CN114269378A - 用于治疗癌症的涉及针对密蛋白18.2的抗体与免疫检查点抑制剂的组合治疗 - Google Patents

Abstract

本发明提供了包含抗密蛋白(CLDN)18.2抗体和免疫检查点抑制剂的组合治疗，其用于有效治疗和/或预防与表达CLDN18.2的细胞相关的疾病，包括癌症疾病，例如胃癌、食管癌、胰腺癌、肺癌、卵巢癌、结肠癌、肝癌、头颈癌和胆囊癌，及其转移。

Description

用于治疗癌症的涉及针对密蛋白18.2的抗体与免疫检查点抑 制剂的组合治疗

胃和食管(胃食管；GE)的癌症是医疗需求最未得到满足的恶性肿瘤之一。胃癌是全世界癌症死亡的主要原因之一。近几十年来，食管癌的发病率提高，这与组织学类型和原发肿瘤位置的转变相符。在美国和西欧，食管腺癌现已比鳞状细胞癌更普遍，其中大多数肿瘤位于食管远端。尽管已建立的标准治疗的积极性与大量副作用相关，但GE癌的总体五年存活率为20％至25％。

大多数患者表现为局部晚期或转移性疾病。对于这些患者，一线治疗是化学治疗。治疗方案是基于铂和氟嘧啶衍生物的骨架，主要结合第三种化合物(例如紫杉烷或蒽环类)。尽管如此，5至7个月的中位无进展存活以及9至11个月的中位总存活是可预期的最佳状态。

针对这些癌症的多种较新一代的组合化学治疗方案的主要益处的缺乏刺激了对使用靶向剂的研究。最近，曲妥珠单抗已获批用于Her2/neu阳性胃食管癌。然而，由于仅约20％的患者有资格接受这种治疗，因此医疗需求仍然很高。

紧密连接分子密蛋白18剪接变体2(密蛋白18.2(CLDN18.2))是紧密连接蛋白的密蛋白家族的成员。CLDN18.2是包含四个跨膜结构域和两个小的胞外环的27.8kDa跨膜蛋白。

在正常组织中，除胃之外，RT-PCR检测不到CLDN18.2的表达。CLDN18.2特异性抗体的免疫组织化学显示出胃是唯一的阳性组织。

CLDN18.2是仅在短寿命分化的胃上皮细胞上表达的高选择性的胃谱系抗原。CLDN18.2在恶性转化进程中保持，并因此经常出现在人胃癌细胞表面。此外，这种泛肿瘤抗原在食管、胰腺和肺腺癌中以显著水平异常表达。CLDN18.2蛋白还定位于胃癌腺癌的淋巴结转移和远处转移，尤其是卵巢中(所谓的克鲁肯贝格肿瘤(Krukenberg tumor))。

Ganymed Pharmaceuticals AG已开发出针对CLDN18.2的嵌合IgG1抗体IMAB362(Zolbetuximab[先前被称为Claudiximab])。该抗体包含具有SEQ ID NO：51所示序列的重链和具有SEQ ID NO：24所示序列的轻链。IMAB362以高亲和力和特异性识别CLDN18.2的第一胞外结构域(ECD1)。IMAB362不与任何其他密蛋白家族成员(包括密蛋白18的密切相关的剪接变体1(CLDN18.1))结合。IMAB362显示出精确的肿瘤细胞特异性，并结合了两种独立的高度强效的作用机制。在靶结合之后，IMAB362主要通过ADCC和CDC介导细胞杀伤。因此，IMAB362在体外和体内有效裂解CLDN18.2阳性细胞，包括人胃癌细胞系。IMAB362的抗肿瘤效力在携带用CLDN18.2阳性癌细胞系接种的异种移植肿瘤的小鼠中得到证实。

IgG1抗体通常通过Fc结构域与在多种免疫细胞(包括自然杀伤细胞，其是ADCC的主要因素)上表达的Fcγ受体(FcγR)的相互作用来参与细胞免疫系统。然而，触发ADCC的IgG1单克隆抗体(mAb)面临数个限制，包括低亲和力Fc受体变体在群体中的广泛分布(高至80％)以及降低mAb效力的体内IgG1修饰(Chames，P.，et al.，2009，BrJ Pharmacol，157(2)：220-233)。治疗性抗体还必须与患者IgG竞争，导致体内所必需的mAb的高剂量。此外，治疗性抗体可与FcγRIIb(由B细胞、巨噬细胞、树突细胞和中性粒细胞表达的抑制性FcγR)相互作用，导致降低其效力的负信号传导。

在过去的几十年里，免疫检查点抑制剂已成为强效的癌症治疗治疗剂。这些治疗剂阻断了限制免疫系统功能的抑制性免疫检查点信号传导。因此，免疫检查点抑制剂可导致T细胞的活化、增殖和/或信号传导的提高。然而，已发现免疫检查点抑制剂在数种癌症中具有较低的活性，并且仅对一小部分患者是有益的(Darvin et al.，2018，Exp Mol Med 50(12)：165)。克服这些限制的方法包括共施用药物，例如靶向共抑制性检查点受体的药物、抗血管生成治疗剂、肿瘤靶标的小分子抑制剂和促进肿瘤细胞裂解的溶瘤病毒(Longo etal.，2019，Cancers 11(4)：539)。由于肿瘤微环境(tumor microenvironment，TME)的高度复杂性以及特定TME组分以协同方式诱导免疫抑制的多种机制，鉴于大量的肿瘤异质性，很难精确评估TME并制定适用于一般人群的抗癌策略(Duan et al.，2019，Cancer Med 7(9)：4517-4529)。因此，迫切需要提高免疫检查点抑制剂治疗的效力，并且癌症免疫治疗协会(Society for Immunotherapy in Cancer，SITC)已召集了联合免疫治疗工作组，以应对将免疫检查点阻断与其他治疗组合的前景和挑战。

在此，我们提供的数据表明，抗CLDN18.2抗体和免疫检查点抑制剂的组合施用导致改善的作用。在小鼠肿瘤模型中，与抗CLDN18.2抗体或免疫检查点抑制剂作为单一药剂的施用相比，抗CLDN18.2抗体加检查点抑制剂的施用显示出更优的效力。

发明内容

本发明一般性地提供了用于有效治疗和/或预防与表达CLDN18.2的细胞相关的疾病的组合治疗，所述疾病包括癌症疾病，例如胃癌、食管癌、胰腺癌、肺癌(例如非小细胞肺癌(non small cell lung cancer，NSCLC))、卵巢癌、结肠癌、肝癌、头颈癌和胆囊癌，及其转移，特别是胃癌转移例如克鲁肯贝格肿瘤、腹膜转移和淋巴结转移。特别优选的癌症疾病是胃、食管、胰管、胆管、肺和卵巢的腺癌。

在一个方面中，本发明提供了用于治疗患者的方法，其包括向所述患者施用抗CLDN18.2抗体和免疫检查点抑制剂。

在一个方面中，本发明提供了用于在患者中治疗或预防癌症的方法，其包括向所述患者施用抗CLDN18.2抗体和免疫检查点抑制剂。

在另一个方面中，本发明提供了用于在患有癌症的患者中抑制肿瘤生长的方法，其包括向所述患者施用抗CLDN18.2抗体和免疫检查点抑制剂。

在另一个方面中，本发明提供了用于在患者(例如，患有癌症的患者)中诱导针对癌细胞的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(antibody-dependent cell-mediatedcytotoxicity，ADCC)的方法，其包括向所述患者施用抗CLDN18.2抗体和免疫检查点抑制剂。

在本文中公开的所有方面的一个实施方案中，免疫检查点抑制剂选自PD-1抑制剂和PD-L1抑制剂。在本文中公开的所有方面的一个实施方案中，免疫检查点抑制剂选自抗PD-1抗体和抗PD-L1抗体。

在本文中公开的所有方面的一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是抗PD-1抗体。在本文中公开的所有方面的一个实施方案中，抗PD-1抗体是纳武单抗(OPDIVO；BMS-936558)、派姆单抗(KEYTRUDA；MK-3475)、皮地利珠单抗(CT-011)、西米普利单抗(LIBTAYO、REGN2810)、斯巴达珠单抗(PDR001)、MEDI0680(AMP-514)、多塔利单抗(TSR-042)、西利单抗(JNJ 63723283)、特瑞普利单抗(JS001)、AMP-224(GSK-2661380)、PF-06801591、替雷利珠单抗(BGB-A317)、ABBV-181、BI 754091或SHR-1210。

在本文中公开的所有方面的一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是抗PD-L1抗体。在本文中公开的所有方面的一个实施方案中，抗PD-L1抗体是阿特珠单抗(TECENTRIQ；RG7446；MPDL3280A；R05541267)、度伐单抗(MEDI4736)、BMS-936559、阿维单抗(bavencio)、洛达利单抗(LY3300054)、CX-072(Proclaim-CX-072)、FAZ053、KN035或MDX-1105。

在本文中公开的所有方面的一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是CTLA-4抑制剂。在本文中公开的所有方面的一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是抗CTLA-4抗体。在本文中公开的所有方面的一个实施方案中，抗CTLA-4抗体是伊匹单抗(Yervoy；BristolMyers Squibb)、替西木单抗(Pfizer/Medlmmune)、trevilizumab、AGEN-1884(Agenus)或ATOR-1015。

在本文中公开的所有方面的一个实施方案中，抗CLDN18.2抗体与存在于活细胞表面上的CLDN18.2的天然表位结合。在本文中公开的所有方面的一个实施方案中，抗CLDN18.2抗体是单克隆、嵌合或人源化抗体，或抗体片段。在本文中公开的所有方面的一个实施方案中，抗CLDN18.2抗体与治疗剂例如毒素、放射性同位素、药物或细胞毒剂偶联。

在本文中公开的所有方面的一个实施方案中，抗CLDN18.2抗体与CLDN18.2的第一胞外环结合。

在本文中公开的所有方面的一个实施方案中，抗CLDN18.2抗体通过补体依赖性细胞毒性(complement-dependent cytotoxicity，CDC)介导的裂解、抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)介导的裂解、诱导细胞凋亡和抑制增殖中的一种或更多种来介导细胞杀伤。

在本文中公开的所有方面的一个实施方案中，抗CLDN18.2抗体是选自以下的抗体：

(i)由以保藏号DSM ACC2737、DSM ACC2738、DSM ACC2739、DSM ACC2740、DSMACC2741、DSM ACC2742、DSM ACC2743、DSM ACC2745、DSM ACC2746、DSM ACC2747、DSMACC2748、DSM ACC2808、DSM ACC2809或DSMACC2810保藏的克隆产生和/或可从其获得的抗体，

(ii)作为(i)中所述抗体的嵌合或人源化形式的抗体，

(iii)具有(i)中所述抗体的特异性的抗体，和

(iv)包含(i)中所述抗体的抗原结合部分或抗原结合位点，特别是可变区，并且优选具有(i)中所述抗体的特异性的抗体。

在本文中公开的所有方面的一个实施方案中，抗CLDN18.2抗体包含含有SEQ IDNO：17所示序列的第45至52位的序列的重链可变区CDR1、含有SEQ ID NO：17所示序列的第70至77位的序列的重链可变区CDR2、含有SEQ ID NO：17所示序列的第116至126位的序列的重链可变区CDR3、含有SEQ ID NO：24所示序列的第47至58位的序列的轻链可变区CDR1、含有SEQ ID NO：24所示序列的第76至78位的序列的轻链可变区CDR2和含有SEQ ID NO：24所示序列的第115至123位的序列的轻链可变区CDR3。

在本文中公开的所有方面的一个实施方案中，抗CLDN18.2抗体包含重链可变区和/或轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：32所示序列或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：39所示序列或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段。

在本文中公开的所有方面的一个实施方案中，抗CLDN18.2抗体包含重链恒定区，所述重链恒定区包含SEQ ID NO：13或52所示序列或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段。

在本文中公开的所有方面的一个实施方案中，抗CLDN18.2抗体包含重链和/或轻链，所述重链包含SEQ ID NO：17或51所示序列或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段，所述轻链包含SEQ ID NO：24所示序列或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段。

在本文中公开的所有方面的一个实施方案中，所述方法包括以最高1000mg/m²的剂量施用所述抗CLDN18.2抗体。在本文中公开的所有方面的一个实施方案中，所述方法包括以300至600mg/m²的剂量重复施用所述抗CLDN18.2抗体。

在本文中公开的所有方面的一个实施方案中，癌症是CLDN18.2阳性的。在本文中公开的所有方面的一个实施方案中，癌症选自胃癌、食管癌、胰腺癌、肺癌、卵巢癌、结肠癌、肝癌、头颈癌、胆囊癌，及其转移。在本文中公开的所有方面的一个实施方案中，癌症是克鲁肯伯格肿瘤、腹膜转移和/或淋巴结转移。在本文中公开的所有方面的一个实施方案中，癌症是腺癌，特别是晚期腺癌。在本文中公开的所有方面的一个实施方案中，癌症选自胃癌、食管癌，特别是下食管癌、食管胃交界癌和胃食管癌。

在本文中公开的所有方面的一个实施方案中，CLDN18.2具有根据SEQ ID NO：1的氨基酸序列。

在另一个方面中，本发明提供了包含抗CLDN18.2抗体和免疫检查点抑制剂的药物制剂。

在本文中公开的所有方面的一个实施方案中，所述药物制剂是包含含有所述抗CLDN18.2抗体的第一容器和含有所述免疫检查点抑制剂的第二容器的药盒。

在本文中公开的所有方面的一个实施方案中，所述药物制剂还包含所述制剂用于治疗癌症的用途的印刷说明。

在本文中公开的所有方面的一个实施方案中，所述药物制剂是包含抗CLDN18.2抗体和免疫检查点抑制剂的组合物。

在本文中公开的所有方面的一个实施方案中，本发明的方法还包括施用细胞毒剂和/或细胞抑制剂(cytostatic agent)。在本文中公开的所有方面的一个实施方案中，本发明的药物制剂还包含细胞毒剂和/或细胞抑制剂。

细胞毒剂和/或细胞抑制剂可以是稳定或提高CLDN18.2表达的药剂。CLDN18.2的表达优选在癌细胞的细胞表面。在一个实施方案中，细胞毒剂和/或细胞抑制剂包括在细胞周期的一个或更多个阶段，优选在细胞周期的除G1期以外的一个或更多个阶段中诱导细胞周期阻滞或细胞积聚的药剂。细胞毒剂和/或细胞抑制剂可包括选自以下的药剂：蒽环类、铂化合物、核苷类似物、紫杉烷类和喜树碱类似物，或其前药，以及其组合。细胞毒剂和/或细胞抑制剂可包括选自以下的药剂：表柔比星、奥沙利铂、顺铂、5-氟尿嘧啶，或其前药，例如卡培他滨、多西他赛、伊立替康及其组合。细胞毒剂和/或细胞抑制剂可包括奥沙利铂和5-氟尿嘧啶或其前药的组合、顺铂和5-氟尿嘧啶或其前药的组合、至少一种蒽环类和奥沙利铂的组合、至少一种蒽环类和顺铂的组合、至少一种蒽环类和5-氟尿嘧啶或其前药的组合、至少一种紫杉烷类和奥沙利铂的组合、至少一种紫杉烷类和顺铂的组合、至少一种紫杉烷类和5-氟尿嘧啶或其前药的组合、或者至少一种喜树碱类似物和5-氟尿嘧啶或其前药的组合。细胞毒剂和/或细胞抑制剂可以是诱导免疫原性细胞死亡的药剂。诱导免疫原性细胞死亡的药剂可包括选自蒽环类、奥沙利铂，及其组合的药剂。细胞毒剂和/或细胞抑制剂可包括表柔比星和奥沙利铂的组合。在一个实施方案中，本发明的方法包括施用至少一种蒽环类、至少一种铂化合物和至少一种5-氟尿嘧啶及其前药。在一个实施方案中，本发明的药物制剂包含至少一种蒽环类、至少一种铂化合物和至少一种5-氟尿嘧啶及其前药。蒽环类可选自表柔比星、多柔比星、柔红霉素、伊达比星和戊柔比星。优选地，蒽环类是表柔比星。铂化合物可选自奥沙利铂和顺铂。核苷类似物可选自5-氟尿嘧啶及其前药。紫杉烷类可以选自多西他赛和紫杉醇。喜树碱类似物可选自伊立替康和拓扑替康。在一个实施方案中，本发明的方法包括施用(i)表柔比星、奥沙利铂和5-氟尿嘧啶，(ii)表柔比星、奥沙利铂和卡培他滨，(iii)表柔比星、顺铂和5-氟尿嘧啶，(iv)表柔比星、顺铂和卡培他滨，(v)亚叶酸、奥沙利铂和5-氟尿嘧啶，(vi)亚叶酸、奥沙利铂和卡培他滨，或(vii)奥沙利铂和卡培他滨。在一个实施方案中，本发明的药物制剂包含(i)表柔比星、奥沙利铂和5-氟尿嘧啶，(ii)表柔比星、奥沙利铂和卡培他滨，(iii)表柔比星、顺铂和5-氟尿嘧啶，(iv)表柔比星、顺铂和卡培他滨，(v)亚叶酸、奥沙利铂和5-氟尿嘧啶，(vi)亚叶酸、奥沙利铂和卡培他滨，或(vii)奥沙利铂和卡培他滨。

抗CLDN18.2抗体和免疫检查点抑制剂，以及任选的细胞毒剂和/或细胞抑制剂，可以以混合物或彼此分开的形式存在于药物制剂中。药物制剂可以是药盒，其包含含有CLDN18.2抗体的第一容器和含有免疫检查点抑制剂的容器，以及任选地含有细胞毒剂和/或细胞抑制剂的容器。药物制剂还可包括制剂用于治疗癌症的用途，特别是制剂在本发明方法中的用途的印刷说明。用于本发明方法的药物制剂，特别是免疫检查点抑制剂以及细胞毒剂和/或细胞抑制剂的不同实施方案如上所述。

本发明还提供了用于治疗用途的本文中所述的药剂，例如抗CLDN18.2抗体和免疫检查点抑制剂。在一个实施方案中，这样的治疗包括治疗和/或预防与表达CLDN18.2的细胞相关的疾病，包括癌症疾病，例如本文中所述的那些。

本发明还提供了用于本文中所述方法，例如用于与免疫检查点抑制剂以及任选的细胞毒剂和/或细胞抑制剂组合施用的本文中所述的药剂，例如抗CLDN18.2抗体。本发明还提供了本文中所述的药剂例如抗CLDN18.2抗体的用途，其用于制备用于本文中所述方法，例如用于与免疫检查点抑制剂以及任选的细胞毒剂和/或细胞抑制剂组合施用的药物组合物的用途。

在一个方面中，本发明提供了抗CLDN18.2抗体，其用于在患者中治疗或预防癌症的方法，所述方法包括向患者施用抗CLDN18.2抗体和免疫检查点抑制剂。在另一个方面中，本发明提供了抗CLDN18.2抗体，其用于在患有癌症的患者中抑制肿瘤生长的方法，所述方法包括向患者施用抗CLDN18.2抗体和免疫检查点抑制剂。在另一个方面中，本发明提供了抗CLDN18.2抗体，其用于在患者(例如患有癌症的患者)中诱导针对癌细胞的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)的方法，所述方法包括向患者施用抗CLDN18.2抗体和免疫检查点抑制剂。用于本发明方法的这些方面的一些优选实施方案如上文所述。

在一个方面中，本发明提供了免疫检查点抑制剂，其用于在患者中治疗或预防癌症的方法，所述方法包括向患者施用抗CLDN18.2抗体和免疫检查点抑制剂。在另一个方面中，本发明提供了免疫检查点抑制剂，其用于在患有癌症的患者中抑制肿瘤生长的方法，所述方法包括向患者施用抗CLDN18.2抗体和免疫检查点抑制剂。在另一个方面中，本发明提供了免疫检查点抑制剂，其用于在患者(例如患有癌症的患者)中诱导针对癌细胞的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)的方法，所述方法包括向患者施用抗CLDN18.2抗体和免疫检查点抑制剂。用于本发明方法的这些方面的一些优选实施方案如上文所述。

在一个方面中，本发明提供了抗CLDN18.2抗体和免疫检查点抑制剂，其用于在患者中治疗或预防癌症的方法中。在另一个方面中，本发明提供了抗CLDN18.2抗体和免疫检查点抑制剂，其用于在患有癌症的患者中抑制肿瘤生长的方法中。在另一个方面中，本发明提供了抗CLDN18.2抗体和免疫检查点抑制剂，其用于在患者(例如患有癌症的患者)中诱导针对癌细胞的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)的方法中。用于本发明方法的这些方面的一些优选实施方案如上文所述。

在一个方面中，本发明提供了抗CLDN18.2抗体用于制备用于在患者中治疗或预防癌症的药物组合物的用途，其中抗CLDN18.2抗体与免疫检查点抑制剂一起施用。在另一个方面中，本发明提供了抗CLDN18.2抗体用于制备用于在患有癌症的患者中抑制肿瘤生长的药物组合物的用途，其中抗CLDN18.2抗体与免疫检查点抑制剂一起施用。在另一个方面中，本发明提供了抗CLDN18.2抗体用于制备用于在患者(例如患有癌症的患者)中诱导针对癌细胞的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)的药物组合物的用途，其中抗CLDN18.2抗体与免疫检查点抑制剂一起施用。用于本发明方法的这些方面的一些优选实施方案如上文所述。

在一个方面中，本发明提供了免疫检查点抑制剂用于制备用于在患者中治疗或预防癌症的药物组合物的用途，其中免疫检查点抑制剂与抗CLDN18.2抗体一起施用。在另一个方面中，本发明提供了免疫检查点抑制剂用于制备用于在患有癌症的患者中抑制肿瘤生长的药物组合物的用途，其中免疫检查点抑制剂与抗CLDN18.2抗体一起施用。在另一个方面中，本发明提供了免疫检查点抑制剂用于制备用于在患者(例如患有癌症的患者)中诱导针对癌细胞的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)的药物组合物的用途，其中免疫检查点抑制剂与抗CLDN18.2抗体一起施用。用于本发明方法的这些方面的一些优选实施方案如上文所述。

在一个方面中，本发明提供了抗CLDN18.2抗体和免疫检查点抑制剂用于制备用于在患者中治疗或预防癌症的药物组合物的用途。在另一个方面中，本发明提供了抗CLDN18.2抗体和免疫检查点抑制剂用于在患有癌症的患者中抑制肿瘤生长的药物组合物的用途。在另一个方面中，本发明提供了抗CLDN18.2抗体和免疫检查点抑制剂用于制备用于在患者(例如患有癌症的患者)中诱导针对癌细胞的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)的药物组合物的用途。用于本发明方法的这些方面的一些优选实施方案如上文所述。

在本文中所述的一些方面的一个实施方案中，本文中所述的治疗涉及患者的免疫治疗。在本文中所述的一些方面的一个实施方案中，本文中所述的治疗包括在患者中诱导免疫介导的对癌细胞的抑制或破坏。在本文中所述的一些方面的一个实施方案中，本文中所述的治疗包括在患者中诱导免疫细胞介导的对癌细胞的抑制或破坏。在本文中所述的一些方面的一个实施方案中，本文中所述的治疗包括在患者中诱导T细胞介导的对癌细胞的抑制或破坏。在本文中所述的一些方面的一个实施方案中，本文中所述的治疗包括在患者中诱导NK细胞介导的对癌细胞的抑制或破坏。在本文中所述的一些方面的一个实施方案中，本文中所述的治疗包括在患者中诱导针对癌细胞的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)。在一个实施方案中，ADCC至少部分地由NK细胞介导。在本文中所述的一些方面的一个实施方案中，本文中所述的治疗包括在患者中诱导针对癌细胞的补体依赖性细胞毒性(CDC)。

在本文中所述的一些方面的一个实施方案中，免疫检查点抑制剂的施用提高了抗CLDN18.2抗体的抗肿瘤效力。在本文中所述的一些方面的一个实施方案中，免疫检查点抑制剂的施用提高了抗CLDN18.2抗体在患者中诱导免疫介导的对癌细胞的抑制或破坏的效力。在本文中所述的一些方面的一个实施方案中，免疫检查点抑制剂的施用提高了抗CLDN18.2抗体在患者中诱导免疫细胞介导的对癌细胞的抑制或破坏的效力。在本文中所述的一些方面的一个实施方案中，免疫检查点抑制剂的施用提高了抗CLDN18.2抗体在患者中诱导T细胞介导的对癌细胞的抑制或破坏的效力。在本文中所述的一些方面的一个实施方案中，免疫检查点抑制剂的施用提高了抗CLDN18.2抗体在患者中诱导NK细胞介导的对癌细胞的抑制或破坏的效力。在本文中所述的一些方面的一个实施方案中，免疫检查点抑制剂的施用提高了抗CLDN18.2抗体在患者中诱导针对癌细胞的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)的效力。在本文中所述的一些方面的一个实施方案中，免疫检查点抑制剂的施用提高了抗CLDN18.2抗体在患者中诱导针对癌细胞的补体依赖性细胞毒性(CDC)的效力。在本文中所述的一些方面的一个实施方案中，免疫检查点抑制剂的施用以协同方式提高了抗CLDN18.2抗体的效力。

通过以下详细描述和所附权利要求书，本发明的其他特征和优点将变得明显。

附图说明

图1.IMAB362与抗mPD-1 Ab组合治疗对CLS-103 LVT-murinCLDN18.2同基因肿瘤的作用

图2.IMAB362与抗mPD-1 Ab组合治疗对CLS-103 LVT-murinCLDN18.2同基因肿瘤的作用——所有经处理小鼠的蜘蛛图分析

图3.IMAB362与抗mPD-1 Ab组合治疗对CLS-103 LVT-murinCLDN18.2同基因肿瘤的长期作用——所有经处理小鼠的蜘蛛图分析

图4.IMAB362与抗mPD-1 Ab组合治疗对CLS-103 LVT-murinCLDN18.2同基因肿瘤的长期作用

图5.IMAB362与抗mCTLA-4 Ab组合治疗对CLS-103 LVT-murinCLDN18.2同基因肿瘤的作用

图6.IMAB362与抗mCTLA-4 Ab组合治疗对CLS-103 LVT-murinCLDN18.2同基因肿瘤的作用——所有经处理小鼠的蜘蛛图分析

图7.IMAB362与抗mPD-L1 Ab组合治疗对CLS-103 LVT-murinCLDN18.2同基因肿瘤的作用

图8.IMAB362与抗mPD-L1 Ab组合治疗对CLS-103 LVT-murinCLDN18.2同基因肿瘤的作用——所有经处理小鼠的蜘蛛图分析。

具体实施方式

尽管下面详细描述了本发明，但应理解本发明不限于本文中所描述的具体的方法、方案和试剂，因为这些可以变化。还应理解，本文中使用的术语仅用于描述具体实施方案的目的，并不旨在限制本发明的范围，本发明的范围将仅由所附权利要求书限定。除非另有定义，否则本文中使用的所有技术术语和科学术语具有与本领域普通技术人员通常理解的相同的含义。

下面将描述本发明的要素。这些要素以具体实施方案列出，然而，应理解，它们可以以任何方式和任何数量组合以形成另外的实施方案。多方面描述的实施例和优选实施方案不应被解释为将本发明仅限于明确描述的实施方案。该描述应被理解为支持和涵盖将明确描述的实施方案与任何数量的所公开和/或优选的要素组合的实施方案。此外，除非上下文另外指明，否则本申请中的所有描述的要素的任何排列和组合应被视为通过本申请的说明书公开。

优选地，本文中使用的术语如“A multilingual glossary of biotechnologicalterms：(IUPAC Recommendations)”，H.G.W.Leuenberger，B.Nagel，and H.

Eds.，Helvetica Chimica Acta，CH-4010 Basel，Switzerland，(1995)中所述定义。

除非另有指明，否则本发明的实践将使用在本领域文献中说明的生物化学、细胞生物学、免疫学和重组DNA技术的常规方法(参见例如Molecular Cloning：A LaboratoryManual，2^nd Edition，J.Sambrook et al.eds.，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor 1989)。

在整个说明书和随后的权利要求书中，除非上下文中另有要求，否则词语“包括/包含”及其变化形式将被理解为意指包括所陈述的成员、整数或步骤或者成员、整数或步骤的组，但不排除任何其他成员、整数或步骤或者成员、整数或步骤的组，尽管在一些实施方案中，这样的其他成员、整数或步骤或者成员、整数或步骤的组可被排除，即，主题在于包括所陈述的成员、整数或步骤或者成员、整数或步骤的组。除非本文中另外指出或者明显与上下文相矛盾，否则在描述本发明的上下文中(尤其在权利要求书的上下文中)使用的没有数量词修饰的名词应解释为表示一个/种和/或更多个/种。本文中值的范围的记载仅旨在用作单独引用落入该范围的每个单独的值的速记方法。除非本文中另外指明，否则将每个单独的值并入本说明书中，如同其在本文中被单独记载一样。除非本文中另有说明或与上下文明显相反，否则本文中所述的所有方法均可以以任何合适的顺序进行。除非另外要求，否则本文中提供的任何和所有实施例或示例性语言(例如，“例如”)的使用仅旨在更好地举例说明本发明，并不对本发明的范围进行限制。说明书中的任何语言均不应被解释为表示对本发明的实践必要的任何未要求保护的要素。

在本说明书的整个文本中引用了若干文献。本文中无论是在上文还是在下文引用的每篇文献(包括所有专利、专利申请、科学出版物、生产商说明书、用法指导等)均在此通过引用其整体并入。本文中的任何内容均不应被解释为承认本发明无权由于在先发明而先于这样的公开内容。

术语“CLDN18”涉及密蛋白18并且包括任何变体，包括密蛋白18剪接变体1(密蛋白18.1(CLDN18.1))和密蛋白18剪接变体2(密蛋白18.2(CLDN18.2))。

术语“CLDN18.2”优选涉及人CLDN18.2，并且特别地涉及包含根据序列表中的SEQID NO：1的氨基酸序列或所述氨基酸序列的变体，优选由其组成的蛋白质。

术语“CLDN18.1”优选涉及人CLDN18.1，并且特别地涉及包含优选根据序列表中的SEQ ID NO：2的氨基酸序列或所述氨基酸序列的变体，优选由其组成的蛋白质。

根据本发明，术语“变体”特别地是指突变体、剪接变体、构象、同种型、等位基因变体、物种变体和物种同源物，特别是天然存在的那些。等位基因变体涉及基因正常序列的改变，其意义通常不清楚。全基因测序通常确定给定基因的许多等位基因变体。物种同源物是具有与给定核酸或氨基酸序列不同的起源物种的核酸或氨基酸序列。术语“变体”应涵盖任何翻译后修饰变体和构象变体。

根据本发明，术语“CLDN18.2阳性癌症”意指涉及(优选在所述癌细胞的表面上)表达CLDN18.2的癌细胞的癌症。

“细胞表面”根据其在本领域中的通常含义使用，并因此包括易于被蛋白质和其他分子结合的细胞外部。

如果CLDN18.2位于细胞的表面并且易于被添加至细胞的CLDN18.2特异性抗体结合，则CLDN18.2在所述细胞的表面上表达。

根据本发明，如果与胃细胞或胃组织中的表达相比表达水平更低，则CLDN18.2基本上不在细胞中表达。优选地，表达水平低于胃细胞或胃组织中的表达的10％，优选低于5％、3％、2％、1％、0.5％、0.1％或0.05％或甚至更低。优选地，如果表达水平超过胃以外的非癌组织中的表达水平不超过2倍、优选1.5倍，并且优选不超过所述非癌组织中的表达水平，则CLDN18.2基本上不在细胞中表达。优选地，如果表达水平低于检测限和/或如果表达水平太低而不允许被添加至细胞的CLDN18.2特异性抗体结合，则CLDN18.2基本上不在细胞中表达。

根据本发明，如果表达水平超过胃以外的非癌组织中的表达水平，优选超过2倍，优选10倍、100倍、1000倍或10000倍，则CLDN18.2在细胞中表达。优选地，如果表达水平高于检测限和/或如果表达水平足够高以允许被添加至细胞的CLDN18.2特异性抗体结合，则CLDN18.2在细胞中表达。优选地，在细胞中表达的CLDN18.2在所述细胞的表面上表达或暴露。

根据本发明，术语“疾病”是指任何病理状态，包括癌症，特别是本文中所述的那些癌症形式。本文中对癌症或特定形式的癌症的任何提及也包括其癌症转移。在一个优选的实施方案中，根据本申请的待治疗的疾病涉及表达CLDN18.2的细胞。

根据本发明的“与表达CLDN18.2的细胞相关的疾病”或类似表达意指CLDN18.2在患病组织或器官的细胞中表达。在一个实施方案中，与健康组织或器官中的状态相比，CLDN18.2在患病组织或器官的细胞中的表达提高。提高是指提高至少10％，特别是至少20％、至少50％、至少100％、至少200％、至少500％、至少1000％、至少10000％，或甚至更多。在一个实施方案中，表达仅见于患病组织中，而健康组织中的表达被抑制。根据本发明，与表达CLDN18.2的细胞相关的疾病包括癌症疾病。此外，根据本发明，癌症疾病优选是其中癌细胞表达CLDN18.2的那些。

如本文中所用，“癌症疾病”或“癌症”包括特征在于异常调节的细胞生长、增殖、分化、黏附和/或迁移的疾病。“癌细胞”意指通过迅速、不受控制的细胞增殖而生长并且在引发新生长的刺激停止之后继续生长的异常细胞。优选地，“癌症疾病”的特征在于表达CLDN18.2的细胞和表达CLDN18.2的癌细胞。表达CLDN18.2的细胞优选是癌细胞，优选本文中所述的癌症的细胞。

“腺癌”为源自腺组织的癌症。这种组织也是被称为上皮组织的一大类组织的一部分。上皮组织包括皮肤、腺体以及内衬于身体的腔和器官的多种其他组织。在胚胎学上，上皮来源于外胚层、内胚层和中胚层。被归类为腺癌的细胞并不一定必须是腺体的一部分，只要它们具有分泌特性即可。这种形式的癌可发生在一些包括人在内的高等哺乳动物中。良好分化的腺癌趋向于与其所来源的腺组织类似，而不良分化的腺癌则可以不是这样。通过对来自组织活检物的细胞进行染色，病理学家将确定肿瘤是腺癌还是一些其他类型的癌症。由于腺体在体内普遍存在的性质，腺癌可在身体的许多组织中产生。尽管每种腺体可不分泌相同的物质，但只要细胞具有外分泌功能，它就可被认为是腺性的，并且因而它的恶性形式被命名为腺癌。只要有充足的时间，恶性腺癌就侵袭其他组织并且常常转移。卵巢腺癌是最常见的卵巢癌类型。其包括浆液性和黏液性腺癌、透明细胞腺癌和子宫内膜样腺癌。

“转移”意指癌细胞从其初始部位扩散至身体的其他部位。转移的形成是非常复杂的过程，并依赖于恶性细胞从原发肿瘤脱离，侵袭胞外基质，穿透内皮基底膜进入体腔和血管，并随后在通过血液运输后，浸润靶器官。最后，新肿瘤在靶部位的生长依赖于血管生成。由于肿瘤细胞或组分可残留并发展出转移潜力，因此即使在去除原发肿瘤之后仍经常发生肿瘤转移。在一个实施方案中，根据本发明的术语“转移”是指“远处转移”，其指远离原发肿瘤和局部淋巴结系统的转移。在一个实施方案中，根据本发明的术语“转移”是指淋巴结转移。可使用本发明的治疗来治疗的一种特定形式的转移是源自作为原发部位的胃癌的转移。在一些优选的实施方案中，这种胃癌转移是克鲁肯贝格肿瘤、腹膜转移和/或淋巴结转移。

克鲁肯贝格肿瘤是卵巢的不常见转移性肿瘤，占所有卵巢肿瘤的1％至2％。克鲁肯贝格肿瘤的预后仍然很差，并且对克鲁肯贝格肿瘤没有已建立的治疗。克鲁肯贝格肿瘤是卵巢的转移性印戒细胞腺癌。胃是大多数克鲁肯伯格肿瘤病例(70％)的原发部位。结肠癌、阑尾癌和乳腺癌(主要是浸润性小叶癌)是第二常见的原发部位。已经报道了源自胆囊癌、胆道癌、胰腺癌、小肠癌、法特壶腹(ampulla of Vater)癌、宫颈癌和膀胱/脐尿管癌的罕见克鲁肯贝格肿瘤病例。原发癌的诊断和随后发现卵巢受累之间的间隔通常为6个月或更短，但也已报道有更长的时间。在许多情况下，原发肿瘤非常小，并且可逃脱检测。仅有20％至30％的病例可获得胃或其他器官的先前癌病史。克鲁肯贝格肿瘤是癌症选择性扩散的一个实例，最常在胃-卵巢轴中。历史上，这种肿瘤扩散轴引起了许多病理学家的注意，尤其是当发现胃肿瘤选择性转移至卵巢而不受累其他组织时。长期以来，胃癌转移至卵巢的途径一直是个谜，但现在明显的是逆行淋巴扩散是最可能的转移途径。患有克鲁肯贝格肿瘤的女性对于患有转移性癌症的患者来说往往异常年轻，因为她们通常在其寿命中的50岁，平均年龄为45岁。这种年轻的分布年龄可部分地与年轻女性胃印戒细胞癌发生率提高有关。常见的表现症状通常与卵巢受累有关，其中最常见的是腹痛和腹胀(主要是因为通常是双侧的且通常是大的卵巢肿块)。其余患者有非特异性胃肠道症状或无症状。另外，据报道，克鲁肯贝格肿瘤与卵巢基质产生激素导致的男性化有关。腹水存在于50％的病例中，并且通常显示出恶性细胞。在超过80％的报告病例中，克鲁肯贝格肿瘤是双侧的。卵巢通常不对称扩大，具有凸起的轮廓。切面呈黄色或白色；其通常是实体的，尽管其偶尔是囊性的。重要的是，患有克鲁肯贝格肿瘤的卵巢的被囊表面通常是光滑的，并且没有黏连或腹膜沉积物。值得注意的是，卵巢的其他转移性肿瘤往往与表面植入物有关。这或许可解释为什么克鲁肯伯格肿瘤的大体形态可欺骗性地看似原发性卵巢肿瘤。然而，克鲁肯伯格肿瘤的双侧性与其转移性性质一致。患有克鲁肯贝格肿瘤的患者的总体死亡率非常高。大多数患者在2年内死亡(中位存活为14个月)。数项研究表明，当在发现转移至卵巢之后鉴定出原发肿瘤时，预后较差，并且如果原发肿瘤保持隐蔽，则预后变得更差。文献中尚未明确建立针对克鲁肯伯格肿瘤的最佳治疗策略。是否应进行手术切除尚未得到充分解决。化学治疗或放射治疗对患有克鲁肯贝格肿瘤的患者的预后无显著影响。

在本发明背景中，术语“治疗”或“治疗性干预”涉及出于对抗病症例如疾病或障碍目的的对象的管理和护理。该术语旨在包括针对对象所遭受的给定病症的全谱治疗，例如施用治疗有效的化合物以减轻症状或并发症，延缓疾病、障碍或病症的进展，缓解或减轻症状和并发症，和/或治愈或消除疾病、障碍或病症以及预防病症，其中预防应理解为出于对抗疾病、病症或障碍目的的个体的管理和护理，并且包括施用活性化合物以预防症状或并发症的发作。

术语“治疗性处理”涉及改善健康状况和/或延长(提高)个体寿命的任何治疗。所述治疗可在个体中消除疾病、在个体中阻止或减缓疾病的发生、在个体中抑制或减缓疾病的发生、在个体中降低症状的频率或严重程度、和/或在目前患有或先前曾患有疾病的个体中降低复发。

术语“预防性处理”或“防止性处理”涉及旨在防止疾病在个体中发生的任何治疗。术语“预防性处理”或“防止性处理”在本文中可互换使用。

术语“个体”和“对象”在本文中可互换使用。其是指可受疾病或病症(例如癌症)折磨或易于患有所述疾病或病症但是可患有或可未患有所述疾病或病症的人或其他哺乳动物(例如小鼠、大鼠、兔、犬、猫、牛、猪、绵羊、马或灵长类动物)。在许多实施方案中，个体是人。除非另有说明，否则术语“个体”和“对象”不表示特定年龄，并且因此涵盖成年人、老年人、儿童和新生儿。在本公开内容的一些实施方案中，“个体”或“对象”是“患者”。

术语“患者”意指治疗的个体或对象，特别是患病的个体或对象。

如本文中所用，“免疫检查点”是指免疫系统的调节剂，并且特别地是调节抗原的T细胞受体识别的强度(amplitude)和质量的共刺激和抑制性信号。在某些实施方案中，免疫检查点是抑制性信号。在某些实施方案中，抑制性信号是PD-1与PD-L1和/或PD-L2之间的相互作用。在某些实施方案中，抑制性信号是CTLA-4与CD80或CD86之间的相互作用以取代CD28结合。在某些实施方案中，抑制性信号是LAG-3与MHC II类分子之间的相互作用。在某些实施方案中，抑制性信号是TIM-3与其一种或更多种配体，例如半乳凝素9、PtdSer、HMGB1和CEACAM1之间的相互作用。在某些实施方案中，抑制性信号是一种或数种KIR与其配体之间的相互作用。在某些实施方案中，抑制性信号是TIGIT与其配体PVR、PVRL2和PVRL3中的一种或更多种之间的相互作用。在某些实施方案中，抑制性信号是CD94/NKG2A与HLAE之间的相互作用。在某些实施方案中，抑制性信号是VISTA与其结合伴侣之间的相互作用。在某些实施方案中，抑制性信号是一种或更多种Siglec与其配体之间的相互作用。在某些实施方案中，抑制性信号是GARP与其一种或更多种配体之间的相互作用。在某些实施方案中，抑制性信号是CD47与SIRPα之间的相互作用。在某些实施方案中，抑制性信号是PVRIG与PVRL2之间的相互作用。在某些实施方案中，抑制性信号是CSF1R与CSF1之间的相互作用。在某些实施方案中，抑制性信号是BTLA与HVEM之间的相互作用。在某些实施方案中，抑制性信号是腺苷能途径(adenosinergic pathway)的一部分，例如，A2AR和/或A2BR与由CD39和CD73产生的腺苷之间的相互作用。在某些实施方案中，抑制性信号是B7-H3与其受体和/或B7-H4与其受体之间的相互作用。在某些实施方案中，抑制性信号由IDO、CD20、NOX或TDO介导。

“程序性死亡-1(Programmed Death-1，PD-1)”受体是指属于CD28家族的免疫抑制性受体。PD-1主要在体内先前激活的T细胞上表达，并与两种配体PD-L1(也被称为B7-H1或CD274)和PD-L2(也被称为B7-DC或CD273)结合。本文中使用的术语“PD-1”包括人PD-1(hPD-1)，hPD-1的变体、同种型和物种同源物，以及与hPD-1具有至少一个共同表位的类似物。“程序性死亡配体1(Programmed Death Ligand-1，PD-L1)”是PD-1的两种细胞表面糖蛋白配体之一(另一种是PD-L2)，在与PD-1结合之后下调T细胞活化和细胞因子分泌。本文中使用的术语“PD-L1”包括人PD-L1(hPD-L1)，hPD-L1的变体、同种型和物种同源物，以及与hPD-L1具有至少一个共同表位的类似物。本文中使用的术语“PD-L2”包括人PD-L2(hPD-L2)，hPD-L2的变体、同种型和物种同源物，以及与hPD-L2具有至少一个共同表位的类似物。PD-1的配体(PD-L1和PD-L2)在抗原呈递细胞(例如树突细胞或巨噬细胞)以及其他免疫细胞的表面上表达。PD-1与PD-L1或PD-L2的结合导致T细胞活化的下调。表达PD-L1和/或PD-L2的癌细胞能够关闭表达PD-1的T细胞，其导致抑制抗癌免疫应答。PD-1与其配体之间的相互作用导致肿瘤浸润淋巴细胞减少、T细胞受体介导的增殖降低以及癌细胞的免疫逃避。免疫抑制可通过抑制PD-1与PD-L1的局部相互作用来逆转，并且当PD-1与PD-L2的相互作用也被阻断时，这种作用是累加的。

“细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(Cytotoxic T Lymphocyte AssociatedAntigen-4，CTLA-4)”(也被称为CD152)是T细胞表面分子，并且是免疫球蛋白超家族的成员。该蛋白质通过与CD80(B7-1)和CD86(B7-2)结合来下调免疫系统。本文中使用的术语“CTLA-4”包括人CTLA-4(hCTLA-4)，hCTLA-4的变体、同种型和物种同源物，以及与hCTLA-4具有至少一个共同表位的类似物。CTLA-4是刺激性检查点蛋白CD28的同源物，对CD80和CD86具有高得多的结合亲和力。CTLA4在活化的T细胞表面表达，并且其配体在专职抗原呈递细胞表面表达。CTLA4与其配体的结合阻止CD28的共刺激信号并产生抑制性信号。因此，CTLA-4下调T细胞活化。

“具有Ig和ITIM结构域的T细胞免疫受体”(T cell Immunoreceptor with Ig andITIM domains，TIGIT，也被称为WUCAM或Vstm3)是T细胞和自然杀伤(Natural Killer，NK)细胞上的免疫受体，并与在DC、巨噬细胞等上的PVR(CD155)和PVRL2(CD112；连接蛋白-2)和PVRL3(CD113；连接蛋白-3)结合并调节T细胞介导的免疫。本文中使用的术语“TIGIT”包括人TIGIT(hTIGIT)，hTIGIT的变体、同种型和物种同源物，以及与hTIGIT具有至少一个共同表位的类似物。本文中使用的术语“PVR”包括人PVR(hPVR)，hPVR的变体、同种型和物种同源物，以及与hPVR具有至少一个共同表位的类似物。本文中使用的术语“PVRL2”包括人PVRL2(hPVRL2)，hPVRL2的变体、同种型和物种同源物，以及与hPVRL2具有至少一个共同表位的类似物。本文中使用的术语“PVRL3”包括人PVRL3(hPVRL3)，hPVRL3的变体、同种型和物种同源物，以及与hPVRL3具有至少一个共同表位的类似物。

“B7家族”是指具有未定义受体的抑制性配体。B7家族包括B7-H3和B7-H4，二者在肿瘤细胞和肿瘤浸润细胞上均被上调。本文中使用的术语“B7-H3”和“B7-H4”包括人B7-H3(hB7-H3)和人B7-H4(hB7-H4)，其变体、同种型和物种同源物，以及分别与B7-H3和B7-H4具有至少一个共同表位的类似物。

“B和T淋巴细胞弱化子”(B and T Lymphocyte Attenuator，BTLA，也被称为CD272)是在Th1而非Th2细胞中表达的TNFR家族成员。BTLA表达在T细胞活化期间被诱导，并且特别地在CD8+T细胞表面表达。本文中使用的术语“BTLA”包括人BTLA(hBTLA)，hBTLA的变体、同种型和物种同源物，以及与hBTLA具有至少一个共同表位的类似物。BTLA表达在人CD8+T细胞分化为效应细胞表型期间逐渐被下调。肿瘤特异性人CD8+T细胞表达高水平的BTLA。BTLA与“疱疹病毒进入介质”(Herpesvirus entry mediator，HVEM，也被称为TNFRSF 14或CD270)结合并参与T细胞抑制。本文中使用的术语“HVEM”包括人HVEM(hHVEM)，hHVEM的变体、同种型和物种同源物，以及与hHVEM具有至少一个共同表位的类似物。BTLA-HVEM复合物负调节T细胞免疫应答。

“杀伤细胞免疫球蛋白样受体”(Killer-cell Immunoglobulin-like Receptor，KIR)是NK T细胞和NK细胞上MHC I类分子的受体，参与健康和患病细胞之间的分化。KIR与人白细胞抗原(human leukocyte antigen，HLA)A、B和C结合，抑制正常的免疫细胞活化。本文中使用的术语“KIR”包括人KIR(hKIR)，hKIR的变体、同种型和物种同源物，以及与hKIR具有至少一个共同表位的类似物。本文中使用的术语“HLA”包括HLA的变体、同种型和物种同源物，以及与HLA具有至少一个共同表位的类似物。如本文中所用，KIR特别是指KIR2DL1、KIR2DL2和/或KIR2DL3。

“淋巴细胞活化基因3(Lymphocyte Activation Gene-3，LAG-3)”(也被称为CD223)是通过与II类MHC分子结合而与淋巴细胞活性的抑制相关的抑制性受体。该受体增强Treg细胞的功能并抑制CD8+效应T细胞功能，导致免疫应答的抑制。LAG-3在活化的T细胞、NK细胞、B细胞和DC上表达。本文中使用的术语“LAG-3”包括人LAG-3(hLAG-3)，hLAG-3的变体、同种型和物种同源物，以及具有至少一个共同表位的类似物。

“T细胞膜蛋白-3(T Cell Membrane Protein-3，TIM-3)”(也被称为HAVcr-2)是通过抑制Th1细胞应答参与淋巴细胞活性的抑制的抑制性受体。其配体是在多种类型的癌症中上调的半乳凝素9(GAL9)。其他TIM-3配体包括磷脂酰丝氨酸(PtdSer)、高速泳动族蛋白1(High Mobility Group Protein 1，HMGB1)和癌胚抗原相关细胞黏附分子1(Carcinoembryonic Antigen Related Cell Adhesion Molecule 1，CEACAM1)。本文中使用的术语“TIM-3”包括人TIM3(hTIM-3)，hTIM-3的变体、同种型和物种同源物，以及具有至少一个共同表位的类似物。本文中使用的术语“GAL9”包括人GAL9(hGAL9)，hGAL9的变体、同种型和物种同源物，以及具有至少一个共同表位的类似物。本文中使用的术语“PdtSer”包括变体和具有至少一个共同表位的类似物。本文中使用的术语“HMGB1”包括人HMGB1(hHMGB1)，hHMGB1的变体、同种型和物种同源物，以及具有至少一个共同表位的类似物。本文中使用的术语“CEACAM1”包括人CEACAM1(hCEACAM1)，hCEACAM1的变体、同种型和物种同源物，以及具有至少一个共同表位的类似物。

“CD94/NKG2A”是主要在自然杀伤细胞和CD8+T细胞的表面上表达的抑制性受体。本文中使用的术语“CD94/NKG2A”包括人CD94/NKG2A(hCD94/NKG2A)，hCD94/NKG2A的变体、同种型和物种同源物，以及具有至少一个共同表位的类似物。CD94/NKG2A受体是包含CD94和NKG2A的异源二聚体。其可能通过与配体(例如HLA-E)结合来抑制NK细胞活化和CD8+T细胞功能。CD94/NKG2A限制自然杀伤细胞(NK细胞)、自然杀伤T细胞(NK-T细胞)和T细胞(α/β和γ/δ)的细胞因子释放和细胞毒性应答。NKG2A经常在肿瘤浸润细胞中表达，而HLA-E在数种癌症中过表达。

“吲哚胺2，3-双加氧酶”(IDO)是具有免疫抑制特性的色氨酸分解代谢酶。本文中使用的术语“IDO”包括人IDO(hIDO)，hIDO的变体、同种型和物种同源物，以及具有至少一个共同表位的类似物。IDO是色氨酸降解的限速酶，催化其转化为犬尿酸原。因此，IDO参与必需氨基酸的耗竭。已知其参与抑制T细胞和NK细胞，产生和活化Treg和髓源性抑制子细胞，以及促进肿瘤血管生成。IDO在许多癌症中过表达，并且表明IDO可促进肿瘤细胞的免疫系统逃逸，并且当被局部炎症诱导时促进慢性肿瘤进展。

如本文中所用，在“腺苷能途径”或“腺苷信号传导途径”中，ATP被外核苷酸酶CD39和CD73转化为腺苷，导致通过腺苷与一种或更多种抑制性腺苷受体“腺苷A2A受体”(Adenosine A2A Receptor，A2AR，也被称为ADORA2A)和“腺苷A2B受体”(Adenosine A2BReceptor，A2BR，也被称为ADORA2B)的结合的抑制性信号传导。腺苷是具有免疫抑制特性的核苷，并且在肿瘤微环境中以高浓度存在，限制免疫细胞浸润、细胞毒性和细胞因子产生。因此，腺苷信号传导是癌细胞避免宿主免疫系统清除的一种策略。通过A2AR和A2BR的腺苷信号传导是由通常存在于肿瘤微环境中的高腺苷浓度激活的癌症治疗重要检查点。CD39、CD73、A2AR和A2BR由大多数免疫细胞表达，包括T细胞、不变自然杀伤细胞、B细胞、血小板、肥大细胞和嗜酸性粒细胞。通过A2AR和A2BR的腺苷信号传导抵消了T细胞受体介导的免疫细胞活化，并导致Treg数量提高，DC和效应T细胞活化降低。本文中使用的术语“CD39”包括人CD39(hCD39)，hCD39的变体、同种型和物种同源物，以及具有至少一个共同表位的类似物。本文中使用的术语“CD73”包括人CD73(hCD73)，hCD73的变体、同种型和物种同源物，以及具有至少一个共同表位的类似物。本文中使用的术语“A2AR”包括人A2AR(hA2AR)，hA2AR的变体、同种型和物种同源物，以及具有至少一个共同表位的类似物。本文中使用的术语“A2BR”包括人A2BR(hA2BR)，hA2BR的变体、同种型和物种同源物，以及具有至少一个共同表位的类似物。

“T细胞活化的V结构域Ig抑制子”(V-domain Ig suppressor of T cellactivation，VISTA，也被称为C10orf54)与PD-L1具有同源性，但显示出限制于造血区室的独特表达模式。本文中使用的术语“VISTA”包括人VISTA(hVISTA)，hVISTA的变体、同种型和物种同源物，以及具有至少一个共同表位的类似物。VISTA诱导T细胞抑制并由肿瘤内的白细胞表达。

“唾液酸结合免疫球蛋白型凝集素”(Sialic acid binding immunoglobulintype lectin，Siglec)家族成员识别唾液酸并参与区分“自身”和“非自身”。本文中使用的术语“Siglec”包括人Siglec(hSiglec)，hSiglec的变体、同种型和物种同源物，以及与一种或更多种hSiglec具有至少一个共同表位的类似物。人基因组包含14个Siglec，其中数个参与免疫抑制，包括但不限于Siglec-2、Siglec-3、Siglec-7和Siglec-9。Siglec受体结合含有唾液酸的聚糖，但在其识别唾液酸残基的连接区域化学和空间分布方面是不同的。家庭成员也有不同的表达模式。多种恶性肿瘤过表达一种或更多种Siglec。

“CD20”是在B细胞和T细胞表面表达的抗原。CD20的高表达可见于癌症，例如B细胞淋巴瘤、毛细胞白血病、B细胞慢性淋巴细胞白血病和黑素瘤癌症干细胞。本文中使用的术语“CD20”包括人CD20(hCD20)，hCD20的变体、同种型和物种同源物，以及具有至少一个共同表位的类似物。

“糖蛋白A为主的重复序列”(Glycoprotein A repetitions predominant，GARP)在免疫耐受和肿瘤逃逸患者免疫系统的能力中发挥作用。本文中使用的术语“GARP”包括人GARP(hGARP)，hGARP的变体、同种型和物种同源物，以及具有至少一个共同表位的类似物。GARP在淋巴细胞上表达，包括外周血中的Treg细胞和肿瘤部位的肿瘤浸润T细胞。其可能与潜在的“转化生长因子β”(transforming growth factor β，TGF-β)结合。Treg中GARP信号传导的中断导致耐受性降低并抑制Treg向肠道的迁移和细胞毒性T细胞的增殖提高。

“CD47”是与配体“信号调节蛋白α”(signal-regulatory protein alpha，SIRPα)结合的跨膜蛋白。本文中使用的术语“CD47”包括人CD47(hCD47)，hCD47的变体、同种型和物种同源物，以及与hCD47具有至少一个共同表位的类似物。本文中使用的术语“SIRPα”包括人SIRPα(hSIRPα)，hSIRPα的变体、同种型和物种同源物，以及与hSIRPα具有至少一个共同表位的类似物。CD47信号传导参与一系列细胞过程，包括细胞凋亡、增殖、黏附和迁移。CD47在许多癌症中过表达，并作为对巨噬细胞的“别吃我(don′t eat me)”信号发挥功能。通过抑制性抗CD47或抗SIRPα抗体阻断CD47信号传导，使巨噬细胞能够吞噬癌细胞并促进癌症特异性T淋巴细胞的活化。

“含有脊髓灰质炎病毒受体相关免疫球蛋白结构域”(poliovirus receptorrelated immunoglobulin domain containing，PVRIG，也被称为CD112R)与“脊髓灰质炎病毒受体相关2”(Poliovirus receptor-related 2，PVRL2)结合。PVRIG和PVRL2在许多癌症中过表达。PVRIG表达还诱导TIGIT和PD-1表达，并且PVRL2和PVR(一种TIGIT配体)在数种癌症中共同过表达。阻断PVRIG信号传导途径会导致T细胞功能和CD8+T细胞应答的提高，并从而降低免疫抑制和提高干扰素应答。本文中使用的术语“PVRIG”包括人PVRIG(hPVRIG)，hPVRIG的变体、同种型和物种同源物，以及与hPVRIG具有至少一个共同表位的类似物。如本文中所用，“PVRL2”包括如上定义的hPVRL2。

“集落刺激因子1”途径是根据本公开内容可被靶向的另一个检查点。CSF1R是结合CSF1的髓系生长因子受体。阻断CSF1R信号传导可在功能上对巨噬细胞应答进行重编程，从而增强抗原呈递和抗肿瘤T细胞应答。本文中使用的术语“CSF1R”包括人CSF1R(hCSF1R)，hCSF1R的变体、同种型和物种同源物，以及与hCSF1R具有至少一个共同表位的类似物。本文中使用的术语“CSF1”包括人CSF1(hCSF1)，hCSF1的变体、同种型和物种同源物，以及与hCSF1具有至少一个共同表位的类似物。

“烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸NADPH氧化酶”是指产生免疫抑制活性氧类(reactive oxygen species，ROS)的髓系细胞的NOX家族酶的酶。已发现五种NOX酶(NOX1至NOX5)参与癌症发展和免疫抑制。升高的ROS水平在几乎所有癌症中都检测到，并促进肿瘤发展和进展的许多方面。NOX产生的ROS会抑制NK和T细胞的功能，抑制骨髓细胞中的NOX可改善相邻NK细胞和T细胞的抗肿瘤功能。本文中使用的术语“NOX”包括人NOX(hNOX)，hNOX的变体、同种型和物种同源物，以及与hNOX具有至少一个共同表位的类似物。

根据本公开内容可被靶向的另一个免疫检查点是由“色氨酸-2，3-双加氧酶”(TDO)介导的信号。TDO表示色氨酸降解中IDO的替代途径，并参与免疫抑制。由于肿瘤细胞可通过TDO而不是IDO分解代谢色氨酸，TDO可代表检查点阻断的另外的靶标。实际上，已发现数种癌细胞系上调TDO，并且TDO可补充IDO抑制。本文中使用的术语“TDO”包括人TDO(hTDO)，hTDO的变体、同种型和物种同源物，以及与hTDO具有至少一个共同表位的类似物。

许多免疫检查点受特定受体与配体对之间的相互作用(例如上述那些)调节。因此，免疫检查点蛋白介导免疫检查点信号传导。例如，检查点蛋白直接或间接调节T细胞活化、T细胞增殖和/或T细胞功能。癌细胞经常利用这些检查点途径来保护其免受免疫系统的攻击。因此，根据本公开内容调节的检查点蛋白的功能通常是调节T细胞活化、T细胞增殖和/或T细胞功能。免疫检查点蛋白因此调节和维持自身耐受性以及生理免疫应答的持续时间和强度。许多免疫检查点蛋白属于B7：CD28家族或肿瘤坏死因子受体(tumor necrosisfactor receptor，TNFR)超家族，并且通过与特定配体结合，激活被募集到胞质结构域的信号传导分子(Suzuki et al.，2016，Jap J Clin Onc，46：191-203)。

本文中使用的术语“免疫检查点调节剂”或“检查点调节剂”是指调节一种或更多种检查点蛋白的功能的分子或化合物。免疫检查点调节剂通常能够调节自身耐受性和/或免疫应答的强度和/或持续时间。优选地，根据本公开使用的免疫检查点调节剂调节一种或更多种人检查点蛋白的功能，并且因此是“人检查点调节剂”。在一个优选的实施方案中，如本文中所用的人检查点调节剂是免疫检查点抑制剂。

如本文中所用，“免疫检查点抑制剂”或“检查点抑制剂”是指完全或部分降低、抑制、干扰或负调节一种或更多种检查点蛋白或者完全或部分降低、抑制、干扰或负调节一种或更多种检查点蛋白的表达。在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂与一种或更多种检查点蛋白结合。在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂与调节检查点蛋白的一种或更多种分子结合。在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂例如在DNA或RNA水平上与一种或更多种检查点蛋白的前体结合。可使用根据本公开内容作为检查点抑制剂发挥作用的任何药剂。

本文中使用的术语“部分地”意指至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的水平，例如检查点蛋白的抑制水平。

在某些实施方案中，适用于本文中公开的方法的免疫检查点抑制剂是抑制性信号的拮抗剂，例如靶向例如PD-1、PD-L1、CTLA-4、LAG-3、B7-H3、B7-H4或TIM-3的抗体。这些配体和受体在Pardoll，D.，Nature.12：252-264，2012中进行了综述。本文中描述了可根据本公开内容靶向的另外的免疫检查点蛋白。

在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂阻止与免疫检查点相关的抑制性信号。在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂是破坏与免疫检查点相关的抑制性信号传导的抗体或其片段。在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂是破坏抑制性信号传导的小分子抑制剂。在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂是破坏抑制性信号传导的基于肽的抑制剂。在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂是破坏抑制性信号传导的抑制性核酸分子。

在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂是阻止检查点阻断剂蛋白之间相互作用的抗体、其片段或抗体模拟物，例如阻止PD-1与PD-L1或PD-L2之间相互作用的抗体或其片段。在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂是阻止CTLA-4与CD80或CD86之间相互作用的抗体、其片段或抗体模拟物。在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂是阻止LAG-3与其配体或TIM-3与其配体之间相互作用的抗体、其片段或抗体模拟物。在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂阻止通过CD39和/或CD73的抑制性信号传导和/或A2AR和/或A2BR与腺苷的相互作用。在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂阻止B7-H3与其受体和/或B7-H4与其受体的相互作用。在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂阻止BTLA与其配体HVEM的相互作用。在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂阻止一种或更多种KIR与其各自配体的相互作用。在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂阻止LAG-3与一种或更多种其配体的相互作用。在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂阻止TIM-3与其配体半乳凝素-9、PtdSer、HMGB1和CEACAM1中的一种或更多种的相互作用。在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂阻止TIGIT与其配体PVR、PVRL2和PVRL3中的一种或更多种的相互作用。在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂阻止CD94/NKG2A与HLA-E的相互作用。在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂阻止VISTA与一种或更多种其结合伴侣的相互作用。在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂阻止一种或更多种Siglec与其各自配体的相互作用。在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂阻止CD20信号传导。在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂阻止GARP与一种或更多种其配体的相互作用。在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂阻止CD47与SIRPα的相互作用。在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂阻止PVRIG与PVRL2的相互作用。在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂阻止CSF1R与CSF1的相互作用。在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂阻止NOX信号传导。在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂阻止IDO和/或TDO信号传导。

如本文中所述，抑制或阻断抑制性免疫检查点信号传导导致阻止或逆转免疫抑制以及针对癌细胞的T细胞免疫的建立或增强。在一个实施方案中，如本文中所述，对免疫检查点信号传导的抑制降低或抑制了免疫系统的功能障碍。在一个实施方案中，如本文中所述，对免疫检查点信号传导的抑制使功能失调的免疫细胞功能失调程度降低。在一个实施方案中，如本文中所述，对免疫检查点信号传导的抑制使功能失调的T细胞之功能失调程度降低。

本文中使用的术语“功能障碍”是指对抗原刺激的免疫应答性降低的状态。该术语包括可发生抗原识别但随后的免疫应答对控制感染或肿瘤生长无效的耗竭和/或无反应性的共同要素。功能障碍还包括抗原识别因免疫细胞功能障碍而受到阻滞的状态。

本文中使用的术语“功能失调”是指处于对抗原刺激的免疫应答性降低的状态的免疫细胞。功能失调包括对抗原识别无应答以及将抗原识别转化为下游T细胞效应子功能的能力受损，所述功能例如增殖、细胞因子产生(例如，IL-2)和/或靶细胞杀伤。

本文中使用的术语“无反应性”是指由于通过T细胞受体(T cell receptor，TCR)递送的信号不完整或不足导致对抗原刺激无应答的状态。在没有共刺激的情况下，抗原刺激也会导致T细胞无反应性，导致即使在共刺激的情况下，细胞也难以被抗原随后激活。无应答状态通常会被IL-2的存在所覆盖。无反应性T细胞不会进行克隆扩增和/或获得效应子功能。

本文中使用的术语“耗竭”是指免疫细胞耗竭，例如作为在许多慢性感染和癌症期间发生的持续TCR信号传导引起的T细胞功能障碍状态的T细胞耗竭。其与无反应性的区别在于，其不是通过不完整或不充分的信号传导产生的，而是由于持续信号传导产生的。耗竭由不良的效应子功能、抑制性受体的持续表达和不同于功能性效应子或记忆T细胞的转录状态定义。耗竭阻止对疾病(例如感染和肿瘤)的最佳控制。耗竭可由外在负调节途径(例如免疫调节细胞因子)以及细胞内在负调节途径(抑制性免疫检查点途径，例如本文中所述)引起。

“增强T细胞功能”意指诱导、引起或刺激T细胞具有持续的或放大的生物学功能，或者更新或再活化已耗竭或失活的T细胞。增强T细胞功能的实例包括：相对于干预之前的该水平，来自CD8+T细胞的γ-干扰素分泌提高，增殖提高，抗原应答性(例如肿瘤清除)提高。在一个实施方案中，增强水平为至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、110％、120％、130％、140％、150％、200％或更多。测量这种增强的方式是本领域普通技术人员已知的。

免疫检查点抑制剂可以是抑制性核酸分子。本文中使用的术语“抑制性核酸”或“抑制性核酸分子”是指完全或部分降低、抑制、干扰或负调节一种或更多种检查点蛋白的核酸分子，例如DNA或RNA。抑制性核酸分子包括但不限于寡核苷酸、siRNA、shRNA、反义DNA或RNA分子以及适配体(例如，DNA或RNA适配体)。

本文中使用的术语“寡核苷酸”是指能够降低蛋白质表达(特别是检查点蛋白的表达，例如本文中所述的检查点蛋白的表达)的核酸分子。寡核苷酸是短的DNA或RNA分子，通常包含2至50个核苷酸。寡核苷酸可以是单链或双链的。检查点抑制剂寡核苷酸可以是反义寡核苷酸。反义寡核苷酸是与给定序列互补，特别是与检查点蛋白的核酸序列(或其片段)的序列互补的单链DNA或RNA分子。反义RNA通常用于通过与所述mRNA结合来阻止mRNA，例如编码检查点蛋白的mRNA的蛋白质翻译。反义DNA通常用于靶向特定的互补(编码或非编码)RNA。如果发生结合，这样的DNA/RNA杂交体可被酶RNase H降解。此外，吗啉代反义寡核苷酸可用于脊椎动物的基因敲除。例如，Kryczek et al.，2006(J Exp Med，203：871-81)设计了B7-H4特异性的吗啉代，其特异性阻断巨噬细胞中B7-H4的表达，导致具有肿瘤相关抗原(tumor associated antigen，TAA)特异性T细胞的小鼠中T细胞增殖提高以及肿瘤体积降低。

术语“siRNA”或“小干扰RNA”或“小抑制性RNA”在本文中可互换使用并且是指具有20至25个碱基对的典型长度的双链RNA分子，其干扰具有互补核苷酸序列的特定基因，例如编码检查点蛋白的基因的表达。在一个实施方案中，siRNA干扰mRNA，因此阻断翻译，例如免疫检查点蛋白的翻译。外源siRNA的转染可用于基因敲低，然而效果可能只是暂时的，尤其是在快速分裂的细胞中。可通过例如RNA修饰或通过使用表达载体来实现稳定转染。用于用siRNA稳定转染细胞的可用修饰和载体是本领域已知的。还可修饰siRNA序列以在两条链之间引入短环，从而产生“小发夹RNA”或“shRNA”。shRNA可被Dicer加工成功能性siRNA。shRNA具有相对较低的降解和周转率。因此，免疫检查点抑制剂可以是shRNA。

本文中使用的术语“适配体”是指能够结合靶分子(例如多肽)的通常长度为25至70个核苷酸的单链核酸分子，例如DNA或RNA。在一个实施方案中，适配体与免疫检查点蛋白，例如本文中所述的免疫检查点蛋白结合。例如，根据本公开内容的适配体可与免疫检查点蛋白或多肽特异性结合，或者与调节免疫检查点蛋白或多肽表达的信号传导途径中的分子特异性结合。适配体的产生和治疗性用途是本领域公知的(参见，例如，US 5,475,096)。

术语“小分子抑制剂”或“小分子”在本文中可互换使用，并且是指低分子量有机化合物，通常高至1000道尔顿，其全部或部分降低、抑制、干扰或负调节一个或更多个如上所述的检查点蛋白。这样的小分子抑制剂通常是通过有机化学合成的，但也可从天然来源(例如，植物、真菌和微生物)中分离。小分子量允许小分子抑制剂迅速扩散穿过细胞膜。例如，本领域已知的多种A2AR拮抗剂是分子量低于500道尔顿的有机化合物。

免疫检查点抑制剂可以是抗体、其抗原结合片段、抗体模拟物或包含具有所需特异性的抗原结合片段的抗体部分的融合蛋白。抗体或其抗原结合片段如本文中所述。作为免疫检查点抑制剂的抗体或其抗原结合片段特别地包括与免疫检查点蛋白，例如免疫检查点受体或免疫检查点受体配体结合的抗体或其抗原结合片段。如本文中所述，抗体或抗原结合片段也可与另外的部分缀合。特别地，抗体或其抗原结合片段是嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。优选地，免疫检查点抑制剂抗体或其抗原结合片段是免疫检查点受体的拮抗剂或免疫检查点受体配体的拮抗剂。

在一个优选的实施方案中，作为免疫检查点抑制剂的抗体是分离的抗体。

根据本公开内容的作为免疫检查点抑制剂的抗体或其抗原结合片段也可以是与任何已知的免疫检查点抑制剂抗体交叉竞争抗原结合的抗体。在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂抗体与一种或更多种本文中所述的免疫检查点抑制剂抗体交叉竞争。抗体交叉竞争结合抗原的能力表明，这些抗体可与抗原的相同表位区域结合，或者当与另一个表位结合时，会在空间上阻碍已知免疫检查点抑制剂抗体与该特定表位区域的结合。这些交叉竞争的抗体可具有与其交叉竞争的那些非常相似的功能特性，因为预计其通过与相同的表位结合或通过空间阻碍配体的结合来阻断免疫检查点与其配体的结合。交叉竞争抗体可基于其在标准结合测定(例如表面等离子体共振分析、ELISA测定或流式细胞术)中与一种或更多种已知抗体交叉竞争的能力而容易地被鉴定(参见，例如，WO 2013/173223)。

在某些实施方案中，与一种或更多种已知抗体交叉竞争与给定抗原的结合或作为一种或更多种已知抗体与给定抗原的相同表位区域结合的抗体或其抗原结合片段是单克隆抗体。对于施用于人患者，这些交叉竞争的抗体可以是嵌合抗体，或者人源化抗体或人抗体。这样的嵌合、人源化或人的单克隆抗体可通过本领域公知的方法制备和分离。

检查点抑制剂也可以是分子(或其变体)本身的可溶性形式，例如可溶性PD-L1或PD-L1融合物。

在本公开内容的上下文中，可使用多于一种的检查点抑制剂，其中多于一种的检查点抑制剂靶向不同的检查点途径或相同的检查点途径。优选地，多于一种的检查点抑制剂是不同的检查点抑制剂。优选地，如果使用多于一种的不同的检查点抑制剂，特别是使用至少2、3、4、5、6、7、8、9或10种不同的检查点抑制剂，优选使用2、3、4或5种不同的检查点抑制剂，更优选使用2、3或4种不同的检查点抑制剂，甚至更优选使用2或3种不同的检查点抑制剂并且最优选使用2种不同的检查点抑制剂。不同检查点抑制剂组合的优选实例包括PD-1信号传导抑制剂和CTLA-4信号传导抑制剂、PD-1信号传导抑制剂和TIGIT信号传导抑制剂、PD-1信号传导抑制剂和B7-H3和/或B7-H4信号传导抑制剂、PD-1信号传导抑制剂和BTLA信号传导抑制剂、PD-1信号传导抑制剂和KIR信号传导抑制剂、PD-1信号传导抑制剂和LAG-3信号传导抑制剂、PD-1信号传导抑制剂和TIM-3信号传导抑制剂、PD-1信号传导抑制剂和CD94/NKG2A信号传导抑制剂、PD-1信号传导抑制剂和IDO信号传导抑制剂、PD-1信号传导抑制剂和腺苷信号传导抑制剂、PD-1信号传导抑制剂和VISTA信号传导抑制剂、PD-1信号传导抑制剂和Siglec信号传导抑制剂、PD-1信号传导抑制剂和CD20信号传导抑制剂、PD-1信号传导抑制剂和GARP信号传导抑制剂、PD-1信号传导抑制剂和CD47信号传导抑制剂、PD-1信号传导抑制剂和PVRIG信号传导抑制剂、PD-1信号传导抑制剂和CSF1R信号传导抑制剂、PD-1信号传导抑制剂和NOX信号传导抑制剂、以及PD-1信号传导抑制剂和TDO信号传导抑制剂。

在某些实施方案中，抑制性免疫调节剂(免疫检查点阻断剂)是PD-1/PD-L1或PD-1/PD-L2信号传导途径的组分。因此，本公开内容的某些实施方案提供了用于向对象施用PD-1信号传导途径的检查点抑制剂。在某些实施方案中，PD-1信号传导途径的检查点抑制剂是PD-1抑制剂。在某些实施方案中，PD-1信号传导途径的检查点抑制剂是PD-1配体抑制剂，例如PD-L1抑制剂或PD-L2抑制剂。在一个优选的实施方案中，PD-1信号传导途径的检查点抑制剂是破坏PD-1受体与其配体PD-L1和/或PD-L2中的一种或更多种之间的相互作用的抗体或其抗原结合部分。与PD-1结合并破坏PD-1与一种或更多种其配体之间相互作用的抗体是本领域已知的。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合部分与PD-1特异性结合。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合部分与PD-L1特异性结合并抑制其与PD-1的相互作用，从而提高免疫活性。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合部分与PD-L2特异性结合并抑制其与PD-1的相互作用，从而提高免疫活性。

在某些实施方案中，抑制性免疫调节剂是CTLA-4信号传导途径的组分。因此，本公开内容的某些实施方案提供了用于向对象施用CTLA-4信号传导途径的检查点抑制剂。在某些实施方案中，CTLA-4信号传导途径的检查点抑制剂是CTLA-4抑制剂。在某些实施方案中，CTLA-4信号传导途径的检查点抑制剂是CTLA-4配体抑制剂。

在某些实施方案中，抑制性免疫调节剂是TIGIT信号传导途径的组分。因此，本公开内容的某些实施方案提供了用于向对象施用TIGIT信号传导途径的检查点抑制剂。在某些实施方案中，TIGIT信号传导途径的检查点抑制剂是TIGIT抑制剂。在某些实施方案中，TIGIT信号传导途径的检查点抑制剂是TIGIT配体抑制剂。

在某些实施方案中，抑制性免疫调节剂是B7家族信号传导途径的组分。在某些实施方案中，B7家族成员是B7-H3和B7-H4。本公开内容的某些实施方案提供了用于向对象施用B7-H3和/或B7-4的检查点抑制剂。因此，本公开内容的某些实施方案提供了用于向对象施用靶向B7-H3或B7-H4的抗体或其抗原结合部分。B7家族没有任何限定的受体，但这些配体在肿瘤细胞或肿瘤浸润细胞上被上调。临床前小鼠模型已表明，阻断这些配体可增强抗肿瘤免疫。

在某些实施方案中，抑制性免疫调节剂是BTLA信号传导途径的组分。因此，本公开内容的某些实施方案提供了用于向对象施用BTLA信号传导途径的检查点抑制剂。在某些实施方案中，BTLA信号传导途径的检查点抑制剂是BTLA抑制剂。在某些实施方案中，BTLA信号传导途径的检查点抑制剂是HVEM抑制剂。

在某些实施方案中，抑制性免疫调节剂是一种或更多种KIR信号传导途径的组分。因此，本公开内容的某些实施方案提供了用于向对象施用一种或更多种KIR信号传导途径的检查点抑制剂。在某些实施方案中，一种或更多种KIR信号传导途径的检查点抑制剂是KIR抑制剂。在某些实施方案中，一种或更多种KIR信号传导途径的检查点抑制剂是KIR配体抑制剂。例如，根据本公开内容的KIR抑制剂可以是与KIR2DL1、KIR2DL2和/或KIR2DL3结合的抗KIR抗体。

在某些实施方案中，抑制性免疫调节剂是LAG-3信号传导途径的组分。因此，本公开内容的某些实施方案提供了用于向对象施用LAG-3信号传导的检查点抑制剂。在某些实施方案中，LAG-3信号传导途径的检查点抑制剂是LAG-3抑制剂。在某些实施方案中，LAG-3信号传导途径的检查点抑制剂是LAG-3配体抑制剂。

在某些实施方案中，抑制性免疫调节剂是TIM-3信号传导途径的组分。因此，本公开内容的某些实施方案提供了用于向对象施用TIM-3信号传导途径的检查点抑制剂。在某些实施方案中，TIM-3信号传导途径的检查点抑制剂是TIM-3抑制剂。在某些实施方案中，TIM-3信号传导途径的检查点抑制剂是TIM-3配体抑制剂。

在某些实施方案中，抑制性免疫调节剂是CD94/NKG2A信号传导途径的组分。因此，本公开内容的某些实施方案提供了用于向对象施用CD94/NKG2A信号传导途径的检查点抑制剂。在某些实施方案中，CD94/NKG2A信号传导途径的检查点抑制剂是CD94/NKG2A抑制剂。在某些实施方案中，CD94/NKG2A信号传导途径的检查点抑制剂是CD94/NKG2A配体抑制剂。

在某些实施方案中，抑制性免疫调节剂是IDO信号传导途径的组分。因此，本公开内容的某些实施方案提供了用于向对象施用IDO信号传导途径的检查点抑制剂，例如IDO抑制剂。

在某些实施方案中，抑制性免疫调节剂是腺苷信号传导途径的组分。因此，本公开内容的某些实施方案提供了用于向对象施用腺苷信号传导途径的检查点抑制剂。在某些实施方案中，腺苷信号传导途径的检查点抑制剂是CD39抑制剂。在某些实施方案中，腺苷信号传导途径的检查点抑制剂是CD73抑制剂。在某些实施方案中，腺苷信号传导途径的检查点抑制剂是A2AR抑制剂。在某些实施方案中，腺苷信号传导途径的检查点抑制剂是A2BR抑制剂。

在某些实施方案中，抑制性免疫调节剂是VISTA信号传导途径的组分。因此，本公开内容的某些实施方案提供了用于向对象施用VISTA信号传导途径的检查点抑制剂。在某些实施方案中，VISTA信号传导途径的检查点抑制剂是VISTA抑制剂。

在某些实施方案中，抑制性免疫调节剂是一种或更多种Siglec信号传导途径的组分。因此，本公开内容的某些实施方案提供了用于向对象施用一种或更多种Siglec信号传导途径的检查点抑制剂。在某些实施方案中，一种或更多种Siglec信号传导途径的检查点抑制剂是Siglec抑制剂。在某些实施方案中，一种或更多种Siglec信号传导途径的检查点抑制剂是Siglec配体抑制剂。

在某些实施方案中，抑制性免疫调节剂是CD20信号传导途径的组分。因此，本公开内容的某些实施方案提供了用于向对象施用CD20信号传导途径的检查点抑制剂。在某些实施方案中，CD20信号传导途径的检查点抑制剂是CD20抑制剂。

在某些实施方案中，抑制性免疫调节剂是GARP信号传导途径的组分。因此，本公开内容的某些实施方案提供了用于向对象施用GARP信号传导途径的检查点抑制剂。在某些实施方案中，GARP信号传导途径的检查点抑制剂是GARP抑制剂。

在某些实施方案中，抑制性免疫调节剂是CD47信号传导途径的组分。因此，本公开内容的某些实施方案提供了用于向对象施用CD47信号传导途径的检查点抑制剂。在某些实施方案中，CD47信号传导途径的检查点抑制剂是CD47抑制剂。在某些实施方案中，CD47信号传导途径的检查点抑制剂是SIRPα抑制剂。

在某些实施方案中，抑制性免疫调节剂是PVRIG信号传导途径的组分。因此，本公开内容的某些实施方案提供了用于向对象施用PVRIG信号传导途径的检查点抑制剂。在某些实施方案中，PVRIG信号传导途径的检查点抑制剂是PVRIG抑制剂。在某些实施方案中，PVRIG信号传导途径的检查点抑制剂是PVRIG配体抑制剂。

在某些实施方案中，抑制性免疫调节剂是CSF1R信号传导途径的组分。因此，本公开内容的某些实施方案提供了用于向对象施用CSF1R信号传导途径的检查点抑制剂。在某些实施方案中，CSF1R信号传导途径的检查点抑制剂是CSF1R抑制剂。在某些实施方案中，CSF1R信号传导途径的检查点抑制剂是CSF1抑制剂。

在某些实施方案中，抑制性免疫调节剂是NOX信号传导途径的组分。因此，本公开内容的某些实施方案提供了用于向对象施用NOX信号传导途径的检查点抑制剂，例如NOX抑制剂。

在某些实施方案中，抑制性免疫调节剂是TDO信号传导途径的组分。因此，本公开内容的某些实施方案提供了用于向对象施用TDO信号传导途径的检查点抑制剂，例如TDO抑制剂。

示例性PD-1抑制剂包括但不限于抗PD-1抗体，例如BGB-A317(BeiGene；参见US 8,735,553、WO 2015/35606和US 2015/0079109)，西米普利单抗(Regeneron；参见WO 2015/112800)和兰立珠单抗(例如，在WO2008/156712中公开为hPD109A及其人源化衍生物h409A1、h409A16和h409A17)，AB137132(Abcam)，EH12.2H7和RMP1-14(#BE0146；BioxcellLifesciences Pvt.LTD.)，MIH4(Affymetrix eBioscience)，纳武单抗(OPDIVO，BMS-936558；Bristol Myers Squibb；参见WO 2006/121168)，派姆单抗(KEYTRUDA；MK-3475；Merck；参见WO 2008/156712)，皮地利珠单抗(CT-011；CureTech；参见Hardy et al.，1994，Cancer Res.，54(22)：5793-6和WO 2009/101611)，PDR001(Novartis；参见WO 2015/112900)，MEDI0680(AMP-514；AstraZeneca；参见WO 2012/145493)，TSR-042(参见WO 2014/179664)、REGN-2810(H4H7798N；参见US 2015/0203579)，JS001(TAIZHOU JUNSHI PHARMA；参见Si-Yang Liu et al.，2007，J.Hematol.Oncol.70：136)，AMP-224(GSK-2661380；参见Li et al.，2016，Int J Mol Sci17(7)：1151以及WO 2010/027827和WO 2011/066342)、PF-06801591(Pfizer)，BGB-A317(BeiGene；参见WO 2015/35606和US 2015/0079109)，BI754091，SHR-1210(参见WO2015/085847)，以及如WO 2006/121168中所述的抗体17D8、2D3、4H1、4A11、7D3和5F4，INCSHR1210(Jiangsu Hengrui Medicine；也被称为SHR-1210；参见WO2015/085847)，TSR-042(Tesaro Biopharmaceutical；也被称为ANB011；参见W02014/179664)，GLS-010(Wuxi/Harbin Gloria Pharmaceuticals；也被称为WBP3055；参见Si-Yang et al.，2017，J.Hematol.Oncol.70：136)，STI-1110(Sorrento Therapeutics；参见WO 2014/194302)，AGEN2034(Agenus；参见WO 2017/040790)，MGA012(Macrogenics；参见WO2017/1983046)，IBI308(Innovent；参见WO 2017/024465、WO 2017/025016、WO 2017/132825和WO 2017/133540)，如在例如US 7,488,802、US 8,008,449、US 8,168,757、WO 03/042402、WO 2010/089411(还公开了抗PD-L1抗体)、WO 2010/036959、WO 2011/159877(还公开了针对TIM-3的抗体)、WO 2011/082400、WO 2011/161699、WO 2009/014708、WO 03/099196、WO 2009/114335、WO 2012/145493(还公开了针对PD-L1的抗体)、WO 2015/035606、WO 2014/055648(还公开了抗KIR抗体)、US 2018/0185482(还公开了抗PD-L1和抗TIGIT抗体)、US 8,008,449、US 8,779,105、US 6,808,710、US 8,168,757、US 2016/0272708和US8,354,509中所述的抗PD-1抗体，如例如在Shaabani et al.，2018，Expert Op Ther Pat.，28(9)：665-678和Sasikumar和Ramachandra，2018，BioDrugs，32(5)：481-497中公开的针对PD-1信号传导途径的小分子拮抗剂，如例如在WO 2019/000146和WO 2018/103501中公开的针对PD-1的siRNA，如在WO 2018/222711中公开的可溶性PD-1蛋白，以及如例如在WO 2018/022831中所述的包含可溶形式的PD-1的溶瘤病毒。

在某个实施方案中，PD-1抑制剂是纳武单抗(OPDIVO；BMS-936558)、派姆单抗(KEYTRUDA；MK-3475)、皮地利珠单抗(CT-011)、PDR001、MEDI0680(AMP-514)、TSR-042、REGN2810、JS001、AMP-224(GSK-2661380)、PF-06801591、BGB-A317、BI 754091或SHR-1210。

示例性PD-1配体抑制剂是PD-L1抑制剂和PD-L2抑制剂，并且包括但不限于抗PD-L1抗体，例如MEDI4736(度伐单抗；AstraZeneca；参见WO 2011/066389)，MSB-0010718C(参见US 2014/0341917)，YW243.55.S70(参见WO 2010/077634和US 8,217,149的SEQ ID NO：20)，MIH1(Affymetrix eBioscience；参见EP 3 230319)，MDX-1105(Roche/Genentech；参见WO2013019906和US 8,217,149)STI-1014(Sorrento；参见W02013/181634)，CK-301(检查点治疗剂)，KN035(3D Med/Alphamab；参见Zhang et al.，2017，Cell Discov.3：17004)，阿特珠单抗(TECENTRIQ；RG7446；MPDL3280A；R05541267；参见US 9,724,413)，BMS-936559(Bristol Myers Squibb；参见US 7,943,743、WO 2013/173223)，阿维单抗(bavencio；参见US 2014/0341917)，LY3300054(Eli Lilly Co.)，CX-072(Proclaim-CX-072；也被称为CytomX；参见WO2016/149201)，FAZ053，KN035(参见WO2017020801和WO2017020802)，MDX-1105(参见US 2015/0320859)，在US 7,943,743中公开的抗PD-L1抗体，包括3G10、12A4(也被称为BMS-936559)、10A5、5F8、10H10、1B12、7H1、11E6、12B7和13G4，如WO 2010/077634、US8,217,149、WO 2010/036959、WO 2010/077634、WO 2011/066342、US 8,217,149、US 7,943,743、WO 2010/089411、US 7,635,757、US 8,217,149、US 2009/0317368、WO 2011/066389、WO2017/034916、WO2017/020291、WO2017/020858、WO2017/020801、WO2016/111645、WO2016/197367、WO2016/061142、WO2016/149201、WO2016/000619、WO2016/160792、WO2016/022630、WO2016/007235、WO2015/179654、WO2015/173267、WO2015/181342、WO2015/109124、WO2018/222711、WO2015/112805、WO2015/061668、WO2014/159562、WO2014/165082、WO2014/100079中所述的抗PD-L1抗体。

示例性CTLA-4抑制剂包括但不限于单克隆抗体伊匹单抗(Yervoy；Bristol MyersSquibb)和替西木单抗(Pfizer/Medlmmune)，trevilizumab，AGEN-1884(Agenus)和ATOR-1015，在WO 2001/014424、US 2005/0201994、EP 1212422、US 5,811,097、US 5,855,887、US6,051,227、US 6,682,736、US 6,984,720、WO 01/14424、WO 00/37504、US 2002/0039581、US 2002/086014、WO 98/42752、US 6,207,156、US 5,977,318、US 7,109,003和US 7,132,281中公开的抗CTLA4抗体，显性负蛋白阿巴西普(Orencia；参见EP 2 855 533)，其包含与CTLA-4 ECD融合的IgG 1的Fe区，以及贝拉西普(Nulojix；参见WO 2014/207748)，其是相对于阿巴西普在CTLA-4 ECD中具有两个氨基酸替换的第二代更高亲和力CTLA-4-Ig变体，可溶性CTLA-4多肽，例如RG2077和CTLA4-IgG4m(参见US 6,750,334)，针对CTLA-4的抗CTLA-4适配体和siRNA，例如，如US2015/203848中所公开。示例性的CTLA-4配体抑制剂描述于Pileet al.，2015(Encyclopedia of Inflammatory Diseases，M.Parnham(ed.)，doi：10.1007/978-3-0348-0620-6_20)。

TIGIT信号传导途径的示例性检查点抑制剂包括但不限于抗TIGIT抗体，例如BMS-986207、COM902(CGEN-15137；Compugen)、AB154(Arcus Biosciences)或etigilimab(OMP-313M32；OncoMed Pharmaceuticals)，或者在WO2017/059095(特别是“MAB10”)、US 2018/0185482、WO 2015/009856和US 2019/0077864中公开的抗体。

B7-H3的示例性检查点抑制剂包括但不限于Fc优化的单克隆抗体依诺妥珠单抗(enoblituzumab)(MGA271；Macrogenics；参见US 2012/0294796)以及抗B7-H3抗体MGD009(Macrogenics)和皮地利珠单抗(参见US 7,332,582)。

示例性B7-H4抑制剂包括但不限于如Dangaj et al.，2013(Cancer Research 73：4820-9)和Smith et al.，2014(Gynecol Oncol，134：181-189)、WO 2013/025779(例如，由SEQ ID NO：3和4编码的2D1，由SEQ ID NO：37和39编码的2H9，以及由SEQ ID NO：41和43编码的2E11)以及WO 2013/067492(例如，具有选自SEQ ID NO：1至8的氨基酸序列的抗体)所述的抗体，吗啉代反义寡核苷酸，例如，如Kryczek et al.，2006(J Exp Med，203：871-81)所述，或者B7-H4的可溶性重组形式，例如如在US2012/0177645中所公开的。

示例性BTLA抑制剂包括但不限于Crawford和Wherry，2009(J Leukocyte Biol86：5-8)、WO 2011/014438(例如，4C7或包含根据SEQ ID NO：8和15和/或SEQ ID NO：11和18的重链和轻链的抗体)、WO 2014/183885(例如，以CNCM I-4752号保藏的抗体)和US 2018/155428中所述的抗BTLA抗体。

KIR信号传导的检查点抑制剂包括但不限于单克隆抗体lirilumab(1-7F9；IPH2102；参见参见US 8,709,411)，IPH4102(Innate Pharma；参见Marie-Cardine et al.，2014，Cancer 74(21)：6060-70)，如例如在US 2018/208652、US 2018/117147、US 2015/344576、WO 2005/003168、WO 2005/009465、WO 2006/072625、WO 2006/072626、WO 2007/042573、WO 2008/084106(例如包含根据SEQ ID NO：2和3的重链和轻链的抗体)、WO 2010/065939、WO 2012/071411、WO 2012/160448和WO 2014/055648中公开的抗KIR抗体。

LAG-3抑制剂包括但不限于抗LAG-3抗体BMS-986016(Bristol-Myers Squibb；参见WO 2014/008218和WO 2015/116539)，25F7(参见US2011/0150892)，IMP731(参见WO2008/132601)，H5L7BW(参见WO2014140180)，MK-4280(28G-10；Merck；参见WO 2016/028672)，REGN3767(Regneron/Sanofi)，BAP050(参见WO 2017/019894)，IMP-701(LAG-525；Novartis)Sym022(Symphogen)，TSR-033(Tesaro)，MGD013(MacroGenics开发的靶向LAG-3和PD-1的双特异性DART抗体)，BI754111(Boehringer Ingelheim)，FS118(F-star开发的靶向LAG-3和PD-1的双特异性抗体)，GSK2831781(GSK)以及如WO 2009/044273、WO 2008/132601、WO 2015/042246、EP 2 320 940、US 2019/169294、US 2019/169292、WO 2016/028672、WO 2016/126858、WO 2016/200782、WO 2015/200119、WO 2017/220569、WO 2017/087589、WO 2017/219995、WO 2017/019846、WO 2017/106129、WO 2017/062888、WO 2018/071500、WO 2017/087901、US 2017/0260271、WO 2017/198741、WO2017/220555、WO2017/015560、WO2017/025498、WO2017/149143、WO 2018/069500、WO2018/083087、WO2018/034227WO2014/140180中公开的抗体，LAG-3拮抗性蛋白AVA-017(Avacta)，可溶性LAG-3融合蛋白IMP321(eftilagimod alpha；Immutep；参见EP 2 205 257和Brignone et al.，2007，J.Immunol.，179：4202-4211)，以及在WO 2018/222711中公开的可溶性LAG-3蛋白。

TIM-3抑制剂包括但不限于靶向TIM-3的抗体，例如F38-2E2(BioLegend)，考伯利单抗(cobolimab)(TSR-022；Tesaro)，LY3321367(Eli Lilly)，MBG453(Novartis)以及如例如在WO 2013/006490、WO 2018/085469(例如，包含由根据SEQ ID NO：3和4的核酸序列编码的重链和轻链序列的抗体)、WO 2018/106588、WO 2018/106529(例如，包含根据SEQ ID NO：8至11的重链和轻链序列的抗体)中公开的抗体。

TIM-3配体抑制剂包括但不限于CEACAM1抑制剂，例如抗CEACAM1抗体CM10(cCAMBiotherapeutics；参见WO 2013/054331)，在WO 2015/075725中公开的抗体(例如CM-24、26H7、5F4、TEC-11、12-140-4、4/3/17、COL-4、F36-54、34B1、YG-C28F2、D14HD11、M8.7.7、D11-AD11、HEA81、B 1.1、CLB-gran-10、F34-187、T84.1、B6.2、B 1.13、YG-C94G7、12-140-5、scFV DIATHIS1、TET-2；cCAM Biotherapeutics)，Watt et al.，2001(Blood，98：1469-1479)和WO 2010/12557中所述的抗体，以及PtdSer抑制剂，例如巴维昔单抗(baVituximab)(Peregrine)。

CD94/NKG2A抑制剂包括但不限于，莫那利珠单抗(monalizumab)(IPH2201；InnatePharma)以及如在US 9,422,368(例如，人源化Z199；参见EP 2 628 753)、EP 3 193 929和WO2016/032334(例如，人源化Z270；参见EP 2 628 753)中公开的抗体及其制备方法。

IDO抑制剂包括但不限于exiguamineA，epacadostat(INCB024360；InCyte；参见US9,624,185)，indoximod(Newlink Genetics；CAS#：110117-83-4)，NLG919(NewlinkGenetics/Genentech；CAS#：1402836-58-1)，GDC-0919(Newlink Genetics/Genentech；CAS#：1402836-58-1)，F001287(Flexus Biosciences/BMS；CAS#：2221034-29-1)，KHK2455(Cheong et al.，2018，Expert Opin Ther Pat.28(4)：317-330)，PF-06840003(参见WO2016/181348)，navoximod(RG6078，GDC-0919，NLG919；CAS#：1402837-78-8)，linrodostat(BMS-986205；Bristol-Myers Suibb；CAS#：1923833-60-6)，小分子，例如1-甲基色氨酸、吡咯烷-2，5-二酮衍生物(参见WO 2015/173764)，以及Sheridan，2015，Nat Biotechnol33：321-322公开的IDO抑制剂。

CD39抑制剂包括但不限于A001485(Arcus Biosciences)、PSB 069(CAS#：78510-31-3)和抗CD39单克隆抗体IPH5201(Innate Pharma；参见Perrot et al.，2019，CellReports 8：2411-2425.E9)。

CD73抑制剂包括但不限于抗CD73抗体，例如CPI-006(Corvus Pharmaceuticals)、MEDI9447(MedImmune；参见WO2016075099)，IPH5301(Innate Pharma；参见Perrot et al.，2019，Cell Reports 8：2411-2425.E9)，在WO2018/110555中所述的抗CD73抗体，小分子抑制剂PBS 12379(Tocris Bioscience；CAS#：1802226-78-3)、A000830、A001190和A001421(Arcus Biosciences，参见Becker et al.，2018，Cancer Research 78(13 Supplement)：3691-3691，doi：10.1158/1538-7445.AM2018-3691)，CB-708(Calithera Biosciences)以及如Allard et al.，2018(Immunol Rev.，276(1)：121-144)所述的基于嘌呤细胞毒性核苷类似物的二膦酸盐。

A2AR抑制剂包括但不限于小分子抑制剂，例如istradefylline(KW-6002；CAS#：155270-99-8)、PBF-509(Palobiopharma)、ciforadenant(CPI-444：Corvus Pharma/Genentech；CAS#：1202402-40-1)、ST1535([2丁基-9-甲基-8-(2H-1，2，3-三唑2-基)-9H-嘌呤-6-xylamine]；CAS#：496955-42-1)、ST4206(参见Stasi et al.，2015，Europ J Pharm761：353-361；CAS#：1246018-36-9)、tozadenant(SYN115；CAS#：870070-55-6)、V81444(参见WO 2002/055082)、preladenant(SCH420814；Merck；CAS#：377727-87-2)、vipadenant(BIIB014；CAS#：442908-10-3)、ST1535(CAS#：496955-42-1)、SCH412348(CAS#：377727-26-9)、SCH442416(Axon 2283；Axon Medchem；CAS#：316173-57-6)、ZM241385(4-(2-(7-氨基-2-(2-呋喃基)-(1，2，4)三唑并(2，3-a)-(1，3，5)三嗪-5-基-氨基)乙基)酚；Cas#：139180-30-6)、AZD4635(AstraZeneca)、AB928(双重A2AR/A2BR小分子抑制剂；Arcus Biosciences)和SCH58261(参见Popoli et al.，2000，Neuropsychopharm 22：522-529；CAS#：160098-96-4)。

A2BR抑制剂包括但不限于AB928(双重A2AR/A2BR小分子抑制剂；ArcusBiosciences)、MRS 1706(CAS#：264622-53-9)、GS6201(CAS#：752222-83-6)和PBS 1115(CAS#：152529-79-8)。

VISTA抑制剂包括但不限于抗VISTA和抗体，例如JNJ-61610588(onvatilimab；Janssen Biotech)和小分子抑制剂CA-170(抗PD-L1/L2和抗VISTA小分子；CAS#：1673534-76-3)。

Siglec抑制剂包括但不限于在US 2019/023786和WO 2018/027203中公开的抗Sigle-7抗体(例如，包含根据SEQ ID NO：1的重链可变区和根据SEQ ID NO：15的轻链可变区)，抗Siglec-2抗体奥英妥珠单抗(Besponsa；参见US 8,153,768和US 9,642,918)，抗Siglec-3抗体吉妥珠单抗奥唑米星(Mylotarg；参见US 9,359,442)，或者在US 2019/062427、US 2019/023786、WO 2019/011855、WO 2019/011852(例如，包含根据SEQ ID NO：171至176、或3和4、或5和6、或7和8、或9和10、或11和12、或13和14、或15和16、或17和18、或19和20、或21和22、或23和24、或25和26的CDR的抗体)、US 2017/306014和EP 3 146 979中公开的抗Siglec-9抗体。

CD20抑制剂包括但不限于抗CD20抗体，例如利妥昔单抗(RITUXAN；IDEC-102；IDEC-C2B8；参见US 5,843,439)、ABP798(利妥昔单抗生物仿制药)、奥法木单抗(2F2；参见W02004/035607)、奥滨尤妥珠单抗、奥美珠单抗(2h7；参见2004/056312)、替伊莫单抗(Zevalin)、托西莫单抗、ublituximab(LFB-R603；LFB Biotechnologies)和US 2018/0036306中公开的抗体(例如，包含根据SEQ ID NO：1至3和4至6，或7和8，或9和10的轻链和重链的抗体)。

GARP抑制剂包括但不限于抗GARP抗体，例如ARGX-115(arGEN-X)以及如US 2019/127483、US 2019/016811、US 2018/327511、US 2016/251438、EP 3 253 796中公开的抗体及其制备方法。

CD47抑制剂包括但不限于抗CD47抗体，例如HuF9-G4(Stanford University/Forty Seven)，CC-90002/INBRX-103(Celgene/Inhibrx)，SRF231(Surface Oncology)，IBI188(Innovent Biologics)，AO-176(Arch Oncology)，靶向CD47的双特异性抗体，包括TG-1801(NI-1701；靶向CD47和CD19的双特异性单克隆抗体；Novimmune/TG Therapeutics)和NI-1801(靶向CD47和间皮素的双特异性单克隆抗体；Novimmune)，以及CD47融合蛋白，例如ALX148(ALX Oncology；参见Kauder et al.，2019，PLoS One，doi：10.1371/journal.pone.0201832)。

SIRPα抑制剂包括但不限于抗SIRPα抗体，例如OSE-172(Boehringer Ingelheim/OSE)、FSI-189(Forty Seven)、抗SIRPα融合蛋白，例如TTI-621和TTI-662(TrilliumTherapeutics；参见WO 2014/094122)。

PVRIG抑制剂包括但不限于抗PVRIG抗体，例如COM701(CGEN-15029)以及如在例如WO 2018/033798(例如，CHA.7.518.1H4(S241P)、CHA.7.538.1.2.H4(S241P)、CPA.9.086H4(S241P)、CPA.9.083H4(S241P)、CHA.9.547.7.H4(S241P)、CHA.9.547.13.H4(S241P)，以及WO 2018/033798的包含根据SEQ ID NO：5的可变重结构域和根据SEQ ID NO：10的可变轻结构域的抗体，或者包含根据SEQ ID NO：9的重链和根据SEQ ID NO：14的轻链的抗体；WO2018/033798还公开了抗TIGIT抗体以及抗TIGIT与抗PVRIG抗体的组合治疗)、WO2016134333、WO2018017864(例如，包含与SEQ ID NO：11具有至少90％序列同一性的根据SEQ ID NO：5至7的重链和/或与SEQ ID NO：12具有至少90％序列同一性的根据SEQ ID NO：8至10的轻链的抗体，或者由SEQ ID NO：13和/或14或者SEQ ID NO：24和/或29编码的抗体，或者在WO 2018/017864中公开的其他抗体)中公开的抗体及其制造方法，以及如WO 2016/134335中公开的抗PVRIG抗体和融合肽。

CSF1R抑制剂包括但不限于抗CSF1R抗体卡比利珠单抗(cabiralizumab)(FPA008；FivePrime；参见WO 2011/140249、WO 2013/169264和WO 2014/036357)、IMC-CS4(EiiLilly)、emactuzumab(R05509554；Roche)、RG7155(WO 2011/70024、WO 2011/107553、WO 2011/131407、WO 2013/87699、WO 2013/119716、WO 2013/132044)以及小分子抑制剂BLZ945(CAS#：953769-46-5)和pexidartinib(PLX3397；Selleckchem；CAS#：1029044-16-3)。

CSF1抑制剂包括但不限于在EP 1223980和Weir et al.，1996(J Bone MineralRes 11：1474-1481)、WO 2014/132072中公开的抗CSF1抗体，以及在WO 2001/030381中公开的反义DNA和RNA。

示例性的NOX抑制剂包括但不限于NOX1抑制剂，例如小分子ML171(Gianni etal.，2010，ACS Chem Biol 5(10)：981-93)、NOS31(Yamamoto et al.，2018，Biol PharmBull.41(3)：419-426)，NOX2抑制剂，例如小分子ceplene(二盐酸组胺；CAS#：56-92-8)、BJ-1301(Gautam et al.，2017，Mol Cancer Ther 16(10)：2144-2156；CAS#：1287234-48-3)和Lu et al.，2017，Biochem Pharmacol 143：25-38所述的抑制剂，NOX4抑制剂，例如小分子抑制剂VAS2870(

et al.，2012，Cell Mol Life Sciences 69(14)：2327-2343)、二亚苯基碘

(CAS#：244-54-2)和GKT137831(CAS#：1218942-37-0；参见Tang etal.，2018，19(10)：578-585)。

TDO抑制剂包括但不限于4-(吲哚-3-基)-吡唑衍生物(参见US 9,126,984和US2016/0263087)，3-吲哚取代的衍生物(参见WO 2015/140717、WO 2017/025868、WO 2016/147144)，3-(吲哚-3-基)-吡啶衍生物(参见US 2015/0225367和WO 2015/121812)，双重IDO/TDO拮抗剂，例如在WO 2015/150097、WO 2015/082499、WO 2016/026772、WO 2016/071283、WO 2016/071293、WO 2017/007700中公开的小分子双重IDO/TDO抑制剂，以及小分子抑制剂CB548(Kim，C，et al.，2018，Annals Oncol 29(suppl_8)：viii400-viii441)。

根据本公开内容，免疫检查点抑制剂是抑制性检查点蛋白的抑制剂，但优选不是刺激性检查点蛋白的抑制剂。如本文中所述，许多CTLA-4、PD-1、TIGIT、B7-H3、B7-H4、BTLA、KIR、LAG-3、TIM-3、CD94/NKG2A、IDO、A2AR、A2BR、VISTA、Siglec、CD20、CD39、CD73、GARP、CD47、PVRIG、CSF1R、NOX和TDO抑制剂以及相应配体的抑制剂是已知的，并且其中数种已经在临床试验中，或甚至已经被批准。基于这些已知的免疫检查点抑制剂，可开发替代的免疫检查点抑制剂。特别地，优选的免疫检查点蛋白的已知抑制剂可以其本身使用或可使用其类似物，特别是嵌合的、人源化的或人形式的抗体以及与本文中所述的任何抗体交叉竞争的抗体。

本领域普通技术人员将理解，其他免疫检查点靶标也可被拮抗剂或抗体靶向，前提是这种靶向导致刺激免疫应答，例如抗肿瘤免疫应答，如反映在T细胞增殖的提高、T细胞活化的增强和/或细胞因子(例如，IFN-γ、IL2)产生的提高。

检查点抑制剂可以以任何方式以及通过本领域已知的任何途径施用。施用方式和途径将取决于待使用的检查点抑制剂的类型。

检查点抑制剂可以以如本文中所述的任何合适的药物组合物的形式施用。

检查点抑制剂可以以编码免疫检查点抑制剂(例如，抑制性核酸分子或者抗体或其片段)的核酸(例如DNA或RNA)分子的形式施用。例如，如本文中所述，抗体可在表达载体中递送编码。核酸分子可以其本身递送，例如以质粒或mRNA分子的形式，或者与递送载剂复合，例如脂质体、脂质复合物或核酸脂质颗粒。检查点抑制剂也可通过包含编码检查点抑制剂的表达盒的溶瘤病毒施用。检查点抑制剂也可通过施用能够表达检查点抑制剂的内源性或同种异体细胞来施用，例如以基于细胞的治疗的形式。

术语“基于细胞的治疗”是指将表达免疫检查点抑制剂的细胞(例如，T淋巴细胞、树突细胞或干细胞)移植到对象中以用于治疗疾病或病症(例如，癌症疾病)的目的。在一个实施方案中，基于细胞的治疗包括经遗传改造细胞。在一个实施方案中，经遗传改造细胞表达免疫检查点抑制剂，例如本文中所述。在一个实施方案中，经遗传改造细胞表达免疫检查点抑制剂，所述免疫检查点抑制剂是抑制性核酸分子，例如siRNA、shRNA、寡核苷酸、反义DNA或RNA、适配体、抗体或其片段或者可溶性免疫检查点蛋白或融合物。经遗传改造细胞还可表达增强T细胞功能的另外的物质。这样的物质是本领域已知的。用于抑制免疫检查点信号转导的基于细胞的治疗公开于例如WO 2018/222711中，其通过引用整体并入本文。

本文中使用的术语“溶瘤病毒”是指能够在体外或体内选择性地在癌细胞或过度增殖细胞中复制并减缓其生长或诱导其死亡，同时对正常细胞没有影响或影响很小的病毒。用于递送免疫检查点抑制剂的溶瘤病毒包含可编码免疫检查点抑制剂的表达盒，所述免疫检查点抑制剂是抑制性核酸分子，例如siRNA、shRNA、寡核苷酸、反义DNA或RNA、适配体、抗体或其片段或者可溶性免疫检查点蛋白或融合物。溶瘤病毒优选具有复制能力并且表达盒在病毒启动子(例如，合成的早期/晚期痘病毒启动子)的控制下。示例性溶瘤病毒包括水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus，VSV)、弹状病毒(例如，小RNA病毒，例如塞内加谷病毒(Seneca Valley virus)；SVV-001)、柯萨奇病毒、细小病毒、新城疫病毒(Newcastle disease virus，NDV)、单纯疱疹病毒(herpes simplex virus，HSV；OncoVEXGMCSF)、逆转录病毒(例如流感病毒)、麻疹病毒、呼肠孤病毒、辛德比斯病毒(Sinbisvirus)、如WO 2017/209053中示例性描述的痘苗病毒(包括Copenhagen、Western Reserve、Wyeth毒株)和腺病毒(例如，δ-24、δ-24-RGD、ICOVIR-5、ICOVIR-7、Onyx-015、ColoAd1、H101、AD5/3-D24-GMCSF)。包含可溶形式的免疫检查点抑制剂的重组溶瘤病毒的产生及其使用方法公开于WO 2018/022831中，其通过引用整体并入本文。溶瘤病毒可用作减毒病毒。

如本文中所述，抗CLDN18.2抗体与检查点抑制剂一起施用，即共施用于对象，例如患者。在某些实施方案中，检查点抑制剂和抗CLDN18.2抗体作为单一组合物施用于对象。在某些实施方案中，检查点抑制剂和抗CLDN18.2抗体同时(同时作为单独的组合物)施用于对象。在某些实施方案中，检查点抑制剂和抗CLDN18.2抗体分别施用于对象。在某些实施方案中，检查点抑制剂在抗CLDN18.2抗体之前施用于对象。在某些实施方案中，检查点抑制剂在抗CLDN18.2抗体之后施用于对象。在某些实施方案中，检查点抑制剂和抗CLDN18.2抗体在同一天施用于对象。在某些实施方案中，检查点抑制剂和抗CLDN18.2抗体在不同的日期施用于对象。

根据本发明，术语“细胞毒剂和/或细胞抑制剂”包括化学治疗剂或化学治疗剂的组合，例如细胞抑制剂。化学治疗剂可以以下列方式之一影响细胞：(1)破坏细胞的DNA，使其无法再增殖，(2)抑制新DNA链的合成，使得细胞复制无法进行成为可能，(3)中止细胞的有丝分裂过程使细胞不能分裂成两个细胞。细胞毒剂和/或细胞抑制剂可以是稳定或提高CLDN18.2表达的药剂。

术语“稳定或提高CLDN18.2表达的药剂”是指这样的药剂或药剂组合，与未向细胞提供其的情况相比，其向细胞的提供导致了CLDN18.2的RNA和/或蛋白质水平提高，优选细胞表面上的CLDN18.2的蛋白水平提高。优选地，细胞是癌细胞，特别是表达CLDN18.2的癌细胞，例如本文中所述的癌症类型的细胞。术语“稳定或提高CLDN18.2表达的药剂”特别地是指这样的药剂或药剂组合，与未向细胞提供其的情况相比，其向细胞的提供导致了所述细胞表面上的CLDN18.2的密度更高。“稳定CLDN18.2的表达”特别包括以下情况：药剂或药剂组合阻止CLDN18.2的表达降低或降低CLDN18.2的表达降低之程度，例如CLDN18.2的表达将在不提供药剂或药剂组合的情况下降低，并且提供药剂或药剂组合阻止了所述降低或降低了CLDN18.2表达的所述降低程度。“提高CLDN18.2的表达”特别包括以下情况：药剂或药剂组合提高CLDN18.2表达，例如CLDN18.2的表达将在不提供药剂或药剂组合的情况下降低、保持基本恒定或提高，并且与不提供药剂或药剂组合的情况相比，提供药剂或药剂组合提高了CLDN18.2表达，因此由此产生的表达与不提供药剂或药剂组合的情况下CLDN18.2的表达将降低、保持基本恒定或提高的情况相比是更高的。

根据本发明，术语“稳定或提高CLDN18.2表达的药剂”优选涉及这样的药剂或药剂组合，例如细胞抑制化合物或细胞抑制化合物的组合，其向细胞，特别是癌细胞的提供导致细胞在细胞周期的一个或更多个阶段，优选在除G1期和G0期之外(优选除G1期之外)的细胞周期的一个或更多个阶段，优选在细胞周期的G2或S期中的一个或更多个(例如G1/G2期、S/G2期、G2期或S期)中阻滞或积聚。术语“细胞在细胞周期的一个或更多个阶段阻滞或积聚”意指处于所述细胞周期的一个或更多个阶段的细胞的百分比提高。每个细胞都会经历包含四个阶段的周期以进行自我复制。被称为G1的第一阶段是细胞准备复制其染色体时。第二阶段被称为S，并且在该阶段发生DNA合成并复制DNA。下一阶段是G2阶段，是RNA和蛋白质复制时。最后一个阶段是M阶段，是实际的细胞分裂的阶段。在这个最后阶段，复制的DNA和RNA分裂并移动至细胞的不同末端，并且细胞实际上分裂成两个相同的功能性细胞。作为DNA损伤剂的化学治疗剂通常会导致细胞在G1和/或G2期积聚。通过干扰DNA合成来阻断细胞生长的化学治疗剂，例如抗代谢物，通常会导致细胞在S期积聚。这些药物的实例是6-巯基嘌呤和5-氟尿嘧啶。

根据本发明，术语“稳定或提高CLDN18.2表达的药剂”包括蒽环类例如表柔比星，铂化合物例如奥沙利铂和顺铂，核苷类似物例如5-氟尿嘧啶或其前药，紫杉烷类例如多西他赛，以及喜树碱类似物例如伊立替康和拓扑替康，以及药物组合，例如包含一种或更多种蒽环类(例如表柔比星)、奥沙利铂和5-氟尿嘧啶的药物组合，例如包含奥沙利铂和5-氟尿嘧啶的药物组合或者本文中所述的其他药物组合。

在一个优选的实施方案中，“细胞毒剂和/或细胞抑制剂”是“诱导免疫原性细胞死亡的药剂”。

在特定情况下，癌细胞可进入致死应激途径，该途径与由免疫系统解码以激活肿瘤特异性免疫应答的时空限定的信号组合的发射有关(Zitvogel L.et al.(2010)Cell140：798-804)。在这样的情况下，癌细胞被触发以发出信号，该信号被先天免疫效应子(例如树突细胞)感知到，从而触发涉及CD8+T细胞和IFN-γ信号传导的同源免疫应答，从而肿瘤细胞死亡可能会引发有效的抗癌免疫应答。这些信号包括细胞表面处内质网(endoplasmic reticulum，ER)伴侣钙网蛋白(calreticulin，CRT)的凋亡前暴露、ATP的凋亡前分泌以及核蛋白HMGB1的凋亡后释放。这些过程共同构成了免疫原性细胞死亡(immunogenic cell death，ICD)的分子决定因素。蒽环类、奥沙利铂和γ辐照能够诱导限定ICD的所有信号，而顺铂，例如，其在诱导CRT从ER易位至垂死细胞表面(需要ER应激的过程)中存在缺陷，需要通过毒胡萝卜素(ER应激诱导剂)的互补。

根据本发明，术语“诱导免疫原性细胞死亡的药剂”是指当提供给细胞，特别是癌细胞时，能够诱导细胞进入最终导致肿瘤特异性免疫应答的致死应激途径的药剂或药剂组合。特别地，当提供给细胞时，诱导免疫原性细胞死亡的药剂诱导细胞发出时空限定的信号组合，特别包括细胞表面处内质网(ER)伴侣钙网蛋白(CRT)的凋亡前暴露、ATP的凋亡前分泌以及核蛋白HMGB1的凋亡后释放。

根据本发明，术语“诱导免疫原性细胞死亡的药剂”包括蒽环类和奥沙利铂。

蒽环类是一类通常用于癌症化学治疗的药物，其也是抗生素。在结构上，所有蒽环类共有一个共同的四环7，8，9，10-四氢并四苯-5，12-醌结构，并通常需要在特定位点进行糖基化。

蒽环类优选带来以下作用机制的一种或更多种：1.通过插入DNA/RNA链的碱基对之间来抑制DNA和RNA的合成，从而阻止迅速生长的癌细胞的复制；2.抑制拓扑异构酶II，阻止超螺旋DNA松弛并因此阻断DNA转录和复制；3.产生破坏DNA和细胞膜的铁介导的游离氧自由基。

根据本发明，术语“蒽环类”优选是指药剂，优选抗癌剂，其诱导凋亡，优选通过抑制DNA在拓扑异构酶II情况下的再结合来诱导凋亡。

优选地，根据本发明，术语“蒽环类”通常是指具有以下环结构的一类化合物

包括其类似物和衍生物、药用盐、水合物、酯、缀合物和前药。

蒽环类和蒽环类类似物的实例包括但不限于柔红霉素(道诺霉素)、多柔比星(阿霉素)、表柔比星、伊达比星、紫红霉素、吡柔比星、戊柔比星、N-三氟-乙酰基多柔比星-14-戊酸盐、阿克拉霉素、吗啉代多柔比星(吗啉代-DOX)、氰基吗啉代-多柔比星(氰基吗啉代-DOX)、2-吡咯啉代-多柔比星(2-PDOX)、5-亚氨基道诺霉素、米托蒽醌和阿克拉霉素A(阿柔比星)。米托蒽醌是蒽醌类化合物中的一员，它们是缺少蒽环类的糖部分但保留了允许插入到DNA中的平面多环芳环结构的蒽环类类似物。

根据本发明，特别优选的蒽环类是下式的化合物：

其中

R₁选自H和OH，R₂选自H和OMe，R₃选自H和OH，并且R₄选自H和OH。

在一个实施方案中，R₁是H，R₂是OMe，R₃是H，并且R₄是OH。在另一个实施方案中，R₁是OH，R₂是OMe，R₃是H，并且R₄是OH。在另一个实施方案中，R₁是OH，R₂是OMe，R₃是OH，并且R₄是H。在另一个实施方案中，R₁是H，R₂是H，R₃是H，并且R₄是OH。

在本发明的上下文中特别考虑作为蒽环类的是表柔比星。表柔比星是蒽环类药物，其具有下式：

并且在美国以商品名Ellence以及在其他地方以Pharmorubicin或EpirubicinEbewe销售。特别地，术语“表柔比星”是指化合物(8R，10S)-10-[(2S，4S，5R，6S)-4-氨基-5-羟基-6-甲基-

烷-2-基]氧基-6，11-二羟基-8-(2-羟基乙酰基)-1-甲氧基-8-甲基-9，10-二氢-7H-并四苯-5，12-二酮。在一些化学治疗方案中，表柔比星比最普遍的蒽环类多柔比星更有利，因为显示其引起的副作用更少。

根据本发明，术语“铂化合物”是指在其结构中含有铂的化合物，例如铂配合物，并且包括例如顺铂、卡铂和奥沙利铂的化合物。

术语“顺铂”是指下式的化合物顺-二氯二氨合铂(II)(CDDP)：

术语“卡铂”是指下式的化合物顺-(1，1-环丁烷二羧酸根合)二氨合铂(II)：

术语“奥沙利铂”是指这样的化合物，其是具有下式的与二氨基环己烷载体配体配合的铂化合物：

特别地，术语“奥沙利铂”是指化合物[(1R，2R)-环己烷-1，2-二胺](乙二酸根合-O，O’)铂(II)。注射用奥沙利铂也以商品名Eloxatine销售。

术语“核苷类似物”是指核苷的结构类似物，这一类别包括嘌呤类似物和嘧啶类似物。特别地，术语“核苷类似物”是指包括氟尿嘧啶及其前药的氟嘧啶衍生物。

术语“氟尿嘧啶”或“5-氟尿嘧啶”(5-FU或f5U)(以Adrucil、Carac、Efudix、Efudex和Fluoroplex商标名出售)是下式的作为嘧啶类似物的化合物：

特别地，该术语是指化合物5-氟-1H-嘧啶-2，4-二酮。

术语“卡培他滨”(Xeloda，Roche)是指这样的化学治疗剂，其是在组织中转化为5-FU的前药。可经口施用的卡培他滨具有下式：

特别地，该术语是指化合物[1-(3，4-二羟基-5-甲基四氢呋喃-2-基)-5-氟-2-氧代-1H-嘧啶-4-基]氨基甲酸戊酯。

紫杉烷类是一类二萜化合物，其最初来源于天然来源，例如紫杉属植物，但一些是人工合成的。紫杉烷类药物的主要作用机制是破坏微管功能，从而抑制细胞分裂过程。紫杉烷类包括多西他赛(Taxotere)和紫杉醇(Taxol)。

根据本发明，术语“多西他赛”是指具有下式的化合物：

根据本发明，术语“紫杉醇”是指具有下式的化合物：

根据本发明，术语“喜树碱类似物”是指化合物喜树碱(CPT；(S)-4-乙基-4-羟基-1H-吡喃并[3’，4’：6，7]中氮茚并[1，2-b]喹啉-3，14-(4H，12H)-二酮)的衍生物。优选地，术语“喜树碱类似物”是指包含以下结构的化合物：

根据本发明，优选的喜树碱类似物是DNA酶拓扑异构酶I(topo I)的抑制剂。根据本发明，优选的喜树碱类似物是伊立替康和拓扑替康。

伊立替康是通过抑制拓扑异构酶I来阻止DNA解旋的药物。在化学上，其是具有下式的天然生物碱喜树碱半合成类似物：

特别地，术语“伊立替康”是指化合物(S)-4，11-二乙基-3，4，12，14-四氢-4-羟基-3，14-二氧代1H-吡喃并[3′，4′：6，7]-中氮茚并[1，2-b]喹啉-9-基-[1，4’联哌啶]-1′-羧酸酯。

拓扑替康是下式的拓扑异构酶抑制剂：

特别地，术语“拓扑替康”是指化合物(S)-10-[(二甲基氨基)甲基]-4-乙基-4，9-二羟基-1H-吡喃并[3′，4′：6，7]中氮茚并[1，2-b]喹啉-3，14(4H，12H)-二酮单盐酸酯。

根据本发明，细胞毒剂和/或细胞抑制剂可以是化学治疗剂，特别是在癌症治疗中建立的化学治疗剂，并且可以是药物组合(例如建立用于癌症治疗的药物组合)的一部分。这样的药物组合可以是用于化学治疗的药物组合，并且可以是用于选自以下的化学治疗方案的药物组合：EOX化学治疗、ECF化学治疗、ECX化学治疗、EOF化学治疗、FLO化学治疗、CAPOX化学治疗、FOLFOX化学治疗、FOLFIRI化学治疗、DCF化学治疗和FLOT化学治疗。

EOX化学治疗中使用的药物组合包含表柔比星、奥沙利铂和卡培他滨。ECF化学治疗中使用的药物组合包含表柔比星、顺铂和5-氟尿嘧啶。ECX化学治疗中使用的药物组合包含表柔比星、顺铂和卡培他滨。EOF化学治疗中使用的药物组合包含表柔比星、奥沙利铂和5-氟尿嘧啶。

表柔比星通常以50mg/m2的剂量给予，顺铂60mg/m2、奥沙利铂130mg/m2、5-氟尿嘧啶以200mg/m2/天的持久静脉输注，以及经口卡培他滨625mg/m2每天两次，总共8个3周的周期。

FLO化学治疗中使用的药物组合包含5-氟尿嘧啶、亚叶酸和奥沙利铂(通常5-氟尿嘧啶2,600mg/m224小时输注，亚叶酸200mg/m2并且奥沙利铂85mg/m2，每2周一次)。

FOLFOX是由亚叶酸、5-氟尿嘧啶和奥沙利铂组成的化学治疗方案。每两周给予的推荐剂量方案如下：第1天：奥沙利铂85mg/m²IV输注和亚叶酸200mg/m²IV输注，然后是5-FU400mg/m²IV推注，然后是作为22小时连续输注的5-FU 600mg/m²IV输注；第2天：亚叶酸200mg/m²IV输注超过120分钟，然后5-FU 400mg/m²IV推注给予超过2至4分钟，然后是作为22小时连续输注的5-FU 600mg/m²IV输注。

CAPOX化学治疗中使用的药物组合包含卡培他滨和奥沙利铂。

FOLFIRI化学治疗中使用的药物组合包含5-氟尿嘧啶、亚叶酸和伊立替康。

DCF化学治疗中使用的药物组合包含多西他赛、顺铂和5-氟尿嘧啶。

FLOT化学治疗中使用的药物组合包含多西他赛、奥沙利铂、5-氟尿嘧啶和亚叶酸。

术语“亚叶酸”是指可用于与化学治疗剂5-氟尿嘧啶协同组合的化合物。亚叶酸具有下式：

特别地，该术语是指化合物(2S)-2-{[4-[(2-氨基-5-甲酰基-4-氧代-5，6，7，8-四氢-1H-蝶啶-6-基)甲基氨基]苯甲酰基]氨基}戊二酸。

术语“抗原”涉及包含免疫应答所针对和/或将针对的表位的物质，例如蛋白质或肽。在一个优选的实施方案中，抗原是肿瘤相关抗原，例如CLDN18.2，即可来源于细胞质、细胞表面和细胞核的癌细胞的成分，特别是产生的那些抗原，优选是大量的，胞内的或作为癌细胞的表面抗原。

在本发明的上下文中，术语“肿瘤相关抗原”优选涉及在正常条件下在有限数量的组织和/或器官中或者在特定发育阶段中特异性表达并且在一个或更多个肿瘤或癌组织中表达或异常表达的蛋白质。在本发明的上下文中，肿瘤相关抗原优选地与癌细胞的细胞表面缔合并且优选地在正常组织中不表达或仅很少表达。

术语“表位”是指分子中的抗原决定簇，即分子中被免疫系统识别，例如被抗体识别的部分。例如，表位是可被免疫系统识别的抗原上离散的三维位点。表位通常由分子的化学活性表面基团例如氨基酸或糖侧链组成，并且通常具有特定的三维结构特征以及特定的电荷特征。构象表位和非构象表位的区别在于，在变性溶剂的存在下，与前者的结合会丧失，但与后者的结合不会丧失。蛋白质(例如CLDN18.2)的表位优选地包含所述蛋白质的连续或不连续部分并且优选地长度为5至100，优选地为5至50，更优选地为8至30，最优选地为10至25个氨基酸。例如，表位的长度可优选为8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个氨基酸。

术语“抗体”是指包含通过二硫键互相连接的至少两条重(H)链和两条轻(L)链的糖蛋白，并且包括包含其抗原结合部分的任何分子。术语“抗体”包括单克隆抗体以及抗体的片段或衍生物，包括但不限于人抗体、人源化抗体、嵌合抗体、单链抗体，例如scFv和抗原结合抗体的片段，例如Fab和Fab’片段，并且还包括所有重组形式的抗体，例如在原核生物中表达的抗体、未糖基化的抗体和本文中所述的任何抗原结合抗体片段和衍生物。每条重链由重链可变区(本文中缩写为VH)和重链恒定区构成。每条轻链由轻链可变区(本文中缩写为VL)和轻链恒定区构成。VH和VL区可进一步细分为高变区，称为互补决定区(CDR)，散布着更保守的区域，称为框架区(FR)。每个VH和VL由三个CDR和四个FR构成，其从氨基端到羧基端按以下顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重链和轻链的可变区包含与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，所述宿主组织或因子包括免疫系统的多种细胞(例如，效应细胞)和经典补体系统的第一组分(C1q)。

本文中所述的抗体可以是人抗体。术语“人抗体”旨在包括具有来自人种系免疫球蛋白序列之的可变区和恒定区的抗体。本文中所述的人抗体可包括不是由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机诱变或位点特异性诱变或者通过体内体细胞突变引入的突变)。

术语“人源化抗体”是指具有基本来自非人物种免疫球蛋白的抗原结合位点的分子，其中所述分子的其余免疫球蛋白结构基于人免疫球蛋白的结构和/或序列。所述抗原结合位点可包含融合到恒定结构域上的完整可变结构域，或者仅包含移植(graft)到可变结构域中适当构架区上的互补决定区(CDR)。抗原结合位点可以是野生型的，或者通过一个或更多个氨基酸替换进行修饰，例如进行修饰以使其与人免疫球蛋白更类似。一些形式的人源化抗体保留了全部CDR序列(例如含有来自小鼠抗体的全部六个CDR的人源化小鼠抗体)。其他形式具有一个或更多个相对于原始抗体而言发生了改变的CDR。

术语“嵌合抗体”是指这样的抗体，其中每个重链和轻链氨基酸序列的一部分与来自特定物种或者属于特定类别的抗体中的相应序列同源，而该链的其余区段则与其他物种或属于其他类别的相应序列同源。通常来说，轻链和重链的可变区均模拟来自一个哺乳动物物种之抗体的可变区，而恒定部分则与来自其他物种的抗体序列同源。这种嵌合形式的一个明显优点是可使用易于获得的B细胞或来自非人宿主生物体的杂交瘤从目前已知的来源方便地产生可变区，而与其组合的恒定区来自例如人细胞制备物。所述可变区具有易于制备的优点，并且特异性不受来源的影响，而由于恒定区为人的，因此该抗体在注射时引发人对象免疫应答的可能性将比恒定区来自非人来源时更低。然而，定义不限于此特定实例。

术语抗体的“抗原结合部分”(或简称为“结合部分”)或者抗体的“抗原结合片段”(或简称为“结合片段”)或者类似的术语是指抗体中保留与抗原特异性结合之能力的一个或更多个片段。已表明，抗体的抗原结合功能可通过全长抗体的片段来进行。术语抗体的“抗原结合部分”中涵盖的结合片段的实例包括(i)Fab片段，由VL、HL、CL和CH结构域组成的一价片段；(ii)F(ab’)2片段，包含通过铰链区处二硫键连接的两个Fab片段的二价片段；(iii)由VH和CH结构域组成的Fd片段；(iv)由抗体单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段；(v)由VH结构域组成的dAb片段(Ward等，(1989)Nature 341：544-546)；(vi)分离的互补决定区(CDR)以及(vii)两个或更多个分离的CDR的组合，其可任选地通过合成接头连接。此外，尽管Fv片段的两个结构域VL和VH由单独的基因编码，但是可使用重组方法通过合成接头将它们连接，使之可成为单个蛋白质链，其中VL和VH区配对以形成一价分子(称为单链Fv(scFv)；参见例如，Bird等(1988)Science 242：423-426；以及Huston等(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85：5879-5883)。此类单链抗体还旨在涵盖于术语抗体的“抗原结合片段”内。另一个实例是结合结构域免疫球蛋白融合蛋白，其包含(i)与免疫球蛋白铰链区多肽融合的结合结构域多肽，(ii)与所述铰链区融合的免疫球蛋白重链CH2恒定区，以及(iii)与所述CH2恒定区融合的免疫球蛋白重链CH3恒定区。所述结合结构域多肽可以是重链可变区或轻链可变区。结合结构域免疫球蛋白融合蛋白在US2003/0118592和US 2003/0133939中进一步公开。使用本领域技术人员已知的常规技术获得这些抗体片段，并以与完整抗体相同的方式针对用途对片段进行筛选。

术语“双特异性分子”旨在包括具有两种不同结合特异性的任何物质，例如蛋白质、肽、或者蛋白质或肽复合物。例如，该分子可与(a)细胞表面抗原和(b)效应细胞表面上的Fc受体结合或相互作用。术语“多特异性分子”或“异特异性分子”旨在包括具有多于两种不同结合特异性的任何物质，例如蛋白质、肽、或者蛋白质或肽复合物。例如，该分子可与(a)细胞表面抗原、(b)效应细胞表面上的Fc受体和(c)至少一种其他组分结合或相互作用。因此，本发明包括但不限于针对CLDN18.2和其他靶标(例如效应细胞上的Fc受体)的双特异性、三特异性、四特异性和其他多特异性分子。术语“双特异性抗体”还包括多价抗体，例如具有两种不同结合特异性的三价抗体、具有两种或三种不同结合特异性的四价抗体等。术语“双特异性抗体”还包括双抗体。双抗体是二价双特异性抗体，其中VH和VL结构域在单个多肽链上表达，但使用的接头太短而无法在同一条链上的两个结构域之间进行配对，从而迫使结构域与另一条链的互补结构域配对并产生两个抗原结合位点(参见例如Holliger，P.，et al.(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：6444-6448；Poljak，R.J.，et al.(1994)Structure 2：1121-1123)。

抗体可与治疗性部分或药剂(例如细胞毒素、药物(例如，免疫抑制剂)或放射性同位素)缀合。细胞毒素或细胞毒剂包括对细胞有害且特别地杀伤细胞的任何药剂。实例包括美登素类(例如mertansine、ravtansine或emtanside)、奥瑞他汀类(单甲基奥瑞他汀F(MMAF)、单乙基奥瑞他汀E(MMAE))、尾海兔素类(dolastatins)、加利车霉素类(例如ozogamicin)、吡咯并苯二氮杂

二聚体(例如tesirine、tairine)、倍癌霉素类(例如倍癌霉素SA、CC-1065、duocarmazine)和α-鹅膏蕈素、伊立替康或其衍生物SN-38、紫杉醇、细胞松弛素B、短杆菌肽D、溴化乙啶、依米丁、丝裂霉素、依托泊苷、替尼泊苷(tenoposide)、长春新碱、长春碱、秋水仙碱(colchicin)、多柔比星、柔红霉素、二羟基炭疽菌素(anthracin)二酮、米托蒽醌、光辉霉素、放线菌素D、1-去氢睾酮、糖皮质激素、普鲁卡因、丁卡因、利多卡因、普萘洛尔和嘌呤霉素，及其类似物或同源物、抗代谢物(例如，甲氨喋呤、6-巯基嘌呤、6-硫代鸟嘌呤、阿糖胞苷、氟达拉滨、5-氟尿嘧啶达卡巴嗪(decarbazine))、烷基化剂(例如，氮芥(mechlorethamine)、塞替派苯丁酸氮芥(thioepa chlorambucil)、美法仑(melphalan)、卡莫司汀(BSNU)和洛莫司丁(CCNU)、环磷酰胺、白消安、二溴甘露醇、链脲霉素、丝裂霉素C和顺-二氯二胺铂(II)(DDP)顺铂)、蒽环类(例如，柔红霉素(原名道诺霉素)和多柔比星)、抗生素类(例如，更生霉素(原名放线菌素)、博来霉素、光辉霉素和氨茴霉素(AMC))以及抗有丝分裂剂(例如，长春新碱和长春碱)。在一个优选实施方案中，治疗剂为细胞毒剂或放射性毒剂。在另一个实施方案中，治疗剂为免疫抑制剂。在又一个实施方案中，治疗剂为GM-CSF。在一个优选实施方案中，治疗剂为多柔比星、顺铂、博来霉素、硫酸盐、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、环磷酰胺或蓖麻毒蛋白A。

抗体还可与放射性同位素(例如，碘-131、钇-90或铟-111)缀合以产生细胞毒性放射性药物。

本发明的抗体缀合物可用于修饰给定的生物应答，并且药物部分不应被解释为仅限于经典的化学治疗剂。例如，药物部分可以是具有期望生物活性的蛋白质或多肽。这样的蛋白质可包括例如具有酶活性的毒素或其活性片段，例如相思豆毒蛋白(abrin)、蓖麻毒蛋白A、假单胞菌外毒素或白喉毒素；蛋白质，例如肿瘤坏死因子或干扰素-γ；或者，生物应答调节剂，例如如淋巴因子、白介素-1(“IL-1”)、白介素-2(“IL-2”)、白介素-6(“IL-6”)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(“GM-CSF”)、粒细胞集落刺激因子(“G-CSF”)或其他生长因子。

用于将这样的治疗部分缀合至抗体的技术是公知的，参见例如Arnon et al.，″Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy″，在Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy中，Reisfeld et al.(eds.)，pp.243-56(Alan R.Liss，Inc.1985)；Hellstrom et al.，″Antibodies For Drug Delivery″，在Controlled Drug Delivery(2nd Ed.)中，Robinson et al.(eds.)，pp.623-53(MarcelDekker，Inc.1987)；Thorpe，″Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In CancerTherapy：A Review″，在Monoclonal Antibodies′84：Biological And ClinicalApplications中，Pincheraet al.(eds.)，pp.475-506(1985)；″Analysis，Results，AndFuture Prospective Of The Therapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In CancerTherapy″，在Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy中，Baldwinet al.(eds.)，pp.303-16(Academic Press 1985)，and Thorpe et al.，″ThePreparation And Cytotoxic Properties Of Antibody-Toxin Conjugates″，Immunol.Rev.，62：119-58(1982)。

如本文中所用，如果抗体是通过对动物进行免疫接种或通过筛选免疫球蛋白基因文库从系统获得的，则抗体“来源于”特定种系序列，并且其中所选抗体的氨基酸序列与种系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列具有至少90％、更优选至少95％、甚至更优选至少96％、97％、98％或99％的同一性。通常来说，来源于特定种系序列的抗体将显示出与种系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列不超过10个氨基酸差异，更优选地，不超过5个，或甚至更优选地，不超过4、3、2或1个氨基酸差异。

本文中使用的术语“异源抗体”是指连接在一起的两种或更多种抗体、其衍生物或抗原结合区，其中至少两种具有不同的特异性。这些不同的特异性包括对效应细胞上的Fc受体的结合特异性，以及对靶细胞(例如肿瘤细胞)上的抗原或表位的结合特异性。

本文中所述的抗体可以是单克隆抗体。本文中使用的术语“单克隆抗体”是指单分子组成的抗体分子的制备物(preparation)。单克隆抗体显示单一的结合特异性和亲和力。在一个实施方案中，单克隆抗体由杂交瘤产生，杂交瘤包括与永生化细胞融合的从非人动物(例如，小鼠)获得的B细胞。

本文中所述的抗体可以是重组抗体。本文中所用的术语“重组抗体”包括通过重组方式制备、表达、产生或分离的所有抗体，例如(a)抗体，其分离自免疫球蛋白基因是转基因或转染色体之动物(例如，小鼠)，或从其制备的杂交瘤，(b)从转化以表达抗体的宿主细胞(例如，从转染瘤)分离的抗体，(c)从重组的、组合的抗体文库分离的抗体，以及(d)通过涉及将免疫球蛋白基因序列剪接成其他DNA序列的任何其他方式制备、表达、产生或分离的抗体。

本文中所述的抗体可来源于不同物种，包括但不限于小鼠、大鼠、兔、豚鼠和人。

本文中所述的抗体包括多克隆和单克隆抗体，并且包括IgA，例如IgA1或IgA2、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgE、IgM和IgD抗体。在多种实施方案中，抗体是IgG1抗体，更具体地，IgG1，κ或IgG1，λ同种型(即IgG1，κ、λ)、IgG2a抗体(例如IgG2a，κ、λ)、IgG2b抗体(例如IgG2b，κ、λ)、IgG3抗体(例如IgG3，κ、λ)或IgG4抗体(例如IgG4，κ、λ)。

本文中使用的术语“转染瘤”包括表达抗体的重组真核宿主细胞，例如CHO细胞、NS/0细胞、HEK293细胞、HEK293T细胞、植物细胞或真菌，包括酵母细胞。

如本文中所用，“异源抗体”相对于产生这种抗体的转基因生物体进行定义。该术语是指这样的抗体，其具有对应于不由所述转基因生物体组成的生物体中可见的那些的氨基酸序列或编码核酸序列，并且通常来自与所述转基因生物体不同的物种。

如本文中所用，“异源杂合抗体(heterohybrid antibody)”是指具有不同生物来源的轻链和重链的抗体。例如，具有与鼠轻链缔合的人重链的抗体是异源杂合抗体。

本发明包括本文中所述的所有抗体和抗体衍生物，出于本发明的目的，术语“抗体”涵盖了这些抗体和抗体衍生物。术语“抗体衍生物”是指抗体的任何经修饰形式，例如，抗体与其他药剂或抗体的缀合物，或抗体片段。

本文中所述的抗体优选是分离的。“分离的”意指改变或脱离自然状态。例如，天然存在于活的动物中的核酸或肽不是“分离的”，但从其天然状态的共存材料中部分或完全分离的同样的核酸或肽是“分离的”。分离的核酸或蛋白质可以以基本上经纯化的形式存在，或者可存在于非天然环境，例如如宿主细胞中。如本文中所用，“分离的抗体”旨在包括基本上不含具有不同抗原特异性的其他抗体的抗体(例如，与CLDN18.2特异性结合的分离的抗体基本上不含特异性结合CLDN18.2以外的抗原的抗体)。然而，与人CLDN18.2的表位、同种型或变体特异性结合的分离的抗体可与其他相关抗原，例如来自其他物种(例如，CLDN18.2物种同源物)的相关抗原具有交叉反应性。此外，分离的抗体可基本上不含其他细胞材料和/或化学物质。在本发明的一个实施方案中，“分离的”单克隆抗体的组合涉及具有不同特异性并且在明确限定的组合物或混合物中组合的抗体。

根据本发明的术语“结合”优选涉及特异性结合。

根据本发明，在标准测定中，如果抗体对预定靶标具有显著的亲和力并且与所述预定靶标结合，则其能够与所述预定靶标结合。“亲和力”或“结合亲和力”一般通过平衡解离常数(K_D)来测量。优选地，术语“显著亲和力”是指以10^-5M或更低、10^-6M或更低、10^-7M或更低、10^-8M或更低、10^-9M或更低、10^-10M或更低、10^-11M或更低或者10^-12M或更低的解离常数(K_D)与预定靶标结合。

在标准测定中，如果抗体对靶标不具有显著的亲和力并且不与所述靶标显著地结合，特别是不与之可检出地结合，则所述抗体(基本上)不能与所述靶标结合。优选地，如果以高至2μg/ml、优选10μg/ml、更优选20μg/ml、特别是50或100μg/ml或更高的浓度存在，则所述抗体不能与所述靶标可检出地结合。优选地，如果抗体与靶标以与预定靶标(所述抗体能够与其结合)结合之K_D相比至少10倍、100倍、10³倍、10⁴倍、10⁵倍或10⁶倍的K_D结合，则所述抗体对所述靶标不具有显著的亲和力。例如，如果抗体与所述抗体能够结合的靶标结合的K_D为10^-7M，则所述抗体与对其无显著亲和力的靶标结合的K_D为至少10^-6M、10^-5M、10^-4M、10^{- 3}M、10^-2M或10^-1M。

在标准测定中，如果抗体能够与预定靶标结合同时不能够与其他靶标结合，即对其他靶标不具有显著亲和力并且不与其他靶标显著结合，则所述抗体对所述预定靶标具有特异性。根据本发明，如果抗体能够与CLDN18.2结合，但(基本上)不能够与其他靶标结合，则所述抗体对CLDN18.2具有特异性。优选地，如果抗体与这样的其他靶标的亲和力和结合没有显著超过与CLDN18.2不相关的蛋白质(例如牛血清白蛋白(BSA)、酪蛋白、人血清白蛋白(HSA)或非密蛋白跨膜蛋白(例如MHC分子或转铁蛋白受体)或任何其他指定的多肽)的亲和力或结合，则所述抗体对CLDN18.2具有特异性。优选地，如果抗体与靶标以与非特异性靶标结合之K_D相比低至少10倍、100倍、10³倍、10⁴倍、10⁵倍或10⁶倍的K_D结合，则所述抗体对所述预定靶标具有特异性。例如，如果抗体与其特异性靶标结合的K_D为10^-7M，则抗体与其无特异性的靶标结合的K_D会为至少10^-6M、10^-5M、10^-4M、10^-3M、10^-2M或10^-1M。

可使用任何合适的方法实验性测定抗体与靶标的结合；参见例如Berzofsky etal.，″Antibody-Antigen Interactions″在Fundamental Immunology中，Paul，W.E.，Ed.，Raven Press New York，N Y(1984)，Kuby，Janis Immunology，W.H.Freeman and CompanyNew York，N Y(1992)和本文中描述的方法。可使用常规技术容易地测定亲和力，例如，通过平衡透析；通过使用BIAcore 2000仪器，使用制造商所描述的通用方法；通过使用放射标记的靶抗原的放射免疫测定；或通过技术人员已知的其他方法。例如，可通过Scatchard等，Ann N.Y.Acad.ScL，51：660(1949)的方法分析亲和力数据。如果在不同条件(例如，盐浓度、pH)下测量，则所测量的具体抗体-抗原相互作用的亲和力可以不同。因此，亲和力和其他抗原-结合参数(例如，K_D、IC₅₀)的测量优选地用抗体与抗原的标准化溶液以及标准化缓冲液进行。

本文中使用的术语“同种型”是指由重链恒定区基因编码的抗体类别(例如，IgM或IgG1)。

本文中使用的术语“同种型转换(isotype switching)”的指抗体的类别或同种型从一个Ig类别变成其他Ig类别之一的现象。

本义中使用的术语“天然存在的”当应用于物体时是指该物体可见于自然界这一事实。例如，存在于可从自然界来源分离的生物体(包括病毒)中并且未经人在实验室中有意修饰的多肽或多核苷酸序列是天然存在的。

本文中使用的术语“重排”是指重链或轻链免疫球蛋白基因座的构型，其中V区段在编码基本完整VH或VL结构域的构象中分别位于紧邻D-J或J区段的位置。重排的免疫球蛋白(抗体)基因座可通过与种系DNA进行比较来鉴定；重排的基因座将具有至少一个重组的七聚体/九聚体同源性元件。

提及V区段时，本文中使用的术语“未重排的”或“种系构型”是指其中V区段未重组从而未与D或J区段紧邻的构型。

根据本发明，抗CLDN18.2抗体是能够与存在于CLDN18.2的表位，优选位于CLDN18.2胞外结构域内，特别是在CLDN18.2的第一胞外结构域，优选氨基酸第29至78位的表位结合的抗体。在一些具体实施方案中，抗CLDN18.2抗体是能够与以下结合的抗体：(i)CLDN18.2上且不存在于CLDN18.1上的表位，优选SEQ ID NO：3、4和5，(ii)位于CLDN18.2-环1上的表位，优选SEQ ID NO：8，(iii)位于CLDN18.2-环2上的表位，优选SEQ ID NO：10，(iv)位于CLDN18.2-环D3上的表位，优选SEQ ID NO：11，(v)涵盖CLDN18.2-环1和CLDN18.2-环D3的表位，或者(vi)位于CLDN18.2-环D3上的非糖基化表位，优选SEQ ID NO：9。

根据本发明，抗CLDN18.2抗体优选是与CLDN18.2结合但不与CLDN18.1结合的抗体。优选地，抗CLDN18.2抗体对CLDN18.2具有特异性。优选地，抗CLDN18.2抗体是与细胞表面上表达的CLDN18.2结合的抗体。在一些特别优选的实施方案中，抗CLDN18.2抗体与存在于活细胞表面上的CLDN18.2的天然表位结合。优选地，抗CLDN18.2抗体与选自SEQ ID NO：1、3至11、44、46和48至50的一种或更多种肽结合。优选地，抗CLDN18.2抗体对上述蛋白质、肽或其免疫原性片段或衍生物具有特异性。抗CLDN18.2抗体可通过包括以下步骤的方法获得：用包含选自SEQ ID NO：1、3至11、44、46和48至50的氨基酸序列的蛋白质或肽、或者表达所述蛋白质或肽的核酸或宿主细胞对动物进行免疫接种。优选地，抗体与癌细胞，特别是上述癌症类型的细胞结合，并且优选地，基本上不与非癌细胞结合。

优选地，抗CLDN 18.2抗体与表达CLDN18.2的细胞的结合诱导或介导对表达CLDN18.2的细胞的杀伤。表达CLDN18.2的细胞优选地是癌细胞并且特别地选自致瘤性胃癌、食管癌、胰腺癌、肺癌、卵巢癌、结肠癌、肝癌、头颈癌和胆囊癌细胞。优选地，抗体通过诱导补体依赖性细胞毒性(CDC)介导的裂解、抗体依赖性细胞毒性(ADCC)介导的裂解、凋亡和抑制表达CLDN18.2之细胞增殖中的一种或更多种来诱导或介导细胞杀伤。优选地，在效应细胞存在的情况下，发生ADCC介导的细胞裂解，在特定实施方案中，所述效应细胞选自单核细胞、单个核细胞、NK细胞和PMN。可通过使用溴脱氧尿苷(5-溴-2-脱氧尿苷，BrdU)在测定中确定细胞增殖来体外测量对细胞增殖的抑制。BrdU为合成的核苷，其为胸苷的类似物，并且在DNA复制期间，可被并入复制中之细胞(在细胞周期的S期)的新合成的DNA中，从而取代胸苷。使用例如对BrdU具有特异性的抗体检测到并入的化学物质，表明细胞正活跃地复制其DNA。

在一些优选的实施方案中，本文中所述的抗体可通过以下一种或更多种特性表征：

a)对CLDN18.2的特异性；

b)对CLDN18.2的为约100nM或更小，优选地，约5至10nM或更小，更优选地，约1至3nM或更小的结合亲和力，

c)在CLDN18.2阳性细胞上诱导或介导CDC的能力；

d)在CLDN18.2阳性细胞上诱导或介导ADCC的能力；

e)抑制CLDN18.2阳性细胞生长的能力；

f)诱导CLDN18.2阳性细胞凋亡的能力。

在一个特别优选的实施方案中，抗CLDN18.2抗体由保藏在DSMZ(Mascheroder Weg1b，31824 Braunschweig，德国；新地址：Inhoffenstr.7B，31824 Braunschweig，德国)的杂交瘤产生并具有以下命名和登录号：

a.182-D1106-055登录号no.DSM ACC2737，保藏于2005年10月19日

b.182-D1106-056登录号no.DSM ACC2738，保藏于2005年10月19日

c.182-D1106-057登录号no.DSM ACC2739，保藏于2005年10月19日

d.182-D1106-058登录号no.DSM ACC2740，保藏于2005年10月19日

e.182-D1106-059登录号no.DSM ACC2741，保藏于2005年10月19日

f.182-D1106-062登录号no.DSM ACC2742，保藏于2005年10月19日，

g.182-D1106-067登录号no.DSM ACC2743，保藏于2005年10月19日

h.182-D758-035登录号no.DSM ACC2745，保藏于2005年11月17日

i.182-D758-036登录号no.DSM ACC2746，保藏于2005年11月17日

j.182-D758-040登录号no.DSM ACC2747，保藏于2005年11月17日

k.182-D1106-061登录号no.DSM ACC2748，保藏于2005年11月17日

l.182-D1106-279登录号no.DSM ACC2808，保藏于2006年10月26日

m.182-D1106-294登录号no.DSM ACC2809，保藏于2006年10月26日，

n.182-D1106-362登录号no.DSM ACC2810，保藏于2006年10月26日。

根据本发明的一些优选的抗体是由上述杂交瘤产生并且可从其获得的那些；即在182-D1106-055的情况下是37G11，在182-D1106-056的情况下是37H8，在182-D1106-057的情况下是38G5，在182-D1106-058的情况下是38H3，在182-D1106-059的情况下是39F11，在182-D1106-062的情况下是43A11，在182-D1106-067的情况下是61C2，在182-D758-035的情况下是26B5，在182-D758-036的情况下是26D12，在182-D758-040的情况下是28D10，在182-D1106-061的情况下是42E12，在182-D1106-279的情况下是125E1，在182-D1106-294的情况下是163E12，并且在182-D1106-362的情况下是175D10；及其嵌合和人源化形式。

优选的嵌合抗体及其序列在下表中示出。

在一些优选的实施方案中，抗体，特别是根据本发明的嵌合形式的抗体包括包含重链恒定区(CH)的抗体，所述重链恒定区(CH)包含来源于人重链恒定区的氨基酸序列，例如由SEQ ID NO：13或52表示的氨基酸序列，或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段。在一些另外的优选的实施方案中，抗体，特别是根据本发明的嵌合形式的抗体包括包含轻链恒定区(CL)的抗体，所述轻链恒定区包含来源于人轻链恒定区的氨基酸序列，例如由SEQ ID NO：12表示的氨基酸序列，或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段。在一个特别优选的实施方案中，抗体，特别是根据本发明的嵌合形式的抗体包括包含CH并且包含CL的抗体，所述CH包含来源于人CH的氨基酸序列，例如由SEQ ID NO：13或52表示的氨基酸序列，或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段，所述CL包含来源于人CL的氨基酸序列，例如由SEQ ID NO：12表示的氨基酸序列，或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段。

在一个实施方案中，抗CLDN18.2抗体是嵌合小鼠/人IgG1单克隆抗体，其包含κ鼠可变轻链、人κ轻链恒定区同种异型Km(3)、鼠重链可变区、人IgG1恒定区同种异型G1m(3)。

在某些优选的实施方案中，嵌合形式的抗体包括包含重链和/或包含轻链的抗体，所述重链包含选自SEQ ID NO：14、15、16、17、18、19、51的氨基酸序列及其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段，所述轻链包含选自SEQ ID NO：20、21、22、23、24、25、26、27、28的氨基酸序列及其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段。

在某些优选的实施方案中，嵌合形式的抗体包括包含选自以下可能性(i)至(ix)的重链和轻链的组合的抗体：

(i)重链包含由SEQ ID NO：14表示的氨基酸序列或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段，并且轻链包含由SEQ ID NO：21表示的氨基酸序列或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段，

(ii)重链包含由SEQ ID NO：15表示的氨基酸序列或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段，并且轻链包含由SEQ ID NO：20表示的氨基酸序列或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段，

(iii)重链包含由SEQ ID NO：16表示的氨基酸序列或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段，并且轻链包含由SEQ ID NO：22表示的氨基酸序列或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段，

(iv)重链包含由SEQ ID NO：18表示的氨基酸序列或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段，并且轻链包含由SEQ ID NO：25表示的氨基酸序列或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段，

(v)重链包含由SEQ ID NO：17表示的氨基酸序列或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段，并且轻链包含由SEQ ID NO：24表示的氨基酸序列或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段，

(vi)重链包含由SEQ ID NO：19表示的氨基酸序列或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段，并且轻链包含由SEQ ID NO：23表示的氨基酸序列或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段，

(vii)重链包含由SEQ ID NO：19表示的氨基酸序列或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段，并且轻链包含由SEQ ID NO：26表示的氨基酸序列或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段，

(viii)重链包含由SEQ ID NO：19表示的氨基酸序列或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段，并且轻链包含由SEQ ID NO：27表示的氨基酸序列或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段，

(ix)重链包含由SEQ ID NO：19表示的氨基酸序列或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段，并且轻链包含由SEQ ID NO：28表示的氨基酸序列或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段，以及

(x)重链包含由SEQ ID NO：51表示的氨基酸序列或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段，并且轻链包含由SEQ ID NO：24表示的氨基酸序列或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段。

在一个特别优选的实施方案中，抗CLDN18.2抗体包含重链和轻链，所述重链包含由SEQ ID NO：17表示的氨基酸序列或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段，所述轻链包含由SEQ ID NO：24表示的氨基酸序列或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段。

在一个特别优选的实施方案中，抗CLDN18.2抗体包含重链和轻链，所述重链包含由SEQ ID NO：51表示的氨基酸序列或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段，所述轻链包含由SEQ ID NO：24表示的氨基酸序列或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段。

选自SEQ ID NO：14、15、16、17、18、19、51、20、21、22、23、24、25、26、27和28的氨基酸序列的片段优选涉及所述序列，其中去除了N端的17、18、19、20、21、22或23个氨基酸。

在一个优选的实施方案中，抗CLDN18.2抗体包含重链可变区(VH)，其包含选自SEQID NO：29、30、31、32、33、34的氨基酸序列及其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段。

在一个优选的实施方案中，抗CLDN18.2抗体包含轻链可变区(VL)，其包含选自SEQID NO：35、36、37、38、39、40、41、42、43的氨基酸序列及其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段。

在某些优选的实施方案中，抗CLDN18.2抗体包含选自以下可能性(i)至(ix)的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)的组合：

(i)VH包含由SEQ ID NO：29表示的氨基酸序列或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段，并且VL包含由SEQ ID NO：36表示的氨基酸序列或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段，

(ii)VH包含由SEQ ID NO：30表示的氨基酸序列或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段，并且VL包含由SEQ ID NO：35表示的氨基酸序列或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段，

(iii)VH包含由SEQ ID NO：31表示的氨基酸序列或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段，并且VL包含由SEQ ID NO：37表示的氨基酸序列或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段，

(iv)VH包含由SEQ ID NO：33表示的氨基酸序列或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段，并且VL包含由SEQ ID NO：40表示的氨基酸序列或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段，

(v)VH包含由SEQ ID NO：32表示的氨基酸序列或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段，并且VL包含由SEQ ID NO：39表示的氨基酸序列或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段，

(vi)VH包含由SEQ ID NO：34表示的氨基酸序列或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段，并且VL包含由SEQ ID NO：38表示的氨基酸序列或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段，

(vii)VH包含由SEQ ID NO：34表示的氨基酸序列或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段，并且VL包含由SEQ ID NO：41表示的氨基酸序列或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段，

(viii)VH包含由SEQ ID NO：34表示的氨基酸序列或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段，并且VL包含由SEQ ID NO：42表示的氨基酸序列或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段，

(ix)VH包含由SEQ ID NO：34表示的氨基酸序列或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段，并且VL包含由SEQ ID NO：43表示的氨基酸序列或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段。

在一个特别优选的实施方案中，抗CLDN18.2抗体包含VH和VL，所述VH包含由SEQID NO：32表示的氨基酸序列或其功能性变体，或者包含氨基酸序列或功能性变体的片段，所述VL包含由SEQ ID NO：39表示的氨基酸序列或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段。在一个更优选的实施方案中，抗CLDN18.2抗体包含VH和VL，所述VH包含由SEQID NO：32表示的氨基酸序列，所述VL包含由SEQ ID NO：39表示的氨基酸序列，例如IMAB362(Zolbetuximab)。

术语“片段”特别是指重链可变区(VH)和/或轻链可变区(VL)的一个或更多个互补决定区(CDR)，优选至少CDR3序列，任选地与CDR1序列和/或CDR2序列组合。在一个实施方案中，所述一个或更多个互补决定区(CDR)选自一组互补决定区CDR1、CDR2和CDR3。在一个特别优选的实施方案中，术语“片段”是指重链可变区(VH)和/或轻链可变区(VL)的互补决定区CDR1、CDR2和CDR3。

在一个优选的实施方案中，抗CLDN 18.2抗体包含VH，其包含选自以下实施方案(i)至(vi)的一组互补决定区CDR1、CDR2和CDR3：

(i)CDR1：SEQ ID NO：14的第45至52位，CDR2：SEQ ID NO：14的第70至77位，CDR3：SEQ ID NO：14的第116至125位，

(ii)CDR1：SEQ ID NO：15的第45至52位，CDR2：SEQ ID NO：15的第70至77位，CDR3：SEQ ID NO：15的第116至126位，

(iii)CDR1：SEQ ID NO：16的第45至52位，CDR2：SEQ ID NO：16的第70至77位，CDR3：SEQ ID NO：16的第116至124位，

(iv)CDR1：SEQ ID NO：17的第45至52位，CDR2：SEQ ID NO：17的第70至77位，CDR3：SEQ ID NO：17的第116至126位，

(v)CDR1：SEQ ID NO：18的第44至51位，CDR2：SEQ ID NO：18的第69至76位，CDR3：SEQ ID NO：18的第115至125位，以及

(vi)CDR1：SEQ ID NO：19的第45至53位，CDR2：SEQ ID NO：19的第71至78位，CDR3：SEQ ID NO：19的第117至128位。

在一个优选的实施方案中，抗CLDN18.2抗体包含VH，其包含选自上述实施方案(i)至(vi)的一组互补决定区CDR1、CDR2和CDR3中的至少一个、优选两个、更优选所有三个CDR序列。

在一个优选的实施方案中，抗CLDN18.2抗体包含VL，其包含选自以下实施方案(i)至(ix)的一组互补决定区CDR1、CDR2和CDR3：

(i)CDR1：SEQ ID NO：20的第47至58位，CDR2：SEQ ID NO：20的第76至78位，CDR3：SEQ ID NO：20的第115至123位，

(ii)CDR1：SEQ ID NO：21的第49至53位，CDR2：SEQ ID NO：21的第71至73位，CDR3：SEQ ID NO：21的第110至128位，

(iii)CDR1：SEQ ID NO：22的第47至52位，CDR2：SEQ ID NO：22的第70至72位，CDR3：SEQ ID NO：22的第109至117位，

(iv)CDR1：SEQ ID NO：23的第47至58位，CDR2：SEQ ID NO：23的第76至78位，CDR3：SEQ ID NO：23的第115至123位，

(v)CDR1：SEQ ID NO：24的第47至58位，CDR2：SEQ ID NO：24的第76至78位，CDR3：SEQ ID NO：24的第115至123位，

(vi)CDR1：SEQ ID NO：25的第47至58位，CDR2：SEQ ID NO：25的第76至78位，CDR3：SEQ ID NO：25的第115至122位，

(vii)CDR1：SEQ ID NO：26的第47至58位，CDR2：SEQ ID NO：26的第76至78位，CDR3：SEQ ID NO：26的第115至123位，

(viii)CDR1：SEQ ID NO：27的第47至58位，CDR2：SEQ ID NO：27的第76至78位，CDR3：SEQ ID NO：27的第115至123位，以及

(ix)CDR1：SEQ ID NO：28的第47至52位，CDR2：SEQ ID NO：28的第70至72位，CDR3：SEQ ID NO：28的第109至117位。

在一个优选的实施方案中，抗CLDN18.2抗体包含VL，其包含选自上述实施方案(i)至(ix)的一组互补决定区CDR1、CDR2和CDR3中的至少一个、优选两个、更优选所有三个CDR序列。

在一个优选的实施方案中，抗CLDN18.2抗体包含VH和VL的组合，VH和VL各自包含选自以下实施方案(i)至(ix)的一组互补决定区CDR1、CDR2和CDR3：

(i)VH：CDR1：SEQ ID NO：14的第45至52位，CDR2：SEQ ID NO：14的第70至77位，CDR3：SEQ ID NO：14的第116至125位，VL：CDR1：SEQ ID NO：21的第49至53位，CDR2：SEQ IDNO：21的第71至73位，CDR3：SEQ ID NO：21的第110至128位，

(ii)VH：CDR1：SEQ ID NO：15的第45至52位，CDR2：SEQ ID NO：15的第70至77位，CDR3：SEQ ID NO：15的第116至126位，VL：CDR1：SEQ ID NO：20的第47至58位，CDR2：SEQ IDNO：20的第76至78位，CDR3：SEQ ID NO：20的第115至123位，

(iii)VH：CDR1：SEQ ID NO：16的第45至52位，CDR2：SEQ ID NO：16的第70至77位，CDR3：SEQ ID NO：16的第116至124位，VL：CDR1：SEQ ID NO：22的第47至52位，CDR2：SEQ IDNO：22的第70至72位，CDR3：SEQ ID NO：22的第109至117位，

(iv)VH：CDR1：SEQ ID NO：18的第44至51位，CDR2：SEQ ID NO：18的第69至76位，CDR3：SEQ ID NO：18的第115至125位，VL：CDR1：SEQ ID NO：25的第47至58位，CDR2：SEQ IDNO：25的第76至78位，CDR3：SEQ ID NO：25的第115至122位，

(v)VH：CDR1：SEQ ID NO：17的第45至52位，CDR2：SEQ ID NO：17的第70至77位，CDR3：SEQ ID NO：17的第116至126位，VL：CDR1：SEQ ID NO：24的第47至58位，CDR2：SEQ IDNO：24的第76至78位，CDR3：SEQ ID NO：24的第115至123位，

(vi)VH：CDR1：SEQ ID NO：19的第45至53位，CDR2：SEQ ID NO：19的第71至78位，CDR3：SEQ ID NO：19的第117至128位，VL：CDR1：SEQ ID NO：23的第47至58位，CDR2：SEQ IDNO：23的第76至78位，CDR3：SEQ ID NO：23的第115至123位，

(vii)VH：CDR1：SEQ ID NO：19的第45至53位，CDR2：SEQ ID NO：19的第71至78位，CDR3：SEQ ID NO：19的第117至128位，VL：CDR1：SEQ ID NO：26的第47至58位，CDR2：SEQ IDNO：26的第76至78位，CDR3：SEQ ID NO：26的第115至123位，

(viii)VH：CDR1：SEQ ID NO：19的第45至53位，CDR2：SEQ ID NO：19的第71至78位，CDR3：SEQ ID NO：19的第117至128位，VL：CDR1：SEQ ID NO：27的第47至58位，CDR2：SEQ IDNO：27的第76至78位，CDR3：SEQ ID NO：27的第115至123位，以及

(ix)VH：CDR1：SEQ ID NO：19的第45至53位，CDR2：SEQ ID NO：19的第71至78位，CDR3：SEQ ID NO：19的第117至128位，VL：CDR1：SEQ ID NO：28的第47至52位，CDR2：SEQ IDNO：28的第70至72位，CDR3：SEQ ID NO：28的第109至117位。

在一个优选的实施方案中，抗CLDN18.2抗体包含VH和VL，所述VH包含选自上述实施方案(i)至(ix)的一组互补决定区CDR1、CDR2和CDR3中的至少一个、优选两个、更优选所有三个VH CDR序列，所述VL包含来自相同实施方案(i)至(ix)的一组互补决定区CDR1、CDR2和CDR3中的至少一个、优选两个、更优选所有三个VL CDR序列。

术语“至少一个、优选两个、更优选所有三个CDR序列”优选涉及至少CDR3序列，任选地与CDR1序列和/或CDR2序列组合。

在一个特别优选的实施方案中，抗CLDN18.2抗体包含VH和VL的组合，VH和VL各自包含如下的一组互补决定区CDR1、CDR2和CDR3：

VH：CDR1：SEQ ID NO：17的第45至52位，CDR2：SEQ ID NO：17的第70至77位，CDR3：SEQ ID NO：17的第116至126位，VL：CDR1：SEQ ID NO：24的第47至58位，CDR2：SEQ ID NO：24的第76至78位，CDR3：SEQ ID NO：24的第115至123位。

在一些另外的优选的实施方案中，抗CLDN18.2抗体优选包含针对CLDN18.2的单克隆抗体(优选本文中所述的针对CLDN18.2的单克隆抗体)的重链可变区(VH)和/或轻链可变区(VL)的一个或更多个互补决定区(CDR)，优选至少CDR3可变区，并且优选包含本文中所述的重链可变区(VH)和/或轻链可变区(VL)的一个或更多个互补决定区(CDR)，优选至少CDR3可变区。在一个实施方案中，所述一个或更多个互补决定区(CDR)选自本文中所述的一组互补决定区CDR1、CDR2和CDR3。在一个特别优选的实施方案中，抗CLDN18.2抗体优选包含针对CLDN18.2的单克隆抗体(优选本文中所述的针对CLDN18.2的单克隆抗体)的重链可变区(VH)和/或轻链可变区(VL)的互补决定区CDR1、CDR2和CDR3，并且优选包含本文中所述的重链可变区(VH)和/或轻链可变区(VL)的互补决定区CDR1、CDR2和CDR3。

在一个实施方案中，如本文中所述的包含一个或更多个CDR、一组CDR或CDR组的组合的抗体包含所述CDR及其间插框架区(intervening framework region)。优选地，该部分还将包含至少约50％的第一和第四框架区之一或二者，所述50％为第一框架区的C端50％和第四框架区的N端50％。通过重组DNA技术进行的抗体构建可导致将残基N端或C端引入由接头编码的可变区，以促进克隆或其他操作步骤，包括引入接头以连接可变区或将可变区与包括如本文中所述的序列的其他蛋白质序列连接。

在一个实施方案中，如本文中所述的包含一个或更多个CDR、一组CDR或CDR组的组合的抗体包含人抗体框架中的所述CDR。

本文中提及的关于其重链包含特定链或特定区域或序列的抗体优选涉及其中所述抗体的所有重链均包含所述特定链、区域或序列的情况。这相应地适用于抗体的轻链。

在一个实施方案中，抗CLDN18.2抗体与本文中所述的抗CLDN18.2抗体竞争CLDN18.2结合和/或具有本文中所述的抗CLDN18.2抗体对CLDN18.2的特异性。在这些和另外的实施方案中，抗CLDN18.2抗体可与本文中所述的抗CLDN18.2抗体高度同源。预期优选的抗CLDN18.2抗体具有与本文中所述的抗CLDN18.2抗体的CDR区相同或高度同源的CDR区。对于“高度同源”，预期在每个CDR区中可进行1至5(优选1至4，例如1至3或1或2)个替换。

术语“竞争”是指两个结合分子(例如抗体)之间针对结合靶抗原而进行的竞争。如果两个结合分子不相互阻断与靶抗原的结合，则这样的结合分子是非竞争性的，并且这表明所述结合分子不与靶抗原的相同部分，即表位结合。如何测试结合分子(例如抗体)对于与靶抗原的结合的竞争对本领域技术人员是公知的。这样的方法的一个实例是所谓的交叉竞争测定，其可例如作为ELISA或流式细胞术进行。例如，可通过以下来进行基于ELISA的测定：用抗体之一包被ELISA板孔，添加竞争抗体和经His标记的抗原/靶标并检测添加的抗体是否抑制经His标记的抗原与经包被抗体的结合，例如通过添加生物素化的抗His抗体，然后添加链霉亲和素-聚-HRP，并进一步用ABTS进行反应并测量405nm处的吸光度。例如，流式细胞术测定可通过以下进行：将表达抗原/靶标的细胞与过量的未经标记抗体一起孵育，将细胞与次优浓度的经生物素标记的抗体一起孵育，然后与经荧光标记的链霉亲和素一起孵育并通过流式细胞术进行分析。

如果两个结合分子与相同的抗原和相同的表位结合，则它们具有“相同的特异性”。待测分子是否识别与某个结合分子相同的表位，即结合分子是否与相同的表位结合，可通过技术人员已知的不同方法来测试，例如，基于结合分子例如抗体针对相同表位的竞争。可通过交叉阻断测定来检测结合分子之间的竞争。例如，竞争性ELISA测定可用作交叉阻断测定。例如，可将靶抗原包被在微量滴定板的孔上，并且可添加抗原结合抗体和候选竞争测试抗体。与孔中的抗原结合的抗原结合抗体的量与和其竞争与相同表位结合的候选竞争测试抗体的结合能力间接相关。具体地，候选竞争测试抗体对相同表位的亲和力越大，则与抗原包被孔结合的抗原结合抗体的量就越小。与孔结合的抗原结合抗体的量可通过用可检测或可测量的标记物质来标记抗体来测量。

“同源”是指两个多肽之间或两个核酸分子之间的序列相似性或序列同一性。当两个比较序列的二者中的一个位置被相同的碱基或氨基酸单体亚基占据时，分子在该位置是同源的。两条序列之间的同源性百分比是两条序列共有的匹配或同源位置数除以比较位置数X 100的函数。例如，如果两条序列中10个位置中有6个匹配或同源则这两条序列具有60％的同源性。通常来说，当比对两条序列以获得最大同源性时进行比较。根据本公开内容，同源序列表现出与氨基酸或核苷酸残基具有至少40％、特别是至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％并且优选至少95％、至少98或至少99％的同一性。

当提及氨基酸序列(肽或蛋白质)时，“片段”涉及氨基酸序列的一部分，即表示在N端和/或C端缩短的氨基酸序列的序列。在C端缩短的片段(N端片段)可例如通过翻译缺少开放阅读框的3’端之截短的开放阅读框来获得。在N端缩短的片段(C端片段)可例如通过翻译缺少开放阅读框的5’端之截短的开放阅读框来获得，只要截短的开放阅读框包含用于起始翻译的起始密码子即可。氨基酸序列的片段包含氨基酸序列的例如至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的氨基酸残基。氨基酸序列的片段优选包含来自氨基酸序列的至少6个、特别地至少8个、至少12个、至少15个、至少20个、至少30个、至少50个或至少100个连续氨基酸。

当抗体序列的“片段”替代抗体中的所述抗体序列时，抗体序列的“片段”优选地保留所述抗体与CLDN18.2的结合，并且优选地保留如本文中所述的所述抗体的功能，例如CDC介导的裂解或ADCC介导的裂解。

本文中的“变体”或“变体蛋白质”或“变体多肽”意指由于至少一个氨基酸修饰而不同于亲本蛋白质的蛋白质。亲本多肽可以是天然存在的或野生型(wild type，WT)多肽，或者可以是野生型多肽的经修饰形式。优选地，变体多肽与亲本多肽相比具有至少一个氨基酸修饰，例如，与亲本相比，1至约20个氨基酸修饰，并且优选1至约10个或1至约5个氨基酸修饰。

如本文中所用，“亲本多肽”、“亲本蛋白质”、“前体多肽”或“前体蛋白质”意指随后被修饰以产生变体之未经修饰的多肽。亲本多肽可以是野生型多肽，或者野生型多肽的变体或经改造形式。

本文中的“野生型”或“WT”或“天然”意指在自然界中发现的氨基酸序列，包括等位基因变异。野生型蛋白质或多肽具有未经有意修饰的氨基酸序列。

出于本公开内容的目的，氨基酸序列(肽、蛋白质或多肽)的“变体”包括氨基酸插入变体、氨基酸添加变体、氨基酸缺失变体和/或氨基酸替换变体。术语“变体”包括所有突变体、剪接变体、翻译后修饰变体、构象变体、同种型变体、等位基因变体、物种变体和物种同源物，特别是天然存在的那些。

氨基酸插入变体包括在特定氨基酸序列中插入单个或两个或更多个氨基酸。在具有插入的氨基酸序列变体的情况下，向氨基酸序列中的特定位点中插入一个或更多个氨基酸残基，但是随机插入并对所产生的产物进行合适的筛选也是可能的。氨基酸添加变体包括一个或更多个氨基酸(例如1、2、3、5、10、20、30、50或更多个氨基酸)的氨基端和/或羧基端融合。氨基酸缺失变体的特征在于从序列中除去一个或更多个氨基酸，例如，除去1、2、3、5、10、20、30、50或更多个氨基酸。所述缺失可在蛋白质的任何位置中。包含蛋白质N端和/或C端缺失的氨基酸缺失变体也被称为N端和/或C端截短变体。氨基酸替换变体的特征在于除去序列中的至少一个残基，并且在其位置插入另一个残基。优选在氨基酸序列中同源蛋白质或肽之间非保守的位置处进行修饰和/或将氨基酸用具有类似特性的其他氨基酸替代。优选地，肽和蛋白质变体中的氨基酸改变为保守氨基酸改变，即，替换带有类似电荷的或不带电荷的氨基酸。保守氨基酸改变涉及替换与其侧链相关的氨基酸家族之一。天然存在的氨基酸一般分为四个家族：酸性氨基酸(天冬氨酸、谷氨酸)、碱性氨基酸(赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、非极性氨基酸(丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)和不带电荷的极性氨基酸(甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸)。苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸有时一起被归类为芳香族氨基酸。在一个实施方案中，保守氨基酸替换包括以下组内的置换：

甘氨酸、丙氨酸；

缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸；

天冬氨酸、谷氨酸；

天冬酰胺、谷氨酰胺；

丝氨酸、苏氨酸；

赖氨酸、精氨酸；以及

苯丙氨酸、酪氨酸。

优选地，给定的氨基酸序列和所述给定的氨基酸序列之变体氨基酸序列之间的相似性(优选同一性)程度将为至少约60％、65％、70％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％。优选地针对氨基酸区域给出相似性或同一性程度，所述区域为参照氨基酸序列整个长度的至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或约100％。例如，如果参照氨基酸序列由200个氨基酸组成，优选地针对至少约20、至少约40、至少约60、至少约80、至少约100、至少约120、至少约140、至少约160、至少约180或约200个氨基酸(优选连续的氨基酸)给出相似性或同一性程度。在一些优选的实施方案中，针对参照氨基酸序列的整个长度给出相似性或同一性程度。可用本领域已知的工具进行用于确定序列相似性(优选序列同一性)的比对，优选使用最佳序列比对，例如，使用Align，采用标准设定，优选EMBOSS：：needle，Matrix：Blosum62，空位开放(Gap Open)10.0，空位扩展(Gap Extend)0.5来进行。

“序列相似性”表明相同的或表示保守氨基酸替换的氨基酸的百分比。两条氨基酸序列之间的“序列同一性”表示所述序列之间相同的氨基酸的百分比。

术语“百分比同一性”旨在表示在最佳比对之后获得的待比较的两条序列之间相同的氨基酸残基的百分比，该百分比完全是统计学意义上的，并且两条序列之间的差异随机分布在其整个长度上。通过在对这些序列进行最佳比对之后对其进行比较来常规地进行两条氨基酸序列之间的序列比较，所述比较通过区段或通过“比较窗”来进行以鉴定和比较局部区域的序列相似性。除手工产生以外，用于比较的序列的最佳比对还可通过以下手段产生：Smith和Waterman，1981，Ads App.Math.2，482的局部同源性算法，Neddleman和Wunsch，1970，J.Mol.Biol.48，443的局部同源性算法，Pearson和Lipman，1988，Proc.NatlAcad.Sci.USA 85，2444的相似性搜索法，或者使用这些算法的计算机程序(在WisconsinGenetics软件包中的GAP、BESTFIT、FASTA、BLAST P、BLAST N和TFASTA，Genetics ComputerGroup，575 Science Drive，Madison，Wis.)。

通过以下方法计算百分比同一性：确定进行比较的两条序列之间相同的位置数，用该数除以进行比较的位置数，并用所得结果乘以100，从而获得这两条序列之间的百分比同一性。

本文中关于特定的氨基酸序列(例如，在序列表中所示的那些)给出的教导将被解释为也涉及产生与所述特定的序列在功能上等同之序列的所述特异性序列的变体，例如与特定氨基酸序列的性质显示出相同或相似性质的氨基酸序列。一个重要的特性是保留抗体与其靶标的结合或维持抗体的效应子功能。优选地，相对于特定序列而言是变体的序列，当它替代了抗体中的特定序列时保留了所述抗体与CLDN18.2的结合，并且优选地保留了如本文中所述的所述抗体的功能，例如CDC介导的裂解或ADCC介导的裂解。

本领域技术人员将理解，特别是CDR、高变区和可变区的序列可被修饰而不丧失结合CLDN18.2的能力。例如，CDR区将与本文中指定的抗体的区域相同或高度同源。对于“高度同源”，预期了在CDR中可进行1至5(优选1至4，例如1至3或1或2)个替换。另外，可修饰高变区和可变区，使其显示出与本文中具体公开的抗体的区域的显著同源性。

本文中使用的术语“功能性变体”是指包含这样的氨基酸序列的变体分子或序列：其与亲本分子或序列的氨基酸序列相比改变了一个或更多个氨基酸并且仍然能够实现亲本分子或序列的一种或更多种功能，例如与靶分子结合或有助于与靶分子结合。如果亲本分子或序列是抗体分子或序列，则改变优选不在抗体的可变区中，更优选不在抗体的CDR区中。在一个实施方案中，单独或与其他元件组合的功能性变体与亲本分子或序列竞争与靶分子结合。换言之，亲本分子或序列的氨基酸序列中的修饰不显著影响或改变分子或序列的结合特征。在不同的实施方案中，功能性变体的结合可降低但仍显著存在，例如功能性变体的结合可以是亲本分子或序列的至少50％、至少60％、至少70％、至少80％或至少90％。然而，在另一些实施方案中，与亲本分子或序列相比，功能性变体的结合可增强。

“来源于”指定氨基酸序列(肽、蛋白质或多肽)的氨基酸序列(肽、蛋白质或多肽)是指第一氨基酸序列的来源。优选地，来源于特定氨基酸序列的氨基酸序列具有与该特定序列或其片段相同、基本上相同或同源的氨基酸序列。来源于特定氨基酸序列的氨基酸序列可以是该特定序列或其片段的变体。

本文中使用的术语“核酸”旨在包括DNA和RNA。核酸可以是单链或双链，但优选是双链DNA。

根据本发明，术语“表达”以其最一般的含义使用，并且包括RNA或RNA和蛋白质/肽的产生。其还包括核酸的部分表达。此外，表达可以瞬时或稳定地进行。

术语“转基因动物”是指具有包含一个或更多个转基因(优选重链和/或轻链转基因)或转染色体(整合或不整合到动物的天然基因组DNA中)，并且其优选能够表达所述转基因的基因组的动物。例如，转基因小鼠可具有人轻链转基因和人重链转基因或人重链转染色体，使得当用CLDN18.2抗原和/或表达CLDN18.2的细胞进行免疫接种时，小鼠产生人抗CLDN18.2抗体。可将人重链转基因整合到小鼠的染色体DNA中，正如转基因小鼠的情况一样，例如HuMAb小鼠，例如HCo7或HCol2小鼠，或者人重链转基因可在染色体外维持，正如WO02/43478中所述的转染色体(例如，KM)小鼠的情况。通过经历V-D-J重组和同种型转换，这样的转基因和转染色体小鼠可能能够产生针对CLDN18.2的人单克隆抗体的多种同种型(例如，IgG、IgA和/或IgE)。

本文中所用的“降低”、“减少”或“抑制”意指水平(例如，表达水平或细胞增殖水平)的总体降低或导致总体降低的能力，优选5％或更高，10％或更高，20％或更高，更优选50％或更高，最优选75％或更高。

例如“提高”或“增强”的术语优选涉及提高或增强约至少10％，优选至少20％，优选至少30％，更优选至少40％，更优选至少50％，甚至更优选至少80％，最优选至少100％、至少200％、至少500％、至少1000％、至少10000％或甚至更多。

当与某种活性或功能(例如抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC))关联使用时，“诱导”可意指在诱导之前不存在这样的活性或功能，但其也可意指在诱导之前存在一定水平的这样的活性或功能，并且在诱导之后所述活性或功能增强。因此，术语“诱导”还包括“增强”。

mAb作用机制

尽管以下提供了关于本发明抗体治疗效力的潜在机制的一些预期，但不应认为以任何方式限制本发明。

本文中所述的抗体优选地与免疫系统的组分相互作用，优选地通过ADCC或CDC。本文中所述的抗体还可用于靶向载荷(例如，放射性同位素、药物或毒素)以直接杀伤肿瘤细胞，或者可与传统化学治疗剂一起使用，通过互补作用机制攻击肿瘤，所述互补作用机制可包括由于化学治疗剂对T淋巴细胞的细胞毒性副作用而已经受到损害的抗肿瘤免疫应答。然而，本文中所述的抗体也可简单地通过与细胞表面上的CLDN18.2结合来发挥作用，因此，例如阻断细胞增殖。

抗体依赖性细胞介导的细胞毒性

ADCC描述了如本文中所述的效应细胞(特别是淋巴细胞)的细胞杀伤能力，其优选需要被抗体标记的靶细胞。

ADCC优选在抗体与肿瘤细胞上的抗原结合以及抗体Fc结构域接合免疫效应细胞表面上的Fc受体(FcR)时发生。已鉴定出数个Fc受体家族，且特定的细胞群特征性地表达确定的Fc受体。可将ADCC视为直接诱导不同程度的直接肿瘤破坏的机制，所述破坏导致抗原呈递并诱导肿瘤指向性T细胞应答。优选地，ADCC的体内诱导将导致肿瘤指向性T细胞应答和宿主来源的抗体应答。

补体依赖性细胞毒性

CDC是可通过抗体指引的另一种细胞杀伤方法。IgM是用于补体活化的最有效同种型。IgG1和IgG3在通过经典补体活化途径指引CDC方面也都很有效。优选地，在该级联中，抗原-抗体复合体的形成导致紧邻参与的抗体分子(例如，IgG分子)的C_H2结构域的多个C1q结合位点暴露出来(C1q是补体C1的三种亚组分之一)。优选地，这些暴露的C1q结合位点将先前的低亲和力C1q-IgG相互作用转变为一种高亲合力相互作用，这触发了涉及一系列其他补体蛋白质的级联事件并且导致效应细胞趋化剂/活化剂C3a和C5a的蛋白水解释放。优选地，该补体级联最终形成膜攻击复合体，其在细胞膜中产生孔，这有利于水和溶质自由地进入和离开细胞。

本文中所述的抗体可通过多种技术产生，包括常规的单克隆抗体法，例如，Kohlerand Milstein，Nature 256：495(1975)的标准体细胞杂交技术。尽管原则上优选体细胞杂交方案，但是也可采用其他用于产生单克隆抗体的技术，例如，B淋巴细胞的病毒或致癌转化或使用抗体基因文库的噬菌体展示技术。

用于制备分泌单克降抗体的杂交瘤的优选动物系统为鼠系统。在小鼠中产生杂交瘤是已经非常成熟的方案。分离用于融合的经免疫接种脾细胞的免疫接种方案和技术是本领域中已知的。融合伴侣(例如，鼠骨髓瘤细胞)和融合方案也是已知的。

用于制备分泌单克隆抗体的杂交瘤的另一些优选动物系统为大鼠系统和兔系统(例如，描述于Spieker-Polet et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.92：9348(1995)，还参见Rossi et al.，Am.J.Clin.Pathol.124：295(2005))。

在又一个优选实施方案中，可使用携带部分人免疫系统而不是小鼠系统的转基因或转染色体小鼠产生人单克隆抗体。这些转基因和转染色小鼠包括分别称为HuMAb小鼠和KM小鼠的小鼠，并且在本文中统称为“转基因小鼠”。可按照WO2004 035607中对CD20的详细描述在这样的转基因小鼠中进行人抗体的产生。

用于产生单克隆抗体的又一策略为直接从产生具有确定特异性之抗体的淋巴细胞中分离编码抗体的基因，例如，参见Babcock et al.，1996；A novel strategy forgenerating monoclonal antibodies from single，isolated lymphocytes producingantibodies of defined specificities。重组抗体工程的细节还可参见Welschof andKraus，Recombinant antibodes for cancer therapy ISBN-0-89603-918-8and BennyK.C.Lo Antibody Engineering ISBN 1-58829-092-1。

为了产生抗体，可如所述，利用来自抗原序列(即，抗体待指向的序列)的载体缀合肽、重组表达的抗原或其片段的富集制备物和/或表达抗原的细胞来免疫接种小鼠。或者，可利用编码抗原或其片段的DNA来免疫接种小鼠。如果使用抗原的纯化制备物或富集制备物的免疫接种不产生抗体，还可用表达抗原的细胞(例如，细胞系)免疫接种小鼠来促进免疫应答。

可用通过尾静脉或眶后取血获得的血浆和血清样品在免疫接种方案的全程中监测免疫应答。可使用具有足够效价的免疫球蛋白的小鼠来进行融合。可在处死并移出脾之前3天，利用抗原表达细胞腹膜内或静脉内对小鼠进行加强以提高分泌特异性抗体之杂交瘤的比例。

为了产生生产单克隆抗体的杂交瘤，可从经免疫接种小鼠中分离脾细胞和淋巴结细胞，并将其与合适的永生化细胞系(例如，小鼠骨髓瘤细胞系)融合。然后，可针对抗原特异性抗体的产生来筛选获得的杂交瘤。然后可通过ELISA对单个孔筛选分泌抗体的杂交瘤。使用抗原表达细胞通过免疫荧光和FACS分析，可对抗原有特异性的抗体进行鉴定。可将分泌抗体的杂交瘤重新平板接种(replate)，再次筛选，并且如果单克隆抗体仍为阳性的，则可通过有限稀释进行亚克隆。然后，可在组织培养基中体外培养稳定的亚克隆以产生抗体用于表征。

还可使用例如本领域公知的重组DNA技术与基因转染方法的组合在宿主细胞转染瘤中产生抗体(Morrison，S.(1985)Science 229：1202)。

例如，在一个实施方案中，可将目的基因(例如，抗体基因)连接到表达载体(例如，真核表达质粒)中，例如通过使用WO 87/04462、WO 89/01036和EP 338841中公开的GS基因表达系统或本领域中公知的其他表达系统来进行。可将具有所克隆抗体基因的纯化质粒引入真核宿主细胞中，例如CHO细胞、NS/0细胞、HEK293T细胞或HEK293细胞或者作为替代地其他真核细胞(例如，来自植物的细胞、真菌或酵母细胞)中。用于引入这些基因的方法可以是本领域中所述的方法，例如电穿孔、lipofectine、lipofectamine等。在将这些抗体基因引入宿主细胞后，可对表达抗体的细胞进行鉴定和选择。这些细胞代表此后可扩增其表达水平并扩大规模以生产抗体的转染瘤。可从这些培养上清液和/或细胞中分离并纯化出重组抗体。

或者，克隆的抗体基因可在其他表达系统中表达，包括原核细胞，例如微生物，例如大肠杆菌(E.coli)。此外，抗体可在转基因非人动物中产生，例如在绵羊和兔的乳汁中或在鸡蛋中产生，或者在转基因植物中产生；参见例如，Verma，R.，等(1998)J.Immunol.Meth.216：165-181；Pollock，等(1999)J.Immunol.Meth.231：147-157；以及Fischer，R，等(1999)Biol.Chem.380：825-839。

嵌合

当用毒素或放射性同位素标记时，鼠单克隆抗体可用作人的治疗性抗体。未标记的鼠抗体在人中具有高度免疫原性，在重复应用时导致治疗效果降低。通过重链恒定区介导主要的免疫原性。如果对各个抗体进行嵌合或人源化，则鼠抗体在人中的免疫原性可被降低或完全避免。嵌合抗体是不同部分来自不同动物物种的抗体，例如具有来自鼠抗体的可变区和人免疫球蛋白恒定区的那些。通过将鼠抗体重链和轻链的可变区与人重链和轻链的恒定区连接来实现抗体的嵌合(例如，如Kraus et al.，in Methods in MolecularBiology series，Recombinant antibodies for cancer therapy ISBN-0-89603-918-8所述)。在一个优选实施方案中，通过将人κ-轻链恒定区连接至鼠轻链可变区来产生嵌合抗体。在另一优选实施方案中，可通过将人λ轻链恒定区连接至鼠轻链可变区来产生嵌合抗体。用于产生嵌合抗体的优选重链恒定区为IgG1、IgG3和IgG4。用于产生嵌合抗体的另一些优选重链恒定区为IgG2、IgA、IgD和IgM。

人源化

抗体主要通过位于六个重链和轻链互补决定区(CDR)的氨基酸残基与靶抗原相互作用。由于这个原因，在各抗体之间，CDR内的氨基酸序列比CDR外的序列更多样。由于CDR序列负责大多数抗体-抗原相互作用，因此可能通过构建表达载体来表达模拟特定天然存在的抗体之特性的重组抗体，所述表达载体包含来自所述特定天然存在抗体的CDR序列，其移植到来自具有不同特性之不同抗体的框架序列上(参见，例如，Riechmann，L et al.(1998)Nature 332：323-327；Jones，P.et al.(1986)Nature 321：522-525；和Queen，C.et al.(1989)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.86：10029-10033))。这样的框架序列可获自包括种系抗体基因序列的公共DNA数据库。这些种系系序列将不同于成熟的抗体基因序列，因为它们将不包含完整组装的可变基因，其是在B细胞成熟期间通过V(D)J连接而形成的。种系基因序列还将在均匀穿过可变区的个别处不同于高亲和力第二抗体库(secondary repertoireantibody)的序列。

可使用标准结合测定(例如，ELISA、Western印迹、免疫荧光和流式细胞术分析)来确定抗体结合抗原的能力。

为了纯化抗体，选择的杂交瘤可在2升旋转烧瓶中培养以进行单克隆抗体纯化。或者，可在基于透析的生物反应器中产生抗体。可过滤上清液，并且如果必要的话，在用蛋白G-sepharose或蛋白A-sepharose进行亲和色谱之前浓缩。可通过凝胶电泳和高效液相色谱检查洗脱的IgG以确保纯度。可将缓冲溶液交换到PBS中，并且可使用1.43消光系数通过OD280确定浓度。可将单克隆抗体等分并储存在-80℃。

为了确定选定的单克隆抗体是否与独特的表位结合，可使用位点定向诱变或多位点定向诱变。

为了确定抗体的同种型，可使用多种市售试剂盒(例如，Zymed，RocheDiagnostics)进行同种型ELISA。可用抗小鼠Ig包被微量滴定板的孔。封闭之后，使所述板与单克隆抗体或纯化的同种型对照于环境温度下反应两小时。然后，可使孔与小鼠IgG1、IgG2a、IgG2b或IgG3、IgA或小鼠IgM特异性过氧化物酶缀合探针反应。在洗涤之后，将所述板用ABTS底物(1mg/ml)显影，并于OD 405至650下进行分析。或者，可使用IsoStrip小鼠单克隆抗体同种型试剂盒(Roche，货号1493027)，如制造商的描述进行。

为了示出经免疫接种小鼠血清中抗体的存在或单克隆抗体与表达抗原的活细胞的结合，可使用流式细胞术。可将天然或转染后表达抗原的细胞系和缺乏抗原表达的阴性对照(在标准生长条件下培养)与杂交瘤上清液中或含有1％FBS的PBS中之不同浓度的单克隆抗体混合，并可于4℃下孵育30分钟。在洗涤之后，APC或Alexa647标记的抗IgG抗体可在与一抗染色相同的条件下与抗原结合的单克隆抗体结合。通过流式细胞术，用FACS仪器利用光散射和侧向散射特性对单个活细胞设门来分析样品。为了在单次测量中区分抗原特异性单克隆抗体和非特异性结合物，可采用共转染方法。可如上所述对用编码抗原和荧光标志物的质粒瞬时转染的细胞进行染色。可在与抗体染色细胞不同的荧光通道中检测到经转染的细胞。由于大多数经转染的细胞同时表达这两种转基因，因此抗原特异性单克隆抗体优选与表达荧光标志物的细胞结合，而非特异性抗体以相当的比例与未转染的细胞结合。可利用使用荧光显微术的替代测定来补充或替代流式细胞术测定。可完全如上所述对细胞进行染色并通过荧光显微术进行检查。

为了示出经免疫接种小鼠血清中抗体的存在或单克隆抗体与表达抗原的活细胞的结合，可使用免疫荧光显微术分析。例如，将自发或在转染后表达抗原的细胞系和缺乏抗原表达的阴性对照于标准培养条件下在腔室载玻片(chamber slide)中在补充有10％胎牛血清(fetal calf serum，FCS)、2mM L-谷氨酰胺、100IU/ml青霉素和100μg/ml链霉素的DMEM/F12培养基中培养。然后用甲醇或多聚甲醛固定细胞或者不做处理。然后，可将细胞与针对抗原的单克隆抗体于25℃下反应30分钟。在洗涤之后，使细胞与Alexa555标记的抗小鼠IgG二抗(Molecular Probes)在相同条件下反应。然后，通过荧光显微术检查细胞。

可制备来自表达抗原之细胞的细胞提取物和适当的阴性对照，并进行十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate，SDS)聚丙烯酰胺凝胶电泳。电泳之后，分开的抗原将被转移至硝酸纤维素膜，封闭，并用待测试的单克隆抗体进行探测。可使用抗小鼠IgG过氧化物酶检测IgG结合并用ECL底物进行显影。

还可按照技术人员公知的方式，通过免疫组织化学来测试抗体与抗原的反应性，例如使用多聚甲醛或丙酮固定的冷冻切片或用多聚甲醛固定的石蜡包埋组织切片，其来自获自常规手术过程期间的患者或获自携带接种有自发表达抗原或在转染后表达抗原之细胞系的异种移植肿瘤的小鼠的非癌组织或癌组织样品。对于免疫染色，可根据供应商的说明孵育与抗原反应的抗体，然后孵育辣根过氧化物酶缀合的山羊抗小鼠或山羊抗兔抗体(DAKO)。

可测试抗体介导吞噬作用和杀伤表达CLDN18.2的细胞的能力。体外单克隆抗体活性的测试将在测试体内模型之前提供初步筛选。

抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)：

简言之，来自健康供体的多形核细胞(PMN)、NK细胞、单核细胞、单核的细胞或其他效应细胞可通过Ficoll Hypaque密度离心然后裂解污染的红细胞来纯化。可将经洗涤的效应细胞悬浮于补充有10％热灭活的胎牛血清或5％热灭活的人血清的RPMI中，并以不同的效应细胞：靶细胞的比与⁵¹Cr标记的表达CLDN18.2的靶细胞混合。或者，可用荧光增强配体(BATDA)标记靶细胞。可用荧光计测量从死细胞中释放的增强配体与铕形成的高荧光螯合物。另一种替代技术可利用用荧光素酶进行的靶细胞的转染。然后，可仅通过活细胞将添加的萤光黄氧化。然后，以不同浓度添加经纯化的抗CLDN18.2 IgG。不相关的人IgG可用作阴性对照。根据使用的效应细胞类型，测定可在37℃下进行4至20小时。可通过测量培养上清液中⁵¹Cr的释放或EuTDA螯合物的存在来测定样品的细胞溶解。或者，由萤光黄氧化产生的发光可作为活细胞的量度。

还可在多种组合中测试抗CLDN18.2单克隆抗体，以确定使用多个单克隆抗体是否增强细胞溶解。

补体依赖性细胞毒性(CDC)：

可使用多种已知的技术来测试单克隆抗CLDN18.2抗体介导CDC的能力。例如，可以以技术人员已知的方式从血液中获得补体血清。为了确定mAb的CDC活性，可使用不同的方法。例如，可测量⁵¹Cr的释放或可使用碘化丙啶(PI)排阻测定来评价提高的膜渗透性。简言之，可洗涤靶细胞，并且可在室温或37℃下将5×10⁵/ml与不同浓度的mAb孵育10至30分钟。然后可添加血清或血浆至终浓度为20％(v/v)，并将细胞在37℃下孵育20至30分钟。每个样品的所有细胞都可添加至FACS管中的PI溶液中。然后，可立即使用FACSArray通过流式细胞术分析来分析该混合物。

在一种替代测定中，可根据贴壁细胞确定CDC的诱导。在该测定的一个实施方案中，在测定之前24小时，以3×10⁴/孔的密度将细胞接种于组织培养平底微量滴定板中。第二天，移除生长培养基并将细胞与抗体一式三份地孵育。将对照细胞分别与生长培养基或含有0.2％皂苷的生长培养基一起孵育以确定背景裂解和最大裂解。在室温下孵育20分钟之后，去除上清液，并将DMEM中20％(v/v)入血浆或血清(预热至37℃)添加至细胞，并在37℃下再孵育20分钟。将来自每个样品的所有细胞添加至碘化丙啶溶液(10μg/ml)。然后，用含有2.5μg/ml溴化乙啶的PBS替换上清液，并在使用Tecan Safire在600nm处测量520nm处激发时的荧光发射。如下计算百分比特异性裂解：％特异性裂解＝(样品荧光-背景荧光)/(最大裂解荧光-背景荧光)×100。

通过单克隆抗体诱导凋亡和抑制细胞增殖：

为了测试引发凋亡的能力，例如可将单克隆抗CLDN18.2抗体与CLDN18.2阳性肿瘤细胞，例如SNU-16、DAN-G、KATO-III或CLDN18.2转染的肿瘤细胞在37℃下一起孵育约20小时。可收获细胞，在膜联蛋白-V结合缓冲液(BD biosciences)中洗涤，并与和FITC或APC缀合的膜联蛋白-V(BD biosciences)在黑暗中孵育15分钟。可将来自每个样品的所有细胞添加至FACS管中的PI溶液(10μg/ml于PBS中)，并立即通过流式细胞术进行评价(如上)。或者，可用市售试剂盒来检测单克隆抗体对细胞增殖的一般抑制。DELFIA细胞增殖试剂盒(Perkin-Elmer，货号AD0200)是基于在微孔板(microplate)中增殖细胞的DNA合成期间对5-溴-2’-脱氧尿苷(BrdU)并入的测量的非同位素免疫测定。使用铕标记的单克隆抗体来检测并入的BrdU。为了进行抗体检测，使用固定溶液固定细胞并使DNA变性。洗去未结合的抗体，并添加DELFIA诱导物以从标记的抗体中解离铕离子至溶液中，其中它们与DELFIA诱导物的组分形成强荧光螯合物。在检测中，利用时间分辨荧光术测定的荧光与每个孔的细胞中DNA的合成成比例。

临床前研究

与CLDN18.2结合的单克隆抗体也可在体内模型中(例如在携带异种移植肿瘤的免疫缺陷小鼠中，所述小鼠接种有表达CLDN18.2的细胞系，例如DAN-G、SNU-16或KATO-III，或者在转染之后，例如HEK293)测试，以确定其在控制CLDN18.2表达肿瘤细胞的生长的效力。

在将CLDN18.2表达肿瘤细胞异种移植到免疫功能低下的小鼠或其他动物中之后的体内研究可使用本文中所述的抗体进行。可将抗体施用于无肿瘤小鼠，然后注射肿瘤细胞以测量抗体阻止肿瘤形成或肿瘤相关症状的作用。可将抗体施用于荷瘤小鼠，以确定相应抗体对降低肿瘤生长、转移或肿瘤相关症状的治疗效力。抗体应用可与其他物质如免疫检查点抑制剂、细胞抑制药物、生长因子抑制剂、细胞周期阻断剂、血管生成抑制剂或其他抗体的应用组合，以确定组合的效力和潜在毒性。为了分析抗体介导的毒副作用，可用抗体或对照试剂接种动物，并彻底调查可能与CLDN18.2抗体治疗相关的症状。体内应用CLDN18.2抗体的可能副作用特别地包括对CLDN18.2表达组织(包括胃)的毒性。在人和其他物种(例如小鼠)中识别CLDN18.2的抗体对于预测由在人中应用单克隆CLDN18.2抗体介导的潜在副作用是特别有用的。

对抗体所识别的表位进行的作图可按照Glenn E.Morris的“Epitope MappingProtocols(Methods in Molecular Biology)”ISBN-089603-375-9和OlwynM.R.Westwood，Frank C.Hay的“Epitope Mapping：A Practical Approach”PracticalApproach Series中的详细描述进行。

本文中所述的化合物和药剂可以以任何合适的药物组合物的形式施用。

术语“药物组合物”涉及包含治疗上有效的药剂，优选与可药用载体、稀释剂和/或赋形剂一起的治疗上有效的药剂的制剂。通过将所述药物组合物施用于对象，所述药物组合物可用于治疗、预防或减轻疾病或病症的严重程度。药物组合物在本领域中也称为药物制剂。

药物组合物通常以均匀剂型提供，并且可以以本身已知的方式制备。药物组合物可例如是溶液或混悬液的形式。

根据本公开内容的药物组合物通常以“药学上有效的量”和“可药用制剂”应用。

术语“可药用的”是指不与药物组合物活性组分的作用相互作用的物质的无毒性。

术语“药学上有效的量”或“治疗有效的量”是指单独或与另外的剂量一起实现期望的反应或期望的效果的量。在治疗特定疾病的情况下，期望的反应优选地涉及抑制疾病的进程。这包括减缓疾病的进展，以及特别是中断或逆转疾病的进展。疾病治疗中期望的反应还可以是延迟所述疾病或所述病症的发作或者预防其发作。本文中所述的组合物的有效量将取决于：待治疗的病症，疾病的严重程度，患者的个体参数包括年龄、生理状况、大小和体重，治疗的持续时间，伴随治疗(如果有的话)的类型，具体施用途径和类似因素。因此，本文中所述的组合物的施用剂量可取决于多种这样的参数。在初始剂量下患者中的反应不充分的情况下，可使用更高剂量(或通过不同的更局部的施用途径来实现有效地更高剂量)。

本公开内容的药物组合物可包含盐、缓冲剂、防腐剂和任选地其他治疗剂。在一个实施方案中，本公开内容的药物组合物包含一种或更多种可药用载体、稀释剂和/或赋形剂。

用于本公开内容的药物组合物中的合适的防腐剂包括但不限于：苯扎氯铵、氯丁醇、对羟基苯甲酸酯和硫柳汞。

本文中使用的术语“赋形剂”是指可以存在于本公开内容的药物组合物中但不是活性成分的物质。赋形剂的一些实例包括但不限于：载体、黏合剂、稀释剂、润滑剂、增稠剂、表面活性剂、防腐剂、稳定剂、乳化剂、缓冲剂、矫味剂或着色剂。

术语“稀释剂”涉及稀释剂(diluting agent)和/或冲淡剂(thinning agent)。此外，术语“稀释剂”包括流体、液体或固体混悬剂和/或混合介质中的任何一种或更多种。合适稀释剂的实例包括乙醇、甘油和水。

术语“载体”是指可以是天然的、合成的、有机的、无机的组分，在其中将活性组分组合以促进、增强或实现药物组合物的施用。本文中使用的载体可以是适合于施用于对象的一种或更多种相容的固体或液体填充剂、稀释剂或包封物质。合适的载体包括但不限于：无菌水、林格液(Ringer)、乳酸林格液、无菌氯化钠溶液、等张盐水、聚亚烷基二醇、氢化萘以及特别是生物相容性丙交酯聚合物、丙交酯/乙交酯共聚物或聚氧乙烯/聚氧丙烯共聚物。在一个实施方案中，本公开内容的药物组合物包含等张盐水。

用于治疗用途的可药用载体或稀释剂在制药领域中是公知的，并且描述于例如Remington′s Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Co.(A.R Gennaroedit.1985)。

可根据预期的施用途径和标准药物实践来选择药用载体、赋形剂或稀释剂。

在一个实施方案中，本文中所述的药物组合物可以以静脉内、动脉内、皮下、皮内或肌内施用。在某些实施方案中，将药物组合物配制成用于局部施用或全身性施用。全身性施用可包括涉及通过胃肠道吸收的肠施用，或肠胃外施用。本文中使用的“肠胃外施用”是指以除通过胃肠道之外的任何方式施用，例如通过静脉内注射。在一个优选实施方案中，将药物组合物配制成用于全身性施用。在另一个优选实施方案中，全身性施用通过静脉内施用。组合物可直接注射到肿瘤或淋巴结中。

本文中所用的术语“共施用”意指将不同的化合物或组合物施用于同一患者的过程。例如，本文中所述的抗CLDN18.2抗体和免疫检查点抑制剂同时、基本上同时或顺序施用。如果施用是顺序进行的，则可在施用免疫检查点抑制剂之前或之后施用抗CLDN18.2抗体。如果施用是同时进行的，则抗CLDN18.2抗体和免疫检查点抑制剂不需要在同一组合物中施用。抗CLDN18.2抗体和免疫检查点抑制剂可施用一次或更多次，每种组分的施用次数可相同或不同。另外，抗CLDN18.2抗体和免疫检查点抑制剂不需要在同一部位施用。

可将本文中所述的试剂和组合物例如在体内施用于患者，以治疗或预防多种疾病，例如本文中所述的那些。优选的患者包括患有可通过施用本文中所述的试剂和组合物来纠正或改善的疾病的人患者。这包括涉及特征在于CLDN18.2表达的细胞的疾病。

例如，在一个实施方案中，本文中所述的药剂可用于治疗患有癌症疾病的患者，所述癌症疾病例如本文中所述的癌症疾病，其特征在于存在表达CLDN18.2的癌细胞。

根据本发明所述的药物组合物和治疗方法也可用于免疫接种或疫苗接种以预防本文中所述的疾病。

如本文中所用，“指导材料”或“说明”包括出版物、录音、图表或可用于传达本发明的组合物和方法的有用性的任何其他表达媒介。本发明试剂盒的说明材料可例如固定在含有本发明组合物的容器上或与含有组合物的容器一起运输。或者，指导材料可与容器分开运输，目的是指导材料和组合物由接受者协作使用。

通过以下实施例进一步说明本发明，所述实施例不应被解释为限制本发明的范围。

实施例

实施例1：抗CLDN18.2抗体与免疫检查点抑制剂的组合的体内效力研究

为了确定抗CLDN18.2抗体与免疫检查点抑制剂的组合相对于单独的单一药剂在体内是否提供改善的抗肿瘤活性，在使用用鼠CLDN18.2进行慢病毒转导的CLS-103细胞(CLS-103 LVT-murinCLDN18.2)的免疫活性远交系Crl：NMRI(Han)小鼠中的皮下移植同基因胃癌模型中检查了IMAB362与抗mPD-1抗体组合的抗肿瘤活性。利妥昔单抗用作IMAB362的同种型对照。

测试抗体

●抗CLDN18.2抗体：IMAB362(Astellas Pharma Inc.)

●对照抗体：利妥昔单抗BS静脉内输注[KHK]500mg(Kyowa Hakko Kirin Co.，Ltd.，Cat# 22900AMX00971000)

●抗mPD-1抗体：InVivoMAb抗小鼠PD-1，克隆RMP1-14(BioXCell，Cat#BE0146)

●同种型对照抗体：InVivoMAb大鼠IgG2a同种型对照，抗三硝基苯酚，克隆2A3(BioXCell，Cat#BE0089)

CLS-103 LVT-murinCLDN18.2胃癌小鼠模型

将慢病毒转导小鼠CLDN18.2表达肿瘤细胞(CLS-103 LVT-murinCLDN18.2)以2×10⁶个细胞/小鼠皮下移植到雌性Crl：NMRI(Han)小鼠(10周龄)的右胁侧。根据移植之后2天测量的肿瘤体积将小鼠随机分为4组(n＝12只/组)。将随机分组当天定义为第0天。IMAB362或对照抗体利妥昔单抗以800μg/小鼠施用。抗mPD-1抗体或同种型对照抗体以100μg/小鼠施用。从第0天开始每周两次通过腹膜内注射施用所有抗体。每周测量肿瘤两次。将研究终点定义为第14天。肿瘤体积由长×宽×宽×0.5确定。使用下述等式计算每组的肿瘤生长抑制(tumor growth inhibition，TGI[％])。

TGI[％]＝100×(1-各组平均肿瘤体积提高^※÷对照组平均肿瘤体积提高^※)

^※：肿瘤体积提高[mm³]＝每组最后一次测量的平均肿瘤体积-随机分组时的平均肿瘤体积

#、##：p＜0.05，p＜0.01，与每个单一药剂组相比(Student t检验)。

从图1中可看出，在小鼠CLS-103 LVT-murinCLDN18.2肿瘤研究中，IMAB362与抗mPD-1抗体的组合处理对肿瘤生长的抑制程度比其单一药剂对照大得多。在第14天，用800μg的IMAB362或100μg的抗mPD-1抗体的处理分别产生50％或60％TGI，而包含800μg的IMAB362+100μg的抗mPD-1抗体的组合处理产生91％TGI。在第14天，与每个单一药剂组相比，联合组的平均肿瘤体积显著更小(Student t检验)。对于所有处理组，示出了每组12只小鼠中每只的单个CLS-103 LVT-murinCLDN18.2肿瘤体积(图2)。对所有经处理小鼠的单个肿瘤生长的蜘蛛图分析显示，在用IMAB362与抗mPD-1抗体的组合处理的小鼠中，肿瘤生长显著延迟和/或受到抑制。

实施例2：抗CLDN18.2抗体与免疫检查点抑制剂的组合的体内长期效力研究

为了确定抗CLDN18.2抗体与免疫检查点抑制剂的组合相对于单独的单一药剂长期在体内是否提供改善的抗肿瘤活性，在使用用鼠CLDN18.2进行慢病毒转导的CLS-103细胞(CLS-103 LVT-murinCLDN18.2)的免疫活性远交系Crl：NMRI(Han)小鼠中的皮下移植同基因胃癌模型中，在长至第28天内检查了IMAB362与抗mPD-1抗体组合的抗肿瘤活性。利妥昔单抗用作IMAB362的同种型对照。

测试抗体

●抗CLDN18.2抗体：IMAB362(Astellas Pharma Inc.)

●对照抗体：利妥昔单抗BS静脉内输注[KHK]500mg(Kyowa Hakko Kirin Co.，Ltd.，Cat# 22900AMX00971000)

●抗mPD-1抗体：InVivoMAb抗小鼠PD-1，克隆RMP1-14(BioXCell，Cat#BE0146)

●同种型对照抗体：InVivoMAb大鼠IgG2a同种型对照，抗三硝基苯酚，克隆2A3(BioXCell，Cat#BE0089)

CLS-103 LVT-murinCLDN18.2胃癌小鼠模型

将慢病毒转导小鼠CLDN18.2表达肿瘤细胞(CLS-103LVT-murinCLDN18.2)以2×10⁶个细胞/小鼠皮下移植到雌性Crl：NMRI(Han)小鼠(11周龄)的右胁侧。根据移植之后2天测量的肿瘤体积将小鼠随机分为4组(n＝12只/组)。将随机分组当天定义为第0天。IMAB362或对照抗体利妥昔单抗以800μg/小鼠施用。抗mPD-1抗体或同种型对照抗体以100μg/小鼠施用。从第0天开始每周两次通过腹膜内注射施用所有抗体。每周测量肿瘤两次。将研究终点定义为第28天。肿瘤体积由长×宽×宽×0.5确定。计算平均肿瘤体积直至第21天，因为利妥昔单抗/同种型处理组中以及抗mPD-1抗体单药剂组中的12只小鼠中各有1只因肿瘤尺寸超过2000mm³被处死。每组的肿瘤生长抑制(TGI[％])是基于直至第21天获得的测量值使用下述等式计算的。直至第28天确定完全消退(complete regression，CR)，因为个体的肿瘤体积消退为零。

TGI[％]＝100×(1-各组平均肿瘤体积提高#÷对照组平均肿瘤体积提高#)

#：平均肿瘤体积提高[mm³]＝每组第21天测量的平均肿瘤体积-随机分组时(第0天)的平均肿瘤体积

p＜0.05，p＜0.01，与每个单一药剂组相比(Student t检验)。

结果

在这项小鼠CLS-103 LVT-murinCLDN18.2肿瘤研究中，IMAB362与抗mPD-1抗体的组合以协同方式改善了长期抗肿瘤作用，其是由直至第28天CR数确定的。如图3所示，示出了所有经处理组的每组12只小鼠的每一个的单个肿瘤生长和CR小鼠的数量。在第28天，用800μg IMAB362或100μg抗mPD-1抗体的处理分别在12只小鼠的组中导致2或1例CR，而包含800μg的IMAB362+100μg的抗mPD-1抗体在12只小鼠的组中导致6例CR。我们的结果显示出与单一药剂组相比，在以协同方式的IMAB362和抗mPD-1抗体的组合的处理组中，具有CR的小鼠数量提高。如图4所示，在第21天，用800μg的IMAB362或100μg的抗mPD-1抗体的处理分别产生40％TGI或无肿瘤生长抑制，而包含800μg的IMAB362+100μg的抗mPD-1抗体的组合处理产生87％TGI。组合组的平均肿瘤体积与每个单一药剂组相比显著更小，并且表明IMAB362和抗mPD-1抗体以协同方式发挥作用。

实施例3：抗CLDN18.2抗体与免疫检查点抑制剂的组合的体内效力研究

为了确定抗CLDN18.2抗体与免疫检查点抑制剂的组合相对于单独的单一药剂在体内是否改善抗肿瘤活性，在使用用鼠CLDN18.2进行慢病毒转导的CLS-103细胞(CLS-103LVT-murinCLDN18.2)的免疫活性远交系Crl：NMRI(Han)小鼠中的皮下移植同基因胃癌模型中检查了IMAB362与抗mCTLA-4抗体组合的抗肿瘤活性。利妥昔单抗用作IMAB362的同种型对照。

测试抗体

●抗CLDN18.2抗体：IMAB362(Astellas Pharma Inc.)

●对照抗体：利妥昔单抗BS静脉内输注[KHK]500mg(Kyowa Kirin Co.，Ltd.，Cat#22900AMX00971000)

●抗mCTLA-4抗体：InVivoMAb抗小鼠CTLA-4，克隆9D9(BioXCell，Cat#BE0164)

●同种型对照抗体：InVivoMAb大鼠IgG2b同种型对照，未知特异性，克隆MPC-11(BioXCell，Cat#BE0086)

CLS-103 LVT-murinCLDN18.2胃癌小鼠模型

将慢病毒转导小鼠CLDN18.2表达肿瘤细胞(CLS-103LVT-murinCLDN18.2)以2×10⁶个细胞/小鼠皮下移植到雌性Crl：NMRI(Han)小鼠(11周龄)的右胁侧。根据移植之后2天测量的肿瘤体积将小鼠随机分为4组(n＝12只/组)。将随机分组当天定义为第0天。IMAB362或对照抗体利妥昔单抗以800μg/小鼠施用。抗mCTLA-4抗体或同种型对照抗体以300μg/小鼠施用。从第0天开始每周两次通过腹膜内注射施用所有抗体。每周测量肿瘤两次。将研究终点定义为第14天。肿瘤体积由长×宽×宽×0.5确定。使用下述等式计算每组的肿瘤生长抑制(TGI[％])或肿瘤消退率(tumor regression rate，TRR[％])

TGI[％]＝100×(1-各组平均肿瘤体积提高#÷对照组平均肿瘤体积提高#)

#：平均肿瘤体积提高[mm³]＝每组第14天测量的平均肿瘤体积-随机分组时(第0天)的平均肿瘤体积

TRR[％]＝100×(1-各组第14天测量的平均肿瘤体积÷各组随机分组时的平均肿瘤体积)

*：p＜0.05，与每个单一药剂组相比(Student t检验)。

结果

从图5中可看出，在小鼠CLS-103 LVT-murinCLDN18.2肿瘤研究中，IMAB362与抗mCTLA-4抗体的组合处理比其单一药剂组更大程度地抑制了肿瘤生长。在第14天，用800μg的IMAB362或300μg的抗mCTLA-4抗体的处理分别产生72％或87％TGI，而包含800μg的IMAB362+300μg的抗mCTLA-4抗体的组合处理不仅抑制肿瘤，而且还使肿瘤消退至3％TRR。对于所有经处理组，示出了每组12只小鼠中每只的单个CLS-103LVT-murinCLDN18.2肿瘤体积(图6)。在用IMAB362与抗mCTLA-4抗体的组合处理的小鼠中，所有经处理小鼠的单个肿瘤生长都显示出肿瘤生长的抑制或甚至消退。

实施例4：抗CLDN18.2抗体与免疫检查点抑制剂的组合的体内效力研究

为了确定抗CLDN18.2抗体与免疫检查点抑制剂的组合相对于单独的单一药剂在体内是否改善抗肿瘤活性，在使用用鼠CLDN18.2进行慢病毒转导的CLS-103细胞(CLS-103LVT-murinCLDN18.2)的免疫活性远交系Crl：NMRI(Han)小鼠中的皮下移植同基因胃癌模型中检查了IMAB362与抗mPD-L1抗体组合的抗肿瘤活性。利妥昔单抗用作IMAB362的同种型对照。

测试抗体

●抗CLDN18.2抗体：IMAB362(Astellas Pharma Inc.)

●对照抗体：利妥昔单抗BS静脉内输注[KHK]500mg(Kyowa Kirin Co.，Ltd.，Cat#22900AMX00971000)

●抗mPD-L1抗体：InVivoMAb抗小鼠PD-L1，克隆10F.9G2(BioXCell，Cat#BE0101)

●同种型对照抗体：InVivoMAb大鼠IgG2b同种型对照，抗钥孔血蓝蛋白，克隆LTF-2(BioXCell，Cat#BE0090)

CLS-103 LVT-murinCLDN18.2胃癌小鼠模型

将慢病毒转导小鼠CLDN18.2表达肿瘤细胞(CLS-103 LVT-murinCLDN18.2)以2×10⁶个细胞/小鼠皮下移植到雌性Crl：NMRI(Han)小鼠(11周龄)的右胁侧。根据移植之后2天测量的肿瘤体积将小鼠随机分为4组(n＝12只/组)。利妥昔单抗/同种型对照组由来自12只小鼠中的11只小鼠的数据组成，因为第11天发生1例死亡。将随机分组当天定义为第0天。IMAB362或对照抗体利妥昔单抗以800μg/小鼠施用。抗mPD-L1抗体或同种型对照抗体以300μg/小鼠施用。从第0天开始每周两次通过腹膜内注射施用所有抗体。每周测量肿瘤两次。将研究终点定义为第14天。肿瘤体积由长×宽×宽×0.5确定。使用下述等式计算每组的肿瘤生长抑制(TGI[％])或肿瘤消退率(TRR[％])

TGI[％]＝100×(1-各组平均肿瘤体积提高#÷对照组平均肿瘤体积提高#)

#：平均肿瘤体积提高[mm³]＝每组第14天测量的平均肿瘤体积-随机分组时(第0天)的平均肿瘤体积

TRR[％]＝100×(1-各组第14天测量的平均肿瘤体积÷各组随机分组时的平均肿瘤体积)

*，**：p＜0.05，p＜0.01，与每个单一药剂组相比(Student t检验)。

结果

在图7中，在小鼠CLS-103 LVT-murinCLDN18.2肿瘤研究中，IMAB362与抗mPD-L1抗体的组合处理对肿瘤生长的抑制程度比其单一药剂组大得多。在第14天，用800μg的IMAB362或300μg的抗mPD-L1抗体的处理分别产生60％或62％TGI，而包含800μg的IMAB362+300μg的抗mPD-L1抗体的组合处理不仅抑制肿瘤，而且还使肿瘤消退至13％TRR。在第14天，组合组的平均肿瘤体积与每个单一药剂组相比显著降低，并且表明IMAB362和抗mPD-L1抗体以协同方式发挥作用。对于所有处理组，示出了每组每只小鼠的单个CLS-103 LVT-murinCLDN18.2肿瘤体积(图8)。在用IMAB362与抗mPD-L1抗体的组合处理的小鼠中，所有经处理小鼠的单个肿瘤生长都显示出以协同方式的对肿瘤生长的抑制或甚至消退。

Claims (31)

1.用于在患者中治疗或预防癌症的方法，其包括向所述患者施用抗CLDN18.2抗体和免疫检查点抑制剂。

2.用于在患有癌症的患者中抑制肿瘤生长的方法，其包括向所述患者施用抗CLDN18.2抗体和免疫检查点抑制剂。

3.用于在患有癌症的患者中诱导针对癌细胞的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)的方法，其包括向所述患者施用抗CLDN18.2抗体和免疫检查点抑制剂。

4.权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述免疫检查点抑制剂选自PD-1抑制剂和PD-L1抑制剂。

5.权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述免疫检查点抑制剂选自抗PD-1抗体和抗PD-L1抗体。

6.权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述免疫检查点抑制剂是抗PD-1抗体。

7.权利要求6所述的方法，其中所述抗PD-1抗体是纳武单抗(OPDIVO；BMS-936558)、派姆单抗(KEYTRUDA；MK-3475)、皮地利珠单抗(CT-011)、西米普利单抗(LIBTAYO、REGN2810)、斯巴达珠单抗(PDR001)、MEDI0680(AMP-514)、多塔利单抗(TSR-042)、西利单抗(JNJ63723283)、特瑞普利单抗(JS001)、AMP-224(GSK-2661380)、PF-06801591、替雷利珠单抗(BGB-A317)、ABBV-181、BI 754091或SHR-1210。

8.权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述免疫检查点抑制剂是抗PD-L1抗体。

9.权利要求8所述的方法，其中所述抗PD-L1抗体是阿特珠单抗(TECENTRIQ；RG7446；MPDL3280A；R05541267)、度伐单抗(MEDI4736)、BMS-936559、阿维单抗(bavencio)、洛达利单抗(LY3300054)、CX-072(Proclaim-CX-072)、FAZ053、KN035或MDX-1105。

10.权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述免疫检查点抑制剂是CTLA-4抑制剂。

11.权利要求1至3和10中任一项所述的方法，其中所述免疫检查点抑制剂是抗CTLA-4抗体。

12.权利要求11所述的方法，其中所述抗CTLA-4抗体是伊匹单抗(Yervoy；BristolMyers Squibb)、替西木单抗(Pfizer/Medlmmune)、trevilizumab、AGEN-1884(Agenus)或ATOR-1015。

13.权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述抗CLDN18.2抗体与CLDN18.2的第一胞外环结合。

14.权利要求1至13中任一项所述的方法，其中所述抗CLDN18.2抗体通过补体依赖性细胞毒性(CDC)介导的裂解、抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)介导的裂解、诱导细胞凋亡和抑制增殖中的一种或更多种来介导细胞杀伤。

15.权利要求1至14中任一项所述的方法，其中所述抗CLDN18.2抗体是选自以下的抗体：

(i)由以保藏号DSM ACC2737、DSM ACC2738、DSM ACC2739、DSM ACC2740、DSM ACC2741、DSM ACC2742、DSM ACC2743、DSM ACC2745、DSM ACC2746、DSM ACC2747、DSM ACC2748、DSMACC2808、DSM ACC2809或DSM ACC2810保藏的克隆产生和/或可从其获得的抗体，

(ii)作为(i)中所述抗体的嵌合或人源化形式的抗体，

(iii)具有(i)中所述抗体的特异性的抗体，和

(iv)包含(i)中所述抗体的抗原结合部分或抗原结合位点，特别是可变区，并且优选具有(i)中所述抗体的特异性的抗体。

16.权利要求1至15中任一项所述的方法，其中所述抗CLDN18.2抗体包含含有SEQ IDNO：17所示序列的第45至52位的序列的重链可变区CDR1、含有SEQ ID NO：17所示序列的第70至77位的序列的重链可变区CDR2、含有SEQ ID NO：17所示序列的第116至126位的序列的重链可变区CDR3、含有SEQ ID NO：24所示序列的第47至58位的序列的轻链可变区CDR1、含有SEQ ID NO：24所示序列的第76至78位的序列的轻链可变区CDR2和含有SEQ ID NO：24所示序列的第115至123位的序列的轻链可变区CDR3。

17.权利要求1至16中任一项所述的方法，其中所述抗CLDN18.2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：32所示序列或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段。

18.权利要求1至17中任一项所述的方法，其中所述抗CLDN18.2抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：39所示序列或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段。

19.权利要求1至18中任一项所述的方法，其中所述抗CLDN18.2抗体包含重链恒定区，所述重链恒定区包含SEQ ID NO：13或52所示序列或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段。

20.权利要求1至19中任一项所述的方法，其中所述抗CLDN18.2抗体包含重链，所述重链包含SEQ ID NO：17或51所示序列或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段。

21.权利要求1至20中任一项所述的方法，其中所述抗CLDN18.2抗体包含轻链，所述轻链包含SEQ ID NO：24所示序列或其功能性变体，或者氨基酸序列或功能性变体的片段。

22.权利要求1至21中任一项所述的方法，其中所述方法包括以最高1000mg/m²的剂量施用所述抗CLDN18.2抗体。

23.权利要求1至22中任一项所述的方法，其中所述方法包括以300至600mg/m²的剂量重复施用所述抗CLDN18.2抗体。

24.权利要求1至23中任一项所述的方法，其中所述癌症是CLDN18.2阳性的。

25.权利要求1至24中任一项所述的方法，其中所述癌症是腺癌，特别是晚期腺癌。

26.权利要求1至25中任一项所述的方法，其中所述癌症选自胃癌、食管癌，特别是下食管癌、食管胃交界癌和胃食管癌。

27.权利要求1至26中任一项所述的方法，其中CLDN18.2具有根据SEQ ID NO：1的氨基酸序列。

28.药物制剂，其包含抗CLDN18.2抗体和免疫检查点抑制剂。

29.权利要求28所述的药物制剂，其是包含含有所述抗CLDN18.2抗体的第一容器和含有所述免疫检查点抑制剂的第二容器的药盒。

30.权利要求28或29所述的药物制剂，其还包含所述制剂用于治疗癌症的用途的印刷说明。

31.权利要求28所述的药物制剂，其是包含所述抗CLDN18.2抗体和所述免疫检查点抑制剂的组合物。

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