CN114287506A - 易吸收的高有机硒含量的食用菌蛋白粉的制备方法 - Google Patents
易吸收的高有机硒含量的食用菌蛋白粉的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114287506A CN114287506A CN202111306559.3A CN202111306559A CN114287506A CN 114287506 A CN114287506 A CN 114287506A CN 202111306559 A CN202111306559 A CN 202111306559A CN 114287506 A CN114287506 A CN 114287506A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- high organic
- edible fungus
- organic selenium
- selenium content
- protein
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Abstract
本发明公开了一种易吸收的高有机硒含量的食用菌蛋白粉、制备方法及应用。将食用菌置于功能水中，在低温环境下，利用内源性酶进行自溶，辅以超声加快自溶，能有效提取蛋白质，功能水采用脱气水，遏制褐变、腐坏现象的发生。功能水中还添加了磁载体，对内源性酶活性有促进作用，加快自溶速度。添加特定的蛋白酶抑制剂，与功能水相互协作，基本不影响自溶速度且对硒蛋白进行了保护。所得蛋白质再利用外源性蛋白酶进行处理，反应程度易于控制，获得易吸收的高有机硒含量的食用菌蛋白粉，生物功能活性好，可应用于制备富硒食品。
Description
技术领域
本发明属于食品加工技术领域，具体涉及一种易吸收的高有机硒含量的食用菌蛋白粉、制备方法及应用。
背景技术
新鲜食用菌中蛋白质含量可高达4％，明显高于一般蔬果。食用菌蛋白质中所含氨基酸种类丰富，赋予了食用菌特殊的鲜香味；且其中人体必须氨基酸的含量高、种类全，是一种优秀的保健食品。
蛋白质的提取方法多样，常用的有：碱法、酶法、物理方法。碱法提取简单易行，但易造成蛋白质的变性，且由于液固比较大，后续沉淀时酸液用量太大，处理困难，难以实现工业化生产；酶法提取条件更为温和，节水节能，且使用蛋白酶能降低肽链长度，显著提高蛋白质的吸收率。由于食用菌不仅含蛋白质，还有脂肪、碳水化合物等大分子成分，利用外源性酶处理时，若单纯使用外源性蛋白酶，提取效果不好。多种外源性酶配合使用时，酶的种类众多、酶解条件不同，增加了工艺难度，酶解程度难控制，操作不当易造成蛋白损失或失去生物学功能。物理方法常结合碱法或酶法使用，通过挤压、膨化、超声等手段破坏菌体细胞结构，使蛋白质更易溶出。
中国专利CN 102657328 B公开了一种螺杆挤压联合酶解提取食用菌的可溶性含氮化合物的方法，依次经原料处理、螺杆挤压膨化预处理、酶解、离心处理，可得含可溶性含氮化合物的上清液。结合了物理方法和酶法的优势，有效释放食用菌菌体内的鲜美滋味物质，又提高可溶性含氮化合物的提取率。在膨化处理过程高温加压等条件的作用下，蛋白质原有三维结构容易被破坏，部分氨基酸之间发生反应，或氨基酸与游离糖反应，降低产物营养价值。
发明内容
针对上述现有技术中存在的不足，本发明提供了一种易吸收的高有机硒含量的食用菌蛋白粉、制备方法及应用。充分利用新鲜食用菌内源性酶，使食用菌自溶释放蛋白质，再添加外源性蛋白酶酶解降低蛋白质分子量，实现高效提取高有机硒含量的食用菌蛋白质，在保证蛋白质营养价值、高有机硒含量的同时提高其吸收率。
第一方面，提供一种易吸收的高有机硒含量的食用菌蛋白粉的制备方法，包括以下步骤：
1)原料预处理：取新鲜高有机硒含量的食用菌，洗净晾干后破碎，经紫外线杀菌，得到预处理高有机硒含量的食用菌块；
2)超声辅助自溶：将预处理高有机硒含量的食用菌块放入功能水中，在低温环境下，密封，在超声辅助条件下进行自溶反应，然后经过滤、离心分离，得到上层清液，即为高有机硒含量的食用菌自溶液；
3)分步等电点沉降：逐次分步调节高有机硒含量的食用菌自溶液pH至等电点，沉淀离心，得到高有机硒含量的食用菌蛋白粗提物；
4)酶解：将高有机硒含量的食用菌蛋白粗提物与水混合，在适宜的温度和 pH条件下，加蛋白酶进行酶解，得到高有机硒含量的食用菌蛋白酶解液；
5)灭菌干燥：将高有机硒含量的食用菌蛋白酶解液经超高温瞬时灭菌，冷冻干燥，得到易吸收的高有机硒含量的食用菌蛋白粉。
优选的，所述易吸收的高有机硒含量的食用菌蛋白粉的制备方法，包括以下步骤：
1)原料预处理：取新鲜高有机硒含量的食用菌，洗净晾干后破碎为1-2g/ 块的块状，经紫外线杀菌，得到预处理高有机硒含量的食用菌块；
2)超声辅助自溶：将100-200重量份预处理高有机硒含量的食用菌块放入 200-500重量份的功能水中，在4-8℃低温环境下，密封，300-600W、30-80kHz 的超声辅助条件下进行3-5d自溶反应，然后经过滤、离心分离，得到上层清液，即为高有机硒含量的食用菌自溶液；
3)分步等电点沉降：逐次分步调节高有机硒含量的食用菌自溶液pH至等电点pH＝5-6、3-4，在每一等电点沉淀离心，分别收集各等电点所得沉淀，得到酸性蛋白质，剩余上清液再逐次分步调节pH＝8-9、9-10，在每一等电点沉淀离心，分别收集各等电点所得沉淀，得到碱性蛋白质，将酸性蛋白质和碱性蛋白质混合，得到高有机硒含量的食用菌蛋白粗提物；
4)酶解：将步骤3)所得高有机硒含量的食用菌蛋白粗提物和10-50重量份水混合，在适宜的温度和pH条件下，添加0.1-0.3重量份蛋白酶进行4-6h酶解，得到高有机硒含量的食用菌蛋白酶解液；
5)灭菌干燥：将高有机硒含量的食用菌蛋白酶解液经135-140℃灭菌3-6s， -40-(-30)℃冷冻干燥12-24h，得到易吸收的高有机硒含量的食用菌蛋白粉。
本发明的高有机硒含量的食用菌选用富硒猴头菇。
所述蛋白酶选自碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶中的至少一种。
所述功能水为脱气水、磁载体脱气水、复磁化磁载体脱气水中的任意一种。
所述脱气水的制备方法，包括以下步骤：
将水加热至沸腾，持续沸腾5-10min后，迅速密封隔绝空气，并在10-20min 内降至室温，得到脱气水。
脱气水与脱气前普通水相比，其表面张力、密度、粘性等物理性质均发生了微小变化，渗透性提高，有利于有效成分的溶出。更重要的是，脱气水中氧含量低，可有效减缓食用菌的褐变、腐坏的速度。
所述磁载体脱气水的制备方法，包括以下步骤：
按照料液比1g:(100-300)mL将磁载体投入水中，加热至沸腾，持续沸腾 5-10min后，迅速密封隔绝空气，并在10-20min内降至室温，得到磁载体脱气水。
所述复磁化磁载体脱气水的制备方法，包括以下步骤：
S1.按照料液比1g:(100-300)mL将磁载体投入水中，加热至沸腾，持续沸腾5-10min后，迅速密封隔绝空气，并在10-20min内降至室温，得到磁载体脱气水；
S2.将磁载体脱气水在场强0.8-2T条件下进行5-10s磁化处理，得到复磁化磁载体脱气水。
所述磁载体选自四氧化三铁、粉煤灰、钴铁氧体中的任意一种。
脱气水中的磁载体对酶有激活促进作用，有效提升自溶效果。在高温作用下，分子的热运动加快，容易破坏电子运动方向的规律性，造成磁载体的磁性降低或消失。但经磁场重新磁化处理后，“元磁体”的排列又从无序到有序，甚至实现较原磁载体磁性提高的效果。从而达到对食用菌自溶促进效果的提高。
进一步优选的，所述步骤2)超声辅助自溶时，还添加了20-30重量份蛋白酶抑制剂。
所述蛋白酶抑制剂选自AEBSF(丝氨酸蛋白酶抑制剂)、EDTA(乙二胺四乙酸，金属蛋白酶抑制剂)、E-64(半胱氨酸蛋白酶抑制剂和钙蛋白酶激活抑制剂)、Bestatin(特异性靶向氨肽酶的金属蛋白酶抑制剂)、PespstatinA(巯基蛋白酶抑制剂)、Aprotinin(丝氨酸蛋白酶抑制剂)中的至少一种。
更进一步优选的，所述蛋白酶抑制剂由E-64和EDTA按照重量比(4-6): (1-2)组成。
在食用菌的自溶过程中，添加蛋白酶抑制剂，能降低内源性蛋白酶活力但不引起其变性，有效抑制蛋白的降解，并维持原有蛋白间相互作用。减缓自溶过程中蛋白降解、分解导致的生物功能活性下降及硒的损失。在添加磁载体，提高对內源性酶活性的促进作用的同时，添加蛋白酶抑制剂，改善单独蛋白酶抑制剂的添加对自溶速度的降低，又能避免蛋白质被内源性酶过度降解、分解。
但蛋白酶抑制剂若对蛋白酶产生广泛的抑制，将不利于自溶的进行、蛋白的释放。选择半胱氨酸蛋白酶抑制剂E-64，既能针对性的对半胱氨酸蛋白进行保护，尽量保证高生物活性物质硒蛋白的结构，且不影响其他蛋白酶的活性，对自溶速度影响小。EDTA是金属蛋白酶抑制剂，还对其他蛋白酶抑制剂有增强作用；同时也是一种金属离子螯合剂，能与自溶液中金属离子发生螯合，生成水溶性络合物，降低重金属离子对酶的抑制作用，在一定程度上促进自溶的进行。且EDTA螯合物在后续处理中被除去，减少了蛋白粉中重金属含量。
本发明充分利用内源性酶，使食用菌自溶释放蛋白质，再添加外源性蛋白酶酶解降低蛋白质分子量。利用外源性蛋白酶对高有机硒含量的食用菌蛋白粗提物进行处理，操作方法可控性高，降解程度易把握，有效降低肽链长度，将蛋白质分解为小分子肽，提高蛋白质的吸收率和生物功能活性。
内源性酶指生物体内自身产生的酶，食用菌内源性酶有氧化还原酶、蛋白酶、果胶酶、酪氨酸酶、纤维素酶等。由于各种内源性酶及外部细菌、空气等的作用，采摘后的食用菌在贮存时，易发生褐变、自溶、腐坏等现象。真菌自溶形式主要为内自溶，内源性蛋白酶起主要作用，水解细胞膜、破坏细胞内部结构，降解并释放大分子物质，有利于蛋白质等有效成分的降解释放。但细胞壁降解效果不好，影响蛋白质的溶出。同时发生的褐变、腐坏也影响营养成分的含量和产品品质。在低温低氧条件下进行自溶，可显著减缓褐变、腐坏的速度，但同时也会延长自溶时间。有研究表明食用菌自溶时蛋白酶的活性明显增大。采摘后食用菌由于氮源缺乏，蛋白酶将分解蛋白质，积累游离氨基酸；碳源不足时，蛋白质、氨基酸均会被分解以提供能量，因此造成可溶性蛋白质和游离氨基酸含量均下降。因此自溶时间过长将导致蛋白质含量降低，氨基酸被过度分解也造成有机硒损失。
本发明在低温低氧条件下采用超声辅助自溶，利用超声空化效应，对蛋白质、多糖等大分子有降解作用，破坏食用菌细胞壁、细胞膜结构，提高通透性，帮助蛋白质溶出到自溶液中，提高产量；同时能激发某些内源性酶，如果胶酶、纤维素酶的活性，加快细胞壁的分解，提高自溶速度，有效改善自溶时间过长导致的蛋白质、有机硒含量降低的问题。
优选的，所述步骤2)超声辅助自溶为间断式超声辅助，具体为每连续超声处理1-2h后停顿20-30min，再进行下一次超声处理。
食用菌对硒的富集能力比一般蔬果更高，硒共价结合在蛋白质中形成的物质有硒蛋白-硒代半胱氨酸、含硒蛋白-硒代甲硫氨酸等。其中硒代半胱氨酸是通过基因编码生成的硒蛋白，为硒在机体内存在的主要功能形式。含硒蛋白，如硒代甲硫氨酸则是随机替代甲硫氨酸而参入到蛋白质分子中，其稳定性相对硒蛋白更低。间断式超声辅助，一方面可以降低工艺能耗，且能保证对食用菌自溶的促进效果；另一方面，能减轻超声对蛋白质的过度降解，有效减少含硒蛋白降解所导致的硒的损失。减轻对蛋白质的过度降解，也有利于减缓硒蛋白被蛋白酶分解提供能量，释放硒导致的硒的损失。所制备的产品中蛋白质含量、生物功能活性、硒含量均更高，可达到更好的保健效果。
第二方面，提供一种按照上述方法制备的易吸收的高有机硒含量的食用菌蛋白粉。
第三方面，提供一种上述易吸收的高有机硒含量的食用菌蛋白粉在富硒食品中的应用。
本发明的有益效果：本发明将食用菌置于功能水中，在低温环境下，利用内源性酶进行自溶，以超声辅助加快自溶，能有效提取蛋白质。采用间断式超声处理，降低能耗，且避免蛋白质过度降解影响提取物的生物功能活性。功能水采用脱气水，改善自溶过程中褐变、腐坏现象的发生，功能水中还添加了磁载体，对内源性酶活性有促进作用，加快自溶速度。自溶过程中，进一步添加了特定的蛋白酶抑制剂，与功能水相互协作，基本不影响自溶速度且对硒蛋白进行了保护。所得蛋白质再利用外源性蛋白酶进行处理，反应程度易于控制，获得易吸收的高有机硒含量的食用菌蛋白粉。
具体实施方式
实施例所用原料如下：
新鲜富硒猴头菇，含水量为85.7g/100g，硒含量为46.8mg/kg，江苏雨田食用菌有限公司。
木瓜蛋白酶，酶活力：10万U/g，货号：SY20210223，山东思扬生物科技有限公司。
E-64，蛋白酶抑制剂，CAS号：66701-25-5，品牌：Trxmark，货号：A588986，昀冠(上海)生物科技有限公司
EDTA，CAS号：60-00-4，产品编号：BH01-3，山东锦沅新材料科技有限公司。
实施例1
易吸收的高有机硒含量的食用菌蛋白粉的制备方法，包括以下步骤：
1)原料预处理：取新鲜富硒猴头菇，洗净晾干后破碎为2g/块的块状，经紫外线杀菌，得到预处理富硒猴头菇块；
2)超声辅助自溶：将160重量份预处理富硒猴头菇块放入300重量份的功能水中，在5℃低温环境下，密封，400W、40kHz的超声辅助条件下进行4d自溶反应，然后经过滤、离心分离，得到上层清液，即为富硒猴头菇自溶液；
3)分步等电点沉降：逐次分步调节富硒猴头菇自溶液pH至等电点pH＝5、 pH＝3.5，在每一等电点沉淀离心，分别收集各等电点所得沉淀，得到酸性蛋白质，剩余上清液再逐次分步调节pH＝8、pH＝10，在每一等电点沉淀离心，分别收集各等电点所得沉淀，得到碱性蛋白质，将酸性蛋白质和碱性蛋白质混合，得到富硒猴头菇蛋白粗提物；
4)酶解：将步骤3)所得富硒猴头菇蛋白粗提物和30重量份水混合，在 55℃，调节pH至6，添加0.1重量份蛋白酶进行4h酶解，得到富硒猴头菇蛋白酶解液；
5)灭菌干燥：将富硒猴头菇蛋白酶解液经137℃灭菌4s，-40℃冷冻干燥 16h，得到易吸收的高有机硒含量的食用菌蛋白粉。
所述蛋白酶为木瓜蛋白酶。
所述功能水为脱气水。
所述脱气水的制备方法，包括以下步骤：
将水加热至沸腾，持续沸腾7min后，迅速密封隔绝空气，并在15min内降至室温，得到脱气水。
所述步骤2)超声辅助自溶为间断式超声辅助，具体为每连续超声处理1.5h 后停顿25min，再进行下一次超声处理。
实施例2
易吸收的高有机硒含量的食用菌蛋白粉的制备方法，包括以下步骤：
1)原料预处理：取新鲜富硒猴头菇，洗净晾干后破碎为2g/块的块状，经紫外线杀菌，得到预处理富硒猴头菇块；
2)超声辅助自溶：将160重量份预处理富硒猴头菇块放入300重量份的功能水中，在5℃低温环境下，密封，400W、40kHz的超声辅助条件下进行4d自溶反应，然后经过滤、离心分离，得到上层清液，即为富硒猴头菇自溶液；
3)分步等电点沉降：逐次分步调节富硒猴头菇自溶液pH至等电点pH＝5、 pH＝3.5，在每一等电点沉淀离心，分别收集各等电点所得沉淀，得到酸性蛋白质，剩余上清液再逐次分步调节pH＝8、pH＝10，在每一等电点沉淀离心，分别收集各等电点所得沉淀，得到碱性蛋白质，将酸性蛋白质和碱性蛋白质混合，得到富硒猴头菇蛋白粗提物；
4)酶解：将步骤3)所得富硒猴头菇蛋白粗提物和30重量份水混合，在 55℃，调节pH至6，添加0.1重量份蛋白酶进行4h酶解，得到富硒猴头菇蛋白酶解液；
5)灭菌干燥：将富硒猴头菇蛋白酶解液经137℃灭菌4s，-40℃冷冻干燥16h，得到易吸收的高有机硒含量的食用菌蛋白粉。
所述蛋白酶为木瓜蛋白酶。
所述功能水为磁载体脱气水。
所述磁载体脱气水的制备方法，包括以下步骤：
按照料液比1g:200mL将磁载体投入水中，加热至沸腾，持续沸腾7min后，迅速密封隔绝空气，并在15min内降至室温，得到磁载体脱气水。
所述磁载体为粉煤灰。
所述步骤2)超声辅助自溶为间断式超声辅助，具体为每连续超声处理1.5h 后停顿25min，再进行下一次超声处理。
实施例3
易吸收的高有机硒含量的食用菌蛋白粉的制备方法，包括以下步骤：
1)原料预处理：取新鲜富硒猴头菇，洗净晾干后破碎为2g/块的块状，经紫外线杀菌，得到预处理富硒猴头菇块；
2)超声辅助自溶：将160重量份预处理富硒猴头菇块放入300重量份的功能水中，在5℃低温环境下，密封，400W、40kHz的超声辅助条件下进行4d自溶反应，然后经过滤、离心分离，得到上层清液，即为富硒猴头菇自溶液；
3)分步等电点沉降：逐次分步调节富硒猴头菇自溶液pH至等电点pH＝5、 pH＝3.5，在每一等电点沉淀离心，分别收集各等电点所得沉淀，得到酸性蛋白质，剩余上清液再逐次分步调节pH＝8、pH＝10，在每一等电点沉淀离心，分别收集各等电点所得沉淀，得到碱性蛋白质，将酸性蛋白质和碱性蛋白质混合，得到富硒猴头菇蛋白粗提物；
4)酶解：将步骤3)所得富硒猴头菇蛋白粗提物和30重量份水混合，在 55℃，调节pH至6，添加0.1重量份蛋白酶进行4h酶解，得到富硒猴头菇蛋白酶解液；
5)灭菌干燥：将富硒猴头菇蛋白酶解液经137℃灭菌4s，-40℃冷冻干燥16h，得到易吸收的高有机硒含量的食用菌蛋白粉。
所述蛋白酶为木瓜蛋白酶。
所述功能水为复磁化磁载体脱气水。
所述复磁化磁载体脱气水的制备方法，包括以下步骤：
S1.按照料液比1g:200mL将磁载体投入水中，加热至沸腾，持续沸腾7min 后，迅速密封隔绝空气，并在15min内降至室温，得到磁载体脱气水；
S2.将磁载体脱气水在场强1.2T条件下进行8s磁化处理，得到复磁化磁载体脱气水。
所述磁载体为粉煤灰。
所述步骤2)超声辅助自溶为间断式超声辅助，具体为每连续超声处理1.5h 后停顿25min，再进行下一次超声处理。
实施例4
易吸收的高有机硒含量的食用菌蛋白粉的制备方法，包括以下步骤：
1)原料预处理：取新鲜富硒猴头菇，洗净晾干后破碎为2g/块的块状，经紫外线杀菌，得到预处理富硒猴头菇块；
2)超声辅助自溶：将160重量份预处理富硒猴头菇块放入300重量份的功能水中，再加入22重量份蛋白酶抑制剂，在5℃低温环境下，密封，400W、40kHz 的超声辅助条件下进行4d自溶反应，然后经过滤、离心分离，得到上层清液，即为富硒猴头菇自溶液；
3)分步等电点沉降：逐次分步调节富硒猴头菇自溶液pH至等电点pH＝5、 pH＝3.5，在每一等电点沉淀离心，分别收集各等电点所得沉淀，得到酸性蛋白质，剩余上清液再逐次分步调节pH＝8、pH＝10，在每一等电点沉淀离心，分别收集各等电点所得沉淀，得到碱性蛋白质，将酸性蛋白质和碱性蛋白质混合，得到富硒猴头菇蛋白粗提物；
4)酶解：将步骤3)所得富硒猴头菇蛋白粗提物和30重量份水混合，在55℃，调节pH至6，添加0.1重量份蛋白酶进行4h酶解，得到富硒猴头菇蛋白酶解液；
5)灭菌干燥：将富硒猴头菇蛋白酶解液经137℃灭菌4s，-40℃冷冻干燥 16h，得到易吸收的高有机硒含量的食用菌蛋白粉。
所述蛋白酶为木瓜蛋白酶。
所述功能水为复磁化磁载体脱气水。
所述复磁化磁载体脱气水的制备方法，包括以下步骤：
S1.按照料液比1g:200mL将磁载体投入水中，加热至沸腾，持续沸腾7min 后，迅速密封隔绝空气，并在15min内降至室温，得到磁载体脱气水；
S2.将磁载体脱气水在场强1.2T条件下进行8s磁化处理，得到复磁化磁载体脱气水。
所述磁载体为粉煤灰。
所述步骤2)超声辅助自溶为间断式超声辅助，具体为每连续超声处理1.5h 后停顿25min，再进行下一次超声处理。
所述蛋白酶抑制剂为E-64。
实施例5
易吸收的高有机硒含量的食用菌蛋白粉的制备方法，包括以下步骤：
1)原料预处理：取新鲜富硒猴头菇，洗净晾干后破碎为2g/块的块状，经紫外线杀菌，得到预处理富硒猴头菇块；
2)超声辅助自溶：将160重量份预处理富硒猴头菇块放入300重量份的功能水中，再加入22重量份蛋白酶抑制剂，在5℃低温环境下，密封，400W、40kHz 的超声辅助条件下进行4d自溶反应，然后经过滤、离心分离，得到上层清液，即为富硒猴头菇自溶液；
3)分步等电点沉降：逐次分步调节富硒猴头菇自溶液pH至等电点pH＝5、 pH＝3.5，在每一等电点沉淀离心，分别收集各等电点所得沉淀，得到酸性蛋白质，剩余上清液再逐次分步调节pH＝8、pH＝10，在每一等电点沉淀离心，分别收集各等电点所得沉淀，得到碱性蛋白质，将酸性蛋白质和碱性蛋白质混合，得到富硒猴头菇蛋白粗提物；
4)酶解：将步骤3)所得富硒猴头菇蛋白粗提物和30重量份水混合，在 55℃，调节pH至6，添加0.1重量份蛋白酶进行4h酶解，得到富硒猴头菇蛋白酶解液；
5)灭菌干燥：将富硒猴头菇蛋白酶解液经137℃灭菌4s，-40℃冷冻干燥 16h，得到易吸收的高有机硒含量的食用菌蛋白粉。
所述蛋白酶为木瓜蛋白酶。
所述功能水为复磁化磁载体脱气水。
所述复磁化磁载体脱气水的制备方法，包括以下步骤：
S1.按照料液比1g:200mL将磁载体投入水中，加热至沸腾，持续沸腾7min 后，迅速密封隔绝空气，并在15min内降至室温，得到磁载体脱气水；
S2.将磁载体脱气水在场强1.2T条件下进行8s磁化处理，得到复磁化磁载体脱气水。
所述磁载体为粉煤灰。
所述步骤2)超声辅助自溶为间断式超声辅助，具体为每连续超声处理1.5h 后停顿25min，再进行下一次超声处理。
所述蛋白酶抑制剂为EDTA。
实施例6
易吸收的高有机硒含量的食用菌蛋白粉的制备方法，包括以下步骤：
1)原料预处理：取新鲜富硒猴头菇，洗净晾干后破碎为2g/块的块状，经紫外线杀菌，得到预处理富硒猴头菇块；
2)超声辅助自溶：将160重量份预处理富硒猴头菇块放入300重量份的功能水中，再加入22重量份蛋白酶抑制剂，在5℃低温环境下，密封，400W、40kHz 的超声辅助条件下进行4d自溶反应，然后经过滤、离心分离，得到上层清液，即为富硒猴头菇自溶液；
3)分步等电点沉降：逐次分步调节富硒猴头菇自溶液pH至等电点pH＝5、 pH＝3.5，在每一等电点沉淀离心，分别收集各等电点所得沉淀，得到酸性蛋白质，剩余上清液再逐次分步调节pH＝8、pH＝10，在每一等电点沉淀离心，分别收集各等电点所得沉淀，得到碱性蛋白质，将酸性蛋白质和碱性蛋白质混合，得到富硒猴头菇蛋白粗提物；
4)酶解：将步骤3)所得富硒猴头菇蛋白粗提物和30重量份水混合，在 55℃，调节pH至6，添加0.1重量份蛋白酶进行4h酶解，得到富硒猴头菇蛋白酶解液；
5)灭菌干燥：将富硒猴头菇蛋白酶解液经137℃灭菌4s，-40℃冷冻干燥 16h，得到易吸收的高有机硒含量的食用菌蛋白粉。
所述蛋白酶为木瓜蛋白酶。
所述功能水为复磁化磁载体脱气水。
所述复磁化磁载体脱气水的制备方法，包括以下步骤：
S1.按照料液比1g:200mL将磁载体投入水中，加热至沸腾，持续沸腾7min 后，迅速密封隔绝空气，并在15min内降至室温，得到磁载体脱气水；
S2.将磁载体脱气水在场强1.2T条件下进行8s磁化处理，得到复磁化磁载体脱气水。
所述磁载体为粉煤灰。
所述步骤2)超声辅助自溶为间断式超声辅助，具体为每连续超声处理1.5h 后停顿25min，再进行下一次超声处理。
所述蛋白酶抑制剂由E-64和EDTA按照重量比5:2组成。
实施例7
易吸收的高有机硒含量的食用菌蛋白粉的制备方法，包括以下步骤：
1)原料预处理：取新鲜富硒猴头菇，洗净晾干后破碎为2g/块的块状，经紫外线杀菌，得到预处理富硒猴头菇块；
2)低温低氧自溶：将160重量份预处理富硒猴头菇块放入300重量份的功能水中，在5℃低温环境下，密封，进行4d自溶反应，然后经过滤、离心分离，得到上层清液，即为富硒猴头菇自溶液；
3)分步等电点沉降：逐次分步调节富硒猴头菇自溶液pH至等电点pH＝5、 pH＝3.5，在每一等电点沉淀离心，分别收集各等电点所得沉淀，得到酸性蛋白质，剩余上清液再逐次分步调节pH＝8、pH＝10，在每一等电点沉淀离心，分别收集各等电点所得沉淀，得到碱性蛋白质，将酸性蛋白质和碱性蛋白质混合，得到富硒猴头菇蛋白粗提物；
4)酶解：将步骤3)所得富硒猴头菇蛋白粗提物和30重量份水混合，在 55℃，调节pH至6，添加0.1重量份蛋白酶进行4h酶解，得到富硒猴头菇蛋白酶解液；
5)灭菌干燥：将富硒猴头菇蛋白酶解液经137℃灭菌4s，-40℃冷冻干燥 16h，得到易吸收的高有机硒含量的食用菌蛋白粉。
所述蛋白酶为木瓜蛋白酶。
所述功能水为脱气水。
所述脱气水的制备方法，包括以下步骤：
将水加热至沸腾，持续沸腾7min后，迅速密封隔绝空气，并在15min内降至室温，得到脱气水。
测试例1
(1)蛋白粉得率测试
蛋白粉得率＝易吸收的高有机硒含量的食用菌蛋白粉质量/预处理富硒猴头菇块质量×100％
(2)蛋白粉中硒含量的测试
分别取各实施例制备的易吸收的高有机硒含量的食用菌蛋白粉，参照GB5009.93-2017《食品安全国家标准食品中硒的测定》，采用氢化物原子荧光光谱法测试硒含量，试样用微波消解。
测试结果见表1。
表1：蛋白粉得率和蛋白粉中硒含量的测试结果
| 蛋白粉得率(％) | 硒含量(mg/kg) | |
| 实施例1 | 2.57 | 252 |
| 实施例2 | 2.82 | 273 |
| 实施例3 | 3.06 | 288 |
| 实施例4 | 3.16 | 294 |
| 实施例5 | 3.19 | 299 |
| 实施例6 | 3.27 | 310 |
| 实施例7 | 1.88 | 226 |
测试例2
参照GB 5009.5-2016《食品安全国家标准食品中蛋白质的测定》采用凯氏定氮法检测总蛋白质含量；
参照中国专利CN 104561206 A《一种易吸收的胶原蛋白肽》中实验例1多肽分子量的测定方法，检测蛋白质分子量分布，计算分子量小于2000Da的多肽在总蛋白质中的占比。
测试结果见表2。
表2：总蛋白质含量和小分子多肽占比测试结果
实施例7在低温低氧条件下自溶，未使用超声辅助，自溶速度缓慢，蛋白粉得率低。由于蛋白质与多糖等其他大分子结构有连结，蛋白粉中蛋白质纯度不高。而蛋白酶对溶出蛋白质的降解、分解作用也导致其中有机硒含量降低。实施例1在实施例7的基础上采用间断式超声辅助自溶，对细胞壁细胞膜产生机械破坏，提高通透性，同时能激发果胶酶、纤维素酶等的活性，加快细胞壁分解，有助于蛋白质的溶出，提高蛋白粉得率。超声对多糖等大分子的降解作用，有助于提高蛋白质纯度，采用间断式超声，减轻超声对蛋白质的过度降解，有效减少含硒蛋白和硒蛋白降解所导致的硒的损失，提高硒含量。
实施例2在实施例1的基础上在功能水中加入了磁载体，磁载体对酶有激活促进作用，有效提升自溶效果。实施例3进一步对受高温作用，磁性降低的磁载体进行了复磁化处理，提高磁性，从而达到对自溶促进作用的提高。蛋白粉得率、硒含量、蛋白质纯度提高，但易造成部分蛋白质的过度降解、分解造成蛋白质和有机硒的损失。
蛋白酶抑制剂能减缓自溶过程中蛋白质的降解、分解，有助于提高蛋白粉得率，与超声和磁载体相互辅助，控制蛋白质分子量相对均衡，避免后续外源酶作用后导致蛋白质分子量过大或过小，而影响生物活性。实施例4添加半胱氨酸蛋白酶抑制剂E-64，针对性的对半胱氨酸蛋白进行保护，尽量保证高生物活性物质硒代半胱氨酸蛋白的结构，且不影响其他蛋白酶的活性；实施例5添加金属蛋白酶抑制剂EDTA，并且是一种金属离子螯合剂，降低重金属离子对酶的抑制作用，在一定程度上有助于促进自溶的进行。实施例6将E-64和EDTA 共同使用，EDTA对E-64还有增强作用，在保护有机硒蛋白的同时，减小对自溶效果的影响，提高硒含量，蛋白粉得率与总蛋白含量。
Claims (10)
1.易吸收的高有机硒含量的食用菌蛋白粉的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)原料预处理：取新鲜高有机硒含量的食用菌，洗净晾干后破碎为1-2g/块的块状，经紫外线杀菌，得到预处理高有机硒含量的食用菌块；
2)超声辅助自溶：将100-200重量份预处理高有机硒含量的食用菌块放入200-500重量份的功能水中，在4-8℃低温环境下，密封，300-600W、30-80kHz的超声辅助条件下进行3-5d自溶反应，然后经过滤、离心分离，得到上层清液，即为高有机硒含量的食用菌自溶液；
3)分步等电点沉降：逐次分步调节高有机硒含量的食用菌自溶液pH至等电点pH＝5-6、3-4，在每一等电点沉淀离心，分别收集各等电点所得沉淀，得到酸性蛋白质，剩余上清液再逐次分步调节pH＝8-9、9-10，在每一等电点沉淀离心，分别收集各等电点所得沉淀，得到碱性蛋白质，将酸性蛋白质和碱性蛋白质混合，得到高有机硒含量的食用菌蛋白粗提物；
4)酶解：将步骤3)所得高有机硒含量的食用菌蛋白粗提物和10-50重量份水混合，在适宜的温度和pH条件下，添加0.1-0.3重量份蛋白酶进行4-6h酶解，得到高有机硒含量的食用菌蛋白酶解液；
5)灭菌干燥：将高有机硒含量的食用菌蛋白酶解液经135-140℃灭菌3-6s，-40-(-30)℃冷冻干燥12-24h，得到易吸收的高有机硒含量的食用菌蛋白粉。
2.如权利要求1所述的易吸收的高有机硒含量的食用菌蛋白粉的制备方法，其特征在于，所述蛋白酶选自碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶中的至少一种。
3.如权利要求1所述的易吸收的高有机硒含量的食用菌蛋白粉的制备方法，其特征在于，所述功能水为脱气水、磁载体脱气水、复磁化磁载体脱气水中的任意一种。
4.如权利要求3所述的易吸收的高有机硒含量的食用菌蛋白粉的制备方法，其特征在于，所述脱气水的制备方法，包括以下步骤：
将水加热至沸腾，持续沸腾5-10min后，迅速密封隔绝空气，并在10-20min内降至室温，得到脱气水。
5.如权利要求3所述的易吸收的高有机硒含量的食用菌蛋白粉的制备方法，其特征在于，所述磁载体脱气水的制备方法，包括以下步骤：
按照料液比1g:(100-300)mL将磁载体投入水中，加热至沸腾，持续沸腾5-10min后，迅速密封隔绝空气，并在10-20min内降至室温，得到磁载体脱气水；
所述磁载体选自四氧化三铁、粉煤灰、钴铁氧体中的任意一种。
6.如权利要求3所述的易吸收的高有机硒含量的食用菌蛋白粉的制备方法，其特征在于，所述复磁化磁载体脱气水的制备方法，包括以下步骤：
S1.按照料液比1g:(100-300)mL将磁载体投入水中，加热至沸腾，持续沸腾5-10min后，迅速密封隔绝空气，并在10-20min内降至室温，得到磁载体脱气水；
S2.将磁载体脱气水在场强0.8-2T条件下进行5-10s磁化处理，得到复磁化磁载体脱气水；
所述磁载体选自四氧化三铁、粉煤灰、钴铁氧体中的任意一种。
7.如权利要求1所述的易吸收的高有机硒含量的食用菌蛋白粉的制备方法，其特征在于，所述步骤2)超声辅助自溶为间断式超声辅助，具体为每连续超声处理1-2h后停顿20-30min，再进行下一次超声处理。
8.如权利要求3所述的易吸收的高有机硒含量的食用菌蛋白粉的制备方法，其特征在于，所述步骤2)超声辅助自溶时，还添加了蛋白酶抑制剂，所述蛋白酶抑制剂选自AEBSF、EDTA、E-64、Bestatin、PespstatinA、Aprotinin中的至少一种。
9.易吸收的高有机硒含量的食用菌蛋白粉，其特征在于，采用如权利要求1-8任一项所述方法制备而成。
10.如权利要求9所述的易吸收的高有机硒含量的食用菌蛋白粉在富硒食品中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111306559.3A CN114287506A (zh) | 2021-11-05 | 2021-11-05 | 易吸收的高有机硒含量的食用菌蛋白粉的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111306559.3A CN114287506A (zh) | 2021-11-05 | 2021-11-05 | 易吸收的高有机硒含量的食用菌蛋白粉的制备方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114287506A true CN114287506A (zh) | 2022-04-08 |
Family
ID=80964136
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202111306559.3A Pending CN114287506A (zh) | 2021-11-05 | 2021-11-05 | 易吸收的高有机硒含量的食用菌蛋白粉的制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114287506A (zh) |
Citations (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103110092A (zh) * | 2013-02-06 | 2013-05-22 | 徐州工程学院 | 一种杏鲍菇活性蛋白肽保健饮料的制作方法 |
| CN103497984A (zh) * | 2013-08-30 | 2014-01-08 | 南京财经大学 | 一种具有免疫活性的大米酶解硒多肽的制备方法 |
| CN104256044A (zh) * | 2014-08-29 | 2015-01-07 | 山西紫团生态农业有限公司 | 一种富硒平菇多肽的制备方法 |
| CN104365988A (zh) * | 2014-11-03 | 2015-02-25 | 苏州硒谷科技有限公司 | 一种利用高硒食用菌提取含硒蛋白的方法 |
| CN105768112A (zh) * | 2016-03-30 | 2016-07-20 | 福建农林大学 | 一种食药用菌蛋白肽-锌螯合物的制备方法 |
| CN105779539A (zh) * | 2016-03-30 | 2016-07-20 | 福建农林大学 | 一种猴头菇蛋白肽-硒螯合物的制备方法 |
| CN106962590A (zh) * | 2017-04-19 | 2017-07-21 | 河北师范大学 | 一种制备食用菌蛋白粉的方法 |
| CN107151687A (zh) * | 2017-06-15 | 2017-09-12 | 西南大学 | 一种利用金针菇菇脚生产蛋白小肽的方法 |
| CN107319304A (zh) * | 2017-08-08 | 2017-11-07 | 山东省农业科学院农产品研究所 | 一种食用菌酶解工艺及其用于制备食用菌面粉的应用 |
| CN107353321A (zh) * | 2017-08-11 | 2017-11-17 | 广西壮族自治区农业科学院农业资源与环境研究所 | 一种从富硒大米中提取植物硒蛋白的方法 |
| CN108157579A (zh) * | 2018-01-08 | 2018-06-15 | 恩施德源健康科技发展有限公司 | 一种高有机硒含量的堇叶碎米荠硒多肽的制备方法 |
| CN108822187A (zh) * | 2018-07-17 | 2018-11-16 | 陕西省安康市圣泰生物科技有限责任公司 | 一种从富硒茶叶中低温超声连续提取速溶富硒蛋白粉生产工艺 |
| CN109965075A (zh) * | 2019-03-11 | 2019-07-05 | 江苏中农科食品工程有限公司 | 一种从富硒食用菌中提取硒蛋白的方法 |
| CN110387395A (zh) * | 2019-08-23 | 2019-10-29 | 武汉轻工大学 | 富硒平菇蛋白肽粉的制备方法及富硒固体饮料 |
-
2021
- 2021-11-05 CN CN202111306559.3A patent/CN114287506A/zh active Pending
Patent Citations (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103110092A (zh) * | 2013-02-06 | 2013-05-22 | 徐州工程学院 | 一种杏鲍菇活性蛋白肽保健饮料的制作方法 |
| CN103497984A (zh) * | 2013-08-30 | 2014-01-08 | 南京财经大学 | 一种具有免疫活性的大米酶解硒多肽的制备方法 |
| CN104256044A (zh) * | 2014-08-29 | 2015-01-07 | 山西紫团生态农业有限公司 | 一种富硒平菇多肽的制备方法 |
| CN104365988A (zh) * | 2014-11-03 | 2015-02-25 | 苏州硒谷科技有限公司 | 一种利用高硒食用菌提取含硒蛋白的方法 |
| CN105768112A (zh) * | 2016-03-30 | 2016-07-20 | 福建农林大学 | 一种食药用菌蛋白肽-锌螯合物的制备方法 |
| CN105779539A (zh) * | 2016-03-30 | 2016-07-20 | 福建农林大学 | 一种猴头菇蛋白肽-硒螯合物的制备方法 |
| CN106962590A (zh) * | 2017-04-19 | 2017-07-21 | 河北师范大学 | 一种制备食用菌蛋白粉的方法 |
| CN107151687A (zh) * | 2017-06-15 | 2017-09-12 | 西南大学 | 一种利用金针菇菇脚生产蛋白小肽的方法 |
| CN107319304A (zh) * | 2017-08-08 | 2017-11-07 | 山东省农业科学院农产品研究所 | 一种食用菌酶解工艺及其用于制备食用菌面粉的应用 |
| CN107353321A (zh) * | 2017-08-11 | 2017-11-17 | 广西壮族自治区农业科学院农业资源与环境研究所 | 一种从富硒大米中提取植物硒蛋白的方法 |
| CN108157579A (zh) * | 2018-01-08 | 2018-06-15 | 恩施德源健康科技发展有限公司 | 一种高有机硒含量的堇叶碎米荠硒多肽的制备方法 |
| CN108822187A (zh) * | 2018-07-17 | 2018-11-16 | 陕西省安康市圣泰生物科技有限责任公司 | 一种从富硒茶叶中低温超声连续提取速溶富硒蛋白粉生产工艺 |
| CN109965075A (zh) * | 2019-03-11 | 2019-07-05 | 江苏中农科食品工程有限公司 | 一种从富硒食用菌中提取硒蛋白的方法 |
| CN110387395A (zh) * | 2019-08-23 | 2019-10-29 | 武汉轻工大学 | 富硒平菇蛋白肽粉的制备方法及富硒固体饮料 |
Non-Patent Citations (7)
| Title |
|---|
| 刘庆;李超;耿中华;张前程;: "杏鲍菇蛋白的中性蛋白酶酶解工艺优化", 农业机械, no. 14 * |
| 刘静;李湘利;苗仙仙;魏海香;赵敏;薛丽萍;: "蛋白酶水解鸡枞菌制备酶解液工艺优化及抗氧化活性", 中国调味品, no. 03 * |
| 戴志刚, 陈明杰, 潘迎捷: "草菇低温诱导蛋白分离纯化及其部分性质的测定", 菌物系统, no. 04 * |
| 田敏爵;李好;: "富硒猴头菌中含硒蛋白提取工艺研究", 现代农业科技, no. 19 * |
| 蒋益;王红连;何静霞;全卫丰;张一平;薛;刘广建;季宏更;汪洁;张东升;: "菌渣蛋白肽的制备及其抗氧化肽的分离鉴定", 食用菌, no. 02 * |
| 钱磊;张志军;周永斌;刘连强;翟宏伟;刘建华;: "酶法水解滑菇蛋白制备抗氧化肽的工艺优化", 食品工业科技, no. 20 * |
| 顾宗珠;沈健;王瑶;: "中性蛋白酶水解香菇的研究", 中国调味品, no. 03 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN108998488B (zh) | 一种活性蜂王浆oco多肽冻干粉及其制备方法 | |
| CN108244402B (zh) | 一种适用于贻贝的蛋白源重金属脱除剂及其制备方法 | |
| KR20070105714A (ko) | 해삼펩타이드 캡슐의 제조방법 | |
| CN1478421A (zh) | 一种海参全粉食品及其制备方法 | |
| WO2020238151A1 (zh) | 一种咸味增强肽及其制备方法和用途 | |
| CN108642111A (zh) | 一种鱼皮胶原蛋白肽螯合亚铁的制备方法 | |
| CN114287506A (zh) | 易吸收的高有机硒含量的食用菌蛋白粉的制备方法 | |
| CN109504731B (zh) | 一种羊胎盘活性肽的制备方法 | |
| CN108796016B (zh) | 核桃肽及其酶解提取方法 | |
| CN108517343B (zh) | 一种条斑紫菜抗氧化蛋白肽的制备方法 | |
| CN106636039A (zh) | 一种菠萝蛋白酶的提取方法 | |
| CN112898447B (zh) | 一种白首乌多糖的提取方法 | |
| KR20110116885A (ko) | 말태반 발효물의 제조방법 | |
| CN111424067B (zh) | 一种低分量海参活性肽的提取方法 | |
| KR20160049251A (ko) | 참치심장으로부터 분리한 항산화 펩타이드의 제조방법 | |
| CN113957112A (zh) | 一种鹿血肽的制备方法及鹿血肽 | |
| CN115381861B (zh) | 一种菌菇营养液的提取方法及其应用 | |
| CN108040939B (zh) | 一种控制贻贝重金属富集的暂养方法 | |
| JP4414837B2 (ja) | 自己消化酵母エキスの製造方法 | |
| CN112321701A (zh) | 一种酪氨酸酶抑制剂及应用 | |
| Kuepethkaew et al. | A Novel Rapid Ultrasonic Treatment for Acid Protease Extraction from Threadfin Bream and Lizardfish Stomachs and Their Biochemical Characterization | |
| CN114933648B (zh) | 一种以鱼鳞生产胶原二肽的方法 | |
| CN111109573A (zh) | 一种骨素分段式抽提生产工艺 | |
| JP2004105074A (ja) | 鮮度保持剤及びその製造方法 | |
| CN114317656B (zh) | 一种生物活性带鱼肽微量元素螯合物及其制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |