CN104365988A - 一种利用高硒食用菌提取含硒蛋白的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种利用高硒食用菌提取含硒蛋白的方法，其特征在于包括以下步骤：A.高硒食用菌子实体的培育；B.高硒食用菌子实体漂洗与干燥；C.高硒食用菌子实体的粉碎；D.溶解处理；E.蛋白沉淀处理；F.偷袭处理；G.硒蛋白溶液进行喷雾干燥或真空冷冻干燥，得到纯净的硒蛋白粉。该方法生产的食用蛋白含硒量比较高，而且可操作性强，能够实现标准化生产，保证所生产的含硒蛋白硒含量的稳定。
Description
技术领域
本发明涉及一种利用高硒食用菌提取含硒蛋白的方法，属于功能性食品的加工领域。
背景技术
硒是人体必需的微量元素，是谷胱甘肽过氧化物酶的必需成分，硒有抗氧化的作用，与人体健康息息相关，硒具有抗癌、保护心脏、抗肝坏死、防治近视和白内障、解毒、提高免疫力、延缓衰老和增强生殖功能等多种药理作用。据不完全统计，世界上有40多个国家和地区缺硒，而我国有72％的地区属于缺硒地区，因此，寻找和开发富硒产品，以保证人体摄入充足的硒，正被各国科学工作者关注。
食用菌是一大类可供食用的真菌，富含丰富的氨基酸和多糖等营养物质，营养价值丰富，同时具有很高的药用价值，是公认的高营养保健食品，成为FAO推荐的21世纪健康食品，WHO推荐的“一荤一素一菇”健康膳食三大基石之一，具有广阔的发展前景。
补硒的方式多种多样，有各种含硒的保健品、各种富硒农产品等。经过几十年的发展，人们补硒的硒源从第一代补硒产品的亚硒酸钠，到第二代产品的富硒酵母，目前正在发展的第三代补硒产品，则以各种形式的有机硒为主，既包括通过各种植物转化得到的有机硒，也包括通过动物转化得到的富硒牛奶、鸡蛋等等有机硒源，而含硒蛋白就是第三代硒源中其主要作用的活性物质。目前关于硒蛋白的提取方法及工艺，尚报道的比较少。“一种米糠硒蛋白粉的制备方法”(专利号：ZL201210494766.0)、“一种米糠硒蛋白与大豆蛋白复配胶囊”(专利申请号：201310287485.2)两篇专利介绍的就是利用NaOH碱提的方法从米糠中提取硒蛋白，最终得到的蛋白硒含量为0.2～0.3mg/kg。“富硒灵芝中硒蛋白的制备方法”(专利号：ZL201010179117.2)介绍的则是利用富硒灵芝通过NaOH碱提与离子交换层析柱相结合的方法进行蛋白的提取，最终得到的蛋白硒含量为6mg/kg。“从富硒酵母中提取含硒蛋白的方法”(专利申请号： 201110440135.6)介绍了从富硒酵母中通过碱提的方法提取含硒蛋白，通过该方法得到的硒的提取率在70％以上。“富硒酵母中含硒蛋白的制备方法”(专利申请号：201210288241.1)则采用盐析和透析相结合并利用洗脱柱纯化的方法制备蛋白硒。“一种富硒绿茶硒蛋白的提取方法”(200910181276.3)介绍的则是利用NaOH碱提的方法从茶叶中提取硒蛋白。以上这些蛋白提取方法利用不同的材料进行硒蛋白的提取，最终得到的硒蛋白产率与硒含量均与选择的材料硒含量及蛋白含量相关，因此选择好的富硒材料来进行硒蛋白的提取是相当重要的。
有鉴于上述的缺陷，本设计人，积极加以研究创新，以期创设一种利用高硒食用菌提取含硒蛋白的方法，使其更具有产业上的利用价值。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明的目的是提供一种利用高硒食用菌提取含硒蛋白的方，旨在解决对目前硒蛋白提取过程中出现的硒蛋白产率低，及硒蛋白硒含量低的问题。
本发明提供的技术方案如下：
A.高硒食用菌子实体的培育：高硒食用菌采用粘土负载亚硒酸钠缓释剂的方法培育得到，其特征在于所述方法包括在食用菌栽培料中按10％的比例加入高硒缓释添加剂，然后按照食用菌正常的培育方法进行高硒食用菌的栽培。
优选的，所述的高硒缓释添加剂以组分的重量份数计包括：
亚硒酸钠 0.22-0.44重量份数；
粘土 100重量份数；
优选的，所述的高硒缓释添加剂中硒含量为1000-2000mg/kg。
优选的，所述粘土为纳米级的中性粘土或高粘凹土。
优选的，所述的食用菌包括杏鲍菇、鸡腿菇、秀珍菇、灵芝、平菇等食用菌中的一种。
优选的，所述高硒缓释添加剂的制备方法为：将亚硒酸钠溶于水中配置成溶液，然后与粘土均匀混合后于50-60℃进行低温烘干，然后进行超微粉碎，制成所述的高硒缓释添加剂。
优选的，本发明所述的高硒缓释添加剂，经过本申请人的研究证实，所述的高硒缓释添加剂在溶液状态下，经过2小时达到稳定释放状态，溶液中硒溶度可达硒缓释添加剂中原始硒浓度的50％以上，而且稳定释放状态可维持60-90天，起到硒的缓控释放的作用。
根据本方法培育得到的食用菌子实体总硒含量在100-400mg/kg(DW)范围内，与普通食用菌子实体相比较，最高可提高1000倍以上。而且，根据子实体硒形态的检测结果，食用菌中硒绝大部分以有机结合态为主，有机硒比例在80％以上。
B.高硒食用菌子实体漂洗与干燥：将优选的高硒食用菌子实体进行漂洗，洗净后将子实体置于50～55℃下烘干。
C.高硒食用菌子实体的粉碎：将干燥的食用菌子实体进行粉碎，过120目筛，得到高硒食用菌子实体菌粉。
D.将C中得到的高硒食用菌子实体菌粉用pH 10～14的NaOH溶液进行溶解，料液比为1:10～1:20，并于37℃水溶中浸提2～5h，离心，取上清液。
E.收集D中的上清液，用0.2mol/L的HCl调至中性。然后加入80～95％饱和度的硫酸铵，并于4℃静止12～15h后用高速冷冻离心机进行离心，转速为10000rpm，取沉淀；
F.收集E中沉淀，用少量pH7.0左右的Tris-HCl缓冲液溶解沉淀，并放入透析袋中进行透析，直至无硫酸根离子，最终得到硒蛋白溶液。
G.对F中得到的硒蛋白溶液进行喷雾干燥或真空冷冻干燥，得到纯净的硒蛋白粉。
对所到的富硒蛋白粉进行总硒测定，总硒含量在25～100mg/kg范围内。
借由上述方案，本发明至少具有以下优点：
(1)本发明实现了高硒食用菌的深加工，利用高硒食用菌提取得到了富硒蛋白，提高了富硒食用菌的附加值；
(2)本发明中采用的高硒食用菌作为原料，总硒含量高，而且高硒食用菌中的硒绝大部分以蛋白结合态为主，硒蛋白含量高，因此最终得到的富硒蛋白硒含量高，达到25～100mg/kg
上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例进行详细说明。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1
富硒蛋白的提取
A.用菌子实体的培育：高硒食用菌采用粘土负载亚硒酸钠缓释剂的方法培育得到，其特征在于所述方法包括在食用菌栽培料中按10％的比例加入高硒缓释添加剂，然后按照食用菌正常的培育方法进行高硒食用菌的栽培。
优选的，所述的高硒缓释添加剂以组分的重量份数计包括：
亚硒酸钠 0.22重量份数；
粘土 100重量份数；
优选的，所述的高硒缓释添加剂中硒含量为1000mg/kg。
优选的，所述粘土为纳米级的中性粘土或高粘凹土。
优选的，所述的食用菌包括杏鲍菇、鸡腿菇、秀珍菇、灵芝、平菇等食用菌中的一种。
优选的，所述高硒缓释添加剂的制备方法为：将亚硒酸钠溶于水中配置成溶液，然后与粘土均匀混合后于50-60℃进行低温烘干，然后进行超微粉碎，制成所述的高硒缓释添加剂。
优选的，本发明所述的高硒缓释添加剂，经过本申请人的研究证实，所述的高硒缓释添加剂在溶液状态下，经过2小时达到稳定释放状态，溶液中硒溶度可达硒缓释添加剂中原始硒浓度的50％以上，而且稳定释放状态可维持60-90天，起到硒的缓控释放的作用。
根据本方法培育得到的香菇子实体总硒含量在100mg/kg(DW)范围内，与普通香菇子实体相比较，最高可提高1000倍以上。而且，根据子实体硒形态的检测结果，食用菌中硒绝大部分以有机结合态为主，有机硒比例在80％以上。
B.用菌子实体漂洗与干燥：将优选的高硒食用菌子实体进行漂洗，洗净后将子实体置于50～55℃下烘干。
C.用菌子实体的粉碎：将干燥的食用菌子实体进行粉碎，过120目筛，得到高硒食用菌子实体菌粉。
D.将C中粉用pH 10的NaOH溶液进行溶解，料液比为1:10，并于37℃水溶中浸提2～5h，离心，取上清液。
E.收集D中的上清液，用0.2mol/L的HCl调至中性。然后加入80～95％饱和度的硫酸铵，并于4℃静止12～15h后用高速冷冻离心机进行离心，转速为10000rpm，取沉淀；
F.收集E中沉淀，用少量pH7.0左右的Tris-HCl缓冲液溶解沉淀，并放入透析袋中进行透析，直至无硫酸根离子，最终得到硒蛋白溶液。
G.对F中得到的硒蛋白溶液进行喷雾干燥或真空冷冻干燥，得到纯净的硒蛋白粉。
对得到的富硒蛋白粉进行总硒测定，总硒含量在25mg/kg范围内。
实施例2
富硒蛋白的提取
A.高硒食用菌子实体的培育：高硒食用菌采用粘土负载亚硒酸钠缓释剂的方法培育得到，其特征在于所述方法包括在食用菌栽培料中按10％的比例加入高硒缓释添加剂，然后按照食用菌正常的培育方法进行高硒食用菌的栽培。
优选的，所述的高硒缓释添加剂以组分的重量份数计包括：
亚硒酸钠 0.264重量份数；
粘土 100重量份数；
优选的，所述的高硒缓释添加剂中硒含量为1200mg/kg。
优选的，所述粘土为纳米级的中性粘土或高粘凹土。
优选的，所述的食用菌包括杏鲍菇、鸡腿菇、秀珍菇、灵芝、平菇等食用菌中的一种。
优选的，所述高硒缓释添加剂的制备方法为：将亚硒酸钠溶于水中配置成 溶液，然后与粘土均匀混合后于50-60℃进行低温烘干，然后进行超微粉碎，制成所述的高硒缓释添加剂。
优选的，本发明所述的高硒缓释添加剂，经过本申请人的研究证实，所述的高硒缓释添加剂在溶液状态下，经过2小时达到稳定释放状态，溶液中硒溶度可达硒缓释添加剂中原始硒浓度的50％以上，而且稳定释放状态可维持60-90天，起到硒的缓控释放的作用。
根据本方法培育得到的香菇子实体总硒含量在200mg/kg(DW)范围内，与普通香菇子实体相比较，最高可提高2000倍以上。而且，根据子实体硒形态的检测结果，食用菌中硒绝大部分以有机结合态为主，有机硒比例在80％以上。
B.高硒食用菌子实体漂洗与干燥：将优选的高硒食用菌子实体进行漂洗，洗净后将子实体置于50～55℃下烘干。
C.高硒食用菌子实体的粉碎：将干燥的食用菌子实体进行粉碎，过120目筛，得到高硒食用菌子实体菌粉。
D.将C中得到的高硒食用菌子实体菌粉用pH 10的NaOH溶液进行溶解，料液比为1:10，并于37℃水溶中浸提2～5h，离心，取上清液。
E.收集D中的上清液，用0.2mol/L的HCl调至中性。然后加入80～95％饱和度的硫酸铵，并于4℃静止12～15h后用高速冷冻离心机进行离心，转速为10000rpm，取沉淀；
F.收集E中沉淀，用少量pH7.0左右的Tris-HCl缓冲液溶解沉淀，并放入透析袋中进行透析，直至无硫酸根离子，最终得到硒蛋白溶液。
G.对F中得到的硒蛋白溶液进行喷雾干燥或真空冷冻干燥，得到纯净的硒蛋白粉。
对得到的富硒蛋白粉进行总硒测定，总硒含量在50mg/kg范围内。
实施例3
富硒蛋白的提取
A.高硒食用菌子实体的培育：高硒食用菌采用粘土负载亚硒酸钠缓释剂的方法培育得到，其特征在于所述方法包括在食用菌栽培料中按10％的比例加入 高硒缓释添加剂，然后按照食用菌正常的培育方法进行高硒食用菌的栽培。
优选的，所述的高硒缓释添加剂以组分的重量份数计包括：
亚硒酸钠 0.33重量份数；
粘土 100重量份数；
优选的，所述的高硒缓释添加剂中硒含量为1500mg/kg。
优选的，所述粘土为纳米级的中性粘土或高粘凹土。
优选的，所述的食用菌包括杏鲍菇、鸡腿菇、秀珍菇、灵芝、平菇等食用菌中的一种。
优选的，所述高硒缓释添加剂的制备方法为：将亚硒酸钠溶于水中配置成溶液，然后与粘土均匀混合后于50-60℃进行低温烘干，然后进行超微粉碎，制成所述的高硒缓释添加剂。
优选的，本发明所述的高硒缓释添加剂，经过本申请人的研究证实，所述的高硒缓释添加剂在溶液状态下，经过2小时达到稳定释放状态，溶液中硒溶度可达硒缓释添加剂中原始硒浓度的50％以上，而且稳定释放状态可维持60-90天，起到硒的缓控释放的作用。
根据本方法培育得到的香菇子实体总硒含量在320mg/kg(DW)左右，与普通香菇子实体相比较，最高可提高3000倍以上。而且，根据子实体硒形态的检测结果，食用菌中硒绝大部分以有机结合态为主，有机硒比例在80％以上。
B.高硒食用菌子实体漂洗与干燥：将优选的高硒食用菌子实体进行漂洗，洗净后将子实体置于50～55℃下烘干。
C.高硒食用菌子实体的粉碎：将干燥的食用菌子实体进行粉碎，过120目筛，得到高硒食用菌子实体菌粉。
D.将C中得到的高硒食用菌子实体菌粉用pH 12的NaOH溶液进行溶解，料液比为1:15，并于37℃水溶中浸提2～5h，离心，取上清液。
E.收集D中的上清液，用0.2mol/L的HCl调至中性。然后加入80～95％饱和度的硫酸铵，并于4℃静止12～15h后用高速冷冻离心机进行离心，转速为10000rpm，取沉淀；
F.收集E中沉淀，用少量pH7.0左右的Tris-HCl缓冲液溶解沉淀，并放入 透析袋中进行透析，直至无硫酸根离子，最终得到硒蛋白溶液。
G.对F中得到的硒蛋白溶液进行喷雾干燥或真空冷冻干燥，得到纯净的硒蛋白粉。
对得到的富硒蛋白粉进行总硒测定，总硒含量在80mg/kg范围内。
实施例4
富硒蛋白的提取
A.高硒食用菌子实体的培育：高硒食用菌采用粘土负载亚硒酸钠缓释剂的方法培育得到，其特征在于所述方法包括在食用菌栽培料中按10％的比例加入高硒缓释添加剂，然后按照食用菌正常的培育方法进行高硒食用菌的栽培。
优选的，所述的高硒缓释添加剂以组分的重量份数计包括：
亚硒酸钠 0.44重量份数；
粘土 100重量份数；
优选的，所述的高硒缓释添加剂中硒含量为2000mg/kg。
优选的，所述粘土为纳米级的中性粘土或高粘凹土。
优选的，所述的食用菌包括杏鲍菇、鸡腿菇、秀珍菇、灵芝、平菇等食用菌中的一种。
优选的，所述高硒缓释添加剂的制备方法为：将亚硒酸钠溶于水中配置成溶液，然后与粘土均匀混合后于50-60℃进行低温烘干，然后进行超微粉碎，制成所述的高硒缓释添加剂。
优选的，本发明所述的高硒缓释添加剂，经过本申请人的研究证实，所述的高硒缓释添加剂在溶液状态下，经过2小时达到稳定释放状态，溶液中硒溶度可达硒缓释添加剂中原始硒浓度的50％以上，而且稳定释放状态可维持60-90天，起到硒的缓控释放的作用。
根据本方法培育得到的香菇子实体总硒含量在400mg/kg(DW)范围内，与普通香菇子实体相比较，最高可提高4000倍以上。而且，根据子实体硒形态的检测结果，食用菌中硒绝大部分以有机结合态为主，有机硒比例在80％以上。
B.高硒食用菌子实体漂洗与干燥：将优选的高硒食用菌子实体进行漂洗， 洗净后将子实体置于50～55℃下烘干。
C.高硒食用菌子实体的粉碎：将干燥的食用菌子实体进行粉碎，过120目筛，得到高硒食用菌子实体菌粉。
D.将C中得到的高硒食用菌子实体菌粉用pH 14的NaOH溶液进行溶解，料液比为1:1:20，并于37℃水溶中浸提2～5h，离心，取上清液。
E.收集D中的上清液，用0.2mol/L的HCl调至中性。然后加入80～95％饱和度的硫酸铵，并于4℃静止12～15h后用高速冷冻离心机进行离心，转速为10000rpm，取沉淀；
F.收集E中沉淀，用少量pH7.0左右的Tris-HCl缓冲液溶解沉淀，并放入透析袋中进行透析，直至无硫酸根离子，最终得到硒蛋白溶液。
G.对F中得到的硒蛋白溶液进行喷雾干燥或真空冷冻干燥，得到纯净的硒蛋白粉。
对得到的富硒蛋白粉进行总硒测定，总硒含量在100mg/kg左右。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，并不用于限制本发明，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变型，这些改进和变型也应视为本发明的保护范围。
Claims (7)
1.一种利用高硒食用菌提取含硒蛋白的方法，其特征在于包括以下步骤：
A.高硒食用菌子实体的培育：高硒食用菌采用在食用菌栽培料中按10％的比例加入高硒缓释添加剂，然后采用粘土负载亚硒酸钠缓释剂的方法培育进行高硒香菇的栽培；
B.高硒食用菌子实体漂洗与干燥：将优选的高硒食用菌子实体进行漂洗，洗净后将子实体进行烘干；
C.高硒食用菌子实体的粉碎：将干燥的食用菌子实体进行粉碎，过120目筛，得到高硒食用菌子实体菌粉；
D.将C中得到的高硒食用菌子实体菌粉用pH 10～14的NaOH溶液进行溶解，料液比为1:10～1:20，并于37℃水溶中浸提2～5h，离心，取上清液；
E.收集D中的上清液，用0.2mol/L的HCl调至中性。然后加入80～95％饱和度的硫酸铵，并于4℃静止12～15h后用高速冷冻离心机进行离心，转速为10000rpm，取沉淀；
F.收集E中沉淀，用少量pH7.0左右的Tris-HCl缓冲液溶解沉淀，并放入透析袋中进行透析，直至无硫酸根离子，最终得到硒蛋白溶液；
G.对F中得到的硒蛋白溶液进行喷雾干燥或真空冷冻干燥，得到纯净的硒蛋白粉。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述高硒缓释添加剂以组分的重量份数计包括：
亚硒酸钠 0.22-0.44重量份数；
粘土 100重量份数。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述高硒缓释添加剂中硒含量为1000-2000mg/kg。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述粘土为纳米级的中性粘土或高粘凹土。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的食用菌包括杏鲍菇、鸡腿菇、秀珍菇、灵芝、平菇等食用菌中的一种。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述高硒缓释添加剂的制备方法为：将亚硒酸钠溶于水中配置成溶液，然后与粘土均匀混合后于50-60℃进行低温烘干，然后进行超微粉碎，制成所述的高硒缓释添加剂。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤B中高硒食用菌子实体的干燥温度为50～55℃。
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