TW202309083A

TW202309083A - 抗ｃｌｄｎ４－抗ｃｄ１３７雙特異性抗體

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Publication number: TW202309083A
Application number: TW111115193A
Authority: TW
Inventors: 天田由幸; 由利正利; 八木繁典; 佐竹佳樹; 平山和徳; 白井宏樹; 佐佐木博己; 千脇史子; 小松将之
Original assignee: 日商安斯泰來製藥股份有限公司; 國立研究開發法人國立癌症研究中心
Priority date: 2021-04-22
Filing date: 2022-04-21
Publication date: 2023-03-01
Also published as: EP4327823A1; WO2022224997A1; CL2023003100A1; CA3217637A1; BR112023021950A2; JP7365654B2; CN117222672A; JPWO2022224997A1; ECSP23087918A; AR125398A1; CR20230490A; US20240209108A1; CO2023015630A2; MX2023012432A; DOP2023000230A; JP2023182689A; IL307744A; KR20230171465A; AU2022262542A1

Abstract

本發明之課題在於提供一種可使用於癌症之治療之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體。使用鍵結於CLDN4之抗CLDN4抗體與鍵結於CD137之抗CD137抗體所製作之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體，係具有對於CD137之促效劑作用，促進T細胞之干擾素γ產生，並對於在細胞表面表現CLDN4之癌細胞顯示出細胞傷害活性。此外，係顯示抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體可安全地投予給猴。因此，抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體可使用於人類之癌症之治療。

Description

抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７雙特異性抗體

本發明係關於一種抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體，其係被期待可作為用於癌症之治療之醫藥組成物之有效成分。

Claudin-4(CLDN4)係屬於密連蛋白家族之4跨膜蛋白質。其係表現於上皮細胞或內皮細胞，且係作為構成緊密型連結之主要分子發揮重要的作用。CLDN4係被認為在大腸癌、膀胱癌、卵巢癌等的癌症組織亦具有高度的表現，故係有抗CLDN4抗體可應用於癌症之治療或診斷之可能性之教示(專利文獻1、非專利文獻1)。此外，在動物模式中，藉由抗CLDN4抗體與抗Epidermal growth factor receptor(EGFR)抗體之併用亦顯示出其所產生之抗腫瘤效果(非專利文獻2)。

Cluster of Differentiation 137(CD137、別名4-1BB)係屬於Tumor Necrosis Factor Receptor Superfamily (TNFRSF)之分子，且係有報導其係表現於T細胞、B細胞、natural killer(NK)細胞、樹狀細胞、嗜酸性球、肥大細胞等的免疫細胞表面。尤其，T細胞上之CD137係已知與抗原提示細胞上之CD137配體鍵結，作為共刺激分子參與T細胞之活性化及生存(非專利文獻3)。抗CD137促效劑抗體在動物模式中，係顯示出透過腫瘤微小環境內之免疫細胞之活性化所產生之抗腫瘤效果(非專利文獻4)。屬於抗CD137促效劑抗體之Urelumab在臨床試驗中顯示出治療效果，然而亦有報導指出其係引起肝疾病之副作用(非專利文獻5)。

作為可以在低抗體濃度下獲得癌細胞選擇性細胞傷害活性之劃時代性的方法，已有報導各種抗體形式之雙特異性T細胞召集抗體(bispecific T-cell-recruiting antibodies)。雙特異性T細胞召集抗體係包含抗癌細胞表面表現之腫瘤關聯抗原(Tumor-Associated Antigens；TAA)之抗體及鍵結於T細胞之抗體之雙特異性抗體，該等抗體對於T細胞媒介性免疫療法之效果係正受到探討(非專利文獻6)。抗CD3抗體係被大量使用作為鍵結於T細胞之抗體，現在亦正研究開發各種對於TAA之雙特異性T細胞召集抗體。

此外，近年來，抗CD137及TAA之雙特異性T細胞召集抗體之研究亦正積極地在進行。識別屬於TAA之Glypican3(GPC3)、Human Epidermal Growth Factor Receptor Type2(HER2)、Programmed Cell Death-Ligand1 (PD-L1)、Fibroblast Activation Protein(FAP)之抗GPC3-抗CD137雙特異性抗體、抗HER2-抗CD137雙特異性抗體、抗PDL1-抗CD137雙特異性抗體、抗FAP-抗CD137雙特異性抗體等的研究係正進行(專利文獻2及3、非專利文獻7~9)。然而，到現在為止皆未有關於抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體之報告。 [先前技術文獻] [專利文獻]

[專利文獻1]國際公開編號2008/114733號 [專利文獻2]國際公開編號2015/156268號 [專利文獻3]國際公開編號2016/177802號 [非專利文獻]

[非專利文獻1]Cancer Science、2009: 100(9): p.1623- 1630 [非專利文獻2]Oncotarget、2018: 9(100): p.37367-37378 [非專利文獻3]Cancer Science、2020: 111(5): p.1461-1467 [非專利文獻4]Cancer Immunology Immunotherapy、2012: 61(5): p.1721-1733 [非專利文獻5]Clinical Cancer Research、2017: 23(8): p.1929-1936 [非專利文獻6]mAbs、2017: 9(2): p.182-212 [非專利文獻7]Clinical Cancer Research、2019: 25(19): p.5878-5889 [非專利文獻8]Clinical Cancer Research、2020: 26(15): p.4154-4167 [非專利文獻9]Journal for Immunotherapy of Cancer、2020; 8(2): e000238

[發明所欲解決之課題]

本發明之課題在於提供一種可用於癌症之治療之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體。 [用於解決課題之手段]

本發明者們係探索選擇性地鍵結於表現於腹膜轉移癌細胞之抗原之抗體，取得屬於抗CLDN4抗體之3D11(實施例1及2)。使用了3D11及抗CD3抗體之雙特異性T細胞召集抗體係被明確判斷不可使用於癌症患者之治療(參考例)。因此，使用屬於3D11及公知之抗CLDN4抗體之KM3900抗體，嘗試取得與抗CD137抗體之雙特異性T細胞召集抗體(實施例3及4)。所取得之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係鍵結於CLDN4及CD137(實施例5)，於in vitro中，促進T細胞之干擾素γ產生，並對於在細胞表面表現CLDN4之癌細胞顯示出細胞傷害活性(實施例6)。此外，係確認所取得之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體在in vivo老鼠模型中發揮抗腫瘤作用(實施例7-1)、在食蟹猴中，亦可安全地使用 (實施例7-2)。有本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體對於癌症之治療係為有用之教示。

亦即，本發明係關於以下之[1]~[32]。 [1] 一種雙特異性抗體，其係包含抗CLDN4抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域，以及抗CD137抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體，其中，抗CLDN4抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域為以下之(a)或(b)中之任一者： (a)包含由序列編號2之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號2之胺基酸編號50至66之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號2之胺基酸編號99至114之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域，以及包含由序列編號4之胺基酸編號24至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號4之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號4之胺基酸編號90至98之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域；或 (b)包含由序列編號6之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號6之胺基酸編號50至66之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號6之胺基酸編號99至112之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域，以及包含由序列編號8之胺基酸編號24至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號8之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號8之胺基酸編號90至98之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域。 [2] 如[1]中所記載之雙特異性抗體，其中，抗CLDN4抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域為以下之(a)或(b)中之任一者： (a)由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域；或 (b)由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域。 [3] 如[1]或[2]中之任一項所記載之雙特異性抗體，其係包含IgG抗體，該IgG抗體係由包含抗CLDN4抗體之重鏈可變區域之重鏈及包含抗CLDN4抗體之輕鏈可變區域之輕鏈所構成之IgG抗體(抗CLDN4 IgG抗體)。 [4] 如[3]中所記載之雙特異性抗體，其係於抗CLDN4 IgG抗體之Fc領域包含LALA突變(L234A及L235A(此處，前述突變位置係依據人類Igγ1恆定區域中之EU編號之胺基酸位置))。 [5] 如[3]中所記載之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體，其係於抗CLDN4 IgG抗體之Fc領域包含P331G突變(此處，前述突變位置係依據人類Igγ1恆定區域中之EU編號之胺基酸位置)。 [6] 如[3]中所記載之雙特異性抗體，其中，抗CLDN4 IgG抗體之Fc領域係包含LALA突變及P331G突變。 [7] 如[1]~[6]中之任一項所記載之雙特異性抗體，其中，抗CD137抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域為以下之(a)~(d)中之任一者： (a)包含由序列編號10之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號10之胺基酸編號50至66之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號10之胺基酸編號99至107之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域，以及包含由序列編號12之胺基酸編號24至34之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號12之胺基酸編號50至56之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號12之胺基酸編號89至98之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域； (b)包含由序列編號14之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號14之胺基酸編號50至65之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號14之胺基酸編號98至107之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域，以及包含由序列編號16之胺基酸編號23至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號16之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號16之胺基酸編號90至100之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域； (c)包含由序列編號18之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號18之胺基酸編號50至65之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號18之胺基酸編號98至107之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域，以及包含由序列編號20之胺基酸編號23至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號20之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號20之胺基酸編號90至100之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域；或 (d)包含由序列編號22之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號22之胺基酸編號50至65之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號22之胺基酸編號98至110之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域，以及包含由序列編號24之胺基酸編號23至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號24之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號24之胺基酸編號90至100之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域。 [8] 如[1]~[7]中之任一項所記載之雙特異性抗體，其中，抗CD137抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域為以下之(a)~(i)中之任一者： (a)由序列編號10之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號12之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域； (b)由序列編號14之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號16之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域； (c)由序列編號18之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號20之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域； (d)由序列編號22之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號24之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域 (e)由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域； (f)由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域； (g)由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域及由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域； (h)由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域；或 (i)由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域。 [9] 如[7]或[8]中之任一項所記載之雙特異性抗體，其中，包含抗CD137單鏈可變區域片段(抗CD137scFv)，且該抗CD137單鏈可變區域片段(抗CD137scFv)係包含抗CD137抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域。 [10] 如[9]中所記載之雙特異性抗體，其中，抗CD137scFv為以下之(a)~(e)中之任一者： (a)由序列編號26之胺基酸編號1至242之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv； (b)由序列編號28之胺基酸編號1至244之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv； (c)由序列編號30之胺基酸編號1至249之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv； (d)由序列編號32之胺基酸編號1至244之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv；或 (e)由序列編號34之胺基酸編號1至247之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv。 [11] 如[9]或[10]中之任一項所記載之雙特異性抗體，其係包含抗CLDN4 IgG抗體及抗CD137scFv，其中，抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於抗CLDN4 IgG抗體之重鏈或輕鏈羧基末端。 [12] 一種抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體，其係以下之(a)~(j)中之任一者： (a)一雙特異性抗體，其係包含：包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端； (b)一雙特異性抗體，其係包含：包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端； (c)一雙特異性抗體，其係包含：包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域及由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端； (d)一雙特異性抗體，其係包含：包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端； (e)一雙特異性抗體，其係包含：包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端； (f)一雙特異性抗體，其係包含：包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端； (g)一雙特異性抗體，其係包含：包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端； (h)一雙特異性抗體，其係包含：包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域及由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端； (i)一雙特異性抗體，其係包含：包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端；或 (j)一雙特異性抗體，其係包含：包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端。 [13] 如[11]或[12]中之任一項所記載之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體，其中，連結子為GS連結子。 [14] 如[13]中所記載之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體，其中，GS連結子為由序列編號54之胺基酸序列所構成之連結子。 [15] 一種抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體，其係以下之(a)或(b)中之任一者： (a)一雙特異性抗體，其係包含：由序列編號36之胺基酸編號1至705之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽，以及由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈；或 (b)一雙特異性抗體，其係包含：由序列編號38之胺基酸編號1至712之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽以及由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈。 [16] 如[1]~[15]中之任一項所記載之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體，其係經轉譯後修飾。 [17] 如[16]中所記載之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體，其中，轉譯後修飾為重鏈可變區域N末端之焦麩胺酸化及/或重鏈C末端離胺酸缺失。 [18] 一種多核苷酸，其係包含由下述(a)~(d)所成之群所選出之編碼抗CLDN4抗體之重鏈可變區域或輕鏈可變區域之鹼基序列： (a)包含編碼由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (b)包含編碼由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (c)包含編碼由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸；或 (d)包含編碼由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸。 [19] 一種多核苷酸，其係包含由下述(a)~(r)所成之群所選出之編碼抗CD137抗體之重鏈可變區域或輕鏈可變區域之鹼基序列： (a)包含編碼由序列編號10之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (b)包含編碼由序列編號12之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (c)包含編碼由序列編號14之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (d)包含編碼由序列編號16之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (e)包含編碼由序列編號18之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (f)包含編碼由序列編號20之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (g)包含編碼由序列編號22之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (h)包含編碼由序列編號24之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (i)包含編碼由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (j)包含編碼由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (k)包含編碼由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (l)包含編碼由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (m)包含編碼由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (n)包含編碼由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (o)包含編碼由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (p)包含編碼由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (q)包含編碼由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸；或 (r)包含編碼由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸。 [20] 一種多核苷酸，其係包含選自由下述(a)~(e)所成之群之編碼抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸： (a)包含編碼由序列編號26之胺基酸編號1至242之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸； (b)包含編碼由序列編號28之胺基酸編號1至244之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸； (c)包含編碼由序列編號30之胺基酸編號1至249之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸； (d)包含編碼由序列編號32之胺基酸編號1至244之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸；或 (e)包含編碼由序列編號34之胺基酸編號1至247之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸。 [21] 一種由下述(a)~(e)所成之群所選出之多核苷酸，其係用於如[15]中所記載之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體之生產： (a)包含編碼由序列編號36之胺基酸編號1至705之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸； (b)包含編碼由序列編號38之胺基酸編號1至712之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸； (c)包含編碼由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列之多核苷酸； (d)包含編碼由序列編號36之胺基酸編號1至705之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸，以及包含編碼由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列之多核苷酸；或 (e)包含編碼由序列編號38之胺基酸編號1至712之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸，以及包含編碼由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列之多核苷酸。 [22] 一種表現載體，其係包含如[18]~[21]中之任一項所記載之多核苷酸。 [23] 一種宿主細胞，其係經過如[22]所記載之表現載體進行轉形者。 [24] 一種宿主細胞，其係包含由以下之(a)~(dd)所成之群所選出之多核苷酸： (a)包含編碼由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (b)包含編碼由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (c)包含編碼由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (d)包含編碼由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸。 (e)包含編碼由序列編號10之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (f)包含編碼由序列編號12之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (g)包含編碼由序列編號14之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (h)包含編碼由序列編號16之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (i)包含編碼由序列編號18之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (j)包含編碼由序列編號20之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (k)包含編碼由序列編號22之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (l)包含編碼由序列編號24之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸。 (m)包含編碼由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (n)包含編碼由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (o)包含編碼由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (p)包含編碼由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (q)包含編碼由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (r)包含編碼由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (s)包含編碼由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (t)包含編碼由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (u)包含編碼由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (v)包含編碼由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (w)包含編碼由序列編號26之胺基酸編號1至242之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸； (x)包含編碼由序列編號28之胺基酸編號1至244之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸； (y)包含編碼由序列編號30之胺基酸編號1至249之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸； (z)包含編碼由序列編號32之胺基酸編號1至244之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸； (aa)包含編碼由序列編號34之胺基酸編號1至247之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸。 (bb)包含編碼由序列編號36之胺基酸編號1至705之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸； (cc)包含編碼由序列編號38之胺基酸編號1至712之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸；或 (dd)包含編碼由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列之多核苷酸。 [25] 一種宿主細胞，其係包含以下之(a)或(b)中之任一項之多核苷酸： (a)包含編碼由序列編號36之胺基酸編號1至705之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸，以及包含編碼由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列之多核苷酸；或 (b)包含編碼由序列編號38之胺基酸編號1至712之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸，以及包含編碼由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列之多核苷酸。 [26] 一種抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體之生產方法，其中包含培養如[23]~[25]中之任一項所記載之宿主細胞之步驟。 [27] 一種醫藥組成物，其係包含如[1]~[17]中之任一項所記載之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體及藥學上可容許之賦形劑。 [28] 如[1]~[17]中之任一項所記載之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體，其係使用於癌症之治療。 [29] 如[27]中所記載之醫藥組成物，其係用於癌症之治療。 [30] 一種治療癌症之方法，其係包含將如[1]~[17]中之任一項所記載之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體之治療有效量投予至對象之步驟。 [31] 如[1]~[17]中之任一項所記載之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體之使用，其係用於用於癌症之治療之醫藥組成物之製造中。 [發明之效果]

本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係鍵結於癌症抗原之CLDN4與表現於T細胞等的免疫細胞之表面之CD137之雙方，係藉由使癌細胞周邊之免疫細胞進行活性化，來增強對於癌細胞之殺傷作用者。本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體或包含前述抗體之醫藥組成物係可使用於各種癌症之治療之用途。

以下係針對本發明進行詳述。＜定義＞本說明書之用語，除非在下文中有特別定義，否則係以本技術領域中具有通常知識者通常所使用之意味來使用。

抗體(或免疫球蛋白)係以具有左右對稱Y字型之構造之4條鏈構造為基本構造之糖蛋白質，且該左右對稱Y字型之構造係由具有單一之序列之重鏈2條，及具有單一之序列之輕鏈2條所構成。抗體係存在有IgG、IgM、IgA、IgD及IgE等之5個種類。抗體分子之基本構造在各種類中係共通，分子量5萬~7萬之重鏈2條及2萬~3萬之輕鏈2條藉由雙硫鍵及非共價鍵而鍵結，且形成由分子量15萬~19萬之Y字型之4條鏈構造所構成之抗體分子。重鏈係由通常包含約440個之胺基酸之多肽鏈所構成，且依種類而具有不同特徵的構造，對應於IgG、IgM、IgA、IgD、IgE係各自被稱為Igγ、Igμ、Igα、Igδ、Igε。此外，IgG中存在有IgG1、IgG2、IgG3、IgG4等之次種類，各別對應之重鏈係被稱為Igγ1、Igγ2、Igγ3、Igγ4。輕鏈係由通常包含約220個之胺基酸之多肽鏈所構成，已知有λ型及κ型之2種，分別稱為Igλ、Igκ。前述2種輕鏈皆可與任一種類之重鏈配對。

抗體分子之鏈內雙硫鍵於重鏈中存在有4個(Igμ、Igε中為5個)、輕鏈中存在有2個，且胺基酸每100~110個殘基形成1個環(loop)。該等立體構造於各環間均類似，稱為構造單位或領域。位於重鏈、輕鏈之N末端之領域係被稱為可變區域，即使是由同種動物之同一類(class)(或次類(subclass))所產生出之抗體，亦具有多樣的胺基酸序列，係已知參與抗體與抗原之鍵結特異性鍵結。比可變區域更下游之C末端側之領域之胺基酸序列在各類或次類中係幾乎固定，被稱為恆定區域。重鏈自N末端起向C末端係具有重鏈可變區域(VH)及重鏈恆定區域(CH)。CH自N末端側起可分為CH1領域、CH2領域，及CH3領域之3個領域。輕鏈自N末端起向C末端係具有輕鏈可變區域(VL)及輕鏈恆定區域(CL)。

存在於VH及VL之3個互補決定區域(CDR)之胺基酸序列之變化係非常的大，對於可變區域之可變化性有所貢獻。CDR係由5~10胺基酸殘基所構成之領域，於重鏈與輕鏈之各自之N末端依序存在有CDR1、CDR2、CDR3，且係與抗原接觸形成抗體鍵結部位。重鏈之CDR比輕鏈之CDR具有更大的對於抗原鍵結之貢獻，CDR1~3之中，已知CDR3之貢獻係最高。另一方面，可變區域之CDR以外之部分係被稱為骨架領域(FR)，係由FR1~4構成，胺基酸序列之變化相較而言係少。

若將抗體以蛋白質分解酵素之木瓜酵素處理，則可獲得3個抗體片段。N末端側的2個片段係被稱為Fab(抗原鍵結片段、Fragment，antigen binding)領域。所謂Fab領域，係指由重鏈之VH、CH1領域及樞紐領域之一部份，以及輕鏈(VL及CL)所構成之領域，且係以構成該Fab領域之VH及VL(抗原鍵結部位)與抗原鍵結。又，C末端側之片段係被稱為Fc(可結晶化片段、Fragment，crystallizable)領域。

本說明書中，所謂「IgG抗體」，係指具有由2個Fab領域與Fc領域所構成之Y字型之構造之抗體。於一實施形態中，IgG抗體之2個Fab領域係由同一之序列所構成之Fab領域。於一實施形態中，IgG抗體之2個Fab領域係由不同序列所構成之Fab領域。

本說明書中，「抗原鍵結片段」及「片段抗體」係可相互互換地使用，且係指包含免疫球蛋白分子之重鏈可變區域及輕鏈可變區域、具有抗原結合活性之至少包含1個多肽鏈之分子。作為代表性的抗原鍵結片段，可舉出單鏈可變區域片段(scFv)、Fab片段、Fab’片段、F(ab’) ₂片段。本說明書中，所謂「scFv」，係指由藉由連結子連結之VH及VL所構成之一價之抗原鍵結片段。Fab片段為由包含輕鏈及重鏈之VH、CH1領域及樞紐領域之一部份之片段所構成之一價之抗原鍵結片段。Fab’片段係由包含輕鏈及重鏈之VH、CH1領域及樞紐領域之一部份之片段所構成之一價之抗原鍵結片段，且該樞紐領域之部分係包含曾構成重鏈間雙硫鍵之半胱胺酸殘基。F(ab’) ₂片段為以雙硫鍵連接在一起之Fab’片段之二價之抗原鍵結片段。所謂一價，係意指包含1個抗原鍵結部位，所謂二價係意指包含2個抗原鍵結部位。

本說明書中，所謂「雙特異性抗體」，係指由對於相異的抗原特異地鍵結之2個抗體或抗原鍵結片段所構成，且對於各抗原具有結合活性之抗體分子。作為雙特異性抗體，對於本發明技術領域中具有通常知識者來說已知有各式各樣的構造之雙特異性抗體(非專利文獻6)。本說明書中所使用之用語「抗體」中，除非上下文中有特別限制，否則係包含全長之抗體(各種免疫球蛋白、尤其是IgG抗體)、抗原鍵結片段，及每個構造之雙特異性抗體。

本說明書中，IgG型之抗CLDN4抗體係稱為「抗CLDN4 IgG抗體」。

本說明書中，所謂「人類抗體」，係表示具有人類免疫球蛋白胺基酸序列之抗體。本說明書中，「人源化抗體」係表示CDR以外之胺基酸殘基之一部份、大部分、或全部經源自人類免疫球蛋白分子之胺基酸殘基取代之抗體。人源化之方法係未受到特別限定，然而，例如，可參照美國專利第5225539號、美國專利第6180370號等來製作人源化抗體。

本說明書中所使用之抗體之胺基酸殘基編號係可藉由指定Kabat編號或EU編號(Kabat等、Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed, 1991, NIH Publication No.91-3242)，依據該等的編號系統來進行規定。

本說明書中，所謂「連結」或「被連結」，係意指複數成分(例如，Fab領域及Fc領域)透過直接或仲介物(例如，胜肽連結子)來進行鍵結的意思。本說明書中，所謂「胜肽連結子」，係意指為了連結複數成分而被使用之可藉由基因工程的手法導入之1個以上的任意之胺基酸序列。本發明中所使用之胜肽連結子之長度係未受到特別限定，本發明技術領域中具有通常知識者係可依據目的適宜地選擇。

本說明書中，所謂「同一性」，係指使用EMBOSS Needle(Nucleic Acids Res.、2015、Vol.43、pW580-W584)，藉由所準備之預設之參數所獲得之Identity之值。前述之參數係如同下述。 Gap Open Penalty = 10 Gap Extend Penalty = 0.5 Matrix = EBLOSUM62 End Gap Penalty = false

＜本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體＞本發明係提供一種鍵結於CLDN4及CD137之雙特異性抗體(亦稱為「抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體」)。本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係包含抗CLDN4抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域，以及抗CD137抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域。本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體中係包含包含抗CLDN4 IgG抗體與抗CD137抗體之scFv(亦稱為「抗CD137scFv」)之雙特異性抗體。於一實施形態中，本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係包含抗CLDN4 IgG抗體與抗CD137scFv之雙特異性抗體。

本說明書中，「抗CLDN4抗體」係可鍵結於人類CLDN4之抗體，「抗CD137抗體」係可鍵結於人類CD137之抗體。是否鍵結於人類CLDN4或人類CD137，係可使用習知的結合活性測定方法來進行確認。作為測定結合活性之方法，例如，可舉出Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay(ELISA)法、流式細胞術等的方法。ELISA法或流式細胞術係可藉由本發明技術領域中具有通常知識者通常使用之方法來實施，例如可使用實施例3或5中所記載之方法。

本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體只要係鍵結於CLDN4及CD137，則可為任何構造，例如，可舉出具有非專利文獻6中所記載之構造之雙特異性抗體。於一實施形態中，本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體可為抗CLDN4抗體之Fab領域與抗CD137抗體之Fab領域連結之接合體(conjugate)、抗CLDN4 IgG抗體及IgG型之抗CD137抗體(亦稱為「抗CD137 IgG抗體」)之接合體、抗CLDN4 IgG抗體及抗CD137抗體之抗原鍵結片段之接合體、抗CLDN4抗體之抗原鍵結片段及抗CD137 IgG抗體之接合體，或抗CLDN4抗體之抗原鍵結片段及抗CD137抗體之抗原鍵結片段之接合體。

於一實施形態中，本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係包含全長之抗CLDN4抗體及全長之抗CD137抗體。於一實施形態中，本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係包含抗CLDN4 IgG抗體及抗CD137 IgG抗體。2個抗體亦可透過連結子來連結。於一實施形態中，本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係包含全長之抗CLDN4抗體及抗CD137抗體之抗原鍵結片段。2個抗體之連結部位係未受到特別限定，係直接或透過連結子來連結。於一實施形態中，本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係包含抗CLDN4 IgG抗體及抗CD137抗體之scFv(本說明書中，係稱為「抗CD137scFv」)。於一實施形態中，本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係包含抗CLDN4 IgG抗體及抗CD137scFv，且抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端係連結抗CD137scFv之胺基末端。於一實施形態中，本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係包含抗CLDN4 IgG抗體及抗CD137scFv，且抗CLDN4抗體之輕鏈羧基末端係連結抗CD137scFv之胺基末端。於一實施形態中，本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係包含抗CLDN4 IgG抗體及抗CD137scFv，且抗CLDN4抗體之重鏈之胺基末端係連結抗CD137scFv之羧基末端。於一實施形態中，本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係包含抗CLDN4 IgG抗體及抗CD137scFv，且抗CLDN4抗體之輕鏈之胺基末端係連結抗CD137scFv之羧基末端。於一實施形態中，本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係包含抗CLDN4抗體之抗原鍵結片段及抗CD137之抗原鍵結片段。於一實施形態中，本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係包含抗CLDN4抗體之scFv及抗CD137之scFv。於一實施形態中，本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係包含抗CD137scFv。

本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體中，抗CLDN4抗體及抗CD137抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域可為源自人類抗體、源自人源化抗體，或該等之組合。於一實施形態中，本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體為人類抗體、人源化抗體，或其之組合所構成之抗體。

本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體，係包含抗CLDN4抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域，以及抗CD137抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體，其係抗CLDN4抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域為以下之(a)或(b)中之任一者之雙特異性抗體： (a)包含由序列編號2之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號2之胺基酸編號50至66之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號2之胺基酸編號99至114之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域，以及包含由序列編號4之胺基酸編號24至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號4之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號4之胺基酸編號90至98之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域；或 (b)包含由序列編號6之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號6之胺基酸編號50至66之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號6之胺基酸編號99至112之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域，以及包含由序列編號8之胺基酸編號24至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號8之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號8之胺基酸編號90至98之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域。

於一實施形態中，本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係包含以下之(a)或(b)中所記載之抗CLDN4抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域： (a)由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域；或 (b)由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域。

本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體中，作為抗CLDN4抗體，可包含IgG抗體等的全長的抗體，亦可包含Fab片段、Fab’片段、F(ab’) ₂片段或scFv等的抗原鍵結片段。

作為本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體中所包含之抗CLDN4抗體中所包含之重鏈恆定區域，可選擇Igγ、Igμ、Igα、Igδ或Igε中之任一恆定區域。作為Igγ，例如，可選自Igγ1、Igγ2、Igγ3或Igγ4。作為本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體中所包含之抗CLDN4抗體中所包含之輕鏈恆定區域，亦可選擇Igλ或Igκ中之任一恆定區域。本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體中所包含之抗CLDN4抗體為IgG抗體之情況中，於一實施形態中，該抗CLDN4抗體之重鏈及輕鏈係分別為人類Igγ1及Igκ。於一實施形態中，本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係包含全長之抗CLDN4抗體。於一實施形態中，本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體中所包含之抗CLDN4抗體為包含抗CLDN4抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域之IgG抗體(抗CLDN4 IgG抗體)。

本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體包含Fc領域之情況中，該雙特異性抗體中之Fc領域中亦可包含使抗體依存性細胞傷害活性(ADCC)或補體依存性傷害活性(CDC)降低之突變。所謂L234A，係指人類Igγ1恆定區域之胺基酸234位之白胺酸取代為丙胺酸之取代。所謂L235A，係指人類Igγ1恆定區域之胺基酸235位之白胺酸取代為丙胺酸之取代。人類Igγ1恆定區域L234A及L235A之胺基酸突變係稱為「LALA突變」。此處，前述234位及235位係依據人類Igγ1恆定區域中之EU編號之胺基酸位置。該突變係已知使抗體之ADCC或CDC降低 (Mol.Immunol.、1992、Vol.29、p.633-639；J.Immunol.、2000、Vol.164、p.4178-4184)。所謂P331G或P331S，係指人類Igγ1恆定區域之胺基酸331位之脯胺酸取代為甘胺酸或絲胺酸之取代。此處，前述331位係依據人類Igγ1恆定區域中之EU編號之胺基酸位置。該突變已知係使抗體之CDC降低(J.Immunol.、2000、Vol.164(8)、p.4178-4184)。

於一實施形態中，本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體中所包含之抗CLDN4 IgG抗體係包含包含L234A及L235A之胺基酸突變(LALA突變)之Fc領域。於一實施形態中，抗CLDN4 IgG抗體係包含包含P331G或P331S突變中之任一種之Fc領域。於一實施形態中，抗CLDN4 IgG抗體係包含包含LALA突變及P331G或P331S突變中之任一種之突變之Fc領域。

本發明者們在本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體之創造過程中，創造出新穎的抗CD137抗體或其鍵結片段(scFv)。本發明者們係確認了在僅鍵結於CD137之情況中不傳達CD137訊號，而僅在同時鍵結於CD137及CLDN4之情況中傳達CD137訊號之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體。此等的抗體在未鍵結於CLDN4之情況中係不顯示促效劑活性。另一方面，藉由抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體所造成之向CLDN4及CD137之結合，可獲得CD137訊號之傳達及T細胞之活性化。此作用係被期待可減輕在Urelumab之臨床試驗中所見到的肝毒性等，故係被期待為作為用於雙特異性抗體之抗CD137抗體之較佳特徵。

於一實施形態中，本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係包含以下之(a)~(d)中之任一項所記載之抗CD137抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域： (a)包含由序列編號10之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號10之胺基酸編號50至66之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號10之胺基酸編號99至107之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域，以及包含由序列編號12之胺基酸編號24至34之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號12之胺基酸編號50至56之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號12之胺基酸編號89至98之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域； (b)包含由序列編號14之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號14之胺基酸編號50至65之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號14之胺基酸編號98至107之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域，以及包含由序列編號16之胺基酸編號23至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號16之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號16之胺基酸編號90至100之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域； (c)包含由序列編號18之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號18之胺基酸編號50至65之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號18之胺基酸編號98至107之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域，以及包含由序列編號20之胺基酸編號23至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號20之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號20之胺基酸編號90至100之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域；或 (d)包含由序列編號22之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號22之胺基酸編號50至65之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號22之胺基酸編號98至110之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域，以及包含由序列編號24之胺基酸編號23至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號24之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號24之胺基酸編號90至100之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域。

於一實施形態中，本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係包含以下之(a)~(i)中之任一項所記載之抗CD137抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域： (a)由序列編號10之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號12之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域； (b)由序列編號14之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號16之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域； (c)由序列編號18之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號20之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域； (d)由序列編號22之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號24之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域 (e)由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域； (f)由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域； (g)由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域及由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域； (h)由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域；或 (i)由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域。

本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體中，作為抗CD137抗體，亦可包含IgG抗體等的全長之抗體，亦可包含或Fab片段、Fab’片段、F(ab’) ₂片段、scFv等的抗原鍵結片段。於一實施形態中，抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體中所包含之抗CD137抗體為抗CD137抗體之抗原鍵結片段。於一實施形態中，抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體中所包含之抗CD137抗體之抗原鍵結片段為抗CD137scFv。

於一實施形態中，本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係包含包含以下之(a)~(m)中所記載之抗CD137抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域之抗CD137scFv： (a)包含由序列編號10之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號10之胺基酸編號50至66之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號10之胺基酸編號99至107之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域，以及包含由序列編號12之胺基酸編號24至34之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號12之胺基酸編號50至56之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號12之胺基酸編號89至98之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域； (b)包含由序列編號14之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號14之胺基酸編號50至65之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號14之胺基酸編號98至107之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域，以及包含由序列編號16之胺基酸編號23至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號16之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號16之胺基酸編號90至100之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域； (c)包含由序列編號18之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號18之胺基酸編號50至65之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號18之胺基酸編號98至107之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域，以及包含由序列編號20之胺基酸編號23至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號20之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號20之胺基酸編號90至100之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域； (d)包含由序列編號22之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號22之胺基酸編號50至65之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號22之胺基酸編號98至110之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域，以及包含由序列編號24之胺基酸編號23至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號24之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號24之胺基酸編號90至100之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域； (e)由序列編號10之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號12之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域； (f)由序列編號14之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號16之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域； (g)由序列編號18之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號20之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域； (h)由序列編號22之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號24之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域 (i)由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域； (j)由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域； (k)由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域及由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域； (l)由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域；或 (m)由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域。

抗CD137scFv中，連結抗CD137抗體之重鏈可變區域與輕鏈可變區域之連結子之種類及長度係未受到特別限定，本發明技術領域中具有通常知識者係可適宜地選擇。作為連結子，亦可使用胜肽連結子。較佳長度為5胺基酸以上(上限係未受到特別限定，然而通常為30胺基酸以下，較佳為20胺基酸以下)，特佳為15胺基酸。作為連結子，例如，可使用甘胺酸-絲胺酸連結子(GS連結子)，或甘胺酸-離胺酸-脯胺酸-甘胺酸-絲胺酸連結子(GKPGS連結子)。作為這樣的連結子，例如，可舉出下列連結子。 Ser Gly-Ser Gly-Gly-Ser Ser-Gly-Gly Gly-Gly-Gly-Ser (序列編號46) Ser-Gly-Gly-Gly (序列編號47) Gly-Gly-Gly-Gly-Ser (序列編號48) Ser-Gly-Gly-Gly-Gly (序列編號49) Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser (序列編號50) Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly (序列編號51) Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser (序列編號52) Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly (序列編號53) Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser (序列編號54) (Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)n (Ser-Gly-Gly-Gly-Gly)n Gly-Lys-Pro-Gly-Ser (序列編號55) (Gly-Lys-Pro-Gly-Ser)n 上述之n係表示1以上之整數。又，在某些態樣中，上述之n為1~10、2~8，或2~6。本發明技術領域中具有通常知識者可依據目的適宜地選擇連結子之長度或序列。於一實施形態中，抗CD137scFv中，所使用之連結子為GS連結子。於一實施形態中，抗CD137scFv中，所使用之連結子為(Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)n之GS連結子，其中n為3或4中之任一者。

於一實施形態中，本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係包含以下之(a)~(e)中之任一項之抗CD137scFv： (a)由序列編號26之胺基酸編號1至242之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv； (b)由序列編號28之胺基酸編號1至244之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv； (c)由序列編號30之胺基酸編號1至249之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv； (d)由序列編號32之胺基酸編號1至244之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv；或 (e)由序列編號34之胺基酸編號1至247之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv。

本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體中，抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段與抗CD137抗體或其抗原鍵結片段亦可以連結子連結。連結抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段與抗CD137抗體或其抗原鍵結片段之連結子之種類及長度係未受到特別限定，本發明技術領域中具有通常知識者係可適宜地選擇。作為連結子，亦可使用胜肽連結子。較佳長度為5胺基酸以上(上限係未受到特別限定，然而通常為30胺基酸以下，較佳為20胺基酸以下)，特佳為10胺基酸。作為胜肽連結子，例如，可使用甘胺酸-絲胺酸連結子(GS連結子)或甘胺酸-離胺酸-脯胺酸-甘胺酸-絲胺酸連結子(GKPGS連結子)。作為這樣的連結子，例如，可舉出下列連結子。 Ser Gly-Ser Gly-Gly-Ser Ser-Gly-Gly Gly-Gly-Gly-Ser (序列編號46) Ser-Gly-Gly-Gly (序列編號47) Gly-Gly-Gly-Gly-Ser (序列編號48) Ser-Gly-Gly-Gly-Gly (序列編號49) Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser (序列編號50) Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly (序列編號51) Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser (序列編號52) Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly (序列編號53) Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser (序列編號54) (Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)n (Ser-Gly-Gly-Gly-Gly)n Gly-Lys-Pro-Gly-Ser (序列編號55) (Gly-Lys-Pro-Gly-Ser)n 上述之n係表示1以上之整數。又，在某些態樣中，上述之n為1~10、2~8，或2~6。胜肽本發明技術領域中具有通常知識者可依據目的適宜地選擇連結子之長度或序列。於一實施形態中，作為連結抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段與抗CD137抗體或其抗原鍵結片段之連結子使用之連結子，為GS連結子或GKPGS連結子，於一實施形態中，係由序列編號54之胺基酸序列所構成之連結子。

於一實施形態中，本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係具有包含抗CLDN4 IgG抗體及抗CD137scFv，且抗CLDN4 IgG抗體與抗CD137scFv係透過連結子連結之構造。抗CLDN4 IgG抗體與抗CD137scFv之連結部位係未受特別限定，然而，例如，本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體可採取抗CD137scFv之羧基末端連結有抗CLDN4 IgG抗體之重鏈胺基末端、於抗CD137scFv之羧基末端連結有抗CLDN4 IgG抗體之輕鏈胺基末端、於抗CLDN4 IgG抗體之重鏈羧基末端連結有抗CD137scFv之胺基末端、於抗CLDN4 IgG抗體之輕鏈羧基末端連結有抗CD137scFv之胺基末端等的各式各樣之構造。於一實施形態中，本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係於抗CLDN4 IgG抗體之重鏈羧基末端連結有抗CD137scFv之胺基末端、或於抗CLDN4 IgG抗體之輕鏈羧基末端連結有抗CD137scFv之胺基末端。於一實施形態中，本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係於抗CLDN4 IgG抗體之重鏈羧基末端連結有抗CD137scFv之胺基末端。

於一實施形態中，本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係包含抗CLDN4 IgG抗體及抗CD137scFv，且抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於抗CLDN4 IgG抗體之重鏈或輕鏈羧基末端，且係抗CD137scFv之重鏈可變區域及輕鏈可變區域為以下之(a)~(m)中之任一者之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體： (a)包含由序列編號10之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號10之胺基酸編號50至66之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號10之胺基酸編號99至107之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域，以及包含由序列編號12之胺基酸編號24至34之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號12之胺基酸編號50至56之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號12之胺基酸編號89至98之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域； (b)包含由序列編號14之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號14之胺基酸編號50至65之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號14之胺基酸編號98至107之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域，以及包含由序列編號16之胺基酸編號23至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號16之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號16之胺基酸編號90至100之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域； (c)包含由序列編號18之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號18之胺基酸編號50至65之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號18之胺基酸編號98至107之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域，以及包含由序列編號20之胺基酸編號23至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號20之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號20之胺基酸編號90至100之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域； (d)包含由序列編號22之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號22之胺基酸編號50至65之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號22之胺基酸編號98至110之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域，以及包含由序列編號24之胺基酸編號23至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號24之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號24之胺基酸編號90至100之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域； (e)由序列編號10之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號12之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域； (f)由序列編號14之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號16之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域； (g)由序列編號18之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號20之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域； (h)由序列編號22之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號24之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域 (i)由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域； (j)由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域； (k)由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域及由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域； (l)由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域；或 (m)由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域。

於一實施形態中，本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係包含抗CLDN4 IgG抗體及抗CD137scFv，且抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於抗CLDN4 IgG抗體之重鏈或輕鏈羧基末端，且係抗CD137scFv為以下之(a)~(e)中之任一者之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體： (a)由序列編號26之胺基酸編號1至242之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv； (b)由序列編號28之胺基酸編號1至244之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv； (c)由序列編號30之胺基酸編號1至249之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv； (d)由序列編號32之胺基酸編號1至244之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv；或 (e)由序列編號34之胺基酸編號1至247之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv。

於一實施形態中，本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體為以下之(a)~(h)中之任一項之抗CLDN4-抗CD137scFv雙特異性抗體： (a)一雙特異性抗體，其係包含：包含包含由序列編號2之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號2之胺基酸編號50至66之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號2之胺基酸編號99至114之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈、包含包含由序列編號4之胺基酸編號24至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號4之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號4之胺基酸編號90至98之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含包含由序列編號10之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號10之胺基酸編號50至66之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號10之胺基酸編號99至107之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域，以及包含由序列編號12之胺基酸編號24至34之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號12之胺基酸編號50至56之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號12之胺基酸編號89至98之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端； (b)一雙特異性抗體，其係包含：包含包含由序列編號2之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號2之胺基酸編號50至66之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號2之胺基酸編號99至114之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈、包含包含由序列編號4之胺基酸編號24至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號4之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號4之胺基酸編號90至98之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含包含由序列編號14之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號14之胺基酸編號50至65之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號14之胺基酸編號98至107之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域，以及包含由序列編號16之胺基酸編號23至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號16之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號16之胺基酸編號90至100之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端； (c)一雙特異性抗體，其係包含：包含包含由序列編號2之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號2之胺基酸編號50至66之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號2之胺基酸編號99至114之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈、包含包含由序列編號4之胺基酸編號24至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號4之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號4之胺基酸編號90至98之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含包含由序列編號18之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號18之胺基酸編號50至65之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號18之胺基酸編號98至107之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域，以及包含由序列編號20之胺基酸編號23至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號20之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號20之胺基酸編號90至100之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端； (d)一雙特異性抗體，其係包含：包含包含由序列編號2之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號2之胺基酸編號50至66之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號2之胺基酸編號99至114之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈、包含包含由序列編號4之胺基酸編號24至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號4之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號4之胺基酸編號90至98之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含包含由序列編號22之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號22之胺基酸編號50至65之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號22之胺基酸編號98至110之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域，以及包含由序列編號24之胺基酸編號23至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號24之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號24之胺基酸編號90至100之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端； (e)一雙特異性抗體，其係包含：包含包含由序列編號6之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號6之胺基酸編號50至66之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號6之胺基酸編號99至112之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈、包含包含由序列編號8之胺基酸編號24至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號8之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號8之胺基酸編號90至98之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含包含由序列編號10之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號10之胺基酸編號50至66之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號10之胺基酸編號99至107之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域，以及包含由序列編號12之胺基酸編號24至34之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號12之胺基酸編號50至56之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號12之胺基酸編號89至98之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端； (f)一雙特異性抗體，其係包含：包含包含由序列編號6之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號6之胺基酸編號50至66之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號6之胺基酸編號99至112之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈、包含包含由序列編號8之胺基酸編號24至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號8之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號8之胺基酸編號90至98之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含包含由序列編號14之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號14之胺基酸編號50至65之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號14之胺基酸編號98至107之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域，以及包含由序列編號16之胺基酸編號23至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號16之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號16之胺基酸編號90至100之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端； (g)一雙特異性抗體，其係包含：包含包含由序列編號6之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號6之胺基酸編號50至66之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號6之胺基酸編號99至112之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈、包含包含由序列編號8之胺基酸編號24至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號8之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號8之胺基酸編號90至98之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含包含由序列編號18之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號18之胺基酸編號50至65之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號18之胺基酸編號98至107之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域，以及包含由序列編號20之胺基酸編號23至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號20之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號20之胺基酸編號90至100之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端；或 (h)一雙特異性抗體，其係包含：包含包含由序列編號6之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號6之胺基酸編號50至66之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號6之胺基酸編號99至112之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈、包含包含由序列編號8之胺基酸編號24至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號8之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號8之胺基酸編號90至98之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含包含由序列編號22之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號22之胺基酸編號50至65之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號22之胺基酸編號98至110之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域，以及包含由序列編號24之胺基酸編號23至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號24之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號24之胺基酸編號90至100之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端。

於一實施形態中，本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體為以下之(a)~(j)中之任一項之抗CLDN4-抗CD137scFv雙特異性抗體： (a)一雙特異性抗體，其係包含：包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端； (b)一雙特異性抗體，其係包含：包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端； (c)一雙特異性抗體，其係包含：包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域及由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端； (d)一雙特異性抗體，其係包含：包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端； (e)一雙特異性抗體，其係包含：包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端； (f)一雙特異性抗體，其係包含：包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端； (g)一雙特異性抗體，其係包含：包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端； (h)一雙特異性抗體，其係包含：包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域及由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端； (i)一雙特異性抗體，其係包含：包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端； (j)一雙特異性抗體，其係包含：包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端； (k)一雙特異性抗體，其係包含：包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之輕鏈羧基末端； (l)一雙特異性抗體，其係包含：包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之輕鏈羧基末端； (m)一雙特異性抗體，其係包含：包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域及由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之輕鏈羧基末端； (n)一雙特異性抗體，其係包含：包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之輕鏈羧基末端； (o)一雙特異性抗體，其係包含：包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之輕鏈羧基末端； (p)一雙特異性抗體，其係包含：包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之輕鏈羧基末端； (q)一雙特異性抗體，其係包含：包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之輕鏈羧基末端； (r)一雙特異性抗體，其係包含：包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域及由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之輕鏈羧基末端； (s)一雙特異性抗體，其係包含：包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之輕鏈羧基末端；或 (t)一雙特異性抗體，其係包含：包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之輕鏈羧基末端。

於一實施形態中，本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體為以下之(a)或(b)之抗CLDN4-抗CD137scFv雙特異性抗體： (a)一雙特異性抗體，其係包含：由序列編號36之胺基酸編號1至705之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽，以及包含由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之多肽；或 (b)一雙特異性抗體，其係包含：由序列編號38之胺基酸編號1至712之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽，以及由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈。

本說明書中，所謂「轉譯後修飾」，係指在使抗體在細胞內表現之情況中，抗體在轉譯後受到修飾。作為轉譯後修飾之例子，可舉出重鏈N末端之麩醯胺酸或麩胺酸之焦麩胺酸化、醣基化、氧化、脫醯胺化、糖化等的修飾，或重鏈C末端之離胺酸之藉由羧基胜肽酶之切斷所造成之離胺酸缺失。在各式各樣的抗體中，已知係產生這樣的轉譯後修飾(J.Pharm.Sci.、2008、Vol.97、p.2426-2447)。

於一實施形態中，本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體亦可進行轉譯後修飾。於一實施形態中，其中，轉譯後修飾為重鏈可變區域N末端之焦麩胺酸化及/或重鏈C末端離胺酸缺失。在該領域中已知藉由N末端之焦麩胺酸化或C末端離胺酸缺失所造成之轉譯後修飾係不影響抗體之活性(Analytical Biochemistry、2006、Vol.348、p.24-39)。

本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係鍵結於人類CLDN4及人類CD137。是否鍵結於人類CLDN4及人類CD137，係可使用習知的結合活性測定方法來進行確認。作為測定結合活性之方法，例如，可舉出ELISA法、流式細胞術等的方法。ELISA法或流式細胞術係可藉由本發明技術領域中具有通常知識者通常使用之方法來實施，例如可使用實施例3或5中所記載之方法。

本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體可由本發明技術領域中具有通常知識者，使用人類CLDN4及人類CD137作為抗原，並使用該領域中習知的抗體製作技術，容易地製作而獲得，或者，本發明技術領域中具有通常知識者可以本說明書中所揭示之抗CLDN4抗體及抗CD137抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域之序列情報等為基礎，使用在該領域中之習知的方法，容易地製作。

本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體並非受到特別限定者，然而，例如，可依循後述之＜生產本發明之雙特異性抗體之方法＞中所記載之方法來製造。

＜本發明之雙特異性抗體之多核苷酸＞本發明又提供一種可使用於本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體之生產之多核苷酸(亦稱為「本發明之雙特異性抗體之多核苷酸」)。

於一實施形態中，本發明之雙特異性抗體之多核苷酸為一種多核苷酸，其係包含由下述(a)~(d)所成之群所選出之編碼抗CLDN4抗體之重鏈可變區域或輕鏈可變區域之鹼基序列： (a)包含編碼由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (b)包含編碼由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (c)包含編碼由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸；或 (d)包含編碼由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸。

於一實施形態中，本發明之雙特異性抗體之多核苷酸係由下述(a)或(b)所選出之包含編碼抗CLDN4抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸： (a)包含編碼由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸；或 (b)包含編碼由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸。

於一實施形態中，本發明之雙特異性抗體之多核苷酸為一種多核苷酸，其係包含由下述(a)~(r)所成之群所選出之編碼抗CD137抗體之重鏈可變區域或輕鏈可變區域之鹼基序列： (a)包含編碼由序列編號10之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (b)包含編碼由序列編號12之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (c)包含編碼由序列編號14之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (d)包含編碼由序列編號16之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (e)包含編碼由序列編號18之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (f)包含編碼由序列編號20之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (g)包含編碼由序列編號22之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (h)包含編碼由序列編號24之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (i)包含編碼由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (j)包含編碼由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (k)包含編碼由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (l)包含編碼由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (m)包含編碼由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (n)包含編碼由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (o)包含編碼由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (p)包含編碼由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (q)包含編碼由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸；或 (r)包含編碼由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸。

於一實施形態中，本發明之雙特異性抗體之多核苷酸係由下述(a)~(i)所成之群所選出之包含編碼抗CD137抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸： (a)包含編碼由序列編號10之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號12之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (b)包含編碼由序列編號14之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號16之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (c)包含編碼由序列編號18之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號20之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (d)包含編碼由序列編號22之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號24之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (e)包含編碼由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (f)包含編碼由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (g)包含編碼由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (h)包含編碼由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸；或 (i)包含編碼由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸。

於一實施形態中，本發明之雙特異性抗體之多核苷酸係一種多核苷酸，其係包含選自由下述(a)~(e)所成之群之編碼抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸： (a)包含編碼由序列編號26之胺基酸編號1至242之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸； (b)包含編碼由序列編號28之胺基酸編號1至244之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸； (c)包含編碼由序列編號30之胺基酸編號1至249之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸； (d)包含編碼由序列編號32之胺基酸編號1至244之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸；或 (e)包含編碼由序列編號34之胺基酸編號1至247之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸。

於一實施形態中，本發明之雙特異性抗體之多核苷酸係由下述(a)~(e)所成之群所選出之多核苷酸： (a)包含編碼由序列編號36之胺基酸編號1至705之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸； (b)包含編碼由序列編號38之胺基酸編號1至712之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸； (c)包含編碼由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列之多核苷酸； (d)包含編碼由序列編號36之胺基酸編號1至705之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸，以及包含編碼由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列之多核苷酸；或 (e)包含編碼由序列編號38之胺基酸編號1至712之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸，以及包含編碼由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列之多核苷酸。

本發明之雙特異性抗體之多核苷酸係本發明技術領域中具有通常知識者可以該鹼基序列為基礎，使用該領域習知的方法來容易地製作並獲得。例如，本發明之雙特異性抗體之多核苷酸係可利用該領域中習知的基因合成方法來合成。作為這樣的基因合成方法，係可使用國際公開編號90/07861號中所記載之抗體基因之合成方法等的本發明技術領域中具有通常知識者所習知的各種的方法。

＜本發明之雙特異性抗體之表現載體＞本發明又，提供一種包含本發明之雙特異性抗體之多核苷酸之表現載體(亦稱為「本發明之雙特異性抗體之表現載體」)。此等的多核苷酸係可各自包含於分別之載體中，或複數個多核苷酸亦可包含於1個載體中。

於一實施形態中，本發明之雙特異性抗體之表現載體係包含由下述(a)~(aa)所成之群所選出之多核苷酸： (a)包含編碼由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (b)包含編碼由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (c)包含編碼由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (d)包含編碼由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸。 (e)包含編碼由序列編號10之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (f)包含編碼由序列編號12之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (g)包含編碼由序列編號14之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (h)包含編碼由序列編號16之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (i)包含編碼由序列編號18之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (j)包含編碼由序列編號20之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (k)包含編碼由序列編號22之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (l)包含編碼由序列編號24之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸。 (m)包含編碼由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (n)包含編碼由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (o)包含編碼由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (p)包含編碼由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (q)包含編碼由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (r)包含編碼由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (s)包含編碼由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (t)包含編碼由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (u)包含編碼由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (v)包含編碼由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (w)包含編碼由序列編號26之胺基酸編號1至242之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸； (x)包含編碼由序列編號28之胺基酸編號1至244之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸； (y)包含編碼由序列編號30之胺基酸編號1至249之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸； (z)包含編碼由序列編號32之胺基酸編號1至244之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸；或 (aa)包含編碼由序列編號34之胺基酸編號1至247之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸。

於一實施形態中，本發明之雙特異性抗體之表現載體係包含由下述(a)~(k)所成之群所選出之多核苷酸： (a)包含編碼由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (b)包含編碼由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (c)包含編碼由序列編號10之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號12之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (d)包含編碼由序列編號14之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號16之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (e)包含編碼由序列編號18之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號20之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (f)包含編碼由序列編號22之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號24之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (g)包含編碼由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (h)包含編碼由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (i)包含編碼由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (j)包含編碼由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸；或 (k)包含編碼由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸。

