CN1221454A - 通过改变海藻糖－6－磷酸的水平来调节代谢 - Google Patents

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Abstract

本发明属于细胞代谢中碳流调节的领域。已发现在细胞内诱导海藻糖－6－磷酸(T－6－P)可得量的改变会诱导体内细胞、组织和器官发育和/或组成的改变。这些改变可通过导入或抑制能形成T－6－P的磷酸海藻糖合成酶(TPS)和能降解T－6－P至海藻糖的磷酸海藻糖磷酸酶(TPP)来诱导。通过细胞内T－6－P水平的下降会促进通过糖酵解的碳流量。

Description

通过改变海藻糖-6-磷酸的水平来调节代谢
                       发明领域
糖酵解是在文献中用生化详细描述的第一批代谢过程之一。尽管已知碳水化合物在生物体中的一般流动，尽管糖酵解途径中所有的酶都已得到阐明，但通过刺激糖酵解来决定代谢诱导的信号还未阐明。已提出了几个尤其是依据酵母中的情况的假说，但没有一个得到毫无疑问的证实。
对碳水化合物分配方向的影响不仅直接影响糖酵解和碳水化合物储存的细胞过程，而且也被用于影响继发性的或衍生的过程例如细胞分裂、生物量的产生和储存化合物的积累，因而决定生长和生产能力。
尤其在植物中，碳水化合物的存在经常直接影响一个组织的特性，碳水化合物分配的方向能产生重要的差别。
植物的生长、发育和产量取决于这种植物在光合作用过程中能从CO2固定衍化而来的能量。光合作用主要发生在叶内，较次一些程度的光合作用发生在茎中，而其它植物组织如根、种子或块茎对光同化作用基本上没有贡献。这些组织的生长和营养完全依靠光合作用活跃的组织。这就意味着有一个从光合作用衍化而来的产物(共同称为光合产物)到植物光合作用不活跃部位的流动。
光合作用活跃的部分命名为“源”，它们定义为光合产物的净输出者。光合作用不活跃的部分命名为“池”，它们被定义为光合产物的净输入者。
假定光合作用的效率和碳水化合物的分配在一个植物内都是必需的。新生长的组织如新叶或其它部分如根和种子完全依赖于源内的光合作用。影响碳水化合物分配的可能性会对一个植物的形态有很大影响，例如它的高度、结间距、叶的大小和形状以及根系统的大小和结构。
此外，光同化作用产物的分配对于植物生物量和产物的产量很重要。一个例子是上个世纪中小麦的培育。它的光合能力没有显著的的变化，但小麦产量却大大增加，即收获指数(可收获生物量/总生物量的比率)增加。根本的原因是通过传统育种改变了池对源的比率，使可收获的池，即种子部分增加。然而调节光同化作用产物的分配以及相应的源和池形成的机制还未知。此机制被认为位于碳水化合物代谢途径和其调节中的某一位置。在最近的研究中，明确了己糖激酶可以在代谢信号传递和代谢流动的控制中起很重要的作用。已推定了许多调节己糖激酶活性的机制(Graham等人(1994)，植物细胞(The Plant Cell)6:761；Jang & Sheen(1994)，植物细胞6,1665；Rose等人，欧洲生物化学杂志(Eur.J.Biochem.)199,511-518,1991；Blazquez等人,(1993),FEBS 329,51；Koch,Annu.Rev.Plant Physiol.Plant.Mol.Biol.(1996)47,509；Jang等人，(1997)，植物细胞9,5。这些己糖激酶调节理论中推定在酵母中的一个提到了海藻糖及其相关单糖(Thevelein和Hohmann(1995),TIBS 20,3)。然而，因为海藻糖的合成被认为限定于某些种类，很难看出这是一个广泛的机制。
因此，仍需要阐明引导体内细胞、组织和器官的组成和/或发育改变的信号。
                       发明概述
现已发现通过导入海藻糖-6-磷酸合成酶(TPS)和/或海藻糖-6-磷酸磷酸酶(TPP)从而在海藻糖-6-磷酸(T-6-P)的代谢途径上诱导一个改变，导致细胞内T-6-P可得量的改变，就有可能在体内改变细胞、组织和器官的发育和/或组成。导入TPS从而诱导细胞内T-6-P浓度的增加，这引起糖酵解方向碳流的抑制、光合作用的促进、生长的抑制、池相关活性的促进和资源储存的增加。导入TPP从而诱导细胞内T-6-P浓度的降低，这引起糖酵解方向碳流的促进、生物量的增加和光合作用活性的降低。通过用一种能影响T-6-P水平的基因构建体对生物进行基因工程改造或外源性地(口服地、局部地、非肠道地等)补充能影响这些水平的化合物均可以影响T-6-P的水平。可用于此发明的基因构建体是包含磷酸海藻糖合成酶(TPS)基因的构建体，此酶能催化从葡萄糖-6-磷酸和UDP-葡萄糖变成T-6-P的反应。另一方面，一种编码催化从T-6-P至海藻糖反应的磷酸海藻糖磷酸酶(TPP)的构建体，一旦表达，可降低T-6-P的产量。
另一方面，含有反义TPS或TPP的基因构建体也能用于调节T-6-P的细胞内可得量。
此外，最近已报道一种来源于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的细胞内磷酸-α-(1,1)-葡糖苷酶(TreA)，其能将T-6-P水解成葡萄糖和葡萄糖6-磷酸(Schock等人，基因，170,77-88,1996)。对于大肠杆菌已描述了一个类似的酶(Rimmele和Boos(1996)，细菌学杂志(J.Bact.)176(18),5654-)。
为了过量表达，不得不使用异源或同源基因构建体。一般认为内源性T-6-P形成和/或降解酶受变构调节和受共价修饰的调节。通过使用异源基因可以避开这种调节。
另一方面，异源或同源基因的突变也可以用于消除调节。
本发明也提供了在植物中改变源-池关系和资源分配的能力。植物的整个碳系统，包括源组织内同化生产和源组织内的使用都可以被改变，这可以导致收获产品生物量的增加。通过此方法，可实现生产能力增加以及收获指数和产品质量的改善。源组织中的这些变化例如通过光合酶输出的增加能导致池组织中的变化。反之，池组织中的改变也能导致源组织中的改变。
在一种细胞器、组织或一种生物的其它部位中的特异性表达使得上述提到的一般效应定向于特定局部应用。通过将编码TPS、TPP的基因或TPS、TPP的反义基因置于特异性启动子的控制下，可以建立这种特异性表达。特异性表达使不同的组织中能同时表达TPS和TPP酶，因而局部地增加T-6-P的水平和降低T-6-P的水平。
通过使用特异性启动子也可能建立一个时间的差异。为了此目的可以使用在植物各个部位的组织发生的特定时期中有特异活性的启动子。这样就有可能首先影响将要发育的器官的量，然后使这些器官充满储存物质如淀粉、油或蛋白质。
另一方面，可诱导的启动子也可以用于选择性地开启或关闭本发明基因的表达。通过例如病原体、应激反应、化学制剂、或光/黑暗刺激可以实现诱导。
                       定义-己糖激酶活性是在细胞中发现的酶的活性，其催化己糖至己糖-6-磷酸的反应。己糖包括葡萄糖、果糖、半乳糖或任何其它C6糖。已知有许多同功酶都能在所述生化反应中起作用。通过催化此反应，己糖激酶在己糖(葡萄糖)信号传递中构成一个关键酶。-己糖信号传递是调节机制，通过它使细胞感受到己糖(葡萄糖)的可得量。-糖酵解是将葡萄糖转化为丙酮酸并伴随有ATP产生的反应。-冷甜化是马铃薯块茎收获后在低温储存时可溶性糖的积累。-资源材料的储存是这样的过程，其中主要产物葡萄糖被代谢成适于在细胞中或在一特定组织中储存的分子形式。这些形式可以不同。在植物界中，储存大多以碳水化合物和多聚碳水化合物如淀粉、果聚糖和纤维素，或以更简单的单-和二糖象果糖、蔗糖和麦芽糖的形式发生；以油的形式如花生(arachic)油或油酸(oleic)油和以蛋白质的形式例如十字花素(cruciferin)、napin和油菜种子中的种子储存蛋白。在动物细胞中也形成多聚碳水化合物例如糖原，但也有大量富含能量的碳化合物转化为脂肪和脂质。-生物量是生物材料的总量。
                    附图说明图1质粒pVDH275的图解说明，其带有两侧连接35S花椰菜花叶病病毒启动子(P35S)和终止子(T35S)的新霉素磷酸转移酶基因(NPTⅡ)作为选择性标记；带有一个含有豌豆质体蓝素启动子(pPCpea)和胭脂碱合成酶终止子(Tnos)的表达盒；带有右(RB)和左(LB)T-DNA边缘序列和一个细菌卡那霉素抗性(kanR)标记基因。图2转基因烟草植物的Northern杂交分析。组A表示在pMOG799转基因烟草植物叶子中otsA mRNA的表达。对照组“C”含有来自未转化的烟草植物(N.tabacum)的总RNA。图3使用Wisconsin GCG序列分析包(Devereux等人(1984)Acomprehensive set of sequence analysis programs of the VAX.核酸研究(Nucl.Acids Res.),12,387)与TPSyeast序列比较植物来源的TPS编码序列直列图。分别编码拟南芥属(Arabidopsis)和水稻(Rice)TPS酶的TPSatal 3/56、142 TPSrice3(SEQ ID NO:53)和RiceTPS源自EST数据库序列。分别编码向日葵(Sunflower)和卷柏属(Selaginella)TPS酶的TPSsun10,TPSse143,(SEQ ID NO:44)和TPSse18(SEQ ID NO:42)源自由PCR技术分离的序列(见实施例3)。图4PCR扩增的烟草TPS cDNA片段与编码酵母TPS1基因的TPS的序列比较。方框表示所有四个所列序列之间的氨基酸相同。图5PCR扩增的烟草TPP cDNA片段与编码酵母TPS2基因的TPP的序列比较。方框表示所有四个所列序列之间的氨基酸相同。图6PCR扩增的向日葵TPS/TPP两分cDNA(SEQ ID NO:24)片段与编码酵母TPS2基因的TPP的序列比较。方框表示两个序列之间的氨基酸相同。图7拟南芥属TPS1和水稻EST克隆的片段与编码酵母TPS1基因的TPS的序列比较。方框表示全部三个序列之间的氨基酸相同。图8PCR扩增的人TPS cDNA片段(SEQ ID NO:10)与编码酵母TPS1基因TPS的序列比较。方框表示两个序列之间的氨基酸相同。图9在pMDG1027(35S反义海藻糖酶)转基因马铃薯植物块茎中海藻糖的积累。图10加和不加海藻糖-6-磷酸的野生型马铃薯(Solanum tuberosum cv.Kardal)块茎抽提液的己糖激酶活性。图11加和不加海藻糖-6-磷酸的野生型马铃薯块茎抽提液的己糖激酶活性。果糖或葡萄糖用作检测底物。图12加和不加海藻糖-6-磷酸的野生型烟草叶(Nicotiana tabacum cv.SR1)抽提液的己糖激酶活性。果糖或葡萄糖用作检测底物。图13烟草己糖激酶活性测量的曲线图。数据系列1：烟草植物抽提液数据系列2：烟草植物抽提液+1mM海藻糖-6-磷酸数据系列3：来源于酵母的商业化己糖激酶抽提液(1/8单位)图14加和不加海藻糖-6-磷酸的野生型水稻叶(Oryza sativa)抽提液的己糖激酶活性。使用不同量的抽提液重复进行实验。果糖或葡萄糖用作检测底物。图15加和不加海藻糖-6-磷酸的野生型玉米叶(Zea mais)抽提液的己糖激酶活性。果糖和葡萄糖用作检测底物。图16野生型(三角)、PC-TPS(四方形)和35S-TPP(叉)烟草叶的荧光特征。上两组表明在标明的光强度(PAR)下的电子传递效率(ETE)。测量经过黑暗时期后(左上组)和经过光照时期后(右上组)的植物。下端两组表示由于同化产物积累(非光化学淬灭)造成的荧光下降。左和右组同前。图17PC-TPS(饥饿)和35S-TPP(足养)转基因烟草植物的各个植物部位的相对池活性。表明的是不同植物部分经过光(D)或光+黑暗(D+N)后以总碳含量的百分比表示的净碳积累。图18PC-TPS(饥饿)和35S-TPP(足养)转基因烟草植物的各个植物部分的碳的实际分布。表明的是不同植物部分经过光(D)或光+黑暗(D+N)后以总日积累的新碳百分比表示的净碳积累。图19与野生型植物相比在表达PC-TPS或PC-TPP的转基因莴苣植物中减少或增加的抽苔。下面的图表示叶的形态和颜色。图20在转基因莴苣(上方图)和转基因甜菜(下方图)品系的抽提液中可溶糖的情况(图20/1)。上图中是与PC-TPS和PC-TPP转基因品系相比较的对照GUS-转基因品系。下图中所有的转基因都是PC-TPS。淀粉的情况在图20/2中描述。图21与野生型植物(对照)相比，表达PC-TPS(TPS)或PC-TPP(TPP)的转基因甜菜品系的植物和叶的形态。TPS A-型的叶与野生型类似，而TPS D-型的叶明显更小。与对照相比，TPP转基因品系的叶子的绿色更淡，柄更大且尺寸增加。图22转基因甜菜品系(PC-TPS)的主根直径。上方图中A、B、C和D表示与对照(A)相比叶尺寸下降。下方图中显示了对照和PC-TPS品系286-2的各个克隆。图23 pMOG799(35S TPS)转基因马铃薯品系的块茎产量。图24 pMOG1010(35S TPP)和pMOG1124(PC-TPP)转基因马铃薯品系的块茎产量。图25 22株独立的0生型马铃薯(S.tuberosum)克隆的块茎产量。图26 pMOG1093(PC-TPS)转基因马铃薯品系与野生型相比的块茎产量。B、C、D、E、F、G表示与野生型(B/C)相比下降的叶尺寸。图27与野生型(图27-2)相比，pMOG845(Pat-TPS)转基因马铃薯品系的块茎产量。B、C表示叶尺寸。图28 pMOG1129(845-11/21/28)转基因马铃薯品系的块茎产量。图29 TPP(下方图)和TPS(上方图)转基因烟草植物叶的横切面。在TPS横切面上可见增加的细胞层和增加的细胞大小。图30 4℃储存之前和储存之后TPSEcoli转基因品系块茎的HPLC-PED分析，马铃薯C、F、B、G和H是未转基因对照品系。图31 35S TPS转基因烟草(上方叶)、野生型(中间叶)和35S TPP转基因烟草(下方叶)叶的形态、颜色和大小。图32 35S TPS(pMOG799)、35S TPP(pMOG1010)、野生型(WT)PC-TPS(pMOG1177)和PC-TPP(pMOG1124)转基因烟草品系代谢情况。表示的是海藻糖、可溶性糖(图32-1)、淀粉和叶绿素(图32-2)的水平。图33与野生型马铃薯品系相比pMOG1027(35S反义海藻糖酶(as-海藻糖酶))和pMOG1027(845-11/22/28)(35S反义海藻糖酶Pat TPS)转基因马铃薯品系块茎产量。图34与野生型马铃薯品系相比pMOG1027(35S反义海藻糖酶)和pMOG1027(845-11/22/28)(35S反义海藻糖酶Pat TPS)转基因马铃薯品系的淀粉含量。在此描述的所有品系的顺序与图33相同。图35与野生型马铃薯品系相比pMOG1028(Pat反义海藻糖酶)和pMOG1028(845-11/22/28)(Pat反义海藻糖酶Pat TPS)转基因马铃薯品系的产量。图36与图35中所描述的野生型马铃薯品系相比pMOG1092(PC反义海藻糖酶)转基因马铃薯品系的产量。图37与图35中所描述的野生型马铃薯品系相比pMOG1130(PC反义海藻糖酶PC TPS)转基因马铃薯品系的产量。
                       发明详述
本发明涉及通过T-6-P的水平在体内改变代谢的研究结果。T-6-P细胞内浓度的降低促进糖酵解的活性。相反，T-6-P浓度的增加将抑制糖酵解的活性并促进光合作用。
通过T-6-P水平变化而建立的这些改变最有可能是己糖激酶信号传递作用的结果，已知己糖激酶的活性受T-6-P调节。已证实在通过参与葡萄糖-6-磷酸反应的己糖激酶的流量增加(即葡萄糖量的增加)可抑制植物中光合活性。此外，通过己糖激酶流量的增加不仅促进糖酵解，而且也促进细胞分裂活性。
              海藻糖-6-磷酸调节碳代谢的理论
在一个正常的植物细胞中，碳水化合物的形成发生在光合作用的过程中，其中CO2被固定且被还原为磷酸化的己糖，终产物为蔗糖。一般情况下，这些蔗糖被从细胞外运至细胞或组织中，这些细胞或组织通过吸收这些蔗糖能将碳水化合物用作它们代谢的材料或能将碳水化合物储存为如淀粉。在此方面，在植物中，能够进行光合作用因而能产生碳水化合物的细胞被命名为源，而消耗或储存碳水化合物的细胞被称为池。
在动物和大多数微生物细胞中，无光合作用发生，碳水化合物不得不从外源获取，通过从糖中直接吸收(如酵母和其它微生物)或者通过碳水化合物的消化(动物)。碳水化合物的运输在这些生物体中经常以葡萄糖的形式发生，其中葡萄糖经过主动运输穿过细胞膜。
进入细胞后，代谢途径中第一个步骤之一是由己糖激酶催化将葡萄糖磷酸化为葡萄糖6-磷酸。已表明在植物中被己糖激酶(HXK)磷酸化的糖控制着参与光合作用的基因的表达(Jang & Sheen(1994)，植物细胞6，1665)。因此已提出HXK也许有双重功能，可以做为碳水化合物介导的基因表达调节的关键感受器和信号递质。认为这种调节通常就起始产物即葡萄糖的可得量向细胞发出信号。通过导入影响T-6-P水平的TPS或TPP可以观察到类似的效果。此外，已表明体外T-6-P的水平影响己糖激酶的活性。通过增加T-6-P的水平，细胞接收到存在碳水化合物输入短缺的信号。相反，T-6-P水平的下降则产生存在充足葡萄糖的信号，因而导致光合作用的下调。它表明用于糖酵解的底物以及随后用于细胞生长和细胞分裂过程的能量供应是充分可得的。认为这个信号传递由通过己糖激酶的流量增加所起始(J.J.Van Oosten,在Rijks Universiteit Utrecht的公开演讲，4月19日，1996)。
通过调节海藻糖-6-磷酸水平的调节植物中己糖激酶信号传递的理论暗示所有植物都需要存在着能产生和分解海藻糖-6-磷酸信号分子的酶系统。尽管海藻糖在真菌、细菌、酵母和藻类以及一些无脊椎动物的多种种类中普遍存在，但推测只有非常有限范围的维管植物被能合成此糖(Elbein(1974),Adv.Carboh.Chem.Biochem.30,227)。一个至今仍无法理解的现象是尽管明显缺少海藻糖合成酶，但所有植物确实含有海藻糖酶，此酶能将海藻糖分解为两个葡萄糖分子。
通过此处所述的用海藻糖酶抑制剂如有效霉素A或用反义海藻糖酶转化的实验可以获得存在海藻糖代谢途径的间接证据。
如果海藻糖中间产物T-6-P过度影响代谢活性，其产生将会受阻。优选的，为了积累高水平的海藻糖而不影响通过海藻糖-6-磷酸作用的代谢产物的分配，需要过量表达一个两分TPS/TPP酶。这个酶与在酵母中发现的一个遗传结构相类似，当与大肠杆菌OtsA和OstB基因相比较时，TPS2基因产物带有一个TPS和TPP同源区域(Kaasen等人，(1994)，基因(Gene)145,9)。使用此酶时，海藻糖-6-磷酸不能被其它细胞组分所自由获得。Zentella和Iturriaga(植物生理(Plant physiol.)(1996),111摘要88)给出了另一个两分酶的例子，他们从卷柏(Selaginellalepidophylla)中分离出一个编码一个推测的海藻糖-6-磷酸合成酶/磷酸酶的3.2kb的cDNA。也设想构建一个截断的TPS-TPP基因产物，籍此只保留TPS的活性，其对于T-6-P的合成同大肠杆菌的OtsA基因一样有效，当在同源系统中应用时也有同样效果。
在分子水平上我们有资料表明除了卷柏属之外海藻糖合成基因也存在于拟南芥属、烟草、水稻和向日葵中。使用简并性引物，依据TPSE.coli和TPSyeast之间的保守序列，我们能够在向日葵和烟草中确定编码推定的海藻糖-6-磷酸产生酶的基因。序列比较表明这些序列与来源于酵母和大肠杆菌的TPS基因，以及与来源于拟南芥属和水稻(也见表6b，其含有已发现的同源EST编号)的EST(表达序列标签)序列有着显著的同源性。
最近已阐明一个拟南芥属基因(公开于GENEBANK Acc.No.YO8568,示于SEQ ID NO:39)，依据其同源性可以认为是一个两分酶。这些资料表明，与目前的认识相反，大多数植物确实含有编码磷酸海藻糖合成酶的基因，其使它们能合成T-6-P。通过在表达TPS的植物中海藻糖的积累所证实，植物也含有非特异性或特异性磷酸酶，其能使T-6-P去磷酸化成为海藻糖。海藻糖酶在所有植物中的存在也可实现海藻糖的转换。
此外，我们也提供在人体组织中T-6-P参与调节碳水化合物途径的资料。我们已阐明了一个人TPS基因(描述于SEQ ID NO:10)，其与酵母、大肠杆菌和植物的TPS基因都表现出同源性。此外，我们展示了己糖激酶活性在哺乳动物(小鼠)组织中受到影响的资料。
通过TPP酶的表达(或TPS酶的抑制)降低细胞内海藻糖-6-磷酸的浓度产生的“充足”信号则会给所有细胞系统一个增加糖酵解碳流量并抑制光合作用的信号。这在实验部分中有很好地展示，例如实例2中描述了TPP酶得到表达的转基因烟草植物，其叶子大小增加，分枝增加，叶绿素的量减少。但是，因为“充足”的信号在缺乏葡萄糖充分供应时产生，细胞内的碳水化合物库被迅速耗竭。
这样，假设保持人为的“充足”信号，碳水化合物的减少最终将会限制细胞生长和分裂，即细胞将会用光所有储存的碳水化合物，会处于“饥饿”状态。这样，带有低储存量碳水化合物的叶子将会形成。另一方面，表达一个带有编码增加细胞内T-6-P量的TPS基因的构建体的植物，其表现为叶子大小的减少，同时叶子呈深绿色，含有的叶绿素量增加。
在酵母中，葡萄糖诱导的信号传递的一个主要作用是将代谢从新生/呼吸方式转换为发酵方式。几个信号传递途径参与此现象(Thevelein和Hohmann,(1995)TIBS 20,3)。除了己糖激酶信号传递的可能作用外，RAS-环状单磷酸腺苷(cAMP)途径也已表明可被葡萄糖活化。通过葡萄糖对RAS-cAMP途径的活化需要葡萄糖磷酸化，但无进一步葡萄糖代谢。到目前为止，已表明此途径可以活化海藻糖酶和6-磷酸果糖-2-激酶(因而促进糖酵解)，而通过cAMP-依赖性蛋白质磷酸化，果糖-1,6-二磷酸酶被抑制(这样防止葡萄糖异生)。此信号传导路线和它所引起的代谢效应能被设想为一个与己糖激酶信号传递途径有平行作用的信号途径，而且显示它受海藻糖-6-磷酸水平的影响。
如在本发明中所述，表达反义海藻糖酶的转基因植物显示有类似现象，如深绿的叶子，产量升高，如表达TPS基因时所观察到的。似乎是在双重构建体(double-construct)中反义海藻糖酶的表达增强了由TPS表达所引起的效应。已表明海藻糖酶活性存在于如植物、昆虫、动物、真菌和细菌中，但是只在有限数目的物种中，海藻糖被积累。
虽然海藻糖酶存在于几乎所有植物种类中，至今海藻糖酶的作用仍未知。据推测其参与植物病原体的相互作用和/或植物防御反应。我们已经分离了一个马铃薯海藻糖酶基因，表明在马铃薯叶和块茎组织中海藻糖酶活性的抑制会导致块茎产量的增加。反义海藻糖酶的果实特异性表达在西红柿中与TPS表达一起显著改变果实的发育。
依据本发明的一个实施方案，在通过引入一个编码磷酸海藻糖合成酶(TPS)的表达性基因构建体而导入产生T-6-P的能力的细胞中造成T-6-P的积累。只要它能在所述细胞中生产能产生T-6-P的磷酸海藻糖合成酶，可以使用在细胞中DNA表达所必需的调控元件控制下的任何磷酸海藻糖合成酶基因，无论其是特异性还是组成性地。依据本发明的开放阅读框架之一是如SEQ ID NO:2中所描述的编码TPS酶的开放阅读框架。另一些例子是描述于SEQ ID NO:10、18-23、41和45-53中的开放阅读框架。如上面述及的序列所示，众所周知多个DNA序列可以编码相同的酶，此由密码子的简并性引起。如需要，编码磷酸海藻糖合成酶活性的开放阅读框架可以改造成所选择宿主的适用密码子，但不必须这样做。
由例如SEQ ID NO:2中所描述的分离的核酸序列，通过PCR技术和/或通过用其它来源的DNA与来源于大肠杆菌基因的DNA或RNA片段杂交，可以用以鉴定其它生物体中的磷酸海藻糖合成酶基因，随后分离并克隆它们。优选地，通过在或多或少地严格条件下(受杂交混合物的温度和离子强度等因素影响)杂交而克隆这些DNA序列。杂交条件是否严格也依赖于杂交的本身，即DNA∶DNA、DNA∶RNA、RNA∶RNA以及最短杂交片段的长度。那些本领域一般技术人员很容易就能建立一个足够严格以避免非特异杂交并分离TPS基因的杂交方法。因为可以获得参与其它来源的海藻糖合成的基因，可以依据本发明用这些基因以类似的方法去获取一个表达性磷酸海藻糖合成酶的基因。更详细的内容在实验部分给出。
用于分离磷酸海藻糖合成酶活性的来源包括微生物(如细菌、酵母、真菌)、植物、动物等等。从其它来源分离的编码磷酸海藻糖合成酶活性的DNA序列也可以类似地用于依据本发明的用于产生T-6-P的方法中。作为一实施例，来自酵母的用于产生T-6-P的基因已公开于WO93/17093中。
本发明也包括这样的核酸序列，它是通过突变一个或多个密码子来改变SEQ ID NO:1中所述核酸序列获得的，突变造成所编码的蛋白质中氨基酸改变，只要氨基酸序列的突变不完全消除磷酸海藻糖合成酶的活性。
依据发明另一个实施方案，通过在细胞中DNA表达所必需的调控元件控制下的磷酸海藻糖磷酸酶编码基因，海藻糖-6-磷酸在细胞中可被转换为海藻糖。依据本发明一个优选的开放阅读框架是SEQ ID NO:4中所描述的编码一种TPP酶的开放阅读框架。(Kaasen等人，(1994)基因，145,9)。众所周知，多个DNA序列可以编码相同的酶，此是由遗传密码子的简并性造成的。如有需要，编码磷酸海藻糖磷酸酶活性的开放阅读框架可以改造成所选择宿主使用的密码子，但并不必须这样做。
由SEQ ID NO:3中所描述的分离的核酸序列，通过PCR技术和/或通过用从大肠杆菌基因中获取的DNA或RNA片段与其它来源的DNA杂交，可用以鉴定其它生物体中磷酸海藻糖磷酸酶基因，随后分离并克隆它们。优选地，通过在或多或少严格条件下(受杂交混合物的温度和离子强度等因素影响)杂交而筛选这些DNA序列。条件是否严格也依赖于杂交的本身，即DNA∶DNA、DNA∶RNA、RNA∶RNA以及最短杂交片段的长度。那些本领域一般技术人员很容易就能建立一个足够严格以避免非特异杂交并分离TPP基因的杂交方法。因为可以获得参与其它来源的海藻糖合成的基因，依据本发明，这些基因可以用于类似的方法中去获取一个表达性磷酸海藻糖磷酸酶基因。更详细的内容在实验部分给出。
用于分离磷酸海藻糖磷酸酶活性的来源包括微生物(如细菌、酵母、真菌)、植物、动物等等。来自其它来源的分离的编码磷酸海藻糖磷酸酶活性的DNA序列也可以类似地使用。
只要氨基酸序列的突变不完全消除磷酸海藻糖磷酸酶的活性，本发明也包括这样的改变过的核酸序列，它是通过突变一个或多个密码子来改变SEQ ID NO:3中所描述的核酸序列获得的，突变造成编码的蛋白质中产生了氨基酸改变。
具有TPS或TPP活性的其它酶通过所谓两分酶表示。设想特异性编码两种活性之一的序列部分能从编码另一活性的两分酶部分中分离出来。一种分离活性的方法是向编码不选择的活性的序列中插入一个突变，通过此突变表达的蛋白受损或缺少此活性，这样只执行另一个功能。这种方法能用于TPS和TPP活性的编码序列。这样，以此方法得到的编码序列能用以形成可表达具有TPS或TPP活性的酶的新型嵌合开放阅读框架。
依据发明的另一个实施方案，尤其是植物能被遗传改变以在植物的特定部分产生和积累上述提到的酶。酶表达优选的部位是叶子和植物的储存部分。特别是马铃薯的块茎被认为是合适的植物部位。在微块茎和马铃薯块茎中实现选择性表达TPS酶的优选启动子获自马铃薯patatin基因开放阅读框架的上游区域。
用于特异性表达的另一个合适启动子是质体蓝素启动子，其特异于植物的光同化作用部分。此外，设想在植物部位的特异性表达可对植物生长和繁殖或该植物的经济用途产生有利的作用。在此方面有用的启动子是：果实特异性的E8启动子(EP0409629)和2A11启动子(Van Haaren和Houck(1993)，植物分子生物学(Plant Mol.Biol.),221,625)；种子特异性的十字花素启动子，napin启动子和ACP启动子；PAL-启动子；花特异性的查耳酮异构酶启动子；叶特异性的SSU启动子和铁氧化还原蛋白启动子；根特异性的TobRb7启动子，韧皮部特异性的RolC启动子和分生组织特异性的HMG2启动子(Enjuto等人(1995)，植物细胞7，517)和水稻PCNA启动子(Kosugi等人，(1995)，植物杂志(Plant J.)7,877)。
本发明中另一个选择是使用可诱导的启动子。已知可以被病原体、应激反应、化学制剂或光/黑暗刺激所诱导的启动子。可以想象为了诱导特定的现象，例如发芽、抽苔、种子形成、储存组织的填充，通过外界刺激诱导本发明基因的活性是有益的。这使得植物的正常发育和期望现象的诱导性的优点均在控制之下。符合以此方式使用的启动子是在DE4446342(真菌和生长素诱导的PRP-1),WO96/28561(真菌诱导的PRP-1),EP 0 586 612(线虫诱导的)EP 0 712 273(线虫诱导的)、WO96/34949(真菌诱导的)，PCT/EP 96/02437(线虫诱导的)、EP 0 330479(应激反应诱导的)，US5,510,474(应激反应诱导的)、WO96/12814(寒冷诱导的)、EP 0 494 724(四环素诱导的)、EP 0 619 844(乙烯诱导的)、EP 0 337 532(水杨酸所诱导的)、WO95/24491(维生素B1诱导的)和WO92/19724(光诱导)中所描述的病原体诱导的启动子。其它化学制剂可诱导的启动子在EP 0 674 608,EP 637 339,EP 455 667和US 5,364,780中描述。
依据发明的另一实施方案，用可以抑制内源性表达TPS或TPP的功能的构建体转化细胞。对不期望的内源性酶活性的抑制可以由许多方法实现，这些方法的选择对本发明并不关键。一种抑制基因表达的方法可以通过所谓“反义方法”来实现。在此表达一个DNA序列，它产生一种与编码要被阻断的酶活性的RNA至少部分互补的RNA。优选使用同源反义基因，因为它们比异源基因更有效。阻断不期望的酶活性合成的另一个可选择的方法是向植物宿主基因组中导入在植物宿主中存在的一种内源基因的附加拷贝。经常可以观察到这种基因的附加拷贝抑制了内源基因：这种效应在文献中称为共同抑制效应或共同抑制。增强底物可得量的步骤的细节在WO95/01446的实施例中提供，此处引入作为参考。
宿主细胞可以是任何细胞，只要其中通过T-6-P水平的改变可以实现己糖激酶信号传递的改变。这样，相应地，所有真核细胞都适用于本发明。从经济学的观点来看，最适合于代谢化合物产生的细胞最适合本发明。这些生物体除了其它之外是植物、动物、酵母、真菌。然而，也设想在特殊的动物细胞(象胰腺的β细胞和脂肪细胞)中表达。
优选的植物宿主在种子植物门(Spermatophytae)中是被子植物纲(Angiospermae)，突出的是双子叶植物纲((Dicotyledoneae)，包括除了其它之外的茄科(Solanaceae)作为一个代表性家族，和单子叶植物纲(Monocotyledoneae)，包括除了其它之外的禾本科(Gramineae)作为一个代表家族。在本发明范围内所定义的合适的宿主植物包括植物(以及该植物的各个部分和细胞)及其子代，其中通过例如用重组DNA技术在期望的植物或植物器官中引起或增加TPS或TPP的产量，而使其子代含有一个改变了的T-6-P水平。依据本发明的作物包括有花的象花椰菜(Brassicaoleracea)、朝鲜蓟(Cynara scolymus)，切花象康乃馨(Dianthuscaryophyllus)、玫瑰(Rose spp.)，菊属(Chrysanthemum)、矮牵牛属(Petunia)、六出花属(Alstromeria)、扶郎花属(Gerbera)、唐菖蒲属(Gladiolus)、百合(Lilium spp.)、蛇麻草(Humulus luplus)、硬花球花柳(Broccoli)，盆载植物象杜鹃花属(Rhododendron)、Azalia、大丽花属(Dahlia)、秋海棠属(Begonia)、倒挂金钟属(Fuchsia)、牛龙牛苗属(Geranium)等；果实类例如苹果(Malus，如domesticus)、香蕉(Musa，如Acuminata)、杏(Prunus armeniaca)、橄榄(Oliva sativa)、菠萝(Ananascomosus)、椰子(Cocos nucifera)、芒果(Mangifera indica)、猕猴桃、油梨(Persea americana)、浆果(例如葡萄干、红醋栗)、樱桃(例如欧洲甜樱桃(Prunus avium))，黄瓜(如：Cucumis sativus)、葡萄(如：Vitisvinifera)、柠檬(Citrus limon)、甜瓜(Cucumis melo)、芥末(Simapis alba和Brassica nigra)、坚果(例如核桃(如：Juglans regia)、落花生(如：Arachis hypogeae))、桔子(如：Citrus maxima)、桃子(如：Prunuspersica)、梨(如：Pyra communis)、胡椒(如：Solaum capsicm)、李子(如：Prunus domestica)、草莓(如：麝香草莓Fragaria moschata)、西红柿(如：Lycopersicon esculentum)；叶例如苜蓿(Medicaqo sativa)、卷心菜(如：甘蓝Brassica oleracea)、菊苣(如：Cichoreum endivia)、葱(Allium porrum)、莴苣(lactuca sativa)、菠菜(Spinacia oleraceae)、烟草(Nicotiana tabacum)，草本类例如羊茅属(Festuca)、早熟禾属(Poa)、黑麦草属(如：黑麦草(Lolium perence)，多花黑麦草(Lolium multiflorm)和Arrenatherum spp.)、Amenity草，草皮草、海草、菊苣(Cichoriumintybus)、茶(Thea sinensis)、旱芹、绉叶欧芹(Petroselinum crispum)、chevil和其它草类；根例如竹芋(Maranta arundinacea)、甜菜根(Betavulgaris)、胡萝卜(Daucus carota)，木薯(Manihot esculenta)、人参(Panaxginseng)、芜菁(Brassica rapa)、萝卜(Raphanus sativus)、番薯(Dioscoreaesculenta)、甘薯(Ipomoea batatas)、芋；种子例如菜豆(Phaseolusvulgaris)、豌豆(Pisum sativum)、大豆(Glycin max)、小麦(Triticumaestivum)、大麦(Hordeum vulgare)、玉米(Zea mays)，水稻(Oryzasativa)，矮菜豆和蚕豆(Vicia faba)、棉花(Gossypium spp.)、咖啡(Coffeaarabica和C.canephora)；块茎例如擘蓝(Brassica oleraceae)，马铃薯(Solanum tuberosum)；鳞茎植物例如洋葱(Allium cepa)、亚实基隆葱，郁金香(Tulipa spp.)，黄水仙(Narcissus spp.)、蒜(Allium sativum)；茎例如栓皮栎，甘蔗(Saccharum spp.)，菠萝剑麻(Sisal spp.)，亚麻(Linumvulgare)，黄麻；树象橡胶树，橡树(Quercus spp.)，山毛榉(Betula spp.)，赤杨(Alnus spp.)，水曲柳(Acer spp.)，榆树(Ulmus spp.)，棕榈，蕨类，ivies等等。
通过周知的载体系统例如pBluescript、pUC和病毒载体系统如RSV和SV40，利用本领域周知的转化技术，可以完成酵母、真菌或动物细胞的转化。
只要基因能在所述植物细胞中表达，将表达性磷酸海藻糖合成酶基因、表达性磷酸海藻糖磷酸酶基因或其它任何有义或反义基因导入受体植物细胞的方法并不关键。
尽管发明的一些实施方案目前还不能实施，例如因为一些植物种类还很难进行转化，但本发明在这些植物种类中的实行只是时间的问题而不是原则问题，因为这种遗传转化的完成与本发明下面的实施方案不相关。
植物种类的转化对大量的植物种类，包括双子叶植物和单子叶植物是很常规的。依据此发明，原则上任何转化方法都可以将嵌合DNA导入合适的祖细胞。合适的方法可以从用于原生质体的钙/聚乙二醇(Krens等人(1982)，自然296,72,Negrutiu等人(1987)，植物分子生物学8，363)，原生质体的电穿孔(Shillito等人(1985)Bio/Technol.3,1099)，显微注射进植物组织(Crossway等人(1986),Mol.Gen.Genet.202),(DNA或RNA包被的)颗粒轰击各种植物组织(Klein等人(1987)，自然327,70)，用(非整合)病毒感染，通过成年植物的浸润或成熟花粉或孢子的转化以在植物内根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的基因转移(EP 0 301 316)等等中选择。依据发明的一个优选方法包括土壤杆菌介导的DNA转移。尤其优选的是公开于EP A120516和美国专利4,940,838中使用的称为二元载体的技术。
尽管认为进行遗传转化更难一些，单子叶植物易于转化，有繁殖力的转基因植物可以从转化的细胞或胚胎或其它植物组织中再生。目前，用于单子叶植物转化优选的方法是胚胎、外植体或悬浮细胞的微粒轰击和DNA直接吸收或(组织)电穿孔法(Shimamoto等人(1989)，自然338,274-276)。通过微粒轰击将编码phosphinothricin酰基转移酶(能灭活除草剂phosphinothricin的一种酶)的吸水链霉菌(Streptomy ceshygroscopicus)bar基因导入玉米悬浮培养物的胚胎细胞来获得转基因玉米植物(Gordon-kamm(1990)植物细胞，2,603)。将遗传物质导入其它单子叶作物例如小麦和大麦的糊粉原生质体也已报道(Lee(1989)，植物分子生物学13,21)。通过选择用于建立胚发生悬浮培养物的胚发生愈伤组织，小麦植株已从胚发生悬浮培养物中再生(Vasil(1990)Bio/Technol.8,429)。用于这些作物的转化系统的组合使本发明可应用于单子叶植物。
单子叶植物，包括商业上重要的作物例如水稻和玉米均能通过土壤杆菌菌株进行DNA转移(Vide WO94/00977；EP 0 159 418 B1；Gould等人(1991)植物生理95,426-434)。
为了获得能组成性表达多于一种嵌合基因的转基因植物，也可采用许多其它方法，包括如下：A．带有与另一个选择性标记基因连接的一系列改变了的基因的DNA，如二元质粒上的T-DNA的使用。这种方法的优点是嵌合基因是物理相连的，因而可以做为单个孟德尔位点转移。B．各自已能表达一种或多种嵌合基因且优选的与一种选择性标记基因连接的转基因植物与来自含有连接到另一种选择性标记上的一种或多种嵌合基因的转基因植物的花粉交叉授粉。通过这种杂交而得到的种子可以依据两种选择标志的出现或依据嵌合基因自身的出现来选择。从选择的种子获得的植物以后能用于进一步杂交。原则上嵌合基因不在单一位点上，因此这些基因可以做为独立的位点分离。C．许多复嵌合DNA分子的使用，例如质粒，每一个含有一种或多种嵌合基因和一种选择性标记。如果共转化的频率很高，那么依据一种标记进行选择就足够了。在其它情况下，优选依据多种标记的选择。D．用选择性含有一种选择性标记基因的新的嵌合DNA去连续转化已含有一种、两种(等等)嵌合基因的转基因植物。如方法B中，嵌合基因原则上不在单一位点上，因此嵌合基因可以做为独立的位点分离。E．上述提及策略的联合。
实际的策略也许取决于几种考虑，如很容易决定的例如亲本的目的(直接生长、用在繁殖计划中、用于产生杂种)，但对所描述的发明它并不关键。
众所周知，实际上所有的植物都可以从培养的细胞或组织中再生，但总的来说要首先提供转化的原生质体悬浮液或含有转化外植体的培养皿。芽可以直接被诱导，也可以通过器官发生或胚胎发生以及随后生根而间接地从愈伤组织中诱导。除了选择性标记，培养基中一般含有各种氨基酸和激素，例如生长素和细胞因子。向培养基中加入谷氨酸和脯氨酸也是有好处的，尤其对于玉米和首蓿这样的物种。有效的再生取决于培养基、培养物的基因型和历史。如果控制这三个变量，再生通常是可以重复的。在将转化的基因序列稳定整合入转基因植物中后，由它们所赋予的特性可以通过性杂交传给其它植物。根据要杂交的种类，可以使用任何标准的繁殖技术。
用于控制植物表达性基因(包括标记基因)表达的合适DNA序列，例如转录启始区域、增强子、非转录性引导子等等，可以源自能在植物细胞中表达的任何基因。也考虑使用含有多种启动子功能部分的杂合启动子或其合成的等效物。除了组成性启动子，诱导性启动子或以它们的表达方式例如发育性地或细胞类型特异性的启动子调节的启动子依据本发明都可以用于控制表达性基因的表达。
为了选择或筛选细胞，依据发明优选的包括一个标记基因，此基因与待转入植物细胞的植物表达性基因相连。在植物转化中合适的标记基因的选择为本领域一般技术人员熟知；一般常规使用的标记基因的实例为新霉素磷酸转移酶基因，其赋予卡那霉素抗性(EP-B131623)，来自大鼠肝脏的谷胱苷肽-S-转移酶基因，其赋予对源自除草剂的谷胱苷肽的抗性(EP-A256223)，谷氨酰胺合成酶，其一旦过量表达则赋予对谷氨酰胺合成酶抑制剂phosphinothricin的抗性(WO87/05327)，来自绿色产色链霉菌(Streptomyces viridochromogenes)的乙酰转移酶基因赋予了对选择性试剂phosphinothricin的抗性(EP-A275957)，编码5-烯醇式莽草酸3-磷酸酯合成酶(EPSPS)的基因赋予了对N-膦酰甲基甘氨酸的抗性，bar基因赋予了对双丙氨酰膦的抗性(例如WO91/02071)等等。只要与所选择的植物细胞联合时标记是有功能的(即有选择性的)，标记的具体选择并不重要。
标记基因和目的基因并不必相连，因为不连接基因的共转化(美国专利4,399,216)在植物转化中也是有效方法。
转化的优选植物材料，尤其对双子叶作物来说是叶盘，它能很容易被转化并有很好的再生能力(Horsch等人(1985)，科学227,1229)。
可以设想以下列方式特异使用本发明：从实施例中可以看出TPP表达的效果(其引起细胞内T-6-P浓度的降低)是叶子尺寸的增加、导致叶子数目增加、分枝的增加、总的叶生物量增加、成熟叶变白、形成更小的花和绝育。这些效果在下列情况下尤其有用：叶尺寸的增加(同时叶数目增加)对多叶蔬菜例如菠菜、莴苣、韭葱、苜蓿、青贮饲料玉米；对于通过绿草和花园植物达到土地覆盖和草的控制；对于叶子做为产品的作物例如烟草、茶、大麻和玫瑰(香水)；对于卷心菜类作物如花椰菜的matting up是有着经济上的重要性的。
这些叶子代谢活性被促进的事实的另一个好处是它们将消耗掉所有细胞间的资源，这就意味着它们是低淀粉含量的。就目前低热量食品的趋势而言，对意味着消费低淀粉含量的植物是有利的。淀粉含量的降低对叶的味道和质地也有影响。通过TPP的表达而产生的蛋白质/碳水化合物平衡的升高对多叶作物例如青贮饲料玉米尤其重要。
伴随有较大直径的茎的趋势的分枝增加在由茎负责产生经济上有吸引力的产品的作物中是有利的。在此范围内的实例是用于增加木材产量的树，木材也是纸生产的初始材料；如用于生产绳子和亚麻布的大麻、菠萝剑麻、亚麻等作物；如竹子和甘蔗；橡胶树的作物，栓皮栎；防止作物或作物某一部分倒伏的，例如谷类、玉米、豆科植物和草莓。
第三个现象是叶的进一步变白(由光合活性的降低所引起)。对于作物菊苣、芦笋优选颜色更少的叶子。对于切花，也期望花瓣变白，例如在六出花属中。
一个总的效果是由于代谢活性的增加造成生物量的增加。这就意味着生物量含有代谢化合物例如蛋白质和脂肪，相应的，在成熟的叶子中蛋白质/碳水化合物平衡增加，这对于如青贮饲料玉米和所有被青贮的饲料的作物是有利的。可以在果实、块茎和其它可食的植物部分建立类似的蛋白质/碳水化合物的平衡的增加。
在植物界以外，代谢的增加对在微生物或真核细胞培养物中蛋白质的生产有益。内源性蛋白和异源性蛋白的生产都可被加强，这就意味着在酵母或其它单细胞生物培养物中异源性蛋白的生产可以以这种方法得到增强。对酵母来说，这将产生一个更有效的发酵，其导致酒精产量的增加，所以对酿酒过程、酒精生产等等是有利的。
在动物和人体中，可以设想通过在受影响的细胞中稳定表达TPP或TPS可以克服由代谢缺损所引起的疾病。在人类细胞中，许多肿瘤细胞葡萄糖消耗的增加在很大程度上依赖于己糖激酶的过量表达(Remple等人(1996)FEBS Lett.385,223)。可以设想海藻糖-6-磷酸合成酶的表达可以影响葡萄糖进入肿瘤细胞代谢的流量。已表明己糖激酶的活化可以被cAMP/PKA(蛋白激酶A途径)强化。因此，这个信号传导途径的灭活可以影响葡萄糖的吸收和瘤形成的增殖。在哺乳动物细胞中能合成海藻糖-6-磷酸和海藻糖以及降解海藻糖的酶活性已示于例如兔肾皮质细胞中(Sacktor(1968)美国国家科学院院报(Proc.Natl.Acad.Sci)60,107)。已在胰腺β-细胞中胰岛素分泌缺陷中发现另一实例，其中由己糖激酶催化的葡萄糖-6-磷酸的生产是主要反应，其可将外源葡萄糖水平的增加和胰岛素的分泌偶联在一起(Efrat等人(1994),TIBS19,535)。由细胞内T-6-P降低引起的己糖激酶活性的增加将在胰岛素分泌缺陷的细胞中促进胰岛素的生产。
在转基因动物中蛋白质/碳水化合物平衡的增加也是有利的。代谢特性的增加和蛋白质生产的增加在畜牧业中是很重要的，其中动物能尽可能多的长肉。将TPP转化到产肉动物例如鸡、牛、绵羊、火鸡、山羊、鱼、龙虾、螃蟹、小虾、蜗牛等中，会产生生长更快且具有含更高蛋白质的肉的动物。
同样，这种代谢的增加意味着碳水化合物消耗率的增加，因而可以防止肥胖。
由细胞内T-6-P浓度降低产生的更多的植物特异性效应是花数目的增加(尽管它们似乎不导致种子的形成)。然而花数目的增加对切花植物和盆载花植物和适于园艺培养的所有植物都是有利的。
这种开花现象的另一效应是绝育，因为植物并不产生种子。绝育的植物在杂交育种中有利。
另一个经济上重要的方面是防止培养作物如莴苣、菊苣和欣赏及饲养型草的抽苔。这是一个有益的特性，因为它使作物生长而不必将代谢作用花费在开花和种子生产上。此外，在象莴苣、菊苣和草的作物中，商业性产品应用是不抽苔的。
TPP在植物某一部分(池)中的特异性表达会产生其它有益的效应。可以设想由一个在种子形成早期有活性的启动子引导的TPP的表达能使发育的种子生长增加。通过一个花特异性的启动子来表达TPP可以取得类似的效果。简言之，如果通过合适的特异性启动子进行TPP的表达，就有可能使植物某一部分过度生长。果实中的特异性表达能导致相对于果肉来说果皮生长的增加。这能改善果实的脱皮，其对自动脱皮工业是有好处的。
在储油种子发芽过程中TPP的表达防止油的降解。在发芽的过程中，乙醛酸循环是非常活跃的。代谢途径将乙酰辅酶A经苹果酸转化为蔗糖，蔗糖可被运输并做为幼苗生长过程中的能量来源。此过程中的关键酶是苹果酸合成酶和异柠檬酸裂解酶。两个酶的表达被认为由己糖激酶信号传递来调节。这种调节的一种指征是2-脱氧葡萄糖和甘露糖均被己糖激酶磷酸化并能在不被进一步代谢的情况下传导它们的信号，苹果酸合成酶和异柠檬酸裂解酶表达的降低，种子中TPP的表达，降低了对己糖激酶的抑制，因而抑制苹果酸合成酶和异柠檬酸裂解酶以维持油储存至种子中，防止发芽。
与TPP效果相反，由TPS的表达引起的T-6-P的增加导致象在实施例中所述的其它效应。从此可知T-6-P量的增加引起矮化生长(尤其在TPS高表达时)、更多的披针形叶的形成、由于叶绿素的增加而颜色加深以及淀粉含量的增加。如上所知，一个反义海藻糖酶构建体的导入也会促成与TPS导入类似的效应。因此，使用反义海藻糖酶也同样可以实现由TPS所示的反应。此外，使用TPS和反义海藻糖酶的双重构建体可加强单个构建体的效果。
矮化是园艺植物中期望的现象，其中日本bonsai树是一个经典的实例。在如多子植物、玫瑰、孤挺花属(Amaryllis)、Hortensia、桦树和棕榈的植物中创造微型花会创造经济上的机会。除了植物界，矮化在动物也是需要的。它也可以在培养的作物例如莴苣中诱导抽苔，因为这样能迅速产生种子，所以是有益的。理想的，用于这些效果的TPS的表达在一种可诱导性启动子的控制下。顶端优势的丢失也引起多个芽的形成，这在例如苜蓿中有经济上的重要性。
生长的降低也是“蔬菜型快餐”工业所需，其中蔬菜被认为以快餐的形式消费。樱桃番茄是一个在市场上成功的大小缩小了的蔬菜的实例。可以想象微型尺寸的其它蔬菜如卷心卷、花椰菜、胡萝卜、甜菜、甘薯和果实如苹果、梨、桃子、甜瓜和几种热带水果如芒果和香蕉是有市场的。
对于所有对生物体产生损害的细胞如病原体细胞和癌细胞都期望生长降低。在后一方面通过改变T-6-P的水平，能看到在调节生长方面的作用。T-6-P水平的增加能降低癌组织的生长和代谢。一种升高细胞内T-6-P水平的方法是通过引入在内源TPP基因中引起一种突变的特异性重组事件来敲除这些细胞中的TPP基因。这样做的一种方法是通过一种癌细胞特异性内源化抗体在内源基因上导入一个能介导突变的DNA序列。另一种方法是用该DNA进行定点微粒轰击。第三种方法是可以使用一个癌细胞特异性病毒载体。
伴随T-6-P浓度的升高可见绿色更深的现象，这对于盆载花植物以及一般地用于园艺的种类和用于欣赏的草都是一种需要的特性。
T-6-P水平的增加也引起储存碳水化合物例如淀粉和蔗糖的增加。这将意味着储存碳水化合物的组织将会储存更多的物质。这可以通过实施例来说明，其中所示在植物中储存器官例如块茎生物量增加和如在甜菜中形成变粗的根(蔗糖的储存)。
可从中受益的作物是马铃薯、甜菜、胡萝卜、菊苣和甘蔗。
在马铃薯中另一个经济上重要的效应是用编码TPS基因的DNA转化后(造成T-6-P的增加)，即使在低温(4℃)下收获和储存块茎，也可以发现可溶性糖量降低。正常情况下为了防止早发芽，需要更冷的储存条件，但这样会造成马铃薯的过度甜化。还原糖量的减少对食品工业是很重要的，因为在还原糖和氨基酸之间发生美拉德反应(Maillard reaction)会变黑，故甜化的马铃薯块茎材料不适合于加工。
同样用编码TPS酶的多核苷酸转化甜菜，也可以获得蔗糖酶活性的抑制。在甜菜抑制其蔗糖酶的活性在经济上是非常重要的。
同样，在果实和种子中，可以改变储存。这不仅能导致储存量的增加，而且使储存化合物的组成也发生变化。种子产量的提高对玉米、水稻、谷类、豌豆、油籽油菜、向日葵、大豆和豆科植物的作物极其重要。此外，对所储存的碳水化合物的组成和量进行改变对于所有带果实的植物是重要的。尤其是对水果，储存产物的组成在硬度上产生改变，这对于如西红柿、香蕉、草莓、桃子、樱桃和葡萄等软水果尤其重要。
与TPP表达所看到的效应相反，TPS的表达降低了叶中蛋白质/碳水化合物的比率。这种效果在多叶作物例如饲料草和苜蓿中重要。此外，生物量降低的叶在amenity草中重要，但更重要的是它们有相对增加的能量含量。这个特性对如洋葱、韭葱和青贮玉米等作物是尤其有益的。
此外细胞内T-6-P可得量的水平可影响种子的生存力。
TPP在一种植物的一部分表达与TPS在此植物另一部分的表达的联合能协同增加上述描述的效果，也有可能通过使用特异性启动子在发育过程中连续表达基因。最后，通过将编码序列置于可诱导性启动子的控制下，也有可能诱导所参与的基因中任意一个的表达。可以想象所描述的应用方法的联合对本领域技术人员而言是显而易见的。
本发明通过下面的实施例进一步阐明。应强调这些实施例表示本发明特殊的实施方案，但应清楚的是本发明也覆盖这些实施例中的变化以及使用其它植物或表达系统。
                          实施例DNA操作
所有DNA操作(从大肠杆菌中分离DNA、限制性酶切、连接，转化，等)均依据标准实验方法(Sambrook等人。(1989)分子克隆：实验室手册(Molecular cloning:a laboratory manual)，第二版Cold spring Harborlaboratory出版社，CSH，纽约)来进行。菌种
在所有实施例中大肠杆菌K-12菌种DH5α被用于克隆。用于植物转化实验的根癌土壤杆菌菌种是EHA105和MOG101(Hood等人(1993)Trans.Research2,208)。土壤杆菌菌种MOG101的构建
