CN117222672A - 抗cldn4-抗cd137双特异性抗体 - Google Patents

抗cldn4-抗cd137双特异性抗体 Download PDF

Info

Publication number
CN117222672A
CN117222672A CN202280029125.XA CN202280029125A CN117222672A CN 117222672 A CN117222672 A CN 117222672A CN 202280029125 A CN202280029125 A CN 202280029125A CN 117222672 A CN117222672 A CN 117222672A
Authority
CN
China
Prior art keywords
amino acid
seq
variable region
chain variable
acid sequences
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202280029125.XA
Other languages
English (en)
Inventor
天田由幸
由利正利
八木繁典
佐竹佳树
平山和德
白井宏树
佐佐木博己
千胁史子
小松将之
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
NATIONAL CANCER CENTER
Astellas Pharma Inc
Original Assignee
NATIONAL CANCER CENTER
Astellas Pharma Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by NATIONAL CANCER CENTER, Astellas Pharma Inc filed Critical NATIONAL CANCER CENTER
Publication of CN117222672A publication Critical patent/CN117222672A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2878—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/74—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
    • C12N15/81—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2809—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/51—Complete heavy chain or Fd fragment, i.e. VH + CH1
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/515—Complete light chain, i.e. VL + CL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/64—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising a combination of variable region and constant region components
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/71—Decreased effector function due to an Fc-modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/75—Agonist effect on antigen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)

Abstract

本发明的课题在于提供能够用于癌的治疗的抗CLDN4‑抗CD137双特异性抗体。使用与CLDN4结合的抗CLDN4抗体和与CD137结合的抗CD137抗体而制作的抗CLDN4‑抗CD137双特异性抗体具有针对CD137的激动作用，促进T细胞的干扰素γ产生，对于在细胞表面表达CLDN4的癌细胞显示出细胞毒活性。另外显示出，抗CLDN4‑抗CD137双特异性抗体能够对猴安全地给药。因此，抗CLDN4‑抗CD137双特异性抗体能够用于人的癌的治疗。

