CN114560941B - Cldn18.2的抗体及其应用 - Google Patents
Cldn18.2的抗体及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114560941B CN114560941B CN202111421855.8A CN202111421855A CN114560941B CN 114560941 B CN114560941 B CN 114560941B CN 202111421855 A CN202111421855 A CN 202111421855A CN 114560941 B CN114560941 B CN 114560941B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- antibody
- seq
- antigen
- binding fragment
- chain variable
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 72
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 72
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 72
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 62
- 108010019670 Chimeric Antigen Receptors Proteins 0.000 claims abstract description 58
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 55
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 140
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 53
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 34
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 30
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 30
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 30
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 claims description 26
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 claims description 24
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 18
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 15
- 241001529936 Murinae Species 0.000 claims description 14
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 13
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 13
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims description 13
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims description 13
- 101000851370 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 9 Proteins 0.000 claims description 12
- 102100036856 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 9 Human genes 0.000 claims description 12
- 102100034922 T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Human genes 0.000 claims description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 10
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 9
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 claims description 7
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 claims description 7
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims description 7
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 claims description 7
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 6
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 6
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 claims description 6
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 claims description 5
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 claims description 5
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 5
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims description 5
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 claims description 4
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 claims description 4
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 4
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 claims description 4
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 claims description 3
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 claims description 3
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 2
- LQRJAEQXMSMEDP-XCHBZYMASA-N peptide a Chemical compound N([C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCCCC[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)C(\NC(=O)[C@@H](CCCCN)NC(=O)CNC(C)=O)=C/C=1C=CC=CC=1)C(N)=O)C(=O)C(\NC(=O)[C@@H](CCCCN)NC(=O)CNC(C)=O)=C\C1=CC=CC=C1 LQRJAEQXMSMEDP-XCHBZYMASA-N 0.000 claims description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims 1
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 15
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 55
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 25
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 25
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 23
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 23
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 23
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 19
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 18
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 17
- 229950007157 zolbetuximab Drugs 0.000 description 17
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 16
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 15
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 14
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 14
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 13
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 13
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 13
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 13
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 13
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 13
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 12
- 102100024952 Protein CBFA2T1 Human genes 0.000 description 11
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 11
- -1 immune cell Proteins 0.000 description 10
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 9
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 9
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 9
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 9
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 8
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 8
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 8
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 8
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 8
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 8
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 8
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 7
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 7
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 7
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 7
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 6
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 6
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 6
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 6
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 6
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 5
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 5
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 5
- 230000004068 intracellular signaling Effects 0.000 description 5
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 5
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 5
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 5
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 4
- 101100112922 Candida albicans CDR3 gene Proteins 0.000 description 4
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102100035360 Cerebellar degeneration-related antigen 1 Human genes 0.000 description 4
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 4
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 4
- 102100022339 Integrin alpha-L Human genes 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 4
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 4
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 230000002601 intratumoral effect Effects 0.000 description 4
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 4
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 4
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 4
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 3
- 102000009410 Chemokine receptor Human genes 0.000 description 3
- 108050000299 Chemokine receptor Proteins 0.000 description 3
- 101000994375 Homo sapiens Integrin alpha-4 Proteins 0.000 description 3
- 102100032818 Integrin alpha-4 Human genes 0.000 description 3
- 102100032816 Integrin alpha-6 Human genes 0.000 description 3
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 3
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 3
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 3
- 108010064548 Lymphocyte Function-Associated Antigen-1 Proteins 0.000 description 3
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 3
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 3
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 3
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 3
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 3
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 3
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 description 3
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 3
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 3
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 3
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- LMFAFFIRCNUJJO-UHFFFAOYSA-N 5-(4-azidophenyl)-8-iodo-3-methyl-1,2,4,5-tetrahydro-3-benzazepin-7-ol Chemical compound C1N(C)CCC2=CC(I)=C(O)C=C2C1C1=CC=C(N=[N+]=[N-])C=C1 LMFAFFIRCNUJJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100024263 CD160 antigen Human genes 0.000 description 2
- 102100027207 CD27 antigen Human genes 0.000 description 2
- 101100314454 Caenorhabditis elegans tra-1 gene Proteins 0.000 description 2
- 102000002029 Claudin Human genes 0.000 description 2
- 108050009302 Claudin Proteins 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000761938 Homo sapiens CD160 antigen Proteins 0.000 description 2
- 101000914511 Homo sapiens CD27 antigen Proteins 0.000 description 2
- 101001078158 Homo sapiens Integrin alpha-1 Proteins 0.000 description 2
- 101000994365 Homo sapiens Integrin alpha-6 Proteins 0.000 description 2
- 101000935043 Homo sapiens Integrin beta-1 Proteins 0.000 description 2
- 101000935040 Homo sapiens Integrin beta-2 Proteins 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102100025323 Integrin alpha-1 Human genes 0.000 description 2
- 102100022338 Integrin alpha-M Human genes 0.000 description 2
- 102100025304 Integrin beta-1 Human genes 0.000 description 2
- 102100025390 Integrin beta-2 Human genes 0.000 description 2
- 108010064593 Intercellular Adhesion Molecule-1 Proteins 0.000 description 2
- 102100037877 Intercellular adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 108091007491 NSP3 Papain-like protease domains Proteins 0.000 description 2
- 239000012124 Opti-MEM Substances 0.000 description 2
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 description 2
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 2
- 102100040678 Programmed cell death protein 1 Human genes 0.000 description 2
- 101710089372 Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 description 2
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 2
- 108010025832 RANK Ligand Proteins 0.000 description 2
- 102000014128 RANK Ligand Human genes 0.000 description 2
- 238000011579 SCID mouse model Methods 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 102100028785 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 14 Human genes 0.000 description 2
- 102100022153 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Human genes 0.000 description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 2
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 2
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 210000003236 esophagogastric junction Anatomy 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 239000003978 infusion fluid Substances 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 2
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000002086 nanomaterial Substances 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 229940055695 pancreatin Drugs 0.000 description 2
- 108010069653 peptide E (adrenal medulla) Proteins 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 238000011895 specific detection Methods 0.000 description 2
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 2
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- 101150028074 2 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010083359 Antigen Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000006306 Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- 101100028789 Arabidopsis thaliana PBS1 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100029822 B- and T-lymphocyte attenuator Human genes 0.000 description 1
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 1
- 108010074708 B7-H1 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 208000031648 Body Weight Changes Diseases 0.000 description 1
- 108010017009 CD11b Antigen Proteins 0.000 description 1
- 102100038077 CD226 antigen Human genes 0.000 description 1
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010062802 CD66 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102100027217 CD82 antigen Human genes 0.000 description 1
- 101710139831 CD82 antigen Proteins 0.000 description 1
- 102100024533 Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 1
- 108091007741 Chimeric antigen receptor T cells Proteins 0.000 description 1
- 101800005151 Cholecystokinin-8 Proteins 0.000 description 1
- 102400000888 Cholecystokinin-8 Human genes 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 102100025137 Early activation antigen CD69 Human genes 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 108010021468 Fc gamma receptor IIA Proteins 0.000 description 1
- 108091006020 Fc-tagged proteins Proteins 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000864344 Homo sapiens B- and T-lymphocyte attenuator Proteins 0.000 description 1
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 1
- 101000884298 Homo sapiens CD226 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000934374 Homo sapiens Early activation antigen CD69 Proteins 0.000 description 1
- 101001035237 Homo sapiens Integrin alpha-D Proteins 0.000 description 1
- 101001046687 Homo sapiens Integrin alpha-E Proteins 0.000 description 1
- 101001046683 Homo sapiens Integrin alpha-L Proteins 0.000 description 1
- 101001046686 Homo sapiens Integrin alpha-M Proteins 0.000 description 1
- 101001046668 Homo sapiens Integrin alpha-X Proteins 0.000 description 1
- 101001015037 Homo sapiens Integrin beta-7 Proteins 0.000 description 1
- 101000971538 Homo sapiens Killer cell lectin-like receptor subfamily F member 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000917858 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 1
- 101000917839 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Proteins 0.000 description 1
- 101001109503 Homo sapiens NKG2-C type II integral membrane protein Proteins 0.000 description 1
- 101001109501 Homo sapiens NKG2-D type II integral membrane protein Proteins 0.000 description 1
- 101000589305 Homo sapiens Natural cytotoxicity triggering receptor 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000633778 Homo sapiens SLAM family member 5 Proteins 0.000 description 1
- 101000633784 Homo sapiens SLAM family member 7 Proteins 0.000 description 1
- 101000716102 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD4 Proteins 0.000 description 1
- 101000596234 Homo sapiens T-cell surface protein tactile Proteins 0.000 description 1
- 101000795169 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 13C Proteins 0.000 description 1
- 101000648507 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 14 Proteins 0.000 description 1
- 101000801234 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 18 Proteins 0.000 description 1
- 101000679851 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Proteins 0.000 description 1
