TW202333785A - Ｃｌａｕｄｉｎ１８．２拮抗劑和ｐｄ－１／ｐｄ－ｌ１軸抑制劑的組合療法 - Google Patents

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Abstract

本發明在本文中提供用於個體之CLDN 18.2拮抗劑及PD-1/PD-L1軸抑制劑之組合療法，該個體在自該個體獲得之疾病組織(例如，腫瘤組織)中具有CLDN 18.2表現且具有低PD-L1表現或無PD-L1表現。

Description

Claudin　18.2拮抗劑和PD-1/PD-L1軸抑制劑的組合療法
本發明總體上係關於用於Claudin 18.2(CLDN18.2)相關疾病之涉及CLDN18.2拮抗劑及PD-1/PD-L1軸抑制劑之組合療法。
Claudin-18(CLDN18)分子剪接變異體2(CLDN18A2或CLDN18.2：NM_001002026，NP_001002026)係分子量為大約27.72 kD之整合跨膜蛋白。對於健康細胞，CLDN18.2只在胃細胞上表現。最重要地，CLDN18.2表現僅限於胃上皮之分化之短壽命細胞，但不存在於胃幹細胞區。使用靈敏RT-PCR，在任何其他正常人類器官中均偵測不到CLDN18.2。CLDN18.2在包括胃、食管、胰臟及肺部腫瘤以及人類癌症細胞株之若干種癌症類型中高度表現(參見 Matsuda Y, Semba S, Ueda J等人, 胃癌侵襲前沿之胃腸 claudin 表現( Gastric and intestinal claudin expression at the invasive front of gastric carcinoma) [J].《癌症科學(Cancer science)》 , 2007, 98(7):1014-1019)。
表現CLDN18.2之癌症可藉由靶向CLDN18.2之抗體及免疫檢查點抑制劑(如PD-1/PD-L1軸抑制劑)之組合療法來治療，例如在WO 2021/025177中所揭示，該文獻之揭示內容以全文引用之方式併入。然而，此類組合療法在實現令人滿意之治療療效之臨床試驗中仍面臨挑戰。
因此，針對表現CLDN18.2之癌症之增強組合療法在臨床上有巨大需求。
在整個本發明中，本文使用之冠詞「一個(a)」、「一種(an)」及「該(the)」係指冠詞之語法賓語中之一個或多於一個(亦即，至少一個)。舉例而言，「抗體」意謂一種抗體或多於一種抗體。
除其他外，本發明提供一種治療有需要之個體之CLDN18.2相關疾病或病狀之方法，該方法包括： 向該個體投與治療有效量之CLDN18.2拮抗劑與治療有效量之PD-1/PD-L1軸抑制劑之組合， 其中該個體經確定為在病變組織中具有CLDN18.2表現。
在某些實施例中，該方法進一步包括向該個體投與治療有效量之化學治療劑。
在某些實施例中，該病變組織中之該CLDN18.2表現高於健康或非癌性胃細胞或胃組織中之表現或與其相當。
在某些實施例中，該病變組織中之該CLDN18.2表現低於健康或非癌性胃細胞或胃組織中之表現，但高於除胃以外之健康或非癌性組織或器官中之表現。
在某些實施例中，該病變組織中之該CLDN18.2表現與除胃以外之健康或非癌性組織或器官中之表現相當，且能夠被抗CLDN18.2診斷抗體偵測到。
在某些實施例中，CLDN18.2之表現在細胞表面上或係膜結合的。
在某些實施例中，該個體經確定為在該病變組織中具有PD-L1表現。
在某些實施例中，該個體經確定為在該病變組織中具有低PD-L1表現或無PD-L1表現。
在某些實施例中，該病變組織中之該PD-L1表現低於參考水準。
在某些實施例中，該病變組織中之不超過20%之細胞對PD-L1表現呈陽性。
在某些實施例中，病變組織中之該細胞包括該病變組織中之疾病細胞及免疫細胞。
在某些實施例中，該病變組織中之該PD-L1表現與健康組織或非癌性組織中之表現相當。
在某些實施例中，該病變組織中之該PD-L1表現較低或不能被抗PD-L1診斷抗體偵測到。
在另一態樣中，本發明亦提供一種使有需要之個體之疾病或病狀對用PD-1/PD-L1軸抑制劑進行之治療敏感之方法，其中該個體經確定為在病變組織中具有低PD-L1表現或無PD-L1表現，該方法包括： a)確定自該個體獲得之該病變組織中CLDN18.2之存在或表現量；以及 b)當在步驟a)中確定該CLDN18.2之存在或當該CLDN18.2之表現量達到步驟a)中之臨限值水準時，向該個體投與治療有效量之CLDN18.2拮抗劑，視情況與治療有效量之PD-1/PD-L1軸抑制劑進行組合， 由此使該疾病或病狀對用PD-1/PD-L1軸抑制劑進行之治療敏感。
在某些實施例中，該步驟b)進一步包括該向個體投與化學治療劑。
在某些實施例中，CLDN18.2之表現在細胞表面上或係膜結合的。
在某些實施例中，該病變組織中之該PD-L1表現低於參考水準。
在某些實施例中，該病變組織中之不超過20%之細胞對PD-L1表現呈陽性。
在某些實施例中，病變組織中之該細胞包括該病變組織中之疾病細胞及免疫細胞。
在某些實施例中，該病變組織中之該PD-L1表現與健康組織或非癌性組織中之表現相當。
在某些實施例中，該病變組織中之該PD-L1表現較低或不能被抗PD-L1診斷抗體偵測到。
在另一態樣中，本發明亦提供一種用於提高個體之腫瘤對用PD-1/PD-L1軸抑制劑進行之治療之反應性之方法，其中該個體經確定為患有對用PD-1/PD-L1軸抑制劑進行之治療具有抗性或難治性之腫瘤，該方法包括： a)確定自該個體獲得之腫瘤樣品中CLDN18.2之存在或表現量；以及 b)當在步驟a)中確定該CLDN18.2之存在或當該CLDN18.2之表現量達到步驟a)中之臨限值水準時，向該個體投與治療有效量之CLDN18.2拮抗劑，以及視情況與治療有效量之PD-1/PD-L1軸抑制劑進行組合， 由此提高該個體之該腫瘤對用PD-1/PD-L1軸抑制劑進行之該治療之反應性。
在某些實施例中，該步驟b)進一步包括該向個體投與化學治療劑。
在某些實施例中，CLDN18.2之表現在細胞表面上或係膜結合的。
在某些實施例中，腫瘤組織中之PD-L1表現低於參考水準。
在某些實施例中，腫瘤組織中之不超過20%之細胞對PD-L1表現呈陽性。
在某些實施例中，該腫瘤組織中之該細胞包括該腫瘤組織中之癌細胞及免疫細胞。
在某些實施例中，腫瘤組織中之該PD-L1表現與健康組織或非癌性組織中之表現相當。
在某些實施例中，腫瘤組織中之該PD-L1表現較低或不能被抗PD-L1診斷抗體偵測到。
在另一態樣中，本發明亦提供一種用於確定具有低PD-L1表現量或無PD-L1表現量之個體對用CLDN18.2拮抗劑，視情況與PD-1/PD-L1軸抑制劑予以組合進行之治療之資格或反應可能性之方法，該方法包括： a)在允許偵測CLDN18.2表現之條件下，使自該個體獲得之樣品與CLDN18.2診斷劑接觸； b)確定該樣品中CLDN18.2之存在或表現量； 其中當該樣品具有CLDN18.2在該樣品中之陽性表現時，該個體經確定為有資格或可能對用CLDN18.2拮抗劑，視情況與PD-1/PD-L1軸抑制劑予以組合進行之治療做出反應，或 其中當該樣品上之該CLDN18.2之表現未被偵測到時，該個體經確定為沒有資格或不可能對用CLDN18.2拮抗劑，視情況與PD-1/PD-L1軸抑制劑予以組合進行之治療做出反應。
在某些實施例中，該CLDN18.2診斷劑為抗CLDN18.2診斷抗體。
在某些實施例中，該CLDN18.2拮抗劑包括抗CLDN18.2抗體，如單株抗CLDN18.2抗體、靶向CLDN18.2及第二抗原(例如，CD3、4-1BB、TGFβ、SIRPα及IL15)之雙特異性抗體，或表現嵌合抗原受體(CAR)之免疫細胞或包括抗CLDN18.2抗原結合結構域之經基因修飾之TCR。 在某些實施例中，該抗CLDN18.2抗體包括重鏈HCDR1、HCDR2及HCDR3序列及/或輕鏈LCDR1、LCDR2及LCDR3序列，其中： 該HCDR1序列包括 GYNMN(SEQ ID NO: 1)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該HCDR2序列包括 NIDPYYGGTSYNQKFKG(SEQ ID NO: 2)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該HCDR3序列包括 MYHGNAFDY(SEQ ID NO: 3)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該LCDR1序列包括 KSSQSLLNSGNLKNYLT(SEQ ID NO: 4)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該LCDR2序列包括 WASTRKS(SEQ ID NO: 5)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該LCDR3序列包括 QNDYSYPLT(SEQ ID NO: 6)或其序列同一性為至少80%之同源序列。
在某些實施例中，該抗CLDN18.2抗體包括重鏈可變區及輕鏈可變區，其中 該重鏈可變區包括SEQ ID NO: 7之胺基酸序列，且該輕鏈可變區包括SEQ ID NO: 8之胺基酸序列。
在某些實施例中，該抗CLDN18.2抗體進一步包括免疫球蛋白恆定區，視情況人Ig之恆定區，或視情況人IgG之恆定區。
在某些實施例中，該抗CLDN18.2抗體進一步包括人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4之恆定區。
在某些實施例中，該人IgG1之恆定區包括SEQ ID NO: 9或其具有至少80%序列同一性之同源序列。
在某些實施例中，該恆定區包括一或多個胺基酸殘基取代或修飾，相對於野生型恆定區，該一或多個胺基酸殘基取代或修飾賦予增加之CDC或ADCC。
在某些實施例中，該恆定區包括相對於SEQ ID NO: 9之一或多個胺基酸殘基取代，該一或多個胺基酸殘基取代選自由以下組成之群：L235V、F243L、R292P、Y300L、P396L或其任何組合。
在某些實施例中，該恆定區包括SEQ ID NO: 11之序列。
在某些實施例中，該恆定區進一步包括SEQ ID NO: 10之序列。
在某些實施例中，該抗CLDN18.2抗體係人源化的。
在某些實施例中，該抗CLDN18.2抗體包括重鏈可變區及輕鏈可變區，其中 該重鏈可變區包括選自由SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 13及SEQ ID NO: 14組成之群的胺基酸序列，且 該輕鏈可變區包括選自由SEQ ID NO: 15及SEQ ID NO: 16組成之群的胺基酸序列。
在某些實施例中，該抗CLDN18.2抗體包括重鏈及輕鏈，其中 該重鏈包括SEQ ID NO: 39之胺基酸序列，且 該輕鏈包括SEQ ID NO: 40之胺基酸序列。
在某些實施例中，該抗CLDN18.2抗體能夠誘導PD-L1在該個體之該病變組織中之表現。 在某些實施例中，該抗CLDN18.2抗體與一或多個結合物部分連接。
在某些實施例中，該結合物部分包括清除改性劑、化學治療劑、毒素、放射性同位素、鑭系元素、發光標記、螢光標記、酶受質標記、DNA烷化劑、拓樸異構酶抑制劑、微管蛋白結合劑、細胞因子(例如，IL-15、IL-2、IL-7)或其他抗癌藥物。
在某些實施例中，該PD-1/PD-L1軸抑制劑包括選自由抗體、小分子及其組合組成之群的PD-1抑制劑。
在某些實施例中，該PD-1抑制劑包括選自由以下組成之群的抗PD-1抗體：納武單抗(Nivolumab，OPDIVO；BMS-936558)、多塔利單抗(Dostarlimab，TSR-042)、派姆單抗(Pembrolizumab，KEYTRUDA；MK-3475)、MEDI0680(AMP-514)、MEDI4736、BI 754091、匹地利珠單抗(Pidilizumab，CT-011)、西米普利單抗(Cemiplimab，LIBTAYO，REGN2810)、斯巴達珠單抗(Spartalizumab，PDR001)、西利單抗(Cetrelimab，JNJ 63723283)、特瑞普利單抗(Toripalimab，JS001)、PF-06801591、替雷利珠單抗(Tislelizumab，BGB-A317)、AMP-224(GSK-2661380)、ABBV-181、蘭博利珠單抗(Lambrolizumab)、卡瑞利珠單抗(Camrelizumab，SHR-1210)、信迪利單抗(Sintilimab，Tyvyt，IBI308)、派安普利單抗(Penpulimab，AK105)、賽帕利單抗(Zimberelimab)、瑞弗利單抗(Retifanlimab)、斯魯利單抗(Serplulimab)、巴替利單抗(Balstilimab)、傑諾單抗(Geptanolimab)、普格單抗(Prolgolimab)、衣唑單抗(Ezabenlimab)、薩善利單抗(Sasanlimab)、皮維單抗(Pimivalimab)、布格利單抗(Budigalimab)、諾發利單抗(Nofazinlimab)、信得利珠單抗(Sindelizumab)、MGA404、Sym021、BAT1306、HX008。
在某些實施例中，該PD-1/PD-L1軸抑制劑包括選自由抗體、小分子及其組合組成之群的PD-L1抑制劑。
在某些實施例中，該PD-L1抑制劑包括選自由以下組成之群的抗PD-L1抗體：阿替利珠單抗(Atezolizumab，TECENTRIQ；R05541267；MPDL3280A；RG7446)、BMS-936559、阿維單抗(Avelumab，bavencio)、洛達利單抗(lodapolimab，LY3300054)、德瓦魯單抗(Durvalumab，MEDI4736)、CX-072(Proclaim-CX-072)、FAZ053、恩沃利單抗(Envafolimab，KN035)、MDX-1105、STI-1040、CS1001、阿得貝利單抗(Adebrelimab，SHR-1316)、SHR-1701、TOB2450、Bintrafusp、LP002、STI-3031、柯希利單抗(Cosibelimab)、帕克米利單抗(Pacmilimab)、NM01、LDP、AMP-224、格瑞利單抗(Garivulimab，BGB-A333)、A167、SCD-135、歐普可利單抗(Opucolimab)、GR1405。
在某些實施例中，該PD-L1抑制劑包括靶向PD-L1及另一個檢查點分子兩者之雙特異性抗體，該檢查點分子選自由以下組成之群：PD-1、PD-L1、PD-L2、CLTA-4、SIRP、TIM-3、LAG3、A2AR、CD160、2B4、TGFβ、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1、OX40、CD2、CD27、CD28、CD30、CD40、CD122、ICAM-1、IDO、NKG2C、SLAMF7、SIGLEC7、NKp80、CD160、B7-H3、LFA-1、1COS、4-1BB、GITR、BAFFR、HVEM、CD7、LIGHT、IL-2、IL-15、CD3、CD16或CD83。
在某些實施例中，該檢查點分子為TGFβ、4-1BB、CTLA4、LAG3或TIGIT。
在某些實施例中，該抗PD-L1抑制劑包含抗PD-L1抗體，該抗PD-L1抗體包括重鏈HCDR1、HCDR2及HCDR3及/或輕鏈LCDR1、LCDR2及LCDR3序列，其中： 該HCDR1序列包括DYYMN(SEQ ID NO: 22)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該HCDR2序列包括DINPNNAETLYNHKFKG(SEQ ID NO: 23)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該HCDR3序列包括WGDGPFAY(SEQ ID NO: 24)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該LCDR1序列包括KASQNVGAAVA(SEQ ID NO: 25)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該LCDR2序列包括SVSDRYT(SEQ ID NO: 26)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該LCDR3序列包括QQYSNYPT(SEQ ID NO: 27)或其序列同一性為至少80%之同源序列。
在某些實施例中，該PD-L1抑制劑包括包含重鏈可變區及輕鏈可變區之抗PD-L1抗體，其中 該重鏈可變區包括SEQ ID NO: 17之胺基酸序列，且 該輕鏈可變區包括SEQ ID NO: 18之胺基酸序列。
在某些實施例中，該PD-L1抑制劑包括包含重鏈及輕鏈之抗PD-L1抗體，其中 該重鏈包括SEQ ID NO: 19或SEQ ID NO: 20之胺基酸序列，且 該輕鏈包括SEQ ID NO: 21之胺基酸序列。
在某些實施例中，該抗PD-L1抑制劑包含抗PD-L1抗體，該抗PD-L1抗體包括重鏈HCDR1、HCDR2及HCDR3及/或輕鏈LCDR1、LCDR2及LCDR3序列，其中： 該HCDR1序列包括TYWMH(SEQ ID NO: 32)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該HCDR2序列包括MIQPNSGGTKYNEKFKK(SEQ ID NO: 33)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該HCDR3序列包括GAGTVDYFDY(SEQ ID NO: 34)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該LCDR1序列包括RASESVDIYGNSFMH(SEQ ID NO: 35)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該LCDR2序列包括RASNLES(SEQ ID NO: 36)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該LCDR3序列包括QQSTEDPYT(SEQ ID NO: 37)或其序列同一性為至少80%之同源序列。
在某些實施例中，該PD-L1抑制劑包括包含重鏈可變區及輕鏈可變區之抗PD-L1抗體，其中 該重鏈可變區包括SEQ ID NO: 28之胺基酸序列，且 該輕鏈可變區包括SEQ ID NO: 29之胺基酸序列。 在某些實施例中，該PD-L1抑制劑包括包含重鏈及輕鏈之抗PD-L1抗體，其中 該重鏈包括SEQ ID NO: 30之胺基酸序列，且 該輕鏈包括SEQ ID NO: 31之胺基酸序列。
在某些實施例中，該個體係人。
在某些實施例中，該投與係經口服、經鼻、靜脈內、皮下、舌下或肌肉內投與。
在某些實施例中，包括抗CLDN18.2抗體之該組合物之該投與在包括PD-1/PD-L1軸抑制劑之該組合物之該投與之前、同時或之後。
在某些實施例中，該疾病或病狀為癌症。
在某些實施例中，該病變組織包括癌細胞。
在某些實施例中，該癌症選自由以下組成之群：胃癌、肺癌、支氣管癌、骨癌、肝及膽管癌、胰臟癌、乳癌、肝癌、卵巢癌、睾丸癌、腎癌、膀胱癌、頭頸癌、脊柱癌、腦癌、子宮頸癌、子宮癌、子宮內膜癌、大腸癌、大腸直腸癌、直腸癌、肛門癌、食道癌、胃腸癌、皮膚癌、前列腺癌、垂體癌、胃癌、陰道癌、甲狀腺癌、膠質母細胞瘤、星形細胞瘤、黑色素瘤、骨髓增生異常症候群、肉瘤、畸胎瘤及腺癌。
在某些實施例中，該癌症為胃癌、肺癌、大腸癌、膽管癌或其組合。
在某些實施例中，該疾病或病狀對用PD-1/PD-L1軸抑制劑進行之治療具有抗性或難治性。
在某些實施例中，該抗性為原發的或獲得性的。
在某些實施例中，該疾病或病狀進一步對選自由以下組成之群的第二療法具有抗性或難治性：化療、放療、免疫療法以及其組合。
在某些實施例中，該疾病或病狀對使用PD-1/PD-L1軸抑制劑及化學治療劑之組合療法具有抗性或難治性。
在某些實施例中，該化學治療劑選自由以下組成之群：抗代謝藥，如甲胺喋呤及5-氟尿嘧啶(5-FU)；奧沙利鉑(Oxaliplatin)；烷化劑(例如，噻替派及環磷醯胺(CytoxanTM))；烷基磺酸鹽(例如，白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)及哌泊舒凡(piposulfan))；氮雜環丙烷(例如，苯佐替哌(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、美妥替派(meturedopa)及烏瑞替派(uredopa))；艾美樂胺(emylerumine)及美樂蜜胺(memylamelamine)(例如，六甲蜜胺(alfretamine)、三亞甲基蜜胺(triemylenemelamine)、三伸乙基磷醯胺(triethylenephosphoramide)、三伸乙基硫磷醯胺(triethylenethiophosphoramide)及三亞甲基洛蜜胺(trimemylolomelamine))；多聚乙醯(acetogenin)；喜樹鹼(camptothecin)(例如，合成類似物拓朴替康(topotecan))；苔蘚抑素(bryostatin)；卡利他汀(callystatin)；CC-1065(包括其阿多來新(adozelesin)、卡折來新(carzelesin)及比折來新(bizelesin)合成類似物)；念珠藻素(cryptophycin)(關節念珠藻素(articularly cryptophycin)及念珠藻素)；尾海兔素(dolastatin)；多卡米星(duocarmycin)(包括合成類似物KW-2189及CBI-TMI)；艾榴塞洛素(eleutherobin)；水鬼蕉鹼(pancratistatin)；匍枝珊瑚醇(sarcodictyin)；海綿抑制素(spongistatin)；順鉑(cisplatin)；氮芥類(nitrogen mustards)(例如，苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、氯磷醯胺(cholophosphamide)、雌氮芥(estramustine)、異環磷醯胺(ifosfamide)、氮芥(mechlorethamine)、鹽酸甲氧氮芥(mechlorethamine oxide hydrochloride)、美法侖(melphalan)、新氮芥(novembichin)、苯芥膽甾醇(phenesterine)、潑尼莫司汀(prednimustine)、曲洛磷胺(trofosfamide)、尿嘧啶芥(uracil mustard))；亞硝基脲(nitrosourea)(例如，卡莫司汀(carmustine)、氯脲黴素(chlorozotocin)、福莫司汀(foremustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)、雷莫司汀(ranimustine))；葉酸類似物(例如，二甲葉酸(demopterin)、胺甲喋呤(methotrexate)、蝶羅呤(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate))；嘌呤類似物(例如，氟達拉濱(fludarabine)、6-巰嘌呤、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鳥嘌呤(thioguanine))；嘧啶類似物(例如，安西他濱(ancitabine)、阿紮胞苷(azacitidine)、6-氮雜尿苷、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、雙脫氧尿苷(dideoxyuridine)、脫氧氟尿苷(doxifluridine)、依諾他濱(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine))；雄激素類(例如，卡普睾酮(calusterone)、丙酸屈他雄酮(dromostanolone propionate)、環硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睾內酯(testolactone))；抗腎上腺類(例如，氨魯米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane))；葉酸補充劑(例如，亞葉酸)；醋葡醛內酯(aceglatone)；醛磷醯胺糖苷(aldophosphamide glycoside)；胺基乙醯丙酸(aminolevulinic acid)；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；海斯濱(hestrabucil)；比生群(bisantrene)；依達曲沙(edatrexate)；地磷醯胺(defofamine)；地美可辛(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；依落氟鳥胺酸(elformthine)；依利醋銨(elliptinium acetate)；埃坡黴素(epothilone)；依託格魯(etoglucid)；硝酸鎵(gallium nitrate)；羥基脲(hydroxyurea)；香菇多糖(lentinan)；氯尼達明(lonidamine)；美登木素生物鹼(maytansinoids)(例如，美坦辛(maytansine)及安絲菌素(ansamitocin))；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫哌達醇(mopidamol)；二胺硝吖啶(nitracrine)；噴司他丁(pentostatin)；蛋氨氮芥(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；鬼臼酸(podophyllinic acid)；2-乙基醯肼；丙卡巴肼(procarbazine)；PSK™；雷佐生(razoxane)；根瘤毒素(rhizoxin)；西佐喃(sizofiran)；螺旋鍺(spirogermanium)；細交鏈孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亞胺醌(triaziquone)；2,2',2''-三氯三乙胺；單端孢黴烯類(trichothecenes)；尿烷；長春地辛(vindesine)；達卡巴嗪(dacarbazine)；甘露醇氮芥(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴衛矛醇(mitolactol)。
在另一態樣中，本發明亦提供一種可用於治療有需要之個體之疾病或病狀之套組，該套組包括包含CLDN18.2拮抗劑之第一容器及包含PD-1/PD-L1軸抑制劑之第二容器，以及視情況選用之該套組之使用說明， 其中該疾病或病狀之特徵在於：a)病變組織中之CLDN18.2表現，及/或b)該病變組織中之低PD-L1表現或無PD-L1表現。
在另一態樣中，本發明亦提供一種套組，其包括CLDN18.2拮抗劑及包裝說明書，該包裝說明書包括使用該CLDN18.2拮抗劑與PD-1/PD-L1軸抑制劑進行組合以治療有需要之個體之疾病或病狀的說明書， 其中該疾病或病狀之特徵在於：a)病變組織中之CLDN18.2表現，及/或b)該病變組織中之低PD-L1表現或無PD-L1表現。
在另一態樣中，本發明亦提供一種套組，其包括PD-1/PD-L1軸抑制劑及包裝說明書，該包裝說明書包括使用該PD-1/PD-L1軸抑制劑與CLDN18.2拮抗劑進行組合以治療有需要之個體之疾病或病狀之說明， 其中該疾病或病狀之特徵在於：a)病變組織中之CLDN18.2表現，及/或b)該病變組織中之低PD-L1表現或無PD-L1表現。
在另一態樣中，本發明亦提供一種用於預測個體對用CLDN18.2拮抗劑與PD-1/PD-L1軸抑制劑予以組合進行之治療之反應性的套組，該套組包括：一或多種用於偵測自該個體獲得之生物樣品中之CLDN18.2及/或PD-L1之存在之試劑；或一或多種用於量測自該個體獲得之生物樣品中之CLDN 18.2及/或PD-L1之表現量之試劑，視情況其中該生物樣品係腫瘤組織。
在另一態樣中，本發明亦提供一種藥物組合物在製備用於治療有需要之個體之疾病或病狀之藥物中的用途，該藥物組合物包括治療有效量之以下各項：a)CLDN18.2拮抗劑；b)PD-1/PD-L1軸抑制劑；或c)兩者，以及一或多種醫藥學上可接受之載劑， 其中該疾病或病狀之特徵在於：a)病變組織中之CLDN18.2表現，及/或b)該病變組織中之低PD-L1表現或無PD-L1表現。
本發明之以下描述僅旨在說明本發明之各個實施例。如此，所討論之具體修改不應解釋為對本發明之範圍之限制。對於熟習此項技術者將顯而易知的是，在不脫離本發明之範圍的情況下，可以做出各種等同物、改變及修飾，且應當理解，此類等同實施例將包括在本文中。在本文中引用之所有文獻，包括公開之出版物、專利及專利申請案以全文引用之方式併入本文中。 定義
如本文所使用的，除非本文另有說明或者與上下文明確地相矛盾，否則在本發明之上下文中(尤其是在申請專利範圍之上下文中)使用術語「一個/一種(a/an)」、「該(the)」以及類似術語應解釋為涵蓋單數及複數兩者。
術語「CLDN18.2」係指源自哺乳動物，如靈長類動物(例如，人類、猴子)及嚙齒類動物(例如，小鼠)之Claudin-18剪接變異體2。在某些實施例中，CLDN18.2係人CLDN18.2。人CLDN18.2之示例性序列包括人CLDN18.2蛋白(NCBI參考序列號NP_001002026.1，或SEQ ID NO: 38)。CLDN18.2之示例性序列包括小家鼠( Mus musculus)CLDN18.2蛋白(NCBI參考序列號NP_001181852.1)、食蟹猴( Macaca fascicularis)CLDN18.2蛋白(NCBI參考序列號XP_015300615.1)。CLDN18.2在癌細胞中表現。在一個實施例中，該CLDN18.2在癌細胞表面上表現。
如本文所使用的，關於CLDN18.2之術語「拮抗劑」係指部分或完全抑制、阻斷或中和CLDN18.2之生物活性之任何分子。合適之CLDN18.2拮抗劑可包括但不限於抗體、反義寡核苷酸、肽及有機小分子。在某些實施例中，CLDN18.2拮抗劑係抗CLDN18.2抗體。
如本文所使用的，「抗CLDN18.2抗體」係指能夠以足夠之親和力與CLDN18.2(例如，人或非人CLDN18.2)特異性結合例如以提供診斷及/或治療用途之抗體。
如本文所使用的，術語「抗體」包括任何與特異性抗原結合之免疫球蛋白、單株抗體、多株抗體、多價抗體、二價抗體、單價抗體、多特異性抗體、雙特異性抗體或抗體變異體(例如，親和變異體、糖基化變異體、半胱胺酸工程化變異體、Fc變異體、抗原結合片段、抗體藥物結合物)。
如本文所使用的，「雙特異性」抗體係指具有源自兩個不同之單株抗體之片段且能夠與兩個不同之抗原決定基結合之人工抗體。兩個抗原決定基可以存在於同一抗原上，或其可以存在於兩種不同抗原上。
如本文所使用的，術語「抗體藥物結合物」係指抗體或其抗原結合片段與另一種藥劑(如化學治療劑、毒素、免疫治療劑、成像探針等)之連接。該連接可為共價鍵，亦可為非共價相互作用，如藉由靜電力。此項技術已知之各種連接子可以用於形成抗體藥物結合物。另外，抗體藥物結合物可以融合蛋白之形式提供，該融合蛋白可以由編碼結合物之聚核苷酸表現。
如本文所使用的，「融合蛋白」係指藉由連接兩個或更多個原本編碼不同之蛋白質(包括肽及多肽)之基因或基因片段而產生之蛋白質。融合基因之轉譯會產生單一蛋白質，該單一蛋白質之功能特性衍生自每個原始蛋白質。
如本文所使用的，術語「抗原結合片段」係指由包含一或多個CDR之抗體片段或任何其他與抗原結合但不包含完整之天然抗體結構之抗體部分形成之抗體片段。抗原結合片段之實例包括但不限於雙功能抗體、Fab、Fab'、F(ab') 2、Fv片段、二硫鍵穩定之Fv片段(dsFv)、(dsFv) 2、雙特異性dsFv(dsFv-dsFv')、二硫鍵穩定之雙功能抗體(ds雙功能抗體)、單鏈抗體分子(scFv)、scFv二聚體(二價雙功能抗體)、多特異性抗體、駱駝化單結構域抗體、奈米抗體、結構域抗體及二價結構域抗體。抗原結合片段能夠與親本抗體所結合之相同抗原結合。在某些實施例中，抗原結合片段可包括來自特定人類抗體之一或多個CDR。
關於抗體之「Fab」係指抗體之由單條輕鏈(可變區及恆定區兩者)與單條重鏈之可變區及第一恆定區藉由二硫鍵結合組成之單價抗原結合片段。Fab可以藉由在接近鉸鏈區之重鏈之間二硫鍵的N末端之殘基處木瓜蛋白酶消化抗體來獲得。
「Fab'」係指包括鉸鏈區之一部分的Fab片段，其可以藉由在接近鉸鏈區之重鏈之間的二硫鍵之C末端之殘基處胃蛋白酶消化抗體來獲得且因此在鉸鏈區中之少量殘基(包括一或多個半胱胺酸)方面與Fab不同。
「F(ab') 2」係指包括兩條輕鏈及兩條重鏈之一部分之Fab'的二聚體。
關於抗體之「Fc」係指由第一重鏈之第二恆定區及第三恆定區藉由二硫鍵與第二重鏈之第二恆定區及第三恆定區結合組成之抗體的該部分。IgG及IgM Fc區包括三個重鏈恆定區(每條鏈中之第二重鏈恆定區、第三重鏈恆定區及第四重鏈恆定區)。其可以藉由木瓜蛋白酶消化抗體來獲得。抗體之Fc部分負責各種效應子功能，如ADCC、ADCP及CDC，但不在抗原結合中起作用。
關於抗體之「Fv」係指攜帶完整抗原結合位點之抗體的最小片段。Fv片段由單條輕鏈之可變區與單條重鏈之可變區結合組成。「dsFv」係指二硫鍵穩定之Fv片段，其單條輕鏈之可變區與單條重鏈之可變區之間的連接係二硫鍵。
「單鏈Fv抗體」或「scFv」係指由輕鏈可變區與重鏈可變區直接相互連接或藉由肽連接子序列連接而成之經工程化之抗體(Huston JS等人《美國國家科學院院刊(Proc Natl Acad Sci USA)》, 85:5879(1988))。「scFv二聚體」係指包含具有連接子之兩個重鏈可變區及兩個輕鏈可變區之單鏈。在某些實施例中，「scFv二聚體」為二價雙功能抗體或二價ScFv(BsFv)，該二價雙功能抗體或BsFv包括(藉由肽連接子連接的)V H-V L，該V H-V L與另一個V H-V L部分二聚化，使得一個部分之V H與另一個部分之V L配位且形成可以靶向相同抗原(或抗原決定基)或不同抗原(或抗原決定基)之兩個結合位點。在其他實施例中，「scFv二聚體」為雙特異性雙功能抗體，該雙特異性雙功能抗體包含與V L1-V H2(藉由肽連接子連接)締合之V H1-V L2(亦藉由肽連接子連接)，使得V H1與V L1配位且V H2與V L2配位，且每個配位對具有不同之抗原特異性。
「單鏈Fv-Fc抗體」或「scFv-Fc」係指由與抗體之Fc區連接之scFv組成之工程化抗體。
「駱駝化單結構域抗體」、「重鏈抗體」、「奈米抗體」或「HCAb」係指包括兩個V H結構域而不包括輕鏈之抗體(Riechmann L.及Muyldermans S., 《免疫學方法雜誌(J Immunol Methods)》 12月10日;231(1-2):25-38 (1999)；Muyldermans S., 《生物技術雜誌(J Biotechnol.)》 6月;74(4):277-302 (2001)；WO94/04678；WO94/25591；美國專利第6,005,079號)。重鏈抗體最初自駱駝科( Camelidae)(駱駝、單峰駱駝及美洲駝)獲得。雖然缺少輕鏈，但駱駝化抗體具有真實之抗原結合譜(Hamers-Casterman C.等人, 《自然(Nature)》 6月3日;363(6428):446-8 (1993)；Nguyen VK.等人「駱駝科之重鏈抗體：一個進化創新之案例(Heavy-chain antibodies in Camelidae; a case of evolutionary innovation)」, 《免疫遺傳學(Immunogenetics.)》 4月;54(1):39-47(2002)；Nguyen VK.等人《免疫學(Immunology)》 5月;109(1):93-101 (2003))。重鏈抗體之可變結構域(VHH結構域)表示由適應性免疫反應產生之最小已知抗原結合單位(Koch-Nolte F.等人, 《美國實驗生物學會聯合會雜誌(FASEB J.)》 11月;21(13):3490-8 電子版2007年6月15日 (2007))。「雙功能抗體」包括具有兩個抗原結合位點之小抗體片段，其中該片段包括在單個多肽鏈中與V L結構域連接之V H結構域(V H-V L或V L-V H)(參見例如Holliger P.等人, 《美國國家科學院院刊》 7月15日;90(14):6444-8 (1993)；EP404097；WO93/11161)。因為連接子太短，所以同一條鏈上之兩個結構域無法配對，因此迫使該結構域與另一條鏈之互補結構域配對，由此產生兩個抗原結合位點。抗原結合位點可以靶向相同或不同之抗原(或抗原決定基)。
「結構域抗體」係指僅含有重鏈可變區或輕鏈可變區之抗體片段。在某些實施例中，兩個或更多個V H結構域藉由肽連接子共價連接，以產生二價或多價結構域抗體。二價結構域抗體之兩個V H結構域可以靶向相同或不同之抗原。
在某些實施例中，「(dsFv) 2」包括三個肽鏈：藉由肽連接子連接之兩個V H部分及與其藉由二硫橋結合的兩個V L部分。
在某些實施例中，「雙特異性ds雙功能抗體」包括藉由V H1與V L1之間的二硫橋與V L1-V H2(藉由肽連接子連接)結合之V H1-V L2(亦藉由肽連接子連接)。
在某些實施例中，「雙特異性dsFv」或「dsFv-dsFv'」包括三個肽鏈：其重鏈藉由肽連接子(例如，長的可撓性連接子)結合之V H1-V H2部分，及與其藉由二硫橋分別配對之V L1及V L2。每個藉由二硫鍵配對之重鏈及輕鏈具有不同之抗原特異性。
如本文所使用的，術語「人源化」意謂抗體或抗原結合片段包括源自非人動物之CDR、源自人之FR區以及當適用時源自人之恆定區。在某些實施例中，將人源化CLDN18.2抗體之可變區框架之胺基酸殘基取代，以進行序列最佳化。在某些實施例中，人源化CLDN18.2抗體鏈之可變區框架序列與對應之人類可變區框架序列至少65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%相同。
如本文所使用，術語「嵌合」係指具有源自一種物種之一部分重鏈及/或輕鏈，且重鏈及/或輕鏈中之其餘部分源自不同物種之抗體或抗原結合片段。在說明性實例中，嵌合抗體可包括源自人之恆定區及源自非人物種(如源自小鼠)之可變區。
關於胺基酸序列(或核酸序列)之「序列同一性百分比(%)」定義為在比對序列且必要時引入空位以實現最大對應性後，在候選序列中與參考序列中之胺基酸(或核酸)殘基相同之胺基酸(或核酸)殘基之百分比。可以例如使用揭示可用之工具，如BLASTN、BLASTp(可在美國國家生物技術資訊中心(U.S. National Center for Biotechnology Information，NCBI)之網站上獲得，亦參見Altschul S.F.等人, 《分子生物學雜誌(J. Mol. Biol.)》 215:403-410 (1990)；Stephen F.等人, 《核酸研究(Nucleic Acids Res.)》, 25:3389-3402 (1997))、ClustalW2(可在歐洲生物資訊研究所(European Bioinformatics Institute)之網站上獲得，亦參見Higgins D.G.等人, 《酶學方法(Methods in Enzymology)》, 266:383-402 (1996)；Larkin M.A.等人《生物資訊學(Bioinformatics)》 (英國劍橋), 23(21): 2947-8 (2007))以及ALIGN或Megalign(DNASTAR)軟體實現用於確定胺基酸(或核酸)序列同一性百分比之比對。熟習此項技術者可以使用由該工具提供之預設參數，亦可以根據比對之需要，藉由例如挑選合適之演算法等方式，適當自定義參數。在某些實施例中，不同之殘基位置可能因保守胺基酸取代而不同。「保守胺基酸取代」為一個胺基酸殘基淨具有類似化學性質(例如，電荷或疏水性)之側鏈(R基團)之另一個胺基酸殘基取代之胺基酸取代。總體而言，保守胺基酸取代將不會大體上改變蛋白質之功能性質。在兩個或更多個胺基酸序列因保守取代而彼此不同之情況下，百分比或類似性程度可以向上調整以校正取代之保守性質。用於作出此調整之方法為熟習此項技術者所熟知的。參見例如，Pearson (1994) 《分子生物學方法(Methods Mol. Biol.)》 24: 307-331，該文獻藉由引用併入本文。
如本文所使用的，術語「同源序列(homologue sequence)」及「同源序列(homologous sequence)」係可以互換使用的，且係指在視情況比對時與另一序列具有至少80%(例如，至少85%、88%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%)之序列同一性之聚核苷酸序列(或其互補鏈)或胺基酸序列。
「分離」之物質已藉由人工由自然狀態改變。若自然界中出現「分離的」組合物或物質，則其已改變或脫離其原始環境，或二者均有發生。例如，活體動物體內天然存在之聚核苷酸或多肽並非「分離的」，但若同一聚核苷酸或多肽與其在天然狀態下共存之物質充分分離以便以基本上純之狀態存在，則可以認為係「分離的」。分離的「核酸」或「聚核苷酸」可互換使用且指分離的核酸分子之序列。在某些實施例中，「分離的抗體或其抗原結合片段」係指純度為至少60%、70%、75%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%之抗體或抗原結合片段，其中純度由電泳方法(如SDS-PAGE、等電聚焦、毛細管電泳)或層析方法(如離子交換層析法或反相HPLC)確定。
術語「個體」包括人及非人動物。非人動物包括所有脊椎動物，例如哺乳動物及非哺乳動物，如非人靈長類動物、小鼠、大鼠、貓、兔、綿羊、狗、牛、雞、兩棲動物及爬行動物。除在指出時之外，術語「患者」或「個體」在本文中可互換使用。
如本文所使用的，術語「病變組織」廣泛涵蓋病變細胞(如癌細胞)及組織(如組織切片)。
術語「抗腫瘤活性」意謂腫瘤細胞增殖、活力或轉移活性之降低。例如，與未使用療法之對照相比，可以藉由在療法期間出現之異常細胞之生長率之減少或腫瘤大小穩定性或減少或由於療法引起之更長的存活率來示出抗腫瘤活性。可以使用公認的活體外或活體內腫瘤模型來評估此類活性，該模型包括但不限於異種移植模型、同種異體移植模型、小鼠乳腺腫瘤病毒(MMTV)模型及此項技術已知之其他已知模型來調查抗腫瘤活性。
如本文所使用的，「效應子功能」或「抗體效應子功能」係指由抗體之Fc區與其如C1複合物及Fc受體等效應子結合引起之生物活性。示例性效應子功能包括：由抗體及C1複合物上之C1q之相互作用誘導之補體依賴性細胞毒性(CDC)；由抗體之Fc區與效應子細胞上之Fc受體之結合誘導之抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)；以及抗體依賴性細胞介導之吞噬作用(ADCP)，其中表現FcγR之非特異性細胞毒性細胞識別靶細胞上結合之抗體，且隨後引起靶細胞之吞噬作用。效應子功能包括在抗原結合之後起作用之效應子功能及獨立於抗原結合起作用之效應子功能。
如本文所使用的，病狀之「治療(treating)」或「治療(treatment)」包括預防或緩解病狀、減緩病狀之發作或發展速率、降低罹患病狀之風險、預防或延遲與病狀相關之症狀的發展、減輕或結束與病狀相關的症狀、產生病狀的完全或部分消退、治癒病狀或其某種組合。
如本文所使用的，「CLDN18.2相關」疾病或病狀係指由CLDN18.2之表現或活性之增加或降低所引起、加劇或以其他方式連接之任何疾病或病狀。在一些實施例中，CLDN18.2相關疾病或病狀例如係癌症。
如本文所使用的，「癌症」係指特徵在於惡性細胞生長或贅生物、異常增殖、浸潤或轉移之任何醫學病狀，且包括實體瘤及非實體癌(例如，血液系統惡性腫瘤)，如白血病。如本文所使用的，「實體瘤」係指贅生物及/或惡性細胞之實體團塊。
術語「醫藥學上可接受之」表示指定之載劑、媒劑、稀釋劑、賦形劑及/或鹽通常與包括調配物之其他成分在化學及/或實體上相容，且與其接受者在生理上相容。
「靶向療法」係作用於與癌症相關之特定分子之療法類型，該特定分子如存在於癌細胞中但不存在於正常細胞中或在癌細胞中更豐富之特定蛋白質，或有助於癌症生長及存活之癌症微環境中之靶分子。靶向療法將治療劑靶向腫瘤，由此使正常組織免受治療劑之影響。
本文中提到「約」一個值或參數包含(且描述)針對該值或參數本身之實施例。例如，提及「約X」之描述包括「X」之描述。數字範圍包括定義該範圍之數字。一般而言，術語「約」係指變數之指示值以及在指示值之實驗誤差範圍內(例如在平均值之95%置信區間內)或在指示值之10%以內(以較大者為凖)之變數之所有值。在時間段(年、月、週、天等)之上下文中使用術語「約」之情況下，術語「約」意謂該時間段加上或減去下一個從屬時間段(例如約1年意謂11-13個月；約6個月意謂6個月加上或減去1週；約1週意謂6-8天；等)，或在指示值之10%內，以較大者為凖。
I. 使用方法
在一態樣中，本發明提供一種治療有需要之個體之CLDN18.2相關疾病或病狀的方法。該方法可包括向該個體投與治療有效量之CLDN18.2拮抗劑與治療有效量之PD-1/PD-L1軸抑制劑的組合。
在某些實施例中，該個體經確定為在該病變組織中具有CLDN18.2表現。在某些實施例中，該個體進一步經確定為該病變組織中具有PD-L1表現。在某些實施例中，該個體已確定為在該病變組織中同時具有CLDN18.2表現或PD-L1表現。
在某些實施例中，該個體進一步經確定為該病變組織中具有低PD-L1表現或無PD-L1表現。在某些實施例中，該個體已確定為在該病變組織中具有CLDN18.2表現以及低PD-L1表現或無PD-L1表現。
PD-1/PD-L1軸抑制劑(例如，PD-1抑制劑、PD-L1抑制劑)係一組免疫檢查點抑制劑，該免疫檢查點抑制劑導致T細胞之激活、增殖及/或信號傳導增加，且用作多種類型之癌症的一線治療，療效顯著。然而，已經發現，免疫檢查點抑制劑僅對一小部分患者有益，且在若干種癌症中活性較低，尤其對於PD-L1表現較低之癌症(參見 Darvin等人, 2018, 免疫檢查點抑制劑：最新進展及潛在生物標誌物(Immune checkpoint inhibitors: recent progress and potential biomarkers) 《實驗與分子醫學(Exp Mol Med)》 5 0(12):165)。例如，僅大約20%之有資格的患者可以獲得少許之持續獲益，且此等患者中之許多患者最終將因耐藥性疾病而復發且隨後經歷疾病進展(參見 D.E. Meyers等人, 靶向 PD-1/PD-L1 軸以治療非小細胞肺癌( Targeting the PD-1/PD-L1 axis for the treatment of non-small-cell lung cancer) 《當代腫瘤學(Curr Oncol)》 2018年8月; 25(4): e324-e334)。研究已經調查腫瘤PD-L1表現與治療療效之間的相關性，且已經表明PD-L1過表現與顯著較高之客觀反應率(ORR)相關( Gettinger等人, 納武單抗 ( 抗程式化死亡 1 抗體， BMS-936558 ， ONO-4538) 在患有既往治療之晚期非小細胞肺癌之患者中之總存活率及長期安全性( Overall survival and long-term safety of nivolumab (anti-programmed death 1 antibody, BMS-936558, ONO-4538) in patients with previously treated advanced non-small-cell lung cancer) 《臨床腫瘤學雜誌(J Clin Oncol)》 2015;33:2004-12 ； Garon 等人 , 用於治療非小細胞肺癌之派姆單抗( Pembrolizumab for the treatment of non-small-cell lung cancer) 《新英格蘭醫藥雜誌(N Engl J Med.)》 2015;372:2018-28. doi: 10.1056/NEJMoa1501824)。2021年美國臨床腫瘤學會(the American Society of Clinical Oncology，ASCO)年會上之出版物及報告亦表明，具有低PD-L1表現之腫瘤患者可能自用PD-1/PD-L1軸抑制劑進行之治療中獲益較少。
本發明出人意料地發現，在表現CLDN18.2以及視情況選用的具有低PD-L1表現或無PD-L1表現之腫瘤組織中，CLDN18.2拮抗劑(例如，抗CLDN18.2抗體)與在腫瘤組織之細胞表面上表現之CLDN18.2結合可顯著上調腫瘤細胞上之PD-L1表現。
至少部分地基於如上所述的發現，本發明提供治療有需要之個體之CLDN18.2相關疾病或病狀的方法，其中該個體經確定或已確定為具有：a)CLDN18.2在病變組織(例如，癌組織或腫瘤組織之細胞)中之表現；以及b)PD-L1在病變組織中之低表現或無表現。
本發明進一步提供使經確定為在病變組織中具有低PD-L1表現或無PD-L1表現之個體對PD-1/PD-L1軸抑制劑敏感之方法：投與治療有效量之CLDN18.2拮抗劑，視情況與治療有效量之PD-1/PD-L1軸抑制劑予以組合。
本發明進一步提供藉由以下提高個體之腫瘤對用PD-1/PD-L1軸抑制劑進行之治療之反應性之方法：投與治療有效量之CLDN18.2拮抗劑，視情況與治療有效量之PD-1/PD-L1軸抑制劑予以組合，該個體患有對用PD-1/PD-L1軸抑制劑進行之治療具有抗性或難治性之腫瘤。
A) 組合療法方法
在一態樣中，本發明提供治療有需要之個體之CLDN18.2相關疾病或病狀之方法。在某些實施例中，本文所提供之方法包括向該個體投與治療有效量之CLDN18.2拮抗劑與治療有效量之PD-1/PD-L1軸抑制劑之組合。
在某些實施例中，該個體經確定為在該病變組織中具有CLDN18.2表現。在某些實施例中，該個體經確定為在該病變組織中同時具有CLDN18.2表現或PD-1表現。在某些實施例中，該個體經確定為在該病變組織中具有低PD-L1表現或無PD-L1表現。
在某些實施例中，本文所提供之方法進一步包括選擇在疾病組織中具有CLDN18.2表現但PD-L1表現低或無PD-L1表現之患者之亞組的步驟。在某些實施例中，所選擇之患者亞組將有資格接受CLDN18.2及PD-1/PD-L1軸抑制劑之組合療法以治療疾病或病狀。在某些實施例中，該疾病或病狀為癌症，該患者為癌症患者，且該疾病組織為癌組織。
B) 使疾病對 PD-1/PD-L1 軸抑制劑敏感之方法
在另一態樣中，本發明進一步提供一種使有需要之個體的疾病或病狀(例如，癌症)對用PD-1/PD-L1軸抑制劑進行之治療敏感的方法，其中該疾病或病狀之特徵在於在自該個體獲得之病變組織(例如，癌組織或腫瘤組織)中具有低PD-L1表現或無PD-L1表現。
在某些實施例中，該方法包括確定自該個體獲得之該病變組織中CLDN18.2之存在或表現量。在某些實施例中，該個體經確定為在該病變組織中具有CLDN18.2表現。
在某些實施例中，當確定CLDN18.2之存在或CLDN18.2之表現量達到前一確定步驟中之臨限值水準時，隨後向此類個體投與治療有效量之CLDN18.2拮抗劑，由此使此類個體之該疾病或病狀對用PD-1/PD-L1軸抑制劑進行之治療敏感。在某些實施例中，該方法進一步包括在該個體已經對用PD-1/PD-L1軸抑制劑進行之治療敏感後，投與治療有效量之PD-1/PD-L1軸抑制劑，以實現顯著改善之治療療效。PD-1/PD-L1軸抑制劑亦可與CLDN18.2拮抗劑(例如，抗CLDN18.2抗體)同時、在其之前或之後投與。
如本文所使用的，與CLDN18.2表現有關之術語「臨限值水準」係指可使用習知技術(如免疫組織化學(IHC)及其他合適之方法)偵測到之CLDN18.2的最小表現量。
C) 減少或克服疾病對 PD-1/PD-L1 軸抑制劑之抗性的方法
在另一態樣中，本發明亦提供一種用於提高個體之腫瘤對用PD-1/PD-L1軸抑制劑進行之治療之反應性的方法，其中該個體經確定或已確定為患有對用PD-1/PD-L1軸抑制劑進行之治療具有抗性或難治性的腫瘤。
在某些實施例中，該方法包括確定自該個體獲得之腫瘤樣品中CLDN18.2之存在或表現量。
在某些實施例中，當確定CLDN18.2之存在或CLDN18.2之表現量達到前一確定步驟中之個體的臨限值水準時，向此類個體投與治療有效量之CLDN18.2拮抗劑，視情況與治療有效量之PD-1/PD-L1軸抑制劑進行組合，由此提高該個體之該腫瘤對用PD-1/PD-L1軸抑制劑進行治療之反應性。
對PD-1/PD-L1軸抑制劑之抗性可為原發的或獲得性的。如本文所使用的，關於對用PD-1/PD-L1軸抑制劑進行之治療的抗性，術語「原發的( de novo)」係指在最初用PD-1/PD-L1軸抑制劑治療時出現之抗性，亦即，具有原發抗性之個體在第一次接受PD-1/PD-L1軸抑制劑治療時無反應。關於對用PD-1/PD-L1軸抑制劑進行治療之抗性使用的術語「獲得性」係指在初始用PD-1/PD-L1軸抑制劑進行治療時不存在且在用PD-1/PD-L1軸抑制劑治療期間出現的抗性，亦即，具有獲得性抗性之個體可以對用PD-1/PD-L1軸抑制劑進行之治療做出反應且在其後對用PD-1/PD-L1軸抑制劑進行之治療變得抗性或無反應。
對用PD-1/PD-L1軸抑制劑進行之治療之抗性可藉由此項技術已知之各種方法偵測，例如藉由量測在用PD-1/PD-L1軸抑制劑治療後的腫瘤體積減小。
在靶向療法中選擇合適之患者亞組可使療效顯著最大化，降低成本且避免錯過治療時機。例如，如上所述，具有低PD-L1表現或無PD-L1表現之癌症患者通常沒有資格用PD-1/PD-L1軸抑制劑進行治療。然而，在有偵測CLDN18.2在此類患者中之表現之步驟的情況下，能選出具有CLDN18.2表現之彼等患者。在其他情況下對用PD-1/PD-L1軸抑制劑進行之治療無反應之此等患者，在當與CLDN18.2拮抗劑進行組合時，有資格接受用PD-1/PD-L1軸抑制劑進行之治療且對能該治療做出反應。在另一態樣中，在如上所述之CLDN18.2偵測及選擇步驟之情況下，組合療法將不浪費在無CLDN18.2表現或偵測不到CLDN18.2表現之患者身上，使得此等患者將有足夠之時間去尋找更合適之療法且避免錯過最佳治療時機。
在某些實施例中，該疾病或病狀進一步對選自由以下組成之群的第二療法具有抗性或難治性：化療、放療、免疫療法以及其組合。
在某些實施例中，該疾病或病狀對使用PD-1/PD-L1軸抑制劑(例如，標準的抗PD-1抗體或抗PD-L1抗體)及化療(例如，標準的化療藥劑，如奧沙利鉑及氟尿嘧啶(5FU))之組合療法具有抗性或難治性。
如本文所使用的，術語「化療」係指使用一或多種細胞毒性抗贅生物藥物(亦可稱為「化學治療劑」或「化學治療藥物」)作為標準化方案之一部分對癌症(癌或腫瘤細胞)進行治療。示例性化學治療劑包括但不限於抗代謝藥，如甲胺喋呤及5-氟尿嘧啶(5-FU)；奧沙利鉑；烷化劑(例如，噻替派及環磷醯胺(Cytoxan TM))；烷基磺酸鹽(例如，白消安、英丙舒凡及哌泊舒凡)；氮雜環丙烷(例如，苯佐替哌、卡波醌、美妥替派及烏瑞替派)；艾美樂胺及美樂蜜胺(例如，六甲蜜胺、三亞甲基蜜胺、三伸乙基磷醯胺、三伸乙基硫磷醯胺及三亞甲基洛蜜胺)；多聚乙醯；喜樹鹼(例如，合成類似物拓朴替康)；苔蘚抑素；卡利他汀；CC-1065(包括其阿多來新、卡折來新及比折來新合成類似物)；念珠藻素(關節念珠藻素及念珠藻素)；尾海兔素；多卡米星(包括合成類似物KW-2189及CBI-TMI)；艾榴塞洛素；水鬼蕉鹼；匍枝珊瑚醇；海綿抑制素；順鉑；氮芥類(例如，苯丁酸氮芥、萘氮芥、氯磷醯胺、雌氮芥、異環磷醯胺、氮芥、鹽酸甲氧氮芥、美法侖、新氮芥、苯芥膽甾醇、潑尼莫司汀、曲洛磷胺、尿嘧啶芥)；亞硝基脲(例如，卡莫司汀、氯脲黴素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀、雷莫司汀)；葉酸類似物(例如，二甲葉酸、胺甲喋呤、蝶羅呤、三甲曲沙)；嘌呤類似物(例如，氟達拉濱、6-巰嘌呤、硫咪嘌呤、硫鳥嘌呤)；嘧啶類似物(例如，安西他濱、阿紮胞苷、6-氮雜尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、雙脫氧尿苷、脫氧氟尿苷、依諾他濱、氟尿苷)；雄激素類(例如，卡普睾酮、丙酸屈他雄酮、環硫雄醇、美雄烷、睾內酯)；抗腎上腺類(例如，氨魯米特、米托坦、曲洛司坦)；葉酸補充劑(例如，亞葉酸)；醋葡醛內酯；醛磷醯胺糖苷；胺基乙醯丙酸；恩尿嘧啶；安吖啶；海斯濱；比生群；依達曲沙；地磷醯胺；地美可辛；地吖醌；依落氟鳥胺酸；依利醋銨；埃坡黴素；依託格魯；硝酸鎵；羥基脲；香菇多糖；氯尼達明；美登木素生物鹼(例如，美坦辛及安絲菌素)；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌達醇；二胺硝吖啶；噴司他丁；蛋氨氮芥；吡柔比星；洛索蒽醌；鬼臼酸；2-乙基醯肼；丙卡巴肼；PSK™；雷佐生；根瘤毒素；西佐喃；螺旋鍺；細交鏈孢菌酮酸；三亞胺醌；2,2',2''-三氯三乙胺；單端孢黴烯類；尿烷；長春地辛；達卡巴嗪；甘露醇氮芥；二溴甘露醇；二溴衛矛醇。在某些實施例中，該化療或化學治療劑是奧沙利鉑及/或5FU。
確定對用 CLDN18.2 拮抗劑進行治療之資格或反應可能性的方法
至少部分地基於如上所述本發明之發現，CLDN18.2可視為一種生物標誌物，其存在可預測個體對CLDN18.2拮抗劑及用PD-1/PD-L1軸抑制劑進行之治療之組合療法的反應性。在某些實施例中，該個體患有對用PD-1/PD-L1軸抑制劑以及視情況標準化療進行之治療具有抗性或難治性的腫瘤。該抗性可為原發的或獲得性的。
在另一態樣中，本發明亦提供一種用於確定具有低PD-L1表現量或無PD-L1表現量之個體對使用CLDN18.2拮抗劑及PD-1/PD-L1軸抑制劑之組合療法的資格或該個體對使用CLDN18.2拮抗劑及PD-1/PD-L1軸抑制劑之組合療法之反應可能性的方法。
在某些實施例中，該方法包括在允許偵測CLDN18.2表現之條件下，使自該個體獲得之樣品與CLDN18.2診斷劑(例如，抗CLDN18.2診斷抗體)接觸。當該樣品具有CLDN18.2在該樣品之細胞中之陽性表現時，該個體確定為有資格或可能對使用CLDN18.2拮抗劑及PD-1/PD-L1軸抑制劑之組合療法做出反應；當該樣品上之CLDN18.2的表現未偵測到時，該個體確定為沒有資格或不可能對用CLDN18.2拮抗劑進行之治療做出反應。
在某些實施例中，基於在病變組織具有CLDN18.2之表現以及視情況進一步在病變組織中具有低PD-L1表現或無PD-L1表現，該個體鑑定為可能對CLDN18.2拮抗劑及PD-1/PD-L1軸抑制劑之組合療法做出反應。
確定 PD-L1 之表現及 / 或 CLDN18.2 之表現
本文所提供的使用方法涉及確定CLDN18.2及/或PD-L1之表現。在某些實施例中，該個體經確定為在該病變組織中具有CLDN18.2表現。在某些實施例中，該個體經確定為在該病變組織中同時具有CLDN18.2表現及PD-1表現。在某些實施例中，該個體經確定為在該病變組織中具有低PD-L1表現或無PD-L1表現。
可使用之適當之方法為此項技術已知的，且在下文中詳細描述該方法。
i. 樣品製備
在某些實施例中，該個體係人。在某些實施例中，本文所提供之方法進一步包括提供來自該個體之生物樣品，其中該生物樣品包括病變組織(例如，癌組織或腫瘤組織)。
可自個體獲得適於執行本文所提供之方法的任何生物樣品。如本文所使用的，「生物樣品」係指藉由自個體取樣獲得之生物樣本，視情況經額外處理過。自個體收集樣品係根據醫院或診所普遍遵循之標準方案進行的，如在活檢過程中。
在某些實施例中，該樣品可為包括癌細胞或非癌細胞之生物樣品。例如，非癌細胞可來自發現癌細胞之同一組織或器官。在某些實施例中，包括或疑似包括癌細胞之生物樣品可自該個體獲得。在一些實施例中，生物樣品可源自癌細胞或癌組織或腫瘤浸潤性免疫細胞。在某些實施例中，生物樣品係腫瘤組織。
在一些實施例中，生物樣品為自腫瘤組織獲得的新鮮的或保藏的樣品，例如，藉由腫瘤活檢或細針抽吸獲得。在一些實施例中，該樣品可為任何包括癌細胞或非癌細胞(例如，外周血單核球(PBMC))之生物體液。
生物樣品之實例包括但不限於體液，如血液、血漿、血清、尿液、陰道液、子宮或陰道沖洗液、胸膜液、腹水、腦脊液、唾液、汗液、眼淚、痰、支氣管肺泡灌洗液等，以及組織，如活檢組織(例如，活檢之骨組織、骨髓、乳腺組織、胃腸道組織、肺組織、大腸組織、肝組織、前列腺組織、腦組織、神經組織、腦膜組織、大腸組織、腎臟組織、子宮內膜組織、子宮頸組織、淋巴結組織、肌肉組織或皮膚組織)、石蠟包埋組織。在另外的實施例中，生物樣品包括細胞、組織、血液、血漿、血清、尿液、漱口水、糞便、唾液以及其任何組合。
在某些實施例中，可藉由用於確定至少一種生物標誌物(如CLDN18.2及/或PD-L1)之表現量的期望方法進一步處理該樣品。
ii. CLDN18.2 表現之確定
在某些實施例中，由病變組織(例如來自生物樣品)確定CLDN18.2表現。
在一些實施例中，該病變組織(例如，癌組織或腫瘤組織)中之該CLDN18.2表現高於健康或非癌性胃細胞或胃組織中之表現或與其相當。
在一些實施例中，該病變組織(例如，癌組織或腫瘤組織)中之該CLDN18.2表現低於健康或非癌性胃細胞或胃組織中之表現，但高於除胃以外的健康或非癌性組織或器官中之表現。
在一些實施例中，該病變組織(例如，癌組織或腫瘤組織)中之該CLDN18.2表現與除胃以外之健康或非癌性組織或器官中之表現相當，且可經抗CLDN18.2診斷抗體偵測到。
在一些實施例中，CLDN18.2之表現在細胞表面上或係膜結合的。
CLDN18.2在病變組織(例如，癌組織或腫瘤組織)中之存在及/或表現量可藉由此項技術已知之各種方法確定。在某些實施例中，可進一步處理生物樣品，例如分離核酸或蛋白質等待測物。CLDN18.2之存在及/或表現量可藉由例如定量螢光細胞計數、免疫組織化學(IHC)或基於核酸之方法確定。例如，來自個體之生物樣品可以暴露於抗CLDN18.2抗體或其抗原結合片段，該抗CLDN18.2抗體或其抗原結合片段與所表現之CLDN18.2蛋白結合且偵測該蛋白。
在某些實施例中，藉由IHC確定或測定CLDN18.2在病變組織(例如，癌組織或腫瘤組織)中之表現。在某些實施例中，根據本文所提供之實例6中描述的方法，可確定人CLDN18.2蛋白在來自個體之癌組織或腫瘤組織上之表現量。
在某些實施例中，該個體經確定或已確定為在源自個體之病變組織(例如，癌組織或腫瘤組織)中具有高的CLDN18.2表現。在某些實施例中，該病變組織中之CLDN18.2表現確定或已確定為高於健康或非癌性胃細胞或胃組織中之表現或與其相當。生物樣品(如病變組織，例如癌組織或腫瘤組織)中之高CLDN18.2表現係指，藉由IHC量測之強度至少為2+且在生物樣品(如病變組織，例如癌組織或腫瘤組織)中至少40%(例如，至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、40-100%、50-100%、60-100%、70-100%、80-100%、90-100%、40-90%、50-90%、60-90%、70-90%、80-90%、40-80%、40-70%、40-60%、40-50%、50-80%、50-70%、50-60%、60-80%、60-70%或70-80%)之細胞在IHC染色中呈陽性的CLDN18.2表現量。
在某些實施例中，該個體經確定或已確定為在源自個體之病變組織(例如，癌組織或腫瘤組織)中具有中等的CLDN18.2表現。在某些實施例中，該病變組織中的CLDN18.2表現確定或已確定為低於健康或非癌性胃細胞或胃組織中之表現，但高於除胃以外的健康或非癌性組織或器官中之表現。生物樣品(如病變組織，例如癌組織或腫瘤組織)中的中等CLDN18.2表現係指，藉由IHC量測之強度至少為1+但低於2+且至少30%(或至少35%)但低於40%之細胞在IHC中染色呈陽性之CLDN18.2表現量。
在某些實施例中，該個體經確定或已確定為在源自個體之病變組織(例如，癌組織或腫瘤組織)中具有低的CLDN18.2表現。在某些實施例中，該病變組織中之CLDN18.2表現確定或已確定為與除胃以外之健康或非癌性組織或器官中之表現相當，且可經抗CLDN18.2診斷抗體偵測到。生物樣品(如病變組織，例如癌組織或腫瘤組織)中的低CLDN18.2表現係指，藉由IHC量測之強度大於0但低於1+且大於0但低於30%(例如，5%、10%、15%、20%、25%、5-25%、10-25%、15-25%、20-25%、5-20%、5-15%、5-10%、10-20%或10-15%)之細胞在IHC中染色呈陽性的CLDN18.2表現量。
抗CLDN18.2診斷抗體可為任何可敏感地偵測CLDN18.2在疾病細胞或疾病組織上之表現的抗CLDN18.2抗體。例如，抗CLDN18.2診斷抗體可為PCT/CN2021/095411中描述之抗體。在某些實施例中，抗CLDN18.2診斷抗體為14G11，該14G11包括包含SEQ ID NO: 43之胺基酸序列之重鏈以及包含SEQ ID NO: 44之胺基酸序列之輕鏈。
iii. PD-L1 表現之確定
在某些實施例中，由病變組織(例如來自生物樣品)確定PD-L1表現。
確定CLDN18.2表現之同一生物樣品(如病變組織，例如癌組織或腫瘤組織)可進一步或同時量測以確定同一樣品上是否有PD-L1之表現。
與確定CLDN18.2表現類似，PD-L1在生物樣品(如病變組織，例如癌組織或腫瘤組織)中之表現可藉由此項技術已知之各種方法確定。包括或疑似包括癌細胞之生物樣品可自該個體獲得。生物樣品可包括癌細胞、癌組織及免疫細胞(例如，腫瘤相關免疫細胞，如腫瘤浸潤性免疫細胞)。可進一步處理生物樣品，例如分離如核酸(例如，mRNA)或蛋白質等待測物。PD-L1之存在及/或表現量可藉由例如定量螢光細胞計數、免疫組織化學(IHC)或基於核酸之方法(例如，RNA定序)確定。例如，來自個體之生物樣品可暴露於抗PD-L1抗體或其抗原結合片段，該抗PD-L1抗體或其抗原結合片段與所表現之PD-L1蛋白結合且偵測該蛋白。可替代地，亦可使用如qPCR、逆轉錄酶PCR、微陣列、SAGE、FISH等方法在核酸表現量上偵測PD-L1。
在某些實施例中，PD-L1表現藉由IHC確定。藉由IHC進行特異性PD-L1染色需要合適的患者材料、敏感的抗PD-L1第一抗體及合適的染色方案。主要有三種對腫瘤類型及臨床決策具有特異性之PD-L1染色之評分演算法：腫瘤比例評分(TPS)、免疫比例評分(IPS)及聯合陽性評分(CPS)(參見 Schildhaus等人, PD-L1 診斷之預測值( Predictive value of PD-L1 diagnostics) 《病理學(Pathologe.)》 , 2018 年 11 月 ;39(6):498-519. doi: 10.1007/s00292-018-0507-x)。
TPS可藉由對PD-L1染色呈陽性之腫瘤細胞占生物樣品中之總腫瘤細胞之百分比來定義，其詳細描述可在例如 Piper等人, PD-L1 腫瘤比例評分能否成為解鎖派姆單抗在晚期肺癌 KEYNOTE 研究中之鑰匙 ?( Can PD-L1 tumor proportion score be used as the key to unlocking the KEYNOTE studies of pembrolizumab in advanced lung cancer?) 《轉化肺癌研究(Transl Lung Cancer Res.)》 2019;8(5):715-722中找到。
IPS可藉由對PD-L1表現呈陽性之腫瘤相關免疫細胞占總腫瘤相關免疫細胞之百分比來定義，其詳細描述可在例如 Yang等人, PD-L1 在中國大腸直腸癌患者之腫瘤細胞及腫瘤浸潤性免疫細胞上之表現( PD-L1 expression on tumor cells and tumor infiltrating immune cells in Chinese colorectal cancer patients) 《臨床腫瘤學雜誌(Journal of Clinical Oncology)》, 第38卷, 第15期_增刊中找到。
CPS可由PD-L1染色細胞(包括但不限於腫瘤細胞、淋巴細胞、巨噬細胞)之數目除以活腫瘤細胞之總數再乘以100來定義，詳細描述可在例如 Yamashita等人, 雙重免疫組織化學染色對患有晚期胃癌之患者之程式化死亡配體 -1 表現之組合陽性評分及腫瘤比例評分之預後影響( Prognostic impacts of the combined positive score and the tumor proportion score for programmed death ligand-1 expression by double immunohistochemical staining in patients with advanced gastric cancer) 《胃癌(Gastric Cancer)》 2020 年 1 月 ;23(1):95-104 ；以及 Dako等人 , 用免疫組織化學測定 PD-L1 IHC 22C3 pharmDx 評估實體瘤中 PD-L1 之組合陽性評分 (CPS) 之開發( Development of the combined positive score (CPS) for the evaluation of PD-L1 in solid tumors with the immunohistochemistry assay PD-L1 IHC 22C3 pharmDx), 《臨床腫瘤學雜誌(Journal of Clinical Oncology)》, 第35卷, 第15期_增刊, 2017中找到。如本發明之實例6所述，CPS亦可藉由PD-L1染色細胞(包括但不限於腫瘤細胞、淋巴細胞、巨噬細胞)相對於活腫瘤細胞之總數的百分比來定義。
使用PD-L1 IHC 22C3 pharmDx或PD-L1 IHC 28-8 pharmDx，可獲得樣品上PD-L1表現之CPS。PD-L1 IHC 28-8 pharmDx(美國加利福尼亞州聖克拉拉之安捷倫科技公司(Agilent Technologies, Santa Clara, California, USA))係一種用於偵測PD-L1表現之套組，已批准為與納武單抗一起用於癌症(如非鱗狀非小細胞肺癌(NSQNSCL)及頭頸部鱗狀細胞癌(SCCHN))之補充診斷。PD-L1 IHC 28-8 pharmDx包括經最佳化之試劑及方案，該試劑及方案係使用Autostainer Link 48及Dako PT Link預處理模組完成福爾馬林固定、石蠟包埋(FFPE)樣品之IHC染色所需的( Phillips T, Simmons P, Inzunza HD等人, 用於非小細胞肺癌之自動化 PD-L1 免疫組織化學 (IHC) 測定之開發( Development of an automated PD-L1 mmunohistochemistry (IHC) assay for non-small cell lung cancer) ,《應用免疫分子形態(Appl Immuno Molec Morph)》, 2015; 23(8):541-9)。簡而言之，FFPE樣品首先與PD-L1之單株第一抗體或陰性對照試劑(NCR)一起培育，隨後與對第一抗體之宿主物種具有特異性的連接子抗體一起培育，且隨後與偶聯至葡聚糖聚合物骨架之第二抗體分子及辣根過氧化物酶分子之即用型可視化試劑一起培育，隨後藉由光學顯微學以可視化PD-L1染色。
PD-L1 IHC 28-8 pharmDx用於CheckMate-649研究中。此係一項針對患有先前未經治療之晚期或轉移性胃癌、胃食管交界部癌症及食管腺癌之患者(n=1581)之隨機化、多中心、開放標籤試驗。此項試驗招募之患者不受PD-L1表現量之影響，且在中心實驗室使用PD-L1 IHC 28-8 pharmDx測定評估來自患者之腫瘤樣品。此臨床試驗顯示，具有CPS ≥ 5之PD-L1表現的患有腫瘤之患者的總生存期(OS)及無進展生存期(PFS)有統計學上顯著之改善，而未觀察到具有CPS低於5之PD-L1表現之患有腫瘤之患者的OS及PFS之此項改善(資訊自 https://www.fda.gov/media/124784/download獲得)。
不同的演算法可用於不同之腫瘤類型。例如，TPS可用於確定肺癌、頭頸癌及黑色素瘤中之PD-L1表現。CPS及IPS係對尿路上皮癌中之PD-L1表現的標準量測。而對於TPS而言，僅腫瘤細胞之PD-L1染色才視為PD-L1陽性，且除腫瘤細胞以外之細胞的染色不視為PD-L1陽性；CPS包括腫瘤相關免疫細胞中之PD-L1表現，而IPS僅限於某些免疫細胞(例如，腫瘤相關免疫細胞)中之PD-L1表現(參見 Schildhaus等人, PD-L1 診斷之預測值, 《病理學》 , 2018 年 11 月 ;39(6):498-519)。
在某些實施例中，PD-L1表現係藉由CPS與IHC確定的。如上文所描述的，CPS可基於生物樣品中PD-L1陽性細胞(包括但不限於腫瘤、淋巴細胞及巨噬細胞)相對於總腫瘤細胞之數目來確定，且因此允許在單個讀段中捕獲腫瘤及免疫細胞上之PD-L1表現。例如，PD-L1在生物樣品(如病變組織，如癌組織或腫瘤組織等)中之表現量為5%(或CPS為5)意謂相對於生物樣品中之總腫瘤細胞而言，5%之細胞(包括但不限於腫瘤、淋巴細胞及巨噬細胞)對PD-L1染色呈陽性。
在某些實施例中，在本文所提供之方法中，該個體確定為在細胞或病變組織中具有低PD-L1表現或無PD-L1表現。
如本文所使用的，術語「低PD-L1表現」可指PD-L1表現量低於或不超過參考水準。
在某些實施例中，關於PD-L1表現之術語「參考水準」係指PD-L1在生物樣品(如病變組織，如癌組織或腫瘤組織等)中之臨限值(例如最小)表現量，該生物樣品源自對用PD-1/PD-L1軸抑制劑進行之治療做出反應之個體。PD-L1之表現可藉由本文所提供之方法測定。對於不同之腫瘤類型及/或使用不同之PD-L1偵測測定，PD-L1表現之臨限值表現量可能不同。例如，胃癌之臨限值表現量可為5%(或CPS為5，藉由PD-L1 IHC 28-8 pharmDx測定得到)，亦意謂，本文所提供之方法適用於治療在胃癌組織中之PD-L1表現低於5%(或CPS為5，藉由PD-L1 IHC 28-8 pharmDx測定得到)且有CLDN18.2表現之癌症。在一些實施例中，胃癌之臨限值表現量亦可為藉由PD-L1 IHC 28-8 pharmDx測定得到之4%(或CPS為4)、3%(或CPS為3)、2%(或CPS為2)或1%(或CPS為1)。在其他實施例中，胃癌之臨限值水準可為藉由PD-L1 IHC 22C3 pharmDx測定得到之10%(或CPS為10)、9%(或CPS為9)、8%(或CPS為8)、7%(或CPS為7)、6%(或CPS為6)、5%(或CPS為5)、4%(或CPS為4)、3%(或CPS為3)、2%(或CPS為2)、或1%(或CPS為1)，其詳細描述參見如 Dako等人, 用免疫組織化學測定 PD-L1 IHC 22C3 pharmDx 評估實體瘤中 PD-L1 之組合陽性評分 (CPS) 之開發( Development of the combined positive score (CPS) for the evaluation of PD-L1 in solid tumors with the immunohistochemistry assay PD-L1 IHC 22C3 pharmDx), 《臨床腫瘤學雜誌(Journal of Clinical Oncology)》 , 第 35 卷 , 第 15 期 _ 增刊 , 2017 。
在本文所提供之方法的一些實施例中，該個體確定為在病變組織(例如，癌組織或腫瘤組織)中具有PD-L1表現，該PD-L1表現不超過20%(或CPS為20)、15%(或CPS為15)、10%(或CPS為10)、9%(或CPS為9)、8%(或CPS為8)、7%(或CPS為7)、6%(或CPS為6)、5%(或CPS為5)、4%(或CPS為4)、3%(或CPS為3)、2%(或CPS為2)或1%(或CPS為1)。
在某些實施例中，該個體確定為具有不超過20%、不超過15%、不超過10%、不超過9%、不超過8%、不超過7%、不超過6%、不超過5%、不超過4%、不超過3%、不超過2%或不超過1%之病變組織細胞對PD-L1表現呈陽性，但仍具有可藉由抗PD-L1診斷抗體偵測到之PD-L1表現。
在一些實施例中，該個體確定為在病變組織(例如，癌組織或腫瘤組織)中具有PD-L1表現，該PD-L1表現與在健康或非癌性組織中之表現相當。
如本文所使用的，術語「無PD-L1表現」係指在生物樣品中沒有任何可藉由抗PD-L1診斷抗體利用各種技術(如IHC)偵測到的PD-L1信號。在一些實施例中，該病變組織中之該PD-L1表現較低或不能被抗PD-L1診斷抗體偵測到。
在整個說明書中，用於偵測PD-L1表現之試劑可為抗PD-L1診斷抗體，如US20170285037A1中所述的22C3，其揭示內容已以全文引用之方式併入，以及可商購獲得之單株兔抗PD-L1，亦即純系28-8。
在本文所提供之方法的一些其他實施例中，該病變組織(例如，癌組織或腫瘤組織)中之PD-L1表現達到參考水準或與其相當或甚至高於參考水準。
治療方法
在某些實施例中，本文所提供之方法進一步包括向該個體投與CLDN18.2拮抗劑與PD-1/PD-L1軸抑制劑之組合。在某些實施例中，CLDN18.2拮抗劑及PD-1/PD-L1軸抑制劑分別以治療有效量投與個體。如本文所使用的，術語本文所提供之方法中使用之CLDN18.2拮抗劑或PD-1/PD-L1軸抑制劑之「治療有效量」將取決於此項技術已知之各種因素，例如個體之體重、年齡、既往病史、當前藥物、健康狀況及交叉反應之可能性、過敏、敏感性及不良副作用，以及投與途徑及疾病發展之程度。如由此等及其他情況或要求所指示的，一般技術者(例如，醫師或獸醫)可按比例減少或增加劑量。
在某些實施例中，CLDN18.2拮抗劑及/或PD-1/PD-L1軸抑制劑可以以約0.01 mg/kg至約100 mg/kg、約0.1 mg/kg至約30 mg/kg、約1 mg/kg至約3 mg/kg、約3 mg/kg至約30 mg/kg、約3 mg/kg至約20 mg/kg、約6 mg/kg至約20 mg/kg、約3 mg/kg至約10 mg/kg或約6 mg/kg至約10 mg/kg之治療有效劑量投與。在某些實施例中，投與劑量可以在治療過程中改變。在某些實施例中，投與劑量可以在治療過程中根據個體之反應而變化。可以調整劑量方案以提供最佳之期望反應(例如，治療反應)。例如，可以投與單次劑量，或可以隨時間推移投與若干分次劑量。
在某些實施例中，本發明提供治療個體之CLDN18.2相關疾病或病狀之方法，該個體已經鑑定為可能對CLDIN18.2拮抗劑及PD-1/PD-L1軸抑制劑之組合療法治療做出反應。在某些實施例中，該治療步驟包括向個體投與治療有效量之CLDIN18.2拮抗劑及治療有效量之PD-1/PD-L1軸抑制劑，該個體已鑑定為可能對CLDIN18.2拮抗劑及PD-1/PD-L1軸抑制劑之組合療法治療做出反應。
本文所提供之方法中使用之CLDN18.2拮抗劑可包括抗CLDN18.2抗體或其抗原結合片段。抗CLDN18.2抗體可為單株抗體、多株抗體、人源化抗體、嵌合抗體、重組抗體、雙特異性抗體、經標記之抗體、二價抗體或抗獨特型抗體。
在某些實施例中，抗CLDN18.2抗體對高表現CLDN18.2之生物樣品具有高結合親和力。
在某些實施例中，抗CLDN18.2抗體對中等表現CLDN18.2之生物樣品具有高結合親和力。
在某些實施例中，抗CLDN18.2抗體對低表現CLDN18.2之生物樣品具有高結合親和力。
生物樣品中CLDN18.2之高、中等或低表現可以以如上文該相同之方式定義，亦即藉由與健康或非癌性胃細胞或胃組織中之表現及/或與除胃以外之健康或非癌性組織或器官中之表現進行比較，或利用藉由IHC獲得之結果進行評分。
在某些實施例中，抗CLDN18.2抗體包括重鏈HCDR1、HCDR2及HCDR3及/或輕鏈LCDR1、LCDR2及LCDR3序列，其中： 該HCDR1序列包括 GYNMN(SEQ ID NO: 1)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該HCDR2序列包括 NIDPYYGGTSYNQKFKG(SEQ ID NO: 2)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該HCDR3序列包括 MYHGNAFDY(SEQ ID NO: 3)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該LCDR1序列包括 KSSQSLLNSGNLKNYLT(SEQ ID NO: 4)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該LCDR2序列包括 WASTRKS(SEQ ID NO: 5)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該LCDR3序列包括 QNDYSYPLT(SEQ ID NO: 6)或其序列同一性為至少80%之同源序列。
已知CDR負責抗原結合，然而，已經發現並非所有6個CDR均必然為必不可少的或不可改變的。換言之，可替換、或改變或修飾抗CLDN18.2抗體中之1、2或3個CDR，但仍基本上保留對CLDN18.2之特異性結合親和力。
在某些實施例中，抗CLDN18.2抗體包括 MYHGNAFDY之重鏈CDR3序列(SEQ ID NO: 21)。重鏈CDR3區位於抗原結合位點之中心，且因此認為與抗原接觸最多且為抗體對抗原之親和力提供最多之自由能。亦據信，重鏈CDR3係迄今為止抗原結合位點在長度、胺基酸組成及構象方面藉由多種多樣化機制之最多樣化CDR(Tonegawa S. 《自然》 302:575-81)。重鏈CDR3之多樣性足以產生大多數抗體特異性(Xu JL, Davis MM. 《免疫力(Immunity)》 13:37-45)以及期望之抗原結合親和力(Schier R等人, 《分子生物學雜誌》, 263:551-67)。
在一些實施例中，抗CLDN18.2抗體包括重鏈可變結構域之全部或一部分及/或輕鏈可變結構域之全部或一部分。在一個實施例中，抗CLDN18.2抗體係由本文所提供之重鏈可變結構域之全部或一部分組成之單結構域抗體。關於此類單結構域抗體之更多資訊在此項技術係可獲得的(參見例如美國專利第6,248,516號)。
在某些實施例中，抗CLDN18.2抗體包括重鏈可變區及輕鏈可變區，其中重鏈可變區包括SEQ ID NO: 7之胺基酸序列，且輕鏈可變區包括SEQ ID NO: 8之胺基酸序列。
在某些實施例中，該抗CLDN18.2抗體進一步包括免疫球蛋白恆定區，視情況選用之人Ig之恆定區，或視情況選用之人IgG之恆定區。在某些實施例中，該抗CLDN18.2抗體進一步包括人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4之恆定區。
在一些實施例中，免疫球蛋白恆定區包括重鏈恆定區及/或輕鏈恆定區。重鏈恆定區包括CH1區、鉸鏈區及/或CH2-CH3區。在某些實施例中，重鏈恆定區包括Fc區。在某些實施例中，輕鏈恆定區包括Cκ或Cλ。
在某些實施例中，本文所提供之抗CLDN18.2抗體及其抗原結合片段包括IgG1同型之恆定區。在某些實施例中，人IgG1之恆定區包括SEQ ID NO: 9或其具有至少80%(例如，至少85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)序列同一性之同源序列。
IgG1同型之恆定區可以誘導效應子功能，如ADCC或CDC。抗CLDN18.2抗體之效應子功能可以產生對表現CLDN18.2之細胞的細胞毒性。可使用各種測定，如Fc受體結合測定、C1q結合測定、細胞裂解測定，或前述任一用於確定ADCC或CDC之測定來評估效應子功能。
在某些實施例中，該恆定區包括一或多個胺基酸殘基取代或修飾，該一或多個胺基酸殘基取代或修飾賦予其相對於野生型恆定區之增加之CDC或ADCC。
如本文所使用的，「ADCC」或「抗體依賴性細胞介導之細胞毒性」係指細胞介導之反應，其中表現Fc受體(FcR)之非特異性細胞毒性細胞(例如，自然殺傷(NK)細胞、嗜中性白血球及巨噬細胞)識別靶細胞上結合之抗體且隨後使靶細胞裂解。靶細胞之裂解係細胞外的，需要直接的細胞間接觸且不涉及補體。ADCC可視為一種直接誘導不同程度之引起抗原呈遞之立即腫瘤破壞且誘導腫瘤定向之T細胞反應之機制。活體內誘導ADCC認為會產生腫瘤定向之T細胞反應及宿主衍生之抗體反應。在某些實施例中，該恆定區包括相對於SEQ ID NO: 9之一或多個胺基酸殘基取代，該一或多個胺基酸殘基取代選自由以下組成之群：L235V、F243L、R292P、Y300L、P396L或其任何組合。在某些實施例中，該恆定區包括SEQ ID NO: 11之序列，且視情況進一步包括SEQ ID NO: 10之序列。
在某些實施例中，該抗CLDN18.2抗體係人源化的。人源化抗體或抗原結合片段在其降低人之免疫原性方面是可觀的。人源化抗體在其可變區中係嵌合的，因為非人CDR序列移植至人或大體上之人FR序列。抗體或抗原結合片段之人源化基本上可藉由用非人(如鼠)CDR基因取代人免疫球蛋白基因中之對應人CDR基因來進行(參見例如Jones等人(1986) 《自然》 321:522-525；Riechmann等人, (1988) 《自然》 332:323-327；Verhoeyen等人(1988) 《科學(Science)》 239:1534-1536)。在某些實施例中，本發明之人源化輕鏈及重鏈在人類中基本上無免疫原性，且保持與CLDN18.2之親本抗體之親和力基本上相同的親和力或甚至比其親和力更高之親和力。
在某些實施例中，本文所提供之抗CLDN18.2抗體或其抗原結合片段包括重鏈可變區，該重鏈可變區包括選自由以下組成之群的序列：SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 14，以及其具有至少80%(例如，至少85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)之序列同一性但仍保留與CLDN18.2(特定言之人CLDN18.2)之特異性結合親和力的同源序列。
在某些實施例中，本文所提供之抗CLDN18.2抗體或其抗原結合片段包括輕鏈可變區，該輕鏈可變區包括選自由以下組成之群的序列：SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 16，以及其具有至少80%(例如，至少85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)之序列同一性但仍保留與CLDN18.2(特定言之人CLDN18.2)之特異性結合親和力之同源序列。
在某些實施例中，該抗CLDN18.2抗體包括重鏈可變區及輕鏈可變區，其中 該重鏈可變區包括選自由SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 13及SEQ ID NO: 14組成之群的胺基酸序列，且 該輕鏈可變區包括選自由SEQ ID NO: 15及SEQ ID NO: 16組成之群的胺基酸序列。
在某些實施例中，人源化抗CLDN18.2抗體可包括與人IgG1同型之恆定區融合之重鏈可變區及與人κ鏈之恆定區融合之輕鏈可變區。
本文所提供之人源化抗CLDN18.2抗體保留對表現CLDN18.2之生物樣品的特異性結合親和力，且在此方面至少與親本抗體相當或甚至優於親本抗體。本文所提供之人源化抗體亦可保留其功能，亦即所有抗體均可藉由ADCC、CDC及凋亡誘導之細胞殺傷作用，該凋亡由腫瘤細胞表面處之目標的交聯及直接抑制增殖所誘導。
在某些實施例中，該抗CLDN18.2抗體包括重鏈及輕鏈，其中 該重鏈包括SEQ ID NO: 39之胺基酸序列，且 該輕鏈包括SEQ ID NO: 40之胺基酸序列。
在某些實施例中，該抗CLDN18.2抗體能夠誘導PD-L1在該個體之該病變組織中之表現。
本文所提供之方法中使用之抗CLDN18.2抗體亦可涵蓋本文所提供之抗體序列之各種類型之變異體。
在某些實施例中，該變異體包括如上所述1個、2個或3個CDR序列、一或多個FR序列、本文所提供之重鏈可變區序列或輕鏈可變區序列及/或恆定區(例如，Fc區)中之一或多個修飾或取代。此類抗體變異體保留其親本抗體對CLDN 18.2之特異性結合親和力，但具有由修飾或取代賦予之一或多個期望性質。例如，抗體變異體可具有改善之抗原結合親和力、改善之糖基化模式、降低之糖基化率、減少之去胺基化、減少或增加之效應子功能、改善之FcRn受體結合、增加之藥代動力學半衰期、pH敏感性及/或與結合(例如，一或多個引入之半胱胺酸殘基)之相容性等。在某些實施例中，本文所提供之方法中使用之抗CLDN18.2抗體亦涵蓋具有改善之效應子功能(如ADCC或CDC)之糖基化變異體。
在某些實施例中，本文所提供之方法中使用之抗CLDN18.2抗體係無岩藻糖基化的。術語「無岩藻糖基化」或「無岩藻糖基化的」係指減少或除去與抗體連接之N-聚糖上之核心岩藻糖。人IgG抗體中之大多數聚糖稱為G0、G1及G2，其係複雜的雙四分體分子(biantennary molecules)，其核心岩藻糖殘基攜帶0個、1個或2個末端半乳糖。
無岩藻糖基化抗體變異體可使用此項技術已知之方法製備，例如如US 2003/0157108、WO 2000/61739、WO 2001/29246、US 2003/0115614、US 2002/0164328、US 2004/0093621、US 2004/0132140、US 2004/0110704、US 2004/0110282、US 2004/0109865、WO 2003/085119、WO 2003/084570、WO 2005/035586、WO 2005/035778、WO2005/053742、WO2002/031140；Okazaki等人, 《分子生物學雜誌》 336:1239-1249 (2004)；Yamane-Ohnuki等人, 《生物技術與生物工程(Biotech. Bioeng.)》, 87: 614 (2004)中所述的。
在某些實施例中，抗體糖基化變異體在抗體Fc中之CH2區之Asn297位點處進行無岩藻糖基化。Asn297係指位於Fc區中約位置297(Fc區殘基之EU編號)處之天冬醯胺殘基；然而，由於抗體中之微小序列變化，Asn297亦可位於位置297上游或下游約±3個胺基酸處，亦即，位置294與300之間。
在某些實施例中，本文所提供之方法中使用之抗CLDN18.2抗體亦涵蓋半胱胺酸工程化變異體，該變異體包括一或多個引入之游離半胱胺酸胺基酸殘基。游離半胱胺酸殘基為並非二硫橋之一部分的半胱胺酸殘基。半胱胺酸工程化變異體可用於藉由例如馬來醯亞胺或鹵代乙醯基在經工程化之半胱胺酸之位點處與例如細胞毒性化合物及/或成像化合物、標記或放射性同位素等結合。用於工程化抗體或抗原結合片段以引入游離半胱胺酸殘基之方法係此項技術已知的，參見例如，WO2006/034488。
在某些實施例中，本文所提供之方法中使用之抗CLDN 18.2抗體或其抗原結合片段之恆定區包括相對於SEQ ID NO: 9(亦即野生型序列)之一或多個胺基酸殘基取代，該一或多個胺基酸殘基取代選自由以下組成之群：L235V、F243L、R292P、Y300L、P396L或其任何組合。在某些實施例中，該恆定區包括SEQ ID NO: 11之序列。
在某些實施例中，本文所提供之方法中使用之抗CLDN18.2抗體亦涵蓋抗CLDN18.2抗原結合片段，如雙功能抗體、Fab、Fab'、F(ab') 2、Fd、Fv片段、二硫鍵穩定之Fv片段(dsFv)、(dsFv) 2、雙特異性dsFv(dsFv-dsFv')、二硫鍵穩定之雙功能抗體(ds雙功能抗體)、單鏈抗體分子(scFv)、scFv二聚體(二價雙功能抗體)、多特異性抗體、駱駝化單結構域抗體、奈米抗體、結構域抗體或二價結構域抗體。
在某些實施例中，本文所提供之方法中使用之抗CLDN18.2抗體為二價、四價、六價或多價的。如本文所使用的，術語「價」係指給定分子中存在指定數目之抗原結合位點。如此，術語「二價」、「四價」及「六價」分別表示在抗原結合分子中存在兩個結合位點、四個結合位點及六個結合位點。任何超過二價之分子均認為係多價的，涵蓋例如三價、四價、六價等。
若兩個結合位點均與同一抗原或同一抗原決定基特異性結合，則二價分子可為單特異性的。在某些實施例中，此提供比單價對應物強的與抗原或抗原決定基之結合。類似地，多價分子亦可為單特異性的。在某些實施例中，在二價或多價抗原結合部分中，結合位點之第一價及結合位點之第二價在結構上相同(亦即，具有相同之序列)或在結構上不同(亦即，儘管具有不同之序列，但具有相同之特異性)。
若兩個結合位點對不同之抗原或抗原決定基具有特異性，則二價亦可為雙特異性的。此亦適用於多價分子。例如，當兩個結合位點對第一抗原(或抗原決定基)係單特異性的且第三結合位點對第二抗原(或抗原決定基)是特異性的時，三價分子可為雙特異性的。可用於本文所提供之方法中之雙特異性抗體可靶向CLDN18.2及檢查點分子兩者，如PD-1、PD-L1、PD-L2、CLTA-4、SIRPα、TIM-3、LAG3、A2AR、CD160、2B4、TGFβ、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1、OX40、CD2、CD27、CD28、CD30、CD40、CD122、ICAM-1、IDO、NKG2C、SLAMF7、SIGLEC7、NKp80、CD160、B7-H3、LFA-1、1COS、4-1BB、GITR、BAFFR、HVEM、CD7、LIGHT、IL-2、IL-15、CD3、CD16或CD83。可用於本文所提供之方法中之示例性雙特異性抗體包括但不限於靶向CLDN 18.2及CD3之雙特異性抗體、靶向CLDN 18.2及4-1BB之雙特異性抗體、靶向CLDN及TGFβ之雙特異性抗體、靶向CLDN 18.2及SIRPα之雙特異性抗體以及靶向CLDN 18.2及IL-15之雙特異性抗體。
本文所提供之方法中使用之抗CLDAN18.2抗體亦可為抗體-藥物結合物(ADC)，該ADC包括上文所述與細胞毒性劑結合之抗CLDN18.2抗體中之任何抗體。
在某些實施例中，細胞毒性劑可為對細胞有害或可能損害或殺死細胞之任何藥劑。在某些實施例中，細胞毒性劑視情況為毒素、化療藥物(如DNA烷化劑、拓樸異構酶抑制劑、微管蛋白結合劑、生長抑制劑或其他抗癌藥物)或放射性同位素。
毒素之實例包括細菌毒素及植物毒素，例如，白喉毒素、外毒素A鏈(來自銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa))、蓖麻毒蛋白(ricin)、相思子毒素(abrin)、莫迪素(modeccin)、α-八疊球菌(alpha-sarcin)、油桐蛋白(Aleurites fordii. protein)、香石竹毒蛋白(dianthin protein)、洋商陸蛋白(Phytolaca americana)(PARI、PAPII及PAP-S)、苦瓜抑制劑(momordica charantia inhibitor)、麻瘋樹毒蛋白(curcin)、巴豆毒素(crotin)、肥皂草抑制劑(sapaonaria officinalis inhibitor)、白樹素(gelonin)、侷限麴菌素(restrictocin)、酚黴素(phenomycin)、伊諾黴素(enomycin)及單端孢黴烯類(tricothecenes)(例如參見WO 93/21232)。此類大分子毒素可使用此項技術已知之方法與本文所提供之抗體或抗原結合片段結合，例如Vitetta等人, (1987), 《科學》, 238:1098中所述的。
細胞毒性劑亦可為小分子毒素及化學治療劑，如格爾德黴素(geldanamycin)(Mandler等人(2000), 《美國國立癌研究所雜誌(Jour. of the Nat. Cancer Inst.)》, 92(19):1573-1581；Mandler等人, (2002) 《生物結合化學(Bioconjugate Chem.)》, 13:786-791)、美登素(maytansine)及美登木素生物鹼(maytansinoid)(EP 1391213；Liu等人, (1996), 《美國國家科學院院刊》, 93:8618-8623；美國專利第5,208,020號)、卡奇黴素(calicheamicin)(Lode等人, (1998) 《癌症研究(Cancer Res.)》, 58:2928；Hinman等人, (1993) 《癌症研究》 53:3336-3342)、紫杉醇(taxol)、細胞鬆弛素B、短桿菌肽D、溴化乙錠、吐根鹼、絲裂黴素、依託泊苷(etoposide)、替尼泊苷(tenoposide)、長春新鹼(vincristine)、長春鹼(vinblastine)、長春地辛(vindesine)、秋水仙鹼(colchicin)、阿黴素(doxorubicin)、柔紅黴素(daunorubicin)、二羥基炭疽菌素二酮(dihydroxy anthracin dione)、米托蒽醌(mitoxantrone)、光神黴素(mithramycin)、放線菌素D(actinomycin D)、1-去氫睾酮、糖皮質激素、普魯卡因(procaine)、丁卡因(tetracaine)、利多卡因(lidocaine)、普萘洛爾(propranolol)、嘌呤黴素(puromycin)及其類似物、抗代謝物(例如，甲胺喋呤、6-巰嘌呤、6-硫鳥嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶達卡巴嗪)、烷化劑(例如，氮芥、塞替派苯丁酸氮芥(thiotepa chlorambucil)、美法侖、卡莫司汀(BSNU)及洛莫司汀(CCNU)、環磷醯胺、白消安、二溴甘露醇、鏈脲黴素(streptozotocin)、絲裂黴素C及順-二氯二胺鉑(II)(DDP)順鉑)、蒽環黴素(anthracycline)(例如，柔紅黴素(以前稱為道諾黴素(daunomycin)及阿黴素)、抗生素(例如，更生黴素(dactinomycin)(以前稱為放線菌素)、博來黴素(bleomycin)、光神黴素及氨茴黴素(anthramycin)(AMC))、以及抗有絲分裂劑(例如，長春新鹼及長春鹼)、拓樸異構酶抑制劑及微管蛋白結合劑、鈣化黴素(calicheamicin)、美登木素生物鹼、尾海兔素(dolastatin)、澳瑞他汀(auristatin)，如MMAE及MMAF(美國專利第5,635,483號；第5,780,588號)、多洛他汀類(dolostatins)、單端孢黴烯(trichothecene)及CC1065以及其具有細胞毒性活性之衍生物。
細胞毒性劑亦可為高放射性同位素。實例包括At 211、I 131、I 125、Y 90、Re 186、Sm 153、Bi 212、P 32、Pb 212及Lu之放射性同位素。將放射性同位素與抗體結合之方法係此項技術已知的，例如，藉由合適之配體試劑(參見例如WO94/11026；《當代免疫學實驗指南(Current Protocols in Immunology)》, 第1及2卷, Coligen等人編輯, 紐約州紐約之威利-國際科學出版社(Wiley-Interscience, New York, N.Y.)出版(1991))。配體試劑具有可與放射性同位素金屬結合、螯合或以其他方式複合之螯合配體，且亦具有與抗體或抗原結合片段之半胱胺酸之巰基具有反應性之官能基。示例性螯合配體包括DOTA、DOTP、DOTMA、DTPA及TETA(德克薩斯州達拉斯之Macrocyclics公司(Macrocyclics, Dallas, Tex.))。
在某些實施例中，在本文所提供之方法中使用之ADC中，抗體(或其抗原結合片段)與一或多種細胞毒性劑結合，抗體與藥劑之比率為約1比約20、約1比約6、約2比約6、約3比約6、約2比約5、約2比約4或約3比約4。
本文所提供之方法中使用之抗CLDN18.2抗體亦可由表現嵌合抗原受體(CAR)或基因修飾之TCR之免疫細胞替換，該免疫細胞包括如上所述的抗CLDN18.2抗原結合結構域以及T細胞激活結構域。嵌合抗原受體(CAR)為將抗體之抗原結合結構域與T細胞激活之一或多個信號傳導結構域組合之工程化嵌合受體。免疫細胞(如T細胞及自然殺傷(NK)細胞)可經基因工程化以表現CAR。表現CAR之T細胞稱為CAR-T細胞。表現基因修飾之TCR之T細胞稱為TCR-T細胞。CAR及基因修飾之TCR可介導T細胞中之抗原特異性細胞免疫活性，從而使CAR-T/TCR-T細胞能夠消除表現靶向抗原之細胞(例如，腫瘤細胞)。在一個實施例中，將本文所提供之CAR-T/TCR-T細胞與在細胞(如癌細胞)上表現之CLDN18.2結合導致該CAR-T/TCR-T細胞增殖及/或激活，其中該激活之CAT-T/TCR-T細胞可以釋放細胞毒性因子，例如穿孔素、顆粒酶及顆粒溶素，且啟動癌細胞之細胞溶解及/或凋亡。
在一些實施例中，CAR之T細胞激活結構域包括共刺激信號傳導結構域及TCR信號傳導結構域，該共刺激信號傳導結構域及TCR信號傳導結構域可以隨機或特定之順序彼此連接，視情況使用長度為例如2至10個胺基酸之短肽連接子(例如，甘胺酸-絲胺酸雙聯體連接子)。
在一些實施例中，CAR進一步包括跨膜結構域。當在細胞中表現時，抗CLDN18.2抗原結合結構域是細胞外的，而T細胞激活結構域是細胞內的。
在某些實施例中，CAR包括抗CLDN18.2抗原結合結構域、跨膜結構域、共刺激信號傳導區及TCR信號傳導結構域，其中抗原結合結構域與CLDN18.2特異性結合，且包括本文所提供之抗體的抗原結合片段。
在某些實施例中，CAR或基因修飾之TCR係雙特異性的。在某些實施例中，本文所提供之方法中使用之雙特異性CAR或TCR與CLDN18.2之第一抗原決定基及第二抗原決定基特異性結合，或能夠與CLDN18.2及第二抗原(如CD3、4-1BB、TGFβ、SIRPa及IL-15)特異性結合。
術語「PD-1/PD-L1軸抑制劑」係指抑制PD-1/PD-L1軸結合配偶體(如PD-1及PD-L1)之間的相互作用以移除由PD-1/PD-L1信號傳導軸上之信號傳導產生之T細胞功能(例如，增殖、細胞因子產生及靶細胞殺死)之抑制效應之分子(例如，小分子、抗體等)。PD-1/PD-L1軸抑制劑可包括PD-1抑制劑或PD-L1抑制劑。
如本文所使用的，術語「PD-1抑制劑」係指減少、廢除、抑制、阻斷或干擾由PD-1與其結合配偶體(如PD-L1、PD-L2)中之一或多個結合配偶體之相互作用而產生的信號轉導之分子。在某些實施例中，PD-1抑制劑為阻斷PD-1與其結合配偶體(如PD-L1、PD-L2)結合之分子。例如，PD-1抑制劑可為抗PD-1抗體或其抗原結合片段、融合蛋白、寡肽、免疫黏附素及其他可以減少、廢除、抑制、阻斷或干擾由PD-1與PD-L1及/或PD-L2之相互作用產生的信號轉導之分子。在一些實施例中，PD-1抑制劑為抗PD-1抗體。在一些實施例中，PD-1抑制劑選自由以下組成之群：納武單抗(OPDIVO；BMS-936558)、多塔利單抗(TSR-042)、派姆單抗(KEYTRUDA；MK-3475)、MEDI0680(AMP-514)、MEDI4736、BI 754091、匹地利珠單抗(CT-011)、西米普利單抗(LIBTAYO，REGN2810)、斯巴達珠單抗(PDR001)、西利單抗(JNJ 63723283)、特瑞普利單抗(JS001)、PF-06801591、替雷利珠單抗(BGB-A317)、AMP-224(GSK-2661380)、ABBV-181、蘭博利珠單抗或卡瑞利珠單抗(SHR-1210)、信迪利單抗(Tyvyt，IBI308)、派安普利單抗(AK105)。
在一些實施例中，該PD-1抑制劑為納武單抗(OPDIVO；BMS-936558)。
在一些實施例中，本文所提供之方法中使用之PD-1抑制劑包括抗PD-1抗體，該抗PD-1抗體包括重鏈HCDR1、HCDR2及HCDR3及/或輕鏈LCDR1、LCDR2及LCDR3序列，其中： 該HCDR1序列包括NSGMH(SEQ ID NO: 55)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該HCDR2序列包括VIWYDGSKRYYADSVKG(SEQ ID NO: 56)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該HCDR3序列包括NDDY(SEQ ID NO: 57)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該LCDR1序列包括RASQSVSSYLA(SEQ ID NO: 58)或其序列一致性至少為80%之同源序列； 該LCDR2序列包括DASNRAT(SEQ ID NO: 59)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該LCDR3序列包括QQSSNWPRT(SEQ ID NO: 60)或其序列同一性為至少80%之同源序列。
在某些實施例中，本文所提供之方法中使用之PD-1抑制劑包括包含重鏈可變區及輕鏈可變區之抗PD-1抗體，其中 該重鏈可變區包括SEQ ID NO: 61之胺基酸序列，且 該輕鏈可變區包括SEQ ID NO: 62之胺基酸序列。
在某些實施例中，本文所提供之方法中使用之PD-1抑制劑包括包含重鏈及輕鏈之抗PD-1抗體，其中 該重鏈包括SEQ ID NO: 63之胺基酸序列，且 該輕鏈包括SEQ ID NO: 64之胺基酸序列。
術語「PD-L1抑制劑」係指減少、廢除、抑制、阻斷或干擾由PD-L1與其結合配偶體(如PD-1、B7-1)中之一或多個結合配偶體之相互作用產生之信號轉導之分子。例如，PD-L1抑制劑可為抗PD-L1抗體或其抗原結合片段、融合蛋白、免疫黏附素、寡肽及其他減少、廢除、抑制、阻斷或干擾由PD-L1與其結合配偶體(如PD-1、B7-1)中之一或多個結合配偶體之相互作用產生之信號轉導之分子。在一些實施例中，PD-L1抑制劑係抗PD-L1抗體。在一些實施例中，抗PD-L1抗體選自由以下組成之群：阿替利珠單抗(TECENTRIQ；R05541267；MPDL3280A；RG7446)、BMS-936559、阿維單抗(bavencio)、洛達利單抗(LY3300054)、德瓦魯單抗(MEDI4736)、CX-072(Proclaim-CX-072)、FAZ053、KN035、MDX-1105、STI-1040、CS1001、阿得貝利單抗(SHR-1316)及SHR-1701。
在一些實施例中，本文所提供之方法中使用之PD-L1抑制劑係靶向PD-L1及另一個檢查點分子兩者之雙特異性抗體，如PD-1、PD-L1、PD-L2、CLTA-4、SIRPα、TIM-3、LAG3、A2AR、CD160、2B4、TGFβ、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1、OX40、CD2、CD27、CD28、CD30、CD40、CD122、ICAM-1、IDO、NKG2C、SLAMF7、SIGLEC7、NKp80、CD160、B7-H3、LFA-1、1COS、4-1BB、GITR、BAFFR、HVEM、CD7、LIGHT、IL-2、IL-15、CD3、CD16或CD83。在某些實施例中，本文所提供之方法中使用之PD-L1抑制劑為靶向PD-L1及另一個檢查點分子兩者之雙特異性抗體，如TGFβ、4-1BB、CTLA4、LAG3或TIGIT。
在某些實施例中，本文所提供之方法中使用之PD-L1抑制劑包括抗PD-L1抗體，該抗PD-L1抗體包括重鏈HCDR1、HCDR2及HCDR3及/或輕鏈LCDR1、LCDR2及LCDR3序列，其中： 該HCDR1序列包括DYYMN(SEQ ID NO: 22)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該HCDR2序列包括DINPNNAETLYNHKFKG(SEQ ID NO: 23)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該HCDR3序列包括WGDGPFAY(SEQ ID NO: 24)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該LCDR1序列包括KASQNVGAAVA(SEQ ID NO: 25)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該LCDR2序列包括SVSDRYT(SEQ ID NO: 26)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該LCDR3序列包括QQYSNYPT(SEQ ID NO: 27)或其序列同一性為至少80%之同源序列。
在某些實施例中，本文所提供之方法中使用之PD-L1抑制劑包括包含重鏈可變區及輕鏈可變區之抗PD-L1抗體，其中 該重鏈可變區包括SEQ ID NO: 17之胺基酸序列，且 該輕鏈可變區包括SEQ ID NO: 18之胺基酸序列。
在某些實施例中，本文所提供之方法中使用之PD-L1抑制劑包括包含重鏈及輕鏈之抗PD-L1抗體，其中 該重鏈包括SEQ ID NO: 19或SEQ ID NO: 20之胺基酸序列，且 該輕鏈包括SEQ ID NO: 21之胺基酸序列。
在某些實施例中，本文所提供之方法中使用之PD-L1抑制劑包括抗PD-L1抗體，該抗PD-L1抗體包括重鏈HCDR1、HCDR2及HCDR3及/或輕鏈LCDR1、LCDR2及LCDR3序列，其中： 該HCDR1序列包括TYWMH(SEQ ID NO: 32)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該HCDR2序列包括MIQPNSGGTKYNEKFKK(SEQ ID NO: 33)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該HCDR3序列包括GAGTVDYFDY(SEQ ID NO: 34)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該LCDR1序列包括RASESVDIYGNSFMH(SEQ ID NO: 35)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該LCDR2序列包括RASNLES(SEQ ID NO: 36)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該LCDR3序列包括QQSTEDPYT(SEQ ID NO: 37)或其序列同一性為至少80%之同源序列。
在某些實施例中，本文所提供之方法中使用之PD-L1抑制劑包括包含重鏈可變區及輕鏈可變區之抗PD-L1抗體，其中 該重鏈可變區包括SEQ ID NO: 28之胺基酸序列，且 該輕鏈可變區包括SEQ ID NO: 29之胺基酸序列。
在某些實施例中，本文所提供之方法中使用之PD-L1抑制劑包括包含重鏈及輕鏈之抗PD-L1抗體，其中 該重鏈包括SEQ ID NO: 30之胺基酸序列，且 該輕鏈包括SEQ ID NO: 31之胺基酸序列。
在某些實施例中，本文所提供之方法中使用之PD-L1抑制劑包括抗PD-L1抗體，該抗PD-L1抗體包括重鏈HCDR1、HCDR2及HCDR3及/或輕鏈LCDR1、LCDR2及LCDR3序列，其中： 該HCDR1序列包括DSWIH(SEQ ID NO: 45)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該HCDR2序列包括WISPYGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO: 46)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該HCDR3序列包括RHWPGGFDY(SEQ ID NO: 47)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該LCDR1序列包括RASQDVSTAVA(SEQ ID NO: 48)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該LCDR2序列包括SASFLYS(SEQ ID NO: 49)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該LCDR3序列包括QQYLYHPAT(SEQ ID NO: 50)或其序列同一性為至少80%之同源序列。
在某些實施例中，本文所提供之方法中使用之PD-L1抑制劑包括包含重鏈可變區及輕鏈可變區之抗PD-L1抗體，其中 該重鏈可變區包括SEQ ID NO: 51之胺基酸序列，且 該輕鏈可變區包括SEQ ID NO: 52之胺基酸序列。
在某些實施例中，本文所提供之方法中使用之PD-L1抑制劑包括包含重鏈及輕鏈之抗PD-L1抗體，其中 該重鏈包括SEQ ID NO: 53之胺基酸序列，且 該輕鏈包括SEQ ID NO: 54之胺基酸序列。
本文所提供之方法中使用之CLDN18.2拮抗劑及PD-1/PD-L1軸抑制劑可以藉由此項技術中已知之任何途徑投與，例如，非經腸(例如，皮下、腹膜內、靜脈內，包括靜脈注射、肌肉內或皮內注射)或非經腸(例如，口服、鼻內、眼內、舌下、直腸或局部)途徑。在某些實施例中，該投與為經口服、經鼻、靜脈內、皮下、舌下或肌肉內投與。
在某些實施例中，包括抗CLDN18.2抗體之該組合物之該投與在包括PD-1/PD-L1軸抑制劑之該組合物之該投與之前、同時或之後。
在此等實施例中之某些實施例中，在本文所提供之方法中與一或多種PD-1/PD-L1軸抑制劑組合投與之CLDN18.2拮抗劑可與該一或多種PD-1/PD-L1軸抑制劑同時投與，且在此等實施例中之某些實施例中，CLDN18.2拮抗劑及該一或多種PD-1/PD-L1軸抑制劑可作為同一藥物組合物之一部分投與。然而，與PD-1/PD-L1軸抑制劑「組合」投與之CLDN18.2拮抗劑不必與該藥劑同時投與或與該藥劑在同一組合物中投與。在PD-1/PD-L1軸抑制劑之前或之後投與的CLDN18.2拮抗劑認為係與本文所用之片語PD-1/PD-L1軸抑制劑「組合」投與的，亦即使CLDN18.2拮抗劑及PD-1/PD-L1軸抑制劑係藉由不同途徑投與的。在可能之情況下，與CLDN18.2拮抗劑組合投與之PD-1/PD-L1軸抑制劑根據PD-1/PD-L1軸抑制劑之產品資訊表所列之時間表或根據《2003年醫師案頭參考(Physicians' Desk Reference 2003)》(醫師案頭參考, 第57版; 醫療經濟學公司(Medical Economics Company); ISBN: 1563634457; 第57版(2002年11月))或此項技術熟知之方案投與。
在另一態樣中，本發明提供一種藥物組合物在製備用於治療有需要之個體之疾病或病狀之藥物中的用途，該藥物組合物包括治療有效量之以下各項：a)CLDN18.2拮抗劑；b)PD-1/PD-L1軸抑制劑；或c)兩者，以及一或多種醫藥學上可接受之載劑。在一些實施例中，該疾病或病狀之特徵在於：a)病變組織中之CLDN18.2表現；以及b)該病變組織中之低PD-L1表現或無PD-L1表現。
II. 套組
在另一態樣中，本發明提供可用於治療有需要之個體之疾病或病狀的套組，該套組包括包含CLDN18.2拮抗劑之第一容器及包含PD-1/PD-L1軸抑制劑之第二容器，以及視情況選用之該套組的使用說明。在一些實施例中，該疾病或病狀之特徵在於：a)病變組織中之CLDN18.2表現；以及b)該病變組織中之低PD-L1表現或無PD-L1表現。合適之容器包括例如小瓶(例如，雙腔小瓶)、瓶子、注射器(如單腔注射器或雙腔注射器)及試管。容器可由多種材料形成，如玻璃或塑膠。
在另一態樣中，本發明提供套組，其包括CLDN18.2拮抗劑及包裝說明書，該包裝說明書包括使用該CLDN18.2拮抗劑與PD-1/PD-L1軸抑制劑進行組合以治療有需要之個體之疾病或病狀的說明書。在一些實施例中，該疾病或病狀之特徵在於：a)病變組織中之CLDN18.2表現；以及b)該病變組織中之低PD-L1表現或無PD-L1表現。
在另一態樣中，本發明提供套組，其包括PD-1/PD-L1軸抑制劑及包裝說明書，該包裝說明書包括使用該PD-1/PD-L1軸抑制劑與CLDN18.2拮抗劑進行組合以治療有需要之個體之疾病或病狀之說明。在一些實施例中，該疾病或病狀之特徵在於：a)病變組織中之CLDN18.2表現；以及b)該病變組織中之低PD-L1表現或無PD-L1表現。
在另一態樣中，本發明提供一種套組，其包括抗CLDN18.2抗體或其抗原結合片段及包裝說明書，該包裝說明書包括將抗CLDN18.2抗體或其抗原結合片段與PD-1/PD-L1軸抑制劑組合使用以治療具有低CLDN18.2表現及/或PD-L1表現之個體之疾病或病狀。任何本文所述的PD-1/PD-L1軸抑制劑或證明對抑制PD-1/PD-L1軸信號傳導有效之PD-1/PD-L1軸抑制劑中均可包括在套組中。
如本文所使用的，術語「包裝說明書」係指包括在藥品商業包裝中之說明，其中包括關於例如適應症、劑量、用法、投與、禁忌症、與包裝產品一起使用之其他藥品及/或關於使用此類藥品之警告之資訊。
在另一態樣中，本發明亦提供一種用於預測個體對用CLDN18.2拮抗劑與PD-1/PD-L1軸抑制劑予以組合進行之治療之反應性的套組，該套組包括：一或多種用於偵測自該個體獲得之生物樣品中之CLDN18.2及/或PD-L1之存在的試劑；或一或多種用於量測自該個體獲得之生物樣品中之CLDN 18.2及/或PD-L1之表現量之試劑。在某些實施例中，該生物樣品係腫瘤組織。在某些實施例中，該套組進一步包括關於預測個體對用CLDN18.2拮抗劑與PD-1/PD-L1軸抑制劑予以組合進行之治療之反應性的說明。說明可包括如上所述的內容。
該套組可進一步包括自商業及使用者之角度所期望的其他材料，包括其他緩衝液、稀釋劑、過濾器、針及注射器。
III. 疾病或病狀
本文所提供之方法或套組所要診斷、致敏或治療之疾病或病狀可為癌症。在某些實施例中，該癌症選自由以下組成之群：胃癌、肺癌、支氣管癌、骨癌、肝及膽管癌、胰臟癌、乳癌、肝癌、卵巢癌、睾丸癌、腎癌、膀胱癌、頭頸癌、脊柱癌、腦癌、子宮頸癌、子宮癌、子宮內膜癌、大腸癌、大腸直腸癌、直腸癌、肛門癌、食道癌、胃腸癌、皮膚癌、前列腺癌、垂體癌、胃癌、陰道癌、甲狀腺癌、膠質母細胞瘤、星形細胞瘤、黑色素瘤、骨髓增生異常症候群、肉瘤、畸胎瘤及腺癌。
癌症之實例包括但不限於非小細胞肺癌(鱗狀/非鱗狀)、小細胞肺癌、腎細胞癌、大腸直腸癌、大腸癌、卵巢癌、乳癌(包括基底乳癌、導管癌及小葉乳癌)、胰臟癌、胃癌、膀胱癌、食道癌、間皮瘤、黑色素瘤、頭頸癌、甲狀腺癌、肉瘤、前列腺癌、膠質母細胞瘤、子宮頸癌、胸腺癌、骨髓瘤、蕈樣肉芽腫病、梅克爾細胞癌(merkel cell cancer)、肝細胞癌(HCC)、纖維肉瘤、黏液肉瘤、脂肪肉瘤、軟骨肉瘤、成骨肉瘤及其他肉瘤、滑膜瘤、間皮瘤、尤文氏瘤(Ewing's tumor)、平滑肌肉瘤、橫紋肌肉瘤、淋巴性惡性腫瘤、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、甲狀腺髓樣癌、甲狀腺乳頭狀癌、嗜鉻細胞瘤皮脂腺癌、乳頭狀癌、乳頭狀腺癌、髓樣癌、支氣管癌、肝癌、膽管癌、絨毛膜癌、威爾姆斯氏腫瘤(Wilms' tumor)、子宮頸癌、睾丸腫瘤、精原細胞瘤、經典霍奇金淋巴瘤(classical Hodgkin lymphoma，CHL)、原發性縱隔大B細胞淋巴瘤、T細胞/富組織細胞之B細胞淋巴瘤、急性淋巴細胞白血病、急性髓細胞白血病(acute myelocytic leukemia)、急性骨髓性白血病(acute myelogenous leukemia)、慢性髓細胞(粒細胞)白血病(chronic myelocytic (granulocytic)leukemia)、慢性髓細胞性白血病(chronic myelogenous leukemia)、慢性淋巴細胞白血病、真性紅細胞增多症、肥大細胞衍生之腫瘤、EBV陽性及陰性PTLD及彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、漿細胞性淋巴瘤、結外NK/T細胞淋巴瘤、鼻咽癌、HHV8相關原發性滲出性淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma)、多發性骨髓瘤、華氏巨球蛋白血症(Waldenstrom's macroglobulinemia)、重鏈病、骨髓增生異常症候群、毛細胞白血病及脊髓發育不良、原發性CNS淋巴瘤、脊柱軸腫瘤、腦幹膠質瘤、星形細胞瘤、成神經管細胞瘤、顱咽管瘤、附睾瘤、松果體瘤、血管母細胞瘤、聽神經瘤、少突膠質瘤、腦膜瘤、神經母細胞瘤及視網膜母細胞瘤。
在某些實施例中，該癌症係胃癌、肺癌、大腸癌或其組合。
在某些實施例中，該癌症係表現CLDN18.2之癌症。如本文所使用的，「表現CLDN18.2之癌症」係指涉及表現CLDN18.2之癌細胞的任何癌症或腫瘤。
表現CLDN18.2之癌症之實例包括但不限於胃癌、食道癌、胰臟癌、肺癌，如非小細胞肺癌(NSCLC)及小細胞肺癌(SCLC)，卵巢癌、大腸癌、大腸直腸癌、胃腸道間質瘤(GIST)、胃腸類癌腫瘤、直腸癌、肛門癌、膽管癌、小腸癌、闌尾癌、前列腺癌、腎癌(例如，腎細胞癌)、肝癌、頭頸癌及膽囊癌以及其轉移，例如，胃癌轉移，如克魯肯伯格瘤(Krukenberg tumor)，腹膜轉移及淋巴結轉移。
在某些實施例中，表現CLDN18.2之癌症可為腺癌，例如，晚期腺癌。在某些實施例中，該癌症選自胃腺癌、食道腺癌、胰臟管腺癌、膽管腺癌、肺腺癌及卵巢腺癌。在某些實施例中，表現CLDN18.2之癌症包括胃癌、食道癌，特定言之下食道癌，食道-胃交界部癌症及胃食道癌。 實例
雖然已經參照具體實施例(其中一些為較佳實施例)具體地示出及描述本發明，但熟習此項技術者應理解，可在其中進行形式及細節上之各種改變而不背離如本文所揭示之本發明之精神及範圍。
實例 1 ：在存在 PBMC 之情況下抗 claudin18.2(CLDN18.2) 抗體對腫瘤細胞上之 PD-L1 表現的上調
在此測定中，三個不同的表現CLDN18.2之胃腫瘤細胞株NUGC-4(JCRB，目錄號JCRBB0834)、KATOIII(ATCC，目錄號HTB-103)及SNU-620(Cobioer，目錄號CBP60508)用作靶細胞，且添加至細胞培養板中。無抗體、30 µg/ml之抗CLDN18.2抗體18B10、30 µg/ml之同型對照hIgG1或5 ng/ml之IFN-γ與靶細胞一起添加至對應孔中。在37℃下持續共培養微孔板30分鐘後，添加人PBMC作為效應細胞，其中E/T比率為40:1。在37℃下將板培育72小時。培育結束時，將每孔100 µl之細胞培養上清液轉移至另一個接種有相同之靶細胞的細胞培養板中。在37℃下將第二微孔板培育72小時後，收集靶細胞，且使用小鼠抗人PD-L1抗體(BD Pharmingen，目錄號557924)藉由流式細胞術分析PD-L1表現。S1代表單獨之靶細胞之上清液；S2代表靶細胞及人PBMC與同型對照hIgG1之上清液；S3代表靶細胞及人PBMC與抗CLDN18.2抗體18B10之上清液；S4代表靶細胞與IFN-γ之上清液。
如圖1A-1C所示，當與在靶細胞中表現基本水準之PD-L1之S1組相比時，S3及S4組示出PD-L1之表現增加，而S2組僅微小之變化。此結果表明，抗CLDN18.2抗體可上調靶腫瘤細胞之PD-L1表現。當抗CLDN 18.2抗體及PD-1/PD-L1軸抑制劑兩者組合以進行癌症治療時，其增加潛在協同作用之可能性。
實例 2 ：抗 CLDN18.2 抗體及抗 PD-L1 抗體 AM4B6 在腫瘤模型中進行組合
為了評估將claudin 18.2抗體及檢查點抑制劑(如抗PDL1抗體)組合之潛在協同作用，使用NCI-H460-CLDN18.2異種移植模型(作為肺癌模型)、CT-26-CLDN18.2同基因模型(作為大腸直腸癌模型)及MC38-CLDN18.2同基因模型(作為大腸腺癌模型)進行了如下實驗。
1. 抗 CLDN18.2 抗體及抗 PD-L1 抗體在 NCI-H460-CLDN18.2 異種移植瘤模型中之抗腫瘤療效
NCI-H460-CLDN18.2購自Kyinno(目錄號，KC-1450)，其穩定地轉染人CLDN18.2表現。藉由胰蛋白酶-EDTA處理(海克隆公司(Hyclone))，每週例行對腫瘤細胞進行兩次傳代培養。採集在指數生長期中生長之細胞且計數以進行腫瘤接種。向雌性SPF級NOD-SCID小鼠接種3 × 10^6個NCI-H460-CLDN18.2細胞及1.5 × 10^6個人PBMC以及50%之基質膠。在接種後大約4小時，選擇動物且將其隨機分為4組(n=10)。隨後，藉由腹膜內注射，用10 mg/kg同型對照、10 mg/kg抗CLDN18.2抗體18B10、10 mg/kg抗PD-L1抗體AM4B6、10 mg/kg抗CLDN18.2抗體18B10加10 mg/kg抗PD-L1抗體AM4B6處理動物，每週兩次，持續5週。使用卡尺(INSIZE)在兩個維度上每週量測兩次或三次腫瘤大小，且使用以下公式以mm^3為單位表示體積：V=0.5 a × b^2，其中a及b分別為腫瘤之長直徑及短直徑。使用Prism GraphPad分析結果且表示為平均值±S.E.M.。藉由T檢驗進行兩組之間的比較，且若p ＜0.05(*)及p ＜0.01(**)，則認為差異係顯著的。
如圖2所示，與同型對照相比，抗CLDN18.2抗體18B10可輕微(但在統計學上顯著地)抑制腫瘤生長，而單獨之抗PD-L1抗體AM4B6對腫瘤生長無顯著影響。具體地，AM4B6組僅有非常輕微之抑制作用，其中TGI為17.6%(表1)。相比之下，兩種抗體之組合對腫瘤生長有顯著改善作用，且TGI增加至53.6%(表1)。
表 1 ： 第 29 天， 組合療法對 NCI-H460-CLDN18.2 及 hPBMC 共接種異種移植腫瘤模型之腫瘤生長抑制作用
處理 (n=10) 腫瘤大小 (mm 3) TGI(%) 相對於同型對照之P值
同型對照10 mg/kg 675.86 ± 73.50 / /
18B10 10 mg/kg 425.01 ± 58.32 37.1 0.0162
AM4B6 10 mg/kg 557.06 ± 67.47 17.6 0.2514
18B10 + AM4B6 10 + 10 mg/kg 313.57 ± 35.36 53.6 0.0004
2. 抗 CLDN18.2 抗體及抗 PD-L1 抗體在 CT26-CLDN18.2 同基因腫瘤模型中之抗腫瘤療效
CT26係同基因小鼠腫瘤模型。CT26-CLDN18.2購自Kyinno(目錄號，KC-1195)，其穩定地轉染人CLDN18.2表現。藉由胰蛋白酶-EDTA處理(海克隆公司)，每週例行對腫瘤細胞進行兩次傳代培養。採集在指數生長期中生長之細胞且計數以進行腫瘤接種。向雌性SPF級BALB/c小鼠接種2 × 10^6個CT26-CLDN18.2細胞。當腫瘤生長至80-120 mm 3時，選擇動物且隨機分為4組(n=8)。隨後，藉由腹膜內注射，用10 mg/kg同型對照、10 mg/kg抗CLDN18.2抗體18B10、3 mg/kg抗PD-L1抗體阿替利珠單抗、10 mg/kg抗CLDN18.2抗體18B10加3 mg/kg抗PD-L1抗體阿替利珠單抗處理動物，每週兩次，持續3週。使用卡尺(INSIZE)在兩個維度上每週量測兩次腫瘤大小，且使用以下公式以mm^3為單位表示體積：V=0.5 a × b^2，其中a及b分別為腫瘤之長直徑及短直徑。使用Prism GraphPad分析結果且表示為平均值±S.E.M.。藉由T檢驗進行兩組之間的比較，且若p ＜0.05(*)及p ＜0.01(**)，則認為差異為顯著的。
如圖3所示，投與後，10 mg/kg同型對照組中之小鼠之腫瘤體積繼續增加。如圖3所示，與用同型對照處理相比，用10 mg/kg 18B10、3 mg/kg阿替利珠單抗、10 mg/kg 18B10加3 mg/kg阿替利珠單抗進行組合處理全部示出更佳之抗腫瘤活性。此外，組合組中之腫瘤抑制活性在最後一個給藥日(第19天)後持續約2週，表明組合治療可能存在一些免疫記憶效應。而且，兩種抗體之組合的TGI增加至88.44%(表2)。
表 2 ： 第 33 天，組合療法對 CT26-CLDN18.2 同基因腫瘤模型之腫瘤生長抑制作用
處理 (n=10) 腫瘤大小 (mm 3) TGI(%) CR 相對於同型對照之P值
同型對照10 mg/kg 4681.63 ± 847.75 / 0/8 /
18B10 10 mg/kg 3130.96 ± 714.01 33.12 0/8 ＞ 0.05
阿替利珠單抗3 mg/kg 1350.18 ± 366.69 71.16 2/8 ＜ 0.01
18B10 +阿替利珠單抗10 + 3 mg/kg 541.23 ± 269.30 88.44 5/8 ＜ 0.01
3. 抗 CLDN18.2 抗體及抗 PD-L1 抗體在 MC38 -CLDN18.2 同基因腫瘤模型中之抗腫瘤療效
MC38-CLDN18.2購自Kyinno(目錄號，KC-1449)，其穩定地轉染人CLDN18.2表現。藉由胰蛋白酶-EDTA處理(海克隆公司)，每週例行對腫瘤細胞進行兩次傳代培養。採集在指數生長期中生長之細胞且計數以進行腫瘤接種。向雌性SPF級C57BL/6小鼠接種2 × 10^6個MC38-CLDN18.2細胞。當腫瘤生長至70-100 mm 3時，選擇動物且隨機分為4組(n=6)。隨後，藉由腹膜內注射，用13 mg/kg同型對照、10 mg/kg抗CLDN18.2抗體18B10、3 mg/kg抗PD-L1抗體阿替利珠單抗、10 mg/kg抗CLDN18.2抗體18B10加3 mg/kg抗PD-L1抗體阿替利珠單抗處理動物，每週兩次，持續4週。使用卡尺(INSIZE)在兩個維度上每週量測兩次腫瘤大小，且使用以下公式以mm^3為單位表示體積：V=0.5 a × b^2，其中a及b分別為腫瘤之長直徑及短直徑。使用Prism GraphPad分析結果且表示為平均值±S.E.M.。藉由T檢驗進行兩組之間的比較，且若p ＜0.05(*)及p ＜0.01(**)，則認為差異係顯著的。
如圖4所示，投與後，與用同型對照處理相比，用10 mg/kg 18B10、3 mg/kg阿替利珠單抗、10 mg/kg 18B10加3 mg/kg阿替利珠單抗之組合全部示出更佳之抗腫瘤活性，示出於圖4中。此外，組合組中之腫瘤抑制活性在最後一個給藥日(第28天)後持續約3週，此與CT26-CLDN18.2模型之療效資料相似。18B10與PD-L1 Ab進行組合可能增加一定免疫記憶效應，以使抗腫瘤活性保持較長時間。而且，兩種抗體之組合的TGI增加至94.34%(表3)。
表 3 ： 第 51 天，組合療法對 MC38-CLDN18.2 同基因腫瘤模型之腫瘤生長抑制作用
處理 (n=10) 腫瘤大小 (mm 3) TGI(%) CR 相對於同型對照之P值
同型對照13 mg/kg 4000.89 ± 806.98 / 0/6 /
18B10 10 mg/kg 2008.68 ± 536.32 49.79 0/6 ＞ 0.05
阿替利珠單抗3 mg/kg 1154.61 ± 526.35 71.14 0/6 ＜ 0.05
18B10 + 阿替利珠單抗10 + 3 mg/kg 226.42 ± 99.82 94.34 1/6 ＜ 0.01
實例 3 ：抗 CLDN18.2 抗體及抗 PD-1 抗體 RMP1-14 在腫瘤模型中進行組合
在CT26-CLDN18.2同基因腫瘤模型中，亦評估抗CLDN18.2抗體及抗PD-1抗體之抗腫瘤療效。
藉由胰蛋白酶-EDTA處理(海克隆公司)，每週例行對CT26-CLDN18.2細胞進行兩次傳代培養。採集在指數生長期中生長之細胞且計數以進行腫瘤接種。向雌性SPF級BALB/c小鼠接種2 × 10^6個CT26-CLDN18.2細胞。當腫瘤生長至80 mm 3時，選擇動物且隨機分為4組(n=10)。隨後，藉由腹膜內注射，用10 mg/kg hIgG1對照加5 mg/kg 2A3(大鼠IgG2a對照)、10 mg/kg抗CLDN18.2抗體18B10加5 mg/kg 2A3、5 mg/kg大鼠抗小鼠PD-1抗體RMP1-14(購自美國BioXcell)加10 mg/kg hIgG1對照、10 mg/kg抗CLDN18.2抗體18B10加5 mg/kg RMP1-14之組合處理動物，每週兩次，持續4週。使用卡尺(INSIZE)在兩個維度上每週量測兩次腫瘤大小，且使用以下公式以mm^3為單位表示體積：V=0.5 a × b^2，其中a及b分別為腫瘤之長直徑及短直徑。使用Prism GraphPad分析結果且表示為平均值±S.E.M.。藉由T檢驗進行兩組之間的比較，且若p ＜0.05(*)及p ＜0.01(**)，則認為差異為顯著的。
如圖5A所示，投與後，10 mg/kg同型對照組中之小鼠之腫瘤體積繼續增加。如圖5A所示，與用同型對照組處理相比，用10 mg/kg 18B10 + 5 mg/kg 2A3、10 mg/kg同型對照hIgG1 + 5 mg/kg RMP1-14、10 mg/kg 18B10加5 mg/kg RMP1-14之組合全部示出更佳之抗腫瘤活性。此外，組合組(18B10 + RMP1-14)中之腫瘤在第29天全部消退(TGI=100%)，而18B10 + 2A3組沒有腫瘤消退，且同型對照+ RMP1-14組中僅一半之腫瘤消退(表4)。
表 4 ：第 29 天，組合療法對 CT26-CLDN18.2 同基因腫瘤模型之腫瘤生長抑制作用
處理 (n=10) 腫瘤大小 (mm 3) TGI(%) CR 相對於同型對照之P值
10 mg/kg同型對照hIgG1 + 5 mg/kg 2A3 1536.9 ± 243.37 / 0/10 /
10 mg/kg 18B10 + 5 mg/kg 2A3 980.36 ± 203.07 36.21 0/10 ＞ 0.05
10 mg/kg同型對照hIgG1 + 5 mg/kg RMP1-14 220.88 ± 176.85 85.63 5/10 ＜ 0.01
10 mg/kg 18B10 + 5 mg/kg RMP1-14 0 ± 0 100.00 10/10 ＜ 0.01
實例 4 ： 18B10 與抗 PD-1 及化療進行組合對 CT26-hCLDN18.2 腫瘤模型之療效
用CLDN18.2基因轉染小鼠大腸癌細胞株CT26，篩選得到穩定表現CLDN18.2之細胞株，將其命名為CT26-hCLDN18.2。在37℃下在空氣中含5% CO 2之氛圍下將CT26-hCLDN18.2細胞在活體外在RPMI1640培養基(賽默飛世爾科技公司(Thermo Fisher))中進行單層培養，該培養基補充有10%熱滅活胎牛血清(ExCell Biology)、100 U/ml青黴素、100 ug/ml鏈黴素(海克隆公司)及1 ug/mL嘌呤黴素(吉博科公司(Gibco))。藉由胰蛋白酶-EDTA處理(海克隆公司)，每週例行對腫瘤細胞進行兩次傳代培養。採集在指數生長期中生長之細胞且計數以進行腫瘤接種。向雌性SPF級BABL/c小鼠接種2*10^6個CT26-hCLDN18.2細胞與50%基質膠。當腫瘤大小為大約80 mm^3時，選擇荷瘤小鼠且將其隨機分為4組(n=10)。藉由靜脈內注射抗體，用10 mg/kg hIgG1對照加1 mg/kg 2A3(抗大鼠IgG2a對照)、10 mg/kg 18B10、1 mg/kg RMP1-14(抗小鼠PD1)加1 mg/kg奧沙利鉑加5 mg/kg 5FU、10 mg/kg 18B10加1 mg/kg RMP1-14(抗小鼠PD1)加1 mg/kg奧沙利鉑加5 mg/kg 5FU之組合處理動物，每週兩次，持續3週，藉由靜脈內注射化療每週一次持續3週處理動物。使用卡尺(INSIZE)在兩個維度上每週量測兩次或三次腫瘤大小，且使用以下公式以mm^3為單位表示體積：V = 0.5 a*b^2，其中a及b分別為腫瘤之長直徑及短直徑。使用Prism GraphPad分析結果且表示為平均值±S.E.M.。藉由T檢驗進行兩組之間的比較，且若p ＜0.05(*)及p ＜0.01(**)，則認為差異為顯著的。如表5及圖5B所示，與單獨之18B10及抗PD-1加化療組合相比，三藥劑組合療法增強了抗腫瘤活性。
表 5 ：第 22 天， 18B10 與抗 PD-1 及化療進行組合對 CT26-hCLDN18.2 腫瘤模型之療效
處理 (n=10) 腫瘤大小 (Mm^3，平均值 ± S.E.M.) TGI(%) 相對於同型對照之p值 相對於3種藥劑組合之p值
hIgG1 + 2A3 + 媒劑 (10+1) mg/kg 1939.17 ± 423.36 / / /
10 mg/kg 18B10 1244.02 ± 196.27 35.85 0.15362 0.00144
RMP1-14 + 奧沙利鉑/5FU (1+1/5) mg/kg 783.29 ± 180.11 59.61 0.02174 0.08615
18B10 + RMP1-14 +奧沙利鉑/5FU (10+1+1/5) mg/kg 401.77 ± 108.26 79.28 0.00246 /
實例 5 ：對 CLDN18.2 及 PD-L1 在各種腫瘤類型之臨床及患者源性異種移植 (PDX) 樣品中之表現進行基於 IHC 之評估
臨床癌症樣品中 CLDN18.2 及 PD-L1 之共表現狀態
為了研究CLDN18.2及PD-L1在胃癌及膽管癌中之表現量及重疊狀態，使用內部開發及驗證之重組抗CLDN18.2(14G11)及商購可獲得之抗PD-L1(22C3)單株抗體對此等4%中性緩衝福爾馬林固定石蠟包埋之(FFPE)腫瘤切片進行免疫組織化學(IHC)。脫蠟及再水化後，藉由在97-99℃下在EnVision™ FLEX免疫組化抗原修復緩衝液(達科公司(Dako)，K8002)中沸騰25分鐘，對所有切片進行抗原修復，隨後淬滅，用EnVision™ FLEX過氧化物酶阻斷試劑(達科公司，K8002)阻斷，且分別與適當稀釋之14G11(0.6 ug/mL)及22C3(1 ug/mL)抗體一起培育。使用EnVision™ FLEX + 小鼠(連接子)使抗體結合可視化，隨後用EnVision™ FLEX/HRP及EnVision™ FLEX受質工作液(達科公司，K8002)進行可視化。最後用蘇木精對切片進行複染且用永久封固劑封固。
如 表 6所示，藉由CLDN18.2之陽性染色腫瘤細胞相對於所有可見腫瘤細胞之相對比例或膜以不同強度(陰性(0)、弱(1+)、中等(2+)、強(3+))染色之PD-L1的總染色免疫細胞及腫瘤細胞相對於所有可見腫瘤細胞之組合陽性評分(CPS)對所有樣品進行評分。僅以≥2+強度染色之膜才認為係呈陽性的。CLDN18.2及PD-L1在胃癌及膽管癌組織中分別由14G11及22C3產生由弱至強之膜信號(參見 圖 6A)。 表 7總結CLDN18.2及PD-L1在胃癌及膽管癌組織中之表現量及重疊情況。結果顯示，大多數樣品在胃癌及膽管癌中均具有CLDN18.2表現。此外，在胃癌中表現CLDN18.2(IHC評分 ≥ 1+)之腫瘤樣品中，無PD-L1表現或低表現率為93.75%；而在膽管癌中表現CLDN18.2(IHC評分 ≥ 1+)之腫瘤樣品中，無PD-L1表現或低表現率為100%。
表 6 ： IHC 結果解讀
IHC 評分 染色強度 陽性百分比(CLDN18.2) 陽性百分比 (PD-L1)
0 負至微弱的 TC ＜ 1% CPS ＜ 1%
1+ 微弱至弱 1% ≤ TC ＜ 40% 1% ≤ CPS ＜ 5%
2+ 弱至中等 40% ≤ TC ＜ 75% CPS ≥ 5%
3+ 中等至強 TC ≥ 75% CPS ≥ 5%
註釋TC ：腫瘤細胞；CPS ：組合陽性評分
表 7. 跨不同癌症類型之臨床樣品中 CLDN18.2 及 PD-L1 表現重疊狀態
腫瘤類型 樣品病例 CLDN18.2(14G11)IHC 評分 PD-L1(22C3)IHC 評分 (%)
0 1+ 2+ 3+
胃癌 73 0 23(92.00%) 2(8.00%) 0(0%) 0(0%)
1+ 11(84.62%) 0(0%) 1(7.69%) 1(7.69%)
2+ 19(90.48%) 1(4.76%) 0(0%) 1(4.76%)
3+ 12(85.71%) 2(14.29%) 0(0%) 0(0%)
膽管癌 44 0 16(100.00%) 0(0%) 0(0%) 0(0%)
1+ 11(100.00%) 0(0%) 0(0%) 0(0%)
2+ 8(100.00%) 0(0%) 0(0%) 0(0%)
3+ 9(100.00%) 0(0%) 0(0%) 0(0%)
PDX 樣品中 CLDN18.2 及 PD-L1 之共表現狀態
製備生物素化之14G11(14G11生物素)及22C3(22C3生物素)。簡而言之，生物素胺基己酸NHS酯(西格瑪公司(Sigma)，B2643-10MG)在無水DMF中以20 mg/mL作為儲備溶液製備。每1 mg將被標記之14G11抗體添加10 µl之儲備溶液，且在室溫下輕輕混合1小時。根據製造商之說明，藉由在Zeba™旋轉脫鹽管柱(賽默飛世爾科技公司，89890)上脫鹽來移除低分子量之反應產物。
對包括胃癌及胰臟癌在內之4%中性緩衝福爾馬林固定石蠟包埋之PDX樣品進行免疫組織化學(IHC)。脫蠟及復水後，藉由在97-99℃下在EnVision™ FLEX免疫組化抗原修復緩衝液(達科公司，K8002)中沸騰25分鐘，對所有玻片進行抗原修復，隨後淬滅，按照說明用IHC生物素阻斷套組(MaiXin，BLK-0001)阻斷，且分別與10 ug/mL內部生物素化之單株小鼠抗claudin 18.2(14G11生物素)及抗PD-L1(22C3 Biotin)抗體在37℃下一起培育30分鐘。用辣根過氧化物酶標記之鏈黴親和素(MaiXin，SP KIT-D1)及EnVision™ FLEX受質工作液(達科公司，K8002)使抗體結合可視化。最後用蘇木精對切片進行複染且用永久封固劑封固。對IHC結果在染色強度、形態及陽性比例方面進行評分(參見 表 6)。
表 8總結CLDN18.2及PD-L1在胃癌及胰臟PDX癌組織中之表現量及重疊情況。結果顯示，大多數樣品在胃癌及胰臟癌中均具有CLDN18.2表現。此外，在胃癌及胰臟癌兩者中之表現CLDN18.2(IHC評分 ≥ 1+，參見 圖 6B)之腫瘤樣品中，無PD-L1表現或低表現為100%。
表 8 ： CLDN18.2 及 PD-L1 在包括胃癌及胰臟癌在內之 PDX 樣品中之表現重疊狀態
PDX 類型 樣品病例 CLDN18.2(14G11)IHC 評分 PD-L1(22C3)IHC 評分
0 1+ 2+ 3+
胰臟癌 12 0 6(50.00%) 0(0%) 0(0%) 0(0%)
1+ 2(16.67%) 0(0%) 0(0%) 0(0%)
2+ 2(16.67%) 0(0%) 0(0%) 0(0%)
3+ 2(16.67%) 0(0%) 0(0%) 0(0%)
胃癌 4 0 0(0%) 0(0%) 0(0%) 0(0%)
1+ 0(0%) 0(0%) 0(0%) 0(0%)
2+ 1(25%) 0(0%) 0(0%) 0(0%)
3+ 3(75%) 0(0%) 0(0%) 0(0%)
實例 6 ： 18B10 與 PD-1 抗體進行組合對 HSC-NSG-hIL-15 小鼠上之 GC-02-0007 PDX 腫瘤模型的療效
自北京腫瘤醫院藉由裸鼠獲得GC-02-0007胃癌組織，且建立PDX庫。CLDN18.2及PD-L1在GC-02-0007 PDX腫瘤模型上之表現量如實例5 「 CLDN18.2 及 PD-L1 在 PDX 樣品中之共表現狀態」章節中所描述的進行量測，且表8「胃癌」中示出結果。HSC-NSG-hIL-15小鼠(購自JAX實驗室)係將人造血幹細胞(HSC，hematopoietic stem cells)在人IL-15小鼠上重建，以維持一定人NK細胞比率之小鼠。向每隻小鼠皮下接種直徑為大約3 mm之小腫瘤組織塊，該小腫瘤組織塊自荷瘤小鼠之整體腫瘤剝離物中剪切得到。接種後若干天，選擇腫瘤大小為約50 mm^3之動物且隨機分為4組，每組由5隻小鼠組成。隨後，藉由腹膜內注射，用30 mg/kg同型對照、20 mg/kg 18B10、10 mg/kg納武單抗、18B10加納武單抗之組合處理小鼠，每週兩次，持續4週。在結束研究時利用CO 2吸入殺死動物。使用卡尺(INSIZE)在兩個維度上每週量測兩次或三次腫瘤大小，且使用以下公式以mm^3為單位表示體積：V = 0.5 a*b^2，其中a及b分別為腫瘤之長直徑及短直徑。使用Prism GraphPad分析結果且表示為平均值±S.E.M.。藉由T檢驗進行兩組之間的比較，且若p ＜0.05(*)及p ＜0.01(**)，則認為差異是顯著的。
與單獨用納武單抗處理相比，用18B10及納武單抗進行組合處理更有效地減少腫瘤體積。
實例 7 ： 18B10-HaLa 與抗 PD-1 及化療進行組合對 NUGC4-hCLDN18.2 及人 PBMC 共接種腫瘤模型的療效
用CLDN18.2基因轉染人胃癌細胞株NUGC4，篩選得到穩定表現CLDN18.2之細胞株，將其命名為NUGC4-hCLDN18.2。在37℃下在空氣中含5% CO 2之氛圍下將NUGC4-hCLDN18.2細胞在活體外在RPMI1640培養基(賽默飛世爾科技公司)中進行單層培養，該培養基補充有10%熱滅活胎牛血清(ExCell Biology)、100 U/ml青黴素、100 ug/ml鏈黴素(海克隆公司)及1 ug/mL嘌呤黴素(吉博科公司)。藉由胰蛋白酶-EDTA處理(海克隆公司)，每週例行對腫瘤細胞進行兩次傳代培養。採集在指數生長期中生長之細胞且計數以進行腫瘤接種。雌性SPF級NOD-SCID小鼠接種混合5*10^6個NUGC4-hCLDN18.2細胞及5*10^6個人PBMC以及50%之基質膠。在接種後大約4小時，選擇小鼠且將其隨機分為4組(n=10)。藉由腹膜內注射抗體，用同型對照及媒劑、10 mg/kg 18B10-HaLa、5 mg/kg納武單抗加3 mg/kg奧沙利鉑加10 mg/kg 5-FU、10 mg/kg 18B10-HaLa加5 mg/kg納武單抗加3 mg/kg奧沙利鉑加10 mg/kg 5-FU之組合處理動物，每週兩次，持續6週，藉由靜脈內注射化療每週一次持續6週處理動物。使用卡尺(INSIZE)在兩個維度上每週量測兩次或三次腫瘤大小，且使用以下公式以mm^3為單位表示體積：V = 0.5 a*b^2，其中a及b分別為腫瘤之長直徑及短直徑。使用Prism GraphPad分析結果且表示為平均值±S.E.M.。藉由T檢驗進行兩組之間的比較，且若p ＜0.05(*)及p ＜0.01(**)，則認為差異係顯著的。如表9及圖7所示，與單獨之18B10-HaLa(p＜0.01)及抗PD-1加化療組合(p＜0.01)相比，三藥劑組合療法顯著增強了抗腫瘤活性。
表 9 ：第 42 天 ， 18B10-HaLa 與抗 PD-1 及化療進行組合對 NUGC4-hCLDN18.2 及人 PBMC 共接種腫瘤模型的療效
處理 (n=9) 腫瘤大小 (Mm^3，平均值 ± S.E.M.) TGI(%) 相對於同型對照之p值 相對於3種藥劑組合之p值
同型對照+媒劑 715.54 ± 70.88 / / /
10 mg/kg 18B10-HaLa 564.09 ± 71.77 21.17 0.15059 0.00211
納武單抗+奧沙利鉑/5FU (5+3/10) mg/kg 412.14 ± 17.96 42.40 0.00060 0.00215
18B10-HaLa +納武單抗+奧沙利鉑/5FU (10+5+3/10) mg/kg 283.44 ± 31.17 60.39 0.00003 /
實例 8 ： 18B10 與抗 PD-1 及化療進行組合對 MFC/hCLDN18.2 腫瘤模型之療效
用CLDN18.2基因轉染小鼠胃癌細胞株MFC，篩選得到穩定表現CLDN18.2之細胞株，將其命名為MFC/CLDN18.2。在37℃下在空氣中含5% CO 2之氛圍下將MFC/CLDN18.2細胞在活體外在DMEM培養基(賽默飛世爾科技公司)中進行單層培養，該培養基補充有10%熱滅活胎牛血清(ExCell Biology)、100 U/ml青黴素、100 ug/ml鏈黴素(海克隆公司)及1 ug/mL嘌呤黴素(吉博科公司)。藉由胰蛋白酶-EDTA處理(海克隆公司)，每週例行對腫瘤細胞進行兩次傳代培養。採集在指數生長期中生長之細胞且計數以進行腫瘤接種。向雌性SPF級615小鼠接種2*10^6個MFC/CLDN18.2細胞。接種後大約5天且腫瘤大小為大約90 mm^3時，選擇荷瘤小鼠且將其隨機分為4組(n=9)。藉由腹膜內注射抗體，用PBS、10 mg/kg 18B10-HaLa、1 mg/kg RMP1-14加1 mg/kg奧沙利鉑加5 mg/kg 5-FU、10 mg/kg 18B10-HaLa加1 mg/kg RMP1-14加1 mg/kg奧沙利鉑加5 mg/kg 5-FU進行組合處理動物，每週兩次，持續3週，藉由靜脈內注射化療每週一次持續3週處理動物。使用卡尺(INSIZE)在兩個維度上每週量測兩次或三次腫瘤大小，且使用以下公式以mm^3為單位表示體積：V = 0.5 a*b^2，其中a及b分別為腫瘤之長直徑及短直徑。使用Prism GraphPad分析結果且表示為平均值±S.E.M.。藉由T檢驗進行兩組之間的比較，且若p為*＜0.05且**＜0.01，則認為差異為顯著的。如表10及圖8所示，與單獨之18B10-HaLa(p＜0.01)及抗PD-1加化療組合(第19天，TGI：72.22%對62.02%)相比，三藥劑組合療法增強了抗腫瘤活性。
表 10 ：第 19 天， 18B10 與抗 PD-1 及化療進行組合對 MFC/CLDN18.2 腫瘤模型之療效
處理 (n=9) 腫瘤大小 (Mm^3，平均值 ± S.E.M.) TGI(%) 相對於同型對照之p值 相對於3種藥劑組合之p值
PBS 4215.07 ± 302.18 / / /
10 mg/kg 18B10-HaLa 2821.81 ± 245.98 33.05 0.0025252 0.00003
RMP1-14 +奧沙利鉑/5FU (1+1/5) mg/kg 1600.84 ± 182.01 62.02 0.0000015 0.08479
18B10-HaLa + RMP1-14 +納武單抗+奧沙利鉑/5FU (10+1+1/5) mg/kg 1170.83 ± 147.11 72.22 0.0000001 /
表 11 ：本發明中提及之胺基酸序列
SED ID NO. 序列 區
1 GYNMN 18B10_HCDR1
2 NIDPYYGGTSYNQKFKG 18B10_HCDR2
3 MYHGNAFDY 18B10_HCDR3
4 KSSQSLLNSGNLKNYLT 18B10_LCDR1
5 WASTRKS 18B10_LCDR2
6 QNDYSYPLT 18B10_LCDR3
7 EFQLQQSGPELEKPGASVRISCKTSGYSFTGYNMNWVKQSNGESLEWIGNIDPYYGGTSYNQKFKGKATLTVDKSSSTAYMQLKSLTSEDSAVYYCARMYHGNAFDYWGQGTTLTVSS 18B10-VH
8 DIVMTQSPSSLTVTAGEKVTMSCKSSQSLLNSGNLKNYLTWYQQKPGQPPKLLIYWASTRKSGVPDRFTGSGSGTDFTLTLSSVQAEDLAVYYCQNDYSYPLTFGAGTKLELK 18B10-VL
9 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 人IgG1重鏈恆定區
10 RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 人κ輕鏈恆定區
11 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELVGGPSVFLLPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPPEEQYNSTLRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPLVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 工程化之Fc L235V/F243L/R292P/Y300L/P396L之序列
12 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYNMNWVRQAPGQGLEWMGNIDPYYGGTSYNQKFKGRVTMTIDKSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARMYHGNAFDYWGQGTTVTVSS Hu18B10-Ha
13 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTGYNMNWVRQAPGQGLEWMGNIDPYYGGTSYNQKFKGRVTLTIDKSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARMYHGNAFDYWGQGTTVTVSS Hu18B10-Hb
14 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTGYNMNWVKQAPGQGLEWIGNIDPYYGGTSYNQKFKGRVTLTIDKSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARMYHGNAFDYWGQGTTVTVSS Hu18B10-Hc
15 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLNSGNLKNYLTWYQQKPGQPPKLLIYWASTRKSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQNDYSYPLTFGGGTKVEIK Hu18B10_La
16 DIVMTQSPDSLAVSLGERATMNCKSSQSLLNSGNLKNYLTWYQQKPGQPPKLLIYWASTRKSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQNDYSYPLTFGGGTKVEIK Hu18B10_Lb
17 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYVFTDYYMNWVRQAPGQSLEWMGDINPNNAETLYNHKFKGRVTVTVDKSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCVKWGDGPFAYWGQGTLVTVSS AM4B6_VH
18 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNVGAAVAWYQQKPGKAPKLLIYSVSDRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDIATYYCQQYSNYPTFGQGTKLEIK AM4B6_VL
19 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYVFTDYYMNWVRQAPGQSLEWMGDINPNNAETLYNHKFKGRVTVTVDKSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCVKWGDGPFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPASIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGA AM4B6_HC_1
20 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYVFTDYYMNWVRQAPGQSLEWMGDINPNNAETLYNHKFKGRVTVTVDKSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCVKWGDGPFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK AM4B6_HC_2
21 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNVGAAVAWYQQKPGKAPKLLIYSVSDRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDIATYYCQQYSNYPTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC AM4B6_LC
22 DYYMN AM4B6_HCDR1
23 DINPNNAETLYNHKFKG AM4B6_HCDR2
24 WGDGPFAY AM4B6_HCDR3
25 KASQNVGAAVA AM4B6_LCDR1
26 SVSDRYT AM4B6_LCDR2
27 QQYSNYPT AM4B6_LCDR3
28 QVQLVQSGAEVKKPGASVKLSCKASGYIFTTYWMHWVKQRPGQGLEWIGMIQPNSGGTKYNEKFKKKATLTVDKSISTAYMELSRLTSDDTAVYYCARGAGTVDYFDYWGQGSTLTVSS 23F11_VH
29 DIVLTQSPASLAVSVGQRATITCRASESVDIYGNSFMHWYQQKPGQPPKLLIYRASNLESGIPARFSGSGSRTDFTLTINPVEAQDTATYYCQQSTEDPYTFGGGTKLEIK 23F11_VL
30 QVQLVQSGAEVKKPGASVKLSCKASGYIFTTYWMHWVKQRPGQGLEWIGMIQPNSGGTKYNEKFKKKATLTVDKSISTAYMELSRLTSDDTAVYYCARGAGTVDYFDYWGQGSTLTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 23F11_HC
31 DIVLTQSPASLAVSVGQRATITCRASESVDIYGNSFMHWYQQKPGQPPKLLIYRASNLESGIPARFSGSGSRTDFTLTINPVEAQDTATYYCQQSTEDPYTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 23F11_LC
32 TYWMH 23F11_HCDR1
33 MIQPNSGGTKYNEKFKK 23F11_HCDR2
34 GAGTVDYFDY 23F11_HCDR3
35 RASESVDIYGNSFMH 23F11_LCDR1
36 RASNLES 23F11_LCDR2
37 QQSTEDPYT 23F11_LCDR3
38 MAVTACQGLGFVVSLIGIAGIIAATCMDQWSTQDLYNNPVTAVFNYQGLWRSCVRESSGFTECRGYFTLLGLPAMLQAVRALMIVGIVLGAIGLLVSIFALKCIRIGSMEDSAKANMTLTSGIMFIVSGLCAIAGVSVFANMLVTNFWMSTANMYTGMGGMVQTVQTRYTFGAALFVGWVAGGLTLIGGVMMCIACRGLAPEETNYKAVSYHASGHSVAYKPGGFKASTGFGSNTKNKKIYDGGARTEDEVQSYPSKHDYV 人CLDN18.2之胺基酸序列
39 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYNMNWVRQAPGQGLEWMGNIDPYYGGTSYNQKFKGRVTMTIDKSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARMYHGNAFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 18B10重鏈
40 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLNSGNLKNYLTWYQQKPGQPPKLLIYWASTRKSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQNDYSYPLTFGGGTKVEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 18B10輕鏈
41 QVQLQQSGPELVRPGASVKISCKASGYRFTRNYFHWVKQRPGQGLEWIGWIYPGGFDIEYSEKFKGKATLTTDTSSSTAYMLLTSLTSEDSAVYYCAINYGSTFGYWGQGTLVTVSVAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPSQTVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISKDDPEVQFSWFVDDVEVHTAQTKPREEQINSTFRSVSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMITNFFPEDITVEWQWNGQPAENYKNTQPIMDTDGSYFVYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSPGK 重組抗CLDN18.2(14G11)之重鏈
42 DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQNIVHSNGNTYLEWYLQRPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKINRVEAEDLGVYYCFQGSHVPFTFGSGTKLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC 重組抗CLDN18.2(14G11)之輕鏈
43 QVQLQQSGPELVRPGASVKISCKASGYRFTRNYFHWVKQRPGQGLEWIGWIYPGGFDIEYSEKFKGKATLTTDTSSSTAYMLLTSLTSEDSAVYYCAINYGSTFGYWGQGTLVTVSV 重組抗CLDN18.2(14G11)之重鏈可變區
44 DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQNIVHSNGNTYLEWYLQRPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKINRVEAEDLGVYYCFQGSHVPFTFGSGTKLEIK 重組抗CLDN18.2(14G11)之輕鏈可變區
45 DSWIH 阿替利珠單抗_HCDR1
46 WISPYGGSTYYADSVKG 阿替利珠單抗_HCDR2
47 RHWPGGFDY 阿替利珠單抗_HCDR3
48 RASQDVSTAVA 阿替利珠單抗_LCDR1
49 SASFLYS 阿替利珠單抗_LCDR2
50 QQYLYHPAT 阿替利珠單抗_LCDR3
51 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSS 阿替利珠單抗_VH
52 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIK 阿替利珠單抗_VL
53 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 阿替利珠單抗_HC
54 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 阿替利珠單抗_LC
55 NSGMH 納武單抗_HCDR1
56 VIWYDGSKRYYADSVKG 納武單抗_HCDR2
57 NDDY 納武單抗_HCDR3
58 RASQSVSSYLA 納武單抗_LCDR1
59 DASNRAT 納武單抗_LCDR2
60 QQSSNWPRT 納武單抗_LCDR3
61 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSS 納武單抗_VH
62 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIK 納武單抗_VL
63 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK 納武單抗_HC
64 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 納武單抗_LC
圖1A係示出NUGC-4在與不同上清液共培養時之PD-L1水準之條形圖。
圖1B係示出KATOIII在與不同上清液共培養時之PD-L1水準之條形圖。
圖1C係示出SNU620在與不同上清液共培養時之PD-L1水準之條形圖。
圖2示出NCI-H460-CLDN18.2異種移植模型在不同處理下之腫瘤體積。
圖3示出CT26-CLDN18.2同基因腫瘤模型在不同處理下之腫瘤體積。
圖4示出MC38-CLDN18.2同基因腫瘤模型在不同處理下之腫瘤體積。
圖5A及5B示出CT26-CLDN18.2同基因腫瘤模型在不同處理下之腫瘤體積。
圖6A示出在不同染色強度下臨床樣品中之各種癌症組織上之CLDN18.2及對應PD-L1染色之代表性IHC圖像。
圖6B示出在不同染色強度下患者源性異種移植(PDX)樣品中之各種癌症組織上之CLDN18.2及對應PD-L1染色之代表性IHC圖像。
圖7示出NUGC4-hCLDN18.2及人PBMC共接種腫瘤模型在不同處理下之腫瘤體積。
圖8示出MFC-hCLDN18.2同基因腫瘤模型在不同處理下之腫瘤體積。
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Claims (78)

  1. 一種治療有需要之個體之CLDN18.2相關疾病或病狀之方法，該方法包括： 向該個體投與治療有效量之CLDN18.2拮抗劑與治療有效量之PD-1/PD-L1軸抑制劑的組合， 其中該個體經確定為在病變組織中具有CLDN18.2表現。
  2. 如請求項1之方法，其進一步包括向該個體投與治療有效量之化學治療劑。
  3. 如請求項1之方法，其中該病變組織中之該CLDN18.2表現高於健康或非癌性胃細胞或胃組織中之表現或與其相當。
  4. 如請求項1之方法，其中該病變組織中之該CLDN18.2表現低於健康或非癌性胃細胞或胃組織中之表現，但高於除胃以外之健康或非癌性組織或器官中之表現。
  5. 如請求項1之方法，其中該病變組織中之該CLDN18.2表現與除胃以外之健康或非癌性組織或器官中之表現相當，且能夠被抗CLDN18.2診斷抗體偵測到。
  6. 如前述請求項中任一項之方法，其中該CLDN18.2表現在細胞表面上或係膜結合的。
  7. 如請求項1之方法，其中該個體經確定為在該病變組織中具有PD-L1表現。
  8. 如請求項1之方法，其中該個體經確定為在該病變組織中具有低PD-L1表現或無PD-L1表現。
  9. 如請求項8之方法，其中該病變組織中之該PD-L1表現低於參考水準。
  10. 如請求項8或9之方法，其中該病變組織中之不超過20%之細胞對PD-L1表現呈陽性。
  11. 如請求項10之方法，其中病變組織中之該細胞包括該病變組織中之疾病細胞及免疫細胞。
  12. 如請求項8之方法，其中該病變組織中之該PD-L1表現與健康組織或非癌性組織中之表現相當。
  13. 如請求項8之方法，其中該病變組織中之該PD-L1表現較低或不能被抗PD-L1診斷抗體偵測到。
  14. 一種使有需要之個體之疾病或病狀對用PD-1/PD-L1軸抑制劑進行之治療敏感之方法，其中該個體經確定為在病變組織中具有低PD-L1表現或無PD-L1表現，該方法包括： a)確定自該個體獲得之該病變組織中CLDN18.2之存在或表現量；以及 b)當在步驟a)中確定該CLDN18.2之存在或當該CLDN18.2之表現量達到步驟a)中之臨限值水準時，向該個體投與治療有效量之CLDN18.2拮抗劑、視情況與治療有效量之PD-1/PD-L1軸抑制劑之組合， 由此使該疾病或病狀對用PD-1/PD-L1軸抑制劑進行之治療敏感。
  15. 如請求項14之方法，其中該步驟b)進一步包括該向個體投與化學治療劑。
  16. 如請求項14之方法，其中CLDN18.2之表現在細胞表面上或係膜結合的。
  17. 如請求項14之方法，其中該病變組織中之該PD-L1表現低於參考水準。
  18. 如請求項14或17之方法，其中該病變組織中之不超過20%之細胞對PD-L1表現呈陽性。
  19. 如請求項18之方法，其中病變組織中之該細胞包括該病變組織中之疾病細胞及免疫細胞。
  20. 如請求項14之方法，其中該病變組織中之該PD-L1表現與健康組織或非癌性組織中之表現相當。
  21. 如請求項14之方法，其中該病變組織中之該PD-L1表現較低或不能被抗PD-L1診斷抗體偵測到。
  22. 一種用於提高個體之腫瘤對用PD-1/PD-L1軸抑制劑進行之治療之反應性之方法，其中該個體經確定為患有對用PD-1/PD-L1軸抑制劑進行之治療具有抗性或難治性之腫瘤，該方法包括： a)確定自該個體獲得之腫瘤樣品中CLDN18.2之存在或表現量；以及 b)當在步驟a)中確定該CLDN18.2之存在或當該CLDN18.2之表現量達到步驟a)中之臨限值水準時，向該個體投與治療有效量之CLDN18.2拮抗劑以及視情況與治療有效量之PD-1/PD-L1軸抑制劑進行組合， 由此提高該個體之該腫瘤對用PD-1/PD-L1軸抑制劑進行之該治療之反應性。
  23. 如請求項22之方法，其中該步驟b)進一步包括該向個體投與化學治療劑。
  24. 如請求項22之方法，其中CLDN18.2之表現在細胞表面上或係膜結合的。
  25. 如請求項22之方法，其中腫瘤組織中之PD-L1表現低於參考水準。
  26. 如請求項22或25之方法，其中腫瘤組織中之不超過20%之細胞對PD-L1表現呈陽性。
  27. 如請求項26之方法，其中該腫瘤組織中之該細胞包括該腫瘤組織中之癌細胞及免疫細胞。
  28. 如請求項22之方法，其中腫瘤組織中之該PD-L1表現與健康組織或非癌性組織中之表現相當。
  29. 如請求項22之方法，其中腫瘤組織中之該PD-L1表現較低或不能被抗PD-L1診斷抗體偵測到。
  30. 一種用於確定具有低PD-L1表現量或無PD-L1表現量之個體對用CLDN18.2拮抗劑、視情況與PD-1/PD-L1軸抑制劑予以組合進行之治療之資格或反應可能性之方法，該方法包括： a)在允許偵測CLDN18.2表現之條件下，使自該個體獲得之樣品與CLDN18.2診斷劑接觸； b)確定該樣品中CLDN18.2之存在或表現量； 其中當該樣品具有CLDN18.2在該樣品中之陽性表現時，該個體經確定為有資格或可能對用CLDN18.2拮抗劑、視情況與PD-1/PD-L1軸抑制劑予以組合進行之治療做出反應，或 其中當該樣品上之該CLDN18.2之表現未被偵測到時，該個體經確定為沒有資格或不可能對用CLDN18.2拮抗劑與視情況之PD-1/PD-L1軸抑制劑予以組合進行之治療做出反應。
  31. 如請求項30之方法，其中該CLDN18.2診斷劑為抗CLDN18.2診斷抗體。
  32. 如請求項1至31中任一項之方法，其中該CLDN18.2拮抗劑包括抗CLDN18.2抗體，如單株抗CLDN18.2抗體、靶向CLDN18.2及第二抗原(例如，CD3、4-1BB、TGFβ、SIRPα及IL15)之雙特異性抗體，或表現嵌合抗原受體(CAR)之免疫細胞或包括抗CLDN18.2抗原結合結構域之經基因修飾之TCR。
  33. 如請求項32之方法，其中該抗CLDN18.2抗體包括重鏈HCDR1、HCDR2及HCDR3序列及/或輕鏈LCDR1、LCDR2及LCDR3序列，其中： 該HCDR1序列包括 GYNMN(SEQ ID NO: 1)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該HCDR2序列包括 NIDPYYGGTSYNQKFKG(SEQ ID NO: 2)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該HCDR3序列包括 MYHGNAFDY(SEQ ID NO: 3)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該LCDR1序列包括 KSSQSLLNSGNLKNYLT(SEQ ID NO: 4)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該LCDR2序列包括 WASTRKS(SEQ ID NO: 5)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該LCDR3序列包括 QNDYSYPLT(SEQ ID NO: 6)或其序列同一性為至少80%之同源序列。
  34. 如請求項33之方法，其中該抗CLDN18.2抗體包括重鏈可變區及輕鏈可變區，其中 該重鏈可變區包括SEQ ID NO: 7之胺基酸序列，且該輕鏈可變區包括SEQ ID NO: 8之胺基酸序列。
  35. 如請求項32至34中任一項之方法，其中該抗CLDN18.2抗體進一步包括免疫球蛋白恆定區，視情況人Ig之恆定區，或視情況人IgG之恆定區。
  36. 如請求項35之方法，其中該抗CLDN18.2抗體進一步包括人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4之恆定區。
  37. 如請求項36之方法，其中該人IgG1之恆定區包括SEQ ID NO: 9或其具有至少80%序列同一性之同源序列。
  38. 如請求項37之方法，其中該恆定區包括一或多個胺基酸殘基取代或修飾，相對於野生型恆定區，該一或多個胺基酸殘基取代或修飾賦予增加之CDC或ADCC。
  39. 如請求項35至38中任一項之方法，其中該恆定區包括相對於SEQ ID NO: 9之一或多個胺基酸殘基取代，該一或多個胺基酸殘基取代選自由以下組成之群：L235V、F243L、R292P、Y300L、P396L或其任何組合。
  40. 如請求項39之方法，其中該恆定區包括SEQ ID NO: 11之序列。
  41. 如請求項35至40中任一項之方法，其中該恆定區進一步包括SEQ ID NO: 10之序列。
  42. 如請求項32至41中任一項之方法，其中該抗CLDN18.2抗體係人源化的。
  43. 如請求項39之方法，其中該抗CLDN18.2抗體包括重鏈可變區及輕鏈可變區，其中 該重鏈可變區包括選自由SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 13及SEQ ID NO: 14組成之群的胺基酸序列，且 該輕鏈可變區包括選自由SEQ ID NO: 15及SEQ ID NO: 16組成之群的胺基酸序列。
  44. 如請求項32至43中任一項之方法，其中該抗CLDN18.2抗體包括重鏈及輕鏈，其中 該重鏈包括SEQ ID NO: 39之胺基酸序列，且 該輕鏈包括SEQ ID NO: 40之胺基酸序列。
  45. 如請求項32至44中任一項之方法，其中該抗CLDN18.2抗體能夠誘導PD-L1在該個體之該病變組織中之表現。
  46. 如請求項32至45中任一項之方法，其中該抗CLDN18.2抗體與一或多個結合物部分連接。
  47. 如請求項46之方法，其中該結合物部分包括清除改性劑、化學治療劑、毒素、放射性同位素、鑭系元素、發光標記、螢光標記、酶受質標記、DNA烷化劑、拓樸異構酶抑制劑、微管蛋白結合劑、細胞因子(例如，IL-15、IL-2、IL-7)或其他抗癌藥物。
  48. 如前述請求項中任一項之方法，其中該PD-1/PD-L1軸抑制劑包括選自由抗體、小分子及其組合組成之群的PD-1抑制劑。
  49. 如請求項48之方法，其中該PD-1抑制劑包括選自由以下組成之群的抗PD-1抗體：納武單抗(OPDIVO；BMS-936558)、多塔利單抗(TSR-042)、派姆單抗(KEYTRUDA；MK-3475)、MEDI0680(AMP-514)、MEDI4736、BI 754091、匹地利珠單抗(CT-011)、西米普利單抗(LIBTAYO，REGN2810)、斯巴達珠單抗(PDR001)、西利單抗(JNJ 63723283)、特瑞普利單抗(JS001)、PF-06801591、替雷利珠單抗(BGB-A317)、AMP-224(GSK-2661380)、ABBV-181、蘭博利珠單抗、卡瑞利珠單抗(SHR-1210)、信迪利單抗(Tyvyt，IBI308)、派安普利單抗(AK105)、賽帕利單抗、瑞弗利單抗、斯魯利單抗、巴替利單抗、傑諾單抗、普格單抗、衣唑單抗、薩善利單抗、皮維單抗、布格利單抗、諾發利單抗、信得利珠單抗、MGA404、Sym021、BAT1306、HX008。
  50. 如請求項49之方法，其中該PD-1抑制劑為納武單抗(OPDIVO；BMS-936558)。
  51. 如前述請求項中任一項之方法，其中該PD-1/PD-L1軸抑制劑包括選自由抗體、小分子及其組合組成之群的PD-L1抑制劑。
  52. 如請求項51之方法，其中該PD-L1抑制劑包括選自由以下組成之群的抗PD-L1抗體：阿替利珠單抗(TECENTRIQ；R05541267；MPDL3280A；RG7446)、BMS-936559、阿維單抗(bavencio)、洛達利單抗(LY3300054)、德瓦魯單抗(MEDI4736)、CX-072(Proclaim-CX-072)、FAZ053、恩沃利單抗(KN035)、MDX-1105、STI-1040、CS1001、阿得貝利單抗(SHR-1316)、SHR-1701、TOB2450、Bintrafusp、LP002、STI-3031、柯希利單抗、帕克米利單抗、NM01、LDP、AMP-224、格瑞利單抗(BGB-A333)、A167、SCD-135、歐普可利單抗、GR1405。
  53. 如請求項52之方法，其中該PD-L1抑制劑為阿替利珠單抗(TECENTRIQ；R05541267；MPDL3280A；RG7446)。
  54. 如請求項51之方法，其中該PD-L1抑制劑包括靶向PD-L1及另一個檢查點分子兩者之雙特異性抗體，該檢查點分子選自由以下組成之群：PD-1、PD-L1、PD-L2、CLTA-4、SIRP、TIM-3、LAG3、A2AR、CD160、2B4、TGFβ、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1、OX40、CD2、CD27、CD28、CD30、CD40、CD122、ICAM-1、IDO、NKG2C、SLAMF7、SIGLEC7、NKp80、CD160、B7-H3、LFA-1、1COS、4-1BB、GITR、BAFFR、HVEM、CD7、LIGHT、IL-2、IL-15、CD3、CD16或CD83。
  55. 如請求項54之方法，其中該檢查點分子為TGFβ、4-1BB、CTLA4、LAG3或TIGIT。
  56. 如請求項51之方法，其中該PD-L1抑制劑包含抗PD-L1抗體，該抗PD-L1抗體包括包含重鏈HCDR1、HCDR2及HCDR3序列及/或輕鏈LCDR1、LCDR2及LCDR3序列，其中： 該HCDR1序列包括DYYMN(SEQ ID NO: 22)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該HCDR2序列包括DINPNNAETLYNHKFKG(SEQ ID NO: 23)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該HCDR3序列包括WGDGPFAY(SEQ ID NO: 24)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該LCDR1序列包括KASQNVGAAVA(SEQ ID NO: 25)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該LCDR2序列包括SVSDRYT(SEQ ID NO: 26)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該LCDR3序列包括QQYSNYPT(SEQ ID NO: 27)或其序列同一性為至少80%之同源序列。
  57. 如請求項56之方法，其中該PD-L1抑制劑包括包含重鏈可變區及輕鏈可變區之抗PD-L1抗體，其中 該重鏈可變區包括SEQ ID NO: 17之胺基酸序列，且 該輕鏈可變區包括SEQ ID NO: 18之胺基酸序列。
  58. 如請求項57之方法，其中該PD-L1抑制劑包括包含重鏈及輕鏈之抗PD-L1抗體，其中 該重鏈包括SEQ ID NO: 19或SEQ ID NO: 20之胺基酸序列，且 該輕鏈包括SEQ ID NO: 21之胺基酸序列。
  59. 請求項51之方法，其中該PD-L1抑制劑包含抗PD-L1抗體，該抗PD-L1抗體包括包含重鏈HCDR1、HCDR2及HCDR3序列及/或輕鏈LCDR1、LCDR2及LCDR3序列，其中： 該HCDR1序列包括TYWMH(SEQ ID NO: 32)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該HCDR2序列包括MIQPNSGGTKYNEKFKK(SEQ ID NO: 33)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該HCDR3序列包括GAGTVDYFDY(SEQ ID NO: 34)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該LCDR1序列包括RASESVDIYGNSFMH(SEQ ID NO: 35)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該LCDR2序列包括RASNLES(SEQ ID NO: 36)或其序列同一性為至少80%之同源序列； 該LCDR3序列包括QQSTEDPYT(SEQ ID NO: 37)或其序列同一性為至少80%之同源序列。
  60. 如請求項59之方法，其中該PD-L1抑制劑包括包含重鏈可變區及輕鏈可變區之抗PD-L1抗體，其中 該重鏈可變區包括SEQ ID NO: 28之胺基酸序列，且 該輕鏈可變區包括SEQ ID NO: 29之胺基酸序列。
  61. 如請求項60之方法，其中該PD-L1抑制劑包括包含重鏈及輕鏈之抗PD-L1抗體，其中 該重鏈包括SEQ ID NO: 30之胺基酸序列，且 該輕鏈包括SEQ ID NO: 31之胺基酸序列。
  62. 如前述請求項中任一項之方法，其中該個體為人。
  63. 如前述請求項中任一項之方法，其中該投與係經口、經鼻、靜脈內、皮下、舌下或肌肉內投與進行。
  64. 如前述請求項中任一項之方法，其中包括抗CLDN18.2抗體之該組合物之該投與係在包括PD-1/PD-L1軸抑制劑之該組合物之該投與之前、同時或之後。
  65. 如前述請求項中任一項之方法，其中該疾病或病狀係癌症。
  66. 如前述請求項中任一項之方法，其中該病變組織包括癌細胞。
  67. 如請求項65之方法，其中該癌症選自由以下組成之群：胃癌、肺癌、支氣管癌、骨癌、肝及膽管癌、胰臟癌、乳癌、肝癌、卵巢癌、睾丸癌、腎癌、膀胱癌、頭頸癌、脊柱癌、腦癌、子宮頸癌、子宮癌、子宮內膜癌、大腸癌、大腸直腸癌、直腸癌、肛門癌、食道癌、胃腸癌、皮膚癌、前列腺癌、垂體癌、胃癌、陰道癌、甲狀腺癌、膠質母細胞瘤、星形細胞瘤、黑色素瘤、骨髓增生異常症候群、肉瘤、畸胎瘤及腺癌。
  68. 如請求項67之方法，其中該癌症為胃癌、肺癌、大腸癌、膽管癌或其組合。
  69. 如前述請求項中任一項之方法，其中該疾病或病狀對用PD-1/PD-L1軸抑制劑進行之治療具有抗性或難治性。
  70. 如請求項69之方法，其中該抗性係原發的或獲得性的。
  71. 如請求項69或70之方法，其中該疾病或病狀進一步對選自由以下組成之群的第二療法具有抗性或難治性：化療、放療、免疫療法以及其組合。
  72. 如請求項71之方法，其中該疾病或病狀對使用PD-1/PD-L1軸抑制劑及化學治療劑之組合療法具有抗性或難治性。
  73. 如請求項72之方法，其中該化學治療劑選自由以下組成之群：抗代謝藥，如甲胺喋呤及5-氟尿嘧啶(5-FU)；奧沙利鉑；烷化劑(例如，噻替派及環磷醯胺(CytoxanTM))；烷基磺酸鹽(例如，白消安、英丙舒凡及哌泊舒凡)；氮雜環丙烷(例如，苯佐替哌、卡波醌、美妥替派及烏瑞替派)；艾美樂胺及美樂蜜胺(例如，六甲蜜胺、三亞甲基蜜胺、三伸乙基磷醯胺、三伸乙基硫磷醯胺及三亞甲基洛蜜胺)；多聚乙醯；喜樹鹼(例如，合成類似物拓朴替康)；苔蘚抑素；卡利他汀；CC-1065(包括其阿多來新、卡折來新及比折來新合成類似物)；念珠藻素(關節念珠藻素及念珠藻素)；尾海兔素；多卡米星(包括合成類似物KW-2189及CBI-TMI)；艾榴塞洛素；水鬼蕉鹼；匍枝珊瑚醇；海綿抑制素；順鉑；氮芥類(例如，苯丁酸氮芥、萘氮芥、氯磷醯胺、雌氮芥、異環磷醯胺、氮芥、鹽酸甲氧氮芥、美法侖、新氮芥、苯芥膽甾醇、潑尼莫司汀、曲洛磷胺、尿嘧啶芥)；亞硝基脲(例如，卡莫司汀、氯脲黴素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀、雷莫司汀)；葉酸類似物(例如，二甲葉酸、胺甲喋呤、蝶羅呤、三甲曲沙)；嘌呤類似物(例如，氟達拉濱、6-巰嘌呤、硫咪嘌呤、硫鳥嘌呤)；嘧啶類似物(例如，安西他濱、阿紮胞苷、6-氮雜尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、雙脫氧尿苷、脫氧氟尿苷、依諾他濱、氟尿苷)；雄激素類(例如，卡普睾酮、丙酸屈他雄酮、環硫雄醇、美雄烷、睾內酯)；抗腎上腺類(例如，氨魯米特、米托坦、曲洛司坦)；葉酸補充劑(例如，亞葉酸)；醋葡醛內酯；醛磷醯胺糖苷；胺基乙醯丙酸；恩尿嘧啶；安吖啶；海斯濱；比生群；依達曲沙；地磷醯胺；地美可辛；地吖醌；依落氟鳥胺酸；依利醋銨；埃坡黴素；依託格魯；硝酸鎵；羥基脲；香菇多糖；氯尼達明；美登木素生物鹼(例如，美坦辛及安絲菌素)；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌達醇；二胺硝吖啶；噴司他丁；蛋氨氮芥；吡柔比星；洛索蒽醌；鬼臼酸；2-乙基醯肼；丙卡巴肼；PSK™；雷佐生；根瘤毒素；西佐喃；螺旋鍺；細交鏈孢菌酮酸；三亞胺醌；2,2',2"-三氯三乙胺；單端孢黴烯類；尿烷；長春地辛；達卡巴嗪；甘露醇氮芥；二溴甘露醇；二溴衛矛醇。
  74. 一種可用於治療有需要之個體之疾病或病狀的套組，該套組包括包含CLDN18.2拮抗劑之第一容器及包含PD-1/PD-L1軸抑制劑之第二容器，以及視情況選用之該套組之使用說明， 其中該疾病或病狀之特徵在於：a)病變組織中之CLDN18.2表現，及/或b)該病變組織中之低PD-L1表現或無PD-L1表現。
  75. 一種套組，其包括CLDN18.2拮抗劑及包裝說明書，該包裝說明書包括使用該CLDN18.2拮抗劑與PD-1/PD-L1軸抑制劑進行組合以治療有需要之個體之疾病或病狀的說明書， 其中該疾病或病狀之特徵在於：a)病變組織中之CLDN18.2表現，及/或b)該病變組織中之低PD-L1表現或無PD-L1表現。
  76. 一種套組，其包括PD-1/PD-L1軸抑制劑及包裝說明書，該包裝說明書包括使用該PD-1/PD-L1軸抑制劑與CLDN18.2拮抗劑進行組合以治療有需要之個體之疾病或病狀之說明， 其中該疾病或病狀之特徵在於：a)病變組織中之CLDN18.2表現，及/或b)該病變組織中之低PD-L1表現或無PD-L1表現。
  77. 一種用於預測個體對用CLDN18.2拮抗劑與PD-1/PD-L1軸抑制劑之組合進行之治療之反應性的套組，該套組包括：一或多種用於偵測自該個體獲得之生物樣品中之CLDN18.2及/或PD-L1之存在的試劑；或一或多種用於量測自該個體獲得之生物樣品中之CLDN 18.2及/或PD-L1之表現量之試劑，視情況其中該生物樣品為腫瘤組織。
  78. 一種藥物組合物在製備用於治療有需要之個體之疾病或病狀之藥物中的用途，該藥物組合物包括治療有效量之以下各項：a)CLDN18.2拮抗劑；b)PD-1/PD-L1軸抑制劑；或c)兩者，以及一或多種醫藥學上可接受之載劑， 其中該疾病或病狀之特徵在於：a)病變組織中之CLDN18.2表現，及/或b)該病變組織中之低PD-L1表現或無PD-L1表現。
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