CN113341023B - 一种基于液质联用的血清二氨基庚二酸的检测试剂盒及检测方法与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种基于液质联用的血清二氨基庚二酸的检测试剂盒及检测方法与应用，属于生物检测技术领域。一种基于液质联用的血清二氨基庚二酸的检测试剂盒，包括提取试剂和衍生试剂，所述提取试剂包括DAP标准品和DAP同位素内标，所述衍生试剂包括硼酸盐缓冲液和6‑氨基喹啉‑N‑琥珀酰亚胺甲酯(AQC)。通过试剂盒的研发能够相对快速、精准的定量血清/血浆中DAP的含量，可重复性好。利用同位素内标可以提高检测的准确性和稳定性。利用衍生化可以提高检测的灵敏度。

Description

一种基于液质联用的血清二氨基庚二酸的检测试剂盒及检测 方法与应用
技术领域
本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种基于液质联用的血清二氨基庚二酸的检测试剂盒及检测方法与应用。
背景技术
二氨基庚二酸(DAP)属于细菌细胞壁肽聚糖成分，广泛存在于绝大多数革兰氏阴性菌和一些革兰氏阳性菌。因为它广泛分布于细菌中，二氨基庚二酸被认为是一种高度特异性的细菌分类标记。然而，由于含量低，检测受限，精准测量更难。目前已有研究对尿液中二氨基庚二酸进行检测，其采用邻苯二甲醛(OPA)衍生试剂进行衍生化，但衍生产物不稳定。然而未见有对血液中二氨基庚二酸检测方法的报道，由于尿液中二氨基庚二酸含量不稳定，受多种因素影响(如采尿时间、饮水量等)，波动范围大，故对疾病指示作用受限。而血液中二氨基庚二酸的精准定量对于疾病的早期预警具有重要的指示作用。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供了一种基于液质联用的血清二氨基庚二酸(DAP)的检测试剂盒及检测方法与应用。
本试剂盒开发的方法是利用同位素内标及衍生化试剂，先通过反相柱进行色谱分离，再利用三重四级杆质谱仪进行定量分析，进而更加精准的定量血清/血浆样本中二氨基庚二酸的含量。本方法所述试剂盒中采用6-氨基喹啉-N-琥珀酰亚胺甲酯(AQC)衍生试剂具有稳定性高、操作方便、信号响应好等优点。利用本发明所述试剂盒结合液质联用方法能相对快速、精准的对血液样本中的二氨基庚二酸进行定量分析。
一种基于液质联用的血清二氨基庚二酸的检测试剂盒，所述检测试剂盒包括：提取试剂和衍生试剂，所述提取试剂包括二氨基庚二酸标准品和二氨基庚二酸同位素内标，所述衍生试剂包括硼酸盐缓冲液和6-氨基喹啉-N-琥珀酰亚胺甲酯(AQC)。
进一步地，上述技术方案中，所述DAP同位素内标包括d4-二氨基庚二酸或氘代赖氨酸的甲醇溶液，浓度为0.5～5ng/mL。
进一步地，上述技术方案中，所述6-氨基喹啉-N-琥珀酰亚胺甲酯的浓度为5～20mmol/L。
进一步地，上述技术方案中，硼酸盐缓冲液PH值范围为8～9。
一种基于液质联用的血清二氨基庚二酸的检测方法，采用上述的检测试剂盒处理血清/血浆样本，再联合反向柱进行色谱分离，利用三重四级杆质谱仪定量分析，检测血清中二氨基庚二酸的含量。
一种基于液质联用的血清二氨基庚二酸的检测方法，具体包括如下步骤：
(1)血清/血浆样本处理：血清/血浆样本采用含有二氨基庚二酸同位素内标的甲醇提取液提取，一次涡旋、离心，取上清液冻干；向冻干后的样本中加入硼酸盐缓冲液，二次涡旋混匀，再加入6-氨基喹啉-N-琥珀酰亚胺甲酯，三次涡旋混匀；室温下静置1±0.2min，55±5℃水浴衍生10±2min；反应后置于冰上1±0.2min；
(2)步骤(1)处理得到的样本先通过反相柱进行色谱分离，再利用三重四级杆质谱仪进行定量分析，定量血清/血浆样本中二氨基庚二酸的含量。
进一步地，上述技术方案中，一次涡旋和二次涡旋的时间均为30±2s；三次旋涡的时间为10±2s。
进一步地，上述技术方案中，离心的温度为10±2℃。
进一步地，上述技术方案中，血清/血浆样本和含有二氨基庚二酸同位素内标的甲醇提取液的体积比为1:3～1:5。
进一步地，上述技术方案中，三重四级杆质谱仪的色谱流动相A为0.08％～0.12％甲酸/超纯水，流动相B为0.08％～0.12％甲酸/乙腈；质谱检测二氨基庚二酸离子对为266.1＞171.1，碰撞能5～20eV。
一种基于液质联用的血清二氨基庚二酸的检测试剂盒在检测不同程度急性胰腺炎中的应用，用于48h内区分中重度急性胰腺炎和重度急性胰腺炎。
一种基于液质联用的血清二氨基庚二酸的检测试剂盒在检测脓毒症中的应用
一种基于液质联用的血清二氨基庚二酸的检测方法在检测不同程度急性胰腺炎或脓毒症中的应用，用于48h内区分中重度急性胰腺炎和重度急性胰腺炎。
有益效果：
(1)通过试剂盒的研发能够相对快速、精准的定量血清(血浆)中二氨基庚二酸的含量，可重复性好。
(2)利用同位素内标可以提高检测的准确性和稳定性。二氨基庚二酸含量在0.115-230ng/mL浓度范围内时，标准曲线线性关系非常好(R2>0.9999)。
(3)利用衍生化可以提高检测的灵敏度，DAP含量可以精确到0.1ng/ml。
(4)本发明所述急性胰腺炎(AP)严重程度分级是根据2012急性胰腺炎亚特兰大分类标准，但该分类标准对于中重度和重度的区分存在48h的等待时间窗：即AP患者伴有器官衰竭，48h内恢复即为中重度，48h内未恢复即为重度。而本发明的二氨基庚二酸含量测定能够在相对早期(48h内)辅助区分中重度和重度(见ROC曲线结果)，具有良好的指导意义。
附图说明
图1为DAP的AQC衍生化反应方程式。
图2为DAP标准品谱图。A为标准品浓度为0.85ng/ml的谱图；B为标准品浓度为170ng/ml的谱图。
图3为从血清/血浆样本中分离出来的DAP实际样本谱图。A为人血清实际样本1的谱图；B为人血清实际样本2的谱图。
图4为DAP-AQC的质谱图。
图5为重症急性胰腺炎大鼠血清DAP含量。
图6为不同严重程度急性胰腺炎患者及健康人血清DAP含量；A为SAP患者血清DAP含量分析；B为血清DAP区分MSAP和SAP的ROC曲线。
图7为脓毒症患者血清DAP含量；A为脓毒症患者血清DAP含量分析；B为血清DAP对脓毒症诊断的ROC曲线。
具体实施方式
下述非限定性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
实施例1
本发明利用同位素内标及衍生化试剂，先通过反相柱进行色谱分离，再利用三重四级杆质谱仪进行定量分析，进而更加精准的定量血清(血浆)样本中二氨基庚二酸的含量。
本发明所述试剂盒的组成：提取试剂{二氨基庚二酸标准品(100mg)，二氨基庚二酸同位素内标(氘代赖氨酸(Lys-d4)}；衍生试剂{硼酸盐缓冲液(PH8～9)，6-氨基喹啉-N-琥珀酰亚胺甲酯(AQC)}。
DAP标准品用于标准曲线的绘制：利用0.1M的HCL对DAP标准品进行溶解，再利用50％乙腈/水进行逐级稀释，稀释浓度包括：230、115、23、11.5、2.3、1.15、0.23、0.115、0.023、0.0115、0.0023、0(ng/mL)，以标准品浓度为横坐标，以衍生化后的峰面积为纵坐标绘制标准曲线。在0.115～230ng/mL浓度范围内，标准曲线线性关系非常好(R2＝0.9999)。
血清/血浆样本处理方法：取血样约100μL加入400μL甲醇(含Lys-d4或DAP同位素内标1ng/mL)，涡旋30s后离心(20000g,10min,10℃)。取上层清液400μL冻干。向冻干后的样本中加入70μL硼酸盐缓冲液(BBS，pH8.4)，涡旋30s混匀，再加入20μL衍生试剂AQC，涡旋10s混匀。室温下放置1min左右，55℃水浴衍生10min。反应后置于冰上1min。准备仪器测试。
检测方法：样本色谱分离使用ACQUITY UPLC BEH C8色谱柱(2.1×50mm，1.7m),柱温为50℃，进样室温度为8℃，流速为0.3mL/min。色谱流动相A为0.1％甲酸/超纯水，流动相B为0.1％甲酸/乙腈。梯度洗脱程序为:起始B相2％，在5min内升至9.1％，接下来1min内升至10％，8min时升至95％并保持1min，到10min时B相回至2％并保持1min。
仪器分析使用Waters Xevo TQ-XS三重四级杆质谱仪(Waters，美国)，质谱检测DAP离子对为266.1＞171.1，碰撞能10eV。Lys-d4离子对为321.2＞171.1，碰撞能10eV。
DAP的AQC衍生化反应如图1所示：
DAP-AQC m/z：[M+2C10H6N2O+2H]2+＝266.10324
DAP标准品谱图如图2所示。
通过上述方法处理得到的二氨基庚二酸实际样本谱图如图3所示。
图3中，DAP-AQC的两个峰如图4，m/z＝266.1033
QE全扫，提取可见两个峰，对比两峰的二级质谱，基本相同。结合文献报道，DAP衍生化后可以将手性异构体分离。因此，此二峰应为手性异构峰。
实施例2
利用该检测方法精准定量重症急性胰腺炎大鼠血清DAP含量。
本实验采用28只雄性SD大鼠，分4组：假手术组(SO组)；重症急性胰腺炎模型组(SAP)；清胰颗粒治疗组(QYKL)；新霉素预处理组(Neo)。利用Waters UPLC-TQXS液质联用系统定量分析各组大鼠血清DAP含量。
血清预处理及检测方法同实施例1。
检测结果：与假手术(SO)组相比，SAP大鼠血清DAP水平显著增高(p<0.05)，经院内制剂清胰颗粒治疗后，血清DAP水平有所降低，而新霉素干预后，血清DAP水平显著降低(p<0.05),如图5所示。提示重症胰腺炎大鼠血清DAP水平显著升高。
实施例3
利用该检测方法精准定量不同严重程度急性胰腺炎患者及健康人血清DAP含量。采集急性胰腺炎患者和健康受试者血清样本共121例，其中包括健康组12例；轻度急性胰腺炎患者(MAP)81例；中重度急性胰腺炎患者(MSAP)13例，重度急性胰腺炎患者(SAP)15例。利用该检测方法对各组受试者血清样本DAP含量进行测定。结果显示：SAP患者血清DAP含量明显较其他组升高(p<0.01)(图6A)。对于区分MSAP和SAP具有较好的效力，AUC为0.731(95％CI:0.535～0.926)，cut-off值为1.27，敏感性和特异性分别为86.7％和61.5％(图6B)。
实施例4
利用该检测方法精准定量脓毒症患者血清DAP含量。
采集脓毒症患者和健康受试者血清样本共23例，包括健康组12例，脓毒症患者11例。利用该检测方法对各组受试者血清样本DAP含量进行测定。结果显示：脓毒症患者组血清DAP含量显著高于健康对照组(p<0.01)(图7A)。ROC曲线显示检测指标DAP对于诊断脓毒症具有很高的效力，AUC为0.92(95％CI:0.776～1.000)，cut-off值为2.22，敏感性和特异性分别为90.9％和91.7％(图7B)。

Claims (7)

1.一种基于液质联用的血清二氨基庚二酸的检测试剂盒在检测不同严重程度急性胰腺炎中的应用，其特征在于，用于48h内区分中重度急性胰腺炎和重度急性胰腺炎；所述检测试剂盒包括：提取试剂和衍生试剂，所述提取试剂包括二氨基庚二酸标准品和二氨基庚二酸同位素内标，所述衍生试剂包括硼酸盐缓冲液和6-氨基喹啉-N-琥珀酰亚胺甲酯；
采用所述的检测试剂盒处理血清/血浆样本，再联合反相 柱进行色谱分离，利用三重四级杆质谱仪定量分析，检测血清中二氨基庚二酸的含量；
三重四级杆质谱仪的色谱流动相A为0.08％～0.12％甲酸/超纯水，流动相B为0.08％～0.12％甲酸/乙腈。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述二氨基庚二酸同位素内标包括d4-二氨基庚二酸或氘代赖氨酸的甲醇溶液，浓度为0.5～5ng/mL。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述6-氨基喹啉-N-琥珀酰亚胺甲酯的浓度为5～20mmol/L。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，具体包括如下步骤：
(1)血清/血浆样本处理：血清/血浆样本采用含有二氨基庚二酸同位素内标的甲醇提取液提取，一次涡旋、离心，取上清液冻干；向冻干后的样本中加入硼酸盐缓冲液，二次涡旋混匀，再加入6-氨基喹啉-N-琥珀酰亚胺甲酯，三次涡旋混匀；室温下静置1±0.2min，55±5℃水浴衍生10±2min；反应后置于冰上1±0.2min；
(2)步骤(1)处理得到的样本先通过反相柱进行色谱分离，再利用三重四级杆质谱仪进行定量分析，定量血清/血浆样本中二氨基庚二酸的含量。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，一次涡旋和二次涡旋的时间均为30±2s；三次旋涡的时间为10±2s；离心的温度为10±2℃。
6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，血清/血浆样本和含有二氨基庚二酸同位素内标的甲醇提取液的体积比为1:3～1:5。
7.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，质谱检测二氨基庚二酸离子对为266.1＞171.1，碰撞能5～20eV。
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Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103354833A (zh) * 2010-10-13 2013-10-16 拜奥尼克泌尿学Ip有限公司 细菌核糖核酸细胞壁组合物及其制备和使用方法
CN110366432A (zh) * 2016-12-23 2019-10-22 约翰霍普金斯大学 基于pd-l1表达的肿瘤和免疫细胞成像
CN110514772A (zh) * 2019-08-09 2019-11-29 中国医学科学院基础医学研究所 透明肾细胞癌代谢标志物在肾细胞癌早期筛查和诊断产品中的应用
CN111060607A (zh) * 2019-11-11 2020-04-24 浙江大学 一种用于心脏死亡后捐献供体术前预警移植肾延迟复功的代谢物组合及其筛选方法
CN112689755A (zh) * 2018-09-11 2021-04-20 梅塔博隆股份有限公司 用于检测和定量微生物区系相关代谢物的质谱测定法
CN112730699A (zh) * 2020-12-18 2021-04-30 杭州汉库医学检验所有限公司 一种用于检测血浆中儿茶酚胺及代谢物的方法及试剂盒

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1750126B1 (en) * 2004-05-26 2015-09-16 Ajinomoto Co., Inc. Method and apparatus for analyzing aminofunctional compound

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103354833A (zh) * 2010-10-13 2013-10-16 拜奥尼克泌尿学Ip有限公司 细菌核糖核酸细胞壁组合物及其制备和使用方法
CN110366432A (zh) * 2016-12-23 2019-10-22 约翰霍普金斯大学 基于pd-l1表达的肿瘤和免疫细胞成像
CN112689755A (zh) * 2018-09-11 2021-04-20 梅塔博隆股份有限公司 用于检测和定量微生物区系相关代谢物的质谱测定法
CN110514772A (zh) * 2019-08-09 2019-11-29 中国医学科学院基础医学研究所 透明肾细胞癌代谢标志物在肾细胞癌早期筛查和诊断产品中的应用
CN111060607A (zh) * 2019-11-11 2020-04-24 浙江大学 一种用于心脏死亡后捐献供体术前预警移植肾延迟复功的代谢物组合及其筛选方法
CN112730699A (zh) * 2020-12-18 2021-04-30 杭州汉库医学检验所有限公司 一种用于检测血浆中儿茶酚胺及代谢物的方法及试剂盒

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Reliable and sensitive analysis of amino acids in peptidoglycan of actinomycetes using the advanced Marfey"s method;Nozawa,Y;《Journal of Microbiological Methods》;20070801;第70卷(第2期);第306-311页 *
手性衍生-高效液相色谱法拆分菌体细胞壁中α,ε-二氨基庚二酸非对映异构体;宋志峰等;《化学试剂》;20090415;第31卷(第4期);第277-279页 *

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