- 229940076838 Immune checkpoint inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 102000037984 Inhibitory immune checkpoint proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091008026 Inhibitory immune checkpoint proteins Proteins 0.000 description 1
- 102100039904 Integrin alpha-D Human genes 0.000 description 1
- 102100022341 Integrin alpha-E Human genes 0.000 description 1
- 102100022297 Integrin alpha-X Human genes 0.000 description 1
- 108010041100 Integrin alpha6 Proteins 0.000 description 1
- 108010030465 Integrin alpha6beta1 Proteins 0.000 description 1
- 102100033016 Integrin beta-7 Human genes 0.000 description 1
- 102100021458 Killer cell lectin-like receptor subfamily F member 1 Human genes 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 1
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 1
- 108010061593 Member 14 Tumor Necrosis Factor Receptors Proteins 0.000 description 1
- 206010063916 Metastatic gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 102100022683 NKG2-C type II integral membrane protein Human genes 0.000 description 1
- 102100022680 NKG2-D type II integral membrane protein Human genes 0.000 description 1
- 108010004217 Natural Cytotoxicity Triggering Receptor 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010004222 Natural Cytotoxicity Triggering Receptor 3 Proteins 0.000 description 1
- 102100032870 Natural cytotoxicity triggering receptor 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100032851 Natural cytotoxicity triggering receptor 2 Human genes 0.000 description 1
- 102100032852 Natural cytotoxicity triggering receptor 3 Human genes 0.000 description 1
- 102100038082 Natural killer cell receptor 2B4 Human genes 0.000 description 1
- 101710141230 Natural killer cell receptor 2B4 Proteins 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 239000005662 Paraffin oil Substances 0.000 description 1
- 102100024216 Programmed cell death 1 ligand 1 Human genes 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 206010070308 Refractory cancer Diseases 0.000 description 1
- 108091027981 Response element Proteins 0.000 description 1
- 102100029216 SLAM family member 5 Human genes 0.000 description 1
- 102100029198 SLAM family member 7 Human genes 0.000 description 1
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 1
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 1
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 description 1
- 102100035268 T-cell surface protein tactile Human genes 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 208000026062 Tissue disease Diseases 0.000 description 1
- 108060008683 Tumor Necrosis Factor Receptor Proteins 0.000 description 1
- 102100029690 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 13C Human genes 0.000 description 1
- 102100033728 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 18 Human genes 0.000 description 1
- 101710165473 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Proteins 0.000 description 1
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical class N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 230000004579 body weight change Effects 0.000 description 1
- 101150058049 car gene Proteins 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000012916 chromogenic reagent Substances 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 238000005336 cracking Methods 0.000 description 1
- 108010057085 cytokine receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000003675 cytokine receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 238000003209 gene knockout Methods 0.000 description 1
- 238000010362 genome editing Methods 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000005965 immune activity Effects 0.000 description 1
- 239000012274 immune-checkpoint protein inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000031146 intracellular signal transduction Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 239000008297 liquid dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 1
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 1
- 238000011897 real-time detection Methods 0.000 description 1
- 210000003370 receptor cell Anatomy 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 239000012925 reference material Substances 0.000 description 1
- 208000016691 refractory malignant neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000022532 regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 1
- 238000010079 rubber tapping Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 239000008299 semisolid dosage form Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N sincalide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000007909 solid dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000012439 solid excipient Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 230000001502 supplementing effect Effects 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 238000002626 targeted therapy Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 210000001578 tight junction Anatomy 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 239000012096 transfection reagent Substances 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 102000003298 tumor necrosis factor receptor Human genes 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 1
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 1
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
- A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
- A61K39/4631—Chimeric Antigen Receptors [CAR]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
- A61K39/464402—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0636—T lymphocytes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0639—Dendritic cells, e.g. Langherhans cells in the epidermis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0646—Natural killers cells [NK], NKT cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6854—Immunoglobulins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/31—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterized by the route of administration
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
- C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
- C07K2317/734—Complement-dependent cytotoxicity [CDC]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/02—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal sequence
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/33—Fusion polypeptide fusions for targeting to specific cell types, e.g. tissue specific targeting, targeting of a bacterial subspecies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2510/00—Genetically modified cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/15011—Lentivirus, not HIV, e.g. FIV, SIV
- C12N2740/15041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2740/15043—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2740/16043—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2800/00—Nucleic acids vectors
- C12N2800/10—Plasmid DNA
- C12N2800/106—Plasmid DNA for vertebrates
- C12N2800/107—Plasmid DNA for vertebrates for mammalian
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
Abstract
本发明提供一种能够特异性识别CLDN18.2的抗体或其抗原结合片段、嵌合抗原受体,该抗体或其抗原结合片段、嵌合抗原受体含有选自下列至少之一的CDR序列或与其具有至少95%同一性的氨基酸序列:轻链可变区CDR序列:SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ IDNO:8和SEQ ID NO:9;重链可变区CDR序列:SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQID NO:10、SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域,具体地,本发明涉及CLDN18.2的抗体及其应用,更具体地,本发明涉及能够特异性识别CLDN18.2的抗体或其抗原结合片段、嵌合抗原受体、免疫细胞、核酸分子、表达载体、重组细胞、药物组合物、制药用途、检测CLDN18.2的试剂盒、检测CLDN18.2的试剂盒的用途、筛选抗体的用途。
背景技术
胃癌在癌症相关死亡率中排名第三,被认为是全世界最难治愈的癌症之一。在晚期或转移性胃癌或胃食管交界处(GEJ)腺癌患者中,中位总生存期(mOS)不超过10个月。虽然人类表皮生长因子受体2(HER-2)靶向治疗和免疫检查点抑制剂已经为特定人群带来福音,但在进展期胃癌中寻找其他靶点势在必行。
Claudins是一个蛋白质家族,其作用是维持控制细胞间分子交换的紧密连接。广泛分布于胃、胰腺和肺组织,可用于诊断和治疗相关组织疾病。CLDN18.2亚型是一种仅在胃部组织少量特异性表达的亚型,其他正常组织不表达;其具有高度选择性,在胃癌、胰腺癌等癌细胞中大量表达,因此是一种理想的肿瘤药物治疗靶点,使CLDN18.2具有靶向治疗的特异性。由于人和鼠的Claudin18.2蛋白高度同源(同源性高于90%以上),常规的免疫程序无法产生有效的免疫抗体。