土壤杆菌菌种MOG101的构建如WO96/21030中所述。大肠杆菌OtsA基因的克隆和pMOG799的构建
在大肠杆菌中磷酸海藻糖合成酶(TPS)由位于操纵子OtsBA中的OtsA基因所编码。otsA基因的克隆和序列测定在WO95/01446的实施例Ⅰ中被详述，此处引用作为参考。为了实现它在植物细胞中的表达，如在WO95/01446的实施例Ⅰ中更详细说明，开放阅读框架已与CaMV 35SRNA启动子的转录调节元件、ALMV引导子的转录增强子以及nos基因的转录终止子相连，得到pMOG799。含有pMOG799的大肠杆菌样品已按照布达佩斯条约于1993年8月23日(星期一)保藏在真菌菌种保藏中心(CBS),Oosterstraat 1,P.O.Box 273,3740 AG Baarn，荷兰：国际保藏研究所的保藏号为CBS430.93。patatin启动子的分离/pMOG546的构建
利用聚合酶链式反应将一个patatin启动子片段从马铃薯(Solanum.tuberosum)的染色体DNA中分离出来。合成一套与λpat21 patatin基因上游区域序列(Bevan等人(1986)核酸研究14,5564)互补的一套寡核苷酸，包括下列序列：5′AAG CTT ATG TTG CCA TAT AGA GTA G 3′    PatB32.2(SEQIDNO:5)5′GTA GTT GCC ATG GTG CAA ATG TTC   3′    PatATG.2(SEQIDNO:6)以从马铃薯中分离的染色体DNA为模板，用这些引物进行PCR以扩增一个1123bp的DNA片段。扩增的片段与λpat21 patatin序列有很高程度的类似性，并用EcoRⅠ接头克隆进pUC18载体，得到质粒pMOG546。构建pMOG845
pMOG845的构建在WO96/21030中描述。pVDH318，质体蓝素-TPS的构建
质粒pMOG798(在WO95/01446中描述)用HindⅢ消化，且与寡核苷酸二聚体TCV11和TCV12连接(见pMOG845的构建)。产生的载体用PstⅠ和HindⅢ酶切，再插入PotPiⅡ终止子产生pTCV118。质粒pTCV118用SmaⅠ和HindⅢ酶切产生含有TPS编码区域和PotPiⅡ终止子的DNA片段。加入BglⅡ接头，将所得片段插入用BamHⅠ消化的植物二元表达载体pVDH275(图.1)中，产生pVDH318。pVDH275是pMOG23(Sijmons等人。(1990),Bio/Technol.8.217)的衍生质粒，其带有在35S CaMV启动子控制下的NPTⅡ选择标记和含有豌豆质体蓝素(PC)启动子以及nos终止子序列的表述盒。存在于pVDH275中的质体蓝素启动子已由Pwee Gray(1993)植物杂志(Plant J.)3,437描述。使用PCR扩增和含有合适克隆位点的引物将此启动子转入二元载体中。大肠杆菌otsB基的克隆和pMOG1010的构建(35S CaMV TPP)
合成一套与大肠杆菌TPP基因(SEQ ID NO:3)序列互补的寡核苷酸，TPPⅠ(5′CTCAGATCTGGCCACAAA 3′)(SEQ ID NO:56)和TPPⅡ(5′GTGCTCGTCTGCAGGTGC 3′)(SEQ ID NO:57)。使用pMOG748(WO95/01446)做为模板，将这些引物用于PCR扩增375bp的DNA片段，此片段带有大肠杆菌TPP基因编码区域的3′部分，并在终止密码子的下游10bp处导入一个PstⅠ位点。此PCR片段用BglⅡ和PstⅠ酶切并克隆进pMOG445(EP0449376A2实施例7a)，并用BglⅡ和PstⅠ线性化。产生的载体用PstⅠ和HindⅢ酶切，插入一个PotPiⅡ终止子(见pMOG845的构建)。前面描述的载体用BglⅡ和HindⅢ酶切，分离产生的1325bp片段，并和用SmaⅠ和BglⅡ酶切的5′TPPPCR片段一同克隆进用SmaⅠ和HindⅢ线性化的pUC18中。产生的载体称为pTCV124。此载体用EcoRⅠ和SmaⅠ线性化并用于插入35S CaMV启动子(一个从含有35S CaMV双增强子启动子的pMOG18中分离的850bp EcoRⅠ-‘NcoⅠ’(NcoⅠ位点由绿豆核酸酶处理变成平端)片段)。此载体称为pTCV127。从这个载体中分离一个含有完整35S TPP表达盒的2.8kb EcoRⅠ-HindⅢ片段，并克隆进二元载体pMOG800，产生pMOG1010载体。pVDH321，质体蓝素(PC)TPP的构建
通过BamHⅠ消化、补平及随后再连接，去除质粒pTCV124的BamHⅠ位点。随后再用HindⅢ和EcoRⅠ酶切产生一个包含TPP编码区域和PotPiⅡ终止子的DNA片段。加入BamHⅠ接头，将所得片段插入植物二元表达载体pVDH275中(用BamHⅠ消化)，产生pVDH321。Patatin TPP表达载体的构建
与Patatin TPS表达载体的构建(见pMOG845的构建)类似，构建一个Patatin TPP表达载体以产生一个二元载体(pMOG1128)，其在转化以后能以块茎特异性的方式实现TPP的表达。其它表达载体的构建
与上述提及的载体的构建类似，使用带有NPTⅡ基因或潮霉素抗性基因做为选择性标记基因的二元载体，应用联合TPS、TPP或海藻糖酶的不同的启动子构建基因构建体。带有HPT选择标记的二元载体pMOG22的说明见Goddijn等人(1993)植物杂志4,863。三亲交配
在与含质粒pRK2013的大肠杆菌菌株HB101(Ditta等人(1980)美国国家科学院院报77,7347)的三亲交配中二元载体被移至根癌土壤杆菌菌株MOG101或EHA105中并用于转化。烟草(Nicotiana tabacum cv.SR1或cv.Samsun NN)的转化
通过植物组织与含有所述的目的二元载体的根癌土壤杆菌菌株MOG101共同培养转化烟草。使用如由Horsch等人(1985)科学227，1229中描述的烟草叶盘共培养进行转化。转基因植物从生长在含有卡那霉素的培养基的苗中再生，生根并转移到土壤中。马铃薯的转化
马铃薯(Solanum tuberosum cv.Kardal)用含有目的二元载体的土壤杆菌菌株EHA105转化。基本培养基是MS30R3培养基，其包括MS盐(Murashige和Skoog(1962)植物生理14,473),R3维生素(Ooms等人(1987)Theor.Appl.Genet.73,744),30g/L蔗糖，0.5g/L MES，最终pH5.8(用KOH调节)，需要时用8g/L Daichin琼脂固化。马铃薯的块茎削皮后并通过在96％乙醇中燃烧5秒钟进行表面消毒。在无菌水中熄灭火焰，切成约2mm厚的片。用一个钻从脉管组织中切出园片，在含有带二元载体的1-5×108细菌/ml的土壤杆菌EHA105的MS30R3培养基中孵育20分钟。用MS30R3培养基冲洗块茎园片并转移到凝固的后培养(Postculthre)培养基(PM)中。PM包括补充有3.5mg/L玉米素核苷和0.03mg/L吲哚乙酸(IAA)的M30R3培养基。两天后将园片转移至含有200mg/L头孢噻肟和100mg/L万古霉素的新鲜PM培养基中。三天后，块茎园片被转移到苗诱导培养基(SIM)中，其包括加有250mg/L羧苄青霉素和100mg/L卡那霉素的PM培养基。4-8周后，剪去从园片中生出的苗，置于生根培养基上(加有100mg/L头孢噻肟，50mg/L万古霉素和50mg/L卡那霉素的MS30R3培养基)。经过分生组织切割无菌性地繁殖苗。莴苣的转化
依据Curtis等人(1994)J.Exp.Bot.45,1441进行莴苣(Lattuac sativacv.Evola)的转化。甜菜的转化
依据Fry等人(1991)ISPMB第三届国际大会，Tucson USA文摘NO.384，或依据Krens等人(1996)植物科学(Plant Sci)116,97进行甜菜(Beta vulagaris维持群)的转化。番茄(Lycopersicon esculentum)的转化
依据Van Roekel等人(1993)Plant cell Rep.12,644进行西红柿的转化。拟南芥(Arabidopsis)的转化
通过Clarke等人(1992)Plant.Mol.Biol.Rep.10,178描述的方法或通过Valvekens等人(1988)美国国家科学院学报，85,5536描述的方法进行拟南芥(Arabidopsis thaliana)的转化。微块茎的诱导
带有辅助性分生组织的体外马铃薯植物的茎片段被转移到微块茎诱导培养基中。微块茎诱导培养基含有补充R3维生素、0.5g/L MES(最终pH=5.8，用KOH调节)和用8g/L Daichin琼脂固化的、60g/L蔗糖和2.5mg/L激动素的1X MS盐。在24℃下黑暗中生长3至5周后，形成微块茎。有效霉素A的分离
已发现有效霉素A是各种来源的范围从(IC50)10-6M至10-10M的海藻糖酶的高度特异抑制剂(Asano等人(1987)抗生素杂志(J.Antibiot.)40,526；Kameda等人(1987)抗生素杂志40,563)。除了海藻糖酶，它并不特异性抑制任何α-或β-糖基水解酶(glycohydrolase)活性。有效霉素A从Solacol,由Kendall等人(1990)植物化学(Phytochemistry)29,2525所描述的一种商业化农用制剂(Takeda chem.Indust.,Tokyo)中分离。步骤包括将3％Solacol农用制剂经过离子交换层析(QAE-Sephadex A-25(Pharmacia)，床体积10ml，平衡缓冲液0.2mM Na-Pi,pH7)。将1mlSolacol上柱并用水洗脱为7个流份，实际上所有的有效霉素均从第4流份内回收。依据100％的回收率，使用这个步骤，有效霉素A的浓度在MS培养基中被调至1.10-3M以用于海藻糖积累实验。此外，有效霉素A和B也可如Iwasa等人(1971)抗生素杂志24,119所述的直接从吸水链霉菌柠檬亚种(Strepotomyces hygroscopicus var.Limoneus)中纯化，此处引入其内容作为参考。碳水化合物分析
通过带有脉冲电化学探测的阴离子交换层析来定量测定碳水化合物。通过用80％乙醇抽提匀浆的冷冻材料制备抽提液。在室温下抽提15分钟后，蒸发可溶部分并溶于蒸馏水中。样品(25μl)在配有4×250mmDionex 35391 Carbopac PA-1柱和4×50mm Dionex 43096 CarbopacPA-1预柱的Dionex DX-300液相层析仪上分析。用1ml/min的100mMNaOH及随后的NaAC梯度洗脱。用脉冲电化学探测器(Dionex,PED)来检测糖。商业可得的碳水化合物(Sigma)用作标准品。淀粉分析
淀粉分析如在Aman等人(1994)碳水化合物方法(Methods inCarbohydrate Chemistry),Volume x(BeMiller等人编)，111-115页所述进行。表达分析
导入各种植物种类中的基因的表达用Northern杂交分析来监测。海藻糖-6-磷酸磷酸酶测定
通过测定从[14C]海藻糖-6-磷酸而来的[14C]海藻糖的生成(Londesborough和Vuorio(1991)普通微生物学杂志(J.of Gen.Microbiol.)137,323)在37℃下测定TPP。粗抽提液在含5.5mMMgCl2,25mM Tris-HCl,pH7.4中制备。样品在含有1mg/ml BSA的抽提缓冲液中稀释至1mg/ml的蛋白质浓度。标准测定混合物(终体积50μl)含有27.5mM Tris-HCl,pH7.4,5.5mM MgCl2,1mg/ml BSA和0.55M T-6-P(特异性活性854cpm/nmol)。通过加入5μl酶起始反应，1小时后通过在沸水中加热5分钟终止反应。加入AG1-X8(甲酸盐)阴离子交换树脂(BioRad)，反应混合物在室温下平衡20分钟后离心。通过液体闪烁计数仪测定样品上清中(400μl)的放射性。用于己糖激酶测定的植物抽提液的制备
在液氮中研磨冷冻植物材料且用含有完全蛋白酶抑制剂(BoehringerMannheim)的抽提缓冲液(EB:100mM HEPES pH7.0(KOH),1％(w/v)PVP,5mM MgCl2,1.5mM EDTA,0.1％v/v β-MeOH)匀浆30秒。离心后上清中的蛋白质用80％硫酸铵沉淀，并溶于Tris-HCl pH7.4中，抽提液用100mM Tris-HCl pH7.4透析过夜。一部分样品用于己糖激酶的测定。己糖激酶测定
在含有0.1M Hepes-KOH pH7.0,4mM MgCl2,5mM ATP,0.2mMNADP+,10U/ml磷酸肌酸激酶(溶于50％甘油，0.1％BSA,50mMHepes pH7.0中),3.5mM磷酸肌酸、7U/ml葡萄糖-6-磷酸脱氢酶和2mM葡萄糖的测定液中通过测定25℃下340nm OD值的上升而测定己糖激酶活性。当用2mM果糖而不是用葡萄糖作为己糖激酶反应的底物时，还包括3.8U/ml磷酸葡糖异构酶。另外，使用由Gancedo等人(1977)生物化学(J.Biol.Chem.)252,4443所述的己糖激酶测定法。
                      实施例1
大肠杆菌otsA基因(TPS)在烟草和马铃薯中的表达
产生了带有由de35S CaMV启动子(pMOG799)或质体蓝素启动子(pVDH318)启动的otsA基因的转基因烟草植物。
产生了带有由马铃薯块茎特异性Patatin启动子(pMOG845)启动的otsA基因的转基因马铃薯植物。
使用根癌土壤杆菌用二元载体pMOG799转化烟草叶盘。在卡那霉素上选择转基因苗。一些土壤生长型植物的叶子在侧向上并不完全展开，导致了一种披针形形态(图.31)。此外，顶端优势的降低导致矮化生长及几个腋生芽的形成。32株植物中的7株表现为严重的生长减退，在开花时植物长度达到4-30cm(表1)。表1．otsA转基因烟草植物叶样品中海藻糖的积累和在开花时植株的高度
   植物品系  海藻糖mg.g-1鲜重    高度cm
    对照      0.00     60-70
    799-1      0.04     ND
    799-3      0.02     10
    799-5      0.08     4
    799-15      0.055     30
    799-24      0.02     12
    799-26      0.05     25
    799-32      0.055     30
    799-40      0.11     25
ND=未测定
对照植物在开花时长度达到60-70cm。带有矮化生长表型的转基因品系产生较少的种子。Northern杂交分析证实有矮化生长表型的植物表达了来源于大肠杆菌的otsA基因(图2)。在对照植物中检测不到转录物。通过对来自32株转基因的温室生长烟草植物的叶材料的碳水化合物分析证明了所导入基因的功能性，揭示在长度减少的植物中存在每克鲜重(Fresh weight)中范围从0.02至0.12mg的海藻糖(表1)，表明TPS催化的反应产物被植物磷酸酶去磷酸化。通过用猪海藻糖酶处理粗抽提液获得在烟草中海藻糖积累的进一步证据。延长烟草叶抽提液与海藻糖酶的孵育导致海藻糖的完全降解(数据未显示)。在对照植物或没有异常表型的转基因烟草植物中没有检测到海藻糖。表1a初始PC-TPS烟草转化物
  植物品系      叶fw(g)   叶面积cm2  分枝数    植物高度cm 叶色  腋生芽      Fw/面积g/cm2   干物质％     干物质/面积g/cm2
   对照1     8.18   349.37     1  wt     0.023     7.21     0.0017
   对照2     10.5   418.89     1  wt     0.025     9.52     0.0024
   对照3     9.99   373.87     1  wt     0.027     12.91     0.0035
   对照4     9.91   362.92     1  wt     0.027     9.59     0.0026
   对照5     9.82   393.84     1  wt     0.025     11.51     0.0029
   平均     0.0254     10.148     0.0026
2 8.39 290 2 105 wt 0.029 12.16 0.0035
    3     9.34    296     1     123  wt     0.032     12.21     0.0039
    4     8.36    254     2     130  wt   许多     0.033     10.05     0.0033
    6     2.28    106     5     90  wt     0.022     11.40     0.0025
    8     5.21    133     4     100  深   许多     0.039     7.49     0.0029
    10     8.08    258     2     165  深   许多     0.031     12.25     0.0038
    11     2.61    64     12     95  深   许多     0.041     9.20     0.0038
    13     2.83    92     1     150  深   许多     0.031     8.48     0.0026
    16     5.86    209     3     130  深   许多     0.028     10.58     0.0030
    17     5.15    224     2     155  wt     0.023     11.65     0.0027
    18     17.2    547     1     133  wt     0.031     10.35     0.0033
    19     2.13    63     4     80  深   许多     0.034     11.74     0.0040
    20     3.44    113     4     90  wt+Da   许多     0.030     8.14     0.0025
21 9.88 246 1 105 深 许多 0.040 8.50 0.0034
    22     13.1    409     1     135  wt     0.032     10.68     0.0034
    23     2.50    73     6     55  深   许多     0.034     8.80     0.0030
    24     8.76    286     2     130  wt     0.031     15.07     0.0046
    27     7.91    219     1     124  wt     0.036     14.41     0.0052
    28     10.0    269     2     117  深   许多     0.038     8.62     0.0032
    29     4.17    142     1     85  深   许多     0.029     10.07     0.0030
    30     10.2    343     1     160  wt     0.030     9.56     0.0029
    32     1.95    61     3     75  深   许多     0.032     8.21     0.0026
    33     2.85    96     5     95  wt+Da   许多     0.030     11.23     0.0033
    34     8.38    244     1     123  wt     0.034     13.60     0.0047
    35     5.59    173     3     126  wt     0.032     14.49     0.0047
    36     3.28    84     3     100  深   许多     0.039     11.28     0.0044
    37     7.80    222     1     125  wt+Da   许多     0.035     11.28     0.0040
    39     3.70    131     2     123  wt     0.028     17.84     0.0050
    40     2.40    68.5     3     108  深   许多     0.035     9.58     0.0034
  平均     0.032     11.00     0.0035
pVDH318转基因烟草植物发育成矮化生长，并长出比对照叶子绿色更深且稍厚的小叶子，一种类似于pMOG799转基因植物的表型(表1a)。进一步分析这些叶子表明与对照相比每个叶面积的鲜重和干重量(表1a和2)增加。深绿色叶子表明在转基因叶子中存在更多的叶绿素(表1b)。pMOG799(35STPS)和pMOG1177(PCTPS)转基因的植物在可溶性碳水化合物、叶绿素、海藻糖和淀粉方面进行分析(图.32)。pMOG1177在功能上与pVDH318相同。
表1b.PC-TPS转基因烟草(N.tabacum)叶(To)中叶绿素的含量
     样品     叶绿素(mg/g叶)
    对照1      0.59
   PC TPS 10-1      0.75
   PC TPS 10-2      0.80
   PC TPS 11      0.60
   PC TPS 13      0.81
   PC TPS 16      0.90
   PC TPS 19      0.64
   PCT PS 37      0.96
注：生长过程中光照条件会显著影响叶绿素的确切水平。叶绿素的计算含量只可在一次实验内收获和分析的植物之间进行比较。
表2．质体蓝素TPS E.coli转基因叶材料的鲜重和干重
PC-TPS转基因烟草N.Tabacum cv.Samsun NN
   转基因     对照
   鲜重(g)     0.83     0.78
   干重(g)     0.072     0.079
    ％干物质     8.70％     10.10％
    鲜重/面积     39(139％)     28(100％)
    干重/面积     3.46(121％)     2.87(100％)
    面积(单位)     208     275
长出的叶长度和宽度之比的计算清楚地表明PC-TPS转基因植物的叶更具披针形(表3)。
用带有二元载体pMOG845的根癌土壤杆菌EHA105转化马铃薯块茎园片(Solanum tuberosum cv.Kardal)。以类似于空载体对照的转化频率获得转基因植物。所有获得的植物在形态上与野生型植物没有区别，表明组织特异性启动子的使用防止了在组成性启动子启动TPS基因的植物中所观察到的表型。在加有10-3M有效霉素A的微块茎诱导培养基上培养的转基因和野生型植物的茎部分以诱导微块茎。作为对照，在不加有效霉素A的培养基上诱导微块茎。在加有效霉素A的培养基上诱导的微块茎显示比在未加有效霉素A的培养基上诱导的微块基中海藻糖水平升高(表4)。在野生型植物中少量海藻糖的存在表明存在一个有功能的海藻糖生物合成途径。表3 pVDH318转基因烟草植物(cv.samsum NN)
转化物    长度(cm)    宽度(cm)     比例1/w
对照1      12      8      1.50
对照2      13      8.5      1.53
对照3      12      7.5      1.60
对照4      15      9      1.67
对照5      25      16      1.56
对照6      24      16.5      1.45
对照7 28 20 1.40
对照8      25      16      1.56
对照9      26      19      1.37
对照10      21      15      1.40
1318-28      16      8.5      1.88*
1318-29      11      6.5      1.69
1318-30      19      14      1.36
1318-35      19      12      1.58
1318-39      21      16.5      1.27
1318-40      14      7      2.00*
1318-34      21      13      1.62
1318-36      13.5      7      1.93*
1318-37      17      9      1.89*
1318-4      20.5      12      1.71
1318-23      14      4.5      3.78*
1318-22      27      18      1.50
1318-19      9      4      2.25*
1318-2      27      19      1.42
1318-15      11      5      2.20*
1318-10      20      13      1.54
1318-3      25      18      1.39
1318-21      17      8.5      2.00*
1318-16 20 10 2.00*
1318-6      19      10.5      1.81
1318-20      13      5      2.60*
1318-33      12      5      2.40*
1318-27      23      20      1.15
1318-11      12      5      2.40*
1318-8      18.5      6.5      2.85*
1318-24      27      17      1.59
1318-13      15      7      2.14*
1318-17      24      16      1.50
1318-18      23      16.5      1.39
*典型的TPS表型                 对照的l/w比例平均为1.50
                 表4．海藻糖(％鲜重)
   +有效霉素A     -有效霉素A
845-2      0.016          -
845-4       -          -
845-8      0.051          -
845-11      0.015          -
845-13      0.011          -
845-22      0.112          -
845-25      0.002          -
845-28      0.109          -
野生型马铃薯(kardal)      0.001          -
实施例2
         大肠杆菌otsB基因(TPP)在烟草中的表达
产生了带有由35S CaMV启动子(pMOG1010)和质体蓝素启动子(pVDH321)双重加强启动的otsB基因的转基因烟草植物。
用pMOG1010转化的烟草(cv.Samsun NN)表明在温室中非常大的叶子的发育过程，(叶面积平均增加高达约140％)，当其完全长成时会开始生成萎黄病(图.31)。此外，与对照相比生成了更粗的茎，在一些情况下导致茎的胀破。在一些情况下从植物的基部生成多个茎(分枝)(表5)。长成大叶的植物的叶样品与对照植物相比表明，海藻糖-6-磷酸磷酸酶活性增加了5-6倍，这证明了所导入基因的功能。异常大叶子的干和鲜重/cm2与对照叶相类似，表明叶子大小的增加是由于干物质的增加而不是水含量的增大。花序也受TPP表达的影响。有矮化表型的植物可能是由于TPP基因在所有植物部分的组成性表达引起。其长出许多并未完全成熟并掉落或坏死的小花。花的发育和种子形成在不太矮化的植物中似乎所受的影响也较少。表5  pMOG1010,de35SCaMV TPP转基因烟草植物
行    高度(cm)    叶面积cm2  变白(5级)   分枝    Fw/cm2(g)   DW/cm2(g)    荧光Norm./    茎直径(mm)
    1     63     489     5     +   0.096   0.0031     A     13
    2     90     472     3     +   0.076   0.0035     A     19
    3     103     345     0   0.072   0.0023     N     16
    4     90     612     4     +   0.096   0.0039     A     5,6,7,8,14
    5     104     618     1     +   0.08   0.0035     N     17
    6     110     658     3     +   0.078   0.0035    N/A     19
    7     120     427     0   0.074   0.0037     N     18
    8     90     472     2   0.076   0.0023     A     6,7,18
    9     60     354     3     +   0.092   0.0031     N     9,13
    10     103     342     0   0.084   0.0025     N     16
    11     110     523     1     +   0.076   0.0031     A     18
    12     90     533     1     +   0.098   0.0023     N     5,16
    13     53     432     4     +   0.084   0.0043     A     5,6,6,14
    14     125     335     0   0.086   0.0023     N     17
    15     85     251     0   0.094   0.0031     N     14
    16     64     352     0   0.076   0.0028     A     9,13
    17     64     267     0     +   0.11   0.0018     N     15
    18     71     370     2   0.086   0.0032     A     5,7,8,14
    19     92     672     4     +   0.076   0.0034     N     16
    20
    21     94     517     4     +   0.07   0.0044     N     17
    22     96     659     3     +   0.082   0.0031     N     17
    23     110     407     0   0.082   0.0042     N     16
    24     90     381     0   0.1   0.0034     A     15
    25     120     535     0   0.076   0.003     N     16
    26     42     511     5   0.08   0.0038     15
    27     100     468     0   0.086   0.0018     N     17
    28     83     583     3   0.072   0.0034    N/A     17
    29     27     452     5     +   0.104   0.004     ？     7,7,15
    30     23     479     4     +   0.076   0.0027     ？     6,6,7,9,14
    31     103     308     1   0.086   0.0027     N     14
    32     48     286     0   0.108   0.002     N     16
    33     67     539     5     +   0.102   0.0056     A     18
    34     40     311     5     +   0.084   0.0051     A     7,7,12
表6初始PC-TPP烟草转化物
 植物品系      叶fw(g)    叶面积cm2  分枝数   植物高度cm   叶色       变白     Fw/面积    干物质％    干物质/面积
   对照1     8.18  349.37   0.023     7.213
   对照2     10.5  418.89   0.025     9.524
   对照3     9.99  373.87   0.027    12.913
   对照4     9.91  362.92   0.027     9.586
   对照5     9.82  393.84   0.025    11.507
      平均   0.0255    10.149   0.0026
    11     11.5  338     3    114    wt   0.0340     6.43   0.0022
    12     20.1  742    浅白       变白   0.0272     9.82   0.0027
    14     9.61  345     1    150    wt   0.0279     11.65   0.0032
    16     5.99  234     5    54    浅白       变白   0.0256     12.85   0.0033
    17     9.10  314     3    105    wt   0.0290     8.79   0.0025
    18     3.78  158     3    75    浅白   0.0239     7.67   0.0018
    19     2.98  130     1    70    浅白   0.0229     10.74   0.0025
    20     8.33  296     3    70    浅白       变白   0.0281     7.56   0.0021
    22     11.5  460     1    117    浅白       变白   0.0251     3.03   0.0008
    24     9.42  369     1    155    wt   0.0255     10.62   0.0027
    25     15.9  565     1    170    wt   0.0282     9.54   0.0027
    26     8.07  343     2    155    wt   0.0235     15.37   0.0036
    28     11.7  411     2    65    浅白       变白   0.0286     6.90   0.0020
    29     11.6  420     1    117    浅白       变白   0.0277     3.53   0.0010
    31     8.21  307     2    153    wt   0.0267     12.79   0.0034
    32     4.03  175     1    70    浅白   0.0230     18.86   0.0043
    34     4.81  203     1    107    浅白   0.0237     20.58   0.0049
    35     7.86  307     3    10    浅白   0.0256     11.45   0.0029
    36     4.90  206     2    95    浅白   0.0238     22.65   0.0054
    37     13.9  475     1    135    wt   0.0293     4.82   0.0014
    38     16.6  614     1    90    浅白       变白   0.0271     3.31   0.0009
    39     14.9  560     1    112    wt       变白   0.0267     6.08   0.0016
    40     24.5  843   0.0292     9.80   0.0029
    41     8.86  343     1    115    wt   0.0258     2.93   0.0008
    42     6.93  289     1    wt   0.0240     3.32   0.0008
    43     11.3  433    136    135    wt   0.0261     6.73   0.0018
    44     10.0  341     2    135    wt   0.0294     6.49   0.0019
    45     9.40  327     2    135    wt   0.0287     8.51   0.0024
    46     9.18  284     2    115    wt   0.0323     15.69   0.0051
      平均   0.027     9.60   0.0025
wt=野生型
用pVDH321转化的烟草植物(cv.Samsun NN)揭示了在温室中与pMOG1010转基因植物相类似的一种发育模式(表6)。
pMOG1010(35S-TPP)和pMOG1124(PC-TPP)转基因植物在碳水化合物、叶绿素、海藻糖和淀粉方面经过分析。(图.32)。叶绿素数据也见表6a。
表6a.PC-TPP转基因烟草叶(To)(N.tabacum)的叶绿素含量
样品      叶绿素(mg/g叶)     叶表型
对照1      1.56     野生型
对照2      1.40     野生型
对照3      1.46     野生型
对照4      1.56     野生型
对照5      1.96     野生型
PC TPP 12      0.79     变白
PC TPP 22      0.76     变白
PC TPP 25      1.30     野生型
PC TPP 37      0.86     野生型
PC TPP 38      0.74     变白
注：生长过程中的光照条件会显著影响叶绿素的确切水平。叶绿素的计算含量只可在一次实验内收获和分析的植物之间进行比较。
                          实施例3编码来源于卷柏(Selaginella lepidophylla)和向日葵(Helianthus annuus)的海藻糖-6-磷酸合成酶的基因片段的分离
来自大肠杆菌和酿酒酵母的TPS蛋白质序列的比较表明存在几个保守区域。这些区域被用于设计简并性引物，这些引物在使用大肠杆菌和酵母的基因组DNA做为模板的PCR扩增中进行测试。使用了一个带有退火和延伸步骤之间的温度循环以促进简并性引物的退火的PCR程序。
使用引物组TPSdeg 1/5和TPSdeg 2/5并以卷柏的cDNA为模板进行PCR扩增。
所使用的简并性引物(IUB密码)TPSdeg1:GAY ITI ATI TGG RTI CAY GAY TAY CA   (SEQ IDNO:7)TPSdeg2:TIG GIT KIT TYY TIC AYA YIC CIT TYC C(SEQ IDNO:8)TPSdeg5:GYI ACI ARR TTC ATI CCR TCI C        (SEQ IDNO:9)
克隆了预期大小的PCR片段并测序。因为分离了许多同源序列，用Southern杂交分析确定哪一个克隆可与卷柏属基因组DNA杂交。分离到两个克隆，其中克隆8的序列在SEQ ID NO:42(PCR引物组合1/5)中给出，克隆43的序列在SEQ ID NO:44(PCR引物组合2/5)中给出，它们在氨基酸水平上显示出与大肠杆菌和酵母来源的TPS基因有高百分比的相同区域。
使用PCR组合TPSdeg 2/5在以向日葵基因组DNA为模板的PCR扩增中从向日葵中分离了一个TPS基因。序列分析和Southern杂交证实与来源于大肠杆菌、酵母和卷柏属的TPS基因有同源性。用各种生物体中来源的EST序列(表达的序列标鉴)与这些序列比较，见表6b和SEQ IDNOS 45-53和41，表明在水稻和拟南芥属中存在高度同源基因，这支持了我们的发明即大多数植物均含有TPS同源基因(图.3)。Table 6b.
 dbEST ID.  Genbank保藏号  生物 功能
 35567  D22143  水稻 TPS
 58199  D35348  Caenorhabditis elegans TPS
 60020  D36432  Caenorhabditis elegans TPS
 87366  T36750  酿酒酵母 TPS
 35991  D22344  水稻 TPS
 57576  D34725  Caenorhabditis elegans TPS
 298273  H37578  拟南芥 TPS
 298289  H37594  拟南芥 TPS
 315344  T76390  拟南芥 TPS
 315675  T76758  拟南芥 TPS
 317475  R65023  拟南芥 TPS
 71710  D40048  水稻 TPS
 401677  D67869  Caenorhabditis elegans TPS
 322639  T43451  拟南芥 TPS
 76027  D41954  水稻 TPP
 296689  H35994  拟南芥 TPP
 297478  H36783  拟南芥 TPP
 300237  T21695  拟南芥 TPP
 372119  U37923  水稻 TPP
 680701  AA054930  Brugia malayi 海藻糖酶
 693476  C12818  Caenorhabditis elegans 海藻糖酶
 311652  T21173  拟南芥 TPP
 914068  AA273090  Brugia malayi 海藻糖酶
 43328  T17578  Saccharomyces cerevisiae TPP
 267495  H07615  Brassica napus 海藻糖酶
 317331  R64855  拟南芥 TPP
 15008  T00368  Caenorhabditis elegans 海藻糖酶
 36717  D23329  水稻 TPP
 71650  D39988  水稻 TPP
 147057  D49134  水稻 TPP
 401537  D67729  Caenorhabditis elegans 海藻糖酶
 680728  AA054884  Brugia malavi 海藻糖酶
 694414  C13756  Caenorhabditis elegans 海藻糖酶
 871371  AA231986  Brugia malayi 海藻糖酶
 894468  AA253544  Brugia malayi 海藻糖酶
 86985  T36369  酿酒酵母 TPP
                      实施例4
从烟草(Nicotiana tabacum)中分离植物TPS和TPP基因
使用PCR在来源于烟草叶总RNA制备物的cDNA上分离出植物编码TPS和TPP的cDNA片段。表7中“嵌套式”一栏表示是否需要用引物组3和4进行第二轮PCR扩增以获取相应的DNA片段。引物均包括在序列表中(表7)。用提及的引物组获得的DNA片段的亚克隆和随后的序列分析表明其与已知的TPS基因基本同源(图.4&5)。
        表7植物来源的TPS和TPP cDNA的扩增
TPS-cDNA 引物1 引物2 嵌套式 引物3 引物4
“825”bpSEQ ID.NO22&23 Tre-TPS-14SEQ ID NO30 Deg1SEQ ID NO7 否
“840”bpSEQ ID NNO18&19 Tre-TPS-14SEQ ID NO30 Tre-TPS-12SEQ ID NO31 是 Tre-TPS-13SEQ ID NO32 Deg5SEQ ID NO9
“630”bpSEQ ID NO20&21 Tre-TPS-14SEQ ID NO30 Tre-TPS-12SEQ ID NO31 是 Deg2SEQ ID NO8 Deg5SEQ ID NO9
TPP-cDNA 引物1 引物2 嵌套式
“723”bpSEQ ID NO16&17 Tre-TPP-5SEQ ID NO35 Tre-TPP-16SEQ ID NO38 否
“543”bpSEQ ID NO14 Tre-TPP-7SEQ ID NO36 Tre-TPP-16SEQ ID NO38 否
“447”bpSEQ ID NO12 Tre-TPP-11SEQ ID NO37 Tre-TPP-16SEQ ID NO38 否
                        实施例5来自向日葵(Helianthus annuus)和烟草(Nicotiana tabacum)的一种两分TPS/TPP基因的分离
使用来自向日葵的TPS基因片段的序列信息，利用RACE-PCR技术获得一全长向日葵TPS克隆。全长克隆的序列分析以及TPS和TPP编码序列与来自酵母的TPS2的序列比较(图.6)表明分离的克隆编码一种TPS/TPP两分酶(SEQ ID NO 24,26和28)。分离的两分克隆(pMOG1192)依布达佩斯条约的规定已于1997年4月21日以保藏号CBS692.97保藏于菌种保藏中心局(Central Bureau for Strain collections)中。随后我们考察了是否其它植物种类也含有TPS/TPP两分克隆。从烟草中扩增出来一种TPS/TPP cDNA。用引物TPS deg1/TRE-TPP-16 PCR以及用引物TPS deg2/TRE-TPP-15(SEQ ID NO:33)嵌套式PCR(nestedPCR)后检测到一个预期大小的DNA产物(即1.5kb)。用TPS deg1/TRE-TPP-6(SEQ ID NO:34)PCR以及用引物TPS deg2/TRE-TPP-15嵌套式PCR后出现相同的带。后一片段在Southern杂交实验中可与向日葵两分cDNA杂交。此外使用计算机数据检索，确认了一种拟南芥(Arabidopsis)两分克隆(SEQ ID NO:39)。
                     实施例6
         植物来源的TPS基因在植物中的表达
通过分离TPS基因相应的全长cDNA克隆并随后在植物中35SCaMV动子控制下表达这些克隆，获得来源于向日葵和卷柏(Selaginellalepidophylla)TPS基因功能的进一步证据。通过卷柏属酶的表达产生的海藻糖的积累已被Zentella和Iturriaga(1996)(植物生理111，文摘88)所报道。
                     实施例7
      来自单子叶植物种类的编码TPS和TPP的基因
在Genebank序列中的计算机检索表明存在几个与来自酵母的TPS1和TPS2同源的水稻EST序列(图.7)，它们已包括在序列表中(SEQ IDNO:41,51,52和53)。
                    实施例8
                人TPS基因的分离
从人cDNA中分离TPS基因。使用简并性TPS引物deg2和deg5在人cDNA上进行PCR反应。这产生了预期的0.6kb的TPS片段。序列分析(SEQ ID NO 10)和与TPSyeast的序列比较表明分离的序列编码一个同源的TPS蛋白(图.8)
                    实施例9
          通过反义抑制以抑制内源性TPS的表达
通过在需要抑制的细胞或组织中在启动反义TPS基因的启动子控制下，同源TPS基因的反义表达可以抑制内源性TPS基因的表达。尽管在一反义表达载体中并不需要表达完整的编码区域，此方法中，优选使用与所要抑制的TPS基因完全相同的序列。这种编码区域的片段已证明在基因表达的反义抑制中是有功能的。此外，与内源基因有足够的同源性的异源基因可以用于反义的方法。
只要保证所抑制的导入基因的编码区域以反方向导入也可使用与pMOG845和pMOG1010类似的二元载体。适于在靶组织中启动基因表达的所有合适的启动子也适合于基因的反义表达。
                       实施例10
          通过反义抑制以抑制内源性TPP的表达
与可用于在细胞和组织中启动TPS反义表达的载体的构建相类似(实施例9)，构建了启动TPP基因反义表达的载体。
                       实施例11
在有效霉素A上生长的野生型烟草和马铃薯植物中海藻糖的积累
通过在有10-3M海藻糖酶抑制剂有效霉素A中培养野生型植物获得了在烟草中存在海藻糖生物合成途径的证据。经过处理的植物积累非常少量的海藻糖，最多达0.0021％(鲜重)。在培养于未加抑制剂的任何对照植物中从未检测到海藻糖的积累。用培养于有效霉素A中的野生型微块茎也可获得类似数据。17个品系中有10个积累平均0.001％海藻糖(鲜重)(表4)。在未加有效霉素A的培养基上诱导的微块茎中未观察到海藻糖。
                      实施例12
     在反义海藻糖酶转基因马铃薯植物中海藻糖的积累
用一个35S CaMV反义海藻糖酶构建体(SEQ ID NO:54和55,pMOG1027；描述于WO96/21030中)转化野生型马铃薯植物获得存在内源性海藻糖生物合成基因的进一步证据。一个pMOG1027转基因马铃薯苗在鲜重基础上表现出海藻糖积累达0.008％。通过用海藻糖酶特异性降解积累的海藻糖证实了所观察到的海藻糖峰是相同的。一些pMOG1027转基因品系的茎显示积累了少量海藻糖(图.9)。
                       实施例13
        通过海藻糖-6-磷酸抑制植物己糖激酶的活性
为了证明海藻糖-6-磷酸对己糖激酶活性的调节作用，制备植物抽提液并在缺少和存在海藻糖-6-磷酸的情况下检测己糖激酶活性。·用果糖(图.10，图.11)和葡萄糖(图.11)作为底物检测马铃薯块茎抽提液。依据Gancedo等人(1997)生物化学杂志(J.Biol.Chem.)252,4443使用1mM T-6-P和果糖作为底物进行马铃薯块茎检测。依据在实验部分描述的方法对烟草，水稻和玉米进行下列检测。·使用果糖(图.12)和葡萄糖(图.12和图.13)作为底物检测烟草叶抽提液。·使用果糖和葡萄糖(图.14)作为底物检测水稻叶抽提液。·使用果糖和葡萄糖(图.15)作为底物检测玉米叶抽提液。
                         实施例14
通过海藻糖-6-磷酸在动物细胞培养物中抑制己糖激酶的活性
为了证明在动物细胞中己糖激酶活性的调节，从小鼠杂交瘤细胞培养物中制备总细胞抽提液。在如Gancedo等人所述的条件(见上)下使用葡萄糖或果糖作为底物进行己糖激酶检测。通过将细胞沉淀先后置于20％蔗糖和蒸馏水中将小鼠杂交瘤细胞渗透压休克。此粗蛋白抽提液被用于己糖激酶测定(50μl抽提液相应于约200μg蛋白质)中。
         表8．通过T-6-P抑制动物己糖激酶的活性
底物 浓度(mM) T6P(mM) V0(ODU/min) V1(ODU/min) 抑制(％)
葡萄糖 2 0.83 0.0204 0.0133 35
葡萄糖 20 0.83 0.214 0.0141 35
葡萄糖 100 0.83 0.0188 0.0125 34
果糖 20 0.23 0.0207 0.0205 1
果糖 20 0.43 0.0267 0.0197 26
果糖 20 0.83 0.0234 0.0151 35
果糖 20 1.67 0.0246 0.0133 46
获得的资料清楚地表明在小鼠细胞抽提液中的己糖激酶活性被海藻糖-6-磷酸抑制。观察到此效果的T-6-P浓度范围与在粗植物抽提液中观察到的类似。使用葡萄糖或果糖为酶的底物，在用海藻糖-6-磷酸对己糖激酶活性抑制的效率上没有可观察到的差别。
                   实施例15
     表达TPS和TPP烟草植物的光合作用和呼吸作用使用35S-TPP(1010-5),PC-TPS(1318-10和1318-37)转基因烟草植物和野生型烟草(Samsum NN)植物，确定在叶子中这些基因的表达对光合作用和呼吸作用的效果。
在气体交换实验装置上进行测量。使用远红外气体分析设备依据进气和出气之间浓度上的差别计算气体交换速度。测定了来源于相同叶子的光合作用和呼吸作用。每一个转基因植物中使用最年轻的，完全成熟的叶(上叶)和其下3-4层叶子的一个叶(下叶)。
在350vpm和950vpm的CO2浓度下四个样品中以0-975μmol.m-2.S-1(200Watt m-2)的光合活性光强度(PAR)的函数测量光合作用。
使用两个不同的时间尺度来测量呼吸作用。光合作用后短暂的黑暗时期内进行的测量在表9中记作RD。这些数值反应了瞬时活性，因为呼吸作用基本上在黑暗时期发生变化。由此，整个夜间的数值也被总结在表10(只在350vpm CO2下测量)中。表9  光合作用和呼吸作用的速率，STD为标差差
 上叶  350ppm   950ppm
    μl/m2/s      STD     μl/m2/s      STD
 野生型  RD      0.0826     0.048      1.016     0.142
 EFF      0.060     0.004      0.087     0.004
 AMAX      11.596     0.588      19.215     0.942
 1010-5  RD      0.873     0.060      1.014     0.134
 EFF      0.059     0.002      0.090     0.007
 AMAX      12.083     1.546      18.651     1.941
 1318-10  RD      0.974     0.076      1.078     0.108
 EFF      0.064     0.003      0.088     0.008
 AMAX      16.261     2.538      24.154     1.854
 1318-37  RD      1.067     0.140      1.204     0.116
 EFF      0.061     0.002      0.084     0.011
 AMAX      16.818     2.368      25.174     2.093
 下叶
 野生型  RD      0.0438     0.079      0.526     0.112
 EFF      0.068     0.002      0.085     0.004
 AMAX      6.529     1.271      11.489     1.841
 1010-5  RD      0.455     0.068      0.562     0.118
 EFF      0.064     0.002      0.085     0.006
 AMAX      8.527     0.770      13.181     1.038
 1318-10  RD      0.690     0.057      0.828     0.086
 EFF      0.064     0.008      0.085     0.005
 AMAX      11.562     1.778      20.031     1.826
 1318-37  RD      0.767     0.033      0.918     0.099
 EFF      0.073     0.006      0.103     0.004
 AMAX      13.467     1.818      19.587     1.681
表10．在12小时黑暗时期内的呼吸作用(mmol CO2)STD是标准差
    上叶   标准差     下叶   标准差
野生型     25.17    0.82     13.19    1.98
1010-5     30.29    5.09     13.08    1.52
1318-10     28.37    4.50     20.47    0.87
1318-37     32.53    2.01     17.7    1.03
与上叶中的呼吸作用相比较，在下叶中TPS转基因植物的呼吸作用显著高于野生型和TPP植物(表10)，表明代谢活性更高。对于TPS转基因植物在叶衰老过程中呼吸作用的下降明显较少。
同样，在TPS转基因植物、TPP转基因植物和野生对照植物之间光合特征显著不同。AMAX值(在光饱和时光合作用最大值)、光合作用的效率(EFF)和光合作用测量后在短暂黑暗时期内呼吸作用速率(RD)示于表9。平均来说，TPS上叶比TPP和野生型的上叶AMAX值高35％。下叶则显示光合作用增加的速率更高(88％)。
为了排除光吸收的不同所引起的不同的光合速率，用SPAD-502(Minolta)测量吸收值。在吸收上未测出显著差异(表11)。
     表11．转基因品系的光吸收值
吸收(％)    上叶    下叶
野生型Samson NN     84     83
1010-5     84     82
1318-10     85     86
1318-37     86     86
                    实施例16
         表达TPS和TPP烟草植物的叶绿素荧光
使用35S-TPP(1010-5)、PC-TPS(1318-10和1318-37)转基因烟草植物和野生型烟草(Samsum NN)植物，确定表达这些基因对叶材料的叶绿素荧光所产生的效果。测量了荧光的两个特征：1)ETE(电子传递效率)，做为对电子传递速度和还原力产生的测量，及2)非光化学淬灭，一种对由同化产物积累所引起的能量分配的测量。
植物生长在加有100μmol.m-2.S-1(04:00-20:00小时)光的温室中。白天/夜晚T=21℃/18℃；R.H.±75％。在测量前的夜时期(持续16小时)，将每个基因型的两株植物转移到黑暗中，两株转移到光照(±430μmol.m-2.S-1,20℃,R.H.70％)中。测量最年轻的完全成熟的叶子。PSⅡ(光系统Ⅱ)的光化学效率和“非光化学淬灭”参数被定为光强度增加的函数。在每一个光强度，采用300秒稳定时间。用3次闪光/分的频率，在350ppm CO2和20％O2的条件下分别对5,38,236,422和784μmol m-2.S-1 PAR进行测量。使用相同的植物逆转从黑暗至光的预处理重复此实验，反之亦然。荧光特征描述于图.16。
在TPP和野生型植物之间电子传递效率(ETE)的降低相差不大。TPS植物明显对光强度增加的反应较小。这种差异在光预处理下最清楚。这些观察与“非光化学”淬灭数据一致。与TPP和野生型植物相比，TPS植物明显对由光提供的附加的同化产物补给反应较小。在TPS植物中，对光合作用积累性同化产物的负调节显著降低。
                   实施例17
   在表达TPS和TPP烟草植物中同化产物的输出和分配
使用35S-TPP(1010-5)和PC-TPS(1318-37)转基因烟草植物，1)由完全长成的叶中碳同化产物的输出(表明“相对源活性”，Koch(1996)Annu.Rev.Plant Physiol.Plant.mol.Biol.47,509)和2)确定在光照和黑暗时期在池中光同化产物的净积累(“相对池活性”)。
植物的发育阶段：花芽刚刚可见。使用的标记技术：稳定态高丰度13C-标记的光合产物(De Visser等人(1997)Plant Cell Environ 20,37)。对于两个基因型的8株植物，使用完全长成的叶子进行标记，在光照时期(10小时)用原子百分比5.1的13CO2标记，当合适时随后接着一个黑暗时期(14小时)。标记之后植物被分成：1)苗尖，2)新的正生长的叶，3)新的完全长成的叶(在被标记叶的上方)，4)新茎(在被标记叶的上方)，5)标记的叶，6)标记叶的柄和基底，7)正在老化的叶，8)低于标记叶的其它叶和最老的叶，9)低于标记叶的茎，10)根尖。确定了数目，鲜重和干重以及13C占C的百分比(13C原子百分比)。除了如生物量、干物质和叶数目的一般参数，还计算了：1)被标记叶输出的碳；2)在植物各个部分输入碳的相对量；3)在植物各个部分输入碳的绝对量，4)在光照时期和一个完全光照和黑暗时期输入C的相对分布。
与TPS转基因植物相比，TPP转基因植物土壤以上部分的生物量大27％(P＜0.001)；TPP转基因植物的根系统也发育得更好。与TPS植物相比，TPP植物的干物质分布有明显改变，叶和茎所占生物量分别为+39％和+10％。TPS植物有大量的叶子，但每个叶的叶面积较小。每个TPS植物总叶面积与野生型(0.4m2植物-1)类似-完全发育叶的相对源活性
使用植物(无被标记叶)中“新碳”量作为尺度，通过夜间“新碳”的百分比相对下降(对TPP为39％和对TPS为56％)和通过在植物中总的固定量确定被标记叶光合产物的净输出率。光照时期以后，相比于TPS叶的51％的输出，TPP叶输出为37％(表11)。在随后的黑暗时期内，此比例分别增加为52％(TPP)和81％(TPS)。两种方法都支持这种结论：相比于TPP转基因植物，TPS转基因植物的光合产物输出率显著提高。-在植物各个部分中“新碳”的绝对量
与TPP转基因植物相比，TPS转基因植物的输出明显高。新生长的TPS叶的碳输入强于新生长的TPP叶。-在植物各个部分中“新碳”的相对增加：池强度
“新碳”在相关植物部分的相对组成描述于图.17中。此比例是池强度的一个标尺。在TPS转基因植物中池强度显著较高，尤其在苗尖、被标记叶以上和以下的茎中以及被标记叶的柄中。表11.一个完全长成的被标记叶的源活性：碳积累和输出。在光照时期(天)经稳定态13C标记后在标记叶和整个植物(土壤以上)中碳同化产物的净日积累量和输出量。N=4:LSD值表示对于P＜0.05时最小的显著性差异
时间(结束) 转基因                   长成叶的源活性
 在源叶中的新碳(叶中总碳的％)   夜间净碳输出与“每日”的％  源叶中新碳(植物中新碳的％)  对植物的净碳输出(总的新碳的％)
白天 TPS     17.8       -     48.7     51
TPP     22.6       -     63.0     37
白天+夜晚 TPS     7.8       56     16.6     81
TPP     13.8       39     48.4     52
LSD0.05     2.4     6.1
-在植物各个部分之间“新碳”在植物内的相对分布：相对池强度
在植物器官之间固定碳的分布(图.18)证实了上述的结论。TPS转基因植物显示出对苗尖、新的正生长的叶子(白天)和最老的叶子(无腋生分生组织)以及新茎和老茎均有相对大的同化产物的输出。
                  实施例18：莴苣
         PC-TPS和PCTPP转基因莴苣植物的特性
在莴苣转化实验中使用的构建体：PC-TPS和PC-TPP。通过将外植体培养在60g/L蔗糖中在再生过程中挽救PC-TPS转基因植物。TPS和TPP转基因植物的表型均与野生型对照有明显区别的；与野生型植物相比，TPS转基因植物有厚、深绿色的叶子，TPP转基因植物带有较光滑叶边缘的淡绿色叶子。
叶子的形态，最显著的是叶子边缘，明显地受TPS和TPP的表达的影响。PC-TPS转基因的叶子比有着较光滑和圆形的PC-TPP转基因的叶子有更多的“缺刻”(图.19)。分析了转基因莴苣品系的叶提取物中的糖和淀粉(图.20)
                     实施例19：甜菜
         PC-TPS和PC-TPP转基因甜菜植物的特性
在甜菜转基因实验中所用构建体是：PC-TPS和PC-TPP。用TPS和TPP构建体获得的转化效率和对照类似。TPS和TPP转基因植物的表型和野生型对照均有明显区别；与野生型植物相比较，TPS转基因植物有厚、深绿色的叶子，TPP转基因植物则带有稍细长柄的淡绿色叶子(图.21)。在温室中生长约8周以后测定所有植物的主根直径。具有与对照植物类似叶尺寸的一些PC-TPS转基因品系主根直径明显更大(图.22)。与非转基因对照相比，PC-TPP转基因品系形成一个较小的主根。分析了转基因甜菜品系的叶抽提液中的糖和淀粉(图.20)。
                实施例20：拟南芥属
        PC-TPS和PC-TPP转基因的拟南芥属的特性
用于拟南芥属转基因实验的构建体：PC-TPS和PC-TPP。TPS和TPP转基因植物的表型均与野生型对照有明显区别的；与野生型植物相比，TPS转基因植物有厚、深绿色的叶子，TPP转基因植物有更大的变白的叶子。具有高水平TPP表达的植物不结种。
                实施例21：马铃薯
  TPS和TPP结构转基因马铃薯(Solanum tuberosum)的特性
构建体：35S-TPS pMOG799
pMOG799转基因植物生长在温室中，测定块茎产量(图.23)。与野生型对照相比，大多数转基因植物的叶子较小。与对照品系相比，具有较小叶子的植物产生较小的块茎量(图.25)。
构建体：35S-TPP pMOG1010和PC-TPP pMOG1124
pMOG1010和pMOG1124转基因植物生长于温室中，测定块茎的产量。块茎量(图.24)与野生型对照品系类似或更少(图.25)。
构建体：PC-TPS pMOG1093
pMOG1093转基因植物生长于温室中，测定块茎的产量。与对照植物相比，许多转基因品系的叶大小与野生型(B-C)类似，叶子颜色上略微显浅绿色且产生更多的块茎(图.26)。比对照植物叶子小的植物(D-G)产生较少的块茎量。
构建体：Pat-TPP pMOG1128
在Pat-TPP转基因植物的外植体上体外诱导微块茎。形成的微块茎的平均鲜重生物量基本上低于对照品系。
构建体：Pat-TPS pMOG845
pMOG845转基因植物生长在温室中，测定了块茎产量。与对照品系相比，三个Pat-TPS品系产生更多的块茎量(图.27)。
构建体：PC TPS Pat TPS；pMOG1129(845-11/22/28)
用带有PC TPS构建体和一个潮霉素抗性标记基因的pMOG1129构建体再转化Pat-TPS品系(卡那霉素抗性)产生同时表达PC TPS和Pat-TPS的植物，即产生基因型pMOG1129(845-11)、pMOG1129(845-22)和pMOG1129(845-28)。所产的块茎量在几乎不产生至与对照植物类似或高于对照植物的量之间变化(图.28)。
                  实施例22：烟草
    TPS和TPP构建体转化烟草(N.tabacum)植物的特性根系统
35S TPP(pMOG1010或35S TPS(pMOG799)转基因烟草植物生长在温室中。在即将开花前测定根大小。与pMOG799转基因植物和非转基因野生型烟草植物相比，pMOG1010转基因品系的根大小明显较小/较大。TPS和/或TPP表达对开花的影响。
35S-TPS,PC-TPS、35S-TPP或PC-TPP转基因烟草植物培养在温室中。与野生型植物相比，TPS基因表达水平高的植物的生长速率较低。在这些植物中较低的叶的开花和老化被延迟，导致正常的正在老化叶的常绿表型。TPP基因表达水平高的植物不产生任何花或产生异常的未完全发育的花芽，以至于绝育。TPS和/或TPP的表达对种子形成的影响
35S-TPS、PC-TPS、35S-TPP或PC-TPP转基因烟草植物培养在温室中。TPP基因高水平表达的植物花的发育较差或不发育，并无种子形成。TPS和/或TPP的表达对种子萌发的影响
35S TPP(pMOG1010)或PC TPP转基因烟草植物生长于温室中。有着低表达水平的转基因的某些转基因品系可以开花并结种。S1种子一旦萌发，与来源于野生型植物的S1种子相比，可观察到萌发频率的显著降低(或不萌发)(表12)。
      表12 35S-TPP转基因植物种子的萌发
  种子号     变白     Rel.[TPPmRNA]     萌发
1010-2      +     15.8     延迟
1010-3      -     5.3     延迟
1010-4      +     4.2     延迟
1010-5      +     5.2     延迟
1010-6      +     3.9     延迟
1010-7      -     2.8     延迟
1010-8      +     6.5     延迟
1010-9      +     4.6     延迟
1010-10      -     1.9     正常
1010-11      -     5.7     正常
1010-12      +     1.4     正常
1010-14      -     0.1     正常
1010-15      -     0.3     正常
1010-18      +     5.6     延迟
1010-20      +     6.4     延迟
1010-21      +     9.5     延迟
1010-22      +     8.8    不萌发
1010-23      -     4.5     正常
1010-24      -     10.2     延迟
1010-25      -     4.7  延迟(较少)
1010-27      -     4.8     正常
1010-28      +     22.1     延迟
1010-31      +     9.4  延迟(较少)
1010-32      -     0.3  延迟(较少)
1010-33      +     14.7     延迟
TPS和/或TPP的表达对种子产量的影响
测定了pMOG1010-5转基因植物S1代的种子产量。平均来说，与野生型植物7.8g种子/每株植物(n=8)相比，pMOG1010-5产生4.9g种子/每株植物(n=8)。对pMOG1010-5品系“1000粒”重量是0.06g而野生型烟草(Samsun NN)是0.08g。这些数据可以通过从源叶子中碳水化合物输出降低，导致种子“池”组织发育较差加以解释。TPS和TPP的表达对叶形态的影响
固定温定内生长的PC-TPS转基因、PC-TPP转基因和非转基因对照烟草叶的片段，包埋于塑料中，制备包埋块(coupe)以用光学显微镜研究细胞结构。PC-TPP转基因植物横切面的细胞结构和形态与在对照植物中所观察到的类似。PC-TPS转基因植物的横切面与野生型和TPP转基因植物中有3层海绵质细胞相比表明，其海绵质细胞层由7层细胞组成(图.29)。这个发现与我们的观察是一致的，即与TPP转基因植物和对照植物相比，TPS转基因品系形成更厚和更硬的叶子。
                       实施例23
         通过磷酸海藻糖合成酶的表达抑制冷甜化
产生了带有马铃薯块茎特异性Patatin启动子控制下的TPS基因(pMOG845；实施例1)的转基因马铃薯植物(Solanum tuberosum cv.Kardal)。转基因植物和野生型对照植物生长于温室中并且收获块茎。在收获后直接进行块茎材料样品的糖分析和4℃下储存6个月后取块茎材料的样品进行糖分析。来自HPLC-PED分析的数据描述于图.30。
清楚表明的是在收获后TPSE.coli转基因马铃薯植物累积于决茎中的总糖(葡萄糖、果糖和蔗糖)量较低。在4℃下储存6个月后，与野生型对照品系相比，在转基因品系中可溶糖的增加明显较少。
                      实施例24在干旱逆境下35S TPS 35S TPP(pMOG851)转基因烟草植物特性的改善
产生带有在35S CaMV启动子控制下来自大肠杆菌的TPS和TPP基因的转基因烟草植物。使用Northern杂交和酶活性测定在获得的品系中证实了TPS和TPP基因的表达。用pMOG851-2转化的植物显示积累了0.008mg海藻糖g-1鲜重，pMOG851-5积累了0.09mg海藻糖·g-1鲜重。在干旱逆境下这两个基因的表达对植物形态和生长特性有显著作用。当在由限制水供应而施加的干旱逆境下生长时，所检测的两个转基因烟草品系，pMOG851-2和pMOG851-5产生比野生型烟草高28％(P＜0.01)和39％(P＜0.001)的总干重量。这些干重的增加主要是由于叶生产的增长：对pMOG851-5转基因植物，叶干重增加达85％。在水供应良好的条件下没有观察到显著差异。干旱逆境实验
从初始转化物pMOG851-2和pMOG851-5自体受精获得的F1种子(Goddijn等人(1997)植物生理113,181)用于此研究。种子在20％家用漂白剂中消毒10分钟，在无菌水中冲洗5遍，播种在含有10g.L-1蔗糖和100mg.L-1卡那霉素的半强度Murashige和Skoog培养基中。野生型SR1种子播种在无卡那霉素的盘中。两星期后，各个品系的幼苗转到土壤(沙质壤土)中，在22℃，约100μE.m-2光强度、14h·d-1条件下生长于生长小室中。所有植物都在3.8升盆内相等量的土壤中生长。植物每天用半强度Hoagland营养液浇水。pMOG851-2和pMOG851-5的幼苗比野生型幼苗生长稍慢。因为我们认为在相同发育阶段开始实验最为重要，当幼苗在相同高度(10cm)、相同发育阶段(4叶)和相同干重(从每个品系的另两株植物测量)时，我们开始对每个品系进行干旱逆境处理。这就意味着对pMOG851-2的处理比野生型晚两天，对pMOG851-5的处理比野生型晚7天。每个品系中，6株植物承受干旱逆境，4株保持良好的供水条件作为对照。通过将野生型烟草植物保持在萎蔫点附近对野生型烟草植物进行干旱处理：当下半部分的叶子萎蔫时，向植物施营养液使植物暂时重新获得生机。实际上，这就意味着每3天供应50ml营养液；对照植物每天浇水以保持其田间持水量。pMOG851-2和pMOG851-5植物以与野生型完全相同的方式浇水，即，它们象野生型一样在相同时间间隔后补充相同量的营养液。在整个研究过程中，定期测量茎高度。所有植物在同一天(野生型植物处理开始后32天)收获，因为在较晚阶段收获转基因植物会使品系的比较更为复杂。收获时用Delta-T Devices叶面积仪(Santa Clara,CA)测量总的叶面积。此外，测定了叶、茎和根的干重和鲜重。以基本上相同的方式进行第二个实验以分析植物的渗透势。在干旱逆境中35天后，在光照时期开始时从最年轻的成熟的叶子中取样(n=3)。离脱叶的空气干燥
从供水良好的、4周龄pMOG851-2,pMOG851-5和野生型植物中测量自空气干燥的离脱叶的水分丢失。每个品系中使用5株植物，从每株植物中分离2个最新成熟的叶子，在25％的相对湿度中空气干燥。每个叶子的鲜重测量32小时。为了测量渗透势和测定可溶性糖的含量，在实验时从类似的供水良好的叶中取样。渗透势测量
用于渗透势分析的叶样品立即储存在带帽的1ml注射器中并在干冰上冷冻。在即将分之前将叶子汁被挤入一个小瓶内、混合并用以浸润一个纸片。在Wescor C52小室内用Wescor HR-33T露点微伏计测定渗透势。叶绿素荧光
在干旱处理20天后，使用脉冲调节(PAM)荧光计(Walz,Effeltrich,德国)测量野生型、pMOG851-2和pMOg851-5植物的叶绿素荧光。在测量之前，植物在黑暗中保存两小时，随后为一小时光照期。随后，最年轻的成熟的叶子适应黑暗20分钟。在每一个测量开始时，打开一个小的(调节为1.6kHz的0.05μmol m-2S-1)测量光束，并测量最小荧光水平(F0)。通过持续使用4000μmol m-2S-1800ms的饱和光脉冲测定最大荧光水平(Fm)。又经过20秒后，当信号衰减至接近F0时，以2秒的黑暗间隔30秒内重复给予有光化性的光(波长800ms,4000μmol m-2S-1)的简短饱和脉冲。从荧光/时间曲线依据Bolhar-Nordenkampf和Oquist(1993)的方法确定光化学(qQ)和非光化学(qE)淬灭组分。在测定时，所研究的叶子无可见的萎蔫。使用程序Number Cruncher统计系统(Dr.J.L.Hintze,865 East 400 North,Kaysville,UT 84037，美国)通过变量的单边(che-way)分析获得统计数据。
干旱逆境处理的植物的叶绿素荧光分析表明在pMOG851-5中有较高的光化学淬灭(qQ)和一个较高的可变荧光对最大荧光(Fv/Fm)的比率，表明是一个更为有效的的光合工作机制(表13)。表13.野生型(wt)和积累海藻糖的(pMOG851-2,pMOG851-5)转基因烟草植物的叶绿素荧光参数。从分析每个品系在供水良好条件下(对照)或干旱条件下生长的植株之间的差异以及在供水良好或干旱条件下生长的转基因品系和野生型的每一个之间的差异，通过ANOVA检测分析可以得到P(概率)值。Fm：最大荧光；Fv：可变荧光(Fm-F0)；qQ：光化学淬灭；qE：非光化学淬灭。Fm,Fv以任意单位(表mm)表示。
  野生型   pMOG851-1   pMOG851-5   8-51-2/WT   815-5
FM 对照   174.4     180.4     175.6    ns   ns
干旱   151.5     155.7     167.8    ns   0.0068
P(ctrl.dry)   0.0004     0.0000     ns
FV 对照   134.6     143.3     142.8    ns   ns
干旱   118.4     122.1     135.6    ns   0.0011
P(ctrl.dry)   0.006     0.0000     ns
FV/FM 对照   0.771     0.794     0.813    0.059   0.0052
干旱   0.782     0.784     0.809    ns   0.0016
P(ctrl.dry)   ns     ns     ns
qE 对照   15.2     23.8     29.9    0.259   0.0085
干旱   25.4     21.6     23.5    ns   ns
P(ctrl.dry)   0.048     ns     ns
qQ 对照   91.3     92.4     90.4    ns   ns
干旱   73.69     78.5     92.75    ns   0.0005
P(ctrl.dry)   0.005     0.006     ns
碳水化合物分析
在收获时，pMOG851-5植物含有0.2mg·g-1干重海藻糖，而在pMOG851-2和野生型中不管在逆境或非逆境条件下，海藻糖水平均低于检测限度。pMOG851-5植物的海藻糖含量与在逆境和非逆境中的植物类似(分别为0.19和0.20mg.g-1干重)。在供水良好的条件下，pMOG851-5植物中葡萄糖和果糖水平比野生型中高两倍。逆境处理的pMOG851-5植物的叶子所含的四种非结构碳水化合物淀粉、蔗糖、葡萄糖和果糖的各自水平比逆境处理的野生型植物叶高约3倍。在pMOG851-2叶子中，碳水化合物的水平象叶绿素荧光值一样和野生型的叶子中的无显著差异。与非逆境处理的植物相比，所有逆境处理的品系的植物含有水平增高的葡萄糖和果糖。干旱逆境处理的植物和对照植物的渗透势
在第二个类似的温室条件下的实验中，转基因植物表现出与上述相同的表型，pMOG851-5植物在干旱逆境下再次比pMOG851-2和野生型植物在生长上下降较少。干旱处理的pMOG851-5植物的叶的渗透势(-1.77±0.39Mpa)显著(P=0.017)低于野生型叶(-1.00±0.88Mpa)；pMOG851-2表现为中间值(-1.12±0.05Mpa)。类似的，在供水良好的条件下pMOG851-5植物的渗透势(-0.79±0.05Mpa)显著(P=0.038)低于野生型叶的渗透势(-0.62±0.03Mpa),pMOG851-2为中间值(0.70±0.01Mpa)。离脱叶的空气干燥
分离pMOG851-2、pMOG851-5和野生型植物的叶，它们鲜重的测量在空气干燥下持续32小时。pMOG851-2和pMOG851-5植物的叶子失水显著(P＜0.05)少于野生型的叶子：经过32小时后，pMOG851-5和pMOG851-2的叶子分别剩下鲜重的44％和41％，而野生型为30％。在实验时，为了测定渗透势以及进行海藻糖、蔗糖、葡萄糖和果糖的分析，从类似的、供水良好的叶子中取样。两个转基因品系的渗透势低于野生型(P＜0.05),pMOG851-5的水势能最低(-0.63±0.03Mpa)，野生型最高(-0.51±0.02Mpa),pMOG851-2居中(-0.57±0.04Mpa)。在pMOG851-5植物叶子中所检测的全部糖水平显著高于野生型叶子中的，导致四种糖的联合水平高出3倍(P=0.002)。pMOG851-2植物含有高出2倍的四种糖的联合水平(P=0.09)。在pMOG851-5植物中海藻糖的水平为0.24±0.02mg·g-2DW，在pMOG851-2和野生型中低于检测水平。
                    实施例25
     在干旱逆境下TPS和TPP转基因莴苣品系的特性
初始TPS和TPP转化物和野生型对照植物经受干旱逆境。TPP转基因品系首先达到萎蔫点，然后是对照植物，接下来是TPS转基因植物，这表明，如在其它植物种类中所观察到的，在干旱应激中TPS转基因品系比TPP和野生型植物有明显优势。
                    实施例26
     PGPS或PC-TPP转基因莴苣植物的抽苔受到影响
在PC-TPP转基因莴苣植物中的抽苔减少(表14)。与野生型莴苣植物相比，PC-TPS转基因品系显示抽苔增加。
                           表14．莴苣植物的抽苔
 PC-TPP植物系 植物总数      1．正常抽苔     2．抽苔减少      3．可见的花序      4．可能的扁化      5．完全生长的
 1A  4     4
 2A  3     1     2
 3A  2     2
 4A  5     1     1     1     2
 5A  5     1     1     3
 7A  1     1
 8A  5     4     1
 9A  5     5
 10A  3     1     2
 11A  5     2     3
 12A  4     4
 对照  5     5
                    实施例27
           TPS和TPP转基因西红柿植物的特性
在西红柿转化实验中使用的构建体：35S TPP、PC-TPS,PC-TPS反义海藻糖酶、PC-TPP、E8-TPS、E8-TPP、E8TPS、E8反义海藻糖酶。由质体蓝素启动子和35S启动子启动的TPP转基因植物具有在其它植物中所观察到的类似表型：叶子变白，花形成减少或无花形成，导致小的果实或无果实。少数35S-TPP转基因品系产生极大的果实。这些果实呈现出果皮的增生。由质体蓝素启动子和35S启动子启动的TPS转基因植物并不形成小披针形叶子。一些严重矮化的植物确实形成小而深绿叶子。与对照植物相比，PC-TPS或PC反义海藻糖酶转基因植物确实形成较小和较深绿色的叶子。
与其它作物中所观察到的相类似，35S或PC启动的TPS和TPP转基因植物的颜色和叶缘有明显区别。
带有在果实特异的E8启动子控制下的TPS和TPP基因的植物与野生型果实相比并未表现出表型上的差异。E8 TPS E8反义海藻糖酶转基因植物产生具有黄皮和不完全成熟的异常果实。
                       实施例28
     反义海藻糖酶和/或TPS转基因马铃薯植物的表现构建体：35S反义海藻糖酶(pMOG1027)和35S反义海藻糖酶Pat TPS(pMOG1027(845-11/22/28)。
用带有35S反义海藻糖酶构建体和一个潮霉素抗性标记基因的构建体pMOG1027再转化Pat-TPS品系(卡那霉素抗性)，产生了同时表达35S反义海藻糖酶和Pat-TPS的植物，即基因型pMOG1027(845-11)、pMOG1027(845-22)和pMOG1027(845-28)。在体外诱导微块茎，并测定微块茎的鲜重。对带有pMOG1027(pMOG845-11/22/28)的转基因品系平均鲜重产量增加。获自pMOG1027转基因品系的微块茎的鲜重生物量仅比野生型对照植物稍高。产生的植物生长于温室中，测定块茎产量(图.33)。与对照品系相比，35S反义海藻糖酶或35S反义海藻糖酶和Pat-TPS联合的转基因品系产生的块茎明显更多。淀粉测定表明在由较高产量的品系所产生的块茎中淀粉含量并无差别(图34)。许多1027(845-11/22/28)品系在土壤以上的叶的腋生芽之外产生块茎，表明所使用的构建体对植物发育有显著影响。35S反义海藻糖酶转基因植物只是不在土壤以上形成块茎。构建体：Pat反义海藻糖酶(pMOG1028)和Pat反义海藻糖酶Pat TPS(pMOG1028(845-11/22/28))
用带有Pat反义海藻糖酶构建体和潮霉素标记基因的构建体pMOG1028再转化Pat-TPS品系(卡那霉素抗性)，产生了同时表达反义海藻糖酶和Pat-TPS的植物，即基因型pMOG1028(845-11)、pMOG1028(845-22)和pMOG1028(845-28)。植物生长于温室中，测定块茎产量(图.25)。与对照品系相比，许多pMOG1028转基因品系产生的块茎明显更多。同时具有Pat-TPS和Pat反义海藻糖酶的单个转基因植物的块茎产量从几乎不产生到类似或高于对照品系的块茎产量之间变化(图.35)。构建体：PC反义海藻糖酶(pMOG1092)
pMOG1092转基因植物生长于温室中，测定了块茎产量。与对照相比，一些品系形成深绿色的叶子。与非转基因植物相比块茎产量显著增加(图.36)。构建体：PC反义海藻糖酶PC-TPS(pMOG1130)
pMOG1130转基因植物生长于温室中，测定块茎产量。几个转基因品系具有小而深绿色的叶子且为严重矮化生长，表明植物用TPS转化时观察到的表型的效果比反义海藻糖酶基因同时表达时更为严重(见实施例21)。与对照植物相比，所产的块茎量在几乎没有至明显更高的产量之间变化(图.37)。
                    实施例29
在烟草(N.tabacum)中马铃薯海藻糖酶cDNA的过量表达构建体：de35S CaMV海藻糖酶(pMOG1078)
初始pMOG1078转基因烟草转化物具有与野生型烟草不同的表型，一些转基因植物有深绿色的叶和更厚的叶(叶的形状不是披针形)，表明了海藻糖酶基因的表达对植物代谢的影响。初始转化物自交的种子被播种并在卡那霉素上选择。在S1代中表型以孟德尔方式分离。
                          保藏
下列保藏按布达佩斯条约进行。克隆于1997年4月21号保藏在真菌菌种保藏中心(CBS)，Oosterstraat 1,P.O.Box 273,3740 AG Baarn,荷兰，获得下列保藏号：大肠杆菌    DH5alpha/pMOG1192    CBS 692.97
        DH5alpha/pMOG1240    CBS 693.97
        DH5alpha/pMOG1241    CBS 694.97
        DH5alpha/pMOG1242    CBS 695.97
    DH5alpha/pMOG1243    CBS 696.97
    DH5alpha/pMOG1244    CBS 697.97
    DH5alpha/pMOG1245    CBS 698.97保藏的克隆：pMOG1192    带有插入多拷贝载体pGEM-T(Promega)中的向日葵
        (Helianthus annusis)TPS/TPP两分cDNA。pMOG1240    带有插入pCRscript(Stratagene)中的烟草TPS
        “825”bp cDNA片段。pMOG1241    带有插入pGEM-T(Promega)中的烟草TPS
        “840”bp的cDNA片段。pMOG1242    带有插入pGEM-T(Promega)中的烟草TPS
        “630”bp的cDNA片段。pMOG1243    带有插入pGEM-T(Promega)中的烟草TPP
        “543”bp的cDNA片段。pMOG1244    带有插入pUC18质粒中的烟草TPP“723”bp的
        cDNA片段。pMOG1245    带有插入pGEM-T(Promega)中的烟草TPP
        “447”bp的片段。相关pMOG###和pVDH###克隆的清单1．二元载体pMOG23      带有NPTⅡ选择标记的二元载体(约10Kb)pMOG22      pMOG23的衍生物，NPTⅡ基因已被赋予潮霉素抗
        性的HPT-基因取代pVDH275     从pMOG23衍生而来的二元载体，带有一个质体蓝素
        启动子-nos终止子的表达盒。pMOG402     pMOG23的衍生物，已恢复在NPTⅡ基因中的一个
        点突变，在多位点接头中无KpnⅠ限制性位点存在。pMOG800      pMOG402的衍生物，在多位点接头中带有恢复的
         KpnⅠ位点。2．TPS/TPP表达构建体pMOG799      35S-TPS-3′nos1
pMOG810  同上，带有潮霉素标记pMOG845      Pat-TPS-3′PotpiⅡ
pMOG925  同上，带有潮霉素标记pMOG851      35S-TPS-3′nos 35S-TPP(atg)2pMOG1010     de 35S CaMV amv引导子TPP(gtg)PotPiⅡ
pMOG1142 同上，带有潮霉素标记pMOG1093     质体蓝素-TPS-3′nos
pMOG1129 同上，带有潮霉素标记pMOG1177     质体蓝素-TPS-3′PotPiⅡ 3′nospVDH318      与pMOG1177相同
         功能上与pMOG1093相同pMOG1124     质体蓝素-TPP(gtg)3′PotPiⅡ3′nospVDH321      与pMOG1124相同pMOG1128     Patatin TPP(gtg)3′PotPiⅡpMOG1140     E8-TPS-3′nospMOG1141     E8-TPP(gtg)-3′PotPiⅡ3．海藻糖酶构建体pMOG1028     Patatin反义海藻糖酶3′PotPiⅡ，潮霉素抗性标记pMOG1078     de35S CaMV amv引导子海藻糖酶3′nospMOG1090     de35S caMV amv引导子反义海藻糖酶3′nos
pMOG1027 同上，带有潮霉素标记pMOG1092     质体蓝素-反义海藻糖酶-3′nospMOG1130     质体蓝素-反义海藻糖酶-3′nos质体蓝素-TPS-3′
         nospMOG1153     E8-TPS-3′nos E8-反义海藻糖酶-3′PotPiⅡ1．除非另外注明，所有构建体均带有NPTⅡ选择性标记2．使用了两种类型的TPP构建体，如在Goddijn等人(1997)植物生理113,181中所述。
                  序列表(1)一般信息(ⅰ)申请人
(A)姓名：MOGEN International nv
(B)街道：Einsteinweg 97
(C)城市：Leiden
(E)国家：荷兰
(F)邮政编码(ZIP):2333CB
(G)电话：(0)71-5258282
(H)电传：(0)71-5221471(ⅱ)发明名称：通过改变海藻糖-6-磷酸的水平来调节代谢(ⅲ)序列数目：57(ⅳ)计算机可读信息：
(A)介质类质：软盘
(B)计算机：IBM PC兼容机
(C)操作系统：PC-DOS/MS-DOS
(D)软件：Patentln Release#1.0,Version#1.25(EPO)(ⅵ)在先申请数据：
(A)申请号：EP96.201.225.8
(B)递交日：1996年5月3日(ⅵ)在先申请数据：
(A)申请号：EP96.202.128.3
(B)递交日：1996年7月26日(ⅵ)在先申请数据：
(A)申请号：EP96.202.395.8
(B)递交日：1996年8月29日(2)SEQ ID NO:1的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：1450个碱基对
(B)类型：核酸
(C)链型：双链
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：DNA(基因组)(ⅲ)假设：非(ⅸ)特征：
(A)名称/关键词：CDS
(B)位置：21..1450(ⅹⅰ)SE Q ID NO:1的序列描述ATAAAACTCT CCCCGGGACC ATG ACT ATG AGT CGT TTA GTC GTA GTA TCT       50
                  Met Thr Met Ser Arg Leu Val Val Val Ser
                    1               5                  10AAC CGG ATT GCA CCA CCA GAC GAG CAC GCC GCC AGT GCC GGT GGC CTT     98Asn Arg Ile Ala Pro Pro Asp Glu His Ala Ala Ser Ala Gly Gly Leu
             15                  20                  25GCC GTT GGC ATA CTG GGG GCA CTG AAA GCC GCA GGC GGA CTG TGG TTT    146Ala Val Gly Ile Leu Gly Ala Leu Lys Ala Ala Gly Gly Leu Trp Phe
         30                  35                  40GGC TGG AGT GGT GAA ACA GGG AAT GAG GAT CAG CCG CTA AAA AAG GTG    194Gly Trp Ser Gly Glu Thr Gly Asn Glu Asp Gln Pro Leu Lys Lys Val
     45                  50                  55AAA AAA GGT AAC ATT ACG TGG GCC TCT TTT AAC CTC AGC GAA CAG GAC    242Lys Lys Gly Asn Ile Thr Trp Ala Ser Phe Asn Leu Ser Glu Gln Asp
 60                  65                  70CTT GAC GAA TAC TAC AAC CAA TTC TCC AAT GCC GTT CTC TGG CCC GCT    290Leu Asp Glu Tyr Tyr Asn Gln Phe Ser Asn Ala Val Leu Trp Pro Ala75                  80                  85                  90TTT CAT TAT CGG CTC GAT CTG GTG CAA TTT CAG CGT CCT GCC TGG GAC    338Phe His Tyr Arg Leu Asp Leu Val Gln Phe Gln Arg Pro Ala Trp Asp
             95                 100                 105GGC TAT CTA CGC GTA AAT GCG TTG CTG GCA GAT AAA TTA CTG CCG CTG    386Gly Tyr Leu Arg Val Asn Ala Leu Leu Ala Asp Lys Leu Leu Pro Leu
        110                 115                 120TTG CAA GAC GAT GAC ATT ATC TGG ATC CAC GAT TAT CAC CTG TTG CCA     434Leu Gln Asp Asp Asp Ile Ile Trp Ile His Asp Tyr His Leu Leu Pro
    125                 130                 135TTT GCG CAT GAA TTA CGC AAA CGG GGA GTG AAT AAT CGC ATT GGT TTC     482Phe Ala His Glu Leu Arg Lys Arg Gly Val Asn Asn Arg Ile Gly Phe
140                 145                 150TTT CTG CAT ATT CCT TTC CCG ACA CCG GAA ATC TTC AAC GCG CTG CCG     530Phe Leu His Ile Pro Phe Pro Thr Pro Glu Ile Phe Asn Ala Leu Pro155                 160                 165                 170ACA TAT GAC ACC TTG CTT GAA CAG CTT TGT GAT TAT GAT TTG CTG GGT     578Thr Tyr Asp Thr Leu Leu Glu Gln Leu Cys Asp Tyr Asp Leu Leu Gly
            175                 180                 185TTC CAG ACA GAA AAC GAT CGT CTG GCG TTC CTG GAT TGT CTT TCT AAC     626Phe Gln Thr Glu Asn Asp Arg Leu Ala Phe Leu Asp Cys Leu Ser Asn
        190                 195                 200CTG ACC CGC GTC ACG ACA CGT AGC GCA AAA AGC CAT ACA GCC TGG GGC     674Leu Thr Arg Val Thr Thr Arg Ser Ala Lys Ser His Thr Ala Trp Gly
    205                 210                 215AAA GCA TTT CGA ACA GAA GTC TAC CCG ATC GGC ATT GAA CCG AAA GAA     722Lys Ala Phe Arg Thr Glu Val Tyr Pro Ile Gly Ile Glu Pro Lys Glu
220                 225                 230ATA GCC AAA CAG GCT GCC GGG CCA CTG CCG CCA AAA CTG GCG CAA CTT     770Ile Ala Lys Gln Ala Ala Gly Pro Leu Pro Pro Lys Leu Ala Gln Leu235                 240                 245                 250AAA GCG GAA CTG AAA AAC GTA CAA AAT ATC TTT TCT GTC GAA CGG CTG     818Lys Ala Glu Leu Lys Asn Val Gln Asn Ile Phe Ser Val Glu Arg Leu
            255                 260                 265GAT TAT TCC AAA GGT TTG CCA GAG CGT TTT CTC GCC TAT GAA GCG TTG     866Asp Tyr Ser Lys Gly Leu Pro Glu Arg Phe Leu Ala Tyr Glu Ala Leu
        270                 275                 280CTG GAA AAA TAT CCG CAG CAT CAT GGT AAA ATT CGT TAT ACC CAG ATT     914Leu Glu Lys Tyr Pro Gln His His Gly Lys Ile Arg Tyr Thr Gln Ile
    285                 290                 295GCA CCA ACG TCG CGT GGT GAT GTG CAA GCC TAT CAG GAT ATT CGT CAT     962Ala Pro Thr Ser Arg Gly Asp Val Gln Ala Tyr Gln Asp Ile Arg His
300                 305                 310CAG CTC GAA AAT GAA GCT GGA CGA ATT AAT GGT AAA TAC GGG CAA TTA    1010Gln Leu Glu Asn Glu Ala Gly Arg Ile Asn Gly Lys Tyr Gly Gln Leu315                 320                 325                 330GGC TGG ACG CCG CTT TAT TAT TTG AAT CAG CAT TTT GAC CGT AAA TTA    1058Gly Trp Thr Pro Leu Tyr Tyr Leu Asn Gln His Phe Asp Arg Lys Leu
            335                 340                 345CTG ATG AAA ATA TTC CGC TAC TCT GAC GTG GGC TTA GTG ACG CCA CTG    1106Leu Met Lys Ile Phe Arg Tyr Ser Asp Val Gly Leu Val Thr Pro Leu
        350                 355                 360CGT GAC GGG ATG AAC CTG GTA GCA AAA GAG TAT GTT GCT GCT CAG GAC    1154Arg Asp Gly Met Asn Leu Val Ala Lys Glu Tyr Val Ala Ala Gln Asp
    365                 370                 375CCA GCC AAT CCG GGC GTT CTT GTT CTT TCG CAA TTT GCG GGA GCG GCA    1202Pro Ala Asn Pro Gly Val Leu Val Leu Ser Gln Phe Ala Gly Ala Ala
380                 385                 390AAC GAG TTA ACG TCG GCG TTA ATT GTT AAC CCC TAC GAT CGT GAC GAA    1250Asn Glu Leu Thr Ser Ala Leu Ile Val Asn Pro Tyr Asp Arg Asp Glu395                 400                 405                 410GTT GCA GCT GCG CTG GAT CGT GCA TTG ACT ATG TCG CTG GCG GAA CGT    1298Val Ala Ala Ala Leu Asp Arg Ala Leu Thr Met Ser Leu Ala Glu Arg
            415                 420                 425ATT TCC CGT CAT GCA GAA ATG CTG GAC GTT ATC GTG AAA AAC GAT ATT    1346Ile Ser Arg His Ala Glu Met Leu Asp Val Ile Val Lys Asn Asp Ile
        430                 435                 440AAC CAC TGG CAG GAG TGC TTC ATT AGC GAC CTA AAG CAG ATA GTT CCG    1394Asn His Trp Gln Glu Cys Phe Ile Ser Asp Leu Lys Gln Ile Val Pro
    445                 450                 455CGA AGC GCG GAA AGC CAG CAG CGC GAT AAA GTT GCT ACC TTT CCA AAG    1442Arg Ser Ala Glu Ser Gln Gln Arg Asp Lys Val Ala Thr Phe Pro Lys
460                 465                 470CTC TGC AG                                                         1450Leu Cys475(2)SEQ ID NO:2的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：476个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：蛋白质(ⅹⅰ)SE Q ID NO:2的序列描述Met Thr Met Ser Arg Leu Val Val Val Ser Asn Arg Ile Ala Pro Pro1               5                  10                  15Asp Glu His Ala Ala Ser Ala Gly Gly Leu Ala Val Gly Ile Leu Gly
         20                  25                  30Ala Leu Lys Ala Ala Gly Gly Leu Trp Phe Gly Trp Ser Gly Glu Thr
     35                  40                  45Gly Asn Glu Asp Gln Pro Leu Lys Lys Val Lys Lys Gly Asn Ile Thr
 50                  55                  60Trp Ala Ser Phe Asn Leu Ser Glu Gln Asp Leu Asp Glu Tyr Tyr Asn65                  70                  75                  80Gln Phe Ser Asn Ala Val Leu Trp Pro Ala Phe His Tyr Arg Leu Asp
             85                  90                  95Leu Val Gln Phe Gln Arg Pro Ala Trp Asp Gly Tyr Leu Arg Val Asn
        100                 105                 110Ala Leu Leu Ala Asp Lys Leu Leu Pro Leu Leu Gln Asp Asp Asp Ile
    115                 120                 125Ile Trp Ile His Asp Tyr His Leu Leu Pro Phe Ala His Glu Leu Arg
130                 135                 140Lys Arg Gly Val Asn Asn Arg Ile Gly Phe Phe Leu His Ile Pro Phe145                 150                 155                 160Pro Thr Pro Glu Ile Phe Asn Ala Leu Pro Thr Tyr Asp Thr Leu Leu
            165                 170                 175Glu Gln Leu Cys Asp Tyr Asp Leu Leu Gly Phe Gln Thr Glu Asn Asp
        180                 185                 190Arg Leu Ala Phe Leu Asp Cys Leu Ser Asn Leu Thr Arg Val Thr Thr
    195                 200                 205Arg Ser Ala Lys Ser His Thr Ala Trp Gly Lys Ala Phe Arg Thr Glu
210                 215                 220Val Tyr Pro Ile Gly Ile Glu Pro Lys Glu Ile Ala Lys Gln Ala Ala225                 230                 235                 240Gly Pro Leu Pro Pro Lys Leu Ala Gln Leu Lys Ala Glu Leu Lys Asn
            245                 250                 255Val Gln Asn Ile Phe Ser Val Glu Arg Leu Asp Tyr Ser Lys Gly Leu
        260                 265                 270Pro Glu Arg Phe Leu Ala Tyr Glu Ala Leu Leu Glu Lys Tyr Pro Gln
    275                 280                 285His His Gly Lys Ile Arg Tyr Thr Gln Ile Ala Pro Thr Ser Arg Gly
290                 295                 300Asp Val Gln Ala Tyr Gln Asp Ile Arg His Gln Leu Glu Asn Glu Ala305                 310                 315                 320Gly Arg Ile Asn Gly Lys Tyr Gly Gln Leu Gly Trp Thr Pro Leu Tyr
            325                 330                 335Tyr Leu Asn Gln His Phe Asp Arg Lys Leu Leu Met Lys Ile Phe Arg
        340                 345                 350Tyr Ser Asp Val Gly Leu Val Thr Pro Leu Arg Asp Gly Met Asn Leu
    355                 360                 365Val Ala Lys Glu Tyr Val Ala Ala Gln Asp Pro Ala Asn Pro Gly Val
370                 375                 380Leu Val Leu Ser Gln Phe Ala Gly Ala Ala Asn Glu Leu Thr Ser Ala385                 390                 395                 400Leu Ile Val Asn Pro Tyr Asp Arg Asp Glu Val Ala Ala Ala Leu Asp
            405                 410                 415Arg Ala Leu Thr Met Ser Leu Ala Glu Arg Ile Ser Arg His Ala Glu
        420                 425                 430Met Leu Asp Val Ile Val Lys Asn Asp Ile Asn His Trp Gln Glu Cys
    435                 440                 445Phe Ile Ser Asp Leu Lys Gln Ile Val Pro Arg Ser Ala Glu Ser Gln
450                 455                 460Gln Arg Asp Lys Val Ala Thr Phe Pro Lys Leu Cys465                 470                 475(2)SEQ ID NO:3的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：835个碱基对
(B)类型：核酸
(C)链型：双链
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：DNA(基因组)(ⅲ)假设：非(ⅸ)特征：
(A)名称/关键词：CDS
(B)位置：18..818(ⅹⅰ)SE Q ID NO:3的序列描述ATAAAACTCT CCCCGGG ATG ACA GAA CCG TTA ACC GAA ACC CCT GAA CTA        50
               Met Thr Glu Pro Leu Thr Glu Thr Pro Glu Leu
                 1               5                  10TCC GCG AAA TAT GCC TGG TTT TTT GAT CTT GAT GGA ACG CTG GCG GAA       98Ser Ala Lys Tyr Ala Trp Phe Phe Asp Leu Asp Gly Thr Leu Ala Glu
         15                  20                  25ATC AAA CCG CAT CCC GAT CAG GTC GTC GTG CCT GAC AAT ATT CTG CAA     146Ile Lys Pro His Pro Asp Gln Val Val Val Pro Asp Asn Ile Leu Gln
     30                  35                  40GGA CTA CAG CTA CTG GCA ACC GCA AGT GAT GGT GCA TTG GCA TTG ATA     194Gly Leu Gln Leu Leu Ala Thr Ala Ser Asp Gly Ala Leu Ala Leu Ile
 45                  50                  55TCA GGG CGC TCA ATG GTG GAG CTT GAC GCA CTG GCA AAA CCT TAT CGC     242Ser Gly Arg Ser Met Val Glu Leu Asp Ala Leu Ala Lys Pro Tyr Arg60                  65                  70                  75TTC CCG TTA GCG GGC GTG CAT GGG GCG GAG CGC CGT GAC ATC AAT GGT     290Phe Pro Leu Ala Gly Val His Gly Ala Glu Arg Arg Asp Ile Asn Gly
             80                  85                  90AAA ACA CAT ATC GTT CAT CTG CCG GAT GCG ATT GCG CGT GAT ATT AGC     338Lys Thr His Ile Val His Leu Pro Asp Ala Ile Ala Arg Asp Ile Ser
         95                 100                 105GTG CAA CTG CAT ACA GTC ATC GCT CAG TAT CCC GGC GCG GAG CTG GAG     386Val Gln Leu His Thr Val Ile Ala Gln Tyr Pro Gly Ala Glu Leu Glu
    110                 115                 120GCG AAA GGG ATG GCT TTT GCG CTG CAT TAT CGT CAG GCT CCG CAG CAT     434Ala Lys Gly Met Ala Phe Ala Leu His Tyr Arg Gln Ala Pro Gln His
125                 130                 135GAA GAC GCA TTA ATG ACA TTA GCG CAA CGT ATT ACT CAG ATC TGG CCA     482Glu Asp Ala Leu Met Thr Leu Ala Gln Arg Ile Thr Gln Ile Trp Pro140                 145                 150                 155CAA ATG GCG TTA CAG CAG GGA AAG TGT GTT GTC GAG ATC AAA CCG AGA     530Gln Met Ala Leu Gln Gln Gly Lys Cys Val Val Glu Ile Lys Pro Arg
            160                 165                 170GGT ACC AGT AAA GGT GAG GCA ATT GCA GCT TTT ATG CAG GAA GCT CCC     578Gly Thr Ser Lys Gly Glu Ala Ile Ala Ala Phe Met Gln Glu Ala Pro
        175                 180                 185TTT ATC GGG CGA ACG CCC GTA TTT CTG GGC GAT GAT TTA ACC GAT GAA     626Phe Ile Gly Arg Thr Pro Val Phe Leu Gly Asp Asp Leu Thr Asp Glu
    190                 195                 200TCT GGC TTC GCA GTC GTT AAC CGA CTG GGC GGA ATG TCA GTA AAA ATT     674Ser Gly Phe Ala Val Val Asn Arg Leu Gly Gly Met Ser Val Lys Ile
205                 210                 215GGC ACA GGT GCA ACT CAG GCA TCA TGG CGA CTG GCG GGT GTG CCG GAT     722Gly Thr Gly Ala Thr Gln Ala Ser Trp Arg Leu Ala Gly Val Pro Asp220                 225                 230                 235GTC TGG AGC TGG CTT GAA ATG ATA ACC ACC GCA TTA CAA CAA AAA AGA     770Val Trp Ser Trp Leu Glu Met Ile Thr Thr Ala Leu Gln Gln Lys Arg
            240                 245                 250GAA AAT AAC AGG AGT GAT GAC TAT GAG TCG TTT AGT CGT AGT ATC TAA     818Glu Asn Asn Arg Ser Asp Asp Tyr Glu Ser Phe Ser Arg Ser Ile  *
        255                 260                 265CCGGATTGCA CCTGCAG855
     270(2)SEQ ID NO:4的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：272个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：蛋白质(ⅹⅰ)SE Q ID NO:4的序列描述Met Thr Glu Pro Leu Thr Glu Thr Pro Glu Leu Ser Ala Lys Tyr Ala1               5                  10                  15Trp Phe Phe Asp Leu Asp Gly Thr Leu Ala Glu Ile Lys Pro His Pro
         20                  25                  30Asp Gln Val Val Val Pro Asp Asn Ile Leu Gln Gly Leu Gln Leu Leu
     35                  40                  45Ala Thr Ala Ser Asp Gly Ala Leu Ala Leu Ile Ser Gly Arg Ser Met
 50                  55                  60Val Glu Leu Asp Ala Leu Ala Lys Pro Tyr Arg Phe Pro Leu Ala Gly65                  70                  75                  80Val His Gly Ala Glu Arg Arg Asp Ile Asn Gly Lys Thr His Ile Val
             85                  90                  95His Leu Pro Asp Ala Ile Ala Arg Asp Ile Ser Val Gln Leu His Thr
        100                 105                 110Val Ile Ala Gln Tyr Pro Gly Ala Glu Leu Glu Ala Lys Gly Met Ala
    115                 120                 125Phe Ala Leu His Tyr Arg Gln Ala Pro Gln His Glu Asp Ala Leu Met
130                 135                 140Thr Leu Ala Gln Arg Ile Thr Gln Ile Trp Pro Gln Met Ala Leu Gln145                 150                 155                 160Gln Gly Lys Cys Val Val Glu Ile Lys Pro Arg Gly Thr Ser Lys Gly
            165                 170                 175Glu Ala Ile Ala Ala Phe Met Gln Glu Ala Pro Phe Ile Gly Arg Thr
        180                 185                 190Pro Val Phe Leu Gly Asp Asp Leu Thr Asp Glu Ser Gly Phe Ala Val
    195                 200                 205Val Asn Arg Leu Gly Gly Met Ser Val Lys Ile Gly Thr Gly Ala Thr
210                 215                 220Gln Ala Ser Trp Arg Leu Ala Gly Val Pro Asp Val Trp Ser Trp Leu225                 230                 235                 240Glu Met Ile Thr Thr Ala Leu Gln Gln Lys Arg Glu Asn Asn Arg Ser
            245                 250                 255Asp Asp Tyr Glu Ser Phe Ser Arg Ser Ile   *
        260                 265(2)SEQ ID NO:5的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：27个碱基对
(B)类型：核酸
(C)链型：单链
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：cDNA(ⅲ)假设：非(ⅹⅰ)SE Q ID NO:5的序列描述AAGCTTATGT TGCCATATAG AGTAGAT                                   27(2)SEQ ID NO:6的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：29个碱基对
(B)类型：核酸
(C)链型：单链
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：cDNA(ⅲ)假设：非(ⅹⅰ)SE Q ID NO:6的序列描述GTAGTTGCCA TGGTGCAAAT GTTCATATG                                 29(2)SEQ ID NO:7的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：26个碱基对
(B)类型：核酸
(C)链型：单链
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：cDNA  (ⅲ)假设：非(ⅹⅰ)SE Q ID NO:7的序列描述GAYITIATIT GGRTICAYGA YTAYCA                              26(2)SEQ ID NO:8的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：28个碱基对
(B)类型：核酸
(C)链型：单链
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：cDNA(ⅲ)假设：非(ⅲ)反义：否(ⅹⅰ)SE Q ID NO:8的序列描述TIGGITKITT YYTICAYAYI CCITTYCC                            28(2)SEQ ID NO:9的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：22个碱基对
(B)类型：核酸
(C)链型：单链
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：cDNA(ⅲ)假设：非(ⅲ)反义：否(ⅹⅰ)SE Q ID NO:9的序列描述GYIACIARRT TCATICCRTC IC                                  22(2)SEQ ID NO:10的信息：  (ⅰ)序列特征：
(A)长度：743个碱基对
(B)类型：核酸
(C)链型：双链
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA(ⅲ)假设：非(ⅲ)反义：否(ⅵ)初始来源：
(A)生物：人(Homo sapiens)(ⅸ)特征：
(A)名称/关键词：CDS
(B)位置：1..743
(D)其它信息：部分(ⅹⅰ)SE Q ID NO:10的序列描述GAC GTG ATG TGG ATG CAC GAC TAC CAT TTG ATG GTG TTG CCT ACG TTC     48Asp Val Met Trp Met His Asp Tyr His Leu Met Val Leu Pro Thr Phe1               5                  10                  15TTG AGG AGG CGG TTC AAT CGT TTG AGA ATG GGG TTT TTC CTT CAC AGT     96Leu Arg Arg Arg Phe Asn Arg Leu Arg Met Gly Phe Phe Leu His Ser
         20                  25                  30CCA TTT CCC TCA TCT GAG ATT TAC AGG ACA CTT CCT GTT AGA GAG GAA    144Pro Phe Pro Ser Ser Glu Ile Tyr Arg Thr Leu Pro Val Arg Glu Glu
     35                  40                  45ATA CTC AAG GCT TTG CTC TGT GCT GAC ATT GTT GGA TTC CAC ACT TTT    192Ile Leu Lys Ala Leu Leu Cys Ala Asp Ile Val Gly Phe His Thr Phe
 50                  55                  60GAC TAC GCG AGA CAC TTC CTC TCT TGT TGC AGT CGG ATG TTG GGT TTA    240Asp Tyr Ala Arg His Phe Leu Ser Cys Cys Ser Arg Met Leu Gly Leu65                  70                  75                  80GAG TAT CAG TCT AAA AGA GGT TAT ATA GGG TTA GAA TAC TAT GGA CGG    288Glu Tyr Gln Ser Lys Arg Gly Tyr Ile Gly Leu Glu Tyr Tyr Gly Arg
             85                  90                  95ACA GTA GGC ATC AAG ATT ATG CCC GTC GGG ATA CAT ATG GGT CAT ATT    336Thr Val Gly Ile Lys Ile Met Pro Val Gly Ile His Met Gly His Ile
        100                 105                 110GAG TCC ATG AAG AAA CTT GCA GCG AAA GAG TTG ATG CTT AAG GCG CTA     384Glu Ser Met Lys Lys Leu Ala Ala Lys Glu Leu Met Leu Lys Ala Leu
    115                 120                 125AAG CAG CAA TTT GAA GGG AAA ACT GTG TTG CTT GGT GCC GAT GAC CTG     432Lys Gln Gln Phe Glu Gly Lys Thr Val Leu Leu Gly Ala Asp Asp Leu
130                 135                 140GAT ATT TTC AAA GGT ATA AAC TTA AAG CTT CTA GCT ATG GAA CAG ATG     480Asp Ile Phe Lys Gly Ile Asn Leu Lys Leu Leu Ala Met Glu Gln Met145                 150                 155                 160CTC AAA CAG CAC CCC AAG TGG CAA GGG CAG GCT GTG TTG GTC CAG ATT     528Leu Lys Gln His Pro Lys Trp Gln Gly Gln Ala Val Leu Val Gln Ile
            165                 170                 175GCA AAT CCT ACG AGG GGT AAA GGA GTA GAT TTT GAG GAA ATA CAG GCT     576Ala Asn Pro Thr Arg Gly Lys Gly Val Asp Phe Glu Glu Ile Gln Ala
        180                 185                 190GAG ATA TCG GAA AGC TGT AAG AGA ATC AAT AAG CAA TTC GGC AAG CCT     624Glu Ile Ser Glu Ser Cys Lys Arg Ile Asn Lys Gln Phe Gly Lys Pro
    195                 200                 205GGA TAT GAG CCT ATA GTT TAT ATT GAT AGG CCC GTG TCA AGC AGT GAA     672Gly Tyr Glu Pro Ile Val Tyr Ile Asp ArG Pro Val Ser Ser Ser Glu
210                 215                 220CGC ATG GCA TAT TAC AGT ATT GCA GAA TGT GTT GTT GTC ACG GCT GTG     720Arg Met Ala Tyr Tyr Ser Ile Ala Glu Cys Val Val Val Thr Ala Val225                 230                 235                 240AGC GAC GGC ATG AAC TTC GTC TC                                      743Ser Asp Gly Met Asn Phe Val
            245(2)SEQ ID NO:11的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：247个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：蛋白质(ⅹⅰ)SE Q ID NO:11的序列描述Asp Val Met Trp Met His Asp Tyr His Leu Met Val Leu Pro Thr Phe1               5                  10                  15Leu Arg Arg Arg Phe Asn Arg Leu Arg Met Gly Phe Phe Leu His Ser
         20                  25                  30Pro Phe Pro Ser Ser Glu Ile Tyr Arg Thr Leu Pro Val Arg Glu Glu
     35                  40                  45Ile Leu Lys Ala Leu Leu Cys Ala Asp Ile Val Gly Phe His Thr Phe
 50                  55                  60Asp Tyr Ala Arg His Phe Leu Ser Cys Cys Ser Arg Met Leu Gly Leu65                  70                  75                  80Glu Tyr Gln Ser Lys Arg Gly Tyr Ile Gly Leu Glu Tyr Tyr Gly Arg
             85                  90                  95Thr Val Gly Ile Lys Ile Met Pro Val Gly Ile His Met Gly His Ile
        100                 105                 110Glu Ser Met Lys Lys Leu Ala Ala Lys Glu Leu Met Leu Lys Ala Leu
    115                 120                 125Lys Gln Gln Phe Glu Gly Lys Thr Val Leu Leu Gly Ala Asp Asp Leu
130                 135                 140Asp Ile Phe Lys Gly Ile Asn Leu Lys Leu Leu Ala Met Glu Gln Met145                 150                 155                 160Leu Lys Gln His Pro Lys Trp Gln Gly Gln Ala Val Leu Val Gln Ile
            165                 170                 175Ala Asn Pro Thr Arg Gly Lys Gly Val Asp Phe Glu Glu Ile Gln Ala
        180                 185                 190Glu Ile Ser Glu Ser Cys Lys Arg Ile Asn Lys Gln Phe Gly Lys Pro
    195                 200                 205Gly Tyr Glu Pro Ile Val Tyr Ile Asp Arg Pro Val Ser Ser Ser Glu
210                 215                 220Arg Met Ala Tyr Tyr Ser Ile Ala Glu Cys Val Val Val Thr Ala Val225                 230                 235                 240Ser Asp Gly Met Asn Phe Val
            245(2)SEQ ID NO:12的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：395个碱基对
(B)类型：核酸
(C)链型：双链
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA(ⅲ)假设：非(ⅲ)反义：否(ⅵ)初始来源：
(A)生物：烟草(Nicotiana tabacum)
(B)种类：Samsun NN
(F)组织类型：叶(ⅸ)特征：
(A)名称/关键词：CDS
(B)位置：1..395
(D)其它信息：部分(ⅹⅰ) SE Q ID NO:12的序列描述GCG AAA CCG GTG ATG AAA CTT TAC AGG GAA GCA ACT GAC GGA TCA TAT      48Ala Lys Pro Val Met Lys Leu Tyr Arg Glu Ala Thr Asp Gly Ser Tyr1               5                  10                  15ATA GAA ACT AAA GAG AGT GCA TTA GTG TGG CAC CAT CAT GAT GCA GAC      96Ile Glu Thr Lys Glu Ser Ala Leu Val Trp His His His Asp Ala Asp
         20                  25                  30CCT GAC TTT GGC TCC TGC CAG GCA AAG GAA TTG TTG GAT CAT TTG GAA     144Pro Asp Phe Gly Ser Cys Gln Ala Lys Glu Leu Leu Asp His Leu Glu
     35                  40                  45AGC GTA CTT GCA AAT GAA CCT GCA GTT GTT AAG AGG GGC CAA CAT ATT     192Ser Val Leu Ala Asn Glu Pro Ala Val Val Lys Arg Gly Gln His Ile
 50                  55                  60GTT GAA GTC AAG CCA CAA GGT GTG ACC AAA GGA TTA GTT TCA GAG AAG     240Val Glu Val Lys Pro Gln Gly Val Thr Lys Gly Leu Val Ser Glu Lys65                  70                  75                  80GTT CTC TCG ATG ATG GTT GAT AGT GGG AAA CCG CCC GAT TTT GTT ATG     288Val Leu Ser Met Met Val Asp Ser Gly Lys Pro Pro Asp Phe Val Met
             85                  90                  95TGC ATT GGA GAT GAT AGG TCA GAC GAA GAC ATG TTT GAG AGC ATA TTA     336Cys Ile Gly Asp Asp Arg Ser Asp Glu Asp Met Phe Glu Ser Ile Leu
        100                 105                 110AGC ACC GTA TCC AGT CTG TCA GTC ACT GCT GCC CCT GAT GTC TTT GCC     384Ser Thr Val Ser Ser Leu Ser Val Thr Ala Ala Pro Asp Val Phe Ala
    115                 120                 125TGC ACC GTC GG                                                      395Cys Thr Val
130(2)SEQ ID NO:13的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：131个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：蛋白质(ⅹⅰ)SE Q ID NO:13的序列描述Ala Lys Pro Val Met Lys Leu Tyr Arg Glu Ala Thr Asp Gly Ser Tyr1               5                  10                  15Ile Glu Thr Lys Glu Ser Ala Leu Val Trp His His His Asp Ala Asp
         20                  25                  30Pro Asp Phe Gly Ser Cys Gln Ala Lys Glu Leu Leu Asp His Leu Glu
     35                  40                  45Ser Val Leu Ala Asn Glu Pro Ala Val Val Lys Arg Gly Gln His Ile
 50                  55                  60Val Glu Val Lys Pro Gln Gly Val Thr Lys Gly Leu Val Ser Glu Lys65                  70                  75                  80Val Leu Ser Met Met Val Asp Ser Gly Lys Pro Pro Asp Fhe Val Met
             85                  90                  95Cys Ile Gly Asp Asp Arg Ser Asp Glu Asp Met Phe Glu Ser Ile Leu
        100                 105                 110Ser Thr Val Ser Ser Leu Ser Val Thr Ala Ala Pro Asp Val Phe Ala
    115                 120                 125Cys Thr Val
130(2)SEQ ID NO:14的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：491个碱基对
(B)类型：核酸
(C)链型：双链
(D)拓扑类型：线性  (ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA(ⅲ)假设：非(ⅲ)反义：否(ⅵ)初始来源：
(A)生物：烟草(Nicotiana tabacum)
(B)种类：Samsun NN
(F)组织类型：叶(ⅸ)特征：
(A)名称/关键词：CDS
(B)位置：1..491
(D)其它信息：部分(ⅹⅰ)SE Q ID NO:14的序列描述GGG CTG TCG GCG GAA CAC GGC TAT TTC TTG AGG ACG AGT CAA GAT GAA      48Gly Leu Ser Ala Glu His Gly Tyr Phe Leu Arg Thr Ser Gln Asp Glu1               5                  10                  15GAA TGG GAA ACA TGT GTA CCA CCA GTG GAA TGT TGT TGG AAA GAA ATA      96Glu Trp Glu Thr Cys Val Pro Pro Val Glu Cys Cys Trp Lys Glu Ile
         20                  25                  30GCT GAG CCT GTT ATG CAA CTT TAC ACT GAG ACT ACT GAT GGA TCA GTT     144Ala Glu Pro Val Met Gln Leu Tyr Thr Glu Thr Thr Asp Gly Ser Val
     35                  40                  45ATT GAA GAT AAG GAA ACA TCA ATG GTC TGG TCT TAC GAG GAT GCG GAT     192Ile Glu Asp Lys Glu Thr Ser Met Val Trp Ser Tyr Glu Asp Ala Asp
 50                  55                  60CCT GAT TTT GGA TCA TGT CAG GCT AAG GAA CTT CTT GAT CAC CTA GAA     240Pro Asp Phe Gly Ser Cys Gln Ala Lys Glu Leu Leu Asp His Leu Glu65                  70                  75                  80AGT GTA CTA GCT AAT GAA CCG GTC ACT GTC AGG AGT GGA CAG AAT ATA     288Ser Val Leu Ala Asn Glu Pro Val Thr Val Arg Ser Gly Gln Asn Ile
             85                  90                  95GTG GAA GTT AAG CCC CAG GGT GTA TCC AAA GGG CTT GTT GCC AAG CGC     336Val Glu Val Lys Pro Gln Gly Val Ser Lys Gly Leu Val Ala Lys Arg
        100                 105                 110CTG CTT TCC GCA ATG CAA GAG AAA GGA ATG TCA CCA GAT TTT GTC CTT     384Leu Leu Ser Ala Met Gln Glu Lys Gly Met Ser Pro Asp Phe Val Leu
    115                 120                 125TGC ATA GGA GAT GAC CGA TCG GAT GAA GAC ATG TTC GAG GTG ATC ATG     432Cys Ile Gly Asp Asp Arg Ser Asp Glu Asp Met Phe Glu Val Ile Met
130                 135                 140AGC TCG ATG TCT GGC CCG TCC ATG GCT CCA ACA GCT GAA GTC TTT GCC      480Ser Ser Met Ser Gly Pro Ser Met Ala Pro Thr Ala Glu Val Phe Ala145                 150                 155                 160TGC ACC GTC GG                                                       491Cys Thr Val(2)SEQ ID NO:15的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：163个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：蛋白质(ⅹⅰ)SE Q ID NO:15的序列描述Gly Leu Ser Ala Glu His Gly Tyr Phe Leu Arg Thr Ser Gln Asp Glu1               5                  10                  15Glu Trp Glu Thr Cys Val Pro Pro Val Glu Cys Cys Trp Lys Glu Ile
         20                  25                  30Ala Glu Pro Val Met Gln Leu Tyr Thr Glu Thr Thr Asp Gly Ser Val
     35                  40                  45Ile Glu Asp Lys Glu Thr Ser Met Val Trp Ser Tyr Glu Asp Ala Asp
 50                  55                  60Pro Asp Phe Gly Ser Cys Gln Ala Lys Glu Leu Leu Asp His Leu Glu65                  70                  75                  80Ser Val Leu Ala Asn Glu Pro Val Thr Val Arg Ser Gly Gln Asn Ile
             85                  90                  95Val Glu Val Lys Pro Gln Gly Val Ser Lys Gly Leu Val Ala Lys Arg
        100                 105                 110Leu Leu Ser Ala Met Gln Glu Lys Gly Met Ser Pro Asp Phe Val Leu
    115                 120                 125Cys Ile Gly Asp Asp Arg Ser Asp Glu Asp Met Phe Glu Val Ile Met
130                 135                 140Ser Ser Met Ser Gly Pro Ser Met Ala Pro Thr Ala Glu Val Phe Ala145                 150                 155                 160Cys Thr Val(2)SEQ ID NO:16的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：361个碱基对
(B)类型：核酸
(C)链型：双链
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA(ⅲ)假设：非(ⅲ)反义：否(ⅵ)初始来源：
(A)生物：烟草(nicotiana tabacum)
(B)种类：Samsun NN
(F)组织类型：叶(ⅹⅰ)SE Q ID NO:16的序列描述TTTGATTATG ATGGGACGCT GCTGTCGGAG GAGAGTGTGG ACAAAACCCC GAGTGAAGAT    60GACATCTCAA TTCTGAATGG TTTATGCAGT GATCCAAAGA ACGTAGTCTT TATCGTGAGT   120GGCAGAGGAA AGGATACACT TAGCAAGTGG TTCTCTCCGT GTCCGAGACT CGGCCTATCA   180GCAGAACATG GATATTTCAC TAGGTGGAGT AAGGATTCCG AGTGGGAATC TCGTCCATAG   240CTGCAGACCT TGACTGGAAA AAAATAGTGT TGCCTATTAT GGAGCGCTAC ACAGAGCACA   300GATGGTTCGT CGATAGAACA GAAGGAAACC TCGTGTTGGC TCATCAAATG CTGGCCCCGA   360A                                                                   361(2)SEQ ID NO:17的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：118个碱基对
(B)类型：核酸
(C)链型：双链
(D)拓扑类型：线性  (ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA(ⅲ)假设：非(ⅲ)反义：否(ⅵ)初始来源：
(A)生物：烟草(nicotiana tabacum)
(B)种类：Samsun NN
(F)组织类型：叶(ⅹⅰ)SE Q ID NO:17的序列描述GGAAACCCAC AGGATGTAAG CAAAGTTTTA GTTTTTGAGA TCTCTTGGCA TCAAGCAAAG     60TAGAGGGAAG TCACCCGATT CGTGCTGTGC GTAGGGATGA CAGATCGGAC GACTTAGA      118(2)SEQ ID NO:18的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：417个碱基对
(B)类型：核酸
(C)链型：双链
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA(ⅲ)假设：非(ⅲ)反义：否(ⅵ)初始来源：
(A)生物：烟草(nicotiana tabacum)
(B)种类：Samsun NN
(F)组织类型：叶(ⅹⅰ)SE Q ID NO:18的序列描述TTGTGGCCGA TGTTCCACTA CATGTTGCCG TTCTCACCTG ACCATGGAGG CCGCTTTGAT    60CGCTCTATGT GGGAAGCATA TGTTTCTGCC AACAAGTTGT TTTCACAAAA AGTAGTTGAG   120GTTCTTAATC CTGAGGATGA CTTTGTCTGG ATTCATGATT ATCATTTGAT GGTGTTGCCA   180ACGTTCTTGA GGAGGCGGTT CAATCGTTTG AGAATGGGGT TTTTCCTTCA CAGTCCATTC   240CTTCATCTGA GATTTACAGG ACACTTCCTG TTAGAGAGGA AATACTCAAG GCTTTGCTCT   300GTGCTGACAT TGTTGGATTC CACACTTTTG ACTACGCGAG ACACTTCCTC TCTTGTTGCA   360GTCGATTTTG GGTAGAGTAC AGTCTAAAAA AAGTTATATT GGGTTAAAAT ACTATGG      417(2)SEQ ID NO:19的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：411个碱基对
(B)类型：核酸
(C)链型：双链
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA(ⅲ)假设：非(ⅲ)反义：否(ⅵ)初始来源：
(A)生物：烟草(nicotiana tabacum)
(B)种类：Samsun NN
(F)组织类型：叶(ⅹⅰ)SE Q ID NO:19的序列描述GGGTCATATT GATCCATGAA GAAATTGCAG CGAAAGAGTG ATGCTTTAAT GCGTAAAGCA    60GCAATTTGAA GGGAAAACTG TGTTGTTAGG TGCCGATGAC CTGGATATTT TCAAAGGTAT   120GAACTTAAAG CTTCTAGCTA TGGAACAGAT GCTCAAACAT CACCCCAAGT GGCAAGGGCA   180GGCTGTGTTG GTCCAAGATT GCAAATCCTA CGAGGGGTAA AGGAGTAGAT TTTGACGAAA   240TACGGCTGAG ACATCGGAAA GCTGTAAGAG AATCAATAAG CAATTCGGCA AGCCTGGATA   300TGAGCCTATA GTTTATATTG ATAGGCCCGT GTCAAGCAGT GAACGCATGG CATATTACAG   360TATTGCAGGA TGTGTTGTGG TCACGCTGTG AGCGATGGCA TGAATCTGTT C            411(2)SEQ ID NO:20的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：405个碱基对
(B)类型：核酸
(C)链型：双链
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA(ⅲ)假设：非(ⅲ)反义：否(ⅵ)初始来源：
(A)生物：烟草(nicotiana tabacum)
(B)种类：Samsun NN
(F)组织类型：叶(ⅹⅰ)SE Q ID NO:20的序列描述TGGGGTGGTT CCTGCATACG CCGTTTCCTT CTTCTGAGAT ATATAAAACT TTGCCTATTC      60GCGAAAGATC TTACAGCTCT CTTGAATTCA ATTTGATTGG GTTCCACACT TTTGACTATG     120CAGGCACTTC CTCTCGTGTT GCAGTCGGAT GTTAGGTATT TCTTATGATC AAAAAGGGGT     180TACATAGGCC TCGATATTAT GGCAGGACTG TAATATAAAA ATTCTGCCAG CGGGTATTCA     240TATGGGGCAG CTTCAGCAAG TCTTGAGTCT TCCTGAAACG GAGGCAAAAT CTCGGAACTC     300GTGCAGCATT TAATCATCAG GGGGAGGACA TTGTTGCTGG GATTGATGAC TGGACATATT     360TAAAGGCTCA TTTGAATTTA TTACCATGGA ACAACTCTAT TGCAC                     405(2)SEQ ID NO:21的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：427个碱基对
(B)类型：核酸
(C)链型：双链
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA(ⅲ)假设：非(ⅲ)反义：否(ⅵ)初始来源：
(A)生物：烟草(nicotiana tabacum)
(B)种类：Samsun NN
(F)组织类型：叶(ⅹⅰ)SE Q ID NO:21的序列描述ATCATATGGG GCAGCTTCAG CAATCTTGAT CTTCCTGAAA CGGAGGCAAA AGTCTTCGGA    60ACTCGGCAGC AGTTTAATCA TCAGGGGAGG ACATTGTTGC TGGGAGTTGA TGACATGGAC   120ATATTTAAAG GCATCAGTTT GAAGTTATTA GCAATGGAAC AACTTCTATT GCAGCACCCG   180GAGAAGCAGG GGAAGGTTGT TTTGGTGCAG ATAGCCAATC CTGCTAGAGG CAAAGGAAAA   240GATGTCAAAG AAGTGCAGGA AGAAACTCAT TGACGGTGAA GCGAATTAAT GAAGCATTTG   300GAAGACCTGG GTACGAACCA GTTATCTTGA TTGATAAGCC ACTAAAGTTT TATGAAAGGA   360TTGCTTATTA TGTTGTTGCA GAGTGTTGCC TAGTCACTGC TGTCAGCGAT GGCATGAACC   420TCGTCTC                                                             427(2)SEQ ID NO:22的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：315个碱基对
(B)类型：核酸
(C)链型：双链
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA(ⅲ)假设：非(ⅲ)反义：否(ⅵ)初始来源：
(A)生物：烟草(nicotiana tabacum)
(B)种类：Samsun NN
(F)组织类型：叶(ⅹⅰ)SE Q ID NO:22的序列描述GATGTGGATG CATGACTACC AATCCAAGAG GGGGTATATT GGTCTTGACT ATTATGGTAA    60ACTGTGACCA TTAAAATCCT TCCAGTTGGT ATTCACATGG GACAACTCCA AAATGTTATG   120TCACTACAGA CACGGGAAAG AAAGCAAAGG AGTTGAAAGA AAAATATGAG GGGAAAATTG   180TGATGTTAGG TATTGATGAT ATGGACATGT TTAAAGGAAT TGGTCTAAAG TTTCTGGCAA   240TGGGGAGGCT TCTAGATGAA AACCCTGTCT TGAGGGGTAA AGTGGTATTG GTTCAATCAC   300CAGGCCTGGA AATTA                                                    315(2)SEQ ID NO:23的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：352个碱基对
(B)类型：核酸
(C)链型：双链
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA(ⅲ)假设：非(ⅲ)反义：否(ⅵ)初始来源：
(A)生物：烟草(nicotiana tabacum)
(B)种类：Samsun NN
(F)组织类型：叶(ⅹⅰ)SE Q ID NO:23的序列描述AGAAGTAAAG GGAGTGAGTC CCCGAGGTTC AAAAAGAGGT CAACAGAATT GCAGTGAAAT    60TAATAAAAAA TATGGCAAAC CGGGGTACAA GCCGATTGTT TGTATCAATG GTCCAGTTTC   120GACACAAGAC AAGATTGCAC ATTATGCGGT CTTGAGTGTG TTGTTGTTAA TGCTGTTAGA   180GATGGGATGA ACTTGGTGCC TTATGAGTAT ACGGTCTTTA GGCAGGGCAG CGATAATTTG   240GATAAGGCCT TGCAGCTAGA TGGTCCTACT GCTTCCAGAA AGAGTGTGAT TATTGTCTTG   300AATTCGTTGG GTGCTCGCCA TCTTTAGTGG CGCCATCCGC GTCAACCCCT GG           352(2)SEQ ID NO:24的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：2640个碱基对
(B)类型：核酸
(C)链型：双链
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA(ⅲ)假设：非(ⅲ)反义：否(ⅵ)初始来源：
(A)生物：向日葵(Helianthus annuus)
(F)组织类型：叶(ⅸ)特征：
(A)名称/关键词：CDS
(B)位置：171..2508(ⅸ)特征：
(A)名称/关键词：不定
(B)位置：置换(2141..2151,“caatnnntta”)(ⅸ)特征：
(A)名称/关键词：不定
(B)位置：置换(2237.2243,“actnaaa”)(ⅹⅰ)SE Q ID NO:24的序列描述GGATCCTGCG GTTTCATCAC ACAATATGAT ACTGTTACAT CTGATGCCCC TTCAGATGTC    60CCAAATAGGT TGATTGTCGT ATCGAATCAG TTACCCATAA TCGCTAGGCT AAGACTAACG   120ACAATGGAGG GTCCTTTTGG GATTTCACTT GGGACGAGAG TTCGATTTAC ATG CAC      176
                                                   Met His
                                                     1ATC AAA GAT GCA TTA CCC GCA GCC GTT GAG GTT TTC TAT GTT GGC GCA     224Ile Lys Asp Ala Leu Pro Ala Ala Val Glu Val Phe Tyr Val Gly Ala
      5                  10                  15CTA AGG GCT GAC GTT GGC CCT ACC GAA CAA GAT GAC GTG TCA AAG ACA     272Leu Arg Ala Asp Val Gly Pro Thr Glu Gln Asp Asp Val Ser Lys Thr
 20                  25                  30TTG CTC GAT AGG TTT AAT TGC GTT GCG GTT TTT GTC CCT ACT TCA AAA     320Leu Leu Asp Arg Phe Asn Cys Val Ala Val Phe Val Pro Thr Ser Lys35                  40                  45                  50TGG GAC CAA TAT TAT CAC TGC TTT TGT AAG CAG TAT TTG TGG CCG ATA     368Trp Asp Gln Tyr Tyr His Cys Phe Cys Lys Gln Tyr Leu Trp Pro Ile
             55                  60                  65TTT CAT TAC AAG GTT CCC GCT TCT GAC GTC AAG AGT GTC CCG AAT AGT     416Phe His Tyr Lys Val Pro Ala Ser Asp Val Lys Ser Val Pro Asn Ser
         70                  75                  80CGG GAT TCA TGG AAC GCT TAT GTT CAC GTG AAC AAA GAG TTT TCC CAG     464Arg Asp Ser Trp Asn Ala Tyr Val His Val Asn Lys Glu Phe Ser Gln
     85                  90                  95AAG GTG ATG GAG GCA GTA ACC AAT GCT AGC AAT TAT GTA TGG ATA CAT     512Lys Val Met Glu Ala Val Thr Asn Ala Ser Asn Tyr Val Trp Ile His
100                 105                 110GAC TAC CAT TTA ATG ACG CTA CCG ACT TTC TTG AGG CGG GAT TTT TGT     560Asp Tyr Mis Leu Met Thr Leu Pro Thr Phe Leu Arg Arg Asp Phe Cys115                 120                 125                 130CGT TTT AAA ATC GGT TTT TTT CTG CAT AGC CCG TTT CCT TCC TCG GAG     608Arg Phe Lys Ile Gly Phe Phe Leu His Ser Pro Phe Pro Ser Ser Glu
            135                 140                 145GTT TAC AAG ACC CTA CCA ATG AGA AAC GAG CTC TTG AAG GGT CTG TTA     656Val Tyr Lys Thr Leu Pro Met Arg Asn Glu Leu Leu Lys Gly Leu Leu
        150                 155                 160AAT GCT GAT CTT ATC GGG TTC CAT ACA TAC GAT TAT GCC CGT CAT TTT     704Asn Ala Asp Leu Ile Gly Phe His Thr Tyr Asp Tyr Ala Arg His Phe
    165                 170                 175CTA ACG TGT TGT AGT CGA ATG TTT GGT TTG GAT CAT CAG TTG AAA AGG     752Leu Thr Cys Cys Ser Arg Met Phe Gly Leu Asp His Gln Leu Lys Arg
180                 185                 190GGG TAC ATT TTC TTG GAA TAT AAT GGA AGG AGC ATT GAG ATC AAG ATA     800Gly Tyr Ile Phe Leu Glu Tyr Asn Gly ArG Ser Ile Glu Ile Lys Ile195                 200                 205                 210AAG GCG AGC GGG ATT CAT GTT GGT CGA ATG GAG TCG TAC TTG AGT CAG     848Lys Ala Ser Gly Ile His Val Gly Arg Met Glu Ser Tyr Leu Ser Gln
            215                 220                 225CCC GAT ACA AGA TTA CAA GTT CAA GAA CTA AAA AAA CGT TTC GAA GGG     896Pro Asp Thr Arg Leu Gln Val Gln Glu Leu Lys Lys Arg Phe Glu Gly
        230                 235                 240AAA ATC GTG CTA CTT GGA GTT GAT GAT TTG GAT ATA TTC AAA GGT GTG     944Lys Ile Val Leu Leu Gly Val Asp Asp Leu Asp Ile Phe Lys Gly Val
    245                 250                 255AAC TTC AAG GTT TTA GCG TTG GAG AAG TTA CTT AAA TCA CAC CCG AGT     992Asn Phe Lys Val Leu Ala Leu Glu Lys Leu Leu Lys Ser His Pro Ser
260                 265                 270TGG CAA GGG CGT GTG GTT TTG GTG CAA ATC TTG AAT CCC GCT CGC GCG    1040Trp Gln Gly Arg Val Val Leu Val Gln Ile Leu Asn Pro Ala Arg Ala275                 280                 285                 290CGT TGC CAA GAC GTC GAT GAG ATC AAT GCC GAG ATA AGA ACA GTC TGT    1088Arg Cys Gln Asp Val Asp Glu Ile Asn Ala Glu Ile Arg Thr Val Cys
            295                 300                 305GAA AGA ATC AAT AAC GAA CTG GGA AGC CCG GGA TAC CAG CCC GTT GTG    1136Glu Arg Ile Asn Asn Glu Leu Gly Ser Pro Gly Tyr Gln Pro Val Val
        310                 315                 320TTA ATT GAT GGG CCC GTT TCG TTA AGT GAA AAA GCT GCT TAT TAT GCT    1184Leu Ile Asp Gly Pro Val Ser Leu Ser Glu Lys Ala Ala Tyr Tyr Ala
    325                 330                 335ATC GCC GAT ATG GCA ATT GTT ACA CCG TTA CGT GAC GGC ATG AAT CTT    1232Ile Ala Asp Met Ala Ile Val Thr Pro Leu Arg Asp Gly Met Asn Leu
340                 345                 350ATC CCG TAC GAG TAC GTC GTT TCC CGA CAA AGT GTT AAT GAC CCA AAT    1280Ile Pro Tyr Glu Tyr Val Val Ser Arg Gln Ser Val Asn Asp Pro Asn355                 360                 365                 370CCC AAT ACT CCA AAA AAG AGC ATG CTA GTG GTC TCC GAG TTC ATC GGG    1328Pro Asn Thr Pro Lys Lys Ser Met Leu Val Val Ser Glu Phe Ile Gly
            375                 380                 385TGT TCA CTA TCT TTA ACC GGG GCC ATA CGG GTC AAC CCA TGG GAT GAG    1376Cys Ser Leu Ser Leu Thr Gly Ala Ile Arg Val Asn Pro Trp Asp Glu
        390                 395                 400TTG GAG ACA GCA GAA GCA TTA TAC GAC GCA CTC ATG GCT CCT GAT GAC    1424Leu Glu Thr Ala Glu Ala Leu Tyr Asp Ala Leu Met Ala Pro Asp Asp
    405                 410                 415CAT AAA GAA ACC GCC CAC ATG AAA CAG TAT CAA TAC ATT ATC TCC CAT    1472His Lys Glu Thr Ala His Met Lys Gln Tyr Gln Tyr Ile Ile Ser His
420                 425                 430GAT GTA GCT AAC TGG GCT CGT AGC TTC TTT CAA GAT TTA GAG CAA GCG    1520Asp Val Ala Asn Trp Ala Arg Ser Phe Phe Gln Asp Leu Glu Gln Ala435                 440                 445                 450TGC ATC GAT CAT TCT CGT AAA CGA TGC ATG AAT TTA GGA TTT GGG TTA    1568Cys Ile Asp His Ser Arg Lys Arg Cys Met Asn Leu Gly Phe Gly Leu
            455                 460                 465GAT ACT AGA GTC GTT CTT TTT GAT GAG AAG TTT AGC AAG TTG GAT ATA    1616Asp Thr ArG Val Val Leu Phe Asp Glu Lys Phe Ser Lys Leu Asp Ile
        470                 475                 480GAT GTC TTG GAG AAT GCT TAT TCC ATG GCT CAA AAT CGG GCC ATA CTT    1664Asp Val Leu Glu Asn Ala Tyr Ser Met Ala Gln Asn Arg Ala Ile Leu
    485                 490                 495TTG GAC TAT GAC GGC ACT GTT ACT CCA TCT ATC AGT AAA TCT CCA ACT    1712Leu Asp Tyr Asp Gly Thr Val Thr Pro Ser Ile Ser Lys Ser Pro Thr
500                 505                 510GAA GCT GTT ATC TCC ATG ATC AAC AAA CTG TGC AAT GAT CCA AAG AAC    1760Glu Ala Val Ile Ser Met Ile Asn Lys Leu Cys Asn Asp Pro Lys Asn515                 520                 525                 530ATG GTG TTC ATC GTT AGT GGA CGC AGT AGA GAA AAT CTT GGC AGT TGG    1808Met Val Phe Ile Val Ser Gly Arg Ser Arg Glu Asn Leu Gly Ser Trp
            535                 540                 545TTC GGC GCG TGT GAG AAA CCC GCC ATT GCA GCT GAG CAC GGA TAC TTT    1856Phe Gly Ala Cys Glu Lys Pro Ala Ile Ala Ala Glu His Gly Tyr Phe
        550                 555                 560ATA AGG TGG GCG GGT GAT CAA GAA TGG GAA ACG TGC GCA CGT GAG AAT    1904Ile Arg Trp Ala Gly Asp Gln Glu Trp Glu Thr Cys Ala Arg Glu Asn
    565                 570                 575AAT GTC GGG TGG ATG GAA ATG GCT GAG CCG GTT ATG AAT CTT TAT ACA    1952Asn Val Gly Trp Met Glu Met Ala Glu Pro Val Met Asn Leu Tyr Thr
580                 585                 590GAA ACT ACT GAC GGT TCG TAT ATT GAA AAG AAA GAA ACT GCA ATG GTT    2000Glu Thr Thr Asp Gly Ser Tyr Ile Glu Lys Lys Glu Thr Ala Met Val595                 600                 605                 610TGG CAC TAT GAA GAT GCT GAT AAA GAT CTT GGG TTG GAG CAG GCT AAG    2048Trp His Tyr Glu Asp Ala Asp Lys Asp Leu Gly Leu Glu Gln Ala Lys
            615                 620                 625GAA CTG TTG GAC CAT CTT GAA AAC GTG CTC GCT AAT GAG CCC GTT GAA    2096Glu Leu Leu Asp His Leu Glu Asn Val Leu Ala Asn Glu Pro Val Glu
        630                 635                 640GTG AAA CGA GGT CAA TAC ATT GTA GAA GTT AAA CCA CAG GTA CCC CAT    2144Val Lys Arg Gly Gln Tyr Ile Val Glu Val Lys Pro Gln Val Pro His
    645                 650                 655GGG TTA CCT TCT TGT TAT GAC ATT CAT AGG CAC AGA TTT GTA GAA TCT    2192Gly Leu Pro Ser Cys Tyr Asp Ile His Arg His Arg Phe Val Glu Ser
660                 665                 670TTT AAC TTA AAT TTC TTT AAA TAT GAA TGC AAT TAT AGG GGG TCA CTG    2240Phe Asn Leu Asn Phe Phe Lys Tyr Glu Cys Asn Tyr Arg Gly Ser Leu675                 680                 685                 690AAA GGT ATA GTT GCA GAG AAG ATT TTT GCG TTC ATG GCT GAA AAG GGA    2288Lys Gly Ile Val Ala Glu Lys Ile Phe Ala Phe Met Ala Glu Lys Gly
            695                 700                 705AAA CAG GCT GAT TTC GTG TTG AGC GTT GGA GAT GAT AGA AGT GAT GAA    2336Lys Gln Ala Asp Phe Val Leu Ser Val Gly Asp Asp Arg Ser Asp Glu
        710                 715                 720GAC ATG TTT GTG GCC ATT GGG GAT GGA ATA AAA AAG GGT CGG ATA ACT    2384Asp Met Phe Val Ala Ile Gly Asp Gly Ile Lys Lys Gly Arg Ile Thr
    725                 730                 735AAC AAC AAT TCA GTG TTT ACA TGC GTA GTG GGA GAG AAA CCG AGT GCA    2432Asn Asn Asn Ser Val Phe Thr Cys Val Val Gly Glu Lys Pro Ser Ala
740                 745                 750GCT GAG TAC TTT TTA GAC GAG ACG AAA GAT GTT TCA ATG ATG CTC GAG    2480Ala Glu Tyr Phe Leu Asp Glu Thr Lys Asp Val Ser Met Met Leu Glu755                 760                 765                 770AAG CTC GGG TGT CTC AGC AAC CAA GGA T GATGATCCGG AAGCTTCTCG        2528Lys Leu Gly Cys Leu Ser Asn Gln Gly
            775TGATCTTTAT GAGTTAAAAG TTTTCGACTT TTTCTTCATC AAGATTCATG GGAAAGTTGT  2588TCAATATGAA CTTGTGTTTC TTGGTTCTGG ATTTTAGGGA GTCTATGGAT CC          2640(2)SEQ ID NO:25的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：779个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：蛋白质(ⅹⅰ)SE Q ID NO:25的序列描述Met His Ile Lys Asp Ala Leu Pro Ala Ala Val Glu Val Phe Tyr Val1               5                  10                  15Gly Ala Leu Arg Ala Asp Val Gly Pro Thr Glu Gln Asp Asp Val Ser
         20                  25                  30Lys Thr Leu Leu Asp Arg Phe Asn Cys Val Ala Val Phe Val Pro Thr
     35                  40                  45Ser Lys Trp Asp Gln Tyr Tyr His Cys Phe Cys Lys Gln Tyr Leu Trp
 50                  55                  60Pro Ile Phe His Tyr Lys Val Pro Ala Ser Asp Val Lys Ser Val Pro65                  70                  75                  80Asn Ser Arg Asp Ser Trp Asn Ala Tyr Val His Val Asn Lys Glu Phe
             85                  90                  95Ser Gln Lys Val Met Glu Ala Val Thr Asn Ala Ser Asn Tyr Val Trp
        100                 105                 110Ile His Asp Tyr His Leu Met Thr Leu Pro Thr Phe Leu Arg Arg Asp
    115                 120                 125Phe Cys Arg Phe Lys Ile Gly Phe Phe Leu His Ser Pro Phe Pro Ser
130                 135                 140Ser Glu Val Tyr Lys Thr Leu Pro Met Arg Asn Glu Leu Leu Lys Gly145                 150                 155                 160Leu Leu Asn Ala Asp Leu Ile Gly Phe His Thr Tyr Asp Tyr Ala Arg
            165                 170                 175His Phe Leu Thr Cys Cys Ser Arg Met Phe Gly Leu Asp His Gln Leu
        180                 185                 190Lys Arg Gly Tyr Ile Phe Leu Glu Tyr Asn Gly Arg Ser Ile Glu Ile
    195                 200                 205Lys Ile Lys Ala Ser Gly Ile His Val Gly Arg Met Glu Ser Tyr Leu
210                 215                 220Ser Gln Pro Asp Thr Arg Leu Gln Val Gln Glu Leu Lys Lys Arg Phe225                 230                 235                 240Glu Gly Lys Ile Val Leu Leu Gly Val Asp Asp Leu Asp Ile Phe Lys
            245                 250                 255Gly Val Asn Phe Lys Val Leu Ala Leu Glu Lys Leu Leu Lys Ser His
        260                 265                 270Pro Ser Trp Gln Gly Arg Val Val Leu Val Gln Ile Leu Asn Pro Ala
    275                 280                 285Arg Ala Arg Cys Gln Asp Val Asp Glu Ile Asn Ala Glu Ile Arg Thr
290                 295                 300Val Cys Glu Arg Ile Asn Asn Glu Leu Gly Ser Pro Gly Tyr Gln Pro305                 310                 315                 320Val Val Leu Ile Asp Gly Pro Val Ser Leu Ser Glu Lys Ala Ala Tyr
            325                 330                 335Tyr Ala Ile Ala Asp Met Ala Ile Val Thr Pro Leu Arg Asp Gly Met
        340                 345                 350Asn Leu Ile Pro Tyr Glu Tyr Val Val Ser Arg Gln Ser Val Asn Asp
    355                 360                 365Pro Asn Pro Asn Thr Pro Lys Lys Ser Met Leu Val Val Ser Glu Phe
370                 375                 380Ile Gly Cys Ser Leu Ser Leu Thr Gly Ala Ile Arg Val Asn Pro Trp385                 390                 395                 400Asp Glu Leu Glu Thr Ala Glu Ala Leu Tyr Asp Ala Leu Met Ala Pro
            405                 410                 415Asp Asp His Lys Glu Thr Ala His Met Lys Gln Tyr Gln Tyr Ile Ile
        420                 425                 430Ser His Asp Val Ala Asn Trp Ala Arg Ser Phe Phe Gln Asp Leu Glu
    435                 440                 445Gln Ala Cys Ile Asp His Ser Arg Lys Arg Cys Met Asn Leu Gly Phe
450                 455                 460Gly Leu Asp Thr Arg Val Val Leu Phe Asp Glu Lys Phe Ser Lys Leu465                 470                 475                 480Asp Ile Asp Val Leu Glu Asn Ala Tyr Ser Met Ala Gln Asn Arg Ala
            485                 490                 495Ile Leu Leu Asp Tyr Asp Gly Thr Val Thr Pro Ser Ile Ser Lys Ser
        500                 505                 510Pro Thr Glu Ala Val Ile Ser Met Ile Asn Lys Leu Cys Asn Asp Pro
    515                 520                 525Lys Asn Met Val Phe Ile Val Ser Gly Arg Ser Arg Glu Asn Leu Gly
530                 535                 540Ser Trp Phe Gly Ala Cys Glu Lys Pro Ala Ile Ala Ala Glu His Gly545                 550                 555                 560Tyr Phe Ile Arg Trp Ala Gly Asp Gln Glu Trp Glu Thr Cys Ala Arg
            565                 570                 575Glu Asn Asn Val Gly Trp Met Glu Met Ala Glu Pro Val Met Asn Leu
        580                 585                 590Tyr Thr Glu Thr Thr Asp Gly Ser Tyr Ile Glu Lys Lys Glu Thr Ala
    595                 600                 605Met Val Trp His Tyr Glu Asp Ala Asp Lys Asp Leu Gly Leu Glu Gln
610                 615                 620Ala Lys Glu Leu Leu Asp His Leu Glu Asn Val Leu Ala Asn Glu Pro625                 630                 635                 640Val Glu Val Lys Arg Gly Gln Tyr Ile Val Glu Val Lys Pro Gln Val
            645                 650                 655Pro His Gly Leu Pro Ser Cys Tyr Asp Ile His Arg His Arg Phe Val
        660                 665                 670Glu Ser Phe Asn Leu Asn Phe Phe Lys Tyr Glu Cys Asn Tyr Arg Gly
    675                 680                 685Ser Leu Lys Gly Ile Val Ala Glu Lys Ile Phe Ala Phe Met Ala Glu
690                 695                 700Lys Gly Lys Gln Ala Asp Phe Val Leu Ser Val Gly Asp Asp Arg Ser705                 710                 715                 720Asp Glu Asp Met Phe Val Ala Ile Gly Asp Gly Ile Lys Lys Gly Arg
            725                 730                 735Ile Thr Asn Asn Asn Ser Val Phe Thr Cys Val Val Gly Glu Lys Pro
        740                 745                 750Ser Ala Ala Glu Tyr Phe Leu Asp Glu Thr Lys Asp Val Ser Met Met
    755                 760                 765Leu Glu Lys Leu Gly Cys Leu Ser Asn Gln Gly
770                 775(2)SEQ ID NO:26的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：2130个碱基对
(B)类型：核酸
(C)链型：双链
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA(ⅲ)假设：非(ⅲ)反义：否(ⅵ)初始来源：
(A)生物：向日葵(Helianthus annuus)(ⅸ)特征：
(A)名称/关键词：CDS
(B)位置：171..2130
(D)其它信息：部分(ⅹⅰ)SE Q ID NO:26的序列描述GGATCCTGCG GTTTCATCAC ACAATATGAT ACTGTTACAT CTGATGCCCC TTCAGATGTC    60CCAAATAGGT TGATTGTCGT ATCGAATCAG TTACCCATAA TCGCTAGGCT AAGACTAACG   120ACAATGGAGG GTCCTTTTGG GATTTCACTT GGGACGAGAG TTCGATTTAC ATG CAC      176
                                                   Met His
                                                     1ATC AAA GAT GCA TTA CCC GCA GCC GTT GAG GTT TTC TAT GTT GGC GCA     224Ile Lys Asp Ala Leu Pro Ala Ala Val Glu Val Phe Tyr Val Gly Ala
      5                  10                  15CTA AGG GCT GAC GTT GGC CCT ACC GAA CAA GAT GAC GTG TCA AAG ACA     272Leu Arg Ala Asp Val Gly Pro Thr Glu Gln Asp Asp Val Ser Lys Thr
 20                  25                  30TTG CTC GAT AGG TTT AAT TGC GTT GCG GTT TTT GTC CCT ACT TCA AAA     320Leu Leu Asp Arg Phe Asn Cys Val Ala Val Phe Val Pro Thr Ser Lys35                  40                  45                  50TGG GAC CAA TAT TAT CAC TGC TTT TGT AAG CAG TAT TTG TGG CCG ATA     368Trp Asp Gln Tyr Tyr His Cys Phe Cys Lys Gln Tyr Leu Trp Pro Ile
             55                  60                  65TTT CAT TAC AAG GTT CCC GCT TCT GAC GTC AAG AGT GTC CCG AAT AGT     416Phe His Tyr Lys Val Pro Ala Ser Asp Val Lys Ser Val Pro Asn Ser
         70                  75                  80CGG GAT TCA TGG AAC GCT TAT GTT CAC GTG AAC AAA GAG TTT TCC CAG     464Arg Asp Ser Trp Asn Ala Tyr Val His Val Asn Lys Glu Phe Ser Gln
     85                  90                  95AAG GTG ATG GAG GCA GTA ACC AAT GCT AGC AAT TAT GTA TGG ATA CAT     512Lys Val Met Glu Ala Val Thr Asn Ala Ser Asn Tyr Val Trp Ile His
100                 105                 110GAC TAC CAT TTA ATG ACG CTA CCG ACT TTC TTG AGG CGG GAT TTT TGT     560Asp Tyr His Leu Met Thr Leu Pro Thr Phe Leu Arg Arg Asp Phe Cys115                 120                 125                 130CGT TTT AAA ATC GGT TTT TTT CTG CAT AGC CCG TTT CCT TCC TCG GAG     608Arg Phe Lys Ile Gly Phe Phe Leu His Ser Pro Phe Pro Ser Ser Glu
            135                 140                 145GTT TAC AAG ACC CTA CCA ATG AGA AAC GAG CTC TTG AAG GGT CTG TTA     656Val Tyr Lys Thr Leu Pro Met Arg Asn Glu Leu Leu Lys Gly Leu Leu
        150                 155                 160AAT GCT GAT CTT ATC GGG TTC CAT ACA TAC GAT TAT GCC CGT CAT TTT     704Asn Ala Asp Leu Ile Gly Phe His Thr Tyr Asp Tyr Ala Arg His Phe
    165                 170                 175CTA ACG TGT TGT AGT CGA ATG TTT GGT TTG GAT CAT CAG TTG AAA AGG     752Leu Thr Cys Cys Ser Arg Met Phe Gly Leu Asp His Gln Leu Lys Arg
180                 185                 190GGG TAC ATT TTC TTG GAA TAT AAT GGA AGG AGC ATT GAG ATC AAG ATA     800Gly Tyr Ile Phe Leu Glu Tyr Asn Gly Arg Ser Ile Glu Ile Lys Ile195                 200                 205                 210AAG GCG AGC GGG ATT CAT GTT GGT CGA ATG GAG TCG TAC TTG AGT CAG     848Lys Ala Ser Gly Ile His Val Gly Arg Met Glu Ser Tyr Leu Ser Gln
            215                 220                 225CCC GAT ACA AGA TTA CAA GTT CAA GAA CTA AAA AAA CGT TTC GAA GGG     896Pro Asp Thr Arg Leu Gln Val Gln Glu Leu Lys Lys Arg Phe Glu Gly
        230                 235                 240AAA ATC GTG CTA CTT GGA GTT GAT GAT TTG GAT ATA TTC AAA GGT GTG     944Lys Ile Val Leu Leu Gly Val Asp Asp Leu Asp Ile Phe Lys Gly Val
    245                 250                 255AAC TTC AAG GTT TTA GCG TTG GAG AAG TTA CTT AAA TCA CAC CCG AGT    992Asn Phe Lys Val Leu Ala Leu Glu Lys Leu Leu Lys Ser His Pro Ser
260                 265                 270TGG CAA GGG CGT GTG GTT TTG GTG CAA ATC TTG AAT CCC GCT CGC GCG   1040Trp Gln Gly Arg Val Val Leu Val Gln Ile Leu Asn Pro Ala Arg Ala275                 280                 285                 290CGT TGC CAA GAC GTC GAT GAG ATC AAT GCC GAG ATA AGA ACA GTC TGT   1088Arg Cys Gln Asp Val Asp Glu Ile Asn Ala Glu Ile Arg Thr Val Cys
            295                 300                 305GAA AGA ATC AAT AAC GAA CTG GGA AGC CCG GGA TAC CAG CCC GTT GTG   1136Glu Arg Ile Asn Asn Glu Leu Gly Ser Pro Gly Tyr Gln Pro Val Val
        310                 315                 320TTA ATT GAT GGG CCC GTT TCG TTA AGT GAA AAA GCT GCT TAT TAT GCT   1184Leu Ile Asp Gly Pro Val Ser Leu Ser Glu Lys Ala Ala Tyr Tyr Ala
    325                 330                 335ATC GCC GAT ATG GCA ATT GTT ACA CCG TTA CGT GAC GGC ATG AAT CTT   1232Ile Ala Asp Met Ala Ile Val Thr Pro Leu Arg Asp Gly Met Asn Leu
340                 345                 350ATC CCG TAC GAG TAC GTC GTT TCC CGA CAA AGT GTT AAT GAC CCA AAT   1280Ile Pro Tyr Glu Tyr Val Val Ser Arg Gln Ser Val Asn Asp Pro Asn355                 360                 365                 370CCC AAT ACT CCA AAA AAG AGC ATG CTA GTG GTC TCC GAG TTC ATC GGG   1328Pro Asn Thr Pro Lys Lys Ser Met Leu Val Val Ser Glu Phe Ile Gly
            375                 380                 385TGT TCA CTA TCT TTA ACC GGG GCC ATA CGG GTC AAC CCA TGG GAT GAG   1376Cys Ser Leu Ser Leu Thr Gly Ala Ile Arg Val Asn Pro Trp Asp Glu
        390                 395                 400TTG GAG ACA GCA GAA GCA TTA TAC GAC GCA CTC ATG GCT CCT GAT GAC   1424Leu Glu Thr Ala Glu Ala Leu Tyr Asp Ala Leu Met Ala Pro Asp Asp
    405                 410                 415CAT AAA GAA ACC GCC CAC ATG AAA CAG TAT CAA TAC ATT ATC TCC CAT   1472His Lys Glu Thr Ala His Met Lys Gln Tyr Gln Tyr Ile Ile Ser His
420                 425                 430GAT GTA GCT AAC TGG GCT CGT AGC TTC TTT CAA GAT TTA GAG CAA GCG   1520Asp Val Ala Asn Trp Ala Arg Ser Phe Phe Gln Asp Leu Glu Gln Ala435                 440                 445                 450TGC ATC GAT CAT TCT CGT AAA CGA TGC ATG AAT TTA GGA TTT GGG TTA   1568Cys Ile Asp His Ser Arg Lys Arg Cys Met Asn Leu Gly Phe Gly Leu
            455                 460                 465GAT ACT AGA GTC GTT CTT TTT GAT GAG AAG TTT AGC AAG TTG GAT ATA   1616Asp Thr Arg Val Val Leu Phe Asp Glu Lys Phe Ser Lys Leu Asp Ile
        470                 475                 480GAT GTC TTG GAG AAT GCT TAT TCC ATG GCT CAA AAT CGG GCC ATA CTT    1664Asp Val Leu Glu Asn Ala Tyr Ser Met Ala Gln Asn Arg Ala Ile Leu
    485                 490                 495TTG GAC TAT GAC GGC ACT GTT ACT CCA TCT ATC AGT AAA TCT CCA ACT    1712Leu Asp Tyr Asp Gly Thr Val Thr Pro Ser Ile Ser Lys Ser Pro Thr
500                 505                 510GAA GCT GTT ATC TCC ATG ATC AAC AAA CTG TGC AAT GAT CCA AAG AAC    1760Glu Ala Val Ile Ser Met Ile Asn Lys Leu Cys Asn Asp Pro Lys Asn515                 520                 525                 530ATG GTG TTC ATC GTT AGT GGA CGC AGT AGA GAA AAT CTT GGC AGT TGG    1808Met Val Phe Ile Val Ser Gly Arg Ser Arg Glu Asn Leu Gly Ser Trp
            535                 540                 545TTC GGC GCG TGT GAG AAA CCC GCC ATT GCA GCT GAG CAC GGA TAC TTT    1856Phe Gly Ala Cys Glu Lys Pro Ala Ile Ala Ala Glu His Gly Tyr Phe
        550                 555                 560ATA AGG TGG GCG GGT GAT CAA GAA TGG GAA ACG TGC GCA CGT GAG AAT    1904Ile Arg Trp Ala Gly Asp Gln Glu Trp Glu Thr Cys Ala Arg Glu Asn
    565                 570                 575AAT GTC GGG TGG ATG GAA ATG GCT GAG CCG GTT ATG AAT CTT TAT ACA    1952Asn Val Gly Trp Met Glu Met Ala Glu Pro Val Met Asn Leu Tyr Thr
580                 585                 590GAA ACT ACT GAC GGT TCG TAT ATT GAA AAG AAA GAA ACT GCA ATG GTT    2000Glu Thr Thr Asp Gly Ser Tyr Ile Glu Lys Lys Glu Thr Ala Met Val595                 600                 605                 610TGG CAC TAT GAA GAT GCT GAT AAA GAT CTT GGG TTG GAG CAG GCT AAG    2048Trp His Tyr Glu Asp Ala Asp Lys Asp Leu Gly Leu Glu Gln Ala Lys
            615                 620                 625GAA CTG TTG GAC CAT CTT GAA AAC GTG CTC GCT AAT GAG CCC GTT GAA    2096Glu Leu Leu Asp His Leu Glu Asn Val Leu Ala Asn Glu Pro Val Glu
        630                 635                 640GTG AAA CGA GGT CAA TAC ATT GTA GAA GTT AAA C                      2130Val Lys Arg Gly Gln Tyr Ile Val Glu Val Lys
    645                 650(2)SEQ ID NO:27的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：653个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：蛋白质(ⅹⅰ)SE Q ID NO:27的序列描述Met His Ile Lys Asp Ala Leu Pro Ala Ala Val Glu Val Phe Tyr Val1               5                  10                  15Gly Ala Leu Arg Ala Asp Val Gly Pro Thr Glu Gln Asp Asp Val Ser
         20                  25                  30Lys Thr Leu Leu Asp Arg Phe Asn Cys Val Ala Val Phe Val Pro Thr
     35                  40                  45Ser Lys Trp Asp Gln Tyr Tyr His Cys Phe Cys Lys Gln Tyr Leu Trp
 50                  55                  60Pro Ile Phe His Tyr Lys Val Pro Ala Ser Asp Val Lys Ser Val Pro65                  70                  75                  80Asn Ser Arg Asp Ser Trp Asn Ala Tyr Val His Val Asn Lys Glu Phe
             85                  90                  95Ser Gln Lys Val Met Glu Ala Val Thr Asn Ala Ser Asn Tyr Val Trp
        100                 105                 110Ile His Asp Tyr His Leu Met Thr Leu Pro Thr Phe Leu Arg Arg Asp
    115                 120                 125Phe Cys Arg Phe Lys Ile Gly Phe Phe Leu His Ser Pro Phe Pro Ser
130                 135                 140Ser Glu Val Tyr Lys Thr Leu Pro Met Arg Asn Glu Leu Leu Lys Gly145                 150                 155                 160Leu Leu Asn Ala Asp Leu Ile Gly Phe His Thr Tyr Asp Tyr Ala Arg
            165                 170                 175His Phe Leu Thr Cys Cys Ser Arg Met Phe Gly Leu Asp His Gln Leu
        180                 185                 190Lys Arg Gly Tyr Ile Phe Leu Glu Tyr Asn Gly Arg Ser Ile Glu Ile
    195                 200                 205Lys Ile Lys Ala Ser Gly Ile His Val Gly Arg Met Glu Ser Tyr Leu
210                 215                 220Ser Gln Pro Asp Thr Arg Leu Gln Val Gln Glu Leu Lys Lys Arg Phe225                 230                 235                 240Glu Gly Lys Ile Val Leu Leu Gly Val Asp Asp Leu Asp Ile Phe Lys
            245                 250                 255Gly Val Asn Phe Lys Val Leu Ala Leu Glu Lys Leu Leu Lys Ser His
        260                 265                 270Pro Ser Trp Gln Gly Arg Val Val Leu Val Gln Ile Leu Asn Pro Ala
    275                 280                 285Arg Ala Arg Cys Gln Asp Val Asp Glu Ile Asn Ala Glu Ile Arg Thr
290                 295                 300Val Cys Glu Arg Ile Asn Asn Glu Leu Gly Ser Pro Gly Tyr Gln Pro305                 310                 315                 320Val Val Leu Ile Asp Gly Pro Val Ser Leu Ser Glu Lys Ala Ala Tyr
            325                 330                 335Tyr Ala Ile Ala Asp Met Ala Ile Val Thr Pro Leu Arg Asp Gly Met
        340                 345                 350Asn Leu Ile Pro Tyr Glu Tyr Val Val Ser Arg Gln Ser Val Asn Asp
    355                 360                 365Pro Asn Pro Asn Thr Pro Lys Lys Ser Met Leu Val Val Ser Glu Phe
370                 375                 380Ile Gly Cys Ser Leu Ser Leu Thr Gly Ala Ile Arg Val Asn Pro Trp385                 390                 395                 400Asp Glu Leu Glu Thr Ala Glu Ala Leu Tyr Asp Ala Leu Met Ala Pro
            405                 410                 415Asp Asp His Lys Glu Thr Ala His Met Lys Gln Tyr Gln Tyr Ile Ile
        420                 425v                 430Ser His Asp Val Ala Asn Trp Ala Arg Ser Phe Phe Gln Asp Leu Glu
    435                 440                 445Gln Ala Cys Ile Asp His Ser Arg Lys Arg Cys Met Asn Leu Gly Phe
450                 455                 460Gly Leu Asp Thr Arg Val Val Leu Phe Asp Glu Lys Phe Ser Lys Leu465                 470                 475                 480Asp Ile Asp Val Leu Glu Asn Ala Tyr Ser Met Ala Gln Asn Arg Ala
            485                 490                 495Ile Leu Leu Asp Tyr Asp Gly Thr Val Thr Pro Ser Ile Ser Lys Ser
        500                 505                 510Pro Thr Glu Ala Val Ile Ser Met Ile Asn Lys Leu Cys Asn Asp Pro
    515                 520                 525Lys Asn Met Val Phe Ile Val Ser Gly Arg Ser Arg Glu Asn Leu Gly
530                 535                 540Ser Trp Phe Gly Ala Cys Glu Lys Pro Ala Ile Ala Ala Glu His Gly545                 550                 555                 560Tyr Phe Ile Arg Trp Ala Gly Asp Gln Glu Trp Glu Thr Cys Ala Arg
            565                 570                 575Glu Asn Asn Val Gly Trp Met Glu Met Ala Glu Pro Val Met Asn Leu
        580                 585                 590Tyr Thr Glu Thr Thr Asp Gly Ser Tyr Ile Glu Lys Lys Glu Thr Ala
    595                 600                 605Met Val Trp His Tyr Glu Asp Ala Asp Lys Asp Leu Gly Leu Glu Gln
610                 615                 620Ala Lys Glu Leu Leu Asp His Leu Glu Asn Val Leu Ala Asn Glu Pro625                 630                 635                 640Val Glu Val Lys Arg Gly Gln Tyr Ile Val Glu Val Lys
            645                 650(2)SEQ ID NO:28的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：390个碱基对
(B)类型：核酸
(C)链型：双链
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA(ⅲ)假设：非(ⅲ)反义：否  (ⅵ)初始来源：
(A)生物：向日葵(Helianthus annuns)(ⅸ)特征：
(A)名称/关键词：CDS
(B)位置：3..258
(D)其它信息：/部分(ⅹⅰ)SE Q ID NO:28的序列描述TT GCA GAG AAG ATT TTT GCG TTC ATG GCT GAA AAG GGA AAA CAG GCT      47Ala Glu Lys Ile Phe Ala Phe Met Ala Glu Lys Gly Lys Gln Ala
 1               5                  10                  15GAT TTC GTG TTG AGC GTT GGA GAT GAT AGA AGT GAT GAA GAC ATG TTT     95Asp Phe Val Leu Ser Val Gly Asp Asp Arg Ser Asp Glu Asp Met Phe
             20                  25                  30GTG GCC ATT GGG GAT GGA ATA AAA AAG GGT CGG ATA ACT AAC AAC AAT    143Val Ala Ile Gly Asp Gly Ile Lys Lys Gly Arg Ile Thr Asn Asn Asn
         35                  40                  45TCA GTG TTT ACA TGC GTA GTG GGA GAG AAA CCG AGT GCA GCT GAG TAC    191Ser Val Phe Thr Cys Val Val Gly Glu Lys Pro Ser Ala Ala Glu Tyr
     50                  55                  60TTT TTA GAC GAG ACG AAA GAT GTT TCA ATG ATG CTC GAG AAG CTC GGG    239Phe Leu Asp Glu Thr Lys Asp Val Ser Met Met Leu Glu Lys Leu Gly
 65                  70                  75TGT CTC AGC AAC CAA GGA T GATGATCCGG AAGCTTCTCG TGATCTTTAT         288Cys Leu Ser Asn Gln Gly80                  85GAGTTAAAAG TTTTCGACTT TTTCTTCATC AAGATTCATG GGAAAGTTGT TCAATATGAA  348CTTGTGTTTC TTGGTTCTGG ATTTTAGGGA GTCTATGGAT CC                     390(2)SEQ ID NO:29的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：85个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：蛋白质(ⅹⅰ)SE Q ID NO:29的序列描述Ala Glu Lys Ile Phe Ala Phe Met Ala Glu Lys Gly Lys Gln Ala Asp1               5                  10                  15Phe Val Leu Ser Val Gly Asp Asp Arg Ser Asp Glu Asp Met Phe Val
         20                  25                  30Ala Ile G1y Asp Gly Ile Lys Lys Gly Arg Ile Thr Asn Asn Asn Ser
     35                  40                  45Val Phe Thr Cys Val Val Gly Glu Lys Pro Ser Ala Ala Glu Tyr Phe
 50                  55                  60Leu Asp Glu Thr Lys Asp Val Ser Met Met Leu Glu Lys Leu Gly Cys65                  70                  75                  80Leu Ser Asn Gln Gly
             85(2)SEQ ID NO:30的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：24个碱基对
(B)类型：核酸
(C)链型：单链
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：cDNA(ⅲ)假设：非(ⅲ)反义：否(ⅹⅰ)SE Q ID NO:30的序列描述CCAIGGRTTI ACICKDATIG CICC                                24(2)SEQ ID NO:31的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：23个碱基对
(B)类型：核酸
(C)链型：单链
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：cDNA(ⅲ)假设：非(ⅲ)反义：否(ⅹⅰ)SE Q ID NO:31的序列描述ATHGTIGTIW SIAAYMRIYT ICC                                 23(2)SEQ ID NO:32的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：20个碱基对
(B)类型：核酸
(C)链型：单链
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：cDNA(ⅲ)假设：非(ⅲ)反义：否(ⅹⅰ)SE Q ID NO:32的序列描述YTITGGCCIA TITTYCAYTA                                     20(2)SEQ ID NO:33的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：20个碱基对
(B)类型：核酸
(C)链型：单链
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：cDNA(ⅲ)假设：非(ⅲ)反义：否(ⅹⅰ)SE Q ID NO:33的序列描述TGRTCIARIA RYTCYTTIGC                                     20(2)SEQ ID NO:34的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：20个碱基对
(B)类型：核酸
(C)链型：单链
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：cDNA(ⅲ)假设：非(ⅲ)反义：否(ⅹⅰ)SE Q ID NO:34的序列描述TCRTCIGTRA ARTCRTCICC                                     20(2)SEQ ID NO:35的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：20个碱基对
(B)类型：核酸
(C)链型：单链
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：cDNA(ⅲ)假设：非(ⅲ)反义：否(ⅹⅰ)SE Q ID NO:35的序列描述TTYGAYTAYG AYGGIACIYT                                     20(2)SEQ ID NO:36的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：20个碱基对
(B)类型：核酸
(C)链型：单链
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：cDNA(ⅲ)假设：非(ⅲ)反义：否(ⅹⅰ)SE Q ID NO:36的序列描述GGIYTIWBNG CIGARCAYGG                                     20(2)SEQ ID NO:37的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：20个碱基对
(B)类型：核酸
(C)链型：单链
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：cDNA(ⅲ)假设：非(ⅲ)反义：否(ⅹⅰ)SE Q ID NO:37的序列描述ATIGCIAARC CIGTIATGAA                                     20(2)SEQ ID NO:38的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：20个碱基对
(B)类型：核酸
(C)链型：单链
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：cDNA(ⅲ)假设：非(ⅲ)反义：否(ⅹⅰ)SE Q ID NO:38的序列描述CCIACIGTRC AIGCRAAIAC                                     20(2)SEQ ID NO:39的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：2982个碱基对
(B)类型：核酸
(C)链型：双链
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA(ⅲ)假设：非(ⅲ)反义：否(ⅵ)初始来源：
(A)生物：拟南芥(Arabi dopsis thaliana)(ⅸ)特征：
(A)名称/关键词：CDS
(B)位置：64..2982(ⅹⅰ)SE Q ID NO:39的序列描述ATAAACTTCC TCGCGGCCGC CAGTGTGAGT AATTTAGTTT TGGTTCTGTT TTGGTGTGAG   60CGT ATG CCT GGA AAT AAG TAC AAC TGC AGT TCT TCT CAT ATC CCA CTC    108
Met Pro Gly Asn Lys Tyr Asn Cys Ser Ser Ser His Ile Pro Leu
  1               5                  10                  15TCT CGA ACA GAA CGC CTC TTG AGA GAT AGA GAG CTT AGA GAG AAG AGG    156Ser Arg Thr Glu Arg Leu Leu Arg Asp Arg Glu Leu Arg Glu Lys Arg
             20                  25                  30AAG AGC AAC CGA GCT CGT AAT CCT AAT GAC GTT GCT GGC AGT TCC GAG    204Lys Ser Asn Arg Ala Arg Asn Pro Asn Asp Val Ala Gly Ser Ser Glu
         35                  40                  45AAC TCT GAG AAT GAC TTG CGT TTA GAA GGT GAC AGT TCA AGG CAG TAT    252Asn Ser Glu Asn Asp Leu Arg Leu Glu Gly Asp Ser Ser Arg Gln Tyr
     50                  55                  60GTT GAA CAG TAC TTG GAA GGG GCT GCT GCT GCA ATG GCG CAC GAT GAT    300Val Glu Gln Tyr Leu Glu Gly Ala Ala Ala Ala Met Ala His Asp Asp
 65                  70                  75GCG TGT GAG AGG CAA GAA GTT AGG CCT TAT AAT AGG CAA CGA CTA CTT    348Ala Cys Glu Arg Gln Glu Val Arg Pro Tyr Asn Arg Gln Arg Leu Leu80                  85                  90                  95GTA GTG GCT AAC AGG CTC CCA GTT TCT CCC GTG AGA AGA GGT GAA GAT    396Val Val Ala Asn Arg Leu Pro Val Ser Pro Val Arg Arg Gly Glu Asp
            100                 105                 110TCA TGG TCT CTT GAG ATC AGT GCT GGT GGT CTA GTC AGT GCT CTC TTA    444Ser Trp Ser Leu Glu Ile Ser Ala Gly Gly Leu Val Ser Ala Leu Leu
        115                 120                 125GGT GTA AAG GAA TTT GAG GCC AGA TGG ATA GGA TGG GCT GGA GTT AAT    492Gly Val Lys Glu Phe Glu Ala Arg Trp Ile Gly Trp Ala Gly Val Asn
    130                 135                 140GTG CCT GAT GAG GTT GGA CAG AAG GCA CTT AGC AAA GCT TTG GCT GAG    540Val Pro Asp Glu Val Gly Gln Lys Ala Leu Ser Lys Ala Leu Ala Glu
145                 150                 155AAG AGG TGT ATT CCC GTG TTC CTT GAT GAA GAG ATT GTT CAT CAG TAC    588Lys Arg Cys Ile Pro Val Phe Leu Asp Glu Glu Ile Val His Gln Tyr160                 165                 170                 175TAT AAT GGT TAC TGC AAC AAT ATT CTG TGG CCT CTG TTT CAC TAC CTT    636Tyr Asn Gly Tyr Cys Asn Asn Ile Leu Trp Pro Leu Phe His Tyr Leu
            180                 185                 190GGA CTT CCG CAA GAA GAT CGG CTT GCC ACA ACC AGA AGC TTT CAG TCC    684Gly Leu Pro Gln Glu Asp Arg Leu Ala Thr Thr Arg Ser Phe Gln Ser
        195                 200                 205CAA TTT GCT GCA TAC AAG AAG GCA AAC CAA ATG TTC GCT GAT GTT GTA    732Gln Phe Ala Ala Tyr Lys Lys Ala Asn Gln Met Phe Ala Asp Val Val
    210                 215                 220AAT GAG CAC TAT GAA GAG GGA GAT GTC GTC TGG TGC CAT GAC TAT CAT    780Asn Glu His Tyr Glu Glu Gly Asp Val Val Trp Cys His Asp Tyr His
225                 230                 235CTT ATG TTC CTT CCT AAA TGC CTT AAG GAG TAC AAC AGT AAG ATG AAA    828Leu Met Phe Leu Pro Lys Cys Leu Lys Glu Tyr Asn Ser Lys Met Lys240                 245                 250                 255GTT GGA TGG TTT CTC CAT ACA CCA TTC CCT TCG TCT GAG ATA CAC AGG    876Val Gly Trp Phe Leu His Thr Pro Phe Pro Ser Ser Glu Ile His Arg
            260                 265                 270ACA CTT CCA TCA CGA TCA GAG CTC CTT CGG TCA GTT CTT GCT GCT GAT    924Thr Leu Pro Ser Arg Ser Glu Leu Leu Arg Ser Val Leu Ala Ala Asp
        275                 280                 285TTA GTT GGC TTC CAT ACA TAT GAC TAT GCA AGG CAC TTT GTG AGT GCG    972Leu Val Gly Phe His Thr Tyr Asp Tyr Ala Arg His Phe Val Ser Ala
    290                 295                 300TGC ACT CGT ATT CTT GGA CTT GAA GGA ACA CCT GAG GGA GTT GAG GAT   1020Cys Thr Arg Ile Leu Gly Leu Glu Gly Thr Pro Glu Gly Val Glu Asp
305                 310                 315CAA GGC AGG CTC ACT CGT GTA GCT GCT TTT CCA ATT GGC ATA GAT TCT    1068Gln Gly Arg Leu Thr Arg Val Ala Ala Phe Pro Ile Gly Ile Asp Ser320                 325                 330                 335GAT CGG TTT ATA CGA GCA CTT GAG GTC CCC GAA GTC AAA CAA CAC ATG    1116Asp Arg Phe Ile Arg Ala Leu Glu Val Pro Glu Val Lys Gln His Met
            340                 345                 350AAG GAA TTG AAA GAA AGA TTT ACT GAC AGA AAG GTG ATG TTA GGT GTT    1164Lys Glu Leu Lys Glu Arg Phe Thr Asp Arg Lys Val Met Leu Gly Val
        355                 360                 365GAT CGT CTT GAC ATG ATC AAA GGG ATT CCA CAA AAG ATT CTG GCA TTC    1212Asp Arg Leu Asp Met Ile Lys Gly Ile Pro Gln Lys Ile Leu Ala Phe
    370                 375                 380GAA AAA TTT CTC GAG GAA AAT GCA AAC TGG CGT GAT AAA GTG GTC TTA    1260Glu Lys Phe Leu Glu Glu Asn Ala Asn Trp Arg Asp Lys Val Val Leu
385                 390                 395TTG AAA ATT GCG GTG CCA ACA AGA CCT GAC GTT CCT GAG TAT CAA ACA    1308Leu Lys Ile Ala Val Pro Thr Arg Pro Asp Val Pro Glu Tyr Gln Thr400                 405                 410                 415CTC ACA AGC CAA GTT CAT GAA ATT GTT GGC CGC ATT ATT GGT CGT CTC    1356Leu Thr Ser Gln Val His Glu Ile Val Gly Arg Ile Ile Gly Arg Leu
            420                 425                 430GGG ACA CTG ACT GCA GTT CCA ATA CAT CAT CTG GAT CGG TCT CTG GAC    1404Gly Thr Leu Thr Ala Val Pro Ile His His Leu Asp Arg Ser Leu Asp
        435                 440                 445TTT CAT GCT TTA TGT GCA CTT TAT GCC GTC ACA GAT GTT GCG CTT GTA    1452Phe His Ala Leu Cys Ala Leu Tyr Ala Val Thr Asp Val Ala Leu Val
    450                 455                 460ACA TCT TTG AGA GAT GGG ATG AAT CTT GTC AGT TAT GAG TTT GTT GCT    1500Thr Ser Leu Arg Asp Gly Met Asn Leu Val Ser Tyr Glu Phe Val Ala
465                 470                 475TGC CAA GAG GCC AAA AAG GGC GTC CTC ATT CTC AGT GAA TTT GCA GGT    1548Cys Gln Glu Ala Lys Lys Gly Val Leu Ile Leu Ser Glu Phe Ala Gly480                 485                 490                 495GCT GCA CAG TCT CTG GGT GCT GGA GCT ATT CTT GTG AAT CCT TGG AAC    1596Ala Ala Gln Ser Leu Gly Ala Gly Ala Ile Leu Val Asn Pro Trp Asn
            500                 505                 510ATC ACA GAA GTT GCT GCC TCC ATT GGA CAA GCC CTA AAC ATG ACA GCT    1644Ile Thr Glu Val Ala Ala Ser Ile Gly Gln Ala Leu Asn Met Thr Ala
        515                 520                 525GAA GAA AGA GAG AAA AGA CAT CGC CAT AAT TTT CAT CAT GTC AAA ACT    1692Glu Glu Arg Glu Lys Arg His Arg His Asn Phe His His Val Lys Thr
    530                 535                 540CAC ACT GCT CAA GAA TGG GCT GAA ACT TTT GTC AGT GAA CTA AAT GAC    1740His Thr Ala Gln Glu Trp Ala Glu Thr Phe Val Ser Glu Leu Asn Asp
545                 550                 555ACT GTA ATT GAG GCG CAA CTA CGA ATT AGT AAA GTC CCA CCA GAG CTT    1788Thr Val Ile Glu Ala Gln Leu Arg Ile Ser Lys Val Pro Pro Glu Leu560                 565                 570                 575CCA CAG CAT GAT GCA ATT CAA CGG TAT TCA AAG TCC AAC AAC AGG CTT    1836Pro Gln His Asp Ala Ile Gln Arg Tyr Ser Lys Ser Asn Asn Arg Leu
            580                 585                 590CTA ATC CTG GGT TTC AAT GCA ACA TTG ACT GAA CCA GTG GAT AAT CAA    1884Leu Ile Leu Gly Phe Asn Ala Thr Leu Thr Glu Pro Val Asp Asn Gln
        595                 600                 605GGG AGA AGA GGT GAT CAA ATA AAG GAG ATG GAT CTT AAT CTA CAC CCT    1932Gly Arg Arg Gly Asp Gln Ile Lys Glu Met Asp Leu Asn Leu His Pro
    610                 615                 620GAG CTT AAA GGG CCC TTA AAG GCA TTA TGC AGT GAT CCA AGT ACA ACC    1980Glu Leu Lys Gly Pro Leu Lys Ala Leu Cys Ser Asp Pro Ser Thr Thr
625                 630                 635ATA GTT GTT CTG AGC GGA AGC AGC AGA AGT GTT TTG GAC AAA AAC TTT    2028Ile Val Val Leu Ser Gly Ser Ser Arg Ser Val Leu Asp Lys Asn Phe640                 645                 650                 655GGA GAG TAT GAC ATG TGG CTG GCA GCA GAA AAT GGG ATG TTC CTA AGG    2076Gly Glu Tyr Asp Met Trp Leu Ala Ala Glu Asn Gly Met Phe Leu Arg
            660                 665                 670CTT ACG AAT GGA GAG TGG ATG ACT ACA ATG CCA GAA CAC TTG AAC ATG    2124Leu Thr Asn Gly Glu Trp Met Thr Thr Met Pro Glu His Leu Asn Met
        675                 680                 685GAA TGG GTT GAT AGC GTA AAG CAT GTT TTC AAG TAC TTC ACT GAG AGA    2172Glu Trp Val Asp Ser Val Lys His Val Phe Lys Tyr Phe Thr Glu ArG
    690                 695                 700ACT CCC AGG TCA CAC TTT GAA ACT CGC GAT ACT TCG CTT ATT TGG AAC    2220Thr Pro Arg Ser His Phe Glu Thr Arg Asp Thr Ser Leu lle Trp Asn
705                 710                 715TAC AAA TAT GCA GAT ATC GAA TTC GGG AGA CTT CAA GCA AGA GAT TTG    2268Tyr Lys Tyr Ala Asp Ile Glu Phe Gly Arg Leu Gln Ala Arg Asp Leu720                 725                 730                 735TTA CAA CAC TTA TGG ACA GGT CCA ATC TCT AAT GCA TCA GTT GAT GTT    2316Leu Gln His Leu Trp Thr Gly Pro Ile Ser Asn Ala Ser Val Asp Val
            740                 745                 750GTC CAA GGA AGC CGC TCT GTG GAA GTC CGT GCA GTT GGT GTC ACA AAG    2364Val Gln Gly Ser Arg Ser Val Glu Val Arg Ala Val Gly Val Thr Lys
        755                 760                 765GGA GCT GCA ATT GAT CGT ATT CTA GGA GAG ATA GTG CAT AGC AAG TCG    2412Gly Ala Ala Ile Asp Arg Ile Leu Gly Glu Ile Val His Ser Lys Ser
    770                 775                 780ATG ACT ACA CCA ATC GAT TAC GTC TTG TGC ATT GGT CAT TTC TTG GGG    2460Met Thr Thr Pro Ile Asp Tyr Val Leu Cys Ile Gly His Phe Leu Gly
785                 790                 795AAG GAC GAA GAT GTT TAC ACT TTC TTC GAA CCA GAA CTT CCA TCC GAC    2508Lys Asp Glu Asp Val Tyr Thr Phe Phe Glu Pro Glu Leu Pro Ser Asp800                 805                 810                 815ATG CCA GCC ATT GCA CGA TCC AGA CCA TCA TCT GAC AGT GGA GCC AAG    2556Met Pro Ala Ile Ala Arg Ser Arg Pro Ser Ser Asp Ser Gly Ala Lys
            820                 825                 830TCA TCA TCA GGA GAC CGA AGA CCA CCT TCA AAG TCG ACA CAT AAC AAC    2604Ser Ser Ser Gly Asp Arg Arg Pro Pro Ser Lys Ser Thr His Asn Asn
        835                 840                 845AAC AAA AGT GGA TCA AAA TCC TCA TCA TCC TCT AAC TCT AAC AAC AAC    2652Asn Lys Ser Gly Ser Lys Ser Ser Ser Ser Ser Asn Ser Asn Asn Asn
    850                 855                 860AAC AAG TCC TCA CAG AGA TCT CTT CAG TCA GAG AGA AAA AGT GGA TCC    2700Asn Lys Ser Ser Gln Arg Ser Leu Gln Ser Glu Arg Lys Ser Gly Ser
865                 870                 875AAC CAT AGC TTA GGA AAC TCA AGA CGT CCT TCA CCA GAG AAG ATC TCA    2748Asn His Ser Leu Gly Asn Ser Arg Arg Pro Ser Pro Glu Lys Ile Ser880                 885                 890                 895TGG AAT GTG CTT GAC CTC AAA GGA GAG AAC TAC TTC TCT TGC GCT GTG    2796Trp Asn Val Leu Asp Leu Lys Gly Glu Asn Tyr Phe Ser Cys Ala Val
            900                 905                 910GGT CGT ACT CGC ACC AAT GCT AGA TAT CTC CTT GGC TCA CCT GAC GAG    2844Gly Arg Thr Arg Thr Asn Ala Arg Tyr Leu Leu Gly Ser Pro Asp Asp
        915                 920                 925GTC GTT TGC TTC CTT GAG AAG CTC GCT GAC ACC ACT TCC TCA CCT TAA    2892Val Val Cys Phe Leu Glu Lys Leu Ala Asp Thr Thr Ser Ser Pro  *
    930                 935                 940TAT CCC GAG ACA GTG TCA AGT GAG TTC ATG TAA CCC AAT AAA AAC TAT    2940Tyr Pro Glu Thr Val Ser Ser Glu Phe Met  *  Pro Asn Lys Asn Tyr
945                 950                 955TGT TTT GTA ACA AAA AGC AGC CAT TAC CAG ACT CTT TAG TGG            2982Cys Phe Val Thr Lys Ser Ser His Tyr Gln Thr Leu  *  Trp960                 965                 970(2)SEQ ID NO:40的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：973个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：蛋白质(ⅹⅰ)SE Q ID NO:40的序列描述Met Pro Gly Asn Lys Tyr Asn Cys Ser Ser Ser His Ile Pro Leu Ser1               5                  10                  15Arg Thr Glu Arg Leu Leu Arg Asp Arg Glu Leu Arg Glu Lys Arg Lys
         20                  25                  30Ser Asn Arg Ala Arg Asn Pro Asn Asp Val Ala Gly Ser Ser Glu Asn
     35                  40                  45Ser Glu Asn Asp Leu Arg Leu Glu Gly Asp Ser Ser Arg Gln Tyr Val
 50                  55                  60Glu Gln Tyr Leu Glu Gly Ala Ala Ala Ala Met Ala His Asp Asp Ala65                  70                  75                  80Cys Glu Arg Gln Glu Val Arg Pro Tyr Asn Arg Gln Arg Leu Leu Val
             85                  90                  95Val Ala Asn Arg Leu Pro Val Ser Pro Val Arg Arg Gly Glu Asp Ser
        100                 105                 110Trp Ser Leu Glu Ile Ser Ala Gly Gly Leu Val Ser Ala Leu Leu Gly
    115                 120                 125Val Lys Glu Phe Glu Ala Arg Trp Ile Gly Trp Ala Gly Val Asn Val
130                 135                 140Pro Asp Glu Val Gly Gln Lys Ala Leu Ser Lys Ala Leu Ala Glu Lys145                 150                 155                 160Arg Cys Ile Pro Val Phe Leu Asp Glu Glu Ile Val His Gln Tyr Tyr
            165                 170                 175Asn Gly Tyr Cys Asn Asn Ile Leu Trp Pro Leu Phe His Tyr Leu Gly
        180                 185                 190Leu Pro Gln Glu Asp Arg Leu Ala Thr Thr Arg Ser Phe Gln Ser Gln
    195                 200                 205Phe Ala Ala Tyr Lys Lys Ala Asn Gln Met Phe Ala Asp Val Val Asn
210                 215                 220Glu His Tyr Glu Glu Gly Asp Val Val Trp Cys His Asp Tyr His Leu225                 230                 235                 240Met Phe Leu Pro Lys Cys Leu Lys Glu Tyr Asn Ser Lys Met Lys Val
            245                 250                 255Gly Trp Phe Leu His Thr Pro Phe Pro Ser Ser Glu Ile His Arg Thr
        260                 265                 270Leu Pro Ser Arg Ser Glu Leu Leu Arg Ser Val Leu Ala Ala Asp Leu
    275                 280                 285Val Gly Phe His Thr Tyr Asp Tyr Ala Arg His Phe Val Ser Ala Cys
290                 295                 300Thr Arg Ile Leu Gly Leu Glu Gly Thr Pro Glu Gly Val Glu Asp Gln305                 310                 315                 320Gly Arg Leu Thr Arg Val Ala Ala Phe Pro Ile Gly Ile Asp Ser Asp
            325                 330                 335Arg Phe Ile Arg Ala Leu Glu Val Pro Glu Val Lys Gln His Met Lys
        340                 345                 350Glu Leu Lys Glu Arg Phe Thr Asp Arg Lys Val Met Leu Gly Val Asp
    355                 360                 365Arg Leu Asp Met Ile Lys Gly Ile Pro Gln Lys Ile Leu Ala Phe Glu
370                 375                 380Lys Phe Leu Glu Glu Asn Ala Asn Trp Arg Asp Lys Val Val Leu Leu385                 390                 395                 400Lys Ile Ala Val Pro Thr Arg Pro Asp Val Pro Glu Tyr Gln Thr Leu
            405                 410                 415Thr Ser Gln Val His Glu Ile Val Gly Arg Ile Ile Gly Arg Leu Gly
        420                 425                 430Thr Leu Thr Ala Val Pro Ile His His Leu Asp Arg Ser Leu Asp Phe
    435                 440                 445His Ala Leu Cys Ala Leu Tyr Ala Val Thr Asp Val Ala Leu Val Thr
450                 455                 460Ser Leu Arg Asp Gly Met Asn Leu Val Ser Tyr Glu Phe Val Ala Cys465                 470                 475                 480Gln Glu Ala Lys Lys Gly Val Leu Ile Leu Ser Glu Phe Ala Gly Ala
            485                 490                 495Ala Gln Ser Leu Gly Ala Gly Ala Ile Leu Val Asn Pro Trp Asn Ile
        500                 505                 510Thr Glu Val Ala Ala Ser Ile Gly Gln Ala Leu Asn Met Thr Ala Glu
    515                 520                 525Glu Arg Glu Lys Arg His Arg His Asn Phe His His Val Lys Thr His
530                 535                 540Thr Ala Gln Glu Trp Ala Glu Thr Phe Val Ser Glu Leu Asn Asp Thr545                 550                 555                 560Val Ile Glu Ala Gln Leu Arg Ile Ser Lys Val Pro Pro Glu Leu Pro
            565                 570                 575Gln His Asp Ala Ile Gln Arg Tyr Ser Lys Ser Asn Asn Arg Leu Leu
        580                 585                 590Ile Leu Gly Phe Asn Ala Thr Leu Thr Glu Pro Val Asp Asn Gln Gly
    595                 600                 605Arg Arg Gly Asp Gln Ile Lys Glu Met Asp Leu Asn Leu His Pro Glu
610                 615                 620Leu Lys Gly Pro Leu Lys Ala Leu Cys Ser Asp Pro Ser Thr Thr Ile625                 630                 635                 640Val Val Leu Ser Gly Ser Ser Arg Ser Val Leu Asp Lys Asn Phe Gly
            645                 650                 655Glu Tyr Asp Met Trp Leu Ala Ala Glu Asn Gly Met Phe Leu Arg Leu
        660                 665                 670Thr Asn Gly Glu Trp Met Thr Thr Met Pro Glu His Leu Asn Met Glu
    675                 680                 685Trp Val Asp Ser Val Lys His Val Phe Lys Tyr Phe Thr Glu Arg Thr
690                 695                 700Pro Arg Ser His Phe Glu Thr Arg Asp Thr Ser Leu Ile Trp Asn Tyr705                 710                 715                 720Lys Tyr Ala Asp Ile Glu Phe Gly Arg Leu Gln Ala Arg Asp Leu Leu
            725                 730                 735Gln His Leu Trp Thr Gly Pro Ile Ser Asn Ala Ser Val Asp Val Val
        740                 745                 750Gln Gly Ser Arg Ser Val Glu Val Arg Ala Val Gly Val Thr Lys Gly
    755                 760                 765Ala Ala Ile Asp Arg Ile Leu Gly Glu Ile Val His Ser Lys Ser Met
770                 775                 780Thr Thr Pro Ile Asp Tyr Val Leu Cys Ile Gly His Phe Leu Gly Lys785                 790                 795                 800Asp Glu Asp Val Tyr Thr Phe Phe Glu Pro Glu Leu Pro Ser Asp Met
            805                 810                 815Pro Ala Ile Ala Arg Ser Arg Pro Ser Ser Asp Ser Gly Ala Lys Ser
        820                 825                 830Ser Ser Gly Asp Arg Arg Pro Pro Ser Lys Ser Thr His Asn Asn Asn
    835                 840                 845Lys Ser Gly Ser Lys Ser Ser Ser Ser Ser Asn Ser Asn Asn Asn Asn
850                 855                 860Lys Ser Ser Gln Arg Ser Leu Gln Ser Glu Arg Lys Ser Gly Ser Asn865                 870                 875                 880His Ser Leu Gly Asn Ser Arg Arg Pro Ser Pro Glu Lys Ile Ser Trp
            885                 890                 895Asn Val Leu Asp Leu Lys Gly Glu Asn Tyr Phe Ser Cys Ala Val Gly
        900                 905                 910Arg Thr Arg Thr Asn Ala Arg Tyr Leu Leu Gly Ser Pro Asp Asp Val
    915                 920                 925Val Cys Phe Leu Glu Lys Leu Ala Asp Thr Thr Ser Ser Pro  *  Tyr
930                 935                 940Pro Glu Thr Val Ser Ser Glu Phe Met  *  Pro Asn Lys Asn Tyr Cys945                 950                 955                 960Phe Val Thr Lys Ser Ser His Tyr Gln Thr Leu  *  Trp
            965                 970(2)SEQ ID NO:41的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：300个碱基对
(B)类型：核酸
(C)链型：双链
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA(ⅲ)假设：非(ⅲ)反义：否(ⅵ)初始来源：
(A)生物：水稻(Oryza sativa)(ⅹⅰ)SE Q ID NO:41的序列描述ATAAACTTCC TCGGACCAAA GAAGAGCATG TTGGTTGTGT CGGAGTTTAT TGGTTGCTCA    60CCTTCACTGA GTGGAGCCAT TCGTGTTAAC CCGTGGAATA TCGAGGCAAC TGCAGAGGCA   120CTGAATGAGG CCATCTCAAT GTCAGAGCGT AAAAGCAGCT GAGGCACGAA AAACATTACC   180GTTATGTCAG CACCCATGAT GTTGCATATT GGTCTAAGAG CTTTGTACAG GACCTGGAGA   240GGGCTTGCAA GGATCACTTT AGGAAACCAT GCTGGGGCAT TGGATTGGAT TTCGCTCAGG   300(2)SEQ ID NO:42的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：627个碱基对
(B)类型：核酸
(C)链型：双链
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA(ⅲ)假设：非(ⅲ)反义：否(ⅵ)初始来源：
(A)生物：卷柏(Selaginella lepidophylla)(ⅸ)特征：
(A)名称/关键词：CDS
(B)位置：4..627
(D)其它信息：/部分(ⅹⅰ)SE Q ID NO:42的序列描述ATT ATG TGG GTG CAT GAT TAC CAC CTC TGT CTG GTC CCT CAG ATG ATC      48
Met Trp Val His Asp Tyr His Leu Cys Leu Val Pro Gln Met Ile
  1               5                  10                  15CGC CAA AAG CTG CCA GAT GTG CAG ATT GGC TTC TTC CTC CAC ACC GCT      96Arg Gln Lys Leu Pro Asp Val Gln Ile Gly Phe Phe Leu His Thr Ala
             20                  25                  30TTT CCC TCG TCA GAG GTC TTC CGC TGC TTG GCC GCA CGA AAG GAG CTG     144Phe Pro Ser Ser Glu Val Phe Arg Cys Leu Ala Ala Arg Lys Glu Leu
         35                  40                  45CTG GAC GGC ATG CTT GGT GCC AAC TTG GTT GCT TTC CAG ACG CCA GAG     192Leu Asp Gly Met Leu Gly Ala Asn Leu Val Ala Phe Gln Thr Pro Glu
     50                  55                  60TAT GCA CAC CAC TTC CTC CAG ACG TGC AGT CGC ATT TCT CTG CTG AAG     240Tyr Ala His His Phe Leu Gln Thr Cys Ser Arg Ile Ser Leu Leu Lys
 65                  70                  75CAA CCG AGG AAG GCG TTC AGC TCG TTT CGT CAA TGT CTG GTC ATA ATG     288Gln Pro Arg Lys Ala Phe Ser Ser Phe Arg Gln Cys Leu Val Ile Met80                  85                  90                  95CAA GAA GCG CTA CGA GGG TCA AGA AGG TCA TCG TTG CGC GTG ACA AGC     336Gln Glu Ala Leu Arg Gly Ser Arg Arg Ser Ser Leu Arg Val Thr Ser
            100                 105                 110TGA CAA CAT CGC GTG TAC GCG AGA AGC TTC TGT CGT ACG AGC TGT TCT     384*  Gln His Arg Val Tyr Ala Arg Ser Phe Cys Arg Thr Ser Cys Ser
        115                 120                 125TGA ACA AGA ACC CAC AGT GGA GGG ACA AGG TCG TTC TCA TTC AGG TTG     432*  Thr Arg Thr His Ser Gly Gly Thr Arg Ser Phe Ser Phe Arg Leu
    130                 135                 140CGA CCT CCA CGA CTG AGG ATT CTG AGC TTG CTG CGA CCG TAT CCG AAA     480Arg Pro Pro Arg Leu Arg Ile Leu Ser Leu Leu Arg Pro Tyr Pro Lys
145                 150                 155TTG TTA CAC GTA TTG ACG CTG TGC ACT CGA CGC TCA CAC ACA CCC ACT     528Leu Leu His Val Leu Thr Leu Cys Thr Arg Arg Ser His Thr Pro Thr160                 165                 170                 175CGT CTT CCT CAG GCA AGA CAT TGC GTT CTC GCA GTA CCT CGC ACT TCT     576Arg Leu Pro Gln Ala Arg His Cys Val Leu Ala Val Pro Arg Thr Ser
            180                 185                 190CTC GAT CGC CGA TGC TCT TGC AAT CAA CTG TTC GAT GGC ATG AAC CTC     624Leu Asp Arg Arg Cys Ser Cys Asn Gln Leu Phe Asp Gly Met Asn Leu
        195                 200                 205GTC                                                                 627Val(2)SEQ ID NO:43的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：208个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：蛋白质(ⅹⅰ)SE Q ID NO:43的序列描述Met Trp Val His Asp Tyr His Leu Cys Leu Val Pro Gln Met Ile Arg1               5                  10                  15Gln Lys Leu Pro Asp Val Gln Ile Gly Phe Phe Leu His Thr Ala Phe
         20                  25                  30Pro Ser Ser Glu Val Phe Arg Cys Leu Ala Ala Arg Lys Glu Leu Leu
     35                  40                  45Asp Gly Met Leu Gly Ala Asn Leu Val Ala Phe Gln Thr Pro Glu Tyr
 50                  55                  60Ala His His Phe Leu Gln Thr Cys Ser Arg Ile Ser Leu Leu Lys Gln65                  70                  75                  80Pro Arg Lys Ala Phe Ser Ser Phe Arg Gln Cys Leu Val Ile Met Gln
             85                  90                  95Glu Ala Leu Arg Gly Ser Arg Arg Ser Ser Leu Arg Val Thr Ser  *
        100                 105                 110Gln His Arg Val Tyr Ala Arg Ser Phe Cys Arg Thr Ser Cys Ser  *
    115                 120                 125Thr Arg Thr His Ser Gly Gly Thr Arg Ser Phe Ser Phe Arg Leu Arg
130                 135                 140Pro Pro Arg Leu Arg Ile Leu Ser Leu Leu Arg Pro Tyr Pro Lys Leu145                 150                 155                 160Leu His Val Leu Thr Leu Cys Thr Arg Arg Ser His Thr Pro Thr Arg
            165                 170                 175Leu Pro Gln Ala Arg His Cys Val Leu Ala Val Pro Arg Thr Ser Leu
        180                 185                 190Asp Arg Arg Cys Ser Cys Asn Gln Leu Phe Asp Gly Met Asn Leu Val
    195                 200                 205(2)SEQ ID NO:44的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：645个碱基对
(B)类型：核酸
(C)链型：双链
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA(ⅲ)假设：非(ⅲ)反义：否(ⅵ)初始来源：
(A)生物：卷柏(Selaginella lepidophylla)(ⅹⅰ)SE Q ID NO:44的序列描述GGGTGGTTCT TGCACACGCC GTTTCCCTCG TCTGAGATTT ACAGAACGCT GCCGCTGCGG    60GCCGAGCTGC TCCAAGGCGT CTTAGGCGCG GACTTAGTGG GGTTCCACAC ATACGACTAT   120GCAAGGCACT TTGTTAGCGC GATGCACACG GATACTCGGG CTGGAAGGCA CTCCCAGGGT   180GTCGAGGATC AAGGGAAGAT CACGCGAGTG GCTGCCTTCC CCGTGGATCG ATTCGGAGCG   240ATTTATCGAC GCGTAGAGAC CGATGCGGTC AAGAAACACA TGCAAGAGCT GAGCCAGGTT   300TTGCTGTCGT AAGGTTATGT TGGGGTGGAT AGGCTTGACA TGATTAAAGG AATTCCACAG   360AAGCTGCTAG CCTTTGAAAA ATTCCTCGAG GAGAACTCCG AGTGGCGTGA TAAGGTCGTC   420CTGGTGCAAA TCGCGGTGCC GACTAGAACG GACGTCCTCG AGTACCAAAA GCTTACGAGC   480CAGGTTCACG AGATTGTTGG TCGCATAAAT GGACGTTTCG GCTCCTTGAC GGCTGTTCCT   540ATCCATCACC TCGATCGGTC CATGAAATTT CCGGAGCTTT GTGCGTTATA TGCAATCACT   600GATGTCCTGC TCGTGACATC CCTGCGCGAC GGCATGAACT TCGTC                   645(2)SEQ ID NO:45的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：498个碱基对
(B)类型：核酸
(C)链型：双链
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA(ⅲ)假设：非(ⅲ)反义：否(ⅵ)初始来源：
(A)生物：拟南芥(Arabidopsis thaliana)(ⅹⅰ)SE Q ID NO:45的序列描述GCCGTTGTGG ATTCATCGCC TCGCACAAGC ACTCTTGTCG TGTCTGAGTT TATTGGATGC    60TCACCTTCTT TGAGTGGTGC CATTAGGGTG AATCCATGGG ATGTGGATGC TGTTGCTGAA   120GCGGTAAACT CGGCTCTTAA AATAGTGAGA CTGAGAAGCA ACTACGGCAT GAGAAACATT   180ATCATTATAT TAGCACTCAT GATGTTGGTT ATTGGGCAAA GAGCTTTATG CAGGATCTTG   240AGAGAGCGTG CCGAGATCAT TATAGTAAAC GTTGTTGGGG GATTGGTTTT GGCTTGGGGT   300TCAGAGTTTT GTCACTCTCT CCAAGTTTTA GGAAGCTATC TGTGGACACA TTTGTTCCAG   360TTTATAGGAA AACCACAGAG AGGGCTAATA TTCTTTTATA ATGGTACTCT TTGTTCCGAA   420AGCTCATTGT TCAAGATCCA GCAACGGGTT CCTTGTCCTA AGCCCCTTAA GGCCCCATAA   480CCGGTGTTTT TTAGTGAG                                                 498(2)SEQ ID NO:46的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：463个碱基对
(B)类型：核酸
(C)链型：双链
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA(ⅲ)假设：非(ⅲ)反义：否  (ⅵ)初始来源：
(A)生物：拟南芥(Arabidopsis thaliana)(ⅹⅰ)SE Q ID NO:46的序列描述GCCGTTGTGG ATTCATCGCC TCGCACAAGC ACTCTTGTCG TGTCTGAGTT TATTGGATGC     60TCACCTTCTT TGAGTGGTGC CATTGGGTGA ATCCATGGGA TGTGGATGCT GTTGCTGAAG    120CGGTAAACTC GGCTCTTAAA ATGAGTGAGA CTGAGAAGCA ACTACGGCAT GAGAAACATT    180ATCATTATAT TAGCACTCAT GATGTTGGTT ATTGGGCAAA GAGCTTTATG CAGGATCTTG    240AGAGAGCGTG CCGAGATCAT TATAGTAAAC GTTGTTGGGG GATTGGTTTT GGTTTGGGGT    300TCAGAGTTTT TGTCACTCTC TCCAAGTTTA GGAAGCTATC TTGGGACAAT TGTTCCAGTT    360TTTAGGGAAA ACACAGGGAA GGTTATTTCC TTGATTATAA TGGACCTTGT CCAAGCCCCA    420TTTTTAAGGC CCAGGAACCG GGTTTTTTTT TCTTAAAGCC CCT                      463(2)SEQ ID NO:47的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：394个碱基对
(B)类型：核酸
(C)链型：双链
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA(ⅲ)假设：非(ⅲ)反义：否(ⅵ)初始来源：
(A)生物：拟南芥(Arabidopsis thaliana)(ⅹⅰ)SE Q ID NO:47的序列描述GGTATTGATG TAGAGGAAAT ACGTGGTGAA ATCGAAGAAA GCTGCAGGAG GATCAATGGA    60GAGTTTGGGA AACCGGATAT CAACCTATCA TATATATTGA TACCCGGTTT CGATTAATGA   120AATAAATGCT TATACCATAT TGCTGAGTGC GTGGTCGTTA CAGCTGTTAG AGATGGTATG   180AACCTTACTC CCTACGAATA TATCGTTTGT AGACAAGGTT TACTTGGGTC TGAATCAGAC   240TTTAGTGGCC CAAAGAAGAG CATGTTGGTT GCATCAAGTT TATTTGGATG TCCCCTTTCG   300CTTAGTGGGG CTATACGCGT AAACCCATGG AACCGTTGAA GCTACTTGAG GAGCCTTAAT   360TAGGCCCCTC AAATATGCTG GAACACTACG GATG                               394(2)SEQ ID NO:48的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：428个碱基对
(B)类型：核酸
(C)链型：双链
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA(ⅲ)假设：非(ⅲ)反义：否(ⅵ)初始来源：
(A)生物：拟南芥(Arabidopsis thaliana)(ⅹⅰ)SE Q ID NO:48的序列描述AAGTCCGTTG TGGATTCACG CCTCGCACAA GCACTCTTGT CGTGTCTAGT TTATTGGATG     60CTCACCTTCT TTAGTGGTGC CATTAGGGTG AATCCATGGA TGTGGATGCT GTTGCTGAAG    120CGGTAAACTC GGCTCTTAAA ATAGTGAGAC TGAGAAGCAA CTACGGCATG AGAAACATTA    180TCATTATATT AGCACTCATG ATGTTGGTTA TTGGGCAAAG AGCTTTATGC AGGACTTAGA    240GAGCGTGCCG AGATCATTAT AGTAAACGTT GTTGGGGGAT TGGTTTTGGT TTGGGGTTCA    300AGTTTTGTCA CTCTCTCCAA GTTTTAGGAA GCTATCTTGT GGACACATTG TTCCAGTTTA    360TAGAAACACA GGGAAGGGGC TATATTCTTG TTTAAATGGG ACCCCTTGTC CCTAAAAGTC    420CCATTTGT                                                             428(2)SEQ ID NO:49的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：481个碱基对
(B)类型：核酸
(C)链型：双链
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA(ⅲ)假设：非(ⅲ)反义：否(ⅵ)初始来源：
(A)生物：拟南芥(Arabidopsis thaliana)(ⅹⅰ)SE Q ID NO:49的序列描述CAAACGAAGA GCTTCGTGGG AAAGTGGTTC TCGTGCAGAT TACTAATCCT GCTCGTAGTT    60CAGGTAAGGA TGTTCAAGAT GTAGAGAAAC AGATAAATTT ATTGCTGATG AGATCAATTC   120TAAATTTGGG AGACCTGGTG GTTATAAGCC TATTGTTTTG TAATGGACCT GTTAGTACTT   180TGGATAAAGT TGCTTATTAC GCGATCTCGG AGTGTGTTGT CGTGAATCTG TGAGAGATGG   240GATGAATTTG GTGCCTTATA AGTACACAGT GACTCGGCAA GGGAGCCCTG CTTTGGATGC   300AGCTTTGGTT TTGGGGAGGA TGATGTTAGG AAGAGTGTGA TTATTGTTTC TGAGGTTCAA   360CCGGTTGTCC TCCATCTCTA GTGGTGCGAT CCCTTTTAAT CCGTGGACAT CGATCAGCAC   420TTACGCCATG AGCTTCAAAT CCGGTTTCCG CAAAGGGAAA ATTGCCCCGA GCTTAAGGCC   480A                                                                   481(2)SEQ ID NO:50的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：395个碱基对
(B)类型：核酸
(C)链型：双链
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA(ⅲ)假设：非(ⅲ)反义：否(ⅵ)初始来源：
(A)生物：拟南芥(Arabidopsis thaliana)(ⅹⅰ)SE Q ID NO:50的序列描述AGACCTGGTG GTTATAAGCC TATTGTGTTT GTCAATGGAC CTGTTAGTAC TTTGGATAAA    60TTGCTTATTA CGCGATCTCG GAGTGTGTTG TCGTGAATCT GTGAGAGATG GGATGAATTT   120GGTGCCTTAT AAGTACACAG TGACTCGGCA AGGGAGCCCT GCTTTGGATG CAGCTTTAGG   180TTTTGGGGAG GATGATGTTA GGAAGAGTGT GATTATTGTT TCTAGTTCAT CGGTTGTCTC   240CATCTCTGAG TGGTGCGATC CGTTAATCCG TGGAACATCG TGCAGTCACT AAACGCCATG   300AGCCTGCAAT ACGATGTCGC AAAGGGAAAA TCTTTGCCAC CAGAAGCATC ATAAGTACAT   360AAAGCCTCAC AATTGCCTAT TTGGGCCGGG GTTTT                              395(2)SEQ ID NO:51的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：431个碱基对
(B)类型：核酸
(C)链型：双链
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA(ⅲ)假设：非(ⅲ)反义：否(ⅵ)初始来源：
(A)生物：水稻(Oryza sativa)(ⅸ)特征：
(A)名称/关键词：misc-feature
(B)位置：1
(D)其它信息：/标准名=“GENBANK ID:D22143”(ⅹⅰ)SE Q ID NO:51的序列描述GGGAATGGAG GGTCTCCGAG CTGCAGCAGC AATTTGAGGG GAAGACTGTG TTGCTCGGTG    60TGGATGACAT GGATATCTTC AAGGGTATCA ACTTGAAGCT TCTTGCCTTC GAGAATATGT   120TGAGGACACA TCCCAAGTGG CAGGGGCGGG CAGTGTTGGT GCAAATTGCT AATCCGGCCC   180GTGGAAAGGG TAAGGATCTT GAAGCCATCC AGGCTGAGAT TCATGAGAGC TGCAAGAGGA   240TTAATGGAGA GTTTGGCCAG TCAGGATACA GCCCTGTTGT CTTCATTGAC CGTGATGTGT   300CAAGTGTGGA GGAAGATTGC CTACTACACA ATAGCAGAAT GTGTGGTGGT GACTGCTGTT   360AGGGATGGGA TTGACTTGAC ACCATATGGA TATATTGTCT GTAGGGCAGG GGTCTTACTC   420ACATCAGAGG T                                                        431(2)SEQ ID NO:52的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：496个碱基对
(B)类型：核酸
(C)链型：双链
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA(ⅲ)假设：非(ⅲ)反义：否(ⅵ)初始来源：
(A)生物：水稻(Oryza sativa)(ⅸ)特征：
(A)名称/关键词：misc feature
(B)位置：1
(D)其它信息：/标准名=“GENBANK ID:D40048”(ⅹⅰ)SE Q ID NO:52的序列描述CTACCGTTCC CTCCCTGTTC GCGACGAGAT CCTCAAATCA CTGCTAAACT GCGATCTGAT    60TGGGTTCCAC ACCTTTGATT ACGCGCGGCA TTTCCTGTCC TGCTGCAGCC GGATGCTGGG   120GATCGAGTAC CAGTCGAAGA GGGGATATAT CGGTCTCGAT TACTTTGGCC GCACTGTTGG   180GATAAAGATC ATGCCTGTTG GGATTAACAT GACGCAGCTG CAGACGCAGA TCCGGCTGCC   240TGATCTTGAG TGGCGTGTCG CGAACTCCGG AAGCAGTTTG ATGGGAAGAC TGTCATGCTC   300GGTGTGGATG ATATGGACAT ATTTAAGGGG ATTAATCTGA AAGTTCTTGC GTTTTGAGCA   360GATGCTGAGG ACACACCCAA AATGGCAGCC AAGGCAGTTT TGGTGCAGAT TCAAACCAAG   420GGTGGTTGTT GGGAGGACTT AGGTACAGCT AGATATGAGT TCAGGGGTAA TGACATTTCA   480GGCGGTATTT CCTTGG                                                   496(2)SEQ ID NO:53的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：288个碱基对
(B)类型：核酸
(C)链型：双链
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA(ⅲ)假设：非(ⅲ)反义：否(ⅵ)初始来源：
(A)生物：水稻(Oryza sativa)(ⅹⅰ)SE Q ID NO:53的序列描述GGACCAAAGA AGAGCATGTT GGTTGTGTCG GAGTTTATTG GTTGCTCACC TTCACTGAGT    60GGAGCCATTC GTGTTAACCC GTGGAATATC GAGGCAACTG CAGAGGCACT GAATGAGGCC   120ATCTCAATGT CAGAGCGTAA AAGCAGCTGA GGCACGAAAA ACATTACCGT TATGTCAGCA   180CCCATGATGT TGCATATTGG TCTAAGAGCT TTGTACAGGA CCTGGAGAGG GCTTGCAAGG   240ATCACTTTAG GAAACCATGC TGGGGCATTG GATTGGATTT CGCTCAGG                288(2)SEQ ID NO:54的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：2207个碱基对
(B)类型：核酸
(C)链型：双链
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA(ⅲ)假设：非(ⅲ)反义：否(ⅵ)初始来源：
(A)生物：马铃薯(Solanum tuberosum)
(B)种类：Kardal(ⅸ)特征：
(A)名称/关键词：CDS
(B)位置：161..1906(ⅸ)特征：
(A)名称/关键词：misc-feature
(B)位置：842..850
(D)其它信息：/功能=“推定的糖基化位点”(ⅹⅰ)SE Q ID NO:54的序列描述CTTTTCTGAG TAATAACATA GGCATTGATT TTTTTTCAAT TAATAACACC TGCAAACATT   60CCCATTGCCG GCATTCTCTG TTCTTACAAA AAAAAACATT TTTTTGTTCA CATAAATTAG  120TTATGGCATC AGTATTGAAC CCTTTAACTT GTTATACAAT ATG GGT AAA GCT ATA    175
                                        Met Gly Lys Ala Ile
                                          1               5ATT TTT ATG ATT TTT ACT ATG TCT ATG AAT ATG ATT AAA GCT GAA ACT     223Ile Phe Met Ile Phe Thr Met Ser Met Asn Met Ile Lys Ala Glu Thr
             10                  15                  20TGC AAA TCC ATT GAT AAG GGT CCT GTA ATC CCA ACA ACC CCT TTA GTG     271Cys Lys Ser Ile Asp Lys Gly Pro Val Ile Pro Thr Thr Pro Leu Val
         25                  30                  35ATT TTT CTT GAA AAA GTT CAA GAA GCT GCT CTT CAA ACT TAT GGC CAT     319Ile Phe Leu Glu Lys Val Gln Glu Ala Ala Leu Gln Thr Tyr Gly His
     40                  45                  50AAA GGG TTT GAT GCT AAA CTG TTT GTT GAT ATG TCA CTG AGA GAG AGT     367Lys Gly Phe Asp Ala Lys Leu Phe Val Asp Met Ser Leu Arg Glu Ser
 55                  60                  65CTT TCA GAA ACA GTT GAA GCT TTT AAT AAG CTT CCA AGA GTT GTG AAT     415Leu Ser Glu Thr Val Glu Ala Phe Asn Lys Leu Pro Arg Val Val Asn70                  75                  80                  85GGT TCA ATA TCA AAA AGT GAT TTG GAT GGT TTT ATA GGT AGT TAC TTG     463Gly Ser Ile Ser Lys Ser Asp Leu Asp Gly Phe Ile Gly Ser Tyr Leu
             90                  95                 100AGT AGT CCT GAT AAG GAT TTG GTT TAT GTT GAG CCT ATG GAT TTT GTG     511Ser Ser Pro Asp Lys Asp Leu Val Tyr Val Glu Pro Met Asp Phe Val
        105                 110                 115GCT GAG CCT GAA GGC TTT TTG CCA AAG GTG AAG AAT TCT GAG GTG AGG     559Ala Glu Pro Glu Gly Phe Leu Pro Lys Val Lys Asn Ser Glu Val Arg
    120                 125                 130GCA TGG GCA TTG GAG GTG CAT TCA CTT TGG AAG AAT TTA AGT AGG AAA     607Ala Trp Ala Leu Glu Val His Ser Leu Trp Lys Asn Leu Ser Arg Lys
135                 140                 145GTG GCT GAT CAT GTA TTG GAA AAA CCA GAG TTG TAT ACT TTG CTT CCA     655Val Ala Asp His Val Leu Glu Lys Pro Glu Leu Tyr Thr Leu Leu Pro150                 155                 160                 165TTG AAA AAT CCA GTT ATT ATA CCG GGA TCG CGT TTT AAG GAG GTT TAT     703Leu Lys Asn Pro Val Ile Ile Pro Gly Ser Arg Phe Lys Glu Val Tyr
            170                 175                 180TAT TGG GAT TCT TAT TGG GTA ATA AGG GGT TTG TTA GCA AGC AAA ATG     751Tyr Trp Asp Ser Tyr Trp Val Ile Arg Gly Leu Leu Ala Ser Lys Met
        185                 190                 195TAT GAA ACT GCA AAA GGG ATT GTG ACT AAT CTG GTT TCT CTG ATA GAT     799Tyr Glu Thr Ala Lys Gly Ile Val Thr Asn Leu Val Ser Leu Ile Asp
    200                 205                 210CAA TTT GGT TAT GTT CTT AAC GGT GCA AGA GCA TAC TAC AGT AAC AGA     847Gln Phe Gly Tyr Val Leu Asn Gly Ala Arg Ala Tyr Tyr Ser Asn Arg
215                 220                 225AGT CAG CCT CCT GTC CTG GCC ACG ATG ATT GTT GAC ATA TTC AAT CAG     895Ser Gln Pro Pro Val Leu Ala Thr Met Ile Val Asp Ile Phe Asn Gln230                 235                 240                 245ACA GGT GAT TTA AAT TTG GTT AGA AGA TCC CTT CCT GCT TTG CTC AAG     943Thr Gly Asp Leu Asn Leu Val Arg Arg Ser Leu Pro Ala Leu Leu Lys
            250                 255                 260GAG AAT CAT TTT TGG AAT TCA GGA ATA CAT AAG GTG ACT ATT CAA GAT     991Glu Asn His Phe Trp Asn Ser Gly Ile His Lys Val Thr Ile Gln Asp
        265                 270                 275GCT CAG GGA TCA AAC CAC AGC TTG AGT CGG TAC TAT GCT ATG TGG AAT    1039Ala Gln Gly Ser Asn His Ser Leu Ser Arg Tyr Tyr Ala Met Trp Asn
    280                 285                 290AAG CCC CGT CCA GAA TCG TCA ACT ATA GAC AGT GAA ACA GCT TCC GTA    1087Lys Pro Arg Pro Glu Ser Ser Thr Ile Asp Ser Glu Thr Ala Ser Val
295                 300                 305CTC CCA AAT ATA TGT GAA AAA AGA GAA TTA TAC CGT GAA CTG GCA TCA    1135Leu Pro Asn Ile Cys Glu Lys Arg Glu Leu Tyr Arg Glu Leu Ala Ser310                 315                 320                 325GCT GCT GAA AGT GGA TGG GAT TTC AGT TCA AGA TGG ATG AGC AAC GGA    1183Ala Ala Glu Ser Gly Trp Asp Phe Ser Ser Arg Trp Met Ser Asn Gly
            330                 335                 340TCT GAT CTG ACA ACA ACT AGT ACA ACA TCA ATT CTA CCA GTT GAT TTG    1231Ser Asp Leu Thr Thr Thr Ser Thr Thr Ser Ile Leu Pro Val Asp Leu
        345                 350                 355AAT GCA TTC CTT CTG AAG ATG GAA CTT GAC ATT GCC TTT CTA GCA AAT    1279Asn Ala Phe Leu Leu Lys Met Glu Leu Asp Ile Ala Phe Leu Ala Asn
    360                 365                 370CTT GTT GGA GAA AGT AGC ACG GCT TCA CAT TTT ACA GAA GCT GCT CAA    1327Leu Val Gly Glu Ser Ser Thr Ala Ser His Phe Thr Glu Ala Ala Gln
375                 380                 385AAT AGA CAG AAG GCT ATA AAC TGT ATC TTT TGG AAC GCA GAG ATG GGG    1375Asn Arg Gln Lys Ala Ile Asn Cys Ile Phe Trp Asn Ala Glu Met Gly390                 395                 400                 405CAA TGG CTT GAT TAC TGG CTT ACC AAC AGC GAC ACA TCT GAG GAT ATT    1423Gln Trp Leu Asp Tyr Trp Leu Thr Asn Ser Asp Thr Ser Glu Asp Ile
            410                 415                 420TAT AAA TGG GAA GAT TTG CAC CAG AAC AAG AAG TCA TTT GCC TCT AAT    1471Tyr Lys Trp Glu Asp Leu His Gln Asn Lys Lys Ser Phe Ala Ser Asn
        425                 430                 435TTT GTT CCG CTG TGG ACT GAA ATT TCT TGT TCA GAT AAT AAT ATC ACA    1519Phe Val Pro Leu Trp Thr Glu Ile Ser Cys Ser Asp Asn Asn Ile Thr
    440                 445                 450ACT CAG AAA GTA GTT CAA AGT CTC ATG AGC TCG GGC TTG CTT CAG CCT    1567Thr Gln Lys Val Val Gln Ser Leu Met Ser Ser Gly Leu Leu Gln Pro
455                 460                 465GCA GGG ATT GCA ATG ACC TTG TCT AAT ACT GGA CAG CAA TGG GAT TTT    1615Ala Gly Ile Ala Met Thr Leu Ser Asn Thr Gly Gln Gln Trp Asp Phe470                 475                 480                 485CCG AAT GGT TGG CCC CCC CTT CAA CAC ATA ATC ATT GAA GGT CTC TTA    1663Pro Asn Gly Trp Pro Pro Leu Gln His Ile Ile Ile Glu Gly Leu Leu
            490                 495                 500AGG TCT GGA CTA GAA GAG GCA AGA ACC TTA GCA AAA GAC ATT GCT ATT    1711Arg Ser Gly Leu Glu Glu Ala Arg Thr Leu Ala Lys Asp Ile Ala Ile
        505                 510                 515CGC TGG TTA AGA ACT AAC TAT GTG ACT TAC AAG AAA ACC GGT GCT ATG    1759Arg Trp Leu Arg Thr Asn Tyr Val Thr Tyr Lys Lys Thr Gly Ala Met
    520                 525                 530TAT GAA AAA TAT GAT GTC ACA AAA TGT GGA GCA TAT GGA GGT GGT GGT    1807Tyr Glu Lys Tyr Asp Val Thr Lys Cys Gly Ala Tyr Gly Gly Gly Gly
535                 540                 545GAA TAT ATG TCC CAA ACG GGT TTC GGA TGG TCA AAT GGC GTT GTA CTG    1855Glu Tyr Met Ser Gln Thr Gly Phe Gly Trp Ser Asn Gly Val Val Leu550                 555                 560                 565GCA CTT CTA GAG GAA TTT GGA TGG CCT GAA GAT TTG AAG ATT GAT TGC    1903Ala Leu Leu Glu Glu Phe Gly Trp Pro Glu Asp Leu Lys Ile Asp Cys
            570                 575                 580TAATGAGCAA GTAGAAAAGC CAAATGAAAC ATCATTGAGT TTTATTTTCT TCTTTTGTTA  1963AAATAAGCTG CAATGGTTTG CTGATAGTTT ATGTTTTGTA TTACTATTTC ATAAGGTTTT  2023TGTACCATAT CAAGTGATAT TACCATGAAC TATGTCGTTC GGACTCTTCA AATCGGATTT  2083TGCAAAAATA ATGCAGTTTT GGAGAATCCG ATAACATAGA CCATGTATGG ATCTAAATTG  2143TAAACAGCTT ACTATATTAA GTAAAAGAAA GATGATTCCT CTGCTTTAAA AAAAAAAAAA  2203AAAA                                                               2207(2)SEQ ID NO:55的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：581个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：蛋白质(ⅹⅰ)SE Q ID NO:55的序列描述Met Gly Lys Ala Ile Ile Phe Met Ile Phe Thr Met Ser Met Asn Met1               5                  10                  15Ile Lys Ala Glu Thr Cys Lys Ser Ile Asp Lys Gly Pro Val Ile Pro
         20                  25                  30Thr Thr Pro Leu Val Ile Phe Leu Glu Lys Val Gln Glu Ala Ala Leu
     35                  40                  45Gln Thr Tyr Gly His Lys Gly Phe Asp Ala Lys Leu Phe Val Asp Met
 50                  55                  60Ser Leu Arg Glu Ser Leu Ser Glu Thr Val Glu Ala Phe Asn Lys Leu65                  70                  75                  80Pro Arg Val Val Asn Gly Ser Ile Ser Lys Ser Asp Leu Asp Gly Phe
             85                  90                  95Ile Gly Ser Tyr Leu Ser Ser Pro Asp Lys Asp Leu Val Tyr Val Glu
        100                 105                 110Pro Met Asp Phe Val Ala Glu Pro Glu Gly Phe Leu Pro Lys Val Lys
    115                 120                 125Asn Ser Glu Val Arg Ala Trp Ala Leu Glu Val His Ser Leu Trp Lys
130                 135                 140Asn Leu Ser Arg Lys Val Ala Asp His Val Leu Glu Lys Pro Glu Leu145                 150                 155                 160Tyr Thr Leu Leu Pro Leu Lys Asn Pro Val Ile Ile Pro Gly Ser Arg
            165                 170                 175Phe Lys Glu Val Tyr Tyr Trp Asp Ser Tyr Trp Val Ile Arg Gly Leu
        180                 185                 190Leu Ala Ser Lys Met Tyr Glu Thr Ala Lys Gly Ile Val Thr Asn Leu
    195                 200                 205Val Ser Leu Ile Asp Gln Phe Gly Tyr Val Leu Asn Gly Ala Arg Ala
210                 215                 220Tyr Tyr Ser Asn Arg Ser Gln Pro Pro Val Leu Ala Thr Met Ile Val225                 230                 235                 240Asp Ile Phe Asn Gln Thr Gly Asp Leu Asn Leu Val Arg Arg Ser Leu
            245                 250                 255Pro Ala Leu Leu Lys Glu Asn His Phe Trp Asn Ser Gly Ile His Lys
        260                 265                 270Val Thr Ile Gln Asp Ala Gln Gly Ser Asn His Ser Leu Ser Arg Tyr
    275                 280                 285Tyr Ala Met Trp Asn Lys Pro Arg Pro Glu Ser Ser Thr Ile Asp Ser
290                 295                 300Glu Thr Ala Ser Val Leu Pro Asn Ile Cys Glu Lys Arg Glu Leu Tyr305                 310                 315                 320Arg Glu Leu Ala Ser Ala Ala Glu Ser Gly Trp Asp Phe Ser Ser Arg
            325                 330                 335Trp Met ser Asn Gly Ser Asp Leu Thr Thr Thr Ser Thr Thr Ser Ile
        340                 345                 350Leu Pro Val Asp Leu Asn Ala Phe Leu Leu Lys Met Glu Leu Asp Ile
    355                 360                 365Ala Phe Leu Ala Asn Leu Val Gly Glu Ser Ser Thr Ala Ser His Phe
370                 375                 380Thr Glu Ala Ala Gln Asn Arg Gln Lys Ala Ile Asn Cys Ile Phe Trp385                 390                 395                 400Asn Ala Glu Met Gly Gln Trp Leu Asp Tyr Trp Leu Thr Asn Ser Asp
            405                 410                 415Thr Ser Glu Asp Ile Tyr Lys Trp Glu Asp Leu His Gln Asn Lys Lys
        420                 425                 430Ser Phe Ala Ser Asn Phe Val Pro Leu Trp Thr Glu Ile Ser Cys Ser
    435                 440                 445Asp Asn Asn Ile Thr Thr Gln Lys Val Val Gln Ser Leu Met Ser Ser
450                 455                 460Gly Leu Leu Gln Pro Ala Gly Ile Ala Met Thr Leu Ser Asn Thr Gly465                 470                 475                 480Gln Gln Trp Asp Phe Pro Asn Gly Trp Pro Pro Leu Gln His Ile Ile
            485                 490                 495Ile Glu Gly Leu Leu Arg Ser Gly Leu Glu Glu Ala Arg Thr Leu Ala
        500                 505                 510Lys Asp Ile Ala Ile Arg Trp Leu Arg Thr Asn Tyr Val Thr Tyr Lys
    515                 520                 525Lys Thr Gly Ala Met Tyr Glu Lys Tyr Asp Val Thr Lys Cys Gly Ala
530                 535                 540Tyr Gly Gly Gly Gly Glu Tyr Met Ser Gln Thr Gly Phe Gly Trp Ser545                 550                 555                 560Asn Gly Val Val Leu Ala Leu Leu Glu Glu Phe Gly Trp Pro Glu Asp
            565                 570                 575Leu Lys Ile Asp Cys
        580(2)SEQ ID NO:56的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：18个碱基对
(B)类型：核酸
(C)链型：单链
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：DNA(ⅲ)假设：非(ⅹⅲ)SE Q ID NO:56的序列描述CTCAGATCTG GCCACAAA                                       18(2)SEQ ID NO:57的信息：(ⅰ)序列特征：
(A)长度：18个碱基对
(B)类型：核酸
(C)链型：单链
(D)拓扑类型：线性(ⅱ)分子类型：cDNA(ⅲ)假设：非(ⅹⅰ)SE Q ID NO:57的序列描述GTGCTCGTCT GCAGGTGC                                       18

Claims (107)

1．通过诱导海藻糖-6-磷酸代谢可得量的改变在体内改变细胞、组织或器官的发育和/或组成的方法。
2．通过降低细胞内海藻糖-6-磷酸可得量在细胞内糖酵解方向中促进碳流动的方法。
3．通过增加细胞内海藻糖-6-磷酸可得量在细胞内糖酵解方向中抑制碳流动的方法。
4．通过降低细胞内海藻糖-6-磷酸可得量在细胞内抑制光合作用的方法。
5．通过增加细胞内海藻糖-6-磷酸可得量在细胞内促进光合作用的方法。
6．通过增加细胞内海藻糖-6-磷酸可得量促进池相关活性的方法。
7．通过降低细胞内海藻糖-6-磷酸可得量促进细胞或组织生长的方法。
8．通过增加细胞内海藻糖-6-磷酸可得量抑制细胞或组织生长的方法。
9．通过降低细胞内海藻糖-6-磷酸可得量增强细胞代谢的方法。
10．依据权利要求2、4、7或9的方法，其特征在于所述细胞内海藻糖-6-磷酸浓度的降低是由磷酸海藻糖磷酸酶(TPP)活性增加的造成的。
11．依据权利要求10的方法，其特征在于TPP活性的增加是通过用一个能表达TPP酶的载体转化所述细胞实现的。
12．依据权利要求11的方法，其特征在于用含有编码TPP的异源基因的一种载体转化所述的细胞。
13．依据权利要求2、4、7或9的方法，其特征在于所述的细胞内海藻糖-6-磷酸浓度的降低是由磷酸海藻糖合成酶(TPS)活性降低造成的。
14．依据权利要求13的方法，其特征在于所述的TPS活性降低是由能表达抑制TPS的分子的载体转化所述细胞造成的。
15．依据权利要求14的方法，其特征在于所述载体包含TPS的反义基因。
16．依据权利要求10的方法，其特征在于所述的降低是由于内源TPP酶的突变。
17．依据权利要求10的方法，其特征在于海藻糖-6-磷酸的降低是由磷酸-α-(1,1)-葡糖苷酶的相对过量表达造成的。
18．依据权利要求3、5、6或8的方法，其特征在于所述的细胞内海藻糖-6-磷酸浓度的增加是由TPS活性的增加造成的。
19．依据权利要求18的方法，其特征在于TPS活性的增加是通过用能表达TPS酶的载体转化所述的细胞而实现的。
20．依据权利要求19的方法，其特征在于用含有编码TPS的异源基因的载体转化所述的细胞。
21．依据权利要求3、5、6或8的方法，其特征在于所述的细胞内海藻糖-6-磷酸浓度的增加是由TPP活性的降低造成的。
22．依据权利要求21的方法，其特征在于所述的TPP活性的降低是通过用能表达抑制TPP的分子的载体转化所述的细胞。
23．依据权利要求22的方法，其特征在于所述的载体含有TPS的反义基因。
24．依据权利要求18的方法，其特征在于所述的增加是由于内源TPS酶的突变。
25．依据权利要求1-24中任一项的方法，其特征在于所述的细胞位于植物内。
26．依据权利要求25的方法，其特征在于所述的植物是一种转基因植物。
27．依据权利要求26的方法，其特征在于所述的转基因植物是用根癌土壤杆菌转化产生的。
28．依据权利要求1-24中任一项的方法，其特征在于所述的细胞位于动物内，优选为哺乳类，更优选为人类。
29．依据权利要求1-24中任何一项的方法，其特征在于所述的细胞是微生物，优选的选自细菌、微生物、酵母、真菌、细胞培养物、卵母细胞、精细胞、杂交瘤、原生生物和愈伤组织。
30．一种包含编码TPP的基因的克隆载体。
31．依据权利要求30的克隆载体，其特征在于其包括选自描述于SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:14、SEQ IDNO:16、SEQ ID NO:17以及来自由SEQ ID NO:24、SEQ IDNO:28、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:42和SEQ ID NO:44所编码的两分酶的TPP编码部分的核苷酸序列。
32．一个克隆载体，其包括TPS的反义基因，该基因一旦表达则能防止内源TPS基因的功能活性。
33．一个包含TPS基因的克隆载体，其特征在于其包括选自描述于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:18、SEQ IDNO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:26、SEQ IDNO:39、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:47、SEQ IDNO:48、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50、SEQ ID NNO:51,SEQ ID NO:52和SEQ ID NO:53中的核苷酸序列。
34．一个克隆载体，其包括TPP的反义基因，该基因一旦表达则能防止内源TPP基因的功能活性。
35．特征在于用包含编码TPP核苷酸序列的载体转化此植物或其祖先之一的植物。
36．特征在于用包含编码TPP反义基因核苷酸序列的载体转化此植物或其祖先之一的植物。
37．特征在于用包含编码TPS反义基因核苷酸序列的载体转化此植物或其祖先之一的植物。
38．海藻糖-6-磷酸影响细胞内碳水化合物分配的用途。
39．海藻糖-6-磷酸增加生物量的用途。
40．海藻糖-6-磷酸影响己糖激酶的活性的用途。
41．海藻糖-6-磷酸影响己糖激酶的信号传递功能的用途。
42．海藻糖-6-磷酸影响细胞壁合成的用途。
43．影响细胞内海藻糖-6-磷酸可得量以增加生物量的化合物的用途。
44．影响细胞内海藻糖-6-磷酸可得量以影响己糖激酶活性的化合物的用途。
45．影响细胞内海藻糖-6-磷酸可得量以影响光合作用的化合物的用途。
46．影响细胞内海藻糖-6-磷酸可得量以影响糖酵解途径中碳流动的化合物的用途。
47．通过增加细胞内海藻糖-6-磷酸可得量防止冷甜化的方法。
48．通过增加细胞内海藻糖-6-磷酸可得量在甜菜收获后抑制蔗糖酶的方法。
49．影响细胞内海藻糖-6-磷酸可得量以影响冷甜化或蔗糖酶的抑制的化合物的用途。
50．依据权利要求47或48的方法，其特征在于细胞内T-6-P可得量的增加来源于磷酸海藻糖合成酶活性的增加。
51．依据权利要求47的方法，其特征在于在马铃薯块茎中T-6-P可得量的调节被特异性地改变。
52．依据权利要求51的方法，其特征在于编码磷酸海藻糖合成酶的基因在块茎中特异性表达。
53．依据权利要求52的方法，其特征在于所述的基因是来源于大肠杆菌的TPS基因。
54．依据权利要求48的方法，其特征在于在甜菜主根中T-6-P可得量的调节被特异性地改变。
55．依据权利要求54的方法，其特征在于编码磷酸海藻糖合成酶的基因在主根中特异性表达。
56．积累海藻糖的方法，其特征在于用编码两分TPS-TPP酶的DNA序列转化生物体。
57．依据权利要求56的方法，其特征在于所述的基因是来源于拟南芥的两分基因。
58．依据权利要求56的方法，其特征在于所述的基因是来源于卷柏的两分基因。
59．依据权利要求56的方法，其特征在于所述的基因是人两分基因。
60．依据权利要求56的方法，其特征在于所述的基因是来源于向日葵的两分基因。
61．在海藻糖生产的过程中通过编码两分TPS-TPP酶的DNA序列的表达防止代谢转向的方法。
62．依据权利要求1-24的方法，其特征在于TPS或TPP的表达被限制在特定的组织中。
63．依据权利要求1-24的方法，其特征在于TPP或TPS的表达在可诱导启动子的控制下。
64．通过在海藻糖酶代谢可得量上诱导一种改变在体内改变细胞、组织或器官发育和/或组成的方法。
65．通过增加细胞内海藻糖酶的可得量在细胞中糖酵解方向上促进碳流量的方法。
66．通过降低细胞内海藻糖酶的可得量在细胞中糖酵解方向上抑制碳流量的方法。
67．通过降低细胞内海藻糖酶的可得量促进池相关活性的方法。
68．通过增加细胞内海藻糖酶的可得量促进细胞或组织生长的方法。
69．通过降低细胞内海藻糖酶的可得量抑制细胞或组织生长的方法。
70．通过增加细胞内海藻糖酶的可得量增加细胞代谢的方法。
71．通过海藻糖-6-磷酸磷酸酶的表达在细胞中糖酵解方向上促进碳流量的方法。
72．通过海藻糖-6-磷酸合成酶的表达在细胞中糖酵解方向上抑制碳流量的方法。
73．通过海藻糖-6-磷酸磷酸酶的表达抑制细胞内光合作用的方法。
74．通过海藻糖-6-磷酸合成酶的表达促进细胞内光合作用的方法。
75．通过海藻糖-6-磷酸合成酶的表达促进池相关活性的方法。
76．通过海藻糖-6-磷酸磷酸酶的表达促进细胞或组织生长的方法。
77．通过海藻糖-6-磷酸合成酶的表达抑制细胞或组织生长的方法。
78．通过海藻糖-6-磷酸磷酸酶的表达增加细胞代谢的方法。
79．通过海藻糖-6-磷酸合成酶的表达防止冷甜化的方法。
80．通过降低细胞内海藻糖酶的可得量防止冷甜化的方法。
81．通过降低细胞内海藻糖-6-磷酸的可得量防止抽苔的方法。
82．通过海藻糖-6-磷酸磷酸酶的表达防止抽苔的方法。
83．通过增加细胞内海藻糖-6-磷酸的可得量诱导抽苔的方法。
84．通过海藻糖-6-磷酸合成酶的表达诱导抽苔的方法。
85．通过降低细胞内海藻糖酶的可得量诱导抽苔的方法。
86．通过用编码海藻糖-6-磷酸磷酸酶的酶的转化以提高植物产量的方法。
87．通过增加细胞内海藻糖-6-磷酸的可得量以提高植物产量的方法。
88．编码海藻糖-6-磷酸合成酶的多核苷酸，其特征在于是一个两分酶，其在编码海藻糖-6-磷酸磷酸酶的部分有突变。
89．编码海藻糖-6-磷酸磷酸酶的多核苷酸，其特征在于是一个两分酶，其在编码海藻糖-6-磷酸合成酶的部分有突变。
90．依据权利要求88或89的多核苷酸，其特征在于两分基因是人TPS/TPP。
91．依据权利要求90的多核苷酸，其特征在于人TPS/TPP有如SEQID NO:11的氨基酸序列。
92．依据权利要求91的多核苷酸，其特征在于它包括SEQ ID NO:10的多核苷酸序列。
93．依据权利要求88或89的多核苷酸，其特征在于两分基因是拟南芥TPS/TPP。
94．依据权利要求93的多核苷酸，其特征在于人TPS/TPP有如SEQID NO:40的氨基酸序列。
95．依据权利要求94的多核苷酸，其特征在于它包括SEQ ID NO:39的多核苷酸序列。
96．依据权利要求88或89的多核苷酸，其特征在于两分基因是卷柏TPS/TPP。
97．依据权利要求96的多核苷酸，其特征在于人TPS/TPP包括如SEQ ID NO:43或其突变蛋白的氨基酸序列。
98．依据权利要求97的多核苷酸，其特征在于它包括SEQ ID NO:42或SEQ ID NO:44的多核苷酸序列。
99．依据权利要求88或89的多核苷酸，其特征在于两分基因是向日葵TPS/TPP。
100．依据权利要求99的多核苷酸，其特征在于人TPS/TPP包括如SEQ ID NO:25或其突变蛋白的氨基酸序列。
101．依据权利要求100的多核苷酸，其特征在于它包括SEQ IDNO:24、SEQ ID NO:26或SEQ ID NO:28的多核苷酸序列。
102．带有依据权利要求88至101中任一项的多核苷酸的载体。
103．包含依据权利要求102的载体的宿主生物。
104．依据权利要求103的宿主生物，其特征在于它是根癌土壤杆菌。
105．用依据权利要求103或104的宿主生物转化的细胞。
106．依据权利要求105的细胞，其特征在于是一种植物细胞。
107．从依据权利106的植物细胞中再生的植物或植物部分。
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