含む融合蛋白質として発現さ
れてもよい。そのような融合蛋白質の発現および精製の
ためのキットはＮｅｗＥｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂ
（Ｂｅｖｅｒｌｙ，Ｍａｓｓ．）Ｐｈａｒｍａｃｉａ
（Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）およびＩｎ Ｖｉ
ｔｒｏｇｅｎからそれぞれ市販されている。蛋白質はエ
ピトープで標識し、その後そのようなエピトープに対す
る特異的抗体の使用により精製することができる。その
ようなエピトープ（“フラッグ”）の一つはＫｏｄａｋ
（Ｎｅｗ Ｈａｖｅｎ，Ｃｏｎｎ．）から市販されてい
る。
【００７０】本発明の抗原性ペプチドまたは本発明の抗
原性融合蛋白質は、抗原性ペプチドまたは抗原性融合蛋
白質をコードする核酸配列を含む体細胞または生殖細胞
により特徴付けられる、トランスジェニックウシ、ヤ
ギ、ブタ、またはヒツジの乳汁成分のような、トランス
ジェニック動物の産物として発現されてもよい。
原性融合蛋白質は、抗原性ペプチドまたは抗原性融合蛋
白質をコードする核酸配列を含む体細胞または生殖細胞
により特徴付けられる、トランスジェニックウシ、ヤ
ギ、ブタ、またはヒツジの乳汁成分のような、トランス
ジェニック動物の産物として発現されてもよい。
【００７１】本発明の抗原性ペプチドまたは抗原性融合
蛋白質を産生するために、当業者に既知の任意の方法が
使用可能である。もっとも簡単な方法として、アミノ酸
配列は市販のペプチドシンセサイザーを使用して合成す
ることができる。これは小ペプチドおよびより大きなペ
プチドのフラグメントの産生に有用である。本発明の単
離された抗原性ペプチドまたは抗原性融合蛋白質は、例
えば、天然のポリペプチドに対する抗体の作製に有用で
ある。
蛋白質を産生するために、当業者に既知の任意の方法が
使用可能である。もっとも簡単な方法として、アミノ酸
配列は市販のペプチドシンセサイザーを使用して合成す
ることができる。これは小ペプチドおよびより大きなペ
プチドのフラグメントの産生に有用である。本発明の単
離された抗原性ペプチドまたは抗原性融合蛋白質は、例
えば、天然のポリペプチドに対する抗体の作製に有用で
ある。
【００７２】当業者は、本発明の単離された抗原性ペプ
チドまたは抗原性融合蛋白質の一つを得るためにペプチ
ドおよび蛋白質を単離するための既知の方法に容易に従
うことができる。これらには、イムノクロマトグラフィ
ー、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ），逆相液
体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）、サイズ排除
クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、
およびイムノアフィニティークロマトグラフィーなどが
含まれるが、それらに限定されない。例えば、Ｓｖｏｐ
ｅｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：Ｐ
ｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｓｐ
ｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ（１９９４）；Ｓａｍｂｒ
ｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎ
ｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ；Ａ
ｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏ
ｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏ
ｇｙを参照されたい。
チドまたは抗原性融合蛋白質の一つを得るためにペプチ
ドおよび蛋白質を単離するための既知の方法に容易に従
うことができる。これらには、イムノクロマトグラフィ
ー、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ），逆相液
体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）、サイズ排除
クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、
およびイムノアフィニティークロマトグラフィーなどが
含まれるが、それらに限定されない。例えば、Ｓｖｏｐ
ｅｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：Ｐ
ｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｓｐ
ｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ（１９９４）；Ｓａｍｂｒ
ｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎ
ｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ；Ａ
ｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏ
ｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏ
ｇｙを参照されたい。
【００７３】本発明の抗原性ペプチドまたは抗原性融合
蛋白質は、その蛋白質が由来する細胞または組織源の細
胞物質または他の汚染蛋白質を実質的に含まないとき、
または化学的に合成されたときは、実質的に化学的前駆
物質または他の化学物質を含まないとき、“単離”また
は“精製”される。“細胞物質が実質的にない”という
言い方は、蛋白質が単離される、または組換えにより産
生される細胞の細胞成分から分離された、蛋白質調製物
を含む。従って、細胞物質を実質的に含まない蛋白質は
（乾燥重量で）約３０％、２０％、１０％または５％よ
り少ない汚染蛋白質を持つ蛋白質調製物を含む。本発明
の抗原性ペプチドまたは抗原性融合蛋白質が組換えによ
り産生されるとき、実質的に培地も含まないことが好ま
しい、すなわち、培地は蛋白質調製物の約２０％、１０
％または５％より少ない容積に相当する。本発明の抗原
性ペプチドまたは抗原性融合蛋白質が化学合成により産
生されるとき、実質的に化学的前駆物質または他の化学
物質を含まないことが好ましい、すなわち、抗原性ペプ
チドまたは抗原性融合蛋白質はその合成に関与した化学
的前駆物質または他の化学物質から分離される。従っ
て、そのような蛋白質調製物は、抗原性ペプチドまたは
抗原性融合蛋白質以外の（乾燥重量で）約３０％、２０
％、１０％または５％より少ない化学的前駆物質または
化合物を含む。本発明の組成物は、ヒトでの使用の前
に、好ましくは所望する治療的または予防的活性をｉｎ
ｖｉｔｒｏで、そして次にｉｎ ｖｉｖｏで試験され
る。例えば、具体的な組成物の投与が必要性か否かを決
定するために使用することができるｉｎ ｖｉｔｒｏア
ッセイは、ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養アッセイを含み、
そのアッセイでは患者組織標本を培養物中で増殖させ、
組成物を曝すか、さもなければ投与して、組織標本に対
するそのような組成物の効果を観察する。
蛋白質は、その蛋白質が由来する細胞または組織源の細
胞物質または他の汚染蛋白質を実質的に含まないとき、
または化学的に合成されたときは、実質的に化学的前駆
物質または他の化学物質を含まないとき、“単離”また
は“精製”される。“細胞物質が実質的にない”という
言い方は、蛋白質が単離される、または組換えにより産
生される細胞の細胞成分から分離された、蛋白質調製物
を含む。従って、細胞物質を実質的に含まない蛋白質は
（乾燥重量で）約３０％、２０％、１０％または５％よ
り少ない汚染蛋白質を持つ蛋白質調製物を含む。本発明
の抗原性ペプチドまたは抗原性融合蛋白質が組換えによ
り産生されるとき、実質的に培地も含まないことが好ま
しい、すなわち、培地は蛋白質調製物の約２０％、１０
％または５％より少ない容積に相当する。本発明の抗原
性ペプチドまたは抗原性融合蛋白質が化学合成により産
生されるとき、実質的に化学的前駆物質または他の化学
物質を含まないことが好ましい、すなわち、抗原性ペプ
チドまたは抗原性融合蛋白質はその合成に関与した化学
的前駆物質または他の化学物質から分離される。従っ
て、そのような蛋白質調製物は、抗原性ペプチドまたは
抗原性融合蛋白質以外の（乾燥重量で）約３０％、２０
％、１０％または５％より少ない化学的前駆物質または
化合物を含む。本発明の組成物は、ヒトでの使用の前
に、好ましくは所望する治療的または予防的活性をｉｎ
ｖｉｔｒｏで、そして次にｉｎ ｖｉｖｏで試験され
る。例えば、具体的な組成物の投与が必要性か否かを決
定するために使用することができるｉｎ ｖｉｔｒｏア
ッセイは、ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養アッセイを含み、
そのアッセイでは患者組織標本を培養物中で増殖させ、
組成物を曝すか、さもなければ投与して、組織標本に対
するそのような組成物の効果を観察する。
【００７４】抗原性ペプチドまたは抗原性融合蛋白質の
発現は、イムノアッセイ、ゲル電気泳動とその後の可視
化、または当業者に既知の任意の他の方法によりアッセ
イすることができる。
発現は、イムノアッセイ、ゲル電気泳動とその後の可視
化、または当業者に既知の任意の他の方法によりアッセ
イすることができる。
【００７５】各種の具体的な態様において、ｉｎ ｖｉ
ｔｒｏアッセイは、組成物が患者の疾患に関与する細胞
型に対して所望する効果を持つかどうかを測定するため
に、そのような細胞型の代表的な細胞により行うことが
できる。本発明に従って、抗原性ペプチドまたは抗原性
融合蛋白質の機能的活性は、ヒスタミンのような血管作
用物質の放出を誘発しないで、ｉｎ ｖｉｔｒｏで肥満
細胞または好塩基球上の受容体にＩｇＥが結合するのを
阻害する抗‐ＩｇＥ抗体を誘導する能力により測定する
ことができる。
ｔｒｏアッセイは、組成物が患者の疾患に関与する細胞
型に対して所望する効果を持つかどうかを測定するため
に、そのような細胞型の代表的な細胞により行うことが
できる。本発明に従って、抗原性ペプチドまたは抗原性
融合蛋白質の機能的活性は、ヒスタミンのような血管作
用物質の放出を誘発しないで、ｉｎ ｖｉｔｒｏで肥満
細胞または好塩基球上の受容体にＩｇＥが結合するのを
阻害する抗‐ＩｇＥ抗体を誘導する能力により測定する
ことができる。
【００７６】治療に使用するための組成物は、ヒトで試
験する前に、ブタ、ニワトリ、ウシまたはサルを含むが
それらに限定されない、適切な動物モデル系で試験する
ことができる。
験する前に、ブタ、ニワトリ、ウシまたはサルを含むが
それらに限定されない、適切な動物モデル系で試験する
ことができる。
【００７７】本発明は、アナフィラキシーを起こさない
抗‐ＩｇＥ抗体の産生を引き起こすための本発明の組成
物の有効量を被験生物に投与することによる治療（およ
び予防）の方法を提供する。好ましい側面において、本
発明の組成物は、実質的に精製されている（例えば、そ
の効果を制限するか、または所望しない副作用を生じる
物質が存在しない）。被験生物は好ましくは、ウシ、ブ
タ、ウマ、ニワトリ、ネコ、イヌなどを含むが、それら
に限定されない動物であり、そして好ましくは哺乳動
物、そして最も好ましくはヒトである。
抗‐ＩｇＥ抗体の産生を引き起こすための本発明の組成
物の有効量を被験生物に投与することによる治療（およ
び予防）の方法を提供する。好ましい側面において、本
発明の組成物は、実質的に精製されている（例えば、そ
の効果を制限するか、または所望しない副作用を生じる
物質が存在しない）。被験生物は好ましくは、ウシ、ブ
タ、ウマ、ニワトリ、ネコ、イヌなどを含むが、それら
に限定されない動物であり、そして好ましくは哺乳動
物、そして最も好ましくはヒトである。
【００７８】組成物が核酸を含むとき使用することがで
きる製剤および投与法は先に記載されている；付加的な
適切な製剤および投与経路は、本明細書で以下に記載し
たものの中から選択することができる。
きる製剤および投与法は先に記載されている；付加的な
適切な製剤および投与経路は、本明細書で以下に記載し
たものの中から選択することができる。
【００７９】各種送達系は既知であり、本発明の組成物
を投与するために使用することができる：例えば、リポ
ソームへの封入、微小粒子、マイクロカプセル、組成物
を発現することができる組換え細胞、受容体媒介エンド
サイトーシス（例えば、Ｗｕａｎｄ Ｗｕ，１９８７，
Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９−４４３２
を参照されたい）、レトロウイルスまたは他のベクター
の一部としての核酸の構築など。導入の方法は腫瘍内、
皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜
外、および経口経路などを含むがそれらに限定されな
い。組成物は任意の都合のよい経路、例えば注入または
ボーラス注射により、上皮または皮膚粘膜被膜（例え
ば、口腔粘膜、直腸および腸粘膜など）からの吸収によ
り投与してもよく、他の生物学的に活性な物質と一緒に
投与してもよい。投与は全身または局所であってもよ
い。さらに、例えば、吸入器またはネブライザーの使
用、およびエアゾール剤との製剤により、肺投与を行う
ことができる。
を投与するために使用することができる：例えば、リポ
ソームへの封入、微小粒子、マイクロカプセル、組成物
を発現することができる組換え細胞、受容体媒介エンド
サイトーシス（例えば、Ｗｕａｎｄ Ｗｕ，１９８７，
Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９−４４３２
を参照されたい）、レトロウイルスまたは他のベクター
の一部としての核酸の構築など。導入の方法は腫瘍内、
皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜
外、および経口経路などを含むがそれらに限定されな
い。組成物は任意の都合のよい経路、例えば注入または
ボーラス注射により、上皮または皮膚粘膜被膜（例え
ば、口腔粘膜、直腸および腸粘膜など）からの吸収によ
り投与してもよく、他の生物学的に活性な物質と一緒に
投与してもよい。投与は全身または局所であってもよ
い。さらに、例えば、吸入器またはネブライザーの使
用、およびエアゾール剤との製剤により、肺投与を行う
ことができる。
【００８０】具体的な態様において、本発明の医薬組成
物を治療が必要な部位に局所的に投与することを所望し
てもよい；このことは、例えば、制限をするためではな
いが、局所注入、局所適用、注射、または移植の方法に
より行うことが可能で、前記移植物はシアラスチック
（ｓｉａｌａｓｔｉｃ）膜のような、膜または線維を含
む、多孔質性、非多孔質性、またはゼラチン様物質であ
る。一態様において、投与はアレルギー反応の部位（先
の部位）における直接注射によるものであってもよい。
物を治療が必要な部位に局所的に投与することを所望し
てもよい；このことは、例えば、制限をするためではな
いが、局所注入、局所適用、注射、または移植の方法に
より行うことが可能で、前記移植物はシアラスチック
（ｓｉａｌａｓｔｉｃ）膜のような、膜または線維を含
む、多孔質性、非多孔質性、またはゼラチン様物質であ
る。一態様において、投与はアレルギー反応の部位（先
の部位）における直接注射によるものであってもよい。
【００８１】他の態様において、本発明の組成物はベシ
クル、特にリポソームで送達することができる（例え
ば、Ｌａｎｇｅｒ，１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４
９：１５２７−１５３３；Ｔｒｅａｔ ｅｔ ａｌ．，
Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｙ
ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ
Ｃａｎｃｅｒ，Ｌｏｐｅｚ−Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ ａｎ
ｄ Ｆｉｄｌｅｒ（編），Ｌｉｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒ
ｋ，ｐｐ．３５３−３６５（１９８９）；およびＬｏｐ
ｅｚ−Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ、同書，ｐｐ．３１７−３２
７を参照されたい；一般に同書を参照されたい）。
クル、特にリポソームで送達することができる（例え
ば、Ｌａｎｇｅｒ，１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４
９：１５２７−１５３３；Ｔｒｅａｔ ｅｔ ａｌ．，
Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｙ
ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ
Ｃａｎｃｅｒ，Ｌｏｐｅｚ−Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ ａｎ
ｄ Ｆｉｄｌｅｒ（編），Ｌｉｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒ
ｋ，ｐｐ．３５３−３６５（１９８９）；およびＬｏｐ
ｅｚ−Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ、同書，ｐｐ．３１７−３２
７を参照されたい；一般に同書を参照されたい）。
【００８２】さらに別の態様において、本発明の組成物
は制御放出系により送達することができる。一態様にお
いて、ポンプを使用してもよい（例えば、先のＬａｎｇ
ｅｒ；Ｓｅｆｔｏｎ，１９８７，ＣＲＣ Ｃｒｉｆ，Ｒ
ｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０１；Ｂｕｃｈ
ｗａｌｄ ｅｔ ａｌ．，１９８０，Ｓｕｒｇｅｒｙ８
８：５０７；およびＳａｕｄｅｋ ｅｔ ａｌ．，１９
８９，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２１：５７４を参
照されたい）。別の態様において、高分子材料を使用し
てもよい（Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ
ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，Ｌａ
ｎｇｅｒ ａｎｄ Ｗｉｓｅ（編），ＣＲＣ Ｐｒｅ
ｓ．，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，Ｆｌｏｒｉｄａ（１９７
４）；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｂｉｏａｖａ
ｉｌａｂｉｌｉｔｙ、ＤｒｕｇＰｒｏｄｕｃｔ Ｐｅｐ
ｐａｓ，１９８３，Ｊ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒ
ｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２３：６１を参照
されたい；Ｌｅｖｙ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｓｃｉ
ｅｎｃｅ ２２８：１９０；Ｄｕｒｉｎｇ ｅｔａ
ｌ．，１９８９，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２５：３５
１；およびＨｏｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９８９，
Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．７１：１０５も参照された
い）。さらに別の態様において、制御放出系を治療標的
に隣接して配置し、それにより全身投与量の一部のみが
必要であるようにすることができる（例えば、Ｇｏｏｄ
ｓｏｎ，先のＭｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ
ｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ、２
巻、ｐｐ．１１５−１３８（１９８４）を参照された
い）。
は制御放出系により送達することができる。一態様にお
いて、ポンプを使用してもよい（例えば、先のＬａｎｇ
ｅｒ；Ｓｅｆｔｏｎ，１９８７，ＣＲＣ Ｃｒｉｆ，Ｒ
ｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０１；Ｂｕｃｈ
ｗａｌｄ ｅｔ ａｌ．，１９８０，Ｓｕｒｇｅｒｙ８
８：５０７；およびＳａｕｄｅｋ ｅｔ ａｌ．，１９
８９，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２１：５７４を参
照されたい）。別の態様において、高分子材料を使用し
てもよい（Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ
ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，Ｌａ
ｎｇｅｒ ａｎｄ Ｗｉｓｅ（編），ＣＲＣ Ｐｒｅ
ｓ．，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，Ｆｌｏｒｉｄａ（１９７
４）；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｂｉｏａｖａ
ｉｌａｂｉｌｉｔｙ、ＤｒｕｇＰｒｏｄｕｃｔ Ｐｅｐ
ｐａｓ，１９８３，Ｊ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒ
ｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２３：６１を参照
されたい；Ｌｅｖｙ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｓｃｉ
ｅｎｃｅ ２２８：１９０；Ｄｕｒｉｎｇ ｅｔａ
ｌ．，１９８９，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２５：３５
１；およびＨｏｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９８９，
Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．７１：１０５も参照された
い）。さらに別の態様において、制御放出系を治療標的
に隣接して配置し、それにより全身投与量の一部のみが
必要であるようにすることができる（例えば、Ｇｏｏｄ
ｓｏｎ，先のＭｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ
ｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ、２
巻、ｐｐ．１１５−１３８（１９８４）を参照された
い）。
【００８３】他の制御放出系はＬａｎｇｅｒ（１９９
０，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７−１５３３）の
総説中で説明されている。本発明の組成物が本発明の抗
原性ペプチドまたは抗原性融合蛋白質をコードする核酸
である具体的な態様において、適切な核酸発現ベクター
の一部として核酸を構築し、例えば、レトロウイルスベ
クターの使用により（米国特許第４，９８０，２８６号
を参照されたい）、または直接注射により、または微小
粒子衝撃（例えば、遺伝子銃；Ｂｉｏｌｉｓｔｉｃ，Ｄ
ｕｐｏｎｔ）、もしくは脂質もしくは細胞表面受容体も
しくはトランスフェクション物質によるコーティングの
使用により、核酸が細胞内になるように投与することに
より、または核に入ることが知られているホメオボック
ス様ペプチドに連結させて核酸を投与する（例えば、Ｊ
ｏｌｉｏｔ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｐｒｏｃ．Ｎａ
ｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ ８８：１８６４−
１８６８を参照されたい）ことにより、核酸にコードさ
れる抗原性ペプチドまたは抗原性融合蛋白質の発現を促
進するために、それをｉｎ ｖｉｖｏで投与することが
できる。あるいは、核酸を細胞内に導入して、相同性組
換えにより、発現のために宿主細胞ＤＮＡ内に取り込ま
せてもよい。
０，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７−１５３３）の
総説中で説明されている。本発明の組成物が本発明の抗
原性ペプチドまたは抗原性融合蛋白質をコードする核酸
である具体的な態様において、適切な核酸発現ベクター
の一部として核酸を構築し、例えば、レトロウイルスベ
クターの使用により（米国特許第４，９８０，２８６号
を参照されたい）、または直接注射により、または微小
粒子衝撃（例えば、遺伝子銃；Ｂｉｏｌｉｓｔｉｃ，Ｄ
ｕｐｏｎｔ）、もしくは脂質もしくは細胞表面受容体も
しくはトランスフェクション物質によるコーティングの
使用により、核酸が細胞内になるように投与することに
より、または核に入ることが知られているホメオボック
ス様ペプチドに連結させて核酸を投与する（例えば、Ｊ
ｏｌｉｏｔ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｐｒｏｃ．Ｎａ
ｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ ８８：１８６４−
１８６８を参照されたい）ことにより、核酸にコードさ
れる抗原性ペプチドまたは抗原性融合蛋白質の発現を促
進するために、それをｉｎ ｖｉｖｏで投与することが
できる。あるいは、核酸を細胞内に導入して、相同性組
換えにより、発現のために宿主細胞ＤＮＡ内に取り込ま
せてもよい。
【００８４】本発明は医薬組成物も提供する。そのよう
な組成物は、本発明の治療的有効量の抗原性ペプチドま
たは抗原性融合蛋白質、および薬剤的に受容できるキャ
リアを含む。具体的な態様において、“薬剤的に受容で
きる”という用語は、連邦または州政府の規制局に認可
されているか、または米国薬局方もしくは他の一般に認
められている薬局方に動物、およびより具体的にはヒト
での使用のためにリストに載せられることを意味する。
“キャリア”という用語は、それらとともに治療薬が投
与される希釈剤、賦形剤、またはベヒクルを表す。その
ような薬剤的キャリアは、ピーナツ油、大豆油、鉱物
油、ごま油などのような、石油、動物、植物または合成
起源のものを含む、水または油のような滅菌した液体で
あってもい。水は、医薬組成物を静脈内投与するときに
好ましいキャリアである。生理食塩水および水性ブドウ
糖およびグリセロール溶液も液体キャリアとして、特に
注射溶液に使用することができる。適切な薬剤的賦形剤
はデンプン、グルコース、ラクトース、蔗糖、ゼラチ
ン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステア
リン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タ
ルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロー
ル、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどを含
む。もし所望するならば、組成物は少量の湿潤剤、乳化
剤またはｐＨ緩衝剤も含んでいてもよい。これらの組成
物は、溶液、懸濁剤、乳化剤、錠剤、丸剤、カプセル
剤、粉末剤、徐放性製剤などの形状をとることができ
る。組成物はトリグリセリドのような慣用の結合剤およ
びキャリアとともに、坐剤として製剤することができ
る。経口製剤は薬剤的等級のマンニトール、乳糖、デン
プン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウ
ム、セルロース、炭酸マグネシウム、などのような標準
キャリアを含むことができる。適切な薬剤的キャリアの
例はＥ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎによる“Ｒｅｍｉｎｇｔｏ
ｎ′ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃ
ｅｓ”に記載されている。そのような組成物は、患者へ
の適切な投与のための形状を提供するように、適切な量
のキャリアと一緒に、好ましくは精製された形状で、治
療的有効量の抗原性ペプチドまたは抗原性融合蛋白質を
含むことになる。剤形は投与様式に適応するべきであ
る。
な組成物は、本発明の治療的有効量の抗原性ペプチドま
たは抗原性融合蛋白質、および薬剤的に受容できるキャ
リアを含む。具体的な態様において、“薬剤的に受容で
きる”という用語は、連邦または州政府の規制局に認可
されているか、または米国薬局方もしくは他の一般に認
められている薬局方に動物、およびより具体的にはヒト
での使用のためにリストに載せられることを意味する。
“キャリア”という用語は、それらとともに治療薬が投
与される希釈剤、賦形剤、またはベヒクルを表す。その
ような薬剤的キャリアは、ピーナツ油、大豆油、鉱物
油、ごま油などのような、石油、動物、植物または合成
起源のものを含む、水または油のような滅菌した液体で
あってもい。水は、医薬組成物を静脈内投与するときに
好ましいキャリアである。生理食塩水および水性ブドウ
糖およびグリセロール溶液も液体キャリアとして、特に
注射溶液に使用することができる。適切な薬剤的賦形剤
はデンプン、グルコース、ラクトース、蔗糖、ゼラチ
ン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステア
リン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タ
ルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロー
ル、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどを含
む。もし所望するならば、組成物は少量の湿潤剤、乳化
剤またはｐＨ緩衝剤も含んでいてもよい。これらの組成
物は、溶液、懸濁剤、乳化剤、錠剤、丸剤、カプセル
剤、粉末剤、徐放性製剤などの形状をとることができ
る。組成物はトリグリセリドのような慣用の結合剤およ
びキャリアとともに、坐剤として製剤することができ
る。経口製剤は薬剤的等級のマンニトール、乳糖、デン
プン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウ
ム、セルロース、炭酸マグネシウム、などのような標準
キャリアを含むことができる。適切な薬剤的キャリアの
例はＥ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎによる“Ｒｅｍｉｎｇｔｏ
ｎ′ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃ
ｅｓ”に記載されている。そのような組成物は、患者へ
の適切な投与のための形状を提供するように、適切な量
のキャリアと一緒に、好ましくは精製された形状で、治
療的有効量の抗原性ペプチドまたは抗原性融合蛋白質を
含むことになる。剤形は投与様式に適応するべきであ
る。
【００８５】好ましい態様において、組成物はヒトへの
静脈内投与に適応した医薬組成物として、常法に従って
製剤される。一般に、静脈内投与のための組成物は、滅
菌等張性水性緩衝液中の溶液である。必要な場合は、組
成物は可溶化剤および注射部位の疼痛を緩和するための
リグノカインのような局所麻酔剤も含んでいてもよい。
一般に、処方成分は、例えば凍結乾燥粉末または、活性
成分の量を示すアンプルまたはサシエ（ｓａｃｈｅｔｔ
ｅ）のような密封した容器中の、水を含まない濃縮物と
して、単位剤形中に別々に、または一緒に供給される。
組成物を注入により投与する場合は、滅菌した薬剤的等
級の水または生理食塩水を含む注入容器により投与する
ことができる。組成物を注射により投与する場合は、処
方成分が投与前に混合されるように、注射用滅菌水また
は生理食塩水のアンプルが提供される。
静脈内投与に適応した医薬組成物として、常法に従って
製剤される。一般に、静脈内投与のための組成物は、滅
菌等張性水性緩衝液中の溶液である。必要な場合は、組
成物は可溶化剤および注射部位の疼痛を緩和するための
リグノカインのような局所麻酔剤も含んでいてもよい。
一般に、処方成分は、例えば凍結乾燥粉末または、活性
成分の量を示すアンプルまたはサシエ（ｓａｃｈｅｔｔ
ｅ）のような密封した容器中の、水を含まない濃縮物と
して、単位剤形中に別々に、または一緒に供給される。
組成物を注入により投与する場合は、滅菌した薬剤的等
級の水または生理食塩水を含む注入容器により投与する
ことができる。組成物を注射により投与する場合は、処
方成分が投与前に混合されるように、注射用滅菌水また
は生理食塩水のアンプルが提供される。
【００８６】本発明の抗原性ペプチドまたは抗原性融合
蛋白質は中性または塩の形状として製剤することができ
る。薬剤的に受容できる塩は、塩酸、リン酸、酢酸、蓚
酸、酒石酸などに由来するもののような、遊離アミノ基
とともに形成されるもの、およびナトリウム、カリウ
ム、アンモニウム、カルシウム、水酸化第２鉄、イソプ
ロピルアミン、トリエチルアミン、２−エチルアミノエ
タノール、ヒスチジン、プロカインなどに由来するもの
のような遊離カルボキシル基とともに形成されるものを
含む。
蛋白質は中性または塩の形状として製剤することができ
る。薬剤的に受容できる塩は、塩酸、リン酸、酢酸、蓚
酸、酒石酸などに由来するもののような、遊離アミノ基
とともに形成されるもの、およびナトリウム、カリウ
ム、アンモニウム、カルシウム、水酸化第２鉄、イソプ
ロピルアミン、トリエチルアミン、２−エチルアミノエ
タノール、ヒスチジン、プロカインなどに由来するもの
のような遊離カルボキシル基とともに形成されるものを
含む。
【００８７】以下の実施例は本発明をさらに説明する。
【００８８】
【００８９】
【実施例１】抗原性ペプチドの選択および対応するポリ
ヌクレオチド配列のクローニング 抗ＩｇＥワクチン開発が直面する主な障害は、アレルギ
ー被験者に免疫接種するために安全に使用され、非アナ
フィラキシー誘発性ポリクローナル抗体（すなわち、受
容体結合ＩｇＥに結合しないポリクローナル抗ＩｇＥ抗
体）を誘発することができる非アナフィラキシー誘発性
ＩｇＥ決定因子を表す的確なアミノ酸に関する情報の欠
如である。定義上は、それらの決定因子は理想的には、
生理的にＩｇＥ受容体に接触するようなアミノ酸配列だ
けに対応する。明らかに、それらの配列の的確な同一性
に関する情報は先行技術には見られない。実際、それら
の配列が存在するＩｇＥ領域またはドメインに関してさ
え、先行技術では一致しない。さらに、非アナフィラキ
シー誘発性決定因子の同一性はＩｇＥ‐受容体複合体の
結晶構造を解析することのみにより正しく説明すること
ができるが、残念ながら、それらはいまだ得られていな
かった。結果として、本発明はこの障害にうち勝ち、治
療的に所望されるポリクローナル抗体を宿主細胞内に誘
発することができるＩｇＥ決定因子を提供し、それらは
天然の血清ＩｇＥと反応し、肥満細胞および好塩基球上
の受容体にＩｇＥが結合するのを妨害し、そして受容体
結合ＩｇＥと反応しない。抗ＩｇＥワクチンへの含有に
適した非アナフィラキシー誘発性ＩｇＥエピトープを同
定するために、効果的で安全なワクチンに適したＩｇＥ
上の正確なアミノ酸の位置についての先駆的な仮定をせ
ず、そしてそれらについての知識を必要としない方法に
従う。ＩｇＥ抗体は例えばヒト、イヌ、ネコ、ヒツジ、
ウシ、ブタ、ウマ、ラット、マウスおよびチンパンジー
を含む動物界の多くの種に存在することが示されてき
た。これらのＩｇＥ分子の一次アミノ酸配列の比較は、
ＩｇＥ分子の多くの部位で共通のアミノ酸配列を共有し
ていることを示す。これらの共通（保存された）配列に
は各種ＩｇＥ分子で異なるアミノ酸配列が隣接する。異
なる種のＩｇＥ分子（例えば、ラットＩｇＥおよびイヌ
ＩｇＥ）の一次配列の比較が非アナフィラキシー誘発性
ＩｇＥ決定因子の同定の手がかりを提供すると推論し
た。イヌ、ネコ、ラットＩｇＥはヒトＩｇＥ受容体に結
合することは既知である。イヌおよびラットＩｇＥがヒ
トＩｇＥ受容体のような、他の関係のない種のＩｇＥ受
容体に結合することから、イヌおよびラットの間に保存
されたアミノ酸が受容体結合コンフォメーション決定因
子を明示する情報を含むに違いないと仮定する。これら
の保存された配列はイヌおよびラットＩｇＥの間で変化
する配列とそれぞれのＩｇＥ分子内で隣接することか
ら、イヌおよびラットいずれかのＩｇＥ分子の全受容体
結合コンフォメーションに影響を与えないで、可変的な
ＩｇＥ配列はそれらのＩｇＥ間で交換することができる
とさらに仮定する。この推論を使用して、安全で効果的
なイヌのワクチンが本発明のペプチドＳＥＱ ＩＤ Ｎ
ＯＳ：１−６を使用することにより開発された。本発明
の抗原性ペプチドをコードするヌクレオチド配列は以下
の方法を使用して構築された： イヌＣＨ３ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５）のク
ローニング イヌＣＨ３ドメインをコードするポリヌクレオチド配列
はＰＣＲ法に基づいた遺伝子合成法により構築した。一
連のオリゴヌクレオチドプライマー（表１に記載）はＬ
ｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．で合成さ
れた。
ヌクレオチド配列のクローニング 抗ＩｇＥワクチン開発が直面する主な障害は、アレルギ
ー被験者に免疫接種するために安全に使用され、非アナ
フィラキシー誘発性ポリクローナル抗体（すなわち、受
容体結合ＩｇＥに結合しないポリクローナル抗ＩｇＥ抗
体）を誘発することができる非アナフィラキシー誘発性
ＩｇＥ決定因子を表す的確なアミノ酸に関する情報の欠
如である。定義上は、それらの決定因子は理想的には、
生理的にＩｇＥ受容体に接触するようなアミノ酸配列だ
けに対応する。明らかに、それらの配列の的確な同一性
に関する情報は先行技術には見られない。実際、それら
の配列が存在するＩｇＥ領域またはドメインに関してさ
え、先行技術では一致しない。さらに、非アナフィラキ
シー誘発性決定因子の同一性はＩｇＥ‐受容体複合体の
結晶構造を解析することのみにより正しく説明すること
ができるが、残念ながら、それらはいまだ得られていな
かった。結果として、本発明はこの障害にうち勝ち、治
療的に所望されるポリクローナル抗体を宿主細胞内に誘
発することができるＩｇＥ決定因子を提供し、それらは
天然の血清ＩｇＥと反応し、肥満細胞および好塩基球上
の受容体にＩｇＥが結合するのを妨害し、そして受容体
結合ＩｇＥと反応しない。抗ＩｇＥワクチンへの含有に
適した非アナフィラキシー誘発性ＩｇＥエピトープを同
定するために、効果的で安全なワクチンに適したＩｇＥ
上の正確なアミノ酸の位置についての先駆的な仮定をせ
ず、そしてそれらについての知識を必要としない方法に
従う。ＩｇＥ抗体は例えばヒト、イヌ、ネコ、ヒツジ、
ウシ、ブタ、ウマ、ラット、マウスおよびチンパンジー
を含む動物界の多くの種に存在することが示されてき
た。これらのＩｇＥ分子の一次アミノ酸配列の比較は、
ＩｇＥ分子の多くの部位で共通のアミノ酸配列を共有し
ていることを示す。これらの共通（保存された）配列に
は各種ＩｇＥ分子で異なるアミノ酸配列が隣接する。異
なる種のＩｇＥ分子（例えば、ラットＩｇＥおよびイヌ
ＩｇＥ）の一次配列の比較が非アナフィラキシー誘発性
ＩｇＥ決定因子の同定の手がかりを提供すると推論し
た。イヌ、ネコ、ラットＩｇＥはヒトＩｇＥ受容体に結
合することは既知である。イヌおよびラットＩｇＥがヒ
トＩｇＥ受容体のような、他の関係のない種のＩｇＥ受
容体に結合することから、イヌおよびラットの間に保存
されたアミノ酸が受容体結合コンフォメーション決定因
子を明示する情報を含むに違いないと仮定する。これら
の保存された配列はイヌおよびラットＩｇＥの間で変化
する配列とそれぞれのＩｇＥ分子内で隣接することか
ら、イヌおよびラットいずれかのＩｇＥ分子の全受容体
結合コンフォメーションに影響を与えないで、可変的な
ＩｇＥ配列はそれらのＩｇＥ間で交換することができる
とさらに仮定する。この推論を使用して、安全で効果的
なイヌのワクチンが本発明のペプチドＳＥＱ ＩＤ Ｎ
ＯＳ：１−６を使用することにより開発された。本発明
の抗原性ペプチドをコードするヌクレオチド配列は以下
の方法を使用して構築された： イヌＣＨ３ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５）のク
ローニング イヌＣＨ３ドメインをコードするポリヌクレオチド配列
はＰＣＲ法に基づいた遺伝子合成法により構築した。一
連のオリゴヌクレオチドプライマー（表１に記載）はＬ
ｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．で合成さ
れた。
【００９０】
【表１】
【００９１】これらのプライマーは以下のような２ステ
ップＰＣＲ反応でイヌＣＨ３ドメインを構築するために
使用された：１）１８プライマー（Ｐ１７３−Ｓ１〜Ｓ
９およびＰ１７３‐Ａ１〜Ａ９）の等モル混合物を使用
した２５サイクル、続いて２）新規反応物へのステップ
１の産物の希釈（０．６２５ｕｌを５０ｕｌ反応物に）
および２つの末端プライマー（Ｐ１７３‐Ｓ１およびＰ
１７３‐Ａ１）を使用したＰＣＲ１５サイクルの実行。
すべての反応はＢＭＢ Ｅｘｐａｎｄ ＨＦポリメラー
ゼ混合物および説明書に明示された条件を使用した。こ
のＰＣＲ反応により正しいサイズの遺伝子配列が増幅さ
れた。 部分的ヒトＣＨ３／部分的イヌＣＨ３ドメイン融合蛋白
質（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６）をコードするヌクレオ
チド配列のクローニング このＤＮＡ配列は、イヌＣＨ３ドメインの最後の５３ア
ミノ酸配列に融合したヒトＣＨ３ドメインの初めの６３
アミノ酸からなる蛋白質をコードする。この構築物をコ
ードするポリヌクレオチド配列は以下の様に構築され
た：一連のオリゴヌクレオチドプライマー（表２に記
載）はＬｉｆｅ ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓＩｎｃ．で
合成された。
ップＰＣＲ反応でイヌＣＨ３ドメインを構築するために
使用された：１）１８プライマー（Ｐ１７３−Ｓ１〜Ｓ
９およびＰ１７３‐Ａ１〜Ａ９）の等モル混合物を使用
した２５サイクル、続いて２）新規反応物へのステップ
１の産物の希釈（０．６２５ｕｌを５０ｕｌ反応物に）
および２つの末端プライマー（Ｐ１７３‐Ｓ１およびＰ
１７３‐Ａ１）を使用したＰＣＲ１５サイクルの実行。
すべての反応はＢＭＢ Ｅｘｐａｎｄ ＨＦポリメラー
ゼ混合物および説明書に明示された条件を使用した。こ
のＰＣＲ反応により正しいサイズの遺伝子配列が増幅さ
れた。 部分的ヒトＣＨ３／部分的イヌＣＨ３ドメイン融合蛋白
質（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６）をコードするヌクレオ
チド配列のクローニング このＤＮＡ配列は、イヌＣＨ３ドメインの最後の５３ア
ミノ酸配列に融合したヒトＣＨ３ドメインの初めの６３
アミノ酸からなる蛋白質をコードする。この構築物をコ
ードするポリヌクレオチド配列は以下の様に構築され
た：一連のオリゴヌクレオチドプライマー（表２に記
載）はＬｉｆｅ ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓＩｎｃ．で
合成された。
【００９２】
【表２】
【００９３】これらのプライマーは以下のような２ステ
ップＰＣＲ反応でヒトＣＨ３／イヌＣＨ３ドメイン融合
体を構築するために使用された：１）１８プライマー
（Ｐ１７４−Ｓ１〜Ｓ９およびＰ１７４‐Ａ１〜Ａ９）
の等モル混合物を使用した２５サイクル、続いて２）新
規反応物へのステップ１の産物の希釈（０．６２５ｕｌ
を５０ｕｌ反応物に）および２つの末端プライマー（Ｐ
１７４‐Ｓ１およびＰ１７４‐Ａ１）を使用したＰＣＲ
１５サイクルの実行。すべての反応はＢＭＢ Ｅｘｐａ
ｎｄ ＨＦ ポリメラーゼ混合物および説明書に明示さ
れた条件を使用した。このＰＣＲ反応により正しいサイ
ズ（３８４ヌクレオチド）の遺伝子配列が増幅された。
キメラヒト／イヌＣＨ３ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ Ｎ
Ｏ：１７）のクローニングこのＤＮＡ配列は交互ヒト／
イヌＣＨ３ドメイン配列からなる蛋白質をコードする。
ヒトＣＨ３／保存されたイヌＣＨ３ドメインをコードす
るポリヌクレオチド配列は以下のように構築された：一
連のオリゴヌクレオチドプライマー（表３に記載）はＬ
ｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．で合成さ
れた。
ップＰＣＲ反応でヒトＣＨ３／イヌＣＨ３ドメイン融合
体を構築するために使用された：１）１８プライマー
（Ｐ１７４−Ｓ１〜Ｓ９およびＰ１７４‐Ａ１〜Ａ９）
の等モル混合物を使用した２５サイクル、続いて２）新
規反応物へのステップ１の産物の希釈（０．６２５ｕｌ
を５０ｕｌ反応物に）および２つの末端プライマー（Ｐ
１７４‐Ｓ１およびＰ１７４‐Ａ１）を使用したＰＣＲ
１５サイクルの実行。すべての反応はＢＭＢ Ｅｘｐａ
ｎｄ ＨＦ ポリメラーゼ混合物および説明書に明示さ
れた条件を使用した。このＰＣＲ反応により正しいサイ
ズ（３８４ヌクレオチド）の遺伝子配列が増幅された。
キメラヒト／イヌＣＨ３ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ Ｎ
Ｏ：１７）のクローニングこのＤＮＡ配列は交互ヒト／
イヌＣＨ３ドメイン配列からなる蛋白質をコードする。
ヒトＣＨ３／保存されたイヌＣＨ３ドメインをコードす
るポリヌクレオチド配列は以下のように構築された：一
連のオリゴヌクレオチドプライマー（表３に記載）はＬ
ｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．で合成さ
れた。
【００９４】
【表３】
【００９５】これらのプライマーは以下のような２ステ
ップＰＣＲ反応でヒトＣＨ３／イヌＣＨ３キメラドメイ
ンを構築するために使用された：１）１８プライマー
（Ｐ１７５−Ｓ１〜Ｓ９およびＰ１７５‐Ａ１〜Ａ９）
の等モル混合物を使用した２５サイクル、続いて２）新
規反応物へのステップ１の産物の希釈（０．６２５ｕｌ
を５０ｕｌ反応物に）および２つの末端プライマー（Ｐ
１７５‐Ｓ１およびＰ１７５‐Ａ１）を使用したＰＣＲ
１５サイクルの実行。すべての反応はＢＭＢ Ｅｘｐａ
ｎｄ ＨＦ ポリメラーゼ混合物および説明書に明示さ
れた条件を使用した。このＰＣＲ反応により正しいサイ
ズ（３８４ヌクレオチド）の遺伝子配列が増幅された。 ヒトＣＨ３ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８）のク
ローニング ヒトＣＨ３ドメインをコードするポリヌクレオチド配列
は以下のように構築された：一連のオリゴヌクレオチド
プライマー（表４に記載）はＬｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌ
ｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．で合成された。
ップＰＣＲ反応でヒトＣＨ３／イヌＣＨ３キメラドメイ
ンを構築するために使用された：１）１８プライマー
（Ｐ１７５−Ｓ１〜Ｓ９およびＰ１７５‐Ａ１〜Ａ９）
の等モル混合物を使用した２５サイクル、続いて２）新
規反応物へのステップ１の産物の希釈（０．６２５ｕｌ
を５０ｕｌ反応物に）および２つの末端プライマー（Ｐ
１７５‐Ｓ１およびＰ１７５‐Ａ１）を使用したＰＣＲ
１５サイクルの実行。すべての反応はＢＭＢ Ｅｘｐａ
ｎｄ ＨＦ ポリメラーゼ混合物および説明書に明示さ
れた条件を使用した。このＰＣＲ反応により正しいサイ
ズ（３８４ヌクレオチド）の遺伝子配列が増幅された。 ヒトＣＨ３ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８）のク
ローニング ヒトＣＨ３ドメインをコードするポリヌクレオチド配列
は以下のように構築された：一連のオリゴヌクレオチド
プライマー（表４に記載）はＬｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌ
ｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．で合成された。
【００９６】
【表４】
【００９７】これらのプライマーは以下のような２ステ
ップＰＣＲ反応でヒトＣＨ３ドメインを構築するために
使用された：１）１８プライマー（Ｐ１７６−Ｓ１〜Ｓ
９およびＰ１７６‐Ａ１〜Ａ９）の等モル混合物を使用
した２５サイクル、続いて２）新規反応物へのステップ
１の産物の希釈（０．６２５ｕｌを５０ｕｌ反応物に）
および２つの末端プライマー（Ｐ１７６‐Ｓ１およびＰ
１７６‐Ａ１）を使用したＰＣＲ１５サイクルの実行。
すべての反応はＢＭＢ Ｅｘｐａｎｄ ＨＦポリメラー
ゼ混合物および説明書に明示された条件を使用した。こ
のＰＣＲ反応により正しいサイズ（３８４ヌクレオチ
ド）の遺伝子配列が増幅された。 ラットＣＨ３ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）の
クローニング ラットＣＨ３ドメインをコードするポリヌクレオチド配
列は以下のように構築された：一連のオリゴヌクレオチ
ドプライマー（表５に記載）はＬｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏ
ｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．で合成された。
ップＰＣＲ反応でヒトＣＨ３ドメインを構築するために
使用された：１）１８プライマー（Ｐ１７６−Ｓ１〜Ｓ
９およびＰ１７６‐Ａ１〜Ａ９）の等モル混合物を使用
した２５サイクル、続いて２）新規反応物へのステップ
１の産物の希釈（０．６２５ｕｌを５０ｕｌ反応物に）
および２つの末端プライマー（Ｐ１７６‐Ｓ１およびＰ
１７６‐Ａ１）を使用したＰＣＲ１５サイクルの実行。
すべての反応はＢＭＢ Ｅｘｐａｎｄ ＨＦポリメラー
ゼ混合物および説明書に明示された条件を使用した。こ
のＰＣＲ反応により正しいサイズ（３８４ヌクレオチ
ド）の遺伝子配列が増幅された。 ラットＣＨ３ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）の
クローニング ラットＣＨ３ドメインをコードするポリヌクレオチド配
列は以下のように構築された：一連のオリゴヌクレオチ
ドプライマー（表５に記載）はＬｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏ
ｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．で合成された。
【００９８】
【表５】
【００９９】これらのプライマーは以下のような２ステ
ップＰＣＲ反応でラットＣＨ３ドメインを構築するため
に使用された：１）１８プライマー（Ｐ１７７−Ｓ１〜
Ｓ９およびＰ１７７‐Ａ１〜Ａ９）の等モル混合物を使
用した２５サイクル、続いて２）新規反応物へのステッ
プ１の産物の希釈（０．６２５ｕｌを５０ｕｌ反応物
に）および２つの末端プライマー（Ｐ１７７‐Ｓ１およ
びＰ１７７‐Ａ１）を使用したＰＣＲ１５サイクルの実
行。すべての反応はＢＭＢ Ｅｘｐａｎｄ ＨＦポリメ
ラーゼ混合物および説明書に明示された条件を使用し
た。このＰＣＲ反応により正しいサイズ（３８４ヌクレ
オチド）の遺伝子配列が増幅された。 バキュロウイルスでの発現のためのヒトＣＨ３ドメイン
（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０）のクローニング ＩｇＥ ＣＨ３ドメインをコードするポリヌクレオチド
配列およびミツバチ毒のシグナル配列は以下のように構
築された：一連のオリゴヌクレオチドプライマー（表６
に記載）はＬｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎ
ｃ．で合成された。
ップＰＣＲ反応でラットＣＨ３ドメインを構築するため
に使用された：１）１８プライマー（Ｐ１７７−Ｓ１〜
Ｓ９およびＰ１７７‐Ａ１〜Ａ９）の等モル混合物を使
用した２５サイクル、続いて２）新規反応物へのステッ
プ１の産物の希釈（０．６２５ｕｌを５０ｕｌ反応物
に）および２つの末端プライマー（Ｐ１７７‐Ｓ１およ
びＰ１７７‐Ａ１）を使用したＰＣＲ１５サイクルの実
行。すべての反応はＢＭＢ Ｅｘｐａｎｄ ＨＦポリメ
ラーゼ混合物および説明書に明示された条件を使用し
た。このＰＣＲ反応により正しいサイズ（３８４ヌクレ
オチド）の遺伝子配列が増幅された。 バキュロウイルスでの発現のためのヒトＣＨ３ドメイン
（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０）のクローニング ＩｇＥ ＣＨ３ドメインをコードするポリヌクレオチド
配列およびミツバチ毒のシグナル配列は以下のように構
築された：一連のオリゴヌクレオチドプライマー（表６
に記載）はＬｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎ
ｃ．で合成された。
【０１００】
【表６】
【０１０１】これらのプライマーは以下のような２ステ
ップＰＣＲ反応でヒトＣＨ３ドメインを構築するために
使用された：１）２０プライマー（Ｐ１５８−Ｓ１〜Ｓ
１０およびＰ１５８‐Ａ１〜Ａ１０）の等モル混合物を
使用した２５サイクル、続いて２）新規反応物へのステ
ップ１の産物の希釈（１．２５ｕｌを５０ｕｌ反応物
に）およびプライマー（Ｐ１５８‐Ｓ１およびＰ１５８
‐Ａ１）を使用したＰＣＲ１０サイクルの実行。すべて
の反応はＢＭＢ Ｅｘｐａｎｄ ＨＦ ポリメラーゼ混
合物および説明書に明示された条件を使用した。このＰ
ＣＲ反応により正しいサイズ（４００ヌクレオチド）の
遺伝子配列が増幅された。ＰＣＲにより増幅された４０
９ｂｐフラグメントはＥｃｏＲ１およびＢａｍＨＩ酵素
により分解され、ＥｃｏＲ１およびＢａｍＨＩ酵素によ
り分解されたｐＦａｓｔＢａｃ１プラスミドに連結され
た。連結混合物はＤＨ５大腸菌に形質転換され、プラス
ミドプラス４０９ｂｐ挿入物を含むコロニーが単離され
た。プラスミドＤＮＡは取り扱い説明書に従い、Ｑｕｉ
ａｇｅｎカラムを使用して、ＤＨ５細胞から調製した。
“ドナープラスミド”（ｐＦａｓｔＢａｃ１‐ＣＨ３）
ＤＮＡは、Ｂａｃ‐Ｔｏ‐Ｂａｃ Ｂａｃｕｌｏｖｉｒ
ｕｓ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍプロトコー
ル（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に従い、バ
クミド（ｂａｃｍｉｄ）への転位のために、ＤＨ１０Ｂ
ａｃコンピテント細胞に形質転換させた。組換えバクミ
ドを含む白色コロニーを単離し、バクミドＤＮＡの単離
のために増殖させた。バクミドＤＮＡを単離するため
に、製造業者に提供された方法に従い、Ｃｏｎｃｅｒｔ
Ｈｉｇｈ Ｐｕｒｉｔｙ Ｐｌａｓｍｉｄ Ｉｓｏｌ
ａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌ
ｏｇｉｅｓ）を使用した。ＣＨ３遺伝子がバクミドに転
位したことを確かめるために、組換えバクミドのＰＣＲ
分析を行った。ＰＵＣ／Ｍ１３増幅プライマー（Ｌｉｆ
ｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）は、Ｂａｃ‐Ｔｏ‐Ｂ
ａｃ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍｓｍａｎｕ
ａｌにより明示された反応条件で使用した。反応により
サイズが２７０９塩基対の単一の特定の産物が得られ、
ＣＨ３ドメイン遺伝子がバクミド（ｐＦａｓｔＢａｃ１
２３００ｂｐ＋ＣＨ３ドメイン４０９ｂｐ＝２７０９
ｂｐにより転位されたバクミド）に挿入されたことを示
した。
ップＰＣＲ反応でヒトＣＨ３ドメインを構築するために
使用された：１）２０プライマー（Ｐ１５８−Ｓ１〜Ｓ
１０およびＰ１５８‐Ａ１〜Ａ１０）の等モル混合物を
使用した２５サイクル、続いて２）新規反応物へのステ
ップ１の産物の希釈（１．２５ｕｌを５０ｕｌ反応物
に）およびプライマー（Ｐ１５８‐Ｓ１およびＰ１５８
‐Ａ１）を使用したＰＣＲ１０サイクルの実行。すべて
の反応はＢＭＢ Ｅｘｐａｎｄ ＨＦ ポリメラーゼ混
合物および説明書に明示された条件を使用した。このＰ
ＣＲ反応により正しいサイズ（４００ヌクレオチド）の
遺伝子配列が増幅された。ＰＣＲにより増幅された４０
９ｂｐフラグメントはＥｃｏＲ１およびＢａｍＨＩ酵素
により分解され、ＥｃｏＲ１およびＢａｍＨＩ酵素によ
り分解されたｐＦａｓｔＢａｃ１プラスミドに連結され
た。連結混合物はＤＨ５大腸菌に形質転換され、プラス
ミドプラス４０９ｂｐ挿入物を含むコロニーが単離され
た。プラスミドＤＮＡは取り扱い説明書に従い、Ｑｕｉ
ａｇｅｎカラムを使用して、ＤＨ５細胞から調製した。
“ドナープラスミド”（ｐＦａｓｔＢａｃ１‐ＣＨ３）
ＤＮＡは、Ｂａｃ‐Ｔｏ‐Ｂａｃ Ｂａｃｕｌｏｖｉｒ
ｕｓ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍプロトコー
ル（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に従い、バ
クミド（ｂａｃｍｉｄ）への転位のために、ＤＨ１０Ｂ
ａｃコンピテント細胞に形質転換させた。組換えバクミ
ドを含む白色コロニーを単離し、バクミドＤＮＡの単離
のために増殖させた。バクミドＤＮＡを単離するため
に、製造業者に提供された方法に従い、Ｃｏｎｃｅｒｔ
Ｈｉｇｈ Ｐｕｒｉｔｙ Ｐｌａｓｍｉｄ Ｉｓｏｌ
ａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌ
ｏｇｉｅｓ）を使用した。ＣＨ３遺伝子がバクミドに転
位したことを確かめるために、組換えバクミドのＰＣＲ
分析を行った。ＰＵＣ／Ｍ１３増幅プライマー（Ｌｉｆ
ｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）は、Ｂａｃ‐Ｔｏ‐Ｂ
ａｃ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍｓｍａｎｕ
ａｌにより明示された反応条件で使用した。反応により
サイズが２７０９塩基対の単一の特定の産物が得られ、
ＣＨ３ドメイン遺伝子がバクミド（ｐＦａｓｔＢａｃ１
２３００ｂｐ＋ＣＨ３ドメイン４０９ｂｐ＝２７０９
ｂｐにより転位されたバクミド）に挿入されたことを示
した。
【０１０２】
【実施例２】蛋白質キャリアの選択および対応するポリ
ヌクレオチド配列のクローニング 本発明の抗原性ペプチドは、ペプチドの免疫原性を増大
させ、同時に適切な抗‐ＩｇＥ抗体を誘導するために必
要なこれらのペプチドのコンフォメーション特性を保持
する機能を持つ、キャリア蛋白質内に取り込まれた。こ
の目的のために、ヒトＩｇＥの修飾されたＣＨ２および
ＣＨ４ドメインの使用に基づいたキャリア系が開発され
た。ヒトＣＨ２およびＣＨ４ドメインの修飾はヒトＣＨ
２−ＣＨ４蛋白質配列とイヌＣＨ２−ＣＨ４蛋白質配列
間の免疫学的交差反応性を妨げるように導入された。キ
ャリア蛋白質ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７−９の配列は以下
の方法に従ってクローニングされた。 ヒトＣＨ２ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１）のク
ローニング シグナル配列：：ヒトＣＨ２ドメインをコードするポリ
ヌクレオチド配列は以下のような２ステップＰＣＲ法に
基づいた遺伝子合成法により構築された：一連のオリゴ
ヌクレオチドプライマー（表７に記載）はＬｉｆｅ Ｔ
ｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．で合成された。
ヌクレオチド配列のクローニング 本発明の抗原性ペプチドは、ペプチドの免疫原性を増大
させ、同時に適切な抗‐ＩｇＥ抗体を誘導するために必
要なこれらのペプチドのコンフォメーション特性を保持
する機能を持つ、キャリア蛋白質内に取り込まれた。こ
の目的のために、ヒトＩｇＥの修飾されたＣＨ２および
ＣＨ４ドメインの使用に基づいたキャリア系が開発され
た。ヒトＣＨ２およびＣＨ４ドメインの修飾はヒトＣＨ
２−ＣＨ４蛋白質配列とイヌＣＨ２−ＣＨ４蛋白質配列
間の免疫学的交差反応性を妨げるように導入された。キ
ャリア蛋白質ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７−９の配列は以下
の方法に従ってクローニングされた。 ヒトＣＨ２ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１）のク
ローニング シグナル配列：：ヒトＣＨ２ドメインをコードするポリ
ヌクレオチド配列は以下のような２ステップＰＣＲ法に
基づいた遺伝子合成法により構築された：一連のオリゴ
ヌクレオチドプライマー（表７に記載）はＬｉｆｅ Ｔ
ｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．で合成された。
【０１０３】
【表７】
【０１０４】これらのプライマーは以下のような２ステ
ップＰＣＲ反応でシグナル配列：：ヒトＣＨ２ドメイン
を構築するために使用された：１）２０プライマー（Ｐ
１７１−Ｓ１〜Ｓ１０およびＰ１７１‐Ａ１〜Ａ１０）
の等モル混合物を使用した２５サイクル、続いて２）新
規反応物へのステップ１の産物の希釈（０．６２５ｕｌ
を５０ｕｌ反応物に）および２つの末端プライマー（Ｐ
１７１‐Ｓ１およびＰ１７１‐Ａ１）を使用したＰＣＲ
１５サイクルの実行。すべての反応はＢＭＢＥｘｐａｎ
ｄ ＨＦ ポリメラーゼ混合物および説明書に明示され
た条件を使用した。このＰＣＲ反応により正しいサイズ
の遺伝子配列が増幅された。増幅された遺伝子は、次に
Ｔ／Ａクローニング部位において、（ｐＧＥＭ−Ｔ）ベ
クターにクローニングされた。増幅されたフラグメント
のヌクレオチド配列は自動蛍光ＤＮＡ配列決定法により
決定した。 ヒトＣＨ４ドメイン（ＳＥＱＩＤ＃２２）のクローニン
グ ヒトＣＨ４ドメインをコードするポリヌクレオチド配列
は以下のような２ステップＰＣＲ法に基づいた遺伝子合
成法により構築された：一連のオリゴヌクレオチドプラ
イマー（表８に記載）はＬｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇ
ｉｅｓ Ｉｎｃ．で合成された。
ップＰＣＲ反応でシグナル配列：：ヒトＣＨ２ドメイン
を構築するために使用された：１）２０プライマー（Ｐ
１７１−Ｓ１〜Ｓ１０およびＰ１７１‐Ａ１〜Ａ１０）
の等モル混合物を使用した２５サイクル、続いて２）新
規反応物へのステップ１の産物の希釈（０．６２５ｕｌ
を５０ｕｌ反応物に）および２つの末端プライマー（Ｐ
１７１‐Ｓ１およびＰ１７１‐Ａ１）を使用したＰＣＲ
１５サイクルの実行。すべての反応はＢＭＢＥｘｐａｎ
ｄ ＨＦ ポリメラーゼ混合物および説明書に明示され
た条件を使用した。このＰＣＲ反応により正しいサイズ
の遺伝子配列が増幅された。増幅された遺伝子は、次に
Ｔ／Ａクローニング部位において、（ｐＧＥＭ−Ｔ）ベ
クターにクローニングされた。増幅されたフラグメント
のヌクレオチド配列は自動蛍光ＤＮＡ配列決定法により
決定した。 ヒトＣＨ４ドメイン（ＳＥＱＩＤ＃２２）のクローニン
グ ヒトＣＨ４ドメインをコードするポリヌクレオチド配列
は以下のような２ステップＰＣＲ法に基づいた遺伝子合
成法により構築された：一連のオリゴヌクレオチドプラ
イマー（表８に記載）はＬｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇ
ｉｅｓ Ｉｎｃ．で合成された。
【０１０５】
【表８】
【０１０６】これらのプライマーは以下のような２ステ
ップＰＣＲ反応でヒトＣＨ４ドメインを構築するために
使用された：１）１６プライマー（Ｐ１７２−Ｓ１〜Ｓ
１０およびＰ１７２‐Ａ１〜Ａ８）の等モル混合物を使
用した２５サイクル、続いて２）新規反応物へのステッ
プ１の産物の希釈（０．６２５ｕｌを５０ｕｌ反応物
に）および２つの末端プライマー（Ｐ１７２‐Ｓ１ｂお
よびＰ１７２‐Ａ１ｂ）を使用したＰＣＲ１５サイクル
の実行。すべての反応はＢＭＢ ＥｘｐａｎｄＨＦ ポ
リメラーゼ混合物および説明書に明示された条件を使用
した。このＰＣＲ反応により正しいサイズの遺伝子配列
が増幅された。増幅された遺伝子は、次にＴ／Ａクロー
ニング部位において、（ｐＧＥＭ−Ｔ）ベクターにクロ
ーニングされた。増幅されたフラグメントのヌクレオチ
ド配列は自動蛍光ＤＮＡ配列決定法により決定した。
ップＰＣＲ反応でヒトＣＨ４ドメインを構築するために
使用された：１）１６プライマー（Ｐ１７２−Ｓ１〜Ｓ
１０およびＰ１７２‐Ａ１〜Ａ８）の等モル混合物を使
用した２５サイクル、続いて２）新規反応物へのステッ
プ１の産物の希釈（０．６２５ｕｌを５０ｕｌ反応物
に）および２つの末端プライマー（Ｐ１７２‐Ｓ１ｂお
よびＰ１７２‐Ａ１ｂ）を使用したＰＣＲ１５サイクル
の実行。すべての反応はＢＭＢ ＥｘｐａｎｄＨＦ ポ
リメラーゼ混合物および説明書に明示された条件を使用
した。このＰＣＲ反応により正しいサイズの遺伝子配列
が増幅された。増幅された遺伝子は、次にＴ／Ａクロー
ニング部位において、（ｐＧＥＭ−Ｔ）ベクターにクロ
ーニングされた。増幅されたフラグメントのヌクレオチ
ド配列は自動蛍光ＤＮＡ配列決定法により決定した。
【０１０７】
【実施例３】融合蛋白質ワクチンをコードする遺伝子の
クローニング：本発明のワクチンとしての使用のための
融合蛋白質ワクチンをコードするポリヌクレオチド配列
（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４−２８）を以下のように構
築した。 ＩｇＥ‐１ワクチン構築物（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２
４）のクローニング：構築物ＩｇＥ‐１の挿入物は、シ
グナル配列‐ヒトＣＨ２ドメイン、続いてイヌＣＨ３ド
メイン、続いてヒトＣＨ４ドメインからなる。ＩｇＥ‐
１挿入物の構築は、１ＰＣＲ反応のための鋳型としてシ
グナル配列‐ヒトＣＨ２ドメイン、および２番目のＰＣ
Ｒ反応のための鋳型としてヒトＣＨ４ドメインを使用す
ることからなる。これらの２反応において、末端プライ
マーをイヌＣＨ３ドメインと相同性領域を作製するため
に使用し、その結果イヌＣＨ３ドメインＤＮＡフラグメ
ントの２つの末端が２つのヒトドメインＤＮＡフラグメ
ントにハイブリダイズし、そして３つのフラグメントが
ＰＣＲ反応における“メガプライマー”になる。イヌＣ
Ｈ３ドメインは、２つのヒトドメインフラグメントに応
じたいずれかの末端上の重複配列（５′末端上のＣＨ２
相同性および３′末端上のＣＨ４相同性）を含むように
設計された。次に全長産物を作製するために、末端プラ
イマーを使用して、３つのＰＣＲフラグメント（ヒトＣ
Ｈ２、イヌＣＨ３およびヒトＣＨ４）を最終ＰＣＲ反応
で混合した。以下に方法を概説する：フラグメント１：
プライマーＰ１７１−Ｓ１ｂおよびＰ１７３‐Ａ４０２
によるヒトＣＨ２ドメインの増幅により得られた（シグ
ナル配列‐ヒトＣＨ２ドメイン）４１３ｂｐフラグメン
ト；フラグメントはＰＣＲ３５サイクルで増幅し、ゲル
精製を行った。すべての反応はＢＭＢ Ｅｘｐａｎｄ
ＨＦ ポリメラーゼ混合物および説明書に明示された条
件を使用した。フラグメント２：先に記載した（イヌＣ
Ｈ３ドメイン）３８４ｂｐフラグメント；ゲル精製した
フラグメント３：プライマーＰ１７３−Ｓ７１２および
Ｐ１７２‐Ａ１ｂによるヒトＣＨ４ドメインの増幅によ
り得られた（ヒトＣＨ４ドメイン）３４０ｂｐ；フラグ
メントはＰＣＲ３５サイクルで増幅し、ゲル精製を行っ
た。すべての反応はＢＭＢ Ｅｘｐａｎｄ ＨＦ ポリ
メラーゼ混合物および説明書に明示された条件を使用し
た。３つのフラグメントは、２つの末端プライマーＰ１
７１−Ｓ１ｂおよびＰ１７２‐Ａ１ｂを使用した最終Ｐ
ＣＲ反応に約等モル量添加され、ＰＣＲを３５サイクル
行った。すべての反応はＢＭＢ Ｅｘｐａｎｄ ＨＦ
ポリメラーゼ混合物および説明書に明示された条件を使
用した。このＰＣＲ反応により正しいサイズ（１．１ｋ
ｂ）の遺伝子配列が増幅された。得られたフラグメント
は、ＥｃｏＲ１およびＮｈｅＩで分解され、プラスミド
ｐＣＩ−ｎｅｏの対応する部位にサブクローニングされ
た。増幅されたフラグメントのヌクレオチド配列は自動
蛍光ＤＮＡ配列決定法により決定した。 構築物ＩｇＥ‐２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５）のクロ
ーニング：構築物ＩｇＥ‐２の挿入物は、シグナル配列
‐ヒトＣＨ２ドメイン、続いてヒトＣＨ３／イヌドメイ
ン、続いてヒトＣＨ４ドメインからなる。ＩｇＥ‐２挿
入物の構築は、１ＰＣＲ反応のための鋳型としてシグナ
ル配列‐ヒトＣＨ２ドメイン、および２番目のＰＣＲ反
応のための鋳型としてヒトＣＨ４ドメインを使用するこ
とからなる。これらの２反応において、末端プライマー
をヒトＣＨ３／イヌＣＨ３ドメインと相同性領域を生成
するために使用し、その結果ヒトＣＨ３／イヌＣＨ３ド
メインＤＮＡフラグメントの２つの末端が２つのヒトド
メインＤＮＡフラグメントにハイブリダイズし、そして
３つのフラグメントがＰＣＲ反応における“メガプライ
マー”になる。ヒトＣＨ３／イヌＣＨ３ドメインは、２
つのヒトドメインフラグメントに応じたいずれかの末端
上の重複配列（５′末端上のＣＨ２相同性および３′末
端上のＣＨ４相同性）を含むように設計された。次に全
長産物を作製するために、末端プライマーを使用して、
３つのＰＣＲフラグメント（ヒトＣＨ２、ヒトＣＨ３／
イヌＣＨ３およびヒトＣＨ４）を最終ＰＣＲ反応で混合
した。以下に方法を概説する：フラグメント１：プライ
マーＰ１７１−Ｓ１ｂおよびＰ１７４‐Ａ４０４による
ヒトＣＨ２ドメインの増幅により得られた（シグナル配
列‐ヒトＣＨ２ドメイン）４１４ｂｐフラグメント；フ
ラグメントはＰＣＲ２５サイクルで増幅し、ゲル精製を
行った。すべての反応はＢＭＢ Ｅｘｐａｎｄ ＨＦ
ポリメラーゼ混合物および説明書に明示された条件を使
用した。フラグメント２：先に記載した（ヒトＣＨ３／
イヌＣＨ３ドメイン）３８４ｂｐフラグメント；ゲル精
製したフラグメント３：プライマーＰ１７４−Ｓ７２１
およびＰ１７２‐Ａ１ｂによるヒトＣＨ４ドメインの増
幅により得られた（ヒトＣＨ４ドメイン）３４０ｂｐフ
ラグメント；フラグメントはＰＣＲ２５サイクルで増幅
し、ゲル精製を行った。すべての反応はＢＭＢ Ｅｘｐ
ａｎｄ ＨＦポリメラーゼ混合物および説明書に明示さ
れた条件を使用した。３つのゲル精製したフラグメント
は、２つの末端プライマーＰ１７１−Ｓ１ｂおよびＰ１
７２‐Ａ１ｂを使用した最終ＰＣＲ反応に約等モル量添
加され、ＰＣＲを３５サイクル行った。すべての反応は
ＢＭＢ Ｅｘｐａｎｄ ＨＦ ポリメラーゼ混合物およ
び説明書に明示された条件を使用した。このＰＣＲ反応
により正しいサイズ（１．１ｋｂ）の遺伝子配列が増幅
された。得られたフラグメントは、ＥｃｏＲ１およびＮ
ｈｅＩで分解され、プラスミドｐＣＩ−ｎｅｏの対応す
る部位にサブクローニングされた。増幅されたフラグメ
ントのヌクレオチド配列は自動蛍光ＤＮＡ配列決定法に
より決定した。ＩｇＥ‐３ワクチン構築物（ＳＥＱ Ｉ
Ｄ ＮＯ：２６）のクローニング：構築物ＩｇＥ‐３の
挿入物は、シグナル配列‐ヒトＣＨ２ドメイン、続いて
ヒトＣＨ３／保存されたイヌＣＨ３配列、続いてヒトＣ
Ｈ４ドメインからなる。ＩｇＥ‐３挿入物の構築は、１
ＰＣＲ反応のための鋳型としてシグナル配列‐ヒトＣＨ
２ドメイン、および２番目のＰＣＲ反応のための鋳型と
してヒトＣＨ４ドメインを使用することからなる。これ
らの２反応において、末端プライマーをヒトＣＨ３／保
存されたイヌＣＨ３配列と相同性領域を作製するために
使用し、その結果中間（ヒトＣＨ３／保存されたイヌＣ
Ｈ３配列）のＤＮＡフラグメントの２つの末端が２つの
ヒトドメインＤＮＡフラグメントにハイブリダイズし、
そして３つのフラグメントがＰＣＲ反応における“メガ
プライマー”になる。ヒトＣＨ３／保存されたイヌＣＨ
３配列は、２つのヒトドメインフラグメントに応じたい
ずれかの末端上の重複配列（５′末端上のＣＨ２相同性
および３′末端上のＣＨ４相同性）を含むように設計さ
れた。次に全長産物を作製するために、２つの末端プラ
イマーを使用して、３つのＰＣＲフラグメント（ヒトＣ
Ｈ２、ヒトＣＨ３／保存されたイヌＣＨ３配列およびヒ
トＣＨ４）を最終ＰＣＲ反応で混合した。以下に方法を
概説する：フラグメント１：プライマーＰ１７１−Ｓ１
ｂおよびＰ１７５‐Ａ４０４によるヒトＣＨ２ドメイン
の増幅により得られた（シグナル配列‐ヒトＣＨ２ドメ
イン）４１４ｂｐフラグメント；フラグメントはＰＣＲ
２５サイクルで増幅し、ゲル精製を行った。すべての反
応はＢＭＢ ＥｘｐａｎｄＨＦ ポリメラーゼ混合物お
よび説明書に明示された条件を使用した。フラグメント
２：先に記載した（ヒトＣＨ３／保存されたイヌＣＨ３
配列）３８４ｂｐフラグメント；ゲル精製したフラグメ
ント３：プライマーＰ１７５−Ｓ７１５およびＰ１７２
‐Ａ１ｂによるヒトＣＨ４ドメインの増幅により得られ
た（ヒトＣＨ４ドメイン）３４０ｂｐフラグメント；フ
ラグメントはＰＣＲ２５サイクルで増幅し、ゲル精製を
行った。すべての反応はＢＭＢ Ｅｘｐａｎｄ ＨＦ
ポリメラーゼ混合物および説明書に明示された条件を使
用した。３つのゲル精製したフラグメントは、２つの末
端プライマーＰ１７１−Ｓ１ｂおよびＰ１７２‐Ａ１ｂ
を使用した最終ＰＣＲ反応に約等モル量添加され、ＰＣ
Ｒを３５サイクル行った。すべての反応はＢＭＢ Ｅｘ
ｐａｎｄ ＨＦ ポリメラーゼ混合物および説明書に明
示された条件を使用した。このＰＣＲ反応により正しい
サイズ（１．１ｋｂ）の遺伝子配列が増幅された。得ら
れたフラグメントは、ＥｃｏＲ１およびＮｈｅＩで分解
され、プラスミドｐＣＩ−ｎｅｏの対応する部位にサブ
クローニングされた。増幅されたフラグメントのヌクレ
オチド配列は自動蛍光ＤＮＡ配列決定法により決定し
た。 ＩｇＥ‐４ワクチン構築物（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２
７）のクローニング：構築物ＩｇＥ‐４の挿入物は、シ
グナル配列‐ヒトＣＨ２ドメイン、続いてヒトＣＨ３ド
メイン、続いてヒトＣＨ４ドメインからなる。ＩｇＥ‐
４挿入物の構築は、１ＰＣＲ反応のための鋳型としてシ
グナル配列‐ヒトＣＨ２ドメイン、および２番目のＰＣ
Ｒ反応のための鋳型としてヒトＣＨ４ドメインを使用す
ることからなる。これらの２反応において、末端プライ
マーをヒトＣＨ３ドメインと相同性領域を作製するため
に使用し、その結果中間（ヒトＣＨ３ドメイン）のＤＮ
Ａフラグメントの２つの末端が２つのヒトドメインＤＮ
Ａフラグメントにハイブリダイズし、そして３つのフラ
グメントがＰＣＲ反応における“メガプライマー”にな
る。ヒトＣＨ３ドメインは、２つのヒトドメインフラグ
メントに合わせたいずれかの末端上の重複配列（５′末
端上のＣＨ２相同性および３′末端上のＣＨ４相同性）
を含むように設計された。次に全長産物を作製するため
に、２つの末端プライマーを使用して、３つのＰＣＲフ
ラグメント（ヒトＣＨ２、ヒトＣＨ３およびヒトＣＨ
４）を最終ＰＣＲ反応で混合した。以下に方法を概説す
る：フラグメント１：プライマーＰ１７１−Ｓ１ｂおよ
びＰ１７６‐Ａ４０４によるヒトＣＨ２ドメインの増幅
により得られた（シグナル配列‐ヒトＣＨ２ドメイン）
４１４ｂｐフラグメント；フラグメントはＰＣＲ２５サ
イクルで増幅し、ゲル精製を行った。すべての反応はＢ
ＭＢ Ｅｘｐａｎｄ ＨＦ ポリメラーゼ混合物および
説明書に明示された条件を使用した。フラグメント２：
先に記載した（ヒトＣＨ３ドメイン）３８４ｂｐフラグ
メント；ゲル精製したフラグメント３：プライマーＰ１
７６−Ｓ７１０およびＰ１７２‐Ａ１ｂによるヒトＣＨ
４ドメインの増幅により得られた（ヒトＣＨ４ドメイ
ン）３４０ｂｐフラグメント；フラグメントはＰＣＲ２
５サイクルで増幅し、ゲル精製を行った。すべての反応
はＢＭＢ Ｅｘｐａｎｄ ＨＦ ポリメラーゼ混合物お
よび説明書に明示された条件を使用した。３つのゲル精
製したフラグメントは、２つの末端プライマーＰ１７１
−Ｓ１ｂおよびＰ１７２‐Ａ１ｂを使用した最終ＰＣＲ
反応に約等モル量添加され、ＰＣＲを３５サイクル行っ
た。すべての反応はＢＭＢ Ｅｘｐａｎｄ ＨＦポリメ
ラーゼ混合物および説明書に明示された条件を使用し
た。このＰＣＲ反応により正しいサイズ（１．１ｋｂ）
の遺伝子配列が増幅された。得られたフラグメントは、
ＥｃｏＲ１およびＮｈｅＩで分解され、プラスミドｐＣ
Ｉ−ｎｅｏの対応する部位にサブクローニングされた。
増幅されたフラグメントのヌクレオチド配列は自動蛍光
ＤＮＡ配列決定法により決定した。 ＩｇＥ‐５ワクチン構築物（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２
８）のクローニング：構築物ＩｇＥ‐５の挿入物は、シ
グナル配列‐ヒトＣＨ２ドメイン、続いてラットＣＨ３
ドメイン、続いてヒトＣＨ４ドメインからなる。ＩｇＥ
‐５挿入物の構築は、１ＰＣＲ反応のための鋳型として
シグナル配列‐ヒトＣＨ２ドメイン、および２番目のＰ
ＣＲ反応のための鋳型としてヒトＣＨ４ドメインを使用
することからなる。これらの２反応において、末端プラ
イマーをラットＣＨ３ドメインと相同性領域を作製する
ために使用し、その結果中間（ラットＣＨ３ドメイン）
のＤＮＡフラグメントの２つの末端が２つのヒトドメイ
ンＤＮＡフラグメントにハイブリダイズし、そして３つ
のフラグメントがＰＣＲ反応における“メガプライマ
ー”になる。ラットＣＨ３ドメインは、２つのヒトドメ
インフラグメントに応じたいずれかの末端上の重複配列
（５′末端上のＣＨ２相同性および３′末端上のＣＨ４
相同性）を含むように設計された。次に全長産物を作製
するために、２つの末端プライマーを使用して、３つの
ＰＣＲフラグメント（ヒトＣＨ２、ラットＣＨ３および
ヒトＣＨ４）を最終ＰＣＲ反応で混合した。以下に方法
を概説する：フラグメント１：プライマーＰ１７１−Ｓ
１ｂおよびＰ１７７‐Ａ４０１によるヒトＣＨ２ドメイ
ンの増幅により得られた（シグナル配列‐ヒトＣＨ２ド
メイン）４１１ｂｐフラグメント；フラグメントはＰＣ
Ｒ２５サイクルで増幅し、ゲル精製を行った。すべての
反応はＢＭＢ Ｅｘｐａｎｄ ＨＦ ポリメラーゼ混合
物および説明書に明示された条件を使用した。フラグメ
ント２：先に記載した（ラットＣＨ３ドメイン）３８４
ｂｐフラグメント；ゲル精製したフラグメント３：プラ
イマーＰ１７７−Ｓ７１１およびＰ１７２‐Ａ１ｂによ
るヒトＣＨ４ドメイン（ＩｇＥ‐６（３′））の増幅に
より得られた（ヒトＣＨ４ドメイン）３４１ｂｐ；フラ
グメントはＰＣＲ２５サイクルで増幅し、ゲル精製を行
った。すべての反応はＢＭＢ Ｅｘｐａｎｄ ＨＦ ポ
リメラーゼ混合物および説明書に明示された条件を使用
した。３つのゲル精製したフラグメントは、２つの末端
プライマーＰ１７１−Ｓ１ｂおよびＰ１７２‐Ａ１ｂを
使用した最終ＰＣＲ反応に約等モル量添加され、ＰＣＲ
を３５サイクル行った。すべての反応はＢＭＢＥｘｐａ
ｎｄ ＨＦ ポリメラーゼ混合物および説明書に明示さ
れた条件を使用した。このＰＣＲ反応により正しいサイ
ズ（１．１ｋｂ）の遺伝子配列が増幅された。得られた
フラグメントは、ＥｃｏＲ１およびＮｈｅＩで分解さ
れ、プラスミドｐＣＩ−ｎｅｏの対応する部位にサブク
ローニングされた。増幅されたフラグメントのヌクレオ
チド配列は自動蛍光ＤＮＡ配列決定法により決定した。
クローニング：本発明のワクチンとしての使用のための
融合蛋白質ワクチンをコードするポリヌクレオチド配列
（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４−２８）を以下のように構
築した。 ＩｇＥ‐１ワクチン構築物（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２
４）のクローニング：構築物ＩｇＥ‐１の挿入物は、シ
グナル配列‐ヒトＣＨ２ドメイン、続いてイヌＣＨ３ド
メイン、続いてヒトＣＨ４ドメインからなる。ＩｇＥ‐
１挿入物の構築は、１ＰＣＲ反応のための鋳型としてシ
グナル配列‐ヒトＣＨ２ドメイン、および２番目のＰＣ
Ｒ反応のための鋳型としてヒトＣＨ４ドメインを使用す
ることからなる。これらの２反応において、末端プライ
マーをイヌＣＨ３ドメインと相同性領域を作製するため
に使用し、その結果イヌＣＨ３ドメインＤＮＡフラグメ
ントの２つの末端が２つのヒトドメインＤＮＡフラグメ
ントにハイブリダイズし、そして３つのフラグメントが
ＰＣＲ反応における“メガプライマー”になる。イヌＣ
Ｈ３ドメインは、２つのヒトドメインフラグメントに応
じたいずれかの末端上の重複配列（５′末端上のＣＨ２
相同性および３′末端上のＣＨ４相同性）を含むように
設計された。次に全長産物を作製するために、末端プラ
イマーを使用して、３つのＰＣＲフラグメント（ヒトＣ
Ｈ２、イヌＣＨ３およびヒトＣＨ４）を最終ＰＣＲ反応
で混合した。以下に方法を概説する：フラグメント１：
プライマーＰ１７１−Ｓ１ｂおよびＰ１７３‐Ａ４０２
によるヒトＣＨ２ドメインの増幅により得られた（シグ
ナル配列‐ヒトＣＨ２ドメイン）４１３ｂｐフラグメン
ト；フラグメントはＰＣＲ３５サイクルで増幅し、ゲル
精製を行った。すべての反応はＢＭＢ Ｅｘｐａｎｄ
ＨＦ ポリメラーゼ混合物および説明書に明示された条
件を使用した。フラグメント２：先に記載した（イヌＣ
Ｈ３ドメイン）３８４ｂｐフラグメント；ゲル精製した
フラグメント３：プライマーＰ１７３−Ｓ７１２および
Ｐ１７２‐Ａ１ｂによるヒトＣＨ４ドメインの増幅によ
り得られた（ヒトＣＨ４ドメイン）３４０ｂｐ；フラグ
メントはＰＣＲ３５サイクルで増幅し、ゲル精製を行っ
た。すべての反応はＢＭＢ Ｅｘｐａｎｄ ＨＦ ポリ
メラーゼ混合物および説明書に明示された条件を使用し
た。３つのフラグメントは、２つの末端プライマーＰ１
７１−Ｓ１ｂおよびＰ１７２‐Ａ１ｂを使用した最終Ｐ
ＣＲ反応に約等モル量添加され、ＰＣＲを３５サイクル
行った。すべての反応はＢＭＢ Ｅｘｐａｎｄ ＨＦ
ポリメラーゼ混合物および説明書に明示された条件を使
用した。このＰＣＲ反応により正しいサイズ（１．１ｋ
ｂ）の遺伝子配列が増幅された。得られたフラグメント
は、ＥｃｏＲ１およびＮｈｅＩで分解され、プラスミド
ｐＣＩ−ｎｅｏの対応する部位にサブクローニングされ
た。増幅されたフラグメントのヌクレオチド配列は自動
蛍光ＤＮＡ配列決定法により決定した。 構築物ＩｇＥ‐２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５）のクロ
ーニング：構築物ＩｇＥ‐２の挿入物は、シグナル配列
‐ヒトＣＨ２ドメイン、続いてヒトＣＨ３／イヌドメイ
ン、続いてヒトＣＨ４ドメインからなる。ＩｇＥ‐２挿
入物の構築は、１ＰＣＲ反応のための鋳型としてシグナ
ル配列‐ヒトＣＨ２ドメイン、および２番目のＰＣＲ反
応のための鋳型としてヒトＣＨ４ドメインを使用するこ
とからなる。これらの２反応において、末端プライマー
をヒトＣＨ３／イヌＣＨ３ドメインと相同性領域を生成
するために使用し、その結果ヒトＣＨ３／イヌＣＨ３ド
メインＤＮＡフラグメントの２つの末端が２つのヒトド
メインＤＮＡフラグメントにハイブリダイズし、そして
３つのフラグメントがＰＣＲ反応における“メガプライ
マー”になる。ヒトＣＨ３／イヌＣＨ３ドメインは、２
つのヒトドメインフラグメントに応じたいずれかの末端
上の重複配列（５′末端上のＣＨ２相同性および３′末
端上のＣＨ４相同性）を含むように設計された。次に全
長産物を作製するために、末端プライマーを使用して、
３つのＰＣＲフラグメント（ヒトＣＨ２、ヒトＣＨ３／
イヌＣＨ３およびヒトＣＨ４）を最終ＰＣＲ反応で混合
した。以下に方法を概説する：フラグメント１：プライ
マーＰ１７１−Ｓ１ｂおよびＰ１７４‐Ａ４０４による
ヒトＣＨ２ドメインの増幅により得られた（シグナル配
列‐ヒトＣＨ２ドメイン）４１４ｂｐフラグメント；フ
ラグメントはＰＣＲ２５サイクルで増幅し、ゲル精製を
行った。すべての反応はＢＭＢ Ｅｘｐａｎｄ ＨＦ
ポリメラーゼ混合物および説明書に明示された条件を使
用した。フラグメント２：先に記載した（ヒトＣＨ３／
イヌＣＨ３ドメイン）３８４ｂｐフラグメント；ゲル精
製したフラグメント３：プライマーＰ１７４−Ｓ７２１
およびＰ１７２‐Ａ１ｂによるヒトＣＨ４ドメインの増
幅により得られた（ヒトＣＨ４ドメイン）３４０ｂｐフ
ラグメント；フラグメントはＰＣＲ２５サイクルで増幅
し、ゲル精製を行った。すべての反応はＢＭＢ Ｅｘｐ
ａｎｄ ＨＦポリメラーゼ混合物および説明書に明示さ
れた条件を使用した。３つのゲル精製したフラグメント
は、２つの末端プライマーＰ１７１−Ｓ１ｂおよびＰ１
７２‐Ａ１ｂを使用した最終ＰＣＲ反応に約等モル量添
加され、ＰＣＲを３５サイクル行った。すべての反応は
ＢＭＢ Ｅｘｐａｎｄ ＨＦ ポリメラーゼ混合物およ
び説明書に明示された条件を使用した。このＰＣＲ反応
により正しいサイズ（１．１ｋｂ）の遺伝子配列が増幅
された。得られたフラグメントは、ＥｃｏＲ１およびＮ
ｈｅＩで分解され、プラスミドｐＣＩ−ｎｅｏの対応す
る部位にサブクローニングされた。増幅されたフラグメ
ントのヌクレオチド配列は自動蛍光ＤＮＡ配列決定法に
より決定した。ＩｇＥ‐３ワクチン構築物（ＳＥＱ Ｉ
Ｄ ＮＯ：２６）のクローニング：構築物ＩｇＥ‐３の
挿入物は、シグナル配列‐ヒトＣＨ２ドメイン、続いて
ヒトＣＨ３／保存されたイヌＣＨ３配列、続いてヒトＣ
Ｈ４ドメインからなる。ＩｇＥ‐３挿入物の構築は、１
ＰＣＲ反応のための鋳型としてシグナル配列‐ヒトＣＨ
２ドメイン、および２番目のＰＣＲ反応のための鋳型と
してヒトＣＨ４ドメインを使用することからなる。これ
らの２反応において、末端プライマーをヒトＣＨ３／保
存されたイヌＣＨ３配列と相同性領域を作製するために
使用し、その結果中間（ヒトＣＨ３／保存されたイヌＣ
Ｈ３配列）のＤＮＡフラグメントの２つの末端が２つの
ヒトドメインＤＮＡフラグメントにハイブリダイズし、
そして３つのフラグメントがＰＣＲ反応における“メガ
プライマー”になる。ヒトＣＨ３／保存されたイヌＣＨ
３配列は、２つのヒトドメインフラグメントに応じたい
ずれかの末端上の重複配列（５′末端上のＣＨ２相同性
および３′末端上のＣＨ４相同性）を含むように設計さ
れた。次に全長産物を作製するために、２つの末端プラ
イマーを使用して、３つのＰＣＲフラグメント（ヒトＣ
Ｈ２、ヒトＣＨ３／保存されたイヌＣＨ３配列およびヒ
トＣＨ４）を最終ＰＣＲ反応で混合した。以下に方法を
概説する：フラグメント１：プライマーＰ１７１−Ｓ１
ｂおよびＰ１７５‐Ａ４０４によるヒトＣＨ２ドメイン
の増幅により得られた（シグナル配列‐ヒトＣＨ２ドメ
イン）４１４ｂｐフラグメント；フラグメントはＰＣＲ
２５サイクルで増幅し、ゲル精製を行った。すべての反
応はＢＭＢ ＥｘｐａｎｄＨＦ ポリメラーゼ混合物お
よび説明書に明示された条件を使用した。フラグメント
２：先に記載した（ヒトＣＨ３／保存されたイヌＣＨ３
配列）３８４ｂｐフラグメント；ゲル精製したフラグメ
ント３：プライマーＰ１７５−Ｓ７１５およびＰ１７２
‐Ａ１ｂによるヒトＣＨ４ドメインの増幅により得られ
た（ヒトＣＨ４ドメイン）３４０ｂｐフラグメント；フ
ラグメントはＰＣＲ２５サイクルで増幅し、ゲル精製を
行った。すべての反応はＢＭＢ Ｅｘｐａｎｄ ＨＦ
ポリメラーゼ混合物および説明書に明示された条件を使
用した。３つのゲル精製したフラグメントは、２つの末
端プライマーＰ１７１−Ｓ１ｂおよびＰ１７２‐Ａ１ｂ
を使用した最終ＰＣＲ反応に約等モル量添加され、ＰＣ
Ｒを３５サイクル行った。すべての反応はＢＭＢ Ｅｘ
ｐａｎｄ ＨＦ ポリメラーゼ混合物および説明書に明
示された条件を使用した。このＰＣＲ反応により正しい
サイズ（１．１ｋｂ）の遺伝子配列が増幅された。得ら
れたフラグメントは、ＥｃｏＲ１およびＮｈｅＩで分解
され、プラスミドｐＣＩ−ｎｅｏの対応する部位にサブ
クローニングされた。増幅されたフラグメントのヌクレ
オチド配列は自動蛍光ＤＮＡ配列決定法により決定し
た。 ＩｇＥ‐４ワクチン構築物（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２
７）のクローニング：構築物ＩｇＥ‐４の挿入物は、シ
グナル配列‐ヒトＣＨ２ドメイン、続いてヒトＣＨ３ド
メイン、続いてヒトＣＨ４ドメインからなる。ＩｇＥ‐
４挿入物の構築は、１ＰＣＲ反応のための鋳型としてシ
グナル配列‐ヒトＣＨ２ドメイン、および２番目のＰＣ
Ｒ反応のための鋳型としてヒトＣＨ４ドメインを使用す
ることからなる。これらの２反応において、末端プライ
マーをヒトＣＨ３ドメインと相同性領域を作製するため
に使用し、その結果中間（ヒトＣＨ３ドメイン）のＤＮ
Ａフラグメントの２つの末端が２つのヒトドメインＤＮ
Ａフラグメントにハイブリダイズし、そして３つのフラ
グメントがＰＣＲ反応における“メガプライマー”にな
る。ヒトＣＨ３ドメインは、２つのヒトドメインフラグ
メントに合わせたいずれかの末端上の重複配列（５′末
端上のＣＨ２相同性および３′末端上のＣＨ４相同性）
を含むように設計された。次に全長産物を作製するため
に、２つの末端プライマーを使用して、３つのＰＣＲフ
ラグメント（ヒトＣＨ２、ヒトＣＨ３およびヒトＣＨ
４）を最終ＰＣＲ反応で混合した。以下に方法を概説す
る：フラグメント１：プライマーＰ１７１−Ｓ１ｂおよ
びＰ１７６‐Ａ４０４によるヒトＣＨ２ドメインの増幅
により得られた（シグナル配列‐ヒトＣＨ２ドメイン）
４１４ｂｐフラグメント；フラグメントはＰＣＲ２５サ
イクルで増幅し、ゲル精製を行った。すべての反応はＢ
ＭＢ Ｅｘｐａｎｄ ＨＦ ポリメラーゼ混合物および
説明書に明示された条件を使用した。フラグメント２：
先に記載した（ヒトＣＨ３ドメイン）３８４ｂｐフラグ
メント；ゲル精製したフラグメント３：プライマーＰ１
７６−Ｓ７１０およびＰ１７２‐Ａ１ｂによるヒトＣＨ
４ドメインの増幅により得られた（ヒトＣＨ４ドメイ
ン）３４０ｂｐフラグメント；フラグメントはＰＣＲ２
５サイクルで増幅し、ゲル精製を行った。すべての反応
はＢＭＢ Ｅｘｐａｎｄ ＨＦ ポリメラーゼ混合物お
よび説明書に明示された条件を使用した。３つのゲル精
製したフラグメントは、２つの末端プライマーＰ１７１
−Ｓ１ｂおよびＰ１７２‐Ａ１ｂを使用した最終ＰＣＲ
反応に約等モル量添加され、ＰＣＲを３５サイクル行っ
た。すべての反応はＢＭＢ Ｅｘｐａｎｄ ＨＦポリメ
ラーゼ混合物および説明書に明示された条件を使用し
た。このＰＣＲ反応により正しいサイズ（１．１ｋｂ）
の遺伝子配列が増幅された。得られたフラグメントは、
ＥｃｏＲ１およびＮｈｅＩで分解され、プラスミドｐＣ
Ｉ−ｎｅｏの対応する部位にサブクローニングされた。
増幅されたフラグメントのヌクレオチド配列は自動蛍光
ＤＮＡ配列決定法により決定した。 ＩｇＥ‐５ワクチン構築物（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２
８）のクローニング：構築物ＩｇＥ‐５の挿入物は、シ
グナル配列‐ヒトＣＨ２ドメイン、続いてラットＣＨ３
ドメイン、続いてヒトＣＨ４ドメインからなる。ＩｇＥ
‐５挿入物の構築は、１ＰＣＲ反応のための鋳型として
シグナル配列‐ヒトＣＨ２ドメイン、および２番目のＰ
ＣＲ反応のための鋳型としてヒトＣＨ４ドメインを使用
することからなる。これらの２反応において、末端プラ
イマーをラットＣＨ３ドメインと相同性領域を作製する
ために使用し、その結果中間（ラットＣＨ３ドメイン）
のＤＮＡフラグメントの２つの末端が２つのヒトドメイ
ンＤＮＡフラグメントにハイブリダイズし、そして３つ
のフラグメントがＰＣＲ反応における“メガプライマ
ー”になる。ラットＣＨ３ドメインは、２つのヒトドメ
インフラグメントに応じたいずれかの末端上の重複配列
（５′末端上のＣＨ２相同性および３′末端上のＣＨ４
相同性）を含むように設計された。次に全長産物を作製
するために、２つの末端プライマーを使用して、３つの
ＰＣＲフラグメント（ヒトＣＨ２、ラットＣＨ３および
ヒトＣＨ４）を最終ＰＣＲ反応で混合した。以下に方法
を概説する：フラグメント１：プライマーＰ１７１−Ｓ
１ｂおよびＰ１７７‐Ａ４０１によるヒトＣＨ２ドメイ
ンの増幅により得られた（シグナル配列‐ヒトＣＨ２ド
メイン）４１１ｂｐフラグメント；フラグメントはＰＣ
Ｒ２５サイクルで増幅し、ゲル精製を行った。すべての
反応はＢＭＢ Ｅｘｐａｎｄ ＨＦ ポリメラーゼ混合
物および説明書に明示された条件を使用した。フラグメ
ント２：先に記載した（ラットＣＨ３ドメイン）３８４
ｂｐフラグメント；ゲル精製したフラグメント３：プラ
イマーＰ１７７−Ｓ７１１およびＰ１７２‐Ａ１ｂによ
るヒトＣＨ４ドメイン（ＩｇＥ‐６（３′））の増幅に
より得られた（ヒトＣＨ４ドメイン）３４１ｂｐ；フラ
グメントはＰＣＲ２５サイクルで増幅し、ゲル精製を行
った。すべての反応はＢＭＢ Ｅｘｐａｎｄ ＨＦ ポ
リメラーゼ混合物および説明書に明示された条件を使用
した。３つのゲル精製したフラグメントは、２つの末端
プライマーＰ１７１−Ｓ１ｂおよびＰ１７２‐Ａ１ｂを
使用した最終ＰＣＲ反応に約等モル量添加され、ＰＣＲ
を３５サイクル行った。すべての反応はＢＭＢＥｘｐａ
ｎｄ ＨＦ ポリメラーゼ混合物および説明書に明示さ
れた条件を使用した。このＰＣＲ反応により正しいサイ
ズ（１．１ｋｂ）の遺伝子配列が増幅された。得られた
フラグメントは、ＥｃｏＲ１およびＮｈｅＩで分解さ
れ、プラスミドｐＣＩ−ｎｅｏの対応する部位にサブク
ローニングされた。増幅されたフラグメントのヌクレオ
チド配列は自動蛍光ＤＮＡ配列決定法により決定した。
【０１０８】
【実施例４】抗‐イヌＩｇＥ抗体を持つワクチンのトラ
ンスフェクション、発現および反応性。 昆虫細胞におけるＩｇＥＣＨ３ドメインの発現：スポド
プテラフルギペルダ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇ
ｉｐｅｒｄａ）由来のＳｆ９細胞（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈ
ｎｏｌｏｇｉｅｓ）は、Ｂａｃ‐Ｔｏ‐Ｂａｃ Ｅｘｐ
ｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ ｐｒｏｔｏｃｏｌに従
ったＣｅｌｌ ＦＥＣＴＩＮ試薬（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈ
ｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して組換えバクミドＤＮＡに
よりトランスフェクションされた。７２時間後に、上清
を新鮮なサブコンフルエントＳｆ９細胞に継代した。７
日目に感染後細胞変性効果（ＣＰＥ）は明らかであっ
た。上清を採取し、４℃で遮光して保存した。標本は電
気泳動（４−１２％Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ Ｎｏｖｅｘ Ｎ
ｕＰａｇｅ Ｓｙｓｔｅｍ 還元条件）により分析し
た。デュプリケートゲルの一つはクマシーブルーで染色
し、他は標準ウェスタンブロット転位法を使用して、Ｐ
ＶＤＦ膜（Ｎｏｖｅｘ）にトランスファーした。膜はウ
サギ＃１４５ ＲＢＳ‐２ポリクローナル抗血清および
ＡＰ−ｒｅｃＰｒｏｔｅｉｎ Ｇ（Ｚｙｍｅｄ）により
分析した。明確な約１４．５ｋＤａのバンドがクマシー
染色ゲル（図１）およびウェスタンブロット（図２）で
ともに明らかで、ＣＨ３蛋白質の発現を示した。
ンスフェクション、発現および反応性。 昆虫細胞におけるＩｇＥＣＨ３ドメインの発現：スポド
プテラフルギペルダ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇ
ｉｐｅｒｄａ）由来のＳｆ９細胞（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈ
ｎｏｌｏｇｉｅｓ）は、Ｂａｃ‐Ｔｏ‐Ｂａｃ Ｅｘｐ
ｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ ｐｒｏｔｏｃｏｌに従
ったＣｅｌｌ ＦＥＣＴＩＮ試薬（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈ
ｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して組換えバクミドＤＮＡに
よりトランスフェクションされた。７２時間後に、上清
を新鮮なサブコンフルエントＳｆ９細胞に継代した。７
日目に感染後細胞変性効果（ＣＰＥ）は明らかであっ
た。上清を採取し、４℃で遮光して保存した。標本は電
気泳動（４−１２％Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ Ｎｏｖｅｘ Ｎ
ｕＰａｇｅ Ｓｙｓｔｅｍ 還元条件）により分析し
た。デュプリケートゲルの一つはクマシーブルーで染色
し、他は標準ウェスタンブロット転位法を使用して、Ｐ
ＶＤＦ膜（Ｎｏｖｅｘ）にトランスファーした。膜はウ
サギ＃１４５ ＲＢＳ‐２ポリクローナル抗血清および
ＡＰ−ｒｅｃＰｒｏｔｅｉｎ Ｇ（Ｚｙｍｅｄ）により
分析した。明確な約１４．５ｋＤａのバンドがクマシー
染色ゲル（図１）およびウェスタンブロット（図２）で
ともに明らかで、ＣＨ３蛋白質の発現を示した。
【０１０９】本発明の配列は表９に記載される。
【０１１０】
【表９】
【図１】 還元条件下で４−１２％ゲルＳＤＳ−ＰＡＧ
Ｅにより分離した、バキュロウイルス発現ヒトＣＨ３ド
メイン。１１ｋＤＡ ＣＨ３ドメインはレイン４に見る
ことができる。ｓｆ−９細胞対照（レイン２）または野
生型バキュロウイルス（レイン３）では、対応するバン
ドは観察されなかった。分子量標準（ｋＤａ）の位置は
レイン１に示す。
Ｅにより分離した、バキュロウイルス発現ヒトＣＨ３ド
メイン。１１ｋＤＡ ＣＨ３ドメインはレイン４に見る
ことができる。ｓｆ−９細胞対照（レイン２）または野
生型バキュロウイルス（レイン３）では、対応するバン
ドは観察されなかった。分子量標準（ｋＤａ）の位置は
レイン１に示す。
【図２】 ウサギＡ＃１４５ＲＢＳ−２抗血清によるバ
キュロウイルス発現ヒトＣＨ３ドメインのイムノブロッ
ティング。標本は還元条件下で４−１２％ゲルＳＤＳ−
ＰＡＧＥにより分離した。１１ｋＤＡ ＣＨ３ドメイン
はレイン４に見ることができる。ｓｆ−９細胞対照（レ
イン２）または野生型バキュロウイルス（レイン３）で
は、バンドは見られなかった。分子量標準（ｋＤａ）の
位置はレイン１に示す。
キュロウイルス発現ヒトＣＨ３ドメインのイムノブロッ
ティング。標本は還元条件下で４−１２％ゲルＳＤＳ−
ＰＡＧＥにより分離した。１１ｋＤＡ ＣＨ３ドメイン
はレイン４に見ることができる。ｓｆ−９細胞対照（レ
イン２）または野生型バキュロウイルス（レイン３）で
は、バンドは見られなかった。分子量標準（ｋＤａ）の
位置はレイン１に示す。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考）
Ｃ０７Ｋ 16/00 Ｃ１２Ｎ 1/15
Ｃ１２Ｎ 1/15 1/19
1/19 1/21
1/21 15/00 ＺＮＡＡ
5/10 5/00 Ａ
(72)発明者 トレイシー・ミッチェル・ブラウン
アメリカ合衆国コネチカット州06340，グ
ロトン，イースタン・ポイント・ロード,
ファイザー・グローバル・リサーチ・アン
ド・ディベロプメント
Ｆターム(参考） 4B024 AA01 BA31 BA61 CA02 CA07
DA02 EA04 GA11
4B065 AA90X AA90Y AA93Y AB01
AC14 BA02 CA24 CA44
4C085 AA03 BB35 CC22
4H045 AA11 AA30 BA41 CA40 DA86
EA22 EA31 FA72 FA74
Claims (15)
- 【請求項１】 以下のものを含む単離された抗原性ペプ
チド： （ｉ）第１の種由来のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメインのア
ミノ酸残基； （ｉｉ）第２の関連性のない種のＩｇＥ分子のＣＨ３ド
メインのアミノ酸残基、ここで、第１の種由来のＩｇＥ
分子のＣＨ３ドメインのアミノ酸残基は第２の種のＩｇ
Ｅ分子のＣＨ３ドメインに保存され、第２の種由来のＩ
ｇＥ分子のＣＨ３ドメインのアミノ酸残基は第１の種の
ＩｇＥ分子のＣＨ３ドメインに保存されず、そして抗原
性ペプチドは動物に投与するとき、アナフィラキシーを
引き起こさない抗‐ＩｇＥ免疫反応を誘発する。 - 【請求項２】 動物に投与するとき、アナフィラキシー
を引き起こさない抗‐ＩｇＥ免疫反応を誘発するＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のアミ
ノ酸配列を含む単離された抗原性ペプチド。 - 【請求項３】 動物に投与するとき、アナフィラキシー
を引き起こさない抗‐ＩｇＥ免疫反応を誘発するＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３，ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：１０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１、ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：１２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３、また
はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４のアミノ酸配列を含む単離
された抗原性ペプチド。 - 【請求項４】 第２の関連性のない種のＩｇＥ分子のＣ
Ｈ３ドメインのアミノ酸残基が隣接する第１の種由来の
ＩｇＥ分子のＣＨ３ドメインのアミノ酸残基を含む抗原
性ペプチドをコードする単離されたポリヌクレオチド配
列（ここで第１の種由来のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメイン
のアミノ酸残基は第２の種のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメイ
ンに保存され、第２の種由来のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメ
インのアミノ酸残基は第１の種のＩｇＥ分子のＣＨ３ド
メインに保存されず、そして抗原性ペプチドは動物に投
与するとき、アナフィラキシーを引き起こさない抗‐Ｉ
ｇＥ免疫反応を誘発する）。 - 【請求項５】 ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６、ＳＥＱ Ｉ
Ｄ ＮＯ：１７，ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４、ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：２５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６、ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：２７、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８
の核酸配列を含む抗原性ペプチドをコードする単離され
たポリヌクレオチド配列（ここで前記抗原性ペプチドは
動物に投与するとき、アナフィラキシーを引き起こさな
い抗‐ＩｇＥ免疫反応を誘発する）。 - 【請求項６】 ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１、ＳＥＱ Ｉ
Ｄ ＮＯ：２２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３の核酸配列
を含む単離されたポリヌクレオチド配列。 - 【請求項７】 第２の関連性のない種のＩｇＥ分子のＣ
Ｈ３ドメインのアミノ酸残基が隣接する第１の種由来の
ＩｇＥ分子のＣＨ３ドメインのアミノ酸残基を含む抗原
性融合蛋白質をコードする単離されたポリヌクレオチド
配列（ここで第１の種由来のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメイ
ンのアミノ酸残基は第２の種のＩｇＥ分子のＣＨ３ドメ
インに保存され、第２の種由来のＩｇＥ分子のＣＨ３ド
メインのアミノ酸残基は第１の種のＩｇＥ分子のＣＨ３
ドメインに保存されない）、および異種蛋白質キャリア
（ここで前記抗原性融合蛋白質は動物に投与するとき、
アナフィラキシーを引き起こさない抗‐ＩｇＥ免疫反応
を誘発する）。 - 【請求項８】 動物に投与するとき、アナフィラキシー
を引き起こさない抗‐ＩｇＥ免疫反応を誘発するＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：２４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５，ＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：２６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７、ま
たはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８の核酸配列を含む抗原性
融合蛋白質をコードする単離されたポリヌクレオチド配
列。 - 【請求項９】 請求項１１のポリヌクレオチド配列を含
む遺伝子工学的に設計された宿主細胞。 - 【請求項１０】 ＩｇＥ分子またはそのフラグメントの
ＣＨ３ドメインのアミノ酸残基を含むアミノ酸配列を持
つ１以上の抗原性ペプチドおよび薬剤的に受容できるキ
ャリアを含む、アナフィラキシーを引き起こさない抗‐
ＩｇＥ免疫反応を誘発する医薬組成物。 - 【請求項１１】 ＩｇＥ分子またはそのフラグメントの
ＣＨ３ドメインのアミノ酸残基を含むアミノ酸配列を持
つ、１以上の抗原性融合蛋白質、異種キャリア蛋白質お
よび薬剤的に受容できるキャリアを含む、アナフィラキ
シーを引き起こさない抗‐ＩｇＥ免疫反応を誘発する医
薬組成物。 - 【請求項１２】 ＩｇＥ分子またはそのフラグメントの
ＣＨ３ドメインのアミノ酸残基を含むアミノ酸配列を持
つ抗原性ペプチドをコードする１以上のポリヌクレオチ
ド配列を含む、アナフィラキシーを引き起こさない抗‐
ＩｇＥ免疫反応を誘発する医薬組成物。 - 【請求項１３】 ＩｇＥ分子またはそのフラグメントの
ＣＨ３ドメインのアミノ酸残基を含むアミノ酸配列を持
つ抗原性融合蛋白質をコードする１以上のポリヌクレオ
チド配列および異種キャリア蛋白質を含む、アナフィラ
キシーを引き起こさない抗‐ＩｇＥ免疫反応を誘発する
医薬組成物。 - 【請求項１４】 ＩｇＥ分子またはそのフラグメントの
ＣＨ３ドメインのアミノ酸残基を含むアミノ酸配列を持
つ１以上の抗原性ペプチドの免疫原的に有効な量を、Ｉ
ｇＥ‐媒介アレルギー性疾患の処置または予防が所望さ
れる動物に投与することを含む、そのような疾患を処置
または予防するための方法。 - 【請求項１５】 ＩｇＥ分子またはそのフラグメントの
ＣＨ３ドメインのアミノ酸残基を含むアミノ酸配列を持
つ１以上の免疫原的有効量の抗原性融合蛋白質および異
種キャリア蛋白質を、ＩｇＥ‐媒介アレルギー性疾患の
処置または予防が所望される動物に投与することを含
む、そのような疾患を処置または予防するための方法。
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US29263801P | 2001-05-22 | 2001-05-22 | |
| US60/292638 | 2001-05-22 |
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|---|---|---|---|
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| JP2006169963A Division JP2006254922A (ja) | 2001-05-22 | 2006-06-20 | 非アナフィラキシー誘発性ＩｇＥワクチン |
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|---|---|
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| JP2006018416A Withdrawn JP2006199701A (ja) | 2001-05-22 | 2006-01-27 | 非アナフィラキシー誘発性ＩｇＥワクチン |
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|---|---|---|---|
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Cited By (1)
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|---|---|---|---|---|
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| CN107177613A (zh) * | 2017-07-18 | 2017-09-19 | 哈尔滨紫霞生物科技有限公司 | 一种提高重组猪干扰素‑γ融合蛋白抗病毒活性的方法 |
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| JPH06510524A (ja) | 1991-05-14 | 1994-11-24 | ユニバーシティ オブ コネチカット | 免疫原性タンパク質をコードする遺伝子の標的への配達 |
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