KR20180020277A - 혈액뇌관문을 통과하는 항인간 트랜스페린 수용체 항체 - Google Patents

혈액뇌관문을 통과하는 항인간 트랜스페린 수용체 항체 Download PDF

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KR20180020277A
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히로유키 소노다
겐이치 다카하시
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제이씨알 파마 가부시키가이샤
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Abstract

생리 활성 또는 약리 활성을 가지고 혈액뇌관문을 통과할 수 없는 물질을 혈액뇌관문 통과 가능한 형태로 개변하기 위해서 사용할 수 있는 수단, 및 이것에 의한 개변 물질이 개시되어 있다. 당해 수단은, 항인간 트랜스페린 수용체 항체이며, 당해 개변 물질은, 생리 활성 단백질 또는 약리 활성 저분자 화합물과 항인간 트랜스페린 수용체 항체의 분자적 결합체이다.

Description

혈액뇌관문을 통과하는 항인간 트랜스페린 수용체 항체
본 발명은, 혈중에 투여하여 중추 신경계(CNS)에 있어서 기능시켜야 할 화합물(단백질, 저분자 화합물 등)이 혈액뇌관문을 통과할 수 있도록 하기 위해서, 그들 화합물과 결합시켜 이용하는 항인간 트랜스페린 수용체 항체, 그의 제조법 및 그의 사용법에 관한 것이다.
뇌실 주위 기관(송과체, 뇌하수체, 최후야 등)을 포함하는 몇 개의 영역을 제외하고 뇌의 대부분의 조직에 혈액을 공급하는 모세혈관은, 근육 등 그 외의 조직에 존재하는 모세혈관과 달리, 그 내피를 형성하고 있는 내피 세포끼리가 강고한 세포간 접합에 의해 서로 밀착하여 합쳐져 있다. 그 때문에, 혈액으로부터 뇌로의 물질의 수동 수송이 방해되고, 예외는 있지만, 지용성이 높은 물질, 또는 분자량이 작고(200∼500달톤 이하) 또한 생리 pH 부근에 있어서 전기적으로 중성인 물질 이외, 모세혈관으로부터 뇌로 이행하기 어렵다. 이와 같은, 뇌내의 모세혈관 내피를 개재한, 혈액과 뇌의 조직액 사이에서의 물질 교환을 제한하는 기구는, 혈액뇌관문(Blood-Brain Barrier, BBB)으로 불리고 있다. 또한, 혈액뇌관문은, 뇌뿐만 아니라, 뇌 및 척수를 포함하는 중추 신경계의 조직액과 혈액 사이의 물질 교환도 제한하고 있다.
혈액뇌관문의 존재에 의해, 중추 신경계의 세포의 대부분은, 혈중의 호르몬, 림포카인 등의 물질의 농도 변동의 영향을 받지 않고, 그 생화학적인 항상성이 유지된다.
그렇지만, 혈액뇌관문의 존재는, 약제 개발상에서 문제를 제기한다. 예를 들어, α-L-이두로니다제의 결손에 기인하는 유전성 대사 질환인 무코 다당증 I형(헐러 증후군)에 대해서는, 재조합 α-L-이두로니다제를 정맥내 보충하는 효소 보충 요법이, 그 치료법으로서 행해지고 있지만, 헐러 증후군에 있어서 확인되는 현저한 중추 신경계(CNS)의 이상에 대해서는, 효소가 혈액뇌관문을 통과할 수 없으므로 유효하지 않다.
중추 신경계에 있어서 작용시켜야 할 그와 같은 단백질 등의 고분자 물질에 혈액뇌관문을 통과시키기 위한 방법이, 여러 가지 개발되고 있다. 예를 들어, 신경 성장 인자의 경우, 이것을 내포시킨 리포솜을 뇌내 모세혈관 내피 세포의 세포막과 융합시키는 것에 의해, 혈액뇌관문을 통과시키는 방법이 시도되고 있지만, 실용화에 이르지 않았다(비특허문헌 1). α-L-이두로니다제의 경우, 1회당에 투여되는 효소의 양을 증가시켜 그 혈중 농도를 높이는 것에 의해, 혈액뇌관문에 있어서의 효소의 수동 수송을 높이는 시도가 행해지고, 헐러 증후군의 동물 모델을 이용하여, 이 수법에 의해 중추 신경계(CNS)의 이상이 완해됨이 나타나 있다(비특허문헌 2).
또한, 혈액뇌관문을 회피하여, 고분자 물질을 수강내 또는 뇌내에 직접 투여하는 시도도 행해지고 있다. 예를 들어, 헐러 증후군(무코 다당증 I형)의 환자의 수강내에 인간 α-L-이두로니다제를 투여하는 방법(특허문헌 1), 니만-픽병의 환자의 뇌실내에 인간 산 스핑고미엘리나제를 투여하는 방법(특허문헌 2), 헌터 증후군의 모델 동물의 뇌실내에 이두론산 2-설파타제(I2S)를 투여하는 방법(특허문헌 3)이 보고되어 있다. 이와 같은 수법에 의하면, 확실히 중추 신경계에 약제를 작용시킬 수 있다고 생각되는 한편, 침습성이 극도로 높다고 하는 문제가 있다.
혈액뇌관문을 통해 고분자 물질을 뇌내에 도달시키는 방법으로서, 뇌내 모세혈관 내피 세포 상에 존재하는 막단백질과 친화성을 가지도록 고분자 물질을 수식하는 방법이 여러 가지 보고되어 있다. 뇌내 모세혈관 내피 세포 상에 존재하는 막단백질로서는, 인슐린, 트랜스페린, 인슐린양(樣) 성장 인자(IGF-I, IGF-II), LDL, 렙틴 등의 화합물에 대한 수용체를 들 수 있다.
예를 들어, 신경 성장 인자(NGF)를 인슐린과의 융합 단백질의 형태로 합성하고, 인슐린 수용체와의 결합을 개재하여 이 융합 단백질에 혈액뇌관문을 통과시키는 기술이 보고되어 있다(특허문헌 4∼6). 또한, 신경 성장 인자(NGF)를 항인슐린 수용체 항체와의 융합 단백질의 형태로 합성하고, 인슐린 수용체와의 결합을 개재하여 이 융합 단백질에 혈액뇌관문을 통과시키는 기술이 보고되어 있다(특허문헌 4및 7). 또한, 신경 성장 인자(NGF)를 트랜스페린과의 융합 단백질의 형태로 합성하고, 트랜스페린 수용체(TfR)와의 결합을 개재하여 이 융합 단백질에 혈액뇌관문을 통과시키는 기술이 보고되어 있다(특허문헌 8). 또한, 신경 성장 인자(NGF)를 항트랜스페린 수용체 항체(항TfR 항체)와의 융합 단백질의 형태로 합성하고, TfR과의 결합을 개재하여 이 융합 단백질에 혈액뇌관문을 통과시키는 기술이 보고되어 있다(특허문헌 4 및 9).
항TfR 항체를 이용한 기술에 대해 더 보면, 항TfR 항체와 결합시키는 것에 의해 약제에 혈액뇌관문을 통과시키는 기술에 있어서, 1본쇄 항체를 사용할 수 있음이 보고되어 있다(비특허문헌 3). 또한, hTfR과의 해리 상수가 비교적 큰 항hTfR 항체(저친화성 항hTfR 항체)가, 약제로 하여금 혈액뇌관문을 통과시키는 기술에 있어서, 적합하게 이용할 수 있음이 보고되어 있다(특허문헌 10 및 11, 비특허문헌 4). 더욱이, hTfR과의 친화성이 pH 의존적으로 변화하는 항TfR 항체가, 약제에 혈액뇌관문을 통과시키기 위해서 캐리어로서 사용할 수 있음이 보고되어 있다(특허문헌 12, 비특허문헌 5).
일본 특허공표 2007-504166호 공보 일본 특허공표 2009-525963호 공보 일본 특허공개 2012-62312호 공보 미국 특허 5154924호 공보 일본 특허공개 2011-144178호 공보 미국 특허 2004/0101904호 공보 일본 특허공표 2006-511516호 공보 일본 특허공개 H06-228199호 공보 미국 특허 5977307호 공보 WO2012/075037 WO2013/177062 WO2012/143379
Xie Y. et al., J Control Release. 105. 106-19(2005) Ou L. et al., Mol Genet Metab. 111. 116-22(2014) Li JY. Protein Engineering. 12. 787-96(1999) Bien-Ly N. et al., J Exp Med. 211. 233-44(2014) Sada H. PLoS ONE. 9. E96340(2014)
상기 배경하에서, 본 발명의 목적은, 혈중에 투여하여 중추 신경계에 있어서 기능시켜야 할 화합물(단백질, 저분자 화합물 등)이 혈액뇌관문을 통과할 수 있도록 하기 위해서, 그들 화합물과 결합시켜 이용할 수 있는 항TfR 항체, 그의 제조법 및 사용법을 제공하는 것이다.
상기 목적을 향한 연구에 있어서, 본 발명자들은, 예의 검토를 거듭한 결과, 본 명세서에 있어서 상술하는 항체 제작법에 의해 얻은, hTfR의 세포외 영역을 인식하는 항인간 트랜스페린 수용체 항체(항hTfR 항체)가, 이것을 생체내에 투여했을 때 효율적으로 혈액뇌관문을 통과한다는 것을 발견하여, 본 발명을 완성했다. 즉, 본 발명은 이하를 제공한다.
1. 항인간 트랜스페린 수용체 항체로서, 해당 항체의 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열이, 이하의 (1)∼(14)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것인, 항체:
(1) CDR1에 서열 번호 6 또는 서열 번호 7의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 8 또는 서열 번호 9의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Trp-Thr-Ser을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 아미노산 서열;
(2) CDR1에 서열 번호 11 또는 서열 번호 12의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 13 또는 서열 번호 14의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Tyr-Ala-Ser을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 아미노산 서열;
(3) CDR1에 서열 번호 16 또는 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 18 또는 서열 번호 19의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Lys-Val-Ser을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 아미노산 서열;
(4) CDR1에 서열 번호 21 또는 서열 번호 22의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 23 또는 서열 번호 24의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Asp-Thr-Ser을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 아미노산 서열;
(5) CDR1에 서열 번호 26 또는 서열 번호 27의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 28 또는 서열 번호 29의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Asp-Thr-Ser을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 아미노산 서열;
(6) CDR1에 서열 번호 31 또는 서열 번호 32의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 33 또는 서열 번호 34의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Ala-Ala-Ser을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 아미노산 서열;
(7) CDR1에 서열 번호 36 또는 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 38 또는 서열 번호 39의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Gln-Thr-Ser을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 40의 아미노산 서열을 포함하는, 아미노산 서열;
(8) CDR1에 서열 번호 41 또는 서열 번호 42의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 43 또는 서열 번호 44의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Gly-Thr-Ser을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 45의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 아미노산 서열;
(9) CDR1에 서열 번호 46 또는 서열 번호 47의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 48 또는 서열 번호 49의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Phe-Thr-Ser을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 아미노산 서열;
(10) CDR1에 서열 번호 51 또는 서열 번호 52의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 53 또는 서열 번호 54의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Ala-Ala-Ser을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 55의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 아미노산 서열;
(11) CDR1에 서열 번호 56 또는 서열 번호 57의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 58 또는 서열 번호 59의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Tyr-Ala-Ser을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 60의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 아미노산 서열;
(12) CDR1에 서열 번호 61 또는 서열 번호 62의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 63 또는 서열 번호 64의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Trp-Ser-Ser을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 아미노산 서열;
(13) CDR1에 서열 번호 66 또는 서열 번호 67의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 68 또는 서열 번호 69의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Tyr-Ala-Ser을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 70의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 아미노산 서열;
(14) CDR1에 서열 번호 71 또는 서열 번호 72의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 73 또는 서열 번호 74의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Asp-Thr-Ser을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 75의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 아미노산 서열;
2. 상기 1의 항인간 트랜스페린 수용체 항체로서, 해당 항체의 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열이, 이하의 (1)∼(14)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것인, 항체:
(1) CDR1에 서열 번호 6의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 8의 아미노산 서열을, 또한 CDR3에 서열 번호 10의 아미노산 서열을, 각각 포함하는 것인, 아미노산 서열;
(2) CDR1에 서열 번호 11의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 13의 아미노산 서열을, 또한 CDR3에 서열 번호 15의 아미노산 서열을, 각각 포함하는 것인, 아미노산 서열;
(3) CDR1에 서열 번호 16의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 18의 아미노산 서열을, 또한 CDR3에 서열 번호 20의 아미노산 서열을, 각각 포함하는 것인, 아미노산 서열;
(4) CDR1에 서열 번호 21의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 23의 아미노산 서열을, 또한 CDR3에 서열 번호 25의 아미노산 서열을, 각각 포함하는 것인, 아미노산 서열;
(5) CDR1에 서열 번호 26의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 28의 아미노산 서열을, 또한 CDR3에 서열 번호 30의 아미노산 서열을, 각각 포함하는 것인, 아미노산 서열;
(6) CDR1에 서열 번호 31의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 33의 아미노산 서열을, 또한 CDR3에 서열 번호 35의 아미노산 서열을, 각각 포함하는, 아미노산 서열;
(7) CDR1에 서열 번호 36의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 38의 아미노산 서열을, 또한 CDR3에 서열 번호 40의 아미노산 서열을, 각각 포함하는 것인, 아미노산 서열;
(8) CDR1에 서열 번호 41의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 43의 아미노산 서열을, 또한 CDR3에 서열 번호 45의 아미노산 서열을, 각각 포함하는 것인, 아미노산 서열;
(9) CDR1에 서열 번호 46의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 48의 아미노산 서열을, 또한 CDR3에 서열 번호 50의 아미노산 서열을, 각각 포함하는 것인, 아미노산 서열;
(10) CDR1에 서열 번호 51의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 53의 아미노산 서열을, 또한 CDR3에 서열 번호 55의 아미노산 서열을, 각각 포함하는 것인, 아미노산 서열;
(11) CDR1에 서열 번호 56의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 58의 아미노산 서열을, 또한 CDR3에 서열 번호 60의 아미노산 서열을, 각각 포함하는 것인, 아미노산 서열;
(12) CDR1에 서열 번호 61의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 63의 아미노산 서열을, 또한 CDR3에 서열 번호 65의 아미노산 서열을, 각각 포함하는 것인, 아미노산 서열;
(13) CDR1에 서열 번호 66의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 68의 아미노산 서열을, 또한 CDR3에 서열 번호 70의 아미노산 서열을, 각각 포함하는 것인, 아미노산 서열; 및
(14) CDR1에 서열 번호 71의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 73의 아미노산 서열을, 또한 CDR3에 서열 번호 75의 아미노산 서열을, 각각 포함하는 것인, 아미노산 서열.
3. 경쇄의 가변 영역의 CDR1, CDR2 및 CDR3의 각 아미노산 서열이, 상기 1 또는 2의 어느 하나의 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3의 각 아미노산 서열과 각각 80% 이상의 상동성을 가지는 것인, 항인간 트랜스페린 수용체 항체.
4. 경쇄의 가변 영역의 CDR1, CDR2 및 CDR3의 각 아미노산 서열이, 상기 1 또는 2의 어느 하나의 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3의 각 아미노산 서열과 각각 90% 이상의 상동성을 가지는 것인, 항인간 트랜스페린 수용체 항체.
5. 상기 1 또는 2의 어느 하나의 경쇄의 CDR 중 적어도 1개에 있어서, 이것을 구성하는 아미노산 서열 중 1∼5개의 아미노산이 치환, 결실 또는 부가된 것인, 항인간 트랜스페린 수용체 항체.
6. 상기 1 또는 2의 어느 하나의 경쇄의 CDR 중 적어도 1개에 있어서, 이것을 구성하는 아미노산 서열 중 1∼3개의 아미노산이 치환, 결실 또는 부가된 것인, 항인간 트랜스페린 수용체 항체.
7. 항인간 트랜스페린 수용체 항체로서, 해당 항체의 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열이, 이하의 (1)∼(14)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것인, 항체:
(1) CDR1에 서열 번호 76 또는 서열 번호 77의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 78 또는 서열 번호 79의 아미노산 서열을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 80 또는 서열 번호 81의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 아미노산 서열;
(2) CDR1에 서열 번호 82 또는 서열 번호 83의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 84 또는 서열 번호 85의 아미노산 서열을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 86 또는 서열 번호 87의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 아미노산 서열;
(3) CDR1에 서열 번호 88 또는 서열 번호 89의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 90 또는 서열 번호 91의 아미노산 서열을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 92 또는 서열 번호 93의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 아미노산 서열;
(4) CDR1에 서열 번호 94 또는 서열 번호 95의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 96 또는 서열 번호 97의 아미노산 서열을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 98 또는 서열 번호 99의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 아미노산 서열;
(5) CDR1에 서열 번호 100 또는 서열 번호 101의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 102 또는 서열 번호 103의 아미노산 서열을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 104 또는 서열 번호 105의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 아미노산 서열;
(6) CDR1에 서열 번호 106 또는 서열 번호 107의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 108의 아미노산 서열 또는 서열 번호 278의 아미노산 서열을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 109 또는 서열 번호 110의 아미노산 서열을 포함하는 것인 아미노산 서열;
(7) CDR1에 서열 번호 111 또는 서열 번호 112의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 113 또는 서열 번호 114의 아미노산 서열을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 115 또는 서열 번호 116의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 아미노산 서열;
(8) CDR1에 서열 번호 117 또는 서열 번호 118의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 119의 아미노산 서열 또는 서열 번호 279의 아미노산 서열을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 120 또는 서열 번호 121의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 아미노산 서열;
(9) CDR1에 서열 번호 122 또는 서열 번호 123의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 124 또는 서열 번호 125의 아미노산 서열을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 126 또는 서열 번호 127의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 아미노산 서열;
(10) CDR1에 서열 번호 128 또는 서열 번호 129의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 130 또는 서열 번호 131의 아미노산 서열을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 132 또는 서열 번호 133의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 아미노산 서열;
(11) CDR1에 서열 번호 134 또는 서열 번호 135의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 136 또는 서열 번호 137의 아미노산 서열을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 138 또는 서열 번호 139의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 아미노산 서열;
(12) CDR1에 서열 번호 140 또는 서열 번호 141의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 142 또는 서열 번호 143의 아미노산 서열을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 144 또는 서열 번호 145의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 아미노산 서열;
(13) CDR1에 서열 번호 146 또는 서열 번호 147의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 148 또는 서열 번호 149의 아미노산 서열을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 150 또는 서열 번호 151의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 아미노산 서열; 및
(14) CDR1이 서열 번호 152 또는 서열 번호 153의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2가 서열 번호 154 또는 서열 번호 155의 아미노산 서열을 포함하고, 또한 CDR3이 서열 번호 156 또는 서열 번호 157의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 아미노산 서열.
8. 상기 7의 항인간 트랜스페린 수용체 항체로서, 해당 항체의 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열이, 이하의 (1)∼(14)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것인, 항체:
(1) CDR1에 서열 번호 76의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 78의 아미노산 서열을, 및 CDR3에 서열 번호 80의 아미노산 서열을, 각각 포함하는 것인, 아미노산 서열;
(2) CDR1에 서열 번호 82의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 84의 아미노산 서열을, 및 CDR3에 서열 번호 86의 아미노산 서열을, 각각 포함하는 것인, 아미노산 서열;
(3) CDR1에 서열 번호 88의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 90의 아미노산 서열을, 및 CDR3에 서열 번호 92의 아미노산 서열을, 각각 포함하는 것인, 아미노산 서열;
(4) CDR1에 서열 번호 94의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 96의 아미노산 서열을, 및 CDR3에 서열 번호 98의 아미노산 서열을, 각각 포함하는 것인, 아미노산 서열;
(5) CDR1에 서열 번호 100의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 102의 아미노산 서열을, 및 CDR3에 서열 번호 104의 아미노산 서열을, 각각 포함하는 것인, 아미노산 서열;
(6) CDR1에 서열 번호 106의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 108의 아미노산 서열을, 및 CDR3에 서열 번호 109의 아미노산 서열을, 각각 포함하는 것인, 아미노산 서열;
(7) CDR1에 서열 번호 111의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 113의 아미노산 서열을, 및 CDR3에 서열 번호 115의 아미노산 서열을, 각각 포함하는 것인, 아미노산 서열;
(8) CDR1에 서열 번호 117의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 119의 아미노산 서열을, 및 CDR3에 서열 번호 120의 아미노산 서열을, 각각 포함하는 것인, 아미노산 서열;
(9) CDR1에 서열 번호 122의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 124의 아미노산 서열을, 및 CDR3에 서열 번호 126의 아미노산 서열을, 각각 포함하는 것인, 아미노산 서열;
(10) CDR1에 서열 번호 128의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 130의 아미노산 서열을, 및 CDR3에 서열 번호 132의 아미노산 서열을, 각각 포함하는 것인, 아미노산 서열;
(11) CDR1에 서열 번호 134의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 136의 아미노산 서열을, 및 CDR3에 서열 번호 138의 아미노산 서열을, 각각 포함하는 것인, 아미노산 서열;
(12) CDR1에 서열 번호 140의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 142의 아미노산 서열을, 및 CDR3에 서열 번호 144의 아미노산 서열을, 각각 포함하는 것인, 아미노산 서열;
(13) CDR1에 서열 번호 146의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 148의 아미노산 서열을, 및 CDR3에 서열 번호 150의 아미노산 서열을, 각각 포함하는 것인 아미노산 서열; 및
(14) CDR1에 서열 번호 152의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 154의 아미노산 서열을, 및 CDR3에 서열 번호 156의 아미노산 서열을, 각각 포함하는 것인, 아미노산 서열.
9. 중쇄의 가변 영역의 CDR1, CDR2 및 CDR3의 각 아미노산 서열이, 상기 7 또는 8의 어느 하나의 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3의 각 아미노산 서열과 각각 80% 이상의 상동성을 가지는 것인, 항인간 트랜스페린 수용체 항체.
10. 중쇄의 가변 영역의 CDR1, CDR2 및 CDR3의 각 아미노산 서열이, 상기 7 또는 8의 어느 하나의 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3의 각 아미노산 서열과 각각 90% 이상의 상동성을 가지는 것인, 항인간 트랜스페린 수용체 항체.
11. 상기 7 또는 8의 어느 하나의 중쇄의 CDR 중 적어도 1개에 있어서, 이것을 구성하는 아미노산 서열 중, 1∼5개의 아미노산이 치환, 결실 또는 부가된 것인, 항인간 트랜스페린 수용체 항체.
12. 상기 7 또는 8의 어느 하나의 중쇄의 CDR 중 적어도 1개에 있어서, 이것을 구성하는 아미노산 서열 중, 1∼3개의 아미노산이 치환, 결실 또는 부가된 것인, 항인간 트랜스페린 수용체 항체.
13. 항인간 트랜스페린 수용체 항체로서, 해당 항체의 경쇄의 가변 영역 및 중쇄의 가변 영역이, 이하의 (1)∼(14)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것인, 항체:
(1) 경쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 6 또는 서열 번호 7의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 8 또는 서열 번호 9의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Trp-Thr-Ser을, 및 CDR3으로서 서열 번호 10의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 76 또는 서열 번호 77의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 78 또는 서열 번호 79의 아미노산 서열을, 및 CDR3으로서 서열 번호 80 또는 서열 번호 81의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것;
(2) 경쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 11 또는 서열 번호 12의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 13 또는 서열 번호 14의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Tyr-Ala-Ser을, 및 CDR3으로서 서열 번호 15의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 82 또는 서열 번호 83의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 84 또는 서열 번호 85의 아미노산 서열을, 및 CDR3으로서 서열 번호 86 또는 서열 번호 87의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것;
(3) 경쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 16 또는 서열 번호 17의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 18 또는 서열 번호 19의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Lys-Val-Ser을, 및 CDR3으로서 서열 번호 20의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 88 또는 서열 번호 89의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 90 또는 서열 번호 91의 아미노산 서열을, 및 CDR3으로서 서열 번호 92 또는 서열 번호 93의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것;
(4) 경쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 21 또는 서열 번호 22의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 23 또는 서열 번호 24의 아미노산 서열, 또는 Asp-Thr-Ser을, 및 CDR3으로서 서열 번호 25의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 94 또는 서열 번호 95의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 96 또는 서열 번호 97의 아미노산 서열을, 및 CDR3으로서 서열 번호 98 또는 서열 번호 99의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것;
(5) 경쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 26 또는 서열 번호 27의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 28 또는 서열 번호 29의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Asp-Thr-Ser을, 및 CDR3으로서 서열 번호 30의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 100 또는 서열 번호 101의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 102 또는 서열 번호 103의 아미노산 서열을, 및 CDR3으로서 서열 번호 104 또는 서열 번호 105의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것;
(6) 경쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 31 또는 서열 번호 32의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 33 또는 서열 번호 34의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Ala-Ala-Ser을, 및 CDR3으로서 서열 번호 35의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 106 또는 서열 번호 107의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 108의 아미노산 서열 또는 서열 번호 278의 아미노산 서열을, 및 CDR3으로서 서열 번호 109 또는 서열 번호 110의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것;
(7) 경쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 36 또는 서열 번호 37의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 38 또는 서열 번호 39의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Gln-Thr-Ser을, 및 CDR3으로서 서열 번호 40의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 111 또는 서열 번호 112의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 113 또는 서열 번호 114의 아미노산 서열을, 및 CDR3으로서 서열 번호 115 또는 서열 번호 116의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것;
(8) 경쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 41 또는 서열 번호 42의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 43 또는 서열 번호 44의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Gly-Thr-Ser을, 및 CDR3으로서 서열 번호 45의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이 CDR1로서 서열 번호 117 또는 서열 번호 118의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 119의 아미노산 서열 또는 서열 번호 279의 아미노산 서열을, 및 CDR3으로서 서열 번호 120 또는 서열 번호 121의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것;
(9) 경쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 46 또는 서열 번호 47의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 48 또는 서열 번호 49의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Phe-Thr-Ser을, 및 CDR3으로서 서열 번호 50의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 122 또는 서열 번호 123의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 124 또는 서열 번호 125의 아미노산 서열을, 및 CDR3으로서 서열 번호 126 또는 서열 번호 127의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것;
(10) 경쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 51 또는 서열 번호 52의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 53 또는 서열 번호 54의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Ala-Ala-Ser을, 및 CDR3으로서 서열 번호 55의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 128 또는 서열 번호 129의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 130 또는 서열 번호 131의 아미노산 서열을, 및 CDR3으로서 서열 번호 132 또는 서열 번호 133의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것;
(11) 경쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 56 또는 서열 번호 57의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 58 또는 서열 번호 59의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Tyr-Ala-Ser을, 및 CDR3으로서 서열 번호 60의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 134 또는 서열 번호 135의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 136 또는 서열 번호 137의 아미노산 서열을, 및 CDR3으로서 서열 번호 138 또는 서열 번호 139의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것;
(12) 경쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 61 또는 서열 번호 62의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 63 또는 서열 번호 64의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Trp-Ser-Ser을, 및 CDR3으로서 서열 번호 65의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 140 또는 서열 번호 141의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 142 또는 서열 번호 143의 아미노산 서열을, 및 CDR3으로서 서열 번호 144 또는 서열 번호 145의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것;
(13) 경쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 66 또는 서열 번호 67의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 68 또는 서열 번호 69의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Tyr-Ala-Ser을, 및 CDR3으로서 서열 번호 70의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 146 또는 서열 번호 147의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 148 또는 서열 번호 149의 아미노산 서열을, 및 CDR3으로서 서열 번호 150 또는 서열 번호 151의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것; 및
(14) 경쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 71 또는 서열 번호 72의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 73 또는 서열 번호 74의 아미노산 서열을, 또는 아미노산 서열 Asp-Thr-Ser을, 및 CDR3으로서 서열 번호 75의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 152 또는 서열 번호 153의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 154 또는 서열 번호 155의 아미노산 서열을, 및 CDR3으로서 서열 번호 156 또는 서열 번호 157의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것.
14. 상기 13의 항인간 트랜스페린 수용체 항체로서, 해당 항체의 경쇄의 가변 영역 및 중쇄의 가변 영역이, 이하의 (1)∼(14)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것인, 항체:
(1) 경쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 6, CDR2에 서열 번호 8, 및 CDR3에 서열 번호 10의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 76, CDR2에 서열 번호 78, 및 CDR3에 서열 번호 80의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것;
(2) 경쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 11, CDR2에 서열 번호 13, 및 CDR3에 서열 번호 15의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 82, CDR2에 서열 번호 84, 및 CDR3에 서열 번호 86의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것;
(3) 경쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 16, CDR2에 서열 번호 18, 및 CDR3에 서열 번호 20의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 88, CDR2에 서열 번호 90, 및 CDR3에 서열 번호 92의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것;
(4) 경쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 21, CDR2에 서열 번호 23, 및 CDR3에 서열 번호 25의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 94, CDR2에 서열 번호 96, 및 CDR3에 서열 번호 98의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것;
(5) 경쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 26, CDR2에 서열 번호 28, 및 CDR3에 서열 번호 30의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 100, CDR2에 서열 번호 102, 및 CDR3에 서열 번호 104의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것;
(6) 경쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 31, CDR2에 서열 번호 33, 및 CDR3에 서열 번호 35의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 106, CDR2에 서열 번호 108, 및 CDR3에 서열 번호 109의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것;
(7) 경쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 36, CDR2에 서열 번호 38, 및 CDR3에 서열 번호 40의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 111, CDR2에 서열 번호 113, 및 CDR3에 서열 번호 115의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것;
(8) 경쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 41, CDR2에 서열 번호 43, 및 CDR3에 서열 번호 45의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 117, CDR2에 서열 번호 119, 및 CDR3에 서열 번호 120의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것;
(9) 경쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 46, CDR2에 서열 번호 48, 및 CDR3에 서열 번호 50의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 122, CDR2에 서열 번호 124, 및 CDR3에 서열 번호 126의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것;
(10) 경쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 51, CDR2에 서열 번호 53, 및 CDR3에 서열 번호 55의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 128, CDR2에 서열 번호 130, 및 CDR3에 서열 번호 132의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것;
(11) 경쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 56, CDR2에 서열 번호 58, 및 CDR3에 서열 번호 60의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 134, CDR2에 서열 번호 136, 및 CDR3에 서열 번호 138의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것;
(12) 경쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 61, CDR2에 서열 번호 63, 및 CDR3에 서열 번호 65의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 140, CDR2에 서열 번호 142, 및 CDR3에 서열 번호 144의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것;
(13) 경쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 66, CDR2에 서열 번호 68, 및 CDR3에 서열 번호 70의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 146, CDR2에 서열 번호 148, 및 CDR3에 서열 번호 150의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것; 및
(14) 경쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 71, CDR2에 서열 번호 73, 및 CDR3에 서열 번호 75의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 152, CDR2에 서열 번호 154, 및 CDR3에 서열 번호 156의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것.
15. 경쇄 및 중쇄의 각각에 있어서의 CDR1, CDR2 및 CDR3의 각 아미노산 서열이, 상기 13 또는 14의 경쇄와 중쇄의 조합 중 어느 하나에 있어서의 경쇄 및 중쇄의 각각의 CDR1, CDR2 및 CDR3의 각 아미노산 서열과 80% 이상의 상동성을 가지는 것인, 항인간 트랜스페린 수용체 항체.
16. 경쇄 및 중쇄의 각각에 있어서의 CDR1, CDR2 및 CDR3의 각 아미노산 서열이, 상기 13 또는 14의 경쇄와 중쇄의 조합 중 어느 하나에 있어서의 경쇄 및 중쇄의 각각의 CDR1, CDR2 및 CDR3의 각 아미노산 서열과 90% 이상의 상동성을 가지는 것인, 항인간 트랜스페린 수용체 항체.
17. 상기 13 또는 14의 경쇄와 중쇄의 조합 중 어느 하나에 있어서의 경쇄 및 중쇄의 각각에 대해, CDR 중 적어도 1개에 있어서, 이것을 구성하는 아미노산 서열 중 1∼5개가 치환, 결실 또는 부가된 것인, 항인간 트랜스페린 수용체 항체.
18. 상기 13 또는 14의 경쇄와 중쇄의 조합 중 어느 하나에 있어서의 경쇄 및 중쇄의 각각에 대해, CDR 중 적어도 1개에 있어서, 이것을 구성하는 아미노산 서열 중 1∼3개가 치환, 결실 또는 부가된 것인, 항인간 트랜스페린 수용체 항체.
19. 항인간 트랜스페린 수용체 항체로서, 해당 항체의 경쇄의 가변 영역이, 서열 번호 158, 서열 번호 159, 서열 번호 160, 서열 번호 161, 서열 번호 162, 및 서열 번호 163의 아미노산 서열로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 또한 해당 항체의 중쇄의 가변 영역이, 서열 번호 166, 서열 번호 167, 서열 번호 168, 서열 번호 169, 서열 번호 170, 및 서열 번호 171의 아미노산 서열로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것인, 항체.
20. 항인간 트랜스페린 수용체 항체로서, 해당 항체의 경쇄의 가변 영역이, 서열 번호 174, 서열 번호 175, 서열 번호 176, 서열 번호 177, 서열 번호 178, 및 서열 번호 179의 아미노산 서열로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 또한 해당 항체의 중쇄의 가변 영역이, 서열 번호 182, 서열 번호 183, 서열 번호 184, 서열 번호 185, 서열 번호 186, 및 서열 번호 187의 아미노산 서열로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것인, 항체.
21. 항인간 트랜스페린 수용체 항체로서, 해당 항체의 경쇄의 가변 영역이, 서열 번호 190, 서열 번호 191, 서열 번호 192, 서열 번호 193, 서열 번호 194, 및 서열 번호 195의 아미노산 서열로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 또한 해당 항체의 중쇄의 가변 영역이, 서열 번호 204, 서열 번호 205, 서열 번호 206, 서열 번호 207, 서열 번호 208, 및 서열 번호 209의 아미노산 서열로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것인, 항체.
22. 항인간 트랜스페린 수용체 항체로서, 다음의 (1)∼(6)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것인, 항체.
(1) 해당 항체의 경쇄의 가변 영역이 서열 번호 163의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 또한 해당 항체의 중쇄의 가변 영역이 서열 번호 171의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것,
(2) 해당 항체의 경쇄의 가변 영역이 서열 번호 179의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 또한 해당 항체의 중쇄의 가변 영역이 서열 번호 187의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것,
(3) 해당 항체의 경쇄의 가변 영역이 서열 번호 191의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 또한 해당 항체의 중쇄의 가변 영역이 서열 번호 205의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것,
(4) 해당 항체의 경쇄의 가변 영역이 서열 번호 193의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 또한 해당 항체의 중쇄의 가변 영역이 서열 번호 205의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것,
(5) 해당 항체의 경쇄의 가변 영역이 서열 번호 194의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 또한 해당 항체의 중쇄의 가변 영역이 서열 번호 205의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것, 및
(6) 해당 항체의 경쇄의 가변 영역이 서열 번호 195의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 또한 해당 항체의 중쇄의 가변 영역이 서열 번호 205의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것.
23. 항인간 트랜스페린 수용체 항체로서, 이하의 (1)∼(10)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것인, 항체.
(1) 해당 항체의 경쇄가 서열 번호 164의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 또한 해당 항체의 중쇄가 서열 번호 172의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것,
(2) 해당 항체의 경쇄가 서열 번호 180의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 또한 해당 항체의 중쇄가 서열 번호 188의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것,
(3) 해당 항체의 경쇄가 서열 번호 196의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 또한 해당 항체의 중쇄가 서열 번호 210의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것,
(4) 해당 항체의 경쇄가 서열 번호 198의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 또한 해당 항체의 중쇄가 서열 번호 210의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것,
(5) 해당 항체의 경쇄가 서열 번호 200의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 또한 해당 항체의 중쇄가 서열 번호 210의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것,
(6) 해당 항체의 경쇄가 서열 번호 202의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 또한 해당 항체의 중쇄가 서열 번호 210의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것,
(7) 해당 항체의 경쇄가 서열 번호 196의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 또한 해당 항체의 중쇄가 서열 번호 212의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것,
(8) 해당 항체의 경쇄가 서열 번호 198의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 또한 해당 항체의 중쇄가 서열 번호 212의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것,
(9) 해당 항체의 경쇄가 서열 번호 200의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 또한 해당 항체의 중쇄가 서열 번호 212의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것, 및
(10) 해당 항체의 경쇄가 서열 번호 202의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 또한 해당 항체의 중쇄가 서열 번호 212의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것.
24. 항인간 트랜스페린 수용체 항체로서, 상기 19∼23 중 어느 하나의 항인간 트랜스페린 수용체 항체와의 사이에, 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 및 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열에 관해서, 각각 80% 이상의 상동성을 가지는 것인, 항체.
25. 항인간 트랜스페린 수용체 항체로서, 상기 19∼23 중 어느 하나의 항인간 트랜스페린 수용체 항체와의 사이에, 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 및 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열에 관해서, 각각 90% 이상의 상동성을 가지는 것인, 항체.
26. 항인간 트랜스페린 수용체 항체로서, 상기 19∼23 중 어느 하나의 항인간 트랜스페린 수용체 항체의 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열을 구성하는 아미노산 서열 중, 1∼10개의 아미노산이 치환, 결실 또는 부가된 것인, 항체.
27. 항인간 트랜스페린 수용체 항체로서, 상기 19∼23 중 어느 하나의 항인간 트랜스페린 수용체 항체의 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열을 구성하는 아미노산 서열 중, 1∼3개의 아미노산이 치환, 결실 또는 부가된 것인, 항인간 트랜스페린 수용체 항체.
28. 항인간 트랜스페린 수용체 항체로서, 상기 19∼23 중 어느 하나의 항인간 트랜스페린 수용체 항체의 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열을 구성하는 아미노산 서열 중, 1∼10개의 아미노산이 치환, 결실 또는 부가된 것인, 항체.
29. 항인간 트랜스페린 수용체 항체로서, 상기 19∼23 중 어느 하나의 항인간 트랜스페린 수용체 항체의 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열을 구성하는 아미노산 서열 중, 1∼3개의 아미노산이 치환, 결실 또는 부가된 것인, 항체.
30. 항인간 트랜스페린 수용체 항체로서, 상기 19∼23 중 어느 하나의 항인간 트랜스페린 수용체 항체의 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 및 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열의 각각을 구성하는 아미노산 서열 중, 각각 1∼10개의 아미노산이 치환, 결실 또는 부가된 것인, 항체.
31. 항인간 트랜스페린 수용체 항체로서, 상기 19∼23 중 어느 하나의 항인간 트랜스페린 수용체 항체의 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 및 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열의 각각을 구성하는 아미노산 서열 중, 각각 1∼3개의 아미노산이 치환, 결실 또는 부가된 것인, 항체.
32. 상기 1∼31 중 어느 하나의 항인간 트랜스페린 수용체 항체로서, 인간 트랜스페린 수용체의 세포외 영역 및 원숭이 트랜스페린 수용체의 세포외 영역의 쌍방에 대해서 친화성을 가지는 것인, 항체.
33. 상기 32의 항인간 트랜스페린 수용체 항체로서, 인간 트랜스페린 수용체의 세포외 영역과의 해리 상수가 1×10-8M 이하이며, 원숭이 트랜스페린 수용체의 세포외 영역과의 해리 상수가 5×10-8M 이하인 것인, 항체.
34. Fab 항체, F(ab')2 항체, 또는 F(ab') 항체인, 상기 1∼33의 항인간 트랜스페린 수용체 항체.
35. scFab, scF(ab'), scF(ab')2 및 scFv로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1본쇄 항체인, 상기 1∼33 중 어느 하나의 항인간 트랜스페린 수용체 항체.
36. 상기 35의 항인간 트랜스페린 수용체 항체로서, 그 경쇄와 중쇄가 링커 서열을 개재하여 결합하고 있는 것인, 항체.
37. 상기 35의 항인간 트랜스페린 수용체 항체로서, 그 경쇄와 중쇄가, 경쇄의 C말단측에 있어서, 링커 서열을 개재하여 결합하고 있는 것인, 항체.
38. 상기 35의 항인간 트랜스페린 수용체 항체로서, 그 중쇄와 경쇄가, 중쇄의 C말단측에 있어서, 링커 서열을 개재하여 결합하고 있는 것인, 항체.
39. 상기 36∼38 중 어느 하나의 항인간 트랜스페린 수용체 항체로서, 해당 링커 서열이, 8∼50개의 아미노산 잔기로 이루어지는 것인, 항체.
40. 상기 39의 항인간 트랜스페린 수용체 항체로서, 해당 링커 서열이, 아미노산 서열 Gly-Ser, 아미노산 서열 Gly-Gly-Ser, 아미노산 서열 Gly-Gly-Gly, 서열 번호 3, 서열 번호 4, 및 서열 번호 5의 각 아미노산 서열, 및, 서열 번호 3의 아미노산 서열의 3개가 연속한 것에 상당하는 아미노산 서열로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것인, 항체.
41. 상기 1∼40 중 어느 하나의 항인간 트랜스페린 수용체 항체와, 그 경쇄의 C말단측 또는 N말단측에 결합한 다른 단백질 A의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는, 융합 단백질.
42. 항인간 트랜스페린 수용체 항체와 다른 단백질 A의 융합 단백질로서,
해당 항인간 트랜스페린 수용체 항체가, 상기 1∼40 중 어느 하나의 항인간 트랜스페린 수용체 항체이고,
해당 다른 단백질 A가, 해당 항인간 트랜스페린 수용체 항체의 경쇄의 C말단측 또는 N말단측에 결합하고 있는 것인, 융합 단백질.
43. 해당 다른 단백질 A가, 해당 경쇄의 C말단측 또는 N말단측에 있어서 링커 서열을 개재하여 결합하고 있는 것인, 상기 41 또는 42의 융합 단백질.