Description

抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体
技术领域
本发明涉及期待作为用于癌的治疗的药物组合物的有效成分有用的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体。
背景技术
紧密连接蛋白-4(Claudin-4，CLDN4)为属于紧密连接蛋白家族的四次跨膜蛋白。其在上皮细胞、内皮细胞中表达，作为构成紧密连接的主要分子发挥重要的作用。CLDN4在大肠癌、膀胱癌、卵巢癌等癌组织中也确认到高表达，暗示了抗CLDN4抗体可以应用于癌的治疗或诊断的可能性(专利文献1、非专利文献1)。另外，在动物模型中显示出抗CLDN4抗体与抗表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor，EGFR)抗体的并用所带来的抗肿瘤效果(非专利文献2)。
分化簇137(Cluster of Differentiation 137，CD137，别名4-1BB)为属于肿瘤坏死因子受体超家族(Tumor Necrosis Factor Receptor Super family，TNFRSF)的分子，已报道其在T细胞、B细胞、自然杀伤细胞(NK)细胞、树突状细胞、嗜酸性粒细胞、肥大细胞等免疫细胞表面表达。尤其已知，T细胞上的CD137与抗原呈递细胞上的CD137配体结合，作为共刺激分子参与T细胞的活化和生存(非专利文献3)。抗CD137激动抗体在动物模型中显示出肿瘤微环境内的免疫细胞的活化介导的抗肿瘤效果(非专利文献4)。作为抗CD137激动抗体的乌瑞芦单抗(Urelumab)虽然在临床试验中显示出治疗效果，但也被报道了会引起肝障碍的副作用(非专利文献5)。
作为能够以低抗体浓度获得癌细胞选择性细胞毒活性的划时代的方法，已报道各种抗体形式的双特异性T细胞募集抗体(bispecific T-cell-recruiting antibodies)。双特异性T细胞募集抗体为包含针对在癌细胞表面表达的肿瘤相关抗原(Tumor-AssociatedAntigens；TAA)的抗体、和与T细胞结合的抗体的双特异性抗体，正在研究这些抗体针对T细胞介导的免疫疗法的效果(非专利文献6)。作为与T细胞结合的抗体，大多使用抗CD3抗体，现在也在研究开发各种针对TAA的双特异性T细胞募集抗体。
另外，近年来正在积极进行针对CD137和TAA的双特异性T细胞募集抗体的研究。正在研究识别作为TAA的磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(Glypican3，GPC3)、人表皮生长因子受体2型(Human Epidermal Growth Factor Receptor Type2，HER2)、程序性细胞死亡配体1(Programmed Cell Death-Ligand1，PD-L1)、成纤维细胞活化蛋白(FibroblastActivation Protein，FAP)的抗GPC3-抗CD137双特异性抗体、抗HER2-抗CD137双特异性抗体、抗PDL1-抗CD137双特异性抗体、抗FAP-抗CD137双特异性抗体等(专利文献2和3、非专利文献7～9)。
然而，迄今为止还没有关于抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体的报道。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：国际公开号2008/114733号
专利文献2：国际公开号2015/156268号
专利文献3：国际公开号2016/177802号
非专利文献
非专利文献1：Cancer Science,2009:100(9):p.1623-1630
非专利文献2：Oncotarget,2018:9(100):p.37367-37378
非专利文献3：Cancer Science,2020:111(5):p.1461-1467
非专利文献4：Cancer Immunology Immunotherapy,2012:61(5):p.1721-1733
非专利文献5：Clinical Cancer Research,2017:23(8):p.1929-1936
非专利文献6：mAbs,2017:9(2):p.182-212
非专利文献7：Clinical Cancer Research,2019:25(19):p.5878-5889
非专利文献8：Clinical Cancer Research,2020:26(15):p.4154-4167
非专利文献9：Journal for Immunotherapy of Cancer,2020；8(2):e000238
发明内容
发明所要解决的问题
本发明的课题在于提供能够用于癌的治疗的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体。
用于解决问题的方法
本发明人进行了与腹膜播散癌细胞所表达的抗原选择性结合的抗体的探索，获得了作为抗CLDN4抗体的3D11(实施例1和2)。判明了使用3D11和抗CD3抗体的双特异性T细胞募集抗体无法用于癌患者的治疗(参考例)。因此，使用3D11和公知的抗CLDN4抗体即KM3900抗体，尝试了与抗CD137抗体的双特异性T细胞募集抗体的获得(实施例3和4)。所获得的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体与CLDN4和CD137结合(实施例5)，在体外促进T细胞的干扰素γ产生，对于在细胞表面表达CLDN4的癌细胞显示出细胞毒活性(实施例6)。另外确认了，所获得的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体在体内小鼠模型中发挥抗肿瘤作用(实施例7-1)，在食蟹猴中也可以安全地使用(实施例7-2)。暗示了本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体对于癌的治疗有用。
即，本发明涉及以下的[1]～[32]。
[1]一种双特异性抗体，其为包含抗CLDN4抗体的重链可变区和轻链可变区、以及抗CD137抗体的重链可变区和轻链可变区的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体，其中，抗CLDN4抗体的重链可变区和轻链可变区为以下的(a)或(b)中的任意一者：
(a)包含由序列号2的氨基酸编号31至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号2的氨基酸编号50至66的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号2的氨基酸编号99至114的氨基酸序列构成的CDR3的重链可变区、以及包含由序列号4的氨基酸编号24至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号4的氨基酸编号51至57的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号4的氨基酸编号90至98的氨基酸序列构成的CDR3的轻链可变区；或者
(b)包含由序列号6的氨基酸编号31至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号6的氨基酸编号50至66的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号6的氨基酸编号99至112的氨基酸序列构成的CDR3的重链可变区、以及包含由序列号8的氨基酸编号24至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号8的氨基酸编号51至57的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号8的氨基酸编号90至98的氨基酸序列构成的CDR3的轻链可变区。
[2]根据[1]所述的双特异性抗体，其中，抗CLDN4抗体的重链可变区和轻链可变区为以下的(a)或(b)中的任意一者：
(a)由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区；或者
(b)由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区。
[3]根据[1]或[2]中任一项所述的双特异性抗体，其包含由抗CLDN4抗体的包含重链可变区的重链和包含轻链可变区的轻链构成的IgG抗体(抗CLDN4 IgG抗体)。
[4]根据[3]所述的双特异性抗体，其在抗CLDN4 IgG抗体的Fc区包含LALA突变(L234A和L235A(在此，上述突变位置为人Igγ1恒定区中的根据EU索引的氨基酸位置))。
[5]根据[3]所述的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体，其在抗CLDN4 IgG抗体的Fc区包含P331G突变(在此，上述突变位置为人Igγ1恒定区中的根据EU索引的氨基酸位置)。
[6]根据[3]所述的双特异性抗体，其在抗CLDN4 IgG抗体的Fc区包含LALA突变和P331G突变。
[7]根据[1]～[6]中任一项所述的双特异性抗体，其中，抗CD137抗体的重链可变区和轻链可变区为以下的(a)～(d)中的任意一者：
(a)包含由序列号10的氨基酸编号31至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号10的氨基酸编号50至66的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号10的氨基酸编号99至107的氨基酸序列构成的CDR3的重链可变区、以及包含由序列号12的氨基酸编号24至34的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号12的氨基酸编号50至56的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号12的氨基酸编号89至98的氨基酸序列构成的CDR3的轻链可变区；
(b)包含由序列号14的氨基酸编号31至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号14的氨基酸编号50至65的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号14的氨基酸编号98至107的氨基酸序列构成的CDR3的重链可变区、以及包含由序列号16的氨基酸编号23至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号16的氨基酸编号51至57的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号16的氨基酸编号90至100的氨基酸序列构成的CDR3的轻链可变区；
(c)包含由序列号18的氨基酸编号31至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号18的氨基酸编号50至65的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号18的氨基酸编号98至107的氨基酸序列构成的CDR3的重链可变区、以及包含由序列号20的氨基酸编号23至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号20的氨基酸编号51至57的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号20的氨基酸编号90至100的氨基酸序列构成的CDR3的轻链可变区；或者
(d)包含由序列号22的氨基酸编号31至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号22的氨基酸编号50至65的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号22的氨基酸编号98至110的氨基酸序列构成的CDR3的重链可变区、以及包含由序列号24的氨基酸编号23至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号24的氨基酸编号51至57的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号24的氨基酸编号90至100的氨基酸序列构成的CDR3的轻链可变区。
[8]根据[1]～[7]中任一项所述的双特异性抗体，其中，抗CD137抗体的重链可变区和轻链可变区为以下的(a)～(i)中的任意一者：
(a)由序列号10的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号12的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(b)由序列号14的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号16的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(c)由序列号18的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号20的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(d)由序列号22的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号24的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(e)由序列号26的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号26的氨基酸编号134至242的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(f)由序列号28的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号28的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(g)由序列号30的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的轻链可变区和由序列号30的氨基酸编号132至249的氨基酸序列构成的重链可变区；
(h)由序列号32的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号32的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的轻链可变区；或者
(i)由序列号34的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号34的氨基酸编号137至247的氨基酸序列构成的轻链可变区。
[9]根据[7]或[8]中任一项所述的双特异性抗体，其包含含有抗CD137抗体的重链可变区和轻链可变区的抗CD137单链可变区片段(抗CD137scFv)。
[10]根据[9]所述的双特异性抗体，其中，抗CD137scFv为以下的(a)～(e)中的任意一者：
(a)由序列号26的氨基酸编号1至242的氨基酸序列构成的抗CD137scFv；
(b)由序列号28的氨基酸编号1至244的氨基酸序列构成的抗CD137scFv；
(c)由序列号30的氨基酸编号1至249的氨基酸序列构成的抗CD137scFv；
(d)由序列号32的氨基酸编号1至244的氨基酸序列构成的抗CD137scFv；或者
(e)由序列号34的氨基酸编号1至247的氨基酸序列构成的抗CD137scFv。
[11]根据[9]或[10]中任一项所述的双特异性抗体，其包含抗CLDN4 IgG抗体和抗CD137scFv，且在抗CLDN4 IgG抗体的重链或轻链羧基末端经由接头连接着抗CD137scFv的氨基末端。
[12]一种抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体，其为以下的(a)～(j)中的任意一者：
(a)含有包含由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链和包含由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及包含由序列号26的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号26的氨基酸编号134至242的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的双特异性抗体；
(b)含有包含由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链和包含由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及包含由序列号28的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号28的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的双特异性抗体；
(c)含有包含由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链和包含由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及包含由序列号30的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的轻链可变区和由序列号30的氨基酸编号132至249的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的双特异性抗体；
(d)含有包含由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链和包含由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及包含由序列号32的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号32的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的双特异性抗体；
(e)含有包含由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链和包含由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及包含由序列号34的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号34的氨基酸编号137至247的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的双特异性抗体；
(f)含有包含由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链和包含由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及包含由序列号26的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号26的氨基酸编号134至242的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的双特异性抗体；
(g)含有包含由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链和包含由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及包含由序列号28的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号28的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的双特异性抗体；
(h)含有包含由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链和包含由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及包含由序列号30的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的轻链可变区和由序列号30的氨基酸编号132至249的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的双特异性抗体；
(i)含有包含由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链和包含由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及包含由序列号32的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号32的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的双特异性抗体；或者
(j)含有包含由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链和包含由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及包含由序列号34的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号34的氨基酸编号137至247的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的双特异性抗体。
[13]根据[11]或[12]中任一项所述的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体，其中，接头为GS接头。
[14]根据[13]所述的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体，其中，GS接头为由序列号54的氨基酸序列构成的接头。
[15]一种抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体，其为以下的(a)或(b)中的任意一者：
(a)含有由序列号36的氨基酸编号1至705的氨基酸序列构成的包含抗CLDN4抗体的重链和抗CD137scFv的多肽、以及由序列号40的氨基酸编号1至215的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链的双特异性抗体；或者
(b)含有由序列号38的氨基酸编号1至712的氨基酸序列构成的包含抗CLDN4抗体的重链和抗CD137scFv的多肽以及由序列号40的氨基酸编号1至215的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链的双特异性抗体。
[16]根据[1]～[15]中任一项所述的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体，其经过了翻译后修饰。
[17]根据[16]所述的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体，其中，翻译后修饰为重链可变区N末端的焦谷氨酰化和/或重链C末端赖氨酸缺失。
[18]一种多核苷酸，其选自由下述(a)～(d)组成的组、且包含编码抗CLDN4抗体的重链可变区或轻链可变区的碱基序列：
(a)包含编码由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(b)包含编码由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(c)包含编码由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；或者
(d)包含编码由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸。
[19]一种多核苷酸，其选自由下述(a)～(r)组成的组、且包含编码抗CD137抗体的重链可变区或轻链可变区的碱基序列：
(a)包含编码由序列号10的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(b)包含编码由序列号12的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(c)包含编码由序列号14的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(d)包含编码由序列号16的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(e)包含编码由序列号18的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(f)包含编码由序列号20的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(g)包含编码由序列号22的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(h)包含编码由序列号24的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(i)包含编码由序列号26的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(j)包含编码由序列号26的氨基酸编号134至242的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(k)包含编码由序列号28的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(l)包含编码由序列号28的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(m)包含编码由序列号30的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(n)包含编码由序列号30的氨基酸编号132至249的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(o)包含编码由序列号32的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(p)包含编码由序列号32的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(q)包含编码由序列号34的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；或者
(r)包含编码由序列号34的氨基酸编号137至247的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸。
[20]一种多核苷酸，其选自由下述(a)～(e)组成的组、且包含编码抗CD137scFv的碱基序列：
(a)包含编码由序列号26的氨基酸编号1至242的氨基酸序列构成的抗CD137scFv的碱基序列的多核苷酸；
(b)包含编码由序列号28的氨基酸编号1至244的氨基酸序列构成的抗CD137scFv的碱基序列的多核苷酸；
(c)包含编码由序列号30的氨基酸编号1至249的氨基酸序列构成的抗CD137scFv的碱基序列的多核苷酸；
(d)包含编码由序列号32的氨基酸编号1至244的氨基酸序列构成的抗CD137scFv的碱基序列的多核苷酸；或者
(e)包含编码由序列号34的氨基酸编号1至247的氨基酸序列构成的抗CD137scFv的碱基序列的多核苷酸。
[21]一种多核苷酸，其用于[15]所述的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体的生产，且选自由下述(a)～(e)组成的组：
(a)包含编码由序列号36的氨基酸编号1至705的氨基酸序列构成的包含抗CLDN4抗体的重链和抗CD137scFv的多肽的碱基序列的多核苷酸；
(b)包含编码由序列号38的氨基酸编号1至712的氨基酸序列构成的包含抗CLDN4抗体的重链和抗CD137scFv的多肽的碱基序列的多核苷酸；
(c)包含编码由序列号40的氨基酸编号1至215的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链的碱基序列的多核苷酸；
(d)包含编码由序列号36的氨基酸编号1至705的氨基酸序列构成的包含抗CLDN4抗体的重链和抗CD137scFv的多肽的碱基序列的多核苷酸、以及包含编码由序列号40的氨基酸编号1至215的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链的碱基序列的多核苷酸；或者
(e)包含编码由序列号38的氨基酸编号1至712的氨基酸序列构成的包含抗CLDN4抗体的重链和抗CD137scFv的多肽的碱基序列的多核苷酸、以及包含编码由序列号40的氨基酸编号1至215的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链的碱基序列的多核苷酸。
[22]一种表达载体，其包含[18]～[21]中任一项所述的多核苷酸。
[23]一种宿主细胞，其利用[22]所述的表达载体进行了转化。
[24]一种宿主细胞，其含有选自由以下的(a)～(dd)组成的组中的多核苷酸：
(a)包含编码由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(b)包含编码由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(c)包含编码由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(d)包含编码由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸。
(e)包含编码由序列号10的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(f)包含编码由序列号12的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(g)包含编码由序列号14的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(h)包含编码由序列号16的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(i)包含编码由序列号18的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(j)包含编码由序列号20的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(k)包含编码由序列号22的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(l)包含编码由序列号24的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸。
(m)包含编码由序列号26的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(n)包含编码由序列号26的氨基酸编号134至242的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(o)包含编码由序列号28的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(p)包含编码由序列号28的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(q)包含编码由序列号30的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(r)包含编码由序列号30的氨基酸编号132至249的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(s)包含编码由序列号32的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(t)包含编码由序列号32的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(u)包含编码由序列号34的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(v)包含编码由序列号34的氨基酸编号137至247的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(w)包含编码由序列号26的氨基酸编号1至242的氨基酸序列构成的抗CD137scFv的碱基序列的多核苷酸；
(x)包含编码由序列号28的氨基酸编号1至244的氨基酸序列构成的抗CD137scFv的碱基序列的多核苷酸；
(y)包含编码由序列号30的氨基酸编号1至249的氨基酸序列构成的抗CD137scFv的碱基序列的多核苷酸；
(z)包含编码由序列号32的氨基酸编号1至244的氨基酸序列构成的抗CD137scFv的碱基序列的多核苷酸；
(aa)包含编码由序列号34的氨基酸编号1至247的氨基酸序列构成的抗CD137scFv的碱基序列的多核苷酸。
(bb)包含编码由序列号36的氨基酸编号1至705的氨基酸序列构成的包含抗CLDN4抗体的重链和抗CD137scFv的多肽的碱基序列的多核苷酸；
(cc)包含编码由序列号38的氨基酸编号1至712的氨基酸序列构成的包含抗CLDN4抗体的重链和抗CD137scFv的多肽的碱基序列的多核苷酸；或者
(dd)包含编码由序列号40的氨基酸编号1至215的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链的碱基序列的多核苷酸。
[25]一种宿主细胞，其含有以下的(a)或(b)中的任意一者的多核苷酸：
(a)包含编码由序列号36的氨基酸编号1至705的氨基酸序列构成的包含抗CLDN4抗体的重链和抗CD137scFv的多肽的碱基序列的多核苷酸、以及包含编码由序列号40的氨基酸编号1至215的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链的碱基序列的多核苷酸；或者
(b)包含编码由序列号38的氨基酸编号1至712的氨基酸序列构成的包含抗CLDN4抗体的重链和抗CD137scFv的多肽的碱基序列的多核苷酸、以及包含编码由序列号40的氨基酸编号1至215的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链的碱基序列的多核苷酸。
[26]一种抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体的生产方法，其包括对[23]～[25]中任一项所述的宿主细胞进行培养的步骤。
[27]一种药物组合物，其包含[1]～[17]中任一项所述的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体和药学上可接受的赋形剂。
[28]根据[1]～[17]中任一项所述的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体，其用于癌的治疗。
[29]根据[27]所述的药物组合物，其用于癌的治疗。
[30]一种治疗癌的方法，其包括将治疗有效量的[1]～[17]中任一项所述的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体向对象给药的步骤。
[31][1]～[17]中任一项所述的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体在制造用于癌的治疗的药物组合物中的应用。
发明效果
本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体与作为癌抗原的CLDN4和在T细胞等免疫细胞的表面表达的CD137这两者结合，将癌细胞周边的免疫细胞活化，由此使对癌细胞的杀伤作用增强。本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体或包含上述抗体的药物组合物能够用于各种癌的治疗。
附图说明
图1-1示出利用ELISA法进行了测定评价的被检抗体的对CD137的结合活性。图的纵轴表示从450nm的吸光度中减去570nm的吸光度而得到的值，横轴表示被检抗体的浓度。符号表示各被检抗体添加时的吸光度的平均值，误差棒表示标准偏差。
图1-2示出利用ELISA法进行了测定评价的被检抗体的对CD137的结合活性。图的纵轴表示从450nm的吸光度中减去570nm的吸光度而得到的值，横轴表示被检抗体的浓度。符号表示各被检抗体添加时的吸光度的平均值。
图1-3示出利用ELISA法进行了测定评价的被检抗体的对CD137的结合活性。图的纵轴表示从450nm的吸光度中减去570nm的吸光度而得到的值，横轴表示被检抗体的浓度。符号表示各被检抗体添加时的吸光度的平均值。
图1-4示出利用ELISA法进行了测定评价的被检抗体的对CD137的结合活性。图的纵轴表示从450nm的吸光度中减去570nm的吸光度而得到的值，横轴表示被检抗体的浓度。符号表示各被检抗体添加时的吸光度的平均值。
图2-1示出表达CLDN4的癌细胞(NCI-H322细胞)与4-1BB效应细胞的共培养试验中的被检抗体的CD137激动活性。图的纵轴表示相对发光量，横轴表示被检抗体的浓度。符号表示各被检抗体添加时的相对发光量的平均值，误差棒表示标准偏差。
图2-2示出表达CLDN4的癌细胞(NCI-H322细胞)与4-1BB效应细胞的共培养试验中的被检抗体的CD137激动活性。图的纵轴表示相对发光量，横轴表示被检抗体的浓度。符号表示各被检抗体添加时的相对发光量的平均值。
图2-3示出表达CLDN4的癌细胞(NCI-H322细胞)与4-1BB效应细胞的共培养试验中的被检抗体的CD137激动活性。图的纵轴表示相对发光量，横轴表示被检抗体的浓度。符号表示各被检抗体添加时的相对发光量的平均值，误差棒表示标准偏差。
图2-4示出4-1BB效应细胞的单独培养试验中的被检抗体的CD137激动活性。图的纵轴表示相对发光量，横轴表示被检抗体的浓度。符号表示各被检抗体添加时的相对发光量的平均值，误差棒表示标准偏差。
图2-5示出4-1BB效应细胞的单独培养试验中的被检抗体的CD137激动活性。图的纵轴表示相对发光量，横轴表示被检抗体的浓度。符号表示各被检抗体添加时的相对发光量的平均值。
图2-6示出4-1BB效应细胞的单独培养试验中的被检抗体的CD137激动活性。图的纵轴表示相对发光量，横轴表示被检抗体的浓度。符号表示各被检抗体添加时的相对发光量的平均值，误差棒表示标准偏差。
图3-1示出60As6-Luc/GFP细胞与扩增panT细胞的共培养体系中的各被检抗体添加时的干扰素-γ产生促进功能。纵轴表示抗体添加6天后的干扰素-γ产生量(pg/mL)，横轴表示抗体浓度。符号表示抗体的各浓度下的干扰素-γ产生量的平均值。
图3-2示出60As6-Luc/GFP细胞与扩增panT细胞的共培养体系中的各被检抗体添加时的干扰素-γ产生促进功能。图的纵轴表示抗体添加4天后的干扰素-γ产生量(pg/mL)，横轴表示抗体浓度。符号表示抗体的各浓度下的干扰素-γ产生量的平均值，误差棒表示标准偏差。
图3-3示出扩增panT细胞的单培养体系中的各被检抗体添加时的干扰素-γ产生量。图的纵轴表示抗体添加6天后的干扰素-γ产生量(pg/mL)，横轴表示抗体浓度。符号表示抗体的各浓度下的干扰素-γ产生量的平均值。
图3-4示出扩增panT细胞的单培养体系中的各被检抗体添加时的干扰素-γ产生量。图的纵轴表示抗体添加5天后的干扰素-γ产生量(pg/mL)，横轴表示抗体浓度。符号表示抗体的各浓度下的干扰素-γ产生量的平均值，误差棒表示标准偏差。
图4示出60As6-Luc/GFP细胞与扩增panT细胞的共培养体系中的基于各被检抗体的癌细胞毒活性(癌细胞的增殖抑制作用)。图的纵轴表示从测定开始0小时增加至168小时的荧光面积中将未添加被检抗体的孔设为100％时的细胞增殖率。横轴表示抗体浓度。符号表示各抗体的癌细胞增殖率的平均值。
图5示出60As6-Luc/GFP细胞与扩增panT细胞的共培养体系中的各被检抗体添加时的癌细胞毒活性。图的纵轴表示抗体添加6天后的60As6-Luc/GFP细胞的化学发光的测定值中将未添加抗体的平均值设为杀伤率0％、将添加Triton-X100的平均值设为杀伤率100％时的癌细胞杀伤率(％)。横轴表示抗体浓度。符号表示抗体的各浓度下的癌细胞杀伤率的平均值，误差棒表示标准偏差。
图6示出皮下荷载NCI-H322癌细胞的PBMC移入小鼠的肿瘤体积变化。图的横轴表示初次给药后天数，纵轴表示肿瘤体积的平均值，误差棒表示标准误差。
具体实施方式
以下对本发明进行详述。
＜定义＞
本说明书的术语只要不是以下特别定义的内容，则以该技术领域中本领域技术人员通常使用的含义来使用。
抗体(或免疫球蛋白)为以具有由2条具有单一序列的重链和2条具有单一序列的轻链构成的左右对称Y字型结构的4条链结构为基本结构的糖蛋白。抗体存在IgG、IgM、IgA、IgD和IgE这5个类。抗体分子的基本结构在各类中是共通的，2条分子量5万～7万的重链和2条分子量2万～3万的轻链通过二硫键和非共价键而结合，形成分子量15万～19万的由Y字型的4条链结构构成的抗体分子。重链通常由包含约440个氨基酸的多肽链构成，在各类中具有特征性结构，与IgG、IgM、IgA、IgD、IgE对应地分别被称为Igγ、Igμ、Igα、Igδ、Igε。另外，IgG中存在IgG1、IgG2、IgG3、IgG4的亚类，各自对应的重链被称为Igγ1、Igγ2、Igγ3、Igγ4。轻链通常由包含约220个氨基酸的多肽链构成，已知有λ型和κ型这2种，分别称为Igλ、Igκ。上述2种轻链可以与任意种类的重链配对。
关于抗体分子的链内二硫键，在重链中存在4个(Igμ、Igε中存在5个)，在轻链中存在2个，每100～110个氨基酸残基形成1个环。这些立体结构在各环之间是相似的，被称为结构单元或结构域。重链、轻链均是位于N末端的结构域被称为可变区，已知即使是由同种动物的同一类(或亚类)产生的抗体也具有多样的氨基酸序列，参与抗体与抗原的结合特异性结合。位于可变区下游的C末端侧的结构域的氨基酸序列在各类或亚类中大致恒定，被称为恒定区。重链中，从N末端向C末端具有重链可变区(VH)和重链恒定区(CH)。CH中，进一步从N末端侧起分为CH1结构域、CH2结构域和CH3结构域这3个结构域。轻链中，从N末端向C末端具有轻链可变区(VL)和轻链恒定区(CL)。
VH和VL中存在的3个互补决定区(CDR)的氨基酸序列的变化非常大，有助于可变区的可变性。CDR为由5～10个氨基酸残基构成的区域，在重链和轻链各自的N末端以CDR1、CDR2、CDR3的顺序存在，与抗原接触而形成抗体结合部位。已知与轻链的CDR相比，重链的CDR对抗原结合的贡献更大，CDR1～3中CDR3的贡献最高。另一方面，可变区的CDR以外的部分被称为框架区(FR)，由FR1～4构成，氨基酸序列的变化比较少。
将抗体用蛋白水解酶的木瓜蛋白酶进行处理时，得到3个抗体片段。N末端侧的2个片段被称为Fab(抗原结合片段，Fragment,antigen binding)区。Fab区是指由重链的VH、CH1结构域和铰链区的一部分、以及轻链(VL和CL)构成的区域，该Fab区在构成的VH和VL(抗原结合部位)与抗原结合。另外，C末端侧的片段被称为Fc(可结晶化片段，Fragment,crystallizable)区。
本说明书中，“IgG抗体”是指由2个Fab区和Fc区构成的具有Y字型的结构的抗体。在一个实施方式中，IgG抗体的2个Fab区为由同一序列构成的Fab区。在一个实施方式中，IgG抗体的2个Fab区为由不同的序列构成的Fab区。
本说明书中，“抗原结合片段”和“片段抗体”可以相互替换地使用，是指包含免疫球蛋白分子的重链可变区和轻链可变区、具有抗原结合活性的包含至少1个多肽链的分子。作为代表性的抗原结合片段，可举出单链可变区片段(scFv)、Fab片段、Fab’片段、F(ab’)2片段。本说明书中，“scFv”是指由以接头连接的VH和VL构成的一价的抗原结合片段。Fab片段为由包含轻链、重链的VH、CH1结构域和铰链区的一部分的片段构成的一价的抗原结合片段。Fab’片段为由包含轻链、重链的VH、CH1结构域和铰链区的一部分的片段构成的一价的抗原结合片段，在该铰链区的部分包含构成重链间二硫键的半胱氨酸残基。F(ab’)2片段为以二硫键连接Fab’片段而成的二价的抗原结合片段。一价是指包含1个抗原结合部位，二价是指包含2个抗原结合部位。
本说明书中，“双特异性抗体”是指由与不同的抗原特异性结合的2个抗体或抗原结合片段构成、且具有对各抗原的结合活性的抗体分子。作为双特异性抗体，各种结构的双特异性抗体已被本领域技术人员公知(非专利文献6)。只要上下文中没有特别限定，则本说明书中使用的术语“抗体”包括全长的抗体(各种免疫球蛋白，特别是IgG抗体)、抗原结合片段和所有结构的双特异性抗体。
本说明书中，将IgG型的抗CLDN4抗体称为“抗CLDN4 IgG抗体”。
本说明书中，“人抗体”表示具有人免疫球蛋白氨基酸序列的抗体。本说明书中，“人源化抗体”表示CDR以外的氨基酸残基的一部分、大部分或全部被来自于人免疫球蛋白分子的氨基酸残基置换的抗体。人源化的方法没有特别限制，但例如可以参照美国专利第5225539号、美国专利第6180370号等来制作人源化抗体。
本说明书中使用的抗体的氨基酸残基编号可以通过指定Kabat编号或EU索引(Kabat等，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第五版，1991，NIHPublication No.91-3242)而按照这些编号系统进行规定。
本说明书中，“连接”或“连接的”是指多个成分(例如Fab区和Fc区)直接结合或经由中介物(例如肽接头)结合。本说明书中，“肽接头”是指用于连接多个成分的、可以通过基因工程方法导入的1个以上的任意氨基酸序列。本发明中使用的肽接头的长度没有特别限制，本领域技术人员能够根据目的适宜选择。
本说明书中，“一致性”是指使用EMBOSS Needle(Nucleic Acids Res.、2015、Vol.43、pW580-W584)通过以默认准备的参数而得到的Identity的值。上述参数如下所述。
Gap Open Penalty＝10
Gap Extend Penalty＝0.5
Matrix＝EBLOSUM62
End Gap Penalty＝false
＜本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体＞
本发明提供与CLDN4和CD137结合的双特异性抗体(也称为“抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体”)。本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体包含抗CLDN4抗体的重链可变区和轻链可变区、以及抗CD137抗体的重链可变区和轻链可变区。本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体包括包含抗CLDN4 IgG抗体和抗CD137抗体的scFv(也称为“抗CD137scFv”)的双特异性抗体。在一个实施方式中，本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体为包含抗CLDN4IgG抗体和抗CD137scFv的双特异性抗体。
本说明书中，“抗CLDN4抗体”为可以与人CLDN4结合的抗体，“抗CD137抗体”为可以与人CD137结合的抗体。是否与人CLDN4或人CD137结合可以通过使用公知的结合活性测定方法来确认。作为测定结合活性的方法，例如可举出酶联免疫吸附测定(Enzyme-LinkedImmuno Sorbent Assay，ELISA)法、流式细胞术法等方法。ELISA法或流式细胞术法可以利用本领域技术人员通常使用的方法来实施，例如可以使用实施例3或5中记载的方法。
本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体只要与CLDN4和CD137结合，则可以为任意的结构，例如可举出具有非专利文献6中记载的结构的双特异性抗体。在一个实施方式中，本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体可以为抗CLDN4抗体的Fab区与抗CD137抗体的Fab区连接而成的连接体、抗CLDN4 IgG抗体和IgG型的抗CD137抗体(也称为“抗CD137 IgG抗体”)的连接体、抗CLDN4 IgG抗体和抗CD137抗体的抗原结合片段的连接体、抗CLDN4抗体的抗原结合片段和抗CD137IgG抗体的连接体、或抗CLDN4抗体的抗原结合片段和抗CD137抗体的抗原结合片段的连接体。
在一个实施方式中，本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体包含全长的抗CLDN4抗体和全长的抗CD137抗体。在一个实施方式中，本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体包含抗CLDN4 IgG抗体和抗CD137 IgG抗体。2个抗体可以经由接头连接。在一个实施方式中，本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体包含全长的抗CLDN4抗体和抗CD137抗体的抗原结合片段。2个抗体的连接部位没有特别限制，直接连接或经由接头连接。在一个实施方式中，本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体包含抗CLDN4 IgG抗体和抗CD137抗体的scFv(本说明书中，称为“抗CD137scFv”)。在一个实施方式中，本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体包含抗CLDN4IgG抗体和抗CD137scFv，且在抗CLDN4抗体的重链羧基末端连接着抗CD137scFv的氨基末端。在一个实施方式中，本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体包含抗CLDN4 IgG抗体和抗CD137scFv，且在抗CLDN4抗体的轻链羧基末端连接着抗CD137scFv的氨基末端。在一个实施方式中，本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体包含抗CLDN4IgG抗体和抗CD137scFv，且在抗CLDN4抗体的重链的氨基末端连接着抗CD137scFv的羧基末端。在一个实施方式中，本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体包含抗CLDN4 IgG抗体和抗CD137scFv，且在抗CLDN4抗体的轻链的氨基末端连接着抗CD137scFv的羧基末端。在一个实施方式中，本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体包含抗CLDN4抗体的抗原结合片段和抗CD137的抗原结合片段。在一个实施方式中，本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体包含抗CLDN4抗体的scFv和抗CD137的scFv。在一个实施方式中，本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体包含抗CD137scFv。
本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体中，抗CLDN4抗体和抗CD137抗体的重链可变区和轻链可变区可以来自人抗体、来自人源化抗体或来自它们的组合。在一个实施方式中，本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体为人抗体、人源化抗体、或由其组合构成的抗体。
本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体为包含抗CLDN4抗体的重链可变区和轻链可变区、以及抗CD137抗体的重链可变区和轻链可变区的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体，且抗CLDN4抗体的重链可变区和轻链可变区为以下的(a)或(b)中的任意一者：
(a)包含由序列号2的氨基酸编号31至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号2的氨基酸编号50至66的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号2的氨基酸编号99至114的氨基酸序列构成的CDR3的重链可变区、以及包含由序列号4的氨基酸编号24至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号4的氨基酸编号51至57的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号4的氨基酸编号90至98的氨基酸序列构成的CDR3的轻链可变区；或者
(b)包含由序列号6的氨基酸编号31至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号6的氨基酸编号50至66的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号6的氨基酸编号99至112的氨基酸序列构成的CDR3的重链可变区、以及包含由序列号8的氨基酸编号24至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号8的氨基酸编号51至57的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号8的氨基酸编号90至98的氨基酸序列构成的CDR3的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体包含以下的(a)或(b)中记载的抗CLDN4抗体的重链可变区和轻链可变区：
(a)由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区；或者
(b)由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区。
本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体中，作为抗CLDN4抗体，可以包含IgG抗体等全长的抗体，也可以包含Fab片段、Fab’片段、F(ab’)2片段或scFv等抗原结合片段。
作为本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体中含有的抗CLDN4抗体中含有的重链恒定区，也可以选择Igγ、Igμ、Igα、Igδ或Igε的任意恒定区。作为Igγ，例如可以从Igγ1、Igγ2、Igγ3或Igγ4中选择。作为本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体中含有的抗CLDN4抗体中含有的轻链恒定区，也可以选择Igλ或Igκ的任意恒定区。本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体中含有的抗CLDN4抗体为IgG抗体时，在一个实施方式中，该抗CLDN4抗体的重链和轻链分别为人Igγ1和Igκ。在一个实施方式中，本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体包含全长的抗CLDN4抗体。在一个实施方式中，本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体中含有的抗CLDN4抗体为包含抗CLDN4抗体的重链可变区和轻链可变区的IgG抗体(抗CLDN4IgG抗体)。
本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体包含Fc区时，该双特异性抗体中的Fc区可以包含使抗体依赖性细胞毒活性(ADCC)、补体依赖性细胞毒活性(CDC)下降的突变。L234A是指人Igγ1恒定区的氨基酸第234位的亮氨酸向丙氨酸的置换。L235A是指人Igγ1恒定区的氨基酸第235位的亮氨酸向丙氨酸的置换。将人Igγ1恒定区L234A和L235A的氨基酸突变称为“LALA突变”。在此，上述第234位和第235位为人Igγ1恒定区中的根据EU索引的氨基酸位置。关于该突变，已知使抗体的ADCC、CDC下降(Mol.Immunol.，1992，Vol.29，p.633-639；J.Immunol.，2000，Vol.164，p.4178-4184)。P331G或P331S是指人Igγ1恒定区的氨基酸第331位的脯氨酸向甘氨酸或丝氨酸的置换。在此，上述第331位为人Igγ1恒定区中的根据EU索引的氨基酸位置。关于该突变，已知使抗体的CDC下降(J.Immunol.，2000，Vol.164(8)，p.4178-4184)。
在一个实施方式中，本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体中含有的抗CLDN4IgG抗体包含含有L234A和L235A的氨基酸突变(LALA突变)的Fc区。在一个实施方式中，抗CLDN4 IgG抗体包含含有P331G或P331S突变中的任意一者的Fc区。在一个实施方式中，抗CLDN4 IgG抗体包含含有LALA突变和P331G或P331S突变中的任意一种突变的Fc区。
本发明人在制造出本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体的过程中，制造出了新型的抗CD137抗体或其结合片段(scFv)。本发明人鉴定出了在仅与CD137结合的情况下不转导CD137信号、仅在与CD137和CLDN4同时结合的情况下转导CD137信号的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体。这些抗体在不与CLDN4结合的情况下不显示激动活性。另一方面，通过抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体与CLDN4和CD137结合，带来CD137信号转导和T细胞的活化。该作用被期待可以减轻在乌瑞芦单抗的临床试验中观察到的肝毒性等，因此，可期待为作为双特异性抗体中使用的抗CD137抗体优选的特征。
在一个实施方式中，本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体包含以下的(a)～(d)中的任意一者中记载的抗CD137抗体的重链可变区和轻链可变区：
(a)包含由序列号10的氨基酸编号31至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号10的氨基酸编号50至66的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号10的氨基酸编号99至107的氨基酸序列构成的CDR3的重链可变区、以及包含由序列号12的氨基酸编号24至34的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号12的氨基酸编号50至56的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号12的氨基酸编号89至98的氨基酸序列构成的CDR3的轻链可变区；
(b)包含由序列号14的氨基酸编号31至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号14的氨基酸编号50至65的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号14的氨基酸编号98至107的氨基酸序列构成的CDR3的重链可变区、以及包含由序列号16的氨基酸编号23至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号16的氨基酸编号51至57的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号16的氨基酸编号90至100的氨基酸序列构成的CDR3的轻链可变区；
(c)包含由序列号18的氨基酸编号31至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号18的氨基酸编号50至65的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号18的氨基酸编号98至107的氨基酸序列构成的CDR3的重链可变区、以及包含由序列号20的氨基酸编号23至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号20的氨基酸编号51至57的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号20的氨基酸编号90至100的氨基酸序列构成的CDR3的轻链可变区；或者
(d)包含由序列号22的氨基酸编号31至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号22的氨基酸编号50至65的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号22的氨基酸编号98至110的氨基酸序列构成的CDR3的重链可变区、以及包含由序列号24的氨基酸编号23至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号24的氨基酸编号51至57的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号24的氨基酸编号90至100的氨基酸序列构成的CDR3的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体包含以下的(a)～(i)中的任意一者中记载的抗CD137抗体的重链可变区和轻链可变区：
(a)由序列号10的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号12的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(b)由序列号14的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号16的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(c)由序列号18的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号20的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(d)由序列号22的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号24的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(e)由序列号26的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号26的氨基酸编号134至242的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(f)由序列号28的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号28的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(g)由序列号30的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的轻链可变区和由序列号30的氨基酸编号132至249的氨基酸序列构成的重链可变区；
(h)由序列号32的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号32的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的轻链可变区；或者
(i)由序列号34的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号34的氨基酸编号137至247的氨基酸序列构成的轻链可变区。
本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体中，作为抗CD137抗体，可以包含IgG抗体等全长的抗体，或者可以包含Fab片段、Fab’片段、F(ab’)2片段、scFv等抗原结合片段。在一个实施方式中，抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体中含有的抗CD137抗体为抗CD137抗体的抗原结合片段。在一个实施方式中，抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体中含有的抗CD137抗体的抗原结合片段为抗CD137scFv。
在一个实施方式中，本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体包含含有以下的(a)～(m)中记载的抗CD137抗体的重链可变区和轻链可变区的抗CD137scFv：
(a)包含由序列号10的氨基酸编号31至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号10的氨基酸编号50至66的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号10的氨基酸编号99至107的氨基酸序列构成的CDR3的重链可变区、以及包含由序列号12的氨基酸编号24至34的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号12的氨基酸编号50至56的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号12的氨基酸编号89至98的氨基酸序列构成的CDR3的轻链可变区；
(b)包含由序列号14的氨基酸编号31至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号14的氨基酸编号50至65的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号14的氨基酸编号98至107的氨基酸序列构成的CDR3的重链可变区、以及包含由序列号16的氨基酸编号23至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号16的氨基酸编号51至57的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号16的氨基酸编号90至100的氨基酸序列构成的CDR3的轻链可变区；
(c)包含由序列号18的氨基酸编号31至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号18的氨基酸编号50至65的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号18的氨基酸编号98至107的氨基酸序列构成的CDR3的重链可变区、以及包含由序列号20的氨基酸编号23至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号20的氨基酸编号51至57的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号20的氨基酸编号90至100的氨基酸序列构成的CDR3的轻链可变区；
(d)包含由序列号22的氨基酸编号31至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号22的氨基酸编号50至65的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号22的氨基酸编号98至110的氨基酸序列构成的CDR3的重链可变区、以及包含由序列号24的氨基酸编号23至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号24的氨基酸编号51至57的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号24的氨基酸编号90至100的氨基酸序列构成的CDR3的轻链可变区；
(e)由序列号10的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号12的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(f)由序列号14的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号16的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(g)由序列号18的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号20的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(h)由序列号22的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号24的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(i)由序列号26的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号26的氨基酸编号134至242的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(j)由序列号28的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号28的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(k)由序列号30的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的轻链可变区和由序列号30的氨基酸编号132至249的氨基酸序列构成的重链可变区；
(l)由序列号32的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号32的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的轻链可变区；或者
(m)由序列号34的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号34的氨基酸编号137至247的氨基酸序列构成的轻链可变区。
抗CD137scFv中，将抗CD137抗体的重链可变区与轻链可变区连接的接头的种类和长度没有特别限制，本领域技术人员能够适宜选择。作为接头，可以使用肽接头。优选长度为5个氨基酸以上(上限没有特别限定，但通常为30个氨基酸以下，优选为20个氨基酸以下)，特别优选为15个氨基酸。作为接头，例如可以使用甘氨酸-丝氨酸接头(GS接头)、甘氨酸-赖氨酸-脯氨酸-甘氨酸-丝氨酸接头(GKPGS接头)。作为这样的接头，例如可举出以下示例。
Ser
Gly-Ser
Gly-Gly-Ser
Ser-Gly-Gly
Gly-Gly-Gly-Ser(序列号46)
Ser-Gly-Gly-Gly(序列号47)
Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(序列号48)
Ser-Gly-Gly-Gly-Gly(序列号49)
Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(序列号50)
Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly(序列号51)
Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(序列号52)
Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly(序列号53)
Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(序列号54)
(Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)n
(Ser-Gly-Gly-Gly-Gly)n
Gly-Lys-Pro-Gly-Ser(序列号55)
(Gly-Lys-Pro-Gly-Ser)n
上述的n表示1以上的整数。另外，某一方式中，上述的n为1～10、2～8或2～6。对于接头的长度、序列，本领域技术人员可以根据目的适宜选择。在一个实施方式中，抗CD137scFv中使用的接头为GS接头。在一个实施方式中，抗CD137scFv中使用的接头为(Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)n的GS接头，n为3或4中的任意一者。
在一个实施方式中，本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体包含以下的(a)～(e)中的任意一者的抗CD137scFv：
(a)由序列号26的氨基酸编号1至242的氨基酸序列构成的抗CD137scFv；
(b)由序列号28的氨基酸编号1至244的氨基酸序列构成的抗CD137scFv；
(c)由序列号30的氨基酸编号1至249的氨基酸序列构成的抗CD137scFv；
(d)由序列号32的氨基酸编号1至244的氨基酸序列构成的抗CD137scFv；或者
(e)由序列号34的氨基酸编号1至247的氨基酸序列构成的抗CD137scFv。
本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体中，抗CLDN4抗体或其抗原结合片段与抗CD137抗体或其抗原结合片段可以由接头连接。将抗CLDN4抗体或其抗原结合片段与抗CD137抗体或其抗原结合片段连接的接头的种类和长度没有特别限制，本领域技术人员可以适宜选择。作为接头，可以使用肽接头。优选长度为5个氨基酸以上(上限没有特别限定，但通常为30个氨基酸以下，优选为20个氨基酸以下)，特别优选为10个氨基酸。作为肽接头，例如可以使用甘氨酸-丝氨酸接头(GS接头)、甘氨酸-赖氨酸-脯氨酸-甘氨酸-丝氨酸接头(GKPGS接头)。作为这样的接头，例如可举出以下示例。
Ser
Gly-Ser
Gly-Gly-Ser
Ser-Gly-Gly
Gly-Gly-Gly-Ser(序列号46)
Ser-Gly-Gly-Gly(序列号47)
Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(序列号48)
Ser-Gly-Gly-Gly-Gly(序列号49)
Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(序列号50)
Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly(序列号51)
Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(序列号52)
Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly(序列号53)
Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(序列号54)
(Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)n
(Ser-Gly-Gly-Gly-Gly)n
Gly-Lys-Pro-Gly-Ser(序列号55)
(Gly-Lys-Pro-Gly-Ser)n