於一實施形態中，本發明之雙特異性抗體之表現載體係包含由下述(a)~(c)所成之群所選出之多核苷酸： (a)包含編碼由序列編號36之胺基酸編號1至705之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸； (b)包含編碼由序列編號38之胺基酸編號1至712之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸；或 (c)包含編碼由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列之多核苷酸。

於一實施形態中，本發明之雙特異性抗體之表現載體係包含選自下述(a)或(b)之多核苷酸： (a)包含編碼由序列編號36之胺基酸編號1至705之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸，以及包含編碼由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列之多核苷酸；或 (b)包含編碼由序列編號38之胺基酸編號1至712之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸，以及包含編碼由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列之多核苷酸。

本發明之雙特異性抗體之表現載體若為可在真核細胞(例如，動物細胞、昆蟲細胞、植物細胞、酵母)及/或原核細胞(例如，大腸菌)等的各種宿主細胞中產生本發明之多核苷酸者，則未受到特別限制。作為這樣的表現載體，例如，可舉出質體載體、病毒載體等。作為質體載體，例如，可使用pcDNA系列(Thermo Fisher Scientific公司)、pALTER(註冊商標)-MAX(Promega)、pHEK293 Ultra Expression Vector(Takara Bio公司)、pEE6.4或pEE12.4 (Lonza Biologics公司)等。作為病毒載體，例如，可使用慢病毒、腺病毒、反轉錄病毒、腺相關病毒病毒。例如，為了將本發明之多核苷酸導入細胞而使用慢病毒之情況中，該慢病毒可使用pLVSIN-CMV/EF1α載體(Takara Bio公司)、pLenti載體(Thermo Fisher Scientific公司)等。於一實施形態中，本發明之雙特異性抗體之表現載體中所使用之載體為pcDNA3.4-TOPO(註冊商標)(Thermo Fisher Scientific公司)及pcDNA3.1(Thermo Fisher Scientific公司)。

本發明之雙特異性抗體之表現載體可包含以使本發明之雙特異性抗體之多核苷酸可動作的方式連結之啟動子。作為使本發明之雙特異性抗體之多核苷酸在動物細胞中表現用之啟動子，例如，可舉出CMV、RSV、SV40等的源自病毒的啟動子、肌動蛋白啟動子、EF(elongation factor)1α啟動子、熱休克啟動子等。作為使本發明之雙特異性抗體之多核苷酸在細菌(例如，埃希氏菌屬菌)中表現用之啟動子，例如，可舉出trp啟動子、lac啟動子、λPL啟動子、tac啟動子等。作為使本發明之雙特異性抗體之多核苷酸在酵母中表現用之啟動子，例如，可舉出GAL1啟動子、GAL10啟動子、PH05啟動子、PGK啟動子、GAP啟動子、ADH啟動子等。

作為宿主細胞，使用動物細胞、昆蟲細胞或酵母之情況中，本發明之雙特異性抗體之表現載體可包含開始密碼子及終止密碼子。在此情況中，亦可包含強化子序列、編碼本發明之抗體或其重鏈或者輕鏈之基因之5’側及3’側之非轉譯領域、分泌訊號序列、剪接(Splicing)接合部、多腺苷酸化部位，或者可複製單元等。使用大腸菌作為宿主細胞之情況中，本發明之表現載體可包含開始密碼子、終止密碼子、終止子領域，及可複製單元。本發明之表現載體亦可依目的包含通常使用之藥劑篩選標示基因(例如，四環黴素耐性基因、安比西林耐性基因、康黴素耐性基因、新黴素耐性基因、二氫葉酸還原酵素基因)。

＜本發明之宿主細胞＞本發明又提供一種藉由本發明之雙特異性抗體之多核苷酸或本發明之雙特異性抗體之表現載體(亦稱為「本發明之多核苷酸等」)進行轉形之宿主細胞(亦稱為「本發明之宿主細胞」)。本發明之宿主細胞係於細胞內包含本發明之多核苷酸等。經導入之本發明之多核苷酸等可嵌入亦可不嵌入宿主細胞之基因體DNA。作為宿主細胞使用之細胞，可為可於in vitro培養之細胞或生物體內之細胞( in vivocell)中之任一者。宿主細胞為可於in vitro培養之細胞之情況中，藉由將本發明之多核苷酸等藉由in vitro的方式導入細胞中，可製作本發明之宿主細胞。將宿主細胞轉形之方法並非受到特別限定者，然而，例如，可使用磷酸鈣法、電穿孔法，或微脂體(liposome)轉染法等的本發明技術領域中具有通常知識者一般地使用之方法。宿主細胞為生物體內之細胞之情況中，於宿主細胞中導入本發明之多核苷酸等之方法，並非受到特別限定者，然而，可使用核酸送達用載體(陽離子性載體或非陽離子性載體(例如，包含但不限於微脂體、脂質奈米粒子(LNP))等)。

作為可於in vitro培養之細胞，若為可藉由所使用之表現載體或電穿孔等的方法來進行轉形，並表現抗體或多肽者，則並非受到特別限定者。作為可於in vitro培養之細胞，例如，在本發明之技術領域中，通常所使用之以往的細胞或人工建立的細胞等各種的細胞(例如，可舉出動物細胞(例如，CHO-K1細胞、ExpiCHO-S(註冊商標)細胞、CHOK1SV細胞、CHO-DG44細胞、HEK293細胞、Expi293F細胞、NS0細胞)、昆蟲細胞(例如，Sf9)、細菌(埃希氏菌屬菌等)、酵母(酵母屬、畢赤酵母屬等)等)。於一實施形態中，本發明之宿主細胞為Expi293F細胞、CHO-K1細胞，或ExpiCHO-S細胞。

於in vitro進行之經轉形之宿主細胞之篩選，係可使用本發明技術領域中具有通常知識者一般使用之方法來進行。篩選方法中，例如，可使用使用了藥劑篩選標示基因與四環黴素、安比西林、新黴素或濕黴素等的藥劑之藥劑選擇法，或極限稀釋法、單細胞分選法(single cell sorting method)，或菌落提取法(colony pick-up method)等的細胞單離法。

於本發明之宿主細胞之一實施形態中，該宿主細胞係包含由下述(a)~(aa)所成之群所選出之多核苷酸： (a)包含編碼由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (b)包含編碼由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (c)包含編碼由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (d)包含編碼由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸。 (e)包含編碼由序列編號10之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (f)包含編碼由序列編號12之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (g)包含編碼由序列編號14之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (h)包含編碼由序列編號16之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (i)包含編碼由序列編號18之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (j)包含編碼由序列編號20之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (k)包含編碼由序列編號22之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (l)包含編碼由序列編號24之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸。 (m)包含編碼由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (n)包含編碼由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (o)包含編碼由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (p)包含編碼由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (q)包含編碼由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (r)包含編碼由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (s)包含編碼由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (t)包含編碼由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (u)包含編碼由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (v)包含編碼由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (w)包含編碼由序列編號26之胺基酸編號1至242之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸； (x)包含編碼由序列編號28之胺基酸編號1至244之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸； (y)包含編碼由序列編號30之胺基酸編號1至249之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸； (z)包含編碼由序列編號32之胺基酸編號1至244之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸；或 (aa)包含編碼由序列編號34之胺基酸編號1至247之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸。

於一實施形態中，該宿主細胞係包含由下述(a)~(k)所成之群所選出之多核苷酸： (a)包含編碼由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (b)包含編碼由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (c)包含編碼由序列編號10之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號12之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (d)包含編碼由序列編號14之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號16之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (e)包含編碼由序列編號18之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號20之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (f)包含編碼由序列編號22之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號24之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (g)包含編碼由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (h)包含編碼由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (i)包含編碼由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (j)包含編碼由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸；或 (k)包含編碼由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸。

於本發明之宿主細胞之一實施形態中，該宿主細胞係包含由下述(a)~(c)所成之群所選出之多核苷酸： (a)包含編碼由序列編號36之胺基酸編號1至705之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸； (b)包含編碼由序列編號38之胺基酸編號1至712之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸；或 (c)包含編碼由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列之多核苷酸。

於一實施形態中，該宿主細胞其係包含由下述(a)或(b)所選出之多核苷酸： (a)包含編碼由序列編號36之胺基酸編號1至705之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸，以及包含編碼由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列之多核苷酸；或 (b)包含編碼由序列編號38之胺基酸編號1至712之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸，以及包含編碼由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列之多核苷酸。

於本發明之宿主細胞之一實施形態中，該宿主細胞係包含下述之(a)~(j)之多肽： (a)一多核苷酸，其中包含編碼一多肽之鹼基序列，該多肽係包含包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈，以及包含由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域及由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端，以及一多核苷酸，其中包含編碼包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列； (b)一多核苷酸，其係包含編碼一多肽之鹼基序列，該多肽係包含包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈，以及包含由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域及由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端，以及一多核苷酸，其中包含編碼包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列； (c)一多核苷酸，其係包含編碼一多肽之鹼基序列，該多肽係包含包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈，以及包含由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域及由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端，以及一多核苷酸，其中包含編碼包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列； (d)一多核苷酸，其係包含編碼一多肽之鹼基序列，該多肽係包含包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈，以及包含由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域及由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端，以及一多核苷酸，其中包含編碼包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列； (e)一多核苷酸，其係包含編碼一多肽之鹼基序列，該多肽係包含包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈，以及包含由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域及由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端之多肽，以及一多核苷酸，其中包含編碼包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列； (f)一多核苷酸，其係包含編碼一多肽之鹼基序列，該多肽係包含包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈，以及包含由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域及由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端，以及一多核苷酸，其係包含編碼包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列； (g)一多核苷酸，其係包含編碼一多肽之鹼基序列，該多肽係包含包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈，以及包含由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域及由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端，以及一多核苷酸，其係包含編碼包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列； (h)一多核苷酸，其係包含編碼一多肽之鹼基序列，該多肽係包含包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈，以及包含由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域及由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端，以及一多核苷酸，其係包含編碼包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列； (i)一多核苷酸，其係包含編碼一多肽之鹼基序列，該多肽係包含包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈，以及包含由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域及由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端之多肽，以及一多核苷酸，其係包含編碼包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列；或 (j)一多核苷酸，其係包含編碼一多肽之鹼基序列，該多肽係包含包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈，以及包含由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域及由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端之多肽，以及一多核苷酸，其係包含編碼包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列。

於本發明之宿主細胞之一實施形態中，該宿主細胞為下述之(a)或(b)之宿主細胞： (a)一宿主細胞，其係包含：包含編碼由序列編號36之胺基酸編號1至705之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸，以及包含編碼由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列之多核苷酸；或 (b)一宿主細胞，其係包含編碼由序列編號38之胺基酸編號1至712之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸，以及包含編碼由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列之多核苷酸。

於本發明之宿主細胞之一實施形態中，該宿主細胞為包含：包含編碼由序列編號38之胺基酸編號1至712之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸，以及包含編碼由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列之多核苷酸之宿主細胞。

＜生產本發明之雙特異性抗體之方法＞本發明又提供一種本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性生產抗體之方法(亦稱為「本發明之生產方法」)。本發明之生產方法中，係可包含前述之本發明之雙特異性抗體之多核苷酸之生產方法、本發明之雙特異性抗體之表現載體之生產方法及本發明之宿主細胞之生產方法。此外，本發明之生產方法中，亦可包含前述之＜本發明之宿主細胞＞中所記載之培養宿主細胞並於該細胞或該培養上清液中使該抗體表現之步驟、將該抗體回收、單離及精製之方法等。然而，本發明之生產方法並非受到此等的方法所限定者，可生產本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體即可。

於一實施形態中，本發明之生產方法係包含培養下述之(a)~(j)之宿主細胞之步驟： (a)一宿主細胞，其係包含：一多核苷酸，其中包含編碼一多肽之鹼基序列，該多肽係包含包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈，以及包含由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域及由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端，以及一多核苷酸，其中包含編碼包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列； (b)一宿主細胞，其係包含：一多核苷酸，其係包含編碼一多肽之鹼基序列，該多肽係包含包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈，以及包含由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域及由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端之多肽，以及一多核苷酸，其中包含編碼包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列； (c)一宿主細胞，其係包含：一多核苷酸，其係包含編碼一多肽之鹼基序列，該多肽係包含包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈，以及包含由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域及由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端，以及一多核苷酸，其中包含編碼包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列； (d)一宿主細胞，其係包含：一多核苷酸，其係包含編碼一多肽之鹼基序列，該多肽係包含包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈，以及包含由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域及由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端，以及一多核苷酸，其中包含編碼包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列； (e)一宿主細胞，其係包含：一多核苷酸，其係包含編碼一多肽之鹼基序列，該多肽係包含包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈，以及包含由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域及由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端之多肽，以及一多核苷酸，其中包含編碼包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列； (f)一宿主細胞，其係包含：一多核苷酸，其係包含編碼一多肽之鹼基序列，該多肽係包含包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈，以及包含由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域及由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端，以及一多核苷酸，其係包含編碼包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列； (g)一宿主細胞，其係包含：一多核苷酸，其係包含編碼一多肽之鹼基序列，該多肽係包含包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈，以及包含由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域及由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端，以及一多核苷酸，其係包含編碼包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列； (h)一宿主細胞，其係包含：一多核苷酸，其係包含編碼一多肽之鹼基序列，該多肽係包含包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈，以及包含由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域及由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端，以及一多核苷酸，其係包含編碼包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列； (i)一宿主細胞，其係包含：一多核苷酸，其係包含編碼一多肽之鹼基序列，該多肽係包含包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈，以及包含由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域及由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端之多肽，以及一多核苷酸，其係包含編碼包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列；或 (j)一宿主細胞，其係包含：一多核苷酸，其係包含編碼一多肽之鹼基序列，該多肽係包含包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈，以及包含由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域及由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端之多肽，以及一多核苷酸，其係包含編碼包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列。

於一實施形態中，本發明之生產方法係包含培養下述之(a)或(b)之宿主細胞之步驟： (a)一宿主細胞，其係包含：包含編碼由序列編號36之胺基酸編號1至705之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸，以及包含編碼由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列之多核苷酸；或 (b)一宿主細胞，其係包含：包含編碼由序列編號38之胺基酸編號1至712之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸，以及包含編碼由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列之多核苷酸。

本發明之宿主細胞之培養係可藉由習知的方法來進行。培養條件，例如，本發明技術領域中具有通常知識者係可適宜選擇溫度、培養基之pH及培養時間。宿主細胞為動物細胞之情況中，作為培養基，例如，可使用包含約5~20%之胎牛血清之MEM培養基(Science、1959、Vol.130、p.432-437)、D-MEM培養基(Virol.、1959、Vol.8、p.396)、RPMI-1640培養基(J.Am.Med.Assoc.、1967、Vol.199、p.519)、199培養基(Exp.Biol.Med.、1950、Vol.73、p.1-8)等。培養基之pH，例如，約為6~8，培養係在依需要進行通氣或攪拌的同時，通常於約30~40℃下進行約15~336小時。宿主細胞為昆蟲細胞之情況下，作為培養基，例如，可使用包含胎牛血清之Grace’s培養基(Proc.Natl.Acad.Sci.USA.、1985、Vol.82、p.8404)等。培養基之pH，例如，約為5~8，培養係在依需要進行通氣或攪拌的同時，通常在約20~40℃下進行約15~100小時。宿主細胞為大腸菌或酵母之情況下，作為培養基，例如，含有營養源之液體培養基係為適當。營養培養基，例如，係包含經轉形之宿主細胞之繁殖所必需的碳源、無機氮源，或有機氮源。作為碳源，例如，可舉出葡萄糖、類糊精、可溶性澱粉、蔗糖等，作為無機氮源或有機氮源，例如，可舉出銨鹽類、硝酸鹽類、胺基酸、玉米浸液、蛋白腖、酪蛋白、肉汁、大豆粕、馬鈴薯萃取液等。亦可依期望包含其他營養素(例如，無機鹽(例如，氯化鈣、磷酸二氫鈉、氯化鎂)、維生素類)、抗生物質(例如，四環黴素、新黴素、安比西林、康黴素)等。培養基之pH，例如，約為5~8。宿主細胞為大腸菌之情況中，作為培養基，例如，可使用LB培養基、M9培養基(Molecular Cloning、Cold Spring Harbor Laboratory、Vol.3、A2.2)等。培養，係在依需要進行通氣或攪拌的同時，通常在約14~43℃下進行約3~24小時。宿主細胞為酵母之情況中，作為培養基，例如，可使用Burkholder最小培養基(Proc. Natl. Acad. Sci. USA.、1980、Vol.77、p.4505)等。培養，係在依需要進行通氣或攪拌的同時，通常在約20~35℃下進行約14~144小時。藉由如同上述之培養，可使本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體表現。

本發明之生產方法除了培養本發明之宿主細胞，並使抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體表現之步驟以外，亦可包含自該宿主細胞將抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體回收、單離或精製之步驟。作為單離或精製方法，例如，可舉出鹽析、溶媒沉澱法等的利用溶解度之方法、透析、超過濾、凝膠過濾等的利用分子量之差之方法、離子交換色譜、氫氧基磷灰石管柱層析等的利用帶電之方法、親和性層析等的利用特異性的親和性之方法、逆相高速液體層析等的利用疏水性的差之方法、等電點電泳等的利用等電點的差之方法等。於一實施形態中，培養上清液中所分泌出之抗體，係可藉由各種層析，例如，使用蛋白質A管柱或蛋白質G管柱之管柱層析來進行精製。

藉由本發明之生產方法所生產之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體及抗CLDN4-抗CD137scFv雙特異性抗體係包含在本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體中。

＜本發明之醫藥組成物等＞本發明又提供一種包含本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體之醫藥組成物等(亦稱為「本發明之醫藥組成物」)。本發明之醫藥組成物中係包含包含本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體及藥學上可容許之賦形劑之醫藥組成物。本發明之醫藥組成物，係可使用該領域中通常使用之賦形劑，亦即，可使用藥劑用賦形劑或藥劑用載體等，藉由通常使用之方法來調製。作為此等醫藥組成物之劑型之例子，例如，可舉出注射劑、點滴用劑等的非經口劑，並可藉由靜脈內投予、皮下投予、腹腔內投予、腫瘤內投予等的適當的方法來進行投予。在製劑化時，在藥學上可容許之範圍內，可依據此等劑型來使用賦形劑、載體、添加劑等。

本發明之醫藥組成物中可包含本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體之轉譯後修飾體。例如，本發明中亦包含一種包含抗體等之醫藥組成物，該抗體係受到C末端離胺酸之缺失或N末端之焦麩胺酸化中之一種或兩種之抗體。

於一實施形態中，本發明之醫藥組成物係含有以下之(a)~(j)中之任一項之本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體及/或該抗體之轉譯後修飾體之醫藥組成物： (a)一抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體及/或該抗體之轉譯後修飾體，其係包含：包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端； (b)一抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體及/或該抗體之轉譯後修飾體，其係包含：包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端； (c)一抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體及/或該抗體之轉譯後修飾體，其係包含：包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域及由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端； (d)一抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體及/或該抗體之轉譯後修飾體，其係包含：包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端； (e)一抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體及/或該抗體之轉譯後修飾體，其係包含：包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端； (f)一抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體及/或該抗體之轉譯後修飾體，其係包含：包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端； (g)一抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體及/或該抗體之轉譯後修飾體，其係包含：包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端； (h)一抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體及/或該抗體之轉譯後修飾體，其係包含：包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域及由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端； (i)一抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體及/或該抗體之轉譯後修飾體，其係包含：包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端；或 (j)一抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體及/或該抗體之轉譯後修飾體，其係包含：包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端。

於一實施形態中，本發明之醫藥組成物係含有以下之(a)或(b)之本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體及/或該抗體之轉譯後修飾體之醫藥組成物： (a)一抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體及/或該抗體之轉譯後修飾體，其係包含：由序列編號36之胺基酸編號1至705之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽，以及由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈；或 (b)一抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體及/或該抗體之轉譯後修飾體，其係包含：由序列編號38之胺基酸編號1至712之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽，以及由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈。

製劑化中之本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體及/或該抗體之轉譯後修飾體之添加量係依據患者之症狀之程度或年齡、所使用之製劑之劑型、或者抗體之結合效價等而有所不同，然而，例如，可使用0.001mg/kg~100mg/kg之程度。

＜本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體之醫藥用途＞本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體及含有該等之醫藥組成物，可用於對象之癌症之治療。又，本發明中，係包含治療癌症之方法，其中係包含將本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體之治療有效量投予至對象之步驟。又，本發明中係包含本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體，其係使用於癌症之治療。又，本發明中係包含本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體之用途，其係用於癌症之治療用醫藥組成物之製造中。藉由本發明來進行之治療之對象之癌症係未受到特別限定，然而，例如，除了各種的腹膜轉移癌症、胃癌、肺癌、急性淋巴母細胞性白血病(lymphoblastic leukemia)、急性骨髓性白血病、霍奇金氏淋巴瘤(Hodgkin's lymphoma)、非霍奇金氏淋巴瘤、B細胞淋巴瘤、多發性骨髓瘤(multiple myeloma)、T細胞淋巴瘤等的血液癌症、骨髓增生不良症候群(Myelodysplastic syndromes)、腺癌(adenocarcinoma)、鱗狀上皮細胞瘤(squamous cell carcinoma)、腺扁平上皮癌症、未分化癌症、大細胞癌症、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、中皮腫、皮膚癌症、皮膚T細胞淋巴瘤、乳癌、攝護腺癌、膀胱癌、陰道癌、頸部癌症、頭頸部癌症、子宮癌、子宮頸癌、肝癌、膽囊癌、膽管癌、腎臓癌、胰臓癌、結腸癌、大腸癌、直腸癌、小腸癌、胃癌、食道癌症、精巢癌、卵巢癌、腦腫瘤等的實質癌，以及骨組織、軟骨組織、脂肪組織、肌肉組織、血管組織及造血組織之癌症以外，還可舉出軟骨肉瘤、尤文氏肉瘤、惡性血管內皮瘤、惡性許旺細胞瘤、骨肉瘤、軟部組織肉瘤等的肉瘤，及膠質母細胞瘤、多形性膠質母細胞瘤、肝母細胞瘤、髓母細胞瘤、腎母細胞瘤、神經母細胞瘤、胰臟母細胞瘤、胸膜肺母細胞瘤、網膜母細胞瘤等的母細胞瘤等。於一實施形態中，藉由本發明來進行之治療之對象之癌症為大腸癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、卵巢癌、乳癌、攝護腺癌。於一實施形態中，藉由本發明來進行之治療之對象之癌症，為CLDN4之表現量比正常組織高之癌症。藉由本發明來進行之治療之對象之癌症較佳係CLDN4之表現量比正常組織高之癌症，或由大腸癌、直腸癌、肺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、卵巢癌、乳癌、攝護腺癌所成之群所選出之癌症。

＜本發明之抗CLDN4抗體＞本發明又，提供如以下之(a)~(c)中之任一項之抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段： (a)一抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段，其係包含：包含由序列編號2之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號2之胺基酸編號50至66之胺基酸序列所構成之CDR2、及由序列編號2之胺基酸編號99至114之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域，以及，包含由序列編號4之胺基酸編號24至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號4之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2、及由序列編號4之胺基酸編號90至98之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域； (b)一抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段，其係包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域；或 (c)一抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段，其係包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域。

於一實施形態中，本發明之抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段為包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域，及，包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段，或包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段。於一實施形態中，本發明之抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段為由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域。於一實施形態中，本發明之抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段為包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段。

作為本發明之抗CLDN4抗體之重鏈恆定區域，可選擇Igγ、Igμ、Igα、Igδ或Igε中之任一恆定區域。作為Igγ，例如，可選自Igγ1、Igγ2、Igγ3或Igγ4。於一實施形態中，重鏈恆定區域為Igγ1恆定區域，例如，為人類Igγ1恆定區域。又，本發明之抗CLDN4抗體之重鏈恆定區域為了使ADCC或CDC降低，亦可包含LALA突變、P331G或P331S突變等之胺基酸突變。作為本發明之抗CLDN4抗體之輕鏈恆定區域，亦可選擇Igλ或Igκ中之任一恆定區域。於一實施形態中，輕鏈恆定區域為Igκ恆定區域，例如，為人類Igκ恆定區域。

於一實施形態中，本發明之抗CLDN4抗體之抗原鍵結片段為scFv、Fab、Fab’、或F(ab’) ₂。

於一實施形態中，本發明之抗CLDN4抗體係包含包含由序列編號2之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之輕鏈之抗CLDN4抗體，或包含包含由序列編號6之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之輕鏈之抗CLDN4抗體。於一實施形態中，本發明之抗CLDN4抗體為包含包含由序列編號2之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之輕鏈之抗CLDN4抗體。於一實施形態中，本發明之抗CLDN4抗體係包含包含由序列編號6之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之輕鏈之抗CLDN4抗體。

本發明又提供一種本發明之抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段(亦稱為「本發明之複合體」)，其係結合有糖質、脂質、金屬(包含放射性同位素)、有機化合物(包含毒素、近紅外螢光色素、螯合劑)等(亦稱為「修飾劑」)。本說明書中，所謂「修飾劑」，係指直接或透過連結子等結合於抗體或其抗原鍵結片段之非胜肽性之物質。用於本發明之複合體之修飾劑係未受到特別限定，例如，可舉出聚乙二醇、糖鏈、磷脂質、放射線同位素(例如，鋯-89( ⁸⁹Zr)、釔-90( ⁹⁰Y)、銦-111( ¹¹¹In)、砈-211( ²¹¹At)、錒-225( ²²⁵Ac))、有機化合物、毒素、近紅外螢光色素(例如IRDye(註冊商標))、螯合劑等。用於該複合體之修飾劑可直接鍵結於本發明之抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段，又，亦可透過任意的連結子鍵結。於一實施形態中，本發明之複合體為抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段之藥物複合體(Antibody Drug Conjugate；ADC)。用於ADC之藥物及連結子係可自本發明技術領域中具有通常知識者一般使用之藥劑及連結子之中選定。

本發明又提供一種於細胞表面表現本發明之抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段之細胞(例如，Chimeric antigen receptor-T cell；CAR-T細胞)。本發明技術領域中具有通常知識者係可使用編碼本發明之抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段之多核苷酸來製作這樣的細胞。作為使本發明之抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段表現之細胞，可使用各種免疫細胞(T細胞、NK細胞、NKT細胞等)。

於一實施形態中，本發明之抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段、本發明之複合體、及於細胞表面表現本發明之抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段之細胞中之抗體或抗原鍵結片段部分，亦可進行轉譯後修飾。於一實施形態中，其中，轉譯後修飾為重鏈可變區域N末端之焦麩胺酸化及/或重鏈C末端離胺酸缺失。

本發明之抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段、本發明之複合體，及於細胞表面表現本發明之抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段之細胞，係本發明技術領域中具有通常知識者可依據本說明書中所揭示之本發明之抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段之VH及VL之序列情報、用於本發明之複合體之修飾劑之情報為基礎，使用該領域習知的方法來製作者。本發明之抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段並非受到特別限定者，然而，例如，可依據＜生產本發明之雙特異性抗體之方法＞項中所記載之方法來進行生產。

本發明又提供一種醫藥組成物，其中包含本發明之抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段、本發明之複合體及於細胞表面表現本發明之抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段之細胞(以下本項係總稱為「本發明之抗CLDN4抗體等」)，以及藥學上可容許之賦形劑。該醫藥組成物可用於癌症之治療。本發明又提供包含將本發明之抗CLDN4抗體等的治療有效量投予至對象之步驟之治療癌症之方法、使用於癌症之治療之本發明之抗CLDN4抗體等、癌症之治療用醫藥組成物之製造中之本發明之抗CLDN4抗體等的用途。本發明之抗CLDN4抗體等的醫藥用途係本發明技術領域中具有通常知識者依據前述之＜本發明之醫藥組成物等＞之記載即可實施者。本發明之抗CLDN4抗體等的醫藥用途之治療之對象之癌症係可舉出前述之＜本發明之醫藥組成物等＞中所記載之癌症。

＜本發明之抗CD137抗體＞本發明又提供一種包含以下之(a)~(d)中之任一項之抗CD137抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域之抗CD137抗體或其抗原鍵結片段： (a)包含由序列編號10之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號10之胺基酸編號50至66之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號10之胺基酸編號99至107之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域，以及包含由序列編號12之胺基酸編號24至34之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號12之胺基酸編號50至56之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號12之胺基酸編號89至98之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域； (b)包含由序列編號14之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號14之胺基酸編號50至65之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號14之胺基酸編號98至107之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域，以及包含由序列編號16之胺基酸編號23至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號16之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號16之胺基酸編號90至100之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域； (c)包含由序列編號18之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號18之胺基酸編號50至65之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號18之胺基酸編號98至107之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域，以及包含由序列編號20之胺基酸編號23至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號20之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號20之胺基酸編號90至100之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域；或 (d)包含由序列編號22之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號22之胺基酸編號50至65之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號22之胺基酸編號98至110之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域，以及包含由序列編號24之胺基酸編號23至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號24之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號24之胺基酸編號90至100之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域。

於一實施形態中，本發明之抗CD137抗體或其抗原鍵結片段係包含以下之(a)~(i)中之任一項之抗CD137抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域； (a)由序列編號10之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號12之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域； (b)由序列編號14之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號16之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域； (c)由序列編號18之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號20之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域； (d)由序列編號22之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號24之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域； (e)由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域； (f)由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域； (g)由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域及由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域； (h)由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域；或 (i)由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域。

於一實施形態中，本發明之抗CD137抗體之抗原鍵結片段為scFv。於一實施形態中，本發明之抗CD137抗體之抗原鍵結片段為以下之(a)~(e)中之任一者； (a)由序列編號26之胺基酸編號1至242之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv； (b)由序列編號28之胺基酸編號1至244之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv； (c)由序列編號30之胺基酸編號1至249之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv； (d)由序列編號32之胺基酸編號1至244之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv；或 (e)由序列編號34之胺基酸編號1至247之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv。

本發明技術領域中具有通常知識者若參照＜本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體＞等的本說明書中之記載，即可製作本發明之抗CD137抗體或其抗原鍵結片段。本發明之抗CD137抗體或其抗原鍵結片段可使用於與任意的，例如，使用於癌症之治療中之相對於TAA之抗體(抗TAA抗體)形成雙特異性抗體。亦即，本發明又提供一種包含本發明之抗CD137抗體或其抗原鍵結片段及抗TAA抗體或其抗原鍵結片段之雙特異性抗體(亦稱為「本發明之抗TAA-抗CD137雙特異性抗體」)。作為TAA，若可表現於腫瘤之細胞表面，則未受到特別限定，然而，例如可使用HER2、EGFR、EpCAM、CEA、BCMA、PSMA，CD19、CD20、CD22、CD33、CD37、CD38、CD123、CD276(B7-H3)、GPC2、GPC3、GPRC5D、WT-1、NY-ESO-1、CLDN4、CLDN6、CLDN18.2、TSPAN8。於一實施形態中，本發明之抗TAA-抗CD137雙特異性抗體係包含抗CD137抗體之scFv，於一實施形態中，本發明之抗TAA-抗CD137雙特異性抗體係包含屬於以下之(a)~(e)中之任一者之抗CD137抗體之scFv； (a)由序列編號26之胺基酸編號1至242之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv； (b)由序列編號28之胺基酸編號1至244之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv； (c)由序列編號30之胺基酸編號1至249之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv； (d)由序列編號32之胺基酸編號1至244之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv；或 (e)由序列編號34之胺基酸編號1至247之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv。

於一實施形態中，本發明之抗TAA-抗CD137雙特異性抗體係包含抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段，於一實施形態中，本發明之抗TAA-抗CD137雙特異性抗體係包含IgG型之抗CLDN4抗體。

為了進一步獲得對於本發明之理解，係於此提供參考之特定之實施例，然而此等係以例示為目的，而非限定本發明者。 [實施例]

[實施例1：選擇性地鍵結於表現於腹膜轉移癌細胞之抗原之抗體之取得] [1-1.源自患者之腹膜轉移癌細胞之取得] 自患者取得腹膜轉移癌細胞，係依據千脇史子、佐佐木博己之文獻「腹膜轉移癌症(胃、胰臟、卵巢癌等)細胞株之建立」(佐佐木博己編『 Practical Guide for Cancer Research using Patient-Derived Experimental Model』羊土公司、2019年、p.28-37)中所記載之方法來進行。將由患者採取出之腹水於室溫、以430×g離心3分鐘，去除上清液後，於沉澱物中添加溶血緩衝液使其溶血。於離心後去除上清液，並添加Dulbecco’s PBS(-)(日水製藥公司、05913、以下「稱為PBS(-)」)50mL，將細胞洗淨。之後，於室溫下、以430×g離心3分鐘，回收細胞。將回收之腹水中之全細胞再懸浮於包含10% FBS(Thermo Fisher Scientific公司、10270−106)、×1 Antibiotic-Antimycotic (Thermo Fisher Scientific公司、15240062)之RPMI-1640(含有L-麩醯胺酸)培養基(富士軟片和光純藥公司、189-02025)、(以下，將實施例1中，添加了FBS等後之培養基稱為「RPMI-1640培養基」)中。稀釋懸浮液，於塗布有100mm膠原蛋白之培養皿(以下稱為「培養皿」)(IWAKI公司、4020-010)中，將細胞分別以5×10 ⁶~1×10 ⁷個/10mL進行播種，並於37℃、5% CO ₂恆溫箱中培養。腹水中之細胞中係存在接著系細胞與浮遊系細胞，接著系細胞中除了包含癌細胞以外，還包含癌細胞以外之細胞(纖維母細胞、腹膜間皮細胞等)。由於癌細胞以外之細胞係具有比癌細胞在更短時間內剝離之性質，故係將此等的細胞由腹水中之全細胞分離並除去。將癌細胞以外之細胞去除後，在使癌細胞增殖至培養皿面積之80%融合(confluent)程度後，重複進行將全細胞之1/2移至新的培養皿進行繼代之作業，將進行過5次以上繼代者作為接著系癌細胞。針對浮遊系細胞，由培養培養皿將培養上清液5mL與RPMI-1640培養基5ml播種新的100mm培養皿進行繼代，並將經過5次以上繼代者當作浮遊系癌細胞。在源自於患者1人之腹膜轉移癌細胞包含接著系癌細胞與浮遊系癌細胞之雙方並直接進行增殖之情況中，係將該等當作混合系癌細胞。本說明書中，將藉由上述方法所單離出之接著系癌細胞、浮遊系癌細胞或混合系癌細胞總稱為「腹膜轉移癌細胞」。將所取得之6細胞(NSC-9C、NSC-15CF、NSC-16C、NSC-20C、NSC-22C、NSC-32C、(以下亦稱為「6種腹膜轉移癌細胞」))使用於以後之探討。

[1-2：產生抗胃癌抗原抗體之融合瘤之製作] 使利用人類單株抗體開發技術「VelocImmune」(VelocImmune(註冊商標) antibody technology；Regeneron (美國專利6596541號))所製作出之VelocImmune老鼠對於腹膜轉移癌細胞免疫，並取得表現於抗腹膜轉移癌細胞之對於癌症抗原之抗體。將在實施例1-1中所取得之腹膜轉移癌細胞中之NSC-9C、NSC-15CF、NSC-16C之3細胞或NSC-20C、NSC-22C、NSC-32C之3細胞混合，懸浮於TiterMax(註冊商標)Gold ADJUVANT(Merck公司、T2684)或PBS(-)中，調製腹膜轉移癌細胞懸浮液。將此懸浮液投予數次至VelocImmune老鼠進行免疫。依據常見方法，由免疫之老鼠之淋巴節將淋巴球回收，並藉由將老鼠骨髓瘤細胞SP2/0(ATCC、CRL-1581)與細胞融合來製作融合瘤。藉由自動挑選裝置將融合瘤之單群體(colony)單離，取得單殖株化融合瘤細胞(以下稱為「殖株」)。將單離後之殖株於37℃、8% CO ₂恆溫箱中培養，將約14日後之上清液回收至96孔盤中，用於以下之實驗中。

[1-3：選擇性地結合至腹膜轉移癌細胞之抗體之篩選] (1)向腹膜轉移癌細胞及EpCAM表現細胞結合之確認實施例1-2中所獲得之殖株之細胞上清液中係包含抗體(以下稱為「殖株上清液中所包含之抗體」)。首先，藉由流式細胞術測定殖株上清液中所包含之抗體與在實施例1-1中所取得之6種腹膜轉移癌細胞之結合，選拔出產生對於腹膜轉移癌細胞具有強鍵結之抗體之殖株。流式細胞儀中係使用BV421 Goat Anti-Mouse Ig (Becton, Dickinson and Company公司、563846)。又，為了排除提供結合於屬於癌症抗原之EpCAM之抗體之殖株，係測定殖株上清液中所包含之抗體與表現人類EpCAM-Myc-DDK之CHO-K1細胞之結合。表現人類EpCAM-Myc-DDK之CHO-K1細胞係藉由將EPCAM(Myc-DDK-tagged)-Human epithelial cell adhesion molecule (EPCAM)(ORIGENE公司、RC201989)轉染至CHO-K1細胞(ATCC、CCL-61)來製作。藉由流式細胞術測定該細胞與殖株上清液中所包含之抗體之結合。流式細胞儀中係使用BV421 Goat Anti-Mouse Ig。為了選擇提供在EpCAM表現細胞中不顯示結合活性之上清液之殖株，而排除結合於該細胞之殖株。作為陽性控制組，係使用CD326(EpCAM) Monoclonal Antibody(1B7)，(eBioscience公司、14-9326)。此外，為了選拔出選擇性地結合於腹膜轉移癌細胞之殖株，係將結合於被培養之人類腹膜間皮細胞上之殖株排除。作為被培養之人類腹膜間皮細胞，係使用Human Mesothelial Cells(Zenbio公司、MES-F、Lot.MESM050311A) (以下亦稱為「被培養之人類腹膜間皮細胞」)，藉由Mesothelial Cell Growth Medium(Zenbio公司、MSO-1)培養之被培養之人類腹膜間皮細胞與殖株之結合之測定，係使用流式細胞法。流式細胞法中係使用BV421 Goat Anti-Mouse Ig。僅篩選出不結合於被培養之人類腹膜間皮細胞之殖株。藉由上述實驗，係取得3D11殖株，作為提供結合於6種腹膜轉移癌細胞中之5種以上，且不結合於人類EpCAM及培養腹膜間皮細胞之抗體之殖株。

(2)由融合瘤上清液精製抗體將3D11殖株於CD融合瘤培養基(Thermo Fisher Scientific公司、11279023)中培養。由培養上清液，使用MabSelectSuRe(GE Healthcare公司、17-5438-02)，來精製3D11抗體(以下係稱為「3D11」)。抗體之精製係依循常見方法。

[1-4：3D11所識別之抗原分子之鑑別] (1)藉由LC-MS/MS測定來進行之抗原候補分子之鑑別進行3D11之抗原候補分子之鑑別。作為本實驗中之控制組抗體，係使用1D10、10B5。此等的抗體在取得3D11之過程中顯示出與3D11不同的對腹膜轉移癌細胞之結合模式(binding pattern)。製作NSC-15CF之細胞勻漿。於細胞勻漿中添加3D11及控制組抗體2種(1D10、10B5)中之任1抗體，進一步添加Dynabeads Protein G (Life Technologies公司、10003D)，並進行攪拌及洗淨。將結合於Dynabeads Protein G之蛋白質使用Trypsin/LysC(Promega公司、V5072)進行消化(digest)，獲得胜肽混合物。將包含胜肽混合物之溶液供給至使用UltiMate3000RSLCnano(Thermo Fisher Scientific公司)及Orbitrap Fusion(Thermo Fisher Scientific公司)之LC-MS/MS測定。針對所獲得之LC-MS/MS數據，使用Progenesis QI for Proteomics(Waters公司)及Mascot(Matrix Science公司)軟體，進行比較定量解析(quantitative analysis)及胜肽/蛋白質鑑別，來鑑別結合之蛋白質。比較3D11與控制組抗體之結合蛋白質，且係鑑別CLDN4作為3D11之抗原候補分子。

(2)3D11之抗原決定為了決定藉由(1)所鑑別之CLDN4是否為3D11之抗原，因此進行對於人類CLDN4-Myc-DDK表現CHO-K1細胞之結合實驗。人類CLDN4-Myc-DDK表現CHO-K1細胞係藉由於CHO-K1細胞轉染CLDN4(Myc-DDK-tagged)-Human claudin 4 (CLDN4)(ORIGENE公司、RC200490)來進行製作。結果，由於3D11結合於人類CLDN4-Myc-DDK表現CHO-K1細胞，故係確認其係將CLDN4作為抗原識別。

[實施例2：3D11之序列決定及人類抗體之製作] 依據常見方法選殖編碼3D11之重鏈及輕鏈之基因，並決定3D11之鹼基序列及胺基酸序列。3D11之重鏈可變區域之胺基酸序列係示於序列編號2、輕鏈可變區域之胺基酸序列係示於序列編號4。藉由VelocImmune老鼠所製作之抗體係以內生性(endogenous)之免疫球蛋白重鏈及輕鏈之可變區域所對應之人類可變區域取代之抗體。亦即，使用VelocImmune技術所獲得之抗體，為具有人類抗體之可變區域及老鼠抗體之恆定區域之抗體(亦稱為「嵌合抗體」)。

[參考例：用於癌症腹膜轉移治療之抗CLDN4-抗CD3雙特異性抗體] 作為對於選擇性地於癌細胞表現之TAA之治療藥，已知有抗體、抗體-藥物複合體(ADC)抗體、Chimeric Antigen Receptor T-cell Therapy(CAR-T)等的各式各樣的種類之藥劑。其中，作為可以在低抗體濃度下獲得癌細胞選擇性細胞傷害活性之劃時代性的方法，亦已知有雙特異性T細胞召集抗體(T-cell-recruiting antibody)。因此，探討使用3D11之雙特異性T細胞召集抗體之製作。

(1)人源化抗CLDN4抗體之製作藉由以下之方法進行人類型抗CLDN4-抗CD3scFv雙特異性抗體之製作。人類型抗CLDN4抗體部分係依據常見方法分別設計為將人類重鏈之IgG1之恆定區域連結於3D11之重鏈可變區域，且將人類輕鏈κ鏈之恆定區域連結於輕鏈可變區域。進一步導入將重鏈之胺基酸編號238及239(EU編號：234及235)之胺基酸分別由白胺酸(L)取代為丙胺酸(A)之LALA突變(L234A及L235A)、分別將胺基酸編號370、372及411(EU編號：366、368及407)之胺基酸由蘇胺酸(T)取代為絲胺酸(S)、由L取代為A、由酪胺酸(Y)取代為纈胺酸(V)之杵-進入-臼(Knobs into holes)突變，以及，將胺基酸編號301(EU編號：297)之胺基酸由天門冬醯胺(N)取代為A之突變。將所製作之人源化抗CLDN4抗體稱為3D11.1。將編碼3D11.1之胺基酸序列之多核苷酸依據常見方法來合成，並插入pcDNA3.4 TOPO載體(Thermo Fisher scientific公司)。

(2)抗CD3scFv之製作抗CD3scFv部分，以日本專利第5686953號中所記載之老鼠抗CD3抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域之序列為基礎來製作。抗CD3scFv之人源化，係依文獻(Front Biosci.、2008、Vol.13、p.1619-1633)記載之方法為準來進行。此時，導入回復突變。將立體構造情報(PDB Code：5FCS)以MOLSIS Inc.公司所提供之統合計算化學系統MOE進行解析，並決定骨架領域內之回復突變之導入位置。人源化抗CD3scFv之胺基酸序列係示於序列編號41。將編碼序列編號41中記載之胺基酸序列之多核苷酸依據常見方法來合成，並插入pcDNA3.1(+)載體(Thermo Fisher scientific公司、V79020)中。

(3)抗CLDN4(3D11)-抗CD3scFv雙特異性抗體之製作使用編碼3D11.1及抗CD3scFv之載體，依據PCT/JP2021/41839之實施例7中所記載之方法，製作藉由抗CLDN4抗體之Fab領域與抗CD3抗體之scFv領域與Fc領域所構成之雙特異性抗體。將所製作之雙特異性抗體稱為抗CLDN4(3D11)-抗CD3scFv雙特異性抗體。

(4)抗CLDN4(3D11)-抗CD3scFv雙特異性抗體之藥效評估依據PCT/JP2021/41839之實施例9中所記載之方法測定抗CLDN4(3D11)-抗CD3scFv雙特異性抗體之in vitro中之redirected T cell cytotoxicity(RTCC)活性。確認抗CLDN4 (3D11)-抗CD3scFv雙特異性抗體具有RTCC活性。再依據PCT/JP2021/41839之實施例11中所記載之方法評估抗CLDN4(3D11)-抗CD3scFv雙特異性抗體之in vivo中之抗腫瘤活性。抗CLDN4(3D11)-抗CD3scFv雙特異性抗體在胃癌腹膜轉移in vivo老鼠模型中，顯示出抗腫瘤效果。依據此等的結果，係教示抗CLDN4(3D11)-抗CD3scFv雙特異性抗體對於癌症之治療有效。此外，為了針對抗CLDN4(3D11)-抗CD3scFv雙特異性抗體之安全性進行探討，而於食蟹猴之靜脈內中單次投予抗CLDN4(3D11)-抗CD3scFv雙特異性抗體。結果，在投予了抗CLDN4(3D11)-抗CD3scFv雙特異性抗體之猴中，係確認到死亡例及瀕死例。死亡之猴，在投予1小時後及6小時後、瀕死之猴，在投予1小時後、6小時後及24小時後中，其血中之IL-6量係顯著增加。根據此等的結果，抗CLDN4(3D11)-抗CD3scFv雙特異性抗體在in vitro及in vivo中發揮藥效，然而另一方面，有被認為因細胞激素之增加而產生嚴重的副作用的疑慮。因此，抗CLDN4(3D11)-抗CD3scFv雙特異性抗體係被判斷為不具有作為用於人類之癌症之治療之抗體之資格。

[實施例3：抗CLDN4(3D11)-抗CD137scFv雙特異性抗體之製作] 使用3D11製作與抗CD137scFv之雙特異性抗體(以下稱為「抗CLDN4(3D11)-抗CD137scFv雙特異性抗體」)，並實施探討。

[3-1.抗CD137抗體之取得] (1)CD137-Fc融合蛋白質之製作將編碼由序列編號42之胺基酸編號1至186之胺基酸序列所構成之人類CD137細胞外領域或由序列編號43之胺基酸編號1至186之胺基酸序列所構成之猴CD137細胞外領域之多核苷酸，分別插入pFUSE-hIgG1-Fc1載體(InvivoGen公司、pfuse-hg1fc1)中，來製作編碼CD137之細胞外領域與人類Fc之融合蛋白質(以下係分別稱為「人類CD137-人類Fc融合蛋白質」及「猴CD137-人類Fc融合蛋白質」)之表現用載體。將製作出之載體使用Expi293 Expression System Kit(Thermo Fisher Scientific公司、A14635)或ExpiCHO Expression System Kit(Thermo Fisher Scientific公司、A29133)，導入Expi293F細胞(Thermo Fisher Scientific公司、A14527)或ExpiCHO-S細胞(Thermo Fisher Scientific公司、A29133)中，進行培養。將分泌於培養上清液中之蛋白質使用MabSelect SuRe或HiTrap MabSelect SuRe(GE Healthcare公司、11-0034-94)進行精製，取得人類CD137-人類Fc融合蛋白質及猴CD137-人類Fc融合蛋白質。

(2)猴CD137-His tag-3×FLAG tag融合蛋白質之製作將編碼由序列編號43之胺基酸編號1至183之胺基酸序列所構成之猴CD137細胞外領域、序列編號44之His tag、及序列編號45之3×FLAG tag之多核苷酸串聯地插入pcDNA3.4 TOPO載體中，製作載體。將製作出之載體使用ExpiFectamine CHO Transfection Kit(Thermo Fisher Scientific公司、A29129)導入ExpiCHO-S細胞中，進行培養。將分泌於培養上清液中之蛋白質使用HisTrap excel (GE Healthcare Bioscience公司、17-3712-06)進行精製。將所獲得之融合蛋白質稱為「猴CD137-His tag-3×FLAG tag融合蛋白質」。

(3)抗CD137抗體產生融合瘤殖株之製作及篩選於VelocImmune老鼠、或AlivaMab老鼠(Ablexis公司、美國專利9346873號)中，數次投予人類CD137-人類Fc融合蛋白質或人類CD137-His tag蛋白質(R＆D SYSTEMS公司、9220-4B)與免疫佐劑，進行免疫。依據常見方法，由免疫之老鼠之淋巴節將淋巴球回收，藉由將老鼠骨髓瘤細胞SP2/0與細胞融合來製作融合瘤。藉由自動挑選裝置將融合瘤之單群體(colony)單離，取得單殖株化融合瘤細胞(以下稱為「殖株」)。將各殖株培養數天，獲得培養上清液。培養上清液中所包含之抗體對於CD137之結合之確認係以以下之方法來進行。對於CD137之結合，係藉由ELISA法來進行評估。評估中，係使用以人類CD137-His tag蛋白質、人類CD137-人類Fc融合蛋白質、猴CD137-人類Fc融合蛋白質或人類Fc蛋白質中之任一者塗布過之平面，二次抗體係使用Goat Anti-Mouse IgG，Human ads-HRP(SouthernBiotech公司、1030-05)。藉由上述方法，取得複數個可與人類CD137及猴CD137兩者結合之殖株。

(4)抗CD137抗體之取得與促效劑活性之確認將於(3)取得之殖株以Hybridoma-SFM(Thermo Fisher Scientific公司、12045-076)培養，自培養上清液使用MabSelect SuRe來精製抗CD137抗體。針對所精製之抗CD137抗體，進行其對於CD137之結合及CD137促效劑活性之確認。抗CD137抗體之對於CD137之結合之確認，係使用(3)中所記載之ELISA法來進行。抗CD137抗體之CD137促效劑活性之測定係使用4-1BB Bioassay套組(Promega公司、JA2351)，藉由以下之方法來進行。將FcγRIIb CHO-K1 Cells(Promega公司、JA2251)播種至384孔盤(Greiner Bio-One公司、781080)，並以37℃、5% CO ₂進行過夜培養。去除培養上清液，添加前述之各殖株之精製抗體與4-1BB Effector Cells(Promega公司、JA2351)，並於37℃、5% CO ₂下靜置6小時。添加Bio-Glo Reagent(Promega公司、JA2351)，來測定對於CD137促效劑活性產生反應之螢光酵素之表現誘導所產生之化學發光。為了評估FcγRIIb CHO-K1 Cells不存在下之CD137促效劑活性，係以不含有FcγRIIb CHO-K1 Cells之條件，進行與上述相同的實驗。進行過評估之抗CD137抗體之中，源自VelocImmune老鼠之3-34，以及源自AlivaMab老鼠之A2-32、A2-48及A2-73係具有對於人類及猴CD137之強結合活性，且係顯示出依存於FcγRIIb CHO-K1 Cells之存在之CD137促效劑活性。

(5)抗CD137抗體之基因序列之鑑別依據常見方法，由提供抗CD137抗體(3-34、A2-32、A2-48、A2-73)之殖株來調製細胞溶解液，合成cDNA，並鑑別抗體鹼基序列。鑑別後之鹼基序列之序列編號係顯示於表1。 [表1]

	重鏈可變區域之鹼基序列	輕鏈可變區域之鹼基序列
3-34	序列編號9	序列編號11
A2-32	序列編號13	序列編號15
A2-48	序列編號17	序列編號19
A2-73	序列編號21	序列編號23

[3-2.抗CLDN4(3D11)-抗CD137(3-34)scFv雙特異性抗體之製作] 以3D11及3-34之重鏈可變區域及輕鏈可變區域之序列為基礎，進行抗CLDN4(3D11)-抗CD137(3-34)scFv雙特異性抗體(以下亦稱為「3D11_3-34-j6_S」)之設計。所製作之3D11_3-34-j6_S係於人類IgG1κ型之抗CLDN4(3D11)抗體之重鏈羧基末端(亦稱為「C末端」)連結有GS連結子，且於GS連結子之C末端結合有包含抗CD137抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域之抗CD137(3-34)scFv(序列編號26)之胺基末端。此外，於3D11之人類IgG1恆定區域中導入L234A、L235A及P331S之胺基酸突變。製作編碼所設計之抗體之多核苷酸，依據常見方法插入pcDNA3.4 TOPO載體中。將前述表現載體基因導入至ExpiCHO-S細胞中，並由培養上清液將3D11_3-34-j6_S進行精製。所製作之3D11_3-34-j6_S係於in vitro中確認其具有抗CD137結合活性及CD137促效劑作用，係教示可期待其作為癌症治療藥之有效性。

[實施例4：抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體之製作] [4-1.人源化抗CLDN4(hKM3900)抗體之製作] 有報告指出，屬於抗CLDN4抗體之KM3900與屬於其他密連蛋白家族分子之CLDN6等相比，係選擇性地結合於CLDN4上(專利文獻1)。因此，以該報告為基礎，來進行KM3900之人源化抗體之製作。具體而言，係以KM3900之可變區域之人源化胺基酸序列為基礎，由人類Igγ1之恆定區域及人類Igκ之恆定區域之序列來進行人源化抗體之設計。人類Igγ1恆定區域中係導入L234A、L235A，及P331G之胺基酸突變，或，L234A、L235A，及P331S之胺基酸突變。依據常見方法製作人源化抗CLDN4(hKM3900)抗體，於以後之探討中使用。將具有L234A、L235A及P331G之胺基酸突變之抗體稱為「hKM3900」將具有L234A、L235A，及P331S之胺基酸突變之抗體稱為「hKM3900_S」。hKM3900之重鏈可變區域之胺基酸序列記載於序列編號6中，並將輕鏈可變區域之胺基酸序列記載於序列編號8。