44. 해당 링커 서열이, 1∼50개의 아미노산 잔기로 이루어지는 것인, 상기 43의 융합 단백질.
45. 해당 링커 서열이, 1개의 글리신, 1개의 세린, 아미노산 서열 Gly-Ser, 아미노산 서열 Gly-Gly-Ser, 서열 번호 3의 아미노산 서열, 서열 번호 4의 아미노산 서열, 서열 번호 5의 아미노산 서열, 및 이들 아미노산 서열이 1∼10개 연속하여 이루어지는 아미노산 서열로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것인, 상기 44의 융합 단백질.
46. 상기 1∼40 중 어느 하나의 항인간 트랜스페린 수용체 항체와, 그 중쇄의 C말단측 또는 N말단측에 결합한 다른 단백질 A의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는, 융합 단백질.
47. 항인간 트랜스페린 수용체 항체와 다른 단백질 A의 융합 단백질로서,
해당 항인간 트랜스페린 수용체 항체가, 상기 1∼40 중 어느 하나의 항인간 트랜스페린 수용체 항체이고,
해당 다른 단백질 A가, 해당 항인간 트랜스페린 수용체 항체의 중쇄의 C말단측 또는 N말단측에 결합하고 있는 것인, 융합 단백질.
48. 해당 다른 단백질 A가, 해당 중쇄의 C말단측 또는 N말단측에 있어서 링커 서열을 개재하여 결합하고 있는 것인, 상기 46 또는 47의 융합 단백질.
49. 해당 링커 서열이, 1∼50개의 아미노산 잔기로 이루어지는 것인, 상기 48의 융합 단백질.
50. 해당 링커 서열이, 1개의 글리신, 1개의 세린, 아미노산 서열 Gly-Ser, 아미노산 서열 Gly-Gly-Ser, 서열 번호 3의 아미노산 서열, 서열 번호 4의 아미노산 서열, 서열 번호 5의 아미노산 서열, 및 이들 아미노산 서열이 1∼10개 연속하여 이루어지는 아미노산 서열로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것인, 상기 48의 융합 단백질.
51. 해당 다른 단백질 A가, 인간 유래의 단백질인, 상기 41∼50 중 어느 하나의 융합 단백질.
52. 해당 다른 단백질 A가, 신경 성장 인자(NGF), 리소좀 효소, 모양체 신경 영양 인자(CNTF), 글리아 세포주 신경 영양 인자(GDNF), 뉴로트로핀 3, 뉴로트로핀 4/5, 뉴로트로핀 6, 뉴레글린 1, 에리트로포이에틴, 다르베포에틴, 액티빈, 염기성 섬유아세포 성장 인자(bFGF), 섬유아세포 성장 인자 2(FGF2), 상피 세포 증식 인자(EGF), 혈관 내피 증식 인자(VEGF), 인터페론 α, 인터페론 β, 인터페론 γ, 인터류킨 6, 과립구 매크로파지 콜로니 자극 인자(GM-CSF), 과립구 콜로니 자극 인자(G-CSF), 매크로파지 콜로니 자극 인자(M-CSF), 각종 사이토카인, 종양괴사 인자 α 수용체(TNF-α 수용체), PD-1 리간드, 베타아밀로이드를 분해하는 활성을 가지는 효소, 항베타아밀로이드 항체, 항BACE 항체, 항EGFR 항체, 항PD-1 항체, 항PD-L1 항체, 항HER2 항체, 항TNF-α 항체, 및 그 외의 항체 의약으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것인, 상기 41∼51 중 어느 하나의 융합 단백질.
53. 해당 다른 단백질 A가 리소좀 효소이며, 해당 리소좀 효소가, α-L-이두로니다제, 이두론산-2-설파타제, 글루코셀레브로시다제, β-갈락토시다아제, GM2 활성화 단백질, β-헥소사미니다제 A, β-헥소사미니다제 B, N-아세틸글루코사민-1-포스포트랜스퍼라제, α-만노시다제, β-만노시다제, 갈락토실세라미다제, 사포신 C, 아릴설파타제 A, α-L-푸코시다제, 아스파틸글루코사미니다제, α-N-아세틸갈락토사미니다제, 산성 스핑고미엘리나제, α-갈락토시다아제 A, β-글루쿠로니다제, 헤파란 N-설파타제, α-N-아세틸글루코사미니다제, 아세틸 CoAα-글루코사미니드 N-아세틸트랜스퍼라제, N-아세틸글루코사민-6-황산 설파타제, 산성 세라미다제, 아밀로-1,6-글루코시다제, 시알리다제, 팔미토일 단백질 싸이오에스터라제-1, 트라이펩티딜펩티다제-1, 하이아루로니다제-1, CLN1 및 CLN2로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것인, 상기 41∼51 중 어느 하나의 융합 단백질.
54. 해당 다른 단백질 A가, 이두론산-2-설파타제인, 상기 41∼51 중 어느 하나의 융합 단백질.
55. 해당 다른 단백질 A가, 인간 이두론산-2-설파타제인 상기 50의 융합 단백질로서, 이하의 (1)∼(3)으로부터 선택되는 것인 융합 단백질:
(1) 해당 인간화 항hTfR 항체의 경쇄가 서열 번호 164의 아미노산 서열을 가지는 것이고, 해당 인간화 항hTfR 항체의 중쇄가 그 C말단측에서, 링커 서열 Gly-Ser을 개재하여, 인간 이두론산-2-설파타제와 결합하고 있고, 전체로서 서열 번호 247로 나타나는 아미노산 서열을 가지는 것인, 융합 단백질;
(2) 해당 인간화 항hTfR 항체의 경쇄가 서열 번호 180의 아미노산 서열을 가지는 것이고, 해당 인간화 항hTfR 항체의 중쇄가 그 C말단측에서, 링커 서열 Gly-Ser을 개재하여, 인간 이두론산-2-설파타제와 결합하고 있고, 전체로서 서열 번호 249로 나타나는 아미노산 서열을 가지는 것인, 융합 단백질; 및
(3) 해당 인간화 항hTfR 항체의 경쇄가, 서열 번호 196의 아미노산 서열을 가지는 것이고, 해당 인간화 항hTfR 항체의 중쇄가, 그 C말단측에서, 링커 서열 Gly-Ser을 개재하여, 인간 이두론산-2-설파타제와 결합하고 있고, 전체로서 서열 번호 251로 나타나는 아미노산 서열을 가지는 것인, 융합 단백질.
56. 해당 다른 단백질 A가, 인간 이두론산-2-설파타제인 상기 50의 융합 단백질로서, 이하의 (1)∼(3)으로부터 선택되는 것인 융합 단백질:
(1) 서열 번호 164의 아미노산 서열을 가지는 인간화 항hTfR 항체의 경쇄와, 서열 번호 172의 아미노산 서열을 가지는 인간화 항hTfR 항체의 중쇄의 C말단측에, 링커 서열 Gly-Ser을 개재하여, 서열 번호 246으로 나타나는 인간 이두론산-2-설파타제가 결합한 것을 포함하는, 융합 단백질;
(2) 서열 번호 180의 아미노산 서열을 가지는 인간화 항hTfR 항체의 경쇄와, 서열 번호 188의 아미노산 서열을 가지는 인간화 항hTfR 항체의 중쇄의 C말단측에, 링커 서열 Gly-Ser을 개재하여, 서열 번호 246으로 나타나는 인간 이두론산-2-설파타제가 결합한 것을 포함하는, 융합 단백질; 및
(3) 서열 번호 196의 아미노산 서열을 가지는 인간화 항hTfR 항체의 경쇄와, 서열 번호 210의 아미노산 서열을 가지는 인간화 항hTfR 항체의 중쇄의 C말단측에, 링커 서열 Gly-Ser을 개재하여, 서열 번호 246으로 나타나는 인간 이두론산-2-설파타제가 결합한 것을 포함하는, 융합 단백질.
57. 해당 다른 단백질 A가, 인간 이두론산-2-설파타제인 상기 50의 융합 단백질이며, 이하의 (1)∼(3)으로부터 선택되는 것인 융합 단백질:
(1) 해당 인간 이두론산-2-설파타제가 링커 서열 Gly-Ser을 개재하여 중쇄의 C말단측에서 결합하여 이루어지는 것과, 경쇄로 이루어지고, 전자의 아미노산 서열이 서열 번호 247로 나타나는 것이고, 후자의 아미노산 서열이 서열 번호 164로 나타나는 것,
(2) 해당 인간 이두론산-2-설파타제가 링커 서열 Gly-Ser을 개재하여 중쇄의 C말단측에서 결합하여 이루어지는 것과, 경쇄로 이루어지고, 전자의 아미노산 서열이 서열 번호 249로 나타나는 것이고, 후자의 아미노산 서열이 서열 번호 180으로 나타나는 것, 및
(3) 해당 인간 이두론산-2-설파타제가 링커 서열 Gly-Ser을 개재하여 중쇄의 C말단측에서 결합하여 이루어지는 것과, 경쇄로 이루어지고, 전자의 아미노산 서열이 서열 번호 251로 나타나는 것이고, 후자의 아미노산 서열이 서열 번호 196으로 나타나는 것.
58. 상기 1∼40 중 어느 하나의 항인간 트랜스페린 수용체 항체의 아미노산 서열을 코딩하는, DNA 단편.
59. 상기 41∼57 중 어느 하나의 융합 단백질의 아미노산 서열을 코딩하는, DNA 단편.
60. 상기 58 또는 59의 DNA 단편을 짜넣어 이루어지는, 발현 벡터.
61. 상기 60의 발현 벡터로 형질 전환된 포유동물 세포.
62. 상기 1∼40 중 어느 하나의 항인간 트랜스페린 수용체 항체의 경쇄 및/또는 중쇄의 어느 것에 혈액뇌관문을 통과시켜 뇌내에서 기능을 발휘시켜야 할 저분자량의 약리 활성 물질을 결합시킨 것인, 항인간 트랜스페린 수용체 항체-약리 활성 물질 복합체.
63. 해당 약리 활성 물질이, 항암제, 알츠하이머병 치료제, 파킨슨병 치료제, 헌팅턴병 치료제, 통합 실조증 치료제, 울증 치료제, 다발성 경화증 치료제, 근위축성 측색경화증 치료제, 뇌종양을 포함하는 중추 신경계의 종양의 치료제, 뇌장애를 수반하는 리소좀병의 치료제, 당원병 치료제, 근 디스트로피 치료제, 뇌허혈 치료제, 프리온병 치료제, 외상성의 중추 신경계 장애의 치료제, 바이러스성 및 세균성의 중추 신경계 질환에 대한 치료제, 뇌외과 수술 후의 회복에 이용하는 약제, 척추 외과 수술 후의 회복에 이용하는 약제, siRNA, 안티센스 DNA, 및 펩타이드로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 것인, 상기 62의 항인간 트랜스페린 수용체 항체.
64. 다른 단백질 A 또는 저분자량의 약리 활성 물질에 혈액뇌관문을 통과시켜 뇌내에서 기능을 발휘시키기 위한, 상기 1∼40 중 어느 하나의 항인간 트랜스페린 수용체 항체의 사용.
65. 중추 신경계의 질환 상태의 치료를 위한 혈중 투여용 약제의 제조를 위한, 해당 질환 상태에 대한 생리 활성 단백질 또는 약리 활성 저분자 화합물의 분자와 결합시키는 것에 의한 상기 1∼40 중 어느 하나의 항인간 트랜스페린 수용체 항체의 사용.
66. 중추 신경계의 질환의 치료 방법으로서, 해당 질환에 대한 생리 활성 단백질 또는 약리 활성 저분자 화합물의 치료상 유효량을, 상기 1∼40 중 어느 하나의 항인간 트랜스페린 수용체 항체 분자와의 결합체의 형태로 당해 질환을 가지는 환자에게 혈중 투여하는 것을 포함하는, 치료 방법.
67. 인간 이두론산-2-설파타제에 혈액뇌관문을 통과시켜 뇌내에서 기능을 발휘시키기 위한, 상기 54∼57 중 어느 하나의 항인간 트랜스페린 수용체 항체의 사용.
68. 헌터 증후군에 수반하는 중추 신경계의 질환 상태의 치료를 위한 혈중 투여용 약제의 제조를 위한, 상기 54∼57 중 어느 하나의 융합 단백질의 사용.
69. 헌터 증후군에 수반하는 중추 신경계의 질환의 치료 방법으로서, 상기 54∼57 중 어느 하나의 융합 단백질의 치료상 유효량을, 당해 질환을 가지는 환자에게 혈중 투여하는 것을 포함하는, 치료 방법.
본 발명은, 생리 활성이나 약리 활성을 가지는 단백질이나 저분자량의 물질이면서, 혈액뇌관문을 거의 또는 전혀 통과할 수 없기 때문에, 종래는 혈중 투여에서는 이용할 수 없었던 여러 가지 물질에 대해, 그것들을 혈액뇌관문 통과 가능한 형태로 할 수 있고, 따라서, 중추 신경계의 질환 상태의 치료를 위한, 혈중 투여용의 새로운 약제로 하는 것을 가능하게 한다.
도 1은 항hTfR 항체를 단회 정맥내 투여한 후의, 필리핀원숭이의 대뇌피질의, 항hTfR 항체에 대한 면역조직화학 염색의 결과를 나타내는 도면 대용 사진. (a) 항hTfR 항체를 비투여, (b) 항hTfR 항체 번호 1을 투여, (c) 항hTfR 항체 번호 2를 투여, (d) 항hTfR 항체 번호 3을 투여. 각 사진의 우하의 바는 50μm를 나타내는 게이지이다.
도 2는 항hTfR 항체를 단회 정맥내 투여한 후의, 필리핀원숭이의 해마의, 항hTfR 항체에 대한 면역조직화학 염색의 결과를 나타내는 도면. (a) 항hTfR 항체를 비투여, (b) 항hTfR 항체 번호 1을 투여, (c) 항hTfR 항체 번호 2를 투여, (d) 항hTfR 항체 번호 3을 투여. 각 사진의 우하의 바는 50μm를 나타내는 게이지이다.
도 3은 항hTfR 항체를 단회 정맥내 투여한 후의, 필리핀원숭이의 소뇌의, 항hTfR 항체에 대한 면역조직화학 염색의 결과를 나타내는 도면 대용 사진. (a) 항hTfR 항체를 비투여, (b) 항hTfR 항체 번호 1을 투여, (c) 항hTfR 항체 번호 2를 투여, (d) 항hTfR 항체 번호 3을 투여. 각 사진의 우하의 바는 50μm를 나타내는 게이지이다.
도 4는 단회 정맥내 투여한 후의, 필리핀원숭이의 뇌 이외의 각종 장기로의 인간화 항hTfR 항체의 축적량을 나타내는 도면. 세로축은, 각 장기의 습중량당의 인간화 항hTfR 항체의 양(μg/g습중량)을 나타낸다. 백색 바는 좌로부터 순차로, 인간화 항hTfR 항체 번호 3, 인간화 항hTfR 항체 번호 3-2, 인간화 항hTfR 항체 번호 3(IgG4), 및 인간화 항hTfR 항체 번호 3-2(IgG4)를, 각각 투여, 흑색 바는, 트라스투주맙(허셉틴TM)을 투여한 원숭이의 각 장기에서의 축적량을 나타낸다. ND는 미측정을 의미한다.
도 5는 단회 정맥내 투여한 후의, 필리핀원숭이의 대뇌피질의, 인간화 항hTfR 항체에 대한 면역조직화학 염색의 결과를 나타내는 도면 대용 사진. (a) 허셉틴을 투여, (b) 인간화 항hTfR 항체 번호 3을 투여, (c) 인간화 항hTfR 항체 번호 3-2를 투여, (d) 인간화 항hTfR 항체 번호 3(IgG4)을 투여, (e) 인간화 항hTfR 항체 번호 3-2(IgG4)를 투여. 각 사진의 우하의 바는 20μm를 나타내는 게이지이다.
도 6은 단회 정맥내 투여한 후의, 필리핀원숭이의 해마의, 인간화 항hTfR 항체에 대한 면역조직화학 염색의 결과를 나타내는 도면. (a) 허셉틴을 투여, (b) 인간화 항hTfR 항체 번호 3을 투여, (c) 인간화 항hTfR 항체 번호 3-2를 투여, (d) 인간화 항hTfR 항체 번호 3(IgG4)을 투여, (e) 인간화 항hTfR 항체 번호 3-2(IgG4)를 투여. 각 사진의 우하의 바는 20μm를 나타내는 게이지이다.
도 7은 단회 정맥내 투여한 후의, 필리핀원숭이의 소뇌의 인간화 항hTfR 항체에 대한 면역조직화학 염색의 결과를 나타내는 도면. (a) 허셉틴을 투여, (b) 인간화 항hTfR 항체 번호 3을 투여, (c) 인간화 항hTfR 항체 번호 3-2를 투여, (d) 인간화 항hTfR 항체 번호 3(IgG4)을 투여, (e) 인간화 항hTfR 항체 번호 3-2(IgG4)를 투여. 각 사진의 우하의 바는 20μm를 나타내는 게이지이다.
도 8은 단회 정맥내 투여한 후의, 필리핀원숭이의 연수의, 인간화 항hTfR 항체에 대한 면역조직화학 염색의 결과를 나타내는 도면. (a) 허셉틴을 투여, (b) 인간화 항hTfR 항체 번호 3을 투여, (c) 인간화 항hTfR 항체 번호 3-2를 투여, (d) 인간화 항hTfR 항체 번호 3(IgG4)을 투여, (e) 인간화 항hTfR 항체 번호 3-2(IgG4)를 투여. 각 사진의 우하의 바는 20μm를 나타내는 게이지이다.
도 9는 필리핀원숭이에게 단회 정맥내 투여한 후의, 뇌조직에의 I2S-항hTfR 항체 및 rhI2S 축적량을 나타내는 도면. 세로축은, 뇌조직의 습중량당의 I2S-항hTfR 항체 및 rhI2S의 양(μg/g습중량)을 나타낸다. 망점 바는 필리핀원숭이의 뇌조직에 있어서의 rhI2S의 축적량을 나타낸다. 횡선 바는 필리핀원숭이의 뇌조직에 있어서의 I2S-항hTfR 항체의 축적량을 나타낸다. 종선분은 표준 편차를 나타낸다.
도 10은 인간화 항hTfR 항체 또는 rhI2S를 정주(靜注)한 I2S 유전자 녹아웃 마우스(I2S-KO 마우스)에 있어서의 각종 장기 중의 글리코사미노글리칸(GAG)의 양을 나타내는 그래프. (a) 뇌, (b) 간장, (c) 폐, (d) 심장. 각 그래프 모두, 바는 좌로부터 순차로, 야생형 마우스(WT), 컨트롤군(비투여군), 0.5mg/kg 투여군, 1.0mg/kg 투여군, 및 2.0mg/kg 투여군. 세로축은, 각 장기의 건조 중량당의 GAG량(μg/g 건조 중량)을 나타낸다. 또한, 종선분은 표준 편차를, **은 컨트롤군을 대조로 한 Dunnet 검정으로 P＜0.01인 것을 나타낸다.
본 발명에 있어서, 「항체」의 말은, 주로 인간 항체, 마우스 항체, 인간화 항체, 인간 항체와 다른 포유동물의 항체의 키메라 항체, 및 마우스 항체와 다른 포유동물의 항체의 키메라 항체를 말하지만, 특정의 항원에 특이적으로 결합하는 성질을 가지는 것인 한, 이들로 한정되는 것은 아니고, 또한, 항체의 동물종에도 특별히 제한은 없다.
본 발명에 있어서, 「인간 항체」의 말은, 그 단백질 전체가 인간 유래의 유전자로 코딩되어 있는 항체를 말한다. 유전자의 발현 효율을 상승시키는 등의 목적으로, 원래의 인간의 유전자에, 원래의 아미노산 서열에 변화를 주지 않고 변이를 가한 유전자로 코딩되는 항체도, 「인간 항체」에 포함된다. 또한, 인간 항체를 코딩하는 2개 이상의 유전자를 조합하거나, 어느 인간 항체의 일부를, 다른 인간 항체의 일부로 치환한 항체도, 「인간 항체」에 포함된다. 인간 항체는, 면역글로불린 경쇄의 3개소의 상보성 결정 영역(CDR: complementary determining region의 약칭)과 면역글로불린 중쇄의 3개소의 상보성 결정 영역(CDR)을 가진다. 면역글로불린 경쇄의 3개소의 CDR은, N말단측에 있는 것으로부터 순차로 CDR1, CDR2 및 CDR3이라고 한다. 면역글로불린 중쇄의 3개소의 CDR도, N말단측에 있는 것으로부터 순차로 CDR1, CDR2 및 CDR3이라고 한다. 어느 인간 항체의 CDR을, 다른 인간 항체의 CDR로 치환하는 것에 의해, 인간 항체의 항원 특이성, 친화성 등을 개변한 항체도, 인간 항체에 포함된다.
본 발명에 있어서, 원래의 인간 항체의 유전자를 개변하는 것에 의해, 원래의 항체의 아미노산 서열에 치환, 결실, 부가 등의 변이를 가한 항체도, 「인간 항체」에 포함된다. 원래의 항체의 아미노산 서열 중의 아미노산을 다른 아미노산으로 치환하는 경우, 치환하는 아미노산의 개수는, 바람직하게는 1∼20개이고, 보다 바람직하게는 1∼5개이며, 더욱 바람직하게는 1∼3개이다. 원래의 항체의 아미노산 서열 중의 아미노산을 결실시키는 경우, 결실시키는 아미노산의 개수는, 바람직하게는 1∼20개이고, 보다 바람직하게는 1∼5개이며, 더욱 바람직하게는 1∼3개이다. 또한, 이들 아미노산의 치환과 결실을 조합한 변이를 가한 항체도, 인간 항체이다. 아미노산을 부가시키는 경우, 원래의 항체의 아미노산 서열 중 혹은 N말단측 또는 C말단측에, 바람직하게는 1∼20개, 보다 바람직하게는 1∼5개, 더욱 바람직하게는 1∼3개의 아미노산을 부가한다. 이들 아미노산의 부가, 치환 및 결실을 조합한 변이를 가한 항체도, 인간 항체이다. 변이를 가한 항체의 아미노산 서열은, 원래의 항체의 아미노산 서열과 바람직하게는 80% 이상의 상동성을 나타내고, 보다 바람직하게는 90% 이상의 상동성을 나타내며, 더욱 바람직하게는 95% 이상의 상동성을 나타내고, 보다 더 바람직하게는 98% 이상의 상동성을 나타내는 것이다. 따라서, 본 발명에 있어서 「인간 유래의 유전자」라고 할 때는, 인간 유래의 원래의 유전자에 더하여, 이것에 개변을 가하는 것에 의해 얻어지는 유전자도 포함된다.
원래의 항체의 아미노산 서열과 변이를 가한 항체의 아미노산 서열의 상동성은, 주지의 상동성 계산 알고리즘을 이용하여 용이하게 산출할 수 있다. 예를 들어, 그와 같은 알고리즘으로서, BLAST(Altschul SF. J Mol. Biol. 215. 403-10, (1990)), Pearson 및 Lipman의 유사성 검색법(Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 85. 2444(1988)), Smith 및 Waterman의 국소 상동성 알고리즘(Adv. Appl. Math. 2. 482-9(1981)) 등이 있다.
「마우스 항체」라고 할 때는, 그 단백질 전체가 마우스 유래의 유전자로 코딩되는 항체와 동일한 아미노산 서열로 이루어지는 항체를 말한다. 따라서, 유전자의 발현 효율을 상승시키는 등의 목적으로, 원래의 마우스의 유전자에, 원래의 아미노산 서열에 변화를 주지 않고 변이를 가한 유전자로 코딩되는 항체도, 「마우스 항체」에 포함된다. 또한, 마우스 항체를 코딩하는 2개 이상의 유전자를 조합하거나, 어느 마우스 항체의 일부를, 다른 마우스 항체의 일부로 치환한 항체도, 마우스 항체에 포함된다. 마우스 항체는, 면역글로불린 경쇄의 3개소의 상보성 결정 영역(CDR)과 면역글로불린 중쇄의 3개소의 상보성 결정 영역(CDR)을 가진다. 면역글로불린 경쇄의 3개소의 CDR은, N말단측에 있는 것으로부터 순차로 CDR1, CDR2 및 CDR3이라고 한다. 면역글로불린 중쇄의 3개소의 CDR은, N말단측에 있는 것으로부터 순차로 CDR1, CDR2 및 CDR3이라고 한다. 예를 들어, 어느 마우스 항체의 CDR을, 다른 마우스 항체의 CDR로 치환하는 것에 의해, 마우스 항체의 항원 특이성, 친화성 등을 개변한 항체도, 마우스 항체에 포함된다.
본 발명에 있어서, 원래의 마우스 항체의 유전자를 개변하는 것에 의해, 원래의 항체의 아미노산 서열에 치환, 결실, 부가 등의 변이를 가한 항체도, 「마우스 항체」에 포함된다. 원래의 항체의 아미노산 서열 중의 아미노산을 다른 아미노산으로 치환하는 경우, 치환하는 아미노산의 개수는, 바람직하게는 1∼20개이고, 보다 바람직하게는 1∼5개이며, 더욱 바람직하게는 1∼3개이다. 원래의 항체의 아미노산 서열 중의 아미노산을 결실시키는 경우, 결실시키는 아미노산의 개수는, 바람직하게는 1∼20개이고, 보다 바람직하게는 1∼5개이며, 더욱 바람직하게는 1∼3개이다. 또한, 이들 아미노산의 치환과 결실을 조합한 변이를 가한 항체도, 마우스 항체이다. 아미노산을 부가하는 경우, 원래의 항체의 아미노산 서열 중 혹은 N말단측 또는 C말단측에, 바람직하게는 1∼20개, 보다 바람직하게는 1∼5개, 더욱 바람직하게는 1∼3개의 아미노산을 부가한다. 이들 아미노산의 부가, 치환 및 결실을 조합한 변이를 가한 항체도, 마우스 항체이다. 변이를 가한 항체의 아미노산 서열은, 원래의 항체의 아미노산 서열과 바람직하게는 80% 이상의 상동성을 가지고, 보다 바람직하게는 90% 이상의 상동성을 나타내며, 더욱 바람직하게는 95% 이상의 상동성을 나타내며, 보다 더 바람직하게는 98% 이상의 상동성을 나타내는 것이다. 따라서, 본 발명에 있어서 「마우스 유래의 유전자」라고 할 때는, 마우스 유래의 원래의 유전자에 더하여, 이것에 개변을 가하는 것에 의해 얻어지는 유전자도 포함된다.
본 발명에 있어서, 「인간화 항체」의 말은, 가변 영역의 일부(예를 들어, 특히 CDR의 전부 또는 일부)의 아미노산 서열이 인간 이외의 포유동물 유래이며, 그 이외의 영역이 인간 유래인 항체를 말한다. 예를 들어, 인간화 항체로서 인간 항체를 구성하는 면역글로불린 경쇄의 3개소의 상보성 결정 영역(CDR)과 면역글로불린 중쇄의 3개소의 상보성 결정 영역(CDR)을, 다른 포유동물의 CDR에 의해 치환하는 것에 의해 제작된 항체를 들 수 있다. 인간 항체의 적절한 위치에 이식되는 CDR의 유래가 되는 다른 포유동물의 생물종은, 인간 이외의 포유동물인 한 특별히 한정은 없지만, 바람직하게는, 마우스, 래트, 토끼, 말, 또는 인간 이외의 영장류이고, 보다 바람직하게는 마우스 및 래트이며, 예를 들어 마우스이다.
본 발명에 있어서, 「키메라 항체」의 말은, 2개 이상의 상이한 종에서 유래하는, 2개 이상의 상이한 항체의 단편이 연결되는 항체를 말한다.
인간 항체와 다른 포유동물의 항체의 키메라 항체란, 인간 항체의 일부가 인간 이외의 포유동물의 항체의 일부에 의해 치환된 항체이다. 항체는, 이하에 설명하는 Fc 영역, Fab 영역 및 힌지부로 이루어진다. 이와 같은 키메라 항체의 구체예로서, Fc 영역이 인간 항체에서 유래하는 한편으로 Fab 영역이 다른 포유동물의 항체에서 유래하는 키메라 항체를 들 수 있다. 힌지부는, 인간 항체 또는 다른 포유동물의 항체 중 어느 하나에서 유래한다. 반대로, Fc 영역이 다른 포유동물에서 유래하는 한편으로 Fab 영역이 인간 항체에서 유래하는 키메라 항체를 들 수 있다. 힌지부는, 인간 항체 또는 다른 포유동물의 항체의 어느 것에서 유래해도 된다. 반대로, Fc 영역이 다른 포유동물에서 유래하는 한편으로 Fab 영역이 인간 항체에서 유래하는 키메라 항체를 들 수 있다. 이 경우도 힌지부는, 인간 항체 또는 다른 포유동물의 항체의 어느 것에서 유래해도 된다.
또한, 항체는, 가변 영역과 정상 영역으로 이루어진다고 말할 수도 있다. 키메라 항체의 다른 구체예로서, 중쇄의 정상 영역(CH)과 경쇄의 정상 영역(Cl)이 인간 항체에서 유래하는 한편으로, 중쇄의 가변 영역(VH) 및 경쇄의 가변 영역(VL)이 다른 포유동물의 항체에서 유래하는 것, 반대로, 중쇄의 정상 영역(CH)과 경쇄의 정상 영역(Cl)이 다른 포유동물의 항체에서 유래하는 한편으로, 중쇄의 가변 영역(VH) 및 경쇄의 가변 영역(VL)이 인간 항체에서 유래하는 것도 들 수 있다. 여기에서, 다른 포유동물의 생물종은, 인간 이외의 포유동물인 한 특별히 한정은 없지만, 바람직하게는, 마우스, 래트, 토끼, 말, 또는 인간 이외의 영장류이며, 보다 바람직하게는 마우스이다.
마우스 항체와 다른 포유동물의 항체와의 키메라 항체란, 마우스 항체의 일부가 마우스 이외의 포유동물의 항체의 일부로 치환된 항체이다. 이와 같은 키메라 항체의 구체예로서, Fc 영역이 마우스 항체에서 유래하는 한편으로 Fab 영역이 다른 포유동물의 항체에서 유래하는 키메라 항체나, 반대로, Fc 영역이 다른 포유동물에서 유래하는 한편으로 Fab 영역이 마우스 항체에서 유래하는 키메라 항체를 들 수 있다. 여기에서, 다른 포유동물의 생물종은, 마우스 이외의 포유동물인 한 특별히 한정은 없지만, 바람직하게는, 래트, 토끼, 말, 인간 이외의 영장류이며, 보다 바람직하게는 인간이다.
인간 항체와 마우스 항체의 키메라 항체는, 특히, 「인간/마우스 키메라 항체」라고 한다. 인간/마우스 키메라 항체에는, Fc 영역이 인간 항체에서 유래하는 한편으로 Fab 영역이 마우스 항체에서 유래하는 키메라 항체나, 반대로, Fc 영역이 마우스 항체에서 유래하는 한편으로 Fab 영역이 인간 항체에서 유래하는 키메라 항체를 들 수 있다. 힌지부는, 인간 항체 또는 마우스 항체 중 어느 하나에서 유래한다. 인간/마우스 키메라 항체의 다른 구체예로서, 중쇄의 정상 영역(CH)과 경쇄의 정상 영역(Cl)이 인간 항체에서 유래하는 한편으로, 중쇄의 가변 영역(VH) 및 경쇄의 가변 영역(VL)이 마우스 항체에서 유래하는 것, 반대로, 중쇄의 정상 영역(CH)과 경쇄의 정상 영역(Cl)이 마우스 항체에서 유래하는 한편으로, 중쇄의 가변 영역(VH) 및 경쇄의 가변 영역(VL)이 인간 항체에서 유래하는 것도 들 수 있다.
항체는, 본래, 2개의 면역글로불린 경쇄와 2개의 면역글로불린 중쇄의 합계 4개의 폴리펩타이드쇄로 이루어지는 기본 구조를 가진다. 단, 본 발명에 있어서, 「항체」라고 할 때는, 이 기본 구조를 가지는 것에 더하여,
(1) 1개의 면역글로불린 경쇄와 1개의 면역글로불린 중쇄의 합계 2개의 폴리펩타이드쇄로 이루어지는 것이나, 이하에 상술하는 바와 같이,
(2) 면역글로불린 경쇄의 C말단측에 링커 서열을, 그리고 추가로 그 C말단측에 면역글로불린 중쇄를 결합시켜 이루어지는 것인 1본쇄 항체, 및
(3) 면역글로불린 중쇄의 C말단측에 링커 서열을, 그리고 추가로 그 C말단측에 면역글로불린 경쇄를 결합시켜 이루어지는 것인 1본쇄 항체도 포함된다. 또한,
(4) 본래의 의미에서의 항체의 기본 구조로부터 Fc 영역이 결실된 것인 Fab 영역으로 이루어지는 것 및 Fab 영역과 힌지부의 전부 혹은 일부로 이루어지는 것(Fab, F(ab') 및 F(ab')2를 포함한다)도,
본 발명에 있어서의 「항체」에 포함된다.
여기에서 Fab란, 가변 영역과 CL영역(경쇄의 정상 영역)을 포함하는 1개의 경쇄와, 가변 영역과 CH1 영역(중쇄의 정상 영역의 부분 1)을 포함하는 1개의 중쇄가, 각각 존재하는 시스테인 잔기끼리에서 다이설파이드 결합에 의해 결합한 분자를 말한다. Fab에 있어서, 중쇄는, 가변 영역과 CH1 영역(중쇄의 정상 영역의 부분 1)에 더하여, 추가로 힌지부의 일부를 포함해도 되지만, 이 경우의 힌지부는, 힌지부에 존재하고 항체의 중쇄끼리를 결합하는 시스테인 잔기를 결여하는 것이다. Fab에 있어서, 경쇄와 중쇄란, 경쇄의 정상 영역(CL 영역)에 존재하는 시스테인 잔기와, 중쇄의 정상 영역(CH1 영역) 또는 힌지부에 존재하는 시스테인 잔기의 사이에 형성되는 다이설파이드 결합에 의해 결합한다. Fab는, 힌지부에 존재하고 항체의 중쇄끼리를 결합하는 시스테인 잔기를 결여하고 있으므로, 1개의 경쇄와 1개의 중쇄로 이루어진다. Fab를 구성하는 경쇄는, 가변 영역과 CL 영역을 포함한다. Fab를 구성하는 중쇄는, 가변 영역과 CH1 영역으로 이루어지는 것이어도 되고, 가변 영역, CH1 영역에 더하여 힌지부의 일부를 포함하는 것이어도 된다. 단 이 경우, 힌지부에서 2개의 중쇄 사이에 다이설파이드 결합이 형성되지 않게, 힌지부는 중쇄 사이를 결합하는 시스테인 잔기를 포함하지 않게 선택된다. F(ab')에 있어서는, 그 중쇄는 가변 영역과 CH1 영역에 더하여, 중쇄끼리를 결합하는 시스테인 잔기를 포함하는 힌지부의 전부 또는 일부를 포함한다. F(ab')2는 2개의 F(ab')가 서로의 힌지부에 존재하는 시스테인 잔기끼리에서 다이설파이드 결합에 의해 결합한 분자를 말한다. 또한, 복수의 항체가 직접 또는 링커를 개재하여 결합하여 이루어지는 2량체, 3량체 등의 중합체도, 항체이다. 더욱이, 이들에 한정하지 않고, 면역글로불린 분자의 일부를 포함하고, 또한 항원에 특이적으로 결합하는 성질을 가지는 것은 어느 것도, 본 발명에서 말하는 「항체」에 포함된다. 즉, 본 발명에 있어서 면역글로불린 경쇄라고 할 때는, 면역글로불린 경쇄에서 유래하고, 그 가변 영역의 모두 또는 일부의 아미노산 서열을 가지는 것이 포함된다. 또한, 면역글로불린 중쇄라고 할 때는, 면역글로불린 중쇄에서 유래하고, 그 가변 영역의 모두 또는 일부의 아미노산 서열을 가지는 것이 포함된다. 따라서, 가변 영역의 모두 또는 일부의 아미노산 서열을 가지는 한, 예를 들어, Fc 영역이 결실된 것도, 면역글로불린 중쇄이다.
또한, 여기에서 Fc 또는 Fc 영역이란, 항체 분자 중의, CH2 영역(중쇄의 정상 영역의 부분 2), 및 CH3 영역(중쇄의 정상 영역의 부분 3)으로 이루어지는 단편을 포함하는 영역을 말한다.
더욱이, 본 발명에 있어서, 「항체」라고 할 때는,
(5) 상기 (4)에서 나타낸 Fab, F(ab') 또는 F(ab')2를 구성하는 경쇄와 중쇄를, 링커 서열을 개재하여 결합시켜, 각각 1본쇄 항체로 한 scFab, scF(ab'), 및 scF(ab')2도 포함된다. 여기에서, scFab, scF(ab'), 및 scF(ab')2에 있어서는, 경쇄의 C말단측에 링커 서열을, 그리고 추가로 그 C말단측에 중쇄를 결합시켜 이루어지는 것이어도 되고, 또한, 중쇄의 C말단측에 링커 서열을, 그리고 추가로 그 C말단측에 경쇄를 결합시켜 이루어지는 것이어도 된다. 더욱이, 경쇄의 가변 영역과 중쇄의 가변 영역을 링커 서열을 개재하여 결합시켜 1본쇄 항체로 한 scFv도, 본 발명에 있어서의 항체에 포함된다. scFv에 있어서는, 경쇄의 가변 영역의 C말단측에 링커 서열을, 그리고 추가로 그 C말단측에 중쇄의 가변 영역을 결합시켜 이루어지는 것이어도 되고, 또한, 중쇄의 가변 영역의 C말단측에 링커 서열을, 그리고 추가로 그 C말단측에 경쇄의 가변 영역을 결합시켜 이루어지는 것이어도 된다.
더욱이, 본 명세서에서 말하는 「항체」에는, 완전장 항체, 상기 (1)∼(5)에 나타나는 것에 더하여, 상기 (4) 및 (5)를 포함하는 것보다 넓은 개념인, 완전장 항체의 일부가 결손된 것인 항원 결합성 단편(항체 프래그먼트)의 어느 형태도 포함된다.
「항원 결합성 단편」이란 용어는, 항원과의 특이적 결합 활성의 적어도 일부를 유지하고 있는 항체의 단편을 말한다. 결합성 단편의 예로서는, 예를 들어 상기 (4) 및 (5)에 나타나는 것에 더하여, Fab, Fab', F(ab')2, 가변 영역(Fv), 중쇄 가변 영역(VH)과 경쇄 가변 영역(VL)을 적당한 링커로 연결시킨 1본쇄 항체(scFv), 중쇄 가변 영역(VH)과 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는 폴리펩타이드의 2량체인 다이아보디, scFv의 중쇄(H쇄)에 정상 영역의 일부(CH3)가 결합한 것의 2량체인 미니보디, 그 외의 저분자화 항체 등을 포함한다. 단, 항원과의 결합능을 가지고 있는 한 이들 분자로 한정되지 않는다. 또한, 이들 결합성 단편에는, 항체 단백질의 전장 분자를 적당한 효소로 처리한 것뿐만 아니라, 유전자 공학적으로 개변된 항체 유전자를 이용하여 적당한 숙주 세포에 있어서 산생된 단백질도 포함된다.
본 발명에 있어서, 「1본쇄 항체」라고 할 때는, 면역글로불린 경쇄의 가변 영역의 모두 또는 일부를 포함하는 아미노산 서열의 C말단측에 링커 서열이 결합하고, 추가로 그 C말단측에 면역글로불린 중쇄의 가변 영역의 모두 또는 일부를 포함하는 아미노산 서열이 결합하여 이루어지고, 특정의 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 단백질을 말한다. 예를 들어, 상기 (2), (3) 및 (5)에 나타나는 것은 1본쇄 항체에 포함된다. 또한, 면역글로불린 중쇄의 가변 영역의 모두 또는 일부를 포함하는 아미노산 서열의 C말단측에 링커 서열이 결합하고, 추가로 그 C말단측에 면역글로불린 경쇄의 가변 영역의 모두 또는 일부를 포함하는 아미노산 서열이 결합하여 이루어지고, 특정의 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 단백질도, 본 발명에 있어서의 「1본쇄 항체」이다. 면역글로불린 중쇄의 C말단측에 링커 서열을 개재하여 면역글로불린 경쇄가 결합한 1본쇄 항체에 있어서는, 통상, 면역글로불린 중쇄는, Fc 영역이 결실되어 있다. 면역글로불린 경쇄의 가변 영역은, 항체의 항원 특이성에 관여하는 상보성 결정 영역(CDR)을 3개 가지고 있다. 마찬가지로, 면역글로불린 중쇄의 가변 영역도, CDR을 3개 가지고 있다. 이들 CDR은, 항체의 항원 특이성을 결정하는 주된 영역이다. 따라서, 1본쇄 항체에는, 면역글로불린 중쇄의 3개의 CDR의 모두와 면역글로불린 경쇄의 3개의 CDR의 모두가 포함되는 것이 바람직하다. 단, 항체의 항원 특이적인 친화성이 유지되는 한, CDR의 1개 또는 복수개를 결실시킨 1본쇄 항체로 할 수도 있다.