上述的n表示1以上的整数。另外，某一方式中，上述的n为1～10、2～8或2～6。对于肽接头的长度、序列，本领域技术人员可以根据目的适宜选择。在一个实施方式中，作为将抗CLDN4抗体或其抗原结合片段与抗CD137抗体或其抗原结合片段连接的接头使用的接头为GS接头或GKPGS接头，在一个实施方式中，为由序列号54的氨基酸序列构成的接头。
在一个实施方式中，本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体包含抗CLDN4 IgG抗体和抗CD137scFv，且具有抗CLDN4 IgG抗体与抗CD137scFv经由接头连接的结构。抗CLDN4IgG抗体与抗CD137scFv的连接部位没有特别限定，但例如本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体可以采取在抗CD137scFv的羧基末端连接着抗CLDN4 IgG抗体的重链氨基末端、在抗CD137scFv的羧基末端连接着抗CLDN4 IgG抗体的轻链氨基末端、在抗CLDN4 IgG抗体的重链羧基末端连接着抗CD137scFv的氨基末端、在抗CLDN4 IgG抗体的轻链羧基末端连接着抗CD137scFv的氨基末端等各种结构。在一个实施方式中，本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体中，在抗CLDN4 IgG抗体的重链羧基末端连接着抗CD137scFv的氨基末端、或在抗CLDN4IgG抗体的轻链羧基末端连接着抗CD137scFv的氨基末端。在一个实施方式中，本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体中，在抗CLDN4IgG抗体的重链羧基末端连接着抗CD137scFv的氨基末端。
在一个实施方式中，本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体为如下的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体，即，包含抗CLDN4 IgG抗体和抗CD137scFv，在抗CLDN4 IgG抗体的重链或轻链羧基末端经由接头连接着抗CD137scFv的氨基末端，抗CD137scFv的重链可变区和轻链可变区为以下的(a)～(m)中的任意一者：
(a)包含由序列号10的氨基酸编号31至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号10的氨基酸编号50至66的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号10的氨基酸编号99至107的氨基酸序列构成的CDR3的重链可变区、以及包含由序列号12的氨基酸编号24至34的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号12的氨基酸编号50至56的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号12的氨基酸编号89至98的氨基酸序列构成的CDR3的轻链可变区；
(b)包含由序列号14的氨基酸编号31至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号14的氨基酸编号50至65的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号14的氨基酸编号98至107的氨基酸序列构成的CDR3的重链可变区、以及包含由序列号16的氨基酸编号23至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号16的氨基酸编号51至57的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号16的氨基酸编号90至100的氨基酸序列构成的CDR3的轻链可变区；
(c)包含由序列号18的氨基酸编号31至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号18的氨基酸编号50至65的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号18的氨基酸编号98至107的氨基酸序列构成的CDR3的重链可变区、以及包含由序列号20的氨基酸编号23至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号20的氨基酸编号51至57的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号20的氨基酸编号90至100的氨基酸序列构成的CDR3的轻链可变区；
(d)包含由序列号22的氨基酸编号31至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号22的氨基酸编号50至65的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号22的氨基酸编号98至110的氨基酸序列构成的CDR3的重链可变区、以及包含由序列号24的氨基酸编号23至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号24的氨基酸编号51至57的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号24的氨基酸编号90至100的氨基酸序列构成的CDR3的轻链可变区；
(e)由序列号10的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号12的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(f)由序列号14的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号16的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(g)由序列号18的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号20的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(h)由序列号22的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号24的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(i)由序列号26的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号26的氨基酸编号134至242的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(j)由序列号28的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号28的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(k)由序列号30的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的轻链可变区和由序列号30的氨基酸编号132至249的氨基酸序列构成的重链可变区；
(l)由序列号32的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号32的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的轻链可变区；或者
(m)由序列号34的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号34的氨基酸编号137至247的氨基酸序列构成的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体为如下的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体，即，包含抗CLDN4 IgG抗体和抗CD137scFv，在抗CLDN4 IgG抗体的重链或轻链羧基末端经由接头连接着抗CD137scFv的氨基末端，抗CD137scFv为以下的(a)～(e)中的任意一者：
(a)由序列号26的氨基酸编号1至242的氨基酸序列构成的抗CD137scFv；
(b)由序列号28的氨基酸编号1至244的氨基酸序列构成的抗CD137scFv；
(c)由序列号30的氨基酸编号1至249的氨基酸序列构成的抗CD137scFv；
(d)由序列号32的氨基酸编号1至244的氨基酸序列构成的抗CD137scFv；或者
(e)由序列号34的氨基酸编号1至247的氨基酸序列构成的抗CD137scFv。
在一个实施方式中，本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体为以下的(a)～(h)中的任意一者的抗CLDN4-抗CD137scFv双特异性抗体：
(a)包含含有包含由序列号2的氨基酸编号31至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号2的氨基酸编号50至66的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号2的氨基酸编号99至114的氨基酸序列构成的CDR3的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链、含有包含由序列号4的氨基酸编号24至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号4的氨基酸编号51至57的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号4的氨基酸编号90至98的氨基酸序列构成的CDR3的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及含有包含由序列号10的氨基酸编号31至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号10的氨基酸编号50至66的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号10的氨基酸编号99至107的氨基酸序列构成的CDR3的重链可变区、以及包含由序列号12的氨基酸编号24至34的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号12的氨基酸编号50至56的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号12的氨基酸编号89至98的氨基酸序列构成的CDR3的轻链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的双特异性抗体；
(b)包含含有包含由序列号2的氨基酸编号31至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号2的氨基酸编号50至66的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号2的氨基酸编号99至114的氨基酸序列构成的CDR3的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链、含有包含由序列号4的氨基酸编号24至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号4的氨基酸编号51至57的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号4的氨基酸编号90至98的氨基酸序列构成的CDR3的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及含有包含由序列号14的氨基酸编号31至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号14的氨基酸编号50至65的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号14的氨基酸编号98至107的氨基酸序列构成的CDR3的重链可变区、以及包含由序列号16的氨基酸编号23至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号16的氨基酸编号51至57的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号16的氨基酸编号90至100的氨基酸序列构成的CDR3的轻链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的双特异性抗体；
(c)包含含有包含由序列号2的氨基酸编号31至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号2的氨基酸编号50至66的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号2的氨基酸编号99至114的氨基酸序列构成的CDR3的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链、含有包含由序列号4的氨基酸编号24至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号4的氨基酸编号51至57的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号4的氨基酸编号90至98的氨基酸序列构成的CDR3的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及含有包含由序列号18的氨基酸编号31至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号18的氨基酸编号50至65的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号18的氨基酸编号98至107的氨基酸序列构成的CDR3的重链可变区、以及包含由序列号20的氨基酸编号23至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号20的氨基酸编号51至57的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号20的氨基酸编号90至100的氨基酸序列构成的CDR3的轻链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的双特异性抗体；
(d)包含含有包含由序列号2的氨基酸编号31至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号2的氨基酸编号50至66的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号2的氨基酸编号99至114的氨基酸序列构成的CDR3的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链、含有包含由序列号4的氨基酸编号24至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号4的氨基酸编号51至57的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号4的氨基酸编号90至98的氨基酸序列构成的CDR3的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及含有包含由序列号22的氨基酸编号31至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号22的氨基酸编号50至65的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号22的氨基酸编号98至110的氨基酸序列构成的CDR3的重链可变区、以及包含由序列号24的氨基酸编号23至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号24的氨基酸编号51至57的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号24的氨基酸编号90至100的氨基酸序列构成的CDR3的轻链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的双特异性抗体；
(e)包含含有包含由序列号6的氨基酸编号31至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号6的氨基酸编号50至66的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号6的氨基酸编号99至112的氨基酸序列构成的CDR3的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链、含有包含由序列号8的氨基酸编号24至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号8的氨基酸编号51至57的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号8的氨基酸编号90至98的氨基酸序列构成的CDR3的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及含有包含由序列号10的氨基酸编号31至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号10的氨基酸编号50至66的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号10的氨基酸编号99至107的氨基酸序列构成的CDR3的重链可变区、以及包含由序列号12的氨基酸编号24至34的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号12的氨基酸编号50至56的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号12的氨基酸编号89至98的氨基酸序列构成的CDR3的轻链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的双特异性抗体；
(f)包含含有包含由序列号6的氨基酸编号31至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号6的氨基酸编号50至66的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号6的氨基酸编号99至112的氨基酸序列构成的CDR3的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链、含有包含由序列号8的氨基酸编号24至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号8的氨基酸编号51至57的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号8的氨基酸编号90至98的氨基酸序列构成的CDR3的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及含有包含由序列号14的氨基酸编号31至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号14的氨基酸编号50至65的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号14的氨基酸编号98至107的氨基酸序列构成的CDR3的重链可变区、以及包含由序列号16的氨基酸编号23至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号16的氨基酸编号51至57的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号16的氨基酸编号90至100的氨基酸序列构成的CDR3的轻链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的双特异性抗体；
(g)包含含有包含由序列号6的氨基酸编号31至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号6的氨基酸编号50至66的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号6的氨基酸编号99至112的氨基酸序列构成的CDR3的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链、含有包含由序列号8的氨基酸编号24至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号8的氨基酸编号51至57的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号8的氨基酸编号90至98的氨基酸序列构成的CDR3的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及含有包含由序列号18的氨基酸编号31至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号18的氨基酸编号50至65的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号18的氨基酸编号98至107的氨基酸序列构成的CDR3的重链可变区、以及包含由序列号20的氨基酸编号23至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号20的氨基酸编号51至57的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号20的氨基酸编号90至100的氨基酸序列构成的CDR3的轻链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的双特异性抗体；或者
(h)包含含有包含由序列号6的氨基酸编号31至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号6的氨基酸编号50至66的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号6的氨基酸编号99至112的氨基酸序列构成的CDR3的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链、含有包含由序列号8的氨基酸编号24至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号8的氨基酸编号51至57的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号8的氨基酸编号90至98的氨基酸序列构成的CDR3的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及含有包含由序列号22的氨基酸编号31至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号22的氨基酸编号50至65的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号22的氨基酸编号98至110的氨基酸序列构成的CDR3的重链可变区、以及包含由序列号24的氨基酸编号23至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号24的氨基酸编号51至57的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号24的氨基酸编号90至100的氨基酸序列构成的CDR3的轻链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的双特异性抗体。
在一个实施方式中，本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体为以下的(a)～(j)中的任意一者的抗CLDN4-抗CD137scFv双特异性抗体：
(a)含有包含由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链和包含由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及包含由序列号26的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号26的氨基酸编号134至242的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的双特异性抗体；
(b)含有包含由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链和包含由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及包含由序列号28的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号28的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的双特异性抗体；
(c)含有包含由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链和包含由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及包含由序列号30的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的轻链可变区和由序列号30的氨基酸编号132至249的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的双特异性抗体；
(d)含有包含由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链和包含由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及包含由序列号32的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号32的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的双特异性抗体；
(e)含有包含由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链和包含由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及包含由序列号34的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号34的氨基酸编号137至247的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的双特异性抗体；
(f)含有包含由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链和包含由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及包含由序列号26的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号26的氨基酸编号134至242的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的双特异性抗体；
(g)含有包含由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链和包含由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及包含由序列号28的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号28的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的双特异性抗体；
(h)含有包含由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链和包含由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及包含由序列号30的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的轻链可变区和由序列号30的氨基酸编号132至249的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的双特异性抗体；
(i)含有包含由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链和包含由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及包含由序列号32的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号32的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的双特异性抗体；
(j)含有包含由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链和包含由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及包含由序列号34的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号34的氨基酸编号137至247的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的双特异性抗体；
(k)含有包含由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链和包含由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及包含由序列号26的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号26的氨基酸编号134至242的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的轻链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的双特异性抗体；
(l)含有包含由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链和包含由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及包含由序列号28的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号28的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的轻链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的双特异性抗体；
(m)含有包含由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链和包含由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及包含由序列号30的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的轻链可变区和由序列号30的氨基酸编号132至249的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的轻链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的双特异性抗体；
(n)含有包含由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链和包含由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及包含由序列号32的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号32的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的轻链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的双特异性抗体；
(o)含有包含由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链和包含由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及包含由序列号34的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号34的氨基酸编号137至247的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的轻链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的双特异性抗体；
(p)含有包含由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链和包含由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及包含由序列号26的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号26的氨基酸编号134至242的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的轻链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的双特异性抗体；
(q)含有包含由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链和包含由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及包含由序列号28的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号28的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的轻链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的双特异性抗体；
(r)含有包含由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链和包含由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及包含由序列号30的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的轻链可变区和由序列号30的氨基酸编号132至249的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的轻链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的双特异性抗体；
(s)含有包含由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链和包含由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及包含由序列号32的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号32的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的轻链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的双特异性抗体；或者
(t)含有包含由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链和包含由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及包含由序列号34的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号34的氨基酸编号137至247的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的轻链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的双特异性抗体。
在一个实施方式中，本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体为以下的(a)或(b)的抗CLDN4-抗CD137scFv双特异性抗体：
(a)含有由序列号36的氨基酸编号1至705的氨基酸序列构成的包含抗CLDN4抗体的重链和抗CD137scFv的多肽、以及包含由序列号40的氨基酸编号1至215的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链的多肽的双特异性抗体；或者
(b)含有由序列号38的氨基酸编号1至712的氨基酸序列构成的包含抗CLDN4抗体的重链和抗CD137scFv的多肽、以及由序列号40的氨基酸编号1至215的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链的双特异性抗体。
本说明书中，“翻译后修饰”是指在细胞内表达抗体时抗体在翻译后接受修饰。作为翻译后修饰的例子，可举出重链N末端的谷氨酰胺或谷氨酸的焦谷氨酰化、糖基化、氧化、脱酰胺化、糖化等修饰、重链C末端的赖氨酸被羧肽酶切断而导致的赖氨酸缺失。已知在各种抗体中发生这样的翻译后修饰(J.Pharm.Sci.，2008，Vol.97，p.2426-2447)。
在一个实施方式中，本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体也可以经过了翻译后修饰。在一个实施方式中，翻译后修饰为重链可变区N末端的焦谷氨酰化和/或重链C末端赖氨酸缺失。基于N末端的焦谷氨酰化或C末端赖氨酸缺失的翻译后修饰不会对抗体的活性造成影响，这是本领域中已知的(Analytical Biochemistry，2006，Vol.348，p.24-39)。
本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体与人CLDN4和人CD137结合。是否与人CLDN4和人CD137结合可以使用公知的结合活性测定方法来确认。作为测定结合活性的方法，例如可举出ELISA法、流式细胞术法等方法。ELISA法或流式细胞术法可以利用本领域技术人员通常使用的方法来实施，例如可以使用实施例3或5中记载的方法。
本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体可以由本领域技术人员使用人CLDN4和人CD137作为抗原、并使用本领域公知的抗体制作技术来容易地制作，或者可以由本领域技术人员基于本说明书中公开的抗CLDN4抗体和抗CD137抗体的重链可变区和轻链可变区的序列信息等，使用本领域公知的方法来容易地制作。
本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体没有特别限制，但例如可以按照后述的＜生产本发明的双特异性抗体的方法＞中记载的方法来制造。
＜本发明的双特异性抗体的多核苷酸＞
本发明还提供能够用于本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体的生产的多核苷酸(也称为“本发明的双特异性抗体的多核苷酸”)。
在一个实施方式中，本发明的双特异性抗体的多核苷酸为选自由下述(a)～(d)组成的组、且包含编码抗CLDN4抗体的重链可变区或轻链可变区的碱基序列的多核苷酸：
(a)包含编码由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(b)包含编码由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(c)包含编码由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；或者
(d)包含编码由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸。
在一个实施方式中，本发明的双特异性抗体的多核苷酸为选自下述(a)或(b)、且包含编码抗CLDN4抗体的重链可变区和轻链可变区的碱基序列的多核苷酸：
(a)包含编码由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸和包含编码由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；或者
(b)包含编码由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸和包含编码由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸。
在一个实施方式中，本发明的双特异性抗体的多核苷酸为选自由下述(a)～(r)组成的组、且包含编码抗CD137抗体的重链可变区或轻链可变区的碱基序列的多核苷酸：
(a)包含编码由序列号10的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(b)包含编码由序列号12的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(c)包含编码由序列号14的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(d)包含编码由序列号16的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(e)包含编码由序列号18的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(f)包含编码由序列号20的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(g)包含编码由序列号22的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(h)包含编码由序列号24的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(i)包含编码由序列号26的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(j)包含编码由序列号26的氨基酸编号134至242的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(k)包含编码由序列号28的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(l)包含编码由序列号28的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(m)包含编码由序列号30的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(n)包含编码由序列号30的氨基酸编号132至249的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(o)包含编码由序列号32的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(p)包含编码由序列号32的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(q)包含编码由序列号34的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；或者
(r)包含编码由序列号34的氨基酸编号137至247的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸。
在一个实施方式中，本发明的双特异性抗体的多核苷酸为选自由下述(a)～(i)组成的组、且包含编码抗CD137抗体的重链可变区和轻链可变区的碱基序列的多核苷酸：
(a)包含编码由序列号10的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸和包含编码由序列号12的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(b)包含编码由序列号14的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸和包含编码由序列号16的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(c)包含编码由序列号18的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸和包含编码由序列号20的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(d)包含编码由序列号22的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸和包含编码由序列号24的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(e)包含编码由序列号26的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸和包含编码由序列号26的氨基酸编号134至242的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(f)包含编码由序列号28的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸和包含编码由序列号28的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(g)包含编码由序列号30的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸和包含编码由序列号30的氨基酸编号132至249的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(h)包含编码由序列号32的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸和包含编码由序列号32的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；或者
(i)包含编码由序列号34的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸和包含编码由序列号34的氨基酸编号137至247的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸。
在一个实施方式中，本发明的双特异性抗体的多核苷酸为选自由下述(a)～(e)组成的组、且包含编码抗CD137scFv的碱基序列的多核苷酸：
(a)包含编码由序列号26的氨基酸编号1至242的氨基酸序列构成的抗CD137scFv的碱基序列的多核苷酸；
(b)包含编码由序列号28的氨基酸编号1至244的氨基酸序列构成的抗CD137scFv的碱基序列的多核苷酸；
(c)包含编码由序列号30的氨基酸编号1至249的氨基酸序列构成的抗CD137scFv的碱基序列的多核苷酸；
(d)包含编码由序列号32的氨基酸编号1至244的氨基酸序列构成的抗CD137scFv的碱基序列的多核苷酸；或者
(e)包含编码由序列号34的氨基酸编号1至247的氨基酸序列构成的抗CD137scFv的碱基序列的多核苷酸。
在一个实施方式中，本发明的双特异性抗体的多核苷酸为选自由下述(a)～(e)组成的组中的多核苷酸：
(a)包含编码由序列号36的氨基酸编号1至705的氨基酸序列构成的包含抗CLDN4抗体的重链和抗CD137scFv的多肽的碱基序列的多核苷酸；
(b)包含编码由序列号38的氨基酸编号1至712的氨基酸序列构成的包含抗CLDN4抗体的重链和抗CD137scFv的多肽的碱基序列的多核苷酸；
(c)包含编码由序列号40的氨基酸编号1至215的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链的碱基序列的多核苷酸；
(d)包含编码由序列号36的氨基酸编号1至705的氨基酸序列构成的包含抗CLDN4抗体的重链和抗CD137scFv的多肽的碱基序列的多核苷酸、以及包含编码由序列号40的氨基酸编号1至215的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链的碱基序列的多核苷酸；或者
(e)包含编码由序列号38的氨基酸编号1至712的氨基酸序列构成的包含抗CLDN4抗体的重链和抗CD137scFv的多肽的碱基序列的多核苷酸、以及包含编码由序列号40的氨基酸编号1至215的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链的碱基序列的多核苷酸。
本发明的双特异性抗体的多核苷酸可以由本领域技术人员基于其碱基序列使用本领域公知的方法而容易地制作。例如本发明的双特异性抗体的多核苷酸能够利用本领域公知的基因合成方法来合成。作为这样的基因合成方法，可以使用国际公开号90/07861号中记载的抗体基因的合成方法等本领域技术人员公知的各种方法。
＜本发明的双特异性抗体的表达载体＞
本发明还提供包含本发明的双特异性抗体的多核苷酸的表达载体(也称为“本发明的双特异性抗体的表达载体”)。这些多核苷酸可以各自包含于不同的载体，或者可以多个多核苷酸包含于1个载体。
在一个实施方式中，本发明的双特异性抗体的表达载体包含选自由下述(a)～(aa)组成的组中的多核苷酸：
(a)包含编码由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(b)包含编码由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(c)包含编码由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(d)包含编码由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(e)包含编码由序列号10的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(f)包含编码由序列号12的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(g)包含编码由序列号14的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(h)包含编码由序列号16的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(i)包含编码由序列号18的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(j)包含编码由序列号20的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(k)包含编码由序列号22的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(l)包含编码由序列号24的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(m)包含编码由序列号26的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(n)包含编码由序列号26的氨基酸编号134至242的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(o)包含编码由序列号28的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(p)包含编码由序列号28的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(q)包含编码由序列号30的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(r)包含编码由序列号30的氨基酸编号132至249的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(s)包含编码由序列号32的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(t)包含编码由序列号32的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(u)包含编码由序列号34的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(v)包含编码由序列号34的氨基酸编号137至247的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(w)包含编码由序列号26的氨基酸编号1至242的氨基酸序列构成的抗CD137scFv的碱基序列的多核苷酸；
(x)包含编码由序列号28的氨基酸编号1至244的氨基酸序列构成的抗CD137scFv的碱基序列的多核苷酸；
(y)包含编码由序列号30的氨基酸编号1至249的氨基酸序列构成的抗CD137scFv的碱基序列的多核苷酸；
(z)包含编码由序列号32的氨基酸编号1至244的氨基酸序列构成的抗CD137scFv的碱基序列的多核苷酸；或者
(aa)包含编码由序列号34的氨基酸编号1至247的氨基酸序列构成的抗CD137scFv的碱基序列的多核苷酸。
在一个实施方式中，本发明的双特异性抗体的表达载体包含选自由下述(a)～(k)组成的组中的多核苷酸：
(a)包含编码由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸和包含编码由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(b)包含编码由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸和包含编码由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(c)包含编码由序列号10的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸和包含编码由序列号12的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(d)包含编码由序列号14的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸和包含编码由序列号16的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(e)包含编码由序列号18的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸和包含编码由序列号20的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(f)包含编码由序列号22的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸和包含编码由序列号24的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(g)包含编码由序列号26的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸和包含编码由序列号26的氨基酸编号134至242的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(h)包含编码由序列号28的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸和包含编码由序列号28的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(i)包含编码由序列号30的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸和包含编码由序列号30的氨基酸编号132至249的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(j)包含编码由序列号32的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸和包含编码由序列号32的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；或者
(k)包含编码由序列号34的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸和包含编码由序列号34的氨基酸编号137至247的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸。
在一个实施方式中，本发明的双特异性抗体的表达载体包含选自由下述(a)～(c)组成的组中的多核苷酸：
(a)包含编码由序列号36的氨基酸编号1至705的氨基酸序列构成的包含抗CLDN4抗体的重链和抗CD137scFv的多肽的碱基序列的多核苷酸；
(b)包含编码由序列号38的氨基酸编号1至712的氨基酸序列构成的包含抗CLDN4抗体的重链和抗CD137scFv的多肽的碱基序列的多核苷酸；或者
(c)包含编码由序列号40的氨基酸编号1至215的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链的碱基序列的多核苷酸。
在一个实施方式中，本发明的双特异性抗体的表达载体包含选自下述(a)或(b)的多核苷酸：
(a)包含编码由序列号36的氨基酸编号1至705的氨基酸序列构成的包含抗CLDN4抗体的重链和抗CD137scFv的多肽的碱基序列的多核苷酸、以及包含编码由序列号40的氨基酸编号1至215的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链的碱基序列的多核苷酸；或者
(b)包含编码由序列号38的氨基酸编号1至712的氨基酸序列构成的包含抗CLDN4抗体的重链和抗CD137scFv的多肽的碱基序列的多核苷酸、以及包含编码由序列号40的氨基酸编号1至215的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链的碱基序列的多核苷酸。
本发明的双特异性抗体的表达载体只要能够在真核细胞(例如动物细胞、昆虫细胞、植物细胞、酵母)和/或原核细胞(例如大肠杆菌)等各种宿主细胞中产生本发明的多核苷酸则没有特别限制。作为这样的表达载体，例如可举出质粒载体、病毒载体等。作为质粒载体，例如可以使用pcDNA系列(Thermo Fisher Scientific公司)、pALTER(注册商标)-MAX(普洛麦格)、pHEK293超级表达载体(宝生物公司)、pEE6.4或pEE12.4(Lonza Biologics公司)等。作为病毒载体，例如可以使用慢病毒、腺病毒、逆转录病毒、腺相关病毒。例如，在为了向细胞导入本发明的多核苷酸而使用慢病毒时，该慢病毒可以使用pLVSIN-CMV/EF1α载体(宝生物公司)、pLenti载体(Thermo Fisher Scientific公司)等。在一个实施方式中，本发明的双特异性抗体的表达载体中使用的载体为pcDNA 3.4-TOPO(注册商标)(ThermoFisher Scientific公司)和pcDNA 3.1(Thermo Fisher Scientific公司)。
本发明的双特异性抗体的表达载体可以包含以可操作的方式与本发明的双特异性抗体的多核苷酸连接的启动子。作为用于在动物细胞中表达本发明的双特异性抗体的多核苷酸的启动子，例如可举出CMV、RSV、SV40等病毒来源启动子、肌动蛋白启动子、EF(elongation factor，延伸因子)1α启动子、热休克启动子等。作为用于在细菌(例如埃希氏菌属菌)中表达本发明的双特异性抗体的多核苷酸的启动子，例如可举出trp启动子、lac启动子、λPL启动子、tac启动子等。作为用于在酵母中表达本发明的双特异性抗体的多核苷酸的启动子，例如可举出GAL1启动子、GAL10启动子、PH05启动子、PGK启动子、GAP启动子、ADH启动子等。
使用动物细胞、昆虫细胞或酵母作为宿主细胞时，本发明的双特异性抗体的表达载体可以包含起始密码子和终止密码子。这种情况下，可以包含增强子序列、编码本发明的抗体或其重链或轻链的基因的5’侧和3’侧的非翻译区、分泌信号序列、剪接接合部、多聚腺苷酸化部位、或可复制单元等。使用大肠杆菌作为宿主细胞时，本发明的表达载体可以包含起始密码子、终止密码子、终止子区域和可复制单元。本发明的表达载体可以根据目的包含通常使用的药剂选择标记基因(例如四环素抗性基因、氨苄青霉素抗性基因、卡那霉素抗性基因、新霉素抗性基因、二氢叶酸还原酶基因)。
＜本发明的宿主细胞＞
本发明还提供利用本发明的双特异性抗体的多核苷酸或本发明的双特异性抗体的表达载体(也称为“本发明的多核苷酸等”)进行了转化的宿主细胞(也称为“本发明的宿主细胞”)。本发明的宿主细胞在细胞内含有本发明的多核苷酸等。所导入的本发明的多核苷酸等可以整合到宿主细胞的基因组DNA，也可以不整合到宿主细胞的基因组DNA。作为宿主细胞使用的细胞可以为能够在体外培养的细胞或生物体内的细胞中的任意一者。在宿主细胞为能够在体外培养的细胞的情况下，可以通过将本发明的多核苷酸等在体外导入到细胞中来制作本发明的宿主细胞。转化宿主细胞的方法没有特别限制，但例如可以使用磷酸钙法、电穿孔法或脂质体转染法等本领域技术人员通常使用的方法。在宿主细胞为生物体内的细胞的情况下，向宿主细胞中导入本发明的多核苷酸等的方法没有特别限制，但可以使用核酸递送用载体(阳离子性载体或非阳离子性载体(例如包括脂质体、脂质纳米粒子(LNP)，但并不限定于此)等)。
作为能够在体外培养的细胞，只要能够利用所使用的表达载体或电穿孔等方法进行转化、并表达抗体或多肽，则没有特别限制。作为能够在体外培养的细胞，例如可举出本发明的技术领域中通常使用的现有细胞或人工建立的细胞等各种细胞(例如动物细胞(例如CHO-K1细胞、ExpiCHO-S(注册商标)细胞、CHOK1SV细胞、CHO-DG44细胞、HEK293细胞、Expi293F细胞、NS0细胞)、昆虫细胞(例如Sf9)、细菌(埃希氏菌属菌等)、酵母(酵母属、毕赤酵母属等)等)。在一个实施方式中，本发明的宿主细胞为Expi293F细胞、CHO-K1细胞、或ExpiCHO-S细胞。
在体外转化的宿主细胞的筛选可以利用本领域技术人员通常使用的方法来进行。作为筛选方法，可以使用例如利用了药剂选择标记基因和四环素、氨苄青霉素、新霉素或潮霉素等药剂的药剂选择法、有限稀释法、单细胞分选法、或菌落挑取法等细胞分离法。
在本发明的宿主细胞的一个实施方式中，该宿主细胞含有选自由下述(a)～(aa)组成的组中的多核苷酸：
(a)包含编码由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(b)包含编码由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(c)包含编码由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(d)包含编码由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(e)包含编码由序列号10的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(f)包含编码由序列号12的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(g)包含编码由序列号14的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(h)包含编码由序列号16的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(i)包含编码由序列号18的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(j)包含编码由序列号20的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(k)包含编码由序列号22的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(l)包含编码由序列号24的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(m)包含编码由序列号26的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(n)包含编码由序列号26的氨基酸编号134至242的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(o)包含编码由序列号28的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(p)包含编码由序列号28的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(q)包含编码由序列号30的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(r)包含编码由序列号30的氨基酸编号132至249的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(s)包含编码由序列号32的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(t)包含编码由序列号32的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(u)包含编码由序列号34的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(v)包含编码由序列号34的氨基酸编号137至247的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(w)包含编码由序列号26的氨基酸编号1至242的氨基酸序列构成的抗CD137scFv的碱基序列的多核苷酸；
(x)包含编码由序列号28的氨基酸编号1至244的氨基酸序列构成的抗CD137scFv的碱基序列的多核苷酸；
(y)包含编码由序列号30的氨基酸编号1至249的氨基酸序列构成的抗CD137scFv的碱基序列的多核苷酸；
(z)包含编码由序列号32的氨基酸编号1至244的氨基酸序列构成的抗CD137scFv的碱基序列的多核苷酸；或者
(aa)包含编码由序列号34的氨基酸编号1至247的氨基酸序列构成的抗CD137scFv的碱基序列的多核苷酸。
在一个实施方式中，该宿主细胞含有选自由下述(a)～(k)组成的组中的多核苷酸：
(a)包含编码由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸和包含编码由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(b)包含编码由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸和包含编码由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(c)包含编码由序列号10的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸和包含编码由序列号12的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(d)包含编码由序列号14的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸和包含编码由序列号16的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(e)包含编码由序列号18的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸和包含编码由序列号20的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(f)包含编码由序列号22的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸和包含编码由序列号24的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(g)包含编码由序列号26的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸和包含编码由序列号26的氨基酸编号134至242的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(h)包含编码由序列号28的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸和包含编码由序列号28的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(i)包含编码由序列号30的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸和包含编码由序列号30的氨基酸编号132至249的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(j)包含编码由序列号32的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸和包含编码由序列号32的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；或者
(k)包含编码由序列号34的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸和包含编码由序列号34的氨基酸编号137至247的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸。
在本发明的宿主细胞的一个实施方式中，该宿主细胞含有选自由下述(a)～(c)组成的组中的多核苷酸：
(a)包含编码由序列号36的氨基酸编号1至705的氨基酸序列构成的包含抗CLDN4抗体的重链和抗CD137scFv的多肽的碱基序列的多核苷酸；
(b)包含编码由序列号38的氨基酸编号1至712的氨基酸序列构成的包含抗CLDN4抗体的重链和抗CD137scFv的多肽的碱基序列的多核苷酸；或者
(c)包含编码由序列号40的氨基酸编号1至215的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链的碱基序列的多核苷酸。
在一个实施方式中，该宿主细胞含有选自下述(a)或(b)的多核苷酸：
(a)包含编码由序列号36的氨基酸编号1至705的氨基酸序列构成的包含抗CLDN4抗体的重链和抗CD137scFv的多肽的碱基序列的多核苷酸、以及包含编码由序列号40的氨基酸编号1至215的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链的碱基序列的多核苷酸；或者
(b)包含编码由序列号38的氨基酸编号1至712的氨基酸序列构成的包含抗CLDN4抗体的重链和抗CD137scFv的多肽的碱基序列的多核苷酸、以及包含编码由序列号40的氨基酸编号1至215的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链的碱基序列的多核苷酸。
在本发明的宿主细胞的一个实施方式中，该宿主细胞含有下述的(a)～(j)的多肽：
(a)包含编码含有包含由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链、以及包含由序列号26的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区和由序列号26的氨基酸编号134至242的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的抗CD137scFv、且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的多肽的碱基序列的多核苷酸、以及包含编码包含由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链的碱基序列的多核苷酸；
(b)包含编码含有包含由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链、以及包含由序列号28的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区和由序列号28的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的抗CD137scFv、且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的多肽的碱基序列的多核苷酸、以及包含编码包含由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链的碱基序列的多核苷酸；
(c)包含编码含有包含由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链、以及包含由序列号30的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区和由序列号30的氨基酸编号132至249的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的抗CD137scFv、且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的多肽的碱基序列的多核苷酸、以及包含编码包含由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链的碱基序列的多核苷酸；
(d)包含编码含有包含由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链、以及包含由序列号32的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区和由序列号32的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的抗CD137scFv、且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的多肽的碱基序列的多核苷酸、以及包含编码包含由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链的碱基序列的多核苷酸；
