CN114044829A - 双特异性抗人A-β/人转铁蛋白受体抗体及使用方法 - Google Patents

双特异性抗人A-β/人转铁蛋白受体抗体及使用方法 Download PDF

Info

Publication number
CN114044829A
CN114044829A CN202111123164.XA CN202111123164A CN114044829A CN 114044829 A CN114044829 A CN 114044829A CN 202111123164 A CN202111123164 A CN 202111123164A CN 114044829 A CN114044829 A CN 114044829A
Authority
CN
China
Prior art keywords
ser
val
gly
thr
leu
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202111123164.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN114044829B (zh
Inventor
H·杜尔
S·芬
U·格普费特
S·伊姆霍夫-容
C·克莱因
L·拉里维尔
M·莫尔霍伊
J·T·雷古拉
P·鲁格尔
W·舍费尔
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
F Hoffmann La Roche AG
Original Assignee
F Hoffmann La Roche AG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by F Hoffmann La Roche AG filed Critical F Hoffmann La Roche AG
Priority to CN202111123164.XA priority Critical patent/CN114044829B/zh
Publication of CN114044829A publication Critical patent/CN114044829A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN114044829B publication Critical patent/CN114044829B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2881—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD71
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
    • C07K16/468—Immunoglobulins having two or more different antigen binding sites, e.g. multifunctional antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/51—Complete heavy chain or Fd fragment, i.e. VH + CH1
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/515—Complete light chain, i.e. VL + CL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/522—CH1 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/64—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising a combination of variable region and constant region components

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

本文提供了双特异性抗人A‑β/人转铁蛋白受体抗体及其使用方法。

Description

双特异性抗人A-β/人转铁蛋白受体抗体及使用方法
本申请是申请日为2016年9月30日的、发明名称为“双特异性抗人A-β/人转铁蛋白受体抗体及使用方法”的中国专利申请201680056850.0(PCT/EP2016/073411)的分案申请。
发明领域
本发明涉及抗人A-β和人转铁蛋白受体的双特异性抗体、其生产方法、含有这些抗体的药物组合物及其用途。
背景
所有痴呆病例中的约70％是由于阿尔茨海默病引起的，阿尔茨海默病与对于认知重要的脑区和神经回路的选择性损伤相关。阿尔茨海默病的特征在于神经纤维缠结(特别是在海马的椎体神经元中)和主要含有淀粉样蛋白沉积的致密核心和弥散晕圈(defusedhalo)的无数淀粉样蛋白斑块。
胞外神经炎斑块含有大量占主导地位的称为“淀粉样蛋白β”、“A-β”、“Aβ4”、“β-A4”或“Aβ”的纤维状肽。参见Selkoe，Ann.Rev.Cell Biol.10(1994)373-403；Koo PNAS 96(1999)9989-9990；US 4,666,829；Glenner BBRC 12(1984)1131)。这种淀粉样蛋白源自“阿尔茨海默前体蛋白/P-淀粉样蛋白前体蛋白”(APP)。APP是整合膜糖蛋白(参见SisodiaPNAS 89(1992)6075)并且被质膜蛋白酶，α-分泌酶在AP序列内通过内切蛋白水解而断裂(参见Sisodia(1992)，Joe.cit.)。此外，其他分泌酶活性，特别是β-分泌酶和γ-分泌酶活性，导致包含39个氨基酸(Aβ39)、40个氨基酸(Aβ40)、42个氨基酸(Aβ42)或43个氨基酸(Aβ43)的淀粉样蛋白-β(Aβ)的胞外释放(参见Sinha PNAS 96(1999)11094-1053；Price，Science 282(1998)1078-1083；WO 00/72880或Hardy，TINS 20(1997)154)。
值得注意的是，Aβ具有几种天然存在的形式，其中人形式被称为上述的Aβ39、Aβ40、Aβ41、Aβ42和Aβ43。最突出的形式Aβ42具有氨基酸序列(从N-末端开始)：DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIA(SEQ ID NO:05)。在Aβ41、Aβ40、Aβ39中，C-末端氨基酸A、IA和VIA分别是缺失的。在Aβ43-形式中，在上述序列的C-末端包含额外的苏氨酸残基。
已经证实，使Aβ40原纤维成核需要的时间明显比Aβ42原纤维成核所需的时间长(参见，例如，Lansbury，Jr.，P.T.和Harper，J.D.，Ann.Rev.Biochem.66(1997)385-407)。如Wagner(J.Clin.Invest.104(1999)1239-1332)中综述的，Aβ42最常发现与神经炎斑块相关，并且被认为在体外是更具有原纤维形成性的。还表明，Aβ42在有序的非晶体Aβ肽的成核依赖性聚合中作为“种子”(参见，例如，Jarrett，Cell 93(1993)1055-1058)。改变的APP加工和/或含有蛋白质沉积的胞外斑块产生不仅得知于阿尔茨海默病病理学，而且得知于患有其他神经学和/或神经变性病症的受试者。这些病症特别包括唐氏综合症、遗传性脑出血伴淀粉样变Dutch型、帕金森病、ALS(肌萎缩性侧索硬化)、Creutzfeldt Jacob病、HIV-相关的痴呆和运动神经病。
迄今为止，只有有限的用于淀粉样蛋白相关疾病的医学干预方案得到了描述。例如，胆碱酯酶抑制剂，如加兰他敏(galantamine)、利凡斯的明(rivastigmine)或多奈哌齐(donepezil)，已经描述为在仅为轻度至中度疾病的阿尔茨海默病中是有益的。然而，由于这些药物的胆碱能作用，也已经报道了不良事件。尽管这些胆碱能-增强治疗确实产生了一些症状益处，但对于大部分治疗的患者，治疗反应不令人满意。已经估计，在仅有约5％受治疗的患者中出现了明显的认知改善，并且存在很少的证据表明治疗可以显著改变这种渐进性疾病的过程。
因此，对于更有效的治疗，特别是可以停止或延迟疾病进展的那些治疗，仍然存在极大的临床需求。
更近来也使用NMDA-受体拮抗剂，如美金刚(memantine)。然而，由于药理学活性，已经报道了不良事件。此外，使用这些NMDA-受体拮抗剂的治疗仅可以被认为是对症方法而非改变疾病的方法。
还提出了用于淀粉样蛋白相关病症治疗的免疫调节方法。WO 99/27944公开了包含部分A-β肽和载体分子的缀合物，由此所述载体分子应当增强免疫应答。在WO 00/72880中提及了另一种主动免疫方法，其中也使用了A-β片段来诱导免疫应答。
在WO 99/27944或WO 01/62801中还提出了使用一般抗-A-β抗体的被动免疫方法，以及在WO 02/46237、WO 02/088306和WO 02/088307中描述了针对部分A-β的特异性人源化抗体。WO 00/77178描述了抗体结合水解过程中由β-淀粉样蛋白采用的过渡态。WO 03/070760公开了识别A-β肽上的两个不连续氨基酸序列的抗体分子。
WO 2014/033074涉及结合血脑屏障上的受体的血脑屏障穿梭体及其使用方法。Pardridge，W.(Exp.Opin.Drug Deliv.12(2015)207-222)等已经报道了用转铁蛋白受体单克隆抗体进行的IgG融合蛋白的血脑屏障药物递送。Yu,Y.J.等(Sci.Translat.Med.6(2014)261ra154-261ra154)报道了在非人灵长类中穿过血脑屏障的治疗性双特异性抗体。Sumbria，R.K.等(Mol.Pharm.10(2013)3507-3513)报道了，用靶向转铁蛋白受体和aβ淀粉样蛋白肽的四价双特异性抗体，每日皮下给药，在阿尔茨海默病转基因小鼠脑中淀粉样蛋白斑块的解聚。Niewoehner，J.等(Neuron 81(2014)49-609)报道，使用单价分子穿梭体提高治疗性抗体的脑渗透和效力。
发明概述
本文中公开一种双特异性抗体，其包含
a)包含两个(全长)抗体轻链和(全长)抗体重链对的一个(全长)抗体，其中每对为一个(全长)抗体轻链和一个(全长)抗体重链，其中由每对的(全长)重链和(全长)轻链形成的结合位点特异性地结合第一抗原，和
b)一个另外的Fab片段，其中所述另外的Fab片段与(全长)抗体的一条重链的C-末端融合，其中所述另外的Fab片段的结合位点特异性地结合第二抗原，
其中每条(全长)抗体轻链在恒定轻链结构域(CL)中在位置123包含氨基酸残基精氨酸(替代野生型谷氨酸残基；E123R突变)，并且在位置124包含氨基酸残基赖氨酸(替代野生型谷氨酰胺残基；Q124K突变)(编号根据Kabat)，
其中每条(全长)抗体重链在第一恒定重链结构域(CH1)中在位置147包含谷氨酸残基(替代野生型赖氨酸残基；K147E突变)，并且在位置213包含谷氨酸残基(替代野生型赖氨酸氨基酸残基；K213E突变)(编号根据Kabat EU索引)，
其中所述特异性地结合第二抗原的另外的Fab片段包含结构域交叉，使得恒定轻链结构域(CL)和恒定重链结构域1(CH1)彼此替换，且
其中所述第一抗原是人A-β蛋白，而所述第二抗原是人转铁蛋白受体。
在一个实施方案中，所述另外的Fab片段通过肽接头与重链的C-末端融合。
在一个实施方案中，所述Fab片段的重链可变结构域的N-末端与全长重链的C-末端或肽接头的C-末端融合。
在一个实施方案中
a)与另外的Fab片段融合的全长重链具有三肽LSP作为C-末端重链氨基酸残基，其中其脯氨酸经由肽键与另外的Fab片段或肽接头的第一个氨基酸残基直接融合，和
b)没有与另外的Fab片段融合的全长重链具有三肽LSP，或SPG，或PGK作为C-末端重链氨基酸残基。
在一个实施方案中，所述(全长)抗体是
a)人亚类IgG1的全长抗体，
b)人亚类IgG4的全长抗体，
c)具有突变L234A、L235A和P329G的人亚类IgG1的全长抗体，
d)具有突变S228P、L235E和P329G的人亚类IgG4的全长抗体，
e)在两条重链中都具有突变L234A、L235A和P329G，并且在一条重链中具有突变T366W和S354C以及在相应的另一条重链中具有突变T366S、L368A、Y407V和Y349C的人亚类IgG1的全长抗体，
f)在两条重链中都具有突变S228P、L235E和P329G，并且在一条重链中具有突变T366W和S354C以及在相应的另一条重链中具有突变T366S、L368A、Y407V和Y349C的人亚类IgG4的全长抗体，
g)在两条重链中都具有突变L234A、L235A、P329G、I253A、H310A和H435A，并且在一条重链中具有突变T366W和S354C以及在相应的另一条重链中具有突变T366S、L368A、Y407V和Y349C的人亚类IgG1的全长抗体，或
h)在两条重链中都具有突变L234A、L235A、P329G、M252Y、S254T和T256E，并且在一条重链中具有突变T366W和S354C以及在相应的另一条重链中具有突变T366S、L368A、Y407V和Y349C的人亚类IgG1的全长抗体。
在一个实施方案中，所述(全长)抗体是
a)人亚类IgG1的全长抗体，
b)人亚类IgG4的全长抗体，
c)具有突变L234A、L235A和P329G的人亚类IgG1的全长抗体，
d)具有突变S228P、L235E和P329G的人亚类IgG4的全长抗体，
e)在两条重链中都具有突变L234A、L235A和P329G，并且在一条重链中具有突变i)T366W，和ii)S354C或Y349C，以及在相应的另一条重链中具有突变i)T366S、L368A、Y407V，和ii)Y349C或S354C的人亚类IgG1的全长抗体，
f)在两条重链中都具有突变S228P、L235E和P329G，并且在一条重链中具有突变i)T366W，和ii)S354C或Y349C，以及在相应的另一条重链中具有突变i)T366S、L368A和Y407V，和ii)Y349C或S354C的人亚类IgG4的全长抗体，
g)在两条重链中都具有突变L234A、L235A、P329G、I253A、H310A和H435A，并且在一条重链中具有突变i)T366W，和ii)S354C或Y349C，以及在相应的另一条重链中具有突变i)T366S、L368A和Y407V，和ii)Y349C或S354C的人亚类IgG1的全长抗体，
h)在两条重链中都具有突变L234A、L235A、P329G、M252Y、S254T和T256E，并且在一条重链中具有突变i)T366W，和ii)S354C或Y349C，以及在相应的另一条重链中具有突变i)T366S、L368A和Y407V，和ii)Y349C或S354C的人亚类IgG1的全长抗体，或
i)在两条重链中都具有突变L234A、L235A、P329G、H310A、H433A和Y436A，并且在一条重链中具有突变i)T366W，和ii)S354C或Y349C，以及在相应的另一条重链中具有突变i)T366S、L368A和Y407V，和ii)Y349C或S354C的人亚类IgG1的全长抗体。
在一个实施方案中，另外的Fab片段与包含突变T366W的重链的C-末端，或与包含突变T366S、L368A和Y407V的重链的C-末端融合。
在一个实施方案中
所述全长抗体是在两条重链中都具有突变L234A、L235A和P329G，并且在一条重链中具有突变T366W和S354C，以及在相应的另一条重链中具有突变T366S、L368A、Y407V和Y349C的人亚类IgG1，和
所述另外的Fab片段与包含突变T366W的重链的C-末端，或与包含突变T366S、L368A和Y407V的重链的C-末端融合。
在所有方面的一个实施方案中，所述人A-β结合位点包含SEQ ID NO:18的VH序列，包括该序列的翻译后修饰，以及SEQ ID NO:19的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。
在所有方面的一个实施方案中，所述人转铁蛋白受体结合位点包括SEQ ID NO:20的VH序列，包括该序列的翻译后修饰，以及SEQ ID NO:21的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。
在一个实施方案中，所述双特异性抗体包含
i)具有与SEQ ID NO:01具有70％或更高序列同一性的氨基酸序列的轻链，
ii)具有与SEQ ID NO:02具有70％或更高序列同一性的氨基酸序列的重链，
iii)具有与SEQ ID NO:03具有70％或更高序列同一性的氨基酸序列的轻链，和
iv)具有与SEQ ID NO:04具有70％或更高序列同一性的氨基酸序列的重链Fab片段，
其中
SEQ ID NO:01具有氨基酸序列
Figure BDA0003277917590000071
SEQ ID NO:02具有氨基酸序列
Figure BDA0003277917590000072
SEQ ID NO:03具有氨基酸序列
Figure BDA0003277917590000073
Figure BDA0003277917590000074
和
SEQ ID NO:04具有氨基酸序列
Figure BDA0003277917590000075
本文公开的一个方面是包含具有SEQ ID NO:01的氨基酸序列的(全长)轻链、具有SEQ ID NO:02的氨基酸序列的(全长)重链、具有SEQ ID NO:03的氨基酸序列的(全长)轻链、和包含SEQ ID NO:04的氨基酸序列的抗体Fab片段的双特异性抗体。
在一个实施方案中，所述双特异性抗体是单克隆的。
本文公开的一个方面是编码本文中所述的双特异性抗体的分离核酸。
本文公开的一个方面是包含编码本文中报道的双特异性抗体的本文中所述的核酸的宿主细胞。
本文公开的一个方面是一种生产本文中所述的双特异性抗体的方法，其包括以下步骤：
a)培养本文中所述的宿主细胞，使得产生所述双特异性抗体，和
b)从细胞或培养基回收所述双特异性抗体，并且由此产生本文中所述的双特异性抗体。
本文公开的一个方面是包含本文中所述的双特异性抗体和细胞毒性剂的免疫缀合物。
本文公开的一个方面是包含本文中所述的双特异性抗体和药物学上可接受载体的药物制剂。
本文公开的一个方面是本文中所述的抗体用作药物。
本文公开的一个方面是本文中所述的双特异性抗体用于治疗阿尔茨海默病。
本文公开的一个方面是本文中所述的双特异性抗体用于抑制/减缓脑中斑块的形成。
本文公开的一个方面是本文中所述的双特异性抗体用于分解β-淀粉样蛋白斑块。
本文公开的一个方面是本文中所述的双特异性抗体在药物制造中的用途。
在一个实施方案中，所述药物用于淀粉样蛋白病症的治疗。
在一个实施方案中，所述药物用于预防和/或治疗与淀粉样变和/或淀粉样蛋白斑块形成相关的疾病。在一个实施方案中，所述疾病选自痴呆、阿尔茨海默病、运动神经病、唐氏综合症、Creutzfeldt Jacob病、遗传性脑出血伴淀粉样变性Dutch型、帕金森病、HIV相关的痴呆、ALS或与衰老相关的神经元病症。在一个优选实施方案中，所述药物是用于治疗阿尔茨海默病。
在一个实施方案中，所述药物是用于抑制/减缓脑中斑块的形成。在一个实施方案中，所述药物是用于分解β-淀粉样蛋白斑块的药物。
本文公开的一个方面是治疗患有与淀粉样变(amyloidogenesis)和/或淀粉样蛋白斑块形成相关的疾病的个体的方法，其包括将有效量的本文中所述的双特异性抗体施用于所述个体。
本文公开的一个方面是治疗患有阿尔茨海默病的个体的方法，其包括将有效量的本文中所述的双特异性抗体施用于所述个体。
本文公开的一个方面是用于分解个体脑中的β-淀粉样蛋白斑块的方法，其包括将有效量的本文中所述的双特异性抗体施用于所述个体，以分解脑中的β-淀粉样蛋白斑块。
本文公开的一个方面是抑制/减缓个体脑中斑块形成的方法，其包括将有效量的本文中所述的双特异性抗体施用于所述个体，以抑制/减缓脑中斑块的形成。
发明实施方案详述
凸起进入孔洞(knobs into holes)二聚化模块及其在抗体工程化中的用途描述于Carter P.；Ridgway J.B.B.；Presta L.G.:Immunotechnology，第2卷，1996年2月1日，pp.73-73。CH3结构域中另外的二硫键报道于Merchant,A.M.等，Nat.Biotechnol.16(1998)677-681。
Kabat,E.A.等，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD(1991)中给出了关于人免疫球蛋白轻链和重链的核苷酸序列的一般信息。
如本文中使用的，所有恒定区以及重链和轻链的结构域的氨基酸位置根据Kabat等，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，Public HealthService，National Institutes of Health，Bethesda,MD(1991)中所述的Kabat编号系统来编号，并且在本文中称为“根据Kabat编号”。具体地，将Kabat等，Sequences of Proteinsof Immunological Interest，第5版，Public Health Service，National Institutes ofHealth，Bethesda,MD(1991)的Kabat编号系统(参见第647-660页)用于κ和λ同种型的轻链恒定结构域CL，而将Kabat EU索引编号系统(参见第661-723页)用于恒定重链结构域(CH1、铰链、CH2和CH3，其在本文中进一步通过提及“根据Kabat EU索引编号”来进一步说明)。
1.定义
术语“血脑屏障”或“BBB”表示在外周循环与脑和脊髓之间的生理学屏障，其由脑毛细血管内皮细胞浆膜内的紧密连接形成，产生限制分子，甚至是非常小的分子，如脲(60道尔顿)，转运至脑中的紧密屏障。脑内的BBB、脊髓内的血液-脊髓屏障和视网膜内的血液-视网膜屏障是CNS内的连续毛细管屏障，并且在本文中总称为血脑屏障或BBB。BBB还包括血液-CSF屏障(脉络丛)，其中所述屏障由室管膜细胞而非毛细管内皮细胞组成。
术语“抗人A-β抗体”和“特异性地结合人A-β的抗体”是指能够以足够的亲合力结合人A-β肽的抗体，使得所述抗体可用作诊断剂和/或治疗剂靶向A-β肽。
值得注意的是，人A-β具有几种天然存在的形式，其中这些人形式称为Aβ39、Aβ40、Aβ41、Aβ42和Aβ43。最突出的形式Aβ42具有SEQ ID NO:05的氨基酸序列。在Aβ41、Aβ40、Aβ39中，C-末端氨基酸A、IA和VIA分别是缺失的。在Aβ43-形式中，在SEQ ID NO:05的C-末端包含额外的苏氨酸残基。在一个实施方案中，所述人A-β蛋白具有SEQ ID NO:05的氨基酸序列。
因此，术语还包括结合人A-β多肽的截短片段的抗体。
术语“中枢神经系统”或“CNS”表示控制身体功能的神经组织的复合物，并且包括脑和脊髓。
术语“血脑屏障受体”(在本文中缩写为“BBBR”)是在脑内皮细胞上表达的胞外膜连接的受体蛋白，其能够跨BBB运送分子，或可以用于运送外源性施用的分子。本文中BBBR的实例包括但不限于：转铁蛋白受体(TfR)、胰岛素受体、胰岛素-样生长因子受体(IGF-R)、低密度脂蛋白受体(包括但不限于低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP1)和低密度脂蛋白受体相关蛋白8(LRP8))，以及肝素结合表皮生长因子样生长因子(HB-EGF)。一种优选的BBBR是转铁蛋白受体(TfR)。
“转铁蛋白受体”(“TfR”)是跨膜糖蛋白(具有约180,000Da分子量)，其由两个二硫键结合的亚基组成(每个亚基的表观分子量为约90,000Da)并且涉及脊椎动物中的铁吸收。在一个实施方案中，本文中提及的TrR是例如包含Schneider等(Nature 311(1984)675-678)中报道的氨基酸序列的人TfR。在一个实施方案中，所述人转铁蛋白受体具有SEQ IDNO:22的氨基酸序列。
“多特异性抗体”表示对同一抗原或两个不同抗原上的至少两个不同表位具有结合特异性的抗体。示例性多特异性抗体可以结合BBBR和脑抗原。多特异性抗体可以制成全长抗体或抗体片段(例如，F(ab’)2双特异性抗体)或其组合(例如，全长抗体加另外的scFv或Fab片段)。具有两个、三个或更多个(例如，四个)功能性抗原结合位点的工程化抗体也已经有报道(参见，例如，US 2002/0004587 A1)。
对于本文的目的，“受体人框架”是包含源自如下定义的人免疫球蛋白框架或人共有框架的轻链可变结构域(VL)框架或重链可变结构域(VH)框架的氨基酸序列的框架。“源自”人免疫球蛋白框架或人共有框架的受体人框架可以包括与其相同的氨基酸序列，或可以含有氨基酸序列变化。在一些实施方案中，氨基酸变化的数量为10个或更少、9个或更少、8个或更少、7个或更少、6个或更少、5个或更少、4个或更少、3个或更少，或2个或更少。在一些实施方案中，VL受体人框架序列与VL人免疫球蛋白框架序列或人共有框架序列相同。
“亲合力”是指分子(例如，抗体)的单个结合位点与其结合伴侣(例如，抗原)之间的非共价相互作用的总和强度。除非另外指出，否则如本文中所使用的，“结合亲合力”是指反映结合对(例如，抗体和抗原)的成员之间1:1相互作用的内在结合亲合力。分子X对于其配偶体Y的亲合力通常可以通过解离常数(kd)来表示。亲合力可以通过本领域已知的常规方法来测量，包括本文中所述的那些。
“亲合力成熟的”抗体是指在一个或多个高变区(HVR)中具有一个或多个改变的抗体，与不具有这种改变的亲本抗体相比，这种改变导致抗体对抗原的亲合力提高。
本文中的术语“抗体”以最宽的含义来使用，并且包括各种抗体结构，包括、但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)，只要它们呈现期望的抗原结合活性。
术语“抗体依赖性细胞毒性(ADCC”)是通过Fc受体结合介导的功能并且是指在效应细胞的存在下通过本文中所述抗体的靶细胞裂解。在一个实施方案中，通过在效应细胞(如新鲜分离的PBMC(外周血单核细胞)或从血沉棕黄层纯化的效应细胞(如单核细胞或NK(自然杀伤)细胞))的存在下，用本文中所述的抗体处理表达CD19的红细胞样细胞(例如，表达重组人CD19的K562细胞)制备物，来测量ADCC。用51Cr标记靶细胞，并随后用抗体孵育。标记的细胞与效应细胞孵育，分析上清液中释放的51Cr。对照包括用效应细胞但没有用抗体孵育的靶内皮细胞。通过测量抗体与表达Fcγ受体的细胞(如重组表达FcγRI和/或FcγRIIA的细胞)或NK细胞(基本上表达FcγRIIIA)的结合，可以研究抗体诱导初始介导ADCC步骤的能力。在一个优选实施方案中，测量与NK细胞上的FcγR的结合。
“抗体片段”是指非完整抗体的分子，其包含完整抗体的部分，该部分与该完整抗体所结合的抗原结合。抗体片段的实例包括但不限于Fv、Fab、Fab'、Fab’-SH、F(ab')2；双链抗体(diabody)；线性抗体；单链抗体分子(例如，scFv)；以及从抗体片段形成的多特异性抗体。
术语“嵌合”抗体是指其中重链和/或轻链的一部分源自特定来源或物种，同时重链和/或轻链的剩余部分源自不同的来源或物种的抗体。
抗体的“类别”表示其重链具有的恒定结构域或恒定区的类别。存在五种主要的抗体类别：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，并且这些中的一些可以进一步分为亚类(同种型)，例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。对应于不同类别的免疫球蛋白的重链恒定结构域分别被称为α、δ、ε、γ和μ。
如本文中使用的术语“细胞毒性剂”是指抑制或阻止细胞功能和/或引起细胞死亡或破坏的物质。细胞毒性剂包括，但不限于，放射性同位素(例如，At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212和Lu的放射性同位素)、化疗剂或药物(例如，氨甲喋呤、阿霉素、长春花生物碱(长春新碱、长春碱、依托泊苷)、亚德里亚霉素(doxorubicin)、美法仑、丝裂霉素C、苯丁酸氮芥、道诺霉素或其他嵌入剂)；生长抑制剂；酶及其片段，如溶核酸酶；抗生素；毒素，如小分子毒素或细菌、真菌、植物或动物来源的酶活性毒素，包括其片段和/或变体；和各种下文公开的各种抗肿瘤或抗癌剂。
术语“补体依赖性细胞毒性(CDC)”是指在补体的存在下通过本文中所述的抗体诱导的细胞裂解。在一个实施方案中，通过在补体的存在下，用本文中所述的抗体处理表达CD19的人内皮细胞来测量CDC。
在一个实施方案中，用钙黄绿素(calcein)标记细胞。如果在30μg/ml浓度下，抗体诱导20％或更多靶细胞裂解，则存在CDC。可以在ELISA中测量与补体因子C1q的结合。在这样的测试中，原则上用一定浓度范围的抗体包被ELISA平板，向其添加纯化的人C1q或人血清。通过针对C1q的抗体，接着通过过氧化物酶标记的缀合物，来检测C1q结合。对于过氧化酶底物
Figure BDA0003277917590000131
(2,2’-联氮-双-[3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸盐(6)])，在405nm(OD405)下，作为光密度进行结合的检测(最大结合Bmax)。
“效应子功能”是指可归因于抗体的Fc-区的那些生物活性，其随抗体类型改变。抗体效应子功能的实例包括：C1q结合和补体依赖性细胞毒性(CDC)；Fc受体结合；抗体依赖性的细胞介导的细胞毒性(ADCC)；吞噬作用；细胞表面受体(例如B细胞受体)的下调；和B-细胞激活。
Fc受体结合依赖性效应子功能可以通过抗体的Fc-区与Fc受体(FcR)的相互作用来介导，Fc受体是造血细胞上的特化细胞表面受体。Fc受体属于免疫球蛋白超家族，并且已经显示出可以介导通过免疫复合物的吞噬作用来除去抗体包被的病原体、以及经由抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)来裂解被相应抗体包被的红细胞和各种其他细胞靶标(例如，肿瘤细胞)(参见，例如，Van de Winkel,J.G.和Anderson,C.L.,J.Leukoc.Biol.49(1991)511-524)。FcR通过其针对免疫球蛋白同种型的特异性来限定：将针对IgG抗体的Fc受体称为FcγR。Fc受体结合描述于例如Ravetch,J.V.和Kinet,J.P.,Annu.Rev.Immunol.9(1991)457-492；Capel,P.J.等，Immunomethods 4(1994)25-34；de Haas,M.等，J.Lab.Clin.Med.126(1995)330-341；和Gessner,J.E.等，Ann.Hematol.76(1998)231-248。
针对IgG抗体的Fc-区的受体(FcγR)的交联引发各种效应子功能，包括吞噬作用、抗体依赖性细胞毒性和炎性介质的释放，以及免疫复合物清除和抗体产生的调节。在人类中，已经表征了三种类型的FcγR，其为：
-FcγRI(CD64)以高亲合力结合单体IgG并且在巨噬细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞和嗜酸粒细胞上表达。至少在氨基酸残基E233-G236、P238、D265、N297、A327和P329(编号根据Kabat的EU索引)中的一个上的Fc-区IgG修饰，可以降低与FcγRI的结合。位置233-236的IgG2残基，替代入IgG1和IgG4中，使FcγRI结合降低了103-倍，并且消除了对抗体敏化红细胞的人单核细胞应答(Armour,K.L.等，Eur.J.Immunol.29(1999)2613-2624)。
-FcγRII(CD32)以中等至低的亲合力结合复合的IgG并且广泛表达。这种受体可以分成两个亚类，FcγRIIA和FcγRIIB。发现FcγRIIA在许多涉及杀伤的细胞上(例如，巨噬细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞)并且似乎能够激活杀伤过程。FcγRIIB似乎在抑制过程中起着作用并且被发现存在于B-细胞、巨噬细胞以及肥大细胞和嗜酸性粒细胞上。在B-细胞上，其似乎用来抑制更多的免疫球蛋白产生和同种型转换成例如IgE类别。在巨噬细胞上，FcγRIIB用来抑制通过FcγRIIA介导的吞噬作用。在嗜酸性粒细胞和肥大细胞上，B-形式可以帮助抑制这些细胞通过IgE结合在其分开的受体上而激活。例如，对于包含至少在氨基酸残基E233-G236、P238、D265、N297、A327、P329、D270、Q295、A327、R292和K414(编号根据Kabat的EU索引)中的一个上具有突变的IgG Fc-区的抗体，发现了降低的与FcγRIIA的结合。
-FcγRIII(CD16)以中等至低的亲合力结合IgG并且作为两种类型存在。在NK细胞、巨噬细胞、嗜酸性粒细胞以及一些单核细胞和T细胞上发现了FcγRIIIA，其介导ADCC。FcγRIIIB在嗜中性粒细胞上高度表达。例如，对于包含至少在氨基酸残基E233-G236、P238、D265、N297、A327、P329、D270、Q295、A327、S239、E269、E293、Y296、V303、A327、K338和D376(编号根据Kabat的EU索引)中的一个上具有突变的IgG Fc-区的抗体，发现了降低的与FcγRIIA的结合。
作图人IgG1上的Fc受体结合位点、上述突变位点以及用于测量与FcγRI和FcγRIIA的结合的方法，描述于Shields，R.L.等，J.Biol.Chem.276(2001)6591-6604。
药剂(例如，药物制剂)的“有效量”是指在所需的剂量和持续时间段下，能有效获得所需治疗或预防结果的量。
如本文中使用的术语“Fc受体”是指，特征在于存在与受体相关的胞质ITAM序列的激活受体(参见，例如，Ravetch,J.V.和Bolland,S.，Annu.Rev.Immunol.19(2001)275-290)。这样的受体是FcγRI、FcγRIIA和FcγRIIIA。术语“无FcγR结合”表示，在10μg/ml的抗体浓度下，本文中所述的抗体与NK细胞的结合是如WO 2006/029879中报道的针对抗-OX40L抗体LC.001发现的结合的10％或更低。
尽管IgG4显示出了降低的FcR结合，但其他IgG亚类的抗体显示出强烈的结合。然而，Pro238、Asp265、Asp270、Asn297(失去Fc碳水化合物)、Pro329和234、235、236和237、Ile253、Ser254、Lys288、Thr307、Gln311、Asn434和His435是提供，如果改变的话，也是降低的FcR结合的残基(Shields，R.L.等，J.Biol.Chem.276(2001)6591-6604；Lund,J.等，FASEBJ.9(1995)115-119；Morgan,A.等，Immunology 86(1995)319-324；和EP 0 307 434)。在一个实施方案中，本文中所述的抗体是IgG1或IgG2亚类的，并且包含突变PVA236、GLPSS331、和/或L234A/L235A。在一个实施方案中，本文中所述的抗体是IgG4亚类的，并且包含突变L253E。在一个实施方案中，抗体进一步包含突变S228P。
本文中的术语“Fc区”用于限定含有至少一部分的恒定区的免疫球蛋白重链的C-末端区域。该术语包括天然序列Fc-区和变体Fc-区。在一个实施方案中，人IgG重链Fc-区从Cys226或从Pro230延伸至重链的羧基端。然而，Fc-区的C-端赖氨酸(Lys447)可以存在或可以不存在。除非本文中另外指出，Fc-区或恒定区中的氨基酸残基的编号是根据EU编号系统，也称为EU索引，如Kabat，E.A.等，Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest，第5版，Public Health Service,National Institutes of Health，Bethesda，MD(1991)，NIH Publication 91-3242。
在一个实施方案中，本文中所述的抗体包含源自人来源的Fc-区作为Fc-区。在一个实施方案中，所述Fc-区包含人恒定区的所有部分。抗体的Fc区直接参与补体激活、C1q结合、C3激活和Fc受体结合。尽管抗体对补体系统的影响取决于特定条件，但结合C1q是由Fc-区中限定的结合位点引起的。这样的结合位点是现有技术中已知的并且描述于例如Lukas,T.J.等，J.Immunol.127(1981)2555-2560；Brunhouse,R.和Cebra,J.J.,Mol.Immunol.16(1979)907-917；Burton,D.R.等，Nature 288(1980)338-344；Thommesen,J.E.等，Mol.Immunol.37(2000)995-1004；Idusogie,E.E.等，J.Immunol.164(2000)4178-4184；Hezareh,M.等，J.Virol.75(2001)12161-12168；Morgan,A.等，Immunology 86(1995)319-324；和EP 0 307 434。这样的结合位点是例如L234、L235、D270、N297、E318、K320、K322、P331和P329(编号根据Kabat的EU索引；除非本文中另外指出，Fc-区或恒定区中的氨基酸残基的编号是根据EU编号系统，也称为EU索引，如Kabat，E.A.等，Sequences of Proteins ofImmunological Interest，第5版，Public Health Service,National Institutes ofHealth，Bethesda，MD(1991)，NIH Publication 91-3242)。亚类IgG1、IgG2和IgG3的抗体通常显示出补体激活、C1q结合和C3激活，而IgG4不激活补体系统，不结合C1q和不激活C3。“抗体的Fc-区”是本领域技术人员公知的术语，并且是基于抗体的木瓜蛋白酶断裂来限定的。在一个实施方案中，Fc-区是人Fc-区。在一个实施方案中，所述Fc区是包含突变S228P和/或L253E(编号根据Kabat的EU索引)的人IgG4亚类的。在一个实施方案中，所述Fc-区是包含突变L234A和L235A(编号根据Kabat的EU索引)的人IgG1亚类的。
“框架”或“FR”是指除了高变区(HVR)残基之外的可变结构域残基。可变结构域的FR通常由四个FR结构域组成：FR1、FR2、FR3和FR4。因此，HVR和FR序列通常以以下顺序出现在VH(或VL)中：FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4。
术语“全长抗体”、“完整抗体”和“全抗体”在本文中可互换使用，是指具有与天然抗体结构基本上类似的结构、或具有含有本文中定义的Fc-区的重链的抗体。“全长抗体”是包含轻链和重链抗原结合可变区(VL、VH)以及轻链恒定结构域(CL)和重链恒定结构域CH1、CH2和CH3的抗体。恒定结构域可以是天然序列恒定结构域(例如，人天然序列恒定结构域)或其氨基酸序列变体。更详细地，全长抗体包含两条抗体轻链(各自包含轻链可变结构域和轻链恒定结构域)和两条抗体重链(各自包含重链可变结构域、铰链区和重链恒定结构域CH1、CH2和CH3)。C-末端氨基酸残基K或GK可以彼此独立地在全长抗体的两条抗体重链中存在或不存在。此外，全长抗体可以在结构域内包含氨基酸添加、突变和删除，但没有整个结构域的删除。
术语“宿主细胞”、“宿主细胞系”和“宿主细胞培养物”可互换使用，并且是指其中已经引入外源核酸的细胞，包括这种细胞的后代。宿主细胞包括“转化体”和“转化的细胞”，其包括原代转化的细胞和由其衍生的后代，不考虑传代数。后代在核酸内容物方面可以与亲本细胞不完全相同，而是可以含有突变。如下突变体后代被包括在本文中，所述突变体具有与针对最初转化的细胞筛选或选择的功能或生物活性相同的功能或生物活性。
“人共有框架”是代表在选择的人免疫球蛋白VL或VH框架序列中最常出现的氨基酸残基的框架。通常，从可变结构域序列的亚组选择人免疫球蛋白VL或VH序列。通常，序列的亚组是如Kabat，E.A.等，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，Bethesda MD(1991)，NIH Publication 91-3242，第1-3卷中的亚组。在一个实施方案中，对于VL，所述亚组是如在Kabat等(出处同上)中的亚组κI。在一个实施方案中，对于VH，所述亚组是如在Kabat等(出处同上)中的亚组III。
“人源化”抗体是指包含来自非人HVR的氨基酸残基和来自人FR的氨基酸残基的嵌合抗体。在某些实施方案中，人源化抗体将包含至少一个和通常两个可变结构域的基本上全部，其中所有或基本上所有的HVR(例如，CDR)对应于非人抗体的HVR，并且所有或基本上所有的FR对应于人抗体的FR。人源化抗体任选地可以包含源自人抗体的抗体恒定区的至少一部分。抗体(例如，非人抗体)的“人源化形式”表示已经经历人源化的抗体。
本文中使用的术语“高变区”或“HVR”表示抗体可变结构域中在序列上高变(“互补性决定区”或“CDR”)和/或形成在结构上确定的环(“超变环”)和/或含有抗原接触残基(“抗原接触点”)的每个区域。通常，抗体包含六个HVR；三个在VH中(H1、H2、H3)，以及三个在VL(L1、L2、L3)中。
本文中的HVR包括
(a)在氨基酸残基26-32(L1)、50-52(L2)、91-96(L3)、26-32(H1)、53-55(H2)和96-101(H3)处存在的超变环(Chothia，C.和Lesk，A.M.，J.Mol.Biol.196(1987)901-917)；
(b)在氨基酸残基24-34(L1)、50-56(L2)、89-97(L3)、31-35b(H1)、50-65(H2)和95-102(H3)处存在的CDR(Kabat，E.A.等，Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest，第5版Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，MD(1991)，NIH Publication 91-3242)；
(c)在氨基酸残基27c-36(L1)、46-55(L2)、89-96(L3)、30-35b(H1)、47-58(H2)和93-101(H3)处存在的抗原接触点(MacCallum等，J.Mol.Biol.262：732-745(1996))；和
(d)(a)、(b)和/或(c)的组合，包括氨基酸残基46-56(L2)、47-56(L2)、48-56(L2)、49-56(L2)、26-35(H1)、26-35b(H1)、49-65(H2)、93-102(H3)和94-102(H3)。
除非另有说明，可变结构域中的HVR残基和其它残基(例如，FR残基)在本文中根据Kabat等(出处同上)编号。
“免疫缀合物”是与一个或多个异源分子(包括但不限于细胞毒性剂)缀合的抗体。
“个体”或“受试者”是哺乳动物。哺乳动物包括，但不限于，驯养动物(例如，牛、绵羊、猫、狗和马)，灵长类动物(例如，人和非人灵长类动物，如猴)，兔和啮齿类动物(例如，小鼠和大鼠)。在某些实施方案中，所述个体或受试者是人。
“分离的”抗体是已经与其天然环境的组分分离的抗体。在一些实施方案中，将抗体纯化至大于95％或99％纯度，所述纯度通过例如电泳(例如，SDS-PAGE、等电聚焦(IEF)、毛细管电泳)或色谱(例如，离子交换或反相HPLC)确定。关于评价抗体纯度的方法的综述，参见，例如，Flatman，S.等，J.Chrom.B 848(2007)79-87。
“分离的”核酸表示已经与其天然环境的组分分离的核酸分子。分离的核酸包括在通常含有该核酸分子的细胞中包含的该核酸分子，但是所述核酸分子存在于染色体外或在不同于其天然染色体位置的染色体位置。
“分离的编码抗人A-β/人转铁蛋白受体抗体的核酸”是指，一个或多个编码抗体重链和轻链(或其片段)的核酸分子，包括在单个载体或分开的载体中的这样核酸分子，以及在宿主细胞中的一个或多个位置存在的这样的核酸分子。
本文中使用的术语“单克隆抗体”表示得自基本上同质的抗体群体的抗体，即，构成所述群体的各个抗体是相同的和/或结合相同表位，除了可能的变体抗体(例如，含有天然存在的突变或在单克隆抗体制品的生产过程中产生)以外，这样的变体通常以微量存在。与通常包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制品不同，单克隆抗体制品中的每个单克隆抗体都针对抗原上的一个决定簇。因而，修饰语“单克隆”表示所述抗体得自基本上同质的抗体群体的特征，并且不应解释为需要通过任何特定方法生产所述抗体。例如，根据本发明使用的单克隆抗体可以通过多种技术来制备，所述技术包括、但不限于杂交瘤方法、重组DNA方法、噬菌体展示方法，和使用包含人免疫球蛋白基因座的全部或部分的转基因动物的方法，本文描述了这样的方法和其它示例性的制备单克隆抗体的方法。
“裸抗体”是指不与异源部分(例如，细胞毒性部分)或放射性标记缀合的抗体。裸抗体可以存在于药物制剂中。
“天然抗体”是指具有不同结构的天然存在的免疫球蛋白分子。例如，天然IgG抗体是约150,000道尔顿的异源四聚体糖蛋白，由二硫键合的两条相同的轻链和两条相同的重链组成。从N-端至C-端，每个重链具有可变区(VH)，也称为可变重链结构域或重链可变结构域，接着是三个恒定结构域(CH1、CH2和CH3)。类似地，从N-端至C-端，每个轻链具有可变区(VL)，也称为可变轻链结构域或轻链可变结构域，接着是恒定轻(CL)结构域。抗体的轻链可以基于其恒定结构域的氨基酸序列归入两种类型(称为kappa(κ)和lambda(λ))中的一种。
术语“包装说明书”用于表示治疗性产品的商业包装中通常包括的指令，其含有关于这样的治疗性产品的使用的适应症、用法、剂量、施用、联合治疗、禁忌和/或告诫的信息。
相对于参考多肽序列的“氨基酸序列同一性百分比(％)”被定义为，比对序列并且如果必要的话引入空位以实现最大序列同一性百分比后，且不考虑任何保守置换作为序列同一性的一部分，候选序列中与参考多肽序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分比。用于确定氨基酸序列同一性百分比目的的比对可以以本领域技术中的多种方式实现，例如，使用公众可得到的计算机软件，如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员可以确定用于比对序列的适当参数，包括实现在所比较的序列的全长上的最大对齐所需的任何算法。但是，为了本文的目的，使用序列比较计算机程序ALIGN-2，产生％氨基酸序列同一性值。ALIGN-2序列比较计算机程序由Genentech，Inc.创造，并且源代码已经在美国版权局，Washington D.C.，20559与用户文档一起提交，其在美国版权登记号TXU510087下登记。ALIGN-2程序可以从Genentech，Inc.，South San Francisco，California公开获得，或可以从源代码编译。应该编译ALIGN-2程序以在UNIX操作系统(包括数字UNIX V4.0D)上使用。所有序列比较参数由ALIGN-2程序设定并且不改变。
在采用ALIGN-2进行氨基酸序列比较的情况下，如下计算给定氨基酸序列A相对、与，或针对给定氨基酸序列B的％氨基酸序列同一性(其可以可替换地叙述为相对、与，或针对给定氨基酸序列B具有或包含特定％氨基酸序列同一性的给定氨基酸序列A)：
100×分数X/Y
其中X是通过序列比对程序ALIGN-2，在该程序的A和B的比对中，评分为相同匹配的氨基酸残基的数目，并且其中Y是B中的氨基酸残基的总数。应当理解，在氨基酸序列A的长度不等于氨基酸序列B的长度的情况下，A相对B的％氨基酸序列同一性将不等于B相对A的％氨基酸序列同一性。除非另外特别说明，本文使用的所有％氨基酸序列同一性值如在紧邻的上一段中所述使用ALIGN-2计算机程序获得。
术语“药物制剂”是指这样的制品：其呈现为使得包含在其中的活性成分的生物活性有效的形式，并且所述制剂不含有对所述制剂要施用的受试者有不可接受的毒性的额外组分。
“药物学上可接受的载体”表示药物制剂中除了活性成分之外的成分，其对受试者无毒。药物学上可接受的载体包括、但不限于缓冲剂、赋形剂、稳定剂或防腐剂。
本文中使用的“治疗(treatment)”(及其语法变体，如“治疗(treat)”或“治疗(treating)”)表示试图改变治疗的个体的天然进程的临床干预，并且可以为了预防或在临床病理学进程中执行。期望的治疗效果包括、但不限于：防止疾病的发生或复发，缓解征状，减少疾病的任何直接或间接病理学后果，防止转移，降低疾病进展的速度，改善或减轻疾病状态，以及缓解或改善的预后。在一些实施方案中，本文中所述的抗体用于延迟疾病的发展或减缓疾病的进展。
术语“可变区”或“可变结构域”表示抗体重链或轻链中参与所述抗体与其抗原的结合的结构域。天然抗体的重链和轻链的可变结构域(分别是VH和VL)通常具有类似的结构，每个结构域包含四个保守框架区(FR)和三个高变区(HVR)(参见，例如，Kindt，T.J.等，Kuby Immunology，第6版，W.H.Freeman and Co.，N.Y.(2007)，第91页)。单个VH或VL结构域可能足以赋予抗原-结合特异性。此外，结合特定抗原的抗体可以使用来自结合所述抗原的抗体的VH或VL结构域分别筛选互补VL或VH结构域的文库来分离(参见，例如，Portolano，S.等，J.Immunol.150(1993)880-887；Clackson，T.等，Nature 352(1991)624-628)。
本文中使用的术语“载体”表示，能够扩增与其连接的另一核酸的核酸分子。该术语包括作为自我复制的核酸结构的载体以及整合进它已经引入其中的宿主细胞的基因组中的载体。某些载体能够指导与其可操作地连接的核酸的表达。这样的载体在本文被称为“表达载体”
II.组合物和方法
在一个方面中，本发明是部分基于发现本文中所述的双特异性抗人A-β/人转铁蛋白受体抗体具有改善的特性。在某些实施方案中，提供了双特异性抗人A-β/人转铁蛋白受体抗体。本文中所述的抗体例如对于阿尔茨海默病的诊断或治疗是有用的。
A.示例性双特异性抗人A-β/人转铁蛋白受体抗体
在一个方面中，本发明提供了分离的结合人A-β和人转铁蛋白受体的双特异性抗体。所述抗体是由全长核心抗体和融合的Fab片段(其中某些结构域是交叉交换的)组成的双特异性抗体。由此，得到的双特异性抗体是不对称的。因此，可以使用具有称为凸起突变的第一重链(HCknob)和具有称为孔洞突变(HChole)的第二重链，使用称为凸起进入孔洞的二聚化技术，来产生所述双特异性抗体。
抗体0012，其也是本发明的一个方面，由四个具有SEQ ID NO:06至09的氨基酸序列的多肽组成。
抗体0012是双特异性抗体，其包含
a)包含两个全长抗体轻链和全长抗体重链对的一个全长抗体，每对为一个全长抗体轻链和一个全长抗体重链，其中由每对全长重链和全长轻链形成的结合位点特异性地结合第一抗原，和
b)一个另外的Fab片段，其中所述另外的Fab片段与全长抗体的一条重链的C-末端融合，其中所述另外的Fab片段的结合位点特异性地结合第二抗原，
其中每条全长抗体轻链在恒定轻链结构域(CL)中位置123包含氨基酸残基精氨酸(替代野生型谷氨酸残基；E123R突变)，并且在位置124包含氨基酸残基赖氨酸(替代野生型谷氨酰胺残基；Q124K突变)(编号根据Kabat)，
其中每条全长抗体重链在第一恒定重链结构域(CH1)中位置147包含谷氨酸残基(替代野生型赖氨酸残基；K147E突变)，并且在位置213包含谷氨酸残基(替代野生型赖氨酸氨基酸残基；K213E突变)(编号根据Kabat EU索引)，
其中所述特异性地结合第二抗原的另外的Fab片段包含结构域交叉，使得轻链可变结构域(VL)和重链可变结构域(VH)彼此替换，和
其中所述第一抗原是人A-β蛋白，而所述第二抗原是人转铁蛋白受体。
抗体0015，其也是本发明的一个方面，由四个具有SEQ ID NO:01至03和SEQ IDNO:10的氨基酸序列的多肽组成。
抗体0015是双特异性抗体，其包含
a)包含两个全长抗体轻链和全长抗体重链对的一个全长抗体，每对为一个全长抗体轻链和一个全长抗体重链，其中由每对全长重链和全长轻链形成的结合位点特异性地结合第一抗原，和
b)一个另外的Fab片段，其中所述另外的Fab片段与全长抗体的一条重链的C-末端融合，其中所述另外的Fab片段的结合位点特异性地结合第二抗原，
其中每条全长抗体轻链在恒定轻链结构域(CL)中位置123包含氨基酸残基精氨酸(替代野生型谷氨酸残基；E123R突变)，并且在位置124包含氨基酸残基赖氨酸(替代野生型谷氨酰胺残基；Q124K突变)(编号根据Kabat)，
其中每条全长抗体重链在第一恒定重链结构域(CH1)中位置147包含谷氨酸残基(替代野生型赖氨酸残基；K147E突变)，并且在位置213包含谷氨酸残基(替代野生型赖氨酸氨基酸残基；K213E突变)(编号根据Kabat EU索引)，
其中所述特异性地结合第二抗原的另外的Fab片段包含结构域交叉，使得恒定轻链结构域(CL)和恒定重链结构域1(CH1)彼此替换，和其中所述第一抗原是人A-β蛋白，而所述第二抗原是人转铁蛋白受体。
抗体0020，其也是本发明的一个方面，由三个具有SEQ ID NO:11至13的氨基酸序列的多肽组成。
抗体0020是双特异性抗体，其包含
a)包含两个全长抗体轻链和全长抗体重链对的一个全长抗体，每对为一个全长抗体轻链和一个全长抗体重链，其中由每对全长重链和全长轻链形成的结合位点特异性地结合第一抗原，和
b)一个另外的Fab片段，其中所述另外的Fab片段与全长抗体的一条重链的C-末端融合，其中所述另外的Fab片段的结合位点特异性地结合第二抗原，
其中每条全长抗体轻链在恒定轻链结构域(CL)中位置123包含氨基酸残基精氨酸(替代野生型谷氨酸残基；E123R突变)，并且在位置124包含氨基酸残基赖氨酸(替代野生型谷氨酰胺残基；Q124K突变)(编号根据Kabat)，
其中每条全长抗体重链在第一恒定重链结构域(CH1)中位置147包含谷氨酸残基(替代野生型赖氨酸残基；K147E突变)，并且在位置213包含谷氨酸残基(替代野生型赖氨酸氨基酸残基；K213E突变)(编号根据Kabat EU索引)，
其中所述特异性地结合第二抗原的另外的Fab片段是单链Fab片段，和其中所述第一抗原是人A-β蛋白，而所述第二抗原是人转铁蛋白受体。
抗体0024，其也是本发明的一个方面，由四个具有SEQ ID NO:14至17的氨基酸序列的多肽组成。
抗体0024是双特异性抗体，其包含
a)包含两个全长抗体轻链和全长抗体重链对的一个全长抗体，每对为一个全长抗体轻链和一个全长抗体重链，其中由每对全长重链和全长轻链形成的结合位点特异性地结合第一抗原，和
b)一个另外的Fab片段，其中所述另外的Fab片段与全长抗体的一条重链的C-末端融合，其中所述另外的Fab片段的结合位点特异性地结合第二抗原，
其中所述特异性地结合第二抗原的另外的Fab片段包含结构域交叉，使得恒定轻链结构域(CL)和恒定重链结构域1(CH1)彼此替换，和其中所述第一抗原是人A-β蛋白，而所述第二抗原是人转铁蛋白受体。
各多肽在不同表达质粒上的不同部署/组合和所得质粒的不同比例已经用于所述双特异性抗体的重组生产。结果呈现于下表中。
Figure BDA0003277917590000261
所述双特异性抗体已经小规模生产，并且在使用蛋白A亲合色谱的第一个纯化步骤后以及在使用制备性大小排阻色谱的第二纯化步骤后分析了副产物分布。结果呈现于下表中。
Figure BDA0003277917590000262
Figure BDA0003277917590000271
Figure BDA0003277917590000272
所述抗A-β结合位点包含另外的糖基化位点。因此，测定了糖基化。
结果呈现于下表中。
Figure BDA0003277917590000281
蛋白A纯化后3升发酵物中非糖基化Fab的百分比
Figure BDA0003277917590000282
蛋白A+SEC纯化后3l发酵物中非糖基化Fab的百分比
Figure BDA0003277917590000291
通过在缓冲液中在特定pH值下孵育14天，来测试双特异性抗体的稳定性。结果呈现于下表中。
Figure BDA0003277917590000292
测定了对于抗体0015和0024的聚集温度大约为53-55℃，而对于抗体0012大约为54-56℃。
对于抗体0015和0024以及对于亲本抗人转铁蛋白受体抗体，在25℃、37℃和40℃下，如通过BIAcore测定的，针对结合人转铁蛋白受体的解离速率(以[1/Ms]计的kd)相当，分别为：1.86E-02至1.97E-02、1.98E-2至2.03E-2和1.44E-02。
在U937-细胞试验中，所有抗体的A-β特异性效应子功能与亲本单特异性抗A-β抗体相当。所述数据呈现于下表中。
抗体 IL-8[ng/ml] IP-10[ng/ml]
亲本抗-A-β抗体 5 4.3
抗体-0012 7 5.3
抗体-0015 - 5
抗体-0020 7 4.5
抗体-0024 8 5.2
没有一个双特异性抗体在体外显示出嗜中性粒细胞激活。
全部抗体0015显示出合适的性质并且因此是本发明的优选方面。此外，这种抗体具有改善的特性，特别是在于改善的副产物性质上。
在本文的一个方面中，提供了一种双特异性抗体，其包含
a)包含两个全长抗体轻链和全长抗体重链对的一个全长抗体，每对为一个全长抗体轻链和一个全长抗体重链，其中由每对全长重链和全长轻链形成的结合位点特异性地结合第一抗原，和
b)一个另外的Fab片段，其中所述另外的Fab片段与全长抗体的一条重链的C-末端融合，其中所述另外的Fab片段的结合位点特异性地结合第二抗原，
其中每条全长抗体轻链在恒定轻链结构域(CL)中在位置123包含氨基酸残基精氨酸(替代野生型谷氨酸残基；E123R突变)，并且在位置124包含氨基酸残基赖氨酸(替代野生型谷氨酰胺残基；Q124K突变)(编号根据Kabat)，
其中每条全长抗体重链在第一恒定重链结构域(CH1)中在位置147包含谷氨酸残基(替代野生型赖氨酸残基；K147E突变)，并且在位置213包含谷氨酸残基(替代野生型赖氨酸氨基酸残基；K213E突变)(编号根据Kabat EU索引)，
其中所述特异性地结合第二抗原的另外的Fab片段包含结构域交叉，使得恒定轻链结构域(CL)和恒定重链结构域1(CH1)彼此替换，和
其中所述第一抗原是人A-β蛋白，而所述第二抗原是人转铁蛋白受体。
本文中所述的另一个方面是一种双特异性抗体，其包含
a)包含两个全长抗体轻链和全长抗体重链对的一个全长抗体，每对为一个全长抗体轻链和一个全长抗体重链，其中由每对全长重链和全长轻链形成的结合位点特异性地结合第一抗原，和
b)一个另外的Fab片段，其中所述另外的Fab片段与全长抗体的一条重链的C-末端融合，其中所述另外的Fab片段的结合位点特异性地结合第二抗原，
其中每条全长抗体轻链在恒定轻链结构域(CL)中在位置123包含氨基酸残基精氨酸(替代野生型谷氨酸残基；E123R突变)，并且在位置124包含氨基酸残基赖氨酸(替代野生型谷氨酰胺残基；Q124K突变)(编号根据Kabat)，
其中每条全长抗体重链在第一恒定重链结构域(CH1)中在位置147包含谷氨酸残基(替代野生型赖氨酸残基；K147E突变)，并且在位置213包含谷氨酸残基(替代野生型赖氨酸氨基酸残基；K213E突变)(编号根据Kabat EU索引)，
其中所述特异性地结合第二抗原的另外的Fab片段包含结构域交叉，使得恒定轻链结构域(CL)和恒定重链结构域1(CH1)彼此替换，
其中所述第一抗原是人A-β蛋白，而所述第二抗原是人转铁蛋白受体，
其中所述人A-β结合位点包含与SEQ ID NO:18的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的重链可变结构域(VH)序列以及与SEQ ID NO:19的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链可变结构域(VL)序列，和
其中所述人转铁蛋白受体结合位点包含与SEQ ID NO:20的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的重链可变结构域(VH)序列以及与SEQ ID NO:21的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链可变结构域(VL)序列。
在某些实施方案中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH序列相对于参照序列含有置换(例如，保守性置换)、插入或删除，但包含该序列的结合位点保留结合其抗原的能力。在某些实施方案中，在SEQ IDNO:18或20中总共1至10个氨基酸被置换、插入和/或删除。在某些实施方案中，置换、插入或删除出现在HVR外的区域中(即，在FR中)。
在某些实施方案中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VL序列相对于参照序列含有置换(例如，保守性置换)、插入或删除，但包含该序列的结合位点保留结合其抗原的能力。在某些实施方案中，在SEQ IDNO:19或21中总共1至10个氨基酸被置换、插入和/或删除。在某些实施方案中，置换、插入或删除出现在HVR外的区域中(即，在FR中)。
在一个实施方案中，所述人A-β结合位点包含SEQ ID NO:18的VH序列，包括该序列的翻译后修饰，以及SEQ ID NO:19的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。
在一个实施方案中，所述人转铁蛋白结合位点包含SEQ ID NO:20的VH序列，包括该序列的翻译后修饰，以及SEQ ID NO:21的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。
在一个实施方案中，所述双特异性抗体包括
i)与SEQ ID NO:01具有70-100％，至少70％，至少80％，至少90％，或95％或更高的序列同一性的轻链，
ii)与SEQ ID NO:02具有70-100％，至少70％，至少80％，至少90％，或95％或更高的序列同一性的重链，
iii)与SEQ ID NO:03具有70-100％，至少70％，至少80％，至少90％，或95％或更高的序列同一性的轻链，和
iv)与SEQ ID NO:04具有70-100％，至少70％，至少80％，至少90％，或95％或更高的序列同一性的重链，
其中
SEQ ID NO:1具有氨基酸序列
Figure BDA0003277917590000331
SEQ ID NO:2具有氨基酸序列
Figure BDA0003277917590000332
SEQ ID NO:03具有氨基酸序列
Figure BDA0003277917590000333
Figure BDA0003277917590000334
和
SEQ ID NO:04具有氨基酸序列
Figure BDA0003277917590000341
本文中所述的另一个方面是一种双特异性抗体，其包含
a)包含两个全长抗体轻链和全长抗体重链对的一个全长抗体，每对为一个全长抗体轻链和一个全长抗体重链，其中由每对全长重链和全长轻链形成的结合位点特异性地结合第一抗原，和
b)一个另外的Fab片段，其中所述另外的Fab片段与全长抗体的一条重链的C-末端融合，其中所述另外的Fab片段的结合位点特异性地结合第二抗原，
其中每条全长抗体轻链在恒定轻链结构域(CL)中在位置123包含氨基酸残基精氨酸(替代野生型谷氨酸残基；E123R突变)，并且在位置124包含氨基酸残基赖氨酸(替代野生型谷氨酰胺残基；Q124K突变)(编号根据Kabat)，
其中每条全长抗体重链在第一恒定重链结构域(CH1)中位置147包含谷氨酸残基(替代野生型赖氨酸残基；K147E突变)，并且在位置213包含谷氨酸残基(替代野生型赖氨酸氨基酸残基；K213E突变)(编号根据Kabat EU索引)，
其中所述特异性地结合第二抗原的另外的Fab片段包含结构域交叉，使得恒定轻链结构域(CL)和恒定重链结构域1(CH1)彼此替换，
其中所述第一抗原是人A-β蛋白，而所述第二抗原是人转铁蛋白受体，
其中所述人A-β结合位点包含具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的轻链可变区，和
其中所述人转铁蛋白受体结合位点包含具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的轻链可变区。
本文中所述的另一个方面是一种双特异性抗体，其包含
a)包含两个全长抗体轻链和全长抗体重链对的一个全长抗体，每对为一个全长抗体轻链和一个全长抗体重链，其中由每对全长重链和全长轻链形成的结合位点特异性地结合第一抗原，其中所述全长抗体包含由两条全长重链的Fc-区多肽形成的Fc-区，所述Fc-区多肽各包含CH1、CH2和CH3结构域，和
b)一个另外的Fab片段，其中所述另外的Fab片段与全长抗体的一条重链的C-末端融合，其中所述另外的Fab片段的结合位点特异性地结合第二抗原，
其中每条全长抗体轻链在恒定轻链结构域(CL)中位置123包含氨基酸残基精氨酸(替代野生型谷氨酸残基；E123R突变)，并且在位置124包含氨基酸残基赖氨酸(替代野生型谷氨酰胺残基；Q124K突变)(编号根据Kabat)，
其中每条全长抗体重链在第一恒定重链结构域(CH1)中位置147包含谷氨酸残基(替代野生型赖氨酸残基；K147E突变)，并且在位置213包含谷氨酸残基(替代野生型赖氨酸氨基酸残基；K213E突变)(编号根据Kabat EU索引)，
其中所述特异性地结合第二抗原的另外的Fab片段包含结构域交叉，使得恒定轻链结构域(CL)和恒定重链结构域1(CH1)彼此替换，
其中所述第一抗原是人A-β蛋白，而所述第二抗原是人转铁蛋白受体，
其中所述人A-β结合位点包含具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的轻链可变区(VL)，
其中所述人转铁蛋白受体结合位点包含具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的轻链可变区(VL)，
其中所述Fc-区多肽是
a)人亚类IgG1的，
b)人亚类IgG4的，
c)具有突变L234A、L235A和P329G的人亚类IgG1的，
d)具有突变S228P、L235E和P329G的人亚类IgG4的，
e)在两个Fc-区多肽中都具有突变L234A、L235A和P329G、并且在一个Fc-区多肽中具有突变T366W和S354C、以及在相应的另一个Fc-区多肽中具有突变T366S、L368A、Y407V和Y349C的人亚类IgG1的，
f)在两个Fc-区多肽中都具有突变S228P和P329G、并且在一个Fc-区多肽中具有突变T366W和S354C、以及在相应的另一个Fc-区多肽中具有突变T366S、L368A、Y407V和Y349C的人亚类IgG4的，
g)在两个Fc-区多肽中都具有突变L234A、L235A、P329G、I253A、H310A和H435A、并且在一个Fc-区多肽中具有突变T366W和S354C、以及在相应的另一个Fc-区多肽中具有突变T366S、L368A、Y407V和Y349C的人亚类IgG1的，
h)在两个Fc-区多肽中都具有突变L234A、L235A、P329G、M252Y、S254T和T256E、并且在一个Fc-区多肽中具有突变T366W和S354C以及在相应的另一个Fc-区多肽中具有突变T366S、L368A、Y407V和Y349C的人亚类IgG1的，或
i)在两条重链中都具有突变L234A、L235A、P329G、H310A、H433A和Y436A、并且在一条重链中具有突变i)T366W和ii)S354C或Y349C以及在相应的另一条重链中具有突变i)T366S、L368A和Y407V和ii)Y349C或S354C的人亚类IgG1的全长抗体。
在进一步的方面中，根据以上任一个实施方案的双特异性抗人A-β/人转铁蛋白受体抗体可以单个或组合地并入以下部分1-3中所述的任何特征。
1.嵌合和人源化抗体
在某些实施方案中，本文提供的抗体是嵌合抗体。特定嵌合抗体例如在US4,816,567；和Morrison，S.L.等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81(1984)6851-6855中描述。在一个实例中，嵌合抗体包含非人可变区(例如衍生自小鼠、大鼠、仓鼠、兔或非人灵长类动物，如猴的可变区)和人恒定区。在进一步的实例中，嵌合抗体是“类别转换的”抗体，其中所述类别或亚类已相对于亲本抗体发生改变。嵌合抗体包括其抗原结合片段。
在某些实施方案中，嵌合抗体是人源化抗体。通常，将非人抗体人源化，以减少对人的免疫原性，同时保留亲本非人抗体的特异性和亲和力。通常，人源化抗体包含一个或多个可变结构域，其中HVR，例如CDR(或其部分)源自非人抗体，并且FR(或其部分)源自人抗体序列。人源化抗体任选地还可以包含人恒定区的至少部分。在一些实施方案中，在人源化抗体中的一些FR残基被置换为来自非人抗体(例如HVR残基所来自的抗体)的相应残基，例如以恢复或改善抗体特异性或亲和力。
人源化抗体及其制备方法例如在Almagro,J.C.和Fransson,J.，Front.Biosci.13(2008)1619-1633中综述，并且例如在下述文献中进一步描述：Riechmann,I.等，Nature332(1988)323-329；Queen,C.等，Proc.Natl Acad.Sci.USA 86(1989)10029-10033；US5,821,337，US7,527,791，US6,982,321和US7,087,409；Kashmiri,S.V.等，Methods 36(2005)25-34(描述特异性决定区(SDR)嫁接)；Padlan,E.A.，Mol.Immunol.28(1991)489-498(描述“表面重建”(resurfacing))；Dall’Acqua,W.F.等，Methods 36(2005)43-60(描述“FR改组”)；和Osbourn,J.等，Methods 36(2005)61-68和Klimka,A.等，Br.J.Ccancer，83(2000)252-260(描述“引导选择”方法到FR改组)。
可以用于人源化的人构架区包括但不限于：使用“最佳配合”法选择的构架区(参见，例如，Sims,M.J.等J.Immumol.151:2296(1993))；源自特定亚组的轻或重链可变区的人抗体的共有序列的构架区(参见，例如，Carter,P.等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89(1992)4285；和Presta，L.G.等，J.Immumol.，151(1993)2623；人成熟(体细胞成熟的)构架区或人种系构架区(参见，例如，Almagro,J.C.和Fransson,J.，Front.Biosci.13(2008)1619-1633；和源自筛选FR文库的构架区(参见，例如，Baca,M.等，J.Biol.Chem.272(1997)10678-10684和Rosok,M.J.等，J.Biol.Chem.271(1996)22611-22618)。
2.人抗体
在某些实施方案中，本文中所述的抗体是人抗体。可以使用本领域已知的各种技术来产生人抗体。人抗体一般地描述于van Dijk,M.A.和van de Winkel,J.G.,Curr.Opin.Pharmacol.5(2001)368-374和Lonberg,N.,Curr.Opin.Immunol.20(2008)450-459。
可以通过将免疫原施用于转基因动物来制备人抗体，所述转基因动物已经改进成应答抗原挑战而产生完整的人抗体或具有人可变区的完整抗体。这样的动物通常含有全部或部分的人免疫球蛋白基因座，其替代了内源性免疫球蛋白基因座，或其存在于染色体体外或随机整合至动物的染色体中。在这样的转基因小鼠中，内源性免疫球蛋白基因座通常已经被灭活。对于从转基因动物获得人抗体的方法的综述，参见，Lonberg,N.,Nat.Biotech.23(2005)1117-1125。还可以参见，例如，US 6,075,181和US6,150,584描述XENOMOUSETM技术；US5,770,429描述
Figure BDA0003277917590000383
技术；US7,041,870描述K-M
Figure BDA0003277917590000381
技术；和US2007/0061900，描述
Figure BDA0003277917590000382
技术。例如，通过结合不同的人恒定区，可以进一步修饰来自这样的动物产生的完整抗体的人可变区。
还可以通过基于杂交瘤的方法来制得人抗体。已经描述了用于人单克隆抗体生产的人骨髓瘤和小鼠-人杂交骨髓瘤细胞系(参见，例如，Kozbor,D.,J.Immunol.133(1984)3001-3005；Brodeur,B.R.等，Monoclonal Antibody Production Techniques andApplications,Marcel Dekker,Inc.,New York(1987)，pp.51-63；和Boerner,P.等，J.Immunol.147(1991)86-95)。通过人B-细胞杂交瘤技术产生的人抗体还描述于Li,J.等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 103(2006)3557-3562。其他方法包括例如US7,159,826(描述从杂交瘤细胞系生产单克隆人IgM抗体)和Ni,J.,Xiandai Mianyixue 26(2006)265-268(描述人-人杂交瘤)中描述的那些。人杂交瘤技术(Trioma技术)还描述于Vollmers,H.P.和Brandlein,S.,Histology and Histopathology 20(2005)927-937以及Vollmers,H.P.和Brandlein,S.,Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology27(2005)185-191中。
还可以通过从人衍生的噬菌体展示文库分离选定的Fv克隆可变结构域序列来产生人抗体。随后将这样的可变结构域序列与所需的人恒定结构域结合。以下描述了用于从抗体文库选择人抗体的技术。
3.抗体变体
在某些实施方案中，考虑本文提供的抗体的氨基酸序列变体。例如，可能期望提高抗体的结合亲和力和/或其他生物性质。抗体的氨基酸序列变体可以通过将合适修饰引入编码抗体的核苷酸序列内，或通过肽合成，进行制备。此类修饰包括例如在抗体的氨基酸序列内的残基的删除，和/或插入和/或置换。可以制备删除、插入和置换的任何组合，以获得最终构建体，只要最终构建体具有所需特征，例如抗原结合。
a)置换、插入和删除变体
在某些实施方案中，提供了具有一个或多个氨基酸置换的抗体变体。用于置换诱变的目的位点包括HVR和FR。保守置换显示于下表中标题“保守性置换”下。更实质性的变化在表1中标题“示例性置换”下提供，并且在下文参考氨基酸侧链种类进一步描述。可以将氨基酸置换引入目的抗体内且就所需活性筛选产物，例如保留/提高的抗原结合、减少的免疫原性或提高的ADCC或CDC。
表1
原始残基 示例性置换 保守性置换
Ala(A) Val；Leu；Ile Val
Arg(R) Lys；Gln；Asn Lys
Asn(N) Gln；His；Asp,Lys；Arg Gln
Asp(D) Glu；Asn Glu
Cys(C) Ser；Ala Ser
Gln(Q) Asn；Glu Asn
Glu(E) Asp；Gln Asp
Gly(G) Ala Ala
His(H) Asn；Gln；Lys；Arg Arg
Ile(I) Leu；Val；Met；Ala；Phe；正亮氨酸 Leu
Leu(L) 正亮氨酸；Ile；Val；Met；Ala；Phe Ile
Lys(K) Arg；Gln；Asn Arg
Met(M) Leu；Phe；Ile Leu
Phe(F) Trp；Leu；Val；Ile；Ala；Tyr Tyr
Pro(P) Ala Ala
Ser(S) Thr Thr
Thr(T) Val；Ser Ser
Trp(W) Tyr；Phe Tyr
Tyr(Y) Trp；Phe；Thr；Ser Phe
Val(V) Ile；Leu；Met；Phe；Ala；正亮氨酸 Leu
氨基酸可以根据共同侧链性质进行分组：
(1)疏水性：正亮氨酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile；
(2)中性亲水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；
(3)酸性：Asp、Glu；
(4)碱性：His、Lys、Arg；
(5)影响链方向的残基：Gly、Pro；
(6)芳香族：Trp、Tyr、Phe。
非保守性置换造成这些类型之一的成员交换为另一类型的成员。
一类置换变体涉及置换亲本抗体的一个或多个超变区残基(例如人源化或人抗体)。通常，选择用于进一步研究的所得变体将相对于亲本抗体在特定生物性质(例如增加的亲和力、减少的免疫原性)上具有修饰(例如提高)，和/或基本上了保留亲本抗体的特定生物性质。示例性置换变体是亲和力成熟抗体，其可以例如使用基于噬菌体展示的亲和力成熟技术，例如本文描述的，方便地生成。简而言之，使一个或多个HVR残基突变，并且将变体抗体展示在噬菌体上且筛选特定生物活性(例如结合亲和力)。
可以在HVR中作出改变(例如置换)，例如以改善抗体亲和力。此类改变可以在HVR“热点”(即，在体细胞成熟过程中高频率经历突变的密码子编码的残基)(参见，例如Chowdhury,P.S.，Methods Mol.Biol.207(2008)179-196)，和/或接触抗原的残基中作出，测试所得到的变体VH或VL的结合亲和力。通过构建二级文库且从中再选择而进行的亲和力成熟，例如描述于Hoogenboom,H.R.等，Methods in Molecular Biology 178(2002)1-37中。在亲和力成熟的一些实施方案中，可以通过多种方法中的任一种(例如易错PCR、链改组、或寡核苷酸定向诱变)，将多样性引入选择用于成熟的可变基因内。随后制备二级文库。随后筛选文库以鉴定具有所需亲和力的任何抗体变体。引入多样性的另一种方法涉及HVR定向的方法，其中几个HVR残基(例如一次4-6个残基)被随机化。可以特意鉴定参与抗原结合的HVR残基，例如使用丙氨酸扫描诱变或建模。特别地，常常靶向CDR-H3和CDR-L3。
在某些实施方案中，置换、插入或删除可以在一个或多个HVR内发生，只要此类改变基本上不降低抗体结合抗原的能力即可。例如，可以在HVR中进行基本上不降低结合亲和力的保守性改变(例如如本文提供的保守性置换)。此类改变可以在HVR中的抗原接触残基外。在上文提供的变体VH和VL序列的某些实施方案中，每个HVR或者是未改变的，或者含有不超过一个、两个或三个氨基酸置换。
用于鉴定可以作为靶标进行诱变的抗体残基或区域的一个有用方法称为“丙氨酸扫描诱变”，如通过Cunningham,B.C.和Wells,J.A.，Science 244(1989)1081-1085描述的。在此方法中，鉴定残基或靶标残基组(例如荷电残基例如Arg、Asp、His、Lys和Glu)，并且替换为中性或带负电荷的氨基酸(例如丙氨酸或聚丙氨酸)，以确定抗体与抗原的相互作用是否受影响。可以在对该最初置换显示出功能性敏感的氨基酸位置上引入进一步的置换。可替代地或另外地，可以利用抗原-抗体复合物的晶体结构，鉴定在抗体和抗原之间的接触点。此类接触残基和邻近残基可以作为用于置换的候选物被靶向或消除。可以筛选变体，以确定它们是否含有所需性质
氨基酸序列插入包括氨基和/或羧基末端融合(长度范围从一个残基到含有一百个或更多个残基的多肽)，以及单个或多个氨基酸残基的序列内插入。末端插入的实例包括具有N末端甲硫氨酰残基的抗体。抗体分子的其他插入变体包括抗体的N或C末端与酶(例如对于ADEPT)或增加抗体血清半衰期的多肽的融合。
b)糖基化变体
在某些实施方案中，改变本文提供的抗体，以提高或降低抗体糖基化的程度。对抗体添加或删除糖基化位点，可以通过改变氨基酸序列从而形成或去除一个或多个糖基化位点而方便地完成。
当抗体包含Fc区时，可以改变与之连接的碳水化合物。通过哺乳动物细胞产生的天然抗体一般包含分支的、双叉型寡糖，其一般通过N键连接Fc区的CH2结构域的Asn297。参见，例如，Wright,A和Morrison,S.L.，TIBTECH 15(1997)26-32。寡糖可以包括各种碳水化合物，例如甘露糖、N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)、半乳糖和唾液酸，以及连接双叉型寡糖结构的“茎”中的GlcNAc上的岩藻糖。在一些实施方案中，可以在本文提供的抗体中进行寡糖的修饰，以便产生具有特定提高性质的抗体变体。
在一个实施方案中，提供了具有缺乏(直接或间接)连接Fc区上的岩藻糖的碳水化合物结构的抗体变体。例如，此类抗体中的岩藻糖量可以是1％至80％、1％至65％、5％至65％，或20％至40％。如例如WO 2008/077546中所述的，如通过MALDI-TOF质谱法测量的，相对于连接Asn 297的所有糖结构(例如复合的、杂合的和高甘露糖的结构)的总和，通过计算在Asn297的糖链内岩藻糖的平均量，确定岩藻糖的量。Asn297指位于Fc区的大约位置297上的天冬酰胺残基(Fc区残基的EU编号)；然而，由于抗体中的微小序列变异，Asn297也可以位于位置297的上游或下游的约±3个氨基酸处，即位置294和300之间。此类岩藻糖基化变体可以具有提高的ADCC功能。参见，例如，US 2003/0157108；US 2004/0093621。与“去岩藻糖化的”或“岩藻糖缺陷的”抗体变体有关的出版物实例包括：US 2003/0157108；WO 2000/61739；WO 2001/29246；US 2003/0115614；US 2002/0164328；US 2004/0093621；US 2004/0132140；US 2004/0110704；US 2004/0110282；US 2004/0109865；WO 2003/085119；WO2003/084570；WO 2005/035586；WO 2005/035778；WO2005/053742；WO2002/031140；Okazaki,A。等，J.Mol.Biol.336(2004)1239-1249；Yamane-Ohnuki,N.等Biotech.Bioeng.87(2004)614。能够产生去岩藻糖基化的抗体的细胞系实例包括具有蛋白质岩藻糖基化缺陷的Lec13 CHO细胞(Ripka,J.等，Arch.Biochem.Biophys.249(1986)533-545；US 2003/0157108；和WO 2004/056312 A1，尤其是实施例11)，和敲除细胞系，例如α-1,6-岩藻糖基转移酶基因，FUT8，敲除CHO细胞(参见，例如，Yamane-Ohunki,N.等，Biotech.Bioeng.87(2004)614-612；Kanda，Y.等，Biotechnol.Bioeng.，94(2006)680-688和WO2003/085107)。
进一步提供了具有平分型寡糖(bisected oligosaccharide)的抗体变体，例如其中与抗体的Fc区附着的二天线寡糖通过GlcNAc平分。此类抗体变体可以具有减少的岩藻糖化和/或提高的ADCC功能。此类抗体变体的实例描述于例如在WO 2003/011878；US 6,602,684；和US 2005/0123546中。还提供了在与Fc区附着的寡糖中具有至少一个半乳糖残基的抗体变体。此类抗体变体可以具有提高的CDC功能。此类抗体变体描述于例如WO 1997/30087；WO 1998/58964；和WO 1999/22764。
c)Fc区变体
在某些实施方案中，可以将一个或多个氨基酸修饰引入本文提供的抗体的Fc区内，从而生成Fc区变体。Fc区变体可以包括包含在一个或多个氨基酸位置上的氨基酸修饰(例如置换)的人Fc区序列(例如人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc区)。
在某些实施方案中，本发明提供具有一些但并非所有效应物功能的抗体变体，这使得其成为用于如下应用的期望候选物，在所述应用中抗体在体内的半衰期是重要的，而一些效应物功能(例如补体和ADCC)是不需要的或有害的。可以进行体外和/或体内细胞毒性测定，以证实CDC和/或ADCC活性的降低/耗竭。例如，可以进行Fc受体(FcR)结合测定试验，以确保抗体缺乏FcγR结合(从而可能缺乏ADCC活性)，但保留FcRn结合能力。用于介导ADCC的主要细胞即NK细胞仅表达FcγRIII，而单核细胞表达FcγRI、FcγRII和FcγRIII。在造血细胞上的FcR表达概括在Ravetch,J.V.和Kinet,J.P.，Annu.Rev.Immunol.9(1991)457-492的第464页表3中。评估目的分子的ADCC活性的体外测定试验的非限制性实例描述于US5,500,362中(参见，例如Hellstrom,I.等，Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 83(1986)7059-7063；和Hellstrom,I等，Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 82(1985)1499-1502；US 5,821,337(参见Bruggemann,M.等，J.Exp.Med.166(1987)1351-1361)。可替代地，可以采用非放射性测定试验方法(参见例如，用于流式细胞术的ACTITM非放射性细胞毒性测定试验(CellTechnology，Inc.Mountain View，CA)；和CytoTox
Figure BDA0003277917590000441
非放射性细胞毒性测定试验(Promega，Madison，WI)。可以用于此类测定试验的效应细胞包括外周血单个核细胞(PBMC)和自然杀伤(NK)细胞。可替代地或另外地，目的分子的ADCC活性可以在体内评估，例如在动物模型中，例如公开于Clynes,R.等，Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 95(1988)652-656中的。还可以进行C1q结合测定试验，以证实抗体不能结合C1q并因此缺乏CDC活性。参见，例如，WO2006/029879和WO 2005/100402中C1q和C3c结合ELISA。为了评估补体激活，可以进行CDC测定试验(参见，例如，Gazzano-Santoro,H.等，J.Immunol.Methods 202(1996)163-171；Cragg,M.S.等，Blood 101(2003)1045-1052；以及Cragg,M.S.和M.J.Glennie，Blood 103(2004)2738-2743)。FcRn结合和体内清除率/半衰期确定也可以使用本领域已知的方法进行(参见，例如，Petkova,S.B.等，Int’l.Immunol.18(2006)1759-1769)。
具有降低的效应物功能的抗体包括具有Fc区残基238、265、269、270、297、327和329中的一个或多个的置换的那些(US 6,737,056)。此类Fc突变体包括在氨基酸位置265、269、270、297和327的两个或更多个上具有置换的Fc突变体，包括具有残基265和297置换成丙氨酸的所谓“DANA”Fc突变体(US 7,332,581)。
描述了具有提高或降低的FcRs结合的特定抗体变体。(参见，例如，US 6,737,056；WO 2004/056312和Shields,R.L.等，J.Biol.Chem.276(2011)6591-6604)。
在某些实施方案中，抗体变体包含具有提高ADCC的一个或多个氨基酸置换的Fc区，例如在Fc区的位置298、333和/或334上的置换(残基的EU编号)。
在一些实施方案中，在Fc区中作出改变，以导致改变的(例如提高或降低的)C1q结合和/或补体依赖性细胞毒性(CDC)，例如US 6,194,551，WO 99/51642，和Idusogie,E.E.等,J.Immunol.164(2000)4178-4184中所述的。
在US2005/0014934A1中描述了具有增加的半衰期和提高的新生儿Fc受体(FcRn)结合的抗体，所述新生儿Fc受体负责母源IgGs至胎儿的转移(Guyer,R.L.等，J.Immunol.117(1976)587和Kim,J.K.等，J.Immunol.24(1994)249)。这些抗体包含其中具有一个或多个置换的Fc区，所述一个或多个置换改善Fc区与FcRn的结合。此类Fc变体包括在如下Fc区残基的一个或多个上具有置换的那些：238、256、265、272、286、303、305、307、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424或434，例如Fc区残基434的置换(US 7,371,826)。
关于Fc区变体的其他实例，还参见Duncan,A.R.&Winter,G.，Nature 322(1988)738-40；US 5,648,260；US 5,624,821；和WO 94/29351。
d)半胱氨酸工程化抗体变体
在特定实施方案中，可能期望制备半胱氨酸工程化抗体，例如“硫代MAbs”，其中抗体的一个或多个残基由半胱氨酸残基置换。在特定实施方案中，被置换的残基位于抗体的可接近位点上。通过用半胱氨酸置换这些残基，从而将反应性巯基基团置于抗体的可接近位点上，这些巯基基团可以用于使抗体缀合至其他部分例如药物部分或接头-药物部分，以产生免疫缀合物，如本文进一步描述的。在特定实施方案中，下述残基中的任何一个或多个可以由半胱氨酸残基置换：轻链的V205(Kabat编号)；重链的A118(EU编号)；和重链Fc区的S400(EU编号)。可以如例如US 7,521,541中所述的，产生半胱氨酸工程化抗体。
e)抗体衍生物
在特定实施方案中，本文提供的抗体可以进一步被修饰，以含有本领域已知的且可容易获得的另外非蛋白质性部分。适于衍生抗体的部分包括但不限于水溶性聚合物。水溶性聚合物的非限制性实例包括但不限于聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇的共聚物、羧甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚-1,3-二噁烷、聚-1,3,6-三噁烷、乙烯/马来酸酐共聚物、聚氨基酸(同聚物或无规共聚物)和葡聚糖或聚(n-乙烯吡咯烷酮)聚乙二醇、前丙二醇(propropylene glycol)同聚物、环氧丙烷/环氧乙烷共聚物、聚氧乙基化多元醇(例如甘油)、聚乙烯醇，及其混合物。聚乙二醇丙醛，由于其在水中的稳定性，可以在制造中具有优点。聚合物可以具有任何分子量，并且可以是分支或未分支的。连接抗体的聚合物数目可以改变，并且如果连接超过一个聚合物，那么它们可以是相同或不同分子。通常，用衍生的聚合物的数目和/或类型可以基于如下考虑进行确定，所述考虑包括但不限于待提高的抗体的特定性质或功能，抗体衍生物是否用于在限定条件下的治疗中等。
在另一个实施方案中，提供了抗体和可以通过暴露于辐射线而被选择性加热的非蛋白质性部分的缀合物。在一个实施方案中，非蛋白质性部分是碳纳米管(Kam,N.W.等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 102(2005)11600-11605)。辐射可以是任何波长，并且包括但不限于，不伤害普通细胞，但使非蛋白质性部分加热至可杀死抗体-非蛋白质性部分附近的细胞的温度的波长。
B.重组方法和组合物
抗体可以使用重组方法和组合物进行生产，例如如US 4,816,567中所述的。在一个实施方案中，提供了编码本文中所述的双特异性抗人A-β/人转铁蛋白受体抗体的分离核酸。此核酸可以编码包含抗体的VL的氨基酸序列和/或包含抗体的VH的氨基酸序列(例如抗体的轻和/或重链)。在进一步的实施方案中，提供了包含此核酸的一个或多个载体(例如表达载体)。在进一步的实施方案中，提供了包含此核酸的宿主细胞。在一个这样的实施方案中，宿主细胞包含(例如已经用以下载体转化)：(1)包含编码含有抗体VL的氨基酸序列和含有抗体VH的氨基酸序列的核酸的载体，或(2)包含编码含有抗体VL的氨基酸序列的核酸的第一载体和包含编码含有抗体VH的氨基酸序列的核酸的第二载体。在一个实施方案中，宿主细胞是真核的，例如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或淋巴样细胞(例如Y0、NS0、Sp20细胞)。在一个实施方案中，提供了制备双特异性抗人A-β/人转铁蛋白受体抗体的方法，其中所述方法包括在适于抗体表达的条件下培养如上文提供的包含编码抗体的核酸的宿主细胞，且任选从宿主细胞(或宿主细胞培养基)中回收抗体。
对于双特异性抗人A-β/人转铁蛋白受体抗体的重组生产，分离编码抗体的核酸，例如如上所述的，并且插入一个或多个用于进一步克隆和/或在宿主细胞中表达的载体内。此核酸可以使用常规程序(例如通过使用能够与编码抗体重和轻链的基因特异性结合的寡核苷酸探针)容易地分离且测序。
用于抗体编码载体的克隆或表达的合适宿主细胞包括本文描述的原核或真核细胞。例如，特别是当不需要糖基化和Fc效应物功能时，抗体可以在细菌中生产。对于抗体片段和多肽在细菌中的表达，参见例如US 5,648,237，US 5,789,199，和US 5,840,523(还参见Charlton,K.A.，Methods in Molecular Biology，第248卷，Lo,B.K.C.(编辑)，HumanaPress，Totowa，NJ(2003)，pp.245-254，描述抗体片段在大肠杆菌中的表达)。在表达后，抗体可以在可溶级分中从细菌细胞糊分离且可以进一步纯化。
除了原核生物外，真核微生物例如丝状真菌或酵母是用于抗体编码载体的合适克隆或表达宿主，包括其糖基化途径已被“人源化”的真菌和酵母菌株，这导致具有部分或全人糖基化模式的抗体生产。参见Gerngross，Nat.Biotech.22(2004)1409-1414；和Li,H.等，Nat.Biotech(2006)24:210-215。
用于糖基化抗体表达的合适宿主细胞也可以源自多细胞生物(无脊椎动物和脊椎动物)。无脊椎动物细胞的实例包括植物和昆虫细胞。已经鉴定了众多杆状病毒株，其可以与昆虫细胞结合使用，特别用于草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)细胞的转染。
植物细胞培养物也可以用作宿主。参见，例如，US 5,959,177，US 6,040,498，US6,420,548，US 7,125,978和US 6,417,429(描述用于在转基因植物中生产抗体的PLANTIBODIESTM技术)。
脊椎动物细胞也可以用作宿主。例如，悬浮生长适应化的哺乳动物细胞系可以是有用的。有用的哺乳动物宿主细胞系的其他例子是SV40转化的猴肾CV1系(COS-7)；人胚肾系(293或如例如Graham,F.L.等，J.Gen Virol.36(1997)59中所述的293细胞)；幼仓鼠肾细胞(BHK)；小鼠塞尔托利细胞(如例如Mather,J.P.，Biol.Reprod.23(1980)243-251中所述的TM4细胞)；猴肾细胞(CV1)；非洲绿猴肾细胞(VERO-76)；人宫颈癌细胞(HELA)；犬肾细胞(MDCK；Buffalo大鼠肝细胞(BRL 3A)；人肺细胞(W138)；人肝细胞(Hep G2)；小鼠乳房肿瘤(MMT 060562)；TRI细胞，如例如Mather,J.P.等，Annals N.Y.Acad.Sci.383(1982)44-68中所述的；MRC 5细胞；和FS4细胞。其他有用的哺乳动物宿主细胞系包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，包括DHFR-CHO细胞(Urlaub,G.等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77(1980)4216-4220)；和骨髓瘤细胞系，如Y0、NS0和Sp2/0。对于适合于抗体生产的一些哺乳动物宿主细胞系的综述，参见，例如，Yazaki,P.和Wu,A.M.，Methods in Molecular Biology，Vol.248，Lo.B.K.C.(编辑)，Humana Press，Totowa，NJ(2004)pp.255-268。
C.用于诊断和检测的方法和组合物
在某些实施方案中，将本文中提供的任一种双特异性抗人A-β/人转铁蛋白受体抗体用于检测生物样品中A-β的存在。本文中使用的术语“检测”包括定量或定性检测。在特定实施方案中，生物样品包括细胞或组织。
在一个实施方案中，提供了用于诊断或检测方法中的双特异性抗人A-β/人转铁蛋白受体抗体。在进一步的方面中，提供了检测生物样品中A-β存在的方法。在某些实施方案中，所述方法包括在允许双特异性抗人A-β/人转铁蛋白受体抗体结合A-β的条件下，将生物样品接触本文中所述的双特异性抗人A-β/人转铁蛋白受体抗体，并检测双特异性抗人A-β/人转铁蛋白受体抗体和A-β之间是否形成了复合物。这样的方法可以是体外或体内方法。
在某些实施方案中，提供了标记的双特异性抗人A-β/人转铁蛋白受体抗体。标记包括，但不限于，可以直接检测的标记或部分(如荧光、生色、电子致密、化学发光和放射性标记)，以及可以间接(例如通过酶促反应或分子相互作用)检测的部分，如酶或配体。示例性标记包括但不限于，放射性同位素32P、14C、125I、3H和131I，荧光团，如稀土螯合物或荧光素及其衍生物，罗丹明及其衍生物，丹磺酰，伞形酮，萤光素酶，如萤火虫萤光素酶和细菌萤光素酶(US 4,737,456)，萤光素，2,3-二氢酞嗪二酮，辣根过氧化物酶(HRP)，碱性磷酸酶，β-半乳糖苷酶，葡糖淀粉酶，溶菌酶，糖氧化酶，例如葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶，杂环氧化酶，如尿酸酶和黄嘌呤氧化酶，与采用过氧化氢以氧化染料前体的酶如HRP、乳过氧化物酶或微过氧化物酶偶联，生物素/抗生物素蛋白，自旋标记，噬菌体标记，稳定自由基等。
D.药物制剂
可以通过使具有所需纯度的抗体与一种或多种任选的药学可接受的载体(Remington’s Pharmaceutical Science，第16版，Osol，A.(编辑)(1980))混合，以冻干制剂或水溶液的形式来制备如本文所述的双特异性抗人A-β/人转铁蛋白受体抗体的的药物制剂。药物学上可接受的载体在采用的剂量和浓度下对接受者一般是无毒的，并且包括但不限于：缓冲剂，如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(如十八基二甲基苄基氯化铵；氯己双铵；苯扎氯铵；苄索氯铵；苯酚、丁醇或苯甲醇；对羟基苯甲酸烷基酯例如对羟基苯甲酸甲或丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(小于约10个残基)多肽；蛋白质，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水聚合物，如聚(乙烯吡咯烷酮)；氨基酸，如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，如EDTA；糖，如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；成盐抗衡离子，如钠；金属络合物(例如Zn-蛋白质络合物)；和/或非离子型表面活性剂，如聚乙二醇(PEG)。示例性药物学上可接受的载体在本文中进一步包括间质(insterstitial)药物分散剂，如可溶性中性-活性透明质酸酶糖蛋白(sHASEGP)，例如人可溶性PH-20透明质酸酶糖蛋白，例如rhuPH20(
Figure BDA0003277917590000501
BaxterInternational，Inc.)。US 2005/0260186和US 2006/0104968中描述了某些示例性sHASEGP及其使用方法，包括rhuPH20。在一个方面中，将sHASEGP与一种或多种另外的葡糖胺聚糖酶(如软骨素酶)组合。
示例性冻干抗体制剂描述于US 6,267,958。水性抗体制剂包括US 6,171,586和WO2006/044908中所述的那些，后面的制剂包括组氨酸-乙酸盐缓冲液。
本文中的制剂还可以针对所治疗的特定适应症按照需要含有一种以上的活性成分，优选具有互补活性且不会不利地彼此影响的那些。此类活性成分适于以对于预期目的有效的量组合存在。
活性成分可以截留在例如通过凝聚技术(coacervation)或通过界面聚合制备的微囊中(例如分别地羟甲基纤维素或明胶-微囊和聚-(甲基丙烯酸甲酯)微囊)、在胶体药物递送系统(例如脂质体、白蛋白微球体、微乳液、纳米颗粒和纳米囊)中，或在粗乳液中。此类技术公开于Remington’s Pharmaceutical Sciences，第16版，Osol，A(编辑)(1980)。
可以制备持续释放的制剂。持续释放的制剂的合适实例包括含有抗体的固体疏水聚合物的半透性基质，所述基质可以为成形物品的形式，薄膜或微胶囊。持续释放基质的实例包括聚酯、水凝胶(例如，聚(2-羟乙基-丙烯酸甲酯)或聚(乙烯醇)、聚交酯(US 3,773,919)、L-谷氨酸和γ乙基-L-谷氨酸酯的共聚物、不可降解的乙烯-醋酸乙烯酯、可降解的乳酸-乙醇酸共聚物，如LUPRON DEPOTTM(由乳酸-乙醇酸共聚物和leuprolide醋酸酯组成的可注射微球体)，以及聚-D-(-)-3-羟丁酸。
待用于体内施用的制剂一般是无菌的。无菌性可以通过例如经由无菌过滤膜过滤而容易地达到。
在一个实施方案中，所述制剂是等渗的。
E.治疗方法和组合物
本文中提供的任一种双特异性抗人A-β/人转铁蛋白受体抗体可以用于治疗方法中。
在一个方面中，提供了双特异性抗人A-β/人转铁蛋白受体抗体用作药物。在进一步的方面中，提供了双特异性抗人A-β/人转铁蛋白受体抗体用于预防和/或治疗与淀粉样变和/或淀粉样蛋白斑块形成相关的疾病。在某些实施方案中，提供了双特异性抗人A-β/人转铁蛋白受体抗体用于治疗方法中。在某些实施方案中，本文中提供了双特异性抗人A-β/人转铁蛋白受体抗体用于治疗患有与淀粉样变和/或淀粉样蛋白斑块形成相关疾病的个体的方法中，所述方法包括将有效量的双特异性抗人A-β/人转铁蛋白受体抗体施用于个体。在一个这样的实施方案中，所述方法进一步包括将有效量的至少一种其他治疗剂施用于所述个体，所述其他治疗剂如以下所列或是抗-pTau或抗-α突触核蛋白抗体。在进一步的实施方案中，本文提供了双特异性抗人A-β/人转铁蛋白受体抗体用于抑制斑块形成和/或分解β-淀粉样蛋白斑块。在某些实施方案中，本文提供了双特异性抗人A-β/人转铁蛋白受体抗体用于抑制个体中的斑块形成和/或分解β-淀粉样蛋白斑块的方法中，所述方法包括将有效量的双特异性抗人A-β/人转铁蛋白受体抗体施用于个体，以抑制斑块的形成和/或分解β-淀粉样蛋白斑块。根据以上任一个实施方案的“个体”优选是人。
在进一步的方面中，本文提供了双特异性抗人A-β/人转铁蛋白受体抗体在制造或制备药物中的用途。在一个实施方案中，所述药物是用于治疗与淀粉样变和/或淀粉样蛋白斑块形成相关的疾病。在进一步的实施方案中，所述药物是用于治疗与淀粉样变和/或淀粉样蛋白斑块形成相关的疾病的方法，所述方法包括将有效量的药物施用于患有与淀粉样变和/或淀粉样蛋白斑块形成相关疾病的个体。在一个这样的实施方案中，所述方法进一步包括将有效量的至少一种其他治疗剂施用于个体，所述治疗剂如以下所列或是抗-pTau或抗-α突触核蛋白抗体。在进一步的实施方案中，所述药物是用于抑制斑块形成和/或使β-淀粉样蛋白斑块分解。在进一步的实施方案中，所述药物是用于抑制个体中的斑块形成和/或分解β-淀粉样蛋白斑块的方法中，所述方法包括将有效量的药物施用于个体，以抑制斑块形成和/或分解β-淀粉样蛋白斑块。根据以上任一个实施方案的“个体”优选是人。
在进一步的方面中，本文提供了用于治疗与淀粉样变和/或淀粉样蛋白斑块形成相关疾病的方法。在一个实施方案中，所述方法包括将有效量的双特异性抗人A-β/人转铁蛋白受体抗体施用于患有与淀粉样变和/或淀粉样蛋白斑块形成相关疾病的个体。在一个这样的实施方案中，所述方法进一步包括将有效量的至少一种其他治疗剂施用于个体，所述治疗剂如以下所列或是抗-pTau或抗-α突触核蛋白抗体。根据以上任一个实施方案的“个体”优选是人。
在进一步的方面中，本文中提供了一种用于抑制个体中的斑块形成和/或用于分解β-淀粉样蛋白斑块的方法。在一个实施方案中，所述方法包括将有效量的双特异性抗人A-β/人转铁蛋白受体抗体施用于个体，以抑制斑块形成和/或分解β-淀粉样蛋白斑块。在一个实施方案中，“个体”是人。
在进一步的方面中，本文中提供了包含本文中提供的任一种双特异性抗人A-β/人转铁蛋白受体抗体的药物制剂，例如用于任何上述治疗方法。在一个实施方案中，药物制剂包含本文中提供的任一种双特异性抗人A-β/人转铁蛋白受体抗体和药物学上可接受的载体。在另一个实施方案中，药物组合物包括本文提供的任一种双特异性抗人A-β/人转铁蛋白受体抗体和至少一种其他的治疗剂，所述治疗剂例如如以下所列或是抗-pTau或抗-α突触核蛋白抗体。
本文中所述的抗体在治疗中可以单独使用或结合其他药剂。例如，本文中所述的抗体可以与至少一种其他治疗剂共同施用。在某些实施方案中，其他治疗剂是有效治疗与本文中所述的双特异性抗体待用于治疗的相同或不同神经病症的治疗剂。.示例性的其他治疗剂包括，但不限于：上述各种神经药物、胆碱酯酶抑制剂(如多奈哌齐、加兰他敏、卡巴拉汀和他可林)、NMDA受体拮抗剂(如美金刚)、淀粉样蛋白β肽聚集抑制剂、抗氧化剂、γ-分泌酶调节剂、神经生长因子(NGF)模拟物或NGF基因疗法、PPARy激动剂、HMS-CoA还原酶抑制剂(抑制素)、安目帕克、钙离子通道阻断剂、GABA受体拮抗剂、糖原合成酶激酶抑制剂、静脉内免疫球蛋白、蕈毒碱受体激动剂、nicrotinic受体调节剂、主动或被动淀粉样蛋白β肽免疫、磷酸二酯酶抑制剂、血清素受体拮抗剂和抗-淀粉样蛋白β肽抗体。在某些实施方案中，针对其减轻所述神经学药物的一种或多种副作用的能力来选择所述至少一种其他治疗剂。
上述的联合治疗包括组合施用(其中在同一或分开制剂中包括两种或更多种治疗剂)和分开施用，在这种情况中，本文中所述抗体的施用可以在其他一种或多种治疗剂的施用之前、同时和/或之后进行。在一个实施方案中，双特异性抗人A-β/人转铁蛋白受体抗体的施用和其他治疗剂的施用彼此可以在约一个月内，或在约一周、两周或三周内，或在约一天、两天、三天、四天、五天或六天内进行。本文中所述的抗体还可以结合其他干预疗法组合使用，所述干预疗法如，但不限于，放疗、行为疗法或本领域已知并且适用于待治疗或预防的神经病症的其他疗法。
本文中所述的抗体(和任何其他治疗剂)可以通过任何合适的方式来施用，包括非肠道、肺内和鼻内，并且如果针对局部治疗需要时，包括损伤内施用。非肠道输注包括肌内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下施用。定量施用可以通过任何合适的途径，例如，通过注射，如静脉内或皮下注射，这部分取决于施用是短期的还是长期的。本文中考虑了各种定量施用时间表，包括但不限于单次或不同时间点的多次施用、快速浓注施用和脉冲式输注。
本文中所述的抗体将以与良好医学实践一致的方式来配制、定量和施用。在这个内容中考虑的因素包括待治疗的特定病症、待治疗的特定哺乳动物、个体患者的临床状况、病症起因、药剂递送部位、施用方法、施用时间表和医学从业者已知的其他因素。抗体并不是必需，而是任选与目前用于预防或治疗所讨论病症的一种或多种药剂一起配制。这样的其他药剂的有效量取决于制剂中存在的抗体含量、病症或治疗的类型和以上讨论的其他因素。这些通常以本文中所述的相同剂量和施用途径来使用，或本文中所述剂量的1至99％，或以任何剂量并通过凭经验/临床上确定为合适的任何途径来使用。
基于脂质的将融合构建体或化合物穿过BBB转运的方法包括，但不限于，将融合构建体或化合物包裹在结合单价结合实体的脂质体中，所述单价结合实体结合BBB血管内皮上的受体(参见，例如，US 2002/0025313)并且将所述单价结合实体包被在低密度脂蛋白颗粒中(参见，例如，US 2004/0204354)或载脂蛋白E中(参见，例如，US 2004/0131692)。
对于疾病的预防或治疗，本文中所述抗体的合适剂量(单独使用或结合一种或多种其他另外的治疗剂使用时)将取决于待治疗疾病的类型、抗体类型、疾病的严重程度和过程、抗体是用于预防目的或是治疗目的、之前的治疗、患者的临床史和对抗体的应答，以及主治医生的判断。在一个时间点或在一系列治疗中，将抗体合适地施用于患者。根据疾病的类型和严重程度，约1μg/kg至15mg/kg(例如，0.5mg/kg-10mg/kg)的抗体可以是用于施用于患者的初始候选剂量，不管是例如通过一次或多次分开施用，或通过连续输注。一个典型的日剂量范围可能为约1μg/kg至100mg/kg或更高，这取决于上述因素。对于在几天或更长时间内的重复施用，根据病况，治疗通常将持续直至出现所需的疾病症状的抑制。一个示例性抗体剂量将在约0.05mg/kg至约10mg/kg范围中。因此，可以将约0.5mg/kg、2.0mg/kg、4.0mg/kg或10mg/kg的一个或多个剂量(或其任意组合)施用于患者。这样的剂量可以间歇地施用，例如，每周或每三周(例如，使得患者接受约二至约二十剂，或，例如，约六剂抗体)。可以施用初始较高载荷剂量，接着一个或多个较低剂量。然而，其他剂量方案可以是有用的。这种疗法的进程容易通过常规技术和测试来监控。
将理解，可以替代或附加双特异性抗人A-β/人转铁蛋白受体抗体，使用本文中所述的免疫缀合物，来实施任何以上的制剂或治疗方法。
III.制成品
在本文的另一方面，提供含有可以用于治疗、预防和/或诊断上述病症的材料的制成品。制成品可以包含容器和在容器上或与容器结合的标签或包装说明书。合适的容器包括例如瓶、小瓶、注射器、IV溶液袋等。容器可以由多种材料例如玻璃或塑料形成。容器容纳单独的或与对于治疗、预防和/或诊断所述状况有效的另外组合物组合的组合物，且可以具有无菌进入口(例如容器可以是具有可被皮下注射针穿透的塞子的静脉溶液袋或小瓶)。组合物中至少一种活性剂是本发明的抗体。标签或包装说明书指示组合物用于治疗所选择的状况。此外，制成品可以包含(a)其中含有组合物的第一容器，其中所述组合物包含本发明的抗体；和(b)其中含有组合物的第二容器，其中所述组合物包含其它的细胞毒性剂或另外的治疗剂。在本发明的这个实施方案中，制成品可以进一步包含指示组合物可以用于治疗特定状况的包装说明书。可替代地或另外地，制成品可以进一步包括包含药学可接受的缓冲液的第二(或第三)容器，所述药学可接受的缓冲液例如抑菌注射用水(BWFI)、磷酸盐缓冲盐水、林格氏溶液和葡萄糖溶液。它可以进一步包括从商业和用户观点来看希望的其他材料，包括其他缓冲液、稀释剂、滤器、针头和注射器。
将理解，替代或附加本文中所述的双特异性抗体，本文中所述的免疫缀合物可以被包括在任何上述制成品中。
VI.实施例
以下是本发明方法和组合物的实例。应当理解，鉴于上文提供的一般描述，可以实施多种其他实施方案。
材料&方法
在Kabat,E.A.等，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD(1991)中给出了关于人免疫球蛋白轻链和重链的核苷酸序列的一般信息。根据Kabat(Kabat,E.A.等，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD(1991))的编号，对抗体链的氨基酸进行编号和提及。
重组DNA技术
按照Sambrook，J.等，Molecular cloning:A laboratory manual(分子克隆：实验室手册)；Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，New York，1989中所述的，使用标准方法来操纵DNA。使用的分子生物试剂根据制造商的说明。
基因合成
通过化学合成从寡核苷酸制备了所需的基因片段。通过退火和连接寡核苷酸(包括PCR扩增)来装配两侧具有单限制性核酸内切酶位点的长基因区段，并且随后经由所示的限制位点克隆。通过DNA测序来证实亚克隆的基因片段的DNA序列。根据在Geneart(Regensburg，德国)给出的规格来订购基因合成片段。
DNA序列测定
通过在MediGenomix GmbH(Martinsried，德国)或SequiServe GmbH(Vaterstetten，德国)进行的双链测序来测定DNA序列。
DNA和蛋白序列分析和序列数据管理
将GCG’s(Genetics Computer Group，Madison，Wisconsin)软件包版本10.2和Infomax’s Vector NT1 Advance suite版本8.0用于序列形成、作图、分析、注释和说明。
表达载体
为了所述双特异性抗体的表达，可以使用用于瞬时表达(例如，在HEK293细胞)的表达质粒，所述质粒是基于使用或未用CMV-内含子A启动子的cDNA组织或基于基因组组织。
除了抗体表达盒，所述载体还含有：
-复制起点，其允许质粒在大肠杆菌中复制，和
-β-内酰胺酶基因，其给予大肠杆菌中的氨苄青霉素抗性。
抗体基因的转录单位由以下元件组成：
-5’端的独特限制位点
-来自人细胞巨化病毒的立即早期增强子和启动子，
-cDNA组织情况中的内含子A序列，
-源自人抗体基因的5’-非翻译区，
-免疫球蛋白重链信号序列，
-作为cDNA或具有基因组外显子-内含子组织的相应抗体链编码核酸，
-具有聚腺苷酸化信号序列的3’非翻译区，和
-3’端的独特限制性位点。
通过PCR和/或基因合成来产生编码抗体链的融合基因，并通过已知重组方法和技术，使用各自载体中的独特限制位点，通过相应核酸区段的连接来装配。通过DNA测序来验证亚克隆的核酸序列。对于瞬时转染，通过自转化的大肠杆菌培养物制备质粒(NucleobondAX，Macherey-Nagel)来制备较大量的质粒。
对于所有构建体，凸起-进入-孔洞杂二聚化技术与第一CH3结构域中的典型凸起(T366W)置换和第二CH3结构域中的相应孔洞置换(T366S、L368A和Y407V)(以及两个另外引入的半胱氨酸残基S354C/Y349C)(包含在上述各自相应的重链(HC)序列中)一起使用。
细胞培养技术
使用标准细胞培养技术，如Current Protocols in Cell Biology(2000),Bonifacino,J.S.,Dasso,M.,Harford,J.B.,Lippincott-Schwartz,J.何Yamada,K.M.(eds.),John Wiley&Sons,Inc.中所述的。
HEK293-F系统中的瞬时转染
通过瞬时表达来产生所述双特异性抗体。因此，根据制造商的说明书，使用HEK293-F系统(Invetrogen)，使用相应质粒，进行了转染。简而言之，在摇瓶或搅拌发酵罐中，在无血清FreeStyleTM 293表达培养基(Invitrogen)中，用相应表达质粒和293fectinTM或fectin(Invitrogen)的混合物，转染悬浮生长的HEK293-F细胞(Invitrogen)。对于2L摇瓶(Corning)，以1.0*106细胞/mL的密度将HEK293-F细胞接种于600mL中，并在120rpm，8％CO2下孵育。第二天，在大约1.5*106细胞/mL的细胞密度下，用大约42mL的A)20mL包含600μg总质粒DNA(1μg/mL)的Opti-MEM培养基(Invitrogen)和B)补充了1.2mL 293fectin或fectin(2μl/mL)的20ml Opti-MEME培养基的混合物，转染细胞。根据葡萄糖消耗，在发酵过程中，加入葡萄糖溶液。在5-10天后，收集含有分泌的抗体的上清液，并且直接从上清液纯化抗体或将上清液冷冻并储存。
蛋白质测定
根据Pace等，Protein Science 4(1995)2411-1423，使用基于氨基酸序列计算的摩尔消光系数，通过测定280nm下的光密度(OD)，来测定纯化抗体和衍生物的蛋白质浓度。
上清液中的抗体浓度测定
通过用蛋白A琼脂糖-珠子(Roche Diagnostics GmbH，Mannheim，德国)免疫沉淀，估算了细胞培养物上清液中的抗体和衍生物的浓度。因此，将60μL蛋白A琼脂糖珠子在TBS-NP40(50mM Tris缓冲液，pH7.5，补充了150mM NaCl和1％Nonidet-P40)中洗涤三次。随后，将1-15mL细胞培养物上清液应用于TBS-NP40中预平衡的蛋白A琼脂糖珠子。在室温下孵育1小时后，在Ultrafree-MC-过滤器柱子(Amicon)上用0.5mL TBS-NP40洗涤珠子一次，用0.5mL 2×磷酸盐缓冲盐水(2×PBS，Roche Diagnostics GmbH，Mannheim，德国)洗涤两次，并用0.5mL 100mM柠檬酸钠缓冲液(pH5.0)简短洗涤四次。通过添加35μl
Figure BDA0003277917590000591
LDS样品缓冲液(Invitrogen)洗脱结合的抗体。分别将一半的样品与
Figure BDA0003277917590000592
样品还原剂混合或保留未还原的，并且在70℃下加热10min。因此，将5-30μl应用于4-12％
Figure BDA0003277917590000593
Bis-Tris SDS-PAGE凝胶(Invitrogen)上(使用MOPS缓冲液用于非还原性SDS-PAGE，和使用含有
Figure BDA0003277917590000594
抗氧化剂运行缓冲液添加剂(Invitrogen)的MES缓冲液用于还原性SDS-PAGE)，并用考马斯蓝染色。
通过亲合力HPLC色谱定量测量了细胞培养物上清液中的抗体的浓度。简而言之，于Agilent HPLC 1100系统上，将含有结合蛋白A的抗体的细胞培养物上清液施加在200mMKH2PO4，100mM柠檬酸钠，pH7.4中的Applied Biosystems Poros A/20柱子，用200mM NaCl、100mM柠檬酸，pH2.5洗脱。通过UV吸光度和峰面积的积分来定量洗脱的抗体。纯化的标准IgG1抗体充当标准品。
或者，通过夹心-IgG-ELISA来测量细胞培养物上清液中的抗体和衍生物的浓度。简而言之，用0.1μL/mL的100μL/孔生物素化的抗人IgG捕获分子F(ab’)2<h-Fcγ>BI(Dianova)，包被StreptaWell高结合链霉亲和素A-96孔微滴定平板(Roche DiagnosticsGmbH，Mannheim，德国)，在室温下1小时，或替换地，在4℃下过夜，并且随后用200μL/孔PBS，0.05％Tween(PBST，Sigma)洗涤三次。此后，将含相应抗体的细胞培养物上清液在PBS(Sigma)中连续稀释液以100μL/孔加入孔中，并在室温下在摇床上孵育1-2小时。用200μL/孔PBST将孔洗涤三次并通过在室温下在摇床上孵育1-2小时，用100μl 0.1μg/mL的F(ab’)2<hFcγ>POD(Dianova)作为检测抗体来检测结合的抗体。通过用200μL/孔PBST洗涤三次来除去未结合的检测抗体。通过添加100μL ABST/孔，接着孵育来检测结合的检测抗体。在405nm的测量波长下(参照波长492nm)，在Tecan Fluor分光光度计上进行吸光度的测定。
制备性抗体纯化
参照标准实验方案从过滤的细胞培养物上清液纯化抗体。简而言之，将抗体施加于蛋白A Sepharose柱子(GE healthcare)，并用PBS洗涤。在pH2.8下进行抗体的洗脱，接着立即中和。通过PBS中或包含150mM NaCl的20mM组氨酸缓冲液(pH6.0)中的大小排阻色谱(Superdex 200，GE Healthcare)，从单体抗体分离聚集的蛋白。将单体抗体级分合并，(如果需要)使用例如MILLIPORE Amicon Ultra(30MWCO)离心浓缩机浓缩，冷冻并储存在-20℃或-80℃。将部分样品提供用于随后的蛋白质分析和分析表征，例如，通过SDS-PAGE、大小排阻色谱(SEC)或质谱。
SDS-PAGE
根据制造商的说明，使用了
Figure BDA0003277917590000611
Pre-Cast凝胶系统(Invitrogen)。特别地，使用了10％或4-12％
Figure BDA0003277917590000612
Bis-Tris Pre-Cast凝胶(pH6.4)和
Figure BDA0003277917590000613
MES(还原性凝胶，使用
Figure BDA0003277917590000614
抗氧化剂运行缓冲液添加剂)或MOPS(非还原凝胶)运行缓冲液。
CE-SDS
使用微流体Labchip技术(PerkinElmer，USA)，通过CE-SDS分析了纯度和抗体完整性。因此，根据制造商的说明，使用HT蛋白表达试剂盒，制备5μl抗体溶液，用于CE-SDS分析，并使用HT蛋白表达芯片，在LabChip GXII系统上分析。使用LabChip GX软件来分析数据。
分析性大小排阻色谱
通过HPLC色谱来进行用于抗体聚集和寡聚状态测定的大小排阻色谱(SEC)。简而言之，将蛋白A纯化的抗体于Dionex
Figure BDA0003277917590000615
系统(Thermo Fischer Scientific)上在300mM NaCl，50mM KH2PO4/K2HPO4缓冲液(pH7.5)中施加于Tosoh TSKgel G3000SW柱，或于Dionex HPLC-系统上在2×PBS中施加于Superdex200柱(GE Heathcare)。通过UV吸光度和峰面积的积分，来定量洗脱的抗体。将BioRad凝胶过滤标准151-1901用作标准。
质谱
这个部分描述了对双特异性抗体的表征，重点在于其正确装配。通过去糖基化完整抗体的电喷雾电离质谱(ESI-MS)，以及在特定情况中去糖基化/限制性LysC消化抗体的电喷雾电离质谱(ESI-MS)，来分析预期的主要结构。
在1mg/ml蛋白浓度下，在磷酸盐或Tris缓冲液中，在37℃下，用N-糖苷酶F，将抗体去糖基化长达17h。在Tris缓冲液(pH8)中，用100μg去糖基化抗体，进行限制性LysC(RocheDiagnostics GmbH，Mannheim，德国)消化，分别在室温下进行120小时，或在37℃下进行40分钟。在质谱分析之前，将样品在Sephadex G25柱(GE Healthcare)上通过HPLC脱盐。在配备了TriVersa NanoMate源(Advion)的maXis 4G UHR-QTOF MS系统上，通过ESI-MS，测定了总质量。
化学降解测试
将样品分成三等份，并且分别再次缓冲至20mM His/His*HCl、140mM NaCl，pH6.0中或至PBS中，并且储存在40℃(His/NaCl)或37℃(PBS)。对照样品储存在-80℃。
孵育结束后，分析样品的相对活性浓度(BIAcore)、聚集(SEC)和片段化(毛细管电泳或SDS-PAGE)，并与未处理的对照进行比较。
热稳定性
在20mM组氨酸/组氨酸盐酸盐、140mM NaCl，pH6.0中制备1mg/mL浓度的样品，并通过0.4μm过滤板转移至光学384-孔板中，并用石蜡油覆盖。通过DynoPro平板阅读器(Wyatt)上动态光散射重复测量流体动力学半径，同时以0.05℃/min速率，将样品从25℃加热至至80℃。
或者，将样品转移至10μL微槽阵列中，并用Opim1000仪器(Avacta Inc.)记录静态光散射数据以及用266nm激光激发时的荧光数据，同时以0.1℃/min速率从25℃加热至80℃。
将聚集开始温度定义为流体动力学半径(DLS)或散射光强度(Optim1000)开始提高时的温度。
或者，将样品转移至9μL多槽阵列中。将所述多槽阵列在Optim1000(AvactaAnalytical Inc.)中以0.1℃/min的恒定速率，从35℃加热至90℃。所述仪器连续记录266nm激光的散射光的强度，大约每0.5℃一个数据点。将光散射强度相对温度进行作图。将聚集开始温度(T_agg)定义为散射光强度开始提高时的温度。
将熔化温度定义为荧光强度的拐点vs.波长。
实施例1
表达和纯化
如以上一般材料和方法部分中所述的来产生双特异性抗体。
通过蛋白A亲合力色谱和大小排阻色谱的组合，从上清液纯化双特异性抗体。通过质谱表征所获产物的身份，并通过CS-SDS表征分析性特性，如纯度，以及表征单体含量和稳定性。
如一般方法部分中所述的，通过去糖基化的完整抗体和去糖基化的/纤维蛋白溶酶消化的抗体、或备选地去糖基化的/限制性LysC消化的抗体的电喷雾电离质谱(ESI-MS)，分析预期的主要结构。
蛋白A和SEC纯化后，只应用其他分析方法(例如，热稳定性、质谱和功能性评估)。
实施例2
通过ELISA测定体外Aβ1-40纤维结合
通过ELISA分析测量了双特异性抗体与纤维状Aβ的结合。简而言之，在37℃下，用PBS中7μg/mL的Aβ(1-40)包被Maxisorb平板3天，以产生纤维状Aβ，并且随后在RT下干燥3h。在RT下，用PBS中的1％CroteinC和0.1％RSA(阻断缓冲液)阻断平板1h，随后用洗涤缓冲液洗涤一次。将高达100nM浓度的双特异性抗体或对照加入阻断缓冲液中，并在4℃下孵育过夜。4个洗涤步骤后，通过在阻断缓冲液(1RT)中添加1:10,000稀释的抗人IgG-HRP(JacksonImmunoresearch)，接着6次洗涤和在TMB(Sigma)中孵育，来检测构建体。在用1N HCl停止显色后，在450nm下读出吸光度。
实施例3
测定体外转铁蛋白结合
通过小鼠X63.AG8-563骨髓瘤细胞上的FACS分析，测试了双特异性抗体与小鼠转铁蛋白受体的结合。如果Aβ抗体显示出非特异性地结合Ag8细胞的某些倾向，则可以用20倍过量的抗小鼠TfR抗体共同孵育来定量特异性结合。通过离心收集细胞，用PBS洗涤一次，并在冰上，在100μL RPMI/10％FCS中，用1.5pM至10nM稀释系列的多肽融合物孵育5×104个细胞1.5h，其中添加或不添加200nM抗小鼠TfR抗体。用RPMI/10％FCS洗涤2次后，用RPMI/19％FCS中1:600稀释度的偶联藻红蛋白(Jackson Immuoresearch)的山羊抗人IgG，孵育细胞，在冰上将细胞孵育1.5h。将细胞再次洗涤，重悬浮于RPMI/10％FCS中，并且在FACS-阵列仪器(Becton-Dicknson)上测量了藻红蛋白荧光。
实施例4
针对人TfR抗体相互作用的基于表面等离子共振的结合试验
根据供应商的手册，使用标准胺偶联化学程序，在配备有预先用抗人Fab抗体(GEHealthcare，目录号28-9583-25)处理的C1传感器芯片(GE Healthcare，目录号BR1005-35)的BIAcore B400(GE Healthcare)上进行了结合实验。
对于动力学测量，在25℃下，在磷酸盐缓冲盐水pH7.4，0.05％Tween20中，使用60秒的接触时间和10μL/min的流速，将样品抗体固定化。以递增浓度施加重组的His6-标记的人转铁蛋白受体(R&D systems，目录号2474-TR-050)，并且随着时间监控信号。记录了30μL/min流速下150秒结合时间和600秒解离时间的平均时间跨度。使用1:1结合模型(Langmuir isotherm)来拟合数据。
实施例5
使用本文中所述的双特异性抗体，通过间接免疫荧光，染色来自阿尔茨海默病患者脑切片的天然人β-淀粉样蛋白斑块
使用间接免疫荧光，通过免疫组织化学分析，可以测试双特异性抗体将天然人β-淀粉样蛋白斑块染色的能力。可以证明真正的人β-淀粉样蛋白斑块的特异且灵敏的染色。通过间接免疫荧光，标记来自颞叶皮层的未固定组织的冷冻切片，所述颞叶皮层从诊断为阿尔茨海默病阳性的患者死后获得。使用两步孵育来检测结合的双特异性抗体，其通过与Alexa555染料(Molecular Probes)缀合的亲合力纯化的山羊抗人(GAH555)IgG(H+L)来揭示。对照可以包括不相关的人IgG1抗体(Sigma)和单独的二抗，其全部应当给出阴性结果。
实施例6
在阿尔茨海默病的小鼠模型中通过本文中所述的双特异性抗体体内缀饰(decoration)β淀粉样蛋白斑块
可以在APP/PS2双转基因小鼠中测试双特异性抗体在体内免疫缀饰β-淀粉样蛋白斑块的能力，所述小鼠是用于AD相关的淀粉样变性的小鼠模型(Richards,J.Neuroscience,23(2003)8989-9003)。这能够评估脑透过和结合β淀粉样蛋白斑块的程度。可以与裸的抗Aβ单克隆抗体相比以不同的剂量来施用融合多肽，并且在6天后，给动物灌注磷酸盐缓冲盐水并在干冰上冷冻脑，并准备进行冷冻切片。
可以使用未固定的冷冻切片，在室温下，用15μg/ml浓度的缀合Alexa555染料(GAH555)(Molecular Probes)的山羊抗人IgG(H+L)，通过单标记间接免疫荧光1小时，来评估结合β-淀粉样蛋白斑块的抗体的存在。可以通过在室温下，用0.5μg/ml浓度的缀合Alexa488的BAP-2孵育1小时来进行针对淀粉样蛋白斑块的复染，BAP-2为抗Aβ的小鼠单克隆抗体。用荧光封固介质(S3023 Dako)包埋载玻片并通过共焦激光显微镜来进行成像。
尽管出于清楚理解的目的，借助说明和实施例在一定程度上详细描述了之前的发明，但这些描述和实施例不应当解释为限制本发明的范围。本文中引用的所有专利和科学文献的公开内容明确地按引用全部并入。
序列表
<110> 豪夫迈·罗氏有限公司(F. Hoffmann-La Roche AG)
<120> 双特异性抗人A-β/人转铁蛋白受体抗体及使用方法
<130> P33106-CN-1
<150> EP 15188064.8
<151> 2015-10-02
<160> 22
<170> PatentIn 版本 3.5
<210> 1
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 0015-LC1
<400> 1
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Ile Tyr Asn Met Pro
85 90 95
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Arg Lys Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 2
<211> 455
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 0015-HC1
<400> 2
Gln Val Glu Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Asn Ala Ser Gly Thr Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr
100 105 110
Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120 125
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr
130 135 140
Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr Phe Pro
145 150 155 160
Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val
165 170 175
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser
180 185 190
Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile
195 200 205
Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys Val
210 215 220
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
225 230 235 240
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
245 250 255
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
260 265 270
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
275 280 285
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
290 295 300
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
305 310 315 320
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
325 330 335
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
340 345 350
Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
355 360 365
Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
370 375 380
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
385 390 395 400
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val
405 410 415
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
420 425 430
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
435 440 445
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
450 455
<210> 3
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 0015-LC2
<400> 3
Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Arg Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Tyr Ala Ser Ser Asn
85 90 95
Val Asp Asn Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Ser Ser
100 105 110
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
115 120 125
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
130 135 140
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
145 150 155 160
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
165 170 175
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
180 185 190
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
195 200 205
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215
<210> 4
<211> 229
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 0015-Fab
<400> 4
Gln Ser Met Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln Thr
1 5 10 15
Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Ala
20 25 30
Met Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Tyr Ile Trp Ser Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Ser
50 55 60
Arg Val Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Ser Leu Lys Leu Ser
65 70 75 80
Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Tyr
85 90 95
Gly Thr Ser Tyr Pro Asp Tyr Gly Asp Ala Ser Gly Phe Asp Pro Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Val Ala Ala Pro
115 120 125
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
130 135 140
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
145 150 155 160
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
165 170 175
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
180 185 190
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
195 200 205
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
210 215 220
Asn Arg Gly Glu Cys
225
<210> 5
<211> 42
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 5
Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His Gln Lys
1 5 10 15
Leu Val Phe Phe Ala Glu Asp Val Gly Ser Asn Lys Gly Ala Ile Ile
20 25 30
Gly Leu Met Val Gly Gly Val Val Ile Ala
35 40
<210> 6
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 0012-LC1
<400> 6
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Ile Tyr Asn Met Pro
85 90 95
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Arg Lys Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 7
<211> 455
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 0012-HC1
<400> 7
Gln Val Glu Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Asn Ala Ser Gly Thr Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr
100 105 110
Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120 125
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr
130 135 140
Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr Phe Pro
145 150 155 160
Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val
165 170 175
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser
180 185 190
Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile
195 200 205
Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys Val
210 215 220
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
225 230 235 240
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
245 250 255
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
260 265 270
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
275 280 285
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
290 295 300
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
305 310 315 320
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
325 330 335
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
340 345 350
Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
355 360 365
Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
370 375 380
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
385 390 395 400
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val
405 410 415
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
420 425 430
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
435 440 445
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
450 455
<210> 8
<211> 229
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 0012-LC2
<400> 8
Gln Ser Met Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln Thr
1 5 10 15
Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Ala
20 25 30
Met Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Tyr Ile Trp Ser Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Ser
50 55 60
Arg Val Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Ser Leu Lys Leu Ser
65 70 75 80
Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Tyr
85 90 95
Gly Thr Ser Tyr Pro Asp Tyr Gly Asp Ala Ser Gly Phe Asp Pro Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Val Ala Ala Pro
115 120 125
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
130 135 140
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
145 150 155 160
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
165 170 175
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
180 185 190
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
195 200 205
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
210 215 220
Asn Arg Gly Glu Cys
225
<210> 9
<211> 688
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 0012-HC2
<400> 9
Gln Val Glu Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Asn Ala Ser Gly Thr Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr
100 105 110
Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120 125
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr
130 135 140
Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr Phe Pro
145 150 155 160
Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val
165 170 175
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser
180 185 190
Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile
195 200 205
Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys Val
210 215 220
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
225 230 235 240
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
245 250 255
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
260 265 270
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
275 280 285
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
290 295 300
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
305 310 315 320
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
325 330 335
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
340 345 350
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr
355 360 365
Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
370 375 380
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
385 390 395 400
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
405 410 415
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
420 425 430
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
435 440 445
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
450 455 460
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser
465 470 475 480
Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
485 490 495
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys
500 505 510
Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Thr Leu Ala
515 520 525
Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
530 535 540
Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr
545 550 555 560
Cys Gln Gln Asn Tyr Ala Ser Ser Asn Val Asp Asn Thr Phe Gly Gly
565 570 575
Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
580 585 590
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
595 600 605
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
610 615 620
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
625 630 635 640
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
645 650 655
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
660 665 670
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
675 680 685
<210> 10
<211> 702
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 0015-HC2
<400> 10
Gln Val Glu Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Asn Ala Ser Gly Thr Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr
100 105 110
Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120 125
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr
130 135 140
Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr Phe Pro
145 150 155 160
Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val
165 170 175
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser
180 185 190
Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile
195 200 205
Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys Val
210 215 220
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
225 230 235 240
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
245 250 255
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
260 265 270
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
275 280 285
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
290 295 300
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
305 310 315 320
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
325 330 335
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
340 345 350
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr
355 360 365
Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
370 375 380
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
385 390 395 400
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
405 410 415
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
420 425 430
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
435 440 445
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
450 455 460
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ser Met Gln Glu Ser Gly
465 470 475 480
Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val
485 490 495
Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Ile Arg Gln His
500 505 510
Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Trp Ser Gly Gly Ser
515 520 525
Thr Asp Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Lys Thr
530 535 540
Ser Thr Thr Val Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr
545 550 555 560
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Tyr Gly Thr Ser Tyr Pro Asp Tyr
565 570 575
Gly Asp Ala Ser Gly Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
580 585 590
Val Ser Ser Ala Ser Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
595 600 605
Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu
610 615 620
Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn
625 630 635 640
Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser
645 650 655
Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala
660 665 670
Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly
675 680 685
Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
690 695 700
<210> 11
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 0020-LC1
<400> 11
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Ile Tyr Asn Met Pro
85 90 95
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Arg Lys Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 12
<211> 457
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 0020-HC1
<400> 12
Gln Val Glu Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Asn Ala Ser Gly Thr Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr
100 105 110
Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120 125
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr
130 135 140
Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr Phe Pro
145 150 155 160
Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val
165 170 175
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser
180 185 190
Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile
195 200 205
Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys Val
210 215 220
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
225 230 235 240
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
245 250 255
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
260 265 270
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
275 280 285
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
290 295 300
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
305 310 315 320
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
325 330 335
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
340 345 350
Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
355 360 365
Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
370 375 380
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
385 390 395 400
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val
405 410 415
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
420 425 430
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
435 440 445
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly
450 455
<210> 13
<211> 947
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 0020-HC2
<400> 13
Gln Val Glu Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Asn Ala Ser Gly Thr Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr
100 105 110
Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120 125
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr
130 135 140
Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr Phe Pro
145 150 155 160
Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val
165 170 175
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser
180 185 190
Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile
195 200 205
Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys Val
210 215 220
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
225 230 235 240
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
245 250 255
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
260 265 270
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
275 280 285
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
290 295 300
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
305 310 315 320
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
325 330 335
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
340 345 350
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr
355 360 365
Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
370 375 380
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
385 390 395 400
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
405 410 415
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
420 425 430
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
435 440 445
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
450 455 460
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser
465 470 475 480
Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
485 490 495
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys
500 505 510
Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Thr Leu Ala
515 520 525
Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
530 535 540
Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr
545 550 555 560
Cys Gln Gln Asn Tyr Ala Ser Ser Asn Val Asp Asn Thr Phe Gly Gly
565 570 575
Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe
580 585 590
Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val
595 600 605
Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp
610 615 620
Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr
625 630 635 640
Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr
645 650 655
Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val
660 665 670
Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly
675 680 685
Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
690 695 700
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
705 710 715 720
Gly Gly Gln Ser Met Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser
725 730 735
Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser
740 745 750
Tyr Ala Met Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
755 760 765
Ile Gly Tyr Ile Trp Ser Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Ala Ser Trp Ala
770 775 780
Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Ser Leu Lys
785 790 795 800
Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
805 810 815
Arg Tyr Gly Thr Ser Tyr Pro Asp Tyr Gly Asp Ala Ser Gly Phe Asp
820 825 830
Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
835 840 845
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
850 855 860
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
865 870 875 880
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
885 890 895
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
900 905 910
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
915 920 925
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro
930 935 940
Lys Ser Cys
945
<210> 14
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 0024-LC1
<400> 14
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Ile Tyr Asn Met Pro
85 90 95
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 15
<211> 455
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 0024-HC1
<400> 15
Gln Val Glu Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Asn Ala Ser Gly Thr Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr
100 105 110
Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120 125
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr
130 135 140
Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro
145 150 155 160
Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val
165 170 175
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser
180 185 190
Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile
195 200 205
Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val
210 215 220
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
225 230 235 240
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
245 250 255
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
260 265 270
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
275 280 285
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
290 295 300
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
305 310 315 320
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
325 330 335
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
340 345 350
Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
355 360 365
Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
370 375 380
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
385 390 395 400
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val
405 410 415
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
420 425 430
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
435 440 445
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
450 455
<210> 16
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 0024-LC2
<400> 16
Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Arg Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Tyr Ala Ser Ser Asn
85 90 95
Val Asp Asn Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Ser Ser
100 105 110
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
115 120 125
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
130 135 140
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
145 150 155 160
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
165 170 175
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
180 185 190
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
195 200 205
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215
<210> 17
<211> 702
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 0024-HC2
<400> 17
Gln Val Glu Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Asn Ala Ser Gly Thr Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr
100 105 110
Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120 125
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr
130 135 140
Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro
145 150 155 160
Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val
165 170 175
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser
180 185 190
Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile
195 200 205
Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val
210 215 220
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
225 230 235 240
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
245 250 255
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
260 265 270
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
275 280 285
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
290 295 300
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
305 310 315 320
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
325 330 335
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
340 345 350
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr
355 360 365
Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
370 375 380
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
385 390 395 400
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
405 410 415
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
420 425 430
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
435 440 445
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
450 455 460
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ser Met Gln Glu Ser Gly
465 470 475 480
Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val
485 490 495
Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Ile Arg Gln His
500 505 510
Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Trp Ser Gly Gly Ser
515 520 525
Thr Asp Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Lys Thr
530 535 540
Ser Thr Thr Val Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr
545 550 555 560
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Tyr Gly Thr Ser Tyr Pro Asp Tyr
565 570 575
Gly Asp Ala Ser Gly Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
580 585 590
Val Ser Ser Ala Ser Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
595 600 605
Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu
610 615 620
Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn
625 630 635 640
Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser
645 650 655
Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala
660 665 670
Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly
675 680 685
Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
690 695 700
<210> 18
<211> 126
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 18
Gln Val Glu Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Asn Ala Ser Gly Thr Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr
100 105 110
Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 19
<211> 108
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 19
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Ile Tyr Asn Met Pro
85 90 95
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 20
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 299-023 VH人源化变体_DASG
<400> 20
Gln Ser Met Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln Thr
1 5 10 15
Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Ala
20 25 30
Met Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Tyr Ile Trp Ser Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Ser
50 55 60
Arg Val Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Ser Leu Lys Leu Ser
65 70 75 80
Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Tyr
85 90 95
Gly Thr Ser Tyr Pro Asp Tyr Gly Asp Ala Ser Gly Phe Asp Pro Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 21
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 299-009 VL人源化变体_NYA
<400> 21
Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Arg Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Tyr Ala Ser Ser Asn
85 90 95
Val Asp Asn Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 22
<211> 760
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 22
Met Met Asp Gln Ala Arg Ser Ala Phe Ser Asn Leu Phe Gly Gly Glu
1 5 10 15
Pro Leu Ser Tyr Thr Arg Phe Ser Leu Ala Arg Gln Val Asp Gly Asp
20 25 30
Asn Ser His Val Glu Met Lys Leu Ala Val Asp Glu Glu Glu Asn Ala
35 40 45
Asp Asn Asn Thr Lys Ala Asn Val Thr Lys Pro Lys Arg Cys Ser Gly
50 55 60
Ser Ile Cys Tyr Gly Thr Ile Ala Val Ile Val Phe Phe Leu Ile Gly
65 70 75 80
Phe Met Ile Gly Tyr Leu Gly Tyr Cys Lys Gly Val Glu Pro Lys Thr
85 90 95
Glu Cys Glu Arg Leu Ala Gly Thr Glu Ser Pro Val Arg Glu Glu Pro
100 105 110
Gly Glu Asp Phe Pro Ala Ala Arg Arg Leu Tyr Trp Asp Asp Leu Lys
115 120 125
Arg Lys Leu Ser Glu Lys Leu Asp Ser Thr Asp Phe Thr Gly Thr Ile
130 135 140
Lys Leu Leu Asn Glu Asn Ser Tyr Val Pro Arg Glu Ala Gly Ser Gln
145 150 155 160
Lys Asp Glu Asn Leu Ala Leu Tyr Val Glu Asn Gln Phe Arg Glu Phe
165 170 175
Lys Leu Ser Lys Val Trp Arg Asp Gln His Phe Val Lys Ile Gln Val
180 185 190
Lys Asp Ser Ala Gln Asn Ser Val Ile Ile Val Asp Lys Asn Gly Arg
195 200 205
Leu Val Tyr Leu Val Glu Asn Pro Gly Gly Tyr Val Ala Tyr Ser Lys
210 215 220
Ala Ala Thr Val Thr Gly Lys Leu Val His Ala Asn Phe Gly Thr Lys
225 230 235 240
Lys Asp Phe Glu Asp Leu Tyr Thr Pro Val Asn Gly Ser Ile Val Ile
245 250 255
Val Arg Ala Gly Lys Ile Thr Phe Ala Glu Lys Val Ala Asn Ala Glu
260 265 270
Ser Leu Asn Ala Ile Gly Val Leu Ile Tyr Met Asp Gln Thr Lys Phe
275 280 285
Pro Ile Val Asn Ala Glu Leu Ser Phe Phe Gly His Ala His Leu Gly
290 295 300
Thr Gly Asp Pro Tyr Thr Pro Gly Phe Pro Ser Phe Asn His Thr Gln
305 310 315 320
Phe Pro Pro Ser Arg Ser Ser Gly Leu Pro Asn Ile Pro Val Gln Thr
325 330 335
Ile Ser Arg Ala Ala Ala Glu Lys Leu Phe Gly Asn Met Glu Gly Asp
340 345 350
Cys Pro Ser Asp Trp Lys Thr Asp Ser Thr Cys Arg Met Val Thr Ser
355 360 365
Glu Ser Lys Asn Val Lys Leu Thr Val Ser Asn Val Leu Lys Glu Ile
370 375 380
Lys Ile Leu Asn Ile Phe Gly Val Ile Lys Gly Phe Val Glu Pro Asp
385 390 395 400
His Tyr Val Val Val Gly Ala Gln Arg Asp Ala Trp Gly Pro Gly Ala
405 410 415
Ala Lys Ser Gly Val Gly Thr Ala Leu Leu Leu Lys Leu Ala Gln Met
420 425 430
Phe Ser Asp Met Val Leu Lys Asp Gly Phe Gln Pro Ser Arg Ser Ile
435 440 445
Ile Phe Ala Ser Trp Ser Ala Gly Asp Phe Gly Ser Val Gly Ala Thr
450 455 460
Glu Trp Leu Glu Gly Tyr Leu Ser Ser Leu His Leu Lys Ala Phe Thr
465 470 475 480
Tyr Ile Asn Leu Asp Lys Ala Val Leu Gly Thr Ser Asn Phe Lys Val
485 490 495
Ser Ala Ser Pro Leu Leu Tyr Thr Leu Ile Glu Lys Thr Met Gln Asn
500 505 510
Val Lys His Pro Val Thr Gly Gln Phe Leu Tyr Gln Asp Ser Asn Trp
515 520 525
Ala Ser Lys Val Glu Lys Leu Thr Leu Asp Asn Ala Ala Phe Pro Phe
530 535 540
Leu Ala Tyr Ser Gly Ile Pro Ala Val Ser Phe Cys Phe Cys Glu Asp
545 550 555 560
Thr Asp Tyr Pro Tyr Leu Gly Thr Thr Met Asp Thr Tyr Lys Glu Leu
565 570 575
Ile Glu Arg Ile Pro Glu Leu Asn Lys Val Ala Arg Ala Ala Ala Glu
580 585 590
Val Ala Gly Gln Phe Val Ile Lys Leu Thr His Asp Val Glu Leu Asn
595 600 605
Leu Asp Tyr Glu Arg Tyr Asn Ser Gln Leu Leu Ser Phe Val Arg Asp
610 615 620
Leu Asn Gln Tyr Arg Ala Asp Ile Lys Glu Met Gly Leu Ser Leu Gln
625 630 635 640
Trp Leu Tyr Ser Ala Arg Gly Asp Phe Phe Arg Ala Thr Ser Arg Leu
645 650 655
Thr Thr Asp Phe Gly Asn Ala Glu Lys Thr Asp Arg Phe Val Met Lys
660 665 670
Lys Leu Asn Asp Arg Val Met Arg Val Glu Tyr His Phe Leu Ser Pro
675 680 685
Tyr Val Ser Pro Lys Glu Ser Pro Phe Arg His Val Phe Trp Gly Ser
690 695 700
Gly Ser His Thr Leu Pro Ala Leu Leu Glu Asn Leu Lys Leu Arg Lys
705 710 715 720
Gln Asn Asn Gly Ala Phe Asn Glu Thr Leu Phe Arg Asn Gln Leu Ala
725 730 735
Leu Ala Thr Trp Thr Ile Gln Gly Ala Ala Asn Ala Leu Ser Gly Asp
740 745 750
Val Trp Asp Ile Asp Asn Glu Phe
755 760

Claims (33)

1.一种单克隆双特异性抗体，其包括
a)包含两个抗体轻链和抗体重链对的一个抗体，其中每对为一个抗体轻链和一个抗体重链，其中由每对重链和轻链形成的结合位点特异性地结合第一抗原，和
b)一个另外的Fab片段，其中所述另外的Fab片段通过肽接头与抗体的一条重链的C-末端融合，其中所述另外的Fab片段的结合位点特异性地结合第二抗原，
其中所述第一抗原是人A-β蛋白，而所述第二抗原是人转铁蛋白受体，
其中a)中所述的一个抗体包含与SEQ ID NO:01具有70％或更高的序列同一性的轻链、和与SEQ ID NO:2具有70％或更高的序列同一性的重链；
其中所述另外的Fab片段包含与SEQ ID NO:03具有70％或更高的序列同一性的轻链、和与SEQ ID NO:4具有70％或更高的序列同一性的重链Fab片段。
2.根据权利要求1的抗体，其中
a)与另外的Fab片段融合的重链具有三肽LSP作为C-末端重链氨基酸残基，其中该三肽的脯氨酸经由肽键与另外的Fab片段或肽接头的第一个氨基酸残基直接融合，和
b)没有与另外的Fab片段融合的重链具有三肽LSP或SPG或PGK作为C-末端重链氨基酸残基。
3.根据权利要求1至2任一项的抗体，其中抗体是
a)具有突变L234A、L235A和P329G的人亚类IgG1的全长抗体，
b)在两条重链中都具有突变L234A、L235A和P329G、并且在一条重链中具有突变T366W和S354C以及在相应的另一条重链中具有突变T366S、L368A、Y407V和Y349C的人亚类IgG1的全长抗体，
c)在两条重链中都具有突变L234A、L235A、P329G、I253A、H310A和H435A、并且在一条重链中具有突变T366W和S354C以及在相应的另一条重链中具有突变T366S、L368A、Y407V和Y349C的人亚类IgG1的全长抗体，或
d)在两条重链中都具有突变L234A、L235A、P329G、M252Y、S254T和T256E、并且在一条重链中具有突变T366W和S354C以及在相应的另一条重链中具有突变T366S、L368A、Y407V和Y349C的人亚类IgG1的全长抗体，或
e)在两条重链中都具有突变L234A、L235A、P329G、H310A、H433A和Y436A、并且在一条重链中具有突变i)T366W和ii)S354C或Y349C、以及在相应的另一条重链中具有突变i)T366S、L368A和Y407V和ii)Y349C或S354C的人亚类IgG1的全长抗体。
4.根据权利要求1至3任一项的抗体，其中所述双特异性抗体包括具有SEQ ID NO:01的氨基酸序列的轻链、具有SEQ ID NO:02的氨基酸序列的重链、具有SEQ ID NO:03的氨基酸序列的轻链、和包含SEQ ID NO:04的氨基酸序列的抗体Fab片段。
5.根据权利要求1至4任一项的抗体，其中所述人A-β结合位点包含SEQ ID NO:18的VH序列，包括该序列的翻译后修饰，以及SEQ ID NO:19的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。
6.根据权利要求1至5任一项的抗体，其中所述人转铁蛋白受体结合位点包含SEQ IDNO:20的VH序列，包括该序列的翻译后修饰，以及SEQ ID NO:21的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。
7.一种药物制剂，包括根据权利要求1至6任一项的抗体和药物学上可接受的载体。
8.根据权利要求1至6任一项的抗体用作药物。
9.根据权利要求8的抗体用途，其中所述药物用于治疗淀粉样蛋白病症。
10.根据权利要求8的抗体用途，其中所述药物用于预防和/或治疗与淀粉样变和/或淀粉样蛋白斑块形成相关的疾病。
11.根据权利要求10的抗体用途，其中所述疾病选自痴呆、阿尔茨海默病、运动神经病、唐氏综合症、Creutzfeldt Jacob病、遗传性脑出血伴淀粉样变性Dutch型、帕金森病、HIV相关的痴呆、ALS或与衰老相关的神经元病症。
12.根据权利要求8的抗体用途，其中所述药物用于治疗阿尔茨海默病。
13.根据权利要求1至6任一项的抗体用于阿尔茨海默病的治疗。
14.根据权利要求1至6任一项的抗体在制造药物中的用途。
15.根据权利要求14的用途，其中所述药物用于治疗淀粉样蛋白病症。
16.根据权利要求14的用途，其中所述药物用于预防和/或治疗与淀粉样变和/或淀粉样蛋白斑块形成相关的疾病。
17.根据权利要求16的用途，其中所述疾病选自痴呆、阿尔茨海默病、运动神经病、唐氏综合症、Creutzfeldt Jacob病、遗传性脑出血伴淀粉样变性Dutch型、帕金森病、HIV相关的痴呆、ALS或与衰老相关的神经元病症。
18.权利要求14的用途，其中所述药物用于阿尔茨海默病的治疗。
19.权利要求14的用途，其中所述药物用于抑制/减缓脑中的斑块形成。
20.一种治疗患有阿尔茨海默病的个体的方法，包括将有效量的根据权利要求1至6任一项的抗体施用于所述个体。
21.一种抑制/减缓个体脑中的斑块形成的方法，包括将有效量的根据权利要求1至6任一项的抗体施用于所述个体，以抑制/减缓脑中的斑块形成。
22.编码根据权利要求1至6任一项的双特异性抗体的核酸。
23.包含编码根据权利要求1至6任一项的双特异性抗体的核酸的一种或多种表达载体。
24.包含根据权利要求22至23任一项的核酸的宿主细胞。
25.一种宿主细胞，其转染了
(1)包含核酸的载体，其中所述核酸编码包含所述一个抗体的VL的氨基酸序列和包含所述一个抗体的VH的氨基酸序列；或
(2)第一载体和第二载体，其中所述第一载体包含编码包含所述一个抗体的VL的氨基酸序列的核酸，且所述第二载体包含编码包含所述一个抗体的VH的氨基酸序列的核酸。
26.根据权利要求24至25任一项的宿主细胞，其中宿主细胞是真核细胞或淋巴样细胞。
27.根据权利要求25的宿主细胞，其中宿主细胞是中国仓鼠卵巢细胞。
28.根据权利要求25的宿主细胞，其中所述宿主细胞是Y0细胞或NS0细胞或Sp20。
29.一种生产根据权利要求1至6任一项的双特异性抗体的方法，包括以下步骤：
a)培养根据权利要求24至28任一项的宿主细胞，使双特异性抗体产生；和
b)从细胞或培养基中回收双特异性抗体，由此产生所述双特异性抗体。
30.包含根据权利要求1至6任一项的双特异性抗体和细胞毒性剂的免疫缀合物。
31.根据权利要求1至6任一项的双特异性抗体用于治疗阿尔茨海默病。
32.根据权利要求1至6任一项的双特异性抗体用于抑制或减缓个体脑中的斑块形成。
33.根据权利要求1至6任一项的双特异性抗体用于分解β-淀粉样蛋白斑块。
CN202111123164.XA 2015-10-02 2016-09-30 双特异性抗人A-β/人转铁蛋白受体抗体及使用方法 Active CN114044829B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111123164.XA CN114044829B (zh) 2015-10-02 2016-09-30 双特异性抗人A-β/人转铁蛋白受体抗体及使用方法

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP15188064 2015-10-02
EP15188064.8 2015-10-02
CN201680056850.0A CN108137678B (zh) 2015-10-02 2016-09-30 双特异性抗人A-β/人转铁蛋白受体抗体及使用方法
CN202111123164.XA CN114044829B (zh) 2015-10-02 2016-09-30 双特异性抗人A-β/人转铁蛋白受体抗体及使用方法
PCT/EP2016/073411 WO2017055540A1 (en) 2015-10-02 2016-09-30 Bispecific anti-human a-beta/human transferrin receptor antibodies and methods of use

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201680056850.0A Division CN108137678B (zh) 2015-10-02 2016-09-30 双特异性抗人A-β/人转铁蛋白受体抗体及使用方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN114044829A true CN114044829A (zh) 2022-02-15
CN114044829B CN114044829B (zh) 2024-08-30

Family

ID=54252165

Family Applications (4)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202111123164.XA Active CN114044829B (zh) 2015-10-02 2016-09-30 双特异性抗人A-β/人转铁蛋白受体抗体及使用方法
CN202111121363.7A Pending CN113846104A (zh) 2015-10-02 2016-09-30 双特异性抗人A-β/人转铁蛋白受体抗体及使用方法
CN201680056850.0A Active CN108137678B (zh) 2015-10-02 2016-09-30 双特异性抗人A-β/人转铁蛋白受体抗体及使用方法
CN202111125339.0A Pending CN113827719A (zh) 2015-10-02 2016-09-30 双特异性抗人A-β/人转铁蛋白受体抗体及使用方法

Family Applications After (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202111121363.7A Pending CN113846104A (zh) 2015-10-02 2016-09-30 双特异性抗人A-β/人转铁蛋白受体抗体及使用方法
CN201680056850.0A Active CN108137678B (zh) 2015-10-02 2016-09-30 双特异性抗人A-β/人转铁蛋白受体抗体及使用方法
CN202111125339.0A Pending CN113827719A (zh) 2015-10-02 2016-09-30 双特异性抗人A-β/人转铁蛋白受体抗体及使用方法

Country Status (24)

Country Link
US (3) US10941205B2 (zh)
EP (1) EP3356400A1 (zh)
JP (3) JP7005487B2 (zh)
KR (1) KR20180054865A (zh)
CN (4) CN114044829B (zh)
AR (1) AR106189A1 (zh)
AU (2) AU2016333510B2 (zh)
BR (1) BR112018004733A2 (zh)
CA (1) CA3000560A1 (zh)
CL (1) CL2018000729A1 (zh)
CO (1) CO2018002360A2 (zh)
CR (1) CR20180150A (zh)
HK (1) HK1255464A1 (zh)
IL (3) IL314744A (zh)
MA (1) MA43022A (zh)
MX (4) MX2018003450A (zh)
MY (1) MY194328A (zh)
NZ (2) NZ779858A (zh)
PE (2) PE20211594A1 (zh)
PH (1) PH12018500709A1 (zh)
RU (1) RU2730682C1 (zh)
TW (3) TWI780679B (zh)
UA (1) UA126652C2 (zh)
WO (1) WO2017055540A1 (zh)

Families Citing this family (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9696312B2 (en) 2011-09-02 2017-07-04 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Diagnosis and treatment of cancer expressing ILT3 or ILT3 ligand
HUE057952T2 (hu) 2015-06-24 2022-06-28 Hoffmann La Roche Anti-transzferrin receptor antitestek testreszabott affinitással
EP3325006A4 (en) 2015-07-17 2019-03-06 The Trustees of Columbia University in the City of New York METHOD FOR TREATING CD166-EXPRESSIVE CANCER
JP6657392B2 (ja) 2015-10-02 2020-03-04 エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 二重特異性抗ヒトｃｄ２０／ヒトトランスフェリン受容体抗体及び使用方法
AR106189A1 (es) 2015-10-02 2017-12-20 Hoffmann La Roche ANTICUERPOS BIESPECÍFICOS CONTRA EL A-b HUMANO Y EL RECEPTOR DE TRANSFERRINA HUMANO Y MÉTODOS DE USO
DK3583120T5 (da) 2017-02-17 2024-09-02 Denali Therapeutics Inc Modificerede transferrinreceptorbindende polypeptider
NZ756132A (en) * 2017-03-10 2022-02-25 Hoffmann La Roche Method for producing multispecific antibodies
MX2019012381A (es) * 2017-05-18 2020-01-23 Hoffmann La Roche Reduccion de reaccion secundaria relacionada con la aplicacion de un anticuerpo terapeutico.
CN111225923B (zh) 2017-08-02 2024-09-24 思瑞麦科生物科技公司 结合活性α突触核蛋白的抗体
HUE063021T2 (hu) * 2017-08-10 2023-12-28 Denali Therapeutics Inc Mesterségesen elõállított transzferrin receptor-kötõ polipeptidek
CN111741977A (zh) * 2018-01-10 2020-10-02 戴纳立制药公司 转铁蛋白受体结合性多肽和其用途
CA3090519A1 (en) 2018-02-07 2019-08-15 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for therapeutic protein delivery
US20230183379A1 (en) * 2018-11-20 2023-06-15 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Bispecific antibody targeting transferrin receptor 1 and soluble antigen
CN114258403A (zh) 2019-06-19 2022-03-29 豪夫迈·罗氏有限公司 通过以限定的组织形式靶向整合多个表达盒来产生多价多特异性抗体表达细胞的方法
TW202128264A (zh) * 2019-09-25 2021-08-01 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 使用經預測之溶離緩衝鹽濃度的陽離子層析法
EP4081536A1 (en) 2019-12-23 2022-11-02 Denali Therapeutics Inc. Progranulin variants
WO2021136772A1 (en) 2020-01-02 2021-07-08 F. Hoffmann-La Roche Ag Method for determining the amount of a therapeutic antibody in the brain
EP4219151A4 (en) 2020-09-23 2024-10-09 Toagosei Co Ltd ADHESIVE COMPOSITION, FILM TYPE ADHESIVE AND MULTILAYER FILM
MX2023005581A (es) 2020-11-16 2023-05-29 Hoffmann La Roche Glucoformas de fab ricas en manosa.
WO2022136140A1 (en) 2020-12-22 2022-06-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Oligonucleotides targeting xbp1
WO2023170290A1 (en) * 2022-03-11 2023-09-14 Janssen Pharmaceutica Nv Multispecific antibodies and uses thereof
TW202400636A (zh) * 2022-03-11 2024-01-01 比利時商健生藥品公司 多特異性抗體及其用途(一)
TW202345899A (zh) * 2022-03-11 2023-12-01 比利時商健生藥品公司 多特異性抗體及其用途(三)
WO2023192288A1 (en) * 2022-03-28 2023-10-05 Denali Therapeutics Inc. Monovalent anti-trem2 binding molecules and methods of use thereof
WO2024026494A1 (en) 2022-07-29 2024-02-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Viral particles retargeted to transferrin receptor 1
WO2024026488A2 (en) 2022-07-29 2024-02-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-human animals comprising a modified transferrin receptor locus

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102933601A (zh) * 2010-04-15 2013-02-13 雅培制药有限公司 β淀粉样蛋白结合蛋白
WO2014033074A1 (en) * 2012-08-29 2014-03-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Blood brain barrier shuttle
WO2014189973A2 (en) * 2013-05-20 2014-11-27 Genentech, Inc. Anti-transferrin receptor antibodies and methods of use

Family Cites Families (293)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
IL47062A (en) 1975-04-10 1979-07-25 Yeda Res & Dev Process for diminishing antigenicity of tissues to be usedas transplants by treatment with glutaraldehyde
US4665077A (en) 1979-03-19 1987-05-12 The Upjohn Company Method for treating rejection of organ or skin grafts with 6-aryl pyrimidine compounds
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4737456A (en) 1985-05-09 1988-04-12 Syntex (U.S.A.) Inc. Reducing interference in ligand-receptor binding assays
US4666829A (en) 1985-05-15 1987-05-19 University Of California Polypeptide marker for Alzheimer's disease and its use for diagnosis
US6548640B1 (en) 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
US5811310A (en) 1986-09-30 1998-09-22 Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva Univ. The Alz-50 monoclonal antibody and diagnostic assay for alzheimer's disease
US6893625B1 (en) 1986-10-27 2005-05-17 Royalty Pharma Finance Trust Chimeric antibody with specificity to human B cell surface antigen
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
WO1988007089A1 (en) 1987-03-18 1988-09-22 Medical Research Council Altered antibodies
US5231000A (en) 1987-10-08 1993-07-27 The Mclean Hospital Antibodies to A4 amyloid peptide
US5606040A (en) 1987-10-30 1997-02-25 American Cyanamid Company Antitumor and antibacterial substituted disulfide derivatives prepared from compounds possessing a methyl-trithio group
US5770701A (en) 1987-10-30 1998-06-23 American Cyanamid Company Process for preparing targeted forms of methyltrithio antitumor agents
US4892538A (en) 1987-11-17 1990-01-09 Brown University Research Foundation In vivo delivery of neurotransmitters by implanted, encapsulated cells
US5283187A (en) 1987-11-17 1994-02-01 Brown University Research Foundation Cell culture-containing tubular capsule produced by co-extrusion
WO1989008114A1 (en) 1988-02-25 1989-09-08 The General Hospital Corporation Rapid immunoselection cloning method
US5506126A (en) 1988-02-25 1996-04-09 The General Hospital Corporation Rapid immunoselection cloning method
IL85746A (en) 1988-03-15 1994-05-30 Yeda Res & Dev Preparations comprising t-lymphocyte cells treated with 8-methoxypsoralen or cell membranes separated therefrom for preventing or treating autoimmune diseases
US4861579A (en) 1988-03-17 1989-08-29 American Cyanamid Company Suppression of B-lymphocytes in mammals by administration of anti-B-lymphocyte antibodies
FI891226A (fi) 1988-04-28 1989-10-29 Univ Leland Stanford Junior Reseptordeterminanter i anti-t-celler foer behandling av autoimmunsjukdom.
WO1990008187A1 (en) 1989-01-19 1990-07-26 Dana Farber Cancer Institute Soluble two domain cd2 protein
ES2062519T5 (es) 1989-03-21 2003-07-16 Immune Response Corp Inc Vacunacion y metodos contra enfermedades originadas a partir de respuestas patogenicas mediante poblaciones especificas de linfocitos t.
AU652540B2 (en) 1989-07-19 1994-09-01 Xoma Corporation T cell receptor peptides as therapeutics for autoimmune and malignant disease
US5154924A (en) 1989-09-07 1992-10-13 Alkermes, Inc. Transferrin receptor specific antibody-neuropharmaceutical agent conjugates
CA2026147C (en) 1989-10-25 2006-02-07 Ravi J. Chari Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5959177A (en) 1989-10-27 1999-09-28 The Scripps Research Institute Transgenic plants expressing assembled secretory antibodies
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
NZ236819A (en) 1990-02-03 1993-07-27 Max Planck Gesellschaft Enzymatic cleavage of fusion proteins; fusion proteins; recombinant dna and pharmaceutical compositions
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
JP2780507B2 (ja) 1991-03-29 1998-07-30 松下電器産業株式会社 内燃機関用フィルタ再生装置
WO1992022653A1 (en) 1991-06-14 1992-12-23 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
US7018809B1 (en) 1991-09-19 2006-03-28 Genentech, Inc. Expression of functional antibody fragments
JPH07509444A (ja) 1991-11-26 1995-10-19 アルカーメス・インコーポレーテツド トランスフェリンセレプター特異的抗体−神経薬又は診断薬複合体の製造法
ZA932522B (en) 1992-04-10 1993-12-20 Res Dev Foundation Immunotoxins directed against c-erbB-2(HER/neu) related surface antigens
EP0646178A1 (en) 1992-06-04 1995-04-05 The Regents Of The University Of California expression cassette with regularoty regions functional in the mammmlian host
EP0652775B1 (en) 1992-07-27 2000-04-19 THE GOVERNMENT OF THE UNITED STATES OF AMERICA as represented by the SECRETARY OF THE DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SERVICES Targeting of liposomes to the blood-brain barrier
US5736137A (en) 1992-11-13 1998-04-07 Idec Pharmaceuticals Corporation Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human B lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of B cell lymphoma
US7744877B2 (en) 1992-11-13 2010-06-29 Biogen Idec Inc. Expression and use of anti-CD20 Antibodies
DE69329503T2 (de) 1992-11-13 2001-05-03 Idec Pharma Corp Therapeutische Verwendung von chimerischen und markierten Antikörpern, die gegen ein Differenzierung-Antigen gerichtet sind, dessen Expression auf menschliche B Lymphozyt beschränkt ist, für die Behandlung von B-Zell-Lymphoma
US5635483A (en) 1992-12-03 1997-06-03 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Tumor inhibiting tetrapeptide bearing modified phenethyl amides
US5750349A (en) 1993-01-25 1998-05-12 Takeda Chemical Industries Ltd. Antibodies to β-amyloids or their derivatives and use thereof
US5955317A (en) 1993-01-25 1999-09-21 Takeda Chemical Industries, Ltd. Antibodies to β-amyloids or their derivatives and use thereof
US5780588A (en) 1993-01-26 1998-07-14 Arizona Board Of Regents Elucidation and synthesis of selected pentapeptides
CA2163345A1 (en) 1993-06-16 1994-12-22 Susan Adrienne Morgan Antibodies
US5417972A (en) 1993-08-02 1995-05-23 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Method of killing B-cells in a complement independent and an ADCC independent manner using antibodies which specifically bind CDIM
US5595721A (en) 1993-09-16 1997-01-21 Coulter Pharmaceutical, Inc. Radioimmunotherapy of lymphoma using anti-CD20
AU705998B2 (en) 1993-11-08 1999-06-03 Connaught Laboratories Limited Haemophilus transferrin receptor genes
US5443953A (en) 1993-12-08 1995-08-22 Immunomedics, Inc. Preparation and use of immunoconjugates
US5773001A (en) 1994-06-03 1998-06-30 American Cyanamid Company Conjugates of methyltrithio antitumor agents and intermediates for their synthesis
US5910486A (en) 1994-09-06 1999-06-08 Uab Research Foundation Methods for modulating protein function in cells using, intracellular antibody homologues
US5789199A (en) 1994-11-03 1998-08-04 Genentech, Inc. Process for bacterial production of polypeptides
US5688651A (en) 1994-12-16 1997-11-18 Ramot University Authority For Applied Research And Development Ltd. Prevention of protein aggregation
US5586553A (en) 1995-02-16 1996-12-24 Minimed Inc. Transcutaneous sensor insertion set
US5840523A (en) 1995-03-01 1998-11-24 Genetech, Inc. Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides
US6015555A (en) 1995-05-19 2000-01-18 Alkermes, Inc. Transferrin receptor specific antibody-neuropharmaceutical or diagnostic agent conjugates
AU5976996A (en) 1995-06-06 1996-12-24 Stemcell Therapeutics L.L.C. Glycoprotein gp105 on bl3 hematopoietic stem cells
US5712374A (en) 1995-06-07 1998-01-27 American Cyanamid Company Method for the preparation of substantiallly monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US5714586A (en) 1995-06-07 1998-02-03 American Cyanamid Company Methods for the preparation of monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US6267958B1 (en) 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
CN100360184C (zh) 1995-07-27 2008-01-09 基因技术股份有限公司 稳定等渗的冻干蛋白质制剂
US6685940B2 (en) 1995-07-27 2004-02-03 Genentech, Inc. Protein formulation
DE19528388A1 (de) 1995-08-02 1997-02-06 Hans Peter Prof Dr Med Zenner Verwendung von Adamantan-Derivaten zur Behandlung von Erkrankungen des Innenohrs
CA2229043C (en) 1995-08-18 2016-06-07 Morphosys Gesellschaft Fur Proteinoptimierung Mbh Protein/(poly)peptide libraries
GB9603256D0 (en) 1996-02-16 1996-04-17 Wellcome Found Antibodies
US20010056066A1 (en) 1996-07-26 2001-12-27 Smithkline Beecham Corporation Method of treating immune cell mediated systemic diseases
US6306393B1 (en) 1997-03-24 2001-10-23 Immunomedics, Inc. Immunotherapy of B-cell malignancies using anti-CD22 antibodies
US6171586B1 (en) 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
DK0999853T3 (da) 1997-06-13 2003-04-22 Genentech Inc Stabiliseret antostofformulering
AU757627B2 (en) 1997-06-24 2003-02-27 Genentech Inc. Methods and compositions for galactosylated glycoproteins
WO1999002567A2 (en) 1997-07-08 1999-01-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Compositions and methods for producing homoconjugates of antibodies which induce growth arrest or apoptosis of tumor cells
US6040498A (en) 1998-08-11 2000-03-21 North Caroline State University Genetically engineered duckweed
ATE419009T1 (de) 1997-10-31 2009-01-15 Genentech Inc Methoden und zusammensetzungen bestehend aus glykoprotein-glykoformen
US6610833B1 (en) 1997-11-24 2003-08-26 The Institute For Human Genetics And Biochemistry Monoclonal human natural antibodies
TWI239847B (en) 1997-12-02 2005-09-21 Elan Pharm Inc N-terminal fragment of Abeta peptide and an adjuvant for preventing and treating amyloidogenic disease
US7964192B1 (en) 1997-12-02 2011-06-21 Janssen Alzheimer Immunotherapy Prevention and treatment of amyloidgenic disease
WO1999029888A1 (en) 1997-12-05 1999-06-17 The Scripps Research Institute Humanization of murine antibody
US6242195B1 (en) 1998-04-02 2001-06-05 Genentech, Inc. Methods for determining binding of an analyte to a receptor
DE69937291T2 (de) 1998-04-02 2008-07-10 Genentech, Inc., South San Francisco Antikörpervarianten und fragmente davon
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
US6528624B1 (en) 1998-04-02 2003-03-04 Genentech, Inc. Polypeptide variants
DK2180007T4 (da) 1998-04-20 2017-11-27 Roche Glycart Ag Glycosyleringsteknik for antistoffer til forbedring af antistofafhængig cellecytotoxicitet
ATE414536T1 (de) 1998-08-11 2008-12-15 Biogen Idec Inc Kombinationstherapien gegen b-zell-lymphome beinhaltend die verabreichung von anti-cd20- antikörpern
US6224866B1 (en) 1998-10-07 2001-05-01 Biocrystal Ltd. Immunotherapy of B cell involvement in progression of solid, nonlymphoid tumors
IL142350A0 (en) 1998-10-16 2002-03-10 Biogen Inc Interferon-beta fusion proteins and pharmaceutical compositions containing the same
JP2002529429A (ja) 1998-11-09 2002-09-10 アイデック・ファーマシューティカルズ・コーポレイション Ｂｍｔまたはｐｂｓｃ移植を受ける患者のキメラ化抗ｃｄ２０抗体による治療。
EP1949910A1 (en) 1998-11-09 2008-07-30 Biogen Idec, Inc. Treatment of chronic lymphocytic leukemia (CLL) using chimeric anti-CD20 antibody.
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
KR20060067983A (ko) 1999-01-15 2006-06-20 제넨테크, 인크. 효과기 기능이 변화된 폴리펩티드 변이체
US6897044B1 (en) 1999-01-28 2005-05-24 Biogen Idec, Inc. Production of tetravalent antibodies
US6383276B1 (en) 1999-03-12 2002-05-07 Fuji Photo Film Co., Ltd. Azomethine compound and oily magenta ink
EP2275541B1 (en) 1999-04-09 2016-03-23 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Method for controlling the activity of immunologically functional molecule
IL129427A0 (en) 1999-04-13 2000-02-17 Yeda Res & Dev Preparation of biologically active molecules
SE9901428D0 (sv) 1999-04-21 1999-04-21 Karolinska Innovations Ab Amphibodies
MXPA01011279A (es) 1999-05-07 2002-07-02 Genentech Inc Tratamiento de enfermedades autoinmunes con antagonistas que se unene a los marcadores de superficie, de celulas b.
EP1194167B1 (en) 1999-06-09 2009-08-19 Immunomedics, Inc. Immunotherapy of autoimmune disorders using antibodies which target b-cells
ITMI991299A1 (it) 1999-06-11 2000-12-11 Consiglio Nazionale Ricerche Uso di anticorpi contro antigeni di superficie per il trattamento della malattia trapianto contro ospite
DK1409654T3 (da) 1999-06-16 2008-12-08 Boston Biomedical Res Inst Immunologisk styring af beta-amyloid-niveauer in vivo
DE19930748C2 (de) 1999-07-02 2001-05-17 Infineon Technologies Ag Verfahren zur Herstellung von EEPROM- und DRAM-Grabenspeicherzellbereichen auf einem Chip
CA2379274A1 (en) 1999-07-12 2001-01-18 Genentech, Inc. Blocking immune response to a foreign antigen using an antagonist which binds to cd20
US6451284B1 (en) 1999-08-11 2002-09-17 Idec Pharmaceuticals Corporation Clinical parameters for determining hematologic toxicity prior to radioimmunotheraphy
US8557244B1 (en) 1999-08-11 2013-10-15 Biogen Idec Inc. Treatment of aggressive non-Hodgkins lymphoma with anti-CD20 antibody
JP2003513012A (ja) 1999-08-11 2003-04-08 アイデック ファーマスーティカルズ コーポレイション 抗ｃｄ２０抗体による骨髄病変を伴う非ホジキンリンパ腫を有する患者の治療
AU6929100A (en) 1999-08-23 2001-03-19 Biocrystal Limited Methods and compositions for immunotherapy of b cell involvement in promotion ofa disease condition comprising multiple sclerosis
PT1222292E (pt) 1999-10-04 2005-11-30 Medicago Inc Metodo para regulacao da transcricao de genes exogenos na presenca de azoto
US7125978B1 (en) 1999-10-04 2006-10-24 Medicago Inc. Promoter for regulating expression of foreign genes
US7504256B1 (en) 1999-10-19 2009-03-17 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Process for producing polypeptide
US20020006404A1 (en) 1999-11-08 2002-01-17 Idec Pharmaceuticals Corporation Treatment of cell malignancies using combination of B cell depleting antibody and immune modulating antibody related applications
WO2001034194A1 (en) 1999-11-08 2001-05-17 Idec Pharmaceuticals Corporation Treatment of b cell malignancies using anti-cd40l antibodies in combination with anti-cd20 antibodies and/or chemotherapeutics and radiotherapy
US20020094335A1 (en) 1999-11-29 2002-07-18 Robert Chalifour Vaccine for the prevention and treatment of alzheimer's and amyloid related diseases
AU784312B2 (en) 1999-11-29 2006-03-09 Bellus Health (International) Limited Vaccine for the prevention and treatment of alzheimer's and amyloid related diseases
DE60031793T2 (de) 1999-12-29 2007-08-23 Immunogen Inc., Cambridge Doxorubicin- und daunorubicin-enthaltende, zytotoxische mittel und deren therapeutische anwendung
US20020127652A1 (en) 2000-02-11 2002-09-12 Schambye Hans Thalsgard Follicle stimulating hormones
EP1125905A1 (en) 2000-02-16 2001-08-22 Pepscan Systems B.V. Segment synthesis
SK288711B6 (sk) 2000-02-24 2019-11-05 Univ Washington Humanizovaná protilátka, jej fragment a ich použitie, polynukleová kyselina, expresný vektor, bunka a farmaceutický prostriedok
AU2001247737A1 (en) 2000-03-24 2001-10-08 Chiron Corporation Methods of therapy for non-hodgkin's lymphoma using a combination of an antibodyto cd20 and interleuking-2
US20030185796A1 (en) 2000-03-24 2003-10-02 Chiron Corporation Methods of therapy for non-hodgkin's lymphoma
CN1981868A (zh) 2000-03-31 2007-06-20 拜奥根Idec公司 抗细胞因子抗体或拮抗剂与抗－cd20在b细胞淋巴瘤治疗中的联合应用
EP1272647B1 (en) 2000-04-11 2014-11-12 Genentech, Inc. Multivalent antibodies and uses therefor
WO2001080884A1 (en) 2000-04-25 2001-11-01 Idec Pharmaceuticals Corporation Intrathecal administration of rituximab for treatment of central nervous system lymphomas
EP2052742A1 (en) 2000-06-20 2009-04-29 Biogen Idec Inc. Treatment of B-cell associated diseases such as malignancies and autoimmune diseases using a cold anti-CD20 antibody/radiolabeled anti-CD22 antibody combination
WO2001097843A2 (en) 2000-06-22 2001-12-27 University Of Iowa Research Foundation Methods for enhancing antibody-induced cell lysis and treating cancer
WO2002002597A2 (en) 2000-06-30 2002-01-10 Maxygen Aps Peptide extended glycosylated polypeptides
JP2004502742A (ja) 2000-07-12 2004-01-29 アイデック　ファーマスーティカルズ　コーポレイション Ｂ細胞を消滅させる抗体及び免疫調節抗体を併用するｂ細胞悪性疾患の治療関連出願
US20030148404A1 (en) 2000-07-27 2003-08-07 Ramot University Authority For Applied Research & Industrial Development Ltd. Peptides and substances, methods and devices using same for diagnosing and treating neurodegenerative disorders
CA2313828A1 (en) 2000-08-01 2002-02-01 Institut De Recherches Cliniques De Montreal/Ircm Post-translational processing of .beta.-secretase (bace): the pro-and transmembrane/cytosolic domains affect its cellular activity and amyloid a.beta. production
WO2002022212A2 (en) 2000-09-18 2002-03-21 Idec Pharmaceuticals Corporation Combination therapy for treatment of autoimmune diseases using b cell depleting/immunoregulatory antibody combination
US7064191B2 (en) 2000-10-06 2006-06-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Process for purifying antibody
EA013224B1 (ru) 2000-10-06 2010-04-30 Киова Хакко Кирин Ко., Лтд. Клетки, продуцирующие композиции антител
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
WO2002034790A1 (en) 2000-10-20 2002-05-02 Idec Pharmaceuticals Corporation Variant igg3 rituxan r and therapeutic use thereof
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
PT1354034E (pt) 2000-11-30 2008-02-28 Medarex Inc Roedores transgénicos transcromossómicos para produção de anticorpos humanos
TWI255272B (en) 2000-12-06 2006-05-21 Guriq Basi Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
WO2002064734A2 (en) 2000-12-19 2002-08-22 Palatin Technologies, Inc. Identification of target-specific folding sites in peptides and proteins
KR100923514B1 (ko) 2000-12-28 2009-10-27 알투스 파마슈티컬스 인코포레이티드 전항체 및 이의 단편의 결정과 이의 제조 및 사용 방법
WO2002096948A2 (en) 2001-01-29 2002-12-05 Idec Pharmaceuticals Corporation Engineered tetravalent antibodies and methods of use
NZ545176A (en) 2001-01-29 2008-05-30 Biogen Idec Inc Modified antibodies reactive with CD20 and methods of use
US20030103971A1 (en) 2001-11-09 2003-06-05 Kandasamy Hariharan Immunoregulatory antibodies and uses thereof
EP1383800A4 (en) 2001-04-02 2004-09-22 Idec Pharma Corp RECOMBINANT ANTIBODIES CO-EXPRESSED WITH GNTIII
US20020197256A1 (en) 2001-04-02 2002-12-26 Genentech, Inc. Combination therapy
DE60229051D1 (de) 2001-04-30 2008-11-06 Lilly Co Eli Humanisierte antikörper
DE60230736D1 (de) 2001-04-30 2009-02-26 Lilly Co Eli HUMANISIERTE ANTIKÖRPER DIE DAS BETA-AMYLOID PEPTID ERKENNEN& x9;
DE10121982B4 (de) 2001-05-05 2008-01-24 Lts Lohmann Therapie-Systeme Ag Nanopartikel aus Protein mit gekoppeltem Apolipoprotein E zur Überwindung der Blut-Hirn-Schranke und Verfahren zu ihrer Herstellung
WO2003061694A1 (en) 2001-05-10 2003-07-31 Seattle Genetics, Inc. Immunosuppression of the humoral immune response by anti-cd20 antibodies
JP2005515161A (ja) 2001-06-14 2005-05-26 インターミューン インコーポレイテッド γ−インターフェロンおよびＢ細胞特異的抗体の併用療法
US7321026B2 (en) 2001-06-27 2008-01-22 Skytech Technology Limited Framework-patched immunoglobulins
US20030113316A1 (en) 2001-07-25 2003-06-19 Kaisheva Elizabet A. Stable lyophilized pharmaceutical formulation of IgG antibodies
NZ592087A (en) 2001-08-03 2012-11-30 Roche Glycart Ag Antibody glycosylation variants having increased antibody-dependent cellular cytotoxicity
EP1944040B1 (en) 2001-08-17 2012-08-01 Washington University Assay method for Alzheimer's disease
WO2003016466A2 (en) 2001-08-17 2003-02-27 Eli Lilly And Company ANTI-Aβ ANTIBODIES
EP2131198B1 (en) 2001-09-20 2013-03-27 Board of Regents, The University of Texas System Measuring circulating therapeutic antibody, antigen and antigen/antibody complexes using ELISA assays
AU2002337935B2 (en) 2001-10-25 2008-05-01 Genentech, Inc. Glycoprotein compositions
AR039067A1 (es) 2001-11-09 2005-02-09 Pfizer Prod Inc Anticuerpos para cd40
US20040093621A1 (en) 2001-12-25 2004-05-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Antibody composition which specifically binds to CD20
CA2476166C (en) 2002-02-14 2011-11-15 Immunomedics, Inc. Anti-cd20 antibodies and fusion proteins thereof and methods of use
AR038568A1 (es) 2002-02-20 2005-01-19 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-a beta y su uso
MY139983A (en) 2002-03-12 2009-11-30 Janssen Alzheimer Immunotherap Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
US20030180292A1 (en) 2002-03-14 2003-09-25 Idec Pharmaceuticals Treatment of B cell malignancies using anti-CD40L antibodies in combination with anti-CD20 antibodies and/or chemotherapeutics and radiotherapy
EP1498490A4 (en) 2002-04-09 2006-11-29 Kyowa Hakko Kogyo Kk PROCESS FOR PREPARING ANTIBODY COMPOSITION
ES2362419T3 (es) 2002-04-09 2011-07-05 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Células con depresión o deleción de la actividad de la proteína que participa en el transporte de gdp-fucosa.
WO2003085107A1 (fr) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cellules à génome modifié
EP1498491A4 (en) 2002-04-09 2006-12-13 Kyowa Hakko Kogyo Kk METHOD FOR INCREASING THE ACTIVITY OF AN ANTIBODY COMPOSITION FOR BINDING TO THE FC GAMMA RECEPTOR IIIA
AU2003236017B2 (en) 2002-04-09 2009-03-26 Kyowa Kirin Co., Ltd. Drug containing antibody composition
JP4832719B2 (ja) 2002-04-09 2011-12-07 協和発酵キリン株式会社 ＦｃγＲＩＩＩａ多型患者に適応する抗体組成物含有医薬
US20030219818A1 (en) 2002-05-10 2003-11-27 Bohen Sean P. Methods and compositions for determining neoplastic disease responsiveness to antibody therapy
US20050180972A1 (en) 2002-07-31 2005-08-18 Wahl Alan F. Anti-CD20 antibody-drug conjugates for the treatment of cancer and immune disorders
AR040778A1 (es) 2002-08-06 2005-04-20 Glaxo Group Ltd Anticuerpos alterados o fragmentos funcionales que se unen a mag (glicoproteina asociada a mielina).
ES2347144T3 (es) 2002-08-30 2010-10-26 Biorexis Pharmaceutical Corporation Proteinas de fusion de la transferrina modificada que comprenden dominos aino o carboxilo de transferrina duplicados.
BR0315157A (pt) 2002-10-09 2005-08-09 Rinat Neuroscience Corp Métodos de tratar doença de alzheimer empregando-se anticorpos direcionados contra peptìdeo beta amilóide e composições deste
US7361740B2 (en) 2002-10-15 2008-04-22 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
MXPA05004022A (es) 2002-10-17 2005-10-05 Genmab As Anticuerpos monoclonales humanos contra cd20.
JP4995423B2 (ja) 2002-12-03 2012-08-08 ブランシェット・ロックフェラー・ニューロサイエンスィズ・インスティテュート 物質を血液−脳関門を渡って輸送するための人工低密度リポタンパク質キャリア
PT1572744E (pt) 2002-12-16 2010-09-07 Genentech Inc Variantes de imunoglobulina e utilizações destas
DE10303974A1 (de) 2003-01-31 2004-08-05 Abbott Gmbh & Co. Kg Amyloid-β(1-42)-Oligomere, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung
NZ541760A (en) 2003-02-10 2008-09-26 To Bbb Holding B V Differentially expressed nucleic acids in the blood-brain barrier under inflammatory conditions
US7871607B2 (en) 2003-03-05 2011-01-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminoglycanases
US20060104968A1 (en) 2003-03-05 2006-05-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases
PL1610820T5 (pl) 2003-04-04 2014-01-31 Genentech Inc Preparaty zawierające wysokoskoncentrowane przeciwciała i białka
AR044388A1 (es) 2003-05-20 2005-09-07 Applied Molecular Evolution Moleculas de union a cd20
EP1688439A4 (en) 2003-10-08 2007-12-19 Kyowa Hakko Kogyo Kk HYBRID PROTEIN COMPOSITION
EP1705251A4 (en) 2003-10-09 2009-10-28 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd PROCESS FOR PRODUCING ANTIBODY COMPOSITION BY RNA INHIBITION OF FUNCTION OF $ G (A) 1,6-FUCOSYLTRANSFERASE
SG10202008722QA (en) 2003-11-05 2020-10-29 Roche Glycart Ag Cd20 antibodies with increased fc receptor binding affinity and effector function
BR122018071808B8 (pt) 2003-11-06 2020-06-30 Seattle Genetics Inc conjugado
EP1701979A2 (en) 2003-12-03 2006-09-20 Xencor, Inc. Optimized antibodies that target the epidermal growth factor receptor
WO2005053742A1 (ja) 2003-12-04 2005-06-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. 抗体組成物を含有する医薬
EP1697741A4 (en) 2003-12-04 2008-02-13 Xencor Inc PROCESS FOR PRODUCING PROTEIN VARIANTS WITH INCREASED HOST STRUCTURE CONTENT AND COMPOSITIONS THEREOF
EP1737890A2 (en) 2004-03-24 2007-01-03 Xencor, Inc. Immunoglobulin variants outside the fc region
JP5128935B2 (ja) 2004-03-31 2013-01-23 ジェネンテック， インコーポレイテッド ヒト化抗ＴＧＦ−β抗体
EP2360186B1 (en) 2004-04-13 2017-08-30 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-P-selectin antibodies
GB0412186D0 (en) 2004-05-28 2004-06-30 Univ Cambridge Tech Production of recombinant protein
CA2569692C (en) 2004-06-07 2015-07-21 Raven Biotechnologies, Inc. Transferrin receptor antibodies
TWI380996B (zh) 2004-09-17 2013-01-01 Hoffmann La Roche 抗ｏｘ４０ｌ抗體
CA2580141C (en) 2004-09-23 2013-12-10 Genentech, Inc. Cysteine engineered antibodies and conjugates
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
US7697967B2 (en) 2005-12-28 2010-04-13 Abbott Diabetes Care Inc. Method and apparatus for providing analyte sensor insertion
MX2007009091A (es) 2005-01-28 2008-01-11 Wyeth Corp Formulaciones de polipeptido liquidas estabilizadas.
GT200600031A (es) 2005-01-28 2006-08-29 Formulacion anticuerpo anti a beta
BRPI0611765B1 (pt) 2005-06-07 2022-09-27 Esbatech Ag Anticorpo ou fragmento de anticorpo estável e solúvel que se liga especificamente ao tnf-alfa seus usos e composição diagnóstica ou terapêutica
US8053569B2 (en) 2005-10-07 2011-11-08 Armagen Technologies, Inc. Nucleic acids encoding and methods of producing fusion proteins
WO2007059782A1 (en) 2005-11-28 2007-05-31 Genmab A/S Recombinant monovalent antibodies and methods for production thereof
NZ568241A (en) * 2005-12-12 2011-08-26 Hoffmann La Roche Antibodies against amyloid beta 4 with glycosylation in the variable region
DE102006013531A1 (de) 2006-03-24 2007-09-27 Lts Lohmann Therapie-Systeme Ag Polylactid-Nanopartikel
EP1998806A1 (en) 2006-03-28 2008-12-10 F. Hoffmann-Roche AG Anti-igf-1r human monoclonal antibody formulation
CA2656558A1 (en) 2006-06-30 2008-01-10 The Regents Of The University Of Michigan Method of producing factor viii proteins by recombinant methods
US8759297B2 (en) 2006-08-18 2014-06-24 Armagen Technologies, Inc. Genetically encoded multifunctional compositions bidirectionally transported between peripheral blood and the cns
EP2059530B1 (en) 2006-08-31 2012-08-29 F.Hoffmann-La Roche Ag Method for the production of insulin-like growth factor-i
US9382327B2 (en) 2006-10-10 2016-07-05 Vaccinex, Inc. Anti-CD20 antibodies and methods of use
MX2009006199A (es) 2006-12-11 2009-06-22 Hoffmann La Roche Formulacion parenteral de anticuerpos abeta.
US20080226635A1 (en) 2006-12-22 2008-09-18 Hans Koll Antibodies against insulin-like growth factor I receptor and uses thereof
US9745367B2 (en) 2007-03-23 2017-08-29 Novelmed Theraputics, Inc. Alternative pathway specific antibodies for treating arthritis
CN101674847A (zh) * 2007-05-02 2010-03-17 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 稳定蛋白质的方法
US8062864B2 (en) 2007-05-21 2011-11-22 Alderbio Holdings Llc Nucleic acids encoding antibodies to IL-6, and recombinant production of anti-IL-6 antibodies
MY147651A (en) 2007-07-31 2012-12-31 Regeneron Pharma Human antibodies to human cd20 and method of using thereof
EP2195341B1 (en) 2007-09-26 2017-03-22 UCB Biopharma SPRL Dual specificity antibody fusions
US20090162359A1 (en) 2007-12-21 2009-06-25 Christian Klein Bivalent, bispecific antibodies
US8759066B2 (en) 2008-04-07 2014-06-24 Zymogenetics, Inc. Thrombin activator compositions and methods of making and using the same
US20090297439A1 (en) 2008-06-02 2009-12-03 Metheresis Translational Research Sa, Anti-met monoclonal antibody, fragments and derivatives thereof for use in tumor diagnosis, corresponding compositions and kits
CN102159126A (zh) 2008-07-21 2011-08-17 阿尔斯塔西斯公司 在组织中形成管道的装置、方法和成套用具
US20100077498A1 (en) * 2008-09-11 2010-03-25 Pardridge William M Compositions and methods for blood-brain barrier delivery in the mouse
AR073295A1 (es) 2008-09-16 2010-10-28 Genentech Inc Metodos para tratar la esclerosis multiple progresiva. articulo de fabricacion.
CN102164960A (zh) 2008-09-26 2011-08-24 罗氏格黎卡特股份公司 双特异性抗-egfr/抗-igf-1r抗体
US20130090457A1 (en) 2008-10-31 2013-04-11 Janssen Biotech, Inc. Toll-Like Receptor 3 Antagonists for the Treatment of Metabolic and Cardiovascular Diseases
US8323649B2 (en) 2008-11-25 2012-12-04 Alderbio Holdings Llc Antibodies to IL-6 and use thereof
BRPI1013688A8 (pt) 2009-03-05 2017-02-14 Abbott Lab Proteínas de ligação de il-17.
RU2598248C2 (ru) 2009-04-02 2016-09-20 Роше Гликарт Аг Полиспецифичные антитела, включающие антитела полной длины и одноцепочечные фрагменты fab
WO2010115553A1 (en) 2009-04-07 2010-10-14 Roche Glycart Ag Bispecific anti-erbb-2/anti-c-met antibodies
US9775921B2 (en) 2009-11-24 2017-10-03 Alderbio Holdings Llc Subcutaneously administrable composition containing anti-IL-6 antibody
WO2011066374A2 (en) 2009-11-24 2011-06-03 Alder Biopharmaceuticals, Inc. Antagonists of il-6 to prevent or treat cachexia, weakness, fatigue, and/or fever
FR2953841B1 (fr) 2009-12-16 2011-12-30 Centre Nat Rech Scient Anticorps diriges contre le recepteur de la transferrine et leurs utilisations pour l'immunotherapie des tumeurs qui dependent du fer
WO2011116387A1 (en) 2010-03-19 2011-09-22 Tetragenetics, Inc. Production of aglycosylated monoclonal antibodies in ciliates
RU2439160C1 (ru) 2010-06-25 2012-01-10 Государственное общеобразовательное учреждение высшего профессионального образования "Российский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" (ГОУ ВПО РГМУ Росздрава) Способ получения моноклональных антител к аблюминальному мембранному антигену церебральных эндотелиоцитов
JP2013537415A (ja) 2010-08-03 2013-10-03 アッヴィ・インコーポレイテッド 二重可変ドメイン免疫グロブリンおよびその使用
PT2646470T (pt) 2010-11-30 2017-05-03 Hoffmann La Roche Anticorpos anti-recetor da transferrina de baixa afinidade e a sua utilização na transferência de scfv terapêuticos através da barreira hematoencefálica
US9783602B2 (en) 2010-12-01 2017-10-10 Alderbio Holdings Llc Anti-NGF compositions and use thereof
WO2012087835A2 (en) 2010-12-22 2012-06-28 Boston Biomedical Research Institute Compositions and methods for enhancing protein folding
EP2661449B1 (en) 2011-01-06 2017-03-22 Glaxo Group Limited Ligands that bind tgf-beta receptor ii
WO2012096924A1 (en) 2011-01-10 2012-07-19 Glaxo Group Limited Novel uses
JP6101638B2 (ja) 2011-03-03 2017-03-22 ザイムワークス，インコーポレイテッド 多価ヘテロマルチマー足場設計及び構築物
HUE041335T2 (hu) 2011-03-29 2019-05-28 Roche Glycart Ag Antitest FC-variánsok
BR112013026423A2 (pt) 2011-04-20 2016-11-29 Roche Glycart Ag método e construtos para a passagem de pendente do ph da barreira sangue-cérebro
US9598496B2 (en) 2011-05-09 2017-03-21 Perseus Proteomics Inc. Antibody capable of specifically recognizing transferrin receptor
US9738707B2 (en) 2011-07-15 2017-08-22 Biogen Ma Inc. Heterodimeric Fc regions, binding molecules comprising same, and methods relating thereto
KR20140057326A (ko) 2011-08-17 2014-05-12 제넨테크, 인크. 뉴레귤린 항체 및 그의 용도
PE20141521A1 (es) 2011-08-23 2014-10-25 Roche Glycart Ag Moleculas biespecificas de union a antigeno activadoras de celulas t
EP2748202B1 (en) * 2011-08-23 2018-07-04 Roche Glycart AG Bispecific antigen binding molecules
CA2855955A1 (en) 2011-09-12 2013-03-21 Janssen Biotech, Inc. Toll-like receptor 3 antagonists
SG11201400193SA (en) 2011-09-16 2014-05-29 Ucb Pharma Sa Neutralising antibodies to the major exotoxins tcda and tcdb of clostridium difficile
US11851476B2 (en) 2011-10-31 2023-12-26 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule having regulated conjugation between heavy-chain and light-chain
SI2785375T1 (sl) 2011-11-28 2020-11-30 Merck Patent Gmbh Protitelesa proti PD-L1 in uporabe le-teh
TW201333040A (zh) 2012-01-06 2013-08-16 Bioalliance Cv 抗－輸鐵蛋白受器之抗體及其使用方法
CN104379601B (zh) 2012-02-03 2021-04-09 霍夫曼-拉罗奇有限公司 双特异性抗体分子和抗原-转染的t-细胞以及它们在医药中的用途
CA2862820A1 (en) 2012-02-29 2013-09-06 F. Hoffmann-La Roche Ag On-column enzymatic cleavage
RU2014140137A (ru) 2012-03-08 2016-04-27 Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг Лекарственный препарат антитела к бета-амилоиду
JP6007310B2 (ja) 2012-04-05 2016-10-12 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ヒトｔｗｅａｋ及びヒトｉｌ１７に対する二重特異性抗体並びにその使用
AU2013266611B2 (en) 2012-05-21 2016-08-11 Genentech, Inc. Methods for improving safety of blood-brain barrier transport
EP2668901A1 (en) 2012-05-31 2013-12-04 Roche Diagniostics GmbH Sensor insertion assembly, sensor cartridge, and inserter
US9382329B2 (en) 2012-08-14 2016-07-05 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Disease therapy by inducing immune response to Trop-2 expressing cells
KR102158467B1 (ko) 2012-09-07 2020-09-25 제넨테크, 인크. Ｉｉ형 항-ｃｄ20 항체와 선택적 ｂｃｌ-2 억제제와의 병용 치료요법
JOP20200236A1 (ar) 2012-09-21 2017-06-16 Regeneron Pharma الأجسام المضادة لمضاد cd3 وجزيئات ربط الأنتيجين ثنائية التحديد التي تربط cd3 وcd20 واستخداماتها
EP2906596B1 (en) * 2012-10-12 2023-12-27 Arizona Board of Regents on behalf of Arizona State University Antibody based reagents that specifically recognize toxic oligomeric forms of tau
UY35148A (es) 2012-11-21 2014-05-30 Amgen Inc Immunoglobulinas heterodiméricas
CA3206122A1 (en) 2012-11-28 2014-06-05 Zymeworks Bc Inc. Engineered immunoglobulin heavy chain-light chain pairs and uses thereof
CA2890455A1 (en) 2012-12-04 2014-06-12 Abbvie, Inc. Blood-brain barrier (bbb) penetrating dual specific binding proteins
JP6499087B2 (ja) 2013-02-26 2019-04-10 ロシュ グリクアート アーゲー 二重特異性ｔ細胞活性化抗原結合分子
WO2014131711A1 (en) 2013-02-26 2014-09-04 Roche Glycart Ag Bispecific t cell activating antigen binding molecules
US9732150B2 (en) 2013-03-14 2017-08-15 Alderbio Holdings Llc Therapeutic use of antibodies to HGF
UY35457A (es) 2013-03-14 2014-10-31 Bayer Healthcare Llc ANTICUERPOS MONOCLONALES CONTRA ANTITROMBINA ß
WO2014153114A1 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Fred Hutchinson Cancer Research Center Compositions and methods to modify cells for therapeutic objectives
US9481725B2 (en) 2013-03-14 2016-11-01 Alderbio Holdings, Llc Antibodies to HGF and compositions containing
DE102013208865A1 (de) 2013-05-14 2014-11-20 Beiersdorf Ag Stabilisierte Zubereitungen mit einem Gehalt an Ascorbinsäure und Phosphationen
SG11201600807YA (en) * 2013-08-02 2016-03-30 Hoffmann La Roche Therapeutic fusion protein
JP6422956B2 (ja) 2013-10-11 2018-11-14 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 多重特異性ドメイン交換共通可変軽鎖抗体
SG11201603244VA (en) 2013-11-04 2016-05-30 Glenmark Pharmaceuticals Sa Production of t cell retargeting hetero-dimeric immunoglobulins
NZ718792A (en) 2013-11-07 2020-05-29 Hoffmann La Roche Combination therapy of an anti cd20 antibody with a btk inhibitor
EP3071597B1 (en) 2013-11-21 2020-07-29 F.Hoffmann-La Roche Ag Anti-alpha-synuclein antibodies and methods of use
DK3736292T3 (da) 2013-12-17 2024-07-22 Genentech Inc Anti-CD3-antistoffer og fremgangsmåder til anvendelse
RU2711322C1 (ru) 2013-12-20 2020-01-16 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Улучшенные способы получения рекомбинантного полипептида
EP3851452A1 (en) 2014-01-06 2021-07-21 F. Hoffmann-La Roche AG Monovalent blood brain barrier shuttle modules
US9629801B2 (en) * 2014-01-10 2017-04-25 Wisconsin Alumni Research Foundation Blood-brain barrier targeting antibodies
UA117289C2 (uk) * 2014-04-02 2018-07-10 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Мультиспецифічне антитіло
PL3177643T3 (pl) 2014-08-04 2019-09-30 F.Hoffmann-La Roche Ag Dwuswoiste cząsteczki wiążące antygen aktywujące komórki T
CN110894240B (zh) 2014-11-26 2022-04-15 森科股份有限公司 结合cd3和肿瘤抗原的异二聚体抗体
US20160297581A1 (en) 2015-04-13 2016-10-13 Aplix Inc Closable container
KR20180020277A (ko) 2015-06-24 2018-02-27 제이씨알 파마 가부시키가이샤 혈액뇌관문을 통과하는 항인간 트랜스페린 수용체 항체
HUE057952T2 (hu) 2015-06-24 2022-06-28 Hoffmann La Roche Anti-transzferrin receptor antitestek testreszabott affinitással
EP3313890A1 (en) 2015-06-24 2018-05-02 H. Hoffnabb-La Roche Ag Trispecific antibodies specific for her2 and a blood brain barrier receptor and methods of use
AR106189A1 (es) 2015-10-02 2017-12-20 Hoffmann La Roche ANTICUERPOS BIESPECÍFICOS CONTRA EL A-b HUMANO Y EL RECEPTOR DE TRANSFERRINA HUMANO Y MÉTODOS DE USO
JP6657392B2 (ja) 2015-10-02 2020-03-04 エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 二重特異性抗ヒトｃｄ２０／ヒトトランスフェリン受容体抗体及び使用方法
JP2017187722A (ja) 2016-04-08 2017-10-12 株式会社リコー 画像濃度検出装置及び画像形成装置
NZ756132A (en) 2017-03-10 2022-02-25 Hoffmann La Roche Method for producing multispecific antibodies

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102933601A (zh) * 2010-04-15 2013-02-13 雅培制药有限公司 β淀粉样蛋白结合蛋白
WO2014033074A1 (en) * 2012-08-29 2014-03-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Blood brain barrier shuttle
WO2014189973A2 (en) * 2013-05-20 2014-11-27 Genentech, Inc. Anti-transferrin receptor antibodies and methods of use

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
WILLIAM M PARDRIDGE: "Blood--brain barrier drug delivery of IgG fusion proteins with a transferrin receptor monoclonal antibody", 《INFORMA HEALTHCARE》, vol. 12, no. 2, pages 207 - 222, XP009183494, DOI: 10.1517/17425247.2014.952627 *

Also Published As

Publication number Publication date
AU2016333510A1 (en) 2018-03-22
AR106189A1 (es) 2017-12-20
TW202128750A (zh) 2021-08-01
IL257772B1 (en) 2024-09-01
US20210301030A1 (en) 2021-09-30
JP2022116158A (ja) 2022-08-09
MA43022A (fr) 2018-08-08
CN114044829B (zh) 2024-08-30
TW202130663A (zh) 2021-08-16
PH12018500709A1 (en) 2018-10-15
IL257772A (en) 2018-04-30
MY194328A (en) 2022-11-28
JP7005487B2 (ja) 2022-02-04
UA126652C2 (uk) 2023-01-11
NZ740980A (en) 2024-01-26
AU2022271490A1 (en) 2022-12-22
IL314744A (en) 2024-10-01
HK1255464A1 (zh) 2019-08-16
MX2018003450A (es) 2018-06-06
TWI780680B (zh) 2022-10-11
CA3000560A1 (en) 2017-04-06
KR20180054865A (ko) 2018-05-24
NZ779858A (en) 2024-08-30
TW201718639A (zh) 2017-06-01
PE20181005A1 (es) 2018-06-26
IL305281A (en) 2023-10-01
US20230365702A1 (en) 2023-11-16
CN113827719A (zh) 2021-12-24
US20180222992A1 (en) 2018-08-09
US10941205B2 (en) 2021-03-09
BR112018004733A2 (pt) 2018-09-25
US20220144963A9 (en) 2022-05-12
MX2022014764A (es) 2023-01-11
CN108137678A (zh) 2018-06-08
WO2017055540A1 (en) 2017-04-06
CN108137678B (zh) 2021-10-15
JP2018535936A (ja) 2018-12-06
US11787868B2 (en) 2023-10-17
PE20211594A1 (es) 2021-08-18
MX2022014761A (es) 2023-01-11
RU2730682C1 (ru) 2020-08-24
JP2020158485A (ja) 2020-10-01
TWI780679B (zh) 2022-10-11
CN113846104A (zh) 2021-12-28
NZ779866A (en) 2024-08-30
AU2016333510B2 (en) 2022-08-25
MX2022014762A (es) 2023-01-11
CL2018000729A1 (es) 2019-04-26
CO2018002360A2 (es) 2018-05-10
EP3356400A1 (en) 2018-08-08
CR20180150A (es) 2018-04-05
TWI723050B (zh) 2021-04-01
JP7530935B2 (ja) 2024-08-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108137678B (zh) 双特异性抗人A-β/人转铁蛋白受体抗体及使用方法
JP7509956B2 (ja) 二重特異性抗ヒトｃｄ２０／ヒトトランスフェリン受容体抗体及び使用方法
JP6618893B2 (ja) Ｆｃ受容体結合が変更された非対称抗体および使用方法
JP2018197264A (ja) ヒトＦｃＲｎ結合改変抗体及び使用方法
TW201731875A (zh) 人類化抗人類cd19抗體及使用方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 40059970

Country of ref document: HK

GR01 Patent grant
GR01 Patent grant