TW202309083A - 抗cldn4-抗cd137雙特異性抗體 - Google Patents
抗cldn4-抗cd137雙特異性抗體 Download PDFInfo
- Publication number
- TW202309083A TW202309083A TW111115193A TW111115193A TW202309083A TW 202309083 A TW202309083 A TW 202309083A TW 111115193 A TW111115193 A TW 111115193A TW 111115193 A TW111115193 A TW 111115193A TW 202309083 A TW202309083 A TW 202309083A
- Authority
- TW
- Taiwan
- Prior art keywords
- amino acid
- variable region
- seq
- antibody
- acid sequence
- Prior art date
Links
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 312
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 138
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 105
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims abstract description 65
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 49
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 28
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 1118
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 1095
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 449
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 449
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 449
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 91
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 85
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 84
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 84
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 78
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 75
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 74
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 62
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 35
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 28
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 26
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 claims description 24
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 claims description 14
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 11
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 9
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 7
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims description 7
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims description 7
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 7
- 230000027455 binding Effects 0.000 abstract description 113
- 101000851370 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 9 Proteins 0.000 abstract description 65
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 abstract description 36
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 abstract description 21
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 abstract description 20
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 abstract description 20
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 abstract description 17
- 101000882890 Homo sapiens Claudin-4 Proteins 0.000 abstract description 13
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 abstract description 6
- 102100038447 Claudin-4 Human genes 0.000 abstract 2
- 230000001270 agonistic effect Effects 0.000 abstract 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 920
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 916
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 89
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 89
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 88
- 102000004161 Claudin-4 Human genes 0.000 description 58
- 108090000601 Claudin-4 Proteins 0.000 description 58
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 53
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 46
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 29
- 229940116741 CD137 agonist Drugs 0.000 description 24
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 23
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 20
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 19
- 230000014828 interferon-gamma production Effects 0.000 description 19
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 18
- 229950005972 urelumab Drugs 0.000 description 18
- 208000037819 metastatic cancer Diseases 0.000 description 16
- 208000011575 metastatic malignant neoplasm Diseases 0.000 description 16
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 15
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 15
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 15
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 15
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 14
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 13
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 13
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 12
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 12
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 12
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 11
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 11
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 11
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 11
- 102000050035 human CLDN4 Human genes 0.000 description 11
- 102000050327 human TNFRSF9 Human genes 0.000 description 11
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 11
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 10
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 9
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 9
- 108091006020 Fc-tagged proteins Proteins 0.000 description 8
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 8
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 8
- 102000018651 Epithelial Cell Adhesion Molecule Human genes 0.000 description 7
- 108010066687 Epithelial Cell Adhesion Molecule Proteins 0.000 description 7
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 7
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 7
- 208000037887 cell injury Diseases 0.000 description 7
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 7
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 7
- 210000003245 peritoneal mesothelial cell Anatomy 0.000 description 7
- 238000011160 research Methods 0.000 description 7
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 6
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 6
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 6
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 6
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 6
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 6
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 6
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 6
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 6
- 238000009343 monoculture Methods 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 6
- HKZAAJSTFUZYTO-LURJTMIESA-N (2s)-2-[[2-[[2-[[2-[(2-aminoacetyl)amino]acetyl]amino]acetyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxypropanoic acid Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O HKZAAJSTFUZYTO-LURJTMIESA-N 0.000 description 5
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 5
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 5
- 239000012515 MabSelect SuRe Substances 0.000 description 5
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 5
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 5
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 5
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 5
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 5
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 5
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 5
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 5
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 5
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 5
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 4
- 108010021472 Fc gamma receptor IIB Proteins 0.000 description 4
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 4
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 4
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 4
- 102100029205 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-b Human genes 0.000 description 4
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 4
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 4
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 4
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 4
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 4
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 4
- 239000000611 antibody drug conjugate Substances 0.000 description 4
- 229940049595 antibody-drug conjugate Drugs 0.000 description 4
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 4
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 4
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 4
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 4
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 4
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 4
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 3
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 3
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 3
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 3
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 3
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 3
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 3
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 3
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 3
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 3
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 3
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 3
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 3
- 230000022534 cell killing Effects 0.000 description 3
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 3
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 3
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 3
- 238000001294 liquid chromatography-tandem mass spectrometry Methods 0.000 description 3
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 239000007758 minimum essential medium Substances 0.000 description 3
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 3
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 208000000587 small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 3
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 3
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 3
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 3
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 3
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 description 3
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)-N-[3-oxo-3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propyl]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C(=O)NCCC(N1CC2=C(CC1)NN=N2)=O VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N Ala-Gln Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- 238000012815 AlphaLISA Methods 0.000 description 2
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 102100038078 CD276 antigen Human genes 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000002029 Claudin Human genes 0.000 description 2
- 108050009302 Claudin Proteins 0.000 description 2
- 102100038449 Claudin-6 Human genes 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 2
- ZFBBMCKQSNJZSN-AUTRQRHGSA-N Gln-Val-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O ZFBBMCKQSNJZSN-AUTRQRHGSA-N 0.000 description 2
- ZYRXTRTUCAVNBQ-GVXVVHGQSA-N Glu-Val-Lys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N ZYRXTRTUCAVNBQ-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BYYNJRSNDARRBX-YFKPBYRVSA-N Gly-Gln-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O BYYNJRSNDARRBX-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- YWAQATDNEKZFFK-BYPYZUCNSA-N Gly-Gly-Ser Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YWAQATDNEKZFFK-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- ONSARSFSJHTMFJ-STQMWFEESA-N Gly-Trp-Ser Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O ONSARSFSJHTMFJ-STQMWFEESA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000882898 Homo sapiens Claudin-6 Proteins 0.000 description 2
- 101001002657 Homo sapiens Interleukin-2 Proteins 0.000 description 2
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- FIYMBBHGYNQFOP-IUCAKERBSA-N Leu-Gly-Gln Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)N FIYMBBHGYNQFOP-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- PDIDTSZKKFEDMB-UWVGGRQHSA-N Lys-Pro-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O PDIDTSZKKFEDMB-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 208000006664 Precursor Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 208000015634 Rectal Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 2
- YMTLKLXDFCSCNX-BYPYZUCNSA-N Ser-Gly-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O YMTLKLXDFCSCNX-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- KDGARKCAKHBEDB-NKWVEPMBSA-N Ser-Gly-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)CNC(=O)[C@H](CO)N)C(=O)O KDGARKCAKHBEDB-NKWVEPMBSA-N 0.000 description 2
- UIGMAMGZOJVTDN-WHFBIAKZSA-N Ser-Gly-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O UIGMAMGZOJVTDN-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 description 2
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 2
- 239000012505 Superdex™ Substances 0.000 description 2
- 230000006043 T cell recruitment Effects 0.000 description 2
- 108060008683 Tumor Necrosis Factor Receptor Proteins 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 108010004469 allophycocyanin Proteins 0.000 description 2
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 230000001130 anti-lysozyme effect Effects 0.000 description 2
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 230000005880 cancer cell killing Effects 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 2
- 102000052116 epidermal growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 description 2
- 108700015053 epidermal growth factor receptor activity proteins Proteins 0.000 description 2
- -1 for example Substances 0.000 description 2
- 230000000762 glandular Effects 0.000 description 2
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 description 2
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 2
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 2
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 2
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010079413 glycyl-prolyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 2
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- APFVFJFRJDLVQX-AHCXROLUSA-N indium-111 Chemical compound [111In] APFVFJFRJDLVQX-AHCXROLUSA-N 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 210000005033 mesothelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[6-[3-(trifluoromethyl)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]cyclopropanecarboxamide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(NC=2N=CN=C(NC=3C=C(NC(=O)C4CC4)C=CC=3)C=2)=C1 YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 2
- 125000001477 organic nitrogen group Chemical group 0.000 description 2
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 2
- 210000002706 plastid Anatomy 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 2
- 206010038038 rectal cancer Diseases 0.000 description 2
- 201000001275 rectum cancer Diseases 0.000 description 2
- 238000007670 refining Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 2
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 2
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 102000003298 tumor necrosis factor receptor Human genes 0.000 description 2
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- QAPSNMNOIOSXSQ-YNEHKIRRSA-N 1-[(2r,4s,5r)-4-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O[Si](C)(C)C(C)(C)C)C1 QAPSNMNOIOSXSQ-YNEHKIRRSA-N 0.000 description 1
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SXAMGRAIZSSWIH-UHFFFAOYSA-N 2-[3-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]-1,2,4-oxadiazol-5-yl]-1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C1=NOC(=N1)CC(=O)N1CC2=C(CC1)NN=N2 SXAMGRAIZSSWIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BGFTWECWAICPDG-UHFFFAOYSA-N 2-[bis(4-chlorophenyl)methyl]-4-n-[3-[bis(4-chlorophenyl)methyl]-4-(dimethylamino)phenyl]-1-n,1-n-dimethylbenzene-1,4-diamine Chemical compound C1=C(C(C=2C=CC(Cl)=CC=2)C=2C=CC(Cl)=CC=2)C(N(C)C)=CC=C1NC(C=1)=CC=C(N(C)C)C=1C(C=1C=CC(Cl)=CC=1)C1=CC=C(Cl)C=C1 BGFTWECWAICPDG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000002627 4-1BB Ligand Human genes 0.000 description 1
- 108010082808 4-1BB Ligand Proteins 0.000 description 1
- QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 5,5-dimethyl-2,4-dioxo-1,3-oxazolidine-3-carboxamide Chemical compound CC1(C)OC(=O)N(C(N)=O)C1=O QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 5-oxo-L-proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 102100031585 ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Human genes 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 208000024893 Acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000014697 Acute lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 1
- ZDILXFDENZVOTL-BPNCWPANSA-N Ala-Val-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O ZDILXFDENZVOTL-BPNCWPANSA-N 0.000 description 1
- 201000003076 Angiosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 1
- HKRXJBBCQBAGIM-FXQIFTODSA-N Arg-Asp-Ser Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N)CN=C(N)N HKRXJBBCQBAGIM-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- ADPACBMPYWJJCE-FXQIFTODSA-N Arg-Ser-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O ADPACBMPYWJJCE-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- KMFPQTITXUKJOV-DCAQKATOSA-N Arg-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O KMFPQTITXUKJOV-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- DXVMJJNAOVECBA-WHFBIAKZSA-N Asn-Gly-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O DXVMJJNAOVECBA-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- GYNUXDMCDILYIQ-QRTARXTBSA-N Asp-Val-Trp Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N GYNUXDMCDILYIQ-QRTARXTBSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010008014 B-Cell Maturation Antigen Proteins 0.000 description 1
- 102000006942 B-Cell Maturation Antigen Human genes 0.000 description 1
- 208000003950 B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 102100038080 B-cell receptor CD22 Human genes 0.000 description 1
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 1
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 description 1
- 206010004593 Bile duct cancer Diseases 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 101150108431 CLDN4 gene Proteins 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 102100025570 Cancer/testis antigen 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010006303 Carboxypeptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000005367 Carboxypeptidases Human genes 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 108010019670 Chimeric Antigen Receptors Proteins 0.000 description 1
- 208000005243 Chondrosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100377706 Escherichia phage T5 A2.2 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000006168 Ewing Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 102100021197 G-protein coupled receptor family C group 5 member D Human genes 0.000 description 1
- 101150094690 GAL1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150038242 GAL10 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100028501 Galanin peptides Human genes 0.000 description 1
- 102100024637 Galectin-10 Human genes 0.000 description 1
- 208000022072 Gallbladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 1
- 201000010915 Glioblastoma multiforme Diseases 0.000 description 1
- OYTPNWYZORARHL-XHNCKOQMSA-N Gln-Ala-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N OYTPNWYZORARHL-XHNCKOQMSA-N 0.000 description 1
- IKFZXRLDMYWNBU-YUMQZZPRSA-N Gln-Gly-Arg Chemical compound NC(=O)CC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N IKFZXRLDMYWNBU-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 102100041003 Glutamate carboxypeptidase 2 Human genes 0.000 description 1
- HAXARWKYFIIHKD-ZKWXMUAHSA-N Gly-Ile-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O HAXARWKYFIIHKD-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- DNAZKGFYFRGZIH-QWRGUYRKSA-N Gly-Tyr-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CC1=CC=C(O)C=C1 DNAZKGFYFRGZIH-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102100032558 Glypican-2 Human genes 0.000 description 1
- 102100032530 Glypican-3 Human genes 0.000 description 1
- 108010009202 Growth Factor Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000009465 Growth Factor Receptors Human genes 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 1
- 206010019851 Hepatotoxicity Diseases 0.000 description 1
- 229920000209 Hexadimethrine bromide Polymers 0.000 description 1
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 description 1
- 208000021519 Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 101000777636 Homo sapiens ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000884305 Homo sapiens B-cell receptor CD22 Proteins 0.000 description 1
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 1
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 description 1
- 101000884279 Homo sapiens CD276 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000856237 Homo sapiens Cancer/testis antigen 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000914324 Homo sapiens Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 5 Proteins 0.000 description 1
- 101000914321 Homo sapiens Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 7 Proteins 0.000 description 1
- 101001040713 Homo sapiens G-protein coupled receptor family C group 5 member D Proteins 0.000 description 1
- 101100121078 Homo sapiens GAL gene Proteins 0.000 description 1
- 101000892862 Homo sapiens Glutamate carboxypeptidase 2 Proteins 0.000 description 1
- 101001014664 Homo sapiens Glypican-2 Proteins 0.000 description 1
- 101001014668 Homo sapiens Glypican-3 Proteins 0.000 description 1
- 101000998120 Homo sapiens Interleukin-3 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 1
- 101000777628 Homo sapiens Leukocyte antigen CD37 Proteins 0.000 description 1
- 101000934338 Homo sapiens Myeloid cell surface antigen CD33 Proteins 0.000 description 1
- 101000617725 Homo sapiens Pregnancy-specific beta-1-glycoprotein 2 Proteins 0.000 description 1
- 101001012157 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000847107 Homo sapiens Tetraspanin-8 Proteins 0.000 description 1
- 101000621309 Homo sapiens Wilms tumor protein Proteins 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 102100033493 Interleukin-3 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 1
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- PMGDADKJMCOXHX-UHFFFAOYSA-N L-Arginyl-L-glutamin-acetat Natural products NC(=N)NCCCC(N)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(O)=O PMGDADKJMCOXHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- FEHQLKKBVJHSEC-SZMVWBNQSA-N Leu-Glu-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 FEHQLKKBVJHSEC-SZMVWBNQSA-N 0.000 description 1
- 102100031586 Leukocyte antigen CD37 Human genes 0.000 description 1
- 235000019738 Limestone Nutrition 0.000 description 1
- UWKNTTJNVSYXPC-CIUDSAMLSA-N Lys-Ala-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN UWKNTTJNVSYXPC-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- 208000000172 Medulloblastoma Diseases 0.000 description 1
- 206010027406 Mesothelioma Diseases 0.000 description 1
- SJDQOYTYNGZZJX-SRVKXCTJSA-N Met-Glu-Leu Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O SJDQOYTYNGZZJX-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 1
- 201000003793 Myelodysplastic syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000033776 Myeloid Acute Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 102100025243 Myeloid cell surface antigen CD33 Human genes 0.000 description 1
- AFCARXCZXQIEQB-UHFFFAOYSA-N N-[3-oxo-3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propyl]-2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound O=C(CCNC(=O)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)N1CC2=C(CC1)NN=N2 AFCARXCZXQIEQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010079364 N-glycylalanine Proteins 0.000 description 1
- 229920002274 Nalgene Polymers 0.000 description 1
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 description 1
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000012124 Opti-MEM Substances 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 102000002508 Peptide Elongation Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010068204 Peptide Elongation Factors Proteins 0.000 description 1
- CWFGECHCRMGPPT-MXAVVETBSA-N Phe-Ile-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O CWFGECHCRMGPPT-MXAVVETBSA-N 0.000 description 1
- 241000235648 Pichia Species 0.000 description 1
- 201000008199 Pleuropulmonary blastoma Diseases 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 102100022019 Pregnancy-specific beta-1-glycoprotein 2 Human genes 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 description 1
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 1
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 1
- UAJAYRMZGNQILN-BQBZGAKWSA-N Ser-Gly-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O UAJAYRMZGNQILN-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- XJDMUQCLVSCRSJ-VZFHVOOUSA-N Ser-Thr-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O XJDMUQCLVSCRSJ-VZFHVOOUSA-N 0.000 description 1
- LGIMRDKGABDMBN-DCAQKATOSA-N Ser-Val-Lys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N LGIMRDKGABDMBN-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- ODRUTDLAONAVDV-IHRRRGAJSA-N Ser-Val-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O ODRUTDLAONAVDV-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000021712 Soft tissue sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 1
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 1
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 208000031673 T-Cell Cutaneous Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 206010042971 T-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000027585 T-cell non-Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000024313 Testicular Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010057644 Testis cancer Diseases 0.000 description 1
- 102100032802 Tetraspanin-8 Human genes 0.000 description 1
- JVTHIXKSVYEWNI-JRQIVUDYSA-N Thr-Asn-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O JVTHIXKSVYEWNI-JRQIVUDYSA-N 0.000 description 1
- FWTFAZKJORVTIR-VZFHVOOUSA-N Thr-Ser-Ala Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O FWTFAZKJORVTIR-VZFHVOOUSA-N 0.000 description 1
- YRJOLUDFVAUXLI-GSSVUCPTSA-N Thr-Thr-Asp Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O YRJOLUDFVAUXLI-GSSVUCPTSA-N 0.000 description 1
- LECUEEHKUFYOOV-ZJDVBMNYSA-N Thr-Thr-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O LECUEEHKUFYOOV-ZJDVBMNYSA-N 0.000 description 1
- MNYNCKZAEIAONY-XGEHTFHBSA-N Thr-Val-Ser Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O MNYNCKZAEIAONY-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 description 1
- MBLJBGZWLHTJBH-SZMVWBNQSA-N Trp-Val-Arg Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O)=CNC2=C1 MBLJBGZWLHTJBH-SZMVWBNQSA-N 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 1
- UMSZZGTXGKHTFJ-SRVKXCTJSA-N Tyr-Ser-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 UMSZZGTXGKHTFJ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- RMRFSFXLFWWAJZ-HJOGWXRNSA-N Tyr-Tyr-Tyr Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 RMRFSFXLFWWAJZ-HJOGWXRNSA-N 0.000 description 1
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000002495 Uterine Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- ZEVNVXYRZRIRCH-GVXVVHGQSA-N Val-Gln-Lys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N ZEVNVXYRZRIRCH-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 1
- JQTYTBPCSOAZHI-FXQIFTODSA-N Val-Ser-Cys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N JQTYTBPCSOAZHI-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- USXYVSTVPHELAF-RCWTZXSCSA-N Val-Thr-Met Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O USXYVSTVPHELAF-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000008383 Wilms tumor Diseases 0.000 description 1
- 102100022748 Wilms tumor protein Human genes 0.000 description 1
- 235000010724 Wisteria floribunda Nutrition 0.000 description 1
- VWQVUPCCIRVNHF-OUBTZVSYSA-N Yttrium-90 Chemical compound [90Y] VWQVUPCCIRVNHF-OUBTZVSYSA-N 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 229940125666 actinium-225 Drugs 0.000 description 1
- QQINRWTZWGJFDB-YPZZEJLDSA-N actinium-225 Chemical compound [225Ac] QQINRWTZWGJFDB-YPZZEJLDSA-N 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000003450 affinity purification method Methods 0.000 description 1
- 108010069020 alanyl-prolyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010086434 alanyl-seryl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 229940125644 antibody drug Drugs 0.000 description 1
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000002543 antimycotic Substances 0.000 description 1
- 108010008355 arginyl-glutamine Proteins 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 108010040443 aspartyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000026900 bile duct neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 102000023732 binding proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 201000000053 blastoma Diseases 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 230000009702 cancer cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000012830 cancer therapeutic Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 1
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000006990 cholangiocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 1
- 201000007241 cutaneous T cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000000254 damaging effect Effects 0.000 description 1
- 230000006240 deamidation Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 1
- 230000000235 effect on cancer Effects 0.000 description 1
- 235000014103 egg white Nutrition 0.000 description 1
- 210000000969 egg white Anatomy 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 201000008184 embryoma Diseases 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 1
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 201000010175 gallbladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 1
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 description 1
- 108010089804 glycyl-threonine Proteins 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000013882 gravy Nutrition 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000005787 hematologic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000024200 hematopoietic and lymphoid system neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 1
- 208000006359 hepatoblastoma Diseases 0.000 description 1
- 230000007686 hepatotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000304 hepatotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000005917 in vivo anti-tumor Effects 0.000 description 1
- 229940055742 indium-111 Drugs 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 230000002601 intratumoral effect Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 208000022013 kidney Wilms tumor Diseases 0.000 description 1
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000003849 large cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 150000002614 leucines Chemical class 0.000 description 1
- 239000006028 limestone Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000003670 luciferase enzyme activity assay Methods 0.000 description 1
- 208000003747 lymphoid leukemia Diseases 0.000 description 1
- 108010038320 lysylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000026037 malignant tumor of neck Diseases 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 201000005962 mycosis fungoides Diseases 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 210000000581 natural killer T-cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 201000008026 nephroblastoma Diseases 0.000 description 1
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 210000004303 peritoneum Anatomy 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- OJMIONKXNSYLSR-UHFFFAOYSA-N phosphorous acid Chemical compound OP(O)O OJMIONKXNSYLSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001481 poly(stearyl methacrylate) Polymers 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 208000025638 primary cutaneous T-cell non-Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 229940043131 pyroglutamate Drugs 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011076 safety test Methods 0.000 description 1
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 210000004116 schwann cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000010187 selection method Methods 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000002314 small intestine cancer Diseases 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 201000003120 testicular cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000001578 tight junction Anatomy 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000003151 transfection method Methods 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 208000010576 undifferentiated carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 206010046766 uterine cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010046885 vaginal cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000013139 vaginal neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- QCWXUUIWCKQGHC-YPZZEJLDSA-N zirconium-89 Chemical compound [89Zr] QCWXUUIWCKQGHC-YPZZEJLDSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2878—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/74—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
- C12N15/81—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2809—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/51—Complete heavy chain or Fd fragment, i.e. VH + CH1
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/515—Complete light chain, i.e. VL + CL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/64—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising a combination of variable region and constant region components
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/71—Decreased effector function due to an Fc-modification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/75—Agonist effect on antigen
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Mycology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本發明之課題在於提供一種可使用於癌症之治療之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體。
使用鍵結於CLDN4之抗CLDN4抗體與鍵結於CD137之抗CD137抗體所製作之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體,係具有對於CD137之促效劑作用,促進T細胞之干擾素γ產生,並對於在細胞表面表現CLDN4之癌細胞顯示出細胞傷害活性。此外,係顯示抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體可安全地投予給猴。因此,抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體可使用於人類之癌症之治療。
Description
本發明係關於一種抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體,其係被期待可作為用於癌症之治療之醫藥組成物之有效成分。
Claudin-4(CLDN4)係屬於密連蛋白家族之4跨膜蛋白質。其係表現於上皮細胞或內皮細胞,且係作為構成緊密型連結之主要分子發揮重要的作用。CLDN4係被認為在大腸癌、膀胱癌、卵巢癌等的癌症組織亦具有高度的表現,故係有抗CLDN4抗體可應用於癌症之治療或診斷之可能性之教示(專利文獻1、非專利文獻1)。此外,在動物模式中,藉由抗CLDN4抗體與抗Epidermal growth factor receptor(EGFR)抗體之併用亦顯示出其所產生之抗腫瘤效果(非專利文獻2)。
Cluster of Differentiation 137(CD137、別名4-1BB)係屬於Tumor Necrosis Factor Receptor Superfamily (TNFRSF)之分子,且係有報導其係表現於T細胞、B細胞、natural killer(NK)細胞、樹狀細胞、嗜酸性球、肥大細胞等的免疫細胞表面。尤其,T細胞上之CD137係已知與抗原提示細胞上之CD137配體鍵結,作為共刺激分子參與T細胞之活性化及生存(非專利文獻3)。抗CD137促效劑抗體在動物模式中,係顯示出透過腫瘤微小環境內之免疫細胞之活性化所產生之抗腫瘤效果(非專利文獻4)。屬於抗CD137促效劑抗體之Urelumab在臨床試驗中顯示出治療效果,然而亦有報導指出其係引起肝疾病之副作用(非專利文獻5)。
作為可以在低抗體濃度下獲得癌細胞選擇性細胞傷害活性之劃時代性的方法,已有報導各種抗體形式之雙特異性T細胞召集抗體(bispecific T-cell-recruiting antibodies)。雙特異性T細胞召集抗體係包含抗癌細胞表面表現之腫瘤關聯抗原(Tumor-Associated Antigens;TAA)之抗體及鍵結於T細胞之抗體之雙特異性抗體,該等抗體對於T細胞媒介性免疫療法之效果係正受到探討(非專利文獻6)。抗CD3抗體係被大量使用作為鍵結於T細胞之抗體,現在亦正研究開發各種對於TAA之雙特異性T細胞召集抗體。
此外,近年來,抗CD137及TAA之雙特異性T細胞召集抗體之研究亦正積極地在進行。識別屬於TAA之Glypican3(GPC3)、Human Epidermal Growth Factor Receptor Type2(HER2)、Programmed Cell Death-Ligand1 (PD-L1)、Fibroblast Activation Protein(FAP)之抗GPC3-抗CD137雙特異性抗體、抗HER2-抗CD137雙特異性抗體、抗PDL1-抗CD137雙特異性抗體、抗FAP-抗CD137雙特異性抗體等的研究係正進行(專利文獻2及3、非專利文獻7~9)。
然而,到現在為止皆未有關於抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體之報告。
[先前技術文獻]
[專利文獻]
[專利文獻1]國際公開編號2008/114733號
[專利文獻2]國際公開編號2015/156268號
[專利文獻3]國際公開編號2016/177802號
[非專利文獻]
[非專利文獻1]Cancer Science、2009: 100(9): p.1623- 1630
[非專利文獻2]Oncotarget、2018: 9(100): p.37367-37378
[非專利文獻3]Cancer Science、2020: 111(5): p.1461-1467
[非專利文獻4]Cancer Immunology Immunotherapy、2012: 61(5): p.1721-1733
[非專利文獻5]Clinical Cancer Research、2017: 23(8): p.1929-1936
[非專利文獻6]mAbs、2017: 9(2): p.182-212
[非專利文獻7]Clinical Cancer Research、2019: 25(19): p.5878-5889
[非專利文獻8]Clinical Cancer Research、2020: 26(15): p.4154-4167
[非專利文獻9]Journal for Immunotherapy of Cancer、2020; 8(2): e000238
[發明所欲解決之課題]
本發明之課題在於提供一種可用於癌症之治療之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體。
[用於解決課題之手段]
本發明者們係探索選擇性地鍵結於表現於腹膜轉移癌細胞之抗原之抗體,取得屬於抗CLDN4抗體之3D11(實施例1及2)。使用了3D11及抗CD3抗體之雙特異性T細胞召集抗體係被明確判斷不可使用於癌症患者之治療(參考例)。因此,使用屬於3D11及公知之抗CLDN4抗體之KM3900抗體,嘗試取得與抗CD137抗體之雙特異性T細胞召集抗體(實施例3及4)。所取得之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係鍵結於CLDN4及CD137(實施例5),於in vitro中,促進T細胞之干擾素γ產生,並對於在細胞表面表現CLDN4之癌細胞顯示出細胞傷害活性(實施例6)。此外,係確認所取得之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體在in vivo老鼠模型中發揮抗腫瘤作用(實施例7-1)、在食蟹猴中,亦可安全地使用 (實施例7-2)。有本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體對於癌症之治療係為有用之教示。
亦即,本發明係關於以下之[1]~[32]。
[1] 一種雙特異性抗體,其係包含抗CLDN4抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域,以及抗CD137抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體,其中,抗CLDN4抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域為以下之(a)或(b)中之任一者:
(a)包含由序列編號2之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號2之胺基酸編號50至66之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號2之胺基酸編號99至114之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域,以及包含由序列編號4之胺基酸編號24至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號4之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號4之胺基酸編號90至98之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域;或
(b)包含由序列編號6之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號6之胺基酸編號50至66之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號6之胺基酸編號99至112之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域,以及包含由序列編號8之胺基酸編號24至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號8之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號8之胺基酸編號90至98之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域。
[2] 如[1]中所記載之雙特異性抗體,其中,抗CLDN4抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域為以下之(a)或(b)中之任一者:
(a)由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域;或
(b)由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域。
[3] 如[1]或[2]中之任一項所記載之雙特異性抗體,其係包含IgG抗體,該IgG抗體係由包含抗CLDN4抗體之重鏈可變區域之重鏈及包含抗CLDN4抗體之輕鏈可變區域之輕鏈所構成之IgG抗體(抗CLDN4 IgG抗體)。
[4] 如[3]中所記載之雙特異性抗體,其係於抗CLDN4 IgG抗體之Fc領域包含LALA突變(L234A及L235A(此處,前述突變位置係依據人類Igγ1恆定區域中之EU編號之胺基酸位置))。
[5] 如[3]中所記載之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體,其係於抗CLDN4 IgG抗體之Fc領域包含P331G突變(此處,前述突變位置係依據人類Igγ1恆定區域中之EU編號之胺基酸位置)。
[6] 如[3]中所記載之雙特異性抗體,其中,抗CLDN4 IgG抗體之Fc領域係包含LALA突變及P331G突變。
[7] 如[1]~[6]中之任一項所記載之雙特異性抗體,其中,抗CD137抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域為以下之(a)~(d)中之任一者:
(a)包含由序列編號10之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號10之胺基酸編號50至66之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號10之胺基酸編號99至107之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域,以及包含由序列編號12之胺基酸編號24至34之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號12之胺基酸編號50至56之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號12之胺基酸編號89至98之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域;
(b)包含由序列編號14之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號14之胺基酸編號50至65之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號14之胺基酸編號98至107之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域,以及包含由序列編號16之胺基酸編號23至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號16之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號16之胺基酸編號90至100之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域;
(c)包含由序列編號18之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號18之胺基酸編號50至65之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號18之胺基酸編號98至107之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域,以及包含由序列編號20之胺基酸編號23至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號20之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號20之胺基酸編號90至100之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域;或
(d)包含由序列編號22之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號22之胺基酸編號50至65之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號22之胺基酸編號98至110之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域,以及包含由序列編號24之胺基酸編號23至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號24之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號24之胺基酸編號90至100之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域。
[8] 如[1]~[7]中之任一項所記載之雙特異性抗體,其中,抗CD137抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域為以下之(a)~(i)中之任一者:
(a)由序列編號10之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號12之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域;
(b)由序列編號14之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號16之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域;
(c)由序列編號18之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號20之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域;
(d)由序列編號22之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號24之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域
(e)由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域;
(f)由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域;
(g)由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域及由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域;
(h)由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域;或
(i)由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域。
[9] 如[7]或[8]中之任一項所記載之雙特異性抗體,其中,包含抗CD137單鏈可變區域片段(抗CD137scFv),且該抗CD137單鏈可變區域片段(抗CD137scFv)係包含抗CD137抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域。
[10] 如[9]中所記載之雙特異性抗體,其中,抗CD137scFv為以下之(a)~(e)中之任一者:
(a)由序列編號26之胺基酸編號1至242之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv;
(b)由序列編號28之胺基酸編號1至244之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv;
(c)由序列編號30之胺基酸編號1至249之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv;
(d)由序列編號32之胺基酸編號1至244之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv;或
(e)由序列編號34之胺基酸編號1至247之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv。
[11] 如[9]或[10]中之任一項所記載之雙特異性抗體,其係包含抗CLDN4 IgG抗體及抗CD137scFv,其中,抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於抗CLDN4 IgG抗體之重鏈或輕鏈羧基末端。
[12] 一種抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體,其係以下之(a)~(j)中之任一者:
(a)一雙特異性抗體,其係包含:包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端;
(b)一雙特異性抗體,其係包含:包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端;
(c)一雙特異性抗體,其係包含:包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域及由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端;
(d)一雙特異性抗體,其係包含:包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端;
(e)一雙特異性抗體,其係包含:包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端;
(f)一雙特異性抗體,其係包含:包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端;
(g)一雙特異性抗體,其係包含:包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端;
(h)一雙特異性抗體,其係包含:包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域及由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端;
(i)一雙特異性抗體,其係包含:包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端;或
(j)一雙特異性抗體,其係包含:包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端。
[13] 如[11]或[12]中之任一項所記載之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體,其中,連結子為GS連結子。
[14] 如[13]中所記載之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體,其中,GS連結子為由序列編號54之胺基酸序列所構成之連結子。
[15] 一種抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體,其係以下之(a)或(b)中之任一者:
(a)一雙特異性抗體,其係包含:由序列編號36之胺基酸編號1至705之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽,以及由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈;或
(b)一雙特異性抗體,其係包含:由序列編號38之胺基酸編號1至712之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽以及由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈。
[16] 如[1]~[15]中之任一項所記載之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體,其係經轉譯後修飾。
[17] 如[16]中所記載之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體,其中,轉譯後修飾為重鏈可變區域N末端之焦麩胺酸化及/或重鏈C末端離胺酸缺失。
[18] 一種多核苷酸,其係包含由下述(a)~(d)所成之群所選出之編碼抗CLDN4抗體之重鏈可變區域或輕鏈可變區域之鹼基序列:
(a)包含編碼由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(b)包含編碼由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(c)包含編碼由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;或
(d)包含編碼由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸。
[19] 一種多核苷酸,其係包含由下述(a)~(r)所成之群所選出之編碼抗CD137抗體之重鏈可變區域或輕鏈可變區域之鹼基序列:
(a)包含編碼由序列編號10之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(b)包含編碼由序列編號12之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(c)包含編碼由序列編號14之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(d)包含編碼由序列編號16之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(e)包含編碼由序列編號18之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(f)包含編碼由序列編號20之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(g)包含編碼由序列編號22之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(h)包含編碼由序列編號24之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(i)包含編碼由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(j)包含編碼由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(k)包含編碼由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(l)包含編碼由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(m)包含編碼由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(n)包含編碼由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(o)包含編碼由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(p)包含編碼由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(q)包含編碼由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;或
(r)包含編碼由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸。
[20] 一種多核苷酸,其係包含選自由下述(a)~(e)所成之群之編碼抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸:
(a)包含編碼由序列編號26之胺基酸編號1至242之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸;
(b)包含編碼由序列編號28之胺基酸編號1至244之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸;
(c)包含編碼由序列編號30之胺基酸編號1至249之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸;
(d)包含編碼由序列編號32之胺基酸編號1至244之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸;或
(e)包含編碼由序列編號34之胺基酸編號1至247之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸。
[21] 一種由下述(a)~(e)所成之群所選出之多核苷酸,其係用於如[15]中所記載之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體之生產:
(a)包含編碼由序列編號36之胺基酸編號1至705之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸;
(b)包含編碼由序列編號38之胺基酸編號1至712之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸;
(c)包含編碼由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列之多核苷酸;
(d)包含編碼由序列編號36之胺基酸編號1至705之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸,以及包含編碼由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列之多核苷酸;或
(e)包含編碼由序列編號38之胺基酸編號1至712之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸,以及包含編碼由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列之多核苷酸。
[22] 一種表現載體,其係包含如[18]~[21]中之任一項所記載之多核苷酸。
[23] 一種宿主細胞,其係經過如[22]所記載之表現載體進行轉形者。
[24] 一種宿主細胞,其係包含由以下之(a)~(dd)所成之群所選出之多核苷酸:
(a)包含編碼由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(b)包含編碼由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(c)包含編碼由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(d)包含編碼由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸。
(e)包含編碼由序列編號10之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(f)包含編碼由序列編號12之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(g)包含編碼由序列編號14之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(h)包含編碼由序列編號16之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(i)包含編碼由序列編號18之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(j)包含編碼由序列編號20之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(k)包含編碼由序列編號22之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(l)包含編碼由序列編號24之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸。
(m)包含編碼由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(n)包含編碼由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(o)包含編碼由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(p)包含編碼由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(q)包含編碼由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(r)包含編碼由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(s)包含編碼由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(t)包含編碼由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(u)包含編碼由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(v)包含編碼由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(w)包含編碼由序列編號26之胺基酸編號1至242之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸;
(x)包含編碼由序列編號28之胺基酸編號1至244之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸;
(y)包含編碼由序列編號30之胺基酸編號1至249之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸;
(z)包含編碼由序列編號32之胺基酸編號1至244之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸;
(aa)包含編碼由序列編號34之胺基酸編號1至247之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸。
(bb)包含編碼由序列編號36之胺基酸編號1至705之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸;
(cc)包含編碼由序列編號38之胺基酸編號1至712之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸;或
(dd)包含編碼由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列之多核苷酸。
[25] 一種宿主細胞,其係包含以下之(a)或(b)中之任一項之多核苷酸:
(a)包含編碼由序列編號36之胺基酸編號1至705之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸,以及包含編碼由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列之多核苷酸;或
(b)包含編碼由序列編號38之胺基酸編號1至712之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸,以及包含編碼由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列之多核苷酸。
[26] 一種抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體之生產方法,其中包含培養如[23]~[25]中之任一項所記載之宿主細胞之步驟。
[27] 一種醫藥組成物,其係包含如[1]~[17]中之任一項所記載之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體及藥學上可容許之賦形劑。
[28] 如[1]~[17]中之任一項所記載之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體,其係使用於癌症之治療。
[29] 如[27]中所記載之醫藥組成物,其係用於癌症之治療。
[30] 一種治療癌症之方法,其係包含將如[1]~[17]中之任一項所記載之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體之治療有效量投予至對象之步驟。
[31] 如[1]~[17]中之任一項所記載之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體之使用,其係用於用於癌症之治療之醫藥組成物之製造中。
[發明之效果]
本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係鍵結於癌症抗原之CLDN4與表現於T細胞等的免疫細胞之表面之CD137之雙方,係藉由使癌細胞周邊之免疫細胞進行活性化,來增強對於癌細胞之殺傷作用者。本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體或包含前述抗體之醫藥組成物係可使用於各種癌症之治療之用途。
以下係針對本發明進行詳述。
<定義>
本說明書之用語,除非在下文中有特別定義,否則係以本技術領域中具有通常知識者通常所使用之意味來使用。
抗體(或免疫球蛋白)係以具有左右對稱Y字型之構造之4條鏈構造為基本構造之糖蛋白質,且該左右對稱Y字型之構造係由具有單一之序列之重鏈2條,及具有單一之序列之輕鏈2條所構成。抗體係存在有IgG、IgM、IgA、IgD及IgE等之5個種類。抗體分子之基本構造在各種類中係共通,分子量5萬~7萬之重鏈2條及2萬~3萬之輕鏈2條藉由雙硫鍵及非共價鍵而鍵結,且形成由分子量15萬~19萬之Y字型之4條鏈構造所構成之抗體分子。重鏈係由通常包含約440個之胺基酸之多肽鏈所構成,且依種類而具有不同特徵的構造,對應於IgG、IgM、IgA、IgD、IgE係各自被稱為Igγ、Igμ、Igα、Igδ、Igε。此外,IgG中存在有IgG1、IgG2、IgG3、IgG4等之次種類,各別對應之重鏈係被稱為Igγ1、Igγ2、Igγ3、Igγ4。輕鏈係由通常包含約220個之胺基酸之多肽鏈所構成,已知有λ型及κ型之2種,分別稱為Igλ、Igκ。前述2種輕鏈皆可與任一種類之重鏈配對。
抗體分子之鏈內雙硫鍵於重鏈中存在有4個(Igμ、Igε中為5個)、輕鏈中存在有2個,且胺基酸每100~110個殘基形成1個環(loop)。該等立體構造於各環間均類似,稱為構造單位或領域。位於重鏈、輕鏈之N末端之領域係被稱為可變區域,即使是由同種動物之同一類(class)(或次類(subclass))所產生出之抗體,亦具有多樣的胺基酸序列,係已知參與抗體與抗原之鍵結特異性鍵結。比可變區域更下游之C末端側之領域之胺基酸序列在各類或次類中係幾乎固定,被稱為恆定區域。重鏈自N末端起向C末端係具有重鏈可變區域(VH)及重鏈恆定區域(CH)。CH自N末端側起可分為CH1領域、CH2領域,及CH3領域之3個領域。輕鏈自N末端起向C末端係具有輕鏈可變區域(VL)及輕鏈恆定區域(CL)。
存在於VH及VL之3個互補決定區域(CDR)之胺基酸序列之變化係非常的大,對於可變區域之可變化性有所貢獻。CDR係由5~10胺基酸殘基所構成之領域,於重鏈與輕鏈之各自之N末端依序存在有CDR1、CDR2、CDR3,且係與抗原接觸形成抗體鍵結部位。重鏈之CDR比輕鏈之CDR具有更大的對於抗原鍵結之貢獻,CDR1~3之中,已知CDR3之貢獻係最高。另一方面,可變區域之CDR以外之部分係被稱為骨架領域(FR),係由FR1~4構成,胺基酸序列之變化相較而言係少。
若將抗體以蛋白質分解酵素之木瓜酵素處理,則可獲得3個抗體片段。N末端側的2個片段係被稱為Fab(抗原鍵結片段、Fragment,antigen binding)領域。所謂Fab領域,係指由重鏈之VH、CH1領域及樞紐領域之一部份,以及輕鏈(VL及CL)所構成之領域,且係以構成該Fab領域之VH及VL(抗原鍵結部位)與抗原鍵結。又,C末端側之片段係被稱為Fc(可結晶化片段、Fragment,crystallizable)領域。
本說明書中,所謂「IgG抗體」,係指具有由2個Fab領域與Fc領域所構成之Y字型之構造之抗體。於一實施形態中,IgG抗體之2個Fab領域係由同一之序列所構成之Fab領域。於一實施形態中,IgG抗體之2個Fab領域係由不同序列所構成之Fab領域。
本說明書中,「抗原鍵結片段」及「片段抗體」係可相互互換地使用,且係指包含免疫球蛋白分子之重鏈可變區域及輕鏈可變區域、具有抗原結合活性之至少包含1個多肽鏈之分子。作為代表性的抗原鍵結片段,可舉出單鏈可變區域片段(scFv)、Fab片段、Fab’片段、F(ab’)
2片段。本說明書中,所謂「scFv」,係指由藉由連結子連結之VH及VL所構成之一價之抗原鍵結片段。Fab片段為由包含輕鏈及重鏈之VH、CH1領域及樞紐領域之一部份之片段所構成之一價之抗原鍵結片段。Fab’片段係由包含輕鏈及重鏈之VH、CH1領域及樞紐領域之一部份之片段所構成之一價之抗原鍵結片段,且該樞紐領域之部分係包含曾構成重鏈間雙硫鍵之半胱胺酸殘基。F(ab’)
2片段為以雙硫鍵連接在一起之Fab’片段之二價之抗原鍵結片段。所謂一價,係意指包含1個抗原鍵結部位,所謂二價係意指包含2個抗原鍵結部位。
本說明書中,所謂「雙特異性抗體」,係指由對於相異的抗原特異地鍵結之2個抗體或抗原鍵結片段所構成,且對於各抗原具有結合活性之抗體分子。作為雙特異性抗體,對於本發明技術領域中具有通常知識者來說已知有各式各樣的構造之雙特異性抗體(非專利文獻6)。本說明書中所使用之用語「抗體」中,除非上下文中有特別限制,否則係包含全長之抗體(各種免疫球蛋白、尤其是IgG抗體)、抗原鍵結片段,及每個構造之雙特異性抗體。
本說明書中,IgG型之抗CLDN4抗體係稱為「抗CLDN4 IgG抗體」。
本說明書中,所謂「人類抗體」,係表示具有人類免疫球蛋白胺基酸序列之抗體。本說明書中,「人源化抗體」係表示CDR以外之胺基酸殘基之一部份、大部分、或全部經源自人類免疫球蛋白分子之胺基酸殘基取代之抗體。人源化之方法係未受到特別限定,然而,例如,可參照美國專利第5225539號、美國專利第6180370號等來製作人源化抗體。
本說明書中所使用之抗體之胺基酸殘基編號係可藉由指定Kabat編號或EU編號(Kabat等、Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed, 1991, NIH Publication No.91-3242),依據該等的編號系統來進行規定。
本說明書中,所謂「連結」或「被連結」,係意指複數成分(例如,Fab領域及Fc領域)透過直接或仲介物(例如,胜肽連結子)來進行鍵結的意思。本說明書中,所謂「胜肽連結子」,係意指為了連結複數成分而被使用之可藉由基因工程的手法導入之1個以上的任意之胺基酸序列。本發明中所使用之胜肽連結子之長度係未受到特別限定,本發明技術領域中具有通常知識者係可依據目的適宜地選擇。
本說明書中,所謂「同一性」,係指使用EMBOSS Needle(Nucleic Acids Res.、2015、Vol.43、pW580-W584),藉由所準備之預設之參數所獲得之Identity之值。前述之參數係如同下述。
Gap Open Penalty = 10
Gap Extend Penalty = 0.5
Matrix = EBLOSUM62
End Gap Penalty = false
<本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體>
本發明係提供一種鍵結於CLDN4及CD137之雙特異性抗體(亦稱為「抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體」)。本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係包含抗CLDN4抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域,以及抗CD137抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域。本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體中係包含包含抗CLDN4 IgG抗體與抗CD137抗體之scFv(亦稱為「抗CD137scFv」)之雙特異性抗體。於一實施形態中,本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係包含抗CLDN4 IgG抗體與抗CD137scFv之雙特異性抗體。
本說明書中,「抗CLDN4抗體」係可鍵結於人類CLDN4之抗體,「抗CD137抗體」係可鍵結於人類CD137之抗體。是否鍵結於人類CLDN4或人類CD137,係可使用習知的結合活性測定方法來進行確認。作為測定結合活性之方法,例如,可舉出Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay(ELISA)法、流式細胞術等的方法。ELISA法或流式細胞術係可藉由本發明技術領域中具有通常知識者通常使用之方法來實施,例如可使用實施例3或5中所記載之方法。
本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體只要係鍵結於CLDN4及CD137,則可為任何構造,例如,可舉出具有非專利文獻6中所記載之構造之雙特異性抗體。於一實施形態中,本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體可為抗CLDN4抗體之Fab領域與抗CD137抗體之Fab領域連結之接合體(conjugate)、抗CLDN4 IgG抗體及IgG型之抗CD137抗體(亦稱為「抗CD137 IgG抗體」)之接合體、抗CLDN4 IgG抗體及抗CD137抗體之抗原鍵結片段之接合體、抗CLDN4抗體之抗原鍵結片段及抗CD137 IgG抗體之接合體,或抗CLDN4抗體之抗原鍵結片段及抗CD137抗體之抗原鍵結片段之接合體。
於一實施形態中,本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係包含全長之抗CLDN4抗體及全長之抗CD137抗體。於一實施形態中,本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係包含抗CLDN4 IgG抗體及抗CD137 IgG抗體。2個抗體亦可透過連結子來連結。於一實施形態中,本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係包含全長之抗CLDN4抗體及抗CD137抗體之抗原鍵結片段。2個抗體之連結部位係未受到特別限定,係直接或透過連結子來連結。於一實施形態中,本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係包含抗CLDN4 IgG抗體及抗CD137抗體之scFv(本說明書中,係稱為「抗CD137scFv」)。於一實施形態中,本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係包含抗CLDN4 IgG抗體及抗CD137scFv,且抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端係連結抗CD137scFv之胺基末端。於一實施形態中,本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係包含抗CLDN4 IgG抗體及抗CD137scFv,且抗CLDN4抗體之輕鏈羧基末端係連結抗CD137scFv之胺基末端。於一實施形態中,本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係包含抗CLDN4 IgG抗體及抗CD137scFv,且抗CLDN4抗體之重鏈之胺基末端係連結抗CD137scFv之羧基末端。於一實施形態中,本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係包含抗CLDN4 IgG抗體及抗CD137scFv,且抗CLDN4抗體之輕鏈之胺基末端係連結抗CD137scFv之羧基末端。於一實施形態中,本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係包含抗CLDN4抗體之抗原鍵結片段及抗CD137之抗原鍵結片段。於一實施形態中,本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係包含抗CLDN4抗體之scFv及抗CD137之scFv。於一實施形態中,本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係包含抗CD137scFv。
本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體中,抗CLDN4抗體及抗CD137抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域可為源自人類抗體、源自人源化抗體,或該等之組合。於一實施形態中,本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體為人類抗體、人源化抗體,或其之組合所構成之抗體。
本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體,係包含抗CLDN4抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域,以及抗CD137抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體,其係抗CLDN4抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域為以下之(a)或(b)中之任一者之雙特異性抗體:
(a)包含由序列編號2之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號2之胺基酸編號50至66之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號2之胺基酸編號99至114之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域,以及包含由序列編號4之胺基酸編號24至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號4之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號4之胺基酸編號90至98之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域;或
(b)包含由序列編號6之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號6之胺基酸編號50至66之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號6之胺基酸編號99至112之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域,以及包含由序列編號8之胺基酸編號24至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號8之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號8之胺基酸編號90至98之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域。
於一實施形態中,本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係包含以下之(a)或(b)中所記載之抗CLDN4抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域:
(a)由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域;或
(b)由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域。
本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體中,作為抗CLDN4抗體,可包含IgG抗體等的全長的抗體,亦可包含Fab片段、Fab’片段、F(ab’)
2片段或scFv等的抗原鍵結片段。
作為本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體中所包含之抗CLDN4抗體中所包含之重鏈恆定區域,可選擇Igγ、Igμ、Igα、Igδ或Igε中之任一恆定區域。作為Igγ,例如,可選自Igγ1、Igγ2、Igγ3或Igγ4。作為本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體中所包含之抗CLDN4抗體中所包含之輕鏈恆定區域,亦可選擇Igλ或Igκ中之任一恆定區域。本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體中所包含之抗CLDN4抗體為IgG抗體之情況中,於一實施形態中,該抗CLDN4抗體之重鏈及輕鏈係分別為人類Igγ1及Igκ。於一實施形態中,本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係包含全長之抗CLDN4抗體。於一實施形態中,本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體中所包含之抗CLDN4抗體為包含抗CLDN4抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域之IgG抗體(抗CLDN4 IgG抗體)。
本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體包含Fc領域之情況中,該雙特異性抗體中之Fc領域中亦可包含使抗體依存性細胞傷害活性(ADCC)或補體依存性傷害活性(CDC)降低之突變。所謂L234A,係指人類Igγ1恆定區域之胺基酸234位之白胺酸取代為丙胺酸之取代。所謂L235A,係指人類Igγ1恆定區域之胺基酸235位之白胺酸取代為丙胺酸之取代。人類Igγ1恆定區域L234A及L235A之胺基酸突變係稱為「LALA突變」。此處,前述234位及235位係依據人類Igγ1恆定區域中之EU編號之胺基酸位置。該突變係已知使抗體之ADCC或CDC降低 (Mol.Immunol.、1992、Vol.29、p.633-639;J.Immunol.、2000、Vol.164、p.4178-4184)。所謂P331G或P331S,係指人類Igγ1恆定區域之胺基酸331位之脯胺酸取代為甘胺酸或絲胺酸之取代。此處,前述331位係依據人類Igγ1恆定區域中之EU編號之胺基酸位置。該突變已知係使抗體之CDC降低(J.Immunol.、2000、Vol.164(8)、p.4178-4184)。
於一實施形態中,本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體中所包含之抗CLDN4 IgG抗體係包含包含L234A及L235A之胺基酸突變(LALA突變)之Fc領域。於一實施形態中,抗CLDN4 IgG抗體係包含包含P331G或P331S突變中之任一種之Fc領域。於一實施形態中,抗CLDN4 IgG抗體係包含包含LALA突變及P331G或P331S突變中之任一種之突變之Fc領域。
本發明者們在本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體之創造過程中,創造出新穎的抗CD137抗體或其鍵結片段(scFv)。本發明者們係確認了在僅鍵結於CD137之情況中不傳達CD137訊號,而僅在同時鍵結於CD137及CLDN4之情況中傳達CD137訊號之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體。此等的抗體在未鍵結於CLDN4之情況中係不顯示促效劑活性。另一方面,藉由抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體所造成之向CLDN4及CD137之結合,可獲得CD137訊號之傳達及T細胞之活性化。此作用係被期待可減輕在Urelumab之臨床試驗中所見到的肝毒性等,故係被期待為作為用於雙特異性抗體之抗CD137抗體之較佳特徵。
於一實施形態中,本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係包含以下之(a)~(d)中之任一項所記載之抗CD137抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域:
(a)包含由序列編號10之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號10之胺基酸編號50至66之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號10之胺基酸編號99至107之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域,以及包含由序列編號12之胺基酸編號24至34之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號12之胺基酸編號50至56之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號12之胺基酸編號89至98之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域;
(b)包含由序列編號14之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號14之胺基酸編號50至65之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號14之胺基酸編號98至107之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域,以及包含由序列編號16之胺基酸編號23至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號16之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號16之胺基酸編號90至100之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域;
(c)包含由序列編號18之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號18之胺基酸編號50至65之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號18之胺基酸編號98至107之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域,以及包含由序列編號20之胺基酸編號23至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號20之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號20之胺基酸編號90至100之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域;或
(d)包含由序列編號22之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號22之胺基酸編號50至65之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號22之胺基酸編號98至110之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域,以及包含由序列編號24之胺基酸編號23至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號24之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號24之胺基酸編號90至100之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域。
於一實施形態中,本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係包含以下之(a)~(i)中之任一項所記載之抗CD137抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域:
(a)由序列編號10之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號12之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域;
(b)由序列編號14之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號16之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域;
(c)由序列編號18之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號20之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域;
(d)由序列編號22之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號24之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域
(e)由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域;
(f)由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域;
(g)由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域及由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域;
(h)由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域;或
(i)由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域。
本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體中,作為抗CD137抗體,亦可包含IgG抗體等的全長之抗體,亦可包含或Fab片段、Fab’片段、F(ab’)
2片段、scFv等的抗原鍵結片段。於一實施形態中,抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體中所包含之抗CD137抗體為抗CD137抗體之抗原鍵結片段。於一實施形態中,抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體中所包含之抗CD137抗體之抗原鍵結片段為抗CD137scFv。
於一實施形態中,本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係包含包含以下之(a)~(m)中所記載之抗CD137抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域之抗CD137scFv:
(a)包含由序列編號10之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號10之胺基酸編號50至66之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號10之胺基酸編號99至107之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域,以及包含由序列編號12之胺基酸編號24至34之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號12之胺基酸編號50至56之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號12之胺基酸編號89至98之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域;
(b)包含由序列編號14之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號14之胺基酸編號50至65之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號14之胺基酸編號98至107之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域,以及包含由序列編號16之胺基酸編號23至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號16之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號16之胺基酸編號90至100之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域;
(c)包含由序列編號18之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號18之胺基酸編號50至65之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號18之胺基酸編號98至107之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域,以及包含由序列編號20之胺基酸編號23至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號20之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號20之胺基酸編號90至100之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域;
(d)包含由序列編號22之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號22之胺基酸編號50至65之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號22之胺基酸編號98至110之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域,以及包含由序列編號24之胺基酸編號23至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號24之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號24之胺基酸編號90至100之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域;
(e)由序列編號10之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號12之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域;
(f)由序列編號14之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號16之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域;
(g)由序列編號18之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號20之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域;
(h)由序列編號22之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號24之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域
(i)由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域;
(j)由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域;
(k)由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域及由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域;
(l)由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域;或
(m)由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域。
抗CD137scFv中,連結抗CD137抗體之重鏈可變區域與輕鏈可變區域之連結子之種類及長度係未受到特別限定,本發明技術領域中具有通常知識者係可適宜地選擇。作為連結子,亦可使用胜肽連結子。較佳長度為5胺基酸以上(上限係未受到特別限定,然而通常為30胺基酸以下,較佳為20胺基酸以下),特佳為15胺基酸。作為連結子,例如,可使用甘胺酸-絲胺酸連結子(GS連結子),或甘胺酸-離胺酸-脯胺酸-甘胺酸-絲胺酸連結子(GKPGS連結子)。作為這樣的連結子,例如,可舉出下列連結子。
Ser
Gly-Ser
Gly-Gly-Ser
Ser-Gly-Gly
Gly-Gly-Gly-Ser (序列編號46)
Ser-Gly-Gly-Gly (序列編號47)
Gly-Gly-Gly-Gly-Ser (序列編號48)
Ser-Gly-Gly-Gly-Gly (序列編號49)
Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser (序列編號50)
Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly (序列編號51)
Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser (序列編號52)
Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly (序列編號53)
Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser (序列編號54)
(Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)n
(Ser-Gly-Gly-Gly-Gly)n
Gly-Lys-Pro-Gly-Ser (序列編號55)
(Gly-Lys-Pro-Gly-Ser)n
上述之n係表示1以上之整數。又,在某些態樣中,上述之n為1~10、2~8,或2~6。本發明技術領域中具有通常知識者可依據目的適宜地選擇連結子之長度或序列。於一實施形態中,抗CD137scFv中,所使用之連結子為GS連結子。於一實施形態中,抗CD137scFv中,所使用之連結子為(Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)n之GS連結子,其中n為3或4中之任一者。
於一實施形態中,本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係包含以下之(a)~(e)中之任一項之抗CD137scFv:
(a)由序列編號26之胺基酸編號1至242之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv;
(b)由序列編號28之胺基酸編號1至244之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv;
(c)由序列編號30之胺基酸編號1至249之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv;
(d)由序列編號32之胺基酸編號1至244之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv;或
(e)由序列編號34之胺基酸編號1至247之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv。
本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體中,抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段與抗CD137抗體或其抗原鍵結片段亦可以連結子連結。連結抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段與抗CD137抗體或其抗原鍵結片段之連結子之種類及長度係未受到特別限定,本發明技術領域中具有通常知識者係可適宜地選擇。作為連結子,亦可使用胜肽連結子。較佳長度為5胺基酸以上(上限係未受到特別限定,然而通常為30胺基酸以下,較佳為20胺基酸以下),特佳為10胺基酸。作為胜肽連結子,例如,可使用甘胺酸-絲胺酸連結子(GS連結子)或甘胺酸-離胺酸-脯胺酸-甘胺酸-絲胺酸連結子(GKPGS連結子)。作為這樣的連結子,例如,可舉出下列連結子。
Ser
Gly-Ser
Gly-Gly-Ser
Ser-Gly-Gly
Gly-Gly-Gly-Ser (序列編號46)
Ser-Gly-Gly-Gly (序列編號47)
Gly-Gly-Gly-Gly-Ser (序列編號48)
Ser-Gly-Gly-Gly-Gly (序列編號49)
Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser (序列編號50)
Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly (序列編號51)
Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser (序列編號52)
Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly (序列編號53)
Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser (序列編號54)
(Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)n
(Ser-Gly-Gly-Gly-Gly)n
Gly-Lys-Pro-Gly-Ser (序列編號55)
(Gly-Lys-Pro-Gly-Ser)n
上述之n係表示1以上之整數。又,在某些態樣中,上述之n為1~10、2~8,或2~6。胜肽本發明技術領域中具有通常知識者可依據目的適宜地選擇連結子之長度或序列。於一實施形態中,作為連結抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段與抗CD137抗體或其抗原鍵結片段之連結子使用之連結子,為GS連結子或GKPGS連結子,於一實施形態中,係由序列編號54之胺基酸序列所構成之連結子。
於一實施形態中,本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係具有包含抗CLDN4 IgG抗體及抗CD137scFv,且抗CLDN4 IgG抗體與抗CD137scFv係透過連結子連結之構造。抗CLDN4 IgG抗體與抗CD137scFv之連結部位係未受特別限定,然而,例如,本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體可採取抗CD137scFv之羧基末端連結有抗CLDN4 IgG抗體之重鏈胺基末端、於抗CD137scFv之羧基末端連結有抗CLDN4 IgG抗體之輕鏈胺基末端、於抗CLDN4 IgG抗體之重鏈羧基末端連結有抗CD137scFv之胺基末端、於抗CLDN4 IgG抗體之輕鏈羧基末端連結有抗CD137scFv之胺基末端等的各式各樣之構造。於一實施形態中,本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係於抗CLDN4 IgG抗體之重鏈羧基末端連結有抗CD137scFv之胺基末端、或於抗CLDN4 IgG抗體之輕鏈羧基末端連結有抗CD137scFv之胺基末端。於一實施形態中,本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係於抗CLDN4 IgG抗體之重鏈羧基末端連結有抗CD137scFv之胺基末端。
於一實施形態中,本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係包含抗CLDN4 IgG抗體及抗CD137scFv,且抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於抗CLDN4 IgG抗體之重鏈或輕鏈羧基末端,且係抗CD137scFv之重鏈可變區域及輕鏈可變區域為以下之(a)~(m)中之任一者之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體:
(a)包含由序列編號10之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號10之胺基酸編號50至66之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號10之胺基酸編號99至107之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域,以及包含由序列編號12之胺基酸編號24至34之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號12之胺基酸編號50至56之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號12之胺基酸編號89至98之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域;
(b)包含由序列編號14之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號14之胺基酸編號50至65之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號14之胺基酸編號98至107之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域,以及包含由序列編號16之胺基酸編號23至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號16之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號16之胺基酸編號90至100之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域;
(c)包含由序列編號18之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號18之胺基酸編號50至65之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號18之胺基酸編號98至107之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域,以及包含由序列編號20之胺基酸編號23至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號20之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號20之胺基酸編號90至100之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域;
(d)包含由序列編號22之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號22之胺基酸編號50至65之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號22之胺基酸編號98至110之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域,以及包含由序列編號24之胺基酸編號23至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號24之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號24之胺基酸編號90至100之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域;
(e)由序列編號10之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號12之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域;
(f)由序列編號14之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號16之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域;
(g)由序列編號18之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號20之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域;
(h)由序列編號22之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號24之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域
(i)由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域;
(j)由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域;
(k)由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域及由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域;
(l)由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域;或
(m)由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域。
於一實施形態中,本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係包含抗CLDN4 IgG抗體及抗CD137scFv,且抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於抗CLDN4 IgG抗體之重鏈或輕鏈羧基末端,且係抗CD137scFv為以下之(a)~(e)中之任一者之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體:
(a)由序列編號26之胺基酸編號1至242之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv;
(b)由序列編號28之胺基酸編號1至244之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv;
(c)由序列編號30之胺基酸編號1至249之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv;
(d)由序列編號32之胺基酸編號1至244之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv;或
(e)由序列編號34之胺基酸編號1至247之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv。
於一實施形態中,本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體為以下之(a)~(h)中之任一項之抗CLDN4-抗CD137scFv雙特異性抗體:
(a)一雙特異性抗體,其係包含:包含包含由序列編號2之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號2之胺基酸編號50至66之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號2之胺基酸編號99至114之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈、包含包含由序列編號4之胺基酸編號24至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號4之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號4之胺基酸編號90至98之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含包含由序列編號10之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號10之胺基酸編號50至66之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號10之胺基酸編號99至107之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域,以及包含由序列編號12之胺基酸編號24至34之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號12之胺基酸編號50至56之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號12之胺基酸編號89至98之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端;
(b)一雙特異性抗體,其係包含:包含包含由序列編號2之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號2之胺基酸編號50至66之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號2之胺基酸編號99至114之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈、包含包含由序列編號4之胺基酸編號24至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號4之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號4之胺基酸編號90至98之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含包含由序列編號14之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號14之胺基酸編號50至65之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號14之胺基酸編號98至107之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域,以及包含由序列編號16之胺基酸編號23至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號16之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號16之胺基酸編號90至100之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端;
(c)一雙特異性抗體,其係包含:包含包含由序列編號2之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號2之胺基酸編號50至66之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號2之胺基酸編號99至114之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈、包含包含由序列編號4之胺基酸編號24至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號4之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號4之胺基酸編號90至98之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含包含由序列編號18之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號18之胺基酸編號50至65之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號18之胺基酸編號98至107之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域,以及包含由序列編號20之胺基酸編號23至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號20之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號20之胺基酸編號90至100之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端;
(d)一雙特異性抗體,其係包含:包含包含由序列編號2之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號2之胺基酸編號50至66之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號2之胺基酸編號99至114之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈、包含包含由序列編號4之胺基酸編號24至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號4之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號4之胺基酸編號90至98之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含包含由序列編號22之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號22之胺基酸編號50至65之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號22之胺基酸編號98至110之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域,以及包含由序列編號24之胺基酸編號23至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號24之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號24之胺基酸編號90至100之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端;
(e)一雙特異性抗體,其係包含:包含包含由序列編號6之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號6之胺基酸編號50至66之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號6之胺基酸編號99至112之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈、包含包含由序列編號8之胺基酸編號24至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號8之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號8之胺基酸編號90至98之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含包含由序列編號10之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號10之胺基酸編號50至66之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號10之胺基酸編號99至107之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域,以及包含由序列編號12之胺基酸編號24至34之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號12之胺基酸編號50至56之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號12之胺基酸編號89至98之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端;
(f)一雙特異性抗體,其係包含:包含包含由序列編號6之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號6之胺基酸編號50至66之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號6之胺基酸編號99至112之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈、包含包含由序列編號8之胺基酸編號24至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號8之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號8之胺基酸編號90至98之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含包含由序列編號14之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號14之胺基酸編號50至65之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號14之胺基酸編號98至107之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域,以及包含由序列編號16之胺基酸編號23至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號16之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號16之胺基酸編號90至100之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端;
(g)一雙特異性抗體,其係包含:包含包含由序列編號6之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號6之胺基酸編號50至66之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號6之胺基酸編號99至112之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈、包含包含由序列編號8之胺基酸編號24至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號8之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號8之胺基酸編號90至98之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含包含由序列編號18之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號18之胺基酸編號50至65之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號18之胺基酸編號98至107之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域,以及包含由序列編號20之胺基酸編號23至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號20之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號20之胺基酸編號90至100之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端;或
(h)一雙特異性抗體,其係包含:包含包含由序列編號6之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號6之胺基酸編號50至66之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號6之胺基酸編號99至112之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈、包含包含由序列編號8之胺基酸編號24至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號8之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號8之胺基酸編號90至98之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含包含由序列編號22之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號22之胺基酸編號50至65之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號22之胺基酸編號98至110之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域,以及包含由序列編號24之胺基酸編號23至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號24之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號24之胺基酸編號90至100之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端。
於一實施形態中,本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體為以下之(a)~(j)中之任一項之抗CLDN4-抗CD137scFv雙特異性抗體:
(a)一雙特異性抗體,其係包含:包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端;
(b)一雙特異性抗體,其係包含:包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端;
(c)一雙特異性抗體,其係包含:包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域及由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端;
(d)一雙特異性抗體,其係包含:包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端;
(e)一雙特異性抗體,其係包含:包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端;
(f)一雙特異性抗體,其係包含:包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端;
(g)一雙特異性抗體,其係包含:包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端;
(h)一雙特異性抗體,其係包含:包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域及由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端;
(i)一雙特異性抗體,其係包含:包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端;
(j)一雙特異性抗體,其係包含:包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端;
(k)一雙特異性抗體,其係包含:包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之輕鏈羧基末端;
(l)一雙特異性抗體,其係包含:包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之輕鏈羧基末端;
(m)一雙特異性抗體,其係包含:包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域及由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之輕鏈羧基末端;
(n)一雙特異性抗體,其係包含:包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之輕鏈羧基末端;
(o)一雙特異性抗體,其係包含:包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之輕鏈羧基末端;
(p)一雙特異性抗體,其係包含:包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之輕鏈羧基末端;
(q)一雙特異性抗體,其係包含:包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之輕鏈羧基末端;
(r)一雙特異性抗體,其係包含:包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域及由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之輕鏈羧基末端;
(s)一雙特異性抗體,其係包含:包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之輕鏈羧基末端;或
(t)一雙特異性抗體,其係包含:包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之輕鏈羧基末端。
於一實施形態中,本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體為以下之(a)或(b)之抗CLDN4-抗CD137scFv雙特異性抗體:
(a)一雙特異性抗體,其係包含:由序列編號36之胺基酸編號1至705之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽,以及包含由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之多肽;或
(b)一雙特異性抗體,其係包含:由序列編號38之胺基酸編號1至712之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽,以及由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈。
本說明書中,所謂「轉譯後修飾」,係指在使抗體在細胞內表現之情況中,抗體在轉譯後受到修飾。作為轉譯後修飾之例子,可舉出重鏈N末端之麩醯胺酸或麩胺酸之焦麩胺酸化、醣基化、氧化、脫醯胺化、糖化等的修飾,或重鏈C末端之離胺酸之藉由羧基胜肽酶之切斷所造成之離胺酸缺失。在各式各樣的抗體中,已知係產生這樣的轉譯後修飾(J.Pharm.Sci.、2008、Vol.97、p.2426-2447)。
於一實施形態中,本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體亦可進行轉譯後修飾。於一實施形態中,其中,轉譯後修飾為重鏈可變區域N末端之焦麩胺酸化及/或重鏈C末端離胺酸缺失。在該領域中已知藉由N末端之焦麩胺酸化或C末端離胺酸缺失所造成之轉譯後修飾係不影響抗體之活性(Analytical Biochemistry、2006、Vol.348、p.24-39)。
本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係鍵結於人類CLDN4及人類CD137。是否鍵結於人類CLDN4及人類CD137,係可使用習知的結合活性測定方法來進行確認。作為測定結合活性之方法,例如,可舉出ELISA法、流式細胞術等的方法。ELISA法或流式細胞術係可藉由本發明技術領域中具有通常知識者通常使用之方法來實施,例如可使用實施例3或5中所記載之方法。
本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體可由本發明技術領域中具有通常知識者,使用人類CLDN4及人類CD137作為抗原,並使用該領域中習知的抗體製作技術,容易地製作而獲得,或者,本發明技術領域中具有通常知識者可以本說明書中所揭示之抗CLDN4抗體及抗CD137抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域之序列情報等為基礎,使用在該領域中之習知的方法,容易地製作。
本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體並非受到特別限定者,然而,例如,可依循後述之<生產本發明之雙特異性抗體之方法>中所記載之方法來製造。
<本發明之雙特異性抗體之多核苷酸>
本發明又提供一種可使用於本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體之生產之多核苷酸(亦稱為「本發明之雙特異性抗體之多核苷酸」)。
於一實施形態中,本發明之雙特異性抗體之多核苷酸為一種多核苷酸,其係包含由下述(a)~(d)所成之群所選出之編碼抗CLDN4抗體之重鏈可變區域或輕鏈可變區域之鹼基序列:
(a)包含編碼由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(b)包含編碼由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(c)包含編碼由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;或
(d)包含編碼由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸。
於一實施形態中,本發明之雙特異性抗體之多核苷酸係由下述(a)或(b)所選出之包含編碼抗CLDN4抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸:
(a)包含編碼由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;或
(b)包含編碼由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸。
於一實施形態中,本發明之雙特異性抗體之多核苷酸為一種多核苷酸,其係包含由下述(a)~(r)所成之群所選出之編碼抗CD137抗體之重鏈可變區域或輕鏈可變區域之鹼基序列:
(a)包含編碼由序列編號10之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(b)包含編碼由序列編號12之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(c)包含編碼由序列編號14之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(d)包含編碼由序列編號16之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(e)包含編碼由序列編號18之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(f)包含編碼由序列編號20之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(g)包含編碼由序列編號22之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(h)包含編碼由序列編號24之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(i)包含編碼由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(j)包含編碼由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(k)包含編碼由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(l)包含編碼由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(m)包含編碼由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(n)包含編碼由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(o)包含編碼由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(p)包含編碼由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(q)包含編碼由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;或
(r)包含編碼由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸。
於一實施形態中,本發明之雙特異性抗體之多核苷酸係由下述(a)~(i)所成之群所選出之包含編碼抗CD137抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸:
(a)包含編碼由序列編號10之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號12之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(b)包含編碼由序列編號14之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號16之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(c)包含編碼由序列編號18之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號20之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(d)包含編碼由序列編號22之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號24之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(e)包含編碼由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(f)包含編碼由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(g)包含編碼由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(h)包含編碼由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;或
(i)包含編碼由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸。
於一實施形態中,本發明之雙特異性抗體之多核苷酸係一種多核苷酸,其係包含選自由下述(a)~(e)所成之群之編碼抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸:
(a)包含編碼由序列編號26之胺基酸編號1至242之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸;
(b)包含編碼由序列編號28之胺基酸編號1至244之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸;
(c)包含編碼由序列編號30之胺基酸編號1至249之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸;
(d)包含編碼由序列編號32之胺基酸編號1至244之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸;或
(e)包含編碼由序列編號34之胺基酸編號1至247之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸。
於一實施形態中,本發明之雙特異性抗體之多核苷酸係由下述(a)~(e)所成之群所選出之多核苷酸:
(a)包含編碼由序列編號36之胺基酸編號1至705之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸;
(b)包含編碼由序列編號38之胺基酸編號1至712之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸;
(c)包含編碼由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列之多核苷酸;
(d)包含編碼由序列編號36之胺基酸編號1至705之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸,以及包含編碼由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列之多核苷酸;或
(e)包含編碼由序列編號38之胺基酸編號1至712之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸,以及包含編碼由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列之多核苷酸。
本發明之雙特異性抗體之多核苷酸係本發明技術領域中具有通常知識者可以該鹼基序列為基礎,使用該領域習知的方法來容易地製作並獲得。例如,本發明之雙特異性抗體之多核苷酸係可利用該領域中習知的基因合成方法來合成。作為這樣的基因合成方法,係可使用國際公開編號90/07861號中所記載之抗體基因之合成方法等的本發明技術領域中具有通常知識者所習知的各種的方法。
<本發明之雙特異性抗體之表現載體>
本發明又,提供一種包含本發明之雙特異性抗體之多核苷酸之表現載體(亦稱為「本發明之雙特異性抗體之表現載體」)。此等的多核苷酸係可各自包含於分別之載體中,或複數個多核苷酸亦可包含於1個載體中。
於一實施形態中,本發明之雙特異性抗體之表現載體係包含由下述(a)~(aa)所成之群所選出之多核苷酸:
(a)包含編碼由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(b)包含編碼由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(c)包含編碼由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(d)包含編碼由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸。
(e)包含編碼由序列編號10之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(f)包含編碼由序列編號12之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(g)包含編碼由序列編號14之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(h)包含編碼由序列編號16之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(i)包含編碼由序列編號18之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(j)包含編碼由序列編號20之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(k)包含編碼由序列編號22之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(l)包含編碼由序列編號24之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸。
(m)包含編碼由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(n)包含編碼由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(o)包含編碼由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(p)包含編碼由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(q)包含編碼由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(r)包含編碼由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(s)包含編碼由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(t)包含編碼由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(u)包含編碼由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(v)包含編碼由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(w)包含編碼由序列編號26之胺基酸編號1至242之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸;
(x)包含編碼由序列編號28之胺基酸編號1至244之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸;
(y)包含編碼由序列編號30之胺基酸編號1至249之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸;
(z)包含編碼由序列編號32之胺基酸編號1至244之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸;或
(aa)包含編碼由序列編號34之胺基酸編號1至247之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸。
於一實施形態中,本發明之雙特異性抗體之表現載體係包含由下述(a)~(k)所成之群所選出之多核苷酸:
(a)包含編碼由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(b)包含編碼由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(c)包含編碼由序列編號10之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號12之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(d)包含編碼由序列編號14之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號16之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(e)包含編碼由序列編號18之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號20之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(f)包含編碼由序列編號22之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號24之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(g)包含編碼由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(h)包含編碼由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(i)包含編碼由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(j)包含編碼由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;或
(k)包含編碼由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸。
於一實施形態中,本發明之雙特異性抗體之表現載體係包含由下述(a)~(c)所成之群所選出之多核苷酸:
(a)包含編碼由序列編號36之胺基酸編號1至705之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸;
(b)包含編碼由序列編號38之胺基酸編號1至712之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸;或
(c)包含編碼由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列之多核苷酸。
於一實施形態中,本發明之雙特異性抗體之表現載體係包含選自下述(a)或(b)之多核苷酸:
(a)包含編碼由序列編號36之胺基酸編號1至705之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸,以及包含編碼由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列之多核苷酸;或
(b)包含編碼由序列編號38之胺基酸編號1至712之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸,以及包含編碼由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列之多核苷酸。
本發明之雙特異性抗體之表現載體若為可在真核細胞(例如,動物細胞、昆蟲細胞、植物細胞、酵母)及/或原核細胞(例如,大腸菌)等的各種宿主細胞中產生本發明之多核苷酸者,則未受到特別限制。作為這樣的表現載體,例如,可舉出質體載體、病毒載體等。作為質體載體,例如,可使用pcDNA系列(Thermo Fisher Scientific公司)、pALTER(註冊商標)-MAX(Promega)、pHEK293 Ultra Expression Vector(Takara Bio公司)、pEE6.4或pEE12.4 (Lonza Biologics公司)等。作為病毒載體,例如,可使用慢病毒、腺病毒、反轉錄病毒、腺相關病毒病毒。例如,為了將本發明之多核苷酸導入細胞而使用慢病毒之情況中,該慢病毒可使用pLVSIN-CMV/EF1α載體(Takara Bio公司)、pLenti載體(Thermo Fisher Scientific公司)等。於一實施形態中,本發明之雙特異性抗體之表現載體中所使用之載體為pcDNA3.4-TOPO(註冊商標)(Thermo Fisher Scientific公司)及pcDNA3.1(Thermo Fisher Scientific公司)。
本發明之雙特異性抗體之表現載體可包含以使本發明之雙特異性抗體之多核苷酸可動作的方式連結之啟動子。作為使本發明之雙特異性抗體之多核苷酸在動物細胞中表現用之啟動子,例如,可舉出CMV、RSV、SV40等的源自病毒的啟動子、肌動蛋白啟動子、EF(elongation factor)1α啟動子、熱休克啟動子等。作為使本發明之雙特異性抗體之多核苷酸在細菌(例如,埃希氏菌屬菌)中表現用之啟動子,例如,可舉出trp啟動子、lac啟動子、λPL啟動子、tac啟動子等。作為使本發明之雙特異性抗體之多核苷酸在酵母中表現用之啟動子,例如,可舉出GAL1啟動子、GAL10啟動子、PH05啟動子、PGK啟動子、GAP啟動子、ADH啟動子等。
作為宿主細胞,使用動物細胞、昆蟲細胞或酵母之情況中,本發明之雙特異性抗體之表現載體可包含開始密碼子及終止密碼子。在此情況中,亦可包含強化子序列、編碼本發明之抗體或其重鏈或者輕鏈之基因之5’側及3’側之非轉譯領域、分泌訊號序列、剪接(Splicing)接合部、多腺苷酸化部位,或者可複製單元等。使用大腸菌作為宿主細胞之情況中,本發明之表現載體可包含開始密碼子、終止密碼子、終止子領域,及可複製單元。本發明之表現載體亦可依目的包含通常使用之藥劑篩選標示基因(例如,四環黴素耐性基因、安比西林耐性基因、康黴素耐性基因、新黴素耐性基因、二氫葉酸還原酵素基因)。
<本發明之宿主細胞>
本發明又提供一種藉由本發明之雙特異性抗體之多核苷酸或本發明之雙特異性抗體之表現載體(亦稱為「本發明之多核苷酸等」)進行轉形之宿主細胞(亦稱為「本發明之宿主細胞」)。本發明之宿主細胞係於細胞內包含本發明之多核苷酸等。經導入之本發明之多核苷酸等可嵌入亦可不嵌入宿主細胞之基因體DNA。作為宿主細胞使用之細胞,可為可於in vitro培養之細胞或生物體內之細胞(
in vivocell)中之任一者。宿主細胞為可於in vitro培養之細胞之情況中,藉由將本發明之多核苷酸等藉由in vitro的方式導入細胞中,可製作本發明之宿主細胞。將宿主細胞轉形之方法並非受到特別限定者,然而,例如,可使用磷酸鈣法、電穿孔法,或微脂體(liposome)轉染法等的本發明技術領域中具有通常知識者一般地使用之方法。宿主細胞為生物體內之細胞之情況中,於宿主細胞中導入本發明之多核苷酸等之方法,並非受到特別限定者,然而,可使用核酸送達用載體(陽離子性載體或非陽離子性載體(例如,包含但不限於微脂體、脂質奈米粒子(LNP))等)。
作為可於in vitro培養之細胞,若為可藉由所使用之表現載體或電穿孔等的方法來進行轉形,並表現抗體或多肽者,則並非受到特別限定者。作為可於in vitro培養之細胞,例如,在本發明之技術領域中,通常所使用之以往的細胞或人工建立的細胞等各種的細胞(例如,可舉出動物細胞(例如,CHO-K1細胞、ExpiCHO-S(註冊商標)細胞、CHOK1SV細胞、CHO-DG44細胞、HEK293細胞、Expi293F細胞、NS0細胞)、昆蟲細胞(例如,Sf9)、細菌(埃希氏菌屬菌等)、酵母(酵母屬、畢赤酵母屬等)等)。於一實施形態中,本發明之宿主細胞為Expi293F細胞、CHO-K1細胞,或ExpiCHO-S細胞。
於in vitro進行之經轉形之宿主細胞之篩選,係可使用本發明技術領域中具有通常知識者一般使用之方法來進行。篩選方法中,例如,可使用使用了藥劑篩選標示基因與四環黴素、安比西林、新黴素或濕黴素等的藥劑之藥劑選擇法,或極限稀釋法、單細胞分選法(single cell sorting method),或菌落提取法(colony pick-up method)等的細胞單離法。
於本發明之宿主細胞之一實施形態中,該宿主細胞係包含由下述(a)~(aa)所成之群所選出之多核苷酸:
(a)包含編碼由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(b)包含編碼由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(c)包含編碼由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(d)包含編碼由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸。
(e)包含編碼由序列編號10之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(f)包含編碼由序列編號12之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(g)包含編碼由序列編號14之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(h)包含編碼由序列編號16之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(i)包含編碼由序列編號18之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(j)包含編碼由序列編號20之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(k)包含編碼由序列編號22之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(l)包含編碼由序列編號24之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸。
(m)包含編碼由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(n)包含編碼由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(o)包含編碼由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(p)包含編碼由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(q)包含編碼由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(r)包含編碼由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(s)包含編碼由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(t)包含編碼由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(u)包含編碼由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(v)包含編碼由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(w)包含編碼由序列編號26之胺基酸編號1至242之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸;
(x)包含編碼由序列編號28之胺基酸編號1至244之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸;
(y)包含編碼由序列編號30之胺基酸編號1至249之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸;
(z)包含編碼由序列編號32之胺基酸編號1至244之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸;或
(aa)包含編碼由序列編號34之胺基酸編號1至247之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸。
於一實施形態中,該宿主細胞係包含由下述(a)~(k)所成之群所選出之多核苷酸:
(a)包含編碼由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(b)包含編碼由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(c)包含編碼由序列編號10之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號12之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(d)包含編碼由序列編號14之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號16之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(e)包含編碼由序列編號18之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號20之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(f)包含編碼由序列編號22之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號24之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(g)包含編碼由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(h)包含編碼由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(i)包含編碼由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;
(j)包含編碼由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;或
(k)包含編碼由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸及包含編碼由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸。
於本發明之宿主細胞之一實施形態中,該宿主細胞係包含由下述(a)~(c)所成之群所選出之多核苷酸:
(a)包含編碼由序列編號36之胺基酸編號1至705之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸;
(b)包含編碼由序列編號38之胺基酸編號1至712之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸;或
(c)包含編碼由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列之多核苷酸。
於一實施形態中,該宿主細胞其係包含由下述(a)或(b)所選出之多核苷酸:
(a)包含編碼由序列編號36之胺基酸編號1至705之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸,以及包含編碼由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列之多核苷酸;或
(b)包含編碼由序列編號38之胺基酸編號1至712之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸,以及包含編碼由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列之多核苷酸。
於本發明之宿主細胞之一實施形態中,該宿主細胞係包含下述之(a)~(j)之多肽:
(a)一多核苷酸,其中包含編碼一多肽之鹼基序列,該多肽係包含包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈,以及包含由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域及由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端,以及一多核苷酸,其中包含編碼包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列;
(b)一多核苷酸,其係包含編碼一多肽之鹼基序列,該多肽係包含包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈,以及包含由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域及由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端,以及一多核苷酸,其中包含編碼包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列;
(c)一多核苷酸,其係包含編碼一多肽之鹼基序列,該多肽係包含包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈,以及包含由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域及由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端,以及一多核苷酸,其中包含編碼包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列;
(d)一多核苷酸,其係包含編碼一多肽之鹼基序列,該多肽係包含包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈,以及包含由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域及由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端,以及一多核苷酸,其中包含編碼包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列;
(e)一多核苷酸,其係包含編碼一多肽之鹼基序列,該多肽係包含包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈,以及包含由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域及由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端之多肽,以及一多核苷酸,其中包含編碼包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列;
(f)一多核苷酸,其係包含編碼一多肽之鹼基序列,該多肽係包含包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈,以及包含由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域及由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端,以及一多核苷酸,其係包含編碼包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列;
(g)一多核苷酸,其係包含編碼一多肽之鹼基序列,該多肽係包含包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈,以及包含由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域及由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端,以及一多核苷酸,其係包含編碼包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列;
(h)一多核苷酸,其係包含編碼一多肽之鹼基序列,該多肽係包含包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈,以及包含由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域及由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端,以及一多核苷酸,其係包含編碼包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列;
(i)一多核苷酸,其係包含編碼一多肽之鹼基序列,該多肽係包含包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈,以及包含由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域及由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端之多肽,以及一多核苷酸,其係包含編碼包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列;或
(j)一多核苷酸,其係包含編碼一多肽之鹼基序列,該多肽係包含包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈,以及包含由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域及由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端之多肽,以及一多核苷酸,其係包含編碼包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列。
於本發明之宿主細胞之一實施形態中,該宿主細胞為下述之(a)或(b)之宿主細胞:
(a)一宿主細胞,其係包含:包含編碼由序列編號36之胺基酸編號1至705之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸,以及包含編碼由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列之多核苷酸;或
(b)一宿主細胞,其係包含編碼由序列編號38之胺基酸編號1至712之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸,以及包含編碼由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列之多核苷酸。
於本發明之宿主細胞之一實施形態中,該宿主細胞為包含:包含編碼由序列編號38之胺基酸編號1至712之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸,以及包含編碼由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列之多核苷酸之宿主細胞。
<生產本發明之雙特異性抗體之方法>
本發明又提供一種本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性生產抗體之方法(亦稱為「本發明之生產方法」)。本發明之生產方法中,係可包含前述之本發明之雙特異性抗體之多核苷酸之生產方法、本發明之雙特異性抗體之表現載體之生產方法及本發明之宿主細胞之生產方法。此外,本發明之生產方法中,亦可包含前述之<本發明之宿主細胞>中所記載之培養宿主細胞並於該細胞或該培養上清液中使該抗體表現之步驟、將該抗體回收、單離及精製之方法等。然而,本發明之生產方法並非受到此等的方法所限定者,可生產本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體即可。
於一實施形態中,本發明之生產方法係包含培養下述之(a)~(j)之宿主細胞之步驟:
(a)一宿主細胞,其係包含:一多核苷酸,其中包含編碼一多肽之鹼基序列,該多肽係包含包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈,以及包含由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域及由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端,以及一多核苷酸,其中包含編碼包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列;
(b)一宿主細胞,其係包含:一多核苷酸,其係包含編碼一多肽之鹼基序列,該多肽係包含包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈,以及包含由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域及由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端之多肽,以及一多核苷酸,其中包含編碼包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列;
(c)一宿主細胞,其係包含:一多核苷酸,其係包含編碼一多肽之鹼基序列,該多肽係包含包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈,以及包含由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域及由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端,以及一多核苷酸,其中包含編碼包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列;
(d)一宿主細胞,其係包含:一多核苷酸,其係包含編碼一多肽之鹼基序列,該多肽係包含包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈,以及包含由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域及由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端,以及一多核苷酸,其中包含編碼包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列;
(e)一宿主細胞,其係包含:一多核苷酸,其係包含編碼一多肽之鹼基序列,該多肽係包含包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈,以及包含由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域及由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端之多肽,以及一多核苷酸,其中包含編碼包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列;
(f)一宿主細胞,其係包含:一多核苷酸,其係包含編碼一多肽之鹼基序列,該多肽係包含包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈,以及包含由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域及由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端,以及一多核苷酸,其係包含編碼包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列;
(g)一宿主細胞,其係包含:一多核苷酸,其係包含編碼一多肽之鹼基序列,該多肽係包含包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈,以及包含由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域及由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端,以及一多核苷酸,其係包含編碼包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列;
(h)一宿主細胞,其係包含:一多核苷酸,其係包含編碼一多肽之鹼基序列,該多肽係包含包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈,以及包含由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域及由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端,以及一多核苷酸,其係包含編碼包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列;
(i)一宿主細胞,其係包含:一多核苷酸,其係包含編碼一多肽之鹼基序列,該多肽係包含包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈,以及包含由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域及由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端之多肽,以及一多核苷酸,其係包含編碼包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列;或
(j)一宿主細胞,其係包含:一多核苷酸,其係包含編碼一多肽之鹼基序列,該多肽係包含包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈,以及包含由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域及由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端之多肽,以及一多核苷酸,其係包含編碼包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列。
於一實施形態中,本發明之生產方法係包含培養下述之(a)或(b)之宿主細胞之步驟:
(a)一宿主細胞,其係包含:包含編碼由序列編號36之胺基酸編號1至705之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸,以及包含編碼由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列之多核苷酸;或
(b)一宿主細胞,其係包含:包含編碼由序列編號38之胺基酸編號1至712之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸,以及包含編碼由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列之多核苷酸。
本發明之宿主細胞之培養係可藉由習知的方法來進行。培養條件,例如,本發明技術領域中具有通常知識者係可適宜選擇溫度、培養基之pH及培養時間。宿主細胞為動物細胞之情況中,作為培養基,例如,可使用包含約5~20%之胎牛血清之MEM培養基(Science、1959、Vol.130、p.432-437)、D-MEM培養基(Virol.、1959、Vol.8、p.396)、RPMI-1640培養基(J.Am.Med.Assoc.、1967、Vol.199、p.519)、199培養基(Exp.Biol.Med.、1950、Vol.73、p.1-8)等。培養基之pH,例如,約為6~8,培養係在依需要進行通氣或攪拌的同時,通常於約30~40℃下進行約15~336小時。宿主細胞為昆蟲細胞之情況下,作為培養基,例如,可使用包含胎牛血清之Grace’s培養基(Proc.Natl.Acad.Sci.USA.、1985、Vol.82、p.8404)等。培養基之pH,例如,約為5~8,培養係在依需要進行通氣或攪拌的同時,通常在約20~40℃下進行約15~100小時。宿主細胞為大腸菌或酵母之情況下,作為培養基,例如,含有營養源之液體培養基係為適當。營養培養基,例如,係包含經轉形之宿主細胞之繁殖所必需的碳源、無機氮源,或有機氮源。作為碳源,例如,可舉出葡萄糖、類糊精、可溶性澱粉、蔗糖等,作為無機氮源或有機氮源,例如,可舉出銨鹽類、硝酸鹽類、胺基酸、玉米浸液、蛋白腖、酪蛋白、肉汁、大豆粕、馬鈴薯萃取液等。亦可依期望包含其他營養素(例如,無機鹽(例如,氯化鈣、磷酸二氫鈉、氯化鎂)、維生素類)、抗生物質(例如,四環黴素、新黴素、安比西林、康黴素)等。培養基之pH,例如,約為5~8。宿主細胞為大腸菌之情況中,作為培養基,例如,可使用LB培養基、M9培養基(Molecular Cloning、Cold Spring Harbor Laboratory、Vol.3、A2.2)等。培養,係在依需要進行通氣或攪拌的同時,通常在約14~43℃下進行約3~24小時。宿主細胞為酵母之情況中,作為培養基,例如,可使用Burkholder最小培養基(Proc. Natl. Acad. Sci. USA.、1980、Vol.77、p.4505)等。培養,係在依需要進行通氣或攪拌的同時,通常在約20~35℃下進行約14~144小時。藉由如同上述之培養,可使本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體表現。
本發明之生產方法除了培養本發明之宿主細胞,並使抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體表現之步驟以外,亦可包含自該宿主細胞將抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體回收、單離或精製之步驟。作為單離或精製方法,例如,可舉出鹽析、溶媒沉澱法等的利用溶解度之方法、透析、超過濾、凝膠過濾等的利用分子量之差之方法、離子交換色譜、氫氧基磷灰石管柱層析等的利用帶電之方法、親和性層析等的利用特異性的親和性之方法、逆相高速液體層析等的利用疏水性的差之方法、等電點電泳等的利用等電點的差之方法等。於一實施形態中,培養上清液中所分泌出之抗體,係可藉由各種層析,例如,使用蛋白質A管柱或蛋白質G管柱之管柱層析來進行精製。
藉由本發明之生產方法所生產之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體及抗CLDN4-抗CD137scFv雙特異性抗體係包含在本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體中。
<本發明之醫藥組成物等>
本發明又提供一種包含本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體之醫藥組成物等(亦稱為「本發明之醫藥組成物」)。本發明之醫藥組成物中係包含包含本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體及藥學上可容許之賦形劑之醫藥組成物。本發明之醫藥組成物,係可使用該領域中通常使用之賦形劑,亦即,可使用藥劑用賦形劑或藥劑用載體等,藉由通常使用之方法來調製。作為此等醫藥組成物之劑型之例子,例如,可舉出注射劑、點滴用劑等的非經口劑,並可藉由靜脈內投予、皮下投予、腹腔內投予、腫瘤內投予等的適當的方法來進行投予。在製劑化時,在藥學上可容許之範圍內,可依據此等劑型來使用賦形劑、載體、添加劑等。
本發明之醫藥組成物中可包含本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體之轉譯後修飾體。例如,本發明中亦包含一種包含抗體等之醫藥組成物,該抗體係受到C末端離胺酸之缺失或N末端之焦麩胺酸化中之一種或兩種之抗體。
於一實施形態中,本發明之醫藥組成物係含有以下之(a)~(j)中之任一項之本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體及/或該抗體之轉譯後修飾體之醫藥組成物:
(a)一抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體及/或該抗體之轉譯後修飾體,其係包含:包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端;
(b)一抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體及/或該抗體之轉譯後修飾體,其係包含:包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端;
(c)一抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體及/或該抗體之轉譯後修飾體,其係包含:包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域及由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端;
(d)一抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體及/或該抗體之轉譯後修飾體,其係包含:包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端;
(e)一抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體及/或該抗體之轉譯後修飾體,其係包含:包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端;
(f)一抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體及/或該抗體之轉譯後修飾體,其係包含:包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端;
(g)一抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體及/或該抗體之轉譯後修飾體,其係包含:包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端;
(h)一抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體及/或該抗體之轉譯後修飾體,其係包含:包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域及由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端;
(i)一抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體及/或該抗體之轉譯後修飾體,其係包含:包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端;或
(j)一抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體及/或該抗體之轉譯後修飾體,其係包含:包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端。
於一實施形態中,本發明之醫藥組成物係含有以下之(a)或(b)之本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體及/或該抗體之轉譯後修飾體之醫藥組成物:
(a)一抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體及/或該抗體之轉譯後修飾體,其係包含:由序列編號36之胺基酸編號1至705之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽,以及由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈;或
(b)一抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體及/或該抗體之轉譯後修飾體,其係包含:由序列編號38之胺基酸編號1至712之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽,以及由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈。
製劑化中之本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體及/或該抗體之轉譯後修飾體之添加量係依據患者之症狀之程度或年齡、所使用之製劑之劑型、或者抗體之結合效價等而有所不同,然而,例如,可使用0.001mg/kg~100mg/kg之程度。
<本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體之醫藥用途>
本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體及含有該等之醫藥組成物,可用於對象之癌症之治療。又,本發明中,係包含治療癌症之方法,其中係包含將本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體之治療有效量投予至對象之步驟。又,本發明中係包含本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體,其係使用於癌症之治療。又,本發明中係包含本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體之用途,其係用於癌症之治療用醫藥組成物之製造中。藉由本發明來進行之治療之對象之癌症係未受到特別限定,然而,例如,除了各種的腹膜轉移癌症、胃癌、肺癌、急性淋巴母細胞性白血病(lymphoblastic leukemia)、急性骨髓性白血病、霍奇金氏淋巴瘤(Hodgkin's lymphoma)、非霍奇金氏淋巴瘤、B細胞淋巴瘤、多發性骨髓瘤(multiple myeloma)、T細胞淋巴瘤等的血液癌症、骨髓增生不良症候群(Myelodysplastic syndromes)、腺癌(adenocarcinoma)、鱗狀上皮細胞瘤(squamous cell carcinoma)、腺扁平上皮癌症、未分化癌症、大細胞癌症、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、中皮腫、皮膚癌症、皮膚T細胞淋巴瘤、乳癌、攝護腺癌、膀胱癌、陰道癌、頸部癌症、頭頸部癌症、子宮癌、子宮頸癌、肝癌、膽囊癌、膽管癌、腎臓癌、胰臓癌、結腸癌、大腸癌、直腸癌、小腸癌、胃癌、食道癌症、精巢癌、卵巢癌、腦腫瘤等的實質癌,以及骨組織、軟骨組織、脂肪組織、肌肉組織、血管組織及造血組織之癌症以外,還可舉出軟骨肉瘤、尤文氏肉瘤、惡性血管內皮瘤、惡性許旺細胞瘤、骨肉瘤、軟部組織肉瘤等的肉瘤,及膠質母細胞瘤、多形性膠質母細胞瘤、肝母細胞瘤、髓母細胞瘤、腎母細胞瘤、神經母細胞瘤、胰臟母細胞瘤、胸膜肺母細胞瘤、網膜母細胞瘤等的母細胞瘤等。於一實施形態中,藉由本發明來進行之治療之對象之癌症為大腸癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、卵巢癌、乳癌、攝護腺癌。於一實施形態中,藉由本發明來進行之治療之對象之癌症,為CLDN4之表現量比正常組織高之癌症。藉由本發明來進行之治療之對象之癌症較佳係CLDN4之表現量比正常組織高之癌症,或由大腸癌、直腸癌、肺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、卵巢癌、乳癌、攝護腺癌所成之群所選出之癌症。
<本發明之抗CLDN4抗體>
本發明又,提供如以下之(a)~(c)中之任一項之抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段:
(a)一抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段,其係包含:包含由序列編號2之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號2之胺基酸編號50至66之胺基酸序列所構成之CDR2、及由序列編號2之胺基酸編號99至114之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域,以及,包含由序列編號4之胺基酸編號24至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號4之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2、及由序列編號4之胺基酸編號90至98之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域;
(b)一抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段,其係包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域;或
(c)一抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段,其係包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域。
於一實施形態中,本發明之抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段為包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域,及,包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段,或包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段。於一實施形態中,本發明之抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段為由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域。於一實施形態中,本發明之抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段為包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段。
作為本發明之抗CLDN4抗體之重鏈恆定區域,可選擇Igγ、Igμ、Igα、Igδ或Igε中之任一恆定區域。作為Igγ,例如,可選自Igγ1、Igγ2、Igγ3或Igγ4。於一實施形態中,重鏈恆定區域為Igγ1恆定區域,例如,為人類Igγ1恆定區域。又,本發明之抗CLDN4抗體之重鏈恆定區域為了使ADCC或CDC降低,亦可包含LALA突變、P331G或P331S突變等之胺基酸突變。作為本發明之抗CLDN4抗體之輕鏈恆定區域,亦可選擇Igλ或Igκ中之任一恆定區域。於一實施形態中,輕鏈恆定區域為Igκ恆定區域,例如,為人類Igκ恆定區域。
於一實施形態中,本發明之抗CLDN4抗體之抗原鍵結片段為scFv、Fab、Fab’、或F(ab’)
2。
於一實施形態中,本發明之抗CLDN4抗體係包含包含由序列編號2之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之輕鏈之抗CLDN4抗體,或包含包含由序列編號6之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之輕鏈之抗CLDN4抗體。於一實施形態中,本發明之抗CLDN4抗體為包含包含由序列編號2之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之輕鏈之抗CLDN4抗體。於一實施形態中,本發明之抗CLDN4抗體係包含包含由序列編號6之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之輕鏈之抗CLDN4抗體。
本發明又提供一種本發明之抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段(亦稱為「本發明之複合體」),其係結合有糖質、脂質、金屬(包含放射性同位素)、有機化合物(包含毒素、近紅外螢光色素、螯合劑)等(亦稱為「修飾劑」)。本說明書中,所謂「修飾劑」,係指直接或透過連結子等結合於抗體或其抗原鍵結片段之非胜肽性之物質。用於本發明之複合體之修飾劑係未受到特別限定,例如,可舉出聚乙二醇、糖鏈、磷脂質、放射線同位素(例如,鋯-89(
89Zr)、釔-90(
90Y)、銦-111(
111In)、砈-211(
211At)、錒-225(
225Ac))、有機化合物、毒素、近紅外螢光色素(例如IRDye(註冊商標))、螯合劑等。用於該複合體之修飾劑可直接鍵結於本發明之抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段,又,亦可透過任意的連結子鍵結。於一實施形態中,本發明之複合體為抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段之藥物複合體(Antibody Drug Conjugate;ADC)。用於ADC之藥物及連結子係可自本發明技術領域中具有通常知識者一般使用之藥劑及連結子之中選定。
本發明又提供一種於細胞表面表現本發明之抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段之細胞(例如,Chimeric antigen receptor-T cell;CAR-T細胞)。本發明技術領域中具有通常知識者係可使用編碼本發明之抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段之多核苷酸來製作這樣的細胞。作為使本發明之抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段表現之細胞,可使用各種免疫細胞(T細胞、NK細胞、NKT細胞等)。
於一實施形態中,本發明之抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段、本發明之複合體、及於細胞表面表現本發明之抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段之細胞中之抗體或抗原鍵結片段部分,亦可進行轉譯後修飾。於一實施形態中,其中,轉譯後修飾為重鏈可變區域N末端之焦麩胺酸化及/或重鏈C末端離胺酸缺失。
本發明之抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段、本發明之複合體,及於細胞表面表現本發明之抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段之細胞,係本發明技術領域中具有通常知識者可依據本說明書中所揭示之本發明之抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段之VH及VL之序列情報、用於本發明之複合體之修飾劑之情報為基礎,使用該領域習知的方法來製作者。本發明之抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段並非受到特別限定者,然而,例如,可依據<生產本發明之雙特異性抗體之方法>項中所記載之方法來進行生產。
本發明又提供一種醫藥組成物,其中包含本發明之抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段、本發明之複合體及於細胞表面表現本發明之抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段之細胞(以下本項係總稱為「本發明之抗CLDN4抗體等」),以及藥學上可容許之賦形劑。該醫藥組成物可用於癌症之治療。本發明又提供包含將本發明之抗CLDN4抗體等的治療有效量投予至對象之步驟之治療癌症之方法、使用於癌症之治療之本發明之抗CLDN4抗體等、癌症之治療用醫藥組成物之製造中之本發明之抗CLDN4抗體等的用途。本發明之抗CLDN4抗體等的醫藥用途係本發明技術領域中具有通常知識者依據前述之<本發明之醫藥組成物等>之記載即可實施者。本發明之抗CLDN4抗體等的醫藥用途之治療之對象之癌症係可舉出前述之<本發明之醫藥組成物等>中所記載之癌症。
<本發明之抗CD137抗體>
本發明又提供一種包含以下之(a)~(d)中之任一項之抗CD137抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域之抗CD137抗體或其抗原鍵結片段:
(a)包含由序列編號10之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號10之胺基酸編號50至66之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號10之胺基酸編號99至107之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域,以及包含由序列編號12之胺基酸編號24至34之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號12之胺基酸編號50至56之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號12之胺基酸編號89至98之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域;
(b)包含由序列編號14之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號14之胺基酸編號50至65之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號14之胺基酸編號98至107之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域,以及包含由序列編號16之胺基酸編號23至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號16之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號16之胺基酸編號90至100之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域;
(c)包含由序列編號18之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號18之胺基酸編號50至65之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號18之胺基酸編號98至107之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域,以及包含由序列編號20之胺基酸編號23至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號20之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號20之胺基酸編號90至100之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域;或
(d)包含由序列編號22之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號22之胺基酸編號50至65之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號22之胺基酸編號98至110之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域,以及包含由序列編號24之胺基酸編號23至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號24之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號24之胺基酸編號90至100之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域。
於一實施形態中,本發明之抗CD137抗體或其抗原鍵結片段係包含以下之(a)~(i)中之任一項之抗CD137抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域;
(a)由序列編號10之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號12之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域;
(b)由序列編號14之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號16之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域;
(c)由序列編號18之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號20之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域;
(d)由序列編號22之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號24之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域;
(e)由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域;
(f)由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域;
(g)由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域及由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域;
(h)由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域;或
(i)由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域。
於一實施形態中,本發明之抗CD137抗體之抗原鍵結片段為scFv。於一實施形態中,本發明之抗CD137抗體之抗原鍵結片段為以下之(a)~(e)中之任一者;
(a)由序列編號26之胺基酸編號1至242之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv;
(b)由序列編號28之胺基酸編號1至244之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv;
(c)由序列編號30之胺基酸編號1至249之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv;
(d)由序列編號32之胺基酸編號1至244之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv;或
(e)由序列編號34之胺基酸編號1至247之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv。
本發明技術領域中具有通常知識者若參照<本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體>等的本說明書中之記載,即可製作本發明之抗CD137抗體或其抗原鍵結片段。本發明之抗CD137抗體或其抗原鍵結片段可使用於與任意的,例如,使用於癌症之治療中之相對於TAA之抗體(抗TAA抗體)形成雙特異性抗體。亦即,本發明又提供一種包含本發明之抗CD137抗體或其抗原鍵結片段及抗TAA抗體或其抗原鍵結片段之雙特異性抗體(亦稱為「本發明之抗TAA-抗CD137雙特異性抗體」)。作為TAA,若可表現於腫瘤之細胞表面,則未受到特別限定,然而,例如可使用HER2、EGFR、EpCAM、CEA、BCMA、PSMA,CD19、CD20、CD22、CD33、CD37、CD38、CD123、CD276(B7-H3)、GPC2、GPC3、GPRC5D、WT-1、NY-ESO-1、CLDN4、CLDN6、CLDN18.2、TSPAN8。於一實施形態中,本發明之抗TAA-抗CD137雙特異性抗體係包含抗CD137抗體之scFv,於一實施形態中,本發明之抗TAA-抗CD137雙特異性抗體係包含屬於以下之(a)~(e)中之任一者之抗CD137抗體之scFv;
(a)由序列編號26之胺基酸編號1至242之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv;
(b)由序列編號28之胺基酸編號1至244之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv;
(c)由序列編號30之胺基酸編號1至249之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv;
(d)由序列編號32之胺基酸編號1至244之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv;或
(e)由序列編號34之胺基酸編號1至247之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv。
於一實施形態中,本發明之抗TAA-抗CD137雙特異性抗體係包含抗CLDN4抗體或其抗原鍵結片段,於一實施形態中,本發明之抗TAA-抗CD137雙特異性抗體係包含IgG型之抗CLDN4抗體。
為了進一步獲得對於本發明之理解,係於此提供參考之特定之實施例,然而此等係以例示為目的,而非限定本發明者。
[實施例]
[實施例1:選擇性地鍵結於表現於腹膜轉移癌細胞之抗原之抗體之取得]
[1-1.源自患者之腹膜轉移癌細胞之取得]
自患者取得腹膜轉移癌細胞,係依據千脇史子、佐佐木博己之文獻「腹膜轉移癌症(胃、胰臟、卵巢癌等)細胞株之建立」(佐佐木博己編『
Practical Guide for Cancer Research using Patient-Derived Experimental Model』羊土公司、2019年、p.28-37)中所記載之方法來進行。
將由患者採取出之腹水於室溫、以430×g離心3分鐘,去除上清液後,於沉澱物中添加溶血緩衝液使其溶血。於離心後去除上清液,並添加Dulbecco’s PBS(-)(日水製藥公司、05913、以下「稱為PBS(-)」)50mL,將細胞洗淨。之後,於室溫下、以430×g離心3分鐘,回收細胞。將回收之腹水中之全細胞再懸浮於包含10% FBS(Thermo Fisher Scientific公司、10270−106)、×1 Antibiotic-Antimycotic (Thermo Fisher Scientific公司、15240062)之RPMI-1640(含有L-麩醯胺酸)培養基(富士軟片和光純藥公司、189-02025)、(以下,將實施例1中,添加了FBS等後之培養基稱為「RPMI-1640培養基」)中。稀釋懸浮液,於塗布有100mm膠原蛋白之培養皿(以下稱為「培養皿」)(IWAKI公司、4020-010)中,將細胞分別以5×10
6~1×10
7個/10mL進行播種,並於37℃、5% CO
2恆溫箱中培養。
腹水中之細胞中係存在接著系細胞與浮遊系細胞,接著系細胞中除了包含癌細胞以外,還包含癌細胞以外之細胞(纖維母細胞、腹膜間皮細胞等)。由於癌細胞以外之細胞係具有比癌細胞在更短時間內剝離之性質,故係將此等的細胞由腹水中之全細胞分離並除去。將癌細胞以外之細胞去除後,在使癌細胞增殖至培養皿面積之80%融合(confluent)程度後,重複進行將全細胞之1/2移至新的培養皿進行繼代之作業,將進行過5次以上繼代者作為接著系癌細胞。針對浮遊系細胞,由培養培養皿將培養上清液5mL與RPMI-1640培養基5ml播種新的100mm培養皿進行繼代,並將經過5次以上繼代者當作浮遊系癌細胞。在源自於患者1人之腹膜轉移癌細胞包含接著系癌細胞與浮遊系癌細胞之雙方並直接進行增殖之情況中,係將該等當作混合系癌細胞。
本說明書中,將藉由上述方法所單離出之接著系癌細胞、浮遊系癌細胞或混合系癌細胞總稱為「腹膜轉移癌細胞」。將所取得之6細胞(NSC-9C、NSC-15CF、NSC-16C、NSC-20C、NSC-22C、NSC-32C、(以下亦稱為「6種腹膜轉移癌細胞」))使用於以後之探討。
[1-2:產生抗胃癌抗原抗體之融合瘤之製作]
使利用人類單株抗體開發技術「VelocImmune」(VelocImmune(註冊商標) antibody technology;Regeneron (美國專利6596541號))所製作出之VelocImmune老鼠對於腹膜轉移癌細胞免疫,並取得表現於抗腹膜轉移癌細胞之對於癌症抗原之抗體。
將在實施例1-1中所取得之腹膜轉移癌細胞中之NSC-9C、NSC-15CF、NSC-16C之3細胞或NSC-20C、NSC-22C、NSC-32C之3細胞混合,懸浮於TiterMax(註冊商標)Gold ADJUVANT(Merck公司、T2684)或PBS(-)中,調製腹膜轉移癌細胞懸浮液。將此懸浮液投予數次至VelocImmune老鼠進行免疫。依據常見方法,由免疫之老鼠之淋巴節將淋巴球回收,並藉由將老鼠骨髓瘤細胞SP2/0(ATCC、CRL-1581)與細胞融合來製作融合瘤。藉由自動挑選裝置將融合瘤之單群體(colony)單離,取得單殖株化融合瘤細胞(以下稱為「殖株」)。將單離後之殖株於37℃、8% CO
2恆溫箱中培養,將約14日後之上清液回收至96孔盤中,用於以下之實驗中。
[1-3:選擇性地結合至腹膜轉移癌細胞之抗體之篩選]
(1)向腹膜轉移癌細胞及EpCAM表現細胞結合之確認
實施例1-2中所獲得之殖株之細胞上清液中係包含抗體(以下稱為「殖株上清液中所包含之抗體」)。
首先,藉由流式細胞術測定殖株上清液中所包含之抗體與在實施例1-1中所取得之6種腹膜轉移癌細胞之結合,選拔出產生對於腹膜轉移癌細胞具有強鍵結之抗體之殖株。流式細胞儀中係使用BV421 Goat Anti-Mouse Ig (Becton, Dickinson and Company公司、563846)。
又,為了排除提供結合於屬於癌症抗原之EpCAM之抗體之殖株,係測定殖株上清液中所包含之抗體與表現人類EpCAM-Myc-DDK之CHO-K1細胞之結合。表現人類EpCAM-Myc-DDK之CHO-K1細胞係藉由將EPCAM(Myc-DDK-tagged)-Human epithelial cell adhesion molecule (EPCAM)(ORIGENE公司、RC201989)轉染至CHO-K1細胞(ATCC、CCL-61)來製作。藉由流式細胞術測定該細胞與殖株上清液中所包含之抗體之結合。流式細胞儀中係使用BV421 Goat Anti-Mouse Ig。為了選擇提供在EpCAM表現細胞中不顯示結合活性之上清液之殖株,而排除結合於該細胞之殖株。作為陽性控制組,係使用CD326(EpCAM) Monoclonal Antibody(1B7),(eBioscience公司、14-9326)。
此外,為了選拔出選擇性地結合於腹膜轉移癌細胞之殖株,係將結合於被培養之人類腹膜間皮細胞上之殖株排除。作為被培養之人類腹膜間皮細胞,係使用Human Mesothelial Cells(Zenbio公司、MES-F、Lot.MESM050311A) (以下亦稱為「被培養之人類腹膜間皮細胞」),藉由Mesothelial Cell Growth Medium(Zenbio公司、MSO-1)培養之被培養之人類腹膜間皮細胞與殖株之結合之測定,係使用流式細胞法。流式細胞法中係使用BV421 Goat Anti-Mouse Ig。僅篩選出不結合於被培養之人類腹膜間皮細胞之殖株。
藉由上述實驗,係取得3D11殖株,作為提供結合於6種腹膜轉移癌細胞中之5種以上,且不結合於人類EpCAM及培養腹膜間皮細胞之抗體之殖株。
(2)由融合瘤上清液精製抗體
將3D11殖株於CD融合瘤培養基(Thermo Fisher Scientific公司、11279023)中培養。由培養上清液,使用MabSelectSuRe(GE Healthcare公司、17-5438-02),來精製3D11抗體(以下係稱為「3D11」)。抗體之精製係依循常見方法。
[1-4:3D11所識別之抗原分子之鑑別]
(1)藉由LC-MS/MS測定來進行之抗原候補分子之鑑別
進行3D11之抗原候補分子之鑑別。作為本實驗中之控制組抗體,係使用1D10、10B5。此等的抗體在取得3D11之過程中顯示出與3D11不同的對腹膜轉移癌細胞之結合模式(binding pattern)。
製作NSC-15CF之細胞勻漿。於細胞勻漿中添加3D11及控制組抗體2種(1D10、10B5)中之任1抗體,進一步添加Dynabeads Protein G (Life Technologies公司、10003D),並進行攪拌及洗淨。將結合於Dynabeads Protein G之蛋白質使用Trypsin/LysC(Promega公司、V5072)進行消化(digest),獲得胜肽混合物。將包含胜肽混合物之溶液供給至使用UltiMate3000RSLCnano(Thermo Fisher Scientific公司)及Orbitrap Fusion(Thermo Fisher Scientific公司)之LC-MS/MS測定。針對所獲得之LC-MS/MS數據,使用Progenesis QI for Proteomics(Waters公司)及Mascot(Matrix Science公司)軟體,進行比較定量解析(quantitative analysis)及胜肽/蛋白質鑑別,來鑑別結合之蛋白質。比較3D11與控制組抗體之結合蛋白質,且係鑑別CLDN4作為3D11之抗原候補分子。
(2)3D11之抗原決定
為了決定藉由(1)所鑑別之CLDN4是否為3D11之抗原,因此進行對於人類CLDN4-Myc-DDK表現CHO-K1細胞之結合實驗。人類CLDN4-Myc-DDK表現CHO-K1細胞係藉由於CHO-K1細胞轉染CLDN4(Myc-DDK-tagged)-Human claudin 4 (CLDN4)(ORIGENE公司、RC200490)來進行製作。結果,由於3D11結合於人類CLDN4-Myc-DDK表現CHO-K1細胞,故係確認其係將CLDN4作為抗原識別。
[實施例2:3D11之序列決定及人類抗體之製作]
依據常見方法選殖編碼3D11之重鏈及輕鏈之基因,並決定3D11之鹼基序列及胺基酸序列。3D11之重鏈可變區域之胺基酸序列係示於序列編號2、輕鏈可變區域之胺基酸序列係示於序列編號4。藉由VelocImmune老鼠所製作之抗體係以內生性(endogenous)之免疫球蛋白重鏈及輕鏈之可變區域所對應之人類可變區域取代之抗體。亦即,使用VelocImmune技術所獲得之抗體,為具有人類抗體之可變區域及老鼠抗體之恆定區域之抗體(亦稱為「嵌合抗體」)。
[參考例:用於癌症腹膜轉移治療之抗CLDN4-抗CD3雙特異性抗體]
作為對於選擇性地於癌細胞表現之TAA之治療藥,已知有抗體、抗體-藥物複合體(ADC)抗體、Chimeric Antigen Receptor T-cell Therapy(CAR-T)等的各式各樣的種類之藥劑。其中,作為可以在低抗體濃度下獲得癌細胞選擇性細胞傷害活性之劃時代性的方法,亦已知有雙特異性T細胞召集抗體(T-cell-recruiting antibody)。因此,探討使用3D11之雙特異性T細胞召集抗體之製作。
(1)人源化抗CLDN4抗體之製作
藉由以下之方法進行人類型抗CLDN4-抗CD3scFv雙特異性抗體之製作。
人類型抗CLDN4抗體部分係依據常見方法分別設計為將人類重鏈之IgG1之恆定區域連結於3D11之重鏈可變區域,且將人類輕鏈κ鏈之恆定區域連結於輕鏈可變區域。進一步導入將重鏈之胺基酸編號238及239(EU編號:234及235)之胺基酸分別由白胺酸(L)取代為丙胺酸(A)之LALA突變(L234A及L235A)、分別將胺基酸編號370、372及411(EU編號:366、368及407)之胺基酸由蘇胺酸(T)取代為絲胺酸(S)、由L取代為A、由酪胺酸(Y)取代為纈胺酸(V)之杵-進入-臼(Knobs into holes)突變,以及,將胺基酸編號301(EU編號:297)之胺基酸由天門冬醯胺(N)取代為A之突變。將所製作之人源化抗CLDN4抗體稱為3D11.1。將編碼3D11.1之胺基酸序列之多核苷酸依據常見方法來合成,並插入pcDNA3.4 TOPO載體(Thermo Fisher scientific公司)。
(2)抗CD3scFv之製作
抗CD3scFv部分,以日本專利第5686953號中所記載之老鼠抗CD3抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域之序列為基礎來製作。抗CD3scFv之人源化,係依文獻(Front Biosci.、2008、Vol.13、p.1619-1633)記載之方法為準來進行。此時,導入回復突變。將立體構造情報(PDB Code:5FCS)以MOLSIS Inc.公司所提供之統合計算化學系統MOE進行解析,並決定骨架領域內之回復突變之導入位置。人源化抗CD3scFv之胺基酸序列係示於序列編號41。將編碼序列編號41中記載之胺基酸序列之多核苷酸依據常見方法來合成,並插入pcDNA3.1(+)載體(Thermo Fisher scientific公司、V79020)中。
(3)抗CLDN4(3D11)-抗CD3scFv雙特異性抗體之製作
使用編碼3D11.1及抗CD3scFv之載體,依據PCT/JP2021/41839之實施例7中所記載之方法,製作藉由抗CLDN4抗體之Fab領域與抗CD3抗體之scFv領域與Fc領域所構成之雙特異性抗體。將所製作之雙特異性抗體稱為抗CLDN4(3D11)-抗CD3scFv雙特異性抗體。
(4)抗CLDN4(3D11)-抗CD3scFv雙特異性抗體之藥效評估
依據PCT/JP2021/41839之實施例9中所記載之方法測定抗CLDN4(3D11)-抗CD3scFv雙特異性抗體之in vitro中之redirected T cell cytotoxicity(RTCC)活性。確認抗CLDN4 (3D11)-抗CD3scFv雙特異性抗體具有RTCC活性。再依據PCT/JP2021/41839之實施例11中所記載之方法評估抗CLDN4(3D11)-抗CD3scFv雙特異性抗體之in vivo中之抗腫瘤活性。抗CLDN4(3D11)-抗CD3scFv雙特異性抗體在胃癌腹膜轉移in vivo老鼠模型中,顯示出抗腫瘤效果。依據此等的結果,係教示抗CLDN4(3D11)-抗CD3scFv雙特異性抗體對於癌症之治療有效。
此外,為了針對抗CLDN4(3D11)-抗CD3scFv雙特異性抗體之安全性進行探討,而於食蟹猴之靜脈內中單次投予抗CLDN4(3D11)-抗CD3scFv雙特異性抗體。結果,在投予了抗CLDN4(3D11)-抗CD3scFv雙特異性抗體之猴中,係確認到死亡例及瀕死例。死亡之猴,在投予1小時後及6小時後、瀕死之猴,在投予1小時後、6小時後及24小時後中,其血中之IL-6量係顯著增加。根據此等的結果,抗CLDN4(3D11)-抗CD3scFv雙特異性抗體在in vitro及in vivo中發揮藥效,然而另一方面,有被認為因細胞激素之增加而產生嚴重的副作用的疑慮。因此,抗CLDN4(3D11)-抗CD3scFv雙特異性抗體係被判斷為不具有作為用於人類之癌症之治療之抗體之資格。
[實施例3:抗CLDN4(3D11)-抗CD137scFv雙特異性抗體之製作]
使用3D11製作與抗CD137scFv之雙特異性抗體(以下稱為「抗CLDN4(3D11)-抗CD137scFv雙特異性抗體」),並實施探討。
[3-1.抗CD137抗體之取得]
(1)CD137-Fc融合蛋白質之製作
將編碼由序列編號42之胺基酸編號1至186之胺基酸序列所構成之人類CD137細胞外領域或由序列編號43之胺基酸編號1至186之胺基酸序列所構成之猴CD137細胞外領域之多核苷酸,分別插入pFUSE-hIgG1-Fc1載體(InvivoGen公司、pfuse-hg1fc1)中,來製作編碼CD137之細胞外領域與人類Fc之融合蛋白質(以下係分別稱為「人類CD137-人類Fc融合蛋白質」及「猴CD137-人類Fc融合蛋白質」)之表現用載體。將製作出之載體使用Expi293 Expression System Kit(Thermo Fisher Scientific公司、A14635)或ExpiCHO Expression System Kit(Thermo Fisher Scientific公司、A29133),導入Expi293F細胞(Thermo Fisher Scientific公司、A14527)或ExpiCHO-S細胞(Thermo Fisher Scientific公司、A29133)中,進行培養。將分泌於培養上清液中之蛋白質使用MabSelect SuRe或HiTrap MabSelect SuRe(GE Healthcare公司、11-0034-94)進行精製,取得人類CD137-人類Fc融合蛋白質及猴CD137-人類Fc融合蛋白質。
(2)猴CD137-His tag-3×FLAG tag融合蛋白質之製作
將編碼由序列編號43之胺基酸編號1至183之胺基酸序列所構成之猴CD137細胞外領域、序列編號44之His tag、及序列編號45之3×FLAG tag之多核苷酸串聯地插入pcDNA3.4 TOPO載體中,製作載體。將製作出之載體使用ExpiFectamine CHO Transfection Kit(Thermo Fisher Scientific公司、A29129)導入ExpiCHO-S細胞中,進行培養。將分泌於培養上清液中之蛋白質使用HisTrap excel (GE Healthcare Bioscience公司、17-3712-06)進行精製。將所獲得之融合蛋白質稱為「猴CD137-His tag-3×FLAG tag融合蛋白質」。
(3)抗CD137抗體產生融合瘤殖株之製作及篩選
於VelocImmune老鼠、或AlivaMab老鼠(Ablexis公司、美國專利9346873號)中,數次投予人類CD137-人類Fc融合蛋白質或人類CD137-His tag蛋白質(R&D SYSTEMS公司、9220-4B)與免疫佐劑,進行免疫。依據常見方法,由免疫之老鼠之淋巴節將淋巴球回收,藉由將老鼠骨髓瘤細胞SP2/0與細胞融合來製作融合瘤。藉由自動挑選裝置將融合瘤之單群體(colony)單離,取得單殖株化融合瘤細胞(以下稱為「殖株」)。將各殖株培養數天,獲得培養上清液。培養上清液中所包含之抗體對於CD137之結合之確認係以以下之方法來進行。
對於CD137之結合,係藉由ELISA法來進行評估。評估中,係使用以人類CD137-His tag蛋白質、人類CD137-人類Fc融合蛋白質、猴CD137-人類Fc融合蛋白質或人類Fc蛋白質中之任一者塗布過之平面,二次抗體係使用Goat Anti-Mouse IgG,Human ads-HRP(SouthernBiotech公司、1030-05)。藉由上述方法,取得複數個可與人類CD137及猴CD137兩者結合之殖株。
(4)抗CD137抗體之取得與促效劑活性之確認
將於(3)取得之殖株以Hybridoma-SFM(Thermo Fisher Scientific公司、12045-076)培養,自培養上清液使用MabSelect SuRe來精製抗CD137抗體。針對所精製之抗CD137抗體,進行其對於CD137之結合及CD137促效劑活性之確認。
抗CD137抗體之對於CD137之結合之確認,係使用(3)中所記載之ELISA法來進行。抗CD137抗體之CD137促效劑活性之測定係使用4-1BB Bioassay套組(Promega公司、JA2351),藉由以下之方法來進行。將FcγRIIb CHO-K1 Cells(Promega公司、JA2251)播種至384孔盤(Greiner Bio-One公司、781080),並以37℃、5% CO
2進行過夜培養。去除培養上清液,添加前述之各殖株之精製抗體與4-1BB Effector Cells(Promega公司、JA2351),並於37℃、5% CO
2下靜置6小時。添加Bio-Glo Reagent(Promega公司、JA2351),來測定對於CD137促效劑活性產生反應之螢光酵素之表現誘導所產生之化學發光。為了評估FcγRIIb CHO-K1 Cells不存在下之CD137促效劑活性,係以不含有FcγRIIb CHO-K1 Cells之條件,進行與上述相同的實驗。
進行過評估之抗CD137抗體之中,源自VelocImmune老鼠之3-34,以及源自AlivaMab老鼠之A2-32、A2-48及A2-73係具有對於人類及猴CD137之強結合活性,且係顯示出依存於FcγRIIb CHO-K1 Cells之存在之CD137促效劑活性。
(5)抗CD137抗體之基因序列之鑑別
依據常見方法,由提供抗CD137抗體(3-34、A2-32、A2-48、A2-73)之殖株來調製細胞溶解液,合成cDNA,並鑑別抗體鹼基序列。鑑別後之鹼基序列之序列編號係顯示於表1。
[表1]
重鏈可變區域之鹼基序列 | 輕鏈可變區域之鹼基序列 | |
3-34 | 序列編號9 | 序列編號11 |
A2-32 | 序列編號13 | 序列編號15 |
A2-48 | 序列編號17 | 序列編號19 |
A2-73 | 序列編號21 | 序列編號23 |
[3-2.抗CLDN4(3D11)-抗CD137(3-34)scFv雙特異性抗體之製作]
以3D11及3-34之重鏈可變區域及輕鏈可變區域之序列為基礎,進行抗CLDN4(3D11)-抗CD137(3-34)scFv雙特異性抗體(以下亦稱為「3D11_3-34-j6_S」)之設計。所製作之3D11_3-34-j6_S係於人類IgG1κ型之抗CLDN4(3D11)抗體之重鏈羧基末端(亦稱為「C末端」)連結有GS連結子,且於GS連結子之C末端結合有包含抗CD137抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域之抗CD137(3-34)scFv(序列編號26)之胺基末端。此外,於3D11之人類IgG1恆定區域中導入L234A、L235A及P331S之胺基酸突變。製作編碼所設計之抗體之多核苷酸,依據常見方法插入pcDNA3.4 TOPO載體中。將前述表現載體基因導入至ExpiCHO-S細胞中,並由培養上清液將3D11_3-34-j6_S進行精製。所製作之3D11_3-34-j6_S係於in vitro中確認其具有抗CD137結合活性及CD137促效劑作用,係教示可期待其作為癌症治療藥之有效性。
[實施例4:抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體之製作]
[4-1.人源化抗CLDN4(hKM3900)抗體之製作]
有報告指出,屬於抗CLDN4抗體之KM3900與屬於其他密連蛋白家族分子之CLDN6等相比,係選擇性地結合於CLDN4上(專利文獻1)。因此,以該報告為基礎,來進行KM3900之人源化抗體之製作。具體而言,係以KM3900之可變區域之人源化胺基酸序列為基礎,由人類Igγ1之恆定區域及人類Igκ之恆定區域之序列來進行人源化抗體之設計。人類Igγ1恆定區域中係導入L234A、L235A,及P331G之胺基酸突變,或,L234A、L235A,及P331S之胺基酸突變。依據常見方法製作人源化抗CLDN4(hKM3900)抗體,於以後之探討中使用。將具有L234A、L235A及P331G之胺基酸突變之抗體稱為「hKM3900」將具有L234A、L235A,及P331S之胺基酸突變之抗體稱為「hKM3900_S」。hKM3900之重鏈可變區域之胺基酸序列記載於序列編號6中,並將輕鏈可變區域之胺基酸序列記載於序列編號8。
[4-2.抗CLDN4-抗CD137scFv雙特異性抗體之製作]
由實施例3中所取得之抗CD137抗體(3-34、A2-32、A2-48、A2-73)來設計抗CD137scFv,並進行hKM3900與抗CD137scFv之雙特異性抗體之製作(表2)。將所製作之抗體總稱為「抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv」。
(1)編碼抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體之載體之製作
以hKM3900之序列及抗CD137抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域之序列為基礎來設計抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體。抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體係於IgG1型之抗CLDN4抗體(hKM3900)之重鏈或輕鏈C末端結合有GS連結子,於GS連結子之C末端結合有包含抗CD137抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域之抗CD137scFv之胺基末端。此外,於hKM3900之人類IgG1恆定區域中,導入L234A、L235A及P331G或P331S之胺基酸突變。將所設計之抗體之情報記載於表2。製作編碼所設計之抗體之多核苷酸,依據常見方法插入pcDNA3.4 TOPO載體。將製作出之載體總稱為「抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體表現載體」。
(2)抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體之製作
使用抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體表現載體,製作表2中所記載之11種之抗CLDN4 (hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體。具體而言,使用ExpiFectamine CHO Transfection Kit,於ExpiCHO-S細胞中導入抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體表現載體,使其於培養上清液中分泌抗CLDN4-抗CD137scFv雙特異性抗體。由所獲得之培養上清液,藉由使用MabSelect SuRe之親和性精製法來精製抗CLDN4 (hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體。此外,一部分之抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體係藉由使用HiLoad 26/600 superdex 200 pg(GE Healthcare公司、28-9893-36)或Superdex 200 Increase 10/300 GL(GE Healthcare公司、28-9909-44)之尺寸排除層析精製法來進行追加之精製。
以後,亦將在實施例3及4所製作之抗CLDN4(3D11)-抗CD137(3-34)scFv雙特異性抗體及抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體總稱為「抗CLDN4-抗CD137scFv雙特異性抗體」。
[實施例5:抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體之結合活性及促效劑活性評估]
評估抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體對於CLDN4及CD137之結合活性,以及CD137促效劑活性。
[5-1.藉由流式細胞術進行之對於抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體之CLDN4之結合活性評估]
使用流式細胞術來評估抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體對於CLDN4之結合活性。將由CLDN4(Myc-DDK-tagged)-Human claudin 4調製之CLDN4基因插入pCMV6-AC-GFP Mammalian Expression Vector (ORIGENE公司、PS100010)中,製作人類CLDN4之表現載體。將人類CLDN4之表現載體導入CHO-K1細胞中,取得人類CLDN4表現CHO-K1。
使用hKM3900及2種類之抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體(hKM3900_tA2-32LH及hKM3900_3-34-j6)作為受試抗體。將受試抗體以Stain Buffer(FBS)(BD Bioscience、554656)由最高濃度100μg/mL以公比3倍連續稀釋至5.08ng/mL,並以各自之受試抗體稀釋液將人類CLDN4表現CHO-K1染色。使用Allophycocyanin (APC) AffiniPure F(ab’)2 Fragment Goat Anti-Human IgG, Fcγ fragment specific(Jackson ImmunoResearch、109-136-170)作為二次抗體。以FACS Canto II(BD Bioscience)測定螢光強度。將測定結果使用GraphPad Prism進行解析,算出人類CLDN4與抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體之表觀(apparent)之解離常數(KD)。表3係顯示表觀之KD值。
2種類之抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體係顯示出與人源化抗CLDN4(hKM3900)抗體同樣的對於人類CLDN4之結合活性。其他之抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體係被認為係顯示出同等的CLDN4結合活性。
[5-2.藉由ELISA法進行之抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體對於CD137之結合活性評估]
使用ELISA法檢測抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體對於CD137之結合活性。ELISA係依據常見方法來進行。將20ng/20μL/well之人類CD137-His tag蛋白質(R&D SYSTEMS、9220-4B)在384孔盤(Thermo Fisher Scientific公司、464718)中進行固相化。使用表2中所記載之11種之抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體及ctrl IgG_L-3-34-j6抗體作為受試抗體。ctrl IgG_L-3-34-j6抗體係於同型控制組(isotype control)抗體之輕鏈羧基末端連結有抗CD137scFv(3-34-j6)抗體之抗體。將受試抗體以含有5%Blocking One (Nacalai Tesque, Inc.、03953-95)之TBS-T(Nippon Gene公司、310-07375)進行連續稀釋,並添加20μL/well。抗體之最終濃度係如同圖1-1~1-4所示。二次抗體中係使用Goat Anti-Human IgG Fc,Multi-Species SP ads-HRP(SouthernBiotech公司、2014-05)。控制組抗體中係使用hKM3900。使用Infinite M200PRO(TECAN公司)來測定450nm與570nm之吸光度。結果示於圖1-1~1-4。抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體皆濃度依存性地結合至人類CD137-His tag蛋白質。根據此結果,可明確得知抗CD137scFv之連結位置係不影響對於人類CD137之結合活性。
[5-3.藉由表面電漿共振法進行之抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體對於CD137之結合活性評估]
使用表面電漿共振(SPR)法檢測抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體對於CD137之結合活性。SPR解析中係使用Biacore T200(GE Healthcare Japan公司)。作為配體,係使用將2種之抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體(hKM3900-3-34-j6、hKM3900_tA2-32LH)固定於Series S Sensor Chip ProteinA (GE Healthcare公司、29-1275-56)者。將以人類CD137-His tag或3-1(2)所製作之猴CD137-His tag-3×FLAG tag融合蛋白質使用HBS-EP+由最高濃度200nM至0.0977nM為止以公比2倍進行連續稀釋後,作為分析物。將分析物以50μL/分添加至結合有配體之流路2分鐘後,藉由將HBS-EP+以50μL/分添加10分鐘,來測定抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體之向CD137之結合與解離。使用藉由此實驗所獲得之結果,將人類CD137與抗CLDN4 (hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體之鍵結速度常數(ka)、解離速度常數(kd)、及解離常數(KD),使用數據解析軟體(BIA Evaluation)來進行計算。ka、kd及KD之值係示於表4。
由此結果可明確得知,抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體對於人類CD137及猴CD137抗體皆表示出同等的結合活性。
[5-4.抗CLDN4-抗CD137scFv雙特異性抗體於表現CLDN4之癌細胞之共存下之CD137促效劑活性之評估]
使用4-1BB Bioassay套組來評估抗CLDN4-抗CD137scFv雙特異性抗體之透過表現CLDN4之癌細胞所產生之特異性的CD137促效劑活性。
於含有10%FBS(Cytiva公司、SH30070.03)之RPMI-1640培養基(Thermo Fisher Scientific公司、11875-093)中,使NCI-H322細胞(ECACC、95111734)懸浮,調製懸浮液。NCI-H322係表現CLDN4。於384孔盤(Greiner Bio-One公司、781080)中,以使其成為1×10
4個/well的方式添加NCI-H322之懸浮液,並於37℃、5% CO
2下進行過夜培養。次日,將培養基去除。將以含有1%FBS之RPMI-1640培養基稀釋過之受試抗體分別添加12.5μL/well。抗體之終濃度係如同圖2-1~圖2-3所示。受試抗體中,係使用3D11_3-34-j6_S、表2中所記載之抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體。作為控制組抗體,係使用hKM3900、ctrl IgG_L-3-34-j6抗體及Urelumab(BMS、國際公開編號2005/035584號中所記載之序列編號3及序列編號6)。
使附屬於4-1BB Bioassay套組之4-1BB Effector Cells懸浮於每瓶含有7mL 1%FBS之RPMI-1640之樣本瓶中,於各孔中添加12.5μL,並於37℃、5% CO
2下靜置6小時。於平面上添加Bio-Glo Reagent 25μL/well,使用EnVision 2103(Perkin Elmer公司)測定化學發光。結果示於圖2-1~圖2-3。抗CLDN4-抗CD137scFv雙特異性抗體在表現CLDN4之癌細胞之共存下,顯示出對於4-1BB Effector Cells之顯著的CD137促效劑活性。
為了評估表現CLDN4之癌細胞不存在下之CD137促效劑活性,係於NCI-H322不存在之條件下藉由與上述同樣的實驗來進行。結果,在表現CLDN4之癌細胞不存在之情況下係未顯示出CD137促效劑活性(圖2-4~圖2-6)。根據此結果,抗CLDN4-抗CD137scFv雙特異性抗體係僅在表現CLDN4之癌細胞共存之情況下發揮CD137促效劑作用。
另一方面,Urelumab在表現CLDN4之癌細胞之共存下雖顯示出CD137促效劑活性,然而該作用與抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體相比之下係弱。又,Urelumab在表現CLDN4之癌細胞不存在下亦顯示出CD137促效劑活性。
根據此等結果,抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體具有毒性之疑慮係比Urelumab低,且係可期待在CLDN4高表現之腫瘤組織中顯示出具有特異性且強力的CD137促效劑作用。
[實施例6:抗CLDN4-抗CD137scFv雙特異性抗體之in vitro藥效評估]
實施抗CLDN4-抗CD137scFv雙特異性抗體之干擾素-γ產生促進機能及癌細胞傷害活性之評估。
[6-1.Expanded Pan T細胞之製作及凍結保存]
(1)Expanded Pan T細胞之調製
實施例6中,將於RPMI-1640(Sigma公司、R8758)中添加了終濃度10%之FBS(Cytiva公司、SH30084.03),及終濃度1%之青黴素鏈黴素(Thermo Fisher Scientific公司、15070-063)者,稱為「培養培養基(culture medium)」。亦有於培養培養基中分別以終濃度1%添加MEM Non-essential Amino Acid(Merck公司、M7145)、Sodium pyruvate(Merck公司、S8636)、GlutaMAX I(Thermo Fisher Scientific公司、35050-061)、HEPES(Thermo Fisher Scientific公司、15630-080)之情況。將以使終濃度成為1-3μg/mL的方式稀釋之抗CD3抗體(BioLegend公司、317325)添加至培養皿中,將抗CD3抗體進行固相化。使用PanT Cell Isolation Kit, human(Miltenyi Biotec公司、130-096-535),依據製造商推薦之步驟準則,由人類周邊血單核細胞(human peripheral blood mononuclear cells)(LONZA公司、CC-2702)將PanT細胞(包含CD4T細胞及CD8T細胞之雙方,以下稱為「PanT細胞」)單離。將單離後之PanT細胞離心分離,去除上清液後懸浮於培養培養基中。於前述之將抗CD3抗體固相化之培養皿中,將懸浮於培養培養基中之PanT細胞進行全量播種。進一步添加終濃度100-200U/mL之人類IL-2(PeproTech公司、200-2)及終濃度1-4μg/mL之抗CD28抗體(BioLegend公司、302923),於37℃、5% CO
2恆溫箱中進行培養。3日後將細胞回收,將回收後之細胞懸浮於培養培養基中,播種至培養皿中。進一步添加終濃度100-200U/mL之人類IL-2,並於37℃、5% CO
2恆溫箱中進行培養。4日後,將細胞全量回收,並進行離心分離,去除上清液後,再懸浮於Cell Banker(Takara公司、CB011)或Bambanker(GS LYMPHOTEC Inc.,、CS-02-001)中,分取至管中,於-80℃下凍結保存。將在此凍結保存之細胞,在本說明書中,稱為「Expanded PanT細胞」。
[6-2.60As6-Luc/GFP表現細胞之製作]
包含Luc/GFP之慢病毒溶液之調製,係使用L293T細胞(Thermo Fisher Scientific公司、K4975-00),依據常見方法來實施。將以pCDH-CMV-GL3-EF1a-GFP-T2A-puro為基礎之載體(廣島大學 醫系科學研究科 細胞分子生物學研究室 高橋陵宇副教授所寄贈(PLoS One、2015、Vol.10、e0123407))導入L293T細胞,係使用Opti-MEM Reduced Serum Medium,GlutaMAX Supplement(Thermo Fisher Scientific公司、51985-034)、MISSION(註冊商標) Lentiviral Packaging Mix(SIGMA公司、SHP001)、Lipofectamin LTX(Thermo Fisher Scientific公司、15338100)。藉由L293T細胞所增殖之GFP表現慢病毒之回收,係使用45μm Millex(註冊商標)-HV過濾器(Merck Millipore公司、SLHV033RS)。病毒溶液係分別於cryovial (Nalgene公司、5000-0020)中注入1mL,於-80℃下凍結保存。
依據常見方法,使60As6-Luc/GFP表現慢病毒感染屬於表現CLDN4之癌細胞株之60As6細胞(受讓自Biomaterials研究所之柳原 五吉 先生),製作60As6-Luc/GFP表現細胞。為了提高感染效率,係使用Polybrene (SantaCruz公司、sc-134220)。作為培養基,係使用包含10%FBS、2μg/mL Puromaycin(Thermo Fisher Scientific公司、A-11138-02)之RPMI-1640。本說明書中,將所建立之細胞稱為「60As6-Luc/GFP細胞」。藉由流式細胞術確認60As6-Luc/GFP細胞係內生性地高表現CLDN4。構築後之細胞係使用於後續之實驗中。
[6-3.抗CLDN4(3D11)-抗CD137scFv雙特異性抗體在癌細胞與T細胞之共培養系中之干擾素-γ產生促進機能評估]
評估在60As6-Luc/GFP細胞與Expanded PanT細胞之共培養系中之抗CLDN4(3D11)-抗CD137scFv雙特異性抗體之干擾素-γ產生促進機能。將0.1μg/100μL/well之抗CD3抗體添加至平底96孔盤(IWAKI公司、3860-096)中,將抗CD3抗體於平面(plate)進行固相化。於平面上以使60As6-Luc/GFP細胞成為5×10
4個/50μL/well的方式進行播種,並於37℃、5% CO
2恆溫箱中培養。次日,於前述平面上,將2×10
5個/30μL/well之Expanded PanT細胞進行播種。將受試抗體及同型控制組於培養培養基中,由最高濃度50000ng/mL起,以5倍公比進行連續稀釋,並分別添加20μL。使用Urelumab及抗CLDN4(3D11)-抗CD137scFv雙特異性抗體(3D11_3-34-j6_S)作為受試抗體,並使用IgG(溶菌酶)-scFv(CD137)(公司內調製)作為同型控制組。6日後,使用AlphaLISA干擾素-γ測定套組(Perkin Elmer公司、AL217C),依循製造商推薦之步驟準則,測定上清液中之干擾素-γ產生量。圖3-1係顯示干擾素-γ產生量與抗體濃度之反應曲線。抗CLDN4(3D11)-抗CD137scFv雙特異性抗體在屬於表現CLDN4之癌細胞株之60As6-Luc/GFP細胞與Expanded PanT細胞之共培養系中,顯示出干擾素-γ產生促進作用。抗CLDN4(3D11)-抗CD137scFv雙特異性抗體之干擾素-γ產生促進機能係顯著地強於Urelumab。
[6-4.抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體在癌細胞與T細胞之共培養系中之干擾素-γ產生促進機能評估]
以與6-3同樣的方法,評估在60As6-Luc/GFP細胞與Expanded PanT細胞之共培養系中之抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體之干擾素-γ產生促進機能。抗CD3抗體係以使其成為0.03μg/100μL/well的方式於96孔盤中進行固相化。將60As6-Luc/GFP細胞以2×10
4個/50μL/well進行播種。又,Expanded PanT細胞係以8×10
4個/30μL/well進行播種。作為受試抗體,係使用由最高濃度5000ng/mL起,以2倍公比進行連續稀釋之Urelumab或抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體(hKM3900_3-34-j6或hKM3900_tA2-32LH)。將每種受試抗體及同型控制組(溶菌酶抗體)分別添加20μL。於4日後測定上清液中之干擾素-γ產生量。圖3-2係顯示干擾素-γ產生量與抗體濃度之反應曲線。抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體在60As6-Luc/GFP細胞與Expanded PanT細胞之共培養系中,顯示出干擾素-γ產生促進機能。此等的雙特異性抗體之干擾素-γ產生促進機能係顯著地強於Urelumab。
[6-5.抗CLDN4(3D11)-抗CD137scFv雙特異性抗體在T細胞之單培養系中之干擾素-γ產生促進機能評估]
評估在Expanded PanT細胞之單培養系中之抗CLDN4(3D11)-抗CD137scFv雙特異性抗體之干擾素-γ產生促進機能。於平底96孔盤中,將抗CD3抗體以0.1μg/ 100μL/well進行添加,並將抗CD3抗體於平面進行固相化。於固相化後之平面上將2×10
5個/80μL/well之Expanded PanT細胞進行播種。使用Urelumab、抗CLDN4(3D11)-抗CD3scFv雙特異性抗體(3D11_3-34-j6_S)作為受試抗體,使用IgG(溶菌酶)-scFv(CD137)(公司內調製)作為同型控制組。將受試抗體及同型控制組於培養培養基中,由最高濃度50000ng/mL起,以5倍公比進行連續稀釋,並分別添加20μL。6日後,使用AlphaLISA干擾素-γ測定套組,以與6-3.同樣的方法來測定上清液中之干擾素-γ產生量。圖3-3係顯示干擾素-γ產生量與抗體濃度之反應曲線。抗CLDN4(3D11)-抗CD137scFv雙特異性抗體在T細胞之單培養系中,雖未顯示出干擾素-γ產生促進機能,然而Urelumab係顯示出干擾素-γ產生促進作用。本結果係表示在表現CLDN4之癌細胞株不存在之環境中,抗CLDN4 (3D11)-抗CD137scFv雙特異性抗體係不顯示T細胞活性增強作用。
[6-6.抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體在T細胞之單培養系中之干擾素-γ產生促進機能評估]
藉由與6-5同樣的方法評估在Expanded PanT細胞之單培養系中之抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體之干擾素-γ產生促進機能。抗CD3抗體係以使其成為0.03μg/100μL/well的方式於96孔盤中進行固相化。將Expanded PanT細胞以8×10
4個/80μL/well進行播種。作為受試抗體,係使用Urelumab、抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體(hKM3900_3-34-j6、hKM3900_tA2-32LH)。受試抗體及同型控制組(溶菌酶抗體)係由最高濃度5000ng/mL起,以2倍公比進行連續稀釋,並分別添加20μL。圖3-4係顯示干擾素-γ產生與抗體濃度之反應曲線。抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體在T細胞之單培養系中,雖未顯示出干擾素-γ產生促進機能,然而Urelumab係顯示出干擾素-γ產生促進機能。
6-5及6-6之結果,係意指在表現CLDN4之癌細胞株不存在之環境中,抗CLDN4-抗CD137scFv雙特異性抗體係不顯示T細胞活性增強作用,而係有減低作為抗CD137抗體之副作用而被報導之全身性的免疫賦活化作用之可能性之教示。
[6-7.抗CLDN4(3D11)-抗CD137scFv雙特異性抗體在癌細胞與T細胞之共培養系中之癌細胞傷害活性評估]
藉由60As6-Luc/GFP細胞與Expanded PanT細胞之共培養系評估抗CLDN4(3D11)-抗CD137scFv雙特異性抗體之癌細胞傷害活性(癌細胞之增殖抑制作用)。將60As6-Luc/GFP細胞於平底96孔盤中,分別以1×10
4個/50μL/well進行播種,並於37℃、5% CO
2恆溫箱進行培養。2小時後,於前述96孔盤中,將Expanded pan T細胞分別以1×10
5個/50μL/well進行播種。作為受試抗體,係使用Urelumab及抗CLDN4(3D11)-抗CD137scFv雙特異性抗體。將此等的抗體於培養培養基中,由最高濃度40000ng/mL起以10倍公比進行連續稀釋,分別添加50μL。此外,將40ng/mL之抗CD3抗體分別添加50μL,使用37℃、5% CO
2恆溫箱內之IncuCyte(註冊商標)ZOOM(莎多利斯公司),開始各孔之螢光(GFP)面積之測定。將測定開始0小時起增加之螢光面積作為細胞增殖之指標。圖4係顯示受試抗體之癌細胞傷害作用(癌細胞增殖率)。圖4之縱軸,係顯示出由0小時起168小時間所增加之螢光面積,以未添加受試抗體之孔作為100%時之相對值。如圖4所示,抗CLDN4(3D11)-抗CD137scFv雙特異性抗體在60As6-Luc/GFP細胞與Expanded PanT細胞之共培養系中,係顯示出細胞傷害作用。本雙特異性抗體之細胞傷害活性係顯著地強於Urelumab。
[6-8.抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體在癌細胞與T細胞之共培養系中之癌細胞傷害活性評估]
將抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體之癌細胞殺傷作用,藉由60As6-Luc/GFP細胞與Expanded PanT細胞之共培養系進行評估。將抗CD3抗體於平底96孔盤(Perkin Elmer公司、6005680)中,以1ng/100μL/well進行添加,並於平面進行固定化。將平面以PBS(-)進行2度洗淨後,以2×10
4個/50μL/well將60As6-Luc/GFP細胞進行播種,並於37℃、5% CO
2恆溫箱進行培養。次日,於96孔盤中,將4.0×10
4個/30μL/well之Expanded PanT細胞進行播種。此外,將自5000ng/mL至0.844ng/mL之濃度之受試抗體及同型控制組分別添加20μL。受試抗體中,使用Urelumab及抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體(hKM3900_3-34-j6、hKM3900_tA2-32LH)。於6日後進行測定。為了將一部分的孔之細胞殺傷,而於測定30分前分別添加1%Triton-X100(Sigma-Aldrich公司、T-9284) 11μL。使用ONE-Glo螢光酵素測定套組(Promega公司、E6120),依循製造商推薦之步驟準則,將各孔之60As6-Luc/GFP細胞之螢光酵素活性使用ARVO Ⅹ-3(Perkin Elmer公司)進行測定。癌症殺傷率係以將未添加抗體之孔之螢光酵素化學發光之平均值訂為0%,並以添加了Triton-X100之孔之平均值訂為100%時之相對值來表示。使用抗溶菌酶抗體(公司內調製) 作為同型控制組。於圖5顯示60As6-Luc/GFP細胞之細胞殺傷率曲線。在60As6-Luc/GFP細胞與Expanded PanT細胞之共培養系中,由於抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體之添加,60As6-Luc/GFP細胞殺傷率係顯著地增加。另一方面,係未發現因抗CD137特異性抗體之Urelumab所造成之對於60As6-Luc/GFP細胞株之細胞殺傷率之增加。
[實施例7:抗CLDN4-抗CD137scFv雙特異性抗體之in vivo評估]
[7-1.抗CLDN4-抗CD137scFv雙特異性抗體之in vivo抗腫瘤效果]
將NCI-H322細胞懸浮於PBS(-)(WAKO公司、045-29795)中,並將5.0×10
6細胞/100μL之細胞懸浮液移植至7週齡之雌性老鼠(NOG、In-Vivo Science公司)之皮下。移植6日後,將3.4×10
6細胞/200μL之人類周邊血單核細胞(Lonza、CC-2702)由尾靜脈注入。在人類周邊血單核細胞移植15日後,進行分群,並開始進行受試抗體之投予。將一群設為10隻,以使各群間之腫瘤體積成為幾乎相等的方式分配老鼠(day0)。使用hKM3900_tA2-32LH作為受試抗體。受試抗體及同型控制組(抗溶菌酶抗體)係混合於PBS中,投予至靜脈內。投予係在day0、4及8時進行,在投予時測定腫瘤徑及體重。使用以下之公式算出腫瘤體積。
[腫瘤體積(mm
3)] = [腫瘤之長徑(mm)] x [腫瘤之短徑(mm)]
2× 0.5
如同圖6所示,在投予了hKM3900_tA2-32LH0.1、1或10mg/kg之群中,係顯示出有意義的腫瘤體積縮小作用。縱軸係表示腫瘤體積,橫軸係表示初次投予後日數。實線及虛線係表示各群之腫瘤體積之平均值之推移,誤差槓係表示平均值之標準誤差。有意機率P值(*:P<0.05、**:P<0.01)係藉由Dunnett之多重比較測定,比較同型控制組投予群與hKM3900_tA2-32LH投予群之第12天之腫瘤體積來算出。hKM3900_tA2-32LH之0.1mg/kg投予群之第12天之例子數為9。
[7-2.抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體在食蟹猴中之安全性試驗]
為了探討抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體(hKM3900_3-34-j6及hKM3900_tA2-32LH)之安全性,而於食蟹猴之靜脈內單次投予抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體。結果,在投予了抗CLDN4 (hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體之猴中,並未確認到血清中之IL-6、TNF-α等的細胞激素濃度有特別的異常。因此,抗CLDN4(hKM3900)-抗CD137scFv雙特異性抗體在安全性之觀點來看,係判斷為適格作為用於癌症之治療之抗體。
[實施例8:藉由抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體進行之癌症之治療]
[8-1.CLDN4之表現量之確認]
為了調查CLDN4作為癌症治療標的之通用性,係藉由The Cancer Genome Atlas(TCGA),來調查癌症組織中之CLDN4之RNA之表現量。結果係確認在大腸癌、膀胱癌、肺癌等的癌症組織中CLDN4之表現係亢進。由此,係教示CLDN4不僅在腹膜轉移癌症中,在其他之癌症種類中,亦有成為治療標的之可能性。此外,藉由The Genotype-Tissue Expression(GTEx),來進行正常組織中之CLDN4之RNA之表現量之調査。結果,係確認在一些正常組織中有表現CLDN4。然而,正常組織中,CLDN4之表現量係比在癌症組織中低。因此,以CLDN4為治療標的之癌症治療藥,係可確保廣泛的安全域,而教示其有成為副作用之疑慮低之治療藥之可能性。
[產業上之利用可能性]
本發明之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體係被期待對於癌症之治療有用。又,本發明之多核苷酸、表現載體、經轉形之宿主細胞及生產抗體之方法係對於產生前述抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體而言有用。
[序列表非關鍵詞文字]
以下之序列表之數字標題<223>中係記載「Artificial Sequence」之說明。具體而言,序列表之序列編號1為3D11之重鏈可變區域之鹼基序列,序列編號2為3D11之重鏈可變區域之胺基酸序列。序列編號3為3D11之輕鏈可變區域之鹼基序列,序列編號4為3D11之輕鏈可變區域之胺基酸序列。序列編號5為hKM3900之重鏈可變區域之鹼基序列,序列編號6為hKM3900之重鏈可變區域之胺基酸序列。序列編號7為hKM3900之輕鏈可變區域之鹼基序列,序列編號8為hKM3900之輕鏈可變區域之胺基酸序列。序列編號9為3-34之重鏈可變區域之鹼基序列,序列編號10為3-34之重鏈可變區域之胺基酸序列。序列編號11為3-34之輕鏈可變區域之鹼基序列,序列編號12為3-34之輕鏈可變區域之胺基酸序列。序列編號13為A2-32之重鏈可變區域之鹼基序列,序列編號14為A2-32之重鏈可變區域之胺基酸序列。序列編號15為A2-32之輕鏈可變區域之鹼基序列,序列編號16為A2-32之輕鏈可變區域之胺基酸序列。序列編號17為A2-48之重鏈可變區域之鹼基序列,序列編號18為A2-48之重鏈可變區域之胺基酸序列。序列編號19為A2-48之輕鏈可變區域之鹼基序列,序列編號20為A2-48之輕鏈可變區域之胺基酸序列。序列編號21為A2-73之重鏈可變區域之鹼基序列,序列編號22為A2-73之重鏈可變區域之胺基酸序列。序列編號23為A2-73之輕鏈可變區域之鹼基序列,序列編號24為A2-73之輕鏈可變區域之胺基酸序列。序列編號25為3-34-j6 scFv之鹼基序列,序列編號26為3-34-j6 scFv之胺基酸序列。序列編號27為tA2-32 scFv之鹼基序列,序列編號28為tA2-32 scFv之胺基酸序列。序列編號29為tA2-32LH scFv之鹼基序列,序列編號30為tA2-32LH scFv之胺基酸序列。序列編號31為tA2-48 scFv之鹼基序列,序列編號32為tA2-48 scFv之胺基酸序列。序列編號33為tA2-73 scFv之鹼基序列,序列編號34為tA2-73 scFv之胺基酸序列。序列編號35為hKM3900_3-34-j6之重鏈之鹼基序列,序列編號36為hKM3900_3-34-j6之重鏈之胺基酸序列。序列編號37為hKM3900_tA2-32LH之重鏈之鹼基序列,序列編號38為hKM3900_tA2-32LH之重鏈之胺基酸序列。序列編號39為hKM3900之輕鏈之鹼基序列,序列編號40為hKM3900之輕鏈之胺基酸序列。序列編號41為抗CD3 scFv-人類Fc融合蛋白質之胺基酸序列。序列編號42為人類CD137之胺基酸序列。序列編號43為猴CD137之胺基酸序列。序列編號44為His tag蛋白質之胺基酸序列。序列編號45為3×FLAG tag之胺基酸序列。序列編號46~54為GS連結子之胺基酸序列。序列編號55為GKPGS連結子之胺基酸序列。
[圖1-1]圖1-1係表示藉由ELISA法所測定評估之受試抗體之對於CD137之結合活性。圖之縱軸係表示由450nm之吸光度減去570nm之吸光度後之值,橫軸係表示受試抗體之濃度。符號係表示各別之受試抗體添加時之吸光度之平均值,誤差槓係表示標準偏差。
[圖1-2]圖1-2係表示藉由ELISA法所測定評估之受試抗體之對於CD137之結合活性。圖之縱軸係表示由450nm之吸光度減去570nm之吸光度後之值,橫軸係表示受試抗體之濃度。符號係表示各別之受試抗體添加時之吸光度之平均值。
[圖1-3]圖1-3係表示藉由ELISA法所測定評估之受試抗體之對於CD137之結合活性。圖之縱軸係表示由450nm之吸光度減去570nm之吸光度後之值,橫軸係表示受試抗體之濃度。符號係表示各別之受試抗體添加時之吸光度之平均值。
[圖1-4]圖1-4係表示藉由ELISA法所測定評估之受試抗體之對於CD137之結合活性。圖之縱軸係表示由450nm之吸光度減去570nm之吸光度後之值,橫軸係表示受試抗體之濃度。符號係表示各別之受試抗體添加時之吸光度之平均值。
[圖2-1]圖2-1係表示在表現CLDN4之癌細胞(NCI-H322細胞)與4-1BB Effector Cells之共培養試驗中之受試抗體之CD137促效劑活性。圖之縱軸係表示相對發光量,橫軸係表示受試抗體之濃度。符號係表示各別受試抗體添加時之相對發光量之平均值,誤差槓係表示標準偏差。
[圖2-2]圖2-2係表示在表現CLDN4之癌細胞(NCI-H322細胞)與4-1BB Effector Cells之共培養試驗中之受試抗體之CD137促效劑活性。圖之縱軸係表示相對發光量,橫軸係表示受試抗體之濃度。符號係表示各別之受試抗體添加時之相對發光量之平均值。
[圖2-3]圖2-3係表示在表現CLDN4之癌細胞(NCI-H322細胞)與4-1BB Effector Cells之共培養試驗中之受試抗體之CD137促效劑活性。圖之縱軸係表示相對發光量,橫軸係表示受試抗體之濃度。符號係表示各別受試抗體添加時之相對發光量之平均值,誤差槓係表示標準偏差。
[圖2-4]圖2-4係表示4-1BB Effector Cells之單獨培養試驗中之受試抗體之CD137促效劑活性。圖之縱軸係表示相對發光量,橫軸係表示受試抗體之濃度。符號係表示各別受試抗體添加時之相對發光量之平均值,誤差槓係表示標準偏差。
[圖2-5]圖2-5係表示4-1BB Effector Cells之單獨培養試驗中之受試抗體之CD137促效劑活性。圖之縱軸係表示相對發光量,橫軸係表示受試抗體之濃度。符號係表示各別之受試抗體添加時之相對發光量之平均值。
[圖2-6]圖2-6係表示4-1BB Effector Cells之單獨培養試驗中之受試抗體之CD137促效劑活性。圖之縱軸係表示相對發光量,橫軸係表示受試抗體之濃度。符號係表示各別受試抗體添加時之相對發光量之平均值,誤差槓係表示標準偏差。
[圖3-1]圖3-1係表示在60As6-Luc/GFP細胞與Expanded pan T細胞之共培養系中,各受試抗體添加時之干擾素-γ產生促進機能。縱軸係表示在抗體添加6日後之干擾素-γ產生量(pg/mL),橫軸係表示抗體濃度。符號係表示抗體之各濃度中,干擾素-γ產生量之平均值。
[圖3-2]圖3-2係表示在60As6-Luc/GFP細胞與Expanded pan T細胞之共培養系中,各受試抗體添加時之干擾素-γ產生促進機能。圖之縱軸係表示抗體添加4日後之干擾素-γ產生量(pg/mL),橫軸係表示抗體濃度。符號係表示抗體之各濃度中,干擾素-γ產生量之平均值,誤差槓係表示標準偏差。
[圖3-3]圖3-3係表示在Expanded pan T細胞之單培養系中,各受試抗體添加時之干擾素-γ產生量。圖之縱軸係表示在抗體添加6日後之干擾素-γ產生量(pg/mL),橫軸係表示抗體濃度。符號係表示抗體之各濃度中,干擾素-γ產生量之平均值。
[圖3-4]圖3-4係表示在Expanded pan T細胞之單培養系中,各受試抗體添加時之干擾素-γ產生量。圖之縱軸係表示在抗體添加5日後之干擾素-γ產生量(pg/mL),橫軸係表示抗體濃度。符號係表示抗體之各濃度中,干擾素-γ產生量之平均值,誤差槓係表示標準偏差。
[圖4]圖4係表示在60As6-Luc/GFP細胞與Expanded pan T細胞之共培養系中,因各受試抗體所造成之癌細胞傷害活性(癌細胞之增殖抑制作用)。圖之縱軸係顯示出由測定開始0小時起168小時所增加之螢光面積,以未添加受試抗體之孔作為100%時之細胞增殖率。橫軸係表示抗體濃度。符號係表示各抗體中之癌細胞增殖率之平均值。
[圖5]圖5係顯示在60As6-Luc/GFP細胞與Expanded pan T細胞之共培養系中之各受試抗體添加時之癌細胞傷害活性。圖之縱軸係顯示在抗體添加6日後之60As6-Luc/GFP細胞之化學發光之測定值中,將未添加抗體之平均值設為殺傷率0%,並將添加Triton-X100之平均值設為殺傷率100%時之癌細胞殺傷率(%)。橫軸係表示抗體濃度。符號係顯示抗體之各濃度中之癌細胞殺傷率之平均值,誤差槓係表示標準偏差。
[圖6]圖6係顯示將NCI-H322細胞進行皮下荷癌之PBMC移入老鼠中之腫瘤體積變化。圖之橫軸係表示初次投予後日數,縱軸係表示腫瘤體積之平均值,誤差槓係表示標準誤差。
<![CDATA[<110> 安斯泰來製藥股份有限公司(Astellas Pharma Inc.)]]> 國立研究開發法人國立癌症研究中心(NATIONAL CANCER CENTER) <![CDATA[<120> 抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體]]> <![CDATA[<130> FA1535-21350]]> <![CDATA[<150> JP2021-072429]]> <![CDATA[<151> 2021-04-22]]> <![CDATA[<160> 55 ]]> <![CDATA[<170> PatentIn version 3.5]]> <![CDATA[<210> 1]]> <![CDATA[<211> 375]]> <![CDATA[<212> DNA]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> 3D11 VH]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<221> CDS]]> <![CDATA[<222> (1)..(375)]]> <![CDATA[<400> 1]]> cag gtt cag ttg gga cag tct ggc ccc gaa gtg aag aaa cct ggc gcc 48 Gln Val Gln Leu Gly Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 tct gtg aag gtg tcc tgc aag gct tcc ggc tac tcc ttt atc tcc tac 96 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ile Ser Tyr 20 25 30 ggc atc tcc tgg gtc cga cag gct cct gga caa ggc ttg gaa tgg atg 144 Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 ggc tgg tcc tcc gtg tac aac ggc aac acc aac tac gtg cag aaa ttc 192 Gly Trp Ser Ser Val Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Val Gln Lys Phe 50 55 60 cag ggc aga gtg acc atg acc acc gac acc tct gcc tcc acc gcc tac 240 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 atg gaa ctg cgg tcc ctg aga tct gat gac gcc gcc gtg tac tac tgc 288 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Ala Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 gcc aga gac tct tac tcc tcc ggc tgg tct tac tac tac tcc ggc atg 336 Ala Arg Asp Ser Tyr Ser Ser Gly Trp Ser Tyr Tyr Tyr Ser Gly Met 100 105 110 gat gtg tgg ggc cag ggc aca aca gtg acc gtg tcc tcc 375 Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <![CDATA[<210> 2]]> <![CDATA[<211> 125]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> 合成結構]]> <![CDATA[<400> 2]]> Gln Val Gln Leu Gly Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ile Ser Tyr 20 25 30 Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ser Ser Val Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Val Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Ala Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Ser Tyr Ser Ser Gly Trp Ser Tyr Tyr Tyr Ser Gly Met 100 105 110 Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <![CDATA[<210> 3]]> <![CDATA[<211> 327]]> <![CDATA[<212> DNA]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> 3D11 VL]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<221> CDS]]> <![CDATA[<222> (1)..(327)]]> <![CDATA[<400> 3]]> gag att gtg ctg acc cag tct cct ggc aca ctg tct ttg agc cct ggc 48 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 gag aga gct acc ctg tcc tgt aga gcc tct cag tcc gtg tcc tcc tct 96 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser 20 25 30 tac ctg gcc tgg tat cag cag aag cct gga cag gct ccc cgg ctg ttg 144 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 atc tac ggc gct tct tct aga gcc aca ggc atc cct gac cgg ttc tcc 192 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 gga tct ggc tct ggc acc gat ttc acc ctg acc atc aac cgg ctg gaa 240 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Arg Leu Glu 65 70 75 80 ccc gag gat ttc gcc gtg tac tac tgc cag cag tac ggc tcc tct cct 288 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro 85 90 95 tac tct ttt ggc cag ggc acc aag ctg gaa atc aag cgg 327 Tyr Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 <![CDATA[<210> 4]]> <![CDATA[<211> 109]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> 合成結構]]> <![CDATA[<400> 4]]> Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Arg Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro 85 90 95 Tyr Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 <![CDATA[<210> 5]]> <![CDATA[<211> 369]]> <![CDATA[<212> DNA]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> hKM3900 VH]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<221> CDS]]> <![CDATA[<222> (1)..(369)]]> <![CDATA[<400> 5]]> gaa gtg cag ctg gtt cag tct ggc gcc gaa gtg aag aaa cct ggc gcc 48 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 tcc gtg aag atc tcc tgc aag gct tct ggc tac acc ttc acc gac tac 96 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 tac atg aac tgg gtc cga cag gct cct gga cag gga ctt gag tgg atg 144 Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 gga gat gtg gtg ccc aac aac ggc gtg ccc acc tac aac cag aaa ttc 192 Gly Asp Val Val Pro Asn Asn Gly Val Pro Thr Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 aag ggc aga gtg acc atc acc gcc gac aag tct acc tcc acc gcc tac 240 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 atg gaa ctg cgg agc ctg aga tct gag gac acc gcc gtg tac tac tgc 288 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 gcc aga cct cac tac tac tac gcc ggc aga tct ggc gcc atg gat tat 336 Ala Arg Pro His Tyr Tyr Tyr Ala Gly Arg Ser Gly Ala Met Asp Tyr 100 105 110 tgg gga cag ggc acc ctg gtc acc gtg tcc tct 369 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <![CDATA[<210> 6]]> <![CDATA[<211> 123]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> 合成結構]]> <![CDATA[<400> 6]]> Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Asp Val Val Pro Asn Asn Gly Val Pro Thr Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Pro His Tyr Tyr Tyr Ala Gly Arg Ser Gly Ala Met Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <![CDATA[<210> 7]]> <![CDATA[<211> 327]]> <![CDATA[<212> DNA]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> hKM3900 VL]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<221> CDS]]> <![CDATA[<222> (1)..(327)]]> <![CDATA[<400> 7]]> gac atc cag ctg acc cag tct cca tcc tct ctg tct gcc tct gtg ggc 48 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 gac aga gtg aca att acc tgc acc gcc tcc tcc acc gtg tcc tct acc 96 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Thr Ala Ser Ser Thr Val Ser Ser Thr 20 25 30 tac ctg cac tgg tat cag cag aag ccc ggc aag gct ccc aag ctg ctg 144 Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 atc tac tcc acc tcc aat ctg gcc tct ggc gtg ccc tct aga ttc tcc 192 Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60 gga tct ggc tct gga acc gac tat acc ctg aca atc tcc agc ctg cag 240 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln 65 70 75 80 cct gag gac ttc gcc acc tac tac tgc cac cag tac cac aga tcc cca 288 Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Tyr His Arg Ser Pro 85 90 95 cct acc ttt ggc cag ggc acc aag ctg gaa atc aag cgt 327 Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 <![CDATA[<210> 8]]> <![CDATA[<211> 109]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> 合成結構]]> <![CDATA[<400> 8]]> Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Thr Ala Ser Ser Thr Val Ser Ser Thr 20 25 30 Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Tyr His Arg Ser Pro 85 90 95 Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 <![CDATA[<210> 9]]> <![CDATA[<211> 354]]> <![CDATA[<212> DNA]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> 3-34 VH]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<221> CDS]]> <![CDATA[<222> (1)..(354)]]> <![CDATA[<400> 9]]> cag gtc cag ctg cag cag tct gag gct gag ctg gtg agg cct ggg gcc 48 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Glu Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15 tca gtg aag att tcc tgc aag gct ttt ggc tac acc ttc aca aac cat 96 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Phe Gly Tyr Thr Phe Thr Asn His 20 25 30 cat ata aac tgg gtg aag cag agg cct gga cag ggc ctg gac tgg att 144 His Ile Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile 35 40 45 gga tat att aat cct tat aat gat tat act acc ttc aac cgg aag ttc 192 Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Tyr Thr Thr Phe Asn Arg Lys Phe 50 55 60 aag gac aag gcc aca ttg act gta cac aaa tcc tcc agc aca gcc tat 240 Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val His Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 atg gag ctt agc ggc ctg aca tct gac gac tct gca gtc tat tac tgt 288 Met Glu Leu Ser Gly Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 gca aga acc tgg ggt cac tgg tat ttc gat ctc tgg ggc cgt ggc acc 336 Ala Arg Thr Trp Gly His Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly Thr 100 105 110 gtg gtc act gtc tcc tca 354 Val Val Thr Val Ser Ser 115 <![CDATA[<210> 10]]> <![CDATA[<211> 118]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> 合成結構]]> <![CDATA[<400> 10]]> Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Glu Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Phe Gly Tyr Thr Phe Thr Asn His 20 25 30 His Ile Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Tyr Thr Thr Phe Asn Arg Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val His Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Gly Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Thr Trp Gly His Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly Thr 100 105 110 Val Val Thr Val Ser Ser 115 <![CDATA[<210> 11]]> <![CDATA[<211> 327]]> <![CDATA[<212> DNA]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> 3-34 VL]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<221> CDS]]> <![CDATA[<222> (1)..(327)]]> <![CDATA[<400> 11]]> gaa ata gtg atg acg cag tct cca gcc acc ctg tct gtg tct cca ggg 48 Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 gaa aga gcc acc ctc tcc tgt agg gcc agt cag agt gtt agc agc aac 96 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn 20 25 30 tta gcc tgg tac cag cag aaa cct ggc cag gct ccc agg ctc ctc atc 144 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 tat gat tca tcc acc agg gcc act ggt atc cca gcc agg ttc agt ggc 192 Tyr Asp Ser Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 agt ggg tct ggg aca gac ttc act ctc acc atc agc agc ctg cag tct 240 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser 65 70 75 80 gaa gat ttt gca gtt tat tac tgt cag cag tat aat aac tgg cct ccg 288 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Asn Trp Pro Pro 85 90 95 tgg acg ttc ggc caa ggg acc aag gtg gaa atc aaa cgg 327 Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 <![CDATA[<210> 12]]> <![CDATA[<211> 109]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> 合成結構]]> <![CDATA[<400> 12]]> Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ser Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Asn Trp Pro Pro 85 90 95 Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 <![CDATA[<210> 13]]> <![CDATA[<211> 354]]> <![CDATA[<212> DNA]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> A2-32 VH]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<221> CDS]]> <![CDATA[<222> (1)..(354)]]> <![CDATA[<400> 13]]> cag gtg cag ctg cag gaa tcg ggc cca gga ctg gtg aag cct tcg gag 48 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 acc ctg tcc ctc acc tgc act gtc tct ggc ggc tcc atc agt ggt tat 96 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Gly Tyr 20 25 30 tac tgg agc tgg atc cgg cag ccc cca ggg aag ggc ctg gag tgg att 144 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 gga tat atc tat tac agt gga ttc acc aac tac aac ccc tcc ctc aag 192 Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Phe Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 agt cga gtc acc ata tca gta gac acg tcc aag aac cag ttc tcc ctg 240 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 aaa ctg agc tct gtg acc gct gcg gac acg gcc gtg tat tat tgt acg 288 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr 85 90 95 aga gat cac tcc cac tac tac tac atg gac gtc tgg ggc caa ggg acc 336 Arg Asp His Ser His Tyr Tyr Tyr Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 acg gtc acc gtc tcc tca 354 Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <![CDATA[<210> 14]]> <![CDATA[<211> 118]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> 合成結構]]> <![CDATA[<400> 14]]> Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Gly Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Phe Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr 85 90 95 Arg Asp His Ser His Tyr Tyr Tyr Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <![CDATA[<210> 15]]> <![CDATA[<211> 333]]> <![CDATA[<212> DNA]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> A2-32 VL]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<221> CD]]>S <![CDATA[<222> (1)..(333)]]> <![CDATA[<400> 15]]> cag tct gtg ctg act cag cca ccc tca gcg tct ggg acc ccc ggg cag 48 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 agg gtc acc atc tct tgt tct gga agc agc tcc aac atc gga agt aat 96 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 act gta aac tgg tac cag cag ttc cca gga acg gcc ccc aaa ctc ctc 144 Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 atc tat agt aat aat cag cgg ccc tca ggg gtc cct gac cga ttc tct 192 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 ggc tcc aag tct ggc acc tca gcc tcc ctg gcc atc agt ggg ctc cag 240 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 tct gag gat gag gct gat tat tac tgt gca gga tgg gat gac agc ctg 288 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Gly Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 aat ggt ccg gta ttc ggc gga ggg acc aag ctg acc gtc cta ggt 333 Asn Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 100 105 110 <![CDATA[<210> 16]]> <![CDATA[<211> 111]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> 合成結構]]> <![CDATA[<400> 16]]> Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Gly Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Asn Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 100 105 110 <![CDATA[<210> 17]]> <![CDATA[<211> 354]]> <![CDATA[<212> DNA]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> A2-48 VH]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<221> CDS]]> <![CDATA[<222> (1)..(354)]]> <![CDATA[<400> 17]]> cag gtg cag ctg cag gag tcg ggc cca gga ctg gtg aag cct tcg gag 48 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 acc ctg tcc ctc acc tgc act gtc tct ggt ggc tcc atc agt agt tac 96 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 tac tgg agc tgg atc cgg cag ccc ccc ggg aag gga ctg gaa tgg att 144 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 ggg tat atc tat tac agt ggg tac acc aac tac aac ccc tcc ctc aag 192 Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 agt cga gtt aac ata tca gta gac acg tcc cag aac cag ttc tcc ctg 240 Ser Arg Val Asn Ile Ser Val Asp Thr Ser Gln Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 aag ctg aat tct ctg acc gct gcg gac acg gcc gtt tat tac tgt gcg 288 Lys Leu Asn Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 aga aca cac tcc tat tac tac ggt atg gac gtc tgg ggc caa ggg acc 336 Arg Thr His Ser Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 acg gtc acc gtc tcc tca 354 Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <![CDATA[<210> 18]]> <![CDATA[<211> 118]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> 合成結構]]> <![CDATA[<400> 18]]> Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Asn Ile Ser Val Asp Thr Ser Gln Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Asn Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Thr His Ser Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <![CDATA[<210> 19]]> <![CDATA[<211> 333]]> <![CDATA[<212> DNA]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> A2-48 VL]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<221> CDS]]> <![CDATA[<222> (1)..(333)]]> <![CDATA[<400> 19]]> cag tct gtg ctg act cag cca ccc tca gcg tct ggg acc ccc ggg cag 48 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 agg gtc acc atc tct tgt tct gga agc agc tcc aac atc gga aat aat 96 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn 20 25 30 cct gta aac tgg tac cag cag ttc cca gga acg gcc ccc aaa ctc ctc 144 Pro Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 atc tat agt aat aat cag cgg ccc tca ggg gtc cct gac cga ttc tct 192 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 ggc tcc aag tct ggc acc tca gcc tcc ctg gcc atc agt ggg ctc cag 240 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 tct gag gat gag gct gat tat tac tgt gaa gca tgg gat gac agc ctg 288 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Glu Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 aat ggt ccg gta ttc ggc gga ggg acc aag ctg acc gtc cta ggt 333 Asn Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 100 105 110 <![CDATA[<210> 20]]> <![CDATA[<211> 111]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> 合成結構]]> <![CDATA[<400> 20]]> Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn 20 25 30 Pro Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Glu Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Asn Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 100 105 110 <![CDATA[<210> 21]]> <![CDATA[<211> 363]]> <![CDATA[<212> DNA]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> A2-73 VH]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<221> CDS]]> <![CDATA[<222> (1)..(363)]]> <![CDATA[<400> 21]]> cag gtg cag ctg cag gag tcg ggc cca gga ctg gtg aag cct tcg gag 48 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 acc ctg tcc ctc acc tgc act gtc tct ggt ggc tcc atc agt agt tac 96 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 tac tgg acc tgg atc cgg cag ccc cca ggg aag gga ctg gaa ttg gtt 144 Tyr Trp Thr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val 35 40 45 gga tat atc tat tac agt ggt tac acc agc tac aac ccc tcc ctc aag 192 Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Tyr Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 agt cga gtc acc ata tca att gac acg tcc aag aac cag ttc tcc ctg 240 Ser Arg Val Thr Ile Ser Ile Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 cag ctg aac tct gtg acc gct gcg gac acg gcc gtg tat ttc tgt gcg 288 Gln Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala 85 90 95 cga gat gac tat ggt ggt aac ggc tac tac ggt gtg gac gtc tgg ggc 336 Arg Asp Asp Tyr Gly Gly Asn Gly Tyr Tyr Gly Val Asp Val Trp Gly 100 105 110 caa ggg acc acg gtc acc gtc tcc tca 363 Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <![CDATA[<210> 22]]> <![CDATA[<211> 121]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> 合成結構]]> <![CDATA[<400> 22]]> Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Tyr Trp Thr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val 35 40 45 Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Tyr Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Ile Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Gln Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Asp Tyr Gly Gly Asn Gly Tyr Tyr Gly Val Asp Val Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <![CDATA[<210> 23]]> <![CDATA[<211> 333]]> <![CDATA[<212> DNA]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> A2-73 VL]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<221> CDS]]> <![CDATA[<222> (1)..(333)]]> <![CDATA[<400> 23]]> cag tct gtg ctg act cag cca ccc tca gcg tct ggg acc ccc ggg cag 48 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 agg gtc acc atc tct tgt tct ggc agc agc tcc aac atc gga aat aat 96 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn 20 25 30 cct gta aac tgg tac cgg cag ctc cca gga acg gcc ccc aaa ctc ctc 144 Pro Val Asn Trp Tyr Arg Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 atc tat agt aat aat cag cgg ccc tca ggg gtc cct gac cga ttc tct 192 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 ggc tcc aag tct ggc acc tca gcc tcc ctg gcc atc agt ggg ctc cag 240 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 tct gag gat gag gct gat tat tac tgt gca gca tgg gat gac agc ctg 288 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 aat ggt tgg gtg ttc ggc gga ggg acc aag ctg acc gtc cta ggt 333 Asn Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 100 105 110 <![CDATA[<210> 24]]> <![CDATA[<211> 111]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> 合成結構]]> <![CDATA[<400> 24]]> Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn 20 25 30 Pro Val Asn Trp Tyr Arg Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Asn Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 100 105 110 <![CDATA[<210> 25]]> <![CDATA[<211> 726]]> <![CDATA[<212> DNA]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> 3-34-j6 scFv]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<221> CDS]]> <![CDATA[<222> (1)..(726)]]> <![CDATA[<400> 25]]> gaa gtt cag ctg ttg gaa agt ggt ggc gga ctg gtc cag cct ggc gaa 48 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Glu 1 5 10 15 tct ctg aga ctg agc tgc aag gcc ttc ggg tat acc ttt acc aac cac 96 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Phe Gly Tyr Thr Phe Thr Asn His 20 25 30 cac atc aat tgg gtt cga caa gcc cct ggc aag tgc ctg gaa tgg gtc 144 His Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Val 35 40 45 gga tat atc aac ccc tac aac gac tac acc acc ttc aac gac aag ttc 192 Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Tyr Thr Thr Phe Asn Asp Lys Phe 50 55 60 aag gac cgg ttc acc ctg tcc gtg gat aag tcc aag agc acc gct tac 240 Lys Asp Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Lys Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 ctg cag atg aac tcc ctg aga gcc gag gat aca gct gtg tat tac tgt 288 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 gcc cgg acc tgg ggc cac tgg tac ttt gat ttg tgg ggc cag gga acc 336 Ala Arg Thr Trp Gly His Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 ctc gtg aca gtc tct tct ggc ggc gga gga agc gga ggc gga ggt tca 384 Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 115 120 125 ggc ggc ggt gga tct aac atc cag atg acc cag tct cca tcc agc ctg 432 Gly Gly Gly Gly Ser Asn Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu 130 135 140 tct gcc tct gtg ggc gac aga gtg aca att acc tgt cgg gcc tct cag 480 Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln 145 150 155 160 tcc gtg tcc agc aat ctg gct tgg tat cag cag aag ccc ggc aag gct 528 Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala 165 170 175 ccc aag ctg ctg atc tac gac tcc tcc acc aga gct acc ggc gtg cca 576 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ser Ser Thr Arg Ala Thr Gly Val Pro 180 185 190 tct aga ttc tcc ggc tct ggc tct ggc acc gac ttt acc ctg aca att 624 Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 195 200 205 tcc agc ctg cag cct gag gac ttc gcc acc tac tac tgc cag cag tac 672 Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr 210 215 220 aac aac tgg cct cct tgg acc ttc ggc tgc ggc acc aaa ctg gaa atc 720 Asn Asn Trp Pro Pro Trp Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Ile 225 230 235 240 aag cgc 726 Lys Arg <![CDATA[<210> 26]]> <![CDATA[<211> 242]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> 合成結構]]> <![CDATA[<400> 26]]> Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Phe Gly Tyr Thr Phe Thr Asn His 20 25 30 His Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Tyr Thr Thr Phe Asn Asp Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Lys Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Thr Trp Gly His Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 115 120 125 Gly Gly Gly Gly Ser Asn Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu 130 135 140 Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln 145 150 155 160 Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala 165 170 175 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ser Ser Thr Arg Ala Thr Gly Val Pro 180 185 190 Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 195 200 205 Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr 210 215 220 Asn Asn Trp Pro Pro Trp Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Ile 225 230 235 240 Lys Arg <![CDATA[<210> 27]]> <![CDATA[<211> 732]]> <![CDATA[<212> DNA]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> tA2-32 scFv]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<221> CDS]]> <![CDATA[<222> (1)..(732)]]> <![CDATA[<400> 27]]> cag gtt cag ttg caa gaa tct ggc cca ggc ctc gtg aag ccc tcc gaa 48 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 aca ctg tct ctg acc tgc aca gtg tcc ggc ggc tct atc tct ggc tac 96 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Gly Tyr 20 25 30 tac tgg tcc tgg atc aga cag cct cct ggc aag tgc ctg gaa tgg atc 144 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Ile 35 40 45 ggc tac atc tac tac tct ggc ttc acc aac tac aac ccc agc ctg aag 192 Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Phe Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 tcc aga gtg acc atc agc gtg gac acc tct aag aac cag ttc tct ctg 240 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 aag ctg tcc tcc gtg acc gcc gct gat acc gct gtg tat tac tgc acc 288 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr 85 90 95 cgg gac cac agc cac tac tac tac atg gac gtg tgg gga cag gga aca 336 Arg Asp His Ser His Tyr Tyr Tyr Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 acc gtg aca gtc tct tca ggc ggt ggt gga tca ggc ggc gga gga agt 384 Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 115 120 125 ggt ggc gga ggt tct cag tct gtg ctg acc caa cct cct tcc gct tct 432 Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser 130 135 140 ggc aca cct ggc cag aga gtg aca atc tct tgc tcc ggc tcc tcc tcc 480 Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser 145 150 155 160 aac atc ggc tct aac acc gtg aac tgg tat cag cag ttc ccc ggc acc 528 Asn Ile Gly Ser Asn Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr 165 170 175 gct cct aag ctg ctg atc tac tcc aac aac cag cgg cct tcc ggc gtg 576 Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val 180 185 190 ccc gat aga ttc tct ggc tct aag tcc ggc acc tct gcc agc ctg gct 624 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala 195 200 205 att tct gga ctg cag agc gag gac gag gcc gac tat tat tgt gcc ggc 672 Ile Ser Gly Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Gly 210 215 220 tgg gac gac tct ctg aac ggc cct gtt ttt ggc tgc ggc acc aaa ctg 720 Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Pro Val Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu 225 230 235 240 act gtg ctg ggc 732 Thr Val Leu Gly <![CDATA[<210> 28]]> <![CDATA[<211> 244]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> 合成結構]]> <![CDATA[<400> 28]]> Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Gly Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Phe Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr 85 90 95 Arg Asp His Ser His Tyr Tyr Tyr Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 115 120 125 Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser 130 135 140 Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser 145 150 155 160 Asn Ile Gly Ser Asn Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr 165 170 175 Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val 180 185 190 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala 195 200 205 Ile Ser Gly Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Gly 210 215 220 Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Pro Val Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu 225 230 235 240 Thr Val Leu Gly <![CDATA[<210> 29]]> <![CDATA[<211> 747]]> <![CDATA[<212> DNA]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> tA2-32LH scFv]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<221> CDS]]> <![CDATA[<222> (1)..(747)]]> <![CDATA[<400> 29]]> caa tct gtt ctg acc caa cct cct tcc gcc tct ggc aca cct ggc cag 48 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 aga gtg acc atc tct tgc tcc ggc tcc tcc tcc aac atc ggc tct aac 96 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 acc gtg aac tgg tat cag cag ttc ccc ggc acc gct cct aag ctg ctg 144 Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 atc tac tcc aac aac cag cgg cct tcc ggc gtg ccc gat aga ttc tct 192 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 ggc tct aag tcc ggc acc tct gcc agc ctg gct att tct gga ctg cag 240 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 agc gag gac gag gcc gac tat tat tgt gcc ggc tgg gac gac tct ctg 288 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Gly Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 aac ggc cct gtt ttt ggc ggt ggc acc aaa ctg aca gtg ctt gga ggc 336 Asn Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly 100 105 110 ggt ggt gga tca ggc ggc ggt gga agt ggt ggt ggt ggt agc gga ggt 384 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 115 120 125 ggt gga tct cag gtg cag ctc caa gag tct gga cct ggc ctc gtg aag 432 Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys 130 135 140 cct tcc gag aca ctg tct ctg acc tgc aca gtg tcc ggc ggc tct atc 480 Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile 145 150 155 160 tct ggc tac tac tgg tcc tgg atc aga cag cct cct ggc aag gga ctc 528 Ser Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu 165 170 175 gag tgg atc ggc tac atc tac tac tct ggc ttc acc aac tac aac ccc 576 Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Phe Thr Asn Tyr Asn Pro 180 185 190 agc ctg aag tcc cgc gtg acc atc agc gtg gac acc tct aag aac cag 624 Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln 195 200 205 ttc tct ctg aag ctg tcc tcc gtg acc gcc gct gat acc gct gtg tat 672 Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr 210 215 220 tac tgc acc cgg gac cac agc cac tac tac tac atg gac gtg tgg gga 720 Tyr Cys Thr Arg Asp His Ser His Tyr Tyr Tyr Met Asp Val Trp Gly 225 230 235 240 cag gga aca acc gtg aca gtg tcc tcc 747 Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 245 <![CDATA[<210> 30]]> <![CDATA[<211> 249]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> 合成結構]]> <![CDATA[<400> 30]]> Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Gly Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Asn Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 115 120 125 Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys 130 135 140 Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile 145 150 155 160 Ser Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu 165 170 175 Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Phe Thr Asn Tyr Asn Pro 180 185 190 Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln 195 200 205 Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr 210 215 220 Tyr Cys Thr Arg Asp His Ser His Tyr Tyr Tyr Met Asp Val Trp Gly 225 230 235 240 Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 245 <![CDATA[<210> 31]]> <![CDATA[<211> 732]]> <![CDATA[<212> DNA]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> tA2-48 scFv]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<221> CDS]]> <![CDATA[<222> (1)..(732)]]> <![CDATA[<400> 31]]> cag gtt cag ttg caa gaa tct ggc cca ggc ctc gtg aag ccc tcc gaa 48 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 aca ctg tct ctg acc tgc aca gtg tcc ggc ggc tcc atc tct tcc tac 96 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 tac tgg tcc tgg atc aga cag cct cct ggc aag tgc ctg gaa tgg atc 144 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Ile 35 40 45 ggc tac atc tac tac tcc ggc tac acc aac tac aac ccc agc ctg aag 192 Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 tcc aga gtg aac atc tcc gtg gac acc agc cag aac cag ttc tct ctg 240 Ser Arg Val Asn Ile Ser Val Asp Thr Ser Gln Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 aag ctg aac tcc ctg acc gcc gct gat acc gct gtg tat tac tgc gct 288 Lys Leu Asn Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 cgg acc cac agc tac tac tat ggc atg gac gtg tgg gga caa ggg aca 336 Arg Thr His Ser Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 acc gtg aca gtc tct tca ggc ggt ggt gga tca ggc ggc gga gga agt 384 Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 115 120 125 ggt ggc gga ggt tct cag tct gtg ctg acc caa cct cct tcc gct tct 432 Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser 130 135 140 ggc aca cct ggc cag aga gtg acc atc agc tgt agc ggc tcc tcc tcc 480 Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser 145 150 155 160 aac atc ggc aac aac ccc gtg aac tgg tat cag cag ttc ccc ggc aca 528 Asn Ile Gly Asn Asn Pro Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr 165 170 175 gcc cct aag ctg ctg atc tac tcc aac aac cag cgg cct tcc ggc gtg 576 Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val 180 185 190 ccc gat aga ttc tct ggc tct aag tcc ggc acc tct gcc agc ctg gct 624 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala 195 200 205 att tct gga ctg cag agc gag gac gag gcc gac tac tat tgc gag gct 672 Ile Ser Gly Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Glu Ala 210 215 220 tgg gac gac tct ctg aac ggc cct gtg ttt ggc tgt ggc acc aaa ctg 720 Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Pro Val Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu 225 230 235 240 act gtg ctg ggc 732 Thr Val Leu Gly <![CDATA[<210> 32]]> <![CDATA[<211> 244]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> 合成結構]]> <![CDATA[<400> 32]]> Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Asn Ile Ser Val Asp Thr Ser Gln Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Asn Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Thr His Ser Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 115 120 125 Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser 130 135 140 Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser 145 150 155 160 Asn Ile Gly Asn Asn Pro Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr 165 170 175 Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val 180 185 190 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala 195 200 205 Ile Ser Gly Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Glu Ala 210 215 220 Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Pro Val Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu 225 230 235 240 Thr Val Leu Gly <![CDATA[<210> 33]]> <![CDATA[<211> 741]]> <![CDATA[<212> DNA]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> tA2-73 scFv]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<221> CDS]]> <![CDATA[<222> (1)..(741)]]> <![CDATA[<400> 33]]> cag gtt cag ttg caa gaa tct ggc cca ggc ctc gtg aag ccc tcc gaa 48 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 aca ctg tct ctg acc tgc aca gtg tcc ggc ggc tcc atc tct tcc tac 96 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 tac tgg acc tgg atc aga cag cct cct ggc aag tgc ttg gaa ctc gtg 144 Tyr Trp Thr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Cys Leu Glu Leu Val 35 40 45 ggc tac atc tac tac tcc ggc tac acc agc tac aac ccc agc ctg aag 192 Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Tyr Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 tcc aga gtg acc atc agc atc gac acc tct aag aac cag ttc agc ctg 240 Ser Arg Val Thr Ile Ser Ile Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 cag ctc aac tcc gtg acc gct gct gat acc gct gtg tac ttc tgc gcc 288 Gln Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala 85 90 95 aga gat gac tac ggc ggc aac ggc tat tat ggc gtg gac gtt tgg gga 336 Arg Asp Asp Tyr Gly Gly Asn Gly Tyr Tyr Gly Val Asp Val Trp Gly 100 105 110 caa ggg aca acc gtg aca gtg tct agc gga ggt ggt gga tca ggc ggc 384 Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 115 120 125 ggt gga agt ggt ggt ggt ggc tct cag tct gtg ctg acc caa cct cct 432 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro 130 135 140 tct gcc tct ggc aca cct ggc cag aga gtg aca atc tct tgc tcc ggc 480 Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly 145 150 155 160 tcc tcc tcc aac atc ggc aac aac ccc gtg aac tgg tac aga cag ctg 528 Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn Pro Val Asn Trp Tyr Arg Gln Leu 165 170 175 cca ggc aca gcc cct aag ctg ctg atc tac tcc aac aac cag cgg cct 576 Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro 180 185 190 tcc ggc gtg ccc gat aga ttc tct gga tct aag tcc ggc acc agc gcc 624 Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala 195 200 205 agc ctg gct att tct gga ctg cag agc gag gac gag gcc gac tac tac 672 Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr 210 215 220 tgt gcc gct tgg gac gat tct ctg aac gga tgg gtg ttc ggc tgc ggc 720 Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Trp Val Phe Gly Cys Gly 225 230 235 240 acc aaa ctg act gtg ctg gga 741 Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 245 <![CDATA[<210> 34]]> <![CDATA[<211> 247]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> 合成結構]]> <![CDATA[<400> 34]]> Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Tyr Trp Thr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Cys Leu Glu Leu Val 35 40 45 Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Tyr Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Ile Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Gln Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Asp Tyr Gly Gly Asn Gly Tyr Tyr Gly Val Asp Val Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 115 120 125 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro 130 135 140 Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly 145 150 155 160 Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn Pro Val Asn Trp Tyr Arg Gln Leu 165 170 175 Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro 180 185 190 Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala 195 200 205 Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr 210 215 220 Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Trp Val Phe Gly Cys Gly 225 230 235 240 Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 245 <![CDATA[<210> 35]]> <![CDATA[<211> 2115]]> <![CDATA[<212> DNA]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> hKM3900_3-34-j6 HC]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<221> CDS]]> <![CDATA[<222> (1]]>)..(2115) <![CDATA[<400> 35]]> gaa gtg cag ctg gtt cag tct ggc gcc gaa gtg aag aaa cct ggc gcc 48 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 tcc gtg aag atc tcc tgc aag gct tct ggc tac acc ttc acc gac tac 96 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 tac atg aac tgg gtc cga cag gct cct gga cag gga ctt gag tgg atg 144 Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 gga gat gtg gtg ccc aac aac ggc gtg ccc acc tac aac cag aaa ttc 192 Gly Asp Val Val Pro Asn Asn Gly Val Pro Thr Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 aag ggc aga gtg acc atc acc gcc gac aag tct acc tcc acc gcc tac 240 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 atg gaa ctg cgg agc ctg aga tct gag gac acc gcc gtg tac tac tgc 288 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 gcc aga cct cac tac tac tac gcc ggc aga tct ggc gcc atg gat tat 336 Ala Arg Pro His Tyr Tyr Tyr Ala Gly Arg Ser Gly Ala Met Asp Tyr 100 105 110 tgg gga cag ggc acc ctg gtc acc gtg tcc tct gct agc aca aag ggc 384 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 115 120 125 ccc tct gtg ttc cct ctg gct cct agc tct aag tcc acc tct ggc gga 432 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly 130 135 140 aca gct gct ctg ggc tgt ctg gtc aag gac tac ttc cct gag cct gtg 480 Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 145 150 155 160 acc gtg tct tgg aac tct ggc gct ctg aca tcc ggc gtg cac aca ttt 528 Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 165 170 175 cca gct gtg ctg cag tcc tcc ggc ctg tac tct ctg tcc tct gtc gtg 576 Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 180 185 190 acc gtg cct tcc agc tct ctg gga acc cag acc tac atc tgc aat gtg 624 Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val 195 200 205 aac cac aag cct tcc aac acc aag gtg gac aag aag gtg gaa ccc aag 672 Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys 210 215 220 tcc tgc gac aag acc cac acc tgt cct cca tgt cct gct cca gaa gct 720 Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala 225 230 235 240 gct ggc gga cct tcc gtg ttc ctg ttt cct cca aag cct aag gac acc 768 Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 245 250 255 ctg atg atc tct cgg acc cct gaa gtg acc tgc gtg gtg gtg gat gtg 816 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 260 265 270 tct cac gag gac cca gaa gtg aag ttc aat tgg tac gtg gac ggc gtg 864 Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 275 280 285 gaa gtg cac aac gcc aag acc aag cct aga gag gaa cag tac aac tcc 912 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 290 295 300 acc tac aga gtg gtg tcc gtg ctg acc gtg ctg cac cag gat tgg ctg 960 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 305 310 315 320 aac ggc aaa gag tac aag tgc aag gtg tcc aac aag gcc ctg cct gcc 1008 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala 325 330 335 ggc atc gaa aag acc atc tcc aag gcc aag ggc cag cct agg gaa ccc 1056 Gly Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 340 345 350 cag gtt tac acc ttg cca cct tct cgg gac gag ctg acc aag aac cag 1104 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln 355 360 365 gtg tcc ctg acc tgt ctc gtg aag ggc ttc tac ccc tcc gat atc gcc 1152 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 370 375 380 gtg gaa tgg gag tct aat ggc cag cct gag aac aac tac aag aca acc 1200 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 385 390 395 400 cct cct gtg ctg gac tcc gac ggc tca ttc ttc ctg tac tcc aag ctg 1248 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 405 410 415 aca gtg gac aag tcc aga tgg cag cag ggc aac gtg ttc tcc tgc agc 1296 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 420 425 430 gtg atg cac gag gcc ctg cac aat cac tac aca cag aag tct ctg tct 1344 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 435 440 445 ctg agc ccc ggc aaa ggt ggc gga gga tct ggc gga ggc gga tcc gaa 1392 Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu 450 455 460 gtt cag ctg ttg gaa agt ggt ggc gga ctg gtc cag cct ggc gaa tct 1440 Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Glu Ser 465 470 475 480 ctg aga ctg agc tgc aag gcc ttc ggg tat acc ttt acc aac cac cac 1488 Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Phe Gly Tyr Thr Phe Thr Asn His His 485 490 495 atc aat tgg gtt cga caa gcc cct ggc aag tgc ctg gaa tgg gtc gga 1536 Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Val Gly 500 505 510 tat atc aac ccc tac aac gac tac acc acc ttc aac gac aag ttc aag 1584 Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Tyr Thr Thr Phe Asn Asp Lys Phe Lys 515 520 525 gac cgg ttc acc ctg tcc gtg gat aag tcc aag agc acc gct tac ctg 1632 Asp Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Lys Ser Thr Ala Tyr Leu 530 535 540 cag atg aac tcc ctg aga gcc gag gat aca gct gtg tat tac tgt gcc 1680 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 545 550 555 560 cgg acc tgg ggc cac tgg tac ttt gat ttg tgg ggc cag gga acc ctc 1728 Arg Thr Trp Gly His Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu 565 570 575 gtg aca gtc tct tct ggc ggc gga gga agc gga ggc gga ggt tca ggc 1776 Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 580 585 590 ggc ggt gga tct aac atc cag atg acc cag tct cca tcc agc ctg tct 1824 Gly Gly Gly Ser Asn Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser 595 600 605 gcc tct gtg ggc gac aga gtg aca att acc tgt cgg gcc tct cag tcc 1872 Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser 610 615 620 gtg tcc agc aat ctg gct tgg tat cag cag aag ccc ggc aag gct ccc 1920 Val Ser Ser Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro 625 630 635 640 aag ctg ctg atc tac gac tcc tcc acc aga gct acc ggc gtg cca tct 1968 Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ser Ser Thr Arg Ala Thr Gly Val Pro Ser 645 650 655 aga ttc tcc ggc tct ggc tct ggc acc gac ttt acc ctg aca att tcc 2016 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 660 665 670 agc ctg cag cct gag gac ttc gcc acc tac tac tgc cag cag tac aac 2064 Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn 675 680 685 aac tgg cct cct tgg acc ttc ggc tgc ggc acc aaa ctg gaa atc aag 2112 Asn Trp Pro Pro Trp Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 690 695 700 cgc 2115 Arg 705 <![CDATA[<210> 36]]> <![CDATA[<211> 705]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> 合成結構]]> <![CDATA[<400> 36]]> Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Asp Val Val Pro Asn Asn Gly Val Pro Thr Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Pro His Tyr Tyr Tyr Ala Gly Arg Ser Gly Ala Met Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 115 120 125 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly 130 135 140 Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 145 150 155 160 Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 165 170 175 Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 180 185 190 Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val 195 200 205 Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys 210 215 220 Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala 225 230 235 240 Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 245 250 255 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 260 265 270 Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 275 280 285 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 290 295 300 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 305 310 315 320 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala 325 330 335 Gly Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 340 345 350 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln 355 360 365 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 370 375 380 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 385 390 395 400 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 405 410 415 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 420 425 430 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 435 440 445 Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu 450 455 460 Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Glu Ser 465 470 475 480 Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Phe Gly Tyr Thr Phe Thr Asn His His 485 490 495 Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Val Gly 500 505 510 Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Tyr Thr Thr Phe Asn Asp Lys Phe Lys 515 520 525 Asp Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Lys Ser Thr Ala Tyr Leu 530 535 540 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 545 550 555 560 Arg Thr Trp Gly His Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu 565 570 575 Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 580 585 590 Gly Gly Gly Ser Asn Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser 595 600 605 Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser 610 615 620 Val Ser Ser Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro 625 630 635 640 Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ser Ser Thr Arg Ala Thr Gly Val Pro Ser 645 650 655 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 660 665 670 Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn 675 680 685 Asn Trp Pro Pro Trp Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 690 695 700 Arg 705 <![CDATA[<210> 37]]> <![CDATA[<211> 2136]]> <![CDATA[<212> DNA]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> hKM3900_tA2-32LH HC]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<221> CDS]]> <![CDATA[<222> (1)..(2136)]]> <![CDATA[<400> 37]]> gaa gtg cag ctg gtt cag tct ggc gcc gaa gtg aag aaa cct ggc gcc 48 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 tcc gtg aag atc tcc tgc aag gct tct ggc tac acc ttc acc gac tac 96 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 tac atg aac tgg gtc cga cag gct cct gga cag gga ctt gag tgg atg 144 Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 gga gat gtg gtg ccc aac aac ggc gtg ccc acc tac aac cag aaa ttc 192 Gly Asp Val Val Pro Asn Asn Gly Val Pro Thr Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 aag ggc aga gtg acc atc acc gcc gac aag tct acc tcc acc gcc tac 240 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 atg gaa ctg cgg agc ctg aga tct gag gac acc gcc gtg tac tac tgc 288 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 gcc aga cct cac tac tac tac gcc ggc aga tct ggc gcc atg gat tat 336 Ala Arg Pro His Tyr Tyr Tyr Ala Gly Arg Ser Gly Ala Met Asp Tyr 100 105 110 tgg gga cag ggc acc ctg gtc acc gtg tcc tct gct agc aca aag ggc 384 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 115 120 125 ccc tct gtg ttc cct ctg gct cct agc tct aag tcc acc tct ggc gga 432 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly 130 135 140 aca gct gct ctg ggc tgt ctg gtc aag gac tac ttc cct gag cct gtg 480 Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 145 150 155 160 acc gtg tct tgg aac tct ggc gct ctg aca tcc ggc gtg cac aca ttt 528 Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 165 170 175 cca gct gtg ctg cag tcc tcc ggc ctg tac tct ctg tcc tct gtc gtg 576 Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 180 185 190 acc gtg cct tcc agc tct ctg gga acc cag acc tac atc tgc aat gtg 624 Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val 195 200 205 aac cac aag cct tcc aac acc aag gtg gac aag aag gtg gaa ccc aag 672 Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys 210 215 220 tcc tgc gac aag acc cac acc tgt cct cca tgt cct gct cca gaa gct 720 Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala 225 230 235 240 gct ggc gga cct tcc gtg ttc ctg ttt cct cca aag cct aag gac acc 768 Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 245 250 255 ctg atg atc tct cgg acc cct gaa gtg acc tgc gtg gtg gtg gat gtg 816 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 260 265 270 tct cac gag gac cca gaa gtg aag ttc aat tgg tac gtg gac ggc gtg 864 Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 275 280 285 gaa gtg cac aac gcc aag acc aag cct aga gag gaa cag tac aac tcc 912 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 290 295 300 acc tac aga gtg gtg tcc gtg ctg acc gtg ctg cac cag gat tgg ctg 960 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 305 310 315 320 aac ggc aaa gag tac aag tgc aag gtg tcc aac aag gcc ctg cct gcc 1008 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala 325 330 335 ggc atc gaa aag acc atc tcc aag gcc aag ggc cag cct agg gaa ccc 1056 Gly Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 340 345 350 cag gtt tac acc ttg cca cct tct cgg gac gag ctg acc aag aac cag 1104 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln 355 360 365 gtg tcc ctg acc tgt ctc gtg aag ggc ttc tac ccc tcc gat atc gcc 1152 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 370 375 380 gtg gaa tgg gag tct aat ggc cag cct gag aac aac tac aag aca acc 1200 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 385 390 395 400 cct cct gtg ctg gac tcc gac ggc tca ttc ttc ctg tac tcc aag ctg 1248 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 405 410 415 aca gtg gac aag tcc aga tgg cag cag ggc aac gtg ttc tcc tgc agc 1296 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 420 425 430 gtg atg cac gag gcc ctg cac aat cac tac aca cag aag tct ctg tct 1344 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 435 440 445 ctg agc ccc ggc aaa ggt ggc gga gga tct ggc gga ggc gga tcc caa 1392 Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln 450 455 460 tct gtt ctg acc caa cct cct tcc gcc tct ggc aca cct ggc cag aga 1440 Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg 465 470 475 480 gtg acc atc tct tgc tcc ggc tcc tcc tcc aac atc ggc tct aac acc 1488 Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Thr 485 490 495 gtg aac tgg tat cag cag ttc ccc ggc acc gct cct aag ctg ctg atc 1536 Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile 500 505 510 tac tcc aac aac cag cgg cct tcc ggc gtg ccc gat aga ttc tct ggc 1584 Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly 515 520 525 tct aag tcc ggc acc tct gcc agc ctg gct att tct gga ctg cag agc 1632 Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln Ser 530 535 540 gag gac gag gcc gac tat tat tgt gcc ggc tgg gac gac tct ctg aac 1680 Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Gly Trp Asp Asp Ser Leu Asn 545 550 555 560 ggc cct gtt ttt ggc ggt ggc acc aaa ctg aca gtg ctt gga ggc ggt 1728 Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 565 570 575 ggt gga tca ggc ggc ggt gga agt ggt ggt ggt ggt agc gga ggt ggt 1776 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 580 585 590 gga tct cag gtg cag ctc caa gag tct gga cct ggc ctc gtg aag cct 1824 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 595 600 605 tcc gag aca ctg tct ctg acc tgc aca gtg tcc ggc ggc tct atc tct 1872 Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser 610 615 620 ggc tac tac tgg tcc tgg atc aga cag cct cct ggc aag gga ctc gag 1920 Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 625 630 635 640 tgg atc ggc tac atc tac tac tct ggc ttc acc aac tac aac ccc agc 1968 Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Phe Thr Asn Tyr Asn Pro Ser 645 650 655 ctg aag tcc cgc gtg acc atc agc gtg gac acc tct aag aac cag ttc 2016 Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe 660 665 670 tct ctg aag ctg tcc tcc gtg acc gcc gct gat acc gct gtg tat tac 2064 Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 675 680 685 tgc acc cgg gac cac agc cac tac tac tac atg gac gtg tgg gga cag 2112 Cys Thr Arg Asp His Ser His Tyr Tyr Tyr Met Asp Val Trp Gly Gln 690 695 700 gga aca acc gtg aca gtg tcc tcc 2136 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 705 710 <![CDATA[<210> 38]]> <![CDATA[<211> 712]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> 合成結構]]> <![CDATA[<400> 38]]> Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Asp Val Val Pro Asn Asn Gly Val Pro Thr Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Pro His Tyr Tyr Tyr Ala Gly Arg Ser Gly Ala Met Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 115 120 125 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly 130 135 140 Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 145 150 155 160 Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 165 170 175 Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 180 185 190 Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val 195 200 205 Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys 210 215 220 Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala 225 230 235 240 Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 245 250 255 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 260 265 270 Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 275 280 285 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 290 295 300 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 305 310 315 320 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala 325 330 335 Gly Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 340 345 350 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln 355 360 365 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 370 375 380 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 385 390 395 400 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 405 410 415 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 420 425 430 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 435 440 445 Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln 450 455 460 Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg 465 470 475 480 Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Thr 485 490 495 Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile 500 505 510 Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly 515 520 525 Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln Ser 530 535 540 Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Gly Trp Asp Asp Ser Leu Asn 545 550 555 560 Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 565 570 575 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 580 585 590 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 595 600 605 Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser 610 615 620 Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 625 630 635 640 Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Phe Thr Asn Tyr Asn Pro Ser 645 650 655 Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe 660 665 670 Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 675 680 685 Cys Thr Arg Asp His Ser His Tyr Tyr Tyr Met Asp Val Trp Gly Gln 690 695 700 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 705 710 <![CDATA[<210> 39]]> <![CDATA[<211> 645]]> <![CDATA[<212> DNA]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> hKM3900 LC]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<221> CDS]]> <![CDATA[<222> (1)..(645)]]> <![CDATA[<400> 39]]> gac atc cag ctg acc cag tct cca tcc tct ctg tct gcc tct gtg ggc 48 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 gac aga gtg aca att acc tgc acc gcc tcc tcc acc gtg tcc tct acc 96 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Thr Ala Ser Ser Thr Val Ser Ser Thr 20 25 30 tac ctg cac tgg tat cag cag aag ccc ggc aag gct ccc aag ctg ctg 144 Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 atc tac tcc acc tcc aat ctg gcc tct ggc gtg ccc tct aga ttc tcc 192 Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60 gga tct ggc tct gga acc gac tat acc ctg aca atc tcc agc ctg cag 240 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln 65 70 75 80 cct gag gac ttc gcc acc tac tac tgc cac cag tac cac aga tcc cca 288 Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Tyr His Arg Ser Pro 85 90 95 cct acc ttt ggc cag ggc acc aag ctg gaa atc aag cgt acg gtg gcc 336 Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala 100 105 110 gct cct tcc gtg ttc atc ttc cca cct tcc gac gag cag ctg aag tcc 384 Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser 115 120 125 ggc aca gct tct gtc gtg tgc ctg ctg aac aac ttc tac cct cgg gaa 432 Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 130 135 140 gcc aag gtg cag tgg aag gtg gac aat gcc ctg cag tcc ggc aac tcc 480 Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser 145 150 155 160 caa gag tct gtg acc gag cag gac tcc aag gac agc acc tac agc ctg 528 Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 165 170 175 tcc tcc aca ctg acc ctg tcc aag gcc gac tac gag aag cac aag gtg 576 Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 180 185 190 tac gcc tgc gaa gtg acc cat cag ggc ctg tct agc cct gtg acc aag 624 Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 195 200 205 tct ttc aac cgg ggc gag tgc 645 Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <![CDATA[<210> 40]]> <![CDATA[<211> 215]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> 合成結構]]> <![CDATA[<400> 40]]> Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Thr Ala Ser Ser Thr Val Ser Ser Thr 20 25 30 Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Tyr His Arg Ser Pro 85 90 95 Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala 100 105 110 Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser 115 120 125 Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 130 135 140 Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser 145 150 155 160 Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 165 170 175 Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 180 185 190 Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 195 200 205 Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <![CDATA[<210> 41]]> <![CDATA[<211> 486]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> 抗CD3 scFv-人類Fc融合蛋白質]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<221> PEPTIDE]]> <![CDATA[<222> (1)..(486)]]> <![CDATA[<400> 41]]> Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr 20 25 30 Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp 50 55 60 Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Thr 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe 100 105 110 Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Lys Pro 115 120 125 Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Lys Pro Gly 130 135 140 Ser Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly 145 150 155 160 Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr 165 170 175 Ser Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg 180 185 190 Gly Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Gly Thr Pro Ala Arg 195 200 205 Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly 210 215 220 Ala Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser 225 230 235 240 Asn Leu Trp Val Phe Gly Ser Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Glu Pro 245 250 255 Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu 260 265 270 Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 275 280 285 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 290 295 300 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 305 310 315 320 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala 325 330 335 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 340 345 350 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro 355 360 365 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 370 375 380 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn 385 390 395 400 Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 405 410 415 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 420 425 430 Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 435 440 445 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 450 455 460 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 465 470 475 480 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 485 <![CDATA[<210> 42]]> <![CDATA[<211> 255]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 智人(Homo sapiens)]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<221> PEPTIDE]]> <![CDATA[<222> (1)..(255)]]> <![CDATA[<400> 42]]> Met Gly Asn Ser Cys Tyr Asn Ile Val Ala Thr Leu Leu Leu Val Leu 1 5 10 15 Asn Phe Glu Arg Thr Arg Ser Leu Gln Asp Pro Cys Ser Asn Cys Pro 20 25 30 Ala Gly Thr Phe Cys Asp Asn Asn Arg Asn Gln Ile Cys Ser Pro Cys 35 40 45 Pro Pro Asn Ser Phe Ser Ser Ala Gly Gly Gln Arg Thr Cys Asp Ile 50 55 60 Cys Arg Gln Cys Lys Gly Val Phe Arg Thr Arg Lys Glu Cys Ser Ser 65 70 75 80 Thr Ser Asn Ala Glu Cys Asp Cys Thr Pro Gly Phe His Cys Leu Gly 85 90 95 Ala Gly Cys Ser Met Cys Glu Gln Asp Cys Lys Gln Gly Gln Glu Leu 100 105 110 Thr Lys Lys Gly Cys Lys Asp Cys Cys Phe Gly Thr Phe Asn Asp Gln 115 120 125 Lys Arg Gly Ile Cys Arg Pro Trp Thr Asn Cys Ser Leu Asp Gly Lys 130 135 140 Ser Val Leu Val Asn Gly Thr Lys Glu Arg Asp Val Val Cys Gly Pro 145 150 155 160 Ser Pro Ala Asp Leu Ser Pro Gly Ala Ser Ser Val Thr Pro Pro Ala 165 170 175 Pro Ala Arg Glu Pro Gly His Ser Pro Gln Ile Ile Ser Phe Phe Leu 180 185 190 Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu 195 200 205 Arg Phe Ser Val Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe 210 215 220 Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly 225 230 235 240 Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu 245 250 255 <![CDATA[<210> 43]]> <![CDATA[<211> 254]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 食蟹獼猴(Macaca fascicularis)]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<221> PEPTIDE]]> <![CDATA[<222> (1)..(254)]]> <![CDATA[<400> 43]]> Met Gly Asn Ser Cys Tyr Asn Ile Val Ala Thr Leu Leu Leu Val Leu 1 5 10 15 Asn Phe Glu Arg Thr Arg Ser Leu Gln Asp Leu Cys Ser Asn Cys Pro 20 25 30 Ala Gly Thr Phe Cys Asp Asn Asn Arg Ser Gln Ile Cys Ser Pro Cys 35 40 45 Pro Pro Asn Ser Phe Ser Ser Ala Gly Gly Gln Arg Thr Cys Asp Ile 50 55 60 Cys Arg Gln Cys Lys Gly Val Phe Lys Thr Arg Lys Glu Cys Ser Ser 65 70 75 80 Thr Ser Asn Ala Glu Cys Asp Cys Ile Ser Gly Tyr His Cys Leu Gly 85 90 95 Ala Glu Cys Ser Met Cys Glu Gln Asp Cys Lys Gln Gly Gln Glu Leu 100 105 110 Thr Lys Lys Gly Cys Lys Asp Cys Cys Phe Gly Thr Phe Asn Asp Gln 115 120 125 Lys Arg Gly Ile Cys Arg Pro Trp Thr Asn Cys Ser Leu Asp Gly Lys 130 135 140 Ser Val Leu Val Asn Gly Thr Lys Glu Arg Asp Val Val Cys Gly Pro 145 150 155 160 Ser Pro Ala Asp Leu Ser Pro Gly Ala Ser Ser Ala Thr Pro Pro Ala 165 170 175 Pro Ala Arg Glu Pro Gly His Ser Pro Gln Ile Ile Phe Phe Leu Ala 180 185 190 Leu Thr Ser Thr Val Val Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu Val Leu Arg 195 200 205 Phe Ser Val Val Lys Arg Ser Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys 210 215 220 Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys 225 230 235 240 Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu 245 250 <![CDATA[<210> 44]]> <![CDATA[<211> 6]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> His tag 蛋白]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<221> PEPTIDE]]> <![CDATA[<222> (1)..(6)]]> <![CDATA[<400> 44]]> His His His His His His 1 5 <![CDATA[<210> 45]]> <![CDATA[<211> 26]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> 3xFLAG tag 蛋白•]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<221> PEPTIDE]]> <![CDATA[<222> (1)..(26)]]> <![CDATA[<400> 45]]> Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys Gly Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp 1 5 10 15 Lys Ile Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys 20 25 <![CDATA[<210> 46]]> <![CDATA[<211> 4]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> ]]> 人工序列 <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> GS 連結子]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<221> PEPTIDE]]> <![CDATA[<222> (1)..(4)]]> <![CDATA[<400> 46]]> Gly Gly Gly Ser 1 <![CDATA[<210> 47]]> <![CDATA[<211> 4]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> GS 連結子]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<221> PEPTIDE]]> <![CDATA[<222> (1)..(4)]]> <![CDATA[<400> 47]]> Ser Gly Gly Gly 1 <![CDATA[<210> 48]]> <![CDATA[<211> 5]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> GS 連結子]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<221> PEPTIDE]]> <![CDATA[<222> (1)..(5)]]> <![CDATA[<400> 48]]> Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 <![CDATA[<210> 49]]> <![CDATA[<211> 5]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> GS 連結子]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<221> PEPTIDE]]> <![CDATA[<222> (1)..(5)]]> <![CDATA[<400> 49]]> Ser Gly Gly Gly Gly 1 5 <![CDATA[<210> 50]]> <![CDATA[<211> 6]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> GS 連]]>結子 <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<221> PEPTIDE]]> <![CDATA[<222> (1)..(6)]]> <![CDATA[<400> 50]]> Gly Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 <![CDATA[<210> 51]]> <![CDATA[<211> 6]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> GS 連結子]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<221> PEPTIDE]]> <![CDATA[<222> (1)..(6)]]> <![CDATA[<400> 51]]> Ser Gly Gly Gly Gly Gly 1 5 <![CDATA[<210> 52]]> <![CDATA[<211> 7]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> GS 連結子]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<221> PEPTIDE]]> <![CDATA[<222> (1)..(7)]]> <![CDATA[<400> 52]]> Gly Gly Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 <![CDATA[<210> 53]]> <![CDATA[<211> 7]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> GS 連結子]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<221> PEPTIDE]]> <![CDATA[<222> (1)..(7)]]> <![CDATA[<400> 53]]> Ser Gly Gly Gly Gly Gly Gly 1 5 <![CDATA[<210> 54]]> <![CDATA[<211> 10]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> GS 連結子]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<221> PEPTIDE]]> <![CDATA[<222> (1)..(10)]]> <![CDATA[<400> 54]]> Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 <![CDATA[<210> 55]]> <![CDATA[<211> 5]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> GKPGS 連結子]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<221> PEPTIDE]]> <![CDATA[<222> (1)..(5)]]> <![CDATA[<400> 55]]> Gly Lys Pro Gly Ser 1 5
Claims (31)
- 一種雙特異性抗體,其係包含抗CLDN4抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域,以及抗CD137抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體,其中,抗CLDN4抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域為以下之(a)或(b)中之任一者: (a)包含由序列編號2之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號2之胺基酸編號50至66之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號2之胺基酸編號99至114之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域,以及包含由序列編號4之胺基酸編號24至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號4之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號4之胺基酸編號90至98之胺基酸序列所構成之CDR3之抗CLDN4抗體之輕鏈可變區域;或 (b)包含由序列編號6之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號6之胺基酸編號50至66之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號6之胺基酸編號99至112之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域,以及包含由序列編號8之胺基酸編號24至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號8之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號8之胺基酸編號90至98之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域。
- 如請求項1中所記載之雙特異性抗體,其中,抗CLDN4抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域為以下之(a)或(b)中之任一者: (a)由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域;或 (b)由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域。
- 如請求項1或2中之任一項所記載之雙特異性抗體,其中,其係包含IgG抗體,該IgG抗體係由包含抗CLDN4抗體之重鏈可變區域之重鏈及包含抗CLDN4抗體之輕鏈可變區域之輕鏈所構成之IgG抗體(抗CLDN4 IgG抗體)。
- 如請求項3中所記載之雙特異性抗體,其係於抗CLDN4 IgG抗體之Fc領域包含LALA突變(L234A及L235A(此處,前述突變位置係依據人類Igγ1恆定區域中之EU編號之胺基酸位置))。
- 如請求項3中所記載之雙特異性抗體,其係於抗CLDN4 IgG抗體之Fc領域包含P331G突變(此處,前述突變位置係依據人類Igγ1恆定區域中之EU編號之胺基酸位置)。
- 如請求項3中所記載之雙特異性抗體,其中,抗CLDN4 IgG抗體之Fc領域係包含LALA突變及P331G突變。
- 如請求項1~6中之任一項所記載之雙特異性抗體,其中,抗CD137抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域為以下之(a)~(d)中之任一者: (a)包含由序列編號10之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號10之胺基酸編號50至66之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號10之胺基酸編號99至107之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域,以及包含由序列編號12之胺基酸編號24至34之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號12之胺基酸編號50至56之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號12之胺基酸編號89至98之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域; (b)包含由序列編號14之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號14之胺基酸編號50至65之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號14之胺基酸編號98至107之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域,以及包含由序列編號16之胺基酸編號23至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號16之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號16之胺基酸編號90至100之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域; (c)包含由序列編號18之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號18之胺基酸編號50至65之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號18之胺基酸編號98至107之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域,以及包含由序列編號20之胺基酸編號23至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號20之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號20之胺基酸編號90至100之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域;或 (d)包含由序列編號22之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號22之胺基酸編號50至65之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號22之胺基酸編號98至110之胺基酸序列所構成之CDR3之重鏈可變區域,以及包含由序列編號24之胺基酸編號23至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號24之胺基酸編號51至57之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號24之胺基酸編號90至100之胺基酸序列所構成之CDR3之輕鏈可變區域。
- 如請求項1~7中之任一項所記載之雙特異性抗體,其中,抗CD137抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域為以下之(a)~(i)中之任一者: (a)由序列編號10之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號12之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域; (b)由序列編號14之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號16之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域; (c)由序列編號18之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號20之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域; (d)由序列編號22之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號24之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域; (e)由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域; (f)由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域; (g)由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域及由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域; (h)由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域;或 (i)由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域。
- 如請求項7或8中之任一項所記載之雙特異性抗體,其中,包含抗CD137單鏈可變區域片段(抗CD137scFv),且該抗CD137單鏈可變區域片段(抗CD137scFv)係包含抗CD137抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域。
- 如請求項9中所記載之雙特異性抗體,其中,抗CD137scFv為以下之(a)~(e)中之任一者: (a)由序列編號26之胺基酸編號1至242之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv; (b)由序列編號28之胺基酸編號1至244之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv; (c)由序列編號30之胺基酸編號1至249之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv; (d)由序列編號32之胺基酸編號1至244之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv;或 (e)由序列編號34之胺基酸編號1至247之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv。
- 如請求項9或10中之任一項所記載之雙特異性抗體,其係包含抗CLDN4 IgG抗體及抗CD137scFv,其中,抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於抗CLDN4 IgG抗體之重鏈或輕鏈羧基末端。
- 一種抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體,其係以下之(a)~(j)中之任一者: (a)一雙特異性抗體,其係包含:包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端; (b)一雙特異性抗體,其係包含:包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端; (c)一雙特異性抗體,其係包含:包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域及由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端; (d)一雙特異性抗體,其係包含:包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端; (e)一雙特異性抗體,其係包含:包含由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端; (f)一雙特異性抗體,其係包含:包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端; (g)一雙特異性抗體,其係包含:包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端; (h)一雙特異性抗體,其係包含:包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域及由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端; (i)一雙特異性抗體,其係包含:包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端;或 (j)一雙特異性抗體,其係包含:包含由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域之抗CLDN4抗體之重鏈及包含由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CLDN4抗體之輕鏈,以及包含由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之重鏈可變區域及由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之輕鏈可變區域之抗CD137scFv,且該抗CD137scFv之胺基末端係透過連結子連結於該抗CLDN4抗體之重鏈羧基末端。
- 如請求項11或12中之任一項所記載之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體,其中,連結子為GS連結子。
- 如請求項13中所記載之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體,其中,GS連結子為由序列編號54之胺基酸序列所構成之連結子。
- 一種抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體,其係以下之(a)或(b)中之任一者: (a)一雙特異性抗體,其係包含:由序列編號36之胺基酸編號1至705之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽,以及由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈;或 (b)一雙特異性抗體,其係包含:由序列編號38之胺基酸編號1至712之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽,以及由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈。
- 如請求項1~15中之任一項所記載之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體,其係經轉譯後修飾。
- 如請求項16中所記載之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體,其中,轉譯後修飾為重鏈可變區域N末端之焦麩胺酸化及/或重鏈C末端離胺酸缺失。
- 一種多核苷酸,其係包含由下述(a)~(d)所成之群所選出之編碼抗CLDN4抗體之重鏈可變區域或輕鏈可變區域之鹼基序列: (a)包含編碼由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸; (b)包含編碼由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸; (c)包含編碼由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;或 (d)包含編碼由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸。
- 一種多核苷酸,其係包含由下述(a)~(r)所成之群所選出之編碼抗CD137抗體之重鏈可變區域或輕鏈可變區域之鹼基序列: (a)包含編碼由序列編號10之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸; (b)包含編碼由序列編號12之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸; (c)包含編碼由序列編號14之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸; (d)包含編碼由序列編號16之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸; (e)包含編碼由序列編號18之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸; (f)包含編碼由序列編號20之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸; (g)包含編碼由序列編號22之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸; (h)包含編碼由序列編號24之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸; (i)包含編碼由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸; (j)包含編碼由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸; (k)包含編碼由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸; (l)包含編碼由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸; (m)包含編碼由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸; (n)包含編碼由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸; (o)包含編碼由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸; (p)包含編碼由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸; (q)包含編碼由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸;或 (r)包含編碼由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸。
- 一種多核苷酸,其係包含選自由下述(a)~(e)所成之群之編碼抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸: (a)包含編碼由序列編號26之胺基酸編號1至242之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸; (b)包含編碼由序列編號28之胺基酸編號1至244之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸; (c)包含編碼由序列編號30之胺基酸編號1至249之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸; (d)包含編碼由序列編號32之胺基酸編號1至244之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸;或 (e)包含編碼由序列編號34之胺基酸編號1至247之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸。
- 一種由下述(a)~(e)所成之群所選出之多核苷酸,其係用於如請求項15中所記載之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體之生產: (a)包含編碼由序列編號36之胺基酸編號1至705之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸; (b)包含編碼由序列編號38之胺基酸編號1至712之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸; (c)包含編碼由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列之多核苷酸; (d)包含編碼由序列編號36之胺基酸編號1至705之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸,以及包含編碼由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列之多核苷酸;或 (e)包含編碼由序列編號38之胺基酸編號1至712之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸,以及包含編碼由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列之多核苷酸。
- 一種表現載體,其係包含如請求項18~21中之任一項所記載之多核苷酸。
- 一種宿主細胞,其係經過如請求項22所記載之表現載體進行轉形者。
- 一種宿主細胞,其係包含由以下之(a)~(dd)所成之群所選出之多核苷酸: (a)包含編碼由序列編號2之胺基酸編號1至125之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸; (b)包含編碼由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸; (c)包含編碼由序列編號6之胺基酸編號1至123之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸; (d)包含編碼由序列編號8之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸。 (e)包含編碼由序列編號10之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸; (f)包含編碼由序列編號12之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸; (g)包含編碼由序列編號14之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸; (h)包含編碼由序列編號16之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸; (i)包含編碼由序列編號18之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸; (j)包含編碼由序列編號20之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸; (k)包含編碼由序列編號22之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸; (l)包含編碼由序列編號24之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸。 (m)包含編碼由序列編號26之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸; (n)包含編碼由序列編號26之胺基酸編號134至242之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸; (o)包含編碼由序列編號28之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸; (p)包含編碼由序列編號28之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸; (q)包含編碼由序列編號30之胺基酸編號1至111之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸; (r)包含編碼由序列編號30之胺基酸編號132至249之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸; (s)包含編碼由序列編號32之胺基酸編號1至118之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸; (t)包含編碼由序列編號32之胺基酸編號134至244之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸; (u)包含編碼由序列編號34之胺基酸編號1至121之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之重鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸; (v)包含編碼由序列編號34之胺基酸編號137至247之胺基酸序列所構成之抗CD137抗體之輕鏈可變區域之鹼基序列之多核苷酸; (w)包含編碼由序列編號26之胺基酸編號1至242之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸; (x)包含編碼由序列編號28之胺基酸編號1至244之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸; (y)包含編碼由序列編號30之胺基酸編號1至249之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸; (z)包含編碼由序列編號32之胺基酸編號1至244之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸; (aa)包含編碼由序列編號34之胺基酸編號1至247之胺基酸序列所構成之抗CD137scFv之鹼基序列之多核苷酸; (bb)包含編碼由序列編號36之胺基酸編號1至705之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸; (cc)包含編碼由序列編號38之胺基酸編號1至712之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸;或 (dd)包含編碼由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列之多核苷酸。
- 一種宿主細胞,其係包含以下之(a)或(b)中之任一項之多核苷酸: (a)包含編碼由序列編號36之胺基酸編號1至705之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸,以及包含編碼由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列之多核苷酸;或 (b)包含編碼由序列編號38之胺基酸編號1至712之胺基酸序列所構成之包含抗CLDN4抗體之重鏈及抗CD137scFv之多肽之鹼基序列之多核苷酸,以及包含編碼由序列編號40之胺基酸編號1至215之胺基酸序列所構成之抗CLDN4抗體之輕鏈之鹼基序列之多核苷酸。
- 一種抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體之生產方法,其中包含培養如請求項23~25中之任一項所記載之宿主細胞之步驟。
- 一種醫藥組成物,其係包含如請求項1~17中之任一項所記載之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體及藥學上可容許之賦形劑。
- 如請求項1~17中之任一項所記載之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體,其係使用於癌症之治療。
- 如請求項27中所記載之醫藥組成物,其係用於癌症之治療。
- 一種治療癌症之方法,其係包含將如請求項1~17中之任一項所記載之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體之治療有效量投予至對象之步驟。
- 一種如請求項1~17中之任一項所記載之抗CLDN4-抗CD137雙特異性抗體之使用,其係用於用於癌症之治療之醫藥組成物之製造中。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2021-072429 | 2021-04-22 | ||
JP2021072429 | 2021-04-22 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
TW202309083A true TW202309083A (zh) | 2023-03-01 |
Family
ID=83722348
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
TW111115193A TW202309083A (zh) | 2021-04-22 | 2022-04-21 | 抗cldn4-抗cd137雙特異性抗體 |
Country Status (19)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20240209108A1 (zh) |
EP (1) | EP4327823A1 (zh) |
JP (2) | JP7365654B2 (zh) |
KR (1) | KR20230171465A (zh) |
CN (1) | CN117222672A (zh) |
AR (1) | AR125398A1 (zh) |
AU (1) | AU2022262542A1 (zh) |
BR (1) | BR112023021950A2 (zh) |
CA (1) | CA3217637A1 (zh) |
CL (1) | CL2023003100A1 (zh) |
CO (1) | CO2023015630A2 (zh) |
CR (1) | CR20230490A (zh) |
DO (1) | DOP2023000230A (zh) |
EC (1) | ECSP23087918A (zh) |
IL (1) | IL307744A (zh) |
MX (1) | MX2023012432A (zh) |
PE (1) | PE20241357A1 (zh) |
TW (1) | TW202309083A (zh) |
WO (1) | WO2022224997A1 (zh) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2023219120A1 (ja) * | 2022-05-12 | 2023-11-16 | アステラス製薬株式会社 | 抗cd37-抗cd3二重特異性抗体 |
WO2024085166A1 (ja) * | 2022-10-19 | 2024-04-25 | アステラス製薬株式会社 | がん治療におけるpd-1シグナル阻害剤との組み合わせによる抗cldn4-抗cd137二重特異性抗体の使用 |
Family Cites Families (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5225539A (en) | 1986-03-27 | 1993-07-06 | Medical Research Council | Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies |
US5530101A (en) | 1988-12-28 | 1996-06-25 | Protein Design Labs, Inc. | Humanized immunoglobulins |
IL162181A (en) | 1988-12-28 | 2006-04-10 | Pdl Biopharma Inc | A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same |
US6596541B2 (en) | 2000-10-31 | 2003-07-22 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods of modifying eukaryotic cells |
US7288638B2 (en) | 2003-10-10 | 2007-10-30 | Bristol-Myers Squibb Company | Fully human antibodies against human 4-1BB |
ES2856451T3 (es) | 2005-10-11 | 2021-09-27 | Amgen Res Munich Gmbh | Composiciones que comprenden anticuerpos específicos para diferentes especies, y usos de las mismas |
KR100999844B1 (ko) | 2006-07-19 | 2010-12-13 | 네오벌브 테크놀러지스 인크 | 고효율 방열 모듈을 구비한 고출력 led 조명장치 |
NZ592308A (en) | 2008-09-30 | 2012-11-30 | Ablexis Llc | Non-human mammals for the production of chimeric antibodies |
WO2014132647A1 (ja) * | 2013-03-01 | 2014-09-04 | 公益財団法人ヒューマンサイエンス振興財団 | 抗体、フラグメント、医薬組成物、分子及び腫瘍マーカー |
WO2019048040A1 (en) * | 2017-09-06 | 2019-03-14 | Ganymed Pharmaceuticals Gmbh | ANTIBODIES USEFUL IN THE DIAGNOSIS OF CANCER |
US20210054076A1 (en) * | 2018-01-05 | 2021-02-25 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Cytotoxicity-inducing therapeutic agent |
US20210163570A1 (en) * | 2018-03-14 | 2021-06-03 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Engineered cells, t cell immune modulating antibodies and methods for using the same |
EP3820898A1 (en) * | 2018-07-12 | 2021-05-19 | F-Star Beta Limited | Antibody molecules that bind cd137 and ox40 |
-
2022
- 2022-04-21 PE PE2023002906A patent/PE20241357A1/es unknown
- 2022-04-21 CA CA3217637A patent/CA3217637A1/en active Pending
- 2022-04-21 CR CR20230490A patent/CR20230490A/es unknown
- 2022-04-21 AU AU2022262542A patent/AU2022262542A1/en active Pending
- 2022-04-21 MX MX2023012432A patent/MX2023012432A/es unknown
- 2022-04-21 CN CN202280029125.XA patent/CN117222672A/zh active Pending
- 2022-04-21 IL IL307744A patent/IL307744A/en unknown
- 2022-04-21 AR ARP220101032A patent/AR125398A1/es unknown
- 2022-04-21 JP JP2023515503A patent/JP7365654B2/ja active Active
- 2022-04-21 EP EP22791768.9A patent/EP4327823A1/en active Pending
- 2022-04-21 BR BR112023021950A patent/BR112023021950A2/pt unknown
- 2022-04-21 US US18/556,606 patent/US20240209108A1/en active Pending
- 2022-04-21 WO PCT/JP2022/018350 patent/WO2022224997A1/ja active Application Filing
- 2022-04-21 KR KR1020237039211A patent/KR20230171465A/ko unknown
- 2022-04-21 TW TW111115193A patent/TW202309083A/zh unknown
-
2023
- 2023-09-29 JP JP2023169033A patent/JP2023182689A/ja active Pending
- 2023-10-18 CL CL2023003100A patent/CL2023003100A1/es unknown
- 2023-10-19 DO DO2023000230A patent/DOP2023000230A/es unknown
- 2023-11-20 CO CONC2023/0015630A patent/CO2023015630A2/es unknown
- 2023-11-21 EC ECSENADI202387918A patent/ECSP23087918A/es unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
MX2023012432A (es) | 2023-11-01 |
CA3217637A1 (en) | 2022-10-27 |
BR112023021950A2 (pt) | 2023-12-19 |
DOP2023000230A (es) | 2023-12-15 |
WO2022224997A1 (ja) | 2022-10-27 |
CR20230490A (es) | 2023-11-16 |
JP2023182689A (ja) | 2023-12-26 |
AU2022262542A1 (en) | 2023-11-02 |
AR125398A1 (es) | 2023-07-12 |
CO2023015630A2 (es) | 2023-11-30 |
KR20230171465A (ko) | 2023-12-20 |
IL307744A (en) | 2023-12-01 |
ECSP23087918A (es) | 2023-12-29 |
JPWO2022224997A1 (zh) | 2022-10-27 |
US20240209108A1 (en) | 2024-06-27 |
CL2023003100A1 (es) | 2024-03-22 |
PE20241357A1 (es) | 2024-07-03 |
CN117222672A (zh) | 2023-12-12 |
EP4327823A1 (en) | 2024-02-28 |
JP7365654B2 (ja) | 2023-10-20 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
AU2018393424B2 (en) | Triabody, preparation method and use thereof | |
TWI564306B (zh) | 雙特異性抗體 | |
US20180222996A1 (en) | Bispecific scfv immunofusion (bif) | |
JP2020018298A (ja) | Cldn18.2及びcd3に対する抗体コンストラクト | |
KR20220050971A (ko) | 신규 항-cd39 항체 | |
WO2022111633A1 (en) | Cldn18.2 antibody and use thereof | |
CN110229232B (zh) | 双特异性抗体及其用途 | |
JP7365654B2 (ja) | 抗cldn4-抗cd137二重特異性抗体 | |
US20240166736A1 (en) | Anti-tspan8/anti-cd3 bispecific antibody and anti-tspan8 antibody | |
CN113474372A (zh) | 一种抗ceacam5的单克隆抗体及其制备方法和用途 | |
CA3229014A1 (en) | Bispecific antibody and use thereof | |
JP2023547662A (ja) | Cldn6及びcd3に選択的に結合するポリペプチド構築物 | |
WO2023219121A1 (ja) | 抗taa-抗cd3多重特異性抗体 | |
CN118215686A (zh) | 靶向pd-l1和cldn18.2的双特异性抗体及其制备方法和应用 |