CN109633181A - 一种血浆中变肾上腺素和去甲变肾上腺素的检测试剂盒 - Google Patents
一种血浆中变肾上腺素和去甲变肾上腺素的检测试剂盒 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种血浆中变肾上腺素和去甲变肾上腺素的检测试剂盒,该检测试剂盒包括校准品、质控品、富集柱、处理液、活化液A、活化液B、淋洗液A、淋洗液B和洗脱液;本发明试剂盒的有益效果为:能够提供校准品,用于每个批次样品检测的工作曲线制定,免除实验室检测自配的繁琐步骤和造成的误差。能够提供样品前处理所涉及的试剂、关键分离材料以及前处理操作流程,实现变肾上腺素和去甲变肾上腺素从血浆中的提取和富集,避免样品中其他物质对检测物的干扰。
Description
技术领域
本发明涉及临床体外检测试剂技术领域,特别涉及一种血浆中变肾上腺素和去甲变肾上腺素的检测试剂盒,其用于对血浆中的变肾上腺素和去甲变肾上腺素含量的检测。
背景技术
嗜铬细胞瘤和副神经节瘤是分别起源于肾上腺髓质或肾上腺外交感神经链的神经内分泌肿瘤,典型症状为头痛、出汗、心动过速(三联征),并造成心、脑、肾等严重并发症。神经内分泌肿瘤通常发展缓慢,很多人早期没有症状,直到肿瘤已经转移到患者身体的其他部位才被诊断出来,所以早期诊断对于神经内分泌肿瘤的治疗和预后具有十分重要的意义。血浆中变肾上腺素和去甲变肾上腺素的测定已经成为了嗜铬细胞瘤和副神经节瘤诊断的首选生化检测。
血浆中变肾上腺素和去甲变肾上腺素定量检测方法中,基于免疫的检测方法由于交叉反应和非特异性的结合会导致检测准确度低,不同的免疫测试的结果可能不统一。随着技术的发展,以色谱作为分离手段、三重四极杆串联质谱作为检测手段的色谱-质谱联用技术成为了定量检测生物样品中痕量目标分析物的强有力的手段。由于变肾上腺素在血浆中的浓度水平极低,以及血浆样本基质的复杂性,在检测之前需要对血浆样本中的变肾上腺素进行提取和富集。现有的基于液质联用技术检测血浆中变肾上腺素定量检测方法多为实验室自建的液质检测方法,因为每个检测之间的方法和试剂选择不同,会造成室间的检测结果差异大,特别是在面对临床大量的检测样本,很难保证检测结果的质量。想要解决这些问题,就需要针对检测项目直接提供经过验证的配套试剂盒标准以及标准的检测流程,提高液质在临床检测的推广性,保证检测结果的准确性。
发明内容
针对上述的现有的检测血浆中变肾上腺素和去甲变肾上腺素的问题,本发明的目的在于提供一种血浆中变肾上腺素和去甲变肾上腺素的试剂盒及制备、使用方法。该试剂盒的使用方法涵盖从样本到进样检测、数据质控的整体解决方案,可满足临床试剂检测的需求。
本发明采用的技术方案为:
一种血浆中变肾上腺素和去甲变肾上腺素的检测试剂盒,包括校准品、质控品、富集柱、处理液、活化液A、活化液B、淋洗液A、淋洗液B和洗脱液;
所述的校准品,为含有梯度浓度变肾上腺素和去甲变肾上腺素的磷酸盐缓冲液;
所述的质控品,为含有一定浓度变肾上腺素和去甲变肾上腺素的血浆样品,包括高浓度质控品和低浓度质控品;高浓度质控品中变肾上腺素和去甲变肾上腺素的浓度范围均是800-1200pg/mL,低浓度质控品中变肾上腺素和去甲变肾上腺素的浓度范围均是50-200pg/mL;
所述的富集柱,柱子中装有弱阳离子交换填料;
所述的处理液,为浓度为80-200pg/mL的同位素标记的变肾上腺素和同位素标记的去甲变肾上腺素的乙酸铵缓冲液,
所述的活化液A为甲醇;
所述的活化液B为50mM的乙酸铵水溶液;
所述的淋洗液A为质量浓度为0.01%的2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚乙腈溶液;
所述的淋洗液B为去离子水。
所述的洗脱液为体积浓度为2%的甲酸乙腈溶液。
优选地,所述校准品的浓度范围为:10pg/mL-2000pg/mL。
优选地,所述的富集柱中填料的质量为5-10mg。
优选地,所述的填料为羧基修饰的聚苯乙烯-二乙烯苯材料,羧基修饰的硅胶材料或羧基修饰的聚苯乙烯材料。
本发明还提供了上述血浆中变肾上腺素和去甲变肾上腺素的检测试剂盒的制备方法,包括:
所述校准品的制备方法为:称取磷酸盐和其他盐,用去离子水溶解稀释得到pH7.4的磷酸盐缓冲溶液;用所述缓冲液稀释变肾上腺素和去甲变肾上腺素的标准品到梯度浓度,浓度范围从10pg/mL-2000pg/mL。更具体地,所述校准品的制备方法为:称取磷酸二氢钾0.27g,磷酸氢二钠1.42g,氯化钠8g,氯化钾0.2g,加去离子水800mL充分搅拌溶解,然后加入浓盐酸调pH至7.4,最后用去离子水定容到1L;得到pH7.4的磷酸盐缓冲溶液;用所述缓冲液稀释变肾上腺素和去甲变肾上腺素的标准品到梯度浓度,浓度范围从10pg/mL-2000pg/mL。
所述的质控品的制备方法为:用活性炭处理后的去激素血清,稀释变肾上腺素和去甲变肾上腺素的标准品到高、低两个浓度,高浓度质控品浓度范围是800-1200pg/mL,低浓度质控品浓度范围是50-200pg/mL。
所述的处理液的制备方法为:称取乙酸铵,用去离子水溶液稀释后得到浓度为50mM的乙酸铵缓冲液;用所述乙酸铵缓冲液溶解同位素标记的变肾上腺素和同位素标记的去甲变肾上腺素标准品,得到处理液,其中同位素标记的变肾上腺素和同位素标记的去甲变肾上腺素的浓度为80-200pg/mL。
所述的活化液B的制备方法为:称取乙酸铵,用去离子水溶解稀释后得到浓度为50mM的乙酸铵缓冲液。
所述的淋洗液A的制备方法为:称取2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚,用乙腈溶解稀释后得到质量浓度为0.01%的2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚乙腈溶液。
所述的洗脱液的制备方法为:向乙腈中加入甲酸,再用乙腈定容到体积浓度为2%甲酸乙腈溶液。
本发明还提供了一种血浆中变肾上腺素和去甲变肾上腺素的检测方法,该方法采用上述试剂盒与液相色谱-串联四级杆质谱设备(如爱博才思、沃特世)联用进行检测。
具体的,该试剂盒的使用方法包括如下步骤:取300-1000μL校准品、质控品或待测血浆样品,加入等量的处理液,涡旋混匀;取200-500μL活化液A加入到富集柱中,正压下使得活化液A通过富集柱滴下;取200-500μL活化液B加入到富集柱中,正压下使得活化液B通过富集柱滴下;将处理好的校准品、质控品或待测血浆样品加入富集柱中,正压下使得样品通过富集柱后滴下;取500-1000μL淋洗液A加入富集柱中,正压下使得淋洗液A通过富集柱滴下;取500-1000μL淋洗液B加入富集柱中,正压下使得淋洗液B通过富集柱滴下;取100-300μL洗脱液加入富集柱中,正压下使得洗脱液通过富集柱滴下;收集洗脱液,用液相色谱-串联四极杆质谱检测。
该方法还包括:以校准品浓度和校准品中变肾上腺素和同位素标记变肾上腺素峰面积比值拟合工作曲线,计算质控品和待测样品中的变肾上腺素浓度;以校准品浓度和校准品中去甲变肾上腺素和同位素标记去甲变肾上腺素峰面积比值拟合工作曲线,计算质控品和待测样品中的去甲变肾上腺素浓度。若测得的质控品浓度不在配制值范围的±15%以内,则本次检测结果无效,应重新检测。
本发明提供的血浆中变肾上腺素和去甲变肾上腺素的检测试剂盒的有益效果在于:
1)、能够提供校准品,用于每个批次样品检测的工作曲线制定,免除实验室检测自配的繁琐步骤和造成的误差。
2)、能够提供样品前处理所涉及的试剂、关键分离材料以及前处理操作流程,实现变肾上腺素和去甲变肾上腺素从血浆中的提取和富集,避免样品中其他物质对检测物的干扰。
3)、能够提供质控品,随每个检测批次一起检测,保证检测结果的准确性。
附图说明
图1为实施例1实测样品色谱图;
图2为实施例1中变肾上腺素的工作曲线图;
图3为实施例1中去甲变肾上腺素的工作曲线图;
图4为以磷酸盐缓冲液配制的校准品变肾上腺素工作曲线:
图5为以去激素血清配制的校准品变肾上腺素工作曲线:
图6为以磷酸盐缓冲液配制的校准品去甲变肾上腺素工作曲线;
图7为以去激素血清配制的校准品去甲变肾上腺素工作曲线。
具体实施方式
下面结合具体的实施例对本发明作进一步的说明,但并不局限于此。
实施例1
本实施例中提供血浆中变肾上腺素和去甲变肾上腺素的检测试剂盒,包括校准品、质控品、富集柱、处理液、活化液A、活化液B、淋洗液A、淋洗液B和洗脱液。
校准品配制,称取磷酸二氢钾0.27g,磷酸氢二钠1.42g,氯化钠8g,氯化钾0.2g,加去离子水约800mL充分搅拌溶解,然后加入浓盐酸调pH至7.4,最后用去离子水定容到1L;用上述缓冲液按照下表稀释变肾上腺素和去甲变肾上腺素的标准品溶液,浓度范围从40pg/mL-1600pg/mL。变肾上腺素和去甲变肾上腺素购于美国TRC公司。
质控品配制,用活性炭处理后的去激素血清,稀释变肾上腺素和去甲变肾上腺素,稀释方法如表
富集柱为填装有5mg的聚合物基的弱阳离子交换填料,填料的质量为5mg。填料为羧基修饰的聚苯乙烯-二乙烯苯球形树脂。
处理液配制:准确称量385.4mg乙酸铵,去离子水溶液后定容到100mL,得到浓度为50mM的乙酸铵缓冲液;用所述乙酸铵缓冲液溶解同位素标记的变肾上腺素和同位素标记的去甲变肾上腺素标准品(购于美国CIL公司),得到处理液,其中同位素标记的变肾上腺素和同位素标记的去甲变肾上腺素的浓度为100pg/mL。
活化液A,取100mL甲醇作为活化液A。
活化液B配制:准确称量385.4mg乙酸铵,去离子水溶液后定容到100mL。
淋洗液A配制:称取1mg的2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚,用乙腈溶解后定容到1000mL;取上述溶液用乙腈稀释10倍后得到淋洗液A。
淋洗液B配制:取100mL去离子水作为淋洗液B。
洗脱液配制:向100mL的乙腈中加入2mL的甲酸,再用乙腈定容到1000mL。
使用该试剂盒进行样品处理,处理步骤如下,取500μL校准品、质控品或待测血浆样品,加入500μL处理液,涡旋混匀;取200μL活化液A加入到富集柱中,正压下使得活化液A通过富集柱滴下;取200μL活化液B加入到富集柱中,正压下使得活化液B通过富集柱滴下;将处理好的校准品、质控品或待测血浆样品加入富集柱中,正压下使得样品通过富集柱后滴下;取500μL淋洗液A加入富集柱中,正压下使得淋洗液A通过富集柱滴下;取500μL淋洗液B加入富集柱中,正压下使得淋洗液B通过富集柱滴下;取200μL洗脱液加入富集柱中,正压下使得洗脱液通过富集柱滴下;收集洗脱液。
将洗脱液进样爱博才思液相色谱-串联四级杆子质谱设备中进行检测。
测试的色谱条件为
流速:0.6mL/min
柱温:40℃
进样体积:10μL
洗脱梯度如下表
时间(min) | 流动相A比例(%) | 流动相B比例(%) |
0.5 | 0 | 100 |
1.5 | 40 | 60 |
2.4 | 40 | 60 |
2.5 | 0 | 100 |
4 | 0 | 100 |
测试的质谱条件为
离子源参数如表格
化合物参数如表格
(MN:变肾上腺素;MN-d3:氘代变肾上腺素;NMN:去甲变肾上腺素;NMN-d3:氘代去甲变肾上腺素)
得到的谱图示例图如图1所示。
1线性范围
以校准品浓度和校准品中变肾上腺素和同位素标记变肾上腺素峰面积比值拟合工作曲线,计算的工作曲线示例图如图2所示,用制得的工作曲线计算质控品和待测样品中的变肾上腺素浓度。
以校准品浓度和校准品中去甲变肾上腺素和同位素标记去甲变肾上腺素峰面积比值拟合工作曲线,计算的工作曲线示例图如图3所示,用制得的工作曲线计算质控品和待测样品中的去甲变肾上腺素浓度。
由结果可知,在MN和NMN的浓度为20-1600pg/mL的范围内,校准品的线性系数大于0.995。
2试剂盒定量下限
使用试剂盒测试MN浓度为20pg/mL,NMN浓度为20pg/mL的血清样品,检测10个平行样品结果如下
结果可知,试剂盒测试MN浓度为20pg/mL,NMN浓度为20pg/mL的样品的准确度满足85%-115%的范围,变异系数满足小于15%,符合定量下限的要求,因此试剂盒的定量下限为MN浓度为20pg/mL,NMN浓度为20pg/mL
3试剂盒准确度
以试剂盒测试混合人血浆样品,通过加标回收率的测定评价试剂盒的检测准确度,结果如下
结果可知,在混合人血清中加入高、中、低浓度的目标分析物,提取回收率均满足85%-115%的范围,表明试剂盒检测的准确度符合临床需求。
4试剂盒稳定性
测试低、中、高三个浓度的质控品,每个浓度测试6次,计算批内不精密度;连续制备并测定3个分析批次,计算批间不精密度。
测试结果如下:
由结果可知,试剂盒的批内和批间不精密度均小于15%,符合临床检测需求。
5.以磷酸盐缓冲液配制的校准品和以去激素血清配制校准品数据比对结果:
分别以磷酸盐缓冲液和去激素血清作为基质配制校准品,磷酸盐缓冲液配制的校准品记为N组,血清配制的校准品记为S组,配制的浓度如下
将配置的所有校准品按照相同的前处理方法处理后进样检测,每个浓度样品测试两次
以校准品浓度和校准品中变肾上腺素和同位素标记变肾上腺素峰面积比值拟合工作曲线,计算的工作曲线示例图如图4,图5所示:图4为以磷酸盐缓冲液配制的校准品变肾上腺素工作曲线:Y=116.23X+0.0223(R=0.9984)。图5为以去激素血清配制的校准品变肾上腺素工作曲线:Y=113.9X-0.9984(R=0.9984)。
对于待测样品,用N组的工作曲线和S组工作曲线计算结果差值
ΔY=|YN-YS|=116.23X+0.0223-113.9X+0.9984=2.33X+1.0217
按照临床检测对于准确度要求为85%-115%可知,ΔY≤0.15YS,可得到X≥0.00856,此时Y≥1.071。
因此当样品浓度在1.071pg/mL以上,用磷酸盐缓冲液配制的校准品工作曲线和用去激素血清配制的校准品工作曲线结果差值在15%范围内,本试剂盒的检测变肾上腺素的线性范围为20-2000pg/mL,磷酸盐缓冲液配制的校准品可替代去激素血清配制的校准品。
以校准品浓度和校准品中去甲变肾上腺素和同位素标记去甲变肾上腺素峰面积比值拟合工作曲线,计算的工作曲线示例图如图6,图7所示:图6为以磷酸盐缓冲液配制的校准品去甲变肾上腺素工作曲线为Y=111.18X+0.197(R=0.9986);图7为以去激素血清配制的校准品去甲变肾上腺素工作曲线为Y=114.095X-0.7315(R=0.9984)。
对于待测样品,用N组的工作曲线和S组工作曲线计算结果差值
ΔY=|YS-YN|=|114.095X-0.7315-111.18X-0.197|=|2.915X-0.9285|
按照临床检测对于准确度要求为85%-115%可知,ΔY≤0.15YS,
当X>0.3185时,ΔY=2.915X-0.9285≤0.15YS,可得到X≥0.3185,此时Y≥35.6,即符合。
当X≤0.3185时,ΔY=0.9285-2.915X≤0.15YS,可得到0.0518≤X≤0.3185,此时5.18≤Y≤35.6,即符合。
因此当样品中去甲变肾上腺素浓度在5.18pg/mL以上,用磷酸盐缓冲液配制的校准品工作曲线和用去激素血清配制的校准品工作曲线结果差值在15%范围内,本试剂盒的检测去甲变肾上腺素的线性范围为20-2000pg/mL,磷酸盐缓冲液配制的校准品可替代去激素血清配制的校准品。
Claims (9)
1.一种血浆中变肾上腺素和去甲变肾上腺素的检测试剂盒,其特征在于:包括校准品、质控品、富集柱、处理液、活化液A、活化液B、淋洗液A、淋洗液B和洗脱液;
所述的校准品,为含有梯度浓度变肾上腺素和去甲变肾上腺素的磷酸盐缓冲液;
所述的质控品,为含有一定浓度变肾上腺素和去甲变肾上腺素的血浆样品,包括高浓度质控品和低浓度质控品;高浓度质控品中变肾上腺素和去甲变肾上腺素的浓度范围均是800-1200pg/mL,低浓度质控品中变肾上腺素和去甲变肾上腺素的浓度范围均是50-200pg/mL;
所述的富集柱,柱子中装有弱阳离子交换填料;
所述的处理液,为浓度为80-200pg/mL的同位素标记的变肾上腺素和同位素标记的去甲变肾上腺素的乙酸铵缓冲液;
所述的活化液A为甲醇;
所述的活化液B为50mM的乙酸铵水溶液;
所述的淋洗液A为质量浓度为0.01%的2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚乙腈溶液;
所述的淋洗液B为去离子水;
所述的洗脱液为体积浓度为2%的甲酸乙腈溶液。
2.根据权利要求1所述的一种血浆中变肾上腺素和去甲变肾上腺素的检测试剂盒,其特征在于:所述校准品的浓度范围为:10pg/mL-2000pg/mL。
3.根据权利要求1所述的一种血浆中变肾上腺素和去甲变肾上腺素的检测试剂盒,其特征在于:所述的富集柱中填料的质量为5-10mg。
4.根据权利要求1所述的一种血浆中变肾上腺素和去甲变肾上腺素的检测试剂盒,其特征在于:所述的填料为羧基修饰的聚苯乙烯-二乙烯苯材料,羧基修饰的硅胶材料或羧基修饰的聚苯乙烯材料。
5.权利要求1-4任一项所述血浆中变肾上腺素和去甲变肾上腺素的检测试剂盒的制备方法,其特征在于:包括:
所述校准品的制备方法为:称取磷酸盐和其他盐,用去离子水溶解稀释得到pH7.4的磷酸盐缓冲溶液;用所述缓冲液稀释变肾上腺素和去甲变肾上腺素的标准品到梯度浓度,浓度范围从10pg/mL-2000pg/mL;
所述的质控品的制备方法为:用活性炭处理后的去激素血清,稀释变肾上腺素和去甲变肾上腺素的标准品到高、低两个浓度,高浓度质控品浓度范围是800-1200pg/mL,低浓度质控品浓度范围是50-200pg/mL;
所述的处理液的制备方法为:称取乙酸铵,用去离子水溶液稀释后得到浓度为50mM的乙酸铵缓冲液;用所述乙酸铵缓冲液溶解同位素标记的变肾上腺素和同位素标记的去甲变肾上腺素标准品,得到处理液,其中同位素标记的变肾上腺素和同位素标记的去甲变肾上腺素的浓度为80-200pg/mL;
所述的活化液B的制备方法为:称取乙酸铵,用去离子水溶解稀释后得到浓度为50mM的乙酸铵缓冲液;
所述的淋洗液A的制备方法为:称取2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚,用乙腈溶解稀释后得到质量浓度为0.01%的2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚乙腈溶液;
所述的洗脱液的制备方法为:向乙腈中加入甲酸,再用乙腈定容到体积浓度为2%甲酸乙腈溶液。
6.根据权利要求5所述血浆中变肾上腺素和去甲变肾上腺素的检测试剂盒的制备方法,其特征在于:所述校准品的制备方法为:称取磷酸二氢钾0.27g,磷酸氢二钠1.42g,氯化钠8g,氯化钾0.2g,加去离子水800mL充分搅拌溶解,然后加入浓盐酸调pH至7.4,最后用去离子水定容到1L;得到pH7.4的磷酸盐缓冲溶液;用所述缓冲液稀释变肾上腺素和去甲变肾上腺素的标准品到梯度浓度,浓度范围从10pg/mL-2000pg/mL。
7.一种血浆中变肾上腺素和去甲变肾上腺素的检测方法,其特征在于:该方法采用权利要求1-4任一项所述试剂盒与液相色谱-串联四级杆质谱设备联用进行检测。
8.根据权利要求7所述一种血浆中变肾上腺素和去甲变肾上腺素的检测方法,其特征在于:该试剂盒的使用方法包括如下步骤:取300-1000μL校准品、质控品或待测血浆样品,加入等量的处理液,涡旋混匀;取200-500μL活化液A加入到富集柱中,正压下使得活化液A通过富集柱滴下;取200-500μL活化液B加入到富集柱中,正压下使得活化液B通过富集柱滴下;将处理好的校准品、质控品或待测血浆样品加入富集柱中,正压下使得样品通过富集柱后滴下;取500-1000μL淋洗液A加入富集柱中,正压下使得淋洗液A通过富集柱滴下;取500-1000μL淋洗液B加入富集柱中,正压下使得淋洗液B通过富集柱滴下;取100-300μL洗脱液加入富集柱中,正压下使得洗脱液通过富集柱滴下;收集洗脱液,用液相色谱-串联四极杆质谱检测。
9.根据权利要求8所述一种血浆中变肾上腺素和去甲变肾上腺素的检测方法,其特征在于:该方法还包括:以校准品浓度和校准品中变肾上腺素和同位素标记变肾上腺素峰面积比值拟合工作曲线,计算质控品和待测样品中的变肾上腺素浓度;以校准品浓度和校准品中去甲变肾上腺素和同位素标记去甲变肾上腺素峰面积比值拟合工作曲线,计算质控品和待测样品中的去甲变肾上腺素浓度。若测得的质控品浓度不在配制值范围的±15%以内,则本次检测结果无效,应重新检测。
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Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110274974A (zh) * | 2019-07-16 | 2019-09-24 | 大连润生康泰医学检验实验室有限公司 | 一种血清中肾上腺素类物质的检测方法及其富集材料 |
CN111965369A (zh) * | 2020-07-28 | 2020-11-20 | 天津国科医工科技发展有限公司 | 一种血浆中血管紧张素ⅰ检测试剂盒及检测方法 |
CN114460188A (zh) * | 2022-01-14 | 2022-05-10 | 上海睿质科技有限公司 | 检测人血浆儿茶酚胺中间代谢物的试剂盒及测试方法 |
CN115541741A (zh) * | 2022-09-13 | 2022-12-30 | 裕菁科技(上海)有限公司 | 同时检测多种血压升高相关的典型生物标记物的方法 |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20100178663A1 (en) * | 2007-05-15 | 2010-07-15 | Waters Technologies Corporation | Apparatus And Methods For The Detection Of Plasma Metanephrines |
CN103614441A (zh) * | 2013-11-20 | 2014-03-05 | 浙江清华长三角研究院 | 一种医疗检测用高纯度甲状旁腺激素的制备方法 |
CN105424826A (zh) * | 2015-11-06 | 2016-03-23 | 河北农业大学 | 一种水果中类胡萝卜素合成能力的检测方法 |
AU2016102158A4 (en) * | 2015-12-22 | 2017-02-16 | Xiamen Lai En Si Te Information Technology Co., Ltd | Phenylephrine drug intermediates hypnone synthesis method |
CN106442837A (zh) * | 2016-10-18 | 2017-02-22 | 杭州佰辰医学检验所有限公司 | 一种利用液相色谱串联质谱检测血浆中儿茶酚胺的方法 |
CN107478741A (zh) * | 2017-08-08 | 2017-12-15 | 辽宁润生康泰生物医药科技有限公司 | 一种同时检测甲氧基肾上腺素和甲氧基去甲肾上腺素的超高效液相色谱串联质谱方法 |
-
2018
- 2018-12-20 CN CN201811564853.2A patent/CN109633181A/zh active Pending
Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20100178663A1 (en) * | 2007-05-15 | 2010-07-15 | Waters Technologies Corporation | Apparatus And Methods For The Detection Of Plasma Metanephrines |
CN103614441A (zh) * | 2013-11-20 | 2014-03-05 | 浙江清华长三角研究院 | 一种医疗检测用高纯度甲状旁腺激素的制备方法 |
CN105424826A (zh) * | 2015-11-06 | 2016-03-23 | 河北农业大学 | 一种水果中类胡萝卜素合成能力的检测方法 |
AU2016102158A4 (en) * | 2015-12-22 | 2017-02-16 | Xiamen Lai En Si Te Information Technology Co., Ltd | Phenylephrine drug intermediates hypnone synthesis method |
CN106442837A (zh) * | 2016-10-18 | 2017-02-22 | 杭州佰辰医学检验所有限公司 | 一种利用液相色谱串联质谱检测血浆中儿茶酚胺的方法 |
CN107478741A (zh) * | 2017-08-08 | 2017-12-15 | 辽宁润生康泰生物医药科技有限公司 | 一种同时检测甲氧基肾上腺素和甲氧基去甲肾上腺素的超高效液相色谱串联质谱方法 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
WILHELMINA H.A.DE JONG 等: "Plasma Free Metanephrine Measurement Using Automated Online Solid-Phase Extraction HPLC–Tandem Mass Spectrometry", 《CLINICAL CHEMISTRY》 * |
杨梅 等: "超高效液相色谱-串联质谱法测定禽蛋中2种色素残留", 《中国食品卫生杂志》 * |
黄旭 等: "固相萃取-高效液相色谱法测定婴幼儿配方粉中维生素A和维生素E的含量", 《中国食品卫生杂志》 * |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110274974A (zh) * | 2019-07-16 | 2019-09-24 | 大连润生康泰医学检验实验室有限公司 | 一种血清中肾上腺素类物质的检测方法及其富集材料 |
CN111965369A (zh) * | 2020-07-28 | 2020-11-20 | 天津国科医工科技发展有限公司 | 一种血浆中血管紧张素ⅰ检测试剂盒及检测方法 |
CN114460188A (zh) * | 2022-01-14 | 2022-05-10 | 上海睿质科技有限公司 | 检测人血浆儿茶酚胺中间代谢物的试剂盒及测试方法 |
CN115541741A (zh) * | 2022-09-13 | 2022-12-30 | 裕菁科技(上海)有限公司 | 同时检测多种血压升高相关的典型生物标记物的方法 |
CN115541741B (zh) * | 2022-09-13 | 2023-06-02 | 裕菁科技(上海)有限公司 | 同时检测多种血压升高相关的典型生物标记物的方法 |
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