CN102191228A - 来自大肠杆菌合成海藻糖的融合蛋白及其在培育矮化草坪草中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种应用大肠杆菌合成海藻糖的融合蛋白培育矮生草坪草的方法。本发明提供的融合蛋白，包括磷酸海藻糖磷酸酶和磷酸海藻糖合成酶，磷酸海藻糖磷酸酶位于磷酸海藻糖合成酶的羧基端。将本发明的融合蛋白的编码基因导入植物中，可以得到矮生草坪草。本发明的融合蛋白及其编码基因可用于培育美观少修剪的草坪草新品种。

Description

来自大肠杆菌合成海藻糖的融合蛋白及其在培育矮化草坪草中的应用

技术领域

本发明涉及一种合成海藻糖的融合蛋白及其在培育矮化草坪草中的应用。

背景技术

低矮整齐的草坪在美化人们的生活环境方面起着重要作用，为了保持草坪草低矮，目前人们普遍采用定期修剪的方式，造成了人力和资源的浪费，因此有必要培育矮生草坪草新品种。近期，分子生物学技术的发展为分子育种手段培育矮生草坪草新品种提供了技术平台。

海藻糖是一种由两个葡萄糖分子以α，α-1，1糖苷键相连而成的非还原二糖，在生物界中广泛存在，它能清除有害的氧自由基，保护蛋白和磷脂膜抗氧化胁迫，维持细胞膜在高渗透压下的稳定状态，阻止细胞内膜变性，抑制膜融合、降低相变温度、保持膜的流动性等等。因此人们通过转基因方法在植物中积累海藻糖以培育耐逆植物新品种。同时为了消除海藻糖的前体6-磷酸-海藻糖在植物体内的积累而影响植物的生理代谢和生长(Trehalose Mediated Growth Inhibition of ArabidopsisSeedlings Is Due to Trehalose-6-Phosphate Accumulation.Plant Physiology，2004，135：879-890)。人们将合成海藻糖的TPS和TPP基因融合后转入植株以得到生长不受影响的耐逆植株。如将大肠杆菌的TPS和TPP融合基因转化水稻，成功获得了正常生长的耐逆的转基因水稻。(Expression of a bifunctional fusion of theEscherichia coli genes for trehalose-6-phosphate synthase andtrehalose-6- phosphate phos phatase in transgenic rice plants increasestrehalose accumulation and abiotic stress

但是，在草坪草的转基因研究中发现，将TPS和TPP融合基因转化草坪草，能得到矮生的转基因植株，为用分子生物学手段培育矮生草坪草新品种提供了可能。

发明内容

本发明提供了一种培育矮生草坪草的方法及其所用的融合蛋白。

本发明提供了一个融合蛋白。

所述融合蛋白可包括磷酸海藻糖合成酶和磷酸海藻糖磷酸酶。

所述磷酸海藻糖磷酸酶位于所述磷酸海藻糖合成酶的羧基端。

所述磷酸海藻糖合成酶和磷酸海藻糖磷酸酶来自大肠杆菌。

所述融合蛋白具体可为下述a)、b)的蛋白质：

a)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

b)将序列2的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由序列4衍生的蛋白质。

上述a)或b)中的融合蛋白可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。上述b)中的融合蛋白的编码基因可通过将序列表中序列1自5′端第1至2247位碱基所示的DNA序列中缺失一个或几个氨基酸残基的密码子，和/或进行一个或几个碱基对的错义突变，和/或在其5′端和/或3′端连上表1所示的标签的编码序列得到。

所述融合蛋白的编码基因也属于本发明的保护范围。

所述编码基因具体可为如下1)至3)的DNA分子之一：

1)其编码序列是序列表中序列1自5′末端第1至2247位脱氧核糖核苷酸所示的DNA分子；

2)在严格条件下与1)限定的DNA序列杂交且编码所述蛋白的DNA分子；

3)与1)限定的DNA序列具有90％以上同源性，且编码相同功能蛋白质的DNA分子。

上述严格条件可为在5×SSC，5×Denhardt’S溶液，0.05mg/mL鱼精DNA，50％去离子甲酰胺溶液中，在65℃下杂交，然后在室温用2×SSC，0.1％SDS，在42℃用0.25×SSC，0.1％SDS各洗膜15分钟两次。

含有所述基因的表达盒、重组表达载体、细胞系或重组菌均属本发明的保护范围。

可用现有的植物表达载体构建含有所述融合蛋白编码基因的重组表达载体。

所述植物表达载体包括双元农杆菌载体和可用于植物微弹轰击的载体等。所述植物表达载体还可包含外源基因的3’端非翻译区域，即包含聚腺苷酸信号和任何其它参与mRNA加工或基因表达的DNA片段。所述聚腺苷酸信号可引导聚腺苷酸加入到mRNA前体的3’端，如农杆菌冠瘿瘤诱导(Ti)质粒基因(如胭脂合成酶Nos基因)、植物基因(如大豆贮存蛋白基因)3’端转录的非翻译区均具有类似功能。

使用所述融合蛋白编码基因构建重组植物表达载体时，在其转录起始核苷酸前可加上任何一种增强型启动子或组成型启动子，如花椰菜花叶病毒(CAMV)35S启动子、玉米的泛素启动子(Ubiquitin)，它们可单独使用或与其它植物启动子结合使用；此外，使用本发明的融合的蛋白编码基因构建植物表达载体时，还可使用增强子，包括翻译增强子或转录增强子，这些增强子区域可以是ATG起始密码子或邻接区域起始密码子等，但必需与编码序列的阅读框相同，以保证整个序列的正确翻译。所述翻译控制信号和起始密码子的来源是广泛的，可以是天然的，也可以是合成的。翻译起始区域可以来自转录起始区域或结构基因。

为了便于对转基因植物细胞或植物进行鉴定及筛选，可对所用植物表达载体进行加工，如加入可在植物中表达的编码可产生颜色变化的酶或发光化合物的基因(GUS基因、萤光素酶基因等)、具有抗性的抗生素标记物(庆大霉素标记物、卡那霉素标记物等)或是抗化学试剂标记基因(如抗除莠剂基因)等。从转基因植物的安全性考虑，可不加任何选择性标记基因，直接以逆境筛选转化植株。

所述表达载体具体可为如图1所示的表达载体。

本发明还提供了一种培育矮生草坪草的方法，是将这些DNA片段导入植物细胞，得到矮生草坪草。

可通过任何常规方法将所述DNA片段导入植物细胞，如通过如图1、图2所示的表达载体将所述DNA片段导入植物细胞，得到矮生草坪草。

本发明提供了一个融合蛋白包括磷酸海藻糖合成酶和磷酸海藻糖磷酸酶，磷酸海藻糖磷酸酶位于磷酸海藻糖合成酶的羧基端。磷酸海藻糖合成酶和磷酸海藻糖磷酸酶来自大肠杆菌。将本发明的融合蛋白的编码基因导入草坪草中，可以得到矮生草坪草。本发明的融合蛋白及其编码基因对培育矮生的草坪草有显著作用。应用本发明方法培育矮生草坪草可以节省人力、节约资源，有较大的应用前景。

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。

附图说明

图1为质粒pBI121::mALB的结构图

图2为转pBI121::mALB草坪草的PCR结果电泳鉴定

图3为转pBI121::mALB草坪草的表型

具体实施方式

细菌基因组DNA的提取采用SDS裂解法，植物基因组DNA的提取采用CTAB法，具体参见Sambrook and Russell″Molecular Cloning：A Laboratory Manual″(2001)；Cloning：A Practical Approach，″Volumes I and II″(D.N.Glover，ed.，1985)。

细胞总RNA的提取采用TRIZOL RNA提取液(鼎国生物技术公司)，并按供应商提供的方案进行总RNA的提取。将得到的总RNA用DNase酶(Prmega，America)消化，以去除残存的DNA，以分光光度计(Eppendorf公司，德国)检测样品中总RNA的浓度。取5μg总RNA，用反转录试剂盒(宝生物工程(大连)有限公司)按试剂盒的方法进行反转录，以得到的cDNA片段为模板进行如下所示的PCR扩增反应。

除非有特殊说明，25μlPCR反应体系为：0.1μg模板DNA、1.5mM MgCl2、20mMTris-HCl(pH8.4)、50mM KCl、0.2mM dNTP混合物、0.2μM正向引物和0.2μM反向引物，以及1U的pfu高保真DNA聚合酶(上海申能博彩生物技术公司)。按照下列方案在PCR-热循环仪(Eppendorf公司，德国)中进行PCR循环反应：94℃预变性4分钟，94℃变性30秒，按各特定温度复性，复性时间30秒，72℃延伸，延伸时间各反应特定，30个循环，最后72℃、10分钟。

本发明中所用的引物均为上海生工公司合成。

本发明中所用的引物如下：

P 1：5’-AAGCCATCCCTTTCGCCTCC-3’

P2：5’-CCTGGGACGGCTATCTACGC-3’

下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。

实施例1、

一、磷酸海藻糖磷酸酶基因和磷酸海藻糖合成酶基因的改造

大肠杆菌的磷酸海藻糖磷酸酶基因和磷酸海藻糖合成酶基因序列已知(GenbankAccession X69160)。参照已知序列，再将其中的植物稀有密码子经过置换，得到人工合成大肠杆菌的磷酸海藻糖磷酸酶基因和磷酸海藻糖合成酶基因融合基因(三博远志)。总长度2247bp，其中磷酸海藻糖磷酸酶基因长1422bp，从序列5‘第1个碱基到第1422个碱基，磷酸海藻糖合成酶基因长801bp，从序列5‘第1447个碱基到第2247个碱基，两者之间有一段长24bp的连接序列从从序列5‘第1423个碱基到第1446个碱基。此融合基因命名为mALB，编码749个氨基酸。

二、融合基因mALB的植物表达载体构建

将mALB融合基因DNA片段连接到质粒pBI121(Genbank Accession NumberX52329)的Sma I-SacI(经CIAP处理，宝生物)位点处，得到的重组质粒命名为pBI121::mALB。在此植物表达载体中ALB受到35S启动子控制。

将质粒pBI121::mALB转入到根癌农杆菌LBA4404中，得到菌株LBA4404/ALB，用于植物组织的侵染。同时，以pBI121做为阴性对照转入到根癌农杆菌LBA4404中，得到菌株LBA4404/121。

三、草坪草转化

1、愈伤组织诱导

选取成熟饱满的草坪草早熟禾的种子，室温下在蒸馏水中浸泡4小时后剥去种皮，再放入蒸馏水中继续浸泡过夜。浸泡好的去皮种子先用70％酒精过两遍，再用30％次氯酸钠消毒30分钟，无菌水冲洗三遍。在无菌条件下，将种子接入愈伤组织诱导培养基。接种密度：100粒/皿，平皿直径75mm。

每升愈伤组织诱导培养基的组成如下：在MS基本培养基的基础上加入生长素类物质2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D，Sigma，美国)2mg，6-苄氨基嘌呤(Sigma，美国)0.1mg，pH 5.8。

2、愈伤组织的农杆菌侵染

将愈伤组织置于经过重悬静置菌液浓度为OD600＝0.1的LBA4404根农杆菌菌液中侵染10分钟，倒去菌液，在无菌滤纸上将愈伤晾干(约5分钟)，置于覆有一层无菌滤纸的共培养培养基，25℃暗培养3天。所用共培养培养基为步骤-的愈伤组织诱导培养基。

3、抗性愈伤组织的筛选

共培养后用筛选培养基对愈伤组织进行筛选，每三星期转皿一次，约两个月后上分化培养基。

每升抗性愈伤组织筛选培养基的组成如下：在MS基本培养基的基础上加入2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D，Sigma，美国)2mg，6-苄氨基嘌呤(Sigma，美国)0.1mg，G418(青岛生工)20mg-100mg，羧苄青霉素(北京欣经科生物技术有限公司)250mg，pH5.8。

4、抗性愈伤组织的分化

将经过筛选的直径达到0.5cm以上的抗性愈伤组织放到分化筛选培养基上进行分化，并于25℃下光照培养(16h光/8h暗)。10天后有绿色小芽出现，约两周后即可生长为幼苗。

每升分化培养基的组成如下：在MS基本培养基的基础上加入6-苄氨基嘌呤(Sigma，美国)0.2mg，激动素(Sigma，美国)0.2mg，G418(青岛生工)50mg，pH5.8。

5、转化植株的生根：

将已分化的幼苗接种于生根培养基，生根。

生根培养基为MS基本培养基。

四、PCR鉴定

取生根培养基上的转pBI121::mALB苗叶片用CTAB法提取植物DNA，用引物P1和P2进行PCR反应验证，结果如图2所示，得到与预期1526bp相一致的条带(图中最左列为marker，左第2列为质粒阳性对照，最右列为阴性对照，其余为转pBI121::mALB基因植物DNA)转基因阳性率接近100％。

五、表型观察

将同时转化的转pBI121::mALB和转pBI121草坪草载入沙盆室内培育一个半月后可见转pBI121::mALB的草坪草明显矮生。如图3所示，左瓶为转pBI121::mALB植株，右瓶为转pBI121植株。

将转基因苗及对照苗50厘米间隔同时种于田间，正常施肥浇水不予修剪，第二年五月分别测量植株的高度，数据如下：

植株号	转基因植株高度	阴性对照植株高度
			1	23.2	29.9
2	21.3	30.0
			3	24.2	30.0
4	22.3	30.1
			5	20.8	30.0
6	19.6	30.1

序列表

<160>2

 

<210>1

<211>2247

<212>DNA

<213>大肠杆菌(Escherichia coli)

 

<400>1

 

atgagtcgtt tggtcgtggt ctctaaccgg attgcaccac cagacgagca cgccgccagt   60

gccggtggcc ttgccgttgg catactgggg gcactgaaag ccgcaggcgg actgtggttt  120

ggctggagtg gtgaaacagg gaatgaggat cagccgctaa aaaaggtgaa aaaaggtaac  180

attacgtggg cctcttttaa cctcagcgaa caggaccttg acgaatacta caaccaattc  240

tccaatgccg ttctctggcc cgcttttcat tatcggctcg atctggtgca atttcagcgt  300

cctgcctggg acggctatct acgcgtcaat gcgttgctgg cagataaatt gctgccgctg  360

ttgcaagacg atgacattat ctggatccac gattatcacc tgttgccatt tgcgcatgaa  420

ttgcgcaaac ggggagtgaa taatcgcatt ggtttctttc tgcatattcc tttcccgaca  480

ccggaaatct tcaacgcgct gccgacatat gacaccttgc ttgaacagct ttgtgattat  540

gatttgctgg gtttccagac agaaaacgat cgtctggcgt tcctggattg tctttctaac  600

ctgacccgcg tcacgacacg tagcgcaaaa agccatacag cctggggcaa agcatttcgc  660

acagaagtct acccgatcgg cattgaaccg aaagaaatag ccaaacaggc tgccgggcca  720

ctgccgccaa aactggcgca acttaaagcg gaactgaaaa acgtccaaaa tatcttttct  780

gtcgaacggc tggattattc caaaggtttg ccagagcgtt ttctcgccta tgaagcgttg  840

ctggaaaaat atccgcagca tcatggtaaa attcgttata cccagattgc accaacgtcg  900

cgtggtgatg tgcaagccta tcaggatatt cgtcatcagc tcgaaaatga agctggacgc  960

attaatggta aatacgggca attgggctgg acgccgcttt attatttgaa tcagcatttt 1020

gaccgtaaat tgctgatgaa aatattccgc tactctgacg tgggcttggt gacgccactg 1080

cgtgacggga tgaacctggt cgcaaaagag tatgttgctg ctcaggaccc agccaatccg 1140

ggcgttcttg ttctttcgca atttgcggga gcggcaaacg agttgacgtc ggcgttgatt 1200

gttaacccct acgatcgtga cgaagttgca gctgcgctgg atcgtgcatt gactatgtcg 1260

ctggcggaac gtatttcccg tcatgcagaa atgctggacg ttatcgtgaa aaacgatatt 1320

aaccactggc aggagtgctt cattagcgac ctaaagcaga tagttccgcg cagcgcggaa 1380

agccagcagc gcgataaagt tgctaccttt ccaaagcttg cgctcggttc tcgttctgct 1440

gagctcatga cagaaccgtt gaccgaaacc cctgaactat ccgcgaaata tgcctggttt 1500

tttgatcttg atggaacgct ggcggaaatc aaaccgcatc ccgatcaggt cgtcgtgcct 1560

gacaatattc tgcaaggact acagctactg gcaaccgcaa gtgatggtgc attggcattg 1620

atatcagggc gctcaatggt ggagcttgac gcactggcaa aaccttatcg cttcccgttg 1680

gcgggcgtgc atggggcgga gcgccgtgac atcaatggta aaacacatat cgttcatctg 1740

ccggatgcga ttgcgcgtga tattagcgtg caactgcata cagtcatcgc tcagtatccc 1800

ggcgcggagc tggaggcgaa agggatggct tttgcgctgc attatcgtca ggctccgcag 1860

catgaagacg cattgatgac attggcgcaa cgtattactc agatctggcc acaaatggcg 1920

ttgcagcagg gaaagtgtgt tgtcgagatc aaaccgagag gtaccagtaa aggtgaggca  1980

attgcagctt ttatgcagga agctcccttt atcgggcgca cgcccgtctt tctgggcgat  2040

gatttgaccg atgaatctgg cttcgcagtc gttaaccgcc tgggcggaat gtcagtcaaa  2100

attggcacag gtgcaactca ggcatcatgg cgcctggcgg gtgtgccgga tgtctggagc  2160

tggcttgaaa tgataaccac cgcattgcaa caaaaaagag aaaataacag gagtgatgac  2220

tatgagtcgt ttagtcgtag tatctaa

<210>2

<211>748

<212>PRT

<213>大肠杆菌(Escherichia coli)

 

<400>2

 

Met Ser Arg Leu Val Val Val Ser Asn Arg Ile Ala Pro Pro Asp Glu

1               5                   10                  15

His Ala Ala Ser Ala Gly Gly Leu Ala Val Gly Ile Leu Gly Ala Leu

            20                  25                  30

Lys Ala Ala Gly Gly Leu Trp Phe Gly Trp Ser Gly Glu Thr Gly Asn

        35                  40                  45

Glu Asp Gln Pro Leu Lys Lys Val Lys Lys Gly Asn Ile Thr Trp Ala

    50                  55                  60

Ser Phe Asn Leu Ser Glu Gln Asp Leu Asp Glu Tyr Tyr Asn Gln Phe

65                  70                  75                  80

Ser Asn Ala Val Leu Trp Pro Ala Phe His Tyr Arg Leu Asp Leu Val

                85                  90                  95

Gln Phe Gln Arg Pro Ala Trp Asp Gly Tyr Leu Arg Val Asn Ala Leu

            100                 105                 110

Leu Ala Asp Lys Leu Leu Pro Leu Leu Gln Asp Asp Asp Ile Ile Trp

        115                 120                 125

Ile His Asp Tyr His Leu Leu Pro Phe Ala His Glu Leu Arg Lys Arg

    130                 135                 140

Gly Val Asn Asn Arg Ile Gly Phe Phe Leu His Ile Pro Phe Pro Thr

145                 150                 155                 160

Pro Glu Ile Phe Asn Ala Leu Pro Thr Tyr Asp Thr Leu Leu Glu Gln

                165                 170                 175

Leu Cys Asp Tyr Asp Leu Leu Gly Phe Gln Thr Glu Asn Asp Arg Leu

            180                 185                 190

Ala Phe Leu Asp Cys Leu Ser Asn Leu Thr Arg Val Thr Thr Arg Ser

        195                 200                 205

Ala Lys Ser His Thr Ala Trp Gly Lys Ala Phe Arg Thr Glu Val Tyr

    210                 215                 220

Pro Ile Gly Ile Glu Pro Lys Glu Ile Ala Lys Gln Ala Ala Gly Pro

225                 230                 235                 240

Leu Pro Pro Lys Leu Ala Gln Leu Lys Ala Glu Leu Lys Asn Val Gln

                245                 250                 255

Asn Ile Phe Ser Val Glu Arg Leu Asp Tyr Ser Lys Gly Leu Pro Glu

            260                 265                 270

Arg Phe Leu Ala Tyr Glu Ala Leu Leu Glu Lys Tyr Pro Gln His His

        275                 280                 285

Gly Lys Ile Arg Tyr Thr Gln Ile Ala Pro Thr Ser Arg Gly Asp Val

    290                 295                 300

Gln Ala Tyr Gln Asp Ile Arg His Gln Leu Glu Asn Glu Ala Gly Arg

305                 310                 315                 320

Ile Asn Gly Lys Tyr Gly Gln Leu Gly Trp Thr Pro Leu Tyr Tyr Leu

                325                 330                 335

Asn Gln His Phe Asp Arg Lys Leu Leu Met Lys Ile Phe Arg Tyr Ser

            340                 345                 350

Asp Val Gly Leu Val Thr Pro Leu Arg Asp Gly Met Asn Leu Val Ala

        355                 360                 365

Lys Glu Tyr Val Ala Ala Gln Asp Pro Ala Asn Pro Gly Val Leu Val

    370                 375                 380

Leu Ser Gln Phe Ala Gly Ala Ala Asn Glu Leu Thr Ser Ala Leu Ile

385                 390                 395                 400

Val Asn Pro Tyr Asp Arg Asp Glu Val Ala Ala Ala Leu Asp Arg Ala

                405                 410                 415

Leu Thr Met Ser Leu Ala Glu Arg Ile Ser Arg His Ala Glu Met Leu

            420                 425                 430

Asp Val Ile Val Lys Asn Asp Ile Asn His Trp Gln Glu Cys Phe Ile

        435                 440                 445

Ser Asp Leu Lys Gln Ile Val Pro Arg Ser Ala Glu Ser Gln Gln Arg

    450                 455                 460

Asp Lys Val Ala Thr Phe Pro Lys Leu Ala Leu Gly Ser Arg Ser Ala

465                 470                 475                 480

Glu Leu Met Thr Glu pro Leu Thr Glu Thr Pro Glu Leu Ser Ala Lys

                485                 490                 495

Tyr Ala Trp Phe Phe Asp Leu Asp Gly Thr Leu Ala Glu Ile Lys Pro

            500                 505                 510

His Pro Asp Gln Val Val Val Pro Asp Asn Ile Leu Gln Gly Leu Gln

        515                 520                 525

Leu Leu Ala Thr Ala Ser Asp Gly Ala Leu Ala Leu Ile Ser Gly Arg

    530                 535                 540

Ser Met Val Glu Leu Asp Ala Leu Ala Lys Pro Tyr Arg Phe Pro Leu

545                 550                 555                 560

Ala Gly Val His Gly Ala Glu Arg Arg Asp Ile Asn Gly Lys Thr His

                565                 570                 575

Ile Val His Leu Pro Asp Ala Ile Ala Arg Asp Ile Ser Val Gln Leu

            580                 585                 590

His Thr Val Ile Ala Gln Tyr Pro Gly Ala Glu Leu Glu Ala Lys Gly

        595                 600                 605

Met Ala Phe Ala Leu His Tyr Arg Gln Ala Pro Gln His Glu Asp Ala

    610                 615                 620

Leu Met Thr Leu Ala Gln Arg Ile Thr Gln Ile Trp Pro Gln Met Ala

625                 630                 635                 640

Leu Gln Gln Gly Lys Cys Val Val Glu Ile Lys Pro Arg Gly Thr Ser

                645                 650                 655

Lys Gly Glu Ala Ile Ala Ala Phe Met Gln Glu Ala Pro Phe Ile Gly

            660                 665                 670

Arg Thr Pro Val Phe Leu Gly Asp Asp Leu Thr Asp Glu Ser Gly Phe

        675                 680                 685

Ala Val Val Asn Arg Leu Gly Gly Met Ser Val Lys Ile Gly Thr Gly

    690                 695                 700

Ala Thr Gln Ala Ser Trp Arg Leu Ala Gly Val Pro Asp Val Trp Ser

705                 710                 715                 720

Trp Leu Glu Met Ile Thr Thr Ala Leu Gln Gln Lys Arg Glu Asn Asn

                725                 730                 735

Arg Ser Asp Asp Tyr Glu Ser Phe Ser Arg Ser Ile

            740                 745

Claims (7)

1.一种融合蛋白，包括磷酸海藻糖合成酶和磷酸海藻糖磷酸酶，所述磷酸海藻糖磷酸酶位于所述磷酸海藻糖合成酶的羧基端。

2.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于：所述磷酸海藻糖合成酶和磷酸海藻糖磷酸酶来自大肠杆菌。

3.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于：所述融合蛋白为下述a)、b)的蛋白质：

a)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

b)将序列2的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由序列2衍生的蛋白质。

4.权利要求1-3中任一所述融合蛋白，其特征在于其编码基因为：

如下1)至3)的DNA分子之一：

1)其编码序列是序列表中序列1自5′末端第1-2247位脱氧核糖核苷酸所示的DNA分子；

2)在严格条件下与1)限定的DNA序列杂交且编码所述蛋白的DNA分子；

3)与1)限定的DNA序列具有90％以上同源性，且编码相同功能蛋白质的DNA分子。

5.含有权利要求4所述基因的表达盒、重组表达载体、细胞系或重组菌；所述表达载体为如图1所示的表达载体。

6.一种培育矮生草坪草的方法，是将权利要求1至3中所述融合蛋白的编码基因导入植物细胞，得到矮生草坪草。所述草坪草可以是早熟禾。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于：所述编码基因通过如图1所示的表达载体导入植物细胞。 

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