CN116917316A - 与NKp30结合的抗体分子及其用途 - Google Patents

与NKp30结合的抗体分子及其用途 Download PDF

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Abstract

公开了与NKp30特异性结合的抗体分子。抗NKp30抗体分子可以用于治疗、预防和/或诊断癌性、自身免疫性或感染性病况和障碍。

Description

与NKp30结合的抗体分子及其用途
相关申请
本申请要求于2020年8月26日提交的美国临时专利申请第63/070,782号的权益，其全部内容在此通过引用并入。
背景技术
自然杀伤(NK)细胞以抗体非依赖性方式识别并破坏肿瘤和病毒感染细胞。NK细胞的调控是通过活化和抑制NK细胞表面上的受体介导的。活化受体的一个家族是天然细胞毒性受体(NCR)，其包括NKp30、NKp44和NKp46。
鉴于免疫检查点途径在调控免疫应答中的重要性，需要开发调节免疫抑制蛋白(例如PD-1)活性从而导致免疫系统活化的新药剂。这样的药剂可以用于例如癌症免疫疗法和治疗其他病况，例如慢性感染。
发明内容
在一方面，本文尤其提供了一种与NKp30结合的分离的抗体分子，其包含：
(a)表8A中所述的重链互补决定区1(VHCDR1)、重链互补决定区2(VHCDR2)和/或重链互补决定区3(VHCDR3)，或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列；和/或
(b)表8B中所述的轻链互补决定区1(VLCDR1)、轻链互补决定区2(VLCDR2)和/或轻链互补决定区3(VLCDR3)，或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列。
在一些实施方案中，VHCDR1包含SEQ ID NO:C019、C033、C047、C061、C075、C089、C103和C116中任一者的氨基酸序列，或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的氨基酸序列。
在一些实施方案中，VHCDR2包含SEQ ID NO:C021、C035、C049、C063、C077、C091、C105或C118中任一者的氨基酸序列，或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的氨基酸序列。
在一些实施方案中，VHCDR3包含SEQ ID NO:C023、C037、C051、C065、C079、C093、C107和C120中任一者的氨基酸序列，或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的氨基酸序列。
在一些实施方案中，VLCDR1包含SEQ ID NO:C026、C040、C054、C068、C082、C096、C110和C123中任一者的氨基酸序列，或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的氨基酸序列。
在一些实施方案中，VLCDR2包含SEQ ID NO:C028、C042、C056、C070、C084、C098、C112和C125中任一者的氨基酸序列，或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的氨基酸序列。
在一些实施方案中，VLCDR3包含SEQ ID NO:C030、C044、C058、C072、C086、C100、C113和C127中任一者的氨基酸序列，或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的氨基酸序列。
在一些实施方案中，如本文所述的抗体分子包含：
(a)表8A中所述的重链框架区1(VHFWR1)、重链框架区2(VHFWR1)、重链框架区3(VHFWR3)和/或重链框架区4(VHFWR4)，或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的氨基酸序列；和/或
(b)表8B中所述的轻链框架区1(VLFWR1)、轻链框架区2(VLFWR1)、轻链框架区3(VLFWR3)和/或轻链框架区4(VLFWR4)，或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的氨基酸序列。
在一些实施方案中，如本文所述的抗体分子包含：
(a)表9中所述的重链可变区(VH)，例如，包含SEQ ID NO:C001-C008中任一者的氨基酸序列或与其具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列的VH；和/或
(b)表9中所述的轻链可变区(VL)，例如，包含SEQ ID NO:C009-C016中任一者的氨基酸序列或与其具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列的VL。
在一些实施方案中，如本文所述的抗体分子包含表10中所述的氨基酸序列，例如，SEQ ID NO:C017-C024中任一者的氨基酸序列，或与其具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列。
在另一方面，本文提供了一种组合物，其包含多肽分子，所述多肽分子包含如本文所述的抗体分子。
在一些实施方案中，多肽分子是多功能性多肽分子。
在一些实施方案中，多肽分子是多特异性多肽分子。
在一些实施方案中，多肽分子进一步包含靶向部分。
在一些实施方案中，靶向部分选自肿瘤靶向部分、靶向自身反应性T细胞的靶向部分和靶向受感染细胞的靶向部分。
在一些实施方案中，靶向自身反应性T细胞的靶向部分与存在于自身反应性T细胞表面上的抗原结合。
在一些实施方案中，存在于自身反应性T细胞表面上的抗原与炎性或自身免疫性障碍相关。
在一些实施方案中，存在于自身反应性T细胞表面上的抗原选自CD3、TCRα、TCRβ、TCRγ、TCRζ、ICOS、CD28、CD27、HVEM、LIGHT、CD40、4-1BB、OX40、DR3、GITR、CD30、TIM1、SLAM、CD2和CD226。
在一些实施方案中，靶向受感染细胞的靶向部分与病毒感染或细菌感染相关抗原结合。
在一些实施方案中，多肽分子进一步包含细胞因子分子。
在一些实施方案中，多肽分子进一步包含以下中的一种、两种、三种、四种或更多种：
(a)肿瘤靶向部分，例如，如本文所述的；
(b)细胞因子分子，例如，如本文所述的；
(c)T细胞接合物，例如，如本文所述的；或
(d)基质修饰部分，例如，如本文所述的。
在一些实施方案中，细胞因子分子是选自GM-CSF、IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-18、IL-21、IFN-α、IFN-β、IFN-γ、MIP-1α、MIP-1β、TGF-β、TNF-α和TNFβ的细胞因子分子。
在一些实施方案中，抗体分子是单特异性抗体分子、双特异性抗体分子或三特异性抗体分子。
在一些实施方案中，抗体分子是单价抗体分子、二价抗体分子或三价抗体分子。
在一些实施方案中，抗体分子是全抗体(例如，包括至少一条(优选两条)完整重链和至少一条(优选两条)完整轻链的抗体)，或抗原结合片段(例如，Fab、F(ab’)2、Fv、单链Fv、单结构域抗体、双抗体(dAb)、二价抗体，或双特异性抗体或其片段、其单结构域变体或骆驼科抗体)。
在一些实施方案中，抗体包含选自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的重链恒定区或其片段。
在一些实施方案中，抗体包含选自κ或λ轻链恒定区的轻链恒定区或其片段。
在一些实施方案中，免疫球蛋白链恒定区(例如，Fc区)被改变(例如，突变)，以增加或减少以下中的一种或多种：Fc受体结合、抗体糖基化、半胱氨酸残基数量、效应细胞功能或补体功能。
在一些实施方案中，第一和第二免疫球蛋白链恒定区(例如，Fc区)的界面被改变(例如，突变)，以例如相对于非工程化界面增加或减少二聚化。
在一些实施方案中，免疫球蛋白链恒定区(例如，Fc区)的二聚化通过提供具有以下中的一种或多种的第一和第二Fc区的Fc界面来增强：成对空腔-突起(“杵-臼”)、静电相互作用或链交换，使得例如相对于非工程化界面形成更大比率的异源多聚体:同源多聚体。
在一些实施方案中，免疫球蛋白链恒定区(例如，Fc区)在例如人IgG1 Fc区的选自347、349、350、351、366、368、370、392、394、395、397、398、399、405、407或409中的一个或多个位置处包含氨基酸取代。
在一些实施方案中，免疫球蛋白链恒定区(例如，Fc区)包含选自以下的氨基酸取代：T366S、L368A或Y407V(例如，对应于空腔或臼)，或T366W(例如，对应于突起或杵)，或其组合。
在一些实施方案中，抗体分子或多肽分子进一步包含接头，例如，在以下中的一个或多个之间的接头：靶向部分和细胞因子分子或基质修饰部分、靶向部分和免疫细胞接合物、细胞因子分子或基质修饰部分和免疫细胞接合物、细胞因子分子或基质修饰部分和免疫球蛋白链恒定区(例如，Fc区)、靶向部分和免疫球蛋白链恒定区、或免疫细胞接合物和免疫球蛋白链恒定区。
在一些实施方案中，接头选自：可切割接头、不可切割接头、肽接头、柔性接头、刚性接头、螺旋接头或非螺旋接头。
在一些实施方案中，接头是肽接头。
在一些实施方案中，肽接头包含Gly和Ser。
在另一方面，本文提供了一种分离的核酸分子，其包含编码本文所述的抗体分子或多肽分子中的任一种的核苷酸序列，或与其基本上同源(例如，与其至少95％至99.9％相同)的核苷酸序列。
在另一方面，本文提供了一种分离的核酸，其编码如本文所述的抗体分子或如本文所述的组合物的多肽分子。
在另一方面，本文提供了一种载体，例如，表达载体，其包含如本文所述的核酸分子中的一种或多种。
在另一方面，本文提供了一种宿主细胞，其包含如本文所述的核酸分子或如本文所述的载体。
在另一方面，本文提供了一种制备(例如，产生)如本文所述的抗体分子或如本文所述的组合物的方法，其包括在合适的条件(例如，适于基因表达和/或同源或异源二聚化的条件)下培养如本文所述的宿主细胞。
在另一方面，本文提供了一种药物组合物，其包含如本文所述的抗体分子、如本文所述的组合物、如本文所述的核酸分子或如本文所述的宿主细胞，以及药学上可接受的载体、赋形剂、稀释剂或稳定剂。
在另一方面，本文提供了一种治疗癌症的方法，其包括向有需要的对象施用如本文所述的抗体分子、如本文所述的组合物或如本文所述的药物组合物，其中抗体分子、组合物或药物组合物以有效治疗癌症的量施用。
在另一方面，本文提供了如本文所述的抗体分子或如本文所述的组合物在治疗癌症方面的用途。
在一些实施方案中，癌症是实体瘤癌症或转移病变。
除非另有定义，否则本文所用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员的通常理解相同的含义。尽管在本发明的实践或测试中可以使用与本文所述的方法和材料相似或等效的那些，但下文描述了合适的方法和材料。本文提及的所有出版物、专利申请、专利和其他参考文献通过引用以它们的整体并入。在冲突的情况下，以本说明书(包括定义)为准。另外，材料、方法和实施例仅是说明性的，而非限制性的。
本发明的其他特征和优点将从以下详细描述和权利要求中显而易见。
附图说明
图1是显示NKp30抗体与NK92细胞结合的图。数据计算为百分比-AF747阳性群体。
图2是显示NKp30抗体活化NK92细胞的图。使用仓鼠抗NKp30mAb生成数据。
具体实施方案
定义
某些术语定义如下。
如本文所用，冠词“一个”和“一种”是指一个或多于一个(例如，至少一个)该冠词的语法对象。当在本文中与术语“包含”结合使用时，词语“一个”的使用可以表示“一个”，但它也符合“一个或多个”、“至少一个”和“一个或多于一个”的含义。
如本文所用，“约”和“大致”通常是指在给定测量的性质或精度的情况下测量的量的可接受的误差程度。示例性误差程度在给定值范围的20％内，通常在10％内，更通常在5％内。
如本文所用，如在例如抗体分子、细胞因子分子、受体分子中使用的术语“分子”包括全长天然存在的分子以及变体，例如，功能性变体(例如，截短、片段、突变(例如，基本上相似的序列)或其衍生形式)，只要保留了未修饰的(例如，天然存在的)分子的至少一种功能和/或活性即可。
如本文所用，“抗体分子”是指包含至少一个免疫球蛋白可变结构域序列的蛋白质，例如，免疫球蛋白链或其片段。抗体分子包括抗体(例如，全长抗体)和抗体片段。在实施方案中，抗体分子包含全长抗体的抗原结合片段或功能性片段，或全长免疫球蛋白链。例如，全长抗体是天然存在的或通过正常免疫球蛋白基因片段重组过程形成的免疫球蛋白(Ig)分子(例如，IgG抗体)。在实施方案中，抗体分子是指免疫球蛋白分子的免疫活性抗原结合部分，例如抗体片段。抗体片段(例如，功能性片段)是抗体的一部分，例如，Fab、Fab’、Fab’、F(ab’)2、F(ab)2、可变片段(Fv)、结构域抗体(dAb)或单链可变片段(scFv)。功能性抗体片段结合至与由完整(例如，全长)抗体识别的抗原相同的抗原。术语“抗体片段”或“功能性片段”还包括由可变区组成的分离的片段，例如由重链和轻链可变区组成的“Fv”片段或其中轻链和重链可变区通过肽接头连接的重组单链多肽分子(“scFv蛋白”)。在一些实施方案中，抗体片段不包括无抗原结合活性的抗体部分，例如Fc片段或单个氨基酸残基。示例性抗体分子包括全长抗体和抗体片段，例如，dAb(结构域抗体)、单链、Fab、Fab’和F(ab’)2片段，以及单链可变片段(scFv)。
如本文所用，“免疫球蛋白可变结构域序列”是指可形成免疫球蛋白可变结构域结构的氨基酸序列。例如，该序列可包括天然存在的可变结构域的全部或部分氨基酸序列。例如，该序列可包括或可不包括一个、两个或更多个N-或C-末端氨基酸，或者可包括与蛋白质结构的形成相容的其他改变。
在实施方案中，抗体分子是单特异性的，例如，其包含对单个表位的结合特异性。在一些实施方案中，抗体分子是多特异性的，例如，其包含多个免疫球蛋白可变结构域序列，其中第一免疫球蛋白可变结构域序列对第一表位具有结合特异性，第二免疫球蛋白可变结构域序列对第二表位具有结合特异性。在一些实施方案中，抗体分子是双特异性抗体分子。如本文所用，“双特异性抗体分子”是指对多于一个(例如，两个、三个、四个或更多个)表位和/或抗原具有特异性的抗体分子。
如本文所用，“抗原”(Ag)是指可激发免疫应答的分子，例如，涉及某些免疫细胞的活化和/或抗体生成。任何大分子(包括几乎所有的蛋白质或肽)都可以是抗原。抗原也可以来源于基因组重组体或DNA。例如，包含编码能够引发免疫应答的蛋白质的核苷酸序列或部分核苷酸序列的任何DNA编码“抗原”。在实施方案中，抗原不需要仅由基因的全长核苷酸序列编码，抗原也根本不需要由基因编码。在实施方案中，抗原可以是合成的或可以来源于生物样品，例如，组织样品、肿瘤样品、细胞或具有其他生物组分的流体。如本文所用，“肿瘤抗原”或可互换的“癌症抗原”包括存在于癌症(例如，癌细胞或肿瘤微环境)上或与其相关的可激发免疫应答的任何分子。如本文所用，“免疫细胞抗原”包括存在于免疫细胞上或与其相关的可激发免疫应答的任何分子。
抗体分子的“抗原结合位点”或“结合部分”是指抗体分子(例如免疫球蛋白(Ig)分子)的参与抗原结合的部分。在实施方案中，抗原结合位点由重(H)链和轻(L)链可变(V)区的氨基酸残基形成。重链和轻链可变区内的三个高度不同的区段被称为高变区，设置在称为“框架区”(FR)的更保守的侧翼区段之间。FR是天然存在于免疫球蛋白高变区之间和与其相邻的氨基酸序列。在实施方案中，在抗体分子中，轻链的三个高变区和重链的三个高变区在三维空间中彼此相对设置，以形成抗原结合表面，其与被结合抗原的三维表面互补。重链和轻链中每一条的三个高变区被称为“互补决定区”或“CDR”。框架区和CDR已在例如Kabat,E.A.,等,(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,U.S.Department of Health and Human Services,NIH公布第91-3242号和Chothia,C.等,(1987)J.Mol.Biol.196:901-917中定义和描述。每条可变链(例如，可变重链和可变轻链)通常由三个CDR和四个FR组成，从氨基末端至羧基末端按以下氨基酸顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。
如本文所用，“癌症”可以包括所有类型的致癌过程和/或癌性生长。在实施方案中，癌症包括原发性肿瘤以及转移性组织或恶性转化细胞、组织或器官。在实施方案中，癌症包括癌症的所有组织病理学和阶段，例如，侵袭性/严重性的阶段。在实施方案中，癌症包括复发性和/或抗性癌症。术语“癌症”和“肿瘤”可互换使用。例如，这两个术语都包括实体瘤和液体肿瘤。如本文所用，术语“癌症”或“肿瘤”包括恶化前以及恶性癌症和肿瘤。
如本文所用，“免疫细胞”是指在免疫系统中起作用的各种细胞中的任一种，例如，以抵御感染剂和外来物质。在实施方案中，该术语包括白细胞，例如，嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞。先天的白细胞包括吞噬细胞(例如，巨噬细胞、嗜中性粒细胞和树突细胞)、肥大细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和自然杀伤细胞。先天的白细胞通过接触攻击较大的病原体或通过吞噬然后杀死微生物来鉴定和消除病原体，并且是适应性免疫应答活化的介质。适应性免疫系统的细胞是特殊类型的白细胞，称为淋巴细胞。B细胞和T细胞是淋巴细胞的重要类型，来源于骨髓中的造血干细胞。B细胞参与体液免疫应答，而T细胞参与细胞介导的免疫应答。术语“免疫细胞”包括免疫效应细胞。
如本文所用，术语“免疫效应细胞”是指参与免疫应答(例如，促进免疫效应应答)的细胞。免疫效应细胞的实例包括但不限于T细胞，例如，α/βT细胞和γ/δT细胞、B细胞、自然杀伤(NK)细胞、自然杀伤T(NK T)细胞和肥大细胞。
术语“效应功能”或“效应应答”是指细胞的特定功能。例如，T细胞的效应功能可以是细胞溶解活性或辅助活性，包括细胞因子的分泌。
本发明的组合物和方法包括多肽和核酸，该多肽和核酸具有指定序列或与其基本上相同或相似的序列，例如，与指定序列至少80％、85％、90％、95％相同或更高的序列。在氨基酸序列的情况下，术语“基本上相同”在本文中用于指含有足够或最小数量的以下氨基酸残基的第一氨基酸，该氨基酸残基与第二氨基酸序列中对齐的氨基酸残基i)相同，或ii)为其保守取代，使得第一和第二氨基酸序列可具有共同的结构域和/或共同的功能活性。例如，含有共同结构域的与参考序列(例如，本文提供的序列)具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。
在核苷酸序列的情况下，术语“基本上相同”在本文中用于指含有足够或最小数量的以下核苷酸的第一核酸序列，该核苷酸与第二核酸序列中对齐的核苷酸相同，使得第一和第二核苷酸序列编码具有共同功能活性的多肽，或编码共同结构多肽结构域或共同功能性多肽活性。例如，与参考序列(例如，本文提供的序列)具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的核苷酸序列。
术语“变体”是指具有与参考氨基酸序列基本上相同的氨基酸序列或由基本上相同的核苷酸序列编码的多肽。在一些实施方案中，变体是功能性变体。
术语“功能性变体”是指具有与参考氨基酸序列基本上相同的氨基酸序列或由基本上相同的核苷酸序列编码，并且能够具有参考氨基酸序列的一种或多种活性的多肽。
序列之间的同源性或序列同一性(该术语在本文中可互换使用)的计算如下进行。
为了确定两个氨基酸序列或两个核酸序列的同一性百分比，出于最佳比较目的将序列对齐(例如，可以在第一和第二氨基酸或核酸序列中的一个或两个中引入空位(gap)以用于最佳对齐，并且出于比较目的可以忽略非同源性序列)。在优选实施方案中，参考序列的出于比较目的而对齐的长度为参考序列长度的至少30％，优选至少40％，更优选至少50％、60％，甚至更优选至少70％、80％、90％、100％。然后比较相应氨基酸位置或核苷酸位置处的氨基酸残基或核苷酸。当第一序列中的位置被与第二序列中相应位置相同的氨基酸残基或核苷酸占据时，则分子在该位置是相同的(如本文所用，氨基酸或核酸“同一性”等同于氨基酸或核酸“同源性”)。
考虑到为了两个序列的最佳对齐而需要引入的空位的数量和每个空位的长度，两个序列之间的同一性百分比是序列共有的相同位置数的函数。
可以使用数学算法来完成序列的比较和两个序列之间同一性百分比的确定。在优选实施方案中，使用已并入GCG软件包(可在www.gcg.com上获得)中GAP程序的Needleman和Wunsch((1970)J.Mol.Biol.48:444-453)算法，使用Blossum 62矩阵或PAM250矩阵，以及空位权重16、14、12、10、8、6或4和长度权重1、2、3、4、5或6来确定两个氨基酸序列之间的同一性百分比。在另一优选实施方案中，使用GCG软件包(可在www.gcg.com上获得)中的GAP程序，使用NWSgapdna.CMP矩阵，以及空位权重40、50、60、70或80和长度权重1、2、3、4、5或6来确定两个核苷酸序列之间的同一性百分比。一组特别优选的参数(以及除非另有说明应使用的参数)是Blossum 62评分矩阵，其空位罚分为12、空位延伸罚分为4和移码空位罚分为5。
可以使用已并入ALIGN程序(2.0版本)的E.Meyers和W.Miller((1989)CABIOS,4:11-17)的算法，使用PAM120权重残基表、空位长度罚分12和空位罚分4来确定两个氨基酸或核苷酸序列之间的同一性百分比。
本文所述的核酸和蛋白质序列可以用作“查询序列”，以对公共数据库进行搜索来例如鉴定其他家族成员或相关序列。可以使用Altschul,等,(1990)J.Mol.Biol.215:403-10的NBLAST和XBLAST程序(2.0版本)来进行这种搜素。可以用NBLAST程序、评分＝100、字长＝12来进行BLAST核苷酸搜索，以获得与本发明的核酸分子同源的核苷酸序列。可以用XBLAST程序、评分＝50、字长＝3来进行BLAST蛋白质搜索，以获得与本发明的蛋白质分子同源的氨基酸序列。为了出于比较目的获得具有空位(gapped)的对齐，可以使用如Altschul等,(1997)Nucleic Acids Res.25:3389-3402中所述的Gapped BLAST。当使用BLAST和Gapped BLAST程序时，可以使用相应程序(例如，XBLAST和NBLAST)的默认参数。参见ncbi.nlm.nih.gov。
应理解，本发明的分子可具有另外的保守或非必需氨基酸取代，其对它们的功能没有实质性影响。
术语“氨基酸”旨在包括包含氨基官能团和酸官能团并且能够包括在天然存在的氨基酸的聚合物中的所有分子，无论是天然的还是合成。示例性氨基酸包括天然存在的氨基酸；其类似物、衍生物和同系物；具有变体侧链的氨基酸类似物；以及前述中任一种的所有立体异构体。如本文所用，术语“氨基酸”包括D-或L-光学异构体和肽模拟物。
“保守氨基酸取代”是其中氨基酸残基被具有相似侧链的氨基酸残基替代的取代。具有相似侧链的氨基酸残基家族已在本领域中定义。这些家族包括具有碱性侧链(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、不带电荷的极性侧链(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、非极性侧链(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、β-分支侧链(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳香族侧链(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)的氨基酸。
术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”(如果是单链)在本文中可互换使用，是指任何长度的氨基酸聚合物。聚合物可以是线性或分支的，它可包含修饰的氨基酸，并且它可被非氨基酸中断。该术语还包括已修饰的氨基酸聚合物；例如，二硫键形成、糖基化、脂化、乙酰化、磷酸化或任何其他操作，例如与标记组分缀合。多肽可以从天然来源分离，可以通过重组技术从真核或原核宿主产生，或者可以是合成程序的产物。
术语“核酸”、“核酸序列”、“核苷酸序列”或“多核苷酸序列”和“多核苷酸”可互换使用。它们是指任何长度的核苷酸(脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸)的聚合形式，或其类似物。多核苷酸可以是单链的或双链的，如果是单链的，可以是编码链或非编码(反义)链。多核苷酸可包含修饰的核苷酸，例如甲基化核苷酸和核苷酸类似物。核苷酸的序列可被非核苷酸组分中断。在聚合之后可以进一步修饰多核苷酸，例如通过与标记组分缀合。核酸可以是重组多核苷酸，或者基因组、cDNA、半合成或合成来源的多核苷酸，其在自然界中不存在或以非天然排列与另一多核苷酸连接。
如本文所用，术语“分离的”是指从其原始或原生环境(例如，天然环境，如果它是天然存在的)中除去的材料。例如，存在于活体动物中的天然存在的多核苷酸或多肽不是分离的，但是通过人为干预从天然系统共存材料中的一些或全部中分离的相同多核苷酸或多肽是分离的。这样的多核苷酸可以是载体的一部分和/或这样的多核苷酸或多肽可以是组合物的一部分，并且仍然是分离的，因为这样的载体或组合物不是其在自然界中存在的环境的一部分。
下文进一步详细地描述本发明的各个方面。在整个说明书中列出了另外的定义。
自然杀伤细胞接合物
自然杀伤(NK)细胞以抗体非依赖性方式识别并破坏肿瘤和病毒感染细胞。NK细胞的调控是通过活化和抑制NK细胞表面上的受体介导的。活化受体的一个家族是天然细胞毒性受体(NCR)，其包括NKp30、NKp44和NKp46。NCR通过识别癌细胞上的硫酸乙酰肝素启动肿瘤靶向。NKG2D是在活化的杀伤(NK)细胞上提供刺激和共刺激先天免疫应答从而导致细胞毒性活性的受体。DNAM1是参与细胞间粘附、淋巴细胞信号传导、细胞毒性和由细胞毒性T淋巴细胞(CTL)和NK细胞介导的淋巴因子分泌的受体。DAP10(也称为HCST)是跨膜衔接蛋白，其与KLRK1缔合，以在淋巴和髓样细胞中形成活化受体KLRK1-HCST；该受体在触发针对表达细胞表面配体(例如MHC I类链相关MICA和MICB以及U(任选地L1)6结合蛋白(ULBP))的靶细胞的细胞毒性中起主要作用；其KLRK1-HCST受体在针对肿瘤的免疫监视中起作用并且是肿瘤细胞的细胞溶解所必需的；实际上，不表达KLRK1配体的黑色素瘤细胞会逃脱由NK细胞介导的免疫监视。CD16是IgG Fc区的受体，其结合复合或聚集的IgG以及单体IgG，从而介导抗体依赖性细胞的细胞毒性(ADCC)和其他抗体依赖性应答，例如吞噬作用。
本发明尤其提供了抗体分子，例如，多特异性(例如，双特异性、三特异性、四特异性)或多功能性分子，其被工程化以含有介导NK细胞的结合和/或活化的一种或多种NK细胞接合物。因此，在一些实施方案中，NK细胞接合物选自抗原结合结构域或配体，其结合(例如，活化)：NKp30、NKp40、NKp44、NKp46、NKG2D、DNAM1、DAP10、CD16(例如，CD16a、CD16b或两者)、CRTAM、CD27、PSGL1、CD96、CD100(SEMA4D)、NKp80、CD244(也称为SLAMF4或2B4)、SLAMF6、SLAMF7、KIR2DS2、KIR2DS4、KIR3DS1、KIR2DS3、KIR2DS5、KIR2DS1、CD94、NKG2C、NKG2E或CD160。
在一些实施方案中，NK细胞接合物是与NKp30(例如，NK细胞表面上存在(例如，表达或展示)的NKp30)结合的抗原结合结构域，并且包含表7-10中公开的任何CDR氨基酸序列、框架区(FWR)氨基酸序列或可变区氨基酸序列。在一些实施方案中，NK细胞接合物是与NKp30(例如，NK细胞表面上存在(例如，表达或展示)的NKp30)结合的抗原结合结构域，并且包含美国专利第6,979,546号、美国专利第9,447,185号、PCT申请第WO2015121383A1号、PCT申请第WO2016110468A1号、PCT申请第WO2004056392A1号或美国申请公布第US20070231322A1号中公开的任何CDR氨基酸序列、框架区(FWR)氨基酸序列或可变区氨基酸序列，这些序列在此通过引用并入。在一些实施方案中，NK细胞接合物(例如，与NKp30结合的抗原结合结构域)与NK细胞的结合活化NK细胞。与NKp30(例如，NK细胞表面上存在(例如，表达或展示)的NKp30)结合的抗原结合结构域可被称为靶向NKp30、NK细胞或两者。
在一些实施方案中，与NKp30结合的抗原结合结构域包含表7、表18或表8中公开的一个或多个CDR(例如，VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和/或VLCDR3)，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。在一些实施方案中，与NKp30结合的抗原结合结构域包含表7、表18或表8中公开的一个或多个框架区(例如，VHFWR1、VHFWR2、VHFWR3、VHFWR4、VLFWR1、VLFWR2、VLFWR3和/或VLFWR4)，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。在一些实施方案中，与NKp30结合的抗原结合结构域包含表9中公开的VH和/或VL，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。在一些实施方案中，表9中公开的VH结构域中的任一个可与表9中公开的VL结构域中的任一个配对，以形成与NKp30结合的抗原结合结构域。在一些实施方案中，与NKp30结合的抗原结合结构域包含表10中公开的氨基酸序列，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。
在一些实施方案中，与NKP30结合的抗原结合结构域包含表8A和/或8B中公开的一个或多个CDR(例如，VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和/或VLCDR3)，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。在一些实施方案中，与NKP30结合的抗原结合结构域包含表8A和/或8B中公开的一个或多个框架区(例如，VHFWR1、VHFWR2、VHFWR3、VHFWR4、VLFWR1、VLFWR2、VLFWR3和/或VLFWR4)，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。在一些实施方案中，与NKP30结合的抗原结合结构域包含表9中公开的VH和/或VL，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。
在一些实施方案中，与NKp30结合的抗原结合结构域包含VH和VL，该VH包含重链互补决定区1(VHCDR1)、VHCDR2和VHCDR3，该VL包含轻链互补决定区1(VLCDR1)、VLCDR2和VLCDR3。
在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ ID NO:7313、6001和7315的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ ID NO:7313、6001和6002的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ ID NO:7313、6008和6009的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ IDNO:7313、7385和7315的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ ID NO:7313、7318和6009的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。
在一些实施方案中，VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:7326、7327和7329的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:6063、6064和7293的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:6070、6071和6072的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ IDNO:6070、6064和7321的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。
在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:7313、6001、7315、7326、7327和7329的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:7313、6001、6002、6063、6064和7293的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:7313、6008、6009、6070、6071和6072的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:7313、7385、7315、6070、6064和7321的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:7313、7318、6009、6070、6064和7321的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。
在一些实施方案中，VH包含选自SEQ ID NO:7298或7300-7304的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)，和/或VL包含选自SEQ ID NO:7299或7305-7309的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7302和7305的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7302和7309的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。
在一些实施方案中，VH包含选自SEQ ID NO:6121或6123-6128的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)，和/或VL包含选自SEQ ID NO:7294或6137-6141的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH包含选自SEQ ID NO:6122或6129-6134的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)，和/或VL包含选自SEQ ID NO:6136或6142-6147的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7295和7296的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7297和7296的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:6122和6136的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。