由此可见,开发一种针对CLDN18.2的高特异性抗体对于肿瘤的诊断和治疗具有重大意义。
发明内容
为解决上述问题,发明人使用含有hClaudin18.2全长基因的质粒免疫Claudin18.2基因敲除C57小鼠,通过杂交瘤融合技术筛选到两株不同亲和力和结合表位的anti-Claudin18.2鼠源抗体,通过基因测序获得两株抗体的重链和轻链可变区。借助linker将轻链可变区和重链可变区串联成VL-LINKER-VH的结构,用于后续不同应用。
在本发明的第一方面,本发明提出了一种能够特异性识别CLDN18.2的抗体或其抗原结合片段。根据本发明的实施例,所述抗体或其抗原结合片段含有选自下列至少之一的CDR序列或与其具有至少95%同一性的氨基酸序列:轻链可变区CDR序列:SEQ ID NO:1~3、SEQ ID NO:7~9;重链可变区CDR序列:SEQ ID NO:4~6、SEQ ID NO:10~12。
SQSLLNSGNQKNYL(SEQ ID NO:1)。
YWAST(SEQ ID NO:2)。
CQNDYSYPFTF(SEQ ID NO:3)。
SQSLFNSGNQKNYL(SEQ ID NO:7)。
YWAST(SEQ ID NO:8)。
CQNDYSYPLTF(SEQ ID NO:9)。
SGYTFTSYWM(SEQ ID NO:4)。
MIHPNSGSTN(SEQ ID NO:5)。
CARRYYGSISPDYW(SEQ ID NO:6)。
SGYTFTDYNM(SEQ ID NO:10)。
YINPNNGGTS(SEQ ID NO:11)。
CVTTRYLAVW(SEQ ID NO:12)。
根据本发明的实施例,上述抗体能够特异性靶向结合CLDN18.2蛋白分子或表面具有该分子的细胞、组织、器官等,进而形成抗原抗体复合物,发挥生物学功能。
根据本发明的实施例,上述抗体或抗原结合片段还可以进一步包括如下附加技术特征至少之一:
根据本发明的实施例,所述抗体包括:
分别如SEQ ID NO:1、2和3或者与SEQ ID NO:1、2和3具有至少95%同一性的氨基酸序列所示的轻链可变区CDR1、CDR2、CDR3序列;或者
分别如SEQ ID NO:7、8和9或者SEQ ID NO:7、8和9具有至少95%同一性的氨基酸序列所示的轻链可变区CDR1、CDR2、CDR3序列。
根据本发明的实施例,所述抗体包括:
分别如SEQ ID NO:4、5和6或者与SEQ ID NO:4、5和6具有至少95%同一性的氨基酸序列所示的重链可变区CDR1、CDR2、CDR3序列;或者
分别如SEQ ID NO:10、11和12或者与SEQ ID NO:10、11和12具有至少95%同一性的氨基酸序列所示的重链可变区CDR1、CDR2、CDR3序列。
根据本发明的实施例,与肽段E相比,所述抗体或其抗原结合片段以肽段A作为特异性识别CLDN18.2的优势表位,其中所述肽段E的序列如SEQ ID NO:14所示,所述肽段A的序列如SEQ ID NO:13所示。
DLYNNPVTAVFNYQGLWRSC(SEQ ID NO:14)。
DQWSTQDLYNNPVTAVFNYQGC(SEQ ID NO:13)。
根据本发明的实施例,具有SEQ ID NO:1~3、SEQ ID NO:4~6任一条序列的抗体只结合A肽段所在的表位;具有SEQ ID NO:7~9、SEQ ID NO:10~12任一条序列的抗体可以结合A和E肽段组成的复合表位,其中A肽段是其优势表位。
根据本发明的实施例,所述抗体含有重链框架区序列和轻链框架区序列的至少之一,其中,所述重链框架区序列和轻链框架区序列的至少之一的至少一部分来自于鼠源抗体、人源抗体、灵长目源抗体或其突变体的至少之一。
根据本发明的实施例,所述抗体具有如SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16任一项所示氨基酸序列的轻链可变区,和/或者,所述抗体具有如SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18任一项所示氨基酸序列的重链可变区。
DIVMTQSPSSLSVTAGEKVTMSCKSSQSLLNSGNQKNYLTWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYYCQNDYSYPFTFGSGTKLEIK(SEQ ID NO:15)。
DIVMTQSPSSLTVTAGEKVTMSCKSSQSLFNSGNQKNYLTWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYFCQNDYSYPLTFGAGTKLELR(SEQ ID NO:16)。
QVQLQQPGSELVKPGASVKLSCKASGYTFTSYWMHWVKQRPGQGLEWIGMIHPNSGSTNYNEKFKSKATLTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARRYYGSISPDYWGQGTTLTVSS(SEQ ID NO:17)。EVQLQQSGPELVRPGASVKMSCKASGYTFTDYNMHWVKQSHGKSLEWIGYINPNNGGTSYNQKFKGKATLTVNKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYYCVTTRYLAVWGTGTTVTVSS(SEQ ID NO:18)。
根据本发明的实施例,所述抗体具有如SEQ ID NO:15所示氨基酸序列的轻链可变区和如SEQ ID NO:17所示氨基酸序列的重链可变区。
根据本发明的实施例,所述抗体具有如SEQ ID NO:16所示氨基酸序列的轻链可变区和如SEQ ID NO:18所示氨基酸序列的重链可变区。
根据本发明的实施例,所述抗体含有重链恒定区和轻链恒定区的至少之一,所述重链恒定区和轻链恒定区的至少之一的至少一部分来自于鼠源抗体、人源抗体、灵长目源抗体或其突变体的至少之一。
根据本发明的实施例,所述抗体的轻链恒定区和重链恒定区均来自于鼠源IgG抗体或其突变体。根据本发明实施例的抗体,所述抗体的轻链恒定区和重链恒定区均来自于人源IgG4、IgG3、或IgG1。
根据本发明的实施例,所述抗体具有如SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20任一项所示氨基酸序列的轻链:
DIVMTQSPSSLTVTAGEKVTMSCKSSQSLFNSGNQKNYLTWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYFCQNDYSYPLTFGAGTKLELRRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC(SEQ ID NO:19)。
DIVMTQSPSSLSVTAGEKVTMSCKSSQSLLNSGNQKNYLTWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYYCQNDYSYPFTFGSGTKLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC(SEQ ID NO:20)。
根据本发明的实施例,所述抗体具有如SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:22任一项所示氨基酸序列的重链:
EVQLQQSGPELVRPGASVKMSCKASGYTFTDYNMHWVKQSHGKSLEWIGYINPNNGGTSYNQKFKGKATLTVNKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYYCVTTRYLAVWGTGTTVTVSSAKTTPPSVYPLAPGCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPESVTVTWNSGSLSSSVHTFPALLQSGLYTMSSSVTVPSSTWPSQTVTCSVAHPASSTTVDKKLEPSGPISTINPCPPCKECHKCPAPNLEGGPSVFIFPPNIKDVLMISLTPKVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTIRVVSTLPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPSPIERTISKIKGLVRAPQVYILPPPAEQLSRKDVSLTCLVVGFNPGDISVEWTSNGHTEENYKDTAPVLDSDGSYFIYSKLNMKTSKWEKTDSFSCNVRHEGLKNYYLKKTISRSPGK(SEQ ID NO:21)。
QVQLQQPGSELVKPGASVKLSCKASGYTFTSYWMHWVKQRPGQGLEWIGMIHPNSGSTNYNEKFKSKATLTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARRYYGSISPDYWGQGTTLTVSSAKTTPPSVYPLAPGCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPESVTVTWNSGSLSSSVHTFPALLQSGLYTMSSSVTVPSSTWPSQTVTCSVAHPASSTTVDKKLEPSGPISTINPCPPCKECHKCPAPNLEGGPSVFIFPPNIKDVLMISLTPKVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTIRVVSTLPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPSPIERTISKIKGLVRAPQVYILPPPAEQLSRKDVSLTCLVVGFNPGDISVEWTSNGHTEENYKDTAPVLDSDGSYFIYSKLNMKTSKWEKTDSFSCNVRHEGLKNYYLKKTISRSPGK(SEQ ID NO:22)。
根据本发明的实施例,具有上述SEQ ID NO:21所示氨基酸序列的重链和具有上述SEQ ID NO:19所示氨基酸序列的轻链的抗体是m1B6抗体;具有上述SEQ ID NO:22所示氨基酸序列的重链和具有上述SEQ ID NO:20所示氨基酸序列的轻链的抗体是m1E7抗体。
根据本发明的实施例,所述抗体为单链抗体、嵌合抗体、多聚体抗体、CDR移植抗体。
根据本发明的实施例,所述抗体为单链抗体,所述单链抗体具有SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24任一项所示的氨基酸序列:
DIVMTQSPSSLTVTAGEKVTMSCKSSQSLFNSGNQKNYLTWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYFCQNDYSYPLTFGAGTKLELRGGGGSGGGGSGGGGSEVQLQQSGPELVRPGASVKMSCKASGYTFTDYNMHWVKQSHGKSLEWIGYINPNNGGTSYNQKFKGKATLTVNKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYYCVTTRYLAVWGTGTTVTVSS(SEQ ID NO:23)。
DIVMTQSPSSLSVTAGEKVTMSCKSSQSLLNSGNQKNYLTWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYYCQNDYSYPFTFGSGTKLEIKGGGGSGGGGSGGGGSQVQLQQPGSELVKPGASVKLSCKASGYTFTSYWMHWVKQRPGQGLEWIGMIHPNSGSTNYNEKFKSKATLTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARRYYGSISPDYWGQGTTLTVSS(SEQ ID NO:24)。
根据本发明的实施例,具有上述SEQ ID NO:23所示氨基酸序列的抗体被称为1B6抗体,具有上述SEQ ID NO:24所示氨基酸序列的抗体被称为1E7抗体。其中,SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24所示氨基酸序列的抗体从N端到C端可表示为VL-Linker-VH,VL表示轻链可变区,VH表示重链可变区,Linker表示连接VL和VH的连接链。
根据本发明的实施例,所述的抗体可以为嵌合抗体IB6和1E7,嵌合抗体IB6具有SEQ ID NO:31所示的重链和SEQ ID NO:32所示的轻链。
EVQLQQSGPELVRPGASVKMSCKASGYTFTDYNMHWVKQSHGKSLEWIGYINPNNGGTSYNQKFKGKATLTVNKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYYCVTTRYLAVWGTGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQID NO:31)。
DIVMTQSPSSLTVTAGEKVTMSCKSSQSLFNSGNQKNYLTWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYFCQNDYSYPLTFGAGTKLELRRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:32)。
嵌合抗体IE7具有SEQ ID NO:33所示的重链和SEQ ID NO:34所示的轻链。
QVQLQQPGSELVKPGASVKLSCKASGYTFTSYWMHWVKQRPGQGLEWIGMIHPNSGSTNYNEKFKSKATLTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARRYYGSISPDYWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:33)。
DIVMTQSPSSLSVTAGEKVTMSCKSSQSLLNSGNQKNYLTWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYYCQNDYSYPFTFGSGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:34)。
根据本发明的实施例,所述抗原结合片段包括Fab片段、(Fab)2片段、scFv-Fc融合蛋白、scFv-Fv融合蛋白、Fv片段、以及最小识别单位的至少之一。
在本发明的第二方面,本发明提出了一种嵌合抗原受体。根据本发明的实施例,所述嵌合抗原受体包括:胞外区,所述胞外区包括单链抗体的重链可变区和轻链可变区,其中,所述轻链可变区和所述重链可变区是根据在本发明第一方面所提出的抗体或其抗原结合片段所确定的。根据本发明的实施例,所述嵌合抗原受体可以用于药物的制备,所述药物基于抗体的抗原识别能力发挥生物学作用。
根据本发明的实施例,所述嵌合抗原受体进一步包括跨膜区和胞内区,其中所述跨膜区包括CD8跨膜区,所述胞内区包括ICOS胞内段、4-1BB及CD3δ链。
根据本发明的实施例,所述ICOS胞内段的N端与所述CD8跨膜区的C端相连,所述ICOS胞内段的C端与所述4-1BB胞内段的N端相连,所述4-1BB胞内段的C端与所述CD3δ链的N端相连。发明人发现,嵌合抗原受体中的免疫共刺激因子跨膜区和胞内段在上述连接顺序下,所获得的嵌合抗原受体在病毒中的表达滴度高,表达该嵌合抗原受体的免疫细胞对表达CLDN18.2的肿瘤细胞的特异性杀伤效果显著,且非特异性杀伤和细胞炎症因子反应较弱。
根据本发明的实施例,所述嵌合抗原受体的结构为:信号肽-Anti-Claudin18.2scfv-CD8铰链+CD8TM-ICOS-4-1BB-CD3δ,其中所述Anti-Claudin18.2 scfv的氨基酸序列如SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24任一项所示。
根据本发明的实施例,所述嵌合抗原受体的信号肽氨基酸序列如SEQ ID NO:25所示。
MGVKVLFALICIAVAEA(SEQ ID NO:25)
根据本发明的实施例,所述嵌合抗原受体的CD8铰链氨基酸序列如SEQ ID NO:26所示。
TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD(SEQ ID NO:26)
根据本发明的实施例,所述嵌合抗原受体的CD8TM氨基酸序列如SEQ ID NO:27所示。
IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYC(SEQ ID NO:27)
根据本发明的实施例,所述嵌合抗原受体的ICOS氨基酸序列如SEQ ID NO:28所示。
CWLTKKKYSSSVHDPNGEYMFMRAVNTAKKSRLTDVTL(SEQ ID NO:28)
根据本发明的实施例,所述嵌合抗原受体的4-1BB氨基酸序列如SEQ ID NO:29所示。
KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL(SEQ ID NO:29)
根据本发明的实施例,所述嵌合抗原受体的CD3δ氨基酸序列如SEQ ID NO:30所示。
RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPQRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR(SEQ ID NO:30)
在本发明的第三方面,本发明提出了一种免疫细胞。根据本发明的实施例,所述免疫细胞表达在本发明第二方面所提出的嵌合抗原受体。根据本发明实施例的免疫细胞具有良好的体内和体外杀伤效果。
根据本发明的实施例,上述核酸免疫细胞还可以进一步包括如下附加技术特征:
根据本发明的实施例,所述免疫细胞包括T淋巴细胞、DC细胞NK细胞和NKT淋巴细胞的至少之一。根据本发明实施例的免疫细胞利用本发明第一方面所提出的抗体,或者本发明第二方面所提出的嵌合抗原受体对靶标蛋白、细胞、组织、器官等进行识别、杀伤,进而发挥生物学功能。
在本发明的第四方面,本发明提出了一种核酸分子。根据本发明的实施例,所述核酸分子编码本发明第一方面所述的抗体或其抗原结合片段或者本发明第二方面所提出的嵌合抗原受体。根据本发明实施例的核酸分子所编码的抗体或抗原结合片段可特异性靶向结合CLDN18.2,且具有较高的抗原结合活性。
根据本发明的实施例,上述核酸分子还可以进一步包括如下附加技术特征:
根据本发明的实施例,所述核酸分子为DNA。
在本发明的第五方面,本发明提出了一种表达载体。根据本发明的实施例,所述表达载体携带本发明第四方面所提出的核酸分子。根据本发明实施例的表达载体导入合适的受体细胞后,可在调控系统的介导下,有效实现前面所述的特异性识别CLDN18.2的抗体或其抗原结合片段表达,进而实现所述抗体或抗原结合片段的体外大量获得。
根据本发明的实施例,上述核酸分子还可以进一步包括如下附加技术特征:
根据本发明的实施例,所述表达载体为真核表达载体或者病毒,优选的,所述病毒为慢病毒。根据本发明的实施例,所述真核表达载体可以为CHO细胞。
在本发明的第六方面,本发明提出了一种重组细胞。根据本发明的实施例,所述重组细胞携带本发明第四方面所提出的核酸分子,或者本发明第五方面所提出的表达载体。所述载体表达所述核酸分子编码本发明第一方面所提出的抗体或其抗原结合片段或者本发明第二方面所提出的嵌合抗原受体。根据本发明实施例的重组细胞可用于前面所述的特异性识别CLDN18.2的抗体或其抗原结合片段体外表达和大量获得。
根据本发明的实施例,上述重组细胞还可以进一步包括如下附加技术特征至少之一:
根据本发明的实施例,所述重组细胞为真核细胞,可选的,所述重组细胞为哺乳动物细胞。根据本发明实施例的重组细胞是通过将前面所述的表达载体引入至宿主细胞中而获得的,可以通过电转导、脂质体、注射等方式将载体导入宿主细胞。
在本发明的第七方面,本发明提出了一种药物组合物。根据本发明的实施例,所述药物组合物含有本发明第一方面所提出的抗体或其抗原结合片段,本发明第二方面所提出的嵌合抗原受体,本发明第三方面所提出的免疫细胞,本发明第四方面所提出的核酸分子,本发明第五方面所提出的表达载体;或者本发明第六方面所提出的重组细胞。根据本发明实施例的药物组合物中所包含的抗体或表达的抗体能够特异性的靶向结合CLDN18.2,特异性强,发挥较好的靶向作用,进而实现药物组合物中其他药物的生物学作用,如CLDN18.2分子活性抑制,表达CLDN18.2分子的细胞杀伤等作用。此外,根据本发明实施例的药物组合物可以发挥诊断作用,依赖于本发明第一方面所提出的能够特异性的靶向结合CLDN18.2的抗体,与诊断试剂进行组合,进而发挥对生物体异常表达CLDN18.2的部位进行诊断,如与诊断性核素、纳米材料等进行组合,实现对生物体异常表达CLDN18.2的细胞、组织、器官进行可视化观察,进而辅助医疗工作者或科研工作者对病灶进行更准确的判断
在本发明的第八方面,本发明提出了一种前述抗体或其抗原结合片段、嵌合抗原受体、免疫细胞、核酸分子、表达载体、重组细胞和/或药物组合物在制备药物中的用途,所述药物用于治疗或者预防CLDN18.2相关疾病。根据本发明实施例的用途,所述药物组合物可以用于诊断、治疗或预防CLDN18.2异常表达的疾病,例如胃癌、胰腺癌、肺癌等。
根据本发明的实施例,上述用途还可以进一步包括如下附加技术特征至少之一:
根据本发明的实施例,所述CLDN18.2相关疾病包括肿瘤。
根据本发明的实施例,所述肿瘤包括表达Claudin18.2的实体瘤,可选的,所述实体瘤包括:胃癌、胰腺癌、食管癌和肺癌。
在本发明的第九方面,本发明提出了一种检测CLDN18.2的试剂盒。根据本发明的实施例,所述试剂盒包括本发明第一方面所提出的抗体。前面所述的CLDN18.2抗体能够特异性靶向结合CLDN18.2,根据本发明实施例的试剂盒可以实现CLDN18.2的特异性检测,如当抗体结合有荧光基团时,可以采用荧光检测装置实现对CLDN18.2的定位或实时检测;当抗体结合有生物素等标记物时,可以通过显色试剂显色实现对CLDN18.2的定性或定量检测;抗体也可以结合抗抗体,实现夹心或者双夹心的方法,进而实现信号逐级放大,对CLDN18.2进行检测。
在本发明的第十方面,本发明提出了前面所述的抗体、前面所述的核酸分子、前面所述的表达载体或前面所述的重组细胞在制备试剂盒中的用途,所述试剂盒用于检测CLDN18.2或者诊断CLDN18.2相关的疾病。根据本发明的实施例,所述试剂盒可以通过直接检测CLDN18.2的表达量,如高表达、低表达、不表达,进而实现对疾病的诊断,也可以与其他诊断试剂进行组合,获取生物体或者组织、细胞的状态,如与诊断性核素结合,可以可视化体内表达CLDN18.2细胞的数量、组织的大小及部位等。
在本发明的第十一方面,本发明提出了前面所述的抗体或其抗原结合片段在筛选抗体中的用途,所述抗体识别CLDN18.2中肽段A之外的表位。根据本发明的实施例,所述抗体和抗原的肽段A表位紧密结合,进而形成复合物,此时本发明的抗体将抗原的肽段A表位封闭,可用于抗体筛选,所筛选到的抗体可以与抗原的肽段A之外的表位结合。此外,也可以筛选与肽段A表位结合的抗体,所筛选到的与肽段A表位结合的抗体与本发明的抗体相比,具有更优的抗原结合能力。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出,部分将从下面的描述中变得明显,或通过本发明的实践了解到。
附图说明
本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解,其中:
图1是根据本发明实施例的小鼠免疫后血清检测;
图2是根据本发明实施例的m1B6/m1E7杂交瘤上清特异性检测;
图3是根据本发明实施例的m1B6/m1E7单克隆抗体亲和力检测;
图4是根据本发明实施例的m1B6/m1E7单克隆抗体非特异性检测;
图5是根据本发明实施例的anti-Claudin18.2 scFv-Fc融合蛋白亲和力检测;
图6是根据本发明实施例的anti-Claudin18.2抗体表位鉴定;
图7是根据本发明实施例的不同anti-Claudin18.2 CAR-T杀伤检测;
图8是根据本发明实施例的不同anti-Claudin18.2 CAR-T阳性率;
图9是根据本发明实施例的anti-Claudin18.2 CAR-T NCI-H460小鼠模型评价;
图10是根据本发明实施例的anti-Claudin18.2 CAR-T Calu-6小鼠模型评价;
图11是嵌合抗体SDS-PAGE电泳图;
图12是根据本发明实施例的anti-Claudin18.2抗体ADCC活性检测;
图13是根据本发明实施例的anti-Claudin18.2抗体CDC活性检测;
图14是根据本发明实施例的anti-Claudin18.2抗体BXPC3肿瘤模型药效验证;
图15是根据本发明实施例的anti-Claudin18.2抗体BXPC3肿瘤模型体重变化检测。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例,所述实施例的示例在附图中示出,其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的,旨在用于解释本发明,而不能理解为对本发明的限制。
此外,术语“第一”、“第二”仅用于描述目的,而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此,限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括至少一个该特征。在本发明的描述中,“多个”的含义是至少两个,例如两个,三个等,除非另有明确具体的限定。
本文中,所述ADCC是指抗体依赖性细胞毒性作用,当IgG抗体通过Fab段与靶细胞表面抗原决定簇特异性结合后,其Fc段可与有FcγR的杀伤细胞(NK细胞、单核-巨噬细胞、中性粒细胞)等效应细胞结合,触发效应细胞的杀伤活性,直接杀伤靶细胞。
本文中,所述CDC是指补体依赖的细胞毒性作用,即补体参与的细胞毒作用,通过特异性抗体与细胞膜表面相应抗原结合,形成复合物而激活补体经典途径,所形成的攻膜复合物对靶细胞发挥裂解效应。
抗体
本文中,术语“抗体”是能够与特异性抗原结合的免疫球蛋白分子。包括两条分子量较轻的轻链和两条分子量较重的重链,重链(H链)和轻链(L链)由二硫键连接形成一个四肽链分子。其中,肽链的氨基端(N端)氨基酸序列变化很大,称为可变区(V区),羧基端(C端)相对稳定,变化很小,称为恒定区(C区)。L链和H链的V区分别称为VL和VH。
在可变区中某些区域氨基酸组成和排列顺序具有更高的变化程度,称为高变区(Hypervariable region,HVR),高变区为抗原和抗体结合的位置,因此也称为决定簇互补区(complementarity-determining region,CDR)。重链可变区和轻链可变区上均有三个CDR区。
本发明利用使用含有hClaudin18.2全长基因的pCDNA3.4质粒免疫Claudin18.2基因敲除C57小鼠,通过杂交瘤融合技术筛选到两株不同亲和力和结合表位的anti-Claudin18.2鼠源抗体。利用该抗体片段能够与CLDN18.2抗原特异性结合,从而可以靶向性治疗异常表达CLDN18.2的疾病,如肿瘤等。
在一些实施方案中,本发明提供了一种能够特异性识别CLDN18.2的抗体或者抗原结合片段,所述抗体或其抗原结合片段含有选自下列至少之一的CDR序列或与其具有至少95%同一性的氨基酸序列:轻链可变区CDR序列:SEQ ID NO:1~3、SEQ ID NO:7~9;重链可变区CDR序列:SEQ ID NO:4~6、SEQ ID NO:10~12。在另一些实施方案中,本发明所提供的抗体或者抗原结合片段与上述重链和轻链相比,具有保守氨基酸取代。“抗原结合片段”是指保持特异性结合抗原(ROR2)能力的抗体片段。抗原结合片段的实施例包括但不限于Fv片段、二硫键稳定的Fv片段(dsFv)、Fab片段、(Fab)2、scFv-Fc融合蛋白、scFv-Fv融合蛋白、Fv-Fc融合蛋白、由抗原结合片段形成的多特异性抗体、单结构域抗体、VHH纳米抗体、结构域抗体、二价结构域抗体或最小识别单位的至少之一。“保守氨基酸取代”指的是氨基酸被另一氨基酸发生生物学上、化学上或者结构上相似的残基所取代。生物学上相似的指的是该取代不破坏CLDN18.2抗体或者与CLDN18.2抗原的生物学活性。结构上相似指的是氨基酸具有相似长度的侧链,如丙氨酸、甘氨酸或丝氨酸,或具有相似大小的侧链。化学相似性指的是氨基酸具有相同的荷电或者都是亲水或者疏水的。例如疏水残基异亮氨酸、缬氨酸、亮氨酸或者甲硫氨酸相互取代。或者用极性氨基酸例如用精氨酸取代赖氨酸、谷氨酸取代天冬氨酸、谷氨酰胺取代天冬酰胺,丝氨酸取代苏氨酸等等。
在一些实施方案中,本发明提供了一种抗体或抗原结合片段,所述抗体或抗原结合片段具有SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18任一项所示氨基酸序列的重链可变区和具有如SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16任一项所示氨基酸序列的轻链可变区。发明人通过抗体序列比对数据库(NCBI、IMGT)或者相关软件可得到上述抗重链可变区序列的CDR区(如SEQ IDNO:4~6、SEQ ID NO:10~12所示)和轻链可变区序列的CDR区(如SEQ ID NO:1~3、SEQ IDNO:7~9所示)。在另一些实施方案中,所述抗体或抗原结合片段的重链可变区序列与SEQID NO:17和SEQ ID NO:18所示氨基酸序列相比,具有保守氨基酸取代。在一些实施方案中,所述抗体或抗原结合片段的轻链可变区序列与SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16任一项所示氨基酸序列相比,具有保守氨基酸取代。当然,这些保守氨基酸取代不会对抗体或者抗原结合片段的生物学功能带来改变。在一些具体方式中,这些保守氨基酸取代可以发生在重链可变区和轻链可变区中除了CDR区之外的氨基酸上。
本发明所述的“m1B6”、“m1E7”可以理解为包含重链和轻链的鼠抗,“1B6”、“1E7”可以理解为由VH-Linker-VL形成的单链抗体,“嵌合抗体1B6”、“嵌合抗体1E7”可以理解为保留m1B6和m1E7鼠抗的可变区,将恒定区替换为人的IgG1的嵌合抗体。
在一些优选方案中,本发明提供了一种抗CLDN18.2抗体,该抗体具有SEQ ID NO:21~22、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:33任一项所示氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:19~20、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:34任一项所示氨基酸序列的轻链。
在一些优选方案中,本发明提供了一种抗CLDN18.2单链抗体,该抗体具有SEQ IDNO:23~24所示的氨基酸序列。本发明实施例的单链抗体从N端到C端为VL-Linker-VH的结构,VL表示轻链可变区,VH表示重链可变区,Linker表示连接VL和VH的连接链。
在一些实施方案中,相比现有技术中的抗CLDN18.2抗体,本申请的抗CLDN18.2抗体具有较高的ADCC活性和CDC活性,EC50和IC50值较小,可以有效作用于靶标细胞。
在一些实施方案中,本申请的抗CLDN18.2抗体可以有效抑制小鼠模型中的肿瘤生长,并且不影响小鼠其他身体指标,如体重等。本申请的抗体具有良好的抗肿瘤效果,并且副作用较小。
免疫细胞、嵌合抗原受体
术语“嵌合抗原受体(CAR)”,是结合基于抗体的针对期望的抗原(例如,肿瘤抗原)的特异性与T细胞受体-激活细胞内结构域以产生展示特异性抗肿瘤细胞免疫活性的嵌合蛋白的分子。
利用上述能够特异性识别CLDN18.2的抗体或其抗原结合片段可以制备免疫细胞或嵌合抗原受体。
为此,本发明还提供了一种嵌合抗原受体,所述嵌合抗原受体包括胞外区,所述胞外区包括单链抗体的重链可变区和轻链可变区,其中,所述轻链可变区和所述重链可变区选自上述能够特异性识别CLDN18.2的抗体或其抗原结合片段。除单链抗体的重链可变区和轻链可变区外,胞外区还包括铰链区,支持单链可变片段。
在一些实施方案中,所述嵌合抗原受体中的可变重链和轻链通过短肽连接在一起。除胞外区,嵌合抗原受体还进一步包括跨膜区和胞内区,这些结构域可启动细胞内信号级联反应而进行抗原识别。
在一些实施方案中,所述的胞内区选自:CD3δ、FcεRIγ、CD27、CD28、CD137、CD134、MyD88、CD40的胞内信号区序列,或其组合;或所述的跨膜区包含CD8或CD28的跨膜区。在一些实施方案中,所述的嵌合抗原受体包括如下的顺序连接的抗体,跨膜区和胞内区:本发明的抗体、CD8和CD3δ;本发明的抗体、CD8、CD137和CD3δ;或本发明的抗体、CD28分子的跨膜区、CD28分子的胞内信号区和CD3δ;或本发明的抗体、CD28分子的跨膜区、CD28分子的胞内信号区、CD137和CD3δ。
在一些实施方案中,跨膜区包括免疫共刺激因子跨膜区。在一些实施方案中,免疫共刺激因子跨膜区可进一步为CD8跨膜区或ICOS跨膜区。
在一些实施方案中,胞内区包括免疫共刺激因子胞内段以及CD3δ链。
在一些实施方案中,免疫共刺激因子胞内段进一步包含融合有源自CD3δ序列胞内信号传导域的ICOS或4-IBB或OX-40。
在一些实施方案中,嵌合抗原受体进一步包含融合有单链单载体上(例如逆转录病毒载体)或双链单载体上(例如逆转录病毒载体)CD3δ内结构域的两个共刺激分子。裂解后的双链单载体表达两条链,其中一条链含有融合有共刺激分子和CD3δ内域的scFv。
在一些实施方案中,嵌合抗原受体进一步包含细胞因子受体和趋化受体。
基于上述嵌合抗原受体可以制备免疫细胞,所述免疫细胞可以表达上述嵌合抗原受体。
在一些实施方案中,所述免疫细胞包括T淋巴细胞、DC细胞NK细胞和NKT淋巴细胞的至少之一。在一些实施方案中。所述免疫细胞可以特异性杀伤表面具有CLDN18.2的癌细胞,具有良好的体内和体外杀伤效果。
表达CAR的T细胞被称为CAR T细胞或CAR修饰的T细胞。
本发明的实施方案的CAR(包括其功能部分和功能变体)可通过本领域已知的方法获得。CAR可以通过制备多肽或蛋白质的任何合适的方法制备。从头合成多肽和蛋白质的合适的方法描述在参考文献,如Chan等,Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis,OxfordUniversity Press,Oxford,United Kingdom,2000;Peptide and Protein DrugAnalysis,Reid,R.编辑,Marcel Dekker Inc.,2000;Epitope Mapping,Westwood等编辑,Oxford University Press,Oxford,United Kingdom,2001;和美国专利5,449,752中。另外,多肽和蛋白质可利用标准的重组方法使用本文描述的核酸重组产生。参见,例如,Sambrook等,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,第3版,Cold SpringHarborPress,Cold Spring Harbor,NY 2001;和Ausubel等,Current Protocols inMolecul arBiology,Greene Publishing Associates以及John Wiley&Sons,NY,1994。此外,本发明的一些CAR(包括其功能部分和功能变体)可分离自和/或纯化自诸如植物,细菌,昆虫,哺乳动物如大鼠、人等的来源。分离和纯化方法为本领域熟知的。可选地,本文描述的CAR(包括其功能部分和功能变体)可通过诸如Synpep(Dublin,CA)、PeptideTechnologiesCorp.(Gaithersburg,MD)和Multiple Peptide Systems(San Diego,CA)的公司商业合成。在这方面,可合成、重组、分离和/或纯化本发明的CAR。
在一些实施方案中,所述的免疫细胞其还携带外源的细胞因子的编码序列;或其还表达另一种嵌合抗原受体,该受体不含有CD3δ,但含有CD28的胞内信号结构域、CD137的胞内信号结构域或者这两者的组合;或其还表达趋化因子受体;较佳地,所述的趋化因子受体包括:CCR;或其还表达能降低PD-1表达的siRNA或者阻断PD-L1的蛋白;或其细胞中内源性的PD-1被基因编辑技术敲除;或其还表达安全开关。
在本发明的另一方面,本发明还提供了一种多功能免疫缀合物,包括本发明所述的抗体;以及与之连接的功能性分子;所述的功能性分子选自:靶向肿瘤表面标志物的分子,抑制肿瘤的分子,靶向免疫细胞的表面标志物的分子或可检测标记物。在一些实施方案中,所述的靶向免疫细胞的表面标志物的分子是结合T细胞表面标志物的抗体,其与本发明所述的抗体形成T细胞参与的双功能抗体。
本文所用的术语“共刺激性分子”是指免疫细胞如T细胞上的同源结合配偶体,其特异性地结合共刺激配体,从而介导共刺激反应,比如但不限于增殖。共刺激性分子为除了抗原受体或其配体之外的细胞表面分子,其促进有效的免疫应答。共刺激性分子包括但不限于MHCI类分子,BTLA和Toll配体受体,以及OX40、CD27、CD28、CDS、ICAM-1、LFA-1(CD11a/CD18)、ICOS(CD278)和4-1BB(CD137)。共刺激性分子的实例包括但不限于:CDS、ICAM-1、GITR、BAFFR、HVEM(LIGHTR)、SLAMF7、NKp80(KLRF1)、NKp44、NKp30、NKp46、CD160、CD19、CD4、CD8α、CD8β、IL2Rβ、IL2Rγ、IL7Rα、ITGA4、VLA1、CD49a、ITGA4、IA4、CD49D、ITGA6、VLA-6、CD49f、ITGAD、CD11d、ITGAE、CD103、ITGAL、CD11a、LFA-1、ITGAM、CD11b、ITGAX、CD11c、ITGB1、CD29、ITGB2、CD18、LFA-1、ITGB7、NKG2D、NKG2C、TNFR2、TRANCE/RANKL、DNAM1(CD226)、SLAMF4(CD244、2B4)、CD84、CD96(Tactile)、CEACAM1、CRTAM、Ly9(CD229)、CD160(BY55)、PSGL1、CD100(SEMA4D)、CD69、SLAMF6(NTB-A、Ly108)、SLAM(SLAMF1、CD150、IPO-3)、BLAME(SLAMF8)、SELPLG(CD162)、LTBR、LAT、GADS、SLP-76、PAG/Cbp、CD19。
术语“scFv”是指包含至少一个包括轻链的可变区抗体片段和至少一个包括重链的可变区的抗体片段的融合蛋白,其中所述轻链和重链可变区是邻接的(例如经由合成接头例如短的柔性多肽接头),并且能够以单链多肽形式表达,且其中所述scFv保留其所来源的完整抗体的特异性。除非指定,否则如正如本文中使用的那样,scFv可以以任何顺序(例如相对于多肽的N-末端和C末端)具有所述的VL和VH可变区,scFv可以包括VL-接头-VH或可以包括VH-接头-VL。
本文所用的术语“表位”及其语法上的其他形式可以指可被抗体、B细胞、T细胞或工程细胞识别的部分抗原。例如,表位可以是被TCR识别的肿瘤表位或病原体表位,也可以识别抗原内的多个表位。表位也可以突变。
核酸分子、表达载体、重组细胞
在制备或者获取这些抗体或嵌合抗原受体的过程中,可以利用表达这些抗体或嵌合抗原受体的核酸分子,与不同的载体连接,然后在不同细胞中表达,来获得相应抗体或嵌合抗原受体。
为此,本发明还提供了一种分离的核酸分子,所述核酸分子编码上述所述的抗体或其抗原结合片段或嵌合抗原受体。
在一些优选的实施方案中,所述核酸分子经过种属优化,更易在哺乳动物细胞中表达。
本发明还提供了一种表达载体,所述表达载体包含上述分离的核酸分子。在将上述分离的多核苷酸连接到载体上时,可以将多核苷酸与载体上的控制元件直接或者间接相连,只要这些控制元件能够控制多核苷酸的翻译和表达等即可。当然这些控制元件可以直接来自于载体本身,也可以是外源性的,即并非来自于载体本身。当然,多核苷酸与控制元件进行可操作地连接即可。本文中“可操作地连接”是指将外源基因连接到载体上,使得载体内的控制元件,例如转录控制序列和翻译控制序列等等,能够发挥其预期的调节外源基因的转录和翻译的功能。当然用来编码抗体重链和轻链的多核苷酸,可以分别独立的插入到不同的载体上,常见的是插入到同一载体上。常用的载体例如可以为质粒、噬菌体等等。
本发明还提供了一种重组细胞,该重组细胞中包含有该表达载体。可以将表达载体导入到哺乳动物细胞中,构建获得重组细胞,然后利用这些重组细胞表达本发明提供的抗体或者抗原结合片段。通过该重组细胞进行培养,即可以获得相应抗体。这些可用的哺乳动物细胞例如可以为CHO细胞等。
药物组合物、试剂盒及制药用途和在制备试剂盒中的用途
本发明还提供了一种药物组合物,所述药物组合物包括上述抗体或者其抗原结合片段和药学可接受的载体,还可以包括上述嵌合抗原受体、免疫细胞、核酸分子、表达载体、重组细胞。
本文提供的CLDN18.2抗体可以掺入适合受试者施用的药物组合物中。通常,这些药物组合物包括本文提供的CLDN18.2抗体。
在一些实施例中,这些药物组合物进一步包括药学上可接受的载体,包括任何溶剂、固体赋形剂、稀释剂、粘合剂、崩解剂、或其他液体赋形剂、分散剂、矫味剂或悬浮剂、表面活性剂、等渗剂、增稠剂、乳化剂、防腐剂、固体粘合剂、助流剂或润滑剂,等等,适合于特有的目标剂型。除了任何常规的辅料与本发明的化合物不相容的范围,例如所产生的任何不良的生物效应或与药学上可接受的组合物的任何其他组分以有害的方式产生的相互作用,它们的用途也是本发明所考虑的范围。
例如,本发明的抗体可掺入适用于胃肠外施用(例如静脉内、皮下、腹膜内、肌肉内)的药物组合物中。这些药物组合物可以被制备成各种形式。例如液体、半固体和固体剂型等,包括但不限于液体溶液(例如,注射溶液和输注溶液)、分散剂或悬浮剂、片剂、丸剂、粉末、脂质体和栓剂。典型的药物组合物为注射溶液或输注溶液形式。所述抗体可通过静脉输注或注射或肌肉内或皮下注射来施用。
当然,本文中的CLDN18.2抗体还可以根据需要被制成试剂盒或者其他诊断性试剂的一部分。根据本发明的实施例,本发明还提供了一种试剂盒,所述试剂盒包括上述CLDN18.2抗体。应用本发明提供的试剂盒,例如可以用于免疫印迹、免疫沉淀等涉及到利用CLDN18.2抗原和抗体特异性结合性能,来检测的试剂盒等。这些试剂盒可包含下列中的任意一种或多种:拮抗剂、CLDN18.2抗体或者药物参照材料;蛋白纯化柱;免疫球蛋白亲和纯化缓冲剂;细胞的测定稀释剂;说明书或者文献等。CLDN18.2抗体可被用于不同类型的诊断测试,例如可以在体外或者体内检测各种各样的疾病或者药物、毒素或者其他蛋白等的存在。例如可以通过对受试者的血清或者血液进行检测,用来测试相关疾病。例如癌症或肿瘤,这些癌症或者肿瘤可以是任何不受调控的细胞生长。
在一些实施例中,所述CLDN18.2抗体可以与任何检测试剂或治疗制剂联用,例如与诊断性核素、纳米材料等联合使用,通过核素的放射性对靶标部位进行探测,进而获取靶标部位的信息;也可以与治疗性核素联用,利用核素的放射性,特异性杀伤靶标细胞、组织等。
在利用本发明所提供的CLDN18.2抗体诊断或治疗或预防上述疾病时,可以将本发明提供的CLDN18.2抗体提供给受试者即可。为此,本发明提供了一种用于治疗上述疾病的方法,包括向有需要的受试者施用本发明所提供的的抗体或其抗原结合片段。
本文使用的术语“治疗”和“预防”以及源自于此的词不必暗示100%或完全治疗或预防。相反,存在不同程度的治疗或预防,本领域普通技术人员认为所述治疗或预防具有潜在的益处或治疗效果。在这方面,本发明方法可提供任何量的任何水平的治疗或预防哺乳动物的癌症。而且,本发明方法提供的治疗或预防可包括正在治疗或预防的疾病如癌症的一种或多种病患或症状的治疗或预防。另外,为了本文的目的,“预防”可涵盖延缓疾病或其症状或病患的发作。
下面参考具体实施例,对本发明进行描述,需要说明的是,这些实施例仅仅是描述性的,而不以任何方式限制本发明。实施例中未注明具体技术或条件的,按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例1 Anti-Claudin18.2单克隆筛选及活性鉴定
1.1 Anti-Claudin18.2单克隆抗体筛选:
小鼠免疫及杂交瘤筛选:
使用含有hClaudin18.2全长基因的pCDNA3.4质粒免疫Claudin18.2基因敲除C57小鼠,每只小鼠通过肌肉注射免疫60μg质粒,共免疫10只小鼠。免疫间隔2周,3次质粒免疫后7天采血,血清稀释100倍,使用hClaudin18.2高表达的293T细胞检测小鼠免疫反应,选择其中具有明显免疫反应的小鼠使用hClaudin18.2高表达的293T细胞进行尾静脉或腹腔冲击免疫(附图1),每只小鼠接种量为1E+07细胞。3-4天后取小鼠脾脏,使用70um筛网研磨后与SP2/0细胞通过PEG融合铺板,使用hClaudin18.2高表达的CHO细胞进行杂交瘤筛选。
1.2 hClaudin18.2-CHO高表达细胞株和hClaudin18.1-CHO高表达细胞株准备:
分别收集hClaudin18.2-CHO和hClaudin18.1-CHO高表达细胞株,每个约5E+06个细胞,细胞活力95%以上。500g 3min离心收集细胞使用含有1%BSA的预冷PBS等体积洗涤离心3次后按照1E+07cells/mL的密度使用含有1%BSA的预冷PBS重悬细胞,每种细胞按照每管100μL的量分装到4个流式检测管中。
1.3 m1B6/m1E7 Anti-Claudin18.2单克隆杂交瘤上清处理:
将分装好的两种细胞分别编号为hClaudin18.2-CHO-NC、hClaudin18.2-CHO-鼠二抗、hClaudin18.2-CHO-m1B6、hClaudin18.2-CHO-m1E7;hClaudin18.1-CHO-NC、hClaudin18.1-CHO-鼠二抗、hClaudin18.1-CHO-m 1B6、hClaudin18.1-CHO-m 1E7,在NC和鼠二抗编号的样品中加入100μL含1%BSA的预冷PBS充分混匀;在m1B6/m1E7标号对应的流式管中分别加入100μL对应的m1B6/m1E7单克隆杂交瘤细胞株上清充分混匀,将所有样品4℃静止反应30min后按照500g、3min离心收集细胞使用含有1%BSA的预冷PBS等体积洗涤离心3次后收集细胞备用。
鼠二抗稀释准备:按照1:500的比例用含有1%BSA的预冷PBS稀释PE标记的GAM-IgG-PE标记(ab97024),共计2mL充分混匀后4℃保存备用。按照每管200μL的量取稀释的鼠二抗稀释液将hClaudin18.2-CHO-鼠二抗、hClaudin18.2-CHO-m1B6、hClaudin18.2-CHO-m1E7;hClaudin18.1-CHO-鼠二抗、hClaudin18.1-CHO-m1B6、hClaudin18.1-CHO-m1E7处理后的细胞重悬;hClaudin18.2-CHO-NC、hClaudin18.1-CHO-NC加入200μL 1%BSA的预冷PBS重悬细胞后,将所有处理后的样品4℃静止反应30min后按照500g、3min离心收集细胞使用含有1%BSA的预冷PBS等体积洗涤离心3次后收集细胞备用。
1.4流式检测:
使用hClaudin18.2-CHO-NC、hClaudin18.1-CHO-NC样品确认流式电压,使用hClaudin18.2-CHO-鼠二抗、hClaudin18.1-CHO-鼠二抗样品确认阴性检测值,利用建立好的流式模板检测hClaudin18.2-CHO-m1B6、hClaudin18.2-CHO-m1E7;hClaudin18.1-CHO-m1B6、hClaudin18.1-CHO-m1E7样品,流式结果显示m1B6/m1E7具有很好的特异性反应,结果如附图2所示。
实施例2 Anti-Claudin18.2 m1B6/m1E7单克隆抗体亲和力和特异性检测
Anti-Claudin18.2 m1B6/m1E7腹水生产及纯化
取10只BA LB/c雌鼠,按照每只0.5mL在腹腔中注射石蜡油,10天后备用。将10只小鼠分成两笼,每笼5只,按照每只小鼠1E+06cells在腹腔中注射提前处理好的1B6/1E7单克隆细胞株,10-12天后开始收集小鼠产生的腹水,每个细胞株收集10mL左右的腹水备用。
将收集的腹水12000g 10min离心收集上清,加入50%饱和硫酸铵,充分混匀后4℃静置30min,10000g10min离心收集沉淀,用等体积的PBS重悬,使用0.45um的滤膜过滤后备用。
使用PBS,以4mL/min的流速平衡蛋白A亲和层析柱(5mL预装柱),平衡5个柱体积后将提前处理好的m1B6/m1E7按照4mL/min的速度分别上样纯化,上样完成后使用PBS继续冲洗至检测基线稳定后,换成0.1M pH3.5的乙酸洗脱,收集洗脱峰,使用1M的tris缓冲液将洗脱液pH调至pH7.4,纯化完成后将蛋白A层析柱用0.1M NaOH缓冲液冲洗5CV后,使用PBS冲洗至pH为中性后用纯化水冲洗至各检测基线稳定后用20%乙醇保存蛋白A层析柱,1B6/1E7洗脱样品转入25kD透析袋将其透析到PBS中备用。
准备CHO过表达claudin18.1细胞、CHO过表达claudin18.2细胞300g离心5min,用PBS重悬,重复这一步骤两次,最后用PBS调整浓度为3E+06cells/mL。设置这10个梯度,将2种抗体从2.5μg/mL按照2倍梯度稀释一直稀释到0.005μg/mL,CHO过表达claudin18.1细胞、CHO过表达claudin18.2细胞在透明96圆底孔各铺2排,每孔100μL,然后把抗体按照顺序加到细胞中1:1混合均匀,各设置空白孔和阴性孔,放进4℃冰箱中孵育1h,孵育结束,在大容量台式高速离心机500g离心3min,用PBS重悬重复该步骤三遍,将PE标记的羊抗鼠二抗稀释成1:500浓度,每孔加入100μL,空白孔不加,放进4℃冰箱孵育30min,孵育结束,在大容量台式高速离心机500g离心3min,用PBS重悬重复该步骤三遍,最后每孔加180μLPBS,用BDverse流式细胞仪进行检测,m1B6的EC50约0.06μg/mL,m1E7的EC50约为0.1μg/mL,且不与Claudin18.1有交叉反应,20μg/mL的浓度也没有和claudin18.1的交叉反应,就有很好的特异性。结果如图3和图4所示。
实施例3 Anti-Claudin18.2 scfv-FC融合蛋白活性检测
委托北京擎科生物科技有限公司对1B6、1E7杂交瘤细胞株进行测序。采用分子克隆的方法构建Anti-Claudin18.2 scFv-FC融合蛋白表达载体。瞬转293F细胞表达Anti-Claudin18.2 scFv-FC融合蛋白,收集培养基上清,12000g 10min离心后备用。使用蛋白A层析柱以4mL/min的流速用PBS平衡蛋白A亲和层析柱(5mL预装柱),平衡5个柱体积后将提前处理好的m1B6/m1E7(FC融合蛋白形式)按照4mL/min的速度分别上样纯化,上样完成后使用PBS继续冲洗至检测基线稳定后,换成0.1M pH3.5的乙酸洗脱,收集洗脱峰,使用1M的tris缓冲液将洗脱液pH调至pH7.4,纯化完成后将蛋白A层析柱用0.1M NaOH缓冲液冲洗5CV后,使用PBS冲洗至pH为中性后用纯化水冲洗至各检测基线稳定后用20%乙醇保存蛋白A层析柱,1B6/1E7洗脱样品转入25KD透析袋将其透析到PBS中备用。
准备CHO过表达claudin18.2细胞300g离心5min,用PBS重悬,重复这一步骤两次,最后用PBS调整浓度为3E+06Cells/mL。设置这6个梯度,将3种抗体m1B6/m1E7/IMAB362-FC从40μg/mL按照4倍梯度稀释一直稀释到0.04μg/mL,CHO过表达claudin18.1细胞、CHO过表达claudin18.2细胞在透明96圆底孔各铺2排,每孔100μL,然后把抗体按照顺序加到细胞中1:1混合均匀,各设置Blank孔和Negative孔,放进4℃冰箱中孵育1h,孵育结束,在大容量台式高速离心机500g离心3min,用PBS重悬重复该步骤三遍,将PE标记的羊抗人二抗稀释成1:500浓度,每孔加入100μL,空白对照孔不加,放进4℃冰箱孵育30min,孵育结束,在大容量台式高速离心机500g离心3min,用PBS重悬重复该步骤三遍,最后每孔加180μLPBS,用BDverse流式细胞仪进行检测,m1B6-FC的EC50约0.5μg/mL,m1E7-FC的EC50约为2.6μg/mL,IMAB362-Fc的EC50约为2.0μg/mL,m1B6具有更高的亲和力,m1E7和现有临床抗体亲和力相当。结果如图5所示。
实施例4 Anti-Claudin18.2抗体1B6/1E7表位鉴定
按照如下氨基酸序列合成hClaudin18.2的不同肽段:18.2EL1-A:DQWSTQDLYNNPVTAVFNYQGC、18.2EL1-B:YQGLWRSCVRESSGFTECRG、18.2EL1-C:CRGYFTLLGLPAmLQAVR、18.2EL1-D:VRESSGFTECRGYFTLLGLP、18.2EL1-E:DLYNNPVTAVFNYQGLWRSC、18.2EL1-F:DQWSTQDLYNNPVTC、18.2EL1-G:AVFNYQGLWRSC、18.2EL1-H:CVRESSGFTE、18.2EL1-I:CRGYFTLLGL。将9个合成肽段按水:乙腈=3:1超声溶解,溶解后终浓度为1mg/mL,每种肽段分装成100μL/1.5mLEP管备用,取m1B6稀释成2μg/mL共1mL,m1E7mAb稀释成4μg/mL共1mL,IMAB362稀释成20μg/mL共1mL,将稀释后的3个anti-claudin18.2抗体与分装好的肽段按照体积比1:1混合均匀,并设置对照组稀释后的m1B6、m1E7、IMAB362与PBS1:1混合均匀,将上述混合体系放到4℃冰箱30min。
将CHO过表达claudin18.2细胞收集后,按照300g离心5min用等体积的PBS重悬,重复离心重悬该步骤两次,最后用PBS调整浓度为3E+06cells/mL。在透明96圆底孔中每孔加100μL细胞悬液(2个空白对照孔和1个阴性对照孔),300g离心5min除去上清留取细胞沉淀备用。
在对应的细胞沉淀中加入孵育好的抗体肽段混合体系,和细胞混合均匀并做好标记,然后放进4℃冰箱中孵育30min,孵育结束。按照300g离心5min,用PBS重悬重复该步骤三遍,将PE标记的羊抗鼠二抗稀释成1:500浓度,每孔加入100μL,空白孔不加,放进4℃冰箱孵育30min,孵育结束,按照300g离心5min用PBS重悬重复该步骤三遍,最后每孔加180μLPBS重悬,用BD流式细胞仪进行检测细胞荧光强度,m1B6结合A和E肽段组成的复合表位,其中A肽段是其优势表位,m1E7只结合A肽段所在的表位,IMAB362结合A、C和E肽段组成的复合表位,其中E肽段是其优势表位。结果如图6所示。
实施例5 Anti-Claudin18.2 CAR-T肿瘤体外杀伤活性检测
anti-Claudin18.2 CAR-T细胞构建(m1B6/m1E7/IMAB362),CAR结构如上所述,包括:信号肽-Anti-Claudin18.2 scfv-CD8铰链+CD8TM-ICOS-4-1BB-CD3δ,其中,Anti-Claudin18.2 scfv的氨基酸序列为1B6或1E7序列,分别如SEQ ID NO:23及SEQ ID NO:24所示,其他结构(如信号肽、CD8铰链等)的氨基酸序列如EQ ID NO:25~30所示。
将293T细胞按照每个10cm细胞培养皿6E+06cells的量铺板,37℃、5%CO2培养过夜备用,第二天观察铺板细胞是否达到95%-99%的汇合度。
按照表1制备慢病毒包装体系(每个10cm的包装体系,分别制备m1B6/m1E7/IMAB362/GFP慢病毒)。
表1
组分 | 体积 |
A管 | |
Opti-MEM减血清培养基 | 1500μL |
Lipofectamine 3000转染试剂 | 41μL |
B管 | |
Opti-MEM减血清培养基 | 1500μL |
P3000Enhancer试剂 | 35μL |
virapower慢病毒包装混合物 | 13μL |
pLenti表达载体 | 4.3μg |
制备A/B后将A管混合物转移到B管中,轻轻充分混匀后,避光静止10-20min后,补加9mL含有10%FBS DMEM培养基充分混匀后备用。
取提前准备好的293T细胞(10cm细胞培养皿),除去培养基上清,将对应的A/B混合后的产物轻轻转入对应的细胞培养皿中,做好相应的标记,37℃、5%CO2培养6小时后更换新鲜的含有采用Ficoll淋巴细胞分离液分离获得健康人的T细胞按照每孔1E+06cells,在24孔板中培养,同时加入CD3/CD28抗体偶联磁珠(Invitrogen公司)刺激T细胞,48h后加入对应的慢病毒感染,病毒感染时加入IL-2(300U/mL),CAR-T细胞扩增至第6或7天后检测CAR基因表达及用于后续实验。
CAR-T和效应细胞(H460/18.2-H460)效靶比设置1:3、1:1、3:1、9:1,收集效应细胞至离心管中,400g离心5min弃去上清,加入适量PBS洗涤1次,离心去除上清,再加入0.5mLCTS完全培养基重悬;检测对应CAR-T的细胞密度和阳性率,用CTS完全培养基调整细胞至合适的密度备用。在96孔细胞检测板中加入适量的稀释后的效应细胞,400g 5min离心除去上清,在对应的孔中加入100μL的不同密度的CAR-T轻轻重悬细胞混匀,再每孔补充100μL的CTS共孵育20小时后,按如下要求检测:
共孵育20h后,TMR孔Vcc孔加入20μL lysis buffer,充分混匀。37℃裂解30min。
400g常温离心5min,吸取上清100μL至96孔板中。另外留样做细胞因子释放。
每孔加入100μL working solution。
避光常温条件下孵育30min。
每孔加入50μL stop solution,测定490nm吸光度。
通过对比发现1B6/1E7构建的CAR-T体外杀伤效果明显,且具有显著的量效关系,相对IMAB362构建的CAR-T具有更强的杀伤效果和CAR阳性率。结果如图7和图8所示。
实施例6 Anti-Claudin18.2 CAR-T体内杀伤活性检测(Claudin18.2 NCI-H460细胞)
Claudin18.2 NCI-H460细胞及NCI-H460细胞,以RPMI-1640培养基(含10%的FBS)进行培养,并置于37℃、5%二氧化碳培养箱中培养。待细胞生长至所需数量时,取对数生长期细胞,弃原培养基,胰酶消化3min。后以含有10%FBS的RPMI-1640培养基终止消化,收集细胞,1000rpm离心5min。细胞计数后,用无血清的RPMI-1640培养基和Matrigel混合液(按1:1的比例)调整细胞密度为5E+07cells/mL。抓取固定NOD/SCID雌性小鼠,将细胞悬液注射入小鼠右侧背部皮下,100μL/mouse。Claudin18.2 NCI-H460模型中,肿瘤生长至150mm3左右时;NCI-H460模型中,肿瘤生长至250mm3左右时;进行动物分组给药。每模型分为Vehicle组,Anti-Claudin18.2-1B6 CAR-T组,共2组,每组6只动物。收集Anti-Claudin18.2-1B6CAR-T细胞,以PBS溶液调整细胞密度为1E+08cells/mL,肿瘤瘤内注射细胞悬液,50μL/mouse。Vehicle组,肿瘤瘤内注射PBS溶液,50μL/mouse。每两天一次或每周两次进行肿瘤长度及宽度的测量,并计算肿瘤体积(肿瘤体积=瘤长*瘤宽*瘤宽/2)。计算肿瘤生长抑制率(TGI),若TX>T0,TGI=[1-TX/CX]*100%;若TX<T0,TGI=[1-(TX-T0)/T0]*100%;TX、CX为测量日的肿瘤体积,T0、C0为给药当天的肿瘤体积。以SPSS16.0进行统计学分析。
Claudin18.2 NCI-H460细胞在NOD/SCID鼠上建立的移植瘤模型上,Anti-Claudin18.2-1B6 CAR-T经瘤内给药后,可显著抑制肿瘤的生长。实验结束时,肿瘤生长抑制率达134.78%,两组间的肿瘤体积进行统计学分析,具有明显的统计学差异P<0.01。
NCI-H460细胞在NOD/SCID鼠上建立的移植瘤模型上,Anti-Claudin18.2-1B6CAR-T经瘤内给药后,不能抑制肿瘤的生长。实验结束时,肿瘤生长抑制率为2.17%,两组间的肿瘤体积进行统计学分析,不具有统计学差异。结果如图9所示。
实施例7 Anti-Claudin18.2 CAR-T体内杀伤活性检测(Claudin18.2 Calu-6细胞)
准备Claudin18.2 Calu-6细胞,以RPMI-1640培养基(含10%的FBS)进行培养,并置于37℃、5%二氧化碳培养箱中培养。待细胞生长至所需数量时,取对数生长期细胞,弃原培养基,胰酶消化3min。后以含有10%FBS的RPMI-1640培养基终止消化,收集细胞,1000rpm离心5min。细胞计数后,用无血清的RPMI-1640培养基和Matrigel混合液(按1:1的比例)调整细胞密度为2.5E+07cells/mL。抓取固定NCG雌性小鼠,将细胞悬液注射入小鼠右侧背部皮下,100μL/mouse。待肿瘤生长至150mm3左右时,进行动物分组给药。实验分为Vehicle组,T cell组,Claudin18.2 CAR-T(1B6)组,共3组,每组8只动物。收集Claudin18.2 CAR-T(1B6)细胞及T cell,以PBS溶液调整细胞密度为1E+08cells/mL,尾静脉注射细胞悬液,200μL/mouse。Vehicle组,尾静脉内注射PBS溶液,200μL/mouse。每周进行2次肿瘤长度及宽度的测量,并计算肿瘤体积(肿瘤体积=瘤长*瘤宽*瘤宽/2)。计算肿瘤生长抑制率(TGI),若TX>T0,TGI=[1-TX/CX]*100%;若TX<T0,TGI=[1-(TX-T0)/T0]*100%;TX、CX为测量日的肿瘤体积,T0、C0为给药当天的肿瘤体积。以SPSS16.0进行统计学分析。
Claudin18.2 Calu-6细胞在NCG鼠上建立的移植瘤模型上,Claudin18.2 CAR-T(1B6)经瘤内给药后,可显著抑制肿瘤的生长。实验结束时,肿瘤生长抑制率为106.56%。Claudin18.2 CAR-T(1B6)组与Vehicle组、T cell组进行统计学分析,均具有明显的统计学差异P<0.01。结果如图10所示。
实施例8 Anti-Claudin18.2嵌合抗体的制备
(1)嵌合抗体表达载体的构建
采用分子克隆的方法分别构建1B6、1E7嵌合抗体表达载体,在CHO-S表达系统中,重组表达嵌合抗体。编码1B6、1E7嵌合单克隆抗体轻重链的核苷酸序列是委托金唯智生物科技有限公司通过化学合成获得的,所获得的序列经双酶切后,插入到真核表达载体的相同酶切位点间,构建1B6、1E7嵌合抗体表达载体。然后采用质粒提取试剂盒(Invitrogen,Cat.A31231)提取一系列经验证正确的表达载体,-80℃保藏。
(2)编码一系列嵌合抗体载体转染并在细胞中表达
将CHO-S宿主细胞用ExpiCHOTMExpression Medium(Gibco,Cat.A2910002)复苏培养后,当细胞密度约6*106cell/mL时收集细胞,采用ExpiFectamineTMCHO TransfectionKit(Gibco,Cat.A29129)进行瞬时转染。每个嵌合抗体转染200mL体系,轻重链表达质粒各100μg,转染当天为DAY-0,细胞置于37℃、130rpm培养,DAY-1补加600ulExpiFectamineTMCHO Enhancer和16mL ExpiCHOTMFeed,细胞至于32℃、130rpm培养,DAY-5补加16mL ExpiCHOTMFeed,细胞置于32℃、130rpm培养,DAY-10收集细胞悬液,200g离心5min后收集上清细胞发酵液,细胞发酵液再置于4℃、8000rpm离心30min,再次收集上清细胞发酵液。
(3)上清细胞发酵液纯化嵌合抗体
采用Protein A层析柱对收集的细胞培养液进行纯化,并收集吸收峰,对收集的样品经还原与非还原后通过10%SDS-PAGE电泳检测,结果如附图11所示。由图可知,还原型SDS-PAGE电泳图谱显示二条带,分别在25KD和50KD左右,非还原型SDS-PAGE电泳图谱显示单一条带,在150KD左右,电泳图谱条带大小与理论一致,抗体表达正确。纯化后样品采用pH7.4的0.01M PBS缓冲液在4℃透析过夜。
实施例9 Anti-Claudin18.2嵌合抗体ADCC活性检测
在本实施例中,应用了稳定转染CD16受体和NFAT(Nuclear Factor of ActivatedT-cells)反应原件的Jurkat-NFAT-Luc-CD16荧光素酶报告基因细胞系。当受试抗体(嵌合抗体1B6、1E7)以及对照抗体IMAB362的Fab段与靶细胞BXPC-3-Claudin18.2、Capan-1-Claudin18.2、SK-GT-Claudin18.2细胞上抗原结合以后,抗体的Fc段与效应细胞Jurkat-NFAT-Luciferase-CD16细胞表面的(FcγRIIIA)结合,引起Jurkat-NFAT-Luciferase-CD16细胞内NFAT相关信号通路活化,进而导致荧光素酶表达水平上升。通过检测不同浓度(100μg/mL,20μg/mL,4μg/mL,0.8μg/mL,0.16μg/mL,0.032μg/mL,0.0064μg/mL,0.00128μg/mL,0.000256μg/mL,0.0000512μg/mL)受试抗体(嵌合抗体1B6、1E7)以及对照抗体IMAB362作用下,效应细胞Jurkat-NFAT-Luciferase-CD16的荧光素酶表达水平情况,评价Anti-Claudin18.2抗体的ADCC活性,结果如附图12所示。图中,半数达峰浓度EC50反映抗体的ADCC活性,半数达峰浓度EC50越小,抗体的ADCC活性越强。实验结果显示,在靶细胞BXPC-3-Claudin18.2上,随着抗体浓度的增高,受试抗体(1B6、1E7)以及对照抗体IMAB362的MeanValue逐渐增大一直到达平台值,半数达峰浓度EC50分别为0.002114μg/mL、0.002698μg/mL和0.003450μg/mL;在靶细胞Capan-1-Claudin18.2上,随着抗体浓度的增高,受试抗体(1B6、1E7)以及对照抗体IMAB362的Mean Value逐渐增大一直到达平台值,半数达峰浓度EC50分别为0.002676μg/mL、0.002634μg/mL和0.003482μg/mL;在靶细胞SK-GT-Claudin18.2上,随着抗体浓度的增高,受试抗体(嵌合抗体1B6、1E7)以及对照抗体IMAB362的Mean Value逐渐增大一直到达平台值,半数达峰浓度EC50分别为0.004466μg/mL、0.007070μg/mL和0.009061μg/mL;可见,受试抗体1B6、1E7的ADCC活性优于对照抗体IMAB362。
实施例 10Anti-Claudin18.2嵌合抗体CDC活性检测
在本实施例中,通过CCK8法检测不同浓度(90μg/mL,30μg/mL,10μg/mL,3.33μg/mL、1.11μg/mL、0.37μg/mL、0.123μg/mL、0.041μg/mL)受试抗体(嵌合抗体1B6、1E7)及对照抗体IMAB362作用下,靶细胞KATOⅢ-3-Claudin18.2的细胞活力情况,评价Anti-Claudin18.2抗体的CDC活性,结果如附图13所示。图中,OD450值反映细胞活力,OD450值越小,细胞活力越差;半数抑制浓度IC50反映抗体的CDC活性,半数抑制浓度IC50越小,抗体的CDC活性越强。实验结果显示,随着抗体浓度的增高,受试抗体(嵌合抗体1B6、1E7)及对照抗体IMAB362的OD450值逐渐降低直到趋近于零,半数抑制浓度IC50分别为2.657μg/mL、1.567μg/mL和4.889μg/mL;可见,受试抗体1B6、1E7的CDC活性优于对照抗体IMAB362。
实施例 11Anti-Claudin18.2嵌合抗体皮下移植瘤抗肿瘤药效检测
为了评价Anti-Claudin18.2抗体在小鼠体内抗肿瘤药效,采用BXPC3~18.2皮下移植瘤模型评价抗体IE7和1B6的抗肿瘤药效。取对数生长期的人胰腺癌细胞BXPC3~18.2,离心,细胞计数后,用无血清RPMI-1640培养基和Matrigel混合液(按1:1的比例)调整细胞密度至5.0*107/mL左右。以0.1mL/Mouse的体积注射入裸小鼠背部皮下。待平均肿瘤体积达到100mm3左右,随机分组给药。交替采用静脉和腹腔给药,IMAB362,嵌合抗体1E7,1B6给药剂量均为10mg/kg,每只给药10uL/g,给药6周,前三周每周给药2次,后三周每周给药1次。从给药0天开始,每周测量瘤径大小以及称量小鼠体重两次,用于计算肿瘤体积及体重变化趋势。采用肿瘤生长抑制率(TGI)作为试验评价指标。(TGI)%=[1-T/C]×100%,其中T、C为实验结束时的肿瘤体积。采用SPSS16.0软件进行统计分析,组间比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA)检验,P<0.05(*)表示有统计学意义。
实验结果如附图14和15所示,抗体IMAB362,嵌合抗体1E7,1B6均对BXPC3~18.2皮下移植瘤模型肿瘤体积有一定的抑制作用,抗体IMAB362和1B6抑制肿瘤生长效果相当,TGI为36~39%,1E7抑制BXPC3~18.2肿瘤生长效果较佳,TGI=51%,且与对照组相比,差异有统计学意义;抗体IMAB362和1B6,1E7均对荷瘤小鼠体重增长无影响。
在本说明书的描述中,参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中,对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且,描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外,在不相互矛盾的情况下,本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例,可以理解的是,上述实施例是示例性的,不能理解为对本发明的限制,本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。
Claims (29)
1.一种能够特异性识别CLDN18.2的抗体或其抗原结合片段,其特征在于,所述抗体包括轻链可变区、重链可变区、轻链框架区、重链框架区,
其中,所述轻链可变区的CDR1、CDR2、CDR3序列分别如SEQ ID NO: 1、2和3所示,所述重链可变区的CDR1、CDR2、CDR3序列分别如SEQ ID NO: 4、5和6所示,
或者,
所述轻链可变区的CDR1、CDR2、CDR3序列分别如SEQ ID NO: 7、8和9所示,所述重链可变区的CDR1、CDR2、CDR3序列分别如SEQ ID NO:10、11和12所示。
2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段,其特征在于,所述重链框架区序列和轻链框架区序列的至少之一的至少一部分来自于鼠源抗体、灵长目源抗体或其突变体的至少之一。
3.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段,其特征在于,所述抗体具有如SEQ IDNO:15所示氨基酸序列的轻链可变区和如SEQ ID NO:17所示氨基酸序列的重链可变区。
4.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段,其特征在于,所述抗体具有如SEQ IDNO:16所示氨基酸序列的轻链可变区和如SEQ ID NO:18所示氨基酸序列的重链可变区。
5.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段,其特征在于,所述抗体含有重链恒定区和轻链恒定区的至少之一,所述重链恒定区和轻链恒定区的至少之一的至少一部分来自于鼠源抗体、灵长目源抗体或其突变体的至少之一。
6.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段,其特征在于,所述抗体的轻链恒定区和重链恒定区均来自于鼠源IgG抗体或其突变体。
7.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段,其特征在于,具有如SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:32或SEQ ID NO:34所示氨基酸序列的轻链。
8.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段,其特征在于,具有如SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:31或SEQ ID NO:33所示氨基酸序列的重链。
9.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段,其特征在于,所述抗体为单链抗体、嵌合抗体、多聚体抗体、CDR移植抗体。
10.根据权利要求9所述的抗体或其抗原结合片段,其特征在于,所述抗体为单链抗体,所述单链抗体具有SEQ ID NO:23或SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列。
11.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段,其特征在于,所述抗原结合片段包括Fab片段、(Fab)2片段、scFv-Fc融合蛋白、scFv-Fv融合蛋白、Fv片段中至少之一。
12.一种嵌合抗原受体,其特征在于,包括:
胞外区,所述胞外区包括单链抗体的重链可变区和轻链可变区,其中,所述轻链可变区和所述重链可变区是根据权利要求1~11任一项中所限定的抗体或其抗原结合片段确定的。
13.根据权利要求12所述嵌合抗原受体,其特征在于,进一步包括跨膜区和胞内区,其中所述跨膜区包括CD8跨膜区,所述胞内区包括ICOS胞内段、4-1BB及CD3ζ链。
14.根据权利要求13所述嵌合抗原受体,其特征在于,所述ICOS胞内段的N端与所述CD8跨膜区的C端相连,所述ICOS胞内段的C端与所述4-1BB胞内段的N端相连,所述4-1BB胞内段的C端与所述CD3ζ链的N端相连。
15.一种免疫细胞,其特征在于,所述免疫细胞表达权利要求12所述的嵌合抗原受体。
16.根据权利要求15所述的免疫细胞,其特征在于,所述免疫细胞包括T淋巴细胞、DC细胞、NK细胞的至少之一。
17.一种核酸分子,其特征在于,所述核酸分子编码权利要求1~11任一项所述的抗体或其抗原结合片段或者权利要求12所述的嵌合抗原受体。
18.根据权利要求17所述的核酸分子,其特征在于,所述核酸分子为DNA。
19.一种表达载体,其特征在于,携带权利要求17或18所述的核酸分子。
20.根据权利要求19所述的表达载体,其特征在于,所述表达载体为真核表达载体或者病毒。
21.根据权利要求20所述的表达载体,其特征在于,所述病毒为慢病毒。
22.一种重组细胞,其特征在于,所述重组细胞:
携带权利要求17或18所述的核酸分子,或者
权利要求19-21任一项所述的表达载体,
表达所述核酸分子编码权利要求1~11任一项所述的抗体或其抗原结合片段或者权利要求12所述的嵌合抗原受体。
23.根据权利要求22所述的重组细胞,其特征在于,所述重组细胞为真核细胞。
24.根据权利要求21所述的重组细胞,其特征在于,所述重组细胞为哺乳动物细胞。
25.一种药物组合物,其特征在于,含有:
权利要求1~11任一项所述的抗体或其抗原结合片段;
权利要求12~14任一项所述的嵌合抗原受体;
权利要求15或16所述的免疫细胞;
权利要求17或18所述的核酸分子;
权利要求19-21任一项所述的表达载体;或者
权利要求22~24任一项所述的重组细胞。
26.权利要求1~11任一项所述的抗体或其抗原结合片段、权利要求12~14任一项所述的嵌合抗原受体、权利要求15或16所述的免疫细胞、权利要求17或18所述的核酸分子、权利要求19-21任一项所述的表达载体、权利要求22~24任一项所述的重组细胞或权利要求25所述的药物组合物在制备药物中的用途,所述药物用于诊断、治疗或预防CLDN18.2相关疾病,所述相关疾病包括表达CLDN18.2的实体瘤,所述实体瘤包括胃癌、胰腺癌、食管癌和肺癌。
27.一种检测CLDN18.2的试剂盒,其特征在于,包括权利要求1~11任一项所述的抗体。
28.权利要求1~11任一项所述的抗体或其抗原结合片段、权利要求12~14任一项所述的嵌合抗原受体、权利要求15或16所述的免疫细胞、权利要求17或18所述的核酸分子、权利要求19-21任一项所述的表达载体、权利要求22~24任一项所述的重组细胞在制备试剂盒中的用途,所述试剂盒用于检测CLDN18.2或者诊断CLDN18.2相关的疾病,所述相关疾病包括表达CLDN18.2的实体瘤,所述实体瘤包括胃癌、胰腺癌、食管癌和肺癌。
29.权利要求1~11任一项所述的抗体或其抗原结合片段在筛选抗体中的用途,所述筛选抗体识别CLDN18.2中肽段A之外的表位。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN2020113640336 | 2020-11-27 | ||
CN202011364033 | 2020-11-27 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN114560941A CN114560941A (zh) | 2022-05-31 |
CN114560941B true CN114560941B (zh) | 2024-01-16 |
Family
ID=81712708
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202111421855.8A Active CN114560941B (zh) | 2020-11-27 | 2021-11-26 | Cldn18.2的抗体及其应用 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP4251652A1 (zh) |
JP (1) | JP2023550998A (zh) |
KR (1) | KR20230113578A (zh) |
CN (1) | CN114560941B (zh) |
AU (1) | AU2021388650A1 (zh) |
CA (1) | CA3199212A1 (zh) |
WO (1) | WO2022111633A1 (zh) |
Families Citing this family (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN116789822A (zh) * | 2022-03-18 | 2023-09-22 | 广东东阳光药业股份有限公司 | Claudin18.2人源化抗体及其应用 |
CN114836388A (zh) * | 2022-06-07 | 2022-08-02 | 江苏亲科生物研究中心有限公司 | Claudin18.2单克隆抗体及其制备方法和用途 |
CN115960229B (zh) * | 2022-09-28 | 2024-02-09 | 华润生物医药有限公司 | 一种cldn18.2抗体及其应用 |
CN115873111A (zh) * | 2022-12-19 | 2023-03-31 | 华润生物医药有限公司 | 一种cldn18.2抗体及其应用 |
CN116082523B (zh) * | 2022-12-30 | 2023-10-13 | 邦恩泰(山东)生物医药科技集团股份有限公司 | 一种靶向Claudin18.2的嵌合抗原受体及其应用 |
CN116143924A (zh) * | 2023-02-07 | 2023-05-23 | 深圳市先康达生命科学有限公司 | 靶向人Claudin18.2蛋白的人源化单克隆抗体及其应用 |
CN116536274B (zh) * | 2023-06-20 | 2023-09-19 | 上海精翰生物科技有限公司 | Claudin18.2表达稳转细胞株、制备方法及应用 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA2992306A1 (en) * | 2015-08-28 | 2017-03-09 | Amunix Operating Inc. | Chimeric polypeptide assembly and methods of making and using the same |
CN111868083A (zh) * | 2018-01-15 | 2020-10-30 | 桑昆血液供给基金会 | 因子h增强抗体及其用途 |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP3266311B2 (ja) | 1991-05-02 | 2002-03-18 | 生化学工業株式会社 | 新規ポリペプチドおよびこれを用いる抗hiv剤 |
EP2547695B1 (en) * | 2010-03-16 | 2018-05-09 | Biontech Protein Therapeutics GmbH | Tumor vaccination involving a humoral immune response against self-protein cldn18.2 |
US9163090B2 (en) * | 2012-05-07 | 2015-10-20 | Cellerant Therapeutics, Inc. | Antibodies specific for CLL-1 |
MX2021004588A (es) * | 2018-10-22 | 2022-01-18 | Shanghai Genbase Biotechnology Co Ltd | Anticuerpo anti-cldn18.2 y sus usos. |
JP2022515487A (ja) * | 2018-12-28 | 2022-02-18 | ナンジン、ジェンスクリプト、バイオテック、カンパニー、リミテッド | クローディン18.2結合部分およびその利用 |
CN109762067B (zh) * | 2019-01-17 | 2020-02-28 | 北京天广实生物技术股份有限公司 | 结合人Claudin 18.2的抗体及其用途 |
JP2022528061A (ja) * | 2019-04-01 | 2022-06-08 | ジエンス ヘンルイ メデイシンカンパニー リミテッド | 抗クローディン18.2抗体及びその用途 |
-
2021
- 2021-11-26 KR KR1020237021077A patent/KR20230113578A/ko unknown
- 2021-11-26 CA CA3199212A patent/CA3199212A1/en active Pending
- 2021-11-26 WO PCT/CN2021/133514 patent/WO2022111633A1/en active Application Filing
- 2021-11-26 JP JP2023532401A patent/JP2023550998A/ja active Pending
- 2021-11-26 CN CN202111421855.8A patent/CN114560941B/zh active Active
- 2021-11-26 EP EP21897133.1A patent/EP4251652A1/en active Pending
- 2021-11-26 AU AU2021388650A patent/AU2021388650A1/en active Pending
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA2992306A1 (en) * | 2015-08-28 | 2017-03-09 | Amunix Operating Inc. | Chimeric polypeptide assembly and methods of making and using the same |
CN111868083A (zh) * | 2018-01-15 | 2020-10-30 | 桑昆血液供给基金会 | 因子h增强抗体及其用途 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP4251652A1 (en) | 2023-10-04 |
JP2023550998A (ja) | 2023-12-06 |
AU2021388650A1 (en) | 2023-06-22 |
WO2022111633A1 (en) | 2022-06-02 |
CN114560941A (zh) | 2022-05-31 |
KR20230113578A (ko) | 2023-07-31 |
CA3199212A1 (en) | 2022-06-02 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN114560941B (zh) | Cldn18.2的抗体及其应用 | |
JP7091447B2 (ja) | 新型なscFvアミノ酸配列、それを含むキメラ抗原受容体、およびその使用 | |
CN110305210B (zh) | 新型抗体分子、其制备方法及其用途 | |
CN108124445B (zh) | Ctla4抗体、其药物组合物及其用途 | |
JP2020122013A (ja) | Cd3イプシロンおよびbcmaに対する二特異性抗体 | |
WO2017049452A1 (zh) | 抗人cd137的完全人抗体及其应用 | |
EP3237446A1 (en) | Anti-pd-1 antibodies | |
WO2022045247A1 (ja) | 抗切断型変異calr-cd3二重特異性抗体及び医薬組成物 | |
CN111349163A (zh) | 针对cd123的单克隆抗体 | |
JP7365654B2 (ja) | 抗cldn4-抗cd137二重特異性抗体 | |
CN116323676A (zh) | 抗Claudin18.2和CD3的双特异性抗体以及其用途 | |
CN116635071A (zh) | 抗tspan8-抗cd3双特异性抗体和抗tspan8抗体 | |
CN116731175B (zh) | 一种抗cd47的纳米抗体及其制备方法和应用 | |
WO2022042715A1 (zh) | 靶向PD-L1和TGFβ的双功能融合蛋白及其制备方法与应用 | |
CA3226441A1 (en) | B7-h3 antibody and use thereof | |
WO2022093694A1 (en) | Polypeptides targeting hpv peptide-mhc complexes and methods of use thereof | |
WO2023185256A1 (zh) | 特异性结合cd7的抗体及其在制备嵌合抗原受体中的应用 | |
CN114316047B (zh) | 一组pd-1单克隆抗体及其医药用途 | |
WO2023134766A1 (zh) | 靶向cd25的抗体及其制备方法和应用 | |
KR102548256B1 (ko) | Cd22에 특이적인 항체 및 이의 용도 | |
CN111704668B (zh) | 抗ccr4抗体及其在治疗癌症中的应用 | |
CN115819582A (zh) | Pvrig的抗体或其抗原结合片段及其应用 | |
WO2024044779A2 (en) | Antibodies and chimeric antigen receptors specific for delta-like ligand 3 (dll3) | |
EP3904383A1 (en) | Anti-ox40 monoclonal antibody and application thereof | |
JP2024503803A (ja) | ムチン1に特異的なポリペプチドおよびその利用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
CB02 | Change of applicant information |
Address after: 523808 No.1, Gongye North Road, Songshanhu Park, Dongguan City, Guangdong Province Applicant after: Guangdong Dongyangguang Pharmaceutical Co.,Ltd. Address before: 523808 No.1, Gongye North Road, Songshanhu Park, Dongguan City, Guangdong Province Applicant before: SUNSHINE LAKE PHARMA Co.,Ltd. |
|
CB02 | Change of applicant information | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |