CN112730699A - 一种用于检测血浆中儿茶酚胺及代谢物的方法及试剂盒 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种用于检测血浆中儿茶酚胺及代谢物的方法及试剂盒。所述方法包括：(a)将标准品溶液与待测血浆样本分别经沉淀剂进行预处理；(b)使用未经同位素标记的衍生试剂I衍生步骤(a)经预处理的血浆样本得到血浆衍生产物；(c)使用经同位素标记的衍生试剂II衍生步骤(a)经预处理的标准品溶液得到标准品衍生产物；(d)将步骤(b)衍生化后的血浆衍生产物和步骤(c)衍生化后的标准品衍生产物混合，经超高效液相色谱串联三重四极杆质谱进行分离检测。所述检测方法成本低廉，所需样本体积少、检测时间短、分析通量高。

Description

一种用于检测血浆中儿茶酚胺及代谢物的方法及试剂盒

技术领域

本发明涉及化合物检测技术领域，尤其是涉及一种用于检测血浆中儿茶酚胺及代谢物的方法及试剂盒。

背景技术

儿茶酚胺是一种含有儿茶酚(邻苯二酚)和胺基的神经类物质。包括多巴胺、去甲肾上腺素和肾上腺素及它们的衍生物。儿茶酚胺的主要生理作用是兴奋血管的α受体，使血管收缩，血压升高，与心血管疾病的发生和发展具有密切的关系。长期的高儿茶酚胺血症会引起一系列心脏并发症和血管并发症，例如心室肥厚、心肌梗死、心律失常以及血管内皮功能紊乱、颈动脉内膜中层厚度增厚等。而儿茶酚胺在体内的代谢还包括了甲氧基肾上腺素和甲氧基去甲肾上腺素等中间代谢产物。人体血液中的儿茶酚胺及其代谢产物水平能够准确反应患者的病情，具有重要的临床诊断意义。升高常见于嗜铬细胞瘤、神经母细胞瘤、肾上腺髓质增生、脑梗死、重症肌无力、进行性肌营养不良、低血糖、心肌梗死、精神分裂症、躁狂性精神病等；而降低则与帕金森病、癫痫、肾上腺切除后、风湿热、营养不良等密切相关。所以，从儿茶酚胺及其代谢物小分子水平探寻与心血管疾病发生、发展的关系具有重要的科研价值和临床意义。

目前，临床上开展的儿茶酚胺项目主要应用酶联免疫法(ELISA)或化学发光法对血浆中多巴胺(DA)、肾上腺素(E)、去甲肾上腺素(NE)和三项进行检测，由于儿茶酚胺在正常人体里含量较低，而且可被多种酶水解为其代谢产物，另外现有分析方法本身的缺陷，如敏感度不够、特异性差、存在交叉反应等原因，已满足不了临床和科研的需求。

基于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于检测血浆中儿茶酚胺及代谢物的方法及试剂盒。所述方法前处理过程简单，成本低，分析通量高且灵敏度高，可同时检测5种儿茶酚胺及其代谢物。

本发明的技术方案如下：

在一方面，提供了一种用于检测血浆中儿茶酚胺及代谢物的方法，所述方法包括：

(a)将标准品溶液与待测血浆样本分别经沉淀剂进行预处理；

(b)使用未经同位素标记的衍生试剂I衍生步骤(a)经预处理的血浆样本得到血浆衍生产物；

(c)使用经同位素标记的衍生试剂II衍生步骤(a)经预处理的标准品溶液得到标准品衍生产物；

(d)将步骤(b)衍生化后的血浆衍生产物和步骤(c)衍生化后的标准品衍生产物混合，经超高效液相色谱串联三重四极杆质谱进行分离检测。

所述同位素标记采用氘进行，所述氘选自氘3(d-3)、氘4(d-4)、氘5(d-5)或氘6(d-6)，优选为氘5(d-5)。

在一个实施方案中，所述衍生试剂I为10％-30％V/V的苯甲酰氯的乙腈溶液，衍生试剂II为10％-30％V/V的氘代苯甲酰氯的乙腈溶液；或者，所述衍生试剂I为10％-30％V/V的苯甲酰氯的甲醇溶液，衍生试剂II为10％-30％V/V的氘代苯甲酰氯的甲醇溶液。

在一个优选的方案中，所述衍生试剂I为20％V/V的苯甲酰氯的乙腈溶液，衍生试剂II为20％V/V的氘代苯甲酰氯的乙腈溶液。

在一个优选的实施方案中，苯甲酰氯溶液的配制溶剂为乙腈，氘代苯甲酰氯溶液配制溶剂为乙腈。

在一个实施方案中，步骤(b)中，所述衍生试剂I与所述待测血浆样本的体积比为1：3至1：1，优选2：3。

在一个实施方案中，步骤(c)中，所述衍生试剂II与所述标准品溶液的体积比为1：3至1：1，优选2：3。

在一个实施方案中，在所述衍生之前，在步骤(b)中，将衍生试剂I与经预处理的血浆样本混匀，离心后取全部上清液加入缓冲液，涡旋混匀后进行衍生；以及在步骤(c)中将衍生试剂II与经预处理的标准品溶液混匀，离心后取全部上清液加入缓冲液，涡旋混匀后进行衍生；

在一个优选的实施方案中，所述缓冲液为0.2-1.0M Na₂CO₃-NaHCO₃缓冲液；更优选地，所述缓冲液为0.5M Na₂CO₃-NaHCO₃缓冲液。

在一个优选的实施方案中，所述衍生在55℃-75℃条件下进行30-50min；更优选在65℃条件下进行40min。

在一个具体实施方案中，所述离心条件为4℃13000rpm离心10min。

在一个实施方案中，所述沉淀剂(也称为前处理试剂)选自乙腈或甲醇；所述沉淀剂的体积为标准品溶液或待测血浆样本体积的1/3至1/2。

在一个实施方案中，在步骤(d)中，所述衍生化后的血浆衍生产物与衍生化后的标准品衍生产物按照1：3至3：1的体积比混合，优选按照1：1的体积比混合。

在一个实施方案中，所述方法还包括标准品溶液的制备步骤：

使用0.1mol/L盐酸将肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺、甲氧基肾上腺素和甲氧基去甲肾上腺素物质溶解制备储备液，然后稀释至浓度在10.0-15.0ng/mL之间，混合制备标准品溶液，所得混合标准品溶液中各儿茶酚胺物质的浓度一致。

在一个实施方案中，所述方法还包括质控品溶液的制备以及对质控品的检测，所述质控品的制备步骤如下：

在所述混合标准品溶液中加入牛血清白蛋白缓冲液配制成浓度范围在3.2-4.8ng/mL之间的第一质控品以及浓度范围在40.0-60.0ng/mL之间的第二质控品。对质控品的检测可以按照与标准品相同的程序进行。

在一个优选的实施方案中，牛血清白蛋白缓冲液为PBS缓冲液(pH7.2～7.4)，牛血清白蛋白浓度为5％。

在一个实施方案中，所述超高效液相色谱的条件为：

色谱柱采用硅胶基质C18反相色谱柱；优选为Agilent Proshell 120 EC-C18 3.0×50mm 2.7μm色谱柱；

流动相A为0.05％-0.2％甲酸-水溶液，流动相B为0.05％-0.2％甲酸-乙腈溶液；优选地，流动相A为0.1％甲酸-水溶液，流动相B为0.1％甲酸-乙腈溶液；

流动相梯度：流动相B，0-3.5min，30％-40％；3.5-4min，40％-95％；4.0-5.0min；95％-95％，5.0-5.1min，95％-30％；

流速为0.5mL/min；

进样体积为5μL；

柱温为30℃-40℃；优选地，柱温为35℃。

甲氧基去甲肾上腺素保留时间为2.18min，甲氧基肾上腺素保留时间为2.39min，去甲肾上腺素保留时间为3.08min，肾上腺素保留时间为3.30min，多巴胺保留时间为3.70min。5种儿茶酚胺经色谱柱分离后流出顺序依次为甲氧基去甲肾上腺素、甲氧基肾上腺素、去甲肾上腺素、肾上腺素、多巴胺。(儿茶酚胺苯甲酰氯衍生产物与氘代苯甲酰氯衍生产物保留时间一致)。

在一个实施方案中，色谱柱流出的5种儿茶酚胺苯甲酰氯衍生产物和5种儿茶酚胺氘代苯甲酰氯衍生产物胺进入质谱系统检测；利用三重四级杆多反应监测模式特异性地检测10种儿茶酚胺衍生产物，根据不同的色谱保留时间，设置不同的检测窗口以及参数。

所述质谱的条件为：

质谱为Waters Xevo TQS；

检测正离子模式，多重反应监测，离子源参数如下：毛细管电压3500V，雾化气温度450℃，离子源温度380℃，雾化气55Arb，辅助气20Arb，气帘气2Arb。

在一个具体的实施方案中，每个儿茶酚胺及代谢物化合物采用2个离子对进行定性和定量，如下表所示。

在一个实施方案中，所述方法还包括采用单点定量方法进行定量，以所述血浆样本中儿茶酚胺衍生产物的峰面积与标准品溶液中儿茶酚胺经同位素标记衍生产物的峰面积与浓度的关系进行定量。在验证线性相关性良好的基础上，采用校准曲线的一个浓度点，利用浓度于峰面积成正比的关系，计算出血浆中儿茶酚胺的含量。

血浆样本中儿茶酚胺苯甲酰氯衍生产物的峰面积为A1，标准品溶液中儿茶酚胺氘代苯甲酰氯衍生产物的峰面积为A2，标准品溶液儿茶酚胺浓度为N1，血浆样本中儿茶酚胺浓度为N2，浓度与峰面积成正比关系，从而计算出血浆中儿茶酚胺的浓度。

在另一方面，本发明还提供了一种用于检测血浆中儿茶酚胺及代谢物的试剂盒，所述试剂盒包括：

(1)标准品：肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺、甲氧基肾上腺素和甲氧基去甲肾上腺素的儿茶酚胺混合标准品溶液，浓度在10.0-15.0ng/mL之间，儿茶酚胺混合标准品溶液中各儿茶酚胺物质的浓度一致；

(2)质控品：包括第一质控品，浓度范围在3.2-4.8ng/mL之间；以及第二质控品，浓度范围在40.0-60.0ng/mL之间；在(1)所述混合标准品溶液中加入牛血清白蛋白缓冲液配制成浓度范围在3.2-4.8ng/mL之间的第一质控品以及浓度范围在40.0-60.0ng/mL之间的第二质控品；

(3)衍生试剂I：10-30％V/V的苯甲酰氯的乙腈溶液；衍生试剂II：10-30％V/V的氘代苯甲酰氯的乙腈溶液；

(4)沉淀剂：乙腈或甲醇。

标准品用于血浆样本中儿茶酚胺的定量；质控品作为检验试剂盒以及预处理实验操作过程、质谱检测过程等精密度准确度的指标。其中第一质控品和第二质控品分别为低、高质控。

有益效果：

(1)本发明提供的检测方法预处理过程不需要另外加入同位素内标物，不需要使用每个检测物质的同位素内标进行定性定量，同位素内标价格昂贵，极大的降低了检测成本；

(2)本发明使用衍生试剂20％的氘代苯甲酰氯衍生儿茶酚胺，有效的提高了检测灵敏度；

(3)本发明采用单点定量方法，不需要配制校准曲线，对校准曲线溶液进行前处理及检测，极大的缩短预处理时间，有效提高样本分析通量，进一步降低检测成本。

附图说明

为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明实施例提供的检测方法步骤的流程示意图；

图2为本发明中定性苯甲酰氯衍生儿茶酚胺产物及氘代苯甲酰氯衍生儿茶酚胺产物的色谱图，其中NMN为甲氧基去甲肾上腺素；MN为甲氧基肾上腺素，NE为去甲肾上腺素，E为肾上腺素以及DA为多巴胺；

图3为本发明中肾上腺素的校准曲线图；

图4为本发明中去甲肾上腺素的校准曲线图；

图5为本发明中多巴胺的校准曲线图；

图6为本发明中甲氧基肾上腺素的校准曲线图；

图7为本发明中甲氧基去甲肾上腺素的校准曲线图。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

5种儿茶酚胺标准物质肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺、甲氧基肾上腺素和甲氧基去甲肾上腺素，以及衍生试剂苯甲酰氯、氘代苯甲酰氯-d5均为TRC公司产品。图1为本发明实施例提供的检测方法步骤的流程示意图。

(1)样品制备

标准品：将购得的5种儿茶酚胺标准物质分别使用0.1mol/L盐酸溶解，配制成一级标准储备液；然后用稀释溶剂0.1mol/L盐酸逐级稀释至浓度在10.0-15.0ng/mL之间的系列标准品；

质控品：首先配制5％牛血清白蛋白的PBS溶液，加入5种儿茶酚胺混合标准溶液，混匀，配制低、高已知浓度的质控品，质控(低)浓度在3.2-4.8ng/mL之间，质控(高)浓度在40.0-60.0ng/mL之间。

(2)样品的前处理+衍生

将300μL血浆加入到1.5mL离心管内，将100μL沉淀剂(乙腈)加入到上述1.5mL离心管内，沉淀后，取上清，再加入衍生试剂Ⅰ(20％的苯甲酰氯乙腈溶液)200μL，涡旋混匀，4℃13000rpm离心10min，取全部上层清液至2.0mL的离心管，加入100μL 0.5M Na₂CO₃-NaHCO₃缓冲溶液，涡旋混匀5min，65℃条件下衍生40min，得到衍生产物(血浆)，备用。

(3)校准品的前处理+衍生

取校准300μL加入到1.5mL离心管内，将100μL沉淀剂(乙腈)加入到上述1.5mL离心管内，沉淀后，取上清，再加入试剂包A中的衍生试剂Ⅱ(20％的氘代苯甲酰氯-d5乙腈溶液)200μL，涡旋2min混匀，4℃13000rpm离心10min，取全部上层清液至2.0mL的离心管，加入100μL 0.5M Na₂CO₃-NaHCO₃缓冲溶液，涡旋混匀5min，65℃条件下衍生40min，得到衍生产物(校准)，备用。

(4)制备衍生产物混合样本

将制备的衍生产物(血浆)和制备的衍生产物(校准)按体积比1：1混合，涡旋混匀。

(5)液相色谱分离

应用超高效液相色谱系统，在反相C18色谱柱上，流动相梯度洗脱，衍生产物(校准)和衍生产物(血浆)混合样本中5种儿茶酚胺苯甲酰氯衍生产物和5种儿茶酚胺氘代苯甲酰氯衍生产物在色谱柱上分离。

色谱条件如下：

色谱柱为Agilent Proshell 120 EC-C18 3.0×50mm 2.7μm；

流动相A为0.1％甲酸/水溶液，流动相B为0.1％甲酸/乙腈溶液；

流速为0.5mL/min，进样体积为5μL；柱温为35℃。

梯度洗脱如表1所示：

表1

时间(min)	流动相A百分比％	流动相B百分比％
			0.0	70	30
3.5	15	40
			4.0	10	95
5.0	10	95
			5.1	70	30
6.0	70	30

甲氧基去甲肾上腺素保留时间为2.18min，甲氧基肾上腺素保留时间为2.39min，去甲肾上腺素保留时间为3.08min，肾上腺素保留时间为3.30min，多巴胺保留时间为3.70min。5种儿茶酚胺经色谱柱分离后流出顺序依次为甲氧基去甲肾上腺素、甲氧基肾上腺素、去甲肾上腺素、肾上腺素、多巴胺。(儿茶酚胺苯甲酰氯衍生产物与氘代苯甲酰氯衍生产物保留时间一致)。图2为本发明中定性苯甲酰氯衍生儿茶酚胺产物及氘代苯甲酰氯衍生儿茶酚胺产物的色谱图，其中NMN为甲氧基去甲肾上腺素；MN为甲氧基肾上腺素，NE为去甲肾上腺素，E为肾上腺素以及DA为多巴胺。

(6)串联质谱检测

色谱柱流出的10种儿茶酚胺衍生产物进入质谱系统检测，质谱为Waters XevoTQS，检测正离子模式，多重反应监测。特定的离子源参数和MRM参数(如下表2所示)，检测校准品中儿茶酚胺苯甲酰氯-d5衍生产物和血浆中儿茶酚胺苯甲酰氯衍生产物。

表2

每个化合物两个离子对，分别用于定量和定性，定性定量离子如表3所示。

表3

＊为定量离子对

单点定量方法进行定量：

血浆中儿茶酚胺苯甲酰氯衍生产物的峰面积为A1，校准中儿茶酚胺苯甲酰氯-d5衍生产物的峰面积为A2，校准中儿茶酚胺浓度为N1，血浆中儿茶酚胺浓度为N2，浓度与峰面积成正比关系，从而计算出血浆中儿茶酚胺的浓度。

图3为本发明中肾上腺素的校准曲线图；图4为本发明中去甲肾上腺素的校准曲线图；图5为本发明中多巴胺的校准曲线图；图6为本发明中甲氧基肾上腺素的校准曲线图；图7为本发明中甲氧基去甲肾上腺素的校准曲线图。

实施例2

相应地，提供了上述检测方法的检测试剂盒，试剂盒组成包括：

试剂包A：包括沉淀剂、衍生试剂Ⅰ、衍生试剂Ⅱ；其中沉淀剂为乙腈或甲醇；衍生试剂Ⅰ为20％的苯甲酰氯乙腈溶液(V/V)或20％的苯甲酰氯甲醇溶液(V/V)，衍生试剂Ⅱ为20％的氘代苯甲酰氯的乙腈溶液(V/V)或20％的氘代苯甲酰氯甲醇溶液(V/V)。

试剂盒中所有组分分装，贴标签，包装。

试剂包B：标准品和质控品(其中标准品为5种儿茶酚胺标准物质肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺、甲氧基肾上腺素和甲氧基去甲肾上腺素的标准品，浓度在10.0-15.0ng/mL之间；质控品为5种儿茶酚胺标准物质肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺、甲氧基肾上腺素和甲氧基去甲肾上腺素)上述5种儿茶酚胺的混合标准溶液中各儿茶酚胺浓度一致。

对比例1

与未经衍生试剂衍生的方法相比：

灵敏度：5种儿茶酚胺在血浆中的含量均很低，尤其是多巴胺、甲氧基肾上腺素和甲氧基去甲肾上腺素含量更低，正常人群血浆样本中多巴胺含量＜0.20nmol/L，甲氧基肾上腺素＜0.50nmol/L，甲氧基去甲肾上腺素＜0.90nmol/L，因此直接检测需要灵敏度相对较高的质谱仪，儿茶酚胺经衍生后检测，灵敏度可提高30-50倍，在灵敏度相对较低的质谱仪上能够实现儿茶酚胺的检测，降低仪器购买成本。

检测时间：本发明的方法检测时间短，6min/样本，该方法每小时能够完成10份样本，每天按照22小时仪器运行时间计算，可完成样本220份，另外两个小时为仪器冲洗维护时间。(分析通量是指单位时间完成样本数量，一般以小时或天计算，分析时间缩短的同时分析通量增加)。

本发明不需要使用每种儿茶酚胺的同位素内标，节省了昂贵的同位素内标费用，极大的降低了检测成本；苯甲酰氯衍生儿茶酚胺后检测，有效的提高了检测灵敏度；预处理过程不需要另外加入同位素内标物，可采用单点定量方法，不需要配制校准曲线，对校准曲线溶液进行前处理及检测，极大的缩短预处理时间，有效提高样本分析通量，进一步降低检测成本。

最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims (10)

1.一种用于检测血浆中儿茶酚胺及代谢物的方法，其特征在于，所述方法包括：

(a)将标准品溶液与待测血浆样本分别经沉淀剂进行预处理；

(b)使用未经同位素标记的衍生试剂I衍生步骤(a)经预处理的血浆样本得到血浆衍生产物；

(c)使用经同位素标记的衍生试剂II衍生步骤(a)经预处理的标准品溶液得到标准品衍生产物；

(d)将步骤(b)衍生化后的血浆衍生产物和步骤(c)衍生化后的标准品衍生产物混合，经超高效液相色谱串联三重四极杆质谱进行分离检测。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述衍生试剂I为10％-30％V/V的苯甲酰氯的乙腈溶液，衍生试剂II为10％-30％V/V的氘代苯甲酰氯的乙腈溶液；或者，所述衍生试剂I为10％-30％V/V的苯甲酰氯的甲醇溶液，衍生试剂II为10％-30％V/V的氘代苯甲酰氯的甲醇溶液；

可选地，步骤(b)中，所述衍生试剂I与所述经预处理的血浆样本的体积比为1：3至1：1，优选2：3；

可选地，步骤(c)中，所述衍生试剂II与所述经预处理的标准品溶液的体积比为1：3至1：1，优选2：3。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(b)中，将所述衍生试剂I与经预处理的血浆样本混匀，离心后取全部上清液加入缓冲液，涡旋混匀后进行衍生；以及在步骤(c)中将所述衍生试剂II与经预处理的标准品溶液混匀，离心后取全部上清液加入缓冲液，涡旋混匀后进行衍生；

优选地，所述缓冲液为0.2-1.0M Na₂CO₃-NaHCO₃缓冲液；更优选地，所述缓冲液为0.5MNa₂CO₃-NaHCO₃缓冲液；

优选地，所述衍生在55℃-75℃条件下进行30-50min；更优选在65℃条件下进行40min。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(a)中，所述沉淀剂选自乙腈或甲醇；所述沉淀剂的体积为标准品溶液或待测血浆样本体积的1/3至1/2；

在步骤(d)中，所述衍生化后的血浆衍生产物与衍生化后的标准品衍生产物按照1：3至3：1的体积比混合，优选按照1：1的体积比混合。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括标准品溶液的制备步骤：

使用0.1mol/L盐酸将肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺、甲氧基肾上腺素和甲氧基去甲肾上腺素物质溶解制备储备液，然后稀释至浓度在10.0-15.0ng/mL之间，混合制备标准品溶液，所得混合标准品溶液中各儿茶酚胺物质的浓度一致。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述方法还包括质控品溶液的制备以及对质控品的检测，所述质控品的制备步骤如下：

在所述混合标准品溶液中加入牛血清白蛋白缓冲液配制成浓度范围在3.2-4.8ng/mL之间的第一质控品以及浓度范围在40.0-60.0ng/mL之间的第二质控品。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述超高效液相色谱的条件为：

色谱柱采用硅胶基质C18反相色谱柱；优选为Agilent Proshell 120EC-C18 3.0×50mm 2.7μm色谱柱；

流动相A为0.05％-0.2％甲酸-水溶液，流动相B为0.05％-0.2％甲酸-乙腈溶液；优选地，流动相A为0.1％甲酸-水溶液，流动相B为0.1％甲酸-乙腈溶液；

流动相梯度：流动相B，0-3.5min，30％-40％；3.5-4min，40％-95％；4.0-5.0min；95％-95％，5.0-5.1min，95％-30％；

流速为0.5mL/min；

进样体积为5μL；

柱温为30℃-40℃；优选地，柱温为35℃。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述质谱的条件为：

质谱为Waters Xevo TQS；

电喷雾离子源；正离子模式，多重反应监控，毛细管电压3500V，离子源温度450℃。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括采用单点定量方法进行定量，以所述血浆样本中儿茶酚胺衍生产物的峰面积与标准品溶液中儿茶酚胺经同位素标记衍生产物的峰面积与浓度的关系进行定量。

10.一种用于检测血浆中儿茶酚胺及代谢物的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：

(1)标准品：肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺、甲氧基肾上腺素和甲氧基去甲肾上腺素的儿茶酚胺混合标准品溶液，浓度在10.0-15.0ng/mL之间，儿茶酚胺混合标准品溶液中各儿茶酚胺物质的浓度一致；

(2)质控品：包括第一质控品，浓度范围在3.2-4.8ng/mL之间；以及第二质控品，浓度范围在40.0-60.0ng/mL之间；在(1)所述混合标准品溶液中加入牛血清白蛋白缓冲液配制成浓度范围在3.2-4.8ng/mL之间的第一质控品以及浓度范围在40.0-60.0ng/mL之间的第二质控品；

(3)衍生试剂I：10％-30％V/V的苯甲酰氯的乙腈溶液；衍生试剂II：10％-30％V/V的氘代苯甲酰氯的乙腈溶液；

(4)沉淀剂：乙腈或甲醇。

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