CN116574611B - 一种用于布氏乳杆菌的冻干保护剂及利用冻干保护剂制备布氏乳杆菌冻干粉剂的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及微生物技术领域，提供了一种用于布氏乳杆菌的冻干保护剂及利用冻干保护剂制备布氏乳杆菌冻干粉剂的方法，所述冻干保护剂，包括以下重量份的组分：乳糖5～20份、麦芽糖15～30份、脱脂乳15～25份、山梨醇5～10份、甘露醇5～10份。采用本发明冻干保护剂可以在冷冻干燥过程中保护微生物菌体不受影响，从而获得较高存活率的菌体。且本发明冻干保护剂原料来源广泛，为微生物制剂的制备提供思路。
Description
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，尤其涉及一种用于布氏乳杆菌的冻干保护剂及利用冻干保护剂制备布氏乳杆菌冻干粉剂的方法。
背景技术
布氏乳杆菌是乳酸杆菌属的微生物，属于异型发酵乳酸菌，布氏乳杆菌能够利用葡萄糖、阿拉伯糖、喝汤、半乳糖、蜜二糖等发酵产生DL型乳酸，常用于食品制造(泡菜、果蔬制品)、农业(生产有机复合菌肥)、青贮饲料、微生物饲料添加剂、污水净化等方面。在使用时为延长保存期限，常将其制备成微生物制剂，但是制成微生物制剂后会对微生物的存活率产生影响，随着储存期限的延长，微生物的活力会逐步降低。因此，如何在延长微生物储存期限的同时可以提高微生物存活率成为亟待解决的问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用于布氏乳杆菌的冻干保护剂及利用冻干保护剂制备布氏乳杆菌冻干粉剂的方法，采用本发明冻干保护剂能够在延长布氏乳杆菌保存期限的同时提高菌体的活力，减少冷冻干燥对布氏乳杆菌产生的影响。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种用于布氏乳杆菌的冻干保护剂，包括以下重量份的组分：乳糖5～20份、麦芽糖15～30份、脱脂乳15～25份、山梨醇5～10份、甘露醇5～10份。
本发明提供了利用上述冻干保护剂制备布氏乳杆菌冻干粉剂的方法，包括以下步骤：
(1)将活化后的布氏乳杆菌进行高密度培养得到布氏乳杆菌菌液；
(2)将所述布氏乳杆菌菌液离心得到菌泥；
(3)将所述菌泥与冻干保护剂混合后进行冷冻干燥得到布氏乳杆菌冻干粉剂。
优选的，步骤(1)中所述高密度培养时所用培养基为MRS液体培养基；
所述步骤(1)得到的布氏乳杆菌菌液的活菌数>109CFU/mL。
优选的，步骤(1)中所述高密度培养的条件为：接种量5～10％，培养温度35～38℃，搅拌速度100～200r/min；
所述高密度培养时培养液的pH值为4.5～5.2。
优选的，步骤(1)中所述高密度培养过程中对培养基进行补料一次，所述补料的时间为开始进行高密度培养后15～20h，所述补料量为原料液体积的10～15％。
优选的，步骤(2)中所述离心的温度为0～5℃，所述离心的转速为4000～6000r/min，所述离心的时间为5～15min。
优选的，步骤(3)中所述菌泥与冻干保护剂的比例为1g:1～2mL。
优选的，步骤(3)中所述冷冻干燥前进行预冻处理，所述预冻处理的温度为-90～-50℃，所述预冻处理的时间为1～3h。
优选的，步骤(3)中所述冷冻干燥的条件为：温度-90～-70℃，压力10～60pa，时间25～30h，冻干厚度5～10mm。
本发明还提供了利用上述方法制备得到的布氏乳杆菌冻干粉剂。
相比于现有技术，本发明的有益效果为：
本发明提供的冻干保护剂中糖类物质可以通过抑制菌体细胞膜的相变温度防止细胞过度脱水造成的“溶质损伤”从而起到保护作用，同时还可以消除美拉德反应，保护冻干制品不被氧化褐变。醇类物质具有多个羟基，在冻干过程中可以与这些磷酸基团形成氢键，保护细胞膜磷脂空间结构的稳定性。所有成分能够相互配合发生水合作用以减缓冰晶晶核的生长速度，从而起到低温保护作用，使布氏乳杆菌在冷冻干燥过程中依旧保持较高活性，延长其保存期限。
附图说明
图1为不同接种量对布氏乳杆菌的生长情况的影响；
图2为培养液不同pH值对布氏乳杆菌的生长情况的影响；
图3为不同转速对布氏乳杆菌的生长情况的影响；
图4为预冻条件对布氏乳杆菌冻干存活率的影响；
图5为布氏乳杆菌冻干时间和含水量以及存活率之间的关系；
图6为布氏乳杆菌冻干粉剂储存时间对存活率的影响。
具体实施方式
本发明提供了一种用于布氏乳杆菌的冻干保护剂，包括以下重量份的组分：乳糖5～20份、麦芽糖15～30份、脱脂乳15～25份、山梨醇5～10份、甘露醇5～10份。
在本发明中，按重量份数计，制备用于布氏乳杆菌的冻干保护剂包括乳糖5～20份，优选为8～18份，进一步优选为10～15份。
在本发明中，按重量份数计，制备用于布氏乳杆菌的冻干保护剂包括麦芽糖15～30份，优选为18～28份，进一步优选为20～25份。
在本发明中，按重量份数计，制备用于布氏乳杆菌的冻干保护剂包括脱脂乳15～25份，优选为17～23份，进一步优选为19～21份。
在本发明中，按重量份数计，制备用于布氏乳杆菌的冻干保护剂包括山梨醇5～10份，优选为6～9份，进一步优选为7～8份。
在本发明中，按重量份数计，制备用于布氏乳杆菌的冻干保护剂包括甘露醇5～10份，优选为6～9份，进一步优选为7～8份。
本发明提供了利用上述冻干保护剂制备布氏乳杆菌冻干粉剂的方法，包括以下步骤：
(1)将活化后的布氏乳杆菌进行高密度培养得到布氏乳杆菌菌液；
(2)将所述布氏乳杆菌菌液离心得到菌泥；
(3)将所述菌泥与冻干保护剂混合后进行冷冻干燥得到布氏乳杆菌冻干粉剂。
在本发明中，首先将活化后的布氏乳杆菌进行高密度培养得到布氏乳杆菌菌液，所述布氏乳杆菌购买自兰州大学益生菌与生物饲料研究中心。
在本发明中，所述活化的步骤为：将布氏乳杆菌经MRS液体培养基活化2～4次，优选为3次，然后划线接种到MRS固体培养皿中，放入35～40℃恒温培养箱下培养36～60h，优选为36～39℃恒温培养箱下培养40～55h，进一步优选为37～38℃恒温培养箱下培养45～50h。待其长出菌落后，挑取单个菌落涂片，然后进行革兰氏染色镜检，确定纯种无杂菌后，挑取纯种菌落接种到MRS液体培养基进行种子液培养。
在本发明中，所述高密度培养时所用培养基为MRS液体培养基；所述高密度培养的条件为：接种量5～10％，优选为6～9％，进一步优选为7～8％；培养温度35～38℃，优选为35.5～37.5℃，进一步优选为36～37℃；搅拌速度100～200r/min，优选为120～180r/min，进一步优选为140～160r/min；所述高密度培养时培养液的pH值为4.5～5.2，优选为4.6～5.0，进一步优选为4.7～4.9。
在本发明中，经过高密度培养后得到的布氏乳杆菌菌液的活菌数>109CFU/mL，优选为1.2×109～1.8×109CFU/mL，进一步优选为1.4×109～1.6×109CFU/mL。
在本发明中，所述高密度培养过程中对培养基进行补料一次，所述补料的时间为开始进行高密度培养后15～20h，优选为16～19h，进一步优选为17～18h；所述补料量为原料液体积的10～15％，优选为11～14％，进一步优选为12～13％。
在本发明中，将所述布氏乳杆菌菌液离心得到菌泥，所述离心的温度为0～5℃，优选为1～4℃，进一步优选为2～3℃；所述离心的转速为4000～6000r/min，优选为4500～5500r/min，进一步优选为4800～5200r/min；所述离心的时间为5～15min，优选为7～13min，进一步优选为8～12min。
在本发明中，将所述菌泥与冻干保护剂混合后进行冷冻干燥得到布氏乳杆菌冻干粉剂，所述菌泥与冻干保护剂的比例为1g:1～2mL，优选为1g:1.2～1.8mL，进一步优选为1g:1.4～1.6mL。
在本发明中，所述冷冻干燥前进行预冻处理，所述预冻处理的温度为-90～-50℃，优选为-80～-60℃，进一步优选为-75～-65℃；所述预冻处理的时间为1～3h，优选为1.5～2.5h，进一步优选为2h。
在本发明中，所述冷冻干燥的条件为：温度-90～-70℃，优选为-85～-75℃，进一步优选为-82～-78℃；压力10～60pa，优选为20～50pa，进一步优选为30～40pa；时间25～30h，优选为26～29h，进一步优选为27～28h；冻干厚度5～10mm，优选为6～9mm，进一步优选为7～8mm。
本发明还提供了利用上述方法制备得到的布氏乳杆菌冻干粉剂。
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
本实施例提供了一种用于布氏乳杆菌的冻干保护剂，包括以下重量份的组分：乳糖10份、麦芽糖20份、脱脂乳20份、山梨醇6份、甘露醇6份。
实施例2
本实施例提供了一种用于布氏乳杆菌的冻干保护剂，包括以下重量份的组分：乳糖10份、麦芽糖30份、脱脂乳24份、山梨醇10份、甘露醇10份。
实施例3
本实施例提供了一种用于布氏乳杆菌的冻干保护剂，包括以下重量份的组分：乳糖20份、麦芽糖20份、脱脂乳20份、山梨醇10份、甘露醇10份。
实施例4
本实施例提供了一种利用实施例1冻干保护剂制备布氏乳杆菌冻干粉剂的方法，包括以下步骤：
(1)将布氏乳杆菌经MRS液体培养基活化3次，划线接种到MRS固体培养皿中，放入37℃恒温培养箱下培养48h，待其长出菌落后，挑取单个菌落涂片，然后进行革兰氏染色镜检，确定纯种无杂菌后，挑取纯种菌落接种到MRS液体培养基中进行扩大培养得到种子液。具体扩大培养的方法为：挑取纯种菌落接种到2mL MRS液体培养基中，37℃条件下厌氧发酵培养8～12h；将发酵好的菌液按照1％的接种量接种到100mL MRS液体培养基中，37℃条件下厌氧发酵培养8～12h；最后按照10％的接种量扩大到1000mL MRS液体培养基中，37℃条件下厌氧发酵培养8～12h，得到种子液。将种子液以7％的接种量重新接种到18L的MRS液体培养基中进行高密度培养，控制培养温度为37℃，搅拌速度150r/min，培养液的pH值为4.6，在开始进行高密度培养后的第16h对培养基进行补料一次，补料量为1L，当布氏乳杆菌菌液的浓度达到1010CFU/mL时停止培养得到布氏乳杆菌菌液。
(2)将上述布氏乳杆菌菌液在4℃条件下5000r/min离心10min得到菌泥。
(3)将实施例1的冻干保护剂溶解在200份无菌水中，将上述菌泥与冻干保护剂以1g:1mL的比例混合，将菌悬液以7mm的厚度进行冻干，先在-80℃条件下预冻2h，然后在-80℃，压力30pa的条件下冻干27h，即得到布氏乳杆菌冻干粉剂。
实施例5
本实施例提供了一种利用实施例1冻干保护剂制备布氏乳杆菌冻干粉剂的方法，包括以下步骤：
(1)将布氏乳杆菌经MRS液体培养基活化3次，划线接种到MRS固体培养皿中，放入37℃恒温培养箱下培养48h，待其长出菌落后，挑取单个菌落涂片，然后进行革兰氏染色镜检，确定纯种无杂菌后，挑取纯种菌落接种到MRS液体培养基中进行扩大培养得到种子液。具体扩大培养的方法为：挑取纯种菌落接种到2mL MRS液体培养基中，37℃条件下厌氧发酵培养8～12h；将发酵好的菌液按照1％的接种量接种到100mL MRS液体培养基中，37℃条件下厌氧发酵培养8～12h；最后按照10％的接种量扩大到1000mL MRS液体培养基中，37℃条件下厌氧发酵培养8～12h，得到种子液。将种子液以5％的接种量重新接种到18L的MRS液体培养基中进行高密度培养，控制培养温度为38℃，搅拌速度100r/min，培养液的pH值为4.9，在开始进行高密度培养后的第15h对培养基进行补料一次，补料量为2L，当布氏乳杆菌菌液的浓度达到1010CFU/mL时停止培养得到布氏乳杆菌菌液。
(2)将上述布氏乳杆菌菌液在4℃条件下6000r/min离心10min得到菌泥。
(3)将实施例2的冻干保护剂溶解在200份无菌水中，将上述菌泥与冻干保护剂以1g:1.5mL的比例混合，将菌悬液以10mm的厚度进行冻干，先在-70℃条件下预冻1h，然后在-85℃，压力10pa的条件下冻干25h，即得到布氏乳杆菌冻干粉剂。
实施例6
本实施例提供了一种利用实施例1冻干保护剂制备布氏乳杆菌冻干粉剂的方法，包括以下步骤：
(1)将布氏乳杆菌经MRS液体培养基活化3次，划线接种到MRS固体培养皿中，放入37℃恒温培养箱下培养48h，待其长出菌落后，挑取单个菌落涂片，然后进行革兰氏染色镜检，确定纯种无杂菌后，挑取纯种菌落接种到MRS液体培养基中进行扩大培养得到种子液。具体扩大培养的方法为：挑取纯种菌落接种到2mL MRS液体培养基中，37℃条件下厌氧发酵培养8～12h；将发酵好的菌液按照1％的接种量接种到100mL MRS液体培养基中，37℃条件下厌氧发酵培养8～12h；最后按照10％的接种量扩大到1000mL MRS液体培养基中，37℃条件下厌氧发酵培养8～12h，得到种子液。将种子液以9％的接种量重新接种到18L的MRS液体培养基中进行高密度培养，控制培养温度为35℃，搅拌速度200r/min，培养液的pH值为5.2，在开始进行高密度培养后的第18h对培养基进行补料一次，补料量为3L，当布氏乳杆菌菌液的浓度达到109CFU/mL时停止培养得到布氏乳杆菌菌液。
(2)将上述布氏乳杆菌菌液在4℃条件下5000r/min离心15min得到菌泥。
(3)将实施例3的冻干保护剂溶解在200份无菌水中，将上述菌泥与冻干保护剂以1g:2mL的比例混合，将菌悬液以6mm的厚度进行冻干，先在-60℃条件下预冻3h，然后在-75℃，压力20pa的条件下冻干30h，即得到布氏乳杆菌冻干粉剂。
对比例1
本对比例与实施例4相比区别在于，步骤(1)中种子液以3％的体积比接种到18L的MRS培养液中，其余操作步骤与参数同实施例4相同。
对比例2
本对比例与实施例4相比区别在于，步骤(1)中高密度培养时培养液的pH值为4.3，其余操作步骤与参数同实施例4相同。
对比例3
本对比例与实施例4相比区别在于，步骤(1)中高密度培养时培养液的pH值为5.5，其余操作步骤与参数同实施例4相同。
对比例4
本对比例与实施例4相比区别在于，步骤(1)中高密度培养时培养液的pH值为5.7，其余操作步骤与参数同实施例4相同。
对比例5
本对比例与实施例4相比区别在于，步骤(1)中高密度培养时培养液的pH值为5.9，其余操作步骤与参数同实施例4相同。
对比例6
本对比例与实施例4相比区别在于，步骤(1)中高密度培养时培养液的pH值为6.2，其余操作步骤与参数同实施例4相同。
对比例7
本对比例与实施例4相比区别在于，步骤(1)中高密度培养时搅拌速度为50r/min，其余操作步骤与参数同实施例4相同。
对比例8
本对比例与实施例4相比区别在于，步骤(2)中离心的条件为4℃，10000r/min离心5min，其余操作步骤与参数同实施例4相同。
对比例9
本对比例与实施例4相比区别在于，步骤(2)中离心的条件为4℃，12000r/min离心15min，其余操作步骤与参数同实施例4相同。
对比例10
本对比例与实施例4相比区别在于，步骤(3)中所用冻干保护剂由以下重量份的组分制得：乳糖20份、麦芽糖10份、脱脂乳20份、山梨醇10份、甘露醇2份，其余操作步骤与参数同实施例4相同。
对比例11
本对比例与实施例4相比区别在于，步骤(3)中所用冻干保护剂由以下重量份的组分制得：乳糖30份、麦芽糖20份、脱脂乳24份、山梨醇6份、甘露醇2份，其余操作步骤与参数同实施例4相同。
对比例12
本对比例与实施例4相比区别在于，步骤(3)中所用冻干保护剂由以下重量份的组分制得：乳糖20份、麦芽糖20份、脱脂乳24份、山梨醇2份、甘露醇6份，其余操作步骤与参数同实施例4相同。
对比例13
本对比例与实施例4相比区别在于，步骤(3)中所用冻干保护剂由以下重量份的组分制得：乳糖20份、麦芽糖30份、脱脂乳24份、山梨醇2份、甘露醇2份，其余操作步骤与参数同实施例4相同。
对比例14
本对比例与实施例4相比区别在于，步骤(3)中所用冻干保护剂由以下重量份的组分制得：乳糖20份、麦芽糖10份、脱脂乳16份、山梨醇6份、甘露醇6份，其余操作步骤与参数同实施例4相同。
对比例15
本对比例与实施例4相比区别在于，步骤(3)中所用冻干保护剂由以下重量份的组分制得：乳糖10份、麦芽糖30份、脱脂乳20份、山梨醇6份、甘露醇2份，其余操作步骤与参数同实施例4相同。
对比例16
本对比例与实施例4相比区别在于，步骤(3)中所用冻干保护剂由以下重量份的组分制得：乳糖10份、麦芽糖10份、脱脂乳16份、山梨醇2份、甘露醇2份，其余操作步骤与参数同实施例4相同。
对比例17
本对比例与实施例4相比区别在于，步骤(3)中，菌泥与保护剂的混合比例为1g:2.5mL，其余操作步骤与参数同实施例4相同。
对比例18
本对比例与实施例4相比区别在于，步骤(3)中，菌泥与保护剂的混合比例为1g:3mL，其余操作步骤与参数同实施例4相同。
对比例19
本对比例与实施例4相比区别在于，步骤(3)中，预冻处理的温度为-20℃，预冻处理的时间为2h，其余操作步骤与参数同实施例4相同。
实验例1
本实验例探究了制备布氏乳杆菌冻干粉剂时的参数对布氏乳杆菌活性的影响。
(1)种子液接种量对布氏乳杆菌活菌数的影响
实施例4～6与对比例1的结果图见图1，由图1可知，接种量对布氏乳杆菌活菌数有显著影响，随着接种量的增加，布氏乳杆菌的活菌数呈现一个先上升再下降的趋势。
(2)高密度培养过程中的pH值对布氏乳杆菌增殖的影响
实施例4～6和对比例2～6的结果图见图2，由图2可知，培养液的pH值对布氏乳杆菌生长状况有显著影响，pH值过高或过低都不利于布氏乳杆菌的生长。
(3)高密度培养过程中搅拌速度对布氏乳杆菌生长的影响
实施例4～6与对比例7的结果图见图3，由图3可知，搅拌速度对布氏乳杆菌活菌数有显著影响，适当的搅拌可以促进菌体细胞与培养液的充分接触，对菌体生长有显著的促进作用。
(4)离心条件对布氏乳杆菌生长的影响
实施例4～6与对比例8～9的结果见表1，其中，待离心后倒出上清液，对其进行梯度稀释涂布；向管中添加和上清液等体积生理盐水并与管中剩余菌泥混合，对其进行梯度稀释涂布，待培养后分别检测各自活菌数。根据以上数据计算离心上清液菌体细胞损失率和离心后菌体细胞存活率(收得率)。
离心损失率％＝上清液菌数(cfu/ml)/初始活菌数(cfu/ml)×100％；
离心收得率％＝沉淀细胞活菌数(cfu/ml)/初始活菌数(cfu/ml)×100％。
由表1可知，随着离心转速的增加以及离心时间的延长，上清液中残存的菌体活细胞数减少，细胞损失率也随之降低。但离心转速增加和离心时间延长的同时，产生的机械力也会增加，此时部分菌体细胞在机械力作用下受到损伤，致使离心沉淀下来的菌体有一部分已经死亡。采用本发明离心条件能够减少布氏乳杆菌菌体细胞损失，提高菌体细胞得率。
表1.不同离心条件对布氏乳杆菌收集情况的影响
(5)保护剂中各组分配比对布氏乳杆菌冻干存活率的影响
实施例4～6与对比例10～16的结果见表2，由表2可知，保护剂中各组分配比对布氏乳杆菌冻干存活率有显著影响，采用本发明保护剂能够提高布氏乳杆菌冻干存活率。
表2.保护剂中各组分配比对布氏乳杆菌冻干存活率的影响
(6)菌泥与保护剂的比例对布氏乳杆菌冻干存活率的影响
实施例4～6与对比例17～18的结果见表3，由表3可知，菌泥与保护剂的比例对布氏乳杆菌冻干存活率有显著影响，合适的菌泥与保护剂的比例关系到细胞表面的被覆盖面积程度并对细胞中蛋白质结构具有维持作用，这些都会影响到冻干过程中细胞的暴露区域程度及细胞通透性，从而影响存活率。采用本发明菌泥与保护剂的比例能够提高布氏乳杆菌冻干存活率。
表3.菌泥与保护剂的比例对布氏乳杆菌冻干存活率的影响
(7)预冻条件对布氏乳杆菌冻干存活率的影响
实施例4与对比例19的结果见图4，预冻的目的是为了将菌悬液中的自由水固化，如果自由水没有得到完全的固化，冻干时候由于真空度的急剧下降，物料中气体的迅速逸出会引起“沸腾”现象，造成制品损失。而当物料冻结完好时，菌悬液中的自由水升华以后，细胞之间的骨架空隙可以使产品具有与干燥前相同的形态，防止起泡、皱缩和溶质移动等不可逆现象的发生。由图4可知，采用本发明预冻条件能够显著提高布氏乳杆菌的冻干存活率。
(8)冻干时间对布氏乳杆菌冻干存活率的影响
在微生物储存期间，水分是影响其稳定性的关键因素。当冻干发酵剂的含水量为1.5～3.0％时，可以获得较高的存活率以及较长时间的储存期。如果含水量＞3.0％，发酵剂贮藏稳定性会随着水分的增大而降低；而当含水量＜1.5％时，由于干燥过度，菌体细胞严重脱水，细胞的冻干死亡率则被提高。冻干开始直至第15h以前，目测物料未完全干燥，无法确定冻干时间对细胞存活的影响。以实施例4的制备方法为例，从15h开始取样，测定冻干时间和活菌数以及物料含水量之间的动态变化情况。结果见图5，由图5可知，在干燥前期，物料含水量在急剧下降，大部分的水分随着升华作用从物料内部逸出，这段时间主要除去的是胞内“结合水”，干燥后期，水分下降趋势缓慢，主要是细胞内“自由水”比“结合水”更难被升华掉，所以花费时间更久一些。同时可以看出，随着干燥时间的延长和水分的散失，冻干制品的活菌数也呈现出下降的趋势，直到在解吸干燥快完成时才趋于稳定。
实验例2
本实施例探究了储藏时间对布氏乳杆菌冻干粉剂稳定性的影响，将实施例4制备得到的冻干粉剂分别放置在4℃和常温两种温度下保藏，每隔15d进行活菌测定。结果见图6，由图6可知，本发明制备得到的布氏乳杆菌冻干粉剂在4℃下储存60d后布氏乳杆菌的活菌数依然能够达到70％以上，说明本发明布氏乳杆菌冻干粉剂能够延长布氏乳杆菌的保存期限。
由以上实施例可知，本发明提供了一种用于布氏乳杆菌的冻干保护剂及利用冻干保护剂制备布氏乳杆菌冻干粉剂的方法，采用本发明冻干保护剂能够在延长布氏乳杆菌保存期限的同时提高菌体的活力，减少冷冻干燥对布氏乳杆菌产生的影响。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种用于布氏乳杆菌的冻干保护剂，其特征在于，由以下重量份的组分组成：乳糖5～20份、麦芽糖15～30份、脱脂乳15～25份、山梨醇5～10份、甘露醇5～10份。
2.利用权利要求1所述的冻干保护剂制备布氏乳杆菌冻干粉剂的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将活化后的布氏乳杆菌进行高密度培养得到布氏乳杆菌菌液；
(2)将所述布氏乳杆菌菌液离心得到菌泥；
(3)将所述菌泥与冻干保护剂混合后进行冷冻干燥得到布氏乳杆菌冻干粉剂。
3.根据权利要求2所述的制备布氏乳杆菌冻干粉剂的方法，其特征在于，步骤(1)中所述高密度培养时所用培养基为MRS液体培养基；
所述步骤(1)得到的布氏乳杆菌菌液的活菌数>109CFU/mL。
4.根据权利要求2所述的制备布氏乳杆菌冻干粉剂的方法，其特征在于，步骤(1)中所述高密度培养的条件为：接种量5～10%，培养温度35～38℃，搅拌速度100～200r/min；
所述高密度培养时培养液的pH值为4.5～5.2。
5.根据权利要求4所述的制备布氏乳杆菌冻干粉剂的方法，其特征在于，步骤(1)中所述高密度培养过程中对培养基进行补料一次，所述补料的时间为开始进行高密度培养后15～20h，所述补料量为原料液体积的10～15%。
6.根据权利要求2所述的制备布氏乳杆菌冻干粉剂的方法，其特征在于，步骤(2)中所述离心的温度为0～5℃，所述离心的转速为4000～6000r/min，所述离心的时间为5～15min。
7.根据权利要求2所述的制备布氏乳杆菌冻干粉剂的方法，其特征在于，步骤(3)中所述菌泥与冻干保护剂的比例为1g:1～2mL。
8.根据权利要求2所述的制备布氏乳杆菌冻干粉剂的方法，其特征在于，步骤(3)中所述冷冻干燥前进行预冻处理，所述预冻处理的温度为-90～-50℃，所述预冻处理的时间为1～3h。
9.根据权利要求2或8所述的制备布氏乳杆菌冻干粉剂的方法，其特征在于，步骤(3)中所述冷冻干燥的条件为：温度-90～-70℃，压力10～60pa，时间25～30h，冻干厚度5～10mm。
10.利用权利要求2～9任一项所述方法制备得到的布氏乳杆菌冻干粉剂。
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