CN1226245A

CN1226245A - 具有药理活性的化合物,其制备方法及其用途

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Publication number: CN1226245A
Application number: CN97196755A
Authority: CN
Inventors: S·克尔温; L·H·赫尔利; M·R·德鲁卡; B·M·摩尔; G·芒迪
Original assignee: University of Texas System
Current assignee: University of Texas System
Priority date: 1996-06-20
Filing date: 1997-06-20
Publication date: 1999-08-18
Also published as: KR20000022040A; AU3791797A; JP2000514048A; US6720344B2; BR9711805A; HUP9904567A2; HUP9904567A3; IL127559A0; AU727708B2; US20030119791A1; WO1997048694A1; PL330814A1; CA2258822A1; NO985975L; EP0912549A1; NO985975D0; EP0912549A4

Abstract

本发明涉及能够结合激素核内受体并用于刺激成骨细胞繁殖和骨生长的药理活性化合物。本发明还涉及这类化合物的用途,即用于治疗或预防与激素核内受体族相关的疾病和/或失调。

Description

具有药理活性的化合物，其制备方法及其用途

发明领域

本发明涉及用于治疗与激素核受体(NHR)族相关的失调的化合物及其用途。更具体地说，本发明涉及的化合物具有特定的三维空间取向，能够与NHR结合由此改变其功能。这样的化合物可以用作与NHR有关的失调的治疗药物，所述受体例如类视色素X受体(RXR)。本发明还涉及治疗或预防骨质疏松、骨质损失、关节炎、炎症，癌症和皮肤病的组合物和方法。

发明背景及现有技术

当今开发缓解主要疾病的治疗药物的方法侧重于分子生物学、酶学、晶体学、药物合成、分子建模和药理学间的各学科交叉方法。典型的方法有：鉴定、分离、纯化和结晶与所研究疾病相关的某目标蛋白；建立该蛋白结合和活性位点的模型；建立化合物的模型，合成和评价该化合物，以优化它们的药理活性。虽然现有技术已是高度发展，但是制药产业仍然需要极大的努力来开发新药，尤其是预见结构-活性关系。所以，仍然需要开发用于治疗特定疾病的药理活性化合物的高效和经济的鉴定方法。

骨质疏松症以骨质减少为特征，同时骨密度降低，骨间隙加大，造成骨孔和骨脆。男性和女性都可能随年龄的增长而患此病，尤其是绝经后的妇女。该病主要是骨基质形成的失调。通常，成骨细胞(即骨形成性细胞群)的数量减少。在局部骨源因子(bone-derived factor)的调控下，成骨细胞产自邻近的间质前体。破骨细胞(即降解骨质并与骨吸收有关的细胞群)数量并不减少。破骨细胞较大，通常是在矿化骨再吸收表面上的多核细胞。破骨细胞由源自骨骼外造血前体的单核前体融合而成。

破骨吸收作用的所有已知局部刺激物(包括甲状旁腺激素，1,25D,IL-2和TNF)都通过最初对成骨细胞的作用来介调(modulate)其对破骨细胞的刺激作用。所以，成骨细胞被认为控制新骨形成速度和产生刺激破骨吸收作用的信号，由此在调节骨的更新中起着主要作用。

NHR族与介调哺乳动物细胞的繁殖与分化有关。这些细胞过程受调控基因表达的信号分子的调控。以类视色素受体为例的NHR与许多疾病和失调有关，例如：骨质疏松、癌症、粉刺、AIDS、关节炎、牛皮癣、红斑狼疮等。类视色素X受体(RXR)的作用是介调细胞转录活性，由此控制细胞的繁殖。

现有技术已经认识到，成骨细胞在骨形成中起着非常复杂的作用。一般认为，破骨细胞起溶骨作用(吸收)，使得成骨细胞然后能够沉积更多的骨质。那么，可以认为能够抑制过度骨吸收或刺激成骨细胞繁殖的化合物将可用于防止骨质损失或刺激骨的生长。

Takashi等(日本专利公开：JP03130216 A2,6/4/94)揭示了具有以下结构的二苯基化合物

其中X是-CH₂-或-C(=O)-，它们是用于治疗或预防骨质疏松症的。

Labroo(95年2月14日授权的美国专利5,389,646)揭示了具有以下结构的化合物

其中R₁是H、OH、C1-C17烷氧基、(C1-C17)烷基羰基氧基、(C1-C17)烷基羰基氨基或(C1-C17)烷基羰基；R₂是-(CH₂)_(1-6)-CH₂-杂环；R₃是H、OH、C1-C17烷氧基、(C1-C17)烷基羰基氧基、(C1-C17)烷基羰基氨基或(C1-C17)烷基羰基；它们是用于治疗或预防骨质损失的。

还有其它化合物被建议用来治疗骨质疏松，例如以下化合物：

即便如此，由于这些化合物的效果有限，它们都没有被广泛地使用。所以，仍然需要治疗骨质疏松更有效的化合物。

Kamala等(Indian J.Chem.(1983),22B,1194-96)和Waisser等(Collect.Czech.Chem.Commun.(1991),56,2978-2985)分别揭示了以下化合物的合成及其作为合成中间体和抗结核药的用途。

二芳香化合物用于治疗癌症和肿瘤是众所周知的。这类化合物通常有效抑制DNA的复制，由此对哺乳动物细胞具有细胞毒性作用。迄今，仍然没有发现能够通用于这类多种癌症和肿瘤的化合物。所以，仍然需要更有效的广谱抗癌和抗肿瘤药物。

本发明的目的之一是克服治疗药物建模领域的固有局限，即提供了一种利用确定的三维空间特性来选择候选化学物质的方法。这些具有确定空间结构的化合物还在某种程度上克服了现有成骨药物的局限，即提供了刺激骨成型蛋白产生的药物，并由此提供了用于在骨质损失造成的疾病中刺激成骨细胞繁殖的组合物。

本发明的目的还在于提供结合激素核受体(NHR)族中与疾病相关的其它受体的物质。

本发明的另一目的是提供用特定的药理活性化合物治疗或预防与NHR有关的生理失调或疾病，例如骨质疏松、关节炎、癌症、肿瘤等的方法。

本发明的目的还在于提供用于选择能够刺激成骨细胞繁殖和分化，并可用于治疗NHR相关性疾病(尤其是与骨质损失相关的疾病)的药理活性化合物的方法。

本发明的目的还在于提供用于选择和筛选能够刺激成骨细胞繁殖和分化的药理活性组合物的方法。由此选出的组合物可用于治疗或预防与NHR相关的骨质疏松和其它生理失调。

发明概述

本发明提供了刺激成骨细胞繁殖的方法，和选择药理活性化合物的方法。在实施方案之一中，刺激成骨细胞繁殖的方法包括选择具有通式Ⅰ的物质：

X-L-Z，其中：

X选自：

L选自：

Z选自：

其中，R¹选自：H,OH,C1-C4烷基、C1-C4烷氧基，C1-C4烷硫基，卤素和(C1-C12)烷基-羰基氧基；

R²选自：H,OH，卤素，C1-C6烷基，C1-C6烯基，C1-C6烷氧基和(C1-C12)烷基-羰基氧基；

R³选自：H,OH，卤素，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基，C1-C6烯基和(C1-C12)烷基-羰基氧基；

R⁴选自：H,OH，卤素，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基和(C1-C12)烷基-羰基氧基；

R⁵选自：H，卤素，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基，-OC(=O)Me，邻苯二甲酰亚胺和(C1-C12)烷基-羰基氧基；

R⁶选自：H,OH,-NH₂,C1-C4烷基和C1-C4烷氧基；

R⁷选自：H,C1-C4烷基，C1-C4烷基-羰基和(C7-C10)芳基烷基；

R⁸选自：H,OH，卤素,-CF₃,C1-C4卤代烷基，C1-C4烷基，C1-C4烷氧基，-NHC(=O)Me和-N(C1-C4烷基)₂；

R⁹选自：H,OH，卤素，-CN,-NO₂,C1-C4卤代烷基，-CF₃,C1-C8烷基，C1-C8烷氧基，-NHC(=O)Me和-OC(=O)Me；

R¹⁰选自：H,OH，卤素，-CN,-NO₂,C1-C4卤代烷基，-CO₂H,C1-C12烷基，C1-C12烷氧基，苯基，C1-C12烯基，(C1-C4)烷氧基羰基，-NHC(=O)Me,(C1-C4)烷基羰基，(C1-C12)烷基-羰基氧基和杂芳基；

R¹¹选自：H,OH,卤素，C1-C4卤代烷基，-CF₃,C1-C4烷基，-NH₂,C1-C4烷氧基，-NHC(=O)Me,C1-C4烯基，(C1-C4)烷氧基羰基，(C1-C4)烷基羰基，(C1-C4)烷基-羰基氧基；

R¹²选自：H,OH,-NH₂,(C1-C4)烷基，C1-C4烷氧基，和(C1-C4)烷基羰基；

R¹³选自：H,OH，卤素，-NH₂,(C1-C4)烷基，C1-C4烷氧基，和-N(C1-C4烷基)₂；

和令包含成骨细胞的细胞与有效量的药理活性化合物接触。

这些方法可望刺激成骨细胞的繁殖，并用于防止骨质损失和/或促进骨生长。

在更具体的实施方案中，作为本方法一部分的选定药物更具体的定义为：R¹⁰和R¹¹可以相互结合成一个5至7元碳环或氧杂碳环，该环与两基团所连接的环稠合，其中的碳环和氧杂碳环互不相干地被一个或多个以下基团所取代：(C1-C4)烷基，C1-C4烷氧基，OH，卤素，羧基、^H和芳基，由此形成药理活性化合物。

在本发明范围内还认为，通式Ⅰ药理活性化合物可能结合一种以上不同类型的激素核受体(NHR)，因此可以用于治疗与NHR相关的其它疾病。

虽然不想局限于任何一种具体的作用机制，本发明认为，通式Ⅰ药理活性化合物可能通过加强BMP-2启动子活性来促进成骨细胞的生长或富集成骨细胞群。

在本发明范围内，还认为，通式Ⅰ药理活性化合物可以与其它化合物合用来刺激或促进成骨细胞的生长。它们还可以用于刺激骨生长或抑制骨质损失和/或骨吸收。

本发明的另一方面内容提供了一种选择药理活性化合物或候选药理活性化合物的方法。在实施方案之一中，所述药理活性化合物能够刺激BMP-2启动子的活性。实施方案之一的方法包括：选择具有通式Ⅱ确定空间三维结构的候选化合物：

W-L-Y

通式Ⅱ

其中，

W含有一个具有以字母“A”表示的质心(centeroid)的芳香基；

Y含有一个具有有以字母“B”表示的质心的碳环基团；

L是连接X和Z的基团；

W内的芳香基原子形成一个“P”平面；

质心“B”位于“P”平面以上或以下约1或约0.7埃；

质心“A”和质心“B”相距约6或约6.6至约8或约8.5埃；由此形成具有确定空间结构的分子；

和选择能够刺激BMP-2启动子活性的具有确定空间结构的分子。

在部分实施方案中，上述方法中的具有确定空间结构的分子被进一步定义为具有至少两个受氢键基团，位于L内或其附近，受氢键基团被进一步定义为：

1)受氢键基团相距约2或约2.3至约5或约5.4埃；

2)受氢键基团之一距质心“A”约4或约4.5至约7或约7.7埃，而距质心“B”约2或约2.7至约3或约3.8埃；而且

3)受氢键基团之一距质心“A”约2或约2.6至约3或约3.8埃，而距质心“B”约4或约4.6至约7或约6.9埃。

在部分方法实施方案中，L进一步定义为据重原子距离测定占据着一个外限约小于或等于3埃(约3.1埃更好)的空间，沿平面“P”的法相测定，位于平面“P”之上或之下并与之正交。在其它实施方案中，L甚至被进一步定义为据重原子距离测定占据着一个外限约为4埃(约4.7至6.0埃更好)的空间，与质心“A”和质心“B”的连线垂直并位于平面“P”内。

本发明还要求保护所述化合物的药学上可接受的制剂，并用于提供刺激成骨细胞繁殖和/或减少骨吸收的药理活性制剂。

在本发明范围内，本发明认为，通式Ⅱ药理活性化合物可能具有除刺激成骨细胞繁殖和抑制骨吸收之外的其它活性。这些活性主要与结合一个或多个激素核受体有关，并由此提供了一种治疗与受体活性相关的各种疾病的方法。

在本发明范围内，本发明还认为，可能有许多药理活性化合物虽然没有在此具体说明，但是也符合通式Ⅱ的确定的空间结构。这些具有确定空间结构的分子也在本发明方法的范围之内，它们能够刺激BMP-2启动子活性，或者刺激成骨细胞的繁殖，或者具有其它所需的药理活性。所以，这些化合物可以用于刺激骨形成或抑制骨组织损失。

应该理解的是，通式Ⅱ化合物还包涵没有在此说明的其它结构参数，这些都属于本发明范围之内。所述的其它结构参数与在此所述的参数相比一般相对次要。即，虽然给W或Y加上一个特定的取代基可能使得通式Ⅱ化合物的活性高于或低于没有该特定取代基的化合物，但是只要具有以上就通式Ⅱ或任何本文中其它通式化合物所言的特征，具有此取代基的化合物仍然属于本发明方法范围内。

本发明的另一实施方案提供了一种治疗和/或预防恶性细胞繁殖的方法。方法实施方案之一包括：给包含恶性细胞的细胞群使用恶性细胞繁殖抑制量的、确定空间结构如通式Ⅱ:W-L-Y所述的药理活性化合物；和抑制恶性细胞，其中的药理活性化合物据其三维结构进一步定义为：

W含有具有以字母“A”表示的质心的芳香基；

Y含有具有以字母“B”表示的质心的碳环；

L是连接X和Z的基团；

W内的芳香基原子形成一个平面“P”；

质心“B”位于“P”平面以上或以下约1或约0.7埃；

质心“A”和质心“B”相距约6或约6.6至约8或约8.5埃。

上述方法中的药理活性分子可进一步定义为具有至少两个受氢键基团，位于L内或其邻近，受氢键基团被进一步定义为：

1)受氢键基团相距约2或约2.3至约5或约5.4埃；

在部分方法实施方案中，L进一步定义为据重原子距离测定占据着一个外限小于或等于约2.5，约3或约3.1埃的空间，沿平面“P”的法相测定，位于平面“P”之上或之下并与之正交。在其它实施方案中，药理活性化合物被进一步定义为其中L据重原子距离测定占据着一个外限约为4埃(约4.7至5埃，或约6.0埃更好)的空间，与质心“A”和质心“B”的连线垂直并位于平面“P”内。

本发明的其它内容提供了刺激BMP-2启动子活性或成骨细胞繁殖的方法和通式Ⅲ药理活性化合物：

通式Ⅲ其中，

R¹选自：芳基、萘基、杂芳基、环烷基、环烯基、氮杂环烷基、氧杂环烷基、氮杂环烯基、氧杂环烯基、酮基取代的环烷基和酮基取代的环烯基，上述各取代基又互不相干地被一个或多个以下基团取代：C1-C7烷基、C1-C7烷氧基、苄氧基、羟基、C1-C2卤代烷基、卤素、氰基、羧基、氢原子、(C1-C4)烷氧基羰基、-N(C1-C4烷基)₂、(C1-C4)烷基羰基氧基、芳基、(C1-C4)烷基羰基氨基、(C1-C4)烷基羰基、(C1-C4)烷基-芳基和-NH₂；

R²选自：H、C1-C4烷基、C1-C4烯基、C1-C4炔基、C1-C4烷氧基、和-NH₂；

R³和R⁶选自：H、羟基、卤素、(C1-C5)烷基羰基氧基、氰基、C1-C4烷基、C1-C4烯基和C1-C4烷氧基；

R⁴和R⁵选自：H、卤素、羟基、(C1-C4)烷基羰基氧基、氰基、C1-C2卤代烷基、C1-C4烷氧基、苯甲酰基、(C1-C4)烷基-芳基、(C1-C6)烷基氨基羰基氧基、苯基氨基羰基氧基、C1-C4烷基、C1-C4烯基、C1-C4炔基、(C1-C4)烯基-芳基、(C1-C4)炔基-芳基、(C1-C4)烷基-(C6-C10)环烷基、(C1-C4)烯基-(C6-C10)环烷基、(C1-C4)炔基-(C6-C10)环烷基、(C1-C4)烷基-(C6-C10)环烯基、(C1-C4)烯基-(C6-C10)环烯基、(C1-C4)炔基-(C6-C10)环烯基、羧基和(C1-C4)烷氧基羰基。

所述方法主要包括给予包含成骨细胞或成骨细胞前体细胞在内的细胞有效量的通式Ⅲ化合物。

刺激BMP-2启动子活性或成骨细胞繁殖的更具体的方法实施方案使用如下的上述化合物：其中R³和R⁴共同连接成一个5至7元的碳环或氧杂碳环，该环与该两基团所连接的环稠合，其中的碳环或氧杂碳环被一个或多个以下基团取代：C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、羟基、卤素、羧基、氢原子和芳基。

在另一方法实施方案中，药理活性化合物定义为：

R⁴和R⁵共同连接成一个5至7元的碳环或氧杂碳环，该环与该两基团所连接的环稠合，其中的碳环或氧杂碳环被一个或多个以下基团取代：C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、羟基、卤素、羧基、氢原子和芳基。

在另一方法实施方案中，药理活性化合物定义为：

R⁵和R⁶共同连接成一个5至7元的碳环或氧杂碳环，该环与该两基团所连接的环稠合，其中的碳环或氧杂碳环被一个或多个以下基团取代：C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、羟基、卤素、羧基、氢原子和芳基。

本发明另一方面的内容是具有成骨细胞繁殖活性的药理活性组合物。在部分实施方案中，组合物根据一确定的具体过程来定义，该过程包括：

利用加热或CrO₃/H₂O/AcOH用足够的时间氧化通式Ⅵ化合物，形成药理活性组合物。

通式Ⅵ

可以进一步纯化该制剂并选取最有效的部分。上述过程所得、据实施例1所述方法测定的ED₅₀约1至约50微克/毫升的组合物应该具有成骨细胞繁殖活性和刺激BMP-2启动子活性的能力。

在本发明范围内，本发明认为，上述过程包括能将通式Ⅵ化合物转化为具有所述药理活性的所需组合物的其它类似或相当步骤。这类方法也属于本发明范围之内。

在本发明范围内，本发明还认为，由此制备的药理活性组合物可用于治疗或预防与肿瘤细胞繁殖相关的疾病或失调、关节炎、炎症、骨吸收、皮肤病和可以用受体-引导疗法治疗的疾病。

根据以下说明、数据和权利要求，本发明的其它特征、优点和实施方式对本领域熟练技术人员来说将是显而易见的。

附图简述

以下附图是说明书的一部分，是用来进一步阐明本发明某些方面内容的。参照一幅或多幅附图，结合本文中具体实施方案的详细说明，将能够更好地理解本发明。

图1．显示视黄酸置换试验的结果曲线图。

图2．通式Ⅱ化合物实例之一空间填充模型的俯视图。

图3．通式Ⅱ化合物实例之一空间填充模型的侧视图。

本发明的详细说明

药理活性化合物的选择方法。

本发明内容之一涉及从一组化合物中选择一种或多种药理活性化合物的方法。选定的化合物应具有在此定义的空间化学结构，并具有可观察到的在培养物中刺激成骨细胞繁殖或维持成骨细胞生长的能力。

所选化合物的化学结构可用以下结构和立体参数来定义。立体参数可以通过测定所选化合物的三维结构来获得。适用于三维结构测定的方法包括：单晶X光衍射或例如CONCORD或分子力学(MM2)的二维至三维转化算法。所选的化合物应具有两个疏水基团(例如芳香基或碳环或杂环基团)。两个疏水基团都可以一个质心来描述，质心的位置即疏水基团内所有原子的平均位置。对具有所需活性的化合物而言，两质心的距离介于约7或7.9至约8或约8.5埃。除了上述两疏水基团外，表现出所需活性的化合物还应具有一个能够形成氢键或起Lewis碱作用的化学基团或取代基。人们可将分子外的一个供氢键或Lewis酸基团在形式上与分子内的这个氢键受体或Lewis碱位点缔合。该外部供氢键基团或Lewis酸基团应当相对该分子这样取向，以便实现与分子上互补性位点的化学接触。如此，则外部位点应与分子上的互补位点相距2至4埃，并由此形成氢键结合或Lewis酸/碱缔合。在两疏水基团和外部供氢键/Lewis酸位点之间必需维持一定的几何关系。这种几何关系可以用距离和角度来描述。外部位点的位置相对两疏水基团应该是不对称的，使得疏水基团之一(远端疏水基团)比另一疏水基团(近端疏水基团)离外部位点更远些。对具有所需活性的化合物而言，外部供氢键/Lewis酸基团和描述远端疏水基团的质心应相距约6或约6.7至约7或7.7埃，相距约6或约6.8至约7或7.7埃更好。对具有所需活性的化合物而言，外部供氢键/Lewis酸基团和描述近端疏水基团的质心应相距约4或约4.6至约6或约6.3埃，相距约4或约4.9至约6.0埃更好。除了上述基团之外，具有所需活性的化合物还具有能够起氢键供体或Lewis碱作用的第二基团。

可以用一个角度来描述该第二受氢键/Lewis碱位点在分子内的相对取向。该角度是远端疏水基团质心，该第二受氢键基团和外部供氢键/Lewis酸基团之间形成的。对具有所需活性的化合物而言，该角度应在74至112度之间，85至89度之间则更好。

参见图2和图3能够更好地理解通式Ⅱ化合物某些实例的空间定义，两图代表了通式Ⅱ化合物的W和Y和L基团内核心环的空间填充模型。注意白区表示W、L和Y各自的位置和所充满的空间。暗区表示L内或其邻近的氢键接受区。为简化起见，没有显示可能从W和Y内核心环上伸出的取代基。所示的三维结构是具有在此所述药理活性的化合物必需具有的。应该理解的是，本发明范围涉及和涵盖的化合物可以具有能够产生药理活性的其它构象。这类其它构象包括键的扭转，键角扭转，空间大小的改变，基团空间取向的改变等，这些都属于本发明范围之内。

在实施方案之一中，所选化合物应具有在体外刺激成骨细胞繁殖的活性和/或能够维持或加强成骨细胞的生长。所述活性可以利用熟练技术人员已知的多种方法中的任一种来测定，例如实施例1所述的荧光素酶启动子试验。在该试验中，具有刺激成骨细胞繁殖或生长能力的化合物将激发荧光素酶的活性。由于BMP-2荧光素酶启动子结构体被转染到无限繁殖的鼠成骨细胞(2T3细胞)内，正如本领域技术人员所知道的那样，对荧光素酶活性的激发作用与成骨细胞繁殖刺激活性具有相当的相关性。

本发明方法中的化合物具有至少近似于参照化合物2-(4-甲氧基苯甲酰基氨基)-1,3-苯并噻唑的成骨细胞繁殖激发活性。“至少近似于”表示根据启动子试验中ED₅₀测定，活性不低于参照化合物的100分之一，较好的是，活性等于或高于参照化合物。在实施例1的试验条件下，参照化合物的ED₅₀约0.1微摩尔浓度；所以，该方法所选化合物的ED₅₀应不高于10微摩尔浓度。

刺激骨生长的方法

本发明内容之一提供了一种利用通式Ⅱ和Ⅲ化合物来刺激成骨细胞繁殖的方法。本发明希望所述化合物具有刺激成骨细胞繁殖由此刺激骨生长的能力。

所述方法可以在体内或体外实施。体内实施时，本发明认为，在用通式Ⅱ或Ⅲ化合物治疗后，所有的脊椎动物均可能，尤其是患有骨质疏松的那些将表现出至少部分对成骨细胞繁殖的刺激作用。

当体外实施时，本发明认为，任何本领域熟练技术人员所知的测定成骨细胞繁殖刺激活性的技术均可用来测试通式Ⅱ或Ⅲ化合物。此类技术之一为实施例1中的成骨细胞繁殖试验。

虽无意拘泥于机制，但据信，通式Ⅱ和Ⅲ化合物通过刺激成骨细胞的繁殖来发挥其骨生长刺激活性，这是化合物能够通过结合一种或多种NHR来介调细胞转录的结果。

有关通式Ⅱ和Ⅲ化合物具有结合NHR的能力的证据可以利用实施例6所述的试验来获得。在该试验中，对化合物从类视色素受体上置换氚化顺视黄酸(RA)的能力进行了测试。被置换的RA用闪烁法来定量。图1显示了化合物置换RA的结果。能够从视黄酸受体上置换RA的化合物可以用来治疗或预防与这些受体有关的失调或疾病。这些疾病或失调包括，例如，骨质疏松、关节炎、粉刺、癌症、糖尿病、白血病、心脏肥大、炎症、淋巴瘤、恶性肿瘤、其它癌性疾病、宫颈发育不良、黑素瘤、牛皮癣、毛发红糠疹、pustulosis palmoplantaris、非生殖器湿疣、硬化症、舌苔平坦、作色性干皮病、免疫抑制和红斑狼疮。

具有药理活性的组合物的制备-氧化产物

本发明部分实施方案涉及由4-异丙氧基苯甲酸或任何其它提供异丙氧基蒽酮的中间体化合物制备药理活性组合物的方法，所述组合物具有用于抑制骨损失或刺激骨生长的组合物所应有的活性。

方案1所示和实施例4所述的是一种将4-异丙氧基苯甲酸转化为具有所需的成骨细胞刺激剂活性的组合物的多步骤合成方法。但是，可以从方案1中任一中间体开始，根据在此所述的以下合适的合成步骤，仍然能够制得所需的组合物。所以，本发明认为，该药理活性组合物是单步骤至多步骤合成方法的产物，其中的关键步骤是利用加热或CrO₃/H₂O/AcOH处理将氧蒽酮氧化成所需的组合物。应该理解的是，除此之外的其它类似或相当的反应条件和/或反应试剂也可以用来氧化得到具有抗繁殖活性的组合物。所以，这类其它反应条件和/或反应试剂也被认为属于本发明范围之内。

方案1

通过氧化步骤后的分馏产物具有实施例1中试验所述的成骨细胞繁殖刺激活性。在该试验中，可以观察到与对照相比的荧光素酶作用的加强，这表示候选组合物对基因表达的促进作用。该试验中，本发明组合物，即由以上方法得到的药理活性组合物，其ED₅₀约为10微克/毫升。ED₅₀约在1至约50微克/毫升，或在5至约40微克/毫升，或更具体地在约10至约40微克/毫升范围内的制剂构成了本发明所述的制剂。

防止和/或治疗恶性细胞性失调的方法

该方法是用来治疗和/或预防恶性细胞相关性失调和疾病的，它包括给予恶性细胞生长抑制量的上述通式Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ和Ⅵ药理活性化合物中任一或多种。

据信，这些化合物能够结合NHR，并由此用于抑制或防止恶性细胞的繁殖。用于恶性细胞失调的药理活性化合物将如实施例3所述来选择，其中，可以分辨出能够抑制或防止恶性细胞生长或繁殖的、具有确定空间结构的分子。该试验中的活性化合物能够抑制或防止黑素瘤细胞的生长或繁殖。恶性细胞抑制量即与对照细胞相比，能够抑制肿瘤细胞生长50％的量。

概要

与本发明化合物有关的药理活性可以描述成：加强或刺激成骨细胞的繁殖，延迟或抑制肿瘤或恶性细胞的繁殖，或者缓解皮肤病(例如粉刺)。在本发明的其它方面内容中，这些化合物的药理活性可能是具有抗关节炎、抗老化和/或抗皱活性。

“激素核受体”(NHR)在此表示位于细胞核内的细胞受体，它们参与调节由激素介导的生理应答。这类受体的实例包括，例如但不限于甾体类激素受体例如雌激素、雄性激素、孕酮、糖皮质素和盐皮质素受体；视黄酸受体例如类视色素A和类视色素X受体族和亚型；甲状腺素受体例如维生素D受体；和孤单受体例如ROR和RZR。

“烷基”在此包括具有一定数量碳原子的，支链、环状和直链饱和脂肪族烃基；“卤代烷基”包括具有一定数量碳原子的，被一个或多个卤原子取代的支链、环状和直链饱和脂肪族烃基(例如，-CvFw,v=1至3,w=1至(2v+1)；“烷氧基”表示通过氧桥连接的具有一定数量碳原子的烷基；“烷硫基”表示通过硫桥连接的具有一定数量碳原子的烷基；“环烷基”包括饱和的环基团，其中包括单环、双环和多环环系统，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、金刚烷基(adamantyl)和环辛基。“烯基”包括在链的任意稳定位置有一个或多个不饱和碳-碳键的，构型为直链、支链或环状的烃链，例如乙烯基、丙烯基等；“环烯基”包括部分不饱和环基团；“炔基”包括在链的任意稳定位置具有一个或多个碳-碳三键的直链、环状或支链构型的烃基，例如乙炔基、丙炔基等。

“烷基羰基”包括在一定位置通过羰基与化合物的其余部分连接的具有一定数量碳原子的烷基；“烷氧基羰基”包括在一定位置通过羰基与化合物的其余部分连接的具有一定数量碳原子的烷氧基。“烷基羰基氨基”包括通过羰基与一氨基桥连接的具有一定数量碳原子的烷基，所述氨基桥又在一定的位置与化合物的其余部分连接；“烷基羰基氧基”包括与羰基连接的具有一定数量碳原子的烷基，所述羰基又通过氧原子在一定位置与化合物的其余部分连接；“烷氧基羰基氨基”表示与羰基连接的具有一定数量碳原子的烷氧基，所述羰基又通过一氨基在一定位置与化合物的其余部分连接；“烷基氨基”表示与氨基连接的具有一定数量碳原子的烷基，所述氨基又在一定位置与化合物的其余部分连接。

“卤素”或“卤原子”在此指氟、氯、溴和碘；“反离子”在此表示小型、带负电荷的离子，例如氯根、溴根、氢氧根、乙酸根、硫酸根等。

“芳香族基团”在此表示芳基或杂芳基；“芳基”包括苯基或苯环上被取代的苯基；“芳基烷基”表示通过烷基桥连接的芳基。例如，“C₇-C₁₀芳基烷基”指通过一C₁-C₄烷基桥与化合物的其余部分连接的芳基；“(C₁-C₃烷基)芳基”指通过一芳基环与化合物其余部分连接的C₁-C₃烷基；“芳基(C₁-C₃烷基)”指通过一C₁-C₃烷基与化合物其余部分连接的芳基。

“碳环”或“碳环的”包括各种稳定的3至7元单环或双环，或7至14元双环或三环，或多至26元的多环碳环，它们都可以是饱和的(环烷基)、部分不饱和的(环烯基)或芳香族的。这类碳环例如但不限于：环丙基、环戊基、环己基、苯基、联苯基、萘基、2,3-二氢化茚基、金刚烷基或四氢萘基(3,4-四氢萘)。

“氮杂环烷基”在此表示至少环内碳原子之一被一个氮原子取代的环烷基；“氧杂环烷基”表示至少环内碳原子之一被一个氧原子取代的环烷基；“氮杂环烯基”表示至少环内碳原子之一被一个氮原子取代的环烯基；“氧杂环烯基”表示至少环内碳原子之一被一个氧原子取代的环烯基。

在此所述的化合物可能具有不对称质心。所有的手性、非对映和外消旋形式都属于本发明范围内。本发明化合物还可以具有烯的、C=N双键等的多种几何异构体，如果不对立体化学或异构形式进行特别的说明，则所有这些稳定的异构体都属于本发明。可以理解的是，本发明的某些化合物可能具有一个不对称取代的碳原子，而且可能分离成光学活性或外消旋的形式。如何制备光学活性的形式是本领域众所周知的，例如拆分外消旋混合物或由光学活性起始物来合成。此外，本发明将说明本发明化合物的顺式和反式几何异构体，以及可分离成异构体的混合物或各个异构体。

只有当取代基和/或变化的组合产生的是稳定的化合物，这样的组合才是允许的。“稳定的化合物”或“稳定的结构”表示，化合物足够牢固可以经受由反应混合物经分离达到可用级的纯度，并被配制成有效的治疗药物。

“取代的”在此表示特定原子或基团上的任一或多个氢原子被规定基团组中的选定基团所取代，条件是不超过特定原子的正常效价，而且取代产生的是稳定的化合物。

“杂芳基”表示一完全不饱和杂环；“杂环”表示一个稳定的5至7元单环或双环，或7至10元双环杂环，所述环是饱和的或不饱和的，由碳原子和1至4个杂原子构成，杂原子各自独立地选自N,O和S，其中的氮和硫杂原子可以是氧化形式的，而且，氮原子可以是季铵化的，而且还包括双环基团，其中任一上述杂环与一苯环稠合。杂环可以在任意杂原子或碳原子位置与其侧基连接，形成一稳定的结构。如果所得的化合物是稳定的，则所述的杂环可以在碳原子或氮原子上被取代。这样的杂环的实例包括但不限于1H-吲唑、2-吡咯烷酮基、2H,6H-1,5,2-二噻嗪基、2H-吡咯基、3H-吲哚基。4-哌啶酮基、4aH-咔唑、4H-喹嗪基、6H-1,5,2-噻二嗪基、吖啶基、吖辛因基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、咔唑、苯并二氢呋喃基、苯并呋喃基、肉啉基、十氢喹啉基、呋喃基、呋咱基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、二氢吲哚基、吲嗪基(indolizinyl)、吲哚基、异苯并呋喃基、异苯并二氢呋喃基、异二氢吲哚基、异吲哚基、异喹啉基(苯并咪唑基)、异噻唑基、异噁唑基、吗啉基、1,5-二氮杂萘基、八氢异喹啉基、噁唑烷基、噁唑基、菲啶基、菲咯啉基、吩吡嗪基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噻噁基、吩噁嗪基、2,3-二氮杂萘基、哌嗪基、哌啶基、蝶啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、吡咯基、喹唑啉基、醌基、喹喔啉基、奎宁环基、咔啉基、四氢呋喃基、四氢异醌基、四氢醌基、四唑基、噻蒽基、噻唑基、噻吩基、苯硫基、三嗪基、砧吨基。还包括含有上述杂环的稠环和螺环化合物。

本文中的缩写定义如下：

RXR：类视色素X受体

RAR：类视色素A受体

NHR：激素核受体

BMP：骨形蛋白

ROR：类视色素相关性孤儿受体

RZR：类视色素Z相关性受体

PR：孕酮受体

ER：雌激素受体

AR：雄性激素受体

GR：糖皮质素受体

MR：盐皮质素受体

TR：甲状腺素受体

VDR：维生素D受体

1,25(OH)₂D:1,25-二羟基维生素D

IL-2：白介素2

TNF：肿瘤坏死因子

药物制剂

“药理活性化合物”在此指具有所需的有益药理或治疗活性的通式Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ或Ⅵ化合物，所述活性例如刺激或维持成骨细胞繁殖的药理活性。

本发明范围内的药理活性化合物的形式可以是其游离酸、游离碱或药学上可接受的盐。它们可以是给定化合物的衍生物或前药。

各药理游离活性化合物加入药物制剂中可以通过各种众所周知的技术来完成，例如Remington’s Pharmaceutical Science，第17版，Mack Publishing Company，Easton,PA,1985，本文引用并参考了其中的内容。

将药理活性化合物加入制剂中可能根据化合物的药理活性、接受治疗的病症、既定治疗方案、预定给药方法、最终制剂的完整性或稳定性，或其它因素而不同。

本发明的药物制剂可以通过多种方法给药。例如但不限于：腹膜内、关节内、动脉内、心内、腔内、软骨内、真皮内、鞘内、眼内、脊柱内、滑膜腔内、胸廓内、气管内、子宫内、硬外膜的、经皮的、血管内、静脉内、冠内(intracoronary)、肌内或皮下注射；吸入或口服、经鼻、口腔、直肠、眼内、耳内、经尿道、阴道、或舌下给药。上述以及本发明范围内的其它给药方法对熟练技术人员来说是众所周知的。

本发明药物制剂可以多种方式提供。本发明制剂所用任何成份在给药前都不得令药理活性化合物大量降解或分解。

就注射而言，药物制剂可以是适合用合适的溶液再生的粉剂，例如但不限于：冷冻干燥、旋转干燥或喷雾干燥的粉末；非晶体粉末；或丸粒，沉淀物或颗粒。就注射而言，药物制剂也可以是合适溶剂中的悬浮液，例如但不限于水、水溶液、非质子性溶剂、质子性溶剂、亲水溶剂、疏水溶剂、极性溶剂、非极性溶剂和/或它们的混合物，其中任选地含有稳定剂、pH调节剂、表面活性剂、生物利用度改进剂和/或它们的混合物。

药物制剂可以缓释输注或植入体制剂的形式给药，由此长期地释放出药理活性化合物。制剂可以压制成片剂或小的圆柱体，并将其植入皮下或肌内，作为缓释输注或植入体。植入体可能用到惰性材料，例如可生物降解的聚合物或合成硅树脂，例如Dow-Corning Corporation制造的硅橡胶，Silastic。

就鼻用而言，药物制剂可以是喷雾剂或气溶胶，其中含有合适的溶剂(例如水、水性、非水性、极性、非极性、亲水性、疏水性和/或以上的组合)，以及任选的其它化合物(例如稳定剂、抗微生物剂、抗氧化剂、pH调节剂、表面活性剂和/或生物利用度改进剂)。在气溶胶中要用到压缩空气、氮气、二氧化碳或基于烃的低沸点溶剂(例如丁烷、丙烷或其它)的推进剂。此外，也可以使用含有本发明胶束的糊剂、油膏或霜剂。本发明认为，为了制备适合鼻用的制剂，可能需要有助于药理活性化合物由药物制剂渗透到鼻粘膜中的生物利用度加强剂，例如醇或其它化合物。

就口服、口腔和舌下给药而言，药物制剂的形式可以是gelcap、caplet、片剂、胶囊、悬浮液或粉剂。就直肠给药而言，药物制剂的形式可以是栓剂、油膏、灌肠剂、片剂和用于在肠道、乙状结肠和/或直肠内释放化合物的霜剂。

呈单位固体剂型时，本发明化合物可以与常规载体混合，例如，粘合剂，例如阿拉伯树胶、玉米淀粉和明胶；崩解剂，例如玉米淀粉、瓜尔树胶、马铃薯淀粉或藻酸；润滑剂，例如硬脂酸或硬脂酸镁；和惰性填料，例如乳糖、蔗糖或玉米淀粉。

“单位剂型”在此表示单一或复合剂量形式，其中含有一定量的含药理活性化合物制剂，所述的量是通常为一次治疗性给药所需的、预定的一个或多个单位。如果是多剂型，例如悬浮液或有划痕的片剂，所述的预定剂量可能是部分(例如5ml(一茶勺))悬浮液，或有划痕片剂的一半或四分之一。

本发明药物制剂还可以作为液体悬浮液或溶液用于口服或肠胃外给药，所述制剂使用合适的无菌液体，例如油、水和醇，或以上的混合物，加有或不加药学上合适的表面活性剂、悬浮剂或乳化剂。

就悬浮剂而言，药物制剂中可以包含油，例如，固定油，如花生油、芝麻油、棉籽油、玉米油和橄榄油；脂肪酸，例如油酸、硬脂酸和异硬脂酸；和脂肪酸酯，如油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯、脂肪酸甘油酯和乙酰化脂肪酸甘油酯；加入醇，如乙醇、异丙醇、十六烷醇、甘油和丙二醇；加入甘油缩酮，如2,2-二甲基-1,3-二氧环戊烷-4-甲醇；加入醚，例如聚(乙二醇)450，加入石油烃，例如矿物油和凡士林；加入水，或加入以上所述的混合物；加或不加药学上合适的表面活性剂、悬浮剂或乳化剂。

油还可能用于制备软性明胶和栓剂制剂。在制备悬浮剂时可能用到水、盐水、葡萄糖水溶液和相关的糖溶液，和甘油，所述悬浮剂还宜含有悬浮剂(如果胶、carbomer、甲基纤维素、羟丙基纤维素或羧甲基纤维素)以及缓冲液和防腐剂。肥皂和合成除垢剂可以用作除垢组合物的表面活性剂和载体。合适的肥皂包括脂肪酸的碱金属、铵和三乙醇胺盐。合适的除垢剂包括阳离子除垢剂，如二甲基二烷基卤化铵、烷基卤化吡啶鎓和乙酸烷基胺；阴离子除垢剂，例如磺酸的烷基、芳基和烯基酯、烷基、烯基、醚、和单硫酸甘油酯、和磺基琥珀酸酯；非离子除垢剂，如脂肪胺氧化物、脂肪酸链烷醇酰胺、和聚氧乙烯-嵌段-聚氧乙烯共聚物；和两性除垢剂，例如β-氨基丙酸烷基酯和2-烷基咪唑啉季铵盐；和以上所述的混合物。

一种或多种组合的速效或短效，快速释放，长效，缓释、控释和缓慢释放剂型可以用于本发明。本发明制剂的给药过程和时间以及所需剂量取决于患者、所用的化合物、所用的制剂、给药方式、所治疗病症的严重程度和类型、合用的其它药物，以及其它因素。

药理活性化合物可以其药学上可接受的盐的形式配制在其制剂中。“药学上可接受的盐”在此指通过形成其酸性或碱性盐对活性亲本药理活性化合物进行了改造的本发明所述化合物的衍生物。药学上可接受的盐例如但不限于，碱性残基例如胺的无机或有机酸盐；酸性残基例如羧酸的碱金属或有机盐；等。药学上可接受的盐包括所得亲本化合物的常规的无毒盐或季铵盐，例如由无毒的无机酸或有机酸制得。例如，这类常规无毒盐包括由盐酸、氢溴酸、硫酸、磺酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等无机酸制得的；和由氨基酸、乙酸、丙酸、琥珀酸、乙二酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酯、双羟萘酸(pamoic acid)、马来酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、对氨基苯磺酸、2-乙酸基苯甲酸、富马酸、甲苯磺酸、甲烷磺酸、乙烷二磺酸、草酸、羟乙磺酸等。

本发明的药学上可接受的盐可以利用常规化学方法由具有碱性或酸性基团的亲本药理活性化合物来制备。简而言之，所述的盐可以在水或在有机溶剂或在两者的混合物中，通过化合物的游离酸或游离碱形式与预定量的合适的碱或酸反应制得。通常，以非水性介质为佳。合适的盐系列可参见Remington’sPharmaceutical Sciences，第17版，Mack Publishing Company,Easton,PA,1985,p.1481，本文引用并参考了其中的内容。

“药学上可接受的”在此指这样的化合物、材料、组合物和/或剂型，它们经严格的医学裁定，适合与人体或其它动物组织接触而没有过度的毒性、刺激、过敏反应或其它问题和并发症，即具有合理的效果/风险比。

优选实施方案

沿袭长期以来的专利法常规，本说明书中所用的“一个”表示“一或多个(种)。

刺激BMP-2活性；成骨细胞繁殖的方法

本发明提供了一种刺激BMP-2启动子活性及由此的成骨细胞繁殖的方法。在部分实施方案中，所述方法包括令含成骨细胞或成骨细胞前体细胞的细胞与通式Ⅰ药理活性化合物接触：

X-L-Z

通式Ⅰ

其中：

X选自：

L选自：

Z选自：

R¹选自：H、OH、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4烷硫基、卤素和(C1-C12)烷基-羰基氧基；

R⁴是H；

R⁶选自：H,OH,-NH₂,C1-C4烷基和C1-C4烷氧基；

R⁷选自：H,C1-C4烷基，C1-C4烷基-羰基和(C7-C10)芳基烷基；

R⁸选自：H,OH，卤素，-CF₃,C1-C4烷基，C1-C4烷氧基，-NHC(=O)Me和-N(C1-C4烷基)₂；

R⁹选自：H,OH，卤素，-CN,-NO₂,C1-C8烷基，C1-C8烷氧基，-NHC(=O)Me和-OC(=O)Me；

R¹⁰选自：H,OH,卤素，-CN,-NO₂,C1-C4卤代烷基，-CO₂H,C1-C12烷基，C1-C12烷氧基，苯基，C1-C12烯基，(C1-C4)烷氧基羰基，-NHC(=O)Me,(C1-C4)烷基羰基，(C1-C12)烷基-羰基氧基和杂芳基；

在本方法有些实施例中，通式Ⅰ药理活性化合物还可以如下定义：

R¹⁰和R¹¹连接在一起形成一个5-7的碳环或氧杂碳环，该环与R¹⁰和R¹¹所连接的环稠合，其中该碳环和氧杂碳环为选自下列基团的一个或多个基团所取代：C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、OH、卤素、羧基、H和芳基；条件是：

1)当X选自

时，L是且，Z是2)如果X是

则L选自：和一单键3)如果X是且Z是：

则L是：

4)如果X是

且Z是

则L是：

5)如果X是：

则Z是

且L是

6)如果X是：则Z是：且L是

以上方法可以包括第二步即刺激BMP-2启动子活性来刺激成骨细胞的繁殖和骨的生长。估计骨吸收也会被降低或抑制。

药效基团模型：

本发明另一方面提供了一种选择药理活性化合物的方法。在部分实施例中，该方法包括：

选择具有确定空间三维结构如通式Ⅱ所定义的候选化合物，

W-L-Y

通式Ⅱ

提供具有确定空间结构的化合物，其中：

W含有一个具有以字母“A”表示的质心的芳香基；

Y含有一个具有以字母“B”表示的质心的碳环基团；

L含连接X和Z的基团；

W内的芳香基原子形成一个“P”平面；

质心“B”位于“P”平面以上或以下约0.7埃；

质心“A”和质心“B”相距约6或约6.6至约8或约8.5埃；和

选择具有药理活性的空间结构确定的化合物。

在有些实施例中，空间结构确定的候选化合物的三维结构可以进一步定义为：

据重原子距离测定，L占据着一个外限小于或等于约3埃或约3.1埃的空间，沿平面“P”的法相测定，位于平面“P”之上或之下并与之正交。

在另一实施方案中，据重原子距离测定，L占据着一个外限约4埃或约4.7至6.0埃的空间，与质心“A”和质心“B”的连线垂直并位于平面“P”内。

在本方法其它实施方案中，通式Ⅱ化合物定义为具有至少两个受氢键基团，位于L内或其附近，受氢键基团被进一步定义为：

1)受氢键基团相距约2或约2.3至约5或约5.4埃；

2)受氢键基团之一距质心“A”约4或约4.5埃至约7或约7.7埃，而距质心“B”约2或约2.7埃至约3或约3.8埃；而且

3)受氢键基团之一距质心“A”约2或约2.6至约3埃或约3.8埃，而距质心“B”约4或约4.6至约7或约6.9埃。

在有些实施方案中，所述方法进一步定义为，其中的通式Ⅱ化合物被定义为：

1)不是通式Ⅹ化合物

通式Ⅹ其中的R¹是H、OH、C1-C17烷氧基、(C1-C17)烷基羰基氧基、(C1-C17)烷基羰基氨基、或(C1-C17)烷基羰基；R₂是-(CH₂)_(1-6)-CH₂-杂环；R₃是H、OH、C1-C17烷氧基、(C1-C17)烷基羰基氧基、(C1-C17)烷基羰基氨基、或(C1-C17)烷基羰基；而且

2)不是通式Ⅺ化合物

通式Ⅺ

本发明还提供了使用通式Ⅱ定义的空间确定的分子来刺激BMP-2启动子活性、成骨细胞繁殖、肿瘤抑制、皮肤病或关节炎的方法。满足上述立构特征的候选物将利用本文所述试验，根据其具体所需的药理活性进行选择。

具有“A”质心的芳香环可以互不相干地被以下基团之一或多个取代：H、卤素、羟基、氨基、羧基、氰基、C1-C6烷基、C1-C2卤代烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烯基、-OC(=O)-(C1-C6烷基)和-NHC(=O)-(C1-C6烷基)。

此外，在具有单取代或多取代“A”质心的上述制剂的其它实施例中，具有“B”质心的碳环可以互不相干地被以下基团之一或多个取代：H、卤素、羟基、氨基、羧基、氰基、硝基、三氟甲基、C1-C6烷基、C1-C2卤代烷基、C1-C6烷氧基、硝基、三氟甲基、C1-C6烯基、芳基、杂芳基、-OC(=O)-(C1-C6烷基)和-NHC(=O)-(C1-C6烷基)。

苯并噻唑-成骨细胞繁殖的方法

本发明的另一方面包括用通式Ⅲ药理活性化合物刺激成骨细胞繁殖或BMP-2启动子活性的方法

通式Ⅲ其中，

R¹选自：芳基、萘基、杂芳基和环烷基；上述各R¹取代基被一个或多个以下基团取代：C1-C7烷基、C1-C7烷氧基、-NO₂、-CF₃、芳基、苄氧基、羟基、C1-C2卤代烷基、卤素、氰基、羧基、氢原子、芳基、(C1-C4)烷基羰基氨基、(C1-C4)烷基羰基、(C1-C4)烷基-芳基和-NH₂；

R²选自：H、C1-C4烷氧基、氨基或C1-C4烷基；

R³和R⁶互不相干地选自：H、羟基、(C1-C5)烷基羰基氧基、氰基、C1-C4烷基、C1-C4烯基和C1-C4烷氧基；

R⁴和R⁵互不相干地选自：H、卤素、羟基、(C1-C4)烷基-羰基氧基、氰基、C1-C2卤代烷基、C1-C4烷氧基、苯甲酰基、C1-C4烷基、C1-C4烯基、C1-C4炔基、(C1-C4)烷基-芳基、(C1-C4)烯基-芳基、(C1-C4)炔基-芳基、(C1-C4)烷基-(C6-C10)环烷基、(C1-C4)烯基-(C6-C10)环烷基、(C1-C4)炔基-(C6-C10)环烷基、羧基和(C1-C4)烷氧基羰基。

在本方法有些实施例中，通式Ⅲ的药理活性化合物进一步定义为：R⁴和R⁵共同连接成一个5至6元的碳环或氧杂碳环，该环与该两基团所连接的环稠合，其中的碳环或氧杂碳环被一个或多个以下基团取代：C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、羟基、卤素、羧基、氢原子和芳基。

本发明方法包括给含成骨细胞的细胞使用有效量的通式Ⅲ化合物。

在一具体实施方案中，本发明方法包括刺激BMP-2启动子活性，即给予2(2-甲氧基苯甲酰胺基)-1,3-苯并噻唑。本发明还具体说明了使用以上命名的化合物来刺激成骨细胞繁殖的方法。

苯并噻唑及其相关化合物

本发明的另一方面涉及作为药理活性制剂的通式Ⅲ苯并噻唑及其相关化合物。这些药理活性制剂可望用于刺激成骨细胞的繁殖，刺激BMP-2启动子活性，抑制或降低骨吸收和用于抑制肿瘤细胞。通式Ⅲ化合物如下：

通式Ⅲ其中，

R¹选自：芳基、萘基、杂芳基和环烷基；上述各取代基被一个或多个以下基团取代：C1-C7烷基、C1-C7烷氧基、-CF₃、-NO₂、苄氧基、羟基、C1-C2卤代烷基、卤素、氰基、羧基、氢原子、芳基、(C1-C4)烷基羰基氨基、(C1-C4)烷基羰基、(C1-C4)烷基-芳基和-NH₂；

R²选自：H、C1-C4烷氧基、氨基或C1-C4烷基；

R³和R⁶互不相干地选自：H、羟基、(C1-C2)烷基羰基氧基、氰基、C1-C4烷基、C1-C4烯基和C1-C4烷氧基；

在本发明其它实施方案中，上述化合物被进一步定义为：R⁴和R⁵共同连接成一个5至6元的碳环或氧杂碳环，该环与该两基团所连接的环稠合，其中的碳环或氧杂碳环被一个或多个以下基团取代：C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、羟基、卤素、羧基、氢原子和芳基；

条件是：

1)当R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶都是H时，R¹不能是苯基、萘基、取代方式如以下之一的单取代苯基：2-叠氮基、2-硝基、2-氯、2-溴、2-氟、2-羟基、2-羧基、2-(2-羧基-5-氯苯基)、2-(4’-乙酰基苯磺酸基)、2-(4’(氰基乙酰基)-苯磺酸基、2-(4’-乙氧基苯基)氨基、2-二(4’-羟基苯基)甲基、2-二(4’-乙酸基苯基)甲基、2-(2,3-羧基丙烯酰基)氨基、3-溴、3-氯、3-甲氧基、4-氯、4-溴、4-氟、4-甲基、4-硝基、4-甲氧基、4-乙氧基、4-正丙氧基、4-异丙氧基、4-正丁氧基、4-异丁氧基、4-正戊氧基、4-苄氧基、4-烯丙基氧基、4-乙酸基、4-(2’-二乙基氨基)乙氧基、4-氨基、4-二甲基氨基、4-胍基、4-硫代甲基、4-(4’-甲基苯磺酰基)氨基、4-(二乙基膦酰基)甲基、4-(二异丙基膦酰基)甲基、4-

n=5,6,8,10,14,

R是H或Me，

其中R’是苄基、2-苯基乙基、α萘基甲基、4-甲氧基苄基、3,4-二氯苄基或2-(3’,4’-二氯苯基)乙基，R”是H或Me，

R”’是2-氯苯基、2-氟苯基或3-氯苯基，

R””是苯基或2-吡啶基，

R””’选自：4-磺基苯基、3,6-二磺基苯基、4-甲氧基-3-磺基苯基、6-氯-3-磺基苯基或2,5-二氯-4-磺基苯基，R⁷是苄基或氢原子，

其中的R⁹是羟基，R¹⁰是

且R³选自：

其中R¹¹、R¹²、R¹³和R¹⁴都是H，或者R¹²和R¹⁴都是H且R¹¹和R¹³都是H、甲基、甲氧基或氯，或者R¹¹和R¹³都是H而R¹²和R¹⁴都是氯，R¹¹是甲基而R¹²、R¹³和R¹⁴都是H，其中R¹⁵是一化学键且R¹⁶是氢或氯，或者R¹⁵是4-偶氮苯基而R¹⁶是氯；R⁹是氢，R¹⁰是

且R⁸是

R¹¹和而R¹³都是氯，且R¹²和R¹⁴都是氢；或者，R⁹是羟基，R¹⁰是羟基，且R⁸是

R¹²和R¹⁴都是羟基，R¹¹和而R¹³都是甲基、甲氧基或氯，或者R¹¹和而R¹³都是氢而R¹²和R¹⁴都是氯，或者R¹²、R¹³和R¹⁴都是氢而R¹¹是甲基，或者R¹¹、R¹²和R¹⁴都是氢而R¹³是甲基；

R¹⁷选自：

R¹⁸是苯基或3-噻吩基，或

R¹⁹是一化学键或-CH=CH-；

2)当R³、R⁴、R⁵和R⁶都是H，且R²是苯基时，则R¹不能是苯基；

3)当R³、R⁴、R⁵和R⁶都是H，且R²是甲基时，则R¹不能是苯基；

4)当R³、R⁴、R⁵和R⁶都是H，且R²是氨基时，则R¹不能是4-甲氧基苯基；

5)如果R³、R⁴、R⁵和R⁶都是H，且R²是

则R¹不能是3-氯苯基；

6)如果R³、R⁴、R⁵和R⁶都是H，且R²是

则R¹不能是氯丙基；

7)当R³、R⁴、R⁵和R⁶都是H，且R²是2-(二甲基氨基)乙基或3-(二甲基氨基)丙基时，则R¹不能是苯基；

8)当R³、R⁴、R⁵和R⁶都是H，且R²是N,N’-二苯基脒基时，则R¹不能是苯基；

9)如果R³、R⁴、R⁵和R⁶都是H，且R²是

则R¹不能是2-呋喃基、2-噻唑基、4-甲氧基苯基、4-三氟甲基苯基、3,4-二甲氧基苯基；

10)当R³、R⁴、R⁵和R⁶都是H，且R²是苯基时，则R¹不能是

R²⁰是H、苯甲酰基或硝基，

11)如果R3、R⁴、R⁵和R⁶都是H，且R²是

则R¹不能是2-呋喃基或3-呋喃基；

12)当R²、R⁴、R⁵和R⁶都是H，且R³是甲氧基时，则R¹不能是：苯基、2-羧基苯基、4-胍基苯基、4-硝基苯基、3,5-二硝基苯基、4-(二苯基膦酰基甲基)苯基、4-(2’-二乙基膦酰基乙氧基)苯基、4-(3’-二乙基膦酰基丙氧基)苯基、4-(乙基膦酰基甲基)苯基、4-(乙基，甲基膦酰基甲基)苯基、4-(苄基，乙基膦酰基甲基)苯基、4-(乙基，异丙基膦酰基甲基)苯基、4-(二乙基膦酰基甲基)苯基、4-(二甲基膦酰基甲基)苯基、4-(二正丁基膦酰基甲基)苯基、

13)当R⁴、R⁵和R⁶都是H,R²是苄基或甲基，且R³是甲氧基时，R¹不能是4-(二乙基膦酰基甲基)苯基；

14)当R²、R⁴、R⁵和R⁶都是H，且R³是乙氧基时，R¹不能是苯基、4-正丁氧基苯基、4-异丙氧基苯基、4-甲氧基苯基或4-乙氧基苯基；

15)当R²、R⁴、R⁵和R⁶都是H，且R³是正丙氧基时，R¹不能是4-乙氧基苯基；

16)当R²、R⁴、R⁵和R⁶都是H，且R³是甲基时，R¹不能是苯基、4-胍基苯基、4-(二乙基膦酰基甲基)苯基、或

17)当R²、R⁴、R⁵和R⁶都是H，且R³是三氟甲基时，R¹不能是4-胍基苯基或2,6-二氟苯基；

18)当R²、R⁴、R⁵和R⁶都是H，且R³是硝基时，R¹不能是苯基或4-胍基苯基；

19)当R⁴、R⁵和R⁶都是H,R²是乙基，且R³是氯时，R¹不能是苯基；

20)当R²、R⁴、R⁵和R⁶都是H，且R³是氯时，R¹不能是4-(二乙基膦酰基甲基)苯基、苯基、3,5-二溴-2-羟基苯基或

21)当R²、R⁴、R⁵和R⁶都是H，且R³是三氟甲氧基时，R¹不能是4-(二乙基膦酰基甲基)苯基；

22)当R²、R³、R⁵和R⁶都是H，且R⁴是磺基时，R¹不能是

23)当R²、R³、R⁵和R⁶都是H，且R⁴是羧基时，R¹不能是

24)当R²、R³、R⁵和R⁶都是H，且R⁴是氨基甲酰基时，R¹不能是4-胍基苯基；

25)当R²、R³、R⁵和R⁶都是H，且R⁴是氟时，R¹不能是4-(胍基甲基)苯基或

26)当R²、R³、R⁵和R⁶都是H，且R⁴是氯时，R¹不能是苯基、4-氯苯基、

27)当R²、R³、R⁵和R⁶都是H，且R⁴是硝基时，R¹不能是苯基；

28)当R²、R³、R⁵和R⁶都是H，且R⁴是三氟甲基时，R¹不能是2,6-二氟苯基；

29)当R²、R³、R⁵和R⁶都是H，且R⁴是甲基时，R¹不能是苯基；

30)当R²、R³、R⁵和R⁶都是H，且R⁴是苯基时，R¹不能是

31)当R²、R³、R⁵和R⁶都是H，且R⁴是4-(三氟甲基)苯甲酰基时，R¹不能是2,6-二氟苯基或2-氯-6-氟苯基；

32)当R²、R³、R⁵和R⁶都是H，且R⁴是甲氧基时，R¹不能是苯基；

33)当R²、R³、R⁵和R⁶都是H，且R⁴是R₁不能是

34)当R²、R³、R⁵和R⁶都是H，且R⁴是乙氧基时，R¹不能是

35)当R²、R³、R⁴和R⁶都是H，且R⁵是氟时，R¹不能是苯基、2-氨基苯基、4-硝基苯基、4-(二乙基膦酰基甲基)苯基、或

36)当R²、R³、R⁴和R⁶都是H，且R⁵是氯时，R¹不能是苯基、2-氨基苯基、4-氨基苯基、2-氟苯基、2,6-二氟苯基、4-硝基苯基、3,5-二硝基苯基、4-胍基苯基、4-(胍基甲基)苯基、

37)当R²、R³、R⁴和R⁶都是H，且R⁵是溴时，R¹不能是苯基、4-甲氧基苯基、4-乙氧基苯基、4-正丁氧基苯基、4-异丁氧基苯基、4-正丙氧基苯基、4-异丙氧基苯基、4-硝基苯基、4-胍基苯基、4-(二乙基膦酰基甲基)苯基、或

38)当R²、R³、R⁴和R⁶都是H，且R⁵是碘时，R¹不能是苯基或4-硝基苯基；

39)当R²、R³、R⁴和R⁶都是H，且R⁵是氨基时，R¹不能是4-胍基苯基；

40)当R²、R³、R⁴和R⁶都是H，且R⁵是乙酰氨基时，R¹不能是苯基；

41)当R²、R³、R⁴和R⁶都是H，且R⁵是二乙基氨基时，R¹不能是苯基；

42)当R²、R³、R⁴和R⁶都是H，且R⁵是硝基时，R¹不能是苯基、4-硝基苯基、4-甲氧基苯基、4-乙氧基苯基、4-正丁氧基苯基、4-胍基苯基、4-(胍基甲基)苯基、3-(胍基甲基)苯基、4-(二乙基膦酰基甲基)苯基、3,5-二硝基苯基、

43)当R²、R³、R⁴和R⁶都是H，且R⁵是羧基时，R¹不能是苯基；

44)当R²、R³、R⁴和R⁶都是H，且R⁵是氨基甲酰基时，R¹不能是4-胍基苯基、4-(二乙基膦酰基甲基)苯基、或4-(胍基甲基)苯基；

45)当R²、R³、R⁴和R⁶都是H，且R⁵是氰基时，R¹不能是4-胍基苯基或

46)当R²、R³、R⁴和R⁶都是H，且R⁵是乙酯基甲氧基时，R¹不能是4-(二乙基膦酰基甲基)苯基；

47)当R²、R³、R⁴和R⁶都是H，且R⁵是乙酯基时，R¹不能是4-(二乙基膦酰基甲基)苯基；

48)当R²、R³、R⁴和R⁶都是H，且R⁵是2-羟基乙基时，R¹不能是4-胍基苯基；

49)当R²、R³、R⁵和R⁶都是H，且R⁵是甲基时，R¹不能是苯基、4-氯苯基、4-甲基苯基、4-甲氧基苯基、4-胍基苯基、4-(二乙基膦酰基甲基)苯基、4-羟基3-碘-5-硝基苯基、

50)当R²、R³、R⁴和R⁶都是H，且R⁵是正丁基时，R¹不能是4-胍基苯基；

51)当R²、R³、R⁴和R⁶都是H，且R⁵是硫代甲基时，R¹不能是4-胍基苯基或4-(二乙基膦酰基甲基)苯基；

52)当R²、R³、R⁴和R⁶都是H，且R⁵是甲基亚硫酰基时，R¹不能是4-胍基苯基；

53)当R²、R³、R⁴和R⁶都是H，且R⁵是甲基磺酰基时，R¹不能是4-胍基苯基；

54)当R²、R³、R⁴和R⁶都是H，且R⁵是氨磺酰基时，R¹不能是苯基、4-胍基苯基或3,5-二硝基苯基；

55)当R³、R⁴和R⁶都是H,R²是苯基，且R⁵是磺基时，R¹不能是

56)当R²、R³、R⁴和R⁶都是H，且R⁵是SCH₂CF₃时，R¹不能是2,6-二氟苯基；

57)当R²、R³、R⁴和R⁶都是H，且R⁵是SOCF₃时，R¹不能是2,6-二氟苯基；

58)当R²、R³、R⁴和R⁶都是H，且R⁵是SCF₃时，R¹不能是2,6-二氟苯基或2-氯苯基；

59)当R²、R³、R⁴和R⁶都是H，且R⁵是异丙基时，R¹不能是4-胍基苯基；

60)当R²、R³、R⁴和R⁶都是H，且R⁵是三氟甲基时，R¹不能是4-胍基苯基、4-(二乙基膦酰基甲基)苯基、4-(胍基甲基)苯基、2-氟苯基、2-甲基苯基、2-氯-6-氟苯基、2-氯苯基或2,6-二氟苯基；

61)当R²、R³、R⁴和R⁶都是H，且R⁵是三氟甲氧基时，R¹不能是2-三氟甲基苯基、2-甲氧基苯基、2-溴苯基、2-氯苯基、2-甲基苯基、2-氯-6-氟苯基、2,4-二氯苯基、2,6-二氟苯基或3,5-二氯苯基；

62)当R²、R³、R⁴和R⁶都是H，且R⁵是OCHF₂时，R¹不能是2,6-二氟苯基；

63)当R²、R³、R⁴和R⁶都是H，且R⁵是OCF₂CHF₂时，R¹不能是2,6-二氟苯基；

64)当R²、R³、R⁴和R⁶都是H，且R⁵是OCF₂CHFCF₃时，R¹不能是2-氯苯基或2,6-二氟苯基；

65)当R²、R³、R⁴和R⁶都是H，且R⁵是2-氯-4-(三氟甲氧基)苯氧基时，R¹不能是2-氯苯基、2,6-二氟苯基或2-氯-6-氟苯基；

66)当R²、R³、R⁴和R⁶都是H，且R⁵是2,3,4,5-四溴-6-氰基苯甲酰氨基时，R¹不能是2,3,4,5-四溴-6-氰基苯基；

67)当R²、R³、R⁴和R⁶都是H，且R⁵是甲氧基时，R¹不能是苯基、4-甲氧基苯基、4-乙氧基苯基、4-正丙氧基苯基、4-异丙氧基苯基、4-正丁氧基苯基、4-异丁氧基苯基、4-正戊氧基苯基、4-(3-甲基丁氧基)苯基、4-甲基苯基、4-氯苯基、3,4-二氨基苯基、4-氨基-3-硝基苯基、4-乙酰氨基-3-硝基苯基、2-氟苯基、4-(二乙基膦酰基甲基)-苯基、

68)当R²、R³、R⁴和R⁶都是H，且R⁵是正丙氧基时，R¹不能是苯基、4-甲氧基苯基、4-乙氧基苯基、4-正丙氧基苯基、4-异丙氧基苯基、4-正丁氧基苯基；

69)当R²、R³、R⁴和R⁶都是H，且R⁵是乙氧基时，R¹不能是苯基、4-羟基苯基、4-甲氧基苯基、4-乙氧基苯基、4-正丙氧基苯基、4-异丙氧基苯基、4-正丁氧基苯基、4-异丁氧基苯基、2-氟苯基、4-胍基苯基、4-(二乙基膦酰基甲基)苯基、2-(二-(4′-羟基苯基)甲基)苯基、

70)当R²、R³、R⁴和R⁶都是H，且R⁵是异丙氧基时，R¹不能是苯基、4-甲氧基苯基或4-乙氧基苯基；

71)当R²、R³、R⁴和R⁶都是H，且R⁵是正丁氧基时，R¹不能是苯基、4-甲氧基苯基、4-乙氧基苯基或4-正丁氧基苯基；

72)当R²、R³、R⁴和R⁶都是H，且R⁵是异丁氧基时，R¹不能是4-甲氧基苯基；

73)当R²、R³、R⁴和R⁶都是H，且R⁵是苄氧基时，R¹不能是4-(二乙基膦酰基甲基)苯基；

74)当R²、R³、R⁴和R⁶都是H，且R⁵是苯基时，R¹不能是3-(胍基甲基)苯基、4-(胍基甲基)苯基、2,6-二氟苯基、R是氢原子、甲基、乙基、正丙基或异丙基；

75)当R²、R³、R⁴和R⁶都是H，且R⁵是4-氟苯基时，R¹不能是

76)当R²、R³、R⁴和R⁶都是H，且R⁵是苯偶氮基时，R¹不能是苯基；

77)当R²、R³、R⁴和R⁵都是H，且R⁶是硝基时，R¹不能是苯基；

78)当R²、R³、R⁴和R⁵都是H，且R⁶是苯基时，R¹不能是

79)当R²、R³和R⁴都是H,R⁵是2-氯-4-(三氟甲基)苯氧基，且R⁶是甲基或氢原子时，R¹不能是2-氯苯基、2-氯-6-氟苯基、或2,6-二氟苯基；

80)当R²、R⁴和R⁵都是H，且R³是甲基且R⁵是SCH₂CO2Et时，R¹不能是4-氰基苯基；

81)当R²、R³和R⁶都是H，且R⁴和R⁵都是Me时，R¹不能是4-胍基苯基、2-羟基苯基、4-(二乙氧基膦酰基甲基)苯基、

其中，R是Cl或Me,R’是H或OH；

82)当R²、R⁵和R⁶都是H，且R³和R⁴都是-CH=CH-CH=CH-时，R¹不能是苯基、4-(3’-(二乙基膦酰基)丙氧基)苯基、4-(二乙基膦酰基甲基)苯基、4-甲基苯基、4-硝基苯基、4-氯苯基、

83)当R²、R³和R⁶都是H，且R⁴和R⁵都是甲酯基时，R¹不能是

84)当R²、R⁴和R⁶都是H,R³是甲氧基，且R⁵是苯基时，R¹不能是

85)当R²、R³和R⁶都是H，且R⁴和R⁵都是甲氧基时，R¹不能是

86)当R²、R³和R⁶都是H,R⁴是氯，且R⁵是硝基时，R¹不能是

87)当R²、R⁴和R⁶都是H,R³是苯甲酰基，且R⁵是氯时，R¹不能是4-(二乙基膦酰基甲基)苯基；

88)当R²、R⁴和R⁶都是H,R³是苯基，R⁵是溴时，R¹不能是4-(二乙基膦酰基甲基)苯基；

89)当R²、R³和R⁴都是H，且R⁵和R⁶都是-CH=CH-CH=CH-时，R¹不能是2-羟基苯基、

90)当R²、R³和R⁴都是H，且R⁵和R⁶都是-CO-CH=C(Ph)-O-时，R¹不能是苯基、4-甲基苯基、4-氯苯基或4-甲氧基苯基；

91)当R²、R³和R⁴都是H，且R⁵和R⁶都是-S-C(NHCOPh)=N-时，R¹不能是苯基；

92)当R²、R³和R⁵都是H，且R⁴和R⁵都是-CH=CH-CH=CH-时，R¹不能是苯基；

93)当R²、R³和R⁵都是H，且R⁴和R⁵都是-OCF₂CF₂O-时，R¹不能是2-氯苯基或2,6-二氟苯基；

94)当R²、R³和R⁴都是H，且R⁵和R⁶都是-OCF₂CF₂O-时，R¹不能是2-氯苯基或2,6-二氟苯基；

95)当R²、R⁴和R⁶都是H，且R³和R⁵都是氯时，R¹不能是苯基或4-硝基苯基；

96)当R²、R⁴和R⁶都是H，且R³和R⁵都是溴时，R¹不能是苯基或4-硝基苯基；

97)当R²、R⁴和R⁶都是H，且R³和R⁵都是甲氧基时，R¹不能是4-(二乙基膦酰基甲基)苯基；

98)当R²、R⁴和R⁶都是H,R³是甲氧基，且R⁵是硝基时，R¹不能是4-胍基苯基、4-(胍基甲基)苯基；

99)当R²、R⁴和R⁶都是H，R³是COCH₃，且R⁵是溴时，R¹不能是4-(二乙基膦酰基甲基)苯基；

100)当R²、R⁴和R⁵都是H,R³是甲氧基，且R⁶是氯时，R¹不能是4-胍基苯基；

101)当R²、R³和R⁶都是H,R⁴是氟，且R⁵是硫代氰基时，R¹不能是苯基或4-硝基苯基；

102)当R²、R³和R⁶都是H,R⁴是氯，且R⁵是甲氧基时，R¹不能是4-(二乙基膦酰基甲基)苯基；

103)当R²和R³都是H，且R⁴、R⁵和R⁶都是溴时，R¹不能是苯基或4-硝基苯基；

104)当R²和R³都是H，且R⁴、R⁵和R⁶都是甲氧基时，R¹不能是苯基；

105)当R²和R³都是H,R⁴和R⁶都是氯，且R⁵是苯氧基时，R¹不能是2-氯苯基或2,6-二氟苯基；

106)当R²和R³都是H,R⁴和R⁶都是氯，且R⁵是4-(三氟甲基)苯氧基时，R¹不能是2,6-二氟苯基；

107)如果R²和R⁴都是H,R⁴和R⁶都是氯，且R⁵是

R¹不能是2-氯苯基或2,6-二氟苯基；

108)当R²和R³都是H,R⁴和R⁶都是氯，且R⁵是4-(三氟甲基硫)苯氧基时，R¹不能是2-氯苯基或2,6-二氟苯基；

109)当R²和R³都是H,R⁴和R⁶都是氯，且R⁵是4-(氯)苯氧基时，R¹不能是2-氯苯基、2-甲基苯基、2-氯-6-氟苯基、2-氯-3-吡啶基或2,6-二氟苯基；

110)当R²和R³都是H,R⁴和R⁶都是氯，且R⁵是(2-氯-4-三氟甲基)苯氧基时，R¹不能是2,6-二氟苯基；

111)如果R²和R³都是H,R⁴和R⁶都是氯，且R⁵是

R¹不能是2,6-二氟苯基；

112)当R²和R³都是H，R⁴和R⁶都是氯，且R⁵是2,4-二氯苯氧基时，R¹不能是2-氯苯基、或2,6-二氟苯基；

113)当R²和R³都是H,R⁴和R⁶都是氯，且R⁵是4-三氟甲基苯氧基时，R¹不能是2-氯苯基、或2,6-二氟苯基；

114)如果R²和R³都是H,R⁴和R⁶都是氯，且R⁵是

R¹不能是2-氯苯基；

115)如果R²和R³都是H,R⁴和R⁶都是氯，且R⁵是

R¹不能是2,6-二氟苯基；

116)当R²和R³都是H,R⁴和R⁶都是氯，且R⁵是氟时，R¹不能是2,6-二氟苯基；

117)当R²和R³都是H,R⁴、R³和R⁶都是氯时，R¹不能是4-硝基苯基或苯基；

118)当R²和R³都是H,R⁴和R⁶都是氯，且R⁵是OCF₂CF₂H时，R¹不能是2-氯苯基或2,6-二氟苯基；

119)当R²和R³都是H,R⁴和R⁶都是氯，且R⁵是甲氧基时，R¹不能是氨磺酰基苯基；

120)当R²和R³都是H,R⁴和R⁶都是氯，且R⁵是乙氧基时，R¹不能是2,6-二氟苯基；

121)当R²和R³都是H,R⁴和R⁶都是氯，且R⁵是二甲基氨基时，R¹不能是2-氯苯基或2,6-二氟苯基；

122)当R²和R³都是H,R⁴和R⁶都是氯，且R⁵是SCH₂CF₃时，R²不能是2,6-二氟苯基；

123)当R²和R⁶都是H,R³和R⁴都是-CH=CH-CH=CH-，且R⁵是硝基时，R¹不能是苯基或4-氯苯基；

124)当R²和R⁴都是H,R³是COCH₃，且R⁵和R⁶都是甲氧基时，R¹不能是4-(二乙基膦酰基甲基)苯基；

125)当R²是H,R³、R⁴和R⁶都是甲基，且R⁵是羟基时，R¹不能是苯基、4-羧基苯基或4-氨磺酰基苯基；

126)当R²是H,R³、R⁴和R⁶都是甲基，且R⁵是甲氧基时，R¹不能是4-氨磺酰基苯基；

除非另作说明，全部化学试剂均购自Aldrich Chemical(Milwaukee,WI)；

实施例1

刺激骨生长的化合物的鉴定技术

该技术可参见科技文献(Ghosh-Choudhury,N.；Windle,J；J.；Koop,B.A.；Harris,M.A.；Guerrero,D.L.；Wozney,J.M.；Mundy,G.R.；Harris,S.E.；“来自表达BMP-2-T-抗原的转基因小鼠的无限繁殖成骨细胞”(“Immortalized MurineOsteoblasts Derived from BMP-2-T-Antigen Expressing Transgeic Mice”)Endocrinology(1996)137,331-339)。本文具体参考了这些技术。该方法可以单独用于鉴定或选择一具有药理活性的候选化合物库，所述药理活性即促进、刺激或维持成骨细胞的生长，或者与用来选择空间结构确定的分子和候选物质的技术合用，所述分子和候选物质具有成骨细胞繁殖活性。

从转基因小鼠的颅骨分离得含有骨成形蛋白2(BMP-2)启动子片段的无限繁殖小鼠成骨细胞(2T3细胞)并克隆。这些细胞可以再克隆，并可以被BMP-2启动子荧光素酶结构体稳定转染。然后，BMP-2启动子活性可以被重组人BMP-2(rhBMP-2)或刺激成骨细胞繁殖的化合物所激活。以此BMP-2启动子试验作为附加筛选技术，可以进一步评价刺激荧光素酶活性的化合物的ED₅₀，并通过推断，可评价成骨细胞繁殖的ED₅₀。本领域众所周知的其它体外评价筛选出的候选化合物活性的细胞试验可以取代上述启动子试验，和进一步测定化合物刺激成骨细胞繁殖的药理活性。例如，可以使用成骨细胞的培养物。

在10厘米的塑料组织培养皿中，用10微克含受-2736/114bp的BMP-2启动子驱动的荧光素酶报道基因的质粒和1微克用于G418-抗性克隆选择的pSV2neo质粒稳定转染2T3细胞。转染通过磷酸钙沉淀技术来进行。用含7％FCS和200微克/毫升G418的MEM产生稳定的克隆细胞系。可在15个不同的克隆细胞系内测量荧光素酶活性。在此选用细胞系(2T3-BMP-2-LUC)，因为已证明，用它进行试验，传代20次以上仍几乎没有变异。作为对照细胞系，如上所述建立一稳定细胞系(2T3-basicLUC)，但用没有启动子的荧光素酶载体即pGL2basic(PromegaCorp.,Madison,WI)取代BMP-2启动子荧光素酶质粒。两细胞系在35毫米的组织培养皿上铺平板培养，并用含0、2、5、10和20纳克/毫升rhBMP-2在含2％FCS的MEM中处理48小时。每一浓度的rhBMP-2进行三份试验，每次试验重复3次。用购自Promega试剂盒和发光计来测定荧光素酶活性。

实施例2

多克2-(2-甲氧基苯甲酰基氨基)苯并噻唑的生产

本实施例提供了获得苯并噻唑的一种方法。但是，在实施本发明时也可以使用其它方法。在冰浴中冷却4.5g 2-氨基苯并噻唑在40ml二氯甲烷和10ml吡啶中所成的溶液。在此低温溶液中缓慢加入2-甲氧基苯甲酰氯的10ml二氯甲烷溶液。所得的混合物搅拌3小时，同时冰浴缓慢升温至室温。反应混合物用200ml乙酸乙酯稀释并用1N HCl(2×50ml)，饱和NaHCO₃(1×40ml)，和饱和NaCl(1×50ml)洗涤。在用Na₂SO₄干燥后，过滤含粗产物的溶液并蒸发至干。所得的8.0g白色固体在乙酸乙酯中重结晶得4.0g 2-(2-甲氧基苯甲酰基氨基)苯并噻唑白色晶体，mp.196-197℃，此为首批产物。

可以使用其它本领域众所周知的合成技术，例如Kamala等(Indian J.Chem.(1983),22B,1194-96)和参考文献表中所述的那些，本文引用和参考了其全部内容。

实施例3

药理活性化合物的一般评价方法-抗肿瘤活性细胞培养

鼠B16黑素瘤细胞系培养在补充了10％热灭活胎牛血清、2mM L-谷氨酰胺、50单位/ml青霉素、50μg/ml链霉素、25μg/ml艮他霉素、0.75％碳酸氢钠、10mM HEPES缓冲液(pH7.4)和0.06mg/ml抗PPLOD的RPMI 1640培养基中。将鼠P388白血病细胞系和人HT-29结肠腺癌细胞系维持在补充了10％热灭活胎牛血清的RPMI 1640培养基中。P388/CPT(抗喜树碱细胞系)维持在补充了20％热灭活胎牛血清、10μM β-巯基乙醇、10MM L-谷氨酰胺、100IU/ml青霉素、100IU/ml链霉素、50μg/ml艮他霉素的RPMI 1640培养基中。MCF-7M人乳腺癌细胞维持在补充了5％未热灭活胎牛血清和1nM胰岛素的IMEM培养基中。

体外生长抑制活性

在首日将0.1ml培养基中的指数期生长细胞(1-2×10³细胞，除非另作说明)接种到96格微滴板上。在第一天，在两格中同样加入含标定浓度待测类似物的培养基。在37℃于潮湿的培养箱内孵育3天(P388,P388/CPT,B16)或6天(HT-29,MCF-7M)后，微滴板略作离心并去除100μl生长培养基。细胞培养物与50μl 3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基-四唑鎓溴(MTT,1mg/ml的Dulbecco磷酸盐缓冲液溶液(PBS))在37℃孵育4小时。所得的紫色甲沉淀重溶在200μl的0.04N HCl异丙醇溶液中。在BioRad3550型微滴板读数仪中，在570nm的测试波长和630nm的参照波长测定吸光度。将吸光度输入PC486计算机。由计算机程序(EZ-ED50)确定IC₅₀值，该程序将所有数据归入以下四参数逻辑方程：

Y = \frac{A_{\max} - A_{\min}}{{[1 + (X / {IC}_{50})]}^{2}} + A_{\min}

其中A_max是对照细胞的吸光度，A_min是化合物浓度最高时细胞的吸光度，Y是测得的吸光度，X是化合物的浓度，IC₅₀是与对照细胞相比抑制细胞生长50％的化合物浓度(根据吸光度)，n是曲线的斜率。

实施例4

由蒽酮合成药理活性化合物

本实施例说明了一种由蒽酮合成药理活性化合物的方法，经BMP-2启动子活性试验测定，该化合物具有降低的药理活性。圆底烧瓶与回流冷凝器(与装有氯化钙的干燥管固接)连接，其中含6.9克4-异丙氧基苯甲酸(购自Aldrich)，向其中加入20ml亚硫酰氯。所得的混合物加热回流30分钟，减压去除过量的亚硫酰氯。所剩的液体与20ml刚蒸馏得的苯混合，并滴加2.79ml二乙胺。再加入20ml苯，所得的混合物加热回流1小时。冷却至室温后，用乙酸乙酯稀释反应混合物，用1％HCl(2×50ml),5％NaOH(3×50ml),1％HCl(2×50ml),5％NaOH(1×50ml)，和盐水(1×50ml)洗涤。所得的有机溶液用MgSO₄干燥，过滤，蒸发得到6.22g无色油状的N,N-二乙基-4-异丙氧基苯甲酰胺。在氩气氛下，将该物质和TMEDA(4.8ml)的THF溶液在圆底烧瓶中冷却至-78℃，并缓慢加入s-BuLi的己烷溶液(30.5ml,1.3M)。反应混合物在-78℃再搅拌1小时，然后加入刚蒸馏的苯甲醛(3.58g)的THF低温(-78℃)溶液。任反应混合物用12小时缓慢升温至室温。用饱和NH₄Cl(50ml)和1％HCl(20ml)处理反应混合物，并用乙酸乙酯(3×50ml)萃取。合并后的有机层用由等体积的饱和NH₄Cl和1％HCl制得的溶液(1×50ml)和盐水(3×50ml)洗涤。有机层用NaSO₄干燥，过滤和蒸发。残留物溶解在200ml甲苯中，并加入1g TsOH。反应混合物加热回流20小时。冷却至室温后，反应混合物用乙酸乙酯(200ml)稀释，用5％K₂CO₃(3×50ml),1％HCl(2×50ml)，饱和NH₄Cl(1×50ml)和盐水(2×50ml)洗涤。有机层用MgSO₄干燥，过滤和蒸发。残留物经乙酸乙酯/己烷重结晶得5.0g无色针状内酯：¹H NMR(CDCl₃)δ1.27(d,J=7.8Hz,6H),4.56(hept,J=7.8Hz,1H),6.26(s,1H),6.67(s,1H),6.95(d,J=10.8Hz,1H),7.25(m,5H),7.79(d,J=10.8Hz,1H)。将该物质溶解在乙酸中，并用500mg碳上的10％Pd在氢气下反应。反应混合物加热至85℃维持2小时。冷却至室温后，过滤去除催化剂，并蒸发去除溶剂。将残留物溶解在甲苯(50ml)中，然后蒸发去除溶剂。将残留物溶解在氯仿(25ml)中，并与三氟乙酸酐(2.5ml)在室温下反应过夜。去除溶剂，产物经乙酸乙酯重结晶得2.27g 3-异丙氧基蒽酮白色晶体，mp.123-124℃。¹H NMR(CDCl₃)δ1.29(d,J=7.8Hz,6H),4.42(s,2H),4.53(hept,J=7.8Hz,1H),6.63(d,J=3.4Hz),6.73(dd,J=3.4,10.8Hz,1H),7.20(m,4H),8.04(d,J=10.8Hz,1H),¹³C NMR(CDCl₃)δ21.86,39.93,69.90,112.50,118.72,119.93,125.93,128.30,128.41,129.08,134.36,140.64,161.66,172.45,193.78；HRMS(CI)MH⁺(C₁₇H₁₇O₂)测得值253.1208,计算值。氧蒽酮可用三种不同的方法转化成药理活性更高的物质：

方法1：将该晶体物质放在小玻璃瓶中，将小瓶放在250℃的热板上加热1至10分钟。

方法2：将3-异丙氧基蒽酮溶解在甲苯中，在密封试管中于310℃油浴加热14小时。蒸发去除溶剂后得到活性物质。

方法3：159mg 3-异丙氧基蒽酮的乙酸(25ml)溶液与三氧化铬(180mg)在室温下反应。20小时后，减压去除乙酸，残留物用乙酸乙酯萃取。有机溶液用5％Na₂CO₃(2×30ml)和盐水(2×30ml)洗涤，然后用MgSO₄干燥。经过滤和蒸发得到的残留物经层析(SiO₂,8∶1的己烷/乙酸乙酯)以获得经薄层层析(SiO₂,3∶1的己烷/乙酸乙酯R_f～0.6)鉴定主要含一个斑点的流份。

实施例5

细胞分化试验

本方法用来选择用于刺激成骨细胞繁殖和富集成骨细胞群的具有确定空间结构的候选化合物。Eckhardt,S.G.；Dai,A；Davidson,K.K.；Fpresth,B.J.；’Wahl,G.M.；Von Hoff,D.D.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA.(1994),91,6674-6678，本文参考了此文有关繁殖试验的细节。

HL60前髓白血病细胞培养在含10％胎牛血清和2mM谷氨酰胺的RPMI1640培养基中。在首日，在各份培养物中加入所示浓度的各种候选化合物，并在每次细胞传代后更换。将全部细胞传代，以维持＜2×10⁶细胞/ml的密度。利用成熟髓细胞的功能试验评价分化作用。为了进行氮蓝四唑还原反应，将300,000细胞悬浮在0.2ml补充了10％胎牛血清的RPMI1640培养基中，并与等体积的氮蓝四唑(Sigma)和50ng刚稀释的佛波醇12-肉豆蔻酸酯13乙酸酯(Sigma)在37℃孵育20分钟。制备cytospin玻片，计数至少500个细胞，并就活性进行校正，由此计算含有胞内还原蓝-黑甲沉淀的细胞的百分比。

实施例6

视黄酸置换试验

该方法与Eyrolles,L.；Kagechika,H.；Kawachi,E.；Fukasawa,H.；Iijima,T.；Matsushima,Y.Hashimoto,Y.；Shudo,K.在J.Med.Chem.(1994),37,1508-1517中所述的相同，本文引用并参考了所述文献。用于本试验的细胞可以与用于实施例1的相同，或者是其它合适的细胞系。该方法可以用作选择本发明具有确定化学结构的分子或本发明具有确定空间结构的分子时的附加筛选步骤，所述分子具有结合生物受体(例如激素核内受体)的药理活性。

将沉淀并溶解的COS-1细胞用缓冲液(0.3M KCl,20mM Tris-HCl,pH8.0,1.5mM EDTA,1mM PMSF,1μg/ml胃酶抑素，0.1mg/ml杆菌肽，0.1mM亮抑酶肽和0.1mg/ml抑蛋白酶肽)稀释，调节至约1-2mg/ml。上清液用Teflon-玻璃匀浆仪均质化，并于4℃以100000g离心。将上清液用于置换试验。上清液在6nM[3H]-顺视黄酸(Amersham)和各种浓度配体存在下，在4℃避光孵育16小时。将孵育混合物吸附到硝基纤维素薄膜上。该薄膜用洗涤缓冲液(20mM Tris-HCl,pH8.0,0.15M NaCl)洗涤3次，然后用25％的乙醇蒸馏水溶液洗涤。用液体闪烁计数法测定留在薄膜上的放射性。

实施例7

骨生长的测定

该方法用来选择可望用于促进骨生长的具有确定空间和/或化学结构的分子。

矿化/骨生长试验

用含7％FCS的1.0ml MEM将2T3细胞以10,000细胞/格的密度平板培养在一24格组织培养板(直径1.5cm/格)上。任其生长至铺满培养板(首日)，然后将培养基换成分化培养基(MEM含7％FCS,100mg/ml抗坏血酸和5mM β甘油磷酸酯)。加入不同浓度的重组人BMP-2(rhBMP-2)和/或1,25-二羟基维生素D3(1,25-(OH)2D3)，每一浓度加3格。每2至3天更换一次培养基。在不同时刻(第4、9、12、16等日)用10％福尔马林固定培养板20分钟，先用蒸馏水洗涤再用乙醇洗涤，然后自然吹干。培养板然后用Van Giesen染剂(基质-胶原)和Von Kossa染剂(矿物质)染色。然后用JAVA造影分析软件(Jandel Scientific,Corte Madera,CA)，定量矿化的骨结(bone nodule)，以测定平均矿化骨结面积，每平方厘米矿化骨结总数和每平方厘米矿化骨结总面积。

2T3骨细胞分化期间多层生长的定量

如上所述制作一式两份24格培养板。如前所述，在不同时刻测定相同三格内的细胞数。用PBS洗涤细胞层，细胞然后用0.1-0.5ml 0.05％胰蛋白酶-25mMEDTA(GIBCO,Gaithershburg,MD)在37℃培养10至40分钟(直至可目测到格中细胞的集拢)。然后加入等体积的FCS，用一1.0ml自动吸液器经25次上下振荡将细胞分散成单细胞悬液。然后用血细胞计数器测定细胞数量。

实施例8

3-苯甲酰氨基喹啉化合物的制备

该方法用来制备多种通式Ⅳ化合物，如表1所示。简而言之，在碱催化剂或酸净化剂(如吡啶)存在下，在合适的有机溶剂中，3-氨基喹啉与特定的苯甲酸衍生物或类似物的活化体反应。根据反应条件，使用合适的分离程序。

例如，3-氨基喹啉(40mg,0.28mmol)的二氯甲烷(1.0ml)溶液与吡啶(25μl)充分混合。然后，加入略微过量的苯甲酰氯，在25℃搅拌反应30分钟，以可接受的得率形成缩合产物3-苯甲酰氨基喹啉。

表1概括了根据该实施例制备的部分通式Ⅳ化合物。反应得率根据0.56mmol的3-氨基喹啉计算。这些化合物是本发明化合物和合成方法的示例，不应由此限定本发明的范围。

表1

通式Ⅳ

就表1所列的化合物而言，R¹、R²、R³、R⁴、R⁵和R⁶都是H。其它取代基如下所示。同时列出各化合物的得率。

化合物	R⁸	R⁹	R¹⁰	R¹¹	R¹²	得率(％)
化合物	R⁸	R⁹	R¹⁰	R¹¹	R¹²	得率(％)	A1	-OMe	H	H	H	H	20
B1	H	H	苯基	H	H	85	A1	-OMe	H	H	H	H	20
B1	H	H	苯基	H	H	85	C1	H	-CF₃	H	-CF₃	H	78
D1	H	H	-n-Bu	H	H	49	C1	H	-CF₃	H	-CF₃	H	78
D1	H	H	-n-Bu	H	H	49	E1	H	H	Cl	H	H	93
F1	H	H	-CH₂Cl	H	H	91	E1	H	H	Cl	H	H	93
F1	H	H	-CH₂Cl	H	H	91	G1	H	-CH₂Cl	H	H	H	42
H1	H	-OMe	H	H	H	91	G1	H	-CH₂Cl	H	H	H	42
H1	H	-OMe	H	H	H	91	I1	H	H	-Et	H	H	32
J1	H	-NO₂	H	H	H	99	I1	H	H	-Et	H	H	32
J1	H	-NO₂	H	H	H	99	K1	H	H	-NO₂	H	H	97
L1	H	H	-C₅H₁₁	H	H	18	K1	H	H	-NO₂	H	H	97
L1	H	H	-C₅H₁₁	H	H	18	M1	H	H	-n-Pr	H	H	65
N1	H	-Me	H	H	H	80	M1	H	H	-n-Pr	H	H	65
N1	H	-Me	H	H	H	80	O1	-CF₃	H	H	H	H	78
P1	H	-CF₃	H	H	H	63	O1	-CF₃	H	H	H	H	78
P1	H	-CF₃	H	H	H	63	Q1	H	-OMe	-OMe	-OMe	H	93
R1	H	-CN	H	H	H	86	Q1	H	-OMe	-OMe	-OMe	H	93
R1	H	-CN	H	H	H	86	S1	H	H	-CN	H	H	99
T1	H	Cl	Cl	H	H	97	S1	H	H	-CN	H	H	99
T1	H	Cl	Cl	H	H	97	U1	H	F	H	H	H	94
V1	H	H	F	H	H	87	U1	H	F	H	H	H	94
V1	H	H	F	H	H	87	W1	H	F	F	H	H	98
X1	H	F	H	H	H	96	W1	H	F	F	H	H	98
X1	H	F	H	H	H	96	Y1	-OMe	H	-OMe	H	H	72
Z1	H	-OMe	-OMe	H	H	63	Y1	-OMe	H	-OMe	H	H	72

实施例9

2-苯甲酰氨基-1,3-苯并噻唑化合物的制备

以下通用方法可用来制备通式Ⅴ的2-苯甲酰氨基-1,3-苯并噻唑化合物，如表2所示。简而言之，在碱催化剂或诸如吡啶的酸净化剂存在下，2-氨基-1,3-苯并噻唑与特定的碳环酸氯反应。分离得到的2-苯甲酰氨基-1,3-苯并噻唑目标化合物可以是游离碱或酰氨基氮原子的碱金属盐。

方法A：

2-氨基-1,3-苯并噻唑(700mg,4.7mmol)在二氯甲烷(20ml)和吡啶(800μl)中所成的溶液与2,4-二甲氧基苯甲酰氯在25℃搅拌反应30分钟。此后，用HCl(10ml5重量％)处理，过滤收集生成的沉淀。固体经甲醇重结晶得无色针状的2-(2,4-二甲氧基苯甲酰氨基)-1,3-苯并噻唑。(1.185mg，得率80％)。

方法B：碱金属盐形式

2-氨基-1,3-苯并噻唑(40mg,0.27mmol)在二氯甲烷(1ml)和吡啶(100μl)中所成的溶液与4-正丁基苯甲酰氯在25℃搅拌反应30分钟。此后，用NaOH(0.5ml,5.0M)处理，所成的混合物搅拌通宵。过滤收集所成的沉淀，在水中重结晶得浅黄色针状的2-(4-正丁基苯甲酰氨基)-1,3-苯并噻唑。(47mg,53％)。

表2概括了根据该实施例制备的部分通式Ⅴ化合物。反应得率根据0.53mmol的2-氨基-1,3-苯并噻唑计算。这些化合物是本发明化合物和合成方法的示例，不应由此限定本发明的范围。

表2

通式Ⅴ

就表2所列的化合物而言，R¹、R²、R³、R⁴、和R⁶都是H。其它取代基如下所示。同时列出各化合物的得率。

化合物	R⁸	R⁹	R¹⁰	R¹¹	R¹²	得率(％)
化合物	R⁸	R⁹	R¹⁰	R¹¹	R¹²	得率(％)	A2	-OMe	H	H	H	H	36
B2	H	H	-OMe	H	H	94	A2	-OMe	H	H	H	H	36
B2	H	H	-OMe	H	H	94	C2	H	H	苯基	H	H	30
D2	H	-CF₃	H	-CF₃	H	63	C2	H	H	苯基	H	H	30
D2	H	-CF₃	H	-CF₃	H	63	E2	H	H	H	H	H	29
F2	H	H	-n-Bu	H	H	53	E2	H	H	H	H	H	29
F2	H	H	-n-Bu	H	H	53	G2	H	H	-t-Bu	H	H	82
H2	H	H	Cl	H	H	53	G2	H	H	-t-Bu	H	H	82
H2	H	H	Cl	H	H	53	I2	H	H	-CN	H	H	69
J2	H	Cl	Cl	H	H	62	I2	H	H	-CN	H	H	69
J2	H	Cl	Cl	H	H	62	K2	H	F	H	H	H	79
L2	-OMe	H	-OMe	H	H	80	K2	H	F	H	H	H	79
L2	-OMe	H	-OMe	H	H	80	M2	H	-OMe	H	-OMe	H	23
N2	H	H	Et	H	H	44	M2	H	-OMe	H	-OMe	H	23
N2	H	H	Et	H	H	44	O2	H	-Me	H	H	H	44

实施例10

2-(环己基酰氨基)-1,3-苯并噻唑的制备

根据实施例9中的方法B来制备该化合物。该化合物由通式Ⅲ表示：

W-L-Y

通式Ⅲ

其中Y是一个碳环，以环己基为佳。在本具体实施例中，目标化合物分离后的得率为66％。

以上具体说明了本发明的特定实施方案。可以看出，在本发明范围内，实施方案可以与所述的有所不同，而且，对于本领域熟练技术人员而言，其改进是显而易见的，这些都应包括在本发明范围内。本发明的范围由后文的权利要求及其相当的涵义限定。所以，不应将说明书和权利要求过度理解成限窄了本发明要求保护的完整范围。根据本发明所揭示的内容，本领域技术人员应该理解，在本发明的宗旨和范围内，在具体实施方案中可以进行许多改动，而仍获得相同或相似的结果。根据本发明内容，无需过多的实验即可获得和实施在此所述和要求保护的化合物和方法。显而易见的是，某些生理和化学相关性化合物可能代替在此所述的药理活性化合物而获得相同或相似的结果。

参考文献

本发明具体引用了以下文献，由此为本发明所述的内容补充了范例性方法或其它细节。

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Claims

1．一种刺激成骨细胞繁殖的方法，它包括选择通式Ⅰ所示物质：

X-L-Z

通式Ⅰ其中：X选自：L选自：

Z选自：

其中，R¹选自：H,OH,C1-C4烷基，C1-C4烷氧基，C1-C4烷硫基，卤素和(C1-C12)烷基-羰基氧基；

R⁶选自：H,OH,-NH₂,C1-C4烷基和C1-C4烷氧基；

R⁷选自：H,C1-C4烷基，C1-C4烷基-羰基和(C7-C10)芳基烷基；

R⁸选自：H,OH，卤素，-CF₃,C1-C4卤代烷基，C1-C4烷基，C1-C4烷氧基，-NHC(=O)Me和-N(C1-C4烷基)₂；

R⁹选自：H,OH,卤素，-CN,-NO₂,C1-C4卤代烷基，C1-C8烷基，C1-C8烷氧基，-NHC(=O)Me和-OC(=O)Me；

和令包含成骨细胞的细胞与有效量的药理活性化合物接触。

2．根据权利要求1所述的方法，其中：

R¹⁰和R¹¹可以相互结合成一个5至7元碳环或氧杂碳环，该环与两基团所连接的环稠合，其中的碳环和氧杂碳环互不相干地被一个或多个以下基团所取代：(C1-C4)烷基，C1-C4烷氧基，OH，卤素，羧基、H和芳基，由此形成药理活性化合物。

3．根据权利要求2所述的方法，其中：

R¹⁰和R¹¹可以相互结合成一个5至7元碳环或氧杂碳环，该环与两基团所连接的环稠合，其中的碳环和氧杂碳环互不相干地被一个或多个以下基团所取代：(C1-C4)烷基，C1-C4烷氧基，OH，卤素，羧基、H和芳基；

条件是：

1)当X选自：时，L是

且Z是

2)当X是

则L选自：

和一单键3)当X是且Z是：

则，L是

4)当X是：

且Z是：

则L是

5)当X是：

则Z是

且L是：

6)当X是：则，Z是：且L是：

4．根据权利要求1所述的方法，其中：

R⁴是H；且

R⁹选自：H,OH，卤素，-CN,-NO₂,C1-C8烷基，C1-C8烷氧基，-NHC(=O)Me和-OC(=O)Me。

5．根据权利要求1所述的方法，其中：

X是

L是

且Z是

6．根据权利要求5所述的方法，其中：

R¹、R²、R³、R⁴、R⁵和R⁶都是H；

R⁹选自：H,OH，卤素，-CN,-NO₂,C1-C4卤代烷基，C1-C8烷基，C1-C8烷氧基，-NHC(=O)Me和-OC(=O)Me；

R¹¹选自：H,OH，卤素，C1-C4卤代烷基，-CF₃,C1-C4烷基，-NH₂,C1-C4烷氧基，-NHC(=O)Me,C1-C4烯基，(C1-C4)烷氧基羰基，(C1-C4)烷基羰基，(C1-C4)烷基-羰基氧基；

R¹²选自：H,OH,-NH₂,(C1-C4)烷基，C1-C4烷氧基，和(C1-C4)烷基羰基。

7．根据权利要求6所述的方法，其中

R⁸选自：H、甲氧基、氟和三氟甲基；

R⁹选自：H、甲基、甲氧基、三氟甲基、氯甲基、硝基、氰基、氯和氟；

R¹⁰选自：H、苯基、正丁基、叔丁基、氯、氯甲基、乙基、正丙基、硝基、苯基、甲氧基、氰基和氟；

R¹¹选自：H、三氟甲基、甲氧基和氟；

R¹²是H。

8．一种选择药理活性化合物或药理活性候选化合物的方法，其中的药理活性指刺激BMP-2启动子活性的能力，该方法包括：

选择具有通式Ⅱ确定空间三维结构的候选化合物：

W-L-Y

通式Ⅱ其中，

W含有一个具有以字母“A”表示的质心的芳香基团；

Y含有一个具有有以字母“B”表示的质心的碳环基团；

L是连接X和Z的基团；

W内的芳香基原子形成一个“P”平面；

质心“B”位于“P”平面以上或以下约1或约0.7埃；

质心“A”和质心“B”相距约6至约8埃；由此形成具有确定空间结构的分子；

9．根据权利要求8所述的方法，其中：

质心“A”和质心“B”相距约6.6至约8.5埃。

10．根据权利要求8所述的方法，其中：具有确定空间结构的分子被进一步定义为具有至少两个受氢键基团，位于L内或其附近，该受氢键基团被进一步定义为：

1)受氢键基团相距约2至约5埃；

2)受氢键基团之一距质心“A”约4至约7埃，而距质心“B”约2至约3埃；而且

3)受氢键基团之一距质心“A”约2至约3埃，而距质心“B”约4至约7埃。

11．根据权利要求10所述的方法，其中：该受氢键基团被进一步定义为：

1)受氢键基团相距约2.3至约5.4埃；

2)受氢键基团之一距质心“A”约4.5至约7.7埃，而距质心“B”约2.7至约3.8埃；而且

3)受氢键基团之一距质心“A”约2.6至约3.8埃，而距质心“B”约4.6至约6.9埃。

12．根据权利要求8所述的方法，其中：L进一步定义为据重原子距离测定占据着一个外限小于或等于约3埃的空间，沿平面“P”的法相测定，位于平面“P”之上或之下并与之正交。

13．根据权利要求12所述的方法，其中：L进一步定义为据重原子距离测定占据着一个外限小于或等于约3.1埃的空间，沿平面“P”的法相测定，位于平面“P”之上或之下并与之正交。

14．根据权利要求8所述的方法，其中：L被进一步定义为据重原子距离测定占据着一个外限为约4埃至约6.0埃的空间，与质心“A”和质心“B”的连线垂直并位于平面“P”内。

15．根据权利要求14所述的方法，其中：L被进一步定义为据重原子距离测定占据着一个外限为约4.7至约6.0埃的空间，与质心“A”和质心“B”的连线垂直并位于平面“P”内。

16．根据权利要求8所述的方法，其中：通式Ⅱ候选化合物进一步定义为：

1)不是通式Ⅹ化合物

通式Ⅹ其中的R₁是H、OH、C1-C17烷氧基、(C1-C17)烷基羰基氧基、(C1-C17)烷基羰基氨基、或(C1-C17)烷基羰基；R₂是-(CH₂)_(1-6)-CH₂-杂环；R₃是H、OH、C1-C17烷氧基、(C1-C17)烷基羰基氧基、(C1-C17)烷基羰基氨基、或(C1-C17)烷基羰基；而且

2)不是通式Ⅺ化合物

通式Ⅺ

17．根据权利要求8所述的方法，其中：具有“A”质心的芳香环可以互不相干地被以下基团之一或多个取代：H、卤素、羟基、氨基、羧基、氰基、C1-C6烷基、C1-C2卤代烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烯基、-OC(=O)-(C1-C6烷基)和-NHC(=O)-(C1-C6烷基)。

18．根据权利要求17所述的方法，其中：具有“B”质心的碳环可以互不相干地被以下基团之一或多个取代：H、卤素、羟基、氨基、羧基、氰基、C1-C6烷基、C1-C2卤代烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烯基、芳基、杂芳基、-OC(=O)-(C1-C6烷基)和-NHC(=O)-(C1-C6烷基)。

19．一种治疗或防止恶性细胞繁殖的方法，它包括：给包含恶性细胞的细胞群使用恶性细胞繁殖抑制量的、确定空间结构如通式Ⅱ:W-L-Y所述的药理活性化合物；和抑制恶性细胞，其中的药理活性化合物据其三维结构进一步定义为：

W含有具有以字母“A”表示的质心的芳香基团；

Y含有具有以字母“B”表示的质心的碳环基团；

L是连接X和Z的基团；

W内的芳香基原子形成一个平面“P”；

质心“B”位于“P”平面以上或以下约1埃；

质心“A”和质心“B”相距约6至约8埃。

20．根据权利要求19所述的方法，其中：

质心“B”位于“P”平面以上或以下约0.7埃；

质心“A”和质心“B”相距约6.6至约8.5埃。

21．根据权利要求19所述的方法，其中：药理活性分子进一步定义为具有确定的空间结构，其中具有至少两个受氢键基团，位于L内或其邻近，该受氢键基团被进一步定义为：

1)受氢键基团相距约2至约5埃；

3)受氢键基团之一距质心“A”约2至约3埃，而距质心“B”约4至约6埃。

22．根据权利要求21所述的方法，其中：药理活性分子进一步定义为具有确定的空间结构，其中具有至少两个受氢键基团，位于L内或其邻近，该受氢键基团被进一步定义为：

1)受氢键基团相距约2.3至约5.4埃；

23．根据权利要求19所述的方法，其中：L进一步定义为据重原子距离测定占据着一个外限小于或等于约2.5埃的空间，沿平面“P”的法相测定，位于平面“P”之上或之下并与之正交。

24．根据权利要求23所述的方法，其中：L进一步定义为据重原子距离测定占据着一个外限小于或等于约3.1埃的空间，沿平面“P”的法相测定，位于平面“P”之上或之下并与之正交。

25．根据权利要求19所述的方法，其中：L据重原子距离测定占据着一个外限为约4埃至约约5埃的空间，与质心“A”和质心“B”的连线垂直并位于平面“P”内。

26．根据权利要求25所述的方法，其中：L据重原子距离测定占据着一个外限为约4.7至约6埃的空间，与质心“A”和质心“B”的连线垂直并位于平面“P”内。

27．一种在成骨细胞或成骨细胞前体细胞内刺激BMP-2启动子活性或成骨细胞繁殖的方法，它包括：给予成骨细胞或成骨细胞前体细胞有效量的通式Ⅲ化合物：

通式Ⅲ其中，

R¹选自：芳基、萘基、杂芳基、环烷基、环烯基、氮杂环烷基、氧杂环烷基、氮杂环烯基、氧杂环烯基、酮基取代的环烷基和酮基取代的环烯基，上述各取代基互不相干地被一个或多个以下基团取代：C1-C7烷基、C1-C7烷氧基、苄氧基、羟基、C1-C2卤代烷基、卤素、氰基、-NO₂,CF₃，羧基、氢原子、(C1-C4)烷氧基羰基、-N(C1-C4烷基)₂、(C1-C4)烷基羰基氧基、芳基、(C1-C4)烷基羰基氨基、(C1-C4)烷基羰基、(C1-C4)烷基-芳基和-NH₂；

R³和R⁴选自：H、羟基、卤素、(C1-C5)烷基羰基氧基、氰基、C1-C4烷基、C1-C4烯基和C1-C4烷氧基；

28．根据权利要求27所述的方法，其中：R³和R⁴共同连接成一个5至7元的碳环或氧杂碳环，该环与该两基团所连接的环稠合，其中的碳环或氧杂碳环被一个或多个以下基团互不相干地取代：C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、羟基、卤素、羧基、氢原子和芳基。

29．根据权利要求27所述的方法，其中：R⁴和R⁵共同连接成一个5至7元的碳环或氧杂碳环，该环与该两基团所连接的环稠合，其中的碳环或氧杂碳环被一个或多个以下基团互不相干地取代：C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、羟基、卤素、羧基、氢原子和芳基。

30．根据权利要求27所述的方法，其中：R⁵和R⁶共同连接成一个5至7元的碳环或氧杂碳环，该环与该两基团所连接的环稠合，其中的碳环或氧杂碳环被一个或多个以下基团互不相干地取代：C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、羟基、卤素、羧基、氢原子和芳基。

31．根据权利要求27所述的方法，其中：

R¹选自：芳基、萘基、杂芳基、环烷基，其中各R¹取代基互不相干地被一个或多个以下基团取代：C1-C7烷基、C1-C7烷氧基、-NO₂、-CF₃、芳基、苄氧基、羟基、C1-C2卤代烷基、卤素、氰基、羧基、氢原子、芳基、(C1-C4)烷基羰基氨基、(C1-C4)烷基羰基、(C1-C4)烷基-芳基和-NH₂；

R²选自：H、C1-C4烷氧基、氨基或C1-C4烷基；

R⁴和R⁵互不相干地选自：H、卤素、羟基、(C1-C4)烷基羰基氧基、氰基、C1-C2卤代烷基、C1-C4烷氧基、苯甲酰基、C1-C4烷基、C1-C4烯基、C1-C4炔基、(C1-C4)烷基-芳基、(C1-C4)烯基-芳基、(C1-C4)炔基-芳基、(C1-C4)烷基-(C6-C10)环烷基、(C1-C4)烯基-(C6-C10)环烷基、(C1-C4)炔基-(C6-C10)环烷基、羧基和(C1-C4)烷氧基羰基。

32．根据权利要求27所述的方法，其中R⁴和R⁵共同连接成一个5至6元的碳环或氧杂碳环，该环与该两基团所连接的环稠合，其中的碳环或氧杂碳环互不相干地被一个或多个以下基团取代：C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、羟基、卤素、羧基、氢原子和芳基。

33．根据权利要求27所述的方法，其中的通式Ⅱ化合物是2-(2-甲氧基苯甲酰氨基)-1,3-苯并噻唑或其药学上可接受的盐。

34．一种具有成骨细胞繁殖活性的药理活性组合物，其中的组合物是通过包含以下步骤的方法制备的：

35．一种包含通式Ⅳ化合物的药理活性组合物：

通式Ⅳ其中：

R¹、R²、R³、R⁴、R⁵和R⁶都是H；

R⁸选自：H,OH，卤素，C1-C4烷基，C1-C4烷氧基，-NHC(=O)Me和-N(C1-C4烷基)₂；

R⁹选自：H,OH，卤素，C1-C8烷基，C1-C8烷氧基，-NHC(=O)Me和-OC(=O)Me；

R¹⁰选自：H,OH，卤素，C1-C4卤代烷基，-CO₂H,C1-C12烷基，C1-C12烷氧基，-NHC(=O)Me,C1-C4烯基，(C1-C4)烷氧基羰基，(C1-C4)烷基羰基，和(C1-C4)烷基-羰基氧基；

R¹¹选自：H,OH，卤素，C1-C4卤代烷基，C1-C4烷基，-NH₂,C1-C4烷氧基，-NHC(=O)Me,C1-C4烯基，(C1-C4)烷氧基羰基，(C1-C4)烷基羰基和(C1-C4)烷基-羰基氧基；

R¹²选自：H,OH,-NH₂,(C1-C4)烷基，C1-C4烷氧基，和-N(C1-C4烷基)₂；条件是：1)当R⁹、R¹⁰、R¹¹和R¹²都是氢时，R⁸不能是-OH；2)当R⁸、R¹⁰、R¹¹和R¹²都是氢时，R⁹不能是-NH₂或

或者，3)当R⁸、R⁹、R¹¹和R¹²都是氢时，R¹⁰不能是H、氯、胍基、CH₂P(=O)(OEt)₂、CH₂P(=O)OiPr₂、CH₂P(O=)(OEt)Ph、

36．一种包含通式Ⅴ化合物的药理活性组合物：

通式Ⅴ其中：

R¹、R²、R³、R⁴、和R⁶都是H；

R¹²选自：H,OH,-NH₂,(C1-C4)烷基，C1-C4烷氧基，和-N(C1-C4烷基)₂；

条件是：

1)当R⁹、R¹⁰、R¹¹和R¹²都是氢时，R⁸不能是叠氮基、硝基、氯、溴、氟、羟基、羧基、2-羧基-5-氯苯基、4’-(乙酰基)苯磺酸基、4’-(氰基乙酰基)苯磺酸基、N-(4’-乙氧基苯基)氨基、二(4’-羟基苯基)甲基、4’-(乙酸基)苯基甲基或N-(Z-,3-羧基丙烯酰基)氨基；

2)当R⁸、R¹⁰、R¹¹和R¹²都是氢时，R⁹不能是溴、氯或甲氧基；

3)当R⁸、R⁹、R¹¹和R¹²都是氢时，R¹⁰不能是氯、溴、氟、甲基、硝基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、正戊氧基、苄氧基、烯丙基氧基、乙酸基、2’-(二乙基氨基)乙氧基、氨基、二甲基氨基、胍基、硫代甲基、4’-(甲基)苯磺酰基氨基、二-(乙基膦酰基)甲基、二-(异丙基膦酰基)甲基、

4)当R⁸和R¹⁰都是氢，R⁹和R¹¹都是溴时，R¹²不能是-OH；5)当R⁸、R¹⁰和R¹¹都是氢，R¹²是-OH时，R⁹不能是(C6-C15)烷基羰基。