(e)包含编码含有包含由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链、以及包含由序列号34的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区和由序列号34的氨基酸编号137至247的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的抗CD137scFv、且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的多肽的碱基序列的多核苷酸、以及包含编码包含由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链的碱基序列的多核苷酸；
(f)包含编码含有包含由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链、以及包含由序列号26的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区和由序列号26的氨基酸编号134至242的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的抗CD137scFv、且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的多肽的碱基序列的多核苷酸、以及包含编码包含由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链的碱基序列的多核苷酸；
(g)包含编码含有包含由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链、以及包含由序列号28的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区和由序列号28的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的抗CD137scFv、且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的多肽的碱基序列的多核苷酸、以及包含编码包含由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链的碱基序列的多核苷酸；
(h)包含编码含有包含由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链、以及包含由序列号30的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区和由序列号30的氨基酸编号132至249的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的抗CD137scFv、且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的多肽的碱基序列的多核苷酸、以及包含编码包含由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链的碱基序列的多核苷酸；
(i)包含编码含有包含由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链、以及包含由序列号32的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区和由序列号32的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的抗CD137scFv、且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的多肽的碱基序列的多核苷酸、以及包含编码包含由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链的碱基序列的多核苷酸；或者
(j)包含编码含有包含由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链、以及包含由序列号34的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区和由序列号34的氨基酸编号137至247的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的抗CD137scFv、且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的多肽的碱基序列的多核苷酸、以及包含编码包含由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链的碱基序列的多核苷酸。
在本发明的宿主细胞的一个实施方式中，该宿主细胞为下述的(a)或(b)的宿主细胞：
(a)含有包含编码由序列号36的氨基酸编号1至705的氨基酸序列构成的包含抗CLDN4抗体的重链和抗CD137scFv的多肽的碱基序列的多核苷酸、以及包含编码由序列号40的氨基酸编号1至215的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链的碱基序列的多核苷酸的宿主细胞；或者
(b)含有包含编码由序列号38的氨基酸编号1至712的氨基酸序列构成的包含抗CLDN4抗体的重链和抗CD137scFv的多肽的碱基序列的多核苷酸、以及包含编码由序列号40的氨基酸编号1至215的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链的碱基序列的多核苷酸的宿主细胞。
在本发明的宿主细胞的一个实施方式中，该宿主细胞为含有包含编码由序列号38的氨基酸编号1至712的氨基酸序列构成的包含抗CLDN4抗体的重链和抗CD137scFv的多肽的碱基序列的多核苷酸、以及包含编码由序列号40的氨基酸编号1至215的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链的碱基序列的多核苷酸的宿主细胞。
＜生产本发明的双特异性抗体的方法＞
本发明还提供生产本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体的方法(也称为“本发明的生产方法”)。作为本发明的生产方法，可以包含前述的本发明的双特异性抗体的多核苷酸的生产方法、本发明的双特异性抗体的表达载体的生产方法和本发明的宿主细胞的生产方法。另外，作为本发明的生产方法，也可以包含对前述的＜本发明的宿主细胞＞中记载的宿主细胞进行培养、并在该细胞或该培养上清液中表达该抗体的步骤、回收该抗体并进行分离和纯化的方法等。然而，本发明的生产方法只要可生产本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体，则并不限定于这些方法。
在一个实施方式中，本发明的生产方法包括对下述的(a)～(j)的宿主细胞进行培养的步骤：
(a)含有包含编码含有包含由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链、以及包含由序列号26的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区和由序列号26的氨基酸编号134至242的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的抗CD137scFv、且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的多肽的碱基序列的多核苷酸、以及包含编码包含由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链的碱基序列的多核苷酸的宿主细胞；
(b)含有包含编码含有包含由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链、以及包含由序列号28的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区和由序列号28的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的抗CD137scFv、且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的多肽的碱基序列的多核苷酸、以及包含编码包含由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链的碱基序列的多核苷酸的宿主细胞；
(c)含有包含编码含有包含由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链、以及包含由序列号30的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区和由序列号30的氨基酸编号132至249的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的抗CD137scFv、且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的多肽的碱基序列的多核苷酸、以及包含编码包含由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链的碱基序列的多核苷酸的宿主细胞；
(d)含有包含编码含有包含由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链、以及包含由序列号32的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区和由序列号32的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的抗CD137scFv、且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的多肽的碱基序列的多核苷酸、以及包含编码包含由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链的碱基序列的多核苷酸的宿主细胞；
(e)含有包含编码含有包含由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链、以及包含由序列号34的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区和由序列号34的氨基酸编号137至247的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的抗CD137scFv、且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的多肽的碱基序列的多核苷酸、以及包含编码包含由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链的碱基序列的多核苷酸的宿主细胞；
(f)含有包含编码含有包含由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链、以及包含由序列号26的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区和由序列号26的氨基酸编号134至242的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的抗CD137scFv、且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的多肽的碱基序列的多核苷酸、以及包含编码包含由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链的碱基序列的多核苷酸的宿主细胞；
(g)含有包含编码含有包含由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链、以及包含由序列号28的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区和由序列号28的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的抗CD137scFv、且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的多肽的碱基序列的多核苷酸、以及包含编码包含由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链的碱基序列的多核苷酸的宿主细胞；
(h)含有包含编码含有包含由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链、以及包含由序列号30的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区和由序列号30的氨基酸编号132至249的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的抗CD137scFv、且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的多肽的碱基序列的多核苷酸、以及包含编码包含由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链的碱基序列的多核苷酸的宿主细胞；
(i)含有包含编码含有包含由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链、以及包含由序列号32的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区和由序列号32的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的抗CD137scFv、且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的多肽的碱基序列的多核苷酸、以及包含编码包含由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链的碱基序列的多核苷酸的宿主细胞；或者
(j)含有包含编码含有包含由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链、以及包含由序列号34的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区和由序列号34的氨基酸编号137至247的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的抗CD137scFv、且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的多肽的碱基序列的多核苷酸、以及包含编码包含由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链的碱基序列的多核苷酸的宿主细胞。
在一个实施方式中，本发明的生产方法包括对下述的(a)或(b)的宿主细胞进行培养的步骤：
(a)含有包含编码由序列号36的氨基酸编号1至705的氨基酸序列构成的包含抗CLDN4抗体的重链和抗CD137scFv的多肽的碱基序列的多核苷酸、以及包含编码由序列号40的氨基酸编号1至215的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链的碱基序列的多核苷酸的宿主细胞；或者
(b)含有包含编码由序列号38的氨基酸编号1至712的氨基酸序列构成的包含抗CLDN4抗体的重链和抗CD137scFv的多肽的碱基序列的多核苷酸、以及包含编码由序列号40的氨基酸编号1至215的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链的碱基序列的多核苷酸的宿主细胞。
本发明的宿主细胞的培养可以利用公知的方法来进行。培养条件、例如温度、培养基的pH和培养时间可以由本领域技术人员适宜选择。在宿主细胞为动物细胞的情况下，作为培养基，例如可以使用包含约5～20％的胎牛血清的MEM培养基(Science，1959，Vol.130，p.432-437)、D-MEM培养基(Virol.，1959，Vol.8，p.396)、RPMI-1640培养基(J.Am.Med.Assoc.，1967，Vol.199，p.519)、199培养基(Exp.Biol.Med.，1950，Vol.73，p.1-8)等。培养基的pH例如为约6～8，培养可以根据需要在进行通气、搅拌的同时，通常在约30～40℃下进行约15～336小时。在宿主细胞为昆虫细胞的情况下，作为培养基，例如可以使用包含胎牛血清的Grace’s培养基(Proc.Natl.Acad.Sci.USA.，1985，Vol.82，p.8404)等。培养基的pH例如为约5～8，培养可以根据需要在进行通气、搅拌的同时，通常在约20～40℃下进行约15～100小时。在宿主细胞为大肠杆菌或酵母的情况下，作为培养基，例如含有营养源的液体培养基是适当的。营养培养基例如包含进行了转化的宿主细胞的生长所需的碳源、无机氮源或有机氮源。作为碳源，例如可举出葡萄糖、葡聚糖、可溶性淀粉、蔗糖等，作为无机氮源或有机氮源，例如可举出铵盐类、硝酸盐类、氨基酸、玉米浆、蛋白胨、酪蛋白、肉提取物、大豆粕、马铃薯提取液等。可以根据期望包含其他营养素(例如无机盐(例如氯化钙、磷酸二氢钠、氯化镁)、维生素类)、抗生素(例如四环素、新霉素、氨苄青霉素、卡那霉素)等。培养基的pH例如为约5～8。在宿主细胞为大肠杆菌的情况下，作为培养基，例如可以使用LB培养基、M9培养基(Molecular Cloning，Cold Spring Harbor Laboratory，Vol.3，A2.2)等。培养可以根据需要在进行通气、搅拌的同时，通常在约14～43℃下进行约3～24小时。在宿主细胞为酵母的情况下，作为培养基，例如可以使用Burkholder最小培养基(Proc.Natl.Acad.Sci.USA.，1980，Vol.77，p.4505)等。培养可以根据需要在进行通气、搅拌的同时，通常在约20～35℃下进行约14～144小时。通过上述的培养，可以表达本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体。
本发明的生产方法在包括培养本发明的宿主细胞并表达抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体的步骤的基础上，还可以包括从该宿主细胞中回收抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体并进行分离或纯化的步骤。作为分离或纯化方法，例如可举出盐析、溶剂沉淀法等利用溶解度的方法、透析、超滤、凝胶过滤等利用分子量差异的方法、离子交换层析、羟基磷灰石层析等利用带电的方法、亲和层析等利用特异性亲和性的方法、反相高效液相层析等利用疏水性差异的方法、等电点电泳等利用等电点差异的方法等。在一个实施方式中，分泌到培养上清液中的抗体可以通过各种层析、例如使用蛋白A柱或蛋白G柱的柱层析来进行纯化。
通过本发明的生产方法生产的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体和抗CLDN4-抗CD137scFv双特异性抗体包含于本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体。
＜本发明的药物组合物等＞
本发明还提供包含本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体的药物组合物等(也称为“本发明的药物组合物”)。作为本发明的药物组合物，包括包含本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。本发明的药物组合物可以通过使用本领域中通常使用的赋形剂、即药剂用赋形剂、药剂用载体等利用通常使用的方法来制备。作为这些药物组合物的剂型的例子，例如可举出注射剂、点滴用剂等非经口剂，可以通过静脉内给药、皮下给药、腹腔内给药、肿瘤内给药等适当的方法来给药。在制剂化时，可以在药学上可接受的范围内使用与这些剂型相应的赋形剂、载体、添加剂等。
本发明的药物组合物中可以包含本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体的翻译后修饰体。例如含有接受了C末端赖氨酸的缺失、N末端的焦谷氨酰化中的两者或一者的抗体等的药物组合物也包括在本发明中。
在一个实施方式中，本发明的药物组合物为含有以下的(a)～(j)中的任意一者的本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体和/或该抗体的翻译后修饰体的药物组合物：
(a)含有包含由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链和包含由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及包含由序列号26的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号26的氨基酸编号134至242的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体和/或该抗体的翻译后修饰体；
(b)含有包含由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链和包含由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及包含由序列号28的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号28的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体和/或该抗体的翻译后修饰体；
(c)含有包含由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链和包含由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及包含由序列号30的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的轻链可变区和由序列号30的氨基酸编号132至249的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体和/或该抗体的翻译后修饰体；
(d)含有包含由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链和包含由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及包含由序列号32的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号32的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体和/或该抗体的翻译后修饰体；
(e)含有包含由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链和包含由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及包含由序列号34的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号34的氨基酸编号137至247的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体和/或该抗体的翻译后修饰体；
(f)含有包含由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链和包含由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及包含由序列号26的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号26的氨基酸编号134至242的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体和/或该抗体的翻译后修饰体；
(g)含有包含由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链和包含由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及包含由序列号28的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号28的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体和/或该抗体的翻译后修饰体；
(h)含有包含由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链和包含由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及包含由序列号30的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的轻链可变区和由序列号30的氨基酸编号132至249的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体和/或该抗体的翻译后修饰体；
(i)含有包含由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链和包含由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及包含由序列号32的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号32的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体和/或该抗体的翻译后修饰体；或者
(j)含有包含由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链和包含由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及包含由序列号34的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号34的氨基酸编号137至247的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体和/或该抗体的翻译后修饰体。
在一个实施方式中，本发明的药物组合物为含有以下的(a)或(b)的本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体和/或该抗体的翻译后修饰体的药物组合物：
(a)含有由序列号36的氨基酸编号1至705的氨基酸序列构成的包含抗CLDN4抗体的重链和抗CD137scFv的多肽、以及由序列号40的氨基酸编号1至215的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体和/或该抗体的翻译后修饰体；或者
(b)含有由序列号38的氨基酸编号1至712的氨基酸序列构成的包含抗CLDN4抗体的重链和抗CD137scFv的多肽、以及由序列号40的氨基酸编号1至215的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体和/或该抗体的翻译后修饰体。
制剂化中的本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体和/或该抗体的翻译后修饰体的添加量根据患者的症状的程度、年龄、所使用的制剂的剂型、或抗体的结合效价等而不同，但例如可以使用0.001mg/kg～100mg/kg左右。
＜本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体的医药用途＞
本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体、和含有它们的药物组合物可以用于对象的癌的治疗。另外，本发明包含治疗癌的方法，其包括将治疗有效量的本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体向对象给药的步骤。另外，本发明包含用于癌的治疗的本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体。另外，本发明包括本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体在制造癌的治疗用药物组合物中的应用。成为本发明的治疗对象的癌没有特别限定，但例如可举出各种腹膜播散癌、胃癌、肺癌、急性淋巴细胞白血病、急性骨髓性白血病、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、B细胞淋巴瘤、多发性骨髓瘤、T细胞淋巴瘤等血液癌、骨髓异常增生综合征、腺癌、鳞状上皮癌、腺鳞癌、未分化癌、大细胞癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、间皮瘤、皮肤癌、皮肤T细胞淋巴瘤、乳腺癌、前列腺癌、膀胱癌、阴道癌、颈癌、头颈癌、子宫癌、宫颈癌、肝癌、胆囊癌、胆管癌、肾癌、胰腺癌、结肠癌、大肠癌、直肠癌、小肠癌、胃癌、食道癌、睾丸癌、卵巢癌、脑瘤等实体癌；以及骨组织、软骨组织、脂肪组织、肌肉组织、血管组织和造血组织的癌；以及软骨肉瘤、尤文氏肉瘤、恶性血管内皮瘤、恶性施万瘤、骨肉瘤、软组织肉瘤等肉瘤；胶质母细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤、肝母细胞瘤、髓母细胞瘤、肾母细胞瘤、神经母细胞瘤、胰母细胞瘤、胸膜肺母细胞瘤、视网膜母细胞瘤等母细胞瘤。在一个实施方式中，成为本发明的治疗对象的癌为大肠癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、膀胱癌、卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌。在一个实施方式中，成为本发明的治疗对象的癌为与正常组织相比高表达CLDN4的癌。成为本发明的治疗对象的癌优选为与正常组织相比高表达CLDN4的癌、或者选自由大肠癌、直肠癌、肺癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、膀胱癌、卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌组成的组中的癌。
＜本发明的抗CLDN4抗体＞
本发明还提供以下的(a)～(c)中的任意一者的抗CLDN4抗体或其抗原结合片段：
(a)含有包含由序列号2的氨基酸编号31至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号2的氨基酸编号50至66的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号2的氨基酸编号99至114的氨基酸序列构成的CDR3的重链可变区、以及包含由序列号4的氨基酸编号24至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号4的氨基酸编号51至57的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号4的氨基酸编号90至98的氨基酸序列构成的CDR3的轻链可变区的抗CLDN4抗体或其抗原结合片段；
(b)包含由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体或其抗原结合片段；或者
(c)包含由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体或其抗原结合片段。
在一个实施方式中，本发明的抗CLDN4抗体或其抗原结合片段为包含由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体或其抗原结合片段、或者包含由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体或其抗原结合片段。在一个实施方式中，本发明的抗CLDN4抗体或其抗原结合片段为由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的重链可变区。在一个实施方式中，本发明的抗CLDN4抗体或其抗原结合片段为包含由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体或其抗原结合片段。
作为本发明的抗CLDN4抗体的重链恒定区，也可以选择Igγ、Igμ、Igα、Igδ或Igε中的任意恒定区。作为Igγ，例如可以选自Igγ1、Igγ2、Igγ3或Igγ4。在一个实施方式中，重链恒定区为Igγ1恒定区，例如为人Igγ1恒定区。另外，对于本发明的抗CLDN4抗体的重链恒定区而言，为了使ADCC、CDC下降，也可以包含LALA突变、P331G或P331S突变等氨基酸突变。作为本发明的抗CLDN4抗体的轻链恒定区，也可以选择Igλ或Igκ中的任意恒定区。在一个实施方式中，轻链恒定区为Igκ恒定区，例如为人Igκ恒定区。
在一个实施方式中，本发明的抗CLDN4抗体的抗原结合片段为scFv、Fab、Fab’或F(ab’)2。
在一个实施方式中，本发明的抗CLDN4抗体为含有包含由序列号2的氨基酸序列构成的重链可变区的重链和包含由序列号4的氨基酸序列构成的轻链可变区的轻链的抗CLDN4抗体、或者含有包含由序列号6的氨基酸序列构成的重链可变区的重链和包含由序列号8的氨基酸序列构成的轻链可变区的轻链的抗CLDN4抗体。在一个实施方式中，本发明的抗CLDN4抗体为含有包含由序列号2的氨基酸序列构成的重链可变区的重链和包含由序列号4的氨基酸序列构成的轻链可变区的轻链的抗CLDN4抗体。在一个实施方式中，本发明的抗CLDN4抗体为含有包含由序列号6的氨基酸序列构成的重链可变区的重链和包含由序列号8的氨基酸序列构成的轻链可变区的轻链的抗CLDN4抗体。
本发明还提供结合有糖质、脂质、金属(包括放射性同位素)、有机化合物(包括毒素、近红外荧光色素、螯合剂)等(也称为“修饰剂”)的本发明的抗CLDN4抗体或其抗原结合片段(也称为“本发明的复合体”)。本说明书中，“修饰剂”是指与抗体或其抗原结合片段直接结合或借助接头等结合的非肽性物质。本发明的复合体中使用的修饰剂没有特别限定，可列举例如聚乙二醇、糖链、磷脂质、放射线同位素(例如锆-89(89Zr)、钇-90(90Y)、铟-111(111In)、砹-211(211At)、锕-225(225Ac))、有机化合物、毒素、近红外荧光色素(例如IRDye(注册商标))、螯合剂等。该复合体中使用的修饰剂可以与本发明的抗CLDN4抗体或其抗原结合片段直接结合，另外也可以借助任意的接头结合。一个实施方式中，本发明的复合体为抗CLDN4抗体或其抗原结合片段的药物复合体(Antibody Drug Conjugate；ADC)。ADC中使用的药物和接头可以从本领域技术人员通常使用的药剂和接头中选择。
本发明还提供在细胞表面表达本发明的抗CLDN4抗体或其抗原结合片段的细胞(例如嵌合抗原受体T细胞(Chimeric antigen receptor-T cell)；CAR-T细胞)。这样的细胞可以由本领域技术人员使用编码本发明的抗CLDN4抗体或其抗原结合片段的多核苷酸来制作。作为表达本发明的抗CLDN4抗体或其抗原结合片段的细胞，可以使用各种免疫细胞(T细胞、NK细胞、NKT细胞等)。
在一个实施方式中，本发明的抗CLDN4抗体或其抗原结合片段、本发明的复合体、和在细胞表面表达本发明的抗CLDN4抗体或其抗原结合片段的细胞中的抗体或抗原结合片段部分可以经过了翻译后修饰。在一个实施方式中，翻译后修饰为重链可变区N末端的焦谷氨酰化和/或重链C末端赖氨酸缺失。
本发明的抗CLDN4抗体或其抗原结合片段、本发明的复合体、和在细胞表面表达本发明的抗CLDN4抗体或其抗原结合片段的细胞可以由本领域技术人员基于本说明书中公开的本发明的抗CLDN4抗体或其抗原结合片段的VH和VL的序列信息、本发明的复合体中使用的修饰剂的信息，使用本领域公知的方法来制作。本发明的抗CLDN4抗体或其抗原结合片段没有特别限制，但例如可以按照＜生产本发明的双特异性抗体的方法＞的项中记载的方法来生产。
本发明还提供包含本发明的抗CLDN4抗体或其抗原结合片段、本发明的复合体和在细胞表面表达本发明的抗CLDN4抗体或其抗原结合片段的细胞(以下本项中统称为“本发明的抗CLDN4抗体等”)、以及药学上可接受的赋形剂的药物组合物。该药物组合物可以用于癌的治疗。本发明还提供包括将治疗有效量的本发明的抗CLDN4抗体等向对象给药的步骤的治疗癌的方法、用于癌的治疗的本发明的抗CLDN4抗体等、本发明的抗CLDN4抗体等在制造癌的治疗用药物组合物中的应用。本发明的抗CLDN4抗体等的医药用途可以由本领域技术人员根据前述的＜本发明的药物组合物等＞的记载来实施。成为本发明的抗CLDN4抗体等的医药用途的治疗对象的癌可举出前述的＜本发明的药物组合物等＞中记载的癌。
＜本发明的抗CD137抗体＞
本发明还提供包含以下的(a)～(d)中的任意一者的抗CD137抗体的重链可变区和轻链可变区的抗CD137抗体或其抗原结合片段：
(a)包含由序列号10的氨基酸编号31至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号10的氨基酸编号50至66的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号10的氨基酸编号99至107的氨基酸序列构成的CDR3的重链可变区、以及包含由序列号12的氨基酸编号24至34的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号12的氨基酸编号50至56的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号12的氨基酸编号89至98的氨基酸序列构成的CDR3的轻链可变区；
(b)包含由序列号14的氨基酸编号31至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号14的氨基酸编号50至65的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号14的氨基酸编号98至107的氨基酸序列构成的CDR3的重链可变区、以及包含由序列号16的氨基酸编号23至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号16的氨基酸编号51至57的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号16的氨基酸编号90至100的氨基酸序列构成的CDR3的轻链可变区；
(c)包含由序列号18的氨基酸编号31至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号18的氨基酸编号50至65的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号18的氨基酸编号98至107的氨基酸序列构成的CDR3的重链可变区、以及包含由序列号20的氨基酸编号23至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号20的氨基酸编号51至57的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号20的氨基酸编号90至100的氨基酸序列构成的CDR3的轻链可变区；或者
(d)包含由序列号22的氨基酸编号31至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号22的氨基酸编号50至65的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号22的氨基酸编号98至110的氨基酸序列构成的CDR3的重链可变区、以及包含由序列号24的氨基酸编号23至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号24的氨基酸编号51至57的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号24的氨基酸编号90至100的氨基酸序列构成的CDR3的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明的抗CD137抗体或其抗原结合片段包含以下的(a)～(i)中的任意一者的抗CD137抗体的重链可变区和轻链可变区：
(a)由序列号10的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号12的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(b)由序列号14的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号16的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(c)由序列号18的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号20的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(d)由序列号22的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号24的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(e)由序列号26的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号26的氨基酸编号134至242的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(f)由序列号28的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号28的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(g)由序列号30的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的轻链可变区和由序列号30的氨基酸编号132至249的氨基酸序列构成的重链可变区；
(h)由序列号32的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号32的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的轻链可变区；或者
(i)由序列号34的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号34的氨基酸编号137至247的氨基酸序列构成的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明的抗CD137抗体的抗原结合片段为scFv。在一个实施方式中，本发明的抗CD137抗体的抗原结合片段为以下的(a)～(e)中的任意一者：
(a)由序列号26的氨基酸编号1至242的氨基酸序列构成的抗CD137scFv；
(b)由序列号28的氨基酸编号1至244的氨基酸序列构成的抗CD137scFv；
(c)由序列号30的氨基酸编号1至249的氨基酸序列构成的抗CD137scFv；
(d)由序列号32的氨基酸编号1至244的氨基酸序列构成的抗CD137scFv；或者
(e)由序列号34的氨基酸编号1至247的氨基酸序列构成的抗CD137scFv。
本发明的抗CD137抗体或其抗原结合片段可以由本领域技术人员参照＜本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体＞等本说明书中的记载来制作。本发明的抗CD137抗体或其抗原结合片段例如可以用于在癌的治疗中使用的、与任意的针对TAA的抗体(抗TAA抗体)的双特异性抗体。即，本发明还提供包含本发明的抗CD137抗体或其抗原结合片段和抗TAA抗体或其抗原结合片段的双特异性抗体(也称为“本发明的抗TAA-抗CD137双特异性抗体”)。作为TAA，只要在肿瘤的细胞表面表达，则没有特别限定，例如可以使用HER2、EGFR、EpCAM、CEA、BCMA、PSMA、CD19、CD20、CD22、CD33、CD37、CD38、CD123、CD276(B7-H3)、GPC2、GPC3、GPRC5D、WT-1、NY-ESO-1、CLDN4、CLDN6、CLDN18.2、TSPAN8。在一个实施方式中，本发明的抗TAA-抗CD137双特异性抗体包含抗CD137抗体的scFv。在一个实施方式中，本发明的抗TAA-抗CD137双特异性抗体包含作为以下的(a)～(e)中的任意一者的抗CD137抗体的scFv；
(a)由序列号26的氨基酸编号1至242的氨基酸序列构成的抗CD137scFv；
(b)由序列号28的氨基酸编号1至244的氨基酸序列构成的抗CD137scFv；
(c)由序列号30的氨基酸编号1至249的氨基酸序列构成的抗CD137scFv；
(d)由序列号32的氨基酸编号1至244的氨基酸序列构成的抗CD137scFv；或者
(e)由序列号34的氨基酸编号1至247的氨基酸序列构成的抗CD137scFv。
在一个实施方式中，本发明的抗TAA-抗CD137双特异性抗体包含抗CLDN4抗体或其抗原结合片段，在一个实施方式中，本发明的抗TAA-抗CD137双特异性抗体包含IgG型的抗CLDN4抗体。
在此提供为了进一步理解本发明而参照的特定实施例，但这些是以例示为目的，并非对本发明进行限定。
实施例
[实施例1：与腹膜播散癌细胞所表达的抗原选择性结合的抗体的获得]
[1-1.患者来源的腹膜播散癌细胞的获得]
来自患者的腹膜播散癌细胞的获得按照千胁史子、佐佐木博己的文献“腹膜转移癌(胃、胰、卵巢癌等)细胞株的建立”(佐佐木博己编《使用患者来源的癌模型的癌研究实践指南》羊土公司，2019年，p.28-37)中记载的方法来进行。
将从患者采集的腹水在室温下以430×g离心3分钟，在除去上清液后，向沉淀中添加溶血缓冲液进行溶血。在离心后除去上清液，加入杜尔贝科PBS(-)(日水制药公司，05913，以下称为“PBS(-)”)50mL，洗涤细胞。之后，在室温下以430×g离心3分钟，回收细胞。将回收的腹水中的全部细胞重新悬浮于包含10％FBS(Thermo Fisher Scientific公司，10270？106)、×1抗生素-抗真菌素(Antibiotic-Antimycotic，Thermo Fisher Scientific公司，15240062)的RPMI-1640(含有L-谷酰胺)培养基(富士胶片和光纯药公司，189-02025)，(以下，将在实施例1中添加FBS等后的培养基称为“RPMI-1640培养基”)。稀释悬浮液，向100mm胶原蛋白包被培养皿(以下称为“培养皿”)(IWAKI公司，4020-010)中以5×106～1×107个/10mL接种细胞，在37℃、5％CO2培养箱中进行培养。
腹水中的细胞中存在粘附型细胞和漂浮型细胞，粘附型细胞中不仅包含癌细胞，也包含癌细胞以外的细胞(成纤维细胞、腹膜间皮细胞等)。癌细胞以外的细胞具有与癌细胞相比会在短时间内剥离的性质,因此将这些细胞从腹水中的全部细胞中分离除去。将癌细胞以外的细胞除去后，重复进行在使癌细胞增殖到培养皿面积的80％汇合程度后、将全部细胞的1/2传代到新培养皿中的操作，将传代5次以上而得者作为粘附型癌细胞。对于漂浮型细胞，将培养上清液5mL和RPMI-1640培养基5mL从培养用培养皿播种到新的100mm培养皿中进行传代，将传代5次以上而得者作为漂浮型癌细胞。来自一名患者的腹膜播散癌细胞以包含粘附型癌细胞和漂浮型癌细胞这两者的状态增殖时，将它们作为混合型癌细胞。
本说明书中，将利用上述方法分离而得的粘附型癌细胞、漂浮型癌细胞或混合型癌细胞总称为“腹膜播散癌细胞”。将所获得的6种细胞(NSC-9C、NSC-15CF、NSC-16C、NSC-20C、NSC-22C、NSC-32C(以下也称为“6种腹膜播散癌细胞”))用于以后的研究。
[1-2：产生抗胃癌抗原抗体的杂交瘤的制作]
向使用人单克隆抗体抗体开发技术“VelocImmune”((注册商标)antibodytechnology；Regeneron(美国专利6596541号))制作的VelocImmune小鼠免疫腹膜播散癌细胞，从而获得针对抗腹膜播散癌细胞所表达的癌抗原的抗体。
将实施例1-1中获得的腹膜播散癌细胞中的NSC-9C、NSC-15CF、NSC-16C这3种细胞或NSC-20C、NSC-22C、NSC-32C这3种细胞混合，悬浮于TiterMax(注册商标)Gold ADJUVANT(Merck公司，T2684)或PBS(-)，制备腹膜播散癌细胞悬浮液。将该悬浮液向VelocImmune小鼠给药数次而进行免疫。按照常规方法从经免疫的小鼠的淋巴结回收淋巴细胞，与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0(ATCC，CRL-1581)进行细胞融合，由此制作杂交瘤。利用自动挑取装置分离杂交瘤的单个菌落，获得单克隆化杂交瘤细胞(以下称为“克隆”)。将分离出的克隆在37℃、8％CO2培养箱中培养，将约14天后的上清液回收到96孔板，用于以下的实验。
[1-3：与腹膜播散癌细胞选择性结合的抗体的筛选]
(1)与腹膜播散癌细胞和EpCAM表达细胞的结合确认
实施例1-2中得到的克隆的细胞上清液中含有抗体(以下称为“克隆上清液中含有的抗体”)。
首先，利用流式细胞术法对克隆上清液中含有的抗体与实施例1-1中获得的6种腹膜播散癌细胞的结合进行测定，筛选出产生与腹膜播散癌细胞强结合的抗体的克隆。流式细胞术中使用BV421山羊抗小鼠Ig(Becton，Dickinson and Company公司，563846)。
另外，为了排除提供与作为癌抗原的EpCAM结合的抗体的克隆，对克隆上清液中含有的抗体与人EpCAM-Myc-DDK表达CHO-K1细胞的结合进行测定。人EpCAM-Myc-DDK表达CHO-K1细胞通过将EPCAM(Myc-DDK-tagged)-人上皮细胞粘附分子(EPCAM)(ORIGENE公司，RC201989)转染于CHO-K1细胞(ATCC，CCL-61)而制作。利用流式细胞术法测定该细胞与克隆上清液中含有的抗体的结合。流式细胞术中使用BV421山羊抗小鼠Ig。为了选择出提供不显示与EpCAM表达细胞的结合活性的上清液的克隆，排除与该细胞结合的克隆。作为阳性对照，使用CD326(EpCAM)单克隆抗体(1B7),(eBioscience公司，14-9326)。
另外，为了筛选出与腹膜播散癌细胞选择性结合的克隆，排除与培养人腹膜间皮细胞结合的克隆。作为培养人腹膜间皮细胞，使用人间皮细胞(Zenbio公司，MES-F，Lot.MESM050311A)(以下也称为“培养人腹膜间皮细胞”)，利用间皮细胞生长培养基(Zenbio公司，MSO-1)培养得到的培养人腹膜间皮细胞与克隆的结合的测定中使用流式细胞术法。流式细胞术法中使用BV421山羊抗小鼠Ig。仅筛选出不与培养人腹膜间皮细胞结合的克隆。
通过上述实验，作为提供与6种腹膜播散癌细胞中的5种以上结合、且不与人EpCAM和培养腹膜间皮细胞结合的抗体的克隆，获得3D11克隆。
(2)从杂交瘤上清液中纯化抗体
利用CD杂交瘤培养基(Thermo Fisher Scientific公司，11279023)培养3D11克隆。使用MabSelect SuRe(GE医疗公司，17-5438-02)从培养上清液中纯化3D11抗体(以下称为“3D11”)。抗体的纯化按照常规方法进行。
[1-4：3D11所识别的抗原分子的鉴定]
(1)利用LC-MS/MS测定的抗原候补分子的鉴定
进行3D11的抗原候补分子的鉴定。作为本实验中的对照抗体，使用1D10、10B5。这些抗体在获得3D11的过程中显示出与3D11不同的对腹膜播散癌细胞的结合模式。
制作NSC-15CF的细胞破碎液。向细胞破碎液中添加3D11和对照抗体2种(1D10、10B5)中的任意1种抗体，然后加入Dynabeads蛋白G(Life Technologies公司，10003D)，进行搅拌和洗涤。将与Dynabeads蛋白G结合的蛋白质用胰蛋白酶/LysC(Promega公司，V5072)消化，得到肽混合物。将包含肽混合物的溶液供于使用了UltiMate3000RSLCnano(ThermoFisher Scientific公司)和Orbitrap Fusion(Thermo Fisher Scientific公司)的LC-MS/MS测定。对于所得到的LC-MS/MS数据，使用Progenesis QI for Proteomics(Waters公司)和Mascot(Matrix Science公司)软件进行比较定量分析和肽/蛋白质鉴定，从而鉴定出结合蛋白。将3D11与对照抗体的结合蛋白进行比较，作为3D11的抗原候补分子，鉴定出CLDN4。
(2)3D11的抗原确定
为了确定(1)中鉴定出的CLDN4是否为3D11的抗原，进行了对人CLDN4-Myc-DDK表达CHO-K1细胞的结合实验。人CLDN4-Myc-DDK表达CHO-K1细胞通过向CHO-K1细胞转染CLDN4(Myc-DDK-tagged)-人紧密连接蛋白4(CLDN4)(ORIGENE公司，RC200490)而制作。结果，3D11由于与人CLDN4-Myc-DDK表达CHO-K1细胞发生结合，因此确认其识别CLDN4作为抗原。
[实施例2：3D11的序列确定和人抗体的制作]
按照常规方法克隆编码3D11的重链和轻链的基因，对3D11的碱基序列和氨基酸序列进行确定。将3D11的重链可变区的氨基酸序列示于序列号2，将轻链可变区的氨基酸序列示于序列号4。利用VelocImmune小鼠制作的抗体为内源性的免疫球蛋白重链和轻链的可变区被对应的人可变区置换后的抗体。即，使用VelocImmune技术得到的抗体为具有人抗体的可变区和小鼠抗体的恒定区的抗体(也称为“嵌合抗体”)。
[参考例：癌腹膜播散治疗中使用的抗CLDN4-抗CD3双特异性抗体]
作为针对癌细胞中选择性表达的TAA的治疗药，已知抗体、抗体-药物复合体(ADC)抗体、嵌合抗原受体T细胞疗法(CAR-T)等各种种类的药剂。其中，作为能够以低抗体浓度获得癌细胞选择性细胞毒活性的划时代的方法，已知双特异性T细胞募集抗体(T-cell-recruiting antibody)。因此，对使用了3D11的双特异性T细胞募集抗体的制作进行了研究。
(1)人源化抗CLDN4抗体的制作
利用以下的方法进行人型抗CLDN4-抗CD3scFv双特异性抗体的制作。
对于人型抗CLDN4抗体部分，分别按照常规方法在3D11的重链可变区连接人重链的IgG1的恒定区，在轻链可变区连接人轻链κ链的恒定区，来进行设计。然后，引入如下突变：将重链的氨基酸编号238和239(EU索引：234和235)的氨基酸分别从亮氨酸(L)置换为丙氨酸(A)的LALA突变(L234A和L235A)；将氨基酸编号370、372和411(EU索引：366、368和407)的氨基酸分别从苏氨酸(T)置换为丝氨酸(S)、从L置换为A、从酪氨酸(Y)置换为缬氨酸(V)的杵臼(Knobs into holes)突变；以及将氨基酸编号301(EU索引：297)的氨基酸从天冬酰胺(N)置换为A的突变。将所制作的人源化抗CLDN4抗体称为3D11.1。按照常规方法来合成编码3D11.1的氨基酸序列的多核苷酸，将其插入到pcDNA3.4 TOPO载体(Thermo Fisherscientific公司)中。
(2)抗CD3scFv的制作
抗CD3scFv部分基于日本专利第5686953号中记载的小鼠抗CD3抗体的重链可变区和轻链可变区的序列来制作。抗CD3scFv的人源化按照文献(Front Biosci.，2008，Vol.13，p.1619-1633)中记载的方法来进行。此时，引入了回复突变。通过MOLSIS Inc.公司提供的综合计算化学系统MOE分析了立体结构信息(PDB Code：5FCS)，确定了框架区内内的回复突变引入位置。将人源化抗CD3scFv的氨基酸序列示于序列号41。按照常规方法来合成编码序列号41中记载的氨基酸序列的多核苷酸，并将其插入到pcDNA3.1(+)载体(Thermo Fisherscientific公司，V79020)中。
(3)抗CLDN4(3D11)-抗CD3scFv双特异性抗体的制作
使用编码3D11.1和抗CD3scFv的载体，按照PCT/JP2021/41839的实施例7中记载的方法，制作出由抗CLDN4抗体的Fab区、抗CD3抗体的scFv区和Fc区构成的双特异性抗体。将所制作的双特异性抗体称为抗CLDN4(3D11)-抗CD3scFv双特异性抗体。
(4)抗CLDN4(3D11)-抗CD3scFv双特异性抗体的药效评价
对于抗CLDN4(3D11)-抗CD3scFv双特异性抗体的体外的重定向T细胞的细胞毒性(redirected T cell cytotoxicity，RTCC)活性，按照PCT/JP2021/41839的实施例9中记载的方法进行测定。确认抗CLDN4(3D11)-抗CD3scFv双特异性抗体具有RTCC活性。另外，按照PCT/JP2021/41839的实施例11中记载的方法，对抗CLDN4(3D11)-抗CD3scFv双特异性抗体的体内的抗肿瘤活性进行评价。抗CLDN4(3D11)-抗CD3scFv双特异性抗体在胃癌腹膜播散体内小鼠模型中显示出抗肿瘤效果。由这些结果暗示了：抗CLDN4(3D11)-抗CD3scFv双特异性抗体对于癌的治疗有效。
另外，为了对抗CLDN4(3D11)-抗CD3scFv双特异性抗体的安全性进行研究，向食蟹猴的静脉内单次给药抗CLDN4(3D11)-抗CD3scFv双特异性抗体。结果，在给药抗CLDN4(3D11)-抗CD3scFv双特异性抗体后的猴中确认到死亡例和濒死例。在死亡的猴中在给药1小时后和6小时后，血中的IL-6量显著增加，在濒死的猴中在给药1小时后、6小时后和24小时后，血中的IL-6量显著增加。由这些结果可知，抗CLDN4(3D11)-抗CD3scFv双特异性抗体在体外和体内可发挥出药效，但另一方面，产生认为因细胞因子的增加而导致的严重副作用的担忧。因此判断，抗CLDN4(3D11)-抗CD3scFv双特异性抗体作为人的癌的治疗中使用的抗体是不合适的。
[实施例3：抗CLDN4(3D11)-抗CD137scFv双特异性抗体的制作]
使用3D11制作出与抗CD137scFv的双特异性抗体(以下称为“抗CLDN4(3D11)-抗CD137scFv双特异性抗体”)，并实施研究。
[3-1.抗CD137抗体的获得]
(1)CD137-Fc融合蛋白的制作
将编码由序列号42的氨基酸编号1至186的氨基酸序列构成的人CD137细胞外区域或由序列号43的氨基酸编号1至186的氨基酸序列构成的猴CD137细胞外区域的多核苷酸分别插入到pFUSE-hIgG1-Fc1载体(InvivoGen公司，pfuse-hg1fc1)中，制作出编码CD137的细胞外区域与人Fc的融合蛋白(以下分别称为“人CD137-人Fc融合蛋白”和“猴CD137-人Fc融合蛋白”)的表达用载体。将所制作的载体用Expi293表达系统试剂盒(Thermo FisherScientific公司，A14635)或ExpiCHO表达系统试剂盒(Thermo Fisher Scientific公司，A29133)导入至Expi293F细胞(Thermo Fisher Scientific公司，A14527)或ExpiCHO-S细胞(Thermo Fisher Scientific公司，A29133)，进行培养。将分泌到培养上清液中的蛋白质用MabSelect SuRe或HiTrap MabSelect SuRe(GE医疗公司，11-0034-94)纯化，获得人CD137-人Fc融合蛋白和猴CD137-人Fc融合蛋白。
(2)猴CD137-His标签-3×FLAG标签融合蛋白的制作
将编码由序列号43的氨基酸编号1至183的氨基酸序列构成的猴CD137细胞外区域、序列号44的His标签和序列号45的3×FLAG标签的多核苷酸串联插入到pcDNA3.4 TOPO载体中，制作载体。将所制作的载体用ExpiFectamine CHO转染试剂盒(Thermo FisherScientific公司，A29129)导入至ExpiCHO-S细胞，进行培养。将分泌到培养上清液中的蛋白质用HisTrap excel(GE Healthcare Bioscience公司，17-3712-06)纯化。将所得到的融合蛋白称为“猴CD137-His标签-3×FLAG标签融合蛋白”。
(3)产生抗CD137抗体的杂交瘤克隆的制作和筛选
向VelocImmune小鼠、或AlivaMab小鼠(Ablexis公司，美国专利9346873号)数次给药人CD137-人Fc融合蛋白或人CD137-His标签蛋白(R&D SYSTEMS公司，9220-4B)和免疫佐剂，进行免疫。按照常规方法从经免疫的小鼠的淋巴结回收淋巴细胞，与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合，由此制作杂交瘤。利用自动挑取装置分离杂交瘤的单个菌落，获得单克隆化杂交瘤细胞(以下称为“克隆”)。将各克隆培养数天，得到培养上清液。利用以下的方法进行培养上清液中含有的抗体的对CD137的结合的确认。
对CD137的结合利用ELISA法进行评价。评价中使用以人CD137-His标签蛋白、人CD137-人Fc融合蛋白、猴CD137-人Fc融合蛋白或人Fc蛋白质中的任意一者进行了包被的板，作为二抗，使用山羊抗小鼠IgG，Human ads-HRP(Southern Biotech公司，1030-05)。通过上述方法获得多个与人CD137和猴CD137中的任意一者均结合的克隆。
(4)抗CD137抗体的获得和激动活性的确认
用Hybridoma-SFM(Thermo Fisher Scientific公司，12045-076)培养(3)中获得的克隆，从培养上清液中使用MabSelect SuRe纯化出抗CD137抗体。对于纯化出的抗CD137抗体，进行对CD137的结合和CD137激动活性的确认。
对于抗CD137抗体的对CD137的结合的确认，使用(3)中记载的ELISA法来进行。对于抗CD137抗体的CD137激动活性的测定，使用4-1BB Bioassay试剂盒(Promega公司，JA2351)利用以下的方法进行。将FcγRIIb CHO-K1细胞(Promega公司，JA2251)接种到384孔板(Greiner Bio-One公司，781080)，在37℃、5％CO2的条件下培养过夜。除去培养上清液，加入前述的各克隆的纯化抗体和4-1BB效应细胞(Promega公司，JA2351)，在37℃、5％CO2的条件下静置6小时。加入Bio-Glo试剂(Promega公司，JA2351)，对响应于CD137激动活性的荧光素酶的表达诱导所致的化学发光进行测定。为了评价不存在FcγRIIb CHO-K1细胞时的CD137激动活性，在不含有FcγRIIb CHO-K1细胞的条件下进行与上述同样的实验。
进行了评价的抗CD137抗体中，VelocImmune小鼠来源的3-34、以及AlivaMab小鼠来源的A2-32、A2-48和A2-73具有对人和猴CD137的强结合活性，且显示出依赖于FcγRIIbCHO-K1细胞的存在的CD137激动活性。
(5)抗CD137抗体的基因序列的鉴定
按照常规方法，由提供抗CD137抗体(3-34、A2-32、A2-48、A2-73)的克隆制备细胞溶解液，合成cDNA，鉴定抗体碱基序列。将所鉴定的碱基序列的序列号表示于表1。
[表1]
重链可变区的碱基序列 轻链可变区的碱基序列
3-34 序列号9 序列号11
A2-32 序列号13 序列号15
A2-48 序列号17 序列号19
A2-73 序列号21 序列号23
[3-2.抗CLDN4(3D11)-抗CD137(3-34)scFv双特异性抗体的制作]
基于3D11和3-34的重链可变区和轻链可变区的序列，进行抗CLDN4(3D11)-抗CD137(3-34)scFv双特异性抗体(以下也称为“3D11_3-34-j6_S”)的设计。所制作的3D11_3-34-j6_S中，在人IgG1κ型的抗CLDN4(3D11)抗体的重链羧基末端(也称为“C末端”)连接着GS接头，在GS接头的C末端结合有包含抗CD137抗体的重链可变区和轻链可变区的抗CD137(3-34)scFv(序列号26)的氨基末端。然后，向3D11的人IgG1恒定区引入L234A、L235A和P331S的氨基酸突变。制作编码所设计的抗体的多核苷酸，按照常规方法插入到pcDNA3.4TOPO载体。将上述表达载体基因导入至ExpiCHO-S细胞，从培养上清液中纯化出3D11_3-34-j6_S。对于所制作的3D11_3-34-j6_S，确认到在体外具有抗CD137结合活性和CD137激动作用，暗示了可以期待作为癌治疗药的有效性。
[实施例4：抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv双特异性抗体的制作]
[4-1.人源化抗CLDN4(hKM3900)抗体的制作]
已报道，与作为其他紧密连接蛋白家族分子的CLDN6等相比，作为抗CLDN4抗体的KM3900与CLDN4选择性地结合(专利文献1)。因此，基于报道，进行KM3900的人源化抗体的制作。具体地，基于KM3900的可变区的人源化氨基酸序列，根据人Igγ1的恒定区和人Igκ的恒定区的序列进行人源化抗体的设计。向人Igγ1恒定区引入L234A、L235A和P331G的氨基酸突变、或者L234A、L235A和P331S的氨基酸突变。按照常规方法来制作人源化抗CLDN4(hKM3900)抗体，用于以后的研究。将具有L234A、L235A和P331G的氨基酸突变的抗体称为“hKM3900”，将具有L234A、L235A和P331S的氨基酸突变的抗体称为“hKM3900_S”。将hKM3900的重链可变区的氨基酸序列记载于序列号6，将轻链可变区的氨基酸序列记载于序列号8。
[4-2.抗CLDN4-抗CD137scFv双特异性抗体的制作]
根据实施例3中获得的抗CD137抗体(3-34、A2-32、A2-48、A2-73)设计抗CD137scFv，进行hKM3900与抗CD137scFv的双特异性抗体的制作(表2)。将所制作的抗体总称为“抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv”。
(1)编码抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv双特异性抗体的载体的制作
基于hKM3900的序列和抗CD137抗体的重链可变区和轻链可变区的序列，设计抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv双特异性抗体。抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv双特异性抗体中，在IgG1型的抗CLDN4抗体(hKM3900)的重链或轻链C末端连接着GS接头，在GS接头的C末端结合有包含抗CD137抗体的重链可变区和轻链可变区的抗CD137scFv的氨基末端。然后，向hKM3900的人IgG1恒定区引入L234A、L235A和P331G或P331S的氨基酸突变。将所设计的抗体的信息记载于表2。制作编码所设计的抗体的多核苷酸，按照常规方法插入到pcDNA3.4 TOPO载体。将所制作的载体总称为“抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv双特异性抗体表达载体”。
[表2]
抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv双特异性抗体
(※)表中的C末端表示羧基末端。
(2)抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv双特异性抗体的制作
使用抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv双特异性抗体表达载体，制作表2中记载的11种抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv双特异性抗体。具体地，使用ExpiFectamine CHO转染试剂盒向ExpiCHO-S细胞中导入抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv双特异性抗体表达载体，使抗CLDN4-抗CD137scFv双特异性抗体分泌到培养上清液中。从所得到的培养上清液中，通过使用了MabSelect SuRe的亲和纯化法，纯化出抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv双特异性抗体。然后，对于一部分的抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv双特异性抗体，利用使用了HiLoad 26/600superdex 200pg(GE医疗公司，28-9893-36)或Superdex200Increase 10/300GL(GE医疗公司，28-9909-44)的尺寸排阻层析纯化法进行追加的纯化。
下文中，也有时将实施例3和4中制作的抗CLDN4(3D11)-抗CD137(3-34)scFv双特异性抗体和抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv双特异性抗体总称为“抗CLDN4-抗CD137scFv双特异性抗体”。
[实施例5：抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv双特异性抗体的结合活性和激动活性评价]
对抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv双特异性抗体的对CLDN4和CD137的结合活性、以及CD137激动活性进行评价。
[5-1.基于流式细胞术法的抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv双特异性抗体的对CLDN4的结合活性评价]
对于抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv双特异性抗体的对CLDN4的结合活性，利用流式细胞术法进行评价。将由CLDN4(Myc-DDK-tagged)-人紧密连接蛋白4制备的CLDN4基因插入到pCMV6-AC-GFP哺乳动物表达载体(ORIGENE公司，PS100010)，制作人CLDN4的表达载体。将人CLDN4的表达载体导入至CHO-K1细胞，获得人CLDN4表达CHO-K1。
作为被检抗体，使用hKM3900和2种抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv双特异性抗体(hKM3900_tA2-32LH和hKM3900_3-34-j6)。将被检抗体用染色缓冲液(FBS)(BDBioscience，554656)从最高浓度100μg/mL以3倍的公比连续稀释至5.08ng/mL，用各被检抗体稀释液分别对人CLDN4表达CHO-K1进行染色。作为二抗，使用别藻蓝蛋白(APC)AffiniPure F(ab’)2片段山羊抗人IgG，Fcγ片段特异性(Jackson ImmunoResearch，109-136-170)。用FACS Canto II(BD Bioscience)测定荧光强度。对于测定结果，使用GraphPadPrism进行分析，算出人CLDN4与抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv双特异性抗体的表观解离常数(KD)。在表3示出表观KD的值。
2种抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv双特异性抗体显示出与人源化抗CLDN4(hKM3900)抗体同样的对人CLDN4的结合活性。认为其他抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv双特异性抗体也显示出同等CLDN4结合活性。
[表3]
hKM3900 hKM3900_tA2-32LH hKM3900_3-34-j6
KD(nM) 10.8 10.8 11.2
[5-2.基于ELISA法的抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv双特异性抗体的对CD137的结合活性评价]
对于抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv双特异性抗体的对CD137的结合活性，使用ELISA法进行检测。ELISA按照常规方法进行。将20ng/20μL/孔的人CD137-His标签蛋白(R&DSYSTEMS，9220-4B)固相化于384孔板(Thermo Fisher Scientific公司，464718)。作为被检抗体，使用表2中记载的11种抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv双特异性抗体和ctrl IgG_L-3-34-j6抗体。ctrl IgG_L-3-34-j6抗体为在同种型对照抗体的轻链羧基末端连接有抗CD137scFv(3-34-j6)抗体的抗体。将被检抗体用含有5％ Blocking One(Nacalai Tesque公司，03953-95)的TBS-T(Nippon Gene公司，310-07375)进行连续稀释，并以20μL/孔添加。抗体的终浓度如图1-1～1-4所示。作为二抗，使用山羊抗人IgG Fc，Multi-Species SPads-HRP(Southern Biotech公司，2014-05)。作为对照抗体，使用hKM3900。使用InfiniteM200PRO(TECAN公司)测定450nm和570nm的吸光度。将结果示于图1-1～1-4。抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv双特异性抗体均呈浓度依赖性地与人CD137-His标签蛋白结合。根据该结果可知，抗CD137scFv的连接位置对于对人CD137的结合活性不造成影响。
[5-3.基于表面等离子体共振法的抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv双特异性抗体的对CD137的结合活性评价]
对于抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv双特异性抗体的对CD137的结合活性，使用表面等离子体共振(SPR)法进行检测。SPR分析中使用Biacore T200(GE医疗日本公司)。作为配体，使用将2种抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv双特异性抗体(hKM3900-3-34-j6、hKM3900_tA2-32LH)固定于S系列传感芯片蛋白A(Series S Sensor Chip ProteinA，GE医疗公司，29-1275-56)而得的配体。作为分析物，使用将人CD137-His标签或3-1(2)中制作的猴CD137-His标签-3×FLAG标签融合蛋白用HBS-EP+从最高浓度200nM以2倍公比连续稀释至0.0977nM而得的产物。将分析物向结合有配体的流路以50μL/分钟添加2分钟，然后，将HBS-EP+以50μL/分钟添加10分钟，由此对抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv双特异性抗体的对CD137的结合和解离进行测定。使用通过该实验得到的结果，利用数据分析软件(BIAEvaluation)计算出人CD137与抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv双特异性抗体的结合速度常数(ka)、解离速度常数(kd)和解离常数(KD)。在表4中示出ka、kd和KD的值。
根据该结果可知，抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv双特异性抗体显示出与人CD137和猴CD137抗体中的任意一者均同等的结合活性。
[表4]
[5-4.抗CLDN4-抗CD137scFv双特异性抗体的在表达CLDN4的癌细胞的共存下的CD137激动活性的评价]
对于抗CLDN4-抗CD137scFv双特异性抗体的由表达CLDN4的癌细胞介导的特异性CD137激动活性，使用4-1BB Bioassay试剂盒进行评价。
在含有10％FBS(Cytiva公司，SH30070.03)的RPMI-1640培养基(Thermo FisherScientific公司，11875-093)中悬浮NCI-H322细胞(ECACC，95111734)，制备悬浮液。NCI-H322表达CLDN4。向384孔板(Greiner Bio-One公司，781080)添加NCI-H322的悬浮液，使得达到1×104个/孔，在37℃、5％CO2的条件下培养过夜。第二天，除去培养基。以12.5μL/孔添加用含有1％FBS的RPMI-1640培养基进行了稀释的被检抗体。抗体的终浓度如图2-1～图2-3所示。作为被检抗体，使用3D11_3-34-j6_S、表2中记载的抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv双特异性抗体。作为对照抗体，使用hKM3900、ctrl IgG_L-3-34-j6抗体和乌瑞芦单抗(BMS，国际公开号2005/035584号中记载的序列号3和序列号6)。
对于4-1BB Bioassay试剂盒附带的4-1BB效应细胞，将每1瓶悬浮于7mL的含有1％FBS的RPMI-1640，向各孔中分别加入12.5μL，在37℃、5％CO2的条件下静置6小时。向板中以25μL/孔加入Bio-Glo试剂，使用EnVision 2103(Perkin Elmer公司)测定化学发光。将结果示于图2-1～图2-3。抗CLDN4-抗CD137scFv双特异性抗体在表达CLDN4的癌细胞的共存下显示出对于4-1BB效应细胞的显著的CD137激动活性。
为了对不存在表达CLDN4的癌细胞时的CD137激动活性进行评价，在不存在NCI-H322的条件下进行与上述同样的实验。结果，在不存在表达CLDN4的癌细胞的条件下，未显示CD137激动活性(图2-4～图2-6)。该结果示出，抗CLDN4-抗CD137scFv双特异性抗体仅在表达CLDN4的癌细胞共存的情况下发挥CD137激动作用。
另一方面，乌瑞芦单抗虽然在表达CLDN4的癌细胞的共存条件下显示出CD137激动活性，但其作用比抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体弱。另外，乌瑞芦单抗即使在不存在表达CLDN4的癌细胞的条件下也显示出CD137激动活性。
由这些结果可知，抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体与乌瑞芦单抗相比毒性的担忧更低，可以期待在高表达CLDN4的肿瘤组织中显示特异且强力的CD137激动作用。
[实施例6：抗CLDN4-抗CD137scFv双特异性抗体的体外药效评价]
实施抗CLDN4-抗CD137scFv双特异性抗体的干扰素-γ产生促进功能和癌细胞毒活性的评价。
[6-1.扩增PanT细胞的制作和冻结保存]
(1)扩增PanT细胞的制备
实施例6中，将向RPMI-1640(Sigma公司，R8758)中加入了终浓度10％的FBS(Cytiva公司，SH30084.03)和终浓度1％的青霉素-链霉素(Thermo Fisher Scientific公司，15070-063)的培养基称为“培养用培养基”。有时也向培养用培养基中分别以终浓度1％加入MEM非必需氨基酸(Merck公司，M7145)、丙酮酸钠(Merck公司，S8636)、GlutaMAXI(Thermo Fisher Scientific公司，35050-061)、HEPES(Thermo Fisher Scientific公司，15630-080)。将稀释至终浓度1-3μg/mL的抗CD3抗体(BioLegend公司，317325)添加至培养皿，将抗CD3抗体固相化。使用人Pan T细胞分离试剂盒(Miltenyi Biotec公司，130-096-535)，按照制造商推荐的方案从人外周血单核细胞(human peripheral bloodmononuclear cells)(LONZA公司，CC-2702)中分离出Pan T细胞(包含CD4T细胞和CD8T细胞这两者，以下称为“Pan T细胞”)。对分离出的Pan T细胞进行离心分离，除去上清液后悬浮于培养用培养基。向前述的固相化有抗CD3抗体的培养皿接种全部量的悬浮于培养用培养基的Pan T细胞。然后添加终浓度100-200U/mL的人IL-2(PeproTech公司，200-2)和终浓度1-4μg/mL的抗CD28抗体(BioLegend公司，302923)，在37℃、5％CO2培养箱中进行培养。在3天后回收细胞，将回收的细胞悬浮于培养用培养基后接种到培养皿。然后添加终浓度100-200U/mL的人IL-2，在37℃、5％CO2培养箱中进行培养。4天后回收全部量的细胞，进行离心分离，在除去上清液后重悬于Cell Banker(Takara公司，CB011)或Bambanker(GSLYMPHOTEC公司，CS-02-001)，分取到管中，在-80℃冻结保存。此处，本说明书中，将冻结保存后的细胞称为“扩增PanT细胞”。
[6-2.表达60As6-Luc/GFP的细胞的制作]
含有Luc/GFP的慢病毒溶液的制备通过使用L293T细胞(Thermo FisherScientific公司，K4975-00)按照常规方法来实施。pCDH-CMV-GL3-EF1a-GFP-T2A-puro改造载体(由广岛大学医学系科学研究科细胞分子生物学研究室高桥陵宇副教授惠赠(PLoSOne，2015，Vol.10，e0123407))向L293T细胞的导入中，使用Opti-MEM减血清培养基、GlutaMAX补充剂(Thermo Fisher Scientific公司，51985-034)、MISSION(注册商标)慢病毒包装混合物(SIGMA公司，SHP001)、Lipofectamin LTX(Thermo Fisher Scientific公司，15338100)。由L293T细胞增殖的表达GFP的慢病毒的回收中，使用45μm Millex(注册商标)-HV过滤器(Merck Millipore公司，SLHV033RS)。将病毒溶液按照每1mL分注到冷冻管(Nalgene公司，5000-0020)中，在-80℃下冻结保存。
按照常规方法使表达60As6-Luc/GFP的慢病毒感染表达CLDN4的癌细胞株即60As6细胞(由生物材料研究所柳原五吉先生转让)，制作表达60As6-Luc/GFP的细胞。为了提高感染效率，使用聚凝胺(Polybrene)(Santa Cruz公司，sc-134220)。作为培养基，使用含有10％FBS、2μg/mL嘌呤霉素(Thermo Fisher Scientific公司，A-11138-02)的RPMI-1640。本说明书中，将所建立的细胞称为“60As6-Luc/GFP细胞”。通过流式细胞术法确认到60As6-Luc/GFP细胞内源性高表达CLDN4。所构建的细胞在之后的实验中使用。
[6-3.抗CLDN4(3D11)-抗CD137scFv双特异性抗体在癌细胞与T细胞的共培养体系中的干扰素-γ产生促进功能评价]
对60As6-Luc/GFP细胞与扩增PanT细胞的共培养体系中的抗CLDN4(3D11)-抗CD137scFv双特异性抗体的干扰素-γ产生促进功能进行评价。将0.1μg/100μL/孔的抗CD3抗体添加到平底96孔板(IWAKI公司，3860-096)，将抗CD3抗体固相化于板上。向板上接种60As6-Luc/GFP细胞使得达到5×104个/50μL/孔，在37℃、5％CO2培养箱中进行培养。第二天，向上述板上接种2×105个/30μL/孔的扩增PanT细胞。将被检抗体和同种型对照用培养用培养基从最高浓度50000ng/mL以5倍的公比进行连续稀释，各添加20μL。作为被检抗体，使用乌瑞芦单抗和抗CLDN4(3D11)-抗CD137scFv双特异性抗体(3D11_3-34-j6_S)，作为同种型对照，使用IgG(溶菌酶)-scFv(CD137)(公司内制备)。6天后，使用Alpha LISA干扰素-γ测定试剂盒(Perkin Elmer公司，AL217C)，按照制造商推荐的方案对上清液中的干扰素-γ产生量进行测定。在图3-1中示出干扰素-γ产生量与抗体浓度的反应曲线。抗CLDN4(3D11)-抗CD137scFv双特异性抗体在表达CLDN4的癌细胞株即60As6-Luc/GFP细胞与扩增PanT细胞的共培养体系中显示出干扰素-γ产生促进作用。抗CLDN4(3D11)-抗CD137scFv双特异性抗体的干扰素-γ产生促进功能显著强于乌瑞芦单抗。
[6-4.抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv双特异性抗体在癌细胞与T细胞的共培养体系中的干扰素-γ产生促进功能评价]
对于60As6-Luc/GFP细胞与扩增PanT细胞的共培养体系中的抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv双特异性抗体的干扰素-γ产生促进功能，利用与6-3同样的方法进行评价。将抗CD3抗体固相化于96孔板使得达到0.03μg/100μL/孔。以2×104个/50μL/孔接种60As6-Luc/GFP细胞。另外，扩增PanT细胞以8×104个/30μL/孔接种。作为被检抗体，使用从最高浓度5000ng/mL以2倍公比进行连续稀释而得的乌瑞芦单抗或抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv双特异性抗体(hKM3900_3-34-j6或hKM3900_tA2-32LH)。将被检抗体和同种型对照(溶菌酶抗体)分别各添加20μL。4天后，对上清液中的干扰素-γ产生量进行测定。在图3-2中示出干扰素-γ产生量与抗体浓度的反应曲线。抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv双特异性抗体在60As6-Luc/GFP细胞与扩增PanT细胞的共培养体系中显示出干扰素-γ产生促进功能。这些双特异性抗体的干扰素-γ产生促进功能显著强于乌瑞芦单抗。
[6-5.抗CLDN4(3D11)-抗CD137scFv双特异性抗体在T细胞的单培养体系中的干扰素-γ产生促进功能评价]
对扩增PanT细胞的单培养体系中的抗CLDN4(3D11)-抗CD137scFv双特异性抗体的干扰素-γ产生促进功能进行评价。向平底96孔板以0.1μg/100μL/孔添加抗CD3抗体，将抗CD3抗体固相化于板上。向经固相化的板接种2×105个/80μL/孔的扩增PanT细胞。作为被检抗体，使用乌瑞芦单抗、抗CLDN4(3D11)-抗CD3scFv双特异性抗体(3D11_3-34-j6_S)，作为同种型对照，使用IgG(溶菌酶)-scFv(CD137)(公司内制备)。将被检抗体和同种型对照用培养用培养基从最高浓度50000ng/mL以5倍公比进行连续稀释，各添加20μL。6天后，使用AlphaLISA干扰素-γ测定试剂盒，利用与6-3.同样的方法对上清液中的干扰素-γ产生量进行测定。在图3-3中示出干扰素-γ产生量与抗体浓度的反应曲线。抗CLDN4(3D11)-抗CD137scFv双特异性抗体在T细胞的单培养体系中未显示干扰素-γ产生促进功能，但乌瑞芦单抗显示出干扰素-γ产生促进作用。本结果意味着：在不存在表达CLDN4的癌细胞株的环境下，抗CLDN4(3D11)-抗CD137scFv双特异性抗体不显示T细胞活性增强作用。
[6-6.抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv双特异性抗体在T细胞的单培养体系中的干扰素-γ产生促进功能评价]
对于扩增PanT细胞的单培养体系中的抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv双特异性抗体的干扰素-γ产生促进功能，利用与6-5同样的方法进行评价。将抗CD3抗体固相化于96孔板使得达到0.03μg/100μL/孔。将扩增PanT细胞以8×104个/80μL/孔接种。作为被检抗体，使用乌瑞芦单抗、抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv双特异性抗体(hKM3900_3-34-j6、hKM3900_tA2-32LH)。将被检抗体和同种型对照(溶菌酶抗体)从最高浓度5000ng/mL以2倍公比进行连续稀释，各添加20μL。在图3-4中示出干扰素-γ产生与抗体浓度的反应曲线。抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv双特异性抗体在T细胞的单培养体系中未显示干扰素-γ产生促进功能，但乌瑞芦单抗显示出干扰素-γ产生促进功能。
6-5和6-6的结果意味着：在不存在表达CLDN4的癌细胞株的环境下，抗CLDN4-抗CD137scFv双特异性抗体不显示T细胞活性增强作用，这暗示了使作为抗CD137抗体的副作用被报道的全身免疫激活作用降低的可能性。
[6-7.抗CLDN4(3D11)-抗CD137scFv双特异性抗体在癌细胞与T细胞的共培养体系中的癌细胞毒活性评价]
利用60As6-Luc/GFP细胞与扩增PanT细胞的共培养体系对抗CLDN4(3D11)-抗CD137scFv双特异性抗体的癌细胞毒活性(癌细胞的增殖抑制作用)进行评价。将60As6-Luc/GFP细胞以1×104个/50μL/孔接种于平底96孔板，在37℃、5％CO2培养箱中进行培养。2小时后，在上述96孔板以1×105个/50μL/孔接种扩增panT细胞。作为被检抗体，使用乌瑞芦单抗和抗CLDN4(3D11)-抗CD137scFv双特异性抗体。将这些抗体用培养用培养基从最高浓度40000ng/mL以10倍公比进行连续稀释，各添加50μL。然后，将40ng/mL的抗CD3抗体各添加50μL，使用37℃、5％CO2培养箱内的IncuCyte(注册商标)ZOOM(Sartorius公司)，开始各孔的荧光(GFP)面积的测定。将从测定开始0小时起增加的荧光面积作为细胞增殖的指标。在图4中示出被检抗体的癌细胞毒作用(癌细胞增殖率)。图4的纵轴表示从0小时增加至168小时的荧光面积中将未添加被检抗体的孔设为100％时的相对值。如图4所示，抗CLDN4(3D11)-抗CD137scFv双特异性抗体在60As6-Luc/GFP细胞与扩增PanT细胞的共培养体系中显示出细胞毒作用。本双特异性抗体的细胞毒活性显著强于乌瑞芦单抗。
[6-8.抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv双特异性抗体在癌细胞与T细胞的共培养体系中的癌细胞毒活性评价]
对于抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv双特异性抗体的癌细胞杀伤作用，利用60As6-Luc/GFP细胞与扩增PanT细胞的共培养体系进行评价。将抗CD3抗体以1ng/100μL/孔添加于平底96孔板(Perkin Elmer公司，6005680)，固定化于板。将板用PBS(-)洗涤2次后，接种2×104个/50μL/孔的60As6-Luc/GFP细胞，利用37℃、5％CO2培养箱进行培养。第二天，在96孔板接种4.0×104个/30μL/孔的扩增PanT细胞。然后，将5000ng/mL至0.844ng/mL的浓度的被检抗体和同种型对照各添加20μL。作为被检抗体，使用乌瑞芦单抗和抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv双特异性抗体(hKM3900_3-34-j6、hKM3900_tA2-32LH)。6天后进行测定。对于一部分的孔，为了杀伤细胞，在测定30分钟之前各添加11μL的1％Triton-X100(Sigma-Aldrich公司，T-9284)。使用ONE-Glo荧光素酶测定试剂盒(Promega公司，E6120)，按照制造商推荐的方案，使用ARVO X-3(Perkin Elmer公司)对各孔的60As6-Luc/GFP细胞的荧光素酶活性进行测定。对于癌杀伤率，用将未添加抗体的孔的荧光素酶化学发光的平均值设为0％、且将添加了Triton-X100的孔的平均值设为100％时的相对值表示。作为同种型对照，使用抗溶菌酶抗体(公司内制备)。在图5中示出60As6-Luc/GFP细胞的细胞杀伤率曲线。在60As6-Luc/GFP细胞与扩增PanT细胞的共培养体系中，通过添加抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv双特异性抗体，60As6-Luc/GFP细胞杀伤率显著增加。另一方面，未观察到作为抗CD137特异性抗体的乌瑞芦单抗带来的对60As6-Luc/GFP细胞株的细胞杀伤率的增加。
[实施例7：抗CLDN4-抗CD137scFv双特异性抗体的体内评价]
[7-1.抗CLDN4-抗CD137scFv双特异性抗体的体内抗肿瘤效果]
将NCI-H322细胞悬浮于PBS(-)(WAKO公司，045-29795)，将5.0×106个细胞/100μL的细胞悬浮液移植到7周龄的雌性小鼠(NOG，In-Vivo Science公司)的皮下。移植6天后，从尾静脉注入3.4×106个细胞/200μL的人外周血单核细胞(Lonza，CC-2702)。在移植人外周血单核细胞15天后进行分组，开始被检抗体的给药。一组各10只，以使各组间的肿瘤体积大致同等的方式分配小鼠(第0天)。作为被检抗体，使用hKM3900_tA2-32LH。将被检抗体和同种型对照(抗溶菌酶抗体)混合到PBS中，向静脉内给药。给药在第0天、第4天和第8天进行，在给药时测定肿瘤径和体重。肿瘤体积的计算中使用以下的式子。
[肿瘤体积(mm3)]＝[肿瘤的长径(mm)]×[肿瘤的短径(mm)]2×0.5
如图6所示，在给药了0.1mg/kg、1mg/kg或10mg/kg的hKM3900_tA2-32LH的组中，显示出显著的肿瘤体积缩小作用。纵轴表示肿瘤体积，横轴表示初次给药后天数。实线和虚线表示各组的肿瘤体积的平均值的推移，误差棒表示平均值的标准误差。利用Dunnett的多重比较检验，对同种型对照给药组与hKM3900_tA2-32LH给药组的第12天的肿瘤体积进行比较，由此算出显著性概率P值(*：P＜0.05，**：P＜0.01)。hKM3900_tA2-32LH的0.1mg/kg给药组的第12天的例数为9。
[7-2.抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv双特异性抗体在食蟹猴中的安全性试验]
为了研究抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv双特异性抗体(hKM3900_3-34-j6和hKM3900_tA2-32LH)的安全性，向食蟹猴的静脉内单次给药抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv双特异性抗体。结果，在给药了抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv双特异性抗体的猴中，对于血清中的IL-6、TNF-α等细胞因子浓度未确认到特别的异常。因此，从安全性的观点进行判断，抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv双特异性抗体作为癌的治疗中使用的抗体是合适的。
[实施例8：利用抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体的癌的治疗]
[8-1.CLDN4的表达量的确认]
为了考察CLDN4作为癌治疗靶点的通用性，利用癌症基因组图谱(TCGA)，对癌组织中的CLDN4的RNA的表达量进行了调查。结果确认到，在大肠癌、膀胱癌、肺癌等癌组织中，CLDN4的表达亢进。由此暗示了CLDN4不仅在腹膜播散癌中成为治疗靶点、在其他种类的癌中也成为治疗靶点的可能性。另外，利用基因型-组织表达(GTEx)，对正常组织中的CLDN4的RNA的表达量进行了调查。结果，在若干正常组织中观察到CLDN4的表达。然而，在正常组织中，CLDN4的表达量比癌组织低。因此暗示了，将CLDN4作为治疗靶点的癌治疗药能够确保广泛的安全域，有可能成为副作用的担忧低的治疗药。
产业上可利用性
本发明的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体被期待对于癌的治疗有用。另外，本发明的多核苷酸、表达载体、所转化的宿主细胞和生产抗体的方法对于产生上述抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体而言是有用的。
序列表自由文本
在以下的序列表的数字标题＜223＞中记载“人工序列”的说明。具体而言，序列表的序列号1为3D11的重链可变区的碱基序列，序列号2为3D11的重链可变区的氨基酸序列。序列号3为3D11的轻链可变区的碱基序列，序列号4为3D11的轻链可变区的氨基酸序列。序列号5为hKM3900的重链可变区的碱基序列，序列号6为hKM3900的重链可变区的氨基酸序列。序列号7为hKM3900的轻链可变区的碱基序列，序列号8为hKM3900的轻链可变区的氨基酸序列。序列号9为3-34的重链可变区的碱基序列，序列号10为3-34的重链可变区的氨基酸序列。序列号11为3-34的轻链可变区的碱基序列，序列号12为3-34的轻链可变区的氨基酸序列。序列号13为A2-32的重链可变区的碱基序列，序列号14为A2-32的重链可变区的氨基酸序列。序列号15为A2-32的轻链可变区的碱基序列，序列号16为A2-32的轻链可变区的氨基酸序列。序列号17为A2-48的重链可变区的碱基序列，序列号18为A2-48的重链可变区的氨基酸序列。序列号19为A2-48的轻链可变区的碱基序列，序列号20为A2-48的轻链可变区的氨基酸序列。序列号21为A2-73的重链可变区的碱基序列，序列号22为A2-73的重链可变区的氨基酸序列。序列号23为A2-73的轻链可变区的碱基序列，序列号24为A2-73的轻链可变区的氨基酸序列。序列号25为3-34-j6scFv的碱基序列，序列号26为3-34-j6 scFv的氨基酸序列。序列号27为tA2-32 scFv的碱基序列，序列号28为tA2-32 scFv的氨基酸序列。序列号29为tA2-32LH scFv的碱基序列，序列号30为tA2-32LH scFv的氨基酸序列。序列号31为tA2-48 scFv的碱基序列，序列号32为tA2-48 scFv的氨基酸序列。序列号33为tA2-73 scFv的碱基序列，序列号34为tA2-73 scFv的氨基酸序列。序列号35为hKM3900_3-34-j6的重链的碱基序列，序列号36为hKM3900_3-34-j6的重链的氨基酸序列。序列号37为hKM3900_tA2-32LH的重链的碱基序列，序列号38为hKM3900_tA2-32LH的重链的氨基酸序列。序列号39为hKM3900的轻链的碱基序列，序列号40为hKM3900的轻链的氨基酸序列。序列号41为抗CD3scFv-人Fc融合蛋白的氨基酸序列。序列号42为人CD137的氨基酸序列。序列号43为猴CD137的氨基酸序列。序列号44为His标签蛋白的氨基酸序列。序列号45为3×FLAG标签的氨基酸序列。序列号46～54为GS接头的氨基酸序列。序列号55为GKPGS接头的氨基酸序列。
序列表
<110> 安斯泰来制药株式会社
国立研究开发法人国立癌症研究中心
<120> 抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体
<130> FA1535-21350
<150> JP2021-72429
<151> 2021-04-22
<160> 55
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 3D11 VH
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(375)
<400> 1
cag gtt cag ttg gga cag tct ggc ccc gaa gtg aag aaa cct ggc gcc 48
Gln Val Gln Leu Gly Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
tct gtg aag gtg tcc tgc aag gct tcc ggc tac tcc ttt atc tcc tac 96
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ile Ser Tyr
20 25 30
ggc atc tcc tgg gtc cga cag gct cct gga caa ggc ttg gaa tgg atg 144
Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
ggc tgg tcc tcc gtg tac aac ggc aac acc aac tac gtg cag aaa ttc 192
Gly Trp Ser Ser Val Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Val Gln Lys Phe
50 55 60
cag ggc aga gtg acc atg acc acc gac acc tct gcc tcc acc gcc tac 240
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
atg gaa ctg cgg tcc ctg aga tct gat gac gcc gcc gtg tac tac tgc 288
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Ala Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
gcc aga gac tct tac tcc tcc ggc tgg tct tac tac tac tcc ggc atg 336
Ala Arg Asp Ser Tyr Ser Ser Gly Trp Ser Tyr Tyr Tyr Ser Gly Met
100 105 110
gat gtg tgg ggc cag ggc aca aca gtg acc gtg tcc tcc 375
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 2
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 2
Gln Val Gln Leu Gly Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ile Ser Tyr
20 25 30
Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ser Ser Val Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Val Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Ala Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Ser Tyr Ser Ser Gly Trp Ser Tyr Tyr Tyr Ser Gly Met
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 3
<211> 327
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 3D11 VL
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(327)
<400> 3
gag att gtg ctg acc cag tct cct ggc aca ctg tct ttg agc cct ggc 48
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
gag aga gct acc ctg tcc tgt aga gcc tct cag tcc gtg tcc tcc tct 96
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
tac ctg gcc tgg tat cag cag aag cct gga cag gct ccc cgg ctg ttg 144
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
atc tac ggc gct tct tct aga gcc aca ggc atc cct gac cgg ttc tcc 192
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
gga tct ggc tct ggc acc gat ttc acc ctg acc atc aac cgg ctg gaa 240
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Arg Leu Glu
65 70 75 80
ccc gag gat ttc gcc gtg tac tac tgc cag cag tac ggc tcc tct cct 288
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro
85 90 95
tac tct ttt ggc cag ggc acc aag ctg gaa atc aag cgg 327
Tyr Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 4
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 4
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro
85 90 95
Tyr Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 5
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> hKM3900 VH
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(369)
<400> 5
gaa gtg cag ctg gtt cag tct ggc gcc gaa gtg aag aaa cct ggc gcc 48
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
tcc gtg aag atc tcc tgc aag gct tct ggc tac acc ttc acc gac tac 96
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
tac atg aac tgg gtc cga cag gct cct gga cag gga ctt gag tgg atg 144
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
gga gat gtg gtg ccc aac aac ggc gtg ccc acc tac aac cag aaa ttc 192
Gly Asp Val Val Pro Asn Asn Gly Val Pro Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
aag ggc aga gtg acc atc acc gcc gac aag tct acc tcc acc gcc tac 240
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
atg gaa ctg cgg agc ctg aga tct gag gac acc gcc gtg tac tac tgc 288
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
gcc aga cct cac tac tac tac gcc ggc aga tct ggc gcc atg gat tat 336
Ala Arg Pro His Tyr Tyr Tyr Ala Gly Arg Ser Gly Ala Met Asp Tyr
100 105 110
tgg gga cag ggc acc ctg gtc acc gtg tcc tct 369
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 6
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 6
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asp Val Val Pro Asn Asn Gly Val Pro Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Pro His Tyr Tyr Tyr Ala Gly Arg Ser Gly Ala Met Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 7
<211> 327
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> hKM3900 VL
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(327)
<400> 7
gac atc cag ctg acc cag tct cca tcc tct ctg tct gcc tct gtg ggc 48
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
gac aga gtg aca att acc tgc acc gcc tcc tcc acc gtg tcc tct acc 96
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Thr Ala Ser Ser Thr Val Ser Ser Thr
20 25 30
tac ctg cac tgg tat cag cag aag ccc ggc aag gct ccc aag ctg ctg 144
Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
atc tac tcc acc tcc aat ctg gcc tct ggc gtg ccc tct aga ttc tcc 192
Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
gga tct ggc tct gga acc gac tat acc ctg aca atc tcc agc ctg cag 240
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
cct gag gac ttc gcc acc tac tac tgc cac cag tac cac aga tcc cca 288
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Tyr His Arg Ser Pro
85 90 95
cct acc ttt ggc cag ggc acc aag ctg gaa atc aag cgt 327
Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 8
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 8
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Thr Ala Ser Ser Thr Val Ser Ser Thr
20 25 30
Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Tyr His Arg Ser Pro
85 90 95
Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 9
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 3-34 VH
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(354)
<400> 9
cag gtc cag ctg cag cag tct gag gct gag ctg gtg agg cct ggg gcc 48
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Glu Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
tca gtg aag att tcc tgc aag gct ttt ggc tac acc ttc aca aac cat 96
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Phe Gly Tyr Thr Phe Thr Asn His
20 25 30
cat ata aac tgg gtg aag cag agg cct gga cag ggc ctg gac tgg att 144
His Ile Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile
35 40 45
gga tat att aat cct tat aat gat tat act acc ttc aac cgg aag ttc 192
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Tyr Thr Thr Phe Asn Arg Lys Phe
50 55 60
aag gac aag gcc aca ttg act gta cac aaa tcc tcc agc aca gcc tat 240
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val His Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
atg gag ctt agc ggc ctg aca tct gac gac tct gca gtc tat tac tgt 288
Met Glu Leu Ser Gly Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
gca aga acc tgg ggt cac tgg tat ttc gat ctc tgg ggc cgt ggc acc 336
Ala Arg Thr Trp Gly His Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly Thr
100 105 110
gtg gtc act gtc tcc tca 354
Val Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 10
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 10
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Glu Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Phe Gly Tyr Thr Phe Thr Asn His
20 25 30
His Ile Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Tyr Thr Thr Phe Asn Arg Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val His Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Gly Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Thr Trp Gly His Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly Thr
100 105 110
Val Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 11
<211> 327
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 3-34 VL
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(327)
<400> 11
gaa ata gtg atg acg cag tct cca gcc acc ctg tct gtg tct cca ggg 48
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
gaa aga gcc acc ctc tcc tgt agg gcc agt cag agt gtt agc agc aac 96
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
tta gcc tgg tac cag cag aaa cct ggc cag gct ccc agg ctc ctc atc 144
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
tat gat tca tcc acc agg gcc act ggt atc cca gcc agg ttc agt ggc 192
Tyr Asp Ser Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
agt ggg tct ggg aca gac ttc act ctc acc atc agc agc ctg cag tct 240
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
gaa gat ttt gca gtt tat tac tgt cag cag tat aat aac tgg cct ccg 288
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Asn Trp Pro Pro
85 90 95
tgg acg ttc ggc caa ggg acc aag gtg gaa atc aaa cgg 327
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 12
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 12
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ser Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Asn Trp Pro Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 13
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> A2-32 VH
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(354)
<400> 13
cag gtg cag ctg cag gaa tcg ggc cca gga ctg gtg aag cct tcg gag 48
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
acc ctg tcc ctc acc tgc act gtc tct ggc ggc tcc atc agt ggt tat 96
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Gly Tyr
20 25 30
tac tgg agc tgg atc cgg cag ccc cca ggg aag ggc ctg gag tgg att 144
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
gga tat atc tat tac agt gga ttc acc aac tac aac ccc tcc ctc aag 192
Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Phe Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
agt cga gtc acc ata tca gta gac acg tcc aag aac cag ttc tcc ctg 240
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
aaa ctg agc tct gtg acc gct gcg gac acg gcc gtg tat tat tgt acg 288
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr
85 90 95
aga gat cac tcc cac tac tac tac atg gac gtc tgg ggc caa ggg acc 336
Arg Asp His Ser His Tyr Tyr Tyr Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
acg gtc acc gtc tcc tca 354
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 14
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 14
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Phe Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr
85 90 95
Arg Asp His Ser His Tyr Tyr Tyr Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 15
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> A2-32 VL
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(333)
<400> 15
cag tct gtg ctg act cag cca ccc tca gcg tct ggg acc ccc ggg cag 48
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
agg gtc acc atc tct tgt tct gga agc agc tcc aac atc gga agt aat 96
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
act gta aac tgg tac cag cag ttc cca gga acg gcc ccc aaa ctc ctc 144
Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
atc tat agt aat aat cag cgg ccc tca ggg gtc cct gac cga ttc tct 192
Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
ggc tcc aag tct ggc acc tca gcc tcc ctg gcc atc agt ggg ctc cag 240
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln
65 70 75 80
tct gag gat gag gct gat tat tac tgt gca gga tgg gat gac agc ctg 288
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Gly Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
aat ggt ccg gta ttc ggc gga ggg acc aag ctg acc gtc cta ggt 333
Asn Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 16
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 16
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Gly Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Asn Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 17
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> A2-48 VH
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(354)
<400> 17
cag gtg cag ctg cag gag tcg ggc cca gga ctg gtg aag cct tcg gag 48
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
acc ctg tcc ctc acc tgc act gtc tct ggt ggc tcc atc agt agt tac 96
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
tac tgg agc tgg atc cgg cag ccc ccc ggg aag gga ctg gaa tgg att 144
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
ggg tat atc tat tac agt ggg tac acc aac tac aac ccc tcc ctc aag 192
Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
agt cga gtt aac ata tca gta gac acg tcc cag aac cag ttc tcc ctg 240
Ser Arg Val Asn Ile Ser Val Asp Thr Ser Gln Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
aag ctg aat tct ctg acc gct gcg gac acg gcc gtt tat tac tgt gcg 288
Lys Leu Asn Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
aga aca cac tcc tat tac tac ggt atg gac gtc tgg ggc caa ggg acc 336
Arg Thr His Ser Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
acg gtc acc gtc tcc tca 354
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 18
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 18
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Asn Ile Ser Val Asp Thr Ser Gln Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Asn Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Thr His Ser Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 19
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> A2-48 VL
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(333)
<400> 19
cag tct gtg ctg act cag cca ccc tca gcg tct ggg acc ccc ggg cag 48
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
agg gtc acc atc tct tgt tct gga agc agc tcc aac atc gga aat aat 96
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn
20 25 30
cct gta aac tgg tac cag cag ttc cca gga acg gcc ccc aaa ctc ctc 144
Pro Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
atc tat agt aat aat cag cgg ccc tca ggg gtc cct gac cga ttc tct 192
Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
ggc tcc aag tct ggc acc tca gcc tcc ctg gcc atc agt ggg ctc cag 240
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln
65 70 75 80
tct gag gat gag gct gat tat tac tgt gaa gca tgg gat gac agc ctg 288
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Glu Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
aat ggt ccg gta ttc ggc gga ggg acc aag ctg acc gtc cta ggt 333
Asn Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 20
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 20
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn
20 25 30
Pro Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Glu Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Asn Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 21
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> A2-73 VH
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(363)
<400> 21
cag gtg cag ctg cag gag tcg ggc cca gga ctg gtg aag cct tcg gag 48
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
acc ctg tcc ctc acc tgc act gtc tct ggt ggc tcc atc agt agt tac 96
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
tac tgg acc tgg atc cgg cag ccc cca ggg aag gga ctg gaa ttg gtt 144
Tyr Trp Thr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val
35 40 45
gga tat atc tat tac agt ggt tac acc agc tac aac ccc tcc ctc aag 192
Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Tyr Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
agt cga gtc acc ata tca att gac acg tcc aag aac cag ttc tcc ctg 240
Ser Arg Val Thr Ile Ser Ile Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
cag ctg aac tct gtg acc gct gcg gac acg gcc gtg tat ttc tgt gcg 288
Gln Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
cga gat gac tat ggt ggt aac ggc tac tac ggt gtg gac gtc tgg ggc 336
Arg Asp Asp Tyr Gly Gly Asn Gly Tyr Tyr Gly Val Asp Val Trp Gly
100 105 110
caa ggg acc acg gtc acc gtc tcc tca 363
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 22
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 22
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Trp Thr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Tyr Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Ile Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Gln Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Asp Tyr Gly Gly Asn Gly Tyr Tyr Gly Val Asp Val Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 23
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> A2-73 VL
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(333)
<400> 23
cag tct gtg ctg act cag cca ccc tca gcg tct ggg acc ccc ggg cag 48
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
agg gtc acc atc tct tgt tct ggc agc agc tcc aac atc gga aat aat 96
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn
20 25 30
cct gta aac tgg tac cgg cag ctc cca gga acg gcc ccc aaa ctc ctc 144
Pro Val Asn Trp Tyr Arg Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
atc tat agt aat aat cag cgg ccc tca ggg gtc cct gac cga ttc tct 192
Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
ggc tcc aag tct ggc acc tca gcc tcc ctg gcc atc agt ggg ctc cag 240
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln
65 70 75 80
tct gag gat gag gct gat tat tac tgt gca gca tgg gat gac agc ctg 288
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
aat ggt tgg gtg ttc ggc gga ggg acc aag ctg acc gtc cta ggt 333
Asn Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 24
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 24
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn
20 25 30
Pro Val Asn Trp Tyr Arg Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Asn Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 25
<211> 726
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 3-34-j6 scFv
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(726)
<400> 25
gaa gtt cag ctg ttg gaa agt ggt ggc gga ctg gtc cag cct ggc gaa 48
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Glu
1 5 10 15
tct ctg aga ctg agc tgc aag gcc ttc ggg tat acc ttt acc aac cac 96
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Phe Gly Tyr Thr Phe Thr Asn His
20 25 30
cac atc aat tgg gtt cga caa gcc cct ggc aag tgc ctg gaa tgg gtc 144
His Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Val
35 40 45
gga tat atc aac ccc tac aac gac tac acc acc ttc aac gac aag ttc 192
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Tyr Thr Thr Phe Asn Asp Lys Phe
50 55 60
aag gac cgg ttc acc ctg tcc gtg gat aag tcc aag agc acc gct tac 240
Lys Asp Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Lys Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
ctg cag atg aac tcc ctg aga gcc gag gat aca gct gtg tat tac tgt 288
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
gcc cgg acc tgg ggc cac tgg tac ttt gat ttg tgg ggc cag gga acc 336
Ala Arg Thr Trp Gly His Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
ctc gtg aca gtc tct tct ggc ggc gga gga agc gga ggc gga ggt tca 384
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
ggc ggc ggt gga tct aac atc cag atg acc cag tct cca tcc agc ctg 432
Gly Gly Gly Gly Ser Asn Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu
130 135 140
tct gcc tct gtg ggc gac aga gtg aca att acc tgt cgg gcc tct cag 480
Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln
145 150 155 160
tcc gtg tcc agc aat ctg gct tgg tat cag cag aag ccc ggc aag gct 528
Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala
165 170 175
ccc aag ctg ctg atc tac gac tcc tcc acc aga gct acc ggc gtg cca 576
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ser Ser Thr Arg Ala Thr Gly Val Pro
180 185 190
tct aga ttc tcc ggc tct ggc tct ggc acc gac ttt acc ctg aca att 624
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
195 200 205
tcc agc ctg cag cct gag gac ttc gcc acc tac tac tgc cag cag tac 672
Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr
210 215 220
aac aac tgg cct cct tgg acc ttc ggc tgc ggc acc aaa ctg gaa atc 720
Asn Asn Trp Pro Pro Trp Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Ile
225 230 235 240
aag cgc 726
Lys Arg
<210> 26
<211> 242
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 26
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Phe Gly Tyr Thr Phe Thr Asn His
20 25 30
His Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Tyr Thr Thr Phe Asn Asp Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Lys Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Thr Trp Gly His Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Asn Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu
130 135 140
Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln
145 150 155 160
Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala
165 170 175
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ser Ser Thr Arg Ala Thr Gly Val Pro
180 185 190
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
195 200 205
Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr
210 215 220
Asn Asn Trp Pro Pro Trp Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Ile
225 230 235 240
Lys Arg
<210> 27
<211> 732
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> tA2-32 scFv
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(732)
<400> 27
cag gtt cag ttg caa gaa tct ggc cca ggc ctc gtg aag ccc tcc gaa 48
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
aca ctg tct ctg acc tgc aca gtg tcc ggc ggc tct atc tct ggc tac 96
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Gly Tyr
20 25 30
tac tgg tcc tgg atc aga cag cct cct ggc aag tgc ctg gaa tgg atc 144
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Ile
35 40 45
ggc tac atc tac tac tct ggc ttc acc aac tac aac ccc agc ctg aag 192
Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Phe Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
tcc aga gtg acc atc agc gtg gac acc tct aag aac cag ttc tct ctg 240
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
aag ctg tcc tcc gtg acc gcc gct gat acc gct gtg tat tac tgc acc 288
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr
85 90 95
cgg gac cac agc cac tac tac tac atg gac gtg tgg gga cag gga aca 336
Arg Asp His Ser His Tyr Tyr Tyr Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
acc gtg aca gtc tct tca ggc ggt ggt gga tca ggc ggc gga gga agt 384
Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
ggt ggc gga ggt tct cag tct gtg ctg acc caa cct cct tcc gct tct 432
Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser
130 135 140
ggc aca cct ggc cag aga gtg aca atc tct tgc tcc ggc tcc tcc tcc 480
Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser
145 150 155 160
aac atc ggc tct aac acc gtg aac tgg tat cag cag ttc ccc ggc acc 528
Asn Ile Gly Ser Asn Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr
165 170 175
gct cct aag ctg ctg atc tac tcc aac aac cag cgg cct tcc ggc gtg 576
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val
180 185 190
ccc gat aga ttc tct ggc tct aag tcc ggc acc tct gcc agc ctg gct 624
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala
195 200 205
att tct gga ctg cag agc gag gac gag gcc gac tat tat tgt gcc ggc 672
Ile Ser Gly Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Gly
210 215 220
tgg gac gac tct ctg aac ggc cct gtt ttt ggc tgc ggc acc aaa ctg 720
Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Pro Val Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu
225 230 235 240
act gtg ctg ggc 732
Thr Val Leu Gly
<210> 28
<211> 244
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 28
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Phe Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr
85 90 95
Arg Asp His Ser His Tyr Tyr Tyr Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser
130 135 140
Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser
145 150 155 160
Asn Ile Gly Ser Asn Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr
165 170 175
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val
180 185 190
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala
195 200 205
Ile Ser Gly Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Gly
210 215 220
Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Pro Val Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu
225 230 235 240
Thr Val Leu Gly
<210> 29
<211> 747
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> tA2-32LH scFv
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(747)
<400> 29
caa tct gtt ctg acc caa cct cct tcc gcc tct ggc aca cct ggc cag 48
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
aga gtg acc atc tct tgc tcc ggc tcc tcc tcc aac atc ggc tct aac 96
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
acc gtg aac tgg tat cag cag ttc ccc ggc acc gct cct aag ctg ctg 144
Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
atc tac tcc aac aac cag cgg cct tcc ggc gtg ccc gat aga ttc tct 192
Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
ggc tct aag tcc ggc acc tct gcc agc ctg gct att tct gga ctg cag 240
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln
65 70 75 80
agc gag gac gag gcc gac tat tat tgt gcc ggc tgg gac gac tct ctg 288
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Gly Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
aac ggc cct gtt ttt ggc ggt ggc acc aaa ctg aca gtg ctt gga ggc 336
Asn Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly
100 105 110
ggt ggt gga tca ggc ggc ggt gga agt ggt ggt ggt ggt agc gga ggt 384
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
ggt gga tct cag gtg cag ctc caa gag tct gga cct ggc ctc gtg aag 432
Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys
130 135 140
cct tcc gag aca ctg tct ctg acc tgc aca gtg tcc ggc ggc tct atc 480
Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile
145 150 155 160
tct ggc tac tac tgg tcc tgg atc aga cag cct cct ggc aag gga ctc 528
Ser Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu
165 170 175
gag tgg atc ggc tac atc tac tac tct ggc ttc acc aac tac aac ccc 576
Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Phe Thr Asn Tyr Asn Pro
180 185 190
agc ctg aag tcc cgc gtg acc atc agc gtg gac acc tct aag aac cag 624
Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln
195 200 205
ttc tct ctg aag ctg tcc tcc gtg acc gcc gct gat acc gct gtg tat 672
Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr
210 215 220
tac tgc acc cgg gac cac agc cac tac tac tac atg gac gtg tgg gga 720
Tyr Cys Thr Arg Asp His Ser His Tyr Tyr Tyr Met Asp Val Trp Gly
225 230 235 240
cag gga aca acc gtg aca gtg tcc tcc 747
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 30
<211> 249
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 30
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Gly Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Asn Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly
100 105 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys
130 135 140
Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile
145 150 155 160
Ser Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu
165 170 175
Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Phe Thr Asn Tyr Asn Pro
180 185 190
Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln
195 200 205
Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr
210 215 220
Tyr Cys Thr Arg Asp His Ser His Tyr Tyr Tyr Met Asp Val Trp Gly
225 230 235 240
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 31
<211> 732
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> tA2-48 scFv
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(732)
<400> 31
cag gtt cag ttg caa gaa tct ggc cca ggc ctc gtg aag ccc tcc gaa 48
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
aca ctg tct ctg acc tgc aca gtg tcc ggc ggc tcc atc tct tcc tac 96
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
tac tgg tcc tgg atc aga cag cct cct ggc aag tgc ctg gaa tgg atc 144
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Ile
35 40 45
ggc tac atc tac tac tcc ggc tac acc aac tac aac ccc agc ctg aag 192
Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
tcc aga gtg aac atc tcc gtg gac acc agc cag aac cag ttc tct ctg 240
Ser Arg Val Asn Ile Ser Val Asp Thr Ser Gln Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
aag ctg aac tcc ctg acc gcc gct gat acc gct gtg tat tac tgc gct 288
Lys Leu Asn Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
cgg acc cac agc tac tac tat ggc atg gac gtg tgg gga caa ggg aca 336
Arg Thr His Ser Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
acc gtg aca gtc tct tca ggc ggt ggt gga tca ggc ggc gga gga agt 384
Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
ggt ggc gga ggt tct cag tct gtg ctg acc caa cct cct tcc gct tct 432
Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser
130 135 140
ggc aca cct ggc cag aga gtg acc atc agc tgt agc ggc tcc tcc tcc 480
Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser
145 150 155 160
aac atc ggc aac aac ccc gtg aac tgg tat cag cag ttc ccc ggc aca 528
Asn Ile Gly Asn Asn Pro Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr
165 170 175
gcc cct aag ctg ctg atc tac tcc aac aac cag cgg cct tcc ggc gtg 576
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val
180 185 190
ccc gat aga ttc tct ggc tct aag tcc ggc acc tct gcc agc ctg gct 624
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala
195 200 205
att tct gga ctg cag agc gag gac gag gcc gac tac tat tgc gag gct 672
Ile Ser Gly Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Glu Ala
210 215 220
tgg gac gac tct ctg aac ggc cct gtg ttt ggc tgt ggc acc aaa ctg 720
Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Pro Val Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu
225 230 235 240
act gtg ctg ggc 732
Thr Val Leu Gly
<210> 32
<211> 244
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 32
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Asn Ile Ser Val Asp Thr Ser Gln Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Asn Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Thr His Ser Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser
130 135 140
Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser
145 150 155 160
Asn Ile Gly Asn Asn Pro Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr
165 170 175
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val
180 185 190
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala
195 200 205
Ile Ser Gly Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Glu Ala
210 215 220
Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Pro Val Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu
225 230 235 240
Thr Val Leu Gly
<210> 33
<211> 741
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> tA2-73 scFv
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(741)
<400> 33
cag gtt cag ttg caa gaa tct ggc cca ggc ctc gtg aag ccc tcc gaa 48
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
aca ctg tct ctg acc tgc aca gtg tcc ggc ggc tcc atc tct tcc tac 96
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
tac tgg acc tgg atc aga cag cct cct ggc aag tgc ttg gaa ctc gtg 144
Tyr Trp Thr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Cys Leu Glu Leu Val
35 40 45
ggc tac atc tac tac tcc ggc tac acc agc tac aac ccc agc ctg aag 192
Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Tyr Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
tcc aga gtg acc atc agc atc gac acc tct aag aac cag ttc agc ctg 240
Ser Arg Val Thr Ile Ser Ile Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
cag ctc aac tcc gtg acc gct gct gat acc gct gtg tac ttc tgc gcc 288
Gln Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
aga gat gac tac ggc ggc aac ggc tat tat ggc gtg gac gtt tgg gga 336
Arg Asp Asp Tyr Gly Gly Asn Gly Tyr Tyr Gly Val Asp Val Trp Gly
100 105 110
caa ggg aca acc gtg aca gtg tct agc gga ggt ggt gga tca ggc ggc 384
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
ggt gga agt ggt ggt ggt ggc tct cag tct gtg ctg acc caa cct cct 432
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro
130 135 140
tct gcc tct ggc aca cct ggc cag aga gtg aca atc tct tgc tcc ggc 480
Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly
145 150 155 160
tcc tcc tcc aac atc ggc aac aac ccc gtg aac tgg tac aga cag ctg 528
Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn Pro Val Asn Trp Tyr Arg Gln Leu
165 170 175
cca ggc aca gcc cct aag ctg ctg atc tac tcc aac aac cag cgg cct 576
Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro
180 185 190
tcc ggc gtg ccc gat aga ttc tct gga tct aag tcc ggc acc agc gcc 624
Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala
195 200 205
agc ctg gct att tct gga ctg cag agc gag gac gag gcc gac tac tac 672
Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr
210 215 220
tgt gcc gct tgg gac gat tct ctg aac gga tgg gtg ttc ggc tgc ggc 720
Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Trp Val Phe Gly Cys Gly
225 230 235 240
acc aaa ctg act gtg ctg gga 741
Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
245
<210> 34
<211> 247
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 34
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Trp Thr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Cys Leu Glu Leu Val
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Tyr Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Ile Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Gln Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Asp Tyr Gly Gly Asn Gly Tyr Tyr Gly Val Asp Val Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro
130 135 140
Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly
145 150 155 160
Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn Pro Val Asn Trp Tyr Arg Gln Leu
165 170 175
Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro
180 185 190
Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala
195 200 205
Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr
210 215 220
Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Trp Val Phe Gly Cys Gly
225 230 235 240
Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
245
<210> 35
<211> 2115
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> hKM3900_3-34-j6 HC
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(2115)
<400> 35
gaa gtg cag ctg gtt cag tct ggc gcc gaa gtg aag aaa cct ggc gcc 48
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
tcc gtg aag atc tcc tgc aag gct tct ggc tac acc ttc acc gac tac 96
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
tac atg aac tgg gtc cga cag gct cct gga cag gga ctt gag tgg atg 144
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
gga gat gtg gtg ccc aac aac ggc gtg ccc acc tac aac cag aaa ttc 192
Gly Asp Val Val Pro Asn Asn Gly Val Pro Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
aag ggc aga gtg acc atc acc gcc gac aag tct acc tcc acc gcc tac 240
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
atg gaa ctg cgg agc ctg aga tct gag gac acc gcc gtg tac tac tgc 288
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
gcc aga cct cac tac tac tac gcc ggc aga tct ggc gcc atg gat tat 336
Ala Arg Pro His Tyr Tyr Tyr Ala Gly Arg Ser Gly Ala Met Asp Tyr
100 105 110
tgg gga cag ggc acc ctg gtc acc gtg tcc tct gct agc aca aag ggc 384
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
ccc tct gtg ttc cct ctg gct cct agc tct aag tcc acc tct ggc gga 432
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
aca gct gct ctg ggc tgt ctg gtc aag gac tac ttc cct gag cct gtg 480
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
acc gtg tct tgg aac tct ggc gct ctg aca tcc ggc gtg cac aca ttt 528
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
cca gct gtg ctg cag tcc tcc ggc ctg tac tct ctg tcc tct gtc gtg 576
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
acc gtg cct tcc agc tct ctg gga acc cag acc tac atc tgc aat gtg 624
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
aac cac aag cct tcc aac acc aag gtg gac aag aag gtg gaa ccc aag 672
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys
210 215 220
tcc tgc gac aag acc cac acc tgt cct cca tgt cct gct cca gaa gct 720
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala
225 230 235 240
gct ggc gga cct tcc gtg ttc ctg ttt cct cca aag cct aag gac acc 768
Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
ctg atg atc tct cgg acc cct gaa gtg acc tgc gtg gtg gtg gat gtg 816
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
tct cac gag gac cca gaa gtg aag ttc aat tgg tac gtg gac ggc gtg 864
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
gaa gtg cac aac gcc aag acc aag cct aga gag gaa cag tac aac tcc 912
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
acc tac aga gtg gtg tcc gtg ctg acc gtg ctg cac cag gat tgg ctg 960
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
aac ggc aaa gag tac aag tgc aag gtg tcc aac aag gcc ctg cct gcc 1008
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
ggc atc gaa aag acc atc tcc aag gcc aag ggc cag cct agg gaa ccc 1056
Gly Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
cag gtt tac acc ttg cca cct tct cgg gac gag ctg acc aag aac cag 1104
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
355 360 365
gtg tcc ctg acc tgt ctc gtg aag ggc ttc tac ccc tcc gat atc gcc 1152
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
gtg gaa tgg gag tct aat ggc cag cct gag aac aac tac aag aca acc 1200
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
cct cct gtg ctg gac tcc gac ggc tca ttc ttc ctg tac tcc aag ctg 1248
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
aca gtg gac aag tcc aga tgg cag cag ggc aac gtg ttc tcc tgc agc 1296
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
gtg atg cac gag gcc ctg cac aat cac tac aca cag aag tct ctg tct 1344
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
ctg agc ccc ggc aaa ggt ggc gga gga tct ggc gga ggc gga tcc gaa 1392
Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu
450 455 460
gtt cag ctg ttg gaa agt ggt ggc gga ctg gtc cag cct ggc gaa tct 1440
Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Glu Ser
465 470 475 480
ctg aga ctg agc tgc aag gcc ttc ggg tat acc ttt acc aac cac cac 1488
Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Phe Gly Tyr Thr Phe Thr Asn His His
485 490 495
atc aat tgg gtt cga caa gcc cct ggc aag tgc ctg gaa tgg gtc gga 1536
Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Val Gly
500 505 510
tat atc aac ccc tac aac gac tac acc acc ttc aac gac aag ttc aag 1584
Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Tyr Thr Thr Phe Asn Asp Lys Phe Lys
515 520 525
gac cgg ttc acc ctg tcc gtg gat aag tcc aag agc acc gct tac ctg 1632
Asp Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Lys Ser Thr Ala Tyr Leu
530 535 540
cag atg aac tcc ctg aga gcc gag gat aca gct gtg tat tac tgt gcc 1680
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
545 550 555 560
cgg acc tgg ggc cac tgg tac ttt gat ttg tgg ggc cag gga acc ctc 1728
Arg Thr Trp Gly His Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu
565 570 575
gtg aca gtc tct tct ggc ggc gga gga agc gga ggc gga ggt tca ggc 1776
Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
580 585 590
ggc ggt gga tct aac atc cag atg acc cag tct cca tcc agc ctg tct 1824
Gly Gly Gly Ser Asn Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
595 600 605
gcc tct gtg ggc gac aga gtg aca att acc tgt cgg gcc tct cag tcc 1872
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser
610 615 620
gtg tcc agc aat ctg gct tgg tat cag cag aag ccc ggc aag gct ccc 1920
Val Ser Ser Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
625 630 635 640
aag ctg ctg atc tac gac tcc tcc acc aga gct acc ggc gtg cca tct 1968
Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ser Ser Thr Arg Ala Thr Gly Val Pro Ser
645 650 655
aga ttc tcc ggc tct ggc tct ggc acc gac ttt acc ctg aca att tcc 2016
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
660 665 670
agc ctg cag cct gag gac ttc gcc acc tac tac tgc cag cag tac aac 2064
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn
675 680 685
aac tgg cct cct tgg acc ttc ggc tgc ggc acc aaa ctg gaa atc aag 2112
Asn Trp Pro Pro Trp Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
690 695 700
cgc 2115
Arg
705
<210> 36
<211> 705
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 36
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asp Val Val Pro Asn Asn Gly Val Pro Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Pro His Tyr Tyr Tyr Ala Gly Arg Ser Gly Ala Met Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala
225 230 235 240
Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Gly Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu
450 455 460
Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Glu Ser
465 470 475 480
Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Phe Gly Tyr Thr Phe Thr Asn His His
485 490 495
Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Val Gly
500 505 510
Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Tyr Thr Thr Phe Asn Asp Lys Phe Lys
515 520 525
Asp Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Lys Ser Thr Ala Tyr Leu
530 535 540
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
545 550 555 560
Arg Thr Trp Gly His Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu
565 570 575
Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
580 585 590
Gly Gly Gly Ser Asn Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
595 600 605
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser
610 615 620
Val Ser Ser Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
625 630 635 640
Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ser Ser Thr Arg Ala Thr Gly Val Pro Ser
645 650 655
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
660 665 670
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn
675 680 685
Asn Trp Pro Pro Trp Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
690 695 700
Arg
705
<210> 37
<211> 2136
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> hKM3900_tA2-32LH HC
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(2136)
<400> 37
gaa gtg cag ctg gtt cag tct ggc gcc gaa gtg aag aaa cct ggc gcc 48
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
tcc gtg aag atc tcc tgc aag gct tct ggc tac acc ttc acc gac tac 96
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
tac atg aac tgg gtc cga cag gct cct gga cag gga ctt gag tgg atg 144
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
gga gat gtg gtg ccc aac aac ggc gtg ccc acc tac aac cag aaa ttc 192
Gly Asp Val Val Pro Asn Asn Gly Val Pro Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
aag ggc aga gtg acc atc acc gcc gac aag tct acc tcc acc gcc tac 240
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
atg gaa ctg cgg agc ctg aga tct gag gac acc gcc gtg tac tac tgc 288
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
gcc aga cct cac tac tac tac gcc ggc aga tct ggc gcc atg gat tat 336
Ala Arg Pro His Tyr Tyr Tyr Ala Gly Arg Ser Gly Ala Met Asp Tyr
100 105 110
tgg gga cag ggc acc ctg gtc acc gtg tcc tct gct agc aca aag ggc 384
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
ccc tct gtg ttc cct ctg gct cct agc tct aag tcc acc tct ggc gga 432
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
aca gct gct ctg ggc tgt ctg gtc aag gac tac ttc cct gag cct gtg 480
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
acc gtg tct tgg aac tct ggc gct ctg aca tcc ggc gtg cac aca ttt 528
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
cca gct gtg ctg cag tcc tcc ggc ctg tac tct ctg tcc tct gtc gtg 576
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
acc gtg cct tcc agc tct ctg gga acc cag acc tac atc tgc aat gtg 624
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
aac cac aag cct tcc aac acc aag gtg gac aag aag gtg gaa ccc aag 672
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys
210 215 220
tcc tgc gac aag acc cac acc tgt cct cca tgt cct gct cca gaa gct 720
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala
225 230 235 240
gct ggc gga cct tcc gtg ttc ctg ttt cct cca aag cct aag gac acc 768
Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
ctg atg atc tct cgg acc cct gaa gtg acc tgc gtg gtg gtg gat gtg 816
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
tct cac gag gac cca gaa gtg aag ttc aat tgg tac gtg gac ggc gtg 864
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
gaa gtg cac aac gcc aag acc aag cct aga gag gaa cag tac aac tcc 912
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
acc tac aga gtg gtg tcc gtg ctg acc gtg ctg cac cag gat tgg ctg 960
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
aac ggc aaa gag tac aag tgc aag gtg tcc aac aag gcc ctg cct gcc 1008
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
ggc atc gaa aag acc atc tcc aag gcc aag ggc cag cct agg gaa ccc 1056
Gly Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
cag gtt tac acc ttg cca cct tct cgg gac gag ctg acc aag aac cag 1104
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
355 360 365
gtg tcc ctg acc tgt ctc gtg aag ggc ttc tac ccc tcc gat atc gcc 1152
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
gtg gaa tgg gag tct aat ggc cag cct gag aac aac tac aag aca acc 1200
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
cct cct gtg ctg gac tcc gac ggc tca ttc ttc ctg tac tcc aag ctg 1248
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
aca gtg gac aag tcc aga tgg cag cag ggc aac gtg ttc tcc tgc agc 1296
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
gtg atg cac gag gcc ctg cac aat cac tac aca cag aag tct ctg tct 1344
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
ctg agc ccc ggc aaa ggt ggc gga gga tct ggc gga ggc gga tcc caa 1392
Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln
450 455 460
tct gtt ctg acc caa cct cct tcc gcc tct ggc aca cct ggc cag aga 1440
Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg
465 470 475 480
gtg acc atc tct tgc tcc ggc tcc tcc tcc aac atc ggc tct aac acc 1488
Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Thr
485 490 495
gtg aac tgg tat cag cag ttc ccc ggc acc gct cct aag ctg ctg atc 1536
Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile
500 505 510
tac tcc aac aac cag cgg cct tcc ggc gtg ccc gat aga ttc tct ggc 1584
Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly
515 520 525
tct aag tcc ggc acc tct gcc agc ctg gct att tct gga ctg cag agc 1632
Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln Ser
530 535 540
gag gac gag gcc gac tat tat tgt gcc ggc tgg gac gac tct ctg aac 1680
Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Gly Trp Asp Asp Ser Leu Asn
545 550 555 560
ggc cct gtt ttt ggc ggt ggc acc aaa ctg aca gtg ctt gga ggc ggt 1728
Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly
565 570 575
ggt gga tca ggc ggc ggt gga agt ggt ggt ggt ggt agc gga ggt ggt 1776
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
580 585 590
gga tct cag gtg cag ctc caa gag tct gga cct ggc ctc gtg aag cct 1824
Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro
595 600 605
tcc gag aca ctg tct ctg acc tgc aca gtg tcc ggc ggc tct atc tct 1872
Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser
610 615 620
ggc tac tac tgg tcc tgg atc aga cag cct cct ggc aag gga ctc gag 1920
Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
625 630 635 640
tgg atc ggc tac atc tac tac tct ggc ttc acc aac tac aac ccc agc 1968
Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Phe Thr Asn Tyr Asn Pro Ser
645 650 655
ctg aag tcc cgc gtg acc atc agc gtg gac acc tct aag aac cag ttc 2016
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
660 665 670
tct ctg aag ctg tcc tcc gtg acc gcc gct gat acc gct gtg tat tac 2064
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
675 680 685
tgc acc cgg gac cac agc cac tac tac tac atg gac gtg tgg gga cag 2112
Cys Thr Arg Asp His Ser His Tyr Tyr Tyr Met Asp Val Trp Gly Gln
690 695 700
gga aca acc gtg aca gtg tcc tcc 2136
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
705 710
<210> 38
<211> 712
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 38
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asp Val Val Pro Asn Asn Gly Val Pro Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Pro His Tyr Tyr Tyr Ala Gly Arg Ser Gly Ala Met Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala
225 230 235 240
Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Gly Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln
450 455 460
Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg
465 470 475 480
Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Thr
485 490 495
Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile
500 505 510
Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly
515 520 525
Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln Ser
530 535 540
Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Gly Trp Asp Asp Ser Leu Asn
545 550 555 560
Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly
565 570 575
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
580 585 590
Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro
595 600 605
Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser
610 615 620
Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
625 630 635 640
Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Phe Thr Asn Tyr Asn Pro Ser
645 650 655
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
660 665 670
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
675 680 685
Cys Thr Arg Asp His Ser His Tyr Tyr Tyr Met Asp Val Trp Gly Gln
690 695 700
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
705 710
<210> 39
<211> 645
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> hKM3900 LC
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(645)
<400> 39
gac atc cag ctg acc cag tct cca tcc tct ctg tct gcc tct gtg ggc 48
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
gac aga gtg aca att acc tgc acc gcc tcc tcc acc gtg tcc tct acc 96
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Thr Ala Ser Ser Thr Val Ser Ser Thr
20 25 30
tac ctg cac tgg tat cag cag aag ccc ggc aag gct ccc aag ctg ctg 144
Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
atc tac tcc acc tcc aat ctg gcc tct ggc gtg ccc tct aga ttc tcc 192
Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
gga tct ggc tct gga acc gac tat acc ctg aca atc tcc agc ctg cag 240
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
cct gag gac ttc gcc acc tac tac tgc cac cag tac cac aga tcc cca 288
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Tyr His Arg Ser Pro
85 90 95
cct acc ttt ggc cag ggc acc aag ctg gaa atc aag cgt acg gtg gcc 336
Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
gct cct tcc gtg ttc atc ttc cca cct tcc gac gag cag ctg aag tcc 384
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
ggc aca gct tct gtc gtg tgc ctg ctg aac aac ttc tac cct cgg gaa 432
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
gcc aag gtg cag tgg aag gtg gac aat gcc ctg cag tcc ggc aac tcc 480
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
caa gag tct gtg acc gag cag gac tcc aag gac agc acc tac agc ctg 528
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
tcc tcc aca ctg acc ctg tcc aag gcc gac tac gag aag cac aag gtg 576
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
tac gcc tgc gaa gtg acc cat cag ggc ctg tct agc cct gtg acc aag 624
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
tct ttc aac cgg ggc gag tgc 645
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 40
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 40
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Thr Ala Ser Ser Thr Val Ser Ser Thr
20 25 30
Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Tyr His Arg Ser Pro
85 90 95
Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 41
<211> 486
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CD3 scFv-人Fc融合蛋白
<220>
<221> 肽
<222> (1)..(486)
<400> 41
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Lys Pro
115 120 125
Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Lys Pro Gly
130 135 140
Ser Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly
145 150 155 160
Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr
165 170 175
Ser Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg
180 185 190
Gly Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Gly Thr Pro Ala Arg
195 200 205
Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly
210 215 220
Ala Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser
225 230 235 240
Asn Leu Trp Val Phe Gly Ser Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Glu Pro
245 250 255
Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
260 265 270
Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
275 280 285
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
290 295 300
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
305 310 315 320
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala
325 330 335
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
340 345 350
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
355 360 365
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
370 375 380
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
385 390 395 400
Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
405 410 415
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
420 425 430
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
435 440 445
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
450 455 460
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
465 470 475 480
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
485
<210> 42
<211> 255
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<220>
<221> 肽
<222> (1)..(255)
<400> 42
Met Gly Asn Ser Cys Tyr Asn Ile Val Ala Thr Leu Leu Leu Val Leu
1 5 10 15
Asn Phe Glu Arg Thr Arg Ser Leu Gln Asp Pro Cys Ser Asn Cys Pro
20 25 30
Ala Gly Thr Phe Cys Asp Asn Asn Arg Asn Gln Ile Cys Ser Pro Cys
35 40 45
Pro Pro Asn Ser Phe Ser Ser Ala Gly Gly Gln Arg Thr Cys Asp Ile
50 55 60
Cys Arg Gln Cys Lys Gly Val Phe Arg Thr Arg Lys Glu Cys Ser Ser
65 70 75 80
Thr Ser Asn Ala Glu Cys Asp Cys Thr Pro Gly Phe His Cys Leu Gly
85 90 95
Ala Gly Cys Ser Met Cys Glu Gln Asp Cys Lys Gln Gly Gln Glu Leu
100 105 110
Thr Lys Lys Gly Cys Lys Asp Cys Cys Phe Gly Thr Phe Asn Asp Gln
115 120 125
Lys Arg Gly Ile Cys Arg Pro Trp Thr Asn Cys Ser Leu Asp Gly Lys
130 135 140
Ser Val Leu Val Asn Gly Thr Lys Glu Arg Asp Val Val Cys Gly Pro
145 150 155 160
Ser Pro Ala Asp Leu Ser Pro Gly Ala Ser Ser Val Thr Pro Pro Ala
165 170 175
Pro Ala Arg Glu Pro Gly His Ser Pro Gln Ile Ile Ser Phe Phe Leu
180 185 190
Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu
195 200 205
Arg Phe Ser Val Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe
210 215 220
Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly
225 230 235 240
Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu
245 250 255
<210> 43
<211> 254
<212> PRT
<213> 食蟹猴（Macaca fascicularis）
<220>
<221> 肽
<222> (1)..(254)
<400> 43
Met Gly Asn Ser Cys Tyr Asn Ile Val Ala Thr Leu Leu Leu Val Leu
1 5 10 15
Asn Phe Glu Arg Thr Arg Ser Leu Gln Asp Leu Cys Ser Asn Cys Pro
20 25 30
Ala Gly Thr Phe Cys Asp Asn Asn Arg Ser Gln Ile Cys Ser Pro Cys
35 40 45
Pro Pro Asn Ser Phe Ser Ser Ala Gly Gly Gln Arg Thr Cys Asp Ile
50 55 60
Cys Arg Gln Cys Lys Gly Val Phe Lys Thr Arg Lys Glu Cys Ser Ser
65 70 75 80
Thr Ser Asn Ala Glu Cys Asp Cys Ile Ser Gly Tyr His Cys Leu Gly
85 90 95
Ala Glu Cys Ser Met Cys Glu Gln Asp Cys Lys Gln Gly Gln Glu Leu
100 105 110
Thr Lys Lys Gly Cys Lys Asp Cys Cys Phe Gly Thr Phe Asn Asp Gln
115 120 125
Lys Arg Gly Ile Cys Arg Pro Trp Thr Asn Cys Ser Leu Asp Gly Lys
130 135 140
Ser Val Leu Val Asn Gly Thr Lys Glu Arg Asp Val Val Cys Gly Pro
145 150 155 160
Ser Pro Ala Asp Leu Ser Pro Gly Ala Ser Ser Ala Thr Pro Pro Ala
165 170 175
Pro Ala Arg Glu Pro Gly His Ser Pro Gln Ile Ile Phe Phe Leu Ala
180 185 190
Leu Thr Ser Thr Val Val Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu Val Leu Arg
195 200 205
Phe Ser Val Val Lys Arg Ser Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys
210 215 220
Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys
225 230 235 240
Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu
245 250
<210> 44
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 组氨酸标签蛋白
<220>
<221> 肽
<222> (1)..(6)
<400> 44
His His His His His His
1 5
<210> 45
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3xFLAG标签蛋白
<220>
<221> 肽
<222> (1)..(26)
<400> 45
Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys Gly Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp
1 5 10 15
Lys Ile Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys
20 25
<210> 46
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GS接头
<220>
<221> 肽
<222> (1)..(4)
<400> 46
Gly Gly Gly Ser
1
<210> 47
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GS接头
<220>
<221> 肽
<222> (1)..(4)
<400> 47
Ser Gly Gly Gly
1
<210> 48
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GS接头
<220>
<221> 肽
<222> (1)..(5)
<400> 48
Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 49
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GS接头
<220>
<221> 肽
<222> (1)..(5)
<400> 49
Ser Gly Gly Gly Gly
1 5
<210> 50
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GS接头
<220>
<221> 肽
<222> (1)..(6)
<400> 50
Gly Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 51
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GS接头
<220>
<221> 肽
<222> (1)..(6)
<400> 51
Ser Gly Gly Gly Gly Gly
1 5
<210> 52
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GS接头
<220>
<221> 肽
<222> (1)..(7)
<400> 52
Gly Gly Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 53
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GS接头
<220>
<221> 肽
<222> (1)..(7)
<400> 53
Ser Gly Gly Gly Gly Gly Gly
1 5
<210> 54
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GS接头
<220>
<221> 肽
<222> (1)..(10)
<400> 54
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10
<210> 55
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GKPGS接头
<220>
<221> 肽
<222> (1)..(5)
<400> 55
Gly Lys Pro Gly Ser
1 5

