CN108040939B - 一种控制贻贝重金属富集的暂养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种控制贻贝重金属富集的暂养方法，包括两次暂养，第一次暂养过程中加入蛋白亚铁螯合肽，并投放沼泽红假单胞菌和大型海藻协同脱除或吸附重金属；第二次暂养过程中加入免疫增强剂，提高贻贝的免疫力。本发明的养殖方法有效降低了贻贝重金属含量，并提高了贻贝成活率，促进其生长。
Description
技术领域
本发明涉及一种贻贝养殖方法，具体涉及一种控制贻贝重金属富集的暂养方法。属于水产养殖技术领域。
背景技术
贻贝一种双壳类软体动物，生活在海滨岩石上，是一种广受人们喜爱的海鲜品，可以蒸、煮食之，也可剥壳后和其他青菜混炒，味均鲜美。据分析，每百克鲜贝肉含蛋白质10.8克，糖2.4克，灰分2.4克，脂肪1.4克，干制贻贝肉蛋白质含量高达59.3％。贻贝还含有多种维生素及人体必需的锰、锌、硒、碘等多种微量元素。值得一提的是，贻贝的营养价值高还由于它所含的蛋白质有人体需要的缬氨酸、亮氨酸等8种必需氨基酸，其含量大大高于鸡蛋以及鸡、鸭、鱼、虾和肉类等必需氨基酸的含量。另据研究，贻贝脂肪中还含有人体所必需的脂肪酸，其饱和脂肪酸的含量，较猪、牛、羊肉和牛奶等食品为低，不饱和脂肪酸的含量相对较高。被誉为海中鸡蛋。目前贻贝已经广泛人工养殖，产量颇高。
但是，近年来我国养殖区域污染问题日益严重，贻贝食用安全问题日显突出，特别是重金属污染已经成为贻贝食品安全的极大隐患，重金属超标会对人体造成暂时或者持久损伤。贻贝为典型滤食性贝类，如翡翠贻贝、紫贻贝、厚壳贻贝、隔贻贝等，其利用鳃上的纤毛过滤水中的悬浮颗粒为食，因此需要过滤大量的海水。此外，由于贻贝的生存环境一般是近岸，所以贻贝富集重金属和有机化合物的几率也高于其他海洋生物。
重金属污染导致贻贝产品不但无法出口，国内的销售也屡屡受挫，严重影响了贻贝产业的发展。
因此，如何在养殖过程中控制贻贝重金属富集已经成为当务之急。
发明内容
本发明的目的是为克服上述现有技术的不足，提供一种控制贻贝重金属富集的暂养方法。
为实现上述目的，本发明采用下述技术方案：
一种控制贻贝重金属富集的暂养方法，包括以下两次暂养：
(1)第一次暂养：向暂养水体中加入蛋白亚铁螯合肽，并投放沼泽红假单胞菌冻干粉和大型海藻，用于脱除或吸附重金属；其中，蛋白亚铁螯合肽是以干制贻贝肉为原料经酶解、螯合亚铁离子而得，每立方米水体中蛋白亚铁螯合肽、沼泽红假单胞菌冻干粉和大型海藻的投放量分别为1kg、1.5～2kg、2～3kg；
(2)第二次暂养：向暂养水体中加入免疫增强剂，用于提高贻贝的免疫力；每立方米水体中免疫增强剂的加入量为1～2kg，所述免疫增强剂是由以下重量份的组分制成的：L-硒代蛋氨酸10份，β-葡聚糖7～8份，鱼腥草总黄酮提取物5～6份，虾青素5～6份，琼胶寡糖-锌离子配合物2～3份。
优选的，步骤(1)中，第一次暂养时间为7～10天。
优选的，步骤(1)中，暂养水体环境为：水温10～12℃，盐度20～23‰，pH值7.0～7.5，氧气饱和含量60％以上，保持紫外线持续照射的天然海水。
进一步优选的，第一次暂养过程紫外线照射强度为20～30W。
进一步优选的，第一次暂养过程贻贝的暂养密度为12～15kg/L，水体流速为15～20L/min。
优选的，步骤(1)中，蛋白亚铁螯合肽的制备方法如下：将干制贻贝肉冷冻后经液氮粉碎至200～300目，所得粉末加入水中，超声处理1～2小时，加入酶和助剂，50～60℃酶解2～3小时，灭酶活，得到酶解液；然后将氯化亚铁加入到所述酶解液中，在40～50℃条件下振荡螯合40～50分钟，离心，去沉淀，即得；其中，干制贻贝肉、水、酶、助剂和氯化亚铁的质量比为1：15～20：7～8：3～4：10～15。
进一步优选的，所述酶为菠萝酶、胃蛋白酶和枯草杆菌酶的混合物，三者质量比为1：2～3：2～3；所述助剂为异麦芽酮糖醇和壳四糖的混合物，两者的质量比为1：2～3。
进一步优选的，采用85～100℃水浴灭酶活10～15分钟。
进一步优选的，离心分离的转速为3000～5000转/分，时间为20～30分钟。
优选的，步骤(1)中，沼泽红假单胞菌冻干粉的活菌含量≥30×108cfu/g。
优选的，步骤(1)中，所述大型海藻选自鹿角菜、马尾藻或石莼中的任一种或多种。
优选的，步骤(2)中，第二次暂养时间为4～5天。
优选的，步骤(2)中，暂养水体环境为：水温22～23℃，盐度20～21‰，pH值7.0～7.3，氧气饱和含量60％以上，保持紫外线持续照射的天然海水。
进一步优选的，第二次暂养过程紫外线照射强度为12～15W。
进一步优选的，第二次暂养过程贻贝的暂养密度为22～25kg/L，水体流速为30～35L/min。
优选的，步骤(2)中，所述鱼腥草总黄酮提取物的制备方法如下：将鱼腥草干燥、粉碎，在85～90℃条件下，利用体积浓度60～65％的乙醇水溶液提取6～8小时，料液比为1：30，浓缩除去乙醇，喷雾干燥，即得。
优选的，步骤(2)中，所述琼胶寡糖-锌离子配合物的制备方法如下：将琼胶寡糖溶于水中制成15～25g/L的琼胶寡糖水溶液，调节pH＝3.5～4.5，向琼胶寡糖水溶液中加入5～6g/L的锌离子，30～40℃水浴振荡，螯合反应5～6小时，离心得上清液，真空浓缩，冷冻干燥，即得。
优选的，第一次暂养和第二次暂养过程中水体采用循环水模式或流动水模式。
本发明的有益效果：
1、本发明的养殖方法包括两次暂养，第一次暂养过程中加入蛋白亚铁螯合肽，并投放沼泽红假单胞菌和大型海藻协同脱除或吸附重金属；第二次暂养过程中加入免疫增强剂，提高贻贝的免疫力。通过添加重金属脱除或吸附剂和免疫增强剂，使贻贝暂养过程中降低重金属含量的同时，继续促进贻贝生长。
2、蛋白亚铁螯合肽是以干制贻贝肉为原料经酶解、螯合亚铁离子而得，与所养殖贻贝蛋白质富集重金属形成有效竞争，有助于重金属脱除；沼泽红假单胞菌不但能吸收重金属，还能抑制水体中病菌滋生；大型海藻的细胞膜以及膜上营养元素的离子通道，能够使水体中的重金属离子黏附于细胞膜上并通过离子通道进入海藻细胞内，从而净化贻贝通过代谢排入水体中的重金属离子。蛋白亚铁螯合肽、沼泽红假单胞菌和大型海藻三者协同配合，有效减少贻贝对重金属的富集，从而控制贻贝重金属含量。尽管干制贻贝肉可能含有重金属，经酶解，重金属以游离态存在于酶解液中，后续离心即可除去，即使有微量残留，在后续暂养过程中，沼泽红假单胞菌冻干粉和大型海藻等的存在，它们与蛋白亚铁螯合肽协同配合，可以一并除去这一部分重金属。
3、免疫增强剂以L-硒代蛋氨酸、β-葡聚糖、鱼腥草总黄酮提取物、虾青素和琼胶寡糖-锌离子配合物混合制成，进一步减少重金属富集，同时，协同提高贻贝的免疫能力，促进贻贝生长，降低贻贝死亡率。
4、干制贻贝肉在酶和助剂的作用下酶解，其中酶为特定比例的菠萝酶、胃蛋白酶和枯草杆菌酶的混合物，助剂为异麦芽酮糖醇和壳四糖的混合物，酶、助剂协同配合，将干制贻贝肉酶解为适当分子量和长度的蛋白亚铁螯合肽，使其具有更佳的重金属脱除效果。
5、从第一次暂养到第二次暂养，水温上升梯度合适，紫外线照射强度降低，暂养密度和水体流速都有一定程度的增长，通过暂养水体环境的调整，进一步提高贻贝的免疫能力，促进贻贝生长，降低贻贝死亡率。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进行进一步的阐述，应该说明的是，下述说明仅是为了解释本发明，并不对其内容进行限定。
本发明涉及的沼泽红假单胞菌冻干粉，购自扬州市海诚生物技术有限公司；菠萝酶，购自河北亚信生物科技有限公司；胃蛋白酶，购自河南益辉化工产品有限公司；枯草杆菌酶，购自南宁东恒华道生物科技有限公司。
实施例1：
一种控制贻贝重金属富集的暂养方法，包括以下两次暂养：
(1)第一次暂养：向暂养水体中加入蛋白亚铁螯合肽，并投放沼泽红假单胞菌冻干粉和大型海藻，用于脱除或吸附重金属；其中，蛋白亚铁螯合肽是以干制贻贝肉为原料经酶解、螯合亚铁离子而得，每立方米水体中蛋白亚铁螯合肽、沼泽红假单胞菌冻干粉和大型海藻的投放量分别为1kg、1.5kg、2kg；
(2)第二次暂养：向暂养水体中加入免疫增强剂，用于提高贻贝的免疫力；每立方米水体中免疫增强剂的加入量为1kg，所述免疫增强剂是由以下重量份的组分制成的：L-硒代蛋氨酸10份，β-葡聚糖7份，鱼腥草总黄酮提取物5份，虾青素5份，琼胶寡糖-锌离子配合物2份。
步骤(1)中，第一次暂养时间为7天。暂养水体环境为：水温10℃，盐度20‰，pH值7.0，氧气饱和含量60％以上，保持紫外线持续照射的天然海水。第一次暂养过程紫外线照射强度为20W。第一次暂养过程贻贝的暂养密度为12kg/L，水体流速为15L/min。
步骤(1)中，蛋白亚铁螯合肽的制备方法如下：将干制贻贝肉冷冻后经液氮粉碎至200目，所得粉末加入水中，超声处理1小时，加入酶和助剂，50℃酶解2小时，采用85℃水浴灭酶活10分钟，得到酶解液；然后将氯化亚铁加入到所述酶解液中，在40℃条件下振荡螯合40分钟，离心(转速为3000转/分，时间为20分钟)，去沉淀，即得；其中，干制贻贝肉、水、酶、助剂和氯化亚铁的质量比为1：15：7：3：10。酶为菠萝酶、胃蛋白酶和枯草杆菌酶的混合物，三者质量比为1：2：2；助剂为异麦芽酮糖醇和壳四糖的混合物，两者的质量比为1：2。
步骤(1)中，沼泽红假单胞菌冻干粉的活菌含量≥30×108cfu/g。大型海藻为鹿角菜。
步骤(2)中，第二次暂养时间为4～5天。暂养水体环境为：水温22℃，盐度20‰，pH值7.0，氧气饱和含量60％以上，保持紫外线持续照射的天然海水。第二次暂养过程紫外线照射强度为12W。第二次暂养过程贻贝的暂养密度为22kg/L，水体流速为30L/min。
步骤(2)中，鱼腥草总黄酮提取物的制备方法如下：将鱼腥草干燥、粉碎，在85℃条件下，利用体积浓度60％的乙醇水溶液提取6小时，料液比为1：30，浓缩除去乙醇，喷雾干燥，即得。琼胶寡糖-锌离子配合物的制备方法如下：将琼胶寡糖溶于水中制成15g/L的琼胶寡糖水溶液，调节pH＝3.5，向琼胶寡糖水溶液中加入5g/L的锌离子，30℃水浴振荡，螯合反应5小时，离心得上清液，真空浓缩，冷冻干燥，即得。
第一次暂养和第二次暂养过程中水体采用循环水模式。
实施例2：
一种控制贻贝重金属富集的暂养方法，包括以下两次暂养：
(1)第一次暂养：向暂养水体中加入蛋白亚铁螯合肽，并投放沼泽红假单胞菌冻干粉和大型海藻，用于脱除或吸附重金属；其中，蛋白亚铁螯合肽是以干制贻贝肉为原料经酶解、螯合亚铁离子而得，每立方米水体中蛋白亚铁螯合肽、沼泽红假单胞菌冻干粉和大型海藻的投放量分别为1kg、2kg、3kg；
(2)第二次暂养：向暂养水体中加入免疫增强剂，用于提高贻贝的免疫力；每立方米水体中免疫增强剂的加入量为2kg，所述免疫增强剂是由以下重量份的组分制成的：L-硒代蛋氨酸10份，β-葡聚糖8份，鱼腥草总黄酮提取物6份，虾青素6份，琼胶寡糖-锌离子配合物3份。
步骤(1)中，第一次暂养时间为10天。暂养水体环境为：水温12℃，盐度23‰，pH值7.5，氧气饱和含量60％以上，保持紫外线持续照射的天然海水。第一次暂养过程紫外线照射强度为30W。第一次暂养过程贻贝的暂养密度为15kg/L，水体流速为20L/min。
步骤(1)中，蛋白亚铁螯合肽的制备方法如下：将干制贻贝肉冷冻后经液氮粉碎至300目，所得粉末加入水中，超声处理2小时，加入酶和助剂，60℃酶解3小时，采用100℃水浴灭酶活15分钟，得到酶解液；然后将氯化亚铁加入到所述酶解液中，在50℃条件下振荡螯合50分钟，离心(转速为5000转/分，时间为30分钟)，去沉淀，即得；其中，干制贻贝肉、水、酶、助剂和氯化亚铁的质量比为1：20：8：4：15。酶为菠萝酶、胃蛋白酶和枯草杆菌酶的混合物，三者质量比为1：3：3；助剂为异麦芽酮糖醇和壳四糖的混合物，两者的质量比为1：3。
步骤(1)中，沼泽红假单胞菌冻干粉的活菌含量≥30亿cfu/g。大型海藻为马尾藻。
步骤(2)中，第二次暂养时间为5天。暂养水体环境为：水温23℃，盐度21‰，pH值7.3，氧气饱和含量60％以上，保持紫外线持续照射的天然海水。第二次暂养过程紫外线照射强度为15W。第二次暂养过程贻贝的暂养密度为25kg/L，水体流速为35L/min。
步骤(2)中，鱼腥草总黄酮提取物的制备方法如下：将鱼腥草干燥、粉碎，在90℃条件下，利用体积浓度65％的乙醇水溶液提取8小时，料液比为1：30，浓缩除去乙醇，喷雾干燥，即得。琼胶寡糖-锌离子配合物的制备方法如下：将琼胶寡糖溶于水中制成25g/L的琼胶寡糖水溶液，调节pH＝4.5，向琼胶寡糖水溶液中加入6g/L的锌离子，40℃水浴振荡，螯合反应6小时，离心得上清液，真空浓缩，冷冻干燥，即得。
第一次暂养和第二次暂养过程中水体采用流动水模式。
实施例3：
一种控制贻贝重金属富集的暂养方法，包括以下两次暂养：
(1)第一次暂养：向暂养水体中加入蛋白亚铁螯合肽，并投放沼泽红假单胞菌冻干粉和大型海藻，用于脱除或吸附重金属；其中，蛋白亚铁螯合肽是以干制贻贝肉为原料经酶解、螯合亚铁离子而得，每立方米水体中蛋白亚铁螯合肽、沼泽红假单胞菌冻干粉和大型海藻的投放量分别为1kg、1.5kg、3kg；