[4-2.抗CLDN4-抗CD137scFv雙特異性抗體之製作] 由實施例3中所取得之抗CD137抗體(3-34、A2-32、A2-48、A2-73)來設計抗CD137scFv，並進行hKM3900與抗CD137scFv之雙特異性抗體之製作(表2)。將所製作之抗體總稱為「抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv」。

(1)編碼抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體之載體之製作以hKM3900之序列及抗CD137抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域之序列為基礎來設計抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體。抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體係於IgG1型之抗CLDN4抗體(hKM3900)之重鏈或輕鏈C末端結合有GS連結子，於GS連結子之C末端結合有包含抗CD137抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域之抗CD137scFv之胺基末端。此外，於hKM3900之人類IgG1恆定區域中，導入L234A、L235A及P331G或P331S之胺基酸突變。將所設計之抗體之情報記載於表2。製作編碼所設計之抗體之多核苷酸，依據常見方法插入pcDNA3.4 TOPO載體。將製作出之載體總稱為「抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體表現載體」。

(2)抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體之製作使用抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體表現載體，製作表2中所記載之11種之抗CLDN4 (hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體。具體而言，使用ExpiFectamine CHO Transfection Kit，於ExpiCHO-S細胞中導入抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體表現載體，使其於培養上清液中分泌抗CLDN4-抗CD137scFv雙特異性抗體。由所獲得之培養上清液，藉由使用MabSelect SuRe之親和性精製法來精製抗CLDN4 (hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體。此外，一部分之抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體係藉由使用HiLoad 26/600 superdex 200 pg(GE Healthcare公司、28-9893-36)或Superdex 200 Increase 10/300 GL(GE Healthcare公司、28-9909-44)之尺寸排除層析精製法來進行追加之精製。以後，亦將在實施例3及4所製作之抗CLDN4(3D11)-抗CD137(3-34)scFv雙特異性抗體及抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體總稱為「抗CLDN4-抗CD137scFv雙特異性抗體」。

[實施例5：抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體之結合活性及促效劑活性評估] 評估抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體對於CLDN4及CD137之結合活性，以及CD137促效劑活性。

[5-1.藉由流式細胞術進行之對於抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體之CLDN4之結合活性評估] 使用流式細胞術來評估抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體對於CLDN4之結合活性。將由CLDN4(Myc-DDK-tagged)-Human claudin 4調製之CLDN4基因插入pCMV6-AC-GFP Mammalian Expression Vector (ORIGENE公司、PS100010)中，製作人類CLDN4之表現載體。將人類CLDN4之表現載體導入CHO-K1細胞中，取得人類CLDN4表現CHO-K1。使用hKM3900及2種類之抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體(hKM3900_tA2-32LH及hKM3900_3-34-j6)作為受試抗體。將受試抗體以Stain Buffer(FBS)(BD Bioscience、554656)由最高濃度100μg/mL以公比3倍連續稀釋至5.08ng/mL，並以各自之受試抗體稀釋液將人類CLDN4表現CHO-K1染色。使用Allophycocyanin (APC) AffiniPure F(ab’)2 Fragment Goat Anti-Human IgG, Fcγ fragment specific(Jackson ImmunoResearch、109-136-170)作為二次抗體。以FACS Canto II(BD Bioscience)測定螢光強度。將測定結果使用GraphPad Prism進行解析，算出人類CLDN4與抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體之表觀(apparent)之解離常數(KD)。表3係顯示表觀之KD值。 2種類之抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體係顯示出與人源化抗CLDN4(hKM3900)抗體同樣的對於人類CLDN4之結合活性。其他之抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體係被認為係顯示出同等的CLDN4結合活性。

[5-2.藉由ELISA法進行之抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體對於CD137之結合活性評估] 使用ELISA法檢測抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體對於CD137之結合活性。ELISA係依據常見方法來進行。將20ng/20μL/well之人類CD137-His tag蛋白質(R＆D SYSTEMS、9220-4B)在384孔盤(Thermo Fisher Scientific公司、464718)中進行固相化。使用表2中所記載之11種之抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體及ctrl IgG_L-3-34-j6抗體作為受試抗體。ctrl IgG_L-3-34-j6抗體係於同型控制組(isotype control)抗體之輕鏈羧基末端連結有抗CD137scFv(3-34-j6)抗體之抗體。將受試抗體以含有5%Blocking One (Nacalai Tesque, Inc.、03953-95)之TBS-T(Nippon Gene公司、310-07375)進行連續稀釋，並添加20μL/well。抗體之最終濃度係如同圖1-1~1-4所示。二次抗體中係使用Goat Anti-Human IgG Fc，Multi-Species SP ads-HRP(SouthernBiotech公司、2014-05)。控制組抗體中係使用hKM3900。使用Infinite M200PRO(TECAN公司)來測定450nm與570nm之吸光度。結果示於圖1-1~1-4。抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體皆濃度依存性地結合至人類CD137-His tag蛋白質。根據此結果，可明確得知抗CD137scFv之連結位置係不影響對於人類CD137之結合活性。

[5-3.藉由表面電漿共振法進行之抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體對於CD137之結合活性評估] 使用表面電漿共振(SPR)法檢測抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體對於CD137之結合活性。SPR解析中係使用Biacore T200(GE Healthcare Japan公司)。作為配體，係使用將2種之抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體(hKM3900-3-34-j6、hKM3900_tA2-32LH)固定於Series S Sensor Chip ProteinA (GE Healthcare公司、29-1275-56)者。將以人類CD137-His tag或3-1(2)所製作之猴CD137-His tag-3×FLAG tag融合蛋白質使用HBS-EP+由最高濃度200nM至0.0977nM為止以公比2倍進行連續稀釋後，作為分析物。將分析物以50μL/分添加至結合有配體之流路2分鐘後，藉由將HBS-EP+以50μL/分添加10分鐘，來測定抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體之向CD137之結合與解離。使用藉由此實驗所獲得之結果，將人類CD137與抗CLDN4 (hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體之鍵結速度常數(ka)、解離速度常數(kd)、及解離常數(KD)，使用數據解析軟體(BIA Evaluation)來進行計算。ka、kd及KD之值係示於表4。由此結果可明確得知，抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體對於人類CD137及猴CD137抗體皆表示出同等的結合活性。

[5-4.抗CLDN4-抗CD137scFv雙特異性抗體於表現CLDN4之癌細胞之共存下之CD137促效劑活性之評估] 使用4-1BB Bioassay套組來評估抗CLDN4-抗CD137scFv雙特異性抗體之透過表現CLDN4之癌細胞所產生之特異性的CD137促效劑活性。於含有10%FBS(Cytiva公司、SH30070.03)之RPMI-1640培養基(Thermo Fisher Scientific公司、11875-093)中，使NCI-H322細胞(ECACC、95111734)懸浮，調製懸浮液。NCI-H322係表現CLDN4。於384孔盤(Greiner Bio-One公司、781080)中，以使其成為1×10 ⁴個/well的方式添加NCI-H322之懸浮液，並於37℃、5% CO ₂下進行過夜培養。次日，將培養基去除。將以含有1%FBS之RPMI-1640培養基稀釋過之受試抗體分別添加12.5μL/well。抗體之終濃度係如同圖2-1~圖2-3所示。受試抗體中，係使用3D11_3-34-j6_S、表2中所記載之抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體。作為控制組抗體，係使用hKM3900、ctrl IgG_L-3-34-j6抗體及Urelumab(BMS、國際公開編號2005/035584號中所記載之序列編號3及序列編號6)。使附屬於4-1BB Bioassay套組之4-1BB Effector Cells懸浮於每瓶含有7mL 1%FBS之RPMI-1640之樣本瓶中，於各孔中添加12.5μL，並於37℃、5% CO ₂下靜置6小時。於平面上添加Bio-Glo Reagent 25μL/well，使用EnVision 2103(Perkin Elmer公司)測定化學發光。結果示於圖2-1~圖2-3。抗CLDN4-抗CD137scFv雙特異性抗體在表現CLDN4之癌細胞之共存下，顯示出對於4-1BB Effector Cells之顯著的CD137促效劑活性。為了評估表現CLDN4之癌細胞不存在下之CD137促效劑活性，係於NCI-H322不存在之條件下藉由與上述同樣的實驗來進行。結果，在表現CLDN4之癌細胞不存在之情況下係未顯示出CD137促效劑活性(圖2-4~圖2-6)。根據此結果，抗CLDN4-抗CD137scFv雙特異性抗體係僅在表現CLDN4之癌細胞共存之情況下發揮CD137促效劑作用。另一方面，Urelumab在表現CLDN4之癌細胞之共存下雖顯示出CD137促效劑活性，然而該作用與抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體相比之下係弱。又，Urelumab在表現CLDN4之癌細胞不存在下亦顯示出CD137促效劑活性。根據此等結果，抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體具有毒性之疑慮係比Urelumab低，且係可期待在CLDN4高表現之腫瘤組織中顯示出具有特異性且強力的CD137促效劑作用。

[實施例6：抗CLDN4-抗CD137scFv雙特異性抗體之in vitro藥效評估] 實施抗CLDN4-抗CD137scFv雙特異性抗體之干擾素-γ產生促進機能及癌細胞傷害活性之評估。

[6-1.Expanded Pan T細胞之製作及凍結保存] (1)Expanded Pan T細胞之調製實施例6中，將於RPMI-1640(Sigma公司、R8758)中添加了終濃度10%之FBS(Cytiva公司、SH30084.03)，及終濃度1%之青黴素鏈黴素(Thermo Fisher Scientific公司、15070-063)者，稱為「培養培養基(culture medium)」。亦有於培養培養基中分別以終濃度1%添加MEM Non-essential Amino Acid(Merck公司、M7145)、Sodium pyruvate(Merck公司、S8636)、GlutaMAX I(Thermo Fisher Scientific公司、35050-061)、HEPES(Thermo Fisher Scientific公司、15630-080)之情況。將以使終濃度成為1-3μg/mL的方式稀釋之抗CD3抗體(BioLegend公司、317325)添加至培養皿中，將抗CD3抗體進行固相化。使用PanT Cell Isolation Kit, human(Miltenyi Biotec公司、130-096-535)，依據製造商推薦之步驟準則，由人類周邊血單核細胞(human peripheral blood mononuclear cells)(LONZA公司、CC-2702)將PanT細胞(包含CD4T細胞及CD8T細胞之雙方，以下稱為「PanT細胞」)單離。將單離後之PanT細胞離心分離，去除上清液後懸浮於培養培養基中。於前述之將抗CD3抗體固相化之培養皿中，將懸浮於培養培養基中之PanT細胞進行全量播種。進一步添加終濃度100-200U/mL之人類IL-2(PeproTech公司、200-2)及終濃度1-4μg/mL之抗CD28抗體(BioLegend公司、302923)，於37℃、5% CO ₂恆溫箱中進行培養。3日後將細胞回收，將回收後之細胞懸浮於培養培養基中，播種至培養皿中。進一步添加終濃度100-200U/mL之人類IL-2，並於37℃、5% CO ₂恆溫箱中進行培養。4日後，將細胞全量回收，並進行離心分離，去除上清液後，再懸浮於Cell Banker(Takara公司、CB011)或Bambanker(GS LYMPHOTEC Inc.,、CS-02-001)中，分取至管中，於-80℃下凍結保存。將在此凍結保存之細胞，在本說明書中，稱為「Expanded PanT細胞」。

[6-2.60As6-Luc/GFP表現細胞之製作] 包含Luc/GFP之慢病毒溶液之調製，係使用L293T細胞(Thermo Fisher Scientific公司、K4975-00)，依據常見方法來實施。將以pCDH-CMV-GL3-EF1a-GFP-T2A-puro為基礎之載體(廣島大學醫系科學研究科細胞分子生物學研究室高橋陵宇副教授所寄贈(PLoS One、2015、Vol.10、e0123407))導入L293T細胞，係使用Opti-MEM Reduced Serum Medium，GlutaMAX Supplement(Thermo Fisher Scientific公司、51985-034)、MISSION(註冊商標) Lentiviral Packaging Mix(SIGMA公司、SHP001)、Lipofectamin LTX(Thermo Fisher Scientific公司、15338100)。藉由L293T細胞所增殖之GFP表現慢病毒之回收，係使用45μm Millex(註冊商標)-HV過濾器(Merck Millipore公司、SLHV033RS)。病毒溶液係分別於cryovial (Nalgene公司、5000-0020)中注入1mL，於-80℃下凍結保存。依據常見方法，使60As6-Luc/GFP表現慢病毒感染屬於表現CLDN4之癌細胞株之60As6細胞(受讓自Biomaterials研究所之柳原五吉先生)，製作60As6-Luc/GFP表現細胞。為了提高感染效率，係使用Polybrene (SantaCruz公司、sc-134220)。作為培養基，係使用包含10%FBS、2μg/mL Puromaycin(Thermo Fisher Scientific公司、A-11138-02)之RPMI-1640。本說明書中，將所建立之細胞稱為「60As6-Luc/GFP細胞」。藉由流式細胞術確認60As6-Luc/GFP細胞係內生性地高表現CLDN4。構築後之細胞係使用於後續之實驗中。

[6-3.抗CLDN4(3D11)-抗CD137scFv雙特異性抗體在癌細胞與T細胞之共培養系中之干擾素-γ產生促進機能評估] 評估在60As6-Luc/GFP細胞與Expanded PanT細胞之共培養系中之抗CLDN4(3D11)-抗CD137scFv雙特異性抗體之干擾素-γ產生促進機能。將0.1μg/100μL/well之抗CD3抗體添加至平底96孔盤(IWAKI公司、3860-096)中，將抗CD3抗體於平面(plate)進行固相化。於平面上以使60As6-Luc/GFP細胞成為5×10 ⁴個/50μL/well的方式進行播種，並於37℃、5% CO ₂恆溫箱中培養。次日，於前述平面上，將2×10 ⁵個/30μL/well之Expanded PanT細胞進行播種。將受試抗體及同型控制組於培養培養基中，由最高濃度50000ng/mL起，以5倍公比進行連續稀釋，並分別添加20μL。使用Urelumab及抗CLDN4(3D11)-抗CD137scFv雙特異性抗體(3D11_3-34-j6_S)作為受試抗體，並使用IgG(溶菌酶)-scFv(CD137)(公司內調製)作為同型控制組。6日後，使用AlphaLISA干擾素-γ測定套組(Perkin Elmer公司、AL217C)，依循製造商推薦之步驟準則，測定上清液中之干擾素-γ產生量。圖3-1係顯示干擾素-γ產生量與抗體濃度之反應曲線。抗CLDN4(3D11)-抗CD137scFv雙特異性抗體在屬於表現CLDN4之癌細胞株之60As6-Luc/GFP細胞與Expanded PanT細胞之共培養系中，顯示出干擾素-γ產生促進作用。抗CLDN4(3D11)-抗CD137scFv雙特異性抗體之干擾素-γ產生促進機能係顯著地強於Urelumab。

[6-4.抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體在癌細胞與T細胞之共培養系中之干擾素-γ產生促進機能評估] 以與6-3同樣的方法，評估在60As6-Luc/GFP細胞與Expanded PanT細胞之共培養系中之抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體之干擾素-γ產生促進機能。抗CD3抗體係以使其成為0.03μg/100μL/well的方式於96孔盤中進行固相化。將60As6-Luc/GFP細胞以2×10 ⁴個/50μL/well進行播種。又，Expanded PanT細胞係以8×10 ⁴個/30μL/well進行播種。作為受試抗體，係使用由最高濃度5000ng/mL起，以2倍公比進行連續稀釋之Urelumab或抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體(hKM3900_3-34-j6或hKM3900_tA2-32LH)。將每種受試抗體及同型控制組(溶菌酶抗體)分別添加20μL。於4日後測定上清液中之干擾素-γ產生量。圖3-2係顯示干擾素-γ產生量與抗體濃度之反應曲線。抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體在60As6-Luc/GFP細胞與Expanded PanT細胞之共培養系中，顯示出干擾素-γ產生促進機能。此等的雙特異性抗體之干擾素-γ產生促進機能係顯著地強於Urelumab。

[6-5.抗CLDN4(3D11)-抗CD137scFv雙特異性抗體在T細胞之單培養系中之干擾素-γ產生促進機能評估] 評估在Expanded PanT細胞之單培養系中之抗CLDN4(3D11)-抗CD137scFv雙特異性抗體之干擾素-γ產生促進機能。於平底96孔盤中，將抗CD3抗體以0.1μg/ 100μL/well進行添加，並將抗CD3抗體於平面進行固相化。於固相化後之平面上將2×10 ⁵個/80μL/well之Expanded PanT細胞進行播種。使用Urelumab、抗CLDN4(3D11)-抗CD3scFv雙特異性抗體(3D11_3-34-j6_S)作為受試抗體，使用IgG(溶菌酶)-scFv(CD137)(公司內調製)作為同型控制組。將受試抗體及同型控制組於培養培養基中，由最高濃度50000ng/mL起，以5倍公比進行連續稀釋，並分別添加20μL。6日後，使用AlphaLISA干擾素-γ測定套組，以與6-3.同樣的方法來測定上清液中之干擾素-γ產生量。圖3-3係顯示干擾素-γ產生量與抗體濃度之反應曲線。抗CLDN4(3D11)-抗CD137scFv雙特異性抗體在T細胞之單培養系中，雖未顯示出干擾素-γ產生促進機能，然而Urelumab係顯示出干擾素-γ產生促進作用。本結果係表示在表現CLDN4之癌細胞株不存在之環境中，抗CLDN4 (3D11)-抗CD137scFv雙特異性抗體係不顯示T細胞活性增強作用。

[6-6.抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體在T細胞之單培養系中之干擾素-γ產生促進機能評估] 藉由與6-5同樣的方法評估在Expanded PanT細胞之單培養系中之抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體之干擾素-γ產生促進機能。抗CD3抗體係以使其成為0.03μg/100μL/well的方式於96孔盤中進行固相化。將Expanded PanT細胞以8×10 ⁴個/80μL/well進行播種。作為受試抗體，係使用Urelumab、抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體(hKM3900_3-34-j6、hKM3900_tA2-32LH)。受試抗體及同型控制組(溶菌酶抗體)係由最高濃度5000ng/mL起，以2倍公比進行連續稀釋，並分別添加20μL。圖3-4係顯示干擾素-γ產生與抗體濃度之反應曲線。抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體在T細胞之單培養系中，雖未顯示出干擾素-γ產生促進機能，然而Urelumab係顯示出干擾素-γ產生促進機能。 6-5及6-6之結果，係意指在表現CLDN4之癌細胞株不存在之環境中，抗CLDN4-抗CD137scFv雙特異性抗體係不顯示T細胞活性增強作用，而係有減低作為抗CD137抗體之副作用而被報導之全身性的免疫賦活化作用之可能性之教示。

[6-7.抗CLDN4(3D11)-抗CD137scFv雙特異性抗體在癌細胞與T細胞之共培養系中之癌細胞傷害活性評估] 藉由60As6-Luc/GFP細胞與Expanded PanT細胞之共培養系評估抗CLDN4(3D11)-抗CD137scFv雙特異性抗體之癌細胞傷害活性(癌細胞之增殖抑制作用)。將60As6-Luc/GFP細胞於平底96孔盤中，分別以1×10 ⁴個/50μL/well進行播種，並於37℃、5% CO ₂恆溫箱進行培養。2小時後，於前述96孔盤中，將Expanded pan T細胞分別以1×10 ⁵個/50μL/well進行播種。作為受試抗體，係使用Urelumab及抗CLDN4(3D11)-抗CD137scFv雙特異性抗體。將此等的抗體於培養培養基中，由最高濃度40000ng/mL起以10倍公比進行連續稀釋，分別添加50μL。此外，將40ng/mL之抗CD3抗體分別添加50μL，使用37℃、5% CO ₂恆溫箱內之IncuCyte(註冊商標)ZOOM(莎多利斯公司)，開始各孔之螢光(GFP)面積之測定。將測定開始0小時起增加之螢光面積作為細胞增殖之指標。圖4係顯示受試抗體之癌細胞傷害作用(癌細胞增殖率)。圖4之縱軸，係顯示出由0小時起168小時間所增加之螢光面積，以未添加受試抗體之孔作為100%時之相對值。如圖4所示，抗CLDN4(3D11)-抗CD137scFv雙特異性抗體在60As6-Luc/GFP細胞與Expanded PanT細胞之共培養系中，係顯示出細胞傷害作用。本雙特異性抗體之細胞傷害活性係顯著地強於Urelumab。

[6-8.抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體在癌細胞與T細胞之共培養系中之癌細胞傷害活性評估] 將抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體之癌細胞殺傷作用，藉由60As6-Luc/GFP細胞與Expanded PanT細胞之共培養系進行評估。將抗CD3抗體於平底96孔盤(Perkin Elmer公司、6005680)中，以1ng/100μL/well進行添加，並於平面進行固定化。將平面以PBS(-)進行2度洗淨後，以2×10 ⁴個/50μL/well將60As6-Luc/GFP細胞進行播種，並於37℃、5% CO ₂恆溫箱進行培養。次日，於96孔盤中，將4.0×10 ⁴個/30μL/well之Expanded PanT細胞進行播種。此外，將自5000ng/mL至0.844ng/mL之濃度之受試抗體及同型控制組分別添加20μL。受試抗體中，使用Urelumab及抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體(hKM3900_3-34-j6、hKM3900_tA2-32LH)。於6日後進行測定。為了將一部分的孔之細胞殺傷，而於測定30分前分別添加1%Triton-X100(Sigma-Aldrich公司、T-9284) 11μL。使用ONE-Glo螢光酵素測定套組(Promega公司、E6120)，依循製造商推薦之步驟準則，將各孔之60As6-Luc/GFP細胞之螢光酵素活性使用ARVO Ⅹ-3(Perkin Elmer公司)進行測定。癌症殺傷率係以將未添加抗體之孔之螢光酵素化學發光之平均值訂為0%，並以添加了Triton-X100之孔之平均值訂為100%時之相對值來表示。使用抗溶菌酶抗體(公司內調製) 作為同型控制組。於圖5顯示60As6-Luc/GFP細胞之細胞殺傷率曲線。在60As6-Luc/GFP細胞與Expanded PanT細胞之共培養系中，由於抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體之添加，60As6-Luc/GFP細胞殺傷率係顯著地增加。另一方面，係未發現因抗CD137特異性抗體之Urelumab所造成之對於60As6-Luc/GFP細胞株之細胞殺傷率之增加。

[實施例7：抗CLDN4-抗CD137scFv雙特異性抗體之in vivo評估] [7-1.抗CLDN4-抗CD137scFv雙特異性抗體之in vivo抗腫瘤效果] 將NCI-H322細胞懸浮於PBS(-)(WAKO公司、045-29795)中，並將5.0×10 ⁶細胞/100μL之細胞懸浮液移植至7週齡之雌性老鼠(NOG、In-Vivo Science公司)之皮下。移植6日後，將3.4×10 ⁶細胞/200μL之人類周邊血單核細胞(Lonza、CC-2702)由尾靜脈注入。在人類周邊血單核細胞移植15日後，進行分群，並開始進行受試抗體之投予。將一群設為10隻，以使各群間之腫瘤體積成為幾乎相等的方式分配老鼠(day0)。使用hKM3900_tA2-32LH作為受試抗體。受試抗體及同型控制組(抗溶菌酶抗體)係混合於PBS中，投予至靜脈內。投予係在day0、4及8時進行，在投予時測定腫瘤徑及體重。使用以下之公式算出腫瘤體積。 [腫瘤體積(mm ³)] = [腫瘤之長徑(mm)] x [腫瘤之短徑(mm)] ²× 0.5 如同圖6所示，在投予了hKM3900_tA2-32LH0.1、1或10mg/kg之群中，係顯示出有意義的腫瘤體積縮小作用。縱軸係表示腫瘤體積，橫軸係表示初次投予後日數。實線及虛線係表示各群之腫瘤體積之平均值之推移，誤差槓係表示平均值之標準誤差。有意機率P值(＊：P＜0.05、＊＊：P＜0.01)係藉由Dunnett之多重比較測定，比較同型控制組投予群與hKM3900_tA2-32LH投予群之第12天之腫瘤體積來算出。hKM3900_tA2-32LH之0.1mg/kg投予群之第12天之例子數為9。

[7-2.抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體在食蟹猴中之安全性試驗] 為了探討抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體(hKM3900_3-34-j6及hKM3900_tA2-32LH)之安全性，而於食蟹猴之靜脈內單次投予抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體。結果，在投予了抗CLDN4 (hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體之猴中，並未確認到血清中之IL-6、TNF-α等的細胞激素濃度有特別的異常。因此，抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體在安全性之觀點來看，係判斷為適格作為用於癌症之治療之抗體。

[實施例8：藉由抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體進行之癌症之治療] [8-1.CLDN4之表現量之確認] 為了調查CLDN4作為癌症治療標的之通用性，係藉由The Cancer Genome Atlas(TCGA)，來調查癌症組織中之CLDN4之RNA之表現量。結果係確認在大腸癌、膀胱癌、肺癌等的癌症組織中CLDN4之表現係亢進。由此，係教示CLDN4不僅在腹膜轉移癌症中，在其他之癌症種類中，亦有成為治療標的之可能性。此外，藉由The Genotype-Tissue Expression(GTEx)，來進行正常組織中之CLDN4之RNA之表現量之調査。結果，係確認在一些正常組織中有表現CLDN4。然而，正常組織中，CLDN4之表現量係比在癌症組織中低。因此，以CLDN4為治療標的之癌症治療藥，係可確保廣泛的安全域，而教示其有成為副作用之疑慮低之治療藥之可能性。 [產業上之利用可能性]

本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係被期待對於癌症之治療有用。又，本發明之多核苷酸、表現載體、經轉形之宿主細胞及生產抗體之方法係對於產生前述抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體而言有用。 [序列表非關鍵詞文字]

以下之序列表之數字標題＜223＞中係記載「Artificial Sequence」之說明。具體而言，序列表之序列編號1為3D11之重鏈可變區域之鹼基序列，序列編號2為3D11之重鏈可變區域之胺基酸序列。序列編號3為3D11之輕鏈可變區域之鹼基序列，序列編號4為3D11之輕鏈可變區域之胺基酸序列。序列編號5為hKM3900之重鏈可變區域之鹼基序列，序列編號6為hKM3900之重鏈可變區域之胺基酸序列。序列編號7為hKM3900之輕鏈可變區域之鹼基序列，序列編號8為hKM3900之輕鏈可變區域之胺基酸序列。序列編號9為3-34之重鏈可變區域之鹼基序列，序列編號10為3-34之重鏈可變區域之胺基酸序列。序列編號11為3-34之輕鏈可變區域之鹼基序列，序列編號12為3-34之輕鏈可變區域之胺基酸序列。序列編號13為A2-32之重鏈可變區域之鹼基序列，序列編號14為A2-32之重鏈可變區域之胺基酸序列。序列編號15為A2-32之輕鏈可變區域之鹼基序列，序列編號16為A2-32之輕鏈可變區域之胺基酸序列。序列編號17為A2-48之重鏈可變區域之鹼基序列，序列編號18為A2-48之重鏈可變區域之胺基酸序列。序列編號19為A2-48之輕鏈可變區域之鹼基序列，序列編號20為A2-48之輕鏈可變區域之胺基酸序列。序列編號21為A2-73之重鏈可變區域之鹼基序列，序列編號22為A2-73之重鏈可變區域之胺基酸序列。序列編號23為A2-73之輕鏈可變區域之鹼基序列，序列編號24為A2-73之輕鏈可變區域之胺基酸序列。序列編號25為3-34-j6 scFv之鹼基序列，序列編號26為3-34-j6 scFv之胺基酸序列。序列編號27為tA2-32 scFv之鹼基序列，序列編號28為tA2-32 scFv之胺基酸序列。序列編號29為tA2-32LH scFv之鹼基序列，序列編號30為tA2-32LH scFv之胺基酸序列。序列編號31為tA2-48 scFv之鹼基序列，序列編號32為tA2-48 scFv之胺基酸序列。序列編號33為tA2-73 scFv之鹼基序列，序列編號34為tA2-73 scFv之胺基酸序列。序列編號35為hKM3900_3-34-j6之重鏈之鹼基序列，序列編號36為hKM3900_3-34-j6之重鏈之胺基酸序列。序列編號37為hKM3900_tA2-32LH之重鏈之鹼基序列，序列編號38為hKM3900_tA2-32LH之重鏈之胺基酸序列。序列編號39為hKM3900之輕鏈之鹼基序列，序列編號40為hKM3900之輕鏈之胺基酸序列。序列編號41為抗CD3 scFv-人類Fc融合蛋白質之胺基酸序列。序列編號42為人類CD137之胺基酸序列。序列編號43為猴CD137之胺基酸序列。序列編號44為His tag蛋白質之胺基酸序列。序列編號45為3×FLAG tag之胺基酸序列。序列編號46~54為GS連結子之胺基酸序列。序列編號55為GKPGS連結子之胺基酸序列。

[圖1-1]圖1-1係表示藉由ELISA法所測定評估之受試抗體之對於CD137之結合活性。圖之縱軸係表示由450nm之吸光度減去570nm之吸光度後之值，橫軸係表示受試抗體之濃度。符號係表示各別之受試抗體添加時之吸光度之平均值，誤差槓係表示標準偏差。 [圖1-2]圖1-2係表示藉由ELISA法所測定評估之受試抗體之對於CD137之結合活性。圖之縱軸係表示由450nm之吸光度減去570nm之吸光度後之值，橫軸係表示受試抗體之濃度。符號係表示各別之受試抗體添加時之吸光度之平均值。 [圖1-3]圖1-3係表示藉由ELISA法所測定評估之受試抗體之對於CD137之結合活性。圖之縱軸係表示由450nm之吸光度減去570nm之吸光度後之值，橫軸係表示受試抗體之濃度。符號係表示各別之受試抗體添加時之吸光度之平均值。 [圖1-4]圖1-4係表示藉由ELISA法所測定評估之受試抗體之對於CD137之結合活性。圖之縱軸係表示由450nm之吸光度減去570nm之吸光度後之值，橫軸係表示受試抗體之濃度。符號係表示各別之受試抗體添加時之吸光度之平均值。 [圖2-1]圖2-1係表示在表現CLDN4之癌細胞(NCI-H322細胞)與4-1BB Effector Cells之共培養試驗中之受試抗體之CD137促效劑活性。圖之縱軸係表示相對發光量，橫軸係表示受試抗體之濃度。符號係表示各別受試抗體添加時之相對發光量之平均值，誤差槓係表示標準偏差。 [圖2-2]圖2-2係表示在表現CLDN4之癌細胞(NCI-H322細胞)與4-1BB Effector Cells之共培養試驗中之受試抗體之CD137促效劑活性。圖之縱軸係表示相對發光量，橫軸係表示受試抗體之濃度。符號係表示各別之受試抗體添加時之相對發光量之平均值。 [圖2-3]圖2-3係表示在表現CLDN4之癌細胞(NCI-H322細胞)與4-1BB Effector Cells之共培養試驗中之受試抗體之CD137促效劑活性。圖之縱軸係表示相對發光量，橫軸係表示受試抗體之濃度。符號係表示各別受試抗體添加時之相對發光量之平均值，誤差槓係表示標準偏差。 [圖2-4]圖2-4係表示4-1BB Effector Cells之單獨培養試驗中之受試抗體之CD137促效劑活性。圖之縱軸係表示相對發光量，橫軸係表示受試抗體之濃度。符號係表示各別受試抗體添加時之相對發光量之平均值，誤差槓係表示標準偏差。 [圖2-5]圖2-5係表示4-1BB Effector Cells之單獨培養試驗中之受試抗體之CD137促效劑活性。圖之縱軸係表示相對發光量，橫軸係表示受試抗體之濃度。符號係表示各別之受試抗體添加時之相對發光量之平均值。 [圖2-6]圖2-6係表示4-1BB Effector Cells之單獨培養試驗中之受試抗體之CD137促效劑活性。圖之縱軸係表示相對發光量，橫軸係表示受試抗體之濃度。符號係表示各別受試抗體添加時之相對發光量之平均值，誤差槓係表示標準偏差。 [圖3-1]圖3-1係表示在60As6-Luc/GFP細胞與Expanded pan T細胞之共培養系中，各受試抗體添加時之干擾素-γ產生促進機能。縱軸係表示在抗體添加6日後之干擾素-γ產生量(pg/mL)，橫軸係表示抗體濃度。符號係表示抗體之各濃度中，干擾素-γ產生量之平均值。 [圖3-2]圖3-2係表示在60As6-Luc/GFP細胞與Expanded pan T細胞之共培養系中，各受試抗體添加時之干擾素-γ產生促進機能。圖之縱軸係表示抗體添加4日後之干擾素-γ產生量(pg/mL)，橫軸係表示抗體濃度。符號係表示抗體之各濃度中，干擾素-γ產生量之平均值，誤差槓係表示標準偏差。 [圖3-3]圖3-3係表示在Expanded pan T細胞之單培養系中，各受試抗體添加時之干擾素-γ產生量。圖之縱軸係表示在抗體添加6日後之干擾素-γ產生量(pg/mL)，橫軸係表示抗體濃度。符號係表示抗體之各濃度中，干擾素-γ產生量之平均值。 [圖3-4]圖3-4係表示在Expanded pan T細胞之單培養系中，各受試抗體添加時之干擾素-γ產生量。圖之縱軸係表示在抗體添加5日後之干擾素-γ產生量(pg/mL)，橫軸係表示抗體濃度。符號係表示抗體之各濃度中，干擾素-γ產生量之平均值，誤差槓係表示標準偏差。 [圖4]圖4係表示在60As6-Luc/GFP細胞與Expanded pan T細胞之共培養系中，因各受試抗體所造成之癌細胞傷害活性(癌細胞之增殖抑制作用)。圖之縱軸係顯示出由測定開始0小時起168小時所增加之螢光面積，以未添加受試抗體之孔作為100%時之細胞增殖率。橫軸係表示抗體濃度。符號係表示各抗體中之癌細胞增殖率之平均值。 [圖5]圖5係顯示在60As6-Luc/GFP細胞與Expanded pan T細胞之共培養系中之各受試抗體添加時之癌細胞傷害活性。圖之縱軸係顯示在抗體添加6日後之60As6-Luc/GFP細胞之化學發光之測定值中，將未添加抗體之平均值設為殺傷率0%，並將添加Triton-X100之平均值設為殺傷率100%時之癌細胞殺傷率(%)。橫軸係表示抗體濃度。符號係顯示抗體之各濃度中之癌細胞殺傷率之平均值，誤差槓係表示標準偏差。 [圖6]圖6係顯示將NCI-H322細胞進行皮下荷癌之PBMC移入老鼠中之腫瘤體積變化。圖之橫軸係表示初次投予後日數，縱軸係表示腫瘤體積之平均值，誤差槓係表示標準誤差。


          <![CDATA[<110>  安斯泰來製藥股份有限公司(Astellas Pharma Inc.)]]>
                 國立研究開發法人國立癌症研究中心(NATIONAL CANCER CENTER)
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          <![CDATA[<130>  FA1535-21350]]>
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          cag gtt cag ttg gga cag tct ggc ccc gaa gtg aag aaa cct ggc gcc         48
          Gln Val Gln Leu Gly Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala           
          1               5                   10                  15                
          tct gtg aag gtg tcc tgc aag gct tcc ggc tac tcc ttt atc tcc tac         96
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ile Ser Tyr           
                      20                  25                  30                    
          ggc atc tcc tgg gtc cga cag gct cct gga caa ggc ttg gaa tgg atg        144
          Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met           
                  35                  40                  45                        
          ggc tgg tcc tcc gtg tac aac ggc aac acc aac tac gtg cag aaa ttc        192
          Gly Trp Ser Ser Val Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Val Gln Lys Phe           
              50                  55                  60                            
          cag ggc aga gtg acc atg acc acc gac acc tct gcc tcc acc gcc tac        240
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr           
          65                  70                  75                  80            
          atg gaa ctg cgg tcc ctg aga tct gat gac gcc gcc gtg tac tac tgc        288
          Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Ala Ala Val Tyr Tyr Cys           
                          85                  90                  95                
          gcc aga gac tct tac tcc tcc ggc tgg tct tac tac tac tcc ggc atg        336
          Ala Arg Asp Ser Tyr Ser Ser Gly Trp Ser Tyr Tyr Tyr Ser Gly Met           
                      100                 105                 110                   
          gat gtg tgg ggc cag ggc aca aca gtg acc gtg tcc tcc                    375
          Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser                       
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          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 
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          Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Ala Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
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                      100                 105                 110         
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          tac ctg gcc tgg tat cag cag aag cct gga cag gct ccc cgg ctg ttg        144
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          atc tac ggc gct tct tct aga gcc aca ggc atc cct gac cgg ttc tcc        192
          Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser           
              50                  55                  60                            
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          Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Arg Leu Glu           
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          ccc gag gat ttc gcc gtg tac tac tgc cag cag tac ggc tcc tct cct        288
          Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro           
                          85                  90                  95                
          tac tct ttt ggc cag ggc acc aag ctg gaa atc aag cgg                    327
          Tyr Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg                       
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              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Arg Leu Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro 
                          85                  90                  95      
          Tyr Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 
                      100                 105                 
          <![CDATA[<210>  5]]>
          <![CDATA[<211>  369]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<400>  5]]>
          gaa gtg cag ctg gtt cag tct ggc gcc gaa gtg aag aaa cct ggc gcc         48
          Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala           
          1               5                   10                  15                
          tcc gtg aag atc tcc tgc aag gct tct ggc tac acc ttc acc gac tac         96
          Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr           
                      20                  25                  30                    
          tac atg aac tgg gtc cga cag gct cct gga cag gga ctt gag tgg atg        144
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met           
                  35                  40                  45                        
          gga gat gtg gtg ccc aac aac ggc gtg ccc acc tac aac cag aaa ttc        192
          Gly Asp Val Val Pro Asn Asn Gly Val Pro Thr Tyr Asn Gln Lys Phe           
              50                  55                  60                            
          aag ggc aga gtg acc atc acc gcc gac aag tct acc tcc acc gcc tac        240
          Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr           
          65                  70                  75                  80            
          atg gaa ctg cgg agc ctg aga tct gag gac acc gcc gtg tac tac tgc        288
          Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys           
                          85                  90                  95                
          gcc aga cct cac tac tac tac gcc ggc aga tct ggc gcc atg gat tat        336
          Ala Arg Pro His Tyr Tyr Tyr Ala Gly Arg Ser Gly Ala Met Asp Tyr           
                      100                 105                 110                   
          tgg gga cag ggc acc ctg gtc acc gtg tcc tct                            369
          Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser                               
                  115                 120                                           
          <![CDATA[<210>  6]]>
          <![CDATA[<211>  123]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成結構]]>
          <![CDATA[<400>  6]]>
          Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Asp Val Val Pro Asn Asn Gly Val Pro Thr Tyr Asn Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Pro His Tyr Tyr Tyr Ala Gly Arg Ser Gly Ala Met Asp Tyr 
                      100                 105                 110         
          Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120             
          <![CDATA[<210>  7]]>
          <![CDATA[<211>  327]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  hKM3900 VL]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  CDS]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(327)]]>
          <![CDATA[<400>  7]]>
          gac atc cag ctg acc cag tct cca tcc tct ctg tct gcc tct gtg ggc         48
          Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly           
          1               5                   10                  15                
          gac aga gtg aca att acc tgc acc gcc tcc tcc acc gtg tcc tct acc         96
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Thr Ala Ser Ser Thr Val Ser Ser Thr           
                      20                  25                  30                    
          tac ctg cac tgg tat cag cag aag ccc ggc aag gct ccc aag ctg ctg        144
          Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu           
                  35                  40                  45                        
          atc tac tcc acc tcc aat ctg gcc tct ggc gtg ccc tct aga ttc tcc        192
          Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser           
              50                  55                  60                            
          gga tct ggc tct gga acc gac tat acc ctg aca atc tcc agc ctg cag        240
          Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln           
          65                  70                  75                  80            
          cct gag gac ttc gcc acc tac tac tgc cac cag tac cac aga tcc cca        288
          Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Tyr His Arg Ser Pro           
                          85                  90                  95                
          cct acc ttt ggc cag ggc acc aag ctg gaa atc aag cgt                    327
          Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg                       
                      100                 105                                       
          <![CDATA[<210>  8]]>
          <![CDATA[<211>  109]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成結構]]>
          <![CDATA[<400>  8]]>
          Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Thr Ala Ser Ser Thr Val Ser Ser Thr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 
                  35                  40                  45              
          Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln 
          65                  70                  75                  80  
          Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Tyr His Arg Ser Pro 
                          85                  90                  95      
          Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 
                      100                 105                 
          <![CDATA[<210>  9]]>
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          <![CDATA[<221>  CDS]]>
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          <![CDATA[<400>  9]]>
          cag gtc cag ctg cag cag tct gag gct gag ctg gtg agg cct ggg gcc         48
          Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Glu Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala           
          1               5                   10                  15                
          tca gtg aag att tcc tgc aag gct ttt ggc tac acc ttc aca aac cat         96
          Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Phe Gly Tyr Thr Phe Thr Asn His           
                      20                  25                  30                    
          cat ata aac tgg gtg aag cag agg cct gga cag ggc ctg gac tgg att        144
          His Ile Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile           
                  35                  40                  45                        
          gga tat att aat cct tat aat gat tat act acc ttc aac cgg aag ttc        192
          Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Tyr Thr Thr Phe Asn Arg Lys Phe           
              50                  55                  60                            
          aag gac aag gcc aca ttg act gta cac aaa tcc tcc agc aca gcc tat        240
          Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val His Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr           
          65                  70                  75                  80            
          atg gag ctt agc ggc ctg aca tct gac gac tct gca gtc tat tac tgt        288
          Met Glu Leu Ser Gly Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys           
                          85                  90                  95                
          gca aga acc tgg ggt cac tgg tat ttc gat ctc tgg ggc cgt ggc acc        336
          Ala Arg Thr Trp Gly His Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly Thr           
                      100                 105                 110                   
          gtg gtc act gtc tcc tca                                                354
          Val Val Thr Val Ser Ser                                                   
                  115                                                               
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成結構]]>
          <![CDATA[<400>  10]]>
          Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Glu Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Phe Gly Tyr Thr Phe Thr Asn His 
                      20                  25                  30          
          His Ile Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Tyr Thr Thr Phe Asn Arg Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val His Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Gly Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Thr Trp Gly His Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly Thr 
                      100                 105                 110         
          Val Val Thr Val Ser Ser 
                  115             
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          <![CDATA[<222>  (1)..(327)]]>
          <![CDATA[<400>  11]]>
          gaa ata gtg atg acg cag tct cca gcc acc ctg tct gtg tct cca ggg         48
          Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly           
          1               5                   10                  15                
          gaa aga gcc acc ctc tcc tgt agg gcc agt cag agt gtt agc agc aac         96
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn           
                      20                  25                  30                    
          tta gcc tgg tac cag cag aaa cct ggc cag gct ccc agg ctc ctc atc        144
          Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile           
                  35                  40                  45                        
          tat gat tca tcc acc agg gcc act ggt atc cca gcc agg ttc agt ggc        192
          Tyr Asp Ser Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly           
              50                  55                  60                            
          agt ggg tct ggg aca gac ttc act ctc acc atc agc agc ctg cag tct        240
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser           
          65                  70                  75                  80            
          gaa gat ttt gca gtt tat tac tgt cag cag tat aat aac tgg cct ccg        288
          Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Asn Trp Pro Pro           
                          85                  90                  95                
          tgg acg ttc ggc caa ggg acc aag gtg gaa atc aaa cgg                    327
          Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg                       
                      100                 105                                       
          <![CDATA[<210>  12]]>
          <![CDATA[<211>  109]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成結構]]>
          <![CDATA[<400>  12]]>
          Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn 
                      20                  25                  30          
          Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Asp Ser Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Asn Trp Pro Pro 
                          85                  90                  95      
          Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 
                      100                 105                 
          <![CDATA[<210>  13]]>
          <![CDATA[<211>  354]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  CDS]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(354)]]>
          <![CDATA[<400>  13]]>
          cag gtg cag ctg cag gaa tcg ggc cca gga ctg gtg aag cct tcg gag         48
          Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu           
          1               5                   10                  15                
          acc ctg tcc ctc acc tgc act gtc tct ggc ggc tcc atc agt ggt tat         96
          Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Gly Tyr           
                      20                  25                  30                    
          tac tgg agc tgg atc cgg cag ccc cca ggg aag ggc ctg gag tgg att        144
          Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile           
                  35                  40                  45                        
          gga tat atc tat tac agt gga ttc acc aac tac aac ccc tcc ctc aag        192
          Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Phe Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys           
              50                  55                  60                            
          agt cga gtc acc ata tca gta gac acg tcc aag aac cag ttc tcc ctg        240
          Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu           
          65                  70                  75                  80            
          aaa ctg agc tct gtg acc gct gcg gac acg gcc gtg tat tat tgt acg        288
          Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr           
                          85                  90                  95                
          aga gat cac tcc cac tac tac tac atg gac gtc tgg ggc caa ggg acc        336
          Arg Asp His Ser His Tyr Tyr Tyr Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr           
                      100                 105                 110                   
          acg gtc acc gtc tcc tca                                                354
          Thr Val Thr Val Ser Ser                                                   
                  115                                                               
          <![CDATA[<210>  14]]>
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          <![CDATA[<400>  14]]>
          Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 
          1               5                   10                  15      
          Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Gly Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Phe Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 
              50                  55                  60                  
          Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr 
                          85                  90                  95      
          Arg Asp His Ser His Tyr Tyr Tyr Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Thr Val Ser Ser 
                  115             
          <![CDATA[<210>  15]]>
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          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  CD]]>S
          <![CDATA[<222>  (1)..(333)]]>
          <![CDATA[<400>  15]]>
          cag tct gtg ctg act cag cca ccc tca gcg tct ggg acc ccc ggg cag         48
          Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln           
          1               5                   10                  15                
          agg gtc acc atc tct tgt tct gga agc agc tcc aac atc gga agt aat         96
          Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn           
                      20                  25                  30                    
          act gta aac tgg tac cag cag ttc cca gga acg gcc ccc aaa ctc ctc        144
          Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu           
                  35                  40                  45                        
          atc tat agt aat aat cag cgg ccc tca ggg gtc cct gac cga ttc tct        192
          Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser           
              50                  55                  60                            
          ggc tcc aag tct ggc acc tca gcc tcc ctg gcc atc agt ggg ctc cag        240
          Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln           
          65                  70                  75                  80            
          tct gag gat gag gct gat tat tac tgt gca gga tgg gat gac agc ctg        288
          Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Gly Trp Asp Asp Ser Leu           
                          85                  90                  95                
          aat ggt ccg gta ttc ggc gga ggg acc aag ctg acc gtc cta ggt            333
          Asn Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly               
                      100                 105                 110                   
          <![CDATA[<210>  16]]>
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          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<223>  合成結構]]>
          <![CDATA[<400>  16]]>
          Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 
          1               5                   10                  15      
          Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 
                      20                  25                  30          
          Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 
                  35                  40                  45              
          Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Gly Trp Asp Asp Ser Leu 
                          85                  90                  95      
          Asn Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 
                      100                 105                 110     
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          cag gtg cag ctg cag gag tcg ggc cca gga ctg gtg aag cct tcg gag         48
          Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu           
          1               5                   10                  15                
          acc ctg tcc ctc acc tgc act gtc tct ggt ggc tcc atc agt agt tac         96
          Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr           
                      20                  25                  30                    
          tac tgg agc tgg atc cgg cag ccc ccc ggg aag gga ctg gaa tgg att        144
          Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile           
                  35                  40                  45                        
          ggg tat atc tat tac agt ggg tac acc aac tac aac ccc tcc ctc aag        192
          Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys           
              50                  55                  60                            
          agt cga gtt aac ata tca gta gac acg tcc cag aac cag ttc tcc ctg        240
          Ser Arg Val Asn Ile Ser Val Asp Thr Ser Gln Asn Gln Phe Ser Leu           
          65                  70                  75                  80            
          aag ctg aat tct ctg acc gct gcg gac acg gcc gtt tat tac tgt gcg        288
          Lys Leu Asn Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala           
                          85                  90                  95                
          aga aca cac tcc tat tac tac ggt atg gac gtc tgg ggc caa ggg acc        336
          Arg Thr His Ser Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr           
                      100                 105                 110                   
          acg gtc acc gtc tcc tca                                                354
          Thr Val Thr Val Ser Ser                                                   
                  115                                                               
          <![CDATA[<210>  18]]>
          <![CDATA[<211>  118]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成結構]]>
          <![CDATA[<400>  18]]>
          Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 
          1               5                   10                  15      
          Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 
              50                  55                  60                  
          Ser Arg Val Asn Ile Ser Val Asp Thr Ser Gln Asn Gln Phe Ser Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Lys Leu Asn Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Thr His Ser Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Thr Val Ser Ser 
                  115             
          <![CDATA[<210>  19]]>
          <![CDATA[<211>  333]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  CDS]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(333)]]>
          <![CDATA[<400>  19]]>
          cag tct gtg ctg act cag cca ccc tca gcg tct ggg acc ccc ggg cag         48
          Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln           
          1               5                   10                  15                
          agg gtc acc atc tct tgt tct gga agc agc tcc aac atc gga aat aat         96
          Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn           
                      20                  25                  30                    
          cct gta aac tgg tac cag cag ttc cca gga acg gcc ccc aaa ctc ctc        144
          Pro Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu           
                  35                  40                  45                        
          atc tat agt aat aat cag cgg ccc tca ggg gtc cct gac cga ttc tct        192
          Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser           
              50                  55                  60                            
          ggc tcc aag tct ggc acc tca gcc tcc ctg gcc atc agt ggg ctc cag        240
          Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln           
          65                  70                  75                  80            
          tct gag gat gag gct gat tat tac tgt gaa gca tgg gat gac agc ctg        288
          Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Glu Ala Trp Asp Asp Ser Leu           
                          85                  90                  95                
          aat ggt ccg gta ttc ggc gga ggg acc aag ctg acc gtc cta ggt            333
          Asn Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly               
                      100                 105                 110                   
          <![CDATA[<210>  20]]>
          <![CDATA[<211>  111]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成結構]]>
          <![CDATA[<400>  20]]>
          Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 
          1               5                   10                  15      
          Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn 
                      20                  25                  30          
          Pro Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 
                  35                  40                  45              
          Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Glu Ala Trp Asp Asp Ser Leu 
                          85                  90                  95      
          Asn Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 
                      100                 105                 110     
          <![CDATA[<210>  21]]>
          <![CDATA[<211>  363]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  CDS]]>
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          <![CDATA[<400>  21]]>
          cag gtg cag ctg cag gag tcg ggc cca gga ctg gtg aag cct tcg gag         48
          Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu           
          1               5                   10                  15                
          acc ctg tcc ctc acc tgc act gtc tct ggt ggc tcc atc agt agt tac         96
          Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr           
                      20                  25                  30                    
          tac tgg acc tgg atc cgg cag ccc cca ggg aag gga ctg gaa ttg gtt        144
          Tyr Trp Thr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val           
                  35                  40                  45                        
          gga tat atc tat tac agt ggt tac acc agc tac aac ccc tcc ctc aag        192
          Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Tyr Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys           
              50                  55                  60                            
          agt cga gtc acc ata tca att gac acg tcc aag aac cag ttc tcc ctg        240
          Ser Arg Val Thr Ile Ser Ile Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu           
          65                  70                  75                  80            
          cag ctg aac tct gtg acc gct gcg gac acg gcc gtg tat ttc tgt gcg        288
          Gln Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala           
                          85                  90                  95                
          cga gat gac tat ggt ggt aac ggc tac tac ggt gtg gac gtc tgg ggc        336
          Arg Asp Asp Tyr Gly Gly Asn Gly Tyr Tyr Gly Val Asp Val Trp Gly           
                      100                 105                 110                   
          caa ggg acc acg gtc acc gtc tcc tca                                    363
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser                                       
                  115                 120                                           
          <![CDATA[<210>  22]]>
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          <![CDATA[<223>  合成結構]]>
          <![CDATA[<400>  22]]>
          Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 
          1               5                   10                  15      
          Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Trp Thr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val 
                  35                  40                  45              
          Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Tyr Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 
              50                  55                  60                  
          Ser Arg Val Thr Ile Ser Ile Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Asp Asp Tyr Gly Gly Asn Gly Tyr Tyr Gly Val Asp Val Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120     
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          cag tct gtg ctg act cag cca ccc tca gcg tct ggg acc ccc ggg cag         48
          Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln           
          1               5                   10                  15                
          agg gtc acc atc tct tgt tct ggc agc agc tcc aac atc gga aat aat         96
          Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn           
                      20                  25                  30                    
          cct gta aac tgg tac cgg cag ctc cca gga acg gcc ccc aaa ctc ctc        144
          Pro Val Asn Trp Tyr Arg Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu           
                  35                  40                  45                        
          atc tat agt aat aat cag cgg ccc tca ggg gtc cct gac cga ttc tct        192
          Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser           
              50                  55                  60                            
          ggc tcc aag tct ggc acc tca gcc tcc ctg gcc atc agt ggg ctc cag        240
          Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln           
          65                  70                  75                  80            
          tct gag gat gag gct gat tat tac tgt gca gca tgg gat gac agc ctg        288
          Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu           
                          85                  90                  95                
          aat ggt tgg gtg ttc ggc gga ggg acc aag ctg acc gtc cta ggt            333
          Asn Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly               
                      100                 105                 110                   
          <![CDATA[<210>  24]]>
          <![CDATA[<211>  111]]>
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          <![CDATA[<223>  合成結構]]>
          <![CDATA[<400>  24]]>
          Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 
          1               5                   10                  15      
          Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn 
                      20                  25                  30          
          Pro Val Asn Trp Tyr Arg Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 
                  35                  40                  45              
          Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 
                          85                  90                  95      
          Asn Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 
                      100                 105                 110     
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          <![CDATA[<223>  3-34-j6 scFv]]>
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          <![CDATA[<222>  (1)..(726)]]>
          <![CDATA[<400>  25]]>
          gaa gtt cag ctg ttg gaa agt ggt ggc gga ctg gtc cag cct ggc gaa         48
          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Glu           
          1               5                   10                  15                
          tct ctg aga ctg agc tgc aag gcc ttc ggg tat acc ttt acc aac cac         96
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Phe Gly Tyr Thr Phe Thr Asn His           
                      20                  25                  30                    
          cac atc aat tgg gtt cga caa gcc cct ggc aag tgc ctg gaa tgg gtc        144
          His Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Val           
                  35                  40                  45                        
          gga tat atc aac ccc tac aac gac tac acc acc ttc aac gac aag ttc        192
          Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Tyr Thr Thr Phe Asn Asp Lys Phe           
              50                  55                  60                            
          aag gac cgg ttc acc ctg tcc gtg gat aag tcc aag agc acc gct tac        240
          Lys Asp Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Lys Ser Thr Ala Tyr           
          65                  70                  75                  80            
          ctg cag atg aac tcc ctg aga gcc gag gat aca gct gtg tat tac tgt        288
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys           
                          85                  90                  95                
          gcc cgg acc tgg ggc cac tgg tac ttt gat ttg tgg ggc cag gga acc        336
          Ala Arg Thr Trp Gly His Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr           
                      100                 105                 110                   
          ctc gtg aca gtc tct tct ggc ggc gga gga agc gga ggc gga ggt tca        384
          Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser           
                  115                 120                 125                       
          ggc ggc ggt gga tct aac atc cag atg acc cag tct cca tcc agc ctg        432
          Gly Gly Gly Gly Ser Asn Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu           
              130                 135                 140                           
          tct gcc tct gtg ggc gac aga gtg aca att acc tgt cgg gcc tct cag        480
          Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln           
          145                 150                 155                 160           
          tcc gtg tcc agc aat ctg gct tgg tat cag cag aag ccc ggc aag gct        528
          Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala           
                          165                 170                 175               
          ccc aag ctg ctg atc tac gac tcc tcc acc aga gct acc ggc gtg cca        576
          Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ser Ser Thr Arg Ala Thr Gly Val Pro           
                      180                 185                 190                   
          tct aga ttc tcc ggc tct ggc tct ggc acc gac ttt acc ctg aca att        624
          Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile           
                  195                 200                 205                       
          tcc agc ctg cag cct gag gac ttc gcc acc tac tac tgc cag cag tac        672
          Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr           
              210                 215                 220                           
          aac aac tgg cct cct tgg acc ttc ggc tgc ggc acc aaa ctg gaa atc        720
          Asn Asn Trp Pro Pro Trp Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Ile           
          225                 230                 235                 240           
          aag cgc                                                                726
          Lys Arg                                                                   
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          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<400>  26]]>
          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Glu 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Phe Gly Tyr Thr Phe Thr Asn His 
                      20                  25                  30          
          His Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Tyr Thr Thr Phe Asn Asp Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Asp Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Lys Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Thr Trp Gly His Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr 
                      100                 105                 110         
          Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
                  115                 120                 125             
          Gly Gly Gly Gly Ser Asn Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu 
              130                 135                 140                 
          Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala 
                          165                 170                 175     
          Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ser Ser Thr Arg Ala Thr Gly Val Pro 
                      180                 185                 190         
          Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 
                  195                 200                 205             
          Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr 
              210                 215                 220                 
          Asn Asn Trp Pro Pro Trp Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Ile 
          225                 230                 235                 240 
          Lys Arg 
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          cag gtt cag ttg caa gaa tct ggc cca ggc ctc gtg aag ccc tcc gaa         48
          Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu           
          1               5                   10                  15                
          aca ctg tct ctg acc tgc aca gtg tcc ggc ggc tct atc tct ggc tac         96
          Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Gly Tyr           
                      20                  25                  30                    
          tac tgg tcc tgg atc aga cag cct cct ggc aag tgc ctg gaa tgg atc        144
          Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Ile           
                  35                  40                  45                        
          ggc tac atc tac tac tct ggc ttc acc aac tac aac ccc agc ctg aag        192
          Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Phe Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys           
              50                  55                  60                            
          tcc aga gtg acc atc agc gtg gac acc tct aag aac cag ttc tct ctg        240
          Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu           
          65                  70                  75                  80            
          aag ctg tcc tcc gtg acc gcc gct gat acc gct gtg tat tac tgc acc        288
          Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr           
                          85                  90                  95                
          cgg gac cac agc cac tac tac tac atg gac gtg tgg gga cag gga aca        336
          Arg Asp His Ser His Tyr Tyr Tyr Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr           
                      100                 105                 110                   
          acc gtg aca gtc tct tca ggc ggt ggt gga tca ggc ggc gga gga agt        384
          Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser           
                  115                 120                 125                       
          ggt ggc gga ggt tct cag tct gtg ctg acc caa cct cct tcc gct tct        432
          Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser           
              130                 135                 140                           
          ggc aca cct ggc cag aga gtg aca atc tct tgc tcc ggc tcc tcc tcc        480
          Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser           
          145                 150                 155                 160           
          aac atc ggc tct aac acc gtg aac tgg tat cag cag ttc ccc ggc acc        528
          Asn Ile Gly Ser Asn Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr           
                          165                 170                 175               
          gct cct aag ctg ctg atc tac tcc aac aac cag cgg cct tcc ggc gtg        576
          Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val           
                      180                 185                 190                   
          ccc gat aga ttc tct ggc tct aag tcc ggc acc tct gcc agc ctg gct        624
          Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala           
                  195                 200                 205                       
          att tct gga ctg cag agc gag gac gag gcc gac tat tat tgt gcc ggc        672
          Ile Ser Gly Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Gly           
              210                 215                 220                           
          tgg gac gac tct ctg aac ggc cct gtt ttt ggc tgc ggc acc aaa ctg        720
          Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Pro Val Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu           
          225                 230                 235                 240           
          act gtg ctg ggc                                                        732
          Thr Val Leu Gly                                                           
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          Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 
          1               5                   10                  15      
          Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Gly Tyr 
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          Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Phe Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 
              50                  55                  60                  
          Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr 
                          85                  90                  95      
          Arg Asp His Ser His Tyr Tyr Tyr Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
                  115                 120                 125             
          Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser 
              130                 135                 140                 
          Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Asn Ile Gly Ser Asn Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr 
                          165                 170                 175     
          Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala 
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          Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Pro Val Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu 
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          Thr Val Leu Gly 
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          caa tct gtt ctg acc caa cct cct tcc gcc tct ggc aca cct ggc cag         48
          Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln           
          1               5                   10                  15                
          aga gtg acc atc tct tgc tcc ggc tcc tcc tcc aac atc ggc tct aac         96
          Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn           
                      20                  25                  30                    
          acc gtg aac tgg tat cag cag ttc ccc ggc acc gct cct aag ctg ctg        144
          Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu           
                  35                  40                  45                        
          atc tac tcc aac aac cag cgg cct tcc ggc gtg ccc gat aga ttc tct        192
          Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser           
              50                  55                  60                            
          ggc tct aag tcc ggc acc tct gcc agc ctg gct att tct gga ctg cag        240
          Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln           
          65                  70                  75                  80            
          agc gag gac gag gcc gac tat tat tgt gcc ggc tgg gac gac tct ctg        288
          Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Gly Trp Asp Asp Ser Leu           
                          85                  90                  95                
          aac ggc cct gtt ttt ggc ggt ggc acc aaa ctg aca gtg ctt gga ggc        336
          Asn Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly           
                      100                 105                 110                   
          ggt ggt gga tca ggc ggc ggt gga agt ggt ggt ggt ggt agc gga ggt        384
          Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly           
                  115                 120                 125                       
          ggt gga tct cag gtg cag ctc caa gag tct gga cct ggc ctc gtg aag        432
          Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys           
              130                 135                 140                           
          cct tcc gag aca ctg tct ctg acc tgc aca gtg tcc ggc ggc tct atc        480
          Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile           
          145                 150                 155                 160           
          tct ggc tac tac tgg tcc tgg atc aga cag cct cct ggc aag gga ctc        528
          Ser Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu           
                          165                 170                 175               
          gag tgg atc ggc tac atc tac tac tct ggc ttc acc aac tac aac ccc        576
          Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Phe Thr Asn Tyr Asn Pro           
                      180                 185                 190                   
          agc ctg aag tcc cgc gtg acc atc agc gtg gac acc tct aag aac cag        624
          Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln           
                  195                 200                 205                       
          ttc tct ctg aag ctg tcc tcc gtg acc gcc gct gat acc gct gtg tat        672
          Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr           
              210                 215                 220                           
          tac tgc acc cgg gac cac agc cac tac tac tac atg gac gtg tgg gga        720
          Tyr Cys Thr Arg Asp His Ser His Tyr Tyr Tyr Met Asp Val Trp Gly           
          225                 230                 235                 240           
          cag gga aca acc gtg aca gtg tcc tcc                                    747
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser                                       
                          245                                                       
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          Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 
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                      100                 105                 110         
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          Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Phe Thr Asn Tyr Asn Pro 
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          cag gtt cag ttg caa gaa tct ggc cca ggc ctc gtg aag ccc tcc gaa         48
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          1               5                   10                  15                
          aca ctg tct ctg acc tgc aca gtg tcc ggc ggc tcc atc tct tcc tac         96
          Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr           
                      20                  25                  30                    
          tac tgg tcc tgg atc aga cag cct cct ggc aag tgc ctg gaa tgg atc        144
          Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Ile           
                  35                  40                  45                        
          ggc tac atc tac tac tcc ggc tac acc aac tac aac ccc agc ctg aag        192
          Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys           
              50                  55                  60                            
          tcc aga gtg aac atc tcc gtg gac acc agc cag aac cag ttc tct ctg        240
          Ser Arg Val Asn Ile Ser Val Asp Thr Ser Gln Asn Gln Phe Ser Leu           
          65                  70                  75                  80            
          aag ctg aac tcc ctg acc gcc gct gat acc gct gtg tat tac tgc gct        288
          Lys Leu Asn Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala           
                          85                  90                  95                
          cgg acc cac agc tac tac tat ggc atg gac gtg tgg gga caa ggg aca        336
          Arg Thr His Ser Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr           
                      100                 105                 110                   
          acc gtg aca gtc tct tca ggc ggt ggt gga tca ggc ggc gga gga agt        384
          Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser           
                  115                 120                 125                       
          ggt ggc gga ggt tct cag tct gtg ctg acc caa cct cct tcc gct tct        432
          Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser           
              130                 135                 140                           
          ggc aca cct ggc cag aga gtg acc atc agc tgt agc ggc tcc tcc tcc        480
          Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser           
          145                 150                 155                 160           
          aac atc ggc aac aac ccc gtg aac tgg tat cag cag ttc ccc ggc aca        528
          Asn Ile Gly Asn Asn Pro Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr           
                          165                 170                 175               
          gcc cct aag ctg ctg atc tac tcc aac aac cag cgg cct tcc ggc gtg        576
          Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val           
                      180                 185                 190                   
          ccc gat aga ttc tct ggc tct aag tcc ggc acc tct gcc agc ctg gct        624
          Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala           
                  195                 200                 205                       
          att tct gga ctg cag agc gag gac gag gcc gac tac tat tgc gag gct        672
          Ile Ser Gly Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Glu Ala           
              210                 215                 220                           
          tgg gac gac tct ctg aac ggc cct gtg ttt ggc tgt ggc acc aaa ctg        720
          Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Pro Val Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu           
          225                 230                 235                 240           
          act gtg ctg ggc                                                        732
          Thr Val Leu Gly                                                           
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          <![CDATA[<400>  32]]>
          Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 
          1               5                   10                  15      
          Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 
              50                  55                  60                  
          Ser Arg Val Asn Ile Ser Val Asp Thr Ser Gln Asn Gln Phe Ser Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Lys Leu Asn Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Thr His Ser Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
                  115                 120                 125             
          Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser 
              130                 135                 140                 
          Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Asn Ile Gly Asn Asn Pro Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr 
                          165                 170                 175     
          Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val 
                      180                 185                 190         
          Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala 
                  195                 200                 205             
          Ile Ser Gly Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Glu Ala 
              210                 215                 220                 
          Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Pro Val Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu 
          225                 230                 235                 240 
          Thr Val Leu Gly 
          <![CDATA[<210>  33]]>
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          <![CDATA[<400>  33]]>
          cag gtt cag ttg caa gaa tct ggc cca ggc ctc gtg aag ccc tcc gaa         48
          Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu           
          1               5                   10                  15                
          aca ctg tct ctg acc tgc aca gtg tcc ggc ggc tcc atc tct tcc tac         96
          Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr           
                      20                  25                  30                    
          tac tgg acc tgg atc aga cag cct cct ggc aag tgc ttg gaa ctc gtg        144
          Tyr Trp Thr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Cys Leu Glu Leu Val           
                  35                  40                  45                        
          ggc tac atc tac tac tcc ggc tac acc agc tac aac ccc agc ctg aag        192
          Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Tyr Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys           
              50                  55                  60                            
          tcc aga gtg acc atc agc atc gac acc tct aag aac cag ttc agc ctg        240
          Ser Arg Val Thr Ile Ser Ile Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu           
          65                  70                  75                  80            
          cag ctc aac tcc gtg acc gct gct gat acc gct gtg tac ttc tgc gcc        288
          Gln Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala           
                          85                  90                  95                
          aga gat gac tac ggc ggc aac ggc tat tat ggc gtg gac gtt tgg gga        336
          Arg Asp Asp Tyr Gly Gly Asn Gly Tyr Tyr Gly Val Asp Val Trp Gly           
                      100                 105                 110                   
          caa ggg aca acc gtg aca gtg tct agc gga ggt ggt gga tca ggc ggc        384
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly           
                  115                 120                 125                       
          ggt gga agt ggt ggt ggt ggc tct cag tct gtg ctg acc caa cct cct        432
          Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro           
              130                 135                 140                           
          tct gcc tct ggc aca cct ggc cag aga gtg aca atc tct tgc tcc ggc        480
          Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly           
          145                 150                 155                 160           
          tcc tcc tcc aac atc ggc aac aac ccc gtg aac tgg tac aga cag ctg        528
          Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn Pro Val Asn Trp Tyr Arg Gln Leu           
                          165                 170                 175               
          cca ggc aca gcc cct aag ctg ctg atc tac tcc aac aac cag cgg cct        576
          Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro           
                      180                 185                 190                   
          tcc ggc gtg ccc gat aga ttc tct gga tct aag tcc ggc acc agc gcc        624
          Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala           
                  195                 200                 205                       
          agc ctg gct att tct gga ctg cag agc gag gac gag gcc gac tac tac        672
          Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr           
              210                 215                 220                           
          tgt gcc gct tgg gac gat tct ctg aac gga tgg gtg ttc ggc tgc ggc        720
          Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Trp Val Phe Gly Cys Gly           
          225                 230                 235                 240           
          acc aaa ctg act gtg ctg gga                                            741
          Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly                                               
                          245                                                       
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          Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 
          1               5                   10                  15      
          Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Trp Thr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Cys Leu Glu Leu Val 
                  35                  40                  45              
          Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Tyr Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 
              50                  55                  60                  
          Ser Arg Val Thr Ile Ser Ile Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Asp Asp Tyr Gly Gly Asn Gly Tyr Tyr Gly Val Asp Val Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 
                  115                 120                 125             
          Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro 
              130                 135                 140                 
          Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn Pro Val Asn Trp Tyr Arg Gln Leu 
                          165                 170                 175     
          Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro 
                      180                 185                 190         
          Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala 
                  195                 200                 205             
          Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr 
              210                 215                 220                 
          Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Trp Val Phe Gly Cys Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 
                          245         
          <![CDATA[<210>  35]]>
          <![CDATA[<211>  2115]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  hKM3900_3-34-j6  HC]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  CDS]]>
          <![CDATA[<222>  (1]]>)..(2115)
          <![CDATA[<400>  35]]>
          gaa gtg cag ctg gtt cag tct ggc gcc gaa gtg aag aaa cct ggc gcc         48
          Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala           
          1               5                   10                  15                
          tcc gtg aag atc tcc tgc aag gct tct ggc tac acc ttc acc gac tac         96
          Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr           
                      20                  25                  30                    
          tac atg aac tgg gtc cga cag gct cct gga cag gga ctt gag tgg atg        144
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met           
                  35                  40                  45                        
          gga gat gtg gtg ccc aac aac ggc gtg ccc acc tac aac cag aaa ttc        192
          Gly Asp Val Val Pro Asn Asn Gly Val Pro Thr Tyr Asn Gln Lys Phe           
              50                  55                  60                            
          aag ggc aga gtg acc atc acc gcc gac aag tct acc tcc acc gcc tac        240
          Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr           
          65                  70                  75                  80            
          atg gaa ctg cgg agc ctg aga tct gag gac acc gcc gtg tac tac tgc        288
          Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys           
                          85                  90                  95                
          gcc aga cct cac tac tac tac gcc ggc aga tct ggc gcc atg gat tat        336
          Ala Arg Pro His Tyr Tyr Tyr Ala Gly Arg Ser Gly Ala Met Asp Tyr           
                      100                 105                 110                   
          tgg gga cag ggc acc ctg gtc acc gtg tcc tct gct agc aca aag ggc        384
          Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly           
                  115                 120                 125                       
          ccc tct gtg ttc cct ctg gct cct agc tct aag tcc acc tct ggc gga        432
          Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly           
              130                 135                 140                           
          aca gct gct ctg ggc tgt ctg gtc aag gac tac ttc cct gag cct gtg        480
          Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val           
          145                 150                 155                 160           
          acc gtg tct tgg aac tct ggc gct ctg aca tcc ggc gtg cac aca ttt        528
          Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe           
                          165                 170                 175               
          cca gct gtg ctg cag tcc tcc ggc ctg tac tct ctg tcc tct gtc gtg        576
          Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val           
                      180                 185                 190                   
          acc gtg cct tcc agc tct ctg gga acc cag acc tac atc tgc aat gtg        624
          Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val           
                  195                 200                 205                       
          aac cac aag cct tcc aac acc aag gtg gac aag aag gtg gaa ccc aag        672
          Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys           
              210                 215                 220                           
          tcc tgc gac aag acc cac acc tgt cct cca tgt cct gct cca gaa gct        720
          Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala           
          225                 230                 235                 240           
          gct ggc gga cct tcc gtg ttc ctg ttt cct cca aag cct aag gac acc        768
          Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr           
                          245                 250                 255               
          ctg atg atc tct cgg acc cct gaa gtg acc tgc gtg gtg gtg gat gtg        816
          Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val           
                      260                 265                 270                   
          tct cac gag gac cca gaa gtg aag ttc aat tgg tac gtg gac ggc gtg        864
          Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val           
                  275                 280                 285                       
          gaa gtg cac aac gcc aag acc aag cct aga gag gaa cag tac aac tcc        912
          Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser           
              290                 295                 300                           
          acc tac aga gtg gtg tcc gtg ctg acc gtg ctg cac cag gat tgg ctg        960
          Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu           
          305                 310                 315                 320           
          aac ggc aaa gag tac aag tgc aag gtg tcc aac aag gcc ctg cct gcc       1008
          Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala           
                          325                 330                 335               
          ggc atc gaa aag acc atc tcc aag gcc aag ggc cag cct agg gaa ccc       1056
          Gly Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro           
                      340                 345                 350                   
          cag gtt tac acc ttg cca cct tct cgg gac gag ctg acc aag aac cag       1104
          Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln           
                  355                 360                 365                       
          gtg tcc ctg acc tgt ctc gtg aag ggc ttc tac ccc tcc gat atc gcc       1152
          Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala           
              370                 375                 380                           
          gtg gaa tgg gag tct aat ggc cag cct gag aac aac tac aag aca acc       1200
          Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr           
          385                 390                 395                 400           
          cct cct gtg ctg gac tcc gac ggc tca ttc ttc ctg tac tcc aag ctg       1248
          Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu           
                          405                 410                 415               
          aca gtg gac aag tcc aga tgg cag cag ggc aac gtg ttc tcc tgc agc       1296
          Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser           
                      420                 425                 430                   
          gtg atg cac gag gcc ctg cac aat cac tac aca cag aag tct ctg tct       1344
          Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser           
                  435                 440                 445                       
          ctg agc ccc ggc aaa ggt ggc gga gga tct ggc gga ggc gga tcc gaa       1392
          Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu           
              450                 455                 460                           
          gtt cag ctg ttg gaa agt ggt ggc gga ctg gtc cag cct ggc gaa tct       1440
          Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Glu Ser           
          465                 470                 475                 480           
          ctg aga ctg agc tgc aag gcc ttc ggg tat acc ttt acc aac cac cac       1488
          Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Phe Gly Tyr Thr Phe Thr Asn His His           
                          485                 490                 495               
          atc aat tgg gtt cga caa gcc cct ggc aag tgc ctg gaa tgg gtc gga       1536
          Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Val Gly           
                      500                 505                 510                   
          tat atc aac ccc tac aac gac tac acc acc ttc aac gac aag ttc aag       1584
          Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Tyr Thr Thr Phe Asn Asp Lys Phe Lys           
                  515                 520                 525                       
          gac cgg ttc acc ctg tcc gtg gat aag tcc aag agc acc gct tac ctg       1632
          Asp Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Lys Ser Thr Ala Tyr Leu           
              530                 535                 540                           
          cag atg aac tcc ctg aga gcc gag gat aca gct gtg tat tac tgt gcc       1680
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala           
          545                 550                 555                 560           
          cgg acc tgg ggc cac tgg tac ttt gat ttg tgg ggc cag gga acc ctc       1728
          Arg Thr Trp Gly His Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu           
                          565                 570                 575               
          gtg aca gtc tct tct ggc ggc gga gga agc gga ggc gga ggt tca ggc       1776
          Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly           
                      580                 585                 590                   
          ggc ggt gga tct aac atc cag atg acc cag tct cca tcc agc ctg tct       1824
          Gly Gly Gly Ser Asn Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser           
                  595                 600                 605                       
          gcc tct gtg ggc gac aga gtg aca att acc tgt cgg gcc tct cag tcc       1872
          Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser           
              610                 615                 620                           
          gtg tcc agc aat ctg gct tgg tat cag cag aag ccc ggc aag gct ccc       1920
          Val Ser Ser Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro           
          625                 630                 635                 640           
          aag ctg ctg atc tac gac tcc tcc acc aga gct acc ggc gtg cca tct       1968
          Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ser Ser Thr Arg Ala Thr Gly Val Pro Ser           
                          645                 650                 655               
          aga ttc tcc ggc tct ggc tct ggc acc gac ttt acc ctg aca att tcc       2016
          Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser           
                      660                 665                 670                   
          agc ctg cag cct gag gac ttc gcc acc tac tac tgc cag cag tac aac       2064
          Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn           
                  675                 680                 685                       
          aac tgg cct cct tgg acc ttc ggc tgc ggc acc aaa ctg gaa atc aag       2112
          Asn Trp Pro Pro Trp Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys           
              690                 695                 700                           
          cgc                                                                   2115
          Arg                                                                       
          705                                                                       
          <![CDATA[<210>  36]]>
          <![CDATA[<211>  705]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成結構]]>
          <![CDATA[<400>  36]]>
          Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Asp Val Val Pro Asn Asn Gly Val Pro Thr Tyr Asn Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Pro His Tyr Tyr Tyr Ala Gly Arg Ser Gly Ala Met Asp Tyr 
                      100                 105                 110         
          Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 
                  115                 120                 125             
          Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly 
              130                 135                 140                 
          Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 
          145                 150                 155                 160 
          Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 
                          165                 170                 175     
          Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 
                      180                 185                 190         
          Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val 
                  195                 200                 205             
          Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys 
              210                 215                 220                 
          Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 
                          245                 250                 255     
          Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 
                      260                 265                 270         
          Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 
                  275                 280                 285             
          Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 
              290                 295                 300                 
          Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala 
                          325                 330                 335     
          Gly Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 
                      340                 345                 350         
          Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln 
                  355                 360                 365             
          Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 
              370                 375                 380                 
          Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 
          385                 390                 395                 400 
          Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 
                          405                 410                 415     
          Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 
                      420                 425                 430         
          Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu 
              450                 455                 460                 
          Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Glu Ser 
          465                 470                 475                 480 
          Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Phe Gly Tyr Thr Phe Thr Asn His His 
                          485                 490                 495     
          Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Val Gly 
                      500                 505                 510         
          Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Tyr Thr Thr Phe Asn Asp Lys Phe Lys 
                  515                 520                 525             
          Asp Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Lys Ser Thr Ala Tyr Leu 
              530                 535                 540                 
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
          545                 550                 555                 560 
          Arg Thr Trp Gly His Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu 
                          565                 570                 575     
          Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 
                      580                 585                 590         
          Gly Gly Gly Ser Asn Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser 
                  595                 600                 605             
          Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser 
              610                 615                 620                 
          Val Ser Ser Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro 
          625                 630                 635                 640 
          Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ser Ser Thr Arg Ala Thr Gly Val Pro Ser 
                          645                 650                 655     
          Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 
                      660                 665                 670         
          Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn 
                  675                 680                 685             
          Asn Trp Pro Pro Trp Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
              690                 695                 700                 
          Arg 
          705 
          <![CDATA[<210>  37]]>
          <![CDATA[<211>  2136]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  hKM3900_tA2-32LH HC]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  CDS]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(2136)]]>
          <![CDATA[<400>  37]]>
          gaa gtg cag ctg gtt cag tct ggc gcc gaa gtg aag aaa cct ggc gcc         48
          Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala           
          1               5                   10                  15                
          tcc gtg aag atc tcc tgc aag gct tct ggc tac acc ttc acc gac tac         96
          Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr           
                      20                  25                  30                    
          tac atg aac tgg gtc cga cag gct cct gga cag gga ctt gag tgg atg        144
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met           
                  35                  40                  45                        
          gga gat gtg gtg ccc aac aac ggc gtg ccc acc tac aac cag aaa ttc        192
          Gly Asp Val Val Pro Asn Asn Gly Val Pro Thr Tyr Asn Gln Lys Phe           
              50                  55                  60                            
          aag ggc aga gtg acc atc acc gcc gac aag tct acc tcc acc gcc tac        240
          Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr           
          65                  70                  75                  80            
          atg gaa ctg cgg agc ctg aga tct gag gac acc gcc gtg tac tac tgc        288
          Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys           
                          85                  90                  95                
          gcc aga cct cac tac tac tac gcc ggc aga tct ggc gcc atg gat tat        336
          Ala Arg Pro His Tyr Tyr Tyr Ala Gly Arg Ser Gly Ala Met Asp Tyr           
                      100                 105                 110                   
          tgg gga cag ggc acc ctg gtc acc gtg tcc tct gct agc aca aag ggc        384
          Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly           
                  115                 120                 125                       
          ccc tct gtg ttc cct ctg gct cct agc tct aag tcc acc tct ggc gga        432
          Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly           
              130                 135                 140                           
          aca gct gct ctg ggc tgt ctg gtc aag gac tac ttc cct gag cct gtg        480
          Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val           
          145                 150                 155                 160           
          acc gtg tct tgg aac tct ggc gct ctg aca tcc ggc gtg cac aca ttt        528
          Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe           
                          165                 170                 175               
          cca gct gtg ctg cag tcc tcc ggc ctg tac tct ctg tcc tct gtc gtg        576
          Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val           
                      180                 185                 190                   
          acc gtg cct tcc agc tct ctg gga acc cag acc tac atc tgc aat gtg        624
          Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val           
                  195                 200                 205                       
          aac cac aag cct tcc aac acc aag gtg gac aag aag gtg gaa ccc aag        672
          Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys           
              210                 215                 220                           
          tcc tgc gac aag acc cac acc tgt cct cca tgt cct gct cca gaa gct        720
          Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala           
          225                 230                 235                 240           
          gct ggc gga cct tcc gtg ttc ctg ttt cct cca aag cct aag gac acc        768
          Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr           
                          245                 250                 255               
          ctg atg atc tct cgg acc cct gaa gtg acc tgc gtg gtg gtg gat gtg        816
          Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val           
                      260                 265                 270                   
          tct cac gag gac cca gaa gtg aag ttc aat tgg tac gtg gac ggc gtg        864
          Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val           
                  275                 280                 285                       
          gaa gtg cac aac gcc aag acc aag cct aga gag gaa cag tac aac tcc        912
          Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser           
              290                 295                 300                           
          acc tac aga gtg gtg tcc gtg ctg acc gtg ctg cac cag gat tgg ctg        960
          Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu           
          305                 310                 315                 320           
          aac ggc aaa gag tac aag tgc aag gtg tcc aac aag gcc ctg cct gcc       1008
          Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala           
                          325                 330                 335               
          ggc atc gaa aag acc atc tcc aag gcc aag ggc cag cct agg gaa ccc       1056
          Gly Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro           
                      340                 345                 350                   
          cag gtt tac acc ttg cca cct tct cgg gac gag ctg acc aag aac cag       1104
          Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln           
                  355                 360                 365                       
          gtg tcc ctg acc tgt ctc gtg aag ggc ttc tac ccc tcc gat atc gcc       1152
          Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala           
              370                 375                 380                           
          gtg gaa tgg gag tct aat ggc cag cct gag aac aac tac aag aca acc       1200
          Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr           
          385                 390                 395                 400           
          cct cct gtg ctg gac tcc gac ggc tca ttc ttc ctg tac tcc aag ctg       1248
          Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu           
                          405                 410                 415               
          aca gtg gac aag tcc aga tgg cag cag ggc aac gtg ttc tcc tgc agc       1296
          Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser           
                      420                 425                 430                   
          gtg atg cac gag gcc ctg cac aat cac tac aca cag aag tct ctg tct       1344
          Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser           
                  435                 440                 445                       
          ctg agc ccc ggc aaa ggt ggc gga gga tct ggc gga ggc gga tcc caa       1392
          Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln           
              450                 455                 460                           
          tct gtt ctg acc caa cct cct tcc gcc tct ggc aca cct ggc cag aga       1440
          Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg           
          465                 470                 475                 480           
          gtg acc atc tct tgc tcc ggc tcc tcc tcc aac atc ggc tct aac acc       1488
          Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Thr           
                          485                 490                 495               
          gtg aac tgg tat cag cag ttc ccc ggc acc gct cct aag ctg ctg atc       1536
          Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile           
                      500                 505                 510                   
          tac tcc aac aac cag cgg cct tcc ggc gtg ccc gat aga ttc tct ggc       1584
          Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly           
                  515                 520                 525                       
          tct aag tcc ggc acc tct gcc agc ctg gct att tct gga ctg cag agc       1632
          Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln Ser           
              530                 535                 540                           
          gag gac gag gcc gac tat tat tgt gcc ggc tgg gac gac tct ctg aac       1680
          Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Gly Trp Asp Asp Ser Leu Asn           
          545                 550                 555                 560           
          ggc cct gtt ttt ggc ggt ggc acc aaa ctg aca gtg ctt gga ggc ggt       1728
          Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly           
                          565                 570                 575               
          ggt gga tca ggc ggc ggt gga agt ggt ggt ggt ggt agc gga ggt ggt       1776
          Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly           
                      580                 585                 590                   
          gga tct cag gtg cag ctc caa gag tct gga cct ggc ctc gtg aag cct       1824
          Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro           
                  595                 600                 605                       
          tcc gag aca ctg tct ctg acc tgc aca gtg tcc ggc ggc tct atc tct       1872
          Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser           
              610                 615                 620                           
          ggc tac tac tgg tcc tgg atc aga cag cct cct ggc aag gga ctc gag       1920
          Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu           
          625                 630                 635                 640           
          tgg atc ggc tac atc tac tac tct ggc ttc acc aac tac aac ccc agc       1968
          Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Phe Thr Asn Tyr Asn Pro Ser           
                          645                 650                 655               
          ctg aag tcc cgc gtg acc atc agc gtg gac acc tct aag aac cag ttc       2016
          Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe           
                      660                 665                 670                   
          tct ctg aag ctg tcc tcc gtg acc gcc gct gat acc gct gtg tat tac       2064
          Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr           
                  675                 680                 685                       
          tgc acc cgg gac cac agc cac tac tac tac atg gac gtg tgg gga cag       2112
          Cys Thr Arg Asp His Ser His Tyr Tyr Tyr Met Asp Val Trp Gly Gln           
              690                 695                 700                           
          gga aca acc gtg aca gtg tcc tcc                                       2136
          Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser                                           
          705                 710                                                   
          <![CDATA[<210>  38]]>
          <![CDATA[<211>  712]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成結構]]>
          <![CDATA[<400>  38]]>
          Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Asp Val Val Pro Asn Asn Gly Val Pro Thr Tyr Asn Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Pro His Tyr Tyr Tyr Ala Gly Arg Ser Gly Ala Met Asp Tyr 
                      100                 105                 110         
          Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 
                  115                 120                 125             
          Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly 
              130                 135                 140                 
          Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 
          145                 150                 155                 160 
          Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 
                          165                 170                 175     
          Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 
                      180                 185                 190         
          Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val 
                  195                 200                 205             
          Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys 
              210                 215                 220                 
          Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala 
          225                 230                 235                 240 
          Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 
                          245                 250                 255     
          Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 
                      260                 265                 270         
          Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 
                  275                 280                 285             
          Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 
              290                 295                 300                 
          Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala 
                          325                 330                 335     
          Gly Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 
                      340                 345                 350         
          Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln 
                  355                 360                 365             
          Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 
              370                 375                 380                 
          Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 
          385                 390                 395                 400 
          Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 
                          405                 410                 415     
          Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 
                      420                 425                 430         
          Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln 
              450                 455                 460                 
          Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg 
          465                 470                 475                 480 
          Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Thr 
                          485                 490                 495     
          Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
                      500                 505                 510         
          Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly 
                  515                 520                 525             
          Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln Ser 
              530                 535                 540                 
          Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Gly Trp Asp Asp Ser Leu Asn 
          545                 550                 555                 560 
          Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 
                          565                 570                 575     
          Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 
                      580                 585                 590         
          Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 
                  595                 600                 605             
          Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser 
              610                 615                 620                 
          Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 
          625                 630                 635                 640 
          Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Phe Thr Asn Tyr Asn Pro Ser 
                          645                 650                 655     
          Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe 
                      660                 665                 670         
          Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 
                  675                 680                 685             
          Cys Thr Arg Asp His Ser His Tyr Tyr Tyr Met Asp Val Trp Gly Gln 
              690                 695                 700                 
          Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
          705                 710         
          <![CDATA[<210>  39]]>
          <![CDATA[<211>  645]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  hKM3900 LC]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  CDS]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(645)]]>
          <![CDATA[<400>  39]]>
          gac atc cag ctg acc cag tct cca tcc tct ctg tct gcc tct gtg ggc         48
          Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly           
          1               5                   10                  15                
          gac aga gtg aca att acc tgc acc gcc tcc tcc acc gtg tcc tct acc         96
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Thr Ala Ser Ser Thr Val Ser Ser Thr           
                      20                  25                  30                    
          tac ctg cac tgg tat cag cag aag ccc ggc aag gct ccc aag ctg ctg        144
          Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu           
                  35                  40                  45                        
          atc tac tcc acc tcc aat ctg gcc tct ggc gtg ccc tct aga ttc tcc        192
          Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser           
              50                  55                  60                            
          gga tct ggc tct gga acc gac tat acc ctg aca atc tcc agc ctg cag        240
          Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln           
          65                  70                  75                  80            
          cct gag gac ttc gcc acc tac tac tgc cac cag tac cac aga tcc cca        288
          Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Tyr His Arg Ser Pro           
                          85                  90                  95                
          cct acc ttt ggc cag ggc acc aag ctg gaa atc aag cgt acg gtg gcc        336
          Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala           
                      100                 105                 110                   
          gct cct tcc gtg ttc atc ttc cca cct tcc gac gag cag ctg aag tcc        384
          Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser           
                  115                 120                 125                       
          ggc aca gct tct gtc gtg tgc ctg ctg aac aac ttc tac cct cgg gaa        432
          Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu           
              130                 135                 140                           
          gcc aag gtg cag tgg aag gtg gac aat gcc ctg cag tcc ggc aac tcc        480
          Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser           
          145                 150                 155                 160           
          caa gag tct gtg acc gag cag gac tcc aag gac agc acc tac agc ctg        528
          Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu           
                          165                 170                 175               
          tcc tcc aca ctg acc ctg tcc aag gcc gac tac gag aag cac aag gtg        576
          Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val           
                      180                 185                 190                   
          tac gcc tgc gaa gtg acc cat cag ggc ctg tct agc cct gtg acc aag        624
          Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys           
                  195                 200                 205                       
          tct ttc aac cgg ggc gag tgc                                            645
          Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys                                               
              210                 215                                               
          <![CDATA[<210>  40]]>
          <![CDATA[<211>  215]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成結構]]>
          <![CDATA[<400>  40]]>
          Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Thr Ala Ser Ser Thr Val Ser Ser Thr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 
                  35                  40                  45              
          Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln 
          65                  70                  75                  80  
          Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Tyr His Arg Ser Pro 
                          85                  90                  95      
          Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala 
                      100                 105                 110         
          Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser 
                  115                 120                 125             
          Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 
              130                 135                 140                 
          Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 
                          165                 170                 175     
          Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 
                      180                 185                 190         
          Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 
                  195                 200                 205             
          Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 215 
          <![CDATA[<210>  41]]>
          <![CDATA[<211>  486]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  抗CD3 scFv-人類Fc融合蛋白質]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  PEPTIDE]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(486)]]>
          <![CDATA[<400>  41]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp 
              50                  55                  60                  
          Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 
                          85                  90                  95      
          Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe 
                      100                 105                 110         
          Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Lys Pro 
                  115                 120                 125             
          Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Lys Pro Gly 
              130                 135                 140                 
          Ser Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr 
                          165                 170                 175     
          Ser Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg 
                      180                 185                 190         
          Gly Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Gly Thr Pro Ala Arg 
                  195                 200                 205             
          Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly 
              210                 215                 220                 
          Ala Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser 
          225                 230                 235                 240 
          Asn Leu Trp Val Phe Gly Ser Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Glu Pro 
                          245                 250                 255     
          Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu 
                      260                 265                 270         
          Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 
                  275                 280                 285             
          Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 
              290                 295                 300                 
          Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala 
                          325                 330                 335     
          Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 
                      340                 345                 350         
          Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro 
                  355                 360                 365             
          Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 
              370                 375                 380                 
          Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn 
          385                 390                 395                 400 
          Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 
                          405                 410                 415     
          Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 
                      420                 425                 430         
          Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 
                  435                 440                 445             
          Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 
              450                 455                 460                 
          Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 
          465                 470                 475                 480 
          Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                          485     
          <![CDATA[<210>  42]]>
          <![CDATA[<211>  255]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人(Homo sapiens)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  PEPTIDE]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(255)]]>
          <![CDATA[<400>  42]]>
          Met Gly Asn Ser Cys Tyr Asn Ile Val Ala Thr Leu Leu Leu Val Leu 
          1               5                   10                  15      
          Asn Phe Glu Arg Thr Arg Ser Leu Gln Asp Pro Cys Ser Asn Cys Pro 
                      20                  25                  30          
          Ala Gly Thr Phe Cys Asp Asn Asn Arg Asn Gln Ile Cys Ser Pro Cys 
                  35                  40                  45              
          Pro Pro Asn Ser Phe Ser Ser Ala Gly Gly Gln Arg Thr Cys Asp Ile 
              50                  55                  60                  
          Cys Arg Gln Cys Lys Gly Val Phe Arg Thr Arg Lys Glu Cys Ser Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Thr Ser Asn Ala Glu Cys Asp Cys Thr Pro Gly Phe His Cys Leu Gly 
                          85                  90                  95      
          Ala Gly Cys Ser Met Cys Glu Gln Asp Cys Lys Gln Gly Gln Glu Leu 
                      100                 105                 110         
          Thr Lys Lys Gly Cys Lys Asp Cys Cys Phe Gly Thr Phe Asn Asp Gln 
                  115                 120                 125             
          Lys Arg Gly Ile Cys Arg Pro Trp Thr Asn Cys Ser Leu Asp Gly Lys 
              130                 135                 140                 
          Ser Val Leu Val Asn Gly Thr Lys Glu Arg Asp Val Val Cys Gly Pro 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Pro Ala Asp Leu Ser Pro Gly Ala Ser Ser Val Thr Pro Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Pro Ala Arg Glu Pro Gly His Ser Pro Gln Ile Ile Ser Phe Phe Leu 
                      180                 185                 190         
          Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu 
                  195                 200                 205             
          Arg Phe Ser Val Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe 
              210                 215                 220                 
          Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu 
                          245                 250                 255 
          <![CDATA[<210>  43]]>
          <![CDATA[<211>  254]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  食蟹獼猴(Macaca fascicularis)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  PEPTIDE]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(254)]]>
          <![CDATA[<400>  43]]>
          Met Gly Asn Ser Cys Tyr Asn Ile Val Ala Thr Leu Leu Leu Val Leu 
          1               5                   10                  15      
          Asn Phe Glu Arg Thr Arg Ser Leu Gln Asp Leu Cys Ser Asn Cys Pro 
                      20                  25                  30          
          Ala Gly Thr Phe Cys Asp Asn Asn Arg Ser Gln Ile Cys Ser Pro Cys 
                  35                  40                  45              
          Pro Pro Asn Ser Phe Ser Ser Ala Gly Gly Gln Arg Thr Cys Asp Ile 
              50                  55                  60                  
          Cys Arg Gln Cys Lys Gly Val Phe Lys Thr Arg Lys Glu Cys Ser Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Thr Ser Asn Ala Glu Cys Asp Cys Ile Ser Gly Tyr His Cys Leu Gly 
                          85                  90                  95      
          Ala Glu Cys Ser Met Cys Glu Gln Asp Cys Lys Gln Gly Gln Glu Leu 
                      100                 105                 110         
          Thr Lys Lys Gly Cys Lys Asp Cys Cys Phe Gly Thr Phe Asn Asp Gln 
                  115                 120                 125             
          Lys Arg Gly Ile Cys Arg Pro Trp Thr Asn Cys Ser Leu Asp Gly Lys 
              130                 135                 140                 
          Ser Val Leu Val Asn Gly Thr Lys Glu Arg Asp Val Val Cys Gly Pro 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Pro Ala Asp Leu Ser Pro Gly Ala Ser Ser Ala Thr Pro Pro Ala 
                          165                 170                 175     
          Pro Ala Arg Glu Pro Gly His Ser Pro Gln Ile Ile Phe Phe Leu Ala 
                      180                 185                 190         
          Leu Thr Ser Thr Val Val Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu Val Leu Arg 
                  195                 200                 205             
          Phe Ser Val Val Lys Arg Ser Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys 
              210                 215                 220                 
          Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys 
          225                 230                 235                 240 
          Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu 
                          245                 250                 
          <![CDATA[<210>  44]]>
          <![CDATA[<211>  6]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  His tag 蛋白]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  PEPTIDE]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(6)]]>
          <![CDATA[<400>  44]]>
          His His His His His His 
          1               5       
          <![CDATA[<210>  45]]>
          <![CDATA[<211>  26]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  3xFLAG tag 蛋白•]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  PEPTIDE]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(26)]]>
          <![CDATA[<400>  45]]>
          Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys Gly Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp 
          1               5                   10                  15      
          Lys Ile Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys 
                      20                  25      
          <![CDATA[<210>  46]]>
          <![CDATA[<211>  4]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213> ]]> 人工序列
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  GS 連結子]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  PEPTIDE]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(4)]]>
          <![CDATA[<400>  46]]>
          Gly Gly Gly Ser 
          1               
          <![CDATA[<210>  47]]>
          <![CDATA[<211>  4]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  GS 連結子]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  PEPTIDE]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(4)]]>
          <![CDATA[<400>  47]]>
          Ser Gly Gly Gly 
          1               
          <![CDATA[<210>  48]]>
          <![CDATA[<211>  5]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  GS 連結子]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  PEPTIDE]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(5)]]>
          <![CDATA[<400>  48]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  49]]>
          <![CDATA[<211>  5]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  GS 連結子]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  PEPTIDE]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(5)]]>
          <![CDATA[<400>  49]]>
          Ser Gly Gly Gly Gly 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  50]]>
          <![CDATA[<211>  6]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  GS 連]]>結子
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  PEPTIDE]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(6)]]>
          <![CDATA[<400>  50]]>
          Gly Gly Gly Gly Gly Ser 
          1               5       
          <![CDATA[<210>  51]]>
          <![CDATA[<211>  6]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  GS 連結子]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  PEPTIDE]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(6)]]>
          <![CDATA[<400>  51]]>
          Ser Gly Gly Gly Gly Gly 
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Claims

一種雙特異性抗體，其係包含抗CLDN4抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域，以及抗CD137抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體，其中，抗CLDN4抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域為以下之(a)或(b)中之任一者： (a)包含由序列編號2之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號2之胺基酸編號50至66之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號2之胺基酸編號99至114之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域，以及包含由序列編號4之胺基酸編號24至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號4之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號4之胺基酸編號90至98之胺基酸序列所構成之CDR3之抗CLDN4抗體之輕鏈可變區域；或 (b)包含由序列編號6之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號6之胺基酸編號50至66之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號6之胺基酸編號99至112之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域，以及包含由序列編號8之胺基酸編號24至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號8之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號8之胺基酸編號90至98之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域。
如請求項1中所記載之雙特異性抗體，其中，抗CLDN4抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域為以下之(a)或(b)中之任一者： (a)由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域；或 (b)由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域。
如請求項1或2中之任一項所記載之雙特異性抗體，其中，其係包含IgG抗體，該IgG抗體係由包含抗CLDN4抗體之重鏈可變區域之重鏈及包含抗CLDN4抗體之輕鏈可變區域之輕鏈所構成之IgG抗體(抗CLDN4 IgG抗體)。
如請求項3中所記載之雙特異性抗體，其係於抗CLDN4 IgG抗體之Fc領域包含LALA突變(L234A及L235A(此處，前述突變位置係依據人類Igγ1恆定區域中之EU編號之胺基酸位置))。
如請求項3中所記載之雙特異性抗體，其係於抗CLDN4 IgG抗體之Fc領域包含P331G突變(此處，前述突變位置係依據人類Igγ1恆定區域中之EU編號之胺基酸位置)。
如請求項3中所記載之雙特異性抗體，其中，抗CLDN4 IgG抗體之Fc領域係包含LALA突變及P331G突變。
如請求項1~6中之任一項所記載之雙特異性抗體，其中，抗CD137抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域為以下之(a)~(d)中之任一者： (a)包含由序列編號10之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號10之胺基酸編號50至66之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號10之胺基酸編號99至107之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域，以及包含由序列編號12之胺基酸編號24至34之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號12之胺基酸編號50至56之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號12之胺基酸編號89至98之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域； (b)包含由序列編號14之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號14之胺基酸編號50至65之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號14之胺基酸編號98至107之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域，以及包含由序列編號16之胺基酸編號23至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號16之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號16之胺基酸編號90至100之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域； (c)包含由序列編號18之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號18之胺基酸編號50至65之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號18之胺基酸編號98至107之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域，以及包含由序列編號20之胺基酸編號23至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號20之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號20之胺基酸編號90至100之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域；或 (d)包含由序列編號22之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號22之胺基酸編號50至65之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號22之胺基酸編號98至110之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域，以及包含由序列編號24之胺基酸編號23至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號24之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號24之胺基酸編號90至100之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域。
如請求項1~7中之任一項所記載之雙特異性抗體，其中，抗CD137抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域為以下之(a)~(i)中之任一者： (a)由序列編號10之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號12之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域； (b)由序列編號14之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號16之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域； (c)由序列編號18之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號20之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域； (d)由序列編號22之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號24之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域； (e)由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域； (f)由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域； (g)由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域及由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域； (h)由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域；或 (i)由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域。
如請求項7或8中之任一項所記載之雙特異性抗體，其中，包含抗CD137單鏈可變區域片段(抗CD137scFv)，且該抗CD137單鏈可變區域片段(抗CD137scFv)係包含抗CD137抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域。
如請求項9中所記載之雙特異性抗體，其中，抗CD137scFv為以下之(a)~(e)中之任一者： (a)由序列編號26之胺基酸編號1至242之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv； (b)由序列編號28之胺基酸編號1至244之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv； (c)由序列編號30之胺基酸編號1至249之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv； (d)由序列編號32之胺基酸編號1至244之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv；或 (e)由序列編號34之胺基酸編號1至247之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv。
如請求項9或10中之任一項所記載之雙特異性抗體，其係包含抗CLDN4 IgG抗體及抗CD137scFv，其中，抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於抗CLDN4 IgG抗體之重鏈或輕鏈羧基末端。
一種抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體，其係以下之(a)~(j)中之任一者： (a)一雙特異性抗體，其係包含：包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端； (b)一雙特異性抗體，其係包含：包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端； (c)一雙特異性抗體，其係包含：包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域及由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端； (d)一雙特異性抗體，其係包含：包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端； (e)一雙特異性抗體，其係包含：包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端； (f)一雙特異性抗體，其係包含：包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端； (g)一雙特異性抗體，其係包含：包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端； (h)一雙特異性抗體，其係包含：包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域及由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端； (i)一雙特異性抗體，其係包含：包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端；或 (j)一雙特異性抗體，其係包含：包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈，以及包含由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv，且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端。
如請求項11或12中之任一項所記載之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體，其中，連結子為GS連結子。
如請求項13中所記載之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體，其中，GS連結子為由序列編號54之胺基酸序列所構成之連結子。
一種抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體，其係以下之(a)或(b)中之任一者： (a)一雙特異性抗體，其係包含：由序列編號36之胺基酸編號1至705之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽，以及由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈；或 (b)一雙特異性抗體，其係包含：由序列編號38之胺基酸編號1至712之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽，以及由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈。
如請求項1~15中之任一項所記載之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體，其係經轉譯後修飾。
如請求項16中所記載之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體，其中，轉譯後修飾為重鏈可變區域N末端之焦麩胺酸化及/或重鏈C末端離胺酸缺失。
一種多核苷酸，其係包含由下述(a)~(d)所成之群所選出之編碼抗CLDN4抗體之重鏈可變區域或輕鏈可變區域之鹼基序列： (a)包含編碼由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (b)包含編碼由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (c)包含編碼由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸；或 (d)包含編碼由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸。
一種多核苷酸，其係包含由下述(a)~(r)所成之群所選出之編碼抗CD137抗體之重鏈可變區域或輕鏈可變區域之鹼基序列： (a)包含編碼由序列編號10之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (b)包含編碼由序列編號12之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (c)包含編碼由序列編號14之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (d)包含編碼由序列編號16之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (e)包含編碼由序列編號18之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (f)包含編碼由序列編號20之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (g)包含編碼由序列編號22之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (h)包含編碼由序列編號24之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (i)包含編碼由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (j)包含編碼由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (k)包含編碼由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (l)包含編碼由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (m)包含編碼由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (n)包含編碼由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (o)包含編碼由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (p)包含編碼由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (q)包含編碼由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸；或 (r)包含編碼由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸。
一種多核苷酸，其係包含選自由下述(a)~(e)所成之群之編碼抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸： (a)包含編碼由序列編號26之胺基酸編號1至242之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸； (b)包含編碼由序列編號28之胺基酸編號1至244之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸； (c)包含編碼由序列編號30之胺基酸編號1至249之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸； (d)包含編碼由序列編號32之胺基酸編號1至244之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸；或 (e)包含編碼由序列編號34之胺基酸編號1至247之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸。
一種由下述(a)~(e)所成之群所選出之多核苷酸，其係用於如請求項15中所記載之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體之生產： (a)包含編碼由序列編號36之胺基酸編號1至705之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸； (b)包含編碼由序列編號38之胺基酸編號1至712之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸； (c)包含編碼由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列之多核苷酸； (d)包含編碼由序列編號36之胺基酸編號1至705之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸，以及包含編碼由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列之多核苷酸；或 (e)包含編碼由序列編號38之胺基酸編號1至712之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸，以及包含編碼由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列之多核苷酸。
一種表現載體，其係包含如請求項18~21中之任一項所記載之多核苷酸。
一種宿主細胞，其係經過如請求項22所記載之表現載體進行轉形者。
一種宿主細胞，其係包含由以下之(a)~(dd)所成之群所選出之多核苷酸： (a)包含編碼由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (b)包含編碼由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (c)包含編碼由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (d)包含編碼由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸。 (e)包含編碼由序列編號10之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (f)包含編碼由序列編號12之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (g)包含編碼由序列編號14之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (h)包含編碼由序列編號16之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (i)包含編碼由序列編號18之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (j)包含編碼由序列編號20之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (k)包含編碼由序列編號22之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (l)包含編碼由序列編號24之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸。 (m)包含編碼由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (n)包含編碼由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (o)包含編碼由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (p)包含編碼由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (q)包含編碼由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (r)包含編碼由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (s)包含編碼由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (t)包含編碼由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (u)包含編碼由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (v)包含編碼由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸； (w)包含編碼由序列編號26之胺基酸編號1至242之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸； (x)包含編碼由序列編號28之胺基酸編號1至244之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸； (y)包含編碼由序列編號30之胺基酸編號1至249之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸； (z)包含編碼由序列編號32之胺基酸編號1至244之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸； (aa)包含編碼由序列編號34之胺基酸編號1至247之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸； (bb)包含編碼由序列編號36之胺基酸編號1至705之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸； (cc)包含編碼由序列編號38之胺基酸編號1至712之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸；或 (dd)包含編碼由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列之多核苷酸。
一種宿主細胞，其係包含以下之(a)或(b)中之任一項之多核苷酸： (a)包含編碼由序列編號36之胺基酸編號1至705之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸，以及包含編碼由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列之多核苷酸；或 (b)包含編碼由序列編號38之胺基酸編號1至712之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸，以及包含編碼由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列之多核苷酸。
一種抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體之生產方法，其中包含培養如請求項23~25中之任一項所記載之宿主細胞之步驟。
一種醫藥組成物，其係包含如請求項1~17中之任一項所記載之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體及藥學上可容許之賦形劑。
如請求項1~17中之任一項所記載之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體，其係使用於癌症之治療。
如請求項27中所記載之醫藥組成物，其係用於癌症之治療。
一種治療癌症之方法，其係包含將如請求項1~17中之任一項所記載之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體之治療有效量投予至對象之步驟。
一種如請求項1~17中之任一項所記載之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體之使用，其係用於用於癌症之治療之醫藥組成物之製造中。