Claims (31)

1.一种双特异性抗体，其为包含抗CLDN4抗体的重链可变区和轻链可变区、以及抗CD137抗体的重链可变区和轻链可变区的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体，其中，抗CLDN4抗体的重链可变区和轻链可变区为以下的(a)或(b)中的任意一者：
(a)包含由序列号2的氨基酸编号31至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号2的氨基酸编号50至66的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号2的氨基酸编号99至114的氨基酸序列构成的CDR3的重链可变区、以及包含由序列号4的氨基酸编号24至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号4的氨基酸编号51至57的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号4的氨基酸编号90至98的氨基酸序列构成的CDR3的抗CLDN4抗体的轻链可变区；或者
(b)包含由序列号6的氨基酸编号31至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号6的氨基酸编号50至66的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号6的氨基酸编号99至112的氨基酸序列构成的CDR3的重链可变区、以及包含由序列号8的氨基酸编号24至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号8的氨基酸编号51至57的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号8的氨基酸编号90至98的氨基酸序列构成的CDR3的轻链可变区。
2.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其中，抗CLDN4抗体的重链可变区和轻链可变区为以下的(a)或(b)中的任意一者：
(a)由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区；或者
(b)由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区。
3.根据权利要求1或2中任一项所述的双特异性抗体，其包含由抗CLDN4抗体的包含重链可变区的重链和包含轻链可变区的轻链构成的IgG抗体(抗CLDN4 IgG抗体)。
4.根据权利要求3所述的双特异性抗体，其在抗CLDN4 IgG抗体的Fc区包含LALA突变(L234A和L235A(在此，所述突变位置为人Igγ1恒定区中的根据EU索引的氨基酸位置))。
5.根据权利要求3所述的双特异性抗体，其在抗CLDN4 IgG抗体的Fc区包含P331G突变(在此，所述突变位置为人Igγ1恒定区中的根据EU索引的氨基酸位置)。
6.根据权利要求3所述的双特异性抗体，其在抗CLDN4 IgG抗体的Fc区包含LALA突变和P331G突变。
7.根据权利要求1～6中任一项所述的双特异性抗体，其中，抗CD137抗体的重链可变区和轻链可变区为以下的(a)～(d)中的任意一者：
(a)包含由序列号10的氨基酸编号31至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号10的氨基酸编号50至66的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号10的氨基酸编号99至107的氨基酸序列构成的CDR3的重链可变区、以及包含由序列号12的氨基酸编号24至34的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号12的氨基酸编号50至56的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号12的氨基酸编号89至98的氨基酸序列构成的CDR3的轻链可变区；
(b)包含由序列号14的氨基酸编号31至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号14的氨基酸编号50至65的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号14的氨基酸编号98至107的氨基酸序列构成的CDR3的重链可变区、以及包含由序列号16的氨基酸编号23至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号16的氨基酸编号51至57的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号16的氨基酸编号90至100的氨基酸序列构成的CDR3的轻链可变区；
(c)包含由序列号18的氨基酸编号31至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号18的氨基酸编号50至65的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号18的氨基酸编号98至107的氨基酸序列构成的CDR3的重链可变区、以及包含由序列号20的氨基酸编号23至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号20的氨基酸编号51至57的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号20的氨基酸编号90至100的氨基酸序列构成的CDR3的轻链可变区；或者
(d)包含由序列号22的氨基酸编号31至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号22的氨基酸编号50至65的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号22的氨基酸编号98至110的氨基酸序列构成的CDR3的重链可变区、以及包含由序列号24的氨基酸编号23至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号24的氨基酸编号51至57的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号24的氨基酸编号90至100的氨基酸序列构成的CDR3的轻链可变区。
8.根据权利要求1～7中任一项所述的双特异性抗体，其中，抗CD137抗体的重链可变区和轻链可变区为以下的(a)～(i)中的任意一者：
(a)由序列号10的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号12的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(b)由序列号14的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号16的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(c)由序列号18的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号20的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(d)由序列号22的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号24的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(e)由序列号26的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号26的氨基酸编号134至242的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(f)由序列号28的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号28的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(g)由序列号30的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的轻链可变区和由序列号30的氨基酸编号132至249的氨基酸序列构成的重链可变区；
(h)由序列号32的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号32的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的轻链可变区；或者
(i)由序列号34的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号34的氨基酸编号137至247的氨基酸序列构成的轻链可变区。
9.根据权利要求7或8中任一项所述的双特异性抗体，其包含含有抗CD137抗体的重链可变区和轻链可变区的抗CD137单链可变区片段(抗CD137scFv)。
10.根据权利要求9所述的双特异性抗体，其中，抗CD137scFv为以下的(a)～(e)中的任意一者：
(a)由序列号26的氨基酸编号1至242的氨基酸序列构成的抗CD137scFv；
(b)由序列号28的氨基酸编号1至244的氨基酸序列构成的抗CD137scFv；
(c)由序列号30的氨基酸编号1至249的氨基酸序列构成的抗CD137scFv；
(d)由序列号32的氨基酸编号1至244的氨基酸序列构成的抗CD137scFv；或者
(e)由序列号34的氨基酸编号1至247的氨基酸序列构成的抗CD137scFv。
11.根据权利要求9或10中任一项所述的双特异性抗体，其包含抗CLDN4 IgG抗体和抗CD137scFv，且在抗CLDN4 IgG抗体的重链或轻链羧基末端经由接头连接着抗CD137scFv的氨基末端。
12.一种抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体，其为以下的(a)～(j)中的任意一者：
(a)含有包含由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链和包含由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及包含由序列号26的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号26的氨基酸编号134至242的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的双特异性抗体；
(b)含有包含由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链和包含由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及包含由序列号28的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号28的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的双特异性抗体；
(c)含有包含由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链和包含由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及包含由序列号30的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的轻链可变区和由序列号30的氨基酸编号132至249的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的双特异性抗体；
(d)含有包含由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链和包含由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及包含由序列号32的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号32的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的双特异性抗体；
(e)含有包含由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链和包含由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及包含由序列号34的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号34的氨基酸编号137至247的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的双特异性抗体；
(f)含有包含由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链和包含由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及包含由序列号26的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号26的氨基酸编号134至242的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着抗CD137scFv的氨基末端的双特异性抗体；
(g)含有包含由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链和包含由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及包含由序列号28的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号28的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的双特异性抗体；
(h)含有包含由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链和包含由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及包含由序列号30的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的轻链可变区和由序列号30的氨基酸编号132至249的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的双特异性抗体；
(i)含有包含由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链和包含由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及包含由序列号32的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号32的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的双特异性抗体；或者
(j)含有包含由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的重链可变区的抗CLDN4抗体的重链和包含由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CLDN4抗体的轻链、以及包含由序列号34的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号34的氨基酸编号137至247的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗CD137scFv，且在该抗CLDN4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗CD137scFv的氨基末端的双特异性抗体。
13.根据权利要求11或12中任一项所述的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体，其中，接头为GS接头。
14.根据权利要求13所述的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体，其中，GS接头为由序列号54的氨基酸序列构成的接头。
15.一种抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体，其为以下的(a)或(b)中的任意一者：
(a)含有由序列号36的氨基酸编号1至705的氨基酸序列构成的包含抗CLDN4抗体的重链和抗CD137scFv的多肽、以及由序列号40的氨基酸编号1至215的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链的双特异性抗体；或者
(b)含有由序列号38的氨基酸编号1至712的氨基酸序列构成的包含抗CLDN4抗体的重链和抗CD137scFv的多肽、以及由序列号40的氨基酸编号1至215的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链的双特异性抗体。
16.根据权利要求1～15中任一项所述的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体，其经过了翻译后修饰。
17.根据权利要求16所述的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体，其中，翻译后修饰为重链可变区N末端的焦谷氨酰化和/或重链C末端赖氨酸缺失。
18.一种多核苷酸，其选自由下述(a)～(d)组成的组、且包含编码抗CLDN4抗体的重链可变区或轻链可变区的碱基序列：
(a)包含编码由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(b)包含编码由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(c)包含编码由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；或者
(d)包含编码由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸。
19.一种多核苷酸，其选自由下述(a)～(r)组成的组、且包含编码抗CD137抗体的重链可变区或轻链可变区的碱基序列：
(a)包含编码由序列号10的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(b)包含编码由序列号12的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(c)包含编码由序列号14的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(d)包含编码由序列号16的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(e)包含编码由序列号18的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(f)包含编码由序列号20的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(g)包含编码由序列号22的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(h)包含编码由序列号24的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(i)包含编码由序列号26的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(j)包含编码由序列号26的氨基酸编号134至242的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(k)包含编码由序列号28的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(l)包含编码由序列号28的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(m)包含编码由序列号30的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(n)包含编码由序列号30的氨基酸编号132至249的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(o)包含编码由序列号32的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(p)包含编码由序列号32的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(q)包含编码由序列号34的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；或者
(r)包含编码由序列号34的氨基酸编号137至247的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸。
20.一种多核苷酸，其选自由下述(a)～(e)组成的组、且包含编码抗CD137scFv的碱基序列：
(a)包含编码由序列号26的氨基酸编号1至242的氨基酸序列构成的抗CD137scFv的碱基序列的多核苷酸；
(b)包含编码由序列号28的氨基酸编号1至244的氨基酸序列构成的抗CD137scFv的碱基序列的多核苷酸；
(c)包含编码由序列号30的氨基酸编号1至249的氨基酸序列构成的抗CD137scFv的碱基序列的多核苷酸；
(d)包含编码由序列号32的氨基酸编号1至244的氨基酸序列构成的抗CD137scFv的碱基序列的多核苷酸；或者
(e)包含编码由序列号34的氨基酸编号1至247的氨基酸序列构成的抗CD137scFv的碱基序列的多核苷酸。
21.一种多核苷酸，其用于权利要求15所述的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体的生产，且选自由下述(a)～(e)组成的组：
(a)包含编码由序列号36的氨基酸编号1至705的氨基酸序列构成的包含抗CLDN4抗体的重链和抗CD137scFv的多肽的碱基序列的多核苷酸；
(b)包含编码由序列号38的氨基酸编号1至712的氨基酸序列构成的包含抗CLDN4抗体的重链和抗CD137scFv的多肽的碱基序列的多核苷酸；
(c)包含编码由序列号40的氨基酸编号1至215的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链的碱基序列的多核苷酸；
(d)包含编码由序列号36的氨基酸编号1至705的氨基酸序列构成的包含抗CLDN4抗体的重链和抗CD137scFv的多肽的碱基序列的多核苷酸、以及包含编码由序列号40的氨基酸编号1至215的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链的碱基序列的多核苷酸；或者
(e)包含编码由序列号38的氨基酸编号1至712的氨基酸序列构成的包含抗CLDN4抗体的重链和抗CD137scFv的多肽的碱基序列的多核苷酸、以及包含编码由序列号40的氨基酸编号1至215的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链的碱基序列的多核苷酸。
22.一种表达载体，其包含权利要求18～21中任一项所述的多核苷酸。
23.一种宿主细胞，其利用权利要求22所述的表达载体进行了转化。
24.一种宿主细胞，其含有选自由以下的(a)～(dd)组成的组中的多核苷酸：
(a)包含编码由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(b)包含编码由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(c)包含编码由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(d)包含编码由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(e)包含编码由序列号10的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(f)包含编码由序列号12的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(g)包含编码由序列号14的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(h)包含编码由序列号16的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(i)包含编码由序列号18的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(j)包含编码由序列号20的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(k)包含编码由序列号22的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(l)包含编码由序列号24的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(m)包含编码由序列号26的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(n)包含编码由序列号26的氨基酸编号134至242的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(o)包含编码由序列号28的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(p)包含编码由序列号28的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(q)包含编码由序列号30的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(r)包含编码由序列号30的氨基酸编号132至249的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(s)包含编码由序列号32的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(t)包含编码由序列号32的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(u)包含编码由序列号34的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(v)包含编码由序列号34的氨基酸编号137至247的氨基酸序列构成的抗CD137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；
(w)包含编码由序列号26的氨基酸编号1至242的氨基酸序列构成的抗CD137scFv的碱基序列的多核苷酸；
(x)包含编码由序列号28的氨基酸编号1至244的氨基酸序列构成的抗CD137scFv的碱基序列的多核苷酸；
(y)包含编码由序列号30的氨基酸编号1至249的氨基酸序列构成的抗CD137scFv的碱基序列的多核苷酸；
(z)包含编码由序列号32的氨基酸编号1至244的氨基酸序列构成的抗CD137scFv的碱基序列的多核苷酸；
(aa)包含编码由序列号34的氨基酸编号1至247的氨基酸序列构成的抗CD137scFv的碱基序列的多核苷酸；
(bb)包含编码由序列号36的氨基酸编号1至705的氨基酸序列构成的包含抗CLDN4抗体的重链和抗CD137scFv的多肽的碱基序列的多核苷酸；
(cc)包含编码由序列号38的氨基酸编号1至712的氨基酸序列构成的包含抗CLDN4抗体的重链和抗CD137scFv的多肽的碱基序列的多核苷酸；或者
(dd)包含编码由序列号40的氨基酸编号1至215的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链的碱基序列的多核苷酸。
25.一种宿主细胞，其含有以下的(a)或(b)中的任意一者的多核苷酸：
(a)包含编码由序列号36的氨基酸编号1至705的氨基酸序列构成的包含抗CLDN4抗体的重链和抗CD137scFv的多肽的碱基序列的多核苷酸、以及包含编码由序列号40的氨基酸编号1至215的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链的碱基序列的多核苷酸；或者
(b)包含编码由序列号38的氨基酸编号1至712的氨基酸序列构成的包含抗CLDN4抗体的重链和抗CD137scFv的多肽的碱基序列的多核苷酸、以及包含编码由序列号40的氨基酸编号1至215的氨基酸序列构成的抗CLDN4抗体的轻链的碱基序列的多核苷酸。
26.一种抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体的生产方法，其包括对权利要求23～25中任一项所述的宿主细胞进行培养的步骤。
27.一种药物组合物，其包含权利要求1～17中任一项所述的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体和药学上可接受的赋形剂。
28.根据权利要求1～17中任一项所述的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体，其用于癌的治疗。
29.根据权利要求27所述的药物组合物，其用于癌的治疗。
30.一种治疗癌的方法，其包括将治疗有效量的权利要求1～17中任一项所述的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体向对象给药的步骤。
31.权利要求1～17中任一项所述的抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体在制造用于癌的治疗的药物组合物中的应用。
CN202280029125.XA 2021-04-22 2022-04-21 抗cldn4-抗cd137双特异性抗体 Pending CN117222672A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2021072429 2021-04-22
JP2021-072429 2021-04-22
PCT/JP2022/018350 WO2022224997A1 (ja) 2021-04-22 2022-04-21 抗ｃｌｄｎ４－抗ｃｄ１３７二重特異性抗体

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN117222672A true CN117222672A (zh) 2023-12-12

Family

ID=83722348

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202280029125.XA Pending CN117222672A (zh) 2021-04-22 2022-04-21 抗cldn4-抗cd137双特异性抗体

Country Status (17)

Country Link
EP (1) EP4327823A1 (zh)
JP (2) JP7365654B2 (zh)
KR (1) KR20230171465A (zh)
CN (1) CN117222672A (zh)
AR (1) AR125398A1 (zh)
AU (1) AU2022262542A1 (zh)
BR (1) BR112023021950A2 (zh)
CA (1) CA3217637A1 (zh)
CL (1) CL2023003100A1 (zh)
CO (1) CO2023015630A2 (zh)
CR (1) CR20230490A (zh)
DO (1) DOP2023000230A (zh)
EC (1) ECSP23087918A (zh)
IL (1) IL307744A (zh)
MX (1) MX2023012432A (zh)
TW (1) TW202309083A (zh)
WO (1) WO2022224997A1 (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023219120A1 (ja) * 2022-05-12 2023-11-16 アステラス製薬株式会社 抗ｃｄ３７－抗ｃｄ３二重特異性抗体
WO2024085166A1 (ja) * 2022-10-19 2024-04-25 アステラス製薬株式会社 がん治療におけるｐｄ－１シグナル阻害剤との組み合わせによる抗ｃｌｄｎ４－抗ｃｄ１３７二重特異性抗体の使用

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
IL162181A (en) 1988-12-28 2006-04-10 Pdl Biopharma Inc A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
US7288638B2 (en) 2003-10-10 2007-10-30 Bristol-Myers Squibb Company Fully human antibodies against human 4-1BB
JP5686953B2 (ja) 2005-10-11 2015-03-18 アムゲン リサーチ （ミュンヘン） ゲーエムベーハー 交差種特異的（ｃｒｏｓｓ−ｓｐｅｃｉｅｓ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ）抗体を含む組成物および該組成物の使用
WO2008011756A1 (en) 2006-07-19 2008-01-31 Jen-Shyan Chen High power light emitting diode illuminating equipment with efficiently heat-dissipating module
CA2739038C (en) 2008-09-30 2020-04-28 Ablexis, Llc Non-human mammals for the production of chimeric antibodies
JP2014193853A (ja) 2013-03-01 2014-10-09 Japan Health Sciences Foundation 抗体、フラグメント、医薬組成物、分子及び腫瘍マーカー
WO2019048040A1 (en) 2017-09-06 2019-03-14 Ganymed Pharmaceuticals Gmbh ANTIBODIES USEFUL IN THE DIAGNOSIS OF CANCER
JP2021510064A (ja) 2018-01-05 2021-04-15 中外製薬株式会社 細胞傷害誘導治療剤
US20210163570A1 (en) 2018-03-14 2021-06-03 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Engineered cells, t cell immune modulating antibodies and methods for using the same
CA3106048A1 (en) 2018-07-12 2020-01-16 F-Star Beta Limited Antibody molecules that bind cd137 and ox40

Also Published As

Publication number Publication date
CR20230490A (es) 2023-11-16
WO2022224997A1 (ja) 2022-10-27
AR125398A1 (es) 2023-07-12
JP7365654B2 (ja) 2023-10-20
ECSP23087918A (es) 2023-12-29
JP2023182689A (ja) 2023-12-26
CO2023015630A2 (es) 2023-11-30
TW202309083A (zh) 2023-03-01
CL2023003100A1 (es) 2024-03-22
MX2023012432A (es) 2023-11-01
BR112023021950A2 (pt) 2023-12-19
KR20230171465A (ko) 2023-12-20
EP4327823A1 (en) 2024-02-28
JPWO2022224997A1 (zh) 2022-10-27
AU2022262542A1 (en) 2023-11-02
IL307744A (en) 2023-12-01
CA3217637A1 (en) 2022-10-27
DOP2023000230A (es) 2023-12-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP3464367B1 (en) Bispecific binding proteins binding an immunomodulatory protein and a tumor antigen
EP3204415B1 (en) Bispecific antibodies against cd3epsilon and ror1
EP3556773A1 (en) Anti-human cd73 antibody
JP2020122013A (ja) Ｃｄ３イプシロンおよびｂｃｍａに対する二特異性抗体
IL264956A (en) Anti-pd1 monoclonal antibody, pharmaceutical preparation thereof and use thereof
CN113166246A (zh) 一种抗体及其用途
CN114560941B (zh) Cldn18.2的抗体及其应用
EP3608341A1 (en) Anti-pd-l1/anti-pd-1 natural antibody structure-like heterodimeric bispecific antibody and preparation thereof
JP2022551081A (ja) 癌処置のための多重特異性結合タンパク質
CN111699201B (zh) 抗pd-1/抗her2天然抗体结构的异源二聚双特异性抗体及其制备方法
AU2021388650A9 (en) Cldn18.2 antibody and use thereof
CN117222672A (zh) 抗cldn4-抗cd137双特异性抗体
IL297432A (en) Anti-cd73-anti-pd-1 bispecific antibody used
CN114989305A (zh) 新型双特异性抗体及其用途
EP4245855A1 (en) Anti-tspan8-anti-cd3 bispecific antibody and anti-tspan8 antibody
CN113698492A (zh) 人间皮素嵌合抗原受体及其用途
EP4119578A1 (en) Bcma-specific antibody and chimeric antigen receptor
CN111848806B (zh) Egfr-cd3双功能抗体及其应用
US20240209108A1 (en) Anti-cldn4/anti-cd137 bispecific antibody
CN114573704B (zh) Pd-1/ctla-4结合蛋白及其医药用途
EP4265640A2 (en) Polypeptide specific for mucin 1 and use thereof
TW202413431A (zh) 抗ｔａａ和ｃｄ３的多特異性抗體
TW202413430A (zh) 抗ｃｄ３７和ｃｄ３的雙特異性抗體
CN113853389A (zh) 与cpnmb和cd3特异性结合的双特异性抗体及其用途

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination