CN114675039A

CN114675039A - 激活素-actrii拮抗剂及用于治疗贫血症的用途

Info

Publication number: CN114675039A
Application number: CN202210225878.XA
Authority: CN
Inventors: 肯尼思·M·阿蒂; 克里斯多佛·罗瓦尔迪; 阿伯达拉曼恩·拉亚德姆
Original assignee: Celgene Corp; Acceleron Pharma Inc
Current assignee: Celgene Corp; Acceleron Pharma Inc
Priority date: 2014-12-03
Filing date: 2015-12-03
Publication date: 2022-06-28
Also published as: EP4233889A2; US20170360887A1; AU2015358469B2; CA2969572A1; HK1245397A1; BR112017011722A2; TWI773117B; FI3227675T3; RS64214B1; EP4233889A3; PL3227675T3; HRP20230504T1; TW201636044A; JP7092853B2; ES2946160T3; MD4801C1; IL252631A0; IL252631B1; CN107533040B; JP2021038249A

Abstract

本发明提供的是用于在任何哺乳动物中治疗对象的贫血症、需要RBC输血的贫血症、低危或中危‑1骨髓增生异常综合征(MDS)和/或非增殖慢性髓单核细胞白血病(CMML)的方法，其中所述方法包括将激活素‑ActRII信号转导抑制剂给予需要治疗的对象。

Description

激活素-ACTRII拮抗剂及用于治疗贫血症的用途

1.相关申请

本申请为2015年12月3日提交的、发明名称为“激活素-ACTRII拮抗剂及用于治疗贫血症的用途”、申请号为201580075198.2的中国发明专利申请的分案申请。

本申请要求2014年12月3日提交的美国临时专利申请号62/086,977的优先权的权益。本申请还要求2014年12月5日提交的美国临时专利申请号62/088,478、2015年4月28日提交的美国临时专利申请号62/153,872、2015年6月10日提交的美国临时专利申请号62/173,782和2015年9月15日提交的美国临时专利申请号62/218,728的优先权的权益；其每一个的完整公开内容均通过引用以其整体结合到本文中并且用于所有目的。

2.序列表

本申请与序列表的计算机可读形式(CRF)拷贝一起提交，所提交的文件名为“12827_978_228_Sequence_Listing.txt”，于2015年11月19日创建，大小为93,638字节，与序列表的纸质复印件完全相同，通过引用以其整体结合到本文中并且用于所有目的。

3.领域

本文提供的是用于长期治疗对象的(i)贫血症；(ii)需要RBC输血的贫血症；(iii)骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)；和/或(iv)非增殖慢性髓单核细胞白血病(CMML)的方法，其中所述方法包括将激活素-ActRII信号转导抑制剂(Activin-ActRII signaling inhibitor)给予需要长期治疗的对象。这样的激活素-ActRII信号转导抑制剂可以是ActRIIA和/或ActRIIB信号转导的信号转导抑制剂。本文提供的是长期治疗对象的(i)贫血症；(ii)需要红细胞(red blood cell,RBC)输血的贫血症；(iii)MDS；和/或(iv)非增殖CMML的方法，其中所述对象具有环形铁粒幼细胞。

4.背景

贫血是血液中的红细胞数减少或者血红蛋白低于正常数量。贫血也可以由血红蛋白的氧合能力降低引起。贫血是最常见的血液病。贫血可以由无效红细胞生成引起。如果有活性的红细胞生成能发生但是成熟红细胞无法以适当速率发育，就存在无效红细胞生成。祖细胞在达到成熟红细胞的阶段之前就经历了细胞凋亡。MDS包含以无效造血为特征的造血干细胞紊乱。此外，MDS紊乱包括以环形铁粒幼细胞为特征的紊乱。环形铁粒幼细胞是异常的成红细胞(erythroblast)。而且，与MDS相关的某些体细胞突变引起环形铁粒幼细胞形成和无效红细胞生成。剪接因子3B1(SF3B1)中的显性突变与环形铁粒幼细胞的形成相关。环形铁粒幼细胞是一类成红细胞，其中最少五个含铁(铁质沉着)颗粒至少覆盖了核周长的三分之一。参见例如，Mufti等人,2008,Haematologica,93(11):1712-7。环形铁粒幼细胞含有铁负载的线粒体。环形铁粒幼细胞的存在可以通过普鲁士蓝染色(Prussian bluestaining)和目测进行检测。在外周血和/或骨髓涂片中可以检测到环形铁粒幼细胞。

两种相关的II型受体ActRIIA和ActRIIB，已被鉴定为激活素的II型受体(Mathews和Vale,1991,Cell 65:973-982；Attisano等人,1992,Cell 68:97-108)。除激活素以外，ActRIIA和ActRIIB还可与几种其它的TGF-β家族蛋白质(包括BMP7、Nodal、GDF8和GDF11)在生物化学上相互作用(Yamashita等人,1995,J.Cell Biol.130:217-226；Lee和McPherron,2001,Proc.Natl.Acad.Sci.98:9306-9311；Yeo和Whitman,2001,Mol.Cell 7:949-957；Oh等人,2002,Genes Dev.16:2749-54)。ALK4是激活素、特别是激活素A的主要的I型受体，而ALK-7也可用作激活素、特别是激活素B的受体。

由激活素-受体IIA型(ActRIIA)的胞外结构域(ECD)和人IgG1 Fc结构域组成的人源化融合蛋白以高亲和力与激活素-A结合，从而通过内源ActRIIA-受体阻断信号转导。激活素-A是影响RBC-成熟晚期的一种类红细胞-分化因子(Murata M,Onomichi K,Eto Y,Shibai H和Muramatsu M.Expression of erythroid differentiation factor inChinese hamster ovary cells(类红细胞分化因子在中国仓鼠卵巢细胞中的表达).Biochem Biophys Res Commun 1988；151:230-5)。用于提高RBC水平的ActRII信号转导抑制剂已有描述(例如，专利申请公布号20110038831、20100204092、20100068215、20100028332、20100028331和20090163417)。

5.概述

本文提供的是治疗对象的血液相关紊乱(blood-related disorder)的方法，包括(a)测定所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比；和(b)如果所述对象中至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或20％的成红细胞是环形铁粒幼细胞，将介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间的药学上有效剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象。在某些实施方案中，所述血液相关紊乱是贫血症、骨髓增生异常综合征(MDS)或非增殖慢性髓单核细胞白血病(CMML)。在某些实施方案中，在第一时间测定所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比。在某些实施方案中，所述第一时间是在将药学上有效剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象的1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、3个月、4个月、5个月或6个月以内。

本文提供的是治疗对象的血液相关紊乱的方法，包括将激活素受体II型(ActRII)信号转导抑制剂以药学上有效剂量给予所述对象并且持续一段时间周期以实现(i)与所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的初始百分比相比，所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比长期降低；和/或(ii)与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象的血红蛋白水平相比，所述对象的血红蛋白水平长期增加；其中所述药学上有效剂量为介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间，和其中所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的初始百分比为至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或至少20％。在某些实施方案中，所述血液相关紊乱是贫血症、MDS或非增殖CMML。本文提供的是治疗对象的贫血症的方法，包括将激活素受体II型(ActRII)信号转导抑制剂以药学上有效剂量给予所述对象并且持续一段时间周期以实现(i)与所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的初始百分比相比，所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比长期降低；和/或(ii)与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象的血红蛋白水平相比，所述对象的血红蛋白水平长期增加；其中所述药学上有效剂量为介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间，和其中所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的初始百分比为至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或至少20％。在某些实施方案中，所述对象是需要RBC输血的对象。本文提供的是用于治疗对象的MDS的方法，包括将ActRII信号转导抑制剂以药学上有效剂量给予所述对象并且持续一段时间周期以实现(i)与所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的初始百分比相比，所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比长期降低；和/或(ii)与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象的血红蛋白水平相比，所述对象的血红蛋白水平长期增加；其中所述药学上有效剂量为介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间，和其中所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的初始百分比为至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或至少20％。本文提供的是用于治疗对象的非增殖CMML的方法，包括将ActRII信号转导抑制剂以药学上有效剂量给予所述对象并且持续一段时间周期以实现(i)与所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的初始百分比相比，所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比长期降低；和/或(ii)与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象的血红蛋白水平相比，所述对象的血红蛋白水平长期增加；其中所述药学上有效剂量为介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间，和其中所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的初始百分比为至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或至少20％。

在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂给药的时间周期是1、2、3、4、5或6个月。在某些实施方案中，所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的初始百分比是在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比。在某些实施方案中，在ActRII信号转导抑制剂给药的时间周期之后至少1、2、3、4、5、6、12、18或24个月，维持所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比的长期降低。在某些实施方案中，所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比的长期降低是比在ActRII信号转导抑制剂给药的时间周期之后至少6、12、18或24个月，所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的初始百分比低至少1.5、2.5、5.0、7.5或10.0倍。在某些实施方案中，所述对象的初始血红蛋白水平为在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象的血红蛋白水平。在某些实施方案中，所述对象的初始血红蛋白水平为小于约11g/dL。在某些实施方案中，在ActRII信号转导抑制剂给药的时间周期之后至少3、4、5、6、12、18或24个月，维持所述对象的血红蛋白水平的长期增加。在某些实施方案中，所述对象的血红蛋白水平的长期增加为在ActRII信号转导抑制剂给药的时间周期之后至少3、4、5、6、12、18或24个月所述对象的血红蛋白水平介于约11g/dL和18g/dL之间。在某些实施方案中，在ActRII信号转导抑制剂给药的时间周期之后至少3、4、5、6、12、18或24个月，所述对象不需要红细胞输血。

在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂按每三周一次给予。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂按(i)每28天一次；或(ii)每42天一次给予。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂经由注射给予。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂经皮下给予。

在某些实施方案中，所述方法还包括测定在ActRII信号转导抑制剂给药的时间周期之后6、12、18和/或24个月所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的另一百分比。在某些实施方案中，所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比通过普鲁士蓝染色来测定。在某些实施方案中，所述方法还包括测定在ActRII信号转导抑制剂给药的时间周期之后6、12、18和/或24个月所述对象的血红蛋白的另一水平。

本文还提供的是用于治疗对象的血液相关紊乱的方法，其中所述方法包括：(a)测定所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的第一百分比；和(b)(i)如果所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的第一百分比为至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或至少20％，将ActRII信号转导抑制剂以介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间的药学上有效剂量给予所述对象一段短的时间周期，或(ii)如果所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比为小于10％，将ActRII信号转导抑制剂以介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间的药学上有效剂量给予所述对象一段长的时间周期。在某些实施方案中，所述血液相关紊乱是贫血症、需要输血的贫血症、MDS或非增殖CMML。本文还提供的是用于治疗对象的贫血症的方法，其中所述方法包括：(a)测定所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的第一百分比；和(b)(i)如果所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的第一百分比为至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或至少20％，将ActRII信号转导抑制剂以介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间的药学上有效剂量给予所述对象一段短的时间周期，或(ii)如果所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比为小于10％，将ActRII信号转导抑制剂以介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间的药学上有效剂量给予所述对象一段长的时间周期。在某些实施方案中，所述对象是需要输血的对象。本文还提供的是用于治疗对象的MDS的方法，其中所述方法包括：(a)测定所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的第一百分比；和(b)(i)如果所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的第一百分比为至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或至少20％，将ActRII信号转导抑制剂以介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间的药学上有效剂量给予所述对象一段短的时间周期，或(ii)如果所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比为小于10％，将ActRII信号转导抑制剂以介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间的药学上有效剂量给予所述对象一段长的时间周期。本文还提供的是用于治疗对象的非增殖CMML的方法，其中所述方法包括：(a)测定所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的第一百分比；和(b)(i)如果所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的第一百分比为至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或至少20％，将ActRII信号转导抑制剂以介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间的药学上有效剂量给予所述对象一段短的时间周期，或(ii)如果所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比为小于10％，将ActRII信号转导抑制剂以介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间的药学上有效剂量给予所述对象一段长的时间周期。

在某些实施方案中，在给予ActRII信号转导抑制剂一段短的时间周期的所述对象中，在ActRII信号转导抑制剂给药的短时间周期之后至少6、12、18或24个月，所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的第一百分比的被降低至小于10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或小于1％。在某些实施方案中，所述对象的血红蛋白水平为小于约11g/dL。在某些实施方案中，在ActRII信号转导抑制剂给药的时间周期之后至少3、4、5、6、12、18或24个月，在给予ActRII信号转导抑制剂一段短的时间周期的所述对象的血红蛋白水平为介于约11g/dL和18g/dL之间。在某些实施方案中，所述短的时间周期是1、2、3、4或5个月。在某些实施方案中，所述长的时间周期是至少6、12、18或24个月。在某些实施方案中，在ActRII信号转导抑制剂给药的时间周期之后至少3、4、5、6、12、18或24个月，所述对象不需要红细胞输血。

在某些实施方案中，所述方法还包括测定在ActRII信号转导抑制剂给药的时间周期之后6、12、18和/或24个月所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的第二百分比。在某些实施方案中，所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比通过普鲁士蓝染色来测定。在某些实施方案中，所述方法还包括测定在ActRII信号转导抑制剂给药的时间周期之后6、12、18和/或24个月所述对象的血红蛋白水平。

本文还提供的是治疗对象的血液相关紊乱的方法，其中所述方法包括：(a)经过测定所述对象具有：所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比为至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或至少20％；(b)将介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间的初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象；(c)在一段时间周期之后测定所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的第二百分比；和(d)任选将调整剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象。在某些实施方案中，所述血液相关紊乱是贫血症、需要输血的贫血症、MDS或非增殖CMML。本文还提供的是治疗对象的贫血症的方法，其中所述方法包括：(a)经过测定所述对象具有：所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比为至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或至少20％；(b)将介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间的初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象；(c)在一段时间周期之后测定所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的第二百分比；和(d)任选将调整剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象。在某些实施方案中，所述对象是需要输血的对象。本文还提供的是治疗对象的MDS的方法，其中所述方法包括：(a)经过测定所述对象具有：所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比为至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或至少20％；(b)将介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间的初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象；(c)在一段时间周期之后测定所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的第二百分比；和(d)任选将调整剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象。本文还提供的是治疗对象的非增殖慢性髓单核细胞白血病(CMML)的方法，其中所述方法包括：(a)经过测定所述对象具有：所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比为至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或至少20％；(b)将介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间的初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象；(c)在一段时间周期之后测定所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的第二百分比；和(d)任选将调整剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象。

在某些实施方案中，所述时间周期是1、2、3、4、5或6个月。在某些实施方案中，所述初始剂量经由注射给予。在某些实施方案中，所述初始剂量经皮下给予。在某些实施方案中，所述初始剂量按每三周一次给予。在某些实施方案中，所述初始剂量按(i)每28天一次；或(ii)每42天一次给予。

在某些实施方案中，在测定所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的第一百分比之后马上或在其至多1天、2天、3天、4天、5天、6天、或1周、2周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月以内，将所述初始剂量给予所述对象。在某些实施方案中，在测定所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的第二百分比之后马上或在其至多1天、2天、3天、4天、5天、6天、或1周、2周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月以内，将所述调整剂量给予所述对象。在某些实施方案中，如果所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的第二百分比为至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或至少20％，所述ActRII信号转导抑制剂的调整剂量是大于初始剂量。在某些实施方案中，所述调整剂量为比初始剂量高约0.05mg/kg、约0.1mg/kg、约0.15mg/kg、约0.25mg/kg、约0.3mg/kg、约0.35mg/kg、约0.4mg/kg或约0.5mg/kg、0.75mg/kg、1.0mg/kg、1.33mg/kg、1.5mg/kg或约1.75mg/kg。在某些实施方案中，所述调整剂量比初始剂量更频繁地给予。在某些实施方案中，所述调整剂量按每5、10、15、20、25、28、30、35或40天给予。在某些实施方案中，所述调整剂量经由注射给予。在某些实施方案中，所述调整剂量经皮下给予。在某些实施方案中，如果所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的第二百分比为小于10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或小于1％，对于所述对象不给予调整剂量。在某些实施方案中，所述调整剂量最多给予1、2、3、4、5或6个月。

在某些实施方案中，在ActRII信号转导抑制剂给药的时间周期之后至少3、4、5、6、12、18或24个月，所述对象不需要红细胞输血。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂按每三周一次给予。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂按(i)每28天一次；或(ii)每42天一次给予。在某些实施方案中，所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比通过普鲁士蓝染色来测定。

本文还提供的是用于治疗对象的血液相关紊乱的方法，其中所述方法包括：(a)测定所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比；(b)如果所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比为至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或至少20％，将ActRII信号转导抑制剂以介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间的药学上有效剂量给予所述对象；(c)在将ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之后，测定所述对象的血红蛋白的水平；和(d)如果所述对象的血红蛋白的水平为至少11g/dL，停止将所述ActRII信号转导抑制剂给予所述对象。在某些实施方案中，所述血液相关紊乱是贫血症、需要输血的贫血症、MDS或非增殖CMML。本文还提供的是用于治疗对象的贫血症的方法，其中所述方法包括：(a)测定所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比；(b)如果所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比为至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或至少20％，将ActRII信号转导抑制剂以介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间的药学上有效剂量给予所述对象；(c)在将ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之后，测定所述对象的血红蛋白的水平；和(d)如果所述对象的血红蛋白的水平为至少11g/dL，停止将所述ActRII信号转导抑制剂给予所述对象。在某些实施方案中，所述对象需要RBC输血。本文还提供的是用于治疗对象的MDS的方法，其中所述方法包括：(a)测定所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比；(b)如果所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比为至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或至少20％，将ActRII信号转导抑制剂以介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间的药学上有效剂量给予所述对象；(c)在将ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之后，测定所述对象的血红蛋白的水平；和(d)如果所述对象的血红蛋白的水平为至少11g/dL，停止将所述ActRII信号转导抑制剂给予所述对象。本文还提供的是用于治疗对象的非增殖CMML的方法，其中所述方法包括：(a)测定所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比；(b)如果所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比为至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或至少20％，将ActRII信号转导抑制剂以介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间的药学上有效剂量给予所述对象；(c)在将ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之后，测定所述对象的血红蛋白的水平；和(d)如果所述对象的血红蛋白的水平为至少11g/dL，停止将所述ActRII信号转导抑制剂给予所述对象。

在某些实施方案中，将所述ActRII信号转导抑制剂给予所述对象，每三周一次。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂按(i)每28天一次；或(ii)每42天一次给予。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂经由注射给予。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂经皮下给予。

在某些实施方案中，在给予ActRII信号转导抑制剂之后6、12、18和/或24个月以内测定血红蛋白的水平。

本文还提供的是促进患有血液相关紊乱的对象的红细胞生成的方法，所述方法包括：(a)测定所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比；(b)在第一时间周期将药学上有效剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象；(c)在第一时间周期之后，如果在步骤(a)中，所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比已超过11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或20％，那么减少给予所述对象ActRII信号转导抑制剂的剂量，减少给予所述对象ActRII信号转导抑制剂的频率，或停止给予ActRII信号转导抑制剂。在某些实施方案中，所述血液相关紊乱是贫血症、需要输血的贫血症、MDS或非增殖CMML。在某些实施方案中，所述方法还包括(i)在第一时间周期期间监测所述对象的血液学参数；和(ii)如果所述对象的血液学参数实现了正常化，那么减少或停止将ActRII信号转导抑制剂给予所述对象。在某些实施方案中，所述方法还包括(i)在第一时间周期期间监测所述对象的血液学参数；和(ii)如果所述对象的血液学参数实现了正常化，那么减少将ActRII信号转导抑制剂给予所述对象的剂量。在某些实施方案中，所述方法还包括(i)在第一时间周期期间监测所述对象的血液学参数；和(ii)如果所述对象的血液学参数实现了正常化，那么减少将ActRII信号转导抑制剂给予所述对象的频率。在某些实施方案中，所述方法还包括(i)在第一时间周期期间监测所述对象的血液学参数；和(ii)如果所述对象的血液学参数实现了正常化，停止将ActRII信号转导抑制剂给予所述对象。在某些实施方案中，所述对象的正常化血液学参数是参比群体的血液学参数的水平。在某些实施方案中，所述对象的正常化血液学参数是与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象的血液学参数相比，所述对象的血液学参数有至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％的改善。在某些实施方案中，在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的时间周期是至少1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、3个月、4个月、5个月或6个月。在某些实施方案中，所述血液学参数是血红蛋白水平、血细胞比容、红细胞计数或所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比。

在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂按每三周一次给予所述对象。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂按(i)每28天一次；或(ii)每42天一次给予。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂经由注射给予。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂经皮下给予。

在某些实施方案中，如果所述对象中至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或20％的成红细胞是环形铁粒幼细胞，所述对象具有实现一个或多个血液学参数正常化的可能性增加。在某些实施方案中，所述血液学参数是血红蛋白水平、血细胞比容、红细胞计数或所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比。

在某些实施方案中，所述正常化血液学参数是参比群体的血液学参数的水平。在某些实施方案中，与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象的血液学参数相比，所述正常化血液学参数是有至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％的改善。在某些实施方案中，在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的时间周期是1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、3个月、4个月、5个月或6个月。

本文提供的是用于长期治疗对象的贫血症的方法，包括将激活素受体II型(ActRII)抑制剂以药学上有效剂量给予所述对象并且持续一段时间周期以实现(i)与所述对象中环形的铁粒幼细胞与正常成红细胞的初始比率相比，所述对象中环形的铁粒幼细胞与正常成红细胞的比率长期降低；和(ii)与在将ActRII抑制剂给予所述对象之前所述对象的血红蛋白水平相比，所述对象的血红蛋白水平长期增加；其中所述药学上有效剂量为介于0.75mg/kg和2.0mg/kg之间，和其中所述对象的环形的铁粒幼细胞与正常成红细胞的初始比率是至少1:10、至少1:7或至少1:5。在某些实施方案中，所述对象是需要输血的对象。

本文提供的是用于长期治疗对象的低危或中危-1骨髓增生异常综合征(MDS)的方法，包括将激活素受体II型(ActRII)抑制剂以药学上有效剂量给予所述对象并且持续一段时间周期以实现(i)与所述对象中环形的铁粒幼细胞与正常成红细胞的初始比率相比，所述对象中环形的铁粒幼细胞与正常成红细胞的比率长期降低；和(ii)与将ActRII抑制剂给予所述对象之前所述对象的血红蛋白水平相比，所述对象的血红蛋白水平长期增加；其中所述药学上有效剂量为介于0.75mg/kg和2.0mg/kg之间，和其中所述对象的环形的铁粒幼细胞与正常成红细胞的初始比率是至少1:10、至少1:7或至少1:5。

本文提供的是用于长期治疗对象的非增殖慢性髓单核细胞白血病(CMML)的方法，包括将激活素受体II型(ActRII)抑制剂以药学上有效剂量给予所述对象并且持续一段时间周期以实现(i)与所述对象中环形的铁粒幼细胞与正常成红细胞的初始比率相比，所述对象中环形的铁粒幼细胞与正常成红细胞的比率长期降低；和(ii)与将ActRII抑制剂给予所述对象之前所述对象的血红蛋白水平相比，所述对象的血红蛋白水平长期增加；其中所述药学上有效剂量为介于0.75mg/kg和2.0mg/kg之间，和其中所述对象的环形的铁粒幼细胞与正常成红细胞的初始比率是至少1:10、至少1:7或至少1:5。

本文还提供的是用于增加对象的中性粒细胞的水平的方法，包括将药学上有效剂量的激活素受体II型(ActRII)信号转导抑制剂给予所述对象。

本文还提供的是用于增加对象的血小板的水平的方法，包括将药学上有效剂量的激活素受体II型(ActRII)信号转导抑制剂给予所述对象。

在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂是包含选自以下的氨基酸序列的多肽：(a)与SEQ ID NO:2有90％同一性；(b)与SEQ ID NO:2有95％同一性；(c)与SEQ IDNO:2有98％同一性；(d)SEQ ID NO:2；(e)与SEQ ID NO:3有90％同一性；(f)与SEQ ID NO:3有95％同一性；(g)与SEQ ID NO:3有98％同一性；(h)SEQ ID NO:3；(i)与SEQ ID NO:6有90％同一性；(j)与SEQ ID NO:6有95％同一性；(k)与SEQ ID NO:6有98％同一性；(l)SEQID NO:6；(m)与SEQ ID NO:7有90％同一性；(n)与SEQ ID NO:7有95％同一性；(o)与SEQ IDNO:7有98％同一性；(p)SEQ ID NO:7；(q)与SEQ ID NO:12有90％同一性；(r)与SEQ ID NO:12有95％同一性；(s)与SEQ ID NO:12有98％同一性；(t)SEQ ID NO:12；(u)与SEQ ID NO:17有90％同一性；(v)与SEQ ID NO:17有95％同一性；(w)与SEQ ID NO:17有98％同一性；(x)SEQ ID NO:17；(y)与SEQ ID NO:20有90％同一性；(z)与SEQ ID NO:20有95％同一性；(aa)与SEQ ID NO:20有98％同一性；(bb)SEQ ID NO:20；(cc)与SEQ ID NO:21有90％同一性；(dd)与SEQ ID NO:21有95％同一性；(ee)与SEQ ID NO:21有98％同一性；(ff)SEQ IDNO:21；(gg)与SEQ ID NO:25有90％同一性；(hh)与SEQ ID NO:25有95％同一性；(ii)与SEQID NO:25有98％同一性；和(jj)SEQ ID NO:25。

在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂是ActRIIA信号转导抑制剂。在某些实施方案中，所述ActRIIA信号转导抑制剂是包含选自以下的氨基酸序列的多肽：(a)与SEQ ID NO:2有90％同一性；(b)与SEQ ID NO:2有95％同一性；(c)与SEQ ID NO:2有98％同一性；(d)SEQ ID NO:2；(e)与SEQ ID NO:3有90％同一性；(f)与SEQ ID NO:3有95％同一性；(g)与SEQ ID NO:3有98％同一性；(h)SEQ ID NO:3；(i)与SEQ ID NO:6有90％同一性；(j)与SEQ ID NO:6有95％同一性；(k)与SEQ ID NO:6有98％同一性；(l)SEQ ID NO:6；(m)与SEQ ID NO:7有90％同一性；(n)与SEQ ID NO:7有95％同一性；(o)与SEQ ID NO:7有98％同一性；和(p)SEQ ID NO:7。

在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂是包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的多肽。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂是由ActRIIA的胞外结构域和人IgG1 Fc结构域组成的人源化融合蛋白。

在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂是ActRIIB的信号转导抑制剂。在某些实施方案中，所述ActRIIB信号转导抑制剂是包含选自以下的氨基酸序列的多肽：(a)与SEQ ID NO:17有90％同一性；(b)与SEQ ID NO:17有95％同一性；(c)与SEQ ID NO:17有98％同一性；(d)SEQ ID NO:17；(e)与SEQ ID NO:20有90％同一性；(f)与SEQ ID NO:20有95％同一性；(g)与SEQ ID NO:20有98％同一性；(h)SEQ ID NO:20；(i)与SEQ ID NO:21有90％同一性；(j)与SEQ ID NO:21有95％同一性；(k)与SEQ ID NO:21有98％同一性；(l)SEQID NO:21；(m)与SEQ ID NO:25有90％同一性；(n)与SEQ ID NO:25有95％同一性；(o)与SEQID NO:25有98％同一性；和(p)SEQ ID NO:25。

在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂是包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的多肽。

在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂是由ActRIIA的胞外结构域和人IgG1 Fc结构域组成的人源化融合蛋白。

在某些实施方案中，所述对象是人。

在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的剂量为介于0.1和2.25mg/kg之间。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的剂量为介于0.1和2.0mg/kg之间。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的剂量为介于0.7和2.0mg/kg之间。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的剂量约为0.1mg/kg、0.125mg/kg、0.3mg/kg、0.5mg/kg、0.7mg/kg、1.0mg/kg、1.25mg/kg、1.33mg/kg、1.5mg/kg、1.75mg/kg、2.0mg/kg或2.25mg/kg。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的剂量为介于0.1mg/kg和0.5mg/kg之间、介于0.3mg/kg和0.7mg/kg之间、介于0.5mg/kg和1.0mg/kg之间、介于0.7mg/kg和1.25mg/kg之间、介于1.0mg/kg和2.0mg/kg之间或介于1.5和2.25mg/kg之间。

方案1.治疗对象的血液相关紊乱的方法，包括

(a)测定所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比；和

(b)如果所述对象中至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或20％的成红细胞是环形铁粒幼细胞，将介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间的药学上有效剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象。

方案2.如方案1的方法，其中所述血液相关紊乱是贫血症、需要输血的贫血症、骨髓增生异常综合征(MDS)或非增殖慢性髓单核细胞白血病(CMML)。

方案3.如方案1或2的方法，其中在第一时间测定所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比。

方案4.如方案3的方法，其中所述第一时间是在将药学上有效剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象的1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、3个月、4个月、5个月或6个月以内。

方案5.治疗对象的血液相关紊乱的方法，包括将激活素受体II型(ActRII)信号转导抑制剂以药学上有效剂量给予所述对象并且持续一段时间周期以实现(i)与所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的初始百分比相比，所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比长期降低；和/或(ii)与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象的血红蛋白水平相比，所述对象的血红蛋白水平长期增加；其中所述药学上有效剂量为介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间，和其中所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的初始百分比为至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或至少20％。

方案6.如方案5的方法，其中所述血液相关紊乱是贫血症、MDS或非增殖CMML。

方案7.治疗对象的贫血症的方法，包括将激活素受体II型(ActRII)信号转导抑制剂以药学上有效剂量给予所述对象并且持续一段时间周期以实现(i)与所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的初始百分比相比，所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比长期降低；和/或(ii)与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象的血红蛋白水平相比，所述对象的血红蛋白水平长期增加；其中所述药学上有效剂量为介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间，和其中所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的初始百分比为至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或至少20％。

方案8.如方案7的方法，其中所述对象是需要RBC输血的对象。

方案9.用于治疗对象的MDS的方法，包括将ActRII信号转导抑制剂以药学上有效剂量给予所述对象并且持续一段时间周期以实现(i)与所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的初始百分比相比，所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比长期降低；和/或(ii)与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象的血红蛋白水平相比，所述对象的血红蛋白水平长期增加；其中所述药学上有效剂量为介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间，和其中所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的初始百分比为至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或至少20％。

方案10.用于治疗对象的非增殖CMML的方法，包括将ActRII信号转导抑制剂以药学上有效剂量给予所述对象并且持续一段时间周期以实现(i)与所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的初始百分比相比，所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比长期降低；和/或(ii)与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象的血红蛋白水平相比，所述对象的血红蛋白水平长期增加；其中所述药学上有效剂量为介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间，和其中所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的初始百分比为至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或至少20％。

方案11.如方案5-10中任一项的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂给药的时间周期是1、2、3、4、5或6个月。

方案12.如方案5-11中任一项的方法，其中所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的初始百分比是在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比。

方案13.如方案5-12中任一项的方法，其中在ActRII信号转导抑制剂给药的时间周期之后至少1、2、3、4、5、6、12、18或24个月，维持所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比的长期降低。

方案14.如方案5-13中任一项的方法，其中所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比的长期降低是比所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的初始百分比低至少1.5、2.5、5.0、7.5或10.0倍，持续时间为在ActRII信号转导抑制剂给药的时间周期之后至少6、12、18或24个月。

方案15.如方案5-14中任一项的方法，其中所述对象的初始血红蛋白水平为在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期，所述对象的血红蛋白水平。

方案16.如方案5-15中任一项的方法，其中所述对象的初始血红蛋白水平为小于约11g/dL。

方案17.如方案5-16中任一项的方法，其中在ActRII信号转导抑制剂给药的时间周期之后至少3、4、5、6、12、18或24个月，维持所述对象的血红蛋白水平的长期增加。

方案18.如方案5-17中任一项的方法，其中所述对象的血红蛋白水平的长期增加是在ActRII信号转导抑制剂给药的时间周期之后至少3、4、5、6、12、18或24个月，所述对象的血红蛋白水平为介于约11g/dL和18g/dL之间。

方案19.方案5-17中任一项的方法，其中在ActRII信号转导抑制剂给药的时间周期之后至少3、4、5、6、12、18或24个月，所述对象不需要红细胞输血。

方案20.前述方案中任一项的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂按每三周一次给予。

方案21.如方案1-19中任一项的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂按(i)每28天一次；或(ii)每42天一次给予。

方案22.前述方案中任一项的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂经由注射给予。

方案23.如方案16的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂经皮下给予。

方案24.前述方案中任一项的方法，其中所述方法还包括在ActRII信号转导抑制剂给药的时间周期之后6、12、18和/或24个月，测定所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的另一百分比。

方案25.前述方案中任一项的方法，其中所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比通过普鲁士蓝染色来测定。

方案26.前述方案中任一项的方法，其中所述方法还包括在ActRII信号转导抑制剂给药的时间周期之后6、12、18和/或24个月，测定所述对象的另一血红蛋白水平。

方案27.用于治疗对象的血液相关紊乱的方法，其中所述方法包括：

(b)(i)如果所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比为至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或至少20％，将ActRII信号转导抑制剂以介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间的药学上有效剂量给予所述对象一段短的时间周期，或(ii)如果所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比为小于10％，将ActRII信号转导抑制剂以介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间的药学上有效剂量给予所述对象一段长的时间周期。

方案28.如方案27的方法，其中所述血液相关紊乱是贫血症、需要输血的贫血症、MDS或非增殖CMML。

方案29.用于治疗对象的贫血症的方法，其中所述方法包括：

(a)测定所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的第一百分比；和

(b)(i)如果所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的第一百分比为至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或至少20％，将ActRII信号转导抑制剂以介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间的药学上有效剂量给予所述对象一段短的时间周期，或(ii)如果所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比为小于10％，将ActRII信号转导抑制剂以介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间的药学上有效剂量给予所述对象一段长的时间周期。

方案30.如方案29的方法，其中所述对象是需要输血的对象。

方案31.用于治疗对象的MDS的方法，其中所述方法包括：

方案32.用于治疗对象的非增殖CMML的方法，其中所述方法包括：

方案33.如方案27-32中任一项的方法，其中在ActRII信号转导抑制剂给药的短的时间周期之后至少6、12、18或24个月，所述给予ActRII信号转导抑制剂短的时间周期的对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的第一百分比被降低至小于10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或小于1％。

方案34.方案27-33中任一项的方法，其中所述对象的血红蛋白水平为小于约11g/dL。

方案35.如方案27-34中任一项的方法，其中在ActRII信号转导抑制剂给药的时间周期之后至少3、4、5、6、12、18或24个月，所述给予ActRII信号转导抑制剂一段短的时间周期的对象的血红蛋白水平为介于约11g/dL和18g/dL之间。

方案36.如方案27-35中任一项的方法，其中所述短的时间周期是1、2、3、4或5个月。

方案37.如方案27-35中任一项的方法，其中所述长的时间周期是至少6、12、18或24个月。

方案38.如方案27-36中任一项的方法，其中在ActRII信号转导抑制剂给药的时间周期之后至少3、4、5、6、12、18或24个月，所述对象不需要红细胞输血。

方案39.如方案27-38中任一项的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂按每三周一次给予。

方案40.如方案27-38中任一项的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂按(i)每28天一次；或(ii)每42天一次给予。

方案41.如方案27-40中任一项的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂经由注射给予。

方案42.如方案41的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂经皮下给予。

方案43.如方案27-42中任一项的方法，其中所述方法还包括在ActRII信号转导抑制剂给药的时间周期之后6、12、18和/或24个月，测定所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的第二百分比。

方案44.如方案27-43中任一项的方法，其中所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比通过普鲁士蓝染色来测定。

方案45.如方案27-43中任一项的方法，其中所述方法还包括在ActRII信号转导抑制剂给药的时间周期之后6、12、18和/或24个月，测定所述对象的血红蛋白水平。

方案46.治疗对象的血液相关紊乱的方法，其中所述方法包括：

(a)经过测定所述对象具有：所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比为至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或至少20％；

(b)将介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间的初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象；

(c)在一段时间周期之后测定所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的第二百分比；和

(d)任选将调整剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象。

方案47.方案46的方法，其中所述血液相关紊乱是贫血症、需要输血的贫血症、MDS或非增殖CMML。

方案48.治疗对象的贫血症的方法，其中所述方法包括：

(d)任选将调整剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象。

方案49.如方案48的方法，其中所述对象是需要输血的对象。

方案50.治疗对象的MDS的方法，其中所述方法包括：

(d)任选将调整剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象。

方案51.治疗对象的非增殖慢性髓单核细胞白血病(CMML)的方法，其中所述方法包括：

(d)任选将调整剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象。

方案52.如方案46-51中任一项的方法，其中所述时间周期是1、2、3、4、5或6个月。

方案53.如方案46-52中任一项的方法，其中所述初始剂量经由注射给予。

方案54.如方案53的方法，其中所述初始剂量经皮下给予。

方案55.如方案46-54中任一项的方法，其中所述初始剂量按每三周一次给予。

方案56.如方案46-54中任一项的方法，其中所述初始剂量按(i)每28天一次；或(ii)每42天一次给予。

方案57.如方案46-56中任一项的方法，其中在测定所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的第一百分比之后马上或在其至多1天、2天、3天、4天、5天、6天、或1周、2周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月以内，将所述初始剂量给予所述对象。

方案58.如方案46-56中任一项的方法，其中在测定所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的第二百分比之后马上或在其至多1天、2天、3天、4天、5天、6天、或1周、2周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月以内，将所述调整剂量给予所述对象。

方案59.如方案46-58中任一项的方法，其中如果所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的第二百分比为至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或至少20％，所述ActRII信号转导抑制剂的调整剂量是大于初始剂量。

方案60.如方案59的方法，其中所述调整剂量是比初始剂量高约0.05mg/kg、约0.1mg/kg、约0.15mg/kg、约0.25mg/kg、约0.3mg/kg、约0.35mg/kg、约0.4mg/kg或约0.5mg/kg、0.75mg/kg、1.0mg/kg、1.33mg/kg、1.5mg/kg或约1.75mg/kg。

方案61.方案59或60中任一项的方法，其中所述调整剂量比初始剂量更频繁地给予。

方案62.如方案59-61中任一项的方法，其中所述调整剂量按每5、10、15、20、25、28、30、35或40天给予。

方案63.如方案46-62中任一项的方法，其中所述调整剂量经由注射给予。

方案64.如方案63的方法，其中所述调整剂量经皮下给予。

方案65.如方案46-57中任一项的方法，其中如果所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的第二百分比为小于10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或小于1％，对所述对象不给予所述调整剂量。

方案66.如方案46-64中任一项的方法，其中所述调整剂量给予至多1、2、3、4、5或6个月。

方案67.如方案46-66中任一项的方法，其中在ActRII信号转导抑制剂给药的时间周期之后至少3、4、5、6、12、18或24个月，所述对象不需要红细胞输血。

方案68.如方案46-67中任一项的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂按每三周一次给予。

方案69.如方案46-67中任一项的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂按(i)每28天一次；或(ii)每42天一次给予。

方案70.如方案46-69中任一项的方法，其中所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比通过普鲁士蓝染色来测定。

方案71.用于治疗对象的血液相关紊乱的方法，其中所述方法包括：

(a)测定所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比；

(b)如果所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比为至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或至少20％，将ActRII信号转导抑制剂以介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间的药学上有效剂量给予所述对象；

(c)在将ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之后，测定所述对象的血红蛋白的水平；和

(d)如果所述对象的血红蛋白的水平为至少11g/dL，停止将所述ActRII信号转导抑制剂给予所述对象。

方案72.如方案71的方法，其中所述血液相关紊乱是贫血症、需要输血的贫血症、MDS或非增殖CMML。

方案73.用于治疗对象的贫血症的方法，其中所述方法包括：

(a)测定所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比；

方案74.如方案73的方法，其中所述对象需要RBC输血。

方案75.用于治疗对象的MDS的方法，其中所述方法包括：

(a)测定所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比；

方案76.用于治疗对象的非增殖CMML的方法，其中所述方法包括：

(a)测定所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比；

方案77.如方案71-76中任一项的方法，其中将所述ActRII信号转导抑制剂给予所述对象，每三周一次。

方案78.如方案71-76中任一项的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂按(i)每28天一次；或(ii)每42天一次给予。

方案79.如方案27-40中任一项的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂经由注射给予。

方案80.如方案79的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂经皮下给予。

方案81.如方案71-80中任一项的方法，其中在给予所述ActRII信号转导抑制剂之后6、12、18和/或24个月以内，测定血红蛋白的水平。

方案82.促进患有血液相关紊乱的对象的红细胞生成的方法，所述方法包括：

(a)测定所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比；

(b)将药学上有效剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象持续第一时间周期；

(c)在第一时间周期之后，如果在步骤(a)中，所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比已超过11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或20％，那么减少给予所述对象ActRII信号转导抑制剂的剂量，减少给予所述对象ActRII信号转导抑制剂的频率，或停止给予ActRII信号转导抑制剂。

方案83.如方案82的方法，其中所述血液相关紊乱是贫血症、需要输血的贫血症、MDS或非增殖CMML。

方案84.如方案82或83的方法，其中所述方法还包括(i)在第一时间周期期间监测所述对象的血液学参数；和(ii)如果所述对象的血液学参数实现了正常化，那么减少或停止给予所述对象ActRII信号转导抑制剂。

方案85.如方案82-84中任一项的方法，其中所述方法还包括(i)在第一时间周期期间监测所述对象的血液学参数；和(ii)如果所述对象的血液学参数实现了正常化，那么减少给予所述对象ActRII信号转导抑制剂的剂量。

方案86.如方案82-85中任一项的方法，其中所述方法还包括(i)在第一时间周期期间监测所述对象的血液学参数；和(ii)如果所述对象的血液学参数实现了正常化，那么减少给予所述对象ActRII信号转导抑制剂的频率。

方案87.如方案82-86中任一项的方法，其中所述方法还包括(i)在第一时间周期期间监测所述对象的血液学参数；和(ii)如果所述对象的血液学参数实现了正常化，那么停止给予所述对象ActRII信号转导抑制剂。

方案88.如方案82-87中任一项的方法，其中所述对象的正常化血液学参数是参比群体的血液学参数的水平。

方案89.如方案82-87中任一项的方法，其中与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的时间周期所述对象的血液学参数相比，所述对象的正常化血液学参数是所述对象的血液学参数的改善达到至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％。

方案90.如方案89的方法，其中在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的时间周期是1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、3个月、4个月、5个月或6个月。

方案91.方案82-90中任一项的方法，其中所述第一时间周期是至少1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或1年。

方案92.如方案82-91中任一项的方法，其中所述血液学参数是血红蛋白水平、血细胞比容、红细胞计数或所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比。

方案93.方案82-92中任一项的方法，其中将所述ActRII信号转导抑制剂给予所述对象，每三周一次。

方案94.如方案82-92中任一项的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂按(i)每28天一次；或(ii)每42天一次给予。

方案95.如方案82-94中任一项的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂经由注射给予。

方案96.如方案95的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂经皮下给予。

方案97.如方案82-96中任一项的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂的药学上有效剂量为介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间。

方案98.前述方案中任一项的方法，其中如果所述对象中至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或20％的成红细胞是环形铁粒幼细胞，所述对象具有实现一个或多个血液学参数正常化的可能性增加。

方案99.如方案98的方法，其中所述血液学参数是血红蛋白水平、血细胞比容、红细胞计数或所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比。

方案100.如方案98或99的方法，其中所述正常化血液学参数是参比群体的血液学参数的水平。

方案101.如方案98-100中任一项的方法，其中与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象的血液学参数相比，所述正常化血液学参数是有至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％的改善。

方案102.如方案101的方法，其中在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的时间周期是1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、3个月、4个月、5个月或6个月。

方案103.用于提高对象的中性粒细胞的水平的方法，包括将药学上有效剂量的激活素受体II型(ActRII)信号转导抑制剂给予所述对象。

方案104.如方案103的方法，其中所述方法是用于治疗与中性粒细胞的水平降低相关的疾病。

方案105.用于提高对象的血小板的水平的方法，包括将药学上有效剂量的激活素受体II型(ActRII)信号转导抑制剂给予所述对象。

方案106.如方案105的方法，其中所述方法是用于治疗与血小板的水平降低相关的疾病。

方案107.如方案103-106中任一项的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂的药学上有效剂量为介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间。

方案108.前述方案中任一项的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂是包含选自以下的氨基酸序列的多肽：

(a)与SEQ ID NO:2有90％同一性；

(b)与SEQ ID NO:2有95％同一性；

(c)与SEQ ID NO:2有98％同一性；

(d)SEQ ID NO:2；

(e)与SEQ ID NO:3有90％同一性；

(f)与SEQ ID NO:3有95％同一性；

(g)与SEQ ID NO:3有98％同一性；

(h)SEQ ID NO:3；

(i)与SEQ ID NO:6有90％同一性；

(j)与SEQ ID NO:6有95％同一性；

(k)与SEQ ID NO:6有98％同一性；

(l)SEQ ID NO:6；

(m)与SEQ ID NO:7有90％同一性；

(n)与SEQ ID NO:7有95％同一性；

(o)与SEQ ID NO:7有98％同一性；

(p)SEQ ID NO:7；

(q)与SEQ ID NO:12有90％同一性；

(r)与SEQ ID NO:12有95％同一性；

(s)与SEQ ID NO:12有98％同一性；

(t)SEQ ID NO:12；

(u)与SEQ ID NO:17有90％同一性；

(v)与SEQ ID NO:17有95％同一性；

(w)与SEQ ID NO:17有98％同一性；

(x)SEQ ID NO:17；

(y)与SEQ ID NO:20有90％同一性；

(z)与SEQ ID NO:20有95％同一性；

(aa)与SEQ ID NO:20有98％同一性；

(bb)SEQ ID NO:20；

(cc)与SEQ ID NO:21有90％同一性；

(dd)与SEQ ID NO:21有95％同一性；

(ee)与SEQ ID NO:21有98％同一性；

(ff)SEQ ID NO:21；

(gg)与SEQ ID NO:25有90％同一性；

(hh)与SEQ ID NO:25有95％同一性；

(ii)与SEQ ID NO:25有98％同一性；和

(jj)SEQ ID NO:25。

方案109.前述方案中任一项的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂是ActRIIA信号转导抑制剂。

方案110.如方案109的方法，其中所述ActRIIA信号转导抑制剂是包含选自以下的氨基酸序列的多肽：

(a)与SEQ ID NO:2有90％同一性；

(b)与SEQ ID NO:2有95％同一性；

(c)与SEQ ID NO:2有98％同一性；

(d)SEQ ID NO:2；

(e)与SEQ ID NO:3有90％同一性；

(f)与SEQ ID NO:3有95％同一性；

(g)与SEQ ID NO:3有98％同一性；

(h)SEQ ID NO:3；

(i)与SEQ ID NO:6有90％同一性；

(j)与SEQ ID NO:6有95％同一性；

(k)与SEQ ID NO:6有98％同一性；

(l)SEQ ID NO:6；

(m)与SEQ ID NO:7有90％同一性；

(n)与SEQ ID NO:7有95％同一性；

(o)与SEQ ID NO:7有98％同一性；和

(p)SEQ ID NO:7。

方案111.前述方案中任一项的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂是包含SEQID NO:7的氨基酸序列的多肽。

方案112.如方案1-106中任一项的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂是由ActRIIA的胞外结构域和人IgG1 Fc结构域组成的人源化融合蛋白。

方案113.如方案1-107中任一项的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂是ActRIIB的信号转导抑制剂。

方案114.如方案113的方法，其中所述ActRIIB信号转导抑制剂是包含选自以下的氨基酸序列的多肽：

(a)与SEQ ID NO:17有90％同一性；

(b)与SEQ ID NO:17有95％同一性；

(c)与SEQ ID NO:17有98％同一性；

(d)SEQ ID NO:17；

(e)与SEQ ID NO:20有90％同一性；

(f)与SEQ ID NO:20有95％同一性；

(g)与SEQ ID NO:20有98％同一性；

(h)SEQ ID NO:20；

(i)与SEQ ID NO:21有90％同一性；

(j)与SEQ ID NO:21有95％同一性；

(k)与SEQ ID NO:21有98％同一性；

(l)SEQ ID NO:21；

(m)与SEQ ID NO:25有90％同一性；

(n)与SEQ ID NO:25有95％同一性；

(o)与SEQ ID NO:25有98％同一性；和

(p)SEQ ID NO:25。

方案115.如方案114的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂是包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的多肽。

方案116.如方案1-107中任一项的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂是由ActRIIB的胞外结构域和人IgG1 Fc结构域组成的人源化融合蛋白。

方案117.前述方案中任一项的方法，其中所述对象是人。

6.附图简述

图1描述实施例2的给药方案和研究设计。参见第8.2节。ActRIIA-I是指ActRIIA信号转导抑制剂(SEQ ID NO:7)。

图2描述对于高输血负担(HTB)受试者，实现RBC输血非依赖(RBC-TI)大于或等于56天；或对于低输血负担(LTB)受试者，在8周无输血周期内，平均血红蛋白(Hb)增加大于或等于1.5g/dL的RBC-TI大于或等于56天的受试者的比例。ActRIIA-I是指ActRIIA信号转导抑制剂(SEQ ID NO:7)。

图3描绘由接受1.0mg/kg剂量的ActRIIA(SEQ ID NO:7)的示例性HTB受试者的血红蛋白水平(Hb,g/dL)和所接受的RBC输血单位数。图3证明该示例性的HTB受试者实现了RBC-TI大于56天。

图4证明在用指定剂量的ActRIIA信号转导抑制剂(SEQ ID NO:7)治疗之后，在HTB应答者(n＝19)中，输血负担应答的最大持续时间。ActRIIA-I是指ActRIIA信号转导抑制剂(SEQ ID NO:7)。

图5证明在用指定剂量的ActRIIA信号转导抑制剂(SEQ ID NO:7)治疗之后，在实现RBC-TI大于或等于56天的HTB受试者(n＝5)中，RBC-TI应答的最大持续时间。ActRIIA-I是指ActRIIA信号转导抑制剂(SEQ ID NO:7)。

图6证明在用指定剂量的ActRIIA信号转导抑制剂(SEQ ID NO:7)治疗之后，实现RBC-TI大于或等于56天和平均Hb增加大于或等于1.5g/dL的LTB受试者(n＝9)的比例。ActRIIA-I是指ActRIIA信号转导抑制剂(SEQ ID NO:7)。

图7证明在用指定剂量的ActRIIA(SEQ ID NO:7)治疗之后，实现RBC-TI大于或等于56天和平均Hb增加大于或等于1.5g/dL的LTB受试者(n＝5)中，RBC-TI应答的最大持续时间。ActRIIA-I是指ActRIIA信号转导抑制剂(SEQ ID NO:7)。

图8描述实施例2的给药方案和研究设计。参见第8.3节。BL＝基线。ActRIIB-I是指ActRIIB信号转导抑制剂(SEQ ID NO:25)。

图9描述在用指定剂量的ActRIIB信号转导抑制剂(SEQ ID NO:25)治疗之后，LTB受试者中的最大血红蛋白增加。

图10描述在用指定剂量的ActRIIB信号转导抑制剂(SEQ ID NO:25)治疗之后，LTB受试者中的网织红细胞的增加。

图11描述根据指定治疗方案所述给予指定剂量的ActRIIB信号转导抑制剂(SEQID NO:25)的示例性LTB受试者的血红蛋白水平。BL＝基线。

图12描述根据指定治疗方案给予指定剂量的ActRIIB信号转导抑制剂(SEQ IDNO:25)的示例性LTB受试者的血红蛋白水平。BL＝基线。

图13描述根据指定治疗方案给予指定剂量的ActRIIB信号转导抑制剂(SEQ IDNO:25)的示例性HTB受试者的血红蛋白水平。BL＝基线。

图14描绘接受1.0mg/kg剂量的ActRIIA-hFc(SEQ ID NO:7)的示例性HTB受试者的血红蛋白水平(Hb,g/dL)和所接受的RBC输血单位数。图14证明，示例性的HTB受试者在开始用ActRIIA-hFc(SEQ ID NO:7)治疗之后实现了RBC-TI至少337天。

图15描绘接受1.0mg/kg剂量的ActRIIA(SEQ ID NO:7)的示例性LTB受试者的血红蛋白水平(Hb,g/dL)和所接受的RBC输血单位数。图15证明示例性的LTB受试者在开始用ActRIIA-hFc(SEQ ID NO:7)治疗之后实现了Hb水平持续提高至少337天。

图16描绘用于获得输血非依赖的合格受试者的输血负担。受试者接受了用介于0.75mg/kg和1.75mg/kg之间的ActRIIB-hFc治疗。

图17描述在接受ActRIIA-hFC融合物(SEQ ID NO:7)的患者中，在任意8周周期内，对于LTB患者，实现平均血红蛋白增加等于或超过1.5g/dL的RBC输血非依赖(RBC-TI)的受试者的比例。深灰色阴影部分表示HTB患者，和浅灰色阴影部分表示LTB患者。

图18说明在12个月ActRIIA-hFc(SEQ ID NO:7)治疗延期研究的过程中，示例性HTB受试者的血红蛋白反应。第一和最后治疗剂量用箭头表示。输血事件用粗线条表示。将血红蛋白(Hgb)结果(g/dL)对时间(天)作图。

图19说明在12个月ActRIIA-hFc(SEQ ID NO:7)治疗延期研究的过程中，示例性LTB受试者的血红蛋白反应。将Hgb的平均变化(g/L)对时间(月)作图。

图20说明在12个月ActRIIA-hFc(SEQ ID NO:7)治疗延期研究的过程中，在同时接受剂量为1.0mg/kg(由底部四个粗线条表示的受试者)和1.75mg/kg(由顶部粗线条表示的受试者)的ActRIIA-hFc(SEQ ID NO:7)治疗的六例受试者中观察到的输血非依赖性反应。在整个研究中，四名患者经历了持续输血非依赖(中间4个粗线条)。一名患者在ActRIIA-hFc(SEQ ID NO:7)治疗的约1个月之后获得了输血非依赖(顶部粗线条)。一名患者经历输血非依赖断断续续约2个月(底部粗线条)。

7.详述

7.1概要

本发明预料不到地发现，患有血液相关紊乱的患者的环形铁粒幼细胞的水平可以用于鉴别对用激活素-ActRII信号转导的抑制剂治疗有反应的患者。这样的血液相关紊乱可以是：(i)贫血症；(ii)需要RBC输血的贫血症；(iii)MDS；和/或(iv)非增殖CMML。参见第7.8节。虽然不受理论的束缚，但是在患有血液相关紊乱的患者中成红细胞的约15％或以上环形铁粒幼细胞预测在该患者中对激活素-ActRII信号转导的抑制剂有改善的临床反应，相对于患有相同血液相关紊乱但具有成红细胞的小于约15％环形铁粒幼细胞的患者。这样的改善的临床反应可以是血液学参数(诸如血红蛋白水平、红细胞水平和血细胞比容)的应答增加。这样的改善的临床反应本身可能表显出较低的输血负担。此外，这样的改善的临床反应可导致对无需继续给予激活素-ActRII信号转导抑制剂的患者的长期益处。换句话说，本文提供的方法可导致在已经停止激活素-ActRII信号转导的抑制剂的给药之后的一段时间周期，患者的一个或多个血液学参数的改善。

因此，本文提供的是用于治疗患有血液相关紊乱的患者的方法，其中所述方法包括：(a)测定环形铁粒幼细胞占成红细胞的百分比；和(b)如果约15％或以上的成红细胞是环形铁粒幼细胞，那么将激活素-ActRII信号转导的抑制剂给予所述患者。更具体地说，本文提供的是用于治疗患有血液相关紊乱的患者的方法，其中所述方法包括：(a)测定患者的环形铁粒幼细胞占成红细胞的百分比；(b)将激活素-ActRII信号转导的抑制剂给予所述患者；和(c)如果至少约15％的成红细胞是环形铁粒幼细胞，那么(i)在一段时间周期之后减少激活素-ActRII信号转导的抑制剂给药的剂量或停止其给药，和/或(ii)在一段时间周期之后降低激活素-ActRII信号转导的抑制剂的给药频率。这些方法的详细描述可以在第7.3节和第7.4中找到。

7.2术语与缩写

如本文所用的，“ActRII”是指激活素受体II型(activin receptor type II)。如本文所用的，“ActRIIA”是指激活素受体IIA型(activin receptor type IIA)。参见例如，Mathews和Vale,1991,Cell 65:973-982。GenBank^TM登记号NM_001278579.1提供一种示例性的人ActRIIA核酸序列。GenBank^TM登记号NP_001265508.1提供一种示例性的人ActRIIA氨基酸序列。如本文所用的，“ActRIIB”是指激活素受体IIB型(activin receptor type IIB)。参见例如，Attisano等人,1992,Cell 68:97-108。GenBank^TM登记号NM_001106.3提供一种示例性的人ActRIIB核酸序列。GenBank^TM登记号NP_001097.2提供一种示例性的人ActRIIB氨基酸序列。

如本文所用的，“ActRIIA-mFc”或“mActRIIA-Fc”是指小鼠激活素IIA型受体-IgG1融合蛋白。参见例如，美国专利号8,173,601。如本文所用的，“mActRIIB-Fc”或“ActRIIB-mFc”是指小鼠激活素IIB型受体-IgG1融合蛋白。参见例如，美国专利号8,173,601。如本文所用的，“hActRIIA-Fc”或“ActRIIA-hFc”是指人激活素IIA型受体-IgG1融合蛋白。参见例如，美国专利号8,173,601。在一个具体的实施方案中，hActRIIA-Fc是sotatercept(SEQ IDNO:7)。如本文所用的，“hActRIIB-Fc”或“ActRIIB-hFc”是指人激活素IIB型受体-IgG1融合蛋白。参见例如，美国专利号8,173,601。在一个具体的实施方案中，hActRIIB-Fc是luspatercept(SEQ ID NO:25)。

如本文所用的，“ALK”是指间变性淋巴瘤激酶。

如本文所用的，“BL”是指基线。

如本文所用的，“BMP7”是指骨形态发生蛋白7。

如本文所用的，“CMML”是指慢性髓单核细胞白血病(chronic myelomonocyticleukemia)。

如本文所用的，“DEXA”是指双能X-射线吸收测定法(dual-energy X-rayabsorptiometry)。

如本文所用的，“DNMT3A”是指DNA(胞嘧啶-5)-甲基转移酶3A。GenBank^TM登记号NM_153759.3、NM_022552.4、NM_175629.2和NM_175630.1提供人DNMT3A的示例性核酸序列。GenBank^TM登记号NP_715640.2、NP_783329.1、NP_783328.1和NP_072046.2提供人DNMT3A的示例性氨基酸序列。

如本文所用的，“ECD”是指胞外结构域(extracellular domain)。

如本文所用的，“EPO”是指红细胞生成素。

如本文所用的，“ESA”是指红细胞生成-刺激剂。

如本文所用的，“G-CSF”是指粒细胞集落-刺激因子。

如本文所用的，“GM-CSG”是指粒细胞巨噬细胞集落-刺激因子。

如本文所用的，“Hb”是指血红蛋白。

如本文所用的，“HBML”是指蜜蜂蜂毒肽。

如本文所用的，“HI-E”是指类红细胞血液学改善(erythroid hematologicalimprovement)。在某些实施方案中，所述HI-E如IWG所定义。在某些实施方案中，所述HI-E如修订的2006IWG所定义。在某些实施方案中，低输血负担患者的HI-E是在该患者中血红蛋白浓度增加至少1.5g/dL，持续至少8周。在某些实施方案中，高输血负担患者的HI-E是在8周内RBC输血有至少4个单位降低。

如本文所用的，“HTB”是指高输血负担(high transfusion burden)。在某些实施方案中，HTB对象在8周的疗程内接受大于或等于4个RBC单位。

如本文所用的，“IgG”是指免疫球蛋白G。

如本文所用的，“中危-1(Int-1)”是指IPSS评分为中危-1(intermediate 1)。参见第7.8节。

如本文所用的，“IPSS”是指国际预后评分系统(International PrognosticScoring System)。参见第7.8节。

如本文所用的，“IWG”是指国际工作组(International Working Group)。参见例如，Cheson等人,Blood.2000 96:3671-3674。在某些实施方案中，IWG是指2006年修订版标准。参见例如，Cheson等人,2006,Blood,108(2)。

如本文所用的，“LTB”是指低输血负担(low transfusion burden)。在某些实施方案中，LTB对象在8周的疗程内接受小于4个RBC单位。

如本文所用的，“MDS”是指骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome)。

如本文所用的，“PD”是指药效动力学。

如本文所用的，“PK”是指药代动力学。

如本文所用的，“qCT"是指定量计算机体层摄影术。

如本文所用的，“RARS”是指难治性贫血伴有环形铁粒幼细胞(refractory anemiawith ring sideroblasts)。

如本文所用的，“RBC”是指红细胞(red blood cell)。

如本文所用的，“RBC-TI”是指红细胞输血非依赖的(red blood celltransfusion independent)。

如本文所用的，“RCMD-RS”是指难治性血细胞减少伴有多谱系发育异常和伴有环形铁粒幼细胞增多(refractory cytopenia with multilineage dysplasia with ringsideroblasts)。

如本文所用的，“RS”是指环形铁粒幼细胞(ring sideroblast)。

如本文所用的，“SC”是指皮下。

如本文所用的，“SETBP1”是指SET结合蛋白1。GenBank^TM登记号NM_015559.2和NM_001130110.1提供人SETBP1的示例性核酸序列。GenBank^TM登记号NP_056374.2和NP_001123582.1提供人SETBP1的示例性氨基酸序列。

如本文所用的，“SF3B1”是指剪接因子3B1。GenBank^TM登记号NM_012433.3、NM_001005523.2和NM_001308824.1提供人SF3B1的示例性核酸序列。GenBank^TM登记号NP_001295753.1、NP_001005526.1和NP_036565.2提供人SF3B1的示例性氨基酸序列。

如本文所用的，“SPR”是指表面等离子体共振。

如本文所用的，“SRSF2”是指富含丝氨酸/精氨酸的剪接因子2。GenBank^TM登记号NM_003016.4和NM_001195427.1提供人SRSF2的示例性核酸序列。GenBank^TM登记号NP_001182356.1和NP_003007.2提供人SRSF2的示例性氨基酸序列。

如本文所用的，“TET2”是指tet甲基胞嘧啶双加氧酶2。GenBank^TM登记号NM_001127208.2和NM_017628.4提供人TET2的示例性核酸序列。GenBank^TM登记号NP_001120680.1和NP_060098.3提供人TET2的示例性氨基酸序列。

如本文所用的，“TGF”是指转化生长因子。

如本文所用的，“TPA”是指组织纤溶酶原激活物(tissue plasminogenactivator)。

7.3治疗方法

在某些实施方案中，本文提供的是治疗患有血液相关紊乱的对象的方法，其中所述方法包括(a)测定所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比；和(b)如果所述对象中至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或20％的成红细胞是环形铁粒幼细胞，将药学上有效剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象。在某些实施方案中，如果所述对象中至少15％的成红细胞是环形铁粒幼细胞，那么将所述ActRII信号转导的抑制剂给予所述对象。在某些实施方案中，在第一时间测定所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比。在某些实施方案中，所述第一时间是在将药学上有效剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象的1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、3个月、4个月、5个月或6个月以内。在某些实施方案中，所述血液相关紊乱是如第7.8节中所描述的血液相关紊乱。在某些实施方案中，所述对象是如第7.8节中所描述的对象。在某些实施方案中，所述对象的血红蛋白水平为小于11g/dL。在某些实施方案中，与参比群体相比，所述对象具有降低的血红蛋白水平。在某些实施方案中，所述参比群体是如第7.10节中所描述的。在某些实施方案中，所述对象患有贫血症。在某些实施方案中，所述对象是需要RBC输血的对象。在某些实施方案中，所述对象患有MDS。在某些实施方案中，所述对象患有非增殖CMML。在某些实施方案中，如果所述对象中至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或20％的成红细胞是环形铁粒幼细胞，那么所述对象具有实现一个或多个血液学参数正常化的可能性增加。在某些实施方案中，如果所述对象中至少15％的成红细胞是环形铁粒幼细胞，所述对象具有实现一个或多个血液学参数正常化的可能性增加。在某些实施方案中，所述血液学参数是血红蛋白水平。在某些实施方案中，所述血液学参数是血细胞比容。在某些实施方案中，所述血液学参数是红细胞计数。在某些实施方案中，所述血液学参数是所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比。在某些实施方案中，所述正常化血液学参数是参比群体的血液学参数的水平。在某些实施方案中，所述参比群体是如第7.10节中所描述的参比群体。在某些实施方案中，与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象的血液学参数相比，所述一个或多个血液学参数的正常化是有至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％的改善。在某些实施方案中，在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的时间周期是1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、3个月、4个月、5个月或6个月。在某些实施方案中，所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比按照如第7.10节中所描述的测定法来测定。在某些实施方案中，环形铁粒幼细胞按照如第7.10节中所描述的测定法来鉴定。在某些实施方案中，环形铁粒幼细胞按照普鲁士蓝染色来鉴定。在某些实施方案中，成红细胞按照如第7.10节中所描述的测定法来鉴定。在某些实施方案中，所述对象的血红蛋白水平按照如第7.10节中所描述的测定法来测定。在某些实施方案中，所述药学上有效剂量是如第7.7节中所描述的剂量。在某些实施方案中，所述药学上有效剂量以如第7.7节中所描述的频率给予。在某些实施方案中，所述药学上有效剂量如第7.7节中所描述给予。在某些实施方案中，所述药学上有效剂量是如第7.7节中所描述的初始剂量。在某些实施方案中，所述药学上有效剂量是如第7.7节中所描述的调整剂量。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂采用如第7.11节中所描述的组合物给予。在某些实施方案中，所述组合物以如第7.7节中所描述的频率给予。在某些实施方案中，所述组合物如第7.7节中所描述给予。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂是如第7.9节中所描述的ActRII信号转导抑制剂。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂是ActRIIA信号转导抑制剂。在某些实施方案中，所述ActRIIA信号转导抑制剂经皮下给予每21天一次。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂是ActRIIA-Fc诸如ActRIIA-hFc(例如，SEQ ID NO:7)。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂是ActRIIB信号转导抑制剂。在某些实施方案中，所述ActRIIB信号转导抑制剂经皮下给予每21天一次。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂是ActRII-Fc诸如ActRIIB-hFc(例如，SEQ ID NO:25)。

在某些实施方案中，本文提供的是治疗对象的血液相关紊乱的方法，包括将激活素受体II型(ActRII)信号转导抑制剂以药学上有效剂量给予所述对象并且持续一段时间周期以实现(i)与所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的初始百分比相比，所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比长期降低；和(ii)与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期内所述对象的血红蛋白水平相比，所述对象的血红蛋白水平长期增加；其中所述药学上有效剂量为介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间，和其中所述对象中至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或至少20％的成红细胞是环形铁粒幼细胞。在某些实施方案中，所述药学上有效剂量为介于0.75mg/kg和2.0mg/kg之间。在某些实施方案中，所述血液相关紊乱是如第7.8节中所描述的血液相关紊乱。在某些实施方案中，所述对象是如第7.8节中所描述的对象。在某些实施方案中，所述对象中15％的成红细胞是环形铁粒幼细胞。在某些实施方案中，在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的时间周期是1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、3个月、4个月、5个月或6个月。在某些实施方案中，所述对象是需要RBC输血的对象。如本文所用的，“环形铁粒幼细胞(ring sideroblasts)”和“环形的铁粒幼细胞(ringed sideroblasts)”和“RS”可互换使用。在某些实施方案中，给予所述ActRII信号转导抑制剂至多1、2、3、4、5或6个月。在某些实施方案中，所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的初始百分比是在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比。在某些实施方案中，在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的时间周期是1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、3个月、4个月、5个月或6个月。在某些实施方案中，在ActRII信号转导抑制剂给药的时间周期之后至少3、4、5、6、12、18或24个月，维持所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比的长期降低。在某些实施方案中，在给予ActRII信号转导抑制剂的最后剂量并且无需进一步给予ActRII信号转导抑制剂之后至少3、4、5、6、12、18或24个月，维持所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比的长期降低。在某些实施方案中，所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比的长期降低是比在ActRII信号转导抑制剂给药的时间周期之后至少6、12、18或24个月所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的初始百分比低至少1.5、2.5、5.0、7.5或10.0倍。在某些实施方案中，在ActRII信号转导抑制剂给药的时间周期之后至少3、4、5、6、12、18或24个月，维持所述对象的血红蛋白水平的长期增加。在某些实施方案中，在ActRII信号转导抑制剂给药的时间周期之后至少3、4、5、6、12、18或24个月，所述对象的血红蛋白水平的长期增加为所述对象的介于约11g/dL和18g/dL之间的血红蛋白水平。在某些实施方案中，在ActRII信号转导抑制剂给药的时间周期之后至少3、4、5、6、12、18或24个月，所述对象不需要RBC输血。在某些实施方案中，在ActRII信号转导抑制剂给药之后至少3、4、5、6、12、18或24个月，所述方法消除了所述对象对RBC输血的需求。在某些实施方案中，所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比的长期降低是比所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的初始百分比低至少1.5、2.5、5.0、7.5或10.0倍，在给予ActRII信号转导抑制剂的最后剂量之后至少6、12、18或24个月并且无需进一步给予ActRII信号转导抑制剂。在某些实施方案中，在给予ActRII信号转导抑制剂的最后剂量之后至少3、4、5、6、12、18或24个月，维持所述对象的血红蛋白水平的长期增加，并且无需进一步给予ActRII信号转导抑制剂。在某些实施方案中，所述对象的血红蛋白水平的长期增加为所述对象的介于约11g/dL和18g/dL之间的血红蛋白水平，在给予ActRII信号转导抑制剂的最后剂量之后至少3、4、5、6、12、18或24个月并且无需进一步给予ActRII信号转导抑制剂。在某些实施方案中，在给予ActRII信号转导抑制剂的最后剂量之后至少3、4、5、6、12、18或24个月并且无需进一步给予ActRII信号转导抑制剂，所述对象不需要RBC输血。在某些实施方案中，在给予ActRII信号转导抑制剂的最后剂量之后至少3、4、5、6、12、18或24个月并且无需进一步给予ActRII信号转导抑制剂，所述方法消除了所述对象对RBC输血的需求。

在某些实施方案中，所述方法还包括在ActRII信号转导抑制剂给药的时间周期之后6、12、18和/或24个月，测定所述对象中是环形铁粒幼细胞成红细胞的另一百分比。在某些实施方案中，所述方法还包括在ActRII信号转导抑制剂给药的时间周期之后6、12、18和/或24个月，测定所述对象的另一血红蛋白水平。

在某些实施方案中，所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比按照如第7.10节中所描述的测定法来测定。在某些实施方案中，环形铁粒幼细胞按照如第7.10节中所描述的测定法来鉴定。在某些实施方案中，环形铁粒幼细胞按照普鲁士蓝染色来鉴定。在某些实施方案中，成红细胞按照如第7.10节中所描述的测定法来鉴定。在某些实施方案中，所述对象的血红蛋白水平按照如第7.10节中所描述的测定法来测定。在某些实施方案中，所述对象是如第7.8节中所描述的对象。在某些实施方案中，所述对象中至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或至少20％的成红细胞是环形铁粒幼细胞。在某些实施方案中，所述对象是如第7.8节中所描述的对象。在某些实施方案中，所述对象中至少15％的成红细胞是环形铁粒幼细胞。在某些实施方案中，所述对象的血红蛋白水平为小于11g/dL。在某些实施方案中，与参比群体相比，所述对象具有降低的血红蛋白水平。在某些实施方案中，所述参比群体是如第7.10节中所描述的。在某些实施方案中，所述对象患有贫血症。在某些实施方案中，所述对象是需要RBC输血的对象。在某些实施方案中，所述对象患有MDS。在某些实施方案中，所述对象患有非增殖CMML。

在某些实施方案中，所述药学上有效剂量是如第7.7节中所描述的剂量。在某些实施方案中，所述药学上有效剂量以如第7.7节中所描述的频率给予。在某些实施方案中，所述药学上有效剂量如第7.7节中所描述给予。在某些实施方案中，所述药学上有效剂量是初始剂量。在某些实施方案中，所述初始剂量按照如第7.4节中所描述的方法给予。在某些实施方案中，所述药学上有效剂量是调整剂量。在某些实施方案中，所述调整剂量按照如第7.4节中所描述的方法给予。

在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂采用如第7.11节中所描述的组合物给予。在某些实施方案中，所述组合物以如第7.7节中所描述的频率给予。在某些实施方案中，所述组合物如第7.7节中所描述给予。

在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂是如第7.9节中所描述的ActRII信号转导抑制剂。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂是ActRIIA信号转导抑制剂。在某些实施方案中，所述ActRIIA信号转导抑制剂经皮下给予每21天一次。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂是ActRIIA-Fc诸如ActRIIA-hFc(例如，SEQ ID NO:7)。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂是ActRIIB信号转导抑制剂。在某些实施方案中，所述ActRIIB信号转导抑制剂经皮下给予每21天一次。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂是ActRII-Fc诸如ActRIIB-hFc(例如，SEQ ID NO:25)。

在某些实施方案中，本文提供的是用于治疗对象的血液相关紊乱的方法，其中所述方法包括：(a)测定所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比；和(b)(i)如果所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比为至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或至少20％，将ActRII信号转导抑制剂以介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间的药学上有效剂量给予所述对象一段短的时间周期，或(ii)如果所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比为小于10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％，将ActRII信号转导抑制剂以介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间的药学上有效剂量给予所述对象一段长的时间周期。在某些实施方案中，所述血液相关紊乱是如第7.8节中所描述的血液相关紊乱。在某些实施方案中，所述对象是如第7.8节中所描述的对象。在某些实施方案中，所述药学上有效剂量为介于0.75mg/kg和2.0mg/kg之间。在某些实施方案中，所述对象是需要RBC输血的对象。在某些实施方案中，将ActRII信号转导抑制剂给予所述对象的短的时间周期是1、2、3、4或5个月。在某些实施方案中，将ActRII信号转导抑制剂给予所述对象的长的时间周期是至少6、12、18或24个月。在一个具体的实施方案中，所述短的给药时间周期之后是在ActRII信号转导抑制剂的最后给药之后至少0、3、4、5、6、12、28、24或48个月，测试环形铁粒幼细胞的水平。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂是如第7.9节中所描述的ActRII信号转导抑制剂。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂是ActRIIA信号转导抑制剂。在某些实施方案中，所述ActRIIA信号转导抑制剂经皮下给予每21天一次。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂是ActRIIA-Fc诸如ActRIIA-hFc(例如，SEQ ID NO:7)。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂是ActRIIB信号转导抑制剂。在某些实施方案中，所述ActRIIB信号转导抑制剂经皮下给予每21天一次。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂是ActRII-Fc诸如ActRIIB-hFc(例如，SEQ IDNO:25)。

在某些实施方案中，所述方法还包括在ActRII信号转导抑制剂给药的时间周期之后6、12、18和/或24个月，测定所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的另一百分比。在某些实施方案中，所述方法还包括在ActRII信号转导抑制剂给药的时间周期之后6、12、18和/或24个月，测定所述对象的另一血红蛋白水平。

在某些实施方案中，所述方法还包括在ActRII信号转导抑制剂给药的时间周期之后6、12、18和/或24个月，测定所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的另一百分比。在某些实施方案中，所述方法还包括在ActRII信号转导抑制剂给药的时间周期之后6、12、18和/或24个月，测定所述对象的血红蛋白水平。在某些实施方案中，在ActRII信号转导抑制剂给药之后至少3、4、5、6、12、18或24个月，所述方法消除了所述对象对红细胞输血的需求。在某些实施方案中，在给予ActRII信号转导抑制剂的最后剂量至少3、4、5、6、12、18或24个月之后并且无需进一步给予ActRII信号转导抑制剂，所述方法消除了所述对象对红细胞输血的需求。

在某些实施方案中，所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比按照如第7.10节中所描述的测定法来测定。在某些实施方案中，环形铁粒幼细胞按照如第7.10节中所描述的测定法来鉴定。在某些实施方案中，环形铁粒幼细胞按照普鲁士蓝染色来鉴定。在某些实施方案中，成红细胞按照如第7.10节中所描述的测定法来鉴定。在某些实施方案中，所述对象的血红蛋白水平按照如第7.10节中所描述的测定法来测定。在某些实施方案中，所述对象的血红蛋白水平按照如第7.10节中所描述的测定法来测定。

在某些实施方案中，所述对象是如第7.8节中所描述的对象。在某些实施方案中，所述对象中至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或至少20％的成红细胞是环形铁粒幼细胞。在某些实施方案中，所述对象中至少15％的成红细胞是环形铁粒幼细胞。在某些实施方案中，所述对象的血红蛋白水平为小于11g/dL。在某些实施方案中，与参比群体相比，所述对象具有降低的血红蛋白水平。在某些实施方案中，所述参比群体是如第7.10节中所描述。在某些实施方案中，所述对象患有贫血症。在某些实施方案中，所述对象是需要RBC输血的对象。在某些实施方案中，所述对象患有MDS。在某些实施方案中，所述对象患有非增殖CMML。

在某些实施方案中，本文提供的是用于治疗对象的血液相关紊乱的方法，包括将药学上有效剂量的激活素受体II型(ActRII)信号转导抑制剂给予所述对象，和其中所述对象表达包含一个或多个突变的SF3B1。在某些实施方案中，所述一个或多个突变是在非编码区内。在某些实施方案中，所述一个或多个突变是在编码区内。在某些实施方案中，SF3B1是SF3B1蛋白。在某些实施方案中，SF3B1是编码SF3B1的基因。在某些实施方案中，所述对象是如第7.8节中所描述的对象。在某些实施方案中，所述血液相关紊乱是如第7.8节中所描述的血液相关紊乱。在某些实施方案中，SF3B中的一个或多个突变是如第7.8节中所描述。在某些实施方案中，所述对象中至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或至少20％的成红细胞是环形铁粒幼细胞。在某些实施方案中，所述对象中至少15％的成红细胞是环形铁粒幼细胞。在某些实施方案中，所述对象的血红蛋白水平为小于11g/dL。在某些实施方案中，与参比群体相比，所述对象具有降低的血红蛋白水平。在某些实施方案中，所述参比群体是如第7.10节中所描述的。在某些实施方案中，所述对象患有贫血症。在某些实施方案中，所述对象是需要RBC输血的对象。在某些实施方案中，所述对象患有MDS。在某些实施方案中，所述对象患有非增殖CMML。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象患有血小板减少症。在某些实施方案中，所述药学上有效剂量是如第7.7节中所描述的剂量。在某些实施方案中，所述药学上有效剂量为ActRII信号转导抑制剂的介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间。在某些实施方案中，所述药学上有效剂量为ActRII信号转导抑制剂的介于0.75mg/kg和2.0mg/kg之间。在某些实施方案中，所述药学上有效剂量以如第7.7节中所描述的频率给予。在某些实施方案中，所述药学上有效剂量如第7.7节中所描述给予。在某些实施方案中，所述药学上有效剂量是初始剂量。在某些实施方案中，所述初始剂量按照如第7.4节中所描述的方法给予。在某些实施方案中，所述药学上有效剂量是调整剂量。在某些实施方案中，所述调整剂量按照如第7.4节中所描述的方法给予。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂采用如第7.11节中所描述的组合物给予。在某些实施方案中，所述组合物以如第7.7节中所描述的频率给予。在某些实施方案中，所述组合物如第7.7节中所描述给予。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂是如第7.9节中所描述的ActRII信号转导抑制剂。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂是ActRIIA信号转导抑制剂。在某些实施方案中，所述ActRIIA信号转导抑制剂经皮下给予每21天一次。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂是ActRIIA-Fc诸如ActRIIA-hFc(例如，SEQID NO:7)。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂是ActRIIB信号转导抑制剂。在某些实施方案中，所述ActRIIB信号转导抑制剂经皮下给予每21天一次。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂是ActRII-Fc诸如ActRIIB-hFc(例如，SEQ ID NO:25)。所述需要提高中性粒细胞水平的对象可以是具有环形铁粒幼细胞、贫血症、需要RBC输血的贫血症、非增殖CMML和/或MDS的对象。

7.3.1遗传标记

在某些实施方案中，本文提供的是用于治疗对象的血液相关紊乱的方法，包括将药学上有效剂量的激活素受体II型(ActRII)信号转导抑制剂给予所述对象，和其中所述对象表达包含一个或多个突变的SF3B1。在某些实施方案中，所述一个或多个突变是在非编码区内。在某些实施方案中，所述一个或多个突变是在编码区内。在某些实施方案中，SF3B1是SF3B1蛋白。在某些实施方案中，SF3B1是编码SF3B1的基因。在某些实施方案中，所述对象是如第7.8节中所描述的对象。在某些实施方案中，所述血液相关紊乱是如第7.8节中所描述的血液相关紊乱。在某些实施方案中，SF3B1中的一个或多个突变是如第7.8节中所描述的。在某些实施方案中，所述对象中至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或至少20％的成红细胞是环形铁粒幼细胞。在某些实施方案中，所述对象中至少15％的成红细胞是环形铁粒幼细胞。在某些实施方案中，所述对象的血红蛋白水平为小于11g/dL。在某些实施方案中，与参比群体相比，所述对象具有降低的血红蛋白水平。在某些实施方案中，所述参比群体是如第7.10节中所描述的。在某些实施方案中，所述对象患有贫血症。在某些实施方案中，所述对象是需要RBC输血的对象。在某些实施方案中，所述对象患有MDS。在某些实施方案中，所述对象患有非增殖CMML。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象患有血小板减少症。在某些实施方案中，所述药学上有效剂量是如第7.7节中所描述的剂量。在某些实施方案中，所述药学上有效剂量为ActRII信号转导抑制剂的介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间。在某些实施方案中，所述药学上有效剂量为ActRII信号转导抑制剂的介于0.75mg/kg和2.0mg/kg之间。在某些实施方案中，所述药学上有效剂量以如第7.7节中所描述的频率给予。在某些实施方案中，所述药学上有效剂量如第7.7节中所描述给予。在某些实施方案中，所述药学上有效剂量是初始剂量。在某些实施方案中，所述初始剂量按照如第7.4节中所描述的方法给予。在某些实施方案中，所述药学上有效剂量是调整剂量。在某些实施方案中，所述调整剂量按照如第7.4节中所描述的方法给予。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂采用如第7.11节中所描述的组合物给予。在某些实施方案中，所述组合物以如第7.7节中所描述的频率给予。在某些实施方案中，所述组合物如第7.7节中所描述给予。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂是如第7.9节中所描述的ActRII信号转导抑制剂。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂是ActRIIA信号转导抑制剂。在某些实施方案中，所述ActRIIA信号转导抑制剂经皮下给予每21天一次。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂是ActRIIA-Fc诸如ActRIIA-hFc(例如，SEQID NO:7)。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂是ActRIIB信号转导抑制剂。在某些实施方案中，所述ActRIIB信号转导抑制剂经皮下给予每21天一次。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂是ActRII-Fc诸如ActRIIB-hFc(例如，SEQ ID NO:25)。所述需要提高中性粒细胞水平的对象可以是具有环形铁粒幼细胞、贫血症、需要RBC输血的贫血症、非增殖CMML和/或MDS的对象。

7.4调整的给药方法

在某些实施方案中，本文提供的是治疗对象的血液相关紊乱的方法，其中所述方法包括：(a)测定所述对象中至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或至少20％的成红细胞是环形铁粒幼细胞；(b)将介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间的初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象；(c)在一段时间周期之后，测定所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的第二百分比；和(d)任选将调整剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象。在某些实施方案中，所述血液相关紊乱是如第7.8节中所描述的血液相关紊乱。在某些实施方案中，所述对象是如第7.8节中所描述的对象。在某些实施方案中，所述初始剂量为介于0.75mg/kg和2.0mg/kg之间。在某些实施方案中，所述对象是需要RBC输血的对象。在某些实施方案中，在测定所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的第一百分比之后马上或在其至多1天、2天、3天、4天、5天、6天、或1周、2周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月以内，将所述初始剂量给予所述对象。在某些实施方案中，介于将初始剂量给予所述对象并且测定所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的第二百分比之间的时间周期是1天、2天、3天、4天、5天、6天、或1周、2周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月。在某些实施方案中，在测定所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的第二百分比之后马上或在其至多1天、2天、3天、4天、5天、6天、或1周、2周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月以内，将所述调整剂量给予所述对象。在某些实施方案中，如果所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的第二百分比为至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或至少20％，那么所述ActRII信号转导抑制剂的调整剂量为小于初始剂量。在某些实施方案中，所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的第二百分比为至少15％。在某些实施方案中，如果所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的第二百分比为小于10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％，对所述对象不给予调整剂量。在某些实施方案中，在ActRII信号转导抑制剂给药之后至少3、4、5、6、12、18或24个月，所述方法消除了所述对象对红细胞输血的需求。

在某些实施方案中，所述对象是如第7.8节中所描述的对象。在某些实施方案中，所述对象中至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或至少20％的成红细胞是环形铁粒幼细胞。在某些实施方案中，所述对象中至少15％的成红细胞是环形铁粒幼细胞。在某些实施方案中，所述对象的血红蛋白水平为小于11g/dL。在某些实施方案中，与参比群体相比，所述对象具有降低的血红蛋白水平。在某些实施方案中，所述参比群体是如第7.10节中所描述的。在某些实施方案中，所述对象患有贫血症。在某些实施方案中，所述对象是需要RBC输血的对象。在某些实施方案中，所述对象患有MDS。在某些实施方案中，所述对象患有非增殖CMML。在某些实施方案中，所述药学上有效剂量是如第7.7节中所描述的初始剂量。在某些实施方案中，所述剂量是如第7.7节中所描述的调整剂量。在某些实施方案中，所述药学上有效剂量是调整剂量。在某些实施方案中，所述药学上有效剂量以如第7.7节中所描述的频率给予。在某些实施方案中，所述药学上有效剂量如第7.7节中所描述给予。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂采用如第7.11节中所描述的组合物给予。在某些实施方案中，所述组合物以如第7.7节中所描述的频率给予。在某些实施方案中，所述组合物如第7.7节中所描述给予。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂是如第7.9节中所描述的ActRII信号转导抑制剂。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂是ActRIIA信号转导抑制剂。在某些实施方案中，所述ActRIIA信号转导抑制剂经皮下给予每21天一次。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂是ActRIIA-Fc诸如ActRIIA-hFc(例如，SEQ ID NO:7)。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂是ActRIIB信号转导抑制剂。在某些实施方案中，所述ActRIIB信号转导抑制剂经皮下给予每21天一次。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂是ActRII-Fc诸如ActRIIB-hFc(例如，SEQ ID NO:25)。

在某些实施方案中，本文提供的是促进患有血液相关紊乱的对象的红细胞生成的方法，所述方法包括：(a)测定所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比；(b)将药学上有效剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象持续第一时间周期；和(c)在第一时间周期之后，如果在步骤(a)中，所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比已超过11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或20％，那么减少给予所述对象ActRII信号转导抑制剂的剂量，减少给予所述对象ActRII信号转导抑制剂的频率，或停止给予ActRII信号转导抑制剂。在某些实施方案中，所述方法还包括(i)在第一时间周期期间监测所述对象的血液学参数；和(ii)如果所述对象的血液学参数实现了正常化，例如，如果所述对象的血液学参数至少是参比群体的血液学参数的水平，那么减少(例如，减少剂量或减少频率)或停止给予所述对象ActRII信号转导抑制剂。在某些实施方案中，所述参比群体是如第7.10节中所描述的参比群体。在某些实施方案中，所述方法还包括(i)在第一时间周期期间监测所述对象的血液学参数；和(ii)如果所述对象的血液学参数实现了正常化，例如，如果与第二时间周期所述对象的血液学参数相比，所述对象的血液学参数是有至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％的改善，那么减少(例如，减少剂量或减少频率)或停止给予所述对象ActRII信号转导抑制剂，其中所述第二时间周期是在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的时间周期。在某些实施方案中，所述第一时间周期是至少1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或1年。在某些实施方案中，所述第二时间周期是1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、3个月、4个月、5个月或6个月。在某些实施方案中，所述血液学参数是血红蛋白水平。在某些实施方案中，所述血液学参数是血细胞比容。在某些实施方案中，所述血液学参数是红细胞计数。在某些实施方案中，所述血液学参数是所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的减少剂量是如第7.7节中所描述的剂量。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的减少的给药频率是如第7.7节中所描述的频率。在某些实施方案中，所述血液相关紊乱是如第7.8节中所描述的血液相关紊乱。在某些实施方案中，所述对象是如第7.8节中所描述的对象。在某些实施方案中，所述药学上有效剂量是如第7.7节中所描述的初始剂量。在某些实施方案中，所述剂量是如第7.7节中所描述的调整剂量。在某些实施方案中，所述药学上有效剂量是调整剂量。在某些实施方案中，所述药学上有效剂量以如第7.7节中所描述的频率给予。在某些实施方案中，所述药学上有效剂量如第7.7节中所描述给予。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂采用如第7.11节中所描述的组合物给予。在某些实施方案中，所述组合物以如第7.7节中所描述的频率给予。在某些实施方案中，所述组合物如第7.7节中所描述给予。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂是如第7.9节中所描述的ActRII信号转导抑制剂。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂是ActRIIA信号转导抑制剂。在某些实施方案中，所述ActRIIA信号转导抑制剂经皮下给予每21天一次。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂是ActRIIA-Fc诸如ActRIIA-hFc(例如，SEQID NO:7)。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂是ActRIIB信号转导抑制剂。在某些实施方案中，所述ActRIIB信号转导抑制剂经皮下给予每21天一次。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂是ActRII-Fc诸如ActRIIB-hFc(例如，SEQ ID NO:25)。

7.5提高中性粒细胞水平的方法

在某些实施方案中，本文提供的是用于提高需要提高中性粒细胞的水平的对象的中性粒细胞的水平的方法，包括将药学上有效剂量的激活素受体II型(ActRII)信号转导抑制剂给予所述对象。在某些实施方案中，所述中性粒细胞水平为绝对中性粒细胞计数。在某些实施方案中，与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象的中性粒细胞的水平相比，所述对象的中性粒细胞的水平提高至少0.1x10⁹/升、0.5x10⁹/升、1.0x10⁹/升、5x10⁹/升、1.0x10¹⁰/升、5x10¹⁰/升或1.0x10¹¹/升。在某些实施方案中，与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象的中性粒细胞的水平相比，所述对象的中性粒细胞的水平提高至少1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍。在某些实施方案中，与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象的中性粒细胞的水平相比，所述对象的中性粒细胞的水平提高至多1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍。在某些实施方案中，在将药学上有效剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之后至少1、2、3、4、5或6个月，所述对象的中性粒细胞的水平提高。在某些实施方案中，在停止将药学上有效剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之后至少1、2、3、4、5或6个月，所述对象的中性粒细胞的水平提高。也参见第7.4节。在某些实施方案中，在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的时间周期是1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、3个月、4个月、5个月或6个月。在某些实施方案中，所述中性粒细胞水平如第7.10节中所描述来测量。在某些实施方案中，所述绝对中性粒细胞计数如第7.10节中所描述来测量。在某些实施方案中，所述对象是如第7.8节中所描述的对象。在某些实施方案中，所述对象中至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或至少20％的成红细胞是环形铁粒幼细胞。在某些实施方案中，所述对象中至少15％的成红细胞是环形铁粒幼细胞。在某些实施方案中，所述对象的血红蛋白水平为小于11g/dL。在某些实施方案中，与参比群体相比，所述对象具有降低的血红蛋白水平。在某些实施方案中，所述参比群体是如第7.10节中所描述的。在某些实施方案中，所述对象患有贫血症。在某些实施方案中，所述对象是需要RBC输血的对象。在某些实施方案中，所述对象患有MDS。在某些实施方案中，所述对象患有非增殖CMML。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象患有血小板减少症。在某些实施方案中，所述药学上有效剂量是如第7.7节中所描述的剂量。在某些实施方案中，所述药学上有效剂量以如第7.7节中所描述的频率给予。在某些实施方案中，所述药学上有效剂量如第7.7节中所描述给予。在某些实施方案中，所述药学上有效剂量是初始剂量。在某些实施方案中，所述初始剂量按照如第7.4节中所描述的方法给予。在某些实施方案中，所述药学上有效剂量是调整剂量。在某些实施方案中，所述调整剂量按照如第7.4节中所描述的方法给予。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂采用如第7.11节中所描述的组合物给予。在某些实施方案中，所述组合物以如第7.7节中所描述的频率给予。在某些实施方案中，所述组合物如第7.7节中所描述给予。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂是如第7.9节中所描述的ActRII信号转导抑制剂。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂是ActRIIA信号转导抑制剂。在某些实施方案中，所述ActRIIA信号转导抑制剂经皮下给予每21天一次。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂是ActRIIA-Fc诸如ActRIIA-hFc(例如，SEQ ID NO:7)。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂是ActRIIB信号转导抑制剂。在某些实施方案中，所述ActRIIB信号转导抑制剂经皮下给予每21天一次。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂是ActRII-Fc诸如ActRIIB-hFc(例如，SEQ ID NO:25)。需要提高中性粒细胞水平的对象可以是具有环形铁粒幼细胞、贫血症、需要RBC输血的贫血症、非增殖CMML和/或MDS的对象。

7.6提高血小板水平的方法

在某些实施方案中，本文提供的是用于提高需要提高血小板的水平对象的血小板的水平的方法，包括将药学上有效剂量的激活素受体II型(ActRII)信号转导抑制剂给予所述对象。在某些实施方案中，与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象的血小板的水平相比，所述对象的血小板的水平提高至少1x10¹⁰/升、3x10¹⁰/升、5x10¹⁰/升、1x10¹¹/升、5x10¹¹/升或至少1x10¹²/升。在某些实施方案中，与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象的血小板的水平相比，所述对象的血小板的水平提高至少1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍。在某些实施方案中，与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象的血小板的水平相比，所述对象的血小板的水平提高至多1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍。在某些实施方案中，在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的时间周期是1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、3个月、4个月、5个月或6个月。在某些实施方案中，在将药学上有效剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之后至少1、2、3、4、5或6个月，所述对象的血小板的水平提高。在某些实施方案中，在停止将药学上有效剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之后至少1、2、3、4、5或6个月，所述对象的中性粒细胞的水平提高。也参见第7.4节。在某些实施方案中，所述血小板水平如第7.10节中所描述来测量。

在某些实施方案中，所述对象是如第7.8节中所描述的对象。在某些实施方案中，所述对象中至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或至少20％的成红细胞是环形铁粒幼细胞。在某些实施方案中，所述对象中至少15％的成红细胞是环形铁粒幼细胞。在某些实施方案中，所述对象的血红蛋白水平为小于11g/dL。在某些实施方案中，与参比群体相比，所述对象具有降低的血红蛋白水平。在某些实施方案中，所述参比群体是如第7.10节中所描述的。在某些实施方案中，所述对象患有贫血症。在某些实施方案中，所述对象是需要RBC输血的对象。在某些实施方案中，所述对象患有MDS。在某些实施方案中，所述对象患有非增殖CMML。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象患有中性粒细胞减少症。

所述需要提高中性粒细胞水平的对象可以是具有环形铁粒幼细胞、贫血症、需要RBC输血的贫血症、非增殖CMML和/或MDS的对象。

7.7剂量

本文提供的是用于治疗血液相关紊乱(例如，贫血症、需要RBC输血的贫血症、MDS和/或非增殖CMML)的对象的方法，其中所述方法包括将药学上有效剂量的ActRII的信号转导抑制剂(参见第7.9节)给予需要治疗的对象。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂是如第7.9.1节中阐述的ActRIIA的信号转导抑制剂。在其它实施方案中，ActRII信号转导抑制剂是如第7.9.2节中阐述的ActRIIB的信号转导抑制剂。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂是ActRIIA信号转导抑制剂和ActRIIB信号转导抑制剂的组合。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂是SEQ ID NO:7。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂是SEQ ID NO:25。

本文提供的剂量可以用于血液相关疾病，诸如，例如，贫血症、需要RBC输血的贫血症、MDS和/或非增殖CMML的治疗。在某些实施方案中，所述剂量是药学上有效剂量。

在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的药学上有效剂量是足以减轻贫血症的一个或多个症状的剂量。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的药学上有效剂量是足以防止贫血症的至少一个症状以免恶化的剂量。贫血症的非限制性实例包括疲乏、能量损耗、心悸(rapid heartbeat)、呼吸急促、头痛、注意力难集中、头晕、苍白的皮肤、腿部抽筋和失眠症。

在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的药学上有效剂量是足以减轻非增殖CMML的一个或多个症状的剂量。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的药学上有效剂量是足以防止非增殖CMML的一个或多个症状以免恶化的剂量。CMML症状的非限制性实例包括脾肿大、肝肿大、贫血、疲乏、呼吸急促、白细胞减少、频繁的感染、血小板减少、容易瘀伤或出血、发热、体重减轻、苍白的皮肤和食欲不振。

在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的药学上有效剂量是足以减轻MDS的一个或多个症状的剂量。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的药学上有效剂量是足以防止MDS的一个或多个症状以免恶化的剂量。MDS症状的非限制性实例包括贫血、呼吸急促、疲乏、苍白的皮肤、白细胞减少、频繁的感染、中性粒细胞减少、血小板减少、容易瘀伤或出血、体重减轻、发热、食欲不振、虚弱和骨痛。

在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂以足以实现0.2微克/kg或更大的血清浓度的间隔和量用药，例如，1微克/kg或2微克/kg或更大的血清水平。可以设计给药方案以达到介于0.2和15微克/kg之间和任选介于1和5微克/kg之间的血清浓度。在人类中，用0.1mg/kg或更大的单次剂量可实现0.2微克/kg的血清水平，并且用0.3mg/kg或更大的单次剂量可实现1微克/kg的血清水平。所观察到的分子的血清半寿期为介于约20和30天之间，大大长于大多数的Fc融合蛋白，并因此例如通过在一周一次或两周一次的基础上给予0.2-0.4mg/kg，可实现持续有效的血清水平，或者可以使用较高的剂量与两次给药之间较长的间隔。例如，可在每月一次或两月一次的基础上使用1-3mg/kg的剂量，并且对骨的作用可能是足够持久的，使得只需每3、4、5、6、9、12个月或更多个月用药一次是必需的。所述ActRII信号转导抑制剂的血清水平可以通过技术人员已知的任何手段来测量。例如，可以用抗所述ActRII信号转导抑制剂的抗体来测定所述ActRII信号转导抑制剂的血清水平，例如采用ELISA。在一个具体的实施方案中，本文提供的方法也能实现对骨密度和骨强度的显著作用。

在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的剂量为约0.1mg/kg、约0.3mg/kg、约0.5mg/kg、0.75mg/kg、约1.0mg/kg、约1.25mg/kg、约1.5mg/kg、约1.75mg/kg、约2.0mg/kg或约2.25mg/kg。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的剂量为介于0.1mg/kg和2.25mg/kg之间。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的剂量为介于0.1mg/kg和1mg/kg之间。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的剂量为介于0.3mg/kg和1.25mg/kg之间。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的剂量为介于0.5mg/kg和1.5mg/kg之间。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的剂量为介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的剂量为介于0.75mg/kg和1.0mg/kg之间、介于1.0mg/kg和1.25mg/kg之间、介于1.25mg/kg和1.5mg/kg之间、介于1.5mg/kg和1.75mg/kg之间或介于1.75mg/kg和2.0mg/kg之间。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的剂量是药学上有效剂量。当与本文提供的剂量(例如，ActRII信号转导抑制剂的剂量或第二活性剂的剂量)结合使用时，单词“约”是指在被提及数值的1％、5％或10％以内的任何数值。

在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的剂量是药学上有效剂量。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的药学上有效剂量为约0.1mg/kg、约0.3mg/kg、约0.5mg/kg、0.75mg/kg、约1.0mg/kg、约1.25mg/kg、约1.5mg/kg、约1.75mg/kg、约2.0mg/kg或约2.25mg/kg。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的药学上有效剂量为介于0.1mg/kg和2.25mg/kg之间。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的药学上有效剂量为介于0.1mg/kg和1mg/kg之间。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的药学上有效剂量为介于0.3mg/kg和1.25mg/kg之间。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的药学上有效剂量为介于0.5mg/kg和1.5mg/kg之间。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的药学上有效剂量为介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的药学上有效剂量为介于0.75mg/kg和1.0mg/kg之间、介于1.0mg/kg和1.25mg/kg之间、介于1.25mg/kg和1.5mg/kg之间、介于1.5mg/kg和1.75mg/kg之间或介于1.75mg/kg和2.0mg/kg之间。

在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的剂量是初始剂量。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的初始剂量为约0.1mg/kg、约0.3mg/kg、约0.5mg/kg、0.75mg/kg、约1.0mg/kg、约1.25mg/kg、约1.5mg/kg、约1.75mg/kg、约2.0mg/kg或约2.25mg/kg。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的初始剂量为介于0.1mg/kg和2.25mg/kg之间。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的初始剂量为介于0.1mg/kg和1mg/kg之间。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的初始剂量为介于0.3mg/kg和1.25mg/kg之间。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的初始剂量为介于0.5mg/kg和1.5mg/kg之间。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的初始剂量为介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的初始剂量为介于0.75mg/kg和1.0mg/kg之间、介于1.0mg/kg和1.25mg/kg之间、介于1.25mg/kg和1.5mg/kg之间、介于1.5mg/kg和1.75mg/kg之间或介于1.75mg/kg和2.0mg/kg之间。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的初始剂量按(i)每28天一次；或(ii)每42天一次给予。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的初始剂量按每三周一次给予。

在某些实施方案中，所述剂量是调整剂量。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的调整剂量为约0.1mg/kg、约0.3mg/kg、约0.5mg/kg、0.75mg/kg、约1.0mg/kg、约1.25mg/kg、约1.5mg/kg、约1.75mg/kg、约2.0mg/kg或约2.25mg/kg。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的调整剂量为介于0.1mg/kg和2.25mg/kg之间。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的调整剂量为介于0.1mg/kg和1mg/kg之间。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的调整剂量为介于0.3mg/kg和1.25mg/kg之间。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的调整剂量为介于0.5mg/kg和1.5mg/kg之间。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的调整剂量为介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的调整剂量为介于0.75mg/kg和1.0mg/kg之间、介于1.0mg/kg和1.25mg/kg之间、介于1.25mg/kg和1.5mg/kg之间、介于1.5mg/kg和1.75mg/kg之间或介于1.75mg/kg和2.0mg/kg之间。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的调整剂量按(i)每28天一次；或(ii)每42天一次给予。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的调整剂量按每三周一次给予。

在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的调整剂量是大于初始剂量。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的调整剂量是比所述ActRII信号转导抑制剂的初始剂量高约2.5mg、约5mg、约10mg、约15mg、约20mg或约35mg，或者比所述ActRII信号转导抑制剂的初始剂量高约0.05mg/kg、约0.1mg/kg、约0.15mg/kg、约0.25mg/kg、约0.3mg/kg、约0.35mg/kg、约0.4mg/kg或约0.5mg/kg。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的调整剂量比所述ActRII信号转导抑制剂的初始剂量更频繁地给予。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的调整剂量按每5、10、15、20、25、28、30、35或40天给予。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的调整剂量按每1周或2周给予。

在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的调整剂量是小于初始剂量。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的调整剂量是比所述ActRII信号转导抑制剂的初始剂量低约2.5mg、约5mg、约10mg、约15mg、约20mg或约35mg，或者比所述ActRII信号转导抑制剂的初始剂量低约0.05mg/kg、约0.1mg/kg、约0.15mg/kg、约0.25mg/kg、约0.3mg/kg、约0.35mg/kg、约0.4mg/kg或约0.5mg/kg。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的调整剂量比所述ActRII信号转导抑制剂的初始剂量更少频次给予。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的调整剂量按每30、35、40、42、50、60、70、80或90天给予。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的调整剂量按每4、5、6、7或8周给予。

在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的剂量经由注射给予。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的剂量按每28天一次或每42天一次给予。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的剂量按每21天一次给予。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂是SEQ ID NO:7。

在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的剂量经由注射给予。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的剂量经皮下给予。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂的剂量按每3周一次给予。在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂是SEQ ID NO:25。

在某些实施方案中，与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比相比，根据本文提供的方法所述将ActRII信号转导抑制剂给予对象的剂量足以使所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比降低至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或至少100％。在某些实施方案中，与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比相比，根据本文提供的方法所述将ActRII信号转导抑制剂给予对象的剂量足以使所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比降低至多5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或至多100％。在某些实施方案中，将ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的时间周期是1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、3个月、4个月、5个月或6个月。在某些实施方案中，在所述ActRII信号转导抑制剂的给药之后至少3、4、5、6、12、18、24或48个月，根据本文提供的方法所述将ActRII信号转导抑制剂给予对象的剂量足以降低所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比。在某些实施方案中，无限期地在所述ActRII信号转导抑制剂的给药之后，根据本文提供的方法所述将ActRII信号转导抑制剂给予对象的剂量足以降低所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比。在某些实施方案中，所述剂量为介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间。在某些实施方案中，所述剂量为介于0.75mg/kg和2.0mg/kg之间。在某些实施方案中，所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比按照如第7.10节中所描述的测定法来测定。在某些实施方案中，与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象的环形铁粒幼细胞的水平相比，根据本文提供的方法所述将ActRII信号转导抑制剂给予对象的剂量足以使所述对象的环形铁粒幼细胞的水平降低至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或至少100％。在某些实施方案中，与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象的环形铁粒幼细胞的水平相比，根据本文提供的方法所述将ActRII信号转导抑制剂给予对象的剂量足以使所述对象的环形铁粒幼细胞的水平降低至多5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或至多100％。在某些实施方案中，在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的时间周期是1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、3个月、4个月、5个月或6个月。在某些实施方案中，在所述ActRII信号转导抑制剂的给药之后至少3、4、5、6、12、18、24或48个月，根据本文提供的方法所述将ActRII信号转导抑制剂给予对象的剂量足以降低所述对象的环形铁粒幼细胞的水平。在某些实施方案中，无限期地在所述ActRII信号转导抑制剂的给药之后，根据本文提供的方法所述将ActRII信号转导抑制剂给予对象的剂量足以降低所述对象的环形铁粒幼细胞的水平。在某些实施方案中，所述剂量为介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间。在某些实施方案中，所述剂量为介于0.75mg/kg和2.0mg/kg之间。在某些实施方案中，所述对象的环形铁粒幼细胞的水平按照如第7.10节中所描述的测定法来测定。

在某些实施方案中，与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象的血红蛋白的水平相比，根据本文提供的方法所述将ActRII信号转导抑制剂给予对象的剂量足以使所述对象的血红蛋白的水平提高至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、150％、200％、300％、400％或至少500％。在某些实施方案中，与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象的血红蛋白的水平相比，根据本文提供的方法所述将ActRII信号转导抑制剂给予对象的剂量足以使所述对象的血红蛋白的水平提高至多5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、150％、200％、300％、400％或至多500％。在某些实施方案中，与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象的血红蛋白的水平相比，根据本文提供的方法所述将ActRII信号转导抑制剂给予对象的剂量足以使所述对象的血红蛋白的水平提高至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％或至少60％。在某些实施方案中，与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象的血红蛋白的水平相比，根据本文提供的方法所述将ActRII信号转导抑制剂给予对象的剂量足以使所述对象的血红蛋白的水平提高至多5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％或至多60％。在某些实施方案中，与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象的血红蛋白的水平相比，根据本文提供的方法所述将ActRII信号转导抑制剂给予对象的剂量足以使血红蛋白的水平提高至少0.5g/dL、1.0g/dL、1.1g/dL、1.3g/dL、1.5g/dL、1.8g g/dL、2.0g/dL、2.2g/dL、2.4g/dL、2.6g/dL、2.8g/dL、3.0g/dL、3.2g/dL、3.4g/dL、3.6g/dL、3.8g/dL、4.0g/dL、4.2g/dL、4.4g/dL或至少4.6g/dL。在某些实施方案中，与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象的血红蛋白的水平相比，根据本文提供的方法所述将ActRII信号转导抑制剂给予对象的剂量足以使血红蛋白的水平提高至多0.5g/dL、1.0g/dL、1.1g/dL、1.3g/dL、1.5g/dL、1.8g g/dL、2.0g/dL、2.2g/dL、2.4g/dL、2.6g/dL、2.8g/dL、3.0g/dL、3.2g/dL、3.4g/dL、3.6g/dL、3.8g/dL、4.0g/dL、4.2g/dL、4.4g/dL或至多4.6g/dL。在某些实施方案中，在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的时间周期是1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、3个月、4个月、5个月或6个月。在某些实施方案中，在所述ActRII信号转导抑制剂的给药之后至少3、4、5、6、12、18、24或48个月，根据本文提供的方法所述将ActRII信号转导抑制剂给予对象的剂量足以提高所述对象的血红蛋白的水平。在某些实施方案中，无限期地在所述ActRII信号转导抑制剂的给药之后，根据本文提供的方法所述将ActRII信号转导抑制剂给予对象的剂量足以提高所述对象的血红蛋白的水平。在某些实施方案中，所述剂量为介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间。在某些实施方案中，所述剂量为介于0.75mg/kg和2.0mg/kg之间。

在某些实施方案中，与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象的网织红细胞的水平相比，根据本文提供的方法所述将ActRII信号转导抑制剂给予对象的剂量足以使所述对象的网织红细胞的水平提高至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。在某些实施方案中，与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象的网织红细胞的水平相比，根据本文提供的方法所述将ActRII信号转导抑制剂给予对象的剂量足以使所述对象的网织红细胞的水平提高至多5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或至多100％、150％、200％、300％、400％或至多500％。在某些实施方案中，在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的时间周期是1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、3个月、4个月、5个月或6个月。在某些实施方案中，在所述ActRII信号转导抑制剂的给药之后至少3、4、5、6、12、18、24或48个月，根据本文提供的方法所述将ActRII信号转导抑制剂给予对象的剂量足以提高所述对象的网织红细胞的水平。在某些实施方案中，无限期地在所述ActRII信号转导抑制剂的给药之后，根据本文提供的方法所述将ActRII信号转导抑制剂给予对象的剂量足以提高所述对象的网织红细胞的水平。在某些实施方案中，所述剂量为介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间。在某些实施方案中，所述剂量为介于0.75mg/kg和2.0mg/kg之间。

在某些实施方案中，与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的时间周期红细胞输血依赖相比，根据本文提供的方法所述将ActRII信号转导抑制剂给予对象的剂量足以降低所述对象的红细胞输血依赖。在某些实施方案中，与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象的红细胞输血的频率相比，根据本文提供的方法所述将ActRII信号转导抑制剂给予对象的剂量足以降低所述对象的红细胞输血的频率。在某些实施方案中，将ActRII信号转导抑制剂给予根据本文提供的方法所述治疗的对象的剂量足以使红细胞输血减少至少30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或减少至少100％。在某些实施方案中，将ActRII信号转导抑制剂给予根据本文提供的方法所述治疗的对象的剂量足以使红细胞输血减少至多30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或减少至多100％。在某些实施方案中，与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象的红细胞输血的单位相比，将ActRII信号转导抑制剂给予根据本文提供的方法所述治疗的对象的剂量足以使所述对象的红细胞输血的单位减少至少4、5、6、7、8、9、11、12或13个单位。在某些实施方案中，在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的时间周期是1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、3个月、4个月、5个月或6个月。在某些实施方案中，将ActRII信号转导抑制剂给予根据本文提供的方法所述治疗的对象的剂量足以使红细胞输血的频率减少至少30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或减少100％。在某些实施方案中，将ActRII信号转导抑制剂给予根据本文提供的方法所述治疗的对象的剂量足以使红细胞输血的频率减少至多30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或减少100％。在某些实施方案中，在所述ActRII信号转导抑制剂的给药之后至少3、4、5、6、12、18、24或48个月，根据本文提供的方法所述将ActRII信号转导抑制剂给予对象的剂量足以取消所述对象对红细胞输血的需求。在某些实施方案中，无限期地在所述ActRII信号转导抑制剂的给药之后，根据本文提供的方法所述将ActRII信号转导抑制剂给予对象的剂量足以取消所述对象对红细胞输血的需求。在某些实施方案中，所述剂量为介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间。在某些实施方案中，所述剂量为介于0.75mg/kg和2.0mg/kg之间。在某些实施方案中，1个RBC单位指的是约150mL、200mL、250mL、300mL、350mL、100-200mL、150-250mL、200-300mL或250-350mL的RBC。

在某些实施方案中，与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象的输血负担相比，根据本文提供的方法所述将ActRII信号转导抑制剂给予对象的剂量足以使所述对象的输血负担降低至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或至少100％。在某些实施方案中，与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象的输血负担相比，根据本文提供的方法所述将ActRII信号转导抑制剂给予对象的剂量足以使所述对象的输血负担降低至多5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或至多100％。在某些实施方案中，与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象的输血负担相比，根据本文提供的方法所述将ActRII信号转导抑制剂给予对象的剂量足以使所述对象的输血负担降低至少33％。在某些实施方案中，与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象的输血负担相比，根据本文提供的方法所述将ActRII信号转导抑制剂给予对象的剂量足以使所述对象的输血负担降低至少50％。在某些实施方案中，在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的时间周期是1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、3个月、4个月、5个月或6个月。在某些实施方案中，在所述ActRII信号转导抑制剂的给药之后至少3、4、5、6、12、18、24或48个月，根据本文提供的方法所述将ActRII信号转导抑制剂给予对象的剂量足以降低所述对象的输血负担。在某些实施方案中，无限期地在所述ActRII信号转导抑制剂的给药之后，根据本文提供的方法所述将ActRII信号转导抑制剂给予对象的剂量足以降低所述对象的输血负担。在某些实施方案中，所述剂量为介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间。在某些实施方案中，所述剂量为介于0.75mg/kg和2.0mg/kg之间。

在某些实施方案中，与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象的铁螯合疗法(例如，剂量或频率)相比，根据本文提供的方法所述将ActRII信号转导抑制剂给予对象的剂量足以使所述对象的铁螯合疗法(例如，剂量或频率)降低至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或至少100％。在某些实施方案中，与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象的铁螯合疗法(例如，剂量或频率)相比，根据本文提供的方法所述将ActRII信号转导抑制剂给予对象的剂量足以使所述对象的铁螯合疗法(例如，剂量或频率)降低至多5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或至多100％。在某些实施方案中，在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的时间周期是1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、3个月、4个月、5个月或6个月。在某些实施方案中，在所述ActRII信号转导抑制剂的给药之后至少3、4、5、6、12、18、24或48个月，根据本文提供的方法所述将ActRII信号转导抑制剂给予对象的剂量足以降低所述对象的铁螯合疗法(例如，剂量或频率)。在某些实施方案中，无限期地在所述ActRII信号转导抑制剂的给药之后，根据本文提供的方法所述将ActRII信号转导抑制剂给予对象的剂量足以降低所述对象的铁螯合疗法(例如，剂量或频率)。在某些实施方案中，所述剂量为介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间。在某些实施方案中，所述剂量为介于0.75mg/kg和2.0mg/kg之间。

在某些实施方案中，与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象的血清铁蛋白水平相比，根据本文提供的方法所述将ActRII信号转导抑制剂给予对象的剂量足以使所述对象的血清铁蛋白水平降低至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％或至少50％。在某些实施方案中，与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象的血清铁蛋白水平相比，根据本文提供的方法所述将ActRII信号转导抑制剂给予对象的剂量足以使所述对象的血清铁蛋白水平降低至多5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％。在某些实施方案中，在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的时间周期是1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、3个月、4个月、5个月或6个月。在某些实施方案中，在所述ActRII信号转导抑制剂的给药之后至少3、4、5、6、12、18、24或48个月，根据本文提供的方法所述将ActRII信号转导抑制剂给予对象的剂量足以降低所述对象的血清铁蛋白水平。在某些实施方案中，无限期地在所述ActRII信号转导抑制剂的给药之后，根据本文提供的方法所述将ActRII信号转导抑制剂给予对象的剂量足以降低所述对象的血清铁蛋白水平。在某些实施方案中，所述剂量为介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间。在某些实施方案中，所述剂量为介于0.75mg/kg和2.0mg/kg之间。

在某些实施方案中，与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象的类红细胞血液学改善相比，根据本文提供的方法所述将ActRII信号转导抑制剂给予对象的剂量足以导致所述对象的类红细胞血液学改善达到至少1.5g/dL、1.8g/dL、2.0g/dL、2.2g/dL、2.4g/dL、2.6g/dL、2.8g/dL、3.0g/dL、3.2g/dL、3.4g/dL、3.6g/dL、3.8g/dL或至少4.0g/dL。在某些实施方案中，在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的时间周期是1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、3个月、4个月、5个月或6个月。在某些实施方案中，在所述ActRII信号转导抑制剂的给药之后至少3、4、5、6、12、18、24或48个月，根据本文提供的方法所述将ActRII信号转导抑制剂给予对象的剂量足以导致所述对象的类红细胞血液学改善。在某些实施方案中，无限期地在所述ActRII信号转导抑制剂的给药之后，根据本文提供的方法所述将ActRII信号转导抑制剂给予对象的剂量足以导致所述对象的类红细胞血液学改善。在某些实施方案中，低输血负担患者的类红细胞血液学改善是患者的血红蛋白浓度增加至少1.5g/dL，持续至少8周。在某些实施方案中，高输血负担患者的类红细胞血液学改善是RBC输血在8周内减少至少4个单位。在某些实施方案中，所述剂量为介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间。在某些实施方案中，所述剂量为介于0.75mg/kg和2.0mg/kg之间。

在某些实施方案中，与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象的中性粒细胞的水平相比，根据本文提供的方法所述将ActRII信号转导抑制剂给予对象的剂量足以使所述对象的中性粒细胞的水平提高至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、150％、200％、300％、400％或至少500％。在某些实施方案中，与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象的中性粒细胞的水平相比，根据本文提供的方法所述将ActRII信号转导抑制剂给予对象的剂量足以使所述对象的中性粒细胞的水平提高至多5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、150％、200％、300％、400％或至多500％。在某些实施方案中，与在所述ActRII信号转导抑制剂的给药之前的一段时间周期所述对象的中性粒细胞的水平相比，根据本文提供的方法所述将ActRII信号转导抑制剂给予对象的剂量足以使中性粒细胞的水平提高至少0.1x10⁹/升、0.5x10⁹/升、1.0x10⁹/升、5x10⁹/升、1.0x10¹⁰/升、5x10¹⁰/升或1.0x10¹¹/升。在某些实施方案中，在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的时间周期是1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、3个月、4个月、5个月或6个月。在某些实施方案中，在所述ActRII信号转导抑制剂的给药之后至少3、4、5、6、12、18、24或48个月，根据本文提供的方法所述将ActRII信号转导抑制剂给予对象的剂量足以提高所述对象的中性粒细胞的水平。在某些实施方案中，无限期地在所述ActRII信号转导抑制剂的给药之后，根据本文提供的方法所述将ActRII信号转导抑制剂给予对象的剂量足以提高所述对象的中性粒细胞的水平。在某些实施方案中，所述剂量为介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间。在某些实施方案中，所述剂量为介于0.75mg/kg和2.0mg/kg之间。

在某些实施方案中，与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象的血小板的水平相比，根据本文提供的方法所述将ActRII信号转导抑制剂给予对象的剂量足以使所述对象的血小板的水平提高至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、150％、200％、300％、400％或至多500％。在某些实施方案中，与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象的血小板的水平相比，根据本文提供的方法所述将ActRII信号转导抑制剂给予对象的剂量足以使所述对象的血小板的水平提高至多5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、150％、200％、300％、400％或至多500％。在某些实施方案中，与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象的血小板的水平相比，根据本文提供的方法所述将ActRII信号转导抑制剂给予对象的剂量足以使血小板的水平提高至少1x10¹⁰/升、3x10¹⁰/升、5x10¹⁰/升、1x10¹¹/升、5x10¹¹/升或至少1x10¹²/升。在某些实施方案中，在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的时间周期是1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、3个月、4个月、5个月或6个月。在某些实施方案中，在所述ActRII信号转导抑制剂的给药之后至少3、4、5、6、12、18、24或48个月，根据本文提供的方法所述将ActRII信号转导抑制剂给予对象的剂量足以提高所述对象的血小板的水平。在某些实施方案中，无限期地在所述ActRII信号转导抑制剂的给药之后，根据本文提供的方法所述将ActRII信号转导抑制剂给予对象的剂量足以提高所述对象的血小板的水平。在某些实施方案中，所述剂量为介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间。在某些实施方案中，所述剂量为介于0.75mg/kg和2.0mg/kg之间。

当与本文提供的剂量(例如，ActRII信号转导抑制剂的剂量或第二活性剂的剂量)结合使用时，单词“约”是指在被提及数值的1％、5％或10％以内的任何数值。

在某些实施方案中，如本文描述的ActRII信号转导抑制剂经皮下或静脉内给予。在某些实施方案中，如本文描述的ActRII信号转导抑制剂经皮下给予每三周一次。在某些实施方案中，将ActRIIA-hFC(SEQ ID NO:7；也称为sotatercept)经皮下给予根据本文提供的方法所述治疗的对象每三周一次。在某些实施方案中，将ActRIIB-hFC(SEQ ID NO:25；也称为luspatercept)经皮下给予根据本文提供的方法所述治疗的对象每三周一次。

7.8患者群体

根据本文描述的方法所述治疗的对象可以是任何哺乳动物(诸如啮齿动物和灵长类动物，和在一个优选的实施方案中，是人类)。在某些实施方案中，所述对象是人。在某些实施方案中，本文描述的方法可以用于治疗任何哺乳动物(诸如啮齿动物和灵长类动物，和在一个优选的实施方案中，是人对象)的贫血症、需要RBC输血的贫血症、MDS和/或非增殖CMML。在某些实施方案中，本文描述的方法可以用于提高任何哺乳动物(诸如啮齿动物和灵长类动物，和在一个优选的实施方案中，是人对象)的中性粒细胞的水平。在某些实施方案中，本文描述的方法可以用于提高任何哺乳动物(诸如啮齿动物和灵长类动物，和在一个优选的实施方案中，是人对象)的血小板的水平。

在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比为至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或至少20％。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象中是环形铁粒幼细胞成红细胞的百分比为至少15％。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比为约15％。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比为介于约10％和约20％之间。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比为介于约12％和17％之间。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象具有环形的铁粒幼细胞与正常成红细胞的比率为至少1:10、至少1:7或至少1:5。

在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象患有血液相关紊乱。在某些实施方案中，所述血液相关紊乱是贫血症。在某些实施方案中，所述血液相关紊乱是需要输血的贫血症。在某些实施方案中，所述血液相关紊乱是MDS。在某些实施方案中，所述血液相关紊乱是非增殖CMML。

在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象已诊断患有贫血症。在有些方面，贫血对象的Hb水平为小于或等于9.0g/dL。在有些方面，在根据本文提供的方法所述治疗之前，贫血对象在84天内需要2个或2个以上单位的RBC输血。在某些实施方案中，所述对象具有高输血负担(HTB)。HTB对象每56天需要至少4个单位的RBC输血。在某些实施方案中，所述对象具有低输血负担(LTB)。LTB对象每56天需要小于4个单位的RBC输血。在某些实施方案中，所述对象是需要RBC输血的对象。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象患有铁粒幼细胞性贫血，诸如，例如，X-染色体连锁铁粒幼细胞性贫血、常染色体隐性吡哆醇-难治性铁粒幼细胞性贫血、X-染色体连锁铁粒幼细胞性贫血和脊髓小脑性共济失调、肌病变、乳酸性酸中毒和铁粒幼细胞性贫血、肌病变、乳酸性酸中毒和铁粒幼细胞性贫血、硫胺素反应性巨幼细胞性贫血(thiamine-responsive megaloblasticanemia)、皮尔森骨髓胰腺综合征(pearson marrow-pancreas syndrome)、难治性贫血伴有环形铁粒幼细胞、难治性贫血伴有环形铁粒幼细胞和明显的血小板增多症和酒精诱发的和药物诱发的铁粒幼细胞性贫血。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象已诊断患有贫血症并且所述对象中至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或至少20％的成红细胞是环形铁粒幼细胞。在某些实施方案中，所述对象中至少15％的成红细胞是环形铁粒幼细胞。

在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象已诊断患有IPSS定义的MDS。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象已诊断患有IPSS定义的MDS并且所述对象中至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或至少20％的成红细胞是环形铁粒幼细胞。在某些实施方案中，所述对象中至少15％的成红细胞是环形铁粒幼细胞。

IPSS是指国际预后评分系统，其用于评估骨髓增生异常综合征中的预后。参见例如，Greenberg等人,Blood,1997；89(6):2079-2088，和Erratum in Blood,1998；91:1100。该IPSS采用标准评分系统来将骨髓增生异常综合征患者结果表征为低危(0分；中位生存期为5.7年)，中危-1(0.5-1分；中位生存期为3.5年)；中危-2(1.5-2.0分；中位生存期为1.2年)；或高危(2.5-3.5分；中位生存期为0.4年)。这种评分系统评估(i)对象的骨髓原始细胞的百分比；(ii)对象的核型；和(iii)和对象的血细胞减少(定义为血红蛋白浓度小于10g/dL，绝对中性粒细胞计数小于1,800/μL，和血小板计数小于100,000/μL)。

在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象已诊断患有IPSS-R定义的MDS。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象已诊断患有IPSS-R定义的MDS并且所述对象中至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或至少20％的成红细胞是环形铁粒幼细胞。在某些实施方案中，所述对象中至少15％的成红细胞是环形铁粒幼细胞。

IPSS-R是指国际预后评分系统修订版(the International Prognostic ScoringSystem-Revised)，其用于评估骨髓增生异常综合征中的预后。参见例如，Greenberg等人,Blood,2012；120(12):2454-2465；和Erratum in Blood,1998；91:1100。该IPSS-R采用标准评分系统来将骨髓增生异常综合征患者结果表征为极低危(小于或等于1.5分；中位生存期为8.8年)，低危(大于1.5分，小于或等于3分；中位生存期为5.3年)；中危(大于3分，小于或等于4.5分；中位生存期为3年)；高危(大于4.5分，小于或等于6分；中位生存期为1.6年)；或极高危(大于6分；中位生存期为0.8年)。这种评分系统尤其评估：(i)对象的骨髓原始细胞的百分比；(ii)对象的核型；和(iii)和对象的血细胞减少(定义为血红蛋白浓度小于10g/dL，绝对中性粒细胞计数小于1,800/μL，和血小板计数小于100,000/μL)。

在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象已诊断患有非增殖CMML。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象已诊断患有非增殖CMML并且所述对象中至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或至少20％的成红细胞是环形铁粒幼细胞。

在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象患有MDS。在某些实施方案中，所述MDS是IPSS定义的低危MDS。在某些实施方案中，所述MDS是IPSS定义的中危-1MDS。在某些实施方案中，所述MDS是IPSS定义的中危-2MDS。在某些实施方案中，所述MDS是IPSS定义的高危MDS。在某些实施方案中，所述MDS是IPSS-R定义的极低危MDS。在某些实施方案中，所述MDS是IPSS-R定义的低危MDS。在某些实施方案中，所述MDS是IPSS-R定义的中危MDS。在某些实施方案中，所述MDS是IPSS-R定义的高危MDS。在某些实施方案中，所述MDS是IPSS-R定义的极高危MDS。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象(i)患有MDS和(ii)患有RARS。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象(i)患有MDS和(ii)患有RCMD-RS。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象(i)患有MDS，(ii)患有RARS，和(iii)患有RCMD-RS。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象(i)患有MDS，和(ii)在所述对象中至少15％的成红细胞是环形铁粒幼细胞。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象(i)患有MDS，(ii)患有RARS，和(iii)在所述对象中至少15％的成红细胞是环形铁粒幼细胞。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象(i)患有MDS，(ii)患有RCMD-RS，和(iii)在所述对象中至少15％的成红细胞是环形铁粒幼细胞。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象(i)患有MDS，(ii)患有RARS，(iii)患有RCMD-RS，和(iv)在所述对象中至少15％的成红细胞是环形铁粒幼细胞。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象(i)患有MDS，(ii)患有RARS，和(iii)表达具有一个或多个突变的SF3B1。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象(i)患有MDS，(ii)患有RCMD-RS，和(iii)表达具有一个或多个突变的SF3B1。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象(i)患有MDS，(ii)患有RARS，(iii)患有RCMD-RS，和(iv)表达具有一个或多个突变的SF3B1。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象(i)患有MDS，(ii)在所述对象中至少15％的成红细胞是环形铁粒幼细胞，和(iii)表达具有一个或多个突变的SF3B1。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象(i)患有MDS，(ii)患有RARS，(iii)在所述对象中至少15％的成红细胞是环形铁粒幼细胞，和(iv)表达具有一个或多个突变的SF3B1。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象(i)患有MDS，(ii)患有RCMD-RS，(iii)在所述对象中至少15％的成红细胞是环形铁粒幼细胞，和(iv)表达具有一个或多个突变的SF3B1。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象(i)患有MDS，(ii)患有RARS，(iii)患有RCMD-RS，(iv)在所述对象中至少15％的成红细胞是环形铁粒幼细胞，和(v)表达具有一个或多个突变的SF3B1。

在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象患有非增殖CMML。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象(i)患有非增殖CMML和(ii)患有RARS。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象(i)患有非增殖CMML和(ii)患有RCMD-RS。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象(i)患有非增殖CMML，(ii)患有RARS，和(iii)患有RCMD-RS。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象(i)患有非增殖CMML，和(ii)在所述对象中至少15％的成红细胞是环形铁粒幼细胞。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象(i)患有非增殖CMML，(ii)患有RARS，和(iii)在所述对象中至少15％的成红细胞是环形铁粒幼细胞。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象(i)患有非增殖CMML，(ii)患有RCMD-RS，和(iii)在所述对象中至少15％的成红细胞是环形铁粒幼细胞。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象(i)患有非增殖CMML，(ii)患有RARS，(iii)患有RCMD-RS，和(iv)在所述对象中至少15％的成红细胞是环形铁粒幼细胞。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象(i)患有非增殖CMML，和(ii)表达具有一个或多个突变的SF3B1。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象(i)患有非增殖CMML，(ii)患有RARS，和(iii)表达具有一个或多个突变的SF3B1。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象(i)患有非增殖CMML，(ii)患有RCMD-RS，和(iii)表达具有一个或多个突变的SF3B1。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象(i)患有非增殖CMML，(ii)患有RARS，(iii)患有RCMD-RS，和(iv)表达具有一个或多个突变的SF3B1。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象(i)患有非增殖CMML，(ii)在所述对象中至少15％的成红细胞是环形铁粒幼细胞，和(iii)表达具有一个或多个突变的SF3B1。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象(i)患有非增殖CMML，(ii)患有RARS，(iii)在所述对象中至少15％的成红细胞是环形铁粒幼细胞，和(iv)表达具有一个或多个突变的SF3B1。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象(i)患有非增殖CMML，(ii)患有RCMD-RS，(iii)在所述对象中至少15％的成红细胞是环形铁粒幼细胞，和(iv)表达具有一个或多个突变的SF3B1。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象患有(i)患有非增殖CMML，(ii)患有RARS，(iii)患有RCMD-RS，(iv)在所述对象中至少15％的成红细胞是环形铁粒幼细胞，和(v)表达具有一个或多个突变的SF3B1。

在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象表达具有与无效红细胞生成相关的突变的基因。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象表达一个或多个剪接因子基因，其包含一个或多个突变。在一个具体的实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象表达具有一个或多个突变的SF3B1。在某些实施方案中，所述一个或多个突变是在非编码区内。在某些实施方案中，SF3B1是编码SB3B1的基因。在某些实施方案中，所述一个或多个突变是在编码区内。在某些实施方案中，SF3B1是SF3B1蛋白。在某些实施方案中，SF3B1蛋白中的一个或多个突变选自由E622D、R625C、H662Q、H662D、K66N、K666T、K666Q、K666E、A672D、K700E、I704N组成的组。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象表达具有突变E622D的SF3B1蛋白。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象表达具有突变R625C的SF3B1蛋白。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象表达具有突变H662Q的SF3B1蛋白。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象表达具有突变H662D的SF3B1蛋白。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象表达具有突变K66N的SF3B1蛋白。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象表达具有突变K666T的SF3B1蛋白。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象表达具有突变K666Q的SF3B1蛋白。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象表达具有突变K666E的SF3B1蛋白。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象表达具有突变A672D的SF3B1蛋白。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象表达具有突变K700E的SF3B1。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象表达具有突变I704N的SF3B1蛋白。在一个具体的实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象表达具有一个或多个突变的SRSF2。在一个具体的实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象表达具有一个或多个突变的DNMT3A。在一个具体的实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象表达具有一个或多个突变的TET2。在一个具体的实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象表达具有一个或多个突变的SETBP1。

在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象患有血小板减少症。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象具有小于1x10¹¹血小板/升。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象患有中性粒细胞减少症。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象的绝对中性粒细胞计数为小于1x10⁹/升。

在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象具有小于13,000个白细胞/μL、小于12,000个白细胞/μL、小于11,000个白细胞/μL、小于10,000个白细胞/μL、小于7,500个白细胞/μL或小于500个白细胞/μL。

在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象的血红蛋白水平为小于10g/dL、9g/dL、8g/dL或7g/dL。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象的血红蛋白水平为介于7g/dL和7.5g/dL之间、介于7.5g/dL和8g/dL之间、介于8g/dL和8.5g/dL之间、介于8.5g/dL和9.0g/dL之间、介于9.0g/dL和9.5g/dL之间或介于9.5g/dL和10.0g/dL之间。

在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象具有低输血负担。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的具有低输血负担的对象每8周需要至多0、1、2或3个单位的红细胞。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象具有高输血负担。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的具有高输血负担的对象每8周需要至少4、5、6、7、8、9、10、11、12或13个单位的红细胞。

在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象对一个或多个ESA没有反应、缺乏反应或反应率低。

在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象已经经历之前接受过一个或多个ESA治疗或目前正在经历接受一个或多个ESA治疗。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象已经经历之前接受过低甲基化剂治疗。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象已经经历之前接受过来那度胺治疗。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象一直没有经历阿扎胞苷、地西他滨、ESA、G-CSF、GM-CSG或来那度胺治疗。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象对用一个或多个ESA治疗没有反应。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象对用一个或多个ESA治疗是难治性的。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象对用一个或多个ESA治疗变成难治性的。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象对之前用ESA治疗是难治性的。在某些实施方案中，对之前用ESA治疗是难治性的对象已有文件证明对于之前接受过含有ESA的方案(或者作为单一药剂或联合药物(例如，联合G-CSF))没有反应或具有不再被维持的反应；该ESA方案必须一直是或(a)大于40,000IU/周的重组人红细胞生成素，至少8个剂量，或等同方案，或(b)大于500μg的达贝泊汀α(darbepoetin alpha)，每三周一次，至少4个剂量，或等同方案。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象对之前ESA-治疗是无法耐受的。在某些实施方案中，对之前ESA-治疗无法耐受的对象已有文件证明在不耐受或不良事件所致的引进之后的任何时间停止之前含有ESA的方案，或者作为单一药剂或联合药物(例如，联合G-CSF)。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象是ESA-无资格的。在某些实施方案中，ESA-无资格的对象对ESA反应率低，基于对于先前未接受ESA治疗的对象来说，内源性血清红细胞生成素水平大于200U/L。

在某些实施方案中，根据此处描述的方法所述治疗的对象可以是任何年龄的。在某些实施方案中，根据本文描述的方法所述治疗的对象是年龄小于18岁。在一个具体的实施方案中，根据本文描述的方法所述治疗的对象是年龄小于13岁。在另一个具体的实施方案中，根据本文描述的方法所述治疗的对象是年龄小于12岁、小于11岁、小于10岁、小于9岁、小于8岁、小于7岁、小于6岁或小于5岁。在另一个具体的实施方案中，根据本文描述的方法所述治疗的对象是年龄1-3岁、3-5岁、5-7岁、7-9岁、9-11岁、11-13岁、13-15岁、15-20岁、20-25岁、25-30岁或大于30岁。在另一个具体的实施方案中，根据本文描述的方法所述治疗的对象是年龄30-35岁、35-40岁、40-45岁、45-50岁、50-55岁、55-60岁或大于60岁。在另一个具体的实施方案中，根据本文描述的方法所述治疗的对象是年龄60-65岁、65-70岁、70-75岁、75-80岁或大于80岁。

在某些实施方案中，根据本文描述的方法所述治疗的对象患有MDS。在某些实施方案中，根据本文描述的方法所述治疗的对象患有MDS和具有完整染色体5q。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象患有MDS、具有完整染色体5q并且没有文件证明用来那度胺治疗失败。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象患有MDS、具有完整染色体5q并且有文件证明用来那度胺治疗失败。在某些实施方案中，根据本文描述的方法所述治疗的对象患有MDS伴随染色体5q缺失。MDS伴随染色体5q缺失包含5号染色体长臂的缺失，除其他外，特征为巨红细胞性贫血症伴有卵形巨红细胞、白细胞计数正常至略微减少、血小板计数正常至升高及骨髓和血液中原始细胞小于5％。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象患有MDS伴随染色体5q缺失并且没有文件证明用来那度胺治疗失败。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象患有MDS伴随染色体5q缺失并且有文件证明用来那度胺治疗失败。在某些实施方案中，用来那度胺治疗失败包含对来那度胺缺乏反应、在用来那度胺治疗4个月之后对来那度胺没有反应、对用来那度胺治疗不耐受或因血细胞减少使得用来那度胺治疗行不通。

在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象具有骨髓和血液中原始细胞小于5％。

在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象的EPO血清浓度为大于500mIU/mL。在某些实施方案中，根据本文提供的方法所述治疗的对象的EPO血清浓度为大于200mIU/mL。

7.9 ACTRII受体的信号转导抑制剂

在本文中所涵盖的ActRII受体的抑制剂包括ActRIIA信号转导抑制剂和ActRIIB信号转导抑制剂(参见下文)。在某些实施方案中，ActRII受体信号转导抑制剂具体指ActRIIA。在其它实施方案中，ActRII受体信号转导抑制剂具体指ActRIIB。在某些实施方案中，ActRII受体信号转导抑制剂优先抑制ActRIIA。在其它实施方案中，ActRII受体信号转导抑制剂优先抑制ActRIIB。在某些实施方案中，ActRII受体信号转导抑制剂抑制ActRIIA和ActRIIB两者。

在某些实施方案中，ActRII受体的信号转导抑制剂可以是包含ActRII的激活素结合结构域的多肽。虽然不受理论的束缚，但是这样的包含激活素结合结构域的多肽螯合激活素并因此阻止激活素信号转导。这些包含激活素结合结构域的多肽可包含ActRII受体的胞外结构域的全部或一部分(即，ActRIIA的胞外结构域的全部或一部分或ActRIIB的胞外结构域的全部或一部分)。在具体的实施方案中，ActRII受体的胞外结构域是可溶性的。

在某些实施方案中，所述包含激活素结合结构域的多肽与抗体的Fc部分连接(即，产生包含ActRII受体的包含激活素结合结构域的多肽和抗体的Fc部分的缀合物)。虽然不受理论的束缚，但是所述抗体部分对该缀合物赋予增加的稳定性。在某些实施方案中，所述激活素结合结构域通过接头(例如，肽接头(peptide linker))与抗体的Fc部分连接。

用于本文描述的组合物和方法的ActRII受体的信号转导抑制剂包含直接或间接地抑制ActRIIA和/或ActRIIB的分子，或细胞外或细胞内。在有些实施方案中，用于本文描述的组合物和方法的ActRIIA和/或ActRIIB的信号转导抑制剂通过与受体本身的相互作用抑制ActRIIA和/或ActRIIB。在其它实施方案中，用于本文描述的组合物和方法的ActRIIA和/或ActRIIB的信号转导抑制剂通过与ActRIIA和/或ActRIIB配体(例如激活素)相互作用抑制ActRIIA和/或ActRIIB。

7.9.1 ACTRIIA的信号转导抑制剂

如本文所用的，术语“ActRIIA”是指来自任何物种的激活素受体IIa型(ActRIIA)蛋白质的一个家族和通过诱变或其它修饰而来源于这类ActRIIA蛋白质的变异体。本文提及ActRIIA时要理解为是提及任一种目前已鉴定的形式。该ActRIIA家族的成员一般是具有预测的丝氨酸/苏氨酸激酶活性的跨膜蛋白质，由具有富含半胱氨酸的区域的配体-结合胞外结构域、跨膜结构域和胞质结构域组成。

待用于本文描述的组合物和方法的ActRIIA信号转导抑制剂包括但不限于激活素-结合可溶性ActRIIA多肽；与激活素(特别是激活素A或B亚基，亦称为βA或βB)结合并破坏ActRIIA结合的抗体；与ActRIIA结合并破坏激活素结合的抗体；针对激活素或ActRIIA结合所选择的非抗体蛋白质(对于用于所述抑制剂的设计和选择的这类蛋白质和方法的实例参见例如WO/2002/088171、WO/2006/055689、WO/2002/032925、WO/2005/037989、US 2003/0133939和US 2005/0238646，其每一个均通过引用以其整体结合到本文中)；和针对激活素或ActRIIA结合所选择的随机肽，其可以与Fc结构域缀合。

在某些实施方案中，具有激活素或ActRIIA结合活性的两种或更多种不同的蛋白质(或其它部分)，尤其是分别阻断I型(例如，可溶性I型激活素受体)和II型(例如，可溶性II型激活素受体)结合位点的激活素结合剂，可以连接在一起以产生抑制ActRIIA并因此可以用于本文描述的组合物和方法的双官能或多官能结合分子。在某些实施方案中，抑制ActRIIA的激活素-ActRIIA信号转导轴拮抗剂包括核酸适体、小分子和用于本文描述的组合物和方法的其它药剂。

(a)包含ActRIIA多肽的ActRIIA信号转导抑制剂

术语“ActRIIA多肽”包括包含ActRIIA家族成员的任何天然存在的多肽以及其保留有益活性的任何变异体(包括突变体、片段、融合物和肽模拟物形式)的多肽。例如，ActRIIA多肽包括来源于任何已知的ActRIIA的序列的多肽，所述序列与ActRIIA多肽的序列具有至少约80％同一性，和任选至少85％、90％、95％、97％、98％、99％或更大同一性。例如，ActRIIA多肽可结合并抑制ActRIIA蛋白质和/或激活素的功能。可针对其促进骨生长和骨矿化的能力选择ActRIIB多肽。ActRIIA多肽的实例包括人ActRIIA前体多肽(SEQ ID NO:1)和可溶性人ActRIIA多肽(例如，SEQ ID NO:2、3、7和12)。关于其氨基酸序列以SEQ IDNO:1描绘的ActRIIA前体多肽，人ActRIIA前体多肽的信号肽位于氨基酸位置1至20；胞外结构域位于氨基酸位置21至135；人ActRIIA前体多肽(SEQ ID NO:1)的N-联糖基化位点位于SEQ ID NO:1的氨基酸位置43和56。编码SEQ ID NO:1的人ActRIIB前体多肽的核酸序列以SEQ ID NO:4(Genbank条目NM_001616的核苷酸164-1705)公开。编码SEQ ID NO:2的可溶性人ActRIIA多肽的核酸序列以SEQ ID NO:5公开。关于序列的描述参见表21。

在具体的实施方案中，用于本文描述的组合物和方法的ActRIIA多肽是可溶性ActRIIA多肽。ActRIIA蛋白质的胞外结构域可与激活素结合并且一般是可溶的，因此可以称为可溶性激活素-结合ActRIIA多肽。因此，如本文所用的，术语“可溶性ActRIIA多肽”一般是指包含ActRIIA蛋白质的胞外结构域的多肽，包括任何天然存在的ActRIIA蛋白质的胞外结构域以及其任何变异体(包括突变体、片段和肽模拟物形式)。可溶性ActRIIA多肽可与激活素结合；然而，野生型ActRIIA蛋白质与激活素相对于与GDF8/11的结合中不表现出显著的选择性。通过使ActRIIA蛋白质与第二激活素选择性结合剂偶联，可赋予天然或改变的ActRIIA蛋白质对激活素的相加的特异性。可溶性激活素结合ActRIIA多肽的实例包括SEQID NO:2、3、7、12和13中所举例说明的可溶性多肽。可溶性激活素结合ActRIIA多肽的其它实例包含除ActRIIA蛋白质的胞外结构域以外的信号序列，例如蜜蜂蜂毒肽前导序列(SEQID NO:8)、组织纤溶酶原激活物(TPA)前导序列(SEQ ID NO:9)或天然ActRIIA前导序列(SEQ ID NO:10)。SEQ ID NO:13中所举例说明的ActRIIA-hFc多肽使用TPA前导序列。

在某些实施方案中，用于本文描述的组合物和方法的ActRIIA的信号转导抑制剂包含缀合/融合蛋白，该缀合/融合蛋白包含与抗体的Fc部分连接的ActRIIA的激活素结合结构域。在某些实施方案中，所述激活素结合结构域通过接头(linker)(例如，肽接头)与抗体的Fc部分连接。任选地，Fc结构域在诸如Asp-265、赖氨酸322和Asn-434等残基处具有一个或多个突变。在某些情况下，相对于野生型Fc结构域，具有这些突变中的一个或多个(例如，Asp-265突变)的突变型Fc结构域与Fcγ受体结合的能力降低。在其它情况下，相对于野生型Fc结构域，具有这些突变中的一个或多个(例如，Asn-434突变)的突变型Fc结构域与MHC I类相关Fc-受体(FcRN)结合的能力提高。包含与Fc结构域融合的ActRIIA的可溶性胞外结构域的示例性融合蛋白如SEQ ID NO:6、7、12和13所示。

在一个具体的实施方案中，用于本文描述的组合物和方法的ActRIIA信号转导抑制剂包含与抗体的Fc部分连接的ActRIIA的胞外结构域或其部分，其中所述ActRIIA信号转导抑制剂包含与选自SEQ ID NO:6、7、12和13的氨基酸序列有至少75％同一性的氨基酸序列。在另一个具体的实施方案中，用于本文描述的组合物和方法的ActRIIA信号转导抑制剂包含与抗体的Fc部分连接的ActRIIA的胞外结构域或其部分，其中所述ActRIIA信号转导抑制剂包含与选自SEQ ID NO:6、7、12和13的氨基酸序列有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。

在某些实施方案中，用于本文描述的组合物和方法的ActRIIA的信号转导抑制剂包含ActRIIA的胞外结构域的截短形式。截短可位于ActRIIA多肽的羧基端和/或氨基端。在某些实施方案中，相对于成熟ActRIIA多肽胞外结构域，所述截短可以是长1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个氨基酸。在某些实施方案中，所述截短可以是成熟ActRIIA多肽胞外结构域的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个N-端氨基酸。在某些实施方案中，所述截短可以是成熟ActRIIA多肽胞外结构域的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个C-端氨基酸。例如，ActRIIA的截短形式包括具有氨基酸20-119、20-128、20-129、20-130、20-131、20-132、20-133、20-134、20-131、21-131、22-131、23-131、24-131和25-131的多肽，其中氨基酸位置是指SEQ ID NO:1中的氨基酸位置。

在某些实施方案中，用于本文描述的组合物和方法的ActRIIA的信号转导抑制剂包含具有一个或多个氨基酸取代的ActRIIA的胞外结构域。在某些实施方案中，用于本文描述的组合物和方法的ActRIIA的信号转导抑制剂包含也携带氨基酸取代的ActRIIA胞外结构域的截短形式。

在一个具体的实施方案中，待用于本文描述的组合物和方法的ActRIIA信号转导抑制剂是在人ActRIIA受体的胞外结构域和IgG1的Fc部分之间的融合蛋白。在另一个具体的实施方案中，待用于本文描述的组合物和方法的ActRIIA信号转导抑制剂是在人ActRIIA受体的截短的胞外结构域和IgG1的Fc部分之间的融合蛋白。在另一个具体的实施方案中，待用于本文描述的组合物和方法的ActRIIA信号转导抑制剂是在人ActRIIA受体的截短的胞外结构域和IgG1的Fc部分之间的融合蛋白，其中人ActRIIA受体的截短的胞外结构域具有一个或多个氨基酸取代。

可以例如通过筛选从编码ActRIIA多肽的核酸的相应片段重组产生的多肽，来获得ActRIIA多肽的功能活性片段。另外，可采用本领域已知的技术，例如常规Merrifield固相f-Moc或t-Boc化学法，来化学合成所述片段。所述片段可以(重组或通过化学合成)产生，并且进行测试以鉴定可起ActRIIA蛋白质或由激活素介导的信号转导的拮抗剂(抑制剂)作用的那些肽基片段。

另外，可以例如通过筛选从编码ActRIIA多肽的相应的诱变核酸重组产生的修饰多肽的文库，来获得ActRIIA多肽的功能活性变异体。可以产生变异体，并且进行测试以鉴定可起ActRIIA蛋白质或由激活素介导的信号转导的拮抗剂(抑制剂)作用的那些。在某些实施方案中，ActRIIA多肽的功能变异体包含与选自SEQ ID NO:2或3的氨基酸序列有至少75％同一性的氨基酸序列。在某些情况下，所述功能变异体具有与选自SEQ ID NO:2或3的氨基酸序列有至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。

可以例如通过修饰ActRIIA多肽的结构，来产生功能变异体，以用于提高治疗功效或稳定性(例如，离体货架期和体内对蛋白质水解性降解的抗性)的这类目的。这类修饰的ActRIIA多肽在选择保留激活素结合时，可被视为天然存在的ActRIIA多肽的功能等同物。也可以例如通过氨基酸取代、缺失或添加，来产生修饰的ActRIIA多肽。举例来说，有理由预期，亮氨酸被异亮氨酸或缬氨酸、天冬氨酸被谷氨酸、苏氨酸被丝氨酸的单独置换或一个氨基酸被结构上相关的另一个氨基酸的类似置换(例如，保守突变)将不会对所得分子的生物活性产生重大作用。保守置换是发生在其侧链中是相关的一类氨基酸内的置换。通过评价变异ActRIIA多肽以类似于野生型ActRIIA多肽的方式在细胞中产生反应的能力，可以容易地确定ActRIIA多肽的氨基酸序列中的变化是否导致产生功能同源物。

在某些实施方案中，本文提供的是可以改变多肽的糖基化的ActRIIA多肽的特定突变。这样的突变可以进行选择以便引入或消除一个或多个糖基化位点，诸如O-联或N-联糖基化位点。天冬酰胺-联糖基化识别位点一般包含三肽序列，天冬酰胺-X-苏氨酸(或天冬酰胺类-X-丝氨酸)(其中“X”为任何氨基酸)，其被适当的细胞糖基化酶特异性识别。还可通过将一个或多个丝氨酸或苏氨酸残基添加至野生型ActRIIA多肽的序列或用一个或多个丝氨酸或苏氨酸残基取代(对于O-联糖基化位点)来进行改变。糖基化识别位点的第一或第三氨基酸位置处的一个或两个的多种氨基酸取代或缺失(和/或第二位置上的氨基酸缺失)导致在修饰的三肽序列上的非糖基化。在ActRIIA多肽上增加糖部分的数目的另一种方式是通过糖苷与ActRIIA多肽的化学或酶促偶联。根据所采用的偶联模式，可使糖连接至：(a)精氨酸和组氨酸；(b)游离羧基；(c)游离巯基，诸如半胱氨酸的游离巯基；(d)游离羟基，诸如丝氨酸、苏氨酸或羟脯氨酸的游离羟基；(e)芳族残基，诸如苯丙氨酸、酪氨酸或色氨酸的芳族残基；或(f)谷氨酰胺的酰胺基。这些方法描述于1987年9月11日公布的WO 87/05330及Aplin和Wriston(1981)CRC Crit.Rev.Biochem.,第259-306页,通过引用结合到本文中。脱去存在于ActRIIA多肽上的一个或多个糖部分可以用化学法和/或酶法来完成。化学去糖基化可以包括例如将ActRIIA多肽暴露在化合物三氟甲烷磺酸或等同化合物中。这种处理导致除连接糖(N-乙酰基葡萄糖胺或N-乙酰基半乳糖胺)以外大部分或所有糖被切割，同时保留氨基酸序列完整。化学去糖基化进一步描述于Hakimuddin等人(1987)Arch.Biochem.Biophys.259:52和Edge等人(1981)Anal.Biochem.118:131。ActRIIA多肽上的糖部分的酶促切割可通过使用Thotakura等人(1987)Meth.Enzymol.138:350所描述的各种内切和外切糖苷酶来实现。适当的时候，ActRIIA多肽的序列可以根据所使用的表达系统的类型进行调节，因为哺乳动物、酵母、昆虫和植物细胞全都可以引入可被肽的氨基酸序列影响的不同的糖基化模式。总的来说，用于人类的ActRIIA蛋白质将在提供正确糖基化的哺乳动物细胞系(诸如HEK293或CHO细胞系)中表达，尽管预期其它表达系统诸如其它哺乳动物表达细胞系、具有工程改造的糖基化酶的酵母细胞系和昆虫细胞也是有用的。

本文还提供的是产生ActRIIA多肽的突变体、特别是组合突变体群组以及截短突变体的方法；组合突变体库(pools)尤其可用于鉴别功能变异序列。筛选这类组合文库的目的可以是产生例如可起激动剂或拮抗剂作用或者一起具有新的活性的ActRIIA多肽变异体。下面提供各种筛选测定法，所述测定法可以用来评估变异体。例如，可以针对与ActRIIA配体结合、防止ActRIIA配体与ActRIIA多肽的结合或干扰由ActRIIA配体引起的信号转导的能力来对ActRIIA多肽变异体进行筛选。

可以产生与天然存在的ActRIIA多肽相比具有选择性或效能通常提高的组合来源的变异体。同样，诱变可产生与相应的野生型ActRIIA多肽相比胞内半寿期显著不同的变异体。例如，可使改变的蛋白质对蛋白质水解性降解或导致天然ActRIIA多肽破坏或以其它方式失活的其它细胞过程更稳定或更不稳定。可以使用这类变异体及其编码基因，以通过调节ActRIIA多肽的半寿期来改变ActRIIA多肽水平。举例来说，短的半寿期可产生更短暂的生物学效应，并且可以更严密地控制对象体内的重组ActRIIA多肽水平。在Fc融合蛋白中，可以在接头(如有的话)和/或Fc部分中进行突变以改变蛋白质的半寿期。

组合文库可通过编码多肽文库的基因的简并文库产生，所述多肽文库各自包括潜在的ActRIIA多肽序列的至少一部分。举例来说，可使合成寡核苷酸的混合物酶促连接至基因序列，使得潜在的ActRIIA多肽核苷酸序列的简并组可表达为个体多肽，或者可表达为一组较大的融合蛋白(例如，用于噬菌体展示)。

有许多可以从简并寡核苷酸序列产生潜在的同源物文库的方法。简并基因序列的化学合成可以在自动DNA合成仪中进行，然后将合成的基因连接至合适载体中用于表达。简并寡核苷酸的合成是本领域众所周知的(参见例如，Narang,S A(1983)Tetrahedron 39:3；Itakura等人,(1981)Recombinant DNA,Proc.3rd Cleveland Sympos.Macromolecules,ed.AG Walton,Amsterdam:Elsevier,第273-289页；Itakura等人,(1984)Annu.Rev.Biochem.53:323；Itakura等人,(1984)Science 198:1056；Ike等人,(1983)Nucleic Acid Res.11:477)。这样的技术已经用于其它蛋白质的定向进化(directedevolution)(参见例如，Scott等人,(1990)Science 249:386-390；Roberts等人,(1992)PNAS USA 89:2429-2433；Devlin等人,(1990)Science 249:404-406；Cwirla等人,(1990)PNAS USA 87:6378-6382；以及美国专利号5,223,409、5,198,346和5,096,815)。

或者，可利用其它诱变形式来产生组合文库。例如，可采用以下诱变产生ActRIIA多肽变异体，并且通过筛选从文库中分离出ActRIIA多肽变异体：例如，丙氨酸扫描诱变等(Ruf等人,(1994)Biochemistry 33:1565-1572；Wang等人,(1994)J.Biol.Chem.269:3095-3099；Balint等人,(1993)Gene 137:109-118；Grodberg等人,(1993)Eur.J.Biochem.218:597-601；Nagashima等人,(1993)J.Biol.Chem.268:2888-2892；Lowman等人,(1991)Biochemistry 30:10832-10838；和Cunningham等人,(1989)Science 244:1081-1085)；通过接头扫描诱变(Gustin等人,(1993)Virology 193:653-660；Brown等人,(1992)Mol.CellBiol.12:2644-2652；McKnight等人,(1982)Science 232:316)；通过饱和诱变(Meyers等人,(1986)Science 232:613)；通过PCR诱变(Leung等人,(1989)Method Cell Mol Biol 1:11-19)；或通过随机诱变，包括化学诱变等(Miller等人,(1992)A Short Course inBacterial Genetics,CSHL Press,Cold Spring Harbor,N.Y.；和Greener等人,(1994)Strategies in Mol Biol 7:32-34)。接头扫描诱变，特别是在组合情况下，是用于鉴别ActRIIA多肽的截短的(有生物活性的)形式的一种有吸引力的方法。

对于筛选通过点突变和截短制备的组合文库的基因产物，以及就此而言，对于筛选具有某种性质的基因产物的cDNA文库，各种各样的技术在本领域都是已知的。这样的技术一般可适用于通过ActRIIA多肽的组合诱变而产生的基因文库的快速筛选。用于筛选大型基因文库的最为广泛使用的技术典型地包括将基因文库克隆到可复制的表达载体中，将合适的细胞用所得的载体文库转化，和在所需活性的检测有利于相对容易地分离载体(其编码所检测产物的基因)的条件下表达所述组合基因。优选的测定法包括激活素结合测定法和激活素-介导的细胞信号转导测定法。

在某些实施方案中，ActRIIA多肽还可包含除天然存在于ActRIIA多肽中的任何修饰以外的翻译后修饰。这样的修饰包括但不限于乙酰化、羧基化、糖基化、磷酸化、脂化和酰基化。结果是，修饰的ActRIIA多肽可含有非氨基酸元素，诸如聚乙二醇、脂质、多糖或单糖和磷酸。这类非氨基酸元素对ActRIIA多肽的功能性的影响可以通过技术人员已知的任何方法进行测试。当通过切割ActRIIA多肽的新生形式在细胞中产生ActRIIA多肽时，翻译后加工对蛋白质的正确折叠和/或功能也可能是重要的。对于这样的翻译后活性，不同的细胞(诸如CHO、HeLa、MDCK、293、W138、NIH-3T3或HEK293)具有特定的细胞机器和特征性机制，并且可以对其进行选择以确保ActRIIA多肽的正确修饰和加工。

在某些方面，ActRIIA多肽的功能变异体或修饰形式包括具有ActRIIA多肽的至少一部分和一个或多个融合结构域的融合蛋白。这样的融合结构域的众所周知的实例包括但不限于多聚组氨酸、Glu-Glu、谷胱甘肽S转移酶(GST)、硫氧还蛋白、蛋白质A、蛋白质G、免疫球蛋白重链恒定区(Fc)、麦芽糖结合蛋白(MBP)或人血清白蛋白。可以对融合结构域进行选择以便赋予所需性质。例如，有些融合结构域对于通过亲和色谱法分离融合蛋白特别有用。为了亲和纯化的目的，使用用于亲和色谱法的相关基质，诸如谷胱甘肽-、淀粉酶-和镍-或钴-缀合的树脂。许多这样的基质可以“试剂盒”形式获得，诸如可与(HIS6)融合配偶体一起使用的Pharmacia GST纯化系统和QIAexpress.TM.系统(Qiagen)。作为另一个实例，可对融合结构域进行选择以便促进ActRIIA多肽的检测。这样的检测结构域的实例包括各种荧光蛋白(例如，GFP)以及“表位标签(epitope tags)”，所述表位标签通常是短的肽序列，可获得针对该短肽序列的特异性抗体。可容易获得的特异性单克隆抗体所针对的众所周知的表位标签包括FLAG、流感病毒血凝素(HA)和c-myc标签。在有些情况下，融合结构域具有诸如针对因子Xa或凝血酶的蛋白酶切割位点，其允许相关蛋白酶对融合蛋白进行部分消化，从而由其释放重组蛋白。然后所释放的蛋白质可以通过后续色谱分离法从融合结构域进行分离。在某些优选的实施方案中，ActRIIA多肽与体内稳定ActRIIA多肽的结构域(“稳定剂(stabilizer)”结构域)融合。所谓“稳定”意指增加血清半寿期的任何情况，不论是因为破坏减少、肾清除减少或其它药代动力学作用。已知与免疫球蛋白的Fc部分融合赋予各种蛋白质所需要的药代动力学性质。同样，与人血清白蛋白融合可赋予所需要的性质。可选择的融合结构域的其它类型包括多聚化(例如，二聚化、四聚化)结构域和功能结构域(其按需要赋予额外的生物学功能，诸如骨生长或肌肉生长的进一步刺激)。

应当理解，融合蛋白的不同元素可以按与所需功能性一致的任何方式排列。例如，ActRIIA多肽可置于异源结构域的C-末端，或者，异源结构域可置于ActRIIA多肽的C-末端。ActRIIA多肽结构域和异源结构域在融合蛋白中不一定相邻，在结构域的C-末端或N-末端或者在结构域之间可包括另外的结构域或氨基酸序列。

在某些实施方案中，本文描述的ActRIIA多肽含有能够稳定ActRIIA多肽的一个或多个修饰。例如，这样的修饰延长ActRIIA多肽的体外半寿期、延长ActRIIA多肽的循环半寿期或降低ActRIIA多肽的蛋白质水解性降解。这样的稳定化修饰包括但不限于融合蛋白(包括例如包含ActRIIA多肽和稳定剂结构域的融合蛋白)、糖基化位点的修饰(包括例如将糖基化位点添加至ActRIIA多肽上)和糖部分的修饰(包括例如从ActRIIA多肽中脱去糖部分)。在融合蛋白的情况下，使ActRIIA多肽与稳定剂结构域诸如IgG分子(例如，Fc结构域)融合。如本文所用的，术语“稳定剂结构域(stabilizer domain)”不仅是指融合结构域(例如，Fc)(如在融合蛋白的情况下)，而且还包括非蛋白质性修饰(诸如糖部分)或非蛋白质性聚合物(诸如聚乙二醇)。

在某些实施方案中，与其它蛋白质分离的或以别的方式基本上不含其它蛋白质的ActRIIA多肽的分离和/或纯化形式可以用于本文描述的方法和组合物。ActRIIA多肽一般可通过自重组核酸表达来生产。

在某些方面，本文提供的是编码ActRIIA多肽(例如，可溶性ActRIIA多肽)(包括本文公开的片段、功能变异体和融合蛋白)中的任何一种的分离和/或重组核酸。例如，SEQ IDNO:4编码天然存在的人ActRIIA前体多肽，而SEQ ID NO:5编码ActRIIA的加工的胞外结构域。这类主题核酸可以是单链的或双链的。这样的核酸可以是DNA或RNA分子。这些核酸可以用于例如制备ActRIIA多肽的方法中或直接用作治疗剂(例如，在基因治疗方法中)。

在某些方面，还应当理解，编码ActRIIA多肽的这类主题核酸包括是SEQ ID NO:4或5的变异体的核酸。变异核苷酸序列包括因一个或多个核苷酸取代、添加或缺失而不同的序列，诸如等位基因变异体。

在某些实施方案中，本文提供的是与SEQ ID NO:4或5有至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的分离或重组核酸序列。本领域普通技术人员将会认识到，与SEQ ID NO:4或5互补的核酸序列及SEQ ID NO:4或5的变异体也包括在本文中。在进一步实施方案中，本文提供的核酸序列可以是分离的、重组的和/或与异源核苷酸序列融合，或者可以在DNA文库中。

在其它实施方案中，本文提供的核酸也包括与SEQ ID NO:4或5中标示的核苷酸序列、SEQ ID NO:4或5的互补序列或其片段在高严格性条件下杂交的核苷酸序列。如上所讨论的，本领域普通技术人员将会容易地理解，促进DNA杂交的适当严格性条件可以改变。本领域普通技术人员将会理解，促进DNA杂交的适当严格性条件可以改变。例如，人们可以在6.0x氯化钠/柠檬酸钠(SSC)中、在约45摄氏度下进行杂交，接着在2.0x SSC中在50摄氏度下进行洗涤。例如，洗涤步骤中的盐浓度可以选自50摄氏度下约2.0x SSC的低严格性到50摄氏度下约0.2x SSC的高严格性。另外，洗涤步骤中的温度可以从低严格性条件下的室温(约22摄氏度)增加到高严格性条件下的约65摄氏度。温度和盐两者均可变化，或温度或盐浓度可保持恒定，而另一变量改变。在一个实施方案中，在室温下的6x SSC的低严格性条件下杂交接着在室温下在2x SSC中进行洗涤的核酸可以用于本文描述的方法和组合物。

因遗传密码的简并性所致不同于如SEQ ID NO:4或5所示的核酸的分离的核酸也包括在本文中。例如，多种氨基酸由多于一种三联体指定。规定同一氨基酸的密码子或同义词(例如，CAU和CAC是组氨酸的同义词)可导致不影响蛋白质的氨基酸序列的“沉默”突变。然而，预期不引起主题蛋白质的氨基酸序列改变的DNA序列多态性将会存在于哺乳动物细胞中。本领域技术人员将会认识到，编码具体蛋白质的核酸的一个或多个核苷酸(最多约3-5％的核苷酸)的这些变异可因天然等位基因变异所致而存在于给定物种的个体中。任何和所有这样的核苷酸变异及所产生的氨基酸多态性都包括在本文中。

在某些实施方案中，在表达构建体中所述重组核酸可与一个或多个调节核苷酸序列操作性连接。调节核苷酸序列一般适合于表达所使用的宿主细胞。对于各种宿主细胞，多种类型的适当的表达载体和合适的调节序列是本领域已知的。典型地，所述一个或多个调节核苷酸序列可包括但不限于启动子序列、前导序列或信号序列、核醣体结合部位、转录起始和终止序列、翻译起始和终止序列、和增强子或激活物序列。本文考虑了如本领域已知的组成型或诱导型启动子。启动子可以是天然存在的启动子，或是将多于一个启动子的元件组合的杂合启动子。表达构建体在细胞中可存在于附加体(episome)(诸如质粒)上，或者表达构建体可以插入染色体中。在一个优选的实施方案中，所述表达载体含有选择标记基因以供选择转化的宿主细胞。选择标记基因是本领域众所周知的并且随所使用的宿主细胞而变化。

在某些方面，这类主题核酸在包含编码ActRIIA多肽并与至少一个调节序列操作性连接的核苷酸序列的表达载体中提供。调节序列是公知的并且选择用于指导ActRIIA多肽的表达。因此，术语调节序列包括启动子、增强子和其它表达控制元件。示例性的调节序列描述于Goeddel；Gene Expression Technology:Methods in Enzymology,AcademicPress,San Diego,Calif.(1990)。举例来说，多种表达控制序列中的任一种(当与其操作性连接时控制DNA序列的表达)可用于这些载体以表达编码ActRIIA多肽的DNA序列。这样的有用表达控制序列包括例如SV40的早期和晚期启动子、tet启动子、腺病毒或巨细胞病毒即时早期启动子、RSV启动子、lac系统、trp系统、TAC或TRC系统、其表达受T7 RNA聚合酶指导的T7启动子、噬菌体λ的主要操纵基因和启动子区、fd外被蛋白的控制区、3-磷酸甘油酸激酶或其它糖酵解酶的启动子、酸性磷酸酶的启动子(例如，Pho5)、酵母α.-交配因子的启动子、杆状病毒系统的多角体启动子和已知控制原核细胞或真核细胞或它们的病毒的基因表达的其它序列及其各种组合。应当理解的是，表达载体的设计可取决于诸如待转化的宿主细胞的选择和/或需要表达的蛋白质的类型等因素。此外，还应当考虑载体的拷贝数、控制该拷贝数和由该载体编码的任何其它蛋白质(诸如抗生素标记)的表达的能力。

可通过将所克隆的基因或其部分连接至适合于在原核细胞、真核细胞(酵母、禽类、昆虫或哺乳动物的)或两者中表达的载体，来产生本文提供的重组核酸。用于产生重组ActRIIA多肽的表达载体包括质粒和其它载体。举例来说，合适的载体包括用于在原核细胞(诸如大肠杆菌(E.coli))中表达的以下类型的质粒：pBR322来源的质粒、pEMBL来源的质粒、pEX来源的质粒、pBTac来源的质粒和pUC来源的质粒。

有些哺乳动物表达载体含有促进载体在细菌中繁殖的原核序列和在真核细胞中表达的一个或多个真核转录单元两者。pcDNAI/amp、pcDNAI/neo、pRc/CMV、pSV2gpt、pSV2neo、pSV2-dhfr、pTk2、pRSVneo、pMSG、pSVT7、pko-neo和pHyg来源的载体都是适合于真核细胞转染的哺乳动物表达载体的实例。这些载体中有一些用来自细菌质粒(诸如pBR322)的序列修饰，以促进在原核和真核细胞两者中的复制和耐药性选择。或者，对于蛋白质在真核细胞中的瞬时表达，可以使用病毒(诸如牛乳头状瘤病毒(BPV-1)或埃-巴病毒(Epstein-Barr virus))的衍生物(pHEBo、pREP来源的和p205)。其它病毒(包括反转录病毒)表达系统的实例可参见下面基因疗法递送系统的描述。用于制备质粒和转化宿主生物的各种方法是本领域众所周知的。对于用于原核和真核细胞两者的其它合适的表达系统以及通用重组方法参见Molecular Cloning A Laboratory Manual,第3版,由Sambrook,Fritsch和Maniatis编著(Cold Spring Harbor Laboratory Press,2001)。在有些情况下，可能需要通过使用杆状病毒表达系统来表达重组多肽。这类杆状病毒表达系统的实例包括pVL来源的载体(诸如pVL1392、pVL1393和pVL941)、pAcUW来源的载体(诸如pAcUW1)和pBlueBac来源的载体(诸如含β.-gal的pBlueBac III)。

在一个优选的实施方案中，可以设计载体用以在CHO细胞中产生主题ActRIIA多肽，诸如Pcmv-Script载体(Stratagene,La Jolla,Calif.)、pcDNA4载体(Invitrogen,Carlsbad,Calif.)和pCI-neo载体(Promega,Madison,Wis.)。将是显而易见的是，可以使用主题基因构建体使主题ActRIIA多肽在培养中繁殖的细胞内表达，以例如产生用于纯化的蛋白质(包括融合蛋白或变异蛋白)。

本公开也涉及对于主题ActRIIA多肽中的一种或多种，用包括编码序列(例如，SEQID NO:4或5)的重组基因转染的宿主细胞。所述宿主细胞可以是任何原核细胞或真核细胞。例如，本文提供的ActRIIA多肽可以在细菌细胞(诸如大肠杆菌)、昆虫细胞(例如，使用杆状病毒表达系统)、酵母或哺乳动物细胞中表达。其它合适的宿主细胞是本领域技术人员已知的。

因此，本文提供的是产生ActRIIA多肽的方法。例如，用编码ActRIIA多肽的表达载体转染的宿主细胞可以在适当的条件下培养，以使ActRIIA多肽进行表达。ActRIIA多肽可分泌，并从含有ActRIIA多肽的细胞和培养基的混合物中分离。或者，ActRIIA多肽可保留在细胞质中或在膜级分(membrane fraction)中并且收获细胞、将细胞裂解和分离蛋白质。细胞培养物包括宿主细胞、培养基和其它副产物。用于细胞培养的合适培养基是本领域众所周知的。可采用用于纯化蛋白质的本领域的已知技术，包括离子交换色谱法、凝胶过滤色谱法、超滤法、电泳、用对ActRIIA多肽的特定表位有特异性的抗体的免疫亲和纯化和用与ActRIIA多肽融合的结构域结合的结合剂的亲和纯化(例如，蛋白质A柱可用来纯化ActRIIA-Fc融合物)，从细胞培养基、宿主细胞或两者中分离出主题ActRIIA多肽。在一个优选的实施方案中，所述ActRIIA多肽是含有促进其纯化的结构域的融合蛋白。在一个优选的实施方案中，通过一系列柱色谱法步骤，包括例如任何顺序的以下三种或更多种来实现纯化：蛋白质A色谱法、Q琼脂糖(sepharose)色谱法、苯基琼脂糖(phenylsepharose)色谱法、大小排阻色谱法和阳离子交换色谱法。可用病毒过滤和缓冲液交换完成纯化。如本文所证明的，ActRIIA-hFc蛋白被纯化至>98％(通过大小排阻色谱法测定)和>95％(通过SDS PAGE测定)的纯度。这种纯度水平足以实现对小鼠骨的所需作用及在小鼠、大鼠和非人类灵长类动物中可接受的安全性特征(safety profile)。

在另一个实施方案中，通过使用Ni2+金属树脂的亲和色谱法，编码纯化前导序列(诸如处于重组ActRIIA多肽所需部分N-末端的聚-(His)/肠激酶切割位点序列)的融合基因，可允许纯化已表达的融合蛋白。然后，接着可用肠激酶处理脱去纯化前导序列以提供纯化的ActRIIA多肽(例如参见，Hochuli等人,(1987)J.Chromatography 411:177；和Janknecht等人,PNAS USA 88:8972)。

用于制备融合基因的技术也是众所周知的。从根本上说，按照常规技术如下进行编码不同多肽序列的各个DNA片段的连接：使用连接用平端或交错端，提供适当的末端的限制性酶消化，适当时补平黏端，碱性磷酸酶处理以避免不合乎需要的连接，和酶促连接。在另一个实施方案中，可通过常规技术(包括自动DNA合成仪)来合成融合基因。或者，基因片段的PCR扩增可以使用锚定引物进行，所述锚定引物在两个相邻的基因片段之间产生互补突出端，其随后可退火以产生嵌合基因序列(参见例如，Current Protocols in MolecularBiology,Ausubel等人编著,John Wiley&Sons:1992)。

可使用SEQ ID NO:9的组织纤溶酶原前导序列，在来自pAID4载体(SV40 ori/增强子、CMV启动子)的稳定转染的CHO-DUKX Bl 1细胞中表达ActRIIA-Fc融合蛋白。Fc部分是人IgGl Fc序列，如SEQ ID NO:7所示。在某些实施方案中，在表达时，所含蛋白质每分子的ActRIIA-Fc融合蛋白具有平均介于约1.5和2.5摩尔之间的唾液酸。

在某些实施方案中，ActRIIA-Fc融合物的长血清半寿期在人对象中可以是25-32天。另外，与所报告的在人293细胞中表达的ActRIIA-hFc融合蛋白相比，CHO细胞表达的材料可具有对激活素B配体的较高亲和力(del Re等人,J Biol Chem.2004 Dec 17；279(51):53126-35)。另外，虽然不受理论的束缚，但是与用天然前导序列表达的ActRIIA-Fc不一样，使用提供比其它前导序列更大产量的TPA前导序列，可提供高纯的N-端序列。使用天然前导序列可导致产生ActRIIA-Fc的两个主要类别，其各自具有不同的N-端序列。

7.9.2 ActRIIB的信号转导抑制剂

如本文所用的，术语“ActRIIB”是指来自任何物种的激活素受体IIB型(ActRIIB)蛋白质的一个家族和通过诱变或其它修饰而来源于这类ActRIIB蛋白质的变异体。本文提及ActRIIB时要理解为是提及任一种目前已鉴定的受体形式。该ActRIIB家族的成员一般是具有预测的丝氨酸/苏氨酸激酶活性的跨膜蛋白质，由具有富含半胱氨酸的区域的配体-结合胞外结构域、跨膜结构域和胞质结构域组成。

待用于本文描述的组合物和方法的ActRIIB信号转导抑制剂包括但不限于激活素-结合可溶性ActRIIB多肽；与激活素(特别是激活素A或B亚基，亦称为βA或βB)结合并破坏ActRIIB结合的抗体；与ActRIIB结合并破坏激活素结合的抗体；针对激活素或ActRIIB结合所选择的非抗体蛋白质；和针对激活素或ActRIIB结合所选择的随机肽，其可以与Fc结构域缀合。

在某些实施方案中，具有激活素或ActRIIB结合活性的两种或更多种不同的蛋白质(或其它部分)，尤其是分别阻断I型(例如，可溶性I型激活素受体)和II型(例如，可溶性II型激活素受体)结合位点的激活素结合剂，可以连接在一起以产生抑制ActRIIB并因此可以用于本文描述的组合物和方法的双官能或多官能结合分子。在某些实施方案中，抑制ActRIIB的激活素-ActRIIB信号转导轴拮抗剂包括核酸适体、小分子和用于本文描述的组合物和方法的其它结合剂。

(a)包含ActRIIB多肽的ActRIIB信号转导抑制剂

如本文所用的，术语“ActRIIB多肽”是指包含ActRIIB家族成员的任何天然存在的多肽以及其保留有益活性的任何变异体(包括突变体、片段、融合物和肽模拟物形式)的多肽。例如，ActRIIB多肽包括来源于任何已知的ActRIIB受体的序列的多肽，所述序列具有与ActRIIB多肽的序列有至少约80％同一性，和任选至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更大同一性的序列。例如，ActRIIB多肽可结合并抑制ActRIIB蛋白质和/或激活素的功能。ActRIIB多肽的一个实例包括人ActRIIB前体多肽(SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28)。有关其氨基酸序列以SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28(即，人ActRIIB前体多肽)描绘的ActRIIB前体多肽，ActRIIB前体多肽的信号肽位于氨基酸1至18；胞外结构域位于氨基酸19至134，和潜在的N-联糖基化位点位于氨基酸位置42和65。编码SEQ ID NO:16的人ActRIIB前体多肽的核酸序列以SEQ ID NO:19公开(SEQ ID NO:19在对应于氨基酸位置64的密码子处提供丙氨酸，但是本领域技术人员可使用本领域已知的方法容易地修饰以替代为在对应于氨基酸位置64的密码子处提供精氨酸)。关于序列的描述参见表21。

所有本文描述的ActRIIB相关多肽的氨基酸的编号基于SEQ ID NO:16和SEQ IDNO:28的氨基酸编号(其只在位置64所表达的氨基酸中不同)，除非另有明确说明。例如，如果ActRIIB多肽被描述为在氨基酸位置79处具有取代/突变，则要了解该位置79是指ActRIIB多肽所来源的SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28中的第79个氨基酸。同样，如果ActRIIB多肽被描述为在氨基酸位置64处具有丙氨酸或精氨酸，则要了解该位置64是指ActRIIB多肽所来源的SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28中的第64个氨基酸。

在某些实施方案中，用于本文描述的组合物和方法的ActRIIB的信号转导抑制剂包含含有ActRIIB的激活素结合结构域的多肽。在有些实施方案中，ActRIIB的激活素结合结构域包含ActRIIB的胞外结构域或其部分。在具体的实施方案中，ActRIIB的胞外结构域或其部分是可溶的。说明性的ActRIIB多肽的修饰形式公开于美国专利申请公布号20090005308和20100068215，其公开内容通过引用以其整体结合到本文中。

在具体的实施方案中，用于本文描述的组合物和方法的ActRIIB多肽是可溶性ActRIIB多肽。术语“可溶性ActRIIB多肽”一般是指包含ActRIIB蛋白质的胞外结构域的多肽，包括任何天然存在的ActRIIB蛋白质的胞外结构域以及其任何变异体(包括突变体、片段和肽模拟物形式)。可溶性ActRIIB多肽可与激活素结合；然而，野生型ActRIIB蛋白质在与激活素相对于与GDF8/11的结合中不表现出显著的选择性。在某些实施方案中，具有不同结合性质的ActRIIB的变化形式可以用于本文提供的方法。这样的变化形式公开于例如国际专利申请公布号WO 2006/012627和WO 2010/019261，其公开内容通过引用以其整体结合到本文中。可通过使ActRIIB蛋白质与第二激活素选择性结合剂偶联，可赋予天然的或改变的ActRIIB蛋白质对激活素的相加的特异性。示例性的可溶性ActRIIB多肽包括人ActRIIB多肽(例如，SEQ ID NO:17、18、23、26、27、29、30、31、32、33、36、37、42和43)的胞外结构域。

具有Hilden等人(Blood,1994,83(8):2163-70)所公开的ActRIIB细胞外序列的Fc融合蛋白，其在对应于ActRIIB前体氨基酸序列即SEQ ID NO:16的氨基酸64的位置处具有丙氨酸(本文称为“A64”)，已被证实具有针对激活素和GDF-11的相对低的亲和力。相比之下，ActRIIB前体氨基酸序列的位置64处具有精氨酸(本文称为“R64”)的Fc融合蛋白在低纳摩尔浓度至高微微摩尔浓度范围内具有对激活素和GDF-11的亲和力(参见例如，美国专利申请公布号20100068215，其公开内容通过引用以其整体结合到本文中)。在位置64处具有精氨酸的ActRIIB前体氨基酸序列以SEQ ID NO:28提供。因此，在某些实施方案中，根据本文描述的组合物和方法所述使用的ActRIIB多肽可包含：(i)在对应于ActRIIB前体氨基酸序列的氨基酸64的位置处的丙氨酸，即SEQ ID NO:16；或(ii)在对应于ActRIIB前体氨基酸序列的位置64处的精氨酸，即SEQ ID NO:28。在其它实施方案中，根据本文描述的组合物和方法所述使用的ActRIIB多肽可包含在对应于ActRIIB前体氨基酸序列的氨基酸64的位置处不是丙氨酸或精氨酸(即，SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28)的氨基酸。

已经表明，ActRIIB的胞外结构域的C-末端的脯氨酸结(proline knot)的缺失降低受体对激活素的亲和力(参见例如，Attisano等人,Cell,1992,68(1):97-108)。相对于含有SEQ ID NO:28的氨基酸20-134(即，SEQ ID NO:31)的ActRIIB-Fc融合蛋白“ActRIIB(20-134)-Fc”(其包括脯氨酸结区域和完全近膜结构域(complete juxtamembrane domain))，含有SEQ ID NO:28的氨基酸20-119(即，SEQ ID NO:32)的ActRIIB-Fc融合蛋白“ActRIIB(20-119)-Fc”与GDF-11和激活素的结合减弱。然而，相对于ActRIIB的未截短的胞外结构域，含有SEQ ID NO:28的氨基酸20-129的ActRIIB-Fc融合蛋白“ActRIIB(20-129)-Fc”保留相似但略微降低的活性，即使脯氨酸结区域被破坏。因此，预期包含终止于SEQ ID NO:28(或SEQ ID NO:16)的氨基酸134、133、132、131、130和129的胞外结构域的ActRIIB多肽全部是有活性的，但是终止于氨基酸134或133的构建体可能是有最高活性的。类似地，预期残基129-134的任一个的突变不会大幅度改变配体结合亲和力，正如SEQ ID NO:28的P129和P130突变基本上不降低配体结合的事实所表明的一样。因此，根据本文描述的方法和组合物所述使用的ActRIIB多肽可早在SEQ ID NO:28(或SEQ ID NO:16)的氨基酸109(即，最后的半胱氨酸)结束，然而，预期结束于SEQ ID NO:28(或SEQ ID NO:16)的氨基酸位置109和119处或两者之间的形式具有降低的配体结合能力。

SEQ ID NO:16和SEQ ID NO:28的氨基酸29表示ActRIIB前体序列中的初始半胱氨酸。预期起始于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的N-末端的氨基酸29或在这些氨基酸位置之前的ActRIIB多肽，将保留配体结合活性。SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的位置24处的丙氨酸至天冬酰胺突变引入N-联糖基化序列而不明显影响配体结合。这证实了信号切割肽和半胱氨酸交联区之间的区域(对应于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸20-29)的突变被完全耐受。具体地说，起始于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸位置20、21、22、23和24的ActRIIB多肽将保留活性，还预期起始于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸位置25、26、27、28和29的ActRIIB多肽保留活性。起始于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸位置22、23、24或25的ActRIIB多肽将具有最大活性。

总之，待根据本文描述的方法和组合物所述使用的ActRIIB前体蛋白(即，SEQ IDNO:16或SEQ ID NO:28)的活性部分(即，ActRIIB多肽)一般将包含SEQ ID NO:16或SEQ IDNO:28的氨基酸29-109，并且这样的ActRIIB多肽可以例如开始于对应于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸19-29中的任一个的残基和结束于对应于SEQ ID NO:16或SEQ IDNO:28的氨基酸109-134中的任一个的位置。本文所包括的ActRIIB多肽的具体实例包括开始于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸位置19-29、20-29或21-29和结束于SEQ IDNO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸位置119-134、119-133或129-134、129-133的那些。本文所包括的ActRIIB多肽的其它具体实例都包括开始于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸位置20-24(或21-24或22-25)和结束于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸位置109-134(或109-133)、119-134(或119-133)或129-134(或129-133)的那些。也考虑了落入这些范围内的变异ActRIIB多肽，特别是与SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的相应部分有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性或序列同源性的那些。

在某些实施方案中，用于本文描述的组合物和方法的ActRIIB的信号转导抑制剂包含ActRIIB的胞外结构域的截短形式。截短可位于ActRIIB多肽的羧基端和/或氨基端。在某些实施方案中，相对于成熟ActRIIB多肽胞外结构域，所述截短可以是长1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个氨基酸。在某些实施方案中，所述截短可以是成熟ActRIIB多肽胞外结构域的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个N-端氨基酸。在某些实施方案中，所述截短可以是成熟ActRIIB多肽胞外结构域的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个C-端氨基酸。例如，ActRIIB的截短形式包括具有氨基酸20-119、20-128、20-129、20-130、20-131、20-132、20-133、20-134、20-131、21-131、22-131、23-131、24-131和25-131的多肽，其中氨基酸位置是指SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28中的氨基酸位置。

ActRIIB的另外的示例性截短形式包括：(i)起始于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸21-29(任选起始于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸22-25)中的任一个和结束于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸109-134中的任一个的多肽；(ii)起始于SEQID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸20-29(任选起始于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的22-25)中的任一个和结束于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸109-133中的任一个的多肽；(iii)起始于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸20-24(任选起始于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的22-25)中的任一个和结束于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸109-133中的任一个的多肽；(iv)起始于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸21-24中的任一个和结束于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸109-134中的任一个的多肽；(v)起始于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸20-24中的任一个和结束于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸118-133中的任一个的多肽；(vi)起始于SEQ ID NO:16或SEQ IDNO:28的氨基酸21-24中的任一个和结束于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸118-134中的任一个的多肽；(vii)起始于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸20-24中的任一个和结束于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸128-133中的任一个的多肽；(viii)起始于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸20-24中的任一个和结束于SEQ ID NO:16或SEQID NO:28的氨基酸128-133中的任一个的多肽；(ix)起始于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸21-29中的任一个和结束于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸118-134中的任一个的多肽；(x)起始于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸20-29中的任一个和结束于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸118-133中的任一个的多肽；(xi)起始于SEQ IDNO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸21-29中的任一个和结束于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸128-134中的任一个的多肽；和(xii)起始于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸20-29中的任一个和结束于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸128-133中的任一个的多肽。在一个具体的实施方案中，ActRIIB多肽包含起始于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸位置25和结束于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸位置131的氨基酸序列，或者基本上由其组成或由其组成。在另一个具体的实施方案中，ActRIIB多肽由或基本上由SEQ ID NO:17、18、23、26、27、29、30、31、32、33、36、37、42或43的氨基酸序列组成。

本文公开的任何ActRIIB多肽可作为同二聚体产生。本文公开的任何ActRIIB多肽可配制为具有包含来自IgG重链的恒定区(诸如Fc结构域)的异源部分的融合蛋白。相对于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28，本文公开的任何ActRIIB多肽在对应于SEQ ID NO:16或SEQID NO:28的位置79的位置上可包含酸性氨基酸，任选与一个或多个另外的氨基酸取代、缺失或插入组合。

在具体的实施方案中，用于本文描述的组合物和方法的ActRIIB的信号转导抑制剂包含具有一个或多个氨基酸取代/突变的ActRIIB的胞外结构域。这样的氨基酸取代/突变可以是例如在SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸位置79上的亮氨酸交换成为酸性氨基酸(诸如天冬氨酸或谷氨酸)。例如，SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的位置L79在ActRIIB胞外结构域多肽中可以进行改变以赋予改变的激活素-肌肉生长抑制素(myostatin)(GDF-11)结合性质。与激活素结合相比，L79A和L79P突变在较大程上降低GDF-11结合。L79E和L79D突变保留GDF-11结合，同时证明大大降低的激活素结合。

在某些实施方案中，用于本文描述的组合物和方法的ActRIIB的信号转导抑制剂包含也携带氨基酸取代(例如，在SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸位置79上的亮氨酸交换成为酸性氨基酸(诸如天冬氨酸或谷氨酸))的ActRIIB胞外结构域的截短形式。在一个具体的实施方案中，用于本文描述的组合物和方法的也携带氨基酸取代的ActRIIB多肽的胞外结构域的截短形式是SEQ ID NO:23。如上所讨论的，被截短的和/或携带一个或多个氨基酸取代的ActRIIB的形式可以与抗体的Fc结构域连接。

可以例如通过筛选从编码ActRIIB多肽的核酸的相应片段重组产生的多肽，来获得ActRIIB多肽的功能活性片段。另外，可采用本领域已知的技术，例如常规Merrifield固相f-Moc或t-Boc化学法，来化学合成所述片段。所述片段可以(重组或通过化学合成)产生，并且进行测试以鉴定可起ActRIIB蛋白质或由激活素介导的信号转导的拮抗剂(抑制剂)作用的那些肽基片段。

另外，可以例如通过筛选从编码ActRIIB多肽的相应的诱变核酸重组产生的修饰多肽的文库，来获得ActRIIB多肽的功能活性变异体。可以产生变异体，并且进行测试以鉴定可起ActRIIB蛋白质或由激活素介导的信号转导的拮抗剂(抑制剂)作用的那些。在某些实施方案中，ActRIIB多肽的功能变异体包含与选自SEQ ID NO:17、18、23、26、27、29、30、31、32、33、36、37、42和43的氨基酸序列有至少75％同一性的氨基酸序列。在某些实施方案中，所述功能变异体具有与选自SEQ ID NO:17、18、23、26、27、29、30、31、32、33、36、37、42和43的氨基酸序列有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。

可以例如通过修饰ActRIIB多肽的结构，来产生功能变异体，以用于例如提高治疗功效或稳定性(例如，离体货架期和体内对蛋白质水解性降解的抗性)的这类目的。这类修饰的ActRIIB多肽选择保留激活素结合时，可被视为天然存在的ActRIIB多肽的功能等同物。也可以例如通过氨基酸取代、缺失或添加，来产生修饰的ActRIIB多肽。举例来说，有理由预期，亮氨酸被异亮氨酸或缬氨酸、天冬氨酸被谷氨酸、苏氨酸被丝氨酸的单独置换或氨基酸被结构上相关的氨基酸的类似置换(例如，保守突变)将不会对所得分子的生物活性产生重大作用。保守置换是发生在其侧链中是相关的一类氨基酸内的置换。通过评价变异ActRIIB多肽以类似于野生型ActRIIB多肽的方式在细胞中产生反应的能力，可以容易地确定ActRIIB多肽的氨基酸序列中的变化是否导致产生功能同源物。

本文提供的是产生ActRIIB多肽的突变体、特别是组合突变体群组以及截短突变体的方法；组合突变体库尤其可用于鉴别功能变异序列。筛选这类组合文库的目的可以是例如产生可起激动剂或拮抗剂作用或者一起具有新的活性的ActRIIB多肽变异体。

已经证明，ActRIIB的配体结合口袋由SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的残基Y31、N33、N35、L38到T41、E47、E50、Q53到K55、L57、H58、Y60、S62、K74、W78到N83、Y85、R87、A92和E94到F101来限定。在这些位置上，预期保守突变将被耐受，尽管K74A突变被很好耐受，R40A、K55A、F82A和在位置L79上的突变也是如此。在爪蟾(Xenopus)中，R40为K，表明该位置上的碱性氨基酸将被耐受。Q53在牛ActRIIB中为R并且在爪蟾ActRIIB中为K，并且因此在该位置上包括R、K、Q、N和H的氨基酸将被耐受。因此，用于本文描述的方法和组合物的ActRIIB多肽的通式是这样的通式，其包含SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸29-109，但是任选起始于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的20-24或22-25的范围的氨基酸位置和结束于SEQID NO:16或SEQ ID NO:28的129-134的范围的氨基酸位置，并且在配体结合口袋中包含不超过1、2、5或15个保守氨基酸变化，以及在配体结合口袋中在SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸位置40、53、55、74、79和/或82处包含零、一个或多个非保守变化。这样的ActRIIB多肽可与SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸29-109的序列保持大于80％、90％、95％或99％序列同一性或序列同源性。结合口袋外的位点(其变异性可被特别很好耐受)包括ActRIIB的胞外结构域的氨基端和羧基端及位置42-46和65-73。SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的位置65上的天冬酰胺至丙氨酸的变化(N65A)实际上在A64背景下改进配体结合，并因此预期在R64背景下对配体结合没有有害作用。这种变化在A64背景下很可能消除N65处的糖基化，因此证明在该区域中的重大变化很可能被耐受。虽然R64A变化耐受较差，但是R64K耐受良好，因此在位置64处可耐受另一个碱性残基，诸如H。

作为配体结合结构域中具有突变的ActRIIB多肽的一个具体实例，ActRIIB的配体-结合结构域的带正电荷的氨基酸残基Asp(D80)可以突变为不同的氨基酸残基，使得变异ActRIIB多肽优先与GDF8而不是与激活素相结合。在一个具体的实施方案中，D80残基被改变为选自以下的氨基酸残基：不带电荷的氨基酸残基、带负电荷的氨基酸残基和疏水性氨基酸残基。作为一个进一步的具体实例，疏水残基L79可以被改变为酸性氨基酸天冬氨酸或谷氨酸以大大降低激活素结合，同时保留GDF11结合。正如本领域技术人员应当认识到的，大多数的所述突变、变异体或修饰可以在核酸水平上进行，或者，在有些情况下，通过翻译后修饰或化学合成来完成。这样的技术是本领域众所周知的。

在具体的实施方案中，用于本文描述的组合物和方法的ActRIIB的信号转导抑制剂包含含有与抗体的Fc部分连接的ActRIIB受体的胞外结构域(例如，激活素结合结构域)的缀合/融合蛋白。这样的缀合/融合蛋白可包含本文公开的ActRIIB多肽中的任一个(例如，SEQ ID NO:17、18、23、26、27、29、30、31、32、33、36、37、42或43中的任一个)、本领域已知的任何ActRIIB多肽或采用本领域已知的和/或本文提供的方法产生的任何ActRIIB多肽。

在某些实施方案中，所述胞外结构域通过接头(例如，肽接头)与抗体的Fc部分连接。示例性的接头包括短多肽序列诸如2-10、2-5、2-4、2-3个氨基酸残基(例如，甘氨酸残基)，诸如，例如，Gly-Gly-Gly接头。在一个具体的实施方案中，所述接头包含氨基酸序列Gly-Gly-Gly(GGG)。在另一个具体的实施方案中，所述接头包含氨基酸序列Thr-Gly-Gly-Gly(TGGG)。任选地，所述Fc结构域在残基诸如Asp-265、赖氨酸322和Asn-434处具有一个或多个突变。在某些情况下，与野生型Fc结构域相比，具有这些突变中的一个或多个(例如，Asp-265突变)的突变型Fc结构域对与Fcγ受体结合的能力降低。在其它情况下，与野生型Fc结构域相比，具有这些突变中的一个或多个(例如，Asn-434突变)的突变型Fc结构域对与MHC I类相关Fc-受体(FcRN)结合的能力提高。包含与Fc结构域融合的ActRIIB的可溶性胞外结构域的示例性融合蛋白如SEQ ID NO:20、21、24、25、34、35、38、39、40、41、44、46和47所示。

在一个具体的实施方案中，用于本文描述的组合物和方法的ActRIIB信号转导抑制剂包含与抗体的Fc部分连接的ActRIIB的胞外结构域或其部分，其中所述ActRIIB信号转导抑制剂包含与选自SEQ ID NO:20、21、24、25、34、35、38、39、40、41、44、46和47的氨基酸序列有至少75％同一性的氨基酸序列。在另一个具体的实施方案中，用于本文描述的组合物和方法的ActRIIB信号转导抑制剂包含与抗体的Fc部分连接的ActRIIB的胞外结构域或其部分，其中所述ActRIIB信号转导抑制剂包含与选自SEQ ID NO:20、21、24、25、34、35、38、39、40、41、44、46和47的氨基酸序列有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。

在一个具体的实施方案中，待用于本文描述的组合物和方法的ActRIIB信号转导抑制剂是人ActRIIB受体的胞外结构域和IgG1的Fc部分之间的融合蛋白。在另一个具体的实施方案中，待用于本文描述的组合物和方法的ActRIIB信号转导抑制剂是人ActRIIB受体的截短的胞外结构域和IgG1的Fc部分之间的融合蛋白。在另一个具体的实施方案中，待用于本文描述的组合物和方法的ActRIIB信号转导抑制剂是人ActRIIB受体的截短的胞外结构域和IgG1的Fc部分之间的融合蛋白，其中人ActRIIB受体的截短的胞外结构域在对应于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸79的氨基酸位置处具备氨基酸取代。在一个实施方案中，在对应于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸79的氨基酸位置处的氨基酸取代是亮氨酸用天冬氨酸取代(即，L79D突变)。

在一个具体的实施方案中，待用于本文描述的组合物和方法的ActRIIB信号转导抑制剂是SEQ ID NO:24或25，其表示人ActRIIB受体的胞外结构域和IgG1的Fc部分之间的融合蛋白，其中所述ActRIIB胞外结构域包含具有L79D突变的SEQ ID NO:28的氨基酸25-131。编码SEQ ID NO:24的ActRIIB-Fc融合蛋白的核酸序列以SEQ ID NO:45提供。

在另一个具体的实施方案中，待用于本文描述的组合物和方法的ActRIIB信号转导抑制剂是SEQ ID NO:34或35，其表示人ActRIIB受体的胞外结构域和IgG1的Fc部分之间的融合蛋白，其中所述ActRIIB胞外结构域包含具有L79D突变的SEQ ID NO:16的氨基酸25-131。

天冬酰胺-联糖基化识别位点一般包含三肽序列，天冬酰胺-X-苏氨酸(或天冬酰胺-X-丝氨酸)(其中“X”为任何氨基酸)，其被适当的细胞糖基化酶特异性识别。还可通过将一个或多个丝氨酸或苏氨酸残基添加至野生型ActRIIB多肽的序列或通过用一个或多个丝氨酸或苏氨酸残基取代(对于O-联糖基化位点)来进行改变。糖基化识别位点的第一或第三氨基酸位置处的一个或两个的多种氨基酸取代或缺失(和/或第二位置上的氨基酸缺失)导致在修饰的三肽序列上的非糖基化。在ActRIIB多肽上增加糖部分的数目的另一种方式是通过糖苷与ActRIIB多肽的化学或酶促偶联。根据所采用的偶联模式，可使糖连接至：(a)精氨酸和组氨酸；(b)游离羧基；(c)游离巯基，诸如半胱氨酸的游离巯基；(d)游离羟基，诸如丝氨酸、苏氨酸或羟脯氨酸的游离羟基；(e)芳族残基，诸如苯丙氨酸、酪氨酸或色氨酸的芳族残基；或(f)谷氨酰胺的酰胺基。这些方法描述于1987年9月11日公布的国际专利申请号WO 87/05330和Aplin和Wriston(1981)CRC Crit.Rev.Biochem.,第259-306页，通过引用结合到本文中。脱去存在于ActRIIB多肽上的一个或多个糖部分可用化学法和/或酶法来完成。化学去糖基化可以包括例如将ActRIIB多肽暴露在化合物三氟甲烷磺酸或等同化合物中。这种处理导致除连接糖(N-乙酰基葡萄糖胺或N-乙酰基半乳糖胺)以外大部分或所有糖被切割，同时保留氨基酸序列完整。化学去糖基化进一步描述于Hakimuddin等人(1987)Arch.Biochem.Biophys.259:52和Edge等人(1981)Anal.Biochem.118:131。ActRIIB多肽上的糖部分的酶促切割可通过使用Thotakura等人(1987)Meth.Enzymol.138:350所描述的各种内切和外切糖苷酶来实现。适当的时候，ActRIIB多肽的序列可以根据所使用的表达系统的类型进行调节，因为哺乳动物、酵母、昆虫和植物细胞全部可以引入可被肽的氨基酸序列影响的不同的糖基化模式。总的来说，用于人类的ActRIIB蛋白质将在提供正确糖基化的哺乳动物细胞系(诸如HEK293或CHO细胞系)中表达，尽管预期其它表达系统诸如其它哺乳动物表达细胞系、具有工程改造的糖基化酶的酵母细胞系和昆虫细胞也是有用的。

在具体的实施方案中，相对于ActRIIB(R64)-Fc形式，包含加入增加ActRIIB-Fc融合蛋白的血清半寿期的其它N-联糖基化位点(N-X-S/T)的突变型ActRIIB多肽都包括在本文中。在一个具体的实施方案中，SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的位置24上的天冬酰胺的引入(A24N)导致赋予较长半寿期的NXT序列的产生。其它NX(T/S)序列可以存在于42-44(NQS)和65-67(NSS)，虽然后者在位置64的R(即，在R64多肽中)处可能不被有效地糖基化。一般可将N-X-S/T序列引入ActRIIB的配体结合口袋以外的位置处，这在上文有详细描述。用于引入非内源性N-X-S/T序列的特别合适的位点包括SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸20-29、20-24、22-25、109-134、120-134或129-134。也可将N-X-S/T序列引入到ActRIIB序列和Fc或其它融合组分之间的接头中。可通过将N引入对于现有的S或T的正确位置中或者过将S或T引入对应于现有的N的位置处，以最小的努力引入这样的位点。因此，可产生N-联糖基化位点的合乎需要的变化是：A24N、R64N、S67N(有可能与N65A组合)、E106N、R112N、G120N、E123N、P129N、A132N、R112S和R112T(其所有氨基酸位置对应于可存在于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28中的位置)。预测可以被糖基化的任何S都可被改变为T而不会产生免疫原性位点，因为由糖基化提供的保护作用。同样，预测可以被糖基化的任何T都可被改变为S。因此，本文包括S67T和S44T的变化。同样，在A24N变异体中，可以使用S26T变化。因此，ActRIIB多肽可包括一个或多个其它的非内源性N-联糖基化共有序列。

本文提供多种筛选测定法，并且这样的测定法可用于评估ActRIIB多肽变异体。例如，可针对与ActRIIB配体结合、防止ActRIIB配体与ActRIIB多肽结合或干扰由ActRIIB配体引起的信号转导的能力，来筛选ActRIIB多肽变异体。也可以在基于细胞的测定法或体内测定法(in vivo assay)中测试ActRIIB多肽或其变异体的活性。

可以产生与天然存在的ActRIIB多肽相比具有选择性或效能通常提高的组合来源的变异体。同样，诱变可产生与相应的野生型ActRIIB多肽相比胞内半寿期显著不同的变异体。例如，可使改变的蛋白质对蛋白质水解性降解或导致天然ActRIIB多肽破坏或以其它方式失活的其它细胞过程更稳定或更不稳定。可以使用这类变异体及其编码基因，以通过调节ActRIIB多肽的半寿期来改变ActRIIB多肽水平。举例来说，短的半寿期可产生更短暂的生物学效应，并且可以更严密地控制对象体内的重组ActRIIB多肽水平。在Fc融合蛋白中，可以在接头(如有的话)和/或Fc部分中进行突变以改变蛋白质的半寿期。

组合文库可通过编码多肽文库的基因的简并文库产生，所述多肽文库各自包括潜在的ActRIIB多肽序列的至少一部分。举例来说，可使合成寡核苷酸的混合物酶促连接至基因序列，使得潜在的ActRIIB多肽核苷酸序列的简并组可表达为各个多肽，或者可表达为一组较大的融合蛋白(例如，用于噬菌体展示)。

有许多可从简并寡核苷酸序列产生潜在的同源物文库的方法。简并基因序列的化学合成可以在自动DNA合成仪中进行，然后将合成基因连接至合适载体中用于表达。简并寡核苷酸的合成是本领域众所周知的(参见例如，Narang,S A(1983)Tetrahedron 39:3；Itakura等人,(1981)Recombinant DNA,Proc.3rd Cleveland Sympos.Macromolecules,ed.AG Walton,Amsterdam:Elsevier,第273-289页；Itakura等人,(1984)Annu.Rev.Biochem.53:323；Itakura等人,(1984)Science 198:1056；Ike等人,(1983)Nucleic Acid Res.11:477)。这样的技术已用于其它蛋白质的定向进化(参见例如，Scott等人,(1990)Science 249:386-390；Roberts等人,(1992)PNAS USA 89:2429-2433；Devlin等人,(1990)Science 249:404-406；Cwirla等人,(1990)PNAS USA 87:6378-6382；以及美国专利号5,223,409、5,198,346和5,096,815)。

或者，可利用其它诱变形式来产生组合文库。例如，可采用以下诱变产生ActRIIB多肽变异体，并且通过筛选从文库中分离出ActRIIB多肽变异体：例如，丙氨酸扫描诱变等(Ruf等人,(1994)Biochemistry 33:1565-1572；Wang等人,(1994)J.Biol.Chem.269:3095-3099；Balint等人,(1993)Gene 137:109-118；Grodberg等人,(1993)Eur.J.Biochem.218:597-601；Nagashima等人,(1993)J.Biol.Chem.268:2888-2892；Lowman等人,(1991)Biochemistry 30:10832-10838；和Cunningham等人,(1989)Science 244:1081-1085)；通过接头扫描诱变(Gustin等人,(1993)Virology 193:653-660；Brown等人,(1992)Mol.CellBiol.12:2644-2652；McKnight等人,(1982)Science 232:316)；通过饱和诱变(Meyers等人,(1986)Science 232:613)；通过PCR诱变(Leung等人,(1989)Method Cell Mol Biol 1:11-19)；或通过随机诱变，包括化学诱变等(Miller等人,(1992)A Short Course inBacterial Genetics,CSHL Press,Cold Spring Harbor,N.Y.；和Greener等人,(1994)Strategies in Mol Biol 7:32-34)。接头扫描诱变，特别是在组合情况下，是用于鉴别ActRIIB多肽的截短的(有生物活性的)形式的一种有吸引力的方法。

对于筛选通过点突变和截短制备的组合文库的基因产物，以及就此而言，对于筛选具有某种性质的基因产物的cDNA文库，各种各样的技术在本领域都是已知的。这样的技术一般可适用于通过ActRIIB多肽的组合诱变而产生的基因文库的快速筛选。用于筛选大型基因文库的最为广泛使用的技术典型地包括将基因文库克隆到可复制的表达载体中，将合适的细胞用所得的载体文库转化，和在所需活性的检测有利于相对容易地分离载体(其编码所检测产物的基因)的条件下表达所述组合基因。优选的测定法包括激活素结合测定法和激活素-介导的细胞信号转导测定法。

在某些实施方案中，ActRIIB多肽还可包含除天然存在于ActRIIB多肽中的任何修饰以外的翻译后修饰。这样的修饰包括但不限于乙酰化、羧基化、糖基化、磷酸化、脂化和酰基化。结果是，修饰的ActRIIB多肽可含有非氨基酸元素，诸如聚乙二醇、脂质、多糖或单糖和磷酸。这类非氨基酸元素对ActRIIB多肽的功能性的影响可以通过技术人员已知的任何方法进行测试。当通过切割ActRIIB多肽的新生形式在细胞中产生ActRIIB多肽时，翻译后加工对蛋白质的正确折叠和/或功能也可能是重要的。对于这样的翻译后活性，不同的细胞(诸如CHO、HeLa、MDCK、293、W138、NIH-3T3或HEK293)具有特定的细胞机器和特征性机制，并且可以对其进行选择以确保ActRIIB多肽的正确修饰和加工。

在某些方面，ActRIIB多肽的功能变异体或修饰形式包括具有ActRIIB多肽的至少一部分和一个或多个融合结构域的融合蛋白。这样的融合结构域的众所周知的实例包括但不限于多聚组氨酸、Glu-Glu、谷胱甘肽S转移酶(GST)、硫氧还蛋白、蛋白质A、蛋白质G、免疫球蛋白重链恒定区(Fc)、麦芽糖结合蛋白(MBP)或人血清白蛋白。可以对融合结构域进行选择以便赋予所需性质。例如，有些融合结构域对于通过亲和色谱法分离融合蛋白特别有用。为了亲和纯化的目的，使用用于亲和色谱法的相关基质，诸如谷胱甘肽-、淀粉酶-和镍-或钴-缀合的树脂。许多这样的基质可以“试剂盒”形式获得，例如可与(HIS6)融合配偶体一起使用的Pharmacia GST纯化系统和QIAexpress TM系统(Qiagen)。作为另一个实例，可对融合结构域进行选择以便促进ActRIIB多肽的检测。这样的检测结构域的实例包括各种荧光蛋白(例如，GFP)以及“表位标签(epitope tags)”，所述表位标签通常是短肽序列，可获得针对该短肽序列的特异性抗体。可容易获得的特异性单克隆抗体所针对的众所周知的表位标签包括FLAG、流感病毒血凝素(HA)和c-myc标签。在有些情况下，融合结构域具有诸如针对因子Xa或凝血酶的蛋白酶切割位点，其允许相关蛋白酶对融合蛋白进行部分消化，从而由其释放重组蛋白。然后所释放的蛋白质可以通过后续色谱分离法从融合结构域进行分离。在某些优选的实施方案中，ActRIIB多肽与体内稳定ActRIIB多肽的结构域(“稳定剂”结构域)融合。所谓“稳定”意指增加血清半寿期的任何情况，不论是因为破坏减少、肾清除减少或其它药代动力学作用。已知与免疫球蛋白的Fc部分融合赋予各种蛋白质所需要的药代动力学性质。同样，与人血清白蛋白融合可赋予所需要的性质。可选择的融合结构域的其它类型包括多聚化(例如，二聚化、四聚化)结构域和功能结构域(其按需要赋予额外的生物学功能，诸如骨生长或肌肉生长的进一步刺激)。

应当理解，融合蛋白的不同元素可以按与所需功能性一致的任何方式排列。例如，ActRIIB多肽可置于异源结构域的C-末端，或者，异源结构域可置于ActRIIB多肽的C-末端。ActRIIB多肽结构域和异源结构域在融合蛋白中不一定相邻，在结构域的C-末端或N-末端或者在结构域之间可包括另外的结构域或氨基酸序列。

在某些实施方案中，所述ActRIIB多肽含有能够稳定ActRIIB多肽的一个或多个修饰。例如，这样的修饰延长ActRIIB多肽的体外半寿期、延长ActRIIB多肽的循环半寿期或降低ActRIIB多肽的蛋白质水解性降解。这样的稳定化修饰包括但不限于融合蛋白(包括例如包含ActRIIB多肽和稳定剂结构域的融合蛋白)、糖基化位点的修饰(包括例如将糖基化位点添加至ActRIIB多肽中)和糖部分的修饰(包括例如从ActRIIB多肽中脱去糖部分)。在融合蛋白的情况下，使ActRIIB多肽与稳定剂结构域诸如IgG分子(例如，Fc结构域)融合。如本文所用的，术语“稳定剂结构域”不仅是指融合结构域(例如，Fc)(在融合蛋白的情况下)，而且还包括非蛋白质性修饰(诸如糖部分)或非蛋白质性聚合物(诸如聚乙二醇)。

在某些实施方案中，与其它蛋白质分离的或以别的方式基本上不含其它蛋白质的ActRIIB多肽的分离和/或纯化形式可以用于本文描述的方法和组合物。ActRIIB多肽一般可通过自重组核酸表达来生产。

在某些方面，本文提供的是编码ActRIIB多肽(例如，可溶性ActRIIB多肽)(包括本文公开的片段、功能变异体和融合蛋白)中的任何一种的分离和/或重组核酸。例如，SEQ IDNO:19编码天然存在的人ActRIIB前体多肽。这类主题核酸可以是单链的或双链的。这样的核酸可以是DNA或RNA分子。这些核酸可以用于例如制备ActRIIB多肽的方法中或直接用作治疗剂(例如，在基因治疗方法中)。

在某些方面，还应当理解，编码ActRIIB多肽的核酸包括是SEQ ID NO:19的变异体以及编码可溶性ActRIIB多肽的那些核酸序列的变异体的核酸(例如，编码SEQ ID NO:17、18、23、26、27、29、30、31、32、33、36、37、42和43的核酸)。变异体核苷酸序列包括因一个或多个核苷酸取代、添加或缺失而不同的序列，诸如等位基因变异体。

在某些实施方案中，可使用的分离或重组核酸序列是与SEQ ID NO:19有至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性或编码可溶性ActRIIB多肽的那些核酸序列(例如，编码SEQ ID NO:17、18、23、26、27、29、30、31、32、33、36、37、42和43的核酸)。本领域普通技术人员将会认识到，与SEQ ID NO:19互补的核酸序列或编码可溶性ActRIIB多肽的那些核酸序列(例如，编码SEQ ID NO:17、18、23、26、27、29、30、31、32、33、36、37、42和43的核酸)，以及SEQ ID NO:19的变异体或编码可溶性ActRIIB多肽的那些核酸序列(例如，编码SEQ ID NO:17、18、23、26、27、29、30、31、32、33、36、37、42和43的核酸)可以用于本文描述的方法和组合物。在进一步实施方案中，所述核酸序列可以是分离的、重组的和/或与异源核苷酸序列融合，或者在DNA文库中。

在其它实施方案中，可使用的核酸也包括在高严格条件下与以下杂交的核苷酸序列：SEQ ID NO:19标示的核苷酸序列或编码可溶性ActRIIB多肽的那些核酸序列(例如，编码SEQ ID NO:17、18、23、26、27、29、30、31、32、33、36、37、42和43的核酸)、SEQ ID NO:19的互补序列或编码可溶性ActRIIB多肽的那些核酸序列(例如，编码SEQ ID NO:17、18、23、26、27、29、30、31、32、33、36、37、42和43的核酸)或其片段。如上所讨论的，本领域普通技术人员将会容易地理解，促进DNA杂交的适当严格性条件可以改变。本领域普通技术人员将会理解，促进DNA杂交的适当严格性条件可以改变。例如，人们可以在6.0x氯化钠/柠檬酸钠(SSC)中、在约45摄氏度下进行杂交，接着在2.0x SSC中在50摄氏度下进行洗涤。例如，洗涤步骤中的盐浓度可以选自50摄氏度下约2.0x SSC的低严格性到50摄氏度下约0.2x SSC的高严格性。另外，洗涤步骤中的温度可以从低严格性条件下的室温(约22摄氏度)增加到高严格性条件下的约65摄氏度。温度和盐两者均可变化，或温度或盐浓度可保持恒定，而另一变量改变。在一个实施方案中，在室温下的6x SSC的低严格性条件下杂交接着在室温下在2xSSC中进行洗涤的核酸可以用于本文描述的方法和组合物。

也可以使用因遗传密码的简并性所致不同于如SEQ ID NO:19所示的核酸或编码可溶性ActRIIB多肽的那些核酸序列(例如，编码SEQ ID NO:17、18、23、26、27、29、30、31、32、33、36、37、42和43的核酸)的分离的核酸。例如，多种氨基酸由多于一种三联体指定。规定同一氨基酸的密码子或同义词(例如，CAU和CAC是组氨酸的同义词)可导致不影响蛋白质的氨基酸序列的“沉默”突变。然而，预期不引起主题蛋白质的氨基酸序列改变的DNA序列多态性将会存在于哺乳动物细胞中。本领域技术人员将会认识到，编码具体蛋白质的核酸的一个或多个核苷酸(最多约3-5％的核苷酸)的这些变异可因天然等位基因变异所致而存在于给定物种的个体中。任何和所有这样的核苷酸变异及所产生的氨基酸多态性可以用于本文描述的方法和组合物。

在某些实施方案中，在表达构建体中所述重组核酸可与一个或多个调节核苷酸序列操作性连接。调节核苷酸序列一般适合于表达所使用的宿主细胞。对于各种宿主细胞，多种类型的适当的表达载体和合适的调节序列是本领域已知的。典型地，所述一个或多个调节核苷酸序列可包括但不限于启动子序列、前导序列或信号序列、核醣体结合部位、转录起始和终止序列、翻译起始和终止序列、和增强子或激活物序列。如本领域已知的组成型或诱导型启动子可以用于本文描述的方法和组合物。启动子可以是天然存在的启动子，或是将多于一个启动子的元件组合的杂合启动子。表达构建体在细胞中可存在于附加体(episome)(诸如质粒)上，或者表达构建体可以插入染色体中。在一个优选的实施方案中，所述表达载体含有选择标记基因以供选择转化的宿主细胞。选择标记基因是本领域众所周知的并且随所使用的宿主细胞而变化。

在某些方面，这类主题核酸在包含编码ActRIIB多肽并与至少一个调节序列操作性连接的核苷酸序列的表达载体中提供。调节序列是公知的并且选择用于指导ActRIIB多肽的表达。因此，术语调节序列包括启动子、增强子和其它表达控制元件。示例性的调节序列描述于Goeddel；Gene Expression Technology:Methods in Enzymology,AcademicPress,San Diego,Calif.(1990)。举例来说，多种表达控制序列中的任一种(当与其操作性连接时控制DNA序列的表达)可用于这些载体以表达编码ActRIIB多肽的DNA序列。这样的有用表达控制序列包括例如SV40的早期和晚期启动子、tet启动子、腺病毒或巨细胞病毒即时早期启动子、RSV启动子、lac系统、trp系统、TAC或TRC系统、其表达受T7 RNA聚合酶指导的T7启动子、噬菌体λ的主要操纵基因和启动子区、fd外被蛋白的控制区、3-磷酸甘油酸激酶或其它糖酵解酶的启动子、酸性磷酸酶的启动子(例如，Pho5)、酵母α.-交配因子的启动子、杆状病毒系统的多角体启动子和已知控制原核细胞或真核细胞或它们的病毒的基因表达的其它序列及其各种组合。应当理解的是，表达载体的设计可取决于诸如待转化的宿主细胞的选择和/或需要表达的蛋白质的类型等因素。此外，还应当考虑载体的拷贝数、控制该拷贝数和由该载体编码的任何其它蛋白质(诸如抗生素标记)的表达的能力。

可通过将所克隆的基因或其部分连接至适合于在原核细胞、真核细胞(酵母、禽类、昆虫或哺乳动物的)或两者中表达的载体，来产生重组核酸。用于产生重组ActRIIB多肽的表达载体包括质粒和其它载体。举例来说，合适的载体包括用于在原核细胞(诸如大肠杆菌(E.coli))中表达的以下类型的质粒：pBR322来源的质粒、pEMBL来源的质粒、pEX来源的质粒、pBTac来源的质粒和pUC来源的质粒。

在一个优选的实施方案中，可以设计载体用以在CHO细胞中产生主题ActRIIB多肽，诸如Pcmv-Script载体(Stratagene,La Jolla,Calif.)、pcDNA4载体(Invitrogen,Carlsbad,Calif.)和pCI-neo载体(Promega,Madison,Wis.)。将是显而易见的是，可以使用主题基因构建体使主题ActRIIB多肽在培养中繁殖的细胞内表达，以例如产生用于纯化的蛋白质(包括融合蛋白或变异蛋白)。

本公开也涉及对于主题ActRIIB多肽中的一种或多种，用包括编码序列(例如，SEQID NO:19或编码可溶性ActRIIB多肽的那些核酸序列(例如，编码SEQ ID NO:17、18、23、26、27、29、30、31、32、33、36、37、42和43的核酸))的重组基因转染的宿主细胞。所述宿主细胞可以是任何原核细胞或真核细胞。例如，ActRIIB多肽可以在细菌细胞(诸如大肠杆菌)、昆虫细胞(例如，使用杆状病毒表达系统)、酵母或哺乳动物细胞中表达。其它合适的宿主细胞是本领域技术人员已知的。

因此，本文提供的是产生ActRIIB多肽的方法。例如，用编码ActRIIB多肽的表达载体转染的宿主细胞可以在适当的条件下培养，以使ActRIIB多肽进行表达。ActRIIB多肽可分泌，并从含有ActRIIB多肽的细胞和培养基的混合物中分离。或者，ActRIIB多肽可保留在细胞质中或在膜级分中并且收获细胞、将细胞裂解和分离蛋白质。细胞培养物包括宿主细胞、培养基和其它副产物。用于细胞培养的合适培养基是本领域众所周知的。可采用用于纯化蛋白质的本领域的已知技术，包括离子交换色谱法、凝胶过滤色谱法、超滤法、电泳、用对ActRIIB多肽的特定表位有特异性的抗体的免疫亲和纯化和用与ActRIIB多肽融合的结构域结合的结合剂的亲和纯化(例如，蛋白质A柱可用来纯化ActRIIB-Fc融合物)，从细胞培养基、宿主细胞或两者中分离出主题ActRIIB多肽。在一个优选的实施方案中，所述ActRIIB多肽是含有促进其纯化的结构域的融合蛋白。在一个优选的实施方案中，通过一系列柱色谱法步骤，包括例如任何顺序的以下三种或更多种来实现纯化：蛋白质A色谱法、Q琼脂糖色谱法、苯基琼脂糖色谱法、大小排阻色谱法和阳离子交换色谱法。可用病毒过滤和缓冲液交换完成纯化。如本文所证明的，ActRIIB-hFc蛋白被纯化至>98％(通过大小排阻色谱法测定)和>95％(通过SDS PAGE测定)的纯度。这种纯度水平足以实现对小鼠骨的所需作用及在小鼠、大鼠和非人类灵长类动物中可接受的安全性特征(safety profile)。

在另一个实施方案中，通过使用Ni2+金属树脂的亲和色谱法，编码纯化前导序列(诸如处于重组ActRIIB多肽所需部分N-末端的聚-(His)/肠激酶切割位点序列)的融合基因，可允许纯化已表达的融合蛋白。然后，接着可用肠激酶处理脱去纯化前导序列以提供纯化的ActRIIB多肽(例如参见，Hochuli等人,(1987)J.Chromatography 411:177；和Janknecht等人,PNAS USA 88:8972)。

可使用SEQ ID NO:8的组织纤溶酶原前导序列，在来自pAID4载体(SV40 ori/增强子、CMV启动子)的稳定转染的CHO-DUKX Bl 1细胞中表达ActRIIB-Fc融合蛋白。Fc部分可包含人IgGl Fc序列，如SEQ ID NO:7所示。在某些实施方案中，在表达时，所含蛋白质每分子的ActRIIB-Fc融合蛋白具有平均介于约1.5和2.5摩尔之间的唾液酸。

在某些实施方案中，ActRIIB-Fc融合物的长血清半寿期在人对象中可以是25-32天。另外，与所报告的在人293细胞中表达的ActRIIB-hFc融合蛋白相比，CHO细胞表达的材料可具有对激活素B配体的较高亲和力(del Re等人,J Biol Chem.2004 Dec 17；279(51):53126-35)。另外，虽然不受理论的束缚，但是与用天然前导序列表达的ActRIIB-Fc不一样，使用提供比其它前导序列更大产量的TPA前导序列，可提供高纯的N-端序列。使用天然前导序列可导致产生ActRIIB-Fc的两个主要类别，其各自具有不同的N-端序列。

7.9.3其它的ACTRII受体信号转导抑制剂

在某些实施方案中，用于本文描述的组合物和方法的ActRII受体的信号转导抑制剂是核酸化合物。

抑制ActRII受体的核酸化合物类别的实例包括反义核酸、siRNA或RNAi构建体和催化核酸构建体。核酸化合物可以是单链的或双链的。双链化合物也可包括突出端或非互补性的区域，其中所述链的一个或另一个是单链的。单链化合物可包括自身互补性的区域，这意味着化合物可形成具有双螺旋结构区的所谓的“发夹(hairpin)”或“茎环(stem-loop)”结构。

在某些实施方案中，抑制ActRII受体的核酸化合物可包含这样的核苷酸序列：其与由全长ActRII受体核酸序列或激活素核酸序列(例如，激活素A或激活素B亚基的核酸序列，亦称为βA或βB)的不超过1000、不超过500、不超过250、不超过100或不超过50、35、30、25、22、20或18个核苷酸组成的区域互补。在具体的实施方案中，互补性的区域将是至少8个核苷酸，和任选至少10或至少15个核苷酸，和任选介于15个和25个之间的核苷酸。互补性的区域可落入目标转录物的内含子、编码序列或非编码序列，诸如编码序列部分内。一般而言，抑制ActRII受体的核酸化合物的长度可为约8至约500个核苷酸或碱基对，和任选长度将是约14至约50个核苷酸。抑制ActRII受体的核酸化合物可以是DNA(特别是用作反义物)、RNA或RNA:DNA杂合体。任何一条链可包括DNA和RNA的混合物以及无法容易地归入DNA或RNA的修饰形式。同样，双链核酸化合物可以是DNA:DNA、DNA:RNA或RNA:RNA，且任何一条链也可包括DNA和RNA的混合物，以及无法容易地归入DNA或RNA的修饰形式。

抑制ActRII受体的核酸化合物可包括各种修饰的任一种，包括对骨架(天然核酸中的糖-磷酸部分，包括核苷酸间键合)或碱基部分(天然核酸的嘌呤或嘧啶部分)的一个或多个修饰。在某些实施方案中，反义核酸化合物的长度可为约15至约30个核苷酸，并且通常可含有一个或多个修饰以改进某些特征，诸如血清中的稳定性、细胞中的稳定性或化合物可能递送的位置(诸如，例如，口服递送的化合物的情况下为胃，吸入的化合物为肺)中的稳定性。在RNAi构建体的情况下，与目标转录物互补的链一般可为RNA或其修饰物。另一链可以是RNA、DNA或任何其它变异。在某些实施方案中，双链或单链的“发夹”RNAi构建体的双链体部分的长度可为18至40个核苷酸，和任选地长度可为约21至23个核苷酸，只要它用作切酶底物(Dicer substrate)即可。催化或酶促核酸可以是核酶或DNA酶，并且还可含有修饰形式。在某些实施方案中，在生理条件下且在其中无义或有义对照几乎没有或没有作用的浓度下，抑制ActRII受体的核酸化合物可抑制其靶标的表达约50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或更高。测试核酸化合物的作用的浓度包括1、5、10微摩尔或更高。

在其它实施方案中，用于本文描述的组合物和方法的ActRII受体的信号转导抑制剂是抗体。这样的抗体包括与激活素(特别是激活素A或B亚基，亦称为βA或βB)结合并破坏ActRII受体结合的抗体；和与ActRII受体多肽(例如，可溶性ActRIIA或可溶性ActRIIB多肽)结合并破坏激活素结合的抗体。

可通过使用来源于ActRII受体多肽或激活素多肽的免疫原，通过标准方案制备抗蛋白质/抗肽抗血清或单克隆抗体(参见例如，Antibodies:A Laboratory Manual,由Harlow和Lane编著(Cold Spring Harbor Press:1988))。可用ActRII受体多肽的免疫原性形式(一种能够诱发抗体应答的抗原性片段)或融合蛋白来免疫哺乳动物(诸如小鼠、仓鼠或兔)。用于赋予蛋白质或肽的免疫原性的技术包括与载体缀合或本领域众所周知的其它技术。可在佐剂的存在下给予ActRII受体或激活素多肽的免疫原性部分。可通过检测血浆或血清中的抗体滴度，来监测免疫进程。标准ELISA或其它免疫测定法可以与作为抗原的免疫原一起使用以评价抗体的水平。

在动物用ActRII受体多肽的抗原制备物免疫后，可获得抗血清，并且如果有需要，可从血清分离多克隆抗体。为了产生单克隆抗体，可从经免疫的动物收获产抗体细胞(淋巴细胞)，并通过标准体细胞融合方法与永生化细胞(诸如骨髓瘤细胞)融合以产生杂交瘤细胞。该技术是本领域众所周知的，并且包括例如杂交瘤技术(最初由Kohler和Milstein开发(1975)Nature,256:495-497)、人B细胞杂交瘤技术(Kozbar等人,(1983)ImmunologyToday,4:72)和EBV-杂交瘤技术以产生人单克隆抗体(Cole等人,(1985)MonoclonalAntibodies and Cancer Therapy,Alan R.Liss,Inc.第77-96页)。可针对与ActRII受体多肽有特异性反应的抗体的产生来在免疫化学上筛选杂交瘤细胞，并从包含这类杂交瘤细胞的培养物中分离出单克隆抗体。

如本文所用的术语“抗体”意在包括其还与主题多肽有特异性反应的片段。可采用常规技术将抗体片段化，并可按上述用于完整抗体的相同方式针对实用性筛选片段。例如，可将抗体用胃蛋白酶处理以产生F(ab)2片段。可对所得F(ab)2片段进行处理以还原二硫桥，得到Fab片段。抗体还意在包括双特异性、单链、嵌合、人源化和完全人分子，其具有由抗体的至少一个CDR区域所赋予的对ActRII受体或激活素多肽的亲和力。抗体还可包含与之连接并能够检测的标记(例如，标记可以是放射性同位素、荧光化合物、酶或酶辅因子)。

在某些实施方案中，所述抗体是重组抗体，该术语包括部分通过分子生物学技术产生的任何抗体，包括CDR移植抗体或嵌合抗体、从文库选择的抗体结构域装配的人抗体或其它抗体、单链抗体和单结构域抗体(例如，人VH蛋白质或骆驼VHH蛋白质)。在某些实施方案中，抗体可以是单克隆抗体，并且在某些实施方案中。例如，用于产生与ActRII受体多肽或激活素多肽特异性结合的单克隆抗体的方法可包括给予小鼠一定量的包含有效刺激可检测的免疫应答的抗原多肽的免疫原性组合物，从小鼠中获得产抗体细胞(例如，来自脾的细胞)，使产抗体细胞与骨髓瘤细胞融合以得到产抗体的杂交瘤，并测试产抗体的杂交瘤以鉴定产生与抗原特异性结合的单克隆抗体的杂交瘤。杂交瘤一旦获得，便可在细胞培养物中繁殖，任选在其中杂交瘤来源的细胞产生与抗原特异性结合的单克隆抗体的培养条件下。单克隆抗体可从细胞培养物中纯化。

如本领域一般所理解的，提及抗体时使用的形容词“与……有特异性反应的”意指抗体在目标抗原(例如，ActRII受体多肽)和其它非目标抗原之间有足够的选择性，所述抗体可用于至少检出特定类型的生物样品中目标抗原的存在。在使用抗体的某些方法中，例如治疗应用，在结合中可能需要较高程度的特异性。单克隆抗体一般具有有效区别所需抗原和交叉反应性多肽的较大趋向(与多克隆抗体相比)。影响抗体:抗原相互作用的特异性的一个特征是抗体对抗原的亲和力。虽然所需特异性可在不同亲和力的范围内达到，但是一般优选的抗体将具有约10^-6、10^-7、10^-8、10^-9或更小的亲和力(解离常数)。如果激活素和ActRII受体间非常严密地结合，则预期中和抗激活素或抗ActRII受体抗体的解离常数一般可为10^-10或更小。

另外，用于筛选抗体以鉴定所需抗体的技术可影响所获得的抗体的性质。例如，如果抗体用于结合溶液中的抗原，则可能需要测试溶液结合。可获得各种不同技术用于测试抗体和抗原间的相互作用以鉴定特别需要的抗体。这样的技术包括ELISA、表面等离子体共振结合测定法(例如，Biacore.TM.binding assay(结合测定法),Biacore AB,Uppsala,Sweden)、夹心测定法(例如，IGEN International,Inc.,Gaithersburg,Md.的顺磁珠系统)、蛋白质印迹法(Western blots)、免疫沉淀测定法和免疫组织化学法。

在某些实施方案中，待用于本文描述的组合物和方法的ActRII受体信号转导抑制剂包括激活素的备选形式，特别是可与II型受体结合并且不能形成有活性的三元复合物的在I型受体结合结构域中具有变化的那些。在某些实施方案中，抑制激活素A、B、C或E，或者特别是ActRII受体表达的核酸(诸如反义分子、siRNA或核酶)可以用于本文描述的组合物和方法。在某些实施方案中，待用于本文描述的组合物和方法的ActRII受体信号转导抑制剂表现出用于抑制激活素-介导的信号转导相对于TGF-β家族的其它成员、特别是关于GDF8和GDF11的选择性。

在其它实施方案中，用于本文描述的组合物和方法的ActRII受体的信号转导抑制剂是具有ActRII受体拮抗剂活性的非抗体蛋白质，包括抑制素(即，抑制素α亚基)、滤泡素抑制素(follistatin)(例如，滤泡素抑制素-288和滤泡素抑制素-315)、Cerberus、滤泡素抑制素相关蛋白(“FSRP”)、内皮糖蛋白(endoglin)、激活素C、α(2)-巨球蛋白和M108A(在位置108处甲硫氨酸变为丙氨酸)突变体激活素A。

在一个具体的实施方案中，待用于本文描述的组合物和方法的ActRII受体信号转导抑制剂是拮抗激活素生物活性和/或与激活素结合的滤泡素抑制素多肽。术语“滤泡素抑制素多肽”包括包含滤泡素抑制素的任何天然存在的多肽以及其保留有益活性的任何变异体(包括突变体、片段、融合物和肽模拟物形式)的多肽，并且还包括滤泡素抑制素的任何功能单体或多聚体。可根据包括滤泡素抑制素和激活素相互作用的先前研究，鉴定保留激活素结合性质的滤泡素抑制素多肽的变异体。例如，WO2008/030367(其通过引用以其整体包括在本文中)公开了已表明对激活素结合是重要的特异性滤泡素抑制素结构域(“FSD”)。滤泡素抑制素多肽包括来源于具有与滤泡素抑制素多肽的序列有至少约80％同一性和任选至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更大同一性的序列的任何已知的滤泡素抑制素的序列的多肽。滤泡素抑制素多肽的实例包括描述于例如WO2005/025601(其通过引用以其整体包括在本文中)的成熟滤泡素抑制素多肽或人滤泡素抑制素前体多肽的较短的同种型(isoform)或其它变异体。

在一个具体的实施方案中，待用于本文描述的组合物和方法的ActRII受体信号转导抑制剂是拮抗激活素生物活性和/或与激活素结合的滤泡素抑制素样相关基因(FLRG)。术语“FLRG多肽”包括包含FLRG的任何天然存在的多肽以及其保留有益活性的任何变异体(包括突变体、片段、融合物和肽模拟物形式)的多肽。可采用测定FLRG和激活素相互作用的常规方法，来鉴定保留激活素结合性质的FLRG多肽的变异体。参见例如，美国专利号6,537,966，其通过引用以其整体包括在本文中。FLRG多肽包括来源于具有与FLRG多肽的序列有至少约80％同一性和任选至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更大同一性的序列的任何已知的FLRG的序列的多肽。

在某些实施方案中，滤泡素抑制素多肽和FLRG多肽的功能变异体或修饰形式包括具有滤泡素抑制素多肽或FLRG多肽的至少一部分和一个或多个融合结构域(诸如，例如，促进多肽的分离、检测、稳定或多聚化的结构域)的融合蛋白。上文在ActRIIA和ActRIIB多肽方面详细论述了合适的融合结构域。在一个实施方案中，ActRII受体信号转导抑制剂是包含与Fc结构域融合的滤泡素抑制素多肽的激活素结合部分的融合蛋白。在另一个实施方案中，ActRII受体信号转导抑制剂是包含与Fc结构域融合的FLRG多肽的激活素结合部分的融合蛋白。

7.10测定法

可以测试各种ActRII多肽变异体或可溶性ActRII多肽变异体抑制ActRII的能力。另外，可以测试化合物抑制ActRII的能力。一旦ActRII活性的信号转导抑制剂得以证实，这些化合物就可以与本发明的方法一起使用。ActRII可以是ActRIIA或ActRIIB，针对ActRIIA描述了以下测定法，但是可针对ActRIIB类似地进行。这些测定法可以用于(i)鉴别对象的贫血症、需要RBC输血的贫血症、MDS和/或非增殖CMML对象亚群体；(ii)诊断对象的贫血症、需要RBC输血的贫血症、MDS和/或非增殖CMML对象；(iii)监测对象的贫血症、需要RBC输血的贫血症、MDS和/或非增殖CMML疾病继续和/或进展；(iv)监测在对象中本文提供的方法用于治疗对象的贫血症、需要RBC输血的贫血症、MDS和/或非增殖CMML的有效性；和/或(v)监测在对象中本文描述的ActRII信号转导抑制剂的有效性。

7.10.1参比群体

在某些实施方案中，所述参比群体的大小可以是约1、5、10、25、50、75、100、200、250、300、400、500或1000个个体。在某些实施方案中，所述参比群体由随机志愿者组成。在某些实施方案中，所述参比群体由健康人组成。在某些实施方案中，所述参比群体由相同年龄、体重和/或性别的人组成，正如如第7.8节中所描述的患者群体一样。在某些实施方案中，所述参比群体由没有血液相关紊乱的人组成。在某些实施方案中，所述参比群体由患有血液相关紊乱的人组成，其中所述参比群体中的人不具有环形铁粒幼细胞。在某些实施方案中，所述参比群体由患有血液相关紊乱的人组成，其中在所述人中，小于15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％的成红细胞是环形铁粒幼细胞。在某些实施方案中，所述参比群体由患有血液相关紊乱的人组成，其中在所述人中，小于15％的成红细胞是环形铁粒幼细胞。在某些实施方案中，所述血液相关紊乱是如第7.8节中所描述的血液相关紊乱。在某些实施方案中，所述参比群体由没有贫血症的人组成。在某些实施方案中，所述参比群体由没有需要RBC输血的贫血症的人组成。在某些实施方案中，所述参比群体由没有MDS的人组成。在某些实施方案中，所述参比群体由没有非增殖CMML的人组成。

7.10.2环形铁粒幼细胞

环形铁粒幼细胞是异常的成红细胞。此外，与MDS相关的某些体细胞突变引起环形铁粒幼细胞形成和无效红细胞生成。剪接因子3B1(SF3B1)中的显性突变与环形铁粒幼细胞的形成相关。如本文所用的，“RS+”是指其中在所述对象中至少15％的成红细胞是环形铁粒幼细胞的对象。在某些实施方案中，环形铁粒幼细胞的百分比为是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比。在某些实施方案中，环形铁粒幼细胞的百分比为是环形铁粒幼细胞的类红细胞前体的百分比。环形铁粒幼细胞是一类成红细胞，其中最少五个含铁(铁质沉着)颗粒至少覆盖了核周长的三分之一。有关鉴定样品中的环形铁粒幼细胞的描述，参见Mufti等人,2008,Haematologica,93(11):1712-7。在环形铁粒幼细胞中，铁负载的线粒体当用普鲁士蓝染色时显现为蓝色颗粒的核周环(perinuclear ring)。在外周血和/或骨髓涂片中可以检测到环形铁粒幼细胞。在本文提供的方法的特别方面，所述环形铁粒幼细胞是在骨髓穿刺液中。

7.10.3筛选测定法

可以测试各种ActRII多肽变异体或可溶性ActRII多肽变异体抑制ActRII的能力。另外，可以测试化合物抑制ActRII的能力。一旦ActRII活性的信号转导抑制剂得以证实，这些化合物就可以与本文提供的方法一起使用。ActRII可以是ActRIIA或ActRIIB。针对ActRIIA描述了以下测定法，但是可针对ActRIIB类似地进行。

例如，可评价ActRIIA多肽变异体对参与骨生成或骨破坏的基因表达的作用。这可以按需在一种或多种重组ActRIIA配体蛋白质(例如，激活素)存在时进行，并可转染细胞以产生ActRIIA多肽和/或其变异体和任选ActRIIA配体。同样，可将ActRIIA多肽给予小鼠或其它动物，并可评价一种或多种骨性质，诸如密度或体积。还可以评价骨折的愈合速率。双能x-射线吸收测定法(DEXA)是用于评价动物骨密度的充分确立的非侵入性定量技术。在人类中，可采用中枢DEXA系统评估脊骨和盆骨的骨密度。这些是总体骨密度的最佳预测因子。可采用外周DEXA系统评估外周骨(包括例如手、腕、踝和足的骨)的骨密度。传统的x-射线成像系统，包括CAT扫描，可用来评估骨生长和骨折愈合。另外，骨密度可采用定量计算机体层摄影术(qCT)测量。还可评估骨的机械强度。

在某些方面，本文提供的是使用ActRIIA多肽(例如，可溶性ActRIIA多肽)和激活素多肽鉴定是激活素-ActRIIA信号转导途径的激动剂或拮抗剂的化合物(药剂)。可测试通过这种筛选鉴定的化合物以评价其体外调节骨生长或矿化的能力。任选地，还可以在动物模型中测试这些化合物以评价其体内调节组织生长的能力。

存在多种方法以筛选通过靶向激活素和ActRIIA多肽来调节组织生长的治疗剂。在某些实施方案中，可进行化合物的高通量筛选以鉴定干扰激活素或ActRIIA-介导的对骨的作用的药剂。在某些实施方案中，进行所述测定法以筛选和鉴定特异性抑制或降低ActRIIA多肽与激活素结合的化合物。或者，可采用所述测定法以鉴定提高ActRIIA多肽与激活素结合的化合物。在一个进一步的实施方案中，可通过其与激活素或ActRIIA多肽相互作用的能力来鉴定化合物。

各种测定格式可满足需要，且根据本公开内容，本文未明确描述的测定格式仍然应该为本领域普通技术人员所掌握。如本文所描述，本文使用的试验化合物(药剂)可通过任何组合化学方法产生。或者，主题化合物可以是体内或体外合成的天然存在的生物分子。可通过例如细菌、酵母、植物或其它生物(例如，天然产物)产生、化学产生(例如，小分子，包括肽模拟物)或重组产生针对其用作组织生长调节剂的能力的待测化合物(药剂)。本文考虑的试验化合物包括非肽基有机分子、肽、多肽、肽模拟物、糖、激素和核酸分子。在一个具体的实施方案中，所述试验药剂是小的有机分子，其分子量小于约2,000道尔顿。

试验化合物可作为单个独立的实体提供，或以较大复杂性的文库提供，例如通过组合化学制备。这些文库可包含例如醇、烷基卤化物、胺、酰胺、酯、醛、醚和其它类别的有机化合物。可以分离形式或作为化合物的混合物，尤其在初始筛选步骤中，将试验化合物提供给试验系统。任选地，化合物可用其它化合物衍生化，并具有促进化合物分离的衍生基团。衍生基团的非限制性实例包括生物素、荧光素、洋地黄毒苷、绿色荧光蛋白、同位素、多聚组氨酸、磁珠、谷胱甘肽S转移酶(GST)、可光活化的交联剂或其任何组合。

在测试化合物文库和天然提取物的许多药物筛选程序中，需要高通量测定法以使在给定的时间周期内所研究的化合物的数目最大化。在无细胞系统(例如可用纯化的或半纯化的蛋白质得到的系统)中进行的测定法，常常称为“初级”筛选，因为它们可产生以允许快速显现，并相对容易地检测由试验化合物介导的分子靶标的变化。此外，在体外系统中一般可忽略试验化合物的细胞毒性的作用或生物利用度，取而代之的是测定法主要集中于药物对分子靶标的作用，正如可表现在ActRIIA多肽和激活素之间的结合亲和力的变化中。

仅举例说明，在一种示例性的筛选测定法中，使目标化合物与通常能够与激活素结合的分离和纯化的ActRIIA多肽接触。然后向化合物和ActRIIA多肽的混合物中加入含有ActRIIA配体的组合物。ActRIIA/激活素复合物的检测和定量测定提供用于测定化合物在抑制(或增强)ActRIIA多肽和激活素之间的复合物形成中的功效的方法。可通过从使用不同浓度的试验化合物获得的数据绘制剂量反应曲线，评价化合物的功效。此外，还可进行对照测定法以提供用于比较的基线。例如，在对照测定法中，将分离和纯化的激活素加入含有ActRIIA多肽的组合物中，在不存在试验化合物时，定量测定ActRIIA/激活素复合物的形成。总的来说，要了解的是反应物可被混合的顺序可以改变，并且可以同时混合。此外，可使用细胞提取物和裂解物代替纯化的蛋白质以提供合适的无细胞测定系统。

可通过各种技术检测ActRIIA多肽和激活素之间的复合物形成。例如，可使用例如可检测标记的蛋白质例如放射性标记的(例如，32P、35S、14C或3H)、荧光标记的(例如，FITC)或酶标记的ActRIIA多肽或激活素，通过免疫测定法或通过色谱检测，定量测定复合物形成的调节。

在某些实施方案中，本文考虑将荧光偏振测定法和荧光共振能量转移(FRET)测定法用于直接或间接测量ActRIIA多肽及其结合蛋白之间的相互作用的程度。此外，其它检测方式，例如基于光波导(PCT公布号WO 96/26432和美国专利号5,677,196)、表面等离子体共振(SPR)、表面电荷传感器和表面力传感器的检测方式与许多本文描述的实施方式并存。

此外，相互作用阱测定法(interaction trap assay)，亦称为“双杂合测定法(twohybrid assay)”可用来鉴定破坏或增强ActRIIA多肽及其结合蛋白之间的相互作用的药剂。参见例如，美国专利号5,283,317；Zervos等人(1993)Cell 72:223-232；Madura等人(1993)J Biol Chem 268:12046-12054；Bartel等人(1993)Biotechniques 14:920-924；和Iwabuchi等人(1993)Oncogene 8:1693-1696)。在一个具体的实施方案中，本文考虑使用反向双杂合系统以鉴定解离ActRIIA多肽及其结合蛋白之间的相互作用的化合物(例如，小分子或肽)。参见例如，Vidal和Legrain,(1999)Nucleic Acids Res 27:919-29；Vidal和Legrain,(1999)Trends Biotechnol 17:374-81；和美国专利号5,525,490、5,955,280和5,965,368。

在某些实施方案中，通过其与ActRIIA或激活素多肽相互作用的能力来鉴定主题化合物。化合物与ActRIIA或激活素多肽之间的相互作用可以是共价或非共价的。例如，可采用体外生物化学方法，包括光致交联、放射性标记的配体结合和亲和色谱法，在蛋白质水平上鉴定这类相互作用(Jakoby W B等人,1974,Methods in Enzymology 46:1)。在某些情况下，可在基于机制的测定法(诸如检测与激活素或ActRIIA多肽结合的化合物的测定法)中，筛选化合物。这可包括固相或液相结合事件。或者，可将编码激活素或ActRIIA多肽的基因与报道系统(例如，β-半乳糖苷酶、萤光素酶或绿色荧光蛋白)一起转染到细胞中，并优选通过高通量筛选或用文库的各个成员针对文库进行筛选。可以采用其它基于机制的结合测定法，例如，检测自由能变化的结合测定法。结合测定法可用固定在孔、珠粒或芯片上或被固定化抗体俘获或通过毛细管电泳分离的靶标进行。通常可采用比色或荧光或表面等离子体共振检测结合的化合物。

在某些方面，本文提供的是用于调节(刺激或或抑制)骨形成和增加骨质量的方法和药剂。因此，可在完整细胞或组织中，在体外或体内，测试所鉴定的任何化合物以证实其调节骨生长或矿化的能力。本领域已知的各种方法可用于此目的。具体地说，可针对其增加骨更新(turnover)的能力测试化合物。

例如，在基于细胞的测定法中，通过测量Msx2的诱导或骨祖细胞分化成为成骨细胞，来测定ActRIIA或激活素多肽或试验化合物对骨或软骨生长的作用(参见例如，Daluiski等人,Nat Genet.2001,27(1):84-8；Hino等人,Front Biosci.2004,9:1520-9)。基于细胞的测定法的另一个实例包括分析间充质祖细胞和成骨细胞中主题ActRIIA或激活素多肽和试验化合物的成骨活性。为了举例说明，可构建表达激活素或ActRIIA多肽的重组腺病毒以感染多能间充质祖细胞C3H10T1/2细胞、前成骨细胞C2Cl2细胞和成骨细胞TE-85细胞。然后通过测量碱性磷酸酶、骨钙蛋白(osteocalcin)和基质矿化的诱导，来测定成骨活性(参见例如，Cheng等人,J bone Joint Surg Am.2003,85-A(8):1544-52)。

本文还提供的是测量骨或软骨生长的体内测定法。例如，Namkung-Matthai等人,Bone,28:80-86(2001)公开了大鼠骨质疏松模型，其中研究了骨折后早期的骨修复。Kubo等人,Steroid Biochemistry&Molecular Biology,68:197-202(1999)也公开了大鼠骨质疏松模型，其中研究了骨折后晚期的骨修复。Andersson等人,J.Endocrinol.170:529-537描述了小鼠骨质疏松症模型，其中小鼠被切除卵巢，这引起小鼠失去大量的骨矿物质含量和骨矿物质密度，其骨小梁丢失大体上50％的骨矿物质密度。通过给予例如甲状旁腺激素等因子，可增加切除卵巢小鼠的骨密度。在某些方面，可采用本领域已知的骨折愈合测定法。这些测定法包括骨折技术、组织学分析和生物力学分析，它们描述于例如美国专利号6,521,750，对于引起以及测量骨折程度和修复过程的实验方案的公开内容，通过引用以其整体予以结合。

7.11药物组合物

在某些实施方案中，将激活素-ActRII拮抗剂(例如，ActRII多肽)与药学上可接受的载体一起配制以用于本文提供的方法。例如，ActRII多肽可以单独或作为药物制剂(治疗组合物)的组分给予。可以用于人或兽用药物的任何方便的方式配制用于给药的主题化合物。ActRII可以是ActRIIA或ActRIIB。

在某些实施方案中，本发明的治疗方法包括全身或作为植入剂或装置局部给予组合物。当给药时，用于本发明的治疗组合物当然是以无热原的生理学上可接受的形式。可与主题化合物(例如，ActRII多肽，诸如ActRIIA和/或ActRIIB多肽(参见第7.9节))一起同时或序贯给予还可任选包括在如上描述的组合物中的ActRII拮抗剂以外的治疗上有用的药剂。

典型地，可以胃肠外给予ActRII拮抗剂。适于胃肠外给药的药物组合物可包含一种或多种ActRII多肽以及一种或多种药学上可接受的无菌等渗的水性或非水性溶液剂、分散体、混悬剂或乳液剂或临用前可复原成无菌注射用溶液剂或分散体的无菌粉针剂，本发明的药物组合物可含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂、赋予制剂与既定接受者的血液等渗的溶质或助悬剂或增稠剂。可用于本发明的药物组合物的合适的水性和非水性载体的实例包括水、乙醇、多元醇(诸如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)及其合适的混合物、植物油(诸如橄榄油)和注射用有机酯(诸如油酸乙酯)。可通过例如使用包衣材料(诸如卵磷脂)、在分散剂的情况下通过保持所需粒度和通过使用表面活性剂，来保持适当的流动性。

此外，所述组合物可以用于递送至靶组织部位(例如，骨)的形式包封或注射。在某些实施方案中，本文提供的组合物可包括能够将一种或多种治疗化合物(例如，ActRIIA多肽)递送至靶组织部位(例如，骨)、提供用于发育组织的结构和最好能够在体内再吸收的基质。例如，基质可提供ActRIIA多肽的缓慢释放。这样的基质可用目前用于其中它植入医疗应用的材料制成。

基质材料的选择基于生物相容性、生物降解性、机械性质、外观外表和界面性质。主题组合物的具体应用将限定合适的制剂。用于组合物的潜在基质可以是生物可降解的和化学成分确定的硫酸钙、磷酸三钙、羟基磷灰石、聚乳酸和聚酸酐。其它潜在的材料是生物可降解的和生物学成分十分确定的，例如骨或真皮胶原。其它基质由纯的蛋白质或胞外基质组分组成。其它潜在的基质是非生物可降解的和化学成分确定的，例如烧结羟磷灰石、生物玻璃、铝酸盐或其它陶瓷。基质可由任何上述类型的材料(诸如聚乳酸和羟基磷灰石或胶原和磷酸三钙)的组合组成。可在组成(诸如磷酸钙铝酸钙(calcium-aluminate-phosphate))中改变生物陶瓷，并加工以改变孔径、粒度、颗粒形状和生物降解性。

在某些实施方案中，用于本发明的方法的组合物可口服给予，例如呈胶囊剂、扁囊剂(cachet)、丸剂、片剂、锭剂(例用调味基料，通常为蔗糖和阿拉伯树胶或西黄蓍胶)、散剂、颗粒剂的形式，或作为水性液体或非水液体中的溶液剂或混悬剂，或作为水包油或油包水液体乳液剂，或作为酏剂或糖浆剂，或作为糖锭剂(使用惰性基料，例如明胶和甘油，或蔗糖或阿拉伯树胶)和/或作为漱口剂等，其各自含有预定量的药剂作为活性成分。所述药剂也可作为大丸剂(bolus)、药糖剂(electuary)或糊剂给予。

在用于口服给药的固体剂型(胶囊剂、片剂、丸剂、锭剂、散剂、颗粒剂等)中，可将本文提供的一种或多种治疗化合物与一种或多种药学上可接受的载体(诸如柠檬酸钠或磷酸二钙)和/或下列的任一种混合：(1)填充剂或增量剂，诸如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和/或硅酸；(2)粘合剂，诸如，例如，羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和/或阿拉伯树胶；(3)湿润剂，诸如甘油；(4)崩解剂，诸如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠；(5)溶液阻滞剂，诸如石蜡；(6)吸收促进剂，诸如季铵化合物；(7)润湿剂，诸如，例如，鲸蜡醇和甘油单硬脂酸酯；(8)吸收剂，诸如高岭土和膨润土；(9)润滑剂，诸如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠及其混合物；和(10)着色剂。在胶囊剂、片剂和丸剂的情况下，药物组合物还可包含缓冲剂。在使用诸如乳糖或奶糖以及高分子量聚乙二醇等这类赋形剂的软和硬充填的明胶胶囊剂中，相似类型的固体组合物也可用作填充剂。

用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液剂、微乳液剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂和酏剂。除活性成分以外，液体剂型可含有常用于本领域的惰性稀释剂，诸如水或其它溶剂、增溶剂和乳化剂，诸如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、油(具体为棉籽油、落花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和山梨醇酐的脂肪酸酯及其混合物。除惰性稀释剂以外，口服组合物也可包括辅助剂，诸如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂、着色剂、芳香剂和防腐剂。

混悬剂除含有活性化合物以外还含有助悬剂，诸如乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇和山梨醇酐酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝(aluminum metahydroxide)、膨润土、琼脂和西黄蓍胶及其混合物。

本发明的组合物还可含有辅助剂，诸如防腐剂、润湿剂、乳化剂和分散剂。通过加入各种抗细菌剂和抗真菌剂，例如，对羟基苯甲酸酯、三氯叔丁醇、苯酚、山梨酸等，可确保防止微生物的作用。组合物中还可能需要包括等渗剂，诸如糖、氯化钠等。另外，可通过加入延长吸收的作用剂，诸如单硬脂酸铝和明胶，引起注射用药物形式的吸收延长。

要了解，可通过主治医师考虑改进用于本发明的主题化合物(例如，ActRII多肽，诸如ActRIIA和/或ActRIIB多肽(参见第7.9节))的作用的各种因素，来确定剂量方案。各种因素包括但不限于需要形成的骨重的量、骨密度丢失的程度、骨损伤的部位、受损骨的情况、患者的年龄、性别和饮食、可促成骨丢失的任何疾病的严重性、给药时间和其它临床因素。任选地，剂量可随用于重构的基质的类型和组合物中化合物的类型而变化。将其它已知的生长因子加入最后的组合物中也可影响剂量。可通过定期评价骨生长和/或修复，例如X-射线(包括DEXA)、组织形态学测定和四环素标记，来监测进展。

在某些实施方案中，本文提供的是用于体内产生ActRII多肽的基因疗法。这样的疗法可通过将ActRII多核苷酸序列导入患有如上所列举的疾病的细胞或组织中，来实现其治疗效果。可使用重组表达载体(诸如嵌合病毒或胶体分散体系)，来实现ActRII多核苷酸序列的递送。ActRII多核苷酸序列的优选治疗递送是使用靶向脂质体。ActRII多肽可以是ActRIIA和/或ActRIIB多肽(参见第7.9节))。

可用于如本文教导的基因疗法的各种病毒载体包括腺病毒、疱疹病毒、痘苗病毒，或优选RNA病毒(诸如反转录病毒)。优选地，反转录病毒载体是鼠类或禽类反转录病毒的衍生物。其中可插入单个外源基因的反转录病毒载体的实例包括但不限于：莫洛尼鼠白血病病毒(Moloney murine leukemia virus,MoMuLV)、Harvey鼠肉瘤病毒(HaMuSV)、鼠乳腺肿瘤病毒(MuMTV)和劳斯肉瘤病毒(Rous Sarcoma Virus,RSV)。多种其它的反转录病毒载体可掺入多个基因。所有的这些载体可转移或掺入选择标记的基因，使得可鉴定并产生转导细胞。可通过连接例如糖、糖脂或蛋白质，制备靶特异性的反转录病毒载体。优选的靶向通过使用抗体来完成。本领域技术人员将会认识到，特定的多核苷酸序列可插入反转录病毒基因组中或与病毒包膜连接以供含有ActRII多核苷酸的反转录病毒载体的靶特异性递送。在一个优选的实施方案中，所述载体靶向骨或软骨。

或者，可通过常规磷酸钙转染，将组织培养细胞用编码反转录病毒结构基因gag、pol和env的质粒进行直接转染。然后将这些细胞用含有目标基因的载体质粒转染。所得细胞释放反转录病毒载体进入培养基中。

用于ActRII多核苷酸的另一个靶向递送系统是胶体分散体系。胶体分散体系包括大分子复合物、纳米囊、微球、珠粒和基于脂质的体系，包括水包油乳液剂、微团(micelles)、混合微团(mixed micelles)和脂质体。本发明的一种优选胶体体系是脂质体。脂质体是人工膜囊泡，在体外和体内可用作递送载体。RNA、DNA和完整病毒粒均可包封在含水内腔中，并可以生物活性形式递送到细胞中(参见例如，Fraley等人,TrendsBiochem.Sci.,6:77,1981)。使用脂质体载体进行高效基因转移的方法是本领域已知的，参见例如，Mannino等人,Biotechniques,6:682,1988。脂质体的组成通常是磷脂的组合，通常与类固醇类(尤其是胆固醇)组合。还可使用其它磷脂或其它脂质。脂质体的物理性质取决于pH、离子强度和二价阳离子的存在。

可用于脂质体生产的脂质的实例包括磷脂酰化合物，诸如磷脂酰甘油、磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰乙醇胺、鞘脂、脑苷脂和神经节苷脂。说明性的磷脂包括卵磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱和二硬脂酰磷脂酰胆碱。脂质体的靶向还可能基于例如器官特异性、细胞特异性和细胞器特异性，并且是本领域已知的。

在某些实施方案中，所述ActRII信号转导抑制剂在药物组合物中是基本纯的。具体地说，药物组合物中至多20％、10％、5％、2.5％、1％、0.1％或至多0.05％的化合物是ActRII信号转导抑制剂和药学上可接受的载体除外的化合物。

在一个优选的实施方案中，所述药物组合物经配制用于皮下给药。

8.实施例

8.1实施例1

8.1.1 ActRIIA-Fc融合蛋白

提供具有通过最小接头与人或小鼠Fc结构域融合的人ActRIIA的胞外结构域的可溶性ActRIIA融合蛋白。构建体分别称为ActRIIA-hFc和ActRIIA-mFc。ActRIIA-hFc以SEQID NO:7提供。

ActRIIA-hFc和ActRIIA-mFc蛋白在CHO细胞系中表达。考虑了三种不同的前导序列：

(i)蜜蜂蜂毒肽(HBML):SEQ ID NO:8

(ii)组织纤溶酶原激活物(TPA):SEQ ID NO:9

(iii)天然ActRIIA:SEQ ID NO:10

所选择的形式使用TPA前导序列，并且具有SEQ ID NO:13所给出的下列未加工的氨基酸序列。该多肽由SEQ ID NO:14编码。

8.1.2 ActRIIB-Fc融合蛋白

与人Fc结构域融合的人ActRIIB的胞外结构域和激活素的晶体结构对配体结合中的胞外结构域的最后(C-末端)15个氨基酸(在本文称为“尾”)不显示任何作用。在晶体结构中该序列未能解析，表明了这些残基存在于一律不包在晶体的柔性环(flexible loop)中。Thompson等人EMBO J.2003Apr 1；22(7):1555-66。该序列在ActRIIB和ActRIIA之间也不太保守。因此，这些残基在基础或本底ActRIIB-Fc融合构建体中被省略。另外，本底形式中的64位被丙氨酸占据，这一般被视为“野生型”形式，虽然A64R等位基因天然存在。因此，本底ActRIIB-Fc融合物具有以SEQ ID NO:21公开的序列。

出乎意料的是，发现C-末端尾促进激活素和GDF-11结合，因此ActRIIB-Fc的优选形式具有序列SEQ ID NO:20。

可根据本文描述的方法使用的各种ActRIIB变异体描述于以WO2006/012627公布的国际专利申请(参见例如第59-60页)，通过引用以其整体结合到本文中。

8.2实施例2：在患有低危或中危-1((Int-1)-Risk)MDS或非增殖CMML和需要RBC输血的贫血症的受试者中，ActRIIA-hFc(SEQ ID NO:7)的开放标记、2期、剂量-探索研究

8.2.1引言

贫血症，是MDS的一种标志，对治疗具有挑战性，特别是在用红细胞生成-刺激剂(ESAs)治疗失败之后。ActRIIA-hFc(SEQ ID NO:7；“sotatercept”)是作用于晚期红细胞生成的一种激活素IIA型受体融合蛋白，从而增加成熟红细胞释放到循环中(Carrancio等人,Br J Haematol 2014；165:870-82)。用ActRIIA-hFc(SEQ ID NO:7)治疗受试者刺激红细胞生成并且在健康受试者中显著提高血红蛋白(Hb)水平(Sherman等人,J Clin Pharmacol2013；53:1121-30)，支持其临床开发用于患有更低危MDS的受试者的贫血症的治疗。

8.2.2材料与方法

本实施例的第一个目的是确定在患有贫血症和IPSS定义的低危或中危-1MDS或非增殖CMML(白细胞<13,000个/μL)的受试者中导致类红细胞血液学改善(HI-E；IWG 2006年修订版标准)的ActRIIA-hFc(SEQ ID NO:7)的安全性、耐受性和有效剂量。第二个目的包括RBC输血非依赖(RBC-TI)的时间大于或等于8周。合格的受试者患有贫血症(在12周内，在登记之前，大于或等于2个RBC单位输血需求，Hb小于或等于9.0g/dL)，对ESA(血清红细胞生成素[EPO]大于500mIU/mL)没有反应、缺乏反应或反应率低。关于本实施例中研究的受试者参见表1。受试者接受皮下ActRIIA-hFc(SEQ ID NO:7)，以0.1、0.3、0.5或1.0mg/kg的剂量水平，每3周一次。关于研究设计的概述参见图1。

8.2.3结果

总共研究了54例MDS受试者：7例、6例、21例和20例分别在ActRIIA-hFc(SEQ IDNO:7)0.1mg/kg、0.3mg/kg、0.5mg/kg和1.0mg/kg剂量组中。中位年龄是71岁(范围56–86岁)和从诊断起的中位时间是4年(范围0–31年)；多数受试者是男性(70％)。在治疗开始之前，在8周内，受试者接受了6个RBC单位的中位数(范围0–18)。在治疗开始之前，在8周内，四十五例受试者(83％)接受了大于或等于4个RBC单位(高输血负担；HTB)，和在治疗开始之前，在8周内，9例受试者(17％)接受了小于4个单位(低输血负担；LTB)。十九例受试者(35％)患有IPSS低危MDS，和34例受试者(63％)患有IPSS中危-1MDS；有1例患者丢失IPSS风险数据。五十一例受试者(94％)之前接受过ESA治疗，30例(56％)之前接受过低甲基化剂治疗，26例(48％)之前接受过来那度胺治疗，和26例(48％)之前接受过其它MDS治疗剂治疗；15例受试者(28％)的血清EPO>500mIU/mL。

其中有53受试者可用于有效性的评估，总体来说，在21例受试者(40％)中观察到HI-E：0例、4例(67％)、8例(40％)和9例(45％)受试者分别在ActRIIA-hFc(SEQ ID NO:7)0.1mg/kg、0.3mg/kg、0.5mg/kg和1.0mg/kg剂量组中。44例HTB受试者中有十九例有反应，大于或等于4个RBC单位/8周输血负担降低；输血反应的持续时间似乎是剂量依赖性的。参见图3：在用ActRIIA-hFc治疗之后实现了RBC-TI大于56天的一例示例性的HTB受试者。参见图4：证明在用ActRIIA-hFc(SEQ ID NO:7)治疗之后的HTB应答者中，输血负担应答的最大持续时间。五例HTB受试者实现了RBC-TI大于或等于8周，RBC-TI持续时间的范围为59–345+天。参见图5：证明在用ActRIIA-hFc(SEQ ID NO:7)治疗之后实现了RBC-TI至少56天的HTB受试者中，RBC-TI应答的最大持续时间。也参见表2。

实现RBC-TI大于或等于8周的HTB受试者的子集(subset)在用ActRIIA-hFc(SEQID NO:7)治疗之前具有增加的是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比。

9例LTB受试者中有八例显示Hb增加，不受输血影响，范围为1.3–3.8g/dL。其中，2例受试者具有Hb增加大于或等于1.5g/dL，持续了大于或等于8周。具有Hb为大于11.0g/dL的受试者对每个方案均为剂量延迟，这可能影响了Hb增加持续能力。在6例LTB受试者中实现了RBC-TI大于或等于8周。参见图6，证明在用ActRIIA-hFc(SEQ ID NO:7)治疗之后实现RBC-TI至少56天和至少1.5g/dL的平均Hb增加的LTB受试者的比例。参见图7，证明在用ActRIIA-hFc(SEQ ID NO:7)治疗之后实现RBC-TI至少56天和至少1.5g/dL的平均Hb增加的LTB受试者中，RBC-TI应答的最大持续时间。在具有基线血小板减少症的受试者和具有基线中性粒细胞减少症的受试者中分别见到了血小板和中性粒细胞水平的提高。

ActRIIA-hFc(SEQ ID NO:7)一般耐受良好。二十例受试者(37％)报告大于或等于1例怀疑的治疗相关的不良事件(AE)；疲乏(11％)、头痛(9.3％)、食欲降低(7.4％)和恶心(7.4％)是最常见的。

在中断治疗的35例受试者(65％)中，28例因缺乏治疗效果而中断，4例因AEs而中断。在导致中断的那些AEs中，3例被怀疑是治疗相关的：1例患有2级溶血性贫血的患者、1例患有3级高血压的患者和1例患有2级肌肉虚弱的患者分别在ActRIIA-hFc(SEQ ID NO:7)0.3mg/kg、0.5mg/kg和1.0mg/kg剂量组中。中断的其他原因是撤回知情同意书(n＝2；4％)和患者决定(n＝1；2％)。

8.2.4结论

ActRIIA-hFc(SEQ ID NO:7)在更低危MDS受试者中以被测试的剂量水平为耐受良好的，在该ESA-难治性、贫血、更低危MDS受试者的大型HTB群组中具有有希望的临床活性证据。此外，这些数据表明在用ActRII抑制剂(例如，ActRIIA-hFc(SEQ ID NO:7))治疗之前的受试者中有环形铁粒幼细胞的存在，可以是用于长期治疗、RBC输血非依赖和血红蛋白水平的长期增加的一个指标。

表1.受试者基线特征

^a0年表示自原始诊断起<1年；^b具有RBC输血负担≥4个单位/8周的受试者；^c具有RBC输血负担<4个单位/8周的受试者；^d非ESA、非低甲基化剂和非来那度胺治疗MDS；EPO，红细胞生成素；ESA，红细胞生成-刺激剂；Hb，血红蛋白；HTB，高输血负担；Int，中危；IPSS，国际预后评分系统；LTB，低输血负担；MDS，骨髓增生异常综合征；RBC，红细胞。

表2.在HTB受试者(n＝44)中的输血反应

8.3实施例3：在患有低危或中危-1MDS的受试者中，ActRIIB-hFc增加血红蛋白和降低输血负担：来自2期研究的初步结果

8.3.1引言

ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25；也称为luspatercept)，是一种含有修饰的激活素受体IIB型和IgG Fc的重组融合蛋白，已用于治疗由于无效红细胞生成所致的贫血症，诸如MDS。患有MDS的受试者经常具有升高的红细胞生成素(EPO)水平并且对红细胞生成-刺激剂(ESAs)可能是无反应的或难治性的。MDS受试者还一直显示在骨髓中具有增加的血清GDF11水平(Suragani R等人,Nature Medicine 2014)和增加的Smad 2/3信号转导(Zhou L等人,Blood 2008)。ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)与TGF-β超家族中的配体(包括GDF11)结合，抑制Smad 2/3信号转导并且通过与ESAs截然不同的机制促进晚期类红细胞分化。在MDS的小鼠模型中，mActRIIB-Fc(ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)的鼠形式)降低Smad 2信号转导，增加血红蛋白(Hb)水平和减少骨髓类红细胞增生(Suragani R等人,Nature Medicine2014)。在健康志愿者研究中，ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)是耐受良好的并且提高Hb水平(Attie K等人,Am J Hematol 2014)。

8.3.2材料与方法

本实施例采用剂量-探索数据评估ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)对患有低危或中危-1MDS的受试者的贫血症(参见表3和表4)的影响，该受试者具有高输血负担(HTB，定义为大于或等于4个单位RBC/8周，在基线之前)或者低输血负担(LTB，定义为小于4个单位RBC/8周，在基线之前)。结果包括类红细胞应答(或者在LTB受试者中Hb增加或者在HTB受试者中输血负担降低)、安全性、耐受能力、PK和PD生物标志物。

纳入标准包括低危或中危-1MDS，年龄至少18周岁，贫血症(定义为或为HTB受试者或在LTB受试者中具有基线Hb小于10.0g/dL)，EPO大于500U/L或对ESAs为无反应/难治性的，之前未接受阿扎胞苷或地西他滨治疗，并且目前未接受ESA、G-CSF、GM-CSF或来那度胺治疗。在剂量递增阶段，ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)经皮下(SC)注射给予每3周一次，在7个序贯群组(n＝3-6)中，以0.125、0.25、0.5、0.75、1.0、1.33和1.75mg/kg的剂量水平，最多5个剂量，进行3个月随访。计划一个扩大群组(n＝30)，完成本研究的所有受试者可登记后参加一个为期12个月的延期研究。参见图8，关于实验设计和给药方案的描述。

8.3.3结果

数据可获自26例受试者(7例LTB/19例HTB)。中位年龄是71岁(范围：27-88岁)，50％是女性，54％之前接受过EPO疗法和15％之前接受过来那度胺。69％是WHO亚型RCMD，剩余的受试者是del(5q)、RARS或RAEB-1。对于LTB受试者(n＝7)，平均(SD)基线Hb是9.1(0.4)g/dL。治疗前8周内输血的平均(SD)单位RBC是0.9(1.1)单位(对于LTB受试者)和6.3(2.4)单位(对于HTB受试者)。参见表3和表4。

在8周内，与基线相比，7例LTB受试者中有两例具有增加，平均Hb≥1.5g/dL。在LTB受试者中，平均最大Hb增加在0.125(n＝1)、0.25(n＝1)、0.75(n＝3)和1.75(n＝2)mg/kg剂量组中分别是0.8、1.0、2.2和2.7g/dL。参见图9，证明在用ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)治疗之后，在LTB受试者中的最大血红蛋白增加。给予ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)的LTB受试者表现出增加的网织红细胞和血红蛋白水平。参见图10-12和表5。在本研究期间，7例LTB受试者中有六例实现了RBC输血非依赖(RBC-TI)达≥8周。

与治疗前8周相比，在治疗期的期间，在8周间隔内输血的RBC单位中，19例HTB受试者中有六例具有≥4个单位或≥50％降低。在该研究期间(范围71-152天)，这6例受试者中有五例实现了RBC-TI≥8周。在给予ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)的HTB受试者中观察到血红蛋白水平的提高。参见例如，图13。在有些受试者中观察到在研究药物给药后，中性粒细胞计数的增加。在用ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)治疗所述受试者之前，实现RBC-TI大于或等于8周的一组受试者，具有是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比增加。参见表7。

ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)一般耐受良好。最常遇到的不良事件(不管因果关系)是：腹泻(n＝4,1/2级)、骨痛、疲乏、肌肉痉挛、肌痛和和鼻咽炎(各n＝3,1/2级)。

表3.基线特征

表4.在用指定剂量的ActRIIB(SEQ ID NO:25)治疗的受试者中HI-E反应率的有效性汇总

表5.LTB受试者中的血红蛋白反应

表6.在用指定剂量的ActRIIB(SEQ ID NO:25)治疗的HTB受试者中的输血反应

表7.通过环形铁粒幼细胞(RS)形态学和突变分析的IWG反应率

^a群组4：0.75mg/kg(n＝3)；群组5：1.0mg/kg(n＝3)；群组6：1.33mg/kg(n＝6)；群组7：1.75mg/kg(n＝2)；^b包括3例变成了输血非依赖的受试者。

8.3.4结论

基于低危或中危-1MDS受试者中的初步数据，每3周皮下(SC)给予的ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)(最多5个剂量)提高了Hb水平或减少了输血需求，具有优异的安全性谱。这些数据强烈地支持用ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)对患有MDS的受试者较长期治疗的进一步评估。

8.4实施例4：在患有低危或中危-1MDS的受试者中，ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)

增加血红蛋白和降低输血负担：来自2期PACE-MDS研究的初步结果

8.4.1引言

ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)是目前正在研究用于治疗具有无效红细胞生成的贫血症的一种融合蛋白(修饰的激活素受体IIB/IgG Fc)。MDS受试者在骨髓中具有升高的GDF11水平(Suragani,Nat Med 2014)和异常的Smad2,3信号转导。ActRIIB-hFc(SEQ IDNO:25)结合TGF-β超家族配体(包括GDF11、激活素B和BMP6)，抑制Smad2,3信号转导并且促进晚期类红细胞分化，与ESAs截然不同。在健康志愿者研究中，ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)是耐受良好的并且提高Hb水平(Attie,Am J Hematol 2014)。

8.4.2目的

提供给本实施例的数据是来自正在进行的2期、多中心、开放标记、剂量-探索研究以评估ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)对患有输血依赖(TD)或输血非依赖(NTD)低危或中危-1MDS的受试者的贫血症的有效性。研究成果包括类红细胞应答、安全性、耐受能力、药代动力学生物标志物和药效动力学生物标志物。在低输血负担(LTB)受试者中，类红细胞应答被定义为血红蛋白浓度的增加。在高输血负担(HTB)受试者中，类红细胞应答被定义为降低的输血负担。

8.4.3方法

纳入标准包括低危或中危-1MDS，年龄≥18周岁，患有如下定义的贫血症：Hb<10.0g/dL(LTB，定义为<4个单位RBC/8周，在基线之前)或≥4个单位RBC/8周，在基线之前(HTB)，EPO>500U/L或对于ESAs为无反应/难治性的，之前未使用阿扎胞苷或地西他滨治疗，和目前未使用ESA、G-CSF、GM-CSF或来那度胺治疗。ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)经皮下(SC)注射给予每3周一次，在序贯群组(各n＝3-6)中，以范围为0.125至1.75mg/kg的剂量水平，最多5个剂量，进行3个月随访。正在进行一个扩大群组(n＝30)，其中个体受试者剂量滴度至应答被允许。完成本研究的受试者可登记后参加一个为期12个月的延期研究。

8.4.4结果

本实施例提供了来自参加II期研究的58例受试者的44例受试者(19例女性，25例男性；15例LTB受试者，29例HTB受试者)的初步安全性和有效性数据。所述受试者的中位年龄是71岁。61％的受试者之前已使用EPO疗法。21％的受试者之前已使用来那度胺疗法。73％的受试者具有RARS或RCMD-RS。80％的受试者在骨髓中具有大于15％环形铁粒幼细胞。

用介于0.75mg/kg和1.75mg/kg之间的ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)治疗的LTB受试者(n＝13)具有77％反应率(对于主要终点)(Hb增加≥1.5g/dL，持续≥2周)和62％IWGHI-E(基于国际工作组的类红细胞血液学改善)反应率(Hb增加≥1.5g/dL，持续≥8周)。血红蛋白中的平均(标准偏差)最大变化在较高剂量组中为2.7(标准偏差：1.1)g/dL，相比之下，在较低剂量组中为0.9(标准偏差：0.1)g/dL。

用介于0.75mg/kg和1.75mg/kg之间(n＝13)的ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)治疗的HTB受试者具有50％HI-E反应率(≥4个RBC单位/8周降低)。对于具有≥15％环形铁粒幼细胞的受试者(n＝30)和对于具有SF3B1突变的受试者(n＝10)，HI-E反应率分别为63％和80％。ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)一般耐受良好。最常遇到的不良事件(不管因果关系)是腹泻、鼻咽炎、肌痛、骨痛、支气管炎、头痛和肌肉痉挛。

8.4.5结论

基于低危/中危-1MDS受试者中的初步数据，ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)以治疗剂量水平治疗3个月，导致在54％的受试者中产生HI-E应答，Hb水平提高和/或输血需求减少，并具有优异的安全性谱。在具有环形铁粒幼细胞和SF3B1突变的受试者中观察到较高的反应率。这些数据强有力地支持利用环形铁粒幼细胞水平和SF3B1突变普遍性作为患有MDS的受试者中用ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)进行有效治疗的生物标志物。

8.5实施例5：在患有低危或中危-1MDS或非增殖CMML和需要RBC输血的贫血症的受试者中，ActRIIA-hFc(SEQ ID NO:7)的开放标记、2期、剂量-探索研究

8.5.1引言

参见实施例2(第8.2节)的引言(第8.2.1节)和材料与方法(第8.2.2节)。本实施例给出来自实施例2(第8.2节)的其他数据，这些数据是在稍晚时候在2期研究中所获得的。

8.5.2结果

总共有59例MDS受试者用0.1mg/kg、0.3mg/kg、0.5mg/kg、1.0mg/kg或2.0mg/kg的ActRIIA-hFc(SEQ ID NO:7)进行了治疗。表8提供各治疗组的受试者的基线特征。

其中有53例受试者可进行有效性评估，在总共23例受试者(43％)中观察到HI-E：在ActRIIA-hFc(SEQ ID NO:7)0.1、0.3、0.5和1.0mg/kg剂量组中分别为0、4例(67％)、9例(45％)和10例(50％)受试者。此外，HTB受试者用区区0.3mg/kg的ActRIIA-hFc(SEQ ID NO:7)治疗导致大于或等于4个RBC单位/8周输血负担降低(参见表9)。输血反应的持续时间似乎是剂量依赖性的。进一步，在45例可评估的HTB受试者中，6例(13)实现了RBC-TI持续至少8周(参见表9)。参见图13，在开始用剂量为1.0mg/kg的ActRIIA-hFc(SEQ ID NO:7)治疗之后实现了RBC-TI至少337天的一例示例性的HTB受试者。

表8.受试者的基线特征

^a0岁表示自原始诊断起<1年；^b具有RBC输血负担≥4个单位/8周的受试者；^c具有RBC输血负担<4个单位/8周的受试者；^d非ESA、非低甲基化剂和非来那度胺治疗MDS；EPO，红细胞生成素；ESA，红细胞生成-刺激剂；Hb，血红蛋白；HTB，高输血负担；Int，中危；IPSS，国际预后评分系统；LTB，低输血负担；MDS，骨髓增生异常综合征；RBC，红细胞。

表9.HTB受试者(n＝45)中的输血反应

另外，在用ActRIIA-hFc(SEQ ID NO:7)治疗的8例LTB受试者中，5例(63％)在任意8周无输血周期内实现了RBC-TI与平均Hb增加为至少1.5g/dL。具体地说，33％的用0.5mg/kg的ActRIIA-hFc(SEQ ID NO:7)治疗的LTB受试者和80％的用1.0mg/kg的ActRIIA-hFc(SEQ ID NO:7)治疗的LTB受试者在任意8周无输血周期内实现了RBC-TI与平均Hb增加为至少1.5g/dL。在用ActRIIA-hFc(SEQ ID NO:7)治疗的LTB受试者中，最大平均Hb增加范围为介于1.45g/dL和4.44g/dL之间。在用ActRIIA-hFc(SEQ ID NO:7)治疗的LTB受试者中，RBC-TI的持续时间范围为76至472天。具有Hb水平为大于11.0g/dL的LTB受试者出现剂量延迟，这可能影响了对Hb水平提高的持续时间的评价。参见图14，在开始用剂量为1.0mg/kg的ActRIIA-hFc(SEQ ID NO:7)治疗之后实现了RBC-TI和血红蛋白水平持续提高至少358天的一例示例性的LTB受试者。

此外，评估了治疗效果和基线时环形铁粒幼细胞(RS)的存在之间的关系(参见表10)。在50％的RS-阳性受试者中实现了HI-E。相比之下，仅在10％的RS-阴性受试者中实现了HI-E。

表10.用ActRIIA-hFc(SEQ ID NO:7)治疗的受试者中的环形铁粒幼细胞的状态。

^aRS状态是来自所能获悉的基线和来自别的方式的基线后；RS状态对于16例受试者是未知的；^b>15％RS；^c≤15％RS

ActRIIA-hFc(SEQ ID NO:7)一般耐受良好。参见表11。四例受试者因怀疑有治疗相关的不良事件而中断治疗：受试者A(0.3mg/kg剂量组)，2级溶血性贫血；受试者B(0.5mg/kg剂量组)，3级高血压；受试者C(1.0mg/kg剂量组)，2级肌肉虚弱；和受试者D(2.0mg/kg剂量组)，2级升高的血压伴有2级腹泻。

8.5.3结论

ActRIIA-hFc(SEQ ID NO:7)在更低危MDS受试者中以被测试的剂量水平为耐受良好的，在这个ESA-难治性、贫血、更低危MDS受试者的大型HTB群组中获得了有希望的临床活性证据。进一步，这些数据表明在用ActRII信号转导抑制剂(例如，ActRIIA-hFc(SEQ IDNO:7))治疗之前的受试者中，环形铁粒幼细胞的存在可以是RBC输血非依赖的长期治疗、血红蛋白水平的长期增加和治疗效果的提高的一个指标。

表11.用指定剂量的ActRIIA-hFc(SEQ ID NO:7)治疗的受试者的不良事件。

8.6实施例6：在患有低危或中危-1MDS的受试者中，ActRIIB-hFc增加血红蛋白和降低输血负担：来自2期研究的初步结果

8.6.1引言

参见实施例3(第8.3节)的引言(第8.3.1节)和材料与方法(第8.3.2节)。本实施例给出来自实施例3(第8.3节)的其他数据，这些数据是在稍晚时候在2期研究中所获得的。

8.6.2结果

数据可获自44例受试者(15例LTB/29例HTB)。表12提供本实施例中所研究的受试者的基线特征。

在用ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)治疗的受试者中评估了类红细胞应答。对于LTB受试者，主要终点是血红蛋白增加为至少1.5g/dL，持续至少2周。对于HTB受试者，主要终点是在8周内RBC输血有至少4个单位或至少50％降低。在给予较低剂量(0.125-0.5mg/kg的ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25))的受试者中有33％(3/9)达到了主要终点，而给予较高剂量(0.75-1.75mg/kg的ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25))的受试者中有63％(22/35)达到了主要终点。

另外，评估了IWG HI-E。对于LTB受试者，IWG HI-E是血红蛋白增加为至少1.5g/dL，持续至少8周。对于HTB受试者，IWG HI-E是在8周内RBC输血有至少4个单位降低。给予较低剂量(0.125-0.5mg/kg的ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25))的受试者中有22％(2/9)实现了IWG HI-E，而给予较高剂量(0.75-1.75mg/kg的ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25))的受试者中有54％(19/35)实现了IWG HI-E。

环形铁粒幼细胞是异常的成红细胞。此外，与MDS相关的某些体细胞突变引起环形铁粒幼细胞形成和无效红细胞生成。剪接因子3B1(SF3B1)中的显性突变与环形铁粒幼细胞的形成相关。如本文所用的，“RS+”是指至少15％环形铁粒幼细胞。因此，在用较高剂量(0.75mg/kg-1.75mg/kg)的ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)治疗的受试者中评估了环形铁粒幼细胞的存在、体细胞突变和无效红细胞生成和类红细胞应答和输血非依赖之间的关系(参见表13和表14)。用ActRIIB-hFc治疗的受试者实现了IWG HI-E和输血非依赖(参见表13、表14和图16)。这些数据表明当受试者是RS+和/或具有SF3B1突变时，在用ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)治疗的受试者中有增加的类红细胞应答。

表12.用ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)治疗的受试者的基线特征

表13.RS+和SF3B1突变阳性受试者中的类红细胞应答。对于LTB受试者，IWG HI-E是血红蛋白增加为至少1.5g/dL，持续至少8周。对于HTB受试者，IWG HI-E是在8周内RBC输血有至少4个单位降低。

患者群体	IWG HI-E
		所有患者(N＝35)	19/35(54％)
RS+患者(N＝30)	19/30(63％)
		RS-患者(N＝5)	0/5(0％)
SF3B1+患者(N＝22)	16/22(73％)
		SF3B1-患者(N＝13)	3/13(23％)

表14.RS+和SF3B1突变阳性受试者中的输血非依赖。输血非依赖是指在治疗时至少8周不需要进行RBC输血。

患者群体	输血非依赖
		所有患者(N＝28)	10/28 36％)
RS+患者(N＝23)	9/23(39％)
		RS-患者(N＝4)	1/4(25％)
SF3B1+患者(N＝17)	7/17(41％)
		SF3B1-患者(N＝11)	3/11(27％)

8.6.3结论

将ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)每三周皮下给予MDS受试者一般是安全的和耐受良好的。在用剂量为至少0.75mg/kg的ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)治疗的受试者中有54％实现了类红细胞应答(IWG HI-E)。进一步，在具有环形铁粒幼细胞或SF3B1中的突变的受试者中见到了较高的类红细胞应答率。另外，在用剂量为至少0.75mg/kg的ActRIIB-hFc(SEQID NO:25)治疗的受试者中有36％实现了输血非依赖。

8.7实施例7：在患有更低危MDS和需要输血的贫血症的患者中，ActRIIA-hFC(SEQID NO:7)的2期、剂量-探索研究

进一步评估了治疗效果和在基线时环形铁粒幼细胞(RS)的存在之间的关系(参见表15)。

在任意8周周期内RBC-TI的实现(具有平均Hb增加≥1.5g/dL，对于LTB患者)示于图17。

表15.用ActRIIA-hFC融合物(SEQ ID NO:7)治疗的受试者中的类红细胞应答:铁粒幼细胞性MDS vs非铁粒幼细胞性MDS。在sotatercept 1.0mg/kg剂量组中，在64％铁粒幼细胞患者和20％非铁粒幼细胞患者中实现的HI-E(卡方检验(Chi-square test)P＝0.11)。

^aRS状态是是来自所能获悉的基线；RS状态对于6例患者是未知的。

8.8实施例8：在患有低危或中危-1MDS的受试者中，ActRIIB-hFc增加血红蛋白和降低输血负担：来自2期研究的初步结果(续)

8.8.1引言

8.8.2结果

总共研究了49例MDS受试者。49例MDS受试者中有27例经登记参加了一个为期3个月的ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)剂量递增研究(0.125mg/kg–1.75mg/kg)，有22例受试者经登记参加了一个后续延期研究，如表16所示。表17提供本实施例中所研究的受试者的基线特征。

3个月剂量递增研究

在用ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)治疗的受试者中评估了类红细胞应答。参见表18。对于LTB受试者，主要终点是血红蛋白增加为至少1.5g/dL，持续至少2周。对于HTB受试者，主要终点是在8周内RBC输血有至少4个单位或至少50％降低。给予较低剂量(0.125-0.5mg/kg的ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25))的受试者中有33％(3/9)达到了主要终点，而给予较高剂量(0.75-1.75mg/kg的ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25))的受试者中有58％(23/40)达到了主要终点。

另外，评估了IWG HI-E。参见表18。对于LTB受试者，所述IWG HI-E是血红蛋白增加为至少1.5g/dL，持续至少8周。对于HTB受试者，所述IWG HI-E是在8周内RBC输血有至少4个单位降低。给予较低剂量(0.125-0.5mg/kg的ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25))的受试者有22％(2/9)实现了IWG HI-E，而给予较高剂量(0.75-1.75mg/kg的ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25))的受试者有48％(19/40)实现了IWG HI-E。

此外，评估了输血非依赖性。参见表18。对于在ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)疗法之前接受至少两个RBC单位的受试者，输血非依赖定义为当接受ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)治疗的同时实现了至少8周不需要进行输血。给予较低剂量(0.125-0.5mg/kg的ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25))的受试者有14％(1/7)实现了输血非依赖性，而给予较高剂量(0.75-1.75mg/kg的ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25))的受试者有37％(11/30)实现了输血非依赖性。4/6LTB受试者和7/24HTB受试者实现了输血非依赖性。11例输血非依赖的患者中有10例在ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)治疗的前6周内开始发作。

在用较高剂量(0.75mg/kg-1.75mg/kg)的ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)治疗的受试者中评估了环形铁粒幼细胞的存在、体细胞突变和无效红细胞生成和类红细胞应答和输血非依赖之间的关系。参见表19。在较高剂量组中所有受试者的19/40(48％)实现了IWGHI-E。19/35(54％)的环形铁粒幼细胞(RS)阳性受试者(定义为在其骨髓中具有至少15％类红细胞前体)实现了IWG HI-E，并且0/4(0％)的RS阴性受试者实现了IWG HI-E。具有EPO水平低于200mU/mL的14/23(61％)RS阳性受试者实现了IWG HI-E，并且具有EPO水平低于200mU/mL的5/12(42％)RS阳性受试者实现了IWG HI-E。16/26(62％)的携带SF3B1突变的受试者和3/13(23％)的不携带SF3B1突变的受试者实现了IWG HI-E。

总之，本实施例提供的结果证明ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)治疗导致强有力的类红细胞应答和输血非依赖性，尤其是在较高剂量组中的受试者中。另外，在RS+阳性和SF3B1突变阳性受试者中发现富集的类红细胞应答。

ActRIIA-hFc(SEQ ID NO:7)一般耐受良好。参见表20。多数不良事件(AE)是1级或2级。观察到两种可能相关的严重不良事件(SAE)：3级肌肉疼痛(在第90天开始发作)和一般健康状况的3级恶化(在第44天开始发作、第66天复发、无关的)。观察到原始细胞的细胞计数的一种可能相关的不严重的3级AE。

表16.用ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)治疗的受试者的用药时间表

^a起始剂量水平；在8例受试者中增加至1.33mg/kg和在2例受试者中增加至1.75mg/kg的剂量水平。

表17.用ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)治疗的受试者的基线特征

参数	N＝44
		年龄,岁,中位(范围)	71(27-88)
性别,男性(％)	27(55％)
		之前接受过ESA治疗,n(％)	30(61％)
之前接受过来那度胺治疗,n(％)	9(18％)
		自诊断起的时间,年,中位(范围)	2.8(0.2-13.6)
低输血负担(LTB)	N＝17(35％)
		血红蛋白,g/dL,中位(范围)	8.7(6.8-10.1)
单位RBC/8周,中位(范围)	2(2-2)(n＝6)
		高输血负担(HTB)	N＝32(65％)
单位RBC/8周,中位(范围)	6(4-14)(n＝32)
		IPSS	N＝49；n(％)
低危	27(55％)
		中危-1	20(41％)
中危-2	2(4％)
		IPSS-R	N＝44；n(％)
极低危	2(4.5％)
		低危	30(61％)
中危	14(29％)
		高危	3(6％)
环形铁粒幼细胞(RS)	N＝48；n(％)
		RS+	40(83％)
SF3B1+(突变存在)	29(73％)
		SF3B1-(突变不存在)	11(27％)
RS-	8(17％)

表18.在用ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)治疗的受试者中的类红细胞应答和输血非依赖

*这11例输血非依赖的患者中有10例在ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)治疗的前6周内具有发作。

表19.在用ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)治疗的受试者中的类红细胞应答和输血非依赖

表20.在用ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)治疗的≥4例受试者中报告的不良事件(所有级别)，不管因果关系：

延期研究

完成3个月剂量递增研究的受试者有资格登记后参加一个后续的为期12个月的延期研究。对于其治疗暂停超过3个月的受试者，ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)的起始剂量水平为1.0mg/kg。其ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)治疗未间断的受试者以与其在3个月治疗规程中最后剂量相同的剂量水平继续他们的治疗。

总共58例受试者登记后参加了3个月治疗研究。其中，22例受试者登记后参加了一个12个月延期研究，9例低输血负担患者和13例高输血负担患者。在延期研究中，17/22受试者继续他们未中断的ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)治疗，5/22受试者在停药>3个月之后进入。

对于9例低输血负担患者，平均血红蛋白增加在1个月时大约为2g/dL，增加至介于2.5g/dL和3.0g/dL之间，并且维持6个月周期，为此数据可获得。

对于13例高输血负担患者，43％实现了输血非依赖，其中几例患者维持这种输血非依赖超过6个月，最长不间断输血非依赖的患者差不多8个月。所有的这些患者仍留在研究中。

图18显示一例示例性受试者的结果。在初始3个月治疗研究中，RS-阳性HTB受试者以0.75mg/kg ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)的剂量进行治疗，并且在11个月ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)治疗中断之后经登记参加了该12个月延期研究，在此期间所述受试者接受了EPO。

在LTB受试者中观察到持久的血红蛋白反应。8/9受试者实现了IWG HI-E。图19显示一例示例性受试者的血红蛋白反应。

在12个月延期研究中，受试者显示持久的输血非依赖性反应。图20说明6例受试者的结果。5例受试者显示在2-7个月之后继续输血非依赖性反应，尽管以1.0mg/kg(4例受试者)和1.75mg/kg(1例受试者)的剂量接受ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)治疗。一例受试者(图20中的最后一排)接受了两个剂量滴度从1.0mg/kg到1.33mg/kg和1.75mg/kg。这后一例受试者经历了输血非依赖间歇地达约2个月并且继续以实现IWG HI-E应答。

结论是，本实施例提供的结果证明：用ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)治疗的较低危RS-阳性MDS受试者证明强有力的血液学改善，如果以≥0.75mg/kg的剂量治疗尤其如此。ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)治疗一般耐受良好。用ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)较长期治疗证明血红蛋白水平持续增加并且维持输血非依赖。

8.9实施例9：ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)治疗IPSS-R极低危、低危或中危MDS所致的贫血症的III期研究

本实施例提供3期、双盲、安慰剂对照、多中心、随机化研究的概述以确定ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)用于治疗需要RBC输血的具有环形铁粒幼细胞(至少15％的成红细胞是环形铁粒幼细胞)的受试者中因IPSS-R极低危、低危或中危MDS所致的贫血症的有效性和安全性。

贫血症被认为是在患有骨髓增生异常综合征的患者中最普遍的血细胞减少症之一，这一统称用于描述与红细胞、白细胞和/或血小板的无效产生相关的紊乱。在从轻微(无症状)到严重的严重程度的范围内，贫血症可导致患者需要RBC输血，而RBC输血可进一步导致因铁过载所致的并发症。本研究的目的是评价在归类为IPSS-R极低危、低危或中危MDS、具有环形铁粒幼细胞存在并且需要恒定的RBC输血的贫血患者中，ActRIIB-hFc(SEQ IDNO:25)相对于安慰剂的安全性和有效性。该研究的设计将允许患者的初始随机化的周期到或者ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)臂或者安慰剂臂，接着是双盲治疗期，然后是MDS疾病评价访问。对于根据研究调查者通过这种疾病评价访问判断而确定正在经历临床获益的那些患者，他们将被许可进入研究的双盲延期阶段。一旦患有因研究治疗而中断，他们将进入治疗后随访期。

8.9.1研究设计

受试者给予1.0mg/kg的ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)的初始剂量，皮下，每三周一次。对照受试者将给予安慰剂，皮下，每三周一次。

(a)纳入标准

对于参与本研究的受试者，纳入标准包括：(1)受试者是年龄≥18周岁，能够独立签署知情同意书；(2)受试者患有确诊的MDS，满足国际预后评分系统-修订版(IPSS-R)分类为极低危、低危或中危疾病，并且具有：(a)骨髓中有大于15％的类红细胞前体是环形铁粒幼细胞，和(b)骨髓中原始细胞少于5％；(3)在8周周期内，受试者需要红细胞输血>2个单位；(4)美国东部肿瘤协作组(Eastern Cooperative Oncology Group,ECOG)体力状态评分为0、1分或2分；(5)受试者对于之前ESA治疗是难治性的/不耐受的/无资格的；对之前ESA-治疗为难治性的要求有对之前接受过含有ESA的方案(或者作为单一药剂或联合药物(例如，联合G-CSF))没有反应或具有不再被维持的反应的证明文件；该ESA方案必须一直是或(a)大于40,000IU/周的重组人红细胞生成素，至少8个剂量，或等同方案；或(b)大于500μg的达贝泊汀α(darbepoetin alpha)，每三周一次，至少4个剂量，或等同方案；对之前ESA-治疗为不耐受的要求有中断之前接受过含有ESA的方案(或者作为单一药剂或联合药物(例如，联合G-CSF))的证明文件，在不耐受或不良事件所致的引进之后的任何时间；ESA-无资格的要求对ESA的反应率低，基于对先前用ESA治疗的受试者为大于200U/L的内源性血清红细胞生成素水平。

(b)排除标准

以下任何一种情况的存在将排除受试者经登记参加研究：(1)之前接受过疾病缓解剂的疗法(例如，免疫调节药物、低甲基化剂或免疫抑制药物)或用于基础MDS疾病的实验药物；(2)与del 5q细胞遗传学异常相关的MDS；(3)继发性MDS，即已知由化学损伤或由针对其它疾病的化疗和/或辐射治疗引起的MDS；(4)已知由铁、维生素B12或叶酸缺乏所致的临床上显著性贫血症，或自身免疫或遗传性溶血性贫血，或胃肠出血；铁缺乏症将通过骨髓穿刺液对铁染色来确定，计算的转铁蛋白饱和度(铁/总铁结合能力)≤20％或血清铁蛋白≤15μg/L；(6)之前接受过同种异体或自体干细胞移植；(7)已知的急性髓细胞样白血病(Acute myeloid leukemia,AML)诊疗史；(8)在随机化之前5周内使用过以下疗法中的任一种：抗癌细胞毒化疗剂或治疗、皮质类固醇(对于MDS除外的医学病症，除了在随机化之前≥1周使用稳定或减少剂量的受试者以外)、铁螯合剂(除了在随机化之前至少8周使用稳定或减少剂量的受试者以外)、其它RBC造血生长因子(例如，白介素-3)；(9)之前还有MDS除外的恶性肿瘤病史，除非受试者已经无疾病≥5年；具有以下病史/伴随病症的受试者是被允许的：皮肤的基底或鳞状细胞癌、子宫颈的原位癌、乳房的原位癌、前列腺癌的偶然发生的组织学检查发现(T1a或T1b，应用肿瘤、结节、肿瘤转移临床分期系统)；或(10)在随机化之前8周内做了大手术；受试者必须在随机化之前做过的任何先前手术是已经完全恢复。

(c)成果测量

本研究的主要成果测量是测定给予ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)且在任何连续的56天周期是RBC输血非依赖(即，不需要RBC输血)的受试者的比例。

次要成果测量包括测定给予ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)且在ActRIIB-hFc(SEQID NO:25)给药之后任何连续的84天周期具有RBC输血非依赖(即，不需要RBC输血)的受试者的比例。也测定了给予ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)且在ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)给药之后16周周期内输血的RBC单位数减少的受试者的比例。此外，也将测定给予ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)的受试者中RBC输血非依赖的最大持续时间。最后，也将测定给予ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)以达到RBC输血非依赖的受试者所需要的时间；至RBC输血非依赖的时间定义为在随机化和首次观察到输血非依赖的日期之间的时间(例如，无需任何RBC输血的56天的第一天)。

也将测定ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)给药之后任何连续的56天周期内，给予ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)且实现修订的类红细胞血液学改善的受试者的比例。在某些方面，所述类红细胞血液学改善如IWG所定义。在某些方面，所述类红细胞血液学改善如修订的2006IWG所定义。在某些方面，对于低输血负担患者，所述类红细胞血液学改善是在患者血红蛋白浓度增加至少1.5g/dL持续至少8周。在某些方面，对于高输血负担患者，所述类红细胞血液学改善是RBC输血在8周内减少至少4个单位。

将测定在不存在RBC输血的任何连续的56天周期内，给予ActRIIB-hFc(SEQ IDNO:25)且实现血红蛋白增加至少1.0g/dL(与将ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)给予受试者之前，受试者的血红蛋白浓度相比)的受试者的比例。

将测定给予ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)的受试者的血清铁蛋白水平与ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)给药之前的血清铁蛋白水平相比较的平均减少。协方差分析(ANCOVA)将用于比较各组之间的治疗差异，其中采用分层因素和基线(ActRIIB-hFC(SEQ ID NO:25)给药前)血清铁蛋白值作为协变量。

将测定给予ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)的受试者的铁螯合疗法使用与ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25给药之前的铁螯合疗法使用相比较的平均减少。对于各受试者，计算每日铁螯合疗法剂量的变化作为基线后平均日剂量和基线平均日剂量之差。协方差分析(ANCOVA)将用于比较各组之间的治疗差异，其中采用分层因素和基线铁螯合疗法值作为协变量。

也将测定给予ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)且在ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)给药之后任何连续的56天周期内实现中性粒细胞血液学改善的受试者的比例。在某些方面，所述中性粒细胞血液学改善如IWG所定义。在某些方面，所述中性粒细胞血液学改善是在将ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)给予受试者之后，受试者在连续56天的周期内中性粒细胞增加至少100％和大于500/uL。

也将测定进展至急性髓细胞样白血病的受试者的比例。

也将采用欧洲癌症研究与治疗组织研制的生活质量调查问卷(The EuropeanOrganization for Research and Treatment of Cancer Quality of LifeQuestionnaire)并进行评估。

不良事件、总体生存期、群体药代动力学和不良事件也将进行评估。

9.序列的描述

表21.序列信息

10.等同实施方案

虽然参照其具体的实施方案详细描述了本发明，但是应当理解，在功能上等同的变化是在本发明的范围之内。实际上，根据前面的描述和附图，除本文所示和描述的修改以外，本发明的各种修改对本领域技术人员而言将变得显而易见。这类修改意欲落入随附权利要求书的范围内。本领域技术人员将会认识到，或者只采用常规实验就能够确定本文所述发明描述的具体实施方案的许多等同内容。随附权利要求书意欲包括这样的等同内容。

本说明书提及的所有出版物、专利和专利申请都通过引用结合到本说明书中，其程度与每个单独的出版物、专利或专利申请具体而单独指明通过引用以其整体结合到本文中一样。

序列表

<110> 细胞基因公司

埃克赛勒隆制药公司

<120> 激活素-ACTRII拮抗剂及用于治疗贫血症的用途

<130> 12827-978-228

<140> To be assigned

<141> On even date herewith

<150> 62/086,977

<151> 2014-12-03

<150> 62/088,478

<151> 2014-12-05

<150> 62/153,872

<151> 2015-04-28

<150> 62/173,782

<151> 2015-06-10

<150> 62/218,728

<151> 2015-09-15

<160> 47

<170> FastSEQ for Windows Version 4.0

<210> 1

<211> 513

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> 人ActRIIA前体多肽

<400> 1

Met Gly Ala Ala Ala Lys Leu Ala Phe Ala Val Phe Leu Ile Ser Cys

1 5 10 15

Ser Ser Gly Ala Ile Leu Gly Arg Ser Glu Thr Gln Glu Cys Leu Phe

20 25 30

Phe Asn Ala Asn Trp Glu Lys Asp Arg Thr Asn Gln Thr Gly Val Glu

35 40 45

Pro Cys Tyr Gly Asp Lys Asp Lys Arg Arg His Cys Phe Ala Thr Trp

50 55 60

Lys Asn Ile Ser Gly Ser Ile Glu Ile Val Lys Gln Gly Cys Trp Leu

65 70 75 80

Asp Asp Ile Asn Cys Tyr Asp Arg Thr Asp Cys Val Glu Lys Lys Asp

85 90 95

Ser Pro Glu Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Met Cys Asn Glu

100 105 110

Lys Phe Ser Tyr Phe Pro Glu Met Glu Val Thr Gln Pro Thr Ser Asn

115 120 125

Pro Val Thr Pro Lys Pro Pro Tyr Tyr Asn Ile Leu Leu Tyr Ser Leu

130 135 140

Val Pro Leu Met Leu Ile Ala Gly Ile Val Ile Cys Ala Phe Trp Val

145 150 155 160

Tyr Arg His His Lys Met Ala Tyr Pro Pro Val Leu Val Pro Thr Gln

165 170 175

Asp Pro Gly Pro Pro Pro Pro Ser Pro Leu Leu Gly Leu Lys Pro Leu

180 185 190

Gln Leu Leu Glu Val Lys Ala Arg Gly Arg Phe Gly Cys Val Trp Lys

195 200 205

Ala Gln Leu Leu Asn Glu Tyr Val Ala Val Lys Ile Phe Pro Ile Gln

210 215 220

Asp Lys Gln Ser Trp Gln Asn Glu Tyr Glu Val Tyr Ser Leu Pro Gly

225 230 235 240

Met Lys His Glu Asn Ile Leu Gln Phe Ile Gly Ala Glu Lys Arg Gly

245 250 255

Thr Ser Val Asp Val Asp Leu Trp Leu Ile Thr Ala Phe His Glu Lys

260 265 270

Gly Ser Leu Ser Asp Phe Leu Lys Ala Asn Val Val Ser Trp Asn Glu

275 280 285

Leu Cys His Ile Ala Glu Thr Met Ala Arg Gly Leu Ala Tyr Leu His

290 295 300

Glu Asp Ile Pro Gly Leu Lys Asp Gly His Lys Pro Ala Ile Ser His

305 310 315 320

Arg Asp Ile Lys Ser Lys Asn Val Leu Leu Lys Asn Asn Leu Thr Ala

325 330 335

Cys Ile Ala Asp Phe Gly Leu Ala Leu Lys Phe Glu Ala Gly Lys Ser

340 345 350

Ala Gly Asp Thr His Gly Gln Val Gly Thr Arg Arg Tyr Met Ala Pro

355 360 365

Glu Val Leu Glu Gly Ala Ile Asn Phe Gln Arg Asp Ala Phe Leu Arg

370 375 380

Ile Asp Met Tyr Ala Met Gly Leu Val Leu Trp Glu Leu Ala Ser Arg

385 390 395 400

Cys Thr Ala Ala Asp Gly Pro Val Asp Glu Tyr Met Leu Pro Phe Glu

405 410 415

Glu Glu Ile Gly Gln His Pro Ser Leu Glu Asp Met Gln Glu Val Val

420 425 430

Val His Lys Lys Lys Arg Pro Val Leu Arg Asp Tyr Trp Gln Lys His

435 440 445

Ala Gly Met Ala Met Leu Cys Glu Thr Ile Glu Glu Cys Trp Asp His

450 455 460

Asp Ala Glu Ala Arg Leu Ser Ala Gly Cys Val Gly Glu Arg Ile Thr

465 470 475 480

Gln Met Gln Arg Leu Thr Asn Ile Ile Thr Thr Glu Asp Ile Val Thr

485 490 495

Val Val Thr Met Val Thr Asn Val Asp Phe Pro Pro Lys Glu Ser Ser

500 505 510

Leu

<210> 2

<211> 115

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> 人ActRIIA可溶性(胞外)，加工的多肽序列

<400> 2

Ile Leu Gly Arg Ser Glu Thr Gln Glu Cys Leu Phe Phe Asn Ala Asn

1 5 10 15

Trp Glu Lys Asp Arg Thr Asn Gln Thr Gly Val Glu Pro Cys Tyr Gly

20 25 30

Asp Lys Asp Lys Arg Arg His Cys Phe Ala Thr Trp Lys Asn Ile Ser

35 40 45

Gly Ser Ile Glu Ile Val Lys Gln Gly Cys Trp Leu Asp Asp Ile Asn

50 55 60

Cys Tyr Asp Arg Thr Asp Cys Val Glu Lys Lys Asp Ser Pro Glu Val

65 70 75 80

Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Met Cys Asn Glu Lys Phe Ser Tyr

85 90 95

Phe Pro Glu Met Glu Val Thr Gln Pro Thr Ser Asn Pro Val Thr Pro

100 105 110

Lys Pro Pro

115

<210> 3

<211> 100

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人ActRIIA可溶性(胞外)，具有C-端15个氨基酸缺失的加工的多肽序列

<400> 3

Ile Leu Gly Arg Ser Glu Thr Gln Glu Cys Leu Phe Phe Asn Ala Asn

1 5 10 15

Trp Glu Lys Asp Arg Thr Asn Gln Thr Gly Val Glu Pro Cys Tyr Gly

20 25 30

Asp Lys Asp Lys Arg Arg His Cys Phe Ala Thr Trp Lys Asn Ile Ser

35 40 45

Gly Ser Ile Glu Ile Val Lys Gln Gly Cys Trp Leu Asp Asp Ile Asn

50 55 60

Cys Tyr Asp Arg Thr Asp Cys Val Glu Lys Lys Asp Ser Pro Glu Val

65 70 75 80

Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Met Cys Asn Glu Lys Phe Ser Tyr

85 90 95

Phe Pro Glu Met

100

<210> 4

<211> 1542

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<223> 编码人ActRIIA前体蛋白的核酸序列

<400> 4

atgggagctg ctgcaaagtt ggcgtttgcc gtctttctta tctcctgttc ttcaggtgct 60

atacttggta gatcagaaac tcaggagtgt cttttcttta atgctaattg ggaaaaagac 120

agaaccaatc aaactggtgt tgaaccgtgt tatggtgaca aagataaacg gcggcattgt 180

tttgctacct ggaagaatat ttctggttcc attgaaatag tgaaacaagg ttgttggctg 240

gatgatatca actgctatga caggactgat tgtgtagaaa aaaaagacag ccctgaagta 300

tatttttgtt gctgtgaggg caatatgtgt aatgaaaagt tttcttattt tccagagatg 360

gaagtcacac agcccacttc aaatccagtt acacctaagc caccctatta caacatcctg 420

ctctattcct tggtgccact tatgttaatt gcggggattg tcatttgtgc attttgggtg 480

tacaggcatc acaagatggc ctaccctcct gtacttgttc caactcaaga cccaggacca 540

cccccacctt ctccattact agggttgaaa ccactgcagt tattagaagt gaaagcaagg 600

ggaagatttg gttgtgtctg gaaagcccag ttgcttaacg aatatgtggc tgtcaaaata 660

tttccaatac aggacaaaca gtcatggcaa aatgaatacg aagtctacag tttgcctgga 720

atgaagcatg agaacatatt acagttcatt ggtgcagaaa aacgaggcac cagtgttgat 780

gtggatcttt ggctgatcac agcatttcat gaaaagggtt cactatcaga ctttcttaag 840

gctaatgtgg tctcttggaa tgaactgtgt catattgcag aaaccatggc tagaggattg 900

gcatatttac atgaggatat acctggccta aaagatggcc acaaacctgc catatctcac 960

agggacatca aaagtaaaaa tgtgctgttg aaaaacaacc tgacagcttg cattgctgac 1020

tttgggttgg ccttaaaatt tgaggctggc aagtctgcag gcgataccca tggacaggtt 1080

ggtacccgga ggtacatggc tccagaggta ttagagggtg ctataaactt cgaaagggat 1140

gcatttttga ggatagatat gtatgccatg ggattagtcc tatgggaact ggcttctcgc 1200

tgtactgctg cagatggacc tgtagatgaa tacatgttgc catttgagga ggaaattggc 1260

cagcatccat ctcttgaaga catgcaggaa gttgttgtgc ataaaaaaaa gaggcctgtt 1320

ttaagagatt attggcagaa acatgctgga atggcaatgc tctgtgaaac cattgaagaa 1380

tgttgggatc acgacgcaga agccaggtta tcagctggat gtgtaggtga aagaattacc 1440

cagatgcaga gactaacaaa tattattacc acagaggaca ttgtaacagt ggtcacaatg 1500

gtgacaaatg ttgactttcc tcccaaagaa tctagtctat ga 1542

<210> 5

<211> 345

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<223> 编码人ActRIIA可溶性(胞外)多肽的核酸序列

<400> 5

atacttggta gatcagaaac tcaggagtgt cttttcttta atgctaattg ggaaaaagac 60

agaaccaatc aaactggtgt tgaaccgtgt tatggtgaca aagataaacg gcggcattgt 120

tttgctacct ggaagaatat ttctggttcc attgaaatag tgaaacaagg ttgttggctg 180

gatgatatca actgctatga caggactgat tgtgtagaaa aaaaagacag ccctgaagta 240

tatttttgtt gctgtgaggg caatatgtgt aatgaaaagt tttcttattt tccagagatg 300

gaagtcacac agcccacttc aaatccagtt acacctaagc caccc 345

<210> 6

<211> 228

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 包含与Fc结构域融合的ActRIIA的可溶性胞外结构域的融合蛋白

<400> 6

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro

1 5 10 15

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

20 25 30

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Ala Val Ser His Glu

35 40 45

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

50 55 60

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg

65 70 75 80

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

85 90 95

Glu Tyr Lys Cys Lys Ala Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Val Pro Ile

100 105 110

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

115 120 125

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser

130 135 140

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

145 150 155 160

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

165 170 175

Val Leu Asp Ser Asp Gly Pro Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val

180 185 190

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

195 200 205

His Glu Ala Leu His Asn Ala His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

210 215 220

Ser Pro Gly Lys

225

<210> 7

<211> 344

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 与人Fc结构域融合的人ActRIIA的胞外结构域

<400> 7

Ile Leu Gly Arg Ser Glu Thr Gln Glu Cys Leu Phe Phe Asn Ala Asn

1 5 10 15

Trp Glu Lys Asp Arg Thr Asn Gln Thr Gly Val Glu Pro Cys Tyr Gly

20 25 30

Asp Lys Asp Lys Arg Arg His Cys Phe Ala Thr Trp Lys Asn Ile Ser

35 40 45

Gly Ser Ile Glu Ile Val Lys Gln Gly Cys Trp Leu Asp Asp Ile Asn

50 55 60

Cys Tyr Asp Arg Thr Asp Cys Val Glu Lys Lys Asp Ser Pro Glu Val

65 70 75 80

Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Met Cys Asn Glu Lys Phe Ser Tyr

85 90 95

Phe Pro Glu Met Glu Val Thr Gln Pro Thr Ser Asn Pro Val Thr Pro

100 105 110

Lys Pro Pro Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

115 120 125

Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

130 135 140

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

145 150 155 160

Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val

165 170 175

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

180 185 190

Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

195 200 205

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala

210 215 220

Leu Pro Val Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

225 230 235 240

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr

245 250 255

Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

260 265 270

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

275 280 285

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr

290 295 300

Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe

305 310 315 320

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

325 330 335

Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

340

<210> 8

<211> 21

<212> PRT

<213> 蜜蜂

<220>

<223> 蜜蜂蜂毒肽(HBML)的前导序列

<400> 8

Met Lys Phe Leu Val Asn Val Ala Leu Val Phe Met Val Val Tyr Ile

1 5 10 15

Ser Tyr Ile Tyr Ala

20

<210> 9

<211> 22

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 组织纤溶酶原激活物(TPA)的前导序列

<400> 9

Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly

1 5 10 15

Ala Val Phe Val Ser Pro

20

<210> 10

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 天然ActRIIA

<400> 10

Met Gly Ala Ala Ala Lys Leu Ala Phe Ala Val Phe Leu Ile Ser Cys

1 5 10 15

Ser Ser Gly Ala

20

<210> 11

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> ActRIIA-hFc和ActRIIA-mFc N-端序列

<400> 11

Ile Leu Gly Arg Ser Glu Thr Gln Glu

1 5

<210> 12

<211> 329

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 具有ActRIIA的胞外结构域的C-端15个氨基酸缺失的ActRIIA-Fc蛋白

<400> 12

Ile Leu Gly Arg Ser Glu Thr Gln Glu Cys Leu Phe Phe Asn Ala Asn

1 5 10 15

Trp Glu Lys Asp Arg Thr Asn Gln Thr Gly Val Glu Pro Cys Tyr Gly

20 25 30

Asp Lys Asp Lys Arg Arg His Cys Phe Ala Thr Trp Lys Asn Ile Ser

35 40 45

Gly Ser Ile Glu Ile Val Lys Gln Gly Cys Trp Leu Asp Asp Ile Asn

50 55 60

Cys Tyr Asp Arg Thr Asp Cys Val Glu Lys Lys Asp Ser Pro Glu Val

65 70 75 80

Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Met Cys Asn Glu Lys Phe Ser Tyr

85 90 95

Phe Pro Glu Met Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

100 105 110

Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

115 120 125

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

130 135 140

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

145 150 155 160

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

165 170 175

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

180 185 190

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

195 200 205

Ala Leu Pro Val Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

210 215 220

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met

225 230 235 240

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

245 250 255

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

260 265 270

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

275 280 285

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

290 295 300

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

305 310 315 320

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325

<210> 13

<211> 369

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 具有TPA前导序列的未加工的ActRIIA-hFc

<400> 13

Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly

1 5 10 15

Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Ala Ile Leu Gly Arg Ser Glu Thr

20 25 30

Gln Glu Cys Leu Phe Phe Asn Ala Asn Trp Glu Lys Asp Arg Thr Asn

35 40 45

Gln Thr Gly Val Glu Pro Cys Tyr Gly Asp Lys Asp Lys Arg Arg His

50 55 60

Cys Phe Ala Thr Trp Lys Asn Ile Ser Gly Ser Ile Glu Ile Val Lys

65 70 75 80

Gln Gly Cys Trp Leu Asp Asp Ile Asn Cys Tyr Asp Arg Thr Asp Cys

85 90 95

Val Glu Lys Lys Asp Ser Pro Glu Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly

100 105 110

Asn Met Cys Asn Glu Lys Phe Ser Tyr Phe Pro Glu Met Glu Val Thr

115 120 125

Gln Pro Thr Ser Asn Pro Val Thr Pro Lys Pro Pro Thr Gly Gly Gly

130 135 140

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro

145 150 155 160

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

165 170 175

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

180 185 190

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

195 200 205

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

210 215 220

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

225 230 235 240

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Val Pro Ile Glu Lys

245 250 255

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

260 265 270

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

275 280 285

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

290 295 300

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

305 310 315 320

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

325 330 335

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

340 345 350

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

355 360 365

Lys

<210> 14

<211> 1114

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码具有TPA前导序列的未加工的ActRIIA-hFc的核酸序列

<400> 14

atggatgcaa tgaagagagg gctctgctgt gtgctgctgc tgtgtggagc agtcttcgtt 60

tcgcccggcg ccgctatact tggtagatca gaaactcagg agtgtctttt tttaatgcta 120

attgggaaaa agacagaacc aatcaaactg gtgttgaacc gtgttatggt gacaaagata 180

aacggcggca ttgttttgct acctggaaga atatttctgg ttccattgaa tagtgaaaca 240

aggttgttgg ctggatgata tcaactgcta tgacaggact gattgtgtag aaaaaaaaga 300

cagccctgaa gtatatttct gttgctgtga gggcaatatg tgtaatgaaa agttttctta 360

ttttccggag atggaagtca cacagcccac ttcaaatcca gttacaccta agccacccac 420

cggtggtgga actcacacat gcccaccgtg cccagcacct gaactcctgg ggggaccgtc 480

agtcttcctc ttccccccaa aacccaagga caccctcatg atctcccgga cccctgaggt 540

cacatgcgtg gtggtggacg tgagccacga agaccctgag gtcaagttca actggtacgt 600

ggacggcgtg gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt acaacagcac 660

gtaccgtgtg gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaatg gcaaggagta 720

caagtgcaag gtctccaaca aagccctccc agtccccatc gagaaaacca tctccaaagc 780

caaagggcag ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc ccatcccggg aggagatgac 840

caagaaccag gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc tatcccagcg acatcgccgt 900

ggagtgggag agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc ccgtgctgga 960

ctccgacggc tccttcttcc tctatagcaa gctcaccgtg gacaagagca ggtggcagca 1020

ggggaacgtc ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacgcagaa 1080

gagcctctcc ctgtctccgg gtaaatgaga attc 1114

<210> 15

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 修饰的人ActRIIB可溶性(胞外)

<400> 15

Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg

1 5 10 15

Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg

20 25 30

Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu

35 40 45

Val Lys Lys Gly Cys Trp Asp Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln

50 55 60

Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys

65 70 75 80

Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly

85 90 95

Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro

100 105

<210> 16

<211> 512

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> 人ActRIIB前体蛋白序列(A64)

<400> 16

Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Trp

1 5 10 15

Pro Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr

20 25 30

Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg

35 40 45

Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala

50 55 60

Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp

65 70 75 80

Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn

85 90 95

Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg

100 105 110

Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro

115 120 125

Pro Pro Thr Ala Pro Thr Leu Leu Thr Val Leu Ala Tyr Ser Leu Leu

130 135 140

Pro Ile Gly Gly Leu Ser Leu Ile Val Leu Leu Ala Phe Trp Met Tyr

145 150 155 160

Arg His Arg Lys Pro Pro Tyr Gly His Val Asp Ile His Glu Asp Pro

165 170 175

Gly Pro Pro Pro Pro Ser Pro Leu Val Gly Leu Lys Pro Leu Gln Leu

180 185 190

Leu Glu Ile Lys Ala Arg Gly Arg Phe Gly Cys Val Trp Lys Ala Gln

195 200 205

Leu Met Asn Asp Phe Val Ala Val Lys Ile Phe Pro Leu Gln Asp Lys

210 215 220

Gln Ser Trp Gln Ser Glu Arg Glu Ile Phe Ser Thr Pro Gly Met Lys

225 230 235 240

His Glu Asn Leu Leu Gln Phe Ile Ala Ala Glu Lys Arg Gly Ser Asn

245 250 255

Leu Glu Val Glu Leu Trp Leu Ile Thr Ala Phe His Asp Lys Gly Ser

260 265 270

Leu Thr Asp Tyr Leu Lys Gly Asn Ile Ile Thr Trp Asn Glu Leu Cys

275 280 285

His Val Ala Glu Thr Met Ser Arg Gly Leu Ser Tyr Leu His Glu Asp

290 295 300

Val Pro Trp Cys Arg Gly Glu Gly His Lys Pro Ser Ile Ala His Arg

305 310 315 320

Asp Phe Lys Ser Lys Asn Val Leu Leu Lys Ser Asp Leu Thr Ala Val

325 330 335

Leu Ala Asp Phe Gly Leu Ala Val Arg Phe Glu Pro Gly Lys Pro Pro

340 345 350

Gly Asp Thr His Gly Gln Val Gly Thr Arg Arg Tyr Met Ala Pro Glu

355 360 365

Val Leu Glu Gly Ala Ile Asn Phe Gln Arg Asp Ala Phe Leu Arg Ile

370 375 380

Asp Met Tyr Ala Met Gly Leu Val Leu Trp Glu Leu Val Ser Arg Cys

385 390 395 400

Lys Ala Ala Asp Gly Pro Val Asp Glu Tyr Met Leu Pro Phe Glu Glu

405 410 415

Glu Ile Gly Gln His Pro Ser Leu Glu Glu Leu Gln Glu Val Val Val

420 425 430

His Lys Lys Met Arg Pro Thr Ile Lys Asp His Trp Leu Lys His Pro

435 440 445

Gly Leu Ala Gln Leu Cys Val Thr Ile Glu Glu Cys Trp Asp His Asp

450 455 460

Ala Glu Ala Arg Leu Ser Ala Gly Cys Val Glu Glu Arg Val Ser Leu

465 470 475 480

Ile Arg Arg Ser Val Asn Gly Thr Thr Ser Asp Cys Leu Val Ser Leu

485 490 495

Val Thr Ser Val Thr Asn Val Asp Leu Pro Pro Lys Glu Ser Ser Ile

500 505 510

<210> 17

<211> 116

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> 人ActRIIB可溶性(胞外)，加工的多肽序列(SEQ ID NO:16的氨基酸19-134)

<400> 17

Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala

1 5 10 15

Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu

20 25 30

Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala Asn Ser

35 40 45

Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe

50 55 60

Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln

65 70 75 80

Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr

85 90 95

His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro

100 105 110

Thr Ala Pro Thr

115

<210> 18

<211> 101

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人ActRIIB可溶性(胞外)，具有C-端15个氨基酸缺失的加工的多肽序列(SEQ IDNO:16的氨基酸19-119)

<400> 18

Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala

1 5 10 15

Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu

20 25 30

Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala Asn Ser

35 40 45

Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe

50 55 60

Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln

65 70 75 80

Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr

85 90 95

His Leu Pro Glu Ala

100

<210> 19

<211> 1539

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<223> 编码人ActRIIB (A64)前体蛋白的核酸序列

<400> 19

atgacggcgc cctgggtggc cctcgccctc ctctggggat cgctgtggcc cggctctggg 60

cgtggggagg ctgagacacg ggagtgcatc tactacaacg ccaactggga gctggagcgc 120

accaaccaga gcggcctgga gcgctgcgaa ggcgagcagg acaagcggct gcactgctac 180

gcctcctggg ccaacagctc tggcaccatc gagctcgtga agaagggctg ctggctagat 240

gacttcaact gctacgatag gcaggagtgt gtggccactg aggagaaccc ccaggtgtac 300

ttctgctgct gtgaaggcaa cttctgcaac gagcgcttca ctcatttgcc agaggctggg 360

ggcccggaag tcacgtacga gccacccccg acagccccca ccctgctcac ggtgctggcc 420

tactcactgc tgcccatcgg gggcctttcc ctcatcgtcc tgctggcctt ttggatgtac 480

cggcatcgca agccccccta cggtcatgtg gacatccatg aggaccctgg gcctccacca 540

ccatcccctc tggtgggcct gaagccactg cagctgctgg agatcaaggc tcgggggcgc 600

tttggctgtg tctggaaggc ccagctcatg aatgactttg tagctgtcaa gatcttccca 660

ctccaggaca agcagtcgtg gcagagtgaa cgggagatct tcagcacacc tggcatgaag 720

cacgagaacc tgctacagtt cattgctgcc gagaagcgag gctccaacct cgaagtagag 780

ctgtggctca tcacggcctt ccatgacaag ggctccctca cggattacct caaggggaac 840

atcatcacat ggaacgaact gtgtcatgta gcagagacga tgtcacgagg cctctcatac 900

ctgcatgagg atgtgccctg gtgccgtggc gagggccaca agccgtctat tgcccacagg 960

gactttaaaa gtaagaatgt attgctgaag agcgacctca cagccgtgct ggctgacttt 1020

ggcttggctg ttcgatttga gccagggaaa cctccagggg acacccacgg acaggtaggc 1080

acgagacggt acatggctcc tgaggtgctc gagggagcca tcaacttcca gagagatgcc 1140

ttcctgcgca ttgacatgta tgccatgggg ttggtgctgt gggagcttgt gtctcgctgc 1200

aaggctgcag acggacccgt ggatgagtac atgctgccct ttgaggaaga gattggccag 1260

cacccttcgt tggaggagct gcaggaggtg gtggtgcaca agaagatgag gcccaccatt 1320

aaagatcact ggttgaaaca cccgggcctg gcccagcttt gtgtgaccat cgaggagtgc 1380

tgggaccatg atgcagaggc tcgcttgtcc gcgggctgtg tggaggagcg ggtgtccctg 1440

attcggaggt cggtcaacgg cactacctcg gactgtctcg tttccctggt gacctctgtc 1500

accaatgtgg acctgccccc taaagagtca agcatctaa 1539

<210> 20

<211> 344

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 包含与Fc结构域融合的ActRIIB (A64; SEQ ID NO:17)的可溶性胞外结构域的融合蛋白

<400> 20

Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala

1 5 10 15

Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu

20 25 30

Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala Asn Ser

35 40 45

Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe

50 55 60

Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln

65 70 75 80

Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr

85 90 95

His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro

100 105 110

Thr Ala Pro Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

115 120 125

Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

130 135 140

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

145 150 155 160

Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val

165 170 175

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

180 185 190

Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

195 200 205

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala

210 215 220

Leu Pro Val Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

225 230 235 240

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr

245 250 255

Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

260 265 270

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

275 280 285

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr

290 295 300

Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe

305 310 315 320

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

325 330 335

Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

340

<210> 21

<211> 329

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 包含与Fc结构域融合的且具有C-端15个氨基酸缺失(SEQ ID NO:18)的ActRIIB(A64)的可溶性胞外结构域的融合蛋白

<400> 21

Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala

1 5 10 15

Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu

20 25 30

Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala Asn Ser

35 40 45

Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe

50 55 60

Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln

65 70 75 80

Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr

85 90 95

His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

100 105 110

Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

115 120 125

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

130 135 140

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

145 150 155 160

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

165 170 175

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

180 185 190

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

195 200 205

Ala Leu Pro Val Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

210 215 220

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met

225 230 235 240

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

245 250 255

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

260 265 270

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

275 280 285

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

290 295 300

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

305 310 315 320

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325

<210> 22

<211> 105

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 修饰的人ActRIIB可溶性(胞外)

<400> 22

Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg

1 5 10 15

Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg

20 25 30

Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu

35 40 45

Val Lys Lys Gly Cys Trp Asp Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln

50 55 60

Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys

65 70 75 80

Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly

85 90 95

Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro

100 105

<210> 23

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 修饰的人ActRIIB可溶性（胞外）

<400> 23

Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg

1 5 10 15

Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg

20 25 30

Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu

35 40 45

Val Lys Lys Gly Cys Trp Asp Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln

50 55 60

Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys

65 70 75 80

Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly

85 90 95

Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr

100 105

<210> 24

<211> 360

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 带有修饰的未加工的ActRIIB-Fc融合蛋白

<400> 24

Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly

1 5 10 15

Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr

20 25 30

Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu

35 40 45

Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp

50 55 60

Arg Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Asp

65 70 75 80

Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu

85 90 95

Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu

100 105 110

Arg Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu

115 120 125

Pro Pro Pro Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

130 135 140

Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

145 150 155 160

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

165 170 175

Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val

180 185 190

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

195 200 205

Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

210 215 220

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala

225 230 235 240

Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

245 250 255

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr

260 265 270

Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

275 280 285

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

290 295 300

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr

305 310 315 320

Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe

325 330 335

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

340 345 350

Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

355 360

<210> 25

<211> 335

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 带修饰的加工的ActRIIB-Fc融合蛋白

<400> 25

Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg

1 5 10 15

Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg

20 25 30

Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu

35 40 45

Val Lys Lys Gly Cys Trp Asp Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln

50 55 60

Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys

65 70 75 80

Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly

85 90 95

Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr Gly Gly Gly Thr His

100 105 110

Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

130 135 140

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu

145 150 155 160

Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

165 170 175

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

180 185 190

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

195 200 205

Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile

210 215 220

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

225 230 235 240

Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

245 250 255

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

260 265 270

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

275 280 285

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

290 295 300

Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

305 310 315 320

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325 330 335

<210> 26

<211> 115

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人ActRIIB可溶性(胞外)，加工的多肽序列(SEQ ID NO:16的氨基酸20-134)

<400> 26

Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn

1 5 10 15

Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly

20 25 30

Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala Asn Ser Ser

35 40 45

Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn

50 55 60

Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val

65 70 75 80

Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His

85 90 95

Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr

100 105 110

Ala Pro Thr

115

<210> 27

<211> 100

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人ActRIIB可溶性(胞外)，具有C-端15个氨基酸缺失的加工的多肽序列(SEQ IDNO:16的氨基酸20-119)

<400> 27

Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn

1 5 10 15

Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly

20 25 30

Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala Asn Ser Ser

35 40 45

Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn

50 55 60

Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val

65 70 75 80

Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His

85 90 95

Leu Pro Glu Ala

100

<210> 28

<211> 512

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> 人ActRIIB前体蛋白序列(R64)

<400> 28

Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Trp

1 5 10 15

Pro Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr

20 25 30

Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg

35 40 45

Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg

50 55 60

Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp

65 70 75 80

Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn

85 90 95

Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg

100 105 110

Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro

115 120 125

Pro Pro Thr Ala Pro Thr Leu Leu Thr Val Leu Ala Tyr Ser Leu Leu

130 135 140

Pro Ile Gly Gly Leu Ser Leu Ile Val Leu Leu Ala Phe Trp Met Tyr

145 150 155 160

Arg His Arg Lys Pro Pro Tyr Gly His Val Asp Ile His Glu Asp Pro

165 170 175

Gly Pro Pro Pro Pro Ser Pro Leu Val Gly Leu Lys Pro Leu Gln Leu

180 185 190

Leu Glu Ile Lys Ala Arg Gly Arg Phe Gly Cys Val Trp Lys Ala Gln

195 200 205

Leu Met Asn Asp Phe Val Ala Val Lys Ile Phe Pro Leu Gln Asp Lys

210 215 220

Gln Ser Trp Gln Ser Glu Arg Glu Ile Phe Ser Thr Pro Gly Met Lys

225 230 235 240

His Glu Asn Leu Leu Gln Phe Ile Ala Ala Glu Lys Arg Gly Ser Asn

245 250 255

Leu Glu Val Glu Leu Trp Leu Ile Thr Ala Phe His Asp Lys Gly Ser

260 265 270

Leu Thr Asp Tyr Leu Lys Gly Asn Ile Ile Thr Trp Asn Glu Leu Cys

275 280 285

His Val Ala Glu Thr Met Ser Arg Gly Leu Ser Tyr Leu His Glu Asp

290 295 300

Val Pro Trp Cys Arg Gly Glu Gly His Lys Pro Ser Ile Ala His Arg

305 310 315 320

Asp Phe Lys Ser Lys Asn Val Leu Leu Lys Ser Asp Leu Thr Ala Val

325 330 335

Leu Ala Asp Phe Gly Leu Ala Val Arg Phe Glu Pro Gly Lys Pro Pro

340 345 350

Gly Asp Thr His Gly Gln Val Gly Thr Arg Arg Tyr Met Ala Pro Glu

355 360 365

Val Leu Glu Gly Ala Ile Asn Phe Gln Arg Asp Ala Phe Leu Arg Ile

370 375 380

Asp Met Tyr Ala Met Gly Leu Val Leu Trp Glu Leu Val Ser Arg Cys

385 390 395 400

Lys Ala Ala Asp Gly Pro Val Asp Glu Tyr Met Leu Pro Phe Glu Glu

405 410 415

Glu Ile Gly Gln His Pro Ser Leu Glu Glu Leu Gln Glu Val Val Val

420 425 430

His Lys Lys Met Arg Pro Thr Ile Lys Asp His Trp Leu Lys His Pro

435 440 445

Gly Leu Ala Gln Leu Cys Val Thr Ile Glu Glu Cys Trp Asp His Asp

450 455 460

Ala Glu Ala Arg Leu Ser Ala Gly Cys Val Glu Glu Arg Val Ser Leu

465 470 475 480

Ile Arg Arg Ser Val Asn Gly Thr Thr Ser Asp Cys Leu Val Ser Leu

485 490 495

Val Thr Ser Val Thr Asn Val Asp Leu Pro Pro Lys Glu Ser Ser Ile

500 505 510

<210> 29

<211> 116

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> 人ActRIIB可溶性(胞外)，加工的多肽序列(SEQ ID NO:28的氨基酸19-134)

<400> 29

Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala

1 5 10 15

Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu

20 25 30

Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser

35 40 45

Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe

50 55 60

Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln

65 70 75 80

Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr

85 90 95

His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro

100 105 110

Thr Ala Pro Thr

115

<210> 30

<211> 101

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人ActRIIB可溶性(胞外)，具有C-端15个氨基酸缺失的加工的多肽序列(SEQ IDNO:28的氨基酸19-119)

<400> 30

Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala

1 5 10 15

Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu

20 25 30

Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser

35 40 45

Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe

50 55 60

Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln

65 70 75 80

Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr

85 90 95

His Leu Pro Glu Ala

100

<210> 31

<211> 115

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人ActRIIB可溶性(胞外)，加工的多肽序列(SEQ ID NO:28的氨基酸20-134)

<400> 31

Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn

1 5 10 15

Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly

20 25 30

Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser

35 40 45

Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn

50 55 60

Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val

65 70 75 80

Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His

85 90 95

Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr

100 105 110

Ala Pro Thr

115

<210> 32

<211> 100

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人ActRIIB可溶性(胞外)，具有C-端15个氨基酸缺失的加工的多肽序列(SEQ IDNO:28的氨基酸20-119)

<400> 32

Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn

1 5 10 15

Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly

20 25 30

Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser

35 40 45

Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn

50 55 60

Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val

65 70 75 80

Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His

85 90 95

Leu Pro Glu Ala

100

<210> 33

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人ActRIIB可溶性(胞外)，带有修饰的加工的多肽

<400> 33

Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg

1 5 10 15

Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg

20 25 30

Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu

35 40 45

Val Lys Lys Gly Cys Trp Asp Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln

50 55 60

Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys

65 70 75 80

Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly

85 90 95

Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr

100 105

<210> 34

<211> 360

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 带有修饰的未加工的ActRIIB-Fc融合蛋白

<400> 34

Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly

1 5 10 15

Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr

20 25 30

Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu

35 40 45

Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp

50 55 60

Ala Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Asp

65 70 75 80

Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu

85 90 95

Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu

100 105 110

Arg Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu

115 120 125

Pro Pro Pro Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

130 135 140

Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

145 150 155 160

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

165 170 175

Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val

180 185 190

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

195 200 205

Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

210 215 220

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala

225 230 235 240

Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

245 250 255

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr

260 265 270

Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

275 280 285

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

290 295 300

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr

305 310 315 320

Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe

325 330 335

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

340 345 350

Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

355 360

<210> 35

<211> 335

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 带有修饰的加工的ActRIIB-Fc融合蛋白

<400> 35

Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg

1 5 10 15

Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg

20 25 30

Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu

35 40 45

Val Lys Lys Gly Cys Trp Asp Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln

50 55 60

Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys

65 70 75 80

Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly

85 90 95

Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr Gly Gly Gly Thr His

100 105 110

Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

130 135 140

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu

145 150 155 160

Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

165 170 175

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

180 185 190

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

195 200 205

Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile

210 215 220

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

225 230 235 240

Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

245 250 255

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

260 265 270

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

275 280 285

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

290 295 300

Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

305 310 315 320

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325 330 335

<210> 36

<211> 115

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人ActRIIB可溶性(胞外)，具有L79D突变的加工的多肽序列(SEQ ID NO:28的氨基酸20-134)

<400> 36

Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn

1 5 10 15

Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly

20 25 30

Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser

35 40 45

Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Asp Asp Asp Phe Asn

50 55 60

Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val

65 70 75 80

Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His

85 90 95

Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr

100 105 110

Ala Pro Thr

115

<210> 37

<211> 115

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人ActRIIB可溶性(胞外)，具有L79D突变的加工的多肽序列(SEQ ID NO:16的氨基酸20-134)

<400> 37

Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn

1 5 10 15

Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly

20 25 30

Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala Asn Ser Ser

35 40 45

Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Asp Asp Asp Phe Asn

50 55 60

Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val

65 70 75 80

Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His

85 90 95

Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr

100 105 110

Ala Pro Thr

115

<210> 38

<211> 343

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人ActRIIB可溶性(胞外)，具有用GGG接头与Fc结构域融合的且具有L79D突变的加工的多肽序列(SEQ ID NO:28的氨基酸20-134)

<400> 38

Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn

1 5 10 15

Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly

20 25 30

Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser

35 40 45

Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Asp Asp Asp Phe Asn

50 55 60

Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val

65 70 75 80

Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His

85 90 95

Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr

100 105 110

Ala Pro Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

115 120 125

Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

130 135 140

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

145 150 155 160

Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

165 170 175

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

180 185 190

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

195 200 205

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

210 215 220

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

225 230 235 240

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

245 250 255

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

260 265 270

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

275 280 285

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

290 295 300

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

305 310 315 320

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

325 330 335

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

340

<210> 39

<211> 343

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人ActRIIB可溶性(胞外)，与Fc结构域融合的且具有L79D突变的加工的多肽序列(SEQ ID NO:16的氨基酸20-134)

<400> 39

Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn

1 5 10 15

Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly

20 25 30

Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala Asn Ser Ser

35 40 45

Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Asp Asp Asp Phe Asn

50 55 60

Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val

65 70 75 80

Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His

85 90 95

Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr

100 105 110

Ala Pro Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

115 120 125

Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

130 135 140

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

145 150 155 160

Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

165 170 175

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

180 185 190

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

195 200 205

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

210 215 220

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

225 230 235 240

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

245 250 255

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

260 265 270

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

275 280 285

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

290 295 300

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

305 310 315 320

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

325 330 335

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

340

<210> 40

<211> 368

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人ActRIIB可溶性(胞外)，与Fc结构域融合的且具有L79D突变和具有TPA前导序列的加工的多肽序列(SEQ ID NO:28的氨基酸20-134)

<400> 40

Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly

1 5 10 15

Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr

20 25 30

Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn

35 40 45

Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His

50 55 60

Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys

65 70 75 80

Lys Gly Cys Trp Asp Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys

85 90 95

Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly

100 105 110

Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro

115 120 125

Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr Ala Pro Thr Gly Gly Gly Thr

130 135 140

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser

145 150 155 160

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

165 170 175

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

180 185 190

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

195 200 205

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

210 215 220

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

225 230 235 240

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

245 250 255

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

260 265 270

Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

275 280 285

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

290 295 300

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

305 310 315 320

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

325 330 335

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

340 345 350

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

355 360 365

<210> 41

<211> 368

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人ActRIIB可溶性(胞外)，与Fc结构域融合的且具有L79D突变和具有TPA前导序列的加工的多肽序列(SEQ ID NO:16的氨基酸20-134)

<400> 41

Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly

1 5 10 15

Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr

20 25 30

Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn

35 40 45

Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His

50 55 60

Cys Tyr Ala Ser Trp Ala Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys

65 70 75 80

Lys Gly Cys Trp Asp Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys

85 90 95

Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly

100 105 110

Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro

115 120 125

Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr Ala Pro Thr Gly Gly Gly Thr

130 135 140

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser

145 150 155 160

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

165 170 175

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

180 185 190

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

195 200 205

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

210 215 220

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

225 230 235 240

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

245 250 255

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

260 265 270

Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

275 280 285

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

290 295 300

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

305 310 315 320

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

325 330 335

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

340 345 350

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

355 360 365

<210> 42

<211> 141

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人ActRIIB可溶性(胞外)，具有变异C-端序列的加工的多肽序列(在WO2007/053775中公开)

<400> 42

Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn

1 5 10 15

Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly

20 25 30

Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser

35 40 45

Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn

50 55 60

Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val

65 70 75 80

Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His

85 90 95

Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Gly Pro Trp Ala Ser Thr Thr Ile

100 105 110

Pro Ser Gly Gly Pro Glu Ala Thr Ala Ala Ala Gly Asp Gln Gly Ser

115 120 125

Gly Ala Leu Trp Leu Cys Leu Glu Gly Pro Ala His Glu

130 135 140

<210> 43

<211> 141

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<400> 43

Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn

1 5 10 15

Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly

20 25 30

Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser

35 40 45

Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Asp Asp Asp Phe Asn

50 55 60

Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val

65 70 75 80

Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His

85 90 95

Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Gly Pro Trp Ala Ser Thr Thr Ile

100 105 110

Pro Ser Gly Gly Pro Glu Ala Thr Ala Ala Ala Gly Asp Gln Gly Ser

115 120 125

Gly Ala Leu Trp Leu Cys Leu Glu Gly Pro Ala His Glu

130 135 140

<210> 44

<211> 370

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<400> 44

Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn

1 5 10 15

Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly

20 25 30

Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser

35 40 45

Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Asp Asp Asp Phe Asn

50 55 60

Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val

65 70 75 80

Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His

85 90 95

Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Gly Pro Trp Ala Ser Thr Thr Ile

100 105 110

Pro Ser Gly Gly Pro Glu Ala Thr Ala Ala Ala Gly Asp Gln Gly Ser

115 120 125

Gly Ala Leu Trp Leu Cys Leu Glu Gly Pro Ala His Glu Thr Gly Gly

130 135 140

Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly

145 150 155 160

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

165 170 175

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu

180 185 190

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

195 200 205

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg

210 215 220

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

225 230 235 240

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu

245 250 255

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

260 265 270

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

275 280 285

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

290 295 300

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

305 310 315 320

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp

325 330 335

Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

340 345 350

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

355 360 365

Gly Lys

370

<210> 45

<211> 1083

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码SEQ ID NO:24的核酸序列

<400> 45

atggatgcaa tgaagagagg gctctgctgt gtgctgctgc tgtgtggagc agtcttcgtt 60

tcgcccggcg ccgccgaaac ccgcgaatgt atttattaca atgctaattg ggaactcgaa 120

cggacgaacc aatccgggct cgaacggtgt gagggggaac aggataaacg cctccattgc 180

tatgcgtcgt ggaggaactc ctccgggacg attgaactgg tcaagaaagg gtgctgggac 240

gacgatttca attgttatga ccgccaggaa tgtgtcgcga ccgaagagaa tccgcaggtc 300

tatttctgtt gttgcgaggg gaatttctgt aatgaacggt ttacccacct ccccgaagcc 360

ggcgggcccg aggtgaccta tgaacccccg cccaccggtg gtggaactca cacatgccca 420

ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc 480

aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc 540

cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc 600

aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc 660

gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc 720

ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag 780

gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc 840

ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg 900

gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg ctggactccg acggctcctt cttcctctat 960

agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg 1020

atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg cagaagagcc tctccctgtc cccgggtaaa 1080

tga 1083

<210> 46

<211> 344

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 包含与Fc结构域融合的ActRIIB (R64; SEQ ID NO:29)的可溶性胞外结构域的融合蛋白

<400> 46

Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala

1 5 10 15

Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu

20 25 30

Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser

35 40 45

Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe

50 55 60

Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln

65 70 75 80

Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr

85 90 95

His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro

100 105 110

Thr Ala Pro Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

115 120 125

Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

130 135 140

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

145 150 155 160

Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val

165 170 175

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

180 185 190

Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

195 200 205

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala

210 215 220

Leu Pro Val Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

225 230 235 240

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr

245 250 255

Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

260 265 270

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

275 280 285

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr

290 295 300

Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe

305 310 315 320

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

325 330 335

Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

340

<210> 47

<211> 329

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 包含与Fc结构域融合的且具有C-端15个氨基酸缺失(SEQ ID NO:30)的ActRIIB(R64)的可溶性胞外结构域的融合蛋白

<400> 47

Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala

1 5 10 15

Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu

20 25 30

Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser

35 40 45

Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe

50 55 60

Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln

65 70 75 80

Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr

85 90 95

His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

100 105 110

Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

115 120 125

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

130 135 140

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

145 150 155 160

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

165 170 175

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

180 185 190

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

195 200 205

Ala Leu Pro Val Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

210 215 220

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met

225 230 235 240

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

245 250 255

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

260 265 270

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

275 280 285

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

290 295 300

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

305 310 315 320

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325

Claims

1.治疗对象的血液相关紊乱的方法，包括

2.权利要求1的方法，其中所述血液相关紊乱是贫血症、需要输血的贫血症或非增殖慢性髓单核细胞白血病(CMML)。

3.权利要求1或2的方法，其中在第一时间测定所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比。

4.权利要求3的方法，其中所述第一时间是在将药学上有效剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象的1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、3个月、4个月、5个月或6个月以内。

5.治疗对象的血液相关紊乱的方法，包括将激活素受体II型(ActRII)信号转导抑制剂以药学上有效剂量给予所述对象并且持续一段时间周期以实现(i)与所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的初始百分比相比，所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比长期降低；和/或(ii)与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象的血红蛋白水平相比，所述对象的血红蛋白水平长期增加；其中所述药学上有效剂量为介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间，和其中所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的初始百分比为至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或至少20％。

6.权利要求5的方法，其中所述血液相关紊乱是贫血症或非增殖CMML。

7.治疗对象的贫血症的方法，包括将激活素受体II型(ActRII)信号转导抑制剂以药学上有效剂量给予所述对象并且持续一段时间周期以实现(i)与所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的初始百分比相比，所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比长期降低；和/或(ii)与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象的血红蛋白水平相比，所述对象的血红蛋白水平长期增加；其中所述药学上有效剂量为介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间，和其中所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的初始百分比为至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或至少20％。

8.权利要求7的方法，其中所述对象是需要RBC输血的对象。

9.用于治疗对象的非增殖CMML的方法，包括将ActRII信号转导抑制剂以药学上有效剂量给予所述对象并且持续一段时间周期以实现(i)与所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的初始百分比相比，所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比长期降低；和/或(ii)与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象的血红蛋白水平相比，所述对象的血红蛋白水平长期增加；其中所述药学上有效剂量为介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间，和其中所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的初始百分比为至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或至少20％。

10.权利要求5-9中任一项的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂给药的时间周期是1、2、3、4、5或6个月。

11.权利要求5-10中任一项的方法，其中所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的初始百分比是在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比。

12.权利要求5-11中任一项的方法，其中在ActRII信号转导抑制剂给药的时间周期之后至少1、2、3、4、5、6、12、18或24个月，维持所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比的长期降低。

13.权利要求5-12中任一项的方法，其中所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比的长期降低是比所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的初始百分比低至少1.5、2.5、5.0、7.5或10.0倍，持续时间为在ActRII信号转导抑制剂给药的时间周期之后至少6、12、18或24个月。

14.权利要求5-13中任一项的方法，其中所述对象的初始血红蛋白水平为在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期，所述对象的血红蛋白水平。

15.权利要求5-14中任一项的方法，其中所述对象的初始血红蛋白水平为小于约11g/dL。

16.权利要求5-15中任一项的方法，其中在ActRII信号转导抑制剂给药的时间周期之后至少3、4、5、6、12、18或24个月，维持所述对象的血红蛋白水平的长期增加。

17.权利要求5-16中任一项的方法，其中所述对象的血红蛋白水平的长期增加是在ActRII信号转导抑制剂给药的时间周期之后至少3、4、5、6、12、18或24个月，所述对象的血红蛋白水平为介于约11g/dL和18g/dL之间。

18.权利要求5-16中任一项的方法，其中在ActRII信号转导抑制剂给药的时间周期之后至少3、4、5、6、12、18或24个月，所述对象不需要红细胞输血。

19.前述权利要求中任一项的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂按每三周一次给予。

20.权利要求1-18中任一项的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂按(i)每28天一次；或(ii)每42天一次给予。

21.前述权利要求中任一项的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂经由注射给予。

22.权利要求16的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂经皮下给予。

23.前述权利要求中任一项的方法，其中所述方法还包括在ActRII信号转导抑制剂给药的时间周期之后6、12、18和/或24个月，测定所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的另一百分比。

24.前述权利要求中任一项的方法，其中所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比通过普鲁士蓝染色来测定。

25.前述权利要求中任一项的方法，其中所述方法还包括在ActRII信号转导抑制剂给药的时间周期之后6、12、18和/或24个月，测定所述对象的另一血红蛋白水平。

26.用于治疗对象的血液相关紊乱的方法，其中所述方法包括：

27.权利要求26的方法，其中所述血液相关紊乱是贫血症、需要输血的贫血症、MDS或非增殖CMML。

28.用于治疗对象的贫血症的方法，其中所述方法包括：

29.权利要求28的方法，其中所述对象是需要输血的对象。

30.用于治疗对象的非增殖CMML的方法，其中所述方法包括：

31.权利要求26-30中任一项的方法，其中在ActRII信号转导抑制剂给药的短的时间周期之后至少6、12、18或24个月，所述给予ActRII信号转导抑制剂短的时间周期的对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的第一百分比被降低至小于10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或小于1％。

32.权利要求26-31中任一项的方法，其中所述对象的血红蛋白水平为小于约11g/dL。

33.权利要求26-32中任一项的方法，其中在ActRII信号转导抑制剂给药的时间周期之后至少3、4、5、6、12、18或24个月，所述给予ActRII信号转导抑制剂一段短的时间周期的对象的血红蛋白水平为介于约11g/dL和18g/dL之间。

34.权利要求26-33中任一项的方法，其中所述短的时间周期是1、2、3、4或5个月。

35.权利要求26-33中任一项的方法，其中所述长的时间周期是至少6、12、18或24个月。

36.权利要求26-34中任一项的方法，其中在ActRII信号转导抑制剂给药的时间周期之后至少3、4、5、6、12、18或24个月，所述对象不需要红细胞输血。

37.权利要求26-36中任一项的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂按每三周一次给予。

38.权利要求26-36中任一项的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂按(i)每28天一次；或(ii)每42天一次给予。

39.权利要求26-38中任一项的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂经由注射给予。

40.权利要求39的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂经皮下给予。

41.权利要求26-40中任一项的方法，其中所述方法还包括在ActRII信号转导抑制剂给药的时间周期之后6、12、18和/或24个月，测定所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的第二百分比。

42.权利要求26-41中任一项的方法，其中所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比通过普鲁士蓝染色来测定。

43.权利要求26-41中任一项的方法，其中所述方法还包括在ActRII信号转导抑制剂给药的时间周期之后6、12、18和/或24个月，测定所述对象的血红蛋白水平。

44.治疗对象的血液相关紊乱的方法，其中所述方法包括：

(d)任选将调整剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象。

45.权利要求44的方法，其中所述血液相关紊乱是贫血症、需要输血的贫血症或非增殖CMML。

46.治疗对象的贫血症的方法，其中所述方法包括：

(d)任选将调整剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象。

47.权利要求46的方法，其中所述对象是需要输血的对象。

48.治疗对象的非增殖慢性髓单核细胞白血病(CMML)的方法，其中所述方法包括：

(d)任选将调整剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象。

49.权利要求44-48中任一项的方法，其中所述时间周期是1、2、3、4、5或6个月。

50.权利要求44-49中任一项的方法，其中所述初始剂量经由注射给予。

51.权利要求50的方法，其中所述初始剂量经皮下给予。

52.权利要求44-51中任一项的方法，其中所述初始剂量按每三周一次给予。

53.权利要求44-51中任一项的方法，其中所述初始剂量按(i)每28天一次；或(ii)每42天一次给予。

54.权利要求44-53中任一项的方法，其中在测定所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的第一百分比之后马上或在其至多1天、2天、3天、4天、5天、6天、或1周、2周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月以内，将所述初始剂量给予所述对象。

55.权利要求44-53中任一项的方法，其中在测定所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的第二百分比之后马上或在其至多1天、2天、3天、4天、5天、6天、或1周、2周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月以内，将所述调整剂量给予所述对象。

56.权利要求44-55中任一项的方法，其中如果所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的第二百分比为至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或至少20％，所述ActRII信号转导抑制剂的调整剂量是大于初始剂量。

57.权利要求56的方法，其中所述调整剂量是比初始剂量高约0.05mg/kg、约0.1mg/kg、约0.15mg/kg、约0.25mg/kg、约0.3mg/kg、约0.35mg/kg、约0.4mg/kg或约0.5mg/kg、0.75mg/kg、1.0mg/kg、1.33mg/kg、1.5mg/kg或约1.75mg/kg。

58.权利要求56或57中任一项的方法，其中所述调整剂量比初始剂量更频繁地给予。

59.权利要求56-58中任一项的方法，其中所述调整剂量按每5、10、15、20、25、28、30、35或40天给予。

60.权利要求44-59中任一项的方法，其中所述调整剂量经由注射给予。

61.权利要求60的方法，其中所述调整剂量经皮下给予。

62.权利要求44-54中任一项的方法，其中如果所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的第二百分比为小于10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或小于1％，对所述对象不给予所述调整剂量。

63.权利要求44-61中任一项的方法，其中所述调整剂量给予至多1、2、3、4、5或6个月。

64.权利要求44-63中任一项的方法，其中在ActRII信号转导抑制剂给药的时间周期之后至少3、4、5、6、12、18或24个月，所述对象不需要红细胞输血。

65.权利要求44-64中任一项的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂按每三周一次给予。

66.权利要求44-64中任一项的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂按(i)每28天一次；或(ii)每42天一次给予。

67.权利要求44-66中任一项的方法，其中所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比通过普鲁士蓝染色来测定。

68.用于治疗对象的血液相关紊乱的方法，其中所述方法包括：

(a)测定所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比；

69.权利要求68的方法，其中所述血液相关紊乱是贫血症、需要输血的贫血症或非增殖CMML。

70.用于治疗对象的贫血症的方法，其中所述方法包括：

(a)测定所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比；

71.权利要求70的方法，其中所述对象需要RBC输血。

72.用于治疗对象的非增殖CMML的方法，其中所述方法包括：

(a)测定所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比；

73.权利要求68-72中任一项的方法，其中将所述ActRII信号转导抑制剂给予所述对象，每三周一次。

74.权利要求68-72中任一项的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂按(i)每28天一次；或(ii)每42天一次给予。

75.权利要求26-38中任一项的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂经由注射给予。

76.权利要求75的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂经皮下给予。

77.权利要求68-76中任一项的方法，其中在给予所述ActRII信号转导抑制剂之后6、12、18和/或24个月以内，测定血红蛋白的水平。

78.促进患有血液相关紊乱的对象的红细胞生成的方法，所述方法包括：

(a)测定所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比；

79.权利要求78的方法，其中所述血液相关紊乱是贫血症、需要输血的贫血症或非增殖CMML。

80.权利要求78或79的方法，其中所述方法还包括(i)在第一时间周期期间监测所述对象的血液学参数；和(ii)如果所述对象的血液学参数实现了正常化，那么减少或停止给予所述对象ActRII信号转导抑制剂。

81.权利要求78-80中任一项的方法，其中所述方法还包括(i)在第一时间周期期间监测所述对象的血液学参数；和(ii)如果所述对象的血液学参数实现了正常化，那么减少给予所述对象ActRII信号转导抑制剂的剂量。

82.权利要求78-81中任一项的方法，其中所述方法还包括(i)在第一时间周期期间监测所述对象的血液学参数；和(ii)如果所述对象的血液学参数实现了正常化，那么减少给予所述对象ActRII信号转导抑制剂的频率。

83.权利要求78-82中任一项的方法，其中所述方法还包括(i)在第一时间周期期间监测所述对象的血液学参数；和(ii)如果所述对象的血液学参数实现了正常化，那么停止给予所述对象ActRII信号转导抑制剂。

84.权利要求78-83中任一项的方法，其中所述对象的正常化血液学参数是参比群体的血液学参数的水平。

85.权利要求78-83中任一项的方法，其中与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的时间周期所述对象的血液学参数相比，所述对象的正常化血液学参数是所述对象的血液学参数的改善达到至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％。

86.权利要求85的方法，其中在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的时间周期是1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、3个月、4个月、5个月或6个月。

87.权利要求78-86中任一项的方法，其中所述第一时间周期是至少1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或1年。

88.权利要求78-87中任一项的方法，其中所述血液学参数是血红蛋白水平、血细胞比容、红细胞计数或所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比。

89.权利要求78-88中任一项的方法，其中将所述ActRII信号转导抑制剂给予所述对象，每三周一次。

90.权利要求78-88中任一项的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂按(i)每28天一次；或(ii)每42天一次给予。

91.权利要求78-90中任一项的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂经由注射给予。

92.权利要求91的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂经皮下给予。

93.权利要求78-92中任一项的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂的药学上有效剂量为介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间。

94.前述权利要求中任一项的方法，其中如果所述对象中至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或20％的成红细胞是环形铁粒幼细胞，所述对象具有实现一个或多个血液学参数正常化的可能性增加。

95.权利要求94的方法，其中所述血液学参数是血红蛋白水平、血细胞比容、红细胞计数或所述对象中是环形铁粒幼细胞的成红细胞的百分比。

96.权利要求94或95的方法，其中所述正常化血液学参数是参比群体的血液学参数的水平。

97.权利要求94-96中任一项的方法，其中与在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的一段时间周期所述对象的血液学参数相比，所述正常化血液学参数是有至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％的改善。

98.权利要求97的方法，其中在将初始剂量的ActRII信号转导抑制剂给予所述对象之前的时间周期是1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、3个月、4个月、5个月或6个月。

99.用于提高对象的中性粒细胞的水平的方法，包括将药学上有效剂量的激活素受体II型(ActRII)信号转导抑制剂给予所述对象。

100.权利要求99的方法，其中所述方法是用于治疗与中性粒细胞的水平降低相关的疾病。

101.用于提高对象的血小板的水平的方法，包括将药学上有效剂量的激活素受体II型(ActRII)信号转导抑制剂给予所述对象。

102.权利要求101的方法，其中所述方法是用于治疗与血小板的水平降低相关的疾病。

103.权利要求99-102中任一项的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂的药学上有效剂量为介于0.1mg/kg和2.0mg/kg之间。

104.前述权利要求中任一项的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂是包含选自以下的氨基酸序列的多肽：

(a)与SEQ ID NO:2有90％同一性；

(b)与SEQ ID NO:2有95％同一性；

(c)与SEQ ID NO:2有98％同一性；

(d)SEQ ID NO:2；

(e)与SEQ ID NO:3有90％同一性；

(f)与SEQ ID NO:3有95％同一性；

(g)与SEQ ID NO:3有98％同一性；

(h)SEQ ID NO:3；

(i)与SEQ ID NO:6有90％同一性；

(j)与SEQ ID NO:6有95％同一性；

(k)与SEQ ID NO:6有98％同一性；

(l)SEQ ID NO:6；

(m)与SEQ ID NO:7有90％同一性；

(n)与SEQ ID NO:7有95％同一性；

(o)与SEQ ID NO:7有98％同一性；

(p)SEQ ID NO:7；

(q)与SEQ ID NO:12有90％同一性；

(r)与SEQ ID NO:12有95％同一性；

(s)与SEQ ID NO:12有98％同一性；

(t)SEQ ID NO:12；

(u)与SEQ ID NO:17有90％同一性；

(v)与SEQ ID NO:17有95％同一性；

(w)与SEQ ID NO:17有98％同一性；

(x)SEQ ID NO:17；

(y)与SEQ ID NO:20有90％同一性；

(z)与SEQ ID NO:20有95％同一性；

(aa)与SEQ ID NO:20有98％同一性；

(bb)SEQ ID NO:20；

(cc)与SEQ ID NO:21有90％同一性；

(dd)与SEQ ID NO:21有95％同一性；

(ee)与SEQ ID NO:21有98％同一性；

(ff)SEQ ID NO:21；

(gg)与SEQ ID NO:25有90％同一性；

(hh)与SEQ ID NO:25有95％同一性；

(ii)与SEQ ID NO:25有98％同一性；和

(jj)SEQ ID NO:25。

105.前述权利要求中任一项的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂是ActRIIA信号转导抑制剂。

106.权利要求105的方法，其中所述ActRIIA信号转导抑制剂是包含选自以下的氨基酸序列的多肽：

(a)与SEQ ID NO:2有90％同一性；

(b)与SEQ ID NO:2有95％同一性；

(c)与SEQ ID NO:2有98％同一性；

(d)SEQ ID NO:2；

(e)与SEQ ID NO:3有90％同一性；

(f)与SEQ ID NO:3有95％同一性；

(g)与SEQ ID NO:3有98％同一性；

(h)SEQ ID NO:3；

(i)与SEQ ID NO:6有90％同一性；

(j)与SEQ ID NO:6有95％同一性；

(k)与SEQ ID NO:6有98％同一性；

(l)SEQ ID NO:6；

(m)与SEQ ID NO:7有90％同一性；

(n)与SEQ ID NO:7有95％同一性；

(o)与SEQ ID NO:7有98％同一性；和

(p)SEQ ID NO:7。

107.前述权利要求中任一项的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂是包含SEQ IDNO:7的氨基酸序列的多肽。

108.权利要求1-102中任一项的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂是由ActRIIA的胞外结构域和人IgG1 Fc结构域组成的人源化融合蛋白。

109.权利要求1-103中任一项的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂是ActRIIB的信号转导抑制剂。

110.权利要求109的方法，其中所述ActRIIB信号转导抑制剂是包含选自以下的氨基酸序列的多肽：

(a)与SEQ ID NO:17有90％同一性；

(b)与SEQ ID NO:17有95％同一性；

(c)与SEQ ID NO:17有98％同一性；

(d)SEQ ID NO:17；

(e)与SEQ ID NO:20有90％同一性；

(f)与SEQ ID NO:20有95％同一性；

(g)与SEQ ID NO:20有98％同一性；

(h)SEQ ID NO:20；

(i)与SEQ ID NO:21有90％同一性；

(j)与SEQ ID NO:21有95％同一性；

(k)与SEQ ID NO:21有98％同一性；

(l)SEQ ID NO:21；

(m)与SEQ ID NO:25有90％同一性；

(n)与SEQ ID NO:25有95％同一性；

(o)与SEQ ID NO:25有98％同一性；和

(p)SEQ ID NO:25。

111.根据权利要求110所述的方法，其中所述ActRII信号传导抑制剂是多肽，其包含：(i)ActRIIB胞外域的片段，其中该片段由SEQ ID NO:23的氨基酸序列组成；(ii)链接器；(iii)IgG的Fc。

112.权利要求110的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂是包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的多肽。

113.权利要求1-103中任一项的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂是由ActRIIB的胞外结构域和人IgG1 Fc结构域组成的人源化融合蛋白。

114.前述权利要求中任一项的方法，其中所述对象是人。