CN114894926A - 基于干血纸片法的胆汁酸检测方法 - Google Patents
基于干血纸片法的胆汁酸检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114894926A CN114894926A CN202210456938.9A CN202210456938A CN114894926A CN 114894926 A CN114894926 A CN 114894926A CN 202210456938 A CN202210456938 A CN 202210456938A CN 114894926 A CN114894926 A CN 114894926A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- blood
- sample
- paper sheet
- bile acid
- dry
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 title claims abstract description 103
- 239000008280 blood Substances 0.000 title claims abstract description 103
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 48
- 239000003613 bile acid Substances 0.000 title claims abstract description 45
- HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N (2s,4r)-4-[(3r,5s,6r,7r,8s,9s,10s,13r,14s,17r)-6-ethyl-3,7-dihydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]-2-methylpentanoic acid Chemical compound C([C@@]12C)C[C@@H](O)C[C@H]1[C@@H](CC)[C@@H](O)[C@@H]1[C@@H]2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)C[C@H](C)C(O)=O)CC[C@H]21 HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N 0.000 title claims abstract description 40
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 40
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 31
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims abstract description 21
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims abstract description 16
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims abstract description 16
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 15
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 14
- 238000007789 sealing Methods 0.000 claims abstract description 12
- 239000012224 working solution Substances 0.000 claims abstract description 12
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 239000012716 precipitator Substances 0.000 claims abstract description 8
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 claims abstract description 6
- 238000001294 liquid chromatography-tandem mass spectrometry Methods 0.000 claims abstract description 4
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims abstract description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 66
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- RUDATBOHQWOJDD-UHFFFAOYSA-N (3beta,5beta,7alpha)-3,7-Dihydroxycholan-24-oic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)CC2 RUDATBOHQWOJDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- GHCZAUBVMUEKKP-UHFFFAOYSA-N ursodeoxycholic acid glycine-conjugate Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(=O)NCC(O)=O)C)C1(C)CC2 GHCZAUBVMUEKKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- RUDATBOHQWOJDD-BSWAIDMHSA-N chenodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 RUDATBOHQWOJDD-BSWAIDMHSA-N 0.000 claims description 14
- GHCZAUBVMUEKKP-GYPHWSFCSA-N glycochenodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCC(O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 GHCZAUBVMUEKKP-GYPHWSFCSA-N 0.000 claims description 14
- WVULKSPCQVQLCU-BUXLTGKBSA-N glycodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 WVULKSPCQVQLCU-BUXLTGKBSA-N 0.000 claims description 14
- RUDATBOHQWOJDD-UZVSRGJWSA-N ursodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 RUDATBOHQWOJDD-UZVSRGJWSA-N 0.000 claims description 13
- 239000007789 gas Substances 0.000 claims description 12
- 102100039215 Guanine nucleotide-binding protein G(t) subunit alpha-3 Human genes 0.000 claims description 10
- 101000888145 Homo sapiens Guanine nucleotide-binding protein G(t) subunit alpha-3 Proteins 0.000 claims description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 10
- GHCZAUBVMUEKKP-XROMFQGDSA-N glycoursodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCC(O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 GHCZAUBVMUEKKP-XROMFQGDSA-N 0.000 claims description 9
- KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N deoxycholic acid Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000000889 atomisation Methods 0.000 claims description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 6
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000000861 blow drying Methods 0.000 claims description 5
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 5
- 238000004080 punching Methods 0.000 claims description 5
- BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N (3alpha,5alpha,7alpha,12alpha)-3,7,12-trihydroxy-cholan-24-oic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- GHCZAUBVMUEKKP-NHIHLBCISA-N 2-[[(4R)-4-[(3R,5S,7S,10S,13R,17R)-3,7-Dihydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]pentanoyl]amino]acetic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)C1C2C2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCC(O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 GHCZAUBVMUEKKP-NHIHLBCISA-N 0.000 claims description 4
- 239000004380 Cholic acid Substances 0.000 claims description 4
- 108010015031 Glycochenodeoxycholic Acid Proteins 0.000 claims description 4
- 108010007979 Glycocholic Acid Proteins 0.000 claims description 4
- 108010035713 Glycodeoxycholic Acid Proteins 0.000 claims description 4
- WVULKSPCQVQLCU-UHFFFAOYSA-N Glycodeoxycholic acid Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(=O)NCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 WVULKSPCQVQLCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- RFDAIACWWDREDC-UHFFFAOYSA-N Na salt-Glycocholic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(=O)NCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 RFDAIACWWDREDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229960001091 chenodeoxycholic acid Drugs 0.000 claims description 4
- BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N cholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N 0.000 claims description 4
- 229960002471 cholic acid Drugs 0.000 claims description 4
- 235000019416 cholic acid Nutrition 0.000 claims description 4
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 claims description 4
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 claims description 4
- RFDAIACWWDREDC-FRVQLJSFSA-N glycocholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 RFDAIACWWDREDC-FRVQLJSFSA-N 0.000 claims description 4
- 229940099347 glycocholic acid Drugs 0.000 claims description 4
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 4
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 4
- 229960001661 ursodiol Drugs 0.000 claims description 4
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 3
- 229910001873 dinitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 3
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 3
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 claims description 3
- 238000005507 spraying Methods 0.000 claims description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 3
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 claims description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 abstract description 3
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 9
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 8
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 6
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 3
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 2
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 2
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 2
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 2
- 238000004808 supercritical fluid chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 2
- RUDATBOHQWOJDD-PSTGXAJBSA-N (4r)-4-[(3r,5r,7r,8r,9s,10s,13r,14s,17r)-2,2,4,4-tetradeuterio-3,7-dihydroxy-10,13-dimethyl-3,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]pentanoic acid Chemical compound C([C@@H]12)C[C@]3(C)[C@@H]([C@H](C)CCC(O)=O)CC[C@H]3[C@@H]1[C@H](O)C[C@H]1[C@]2(C)CC([2H])([2H])[C@@H](O)C1([2H])[2H] RUDATBOHQWOJDD-PSTGXAJBSA-N 0.000 description 1
- GHCZAUBVMUEKKP-PKIQRPOYSA-N 2-[[(4R)-4-[(3R,5S,7R,8R,9S,10S,13R,14S,17R)-2,2,4,4-tetradeuterio-3,7-dihydroxy-10,13-dimethyl-3,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]pentanoyl]amino]acetic acid Chemical compound [2H]C1([2H])C[C@]2(C)[C@H]3CC[C@]4(C)[C@H](CC[C@H]4[C@@H]3[C@H](O)C[C@@H]2C([2H])([2H])[C@@H]1O)[C@H](C)CCC(=O)NCC(O)=O GHCZAUBVMUEKKP-PKIQRPOYSA-N 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000298 Cellophane Polymers 0.000 description 1
- BHQCQFFYRZLCQQ-YFEOEUIKSA-N Cholic acid-2,2,4,4-d4 Chemical compound C([C@@H]12)[C@H](O)[C@]3(C)[C@@H]([C@H](C)CCC(O)=O)CC[C@H]3[C@@H]1[C@H](O)C[C@H]1[C@]2(C)CC([2H])([2H])[C@@H](O)C1([2H])[2H] BHQCQFFYRZLCQQ-YFEOEUIKSA-N 0.000 description 1
- 208000018522 Gastrointestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- RUDATBOHQWOJDD-UQDNBFFBSA-N Ursodeoxycholic Acid-D4 Chemical compound [2H]C1([2H])C[C@]2(C)C3CC[C@]4(C)[C@H](CCC4[C@@H]3[C@@H](O)C[C@@H]2C([2H])([2H])[C@@H]1O)[C@H](C)CCC(O)=O RUDATBOHQWOJDD-UQDNBFFBSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 1
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000001112 coagulating effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-FCSCGBJGSA-N deoxycholic acid-2,2,4,4-d4 Chemical compound C([C@@H]12)[C@H](O)[C@]3(C)[C@@H]([C@H](C)CCC(O)=O)CC[C@H]3[C@@H]1CC[C@H]1[C@]2(C)CC([2H])([2H])[C@@H](O)C1([2H])[2H] KXGVEGMKQFWNSR-FCSCGBJGSA-N 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 239000002274 desiccant Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 208000010643 digestive system disease Diseases 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000001952 enzyme assay Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 208000018685 gastrointestinal system disease Diseases 0.000 description 1
- RFDAIACWWDREDC-WYRWIKLOSA-N glycocholic acid-d4 Chemical compound [2H]C1(C[C@@]2(C3CC([C@]4(C(C3C(CC2C(C1O)([2H])[2H])O)CCC4C(C)CCC(=O)NCC(=O)O)C)O)C)[2H] RFDAIACWWDREDC-WYRWIKLOSA-N 0.000 description 1
- WVULKSPCQVQLCU-JHVXYEQYSA-N glycodeoxycholic acid-2,2,4,4-d4 Chemical compound C([C@@H]12)[C@H](O)[C@]3(C)[C@@H]([C@H](C)CCC(=O)NCC(O)=O)CC[C@H]3[C@@H]1CC[C@H]1[C@]2(C)CC([2H])([2H])[C@@H](O)C1([2H])[2H] WVULKSPCQVQLCU-JHVXYEQYSA-N 0.000 description 1
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007269 microbial metabolism Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000010413 mother solution Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 102000037983 regulatory factors Human genes 0.000 description 1
- 108091008025 regulatory factors Proteins 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000005464 sample preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000004885 tandem mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/2813—Producing thin layers of samples on a substrate, e.g. smearing, spinning-on
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
- G01N30/14—Preparation by elimination of some components
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
- G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
- G01N30/34—Control of physical parameters of the fluid carrier of fluid composition, e.g. gradient
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
- G01N30/72—Mass spectrometers
- G01N30/7233—Mass spectrometers interfaced to liquid or supercritical fluid chromatograph
- G01N30/724—Nebulising, aerosol formation or ionisation
- G01N30/7266—Nebulising, aerosol formation or ionisation by electric field, e.g. electrospray
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明公开了一种基于干血纸片法的胆汁酸检测方法，包括以下步骤：1)将待测血样制备成干血斑纸片样本；2)样本前处理：2‑1)从干血斑纸片样本上取下血斑，将血斑与沉淀剂、内标工作液混合，涡旋匀混然后密封；2‑2)于20‑30℃的条件下超声水浴孵化；2‑3)冷冻，再于4‑10℃冷冻离心，取上清液氮气下吹干；2‑4)用复溶液复溶，涡旋震荡；2‑5)离心，取上清液作为测试样本；3)采用液相色谱‑串联质谱的方法对测试样本进行检测。本发明提供的方法实现了基于干血纸片法的胆汁酸浓度定量检测，该方法需求较少的血量，可方便血样采集、存储运输，且具有较高的精密度和准确度，为胆汁酸的定量检测提供了一种新的策略。
Description
技术领域
本发明涉及体外检测领域，特别涉及一种基于干血纸片法的胆汁酸检测方法。
背景技术
胆汁酸是人体生活活动的重要调节因素，帮助机体的脂质吸收、充当信号分子、并且是宿主和肠道微生物代谢之间的关键中间分子。人体循环胆汁酸池中的扰动会影响代谢和免疫功能失调，导致炎症和肝肠疾病，疾病的发展也会影响胆汁酸。因此，胆汁酸含量变化能提供重要信息。但胆汁酸具有不同的化学结构，并存在于各种复杂的生物基质(胆汁、血浆、尿液、粪便)中。因此，当前需要先进的分析方法来鉴定和准确定量单个胆汁酸。
在过去的十年中，已经报道了使用不同平台的几种方法用于胆汁酸分离、检测和定量。这些方法包括简单而稳健的技术，如酶测定、酶联免疫吸附测定(ELISA)、薄层色谱(TLC)、高效液相色谱HPLC)、气相色谱(GC)和超临界流体色谱(SFC)。最近，使用高通量平台的几种敏感方法包括GC结合质谱(GC-MS)、液相色谱-质谱(LC-MS)、SFC质谱(SFC-MS)对胆汁酸分子进行表征，还开发了光谱学方法核磁共振(NMR)来检测胆汁酸。
其中，HPLC或超高压液相色谱(UPLC)与MS结合是胆汁酸分析最灵敏的分析工具，大多数可用的HPLC或UPLC方法使用反相色谱法，其允许更高的流速和柱尺寸选择，与GC-MS和HPLC相比，LC-MS具有快速样品制备方法，无需衍生化。
相比于全血或血清检测胆汁酸，干血纸片法(dried blood spot，DBS)，即将全血样品收集在卡纸上，在血样采集方法上比传统方法有一定的优势。它需求较少的血量，可方便血样采集、存储运输。但现在未见公开将干血纸片法用于胆汁酸检测的可靠方案。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术中的不足，提供一种基于干血纸片法的胆汁酸检测方法。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种基于干血纸片法的胆汁酸检测方法，包括以下步骤：
1)将待测血样制备成干血斑纸片样本；
2)样本前处理：
2-1)从干血斑纸片样本上取下血斑，将血斑与沉淀剂、内标工作液混合，涡旋匀混然后密封；
2-2)于20-30℃的条件下超声水浴孵化；
2-3)冷冻，再于4-10℃冷冻离心，取上清液氮气下吹干；
2-4)用复溶液复溶，涡旋震荡；
2-5)离心，取上清液作为测试样本；
3)采用液相色谱-串联质谱的方法对测试样本进行检测，通过标准曲线计算得到待测血样中的胆汁酸含量。
优选的是，其中，所述胆汁酸至少包括胆酸CA、脱氧胆酸DCA、鹅脱氧胆酸CDCA、熊脱氧胆酸UDCA、甘氨胆酸GCA、甘氨脱氧胆酸GDCA、甘氨鹅脱氧胆酸GCDCA、甘氨熊脱氧胆酸GUDCA中的一种或多种。
优选的是，所述步骤1)具体包括：吸取待测血样与乙二胺四乙酸混合，然后滴加到滤纸上，室温下自然干燥，得到干血斑纸片样本，密封保存。
优选的是，其中，所述滤纸为Whatman903滤纸。
优选的是，所述步骤2)具体包括：
2-1)使用打孔器从干血斑纸片样本上的血点位置打孔取具有血斑的5-20mm直径的圆盘纸片，然后从圆盘纸片上取下血斑，将血斑与250-1000μL沉淀剂、5-20μL内标工作液混合，涡旋匀混然后密封；
2-2)于20-30℃的条件下超声水浴孵化；
2-3)于-20℃冷冻10-20min，再于4-10℃冷冻离心5-20min，取200-800μL上清液于40℃下氮气吹干；
2-4)用50-200μL复溶液复溶，涡旋震荡2-10min；
2-5)于4℃下7000-28000转离心5-20min，取50-200μL上清液作为测试样本。
优选的是，所述步骤2)具体包括：
2-1)使用打孔器从干血斑纸片样本上的血点位置打孔取具有血斑的8mm直径的圆盘纸片，然后从圆盘纸片上取下血斑，将血斑与500μL沉淀剂、10μL内标工作液混合，涡旋匀混然后密封；
2-2)于20-30℃的条件下超声水浴孵化；
2-3)于-20℃冷冻10-20min，再于4-10℃冷冻离心10min，取400μL上清液于40℃下氮气吹干；
2-4)用100μL复溶液复溶，涡旋震荡5min；
2-5)于4℃下14000转离心10min，取100μL上清液作为测试样本。
优选的是，其中，所述沉淀剂为甲醇和乙腈的混合液，且甲醇和乙腈的体积比为3：7。
优选的是，其中，所述复溶液为乙腈和水的混合液，且乙腈和水的体积比为1：1。
优选的是，所述步骤3)中，液相色谱条件为：
流动相A为体积分数0.1％的氨水水溶液；流动相B为乙腈溶液；洗针液为体积比乙腈：水＝1:1的乙腈水溶液；色谱柱为Kinetex C18；柱温为50℃；检测时间为10min；进样量为10μL；梯度洗脱条件：0-1.5min，15％B，1.5-1.1min，20％B，1.1-4.5min，25％B，4.5-4.6min，40％B，4.6-5min，30％B，5.1-5.2min，20％B，5.2-6min，20％B；流速0.6mL/min。
优选的是，所述步骤3)中，质谱条件为：负离子模式，采用ESI源，碰撞气20psi，气帘气20psi，雾化气35psi，辅助加热气30psi，喷雾电压-5500V，雾化温度550℃。
本发明的有益效果是：本发明提供的方法实现了基于干血纸片法的胆汁酸浓度定量检测，该方法需求较少的血量，可方便血样采集、存储运输，且具有较高的精密度和准确度，为胆汁酸的定量检测提供了一种新的策略。
附图说明
图1为本实施例中获得的胆汁酸标品的峰形图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
应当理解，本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不排除一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。
实施例1
1、试剂来源说明
标准品(胆酸CA、脱氧胆酸DCA、鹅脱氧胆酸CDCA、熊脱氧胆酸UDCA、甘氨胆酸GCA、甘氨脱氧胆酸GDCA、甘氨鹅脱氧胆酸GCDCA、甘氨熊脱氧胆酸GUDCA均购自上海甄准生物科技有限公司；
内标品(胆酸-d4 CA-d4、脱氧胆酸-d4 DCA-d4、鹅脱氧胆酸-d4 CDCA-d4、熊脱氧胆酸-d4 UDCA-d4、甘氨胆酸-d4 GCA-d4、甘氨脱氧胆酸-d4 GDCA-d4、甘氨鹅脱氧胆酸-d4GCDCA-d4、甘氨熊脱氧胆酸-d4 GUDCA-d4均购自上海谱芬生物科技有限公司；
甲醇、乙腈购买于天津康科德公司。氨水购自于国药集团化学试剂有限公司，高纯水是符合国际GB/T 6682-2008的一级水。
2、试剂配制
(1)配制胆汁酸的标准品工作液SW组，精确称量1mg标准品，使用1mL甲醇充分溶解，得到1mg/mL母液，经稀释后得到SW组，浓度如下表1：
表1
(2)生物标准曲线样品的制备
精密吸取90μL的空白基质(吸附处理的人全血)，加入10μL标准品的基础工作溶液SW1-SW8，涡旋混匀，经前处理过程，制备得到生物标准曲线样品，浓度如下表2：
表2
| 胆汁酸名 | 生物标准曲线浓度线性范围(ng/mL) |
| CA | 5-1000 |
| DCA | 5-1000 |
| CDCA | 10-1000 |
| UDCA | 5-500 |
| GCA | 5-1000 |
| GDCA | 5-2000 |
| GCDCA | 10-2500 |
| GUDCA | 5-500 |
将生物标准曲线样品共液相色谱-串联质谱检测，从而构建得到标准曲线，以下会再详细说明。
(3)配制内标工作液ISW，将内标母液1mg/mL经稀释后得到ISW，内标工作液浓度如下：CA-d4 4000ng/mL；DCA-d4 4000ng/mL；CDCA-d4 5000ng/mL；UDCA-d4 2000ng/mL；GCA-d4 4000ng/mL；GDCA-d4 5000ng/mL；GCDCA-d4 5000ng/mL；GUDCA-d4 1000ng/mL。
本实施例中，胆汁酸包括胆酸CA、脱氧胆酸DCA、鹅脱氧胆酸CDCA、熊脱氧胆酸UDCA、甘氨胆酸GCA、甘氨脱氧胆酸GDCA、甘氨鹅脱氧胆酸GCDCA和甘氨熊脱氧胆酸GUDCA。基于此，提供的基于干血纸片法的胆汁酸检测方法包括以下步骤：
1)将待测血样制备成干血斑纸片样本：
吸取待测静脉血血样与乙二胺四乙酸混合，然后用移液器吸取50ul滴加到Whatman903滤纸上，室温下自然干燥(干燥至少4小时，且不要加热血片或将其堆叠在一起)，充分干燥后得到干血斑纸片样本，可放入玻璃纸或塑料纸里(若需要邮寄，则需要将分装的干血斑纸片样本放入大的密封袋，加入干燥剂和湿度指示卡，送检清单、申请报告单等)，密封保存，避免滤纸间的污染。一般无法立即检测时，可暂时储存在-20℃冰柜中。
其中，添加的乙二胺四乙酸可以阻止血液凝固，以便于充分混合，另外在静脉血与乙二胺四乙酸充分混合时如果静脉血中的血浆与血细胞分层，需轻柔地上下颠倒采血管，避免血细胞破裂。
2)样本前处理：
2-1)使用8mm打孔器从干血斑纸片样本上的每个血点位置打孔取具有血斑的8mm直径的圆盘纸片，然后从圆盘纸片上取下血斑，将血斑与500μL沉淀剂、10μL内标工作液混合，涡旋匀混然后密封；
2-2)于20-30℃的条件下超声水浴孵化；
2-3)于-20℃冷冻10-20min，再于4-10℃冷冻离心10min，取400μL上清液于40℃下氮气吹干；
2-4)用100μL复溶液复溶，涡旋震荡5min；
2-5)于4℃下14000转离心10min，取100μL上清液作为测试样本。
其中，沉淀剂为甲醇和乙腈的混合液，且甲醇和乙腈的体积比为：3；7。
其中，复溶液为乙腈和水的混合液，且乙腈和水的体积比为：1；1。
3)采用液相色谱(珂睿)-串联质谱(天津国科HTQ2020)设备对测试样本进行检测，通过标准曲线计算得到待测血样中的胆汁酸含量。
其中，液相色谱条件为：
流动相A为体积分数0.1％的氨水水溶液；流动相B为乙腈溶液；洗针液为体积比乙腈：水＝1:1的乙腈水溶液；色谱柱为Kinetex C18；柱温为50℃；检测时间为10min；进样量为10μL；梯度洗脱条件：0-1.5min，15％B，1.5-1.1min，20％B，1.1-4.5min，25％B，4.5-4.6min，40％B，4.6-5min，30％B，5.1-5.2min，20％B，5.2-6min，20％B；流速0.6mL/min。
其中，质谱条件为：负离子模式，采用ESI源，碰撞气20psi，气帘气20psi，雾化气35psi，辅助加热气30psi，喷雾电压-5500V，雾化温度550℃。化合物质谱参数如下表3：
表3
参照图1，为本实施例中获得的胆汁酸标品的峰形图。
一、本实施例中，标准曲线的构建方法为：以待测物质与待测物对应内标的峰面积响应值比(y)对混合待测物系列标准储备液浓度(x，ng/mL)进行线性回归，得到斜率b、各元素的线性回归方程及相关系数(r)值。
根据胆汁酸的临床检测需求确定检测范围，并在检测范围需求内设置浓度梯度，检测梯度浓度的校准品，将目标分析物和内标峰面积的比值与梯度浓度进行拟合，得到工作曲线，拟合曲线及工程曲线方程如下表4所示。可知拟合的线性呈良好的线性关系，且r值均在0.9960以上。
表4
根据胆汁酸的临床检测需求以及仪器设备的灵敏度，本实施例中提供的方法的定量下限定为CA为5ng/mL，DCA为5ng/mL，CDCA为10ng/mL，UDCA为5ng/mL，GCA为5ng/mL，GDCA为5ng/mL，GCDCA为10ng/mL，GUDCA为5ng/mL，连续检测10次，计算检测值和理论值的偏差以及测试结果的变异系数CV值。测试结果如下表5所示。由结果可知，测试值和理论值的偏差均在15％以内，测试的平行样本变异系数在20％以内，由此可知将方法的定量下限定为CA为5ng/mL，DCA为5ng/mL，CDCA为10ng/mL，UDCA为5ng/mL，GCA为5ng/mL，GDCA为5ng/mL，GCDCA为10ng/mL，GUDCA为5ng/mL符合临床检测方法学要求。
表5定量下限样本测试结果
二、本实施例中，对该方法的精密度进行了评价，具体如下。选取低、中、高三个浓度评价方法的精密度，每个批次每个浓度样本分不少于5次进行处理，连续测定3个批次，总样本数不少于45份，分别评估每个浓度样本的批内精密度和批间精密度以及总精密度。
表6-1
表6-2
表6-3
表6-4
表6-5
表6-6
表6-7
表6-8
由表6-1至6-8的结果可知，低、中、高三个浓度的批内精密度、批间精密度以及总精密度均在15％以内，符合要求。
三、本实施例中，还对该方法的准确度进行了评价，具体如下。采用真实混合人全血加标回收率来评价方法的准确度。每个浓度两个平行样，每个样本测试两次，计算加标回收率和检测结果的变异系数。结果下表7-1至7-8所示。由数据结果可知，加标样品的检测值和理论值的偏差符合±15％范围内。
表7-1
| 分析物 | 加标浓度 | 测试次数 | 测试浓度 | 回收率(％) |
| CA | 50 | 1 | 51.21 | 102.42 |
| 2 | 50.32 | 100.64 | ||
| 3 | 49.88 | 99.76 | ||
| 100 | 1 | 104.88 | 104.88 | |
| 2 | 105.70 | 105.70 | ||
| 3 | 99.88 | 99.88 | ||
| 500 | 1 | 542.42 | 108.48 | |
| 2 | 514.23 | 102.84 | ||
| 3 | 523.11 | 104.62 |
表7-2
| 分析物 | 加标浓度 | 测试次数 | 测试浓度 | 回收率 |
| DCA | 50 | 1 | 48.36 | 96.72 |
| 2 | 52.13 | 104.26 | ||
| 3 | 55.10 | 110.2 | ||
| 100 | 1 | 97.56 | 97.56 | |
| 2 | 100.32 | 100.32 | ||
| 3 | 104.98 | 104.98 | ||
| 500 | 1 | 515.67 | 103.13 | |
| 2 | 503.46 | 100.69 | ||
| 3 | 513.87 | 102.77 |
表7-3
| 分析物 | 加标浓度 | 测试次数 | 测试浓度 | 回收率 |
| CDCA | 100 | 1 | 106.39 | 106.39 |
| 2 | 98.77 | 98.77 | ||
| 3 | 103.21 | 103.21 | ||
| 250 | 1 | 279.12 | 111.65 | |
| 2 | 262.18 | 104.87 | ||
| 3 | 269.70 | 107.88 | ||
| 750 | 1 | 751.80 | 100.24 | |
| 2 | 816.83 | 108.91 | ||
| 3 | 768.38 | 102.45 |
表7-4
表7-5
| 分析物 | 加标浓度 | 测试次数 | 测试浓度 | 回收率 |
| GCA | 50 | 1 | 53.86 | 107.72 |
| 2 | 47.77 | 95.54 | ||
| 3 | 52.34 | 104.68 | ||
| 100 | 1 | 100.23 | 100.23 | |
| 2 | 92.46 | 92.46 | ||
| 3 | 98.78 | 98.78 | ||
| 500 | 1 | 468.70 | 93.74 | |
| 2 | 492.30 | 98.46 | ||
| 3 | 527.60 | 105.52 |
表7-6
| 分析物 | 加标浓度 | 测试次数 | 测试浓度 | 回收率 |
| GDCA | 50 | 1 | 52.57 | 105.13 |
| 2 | 51.65 | 103.30 | ||
| 3 | 43.71 | 87.41 | ||
| 200 | 1 | 199.80 | 99.90 | |
| 2 | 208.84 | 104.12 | ||
| 3 | 219.08 | 109.54 | ||
| 1000 | 1 | 968.70 | 96.87 | |
| 2 | 1010.00 | 101.00 | ||
| 3 | 1013.00 | 101.30 |
表7-7
| 分析物 | 加标浓度 | 测试次数 | 测试浓度 | 回收率 |
| GCDCA | 100 | 1 | 86.71 | 86.71 |
| 2 | 96.83 | 96.83 | ||
| 3 | 93.60 | 93.60 | ||
| 500 | 1 | 467.15 | 93.43 | |
| 2 | 508.75 | 101.75 | ||
| 3 | 446.60 | 89.32 | ||
| 1500 | 1 | 1495.35 | 99.69 | |
| 2 | 1415.25 | 94.35 | ||
| 3 | 1535.54 | 102.36 |
表7-8
四、本实施例还对本发明提供的干血斑检测方法与常规的血清检测方法的检测结果进行了对比，具体对比结果如下表9所示，可以看出：干血斑与血清检测相比，峰面积有所降低，但满足检测要求。
表9
| 分析物 | 干血斑检测峰面积 | 血清检测峰面积 |
| CA | 891240.167 | 1252290.167 |
| DCA | 791425.750 | 1106244.750 |
| CDCA | 2032524.750 | 2681411.833 |
| UDCA | 1463303.833 | 1794757.417 |
| GCA | 345058.667 | 443759.500 |
| GDCA | 429400.500 | 616690.000 |
| GCDCA | 967600.167 | 1380373.000 |
| GUDCA | 416079.000 | 570196.167 |
五、本实施例还对本发明的方法中的干血斑样本处理后的稳定性进行了检测，检测结果如下表10所示，由结果可以看出：20小时后干血斑检测峰面积与处理后干血斑检测峰面积相对比值无明显变化，说明溶剂复融剂对胆汁酸具有较强稳定性。
表10
| 分析物 | 干血斑检测峰面积 | 20小时后干血斑检测峰面积 | 相对值 |
| CA | 891240.167 | 834322.917 | 1.068 |
| DCA | 791425.750 | 749088.833 | 1.057 |
| CDCA | 2032524.750 | 1916546.083 | 1.061 |
| UDCA | 1463303.833 | 1294302.000 | 1.130 |
| GCA | 345058.667 | 327843.083 | 1.052 |
| GDCA | 429400.500 | 415767.750 | 1.033 |
| GCDCA | 967600.167 | 887554.750 | 1.090 |
| GUDCA | 416079.000 | 410656.333 | 1.013 |
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节。
Claims (10)
1.一种基于干血纸片法的胆汁酸检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将待测血样制备成干血斑纸片样本；
2)样本前处理：
2-1)从干血斑纸片样本上取下血斑，将血斑与沉淀剂、内标工作液混合，涡旋匀混然后密封；
2-2)于20-30℃的条件下超声水浴孵化；
2-3)冷冻，再于4-10℃冷冻离心，取上清液氮气下吹干；
2-4)用复溶液复溶，涡旋震荡；
2-5)离心，取上清液作为测试样本；
3)采用液相色谱-串联质谱的方法对测试样本进行检测，通过标准曲线计算得到待测血样中的胆汁酸含量。
2.根据权利要求1所述的基于干血纸片法的胆汁酸检测方法，其特征在于，其中，所述胆汁酸至少包括胆酸CA、脱氧胆酸DCA、鹅脱氧胆酸CDCA、熊脱氧胆酸UDCA、甘氨胆酸GCA、甘氨脱氧胆酸GDCA、甘氨鹅脱氧胆酸GCDCA、甘氨熊脱氧胆酸GUDCA中的一种或多种。
3.根据权利要求1所述的基于干血纸片法的胆汁酸检测方法，其特征在于，所述步骤1)具体包括：吸取待测血样与乙二胺四乙酸混合，然后滴加到滤纸上，室温下自然干燥，得到干血斑纸片样本，密封保存。
4.根据权利要求3所述的基于干血纸片法的胆汁酸检测方法，其特征在于，其中，所述滤纸为Whatman903滤纸。
5.根据权利要求1所述的基于干血纸片法的胆汁酸检测方法，其特征在于，所述步骤2)具体包括：
2-1)使用打孔器从干血斑纸片样本上的血点位置打孔取具有血斑的5-20mm直径的圆盘纸片，然后从圆盘纸片上取下血斑，将血斑与250-1000μL沉淀剂、5-20μL内标工作液混合，涡旋匀混然后密封；
2-2)于20-30℃的条件下超声水浴孵化；
2-3)于-20℃冷冻10-20min，再于4-10℃冷冻离心5-20min，取200-800μL上清液于40℃下氮气吹干；
2-4)用50-200μL复溶液复溶，涡旋震荡2-10min；
2-5)于4℃下7000-28000转离心5-20min，取50-200μL上清液作为测试样本。
6.根据权利要求5所述的基于干血纸片法的胆汁酸检测方法，其特征在于，所述步骤2)具体包括：
2-1)使用打孔器从干血斑纸片样本上的血点位置打孔取具有血斑的8mm直径的圆盘纸片，然后从圆盘纸片上取下血斑，将血斑与500μL沉淀剂、10μL内标工作液混合，涡旋匀混然后密封；
2-2)于20-30℃的条件下超声水浴孵化；
2-3)于-20℃冷冻10-20min，再于4-10℃冷冻离心10min，取400μL上清液于40℃下氮气吹干；
2-4)用100μL复溶液复溶，涡旋震荡5min；
2-5)于4℃下14000转离心10min，取100μL上清液作为测试样本。
7.根据权利要求5所述的基于干血纸片法的胆汁酸检测方法，其特征在于，其中，所述沉淀剂为甲醇和乙腈的混合液，且甲醇和乙腈的体积比为3：7。
8.根据权利要求5所述的基于干血纸片法的胆汁酸检测方法，其特征在于，其中，所述复溶液为乙腈和水的混合液，且乙腈和水的体积比为1：1。
9.根据权利要求1-8中任意一项所述的基于干血纸片法的胆汁酸检测方法，其特征在于，所述步骤3)中，液相色谱条件为：
流动相A为体积分数0.1％的氨水水溶液；流动相B为乙腈溶液；洗针液为体积比乙腈：水＝1:1的乙腈水溶液；色谱柱为Kinetex C18；柱温为50℃；检测时间为10min；进样量为10μL；梯度洗脱条件：0-1.5min，15％B，1.5-1.1min，20％B，1.1-4.5min，25％B，4.5-4.6min，40％B，4.6-5min，30％B，5.1-5.2min，20％B，5.2-6min，20％B；流速0.6mL/min。
10.根据权利要求9所述的基于干血纸片法的胆汁酸检测方法，其特征在于，所述步骤3)中，质谱条件为：负离子模式，采用ESI源，碰撞气20psi，气帘气20psi，雾化气35psi，辅助加热气30psi，喷雾电压-5500V，雾化温度550℃。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210456938.9A CN114894926A (zh) | 2022-04-27 | 2022-04-27 | 基于干血纸片法的胆汁酸检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210456938.9A CN114894926A (zh) | 2022-04-27 | 2022-04-27 | 基于干血纸片法的胆汁酸检测方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114894926A true CN114894926A (zh) | 2022-08-12 |
Family
ID=82719318
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202210456938.9A Pending CN114894926A (zh) | 2022-04-27 | 2022-04-27 | 基于干血纸片法的胆汁酸检测方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114894926A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN117929585A (zh) * | 2024-01-29 | 2024-04-26 | 华东理工大学 | 分步内标法检测干血斑中的神经递质 |
Citations (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20170285015A1 (en) * | 2014-10-28 | 2017-10-05 | Washington University | Bile acid biomarkers for niemann-pick diseases, methods and uses therefor |
| CN107356694A (zh) * | 2017-07-21 | 2017-11-17 | 杭州汉库医学检验所有限公司 | 一种高效检测血液中15种胆汁酸的方法 |
| CN111257476A (zh) * | 2020-03-17 | 2020-06-09 | 浙江迪赛思诊断技术有限公司 | 一种高效液相色谱串联质谱检测血清中17种胆汁酸的方法 |
| CN111307993A (zh) * | 2020-04-20 | 2020-06-19 | 北京和合医学诊断技术股份有限公司 | 检测血液中胆汁酸含量的方法 |
| CN111474288A (zh) * | 2020-01-07 | 2020-07-31 | 美康生物科技股份有限公司 | 一种用于准确测定血清中胆汁酸浓度的质谱试剂盒 |
| CN111521705A (zh) * | 2020-05-05 | 2020-08-11 | 大连润生康泰医学检验实验室有限公司 | 一种血清中胆汁酸的富集方法 |
| CN111610262A (zh) * | 2020-05-19 | 2020-09-01 | 上海鹿明生物科技有限公司 | 一种用于肝胆疾病诊断的代谢标志物 |
| CN111830161A (zh) * | 2020-07-21 | 2020-10-27 | 南京品生医学检验实验室有限公司 | 一种检测血清中15种胆汁酸的方法 |
| CN112098532A (zh) * | 2020-08-11 | 2020-12-18 | 杭州凯莱谱精准医疗检测技术有限公司 | 一种改进的高效液相色谱串联质谱人血清中15种胆汁酸的检测方法 |
| CN113848264A (zh) * | 2021-09-14 | 2021-12-28 | 深圳脉图精准技术有限公司 | 干血片样本采集质量的监控方法 |
| CN114235995A (zh) * | 2021-12-03 | 2022-03-25 | 天津国科医工科技发展有限公司 | 检测血清中15种胆汁酸的方法 |
-
2022
- 2022-04-27 CN CN202210456938.9A patent/CN114894926A/zh active Pending
Patent Citations (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20170285015A1 (en) * | 2014-10-28 | 2017-10-05 | Washington University | Bile acid biomarkers for niemann-pick diseases, methods and uses therefor |
| CN107356694A (zh) * | 2017-07-21 | 2017-11-17 | 杭州汉库医学检验所有限公司 | 一种高效检测血液中15种胆汁酸的方法 |
| CN111474288A (zh) * | 2020-01-07 | 2020-07-31 | 美康生物科技股份有限公司 | 一种用于准确测定血清中胆汁酸浓度的质谱试剂盒 |
| CN111257476A (zh) * | 2020-03-17 | 2020-06-09 | 浙江迪赛思诊断技术有限公司 | 一种高效液相色谱串联质谱检测血清中17种胆汁酸的方法 |
| CN111307993A (zh) * | 2020-04-20 | 2020-06-19 | 北京和合医学诊断技术股份有限公司 | 检测血液中胆汁酸含量的方法 |
| CN111521705A (zh) * | 2020-05-05 | 2020-08-11 | 大连润生康泰医学检验实验室有限公司 | 一种血清中胆汁酸的富集方法 |
| CN111610262A (zh) * | 2020-05-19 | 2020-09-01 | 上海鹿明生物科技有限公司 | 一种用于肝胆疾病诊断的代谢标志物 |
| CN111830161A (zh) * | 2020-07-21 | 2020-10-27 | 南京品生医学检验实验室有限公司 | 一种检测血清中15种胆汁酸的方法 |
| CN112098532A (zh) * | 2020-08-11 | 2020-12-18 | 杭州凯莱谱精准医疗检测技术有限公司 | 一种改进的高效液相色谱串联质谱人血清中15种胆汁酸的检测方法 |
| CN113848264A (zh) * | 2021-09-14 | 2021-12-28 | 深圳脉图精准技术有限公司 | 干血片样本采集质量的监控方法 |
| CN114235995A (zh) * | 2021-12-03 | 2022-03-25 | 天津国科医工科技发展有限公司 | 检测血清中15种胆汁酸的方法 |
Non-Patent Citations (6)
| Title |
|---|
| MA JIE QIONG等: "Exploration of an Efficient Simultaneous Molecular Detection Method of HIV, HCV, and Syphilis from a Single Dried Blood Spot", BIOMEDICAL AND ENVIRONMENTAL SCIENCES, vol. 34, no. 4, 30 April 2021 (2021-04-30), XP086557090, DOI: 10.3967/bes2021.034 * |
| N. JANZEN等: "Rapid quantification of conjugated and unconjugated bile acids and C 27 precursors in dried blood spots and small volumes of serum", 《JOURNAL OF LIPID RESEARCH》, vol. 51 * |
| XUNTIAN JIANG等: "Development of a Bile Acid-Based Newborn Screen for Niemann- Pick C Disease", 《SCI TRANSL MED. 》 * |
| 刘昕亮等: "乐山市1例输入性三日疟的实验室检测与诊断", 寄生虫病与感染性疾病, vol. 16, no. 1, 31 January 2018 (2018-01-31) * |
| 柴慧颖等: "2014-2018年广东省婴儿HIV感染早期诊断检测情况分析", 中国艾滋病性病, vol. 26, no. 2, 29 February 2020 (2020-02-29) * |
| 沈仁等: "超高效液相色谱串联质谱法同时测定干血片中15种胆汁酸", 《中国社区医师》, vol. 36, no. 30 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN117929585A (zh) * | 2024-01-29 | 2024-04-26 | 华东理工大学 | 分步内标法检测干血斑中的神经递质 |
| CN117929585B (zh) * | 2024-01-29 | 2024-08-09 | 华东理工大学 | 分步内标法检测干血斑中的神经递质 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Vuckovic | Current trends and challenges in sample preparation for global metabolomics using liquid chromatography–mass spectrometry | |
| CN109212091A (zh) | 血清中25-羟基维生素d液相色谱串联质谱联用检测方法及试剂盒 | |
| CN111307993B (zh) | 检测血液中胆汁酸含量的方法 | |
| US20130316462A1 (en) | Rapid and high-throughput analysis of sterols/stanols or derivatives thereof | |
| CN110455954A (zh) | 一种血浆中儿茶酚胺代谢物高效液相色谱串联质谱检测方法 | |
| CN111521705B (zh) | 一种血清中胆汁酸的富集方法 | |
| CN109387573A (zh) | 一种液相色谱串联质谱法定量干血滤纸片中他克莫司试剂盒及其制备 | |
| CN111323507A (zh) | 基于固相萃取法同时检测血清中11种类固醇的检测方法 | |
| CN111830146B (zh) | 一种干血片中25-羟基维d的lc-ms/ms高通量检测方法及试剂盒 | |
| CN112986433A (zh) | 检测人血清样本中类固醇含量的方法 | |
| CN114994198A (zh) | 一种液相色谱质谱联用法同时定量检测78种神经精神类药物的方法 | |
| CN114894926A (zh) | 基于干血纸片法的胆汁酸检测方法 | |
| CN109633181A (zh) | 一种血浆中变肾上腺素和去甲变肾上腺素的检测试剂盒 | |
| CN115902048A (zh) | 甲基衍生化-高效液相色谱串联质谱检测血清中水溶性维生素的方法 | |
| CN111458417B (zh) | 联合检测待测样品中多种抗生素的方法及试剂盒 | |
| CN117368347A (zh) | 一种同时测定血浆中原发性醛固酮增多症分型标志物的液相色谱-串联质谱法 | |
| CN115420812B (zh) | 一种检测尿液中Calcitroic acid的方法及其应用 | |
| CN114965786B (zh) | 一种检测干血斑中酯类胆固醇多种中间代谢产物的方法 | |
| CN114814044B (zh) | 一种检测血液中儿茶酚胺及其代谢物含量的方法 | |
| CN114397379A (zh) | 一种液质联用测定血浆中奥硝唑浓度的方法 | |
| CN114778737B (zh) | 可缩短时间的液相色谱检测样品前处理方法 | |
| CN114563504B (zh) | 一种测定血浆中游离醛固酮含量的方法及试剂盒 | |
| CN114487185B (zh) | 一种胆固醇通路的分离鉴定方法 | |
| CN118759101A (zh) | 一种液相色谱串联质谱检测干尿片中黄嘌呤及其代谢物的方法 | |
| CN113341023B (zh) | 一种基于液质联用的血清二氨基庚二酸的检测试剂盒及检测方法与应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| CB02 | Change of applicant information | ||
| CB02 | Change of applicant information |
Country or region after: China Address after: Building 4, No.16 Wujing Road, development zone, Dongli District, Tianjin Applicant after: Tianjin Guoke Medical Technology Development Co.,Ltd. Address before: Building 4, No.16 Wujing Road, development zone, Dongli District, Tianjin Applicant before: TIANJIN GUOKE YIGONG TECHNOLOGY DEVELOPMENT Co.,Ltd. Country or region before: China |
|
| TA01 | Transfer of patent application right | ||
| TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20240325 Address after: Building 4, No.16 Wujing Road, development zone, Dongli District, Tianjin Applicant after: Tianjin Guoke Medical Technology Development Co.,Ltd. Country or region after: China Applicant after: Suzhou Institute of Biomedical Engineering and Technology Chinese Academy of Sciences Address before: Building 4, No.16 Wujing Road, development zone, Dongli District, Tianjin Applicant before: Tianjin Guoke Medical Technology Development Co.,Ltd. Country or region before: China |