(2)第二次暂养：向暂养水体中加入免疫增强剂，用于提高贻贝的免疫力；每立方米水体中免疫增强剂的加入量为1kg，所述免疫增强剂是由以下重量份的组分制成的：L-硒代蛋氨酸10份，β-葡聚糖8份，鱼腥草总黄酮提取物5份，虾青素6份，琼胶寡糖-锌离子配合物2份。
步骤(1)中，第一次暂养时间为10天。暂养水体环境为：水温10℃，盐度23‰，pH值7.0，氧气饱和含量60％以上，保持紫外线持续照射的天然海水。第一次暂养过程紫外线照射强度为30W。第一次暂养过程贻贝的暂养密度为12kg/L，水体流速为20L/min。
步骤(1)中，蛋白亚铁螯合肽的制备方法如下：将干制贻贝肉冷冻后经液氮粉碎至200目，所得粉末加入水中，超声处理2小时，加入酶和助剂，50℃酶解3小时，采用85℃水浴灭酶活15分钟，得到酶解液；然后将氯化亚铁加入到所述酶解液中，在40℃条件下振荡螯合50分钟，离心(转速为5000转/分，时间为20分钟)，去沉淀，即得；其中，干制贻贝肉、水、酶、助剂和氯化亚铁的质量比为1：20：7：4：10。酶为菠萝酶、胃蛋白酶和枯草杆菌酶的混合物，三者质量比为1：2：3；助剂为异麦芽酮糖醇和壳四糖的混合物，两者的质量比为1：2。
步骤(1)中，沼泽红假单胞菌冻干粉的活菌含量≥30亿cfu/g。大型海藻为鹿角菜和石莼，两者投放量比例为1：1。
步骤(2)中，第二次暂养时间为5天。暂养水体环境为：水温22℃，盐度21‰，pH值7.0，氧气饱和含量60％以上，保持紫外线持续照射的天然海水。第二次暂养过程紫外线照射强度为15W。第二次暂养过程贻贝的暂养密度为22kg/L，水体流速为35L/min。
步骤(2)中，鱼腥草总黄酮提取物的制备方法如下：将鱼腥草干燥、粉碎，在85℃条件下，利用体积浓度65％的乙醇水溶液提取6小时，料液比为1：30，浓缩除去乙醇，喷雾干燥，即得。琼胶寡糖-锌离子配合物的制备方法如下：将琼胶寡糖溶于水中制成25g/L的琼胶寡糖水溶液，调节pH＝3.5，向琼胶寡糖水溶液中加入6g/L的锌离子，30℃水浴振荡，螯合反应6小时，离心得上清液，真空浓缩，冷冻干燥，即得。
第一次暂养和第二次暂养过程中水体采用循环水模式。
实施例4：
一种控制贻贝重金属富集的暂养方法，包括以下两次暂养：
(1)第一次暂养：向暂养水体中加入蛋白亚铁螯合肽，并投放沼泽红假单胞菌冻干粉和大型海藻，用于脱除或吸附重金属；其中，蛋白亚铁螯合肽是以干制贻贝肉为原料经酶解、螯合亚铁离子而得，每立方米水体中蛋白亚铁螯合肽、沼泽红假单胞菌冻干粉和大型海藻的投放量分别为1kg、2kg、2kg；
(2)第二次暂养：向暂养水体中加入免疫增强剂，用于提高贻贝的免疫力；每立方米水体中免疫增强剂的加入量为2kg，所述免疫增强剂是由以下重量份的组分制成的：L-硒代蛋氨酸10份，β-葡聚糖7份，鱼腥草总黄酮提取物6份，虾青素5份，琼胶寡糖-锌离子配合物3份。
步骤(1)中，第一次暂养时间为7天。暂养水体环境为：水温12℃，盐度20‰，pH值7.5，氧气饱和含量60％以上，保持紫外线持续照射的天然海水。第一次暂养过程紫外线照射强度为20W。第一次暂养过程贻贝的暂养密度为15kg/L，水体流速为15L/min。
步骤(1)中，蛋白亚铁螯合肽的制备方法如下：将干制贻贝肉冷冻后经液氮粉碎至300目，所得粉末加入水中，超声处理1小时，加入酶和助剂，60℃酶解2小时，采用100℃水浴灭酶活10分钟，得到酶解液；然后将氯化亚铁加入到所述酶解液中，在50℃条件下振荡螯合40分钟，离心(转速为3000转/分，时间为30分钟)，去沉淀，即得；其中，干制贻贝肉、水、酶、助剂和氯化亚铁的质量比为1：15：8：3：15。酶为菠萝酶、胃蛋白酶和枯草杆菌酶的混合物，三者质量比为1：3：2；助剂为异麦芽酮糖醇和壳四糖的混合物，两者的质量比为1：3。
步骤(1)中，沼泽红假单胞菌冻干粉的活菌含量≥30亿cfu/g。大型海藻为鹿角菜和马尾藻，两者投放量比例为1：1。
步骤(2)中，第二次暂养时间为4天。暂养水体环境为：水温23℃，盐度20‰，pH值7.3，氧气饱和含量60％以上，保持紫外线持续照射的天然海水。第二次暂养过程紫外线照射强度为12W。第二次暂养过程贻贝的暂养密度为25kg/L，水体流速为30L/min。
步骤(2)中，鱼腥草总黄酮提取物的制备方法如下：将鱼腥草干燥、粉碎，在90℃条件下，利用体积浓度60％的乙醇水溶液提取8小时，料液比为1：30，浓缩除去乙醇，喷雾干燥，即得。琼胶寡糖-锌离子配合物的制备方法如下：将琼胶寡糖溶于水中制成15g/L的琼胶寡糖水溶液，调节pH＝4.5，向琼胶寡糖水溶液中加入5g/L的锌离子，40℃水浴振荡，螯合反应5小时，离心得上清液，真空浓缩，冷冻干燥，即得。
第一次暂养和第二次暂养过程中水体采用流动水模式。
实施例5：
一种控制贻贝重金属富集的暂养方法，包括以下两次暂养：
(1)第一次暂养：向暂养水体中加入蛋白亚铁螯合肽，并投放沼泽红假单胞菌冻干粉和大型海藻，用于脱除或吸附重金属；其中，蛋白亚铁螯合肽是以干制贻贝肉为原料经酶解、螯合亚铁离子而得，每立方米水体中蛋白亚铁螯合肽、沼泽红假单胞菌冻干粉和大型海藻的投放量分别为1kg、1.8kg、2.5kg；
(2)第二次暂养：向暂养水体中加入免疫增强剂，用于提高贻贝的免疫力；每立方米水体中免疫增强剂的加入量为1.5kg，所述免疫增强剂是由以下重量份的组分制成的：L-硒代蛋氨酸10份，β-葡聚糖7.5份，鱼腥草总黄酮提取物5.5份，虾青素5.5份，琼胶寡糖-锌离子配合物2.5份。
步骤(1)中，第一次暂养时间为8天。暂养水体环境为：水温11℃，盐度22‰，pH值7.2，氧气饱和含量60％以上，保持紫外线持续照射的天然海水。第一次暂养过程紫外线照射强度为25W。第一次暂养过程贻贝的暂养密度为13kg/L，水体流速为18L/min。
步骤(1)中，蛋白亚铁螯合肽的制备方法如下：将干制贻贝肉冷冻后经液氮粉碎至250目，所得粉末加入水中，超声处理1.5小时，加入酶和助剂，55℃酶解2.5小时，采用90℃水浴灭酶活13分钟，得到酶解液；然后将氯化亚铁加入到所述酶解液中，在45℃条件下振荡螯合45分钟，离心(转速为4000转/分，时间为25分钟)，去沉淀，即得；其中，干制贻贝肉、水、酶、助剂和氯化亚铁的质量比为1：18：7.5：3.5：12。酶为菠萝酶、胃蛋白酶和枯草杆菌酶的混合物，三者质量比为1：2.5：2.5；助剂为异麦芽酮糖醇和壳四糖的混合物，两者的质量比为1：2.5。
步骤(1)中，沼泽红假单胞菌冻干粉的活菌含量≥30亿cfu/g。大型海藻为鹿角菜、马尾藻和石莼，三者投放量比例为1：1：1。
步骤(2)中，第二次暂养时间为5天。暂养水体环境为：水温23℃，盐度21‰，pH值7.2，氧气饱和含量60％以上，保持紫外线持续照射的天然海水。第二次暂养过程紫外线照射强度为13W。第二次暂养过程贻贝的暂养密度为24kg/L，水体流速为33L/min。
步骤(2)中，鱼腥草总黄酮提取物的制备方法如下：将鱼腥草干燥、粉碎，在88℃条件下，利用体积浓度63％的乙醇水溶液提取7小时，料液比为1：30，浓缩除去乙醇，喷雾干燥，即得。琼胶寡糖-锌离子配合物的制备方法如下：将琼胶寡糖溶于水中制成20g/L的琼胶寡糖水溶液，调节pH＝4，向琼胶寡糖水溶液中加入5.5g/L的锌离子，35℃水浴振荡，螯合反应5.5小时，离心得上清液，真空浓缩，冷冻干燥，即得。
第一次暂养和第二次暂养过程中水体采用流动水模式。
对比例1
一种控制贻贝重金属富集的暂养方法，包括以下两次暂养：
(1)第一次暂养：向暂养水体中加入蛋白亚铁螯合肽，并投放大型海藻，用于脱除或吸附重金属；其中，蛋白亚铁螯合肽是以干制贻贝肉为原料经酶解、螯合亚铁离子而得，每立方米水体中蛋白亚铁螯合肽和大型海藻的投放量分别为1kg、2.5kg；
(2)第二次暂养：向暂养水体中加入免疫增强剂，用于提高贻贝的免疫力；每立方米水体中免疫增强剂的加入量为1.5kg，所述免疫增强剂是由以下重量份的组分制成的：L-硒代蛋氨酸10份，β-葡聚糖7.5份，鱼腥草总黄酮提取物5.5份，虾青素5.5份，琼胶寡糖-锌离子配合物2.5份。
步骤(1)中，第一次暂养时间为8天。暂养水体环境为：水温11℃，盐度22‰，pH值7.2，氧气饱和含量60％以上，保持紫外线持续照射的天然海水。第一次暂养过程紫外线照射强度为25W。第一次暂养过程贻贝的暂养密度为13kg/L，水体流速为18L/min。
步骤(1)中，蛋白亚铁螯合肽的制备方法如下：将干制贻贝肉冷冻后经液氮粉碎至250目，所得粉末加入水中，超声处理1.5小时，加入酶和助剂，55℃酶解2.5小时，采用90℃水浴灭酶活13分钟，得到酶解液；然后将氯化亚铁加入到所述酶解液中，在45℃条件下振荡螯合45分钟，离心(转速为4000转/分，时间为25分钟)，去沉淀，即得；其中，干制贻贝肉、水、酶、助剂和氯化亚铁的质量比为1：18：7.5：3.5：12。酶为菠萝酶、胃蛋白酶和枯草杆菌酶的混合物，三者质量比为1：2.5：2.5；助剂为异麦芽酮糖醇和壳四糖的混合物，两者的质量比为1：2.5。
步骤(1)中，大型海藻为鹿角菜、马尾藻和石莼，三者投放量比例为1：1：1。
步骤(2)中，第二次暂养时间为5天。暂养水体环境为：水温23℃，盐度21‰，pH值7.2，氧气饱和含量60％以上，保持紫外线持续照射的天然海水。第二次暂养过程紫外线照射强度为13W。第二次暂养过程贻贝的暂养密度为24kg/L，水体流速为33L/min。
步骤(2)中，鱼腥草总黄酮提取物的制备方法如下：将鱼腥草干燥、粉碎，在88℃条件下，利用体积浓度63％的乙醇水溶液提取7小时，料液比为1：30，浓缩除去乙醇，喷雾干燥，即得。琼胶寡糖-锌离子配合物的制备方法如下：将琼胶寡糖溶于水中制成20g/L的琼胶寡糖水溶液，调节pH＝4，向琼胶寡糖水溶液中加入5.5g/L的锌离子，35℃水浴振荡，螯合反应5.5小时，离心得上清液，真空浓缩，冷冻干燥，即得。
第一次暂养和第二次暂养过程中水体采用流动水模式。
对比例2
一种控制贻贝重金属富集的暂养方法，包括以下两次暂养：
(1)第一次暂养：向暂养水体中加入蛋白亚铁螯合肽，并投放沼泽红假单胞菌冻干粉，用于脱除或吸附重金属；其中，蛋白亚铁螯合肽是以干制贻贝肉为原料经酶解、螯合亚铁离子而得，每立方米水体中蛋白亚铁螯合肽、沼泽红假单胞菌冻干粉的投放量分别为1kg、1.8kg；
(2)第二次暂养：向暂养水体中加入免疫增强剂，用于提高贻贝的免疫力；每立方米水体中免疫增强剂的加入量为1.5kg，所述免疫增强剂是由以下重量份的组分制成的：L-硒代蛋氨酸10份，β-葡聚糖7.5份，鱼腥草总黄酮提取物5.5份，虾青素5.5份，琼胶寡糖-锌离子配合物2.5份。
步骤(1)中，第一次暂养时间为8天。暂养水体环境为：水温11℃，盐度22‰，pH值7.2，氧气饱和含量60％以上，保持紫外线持续照射的天然海水。第一次暂养过程紫外线照射强度为25W。第一次暂养过程贻贝的暂养密度为13kg/L，水体流速为18L/min。
步骤(1)中，蛋白亚铁螯合肽的制备方法如下：将干制贻贝肉冷冻后经液氮粉碎至250目，所得粉末加入水中，超声处理1.5小时，加入酶和助剂，55℃酶解2.5小时，采用90℃水浴灭酶活13分钟，得到酶解液；然后将氯化亚铁加入到所述酶解液中，在45℃条件下振荡螯合45分钟，离心(转速为4000转/分，时间为25分钟)，去沉淀，即得；其中，干制贻贝肉、水、酶、助剂和氯化亚铁的质量比为1：18：7.5：3.5：12。酶为菠萝酶、胃蛋白酶和枯草杆菌酶的混合物，三者质量比为1：2.5：2.5；助剂为异麦芽酮糖醇和壳四糖的混合物，两者的质量比为1：2.5。
步骤(1)中，沼泽红假单胞菌冻干粉的活菌含量≥30亿cfu/g。
步骤(2)中，第二次暂养时间为5天。暂养水体环境为：水温23℃，盐度21‰，pH值7.2，氧气饱和含量60％以上，保持紫外线持续照射的天然海水。第二次暂养过程紫外线照射强度为13W。第二次暂养过程贻贝的暂养密度为24kg/L，水体流速为33L/min。
步骤(2)中，鱼腥草总黄酮提取物的制备方法如下：将鱼腥草干燥、粉碎，在88℃条件下，利用体积浓度63％的乙醇水溶液提取7小时，料液比为1：30，浓缩除去乙醇，喷雾干燥，即得。琼胶寡糖-锌离子配合物的制备方法如下：将琼胶寡糖溶于水中制成20g/L的琼胶寡糖水溶液，调节pH＝4，向琼胶寡糖水溶液中加入5.5g/L的锌离子，35℃水浴振荡，螯合反应5.5小时，离心得上清液，真空浓缩，冷冻干燥，即得。
第一次暂养和第二次暂养过程中水体采用流动水模式。
对比例3
一种控制贻贝重金属富集的暂养方法，包括以下两次暂养：
(1)第一次暂养：向暂养水体中加入蛋白亚铁螯合肽，并投放沼泽红假单胞菌冻干粉和大型海藻，用于脱除或吸附重金属；其中，蛋白亚铁螯合肽是以干制贻贝肉为原料经酶解、螯合亚铁离子而得，每立方米水体中蛋白亚铁螯合肽、沼泽红假单胞菌冻干粉和大型海藻的投放量分别为1kg、1.8kg、2.5kg；
(2)第二次暂养：向暂养水体中加入免疫增强剂，用于提高贻贝的免疫力；每立方米水体中免疫增强剂的加入量为1.5kg，所述免疫增强剂是由以下重量份的组分制成的：L-硒代蛋氨酸10份，β-葡聚糖7.5份，鱼腥草总黄酮提取物5.5份，虾青素5.5份。
步骤(1)中，第一次暂养时间为8天。暂养水体环境为：水温11℃，盐度22‰，pH值7.2，氧气饱和含量60％以上，保持紫外线持续照射的天然海水。第一次暂养过程紫外线照射强度为25W。第一次暂养过程贻贝的暂养密度为13kg/L，水体流速为18L/min。
步骤(1)中，蛋白亚铁螯合肽的制备方法如下：将干制贻贝肉冷冻后经液氮粉碎至250目，所得粉末加入水中，超声处理1.5小时，加入酶和助剂，55℃酶解2.5小时，采用90℃水浴灭酶活13分钟，得到酶解液；然后将氯化亚铁加入到所述酶解液中，在45℃条件下振荡螯合45分钟，离心(转速为4000转/分，时间为25分钟)，去沉淀，即得；其中，干制贻贝肉、水、酶、助剂和氯化亚铁的质量比为1：18：7.5：3.5：12。酶为菠萝酶、胃蛋白酶和枯草杆菌酶的混合物，三者质量比为1：2.5：2.5；助剂为异麦芽酮糖醇和壳四糖的混合物，两者的质量比为1：2.5。
步骤(1)中，沼泽红假单胞菌冻干粉的活菌含量≥30亿cfu/g。大型海藻为鹿角菜、马尾藻和石莼，三者投放量比例为1：1：1。
步骤(2)中，第二次暂养时间为5天。暂养水体环境为：水温23℃，盐度21‰，pH值7.2，氧气饱和含量60％以上，保持紫外线持续照射的天然海水。第二次暂养过程紫外线照射强度为13W。第二次暂养过程贻贝的暂养密度为24kg/L，水体流速为33L/min。
步骤(2)中，鱼腥草总黄酮提取物的制备方法如下：将鱼腥草干燥、粉碎，在88℃条件下，利用体积浓度63％的乙醇水溶液提取7小时，料液比为1：30，浓缩除去乙醇，喷雾干燥，即得。
第一次暂养和第二次暂养过程中水体采用流动水模式。
对比例4
一种控制贻贝重金属富集的暂养方法，包括以下两次暂养：
(1)第一次暂养：向暂养水体中加入蛋白亚铁螯合肽，并投放沼泽红假单胞菌冻干粉和大型海藻，用于脱除或吸附重金属；其中，蛋白亚铁螯合肽是以干制贻贝肉为原料经酶解、螯合亚铁离子而得，每立方米水体中蛋白亚铁螯合肽、沼泽红假单胞菌冻干粉和大型海藻的投放量分别为1kg、1.8kg、2.5kg；
(2)第二次暂养：向暂养水体中加入免疫增强剂，用于提高贻贝的免疫力；每立方米水体中免疫增强剂的加入量为1.5kg，所述免疫增强剂是由以下重量份的组分制成的：L-硒代蛋氨酸10份，β-葡聚糖7.5份，虾青素5.5份，琼胶寡糖-锌离子配合物2.5份。
步骤(1)中，第一次暂养时间为8天。暂养水体环境为：水温11℃，盐度22‰，pH值7.2，氧气饱和含量60％以上，保持紫外线持续照射的天然海水。第一次暂养过程紫外线照射强度为25W。第一次暂养过程贻贝的暂养密度为13kg/L，水体流速为18L/min。
步骤(1)中，蛋白亚铁螯合肽的制备方法如下：将干制贻贝肉冷冻后经液氮粉碎至250目，所得粉末加入水中，超声处理1.5小时，加入酶和助剂，55℃酶解2.5小时，采用90℃水浴灭酶活13分钟，得到酶解液；然后将氯化亚铁加入到所述酶解液中，在45℃条件下振荡螯合45分钟，离心(转速为4000转/分，时间为25分钟)，去沉淀，即得；其中，干制贻贝肉、水、酶、助剂和氯化亚铁的质量比为1：18：7.5：3.5：12。酶为菠萝酶、胃蛋白酶和枯草杆菌酶的混合物，三者质量比为1：2.5：2.5；助剂为异麦芽酮糖醇和壳四糖的混合物，两者的质量比为1：2.5。
步骤(1)中，沼泽红假单胞菌冻干粉的活菌含量≥30亿cfu/g。大型海藻为鹿角菜、马尾藻和石莼，三者投放量比例为1：1：1。
步骤(2)中，第二次暂养时间为5天。暂养水体环境为：水温23℃，盐度21‰，pH值7.2，氧气饱和含量60％以上，保持紫外线持续照射的天然海水。第二次暂养过程紫外线照射强度为13W。第二次暂养过程贻贝的暂养密度为24kg/L，水体流速为33L/min。
步骤(2)中，琼胶寡糖-锌离子配合物的制备方法如下：将琼胶寡糖溶于水中制成20g/L的琼胶寡糖水溶液，调节pH＝4，向琼胶寡糖水溶液中加入5.5g/L的锌离子，35℃水浴振荡，螯合反应5.5小时，离心得上清液，真空浓缩，冷冻干燥，即得。
第一次暂养和第二次暂养过程中水体采用流动水模式。
试验例
1、将同一批养殖的贻贝，随机分为8组，每组35kg，基础饲料喂食，分别按照实施例1～5或对比例1～3的方法进行养殖，检测养殖(实施例1～5或对比例1～3的养殖过程)前后的铅、镉平均含量，结果见表1。
表1.养殖前后重金属含量比较
显然，实施例1～5的养殖方法有效降低了贻贝重金属(铅、镉)含量，对比例1和对比例2的第一次暂养过程不投放沼泽红假单胞菌冻干粉或大型海藻，重金属含量下降程度明显变差，对比例3的第二次暂养过程的免疫增强剂略去琼胶寡糖-锌离子配合物，重金属含量下降程度也变差。
2、将同一批养殖的贻贝，随机分为8组，每组50kg，设置对照组，实施例1～5或对比例1、对比例4作为实验组，分别按照实施例1～5或对比例1、对比例4、对照组的方法进行养殖，对照组仅采用基础饲料进行喂食，水体环境的调整与实施例5相同，计算各组的成活率以及免疫保护率，免疫保护率＝(1-实验组死亡率/对照组死亡率)×100％，结果见表2。
表2.成活率和免疫保护率统计结果
| 成活率(％) | 免疫保护率(％) | |
| 实施例1 | 97.1 | 93.1 |
| 实施例2 | 97.3 | 93.6 |
| 实施例3 | 97.6 | 94.3 |
| 实施例4 | 97.6 | 94.3 |
| 实施例5 | 97.9 | 95.0 |
| 对比例1 | 86.3 | 67.3 |
| 对比例4 | 73.4 | 36.5 |
| 对照组 | 58.1 | -- |
对比例1在第一次暂养过程中未投放沼泽红假单胞菌冻干粉，一定程度上无法缓解水体内病菌增生，使得贻贝死亡率上升；对比例4在第二次暂养过程中免疫增强剂略去其中的鱼腥草总黄酮提取物，贻贝的免疫功能明显下降，导致死亡率升高。与对照组相比，实施例1～5的养殖方法明显提高了贻贝的免疫功能，提高贻贝成活率。
上述虽然对本发明的具体实施方式进行了描述，但并非对本发明保护范围的限制，在本发明的技术方案的基础上，本领域技术人员不需要付出创造性劳动即可做出的各种修改或变形仍在本发明的保护范围以内。
Claims (1)
1.一种控制贻贝重金属富集的暂养方法，其特征在于，包括以下两次暂养：
（1）第一次暂养：向暂养水体中加入蛋白亚铁螯合肽，并投放沼泽红假单胞菌冻干粉和大型海藻，用于脱除或吸附重金属；其中，蛋白亚铁螯合肽是以干制贻贝肉为原料经酶解、螯合亚铁离子而得，每立方米水体中蛋白亚铁螯合肽、沼泽红假单胞菌冻干粉和大型海藻的投放量分别为1kg、1.5～2kg、2～3kg；
（2）第二次暂养：向暂养水体中加入免疫增强剂，用于提高贻贝的免疫力；每立方米水体中免疫增强剂的加入量为1～2kg，所述免疫增强剂是由以下重量份的组分制成的：L-硒代蛋氨酸10份，β-葡聚糖7～8份，鱼腥草总黄酮提取物5～6份，虾青素5～6份，琼胶寡糖-锌离子配合物2～3份；
步骤（1）中，暂养水体环境为：水温10～12℃，盐度20～23‰，pH值7.0～7.5，氧气饱和含量60%以上，保持紫外线持续照射的天然海水；
步骤（1）中，蛋白亚铁螯合肽的制备方法如下：将干制贻贝肉冷冻后经液氮粉碎至200～300目，所得粉末加入水中，超声处理1～2小时，加入酶和助剂，50～60℃酶解2～3小时，灭酶活，得到酶解液；然后将氯化亚铁加入到所述酶解液中，在40～50℃条件下振荡螯合40～50分钟，离心，去沉淀，即得；其中，干制贻贝肉、水、酶、助剂和氯化亚铁的质量比为1：15～20：7～8：3～4：10～15；
所述酶为菠萝酶、胃酶和枯草杆菌酶的混合物，三者质量比为1：2～3：2～3；所述助剂为异麦芽酮糖醇和壳四糖的混合物，两者的质量比为1：2～3；
步骤（2）中，暂养水体环境为：水温22～23℃，盐度20～21‰，pH值7.0～7.3，氧气饱和含量60%以上，保持紫外线持续照射的天然海水；
步骤（1）中，第一次暂养时间为7～10天；
步骤（1）中，所述大型海藻选自鹿角菜、马尾藻或石莼中的任一种或多种；
步骤（2）中，第二次暂养时间为4～5天；
步骤（2）中，所述鱼腥草总黄酮提取物的制备方法如下：将鱼腥草干燥、粉碎，在85～90℃条件下，利用体积浓度60～65%的乙醇水溶液提取6～8小时，料液比为1：30，浓缩除去乙醇，喷雾干燥，即得；
步骤（2）中，所述琼胶寡糖-锌离子配合物的制备方法如下：将琼胶寡糖溶于水中制成15～25g/L的琼胶寡糖水溶液，调节pH=3.5～4.5，向琼胶寡糖水溶液中加入5～6g/L的锌离子，30～40℃水浴振荡，螯合反应5～6小时，离心得上清液，真空浓缩，冷冻干燥，即得。
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