WO2022224997A1 - 抗ｃｌｄｎ４－抗ｃｄ１３７二重特異性抗体 - Google Patents

抗ｃｌｄｎ４－抗ｃｄ１３７二重特異性抗体 Download PDF

Info

Publication number
WO2022224997A1
WO2022224997A1 PCT/JP2022/018350 JP2022018350W WO2022224997A1 WO 2022224997 A1 WO2022224997 A1 WO 2022224997A1 JP 2022018350 W JP2022018350 W JP 2022018350W WO 2022224997 A1 WO2022224997 A1 WO 2022224997A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
amino acid
seq
antibody
variable region
chain variable
Prior art date
Application number
PCT/JP2022/018350
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
由幸 天田
正利 由利
繁典 八木
佳樹 佐竹
和▲徳▼ 平山
宏樹 白井
博己 佐々木
史子 千脇
将之 小松
Original Assignee
アステラス製薬株式会社
国立研究開発法人国立がん研究センター
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority to CA3217637A priority Critical patent/CA3217637A1/en
Application filed by アステラス製薬株式会社, 国立研究開発法人国立がん研究センター filed Critical アステラス製薬株式会社
Priority to KR1020237039211A priority patent/KR20230171465A/ko
Priority to CR20230490A priority patent/CR20230490A/es
Priority to JP2023515503A priority patent/JP7365654B2/ja
Priority to AU2022262542A priority patent/AU2022262542A1/en
Priority to CN202280029125.XA priority patent/CN117222672A/zh
Priority to EP22791768.9A priority patent/EP4327823A1/en
Priority to IL307744A priority patent/IL307744A/en
Priority to BR112023021950A priority patent/BR112023021950A2/pt
Publication of WO2022224997A1 publication Critical patent/WO2022224997A1/ja
Priority to JP2023169033A priority patent/JP2023182689A/ja
Priority to DO2023000230A priority patent/DOP2023000230A/es
Priority to CONC2023/0015630A priority patent/CO2023015630A2/es

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2878—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/74—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
    • C12N15/81—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2809—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/51—Complete heavy chain or Fd fragment, i.e. VH + CH1
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/515—Complete light chain, i.e. VL + CL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/64—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising a combination of variable region and constant region components
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/71—Decreased effector function due to an Fc-modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/75—Agonist effect on antigen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Definitions

  • the present invention relates to an anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody that is expected to be useful as an active ingredient of pharmaceutical compositions used for cancer treatment.
  • Claudin-4 is a four-transmembrane protein belonging to the claudin family. It is expressed in epithelial and endothelial cells and plays an important role as a major molecule that constitutes tight junctions. CLDN4 is also found to be highly expressed in cancer tissues such as colon cancer, bladder cancer, and ovarian cancer, suggesting the possibility that anti-CLDN4 antibodies can be applied to the treatment or diagnosis of cancer (Patent document 1, Non-Patent Document 1). Furthermore, in animal models, an anti-tumor effect has been demonstrated by the combined use of an anti-CLDN4 antibody and an anti-epidermal growth factor receptor (EGFR) antibody (Non-Patent Document 2).
  • EGFR anti-epidermal growth factor receptor
  • CD137 Cluster of Differentiation 137
  • 4-1BB Tumor Necrosis Factor Receptor Superfamily
  • TNFRSF Tumor Necrosis Factor Receptor Superfamily
  • Non-Patent Document 4 Anti-CD137 agonistic antibodies have demonstrated anti-tumor effects in animal models via activation of immune cells within the tumor microenvironment.
  • Urelumab an anti-CD137 agonist antibody, has shown therapeutic effects in clinical trials, but it has also been reported to cause side effects of liver damage (Non-Patent Document 5).
  • Bispecific T-cell-recruiting antibodies in various antibody formats have been reported as an epoch-making method for obtaining cancer cell-selective cytotoxic activity at low antibody concentrations. ing.
  • a bispecific T cell recruiting antibody is a bispecific antibody containing an antibody against tumor-associated antigens (TAA) expressed on the surface of cancer cells and an antibody that binds to T cells. The effect of those antibodies on mediated immunotherapy is being investigated (Non-Patent Document 6).
  • Anti-CD3 antibodies are often used as antibodies that bind to T cells, and bispecific T cell recruiting antibodies against various TAAs are currently being researched and developed.
  • TAA Glypican3 Glypican3
  • HER2 Human Epidermal Growth Factor Receptor Type2
  • PD-L1 Programmed Cell Death-Ligand1
  • anti-FAP Fibroblast Activation Protein
  • An object of the present invention is to provide an anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody that can be used for cancer therapy.
  • the present inventors searched for antibodies that selectively bind to antigens expressed in peritoneally disseminated cancer cells, and obtained 3D11, an anti-CLDN4 antibody (Examples 1 and 2). It was found that a bispecific T-cell recruiting antibody using 3D11 and anti-CD3 antibody cannot be used for treating cancer patients (Reference Example). Therefore, using 3D11 and the KM3900 antibody, which is a known anti-CLDN4 antibody, an attempt was made to obtain a bispecific T-cell recruiting antibody with an anti-CD137 antibody (Examples 3 and 4).
  • the obtained anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody binds to CLDN4 and CD137 (Example 5), promotes interferon ⁇ production of T cells in vitro, and suppresses cancer cells expressing CLDN4 on the cell surface. cytotoxic activity was shown against (Example 6). Furthermore, it was confirmed that the obtained anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody exhibited an anti-tumor effect in an in vivo mouse model (Example 7-1) and could be safely used in cynomolgus monkeys (Example 7- 2). It was suggested that the anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the present invention would be useful for treating cancer.
  • an anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody comprising the heavy chain variable region and light chain variable region of an anti-CLDN4 antibody and the heavy chain variable region and light chain variable region of an anti-CD137 antibody, the anti-CLDN4 antibody A bispecific antibody, wherein the heavy chain variable region and light chain variable region of is any of the following (a) or (b): (a) CDR1 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 31 to 35 of SEQ ID NO:2, CDR2 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 50 to 66 of SEQ ID NO:2, and the amino acid sequence from amino acid numbers 99 to 114 of SEQ ID NO:2 and CDR1 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 24 to 35 of SEQ ID NO: 4, CDR2 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 51 to 57 of SEQ ID NO: 4 and the amino acids of SEQ ID NO: 4 or (b) a CDR1 consist
  • a heavy chain variable region comprising CDR2 consisting of the amino acid sequence and CDR3 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 99 to 112 of SEQ ID NO: 6, and CDR1 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 24 to 35 of SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 8 and CDR3 consisting of the amino acid sequence from 90 to 98 of SEQ ID NO:8.
  • the IgG antibody (anti-CLDN4 IgG antibody) consisting of a heavy chain containing a heavy chain variable region of an anti-CLDN4 antibody and a light chain containing a light chain variable region, according to any one of [1] or [2].
  • Bispecific antibody [4] The duplex of [3], comprising LALA mutations (L234A and L235A (wherein the mutation positions are amino acid positions according to the EU index in the human Ig ⁇ 1 constant region)) in the Fc region of the anti-CLDN4 IgG antibody. specific antibody.
  • the bispecific antibody of [3] which comprises an LALA mutation and a P331G mutation in the Fc region of the anti-CLDN4 IgG antibody.
  • a heavy chain variable region comprising CDR2 consisting of the amino acid sequence and CDR3 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 98 to 110 of SEQ ID NO: 22, and CDR1 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 23 to 35 of SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 24 and CDR3 consisting of the amino acid sequence from 90 to 100 of SEQ ID NO:24.
  • the anti-CD137scFv is any of the following (a) to (e): (a) an anti-CD137 scFv consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 242 of SEQ ID NO:26; (b) an anti-CD137 scFv consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 244 of SEQ ID NO:28; (c) an anti-CD137 scFv consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 249 of SEQ ID NO:30; (d) an anti-CD137scFv consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 244 of SEQ ID NO:32; or (e) an anti-CD137scFv consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 247 of SEQ ID NO:34.
  • a bispecific antibody comprising an anti-CLDN4 antibody light chain consisting of amino acid sequences numbered 1 to 215.
  • a polynucleotide comprising a base sequence encoding a heavy chain variable region or light chain variable region of an anti-CLDN4 antibody selected from the group consisting of the following (a) to (d): (a) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a heavy chain variable region of an anti-CLDN4 antibody consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 125 of SEQ ID NO:2; (b) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a light chain variable region of an anti-CLDN4 antibody consisting of amino acid sequences from amino acid numbers 1 to 109 of SEQ ID NO:4; (c) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a heavy chain variable region of an anti-CLDN4 antibody consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 123 of SEQ ID NO:6; or (d) amino acid numbers from 1 to 109
  • a host cell comprising a polynucleotide selected from the group consisting of the following (a) to (dd): (a) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a heavy chain variable region of an anti-CLDN4 antibody consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 125 of SEQ ID NO:2; (b) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a light chain variable region of an anti-CLDN4 antibody consisting of amino acid sequences from amino acid numbers 1 to 109 of SEQ ID NO:4; (c) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a heavy chain variable region of an anti-CLDN4 antibody consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 123
  • a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a heavy chain variable region of an anti-CD137 antibody consisting of amino acid sequences from amino acid numbers 1 to 118 of SEQ ID NO: 10;
  • a polynucleotide comprising a base sequence encoding a light chain variable region of an anti-CD137 antibody consisting of amino acid sequences from amino acid numbers 1 to 109 of SEQ ID NO: 12;
  • a polynucleotide comprising a base sequence encoding a heavy chain variable region of an anti-CD137 antibody consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 118 of SEQ ID NO: 14;
  • a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a light chain variable region of an anti-CD137 antibody consisting of amino acid sequences from amino acid numbers 1 to 111 of SEQ ID NO: 16;
  • a polynucleotide comprising a nucleo
  • a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a heavy chain variable region of an anti-CD137 antibody consisting of amino acid sequences from amino acid numbers 1 to 118 of SEQ ID NO:26;
  • a polynucleotide comprising a base sequence encoding a light chain variable region of an anti-CD137 antibody consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 134 to 242 of SEQ ID NO:26;
  • a polynucleotide comprising a base sequence encoding a heavy chain variable region of an anti-CD137 antibody consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 118 of SEQ ID NO:28;
  • p a polynucleotide comprising a base sequence encoding a light chain variable region of an anti-CD137 antibody consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 134 to 244 of SEQ ID NO:28;
  • a polynucleotide comprising a nucleotide comprising a
  • a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a polypeptide comprising an anti-CLDN4 antibody heavy chain consisting of amino acid sequences from amino acid numbers 1 to 705 of SEQ ID NO: 36 and an anti-CD137scFv;
  • cc a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a polypeptide comprising a heavy chain of an anti-CLDN4 antibody consisting of amino acid sequences from amino acid numbers 1 to 712 of SEQ ID NO: 38 and an anti-CD137scFv; or (dd) an amino acid of SEQ ID NO: 40
  • a polynucleotide comprising a base sequence encoding a light chain of an anti-CLDN4 antibody consisting of amino acid sequences numbered 1 to 215.
  • a host cell comprising the polynucleotide of either (a) or (b) below: (a) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a polypeptide comprising an anti-CLDN4 antibody heavy chain and anti-CD137scFv consisting of amino acid sequences from amino acid numbers 1 to 705 of SEQ ID NO: 36, and from amino acid number 1 of SEQ ID NO: 40 (b) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding an anti-CLDN4 antibody light chain consisting of an amino acid sequence up to 215; A polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a polypeptide comprising CD137scFv, and a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding an anti-CLDN4 antibody light chain consisting of amino acid sequences from amino acid numbers 1 to 215 of SEQ ID NO:40.
  • a method for producing an anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody comprising the step of culturing the host cell of any one of [23] to [25].
  • a pharmaceutical composition comprising the anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of any one of [1] to [17] and a pharmaceutically acceptable excipient.
  • the pharmaceutical composition of [27] for use in treating cancer.
  • a method of treating cancer comprising administering to a subject a therapeutically effective amount of the anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of any one of [1] to [17].
  • the anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the present invention binds to both CLDN4, which is a cancer antigen, and CD137 expressed on the surface of immune cells such as T cells, and suppresses immune cells around cancer cells. By activating it, it enhances the killing effect on cancer cells.
  • CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the present invention or a pharmaceutical composition comprising said antibody can be used for treatment of various cancers.
  • FIG. 1-1 shows the CD137-binding activity of test antibodies measured and evaluated by the ELISA method.
  • the vertical axis of the figure represents the value obtained by subtracting the absorbance at 570 nm from the absorbance at 450 nm, and the horizontal axis represents the concentration of the test antibody.
  • the symbol indicates the average absorbance at the time of adding each test antibody, and the error bar indicates the standard deviation.
  • FIG. 1-2 shows the CD137 binding activity of test antibodies measured and evaluated by the ELISA method.
  • the vertical axis of the figure represents the value obtained by subtracting the absorbance at 570 nm from the absorbance at 450 nm, and the horizontal axis represents the concentration of the test antibody. Symbols indicate the average absorbance values when each test antibody was added.
  • FIGS. 1-4 show the CD137-binding activity of test antibodies measured and evaluated by the ELISA method.
  • the vertical axis of the figure represents the value obtained by subtracting the absorbance at 570 nm from the absorbance at 450 nm, and the horizontal axis represents the concentration of the test antibody. Symbols indicate the average absorbance values when each test antibody was added.
  • FIGS. 1-4 show the CD137-binding activity of test antibodies measured and evaluated by ELISA.
  • the vertical axis of the figure represents the value obtained by subtracting the absorbance at 570 nm from the absorbance at 450 nm, and the horizontal axis represents the concentration of the test antibody. Symbols indicate the average absorbance values when each test antibody was added.
  • FIG. 2-1 shows the CD137 agonist activity of the test antibody in a co-culture test of CLDN4-expressing cancer cells (NCI-H322 cells) and 4-1BB Effector Cells.
  • the vertical axis of the figure represents the relative luminescence amount, and the horizontal axis represents the concentration of the test antibody.
  • the symbol indicates the average value of the relative luminescence amount when each test antibody was added, and the error bar indicates the standard deviation.
  • FIG. 2-2 shows the CD137 agonist activity of the test antibody in a co-culture test of CLDN4-expressing cancer cells (NCI-H322 cells) and 4-1BB effector cells.
  • the vertical axis of the figure represents the relative luminescence amount, and the horizontal axis represents the concentration of the test antibody.
  • Figure 2-3 shows the CD137 agonistic activity of the test antibody in a co-culture test of CLDN4-expressing cancer cells (NCI-H322 cells) and 4-1BB effector cells.
  • the vertical axis of the figure represents the relative luminescence amount, and the horizontal axis represents the concentration of the test antibody.
  • the symbol indicates the average value of the relative luminescence amount when each test antibody was added, and the error bar indicates the standard deviation.
  • Figure 2-4 shows the CD137 agonistic activity of the test antibody in the 4-1BB effector cells monoculture test.
  • the vertical axis of the figure represents the relative luminescence amount
  • the horizontal axis represents the concentration of the test antibody.
  • Figure 2-5 shows the CD137 agonistic activity of the test antibody in the 4-1BB effector cells monoculture test.
  • the vertical axis of the figure represents the relative luminescence amount, and the horizontal axis represents the concentration of the test antibody.
  • the symbol indicates the average value of the relative luminescence amount upon addition of each test antibody.
  • Figure 2-6 shows the CD137 agonistic activity of the test antibody in the 4-1BB effector cells monoculture test.
  • the vertical axis of the figure represents the relative luminescence amount, and the horizontal axis represents the concentration of the test antibody.
  • the symbol indicates the average value of the relative luminescence amount when each test antibody was added, and the error bar indicates the standard deviation.
  • FIG. 3-1 shows interferon- ⁇ production-promoting function upon addition of each test antibody in a co-culture system of 60As6-Luc/GFP cells and Expanded pan T cells.
  • the vertical axis indicates interferon- ⁇ production (pg/mL) 6 days after antibody addition, and the horizontal axis indicates antibody concentration. Symbols indicate the average interferon- ⁇ production at each antibody concentration.
  • FIG. 3-2 shows the interferon- ⁇ production-promoting function upon addition of each test antibody in a co-culture system of 60As6-Luc/GFP cells and Expanded pan T cells.
  • the vertical axis indicates interferon- ⁇ production (pg/mL) 4 days after antibody addition, and the horizontal axis indicates antibody concentration.
  • FIG. 3-3 shows the amount of interferon- ⁇ produced when each test antibody was added in a monoculture system of Expanded pan T cells.
  • the vertical axis indicates interferon- ⁇ production (pg/mL) 6 days after antibody addition, and the horizontal axis indicates antibody concentration.
  • Symbols indicate the average interferon- ⁇ production at each antibody concentration.
  • FIG. 3-4 shows the amount of interferon- ⁇ produced when each test antibody was added in a monoculture system of Expanded pan T cells.
  • the vertical axis indicates interferon- ⁇ production (pg/mL) 5 days after antibody addition, and the horizontal axis indicates antibody concentration.
  • FIG. 4 shows the cancer cytotoxic activity (cancer cell proliferation inhibitory action) of each test antibody in a co-culture system of 60As6-Luc/GFP cells and Expanded panT cells.
  • the vertical axis of the figure shows the cell growth rate when the fluorescence area increased from 0 hours to 168 hours after the start of measurement, with the test antibody-free wells taken as 100%.
  • the horizontal axis indicates antibody concentration. Symbols indicate average values of cancer cell proliferation rate for each antibody.
  • FIG. 5 shows cancer cytotoxic activity upon addition of each test antibody in a co-culture system of 60As6-Luc/GFP cells and Expanded panT cells.
  • the vertical axis of the figure represents the measured values of chemiluminescence of 60As6-Luc/GFP cells 6 days after the addition of the antibody. Shows the cancer cell killing rate (%) at time.
  • the horizontal axis indicates antibody concentration. The symbol indicates the average cancer cell killing rate at each antibody concentration, and the error bar indicates the standard deviation.
  • FIG. 6 shows changes in tumor volume in PBMC-transfected mice subcutaneously bearing NCI-H322 cells.
  • the horizontal axis indicates the number of days after the first administration
  • the vertical axis indicates the average tumor volume
  • the error bars indicate the standard error.
  • An antibody (or immunoglobulin) has a basic structure of four chains with a symmetrical Y-shaped structure consisting of two heavy chains with a single sequence and two light chains with a single sequence. It is a glycoprotein.
  • the basic structure of the antibody molecule is common to each class, and two heavy chains with a molecular weight of 50,000 to 70,000 and two light chains with a molecular weight of 20,000 to 30,000 are bound by disulfide bonds and non-covalent bonds, resulting in a molecular weight of 150,000 to 19,000. It forms an antibody molecule consisting of 10,000 Y-shaped four-chain structures.
  • Heavy chains are usually composed of polypeptide chains containing about 440 amino acids and have characteristic structures for each class, corresponding to IgG, IgM, IgA, IgD and IgE, respectively, Ig ⁇ , Ig ⁇ , Ig ⁇ and Ig ⁇ . , Ig ⁇ .
  • IgG has subclasses of IgG1, IgG2, IgG3 and IgG4, and the heavy chains corresponding to these are called Ig ⁇ 1, Ig ⁇ 2, Ig ⁇ 3 and Ig ⁇ 4.
  • a light chain usually consists of a polypeptide chain containing about 220 amino acids, and two types, ⁇ type and ⁇ type, are known, which are referred to as Ig ⁇ and Ig ⁇ , respectively. The two light chains can be paired with either type of heavy chain.
  • a heavy chain has a heavy chain variable region (VH) and a heavy chain constant region (CH) from N-terminus to C-terminus.
  • CH is further divided into three domains, CH1 domain, CH2 domain and CH3 domain, from the N-terminal side.
  • a light chain has, from N-terminus to C-terminus, a light chain variable region (VL) and a light chain constant region (CL).
  • CDR complementarity determining regions
  • VH and VL vary greatly and contribute to the variability of the variable regions.
  • CDR is a region consisting of 5 to 10 amino acid residues, present in the order of CDR1, CDR2, and CDR3 at the N-terminus of each heavy chain and light chain, and forms an antibody binding site in contact with an antigen. do. It is known that heavy chain CDRs contribute more to antigen binding than light chain CDRs, and CDR3 has the highest contribution among CDRs 1-3.
  • FR framework region
  • the portion other than the CDRs of the variable region is called a framework region (FR), which consists of FR1 to FR4 and has relatively little change in amino acid sequence.
  • the antibody When the antibody is treated with the proteolytic enzyme papain, three antibody fragments are obtained. Two fragments on the N-terminal side are called Fab (Fragment, antigen binding) regions.
  • the Fab region refers to a region consisting of the heavy chain VH, CH1 domain and part of the hinge region, and the light chain (VL and CL). Join.
  • the C-terminal side fragment is called an Fc (Fragment, crystallizable) region.
  • the term "IgG antibody” refers to an antibody having a Y-shaped structure consisting of two Fab regions and an Fc region.
  • the two Fab regions of the IgG antibody are Fab regions consisting of identical sequences.
  • the two Fab regions of the IgG antibody are Fab regions of different sequences.
  • antigen-binding fragment and “fragment antibody” can be used interchangeably and comprise at least one antibody comprising the heavy and light chain variable regions of an immunoglobulin molecule and having antigen-binding activity.
  • a molecule comprising a polypeptide chain.
  • Representative antigen binding fragments include single chain variable region fragments (scFv), Fab fragments, Fab' fragments, F(ab') 2 fragments.
  • scFv refers to a monovalent antigen-binding fragment composed of VH and VL linked by a linker.
  • a Fab fragment is a monovalent antigen-binding fragment composed of a light chain and a fragment containing the VH, CH1 domains and part of the hinge region of the heavy chain.
  • a Fab' fragment is a monovalent antigen-binding fragment composed of a light chain, a fragment containing the VH, CH1 domains of the heavy chain and part of the hinge region, in which part of the hinge region contains inter-heavy chain disulfides. The cysteine residues that made up the bond are included.
  • An F(ab') 2 fragment is a bivalent antigen-binding fragment in which the Fab' fragments are linked by disulfide bonds. Monovalent means containing one antigen binding site and bivalent means containing two antigen binding sites.
  • bispecific antibody refers to an antibody molecule composed of two antibodies or antigen-binding fragments that specifically bind to different antigens and having binding activity to each antigen. Bispecific antibodies with various structures are known to those skilled in the art as bispecific antibodies (Non-Patent Document 6).
  • antibody as used herein includes full-length antibodies (various immunoglobulins, especially IgG antibodies), antigen-binding fragments, and bispecific antibodies of any structure, unless otherwise limited by the context.
  • an IgG-type anti-CLDN4 antibody is referred to as an "anti-CLDN4 IgG antibody”.
  • human antibody refers to an antibody having a human immunoglobulin amino acid sequence.
  • humanized antibody refers to an antibody in which some, most, or all of the amino acid residues other than the CDRs have been replaced with amino acid residues derived from human immunoglobulin molecules.
  • the method of humanization is not particularly limited, for example, a humanized antibody can be produced with reference to US Pat. No. 5,225,539, US Pat.
  • antibody amino acid residue numbers are designated by Kabat numbering or the EU index (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed, 1991, NIH Publication No. 91-3242). They can be defined according to their numbering system.
  • linked means that multiple components (e.g., Fab regions and Fc regions) are linked directly or via an intermediary (e.g., peptide linker).
  • peptide linker means any one or more amino acid sequences that can be introduced by genetic engineering techniques and used to link multiple components.
  • the length of the peptide linker used in the present invention is not particularly limited, and can be appropriately selected by those skilled in the art depending on the purpose.
  • Anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the present invention provides bispecific antibodies that bind CLDN4 and CD137 (also referred to as "anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibodies").
  • Anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibodies of the invention comprise heavy and light chain variable regions of an anti-CLDN4 antibody and heavy and light chain variable regions of an anti-CD137 antibody.
  • Anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibodies of the invention include bispecific antibodies comprising an anti-CLDN4 IgG antibody and an scFv of an anti-CD137 antibody (also referred to as "anti-CD137 scFv").
  • the anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the invention is a bispecific antibody comprising an anti-CLDN4 IgG antibody and an anti-CD137 scFv.
  • anti-CLDN4 antibody is an antibody capable of binding to human CLDN4
  • anti-CD137 antibody is an antibody capable of binding to human CD137. Whether or not it binds to human CLDN4 or human CD137 can be confirmed using a known binding activity measurement method. Methods for measuring binding activity include, for example, Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) method, flow cytometry method and the like. The ELISA method or flow cytometry method can be performed by a method commonly used by those skilled in the art, for example, the method described in Example 3 or 5 can be used.
  • ELISA Enzyme-Linked Immunosorbent Assay
  • the anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the present invention may have any structure as long as it binds to CLDN4 and CD137. antibodies.
  • the anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the present invention is a conjugate in which the Fab region of an anti-CLDN4 antibody and the Fab region of an anti-CD137 antibody are linked, an anti-CLDN4 IgG antibody, and an IgG-type antibody.
  • a conjugate of a CD137 antibody (also referred to as an "anti-CD137 IgG antibody"), a conjugate of an anti-CLDN4 IgG antibody and an antigen-binding fragment of an anti-CD137 antibody, a conjugate of an antigen-binding fragment of an anti-CLDN4 antibody and an anti-CD137 IgG antibody, or an anti- It may be a conjugate of an antigen-binding fragment of the CLDN4 antibody and an antigen-binding fragment of the anti-CD137 antibody.
  • an anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the invention comprises a full-length anti-CLDN4 antibody and a full-length anti-CD137 antibody.
  • an anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the invention comprises an anti-CLDN4 IgG antibody and an anti-CD137 IgG antibody.
  • Two antibodies may be linked via a linker.
  • an anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the invention comprises a full-length anti-CLDN4 antibody and an antigen-binding fragment of an anti-CD137 antibody.
  • the linking sites of the two antibodies are not particularly limited, and are linked directly or via a linker.
  • an anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the invention comprises an anti-CLDN4 IgG antibody and an scFv of an anti-CD137 antibody (referred to herein as "anti-CD137 scFv").
  • an anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the invention comprises an anti-CLDN4 IgG antibody and an anti-CD137 scFv, wherein the amino terminus of the anti-CD137 scFv is linked to the heavy chain carboxy terminus of the anti-CLDN4 antibody. .
  • an anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the invention comprises an anti-CLDN4 IgG antibody and an anti-CD137 scFv, wherein the amino terminus of the anti-CD137 scFv is linked to the light chain carboxy terminus of the anti-CLDN4 antibody.
  • the anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the present invention comprises an anti-CLDN4 IgG antibody and an anti-CD137 scFv, wherein the carboxy terminus of the anti-CD137 scFv is linked to the amino terminus of the heavy chain of the anti-CLDN4 antibody.
  • the anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the present invention comprises an anti-CLDN4 IgG antibody and an anti-CD137 scFv, wherein the carboxy terminus of the anti-CD137 scFv is linked to the amino terminus of the light chain of the anti-CLDN4 antibody.
  • an anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the invention comprises an antigen-binding fragment of an anti-CLDN4 antibody and an antigen-binding fragment of anti-CD137.
  • an anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the invention comprises an anti-CLDN4 antibody scFv and an anti-CD137 scFv.
  • an anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the invention comprises an anti-CD137 scFv.
  • the heavy chain variable region and light chain variable region of the anti-CLDN4 antibody and anti-CD137 antibody are derived from human antibodies, humanized antibodies, or combinations thereof good.
  • the anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the invention is an antibody consisting of a human antibody, a humanized antibody, or a combination thereof.
  • the anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the present invention comprises an anti-CLDN4 antibody heavy chain variable region and a light chain variable region and an anti-CD137 antibody heavy chain variable region and a light chain variable region.
  • a bispecific antibody, wherein the heavy and light chain variable regions of an anti-CLDN4 antibody are either (a) or (b) below: (a) CDR1 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 31 to 35 of SEQ ID NO:2, CDR2 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 50 to 66 of SEQ ID NO:2, and the amino acid sequence from amino acid numbers 99 to 114 of SEQ ID NO:2 and CDR1 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 24 to 35 of SEQ ID NO: 4, CDR2 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 51 to 57 of SEQ ID NO: 4 and the amino acids of SEQ ID NO: 4 or (b) a CDR1 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 31 to 35 of SEQ ID NO:6,
  • a heavy chain variable region comprising CDR2 consisting of the amino acid sequence and CDR3 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 99 to 112 of SEQ ID NO: 6, and CDR1 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 24 to 35 of SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 8 and CDR3 consisting of the amino acid sequence from 90 to 98 of SEQ ID NO:8.
  • the anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the invention comprises the heavy and light chain variable regions of the anti-CLDN4 antibody described in (a) or (b) below: (a) a heavy chain variable region consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 125 of SEQ ID NO:2 and a light chain variable region consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 109 of SEQ ID NO:4; or (b) SEQ ID NO:6 and a light chain variable region consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 109 of SEQ ID NO:8.
  • the anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the present invention may comprise full-length antibodies such as IgG antibodies as anti-CLDN4 antibodies, Fab fragments, Fab′ fragments, F(ab′) 2 fragments or scFv etc. may include an antigen-binding fragment of
  • Ig ⁇ , Ig ⁇ , Ig ⁇ , Ig ⁇ or Ig ⁇ can be selected as the heavy chain constant region contained in the anti-CLDN4 antibody contained in the anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the present invention.
  • Ig ⁇ can be selected from, for example, Ig ⁇ 1, Ig ⁇ 2, Ig ⁇ 3 or Ig ⁇ 4.
  • Either Ig ⁇ or Ig ⁇ constant region can be selected as the light chain constant region contained in the anti-CLDN4 antibody contained in the anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the present invention.
  • an anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the present invention is an IgG antibody
  • the heavy and light chains of the anti-CLDN4 antibody are human Ig ⁇ 1 and Ig ⁇ , respectively.
  • an anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the invention comprises a full-length anti-CLDN4 antibody.
  • the anti-CLDN4 antibody contained in the anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the present invention is an IgG antibody comprising the heavy chain variable region and light chain variable region of an anti-CLDN4 antibody (anti-CLDN4 IgG antibody) is.
  • the Fc region in the bispecific antibody has antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADCC) and complement-dependent cytotoxicity (CDC) may include mutations that reduce L234A is a leucine to alanine substitution at amino acid position 234 of the human Ig ⁇ 1 constant region.
  • L235A is a leucine to alanine substitution at amino acid position 235 of the human Ig ⁇ 1 constant region.
  • Amino acid mutations in the human Ig ⁇ 1 constant regions L234A and L235A are referred to as “LALA mutations”.
  • said positions 234 and 235 are amino acid positions according to the EU index in the human Ig ⁇ 1 constant region.
  • the mutation is known to reduce antibody ADCC and CDC (Mol. Immunol., 1992, Vol. 29, p. 633-639; J. Immunol., 2000, Vol. 164, p. 4178 -4184).
  • P331G or P331S is a substitution of proline to glycine or serine at amino acid position 331 of the human Ig ⁇ 1 constant region. wherein said position 331 is the amino acid position according to the EU index in the human Ig ⁇ 1 constant region.
  • This mutation is known to reduce antibody CDC (J. Immunol., 2000, Vol. 164(8), p. 4178-4184).
  • the anti-CLDN4 IgG antibody contained in the anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the present invention comprises an Fc region containing L234A and L235A amino acid mutations (LALA mutations). In one embodiment, the anti-CLDN4 IgG antibody comprises an Fc region comprising either the P331G or P331S mutation. In one embodiment, the anti-CLDN4 IgG antibody comprises an Fc region comprising an LALA mutation and either a P331G or P331S mutation.
  • the present inventors created a novel anti-CD137 antibody or its binding fragment (scFv) in the process of creating the anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the present invention.
  • the inventors have identified an anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody that does not transduce CD137 signal when bound only to CD137, but transduces CD137 signal only when bound to CD137 and CLDN4 simultaneously. These antibodies do not exhibit agonistic activity when not bound to CLDN4.
  • binding to CLDN4 and CD137 by the anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody results in CD137 signaling and T cell activation. Since this action is expected to alleviate hepatotoxicity and the like observed in clinical trials of urelumab, it is expected to have a favorable profile as an anti-CD137 antibody used in bispecific antibodies.
  • the anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the present invention comprises the heavy chain variable region and light chain variable region of the anti-CD137 antibody described in any of (a) to (d) below.
  • a heavy chain variable region comprising CDR2 consisting of the amino acid sequence and CDR3 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 98 to 110 of SEQ ID NO: 22, and CDR1 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 23 to 35 of SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 24 and CDR3 consisting of the amino acid sequence from 90 to 100 of SEQ ID NO:24.
  • the anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the present invention comprises the heavy chain variable region and light chain variable region of the anti-CD137 antibody described in any of (a) to (i) below.
  • Anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibodies of the invention may comprise full-length antibodies such as IgG antibodies, or Fab fragments, Fab′ fragments, F(ab′) 2 fragments, scFv It may also contain an antigen-binding fragment such as.
  • the anti-CD137 antibody comprised in the anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody is an antigen-binding fragment of an anti-CD137 antibody.
  • the antigen-binding fragment of the anti-CD137 antibody included in the anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody is anti-CD137 scFv.
  • the anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the present invention is an anti-CD137 scFv comprising the heavy chain variable region and light chain variable region of the anti-CD137 antibody described in (a) to (m) below including: (a) CDR1 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 31 to 35 of SEQ ID NO: 10, CDR2 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 50 to 66 of SEQ ID NO: 10, and the amino acid sequence from amino acid numbers 99 to 107 of SEQ ID NO: 10 and CDR1 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 24 to 34 of SEQ ID NO: 12, CDR2 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 50 to 56 of SEQ ID NO: 12, and the amino acids of SEQ ID NO: 12 a light chain variable region comprising a CDR3 consisting of amino acid sequences numbered 89 to 98; (b) CDR1 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 31 to 35 of SEQ ID NO: 14, CDR2 consist
  • the type and length of the linker connecting the heavy chain variable region and the light chain variable region of the anti-CD137 antibody are not particularly limited, and can be appropriately selected by those skilled in the art.
  • a peptide linker may be used as the linker.
  • the length is preferably 5 amino acids or more (the upper limit is not particularly limited, but usually 30 amino acids or less, preferably 20 amino acids or less), and particularly preferably 15 amino acids.
  • a linker for example, a glycine-serine linker (GS linker) or a glycine-lysine-proline-glycine-serine linker (GKPGS linker) can be used. Examples of such linkers include the following.
  • n is 1-10, 2-8, or 2-6.
  • the length and sequence of the linker can be appropriately selected by those skilled in the art depending on the purpose.
  • the linker used in the anti-CD137 scFv is a GS linker.
  • the linker used in the anti-CD137 scFv is a (Gly-Gly-Gly-Gly-Ser) n GS linker, where n is either 3 or 4.
  • the anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the invention comprises any of the following anti-CD137 scFv (a) to (e): (a) an anti-CD137 scFv consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 242 of SEQ ID NO:26; (b) an anti-CD137 scFv consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 244 of SEQ ID NO:28; (c) an anti-CD137 scFv consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 249 of SEQ ID NO:30; (d) an anti-CD137scFv consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 244 of SEQ ID NO:32; or (e) an anti-CD137scFv consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 247 of SEQ ID NO:34.
  • the anti-CLDN4 antibody or antigen-binding fragment thereof and the anti-CD137 antibody or antigen-binding fragment thereof may be linked by a linker.
  • the type and length of the linker connecting the anti-CLDN4 antibody or antigen-binding fragment thereof and the anti-CD137 antibody or antigen-binding fragment thereof are not particularly limited, and can be appropriately selected by those skilled in the art.
  • a peptide linker may be used as the linker.
  • the length is preferably 5 amino acids or more (the upper limit is not particularly limited, but usually 30 amino acids or less, preferably 20 amino acids or less), and particularly preferably 10 amino acids.
  • a glycine-serine linker for example, a glycine-serine linker (GS linker) or a glycine-lysine-proline-glycine-serine linker (GKPGS linker) can be used.
  • GS linker glycine-serine linker
  • GKPGS linker glycine-lysine-proline-glycine-serine linkerine linker
  • n is 1-10, 2-8, or 2-6.
  • the length and sequence of the peptide linker can be appropriately selected by those skilled in the art depending on the purpose.
  • the linker used as a linker connecting the anti-CLDN4 antibody or antigen-binding fragment thereof and the anti-CD137 antibody or antigen-binding fragment thereof is a GS linker or a GKPGS linker, and in one embodiment, SEQ ID NO: A linker consisting of a 54 amino acid sequence.
  • the anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the present invention comprises an anti-CLDN4 IgG antibody and an anti-CD137scFv, and has a structure in which the anti-CLDN4 IgG antibody and the anti-CD137scFv are linked via a linker.
  • the linking site between the anti-CLDN4 IgG antibody and the anti-CD137 scFv is not particularly limited.
  • the carboxy terminus of the anti-CD137 scFv is linked to the light chain amino terminus of the anti-CLDN4 IgG antibody
  • the heavy chain carboxy terminus of the anti-CLDN4 IgG antibody is linked to the amino terminus of the anti-CD137 scFv
  • the anti-CLDN4 IgG antibody The light chain carboxy terminus of anti-CD137 scFv is linked to the amino terminus of anti-CD137 scFv.
  • the anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the present invention has the amino terminus of anti-CD137 scFv linked to the carboxy terminus of the heavy chain of an anti-CLDN4 IgG antibody, or the light chain of an anti-CLDN4 IgG antibody. To the carboxy terminus is ligated the amino terminus of anti-CD137 scFv.
  • an anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the invention has an anti-CD137 scFv amino terminus linked to the heavy chain carboxy terminus of an anti-CLDN4 IgG antibody.
  • an anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the invention comprises an anti-CLDN4 IgG antibody and an anti-CD137 scFv, wherein the amino terminus of the anti-CD137 scFv is at the heavy or light chain carboxy terminus of the anti-CLDN4 IgG antibody.
  • an anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody linked via a linker wherein the heavy and light chain variable regions of the anti-CD137 scFv are any of the following (a) to (m): (a) CDR1 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 31 to 35 of SEQ ID NO: 10, CDR2 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 50 to 66 of SEQ ID NO: 10, and the amino acid sequence from amino acid numbers 99 to 107 of SEQ ID NO: 10 and CDR1 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 24 to 34 of SEQ ID NO: 12, CDR2 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 50 to 56 of SEQ ID NO: 12, and the amino acids of SEQ ID NO: 12 a light chain variable region comprising a CDR3 consisting of amino acid sequences numbered 89 to 98; (b) CDR1 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 31 to 35 of SEQ ID NO: 14, CDR2 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers
  • an anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the invention comprises an anti-CLDN4 IgG antibody and an anti-CD137 scFv, wherein the amino terminus of the anti-CD137 scFv is at the heavy or light chain carboxy terminus of the anti-CLDN4 IgG antibody.
  • an anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody linked via a linker wherein the anti-CD137 scFv is any of the following (a)-(e): (a) an anti-CD137 scFv consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 242 of SEQ ID NO:26; (b) an anti-CD137 scFv consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 244 of SEQ ID NO:28; (c) an anti-CD137 scFv consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 249 of SEQ ID NO:30; (d) an anti-CD137scFv consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 244 of SEQ ID NO:32; or (e) an anti-CD137scFv consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 247 of SEQ ID NO:34.
  • the anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the invention is any of the following anti-CLDN4-anti-CD137 scFv bispecific antibodies (a) to (h): (a) CDR1 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 31 to 35 of SEQ ID NO:2, CDR2 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 50 to 66 of SEQ ID NO:2, and the amino acid sequence from amino acid numbers 99 to 114 of SEQ ID NO:2 a heavy chain of an anti-CLDN4 antibody comprising a heavy chain variable region comprising a CDR3 consisting of a CDR1 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 24 to 35 of SEQ ID NO: 4; a light chain of an anti-CLDN4 antibody comprising a light chain variable region comprising CDR2 and CDR3 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 90 to 98 of SEQ ID NO: 4, and CDR1 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 31 to 35 of SEQ ID NO:
  • a bispecific antibody comprising an anti-CD137 scFv, wherein the amino terminus of the anti-CD137 scFv is linked via a linker to the heavy chain carboxy terminus of the anti-CLDN4 antibody;
  • CDR1 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 31 to 35 of SEQ ID NO:2,
  • CDR2 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 50 to 66 of SEQ ID NO:2, and the amino acid sequence from amino acid numbers 99 to 114 of SEQ ID NO:2
  • a heavy chain of an anti-CLDN4 antibody comprising a heavy chain variable region comprising a CDR3 consisting of a CDR1 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 24 to 35 of SEQ ID NO: 4;
  • a light chain of an anti-CLDN4 antibody comprising a light chain variable region comprising CDR2 and CDR3 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 90 to 98 of SEQ ID NO: 4, and CDR1 consisting of the amino acid
  • a bispecific antibody comprising an anti-CD137 scFv, wherein the amino terminus of the anti-CD137 scFv is linked via a linker to the heavy chain carboxy terminus of the anti-CLDN4 antibody;
  • CDR1 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 31 to 35 of SEQ ID NO:2,
  • CDR2 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 50 to 66 of SEQ ID NO:2, and the amino acid sequence from amino acid numbers 99 to 114 of SEQ ID NO:2
  • a heavy chain of an anti-CLDN4 antibody comprising a heavy chain variable region comprising a CDR3 consisting of a CDR1 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 24 to 35 of SEQ ID NO: 4;
  • a light chain of an anti-CLDN4 antibody comprising a light chain variable region comprising CDR2 and CDR3 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 90 to 98 of SEQ ID NO: 4, and CDR1 consisting of the amino acid
  • a bispecific antibody comprising an anti-CD137 scFv, wherein the amino terminus of the anti-CD137 scFv is linked via a linker to the heavy chain carboxy terminus of the anti-CLDN4 antibody;
  • CDR1 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 31 to 35 of SEQ ID NO: 2
  • CDR2 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 50 to 66 of SEQ ID NO: 2
  • a heavy chain of an anti-CLDN4 antibody comprising a heavy chain variable region comprising a CDR3 consisting of a CDR1 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 24 to 35 of SEQ ID NO: 4
  • a light chain of an anti-CLDN4 antibody comprising a light chain variable region comprising CDR2 and CDR3 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 90 to 98 of SEQ ID NO:4, and CDR1 consisting of the amino acid sequence
  • a bispecific antibody comprising an anti-CD137 scFv, wherein the amino terminus of the anti-CD137 scFv is linked via a linker to the heavy chain carboxy terminus of the anti-CLDN4 antibody;
  • CDR1 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 31 to 35 of SEQ ID NO: 6,
  • CDR2 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 50 to 66 of SEQ ID NO: 6, and the amino acid sequence from amino acid numbers 99 to 112 of SEQ ID NO: 6
  • a heavy chain of an anti-CLDN4 antibody comprising a heavy chain variable region comprising a CDR3 consisting of a CDR1 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 24 to 35 of SEQ ID NO: 8;
  • a light chain of an anti-CLDN4 antibody comprising a light chain variable region comprising CDR2 and CDR3 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 90 to 98 of SEQ ID NO:8, and CDR1 consisting of the amino acid
  • a bispecific antibody comprising an anti-CD137 scFv, wherein the amino terminus of the anti-CD137 scFv is linked via a linker to the heavy chain carboxy terminus of the anti-CLDN4 antibody;
  • CDR1 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 31 to 35 of SEQ ID NO: 6,
  • CDR2 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 50 to 66 of SEQ ID NO: 6, and the amino acid sequence from amino acid numbers 99 to 112 of SEQ ID NO: 6
  • a heavy chain of an anti-CLDN4 antibody comprising a heavy chain variable region comprising a CDR3 consisting of a CDR1 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 24 to 35 of SEQ ID NO: 8;
  • a light chain of an anti-CLDN4 antibody comprising a light chain variable region comprising CDR2 and CDR3 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 90 to 98 of SEQ ID NO:8, and CDR1 consisting of the amino acid
  • a bispecific antibody comprising an anti-CD137 scFv, wherein the amino terminus of the anti-CD137 scFv is linked via a linker to the heavy chain carboxy terminus of the anti-CLDN4 antibody;
  • CDR1 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 31 to 35 of SEQ ID NO: 6,
  • CDR2 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 50 to 66 of SEQ ID NO: 6, and the amino acid sequence from amino acid numbers 99 to 112 of SEQ ID NO: 6
  • a heavy chain of an anti-CLDN4 antibody comprising a heavy chain variable region comprising a CDR3 consisting of a CDR1 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 24 to 35 of SEQ ID NO: 8;
  • a light chain of an anti-CLDN4 antibody comprising a light chain variable region comprising CDR2 and CDR3 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 90 to 98 of SEQ ID NO:8, and CDR1 consisting of the amino acid
  • a bispecific antibody comprising an anti-CD137 scFv, wherein the amino terminus of said anti-CD137 scFv is linked via a linker to the heavy chain carboxy terminus of said anti-CLDN4 antibody;
  • CDR1 consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6
  • CDR2 consisting of the amino acid sequence of amino acid numbers 50 to 66 of SEQ ID NO: 6
  • CDR3 consisting of the amino acid sequence of amino acid numbers 99 to 112 of SEQ ID NO: 6.
  • Heavy chain of antibody CDR1 consisting of amino acid sequence from amino acid number 24 to 35 of SEQ ID NO: 8
  • CDR2 consisting of amino acid sequence from amino acid number 51 to 57 of SEQ ID NO: 8 and amino acid number from 90 to 98 of SEQ ID NO: 8
  • a light chain of an anti-CLDN4 antibody comprising a light chain variable region comprising CDR3 consisting of an amino acid sequence, CDR1 consisting of an amino acid sequence of amino acid numbers 31 to 35 of SEQ ID NO: 22, amino acids of amino acid numbers 50 to 65 of SEQ ID NO: 22 a heavy chain variable region comprising a CDR2 consisting of the sequence and a CDR3 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 98 to 110 of SEQ ID NO:22;
  • the anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the invention is any of the following anti-CLDN4-anti-CD137 scFv bispecific antibodies (a) to (j): (a) A heavy chain of an anti-CLDN4 antibody comprising a heavy chain variable region consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 125 of SEQ ID NO:2 and a light chain variable region consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 109 of SEQ ID NO:4 a light chain of an anti-CLDN4 antibody comprising a a bispecific antibody comprising an anti-CD137 scFv comprising, wherein the amino terminus of said anti-CD137 scFv is linked via a linker to the heavy chain carboxy terminus of said anti-CLDN4 antibody; (b) a heavy chain of an anti-CLDN4 antibody comprising a heavy chain variable region consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 125 of SEQ ID NO:2 and a light chain variable region consist
  • the anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the invention is the following (a) or (b) anti-CLDN4-anti-CD137 scFv bispecific antibody: (a) a polypeptide comprising the heavy chain of an anti-CLDN4 antibody consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 705 of SEQ ID NO: 36 and anti-CD137 scFv, and anti-CLDN4 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 215 of SEQ ID NO: 40 or (b) a polypeptide comprising the heavy chain of an anti-CLDN4 antibody consisting of amino acid numbers 1 to 712 of SEQ ID NO:38 and an anti-CD137 scFv, and A bispecific antibody comprising a light chain of an anti-CLDN4 antibody consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 215 of SEQ ID NO:40.
  • post-translational modification refers to post-translational modification of an antibody when the antibody is expressed intracellularly.
  • post-translational modifications include modifications such as pyroglutamylation, glycosylation, oxidation, deamidation, and glycation of glutamine or glutamic acid at the N-terminus of the heavy chain, and deletion of lysine by cleavage of the C-terminal lysine of the heavy chain with carboxypeptidase. is mentioned.
  • Various antibodies are known to undergo such post-translational modifications (J. Pharm. Sci., 2008, Vol. 97, p.2426-2447).
  • the anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the invention may be post-translationally modified.
  • the post-translational modification is heavy chain variable region N-terminal pyroglutamylation and/or heavy chain C-terminal lysine deletion. It is known in the art that post-translational modifications by N-terminal pyroglutamylation or C-terminal lysine deletion do not affect antibody activity (Analytical Biochemistry, 2006, Vol.348, p.24- 39).
  • the anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the present invention binds to human CLDN4 and human CD137. Whether or not it binds to human CLDN4 and human CD137 can be confirmed using a known binding activity measurement method.
  • Methods for measuring binding activity include, for example, ELISA, flow cytometry, and the like.
  • the ELISA method or flow cytometry method can be performed by a method commonly used by those skilled in the art, for example, the method described in Example 3 or 5 can be used.
  • anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibodies of the present invention can be readily produced by those skilled in the art using antibody production techniques known in the art using human CLDN4 and human CD137 as antigens, or alternatively, as described herein. Based on the sequence information and the like of the heavy chain variable regions and light chain variable regions of the anti-CLDN4 antibody and anti-CD137 antibody disclosed in the literature, it can be easily produced by those skilled in the art using methods known in the art.
  • the anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the present invention is not particularly limited, but can be produced, for example, according to the method described in ⁇ Method for Producing the Bispecific Antibody of the Present Invention> below. can be done.
  • the invention also provides polynucleotides (also referred to as “polynucleotides of the bispecific antibodies of the invention") that can be used in the production of the anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibodies of the invention.
  • the polynucleotide of the bispecific antibody of the present invention encodes an anti-CLDN4 antibody heavy chain variable region or light chain variable region selected from the group consisting of (a) to (d) below: is a polynucleotide containing a base sequence that: (a) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a heavy chain variable region of an anti-CLDN4 antibody consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 125 of SEQ ID NO:2; (b) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a light chain variable region of an anti-CLDN4 antibody consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 109 of SEQ ID NO:4; (c) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a heavy chain variable region of an anti-CLDN4 antibody consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 123 of SEQ ID
  • the polynucleotide of the bispecific antibody of the present invention has a nucleotide sequence encoding the heavy chain variable region and light chain variable region of an anti-CLDN4 antibody selected from (a) or (b) below: is a polynucleotide containing: (a) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a heavy chain variable region of an anti-CLDN4 antibody consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO:2 from amino acid numbers 1 to 125 and the amino acid sequence of SEQ ID NO:4 from amino acid numbers 1 to 109; or (b) a base encoding the heavy chain variable region of an anti-CLDN4 antibody consisting of amino acid sequences from amino acid numbers 1 to 123 of SEQ ID NO: 6
  • the polynucleotide of the bispecific antibody of the present invention encodes a heavy chain variable region or light chain variable region of an anti-CD137 antibody selected from the group consisting of (a) to (r) below is a polynucleotide containing a base sequence that: (a) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a heavy chain variable region of an anti-CD137 antibody consisting of amino acid sequences from amino acid numbers 1 to 118 of SEQ ID NO: 10; (b) a polynucleotide comprising a base sequence encoding a light chain variable region of an anti-CD137 antibody consisting of amino acid sequences from amino acid numbers 1 to 109 of SEQ ID NO: 12; (c) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a heavy chain variable region of an anti-CD137 antibody consisting of amino acid sequences from amino acid numbers 1 to 118 of SEQ ID NO: 14; (d
  • the polynucleotide of the bispecific antibody of the present invention encodes a heavy chain variable region and a light chain variable region of an anti-CD137 antibody selected from the group consisting of (a) to (i) below is a polynucleotide containing a base sequence that: (a) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a heavy chain variable region of an anti-CD137 antibody consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10 to 118 and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12 to amino acid numbers 1 to 109; A polynucleotide comprising a base sequence encoding a light chain variable region of an anti-CD137 antibody consisting of; (b) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a heavy chain variable region of an anti-CD137 antibody consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 118 of SEQ ID NO: 14 and the amino acid sequence from amino acid numbers
  • the polynucleotide of the bispecific antibody of the present invention is a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding anti-CD137scFv, selected from the group consisting of (a) to (e) below: (a) a polynucleotide comprising a base sequence encoding an anti-CD137scFv consisting of amino acid sequences from amino acid numbers 1 to 242 of SEQ ID NO:26; (b) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding an anti-CD137scFv consisting of amino acid sequences from amino acid numbers 1 to 244 of SEQ ID NO:28; (c) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding an anti-CD137scFv consisting of amino acid sequences from amino acid numbers 1 to 249 of SEQ ID NO:30; (d) a polynucleotide comprising a nucleo
  • the polynucleotide of the bispecific antibody of the invention is a polynucleotide selected from the group consisting of (a) to (e): (a) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a polypeptide comprising an anti-CLDN4 antibody heavy chain consisting of amino acid sequences from amino acid numbers 1 to 705 of SEQ ID NO: 36 and an anti-CD137scFv; (b) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a polypeptide comprising the heavy chain of an anti-CLDN4 antibody consisting of amino acid sequences from amino acid numbers 1 to 712 of SEQ ID NO: 38 and anti-CD137scFv; (c) a polynucleotide comprising a base sequence encoding a light chain of an anti-CLDN4 antibody consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 215 of SEQ ID NO: 40; (d) a
  • the polynucleotide of the bispecific antibody of the present invention can be easily produced by those skilled in the art based on its nucleotide sequence using methods known in the art.
  • the polynucleotides of the bispecific antibodies of the invention can be synthesized using gene synthesis methods known in the art. As such a gene synthesis method, various methods known to those skilled in the art can be used, such as the antibody gene synthesis method described in International Publication No. 90/07861.
  • the invention also provides an expression vector comprising a polynucleotide of the bispecific antibody of the invention (also referred to as an "expression vector of the bispecific antibody of the invention").
  • a polynucleotide of the bispecific antibody of the invention also referred to as an "expression vector of the bispecific antibody of the invention”
  • Each of these polynucleotides may be contained in a separate vector, or multiple polynucleotides may be contained in one vector.
  • the bispecific antibody expression vector of the invention comprises a polynucleotide selected from the group consisting of (a) to (aa): (a) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a heavy chain variable region of an anti-CLDN4 antibody consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 125 of SEQ ID NO:2; (b) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a light chain variable region of an anti-CLDN4 antibody consisting of amino acid sequences from amino acid numbers 1 to 109 of SEQ ID NO:4; (c) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a heavy chain variable region of an anti-CLDN4 antibody consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 123 of SEQ ID NO:6; (d) A polynucleotide comprising a base sequence encoding a light chain variable region of an anti-
  • a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a heavy chain variable region of an anti-CD137 antibody consisting of amino acid sequences from amino acid numbers 1 to 118 of SEQ ID NO: 10;
  • a polynucleotide comprising a base sequence encoding a light chain variable region of an anti-CD137 antibody consisting of amino acid sequences from amino acid numbers 1 to 109 of SEQ ID NO: 12;
  • a polynucleotide comprising a base sequence encoding a heavy chain variable region of an anti-CD137 antibody consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 118 of SEQ ID NO: 14;
  • a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a light chain variable region of an anti-CD137 antibody consisting of amino acid sequences from amino acid numbers 1 to 111 of SEQ ID NO: 16;
  • a polynucleotide comprising a nucleo
  • a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a heavy chain variable region of an anti-CD137 antibody consisting of amino acid sequences from amino acid numbers 1 to 118 of SEQ ID NO:26;
  • a polynucleotide comprising a base sequence encoding a light chain variable region of an anti-CD137 antibody consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 134 to 242 of SEQ ID NO:26;
  • a polynucleotide comprising a base sequence encoding a heavy chain variable region of an anti-CD137 antibody consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 118 of SEQ ID NO:28;
  • p a polynucleotide comprising a base sequence encoding a light chain variable region of an anti-CD137 antibody consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 134 to 244 of SEQ ID NO:28;
  • a polynucleotide comprising a nucleotide comprising a
  • the bispecific antibody expression vector of the invention comprises a polynucleotide selected from the group consisting of (a) to (k): (a) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a heavy chain variable region of an anti-CLDN4 antibody consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO:2 from amino acid numbers 1 to 125 and the amino acid sequence of SEQ ID NO:4 from amino acid numbers 1 to 109; A polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding the light chain variable region of an anti-CLDN4 antibody consisting of; (b) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a heavy chain variable region of an anti-CLDN4 antibody consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 123 of SEQ ID NO: 6 and the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 109 of SEQ ID NO: 8; A polynucleotide comprising a nucleotide selected
  • the bispecific antibody expression vector of the invention comprises a polynucleotide selected from the group consisting of (a) to (c): (a) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a polypeptide comprising an anti-CLDN4 antibody heavy chain consisting of amino acid sequences from amino acid numbers 1 to 705 of SEQ ID NO: 36 and an anti-CD137scFv; (b) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a polypeptide comprising a heavy chain of an anti-CLDN4 antibody consisting of amino acid sequences from amino acid numbers 1 to 712 of SEQ ID NO: 38 and an anti-CD137scFv; or (c) an amino acid of SEQ ID NO: 40
  • the bispecific antibody expression vector of the invention comprises a polynucleotide selected from (a) or (b): (a) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a polypeptide comprising an anti-CLDN4 antibody heavy chain and anti-CD137scFv consisting of amino acid sequences from amino acid numbers 1 to 705 of SEQ ID NO: 36, and from amino acid number 1 of SEQ ID NO: 40 (b) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding an anti-CLDN4 antibody light chain consisting of an amino acid sequence up to 215; A polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a polypeptide comprising CD137scFv, and a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding an anti-CLDN4 antibody light chain consisting of amino acid sequences from amino acid numbers 1 to 215 of SEQ ID NO:40.
  • the expression vector of the bispecific antibody of the present invention can be used in various host cells such as eukaryotic cells (e.g., animal cells, insect cells, plant cells, yeast) and/or prokaryotic cells (e.g., E. coli). It is not particularly limited as long as it can produce polynucleotides.
  • eukaryotic cells e.g., animal cells, insect cells, plant cells, yeast
  • prokaryotic cells e.g., E. coli
  • Examples of such expression vectors include plasmid vectors, virus vectors and the like. Plasmid vectors include, for example, pcDNA series (Thermo Fisher Scientific), pALTER (registered trademark)-MAX (Promega), pHEK293 Ultra Expression Vector (Takara Bio), pEE6.4 or pEE12.4 (Lonza Biologies), etc. can be used.
  • Viral vectors that can be used include, for example, lentiviruses, adenoviruses, retroviruses, and adeno-associated viruses.
  • the lentivirus when using a lentivirus to introduce the polynucleotide of the present invention into cells, the lentivirus may be pLVSIN-CMV/EF1 ⁇ vector (Takara Bio Inc.), pLenti vector (Thermo Fisher Scientific), etc. can be done.
  • the vectors used for the expression vectors of the bispecific antibodies of the present invention are pcDNA3.4-TOPO® (Thermo Fisher Scientific) and pcDNA3.1 (Thermo Fisher Scientific). be.
  • the expression vector of the bispecific antibody of the present invention can contain a promoter operably linked to the polynucleotide of the bispecific antibody of the present invention.
  • promoters for expressing the polynucleotide of the bispecific antibody of the present invention in animal cells include virus-derived promoters such as CMV, RSV, and SV40, actin promoters, EF (elongation factor) 1 ⁇ promoters, and heat shock promoters. etc.
  • promoters for expressing the polynucleotide of the bispecific antibody of the present invention in bacteria include trp promoter, lac promoter, ⁇ PL promoter, tac promoter and the like.
  • promoters for expressing the polynucleotide of the bispecific antibody of the present invention in yeast include GAL1 promoter, GAL10 promoter, PH05 promoter, PGK promoter, GAP promoter, ADH promoter and the like.
  • the expression vector for the bispecific antibody of the present invention may contain a start codon and a stop codon.
  • enhancer sequences, 5′ and 3′ untranslated regions of the gene encoding the antibody of the present invention or its heavy or light chain, secretory signal sequences, splicing junctions, polyadenylation sites, or replicable Units and the like may be included.
  • E. coli is used as the host cell, the expression vector of the present invention may contain an initiation codon, a termination codon, a terminator region and a replicable unit.
  • the expression vector of the present invention may contain commonly used drug selection marker genes (eg, tetracycline resistance gene, ampicillin resistance gene, kanamycin resistance gene, neomycin resistance gene, dihydrofolate reductase gene) depending on the purpose.
  • drug selection marker genes eg, tetracycline resistance gene, ampicillin resistance gene, kanamycin resistance gene, neomycin resistance gene, dihydrofolate reductase gene
  • the present invention also provides a host cell transformed with a polynucleotide of the bispecific antibody of the present invention or an expression vector of the bispecific antibody of the present invention (also referred to as "polynucleotide of the present invention, etc.") ("this (also referred to as "host cells of the invention”).
  • the host cell of the present invention contains the polynucleotide and the like of the present invention inside the cell.
  • the introduced polynucleotide, etc. of the present invention may or may not be integrated into the genomic DNA of the host cell.
  • Cells used as host cells may be either in vitro culturable cells or in vivo cells.
  • the host cell of the present invention can be produced by introducing the polynucleotide or the like of the present invention into the cell in vitro.
  • the method of transforming host cells is not particularly limited, but methods commonly used by those skilled in the art, such as the calcium phosphate method, electroporation method, or lipofection method, can be used.
  • the method for introducing the polynucleotide of the present invention into the host cell is not particularly limited. , liposomes, lipid nanoparticles (LNPs), etc.) can be used.
  • Cells that can be cultured in vitro are not particularly limited as long as they can be transformed by the expression vector used or a method such as electroporation and can express the antibody or polypeptide.
  • Cells that can be cultured in vitro include, for example, conventional cells commonly used in the technical field of the present invention, various cells such as artificially established cells (e.g., animal cells (e.g., CHO-K1 cells, ExpiCHO -S (registered trademark) cells, CHOK1SV cells, CHO-DG44 cells, HEK293 cells, Expi293F cells, NS0 cells), insect cells (e.g., Sf9), bacteria (Escherichia, etc.), yeast (Saccharomyces, Pichia, etc.) ) etc.).
  • the host cells of the invention are Expi293F cells, CHO-K1 cells, or ExpiCHO-S cells.
  • Selection of host cells transformed in vitro can be performed by methods commonly used by those skilled in the art. Selection methods include, for example, a drug selection method using a drug selection marker gene and a drug such as tetracycline, ampicillin, neomycin or hygromycin, cell isolation such as a limiting dilution method, a single cell sorting method, or a colony pick-up method. law can be used.
  • a drug selection method using a drug selection marker gene and a drug such as tetracycline, ampicillin, neomycin or hygromycin
  • cell isolation such as a limiting dilution method, a single cell sorting method, or a colony pick-up method. law can be used.
  • the host cell comprises a polynucleotide selected from the group consisting of (a)-(aa): (a) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a heavy chain variable region of an anti-CLDN4 antibody consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 125 of SEQ ID NO:2; (b) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a light chain variable region of an anti-CLDN4 antibody consisting of amino acid sequences from amino acid numbers 1 to 109 of SEQ ID NO:4; (c) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a heavy chain variable region of an anti-CLDN4 antibody consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 123 of SEQ ID NO:6; (d) A polynucleotide comprising a base sequence encoding a light chain variable region of an anti-CLDN4 antibody consisting of the amino
  • a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a heavy chain variable region of an anti-CD137 antibody consisting of amino acid sequences from amino acid numbers 1 to 118 of SEQ ID NO: 10;
  • a polynucleotide comprising a base sequence encoding a light chain variable region of an anti-CD137 antibody consisting of amino acid sequences from amino acid numbers 1 to 109 of SEQ ID NO: 12;
  • a polynucleotide comprising a base sequence encoding a heavy chain variable region of an anti-CD137 antibody consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 118 of SEQ ID NO: 14;
  • a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a light chain variable region of an anti-CD137 antibody consisting of amino acid sequences from amino acid numbers 1 to 111 of SEQ ID NO: 16;
  • a polynucleotide comprising a nucleo
  • a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a heavy chain variable region of an anti-CD137 antibody consisting of amino acid sequences from amino acid numbers 1 to 118 of SEQ ID NO:26;
  • a polynucleotide comprising a base sequence encoding a light chain variable region of an anti-CD137 antibody consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 134 to 242 of SEQ ID NO:26;
  • a polynucleotide comprising a base sequence encoding a heavy chain variable region of an anti-CD137 antibody consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 118 of SEQ ID NO:28;
  • p a polynucleotide comprising a base sequence encoding a light chain variable region of an anti-CD137 antibody consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 134 to 244 of SEQ ID NO:28;
  • a polynucleotide comprising a nucleotide comprising a
  • the host cell comprises a polynucleotide selected from the group consisting of (a)-(k): (a) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a heavy chain variable region of an anti-CLDN4 antibody consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO:2 from amino acid numbers 1 to 125 and the amino acid sequence of SEQ ID NO:4 from amino acid numbers 1 to 109; A polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding the light chain variable region of an anti-CLDN4 antibody consisting of; (b) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a heavy chain variable region of an anti-CLDN4 antibody consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 123 of SEQ ID NO: 6 and the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 109 of SEQ ID NO: 8; A polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding
  • the host cell comprises a polynucleotide selected from the group consisting of (a)-(c): (a) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a polypeptide comprising an anti-CLDN4 antibody heavy chain consisting of amino acid sequences from amino acid numbers 1 to 705 of SEQ ID NO: 36 and an anti-CD137scFv; (b) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a polypeptide comprising a heavy chain of an anti-CLDN4 antibody consisting of amino acid sequences from amino acid numbers 1 to 712 of SEQ ID NO: 38 and an anti-CD137scFv; or (c) an amino acid of SEQ ID NO: 40
  • the host cell comprises a polynucleotide selected from (a) or (b): (a) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a polypeptide comprising an anti-CLDN4 antibody heavy chain and anti-CD137scFv consisting of amino acid sequences from amino acid numbers 1 to 705 of SEQ ID NO: 36, and from amino acid number 1 of SEQ ID NO: 40 (b) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding an anti-CLDN4 antibody light chain consisting of an amino acid sequence up to 215; A polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a polypeptide comprising CD137scFv, and a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding an anti-CLDN4 antibody light chain consisting of amino acid sequences from amino acid numbers 1 to 215 of SEQ ID NO:40.
  • the host cell comprises the following polypeptides (a)-(j): (a) a heavy chain of an anti-CLDN4 antibody comprising a heavy chain variable region consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 125 of SEQ ID NO:2, and an anti-CD137 antibody consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 118 of SEQ ID NO:26 and an anti-CD137 scFv comprising the light chain variable region of an anti-CD137 antibody consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 134 to 242 of SEQ ID NO: 26, and the anti-CD137 scFv at the heavy chain carboxy terminus of the anti-CLDN4 antibody
  • a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a polypeptide whose amino terminus is linked via a linker, and an anti-CLDN4 antibody light comprising a light chain variable region consisting of amino acid sequences from amino acid numbers 1 to 109 of SEQ ID NO:
  • a polynucleotide comprising a base sequence encoding a strand;
  • a heavy chain of an anti-CLDN4 antibody comprising a heavy chain variable region consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 123 of SEQ ID NO:6, and an anti-CD137 antibody consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 118 of SEQ ID NO:28 and an anti-CD137 scFv comprising the light chain variable region of an anti-CD137 antibody consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 134 to 244 of SEQ ID NO: 28, and the anti-CD137 scFv at the heavy chain carboxy terminus of the anti-CLDN4 antibody
  • a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a polypeptide whose amino terminus is linked via a linker, and an anti-CLDN4 antibody light comprising a light chain variable region consisting of amino acid sequences from amino acid numbers 1 to 109 of SEQ ID NO:8.
  • a polynucleotide comprising a base sequence encoding a strand; (h) a heavy chain of an anti-CLDN4 antibody comprising a heavy chain variable region consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 123 of SEQ ID NO:6, and an anti-CD137 antibody consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 111 of SEQ ID NO:30 and an anti-CD137 scFv comprising the heavy chain variable region of an anti-CD137 antibody consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 132 to 249 of SEQ ID NO: 30, and the anti-CD137 scFv at the heavy chain carboxy terminus of the anti-CLDN4 antibody
  • a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a polypeptide whose amino terminus is linked via a linker, and an anti-CLDN4 antibody light comprising a light chain variable region consisting of amino acid sequences from amino acid numbers 1 to 109 of SEQ ID NO:8.
  • a polynucleotide comprising a base sequence encoding a strand; (i) a heavy chain of an anti-CLDN4 antibody comprising a heavy chain variable region consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 123 of SEQ ID NO:6, and an anti-CD137 antibody consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 118 of SEQ ID NO:32 and an anti-CD137 scFv comprising the light chain variable region of an anti-CD137 antibody consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 134 to 244 of SEQ ID NO: 32, and the anti-CD137 scFv at the heavy chain carboxy terminus of the anti-CLDN4 antibody
  • a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a polypeptide whose amino terminus is linked via a linker, and an anti-CLDN4 antibody light comprising a light chain variable region consisting of amino acid sequences from amino acid numbers 1 to 109 of SEQ ID NO:8.
  • an anti-CD137 scFv comprising an anti-CD137 antibody heavy chain variable region consisting of an amino acid sequence from 1 to 121 and an anti-CD137 antibody light chain variable region consisting of an amino acid sequence from amino acid numbers 137 to 247 of SEQ ID NO: 34
  • a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a polypeptide in which the amino terminus of the anti-CD137 scFv is linked via a linker to the heavy chain carboxy terminus of the CLDN4 antibody, and the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 109 of SEQ ID NO: 8
  • a polynucleotide comprising a base sequence encoding a light chain of an anti-CLDN4 antibody comprising a light chain variable region comprising:
  • the host cell is a host cell of (a) or (b) below: (a) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a polypeptide comprising an anti-CLDN4 antibody heavy chain and anti-CD137scFv consisting of amino acid sequences from amino acid numbers 1 to 705 of SEQ ID NO: 36, and from amino acid number 1 of SEQ ID NO: 40 a host cell comprising a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a light chain of an anti-CLDN4 antibody consisting of an amino acid sequence up to 215; or (b) an anti-CLDN4 antibody consisting of amino acid numbers 1 to 712 of SEQ ID NO:38.
  • a host cell containing nucleotides A host cell containing nucleotides.
  • the host cell has a base sequence encoding a polypeptide comprising an anti-CLDN4 antibody heavy chain and anti-CD137 scFv consisting of amino acid sequences from amino acid numbers 1 to 712 of SEQ ID NO:38 and a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a light chain of an anti-CLDN4 antibody consisting of amino acid numbers 1 to 215 of SEQ ID NO:40.
  • the present invention also provides methods of producing the anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibodies of the invention (also referred to as "production methods of the invention").
  • the production method of the present invention includes the aforementioned method for producing the polynucleotide of the bispecific antibody of the present invention, the method for producing the expression vector for the bispecific antibody of the present invention, and the method for producing the host cell of the present invention.
  • the production method of the present invention includes a step of culturing the host cell described in ⁇ Host cell of the present invention> above to express the antibody in the cell or the culture supernatant, recovering and isolating the antibody. and purification methods.
  • the production method of the present invention is not limited to these methods as long as the anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the present invention is produced.
  • the production method of the present invention comprises the steps of culturing host cells of (a) to (j) below: (a) a heavy chain of an anti-CLDN4 antibody comprising a heavy chain variable region consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 125 of SEQ ID NO:2, and an anti-CD137 antibody consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 118 of SEQ ID NO:26 and an anti-CD137 scFv comprising the light chain variable region of an anti-CD137 antibody consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 134 to 242 of SEQ ID NO: 26, and the anti-CD137 scFv at the heavy chain carboxy terminus of the anti-CLDN4 antibody
  • a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a polypeptide whose amino terminus is linked via a linker, and an anti-CLDN4 antibody light comprising a light chain variable region consisting of amino acid sequences from amino acid numbers 1 to 109 of SEQ ID NO
  • a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a polypeptide whose amino terminus is linked via a linker, and an anti-CLDN4 antibody light comprising a light chain variable region consisting of amino acid sequences from amino acid numbers 1 to 109 of SEQ ID
  • a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a polypeptide whose amino terminus is linked via a linker, and an anti-CLDN4 antibody light comprising a light chain variable region consisting of amino acid sequences from amino acid numbers 1 to 109 of SEQ ID
  • a host cell containing a polynucleotide comprising a base sequence encoding a strand; (i) a heavy chain of an anti-CLDN4 antibody comprising a heavy chain variable region consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 123 of SEQ ID NO:6, and an anti-CD137 antibody consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 118 of SEQ ID NO:32 and an anti-CD137 scFv comprising the light chain variable region of an anti-CD137 antibody consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 134 to 244 of SEQ ID NO: 32, and the anti-CD137 scFv at the heavy chain carboxy terminus of the anti-CLDN4 antibody
  • a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a polypeptide whose amino terminus is linked via a linker, and an anti-CLDN4 antibody light comprising a light chain variable region consisting of amino acid sequences from amino acid numbers 1 to 109 of S
  • an anti-CD137 scFv comprising an anti-CD137 antibody heavy chain variable region consisting of the amino acid sequence of amino acid numbers 1 to 121 of 34 and an anti-CD137 antibody light chain variable region consisting of the amino acid sequence of amino acid numbers 137 to 247 of SEQ ID NO: 34 a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a polypeptide, wherein the amino terminus of the anti-CD137 scFv is linked via a linker to the heavy chain carboxy terminus of the anti-CLDN4 antibody, and amino acid numbers 1 to 109 of SEQ ID NO:8
  • a host cell comprising a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a light chain of an anti-CLDN4 antibody comprising a light chain variable region consisting of an
  • the production method of the present invention comprises the step of culturing the host cell of (a) or (b) below: (a) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a polypeptide comprising an anti-CLDN4 antibody heavy chain and anti-CD137scFv consisting of amino acid sequences from amino acid numbers 1 to 705 of SEQ ID NO: 36, and from amino acid number 1 of SEQ ID NO: 40 (b) a host cell comprising a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a light chain of an anti-CLDN4 antibody consisting of amino acid sequence up to 215; A polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a polypeptide comprising a heavy chain and an anti-CD137 scFv, and a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a light chain of an anti-CLDN4 antibody consisting of amino acid sequence up
  • the host cells of the present invention can be cultured by known methods. Culture conditions such as temperature, medium pH and culture time can be appropriately selected by those skilled in the art.
  • the medium includes, for example, MEM medium containing about 5 to 20% fetal bovine serum (Science, 1959, Vol. 130, p. 432-437), D-MEM medium (Virol. , 1959, Vol.8, p.396), RPMI-1640 medium (J.Am.Med.Assoc., 1967, Vol.199, p.519), 199 medium (Exp.Biol.Med., 1950, Vol. .73, pp.1-8) and the like can be used.
  • the pH of the medium is, for example, about 6 to 8, and the culture is usually performed at about 30 to 40° C. for about 15 to 336 hours with aeration or stirring as necessary.
  • the medium may be, for example, Grace's medium containing fetal bovine serum (Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 1985, Vol. 82, p. 8404). can.
  • the pH of the medium is, for example, about 5 to 8, and the culture is usually carried out at about 20 to 40° C. for about 15 to 100 hours with aeration or stirring if necessary.
  • a suitable medium is, for example, a liquid medium containing nutrients.
  • a nutrient medium contains, for example, a carbon source, an inorganic nitrogen source, or an organic nitrogen source necessary for the growth of transformed host cells.
  • carbon sources include glucose, dextran, soluble starch, and sucrose.
  • inorganic nitrogen sources or organic nitrogen sources include ammonium salts, nitrates, amino acids, corn steep liquor, peptone, casein, and meat extract. , soybean meal, potato extract, and the like.
  • other nutrients e.g., inorganic salts (e.g., calcium chloride, sodium dihydrogen phosphate, magnesium chloride), vitamins
  • antibiotics e.g., tetracycline, neomycin, ampicillin, kanamycin
  • the pH of the medium is, for example, about 5-8.
  • Escherichia coli for example, LB medium, M9 medium (Molecular Cloning, Cold Spring Harbor Laboratory, Vol. 3, A2.2) or the like can be used as the medium. Cultivation is usually carried out at about 14 to 43° C. for about 3 to 24 hours with aeration or stirring if necessary.
  • yeast for example, Burkholder's minimal medium (Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 1980, Vol. 77, p. 4505) or the like can be used as the medium. Cultivation is usually carried out at about 20 to 35° C. for about 14 to 144 hours with aeration or stirring if necessary.
  • the anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the present invention can be expressed by culturing as described above.
  • the production method of the present invention comprises the steps of culturing the host cell of the present invention and expressing the anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody, recovering the anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody from the host cell, A step of isolating or purifying can be included.
  • Isolation or purification methods include, for example, methods utilizing solubility such as salting out and solvent precipitation, methods utilizing differences in molecular weight such as dialysis, ultrafiltration and gel filtration, ion exchange chromatography, and hydroxyapatite chromatography.
  • a method using charge such as photography, a method using specific affinity such as affinity chromatography, a method using a difference in hydrophobicity such as reversed-phase high-performance liquid chromatography, and an isoelectric point such as isoelectric focusing.
  • a method using the difference between the in one embodiment antibodies secreted into the culture supernatant can be purified by various types of chromatography, eg, column chromatography using a protein A column or protein G column.
  • the anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody and the anti-CLDN4-anti-CD137scFv bispecific antibody produced by the production method of the present invention are included in the anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the present invention.
  • the present invention also provides pharmaceutical compositions (also referred to as “pharmaceutical compositions of the present invention”) comprising the anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the present invention.
  • Pharmaceutical compositions of the invention include pharmaceutical compositions comprising an anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the invention and a pharmaceutically acceptable excipient.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be prepared by a commonly used method using excipients commonly used in the field, ie, pharmaceutical excipients, pharmaceutical carriers, and the like. Examples of dosage forms of these pharmaceutical compositions include, for example, parenteral agents such as injections and infusions. can do. For formulation, excipients, carriers, additives and the like according to these dosage forms can be used within a pharmaceutically acceptable range.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may contain a post-translational modification of the anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the present invention.
  • the present invention also includes pharmaceutical compositions containing antibodies that have been subjected to both or one of C-terminal lysine deletion and N-terminal pyroglutamylation.
  • the pharmaceutical composition of the present invention is an anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the present invention and/or a post-translational modification of any of the following (a) to (j) is a pharmaceutical composition containing: (a) A heavy chain of an anti-CLDN4 antibody comprising a heavy chain variable region consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 125 of SEQ ID NO:2 and a light chain variable region consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 109 of SEQ ID NO:4 a light chain of an anti-CLDN4 antibody comprising a an anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody comprising an anti-CD137 scFv comprising a heavy chain carboxy terminus of the anti-CLDN4 antibody linked via a linker to the amino terminus of the anti-CD137 scFv and/or a post-translational modification of the antibody body; (b) a heavy chain of an anti-CLDN4 antibody comprising a heavy chain variable region
  • the pharmaceutical composition of the present invention contains the following (a) or (b) anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the present invention and/or a post-translational modification of the antibody
  • the pharmaceutical composition is: (a) a polypeptide comprising the heavy chain of an anti-CLDN4 antibody consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 705 of SEQ ID NO: 36 and anti-CD137 scFv, and anti-CLDN4 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 215 of SEQ ID NO: 40 an anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody and/or post-translational modifications thereof, comprising the light chain of the antibody; or (b) an anti-CLDN4 antibody consisting of the amino acid sequence of amino acid numbers 1 to 712 of SEQ ID NO:38. and a light chain of an anti-CLDN4 antibody consisting of the amino acid sequence of amino acid numbers 1 to 215 of SEQ ID NO: 40, and/or Post-translational modifications of antibodies.
  • the amount of the anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the present invention and / or the post-translational modification of the antibody of the present invention in the formulation depends on the severity and age of the patient's symptoms, the dosage form of the formulation used, or the binding of the antibody For example, about 0.001 mg/kg to 100 mg/kg can be used, although it varies depending on the potency and the like.
  • the anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibodies of the invention can be used to treat cancer in a subject.
  • the present invention also includes a method of treating cancer comprising administering to a subject a therapeutically effective amount of the anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the present invention.
  • the invention also includes an anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the invention for use in treating cancer.
  • the present invention also includes use of the anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the present invention in the manufacture of a pharmaceutical composition for treating cancer. Cancers to be treated by the present invention are not particularly limited.
  • Hematological cancers such as cellular lymphoma, multiple myeloma, T-cell lymphoma, myelodysplastic syndrome, adenocarcinoma, squamous cell carcinoma, adenosquamous cell carcinoma, undifferentiated carcinoma, large cell carcinoma, non-small cell carcinoma Lung cancer, small cell lung cancer, mesothelioma, skin cancer, cutaneous T-cell lymphoma, breast cancer, prostate cancer, bladder cancer, vaginal cancer, cervical cancer, head and neck cancer, uterine cancer, cervical cancer cancer, liver cancer, gallbladder cancer, bile duct cancer, kidney cancer, pancreatic cancer, colon cancer, colorectal cancer, rectal cancer, small bowel cancer, stomach cancer, esophageal cancer, testicular cancer, and ovarian cancer.
  • cellular lymphoma such as cellular lymphoma, multiple myeloma, T-cell lymphoma, myelodysplastic syndrome, adenocarcino
  • solid tumors such as cancer, brain tumors, and cancers of bone tissue, cartilage tissue, adipose tissue, muscle tissue, vascular tissue and hematopoietic tissue, chondrosarcoma, Ewing sarcoma, malignant hemangioendothelioma, malignant schwannoma, osteosarcoma , sarcoma such as soft tissue sarcoma, glioblastoma, glioblastoma multiforme, hepatoblastoma, medulloblastoma, nephroblastoma, neuroblastoma, pancreatoblastoma, pleuropulmonary blastoma, retinoblastoma, etc.
  • cancers targeted for treatment by the present invention are colon cancer, non-small cell lung cancer, small cell lung cancer, bladder cancer, ovarian cancer, breast cancer, and prostate cancer.
  • cancers to be treated by the present invention are cancers in which CLDN4 is highly expressed compared to normal tissues. Cancers to be treated by the present invention are preferably cancers in which CLDN4 is highly expressed compared to normal tissues, or colon cancer, rectal cancer, lung cancer, non-small cell lung cancer, or small cell lung cancer. , bladder cancer, ovarian cancer, breast cancer, and prostate cancer.
  • the present invention also provides any of the following anti-CLDN4 antibodies or antigen-binding fragments (a) to (c): (a) CDR1 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 31 to 35 of SEQ ID NO: 2, CDR2 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 50 to 66 of SEQ ID NO: 2, and amino acids from 99 to 114 of SEQ ID NO: 2 a heavy chain variable region comprising CDR3 consisting of the sequence, CDR1 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 24 to 35 of SEQ ID NO: 4, CDR2 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 51 to 57 of SEQ ID NO: 4, and SEQ ID NO: an anti-CLDN4 antibody or antigen-binding fragment thereof comprising a light chain variable region comprising a CDR3 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 90 to 98 of 4; (b) an anti-CLDN4 antibody comprising a heavy chain variable region consisting of the amino acid
  • the anti-CLDN4 antibody or antigen-binding fragment thereof of the invention has a heavy chain variable region consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 125 of SEQ ID NO:2 and amino acid numbers from 1 to 109 of SEQ ID NO:4. or an anti-CLDN4 antibody or antigen-binding fragment thereof comprising a light chain variable region consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6, or a heavy chain variable region consisting of the amino acid sequence of amino acid numbers 1 to 123 of SEQ ID NO: 6 and amino acid number 1 of SEQ ID NO: 8 An anti-CLDN4 antibody or antigen-binding fragment thereof comprising a light chain variable region consisting of the amino acid sequence from to 109.
  • the anti-CLDN4 antibody or antigen-binding fragment thereof of the invention is a heavy chain variable region consisting of amino acid numbers 1 to 125 of SEQ ID NO:2.
  • the anti-CLDN4 antibody or antigen-binding fragment thereof of the invention comprises a heavy chain variable region consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 123 of SEQ ID NO:6 and from amino acid numbers 1 to 109 of SEQ ID NO:8.
  • An anti-CLDN4 antibody or antigen-binding fragment thereof comprising a light chain variable region consisting of an amino acid sequence.
  • any constant region of Ig ⁇ , Ig ⁇ , Ig ⁇ , Ig ⁇ or Ig ⁇ can be selected as the heavy chain constant region of the anti-CLDN4 antibody of the present invention.
  • Ig ⁇ can be selected from, for example, Ig ⁇ 1, Ig ⁇ 2, Ig ⁇ 3 or Ig ⁇ 4.
  • the heavy chain constant region is an Ig ⁇ 1 constant region, eg, a human Ig ⁇ 1 constant region.
  • the heavy chain constant region of the anti-CLDN4 antibody of the present invention may contain amino acid mutations such as LALA mutations, P331G or P331S mutations in order to reduce ADCC and CDC.
  • Either Ig ⁇ or Ig ⁇ constant region can be selected as the light chain constant region of the anti-CLDN4 antibody of the present invention.
  • the light chain constant region is an Ig ⁇ constant region, eg, a human Ig ⁇ constant region.
  • the antigen-binding fragment of an anti-CLDN4 antibody of the invention is scFv, Fab, Fab', or F(ab') 2 .
  • the anti-CLDN4 antibody of the present invention comprises a heavy chain comprising a heavy chain variable region consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO:2 and a light chain comprising a light chain variable region consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO:4.
  • An anti-CLDN4 antibody, or an anti-CLDN4 antibody comprising a heavy chain comprising a heavy chain variable region consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO:6 and a light chain comprising a light chain variable region consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO:8.
  • the anti-CLDN4 antibody of the present invention is an anti-CLDN4 antibody comprising a heavy chain comprising a heavy chain variable region consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO:2 and a light chain comprising a light chain variable region consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO:4.
  • CLDN4 antibody In one embodiment, the anti-CLDN4 antibody of the present invention comprises a heavy chain comprising a heavy chain variable region consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO:6 and a light chain comprising a light chain variable region consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO:8.
  • Anti-CLDN4 antibody is an anti-CLDN4 antibody comprising a heavy chain comprising a heavy chain variable region consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO:2 and a light chain comprising a light chain variable region consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO:4.
  • the present invention also relates to the binding of carbohydrates, lipids, metals (including radioactive isotopes), organic compounds (including toxins, near-infrared fluorescent dyes, chelating agents), etc. (also referred to as "modifying agents”). or an antigen-binding fragment thereof (also referred to as a "conjugate of the invention”).
  • modifying agent refers to a non-peptidic substance that is bound directly or via a linker or the like to an antibody or antigen-binding fragment thereof.
  • the modifier used in the complex of the present invention is not particularly limited.
  • the conjugate of the invention is an Antibody Drug Conjugate (ADC) of an anti-CLDN4 antibody or antigen-binding fragment thereof.
  • ADC Antibody Drug Conjugate
  • Drugs and linkers used in ADC can be selected from drugs and linkers commonly used by those skilled in the art.
  • the present invention also provides cells (eg, chimeric antigen receptor-T cells; CAR-T cells) expressing the anti-CLDN4 antibody or antigen-binding fragment thereof of the present invention on the cell surface.
  • cells eg, chimeric antigen receptor-T cells; CAR-T cells
  • Such cells can be produced by those skilled in the art using polynucleotides encoding the anti-CLDN4 antibodies or antigen-binding fragments thereof of the present invention.
  • Various immune cells T cells, NK cells, NKT cells, etc.
  • T cells, NK cells, NKT cells, etc. can be used as cells for expressing the anti-CLDN4 antibody or antigen-binding fragment thereof of the present invention.
  • the anti-CLDN4 antibody or antigen-binding fragment thereof of the present invention, the conjugate of the present invention, and the antibody or antigen-binding fragment in a cell expressing the anti-CLDN4 antibody or antigen-binding fragment thereof of the present invention on the cell surface Portions may be post-translationally modified.
  • the post-translational modification is heavy chain variable region N-terminal pyroglutamylation and/or heavy chain C-terminal lysine deletion.
  • the anti-CLDN4 antibody or antigen-binding fragment thereof of the present invention, the conjugate of the present invention, and the cell expressing the anti-CLDN4 antibody or antigen-binding fragment thereof of the present invention on the surface of the cell are the anti-CLDN4 antibodies or antigen-binding fragments thereof of the present invention disclosed herein.
  • a person skilled in the art can prepare it using methods known in the art. obtain.
  • the anti-CLDN4 antibody or antigen-binding fragment thereof of the present invention is not particularly limited, but can be produced, for example, according to the method described in ⁇ Method for Producing Bispecific Antibody of the Present Invention>. .
  • the present invention also provides anti-CLDN4 antibodies or antigen-binding fragments thereof of the present invention, conjugates of the present invention, and cells expressing the anti-CLDN4 antibodies of the present invention or antigen-binding fragments thereof on the cell surface (hereinafter collectively referred to as "A pharmaceutical composition comprising the anti-CLDN4 antibody of the present invention, etc.) and a pharmaceutically acceptable excipient is provided.
  • the pharmaceutical composition can be used for cancer treatment.
  • the present invention also provides a method of treating cancer comprising the step of administering a therapeutically effective amount of the anti-CLDN4 antibody of the present invention to a subject, anti-CLDN4 antibody of the present invention for use in treating cancer, cancer use of the anti-CLDN4 antibody, etc.
  • the present invention also provides an anti-CD137 antibody or antigen-binding fragment thereof comprising the heavy chain variable region and light chain variable region of any of the following anti-CD137 antibodies (a) to (d): (a) CDR1 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 31 to 35 of SEQ ID NO: 10, CDR2 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 50 to 66 of SEQ ID NO: 10, and the amino acid sequence from amino acid numbers 99 to 107 of SEQ ID NO: 10 and CDR1 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 24 to 34 of SEQ ID NO: 12, CDR2 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 50 to 56 of SEQ ID NO: 12, and the amino acids of SEQ ID NO: 12 a light chain variable region comprising a CDR3 consisting of amino acid sequences numbered 89 to 98; (b) CDR1 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 31 to 35 of SEQ ID NO: 14, CDR2 consisting of the
  • a heavy chain variable region comprising CDR2 consisting of the amino acid sequence and CDR3 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 98 to 110 of SEQ ID NO: 22, and CDR1 consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 23 to 35 of SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 24 and CDR3 consisting of the amino acid sequence from 90 to 100 of SEQ ID NO:24.
  • the anti-CD137 antibody or antigen-binding fragment thereof of the present invention comprises the heavy chain variable region and light chain variable region of any of the following anti-CD137 antibody (a) to (i); (a) a heavy chain variable region consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 118 of SEQ ID NO: 10 and a light chain variable region consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 109 of SEQ ID NO: 12; (b) a heavy chain variable region consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 118 of SEQ ID NO: 14 and a light chain variable region consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 111 of SEQ ID NO: 16; (c) a heavy chain variable region consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 118 of SEQ ID NO: 18 and a light chain variable region consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 111 of SEQ ID NO: 20; (d) a heavy chain variable region consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to
  • the antigen-binding fragment of an anti-CD137 antibody of the invention is a scFv.
  • the antigen-binding fragment of the anti-CD137 antibody of the invention is any of (a) to (e) below; (a) an anti-CD137 scFv consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 242 of SEQ ID NO:26; (b) an anti-CD137 scFv consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 244 of SEQ ID NO:28; (c) an anti-CD137 scFv consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 249 of SEQ ID NO:30; (d) an anti-CD137scFv consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 244 of SEQ ID NO:32; or (e) an anti-CD137scFv consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 247 of SEQ ID NO:34.
  • the anti-CD137 antibody or antigen-binding fragment thereof of the present invention can be produced by those skilled in the art by referring to the descriptions herein such as ⁇ anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the present invention>.
  • the anti-CD137 antibodies or antigen-binding fragments thereof of the present invention can be used, for example, in bispecific antibodies with antibodies against any TAA (anti-TAA antibodies) used in the treatment of cancer. That is, the present invention also provides a bispecific antibody comprising an anti-CD137 antibody or antigen-binding fragment thereof of the present invention and an anti-TAA antibody or antigen-binding fragment thereof (“anti-TAA-anti-CD137 bispecific antibody of the present invention”).
  • the TAA is not particularly limited as long as it is expressed on the cell surface of the tumor.
  • -H3 GPC2, GPC3, GPRC5D, WT-1, NY-ESO-1, CLDN4, CLDN6, CLDN18.2, TSPAN8 can be used.
  • an anti-TAA-anti-CD137 bispecific antibody of the invention comprises a scFv of an anti-CD137 antibody.
  • an anti-TAA-anti-CD137 bispecific antibody of the invention comprises: A scFv of an anti-CD137 antibody that is any of the following (a) to (e); (a) an anti-CD137 scFv consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 242 of SEQ ID NO:26; (b) an anti-CD137 scFv consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 244 of SEQ ID NO:28; (c) an anti-CD137 scFv consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 249 of SEQ ID NO:30; (d) an anti-CD137scFv consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 244 of SEQ ID NO:32; or (e) an anti-CD137scFv consisting of the amino acid sequence from amino acid numbers 1 to 247
  • an anti-TAA-anti-CD137 bispecific antibody of the invention comprises an anti-CLDN4 antibody or antigen-binding fragment thereof, and in one embodiment, an anti-TAA-anti-CD137 bispecific antibody of the invention contains IgG-type anti-CLDN4 antibodies.
  • Example 1 Obtaining an antibody that selectively binds to an antigen expressed in peritoneally disseminated cancer cells] [1-1. Acquisition of patient-derived peritoneally disseminated cancer cells] Acquisition of peritoneally disseminated cancer cells from patients is based on Fumiko Chiwaki and Hiroki Sasaki's article "Establishment of peritoneal metastatic cancer (gastric, pancreatic, ovarian cancer, etc.) cell lines" (Hiroki Sasaki ed. Cancer Research Practical Guide Used” Yodosha, 2019, p.28-37).
  • Ascitic fluid collected from a patient was centrifuged at room temperature and 430 ⁇ g for 3 minutes, the supernatant was removed, and a hemolysis buffer was added to the precipitate for hemolysis. After centrifugation, the supernatant was removed, and 50 mL of Dulbecco's PBS(-) (Nissui Pharmaceutical Co., Ltd., 05913, hereinafter referred to as "PBS(-)”) was added to wash the cells. Cells were then collected by centrifugation at room temperature and 430 xg for 3 minutes.
  • PBS(-) Dulbecco's PBS(-)
  • RPMI-1640 L-glutamine-containing medium (Fujifilm Wako Pure Chemical Industries, Ltd., 189-02025) (hereinafter, the medium after addition of FBS etc. in Example 1 is referred to as "RPMI-1640 medium”).
  • RPMI-1640 medium the medium after addition of FBS etc. in Example 1
  • 5 ⁇ 10 6 to 1 ⁇ 10 7 cells/10 mL of cells were seeded on a 100 mm collagen-coated dish (hereinafter referred to as “dish”) (IWAKI, 4020-010), and incubated at 37° C. for 5 hours. Cultured in a % CO2 incubator. Cells in ascites include adherent cells and floating cells.
  • Adhesive cells include not only cancer cells but also non-cancer cells (fibroblasts, peritoneal mesothelial cells, etc.). There is Since cells other than cancer cells have the property of exfoliating in a shorter time than cancer cells, these cells were separated and removed from all cells in the ascites. After removing cells other than cancer cells, the cancer cells proliferated to about 80% confluency of the dish area, and then 1/2 of the total cells were subcultured to a new dish repeatedly, and the cells were subcultured 5 times or more. These cells were used as adherent cancer cells. For suspension cells, 5 mL of the culture supernatant and 5 mL of RPMI-1640 medium were seeded from the culture dish onto a new 100 mm dish and subcultured.
  • non-cancer cells fibroblasts, peritoneal mesothelial cells, etc.
  • peritoneally disseminated cancer cells derived from one patient proliferate while containing both adherent cancer cells and planktonic cancer cells, they were defined as mixed cancer cells.
  • the adherent cancer cells, floating cancer cells, and mixed cancer cells isolated by the above method are collectively referred to as "peritoneally disseminated cancer cells.”
  • the obtained 6 cells (NSC-9C, NSC-15CF, NSC-16C, NSC-20C, NSC-22C, NSC-32C, (hereinafter also referred to as "6 types of peritoneally disseminated cancer cells")) were used for subsequent examination. Using.
  • Example 1-1 3 cells of NSC-9C, NSC-15CF, and NSC-16C or 3 cells of NSC-20C, NSC-22C, and NSC-32C were mixed and TiterMax (registered trademark) Gold ADJUVANT (Merck, T2684) or suspended in PBS (-) to prepare a peritoneally disseminated cancer cell suspension.
  • This suspension was administered to velocimmune mice several times for immunization.
  • lymphocytes were collected from the lymph nodes of the immunized mice and fused with mouse myeloma cells SP2/0 (ATCC, CRL-1581) to prepare hybridomas.
  • a single hybridoma colony was isolated by an automatic picking device to obtain a monocloned hybridoma cell (hereinafter referred to as "clone").
  • the isolated clones were cultured in an 8% CO 2 incubator at 37° C. About 14 days later, the supernatant was collected in a 96-well plate and used for the following experiments.
  • BV421 Goat Anti-Mouse Ig (Becton, Dickinson and Company, 563846) was used for flow cytometry.
  • EpCAM which is a cancer antigen
  • Human EpCAM-Myc-DDK-expressing CHO-K1 cells were obtained by transfecting EPCAM (Myc-DDK-tagged)-Human epithelial cell adhesion molecule (EPCAM) (ORIGENE, RC201989) into CHO-K1 cells (ATCC, CCL-61). It was prepared by injection.
  • the binding between the cells and antibodies contained in the clone supernatant was measured by flow cytometry.
  • BV421 Goat Anti-Mouse Ig was used for flow cytometry.
  • Clones that bound to EpCAM-expressing cells were excluded in order to select clones that provided supernatants showing no binding activity to the cells.
  • CD326 (EpCAM) Monoclonal Antibody (1B7), (eBioscience, 14-9326) was used as a positive control.
  • clones that bind to cultured human peritoneal mesothelial cells were excluded.
  • Human Mesothelial Cells Zenbio, MES-F, Lot.
  • MESM050311A (hereinafter also referred to as “cultured human peritoneal mesothelial cells”) were used as cultured human peritoneal mesothelial cells, and Mesothelial Cell Growth Medium (Zenbio, MSO-1) was used.
  • a flow cytometry method was used to measure the binding of clones to cultured human peritoneal mesothelial cells cultured in .
  • BV421 Goat Anti-Mouse Ig was used for the flow cytometry method. Only clones that did not bind to cultured human peritoneal mesothelial cells were selected.
  • 3D11 clone was obtained as a clone providing an antibody that binds to 5 or more out of 6 types of peritoneally disseminated cancer cells and does not bind to human EpCAM and cultured peritoneal mesothelial cells.
  • Example 2 Sequencing of 3D11 and generation of human antibodies
  • Genes encoding the heavy and light chains of 3D11 were cloned according to a conventional method, and the nucleotide and amino acid sequences of 3D11 were determined.
  • the amino acid sequence of the heavy chain variable region of 3D11 is shown in SEQ ID NO:2, and the amino acid sequence of the light chain variable region is shown in SEQ ID NO:4.
  • Antibodies generated by velocimucin mice are antibodies in which the endogenous immunoglobulin heavy and light chain variable regions are replaced with the corresponding human variable regions. That is, the antibody obtained using the velosimulation technology is an antibody (also referred to as a "chimeric antibody") having the variable region of a human antibody and the constant region of a mouse antibody.
  • Antibodies antibody-drug conjugate (ADC) antibodies, Chimeric Antigen Receptor T-cell Therapy (CAR-T), and various other types of agents are known as therapeutic agents for TAAs selectively expressed in cancer cells.
  • ADC antibody-drug conjugate
  • CAR-T Chimeric Antigen Receptor T-cell Therapy
  • a bispecific T-cell-recruiting antibody is known as an epoch-making method capable of obtaining cancer cell-selective cytotoxic activity at a low antibody concentration. Therefore, preparation of a bispecific T-cell recruiting antibody using 3D11 was investigated.
  • Human anti-CLDN4 -anti-CD3scFv bispecific antibody was produced by the following method.
  • the human anti-CLDN4 antibody portion was designed by linking the constant region of human heavy chain IgG1 to the heavy chain variable region of 3D11, and linking the constant region of human light chain ⁇ chain to the light chain variable region, respectively.
  • LALA mutations in which the amino acids at amino acid numbers 238 and 239 (EU index: 234 and 235) of the heavy chain are replaced with alanine (A) from leucine (L), respectively, amino acid numbers 370, 372 and 411 (EU Index: 366, 368 and 407) Knobs into holes mutations replacing amino acids threonine (T) to serine (S), L to A, tyrosine (Y) to valine (V), respectively; In addition, a mutation was introduced to replace the amino acid at amino acid number 301 (EU index: 297) from asparagine (N) to A.
  • the generated humanized anti-CLDN4 antibody is designated 3D11.1.
  • a polynucleotide encoding the amino acid sequence of 3D11.1 was synthesized according to a conventional method and inserted into a pcDNA3.4 TOPO vector (Thermo Fisher Scientific).
  • the anti-CD3 scFv portion was prepared based on the sequences of the heavy and light chain variable regions of the mouse anti-CD3 antibody described in Japanese Patent No. 5686953. Humanization of anti-CD3scFv was performed according to the method described in the literature (Front Biosci., 2008, Vol. 13, p.1619-1633). At this time, back mutation was introduced. Three-dimensional structure information (PDB Code: 5FCS) was obtained from MOLSIS Inc. Analysis was performed using the integrated computational chemistry system MOE provided by the company to determine the backmutation-introducing positions within the framework region. The amino acid sequence of humanized anti-CD3 scFv is shown in SEQ ID NO:41. A polynucleotide encoding the amino acid sequence of SEQ ID NO: 41 was synthesized according to a conventional method and inserted into a pcDNA3.1(+) vector (Thermo Fisher Scientific, V79020).
  • Anti-CLDN4 (3D11) - Preparation of anti-CD3scFv bispecific antibody Using a vector encoding 3D11.1 and anti-CD3scFv, according to the method described in Example 7 of PCT / JP2021 / 41839, anti- A bispecific antibody composed of the Fab region of the CLDN4 antibody and the scFv and Fc regions of the anti-CD3 antibody was generated. The generated bispecific antibody is called anti-CLDN4 (3D11)-anti-CD3 scFv bispecific antibody.
  • Anti-CLDN4 (3D11)-anti-CD3 scFv bispecific antibody showed anti-tumor effects in an in vivo mouse model of peritoneal dissemination of gastric cancer. These results suggested that the anti-CLDN4 (3D11)-anti-CD3scFv bispecific antibody is effective in treating cancer. Furthermore, to examine the safety of the anti-CLDN4 (3D11)-anti-CD3scFv bispecific antibody, a single dose of the anti-CLDN4 (3D11)-anti-CD3scFv bispecific antibody was administered intravenously to cynomolgus monkeys.
  • Example 3 Preparation of anti-CLDN4 (3D11)-anti-CD137scFv bispecific antibody
  • 3D11 a bispecific antibody with anti-CD137scFv (hereinafter referred to as "anti-CLDN4 (3D11)-anti-CD137scFv bispecific antibody”) was produced and examined.
  • Proteins secreted into the culture supernatant were purified using MabSelect SuRe or HiTrap MabSelect SuRe (GE Healthcare, 11-0034-94) to obtain human CD137-human Fc fusion protein and monkey CD137-human Fc fusion protein. did.
  • a single hybridoma colony was isolated by an automatic picking device to obtain a monocloned hybridoma cell (hereinafter referred to as "clone"). Each clone was cultured for several days to obtain a culture supernatant. The binding of antibodies contained in the culture supernatant to CD137 was confirmed by the following method. Binding to CD137 was evaluated by ELISA. For evaluation, plates coated with either human CD137-His tagged protein, human CD137-human Fc fusion protein, monkey CD137-human Fc fusion protein or human Fc protein were used, and the secondary antibody was Goat Anti-Mouse IgG. , Human ads-HRP (Southern Biotech, 1030-05) was used. A plurality of clones that bind to both human CD137 and monkey CD137 were obtained by the above method.
  • Fc ⁇ RIIb CHO-K1 Cells (Promega, JA2251) were seeded in 384-well plates (Greiner Bio-One, 781080) and incubated overnight at 37° C., 5% CO 2 . The culture supernatant was removed, the above-mentioned purified antibody of each clone and 4-1BB Effector Cells (Promega, JA2351) were added and allowed to stand at 37° C., 5% CO 2 for 6 hours. Bio-Glo Reagent (Promega, JA2351) was added, and chemiluminescence was measured by induction of luciferase expression in response to CD137 agonist activity.
  • Anti-CLDN4 (3D11)-anti-CD137 (3-34) scFv bispecific antibody (hereinafter also referred to as "3D11_3-34-j6_S", based on the heavy and light chain variable region sequences of 3D11 and 3-34 ) was designed.
  • the prepared 3D11_3-34-j6_S has a GS linker linked to the heavy chain carboxy terminus (also referred to as “C terminus”) of the human IgG1 ⁇ type anti-CLDN4 (3D11) antibody, and an anti-CD137 antibody at the C terminus of the GS linker.
  • the amino terminus of anti-CD137(3-34) scFv (SEQ ID NO: 26) containing the heavy and light chain variable regions of . Furthermore, amino acid mutations L234A, L235A and P331S were introduced into the human IgG1 constant region of 3D11.
  • a polynucleotide encoding the designed antibody was prepared and inserted into the pcDNA3.4 TOPO vector according to a conventional method. The expression vector was transfected into ExpiCHO-S cells, and 3D11_3-34-j6_S was purified from the culture supernatant. The produced 3D11_3-34-j6_S was confirmed to have anti-CD137 binding activity and CD137 agonistic action in vitro, suggesting that it can be expected to be effective as a therapeutic drug for cancer.
  • Example 4 Preparation of anti-CLDN4 (hKM3900)-anti-CD137scFv bispecific antibody]
  • 4-1 Production of humanized anti-CLDN4 (hKM3900) antibody
  • the anti-CLDN4 antibody KM3900 selectively binds to CLDN4 compared to other claudin family molecules such as CLDN6 (Patent Document 1). Therefore, based on the report, a humanized antibody against KM3900 was produced.
  • a humanized antibody was designed from the sequences of the constant region of human Ig ⁇ 1 and the constant region of human Ig ⁇ .
  • L234A, L235A and P331G amino acid mutations or L234A, L235A and P331S amino acid mutations were introduced into the human Ig ⁇ 1 constant region.
  • a humanized anti-CLDN4 (hKM3900) antibody was prepared according to a standard method and used for subsequent studies.
  • An antibody with amino acid mutations L234A, L235A and P331G is referred to as "hKM3900” and an antibody with amino acid mutations L234A, L235A and P331S is referred to as "hKM3900_S”.
  • the amino acid sequence of the heavy chain variable region of hKM3900 is set forth in SEQ ID NO:6, and the amino acid sequence of the light chain variable region is set forth in SEQ ID NO:8.
  • Anti-CD137 scFv was designed from the anti-CD137 antibodies (3-34, A2-32, A2-48, A2-73) obtained in Example 3, and a bispecific antibody of hKM3900 and anti-CD137 scFv was produced. (Table 2). The produced antibodies are collectively referred to as "anti-CLDN4 (hKM3900)-anti-CD137scFv".
  • Anti-CLDN4 (hKM3900)-anti-CD137scFv bispecific antibody is prepared by combining the sequence of hKM3900 and the heavy chain variable region of anti-CD137 antibody and Designed based on the sequence of the light chain variable region.
  • Anti-CLDN4 (hKM3900) - anti-CD137 scFv bispecific antibody is an IgG1-type anti-CLDN4 antibody (hKM3900) heavy chain or light chain C-terminus linked to a GS linker, anti-CD137 antibody to the C-terminus of the GS linker The amino terminus of anti-CD137 scFv containing the heavy and light chain variable regions of . Furthermore, amino acid mutations L234A, L235A and P331G or P331S were introduced into the human IgG1 constant region of hKM3900. Information on the designed antibodies is listed in Table 2.
  • a polynucleotide encoding the designed antibody was prepared and inserted into the pcDNA3.4 TOPO vector according to a conventional method.
  • the generated vectors are collectively referred to as "anti-CLDN4 (hKM3900)-anti-CD137scFv bispecific antibody expression vectors”.
  • the anti-CLDN4 (hKM3900)-anti-CD137scFv bispecific antibody was purified from the resulting culture supernatant by an affinity purification method using MabSelect SuRe.
  • some anti-CLDN4 (hKM3900)-anti-CD137scFv bispecific antibodies are HiLoad 26/600 superdex 200 pg (GE Healthcare, 28-9893-36) or Superdex 200 Increase 10/300 GL (GE Healthcare Additional purification was performed by size exclusion chromatographic purification using the company, 28-9909-44).
  • anti-CLDN4 (3D11) -anti-CD137 (3-34) scFv bispecific antibody and anti-CLDN4 (hKM3900) -anti-CD137 scFv bispecific antibody prepared in Examples 3 and 4 are collectively referred to as "anti It may also be referred to as a CLDN4-anti-CD137 scFv bispecific antibody.
  • Example 5 Evaluation of binding activity and agonist activity of anti-CLDN4 (hKM3900) -anti-CD137scFv bispecific antibody]
  • Anti-CLDN4 (hKM3900)-anti-CD137 scFv bispecific antibody was evaluated for binding activity to CLDN4 and CD137, as well as CD137 agonist activity.
  • hKM3900 and two anti-CLDN4 (hKM3900)-anti-CD137scFv bispecific antibodies were used.
  • the test antibody was serially diluted with Stain Buffer (FBS) (BD Bioscience, 554656) from the highest concentration of 100 ⁇ g / mL to 5.08 ng / mL at a 3-fold ratio, and human CLDN4-expressed CHO-K1 was diluted with each test antibody dilution. dyed.
  • FBS Stain Buffer
  • Allophycocyanin (APC) AffiniPure F(ab')2 Fragment Goat Anti-Human IgG, Fc ⁇ fragment specific was used as a secondary antibody. Fluorescence intensity was measured with FACS Canto II (BD Bioscience). The measurement results were analyzed using GraphPad Prism, and the apparent dissociation constants (KD) of human CLDN4 and anti-CLDN4 (hKM3900)-anti-CD137scFv bispecific antibody were calculated. Table 3 shows the apparent KD values.
  • Two anti-CLDN4 (hKM3900)-anti-CD137 scFv bispecific antibodies showed similar binding activity to human CLDN4 as the humanized anti-CLDN4 (hKM3900) antibody.
  • Other anti-CLDN4 (hKM3900)-anti-CD137scFv bispecific antibodies are believed to exhibit comparable CLDN4 binding activity.
  • the binding activity of the anti-CLDN4 (hKM3900)-anti-CD137scFv bispecific antibody to CD137 was detected using an ELISA method.
  • ELISA was performed according to a conventional method. 20 ng/20 ⁇ L/well of human CD137-His tag protein (R&D SYSTEMS, 9220-4B) was immobilized on a 384-well plate (Thermo Fisher Scientific, 464718).
  • test antibodies 11 types of anti-CLDN4 (hKM3900)-anti-CD137scFv bispecific antibodies and ctrl IgG_L-3-34-j6 antibody described in Table 2 were used.
  • the ctrl IgG_L-3-34-j6 antibody is an anti-CD137 scFv (3-34-j6) antibody linked to the light chain carboxy terminus of an isotype control antibody.
  • the test antibody was serially diluted with TBS-T (Nippon Gene, 310-07375) containing 5% Blocking One (Nacalai Tesque, 03953-95) and added at 20 ⁇ L/well. The final antibody concentrations are shown in Figures 1-1 to 1-4.
  • human CD137-His tag or monkey CD137-His tag-3 ⁇ FLAG tag fusion protein prepared with 3-1(2) was added to HBS-EP+ at a maximum concentration of 200 nM to 0.0977 nM at a ratio of 2. Serial dilutions were used.
  • Anti-CLDN4 (hKM3900)-anti-CD137 scFv bispecific was generated by adding the analyte to the ligand-bound channel at 50 ⁇ L/min for 2 min, followed by the addition of HBS-EP+ at 50 ⁇ L/min for 10 min. Antibody binding and dissociation to CD137 was measured.
  • the binding rate constant (ka), dissociation rate constant (kd), and dissociation constant (KD) of human CD137 and anti-CLDN4 (hKM3900)-anti-CD137scFv bispecific antibody were Calculated using data analysis software (BIA Evaluation). Table 4 shows the values of ka, kd and KD. As a result, it was revealed that the anti-CLDN4 (hKM3900)-anti-CD137scFv bispecific antibody exhibits equivalent binding activity to both human CD137 and monkey CD137 antibodies.
  • NCI-H322 was added to a 384-well plate (Greiner Bio-One, 781080) at 1 ⁇ 10 4 cells/well and cultured overnight at 37° C. and 5% CO 2 . The next day, medium was removed. A test antibody diluted with RPMI-1640 medium containing 1% FBS was added at 12.5 ⁇ L/well. Final antibody concentrations are shown in Figures 2-1 to 2-3. 3D11_3-34-j6_S, an anti-CLDN4 (hKM3900)-anti-CD137scFv bispecific antibody described in Table 2, was used as the test antibody.
  • hKM3900, ctrl IgG_L-3-34-j6 antibody and Urelumab (BMS, SEQ ID NO: 3 and SEQ ID NO: 6 described in International Publication No. 2005/035584) were used.
  • BMS ctrl IgG_L-3-34-j6 antibody and Urelumab
  • 12.5 ⁇ L was added to each well, 37° C., 5% CO 2 for 6 hours.
  • 25 ⁇ L/well of Bio-Glo Reagent was added to the plate, and chemiluminescence was measured using EnVision 2103 (Perkin Elmer). The results are shown in Figures 2-1 to 2-3.
  • the anti-CLDN4-anti-CD137 scFv bispecific antibody exhibited significant CD137 agonist activity against 4-1BB Effector Cells in the presence of CLDN4-expressing cancer cells.
  • experiments similar to those described above were performed in the absence of NCI-H322.
  • no CD137 agonistic activity was exhibited in the absence of CLDN4-expressing cancer cells (FIGS. 2-4 to 2-6).
  • urelumab exhibited CD137 agonist activity in the presence of CLDN4-expressing cancer cells, but the activity was weaker than that of the anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody. Urelumab also exhibited CD137 agonist activity in the absence of CLDN4-expressing cancer cells. Based on these results, the anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody is less toxic than urelumab, and can be expected to exhibit a specific and potent CD137 agonistic effect on tumor tissues in which CLDN4 is highly expressed.
  • Example 6 In vitro efficacy evaluation of anti-CLDN4-anti-CD137scFv bispecific antibody.
  • the anti-CLDN4-anti-CD137 scFv bispecific antibody was evaluated for its interferon- ⁇ production promoting function and cancer cytotoxic activity.
  • PanT Cell Isolation Kit human (Miltenyi Biotec, 130-096-535), human peripheral blood mononuclear cells (LONZA, CC-2702) were isolated from PanT cells (CD4T hereinafter referred to as "PanT cells"), which contains both CD8 T cells and CD8 T cells, were isolated. The isolated PanT cells were centrifuged and suspended in culture medium after removing the supernatant.
  • PanT cells suspended in the culture medium were seeded on the anti-CD3 antibody-immobilized dish. Furthermore, human IL-2 (PeproTech, 200-2) at a final concentration of 100-200 U/mL and an anti-CD28 antibody (BioLegend, 302923) at a final concentration of 1-4 ⁇ g/mL were added and incubated at 37° C., 5% CO 2 . Culture was performed in an incubator. Three days later, the cells were collected, suspended in a culture medium, and seeded in a dish. Furthermore, human IL-2 was added at a final concentration of 100-200 U/mL, and cultured at 37° C. in a 5% CO 2 incubator.
  • human IL-2 was added at a final concentration of 100-200 U/mL, and cultured at 37° C. in a 5% CO 2 incubator.
  • a lentiviral solution containing Luc/GFP was prepared using L293T cells (Thermo Fisher Scientific, K4975-00) according to a standard method.
  • pCDH-CMV-GL3-EF1a-GFP-T2A-puro modified vector for L293T cells (donated by Associate Professor Ryo Takahashi, Laboratory of Cellular and Molecular Biology, graduate School of Biomedical Sciences, Hiroshima University (PLoS One, 2015, Vol.10, e0123407)) ⁇ Opti-MEM Reduced Serum Medium,GlutaMAX Supplement(Thermo Fisher Scientific ⁇ 51985-034) ⁇ MISSION( ⁇ )Lentiviral Packaging Mix(SIGMA ⁇ SHP001) ⁇ Lipofectamin LTX(Thermo Fisher Scientific ⁇ , 15338100) was used.
  • a 45 ⁇ m Millex®-HV filter (Merck Millipore, SLHV033RS) was used to collect GFP-expressing lentivirus grown in L293T cells.
  • the virus solution was dispensed into cryovials (Nalgene, 5000-0020) in 1 mL portions and stored frozen at -80°C.
  • 60As6-Luc/GFP-expressing lentivirus was used to infect CLDN4-expressing cancer cell lines, 60As6 cells (transferred from Dr. Gokichi Yanagihara, Biomaterials Laboratory), to prepare 60As6-Luc/GFP-expressing cells according to a conventional method.
  • Polybrene SurkCruz, sc-134220 was used to increase the efficiency of infection.
  • RPMI-1640 containing 10% FBS and 2 ⁇ g/mL Puromacin (Thermo Fisher Scientific, A-11138-02) was used as the medium.
  • the established cells are referred to herein as "60As6-Luc/GFP cells". It was confirmed by flow cytometry that 60As6-Luc/GFP endogenously expressed CLDN4 at a high level. The constructed cells were used in subsequent experiments.
  • 60As6-Luc/GFP cells were seeded on the plate at 5 ⁇ 10 4 cells/50 ⁇ L/well and cultured at 37° C. in a 5% CO 2 incubator. On the next day, 2 ⁇ 10 5 cells/30 ⁇ L/well of Expanded PanT cells were seeded on the plate.
  • the test antibody and isotype control were serially diluted in culture medium from the highest concentration of 50,000 ng/mL in 5-fold dilutions and added in 20 ⁇ L aliquots.
  • Urelumab and anti-CLDN4 (3D11)-anti-CD137 scFv bispecific antibody (3D11_3-34-j6_S) were used as test antibodies, and IgG (lysozyme)-scFv (CD137) (prepared in-house) was used as an isotype control.
  • IgG lysozyme-scFv
  • CD137 prepared in-house
  • FIG. 3-1 shows the reaction curve between interferon- ⁇ production and antibody concentration.
  • the anti-CLDN4 (3D11)-anti-CD137 scFv bispecific antibody showed an interferon- ⁇ production promoting effect in a co-culture system of 60As6-Luc/GFP cells, which is a CLDN4-expressing cancer cell line, and Expanded PanT cells.
  • the anti-CLDN4 (3D11)-anti-CD137 scFv bispecific antibody was significantly stronger in promoting interferon- ⁇ production than urelumab.
  • Expanded PanT cells were seeded at 8 ⁇ 10 4 cells/30 ⁇ L/well.
  • 20 ⁇ L each of the test antibody and isotype control (lysozyme antibody) were added.
  • FIG. 3-2 shows the reaction curve of interferon- ⁇ production and antibody concentration.
  • the anti-CLDN4 (hKM3900)-anti-CD137scFv bispecific antibody showed interferon- ⁇ production promoting function in the co-culture system of 60As6-Luc/GFP cells and Expanded PanT cells.
  • the interferon- ⁇ production-promoting function of these bispecific antibodies was significantly stronger than that of urelumab.
  • Urelumab and anti-CLDN4 (3D11)-anti-CD3 scFv bispecific antibody (3D11_3-34-j6_S) were used as test antibodies, and IgG (lysozyme)-scFv (CD137) (prepared in-house) was used as an isotype control.
  • Test antibodies and isotype controls were serially diluted in culture medium from the highest concentration of 50,000 ng/mL in 5-fold dilutions and added in 20 ⁇ L aliquots. 6 days later, using AlphaLISA interferon- ⁇ measurement kit, 6-3. The amount of interferon- ⁇ production in the supernatant was measured by the same method as described above.
  • FIG. 3-3 shows the reaction curve of interferon- ⁇ production and antibody concentration.
  • the anti-CLDN4 (3D11)-anti-CD137 scFv bispecific antibody did not show an interferon- ⁇ production-promoting function in the T cell monoculture system, but urelumab showed an interferon- ⁇ production-promoting effect. This result means that the anti-CLDN4 (3D11)-anti-CD137scFv bispecific antibody does not exhibit T cell activity enhancement in an environment where CLDN4-expressing cancer cell lines do not exist.
  • Urelumab and anti-CLDN4 (hKM3900)-anti-CD137scFv bispecific antibody (hKM3900_3-34-j6, hKM3900_tA2-32LH) were used as test antibodies.
  • a test antibody and an isotype control (lysozyme antibody) were serially diluted from the highest concentration of 5,000 ng/mL in 2-fold dilutions and added in 20 ⁇ L portions.
  • FIG. 3-4 shows the reaction curve between interferon- ⁇ production and antibody concentration.
  • the anti-CLDN4 (hKM3900)-anti-CD137scFv bispecific antibody did not exhibit an interferon- ⁇ production-promoting function in the T cell monoculture system, but urelumab exhibited an interferon- ⁇ production-promoting function. From the results of 6-5 and 6-6, it means that the anti-CLDN4-anti-CD137 scFv bispecific antibody does not exhibit T cell activity enhancing effect in an environment where there is no CLDN4-expressing cancer cell line. It suggests the possibility of reducing systemic immunostimulatory effects reported as side effects.
  • the anti-CLDN4 (3D11)-anti-CD137scFv bispecific antibody was evaluated for cancer cytotoxic activity (cancer cell growth inhibitory action) in a co-culture system of 60As6-Luc/GFP cells and Expanded PanT cells.
  • 60As6-Luc/GFP cells were seeded in a flat-bottomed 96-well plate at 1 ⁇ 10 4 cells/50 ⁇ L/well and cultured in a 37° C., 5% CO 2 incubator.
  • FIG. 4 shows the cancer cell toxic effect (cancer cell growth rate) of the test antibody.
  • the vertical axis in FIG. 4 indicates the relative value of the fluorescence area increased from 0 hours to 168 hours when the wells to which the test antibody was not added was taken as 100%.
  • the anti-CLDN4 (3D11)-anti-CD137 scFv bispecific antibody exhibited cytotoxicity in the co-culture system of 60As6-Luc/GFP cells and Expanded PanT cells. The cytotoxic activity of this bispecific antibody was significantly stronger than urelumab.
  • test antibodies After washing the plate twice with PBS(-), 2 ⁇ 10 4 cells/50 ⁇ L/well of 60As6-Luc/GFP cells were seeded and cultured at 37° C. in a 5% CO 2 incubator. The next day, 4.0 ⁇ 10 4 cells/30 ⁇ L/well of Expanded PanT cells were seeded in a 96-well plate. In addition, 20 ⁇ L each of test antibody and isotype control at concentrations from 5000 ng/mL to 0.844 ng/mL were added. Urelumab and anti-CLDN4 (hKM3900)-anti-CD137scFv bispecific antibodies (hKM3900_3-34-j6, hKM3900_tA2-32LH) were used as test antibodies.
  • Triton-X100 (Sigma-Aldrich, T-9284) was added 30 minutes before measurement to kill the cells. Luciferase activity of 60As6-Luc/GFP cells in each well was measured using ONE-Glo luciferase assay kit (Promega, E6120) according to the manufacturer's recommended protocol, using ARVO X-3 (Perkin Elmer). The cancer killing rate is shown as a relative value when the average value of luciferase chemiluminescence in antibody-free wells is 0% and the average value in Triton-X100-added wells is 100%.
  • FIG. 5 shows the cell killing rate curve of 60As6-Luc/GFP cells.
  • Addition of the anti-CLDN4 (hKM3900)-anti-CD137 scFv bispecific antibody markedly increased the 60As6-Luc/GFP cell-killing rate in the co-culture system of 60As6-Luc/GFP cells and Expanded PanT cells.
  • the anti-CD137 specific antibody urelumab did not increase the cell killing rate against the 60As6-Luc/GFP cell line.
  • Example 7 In vivo evaluation of anti-CLDN4-anti-CD137scFv bispecific antibody]
  • 7-1 In vivo antitumor effect of anti-CLDN4-anti-CD137scFv bispecific antibody]
  • NCI-H322 cells were suspended in PBS( ⁇ ) (WAKO, 045-29795), and 5.0 ⁇ 10 6 cells/100 ⁇ L of the cell suspension was added to 7-week-old female mice (NOG, Invivoscience). Implanted subcutaneously. Six days after seeding, 3.4 ⁇ 10 6 cells/200 ⁇ L of human peripheral blood mononuclear cells (Lonza, CC-2702) were injected via the tail vein.
  • the anti-CLDN4 (hKM3900)-anti-CD137scFv bispecific antibody is suitable as an antibody for cancer therapy from the viewpoint of safety.
  • the anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibody of the present invention is expected to be useful for treating cancer.
  • the polynucleotides, expression vectors, transformed host cells, and methods of producing antibodies of the invention are also useful for producing said anti-CLDN4-anti-CD137 bispecific antibodies.
  • SEQ ID NO: 1 in the sequence listing is the base sequence of the 3D11 heavy chain variable region
  • SEQ ID NO: 2 is the amino acid sequence of the 3D11 heavy chain variable region
  • SEQ ID NO: 3 is the nucleotide sequence of the 3D11 light chain variable region
  • SEQ ID NO: 4 is the amino acid sequence of the 3D11 light chain variable region
  • SEQ ID NO: 5 is the base sequence of the heavy chain variable region of hKM3900
  • SEQ ID NO: 6 is the amino acid sequence of the heavy chain variable region of hKM3900.
  • SEQ ID NO: 7 is the base sequence of the light chain variable region of hKM3900
  • SEQ ID NO: 8 is the amino acid sequence of the light chain variable region of hKM3900
  • SEQ ID NO: 9 is the nucleotide sequence of the heavy chain variable region of 3-34
  • SEQ ID NO: 10 is the amino acid sequence of the heavy chain variable region of 3-34
  • SEQ ID NO: 11 is the nucleotide sequence of the light chain variable region of 3-34
  • SEQ ID NO: 12 is the amino acid sequence of the light chain variable region of 3-34
  • SEQ ID NO: 13 is the base sequence of the heavy chain variable region of A2-32
  • SEQ ID NO: 14 is the amino acid sequence of the heavy chain variable region of A2-32.
  • SEQ ID NO: 15 is the nucleotide sequence of the light chain variable region of A2-32
  • SEQ ID NO: 16 is the amino acid sequence of the light chain variable region of A2-32
  • SEQ ID NO: 17 is the base sequence of the heavy chain variable region of A2-48, and SEQ ID NO: 18 is the amino acid sequence of the heavy chain variable region of A2-48.
  • SEQ ID NO: 19 is the nucleotide sequence of the light chain variable region of A2-48, and SEQ ID NO: 20 is the amino acid sequence of the light chain variable region of A2-48.
  • SEQ ID NO:21 is the base sequence of the heavy chain variable region of A2-73
  • SEQ ID NO:22 is the amino acid sequence of the heavy chain variable region of A2-73.
  • SEQ ID NO: 23 is the nucleotide sequence of the light chain variable region of A2-73
  • SEQ ID NO: 24 is the amino acid sequence of the light chain variable region of A2-73
  • SEQ ID NO: 25 is the nucleotide sequence of 3-34-j6 scFv
  • SEQ ID NO: 26 is the amino acid sequence of 3-34-j6 scFv
  • SEQ ID NO: 27 is the nucleotide sequence of tA2-32 scFv
  • SEQ ID NO: 28 is the amino acid sequence of tA2-32 scFv.
  • SEQ ID NO: 29 is the nucleotide sequence of tA2-32LH scFv
  • SEQ ID NO: 30 is the amino acid sequence of tA2-32LH scFv
  • SEQ ID NO: 31 is the nucleotide sequence of tA2-48 scFv
  • SEQ ID NO: 32 is the amino acid sequence of tA2-48 scFv
  • SEQ ID NO: 33 is the nucleotide sequence of tA2-73 scFv
  • SEQ ID NO: 34 is the amino acid sequence of tA2-73 scFv.
  • SEQ ID NO:35 is the base sequence of the heavy chain of hKM3900_3-34-j6, and SEQ ID NO:36 is the amino acid sequence of the heavy chain of hKM3900_3-34-j6.
  • SEQ ID NO:37 is the base sequence of the heavy chain of hKM3900_tA2-32LH, and SEQ ID NO:38 is the amino acid sequence of the heavy chain of hKM3900_tA2-32LH.
  • SEQ ID NO: 39 is the base sequence of the light chain of hKM3900, and SEQ ID NO: 40 is the amino acid sequence of the light chain of hKM3900.
  • SEQ ID NO: 41 is the amino acid sequence of anti-CD3 scFv-human Fc fusion protein.
  • SEQ ID NO:42 is the amino acid sequence of human CD137.
  • SEQ ID NO:43 is the amino acid sequence of monkey CD137.
  • SEQ ID NO:44 is the amino acid sequence of the His-tagged protein.
  • SEQ ID NO:45 is the amino acid sequence of the 3xFLAG tag.
  • SEQ ID NOs:46-54 are the amino acid sequences of GS linkers.
  • SEQ ID NO:55 is the amino acid sequence of the GKPGS linker.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)

Abstract

本発明の課題は、がんの治療に用いることができる抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体を提供することである。　ＣＬＤＮ４に結合する抗ＣＬＤＮ４抗体とＣＤ１３７に結合する抗ＣＤ１３７抗体を用いて作製した抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、ＣＤ１３７に対するアゴニスト作用を有し、Ｔ細胞のインターフェロンγ産生を促進し、細胞表面にＣＬＤＮ４を発現するがん細胞に対して細胞傷害活性を示した。さらに、抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体はサルに安全に投与しうることが示された。よって、抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体はヒトのがんの治療に用いることができる。

Description

抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体
　本発明は、がんの治療に用いる医薬組成物の有効成分として有用であると期待される抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体に関する。
　Ｃｌａｕｄｉｎ－４（ＣＬＤＮ４）はクローディンファミリーに属する４回膜貫通タンパク質である。上皮細胞や内皮細胞に発現しており、タイトジャンクションを構成する主要分子として重要な役割を果たしている。ＣＬＤＮ４は大腸がん、膀胱がん、卵巣がん等のがん組織でも高発現が認められており、抗ＣＬＤＮ４抗体はがんの治療又は診断に応用できる可能性が示唆されている（特許文献１、非特許文献１）。さらに、動物モデルにおいて、抗ＣＬＤＮ４抗体と抗Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＥＧＦＲ）抗体の併用による抗腫瘍効果が示されている（非特許文献２）。
　Ｃｌｕｓｔｅｒ　ｏｆ　Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　１３７（ＣＤ１３７、別名４－１ＢＢ）は、Ｔｕｍｏｒ　Ｎｅｃｒｏｓｉｓ　Ｆａｃｔｏｒ　Ｒｅｃｅｐｔｏｒ　Ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ（ＴＮＦＲＳＦ）に属する分子であり、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ｎａｔｕｒａｌ　ｋｉｌｌｅｒ（ＮＫ）細胞、樹状細胞、好酸球、マスト細胞等の免疫細胞表面に発現していることが報告されている。特に、Ｔ細胞上のＣＤ１３７は抗原提示細胞上のＣＤ１３７リガンドと結合し、共刺激分子としてＴ細胞の活性化と生存に関与していることが知られている（非特許文献３）。抗ＣＤ１３７アゴニスト抗体は、動物モデルにおいて腫瘍微小環境内の免疫細胞の活性化を介した抗腫瘍効果を示している（非特許文献４）。抗ＣＤ１３７アゴニスト抗体であるウレルマブは臨床試験で治療効果を示したが、肝障害の副作用を引き起こすことも報告されている（非特許文献５）。
　低い抗体濃度でがん細胞選択的な細胞傷害活性を得ることができる画期的な方法として、種々の抗体フォーマットの二重特異性Ｔ細胞リクルート抗体（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ　Ｔ－ｃｅｌｌ－ｒｅｃｒｕｉｔｉｎｇ　ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）が報告されている。二重特異性Ｔ細胞リクルート抗体は、がん細胞表面に発現する腫瘍関連抗原（Ｔｕｍｏｒ－Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　Ａｎｔｉｇｅｎｓ；ＴＡＡ）に対する抗体と、Ｔ細胞に結合する抗体を含む二重特異性抗体であり、Ｔ細胞媒介性免疫療法に対するそれらの抗体の効果が検討されつつある（非特許文献６）。Ｔ細胞に結合する抗体として抗ＣＤ３抗体が多く用いられており、現在も種々のＴＡＡに対する二重特異性Ｔ細胞リクルート抗体の研究開発がなされている。
　さらに、近年では、ＣＤ１３７及びＴＡＡに対する二重特異性Ｔ細胞リクルート抗体の研究も盛んに行われている。ＴＡＡであるＧｌｙｐｉｃａｎ３（ＧＰＣ３）、Ｈｕｍａｎ　Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ　Ｇｒｏｗｔｈ　Ｆａｃｔｏｒ　Ｒｅｃｅｐｔｏｒ　Ｔｙｐｅ２（ＨＥＲ２）、Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ　Ｃｅｌｌ　Ｄｅａｔｈ－Ｌｉｇａｎｄ１（ＰＤ－Ｌ１）、Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ　Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　Ｐｒｏｔｅｉｎ（ＦＡＰ）を認識する抗ＧＰＣ３－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体、抗ＨＥＲ２－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体、抗ＰＤＬ１－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体、抗ＦＡＰ－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体等の研究がなされている（特許文献２及び３、非特許文献７～９）。
　しかしながら、現在までに、抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体についての報告はない。
国際公開番号２００８／１１４７３３号 国際公開番号２０１５／１５６２６８号 国際公開番号２０１６／１７７８０２号
Ｃａｎｃｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ、２００９：１００（９）：ｐ．１６２３－１６３０ Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ、２０１８：９（１００）：ｐ．３７３６７－３７３７８ Ｃａｎｃｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ、２０２０：１１１（５）：ｐ．１４６１－１４６７ Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ　Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ、２０１２：６１（５）：ｐ．１７２１－１７３３ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２０１７：２３（８）：ｐ．１９２９－１９３６ ｍＡｂｓ、２０１７：９（２）：ｐ．１８２－２１２ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２０１９：２５（１９）：ｐ．５８７８－５８８９ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２０２０：２６（１５）：ｐ．４１５４－４１６７ Ｊｏｕｒｎａｌ ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ、２０２０；８（２）：ｅ０００２３８
　本発明の課題は、がんの治療に用いることができる抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体を提供することにある。
　本発明者らは、腹膜播種がん細胞に発現する抗原に選択的に結合する抗体の探索を行い、抗ＣＬＤＮ４抗体である３Ｄ１１を取得した（実施例１及び２）。３Ｄ１１及び抗ＣＤ３抗体を用いた二重特異性Ｔ細胞リクルート抗体はがん患者の治療には使用できないことが判明した（参考例）。そこで、３Ｄ１１及び公知の抗ＣＬＤＮ４抗体であるＫＭ３９００抗体を用い、抗ＣＤ１３７抗体との二重特異性Ｔ細胞リクルート抗体の取得を試みた（実施例３及び４）。取得した抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、ＣＬＤＮ４及びＣＤ１３７に結合し（実施例５）、ｉｎ　ｖｉｔｒｏにおいてＴ細胞のインターフェロンγ産生を促進し、細胞表面にＣＬＤＮ４を発現するがん細胞に対して細胞傷害活性を示した（実施例６）。さらに、取得した抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体はｉｎ　ｖｉｖｏマウスモデルにおいて抗腫瘍作用を発揮し（実施例７－１）、カニクイザルにおいても安全に使用できることが確認された（実施例７－２）。本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体はがんの治療に有用であることが示唆された。
　即ち、本発明は、以下の［１］～［３２］に関する。
［１］　抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域、並びに抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体であって、抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域が以下の（ａ）又は（ｂ）のいずれかである、二重特異性抗体：
（ａ）配列番号２のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸番号５０から６６までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２のアミノ酸番号９９から１１４までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号４のアミノ酸番号２４から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸番号５１から５７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号４のアミノ酸番号９０から９８までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；又は
（ｂ）配列番号６のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸番号５０から６６までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号６のアミノ酸番号９９から１１２までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号８のアミノ酸番号２４から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸番号５１から５７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号８のアミノ酸番号９０から９８までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域。
［２］　抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域が以下の（ａ）又は（ｂ）のいずれかである、［１］に記載の二重特異性抗体：
（ａ）配列番号２のアミノ酸番号１から１２５までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；又は
（ｂ）配列番号６のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号８のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域。
［３］　抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域を含む重鎖及び軽鎖可変領域を含む軽鎖からなるＩｇＧ抗体（抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体）を含む、［１］又は［２］のいずれかに記載の二重特異性抗体。
［４］　抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体のＦｃ領域にＬＡＬＡ変異（Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ（ここで、前記変異位置はヒトＩｇγ１定常領域におけるＥＵインデックスに従うアミノ酸位置である））を含む、［３］に記載の二重特異性抗体。
［５］　抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体のＦｃ領域にＰ３３１Ｇ変異（ここで、前記変異位置はヒトＩｇγ１定常領域におけるＥＵインデックスに従うアミノ酸位置である）を含む、［３］に記載の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体。
［６］　抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体のＦｃ領域にＬＡＬＡ変異及びＰ３３１Ｇ変異を含む、［３］に記載の二重特異性抗体。
［７］　抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域が以下の（ａ）～（ｄ）のいずれかである、［１］～［６］のいずれかに記載の二重特異性抗体：
（ａ）配列番号１０のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１０のアミノ酸番号５０から６６までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１０のアミノ酸番号９９から１０７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号１２のアミノ酸番号２４から３４までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸番号５０から５６までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１２のアミノ酸番号８９から９８までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｂ）配列番号１４のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１４のアミノ酸番号５０から６５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１４のアミノ酸番号９８から１０７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号１６のアミノ酸番号２３から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１６のアミノ酸番号５１から５７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１６のアミノ酸番号９０から１００までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｃ）配列番号１８のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸番号５０から６５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１８のアミノ酸番号９８から１０７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号２０のアミノ酸番号２３から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２０のアミノ酸番号５１から５７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２０のアミノ酸番号９０から１００までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；又は
（ｄ）配列番号２２のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２２のアミノ酸番号５０から６５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２２のアミノ酸番号９８から１１０までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号２４のアミノ酸番号２３から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２４のアミノ酸番号５１から５７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２４のアミノ酸番号９０から１００までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域。
［８］　抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域が以下の（ａ）～（ｉ）のいずれかである、［１］～［７］のいずれかに記載の二重特異性抗体：
（ａ）配列番号１０のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号１２のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
（ｂ）配列番号１４のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号１６のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
（ｃ）配列番号１８のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２０のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
（ｄ）配列番号２２のアミノ酸番号１から１２１までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２４のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域
（ｅ）配列番号２６のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２６のアミノ酸番号１３４から２４２までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
（ｆ）配列番号２８のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２８のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
（ｇ）配列番号３０のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域及び配列番号３０のアミノ酸番号１３２から２４９までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域；
（ｈ）配列番号３２のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号３２のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；又は
（ｉ）配列番号３４のアミノ酸番号１から１２１までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号３４のアミノ酸番号１３７から２４７までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域。
［９］　抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７一本鎖可変領域フラグメント（抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ）を含む、［７］又は［８］のいずれかに記載の二重特異性抗体。
［１０］　抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖが以下の（ａ）～（ｅ）のいずれかである、［９］に記載の二重特異性抗体：
（ａ）配列番号２６のアミノ酸番号１から２４２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ；
（ｂ）配列番号２８のアミノ酸番号１から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ；
（ｃ）配列番号３０のアミノ酸番号１から２４９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ；
（ｄ）配列番号３２のアミノ酸番号１から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ；又は
（ｅ）配列番号３４のアミノ酸番号１から２４７までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ。
［１１］　抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体の重鎖又は軽鎖カルボキシ末端に抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている、［９］又は［１０］のいずれかに記載の二重特異性抗体。
［１２］　以下の（ａ）～（ｊ）のいずれかの抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体：
（ａ）配列番号２のアミノ酸番号１から１２５までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号２６のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２６のアミノ酸番号１３４から２４２までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている二重特異性抗体；
（ｂ）配列番号２のアミノ酸番号１から１２５までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号２８のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２８のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている二重特異性抗体；
（ｃ）配列番号２のアミノ酸番号１から１２５までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号３０のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域及び配列番号３０のアミノ酸番号１３２から２４９までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている二重特異性抗体；
（ｄ）配列番号２のアミノ酸番号１から１２５までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号３２のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号３２のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている二重特異性抗体；
（ｅ）配列番号２のアミノ酸番号１から１２５までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号３４のアミノ酸番号１から１２１までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号３４のアミノ酸番号１３７から２４７までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている二重特異性抗体；
（ｆ）配列番号６のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号８のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号２６のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２６のアミノ酸番号１３４から２４２までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている二重特異性抗体；
（ｇ）配列番号６のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号８のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号２８のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２８のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている二重特異性抗体；
（ｈ）配列番号６のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号８のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号３０のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域及び配列番号３０のアミノ酸番号１３２から２４９までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている二重特異性抗体；
（ｉ）配列番号６のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号８のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号３２のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号３２のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている二重特異性抗体；又は
（ｊ）配列番号６のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号８のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号３４のアミノ酸番号１から１２１までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号３４のアミノ酸番号１３７から２４７までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている二重特異性抗体。
［１３］　リンカーがＧＳリンカーである、［１１］又は［１２］のいずれかに記載の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体。
［１４］　ＧＳリンカーが配列番号５４のアミノ酸配列からなるリンカーである、［１３］に記載の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体。
［１５］　以下の（ａ）又は（ｂ）のいずれかの抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体：
（ａ）配列番号３６のアミノ酸番号１から７０５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含むポリペプチド、並びに配列番号４０のアミノ酸番号１から２１５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖を含む二重特異性抗体；又は
（ｂ）配列番号３８のアミノ酸番号１から７１２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含むポリペプチド並びに配列番号４０のアミノ酸番号１から２１５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖を含む二重特異性抗体。
［１６］　翻訳後修飾された、［１］～［１５］のいずれかに記載の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体。
［１７］　翻訳後修飾が、重鎖可変領域Ｎ末端のピログルタミル化及び／又は重鎖Ｃ末端リジン欠失である、［１６］に記載の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体。
［１８］　下記（ａ）～（ｄ）からなる群より選択される、抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域又は軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド：
（ａ）配列番号２のアミノ酸番号１から１２５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｃ）配列番号６のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；又は
（ｄ）配列番号８のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
［１９］　下記（ａ）～（ｒ）からなる群より選択される、抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域又は軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド：
（ａ）配列番号１０のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ）配列番号１２のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｃ）配列番号１４のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｄ）配列番号１６のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｅ）配列番号１８のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｆ）配列番号２０のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｇ）配列番号２２のアミノ酸番号１から１２１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｈ）配列番号２４のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｉ）配列番号２６のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｊ）配列番号２６のアミノ酸番号１３４から２４２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｋ）配列番号２８のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｌ）配列番号２８のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｍ）配列番号３０のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｎ）配列番号３０のアミノ酸番号１３２から２４９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｏ）配列番号３２のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｐ）配列番号３２のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｑ）配列番号３４のアミノ酸番号１から１２１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；又は
（ｒ）配列番号３４のアミノ酸番号１３７から２４７までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
［２０］　下記（ａ）～（ｅ）からなる群より選択される、抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド：
（ａ）配列番号２６のアミノ酸番号１から２４２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ）配列番号２８のアミノ酸番号１から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｃ）配列番号３０のアミノ酸番号１から２４９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｄ）配列番号３２のアミノ酸番号１から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；又は
（ｅ）配列番号３４のアミノ酸番号１から２４７までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
［２１］　［１５］に記載の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体の生産に用いる、下記（ａ）～（ｅ）からなる群より選択されるポリヌクレオチド：
（ａ）配列番号３６のアミノ酸番号１から７０５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含むポリペプチドをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ）配列番号３８のアミノ酸番号１から７１２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含むポリペプチドをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｃ）配列番号４０のアミノ酸番号１から２１５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｄ）配列番号３６のアミノ酸番号１から７０５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含むポリペプチドをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、並びに配列番号４０のアミノ酸番号１から２１５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；又は
（ｅ）配列番号３８のアミノ酸番号１から７１２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含むポリペプチドをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、並びに配列番号４０のアミノ酸番号１から２１５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
［２２］　［１８］～［２１］のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含む、発現ベクター。
［２３］　［２２］に記載の発現ベクターで形質転換された、宿主細胞。
［２４］　以下の（ａ）～（ｄｄ）からなる群より選択されるポリヌクレオチドを含む宿主細胞：
（ａ）配列番号２のアミノ酸番号１から１２５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｃ）配列番号６のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｄ）配列番号８のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
（ｅ）配列番号１０のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｆ）配列番号１２のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｇ）配列番号１４のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｈ）配列番号１６のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｉ）配列番号１８のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｊ）配列番号２０のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｋ）配列番号２２のアミノ酸番号１から１２１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｌ）配列番号２４のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
（ｍ）配列番号２６のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｎ）配列番号２６のアミノ酸番号１３４から２４２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｏ）配列番号２８のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｐ）配列番号２８のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｑ）配列番号３０のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｒ）配列番号３０のアミノ酸番号１３２から２４９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｓ）配列番号３２のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｔ）配列番号３２のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｕ）配列番号３４のアミノ酸番号１から１２１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｖ）配列番号３４のアミノ酸番号１３７から２４７までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｗ）配列番号２６のアミノ酸番号１から２４２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｘ）配列番号２８のアミノ酸番号１から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｙ）配列番号３０のアミノ酸番号１から２４９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｚ）配列番号３２のアミノ酸番号１から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ａａ）配列番号３４のアミノ酸番号１から２４７までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
（ｂｂ）配列番号３６のアミノ酸番号１から７０５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含むポリペプチドをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｃｃ）配列番号３８のアミノ酸番号１から７１２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含むポリペプチドをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；又は
（ｄｄ）配列番号４０のアミノ酸番号１から２１５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
［２５］　以下の（ａ）又は（ｂ）のいずれかのポリヌクレオチドを含む、宿主細胞：
（ａ）配列番号３６のアミノ酸番号１から７０５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含むポリペプチドをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、並びに配列番号４０のアミノ酸番号１から２１５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；又は
（ｂ）配列番号３８のアミノ酸番号１から７１２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含むポリペプチドをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、並びに配列番号４０のアミノ酸番号１から２１５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
［２６］　抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体の生産方法であって、［２３］～［２５］のいずれかに記載の宿主細胞を培養する工程を含む、前記方法。
［２７］　［１］～［１７］のいずれかに記載の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体及び薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
［２８］　がんの治療に使用するための、［１］～［１７］のいずれかに記載の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体。
［２９］　がんの治療に用いるための、［２７］に記載の医薬組成物。
［３０］　［１］～［１７］のいずれかに記載の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体の治療有効量を対象に投与する工程を含む、がんを治療する方法。
［３１］　がんの治療に用いる医薬組成物の製造における、［１］～［１７］のいずれかに記載の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体の使用。
　本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、がん抗原であるＣＬＤＮ４とＴ細胞等の免疫細胞の表面に発現しているＣＤ１３７の両方に結合し、がん細胞周辺の免疫細胞を活性化することによりがん細胞に対する殺傷作用を増強させるものである。本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体又は前記抗体を含む医薬組成物は、各種がんの治療のために使用することができる。
図１－１はＥＬＩＳＡ法により測定評価した被験抗体のＣＤ１３７への結合活性を示す。図の縦軸は４５０ｎｍの吸光度から５７０ｎｍの吸光度を引いた値を、横軸は被験抗体の濃度を表す。シンボルはそれぞれの被験抗体添加時の吸光度の平均値を、エラーバーは標準偏差を示す。 図１－２はＥＬＩＳＡ法により測定評価した被験抗体のＣＤ１３７への結合活性を示す。図の縦軸は４５０ｎｍの吸光度から５７０ｎｍの吸光度を引いた値を、横軸は被験抗体の濃度を表す。シンボルはそれぞれの被験抗体添加時の吸光度の平均値を示す。 図１－３はＥＬＩＳＡ法により測定評価した被験抗体のＣＤ１３７への結合活性を示す。図の縦軸は４５０ｎｍの吸光度から５７０ｎｍの吸光度を引いた値を、横軸は被験抗体の濃度を表す。シンボルはそれぞれの被験抗体添加時の吸光度の平均値を示す。 図１－４はＥＬＩＳＡ法により測定評価した被験抗体のＣＤ１３７への結合活性を示す。図の縦軸は４５０ｎｍの吸光度から５７０ｎｍの吸光度を引いた値を、横軸は被験抗体の濃度を表す。シンボルはそれぞれの被験抗体添加時の吸光度の平均値を示す。 図２－１はＣＬＤＮ４発現がん細胞（ＮＣＩ－Ｈ３２２細胞）と４－１ＢＢ　Ｅｆｆｅｃｔｏｒ　Ｃｅｌｌｓの共培養試験における被験抗体のＣＤ１３７アゴニスト活性を示す。図の縦軸は相対発光量、横軸は被験抗体の濃度を表す。シンボルはそれぞれの被験抗体添加時の相対発光量の平均値を、エラーバーは標準偏差を示す。 図２－２はＣＬＤＮ４発現がん細胞（ＮＣＩ－Ｈ３２２細胞）と４－１ＢＢ　Ｅｆｆｅｃｔｏｒ　Ｃｅｌｌｓの共培養試験における被験抗体のＣＤ１３７アゴニスト活性を示す。図の縦軸は相対発光量、横軸は被験抗体の濃度を表す。シンボルはそれぞれの被験抗体添加時の相対発光量の平均値を示す。 図２－３はＣＬＤＮ４発現がん細胞（ＮＣＩ－Ｈ３２２細胞）と４－１ＢＢ　Ｅｆｆｅｃｔｏｒ　Ｃｅｌｌｓの共培養試験における被験抗体のＣＤ１３７アゴニスト活性を示す。図の縦軸は相対発光量、横軸は被験抗体の濃度を表す。シンボルはそれぞれの被験抗体添加時の相対発光量の平均値を、エラーバーは標準偏差を示す。 図２－４は４－１ＢＢ　Ｅｆｆｅｃｔｏｒ　Ｃｅｌｌｓの単独培養試験における被験抗体のＣＤ１３７アゴニスト活性を示す。図の縦軸は相対発光量、横軸は被験抗体の濃度を表す。シンボルはそれぞれの被験抗体添加時の相対発光量の平均値を、エラーバーは標準偏差を示す。 図２－５は４－１ＢＢ　Ｅｆｆｅｃｔｏｒ　Ｃｅｌｌｓの単独培養試験における被験抗体のＣＤ１３７アゴニスト活性を示す。図の縦軸は相対発光量、横軸は被験抗体の濃度を表す。シンボルはそれぞれの被験抗体添加時の相対発光量の平均値を示す。 図２－６は４－１ＢＢ　Ｅｆｆｅｃｔｏｒ　Ｃｅｌｌｓの単独培養試験における被験抗体のＣＤ１３７アゴニスト活性を示す。図の縦軸は相対発光量、横軸は被験抗体の濃度を表す。シンボルはそれぞれの被験抗体添加時の相対発光量の平均値を、エラーバーは標準偏差を示す。 図３－１は、６０Ａｓ６－Ｌｕｃ／ＧＦＰ細胞とＥｘｐａｎｄｅｄ　ｐａｎＴ細胞の共培養系における各被験抗体添加時のインターフェロン－γ産生促進機能を示す。縦軸は抗体添加６日後におけるインターフェロン－γ産生量（ｐｇ／ｍＬ）を、横軸は抗体濃度を示す。シンボルは抗体の各濃度におけるインターフェロン－γ産生量の平均値を示す。 図３－２は、６０Ａｓ６－Ｌｕｃ／ＧＦＰ細胞とＥｘｐａｎｄｅｄ　ｐａｎＴ細胞の共培養系における各被験抗体添加時のインターフェロン－γ産生促進機能を示す。図の縦軸は抗体添加４日後におけるインターフェロン－γ産生量（ｐｇ／ｍＬ）を、横軸は抗体濃度を示す。シンボルは抗体の各濃度におけるインターフェロン－γ産生量の平均値を、エラーバーは標準偏差を示す。 図３－３は、Ｅｘｐａｎｄｅｄ　ｐａｎＴ細胞の単培養系における各被験抗体添加時のインターフェロン－γ産生量を示す。図の縦軸は抗体添加６日後におけるインターフェロン－γ産生量（ｐｇ／ｍＬ）を、横軸は抗体濃度を示す。シンボルは抗体の各濃度におけるインターフェロン－γ産生量の平均値を示す。 図３－４は、Ｅｘｐａｎｄｅｄ　ｐａｎＴ細胞の単培養系における各被験抗体添加時のインターフェロン－γ産生量を示す。図の縦軸は抗体添加５日後におけるインターフェロン－γ産生量（ｐｇ／ｍＬ）を、横軸は抗体濃度を示す。シンボルは抗体の各濃度におけるインターフェロン－γ産生量の平均値を、エラーバーは標準偏差を示す。 図４は、６０Ａｓ６－Ｌｕｃ／ＧＦＰ細胞とＥｘｐａｎｄｅｄ　ｐａｎＴ細胞の共培養系における各被験抗体によるがん細胞傷害活性（がん細胞の増殖抑制作用）を示す。図の縦軸は測定開始０時間から１６８時間に増加した蛍光面積において被験抗体非添加ウェルを１００％とした時の細胞増殖率を示す。横軸は抗体濃度を示す。シンボルは各抗体におけるがん細胞増殖率の平均値を示す。 図５は、６０Ａｓ６－Ｌｕｃ／ＧＦＰ細胞とＥｘｐａｎｄｅｄ　ｐａｎＴ細胞の共培養系における各被験抗体添加時のがん細胞傷害活性を示す。図の縦軸は抗体添加６日後における６０Ａｓ６－Ｌｕｃ／ＧＦＰ細胞の化学発光の測定値において、抗体非添加の平均値を殺傷率０％、Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ１００添加の平均値を殺傷率１００％とした時の、がん細胞殺傷率（％）を示す。横軸は抗体濃度を示す。シンボルは抗体の各濃度におけるがん細胞殺傷率の平均値を、エラーバーは標準偏差を示す。 図６はＮＣＩ－Ｈ３２２細胞を皮下担癌したＰＢＭＣ移入マウスにおける腫瘍体積変化を示す。図の横軸は初回投与後日数を、縦軸は腫瘍体積の平均値を、エラーバーは標準誤差を示す。
　以下に、本発明について詳述する。
　＜定義＞
　本明細書の用語は、以下で特に定義されない限り、当該技術分野で当業者に一般に使用されている意味にて使用される。
　抗体（又は免疫グロブリン）は、単一の配列を有する重鎖２本と、単一の配列を有する軽鎖２本からなる左右対称Ｙ字型の構造を有する４本鎖構造を基本構造とする糖タンパク質である。抗体にはＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＥの５つのクラスが存在する。抗体分子の基本構造は各クラス共通であり、分子量５万～７万の重鎖２本と２万～３万の軽鎖２本がジスルフィド結合及び非共有結合によって結合し、分子量１５万～１９万のＹ字型の４本鎖構造からなる抗体分子を形成する。重鎖は、通常約４４０個のアミノ酸を含むポリペプチド鎖からなり、クラスごとに特徴的な構造をもち、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥに対応してそれぞれ、Ｉｇγ、Ｉｇμ、Ｉｇα、Ｉｇδ、Ｉｇεとよばれる。さらにＩｇＧには、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４のサブクラスが存在し、それぞれに対応する重鎖はＩｇγ１、Ｉｇγ２、Ｉｇγ３、Ｉｇγ４とよばれる。軽鎖は、通常約２２０個のアミノ酸を含むポリペプチド鎖からなり、λ型とκ型の２種が知られており、それぞれＩｇλ、Ｉｇκという。前記２種の軽鎖は、いずれの種類の重鎖とも対をなすことができる。
　抗体分子の鎖内ジスルフィド結合は、重鎖には４つ（Ｉｇμ、Ｉｇεには５つ）、軽鎖には２つ存在し、アミノ酸１００～１１０残基ごとに１つのループを成している。それらの立体構造は各ループ間で類似していて、構造単位又はドメインとよばれる。重鎖、軽鎖ともにＮ末端に位置するドメインは可変領域とよばれ、同種動物の同一クラス（又はサブクラス）から産生された抗体であっても多様なアミノ酸配列を有し、抗体と抗原との結合特異性結合に関与することが知られている。可変領域よりも下流のＣ末端側のドメインのアミノ酸配列は各クラス又はサブクラスごとにほぼ一定で、定常領域とよばれている。重鎖は、Ｎ末端からＣ末端に向かって重鎖可変領域（ＶＨ）及び重鎖定常領域（ＣＨ）を有する。ＣＨはさらにＮ末端側からＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメインの３つのドメインに分けられる。軽鎖は、Ｎ末端からＣ末端に向かって軽鎖可変領域（ＶＬ）及び軽鎖定常領域（ＣＬ）を有す。
　ＶＨ及びＶＬに存在する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列は変化が非常に大きく、可変領域の可変性に寄与している。ＣＤＲは５～１０アミノ酸残基からなる領域であって、重鎖と軽鎖のぞれぞれのＮ末端にＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３の順番で存在し、抗原に接触して抗体結合部位を形成する。軽鎖のＣＤＲよりも重鎖のＣＤＲが抗原結合への寄与が大きく、ＣＤＲ１～３の中ではＣＤＲ３の寄与が最も高いことが知られている。一方、可変領域のＣＤＲ以外の部分はフレームワーク領域（ＦＲ）とよばれ、ＦＲ１～４からなり、アミノ酸配列の変化は比較的少ない。
　抗体をタンパク質分解酵素のパパインで処理すると、３つの抗体断片が得られる。Ｎ末端側の２つの断片はＦａｂ（抗原結合断片、Ｆｒａｇｍｅｎｔ，ａｎｔｉｇｅｎ　ｂｉｎｄｉｎｇ）領域と呼ばれている。Ｆａｂ領域とは、重鎖のＶＨ、ＣＨ１ドメイン及びヒンジ領域の一部、並びに軽鎖（ＶＬとＣＬ）からなる領域を指し、当該Ｆａｂ領域が構成するＶＨ及びＶＬ（抗原結合部位）で抗原と結合する。また、Ｃ末端側の断片はＦｃ（結晶化可能断片、Ｆｒａｇｍｅｎｔ，ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｂｌｅ）領域と呼ばれている。
　本明細書において「ＩｇＧ抗体」とは、２つのＦａｂ領域とＦｃ領域からなるＹ字型の構造を有する抗体をいう。１つの実施形態において、ＩｇＧ抗体の２つのＦａｂ領域は、同一の配列からなるＦａｂ領域である。１つの実施形態において、ＩｇＧ抗体の２つのＦａｂ領域は、異なる配列からなるＦａｂ領域である。
　本明細書において「抗原結合フラグメント」及び「フラグメント抗体」は相互互換的に使用することができ、免疫グロブリン分子の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、抗原結合活性を有する、少なくとも１つのポリペプチド鎖を含む分子をいう。代表的な抗原結合フラグメントとしては、一本鎖可変領域フラグメント（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントが挙げられる。本明細書において、「ｓｃＦｖ」とは、リンカーで連結されたＶＨとＶＬから構成される一価の抗原結合フラグメントをいう。Ｆａｂフラグメントは、軽鎖と、重鎖のＶＨ、ＣＨ１ドメインとヒンジ領域の一部とを含むフラグメントから構成される一価の抗原結合フラグメントである。Ｆａｂ’フラグメントは、軽鎖と、重鎖のＶＨ、ＣＨ１ドメインとヒンジ領域の一部とを含むフラグメントから構成される一価の抗原結合フラグメントであり、このヒンジ領域の部分には重鎖間ジスルフィド結合を構成していたシステイン残基が含まれる。Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、Ｆａｂ’フラグメントがジスルフィド結合で繋がっている二価の抗原結合フラグメントである。一価とは、抗原結合部位を１つ含むことを、二価とは、抗原結合部位を２つ含むことを意味する。
　本明細書において、「二重特異性抗体」とは、異なる抗原に特異的に結合する２つの抗体又は抗原結合フラグメントから構成され、各抗原に対する結合活性を有する抗体分子をいう。二重特異性抗体としては、様々な構造の二重特異性抗体が当業者に公知である（非特許文献６）。本明細書で使用される用語「抗体」には、文脈上特に限定されない限り、完全長の抗体（各種免疫グロブリン、特にＩｇＧ抗体）、抗原結合フラグメント、及びあらゆる構造の二重特異性抗体が含まれる。
　本明細書において、ＩｇＧ型の抗ＣＬＤＮ４抗体を「抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体」と称する。
　本明細書において「ヒト抗体」とはヒト免疫グロブリンアミノ酸配列を有する抗体を表す。本明細書において「ヒト化抗体」は、ＣＤＲ以外のアミノ酸残基の一部、大部分、又は全部がヒト免疫グロブリン分子に由来するアミノ酸残基で置換された抗体を表す。ヒト化の方法は特に制限されないが、例えば、米国特許第５２２５５３９号、米国特許第６１８０３７０号等を参照してヒト化抗体を作製することができる。
　本明細書中で使用される抗体のアミノ酸残基番号はＫａｂａｔナンバリング又はＥＵインデックス（Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　Ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ　Ｅｄ，１９９１，ＮＩＨ　Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ　Ｎｏ．９１－３２４２）を指定することで、それらのナンバリングシステムに従って規定することができる。
　本明細書において、「連結」又は「連結された」とは、複数の成分（例えば、Ｆａｂ領域及びＦｃ領域）が、直接又は仲介物（例えば、ペプチドリンカー）を介して結合していることを意味する。本明細書において「ペプチドリンカー」とは、複数の成分を連結するために用いられる、遺伝子工学的手法により導入され得る１以上の任意のアミノ酸配列を意味する。本発明で使用されるペプチドリンカーの長さは特に限定されず、目的に応じて当業者が適宜選択することが可能である。
　本明細書において、「同一性」とは、ＥＭＢＯＳＳ　Ｎｅｅｄｌｅ（Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓ．、２０１５、Ｖｏｌ．４３、ｐＷ５８０－Ｗ５８４）を用いて、デフォルトで用意されているパラメータによって得られたＩｄｅｎｔｉｔｙの値を意味する。前記のパラメータは以下のとおりである。
　Ｇａｐ　Ｏｐｅｎ　Ｐｅｎａｌｔｙ　＝　１０
　Ｇａｐ　Ｅｘｔｅｎｄ　Ｐｅｎａｌｔｙ　＝　０．５
　Ｍａｔｒｉｘ　＝　ＥＢＬＯＳＵＭ６２
　Ｅｎｄ　Ｇａｐ　Ｐｅｎａｌｔｙ　＝　ｆａｌｓｅ
＜本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体＞
　本発明は、ＣＬＤＮ４及びＣＤ１３７に結合する二重特異性抗体（「抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体」とも称する）を提供する。本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域、並びに抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体には、抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体と抗ＣＤ１３７抗体のｓｃＦｖ（「抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ」とも称する）を含む二重特異性抗体が含まれる。１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体と抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含む二重特異性抗体である。
　本明細書において、「抗ＣＬＤＮ４抗体」はヒトＣＬＤＮ４に結合可能な抗体であり、「抗ＣＤ１３７抗体」はヒトＣＤ１３７に結合可能な抗体である。ヒトＣＬＤＮ４又はヒトＣＤ１３７に結合するか否かは、公知の結合活性測定方法を用いて確認することができる。結合活性を測定する方法としては、例えば、Ｅｎｚｙｍｅ－Ｌｉｎｋｅｄ　ＩｍｍｕｎｏＳｏｒｂｅｎｔ　Ａｓｓａｙ（ＥＬＩＳＡ）法、フローサイトメトリー法等の方法が挙げられる。ＥＬＩＳＡ法又はフローサイトメトリー法は、当業者が通常用いる方法にて実施することができ、例えば実施例３又は５に記載される方法を用いることができる。
　本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、ＣＬＤＮ４及びＣＤ１３７に結合する限りにおいてどのような構造であってもよく、例えば、非特許文献６に記載されている構造を有する二重特異性抗体が挙げられる。１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、抗ＣＬＤＮ４抗体のＦａｂ領域と抗ＣＤ１３７抗体のＦａｂ領域が連結された連結体、抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体及びＩｇＧ型の抗ＣＤ１３７抗体（「抗ＣＤ１３７　ＩｇＧ抗体」とも称する）の連結体、抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体及び抗ＣＤ１３７抗体の抗原結合フラグメントの連結体、抗ＣＬＤＮ４抗体の抗原結合フラグメント及び抗ＣＤ１３７　ＩｇＧ抗体の連結体、又は抗ＣＬＤＮ４抗体の抗原結合フラグメント及び抗ＣＤ１３７抗体の抗原結合フラグメントの連結体であってよい。
　１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、完全長の抗ＣＬＤＮ４抗体及び完全長の抗ＣＤ１３７抗体を含む。１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体及び抗ＣＤ１３７　ＩｇＧ抗体を含む。２つの抗体はリンカーを介して連結されていてもよい。１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、完全長の抗ＣＬＤＮ４抗体及び抗ＣＤ１３７抗体の抗原結合フラグメントを含む。２つの抗体の連結部位は特に限定されず、直接又はリンカーを介して連結されている。１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体及び抗ＣＤ１３７抗体のｓｃＦｖ（本明細書において「抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ」と称する）を含む。１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端が連結されている。１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖カルボキシ末端に抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端が連結されている。１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖のアミノ末端に抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのカルボキシ末端が連結されている。１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖のアミノ末端に抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのカルボキシ末端が連結されている。１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、抗ＣＬＤＮ４抗体の抗原結合フラグメント及び抗ＣＤ１３７の抗原結合フラグメントを含む。１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、抗ＣＬＤＮ４抗体のｓｃＦｖ及び抗ＣＤ１３７のｓｃＦｖを含む。１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含む。
　本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体において、抗ＣＬＤＮ４抗体及び抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域は、ヒト抗体由来、ヒト化抗体由来、又はそれらの組み合わせであってよい。１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、又はその組み合わせからなる抗体である。
　本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域、並びに抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体であって、抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域が以下の（ａ）又は（ｂ）のいずれかである二重特異性抗体である：
（ａ）配列番号２のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸番号５０から６６までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２のアミノ酸番号９９から１１４までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号４のアミノ酸番号２４から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸番号５１から５７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号４のアミノ酸番号９０から９８までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；又は
（ｂ）配列番号６のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸番号５０から６６までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号６のアミノ酸番号９９から１１２までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号８のアミノ酸番号２４から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸番号５１から５７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号８のアミノ酸番号９０から９８までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域。
　１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、以下の（ａ）又は（ｂ）に記載の抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む：
（ａ）配列番号２のアミノ酸番号１から１２５までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；又は
（ｂ）配列番号６のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号８のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域。
　本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、抗ＣＬＤＮ４抗体として、ＩｇＧ抗体等の完全長の抗体を含んでもよく、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント又はｓｃＦｖ等の抗原結合フラグメントを含んでもよい。
　本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体に含まれる抗ＣＬＤＮ４抗体に含まれる重鎖定常領域としては、Ｉｇγ、Ｉｇμ、Ｉｇα、Ｉｇδ又はＩｇεのいずれの定常領域も選択可能である。Ｉｇγとしては、例えば、Ｉｇγ１、Ｉｇγ２、Ｉｇγ３又はＩｇγ４から選択することが可能である。本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体に含まれる抗ＣＬＤＮ４抗体に含まれる軽鎖定常領域としては、Ｉｇλ又はＩｇκのいずれの定常領域も選択可能である。本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体に含まれる抗ＣＬＤＮ４抗体がＩｇＧ抗体である場合、１つの実施形態において、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び軽鎖は、それぞれ、ヒトＩｇγ１及びＩｇκである。１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は完全長の抗ＣＬＤＮ４抗体を含む。１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体に含まれる抗ＣＬＤＮ４抗体は、抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含むＩｇＧ抗体（抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体）である。
　本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体がＦｃ領域を含む場合、該二重特異性抗体におけるＦｃ領域は、抗体依存性細胞傷害活性（ＡＤＣＣ）や補体依存性傷害活性（ＣＤＣ）を低下させる変異を含んでもよい。Ｌ２３４Ａとは、ヒトＩｇγ１定常領域のアミノ酸２３４位のロイシンのアラニンへの置換である。Ｌ２３５Ａとは、ヒトＩｇγ１定常領域のアミノ酸２３５位のロイシンのアラニンへの置換である。ヒトＩｇγ１定常領域Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａのアミノ酸変異を「ＬＡＬＡ変異」という。ここで、前記２３４位及び２３５位はヒトＩｇγ１定常領域におけるＥＵインデックスに従うアミノ酸位置である。当該変異は、抗体のＡＤＣＣやＣＤＣを低下させることが知られている（Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９２、Ｖｏｌ．２９、ｐ．６３３－６３９；Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２０００、Ｖｏｌ．１６４、ｐ．４１７８－４１８４）。Ｐ３３１Ｇ又はＰ３３１Ｓとは、ヒトＩｇγ１定常領域のアミノ酸３３１位のプロリンのグリシン又はセリンへの置換である。ここで、前記３３１位はヒトＩｇγ１定常領域におけるＥＵインデックスに従うアミノ酸位置である。当該変異は、抗体のＣＤＣを低下させることが知られている（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２０００、Ｖｏｌ．１６４（８）、ｐ．４１７８－４１８４）。
　１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体に含まれる抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体は、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａのアミノ酸変異（ＬＡＬＡ変異）を含むＦｃ領域を含む。１つの実施形態において、抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体はＰ３３１Ｇ又はＰ３３１Ｓ変異のいずれかを含むＦｃ領域を含む。１つの実施形態において、抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体は、ＬＡＬＡ変異及びＰ３３１Ｇ又はＰ３３１Ｓ変異のいずれかの変異を含むＦｃ領域を含む。
　本発明者らは、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体の創出の過程において、新規な抗ＣＤ１３７抗体又はその結合フラグメント（ｓｃＦｖ）を創出した。本発明者らは、ＣＤ１３７にのみ結合する場合にはＣＤ１３７シグナルを伝達せず、ＣＤ１３７とＣＬＤＮ４に同時に結合した場合にのみＣＤ１３７シグナルを伝達する抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体を同定した。これらの抗体は、ＣＬＤＮ４に結合していない場合にはアゴニスト活性を示さない。一方で、抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体によるＣＬＤＮ４及びＣＤ１３７へ結合により、ＣＤ１３７シグナル伝達及びＴ細胞の活性化をもたらす。この作用は、ウレルマブの臨床試験において見られた肝毒性等を軽減しうることが期待されるため、二重特異性抗体に用いる抗ＣＤ１３７抗体として好ましいプロファイルであることが期待される。
　１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、以下の（ａ）～（ｄ）のいずれかに記載の抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む：
（ａ）配列番号１０のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１０のアミノ酸番号５０から６６までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１０のアミノ酸番号９９から１０７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号１２のアミノ酸番号２４から３４までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸番号５０から５６までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１２のアミノ酸番号８９から９８までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｂ）配列番号１４のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１４のアミノ酸番号５０から６５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１４のアミノ酸番号９８から１０７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号１６のアミノ酸番号２３から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１６のアミノ酸番号５１から５７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１６のアミノ酸番号９０から１００までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｃ）配列番号１８のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸番号５０から６５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１８のアミノ酸番号９８から１０７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号２０のアミノ酸番号２３から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２０のアミノ酸番号５１から５７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２０のアミノ酸番号９０から１００までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；又は
（ｄ）配列番号２２のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２２のアミノ酸番号５０から６５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２２のアミノ酸番号９８から１１０までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号２４のアミノ酸番号２３から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２４のアミノ酸番号５１から５７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２４のアミノ酸番号９０から１００までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域。
　１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、以下の(ａ）～（ｉ）のいずれかに記載の抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む：
（ａ）配列番号１０のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号１２のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
（ｂ）配列番号１４のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号１６のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
（ｃ）配列番号１８のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２０のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
（ｄ）配列番号２２のアミノ酸番号１から１２１までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２４のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域
（ｅ）配列番号２６のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２６のアミノ酸番号１３４から２４２までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
（ｆ）配列番号２８のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２８のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
（ｇ）配列番号３０のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域及び配列番号３０のアミノ酸番号１３２から２４９までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域；
（ｈ）配列番号３２のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号３２のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；又は
（ｉ）配列番号３４のアミノ酸番号１から１２１までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号３４のアミノ酸番号１３７から２４７までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域。
　本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、抗ＣＤ１３７抗体として、ＩｇＧ抗体等の完全長の抗体を含んでもよく、又はＦａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、ｓｃＦｖ等の抗原結合フラグメントを含んでもよい。１つの実施形態において、抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体に含まれる抗ＣＤ１３７抗体は、抗ＣＤ１３７抗体の抗原結合フラグメントである。１つの実施形態において、抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体に含まれる抗ＣＤ１３７抗体の抗原結合フラグメントは、抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖである。
　１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、以下の（ａ）～（ｍ）に記載の抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含む：
（ａ）配列番号１０のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１０のアミノ酸番号５０から６６までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１０のアミノ酸番号９９から１０７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号１２のアミノ酸番号２４から３４までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸番号５０から５６までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１２のアミノ酸番号８９から９８までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｂ）配列番号１４のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１４のアミノ酸番号５０から６５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１４のアミノ酸番号９８から１０７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号１６のアミノ酸番号２３から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１６のアミノ酸番号５１から５７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１６のアミノ酸番号９０から１００までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｃ）配列番号１８のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸番号５０から６５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１８のアミノ酸番号９８から１０７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号２０のアミノ酸番号２３から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２０のアミノ酸番号５１から５７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２０のアミノ酸番号９０から１００までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｄ）配列番号２２のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２２のアミノ酸番号５０から６５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２２のアミノ酸番号９８から１１０までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号２４のアミノ酸番号２３から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２４のアミノ酸番号５１から５７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２４のアミノ酸番号９０から１００までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｅ）配列番号１０のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号１２のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
（ｆ）配列番号１４のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号１６のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
（ｇ）配列番号１８のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２０のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
（ｈ）配列番号２２のアミノ酸番号１から１２１までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２４のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域
（ｉ）配列番号２６のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２６のアミノ酸番号１３４から２４２までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
（ｊ）配列番号２８のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２８のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
（ｋ）配列番号３０のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域及び配列番号３０のアミノ酸番号１３２から２４９までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域；
（ｌ）配列番号３２のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号３２のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；又は
（ｍ）配列番号３４のアミノ酸番号１から１２１までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号３４のアミノ酸番号１３７から２４７までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域。
　抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖにおいて、抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域と軽鎖可変領域を連結するリンカーの種類及び長さは特に限定されず、当業者が適宜選択することが可能である。リンカーとしては、ペプチドリンカーを用いてもよい。好ましい長さは５アミノ酸以上（上限は特に限定されないが、通常、３０アミノ酸以下、好ましくは２０アミノ酸以下）であり、特に好ましくは１５アミノ酸である。リンカーとして、例えば、グリシン－セリンリンカー（ＧＳリンカー）や、グリシン－リジン－プロリン－グリシン－セリンリンカー（ＧＫＰＧＳリンカー）を使用することができる。このようなリンカーとしては、例えば、以下が挙げられる。
Ｓｅｒ
Ｇｌｙ－Ｓｅｒ
Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ
Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ
Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ　（配列番号４６）
Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ　（配列番号４７）
Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ　（配列番号４８）
Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ　（配列番号４９）
Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ　（配列番号５０）
Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ　（配列番号５１）
Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ　（配列番号５２）
Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ　（配列番号５３）
Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ　（配列番号５４）
（Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ）ｎ
（Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ）ｎ
Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ　（配列番号５５）
（Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ）ｎ
　上記のｎは１以上の整数を示す。また、ある態様では、上記のｎは１～１０、２～８、又は２～６である。リンカーの長さや配列は目的に応じて当業者が適宜選択することができる。１つの実施形態において、抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖにおいて使用されるリンカーは、ＧＳリンカーである。１つの実施形態において、抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖにおいて使用されるリンカーは、（Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ）ｎのＧＳリンカーであり、ｎは３又は４のいずれかである。
　１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、以下の（ａ）～（ｅ）のいずれかの抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含む：
（ａ）配列番号２６のアミノ酸番号１から２４２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ；
（ｂ）配列番号２８のアミノ酸番号１から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ；
（ｃ）配列番号３０のアミノ酸番号１から２４９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ；
（ｄ）配列番号３２のアミノ酸番号１から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ；又は
（ｅ）配列番号３４のアミノ酸番号１から２４７までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ。
　本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体において、抗ＣＬＤＮ４抗体又はその抗原結合フラグメントと抗ＣＤ１３７抗体又はその抗原結合フラグメントはリンカーで連結されていてもよい。抗ＣＬＤＮ４抗体又はその抗原結合フラグメントと抗ＣＤ１３７抗体又はその抗原結合フラグメントを連結するリンカーの種類及び長さは特に限定されず、当業者が適宜選択することが可能である。リンカーとしては、ペプチドリンカーを用いてもよい。好ましい長さは５アミノ酸以上（上限は特に限定されないが、通常、３０アミノ酸以下、好ましくは２０アミノ酸以下）であり、特に好ましくは１０アミノ酸である。ペプチドリンカーとして、例えば、グリシン－セリンリンカー（ＧＳリンカー）や、グリシン－リジン－プロリン－グリシン－セリンリンカー（ＧＫＰＧＳリンカー）を使用することができる。このようなリンカーとしては、例えば、以下が挙げられる。
Ｓｅｒ
Ｇｌｙ－Ｓｅｒ
Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ
Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ
Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ　（配列番号４６）
Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ　（配列番号４７）
Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ　（配列番号４８）
Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ　（配列番号４９）
Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ　（配列番号５０）
Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ　（配列番号５１）
Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ　（配列番号５２）
Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ　（配列番号５３）
Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ　（配列番号５４）
（Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ）ｎ
（Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ）ｎ
Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ　（配列番号５５）
（Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ）ｎ
　上記のｎは１以上の整数を示す。また、ある態様では、上記のｎは１～１０、２～８、又は２～６である。ペプチドリンカーの長さや配列は目的に応じて当業者が適宜選択することができる。１つの実施形態において、抗ＣＬＤＮ４抗体又はその抗原結合フラグメントと抗ＣＤ１３７抗体又はその抗原結合フラグメントを連結するリンカーとして使用されるリンカーは、ＧＳリンカー又はＧＫＰＧＳリンカーであり、１つの実施形態において、配列番号５４のアミノ酸配列からなるリンカーである。
　１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体と抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖがリンカーを介して連結されている構造を有する。抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体と抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖの連結部位は特に限定されないが、例えば、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのカルボキシ末端に抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体の重鎖アミノ末端が連結されている、抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのカルボキシ末端に抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体の軽鎖アミノ末端が連結されている、抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体の重鎖カルボキシ末端に抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端が連結されている、抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体の軽鎖カルボキシ末端に抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端が連結されている等の種々の構造をとることができる。１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体の重鎖カルボキシ末端に抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端が連結されている、又は抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体の軽鎖カルボキシ末端に抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端が連結されている。１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体の重鎖カルボキシ末端に抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端が連結されている。
　１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体の重鎖又は軽鎖カルボキシ末端に抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されており、抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖの重鎖可変領域及び軽鎖可変領域が以下の（ａ）～（ｍ）のいずれかである、抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体である：
（ａ）配列番号１０のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１０のアミノ酸番号５０から６６までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１０のアミノ酸番号９９から１０７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号１２のアミノ酸番号２４から３４までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸番号５０から５６までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１２のアミノ酸番号８９から９８までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｂ）配列番号１４のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１４のアミノ酸番号５０から６５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１４のアミノ酸番号９８から１０７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号１６のアミノ酸番号２３から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１６のアミノ酸番号５１から５７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１６のアミノ酸番号９０から１００までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｃ）配列番号１８のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸番号５０から６５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１８のアミノ酸番号９８から１０７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号２０のアミノ酸番号２３から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２０のアミノ酸番号５１から５７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２０のアミノ酸番号９０から１００までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｄ）配列番号２２のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２２のアミノ酸番号５０から６５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２２のアミノ酸番号９８から１１０までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号２４のアミノ酸番号２３から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２４のアミノ酸番号５１から５７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２４のアミノ酸番号９０から１００までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｅ）配列番号１０のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号１２のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
（ｆ）配列番号１４のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号１６のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
（ｇ）配列番号１８のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２０のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
（ｈ）配列番号２２のアミノ酸番号１から１２１までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２４のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域
（ｉ）配列番号２６のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２６のアミノ酸番号１３４から２４２までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
（ｊ）配列番号２８のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２８のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
（ｋ）配列番号３０のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域及び配列番号３０のアミノ酸番号１３２から２４９までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域；
（ｌ）配列番号３２のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号３２のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；又は
（ｍ）配列番号３４のアミノ酸番号１から１２１までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号３４のアミノ酸番号１３７から２４７までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域。
　１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体の重鎖又は軽鎖カルボキシ末端に抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されており、抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖが以下の（ａ）～（ｅ）のいずれかである、抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体である：
（ａ）配列番号２６のアミノ酸番号１から２４２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ；
（ｂ）配列番号２８のアミノ酸番号１から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ；
（ｃ）配列番号３０のアミノ酸番号１から２４９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ；
（ｄ）配列番号３２のアミノ酸番号１から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ；又は
（ｅ）配列番号３４のアミノ酸番号１から２４７までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ。
　１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、以下の（ａ）～（ｈ）のいずれかの抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体である：
（ａ）配列番号２のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸番号５０から６６までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２のアミノ酸番号９９から１１４までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖、配列番号４のアミノ酸番号２４から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸番号５１から５７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号４のアミノ酸番号９０から９８までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号１０のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１０のアミノ酸番号５０から６６までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１０のアミノ酸番号９９から１０７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号１２のアミノ酸番号２４から３４までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸番号５０から５６までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１２のアミノ酸番号８９から９８までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている二重特異性抗体；
（ｂ）配列番号２のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸番号５０から６６までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２のアミノ酸番号９９から１１４までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖、配列番号４のアミノ酸番号２４から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸番号５１から５７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号４のアミノ酸番号９０から９８までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号１４のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１４のアミノ酸番号５０から６５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１４のアミノ酸番号９８から１０７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号１６のアミノ酸番号２３から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１６のアミノ酸番号５１から５７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１６のアミノ酸番号９０から１００までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている二重特異性抗体；
（ｃ）配列番号２のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸番号５０から６６までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２のアミノ酸番号９９から１１４までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖、配列番号４のアミノ酸番号２４から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸番号５１から５７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号４のアミノ酸番号９０から９８までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号１８のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸番号５０から６５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１８のアミノ酸番号９８から１０７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号２０のアミノ酸番号２３から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２０のアミノ酸番号５１から５７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２０のアミノ酸番号９０から１００までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている二重特異性抗体；
（ｄ）配列番号２のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸番号５０から６６までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２のアミノ酸番号９９から１１４までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖、配列番号４のアミノ酸番号２４から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸番号５１から５７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号４のアミノ酸番号９０から９８までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号２２のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２２のアミノ酸番号５０から６５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２２のアミノ酸番号９８から１１０までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号２４のアミノ酸番号２３から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２４のアミノ酸番号５１から５７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２４のアミノ酸番号９０から１００までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている二重特異性抗体；
（ｅ）配列番号６のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸番号５０から６６までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号６のアミノ酸番号９９から１１２までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖、配列番号８のアミノ酸番号２４から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸番号５１から５７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号８のアミノ酸番号９０から９８までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号１０のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１０のアミノ酸番号５０から６６までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１０のアミノ酸番号９９から１０７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号１２のアミノ酸番号２４から３４までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸番号５０から５６までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１２のアミノ酸番号８９から９８までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている二重特異性抗体；
（ｆ）配列番号６のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸番号５０から６６までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号６のアミノ酸番号９９から１１２までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖、配列番号８のアミノ酸番号２４から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸番号５１から５７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号８のアミノ酸番号９０から９８までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号１４のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１４のアミノ酸番号５０から６５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１４のアミノ酸番号９８から１０７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号１６のアミノ酸番号２３から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１６のアミノ酸番号５１から５７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１６のアミノ酸番号９０から１００までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている二重特異性抗体；
（ｇ）配列番号６のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸番号５０から６６までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号６のアミノ酸番号９９から１１２までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖、配列番号８のアミノ酸番号２４から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸番号５１から５７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号８のアミノ酸番号９０から９８までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号１８のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸番号５０から６５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１８のアミノ酸番号９８から１０７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号２０のアミノ酸番号２３から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２０のアミノ酸番号５１から５７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２０のアミノ酸番号９０から１００までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている二重特異性抗体；又は
（ｈ）配列番号６のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸番号５０から６６までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号６のアミノ酸番号９９から１１２までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖、配列番号８のアミノ酸番号２４から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸番号５１から５７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号８のアミノ酸番号９０から９８までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号２２のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２２のアミノ酸番号５０から６５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２２のアミノ酸番号９８から１１０までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号２４のアミノ酸番号２３から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２４のアミノ酸番号５１から５７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２４のアミノ酸番号９０から１００までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている二重特異性抗体。
　１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、以下の（ａ）～（ｊ）のいずれかの抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体である：
（ａ）配列番号２のアミノ酸番号１から１２５までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号２６のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２６のアミノ酸番号１３４から２４２までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている二重特異性抗体；
（ｂ）配列番号２のアミノ酸番号１から１２５までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号２８のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２８のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている二重特異性抗体；
（ｃ）配列番号２のアミノ酸番号１から１２５までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号３０のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域及び配列番号３０のアミノ酸番号１３２から２４９までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている二重特異性抗体；
（ｄ）配列番号２のアミノ酸番号１から１２５までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号３２のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号３２のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている二重特異性抗体；
（ｅ）配列番号２のアミノ酸番号１から１２５までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号３４のアミノ酸番号１から１２１までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号３４のアミノ酸番号１３７から２４７までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている二重特異性抗体；
（ｆ）配列番号６のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号８のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号２６のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２６のアミノ酸番号１３４から２４２までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている二重特異性抗体；
（ｇ）配列番号６のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号８のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号２８のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２８のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている二重特異性抗体；
（ｈ）配列番号６のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号８のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号３０のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域及び配列番号３０のアミノ酸番号１３２から２４９までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている二重特異性抗体；
（ｉ）配列番号６のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号８のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号３２のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号３２のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている二重特異性抗体；
（ｊ）配列番号６のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号８のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号３４のアミノ酸番号１から１２１までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号３４のアミノ酸番号１３７から２４７までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている二重特異性抗体；
（ｋ）配列番号２のアミノ酸番号１から１２５までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号２６のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２６のアミノ酸番号１３４から２４２までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている二重特異性抗体；
（ｌ）配列番号２のアミノ酸番号１から１２５までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号２８のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２８のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている二重特異性抗体；
（ｍ）配列番号２のアミノ酸番号１から１２５までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号３０のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域及び配列番号３０のアミノ酸番号１３２から２４９までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている二重特異性抗体；
（ｎ）配列番号２のアミノ酸番号１から１２５までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号３２のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号３２のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている二重特異性抗体；
（ｏ）配列番号２のアミノ酸番号１から１２５までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号３４のアミノ酸番号１から１２１までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号３４のアミノ酸番号１３７から２４７までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている二重特異性抗体；
（ｐ）配列番号６のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号８のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号２６のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２６のアミノ酸番号１３４から２４２までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている二重特異性抗体；
（ｑ）配列番号６のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号８のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号２８のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２８のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている二重特異性抗体；
（ｒ）配列番号６のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号８のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号３０のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域及び配列番号３０のアミノ酸番号１３２から２４９までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている二重特異性抗体；
（ｓ）配列番号６のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号８のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号３２のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号３２のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている二重特異性抗体；又は
（ｔ）配列番号６のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号８のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号３４のアミノ酸番号１から１２１までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号３４のアミノ酸番号１３７から２４７までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている二重特異性抗体。
　１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、以下の（ａ）又は（ｂ）の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体である：
（ａ）配列番号３６のアミノ酸番号１から７０５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含むポリペプチド、並びに配列番号４０のアミノ酸番号１から２１５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖を含むポリペプチドを含む二重特異性抗体；又は
（ｂ）配列番号３８のアミノ酸番号１から７１２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含むポリペプチド、並びに配列番号４０のアミノ酸番号１から２１５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖を含む二重特異性抗体。
　本明細書において「翻訳後修飾」とは、抗体を細胞内で発現させた場合に抗体が翻訳後に修飾を受けることをいう。翻訳後修飾の例として、重鎖Ｎ末端のグルタミン又はグルタミン酸のピログルタミル化、グリコシル化、酸化、脱アミド化、糖化等の修飾や、重鎖Ｃ末端のリジンのカルボキシペプチダーゼによる切断によるリジン欠失が挙げられる。種々の抗体において、このような翻訳後修飾が生じることが知られている（Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．、２００８、Ｖｏｌ．９７、ｐ．２４２６－２４４７）。
　１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、翻訳後修飾されていてもよい。１つの実施形態において、翻訳後修飾が、重鎖可変領域Ｎ末端のピログルタミル化及び／又は重鎖Ｃ末端リジン欠失である。Ｎ末端のピログルタミル化又はＣ末端リジン欠失による翻訳後修飾が抗体の活性に影響を及ぼすものではないことは当該分野で知られている（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２００６、Ｖｏｌ．３４８、ｐ．２４－３９）。
　本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、ヒトＣＬＤＮ４及びヒトＣＤ１３７に結合する。ヒトＣＬＤＮ４及びヒトＣＤ１３７に結合するか否かは、公知の結合活性測定方法を用いて確認することができる。結合活性を測定する方法としては、例えば、ＥＬＩＳＡ法、フローサイトメトリー法等の方法が挙げられる。ＥＬＩＳＡ法又はフローサイトメトリー法は、当業者が通常用いる方法にて実施することができ、例えば実施例３又は５に記載される方法を用いることができる。
　本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、ヒトＣＬＤＮ４及びヒトＣＤ１３７を抗原として用いて当該分野で公知の抗体作製技術を使用して当業者に容易に作製され得、或いは、本明細書に開示される抗ＣＬＤＮ４抗体及び抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の配列情報等に基づいて、当該分野で公知の方法を使用して、当業者によって容易に作製され得る。
　本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、特に限定されるものではないが、例えば、後述の＜本発明の二重特異性抗体を生産する方法＞に記載の方法に従い製造することができる。
＜本発明の二重特異性抗体のポリヌクレオチド＞
　本発明はまた、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体の生産に使用されうるポリヌクレオチド（「本発明の二重特異性抗体のポリヌクレオチド」とも称する）を提供する。
　１つの実施形態において、本発明の二重特異性抗体のポリヌクレオチドは、下記（ａ）～（ｄ）からなる群より選択される、抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域又は軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドである：
（ａ）配列番号２のアミノ酸番号１から１２５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｃ）配列番号６のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；又は
（ｄ）配列番号８のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
　１つの実施形態において、本発明の二重特異性抗体のポリヌクレオチドは、下記（ａ）又は（ｂ）より選択される、抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドである：
（ａ）配列番号２のアミノ酸番号１から１２５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド及び配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；又は
（ｂ）配列番号６のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド及び配列番号８のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
　１つの実施形態において、本発明の二重特異性抗体のポリヌクレオチドは、下記（ａ）～（ｒ）からなる群より選択される、抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域又は軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドである：
（ａ）配列番号１０のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ）配列番号１２のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｃ）配列番号１４のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｄ）配列番号１６のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｅ）配列番号１８のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｆ）配列番号２０のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｇ）配列番号２２のアミノ酸番号１から１２１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｈ）配列番号２４のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｉ）配列番号２６のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｊ）配列番号２６のアミノ酸番号１３４から２４２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｋ）配列番号２８のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｌ）配列番号２８のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｍ）配列番号３０のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｎ）配列番号３０のアミノ酸番号１３２から２４９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｏ）配列番号３２のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｐ）配列番号３２のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｑ）配列番号３４のアミノ酸番号１から１２１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；又は
（ｒ）配列番号３４のアミノ酸番号１３７から２４７までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
　１つの実施形態において、本発明の二重特異性抗体のポリヌクレオチドは、下記（ａ）～（ｉ）からなる群より選択される、抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドである：
（ａ）配列番号１０のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド及び配列番号１２のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ）配列番号１４のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド及び配列番号１６のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｃ）配列番号１８のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド及び配列番号２０のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｄ）配列番号２２のアミノ酸番号１から１２１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド及び配列番号２４のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｅ）配列番号２６のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド及び配列番号２６のアミノ酸番号１３４から２４２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｆ）配列番号２８のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド及び配列番号２８のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｇ）配列番号３０のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド及び配列番号３０のアミノ酸番号１３２から２４９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｈ）配列番号３２のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド及び配列番号３２のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；又は
（ｉ）配列番号３４のアミノ酸番号１から１２１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド及び配列番号３４のアミノ酸番号１３７から２４７までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
　１つの実施形態において、本発明の二重特異性抗体のポリヌクレオチドは、下記（ａ）～（ｅ）からなる群より選択される、抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドである：
（ａ）配列番号２６のアミノ酸番号１から２４２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ）配列番号２８のアミノ酸番号１から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｃ）配列番号３０のアミノ酸番号１から２４９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｄ）配列番号３２のアミノ酸番号１から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；又は
（ｅ）配列番号３４のアミノ酸番号１から２４７までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
　１つの実施形態において、本発明の二重特異性抗体のポリヌクレオチドは、下記（ａ）～（ｅ）からなる群より選択されるポリヌクレオチドである：
（ａ）配列番号３６のアミノ酸番号１から７０５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含むポリペプチドをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ）配列番号３８のアミノ酸番号１から７１２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含むポリペプチドをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｃ）配列番号４０のアミノ酸番号１から２１５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｄ）配列番号３６のアミノ酸番号１から７０５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含むポリペプチドをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、並びに配列番号４０のアミノ酸番号１から２１５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；又は
（ｅ）配列番号３８のアミノ酸番号１から７１２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含むポリペプチドをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、並びに配列番号４０のアミノ酸番号１から２１５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
　本発明の二重特異性抗体のポリヌクレオチドは、その塩基配列に基づき、当該分野で公知の方法を使用して、当業者によって容易に作製され得る。例えば、本発明の二重特異性抗体のポリヌクレオチドは、当該分野で公知の遺伝子合成方法を利用して合成することが可能である。このような遺伝子合成方法としては、国際公開番号９０／０７８６１号に記載の抗体遺伝子の合成方法等の当業者に公知の種々の方法が使用され得る。
＜本発明の二重特異性抗体の発現ベクター＞
　本発明はまた、本発明の二重特異性抗体のポリヌクレオチドを含む発現ベクター（「本発明の二重特異性抗体の発現ベクター」とも称する）を提供する。これらのポリヌクレオチドは、それぞれが別々のベクターに含まれていてもよく、又は複数のポリヌクレオチドが１つのベクターに含まれていてもよい。
　１つの実施形態において、本発明の二重特異性抗体の発現ベクターは、下記（ａ）～（ａａ）からなる群より選択されるポリヌクレオチドを含む：
（ａ）配列番号２のアミノ酸番号１から１２５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｃ）配列番号６のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｄ）配列番号８のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
（ｅ）配列番号１０のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｆ）配列番号１２のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｇ）配列番号１４のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｈ）配列番号１６のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｉ）配列番号１８のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｊ）配列番号２０のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｋ）配列番号２２のアミノ酸番号１から１２１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｌ）配列番号２４のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
（ｍ）配列番号２６のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｎ）配列番号２６のアミノ酸番号１３４から２４２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｏ）配列番号２８のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｐ）配列番号２８のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｑ）配列番号３０のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｒ）配列番号３０のアミノ酸番号１３２から２４９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｓ）配列番号３２のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｔ）配列番号３２のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｕ）配列番号３４のアミノ酸番号１から１２１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｖ）配列番号３４のアミノ酸番号１３７から２４７までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｗ）配列番号２６のアミノ酸番号１から２４２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｘ）配列番号２８のアミノ酸番号１から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｙ）配列番号３０のアミノ酸番号１から２４９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｚ）配列番号３２のアミノ酸番号１から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；又は
（ａａ）配列番号３４のアミノ酸番号１から２４７までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
　１つの実施形態において、本発明の二重特異性抗体の発現ベクターは、下記（ａ）～（ｋ）からなる群より選択されるポリヌクレオチドを含む：
（ａ）配列番号２のアミノ酸番号１から１２５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド及び配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ）配列番号６のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド及び配列番号８のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｃ）配列番号１０のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド及び配列番号１２のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｄ）配列番号１４のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド及び配列番号１６のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｅ）配列番号１８のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド及び配列番号２０のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｆ）配列番号２２のアミノ酸番号１から１２１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド及び配列番号２４のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｇ）配列番号２６のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド及び配列番号２６のアミノ酸番号１３４から２４２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｈ）配列番号２８のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド及び配列番号２８のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｉ）配列番号３０のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド及び配列番号３０のアミノ酸番号１３２から２４９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｊ）配列番号３２のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド及び配列番号３２のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；又は
（ｋ）配列番号３４のアミノ酸番号１から１２１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド及び配列番号３４のアミノ酸番号１３７から２４７までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
　１つの実施形態において、本発明の二重特異性抗体の発現ベクターは、下記（ａ）～（ｃ）からなる群より選択されるポリヌクレオチドを含む：
（ａ）配列番号３６のアミノ酸番号１から７０５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含むポリペプチドをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ）配列番号３８のアミノ酸番号１から７１２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含むポリペプチドをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；又は
（ｃ）配列番号４０のアミノ酸番号１から２１５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
　１つの実施形態において、本発明の二重特異性抗体の発現ベクターは、下記（ａ）又は（ｂ）より選択されるポリヌクレオチドを含む：
（ａ）配列番号３６のアミノ酸番号１から７０５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含むポリペプチドをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、並びに配列番号４０のアミノ酸番号１から２１５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；又は
（ｂ）配列番号３８のアミノ酸番号１から７１２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含むポリペプチドをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、並びに配列番号４０のアミノ酸番号１から２１５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
　本発明の二重特異性抗体の発現ベクターは、真核細胞（例えば、動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母）及び／又は原核細胞（例えば、大腸菌）等の各種宿主細胞中において本発明のポリヌクレオチドを産生できるものである限り、特に制限されるものではない。このような発現ベクターとしては、例えば、プラスミドベクター、ウイルスベクター等が挙げられる。プラスミドベクターとしては、例えば、ｐｃＤＮＡシリーズ（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）、ｐＡＬＴＥＲ（登録商標）－ＭＡＸ（プロメガ）、ｐＨＥＫ２９３　Ｕｌｔｒａ　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　Ｖｅｃｔｏｒ（タカラバイオ社）、ｐＥＥ６．４又はｐＥＥ１２．４（Ｌｏｎｚａ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ社）等を使用することができる。ウイルスベクターとしては、例えば、レンチウイルス、アデノウイルス、レトロウイルス、アデノ随伴ウイルスを使用することができる。例えば、細胞へ本発明のポリヌクレオチドを導入するためにレンチウイルスを使用する場合、当該レンチウイルスは、ｐＬＶＳＩＮ－ＣＭＶ／ＥＦ１αベクター（タカラバイオ社）、ｐＬｅｎｔｉベクター（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）等を用いることができる。１つの実施形態において、本発明の二重特異性抗体の発現ベクターに使用されるベクターは、ｐｃＤＮＡ３．４－ＴＯＰＯ（登録商標）（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）及びｐｃＤＮＡ３．１（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）である。
　本発明の二重特異性抗体の発現ベクターは、本発明の二重特異性抗体のポリヌクレオチドに動作可能なように連結されたプロモーターを含み得る。動物細胞で本発明の二重特異性抗体のポリヌクレオチドを発現させるためのプロモーターとしては、例えば、ＣＭＶ、ＲＳＶ、ＳＶ４０等のウイルス由来プロモーター、アクチンプロモーター、ＥＦ（ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ　ｆａｃｔｏｒ）１αプロモーター、ヒートショックプロモーター等が挙げられる。細菌（例えば、エシェリキア属菌）で本発明の二重特異性抗体のポリヌクレオチドを発現させるためのプロモーターとしては、例えば、ｔｒｐプロモーター、ｌａｃプロモーター、λＰＬプロモーター、ｔａｃプロモーター等が挙げられる。酵母で本発明の二重特異性抗体のポリヌクレオチドを発現させるためのプロモーターとしては、例えば、ＧＡＬ１プロモーター、ＧＡＬ１０プロモーター、ＰＨ０５プロモーター、ＰＧＫプロモーター、ＧＡＰプロモーター、ＡＤＨプロモーター等が挙げられる。
　宿主細胞として、動物細胞、昆虫細胞又は酵母を用いる場合、本発明の二重特異性抗体の発現ベクターは、開始コドン及び終止コドンを含み得る。この場合、エンハンサー配列、本発明の抗体又はその重鎖若しくは軽鎖をコードする遺伝子の５’側及び３’側の非翻訳領域、分泌シグナル配列、スプライシング接合部、ポリアデニレーション部位、あるいは複製可能単位等を含んでいてもよい。宿主細胞として大腸菌を用いる場合、本発明の発現ベクターは、開始コドン、終止コドン、ターミネーター領域、及び複製可能単位を含み得る。本発明の発現ベクターは、目的に応じて通常用いられる薬剤選択マーカー遺伝子（例えば、テトラサイクリン耐性遺伝子、アンピシリン耐性遺伝子、カナマイシン耐性遺伝子、ネオマイシン耐性遺伝子、ジヒドロ葉酸還元酵素遺伝子）を含んでいてもよい。
＜本発明の宿主細胞＞
　本発明はまた、本発明の二重特異性抗体のポリヌクレオチド又は本発明の二重特異性抗体の発現ベクター（「本発明のポリヌクレオチド等」とも称する）によって形質転換された宿主細胞（「本発明の宿主細胞」とも称する）を提供する。本発明の宿主細胞は、細胞内に本発明のポリヌクレオチド等を含む。導入された本発明のポリヌクレオチド等は宿主細胞のゲノムＤＮＡに組み込まれていてもよく、組み込まれていなくてもよい。宿主細胞として用いる細胞は、ｉｎ　ｖｉｔｒｏで培養可能な細胞又は生体内の細胞のいずれでもよい。宿主細胞がｉｎ　ｖｉｔｒｏで培養可能な細胞である場合、本発明のポリヌクレオチド等をｉｎ　ｖｉｔｒｏにて細胞に導入することで、本発明の宿主細胞を作製することができる。宿主細胞を形質転換する方法は、特に限定されるものではないが、例えば、リン酸カルシウム法、エレクトロポレーション法、又はリポフェクション方等の当業者に一般的に用いられる方法を使用することができる。宿主細胞が生体内の細胞である場合、宿主細胞に本発明のポリヌクレオチド等を導入する方法は、特に限定されるものではないが、核酸送達用キャリア（カチオン性キャリア又は非カチオン性キャリア（例えば、リポソーム、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を含むがこれに限らない）等）を用いることができる。
　ｉｎ　ｖｉｔｒｏで培養可能な細胞としては、使用する発現ベクター又はエレクトロポレーション等の方法によって形質転換され、抗体又はポリペプチドを発現することができるものである限り特に限定されるものではない。ｉｎ　ｖｉｔｒｏで培養可能な細胞としては、例えば、本発明の技術分野において通常使用される従来細胞又は人工的に樹立された細胞等種々の細胞（例えば、動物細胞（例えば、ＣＨＯ－Ｋ１細胞、ＥｘｐｉＣＨＯ－Ｓ（登録商標）細胞、ＣＨＯＫ１ＳＶ細胞、ＣＨＯ－ＤＧ４４細胞、ＨＥＫ２９３細胞、Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞、ＮＳ０細胞）、昆虫細胞（例えば、Ｓｆ９）、細菌（エシェリキア属菌等）、酵母（サッカロマイセス属、ピキア属等）等）が挙げられる。１つの実施形態において、本発明の宿主細胞はＥｘｐｉ２９３Ｆ細胞、ＣＨＯ－Ｋ１細胞、又はＥｘｐｉＣＨＯ－Ｓ細胞である。
　ｉｎ　ｖｉｔｒｏにて形質転換された宿主細胞の選別は、当業者に一般に使用されている方法にて行うことができる。選別方法には、例えば、薬剤選択マーカー遺伝子とテトラサイクリン、アンピシリン、ネオマイシン又はハイグロマイシン等の薬剤を用いた薬剤選択法や、限外希釈法、シングルセルソーティング法、又はコロニーピックアップ法等の細胞単離法を用いることができる。
　本発明の宿主細胞の１つの実施形態において、該宿主細胞は、下記（ａ）～（ａａ）からなる群より選択されるポリヌクレオチドを含む：
（ａ）配列番号２のアミノ酸番号１から１２５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｃ）配列番号６のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｄ）配列番号８のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
（ｅ）配列番号１０のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｆ）配列番号１２のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｇ）配列番号１４のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｈ）配列番号１６のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｉ）配列番号１８のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｊ）配列番号２０のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｋ）配列番号２２のアミノ酸番号１から１２１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｌ）配列番号２４のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
（ｍ）配列番号２６のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｎ）配列番号２６のアミノ酸番号１３４から２４２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｏ）配列番号２８のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｐ）配列番号２８のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｑ）配列番号３０のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｒ）配列番号３０のアミノ酸番号１３２から２４９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｓ）配列番号３２のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｔ）配列番号３２のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｕ）配列番号３４のアミノ酸番号１から１２１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｖ）配列番号３４のアミノ酸番号１３７から２４７までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｗ）配列番号２６のアミノ酸番号１から２４２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｘ）配列番号２８のアミノ酸番号１から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｙ）配列番号３０のアミノ酸番号１から２４９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｚ）配列番号３２のアミノ酸番号１から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；又は
（ａａ）配列番号３４のアミノ酸番号１から２４７までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
　１つの実施形態において、該宿主細胞は、下記（ａ）～（ｋ）からなる群より選択されるポリヌクレオチドを含む：
（ａ）配列番号２のアミノ酸番号１から１２５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド及び配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ）配列番号６のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド及び配列番号８のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｃ）配列番号１０のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド及び配列番号１２のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｄ）配列番号１４のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド及び配列番号１６のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｅ）配列番号１８のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド及び配列番号２０のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｆ）配列番号２２のアミノ酸番号１から１２１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド及び配列番号２４のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｇ）配列番号２６のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド及び配列番号２６のアミノ酸番号１３４から２４２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｈ）配列番号２８のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド及び配列番号２８のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｉ）配列番号３０のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド及び配列番号３０のアミノ酸番号１３２から２４９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｊ）配列番号３２のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド及び配列番号３２のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；又は
（ｋ）配列番号３４のアミノ酸番号１から１２１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド及び配列番号３４のアミノ酸番号１３７から２４７までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
　本発明の宿主細胞の１つの実施形態において、該宿主細胞は、下記（ａ）～（ｃ）からなる群より選択されるポリヌクレオチドを含む：
（ａ）配列番号３６のアミノ酸番号１から７０５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含むポリペプチドをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ）配列番号３８のアミノ酸番号１から７１２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含むポリペプチドをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；又は
（ｃ）配列番号４０のアミノ酸番号１から２１５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
　１つの実施形態において、該宿主細胞は、下記（ａ）又は（ｂ）より選択されるポリヌクレオチドを含む：
（ａ）配列番号３６のアミノ酸番号１から７０５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含むポリペプチドをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、並びに配列番号４０のアミノ酸番号１から２１５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；又は
（ｂ）配列番号３８のアミノ酸番号１から７１２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含むポリペプチドをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、並びに配列番号４０のアミノ酸番号１から２１５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
　本発明の宿主細胞の１つの実施形態において、該宿主細胞は下記の（ａ）～（ｊ）のポリペプチドを含む：
（ａ）配列番号２のアミノ酸番号１から１２５までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖、並びに配列番号２６のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び配列番号２６のアミノ酸番号１３４から２４２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されているポリペプチドをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、並びに配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ）配列番号２のアミノ酸番号１から１２５までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖、並びに配列番号２８のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び配列番号２８のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されているポリペプチドをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、並びに配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｃ）配列番号２のアミノ酸番号１から１２５までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖、並びに配列番号３０のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域及び配列番号３０のアミノ酸番号１３２から２４９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されているポリペプチドをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、並びに配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｄ）配列番号２のアミノ酸番号１から１２５までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖、並びに配列番号３２のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び配列番号３２のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されているポリペプチドをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、並びに配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｅ）配列番号２のアミノ酸番号１から１２５までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖、並びに配列番号３４のアミノ酸番号１から１２１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び配列番号３４のアミノ酸番号１３７から２４７までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されているポリペプチドをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、並びに配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｆ）配列番号６のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖、並びに配列番号２６のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び配列番号２６のアミノ酸番号１３４から２４２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されているポリペプチドをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、並びに配列番号８のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｇ）配列番号６のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖、並びに配列番号２８のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び配列番号２８のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されているポリペプチドをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、並びに配列番号８のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｈ）配列番号６のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖、並びに配列番号３０のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域及び配列番号３０のアミノ酸番号１３２から２４９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されているポリペプチドをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、並びに配列番号８のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｉ）配列番号６のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖、並びに配列番号３２のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び配列番号３２のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されているポリペプチドをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、並びに配列番号８のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；又は
（ｊ）配列番号６のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖、並びに配列番号３４のアミノ酸番号１から１２１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び配列番号３４のアミノ酸番号１３７から２４７までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されているポリペプチドをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、並びに配列番号８のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
　本発明の宿主細胞の１つの実施形態において、該宿主細胞は、下記の（ａ）又は（ｂ）の宿主細胞である：
（ａ）配列番号３６のアミノ酸番号１から７０５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含むポリペプチドをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、並びに配列番号４０のアミノ酸番号１から２１５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む、宿主細胞；又は
（ｂ）配列番号３８のアミノ酸番号１から７１２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含むポリペプチドをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、並びに配列番号４０のアミノ酸番号１から２１５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む、宿主細胞。
　本発明の宿主細胞の１つの実施形態において、該宿主細胞は、配列番号３８のアミノ酸番号１から７１２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含むポリペプチドをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、並びに配列番号４０のアミノ酸番号１から２１５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む、宿主細胞である。
＜本発明の二重特異性抗体を生産する方法＞
　本発明はまた、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体を生産する方法（「本発明の生産方法」とも称する）を提供する。本発明の生産方法には、前述の本発明の二重特異性抗体のポリヌクレオチドの生産方法、本発明の二重特異性抗体の発現ベクターの生産方法及び本発明の宿主細胞の生産方法が含まれうる。さらに、本発明の生産方法には、前述の＜本発明の宿主細胞＞に記載の宿主細胞を培養し該細胞又は該培養上清中に該抗体を発現させる工程、該抗体を回収、単離及び精製する方法等も含まれうる。しかしながら、本発明の生産方法は、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体が生産される限りにおいて、これらの方法に限定されるものではない。
　１つの実施形態において、本発明の生産方法は、下記の（ａ）～（ｊ）の宿主細胞を培養する工程を含む：
（ａ）配列番号２のアミノ酸番号１から１２５までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖、並びに配列番号２６のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び配列番号２６のアミノ酸番号１３４から２４２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されているポリペプチドをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、並びに配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む宿主細胞；
（ｂ）配列番号２のアミノ酸番号１から１２５までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖、並びに配列番号２８のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び配列番号２８のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されているポリペプチドをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、並びに配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む宿主細胞；
（ｃ）配列番号２のアミノ酸番号１から１２５までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖、並びに配列番号３０のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域及び配列番号３０のアミノ酸番号１３２から２４９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されているポリペプチドをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、並びに配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む宿主細胞；
（ｄ）配列番号２のアミノ酸番号１から１２５までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖、並びに配列番号３２のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び配列番号３２のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されているポリペプチドをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、並びに配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む宿主細胞；
（ｅ）配列番号２のアミノ酸番号１から１２５までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖、並びに配列番号３４のアミノ酸番号１から１２１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び配列番号３４のアミノ酸番号１３７から２４７までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されているポリペプチドをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、並びに配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む宿主細胞；
（ｆ）配列番号６のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖、並びに配列番号２６のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び配列番号２６のアミノ酸番号１３４から２４２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されているポリペプチドをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、並びに配列番号８のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む宿主細胞；
（ｇ）配列番号６のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖、並びに配列番号２８のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び配列番号２８のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されているポリペプチドをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、並びに配列番号８のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む宿主細胞；
（ｈ）配列番号６のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖、並びに配列番号３０のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域及び配列番号３０のアミノ酸番号１３２から２４９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されているポリペプチドをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、並びに配列番号８のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む宿主細胞；
（ｉ）配列番号６のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖、並びに配列番号３２のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び配列番号３２のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されているポリペプチドをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、並びに配列番号８のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む宿主細胞；又は
（ｊ）配列番号６のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖、並びに配列番号３４のアミノ酸番号１から１２１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び配列番号３４のアミノ酸番号１３７から２４７までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されているポリペプチドをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、並びに配列番号８のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む宿主細胞。
　１つの実施形態において、本発明の生産方法は、下記の（ａ）又は（ｂ）の宿主細胞を培養する工程を含む：
（ａ）配列番号３６のアミノ酸番号１から７０５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含むポリペプチドをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、並びに配列番号４０のアミノ酸番号１から２１５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む宿主細胞；又は
（ｂ）配列番号３８のアミノ酸番号１から７１２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含むポリペプチドをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、並びに配列番号４０のアミノ酸番号１から２１５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む宿主細胞。
　本発明の宿主細胞の培養は公知の方法により行うことができる。培養条件、例えば、温度、培地のｐＨ及び培養時間は、当業者により適宜選択されうる。宿主細胞が動物細胞の場合、培地としては、例えば、約５～２０％の胎児牛血清を含むＭＥＭ培地（Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９５９、Ｖｏｌ．１３０、ｐ．４３２－４３７）、Ｄ－ＭＥＭ培地（Ｖｉｒｏｌ．、１９５９、Ｖｏｌ．８、ｐ．３９６）、ＲＰＭＩ－１６４０培地（Ｊ．Ａｍ．Ｍｅｄ．Ａｓｓｏｃ．、１９６７、Ｖｏｌ．１９９、ｐ．５１９）、１９９培地（Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．、１９５０、Ｖｏｌ．７３、ｐ．１－８）等を用いることができる。培地のｐＨは、例えば、約６～８であり、培養は、必要により通気や撹拌しながら、通常約３０～４０℃で約１５～３３６時間行われる。宿主細胞が昆虫細胞の場合、培地としては、例えば、胎児牛血清を含むＧｒａｃｅ’ｓ培地（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．、１９８５、Ｖｏｌ．８２、ｐ．８４０４）等を用いることができる。培地のｐＨは、例えば、約５～８であり、培養は、必要により通気や撹拌しながら、通常約２０～４０℃で約１５～１００時間行われる。宿主細胞が大腸菌又は酵母である場合、培地としては、例えば、栄養源を含有する液体培地が適当である。栄養培地は、例えば、形質転換された宿主細胞の生育に必要な炭素源、無機窒素源、又は有機窒素源を含んでいる。炭素源としては、例えば、グルコース、デキストラン、可溶性デンプン、ショ糖等が、無機窒素源又は有機窒素源としては、例えば、アンモニウム塩類、硝酸塩類、アミノ酸、コーンスチープ・リカー、ペプトン、カゼイン、肉エキス、大豆粕、バレイショ抽出液等が挙げられる。所望により他の栄養素（例えば、無機塩（例えば、塩化カルシウム、リン酸二水素ナトリウム、塩化マグネシウム）、ビタミン類）、抗生物質（例えば、テトラサイクリン、ネオマイシン、アンピシリン、カナマイシン）等を含んでいてもよい。培地のｐＨは、例えば、約５～８である。宿主細胞が大腸菌の場合、培地としては、例えば、ＬＢ培地、Ｍ９培地（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ、Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｖｏｌ．３、Ａ２．２）等を用いることができる。培養は、必要により通気や撹拌しながら、通常約１４～４３℃で約３～２４時間行われる。宿主細胞が酵母の場合、培地としては、例えば、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒ最小培地（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．、１９８０、Ｖｏｌ．７７、ｐ．４５０５）等を用いることができる。培養は、必要により通気や撹拌しながら、通常約２０～３５℃で約１４～１４４時間行われる。上述のような培養により、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体を発現させることができる。
　本発明の生産方法は、本発明の宿主細胞を培養し、抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体を発現させる工程に加え、該宿主細胞から抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体を回収、単離又は精製する工程を含むことができる。単離又は精製方法としては、例えば、塩析、溶媒沈澱法等の溶解度を利用する方法、透析、限外濾過、ゲル濾過等の分子量の差を利用する方法、イオン交換クロマトグラフィー、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー等の荷電を利用する方法、アフィニティークロマトグラフィー等の特異的親和性を利用する方法、逆相高速液体クロマトグラフィー等の疎水性の差を利用する方法、等電点電気泳動等の等電点の差を利用する方法等が挙げられる。１つの実施形態において、培養上清中に分泌された抗体は、各種クロマトグラフィー、例えば、プロテインＡカラム又はプロテインＧカラムを用いたカラムクロマトグラフィーにより精製することができる。
　本発明の生産方法によって生産される抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体及び抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体は本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体に含まれる。
＜本発明の医薬組成物等＞
　本発明はまた、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体を含む医薬組成物等（「本発明の医薬組成物」とも称する）を提供する。本発明の医薬組成物には、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体及び薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物が含まれる。本発明の医薬組成物は、当該分野において通常用いられている賦形剤、即ち、薬剤用賦形剤や薬剤用担体等を用いて、通常使用される方法によって調製することができる。これら医薬組成物の剤型の例としては、例えば、注射剤、点滴用剤等の非経口剤が挙げられ、静脈内投与、皮下投与、腹腔内投与、腫瘍内投与等の適切な方法により投与することができる。製剤化にあたっては、薬学的に許容される範囲で、これら剤型に応じた賦形剤、担体、添加剤等を使用することができる。
　本発明の医薬組成物には、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体の翻訳後修飾体を含み得る。例えば、Ｃ末端リジンの欠失やＮ末端のピログルタミル化の両方又は一方を受けた抗体等を含有する医薬組成物も本発明に含まれる。
　１つの実施形態において、本発明の医薬組成物は、以下の（ａ）～（ｊ）のいずれかの本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体及び／又は当該抗体の翻訳後修飾体を含有する医薬組成物である：
（ａ）配列番号２のアミノ酸番号１から１２５までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号２６のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２６のアミノ酸番号１３４から２４２までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体及び／又は当該抗体の翻訳後修飾体；
（ｂ）配列番号２のアミノ酸番号１から１２５までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号２８のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２８のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体及び／又は当該抗体の翻訳後修飾体；
（ｃ）配列番号２のアミノ酸番号１から１２５までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号３０のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域及び配列番号３０のアミノ酸番号１３２から２４９までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体及び／又は当該抗体の翻訳後修飾体；
（ｄ）配列番号２のアミノ酸番号１から１２５までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号３２のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号３２のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体及び／又は当該抗体の翻訳後修飾体；
（ｅ）配列番号２のアミノ酸番号１から１２５までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号３４のアミノ酸番号１から１２１までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号３４のアミノ酸番号１３７から２４７までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体及び／又は当該抗体の翻訳後修飾体；
（ｆ）配列番号６のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号８のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号２６のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２６のアミノ酸番号１３４から２４２までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体及び／又は当該抗体の翻訳後修飾体；
（ｇ）配列番号６のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号８のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号２８のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２８のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体及び／又は当該抗体の翻訳後修飾体；
（ｈ）配列番号６のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号８のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号３０のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域及び配列番号３０のアミノ酸番号１３２から２４９までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体及び／又は当該抗体の翻訳後修飾体；
（ｉ）配列番号６のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号８のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号３２のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号３２のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体及び／又は当該抗体の翻訳後修飾体；又は
（ｊ）配列番号６のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号８のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号３４のアミノ酸番号１から１２１までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号３４のアミノ酸番号１３７から２４７までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体及び／又は当該抗体の翻訳後修飾体。
　１つの実施形態において、本発明の医薬組成物は、以下の（ａ）又は（ｂ）の本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体及び／又は当該抗体の翻訳後修飾体を含有する医薬組成物である：
（ａ）配列番号３６のアミノ酸番号１から７０５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含むポリペプチド、並びに配列番号４０のアミノ酸番号１から２１５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖を含む、抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体及び／又は当該抗体の翻訳後修飾体；又は
（ｂ）配列番号３８のアミノ酸番号１から７１２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含むポリペプチド、並びに配列番号４０のアミノ酸番号１から２１５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖を含む、抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体及び／又は当該抗体の翻訳後修飾体。
　製剤化における本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体及び／又は当該抗体の翻訳後修飾体の添加量は、患者の症状の程度や年齢、使用する製剤の剤型、あるいは抗体の結合力価等により異なるが、例えば、０．００１ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇ程度を用いることができる。
＜本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体の医薬用途＞
　本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体、及びそれらを含有する医薬組成物は、対象のがんの治療のために用いることができる。また、本発明には、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体の治療有効量を対象に投与する工程を包含する、がんを治療する方法が含まれる。また、本発明には、がんの治療に使用するための、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体を含む。また、本発明には、がんの治療用医薬組成物の製造における、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体の使用が含まれる。本発明による治療の対象となるがんは、特に限定されないが、例えば、種々の腹膜播種がん、胃がん、肺がん、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、多発性骨髄腫、Ｔ細胞リンパ腫等の血液がん、骨髄異形成症候群、腺がん、扁平上皮がん、腺扁平上皮がん、未分化がん、大細胞がん、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、中皮腫、皮膚がん、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、乳がん、前立腺がん、膀胱がん、膣がん、頸部がん、頭頸部がん、子宮がん、子宮頸がん、肝臓がん、胆のうがん、胆管がん、腎臓がん、膵臓がん、結腸がん、大腸がん、直腸がん、小腸がん、胃がん、食道がん、精巣がん、卵巣がん、脳腫瘍等の固形がん、並びに骨組織、軟骨組織、脂肪組織、筋組織、血管組織及び造血組織のがんの他、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、悪性血管内皮腫、悪性シュワン腫、骨肉腫、軟部組織肉腫等の肉腫や、膠芽腫、多形性膠芽腫、肝芽腫、髄芽腫、腎芽腫、神経芽腫、膵芽腫、胸膜肺芽腫、網膜芽腫などの芽腫等が挙げられる。１つの実施形態において、本発明による治療の対象となるがんは、大腸がん、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、膀胱がん、卵巣がん、乳がん、前立腺がんである。１つの実施形態において、本発明による治療の対象となるがんは、正常組織と比較してＣＬＤＮ４が高発現しているがんである。本発明による治療の対象となるがんは、好ましくは、正常組織と比較してＣＬＤＮ４が高発現しているがん、又は大腸がん、直腸がん、肺がん、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、膀胱がん、卵巣がん、乳がん、前立腺がんからなる群から選択されるがんである。
＜本発明の抗ＣＬＤＮ４抗体＞
　本発明はまた、以下の（ａ）～（ｃ）のいずれかの抗ＣＬＤＮ４抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する：
（ａ）配列番号２のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸番号５０から６６までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２、及び配列番号２のアミノ酸番号９９から１１４までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに、配列番号４のアミノ酸番号２４から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸番号５１から５７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２、及び配列番号４のアミノ酸番号９０から９８までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、抗ＣＬＤＮ４抗体又はその抗原結合フラグメント；
（ｂ）配列番号２のアミノ酸番号１から１２５までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む、抗ＣＬＤＮ４抗体又はその抗原結合フラグメント；又は
（ｃ）配列番号６のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号８のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む、抗ＣＬＤＮ４抗体又はその抗原結合フラグメント。
　１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号２のアミノ酸番号１から１２５までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域、及び、配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む、抗ＣＬＤＮ４抗体又はその抗原結合フラグメント、又は配列番号６のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号８のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む、抗ＣＬＤＮ４抗体又はその抗原結合フラグメントである。１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号２のアミノ酸番号１から１２５までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域である。１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号６のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号８のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む、抗ＣＬＤＮ４抗体又はその抗原結合フラグメントである。
　本発明の抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖定常領域としては、Ｉｇγ、Ｉｇμ、Ｉｇα、Ｉｇδ又はＩｇεのいずれの定常領域も選択可能である。Ｉｇγとしては、例えば、Ｉｇγ１、Ｉｇγ２、Ｉｇγ３又はＩｇγ４から選択することが可能である。１つの実施形態において、重鎖定常領域はＩｇγ１定常領域であり、例えば、ヒトＩｇγ１定常領域である。また、本発明の抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖定常領域は、ＡＤＣＣやＣＤＣを低下させるためにＬＡＬＡ変異、Ｐ３３１Ｇ又はＰ３３１Ｓ変異等のアミノ酸変異を含んでもよい。本発明の抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖定常領域としては、Ｉｇλ又はＩｇκのいずれの定常領域も選択可能であり得る。１つの実施形態において、軽鎖定常領域はＩｇκ定常領域であり、例えば、ヒトＩｇκ定常領域である。
　１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４抗体の抗原結合フラグメントは、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、又はＦ（ａｂ’）２である。
　１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４抗体は、配列番号２のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む重鎖及び配列番号４のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む軽鎖を含む、抗ＣＬＤＮ４抗体、又は配列番号６のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む重鎖及び配列番号８のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む軽鎖を含む、抗ＣＬＤＮ４抗体である。１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４抗体は、配列番号２のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む重鎖及び配列番号４のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む軽鎖を含む抗ＣＬＤＮ４抗体である。１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４抗体は、配列番号６のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む重鎖及び配列番号８のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む軽鎖を含む、抗ＣＬＤＮ４抗体である。
　本発明はまた、糖質、脂質、金属（放射性同位体を含む）、有機化合物（毒素、近赤外蛍光色素、キレート剤を含む）等（「修飾剤」ともいう）が結合した、本発明の抗ＣＬＤＮ４抗体又はその抗原結合フラグメント（「本発明の複合体」ともいう）を提供する。本明細書において、「修飾剤」とは抗体又はその抗原結合フラグメントに直接又はリンカー等を介して結合している、非ペプチド性の物質を指す。本発明の複合体に用いられる修飾剤は特に限定されず、例えば、ポリエチレングリコール、糖鎖、リン脂質、放射線同位体（例えば、ジルコニウム－８９（８９Ｚｒ）、イットリウム－９０（９０Ｙ）、インジウム－１１１（１１１Ｉｎ）、アスタチン－２１１（２１１Ａｔ）、アクチニウム－２２５（２２５Ａｃ））、有機化合物、毒素、近赤外蛍光色素（例えばＩＲＤｙｅ（登録商標））、キレート剤等が挙げられる。当該複合体に用いられる修飾剤は、本発明の抗ＣＬＤＮ４抗体又はその抗原結合フラグメントに直接結合していてもよく、また、任意のリンカーを介して結合していてもよい。１つの実施形態において、本発明の複合体は、抗ＣＬＤＮ４抗体又はその抗原結合フラグメントの薬物複合体（Ａｎｔｉｂｏｄｙ　Ｄｒｕｇ　Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ；ＡＤＣ）である。ＡＤＣに用いられる薬物及びリンカーは、当業者が一般に用いる薬剤及びリンカーの中より選定されうる。
　本発明はまた、本発明の抗ＣＬＤＮ４抗体又はその抗原結合フラグメントを細胞表面に発現させた細胞（例えば、Ｃｈｉｍｅｒｉｃ　ａｎｔｉｇｅｎ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ－Ｔ　ｃｅｌｌ；ＣＡＲ－Ｔ細胞）を提供する。このような細胞は、本発明の抗ＣＬＤＮ４抗体又はその抗原結合フラグメントをコードするポリヌクレオチドを用いて、当業者であれば作製することができる。本発明の抗ＣＬＤＮ４抗体又はその抗原結合フラグメントを発現させる細胞としては、各種免疫細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞等）を用いることができる。
　１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４抗体又はその抗原結合フラグメント、本発明の複合体、及び本発明の抗ＣＬＤＮ４抗体又はその抗原結合フラグメントを細胞表面に発現させた細胞における抗体又は抗原結合フラグメント部分は、翻訳後修飾されていてもよい。１つの実施形態において、翻訳後修飾が、重鎖可変領域Ｎ末端のピログルタミル化及び／又は重鎖Ｃ末端リジン欠失である。
　本発明の抗ＣＬＤＮ４抗体又はその抗原結合フラグメント、本発明の複合体、及び本発明の抗ＣＬＤＮ４抗体又はその抗原結合フラグメントを細胞表面に発現させた細胞は、本明細書に開示される本発明の抗ＣＬＤＮ４抗体又はその抗原結合フラグメントのＶＨ及びＶＬの配列情報、本発明の複合体に用いられる修飾剤の情報に基づいて、当該分野で公知の方法を使用して、当業者であれば作製し得る。本発明の抗ＣＬＤＮ４抗体又はその抗原結合フラグメントは、特に限定されるものではないが、例えば、＜本発明の二重特異性抗体を生産する方法＞の項に記載の方法に従って生産することができる。
　本発明はまた、本発明の抗ＣＬＤＮ４抗体又はその抗原結合フラグメント、本発明の複合体及び本発明の抗ＣＬＤＮ４抗体又はその抗原結合フラグメントを細胞表面に発現させた細胞（纏めて以下本項において「本発明の抗ＣＬＤＮ４抗体等」と称する）、並びに薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物を提供する。当該医薬組成物は、がんの治療のために用いることができる。本発明はまた、本発明の抗ＣＬＤＮ４抗体等の治療有効量を対象に投与する工程を含むがんを治療する方法、がんの治療に使用するための本発明の抗ＣＬＤＮ４抗体等、がんの治療用医薬組成物の製造における本発明の抗ＣＬＤＮ４抗体等の使用を提供する。本発明の抗ＣＬＤＮ４抗体等の医薬用途は、前述の＜本発明の医薬組成物等＞の記載に準じて当業者であれば実施し得る。本発明の抗ＣＬＤＮ４抗体等の医薬用途の治療の対象となるがんは、前述の＜本発明の医薬組成物等＞に記載のがんが挙げられる。
＜本発明の抗ＣＤ１３７抗体＞
　本発明はまた、以下の（ａ）～（ｄ）のいずれかの抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する：
（ａ）配列番号１０のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１０のアミノ酸番号５０から６６までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１０のアミノ酸番号９９から１０７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号１２のアミノ酸番号２４から３４までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸番号５０から５６までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１２のアミノ酸番号８９から９８までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｂ）配列番号１４のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１４のアミノ酸番号５０から６５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１４のアミノ酸番号９８から１０７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号１６のアミノ酸番号２３から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１６のアミノ酸番号５１から５７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１６のアミノ酸番号９０から１００までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｃ）配列番号１８のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸番号５０から６５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１８のアミノ酸番号９８から１０７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号２０のアミノ酸番号２３から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２０のアミノ酸番号５１から５７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２０のアミノ酸番号９０から１００までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；又は
（ｄ）配列番号２２のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２２のアミノ酸番号５０から６５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２２のアミノ酸番号９８から１１０までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号２４のアミノ酸番号２３から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２４のアミノ酸番号５１から５７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２４のアミノ酸番号９０から１００までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域。
　１つの実施形態において、本発明の抗ＣＤ１３７抗体又はその抗原結合フラグメントは、以下の（ａ）～（ｉ）のいずれかの抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む；
（ａ）配列番号１０のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号１２のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
（ｂ）配列番号１４のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号１６のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
（ｃ）配列番号１８のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２０のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
（ｄ）配列番号２２のアミノ酸番号１から１２１までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２４のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
（ｅ）配列番号２６のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２６のアミノ酸番号１３４から２４２までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
（ｆ）配列番号２８のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２８のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
（ｇ）配列番号３０のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域及び配列番号３０のアミノ酸番号１３２から２４９までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域；
（ｈ）配列番号３２のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号３２のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；又は
（ｉ）配列番号３４のアミノ酸番号１から１２１までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号３４のアミノ酸番号１３７から２４７までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域。
　１つの実施形態において、本発明の抗ＣＤ１３７抗体の抗原結合フラグメントは、ｓｃＦｖである。１つの実施形態において、本発明の抗ＣＤ１３７抗体の抗原結合フラグメントは、以下の（ａ）～（ｅ）のいずれかである；
（ａ）配列番号２６のアミノ酸番号１から２４２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ；
（ｂ）配列番号２８のアミノ酸番号１から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ；
（ｃ）配列番号３０のアミノ酸番号１から２４９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ；
（ｄ）配列番号３２のアミノ酸番号１から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ；又は
（ｅ）配列番号３４のアミノ酸番号１から２４７までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ。
　本発明の抗ＣＤ１３７抗体又はその抗原結合フラグメントは、＜本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体＞等の本明細書中の記載を参照して、当業者であれば作製し得る。本発明の抗ＣＤ１３７抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば、がんの治療において使用される、任意のＴＡＡに対する抗体（抗ＴＡＡ抗体）との二重特異性抗体に使用されうる。すなわち、本発明はまた、本発明の抗ＣＤ１３７抗体又はその抗原結合フラグメント及び抗ＴＡＡ抗体又はその抗原結合フラグメントを含む二重特異性抗体（「本発明の抗ＴＡＡ－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体」とも称する）を提供する。ＴＡＡとしては、腫瘍の細胞表面に発現している限りにおいて特に限定されないが、例えばＨＥＲ２、ＥＧＦＲ、ＥｐＣＡＭ、ＣＥＡ、ＢＣＭＡ、ＰＳＭＡ，ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ１２３、ＣＤ２７６（Ｂ７－Ｈ３）、ＧＰＣ２、ＧＰＣ３、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＷＴ－１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＣＬＤＮ４、ＣＬＤＮ６、ＣＬＤＮ１８．２、ＴＳＰＡＮ８が使用されうる。１つの実施形態において、本発明の抗ＴＡＡ－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、抗ＣＤ１３７抗体のｓｃＦｖを含む、１つの実施形態において、本発明の抗ＴＡＡ－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、以下の（ａ）～（ｅ）のいずれかである抗ＣＤ１３７抗体のｓｃＦｖを含む；
（ａ）配列番号２６のアミノ酸番号１から２４２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ；
（ｂ）配列番号２８のアミノ酸番号１から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ；
（ｃ）配列番号３０のアミノ酸番号１から２４９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ；
（ｄ）配列番号３２のアミノ酸番号１から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ；又は
（ｅ）配列番号３４のアミノ酸番号１から２４７までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ。
　１つの実施形態において、本発明の抗ＴＡＡ－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は抗ＣＬＤＮ４抗体又はその抗原結合フラグメントを含み、１つの実施形態において、本発明の抗ＴＡＡ－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体はＩｇＧ型の抗ＣＬＤＮ４抗体を含む。
　本発明についてさらに理解を得るために参照する特定の実施例をここに提供するが、これらは例示目的とするものであって、本発明を限定するものではない。
［実施例１：腹膜播種がん細胞に発現する抗原に選択的に結合する抗体の取得］
［１－１．患者由来の腹膜播種がん細胞の取得］
　患者からの腹膜播種がん細胞の取得は、千脇史子、佐々木博己による文献「腹膜転移がん（胃、膵、卵巣がんなど）細胞株の樹立」（佐々木博己編『患者由来がんモデルを用いたがん研究実践ガイド』羊土社、２０１９年、p.２８-３７）に記載の方法に準じて行った。
　患者より採取した腹水を室温、４３０×ｇで３分間遠心し、上清を除去した後に、沈殿に溶血緩衝液を添加して溶血させた。遠心後に上清を除去し、ダルベッコＰＢＳ（－）（日水製薬社、０５９１３、以下「ＰＢＳ（－）と称する」）を５０ｍＬ加えて細胞を洗浄した。その後、室温、４３０×ｇで３分間遠心して細胞を回収した。回収した腹水中の全細胞を１０％　ＦＢＳ（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、１０２７０?１０６）、×１　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ－Ａｎｔｉｍｙｃｏｔｉｃ（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、１５２４００６２）を含むＲＰＭＩ－１６４０（Ｌ－グルタミン含有）培地（富士フイルム和光純薬社、１８９－０２０２５）、（以下、実施例１においてＦＢＳ等を添加後の培地を「ＲＰＭＩ－１６４０培地」と称す）に再懸濁した。懸濁液を希釈し、１００ｍｍコラーゲンコートディッシュ（以下「ディッシュ」と称する）（ＩＷＡＫＩ社、４０２０－０１０）に細胞を５×１０６～１×１０７個／１０ｍＬずつ播種し、３７℃、５％　ＣＯ２インキュベーターで培養した。
　腹水中の細胞には、接着系細胞と浮遊系細胞が存在し、接着系細胞にはがん細胞だけでなくがん細胞以外の細胞（線維芽細胞、腹膜中皮細胞等）も含まれている。がん細胞以外の細胞はがん細胞より短時間で剥離する性質を有するため、これらの細胞を腹水中の全細胞より分離して除去した。がん細胞以外の細胞を除いた後、がん細胞がディッシュ面積の８０％コンフルエント程度まで増殖した後に、全細胞の１／２を新しいディッシュへ継代する作業を繰り返し、５回以上継代したものを接着系がん細胞とした。浮遊系細胞については、培養ディッシュより培養上清５ｍＬとＲＰＭＩ－１６４０培地５ｍｌを新しい１００ｍｍディッシュへ播種して継代し、５回以上継代したものを浮遊系がん細胞とした。１人の患者に由来する腹膜播種がん細胞が接着系がん細胞と浮遊系がん細胞の両方を含んだまま増殖する場合は、それらを混合系がん細胞とした。
　本明細書において、上記方法にて単離した接着系がん細胞、浮遊系がん細胞又は混合系がん細胞を総称して「腹膜播種がん細胞」と称する。取得した６細胞（ＮＳＣ－９Ｃ、ＮＳＣ－１５ＣＦ、ＮＳＣ－１６Ｃ、ＮＳＣ－２０Ｃ、ＮＳＣ－２２Ｃ、ＮＳＣ－３２Ｃ、（以下「６種の腹膜播種がん細胞」とも称する））を以後の検討に用いた。
［１－２：抗胃がん抗原抗体産生ハイブリドーマの作製］
　ヒ卜モノクローナル抗体開発技術「ベロシミューン」（ＶｅｌｏｃＩｍｍｕｎｅ（登録商標）　ａｎｔｉｂｏｄｙ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ（米国特許６５９６５４１号））を用いて作製されたベロシミューンマウスに腹膜播種がん細胞を免疫して抗腹膜播種がん細胞に発現するがん抗原に対する抗体を取得した。
　実施例１－１にて取得した腹膜播種がん細胞のうちＮＳＣ－９Ｃ、ＮＳＣ－１５ＣＦ、ＮＳＣ－１６Ｃの３細胞又はＮＳＣ－２０Ｃ、ＮＳＣ－２２Ｃ、ＮＳＣ－３２Ｃの３細胞を混合し、ＴｉｔｅｒＭａｘ（登録商標）Ｇｏｌｄ　ＡＤＪＵＶＡＮＴ（Ｍｅｒｃｋ社、Ｔ２６８４）又はＰＢＳ（－）に懸濁し、腹膜播種がん細胞懸濁液を調製した。この懸濁液をベロシミューンマウスに数回投与して免疫を行った。常法に従い、免疫したマウスのリンパ節からリンパ球を回収し、マウスミエローマ細胞ＳＰ２／０（ＡＴＣＣ、ＣＲＬ－１５８１）と細胞融合することでハイブリドーマを作製した。自動ピッキング装置にてハイブリドーマの単コロニーを単離し、モノクローン化ハイブリドーマ細胞（以下「クローン」と称する）を取得した。単離したクローンを３７℃、８％　ＣＯ２インキュベーターにて培養し、約１４日後の上清を９６ウェルプレートに回収し、以下の実験に用いた。
［１－３：腹膜播種がん細胞に選択的に結合する抗体の選別］
（１）腹膜播種がん細胞及びＥｐＣＡＭ発現細胞への結合確認
　実施例１－２にて得られたクローンの細胞上清には抗体（以下「クローン上清に含まれる抗体」と称する）が含まれている。
　まず、クローン上清に含まれる抗体と実施例１－１で取得した６種の腹膜播種がん細胞との結合をフローサイトメトリー法にて測定し、腹膜播種がん細胞に強く結合する抗体を産生するクローンを選抜した。フローサイトメトリーにはＢＶ４２１　Ｇｏａｔ　Ａｎｔｉ－Ｍｏｕｓｅ　Ｉｇ（Ｂｅｃｔｏｎ，　Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ　ａｎｄ　Ｃｏｍｐａｎｙ社、５６３８４６）を用いた。
　また、がん抗原であるＥｐＣＡＭに結合する抗体を提供するクローンを除外するために、クローン上清に含まれる抗体とヒトＥｐＣＡＭ－Ｍｙｃ－ＤＤＫ発現ＣＨＯ－Ｋ１細胞との結合を測定した。ヒトＥｐＣＡＭ－Ｍｙｃ－ＤＤＫ発現ＣＨＯ－Ｋ１細胞は、ＥＰＣＡＭ（Ｍｙｃ－ＤＤＫ－ｔａｇｇｅｄ）－Ｈｕｍａｎ　ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｌ　ａｄｈｅｓｉｏｎ　ｍｏｌｅｃｕｌｅ（ＥＰＣＡＭ）（ＯＲＩＧＥＮＥ社、ＲＣ２０１９８９）をＣＨＯ－Ｋ１細胞（ＡＴＣＣ、ＣＣＬ－６１）にトランスフェクションすることにより作製した。当該細胞とクローン上清に含まれる抗体の結合をフローサイトメトリー法にて測定した。フローサイトメトリーには、ＢＶ４２１　Ｇｏａｔ　Ａｎｔｉ－Ｍｏｕｓｅ　Ｉｇを用いた。ＥｐＣＡＭ発現細胞に結合活性を示さない上清を提供するクローンを選択するために、当該細胞に結合するクローンを除外した。陽性コントロールとして、ＣＤ３２６（ＥｐＣＡＭ）　Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉｂｏｄｙ（１Ｂ７），（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社、１４－９３２６）を使用した。
　さらに、腹膜播種がん細胞に選択的に結合するクローンを選抜するために、培養ヒト腹膜中皮細胞に結合するクローンを除外した。培養ヒト腹膜中皮細胞としてＨｕｍａｎ　Ｍｅｓｏｔｈｅｌｉａｌ　Ｃｅｌｌｓ（Ｚｅｎｂｉｏ社、ＭＥＳ－Ｆ、Ｌｏｔ．ＭＥＳＭ０５０３１１Ａ）（以下「培養ヒト腹膜中皮細胞」とも称する）を用い、Ｍｅｓｏｔｈｅｌｉａｌ　Ｃｅｌｌ　Ｇｒｏｗｔｈ　Ｍｅｄｉｕｍ（Ｚｅｎｂｉｏ社、ＭＳＯ－１）にて培養した培養ヒト腹膜中皮細胞とクローンとの結合の測定にはフローサイトメ卜リ一法を用いた。フローサイトメ卜リ一法には、ＢＶ４２１　Ｇｏａｔ　Ａｎｔｉ－Ｍｏｕｓｅ　Ｉｇを用いた。培養ヒト腹膜中皮細胞に結合しないクローンのみを選別した。
　上記実験により、６種の腹膜播種がん細胞中の５種以上に結合し、且つ、ヒトＥｐＣＡＭ及び培養腹膜中皮細胞には結合しない抗体を提供するクローンとして３Ｄ１１クローンを取得した。
（２）ハイブリドーマ上清からの抗体精製
　３Ｄ１１クローンをＣＤハイブリドーマメディウム（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、１１２７９０２３）で培養した。培養上清から、ＭａｂＳｅｌｅｃｔＳｕＲｅ（ＧＥヘルスケア社、１７－５４３８－０２）を用いて、３Ｄ１１抗体を精製した（以下「３Ｄ１１」と称する）。抗体の精製は常法に従った。
［１－４：３Ｄ１１が認識する抗原分子の同定］
（１）ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ測定による抗原候補分子の同定
　３Ｄ１１の抗原候補分子の同定を行った。本実験におけるコントロール抗体として、１Ｄ１０、１０Ｂ５を使用した。これらの抗体は、３Ｄ１１を取得する過程にて３Ｄ１１と異なる腹膜播種がん細胞への結合パターンを示した。
　ＮＳＣ－１５ＣＦの細胞破砕液を作製した。細胞破砕液に、３Ｄ１１及びコントロール抗体２種（１Ｄ１０、１０Ｂ５）のうちのいずれか１抗体を添加し、さらにＤｙｎａｂｅａｄｓ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｇ　（Ｌｉｆｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、１０００３Ｄ）を加えて攪拌及び洗浄を行った。Ｄｙｎａｂｅａｄｓ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｇに結合したタンパク質をＴｒｙｐｓｉｎ／ＬｙｓＣ（Ｐｒｏｍｅｇａ社、Ｖ５０７２）を用いて消化し、ペプチド混合物を得た。ペプチド混合物を含む溶液をＵｌｔｉＭａｔｅ３０００ＲＳＬＣｎａｎｏ（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）及びＯｒｂｉｔｒａｐ　Ｆｕｓｉｏｎ（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）を用いたＬＣ－ＭＳ／ＭＳ測定に供した。得られたＬＣ－ＭＳ／ＭＳデータについて、Ｐｒｏｇｅｎｅｓｉｓ　ＱＩ　ｆｏｒ　Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ（Ｗａｔｅｒｓ社）及びＭａｓｃｏｔ（Ｍａｔｒｉｘ　Ｓｃｉｅｎｃｅ社）ソフトを用いて比較定量解析及びペプチド／タンパク質同定を行い、結合タンパク質を同定した。３Ｄ１１とコントロール抗体の結合タンパク質を比較し、３Ｄ１１の抗原候補分子としてＣＬＤＮ４を同定した。
（２）３Ｄ１１の抗原決定
　（１）にて同定したＣＬＤＮ４が３Ｄ１１の抗原であるかどうかを決定するために、ヒトＣＬＤＮ４－Ｍｙｃ－ＤＤＫ発現ＣＨＯ－Ｋ１細胞に対する結合実験を行った。ヒトＣＬＤＮ４－Ｍｙｃ－ＤＤＫ発現ＣＨＯ－Ｋ１細胞は、ＣＨＯ－Ｋ１細胞にＣＬＤＮ４（Ｍｙｃ－ＤＤＫ－ｔａｇｇｅｄ）－Ｈｕｍａｎ　ｃｌａｕｄｉｎ　４　（ＣＬＤＮ４）（ＯＲＩＧＥＮＥ社、ＲＣ２００４９０）をトランスフェクションすることにより作製した。結果、３Ｄ１１はヒトＣＬＤＮ４－Ｍｙｃ－ＤＤＫ発現ＣＨＯ－Ｋ１細胞に結合したため、ＣＬＤＮ４を抗原として認識することが確認された。
［実施例２：３Ｄ１１の配列決定及びヒト抗体の作製］
　常法に従い３Ｄ１１の重鎖及び軽鎖をコ一ドする遺伝子をクロ一ニングし、３Ｄ１１の塩基配列及びアミノ酸配列を決定した。３Ｄ１１の重鎖可変領域のアミノ酸配列を配列番号２に、軽鎖可変領域のアミノ酸配列を配列番号４に示す。ベロシミュ一ンマウスにより作製される抗体は内因性の免疫グロブリン重鎖及び軽鎖の可変領域が対応するヒ卜可変領域で置換された抗体である。すなわち、ベロシミュ一ン技術を用いて得られた抗体は、ヒ卜抗体の可変領域とマウス抗体の定常領域を有する抗体（「キメラ抗体」とも称する）である。
［参考例：がん腹膜播種治療に用いる抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ３二重特異性抗体］
　がん細胞に選択的に発現するＴＡＡに対する治療薬として、抗体、抗体－薬物複合体（ＡＤＣ）抗体、Ｃｈｉｍｅｒｉｃ　Ａｎｔｉｇｅｎ　Ｒｅｃｅｐｔｏｒ　Ｔ－ｃｅｌｌ　Ｔｈｅｒａｐｙ（ＣＡＲ－Ｔ）等の様々な種類の薬剤が知られている。その中でも低い抗体濃度でがん細胞選択的な細胞傷害活性を得ることができる画期的な方法として、二重特異性Ｔ細胞リクルート抗体（Ｔ－ｃｅｌｌ－ｒｅｃｒｕｉｔｉｎｇ　ａｎｔｉｂｏｄｙ）が知られている。そこで、３Ｄ１１を用いた二重特異性Ｔ細胞リクルート抗体の作製を検討した。
（１）ヒト化抗ＣＬＤＮ４抗体の作製
　ヒト型抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ３ｓｃＦｖ二重特異性抗体の作製を以下の方法で行った。
　ヒト型抗ＣＬＤＮ４抗体部分は、常法に従い３Ｄ１１の重鎖可変領域にヒト重鎖のＩｇＧ１の定常領域を、軽鎖可変領域にヒト軽鎖κ鎖の定常領域をそれぞれ連結して設計した。更に重鎖のアミノ酸番号２３８及び２３９（ＥＵインデックス：２３４及び２３５）のアミノ酸をそれぞれロイシン（Ｌ）からアラニン（Ａ）に置換したＬＡＬＡ変異（Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ）、アミノ酸番号３７０、３７２及び４１１（ＥＵインデックス：３６６、３６８及び４０７）のアミノ酸をそれぞれトレオニン（Ｔ）からセリン（Ｓ）、ＬからＡ、チロシン（Ｙ）からバリン（Ｖ）に置換するノブズ・イントゥー・ホールズ（Ｋｎｏｂｓ　ｉｎｔｏ　ｈｏｌｅｓ）変異、並びに、アミノ酸番号３０１（ＥＵインデックス：２９７）のアミノ酸をアスパラギン（Ｎ）からＡに置換する変異を導入した。作製したヒト化抗ＣＬＤＮ４抗体を３Ｄ１１．１と称する。３Ｄ１１．１のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを常法に従って合成し、ｐｃＤＮＡ３．４　ＴＯＰＯベクター（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）に挿入した。
（２）抗ＣＤ３ｓｃＦｖの作製
　抗ＣＤ３ｓｃＦｖ部分は、日本特許第５６８６９５３号に記載のマウス抗ＣＤ３抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の配列に基づき作製した。抗ＣＤ３ｓｃＦｖのヒト化は、文献（Ｆｒｏｎｔ　Ｂｉｏｓｃｉ．、２００８、Ｖｏｌ．１３、ｐ．１６１９－１６３３）記載の方法に準じて行った。この際に、バックミューテーションを導入した。立体構造情報（ＰＤＢ Ｃｏｄｅ：５ＦＣＳ）をＭＯＬＳＩＳ Ｉｎｃ．社が提供する統合計算化学システムＭＯＥで解析して、フレームワーク領域内のバックミューテーション導入位置を決定した。ヒト化抗ＣＤ３ｓｃＦｖのアミノ酸配列を配列番号４１に示す。配列番号４１に記載のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを常法に従って合成し、ｐｃＤＮＡ３．１（＋）ベクター（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社　、Ｖ７９０２０）に挿入した。
（３）抗ＣＬＤＮ４（３Ｄ１１）－抗ＣＤ３ｓｃＦｖ二重特異性抗体の作製
　３Ｄ１１．1と抗ＣＤ３ｓｃＦｖをコードするベクターを用いて、ＰＣＴ／ＪＰ２０２１／４１８３９の実施例７に記載の方法に準じて、抗ＣＬＤＮ４抗体のＦａｂ領域と抗ＣＤ３抗体のｓｃＦｖ領域とＦｃ領域により構成される二重特異性抗体を作製した。作製した二重特異性抗体を、抗ＣＬＤＮ４（３Ｄ１１）－抗ＣＤ３ｓｃＦｖ二重特異性抗体と称する。
（４）抗ＣＬＤＮ４（３Ｄ１１）－抗ＣＤ３ｓｃＦｖ二重特異性抗体の薬効評価　
　抗ＣＬＤＮ４（３Ｄ１１）－抗ＣＤ３ｓｃＦｖ二重特異性抗体のｉｎ　ｖｉｔｒｏにおけるｒｅｄｉｒｅｃｔｅｄ　Ｔ　ｃｅｌｌ　ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ（ＲＴＣＣ）活性をＰＣＴ／ＪＰ２０２１／４１８３９の実施例９に記載の方法に準じて測定した。抗ＣＬＤＮ４（３Ｄ１１）－抗ＣＤ３ｓｃＦｖ二重特異性抗体がＲＴＣＣ活性を有することを確認した。またＰＣＴ／ＪＰ２０２１／４１８３９の実施例１１に記載の方法に準じて抗ＣＬＤＮ４（３Ｄ１１）－抗ＣＤ３ｓｃＦｖ二重特異性抗体のｉｎ　ｖｉｖｏにおける抗腫瘍活性を評価した。抗ＣＬＤＮ４（３Ｄ１１）－抗ＣＤ３ｓｃＦｖ二重特異性抗体は胃がん腹膜播種ｉｎ　ｖｉｖｏマウスモデルにおいて抗腫瘍効果を示した。これらの結果より、抗ＣＬＤＮ４（３Ｄ１１）－抗ＣＤ３ｓｃＦｖ二重特異性抗体はがんの治療に有効であることが示唆された。
　さらに、抗ＣＬＤＮ４（３Ｄ１１）－抗ＣＤ３ｓｃＦｖ二重特異性抗体の安全性について検討をするため、カニクイザルの静脈内に抗ＣＬＤＮ４（３Ｄ１１）－抗ＣＤ３ｓｃＦｖ二重特異性抗体を単回投与した。結果、抗ＣＬＤＮ４（３Ｄ１１）－抗ＣＤ３ｓｃＦｖ二重特異性抗体を投与したサルにおいて死亡例及び瀕死例が確認された。死亡したサルにおいては投与１時間後及び６時間後、瀕死のサルにおいては投与１時間後、６時間後及び２４時間後において血中のＩＬ－６量が著しく増加していた。これらの結果より、抗ＣＬＤＮ４（３Ｄ１１）－抗ＣＤ３ｓｃＦｖ二重特異性抗体はｉｎ　ｖｉｔｒｏ及びｉｎ　ｖｉｖｏにおいて薬効を発揮する一方で、サイトカインの増加によると思われる重篤な副作用の懸念が生じた。よって、抗ＣＬＤＮ４（３Ｄ１１）－抗ＣＤ３ｓｃＦｖ二重特異性抗体は、ヒトのがんの治療に用いる抗体としては不適格であると判断した。
［実施例３：抗ＣＬＤＮ４（３Ｄ１１）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体の作製］
　３Ｄ１１を用いて抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖとの二重特異性抗体（以下「抗ＣＬＤＮ４（３Ｄ１１）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体」と称する）を作製し、検討を実施した。
［３－１．抗ＣＤ１３７抗体の取得］
（１）ＣＤ１３７―Ｆｃ融合タンパク質の作製
　配列番号４２のアミノ酸番号１から１８６までのアミノ酸配列からなるヒトＣＤ１３７細胞外領域又は配列番号４３のアミノ酸番号１から１８６までのアミノ酸配列からなるサルＣＤ１３７細胞外領域をコードするポリヌクレオチドを、それぞれｐＦＵＳＥ－ｈＩｇＧ１－Ｆｃ１ベクター（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ社、ｐｆｕｓｅ－ｈｇ１ｆｃ１）に挿入し、ＣＤ１３７の細胞外領域とヒトＦｃとの融合タンパク質（以下それぞれ、「ヒトＣＤ１３７－ヒトＦｃ融合タンパク質」及び「サルＣＤ１３７－ヒトＦｃ融合タンパク質」と称する）をコードする発現用ベクターを作製した。作製したベクターをＥｘｐｉ２９３　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　Ｓｙｓｔｅｍ　Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、Ａ１４６３５）又はＥｘｐｉＣＨＯ　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　Ｓｙｓｔｅｍ　Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、Ａ２９１３３）を用いてＥｘｐｉ２９３Ｆ細胞（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、Ａ１４５２７）又はＥｘｐｉＣＨＯ－Ｓ細胞（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、Ａ２９１３３）に導入し、培養を行った。培養上清中に分泌したタンパク質をＭａｂＳｅｌｅｃｔ　ＳｕＲｅ又はＨｉＴｒａｐ　ＭａｂＳｅｌｅｃｔ　ＳｕＲｅ（ＧＥヘルスケア社、１１－００３４－９４）を用いて精製し、ヒトＣＤ１３７－ヒトＦｃ融合タンパク質及びサルＣＤ１３７－ヒトＦｃ融合タンパク質を取得した。
（２）サルＣＤ１３７－Ｈｉｓタグ－３×ＦＬＡＧタグ融合タンパク質の作製
　配列番号４３のアミノ酸番号１から１８３までのアミノ酸配列からなるサルＣＤ１３７細胞外領域、配列番号４４のＨｉｓタグ、及び配列番号４５の３×ＦＬＡＧタグをコードするポリヌクレオチドをｐｃＤＮＡ３．４　ＴＯＰＯベクターにタンデムに挿入してベクターを作製した。作製したベクターを、ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ　ＣＨＯ　Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ　Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、Ａ２９１２９）を用いてＥｘｐｉＣＨＯ－Ｓ細胞に導入し、培養を行った。培養上清中に分泌したタンパク質をＨｉｓＴｒａｐ　ｅｘｃｅｌ（ＧＥヘルスケアバイオサイエンス社、１７－３７１２－０６）を用いて精製した。得られた融合タンパク質を「サルＣＤ１３７－Ｈｉｓタグ－３×ＦＬＡＧタグ融合タンパク質」と称する。
（３）抗ＣＤ１３７抗体産生ハイブリドーマクローンの作製及びスクリーニング
　ベロシミューンマウス、又はＡｌｉｖａＭａｂマウス（Ａｂｌｅｘｉｓ社、米国特許９３４６８７３号）に、ヒトＣＤ１３７－ヒトＦｃ融合タンパク質又はヒトＣＤ１３７－Ｈｉｓタグタンパク質（Ｒ＆Ｄ　ＳＹＳＴＥＭＳ社、９２２０－４Ｂ）と免疫アジュバントを数回投与して免疫を行った。常法に従い、免疫したマウスのリンパ節からリンパ球を回収し、マウスミエローマ細胞ＳＰ２／０と細胞融合することでハイブリドーマを作製した。自動ピッキング装置にてハイブリドーマの単コロニーを単離し、モノクローン化ハイブリドーマ細胞（以下「クローン」と称する）を取得した。各クローンを数日間培養し、培養上清を得た。培養上清に含まれる抗体のＣＤ１３７に対する結合の確認を以下の方法で行った。
　ＣＤ１３７に対する結合は、ＥＬＩＳＡ法にて評価した。評価には、ヒトＣＤ１３７－Ｈｉｓタグタンパク質、ヒトＣＤ１３７－ヒトＦｃ融合タンパク質、サルＣＤ１３７－ヒトＦｃ融合タンパク質又はヒトＦｃタンパク質のいずれかでコーティングしたプレートを用い、二次抗体にはＧｏａｔ　Ａｎｔｉ－Ｍｏｕｓｅ　ＩｇＧ，Ｈｕｍａｎ　ａｄｓ－ＨＲＰ（ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ社、１０３０－０５）を用いた。上記方法によりヒトＣＤ１３７及びサルＣＤ１３７のいずれにも結合するクローンを複数取得した。
（４）抗ＣＤ１３７抗体の取得とアゴニスト活性の確認
　（３）で取得したクローンをＨｙｂｒｉｄｏｍａ－ＳＦＭ（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、１２０４５－０７６）で培養し、培養上清からＭａｂＳｅｌｅｃｔ　ＳｕＲｅを用いて抗ＣＤ１３７抗体を精製した。精製した抗ＣＤ１３７抗体について、ＣＤ１３７への結合及びＣＤ１３７アゴニスト活性の確認を行った。
　抗ＣＤ１３７抗体のＣＤ１３７への結合の確認は、（３）に記載したＥＬＩＳＡ法を用いて行った。抗ＣＤ１３７抗体のＣＤ１３７アゴニスト活性の測定は、４－１ＢＢ　Ｂｉｏａｓｓａｙキット（Ｐｒｏｍｅｇａ社、ＪＡ２３５１）を用いて、以下の方法で行った。ＦｃγＲＩＩｂ　ＣＨＯ－Ｋ１　Ｃｅｌｌｓ（Ｐｒｏｍｅｇａ社、ＪＡ２２５１）を３８４ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ　Ｂｉｏ－Ｏｎｅ社、７８１０８０）に播種し、３７℃、５％　ＣＯ２で終夜培養した。培養上清を除去し、前述の各クローンの精製抗体と４－１ＢＢ　Ｅｆｆｅｃｔｏｒ　Ｃｅｌｌｓ（Ｐｒｏｍｅｇａ社、ＪＡ２３５１）を加えて、３７℃、５％　ＣＯ２で６時間静置した。Ｂｉｏ－Ｇｌｏ　Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ社、ＪＡ２３５１）を加え、ＣＤ１３７アゴニスト活性に応答するルシフェラーゼの発現誘導による化学発光を測定した。ＦｃγＲＩＩｂ　ＣＨＯ－Ｋ１　Ｃｅｌｌｓの非存在下におけるＣＤ１３７アゴニスト活性を評価するために、ＦｃγＲＩＩｂ　ＣＨＯ－Ｋ１　Ｃｅｌｌｓ非含有条件にて上記と同様の実験を行った。
　評価を行った抗ＣＤ１３７抗体のうち、ベロシミューンマウス由来の３－３４、並びにＡｌｉｖａＭａｂマウス由来のＡ２－３２、Ａ２－４８及びＡ２－７３がヒト及びサルＣＤ１３７への強い結合活性を有し、且つＦｃγＲＩＩｂ　ＣＨＯ－Ｋ１　Ｃｅｌｌｓの存在に依存したＣＤ１３７アゴニスト活性を示した。
（５）抗ＣＤ１３７抗体の遺伝子配列の同定
　常法に従い、抗ＣＤ１３７抗体（３－３４、Ａ２－３２、Ａ２－４８、Ａ２－７３）を提供するクローンから細胞溶解液を調製してｃＤＮＡを合成し、抗体塩基配列を同定した。同定した塩基配列の配列番号を表１に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
  
［３－２．抗ＣＬＤＮ４（３Ｄ１１）－抗ＣＤ１３７（３－３４）ｓｃＦｖ二重特異性抗体の作製］
　３Ｄ１１及び３－３４の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の配列に基づき、抗ＣＬＤＮ４（３Ｄ１１）－抗ＣＤ１３７（３－３４）ｓｃＦｖ二重特異性抗体（以下「３Ｄ１１＿３－３４－ｊ６＿Ｓ」とも称する）の設計を行った。作製した３Ｄ１１＿３－３４－ｊ６＿Ｓは、ヒトＩｇＧ１κ型の抗ＣＬＤＮ４（３Ｄ１１）抗体の重鎖カルボキシ末端（「Ｃ末端」とも称する）にＧＳリンカーが連結されており、ＧＳリンカーのＣ末端に抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７（３－３４）ｓｃＦｖ（配列番号２６）のアミノ末端が結合している。さらに、３Ｄ１１のヒトＩｇＧ１定常領域にＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３３１Ｓのアミノ酸変異を導入した。設計した抗体をコードするポリヌクレオチドを作製し、常法に従いｐｃＤＮＡ３．４　ＴＯＰＯベクターに挿入した。前記発現ベクターをＥｘｐｉＣＨＯ－Ｓ細胞に遺伝子導入し、培養上清から３Ｄ１１＿３－３４－ｊ６＿Ｓを精製した。作製した３Ｄ１１＿３－３４－ｊ６＿Ｓは、ｉｎ　ｖｉｔｒｏにて抗ＣＤ１３７結合活性及びＣＤ１３７アゴニスト作用を有することが確かめられ、がん治療薬としての有効性が期待できることが示唆された。
［実施例４：抗ＣＬＤＮ４（ｈＫＭ３９００）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体の作製］
［４－１．ヒト化抗ＣＬＤＮ４（ｈＫＭ３９００）抗体の作製］
　抗ＣＬＤＮ４抗体であるＫＭ３９００は他のクローディンファミリー分子であるＣＬＤＮ６等に比べてＣＬＤＮ４に選択的に結合することが報告されている（特許文献１）。そこで、報告に基づきＫＭ３９００のヒト化抗体の作製を行った。具体的には、ＫＭ３９００の可変領域のヒト化アミノ酸配列に基づき、ヒトＩｇγ１の定常領域及びヒトＩｇκの定常領域の配列からヒト化抗体の設計を行なった。ヒトＩｇγ１定常領域には、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３３１Ｇのアミノ酸変異、又は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３３１Ｓのアミノ酸変異を導入した。常法に従ってヒト化抗ＣＬＤＮ４（ｈＫＭ３９００）抗体を作製し、以後の検討に使用した。Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３３１Ｇのアミノ酸変異を有する抗体を「ｈＫＭ３９００」と、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３３１Ｓのアミノ酸変異を有する抗体を「ｈＫＭ３９００＿Ｓ」と称する。ｈＫＭ３９００の重鎖可変領域のアミノ酸配列を配列番号６に、軽鎖可変領域のアミノ酸配列を配列番号８に記載する。
［４－２．抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体の作製］
　実施例３にて取得した抗ＣＤ１３７抗体（３－３４、Ａ２－３２、Ａ２－４８、Ａ２－７３）から抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを設計し、ｈＫＭ３９００と抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖとの二重特異性抗体の作製を行った（表２）。作製した抗体を総称して「抗ＣＬＤＮ４（ｈＫＭ３９００）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ」と称する。
（１）抗ＣＬＤＮ４（ｈＫＭ３９００）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体をコードするベクターの作製
　抗ＣＬＤＮ４（ｈＫＭ３９００）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体を、ｈＫＭ３９００の配列及び抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の配列に基づき設計した。抗ＣＬＤＮ４（ｈＫＭ３９００）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体は、ＩｇＧ１型の抗ＣＬＤＮ４抗体（ｈＫＭ３９００）の重鎖又は軽鎖Ｃ末端にＧＳリンカーが連結されており、ＧＳリンカーのＣ末端に抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端が結合している。さらに、ｈＫＭ３９００のヒトＩｇＧ１定常領域にＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３３１Ｇ又はＰ３３１Ｓのアミノ酸変異を導入した。設計した抗体の情報を表２に記載する。設計した抗体をコードするポリヌクレオチドを作製し、常法に従いｐｃＤＮＡ３．４　ＴＯＰＯベクターへ挿入した。作製したベクターを総称して、「抗ＣＬＤＮ４（ｈＫＭ３９００）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体発現ベクター」と称する。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
  
（２）抗ＣＬＤＮ４（ｈＫＭ３９００）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体の作製
　抗ＣＬＤＮ４（ｈＫＭ３９００）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体発現ベクターを用いて、表２に記載の１１種の抗ＣＬＤＮ４（ｈＫＭ３９００）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体を作製した。具体的には、ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ　ＣＨＯ　Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ　Ｋｉｔを用いてＥｘｐｉＣＨＯ－Ｓ細胞に抗ＣＬＤＮ４（ｈＫＭ３９００）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体発現ベクターを導入し、抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体を培養上清中に分泌させた。得られた培養上清からＭａｂＳｅｌｅｃｔ　ＳｕＲｅを用いたアフィニティ精製法により抗ＣＬＤＮ４（ｈＫＭ３９００）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体を精製した。更に、一部の抗ＣＬＤＮ４（ｈＫＭ３９００）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体はＨｉＬｏａｄ　２６／６００ ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００ ｐｇ（ＧＥヘルスケア社、２８－９８９３－３６）又はＳｕｐｅｒｄｅｘ　２００　Ｉｎｃｒｅａｓｅ　１０／３００　ＧＬ（ＧＥヘルスケア社、２８－９９０９－４４）を用いたサイズ排除クロマトグラフィー精製法による追加の精製を行った。
　以後、実施例３及び４にて作製した抗ＣＬＤＮ４（３Ｄ１１）－抗ＣＤ１３７（３－３４）ｓｃＦｖ二重特異性抗体及び抗ＣＬＤＮ４（ｈＫＭ３９００）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体を総称して「抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体」と称することもある。
［実施例５：抗ＣＬＤＮ４（ｈＫＭ３９００）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体の結合活性及びアゴニスト活性評価］
　抗ＣＬＤＮ４（ｈＫＭ３９００）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体のＣＬＤＮ４及びＣＤ１３７に対する結合活性、並びにＣＤ１３７アゴニスト活性を評価した。
［５－１．フローサイトメトリー法による抗ＣＬＤＮ４（ｈＫＭ３９００）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体のＣＬＤＮ４に対する結合活性評価］
　抗ＣＬＤＮ４（ｈＫＭ３９００）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体のＣＬＤＮ４への結合活性を、フローサイトメトリー法を用いて評価した。ＣＬＤＮ４（Ｍｙｃ－ＤＤＫ－ｔａｇｇｅｄ）－Ｈｕｍａｎ　ｃｌａｕｄｉｎ　４から調製したＣＬＤＮ４遺伝子をｐＣＭＶ６－ＡＣ－ＧＦＰ　Ｍａｍｍａｌｉａｎ　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　Ｖｅｃｔｏｒ（ＯＲＩＧＥＮＥ社、ＰＳ１０００１０）に挿入し、ヒトＣＬＤＮ４の発現ベクターを作製した。ヒトＣＬＤＮ４の発現ベクターをＣＨＯ－Ｋ１細胞に導入し、ヒトＣＬＤＮ４発現ＣＨＯ－Ｋ１を取得した。
　被験抗体として、ｈＫＭ３９００及び２種類の抗ＣＬＤＮ４（ｈＫＭ３９００）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体（ｈＫＭ３９００＿ｔＡ２－３２ＬＨ及びｈＫＭ３９００＿３－３４－ｊ６）を用いた。被験抗体をＳｔａｉｎ　Ｂｕｆｆｅｒ（ＦＢＳ）（ＢＤ　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、５５４６５６）で最高濃度１００μｇ／ｍＬから５．０８ｎｇ／ｍＬまで公比３倍で段階希釈し、それぞれの被験抗体希釈液でヒトＣＬＤＮ４発現ＣＨＯ－Ｋ１を染色した。二次抗体として、Ａｌｌｏｐｈｙｃｏｃｙａｎｉｎ　（ＡＰＣ）　ＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ　Ｆ（ａｂ’）２　Ｆｒａｇｍｅｎｔ　Ｇｏａｔ　Ａｎｔｉ－Ｈｕｍａｎ　ＩｇＧ，　Ｆｃγ　ｆｒａｇｍｅｎｔ　ｓｐｅｃｉｆｉｃ（Ｊａｃｋｓｏｎ　ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、１０９－１３６－１７０）を用いた。ＦＡＣＳ　Ｃａｎｔｏ　ＩＩ（ＢＤ　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）で蛍光強度を測定した。測定結果をＧｒａｐｈＰａｄ　Ｐｒｉｓｍを用いて解析し、ヒトＣＬＤＮ４と抗ＣＬＤＮ４（ｈＫＭ３９００）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体の見かけの解離定数（ＫＤ）を算出した。表３に見かけのＫＤの値を示す。
　２種類の抗ＣＬＤＮ４（ｈＫＭ３９００）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体は、ヒト化抗ＣＬＤＮ４（ｈＫＭ３９００）抗体と同様のヒトＣＬＤＮ４への結合活性を示した。他の抗ＣＬＤＮ４（ｈＫＭ３９００）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体も同等のＣＬＤＮ４結合活性を示すと考えられる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
  
［５－２．ＥＬＩＳＡ法による抗ＣＬＤＮ４（ｈＫＭ３９００）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体のＣＤ１３７に対する結合活性評価］
　抗ＣＬＤＮ４（ｈＫＭ３９００）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体のＣＤ１３７への結合活性を、ＥＬＩＳＡ法を用いて検出した。ＥＬＩＳＡは、常法に従い行った。２０ｎｇ／２０μＬ／ｗｅｌｌのヒトＣＤ１３７－Ｈｉｓタグタンパク質（Ｒ＆Ｄ　ＳＹＳＴＥＭＳ、９２２０－４Ｂ）を３８４ウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、４６４７１８）に固相化した。被験抗体として表２に記載の１１種の抗ＣＬＤＮ４（ｈＫＭ３９００）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体及びｃｔｒｌ　ＩｇＧ＿Ｌ－３－３４－ｊ６抗体を用いた。ｃｔｒｌ　ＩｇＧ＿Ｌ－３－３４－ｊ６抗体はアイソタイプコントロール抗体の軽鎖カルボキシ末端に抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ（３－３４－ｊ６）抗体を連結した抗体である。被験抗体を５％ブロッキングワン（ナカライテスク社、０３９５３－９５）含有ＴＢＳ－Ｔ（ニッポンジーン社、３１０－０７３７５）で段階希釈し、２０μＬ／ｗｅｌｌ添加した。抗体の終濃度は図１－１～１－４に示す通りである。二次抗体にはＧｏａｔ　Ａｎｔｉ－Ｈｕｍａｎ　ＩｇＧ　Ｆｃ，　Ｍｕｌｔｉ－Ｓｐｅｃｉｅｓ　ＳＰ　ａｄｓ－ＨＲＰ（ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ社、２０１４－０５）を用いた。コントロール抗体にはｈＫＭ３９００を用いた。Ｉｎｆｉｎｉｔｅ　Ｍ２００ＰＲＯ（ＴＥＣＡＮ社）を用いて４５０ｎｍと５７０ｎｍの吸光度を測定した。結果を図１－１～１－４に示す。抗ＣＬＤＮ４（ｈＫＭ３９００）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体はいずれも濃度依存的にヒトＣＤ１３７－Ｈｉｓタグタンパク質に結合した。この結果より、抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖの連結位置はヒトＣＤ１３７への結合活性に影響を及ぼさないことが明らかとなった。
［５－３．表面プラズモン共鳴法による抗ＣＬＤＮ４（ｈＫＭ３９００）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体のＣＤ１３７に対する結合活性評価］
　抗ＣＬＤＮ４（ｈＫＭ３９００）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体のＣＤ１３７への結合活性を、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）法を用いて検出した。ＳＰＲ解析には、Ｂｉａｃｏｒｅ　Ｔ２００（ＧＥヘルスケアジャパン社）を用いた。リガンドとして２種の抗ＣＬＤＮ４（ｈＫＭ３９００）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体（ｈＫＭ３９００－３－３４－ｊ６、ｈＫＭ３９００＿ｔＡ２－３２ＬＨ）をＳｅｒｉｅｓ　Ｓ　Ｓｅｎｓｏｒ　Ｃｈｉｐ　ＰｒｏｔｅｉｎＡ（ＧＥヘルスケア社、２９－１２７５－５６）に固定したものを使用した。アナライトとしてヒトＣＤ１３７－Ｈｉｓタグ又は３－１（２）で作製したサルＣＤ１３７－Ｈｉｓタグ－３×ＦＬＡＧタグ融合タンパク質をＨＢＳ－ＥＰ＋を用いて最高濃度２００ｎＭから０．０９７７ｎＭまで公比２倍で段階希釈したものを用いた。アナライトをリガンドが結合している流路に５０μＬ／分にて２分間添加した後、ＨＢＳ－ＥＰ＋を５０μＬ／分にて１０分間添加することにより、抗ＣＬＤＮ４（ｈＫＭ３９００）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体のＣＤ１３７への結合と解離を測定した。この実験により得られた結果を用いてヒトＣＤ１３７と抗ＣＬＤＮ４（ｈＫＭ３９００）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体との結合速度定数（ｋａ）、解離速度定数（ｋｄ）、及び解離定数（ＫＤ）を、データ解析ソフトウェア（ＢＩＡ　Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ）を用いて計算した。表４にｋａ、ｋｄ及びＫＤの値を示す。
　この結果、抗ＣＬＤＮ４（ｈＫＭ３９００）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体はヒトＣＤ１３７及びサルＣＤ１３７抗体のいずれにも同等の結合活性を示すことが明らかとなった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
  
［５－４．抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体のＣＬＤＮ４発現がん細胞の共存下でのＣＤ１３７アゴニスト活性の評価］
　抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体のＣＬＤＮ４発現がん細胞を介した特異的なＣＤ１３７アゴニスト活性を４－１ＢＢ　Ｂｉｏａｓｓａｙキットを用いて評価した。
　１０％ＦＢＳ（Ｃｙｔｉｖａ社、ＳＨ３００７０．０３）含有ＲＰＭＩ－１６４０培地（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、１１８７５－０９３）にＮＣＩ－Ｈ３２２細胞（ＥＣＡＣＣ、９５１１１７３４）を懸濁し、懸濁液を調製した。ＮＣＩ－Ｈ３２２はＣＬＤＮ４を発現している。３８４ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ　Ｂｉｏ－Ｏｎｅ社、７８１０８０）にＮＣＩ－Ｈ３２２の懸濁液を１×１０４個／ｗｅｌｌとなるように添加し、３７℃、５％　ＣＯ２で終夜培養した。翌日、培地を除去した。１％ＦＢＳ含有ＲＰＭＩ－１６４０培地で希釈した被験抗体を１２．５μＬ／ｗｅｌｌずつ添加した。抗体の終濃度は図２－１～図２－３に示す通り。被験抗体には、３Ｄ１１＿３－３４－ｊ６＿Ｓ、表２に記載の抗ＣＬＤＮ４（ｈＫＭ３９００）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体を用いた。コントロール抗体として、ｈＫＭ３９００、ｃｔｒｌ　ＩｇＧ＿Ｌ－３－３４－ｊ６抗体及びウレルマブ（ＢＭＳ、国際公開番号２００５／０３５５８４号に記載される配列番号３及び配列番号６）を用いた。
　４－１ＢＢ　Ｂｉｏａｓｓａｙキットに付属されている４－１ＢＢ　Ｅｆｆｅｃｔｏｒ　Ｃｅｌｌｓのバイアル１本につき７ｍＬの１％ＦＢＳ含有ＲＰＭＩ－１６４０に懸濁し、各ウェルに１２．５μＬずつ加えて、３７℃、５％　ＣＯ２で６時間静置した。プレートにＢｉｏ－Ｇｌｏ　Ｒｅａｇｅｎｔを２５μＬ／ｗｅｌｌ加え、ＥｎＶｉｓｉｏｎ　２１０３（Ｐｅｒｋｉｎ　Ｅｌｍｅｒ社）を用いて化学発光を測定した。結果を図２－１～図２－３に示す。抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体は、ＣＬＤＮ４発現がん細胞の共存下にて４－１ＢＢ　Ｅｆｆｅｃｔｏｒ　Ｃｅｌｌｓに対する顕著なＣＤ１３７アゴニスト活性を示した。
　ＣＬＤＮ４発現がん細胞の非存在下におけるＣＤ１３７アゴニスト活性を評価するために、ＮＣＩ－Ｈ３２２非存在条件にて上記と同様の実験を行った。結果、ＣＬＤＮ４発現がん細胞の非存在下ではＣＤ１３７アゴニスト活性を示さなかった（図２－４～図２－６）。この結果より、抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体はＣＬＤＮ４発現がん細胞が共存する場合にのみＣＤ１３７アゴニスト作用を発揮することが示された。
　一方、ウレルマブはＣＬＤＮ４発現がん細胞の共存下でＣＤ１３７アゴニスト活性を示したものの、その作用は抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体に比べると弱かった。また、ウレルマブはＣＬＤＮ４発現がん細胞の非存在下でもＣＤ１３７アゴニスト活性を示した。
　これらの結果より、抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体はウレルマブより毒性の懸念が低く、ＣＬＤＮ４が高発現している腫瘍組織で特異的かつ強力なＣＤ１３７アゴニスト作用を示すと期待できる。
［実施例６：抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体のｉｎ　ｖｉｔｒｏ薬効評価］
　抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体のインターフェロン－γ産生促進機能及びがん細胞傷害活性の評価を実施した。
［６－１．Ｅｘｐａｎｄｅｄ　ＰａｎＴ細胞の作製及び凍結保存］
（１）Ｅｘｐａｎｄｅｄ　ＰａｎＴ細胞の調製
　実施例６において、ＲＰＭＩ－１６４０（Ｓｉｇｍａ社、Ｒ８７５８）に終濃度１０％のＦＢＳ（Ｃｙｔｉｖａ社、ＳＨ３００８４．０３）と、終濃度１％のペニシリンストレプトマイシン（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、１５０７０－０６３）を加えたものを「培養培地」と称する。培養培地にはそれぞれ終濃度１％でＭＥＭ　Ｎｏｎ－ｅｓｓｅｎｔｉａｌ　Ａｍｉｎｏ　Ａｃｉｄ（Ｍｅｒｃｋ社、Ｍ７１４５）、Ｓｏｄｉｕｍ　ｐｙｒｕｖａｔｅ（Ｍｅｒｃｋ社、Ｓ８６３６）、ＧｌｕｔａＭＡＸ　Ｉ（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、３５０５０－０６１）、ＨＥＰＥＳ（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、１５６３０－０８０）を加える場合もある。終濃度１－３μｇ／ｍＬとなるように希釈した抗ＣＤ３抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ社、３１７３２５）をディッシュに添加し、抗ＣＤ３抗体を固相化した。ＰａｎＴ　Ｃｅｌｌ　Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　Ｋｉｔ，ｈｕｍａｎ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ　Ｂｉｏｔｅｃ社、１３０－０９６－５３５）を用い、メーカー推奨プロトコルに従ってヒト末梢血単核細胞（ｈｕｍａｎ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｂｌｏｏｄ　ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ　ｃｅｌｌｓ）（ＬＯＮＺＡ社、ＣＣ－２７０２）からＰａｎＴ細胞（ＣＤ４Ｔ細胞及びＣＤ８Ｔ細胞の両方を含む、以下「ＰａｎＴ細胞」と称す）を単離した。単離したＰａｎＴ細胞を遠心分離し、上清を取り除いた後に培養培地に懸濁した。前述の抗ＣＤ３抗体を固相化したディッシュに、培養培地に懸濁したＰａｎＴ細胞を全量播種した。更に終濃度１００－２００Ｕ／ｍＬのヒトＩＬ－２（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ社、２００－２）及び終濃度１－４μｇ／ｍＬの抗ＣＤ２８抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ社、３０２９２３）を添加し、３７℃、５％　ＣＯ２インキュベーターにて培養を行った。３日後に細胞を回収し、回収した細胞を培養培地に懸濁してディッシュに播種した。更に終濃度１００－２００Ｕ／ｍＬのヒトＩＬ－２を添加し、３７℃、５％　ＣＯ２インキュベーターにて培養を行った。４日後、細胞を全量回収して遠心分離し、上清を取り除いた後にセルバンカー（Ｔａｋａｒａ社、ＣＢ０１１）又はバンバンカー（ＧＳリンフォテック社、ＣＳ－０２－００１）に再懸濁し、チューブに分取して－８０℃で凍結保存した。ここで凍結保存した細胞を、本明細書において「Ｅｘｐａｎｄｅｄ　ＰａｎＴ細胞」と称する。
［６－２．６０Ａｓ６－Ｌｕｃ／ＧＦＰ発現細胞の作製］
　Ｌｕｃ／ＧＦＰを含むレンチウイルス溶液の調製は、Ｌ２９３Ｔ細胞（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、Ｋ４９７５－００）を用いて、常法に従って実施した。Ｌ２９３Ｔ細胞へのｐＣＤＨ－ＣＭＶ－ＧＬ３－ＥＦ１ａ－ＧＦＰ－Ｔ２Ａ－ｐｕｒｏ改変ベクター（広島大学　医系科学研究科　細胞分子生物学研究室　高橋陵宇准教授より寄贈（ＰＬｏＳ　Ｏｎｅ、 ２０１５、Ｖｏｌ．１０、ｅ０１２３４０７））の導入には、Ｏｐｔｉ－ＭＥＭ　Ｒｅｄｕｃｅｄ　Ｓｅｒｕｍ　Ｍｅｄｉｕｍ，ＧｌｕｔａＭＡＸ　Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、５１９８５－０３４）、ＭＩＳＳＩＯＮ（登録商標）Ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ　Ｐａｃｋａｇｉｎｇ　Ｍｉｘ（ＳＩＧＭＡ社、ＳＨＰ００１）、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎ　ＬＴＸ（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、１５３３８１００）を使用した。Ｌ２９３Ｔ細胞にて増殖したＧＦＰ発現レンチウイルスの回収には、４５μｍ　Ｍｉｌｌｅｘ（登録商標）－ＨＶフィルター（Ｍｅｒｃｋ　Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社、ＳＬＨＶ０３３ＲＳ）を使用した。ウイルス溶液はクライオバイアル（Ｎａｌｇｅｎｅ社、５０００－００２０）に１ｍＬずつ分注し、－８０℃で凍結保存した。
　常法に従い、６０Ａｓ６－Ｌｕｃ／ＧＦＰ発現レンチウイルスをＣＬＤＮ４発現がん細胞株である６０Ａｓ６細胞（バイオマテリアル研究所柳原 五吉 先生より譲受）に感染させ、６０Ａｓ６－Ｌｕｃ／ＧＦＰ発現細胞を作製した。感染効率を上げるためにＰｏｌｙｂｒｅｎｅ（ＳａｎｔａＣｒｕｚ社、ｓｃ－１３４２２０）を用いた。培地として、１０％ＦＢＳ、２μｇ／ｍＬ　Ｐｕｒｏｍａｙｃｉｎ（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、Ａ－１１１３８－０２）含むＲＰＭＩ－１６４０を使用した。本明細書において、樹立した細胞を、「６０Ａｓ６－Ｌｕｃ／ＧＦＰ細胞」と称する。６０Ａｓ６－Ｌｕｃ／ＧＦＰ細胞は内因性にＣＬＤＮ４が高発現していることをフローサイトメトリー法により確認した。構築した細胞は後の実験で使用した。
［６－３．抗ＣＬＤＮ４（３Ｄ１１）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体のがん細胞とＴ細胞の共培養系におけるインターフェロン－γ産生促進機能評価］
　６０Ａｓ６－Ｌｕｃ／ＧＦＰ細胞とＥｘｐａｎｄｅｄ　ＰａｎＴ細胞の共培養系における抗ＣＬＤＮ４（３Ｄ１１）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体のインターフェロン-γ産生促進機能を評価した。０．１μｇ／１００μＬ／ｗｅｌｌの抗ＣＤ３抗体を平底９６ウェルプレート（ＩＷＡＫＩ社、３８６０－０９６）に添加して抗ＣＤ３抗体をプレートに固相化した。プレートに６０Ａｓ６－Ｌｕｃ／ＧＦＰ細胞を５×１０４個／５０μＬ／ｗｅｌｌとなるように播種し、３７℃、５％　ＣＯ２インキュベーターにて培養した。翌日、前記プレートに、２×１０５個／３０μＬ／ｗｅｌｌのＥｘｐａｎｄｅｄ　ＰａｎＴ細胞を播種した。被験抗体及びアイソタイプコントロールを培養培地で最高濃度５００００ｎｇ／ｍＬから５倍公比で段階希釈し、２０μＬずつ添加した。被験抗体としてウレルマブ及び抗ＣＬＤＮ４（３Ｄ１１）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体（３Ｄ１１＿３－３４－ｊ６＿Ｓ）を、アイソタイプコントロールとしてＩｇＧ（リゾチーム）－ｓｃＦｖ（ＣＤ１３７）（社内調製）を用いた。６日後、ＡｌｐｈａＬＩＳＡインターフェロン－γ測定キット（Ｐｅｒｋｉｎ　Ｅｌｍｅｒ社、ＡＬ２１７Ｃ）を用いてメーカー推奨プロトコルに従い上清中のインターフェロン－γ産生量を測定した。図３－１にインターフェロン－γ産生量と抗体濃度の反応曲線を示す。抗ＣＬＤＮ４（３Ｄ１１）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体はＣＬＤＮ４発現がん細胞株である６０Ａｓ６－Ｌｕｃ／ＧＦＰ細胞とＥｘｐａｎｄｅｄ　ＰａｎＴ細胞の共培養系においてインターフェロン－γ産生促進作用を示した。抗ＣＬＤＮ４（３Ｄ１１）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体のインターフェロン－γ産生促進機能はウレルマブより顕著に強かった。
［６－４．抗ＣＬＤＮ４（ｈＫＭ３９００）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体のがん細胞とＴ細胞の共培養系におけるインターフェロン－γ産生促進機能評価］
　６０Ａｓ６－Ｌｕｃ／ＧＦＰ細胞とＥｘｐａｎｄｅｄ　ＰａｎＴ細胞の共培養系における抗ＣＬＤＮ４（ｈＫＭ３９００）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体のインターフェロン-γ産生促進機能を６－３と同様の方法で評価した。抗ＣＤ３抗体は０．０３μｇ／１００μＬ／ｗｅｌｌとなるよう９６ウェルプレートに固相化した。６０Ａｓ６－Ｌｕｃ／ＧＦＰ細胞を２×１０４個／５０μＬ／ｗｅｌｌで播種した。またＥｘｐａｎｄｅｄ　ＰａｎＴ細胞は８×１０４個／３０μＬ／ｗｅｌｌで播種した。被験抗体として、最高濃度５０００ｎｇ／ｍＬから２倍公比で段階希釈したウレルマブ又は抗ＣＬＤＮ４（ｈＫＭ３９００）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体（ｈＫＭ３９００＿３－３４－ｊ６又はｈＫＭ３９００＿ｔＡ２－３２ＬＨ）を使用した。被験抗体及びアイソタイプコントロール（リゾチーム抗体）をそれぞれ２０μＬずつ添加した。４日後に上清中のインターフェロン－γ産生量を測定した。図３－２にインターフェロン－γ産生量と抗体濃度の反応曲線を示す。抗ＣＬＤＮ４（ｈＫＭ３９００）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体は６０Ａｓ６－Ｌｕｃ／ＧＦＰ細胞とＥｘｐａｎｄｅｄ　ＰａｎＴ細胞の共培養系においてインターフェロン－γ産生促進機能を示した。これらの二重特異性抗体のインターフェロン－γ産生促進機能はウレルマブより顕著に強かった。
［６－５．抗ＣＬＤＮ４（３Ｄ１１）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体のＴ細胞の単培養系におけるインターフェロン－γ産生促進機能評価］
　Ｅｘｐａｎｄｅｄ　ＰａｎＴ細胞の単培養系における抗ＣＬＤＮ４（３Ｄ１１）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体のインターフェロン-γ産生促進機能を評価した。平底９６ウェルプレートに抗ＣＤ３抗体を０．１μｇ／１００μＬ／ｗｅｌｌで添加して抗ＣＤ３抗体をプレートに固相化した。固相化したプレートに２×１０５個／８０μＬ／ｗｅｌｌのＥｘｐａｎｄｅｄ　ＰａｎＴ細胞を播種した。被験抗体として、ウレルマブ、抗ＣＬＤＮ４（３Ｄ１１）－抗ＣＤ３ｓｃＦｖ二重特異性抗体（３Ｄ１１＿３－３４－ｊ６＿Ｓ）を、アイソタイプコントロールとしてＩｇＧ（リゾチーム）－ｓｃＦｖ（ＣＤ１３７）（社内調製）を用いた。被験抗体及びアイソタイプコントロールを培養培地で最高濃度５００００ｎｇ／ｍＬから５倍公比で段階希釈し、２０μＬずつ添加した。６日後、ＡｌｐｈａＬＩＳＡインターフェロン－γ測定キットを用い、６－３．と同様の方法で上清中のインターフェロン－γ産生量を測定した。図３－３にインターフェロン－γ産生量と抗体濃度の反応曲線を示す。抗ＣＬＤＮ４（３Ｄ１１）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体は、Ｔ細胞の単培養系においてはインターフェロン－γ産生促進機能を示さなかったが、ウレルマブはインターフェロン－γ産生促進作用を示した。本結果は、ＣＬＤＮ４発現がん細胞株が存在しない環境では抗ＣＬＤＮ４（３Ｄ１１）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体はＴ細胞活性増強作用を示さないことを意味する。
［６－６．抗ＣＬＤＮ４（ｈＫＭ３９００）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体のＴ細胞の単培養系におけるインターフェロン－γ産生促進機能評価］
　Ｅｘｐａｎｄｅｄ　ＰａｎＴ細胞の単培養系における抗ＣＬＤＮ４（ｈＫＭ３９００）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体のインターフェロン-γ産生促進機能を６－５と同様の方法にて評価した。抗ＣＤ３抗体は０．０３μｇ／１００μＬ／ｗｅｌｌとなるよう９６ウェルプレートに固相化した。Ｅｘｐａｎｄｅｄ　ＰａｎＴ細胞を８×１０４個／８０μＬ／ｗｅｌｌ播種した。被験抗体としてウレルマブ、抗ＣＬＤＮ４（ｈＫＭ３９００）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体（ｈＫＭ３９００＿３－３４－ｊ６、ｈＫＭ３９００＿ｔＡ２－３２ＬＨ）を用いた。被験抗体及びアイソタイプコントロール（リゾチーム抗体）は最高濃度５０００ｎｇ／ｍＬから２倍公比で段階希釈し、２０μＬずつ添加した。図３－４にインターフェロン－γ産生と抗体濃度の反応曲線を示す。抗ＣＬＤＮ４（ｈＫＭ３９００）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体は、Ｔ細胞の単培養系においてはインターフェロン－γ産生促進機能を示さなかったが、ウレルマブはインターフェロン－γ産生促進機能を示した。
　６－５及び６－６の結果より、ＣＬＤＮ４発現がん細胞株が存在しない環境では抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体はＴ細胞活性増強作用を示さないことを意味し、抗ＣＤ１３７抗体の副作用として報告されている全身的な免疫賦活化作用が低減される可能性を示唆する。
［６－７．抗ＣＬＤＮ４（３Ｄ１１）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体のがん細胞とＴ細胞の共培養系におけるがん細胞傷害活性評価］
　６０Ａｓ６－Ｌｕｃ／ＧＦＰ細胞とＥｘｐａｎｄｅｄ　ＰａｎＴ細胞の共培養系にて抗ＣＬＤＮ４（３Ｄ１１）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体のがん細胞傷害活性（がん細胞の増殖抑制作用）を評価した。６０Ａｓ６－Ｌｕｃ／ＧＦＰ細胞を平底９６ウェルプレートに１×１０４個／５０μＬ／ｗｅｌｌずつ播種し、３７℃、５％　ＣＯ２インキュベーターにて培養した。２時間後、前記９６ウェルプレートにＥｘｐａｎｄｅｄ　ｐａｎＴ細胞を１×１０5個／５０μＬ／ｗｅｌｌずつ播種した。被験抗体として、ウレルマブ及び抗ＣＬＤＮ４（３Ｄ１１）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体を用いた。これらの抗体を培養培地で最高濃度４００００ｎｇ／ｍＬから１０倍公比で段階希釈し、５０μＬずつ添加した。さらに、４０ｎｇ／ｍＬの抗ＣＤ３抗体を５０μＬずつ添加し、３７℃、５％　ＣＯ２インキュベーター内のＩｎｃｕＣｙｔｅ（登録商標）ＺＯＯＭ（ザルトリウス社）を用いて、各ウェルの蛍光（ＧＦＰ）面積の測定を開始した。測定開始０時間から増加した蛍光面積を細胞増殖の指標とした。図４に被験抗体のがん細胞傷害作用（がん細胞増殖率）を示す。図４の縦軸は、０時間から１６８時間に増加した蛍光面積において被験抗体非添加ウェルを１００％とした時の相対値を示す。図４に示す通り、抗ＣＬＤＮ４（３Ｄ１１）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体は６０Ａｓ６－Ｌｕｃ／ＧＦＰ細胞とＥｘｐａｎｄｅｄ　ＰａｎＴ細胞の共培養系において細胞傷害作用を示した。本二重特異性抗体の細胞傷害活性はウレルマブより顕著に強かった。
［６－８．抗ＣＬＤＮ４（ｈＫＭ３９００）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体のがん細胞とＴ細胞の共培養系におけるがん細胞傷害活性評価］
　抗ＣＬＤＮ４（ｈＫＭ３９００）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体のがん細胞殺傷作用を６０Ａｓ６－Ｌｕｃ／ＧＦＰ細胞とＥｘｐａｎｄｅｄ　ＰａｎＴ細胞の共培養系にて評価した。抗ＣＤ３抗体を平底９６ウェルプレート（Ｐｅｒｋｉｎ　Ｅｌｍｅｒ社、６００５６８０）に１ｎｇ／１００μＬ／ｗｅｌｌずつ添加し、プレートに固定化した。プレートをＰＢＳ（－）で２度洗浄した後に、２×１０４個／５０μＬ／ｗｅｌｌの６０Ａｓ６－Ｌｕｃ／ＧＦＰ細胞を播種し、３７℃、５％　ＣＯ２インキュベーターにて培養した。翌日、９６ウェルプレートに、４．０×１０４個／３０μＬ／ｗｅｌｌのＥｘｐａｎｄｅｄ　ＰａｎＴ細胞を播種した。さらに、５０００ｎｇ／ｍＬから０．８４４ｎｇ／ｍＬの濃度の被験抗体及びアイソタイプコントロールを２０μＬずつ添加した。被験抗体には、ウレルマブ及び抗ＣＬＤＮ４（ｈＫＭ３９００）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体（ｈＫＭ３９００＿３－３４－ｊ６、ｈＫＭ３９００＿ｔＡ２－３２ＬＨ）を使用した。６日後に測定を行った。一部のウェルについて、細胞を殺傷するために、測定３０分前に１％Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ１００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社、Ｔ－９２８４）を１１μＬずつ添加した。ＯＮＥ－Ｇｌｏルシフェラーゼ測定キット（Ｐｒｏｍｅｇａ社、Ｅ６１２０）を用いてメーカー推奨プロトコルに従い、各ウェルの６０Ａｓ６－Ｌｕｃ／ＧＦＰ細胞のルシフェラーゼ活性をＡＲＶＯ　Ｘ－３（Ｐｅｒｋｉｎ　Ｅｌｍｅｒ社）を用いて測定した。がん殺傷率は、抗体非添加ウェルのルシフェラーゼ化学発光の平均値を０％、Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ１００を添加したウェルの平均値を１００％としたときの相対値で示す。アイソタイプコントロールとして抗リゾチーム抗体（社内調製）を用いた。図５に６０Ａｓ６－Ｌｕｃ／ＧＦＰ細胞の細胞殺傷率曲線を示す。６０Ａｓ６－Ｌｕｃ／ＧＦＰ細胞とＥｘｐａｎｄｅｄ　ＰａｎＴ細胞の共培養系において抗ＣＬＤＮ４（ｈＫＭ３９００）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体の添加により６０Ａｓ６－Ｌｕｃ／ＧＦＰ細胞殺傷率が顕著に増加した。一方で、抗ＣＤ１３７特異性抗体であるウレルマブによる６０Ａｓ６－Ｌｕｃ／ＧＦＰ細胞株に対する細胞殺傷率の増加はみられなかった。
［実施例７：抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体のｉｎ　ｖｉｖｏ評価］
［７－１．抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体のｉｎ　ｖｉｖｏ抗腫瘍効果］
　ＮＣＩ－Ｈ３２２細胞をＰＢＳ（－）（ＷＡＫＯ社、０４５－２９７９５）に懸濁し、５．０×１０６細胞/１００μＬの細胞懸濁液を７週齡の雌性マウス（ＮＯＧ、インビボサイエンス社）の皮下に植え付けた。植え付け６日後、３．４×１０６細胞/２００μＬのヒト末梢血単核細胞（Ｌｏｎｚａ、ＣＣ－２７０２）を尾静脈から注入した。ヒト末梢血単核細胞移植１５日後に群分けを行い被験抗体の投与を開始した。一群は１０匹ずつとし、各群間の腫瘍体積がほぼ同等となるようにマウスを分配した（ｄａｙ０）。被験抗体としてｈＫＭ３９００＿ｔＡ２－３２ＬＨを用いた。被験抗体及びアイソタイプコントロール（抗リゾチーム抗体）はＰＢＳに混合して静脈内に投与した。投与はｄａｙ０、４及び８に行い、投与時に腫瘍径及び体重を測定した。腫瘍体積の算出には以下の式を用いた。
[腫瘍体積（ｍｍ３）] = [腫瘍の長径（ｍｍ）] x [腫瘍の短径（ｍｍ）]２ × ０．５
図６に示す通り、ｈＫＭ３９００＿ｔＡ２－３２ＬＨを０．１、１又は１０ｍｇ／ｋｇ投与した群においては、有意な腫瘍体積縮小作用が示された。縦軸は腫瘍体積を、横軸は初回投与後日数を示す。実線及び破線は各群の腫瘍体積の平均値の推移を、エラーバーは平均値の標準誤差を示す。有意確率Ｐ値（＊：Ｐ＜０．０５、＊＊：Ｐ＜０．０１）は、ダネットの多重比較検定により、アイソタイプコントロール投与群とｈＫＭ３９００＿ｔＡ２－３２ＬＨ投与群の１２日目の腫瘍体積を比較することにより算出した。ｈＫＭ３９００＿ｔＡ２－３２ＬＨ０．１ｍｇ/ｋｇ投与群の１２日目の例数は９であった。
［７－２．抗ＣＬＤＮ４（ｈＫＭ３９００）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体のカニクイザルにおける安全性試験］
　抗ＣＬＤＮ４（ｈＫＭ３９００）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体（ｈＫＭ３９００＿３－３４－ｊ６及びｈＫＭ３９００＿ｔＡ２－３２ＬＨ）の安全性を検討するため、カニクイザルの静脈内に抗ＣＬＤＮ４（ｈＫＭ３９００）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体を単回投与した。結果、抗ＣＬＤＮ４（ｈＫＭ３９００）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体を投与したサルにおいて、血清中のＩＬ－６、ＴＮＦ－α等のサイトカイン濃度に特段の異常は確認されなかった。したがって、抗ＣＬＤＮ４（ｈＫＭ３９００）－抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ二重特異性抗体は、安全性の観点において、がんの治療に用いる抗体として適格であるとの判断を行った。
［実施例８：抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体によるがんの治療］
［８－１．ＣＬＤＮ４の発現量の確認］
　ＣＬＤＮ４のがん治療標的としての汎用性を調べるために、Ｔｈｅ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｇｅｎｏｍｅ　Ａｔｌａｓ（ＴＣＧＡ）にて、がん組織におけるＣＬＤＮ４のＲＮＡの発現量を調査した。結果、大腸がん、膀胱がん、肺がん等のがん組織でＣＬＤＮ４の発現が亢進していることが確認された。これにより、ＣＬＤＮ４は腹膜播種がんのみならず他のがん種においても治療標的となる可能性が示唆された。さらにＴｈｅ　Ｇｅｎｏｔｙｐｅ－Ｔｉｓｓｕｅ　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ（ＧＴＥｘ）にて、正常組織におけるＣＬＤＮ４のＲＮＡの発現量の調査を行った。結果、いくつかの正常組織においてＣＬＤＮ４が発現していることが認められた。しかしながら、正常組織においてはがん組織よりもＣＬＤＮ４の発現量が低かった。よって、ＣＬＤＮ４を治療標的とするがん治療薬は、広い安全域を確保することができ、副作用の懸念が低い治療薬となる可能性があることが示唆された。
　本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、がんの治療に有用であると期待される。また、本発明のポリヌクレオチド、発現ベクター、形質転換された宿主細胞、及び抗体を生産する方法は、前記抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体を産生するために有用である。
　以下の配列表の数字見出し＜２２３＞には、「Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ　Ｓｅｑｕｅｎｃｅ」の説明を記載する。具体的には、配列表の配列番号１は３Ｄ１１の重鎖可変領域の塩基配列であり、配列番号２は３Ｄ１１の重鎖可変領域のアミノ酸配列である。配列番号３は３Ｄ１１の軽鎖可変領域の塩基配列であり、配列番号４は３Ｄ１１の軽鎖可変領域のアミノ酸配列である。配列番号５は、ｈＫＭ３９００の重鎖可変領域の塩基配列であり、配列番号６は、ｈＫＭ３９００の重鎖可変領域のアミノ酸配列である。配列番号７はｈＫＭ３９００の軽鎖可変領域の塩基配列であり、配列番号８はｈＫＭ３９００の軽鎖可変領域のアミノ酸配列である。配列番号９は３－３４の重鎖可変領域の塩基配列であり、配列番号１０は３－３４の重鎖可変領域のアミノ酸配列である。配列番号１１は３－３４の軽鎖可変領域の塩基配列であり、配列番号１２は３－３４の軽鎖可変領域のアミノ酸配列である。配列番号１３はＡ２－３２の重鎖可変領域の塩基配列であり、配列番号１４はＡ２－３２の重鎖可変領域のアミノ酸配列である。配列番号１５はＡ２－３２の軽鎖可変領域の塩基配列であり、配列番号１６はＡ２－３２の軽鎖可変領域のアミノ酸配列である。配列番号１７はＡ２－４８の重鎖可変領域の塩基配列であり、配列番号１８はＡ２－４８の重鎖可変領域のアミノ酸配列である。配列番号１９はＡ２－４８の軽鎖可変領域の塩基配列であり、配列番号２０はＡ２－４８の軽鎖可変領域のアミノ酸配列である。配列番号２１はＡ２－７３の重鎖可変領域の塩基配列であり、配列番号２２はＡ２－７３の重鎖可変領域のアミノ酸配列である。配列番号２３はＡ２－７３の軽鎖可変領域の塩基配列であり、配列番号２４はＡ２－７３の軽鎖可変領域のアミノ酸配列である。配列番号２５は３－３４－ｊ６　ｓｃＦｖの塩基配列であり、配列番号２６は３－３４－ｊ６　ｓｃＦｖのアミノ酸配列である。配列番号２７はｔＡ２－３２　ｓｃＦｖの塩基配列であり、配列番号２８はｔＡ２－３２　ｓｃＦｖのアミノ酸配列である。配列番号２９はｔＡ２－３２ＬＨ　ｓｃＦｖの塩基配列であり、配列番号３０はｔＡ２－３２ＬＨ　ｓｃＦｖのアミノ酸配列である。配列番号３１はｔＡ２－４８　ｓｃＦｖの塩基配列であり、配列番号３２はｔＡ２－４８　ｓｃＦｖのアミノ酸配列である。配列番号３３はｔＡ２－７３　ｓｃＦｖの塩基配列であり、配列番号３４はｔＡ２－７３　ｓｃＦｖのアミノ酸配列である。配列番号３５はｈＫＭ３９００＿３－３４－ｊ６の重鎖の塩基配列であり、配列番号３６はｈＫＭ３９００＿３－３４－ｊ６の重鎖のアミノ酸配列である。配列番号３７はｈＫＭ３９００＿ｔＡ２－３２ＬＨの重鎖の塩基配列であり、配列番号３８はｈＫＭ３９００＿ｔＡ２－３２ＬＨの重鎖のアミノ酸配列である。配列番号３９はｈＫＭ３９００の軽鎖の塩基配列であり、配列番号４０はｈＫＭ３９００の軽鎖のアミノ酸配列である。配列番号４１は抗ＣＤ３　ｓｃＦｖ－ヒトＦｃ融合タンパク質のアミノ酸配列である。配列番号４２はヒトＣＤ１３７のアミノ酸配列である。配列番号４３はサルＣＤ１３７のアミノ酸配列である。配列番号４４はＨｉｓタグタンパク質のアミノ酸配列である。配列番号４５は３×ＦＬＡＧタグのアミノ酸配列である。配列番号４６～５４はＧＳリンカーのアミノ酸配列である。配列番号５５はＧＫＰＧＳリンカーのアミノ酸配列である。

Claims (31)

  1. 　抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域、並びに抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体であって、抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域が以下の（ａ）又は（ｂ）のいずれかである、二重特異性抗体：
    （ａ）配列番号２のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸番号５０から６６までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２のアミノ酸番号９９から１１４までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号４のアミノ酸番号２４から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸番号５１から５７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号４のアミノ酸番号９０から９８までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖可変領域；又は
    （ｂ）配列番号６のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸番号５０から６６までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号６のアミノ酸番号９９から１１２までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号８のアミノ酸番号２４から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸番号５１から５７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号８のアミノ酸番号９０から９８までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域。
  2. 　抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域が以下の（ａ）又は（ｂ）のいずれかである、請求項１に記載の二重特異性抗体：
    （ａ）配列番号２のアミノ酸番号１から１２５までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；又は
    （ｂ）配列番号６のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号８のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域。
  3. 　抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域を含む重鎖及び軽鎖可変領域を含む軽鎖からなるＩｇＧ抗体（抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体）を含む、請求項１又は２のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
  4. 　抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体のＦｃ領域にＬＡＬＡ変異（Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ（ここで、前記変異位置はヒトＩｇγ１定常領域におけるＥＵインデックスに従うアミノ酸位置である））を含む、請求項３に記載の二重特異性抗体。
  5. 　抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体のＦｃ領域にＰ３３１Ｇ変異（ここで、前記変異位置はヒトＩｇγ１定常領域におけるＥＵインデックスに従うアミノ酸位置である）を含む、請求項３に記載の二重特異性抗体。
  6. 　抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体のＦｃ領域にＬＡＬＡ変異及びＰ３３１Ｇ変異を含む、請求項３に記載の二重特異性抗体。
  7. 　抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域が以下の（ａ）～（ｄ）のいずれかである、請求項１～６のいずれか一項に記載の二重特異性抗体：
    （ａ）配列番号１０のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１０のアミノ酸番号５０から６６までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１０のアミノ酸番号９９から１０７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号１２のアミノ酸番号２４から３４までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸番号５０から５６までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１２のアミノ酸番号８９から９８までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
    （ｂ）配列番号１４のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１４のアミノ酸番号５０から６５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１４のアミノ酸番号９８から１０７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号１６のアミノ酸番号２３から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１６のアミノ酸番号５１から５７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１６のアミノ酸番号９０から１００までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
    （ｃ）配列番号１８のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸番号５０から６５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１８のアミノ酸番号９８から１０７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号２０のアミノ酸番号２３から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２０のアミノ酸番号５１から５７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２０のアミノ酸番号９０から１００までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；又は
    （ｄ）配列番号２２のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２２のアミノ酸番号５０から６５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２２のアミノ酸番号９８から１１０までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号２４のアミノ酸番号２３から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２４のアミノ酸番号５１から５７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２４のアミノ酸番号９０から１００までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域。
  8. 　抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域が以下の（ａ）～（ｉ）のいずれかである、請求項１～７のいずれか一項に記載の二重特異性抗体：
    （ａ）配列番号１０のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号１２のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
    （ｂ）配列番号１４のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号１６のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
    （ｃ）配列番号１８のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２０のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
    （ｄ）配列番号２２のアミノ酸番号１から１２１までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２４のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
    （ｅ）配列番号２６のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２６のアミノ酸番号１３４から２４２までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
    （ｆ）配列番号２８のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２８のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
    （ｇ）配列番号３０のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域及び配列番号３０のアミノ酸番号１３２から２４９までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域；
    （ｈ）配列番号３２のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号３２のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；又は
    （ｉ）配列番号３４のアミノ酸番号１から１２１までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号３４のアミノ酸番号１３７から２４７までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域。
  9. 　抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７一本鎖可変領域フラグメント（抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ）を含む、請求項７又は８のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
  10. 　抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖが以下の（ａ）～（ｅ）のいずれかである、請求項９に記載の二重特異性抗体：
    （ａ）配列番号２６のアミノ酸番号１から２４２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ；
    （ｂ）配列番号２８のアミノ酸番号１から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ；
    （ｃ）配列番号３０のアミノ酸番号１から２４９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ；
    （ｄ）配列番号３２のアミノ酸番号１から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ；又は
    （ｅ）配列番号３４のアミノ酸番号１から２４７までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ。
  11. 　抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体の重鎖又は軽鎖カルボキシ末端に抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている、請求項９又は１０のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
  12. 　以下の（ａ）～（ｊ）のいずれかの抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体：
    （ａ）配列番号２のアミノ酸番号１から１２５までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号２６のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２６のアミノ酸番号１３４から２４２までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている二重特異性抗体；
    （ｂ）配列番号２のアミノ酸番号１から１２５までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号２８のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２８のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている二重特異性抗体；
    （ｃ）配列番号２のアミノ酸番号１から１２５までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号３０のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域及び配列番号３０のアミノ酸番号１３２から２４９までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている二重特異性抗体；
    （ｄ）配列番号２のアミノ酸番号１から１２５までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号３２のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号３２のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている二重特異性抗体；
    （ｅ）配列番号２のアミノ酸番号１から１２５までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号３４のアミノ酸番号１から１２１までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号３４のアミノ酸番号１３７から２４７までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている二重特異性抗体；
    （ｆ）配列番号６のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号８のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号２６のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２６のアミノ酸番号１３４から２４２までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている二重特異性抗体；
    （ｇ）配列番号６のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号８のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号２８のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２８のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている二重特異性抗体；
    （ｈ）配列番号６のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号８のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号３０のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域及び配列番号３０のアミノ酸番号１３２から２４９までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている二重特異性抗体；
    （ｉ）配列番号６のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号８のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号３２のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号３２のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている二重特異性抗体；又は
    （ｊ）配列番号６のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号８のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号３４のアミノ酸番号１から１２１までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号３４のアミノ酸番号１３７から２４７までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている二重特異性抗体。
  13. 　リンカーがＧＳリンカーである、請求項１１又は１２のいずれか一項に記載の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体。
  14. 　ＧＳリンカーが配列番号５４のアミノ酸配列からなるリンカーである、請求項１３に記載の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体。
  15. 　以下の（ａ）又は（ｂ）のいずれかの抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体：
    （ａ）配列番号３６のアミノ酸番号１から７０５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含むポリペプチド、並びに配列番号４０のアミノ酸番号１から２１５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖を含む二重特異性抗体；又は
    （ｂ）配列番号３８のアミノ酸番号１から７１２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含むポリペプチド、並びに配列番号４０のアミノ酸番号１から２１５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖を含む二重特異性抗体。
  16. 　翻訳後修飾された、請求項１～１５のいずれか一項に記載の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体。
  17. 　翻訳後修飾が、重鎖可変領域Ｎ末端のピログルタミル化及び／又は重鎖Ｃ末端リジン欠失である、請求項１６に記載の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体。
  18. 下記（ａ）～（ｄ）からなる群より選択される、抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域又は軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド：
    （ａ）配列番号２のアミノ酸番号１から１２５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｂ）配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｃ）配列番号６のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；又は
    （ｄ）配列番号８のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
  19. 　下記（ａ）～（ｒ）からなる群より選択される、抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域又は軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド：
    （ａ）配列番号１０のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｂ）配列番号１２のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｃ）配列番号１４のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｄ）配列番号１６のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｅ）配列番号１８のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｆ）配列番号２０のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｇ）配列番号２２のアミノ酸番号１から１２１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｈ）配列番号２４のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｉ）配列番号２６のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｊ）配列番号２６のアミノ酸番号１３４から２４２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｋ）配列番号２８のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｌ）配列番号２８のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｍ）配列番号３０のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｎ）配列番号３０のアミノ酸番号１３２から２４９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｏ）配列番号３２のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｐ）配列番号３２のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｑ）配列番号３４のアミノ酸番号１から１２１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；又は
    （ｒ）配列番号３４のアミノ酸番号１３７から２４７までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
  20. 　下記（ａ）～（ｅ）からなる群より選択される、抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド：
    （ａ）配列番号２６のアミノ酸番号１から２４２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｂ）配列番号２８のアミノ酸番号１から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｃ）配列番号３０のアミノ酸番号１から２４９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｄ）配列番号３２のアミノ酸番号１から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；又は
    （ｅ）配列番号３４のアミノ酸番号１から２４７までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
  21. 　請求項１５に記載の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体の生産に用いる、下記（ａ）～（ｅ）からなる群より選択されるポリヌクレオチド：
    （ａ）配列番号３６のアミノ酸番号１から７０５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含むポリペプチドをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｂ）配列番号３８のアミノ酸番号１から７１２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含むポリペプチドをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｃ）配列番号４０のアミノ酸番号１から２１５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｄ）配列番号３６のアミノ酸番号１から７０５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含むポリペプチドをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、並びに配列番号４０のアミノ酸番号１から２１５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；又は
    （ｅ）配列番号３８のアミノ酸番号１から７１２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含むポリペプチドをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、並びに配列番号４０のアミノ酸番号１から２１５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
  22. 　請求項１８～２１のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含む、発現ベクター。
  23. 　請求項２２に記載の発現ベクターで形質転換された、宿主細胞。
  24. 　以下の（ａ）～（ｄｄ）からなる群より選択されるポリヌクレオチドを含む宿主細胞：
    （ａ）配列番号２のアミノ酸番号１から１２５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｂ）配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｃ）配列番号６のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｄ）配列番号８のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
    （ｅ）配列番号１０のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｆ）配列番号１２のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｇ）配列番号１４のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｈ）配列番号１６のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｉ）配列番号１８のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｊ）配列番号２０のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｋ）配列番号２２のアミノ酸番号１から１２１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｌ）配列番号２４のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
    （ｍ）配列番号２６のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｎ）配列番号２６のアミノ酸番号１３４から２４２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｏ）配列番号２８のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｐ）配列番号２８のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｑ）配列番号３０のアミノ酸番号１から１１１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｒ）配列番号３０のアミノ酸番号１３２から２４９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｓ）配列番号３２のアミノ酸番号１から１１８までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｔ）配列番号３２のアミノ酸番号１３４から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｕ）配列番号３４のアミノ酸番号１から１２１までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｖ）配列番号３４のアミノ酸番号１３７から２４７までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｗ）配列番号２６のアミノ酸番号１から２４２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｘ）配列番号２８のアミノ酸番号１から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｙ）配列番号３０のアミノ酸番号１から２４９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｚ）配列番号３２のアミノ酸番号１から２４４までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ａａ）配列番号３４のアミノ酸番号１から２４７までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
    （ｂｂ）配列番号３６のアミノ酸番号１から７０５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含むポリペプチドをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （ｃｃ）配列番号３８のアミノ酸番号１から７１２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含むポリペプチドをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；又は
    （ｄｄ）配列番号４０のアミノ酸番号１から２１５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
  25. 　以下の（ａ）又は（ｂ）のいずれかのポリヌクレオチドを含む、宿主細胞：
    （ａ）配列番号３６のアミノ酸番号１から７０５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含むポリペプチドをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、並びに配列番号４０のアミノ酸番号１から２１５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；又は
    （ｂ）配列番号３８のアミノ酸番号１から７１２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含むポリペプチドをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、並びに配列番号４０のアミノ酸番号１から２１５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
  26. 　抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体の生産方法であって、請求項２３～２５のいずれか一項に記載の宿主細胞を培養する工程を含む、前記方法。
  27. 　請求項１～１７のいずれか一項に記載の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体及び薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
  28. 　がんの治療に使用するための、請求項１～１７のいずれか一項に記載の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体。
  29. 　がんの治療に用いるための、請求項２７に記載の医薬組成物。
  30. 　請求項１～１７のいずれか一項に記載の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体の治療有効量を対象に投与する工程を含む、がんを治療する方法。
  31. 　がんの治療に用いる医薬組成物の製造における、請求項１～１７のいずれか一項に記載の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体の使用。
PCT/JP2022/018350 2021-04-22 2022-04-21 抗ｃｌｄｎ４－抗ｃｄ１３７二重特異性抗体 WO2022224997A1 (ja)

Priority Applications (12)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202280029125.XA CN117222672A (zh) 2021-04-22 2022-04-21 抗cldn4-抗cd137双特异性抗体
KR1020237039211A KR20230171465A (ko) 2021-04-22 2022-04-21 항cldn4-항cd137 이중특이성 항체
CR20230490A CR20230490A (es) 2021-04-22 2022-04-21 Anticuerpo biespecífico anti–cldn4/anti–cd137
JP2023515503A JP7365654B2 (ja) 2021-04-22 2022-04-21 抗ｃｌｄｎ４－抗ｃｄ１３７二重特異性抗体
AU2022262542A AU2022262542A1 (en) 2021-04-22 2022-04-21 Anti-cldn4/anti-cd137 bispecific antibody
CA3217637A CA3217637A1 (en) 2021-04-22 2022-04-21 Anti-cldn4/anti-cd137 bispecific antibody
EP22791768.9A EP4327823A1 (en) 2021-04-22 2022-04-21 Anti-cldn4/anti-cd137 bispecific antibody
IL307744A IL307744A (en) 2021-04-22 2022-04-21 Anti-CLDN4/anti-CD137 bispecific antibody
BR112023021950A BR112023021950A2 (pt) 2021-04-22 2022-04-21 Anticorpo bispecífico anti-cldn4/anti-cd137
JP2023169033A JP2023182689A (ja) 2021-04-22 2023-09-29 抗ｃｌｄｎ４－抗ｃｄ１３７二重特異性抗体
DO2023000230A DOP2023000230A (es) 2021-04-22 2023-10-19 Anticuerpo biespecífico anti–cldn4/anti–cd137
CONC2023/0015630A CO2023015630A2 (es) 2021-04-22 2023-11-20 Anticuerpo biespecífico anti–cldn4/anti–cd137

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2021-072429 2021-04-22
JP2021072429 2021-04-22

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2022224997A1 true WO2022224997A1 (ja) 2022-10-27

Family

ID=83722348

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2022/018350 WO2022224997A1 (ja) 2021-04-22 2022-04-21 抗ｃｌｄｎ４－抗ｃｄ１３７二重特異性抗体

Country Status (16)

Country Link
EP (1) EP4327823A1 (ja)
JP (2) JP7365654B2 (ja)
KR (1) KR20230171465A (ja)
CN (1) CN117222672A (ja)
AR (1) AR125398A1 (ja)
AU (1) AU2022262542A1 (ja)
BR (1) BR112023021950A2 (ja)
CA (1) CA3217637A1 (ja)
CL (1) CL2023003100A1 (ja)
CO (1) CO2023015630A2 (ja)
CR (1) CR20230490A (ja)
DO (1) DOP2023000230A (ja)
EC (1) ECSP23087918A (ja)
IL (1) IL307744A (ja)
TW (1) TW202309083A (ja)
WO (1) WO2022224997A1 (ja)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023219121A1 (ja) * 2022-05-12 2023-11-16 アステラス製薬株式会社 抗ｔａａ－抗ｃｄ３多重特異性抗体
WO2024085166A1 (ja) * 2022-10-19 2024-04-25 アステラス製薬株式会社 がん治療におけるｐｄ－１シグナル阻害剤との組み合わせによる抗ｃｌｄｎ４－抗ｃｄ１３７二重特異性抗体の使用

Citations (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1990007861A1 (en) 1988-12-28 1990-07-26 Protein Design Labs, Inc. CHIMERIC IMMUNOGLOBULINS SPECIFIC FOR p55 TAC PROTEIN OF THE IL-2 RECEPTOR
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US6180370B1 (en) 1988-12-28 2001-01-30 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins and methods of making the same
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
WO2005035584A1 (en) 2003-10-10 2005-04-21 Bristol-Myers Squibb Company Fully human antibodies against human 4-1bb (cd137)
WO2014132647A1 (ja) * 2013-03-01 2014-09-04 公益財団法人ヒューマンサイエンス振興財団 抗体、フラグメント、医薬組成物、分子及び腫瘍マーカー
JP5686953B2 (ja) 2005-10-11 2015-03-18 アムゲン リサーチ （ミュンヘン） ゲーエムベーハー 交差種特異的（ｃｒｏｓｓ−ｓｐｅｃｉｅｓ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ）抗体を含む組成物および該組成物の使用
US9346873B2 (en) 2008-09-30 2016-05-24 Ablexis, Llc Non-human mammals for the production of chimeric antibodies
WO2019178356A1 (en) * 2018-03-14 2019-09-19 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Engineered cells, t cell immune modulating antibodies and methods for using the same
WO2020011966A1 (en) * 2018-07-12 2020-01-16 F-Star Beta Limited Antibody molecules that bind cd137 and ox40
JP2020532572A (ja) * 2017-09-06 2020-11-12 アステラス製薬株式会社 癌の診断に有用な抗体
JP2021510064A (ja) * 2018-01-05 2021-04-15 中外製薬株式会社 細胞傷害誘導治療剤

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100999844B1 (ko) 2006-07-19 2010-12-13 네오벌브 테크놀러지스 인크 고효율 방열 모듈을 구비한 고출력 ｌｅｄ 조명장치

Patent Citations (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
WO1990007861A1 (en) 1988-12-28 1990-07-26 Protein Design Labs, Inc. CHIMERIC IMMUNOGLOBULINS SPECIFIC FOR p55 TAC PROTEIN OF THE IL-2 RECEPTOR
US6180370B1 (en) 1988-12-28 2001-01-30 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins and methods of making the same
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
WO2005035584A1 (en) 2003-10-10 2005-04-21 Bristol-Myers Squibb Company Fully human antibodies against human 4-1bb (cd137)
JP5686953B2 (ja) 2005-10-11 2015-03-18 アムゲン リサーチ （ミュンヘン） ゲーエムベーハー 交差種特異的（ｃｒｏｓｓ−ｓｐｅｃｉｅｓ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ）抗体を含む組成物および該組成物の使用
US9346873B2 (en) 2008-09-30 2016-05-24 Ablexis, Llc Non-human mammals for the production of chimeric antibodies
WO2014132647A1 (ja) * 2013-03-01 2014-09-04 公益財団法人ヒューマンサイエンス振興財団 抗体、フラグメント、医薬組成物、分子及び腫瘍マーカー
JP2020532572A (ja) * 2017-09-06 2020-11-12 アステラス製薬株式会社 癌の診断に有用な抗体
JP2021510064A (ja) * 2018-01-05 2021-04-15 中外製薬株式会社 細胞傷害誘導治療剤
WO2019178356A1 (en) * 2018-03-14 2019-09-19 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Engineered cells, t cell immune modulating antibodies and methods for using the same
WO2020011966A1 (en) * 2018-07-12 2020-01-16 F-Star Beta Limited Antibody molecules that bind cd137 and ox40

Non-Patent Citations (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"PLoS One", vol. 10, 2015, ASSOCIATE PROFESSOR RYOUU TAKAHASHI AT HIROSHIMA UNIVERSITY, pages: e0123407
ANALYTICAL BIOCHEMISTRY, vol. 348, 2006, pages 24 - 39
CANCER IMMUNOLOGY IMMUNOTHERAPY, vol. 61, no. 5, 2012, pages 1721 - 1733
CANCER SCIENCE, vol. 100, no. 9, 2009, pages 1623 - 1630
CANCER SCIENCE, vol. 111, no. 5, 2020, pages 1461 - 1467
CLINICAL CANCER RESEARCH, vol. 23, no. 8, 2017, pages 1929 - 1936
CLINICAL CANCER RESEARCH, vol. 25, no. 19, 2019, pages 5878 - 5889
CLINICAL CANCER RESEARCH, vol. 26, no. 15, 2020, pages 4154 - 4167
EXP. BIOL. MED., vol. 73, 1950, pages 1 - 8
FRONT BIOSCI., vol. 13, 2008, pages 1619 - 1633
FUMIKO CHIWAKIHIROKI SASAKI: "Practical Guide for Cancer Research using Patient-Derived Experimental Model", 2019, YODOSHA COMPANY, LTD., article "Establishment of Peritoneal Metastasis Cancer (such as Gastric, Pancreatic, and Ovarian Cancer) Cell Lines", pages: 28 - 37
J. AM. MED. ASSOC., vol. 199, 1967, pages 519
J. IMMUNOL., vol. 164, no. 8, 2000, pages 4178 - 4184
JOURNAL FOR IMMUNOTHERAPY OF CANCER, vol. 8, no. 2, 2020, pages e000238
KABAT ET AL.: "Sequences of Proteins of Immunological Interest", 1991, NIH PUBLICATION
MABS, vol. 9, no. 2, 2017, pages 182 - 212
MOL. IMMUNOL., vol. 29, 1992, pages 633 - 639
NUCLEIC ACIDS RES., vol. 43, 2015, pages W580 - W584
ONCOTARGET, vol. 9, no. 100, 2018, pages 37367 - 37378
PROC. NATL. ACAD. SCI. USA., vol. 77, 1980, pages 4505
PROC. NATL. ACAD. SCI. USA., vol. 82, 1985, pages 8404
RAJENDRAN SAKTHI, LI YATING, NGOH EVELYN, WONG HIU YI, CHENG MAN SI, WANG CHENG-I, SCHWARZ HERBERT: "Development of a Bispecific Antibody Targeting CD30 and CD137 on Hodgkin and Reed-Sternberg Cells", FRONTIERS IN ONCOLOGY, vol. 9, 1 January 2019 (2019-01-01), pages 945, XP055930321, DOI: 10.3389/fonc.2019.00945 *
SCI., vol. 97, 2008, pages 2426 - 2447
SCIENCE, vol. 130, 1959, pages 432 - 437
VIROL., vol. 8, 1959, pages 396
X. LI, M. IIDA, M. TADA, A. WATARI, Y. KAWAHIGASHI, Y. KIMURA, T. YAMASHITA, A. ISHII-WATABE, T. UNO, M. FUKASAWA, H. KUNIYASU, K.: "Development of an Anti-Claudin-3 and -4 Bispecific Monoclonal Antibody for Cancer Diagnosis and Therapy", JOURNAL OF PHARMACOLOGY AND EXPERIMENTAL THERAPEUTICS, vol. 351, no. 1, 9 September 2014 (2014-09-09), pages 206 - 213, XP055360674, DOI: 10.1124/jpet.114.216911 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023219121A1 (ja) * 2022-05-12 2023-11-16 アステラス製薬株式会社 抗ｔａａ－抗ｃｄ３多重特異性抗体
WO2023219120A1 (ja) * 2022-05-12 2023-11-16 アステラス製薬株式会社 抗ｃｄ３７－抗ｃｄ３二重特異性抗体
WO2024085166A1 (ja) * 2022-10-19 2024-04-25 アステラス製薬株式会社 がん治療におけるｐｄ－１シグナル阻害剤との組み合わせによる抗ｃｌｄｎ４－抗ｃｄ１３７二重特異性抗体の使用

Also Published As

Publication number Publication date
CR20230490A (es) 2023-11-16
IL307744A (en) 2023-12-01
ECSP23087918A (es) 2023-12-29
CA3217637A1 (en) 2022-10-27
CO2023015630A2 (es) 2023-11-30
KR20230171465A (ko) 2023-12-20
AR125398A1 (es) 2023-07-12
JP7365654B2 (ja) 2023-10-20
JPWO2022224997A1 (ja) 2022-10-27
EP4327823A1 (en) 2024-02-28
DOP2023000230A (es) 2023-12-15
BR112023021950A2 (pt) 2023-12-19
AU2022262542A1 (en) 2023-11-02
CL2023003100A1 (es) 2024-03-22
TW202309083A (zh) 2023-03-01
JP2023182689A (ja) 2023-12-26
CN117222672A (zh) 2023-12-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2018393424B2 (en) Triabody, preparation method and use thereof
JP7425604B2 (ja) 抗ｃｔｌａ４－抗ｐｄ－１二機能性抗体、その医薬組成物および使用
EP3464367B1 (en) Bispecific binding proteins binding an immunomodulatory protein and a tumor antigen
EP3204415B1 (en) Bispecific antibodies against cd3epsilon and ror1
TWI564306B (zh) 雙特異性抗體
JP2021527441A (ja) Ｃｌｄｎ１８．２を標的とする抗体、二重特異性抗体、ａｄｃ及びｃａｒならびにその使用
CA3034849A1 (en) Anti-pd1 monoclonal antibody, pharmaceutical composition thereof and use thereof
JP2020018298A (ja) Ｃｌｄｎ１８．２及びｃｄ３に対する抗体コンストラクト
KR20220071263A (ko) Cd3을 표적으로 하는 항체, 이중 특이성 항체 및 이의 용도
KR20220050971A (ko) 신규 항-cd39 항체
CN113301919A (zh) 激活免疫细胞的双特异性抗体
WO2022224997A1 (ja) 抗ｃｌｄｎ４－抗ｃｄ１３７二重特異性抗体
JP7078237B1 (ja) 抗ｔｓｐａｎ８－抗ｃｄ３二重特異性抗体及び抗ｔｓｐａｎ８抗体
CN113474372A (zh) 一种抗ceacam5的单克隆抗体及其制备方法和用途
WO2023219121A1 (ja) 抗ｔａａ－抗ｃｄ３多重特異性抗体
TW202413431A (zh) 抗ｔａａ和ｃｄ３的多特異性抗體
TW202413430A (zh) 抗ｃｄ３７和ｃｄ３的雙特異性抗體
JP2023547662A (ja) Ｃｌｄｎ６及びｃｄ３に選択的に結合するポリペプチド構築物
EA042365B1 (ru) Бифункциональное антитело против ctla4 и против pd-1, его фармацевтическая композиция и их применение

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 22791768

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2023515503

Country of ref document: JP

Kind code of ref document: A

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 307744

Country of ref document: IL

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 804657

Country of ref document: NZ

Ref document number: 2022262542

Country of ref document: AU

Ref document number: AU2022262542

Country of ref document: AU

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: MX/A/2023/012432

Country of ref document: MX

Ref document number: 2301006845

Country of ref document: TH

Ref document number: P6002733/2023

Country of ref document: AE

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 18556606

Country of ref document: US

Ref document number: 002906-2023

Country of ref document: PE

Ref document number: 3217637

Country of ref document: CA

REG Reference to national code

Ref country code: BR

Ref legal event code: B01A

Ref document number: 112023021950

Country of ref document: BR

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2022262542

Country of ref document: AU

Date of ref document: 20220421

Kind code of ref document: A

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 20237039211

Country of ref document: KR

Kind code of ref document: A

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 1020237039211

Country of ref document: KR

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 202392971

Country of ref document: EA

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2023130151

Country of ref document: RU

Ref document number: 2022791768

Country of ref document: EP

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 523451235

Country of ref document: SA

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2022791768

Country of ref document: EP

Effective date: 20231122

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 112023021950

Country of ref document: BR

Kind code of ref document: A2

Effective date: 20231020