在一些实施方案中，与NKp30结合的抗原结合结构域包含SEQ ID NO:7310的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，与NKp30结合的抗原结合结构域包含SEQ ID NO:7311的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，与NKp30结合的抗原结合结构域包含SEQ ID NO:6187、6188、6189或6190的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6000的重链互补决定区1(VHCDR1)氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6001的VHCDR2氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6002的VHCDR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)。在一些实施方案中，NKp30抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6000的VHCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:6001的VHCDR2氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6002的VHCDR3氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6063的轻链互补决定区1(VLCDR1)氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6064的VLCDR2氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:7293的VLCDR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)。在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6063的VLCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:6064的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:7293的VLCDR3氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH和VL，该VH包含SEQ IDNO:6000的重链互补决定区1(VHCDR1)氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6001的VHCDR2氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6002的VHCDR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，该VL包含SEQ ID NO:6063的轻链互补决定区1(VLCDR1)氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6064的VLCDR2氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:7293的VLCDR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)。在一些实施方案中，NKp30抗原结合结构域包含VH和VL，该VH包含SEQ ID NO:6000的VHCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:6001的VHCDR2氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6002的VHCDR3氨基酸序列，该VL包含SEQ ID NO:6063的VLCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:6064的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:7293的VLCDR3氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6007的重链互补决定区1(VHCDR1)氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6008的VHCDR2氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6009的VHCDR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)。在一些实施方案中，NKp30抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6007的VHCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:6008的VHCDR2氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6009的VHCDR3氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6070的轻链互补决定区1(VLCDR1)氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6071的VLCDR2氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6072的VLCDR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)。在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6070的VLCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:6071的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:6072的VLCDR3氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH和VL，该VH包含SEQ IDNO:6007的重链互补决定区1(VHCDR1)氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6008的VHCDR2氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6009的VHCDR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，该VL包含SEQ ID NO:6070的轻链互补决定区1(VLCDR1)氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6071的VLCDR2氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6072的VLCDR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)。在一些实施方案中，NKp30抗原结合结构域包含VH和VL，该VH包含SEQ ID NO:6007的VHCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:6008的VHCDR2氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6009的VHCDR3氨基酸序列，该VL包含SEQ ID NO:6070的VLCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:6071的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:6072的VLCDR3氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6003的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6004的VHFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:6005的VHFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6006的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6066的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6067的VLFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:7292的VLFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6069的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH和VL，该VH包含SEQ IDNO:6003的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6004的VHFWR2氨基酸序列、SEQID NO:6005的VHFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6006的VHFWR4氨基酸序列，该VL包含SEQ ID NO:6066的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6067的VLFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:7292的VLFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6069的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6003的VHFWR1氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6004的VHFWR2氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6005的VHFWR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQID NO:6006的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6066的VLFWR1氨基酸序列(或具有不多于1、2或3个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6067的VLFWR2氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:7292的VLFWR3氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6069的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH和VL，该VH包含SEQ IDNO:6003的VHFWR1氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6004的VHFWR2氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6005的VHFWR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6006的VHFWR4氨基酸序列，该VL包含SEQ ID NO:6066的VLFWR1氨基酸序列(或具有不多于1、2或3个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6067的VLFWR2氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:7292的VLFWR3氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ IDNO:6069的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6010的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6011的VHFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:6012的VHFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6013的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6073的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ IDNO:6074的VLFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:6075的VLFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6076的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH和VL，该VH包含SEQ IDNO:6010的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6011的VHFWR2氨基酸序列、SEQID NO:6012的VHFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6013的VHFWR4氨基酸序列，该VL包含SEQ ID NO:6073的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6074的VLFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6075的VLFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6076的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6010的VHFWR1氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6011的VHFWR2氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6012的VHFWR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQID NO:6013的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6073的VLFWR1氨基酸序列(或具有不多于1、2或3个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6074的VLFWR2氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6075的VLFWR3氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6076的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH和VL，该VH包含SEQ IDNO:6010的VHFWR1氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6011的VHFWR2氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6012的VHFWR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6013的VHFWR4氨基酸序列，该VL包含SEQ ID NO:6073的VLFWR1氨基酸序列(或具有不多于1、2或3个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6074的VLFWR2氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6075的VLFWR3氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ IDNO:6076的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6014的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6015的VHFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:6016的VHFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6017的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6014的VHFWR1氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6015的VHFWR2氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6016的VHFWR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQID NO:6017的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6077的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6078的VLFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:6079的VLFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6080的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6077的VLFWR1氨基酸序列(或具有不多于1、2或3个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6078的VLFWR2氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6079的VLFWR3氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6080的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6018的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6019的VHFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:6020的VHFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6021的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6018的VHFWR1氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6019的VHFWR2氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6020的VHFWR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQID NO:6021的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6081的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6082的VLFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:6083的VLFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6084的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6081的VLFWR1氨基酸序列(或具有不多于1、2或3个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6082的VLFWR2氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6083的VLFWR3氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6084的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6022的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6023的VHFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:6024的VHFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6025的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6022的VHFWR1氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6023的VHFWR2氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6024的VHFWR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQID NO:6025的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6085的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6086的VLFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:6087的VLFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6088的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6085的VLFWR1氨基酸序列(或具有不多于1、2或3个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6086的VLFWR2氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6087的VLFWR3氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6088的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6026的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6027的VHFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:6028的VHFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6029的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6026的VHFWR1氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6027的VHFWR2氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6028的VHFWR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQID NO:6029的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6089的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6090的VLFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:6091的VLFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6092的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6089的VLFWR1氨基酸序列(或具有不多于1、2或3个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6090的VLFWR2氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6091的VLFWR3氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6092的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6030的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6032的VHFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:6033的VHFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6034的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6030的VHFWR1氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6032的VHFWR2氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6033的VHFWR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQID NO:6034的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6093的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6094的VLFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:6095的VLFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6096的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6093的VLFWR1氨基酸序列(或具有不多于1、2或3个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6094的VLFWR2氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6095的VLFWR3氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6096的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6035的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6036的VHFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:6037的VHFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6038的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6035的VHFWR1氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6036的VHFWR2氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6037的VHFWR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQID NO:6038的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6039的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6040的VHFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:6041的VHFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6042的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6039的VHFWR1氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6040的VHFWR2氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6041的VHFWR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQID NO:6042的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6097的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6098的VLFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:6099的VLFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6100的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6097的VLFWR1氨基酸序列(或具有不多于1、2或3个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6098的VLFWR2氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6099的VLFWR3氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6100的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6043的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6044的VHFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:6045的VHFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6046的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6043的VHFWR1氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6044的VHFWR2氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6045的VHFWR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQID NO:6046的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6101的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6102的VLFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:6103的VLFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6104的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6101的VLFWR1氨基酸序列(或具有不多于1、2或3个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6102的VLFWR2氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6103的VLFWR3氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6104的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6047的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6048的VHFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:6049的VHFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6050的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6047的VHFWR1氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6048的VHFWR2氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6049的VHFWR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQID NO:6050的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6105的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6106的VLFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:6107的VLFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6108的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6105的VLFWR1氨基酸序列(或具有不多于1、2或3个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6106的VLFWR2氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6107的VLFWR3氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6108的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6051的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6052的VHFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:6053的VHFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6054的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6051的VHFWR1氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6052的VHFWR2氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6053的VHFWR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQID NO:6054的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6109的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6110的VLFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:6111的VLFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6112的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6109的VLFWR1氨基酸序列(或具有不多于1、2或3个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6110的VLFWR2氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6111的VLFWR3氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6112的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6055的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6056的VHFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:6057的VHFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6058的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6055的VHFWR1氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6056的VHFWR2氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6057的VHFWR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQID NO:6058的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6113的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6114的VLFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:6115的VLFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6116的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6113的VLFWR1氨基酸序列(或具有不多于1、2或3个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6114的VLFWR2氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6115的VLFWR3氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6116的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6059的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6060的VHFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:6061的VHFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6062的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6059的VHFWR1氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6060的VHFWR2氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6061的VHFWR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQID NO:6062的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6117的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6118的VLFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:6119的VLFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6120的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6117的VLFWR1氨基酸序列(或具有不多于1、2或3个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6118的VLFWR2氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6119的VLFWR3氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6120的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6148的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6148具有至少约77％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6149的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6149具有至少约77％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6150的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6150具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6148的氨基酸序列。在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6149的氨基酸序列。在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6150的氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH和VL，该VH包含SEQ IDNO:6148的氨基酸序列，该VL包含SEQ ID NO:6150的氨基酸序列。在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH和VL，该VH包含SEQ ID NO:6149的氨基酸序列，该VL包含SEQ IDNO:6150的氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6151的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6151具有至少约77％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6152的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6152具有至少约77％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6153的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6153具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6151的氨基酸序列。在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6152的氨基酸序列。在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6153的氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH和VL，该VH包含SEQ IDNO:6151的氨基酸序列，该VL包含SEQ ID NO:6153的氨基酸序列。在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH和VL，该VH包含SEQ ID NO:6152的氨基酸序列，该VL包含SEQ ID NO:6153的氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含scFv。在一些实施方案中，scFv包含选自SEQ ID NO:6187-6190的氨基酸序列，或与其具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列。
表7.NKp30靶向性抗原结合结构域的示例性重链CDR和FWR
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表18.NKp30靶向性抗原结合结构域的示例性重链CDR和FWR(根据Kabat编号方案)
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表8.NKp30靶向性抗原结合结构域的示例性轻链CDR和FWR
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表8A.NKp30靶向性抗原结合结构域的示例性重链CDR和FWR
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表8B.NKp30靶向性抗原结合结构域的示例性轻链CDR和FWR
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表9.NKp30靶向性抗原结合结构域的示例性可变区
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表10.示例性NKp30靶向性抗原结合结构域/抗体分子
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在一些实施方案中，NK细胞接合物是与NKp46(例如，NK细胞表面上存在(例如，表达或展示)的NKp46)结合的抗原结合结构域，并且包含表15中公开的任何CDR氨基酸序列、框架区(FWR)氨基酸序列或可变区氨基酸序列。在一些实施方案中，NK细胞接合物(例如，与NKp46结合的抗原结合结构域)与NK细胞的结合活化NK细胞。与NKp46(例如，NK细胞表面上存在(例如，表达或展示)的NKp46)结合的抗原结合结构域可被称为靶向NKp46、NK细胞或两者。
在一些实施方案中，NK细胞接合物是与NKG2D(例如，NK细胞表面上存在(例如，表达或展示)的NKG2D)结合的抗原结合结构域，并且包含表15中公开的任何CDR氨基酸序列、框架区(FWR)氨基酸序列或可变区氨基酸序列。在一些实施方案中，NK细胞接合物(例如，与NKG2D结合的抗原结合结构域)与NK细胞的结合活化NK细胞。与NKG2D(例如，NK细胞表面上存在(例如，表达或展示)的NKG2D)结合的抗原结合结构域可被称为靶向NKG2D、NK细胞或两者。
在一些实施方案中，NK细胞接合物是与CD16(例如，NK细胞表面上存在(例如，表达或展示)的CD16)结合的抗原结合结构域，并且包含表15中公开的任何CDR氨基酸序列、框架区(FWR)氨基酸序列或可变区氨基酸序列。在一些实施方案中，NK细胞接合物(例如，与CD16结合的抗原结合结构域)与NK细胞的结合活化NK细胞。与CD16(例如，NK细胞表面上存在(例如，表达或展示)的CD16)结合的抗原结合结构域可被称为靶向CD16、NK细胞或两者。
表15.NKp46、NKG2D或CD16靶向性抗原结合结构域的示例性可变区
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在一个实施方案中，NK细胞接合物是NKp30的配体，例如，是B7-6，例如，包含以下氨基酸序列：
DLKVEMMAGGTQITPLNDNVTIFCNIFYSQPLNITSMGITWFWKSLTFDKEVKVFEFFGDHQEAFRPGAIVSPWRLKSGDASLRLPGIQLEEAGEYRCEVVVTPLKAQGTVQLEVVASPASRLLLDQVGMKENEDKYMCESSGFYPEAINITWEKQTQKFPHPIEISEDVITGPTIKNMDGTFNVTSCLKLNSSQEDPGTVYQCVVRHASLHTPLRSNFTLTAARHSLSETEKTDNFS(SEQ ID NO:7233)、其片段，或与其基本上相同(例如，与其95％至99.9％相同，或对于SEQ ID NO:7233的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不多于五个、十个或十五个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代))的氨基酸序列。
在一些实施方案中，NK细胞接合物是NKp44或NKp46的配体，其是病毒HA。病毒血凝素(HA)是病毒表面上的糖蛋白。HA蛋白允许病毒经由唾液酸糖部分结合至细胞膜，这有助于病毒膜与细胞膜的融合(参见例如，Eur J Immunol.2001年9月；31(9):2680-9“Recognition of viral hemagglutinins by NKp44 but not by NKp30”；和Nature.2001年2月22日；409(6823):1055-60“Recognition of haemagglutinins on virus-infectedcells by NKp46 activates lysis by human NK cells”，其中每一个的内容通过引用并入本文)。
在其他实施方案中，NK细胞接合物是NKG2D的配体，选自MICA、MICB或ULBP1，例如，其中：
(i)MICA包含以下氨基酸序列：
EPHSLRYNLTVLSWDGSVQSGFLTEVHLDGQPFLRCDRQKCRAKPQ
GQWAEDVLGNKTWDRETRDLTGNGKDLRMTLAHIKDQKEGLHSLQ
EIRVCEIHEDNSTRSSQHFYYDGELFLSQNLETKEWTMPQSSRAQTLA
MNVRNFLKEDAMKTKTHYHAMHADCLQELRRYLKSGVVLRRTVPP
MVNVTRSEASEGNITVTCRASGFYPWNITLSWRQDGVSLSHDTQQW
GDVLPDGNGTYQTWVATRICQGEEQRFTCYMEHSGNHSTHPVPSGKVLVLQSHW(SEQ ID NO:7234)、其片段，或与其基本上相同(例如，与其95％至99.9％相同，或对于SEQ ID NO:7234的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不多于五个、十个或十五个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代))的氨基酸序列；
(ii)MICB包含以下氨基酸序列：
AEPHSLRYNLMVLSQDESVQSGFLAEGHLDGQPFLRYDRQKRRAKP
QGQWAEDVLGAKTWDTETEDLTENGQDLRRTLTHIKDQKGGLHSL
QEIRVCEIHEDSSTRGSRHFYYDGELFLSQNLETQESTVPQSSRAQTL
AMNVTNFWKEDAMKTKTHYRAMQADCLQKLQRYLKSGVAIRRTV
PPMVNVTCSEVSEGNITVTCRASSFYPRNITLTWRQDGVSLSHNTQQ
WGDVLPDGNGTYQTWVATRIRQGEEQRFTCYMEHSGNHGTHPVPSGKVLVLQSQRTD(SEQ ID NO:7235)、其片段，或与其基本上相同(例如，与其95％至99.9％相同，或对于SEQ ID NO:7235的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不多于五个、十个或十五个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代))的氨基酸序列；或
(iii)ULBP1包含以下氨基酸序列：
GWVDTHCLCYDFIITPKSRPEPQWCEVQGLVDERPFLHYDCVNHKA
KAFASLGKKVNVTKTWEEQTETLRDVVDFLKGQLLDIQVENLIPIEP
LTLQARMSCEHEAHGHGRGSWQFLFNGQKFLLFDSNNRKWTALHP
GAKKMTEKWEKNRDVTMFFQKISLGDCKMWLEEFLMYWEQMLDPTKPPSLAPG(SEQ ID NO:7236)、其片段，或与其基本上相同(例如，与其95％至99.9％相同，或对于SEQ ID NO:7236的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不多于五个、十个或十五个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代))的氨基酸序列。
在其他实施方案中，NK细胞接合物是DNAM1的配体，选自NECTIN2或NECL5，例如，其中：
(i)NECTIN2包含以下氨基酸序列：
QDVRVQVLPEVRGQLGGTVELPCHLLPPVPGLYISLVTWQRPDAPAN
HQNVAAFHPKMGPSFPSPKPGSERLSFVSAKQSTGQDTEAELQDATL
ALHGLTVEDEGNYTCEFATFPKGSVRGMTWLRVIAKPKNQAEAQKV
TFSQDPTTVALCISKEGRPPARISWLSSLDWEAKETQVSGTLAGTVTV
TSRFTLVPSGRADGVTVTCKVEHESFEEPALIPVTLSVRYPPEVSISGY
DDNWYLGRTDATLSCDVRSNPEPTGYDWSTTSGTFPTSAVAQGSQL
VIHAVDSLFNTTFVCTVTNAVGMGRAEQVIFVRETPNTAGAGATGG(SEQ ID NO:7237)、其片段，或与其基本上相同(例如，与其95％至99.9％相同，或对于SEQ ID NO:7237的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不多于五个、十个或十五个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代))的氨基酸序列；或
(ii)NECL5包含以下氨基酸序列：
WPPPGTGDVVVQAPTQVPGFLGDSVTLPCYLQVPNMEVTHVSQLTW
ARHGESGSMAVFHQTQGPSYSESKRLEFVAARLGAELRNASLRMFG
LRVEDEGNYTCLFVTFPQGSRSVDIWLRVLAKPQNTAEVQKVQLTG
EPVPMARCVSTGGRPPAQITWHSDLGGMPNTSQVPGFLSGTVTVTSL
WILVPSSQVDGKNVTCKVEHESFEKPQLLTVNLTVYYPPEVSISGYD
NNWYLGQNEATLTCDARSNPEPTGYNWSTTMGPLPPFAVAQGAQL
LIRPVDKPINTTLICNVTNALGARQAELTVQVKEGPPSEHSGISRN(SEQ ID NO:7238)、其片段，或与其基本上相同(例如，与其95％至99.9％相同，或对于SEQ ID NO:7238的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不多于五个、十个或十五个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代))的氨基酸序列。
在其他实施方案中，NK细胞接合物是DAP10的配体，其是NKG2D的衔接子(参见例如，Proc Natl Acad Sci U S A.2005年5月24日；102(21):7641-7646；和Blood，2011年9月15日，第118卷，第11期，其中每一个的全部内容通过引用并入本文)。
在其他实施方案中，NK细胞接合物是CD16的配体，其是CD16a/b配体，例如，进一步包含抗体Fc区的CD16a/b配体(参见例如，Front Immunol.2013；4:76讨论的抗体如何使用Fc通过CD16触发NK细胞，其全部内容并入本文)。
在其他实施方案中，NK细胞接合物是CRTAM的配体，其是NECL2，例如，其中NECL2包含以下氨基酸序列：QNLFTKDVTVIEGEVATISCQVNKSDDSVIQLLNPNRQTIYFRDFRPLKDSRFQLLNFSSSELKVSLTNVSISDEGRYFCQLYTDPPQESYTTITVLVPPRNLMIDIQKDTAVEGEEIEVNCTAMASKPATTIRWFKGNTELKGKSEVEEWSDMYTVTSQLMLKVHKEDDGVPVICQVEHPAVTGNLQTQRYLEVQYKPQVHIQMTYPLQGLTREGDALELTCEAIGKPQPVMVTWVRVDDEMPQHAVLSGPNLFINNLNKTDNGTYRCEASNIVGKAHSDYMLYVYDPPTTIPPPTTTTTTTTTTTTTILTIITDSRAGEEGSIRAVDH(SEQ ID NO:7239)、其片段，或与其基本上相同(例如，与其95％至99.9％相同，或对于SEQ ID NO:7239的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不多于五个、十个或十五个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代))的氨基酸序列。
在其他实施方案中，NK细胞接合物是CD27的配体，其是CD70，例如，其中CD70包含以下氨基酸序列：QRFAQAQQQLPLESLGWDVAELQLNHTGPQQDPRLYWQGGPALGRSFLHGPELDKGQLRIHRDGIYMVHIQVTLAICSSTTASRHHPTTLAVGICSPASRSISLLRLSFHQGCTIASQRLTPLARGDTLCTNLTGTLLPSRNTDETFFGVQWVRP(SEQ ID NO:7240)、其片段，或与其基本上相同(例如，与其95％至99.9％相同，或对于SEQ ID NO:7240的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不多于五个、十个或十五个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代))的氨基酸序列。
在其他实施方案中，NK细胞接合物是PSGL1的配体，其是L-选择素(CD62L)，例如，其中L-选择素包含以下氨基酸序列：WTYHYSEKPMNWQRARRFCRDNYTDLVAIQNKAEIEYLEKTLPFSRSYYWIGIRKIGGIWTWVGTNKSLTEEAENWGDGEPNNKKNKEDCVEIYIKRNKDAGKWNDDACHKLKAALCYTASCQPWSCSGHGECVEIINNYTCNCDVGYYGPQCQFVIQCEPLEAPELGTMDCTHPLGNFSFSSQCAFSCSEGTNLTGIEETTCGPFGNWSSPEPTCQVIQCEPLSAPDLGIMNCSHPLASFSFTSACTFICSEGTELIGKKKTICESSGIWSNPSPICQKLDKSFSMIKEGDYN(SEQ ID NO:7241)、其片段，或与其基本上相同(例如，与其95％至99.9％相同，或对于SEQ ID NO:7241的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不多于五个、十个或十五个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代))的氨基酸序列。
在其他实施方案中，NK细胞接合物是CD96的配体，其是NECL5，例如，其中NECL5包含以下氨基酸序列：WPPPGTGDVVVQAPTQVPGFLGDSVTLPCYLQVPNMEVTHVSQLTWARHGESGSMAVFHQTQGPSYSESKRLEFVAARLGAELRNASLRMFGLRVEDEGNYTCLFVTFPQGSRSVDIWLRVLAKPQNTAEVQKVQLTGEPVPMARCVSTGGRPPAQITWHSDLGGMPNTSQVPGFLSGTVTVTSLWILVPSSQVDGKNVTCKVEHESFEKPQLLTVNLTVYYPPEVSISGYDNNWYLGQNEATLTCDARSNPEPTGYNWSTTMGPLPPFAVAQGAQLLIRPVDKPINTTLICNVTNALGARQAELTVQVKEGPPSEHSGISRN(SEQ ID NO:7238)、其片段，或与其基本上相同(例如，与其95％至99.9％相同，或对于SEQ ID NO:7238的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不多于五个、十个或十五个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代))的氨基酸序列。
在其他实施方案中，NK细胞接合物是CD100(SEMA4D)的配体，其是CD72，例如，其中CD72包含以下氨基酸序列：RYLQVSQQLQQTNRVLEVTNSSLRQQLRLKITQLGQSAEDLQGSRRELAQSQEALQVEQRAHQAAEGQLQACQADRQKTKETLQSEEQQRRALEQKLSNMENRLKPFFTCGSADTCCPSGWIMHQKSCFYISLTSKNWQESQKQCETLSSKLATFSEIYPQSHSYYFLNSLLPNGGSGNSYWTGLSSNKDWKLTDDTQRTRTYAQSSKCNKVHKTWSWWTLESESCRSSLPYICEMTAFRFPD(SEQ ID NO:7242)、其片段，或与其基本上相同(例如，与其95％至99.9％相同，或对于SEQ ID NO:7242的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不多于五个、十个或十五个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代))的氨基酸序列。
在其他实施方案中，NK细胞接合物是NKp80的配体，其是CLEC2B(AICL)，例如，其中CLEC2B(AICL)包含以下氨基酸序列：KLTRDSQSLCPYDWIGFQNKCYYFSKEEGDWNSSKYNCSTQHADLTI IDNIEEMNFLRRYKCSSDHWIGLKMAKNRTGQWVDGATFTKSFGMRGSEGCAYLSDDGAATARCYTERKWICRKRIH(SEQ ID NO:7243)、其片段，或与其基本上相同(例如，与其95％至99.9％相同，或对于SEQ ID NO:7243的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不多于五个、十个或十五个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代))的氨基酸序列。
在其他实施方案中，NK细胞接合物是CD244的配体，其是CD48，例如，其中CD48包含以下氨基酸序列：QGHLVHMTVVSGSNVTLNISESLPENYKQLTWFYTFDQKIVEWDSRKSKYFESKFKGRVRLDPQSGALYISKVQKEDNSTYIMRVLKKTGNEQEWKIKLQVLDPVPKPVIKIEKIEDMDDNCYLKLSCVIPGESVNYTWYGDKRPFPKELQNSVLETTLMPHNYSRCYTCQVSNSVSSKNGTVCLSPPCTLARS(SEQ ID NO:7244)、其片段，或与其基本上相同(例如，与其95％至99.9％相同，或对于SEQ ID NO:7244的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不多于五个、十个或十五个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代))的氨基酸序列。
在一些实施方案中，NK细胞接合物是病毒血凝素(HA)，HA是存在于流感病毒表面上的糖蛋白。它负责将病毒结合至在膜上具有唾液酸的细胞，例如上呼吸道中的细胞或红细胞。HA具有至少18种不同的抗原。这些亚型被命名为H1至H18。NCR可以识别病毒蛋白。NKp46已显示出能够与流感的HA和副粘病毒(包括仙台病毒和新城疫病毒)的HA-NA相互作用。除NKp46以外，NKp44也可以与不同流感亚型的HA功能上相互作用。
抗体分子
在实施方案中，抗NKp30抗体分子是单特异性抗体分子并结合NKp30上的单个表位。例如，具有多个免疫球蛋白可变结构域序列的单特异性抗体分子，免疫球蛋白可变结构域序列中的每一个结合同一表位。
在另一实施方案中，抗NKp30抗体分子是多特异性或多功能性抗体分子，例如，其包含多个免疫球蛋白可变结构域序列，其中多个中的第一免疫球蛋白可变结构域序列对第一表位具有结合特异性，多个中的第二免疫球蛋白可变结构域序列对第二表位具有结合特异性。在实施方案中，第一和第二表位在同一抗原(例如，同一蛋白质(或多聚体蛋白质的亚基))上。在实施方案中，第一和第二表位重叠。在实施方案中，第一和第二表位不重叠。在实施方案中，第一和第二表位在不同抗原(例如，不同蛋白质(或多聚体蛋白质的不同亚基))上。在实施方案中，多特异性抗体分子包含第三、第四或第五免疫球蛋白可变结构域。在实施方案中，多特异性抗体分子是双特异性抗体分子、三特异性抗体分子或四特异性抗体分子。
在实施方案中，多特异性抗体分子是双特异性抗体分子。双特异性抗体对不多于两种抗原具有特异性。双特异性抗体分子的特征在于对第一表位具有结合特异性的第一免疫球蛋白可变结构域序列和对第二表位具有结合特异性的第二免疫球蛋白可变结构域序列。在实施方案中，第一和第二表位在同一抗原(例如，同一蛋白质(或多聚体蛋白质的亚基))上。在实施方案中，第一和第二表位重叠。在实施方案中，第一和第二表位不重叠。在实施方案中，第一和第二表位在不同抗原(例如，不同蛋白质(或多聚体蛋白质的不同亚基))上。在实施方案中，双特异性抗体分子包含对第一表位具有结合特异性的重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，以及对第二表位具有结合特异性的重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列。在实施方案中，双特异性抗体分子包含对第一表位具有结合特异性的半抗体和对第二表位具有结合特异性的半抗体。在实施方案中，双特异性抗体分子包含对第一表位具有结合特异性的半抗体或其片段，以及对第二表位具有结合特异性的半抗体或其片段。在实施方案中，双特异性抗体分子包含对第一表位具有结合特异性的scFv或Fab或其片段，以及对第二表位具有结合特异性的scFv或Fab或其片段。
在实施方案中，抗体分子包含双抗体和单链分子，以及抗体的抗原结合片段(例如，Fab、F(ab’)2和Fv)。例如，抗体分子可以包括重(H)链可变结构域序列(本文缩写为VH)和轻(L)链可变结构域序列(本文缩写为VL)。在实施方案中，抗体分子包含一个重链和一个轻链或由一个重链和一个轻链组成(本文称为半抗体)。在另一实例中，抗体分子包括两个重(H)链可变结构域序列和两个轻(L)链可变结构域序列，从而形成两个抗原结合位点，例如Fab、Fab’、F(ab’)2、Fc、Fd、Fd’、Fv、单链抗体(例如scFv)、单可变结构域抗体、双抗体(Dab)(二价和双特异性)和嵌合(例如，人源化)抗体，其可通过修饰整个抗体或使用重组DNA技术从头合成的那些抗体来产生。这些功能性抗体片段保留了与它们相应抗原或受体选择性地结合的能力。抗体和抗体片段可以来自任何类型的抗体，包括但不限于IgG、IgA、IgM、IgD和IgE，以及来自任何亚类(例如，IgG1、IgG2、IgG3和IgG4)的抗体。抗体分子的制剂可以是单克隆或多克隆的。抗体分子也可以是人、人源化、CDR移植或体外生成的抗体。抗体可以具有重链恒定区，选自例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。抗体还可以具有轻链，选自例如κ或λ。术语“免疫球蛋白”(Ig)在本文中可与术语“抗体”互换使用。
抗体分子的抗原结合片段的实例包括：(i)Fab片段，由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；(ii)F(ab’)2片段，包含通过铰链区的二硫键连接的两个Fab片段的二价片段；(iii)由VH和CH1结构域组成的Fd片段；(iv)由抗体单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段，(v)由VH结构域组成的双抗体(dAb)片段；(vi)骆驼科或骆驼源化可变结构域；(vii)单链Fv(scFv)，参见例如，Bird等,(1988)Science 242:423-426；和Huston等,(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-5883)；(viii)单结构域抗体。使用本领域技术人员已知的常规技术来获得这些抗体片段，并以与完整抗体相同的方式筛选片段的效用。
抗体分子包括完整分子以及其功能性片段。抗体分子的恒定区可以被改变(例如，突变)，以修改抗体的特性(例如，增加或减少以下中的一种或多种：Fc受体结合、抗体糖基化、半胱氨酸残基数量、效应细胞功能或补体功能)。
抗体分子也可以是单结构域抗体。单结构域抗体可以包括其互补决定区是单结构域多肽的一部分的抗体。实例包括但不限于重链抗体、天然无轻链的抗体、来源于常规4-链抗体的单结构域抗体、工程化抗体和除来源于抗体的那些以外的单结构域支架。单结构域抗体可以是本领域中的任一种，或任何未来的单结构域抗体。单结构域抗体可来源于任何物种，包括但不限于小鼠、人、骆驼、美洲驼、鱼、鲨鱼、山羊、兔和牛。根据本发明的另一方面，单结构域抗体是天然存在的单结构域抗体，称为无轻链的重链抗体。例如，这种单结构域抗体公开于WO9404678中。为清楚起见，这种来源于天然无轻链的重链抗体的可变结构域在本文中称为VHH或纳米抗体，以将其与四条链免疫球蛋白的常规VH区分开。这种VHH分子可以来源于骆驼科物种(例如骆驼、美洲驼、单峰驼、羊驼和原驼)中产生的抗体。除骆驼科以外的其他物种可能会产生天然无轻链的重链抗体；这种VHH在本发明的范围内。
VH和VL区可以细分为高变区，称为“互补决定区”(CDR)，中间散布着更保守的区域，称为“框架区”(FR或FW)。
框架区和CDR的范围已通过许多方法精确地定义(参见，Kabat,E.A.,等,(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,U.S.Department ofHealth and Human Services,NIH公布第91-3242号；Chothia,C.等,(1987)J.Mol.Biol.196:901-917；以及由Oxford Molecular的AbM抗体建模软件使用的AbM定义。通常参见例如，Antibody Engineering Lab Manual中的Protein Sequence andStructure Analysis of Antibody Variable Domains.(编著：Duebel,S.和Kontermann,R.,Springer-Verlag,Heidelberg)。
如本文所用，术语“互补决定区”和“CDR”是指抗体可变区内赋予抗原特异性和结合亲和力的氨基酸序列。通常，在每个重链可变区中存在三个CDR(HCDR1、HCDR2、HCDR3)，并且在每个轻链可变区中存在三个CDR(LCDR1、LCDR2、LCDR3)。
给定CDR的精确氨基酸序列边界可使用许多已知方案中的任一种来确定，包括Kabat等,(1991),“Sequences of Proteins of Immunological Interest,”第5版，PublicHealth Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD(“Kabat”编号方案)、Al-Lazikani等,(1997)JMB 273,927-948(“Chothia”编号方案)描述的那些。如本文所用，根据“Chothia”编号方案定义的CDR有时也称为“高变环”。
例如，在Kabat下，重链可变结构域(VH)中的CDR氨基酸残基编号为31-35(HCDR1)、50-65(HCDR2)和95-102(HCDR3)；并且轻链可变结构域(VL)中的CDR氨基酸残基编号为24-34(LCDR1)、50-56(LCDR2)和89-97(LCDR3)。在Chothia下，VH中的CDR氨基酸编号为26-32(HCDR1)、52-56(HCDR2)和95-102(HCDR3)；并且VL中的氨基酸残基编号为26-32(LCDR1)、50-52(LCDR2)和91-96(LCDR3)。
每个VH和VL通常包括三个CDR和四个FR，从氨基末端至羧基末端按以下顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。
抗体分子可以是多克隆或单克隆抗体。
如本文所用，术语“单克隆抗体”或“单克隆抗体组合物”是指单分子组成的抗体分子的制剂。单克隆抗体组合物展示出对特定表位的单一结合特异性和亲和力。单克隆抗体可以通过杂交瘤技术或通过不使用杂交瘤技术的方法(例如，重组方法)制备。
抗体可以重组产生，例如，通过噬菌体展示或通过组合方法产生。
用于生成抗体的噬菌体展示和组合方法是本领域已知的(如例如，Ladner等,美国专利第5,223,409号；Kang等,国际公布WO92/18619号；Dower等,国际公布第WO91/17271号；Winter等,国际公布第WO92/20791号；Markland等,国际公布第WO92/15679号；Breitling等,国际公布第WO93/01288号；McCafferty等,国际公布第WO92/01047号；Garrard等,国际公布第WO92/09690号；Ladner等,国际公布第WO90/02809号；Fuchs等,(1991)Bio/Technology 9:1370-1372；Hay等,(1992)Hum Antibod Hybridomas 3:81-85；Huse等,(1989)Science 246:1275-1281；Griffths等,(1993)EMBO J 12:725-734；Hawkins等,(1992)J Mol Biol226:889-896；Clackson等,(1991)Nature 352:624-628；Gram等,(1992)PNAS 89:3576-3580；Garrad等,(1991)Bio/Technology 9:1373-1377；Hoogenboom等,(1991)Nuc Acid Res 19:4133-4137；和Barbas等,(1991)PNAS 88:7978-7982中描述的，其全部内容通过引用并入本文)。
在一个实施方案中，抗体是完全人抗体(例如，在小鼠中制备的抗体，所述小鼠已被遗传工程化为从人免疫球蛋白序列产生抗体)，或非人抗体，例如，啮齿动物(小鼠或大鼠)、山羊、灵长类动物(例如，猴)、骆驼抗体。优选地，非人抗体是啮齿动物(小鼠或大鼠抗体)。产生啮齿动物抗体的方法是本领域已知的。
可以使用携带人免疫球蛋白基因而非小鼠系统的转基因小鼠来生成人单克隆抗体。用目的抗原免疫的这些转基因小鼠的脾细胞用于产生杂交瘤，该杂交瘤分泌对来自人蛋白质的表位具有特异性亲和力的人mAb(参见例如，Wood等,国际申请WO91/00906、Kucherlapati等,PCT申请WO91/10741；Lonberg等,国际申请WO92/03918；Kay等,国际申请92/03917；Lonberg,N.等,1994Nature 368:856-859；Green,L.L.等,1994Nature Genet.7:13-21；Morrison,S.L.等,1994Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81:6851-6855；Bruggeman等,1993Year Immunol 7:33-40；Tuaillon等,1993PNAS 90:3720-3724；Bruggeman等,1991EurJ Immunol 21:1323-1326)。
抗体分子可以是其中可变区或其一部分(例如，CDR)在非人生物体(例如，大鼠或小鼠)中生成的抗体分子。嵌合、CDR移植和人源化的抗体在本发明范围内。在非人生物体(例如，大鼠或小鼠)中生成，然后例如在可变框架或恒定区中修饰以降低人中抗原性的抗体分子在本发明范围内。
“有效人”蛋白质是基本上不引起中和抗体应答(例如，人抗鼠抗体(HAMA)应答)的蛋白质。HAMA在许多情况下可能是有问题的，例如，在例如在慢性或复发性疾病病况的治疗中如果重复施用抗体分子的话。HAMA应答可使重复的抗体施用可能无效，这是因为血清中的抗体清除率增加(参见例如，Saleh等,Cancer Immunol.Immunother.,32:180-190(1990))，并且还因为可能的过敏反应(参见例如，LoBuglio等,Hybridoma,5:5117-5123(1986))。
嵌合抗体可通过本领域已知的重组DNA技术产生(参见Robinson等,国际专利申请PCT/US86/02269；Akira,等,欧洲专利申请184,187；Taniguchi,M.,欧洲专利申请171,496；Morrison等,欧洲专利申请173,494；Neuberger等,国际申请WO86/01533；Cabilly等,美国专利第4,816,567号；Cabilly等,欧洲专利申请125,023；Better等,(1988Science 240:1041-1043)；Liu等,(1987)PNAS 84:3439-3443；Liu等,1987,J.Immunol.139:3521-3526；Sun等,(1987)PNAS 84:214-218；Nishimura等,1987,Canc.Res.47:999-1005；Wood等,(1985)Nature 314:446-449；和Shaw等,1988,J.Natl Cancer Inst.80:1553-1559)。
人源化或CDR移植抗体将具有(免疫球蛋白重链和/或轻链的)至少一个或两个但通常为所有三个受体CDR被供体CDR替代。抗体可被非人CDR的至少一部分替代，或者CDR中的仅一些可被非人CDR替代。仅需要替代与抗原结合所需数量的CDR。优选地，供体是啮齿动物抗体，例如，大鼠或小鼠抗体，受体将是人框架或人共有框架。通常，提供CDR的免疫球蛋白称为“供体”，提供框架的免疫球蛋白称为“受体”。在一个实施方案中，供体免疫球蛋白是非人(例如，啮齿动物)的。受体框架是天然存在的(例如，人)框架或共有框架，或与其约85％或更高，优选90％、95％、99％或更高相同的序列。
如本文所用，术语“共有序列”是指由相关序列家族中最频繁出现的氨基酸(或核苷酸)形成的序列(参见例如，Winnaker,From Genes to Clones(Verlagsgesellschaft,Weinheim,Germany 1987)。在蛋白质家族中，共有序列中的每个位置被该家族中该位置最频繁出现的氨基酸占据。如果两个氨基酸出现的频率相同，则任一个可以包括在共有序列中。“共有框架”是指共有免疫球蛋白序列中的框架区。
抗体分子可以通过本领域已知的方法人源化(参见例如，Morrison,S.L.,1985,Science 229:1202-1207、Oi等,1986,BioTechniques 4:214，以及Queen等,US 5,585,089、US 5,693,761和US 5,693,762，其全部内容在此通过引用并入)。
人源化或CDR移植的抗体分子可以通过CDR移植或CDR取代产生，其中免疫球蛋白链的一个、两个或所有CDR可以被替代。参见例如，美国专利5,225,539；Jones等,1986Nature 321:552-525；Verhoeyan等,1988Science 239:1534；Beidler等,1988J.Immunol.141:4053-4060；Winter US 5,225,539，其全部内容在此明确地通过引用并入。Winter描述了可用于制备本发明的人源化抗体的CDR移植方法(1987年3月26日提交的UK专利申请GB 2188638A；Winter US 5,225,539)，其内容明确地通过引用并入。
其中特定氨基酸已被取代、缺失或添加的人源化抗体分子也在本发明的范围内。在US 5,585,089(例如，US 5,585,089的第12-16栏，例如，US 5,585,089的第12-16栏)中描述了从供体中选择氨基酸的标准，其内容在此通过引用并入。1992年12月23日公布的Padlan等,EP 519596A1中描述了使抗体人源化的其他技术。
抗体分子可以是单链抗体。单链抗体(scFv)可以是工程化的(参见例如，Colcher,D.等,(1999)Ann N Y Acad Sci 880:263-80；和Reiter,Y.(1996)Clin Cancer Res 2:245-52)。单链抗体可以二聚化或多聚化，以生成对同一靶蛋白的不同表位具有特异性的多价抗体。
在另一些实施方案中，抗体分子具有重链恒定区，选自例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD和IgE的重链恒定区；特别地，选自例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的(例如，人)重链恒定区。在另一实施方案中，抗体分子具有轻链恒定区，选自例如κ或λ的(例如，人)轻链恒定区。恒定区可以被改变(例如，突变)，以修改抗体的特性(例如，增加或减少以下中的一种或多种：Fc受体结合、抗体糖基化、半胱氨酸残基数量、效应细胞功能和/或补体功能)。在一个实施方案中，抗体具有：效应功能；并且可以固定补体。在其他实施方案中，抗体不会：招募效应细胞；或固定补体。在另一实施方案中，抗体结合Fc受体的能力降低或无该能力。例如，它是不支持与Fc受体结合的同种型或亚型、片段或其他突变体，例如，它具有诱变的或缺失的Fc受体结合区。
改变抗体恒定区的方法是本领域已知的。具有功能改变(例如，对效应配体(例如细胞上的FcR)或补体的C1组分的亲和力改变)的抗体可以通过用不同残基替代抗体恒定部分中的至少一个氨基酸残基来产生(参见例如，EP 388,151A1、美国专利第5,624,821号和美国专利第5,648,260号，其全部内容在此通过引用并入)。可以描述相似类型的改变，如果将其施加至鼠或其他物种免疫球蛋白，将减少或消除这些功能。
抗体分子可以衍生化或与另一功能性分子(例如，另一肽或蛋白质)连接。如本文所用，“衍生化”抗体分子是已被修饰的抗体分子。衍生化方法包括但不限于添加荧光部分、放射性核苷酸、毒素、酶或亲和配体，例如生物素。因此，本发明的抗体分子旨在包括本文所述抗体(包括免疫粘附分子)的衍生化形式和其他修饰形式。例如，抗体分子可以功能性地连接(通过化学偶联、基因融合、非共价缔合或其他方式)至一个或多个其他分子实体，例如另一种抗体(例如，双特异性抗体或双抗体)、可检测剂、细胞毒性剂、药剂和/或可介导抗体或抗体部分与另一分子(例如链霉亲和素核心区或多组氨酸标签)缔合的蛋白质或肽。
一种类型的衍生化抗体分子通过将两个或更多个抗体(相同类型的或不同类型的，例如，以产生双特异性抗体)交联来产生。合适的交联剂包括具有由合适间隔区分开的两个明显反应性基团的异双功能性交联剂(例如，间马来酰亚胺苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯)或同双功能性交联剂(例如，辛二酸二琥珀酰亚胺酯)。这些接头可从PierceChemical Company,Rockford,Ill获得。
多特异性或多功能性抗体分子
本文定义的多特异性和多功能性分子的示例性结构在全文中描述。示例性结构进一步描述于：Weidle U等,(2013)The Intriguing Options of Multispecific AntibodyFormats for Treatment of Cancer.Cancer Genomics&Proteomics 10:1-18(2013)；和Spiess C等,(2015)Alternative molecular formats and therapeutic applicationsfor bispecific antibodies.Molecular Immunology 67:95-106；其中每一个的全部内容通过引用并入本文)。
在实施方案中，多特异性抗体分子可以包含多于一个抗原结合位点，其中不同位点对不同抗原具有特异性。在实施方案中，多特异性抗体分子可以结合同一抗原上的多于一个(例如，两个或更多个)表位。在实施方案中，多特异性抗体分子包含对靶细胞(例如，癌细胞)具有特异性的抗原结合位点和对免疫效应细胞具有特异性的不同抗原结合位点。在一个实施方案中，多特异性抗体分子是双特异性抗体分子。双特异性抗体分子可分为五个不同的结构组：(i)双特异性免疫球蛋白G(BsIgG)；(ii)附加有另外抗原结合部分的IgG；(iii)双特异性抗体片段；(iv)双特异性融合蛋白；以及(v)双特异性抗体缀合物。
BsIgG是对于每种抗原的单价形式。示例性BsIgG形式包括但不限于crossMab、DAF(二合一)、DAF(四合一)、DutaMab、DT-IgG、杵-臼共同LC、杵-臼组装件、电荷对、Fab臂交换、SEEDbody、triomab、LUZ-Y、Fcab、κλ-体、正交Fab。参见Spiess等,Mol.Immunol.67(2015):95-106。示例性BsIgG包括卡妥索单抗(Fresenius Biotech，Trion Pharma，Neopharm)，其含有抗-CD3臂和抗-EpCAM臂；以及厄妥索单抗(Neovii Biotech，Fresenius Biotech)，其靶向CD3和HER2。在一些实施方案中，BsIgG包含经工程化用于异源二聚化的重链。例如，可以使用“杵-臼”策略、SEED平台、共同重链(例如，在κλ-体内)和使用异源二聚体Fc区将重链工程化用于异源二聚化。参见Spiess等,Mol.Immunol.67(2015):95-106。已用于避免BsIgG中同源二聚体的重链配对的策略包括杵-臼、duobody、azymetric、电荷对、HA-TF、SEEDbody和差异蛋白A亲和力。参见同上。可以通过在不同宿主细胞中分开表达组分抗体并随后纯化/组装为BsIgG来产生BsIgG。也可以通过在单个宿主细胞中表达组分抗体来产生BsIgG。BsIgG可以使用亲和层析(例如，使用蛋白A和连续pH洗脱)来纯化。
附加有另外抗原结合部分的IgG是双特异性抗体分子的另一种形式。例如，通过将另外抗原结合单元附加至单特异性IgG上，例如，重链或轻链的N-或C-末端处，单特异性IgG可以被工程化为具有双特异性。示例性另外抗原结合单元包括单结构域抗体(例如，可变重链或可变轻链)、工程化蛋白质支架和成对的抗体可变结构域(例如，单链可变片段或可变片段)。参见同上。附加的IgG形式的实例包括双可变结构域IgG(DVD-Ig)、IgG(H)-scFv、scFv-(H)IgG、IgG(L)-scFv、scFv-(L)IgG、IgG(L,H)-Fv、IgG(H)-V、V(H)-IgG、IgG(L)-V、V(L)-IgG、KIH IgG-scFab、2scFv-IgG、IgG-2scFv、scFv4-Ig、zybody和DVI-IgG(四合一)。参见Spiess等,Mol.Immunol.67(2015):95-106。IgG-scFv的实例是MM-141(MerrimackPharmaceuticals)，其结合IGF-1R和HER3。DVD-Ig的实例包括ABT-981(AbbVie)，其结合IL-1α和IL-1β；以及ABT-122(AbbVie)，其结合TNF和IL-17A。
双特异性抗体片段(BsAb)是缺乏抗体恒定结构域中的一些或全部的双特异性抗体分子的形式。例如，一些BsAb缺乏Fc区。在实施方案中，双特异性抗体片段包括通过允许BsAb在单个宿主细胞中有效表达的肽接头连接的重链和轻链区。示例性双特异性抗体片段包括但不限于纳米抗体、纳米抗体-HAS、BiTE、双抗体、DART、TandAb、scDiabody、scDiabody-CH3、双抗体-CH3、三联体、微型抗体、微抗体(minibody)、TriBi微抗体、scFv-CH3 KIH、Fab-scFv、scFv-CH-CL-scFv、F(ab’)2、F(ab’)2-scFv2、scFv-KIH、Fab-scFv-Fc、四价HCAb、scDiabody-Fc、双抗体-Fc、串联scFv-Fc和内抗体(intrabody)。参见同上。例如，BiTE形式包含串联scFv，其中组分scFv与T细胞上的CD3和癌细胞上的表面抗原结合。
双特异性融合蛋白包括与其他蛋白质连接的抗体片段，例如，以增加另外的特异性和/或功能性。双特异性融合蛋白的实例是immTAC，其包含与识别HLA呈递肽的亲和力成熟T细胞受体连接的抗CD3 scFv。在实施方案中，对接-锁定(DNL)方法可用于生成更高化合价的双特异性抗体分子。此外，与白蛋白结合蛋白或人血清白蛋白的融合可以延长抗体片段的血清半衰期。参见同上。
在实施方案中，化学缀合(例如，抗体和/或抗体片段的化学缀合)可以用于产生BsAb分子。参见同上。示例性双特异性抗体缀合物包括CovX-体形式，其中低分子量药物位点特异性缀合至每个Fab臂或抗体或其片段中的单个反应性赖氨酸。在实施方案中，缀合改善了低分子量药物的血清半衰期。示例性CovX-体是CVX-241(NCT01004822)，其包含与抑制VEGF或Ang2的两个短肽缀合的抗体。参见同上。
抗体分子可以通过在宿主系统中例如至少一种或多种组分的重组表达来产生。示例性宿主系统包括真核细胞(例如，哺乳动物细胞，例如CHO细胞，或昆虫细胞，例如SF9或S2细胞)和原核细胞(例如，大肠杆菌)。双特异性抗体分子可以通过在不同宿主细胞中分开表达组分并随后纯化/组装来产生。可替代地，抗体分子可以通过在单个宿主细胞中表达组分来产生。双特异性抗体分子的纯化可以通过各种方法进行，例如亲和层析，例如，使用蛋白A和连续pH洗脱。在其他实施方案中，亲和标签可用于纯化，例如，含组氨酸的标签、myc标签或链霉亲和素标签。
CDR移植支架
在实施方案中，抗体分子是CDR移植支架结构域。在实施方案中，支架结构域基于纤连蛋白结构域，例如，III型纤连蛋白结构域。III型纤连蛋白(Fn3)结构域的总体折叠与最小功能性抗体片段(抗体重链的可变结构域)的总体折叠密切相关。Fn3末端存在三个环；BC、DE和FG环的位置大致对应于抗体VH结构域的CDR1、CDR2和CDR3的位置。Fn3不具有二硫键；因此，与抗体及其片段不同，Fn3在还原条件下是稳定的(参见例如，WO98/56915；WO01/64942；WO00/34784)。Fn3结构域可以修饰(例如，使用本文所述的CDR或高变环)或改变，例如，以选择与本文所述的抗原/标记物/细胞结合的结构域。
在实施方案中，支架结构域(例如，折叠结构域)基于抗体，例如，通过从单克隆抗体的重链可变结构域缺失三条β链产生的“微抗体”支架(参见例如，Tramontano等,1994,JMol.Recognit.7:9；和Martin等,1994,EMBO J.13:5303-5309)。“微抗体”可用于提供两个高变环。在实施方案中，支架结构域是V-样结构域(参见例如，Coia等,WO99/45110)或来源于tendamistatin的结构域，tendamistatin是通过两个二硫键保持在一起的74残基六链β折叠片夹心结构(参见例如，McConnell和Hoess,1995,JMol.Biol.250:460)。例如，tendamistatin的环可以修饰(例如，使用CDR或高变环)或改变，例如，以选择与本文所述的标记物/抗原/细胞结合的结构域。另一种示例性支架结构域是来源于CTLA-4胞外结构域的β-夹心结构(参见例如，WO00/60070)。
其他示例性支架结构域包括但不限于T细胞受体；MHC蛋白；胞外结构域(例如，III型纤连蛋白重复序列、EGF重复序列)；蛋白酶抑制剂(例如，Kunitz结构域、ecotin、BPTI等)；TPR重复序列；三叶草结构；锌指结构域；DNA结合蛋白；特别是单体DNA结合蛋白；RNA结合蛋白；酶，例如，蛋白酶(特别是灭活的蛋白酶)、RNA酶；伴侣蛋白，例如，硫氧还蛋白和热休克蛋白；以及胞内信号传导结构域(例如SH2和SH3结构域)。参见例如，US 20040009530和US 7,501,121，其通过引用并入本文。
在实施方案中，例如通过以下标准中的一个或多个评估和选择支架结构域：(1)氨基酸序列，(2)几个同源性结构域的序列，(3)三维结构，和/或(4)在pH、温度、盐度、有机溶剂、氧化剂浓度范围内的稳定性数据。在实施方案中，支架结构域是小的、稳定的蛋白质结构域，例如，少于100、70、50、40或30个氨基酸的蛋白质。结构域可包括一个或多个二硫键，或可螯合金属，例如，锌。
基于抗体的融合体
可以生成多种形式，其含有附接至抗体的N或C末端的另外结合实体。这些具有单链或二硫键稳定的Fv或Fab的融合体导致生成对每种抗原具有二价结合特异性的四价分子。scFv和scFab与IgG的组合使得能够产生可识别三种或更多种不同抗原的分子。
抗体-Fab融合体
抗体-Fab融合体是双特异性抗体，其包含第一靶的传统抗体和与抗体重链C末端融合的第二靶的Fab。通常，抗体和Fab将具有共同轻链。可以通过(1)使靶融合体的DNA序列工程化，和(2)将靶DNA转染至合适的宿主细胞中以表达融合蛋白来产生抗体融合体。如Coloma,J.等,(1997)Nature Biotech 15:159所述，似乎抗体-scFv融合体可通过CH3结构域的C-末端和scFv的N-末端之间的(Gly)-Ser接头连接。
抗体-scFv融合体
抗体-scFv融合体是双特异性抗体，其包含传统抗体和与抗体重链C末端融合的唯一特异性的scFv。scFv可以直接或通过接头肽通过scFv的重链与C末端融合。可以通过(1)使靶融合体的DNA序列工程化，和(2)将靶DNA转染至合适的宿主细胞中以表达融合蛋白来产生抗体融合体。如Coloma,J.等,(1997)Nature Biotech 15:159所述，似乎抗体-scFv融合体可通过CH3结构域的C-末端和scFv的N-末端之间的(Gly)-Ser接头连接。
可变结构域免疫球蛋白DVD
相关形式是双可变结构域免疫球蛋白(DVD)，其由通过较短接头序列在V结构域N末端的第二特异性位置的VH和VL结构域组成。
其他示例性多特异性抗体形式包括例如以下US 20160114057A1、US20130243775A1、US 20140051833、US 20130022601、US 20150017187A1、US20120201746A1、US 20150133638A1、US 20130266568A1、US 20160145340A1、WO2015127158A1、US 20150203591A1、US 20140322221A1、US 20130303396A1、US20110293613、US 20130017200A1、US 20160102135A1、WO2015197598A2、WO2015197582A1、US 9359437、US 20150018529、WO2016115274A1、WO2016087416A1、US20080069820A1、US 9145588B、US 7919257和US 20150232560A1中描述的那些。利用全抗体-Fab/scFab形式的示例性多特异性分子包括以下US 9382323B2、US 20140072581A1、US20140308285A1、US 20130165638A1、US 20130267686A1、US 20140377269A1、US 7741446B2和WO1995009917A1中描述的那些。利用结构域交换形式的示例性多特异性分子包括以下US20150315296A1、WO2016087650A1、US 20160075785A1、WO2016016299A1、US20160130347A1、US 20150166670、US 8703132B2、US 20100316645、US 8227577B2、US20130078249中描述的那些。
含Fc的实体(微型抗体)
含Fc的实体(也称为微型抗体)可以通过将scFv与恒定重链区结构域3的C-末端(CH3-scFv)和/或与具有不同特异性的抗体的铰链区(scFv-铰链-Fc)融合来产生。还可以制备三价实体，其具有与IgG CH3结构域C-末端融合的二硫键稳定的可变结构域(无肽接头)。
含Fc的多特异性分子
在一些实施方案中，本文公开的多特异性分子包括免疫球蛋白恒定区(例如，Fc区)。示例性Fc区可以选自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的重链恒定区；更特别地，人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的重链恒定区。
在一些实施方案中，免疫球蛋白链恒定区(例如，Fc区)被改变(例如，突变)，以增加或减少以下中的一种或多种：Fc受体结合、抗体糖基化、半胱氨酸残基数量、效应细胞功能或补体功能。
在其他实施方案中，第一和第二免疫球蛋白链恒定区(例如，第一和第二Fc区)的界面被改变(例如，突变)，以例如相对于非工程化界面(例如，天然存在的界面)增加或减少二聚化。例如，免疫球蛋白链恒定区(例如，Fc区)的二聚化可以通过提供具有以下中的一种或多种的第一和第二Fc区的Fc界面来增强：成对突起-空腔(“杵-臼”)、静电相互作用或链交换，使得例如相对于非工程化界面形成更大比率的异源多聚体比同源多聚体。
在一些实施方案中，多特异性分子在例如人IgG1 Fc区的选自347、349、350、351、366、368、370、392、394、395、397、398、399、405、407或409中的一个或多个位置处包括配对的氨基酸取代。例如，免疫球蛋白链恒定区(例如，Fc区)可以包括选自以下的配对的氨基酸取代：T366S、L368A或Y407V(例如，对应于空腔或臼)和T366W(例如，对应于突起或杵)。
在其他实施方案中，多功能性分子包括半衰期延长剂，例如，人血清白蛋白或人血清白蛋白的抗体分子。
异源二聚化抗体分子及制备方法
已经公开了各种产生多特异性抗体的方法，以解决重链配对不正确的问题。下文描述了示例性方法。示例性多特异性抗体形式和制备所述多特异性抗体的方法也公开于例如Speiss等,Molecular Immunology 67(2015)95-106；和Klein等,mAbs 4:6,653-663；2012年11月/12月；其中每一个的全部内容通过引用并入本文。
异源二聚化双特异性抗体基于天然IgG结构，其中两个结合臂识别不同抗原。通过强制重链异源二聚化，结合使轻链错配(例如，共同轻链)最小化的技术，生成能够限定单价(和同时)抗原结合的IgG衍生化形式。可以使用例如杵-臼或链交换工程化结构域(SEED)来获得强制重链异源二聚化。
杵-臼
如US 5,731,116、US 7,476,724和Ridgway,J.等,(1996)Prot.Engineering 9(7):617-621中描述的杵-臼广义上涉及：(1)使一种或两种抗体的CH3结构域突变以促进异源二聚化；和(2)在促进异源二聚化的条件下组合突变的抗体。“杵”或“突起”通常通过用较大氨基酸替代亲本抗体中的小氨基酸(例如，T366Y或T366W)来产生；“臼”或“空腔”通过用较小氨基酸替代亲本抗体中的较大残基(例如，Y407T、T366S、L368A和/或Y407V)来产生。
对于包括Fc结构域的双特异性抗体，可以利用将特定突变引入重链的恒定区以促进Fc部分正确异源二聚化。Klein等(mAbs(2012)4:6,1-11)综述了几种这种技术，其内容通过引用以其整体并入本文。这些技术包括“杵-臼”(KiH)方法，其涉及将大残基引入抗体重链之一的CH3结构域之一中。这种大残基配合到配对重链另一个CH3结构域中的互补“臼”中，以便促进重链正确配对(参见例如，US 7642228)。
示例性KiH突变包括“杵”重链中的S354C、T366W以及“臼”重链中的Y349C、T366S、L368A、Y407V。其他示例性KiH突变在表1中提供，具有另外任选的稳定化Fc半胱氨酸突变。
表1.示例性Fc KiH突变和任选的半胱氨酸突变
Igawa和Tsunoda提供了其他Fc突变，他们在一条链的CH3结构域中鉴定了三个带负电荷的残基，其与另一条链CH3结构域中的三个带正电荷的残基配对。这些特定的带电荷的残基对是：E356-K439、E357-K370、D399-K409，反之亦然。通过单独在链A中引入以下三种突变中的至少两种：E356K、E357K和D399K，以及链B中的K370E、K409D、K439E，或与新鉴定的二硫键结合，它们能够促进非常有效的异源二聚化，同时抑制同源二聚化(Martens T等,Anovel one-armed antic-Met antibody inhibits glioblastoma growth in vivo.ClinCancer Res 2006；12:6144-52；PMID:17062691)。Xencor基于组合结构计算和序列信息定义了41种变体对，随后筛选出最大异源二聚体，定义了链A上的S364H、F405A(HA)和链B上的Y349T、T394F(TF)的组合(Moore GL等,A novel bispecific antibody format enablessimultaneous bivalent and monovalent co-engagement of distinct targetantigens.MAbs 2011；3:546-57；PMID:22123055)。
促进多特异性抗体的异源二聚化的其他示例性Fc突变包括以下参考文献中描述的那些，其中每一个的内容通过引用并入本文，WO2016071377A1、US 20140079689A1、US20160194389A1、US 20160257763、WO2016071376A2、WO2015107026A1、WO2015107025A1、WO2015107015A1、US 20150353636A1、US 20140199294A1、US 7750128B2、US20160229915A1、US 20150344570A1、US 8003774A1、US 20150337049A1、US20150175707A1、US 20140242075A1、US 20130195849A1、US 20120149876A1、US20140200331A1、US 9309311B2、US 8586713、US 20140037621A1、US 20130178605A1、US20140363426A1、US 20140051835A1和US 20110054151A1。
稳定化半胱氨酸突变也已与KiH和其他Fc异源二聚化促进变体组合使用，参见例如，US 7183076。其他示例性半胱氨酸修饰包括例如US 20140348839A1、US 7855275B2和US9000130B2中公开的那些。
链交换工程化结构域(SEED)
通过发明链交换工程化结构域(SEED)C(H)3异源二聚体支持双特异性和不对称融合蛋白的设计的异源二聚体Fc平台是已知的。人IgG和IgA C(H)3结构域的这些衍生物产生互补的人SEED C(H)3异源二聚体，其由人IgA和IgG C(H)3序列的交替区段组成。当在哺乳动物细胞中表达时，所得SEED C(H)3结构域对优先缔合形成异源二聚体。SEEDbody(Sb)融合蛋白由[IgG1铰链]-C(H)2-[SEED C(H)3]组成，其可与一种或多种融合伴侣遗传连接(参见例如，Davis JH等,SEEDbodies:fusion proteins based on strand exchangeengineered domain(SEED)CH3 heterodimers in an Fc analogue platform forasymmetric binders or immunofusions and bispecific antibodies.Protein Eng DesSel 2010；23:195-202；PMID:20299542和US 8871912。其中每一个的内容通过引用并入本文)。
Duobody
产生具有正确重链配对的双特异性抗体的“Duobody”技术是已知的。DuoBody技术涉及三个基本步骤，以在生产后交换反应中生成稳定的双特异性人IgG1抗体。在第一步中，使用标准哺乳动物重组细胞系分别产生两个IgG1，每个IgG1在第三恒定(CH3)结构域中含有单一配对突变。随后，根据回收和纯化的标准过程纯化这些IgG1抗体。在生产和纯化之后(生产后)，两种抗体在特制实验室条件下重组，以非常高的产率(通常>95％)产生双特异性抗体产物(参见例如，Labrijn等,PNAS 2013；110(13):5145-5150和Labrijn等,NatureProtocols 2014；9(10):2450-63，其中每一个的内容通过引用并入本文)。
静电相互作用
公开了使用利用带电荷的氨基酸的CH3氨基酸改变来制备多特异性抗体的方法，使得同源二聚体形成是静电上不利的。EP 1870459和WO2009089004描述了在宿主细胞中共表达不同抗体结构域时促进异源二聚体形成的其他策略。在这些方法中，用带电荷的氨基酸替代两个CH3结构域中构成重链恒定结构域3(CH3)、CH3-CH3界面的一个或多个残基，使得同源二聚体形成是静电上不利的，而异源二聚化是静电上有利的。使用静电相互作用来制备多特异性分子的另外的方法在以下参考文献中描述，其中每一个的内容通过引用并入本文，包括US 20100015133、US 8592562B2、US 9200060B2、US 20140154254A1和US9358286A1。
共同轻链
需要避免轻链错配，以生成双特异性IgG的均一制剂。实现其的一种方式是通过使用共同轻链原理，即组合共享一条轻链但仍具有单独特异性的两种结合物。提高从单体混合物形成所需双特异性抗体的一种示例性方法是通过提供与双特异性抗体的异聚化可变重链区中的每一个相互作用的共同可变轻链。如例如US 7183076B2、US 20110177073A1、EP2847231A1、WO2016079081A1和EP 3055329A1中公开的产生具有共同轻链的双特异性抗体的组合物和方法，其中每一个的内容通过引用并入本文。
CrossMab
减少轻链错配的另一种选择是CrossMab技术，其通过交换双特异性抗体的一半中的Fab中的CH1和CL结构域来避免非特异性L链错配。这种交叉变体保留了结合特异性和亲和力，但使两个臂如此不同以致防止了L链错配。CrossMab技术(如Klein等同上中综述的)涉及重链和轻链之间的结构域交换，以便促进形成正确配对。简言之，为了构建可通过使用两个不同的轻链-重链对结合至两种抗原的双特异性IgG样CrossMab抗体，应用两步修饰过程。首先，使用异源二聚化方法(例如，杵-臼(KiH)技术)将二聚化界面工程化到每条重链的C-末端，以确保仅有效地形成来自一个抗体(例如，抗体A)和第二抗体(例如，抗体B)的两条不同重链的异源二聚体。接着，交换一个抗体(抗体A)的恒定重链1(CH1)和恒定轻链(CL)结构域，保持可变重链(VH)和可变轻链(VL)结构域一致。CH1和CL结构域的交换确保修饰的抗体(抗体A)轻链仅有效地与修饰的抗体(抗体A)重链二聚化，而未修饰的抗体(抗体B)轻链仅有效地与未修饰的抗体(抗体B)重链二聚化；因此，只有所需的双特异性CrossMab才能有效地形成(参见例如，Cain,C.SciBX 4(28)；doi:10.1038/scibx.2011.783，其内容通过引用并入本文)。
共同重链
提高从单体混合物形成所需双特异性抗体的一种示例性方法是通过提供与双特异性抗体的异聚化可变轻链区中的每一个相互作用的共同可变重链。例如US20120184716、US 20130317200和US 20160264685A1中公开了产生具有共同重链的双特异性抗体的组合物和方法，其中每一个的内容通过引用并入本文。
氨基酸修饰
产生具有正确轻链配对的多特异性抗体的替代组合物和方法包括各种氨基酸修饰。例如，Zymeworks描述了在作为轻链和重链之间的界面的一部分的CH1和/或CL结构域中具有一个或多个氨基酸修饰、在VH和/或VL结构域中具有一个或多个氨基酸修饰或其组合的异源二聚体，并且在每条重链和所需轻链之间产生优先配对，使得当异源二聚体对的两条重链和两条轻链在细胞中共表达时，第一异源二聚体的重链优先与轻链中的一条而不是另一条配对(参见例如，WO2015181805)。在WO2016026943(Argen-X)、US 20150211001、US20140072581A1、US 20160039947A1和US 20150368352中描述了其他示例性方法。
λ/κ形式
包括λ轻链多肽和κ轻链多肽的多特异性分子(例如，多特异性抗体分子)可用于允许异源二聚化。2017年9月22日提交的PCT/US17/53053中公开了生成包含λ轻链多肽和κ轻链多肽的双特异性抗体分子的方法，通过引用以其整体并入本文。
在实施方案中，多特异性分子包括多特异性抗体分子，例如，包含两种结合特异性的抗体分子，例如，双特异性抗体分子。多特异性抗体分子包括：
对第一表位具有特异性的λ轻链多肽1(LLCP1)；
对第一表位具有特异性的重链多肽1(HCP1)；
对第二表位具有特异性的κ轻链多肽2(KLCP2)；以及
对第二表位具有特异性的重链多肽2(HCP2)。
如本文所用，术语“λ轻链多肽1(LLCP1)”是指包含足够轻链(LC)序列的多肽，使得当与同源重链可变区组合时，可以介导与其表位的特异性结合以及与HCP1复合。在实施方案中，它包含CH1区的全部或片段。在实施方案中，LLCP1包含LC-CDR1、LC-CDR2、LC-CDR3、FR1、FR2、FR3、FR4和CH1，或介导其表位的特异性结合以及与HCP1复合的其足够的序列。LLCP1与其HCP1一起提供对第一表位的特异性(而KLCP2与其HCP2一起提供对第二表位的特异性)。如本文别处所述，LLCP1对HCP1比对HCP2具有更高的亲和力。
如本文所用，术语“κ轻链多肽2(KLCP2)”是指包含足够轻链(LC)序列的多肽，使得当与同源重链可变区组合时，可以介导与其表位的特异性结合以及与HCP2复合。在实施方案中，它包含CH1区的全部或片段。在实施方案中，KLCP2包含LC-CDR1、LC-CDR2、LC-CDR3、FR1、FR2、FR3、FR4和CH1，或介导其表位的特异性结合以及与HCP2复合的其足够的序列。KLCP2与其HCP2一起提供对第二表位的特异性(而LLCP1与其HCP1一起提供对第一表位的特异性)。
如本文所用，术语“重链多肽1(HCP1)”是指包含足够重链(HC)序列(例如，HC可变区序列)的多肽，使得当与同源LLCP1组合时，可以介导与其表位的特异性结合以及与HCP1复合。在实施方案中，它包含CH1区的全部或片段。在实施方案中，它包含CH2和/或CH3区的全部或片段。在实施方案中，HCP1包含HC-CDR1、HC-CDR2、HC-CDR3、FR1、FR2、FR3、FR4、CH1、CH2和CH3，或其足够的序列，该序列：(i)介导其表位的特异性结合以及与LLCP1复合，(ii)如本文所述优先与LLCP1而不是KLCP2复合；以及(iii)如本文所述优先与HCP2而不是HCP1的另一分子复合。HCP1与其LLCP1一起提供对第一表位的特异性(而KLCP2与其HCP2一起提供对第二表位的特异性)。
如本文所用，术语“重链多肽2(HCP2)”是指包含足够重链(HC)序列(例如，HC可变区序列)的多肽，使得当与同源LLCP1组合时，可以介导与其表位的特异性结合以及与HCP1复合。在实施方案中，它包含CH1区的全部或片段。在实施方案中，它包含CH2和/或CH3区的全部或片段。在实施方案中，HCP1包含HC-CDR1、HC-CDR2、HC-CDR3、FR1、FR2、FR3、FR4、CH1、CH2和CH3，或其足够的序列，该序列：(i)介导其表位的特异性结合以及与KLCP2复合，(ii)如本文所述优先与KLCP2而不是LLCP1复合；以及(iii)如本文所述优先与HCP1而不是HCP2的另一分子复合。HCP2与其KLCP2一起提供对第二表位的特异性(而LLCP1与其HCP1一起提供对第一表位的特异性)。
在本文公开的多特异性抗体分子的一些实施方案中：LLCP1对HCP1比对HCP2具有更高的亲和力；和/或
KLCP2对HCP2比对HCP1具有更高的亲和力。
在实施方案中，LLCP1对HCP1的亲和力充分大于其对HCP2的亲和力，使得在预选条件下，例如，在例如pH 7的水性缓冲液中，在例如pH 7的盐水中，或在生理条件下，至少75％、80％、90％、95％、98％、99％、99.5％或99.9％的多特异性抗体分子具有与HCP1复合或形成界面的LLCP1。
在本文公开的多特异性抗体分子的一些实施方案中：HCP1对HCP2比对HCP1的第二分子具有更大的亲和力；和/或HCP2对HCP1比对HCP2的第二分子具有更大的亲和力。
在实施方案中，HCP1对HCP2的亲和力充分大于其对HCP1的第二分子的亲和力，使得在预选条件下，例如，在例如pH 7水性缓冲液中，在例如pH 7的盐水中，或在生理条件下，至少75％、80％、90％、95％、98％、99％、99.5％或99.9％的多特异性抗体分子具有与HCP2复合或形成界面的HCP1。
在另一方面，本文公开了一种制备或产生多特异性抗体分子的方法。该方法包括：在(i)-(iv)缔合的条件下，
(i)提供第一重链多肽(例如，包含第一重链可变区(第一VH)、第一CH1、第一重链恒定区(例如，第一CH2、第一CH3或两者)中的一个、两个、三个或全部的重链多肽)；
(ii)提供第二重链多肽(例如，包含第二重链可变区(第二VH)、第二CH1、第二重链恒定区(例如，第二CH2、第二CH3或两者)中的一个、两个、三个或全部的重链多肽)；
(iii)提供优先与第一重链多肽(例如，第一VH)缔合的λ链多肽(例如，λ轻链可变区(VL)、λ轻链恒定链(VL)或两者)；以及
(iv)提供优先与第二重链多肽(例如，第二VH)缔合的κ链多肽(例如，λ轻链可变区(VL)、λ轻链恒定链(VL)或两者)。
在实施方案中，第一和第二重链多肽形成增强异源二聚化的Fc界面。
在实施方案中，将(i)-(iv)(例如，编码(i)-(iv)的核酸)导入单个细胞，例如，单个哺乳动物细胞，例如，CHO细胞。在实施方案中，在细胞中表达(i)-(iv)。
在实施方案中，将(i)-(iv)(例如，编码(i)-(iv)的核酸)导入不同细胞，例如，不同的哺乳动物细胞，例如，两种或更多种CHO细胞。在实施方案中，在细胞中表达(i)-(iv)。
在一个实施方案中，该方法进一步包括纯化细胞表达的抗体分子，例如，使用λ和/或κ特异性纯化，例如，亲和层析。
在实施方案中，该方法进一步包括评估细胞表达的多特异性抗体分子。例如，纯化的细胞表达的多特异性抗体分子可以通过本领域已知的技术进行分析，包括质谱。在一个实施方案中，纯化的细胞表达的抗体分子被裂解，例如，用木瓜蛋白酶消化以产生Fab部分，并使用质谱进行评估。
在实施方案中，该方法以高产率(例如，至少75％、80％、90％、95％、98％、99％、99.5％或99.9％)产生正确配对的κ/λ多特异性(例如，双特异性)抗体分子。
在其他实施方案中，多特异性(例如，双特异性)抗体分子包括：(i)第一重链多肽(HCP1)(例如，包含第一重链可变区(第一VH)、第一CH1、第一重链恒定区(例如，第一CH2、第一CH3或两者)中的一个、两个、三个或全部的重链多肽)，例如，其中HCP1与第一表位结合；(ii)第二重链多肽(HCP2)(例如，包含第二重链可变区(第二VH)、第二CH1、第二重链恒定区(例如，第二CH2、第二CH3或两者)中的一个、两个、三个或全部的重链多肽)，例如，其中HCP2与第二表位结合；(iii)优先与第一重链多肽(例如，第一VH)缔合的λ轻链多肽(LLCP1)(例如，λ轻链可变区(VLl)、λ轻链恒定链(VLl)或两者)，例如，其中LLCP1与第一表位结合；以及
(iv)优先与第二重链多肽(例如，第二VH)缔合的κ轻链多肽(KLCP2)(例如，λ轻可变区(VLk)、λ轻恒定链(VLk)或两者)，例如，其中KLCP2与第二表位结合。
在实施方案中，第一和第二重链多肽形成增强异源二聚化的Fc界面。在实施方案中，多特异性抗体分子具有第一结合特异性和第二结合特异性，第一结合特异性包括与连接至Fc恒定CH2-CH3结构域的第一重链可变区异源二聚化的杂合VLl-CLl(具有杵修饰)，第二结合特异性包括与连接至Fc恒定CH2-CH3结构域的第二重链可变区异源二聚化的杂合VLk-CLk(具有臼修饰)。
接头
本文公开的多特异性或多功能性分子可以进一步包括接头，例如，在以下中的一个或多个之间的接头：抗原结合结构域和细胞因子分子、抗原结合结构域和免疫细胞接合物、抗原结合结构域和基质修饰部分、细胞因子分子和免疫细胞接合物、细胞因子分子和基质修饰部分、免疫细胞接合物和基质修饰部分、抗原结合结构域和免疫球蛋白链恒定区、细胞因子分子和免疫球蛋白链恒定区、免疫细胞接合物和免疫球蛋白链恒定区，或基质修饰部分和免疫球蛋白链恒定区。在实施方案中，接头选自：可切割接头、不可切割接头、肽接头、柔性接头、刚性接头、螺旋接头或非螺旋接头，或其组合。
在一个实施方案中，多特异性分子可以包括一个、两个、三个或四个接头，例如，肽接头。在一个实施方案中，肽接头包括Gly和Ser。在一些实施方案中，肽接头选自GGGGS(SEQID NO:42)；GGGGSGGGGS(SEQ ID NO:43)；GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:44)；以及DVPSGPGGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:45)。在一些实施方案中，肽接头是A(EAAAK)nA(SEQ IDNO:6154)家族的接头(例如，如Protein Eng.(2001)14(8):529-532中所述的)。这些是刚性螺旋接头，其中n为2-5。在一些实施方案中，肽接头选自AEAAAKEAAAKAAA(SEQ ID NO:75)；AEAAAKEAAAKEAAAKAAA(SEQ ID NO:76)；AEAAAKEAAAKEAAAKEAAAKAAA(SEQ ID NO:77)；以及AEAAAKEAAAKEAAAKEAAAKEAAAKAAA(SEQ ID NO:78)。
靶向部分
在一个实施方案中，抗NKp30抗体分子进一步包含第二抗原结合部分，例如，肿瘤靶向部分，其与癌抗原例如肿瘤抗原或基质抗原结合。在一些实施方案中，癌抗原是例如哺乳动物(例如，人)癌抗原。在其他实施方案中，抗体分子进一步包含与免疫细胞抗原例如哺乳动物(例如，人)免疫细胞抗原结合的第二结合部分。在其他实施方案中，抗体分子进一步包含与病毒抗原结合的第二结合部分。例如，抗体分子与癌抗原或免疫细胞抗原上的表位(例如，线性或构象表位)结合。
在一些实施方案中，多特异性(例如，双特异性、三特异性、四特异性)分子包括(例如，被工程化以包含)一个或多个将分子引导至肿瘤细胞的肿瘤特异性靶向部分。在某些实施方案中，本文公开的多特异性分子包括肿瘤靶向部分。肿瘤靶向部分可以选自抗体分子(例如，如本文所述的抗原结合结构域)、受体或受体片段，或配体或配体片段，或其组合。在一些实施方案中，肿瘤靶向部分与肿瘤细胞(例如，存在于肿瘤细胞表面上的分子，例如，抗原)缔合(例如结合)。在某些实施方案中，肿瘤靶向部分将本文公开的多特异性分子靶向(例如，引导)至癌症(例如，癌症或肿瘤细胞)。在一些实施方案中，癌症选自血液癌症、实体癌、转移性癌症或其组合。
在一些实施方案中，多特异性分子(例如，肿瘤靶向部分)与实体瘤抗原或基质抗原结合。实体瘤抗原或基质抗原可以存在于实体瘤或其转移病变上。在一些实施方案中，实体瘤选自胰腺癌(例如，胰腺腺癌)、乳腺癌、结直肠癌、肺癌(例如，小细胞或非小细胞肺癌)、皮肤癌、卵巢癌或肝癌中的一种或多种。在一个实施方案中，实体瘤是纤维化或促结缔组织增生性实体瘤。例如，实体瘤抗原或基质抗原可以存在于肿瘤上，例如，以具有以下中的一种或多种为特征的一类肿瘤：有限的肿瘤灌注、压缩的血管或纤维化的肿瘤间质。
在某些实施方案中，实体瘤抗原选自以下中的一种或多种：PDL1、CD47、间皮素、神经节苷脂2(GD2)、前列腺干细胞抗原(PSCA)、前列腺特异性膜抗原(PMSA)、前列腺特异性抗原(PSA)、癌胚抗原(CEA)、Ron激酶、c-Met、未成熟层粘连蛋白受体、TAG-72、BING-4、钙活化氯离子通道2、细胞周期蛋白-B1、9D7、Ep-CAM、EphA3、Her2/neu、端粒酶、SAP-1、存活蛋白、NY-ESO-1/LAGE-1、PRAME、SSX-2、Melan-A/MART-1、Gp100/pmel17、酪氨酸酶、TRP-1/-2、MC1R、β-连环蛋白、BRCA1/2、CDK4、CML66、纤连蛋白、p53、Ras、TGF-Β受体、AFP、ETA、MAGE、MUC-1、CA-125、BAGE、GAGE、NY-ESO-1、β-连环蛋白、CDK4、CDC27、CD47、α辅肌动蛋白-4、TRP1/gp75、TRP2、gp100、Melan-A/MART1、神经节苷脂、WT1、EphA3、表皮生长因子受体(EGFR)、CD20、MART-2、MART-1、MUC1、MUC2、MUM1、MUM2、MUM3、NA88-1、NPM、OA1、OGT、RCC、RUI1、RUI2、SAGE、TRG、TRP1、TSTA、叶酸受体α、L1-CAM、CAIX、EGFRvIII、gpA33、GD3、GM2、VEGFR、整合素(整合素αVβ3、整合素α5β1)、碳水化合物(Le)、IGF1R、EPHA3、TRAILR1、TRAILR2或RANKL。在一些实施方案中，实体瘤抗原选自：PDL1、间皮素、CD47、GD2、PMSA、PSCA、CEA、Ron激酶或c-Met。肿瘤靶向部分的示例性氨基酸和核苷酸序列公开于WO2017/165464中，参见例如，第102-108页、第172-290页，其通过引用并入本文。
在一些实施方案中，抗NKp30抗体分子(例如，多特异性抗体分子)进一步包含与自身反应性T细胞(例如，与炎性或自身免疫性障碍相关的存在于自身反应性T细胞表面上的抗原)结合的靶向部分，例如，结合特异性。
在一些实施方案中，抗NKp30抗体分子(例如，多特异性抗体分子)进一步包含与受感染细胞(例如，病毒感染的细胞)结合的靶向部分，例如，结合特异性。
T细胞接合物
在其他实施方案中，抗NKp30抗体分子(例如，多特异性抗体分子)进一步包含介导T细胞的结合和/或活化的一种或多种T细胞接合物。因此，在一些实施方案中，T细胞接合物选自抗原结合结构域或配体，其结合(例如，并在一些实施方案中活化)CD3、TCRα、TCRβ、TCRγ、TCRζ、ICOS、CD28、CD27、HVEM、LIGHT、CD40、4-1BB、OX40、DR3、GITR、CD30、TIM1、SLAM、CD2或CD226中的一种或多种。在其他实施方案中，T细胞接合物选自抗原结合结构域或配体，其结合但不活化CD3、TCRα、TCRβ、TCRγ、TCRζ、ICOS、CD28、CD27、HVEM、LIGHT、CD40、4-1BB、OX40、DR3、GITR、CD30、TIM1、SLAM、CD2或CD226中的一种或多种。
示例性T细胞接合物公开于WO2017/165464中，其通过引用并入本文。
细胞因子分子
在其他实施方案中，抗NKp30抗体分子(例如，多特异性抗体分子)进一步包含一种或多种细胞因子分子，例如，免疫调节(例如，促炎性)细胞因子及其变体，例如，功能性变体。因此，在一些实施方案中，细胞因子分子是白介素或其变体，例如，功能性变体。在一些实施方案中，白介素是促炎性白介素。在一些实施方案中，白介素选自白介素-2(IL-2)、白介素-12(IL-12)、白介素-15(IL-15)、白介素-18(IL-18)、白介素-21(IL-21)、白介素-7(IL-7)或干扰素γ。在一些实施方案中，细胞因子分子是促炎性细胞因子。
在某些实施方案中，细胞因子是单链细胞因子。在某些实施方案中，细胞因子是多链细胞因子(例如，细胞因子包含2条或更多条(例如，2条)多肽链)。示例性多链细胞因子是IL-12。
可用的细胞因子的实例包括但不限于GM-CSF、IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-21、IFN-α、IFN-β、IFN-γ、MIP-1α、MIP-1β、TGF-β、TNF-α和TNFβ。在一个实施方案中，多特异性或多功能性多肽的细胞因子是选自GM-CSF、IL-2、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-21、IFN-α、IFN-γ、MIP-1α、MIP-1β和TGF-β的细胞因子。在一个实施方案中，多特异性或多功能性多肽的细胞因子是选自IL-2、IL-7、IL-10、IL-12、IL-15、IFN-α和IFN-γ的细胞因子。在某些实施方案中，细胞因子被突变，以除去N-和/或O-糖基化位点。糖基化的消除增加了可在重组生产中获得的产物的均一性。
在一个实施方案中，多特异性或多功能性多肽的细胞因子是IL-2。在具体实施方案中，IL-2细胞因子可以引发选自以下细胞应答中的一种或多种：活化T淋巴细胞中的增殖、活化T淋巴细胞中的分化、细胞毒性T细胞(CTL)活性、活化B细胞中的增殖、活化B细胞中的分化、自然杀伤(NK)细胞中的增殖、NK细胞中的分化、活化T细胞或NK细胞的细胞因子分泌，以及NK/淋巴细胞活化的杀伤细胞(LAK)抗肿瘤细胞毒性。在另一具体实施方案中，IL-2细胞因子是对IL-2受体α-亚基的结合亲和力降低的突变型IL-2细胞因子。α-亚基(也称为CD25)与β-和γ-亚基(也分别称为CD122和CD132)一起形成异源三聚体高亲和力IL-2受体，而仅由β-和γ-亚基组成的二聚体受体被称为中间亲和力IL-2受体。如PCT专利申请第PCT/EP2012/051991号(其通过引用以其整体并入本文)中所述，与野生型IL-2多肽相比，与IL-2受体α-亚基结合降低的突变型IL-2多肽在调节性T细胞中诱导IL-2信号传导的能力降低，在T细胞中诱导较少的活化诱导的细胞死亡(AICD)，并且体内毒性谱(toxicity profile)降低。使用这种毒性降低的细胞因子特别有利于根据本发明的多特异性或多功能性多肽，其因为Fc结构域的存在而具有长的血清半衰期。在一个实施方案中，根据本发明的多特异性或多功能性多肽的突变型IL-2细胞因子包含至少一个氨基酸突变，与未突变的IL-2细胞因子相比，其降低或消除突变型IL-2细胞因子对IL-2受体(CD25)α亚基的亲和力，但保留突变型IL-2细胞因子对中间亲和力IL-2受体(由IL-2受体的β和γ亚基组成)的亲和力。在一个实施方案中，一个或多个氨基酸突变是氨基酸取代。在具体实施方案中，突变型IL-2细胞因子在选自对应于人IL-2的第42、45和72位残基位置的一个、两个或三个位置处包含一个、两个或三个氨基酸取代。在更具体实施方案中，突变型IL-2细胞因子在对应于人IL-2的第42、45和72位残基的位置处包含三个氨基酸取代。在甚至更具体的实施方案中，突变型IL-2细胞因子是包含氨基酸取代F42A、Y45A和L72G的人IL-2。在一个实施方案中，突变型IL-2细胞因子在对应于人IL-2的第3位位置处另外包含氨基酸突变，其消除IL-2的O-糖基化位点。特别地，所述另外的氨基酸突变是用丙氨酸残基替代苏氨酸残基的氨基酸取代。可用于本发明的特定突变型IL-2细胞因子在对应于人IL-2的第3、42、45和72位残基的位置处包含四个氨基酸取代。具体的氨基酸取代是T3A、F42A、Y45A和L72G。如PCT专利申请第PCT/EP2012/051991号和所附实施例中所证明的，所述四重突变型IL-2多肽(IL-2qm)表现出与CD25无可检测到的结合、在T细胞中诱导凋亡的能力降低、在T.sub.reg细胞中诱导IL-2信号传导的能力降低，以及体内毒性谱降低。然而，它保留了活化效应细胞中的IL-2信号传导、诱导效应细胞增殖和由NK细胞生成作为次级细胞因子的IFN-γ的能力。
根据上述实施方案中任一项的IL-2或突变型IL-2细胞因子可包含另外的突变，该突变提供了进一步的优点，例如表达或稳定性增加。例如，第125位处的半胱氨酸可被中性氨基酸(例如丙氨酸)替代，以避免形成二硫键桥接的IL-2二聚体。因此，在某些实施方案中，根据本发明的多特异性或多功能性多肽的IL-2或突变型IL-2细胞因子在对应于人IL-2的第125位残基的位置处包含另外的氨基酸突变。在一个实施方案中，所述另外的氨基酸突变是氨基酸取代C125A。
示例性细胞因子分子公开于WO2017/165464中，参见例如，第108-118页、第169-172页，其通过引用并入本文。
TGF-β抑制剂
在其他实施方案中，抗NKp30抗体分子(例如，多特异性抗体分子)进一步包含一种或多种TGF-β调节剂(例如，TGF-β抑制剂)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂结合至并抑制TGF-β，例如，降低TGF-β的活性。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂抑制TGF-β1(例如，降低其活性)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂抑制TGF-β2(例如，降低其活性)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂抑制TGF-β3(例如，降低其活性)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂抑制TGF-β1和TGF-β3(例如，降低其活性)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂抑制TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3(例如，降低其活性)。
在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含能够抑制TGF-β(例如，降低其活性)的TGF-β受体的一部分(例如，TGF-β受体的胞外结构域)，或其功能性片段或变体。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含TGFBR1多肽(例如，TGFBR1的胞外结构域或其功能性变体)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含TGFBR2多肽(例如，TGFBR2的胞外结构域或其功能性变体)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含TGFBR3多肽(例如，TGFBR3的胞外结构域或其功能性变体)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含TGFBR1多肽(例如，TGFBR1的胞外结构域或其功能性变体)和TGFBR2多肽(例如，TGFBR2的胞外结构域或其功能性变体)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含TGFBR1多肽(例如，TGFBR1的胞外结构域或其功能性变体)和TGFBR3多肽(例如，TGFBR3的胞外结构域或其功能性变体)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含TGFBR2多肽(例如，TGFBR2的胞外结构域或其功能性变体)和TGFBR3多肽(例如，TGFBR3的胞外结构域或其功能性变体)。
可用作TGF-β抑制剂的示例性TGF-β受体多肽已公开于US 8993524、US 9676863、US 8658135、US 20150056199、US 20070184052和WO2017037634中，它们全部通过引用以其整体并入本文。
在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含TGFBR1的胞外结构域，或与其基本上相同的序列(例如，与其至少80％、85％、90％或95％相同的序列)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含SEQ ID NO:3095的胞外结构域，或与其基本上相同的序列(例如，与其至少80％、85％、90％或95％相同的序列)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含SEQ ID NO:3096的胞外结构域，或与其基本上相同的序列(例如，与其至少80％、85％、90％或95％相同的序列)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含SEQ ID NO:3097的胞外结构域，或与其基本上相同的序列(例如，与其至少80％、85％、90％或95％相同的序列)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含SEQ ID NO:3104的氨基酸序列，或与其基本上相同的序列(例如，与其至少80％、85％、90％或95％相同的序列)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含SEQ ID NO:3105的氨基酸序列，或与其基本上相同的序列(例如，与其至少80％、85％、90％或95％相同的序列)。
在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含TGFBR2的胞外结构域，或与其基本上相同的序列(例如，与其至少80％、85％、90％或95％相同的序列)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含SEQ ID NO:3098的胞外结构域，或与其基本上相同的序列(例如，与其至少80％、85％、90％或95％相同的序列)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含SEQ ID NO:3099的胞外结构域，或与其基本上相同的序列(例如，与其至少80％、85％、90％或95％相同的序列)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含SEQ ID NO:3100的氨基酸序列，或与其基本上相同的序列(例如，与其至少80％、85％、90％或95％相同的序列)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含SEQ ID NO:3101的氨基酸序列，或与其基本上相同的序列(例如，与其至少80％、85％、90％或95％相同的序列)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含SEQ ID NO:3102的氨基酸序列，或与其基本上相同的序列(例如，与其至少80％、85％、90％或95％相同的序列)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含SEQ ID NO:3103的氨基酸序列，或与其基本上相同的序列(例如，与其至少80％、85％、90％或95％相同的序列)。
在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含TGFBR3的胞外结构域，或与其基本上相同的序列(例如，与其至少80％、85％、90％或95％相同的序列)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含SEQ ID NO:3106的胞外结构域，或与其基本上相同的序列(例如，与其至少80％、85％、90％或95％相同的序列)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含SEQ ID NO:3107的胞外结构域，或与其基本上相同的序列(例如，与其至少80％、85％、90％或95％相同的序列)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含SEQ ID NO:3108的氨基酸序列，或与其基本上相同的序列(例如，与其至少80％、85％、90％或95％相同的序列)。
在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含不多于一个TGF-β受体胞外结构域。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含两个或更多个(例如，两个、三个、四个、五个或更多个)例如经由接头连接在一起的TGF-β受体胞外结构域。
表4.TGF-β多肽或TGF-β受体多肽的示例性氨基酸序列
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基质修饰部分
在其他实施方案中，抗NKp30抗体分子(例如，多特异性抗体分子)进一步包含一种或多种基质修饰部分。本文所述的基质修饰部分包括能够降解基质组分的部分(例如，蛋白质，例如，酶)，该基质组分为例如ECM组分，例如，糖胺聚糖，例如，透明质酸(也称为玻尿酸或HA)、硫酸软骨素、软骨素、硫酸皮肤素、硫酸肝素、肝素、巢蛋白、腱生蛋白、聚集蛋白聚糖和硫酸角蛋白；或胞外蛋白，例如，胶原、层粘连蛋白、弹性蛋白、纤维蛋白原、纤连蛋白和玻连蛋白。
在一些实施方案中，基质修饰部分是酶。例如，基质修饰部分可以包括但不限于透明质酸酶、胶原酶、软骨素酶、基质金属蛋白酶(例如，巨噬细胞金属弹性蛋白酶)。
基质修饰部分的示例性氨基酸和核苷酸序列公开于WO2017/165464中，参见例如，第131-136页、第188-193页，其通过引用并入本文。
核酸
还公开了编码上述抗体分子(例如，多特异性或多功能性分子)的核酸。
在某些实施方案中，本发明的特征在于核酸，其包含编码如本文所述的抗体分子的重链和轻链可变区以及CDR或高变环的核苷酸序列。例如，本发明的特征在于第一和第二核酸，它们分别编码选自本文公开的抗体分子中一种或多种抗体分子的重链和轻链可变区。核酸可以包含如本文表中所述的核苷酸序列，或与其基本上相同的序列(例如，与其至少约85％、90％、95％、99％或更多相同的序列，或与本文表中所示的序列相差不多于3、6、15、30或45个核苷酸的序列)。
在某些实施方案中，核酸可以包含编码来自重链可变区的至少一个、两个或三个CDR或高变环的核苷酸序列，该重链可变区具有本文表中所述的氨基酸序列，或与其基本上同源的序列(例如，与其至少约85％、90％、95％、99％或更多相同的序列，和/或具有一个或多个取代，例如，保守取代)。在其他实施方案中，核酸可以包含编码来自轻链可变区的至少一个、两个或三个CDR或高变环的核苷酸序列，该轻链可变区具有本文表中所述的氨基酸序列，或与其基本上同源的序列(例如，与其至少约85％、90％、95％、99％或更多相同的序列，和/或具有一个或多个取代，例如，保守取代)。在另一实施方案中，核酸可以包含编码来自重链和轻链可变区的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR或高变环的核苷酸序列，该重链和轻链可变区具有本文表中所述的氨基酸序列，或与其基本上同源的序列(例如，与其至少约85％、90％、95％、99％或更多相同的序列，和/或具有一个或多个取代，例如，保守取代)。
在某些实施方案中，核酸可以包含编码来自重链可变区的至少一个、两个或三个CDR或高变环的核苷酸序列，该重链可变区具有本文表中所述的核苷酸序列，或与其基本上同源的序列(例如，与其至少约85％、90％、95％、99％或更多相同和/或能够在本文所述的严格条件下杂交的序列)。在另一实施方案中，核酸可以包含编码来自轻链可变区的至少一个、两个或三个CDR或高变环的核苷酸序列，该轻链可变区具有本文表中所述的核苷酸序列，或与其基本上同源的序列(例如，与其至少约85％、90％、95％、99％或更多相同和/或能够在本文所述的严格条件下杂交的序列)。在另一实施方案中，核酸可以包含编码来自重链和轻链可变区的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR或高变环的核苷酸序列，该重链和轻链可变区具有本文表中所述的核苷酸序列，或与其基本上同源的序列(例如，与其至少约85％、90％、95％、99％或更多相同和/或能够在本文所述的严格条件下杂交的序列)。
在某些实施方案中，核酸可以包含编码本文公开的细胞因子分子、免疫细胞接合物或基质修饰部分的核苷酸序列。
在另一方面，本申请的特征在于宿主细胞和载体，它们含有本文所述的核酸。如下文更详细描述，核酸可存在于单一载体中或存在于同一宿主细胞或不同宿主细胞中的不同载体中。
载体
本文进一步提供了载体，其包含编码本文所述的多特异性或多功能性分子的核苷酸序列。在一个实施方案中，载体包含编码本文所述的多特异性或多功能性分子的核苷酸。在一个实施方案中，载体包含本文所述的核苷酸序列。载体包括但不限于病毒、质粒、粘粒、λ噬菌体或酵母人工染色体(YAC)。
可以使用许多载体系统。例如，一类载体利用来源于动物病毒(例如，牛乳头瘤病毒、多瘤病毒、腺病毒、牛痘病毒、杆状病毒、逆转录病毒(劳斯肉瘤病毒、MMTV或MOMLV)或SV40病毒)的DNA元件。另一类载体利用来源于RNA病毒(例如塞姆利基森林病毒、东方马脑炎病毒和黄病毒)的RNA元件。
另外，可通过引入一个或多个允许选择转染的宿主细胞的标记来选择已将DNA稳定整合至其染色体中的细胞。标记可提供例如对营养缺陷型宿主的质子转移、杀生物剂抗性(例如，抗生素)或对重金属(例如铜)的抗性等。选择性标记基因可以直接与待表达的DNA序列连接，或通过共转化导入同一细胞。mRNA的最佳合成还可能需要另外的元件。这些元件可包括剪接信号，以及转录启动子、增强子和终止信号。
一旦制备了用于表达的含有构建体的表达载体或DNA序列，就可以将表达载体转染或导入合适的宿主细胞中。这可以使用各种技术来实现，例如，原生质体融合、磷酸钙沉淀、电穿孔、逆转录病毒转导、病毒转染、基因枪、基于脂质的转染或其他常规技术。在原生质体融合的情况下，细胞在培养基中生长并筛选合适的活性。用于培养所得转染的细胞和用于回收产生的抗体分子的方法和条件是本领域技术人员已知的，并且可基于本说明书根据所用的特定表达载体和哺乳动物宿主细胞而改变或优化。
细胞
在另一方面，本申请的特征在于包含本文所述的核酸的宿主细胞和载体。核酸可存在于单一载体中或存在于同一宿主细胞或不同宿主细胞中的不同载体中。宿主细胞可以是真核细胞，例如，哺乳动物细胞、昆虫细胞、酵母细胞或原核细胞，例如，大肠杆菌。例如，哺乳动物细胞可以是培养的细胞或细胞系。示例性哺乳动物细胞包括淋巴细胞系(例如，NSO)、中国仓鼠卵巢细胞(CHO)、COS细胞、卵母细胞和来自转基因动物的细胞，例如，乳腺上皮细胞。
本发明还提供了包含编码如本文所述的抗体分子的核酸的宿主细胞。
在一个实施方案中，宿主细胞被遗传工程化以包含编码抗体分子的核酸。
在一个实施方案中，通过使用表达盒对宿主细胞进行遗传工程化。短语“表达盒”是指核苷酸序列，其能够影响基因在与这种序列相容的宿主中表达。这种盒可包括启动子、含或不含内含子的开放阅读框，以及终止信号。也可以使用实现表达所需或有帮助的另外因子，例如，诱导型启动子。
本发明还提供了包含本文所述载体的宿主细胞。
细胞可以是但不限于真核细胞、细菌细胞、昆虫细胞或人细胞。合适的真核细胞包括但不限于Vero细胞、Hela细胞、COS细胞、CHO细胞、HEK293细胞、BHK细胞和MDCKII细胞。合适的昆虫细胞包括但不限于Sf9细胞。
用途
本文所述的方法包括通过使用本文所述的抗NKp30抗体分子(例如，多特异性分子)，例如，使用本文所述的药物组合物治疗对象的障碍，例如，癌症、自身免疫性或炎性障碍或感染性障碍。还提供了降低或改善对象的障碍(例如，癌症、自身免疫性或炎性障碍或感染性障碍)症状的方法，以及抑制患病细胞(例如，癌细胞)生长和/或杀伤或耗尽一种或多种患病细胞(例如，癌细胞)的方法。在实施方案中，本文所述的方法在施用本文所述的或本文所述的药物组合物的对象中减小肿瘤的大小和/或减小癌细胞的数量。
在实施方案中，将抗体分子(例如，多特异性分子或药物组合物)肠胃外施用至对象。在实施方案中，将抗体分子或药物组合物静脉内、皮下、瘤内、结内、肌内、皮内或腹膜内施用至对象。在实施方案中，将细胞直接施用(例如，注射)至肿瘤或淋巴结中。在实施方案中，将细胞作为输注物(例如，如Rosenberg等,New Eng.J.of Med.319:1676,1988中所述)或静脉内推注施用。在实施方案中，将细胞作为可注射的贮库制剂施用。
在实施方案中，对象是哺乳动物。在实施方案中，对象是人、猴、猪、狗、猫、牛、绵羊、山羊、兔、大鼠或小鼠。在实施方案中，对象是人。在实施方案中，对象是儿科对象，例如，小于18岁，例如，小于17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1岁或更小。在实施方案中，对象是成人，例如，至少18岁，例如，至少19、20、21、22、23、24、25、25-30、30-35、35-40、40-50、50-60、60-70、70-80或80-90岁。
癌症
在实施方案中，癌症是血液癌症、实体瘤或其转移病变。在一些实施方案中，用于治疗癌症的抗NKp30抗体分子进一步包含肿瘤靶向部分，例如，如本文所述的肿瘤靶向部分。
在实施方案中，血液癌症是白血病或淋巴瘤。如本文所用，“血液癌症”是指造血组织或淋巴组织的肿瘤，例如，影响血液、骨髓或淋巴结的肿瘤。示例性血液恶性肿瘤包括但不限于白血病(例如，急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、急性髓样白血病(AML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性髓性白血病(CML)、毛细胞白血病、急性单核细胞性白血病(AMoL)、慢性粒-单核细胞性白血病(CMML)、幼年型粒-单核细胞白血病(JMML)或大颗粒淋巴细胞性白血病)、淋巴瘤(例如，AIDS相关淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤(例如，典型霍奇金淋巴瘤或结节性淋巴细胞主导型霍奇金淋巴瘤)、蕈样真菌病、非霍奇金淋巴瘤(例如，B细胞非霍奇金淋巴瘤(例如，伯基特淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞性大细胞淋巴瘤、前体B成淋巴细胞性淋巴瘤或套细胞淋巴瘤)或T细胞非霍奇金淋巴瘤(蕈样真菌病、间变性大细胞淋巴瘤或前体T成淋巴细胞性淋巴瘤))、原发性中枢神经系统淋巴瘤、塞扎里综合征、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症)、慢性骨髓增生性赘生物、朗格汉斯细胞组织细胞增生症、多发性骨髓瘤/浆细胞赘生物、骨髓增生异常综合征或骨髓增生异常/骨髓增生性赘生物。
在实施方案中，癌症是实体癌。示例性实体癌包括但不限于卵巢癌、直肠癌、胃癌、睾丸癌、肛门区癌、子宫癌、结肠癌、直肠癌、肾细胞癌、肝癌、非小细胞肺癌、小肠癌、食管癌、黑色素瘤、卡波西肉瘤、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、皮肤或眼内恶性黑色素瘤、子宫癌、脑干神经胶质瘤、垂体腺瘤、表皮样癌、子宫颈鳞状细胞癌、输卵管癌、子宫内膜癌、阴道癌、软组织肉瘤、尿道癌、外阴癌、阴茎癌、膀胱癌、肾癌或输尿管癌、肾盂癌、脊髓轴肿瘤、中枢神经系统(CNS)赘生物、原发性CNS淋巴瘤、肿瘤血管生成、所述癌症的转移病变，或其组合。
在某些实施方案中，癌症是上皮、间充质或血液恶性肿瘤。在某些实施方案中，所治疗的癌症是实体瘤(例如，类癌、癌或肉瘤)、软组织肿瘤(例如，血红素恶性肿瘤)和转移病变，例如，本文公开的癌症中任一种的转移病变。在一个实施方案中，所治疗的癌症是纤维化或促结缔组织增生性实体瘤，例如，具有以下中的一种或多种的肿瘤：有限的肿瘤灌注、压缩的血管、纤维化的肿瘤间质或增加的间质液压。在一个实施方案中，实体瘤选自胰腺癌(例如，胰腺腺癌或胰腺导管腺癌)、乳腺癌、结肠癌、结直肠癌、肺癌(例如，小细胞肺癌(SCLC)或非小细胞肺癌(NSCLC))、皮肤癌、卵巢癌、肝癌、食管癌、子宫内膜癌、胃癌、头颈癌、肾癌或前列腺癌中的一种或多种。
癌症的实例包括但不限于癌、淋巴瘤、胚细胞瘤、肉瘤和白血病或淋巴恶性肿瘤。这样的癌症的更具体实例在下文中指出，并且包括：鳞状细胞癌(例如，上皮鳞状细胞癌)、肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌和肺鳞状细胞癌)、腹膜癌、肝细胞癌、胃(gastric、stomach)癌(包括胃肠癌)、胰腺癌、成胶质细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝细胞瘤、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、结直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺癌、肾(kidney、renal)癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌、肛门癌、阴茎癌以及头颈癌。术语“癌症”包括原发性恶性细胞或肿瘤(例如，其细胞未迁移至对象身体中除最初恶性肿瘤或肿瘤部位以外的部位的那些)和继发性恶性细胞或肿瘤(例如，由转移引起的那些，转移为恶性细胞或肿瘤细胞迁移至不同于最初肿瘤部位的继发性部位)。
癌症或恶性肿瘤的其他实例包括但不限于：急性儿童成淋巴细胞性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、急性淋巴细胞白血病、急性髓样白血病、肾上腺皮质癌、成人(原发性)肝细胞癌、成人(原发性)肝癌、成人急性淋巴细胞白血病、成人急性髓样白血病、成人霍奇金病、成人霍奇金淋巴瘤、成人淋巴细胞白血病、成人非霍奇金淋巴瘤、成人原发性肝癌、成人软组织肉瘤、AIDS相关淋巴瘤、AIDS相关恶性肿瘤、肛门癌、星形细胞瘤、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脑干神经胶质瘤、脑肿瘤、乳腺癌、肾盂癌和输尿管癌、中枢神经系统(原发性)淋巴瘤、中枢神经系统淋巴瘤、小脑星形细胞瘤、脑星形细胞瘤、宫颈癌、儿童(原发性)肝细胞癌、儿童(原发性)肝癌、儿童急性成淋巴细胞性白血病、儿童急性髓样白血病、儿童脑干神经胶质瘤、儿童小脑星形细胞瘤、儿童脑星形细胞瘤、儿童颅外生殖细胞肿瘤、儿童霍奇金病、儿童霍奇金淋巴瘤、儿童下丘脑和视觉通路神经胶质瘤、儿童成淋巴细胞性白血病、儿童成神经管细胞瘤、儿童非霍奇金淋巴瘤、儿童松果体和幕上原始神经外胚层肿瘤、儿童原发性肝癌、儿童横纹肌肉瘤、儿童软组织肉瘤、儿童视觉通路和下丘脑神经胶质瘤、慢性淋巴细胞白血病、慢性髓性白血病、结肠癌、皮肤T细胞淋巴瘤、内分泌胰岛细胞癌、子宫内膜癌、室管膜瘤、上皮癌、食管癌、尤因肉瘤和相关肿瘤、外分泌胰腺癌、颅外生殖细胞肿瘤、性腺外生殖细胞肿瘤、肝外胆管癌、眼癌、女性乳腺癌、戈谢病、胆囊癌、胃癌、胃肠类癌瘤、胃肠肿瘤、生殖细胞肿瘤、妊娠滋养细胞肿瘤、毛细胞白血病、头颈癌、肝细胞癌、霍奇金病、霍奇金淋巴瘤、高丙种球蛋白血症、下咽癌、肠癌、眼内黑色素瘤、胰岛细胞癌、胰岛细胞胰腺癌、卡波西肉瘤、肾癌、喉癌、唇和口腔癌、肝癌、肺癌、淋巴增生性障碍、巨球蛋白血症、男性乳腺癌、恶性间皮瘤、恶性胸腺瘤、成神经管细胞瘤、黑色素瘤、间皮瘤、转移性隐匿性原发性鳞状颈癌、转移性原发性鳞状颈癌、转移性鳞状颈癌、多发性骨髓瘤、多发性骨髓瘤/浆细胞赘生物、骨髓增生异常综合征、髓性白血病、髓样白血病、骨髓增生性障碍、鼻腔和副鼻窦癌、鼻咽癌、成神经细胞瘤、妊娠期间的非霍奇金淋巴瘤、非黑色素瘤皮肤癌、非小细胞肺癌、隐匿性原发性转移性鳞状颈癌、口咽癌、骨/恶性纤维肉瘤、骨肉瘤/恶性纤维组织细胞瘤、骨肉瘤/骨恶性纤维组织细胞瘤、卵巢上皮癌、卵巢生殖细胞肿瘤、卵巢低恶性潜能肿瘤、胰腺癌、副蛋白血症、紫癜、甲状旁腺癌、阴茎癌、嗜铬细胞瘤、垂体肿瘤、浆细胞赘生物/多发性骨髓瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、原发性肝癌、前列腺癌、直肠癌、肾细胞癌、肾盂和输尿管癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾液腺癌、结节病肉瘤、塞扎里综合征、皮肤癌、小细胞肺癌、小肠癌、软组织肉瘤、鳞状颈癌、胃癌、幕上原始神经外胚层和松果体肿瘤、T细胞淋巴瘤、睾丸癌、胸腺瘤、甲状腺癌、肾盂和输尿管的移行细胞癌、肾盂和输尿管移行癌、滋养细胞肿瘤、输尿管和肾盂细胞癌、尿道癌、子宫癌、子宫肉瘤、阴道癌、视觉通路和下丘脑神经胶质瘤、外阴癌、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、威尔姆斯瘤，以及位于上述器官系统中的除瘤形成以外的任何其他过度增殖性疾病。
在其他实施方案中，如上文和本文所述的多特异性分子用于治疗过度增殖性障碍，例如，过度增殖性结缔组织障碍(例如，过度增殖性纤维化疾病)。在一个实施方案中，过度增殖性纤维化疾病是多系统或器官特异性的。示例性过度增殖性纤维化疾病包括但不限于多系统(例如，系统性硬化症、多灶性纤维硬化、骨髓移植接受者的硬皮病移植物抗宿主病、肾源性系统性纤维化、硬皮病)和器官特异性障碍(例如，眼、肺、肝、心脏、肾、胰腺、皮肤和其他器官的纤维化)。在其他实施方案中，障碍选自肝硬化或结核病。在其他实施方案中，障碍是麻风病。
在实施方案中，多特异性分子(或药物组合物)以适于待治疗或预防的疾病的方式施用。施用的量和频率将由例如患者病况以及患者疾病类型和严重性等因素来确定。合适的剂量可通过临床试验来确定。例如，当指示“有效量”或“治疗量”时，医生可以考虑个体在肿瘤大小、感染或转移程度、对象的年龄、体重和病况方面的差异来确定待施用的药物组合物(或多特异性分子)的精确量。在实施方案中，本文所述的药物组合物可以104至109个细胞/kg体重(例如，105至106个细胞/kg体重，包括那些范围内的所有整数值)的剂量施用。在实施方案中，本文所述的药物组合物可以以这些剂量施用多次。在实施方案中，本文所述的药物组合物可以使用免疫疗法中所述的输注技术来施用(参见例如，Rosenberg等,NewEng.J.of Med.319:1676,1988)。
在实施方案中，癌症是骨髓增生性赘生物，例如，原发性或特发性骨髓纤维化(MF)、原发性血小板增多症(ET)、真性红细胞增多症(PV)或慢性髓性白血病(CML)。在实施方案中，癌症是骨髓纤维化。在实施方案中，对象患有骨髓纤维化。在实施方案中，对象具有钙网蛋白突变，例如，本文公开的钙网蛋白突变。在实施方案中，对象不具有JAK2-V617F突变。在实施方案中，对象具有JAK2-V617F突变。在实施方案中，对象具有MPL突变。在实施方案中，对象不具有MPL突变。
在实施方案中，癌症是实体癌。示例性实体癌包括但不限于卵巢癌、直肠癌、胃癌、睾丸癌、肛门区癌、子宫癌、结肠癌、直肠癌、肾细胞癌、肝癌、非小细胞肺癌、小肠癌、食管癌、黑色素瘤、卡波西肉瘤、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、皮肤或眼内恶性黑色素瘤、子宫癌、脑干神经胶质瘤、垂体腺瘤、表皮样癌、子宫颈鳞状细胞癌、输卵管癌、子宫内膜癌、阴道癌、软组织肉瘤、尿道癌、外阴癌、阴茎癌、膀胱癌、肾癌或输尿管癌、肾盂癌、脊髓轴肿瘤、中枢神经系统(CNS)赘生物、原发性CNS淋巴瘤、肿瘤血管生成、所述癌症的转移病变，或其组合。
炎性和自身免疫性障碍
在一些实施方案中，本文公开的抗NKp30抗体分子(例如，多特异性抗体分子)可以用于治疗炎性和自身免疫性疾病以及移植物抗宿主病(GvHD)。在一些实施方案中，本文公开的抗体分子(例如，多特异性抗体分子)耗尽自身反应性T细胞，例如通过将NK细胞(例如，表达NKp30的细胞)引导至自身反应性T细胞。在一些实施方案中，抗NKp30抗体分子进一步包含与自身反应性T细胞(例如，与炎性或自身免疫性障碍相关的存在于自身反应性T细胞表面上的抗原)结合的结合特异性。
如本文所用，术语“自身免疫性”疾病、障碍或病况是指身体免疫系统攻击其自身细胞或组织的疾病。自身免疫性疾病可以导致产生针对自体抗原或自身抗原的不适当产生和/或过度产生的自身抗体。自身免疫性疾病包括但不限于心血管疾病、类风湿病、腺疾病、胃肠疾病、皮肤病、肝病、神经疾病、肌肉疾病、肾病、与生殖有关的疾病、结缔组织疾病和全身性疾病。在一些实施方案中，自身免疫性疾病由T细胞、B细胞、先天免疫细胞(例如，巨噬细胞、嗜酸性粒细胞或自然杀伤细胞)或补体介导的途径介导。
可通过施用本发明的抗体治疗的自身免疫性障碍的实例包括但不限于斑秃、强直性脊柱炎、抗磷脂综合征、自身免疫性阿狄森氏病、肾上腺的自身免疫性疾病、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性肝炎、自身免疫性卵巢炎和睾丸炎、自身免疫性血小板减少症、白塞氏病、大疱性类天疱疮、心肌病、口炎性腹泻-皮炎、慢性疲劳免疫功能障碍综合征(CFIDS)、慢性炎性脱髓鞘性多神经病、Churg-Strauss综合征、瘢痕性类天疱疮、CREST综合征、冷凝集素病、克罗恩病、盘状狼疮、原发性混合型冷球蛋白血症、纤维肌痛-纤维肌炎、肾小球肾炎、格雷夫斯病、格林-巴利综合征、桥本氏甲状腺炎、特发性肺纤维化、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、IgA神经病、幼年型关节炎、扁平苔癣、红斑狼疮、美尼尔氏病、混合型结缔组织病、多发性硬化、视神经脊髓炎(NMO)、1型或免疫介导的糖尿病、重症肌无力、寻常天疱疮、恶性贫血、结节性多动脉炎、多软骨炎、多腺综合征、风湿性多肌痛、多肌炎和皮肌炎、原发性无丙种球蛋白血症、原发性胆汁性肝硬化、银屑病、银屑病关节炎、雷诺现象、赖特综合征、类风湿性关节炎、结节病、硬皮病、干燥综合征、僵人综合征、全身性红斑狼疮、红斑狼疮、大动脉炎、颞动脉炎/巨细胞动脉炎、横贯性脊髓炎、溃疡性结肠炎、葡萄膜炎、血管炎(例如疱疹样皮炎血管炎)、白癜风和韦格纳肉芽肿。在一些实施方案中，自身免疫性障碍是SLE或1型糖尿病。
可以根据本发明的方法预防、治疗或管理的炎性障碍的实例包括但不限于哮喘、脑炎、炎性肠病、慢性阻塞性肺病(COPD)、过敏性障碍、败血性休克、肺纤维化、未分化的脊椎关节病、未分化的关节病、关节炎、炎性骨质溶解和由慢性病毒或细菌感染引起的慢性炎症。
因此，本发明的抗NKp30抗体分子(例如，多特异性分子)可用于治疗炎性和自身免疫性疾病。
感染性疾病
在一些实施方案中，本文公开的抗NKp30抗体分子(例如，多特异性抗体分子)可以用于治疗感染性疾病。在一些实施方案中，本文公开的抗体分子(例如，多特异性抗体分子)耗尽表达病毒或细菌抗原的细胞。在一些实施方案中，抗NKp30抗体分子进一步包含与存在于受感染细胞(例如，病毒感染的细胞)表面上的抗原结合的结合特异性。
引起可通过方法治疗的感染的致病病毒的一些实例包括HIV、肝炎(甲型、乙型或丙型)、疱疹病毒(例如，VZV、HSV-1、HAV-6、HSV-II和CMV、爱泼斯坦-巴尔病毒)、腺病毒、流感病毒、黄病毒、艾柯病毒、鼻病毒、柯萨奇病毒、冠状病毒(cornovirus)、呼吸道合胞病毒、腮腺炎病毒、轮状病毒、麻疹病毒、风疹病毒、细小病毒、牛痘病毒、HTLV病毒、登革病毒、乳头瘤病毒、软疣病毒、脊髓灰质炎病毒、狂犬病病毒、JC病毒和虫媒脑炎病毒。在一个实施方案中，感染是流感感染。
在另一实施方案中，感染是肝炎感染，例如，乙型肝炎或丙型肝炎感染。
可以治疗的示例性病毒性障碍包括但不限于爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)、流感病毒、HIV、SIV、结核病、疟疾和HCMV。
引起可通过本发明方法治疗的感染的致病细菌的一些实例包括梅毒、衣原体、立克次氏体细菌、分枝杆菌、葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌、脑膜炎球菌和conococci、克雷伯菌、变形杆菌、沙雷菌、假单胞菌、军团菌、白喉、沙门菌、杆菌、霍乱、破伤风、肉毒中毒、炭疽、鼠疫、钩端螺旋体病和莱姆病细菌。抗NKp30抗体分子可以与上述感染的现有治疗方式组合使用。例如，梅毒的治疗包括青霉素(例如，青霉素G)、四环素、多西环素、头孢曲松和阿奇霉素。
诊断用途
在一方面，本发明提供了一种用于在体外(例如，在生物样品中，例如组织活检，例如，来自癌性组织)或体内(例如，对象体内成像)检测NKp30蛋白的存在的诊断方法。该方法包括：(i)使样品与本文所述的抗体分子接触，或向对象施用该抗体分子；(任选地)(ii)接触参考样品，例如，对照样品(例如，对照生物样品，例如血浆、组织、活检)或对照对象)；以及(iii)检测抗体分子与样品或对象或对照样品或对象之间的复合物的形成，其中样品或对象中的复合物的形成相对于对照样品或对象的变化(例如，统计学上显著的变化)指示样品中NKp30的存在。抗体分子可以直接或间接用可检测物质标记，以便于检测结合或未结合的抗体。如上文所述和下文更详细描述的，合适的可检测物质包括各种酶、辅基、荧光材料、发光材料和放射性材料。
术语“样品”是指用于检测多肽的样品，包括但不限于细胞、细胞裂解物、细胞的蛋白质或膜提取物、体液或组织样品。
抗体分子和NKp30之间的复合物形成可以通过测量或可视化与NKp30抗原结合的结合分子或未结合的结合分子来检测。可以使用常规的检测测定，例如，酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫测定(RIA)或组织免疫组织化学。作为标记抗体分子的替代方法，可以通过竞争免疫测定，利用标记有可检测物质的标准品和未标记的抗体分子来测定样品中NKp30的存在。在该测定中，将生物样品、标记的标准品和抗体分子组合，并确定与未标记的结合分子结合的标记的标准品的量。样品中NKp30的量与结合抗体分子的标记的标准品的量成反比。
实施例
阐述下文实施例以帮助理解本发明，但不旨在且不应解释为以任何方式限制其范围。
实施例1：免疫接种亚美尼亚仓鼠以生成抗NKp30抗体
简言之，用完全弗氏佐剂中的人NKp30蛋白胞外结构域对亚美尼亚仓鼠进行免疫，并在第14天和第28天用不完全弗氏佐剂(IFA)中的NKp30强化两次。在第56天，再给予一次IFA中的强化，三天后收获动物。收集脾，并与P3X63Ag8.653鼠骨髓瘤细胞系融合。将125ul的0.9×10^5个细胞/孔置于96孔板中，并在第7天、第11天以及之后根据需要，在不存在或存在用于选择的HAT或HT的情况下，供应125μl的I-20+2ME+HAT(IMDM(4g/L葡萄糖)(补充有20％胎牛血清、4mM L-谷氨酰胺、1mM丙酮酸钠、50U青霉素、50μg链霉素和50μM 2-ME)以及杂交瘤克隆因子(最终1％)。融合后大致2周(细胞约50％融汇)，收集上清液并测定结合。
实施例2：NKp30 mAb的杂交瘤筛选
在筛选前18小时用BG160(hNKp30细胞抗原)转染Expi293细胞。筛选当天，将转染的细胞稀释至0.05×10^6/mL，并添加抗亚美尼亚仓鼠Fc Alexa Fluor 488至终浓度为0.4ug/mL。将50uL(2,500个细胞)的该混合物添加至384孔板的每个孔中。使用相同密度的未转染的二代293细胞作为阴性对照。将5uL杂交瘤上清液添加至细胞混合物中，并将板在37℃下孵育1小时。然后该板在镜面球(Mirrorball)上进行成像。鉴定阳性克隆，并通过连续稀释亚克隆，以获得克隆选择的杂交瘤。使用相同方案再次确认之后，收获杂交瘤细胞，并回收相应的重链和轻链序列。将DNA亚克隆至pcDNA3.4中，用于随后表达相应的抗体并进一步验证。
实施例3：NKp30抗体与NK92细胞的结合
用含有0.5％ BSA和0.1％叠氮化钠的PBS(染色缓冲液)洗涤NK-92细胞，并以200,000个细胞/孔添加至96孔V底板中。将仓鼠NKp30抗体添加至2.0倍连续稀释的细胞中，并在室温下孵育1小时。用染色缓冲液洗涤板两次。以1:100稀释(1.4mg/ml储液)添加与AF647缀合的针对仓鼠Fc的第二抗体(Jackson，127-605-160)，并与细胞在4℃下孵育30分钟，随后用染色缓冲液洗涤。随后在室温下用4％多聚甲醛将细胞固定10分钟。在CytoFLEX LS(Beckman Coulter)上读取板。数据计算为百分比AF747阳性群体(图1)。
实施例4：使用NK92细胞系测量NKp30抗体活性的生物测定
将NKp30抗体在PBS中三倍连续稀释，并在平底96孔板中在2-8℃下孵育过夜。将板在PBS中洗涤两次，并添加含有IL-2的生长培养基中的40,000个NK-92细胞。将板在37℃、5％ CO2的潮湿培养箱中孵育16-24小时，然后收集上清液。按照MSD测定说明来测量上清液中的IFNγ水平(图2)。从与仓鼠同种型IgG一起孵育的细胞中收集的上清液被用作阴性对照，并且来自与NKp30单克隆抗体(R&D，克隆210847)一起孵育的细胞的上清液用作阳性对照。使用仓鼠抗NKp30 mAB生成数据。
实施例5：人源化抗NKp30抗体的生成和表征
选择一系列仓鼠抗NKp30抗体。这些抗体显示出与人NKp30和食蟹猴NKp30结合，并诱导NK-90细胞产生IFNγ(数据未显示)。表9中公开了示例性仓鼠抗NKp30抗体15E1、9G1、15H6、9D9、3A12和12D10的VH和VL序列。表9中也公开了基于15E1、9G1和15H6的示例性人源化抗NKp30抗体的VH和VL序列。表18和表8中公开了这些抗体的Kabat CDR。
选择基于15E1的两种人源化构建体。第一种构建体BJM0407是包含重链可变区和λ轻链可变区的Fab，该重链可变区包含SEQ ID NO:7302的氨基酸序列，该λ轻链可变区包含SEQ ID NO:7305的氨基酸序列。其相应的scFv构建体BJM0859包含SEQ ID NO:7310的氨基酸序列。第二种构建体BJM0411是包含重链可变区和κ轻链可变区的Fab，该重链可变区包含SEQ ID NO:7302的氨基酸序列，该κ轻链可变区包含SEQ ID NO:7309的氨基酸序列。其相应的scFv构建体BJM0860包含SEQ ID NO:7311的氨基酸序列。BJM0407和BJM0411显示出可比较的生物物理学特征，例如，与NKp30的结合亲和力和热稳定性。scFv构建体BJM0859和BJM0860也显示出可比较的生物物理学特性。
实施例6：示例性抗NKp30抗体分子的Biacore分析
在本实施例中，分析了一系列示例性抗NKp30抗体分子对NKp30的结合亲和力。简言之，通过使用BIAcore T200进行表面等离子体共振(SPR)测量。经由抗小鼠Fc抗体将人NKp30(BKM0179)固定在CM5芯片上至应答为50RU。将每种示例性抗体构建体以3.9、7.8、15.6、31.2、62.5和125nM的浓度以及20μl/min的流速注射到其上固定有人NKp30的表面上。使用1:1结合模型拟合数据。
如表19所示，与亲本抗体相比，示例性抗体中的大多数显示保留了对人NKp30的亲和力。
表19：Biacore结果
援引并入
本文提及的所有出版物、专利和登录号在此通过引用以其整体并入，如同每个单独的出版物或专利被明确且单独地表明通过引用并入。
等效物
虽然已经讨论了本发明的具体实施方案，但上面的说明书是说明性的而非限制性的。在阅读本说明书和下面的权利要求书后，本发明的许多变化对于本领域技术人员将变得显而易见。本发明的全部范围应参照权利要求书及其等效物的全部范围和说明书以及这种变化来确定。
示例性实施方案
上述多功能性分子、核酸、载体、宿主细胞或方法中任一种的其他特征包括以下示例性实施方案中的一个或多个。
本领域技术人员将认识到或仅使用常规实验的方法就能够确定本文所述的本发明具体实施方案的许多等效物。这些等效物旨在被以下示例性实施方案涵盖。
示例性实施方案1
本文公开了以高亲和力和特异性与NKp30结合的抗体分子(例如，人源化抗体分子)。还提供了编码抗体分子的核酸分子、表达载体、宿主细胞和制备抗体分子的方法。还提供了多特异性或双特异性或多功能性抗体分子和包含抗体分子的药物组合物。本文公开的抗NKp30抗体分子可以(单独或与其他药剂或治疗形式组合)用于治疗、预防和/或诊断障碍，例如癌性障碍(例如，实体瘤和软组织肿瘤)，以及自身免疫性和感染性疾病。因此，本文公开了使用抗NKp30抗体分子检测NKp30的组合物和方法，以及治疗包括癌症、自身免疫性和/或感染性疾病在内的各种障碍的方法。
因此，在一方面，本发明的特征在于一种抗体分子(例如，分离的或重组的抗体分子)，其包含根据以下列举的实施方案的一个或多个序列。所公开的抗体分子、多功能性分子、核酸、载体、宿主细胞或方法中任一种的其他特征包括以下列举的实施方案中的一个或多个。
本领域技术人员将认识到或仅使用常规实验的方法就能够确定本文所述的本发明具体实施方案的许多等效物。这样的等效物旨在被以下列举的实施方案涵盖。
在一方面，本公开的特征在于一种与NKp30结合的分离的抗体分子，其包含：
(a)表8A中所述的重链互补决定区1(VHCDR1)、重链互补决定区2(VHCDR2)和/或重链互补决定区3(VHCDR3)，或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列；和/或
(b)表8B中所述的轻链互补决定区1(VLCDR1)、轻链互补决定区2(VLCDR2)和/或轻链互补决定区3(VLCDR3)，或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列。
在一些实施方案中，VHCDR1包含SEQ ID NO:C019、C033、C047、C061、C075、C089、C103或C116中任一者的氨基酸序列，或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的氨基酸序列。
在一些实施方案中，VHCDR2包含SEQ ID NO:C021、C035、C049、C063、C077、C091、C105或C118中任一者的氨基酸序列，或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的氨基酸序列。
在一些实施方案中，VHCDR3包含SEQ ID NO:C023、C037、C051、C065、C079、C093、C107或C120中任一者的氨基酸序列，或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的氨基酸序列。
在一些实施方案中，VLCDR1包含SEQ ID NO:C026、C040、C054、C068、C082、C096、C110或C123中任一者的氨基酸序列，或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的氨基酸序列。
在一些实施方案中，VLCDR2包含SEQ ID NO:C028、C042、C056、C070、C084、C098、C112或C125中任一者的氨基酸序列，或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的氨基酸序列。
在一些实施方案中，VLCDR3包含SEQ ID NO:C030、C044、C058、C072、C086、C100、C113或C127中任一者的氨基酸序列，或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗体分子包含：
(a)表8A中所述的重链框架区1(VHFWR1)、重链框架区2(VHFWR1)、重链框架区3(VHFWR3)和/或重链框架区4(VHFWR4)，或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的氨基酸序列；和/或
(b)表8B中所述的轻链框架区1(VLFWR1)、轻链框架区2(VLFWR1)、轻链框架区3(VLFWR3)和/或轻链框架区4(VLFWR4)，或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗体分子包含：
(a)表9中所述的重链可变区(VH)，例如，包含SEQ ID NO:C001-C008中任一者的氨基酸序列或与其具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列的VH；和/或
(b)表9中所述的轻链可变区(VL)，例如，包含SEQ ID NO:C009-C016中任一者的氨基酸序列或与其具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列的VL。
在一些实施方案中，抗体分子包含表10中所述的氨基酸序列，例如，SEQ ID NO:C017-C024中任一者的氨基酸序列，或与其具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列。
在一方面，本公开的特征在于一种多特异性分子，其包含本文所述的抗体分子。
在一些实施方案中，多特异性分子进一步包含以下中的一种、两种、三种、四种或更多种：(a)肿瘤靶向部分，例如，如本文所述的；(b)细胞因子分子，例如，如本文所述的；(c)T细胞接合物，例如，如本文所述的；或(d)基质修饰部分，例如，如本文所述的。
在一些实施方案中，多特异性分子进一步包含与自身反应性T细胞(例如，与炎性或自身免疫性障碍相关的存在于自身反应性T细胞表面上的抗原)结合的结合特异性。
在一些实施方案中，多特异性分子进一步包含与受感染细胞(例如，病毒或细菌感染的细胞)结合的结合特异性。
在一些实施方案中，抗体分子是单特异性抗体分子、双特异性抗体分子或三特异性抗体分子。在一些实施方案中，多特异性分子是双特异性抗体分子或三特异性抗体分子。
在一些实施方案中，抗体分子或多特异性分子是单价抗体分子、二价抗体分子或三价抗体分子。
在一些实施方案中，抗体分子或多特异性分子是全抗体(例如，包括至少一条(优选两条)完整重链和至少一条(优选两条)完整轻链的抗体)，或抗原结合片段(例如，Fab、F(ab’)2、Fv、单链Fv、单结构域抗体、双抗体(dAb)、二价抗体，或双特异性抗体或其片段、其单结构域变体或骆驼科抗体)。
在一些实施方案中，抗体分子或多特异性分子包含选自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的重链恒定区或其片段。
在一些实施方案中，抗体分子或多特异性分子包含选自κ或λ轻链恒定区的轻链恒定区或其片段。
在一些实施方案中，免疫球蛋白链恒定区(例如，Fc区)被改变(例如，突变)，以增加或减少以下中的一种或多种：Fc受体结合、抗体糖基化、半胱氨酸残基数量、效应细胞功能或补体功能。
在一些实施方案中，第一和第二免疫球蛋白链恒定区(例如，Fc区)的界面被改变(例如，突变)，以例如相对于非工程化界面增加或减少二聚化。
在一些实施方案中，免疫球蛋白链恒定区(例如，Fc区)的二聚化通过提供具有以下中的一种或多种的第一和第二Fc区的Fc界面来增强：成对空腔-突起(“杵-臼”)、静电相互作用或链交换，使得例如相对于非工程化界面形成更大比率的异源多聚体:同源多聚体。
在一些实施方案中，免疫球蛋白链恒定区(例如，Fc区)在例如人IgG1 Fc区的选自347、349、350、351、366、368、370、392、394、395、397、398、399、405、407或409中的一个或多个位置处包含氨基酸取代。
在一些实施方案中，免疫球蛋白链恒定区(例如，Fc区)包含选自以下的氨基酸取代：T366S、L368A或Y407V(例如，对应于空腔或臼)，或T366W(例如，对应于突起或杵)，或其组合。
在一些实施方案中，抗体分子或多特异性分子进一步包含接头，例如，在以下中的一个或多个之间的接头：靶向部分和细胞因子分子或基质修饰部分、靶向部分和免疫细胞接合物、细胞因子分子或基质修饰部分和免疫细胞接合物、细胞因子分子或基质修饰部分和免疫球蛋白链恒定区(例如，Fc区)、靶向部分和免疫球蛋白链恒定区、或免疫细胞接合物和免疫球蛋白链恒定区。
在一些实施方案中，接头选自：可切割接头、不可切割接头、肽接头、柔性接头、刚性接头、螺旋接头或非螺旋接头。在一些实施方案中，接头是肽接头。在一些实施方案中，肽接头包含Gly和Ser。
在另一方面，本公开的特征在于一种分离的核酸分子，其包含编码本文所述的抗体分子或多特异性或多功能性分子中任一种的核苷酸序列，或与其基本上同源(例如，与其至少95％至99.9％相同)的核苷酸序列。
在另一方面，本公开的特征在于一种分离的核酸，其编码本文所述的抗体分子或本文所述的多特异性分子。
在另一方面，本公开的特征在于一种载体，例如，表达载体，其包含本文所述的核酸分子中的一种或多种。
在另一方面，本公开的特征在于一种宿主细胞，其包含本文所述的核酸分子或本文所述的载体。
在另一方面，本公开的特征在于一种制备(例如，产生)本文所述的抗体分子或本文所述的多特异性或多功能性分子多肽的方法，其包括在合适的条件(例如，适于基因表达和/或同源或异源二聚化的条件)下培养本文所述的宿主细胞。
在另一方面，本公开的特征在于一种药物组合物，其包含本文所述的抗体分子或本文所述的多特异性或多功能性分子多肽以及药学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂。
在另一方面，本公开的特征在于一种治疗癌症的方法，其包括向有需要的对象施用本文所述的抗体分子或本文所述的多特异性或多功能性分子多肽，其中抗体分子或多特异性或多功能性分子多肽以有效治疗癌症的量施用。
在另一方面，本公开的特征在于本文所述的抗体分子或本文所述的多特异性或多功能性分子多肽在治疗癌症方面的用途。
在一些实施方案中，癌症是实体瘤癌症或转移病变。在一些实施方案中，实体瘤癌症是胰腺癌(例如，胰腺腺癌)、乳腺癌、结直肠癌、肺癌(例如，小细胞或非小细胞肺癌)、皮肤癌、卵巢癌或肝癌中的一种或多种。在一些实施方案中，癌症是血液癌症。
在一些实施方案中，方法或用途进一步包括施用第二种治疗性处理。在一些实施方案中，第二种治疗性处理包括治疗剂(例如，化学治疗剂、生物药剂、激素疗法)、放射或手术。在一些实施方案中，治疗剂选自：化学治疗剂或生物药剂。
在一方面，本公开的特征在于一种治疗自身免疫性或炎性障碍的方法，其包括向有需要的对象施用本文所述的抗体分子或本文所述的多特异性或多功能性分子多肽，其中抗体分子或多特异性或多功能性分子多肽以有效治疗自身免疫性或炎性障碍的量施用。
在一方面，本公开的特征在于本文所述的抗体分子或本文所述的多特异性或多功能性分子多肽在治疗自身免疫性或自身炎性障碍方面的用途。
在一方面，本公开的特征在于一种治疗感染性障碍的方法，其包括向有需要的对象施用本文所述的抗体分子或本文所述的多特异性或多功能性分子多肽，其中抗体分子或多特异性或多功能性分子多肽以有效治疗感染性障碍的量施用。
在一方面，本公开的特征在于本文所述的抗体分子或本文所述的多特异性或多功能性分子多肽在治疗感染性障碍方面的用途。
示例性实施方案2
本发明还包括以下列举的实施方案中的任一个：
1.一种与NKp30结合的分离的抗体分子，其包含：
(i)重链可变区(VH)，该重链可变区(VH)包含SEQ ID NO:7313的重链互补决定区1(VHCDR1)氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6001的VHCDR2氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:7315的VHCDR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)；和/或
(ii)轻链可变区(VL)，该轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO:7326的轻链互补决定区1(VLCDR1)氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:7327的VLCDR2氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:7329的VLCDR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)。
2.根据实施方案1的抗体分子，其中抗原结合结构域包含：
(i)VH，该VH包含SEQ ID NO:7298或7300-7304中任一者的氨基酸序列(或与SEQID NO:7298或7300-7304中任一者具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)，和/或
(ii)VL，该VL包含SEQ ID NO:7299或7305-7309中任一者的氨基酸序列(或与SEQID NO:7299或7305-7309中任一者具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
3.根据实施方案2的抗体分子，其中抗原结合结构域包含：
(i)VH和VL，该VH包含SEQ ID NO:7302的氨基酸序列(或与7302具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)，该VL包含SEQ ID NO:7305的氨基酸序列(或与7305具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)；或
(ii)VH和VL，该VH包含SEQ ID NO:7302的氨基酸序列(或与7302具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)，该VL包含SEQ ID NO:7309的氨基酸序列(或与7309具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
4.根据实施方案1-3中任一项的抗体分子，其中抗原结合结构域包含：
(i)SEQ ID NO:7310的氨基酸序列(或与7310具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)；或
(ii)SEQ ID NO:7311的氨基酸序列(或与7311具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
5.一种与NKp30结合的分离的抗体分子，其包含：
(i)重链可变区(VH)，该重链可变区(VH)包含SEQ ID NO:6000的重链互补决定区1(VHCDR1)氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6001的VHCDR2氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6002的VHCDR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和
(ii)轻链可变区(VL)，该轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO:6063的轻链互补决定区1(VLCDR1)氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6064的VLCDR2氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:7293的VLCDR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)。
6.根据实施方案5的抗体分子，其中抗原结合结构域包含：(i)重链可变区(VH)，该重链可变区(VH)包含SEQ ID NO:6000的重链互补决定区1(VHCDR1)氨基酸序列、SEQ IDNO:6001的VHCDR2氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6002的VHCDR3氨基酸序列，和
(ii)轻链可变区(VL)，该轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO:6063的轻链互补决定区1(VLCDR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6064的VLCDR2氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:7293的VLCDR3氨基酸序列。
7.根据实施方案5或6的抗体分子，其中抗原结合结构域包含：
(1)重链可变区(VH)，该重链可变区(VH)包含SEQ ID NO:6003的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6004的VHFWR2氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6005的VHFWR3氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，或SEQ ID NO:6006的VHFWR4氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或
(2)轻链可变区(VL)，该轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO:6066的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6067的VLFWR2氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:7292的VLFWR3氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，或SEQ ID NO:6069的VLFWR4氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)。
8.根据实施方案7的抗体分子，其中抗原结合结构域包含：
(1)重链可变区(VH)，该重链可变区(VH)包含SEQ ID NO:6003的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6004的VHFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6005的VHFWR3氨基酸序列，或SEQ ID NO:6006的VHFWR4氨基酸序列，和
(3)轻链可变区(VL)，该轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO:6066的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6067的VLFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:7292的VLFWR3氨基酸序列，或SEQ ID NO:6069的VLFWR4氨基酸序列。
9.根据实施方案5-8中任一项的抗体分子，其中抗原结合结构域包含：
(i)VH，该VH包含SEQ ID NO:6121的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6121具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)，和/或(i)VL，该VL包含SEQID NO:7294的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:7294具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
10.根据实施方案5-9中任一项的抗体分子，其中抗原结合结构域包含重链，该重链包含SEQ ID NO:6148或6149的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6148或6149具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
11.根据实施方案5-10中任一项的抗体分子，其中抗原结合结构域包含轻链，该轻链包含SEQ ID NO:6150的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6150具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
12.根据实施方案5-11中任一项的抗体分子，其中抗原结合结构域包含重链和轻链，该重链包含SEQ ID NO:6148或6149的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6148或6149具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)，该轻链包含SEQ IDNO:6150的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6150具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或的99％序列同一性的氨基酸序列)。
13.根据实施方案5-12中任一项的抗体分子，其中抗原结合结构域包含重链可变区(VH)，该重链可变区(VH)包含SEQ ID NO:6014的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6015的VHFWR2氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6016的VHFWR3氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，或SEQ ID NO:6017的VHFWR4氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)。
14.根据实施方案13的抗体分子，其中抗原结合结构域包含重链可变区(VH)，该重链可变区(VH)包含SEQ ID NO:6014的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6015的VHFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6016的VHFWR3氨基酸序列，或SEQ ID NO:6017的VHFWR4氨基酸序列。
15.根据实施方案14的抗体分子，其中抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ IDNO:6123的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6123具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
16.根据实施方案5-15中任一项的抗体分子，其中抗原结合结构域包含重链可变区(VH)，该重链可变区(VH)包含SEQ ID NO:6018的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6019的VHFWR2氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6020的VHFWR3氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，或SEQ ID NO:6021的VHFWR4氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)。
17.根据实施方案16的抗体分子，其中抗原结合结构域包含重链可变区(VH)，该重链可变区(VH)包含SEQ ID NO:6018的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6019的VHFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6020的VHFWR3氨基酸序列，或SEQ ID NO:6021的VHFWR4氨基酸序列。
18.根据实施方案17的抗体分子，其中抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ IDNO:6124的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6124具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
19.根据实施方案5-18中任一项的抗体分子，其中抗原结合结构域包含重链可变区(VH)，该重链可变区(VH)包含SEQ ID NO:6022的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6023的VHFWR2氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6024的VHFWR3氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，或SEQ ID NO:6025的VHFWR4氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)。
20.根据实施方案19的抗体分子，其中抗原结合结构域包含重链可变区(VH)，该重链可变区(VH)包含SEQ ID NO:6022的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6023的VHFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6024的VHFWR3氨基酸序列，或SEQ ID NO:6025的VHFWR4氨基酸序列。
21.根据实施方案20的抗体分子，其中抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ IDNO:6125的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6125具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
22.根据实施方案5-21中任一项的抗体分子，其中抗原结合结构域包含重链可变区(VH)，该重链可变区(VH)包含SEQ ID NO:6026的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6027的VHFWR2氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6028的VHFWR3氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，或SEQ ID NO:6029的VHFWR4氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)。
23.根据实施方案22的抗体分子，其中抗原结合结构域包含重链可变区(VH)，该重链可变区(VH)包含SEQ ID NO:6026的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6027的VHFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6028的VHFWR3氨基酸序列，或SEQ ID NO:6029的VHFWR4氨基酸序列。
24.根据实施方案23的抗体分子，其中抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ IDNO:6126的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6126具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
25.根据实施方案5-24中任一项的抗体分子，其中抗原结合结构域包含重链可变区(VH)，该重链可变区(VH)包含SEQ ID NO:6030的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6032的VHFWR2氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6033的VHFWR3氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，或SEQ ID NO:6034的VHFWR4氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)。
26.根据实施方案25的抗体分子，其中抗原结合结构域包含重链可变区(VH)，该重链可变区(VH)包含SEQ ID NO:6030的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6032的VHFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6033的VHFWR3氨基酸序列，或SEQ ID NO:6034的VHFWR4氨基酸序列。
27.根据实施方案26的抗体分子，其中抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ IDNO:6127的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6127具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
28.根据实施方案5-27中任一项的抗体分子，其中抗原结合结构域包含重链可变区(VH)，该重链可变区(VH)包含SEQ ID NO:6035的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6036的VHFWR2氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6037的VHFWR3氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，或SEQ ID NO:6038的VHFWR4氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)。
29.根据实施方案28的抗体分子，其中抗原结合结构域包含重链可变区(VH)，该重链可变区(VH)包含SEQ ID NO:6035的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6036的VHFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6037的VHFWR3氨基酸序列，或SEQ ID NO:6038的VHFWR4氨基酸序列。
30.根据实施方案29的抗体分子，其中抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ IDNO:6128的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6128具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
31.根据实施方案5、6或13-30中任一项的抗体分子，其中抗原结合结构域包含轻链可变区(VL)，该轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO:6077的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ IDNO:6078的VLFWR2氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6079的VLFWR3氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，或SEQ ID NO:6080的VLFWR4氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)。
32.根据实施方案31的抗体分子，其中抗原结合结构域包含轻链可变区(VL)，该轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO:6077的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6078的VLFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6079的VLFWR3氨基酸序列，或SEQ ID NO:6080的VLFWR4氨基酸序列。
33.根据实施方案32的抗体分子，其中抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ IDNO:6137的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6137具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
34.根据实施方案5、6或13-30中任一项的抗体分子，其中抗原结合结构域包含轻链可变区(VL)，该轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO:6081的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ IDNO:6082的VLFWR2氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6083的VLFWR3氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，或SEQ ID NO:6084的VLFWR4氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)。
35.根据实施方案34的抗体分子，其中抗原结合结构域包含轻链可变区(VL)，该轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO:6081的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6082的VLFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6083的VLFWR3氨基酸序列，或SEQ ID NO:6084的VLFWR4氨基酸序列。
36.根据实施方案35的抗体分子，其中抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ IDNO:6138的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6138具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
37.根据实施方案5、6或13-30中任一项的抗体分子，其中抗原结合结构域包含轻链可变区(VL)，该轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO:6085的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ IDNO:6086的VLFWR2氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6087的VLFWR3氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，或SEQ ID NO:6088的VLFWR4氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)。
38.根据实施方案37的抗体分子，其中抗原结合结构域包含轻链可变区(VL)，该轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO:6085的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6086的VLFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6087的VLFWR3氨基酸序列，或SEQ ID NO:6088的VLFWR4氨基酸序列。
39.根据实施方案38的抗体分子，其中抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ IDNO:6139的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6139具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
40.根据实施方案5、6或13-30中任一项的抗体分子，其中抗原结合结构域包含轻链可变区(VL)，该轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO:6089的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ IDNO:6090的VLFWR2氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6091的VLFWR3氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，或SEQ ID NO:6092的VLFWR4氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)。
41.根据实施方案40的抗体分子，其中抗原结合结构域包含轻链可变区(VL)，该轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO:6089的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6090的VLFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6091的VLFWR3氨基酸序列，或SEQ ID NO:6092的VLFWR4氨基酸序列。
42.根据实施方案41的抗体分子，其中抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ IDNO:6140的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6140具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
43.根据实施方案5、6或13-30中任一项的抗体分子，其中抗原结合结构域包含轻链可变区(VL)，该轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO:6093的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ IDNO:6094的VLFWR2氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6095的VLFWR3氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，或SEQ ID NO:6096的VLFWR4氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)。
44.根据实施方案43的抗体分子，其中抗原结合结构域包含轻链可变区(VL)，该轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO:6093的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6094的VLFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6095的VLFWR3氨基酸序列，或SEQ ID NO:6096的VLFWR4氨基酸序列。
45.根据实施方案44的抗体分子，其中抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ IDNO:6141的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6141具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
46.一种与NKp30结合的分离的抗体分子，其包含：
(i)重链可变区(VH)，该重链可变区(VH)包含SEQ ID NO:6007的重链互补决定区1(VHCDR1)氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6008的VHCDR2氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6009的VHCDR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和
(ii)轻链可变区(VL)，该轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO:6070的轻链互补决定区1(VLCDR1)氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6071的VLCDR2氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6072的VLCDR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)。
47.根据实施方案46的抗体分子，其中抗原结合结构域包含：
(i)重链可变区(VH)，该重链可变区(VH)包含SEQ ID NO:6007的重链互补决定区1(VHCDR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6008的VHCDR2氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6009的VHCDR3氨基酸序列，和
(ii)轻链可变区(VL)，该轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO:6070的轻链互补决定区1(VLCDR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6071的VLCDR2氨基酸序列,和/或SEQ ID NO:6072的VLCDR3氨基酸序列。
48.根据实施方案46或47的抗体分子，其中抗原结合结构域包含：(1)重链可变区(VH)，该重链可变区(VH)包含SEQ ID NO:6010的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6011的VHFWR2氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6012的VHFWR3氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，或SEQ ID NO:6013的VHFWR4氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或
(2)轻链可变区(VL)，该轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO:6073的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6074的VLFWR2氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6075的VLFWR3氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，或SEQ ID NO:6076的VLFWR4氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)。
49.根据实施方案48的抗体分子，其中抗原结合结构域包含：
(1)重链可变区(VH)，该重链可变区(VH)包含SEQ ID NO:6010的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6011的VHFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6012的VHFWR3氨基酸序列，或SEQ ID NO:6013的VHFWR4氨基酸序列，和
(3)轻链可变区(VL)，该轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO:6073的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6074的VLFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6075的VLFWR3氨基酸序列，或SEQ ID NO:6076的VLFWR4氨基酸序列。
50.根据实施方案46-49中任一项的抗体分子，其中抗原结合结构域包含：
(i)VH，该VH包含SEQ ID NO:6122的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6122具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)，和/或(i)VL，该VL包含SEQID NO:6136的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6136具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
51.根据实施方案46-50中任一项的抗体分子，其中抗原结合结构域包含重链，该重链包含SEQ ID NO:6151或6152的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6151或6152具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
52.根据实施方案46-51中任一项的抗体分子，其中抗原结合结构域包含轻链，该轻链包含SEQ ID NO:6153的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6153具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
53.根据实施方案46-51中任一项的抗体分子，其中抗原结合结构域包含重链和轻链，该重链包含SEQ ID NO:6151或6152的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6151或6152具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)，该轻链包含SEQ IDNO:6153的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6153具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或的99％序列同一性的氨基酸序列)。
54.根据实施方案46或47的抗体分子，其中抗原结合结构域包含重链可变区(VH)，该重链可变区(VH)包含SEQ ID NO:6039的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6040的VHFWR2氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6041的VHFWR3氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，或SEQ ID NO:6042的VHFWR4氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)。
55.根据实施方案54的抗体分子，其中抗原结合结构域包含重链可变区(VH)，该重链可变区(VH)包含SEQ ID NO:6039的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6040的VHFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6041的VHFWR3氨基酸序列，或SEQ ID NO:6042的VHFWR4氨基酸序列。
56.根据实施方案55的抗体分子，其中抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ IDNO:6129的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6129具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
57.根据实施方案46或47的抗体分子，其中抗原结合结构域包含重链可变区(VH)，该重链可变区(VH)包含SEQ ID NO:6043的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6044的VHFWR2氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6045的VHFWR3氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，或SEQ ID NO:6046的VHFWR4氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)。
58.根据实施方案57的抗体分子，其中抗原结合结构域包含重链可变区(VH)，该重链可变区(VH)包含SEQ ID NO:6043的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6044的VHFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6045的VHFWR3氨基酸序列，或SEQ ID NO:6046的VHFWR4氨基酸序列。
59.根据实施方案58的抗体分子，其中抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ IDNO:6130的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6130具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
60.根据实施方案46或47中任一项的抗体分子，其中抗原结合结构域包含重链可变区(VH)，该重链可变区(VH)包含SEQ ID NO:6047的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6048的VHFWR2氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6049的VHFWR3氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，或SEQ ID NO:6050的VHFWR4氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)。
61.根据实施方案60的抗体分子，其中抗原结合结构域包含重链可变区(VH)，该重链可变区(VH)包含SEQ ID NO:6047的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6048的VHFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6049的VHFWR3氨基酸序列，或SEQ ID NO:6050的VHFWR4氨基酸序列。
62.根据实施方案61的抗体分子，其中抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ IDNO:6131的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6131具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
63.根据实施方案46或47中任一项的抗体分子，其中抗原结合结构域包含重链可变区(VH)，该重链可变区(VH)包含SEQ ID NO:6051的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6052的VHFWR2氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6053的VHFWR3氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，或SEQ ID NO:6054的VHFWR4氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)。
64.根据实施方案63的抗体分子，其中抗原结合结构域包含重链可变区(VH)，该重链可变区(VH)包含SEQ ID NO:6051的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6052的VHFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6053的VHFWR3氨基酸序列，或SEQ ID NO:6054的VHFWR4氨基酸序列。
65.根据实施方案64的抗体分子，其中抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ IDNO:6132的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6132具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
66.根据实施方案46或47中任一项的抗体分子，其中抗原结合结构域包含重链可变区(VH)，该重链可变区(VH)包含SEQ ID NO:6055的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6056的VHFWR2氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6057的VHFWR3氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，或SEQ ID NO:6058的VHFWR4氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)。
67.根据实施方案66的抗体分子，其中抗原结合结构域包含重链可变区(VH)，该重链可变区(VH)包含SEQ ID NO:6055的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6056的VHFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6057的VHFWR3氨基酸序列，或SEQ ID NO:6058的VHFWR4氨基酸序列。
68.根据实施方案67的抗体分子，其中抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ IDNO:6133的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6133具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
69.根据实施方案46或47中任一项的抗体分子，其中抗原结合结构域包含重链可变区(VH)，该重链可变区(VH)包含SEQ ID NO:6059的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6060的VHFWR2氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6061的VHFWR3氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，或SEQ ID NO:6062的VHFWR4氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)。
70.根据实施方案69的抗体分子，其中抗原结合结构域包含重链可变区(VH)，该重链可变区(VH)包含SEQ ID NO:6059的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6060的VHFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6061的VHFWR3氨基酸序列，或SEQ ID NO:6062的VHFWR4氨基酸序列。
71.根据实施方案70的抗体分子，其中抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ IDNO:6134的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6134具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
72.根据实施方案46、47或54-71中任一项的抗体分子，其中抗原结合结构域包含轻链可变区(VL)，该轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO:6097的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQID NO:6098的VLFWR2氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6099的VLFWR3氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，或SEQ ID NO:6100的VLFWR4氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)。
73.根据实施方案72的抗体分子，其中抗原结合结构域包含轻链可变区(VL)，该轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO:6097的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6098的VLFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6099的VLFWR3氨基酸序列，或SEQ ID NO:6100的VLFWR4氨基酸序列。
74.根据实施方案73的抗体分子，其中抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ IDNO:6142的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6142具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
75.根据实施方案46、47或54-74中任一项的抗体分子，其中抗原结合结构域包含轻链可变区(VL)，该轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO:6101的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQID NO:6102的VLFWR2氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6103的VLFWR3氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，或SEQ ID NO:6104的VLFWR4氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)。
76.根据实施方案75的抗体分子，其中抗原结合结构域包含轻链可变区(VL)，该轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO:6101的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6102的VLFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6103的VLFWR3氨基酸序列，或SEQ ID NO:6104的VLFWR4氨基酸序列。
77.根据实施方案76的抗体分子，其中抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ IDNO:6143的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6143具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
78.根据实施方案46、47或54-77中任一项的抗体分子，其中抗原结合结构域包含轻链可变区(VL)，该轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO:6105的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQID NO:6106的VLFWR2氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6107的VLFWR3氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，或SEQ ID NO:6108的VLFWR4氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)。
79.根据实施方案78的抗体分子，其中抗原结合结构域包含轻链可变区(VL)，该轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO:6105的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6106的VLFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6107的VLFWR3氨基酸序列，或SEQ ID NO:6108的VLFWR4氨基酸序列。
80.根据实施方案79的抗体分子，其中抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ IDNO:6144的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6144具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
81.根据实施方案46、47或54-80中任一项的抗体分子，其中抗原结合结构域包含轻链可变区(VL)，该轻链可变区(VL)包含SEQ IDNO:6109的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ IDNO:6110的VLFWR2氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6111的VLFWR3氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，或SEQ ID NO:6112的VLFWR4氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)。
82.根据实施方案81的抗体分子，其中抗原结合结构域包含轻链可变区(VL)，该轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO:6109的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6110的VLFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6111的VLFWR3氨基酸序列，或SEQ ID NO:6112的VLFWR4氨基酸序列。
83.根据实施方案78的抗体分子，其中抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ IDNO:6145的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6145具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
84.根据实施方案46、47或54-83中任一项的抗体分子，其中抗原结合结构域包含轻链可变区(VL)，该轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO:6113的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQID NO:6114的VLFWR2氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6115的VLFWR3氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，或SEQ ID NO:6116的VLFWR4氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)。
85.根据实施方案84的抗体分子，其中抗原结合结构域包含轻链可变区(VL)，该轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO:6113的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6114的VLFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6115的VLFWR3氨基酸序列，或SEQ ID NO:6116的VLFWR4氨基酸序列。
86.根据实施方案85的抗体分子，其中抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ IDNO:6146的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6146具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
87.根据实施方案46、47或54-86中任一项的抗体分子，其中抗原结合结构域包含轻链可变区(VL)，该轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO:6117的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQID NO:6118的VLFWR2氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6119的VLFWR3氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，或SEQ ID NO:6120的VLFWR4氨基酸序列(或来自其的具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)。
88.根据实施方案87的抗体分子，其中抗原结合结构域包含轻链可变区(VL)，该轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO:6117的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6118的VLFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6119的VLFWR3氨基酸序列，或SEQ ID NO:6120的VLFWR4氨基酸序列。
89.根据实施方案88的抗体分子，其中抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ IDNO:6147的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6147具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
90.根据前述实施方案中任一项的抗体分子，其中抗原结合结构域包含：
(i)VH，该VH包含SEQ ID NO:6122的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6122具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)，和/或(i)VL，该VL包含SEQID NO:6136的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6136具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
91.一种多特异性分子，其包含实施方案1-90中任一项的抗体分子。
92.根据实施方案91的多特异性分子，其进一步包含以下中的一种、两种、三种、四种或更多种：
a.肿瘤靶向部分，例如，如本文所述的；
b.细胞因子分子，例如，如本文所述的；
c.T细胞接合物，例如，如本文所述的；或
d.基质修饰部分，例如，如本文所述的。
93.根据实施方案91的多特异性分子，其进一步包含与自身反应性T细胞(例如，与炎性或自身免疫性障碍相关的存在于自身反应性T细胞表面上的抗原)结合的结合特异性。
94.根据实施方案91的多特异性分子，其进一步包含与受感染细胞(例如，病毒或细菌感染的细胞)结合的结合特异性。
95.根据前述实施方案中任一项的抗体分子或多特异性分子，其是单特异性抗体分子、双特异性抗体分子或三特异性抗体分子。
96.根据前述实施方案中任一项的抗体分子或多特异性分子，其是单价抗体分子、二价抗体分子或三价抗体分子。
97.根据前述实施方案中任一项的抗体分子或多特异性分子，其是全抗体(例如，包括至少一条(优选两条)完整重链和至少一条(优选两条)完整轻链的抗体)，或抗原结合片段(例如，Fab、F(ab’)2、Fv、单链Fv、单结构域抗体、双抗体(dAb)、二价抗体，或双特异性抗体或其片段、其单结构域变体或骆驼科抗体)。
98.根据前述实施方案中任一项的抗体分子或多特异性分子，其包含选自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的重链恒定区或其片段。
99.前述实施方案中任一项的抗体分子或多特异性分子，其包含选自κ或λ轻链恒定区的轻链恒定区或其片段。
100.根据前述实施方案中任一项的抗体分子或多特异性分子，其中免疫球蛋白链恒定区(例如，Fc区)被改变(例如，突变)，以增加或减少以下中的一种或多种：Fc受体结合、抗体糖基化、半胱氨酸残基数量、效应细胞功能或补体功能。
101.根据前述实施方案中任一项的抗体分子或多特异性分子，其中第一和第二免疫球蛋白链恒定区(例如，Fc区)的界面被改变(例如，突变)，以例如相对于非工程化界面增加或减少二聚化。
102.根据实施方案101的抗体分子或多特异性分子，其中免疫球蛋白链恒定区(例如，Fc区)的二聚化通过提供具有以下中的一种或多种的第一和第二Fc区的Fc界面来增强：成对的空腔-突起(“杵-臼”)、静电相互作用或链交换，使得例如相对于非工程化界面形成更大比率的异源多聚体:同源多聚体。
103.根据实施方案101或102的抗体分子或多特异性分子，其中免疫球蛋白链恒定区(例如，Fc区)在例如人IgG1 Fc区的选自347、349、350、351、366、368、370、392、394、395、397、398、399、405、407或409中的一个或多个位置处包含氨基酸取代。
104.根据实施方案103的抗体分子或多特异性分子，其中免疫球蛋白链恒定区(例如，Fc区)包含选自以下的氨基酸取代：T366S、L368A或Y407V(例如，对应于空腔或臼)，或T366W(例如，对应于突起或杵)，或其组合。
105.根据实施方案1-104中任一项的抗体分子或多特异性分子，其进一步包含接头，例如，在以下的一个或多个之间的接头：靶向部分和细胞因子分子或基质修饰部分、靶向部分和免疫细胞接合物、细胞因子分子或基质修饰部分和免疫细胞接合物、细胞因子分子或基质修饰部分和免疫球蛋白链恒定区(例如，Fc区)、靶向部分和免疫球蛋白链恒定区、或免疫细胞接合物和免疫球蛋白链恒定区。
106.根据实施方案105的抗体分子或多特异性分子，其中接头选自：可切割接头、不可切割接头、肽接头、柔性接头、刚性接头、螺旋接头或非螺旋接头。
107.根据实施方案106的抗体分子或多特异性分子，其中接头是肽接头。
108.根据实施方案107的抗体分子或多特异性分子，其中肽接头包含Gly和Ser。
109.一种分离的核酸分子，其包含编码本文所述的抗体分子或多特异性或多功能性分子中任一种的核苷酸序列，或与其基本上同源(例如，与其至少95％至99.9％相同)的核苷酸序列。
110.一种分离的核酸，其编码实施方案1-108中任一项的抗体分子或多特异性分子。
111.一种载体，例如，表达载体，其包含实施方案109或110中任一项的核酸分子中的一种或多种。
112.一种宿主细胞，其包含核酸分子或实施方案111的载体。
113.一种制备(例如，产生)实施方案1-108中任一项的抗体分子或多特异性或多功能性分子多肽的方法，其包括在合适的条件(例如，适于基因表达和/或同源或异源二聚化的条件)下培养实施方案112的宿主细胞。
114.一种药物组合物，其包含实施方案1-108中任一项的抗体分子或多特异性或多功能性分子多肽以及药学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂。
115.一种治疗癌症的方法，其包括向有需要的对象施用前述实施方案中任一项的抗体分子或多特异性或多功能性分子多肽，其中多特异性抗体以有效治疗癌症的量施用。
116.前述实施方案中任一项的抗体分子或多特异性或多功能性分子多肽在治疗癌症方面的用途。
117.根据实施方案115的方法或实施方案116的用途，其中癌症是实体瘤癌症或转移病变。
118.根据实施方案117的方法或实施方案117的用途，其中实体瘤癌症是胰腺癌(例如，胰腺腺癌)、乳腺癌、结直肠癌、肺癌(例如，小细胞肺癌或非小细胞肺癌)、皮肤癌、卵巢癌或肝癌中的一种或多种。
119.根据实施方案115的方法或实施方案116的用途，其中癌症是血液癌症。
120.根据实施方案115或116-119中任一项的方法或实施方案116-119中任一项的用途，其进一步包括施用第二种治疗性处理。
121.根据实施方案120的方法或实施方案120的用途，其中第二种治疗性处理包括治疗剂(例如，化学治疗剂、生物药剂、激素疗法)、放射或手术。
122.根据实施方案121的方法或实施方案121的用途，其中治疗剂选自：化学治疗剂或生物药剂。
123.一种治疗自身免疫性或炎性障碍的方法，其包括向有需要的对象施用前述实施方案中任一项的抗体分子或多特异性或多功能性分子多肽，其中多特异性抗体以有效治疗自身免疫性或炎性障碍的量施用。
124.前述实施方案中任一项的抗体分子或多特异性或多功能性分子多肽在治疗自身免疫性或炎性障碍方面的用途。
125.一种治疗感染性障碍的方法，其包括向有需要的对象施用前述实施方案中任一项的抗体分子或多特异性或多功能性分子多肽，其中多特异性抗体以有效治疗感染性障碍的量施用。
126.前述实施方案中任一项的抗体分子或多特异性或多功能性分子多肽在治疗感染性障碍方面的用途。
示例性实施方案3
1.一种与NKp30结合的分离的抗体分子，其包含：
(a)表8A中所述的重链互补决定区1(VHCDR1)、重链互补决定区2(VHCDR2)和/或重链互补决定区3(VHCDR3)，或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列；和/或
(b)表8B中所述的轻链互补决定区1(VLCDR1)、轻链互补决定区2(VLCDR2)和/或轻链互补决定区3(VLCDR3)，或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列。
2.根据实施方案1的抗体分子，其中VHCDR1包含SEQ ID NO:C019、C033、C047、C061、C075、C089、C103或C116中任一者的氨基酸序列，或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的氨基酸序列。
3.根据实施方案1或2的抗体分子，其中VHCDR2包含SEQ ID NO:C021、C035、C049、C063、C077、C091、C105或C118中任一者的氨基酸序列，或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的氨基酸序列。
4.根据实施方案1-3中任一项的抗体分子，其中VHCDR3包含SEQ ID NO:C023、C037、C051、C065、C079、C093、C107或C120中任一者的氨基酸序列，或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的氨基酸序列。
5.根据实施方案1-4中任一项的抗体分子，其中VLCDR1包含SEQ ID NO:C026、C040、C054、C068、C082、C096、C110或C123中任一者的氨基酸序列，或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的氨基酸序列。
6.根据实施方案1-5中任一项的抗体分子，其中VLCDR2包含SEQ ID NO:C028、C042、C056、C070、C084、C098、C112或C125中任一者的氨基酸序列，或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的氨基酸序列。
7.根据实施方案1-6中任一项的抗体分子，其中VLCDR3包含SEQ ID NO:C030、C044、C058、C072、C086、C100、C113或C127中任一者的氨基酸序列，或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的氨基酸序列。
8.根据实施方案1-7中任一项的抗体分子，其包含：
(a)表8A中所述的重链框架区1(VHFWR1)、重链框架区2(VHFWR1)、重链框架区3(VHFWR3)和/或重链框架区4(VHFWR4)，或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的氨基酸序列；和/或
(b)表8B中所述的轻链框架区1(VLFWR1)、轻链框架区2(VLFWR1)、轻链框架区3(VLFWR3)和/或轻链框架区4(VLFWR4)，或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的氨基酸序列。
9.根据实施方案1-8中任一项的抗体分子，其包含：
(a)表9中所述的重链可变区(VH)，例如，包含SEQ ID NO:C001-C008中任一者的氨基酸序列或与其具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列的VH；和/或
(b)表9中所述的轻链可变区(VL)，例如，包含SEQ ID NO:C009-C016中任一者的氨基酸序列或与其具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列的VL。
10.根据实施方案1-9中任一项的抗体分子，其包含表10中所述的氨基酸序列，例如，SEQ ID NO:C017-C024中任一者的氨基酸序列，或与其具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列。
11.一种多特异性分子，其包含实施方案1-10中任一项的抗体分子。
12.根据实施方案11的多特异性分子，其进一步包含以下中的一种、两种、三种、四种或更多种：
a.肿瘤靶向部分，例如，如本文所述的；
b.细胞因子分子，例如，如本文所述的；
c.T细胞接合物，例如，如本文所述的；或
d.基质修饰部分，例如，如本文所述的。
13.根据实施方案11的多特异性分子，其进一步包含与自身反应性T细胞(例如，与炎性或自身免疫性障碍相关的存在于自身反应性T细胞表面上的抗原)结合的结合特异性。
14.根据实施方案11的多特异性分子，其进一步包含与受感染细胞(例如，病毒或细菌感染的细胞)结合的结合特异性。
15.根据实施方案1-10中任一项的抗体分子或实施方案11-14中任一项的多特异性分子，其是单特异性抗体分子、双特异性抗体分子或三特异性抗体分子。
16.根据实施方案1-10中任一项的抗体分子或实施方案11-14中任一项的多特异性分子，其是单价抗体分子、二价抗体分子或三价抗体分子。
17.根据实施方案1-10、15或16中任一项的抗体分子或实施方案11-15中任一项的多特异性分子，其是全抗体(例如，包括至少一条(优选两条)完整重链和至少一条(优选两条)完整轻链的抗体)，或抗原结合片段(例如，Fab、F(ab’)2、Fv、单链Fv、单结构域抗体、双抗体(dAb)、二价抗体，或双特异性抗体或其片段、其单结构域变体或骆驼科抗体)。
18.根据实施方案1-17中任一项的抗体分子或多特异性分子，其包含选自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的重链恒定区或其片段。
19.根据实施方案1-18中任一项的抗体分子或多特异性分子，其包含选自κ或λ轻链恒定区的轻链恒定区或其片段。
20.根据实施方案1-19中任一项的抗体分子或多特异性分子，其中免疫球蛋白链恒定区(例如，Fc区)被改变(例如，突变)，以增加或减少以下中的一种或多种：Fc受体结合、抗体糖基化、半胱氨酸残基数量、效应细胞功能或补体功能。
21.根据实施方案1-20中任一项的抗体分子或多特异性分子，其中第一和第二免疫球蛋白链恒定区(例如，Fc区)的界面被改变(例如，突变)，以例如相对于非工程化界面增加或减少二聚化。
22.根据实施方案21的抗体分子或多特异性分子，其中免疫球蛋白链恒定区(例如，Fc区)的二聚化通过提供具有以下中的一种或多种的第一和第二Fc区的Fc界面来增强：成对的空腔-突起(“杵-臼”)、静电相互作用或链交换，使得例如相对于非工程化界面形成更大比率的异源多聚体:同源多聚体。
23.根据实施方案21或22的抗体分子或多特异性分子，其中免疫球蛋白链恒定区(例如，Fc区)在例如人IgG1 Fc区的选自347、349、350、351、366、368、370、392、394、395、397、398、399、405、407或409中的一个或多个位置处包含氨基酸取代。
24.根据实施方案21的抗体分子或多特异性分子，其中免疫球蛋白链恒定区(例如，Fc区)包含选自以下的氨基酸取代：T366S、L368A或Y407V(例如，对应于空腔或臼)，或T366W(例如，对应于突起或杵)，或其组合。
25.根据实施方案1-24中任一项的抗体分子或多特异性分子，其进一步包含接头，例如，在以下的一个或多个之间的接头：靶向部分和细胞因子分子或基质修饰部分、靶向部分和免疫细胞接合物、细胞因子分子或基质修饰部分和免疫细胞接合物、细胞因子分子或基质修饰部分和免疫球蛋白链恒定区(例如，Fc区)、靶向部分和免疫球蛋白链恒定区、或免疫细胞接合物和免疫球蛋白链恒定区。
26.根据实施方案25的抗体分子或多特异性分子，其中接头选自：可切割接头、不可切割接头、肽接头、柔性接头、刚性接头、螺旋接头或非螺旋接头。
27.根据实施方案26的抗体分子或多特异性分子，其中接头是肽接头。
28.根据实施方案27的抗体分子或多特异性分子，其中肽接头包含Gly和Ser。
29.一种分离的核酸分子，其包含编码本文所述的抗体分子或多特异性或多功能性分子中任一种的核苷酸序列，或与其基本上同源(例如，与其至少95％至99.9％相同)的核苷酸序列。
30.一种分离的核酸，其编码实施方案1-29中任一项的抗体分子或多特异性分子。
31.一种载体，例如，表达载体，其包含实施方案29或30的核酸分子中的一种或多种。
32.一种宿主细胞，其包含实施方案29-31中任一项的核酸分子或载体。
33.一种制备(例如，产生)实施方案1-28中任一项的抗体分子或多特异性或多功能性分子多肽的方法，其包括在合适的条件(例如，适于基因表达和/或同源或异源二聚化的条件)下培养实施方案32的宿主细胞。
34.一种药物组合物，其包含实施方案1-28中任一项的抗体分子或多特异性或多功能性分子多肽以及药学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂。
35.一种治疗癌症的方法，其包括向有需要的对象施用实施方案1-12或15-28中任一项的抗体分子或多特异性或多功能性分子多肽，其中多特异性抗体以有效治疗癌症的量施用。
36.实施方案1-12或15-28中任一项的抗体分子或多特异性或多功能性分子多肽在治疗癌症方面的用途。
37.根据实施方案35的方法或实施方案36的用途，其中癌症是实体瘤癌症或转移病变。
38.根据实施方案37的方法或实施方案37的用途，其中实体瘤癌症是胰腺癌(例如，胰腺腺癌)、乳腺癌、结直肠癌、肺癌(例如，小细胞肺癌或非小细胞肺癌)、皮肤癌、卵巢癌或肝癌中的一种或多种。
39.根据实施方案35的方法或实施方案36的用途，其中癌症是血液癌症。
40.根据实施方案35或37-39中任一项的方法或实施方案36-39中任一项的用途，其进一步包括施用第二种治疗性处理。
41.根据实施方案40的方法或实施方案40的用途，其中第二种治疗性处理包括治疗剂(例如，化学治疗剂、生物药剂、激素疗法)、放射或手术。
42.根据实施方案41的方法或实施方案41的用途，其中治疗剂选自：化学治疗剂或生物药剂。
43.一种治疗自身免疫性或炎性障碍的方法，其包括向有需要的对象施用实施方案1-11、13或15-28中任一项的抗体分子或多特异性或多功能性分子多肽，其中多特异性抗体以有效治疗自身免疫性或炎性障碍的量施用。
44.实施方案1-11、13或15-28中任一项的抗体分子或多特异性或多功能性分子多肽在治疗自身免疫性或自身炎性障碍方面的用途。
45.一种治疗感染性障碍的方法，其包括向有需要的对象施用实施方案1-11或14-28中任一项的抗体分子或多特异性或多功能性分子多肽，其中多特异性抗体以有效治疗感染性障碍的量施用。
46.实施方案1-11或14-28中任一项的抗体分子或多特异性或多功能性分子多肽在治疗感染性障碍方面的用途。

Claims (45)

1.一种与NKp30结合的分离的抗体分子，其包含：
(a)表8A中所述的重链互补决定区1(VHCDR1)、重链互补决定区2(VHCDR2)和重链互补决定区3(VHCDR3)；和/或
(b)表8B中所述的轻链互补决定区1(VLCDR1)、轻链互补决定区2(VLCDR2)和轻链互补决定区3(VLCDR3)。
2.根据权利要求1所述的抗体分子，其中所述VHCDR1包含SEQ ID NO:C019、C033、C047、C061、C075、C089、C103和C116中任一者的氨基酸序列。
3.根据权利要求1或2所述的抗体分子，其中所述VHCDR2包含SEQ ID NO:C021、C035、C049、C063、C077、C091、C105或C118中任一者的氨基酸序列。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的抗体分子，其中所述VHCDR3包含SEQ ID NO:C023、C037、C051、C065、C079、C093、C107和C120中任一者的氨基酸序列。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的抗体分子，其中所述VLCDR1包含SEQ ID NO:C026、C040、C054、C068、C082、C096、C110和C123中任一者的氨基酸序列。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的抗体分子，其中所述VLCDR2包含SEQ ID NO:C028、C042、C056、C070、C084、C098、C112和C125中任一者的氨基酸序列。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的抗体分子，其中所述VLCDR3包含SEQ ID NO:C030、C044、C058、C072、C086、C100、C113和C127中任一者的氨基酸序列。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的抗体分子，其包含：
(a)表8A中所述的重链框架区1(VHFWR1)、重链框架区2(VHFWR1)、重链框架区3(VHFWR3)和/或重链框架区4(VHFWR4)，或具有不多于1、2、3或4个突变例如取代、添加或缺失的氨基酸序列；和/或
(b)表8B中所述的轻链框架区1(VLFWR1)、轻链框架区2(VLFWR1)、轻链框架区3(VLFWR3)和/或轻链框架区4(VLFWR4)，或具有不多于1、2、3或4个突变例如取代、添加或缺失的氨基酸序列。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的抗体分子，其包含：
(a)表9中所述的重链可变区(VH)，例如，包含SEQ ID NO:C001-C008中任一者的氨基酸序列或与其具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列的VH；和/或
(b)表9中所述的轻链可变区(VL)，例如，包含SEQ ID NO:C009-C016中任一者的氨基酸序列或与其具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列的VL。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的抗体分子，其包含表10中所述的氨基酸序列，任选地其中所述氨基酸序列是SEQ ID NO:C017-C024中任一者的氨基酸序列，或与其具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列。
11.一种组合物，其包含多肽分子，所述多肽分子包含根据权利要求1-10中任一项所述的抗体分子。
12.根据权利要求11所述的组合物，其中所述多肽分子是多功能性多肽分子。
13.根据权利要求11或12所述的组合物，其中所述多肽分子是多特异性多肽分子。
14.根据权利要求11-13中任一项所述的组合物，其中所述多肽分子进一步包含靶向部分。
15.根据权利要求14所述的组合物，其中所述靶向部分选自肿瘤靶向部分、靶向自身反应性T细胞的靶向部分和靶向受感染细胞的靶向部分。
16.根据权利要求15所述的组合物，其中所述靶向自身反应性T细胞的靶向部分与存在于自身反应性T细胞表面上的抗原结合。
17.根据权利要求16所述的组合物，其中所述存在于自身反应性T细胞表面上的抗原与炎性或自身免疫性障碍相关。
18.根据权利要求16或17所述的组合物，其中所述存在于自身反应性T细胞表面上的抗原选自CD3、TCRα、TCRβ、TCRγ、TCRζ、ICOS、CD28、CD27、HVEM、LIGHT、CD40、4-1BB、OX40、DR3、GITR、CD30、TIM1、SLAM、CD2和CD226。
19.根据权利要求15所述的组合物，其中所述靶向受感染细胞的靶向部分与病毒感染或细菌感染相关抗原结合。
20.根据权利要求11-19中任一项所述的组合物，其中所述多肽分子进一步包含细胞因子分子。
21.根据权利要求11-13中任一项所述的组合物，其中所述多肽分子进一步包含以下中的一种、两种、三种、四种或更多种：
(a)肿瘤靶向部分；
(b)细胞因子分子；
(c)T细胞接合物；或
(d)基质修饰部分。
22.根据权利要求20或21所述的组合物，其中所述细胞因子分子是选自GM-CSF、IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-18、IL-21、IFN-α、IFN-β、IFN-γ、MIP-1α、MIP-1β、TGF-β、TNF-α和TNFβ的细胞因子分子。
23.根据权利要求1-10中任一项所述的抗体分子或根据权利要求11-22中任一项所述的组合物，其中所述抗体分子是单特异性抗体分子、双特异性抗体分子或三特异性抗体分子。
24.根据权利要求1-10中任一项所述的抗体分子或根据权利要求11-22中任一项所述的组合物，其中所述抗体分子是单价抗体分子、二价抗体分子或三价抗体分子。
25.根据权利要求1-10、23和24中任一项所述的抗体分子或根据权利要求11-24中任一项所述的组合物，其中所述抗体分子是全抗体或其抗原结合片段。
26.根据权利要求1-10和23-25中任一项所述的抗体分子或根据权利要求11-25中任一项所述的组合物，其中所述抗体包含选自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的重链恒定区或其片段。
27.根据权利要求1-10和23-26中任一项所述的抗体分子或根据权利要求11-26中任一项所述的组合物，其中所述抗体包含选自κ或λ轻链恒定区的轻链恒定区或其片段。
28.根据权利要求1-10和23-27中任一项所述的抗体分子或根据权利要求11-27中任一项所述的组合物，其中所述免疫球蛋白链恒定区被改变，以增加或减少以下中的一种或多种：Fc受体结合、抗体糖基化、半胱氨酸残基数量、效应细胞功能或补体功能。
29.根据权利要求1-10和23-28中任一项所述的抗体分子或根据权利要求11-28中任一项所述的组合物，其中第一和第二免疫球蛋白链恒定区的界面被改变例如突变，以相对于非工程化界面增加或减少二聚化。
30.根据权利要求29所述的抗体分子或组合物，其中所述免疫球蛋白链恒定区的二聚化通过提供具有以下中的一种或多种的第一和第二Fc区的Fc界面来增强：成对的空腔-突起(“杵-臼”)、静电相互作用或链交换，使得相对于非工程化界面形成更大比率的异源多聚体:同源多聚体。
31.根据权利要求29或30所述的抗体分子或组合物，其中所述免疫球蛋白链恒定区在例如人IgG1 Fc区的选自347、349、350、351、366、368、370、392、394、395、397、398、399、405、407或409中的一个或多个位置处包含氨基酸取代。
32.根据权利要求29所述的抗体分子或组合物，其中所述免疫球蛋白链恒定区包含选自以下的氨基酸取代：T366S、L368A或Y407V，或T366W，或其组合。
33.根据权利要求1-10和23-32中任一项所述的抗体分子或根据权利要求11-32中任一项所述的组合物，其中所述抗体分子或所述多肽分子进一步包含接头，任选地其中所述接头是在以下中的一个或多个之间的接头：所述靶向部分和所述细胞因子分子或所述基质修饰部分、所述靶向部分和所述免疫细胞接合物、所述细胞因子分子或所述基质修饰部分和所述免疫细胞接合物、所述细胞因子分子或所述基质修饰部分和所述免疫球蛋白链恒定区、所述靶向部分和所述免疫球蛋白链恒定区、或所述免疫细胞接合物和所述免疫球蛋白链恒定区。
34.根据权利要求33所述的抗体分子或组合物，其中所述接头选自：可切割接头、不可切割接头、肽接头、柔性接头、刚性接头、螺旋接头或非螺旋接头。
35.根据权利要求34所述的抗体分子或组合物，其中所述接头是肽接头。
36.根据权利要求35所述的抗体分子或组合物，其中所述肽接头包含Gly和Ser。
37.一种分离或重组的核酸分子，其包含编码本文所述的抗体分子或多肽分子中的任一种的核苷酸序列，或与其基本上同源的核苷酸序列。
38.一种分离或重组的核酸，其编码根据权利要求1-10和23-36中任一项所述的抗体分子或根据权利要求11-36中任一项所述的组合物的多肽分子。
39.一种载体，其包含根据权利要求37或38所述的核酸分子中的一种或多种。
40.一种宿主细胞，其包含根据权利要求37或38所述的核酸分子或根据权利要求39所述的载体。
41.一种制备根据权利要求1-10和23-36中任一项所述的抗体分子或根据权利要求11-36中任一项所述的组合物的方法，其包括在合适的条件下培养根据权利要求40所述的宿主细胞。
42.一种药物组合物，其包含根据权利要求1-10和23-36中任一项所述的抗体分子、根据权利要求11-36中任一项所述的组合物、根据权利要求37或38所述的核酸分子或根据权利要求40所述的宿主细胞，以及药学上可接受的载体、赋形剂、稀释剂或稳定剂。
43.一种治疗癌症的方法，其包括向有需要的对象施用根据权利要求1-10和23-36中任一项所述的抗体分子、根据权利要求11-36中任一项所述的组合物或根据权利要求42所述的药物组合物，其中所述抗体分子、所述组合物或所述药物组合物以有效治疗所述癌症的量施用。
44.根据权利要求1-10和23-36中任一项所述的抗体分子或根据权利要求11-36中任一项所述的组合物在治疗癌症方面的用途。
45.根据权利要求43所述的方法或根据权利要求44所述的用途，其中所述癌症是实体瘤癌症或转移病变。
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