1본쇄 항체에 있어서, 면역글로불린의 경쇄와 중쇄 사이에 배치되는 링커 서열은, 바람직하게는 2∼50개, 보다 바람직하게는 8∼50개, 더욱 바람직하게는 10∼30개, 보다 더 바람직하게는 12∼18개 또는 15∼25개, 예를 들어 15개 혹은 25개의 아미노산 잔기로 구성되는 펩타이드쇄이다. 그와 같은 링커 서열은, 이것에 의해 양쇄가 연결되는 항hTfR 항체가 hTfR에 대한 친화성을 유지하는 한, 그 아미노산 서열에 한정은 없지만, 바람직하게는, 글리신만 또는 글리신과 세린으로 구성되는 것이고, 예를 들어, 아미노산 서열 Gly-Ser, 아미노산 서열 Gly-Gly-Ser, 아미노산 서열 Gly-Gly-Gly, 아미노산 서열 Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열 번호 3), 아미노산 서열 Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열 번호 4), 아미노산 서열 Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly(서열 번호 5), 또는 이들 아미노산 서열이 2∼10회, 혹은 2∼5회 반복된 서열을 포함하는 것이다. 예를 들어, 면역글로불린 중쇄의 가변 영역의 전 영역으로 이루어지는 아미노산 서열의 C말단측에, 링커 서열을 개재하여 면역글로불린 경쇄의 가변 영역을 결합시키는 경우, 아미노산 서열 Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열 번호 3)의 3개가 연속한 것에 상당하는 합계 15개의 아미노산을 포함하는 링커 서열이 적합하다.
본 발명에 있어서, 「인간 트랜스페린 수용체」 또는 「hTfR」의 말은, 서열 번호 1에 나타나는 아미노산 서열을 가지는 막단백질을 말한다. 본 발명의 항hTfR 항체는, 그 일 실시태양에 있어서, 서열 번호 1로 나타나는 아미노산 서열 중 N말단측으로부터 89번째의 시스테인 잔기로부터 C말단의 페닐알라닌까지의 부분(hTfR의 세포외 영역)에 대해서 특이적으로 결합하는 것이지만, 이것으로 한정되지 않는다. 또한, 본 발명에 있어서 「원숭이 트랜스페린 수용체」 또는 「원숭이 TfR」의 말은, 특히, 필리핀원숭이(Macaca fascicularis) 유래의 서열 번호 2에 나타나는 아미노산 서열을 가지는 막단백질이다. 본 발명의 항hTfR 항체는, 그 일 실시태양에 있어서, 서열 번호 2로 나타나는 아미노산 서열 중 N말단측으로부터 89번째의 시스테인 잔기로부터 C말단의 페닐알라닌까지의 부분(원숭이 TfR의 세포외 영역)에 대해서도 결합하는 것이지만, 이것으로 한정되지 않는다.
hTfR에 대한 항체의 제작 방법으로서는, hTfR 유전자를 짜넣은 발현 벡터를 도입한 세포를 이용하여, 재조합 인간 트랜스페린 수용체(rhTfR)를 제작하고, 이 rhTfR을 이용하여 마우스 등의 동물을 면역하여 얻는 방법이 일반적이다. 면역 후의 동물로부터 hTfR에 대한 항체 산생 세포를 취출하고, 이것과 미엘로마 세포를 융합시키는 것에 의해, 항체 산생능을 가지는 하이브리도마 세포를 제작할 수 있다.
또한, 마우스 등의 동물로부터 얻은 면역계 세포를 체외 면역법에 의해 rhTfR로 면역하는 것에 의해서도, hTfR에 대한 항체를 산생하는 세포를 취득할 수 있다. 체외 면역법을 이용하는 경우, 그 면역계 세포가 유래하는 동물종에 특별히 한정은 없지만, 바람직하게는, 마우스, 래트, 토끼, 모르모트, 개, 고양이, 말, 및 인간을 포함하는 영장류이고, 보다 바람직하게는, 마우스, 래트 및 인간이며, 더욱 바람직하게는 마우스 및 인간이다. 마우스의 면역계 세포로서는, 예를 들어, 마우스의 비장으로부터 조제한 비세포를 이용할 수 있다. 인간의 면역계 세포로서는, 인간의 말초혈, 골수, 비장 등으로부터 조제한 세포를 이용할 수 있다. 인간의 면역계 세포를 체외 면역법에 의해 면역했을 경우, hTfR에 대한 인간 항체를 얻을 수 있다.
체외 면역법에 의해 면역계 세포를 면역한 후, 세포를 미엘로마 세포와 융합시키는 것에 의해, 항체 산생능을 가지는 하이브리도마 세포를 제작할 수 있다. 또한, 면역 후의 세포로부터 mRNA를 추출하여 cDNA를 합성하고, 이 cDNA를 주형으로 하여 PCR 반응에 의해 면역글로불린의 경쇄 및 중쇄를 코딩하는 유전자를 포함하는 DNA 단편을 증폭하고, 이들을 이용하여 인공적으로 항체 유전자를 재구축할 수도 있다.
상기 방법에 의해 얻어진 그대로의 하이브리도마 세포에는, hTfR 이외의 단백질을 항원으로서 인식하는 항체를 산생하는 세포도 포함된다. 또한, 항hTfR 항체를 산생하는 하이브리도마 세포의 모두가, hTfR에 대해서 고친화성을 나타내는 항hTfR 항체를 산생한다고도 할 수 없다.
마찬가지로, 인공적으로 재구축한 항체 유전자에는, hTfR 이외의 단백질을 항원으로서 인식하는 항체를 코딩하는 유전자도 포함된다. 또한, 항hTfR 항체를 코딩하는 유전자의 모두가, hTfR에 대해서 고친화성을 나타내는 항hTfR 항체를 코딩하는 등의 원하는 특성을 갖춘다고도 할 수 없다.
따라서, 상기에서 얻어진 그대로의 하이브리도마 세포로부터, 원하는 특성(hTfR에 대한 고친화성 등)을 가지는 항체를 산생하는 하이브리도마 세포를 선택하는 스텝이 필요하다. 또한, 인공적으로 재구축한 항체 유전자에 있어서는, 당해 항체 유전자로부터, 원하는 특성(hTfR에 대한 고친화성 등)을 가지는 항체를 코딩하는 유전자를 선택하는 스텝이 필요하다. hTfR에 대해서 고친화성을 나타내는 항체(고친화성 항체)를 산생하는 하이브리도마 세포, 또는 고친화성 항체를 코딩하는 유전자를 선택하는 방법으로서, 이하에 상술하는 방법이 유효하다. 한편, hTfR에 대해서 고친화성을 나타내는 항체란, 실시예 7에 기재된 방법에 의해 측정되는 hTfR과의 해리 상수(KD)가, 바람직하게는 1×10-8M 이하인 것이고, 보다 바람직하게는 1×10-9M 이하인 것이며, 더욱 바람직하게는 1×10-10 이하인 것이고, 더욱이 더 바람직하게는 1×10-11 이하인 것이다. 예를 들어 적합한 것으로서, 해리 상수가 1×10-13M∼1×10-9M인 것, 1×10-13M∼1×10-10인 것을 들 수 있다.
예를 들어, 항hTfR 항체에 대해서 고친화성의 항체를 산생하는 하이브리도마 세포를 선택하는 경우, 재조합 hTfR을 플레이트에 첨가하여 이것에 보지(保持)시킨 후, 하이브리도마 세포의 배양 상청을 첨가하고, 그 다음에 재조합 hTfR과 결합하고 있지 않는 항체를 플레이트로부터 제거하고, 플레이트에 보지된 항체의 양을 측정하는 방법이 이용된다. 이 방법에 의하면, 플레이트에 첨가한 하이브리도마 세포의 배양 상청에 포함되는 항체의 hTfR에 대한 친화성이 높을수록, 플레이트에 보지되는 항체의 양이 많아진다. 따라서, 플레이트에 보지된 항체의 양을 측정하여, 보다 많은 항체가 보지된 플레이트에 대응하는 하이브리도마 세포를, hTfR에 대해서 상대적으로 높은 친화성을 가지는 항hTfR 항체를 산생하는 세포주로서 선택할 수 있다. 이와 같이 하여 선택된 세포주로부터, mRNA를 추출하여 cDNA를 합성하고, 이 cDNA를 주형으로 하여 항hTfR 항체를 코딩하는 유전자를 포함하는 DNA 단편을 PCR법을 이용하여 증폭하는 것에 의해, 고친화성 항체를 코딩하는 유전자를 단리할 수도 있다.
상기의 인공적으로 재구축한 항체 유전자로부터, 고친화성을 가지는 항hTfR 항체를 코딩하는 유전자를 선택하는 경우는, 일단, 인공적으로 재구축한 항체 유전자를 발현 벡터에 짜넣고, 이 발현 벡터를 호스트 세포에 도입한다. 이 때, 호스트 세포로서 이용하는 세포로서는, 인공적으로 재구축한 항체 유전자를 짜넣은 발현 벡터를 도입하는 것에 의해 항체 유전자를 발현시킬 수 있는 세포이면 원핵세포, 진핵세포를 불문하고 특별히 한정은 없지만, 인간, 마우스, 차이니즈 햄스터 등의 포유동물 유래의 세포가 바람직하고, 특히 차이니즈 햄스터 난소 유래의 CHO 세포, 또는 마우스 미엘로마에서 유래하는 NS/0 세포가 바람직하다. 또한, 항체 유전자를 코딩하는 유전자를 짜넣어 발현시키기 위해서 이용하는 발현 벡터는, 포유동물 세포 내에 도입시켰을 때에, 해당 유전자를 발현시키는 것이면 특별히 한정없이 이용할 수 있다. 발현 벡터에 짜넣어진 해당 유전자는, 포유동물 세포 내에서 유전자의 전사의 빈도를 조절할 수 있는 DNA 서열(유전자 발현 제어 부위)의 하류에 배치된다. 본 발명에 있어서 이용할 수 있는 유전자 발현 제어 부위로서는, 예를 들어, 사이토메갈로바이러스 유래의 프로모터, SV40 초기 프로모터, 인간 신장 인자-1 알파(EF-1α) 프로모터, 인간 유비퀴틴 C 프로모터 등을 들 수 있다.
이와 같은 발현 벡터가 도입된 포유동물 세포는, 발현 벡터에 짜넣어진 전술한 인공적으로 재구축한 항체를 발현하게 된다. 이와 같이 하여 얻은, 인공적으로 재구축한 항체를 발현하는 세포로부터, 항hTfR 항체에 대해서 고친화성을 가지는 항체를 산생하는 세포를 선택하는 경우, 재조합 hTfR을 플레이트에 첨가하여 이것에 보지시킨 후, 재조합 hTfR에 세포의 배양 상청을 접촉시키고, 그 다음에, 재조합 hTfR과 결합하고 있지 않는 항체를 플레이트로부터 제거하고, 플레이트에 보지된 항체의 양을 측정하는 방법이 이용된다. 이 방법에 의하면, 세포의 배양 상청에 포함되는 항체의 hTfR에 대한 친화성이 높을수록, 플레이트에 보지된 항체의 양이 많아진다. 따라서, 플레이트에 보지된 항체의 양을 측정하여, 보다 많은 항체가 보지된 플레이트에 대응하는 세포를, hTfR에 대해서 상대적으로 높은 친화성을 가지는 항hTfR 항체를 산생하는 세포주로서 선택할 수 있고, 나아가서는, hTfR에 대해서 고친화성을 가지는 항hTfR 항체를 코딩하는 유전자를 선택할 수 있다. 이와 같이 하여 선택된 세포주로부터, 항hTfR 항체를 코딩하는 유전자를 포함하는 DNA 단편을, PCR법을 이용하여 증폭하는 것에 의해, 고친화성 항체를 코딩하는 유전자를 단리할 수 있다.
상기의 인공적으로 재구축한 항체 유전자로부터의, 고친화성을 가지는 항hTfR 항체를 코딩하는 유전자의 선택은, 인공적으로 재구축한 항체 유전자를 발현 벡터에 짜넣고, 이 발현 벡터를 대장균에 도입하고, 이 대장균을 배양하여 얻은 배양 상청 또는 대장균을 용해시켜 얻은 항체를 포함하는 용액을 이용하여, 전술한 하이브리도마 세포를 선택하는 경우와 마찬가지의 방법으로, 원하는 유전자를 가지는 대장균을 선택하는 것에 의해서도 할 수 있다. 선택된 대장균주는, hTfR에 대해서 상대적으로 높은 친화성을 가지는 항hTfR 항체를 코딩하는 유전자를 발현하는 것이다. 이 세포주로부터, hTfR에 대해서 상대적으로 높은 친화성을 가지는 항hTfR 항체를 코딩하는 유전자를 선택할 수 있다. 대장균의 배양 상청 중에 항체를 분비시키는 경우에는, N말단측에 분비 시그널 서열이 결합하도록 항체 유전자를 발현 벡터에 짜넣으면 된다.
고친화성을 가지는 항hTfR 항체를 코딩하는 유전자를 선택하는 다른 방법으로서, 전술한 인공적으로 재구축한 항체 유전자로 코딩된 항체를 파지 입자 상에 보지시켜 발현시키는 방법이 있다. 이 때, 항체 유전자는, 1본쇄 항체를 코딩하는 유전자로서 재구축된다. 항체를 파지 입자 상에 보지하는 방법은, 국제 공개공보(WO1997/09436, WO1995/11317) 등에 기재되어 있고, 주지이다. 인공적으로 재구축한 항체 유전자로 코딩된 항체를 보지하는 파지로부터, 항hTfR 항체에 대해서 고친화성을 가지는 항체를 보지하는 파지를 선택하는 경우, 재조합 hTfR을, 플레이트에 첨가하여 보지시킨 후, 파지를 접촉시키고, 그 다음에 플레이트로부터 재조합 hTfR과 결합하고 있지 않는 파지를 제거하고, 플레이트에 보지된 파지의 양을 측정하는 방법이 이용된다. 이 방법에 의하면, 파지 입자 상에 보지된 항체의 hTfR에 대한 친화성이 높을수록, 플레이트에 보지된 파지의 양이 많아진다. 따라서, 플레이트에 보지된 파지의 양을 측정하여, 보다 많은 파지가 보지된 플레이트에 대응하는 파지 입자를, hTfR에 대해서 상대적으로 높은 친화성을 가지는 항hTfR 항체를 산생하는 파지 입자로서 선택할 수 있고, 나아가서는, hTfR에 대해서 고친화성을 가지는 항hTfR 항체를 코딩하는 유전자를 선택할 수 있다. 이와 같이 하여 선택된 파지 입자로부터, 항hTfR 항체를 코딩하는 유전자를 포함하는 DNA 단편을, PCR법을 이용하여 증폭하는 것에 의해, 고친화성 항체를 코딩하는 유전자를 단리할 수 있다.
상기의 항hTfR 항체에 대해서 고친화성을 가지는 항체를 산생하는 하이브리도마 세포 등의 세포, 또는, 항hTfR 항체에 대해서 고친화성을 가지는 항체를 가지는 파지 입자로부터 cDNA 또는 파지 DNA를 조제하고, 이것을 주형으로 하여 항hTfR 항체의 경쇄, 항hTfR 항체의 중쇄, 또는 항hTfR 항체인 1본쇄 항체의, 모두 또는 그 일부를 코딩하는 유전자를 포함하는 DNA 단편을, PCR법 등에 의해 증폭하여 단리할 수 있다. 마찬가지로 하여, 항hTfR 항체의 경쇄의 가변 영역의 모두 또는 그 일부를 코딩하는 유전자를 포함하는 DNA 단편, 항hTfR 항체의 중쇄의 가변 영역의 모두 또는 그 일부를 코딩하는 유전자를 포함하는 DNA 단편을, PCR법 등에 의해 증폭하여 단리할 수도 있다.
이 고친화성을 가지는 항hTfR 항체의 경쇄 및 중쇄를 코딩하는 유전자의 모두 또는 그 일부를 발현 벡터에 짜넣고, 이 발현 벡터를 이용하여 포유동물 세포 등의 호스트 세포를 형질 전환하고, 얻어진 형질 전환 세포를 배양하는 것에 의해, 고친화성을 가지는 항hTfR 항체를 산생시킬 수 있다. 단리된 항hTfR 항체를 코딩하는 유전자의 염기 서열로부터 항hTfR 항체의 아미노산 서열을 번역하여, 이 아미노산 서열을 코딩하는 DNA 단편을 인공적으로 합성할 수도 있다. DNA 단편을 인공적으로 합성하는 경우, 적절한 코돈을 선택하는 것에 의해, 호스트 세포에 있어서의 항hTfR 항체의 발현량을 증가시킬 수 있다.
원래의 항hTfR 항체에 아미노산 서열에 치환, 결실, 부가 등의 변이를 가하기 위해서, 단리된 DNA 단편에 포함되는 항hTfR 항체를 코딩하는 유전자에, 적절히 변이를 가할 수도 있다. 변이를 가한 후의 항hTfR 항체를 코딩하는 유전자는, 원래의 유전자와 바람직하게는 80% 이상의 상동성을 가지는 것이고, 보다 바람직하게는 90% 이상의 상동성을 가지는 것이지만, 상동성에 특별히 제한은 없다. 아미노산 서열에 변이를 가하는 것에 의해, 항hTfR 항체와 결합하는 당쇄의 수, 당쇄의 종류를 개변하여, 생체내에 있어서의 항hTfR 항체의 안정성을 증가시키는 것 등도 할 수 있다.
항hTfR 항체의 경쇄의 가변 영역의 모두 또는 그 일부를 코딩하는 유전자에 변이를 가하는 경우에 있어서는, 변이를 가한 후의 유전자는, 원래의 유전자와 바람직하게는 80% 이상의 상동성을 가지는 것이고, 보다 바람직하게는 90% 이상의 상동성을 가지는 것이지만, 상동성에 특별히 제한은 없다. 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열의 아미노산을 다른 아미노산으로 치환시키는 경우, 치환시키는 아미노산의 개수는, 바람직하게는 1∼10개이며, 보다 바람직하게는 1∼5개이며, 더욱 바람직하게는 1∼3개이며, 보다 더 바람직하게는 1∼2개이다. 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 중의 아미노산을 결실시키는 경우, 결실시키는 아미노산의 개수는, 바람직하게는 1∼10개이고, 보다 바람직하게는 1∼5개이며, 더욱 바람직하게는 1∼3개이고, 보다 더 바람직하게는 1∼2개이다. 또한, 이들 아미노산의 치환과 결실을 조합한 변이를 가할 수도 있다. 경쇄의 가변 영역에 아미노산을 부가시키는 경우, 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 중 혹은 N말단측 또는 C말단측에, 바람직하게는 1∼10개, 보다 바람직하게는 1∼5개, 더욱 바람직하게는 1∼3개, 보다 더 바람직하게는 1∼2개 아미노산이 부가된다. 이들 아미노산의 부가, 치환 및 결실을 조합한 변이를 가할 수도 있다. 변이를 가한 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열은, 원래의 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열과 바람직하게는 80% 이상의 상동성을 가지고, 보다 바람직하게는 90% 이상의 상동성을 나타내며, 더욱 바람직하게는, 95% 이상의 상동성을 나타낸다. 특히, CDR의 아미노산 서열의 아미노산을 다른 아미노산으로 치환시키는 경우, 치환시키는 아미노산의 개수는, 바람직하게는 1∼5개이고, 보다 바람직하게는 1∼3개이며, 더욱 바람직하게는 1∼2개이다. CDR의 아미노산 서열 중의 아미노산을 결실시키는 경우, 결실시키는 아미노산의 개수는, 바람직하게는 1∼5개이고, 보다 바람직하게는 1∼3개이며, 더욱 바람직하게는 1∼2개이다. 또한, 이들 아미노산의 치환과 결실을 조합한 변이를 가할 수도 있다. 아미노산을 부가시키는 경우, 당해 아미노산 서열 중 혹은 N말단측 또는 C말단측에, 바람직하게는 1∼5개, 보다 바람직하게는 1∼3개, 더욱 바람직하게는 1∼2개의 아미노산이 부가된다. 이들 아미노산의 부가, 치환 및 결실을 조합한 변이를 가할 수도 있다. 변이를 가한 각 CDR의 각각의 아미노산 서열은, 원래의 각 CDR의 아미노산 서열과 바람직하게는 80% 이상의 상동성을 가지고, 보다 바람직하게는 90% 이상의 상동성을 나타내며, 더욱 바람직하게는, 95% 이상의 상동성을 나타낸다.
항hTfR 항체의 중쇄의 가변 영역의 모두 또는 그 일부를 코딩하는 유전자에 변이를 가하는 경우에 있어서는, 변이를 가한 후의 유전자는, 원래의 유전자와 바람직하게는 80% 이상의 상동성을 가지는 것이고, 보다 바람직하게는 90% 이상의 상동성을 가지는 것이지만, 상동성에 특별히 제한은 없다. 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열의 아미노산을 다른 아미노산으로 치환시키는 경우, 치환시키는 아미노산의 개수는, 바람직하게는 1∼10개이고, 보다 바람직하게는 1∼5개이며, 더욱 바람직하게는 1∼3개이고, 보다 더 바람직하게는 1∼2개이다. 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 중의 아미노산을 결실시키는 경우, 결실시키는 아미노산의 개수는, 바람직하게는 1∼10개이고, 보다 바람직하게는 1∼5개이며, 더욱 바람직하게는 1∼3개이고, 보다 더 바람직하게는 1∼2개이다. 또한, 이들 아미노산의 치환과 결실을 조합한 변이를 가할 수도 있다. 중쇄의 가변 영역에 아미노산을 부가시키는 경우, 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 중 혹은 N말단측 또는 C말단측에, 바람직하게는 1∼10개, 보다 바람직하게는 1∼5개, 더욱 바람직하게는 1∼3개, 보다 더 바람직하게는 1∼2개 아미노산이 부가된다. 이들 아미노산의 부가, 치환 및 결실을 조합한 변이를 가할 수도 있다. 변이를 가한 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열은, 원래의 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열과 바람직하게는 80% 이상의 상동성을 가지고, 보다 바람직하게는 90% 이상의 상동성을 나타내며, 더욱 바람직하게는, 95% 이상의 상동성을 나타낸다. 특히, CDR의 아미노산 서열의 아미노산을 다른 아미노산으로 치환시키는 경우, 치환시키는 아미노산의 개수는, 바람직하게는 1∼5개이고, 보다 바람직하게는 1∼3개이며, 더욱 바람직하게는 1∼2개이다. CDR의 아미노산 서열 중의 아미노산을 결실시키는 경우, 결실시키는 아미노산의 개수는, 바람직하게는 1∼5개이고, 보다 바람직하게는 1∼3개이며, 더욱 바람직하게는 1∼2개이다. 또한, 이들 아미노산의 치환과 결실을 조합한 변이를 가할 수도 있다. 아미노산을 부가시키는 경우, 당해 아미노산 서열 중 혹은 N말단측 또는 C말단측에, 바람직하게는 1∼5개, 보다 바람직하게는 1∼3개, 더욱 바람직하게는 1∼2개의 아미노산이 부가된다. 이들 아미노산의 부가, 치환 및 결실을 조합한 변이를 가할 수도 있다. 변이를 가한 각 CDR의 각각의 아미노산 서열은, 원래의 각 CDR의 아미노산 서열과 바람직하게는 80% 이상의 상동성을 가지고, 보다 바람직하게는 90% 이상의 상동성을 나타내며, 더욱 바람직하게는, 95% 이상의 상동성을 나타낸다.
상기의 항hTfR 항체의 경쇄의 가변 영역에의 변이와, 상기의 항hTfR 항체의 중쇄의 가변 영역에의 변이를 조합하여, 항hTfR 항체의 경쇄와 중쇄의 가변 영역의 양방에 변이를 가할 수도 있다.
상기의 항hTfR 항체의 경쇄 및 중쇄의 아미노산 서열 중의 아미노산의 다른 아미노산으로의 치환으로서는, 예를 들어, 산성 아미노산인 아스파라긴산과 글루타민산의 상호의 치환, 아마이드형 아미노산인 아스파라긴과 글루타민의 상호의 치환, 염기성 아미노산인 리신과 아르기닌의 상호의 치환, 분지 아미노산인 발린, 류신 및 아이소류신의 상호의 치환, 지방족 아미노산인 글리신과 알라닌의 상호의 치환, 하이드록시아미노산인 세린과 트레오닌의 상호의 치환, 방향족 아민산인 페닐알라닌과 티로신의 상호의 치환 등을 들 수 있다.
한편, 항hTfR 항체에 변이를 가하여 C말단 또는 N말단에 아미노산을 부가했을 경우에 있어서, 당해 아미노산을 개재하여 항hTfR 항체와 다른 단백질 A를 융합시켰을 때는, 당해 아미노산은 링커의 일부를 구성한다. 항hTfR 항체를 다른 단백질 A와 융합시켰을 때에, 항hTfR 항체와 다른 단백질 A 사이에 배치되는 링커에 대해서는 후에 상술한다.
상기의 방법 등에 의해 선택된 hTfR에 대해서 비교적 높은 친화성을 가지는 항hTfR 항체를 산생하는 세포를 배양하여 얻어지는 항hTfR 항체, 및 고친화성을 가지는 항hTfR 항체를 코딩하는 유전자를 발현시켜 얻어지는 항hTfR 항체는, 그 아미노산 서열에 치환, 결실, 부가 등의 변이를 도입하는 것에 의해 원하는 특성을 가지는 항체로 개변시킬 수도 있다. 항hTfR 항체의 아미노산 서열으로의 변이의 도입은, 그 아미노산 서열에 대응하는 유전자에 변이를 가하는 것에 의해 행해진다.
항hTfR 항체는, 그 항체의 가변 영역의 아미노산 서열에 치환, 결실, 부가 등의 변이를 가하는 것에 의해, 항체의 hTfR에 대한 친화성을 적절히 조정할 수 있다. 예를 들어, 항체와 항원의 친화성이 높고, 수성액 중에서의 해리 상수가 현저하게 낮은 경우, 이것을 생체내에 투여했을 때에, 항체가 항원과 해리되지 않고, 그 결과, 기능상의 지장이 생길 가능성이 있다. 이와 같은 경우에, 항체의 가변 영역에 변이를 도입하는 것에 의해, 해리 상수를, 원래의 항체의 2∼5배, 5∼10배, 10∼100배 등으로 단계적으로 조정하여, 목적에 합치한 가장 바람직한 항체를 획득 할 수 있다. 반대로, 당해 변이의 도입에 의해, 해리 상수를, 원래의 항체의 1/2∼1/5배, 1/5∼1/10배, 1/10∼1/100배 등으로 단계적으로 조정할 수도 있다.
항hTfR 항체의 아미노산 서열로의 치환, 결실, 부가 등의 변이의 도입은, 예를 들어, 항hTfR 항체를 코딩하는 유전자를 주형으로 하여, PCR 등의 방법에 의해, 유전자의 염기 서열의 특정의 부위에 변이를 도입하거나, 또는 랜덤으로 변이를 도입하는 것에 의해 행할 수 있다.
항체와 hTfR의 친화성의 조정을 목적으로 한, 항hTfR 항체의 아미노산 서열로의 변이의 도입은, 예를 들어, 1본쇄 항체인 항hTfR 항체를 코딩하는 유전자를 파지미드에 짜넣고, 이 파지미드를 이용하여 캡시드 표면 상에 1본쇄 항체를 발현시킨 파지를 제작하고, 변이원 등을 작용시키는 것에 의해 1본쇄 항체를 코딩하는 유전자 상에 변이를 도입시키면서 파지를 증식시키고, 증식시킨 파지로부터, 원하는 해리 상수를 가지는 1본쇄 항체를 발현하는 파지를, 전술한 방법에 의해 선택하거나, 또는 일정 조건하에서 항원 컬럼을 이용하여 정제하는 것에 의해, 얻을 수 있다.
상기의 고친화성 항체를 산생하는 세포를 선택하는 방법에 의해 얻어지는, hTfR에 대해서 상대적으로 높은 친화성을 가지는 항체는, 바람직하게는, 실시예 7에 기재된 방법에 의해 측정되는 hTfR과의 해리 상수(KD)가, 바람직하게는 1×10-8M 이하인 것이고, 보다 바람직하게는 1×10-9M 이하인 것이고, 더욱 바람직하게는 1×10-10 이하인 것이며, 더욱이 더 바람직하게는 1×10-11 이하인 것이다. 예를 들어 적합한 것으로서, 해리 상수가 1×10-13M∼1×10-9M인 것, 1×10-13M∼1×10-10인 것을 들 수 있다. 항체가 1본쇄 항체여도 마찬가지이다. 일단 얻어진 항체는, 변이를 도입하는 등을 하여, 원하는 특성을 가지도록 적절히 개변할 수 있다.
상기의 고친화성 항체를 산생하는 세포를 선택하는 방법에 의해 얻어지는, 상대적으로 높은 친화성을 가지는 항체로부터, 원숭이 TfR에 대한 친화성을 가지는 항체를 선택하는 것에 의해, 인간 및 원숭이의 TfR의 어느 것에도 친화성을 가지는 항체를 얻을 수 있다. 원숭이 TfR에 대한 친화성을 가지는 항체는, 예를 들어, 유전자 재조합 기술을 이용하여 제작한 재조합 원숭이 TfR을 이용한 ELISA법에 의해 선택할 수 있다. 이 ELISA법에서는, 재조합 원숭이 TfR을 플레이트에 첨가하여 이것에 보지시킨 후, 항hTfR 항체를 접촉시키고, 그 다음에 재조합 원숭이 TfR과 결합하고 있지 않는 항체를 플레이트로부터 제거하고, 플레이트에 보지된 항체의 양을 측정한다. 재조합 원숭이 TfR에 대한 친화성이 높을수록 플레이트에 보지되는 항체의 양이 많아지므로, 보다 많은 항체가 보지된 플레이트에 대응하는 항체를, 원숭이 TfR에 친화성을 가지는 항체로서 선택할 수 있다. 한편, 여기에서 말하는 「원숭이」란, 바람직하게는 인간을 제외한 유인원으로 분류되는 것이고, 보다 바람직하게는 긴꼬리원숭이과로 분류되는 것이고, 더욱 바람직하게는 마카크속으로 분류되는 것이고, 예를 들어, 필리핀원숭이 또는 히말라야원숭이이며, 특히 필리핀원숭이는, 평가에 이용하는 데 있어서 형편이 좋다.
인간 및 원숭이의 hTfR의 어느 것에도 친화성을 가지는 항체는, 이 항체를 투여했을 때의 생체내에서의 동태를, 원숭이를 이용하여 관찰할 수 있다고 하는 유리한 효과를 가진다. 예를 들어, 본 발명의 항hTfR 항체를 이용하여 의약을 개발하는 경우, 당해 의약의 약물 동태 시험을 원숭이를 이용하여 실시할 수 있기 때문에, 당해 의약의 개발을 현저하게 촉진할 수 있다.
hTfR에 대해서 상대적으로 높은 친화성을 가지는 항체로서, 인간 및 원숭이의 TfR의 어느 것에도 친화성을 가지는 항체는, 실시예 7에 기재된 방법에 의해 측정되는 원숭이 TfR과의 해리 상수가, 바람직하게는 5×10-8M 이하인 것이고, 보다 바람직하게는 2×10-8M 이하인 것이며, 더욱 바람직하게는 1×10-8M 이하인 것이다. 예를 들어 적합한 것으로서, 해리 상수가 1×10-13M∼2×10-8M인 것, 1×10-13M∼2×10-8M인 것을 들 수 있다. 항체가 1본쇄 항체여도 마찬가지이다.
상기의 고친화성 항체를 산생하는 세포를 선택하는 방법에 의해 얻어진, hTfR에 대해서 상대적으로 높은 친화성을 가지는 항체는, 인간 이외의 동물의 항체인 경우, 인간화 항체로 할 수 있다. 인간화 항체란, 항원에 대한 특이성을 유지하면서, 인간 이외의 동물의 항체의 가변 영역의 일부(예를 들어, 특히 CDR의 전부 또는 일부)의 아미노산 서열에 의해 인간 항체의 적절한 영역을 치환하여(이식하여) 얻어지는 항체이다. 예를 들어, 인간화 항체로서, 인간 항체를 구성하는 면역글로불린 경쇄의 3개소의 상보성 결정 영역(CDR)과 면역글로불린 중쇄의 3개소의 상보성 결정 영역(CDR)을, 다른 포유동물의 CDR로 치환한 항체를 들 수 있다. 인간 항체에 짜넣어지는 CDR이 유래하는 생물종은, 인간 이외의 포유동물인 한 특별히 한정은 없지만, 바람직하게는, 마우스, 래트, 토끼, 말, 인간 이외의 영장류이고, 보다 바람직하게는 마우스 및 래트이며, 더욱 바람직하게는 마우스이다.
인간화 항체의 제작법은, 당해 기술 분야에서 주지이며, 윈터(Winter) 등이 고안한, 인간 항체의 가변 영역에 있는 상보성 결정 영역(CDR)의 아미노산 서열을, 비인간 포유동물의 항체의 CDR로 치환하는 방법(Verhoeyen M. Science. 239. 1534-1536(1988))에 기초하는 것이, 가장 일반적이다. 여기에서, 비인간 포유동물의 항체의 CDR 뿐만 아니라, CDR의 구조 유지 혹은 항원과의 결합에 관여하고 있는 CDR 외의 영역의 아미노산 서열에 의해, 억셉터가 되는 인간 항체의 대응하는 개소를 치환하는 것이, 도너 항체가 가지는 본래의 활성을 재현하기 위해서 필요한 경우가 있음도 주지이다(Queen C. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 86. 10029-10033(1989). 여기에서, CDR 외의 영역은, 프레임워크 영역(FR)이라고도 한다.
즉, 인간화 항체의 제작은, 인간 항체의 가변 영역의 CDR(과 경우에 따라 그 주변의 FR) 대신에, 비인간 포유동물의 항체의 CDR(과 경우에 따라 그 주변의 FR)을 이식하는 작업을 포함한다. 이 작업에 있어서, 본이 되는 인간 항체의 가변 영역의 프레임워크 영역은, 생식 세포 계열 항체 유전자 서열을 포함하는 공공의 DNA 데이터베이스 등으로부터 얻을 수 있다. 예를 들어, 인간 중쇄 및 경쇄 가변 영역 유전자의 생식 세포 계열 DNA 서열 및 아미노산 서열은, 「VBase」 인간 생식 세포계 서열 데이터베이스(인터넷에 있어서 www.mrc-cpe.cam.ac.uk/vbase에서 입수 가능)로부터 선택할 수 있다. 이 외, 공표된 문헌, 예를 들어 「Kabat EA. Sequences of Proteins of Immunological Interest, 제5판, 미국 보건복지성, NIH Publication No. 91-3242(1991)」, 「Tomlinson IM. J. fol. Biol. 227. 776-98(1992)」, 「Cox JPL. Eur. J Immunol. 24:827-836(1994)」 등에 기재된 DNA 서열 및 아미노산 서열로부터 선택할 수도 있다.
이상과 같이, 인간화 항체에 있어서, 원래의 인간 항체의 가변 영역에 이식되는 비인간 포유동물의 항체의 영역은, 일반적으로, CDR 그 자체, 또는 CDR과 그 주변의 FR을 포함한다. 단, CDR과 함께 이식되는 FR도, CDR의 구조 유지 혹은 항원과의 결합에 관여하고 있고, 실질적으로 항체의 상보성을 결정하는 기능을 가진다고 생각되므로, 본 발명에 있어서 「CDR」의 말은, 인간화 항체를 제작하는 경우에, 비인간 포유동물의 항체로부터 인간화 항체로 이식되거나, 또는 이식될 수 있는 영역을 말한다. 즉, 일반적으로 FR로 여겨지는 영역에 있어서도, 그것이 CDR의 구조 유지 혹은 항원과의 결합에 관여하고 있고, 실질적으로 항체의 상보성을 결정하는 기능을 가지고 있다고 생각되는 것인 한, 본 발명에 있어서는 CDR에 포함한다.
본 발명의 항hTfR 항체는, 이것을 정맥 주사 등에 의해 생체내에 투여했을 경우, 뇌내의 모세혈관 내피 세포 상에 존재하는 hTfR에 효율 좋게 결합할 수 있다. hTfR과 결합한 항체는, 엔도사이토시스, 트랜스사이토시스 등의 기구에 의해 혈액뇌관문을 통과하여 뇌내에 받아들여진다. 따라서, 뇌내에서 기능시켜야 할 단백질, 저분자 화합물 등을, 본 발명의 항hTfR 항체와 결합시키는 것에 의해, 이들 물질에 효율 좋게 혈액뇌관문을 통과시켜 뇌내에 도달시킬 수 있다. 또한, 본 발명의 항hTfR 항체는, 혈액뇌관문을 통과한 후에, 대뇌의 뇌실질, 해마의 신경양 세포, 소뇌의 푸르킨예 세포 등에, 또는 적어도 이들 중 어느 것에 도달할 수 있다. 그리고, 대뇌의 선조체의 신경양 세포 및 중뇌의 흑질의 신경양 세포에 도달할 것도 예상된다. 따라서, 이들 조직 또는 세포에 작용하는 단백질, 저분자 화합물 등을, 본 발명의 항hTfR 항체와 결합시키는 것에 의해, 이들 조직 또는 세포에 도달시킬 수 있다.
통상이면 혈액뇌관문을 통과하지 못하고, 그 때문에 정맥내 투여에서는 뇌내에서 생리적, 약리적인 작용을 거의 또는 전혀 발휘할 수 없는 물질(단백질, 저분자 화합물 등)을, 혈중에서 뇌내로 도달시켜 거기에서 작용을 발휘시키는데 있어서, 본 발명의 항hTfR 항체는, 유효한 수단이 될 수 있다. 특히, 본 발명의 항hTfR 항체는 혈액뇌관문을 통과한 후에, 대뇌의 뇌실질, 해마의 신경양 세포, 소뇌의 푸르킨예 세포 등에, 또는 적어도 이들 중 어느 것에 도달한다. 그리고, 대뇌의 선조체의 신경양 세포 및 중뇌의 흑질의 신경양 세포에 도달할 것도 예상된다. 따라서, 그들 물질을 본 발명의 항hTfR 항체 분자와 결합한 형태로서 정맥내 투여 등에 의해 혈중 투여하는 것에 의해, 이들 뇌의 조직 또는 세포에 있어서 그들의 작용을 발휘시키거나 또는 강화하는 것이 가능해진다.
항hTfR 항체와 그와 같은 물질(단백질, 저분자 화합물 등)을 결합시키는 방법으로서는, 비(非)펩타이드 링커 또는 펩타이드 링커를 개재하여 결합시키는 방법이 있다. 비펩타이드 링커로서는, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜, 에틸렌 글리콜과 프로필렌 글리콜의 공중합체, 폴리옥시에틸화 폴리올, 폴리바이닐알코올, 다당류, 덱스트란, 폴리바이닐 에터, 생분해성 고분자, 지방질 중합체, 키틴류, 및 하이아루론산, 또는 이들의 유도체, 혹은 이들을 조합한 것을 이용할 수 있다. 펩타이드 링커는, 펩타이드 결합한 1∼50개의 아미노산으로 구성되는 펩타이드쇄 혹은 그의 유도체이며, 그 N말단과 C말단이, 각각 항hTfR 항체 또는 단백질, 저분자 화합물 등의 어느 것과 공유 결합을 형성하는 것에 의해, 항hTfR 항체와 단백질, 저분자 화합물 등을 결합시키는 것이다.
비펩타이드 링커로서 PEG를 이용하여 본 발명의 항hTfR 항체와 원하는 다른 단백질 A를 결합시킨 것은, 특히, 항hTfR 항체-PEG-단백질이라고 한다. 항hTfR 항체-PEG-단백질은, 항hTfR 항체와 PEG를 결합시켜 항hTfR 항체-PEG를 제작하고, 그 다음에 항hTfR 항체-PEG와 다른 단백질 A를 결합시키는 것에 의해 제조할 수 있다. 또는, 항hTfR 항체-PEG-단백질은, 다른 단백질 A와 PEG를 결합시켜 단백질-PEG를 제작하고, 그 다음에 단백질-PEG와 항hTfR 항체를 결합시키는 것에 의해서도 제조할 수 있다. PEG를 항hTfR 항체 및 다른 단백질 A와 결합시킬 때에는, 카보네이트, 카보닐이미다졸, 카복실산의 활성 에스터, 아즈락톤, 환상 이미드싸이온, 아이소사이아네이트, 아이소싸이오사이아네이트, 이미데이트, 또는 알데하이드 등의 작용기로 수식된 PEG가 이용된다. 이들 PEG에 도입된 작용기가, 주로 항hTfR 항체 및 다른 단백질 A분자 내의 아미노기와 반응하는 것에 의해, PEG와 hTfR 항체 및 다른 단백질 A가 공유 결합한다. 이 때 이용되는 PEG의 분자량 및 형상에 특별히 한정은 없지만, 그 평균 분자량(MW)은, 바람직하게는 MW=500∼60000이며, 보다 바람직하게는 MW=500∼20000이다. 예를 들어, 평균 분자량이 약 300, 약 500, 약 1000, 약 2000, 약 4000, 약 10000, 약 20000 등인 PEG는, 비펩타이드 링커로서 적합하게 사용할 수 있다. 항hTfR 항체와 원하는 저분자 화합물을 결합시키는 경우도 마찬가지이다.
예를 들어, 항hTfR 항체-PEG는, 항hTfR 항체와 알데하이드기를 작용기로서 가지는 폴리에틸렌 글리콜(ALD-PEG-ALD)을, 해당 항체에 대한 ALD-PEG-ALD의 몰비가 11, 12.5, 15, 110, 120 등이 되도록 혼합하고, 이것에 NaCNBH3 등의 환원제를 첨가하여 반응시키는 것에 의해 얻어진다. 그 다음에, 항hTfR 항체-PEG를, NaCNBH3 등의 환원제의 존재하에서, 다른 단백질 A와 반응시키는 것에 의해, 항hTfR 항체-PEG-단백질이 얻어진다. 반대로, 먼저 다른 단백질 A와 ALD-PEG-ALD를 결합시켜 단백질-PEG를 제작하고, 그 다음에 단백질-PEG와 항hTfR 항체를 결합시키는 것에 의해서도, 항hTfR 항체-PEG-단백질을 얻을 수 있다.
항hTfR 항체와 다른 단백질 A는, 항hTfR 항체의 중쇄 또는 경쇄의 C말단측 또는 N말단측에, 링커 서열을 개재하여 또는 직접, 각각 다른 단백질 A의 N말단 또는 C말단을 펩타이드 결합에 의해 결합시킬 수도 있다. 이와 같이 항hTfR 항체와 다른 단백질 A를 결합시켜 이루어지는 융합 단백질은, 항hTfR 항체의 중쇄 또는 경쇄를 코딩하는 cDNA의 3'말단측 또는 5'말단측에, 직접 또는 링커 서열을 코딩하는 DNA 단편을 끼우고, 다른 단백질 A를 코딩하는 cDNA가 인프레임으로 배치된 DNA 단편을, 포유동물 세포용의 발현 벡터에 짜넣고, 이 발현 벡터를 도입한 포유동물 세포를 배양하는 것에 의해, 얻을 수 있다. 이 포유동물 세포에는, 다른 단백질 A를 코딩하는 DNA 단편을 중쇄와 결합시키는 경우에 있어서는, 항hTfR 항체의 경쇄를 코딩하는 cDNA 단편을 짜넣은 포유동물 세포용의 발현 벡터도, 동일한 호스트 세포에 도입되고, 또한, 다른 단백질 A를 코딩하는 DNA 단편을 경쇄와 결합시키는 경우에 있어서는, 항hTfR 항체의 중쇄를 코딩하는 cDNA 단편을 짜넣은 포유동물 세포용의 발현 벡터도, 동일한 호스트 세포에 도입된다. 항hTfR 항체가 1본쇄 항체인 경우, 항hTfR 항체와 다른 단백질 A를 결합시킨 융합 단백질은, 다른 단백질 A를 코딩하는 cDNA의 5'말단측 또는 3'말단측에, 직접, 또는 링커 서열을 코딩하는 DNA 단편을 끼우고, 1본쇄 항hTfR 항체를 코딩하는 cDNA를 연결한 DNA 단편을, (포유동물 세포, 효모 등의 진핵생물 또는 대장균 등의 원핵생물 세포용의) 발현 벡터에 짜넣고, 이 발현 벡터를 도입한 이들 세포 중에서 발현시키는 것에 의해, 얻을 수 있다.
항hTfR 항체의 경쇄의 C말단측에 다른 단백질 A를 결합시킨 타입의 융합 단백질은, 항인간 트랜스페린 수용체 항체가, 경쇄의 가변 영역의 모두 또는 일부를 포함하는 아미노산 서열과 중쇄의 가변 영역의 모두 또는 일부를 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 것이고, 다른 단백질 A가, 이 항인간 트랜스페린 수용체 항체의 경쇄의 C말단측에 결합한 것이다. 여기에서 항hTfR 항체의 경쇄와 다른 단백질 A는, 직접 결합해도 되고, 링커를 개재하여 결합해도 된다.
항hTfR 항체의 중쇄의 C말단측에 다른 단백질 A를 결합시킨 타입의 융합 단백질은, 항인간 트랜스페린 수용체 항체가, 경쇄의 가변 영역의 모두 또는 일부를 포함하는 아미노산 서열과 중쇄의 가변 영역의 모두 또는 일부를 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 것이고, 다른 단백질 A가, 이 항인간 트랜스페린 수용체 항체의 중쇄의 C말단측에 결합한 것이다. 여기에서 항hTfR 항체의 중쇄와 다른 단백질 A는, 직접 결합해도 되고, 링커를 개재하여 결합해도 된다.
항hTfR 항체의 경쇄의 N말단측에 다른 단백질 A를 결합시킨 타입의 융합 단백질은, 항인간 트랜스페린 수용체 항체가, 경쇄의 가변 영역의 모두 또는 일부를 포함하는 아미노산 서열과 중쇄의 가변 영역의 모두 또는 일부를 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 것이고, 다른 단백질 A가, 이 항인간 트랜스페린 수용체 항체의 경쇄의 N말단측에 결합한 것이다. 여기에서 항hTfR 항체의 경쇄와 다른 단백질 A는, 직접 결합해도 되고, 링커를 개재하여 결합해도 된다.
항hTfR 항체의 중쇄의 N말단측에 다른 단백질 A를 결합시킨 타입의 융합 단백질은, 항인간 트랜스페린 수용체 항체가, 경쇄의 가변 영역의 모두 또는 일부를 포함하는 아미노산 서열과 중쇄의 가변 영역의 모두 또는 일부를 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 것이고, 다른 단백질 A가, 이 항인간 트랜스페린 수용체 항체의 중쇄의 N말단측에 결합한 것이다. 여기에서 항hTfR 항체의 중쇄와 다른 단백질 A는, 직접 결합해도 되고, 링커를 개재하여 결합해도 된다.
이 때 항hTfR 항체와 다른 단백질 A 사이에 배치되는 링커 서열은, 바람직하게는 1∼50개, 보다 바람직하게는 1∼17개, 더욱 바람직하게는 1∼10개, 보다 더 바람직하게는 1∼5개의 아미노산으로 구성되는 펩타이드쇄이지만, 항hTfR 항체에 결합시켜야 할 다른 단백질 A에 따라, 링커 서열을 구성하는 아미노산의 개수는, 1개, 2개, 3개, 1∼17개, 1∼10개, 10∼40개, 20∼34개, 23∼31개, 25∼29개, 27개 등으로 적절히 조정할 수 있다. 그와 같은 링커 서열은, 이것에 의해 연결된 항hTfR 항체가 hTfR과의 친화성을 보지하고, 또한 당해 링커 서열에 의해 연결된 다른 단백질 A가, 생리적 조건하에서 당해 단백질의 생리 활성을 발휘할 수 있는 한, 그 아미노산 서열에 한정은 없지만, 바람직하게는, 글리신과 세린으로 구성되는 것이다. 예를 들어, 글리신 또는 세린의 어느 1개의 아미노산으로 이루어지는 것, 아미노산 서열 Gly-Ser, 아미노산 서열 Gly-Gly-Ser, 아미노산 서열 Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열 번호 3), 아미노산 서열 Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열 번호 4), 아미노산 서열 Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly(서열 번호 5), 또는 이들 아미노산 서열이 1∼10개, 혹은 2∼5개 연속하여 이루어지는 서열을 포함하는 것을 들 수 있다. 1∼50개의 아미노산으로 이루어지는 서열, 2∼17개, 2∼10개, 10∼40개, 20∼34개, 23∼31개, 25∼29개, 또는 27개의 아미노산으로 이루어지는 서열 등을 가지는 것이다. 예를 들어, 아미노산 서열 Gly-Ser을 포함하는 것은 링커 서열로서 적합하게 이용할 수 있다. 또한, 아미노산 서열 Gly-Ser에 이어 아미노산 서열 Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열 번호 3)이 5개 연속하여 이루어지는 합계 27개의 아미노산 서열을 포함하는 것은 링커 서열로서 적합하게 이용할 수 있다.
항hTfR 항체와 다른 단백질 A의 융합 단백질에 있어서, 항hTfR 항체가 1본쇄 항체인 경우, 면역글로불린 경쇄의 가변 영역의 모두 또는 일부를 포함하는 아미노산 서열과 면역글로불린 중쇄의 가변 영역의 모두 또는 일부를 포함하는 아미노산 서열은, 일반적으로 링커 서열을 개재하여 결합된다. 이 때, hTfR에 대한 항hTfR 항체의 친화성이 유지되는 한, 경쇄 유래의 아미노산 서열의 C말단측에 링커 서열이 결합하고, 추가로 그 C말단측에 중쇄 유래의 아미노산 서열이 결합해도 되고, 또한 이것과는 반대로, 중쇄 유래의 아미노산 서열의 C말단측에 링커 서열이 결합하고, 추가로 그 C말단측에 경쇄 유래의 아미노산 서열이 결합해도 된다.
면역글로불린의 경쇄와 중쇄 사이에 배치되는 링커 서열은, 바람직하게는 2∼50개, 보다 바람직하게는 8∼50개, 더욱 바람직하게는 10∼30개, 보다 더 바람직하게는 12∼18개 또는 15∼25개, 예를 들어 15개 혹은 25개의 아미노산으로 구성되는 펩타이드쇄이다. 그와 같은 링커 서열은, 이것에 의해 양쇄가 연결되는 항hTfR 항체가 hTfR과 친화성을 보지하고, 또한 당해 항체에 결합한 다른 단백질 A가, 생리적 조건하에서 그 생리 활성을 발휘할 수 있는 한, 그 아미노산 서열에 한정은 없지만, 바람직하게는, 글리신으로 또는 글리신과 세린으로 구성되는 것이고, 예를 들어, 아미노산 서열 Gly-Ser, 아미노산 서열 Gly-Gly-Ser, 아미노산 서열 Gly-Gly-Gly, 아미노산 서열 Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열 번호 3), 아미노산 서열 Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열 번호 4), 아미노산 서열 Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly)(서열 번호 5), 또는 이들 아미노산 서열이 2∼10개, 혹은 2∼5개 연속하여 이루어지는 서열을 포함하는 것이다. 링커 서열의 바람직한 일 태양으로서, 아미노산 서열 Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열 번호 3)이 3개 연속하여 이루어지는 15개의 아미노산으로 이루어지는 서열을 포함하는 것을 들 수 있다.
항hTfR 항체가 1본쇄 항체인 경우에 있어서의, 본 발명의 인간화 항hTfR 항체와 다른 단백질 A의 융합 단백질의 구체적인 태양의 일례로서, 다른 단백질 A의 C말단측에, 아미노산 서열 Gly-Ser에 이어 아미노산 서열 Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열 번호 3)이 5개 연속하여 이루어지는 합계 27개의 아미노산으로 이루어지는 제 1 링커 서열을 개재하여, 1본쇄 항체가 결합한 것을 예시할 수 있다. 여기에서 이용되는, 1본쇄 항체의 바람직한 일 태양으로서, 서열 번호 205에 기재된 아미노산 서열을 가지는 항hTfR 항체 중쇄의 가변 영역의 C말단에, 아미노산 서열 Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열 번호 3)이 3개 연속하여 이루어지는 합계 15개의 아미노산으로 이루어지는 제 1 링커 서열을 개재하여, 서열 번호 191에 기재된 아미노산 서열을 가지는 항hTfR 항체 경쇄의 가변 영역이 결합한 것인, 서열 번호 277에 기재된 아미노산 서열을 가지는 것을 들 수 있다.
항hTfR 항체가 1본쇄 항체인 경우에 있어서의 이와 같은 융합 단백질은, 예를 들어, 융합 단백질을 코딩하는 염기 서열을 가지는 DNA 단편을 짜넣은 발현 벡터로 포유동물 세포 등의 호스트 세포를 형질 전환시키고, 이 호스트 세포를 배양하는 것에 의해 제조할 수 있다.
한편, 본 발명에 있어서, 1개의 펩타이드쇄에 복수의 링커 서열이 포함되는 경우, 편의상, 각 링커 서열은 N말단측으로부터 순차로, 제 1 링커 서열, 제 2 링커 서열과 같이 명명한다.
항hTfR 항체가 Fab인 경우에 있어서의, 본 발명의 인간화 항hTfR 항체와 다른 단백질 A의 융합 단백질의 구체적인 태양의 일례로서, 다른 단백질 A의 C말단측에, Gly-Ser에 이어 아미노산 서열 Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열 번호 3)이 5개 연속하여 이루어지는 합계 27개의 아미노산으로 이루어지는 링커 서열을 개재하여, 항hTfR 항체 중쇄의 가변 영역과 CH1 영역을 포함하는 영역을 융합시킨 것을 들 수 있다. 이 때 CH1 영역에 더하여 힌지부의 일부가 포함되어도 되지만, 당해 힌지부는 중쇄 사이의 다이설파이드 결합을 형성하는 시스테인 잔기를 포함하지 않는다.
항hTfR 항체와 결합시켜야 할 다른 단백질 A에 특별히 한정은 없지만, 생체내에 있어서 생리 활성을 발휘할 수 있는 것이고, 특히, 뇌내에 도달시켜 그 기능을 발휘시켜야 할 것임에도 불구하고, 그대로는 혈액뇌관문을 통과할 수 없기 때문에, 정맥내 투여에서는 뇌내에서 기능시킬 것을 기대할 수 없는 단백질이다. 그와 같은 단백질로서는, 예를 들어, 신경 성장 인자(NGF)나, α-L-이두로니다제, 이두론산-2-설파타제, 글루코셀레브로시다제, β-갈락토시다아제, GM2 활성화 단백질, β-헥소사미니다제 A, β-헥소사미니다제 B, N-아세틸글루코사민-1-포스포트랜스퍼라제, α-만노시다제, β-만노시다제, 갈락토실세라미다제, 사포신 C, 아릴설파타제 A, α-L-푸코시다제, 아스파틸글루코사미니다제, α-N-아세틸갈락토사미니다제, 산성 스핑고미엘리나제, α-갈락토시다아제 A, β-글루쿠로니다제, 헤파란 N-설파타제, α-N-아세틸글루코사미니다제, 아세틸 CoAα-글루코사미니드 N-아세틸트랜스퍼라제, N-아세틸글루코사민-6-황산 설파타제, 산성 세라미다제, 아밀로-1,6-글루코시다제, 시알리다제, 아스파틸글루코사미니다제(PPT1), 트라이펩티딜펩티다제-1, 하이아루로니다제-1, CLN1, CLN2 등의 리소좀 효소를 들 수 있다.
항hTfR 항체와 결합시킨 신경 성장 인자(NGF)는, 알츠하이머병의 치매증 치료약으로서, 항hTfR 항체와 융합시킨 α-L-이두로니다제는 헐러 증후군 또는 헐러-샤이에 증후군에 있어서의 중추 신경 장애 치료제로서, 항hTfR 항체와 융합시킨 이두론산-2-설파타제는 헌터 증후군에 있어서의 중추 신경 장애 치료제로서, 글루코셀레브로시다제는 고셔병에 있어서의 중추 신경 장애 치료제로서, β갈락토시다아제는 GM1-강글리오사이드 시스 1∼3형에 있어서의 중추 신경 장애 치료제로서, GM2 활성화 단백질은 GM2-강글리오사이드 시스 AB이형에 있어서의 중추 신경 장애 치료제로서, β-헥소사미니다제 A는 샌드호프병 및 테이삭스병에 있어서의 중추 신경 장애 치료제로서, β-헥소사미니다제 B는 샌드호프병에 있어서의 중추 신경 장애 치료제로서, N-아세틸글루코사민-1-포스포트랜스퍼라제는 I-세포병에 있어서의 중추 신경 장애 치료제로서, α-만노시다제는 α-만노시도시스에 있어서의 중추 신경 장애 치료제로서, β-만노시다제는 β-만노시도시스에 있어서의 중추 신경 장애 치료제로서, 갈락토실세라미다제는 크라베병에 있어서의 중추 신경 장애 치료제로서, 사포신 C는 고셔병양 축적증에 있어서의 중추 신경 장애 치료제로서, 아릴설파타제 A는 이염성 백질 변성증(이염성 백질 디스트로피)에 있어서의 중추 신경 장애 치료제로서, α-L-푸코시다제는 푸코시도시스에 있어서의 중추 신경 장애 치료제로서, 아스파틸글루코사미니다제는 아스파틸글루코사민뇨증에 있어서의 중추 신경 장애 치료제로서, α-N-아세틸갈락토사미니다제는 쉰들러병 및 가와사키병에 있어서의 중추 신경 장애 치료제로서, 산성 스핑고미엘리나제는 니만-픽병에 있어서의 중추 신경 장애 치료제로서, α-갈락토시다아제 A는 파브리병에 있어서의 중추 신경 장애 치료제로서, β-글루쿠로니다제는 슬라이 증후군에 있어서의 중추 신경 장애 치료제로서, 헤파란 N-설파타제, α-N-아세틸글루코사미니다제, 아세틸 CoAα-글루코사미니드 N-아세틸트랜스퍼라제 및 N-아세틸글루코사민-6-황산 설파타제는 산필리포 증후군에 있어서의 중추 신경 장애 치료제로서, 산성 세라미다제는 파버병에 있어서의 중추 신경 장애 치료제로서, 아밀로-1,6-글루코시다제는 코리병(포브스-코리병)에 있어서의 중추 신경 장애 치료제로서, 시알리다제는 시알리다제 결손증에 있어서의 중추 신경 장애 치료제로서, 아스파틸글루코사미니다제는 아스파틸글루코사민뇨증에 있어서의 중추 신경 장애 치료제로서, 팔미토일 단백질 싸이오에스터라제-1(PPT-1)은, 신경 세로이드리포푸신증 또는 Santavuori-Haltia병에 있어서의 중추 신경 장애 치료제로서, 트라이펩티딜펩티다제-1(TPP-1)은, 신경 세로이드리포푸신증 또는 Jansky-Bielschowsky병에 있어서의 중추 신경 장애 치료제로서, 하이아루로니다제-1은 하이아루로니다제 결손증에 있어서의 중추 신경 장애 치료제로서, CLN1 및 2는 바텐병에 있어서의 중추 신경 장애 치료제로서 사용할 수 있다. 특히, 본 발명의 항hTfR 항체는, 혈액뇌관문을 통과한 후에, 대뇌의 뇌실질, 해마의 신경양 세포, 소뇌의 푸르킨예 세포 등에 도달하고, 또한 대뇌의 선조체의 신경양 세포 및 중뇌의 흑질의 신경양 세포에도 도달한다고 예상되므로, 이들 조직 또는 세포에 있어서 약효를 기능시켜야 할 단백질과 융합시키는 것에 의해, 그 단백질의 약효를 강화할 수 있다. 단, 의약 용도는 이들 질환에 한정되는 것은 아니다.
그 외, 항hTfR 항체와 결합시켜 약효를 발휘할 수 있는 단백질로서는, 리소좀 효소, 모양체 신경 영양 인자(CNTF), 글리아 세포주 유래 신경 영양 인자(GDNF), 뉴로트로핀 3, 뉴로트로핀 4/5, 뉴로트로핀 6, 뉴레글린 1, 에리트로포이에틴, 다르베포에틴, 액티빈, 염기성 섬유아세포 성장 인자(bFGF), 섬유아세포 성장 인자 2(FGF2), 상피 세포 증식 인자(EGF), 혈관 내피 증식 인자(VEGF), 인터페론 α, 인터페론 β, 인터페론 γ, 인터류킨 6, 과립구 매크로파지 콜로니 자극 인자(GM-CSF), 과립구 콜로니 자극 인자(G-CSF), 매크로파지 콜로니 자극 인자(M-CSF), 각종 사이토카인, 종양괴사 인자 α 수용체(TNF-α 수용체), PD-1 리간드, 베타아밀로이드를 분해하는 활성을 가지는 효소, 항베타아밀로이드 항체, 항BACE 항체, 항EGFR 항체, 항PD-1 항체, 항PD-L1 항체, 항HER2 항체, 항TNF-α 항체, 및 그 외의 항체 의약 등을 들 수 있다.
항hTfR 항체와 결합시킨 리소좀 효소는 리소좀병에 있어서의 중추 신경 장애 치료제로서, CNTF는 근위축성 측색경화증의 치료제로서, GDNF, 뉴로트로핀 3 및 뉴로트로핀 4/5는 뇌허혈의 치료제로서, GDNF는 파킨슨병의 치료제로서, 뉴레글린 1은 통합 실조증의 치료제로서, 에리트로포이에틴 및 다르베포에틴은 뇌허혈의 치료제로서, bFGF 및 FGF2는 외상성의 중추 신경계 장애의 치료제, 뇌외과 수술, 척추 외과 수술 후의 회복에, 베타아밀로이드를 분해하는 활성을 가지는 효소, 항베타아밀로이드 항체 및 항BACE 항체는 알츠하이머병의 치료제로서, 항EGFR 항체, 항PD-1 항체, 항PD-L1 항체, 및 항HER2 항체는 뇌종양을 포함하는 중추 신경계의 종양의 치료제로서, TNFαR-항hTfR 항체는 뇌허혈 및 뇌염증성 질환의 치료제로서 사용할 수 있다.
알츠하이머병, 파킨슨병, 헌팅턴병 등의 신경 변성 질환, 통합 실조증, 울증 등의 정신 장애, 다발성 경화증, 근위축성 측색경화증, 뇌종양을 포함하는 중추 신경계의 종양, 뇌장애를 수반하는 리소좀병, 당원병, 근 디스트로피, 뇌허혈, 뇌염증성 질환, 프리온병, 외상성의 중추 신경계 장애 등의 질환에 대한 치료제는, 대체로 항hTfR 항체와 융합시켜야 할 다른 단백질 A가 될 수 있다. 또한, 바이러스성 및 세균성의 중추 신경계 질환에 대한 치료제도, 대체로 항hTfR 항체와 융합시켜야 할 다른 단백질 A가 될 수 있다. 더욱이, 뇌외과 수술, 척추 외과 수술 후의 회복에도 이용할 수 있는 약제도, 대체로 항hTfR 항체와 융합시켜야 할 다른 단백질 A가 될 수 있다.
항hTfR 항체와 결합시켜야 할 다른 단백질 A로서, 상기의 단백질의 천연형(야생형)의 것에 더하여, 천연형(야생형)의 이들 단백질의 1개 또는 복수개의 아미노산이, 다른 아미노산으로 치환, 결실 등이 된 유사물도, 이들 단백질로서의 기능을 완전하게 또는 부분적으로 가지는 한, 이들 단백질에 포함된다. 아미노산을 다른 아미노산으로 치환시키는 경우, 치환시키는 아미노산의 개수는, 바람직하게는 1∼10개이고, 보다 바람직하게는 1∼5개이며, 더욱 바람직하게는 1∼3개이다. 아미노산을 결실시키는 경우, 결실시키는 아미노산의 개수는, 바람직하게는 1∼10개이고, 보다 바람직하게는 1∼5개이며, 더욱 바람직하게는 1∼3개이다. 또한, 이들 아미노산의 치환과 결실을 조합하여, 원하는 유사물로 할 수도 있다. 더욱이, 천연형(야생형)의 단백질 또는 그 유사물의 아미노산 서열 중 혹은 N말단측 또는 C말단측에, 1개 또는 복수개의 아미노산이 부가된 것도, 이들 단백질로서의 기능을 완전하게 또는 부분적으로 가지는 한, 이들 단백질에 포함된다. 이 때 부가되는 아미노산의 개수는, 바람직하게는 1∼10개이고, 보다 바람직하게는 1∼5개이며, 더욱 바람직하게는 1∼3개이다. 이들 아미노산의 부가, 치환 및 결실을 조합하여, 원하는 이들 단백질의 유사물로 할 수도 있다.
한편, 이들 다른 단백질 A에 변이를 가하여 C말단 또는 N말단에 아미노산을 부가했을 경우, 그 부가한 아미노산이, 이들 단백질을 항hTfR 항체와 융합시켰을 때에, 이들 단백질과 항hTfR 항체 사이에 위치하게 되었을 경우, 당해 부가한 아미노산은 링커의 일부를 구성한다.
천연형의 인간 I2S(hI2S)는, 서열 번호 246으로 나타나는 525개의 아미노산으로 구성되는 리소좀 효소의 일종이다. 본 발명에 있어서의, 항hTfR 항체와 다른 단백질 A의 융합 단백질의 구체적인 태양의 일례로서, 항hTfR 항체 중쇄의 C말단에 링커 서열로서 아미노산 서열 Gly-Ser을 개재하여 천연형의 인간 I2S를 융합시킨 타입의 것을 들 수 있다. 이와 같은 융합 단백질로서,
(1) 경쇄가 서열 번호 164에 기재된 아미노산 서열로 이루어지고 또한 C말단측에 펩타이드 결합에 의해 링커 서열 Gly-Ser을 개재하여 인간 I2S가 결합한 중쇄가 서열 번호 247에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 것,
(2) 경쇄가 서열 번호 180에 기재된 아미노산 서열로 이루어지고 또한 C말단측에 펩타이드 결합에 의해 링커 서열 Gly-Ser을 개재하여 인간 I2S가 결합한 중쇄가 서열 번호 249에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 것, 및
(3) 경쇄가 서열 번호 196에 기재된 아미노산 서열로 이루어지고 또한 C말단측에 펩타이드 결합에 의해 링커 서열 Gly-Ser을 개재하여 인간 I2S가 결합한 중쇄가 서열 번호 251에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 것을 예시할 수 있다.
본 발명에 있어서, 「인간 I2S」 또는 「hI2S」의 말은, 특히 천연형의 hI2S와 동일한 아미노산 서열을 가지는 hI2S를 말하지만, 이것에 한정하지 않고, I2S 활성을 가지는 것인 한, 천연형의 hI2S의 아미노산 서열에 치환, 결실, 부가 등의 변이를 가한 것도 hI2S에 포함된다. hI2S의 아미노산 서열의 아미노산을 다른 아미노산으로 치환시키는 경우, 치환시키는 아미노산의 개수는, 바람직하게는 1∼10개이고, 보다 바람직하게는 1∼5개이며, 더욱 바람직하게는 1∼3개이고, 보다 더 바람직하게는 1∼2개이다. hI2S의 아미노산 서열 중의 아미노산을 결실시키는 경우, 결실시키는 아미노산의 개수는, 바람직하게는 1∼10개이고, 보다 바람직하게는 1∼5개이며, 더욱 바람직하게는 1∼3개이고, 보다 더 바람직하게는 1∼2개이다. 또한, 이들 아미노산의 치환과 결실을 조합한 변이를 가할 수도 있다. hI2S에 아미노산을 부가시키는 경우, hI2S의 아미노산 서열 중 혹은 N말단측 또는 C말단측에, 바람직하게는 1∼10개, 보다 바람직하게는 1∼5개, 더욱 바람직하게는 1∼3개, 보다 더 바람직하게는 1∼2개 아미노산이 부가된다. 이들 아미노산의 부가, 치환 및 결실을 조합한 변이를 가할 수도 있다. 변이를 가한 hI2S의 아미노산 서열은, 원래의 hI2S의 아미노산 서열과 바람직하게는 80% 이상의 상동성을 가지고, 보다 바람직하게는 90% 이상의 상동성을 나타내며, 더욱 바람직하게는, 95% 이상의 상동성을 나타낸다.
한편 여기에서, hI2S가 I2S 활성을 가진다고 할 때는, 항hTfR 항체와 융합시켰을 때에, 천연형의 hI2S가 본래 가지는 활성에 대해서, 3% 이상의 활성을 가지고 있는 것을 말한다. 단, 그 활성은, 천연형의 hI2S가 본래 가지는 활성에 대해서, 10% 이상인 것이 바람직하고, 20% 이상인 것이 보다 바람직하고, 50% 이상인 것이 더욱 바람직하고, 80% 이상인 것이 보다 더 바람직하다. 항hTfR 항체와 융합시킨 hI2S가 변이를 가한 것인 경우도 마찬가지이다.
항hTfR 항체와 인간 I2S의 융합 단백질은, 예를 들어, 서열 번호 249로 나타나는 아미노산 서열을 코딩하는 서열 번호 250으로 나타나는 염기 서열을 가지는 DNA 단편을 짜넣은 발현 벡터와, 서열 번호 180으로 나타나는 아미노산 서열을 가지는, 항hTfR 항체 경쇄를 코딩하는 서열 번호 181로 나타나는 염기 서열을 가지는 DNA 단편을 짜넣은 발현 벡터에 의해 포유동물 세포 등의 호스트 세포를 형질 전환시키고, 이 호스트 세포를 배양하는 것에 의해 제조할 수 있다. 제조된 융합 단백질은 헌터병의 치료제, 특히 헌터병에 있어서의 중추 신경 장애 치료제로서 사용할 수 있다.
한편, 항hTfR 항체 또는 인간 I2S에 변이를 가하여 C말단 또는 N말단에 아미노산을 부가했을 경우, 그 부가한 아미노산이, 항hTfR 항체와 인간 I2S 사이에 배치되었을 경우, 당해 부가한 아미노산은 링커의 일부를 구성한다.
상기와 같이 항hTfR 항체와 인간 I2S의 융합 단백질을 예시했지만, 항hTfR 항체와 인간 I2S의 융합 단백질의 바람직한 실시형태에 있어서, 항hTfR 항체의 중쇄 및 경쇄의 CDR의 아미노산 서열은, 항체가 hTfR에 대한 특이적인 친화성을 가지는 것인 한, 특별히 제한은 없다. 단, 본 발명의 항hTfR 항체는, 바람직하게는, 실시예 7에 기재된 방법에 의해 측정되는 hTfR과의 해리 상수(KD)가, 바람직하게는 1×10-8M 이하인 것이고, 보다 바람직하게는 1×10-9M 이하인 것이고, 더욱 바람직하게는 1×10-10 이하이다. 예를 들어, 적합한 것으로서, 해리 상수가 1×10-13M∼1×10-9M인 것, 1×10-13M∼1×10-10M인 것을 들 수 있다. 항체가 1본쇄 항체여도 마찬가지이다. 또한, 본 발명의 항hTfR 항체가 원숭이 TfR에 대해서도 친화성을 가지는 것인 경우, 실시예 7에 기재된 방법에 의해 측정되는 항hTfR 항체의 원숭이 TfR과의 해리 상수는, 바람직하게는 5×10-8M 이하인 것이고, 보다 바람직하게는 2×10-8M 이하인 것이고, 더욱 바람직하게는 1×10-8M 이하인 것이다. 예를 들어 적합한 것으로서, 해리 상수가 1×10-13M∼2×10-8M인 것, 1×10-13M∼2×10-8M인 것을 들 수 있다. 항체가 1본쇄 항체여도 마찬가지이다.
항hTfR 항체에는, 항hTfR 항체에 다른 단백질 A를 결합시키는 것과 동일한 수법에 의해, 비교적 짧은 펩타이드쇄를 결합시킬 수도 있다. 항hTfR 항체에 결합시켜야 할 펩타이드쇄는, 그 펩타이드쇄가 원하는 생리 활성을 가지는 것인 한 한정은 없고, 예를 들어, 각종 단백질의 생리 활성을 발휘하는 영역의 아미노산 서열을 가지는 펩타이드쇄를 들 수 있다. 펩타이드쇄의 쇄길이는 특별히 한정은 없지만, 바람직하게는 2∼200개의 아미노산으로 구성되는 것이고, 예를 들어 5∼50개의 아미노산으로 구성되는 것이다.
항hTfR 항체에 저분자 물질을 결합시키는 경우, 후보가 되는 저분자 물질에 특별히 한정은 없지만, 뇌내에 도달시켜 그 기능을 발휘시켜야 할 것임에도 불구하고, 그대로는 혈액뇌관문을 통과할 수 없기 때문에, 정맥내 투여에서는 뇌내에서 기능시킬 것을 기대할 수 없는 저분자 물질이다. 예를 들어, 이러한 저분자 물질로서, 사이클로포스파마이드, 이포스파마이드, 멜팔란, 부설판, 티오테바, 니무스틴, 라니무스틴, 다카바진, 프로카바진, 테모졸로마이드, 카르무스틴, 스트렙토조토신, 펜다무스틴, 시스플라틴, 카보플라틴, 옥살리플라틴, 네다플라틴, 5-플루오로우라실, 설파다이아진, 설파메톡사졸, 메토트렉세이트, 트리메토프림, 피리메타민, 플루오로우라실, 플루시토신, 아자티오프린, 펜토스타틴, 하이드록시유레아, 플루다라빈, 시타라빈, 젬시타빈, 이리노테칸, 독소루비신, 에토포시드, 레포플록사신, 시프로플록사신, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 파클리탁셀, 도데탁셀, 마이토마이신 C, 독소루비신, 에피루비신 등의 항암제를 들 수 있다. 그 외, 항hTfR 항체와 결합시켜야 할 저분자 물질로서 siRNA, 안티센스 DNA, 짧은 펩타이드를 들 수 있다.
항hTfR 항체와 저분자 물질을 결합시키는 경우, 저분자 물질은 경쇄 또는 중쇄의 어느 한쪽에만 결합시켜도 되고, 또한, 경쇄와 중쇄의 각각에 결합시켜도 된다. 또한, 항hTfR 항체는, hTfR에 대한 친화성을 가지는 것인 한, 경쇄의 가변 영역의 모두 또는 일부를 포함하는 아미노산 서열, 및/또는 중쇄의 가변 영역의 모두 또는 일부를 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 것이어도 된다.
알츠하이머병, 파킨슨병, 헌팅턴병 등의 신경 변성 질환, 통합 실조증, 울증 등의 정신 장애, 다발성 경화증, 근위축성 측색경화증, 뇌종양을 포함하는 중추 신경계의 종양, 뇌장애를 수반하는 리소좀병, 당원병, 근 디스트로피, 뇌허혈, 뇌염증성 질환, 프리온병, 외상성의 중추 신경계 장애 등의 질환에 대한 치료제는, 일반적으로 항hTfR 항체와 융합시켜야 할 저분자 물질 후보가 될 수 있다. 또한, 바이러스성 및 세균성의 중추 신경계 질환에 대한 치료제도, 일반적으로 항hTfR 항체와 융합시켜야 할 저분자 물질 후보가 될 수 있다. 더욱이, 뇌외과 수술, 척추 외과 수술 후의 회복에도 이용할 수 있는 약제도, 일반적으로 항hTfR 항체와 융합시켜야 할 저분자 물질 후보가 될 수 있다.
항hTfR 항체가, 인간 이외의 동물의 것인 경우, 이것을 인간에 투여했을 때에, 당해 항체에 대한 항원 항체 반응을 야기하여, 바람직하지 않은 부작용이 생길 우려가 높다. 인간 이외의 동물의 항체는, 인간화 항체로 함으로써 그와 같은 항원성을 감소할 수 있어, 인간에 투여했을 때의 항원 항체 반응에 기인하는 부작용의 발생을 억제할 수 있다. 또한, 원숭이를 이용한 실험에 의하면, 인간화 항체는, 마우스 항체와 비교하여, 혈중에서 보다 안정되는 것이 보고되어 있어, 치료 효과를 그만큼 장기간 지속시킬 수 있다고 생각된다. 항원 항체 반응에 기인하는 부작용의 발생은, 항hTfR 항체로서 인간 항체를 이용하는 것에 의해서도 억제할 수 있다.
항hTfR 항체가, 인간화 항체 또는 인간 항체인 경우에 대해, 이하에 더욱 상세하게 설명한다. 인간 항체의 경쇄에는, λ쇄와 κ쇄가 있다. 항hTfR 항체를 구성하는 경쇄는, λ쇄와 κ쇄의 어느 것이어도 된다. 또한, 인간의 중쇄에는, γ쇄, μ쇄, α쇄, σ쇄 및 ε쇄가 있고, 각각, IgG, IgM, IgA, IgD 및 IgE에 대응하고 있다. 항hTfR 항체를 구성하는 중쇄는, γ쇄, μ쇄, α쇄, σ쇄 및 ε쇄의 어느 것이어도 되지만, 바람직하게는 γ쇄이다. 더욱이, 인간의 중쇄의 γ쇄에는, γ1쇄, γ2쇄, γ3쇄 및 γ4쇄가 있고, 각각, IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4에 대응하고 있다. 항hTfR 항체를 구성하는 중쇄가 γ쇄인 경우, 그 γ쇄는, γ1쇄, γ2쇄, γ3쇄 및 γ4쇄의 어느 것이어도 되지만, 바람직하게는, γ1쇄 또는 γ4쇄이다. 항hTfR 항체가, 인간화 항체 또는 인간 항체이며, 또한 IgG인 경우, 인간 항체의 경쇄는 λ쇄와 κ쇄의 어느 것이어도 되고, 인간 항체의 중쇄는, γ1쇄, γ2쇄, γ3쇄 및 γ4쇄의 어느 것이어도 되지만, 바람직하게는, γ1쇄 또는 γ4쇄이다. 예를 들어, 바람직한 항hTfR 항체의 하나의 태양으로서, 경쇄가 λ쇄이며 중쇄가 γ1쇄인 것을 들 수 있다.
항hTfR 항체가 인간화 항체 또는 인간 항체인 경우, 항hTfR 항체와 다른 단백질 A는, 항hTfR 항체의 중쇄 또는 경쇄의 N말단(또는 C말단)에, 링커 서열을 개재하여 또는 직접, 다른 단백질 A의 C말단(또는 N말단)을, 각각 펩타이드 결합에 의해 결합시킬 수 있다. 다른 단백질 A를 항hTfR 항체의 중쇄의 N말단측(또는 C말단측)에 결합시키는 경우, 항hTfR 항체의 γ쇄, μ쇄, α쇄, σ쇄 또는 ε쇄의 N말단(또는 C말단)에, 링커 서열을 개재하여 또는 직접, 다른 단백질 A의 C말단(또는 N말단)이, 펩타이드 결합에 의해 각각 결합된다. 항hTfR 항체의 경쇄의 N말단측(또는 C말단측)에 다른 단백질 A를 결합시키는 경우, 항hTfR 항체의 λ쇄와 κ쇄의 N말단(또는 C말단)에, 링커 서열을 개재하여 또는 직접, 다른 단백질 A의 C말단(또는 N말단)이, 펩타이드 결합에 의해 각각 결합된다. 단, 항hTfR 항체가, Fab 영역 로 이루어지는 것 또는 Fab 영역과 힌지부의 전부 혹은 일부로 이루어지는 것(Fab, F(ab')2 및 F(ab'))인 경우, 다른 단백질 A는, Fab, F(ab')2 및 F(ab')를 구성하는 중쇄 또는 경쇄의 N말단(또는 C말단)에, 링커 서열을 개재하여 또는 직접, 그 C말단(또는 N말단)을 펩타이드 결합에 의해 각각 결합시킬 수 있다.
인간화 항체 또는 인간 항체인 항hTfR 항체의 경쇄의 C말단측에 다른 단백질 A를 결합시킨 융합 단백질에 있어서, 항인간 트랜스페린 수용체 항체는, 경쇄의 가변 영역의 모두 또는 일부를 포함하는 아미노산 서열과, 중쇄의 가변 영역의 모두 또는 일부를 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 것이다. 여기에서 항hTfR 항체의 경쇄와 다른 단백질 A는, 직접 결합해도 되고, 링커를 개재하여 결합해도 된다.
인간화 항체 또는 인간 항체인 항hTfR 항체의 중쇄의 C말단측에 다른 단백질 A를 결합시킨 융합 단백질에 있어서, 항인간 트랜스페린 수용체 항체는, 경쇄의 가변 영역의 모두 또는 일부를 포함하는 아미노산 서열과, 중쇄의 가변 영역의 모두 또는 일부를 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 것이다. 여기에서 항hTfR 항체의 중쇄와 다른 단백질 A는, 직접 결합해도 되고, 링커를 개재하여 결합해도 된다.
인간화 항체 또는 인간 항체인 항hTfR 항체의 경쇄의 N말단측에 다른 단백질 A를 결합시킨 융합 단백질에 있어서, 항인간 트랜스페린 수용체 항체는, 경쇄의 가변 영역의 모두 또는 일부를 포함하는 아미노산 서열과, 중쇄의 가변 영역의 모두 또는 일부를 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 것이다. 여기에서 항hTfR 항체의 경쇄와 다른 단백질 A는, 직접 결합해도 되고, 링커를 개재하여 결합해도 된다.
인간화 항체 또는 인간 항체인 항hTfR 항체의 중쇄의 N말단측에 다른 단백질 A를 결합시킨 융합 단백질에 있어서, 항인간 트랜스페린 수용체 항체는, 경쇄의 가변 영역의 모두 또는 일부를 포함하는 아미노산 서열과, 중쇄의 가변 영역의 모두 또는 일부를 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 것이다. 여기에서 항hTfR 항체의 중쇄와 다른 단백질 A는, 직접 결합해도 되고, 링커를 개재하여 결합해도 된다.
항hTfR 항체와 다른 단백질 A 사이에 링커 서열을 배치하는 경우, 항hTfR 항체와 다른 단백질 A 사이에 배치되는 링커 서열은, 바람직하게는 1∼50개의 아미노산으로 구성되는 펩타이드쇄이지만, 항hTfR 항체에 결합시켜야 할 다른 단백질 A에 따라, 링커 서열을 구성하는 아미노산의 개수는, 1∼17개, 1∼10개, 10∼40개, 20∼34개, 23∼31개, 25∼29개 등으로 적절히 조정된다. 그와 같은 링커 서열은, 당해 링커 서열에 의해 연결된 항hTfR 항체와 다른 단백질 A가, 각각의 기능(hTfR에 대한 친화성, 및 생리적 조건하에서의 활성 또는 기능)을 보지하고 있는 한, 그 아미노산 서열에 한정은 없지만, 바람직하게는, 글리신과 세린으로 구성되는 것이고, 예를 들어, 글리신 또는 세린의 어느 1개의 아미노산으로 이루어지는 것, 아미노산 서열 Gly-Ser, 아미노산 서열 Gly-Gly-Ser, 아미노산 서열 Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열 번호 3), 아미노산 서열 Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열 번호 4), 아미노산 서열 Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly(서열 번호 5), 또는 이들 아미노산 서열이 1∼10개, 혹은 2∼5개 연속하여 이루어지는 서열을 포함하는 것이다. 예를 들어, 아미노산 서열 Gly-Ser에 이어 아미노산 서열 Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열 번호 3)이 5개 연속하여 이루어지는 합계 27개의 아미노산 서열을 포함하는 것을, 링커 서열로서 적합하게 이용할 수 있다.
한편 여기에서, 항hTfR 항체와 융합시킨 다른 단백질 A가, 당해 다른 단백질 A의 생리적 조건하에서의 활성 또는 기능을 보지하고 있다고 할 때 또는 단지 활성을 가진다고 할 때는, 천연형인 다른 단백질 A가 본래 가지는 활성에 대해서, 3% 이상의 활성 또는 기능을 보지하고 있는 것을 말한다. 단, 그 활성 또는 기능은, 천연형의 다른 단백질 A가 본래 가지는 활성에 대해서, 10% 이상인 것이 바람직하고, 20% 이상인 것이 보다 바람직하고, 50% 이상인 것이 더욱 바람직하고, 80% 이상인 것이 보다 더 바람직하다. 항hTfR 항체와 융합시킨 다른 단백질 A가 변이를 가한 것인 경우도 마찬가지이다.
본 발명에 있어서의, 인간화 항hTfR 항체와 다른 단백질 A의 융합 단백질의 더욱 구체적인 태양의 일례로서, 항hTfR 항체 중쇄의 C말단측에, Gly-Ser에 이어 아미노산 서열 Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열 번호 3)이 5개 연속하여 이루어지는 합계 27개의 아미노산으로 이루어지는 링커 서열을 개재하여, 다른 단백질 A를 융합시킨 것을 들 수 있다.
항hTfR 항체가 Fab인 경우에 있어서의, 본 발명의 인간화 항hTfR 항체와 다른 단백질 A의 융합 단백질의 구체적인 태양의 일례로서, 다른 단백질 A의 C말단측에, Gly-Ser에 이어 아미노산 서열 Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열 번호 3)이 5개 연속하여 이루어지는 합계 27개의 아미노산으로 이루어지는 링커 서열을 개재하여, 항hTfR 항체 중쇄의 가변 영역과 CH1 영역을 포함하는 영역을 융합시킨 것을 들 수 있다. 이 때 CH1 영역에 더하여 힌지부의 일부가 포함되어도 되지만, 당해 힌지부는, 중쇄 사이의 다이설파이드 결합을 형성하는 시스테인 잔기를 포함하지 않는다.
항hTfR 항체의 hTfR에 대한 특이적 친화성은, 주로 항hTfR 항체의 중쇄 및 경쇄의 CDR의 아미노산 서열에 의존한다. 그들 CDR의 아미노산 서열은, 항hTfR 항체가 hTfR에 대한 특이적인 친화성을 가지는 것인 한, 특별히 제한은 없다. 단, 본 발명의 항hTfR 항체는, 바람직하게는, 실시예 7에 기재된 방법에 의해 측정되는 hTfR과의 해리 상수(KD)가, 바람직하게는 1×10-8M 이하인 것이고, 보다 바람직하게는 1×10-9M 이하인 것이며, 더욱 바람직하게는 1×10-10 이하인 것이고, 더욱이 더 바람직하게는 1×10-11 이하인 것이다. 예를 들어 적합한 것으로서, 해리 상수가 1×10-13M∼1×10-9M인 것, 1×10-13M∼1×10-10인 것을 들 수 있다. 항체가 1본쇄 항체여도 마찬가지이다. 또한, 본 발명의 항hTfR 항체가 원숭이 TfR에 대해서도 친화성을 가지는 것인 경우, 실시예 7에 기재된 방법에 의해 측정되는 항hTfR 항체의 원숭이 TfR과의 해리 상수는, 바람직하게는 5×10-8M 이하인 것이고, 보다 바람직하게는 2×10-8M 이하인 것이며, 더욱 바람직하게는 1×10-8M 이하인 것이다. 예를 들어 적합한 것으로서, 해리 상수가 1×10-13M∼2×10-8M인 것, 1×10-13M∼2×10-8M인 것을 들 수 있다. 항체가 1본쇄 항체여도 마찬가지이다.
hTfR에 친화성을 가지는 항체의 바람직한 실시형태로서, 항체의 경쇄의 CDR이 이하에 나타내는 (1)∼(14)에 기재된 아미노산 서열을 가지는 것을 예시할 수 있다. 즉:
(1) CDR1로서 서열 번호 6 또는 서열 번호 7의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 8 또는 서열 번호 9의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Trp-Thr-Ser, 및 CDR3으로서 서열 번호 10의 아미노산 서열,
(2) CDR1로서 서열 번호 11 또는 서열 번호 12의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 13 또는 서열 번호 14의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Tyr-Ala-Ser, 및 CDR3으로서 서열 번호 15의 아미노산 서열,
(3) CDR1로서 서열 번호 16 또는 서열 번호 17의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 18 또는 서열 번호 19의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Lys-Val-Ser, 및 CDR3으로서 서열 번호 20의 아미노산 서열,
(4) CDR1로서 서열 번호 21 또는 서열 번호 22의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 23 또는 서열 번호 24의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Asp-Thr-Ser, 및 CDR3으로서 서열 번호 25의 아미노산 서열,
(5) CDR1로서 서열 번호 26 또는 서열 번호 27의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 28 또는 서열 번호 29의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Asp-Thr-Ser, 및 CDR3으로서 서열 번호 30의 아미노산 서열,
(6) CDR1로서 서열 번호 31 또는 서열 번호 32의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 33 또는 서열 번호 34의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Ala-Ala-Ser, 및 CDR3으로서 서열 번호 35의 아미노산 서열,
(7) CDR1로서 서열 번호 36 또는 서열 번호 37의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 38 또는 서열 번호 39의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Gln-Th-Ser, 및 CDR3으로서 서열 번호 40의 아미노산 서열,
(8) CDR1로서 서열 번호 41 또는 서열 번호 42의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 43 또는 서열 번호 44의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Gly-Thr-Ser, 및 CDR3으로서 서열 번호 45의 아미노산 서열,
(9) CDR1로서 서열 번호 46 또는 서열 번호 47의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 48 또는 서열 번호 49의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Phe-Thr-Ser, 및 CDR3으로서 서열 번호 50의 아미노산 서열을 가지는 경쇄,
(10) CDR1로서 서열 번호 51 또는 서열 번호 52의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 53 또는 서열 번호 54의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Ala-Ala-Ser, 및 CDR3으로서 서열 번호 55의 아미노산 서열,
(11) CDR1로서 서열 번호 56 또는 서열 번호 57의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 58 또는 서열 번호 59의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Tyr-Ala-Ser, 및 CDR3으로서 서열 번호 60의 아미노산 서열,
(12) CDR1로서 서열 번호 61 또는 서열 번호 62의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 63 또는 서열 번호 64의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Trp-Ser-Ser, 및 CDR3으로서 서열 번호 65의 아미노산 서열,
(13) CDR1로서 서열 번호 66 또는 서열 번호 67의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 68 또는 서열 번호 69의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Tyr-Ala-Ser, 및 CDR3으로서 서열 번호 70의 아미노산 서열,
(14) CDR1로서 서열 번호 71 또는 서열 번호 72의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 73 또는 서열 번호 74의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Asp-Thr-Ser, 및 CDR3으로서 서열 번호 75의 아미노산 서열.
hTfR에 친화성을 가지는 항체의 보다 구체적인 실시형태로서, 항체의 경쇄의 CDR이 이하에 나타내는 (1)∼(14)에 기재된 아미노산 서열을 가지는 것을 예시할 수 있다. 즉:
(1) CDR1로서 서열 번호 6, CDR2로서 서열 번호 8, 및 CDR3으로서 서열 번호 10에 기재된 아미노산 서열,
(2) CDR1로서 서열 번호 11, CDR2로서 서열 번호 13, 및 CDR3으로서 서열 번호 15에 기재된 아미노산 서열,
(3) CDR1로서 서열 번호 16, CDR2로서 서열 번호 18, 및 CDR3으로서 서열 번호 20에 기재된 아미노산 서열,
(4) CDR1로서 서열 번호 21, CDR2로서 서열 번호 23, 및 CDR3으로서 서열 번호 25에 기재된 아미노산 서열,
(5) CDR1로서 서열 번호 26, CDR2로서 서열 번호 28, 및 CDR3으로서 서열 번호 30에 기재된 아미노산 서열,
(6) CDR1로서 서열 번호 31, CDR2로서 서열 번호 33, 및 CDR3으로서 서열 번호 35에 기재된 아미노산 서열,
(7) CDR1로서 서열 번호 36, CDR2로서 서열 번호 38, 및 CDR3으로서 서열 번호 40에 기재된 아미노산 서열,
(8) CDR1로서 서열 번호 41, CDR2로서 서열 번호 43, 및 CDR3으로서 서열 번호 45에 기재된 아미노산 서열,
(9) CDR1로서 서열 번호 46, CDR2로서 서열 번호 48, 및 CDR3으로서 서열 번호 50에 기재된 아미노산 서열,
(10) CDR1로서 서열 번호 51, CDR2로서 서열 번호 53, 및 CDR3으로서 서열 번호 55에 기재된 아미노산 서열,
(11) CDR1로서 서열 번호 56, CDR2로서 서열 번호 58, 및 CDR3으로서 서열 번호 60에 기재된 아미노산 서열,
(12) CDR1로서 서열 번호 61, CDR2로서 서열 번호 63, 및 CDR3으로서 서열 번호 65에 기재된 아미노산 서열,
(13) CDR1로서 서열 번호 66, CDR2로서 서열 번호 68, 및 CDR3으로서 서열 번호 70에 기재된 아미노산 서열,
(14) CDR1로서 서열 번호 71, CDR2로서 서열 번호 73, 및 CDR3으로서 서열 번호 75에 기재된 아미노산 서열.
hTfR에 친화성을 가지는 항체의 바람직한 실시형태로서, 항체의 중쇄의 CDR이 이하에 나타내는 (1)∼(14)에 기재된 아미노산 서열을 가지는 것을 예시할 수 있다. 즉:
(1) CDR1로서 서열 번호 76 또는 서열 번호 77의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 78 또는 서열 번호 79의 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 서열 번호 80 또는 서열 번호 81의 아미노산 서열,
(2) CDR1로서 서열 번호 82 또는 서열 번호 83의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 84 또는 서열 번호 85의 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 서열 번호 86 또는 서열 번호 87의 아미노산 서열,
(3) CDR1로서 서열 번호 88 또는 서열 번호 89의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 90 또는 서열 번호 91의 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 서열 번호 92 또는 서열 번호 93의 아미노산 서열,
(4) CDR1로서 서열 번호 94 또는 서열 번호 95의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 96 또는 서열 번호 97의 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 서열 번호 98 또는 서열 번호 99의 아미노산 서열,
(5) CDR1로서 서열 번호 100 또는 서열 번호 101의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 102 또는 서열 번호 103의 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 서열 번호 104 또는 서열 번호 105의 아미노산 서열,
(6) CDR1로서 서열 번호 106 또는 서열 번호 107의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 108의 아미노산 서열 또는 서열 번호 278의 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 서열 번호 109 또는 서열 번호 110의 아미노산 서열,
(7) CDR1로서 서열 번호 111 또는 서열 번호 112의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 113 또는 서열 번호 114의 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 서열 번호 115 또는 서열 번호 116의 아미노산 서열,
(8) CDR1로서 서열 번호 117 또는 서열 번호 118의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 119의 아미노산 서열 또는 서열 번호 279의 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 서열 번호 120 또는 서열 번호 121의 아미노산 서열,
(9) CDR1로서 서열 번호 122 또는 서열 번호 123의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 124 또는 서열 번호 125의 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 서열 번호 126 또는 서열 번호 127의 아미노산 서열,
(10) CDR1로서 서열 번호 128 또는 서열 번호 129의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 130 또는 서열 번호 131의 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 서열 번호 132 또는 서열 번호 133의 아미노산 서열,
(11) CDR1로서 서열 번호 134 또는 서열 번호 135의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 136 또는 서열 번호 137의 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 서열 번호 138 또는 서열 번호 139의 아미노산 서열,
(12) CDR1로서 서열 번호 140 또는 서열 번호 141의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 142 또는 서열 번호 143의 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 서열 번호 144 또는 서열 번호 145의 아미노산 서열,
(13) CDR1로서 서열 번호 146 또는 서열 번호 147의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 148 또는 서열 번호 149의 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 서열 번호 150 또는 서열 번호 151의 아미노산 서열, 및
(14) CDR1로서 서열 번호 152 또는 서열 번호 153의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 154 또는 서열 번호 155의 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 서열 번호 156 또는 서열 번호 157의 아미노산 서열.
hTfR에 친화성을 가지는 항체의 보다 구체적인 실시형태로서, 항체의 중쇄의 CDR이 이하에 나타내는 (1)∼(14)에 기재된 아미노산 서열을 가지는 것을 예시할 수 있다. 즉:
(1) CDR1로서 서열 번호 76, CDR2로서 서열 번호 78, 및 CDR3으로서 서열 번호 80에 기재된 아미노산 서열,
(2) CDR1로서 서열 번호 82, CDR2로서 서열 번호 84, 및 CDR3으로서 서열 번호 86에 기재된 아미노산 서열,
(3) CDR1로서 서열 번호 88, CDR2로서 서열 번호 90, 및 CDR3으로서 서열 번호 92에 기재된 아미노산 서열,
(4) CDR1로서 서열 번호 94, CDR2로서 서열 번호 96, 및 CDR3으로서 서열 번호 98에 기재된 아미노산 서열,
(5) CDR1로서 서열 번호 100, CDR2로서 서열 번호 102, 및 CDR3으로서 서열 번호 104에 기재된 아미노산 서열,
(6) CDR1로서 서열 번호 106, CDR2로서 서열 번호 108, 및 CDR3으로서 서열 번호 109에 기재된 아미노산 서열,
(7) CDR1로서 서열 번호 111, CDR2로서 서열 번호 113, 및 CDR3으로서 서열 번호 115에 기재된 아미노산 서열,
(8) CDR1로서 서열 번호 117, CDR2로서 서열 번호 119, 및 CDR3으로서 서열 번호 120에 기재된 아미노산 서열,
(9) CDR1로서 서열 번호 122, CDR2로서 서열 번호 124, 및 CDR3으로서 서열 번호 126에 기재된 아미노산 서열,
(10) CDR1로서 서열 번호 128, CDR2로서 서열 번호 130, 및 CDR3으로서 서열 번호 132에 기재된 아미노산 서열,
(11) CDR1로서 서열 번호 134, CDR2로서 서열 번호 136, 및 CDR3으로서 서열 번호 138 기재의 아미노산 서열,
(12) CDR1로서 서열 번호 140, CDR2로서 서열 번호 142, 및 CDR3으로서 서열 번호 144에 기재된 아미노산 서열,
(13) CDR1로서 서열 번호 146, CDR2로서 서열 번호 148, 및 CDR3으로서 서열 번호 150에 기재된 아미노산 서열, 및
(14) CDR1로서 서열 번호 152, CDR2로서 서열 번호 154, 및 CDR3으로서 서열 번호 156에 기재된 아미노산 서열.
hTfR에 친화성을 가지는 항체의 바람직한 경쇄와 중쇄의 조합으로서는, CDR이 이하에 나타내는 (1)∼(14)에 기재된 아미노산 서열을 가지는 것을 예시할 수 있다. 즉:
(1) CDR1로서 서열 번호 6 또는 서열 번호 7의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 8 또는 서열 번호 9의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Trp-Thr-Ser, 및 CDR3으로서 서열 번호 10의 아미노산 서열을 가지는 경쇄와, CDR1로서 서열 번호 76 또는 서열 번호 77의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 78 또는 서열 번호 79의 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 서열 번호 80 또는 서열 번호 81의 아미노산 서열을 가지는 중쇄의 조합,
(2) CDR1로서 서열 번호 11 또는 서열 번호 12의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 13 또는 서열 번호 14의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열(TyrAlaSer), 및 CDR3으로서 서열 번호 15의 아미노산 서열을 가지는 경쇄와, CDR1로서 서열 번호 82 또는 서열 번호 83의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 84 또는 서열 번호 85의 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 서열 번호 86 또는 서열 번호 87의 아미노산 서열을 가지는 중쇄의 조합,
(3) CDR1로서 서열 번호 16 또는 서열 번호 17의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 18 또는 서열 번호 19의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Lys-Val-Ser, 및 CDR3으로서 서열 번호 20의 아미노산 서열을 가지는 경쇄와, CDR1로서 서열 번호 88 또는 서열 번호 89의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 90 또는 서열 번호 91의 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 서열 번호 92 또는 서열 번호 93의 아미노산 서열을 가지는 중쇄의 조합,
(4) CDR1로서 서열 번호 21 또는 서열 번호 22의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 23 또는 서열 번호 24의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Asp-Thr-Ser, 및 CDR3으로서 서열 번호 25의 아미노산 서열을 가지는 경쇄와, CDR1로서 서열 번호 94 또는 서열 번호 95의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 96 또는 서열 번호 97의 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 서열 번호 98 또는 서열 번호 99의 아미노산 서열을 가지는 중쇄의 조합,
(5) CDR1로서 서열 번호 26 또는 서열 번호 27의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 28 또는 서열 번호 29의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Asp-Thr-Ser, 및 CDR3으로서 서열 번호 30의 아미노산 서열을 가지는 경쇄와, CDR1로서 서열 번호 100 또는 서열 번호 101의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 102 또는 서열 번호 103의 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 서열 번호 104 또는 서열 번호 105의 아미노산 서열을 가지는 중쇄의 조합,
(6) CDR1로서 서열 번호 31 또는 서열 번호 32의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 33 또는 서열 번호 34의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Ala-Ala-Ser, 및 CDR3으로서 서열 번호 35의 아미노산 서열을 가지는 경쇄와, CDR1로서 서열 번호 106 또는 서열 번호 107의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 108 또는 서열 번호 278의 아미노산 서열의 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 서열 번호 109 또는 서열 번호 110의 아미노산 서열을 가지는 중쇄의 조합,
(7) CDR1로서 서열 번호 36 또는 서열 번호 37의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 38 또는 서열 번호 39의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Gln-Thr-Ser, 및 CDR3으로서 서열 번호 40의 아미노산 서열을 가지는 경쇄와, CDR1로서 서열 번호 111 또는 서열 번호 112의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 113 또는 서열 번호 114의 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 서열 번호 115 또는 서열 번호 116의 아미노산 서열을 가지는 중쇄의 조합,
(8) CDR1로서 서열 번호 41 또는 서열 번호 42의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 43 또는 서열 번호 44의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Gly-Thr-Ser, 및 CDR3으로서 서열 번호 45의 아미노산 서열을 가지는 경쇄와, CDR1로서 서열 번호 117 또는 서열 번호 118의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 119의 아미노산 서열 또는 서열 번호 279의 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 서열 번호 120 또는 서열 번호 121의 아미노산 서열을 가지는 중쇄의 조합,
(9) CDR1로서 서열 번호 46 또는 서열 번호 47의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 48 또는 서열 번호 49의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Phe-Thr-Ser, 및 CDR3으로서 서열 번호 50의 아미노산 서열을 가지는 경쇄와, CDR1로서 서열 번호 122 또는 서열 번호 123의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 124 또는 서열 번호 125의 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 서열 번호 126 또는 서열 번호 127의 아미노산 서열을 가지는 중쇄의 조합,
(10) CDR1로서 서열 번호 51 또는 서열 번호 52의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 53 또는 서열 번호 54의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Ala-Ala-Ser, 및 CDR3으로서 서열 번호 55의 아미노산 서열을 가지는 경쇄와, CDR1로서 서열 번호 128 또는 서열 번호 129의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 130 또는 서열 번호 131의 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 서열 번호 132 또는 서열 번호 133의 아미노산 서열을 가지는 중쇄의 조합,
(11) CDR1로서 서열 번호 56 또는 서열 번호 57의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 58 또는 서열 번호 59의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Tyr-Ala-Ser, 및 CDR3으로서 서열 번호 60의 아미노산 서열을 가지는 경쇄와, CDR1로서 서열 번호 134 또는 서열 번호 135의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 136 또는 서열 번호 137의 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 서열 번호 138 또는 서열 번호 139의 아미노산 서열을 가지는 중쇄의 조합,
(12) CDR1로서 서열 번호 61 또는 서열 번호 62의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 63 또는 서열 번호 64의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Trp-Ser-Ser, 및 CDR3으로서 서열 번호 65의 아미노산 서열을 가지는 경쇄와, CDR1로서 서열 번호 140 또는 서열 번호 141의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 142 또는 서열 번호 143의 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 서열 번호 144 또는 서열 번호 145의 아미노산 서열을 가지는 중쇄의 조합,
(13) CDR1로서 서열 번호 66 또는 서열 번호 67의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 68 또는 서열 번호 69의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Tyr-Ala-Ser, 및 CDR3으로서 서열 번호 70의 아미노산 서열을 가지는 경쇄와, CDR1로서 서열 번호 146 또는 서열 번호 147의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 148 또는 서열 번호 149의 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 서열 번호 150 또는 서열 번호 151의 아미노산 서열을 가지는 중쇄의 조합, 및
(14) CDR1로서 서열 번호 71 또는 서열 번호 72의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 73 또는 서열 번호 74의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Asp-Thr-Ser, 및 CDR3으로서 서열 번호 75의 아미노산 서열을 가지는 경쇄와, CDR1로서 서열 번호 152 또는 서열 번호 153의 아미노산 서열, CDR2로서 서열 번호 154 또는 서열 번호 155의 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 서열 번호 156 또는 서열 번호 157의 아미노산 서열을 가지는 중쇄의 조합.
hTfR에 친화성을 가지는 항체의 경쇄와 중쇄의 조합의 구체적 태양으로서는, CDR이 이하에 나타내는 (1)∼(14)에 기재된 아미노산 서열을 가지는 것을 예시할 수 있다. 즉:
(1) CDR1로서 서열 번호 6, CDR2로서 서열 번호 8, 및 CDR3으로서 서열 번호 10에 기재된 아미노산 서열을 가지는 경쇄와, CDR1로서 서열 번호 76, CDR2로서 서열 번호 78, 및 CDR3으로서 서열 번호 80에 기재된 아미노산 서열을 가지는 중쇄의 조합,
(2) CDR1로서 서열 번호 11, CDR2로서 서열 번호 13, 및 CDR3으로서 서열 번호 15에 기재된 아미노산 서열을 가지는 경쇄와, CDR1로서 서열 번호 82, CDR2로서 서열 번호 84, 및 CDR3으로서 서열 번호 86에 기재된 아미노산 서열을 가지는 중쇄의 조합,
(3) CDR1로서 서열 번호 16, CDR2로서 서열 번호 18, 및 CDR3으로서 서열 번호 20에 기재된 아미노산 서열을 가지는 경쇄와, CDR1로서 서열 번호 88, CDR2로서 서열 번호 90, 및 CDR3으로서 서열 번호 92에 기재된 아미노산 서열을 가지는 중쇄의 조합,
(4) CDR1로서 서열 번호 21, CDR2로서 서열 번호 23, 및 CDR3으로서 서열 번호 25에 기재된 아미노산 서열을 가지는 경쇄와, CDR1로서 서열 번호 94, CDR2로서 서열 번호 96, 및 CDR3으로서 서열 번호 98에 기재된 아미노산 서열을 가지는 중쇄의 조합,
(5) CDR1로서 서열 번호 26, CDR2로서 서열 번호 28, 및 CDR3으로서 서열 번호 30에 기재된 아미노산 서열을 가지는 경쇄와, CDR1로서 서열 번호 100, CDR2로서 서열 번호 102, 및 CDR3으로서 서열 번호 104에 기재된 아미노산 서열을 가지는 중쇄의 조합,
(6) CDR1로서 서열 번호 31, CDR2로서 서열 번호 33, 및 CDR3으로서 서열 번호 35에 기재된 아미노산 서열을 가지는 경쇄와, CDR1로서 서열 번호 106, CDR2로서 서열 번호 108, 및 CDR3으로서 서열 번호 109에 기재된 아미노산 서열을 가지는 중쇄의 조합,
(7) CDR1로서 서열 번호 36, CDR2로서 서열 번호 38, 및 CDR3으로서 서열 번호 40에 기재된 아미노산 서열을 가지는 경쇄와, CDR1로서 서열 번호 111, CDR2로서 서열 번호 113, 및 CDR3으로서 서열 번호 115에 기재된 아미노산 서열을 가지는 중쇄의 조합,
(8) CDR1로서 서열 번호 41, CDR2로서 서열 번호 43, 및 CDR3으로서 서열 번호 45에 기재된 아미노산 서열을 가지는 경쇄와, CDR1로서 서열 번호 117, CDR2로서 서열 번호 119, 및 CDR3으로서 서열 번호 120에 기재된 아미노산 서열을 가지는 중쇄의 조합,
(9) CDR1로서 서열 번호 46, CDR2로서 서열 번호 48, 및 CDR3으로서 서열 번호 50에 기재된 아미노산 서열을 가지는 경쇄와, CDR1로서 서열 번호 122, CDR2로서 서열 번호 124, 및 CDR3으로서 서열 번호 126에 기재된 아미노산 서열을 가지는 중쇄의 조합,
(10) CDR1로서 서열 번호 51, CDR2로서 서열 번호 53, 및 CDR3으로서 서열 번호 55에 기재된 아미노산 서열을 가지는 경쇄와, CDR1로서 서열 번호 128, CDR2로서 서열 번호 130, 및 CDR3으로서 서열 번호 132에 기재된 아미노산 서열을 가지는 중쇄의 조합,
(11) CDR1로서 서열 번호 56, CDR2로서 서열 번호 58, 및 CDR3으로서 서열 번호 60에 기재된 아미노산 서열을 가지는 경쇄와, CDR1로서 서열 번호 134, CDR2로서 서열 번호 136, 및 CDR3으로서 서열 번호 138 기재의 아미노산 서열을 가지는 중쇄의 조합,
(12) CDR1로서 서열 번호 61, CDR2로서 서열 번호 63, 및 CDR3으로서 서열 번호 65에 기재된 아미노산 서열을 가지는 경쇄와, CDR1로서 서열 번호 140, CDR2로서 서열 번호 142, 및 CDR3으로서 서열 번호 144에 기재된 아미노산 서열을 가지는 중쇄의 조합,
(13) CDR1로서 서열 번호 66, CDR2로서 서열 번호 68, 및 CDR3으로서 서열 번호 70에 기재된 아미노산 서열을 가지는 경쇄와, CDR1로서 서열 번호 146, CDR2로서 서열 번호 148, 및 CDR3으로서 서열 번호 150에 기재된 아미노산 서열을 가지는 중쇄의 조합, 및
(14) CDR1로서 서열 번호 71, CDR2로서 서열 번호 73, 및 CDR3으로서 서열 번호 75에 기재된 아미노산 서열을 가지는 경쇄와, CDR1로서 서열 번호 152, CDR2로서 서열 번호 154, 및 CDR3으로서 서열 번호 156에 기재된 아미노산 서열을 가지는 중쇄의 조합.
hTfR에 친화성을 가지는 인간화 항체의 바람직한 실시형태로서, 서열 번호 218∼서열 번호 245로 나타나는 마우스 항인간 TfR 항체의 경쇄 및 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열을 CDR로서 이용하여 제작된 인간화 항체를 들 수 있다. 인간화 항체는, 이들 마우스 항인간 TfR 항체의 경쇄 및 중쇄의 가변 영역의 CDR의 아미노산 서열을, 인간 항체의 적절한 위치에 치환하는 것에 의해 제작된다.
예를 들어, 서열 번호 218에 기재된 아미노산 서열에 있어서, CDR1로서 24번째∼34번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 6개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, CDR2로서 50번째∼56번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 6개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 89번째∼97번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 8개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열에 의해, 인간 항체의 경쇄의 대응하는 CDR의 아미노산 서열을 치환한 것을, 인간화 항체의 경쇄로 할 수 있고, 서열 번호 219에 기재된 아미노산 서열에 있어서, CDR1로서 26번째∼35번째의 임의의 연속한 3개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, CDR2로서 50번째∼66번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 8개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 97번째∼105번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 7개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열에 의해, 인간 항체의 중쇄의 대응하는 CDR의 아미노산 서열을 치환한 것을, 인간화 항체의 중쇄로 할 수 있다. 이렇게 하여 얻어진 인간화 항체의 경쇄와 중쇄를 조합하여 인간화 항체를 제작할 수 있다.
또한 예를 들어, 서열 번호 220에 기재된 아미노산 서열에 있어서, CDR1로서 24번째∼34번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 6개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, CDR2로서 50번째∼56번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 6개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 89번째∼97번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 8개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열에 의해, 인간 항체의 경쇄의 대응하는 CDR의 아미노산 서열을 치환한 것을, 인간화 항체의 경쇄로 할 수 있고, 서열 번호 221에 기재된 아미노산 서열에 있어서, CDR1로서 26번째∼35번째의 임의의 연속한 3개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, CDR2로서 50번째∼66번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 8개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 97번째∼112번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 14개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열에 의해, 인간 항체의 중쇄의 대응하는 CDR의 아미노산 서열을 치환한 것을, 인간화 항체의 중쇄로 할 수 있다. 이렇게 하여 얻어진 인간화 항체의 경쇄와 중쇄를 조합하여 인간화 항체를 제작할 수 있다.
더욱이, 예를 들어, 서열 번호 222에 기재된 아미노산 서열에 있어서, CDR1로서 24번째∼39번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 11개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, CDR2로서 55번째∼61번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 6개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 94번째∼102번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 8개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열에 의해, 인간 항체의 경쇄의 대응하는 CDR의 아미노산 서열을 치환한 것을, 인간화 항체의 경쇄로 할 수 있고, 서열 번호 223에 기재된 아미노산 서열에 있어서, CDR1로서 26번째∼35번째의 임의의 연속한 3개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, CDR2로서 50번째∼66번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 8개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 97번째∼107번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 9개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열에 의해, 인간 항체의 중쇄의 대응하는 CDR의 아미노산 서열을 치환한 것을, 인간화 항체의 중쇄로 할 수 있다. 이렇게 하여 얻어진 인간화 항체의 경쇄와 중쇄를 조합하여 인간화 항체를 제작할 수 있다.
더욱이, 예를 들어, 서열 번호 224에 기재된 아미노산 서열에 있어서, CDR1로서 24번째∼33번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 5개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, CDR2로서 49번째∼55번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 6개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 88번째∼96번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 8개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열에 의해, 인간 항체의 경쇄의 대응하는 CDR의 아미노산 서열을 치환한 것을, 인간화 항체의 경쇄로 할 수 있고, 서열 번호 225에 기재된 아미노산 서열에 있어서, CDR1로서 26번째∼35번째의 임의의 연속한 3개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, CDR2로서 51번째∼66번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 8개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 97번째∼111번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 13개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열에 의해, 인간 항체의 중쇄의 대응하는 CDR의 아미노산 서열을 치환한 것을, 인간화 항체의 중쇄로 할 수 있다. 이렇게 하여 얻어진 인간화 항체의 경쇄와 중쇄를 조합하여 인간화 항체를 제작할 수 있다.
더욱이, 예를 들어, 서열 번호 226에 기재된 아미노산 서열에 있어서, CDR1로서 24번째∼33번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 5개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, CDR2로서 49번째∼55번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 6개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 88번째∼95번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 7개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열에 의해, 인간 항체의 경쇄의 대응하는 CDR의 아미노산 서열을 치환한 것을, 인간화 항체의 경쇄로 할 수 있고, 서열 번호 227에 기재된 아미노산 서열에 있어서, CDR1로서 26번째∼35번째의 임의의 연속한 3개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, CDR2로서 51번째∼66번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 8개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 97번째∼107번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 9개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열에 의해, 인간 항체의 중쇄의 대응하는 CDR의 아미노산 서열을 치환한 것을, 인간화 항체의 중쇄로 할 수 있다. 이렇게 하여 얻어진 인간화 항체의 경쇄와 중쇄를 조합하여 인간화 항체를 제작할 수 있다.
더욱이, 예를 들어, 서열 번호 228에 기재된 아미노산 서열에 있어서, CDR1로서 24번째∼34번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 6개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, CDR2로서 50번째∼56번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 6개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 89번째∼97번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 8개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열에 의해, 인간 항체의 경쇄의 대응하는 CDR의 아미노산 서열을 치환한 것을, 인간화 항체의 경쇄로 할 수 있고, 서열 번호 229에 기재된 아미노산 서열에 있어서, CDR1로서 26번째∼35번째의 임의의 연속한 3개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, CDR2로서 50번째∼65번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 7개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 96번째∼101번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 4개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열에 의해, 인간 항체의 중쇄의 대응하는 CDR의 아미노산 서열을 치환한 것을, 인간화 항체의 중쇄로 할 수 있다. 이렇게 하여 얻어진 인간화 항체의 경쇄와 중쇄를 조합하여 인간화 항체를 제작할 수 있다.
더욱이, 예를 들어, 서열 번호 230에 기재된 아미노산 서열에 있어서, CDR1로서 24번째∼33번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 5개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, CDR2로서 49번째∼55번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 6개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 88번째∼96번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 8개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열에 의해, 인간 항체의 경쇄의 대응하는 CDR의 아미노산 서열을 치환한 것을, 인간화 항체의 경쇄로 할 수 있고, 서열 번호 231에 기재된 아미노산 서열에 있어서, CDR1로서 26번째∼35번째의 임의의 연속한 3개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, CDR2로서 51번째∼66번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 8개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 97번째∼109번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 11개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열에 의해, 인간 항체의 중쇄의 대응하는 CDR의 아미노산 서열을 치환한 것을, 인간화 항체의 중쇄로 할 수 있다. 이렇게 하여 얻어진 인간화 항체의 경쇄와 중쇄를 조합하여 인간화 항체를 제작할 수 있다.
더욱이, 예를 들어, 서열 번호 232에 기재된 아미노산 서열에 있어서, CDR1로서 24번째∼33번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 5개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, CDR2로서 49번째∼55번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 6개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 88번째∼96번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 8개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열에 의해, 인간 항체의 경쇄의 대응하는 CDR의 아미노산 서열을 치환한 것을, 인간화 항체의 경쇄로 할 수 있고, 서열 번호 233에 기재된 아미노산 서열에 있어서, CDR1로서 26번째∼35번째의 임의의 연속한 3개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, CDR2로서 50번째∼65번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 7개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 96번째∼101번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 4개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열에 의해, 인간 항체의 중쇄의 대응하는 CDR의 아미노산 서열을 치환한 것을, 인간화 항체의 중쇄로 할 수 있다. 이렇게 하여 얻어진 인간화 항체의 경쇄와 중쇄를 조합하여 인간화 항체를 제작할 수 있다.
더욱이, 예를 들어, 서열 번호 234에 기재된 아미노산 서열에 있어서, CDR1로서 24번째∼33번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 5개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, CDR2로서 49번째∼55번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 6개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 88번째∼96번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 8개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열에 의해, 인간 항체의 경쇄의 대응하는 CDR의 아미노산 서열을 치환한 것을, 인간화 항체의 경쇄로 할 수 있고, 서열 번호 235에 기재된 아미노산 서열에 있어서, CDR1로서 26번째∼35번째의 임의의 연속한 3개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, CDR2로서 51번째∼66번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 8개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 97번째∼106번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 8개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열에 의해, 인간 항체의 중쇄의 대응하는 CDR의 아미노산 서열을 치환한 것을, 인간화 항체의 중쇄로 할 수 있다. 이렇게 하여 얻어진 인간화 항체의 경쇄와 중쇄를 조합하여 인간화 항체를 제작할 수 있다.
더욱이, 예를 들어, 서열 번호 236에 기재된 아미노산 서열에 있어서, CDR1로서 24번째∼34번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 6개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, CDR2로서 50번째∼56번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 6개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 89번째∼97번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 8개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열에 의해, 인간 항체의 경쇄의 대응하는 CDR의 아미노산 서열을 치환한 것을, 인간화 항체의 경쇄로 할 수 있고, 서열 번호 237에 기재된 아미노산 서열에 있어서, CDR1로서 26번째∼35번째의 임의의 연속한 3개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, CDR2로서 51번째∼66번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 8개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 97번째∼109번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 11개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열에 의해, 인간 항체의 중쇄의 대응하는 CDR의 아미노산 서열을 치환한 것을, 인간화 항체의 중쇄로 할 수 있다. 이렇게 하여 얻어진 인간화 항체의 경쇄와 중쇄를 조합하여 인간화 항체를 제작할 수 있다.
더욱이, 예를 들어, 서열 번호 238에 기재된 아미노산 서열에 있어서, CDR1로서 24번째∼34번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 6개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, CDR2로서 50번째∼56번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 6개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 89번째∼97번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 8개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열에 의해, 인간 항체의 경쇄의 대응하는 CDR의 아미노산 서열을 치환한 것을, 인간화 항체의 경쇄로 할 수 있고, 서열 번호 239에 기재된 아미노산 서열에 있어서, CDR1로서 26번째∼35번째의 임의의 연속한 3개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, CDR2로서 51번째∼66번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 8개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 97번째∼107번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 9개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열에 의해, 인간 항체의 중쇄의 대응하는 CDR의 아미노산 서열을 치환한 것을, 인간화 항체의 중쇄로 할 수 있다. 이렇게 하여 얻어진 인간화 항체의 경쇄와 중쇄를 조합하여 인간화 항체를 제작할 수 있다.
더욱이, 예를 들어, 서열 번호 240에 기재된 아미노산 서열에 있어서, CDR1로서 24번째∼34번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 6개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, CDR2로서 50번째∼56번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 6개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 89번째∼97번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 8개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열에 의해, 인간 항체의 경쇄의 대응하는 CDR의 아미노산 서열을 치환한 것을, 인간화 항체의 경쇄로 할 수 있고, 서열 번호 241에 기재된 아미노산 서열에 있어서, CDR1로서 26번째∼35번째의 임의의 연속한 3개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, CDR2로서 51번째∼66번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 8개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 97번째∼108번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 10개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열에 의해, 인간 항체의 중쇄의 대응하는 CDR의 아미노산 서열을 치환한 것을, 인간화 항체의 중쇄로 할 수 있다. 이렇게 하여 얻어진 인간화 항체의 경쇄와 중쇄를 조합하여 인간화 항체를 제작할 수 있다.
더욱이, 예를 들어, 서열 번호 242에 기재된 아미노산 서열에 있어서, CDR1로서 24번째∼34번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 6개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, CDR2로서 50번째∼56번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 6개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 89번째∼97번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 8개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열에 의해, 인간 항체의 경쇄의 대응하는 CDR의 아미노산 서열을 치환한 것을, 인간화 항체의 경쇄로 할 수 있고, 서열 번호 243에 기재된 아미노산 서열에 있어서, CDR1로서 26번째∼35번째의 임의의 연속한 3개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, CDR2로서 51번째∼66번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 8개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 97번째∼107번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 9개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열에 의해, 인간 항체의 중쇄의 대응하는 CDR의 아미노산 서열을 치환한 것을, 인간화 항체의 중쇄로 할 수 있다. 이렇게 하여 얻어진 인간화 항체의 경쇄와 중쇄를 조합하여 인간화 항체를 제작할 수 있다.
더욱이, 예를 들어, 서열 번호 244에 기재된 아미노산 서열에 있어서, CDR1로서 24번째∼33번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 5개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, CDR2로서 49번째∼55번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 6개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 88번째∼96번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 9개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열에 의해, 인간 항체의 경쇄의 대응하는 CDR의 아미노산 서열을 치환한 것을, 인간화 항체의 경쇄로 할 수 있고, 서열 번호 245에 기재된 아미노산 서열에 있어서, CDR1로서 26번째∼35번째의 임의의 연속한 3개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, CDR2로서 51번째∼66번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 8개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열, 및 CDR3으로서 97번째∼107번째의 임의의 연속한 3개 이상 또는 9개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열에 의해, 인간 항체의 중쇄의 대응하는 CDR의 아미노산 서열을 치환한 것을, 인간화 항체의 중쇄로 할 수 있다. 이렇게 하여 얻어진 인간화 항체의 경쇄와 중쇄를 조합하여 인간화 항체를 제작할 수 있다.
hTfR에 친화성을 가지는 인간화 항체의 바람직한 실시형태로서는, 이하에 나타내는 (1)∼(3)에 기재된 아미노산 서열을 가지는 것을 예시할 수 있다. 즉:
(1) 항hTfR 항체로서, 경쇄의 가변 영역이, 서열 번호 158, 서열 번호 159, 서열 번호 160, 서열 번호 161, 서열 번호 162, 및 서열 번호 163으로 나타나는 아미노산 서열로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 중쇄의 가변 영역이, 서열 번호 166, 서열 번호 167, 서열 번호 168, 서열 번호 169, 서열 번호 170, 및 서열 번호 171로 나타나는 아미노산 서열로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는, 항hTfR 항체,
(2) 항hTfR 항체로서, 경쇄의 가변 영역이, 서열 번호 174, 서열 번호 175, 서열 번호 176, 서열 번호 177, 서열 번호 178, 및 서열 번호 179의 어느 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 중쇄의 가변 영역이, 서열 번호 182, 서열 번호 183, 서열 번호 184, 서열 번호 185, 서열 번호 186, 및 서열 번호 187의 어느 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는, 항hTfR 항체,
(3) 항hTfR 항체로서, 경쇄의 가변 영역이, 서열 번호 190, 서열 번호 191, 서열 번호 192, 서열 번호 193, 서열 번호 194, 및 서열 번호 195로 나타나는 아미노산 서열로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 중쇄의 가변 영역이, 서열 번호 204, 서열 번호 205, 서열 번호 206, 서열 번호 207, 서열 번호 208 및 서열 번호 209로 나타나는 아미노산 서열로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는, 항hTfR 항체.
서열 번호 158, 서열 번호 159, 서열 번호 160, 서열 번호 161, 서열 번호 162, 및 서열 번호 163에 기재된 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열은, CDR1에 서열 번호 6 또는 7, CDR2에 서열 번호 8 또는 9, 및 CDR3에 서열 번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 것이다. 단, 서열 번호 158∼162에 기재된 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열에 있어서, CDR이라고 할 때는, CDR의 서열은 이들로 한정되는 것은 아니고, 이들 CDR의 아미노산 서열을 포함하는 영역, 이들 CDR의 아미노산 서열의 임의의 연속한 3개 이상의 아미노산을 포함하는 아미노산 서열도 CDR로 할 수 있다.
서열 번호 166, 서열 번호 167, 서열 번호 168, 서열 번호 169, 서열 번호 170, 및 서열 번호 171에 기재된 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열은, CDR1에 서열 번호 76 또는 77, CDR2에 서열 번호 78 또는 79, 및 CDR3에 서열 번호 80 또는 81의 아미노산 서열을 포함하는 것이다. 단, 서열 번호 166∼171에 기재된 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열에 있어서, CDR이라고 할 때는, CDR의 서열은 이들로 한정되는 것은 아니고, 이들 CDR의 아미노산 서열을 포함하는 영역, 이들 CDR의 아미노산 서열의 임의의 연속한 3개 이상의 아미노산을 포함하는 아미노산 서열도 CDR로 할 수 있다.
서열 번호 174, 서열 번호 175, 서열 번호 176, 서열 번호 177, 서열 번호 178, 및 서열 번호 179에 기재된 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열은, CDR1에 서열 번호 11 또는 12, CDR2에 서열 번호 13 또는 14, 및 CDR3에 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 것이다. 단, 서열 번호 174∼179에 기재된 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열에 있어서, CDR이라고 할 때는, CDR의 서열은 이들로 한정되는 것은 아니고, 이들 CDR의 아미노산 서열을 포함하는 영역, 이들 CDR의 아미노산 서열의 임의의 연속한 3개 이상의 아미노산을 포함하는 아미노산 서열도 CDR로 할 수 있다.
서열 번호 182, 서열 번호 183, 서열 번호 184, 서열 번호 185, 서열 번호 186, 및 서열 번호 187에 기재된 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열은, CDR1에 서열 번호 82 또는 83, CDR2에 서열 번호 84 또는 85, 및 CDR3에 서열 번호 86 또는 87의 아미노산 서열을 포함하는 것이다. 단, 서열 번호 182∼187에 기재된 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열에 있어서, CDR이라고 할 때는, CDR의 서열은 이들로 한정되는 것은 아니고, 이들 CDR의 아미노산 서열을 포함하는 영역, 이들 CDR의 아미노산 서열의 임의의 연속한 3개 이상의 아미노산을 포함하는 아미노산 서열도 CDR로 할 수 있다.
서열 번호 190, 서열 번호 191, 서열 번호 192, 서열 번호 193, 서열 번호 194, 및 서열 번호 195에 기재된 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열은, CDR1에 서열 번호 16 또는 17, CDR2에 서열 번호 18 또는 19, 및 CDR3에 서열 번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 것이다. 단, 서열 번호 190∼195에 기재된 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열에 있어서, CDR이라고 할 때는, CDR의 서열은 이들로 한정되는 것은 아니고, 이들 CDR의 아미노산 서열을 포함하는 영역, 이들 CDR의 아미노산 서열의 임의의 연속한 3개 이상의 아미노산을 포함하는 아미노산 서열도 CDR로 할 수 있다.
서열 번호 204, 서열 번호 205, 서열 번호 206, 서열 번호 207, 서열 번호 208및 서열 번호 209에 기재된 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열은, CDR1에 서열 번호 88 또는 89, CDR2에 서열 번호 90 또는 91, 및 CDR3에 서열 번호 92 또는 93의 아미노산 서열을 포함하는 것이다. 단, 서열 번호 204∼209에 기재된 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열에 있어서, CDR이라고 할 때는, CDR의 서열은 이들로 한정되는 것은 아니고, 이들 CDR의 아미노산 서열을 포함하는 영역, 이들 CDR의 아미노산 서열의 임의의 연속한 3개 이상의 아미노산을 포함하는 아미노산 서열도 CDR로 할 수 있다.
hTfR에 친화성을 가지는 인간화 항체의 보다 구체적인 실시형태로서는,
경쇄의 가변 영역이 서열 번호 163의 아미노산 서열을 포함하고 또한 중쇄의 가변 영역이 서열 번호 171의 아미노산 서열을 포함하는 것,
경쇄의 가변 영역이 서열 번호 179의 아미노산 서열을 포함하고 또한 중쇄의 가변 영역이 서열 번호 187의 아미노산 서열을 포함하는 것,
경쇄의 가변 영역이 서열 번호 191의 아미노산 서열을 포함하고 또한 중쇄의 가변 영역이 서열 번호 205의 아미노산 서열을 포함하는 것,
경쇄의 가변 영역이 서열 번호 193의 아미노산 서열을 포함하고 또한 중쇄의 가변 영역이 서열 번호 205의 아미노산 서열을 포함하는 것,
경쇄의 가변 영역이 서열 번호 194의 아미노산 서열을 포함하고 또한 중쇄의 가변 영역이 서열 번호 205의 아미노산 서열을 포함하는 것, 및
경쇄의 가변 영역이 서열 번호 195의 아미노산 서열을 포함하고 또한 중쇄의 가변 영역이 서열 번호 205의 아미노산 서열을 포함하는 것
을 들 수 있다.
hTfR에 친화성을 가지는 인간화 항체의 보다 구체적인 실시형태로서는,
경쇄가 서열 번호 164의 아미노산 서열을 포함하고 또한 중쇄가 서열 번호 172의 아미노산 서열을 포함하는 것,
경쇄가 서열 번호 180의 아미노산 서열을 포함하고 또한 중쇄가 서열 번호 188의 아미노산 서열을 포함하는 것,
경쇄가 서열 번호 196의 아미노산 서열을 포함하고 또한 중쇄가 서열 번호 210의 아미노산 서열을 포함하는 것,
경쇄가 서열 번호 198의 아미노산 서열을 포함하고 또한 중쇄가 서열 번호 210의 아미노산 서열을 포함하는 것,
경쇄가 서열 번호 200의 아미노산 서열을 포함하고 또한 중쇄가 서열 번호 210의 아미노산 서열을 포함하는 것,
경쇄가 서열 번호 202의 아미노산 서열을 포함하고 또한 중쇄가 서열 번호 210의 아미노산 서열을 포함하는 것,
경쇄가 서열 번호 196의 아미노산 서열을 포함하고 또한 중쇄가 서열 번호 212의 아미노산 서열을 포함하는 것,
경쇄가 서열 번호 198의 아미노산 서열을 포함하고 또한 중쇄가 서열 번호 212의 아미노산 서열을 포함하는 것,
경쇄가 서열 번호 200의 아미노산 서열을 포함하고 또한 중쇄가 서열 번호 212의 아미노산 서열을 포함하는 것, 및
경쇄가 서열 번호 202의 아미노산 서열을 포함하고 또한 중쇄가 서열 번호 212의 아미노산 서열을 포함하는 것
을 들 수 있다.
hTfR에 친화성을 가지는 항체의 바람직한 실시형태를 상기와 같이 예시했다. 이들 항hTfR 항체의 경쇄 및 중쇄는, 그 가변 영역의 아미노산 서열에, 항hTfR 항체와 hTfR의 친화성을 원하는 것으로 조정 등을 할 목적으로, 적절히 치환, 결실, 부가 등의 변이를 가할 수 있다.
경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열의 아미노산을 다른 아미노산으로 치환시키는 경우, 치환시키는 아미노산의 개수는, 바람직하게는 1∼10개이고, 보다 바람직하게는 1∼5개이며, 더욱 바람직하게는 1∼3개, 보다 더 바람직하게는 1∼2개이다. 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 중의 아미노산을 결실시키는 경우, 결실시키는 아미노산의 개수는, 바람직하게는 1∼10개이고, 보다 바람직하게는 1∼5개이며, 더욱 바람직하게는 1∼3개이고, 보다 더 바람직하게는 1∼2개이다. 또한, 이들 아미노산의 치환과 결실을 조합한 변이를 가할 수도 있다.
경쇄의 가변 영역에 아미노산을 부가하는 경우, 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 중 혹은 N말단측 또는 C말단측에, 바람직하게는 1∼10개, 보다 바람직하게는 1∼5개, 더욱 바람직하게는 1∼3개, 보다 더 바람직하게는 1∼2개 아미노산이 부가된다. 이들 아미노산의 부가, 치환 및 결실을 조합한 변이를 가할 수도 있다. 변이를 가한 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열은, 원래의 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열과 바람직하게는 80% 이상의 상동성을 가지고, 보다 바람직하게는 90% 이상의 상동성을 나타내며, 더욱 바람직하게는, 95% 이상의 상동성을 나타낸다.
특히, 경쇄의 각 CDR의 각각의 아미노산 서열 중의 아미노산을 다른 아미노산으로 치환시키는 경우, 치환시키는 아미노산의 개수는, 바람직하게는 1∼5개이고, 보다 바람직하게는 1∼3개이며, 더욱 바람직하게는 1∼2개이고, 보다 더 바람직하게는 1개이다. 각 CDR의 각각의 아미노산 서열 중의 아미노산을 결실시키는 경우, 결실시키는 아미노산의 개수는, 바람직하게는 1∼5개이고, 보다 바람직하게는 1∼3개이며, 더욱 바람직하게는 1∼2개이고, 보다 더 바람직하게는 1개이다. 또한, 이들 아미노산의 치환과 결실을 조합한 변이를 가할 수도 있다.
경쇄의 각 CDR의 각각의 아미노산 서열 중에 아미노산을 부가시키는 경우, 당해 아미노산 서열 중 혹은 N말단측 또는 C말단측에, 바람직하게는 1∼5개, 보다 바람직하게는 1∼3개, 더욱 바람직하게는 1∼2개, 보다 더 바람직하게는 의 아미노산이 부가된다. 이들 아미노산의 부가, 치환 및 결실을 조합한 변이를 가할 수도 있다. 변이를 가한 각 CDR의 각각의 아미노산 서열은, 원래의 각 CDR의 아미노산 서열과 바람직하게는 80% 이상의 상동성을 가지고, 보다 바람직하게는 90% 이상의 상동성을 나타내며, 더욱 바람직하게는, 95% 이상의 상동성을 나타낸다.
중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열의 아미노산을 다른 아미노산으로 치환시키는 경우, 치환시키는 아미노산의 개수는, 바람직하게는 1∼10개이고, 보다 바람직하게는 1∼5개이며, 더욱 바람직하게는 1∼3개, 보다 더 바람직하게는 1∼2개이다. 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 중의 아미노산을 결실시키는 경우, 결실시키는 아미노산의 개수는, 바람직하게는 1∼10개이고, 보다 바람직하게는 1∼5개이며, 더욱 바람직하게는 1∼3개이고, 보다 더 바람직하게는 1∼2개이다. 또한, 이들 아미노산의 치환과 결실을 조합한 변이를 가할 수도 있다.
중쇄의 가변 영역에 아미노산을 부가시키는 경우, 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 중 혹은 N말단측 또는 C말단측에, 바람직하게는 1∼10개, 보다 바람직하게는 1∼5개, 더욱 바람직하게는 1∼3개, 보다 더 바람직하게는 1∼2개 아미노산이 부가된다. 이들 아미노산의 부가, 치환 및 결실을 조합한 변이를 가할 수도 있다. 변이를 가한 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열은, 원래의 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열과 바람직하게는 80% 이상의 상동성을 가지고, 보다 바람직하게는 90% 이상의 상동성을 나타내며, 더욱 바람직하게는, 95% 이상의 상동성을 나타낸다.
특히, 중쇄의 각 CDR의 각각의 아미노산 서열 중의 아미노산을 다른 아미노산으로 치환시키는 경우, 치환시키는 아미노산의 개수는, 바람직하게는 1∼5개이고, 보다 바람직하게는 1∼3개이며, 더욱 바람직하게는 1∼2개이고, 보다 더 바람직하게는 1개이다. 각 CDR의 각각의 아미노산 서열 중의 아미노산을 결실시키는 경우, 결실시키는 아미노산의 개수는, 바람직하게는 1∼5개이고, 보다 바람직하게는 1∼3개이며, 더욱 바람직하게는 1∼2개이고, 보다 더 바람직하게는 1개이다. 또한, 이들 아미노산의 치환과 결실을 조합한 변이를 가할 수도 있다.
중쇄의 각 CDR의 각각의 아미노산 서열 중에 아미노산을 부가시키는 경우, 당해 아미노산 서열 중 혹은 N말단측 또는 C말단측에, 바람직하게는 1∼5개, 보다 바람직하게는 1∼3개, 더욱 바람직하게는 1∼2개, 보다 더 바람직하게는 1개의 아미노산이 부가된다. 이들 아미노산의 부가, 치환 및 결실을 조합한 변이를 가할 수도 있다. 변이를 가한 각 CDR의 각각의 아미노산 서열은, 원래의 각 CDR의 아미노산 서열과 바람직하게는 80% 이상의 상동성을 가지고, 보다 바람직하게는 90% 이상의 상동성을 나타내며, 더욱 바람직하게는, 95% 이상의 상동성을 나타낸다.
상기의 항hTfR 항체의 가변 영역의 아미노산 서열 중의 아미노산의 다른 아미노산으로의 치환으로서는, 예를 들어, 산성 아미노산인 아스파라긴산과 글루타민산의 상호의 치환, 아마이드형 아미노산인 아스파라긴과 글루타민의 상호의 치환, 염기성 아미노산인 리신과 아르기닌의 상호의 치환, 분지 아미노산인 발린, 류신 및 아이소류신의 상호의 치환, 지방족 아미노산인 글리신과 알라닌의 상호의 치환, 하이드록시아미노산인 세린과 트레오닌의 상호의 치환, 방향족 아민산인 페닐알라닌과 티로신의 상호의 치환 등을 들 수 있다.
한편, 항hTfR 항체에 변이를 가하여 C말단 또는 N말단에 아미노산을 부가했을 경우, 그 부가한 아미노산이, 항hTfR 항체를 다른 단백질 A와 융합시켰을 때에, 항hTfR 항체와 다른 단백질 A 사이에 위치하게 되었을 경우, 당해 부가한 아미노산은 링커의 일부를 구성한다.
상기에 예시한 hTfR에 친화성을 가지는 인간화 항체를 포함하는 항체의 바람직한 실시형태에 있어서, 항hTfR 항체의 중쇄 및 경쇄의 CDR의 아미노산 서열은, 항체가 hTfR에 대한 특이적인 친화성을 가지는 것인 한, 특별히 제한은 없다. 단, 본 발명의 항hTfR 항체는, 바람직하게는, 실시예 7에 기재된 방법에 의해 측정되는 hTfR과의 해리 상수(KD)가, 바람직하게는 1×10-8M 이하인 것이고, 보다 바람직하게는 1×10-9M 이하인 것이고, 더욱 바람직하게는 1×10-9M 이하인 것이고, 더욱이 더 바람직하게는 1×10-9M 이하의 것이다. 예를 들어 적합한 것으로서, 해리 상수가 1×10-13M∼1×10-9M인 것, 1×10-13M∼1×10-10M인 것을 들 수 있다. 항체가 1본쇄 항체여도 마찬가지이다. 또한, 본 발명의 항hTfR 항체가 원숭이 TfR에 대해서도 친화성을 가지는 것인 경우, 실시예 7에 기재된 방법에 의해 측정되는 항hTfR 항체의 원숭이 TfR과의 해리 상수는, 바람직하게는 5×10-8M 이하인 것이고, 보다 바람직하게는 2×10-8M 이하인 것이고, 더욱 바람직하게는 1×10-8M 이하인 것이다. 예를 들어 적합한 것으로서, 해리 상수가 1×10-13M∼2×10-8M인 것, 1×10-13M∼2×10-8M인 것을 들 수 있다. 항체가 1본쇄 항체여도 마찬가지이다.
상기의 구체적인 실시형태로서 나타낸 hTfR에 친화성을 가지는 인간화 항체와, 다른 단백질 A의 융합 단백질의 구체적인 실시형태로서는, 다른 단백질 A가, 인간 이두론산-2-설파타제(hI2S), 인간 에리트로포이에틴(hEPO), 인간 아릴설파타제 A(hARSA), 인간 PPT-1(hPPT-1), 인간 TPP-1(hTPP-1), 인간 α-L-이두로니다제(hIDUA), 인간 TNFα 수용체(hTNFαR), 및 인간 헤파란 N-설파타제(hSGSH)인 것을 들 수 있다.
다른 단백질 A가 hI2S인 융합 단백질의 구체적인 실시예로서는,
(1) hI2S가 링커 서열 Gly-Ser을 개재하여 hTfR의 중쇄의 C말단측에서 결합하여 이루어지는 것과, hTfR의 경쇄로 이루어지고, 전자의 아미노산 서열이 서열 번호 247로 나타나는 것이고, 후자의 아미노산 서열이 서열 번호 164로 나타나는 것,
(2) hI2S가 링커 서열 Gly-Ser을 개재하여 hTfR의 중쇄의 C말단측에서 결합하여 이루어지는 것과, hTfR의 경쇄로 이루어지고, 전자의 아미노산 서열이 서열 번호 249로 나타나는 것이고, 후자의 아미노산 서열이 서열 번호 180으로 나타나는 것, 및
(3) hI2S가 링커 서열 Gly-Ser을 개재하여 hTfR의 중쇄의 C말단측에서 결합하여 이루어지는 것과, hTfR의 경쇄로 이루어지고, 전자의 아미노산 서열이 서열 번호 251로 나타나는 것이고, 후자의 아미노산 서열이 서열 번호 196으로 나타나는 것을 예시할 수 있다.
여기에서, 상기 (1)에 있어서 서열 번호 247에 포함되는 hTfR의 중쇄의 아미노산 서열은 서열 번호 172로 나타나는 것이다. 즉, 상기 (1)의 융합 단백질은, 인간화 항체로서, 경쇄가 서열 번호 164의 아미노산 서열을 포함하고 또한 중쇄가 서열 번호 172의 아미노산 서열을 포함하는 것이다. 상기 (2)에 있어서 서열 번호 249에 포함되는 hTfR의 중쇄의 아미노산 서열은 서열 번호 188로 나타나는 것이다. 즉, 상기 (2)의 융합 단백질은, 인간화 항체로서 경쇄가 서열 번호 180의 아미노산 서열을 포함하고 또한 중쇄가 서열 번호 188의 아미노산 서열을 포함하는 것이다. 상기 (3)에 있어서 서열 번호 251에 포함되는 hTfR의 중쇄의 아미노산 서열은 서열 번호 210으로 나타나는 것이다. 즉, 상기 (3)의 융합 단백질은, 인간화 항체로서, 경쇄가 서열 번호 196의 아미노산 서열을 포함하고 또한 중쇄가 서열 번호 210의 아미노산 서열을 포함하는 것이다.
다른 단백질 A가 인간 에리트로포이에틴(hEPO)인 융합 단백질의 구체적인 실시예로서는,
(1) hEPO가 펩타이드 결합을 개재하여 hTfR의 중쇄의 C말단측에서 결합하여 이루어지는 것과, hTfR의 경쇄로 이루어지고, 전자에 있어서의 hTfR의 중쇄의 아미노산 서열이 서열 번호 172로 나타나는 것이고, 후자의 아미노산 서열이 서열 번호 164로 나타나는 것,
(2) hEPO가 펩타이드 결합을 개재하여 hTfR의 중쇄의 C말단측에서 결합하여 이루어지는 것과, hTfR의 경쇄로 이루어지고, 전자에 있어서의 hTfR의 중쇄의 아미노산 서열이 서열 번호 188로 나타나는 것이고, 후자의 아미노산 서열이 서열 번호 180으로 나타나는 것, 및
(3) hEPO가 펩타이드 결합을 개재하여 hTfR의 중쇄의 C말단측에서 결합하여 이루어지는 것과, hTfR의 경쇄로 이루어지고, 전자에 있어서의 hTfR의 중쇄의 아미노산 서열이 서열 번호 210으로 나타나는 것이고, 후자의 아미노산 서열이 서열 번호 196으로 나타나는 것을 예시할 수 있다.
여기에서, 상기 (1)∼(3)의 어느 것에 있어서도, hEPO와 hTfR의 중쇄는, 직접 또는 링커 서열을 개재하여 펩타이드 결합할 수 있다. 즉, 상기 (1)∼(3)의 어느 것에 있어서도, 「펩타이드 결합을 개재하여」의 말은, 「직접 또는 링커 서열을 개재하여」와 동의이다. 여기에서 이용되는 링커 서열은, 1∼50개의 아미노산 잔기로 이루어지는 것이다. 그 아미노산 서열에 한정은 없지만, 바람직하게는, 글리신과 세린으로 구성되는 것이고, 예를 들어, 글리신 또는 세린의 어느 1개의 아미노산으로 이루어지는 것, 아미노산 서열 Gly-Ser, 아미노산 서열 Gly-Gly-Ser, 아미노산 서열 Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열 번호 3), 아미노산 서열 Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열 번호 4), 아미노산 서열 Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly(서열 번호 5), 또는 이들 아미노산 서열이 1∼10개, 혹은 2∼5개 연속하여 이루어지는 1∼50개의 아미노산으로 이루어지는 서열, 2∼17개, 2∼10개, 10∼40개, 20∼34개, 23∼31개, 25∼29개, 또는 27개의 아미노산으로 이루어지는 서열 등을 포함하는 것이다. 예를 들어, 아미노산 서열 Gly-Ser을 포함하는 것은 링커 서열로서 적합하게 이용할 수 있다. 또한, 아미노산 서열 Gly-Ser에 이어 아미노산 서열 Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열 번호 3)이 5개 연속하여 이루어지는 합계 27개의 아미노산 서열을 포함하는 것은 링커 서열로서 적합하게 이용할 수 있다.
인간화 항체와 hEPO의 보다 구체적인 실시형태로서는, hEPO가 링커 서열 Gly-Ser을 개재하여 hTfR의 중쇄의 C말단측에서 결합하여 이루어지는 것과, hTfR의 경쇄로 이루어지고, 전자의 아미노산 서열이 서열 번호 257로 나타나는 것이고, 후자의 아미노산 서열이 서열 번호 196으로 나타나는 것을 예시할 수 있다.
한편, 본 발명에 있어서, 「인간 EPO」 또는 「hEPO」의 말은, 특히 서열 번호 256으로 나타나는 천연형의 hEPO와 동일한 아미노산 서열을 가지는 hEPO를 말하지만, 이것에 한정하지 않고, EPO 활성을 가지는 것인 한, 천연형의 hEPO의 아미노산 서열에 치환, 결실, 부가 등의 변이를 가한 것도 hEPO에 포함된다. hEPO의 아미노산 서열의 아미노산을 다른 아미노산으로 치환시키는 경우, 치환시키는 아미노산의 개수는, 바람직하게는 1∼10개이고, 보다 바람직하게는 1∼5개이며, 더욱 바람직하게는 1∼3개이고, 보다 더 바람직하게는 1∼2개이다. hEPO의 아미노산 서열 중의 아미노산을 결실시키는 경우, 결실시키는 아미노산의 개수는, 바람직하게는 1∼10개이고, 보다 바람직하게는 1∼5개이며, 더욱 바람직하게는 1∼3개이고, 보다 더 바람직하게는 1∼2개이다. 또한, 이들 아미노산의 치환과 결실을 조합한 변이를 가할 수도 있다. hEPO에 아미노산을 부가시키는 경우, hEPO의 아미노산 서열 중 혹은 N말단측 또는 C말단측에, 바람직하게는 1∼10개, 보다 바람직하게는 1∼5개, 더욱 바람직하게는 1∼3개, 보다 더 바람직하게는 1∼2개 아미노산이 부가된다. 이들 아미노산의 부가, 치환 및 결실을 조합한 변이를 가할 수도 있다. 변이를 가한 hEPO의 아미노산 서열은, 원래의 hEPO의 아미노산 서열과 바람직하게는 80% 이상의 상동성을 가지고, 보다 바람직하게는 90% 이상의 상동성을 나타내며, 더욱 바람직하게는, 95% 이상의 상동성을 나타낸다. 천연형의 hEPO에 변이를 가한 것으로서는 다르베포에틴을 들 수 있다.
다른 단백질 A가 인간 아릴설파타제 A(hARSA)인 융합 단백질의 구체적인 실시예로서는,
(1) hARSA가 펩타이드 결합을 개재하여 hTfR의 중쇄의 C말단측에서 결합하여 이루어지는 것과, hTfR의 경쇄로 이루어지고, 전자에 있어서의 hTfR의 중쇄의 아미노산 서열이 서열 번호 172로 나타나는 것이고, 후자의 아미노산 서열이 서열 번호 164로 나타나는 것,
(2) hARSA가 펩타이드 결합을 개재하여 hTfR의 중쇄의 C말단측에서 결합하여 이루어지는 것과, hTfR의 경쇄로 이루어지고, 전자에 있어서의 hTfR의 중쇄의 아미노산 서열이 서열 번호 188로 나타나는 것이고, 후자의 아미노산 서열이 서열 번호 180으로 나타나는 것, 및
(3) hARSA가 펩타이드 결합을 개재하여 hTfR의 중쇄의 C말단측에서 결합하여 이루어지는 것과, hTfR의 경쇄로 이루어지고, 전자에 있어서의 hTfR의 중쇄의 아미노산 서열이 서열 번호 210으로 나타나는 것이고, 후자의 아미노산 서열이 서열 번호 196으로 나타나는 것을 예시할 수 있다.
상기 (1)∼(3)의 어느 것에 있어서도, hARSA와 hTfR의 중쇄는, 직접 또는 링커 서열을 개재하여 펩타이드 결합할 수 있다. 즉, 상기 (1)∼(3)의 어느 것에 있어서도, 「펩타이드 결합을 개재하여」의 말은, 「직접 또는 링커 서열을 개재하여」와 동의이다. 여기에서 이용되는 링커 서열은, 1∼50개의 아미노산 잔기로 이루어지는 것이다. 그 아미노산 서열에 한정은 없지만, 바람직하게는, 글리신과 세린으로 구성되는 것이고, 예를 들어, 글리신 또는 세린의 어느 1개의 아미노산으로 이루어지는 것, 아미노산 서열 Gly-Ser, 아미노산 서열 Gly-Gly-Ser, 아미노산 서열 Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열 번호 3), 아미노산 서열 Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열 번호 4), 아미노산 서열 Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly(서열 번호 5), 또는 이들 아미노산 서열이 1∼10개, 혹은 2∼5개 연속하여 이루어지는 1∼50개의 아미노산으로 이루어지는 서열, 2∼17개, 2∼10개, 10∼40개, 20∼34개, 23∼31개, 25∼29개, 또는 27개의 아미노산으로 이루어지는 서열 등을 포함하는 것이다. 예를 들어, 아미노산 서열 Gly-Ser을 포함하는 것은 링커 서열로서 적합하게 이용할 수 있다. 또한, 아미노산 서열 Gly-Ser에 이어 아미노산 서열 Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열 번호 3)이 5개 연속하여 이루어지는 합계 27개의 아미노산 서열을 포함하는 것은 링커 서열로서 적합하게 이용할 수 있다.
인간화 항체와 hARSA의 보다 구체적인 실시형태로서는, hARSA가 링커 서열 Gly-Ser을 개재하여 hTfR의 중쇄의 C말단측에서 결합하여 이루어지는 것과, hTfR의 경쇄로 이루어지고, 전자의 아미노산 서열이 서열 번호 260으로 나타나는 것이고, 후자의 아미노산 서열이 서열 번호 196으로 나타나는 것을 예시할 수 있다.
한편, 본 발명에 있어서, 「인간 ARSA」 또는 「hARSA」의 말은, 특히 서열 번호 259로 나타나는 천연형의 hARSA와 동일한 아미노산 서열을 가지는 hARSA를 말하지만, 이것에 한정하지 않고, ARSA 활성을 가지는 것인 한, 천연형의 hARSA의 아미노산 서열에 치환, 결실, 부가 등의 변이를 가한 것도 hARSA에 포함된다. hARSA의 아미노산 서열의 아미노산을 다른 아미노산으로 치환시키는 경우, 치환시키는 아미노산의 개수는, 바람직하게는 1∼10개이고, 보다 바람직하게는 1∼5개이며, 더욱 바람직하게는 1∼3개이고, 보다 더 바람직하게는 1∼2개이다. hARSA의 아미노산 서열 중의 아미노산을 결실시키는 경우, 결실시키는 아미노산의 개수는, 바람직하게는 1∼10개이고, 보다 바람직하게는 1∼5개이며, 더욱 바람직하게는 1∼3개이고, 보다 더 바람직하게는 1∼2개이다. 또한, 이들 아미노산의 치환과 결실을 조합한 변이를 가할 수도 있다. hARSA에 아미노산을 부가시키는 경우, hARSA의 아미노산 서열 중 혹은 N말단측 또는 C말단측에, 바람직하게는 1∼10개, 보다 바람직하게는 1∼5개, 더욱 바람직하게는 1∼3개, 보다 더 바람직하게는 1∼2개 아미노산이 부가된다. 이들 아미노산의 부가, 치환 및 결실을 조합한 변이를 가할 수도 있다. 변이를 가한 hARSA의 아미노산 서열은, 원래의 hARSA의 아미노산 서열과 바람직하게는 80% 이상의 상동성을 가지고, 보다 바람직하게는 90% 이상의 상동성을 나타내며, 더욱 바람직하게는, 95% 이상의 상동성을 나타낸다.
다른 단백질 A가 인간 PPT-1(hPPT-1)인 융합 단백질의 구체적인 실시예로서는,
(1) hPPT-1이 펩타이드 결합을 개재하여 hTfR의 중쇄의 C말단측에서 결합하여 이루어지는 것과, hTfR의 경쇄로 이루어지고, 전자에 있어서의 hTfR의 중쇄의 아미노산 서열이 서열 번호 172로 나타나는 것이고, 후자의 아미노산 서열이 서열 번호 164로 나타나는 것,
(2) hPPT-1이 펩타이드 결합을 개재하여 hTfR의 중쇄의 C말단측에서 결합하여 이루어지는 것과, hTfR의 경쇄로 이루어지고, 전자에 있어서의 hTfR의 중쇄의 아미노산 서열이 서열 번호 188로 나타나는 것이고, 후자의 아미노산 서열이 서열 번호 180으로 나타나는 것, 및
(3) hPPT-1이 펩타이드 결합을 개재하여 hTfR의 중쇄의 C말단측에서 결합하여 이루어지는 것과, hTfR의 경쇄로 이루어지고, 전자에 있어서의 hTfR의 중쇄의 아미노산 서열이 서열 번호 210으로 나타나는 것이고, 후자의 아미노산 서열이 서열 번호 196으로 나타나는 것을 예시할 수 있다.
상기 (1)∼(3)의 어느 것에 있어서도, hPPT-1과 hTfR의 중쇄는, 직접 또는 링커 서열을 개재하여 펩타이드 결합할 수 있다. 즉, 상기 (1)∼(3)의 어느 것에 있어서도, 「펩타이드 결합을 개재하여」의 말은, 「직접 또는 링커 서열을 개재하여」와 동의이다. 여기에서 이용되는 링커 서열은, 1∼50개의 아미노산 잔기로 이루어지는 것이다. 그 아미노산 서열에 한정은 없지만, 바람직하게는, 글리신과 세린으로 구성되는 것이고, 예를 들어, 글리신 또는 세린의 어느 1개의 아미노산으로 이루어지는 것, 아미노산 서열 Gly-Ser, 아미노산 서열 Gly-Gly-Ser, 아미노산 서열 Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열 번호 3), 아미노산 서열 Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열 번호 4), 아미노산 서열 Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly(서열 번호 5), 또는 이들 아미노산 서열이 1∼10개, 혹은 2∼5개 연속하여 이루어지는 1∼50개의 아미노산으로 이루어지는 서열, 2∼17개, 2∼10개, 10∼40개, 20∼34개, 23∼31개, 25∼29개, 또는 27개의 아미노산으로 이루어지는 서열 등을 포함하는 것이다. 예를 들어, 아미노산 서열 Gly-Ser을 포함하는 것은 링커 서열로서 적합하게 이용할 수 있다. 또한, 아미노산 서열 Gly-Ser에 이어 아미노산 서열 Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열 번호 3)이 5개 연속하여 이루어지는 합계 27개의 아미노산 서열을 포함하는 것은 링커 서열로서 적합하게 이용할 수 있다.
인간화 항체와 hPPT-1의 보다 구체적인 실시형태로서는, hPPT-1이 링커 서열 Gly-Ser을 개재하여 hTfR의 중쇄의 C말단측에서 결합하여 이루어지는 것과, hTfR의 경쇄로 이루어지고, 전자의 아미노산 서열이 서열 번호 263으로 나타나는 것이고, 후자의 아미노산 서열이 서열 번호 196으로 나타나는 것을 예시할 수 있다.
한편, 본 발명에 있어서, 「인간 PPT-1」 또는 「hPPT-1」의 말은, 특히 서열 번호 262로 나타나는 천연형의 hPPT-1과 동일한 아미노산 서열을 가지는 hPPT-1을 말하지만, 이것에 한정하지 않고, PPT-1 활성을 가지는 것인 한, 천연형의 hPPT-1의 아미노산 서열에 치환, 결실, 부가 등의 변이를 가한 것도 hPPT-1에 포함된다. hPPT-1의 아미노산 서열의 아미노산을 다른 아미노산으로 치환시키는 경우, 치환시키는 아미노산의 개수는, 바람직하게는 1∼10개이고, 보다 바람직하게는 1∼5개이며, 더욱 바람직하게는 1∼3개이고, 보다 더 바람직하게는 1∼2개이다. hPPT-1의 아미노산 서열 중의 아미노산을 결실시키는 경우, 결실시키는 아미노산의 개수는, 바람직하게는 1∼10개이고, 보다 바람직하게는 1∼5개이며, 더욱 바람직하게는 1∼3개이고, 보다 더 바람직하게는 1∼2개이다. 또한, 이들 아미노산의 치환과 결실을 조합한 변이를 가할 수도 있다. hPPT-1에 아미노산을 부가시키는 경우, hPPT-1의 아미노산 서열 중 혹은 N말단측 또는 C말단측에, 바람직하게는 1∼10개, 보다 바람직하게는 1∼5개, 더욱 바람직하게는 1∼3개, 보다 더 바람직하게는 1∼2개 아미노산이 부가된다. 이들 아미노산의 부가, 치환 및 결실을 조합한 변이를 가할 수도 있다. 변이를 가한 hPPT-1의 아미노산 서열은, 원래의 hPPT-1의 아미노산 서열과 바람직하게는 80% 이상의 상동성을 가지고, 보다 바람직하게는 90% 이상의 상동성을 나타내며, 더욱 바람직하게는, 95% 이상의 상동성을 나타낸다.
다른 단백질 A가 인간 TPP-1(hTPP-1)인 융합 단백질의 구체적인 실시예로서는,
(1) hTPP-1이 펩타이드 결합을 개재하여 hTfR의 중쇄의 C말단측에서 결합하여 이루어지는 것과, hTfR의 경쇄로 이루어지고, 전자에 있어서의 hTfR의 중쇄의 아미노산 서열이 서열 번호 172로 나타나는 것이고, 후자의 아미노산 서열이 서열 번호 164로 나타나는 것,
(2) hTPP-1이 펩타이드 결합을 개재하여 hTfR의 중쇄의 C말단측에서 결합하여 이루어지는 것과, hTfR의 경쇄로 이루어지고, 전자에 있어서의 hTfR의 중쇄의 아미노산 서열이 서열 번호 188로 나타나는 것이고, 후자의 아미노산 서열이 서열 번호 180으로 나타나는 것, 및
(3) hTPP-1이 펩타이드 결합을 개재하여 hTfR의 중쇄의 C말단측에서 결합하여 이루어지는 것과, hTfR의 경쇄로 이루어지고, 전자에 있어서의 hTfR의 중쇄의 아미노산 서열이 서열 번호 210으로 나타나는 것이고, 후자의 아미노산 서열이 서열 번호 196으로 나타나는 것을 예시할 수 있다.
상기 (1)∼(3)의 어느 것에 있어서도, hTPP-1과 hTfR의 중쇄는, 직접 또는 링커 서열을 개재하여 펩타이드 결합할 수 있다. 즉, 상기 (1)∼(3)의 어느 것에 있어서도, 「펩타이드 결합을 개재하여」의 말은, 「직접 또는 링커 서열을 개재하여」와 동의이다. 여기에서 이용되는 링커 서열은, 1∼50개의 아미노산 잔기로 이루어지는 것이다. 그 아미노산 서열에 한정은 없지만, 바람직하게는, 글리신과 세린으로 구성되는 것이고, 예를 들어, 글리신 또는 세린의 어느 1개의 아미노산으로 이루어지는 것, 아미노산 서열 Gly-Ser, 아미노산 서열 Gly-Gly-Ser, 아미노산 서열 Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열 번호 3), 아미노산 서열 Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열 번호 4), 아미노산 서열 Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly(서열 번호 5), 또는 이들 아미노산 서열이 1∼10개, 혹은 2∼5개 연속하여 이루어지는 1∼50개의 아미노산으로 이루어지는 서열, 2∼17개, 2∼10개, 10∼40개, 20∼34개, 23∼31개, 25∼29개, 또는 27개의 아미노산으로 이루어지는 서열 등을 포함하는 것이다. 예를 들어, 아미노산 서열 Gly-Ser을 포함하는 것은 링커 서열로서 적합하게 이용할 수 있다. 또한, 아미노산 서열 Gly-Ser에 이어 아미노산 서열 Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열 번호 3)이 5개 연속하여 이루어지는 합계 27개의 아미노산 서열을 포함하는 것은 링커 서열로서 적합하게 이용할 수 있다.
인간화 항체와 hTPP-1의 보다 구체적인 실시형태로서는, hTPP-1이 링커 서열 Gly-Ser을 개재하여 hTfR의 중쇄의 C말단측에서 결합하여 이루어지는 것과, hTfR의 경쇄로 이루어지고, 전자의 아미노산 서열이 서열 번호 266으로 나타나는 것이고, 후자의 아미노산 서열이 서열 번호 196으로 나타나는 것을 예시할 수 있다.
한편, 본 발명에 있어서, 「인간 TPP-1」 또는 「hTPP-1」의 말은, 특히 서열 번호 265로 나타나는 천연형의 hTPP-1과 동일한 아미노산 서열을 가지는 hTPP-1을 말하지만, 이것에 한정하지 않고, TPP-1 활성을 가지는 것인 한, 천연형의 hTPP-1의 아미노산 서열에 치환, 결실, 부가 등의 변이를 가한 것도 hTPP-1에 포함된다. hTPP-1의 아미노산 서열의 아미노산을 다른 아미노산으로 치환시키는 경우, 치환시키는 아미노산의 개수는, 바람직하게는 1∼10개이고, 보다 바람직하게는 1∼5개이며, 더욱 바람직하게는 1∼3개이고, 보다 더 바람직하게는 1∼2개이다. hTPP-1의 아미노산 서열 중의 아미노산을 결실시키는 경우, 결실시키는 아미노산의 개수는, 바람직하게는 1∼10개이고, 보다 바람직하게는 1∼5개이며, 더욱 바람직하게는 1∼3개이고, 보다 더 바람직하게는 1∼2개이다. 또한, 이들 아미노산의 치환과 결실을 조합한 변이를 가할 수도 있다. hTPP-1에 아미노산을 부가시키는 경우, hTPP-1의 아미노산 서열 중 혹은 N말단측 또는 C말단측에, 바람직하게는 1∼10개, 보다 바람직하게는 1∼5개, 더욱 바람직하게는 1∼3개, 보다 더 바람직하게는 1∼2개 아미노산이 부가된다. 이들 아미노산의 부가, 치환 및 결실을 조합한 변이를 가할 수도 있다. 변이를 가한 hTPP-1의 아미노산 서열은, 원래의 hTPP-1의 아미노산 서열과 바람직하게는 80% 이상의 상동성을 가지고, 보다 바람직하게는 90% 이상의 상동성을 나타내며, 더욱 바람직하게는, 95% 이상의 상동성을 나타낸다.
다른 단백질 A가 인간 α-L-이두로니다제(hIDUA)인 융합 단백질의 구체적인 실시예로서는,
(1) hIDUA가 펩타이드 결합을 개재하여 hTfR의 중쇄의 C말단측에서 결합하여 이루어지는 것과, hTfR의 경쇄로 이루어지고, 전자에 있어서의 hTfR의 중쇄의 아미노산 서열이 서열 번호 172로 나타나는 것이고, 후자의 아미노산 서열이 서열 번호 164로 나타나는 것,
(2) hIDUA가 펩타이드 결합을 개재하여 hTfR의 중쇄의 C말단측에서 결합하여 이루어지는 것과, hTfR의 경쇄로 이루어지고, 전자에 있어서의 hTfR의 중쇄의 아미노산 서열이 서열 번호 188로 나타나는 것이고, 후자의 아미노산 서열이 서열 번호 180으로 나타나는 것, 및
(3) hIDUA가 펩타이드 결합을 개재하여 hTfR의 중쇄의 C말단측에서 결합하여 이루어지는 것과, hTfR의 경쇄로 이루어지고, 전자에 있어서의 hTfR의 중쇄의 아미노산 서열이 서열 번호 210으로 나타나는 것이고, 후자의 아미노산 서열이 서열 번호 196으로 나타나는 것을 예시할 수 있다.
상기 (1)∼(3)의 어느 것에 있어서도, hIDUA와 hTfR의 중쇄는, 직접 또는 링커 서열을 개재하여 펩타이드 결합할 수 있다. 즉, 상기 (1)∼(3)의 어느 것에 있어서도, 「펩타이드 결합을 개재하여」의 말은, 「직접 또는 링커 서열을 개재하여」와 동의이다. 여기에서 이용되는 링커 서열은, 1∼50개의 아미노산 잔기로 이루어지는 것이다. 그 아미노산 서열에 한정은 없지만, 바람직하게는, 글리신과 세린으로 구성되는 것이고, 예를 들어, 글리신 또는 세린의 어느 1개의 아미노산으로 이루어지는 것, 아미노산 서열 Gly-Ser, 아미노산 서열 Gly-Gly-Ser, 아미노산 서열 Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열 번호 3), 아미노산 서열 Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열 번호 4), 아미노산 서열 Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly(서열 번호 5), 또는 이들 아미노산 서열이 1∼10개, 혹은 2∼5개 연속하여 이루어지는 1∼50개의 아미노산으로 이루어지는 서열, 2∼17개, 2∼10개, 10∼40개, 20∼34개, 23∼31개, 25∼29개, 또는 27개의 아미노산으로 이루어지는 서열 등을 포함하는 것이다. 예를 들어, 아미노산 서열 Gly-Ser을 포함하는 것은 링커 서열로서 적합하게 이용할 수 있다. 또한, 아미노산 서열 Gly-Ser에 이어 아미노산 서열 Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열 번호 3)이 5개 연속하여 이루어지는 합계 27개의 아미노산 서열을 포함하는 것은 링커 서열로서 적합하게 이용할 수 있다.
인간화 항체와 hIDUA의 보다 구체적인 실시형태로서는, hIDUA가 링커 서열 Gly-Ser을 개재하여 hTfR의 중쇄의 C말단측에서 결합하여 이루어지는 것과, hTfR의 경쇄로 이루어지고, 전자의 아미노산 서열이 서열 번호 269로 나타나는 것이고, 후자의 아미노산 서열이 서열 번호 196으로 나타나는 것을 예시할 수 있다.
한편, 본 발명에 있어서, 「인간 IDUA」 또는 「hIDUA」의 말은, 특히 서열 번호 268로 나타나는 천연형의 hIDUA와 동일한 아미노산 서열을 가지는 hIDUA를 말하지만, 이것에 한정하지 않고, IDUA 활성을 가지는 것인 한, 천연형의 hIDUA의 아미노산 서열에 치환, 결실, 부가 등의 변이를 가한 것도 hIDUA에 포함된다. hIDUA의 아미노산 서열의 아미노산을 다른 아미노산으로 치환시키는 경우, 치환시키는 아미노산의 개수는, 바람직하게는 1∼10개이고, 보다 바람직하게는 1∼5개이며, 더욱 바람직하게는 1∼3개이고, 보다 더 바람직하게는 1∼2개이다. hIDUA의 아미노산 서열 중의 아미노산을 결실시키는 경우, 결실시키는 아미노산의 개수는, 바람직하게는 1∼10개이고, 보다 바람직하게는 1∼5개이며, 더욱 바람직하게는 1∼3개이고, 보다 더 바람직하게는 1∼2개이다. 또한, 이들 아미노산의 치환과 결실을 조합한 변이를 가할 수도 있다. hIDUA에 아미노산을 부가시키는 경우, hIDUA의 아미노산 서열 중 혹은 N말단측 또는 C말단측에, 바람직하게는 1∼10개, 보다 바람직하게는 1∼5개, 더욱 바람직하게는 1∼3개, 보다 더 바람직하게는 1∼2개 아미노산이 부가된다. 이들 아미노산의 부가, 치환 및 결실을 조합한 변이를 가할 수도 있다. 변이를 가한 hIDUA의 아미노산 서열은, 원래의 hIDUA의 아미노산 서열과 바람직하게는 80% 이상의 상동성을 가지고, 보다 바람직하게는 90% 이상의 상동성을 나타내며, 더욱 바람직하게는, 95% 이상의 상동성을 나타낸다.
다른 단백질 A가 인간 TNFα 수용체(hTNFαR)인 융합 단백질의 구체적인 실시예로서는,
(1) hTNFαR이 펩타이드 결합을 개재하여 hTfR의 중쇄의 C말단측에서 결합하여 이루어지는 것과, hTfR의 경쇄로 이루어지고, 전자에 있어서의 hTfR의 중쇄의 아미노산 서열이 서열 번호 172로 나타나는 것이고, 후자의 아미노산 서열이 서열 번호 164로 나타나는 것,
(2) hTNFαR이 펩타이드 결합을 개재하여 hTfR의 중쇄의 C말단측에서 결합하여 이루어지는 것과, hTfR의 경쇄로 이루어지고, 전자에 있어서의 hTfR의 중쇄의 아미노산 서열이 서열 번호 188로 나타나는 것이고, 후자의 아미노산 서열이 서열 번호 180으로 나타나는 것, 및
(3) hTNFαR이 펩타이드 결합을 개재하여 hTfR의 중쇄의 C말단측에서 결합하여 이루어지는 것과, hTfR의 경쇄로 이루어지고, 전자에 있어서의 hTfR의 중쇄의 아미노산 서열이 서열 번호 210으로 나타나는 것이고, 후자의 아미노산 서열이 서열 번호 196으로 나타나는 것을 예시할 수 있다.
상기 (1)∼(3)의 어느 것에 있어서도, hTNFαR과 hTfR의 중쇄는, 직접 또는 링커 서열을 개재하여 펩타이드 결합할 수 있다. 즉, 상기 (1)∼(3)의 어느 것에 있어서도, 「펩타이드 결합을 개재하여」의 말은, 「직접 또는 링커 서열을 개재하여」와 동의이다. 여기에서 이용되는 링커 서열은, 1∼50개의 아미노산 잔기로 이루어지는 것이다. 그 아미노산 서열에 한정은 없지만, 바람직하게는, 글리신과 세린으로 구성되는 것이고, 예를 들어, 글리신 또는 세린의 어느 1개의 아미노산으로 이루어지는 것, 아미노산 서열 Gly-Ser, 아미노산 서열 Gly-Gly-Ser, 아미노산 서열 Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열 번호 3), 아미노산 서열 Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열 번호 4), 아미노산 서열 Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly(서열 번호 5), 또는 이들 아미노산 서열이 1∼10개, 혹은 2∼5개 연속하여 이루어지는 1∼50개의 아미노산으로 이루어지는 서열, 2∼17개, 2∼10개, 10∼40개, 20∼34개, 23∼31개, 25∼29개, 또는 27개의 아미노산으로 이루어지는 서열 등을 포함하는 것이다. 예를 들어, 아미노산 서열 Gly-Ser을 포함하는 것은 링커 서열로서 적합하게 이용할 수 있다. 또한, 아미노산 서열 Gly-Ser에 이어 아미노산 서열 Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열 번호 3)이 5개 연속하여 이루어지는 합계 27개의 아미노산 서열을 포함하는 것은 링커 서열로서 적합하게 이용할 수 있다.
인간화 항체와 hTNFαR의 보다 구체적인 실시형태로서는, hTNFαR이 링커 서열 Gly-Ser을 개재하여 hTfR의 중쇄의 C말단측에서 결합하여 이루어지는 것과, hTfR의 경쇄로 이루어지고, 전자의 아미노산 서열이 서열 번호 272로 나타나는 것이고, 후자의 아미노산 서열이 서열 번호 196으로 나타나는 것을 예시할 수 있다.
한편, 본 발명에 있어서, 「인간 TNFαR」 또는 「hTNFαR」의 말은, 특히 서열 번호 271로 나타나는 천연형의 hTNFαR과 동일한 아미노산 서열을 가지는 hTNFαR을 말하지만, 이것에 한정하지 않고, hTNFαR로서의 활성 또는 기능을 가지는 것인 한, 천연형의 hTNFαR의 아미노산 서열에 치환, 결실, 부가 등의 변이를 가한 것도 hTNFαR에 포함된다. hTNFαR의 아미노산 서열의 아미노산을 다른 아미노산으로 치환시키는 경우, 치환시키는 아미노산의 개수는, 바람직하게는 1∼10개이고, 보다 바람직하게는 1∼5개이며, 더욱 바람직하게는 1∼3개이고, 보다 더 바람직하게는 1∼2개이다. hTNFαR의 아미노산 서열 중의 아미노산을 결실시키는 경우, 결실시키는 아미노산의 개수는, 바람직하게는 1∼10개이고, 보다 바람직하게는 1∼5개이며, 더욱 바람직하게는 1∼3개이고, 보다 더 바람직하게는 1∼2개이다. 또한, 이들 아미노산의 치환과 결실을 조합한 변이를 가할 수도 있다. hTNFαR에 아미노산을 부가시키는 경우, hTNFαR의 아미노산 서열 중 혹은 N말단측 또는 C말단측에, 바람직하게는 1∼10개, 보다 바람직하게는 1∼5개, 더욱 바람직하게는 1∼3개, 보다 더 바람직하게는 1∼2개 아미노산이 부가된다. 이들 아미노산의 부가, 치환 및 결실을 조합한 변이를 가할 수도 있다. 변이를 가한 hTNFαR의 아미노산 서열은, 원래의 hTNFαR의 아미노산 서열과 바람직하게는 80% 이상의 상동성을 가지고, 보다 바람직하게는 90% 이상의 상동성을 나타내며, 더욱 바람직하게는, 95% 이상의 상동성을 나타낸다.
다른 단백질 A가 인간 헤파란 N-설파타제(hSGSH)인 융합 단백질의 구체적인 실시예로서는,
(1) hSGSH가 펩타이드 결합을 개재하여 hTfR의 중쇄의 C말단측에서 결합하여 이루어지는 것과, hTfR의 경쇄로 이루어지고, 전자에 있어서의 hTfR의 중쇄의 아미노산 서열이 서열 번호 172로 나타나는 것이고, 후자의 아미노산 서열이 서열 번호 164로 나타나는 것,
(2) hSGSH가 펩타이드 결합을 개재하여 hTfR의 중쇄의 C말단측에서 결합하여 이루어지는 것과, hTfR의 경쇄로 이루어지고, 전자에 있어서의 hTfR의 중쇄의 아미노산 서열이 서열 번호 188로 나타나는 것이고, 후자의 아미노산 서열이 서열 번호 180으로 나타나는 것, 및
(3) hSGSH가 펩타이드 결합을 개재하여 hTfR의 중쇄의 C말단측에서 결합하여 이루어지는 것과, hTfR의 경쇄로 이루어지고, 전자에 있어서의 hTfR의 중쇄의 아미노산 서열이 서열 번호 210으로 나타나는 것이고, 후자의 아미노산 서열이 서열 번호 196으로 나타나는 것을 예시할 수 있다.
상기 (1)∼(3)의 어느 것에 있어서도, hSGSH와 hTfR의 중쇄는, 직접 또는 링커 서열을 개재하여 펩타이드 결합할 수 있다. 즉, 상기 (1)∼(3)의 어느 것에 있어서도, 「펩타이드 결합을 개재하여」의 말은, 「직접 또는 링커 서열을 개재하여」와 동의이다. 여기에서 이용되는 링커 서열은, 1∼50개의 아미노산 잔기로 이루어지는 것이다. 그 아미노산 서열에 한정은 없지만, 바람직하게는, 글리신과 세린으로 구성되는 것이고, 예를 들어, 글리신 또는 세린의 어느 1개의 아미노산으로 이루어지는 것, 아미노산 서열 Gly-Ser, 아미노산 서열 Gly-Gly-Ser, 아미노산 서열 Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열 번호 3), 아미노산 서열 Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열 번호 4), 아미노산 서열 Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly(서열 번호 5), 또는 이들 아미노산 서열이 1∼10개, 혹은 2∼5개 연속하여 이루어지는 1∼50개의 아미노산으로 이루어지는 서열, 2∼17개, 2∼10개, 10∼40개, 20∼34개, 23∼31개, 25∼29개, 또는 27개의 아미노산으로 이루어지는 서열 등을 포함하는 것이다. 예를 들어, 아미노산 서열 Gly-Ser을 포함하는 것은 링커 서열로서 적합하게 이용할 수 있다. 또한, 아미노산 서열 Gly-Ser에 이어 아미노산 서열 Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열 번호 3)이 5개 연속하여 이루어지는 합계 27개의 아미노산 서열을 포함하는 것은 링커 서열로서 적합하게 이용할 수 있다.
인간화 항체와 hSGSH의 보다 구체적인 실시형태로서는, hSGSH가 링커 서열 Gly-Ser을 개재하여 hTfR의 중쇄의 C말단측에서 결합하여 이루어지는 것과, hTfR의 경쇄로 이루어지고, 전자의 아미노산 서열이 서열 번호 275로 나타나는 것이고, 후자의 아미노산 서열이 서열 번호 196으로 나타나는 것을 예시할 수 있다.
한편, 본 발명에 있어서, 「인간 SGSH」 또는 「hSGSH」의 말은, 특히 서열 번호 274로 나타나는 천연형의 hSGSH와 동일한 아미노산 서열을 가지는 hSGSH를 말하지만, 이것에 한정하지 않고, SGSH 활성을 가지는 것인 한, 천연형의 hSGSH의 아미노산 서열에 치환, 결실, 부가 등의 변이를 가한 것도 hSGSH에 포함된다. hSGSH의 아미노산 서열의 아미노산을 다른 아미노산으로 치환시키는 경우, 치환시키는 아미노산의 개수는, 바람직하게는 1∼10개이고, 보다 바람직하게는 1∼5개이며, 더욱 바람직하게는 1∼3개이고, 보다 더 바람직하게는 1∼2개이다. hSGSH의 아미노산 서열 중의 아미노산을 결실시키는 경우, 결실시키는 아미노산의 개수는, 바람직하게는 1∼10개이고, 보다 바람직하게는 1∼5개이며, 더욱 바람직하게는 1∼3개이고, 보다 더 바람직하게는 1∼2개이다. 또한, 이들 아미노산의 치환과 결실을 조합한 변이를 가할 수도 있다. hSGSH에 아미노산을 부가시키는 경우, hSGSH의 아미노산 서열 중 혹은 N말단측 또는 C말단측에, 바람직하게는 1∼10개, 보다 바람직하게는 1∼5개, 더욱 바람직하게는 1∼3개, 보다 더 바람직하게는 1∼2개 아미노산이 부가된다. 이들 아미노산의 부가, 치환 및 결실을 조합한 변이를 가할 수도 있다. 변이를 가한 hSGSH의 아미노산 서열은, 원래의 hSGSH의 아미노산 서열과 바람직하게는 80% 이상의 상동성을 가지고, 보다 바람직하게는 90% 이상의 상동성을 나타내며, 더욱 바람직하게는, 95% 이상의 상동성을 나타낸다.
한편 여기에서, 항hTfR 항체와 융합시킨 다른 단백질 A가, 인간 이두론산-2-설파타제(hI2S), 인간 에리트로포이에틴(hEPO), 인간 아릴설파타제 A(hARSA), 인간 PPT-1(hPPT-1), 인간 TPP-1(hTPP-1), 인간 α-L-이두로니다제(hIDUA), 인간 TNFα 수용체(hTNFαR), 및 인간 헤파란 N-설파타제(hSGSH)의 어느 것인 경우에 있어서, 항hTfR 항체와 융합시킨 다른 단백질 A가, 당해 다른 단백질 A의 생리적 조건하에서의 활성 또는 기능을 보지하고 있다고 할 때 또는 단지 활성 또는 기능을 가진다고 할 때는, 대응하는 천연형의 이들 단백질이 본래 가지는 활성 또는 기능에 대해서, 3% 이상의 활성 또는 기능을 보지하고 있는 것을 말한다. 단, 그 활성 또는 기능은, 대응하는 천연형의 이들 다른 단백질 A가 본래 가지는 활성 또는 기능에 대해서, 10% 이상인 것이 바람직하고, 20% 이상인 것이 보다 바람직하고, 50% 이상인 것이 더욱 바람직하고, 80% 이상인 것이 보다 더 바람직하다. 항hTfR 항체와 융합시킨 이들 다른 단백질 A가 변이를 가한 것인 경우도 마찬가지이다.
본 발명의 항hTfR 항체는, 생리 활성 단백질 또는 약리 활성 저분자 화합물의 분자와 결합시키는 것에 의해, 중추 신경계의 질환 상태의 치료를 위한 혈중 투여용 약제의 제조를 위해서 사용할 수 있다. 또한, 생리 활성 단백질 또는 약리 활성 저분자 화합물의 분자와 결합시킨 항hTfR 항체는, 생리 활성 단백질 또는 약리 활성 저분자 화합물의 치료상 유효량을, 중추 신경계의 질환의 환자에게 혈중 투여(점적 정주 등의 정맥 주사를 포함한다)하는 것을 포함하는, 치료 방법에 있어서 사용할 수 있다. 혈중 투여된 생리 활성 단백질 또는 약리 활성 저분자 화합물의 분자와 결합시킨 항hTfR 항체는, 뇌내에 도달하는 것 외에, hTfR을 발현하는 다른 장기·기관에도 도달할 수 있다.
특히, 본 발명의 항hTfR 항체는, 인간 이두론산-2-설파타제(hI2S)와 결합시키는 것에 의해, hI2S에 혈액뇌관문을 통과시켜 뇌내에서 기능을 발휘시킬 수 있으므로, 헌터 증후군에 수반하는 중추 신경계의 질환 상태의 치료를 위한 혈중 투여용 약제의 제조를 위해서 사용할 수 있다. 또한, hI2S와 결합시킨 항hTfR 항체는, 헌터 증후군에 수반하는 중추 신경계의 질환 상태의 치료상 유효량을, 헌터 증후군의 환자에게 혈중 투여(점적 정주 등의 정맥 주사를 포함한다)하는 것을 포함하는, 치료 방법에 있어서 사용할 수 있다. 혈중 투여된 hI2S와 결합시킨 항hTfR 항체는, 뇌내에 도달하는 것 외에, hTfR을 발현하는 다른 장기·기관에도 도달할 수 있다.
또한, 본 발명의 항hTfR 항체는, 인간 에리트로포이에틴(hEPO)과 결합시키는 것에 의해, hEPO에 혈액뇌관문을 통과시켜 뇌내에서 기능을 발휘시킬 수 있으므로, 뇌허혈에 수반하는 중추 신경계의 치료를 위한 혈중 투여용 약제의 제조를 위해서 사용할 수 있다. 또한, hEPO와 결합시킨 항hTfR 항체는, 뇌허혈에 수반하는 중추 신경계의 질환 상태의 치료상 유효량을, 뇌허혈의 환자에게 혈중 투여(점적 정주 등의 정맥 주사를 포함한다)하는 것을 포함하는, 치료 방법에 있어서 사용할 수 있다. 혈중 투여된 hEPO와 결합시킨 항hTfR 항체는, 뇌내에 도달하는 것 외에, hTfR을 발현하는 다른 장기·기관에도 도달할 수 있다. 인간 에리트로포이에틴을 인간 다르베포에틴으로 바꾸어도 마찬가지의 것을 말할 수 있다.
또한, 본 발명의 항hTfR 항체는, 인간 아릴설파타제 A(hARSA)와 결합시키는 것에 의해, hARSA에 혈액뇌관문을 통과시켜 뇌내에서 기능을 발휘시킬 수 있으므로, 이염성 백질 변성증(이염성 백질 디스트로피)에 수반하는 중추 신경계의 질환 상태의 치료를 위한 혈중 투여용 약제의 제조를 위해서 사용할 수 있다. 또한, hARSA와 결합시킨 항hTfR 항체는, 이염성 백질 변성증(이염성 백질 디스트로피)에 수반하는 중추 신경계의 질환 상태의 치료상 유효량을, 해당 질환의 환자에게 혈중 투여(점적 정주 등의 정맥 주사를 포함한다)하는 것을 포함하는, 치료 방법에 있어서 사용할 수 있다. 혈중 투여된 hARSA와 결합시킨 항hTfR 항체는, 뇌내에 도달하는 것 외에, hTfR을 발현하는 다른 장기·기관에도 도달할 수 있다.
또한, 본 발명의 항hTfR 항체는, 인간 PPT-1(hPPT-1)과 결합시키는 것에 의해, hPPT-1에 혈액뇌관문을 통과시켜 뇌내에서 기능을 발휘시킬 수 있으므로, 신경 세로이드리포푸신증 또는 Santavuori-Haltia병에 수반하는 중추 신경계의 질환 상태의 치료를 위한 혈중 투여용 약제의 제조를 위해서 사용할 수 있다. 또한, hPPT-1과 결합시킨 항hTfR 항체는, 신경 세로이드리포푸신증 또는 Santavuori-Haltia병에 수반하는 중추 신경계의 질환 상태의 치료상 유효량을, 이들 질환의 환자에게 혈중 투여(점적 정주 등의 정맥 주사를 포함한다)하는 것을 포함하는, 치료 방법에 있어서 사용할 수 있다. 혈중 투여된 hPPT-1로 결합시킨 항hTfR 항체는, 뇌내에 도달하는 것 외에, hTfR을 발현하는 다른 장기·기관에도 도달할 수 있다.
또한, 본 발명의 항hTfR 항체는, 인간 TPP-1(hTPP-1)과 결합시키는 것에 의해, hTPP-1에 혈액뇌관문을 통과시켜 뇌내에서 기능을 발휘시킬 수 있으므로, 신경 세로이드리포푸신증 또는 Jansky-Bielschowsky병에 수반하는 중추 신경계의 질환 상태의 치료를 위한 혈중 투여용 약제의 제조를 위해서 사용할 수 있다. 또한, hPPT-1과 결합시킨 항hTfR 항체는, 신경 세로이드리포푸신증 또는 Jansky-Bielschowsky병에 수반하는 중추 신경계의 질환 상태의 치료상 유효량을, 이들 질환의 환자에게 혈중 투여(점적 정주 등의 정맥 주사를 포함한다)하는 것을 포함하는, 치료 방법에 있어서 사용할 수 있다. 혈중 투여된 hTPP-1과 결합시킨 항hTfR 항체는, 뇌내에 도달하는 것 외에, hTfR을 발현하는 다른 장기·기관에도 도달할 수 있다.
또한, 본 발명의 항hTfR 항체는, 인간 α-L-이두로니다제(hIDUA)와 결합시키는 것에 의해, hIDUA에 혈액뇌관문을 통과시켜 뇌내에서 기능을 발휘시킬 수 있으므로, 헐러 증후군 또는 헐러-샤이에 증후군에 수반하는 중추 신경계의 질환 상태의 치료를 위한 혈중 투여용 약제의 제조를 위해서 사용할 수 있다. 또한, hIDUA와 결합시킨 항hTfR 항체는, 헐러 증후군 또는 헐러-샤이에 증후군에 수반하는 중추 신경계의 질환 상태의 치료상 유효량을, 이들 질환의 환자에게 혈중 투여(점적 정주 등의 정맥 주사를 포함한다)하는 것을 포함하는, 치료 방법에 있어서 사용할 수 있다. 혈중 투여된 hIDUA와 결합시킨 항hTfR 항체는, 뇌내에 도달하는 것 외에, hTfR을 발현하는 다른 장기·기관에도 도달할 수 있다.
또한, 본 발명의 항hTfR 항체는, 인간 TNFα 수용체(hTNFαR)와 결합시키는 것에 의해, hTNFαR에 혈액뇌관문을 통과시켜 뇌내에서 기능을 발휘시킬 수 있으므로, 뇌허혈 또는 뇌염증성 질환에 수반하는 중추 신경계의 질환 상태의 치료를 위한 혈중 투여용 약제의 제조를 위해서 사용할 수 있다. 또한, hTNFαR과 결합시킨 항hTfR 항체는, 뇌허혈 또는 뇌염증성 질환에 수반하는 중추 신경계의 질환 상태의 치료상 유효량을, 이들 질환의 환자에게 혈중 투여(점적 정주 등의 정맥 주사를 포함한다)하는 것을 포함하는, 치료 방법에 있어서 사용할 수 있다. 혈중 투여된 hTNFαR과 결합시킨 항hTfR 항체는, 뇌내에 도달하는 것 외에, hTfR을 발현하는 다른 장기·기관에도 도달할 수 있다.
또한, 본 발명의 항hTfR 항체는, 인간 헤파란 N-설파타제(hSGSH)와 결합시키는 것에 의해, hSGSH에 혈액뇌관문을 통과시켜 뇌내에서 기능을 발휘시킬 수 있으므로, 산필리포 증후군에 수반하는 중추 신경계의 질환 상태의 치료를 위한 혈중 투여용 약제의 제조를 위해서 사용할 수 있다. 또한, hSGSH와 결합시킨 항hTfR 항체는, 산필리포 증후군에 수반하는 중추 신경계의 질환 상태의 치료상 유효량을, 이들 질환의 환자에게 혈중 투여(점적 정주 등의 정맥 주사를 포함한다)하는 것을 포함하는, 치료 방법에 있어서 사용할 수 있다. 혈중 투여된 hSGSH와 결합시킨 항hTfR 항체는, 뇌내에 도달하는 것 외에, hTfR을 발현하는 다른 장기·기관에도 도달할 수 있다.
본 발명의 항hTfR 항체와 결합시킨 단백질, 저분자 화합물 등은, 혈중에 투여하여 중추 신경계(CNS)에 있어서 약효를 발휘시켜야 할 약제로서 사용할 수 있다. 이러한 약제는, 일반적으로 점적 정맥 주사 등에 의한 정맥 주사, 피하 주사, 근육 주사에 의해 환자에게 투여되지만, 투여 경로에는 특별히 한정은 없다.
본 발명의 항hTfR 항체와 결합시킨 단백질, 저분자 화합물 등은, 약제로서 동결건조품, 또는 수성 액제 등의 형태로 의료 기관에 공급할 수 있다. 수성 액제의 경우, 약제를, 안정화제, 완충제, 등장화제를 함유하는 용액에 미리 용해한 것을, 바이알 또는 주사기에 봉입한 제제로서 공급할 수 있다. 주사기에 봉입된 제제는, 일반적으로 프리필드 시린지 제제라고 호칭된다. 프리필드 시린지 제제로 하는 것에 의해, 환자 자신에 의한 약제의 투여를 간이하게 할 수 있다.
수성 액제로서 공급되는 경우, 수성 액제에 함유되는 항hTfR 항체와 결합시킨 단백질, 저분자 화합물 등의 농도는, 용법 용량에 따라 적절히 조정되어야 하는 것이지만, 예를 들어 1∼4mg/mL이다. 또한, 수성 액제에 함유되는 안정화제는, 약제학적으로 허용할 수 있는 것인 한 특별히 한정은 없지만, 비이온성 계면활성제를 적합하게 사용할 수 있다. 이와 같은 비이온성 계면활성제로서는, 폴리소르베이트, 폴록사머 등을 단독으로 또는 이들을 조합하여 사용할 수 있다. 폴리소르베이트로서는 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80이, 폴록사머로서는 폴록사머 188(폴리옥시에틸렌(160) 폴리옥시프로필렌(30) 글리콜)이 특히 적합하다. 또한, 수성 액제에 함유되는 비이온성 계면활성제의 농도는, 0.01∼1mg/mL인 것이 바람직하고, 0.01∼0.5mg/mL인 것이 보다 바람직하고, 0.1∼0.5mg/mL인 것이 더욱 바람직하다. 안정화제로서 히스티딘, 아르기닌, 메티오닌, 글리신 등의 아미노산을 사용할 수도 있다. 안정화제로서 사용하는 경우의, 수성 액제에 함유되는 아미노산의 농도는, 0.1∼40mg/mL인 것이 바람직하고, 0.2∼5mg/mL인 것이 보다 바람직하고, 0.5∼4mg/mL인 것이 더욱 바람직하다. 수성 액제에 함유되는 완충제는, 약제학적으로 허용할 수 있는 것인 한 특별히 한정은 없지만, 인산염 완충제가 바람직하고, 특히 인산 나트륨 완충제가 바람직하다. 완충제로서 인산 나트륨 완충제를 사용하는 경우의, 인산 나트륨의 농도는, 바람직하게는 0.01∼0.04M이다. 또한, 완충제에 의해 조정되는 수성 액제의 pH는, 바람직하게는 5.5∼7.2이다. 수성 액제에 함유되는 등장화제는, 약제학적으로 허용할 수 있는 것인 한 특별히 한정은 없지만, 염화 나트륨, 만니톨을 단독으로 또는 조합하여 등장화제로서 적합하게 사용할 수 있다.
실시예
이하, 실시예를 참조하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하지만, 본 발명이 실시예로 한정되는 것은 의도하지 않는다.
〔실시예 1〕 hTfR 발현용 벡터의 구축
인간 비장 Quick Clone cDNA(Clontech사)를 주형으로 하여 프라이머 hTfR5'(서열 번호 214) 및 프라이머 hTfR3'(서열 번호 215)를 이용하여, PCR에 의해 인간 트랜스페린 수용체(hTfR)를 코딩하는 유전자 단편을 증폭시켰다. 증폭시킨 hTfR을 코딩하는 유전자 단편을, MluI와 NotI로 소화하고, pCI-neo 벡터(Promega사)의 MluI와 NotI 사이에 삽입했다. 얻어진 벡터를, pCI-neo(hTfR)라고 이름 붙였다. 그 다음에, 이 벡터를, MluI와 NotI로 소화하고, hTfR을 코딩하는 유전자 단편을 잘라내어, 국제 공개 공보(WO2012/063799)에 기재된 발현 벡터인 pE-mIRES-GS-puro의 MluI와 NotI 사이에 짜넣는 것에 의해, hTfR 발현용 벡터인 pE-mIRES-GS-puro(hTfR)를 구축했다.
〔실시예 2〕 재조합 hTfR의 제작
일렉트로포레이션법에 의해, CHO-K1 세포에 pE-mIRES-GS-puro(hTfR)를 도입한 후, 메티오닌설폭시민(MSX) 및 퓨로마이신을 포함하는 CD OptiCHOTM 배지(Invitrogen사)를 이용하여 세포의 선택 배양을 행하여, 재조합 hTfR 발현 세포를 얻었다. 이 재조합 hTfR 발현 세포를 배양하여, 재조합 hTfR을 조제했다.
〔실시예 3〕 재조합 hTfR을 이용한 마우스의 면역
실시예 2에서 조제한 재조합 hTfR을 항원으로서 이용하여 마우스를 면역했다. 면역은, 마우스에 항원을 정맥내 투여 또는 복강내 투여하여 행했다.
〔실시예 4〕 하이브리도마의 제작
최후로 세포를 투여한 날의 약 1주일 후에 마우스의 비장을 적출하고 호모지나이즈하여, 비세포를 분리했다. 얻어진 비세포를 마우스 미엘로마 세포주(P3. X63. Ag8. 653)와 폴리에틸렌 글리콜법을 이용하여 세포 융합시켰다. 세포 융합 종료 후, (1X)HAT 서플리먼트(Life Technologies사) 및 10% Ultra low IgG 소 태아 혈청(Life Technologies사)을 포함하는 RPMI1640 배지에 세포를 현탁하고, 세포 현탁액을 96웰 플레이트 20매에 200μL/웰씩 분주했다. 탄산 가스 배양기(37℃, 5% CO2)로 세포를 10일간 배양한 후, 각 웰을 현미경하에서 관찰하여, 단일의 콜로니가 존재하는 웰을 선택했다.
각 웰의 세포가 거의 컨플루언트가 된 시점에서 배양 상청을 회수하고, 이것을 하이브리도마의 배양 상청으로서 이하의 스크리닝에 제공했다.
〔실시예 5〕 고친화성 항체 산생 세포주의 스크리닝
재조합 hTfR 용액(Sino Biologics사)을 50mM 탄산나트륨 완충액(pH 9.5∼9.6)으로 희석하여 5μg/mL의 농도로 조정하여, 이것을 고상 용액으로 했다. 고상 용액을, Nunc MaxiSorpTM flat-bottom 96웰 플레이트(기재: 폴리스타이렌, Nunc사제)의 각 웰에 50μL씩 첨가한 후, 플레이트를 실온에서 1시간 정치하여, 재조합 hTfR을 플레이트에 흡착시켜 고정했다. 고상 용액을 버리고, 각 웰을 250μL의 세정액(0.05% Tween20을 함유하는 PBS)으로 3회 세정한 후, 각 웰에 블로킹액(1% BSA를 함유하는 PBS)을 200μL씩 첨가하고, 플레이트를 실온에서 1시간 정치했다.
블로킹액을 버리고, 각 웰을 250μL의 세정액(0.05% Tween20을 함유하는 PBS)으로 3회 세정한 후, 각 웰에 하이브리도마의 배양 상청을 50μL씩 첨가하고, 플레이트를 실온에서 1시간 정치하여, 배양 상청에 포함되는 마우스 항hTfR 항체를 재조합 hTfR에 결합시켰다. 이 때, 컨트롤로서, 마우스 항hTfR 항체를 산생하지 않는 하이브리도마의 배양 상청을 웰에 50μL 첨가한 것을 두었다. 또한, 각 배양 상청을 가한 웰의 옆의 웰에, 하이브리도마의 배양용 배지를 50μL 첨가한 것을 두어, 이것을 모크 웰로 했다. 측정은 n=2로 실시했다. 그 다음에, 용액을 버리고, 각 웰을 250μL의 세정액(0.05% Tween20을 함유하는 PBS)으로 3회 세정했다.
상기의 각 웰에 100μL의 HRP 표지 염소 항마우스 이뮤노글로불린 항체 용액(프로메가사)을 첨가하고, 플레이트를 실온에서 1분간 정치했다. 그 다음에, 용액을 버리고, 각 웰을 250μL의 세정액(0.05% Tween20을 함유하는 PBS)으로 3회 세정했다. 그 다음에, 각 웰에 50μL의 발색용 기질액 TMB Stabilized Substrate for Horseradish Peroxidase(프로메가사)를 첨가하고, 실온에서 10∼20분간 정치했다. 그 다음에, 각 웰에 100μL의 정지액(2N 황산)을 첨가한 후, 플레이트 리더를 이용하여 각 웰의 450nm에 있어서의 흡광도를 측정했다. 각 배양 상청 및 컨트롤의 2개의 웰의 평균치를 취하고, 이들 평균치로부터, 각 배양 상청 및 컨트롤마다 둔 2개의 모크 웰의 평균치를 각각 뺀 것을 측정치로 했다.
높은 측정치를 나타낸 웰에 첨가한 배양 상청에 대응하는 14종류의 하이브리도마 세포를, hTfR에 대해서 고친화성을 나타내는 항체(고친화성 항hTfR 항체)를 산생하는 세포주(고친화성 항체 산생 세포주)로서 선택했다. 이들 14종의 세포주를, 클론 1주∼클론 14주로 번호 붙였다. 또한, 클론 1주∼클론 14주가 산생하는 항hTfR 항체를, 각각 항hTfR 항체 번호 1∼항hTfR 항체 번호 14로 했다.
〔실시예 6〕 고친화성 항hTfR 항체의 가변 영역의 아미노산 서열의 해석
실시예 5에서 선택한 클론 1주∼클론 14주로부터 cDNA를 조제하고, 이들 cDNA를 주형으로 하여 항체의 경쇄 및 중쇄를 코딩하는 유전자를 증폭시켰다. 증폭시킨 유전자의 염기 서열을 번역하고, 각 세포주의 산생하는 항hTfR 항체 번호 1∼항hTfR 항체 번호 14의 항체의 각각에 대해, 경쇄 및 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열을 결정했다.
항hTfR 항체 번호 1은, 경쇄의 가변 영역에 서열 번호 218에 기재된 아미노산 서열과, 중쇄의 가변 영역에 서열 번호 219에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 것이었다. 또한, 경쇄의 가변 영역은, CDR1에 서열 번호 6 또는 7, CDR2에 서열 번호 8 또는 9, 및 CDR3에 서열 번호 10에 기재된 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 그 중쇄의 가변 영역은, CDR1에 서열 번호 76 또는 77, CDR2에 서열 번호 78 또는 79, 및 CDR3에 서열 번호 80 또는 81에 기재된 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것이었다. 단, CDR은 상기의 아미노산 서열에 한정되지 않고, 이들 아미노산 서열을 포함하는 영역, 이들 아미노산 서열의 일부를 포함하는 연속한 3개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열도 CDR로 할 수 있다고 생각되었다.
항hTfR 항체 번호 2는, 경쇄의 가변 영역에 서열 번호 220에 기재된 아미노산 서열과, 중쇄의 가변 영역에 서열 번호 221에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 것이었다. 또한, 그 경쇄의 가변 영역은, CDR1에 서열 번호 11 또는 12, CDR2에 서열 번호 13 또는 14, 및 CDR3에 서열 번호 15에 기재된 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 그 중쇄의 가변 영역은, CDR1에 서열 번호 82 또는 83, CDR2에 서열 번호 84 또는 85, 및 CDR3에 서열 번호 86 또는 87에 기재된 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것이었다. 단, CDR은 상기의 아미노산 서열에 한정되지 않고, 이들 아미노산 서열을 포함하는 영역, 이들 아미노산 서열의 일부를 포함하는 연속한 3개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열도 CDR로 할 수 있다고 생각되었다.
항hTfR 항체 번호 3은, 경쇄의 가변 영역에 서열 번호 222에 기재된 아미노산 서열과, 중쇄의 가변 영역에 서열 번호 223에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 것이었다. 또한, 그 경쇄의 가변 영역은, CDR1에 서열 번호 16 또는 17, CDR2에 서열 번호 18 또는 19, 및 CDR3에 서열 번호 20에 기재된 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 그 중쇄의 가변 영역은, CDR1에 서열 번호 88 또는 89, CDR2에 서열 번호 90 또는 91, 및 CDR3에 서열 번호 92 또는 93에 기재된 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것이었다. 단, CDR은 상기의 아미노산 서열에 한정되지 않고, 이들 아미노산 서열을 포함하는 영역, 이들 아미노산 서열의 일부를 포함하는 연속한 3개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열도 CDR로 할 수 있다고 생각되었다.
항hTfR 항체 번호 4는, 경쇄의 가변 영역에 서열 번호 224에 기재된 아미노산 서열과, 중쇄의 가변 영역에 서열 번호 225에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 것이었다. 또한, 그 경쇄의 가변 영역은, CDR1에 서열 번호 21 또는 22, CDR2에 서열 번호 23 또는 24, 및 CDR3에 서열 번호 25에 기재된 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 그 중쇄의 가변 영역은, CDR1에 서열 번호 94 또는 95, CDR2에 서열 번호 96 또는 97, 및 CDR3에 서열 번호 98 또는 99에 기재된 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것이었다. 단, CDR은 상기의 아미노산 서열에 한정되지 않고, 이들 아미노산 서열을 포함하는 영역, 이들 아미노산 서열의 일부를 포함하는 연속한 3개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열도 CDR로 할 수 있다고 생각되었다.
항hTfR 항체 번호 5는, 경쇄의 가변 영역에 서열 번호 226에 기재된 아미노산 서열과, 중쇄의 가변 영역에 서열 번호 227에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 것이었다. 또한, 그 경쇄의 가변 영역은, CDR1에 서열 번호 26 또는 27, CDR2에 서열 번호 28 또는 29, 및 CDR3에 서열 번호 30에 기재된 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 그 중쇄의 가변 영역은, CDR1에 서열 번호 100 또는 101, CDR2에 서열 번호 102 또는 103, 및 CDR3에 서열 번호 104 또는 105에 기재된 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것이었다. 단, CDR은 상기의 아미노산 서열에 한정되지 않고, 이들 아미노산 서열을 포함하는 영역, 이들 아미노산 서열의 일부를 포함하는 연속한 3개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열도 CDR로 할 수 있다고 생각되었다.
항hTfR 항체 번호 6은, 경쇄의 가변 영역에 서열 번호 228에 기재된 아미노산 서열과, 중쇄의 가변 영역에 서열 번호 229에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 것이었다. 또한, 그 경쇄의 가변 영역은, CDR1에 서열 번호 31 또는 32, CDR2에 서열 번호 33 또는 34, 및 CDR3에 서열 번호 35에 기재된 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 그 중쇄의 가변 영역은, CDR1에 서열 번호 106 또는 107, CDR2에 서열 번호 108 또는 278, 및 CDR3에 서열 번호 109 또는 110에 기재된 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것이었다. 단, CDR은 상기의 아미노산 서열에 한정되지 않고, 이들 아미노산 서열을 포함하는 영역, 이들 아미노산 서열의 일부를 포함하는 연속한 3개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열도 CDR로 할 수 있다고 생각되었다.
항hTfR 항체 번호 7은, 경쇄의 가변 영역에 서열 번호 230에 기재된 아미노산 서열과, 중쇄의 가변 영역에 서열 번호 231에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 것이었다. 또한, 그 경쇄의 가변 영역은, CDR1에 서열 번호 36 또는 37, CDR2에 서열 번호 38 또는 39, 및 CDR3에 서열 번호 40에 기재된 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 그 중쇄의 가변 영역은, CDR1에 서열 번호 111 또는 112, CDR2에 서열 번호 113 또는 114, 및 CDR3에 서열 번호 115 또는 116에 기재된 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것이었다. 단, CDR은 상기의 아미노산 서열에 한정되지 않고, 이들 아미노산 서열을 포함하는 영역, 이들 아미노산 서열의 일부를 포함하는 연속한 3개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열도 CDR로 할 수 있다고 생각되었다.
항hTfR 항체 번호 8은, 경쇄의 가변 영역에 서열 번호 232에 기재된 아미노산 서열과, 중쇄의 가변 영역에 서열 번호 233에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 것이었다. 또한, 그 경쇄의 가변 영역은, CDR1에 서열 번호 41 또는 42, CDR2에 서열 번호 43 또는 44, 및 CDR3에 서열 번호 45에 기재된 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 그 중쇄의 가변 영역은, CDR1에 서열 번호 117 또는 118, CDR2에 서열 번호 119 또는 279, 및 CDR3에 서열 번호 120 또는 121에 기재된 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것이었다. 단, CDR은 상기의 아미노산 서열에 한정되지 않고, 이들 아미노산 서열을 포함하는 영역, 이들 아미노산 서열의 일부를 포함하는 연속한 3개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열도 CDR로 할 수 있다고 생각되었다.
항hTfR 항체 번호 9는, 경쇄의 가변 영역에 서열 번호 234에 기재된 아미노산 서열과, 중쇄의 가변 영역에 서열 번호 235에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 것이었다. 또한, 그 경쇄의 가변 영역은, CDR1에 서열 번호 46 또는 47, CDR2에 서열 번호 48 또는 49, 및 CDR3에 서열 번호 50에 기재된 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 그 중쇄의 가변 영역은, CDR1에 서열 번호 122 또는 123, CDR2에 서열 번호 124 또는 125, 및 CDR3에 서열 번호 126 또는 127에 기재된 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것이었다. 단, CDR은 상기의 아미노산 서열에 한정되지 않고, 이들 아미노산 서열을 포함하는 영역, 이들 아미노산 서열의 일부를 포함하는 연속한 3개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열도 CDR로 할 수 있다고 생각되었다.
항hTfR 항체 번호 10은, 경쇄의 가변 영역에 서열 번호 236에 기재된 아미노산 서열과, 중쇄의 가변 영역에 서열 번호 237에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 것이었다. 또한, 그 경쇄의 가변 영역은, CDR1에 서열 번호 51 또는 52, CDR2에 서열 번호 53 또는 54, 및 CDR3에 서열 번호 55에 기재된 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 그 중쇄의 가변 영역은, CDR1에 서열 번호 128 또는 129, CDR2에 서열 번호 130 또는 131, 및 CDR3에 서열 번호 132 또는 133에 기재된 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것이었다. 단, CDR은 상기의 아미노산 서열에 한정되지 않고, 이들 아미노산 서열을 포함하는 영역, 이들 아미노산 서열의 일부를 포함하는 연속한 3개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열도 CDR로 할 수 있다고 생각되었다.
항hTfR 항체 번호 11은, 경쇄의 가변 영역에 서열 번호 238에 기재된 아미노산 서열과, 중쇄의 가변 영역에 서열 번호 239에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 것이었다. 또한, 그 경쇄의 가변 영역은, CDR1에 서열 번호 56 또는 57, CDR2에 서열 번호 58 또는 59, 및 CDR3에 서열 번호 60에 기재된 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 그 중쇄의 가변 영역은, CDR1에 서열 번호 134 또는 135, CDR2에 서열 번호 136 또는 137, 및 CDR3에 서열 번호 138 또는 139에 기재된 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것이었다. 단, CDR은 상기의 아미노산 서열에 한정되지 않고, 이들 아미노산 서열을 포함하는 영역, 이들 아미노산 서열의 일부를 포함하는 연속한 3개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열도 CDR로 할 수 있다고 생각되었다.
항hTfR 항체 번호 12는, 경쇄의 가변 영역에 서열 번호 240에 기재된 아미노산 서열과, 중쇄의 가변 영역에 서열 번호 241에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 것이었다. 또한, 그 경쇄의 가변 영역은, CDR1에 서열 번호 61 또는 62, CDR2에 서열 번호 63 또는 64, 및 CDR3에 서열 번호 65에 기재된 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 그 중쇄의 가변 영역은, CDR1에 서열 번호 140 또는 141, CDR2에 서열 번호 142 또는 143, 및 CDR3에 서열 번호 144 또는 145에 기재된 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것이었다. 단, CDR은 상기의 아미노산 서열에 한정되지 않고, 이들 아미노산 서열을 포함하는 영역, 이들 아미노산 서열의 일부를 포함하는 연속한 3개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열도 CDR로 할 수 있다고 생각되었다.
항hTfR 항체 번호 13은, 경쇄의 가변 영역에 서열 번호 242에 기재된 아미노산 서열과, 중쇄의 가변 영역에 서열 번호 243에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 것이었다. 또한, 그 경쇄의 가변 영역은, CDR1에 서열 번호 66 또는 67, CDR2에 서열 번호 68 또는 69, 및 CDR3에 서열 번호 70에 기재된 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 그 중쇄의 가변 영역은, CDR1에 서열 번호 146 또는 147, CDR2에 서열 번호 148 또는 149, 및 CDR3에 서열 번호 150 또는 151에 기재된 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것이었다. 단, CDR은 상기의 아미노산 서열에 한정되지 않고, 이들 아미노산 서열을 포함하는 영역, 이들 아미노산 서열의 일부를 포함하는 연속한 3개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열도 CDR로 할 수 있다고 생각되었다.
항hTfR 항체 번호 14는, 경쇄의 가변 영역에 서열 번호 244에 기재된 아미노산 서열과, 중쇄의 가변 영역에 서열 번호 245에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 것이었다. 또한, 그 경쇄의 가변 영역은, CDR1에 서열 번호 71 또는 72, CDR2에 서열 번호 73 또는 74, 및 CDR3에 서열 번호 75에 기재된 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 그 중쇄의 가변 영역은, CDR1에 서열 번호 152 또는 153, CDR2에 서열 번호 154 또는 155, 및 CDR3에 서열 번호 156 또는 157에 기재된 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것이었다. 단, CDR은 상기의 아미노산 서열에 한정되지 않고, 이들 아미노산 서열을 포함하는 영역, 이들 아미노산 서열의 일부를 포함하는 연속한 3개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열도 CDR로 할 수 있다고 생각되었다.
항hTfR 항체 번호 1∼항hTfR 항체 번호 14의, 경쇄 및 중쇄의 가변 영역에 포함되는 아미노산 서열의 서열 번호를, 표 1에 정리하여 나타낸다.
Figure pct00001
항hTfR 항체 번호 1∼항hTfR 항체 번호 14의, 경쇄의 가변 영역의 CDR1∼3과 중쇄의 가변 영역의 CDR1∼3에 포함되는 아미노산 서열의 서열 번호를, 표 2에 정리하여 나타낸다. 단, 표 2는 각 CDR의 아미노산 서열을 예시하는 것이고, 각 CDR의 아미노산 서열은 표 2에 기재된 아미노산 서열에 한정되는 것은 아니고, 이들 아미노산 서열을 포함하는 영역의 아미노산 서열, 이들 아미노산 서열의 일부를 포함하는 연속한 3개 이상의 아미노산으로 이루어지는 아미노산 서열도 CDR로 할 수 있다고 생각된다.
Figure pct00002
〔실시예 7〕 항hTfR 항체의 인간 TfR 및 원숭이 TfR에의 친화성의 측정
항hTfR 항체와 인간 TfR 및 원숭이 TfR에의 친화성의 측정은, 바이오레이어 간섭법(BioLayer Interferometry: BLI)을 이용한 생체 분자 상호작용 해석 시스템인 OctetRED96(ForteBio사, a division of Pall Corporation)을 이용하여 실시했다. 바이오레이어 간섭법의 기본 원리에 대해 간단하게 설명한다. 센서 칩 표면에 고정된 생체 분자의 층(레이어)에 특정 파장의 광을 투사했을 때, 생체 분자의 레이어와 내부의 참조가 되는 레이어의 2개의 표면에서 광이 반사되어, 광의 간섭파가 생긴다. 측정 시료 중의 분자가 센서 칩 표면의 생체 분자에 결합하는 것에 의해, 센서 첨단의 레이어의 두께가 증가하여, 간섭파에 파장 쉬프트가 생긴다. 이 파장 쉬프트의 변화를 측정하는 것에 의해, 센서 칩 표면에 고정된 생체 분자에 결합하는 분자수의 정량 및 속도론적 해석을 리얼타임으로 행할 수 있다. 측정은, 대체로 OctetRED96에 첨부된 조작 매뉴얼에 따라 실시했다. 인간 TfR로서는, N말단에 히스티딘 태그가 부가된, 서열 번호 1에 나타나는 아미노산 서열 중에서 N말단측으로부터 89번째의 시스테인 잔기로부터 C말단의 페닐알라닌까지의, hTfR의 세포외 영역의 아미노산 서열을 가지는 재조합 인간 TfR(r인간 TfR: Sino Biological사)를 이용했다. 원숭이 TfR로서는, N말단에 히스티딘 태그가 부가된, 서열 번호 2에 나타나는 아미노산 서열 중에서 N말단측으로부터 89번째의 시스테인 잔기로부터 C말단의 페닐알라닌까지의, 필리핀원숭이의 TfR의 세포외 영역의 아미노산 서열을 가지는 재조합 원숭이 TfR(r원숭이 TfR: Sino Biological사)을 이용했다.
실시예 5에서 선택한 클론 1주∼클론 14주를, 각각 세포 농도가 약 2X105개/mL가 되도록, (1X)HAT 서플리먼트(Life Technologies사) 및 10% Ultra low IgG 소 태아 혈청(Life Technologies사)을 포함하는 RPMI1640 배지로 희석하고, 1L의 삼각 플라스크에 200mL의 세포 현탁액을 가하고, 37℃에서, 5% CO2와 95% 공기로 이루어지는 습윤 환경에서 약 70rpm의 교반 속도로 6∼7일간 배양했다. 배양 상청을 원심 조작에 의해 회수하고, 0.22μm 필터(Millipore사)로 여과하여, 배양 상청으로 했다. 회수한 배양 상청을, 미리 150mM NaCl을 포함하는 컬럼 체적 3배용(容)의 20mM Tris 완충액(pH 8.0)으로 평형화해 둔 Protein G 컬럼(컬럼 체적: 1mL, GE헬스케어사)에 부하했다. 그 다음에, 컬럼 체적의 5배용의 동 완충액에 의해 컬럼을 세정한 후, 150mM NaCl을 포함하는 컬럼 체적의 4배용의 50mM 글리신 완충액(pH 2.8)으로, 흡착한 항체를 용출시키고, 용출 획분을 채취했다. 용출 획분을 1M Tris 완충액(pH 8.0)을 첨가하여 pH 7.0으로 조정했다. 이것을 항hTfR 항체 번호 1∼항hTfR 항체 번호 14의 정제품으로서 이하의 실험에 이용했다.
정제한 각 항체(항hTfR 항체 번호 1∼항hTfR 항체 번호 14)를, 각각 HBS-P+(150mM NaCl, 50μM EDTA 및 0.05% Surfactant P20을 포함하는 10mM HEPES)로 2단계 희석하여, 0.78125∼50nM(0.117∼7.5μg/mL)의 7 단계의 농도의 항체 용액을 조제했다. 이 항체 용액을 샘플 용액으로 했다. r인간 TfR과 r원숭이 TfR을, 각각 HBS-P+로 희석하여, 25μg/mL의 용액을 조제하여, 각각 r인간 TfR-ECD(Histag) 용액 및 r원숭이 TfR-ECD(Histag) 용액으로 했다.
상기 2단계 희석하여 조제한 샘플 용액을, 96 well plate, black(greiner bio-one사)에 200μL/웰씩 첨가했다. 또한, 상기 조제한 r인간 TfR-ECD(Histag) 용액 및 r원숭이 TfR-ECD(Histag) 용액을, 소정의 웰에 각각 200μL/웰씩 첨가했다. 베이스라인, 해리용 및 세정용의 웰에는, HBS-P+를 200μL/웰씩 첨가했다. 재생용의 웰에는, 10mM Glycine-HCl, pH 1.7을 200μL/웰씩 첨가했다. 활성화용의 웰에는, 0.5mM NiCl2 용액을 200μL/웰씩 첨가했다. 이 플레이트와 바이오센서(Biosensor/Ni-NTA: ForteBio사, a division of Pall Corporation)를, OctetRED96의 소정의 위치에 설치했다.
OctetRED96을 하기의 표 3에 나타내는 조건에서 작동시켜 데이터를 취득 후, OctetRED96 부속의 해석 소프트웨어를 이용하여, 결합 반응 곡선을 1:1 결합 모델 혹은 2:1 결합 모델에 피팅하여, 항hTfR 항체와 r인간 TfR 및 r원숭이 TfR에 대한 회합 속도 상수(kon) 및 해리 속도 상수(koff)를 측정하고, 해리 상수(Kd)를 산출했다. 한편, 측정은 25∼30℃의 온도하에서 실시했다.
Figure pct00003
표 4에 항hTfR 항체 번호 1∼14(표 중, 항체 번호 1∼14에 각각 대응)의 인간 TfR에 대한 회합 속도 상수(kon) 및 해리 속도 상수(koff)의 측정 결과, 및 해리 상수(kD)를 나타낸다.
Figure pct00004
표 5에 항hTfR 항체 번호 1∼14(표 중, 항체 번호 1∼14에 각각 대응)의 원숭이 TfR에 대한 회합 속도 상수(kon) 및 해리 속도 상수(koff)의 측정 결과, 및 해리 상수(kD)를 나타낸다.
Figure pct00005
항hTfR 항체의 인간 TfR에의 친화성의 측정의 결과, 모든 항체에서, 인간 TfR과의 해리 상수는 1×10-8M 이하이고, 항체 번호 10을 제외한 13종류의 항체에서는 인간 TfR과의 해리 상수는 1×10-9M 이하이며, 특히 항체 번호 3, 8, 13 및 14에서는, 인간 TfR과의 해리 상수가 1×10-12M 이하였다(표 4). 이들 결과는, 14종류의 항체가 모두 인간 TfR과 높은 친화성을 가지는 항체임을 나타낸다. 그 다음에, 항hTfR 항체의 원숭이 TfR에의 친화성의 측정의 결과를 보면, 모든 항체에서, 원숭이 TfR과의 해리 상수는 5×10-8M 이하이고, 특히, 항체 번호 1 및 3에서는, 원숭이 TfR과의 해리 상수가 1×10-12M 이하였다(표 5). 이들 결과는, 14종류의 항체가 모두 인간 TfR뿐만 아니라 원숭이 TfR과도 높은 친화성을 가지는 항체임을 나타낸다.
〔실시예 7-2〕 항hTfR 항체의 마우스를 이용한 뇌이행 평가
그 다음에, 항hTfR 항체 번호 1∼9 및 11∼14의 13종류의 항체에 대해, 각 항체가 BBB를 통과해 뇌내로 이행하는 것을, 마우스 트랜스페린 수용체의 세포외 영역을 코딩하는 유전자를 인간 트랜스페린 수용체 유전자의 세포외 영역을 코딩하는 유전자로 치환한 hTfR 녹인 마우스(hTfR-KI 마우스)를 이용하여 평가했다. hTfR-KI 마우스는, 대체로 하기의 방법으로 제작했다. 또한, 항hTfR 항체로서는, 실시예 7에 기재된 항체의 정제품을 이용했다.
세포내 영역이 마우스 hTfR의 아미노산 서열이며, 세포외 영역이 인간 hTfR의 아미노산 서열인 키메라 hTfR을 코딩하는 cDNA의 3'측에, loxP 서열로 끼워넣은 네오마이신 내성 유전자를 배치한, 서열 번호 253으로 나타나는 염기 서열을 가지는 DNA 단편을 화학적으로 합성했다. 이 DNA 단편을, 5'암 서열로서 서열 번호 254로 나타나는 염기 서열, 3'암 서열로서 서열 번호 255로 나타나는 염기 서열을 가지는 타게팅 벡터에, 통상적인 방법에 의해 짜넣고, 이것을 마우스 ES 세포에 일렉트로포레이션법에 의해 도입했다. 유전자 도입 후의 마우스 ES 세포를, 네오마이신 존재하에서 선택 배양하여, 타게팅 벡터가 상동 재조합에 의해 염색체에 짜넣어진 마우스 ES 세포를 선택했다. 얻어진 유전자 재조합 마우스 ES 세포를, ICR 마우스의 8세포기배(숙주배)에 주입하고, 정관 결찰을 실시한 마우스와의 교배에 의해 얻어진 가짜 임신 마우스(레시피언트 마우스)에 이식했다. 얻어진 갓난 새끼(키메라 마우스)에 대해 모색 판정을 행하여, ES 세포가 생체의 형성에 고효율로 기여한 개체, 즉 전체 털에 대한 백색 털이 차지하는 비율이 높은 개체를 선별했다. 이 키메라 마우스 개체를 ICR 마우스와 교배하여 F1 마우스를 얻었다. 백색의 F1 마우스를 선별하고, 꼬리의 조직으로부터 추출한 DNA를 해석하여, 염색체 상에서 마우스 트랜스페린 수용체 유전자가 키메라 hTfR로 치환되어 있는 마우스를 hTfR-KI 마우스로 했다.
상기 13종류의 항hTfR 항체를, Fluorescein Labeling Kit-NH2(도진화학연구소)를 이용하여, 첨부의 조작 매뉴얼에 따라 플루오레세인 아이소싸이오사이아네이트(FITC)에 의해 형광 표지했다. 이 FITC 형광 표지한 13종류의 항hTfR 항체를 포함하는 PBS 용액을 각각 조제했다. 이 항체 용액을, 투여되는 항hTfR 항체의 용량이 3mg/kg이 되도록, 각각 1마리의 hTfR-KI 마우스(수컷, 10∼12주령)에게 정맥 주사 했다. 또한, 컨트롤로서, 마찬가지로 하여 조제한 FITC 형광 표지한 마우스 IgG1(시그마사)을 포함하는 PBS 용액을, 3mg/kg의 용량으로 1마리의 hTfR-KI 마우스(수컷, 10∼12주령)에게 정맥 주사했다. 정맥 주사하고 나서 약 8시간 후에 생리 식염액으로 전신 관류하고, 뇌(대뇌와 소뇌를 포함하는 부분)를 채취했다. 적출한 뇌의 중량(습중량)을 측정한 후, Protease Inhibitor Cocktail(시그마사)을 포함하는 T-PER(Thermo Fisher Scientific사)을 첨가하여 뇌조직을 호모지네이트했다. 호모지네이트를 원심하여 상청을 회수하고, 상청 중에 포함되는 FITC 형광 표지한 항체의 양을 이하의 방법으로 측정했다. 우선, 항FITC Antibody(Bethyl사)를 High Bind Plate(Meso Scale Diagnostics사)의 각 웰에 10μL씩 첨가하고, 1시간 정치하여 플레이트에 고정시켰다. 그 다음에, 각 웰에 SuperBlock Blocking buffer in PBS(Thermo Fisher Scientific사)를 150μL씩 첨가하고, 1시간 진탕하여 플레이트를 블로킹했다. 그 다음에, 각 웰에 뇌조직의 호모지네이트 상청을 25μL씩 첨가하고, 1시간 진탕했다. 그 다음에, 각 웰에 SULFO-TAG Anti-Mouse Antibody(Goat)(Meso Scale Diagnostics사)를 25μL씩 첨가하고, 1시간 진탕했다. 그 다음에, 각 웰에 Read buffer T(Meso Scale Diagnostics사)를 150μL씩 첨가하고, SectorTM Imager 6000 reader를 이용하여 각 웰로부터의 발광량을 측정했다. 농도 기지의 FITC 형광 표지한 항hTfR 항체의 표준 시료의 측정치로부터 검량선을 작성하고, 이것에 각 검체의 측정치를 내삽하는 것에 의해, 뇌의 그램중량(습중량)당에 포함되는 항체의 양(뇌조직 중의 항hTfR 항체의 농도)을 산출했다. 그 결과를 표 5-2에 나타낸다.
컨트롤과 비교하여, 항hTfR 항체 번호 1∼9 및 11∼14의 항체의 뇌조직 중의 농도는, 모두 25배 이상이었다. 항hTfR 항체 번호 5 및 6에서는, 그 농도가 컨트롤과 비교하여 100배 이상이며, 특히 항hTfR 항체 번호 6에서는 약 160배에까지 달했다. 이들 결과는, 항hTfR 항체 번호 1∼9 및 11∼14의 항체가, BBB를 적극적으로 통과하여 뇌내로 이행하는 성질을 가짐을 나타내는 것이다.
[표 5-2]
Figure pct00006
〔실시예 8〕 항hTfR 항체의 원숭이를 이용한 약물 동태 해석
항hTfR 항체 번호 1∼3의 항체를, 각각, 5.0mg/kg의 용량으로 각각 웅성 필리핀원숭이에 단회 정맥내 투여하고, 투여 8시간 후에 생리 식염액으로 전신 관류를 실시했다. 또한, 음성 대조로서, 항hTfR 항체를 비투여의 1마리의 개체를 마찬가지로 전신 관류했다. 관류 후, 연수를 포함하는 뇌조직을 적출했다. 이 뇌조직을 이용하여, 이하의 항hTfR 항체의 농도 측정 및 면역조직화학 염색을 행했다. 또한, 항hTfR 항체로서는, 실시예 7에 기재된 항체의 정제품을 이용했다.
뇌조직 중의 항hTfR 항체의 농도 측정은, 대체로 이하의 수순으로 행했다. 채취한 조직을, 뇌조직을 대뇌, 소뇌, 해마 및 연수로 나누고 나서, 각각 Protease Inhibitor Cocktail(Sigma-Aldrich사)을 포함하는 RIPA Buffer(와코준야쿠공업주식회사)로 호모지네이트하고 원심하여 상청을 회수했다. Affinipure Goat Anti mouse IgG Fcγ pAb(Jackson ImmunoResearch사)를 High Bind Plate(Meso Scale Diagnostics사)의 각 웰에 10μL씩 첨가하고, 1시간 정치하여 플레이트에 고정했다. 그 다음에, 각 웰에 SuperBlock blocking buffer in PBS(Thermo Fisher Scientific사)를 150μL씩 첨가하고, 1시간 진탕하여, 플레이트를 블로킹했다. 그 다음에, 각 웰에 뇌조직의 호모지네이트 상청을 25μL씩 첨가하고, 1시간 진탕했다. 그 다음에, 각 웰에 Affinipure Goat Anti mouse IgG Fab-Biotin(Jackson ImmunoResearch사)을 25μL씩 첨가하고, 1시간 진탕했다. 그 다음에, 각 웰에 SULFO-Tag-Streptavidin(Meso Scale Diagnostics사)을 25μL씩 첨가하고, 0.5시간 진탕했다. 각 웰에 Read buffer T(Meso Scale Diagnostics사)를 150μL씩 첨가하고, SectorTM Imager 6000 reader(Meso Scale Diagnostics사)를 이용하여 각 웰로부터의 발광량을 측정했다. 농도 기지의 항hTfR 항체의 표준 시료의 측정치로부터 검량선을 작성하고, 이것에 각 검체의 측정치를 내삽하는 것에 의해, 각 뇌조직의 그램중량(습중량)당에 포함되는 항체의 양(뇌조직 중의 항hTfR 항체의 농도)을 산출했다.
뇌조직 중의 항hTfR 항체의 농도 측정의 결과를 표 6에 나타낸다. 항hTfR 항체 번호 1∼항hTfR 항체 번호 3의 항체 모두, 대뇌, 소뇌, 해마 및 연수에서의 축적이 인정되었지만, 그 양은, 항hTfR 항체 번호 1＜항hTfR 항체 번호 3＜항hTfR 항체 번호 2로, 항hTfR 항체 번호 1에서 가장 적고, 항hTfR 항체 번호 2에서 가장 많았다. hTfR 항체 번호 2에서는, 항hTfR 항체 번호 1과 비교하여, 대뇌에서 약 4.3배, 소뇌에서 약 6.6배, 해마에서 약 4.6배, 및 연수에서 약 2배의, 항체의 축적이 확인되었다. 이들 결과는, 이들 3종류의 항체가 혈액뇌관문을 통과하여 뇌조직에 축적하는 성질을 가짐을 나타내는 것이고, 뇌조직 내에서 기능시켜야 할 약제를 이들 항체와 결합시키는 것에 의해, 그 약제를 효율 좋게 뇌조직에 축적시킬 수 있음을 나타내는 것이다.
Figure pct00007
뇌조직 중의 항hTfR 항체의 면역조직화학 염색은, 대체로 이하의 수순으로 행했다. 티슈테크크라이오 3DM(사쿠라파인테크주식회사)을 이용하여, 채취한 조직을 -80℃로까지 급속 냉동하여, 조직의 동결 블록을 제작했다. 이 동결 블록을 4μm로 박절 후, MAS 코트 슬라이드 글라스(마쓰나미유리주식회사)에 첩부했다. 조직 박편에 4% 파라폼알데하이드(와코준야쿠공업주식회사)를 4℃에서 5분간 반응시켜, 조직 박편을 슬라이드 글라스 상에 고정했다. 계속하여, 조직 박편에 0.3% 과산화수소수를 포함하는 메탄올 용액(와코준야쿠공업주식회사)을 30분간 반응시켜,내인성 퍼옥시다제를 실활시켰다. 그 다음에 슬라이드 글라스를 SuperBlock blocking buffer in PBS에 30분간 실온에서 반응시켜 블로킹했다. 그 다음에, 조직 박편에 Mouse IgG-heavy and light chain Antibody(Bethyl Laboratories사)를 1시간 실온에서 반응시켰다. 조직 박편을, DAB 기질(3,3'-diaminobenzidine, Vector Laboratories사)로 발색시키고, 마이어 헤마톡실린(Merck사)으로 대비 염색을 행하고, 탈수, 투철한 후에 봉입하고, 광학 현미경으로 관찰했다.
도 1에 대뇌피질의 항hTfR 항체의 면역조직화학 염색의 결과를 나타낸다. 항hTfR 항체 번호 1∼항hTfR 항체 번호 3을 투여한 원숭이의 대뇌피질에서는, 혈관의 특이적인 염색이 확인되었다(각각 도 1b∼d). 특히, 항hTfR 항체 번호 2를 투여한 원숭이와 항hTfR 항체 번호 3을 투여한 원숭이의 대뇌피질(각각 도 1c 및 도 1d)에서는, 뇌혈관외의 뇌실질 영역에도 광범위하게 특이적인 염색이 확인되었다. 한편, 컨트롤로 해둔 항hTfR 항체를 비투여한 원숭이의 대뇌피질에서는 염색은 확인되지 않고, 백그라운드의 염색은 거의 없음이 나타났다(도 1a).
도 2에 해마의 항hTfR 항체의 면역조직화학 염색의 결과를 나타낸다. 항hTfR 항체 번호 1∼항hTfR 항체 번호 3을 투여한 원숭이의 대뇌에서는, 혈관의 특이적인 염색이 확인되었다(각각 도 2b∼d). 특히, 항hTfR 항체 번호 2를 투여한 원숭이와 항hTfR 항체 번호 3을 투여한 원숭이의 해마(각각 도 2c 및 도 2d)에서는, 신경양 세포에도 특이적인 염색이 확인되고, 더욱이, 뇌혈관외의 뇌실질 영역에도 광범위하게 특이적인 염색이 확인되었다. 한편, 컨트롤로 해둔 항hTfR 항체를 비투여한 원숭이의 해마에서는 염색은 확인되지 않고, 백그라운드의 염색은 거의 없음이 나타났다(도 2a).
도 3에 소뇌의 항hTfR 항체의 면역조직화학 염색의 결과를 나타낸다. 항hTfR 항체 번호 1∼항hTfR 항체 번호 3을 투여한 원숭이의 소뇌에서는, 혈관의 특이적인 염색이 확인되었다(각각 도 3b∼d). 특히, 항hTfR 항체 번호 2를 투여한 원숭이와 항hTfR 항체 번호 3을 투여한 원숭이의 소뇌(각각 도 3c 및 도 3d)에서는, 푸르킨예 세포에도 특이적인 염색이 확인되었다. 한편, 컨트롤로 해둔 항hTfR 항체를 비투여한 원숭이의 소뇌에서는 염색은 확인되지 않고, 백그라운드의 염색은 거의 없음이 나타났다(도 3a).
이상의 대뇌, 해마 및 소뇌의 면역조직화학 염색의 결과로부터, 항hTfR 항체 번호 1은 뇌혈관 내피 표면에 존재하는 hTfR에는 결합할 수 있지만, 항hTfR 항체 번호 2 및 3과 비교하여 뇌실질로의 이행하는 양은 비교적 적다고 생각되었다. 한편, 항hTfR 항체 번호 2 및 3은, 뇌혈관 내피 표면에 존재하는 hTfR에 결합할 수 있고, 또한 hTfR로의 결합 후, 혈액뇌관문을 통과하여 뇌실질내로 이행하고, 더욱이 해마에 있어서는 뇌실질내로부터 신경양 세포에까지, 소뇌에 있어서는 푸르킨예 세포에까지 받아들여지는 것을 알 수 있었다.
〔실시예 9〕 인간화 항hTfR 항체의 제작
표 1에 나타내는 항hTfR 항체 번호 1∼3의 경쇄 및 중쇄의 가변 영역에 포함되는 아미노산 서열의 인간화를 시도했다. 항hTfR 항체 번호 1에 대해서는, 서열 번호 158∼서열 번호 163에 나타나는 아미노산 서열을 가지는 인간화된 경쇄의 가변 영역과, 서열 번호 166∼서열 번호 171에 나타나는 아미노산 서열을 가지는 인간화된 중쇄의 가변 영역을 얻었다. 항hTfR 항체 번호 2에 대해서는, 서열 번호 174∼서열 번호 179에 나타나는 아미노산 서열을 가지는 인간화된 경쇄의 가변 영역과, 서열 번호 182∼서열 번호 187에 나타나는 아미노산 서열을 가지는 인간화된 중쇄의 가변 영역을 얻었다. 항hTfR 항체 번호 3에 대해서는, 서열 번호 190∼서열 번호 195에 나타나는 아미노산 서열을 가지는 인간화된 경쇄의 가변 영역과, 서열 번호 204∼서열 번호 209에 나타나는 아미노산 서열을 가지는 인간화된 중쇄의 가변 영역을 얻었다.
〔실시예 10〕 인간화 항hTfR 항체를 코딩하는 유전자의 구축
상기의 항hTfR 항체 번호 1∼3에 대해, 각각 인간화 항hTfR 항체의 경쇄 및 중쇄의 가변 영역을 포함하는, 경쇄 및 중쇄의 전장을 코딩하는 유전자를 포함하는 DNA 단편을 인공적으로 합성했다. 이 때, 경쇄의 전장을 코딩하는 유전자의 5'측에는, 5'단으로부터 순차로 MluI 서열과 리더 펩타이드를 코딩하는 서열을, 3'측에는 NotI 서열을 도입했다. 또한, 중쇄의 전장을 코딩하는 유전자의 5'측에는, 5'단으로부터 순차로 MluI 서열과 리더 펩타이드를 코딩하는 서열을, 3'측에는 NotI 서열을 도입했다. 한편, 여기에서 도입한 리더 펩타이드는, 인간화 항체의 경쇄 및 중쇄를 호스트 세포인 포유동물 세포에서 발현시켰을 때에, 경쇄 및 중쇄가 세포외로 분비되도록, 분비 시그널로서 기능하는 것이다.
항hTfR 항체 번호 1의 경쇄에 대해서는, 가변 영역에 서열 번호 163으로 나타나는 아미노산 서열을 가지는, 서열 번호 164로 나타나는 아미노산 서열의 경쇄(인간화 항hTfR 항체 번호 1의 경쇄)의 전장을 코딩하는 유전자를 포함하는 DNA 단편(서열 번호 165)을 합성했다. 항hTfR 항체 번호 1의 중쇄에 대해서는, 가변 영역에 서열 번호 171로 나타나는 아미노산 서열을 가지는, 서열 번호 172로 나타나는 아미노산 서열의 중쇄(인간화 항hTfR 항체 번호 1의 중쇄)의 전장을 코딩하는 유전자를 포함하는 DNA 단편(서열 번호 173)을 합성했다. 서열 번호 173으로 나타나는 DNA 단편에 코딩되는 인간화 항hTfR 항체의 중쇄는 IgG1이다.
항hTfR 항체 번호 2의 경쇄에 대해서는, 가변 영역에 서열 번호 179로 나타나는 아미노산 서열을 가지는, 서열 번호 180으로 나타나는 아미노산 서열의 경쇄(인간화 항hTfR 항체 번호 2의 경쇄)의 전장을 코딩하는 유전자를 포함하는 DNA 단편(서열 번호 181)을 합성했다. 항hTfR 항체 번호 2의 중쇄에 대해서는, 가변 영역에 서열 번호 187로 나타나는 아미노산 서열을 가지는, 서열 번호 188로 나타나는 아미노산 서열의 중쇄(인간화 항hTfR 항체 번호 2의 중쇄)의 전장을 코딩하는 유전자를 포함하는 DNA 단편(서열 번호 189)을 합성했다. 서열 번호 189로 나타나는 DNA 단편에 코딩되는 인간화 항hTfR 항체의 중쇄는 IgG1이다.
항hTfR 항체 번호 3의 경쇄에 대해서는, 가변 영역에 서열 번호 191로 나타나는 아미노산 서열을 가지는, 서열 번호 196으로 나타나는 아미노산 서열의 경쇄(인간화 항hTfR 항체 번호 3의 경쇄)의 전장을 코딩하는 DNA 단편(서열 번호 197)을 합성했다. 항hTfR 항체 번호 3의 중쇄에 대해서는, 가변 영역에 서열 번호 205로 나타나는 아미노산 서열을 가지는, 서열 번호 210으로 나타나는 아미노산 서열의 중쇄(인간화 항hTfR 항체 번호 3의 중쇄)의 전장을 코딩하는 DNA 단편(서열 번호 211)을 합성했다. 서열 번호 211로 나타나는 DNA 단편에 코딩되는 인간화 항hTfR 항체의 중쇄는 IgG1이다.
항hTfR 항체 번호 3의 경쇄에 대해서는, 가변 영역에 서열 번호 193으로 나타나는 아미노산 서열을 가지는, 서열 번호 198로 나타나는 아미노산 서열의 경쇄(인간화 항hTfR 항체 번호 3-2의 경쇄)의 전장을 코딩하는 DNA 단편(서열 번호 199)과, 가변 영역에 서열 번호 194로 나타나는 아미노산 서열을 가지는, 서열 번호 200으로 나타나는 아미노산 서열의 경쇄(인간화 항hTfR 항체 번호 3-3의 경쇄)의 전장을 코딩하는 DNA 단편(서열 번호 201)과, 가변 영역에 서열 번호 195로 나타나는 아미노산 서열을 가지는, 서열 번호 202로 나타나는 아미노산 서열의 경쇄(인간화 항hTfR 항체 번호 3-4의 경쇄)의 전장을 코딩하는 DNA 단편(서열 번호 203)도 합성했다.
더욱이, 항hTfR 항체 번호 3의 중쇄에 대해서는, 가변 영역에 서열 번호 205로 나타나는 아미노산 서열을 가지는, 서열 번호 212로 나타나는 아미노산 서열의 중쇄(인간화 항hTfR 항체 번호 3의 중쇄 IgG4)의 전장을 코딩하는 DNA 단편(서열 번호 213)을 합성했다. 이 서열 번호 213으로 나타나는 DNA 단편에 코딩되는 인간화 항hTfR 항체의 중쇄는 IgG4이다.
〔실시예 11〕 인간화 항hTfR 항체 발현 벡터의 구축
pEF/myc/nuc 벡터(인비트로젠사)를, KpnI와 NcoI로 소화하고, EF-1α 프로모터 및 그의 제 1 인트론을 포함하는 영역을 잘라내고, 이것을 T4 DNA 폴리머라제로 평활 말단화 처리했다. pCI-neo(인비트로젠사)를, BglII 및 EcoRI로 소화하고, CMV의 인핸서/프로모터 및 인트론을 포함하는 영역을 절제한 후에, T4 DNA 폴리머라제로 평활 말단화 처리했다. 이것에, 상기의 EF-1α 프로모터 및 그의 제 1 인트론을 포함하는 영역을 삽입하여, pE-neo 벡터를 구축했다. pE-neo 벡터를, SfiI 및 BstXI로 소화하고, 네오마이신 내성 유전자를 포함하는 약 1kbp의 영역을 절제했다. pcDNA3.1/Hygro(+)(인비트로젠사)를 주형으로 하여 프라이머 Hyg-Sfi5'(서열 번호 216) 및 프라이머 Hyg-BstX3'(서열 번호 217)를 이용하여, PCR 반응에 의해 하이그로마이신 유전자를 증폭했다. 증폭한 하이그로마이신 유전자를, SfiI 및 BstXI로 소화하고, 상기의 네오마이신 내성 유전자를 절제한 pE-neo 벡터에 삽입하여, pE-hygr 벡터를 구축했다.
pE-hygr 벡터 및 pE-neo 벡터를 각각 MluI와 NotI로 소화했다. 실시예 10에서 합성한 인간화 항hTfR 항체 번호 1의 경쇄를 코딩하는 DNA 단편(서열 번호 165)과 중쇄를 코딩하는 DNA 단편(서열 번호 173)을 MluI와 NotI로 소화하고, 각각 pE-hygr 벡터와 pE-neo 벡터의 MluI-NotI 사이에 삽입했다. 얻어진 벡터를, 각각 인간화 항hTfR 항체 번호 1의 경쇄 발현용 벡터의 pE-hygr(LC1)와 인간화 항hTfR 항체 번호 1의 중쇄 발현용 벡터의 pE-neo(HC1)로서 이하의 실험에 이용했다.
마찬가지로, 실시예 10에서 합성한 인간화 항hTfR 항체 번호 2의 경쇄를 코딩하는 DNA 단편(서열 번호 181)과 중쇄를 코딩하는 DNA 단편(서열 번호 189)을 MluI와 NotI로 소화하고, 각각 pE-hygr 벡터와 pE-neo 벡터의 MluI-NotI 사이에 삽입했다. 얻어진 벡터를, 각각 인간화 항hTfR 항체 번호 2의 경쇄 발현용 벡터의 pE-hygr(LC2), 인간화 항hTfR 항체 번호 2의 중쇄 발현용 벡터의 pE-neo(HC2)로서 이하의 실험에 이용했다.
더욱이 마찬가지로, 실시예 10에서 합성한 인간화 항hTfR 항체 번호 3의 경쇄 코딩하는 DNA 단편(서열 번호 197)과 중쇄를 코딩하는 DNA 단편(서열 번호 211)을 MluI와 NotI로 소화하고, 각각 pE-hygr 벡터와 pE-neo 벡터의 MluI-NotI 사이에 삽입했다. 얻어진 벡터를, 각각 인간화 항hTfR 항체 번호 3의 경쇄 발현용 벡터의 pE-hygr(LC3), 인간화 항hTfR 항체 번호 3의 중쇄 발현용 벡터의 pE-neo(HC3)로서 이하의 실험에 이용했다.
더욱이, 항hTfR 항체 번호 3의 경쇄에 대해서는, 실시예 10에서 합성한 인간화 항hTfR 항체 번호 3-2의 경쇄를 코딩하는 DNA 단편(서열 번호 199), 인간화 항hTfR 항체 번호 3-3의 경쇄를 코딩하는 DNA 단편(서열 번호 201), 및 인간화 항hTfR 항체 번호 3-4의 경쇄를 코딩하는 DNA 단편(서열 번호 203)을 MluI와 NotI로 소화하고, pE-hygr 벡터의 MluI-NotI 사이에 삽입하여, 각각 인간화 항hTfR 항체 번호 3-2의 경쇄 발현용 벡터의 pE-hygr(LC3-2), 인간화 항hTfR 항체 번호 3-3의 경쇄 발현용 벡터의 pE-hygr(LC3-3), 및 인간화 항hTfR 항체 번호 3-4의 경쇄 발현용 벡터의 pE-hygr(LC3-4)를 구축했다.
더욱이 마찬가지로, 항hTfR 항체 번호 3의 중쇄에 대해서는, 실시예 10에서 합성한 인간화 항hTfR 항체 번호 3의 중쇄 IgG4를 코딩하는 DNA 단편(서열 번호 213)을 MluI와 NotI로 소화하고, pE-neo 벡터의 MluI-NotI 사이에 삽입하여, 인간화 항hTfR 항체 번호 3의 중쇄 IgG4 발현용 벡터의 pE-neo(HC3-IgG4)를 구축했다.
〔실시예 12〕 인간화 항hTfR 항체 발현용 세포의 구축
CHO 세포(CHO-K1: American Type Culture Collection으로부터 입수)를, 하기의 방법에 의해, GenePulser(Bio-Rad사)를 이용하여, 실시예 11에서 구축한 경쇄 발현용 벡터 pE-hygr(LC1) 및 중쇄 발현용 벡터 pE-neo(HC1)로 형질 전환했다. 세포의 형질 전환은 대체로 이하의 방법으로 행했다. 5×105개의 CHO-K1 세포를 CD OptiCHOTM 배지(라이프 테크놀로지사)를 첨가한 3.5cm 배양 디쉬에 파종하고, 37℃, 5% CO2의 조건하에서 하룻밤 배양했다. 배지를 Opti-MEMTM I 배지(라이프 테크놀로지사)로 교환하고, 세포를 5×106세포/mL의 밀도가 되도록 현탁했다. 세포 현탁액 100μL를 채취하고, 이것에 Opti-MEMTM I 배지로 100μg/mL로 희석한 pE-hygr(LC1) 및 pE-neo(HC1) 핵외 유전자 DNA 용액을 5μL씩 첨가했다. GenePulser(Bio-Rad사)를 이용하여, 일렉트로포레이션을 실시하여, 세포에 핵외 유전자를 도입했다. 세포를, 37℃, 5% CO2의 조건하에서 하룻밤 배양한 후, 0.5mg/mL의 하이그로마이신 및 0.8mg/mL의 G418을 첨가한 CD OptiCHOTM 배지로 선택 배양했다.
그 다음에, 한계 희석법에 의해, 1웰당 1개 이하의 세포가 파종되도록, 96웰 플레이트 상에 선택 배양으로 선택된 세포를 파종하고, 각 세포가 단클론 콜로니를 형성하도록 약 10일간 배양했다. 단클론 콜로니가 형성된 웰의 배양 상청을 채취하고, 배양 상청 중의 인간화 항체 함량을 ELISA법으로 조사하여 인간화 항체 고발현 세포주를 선택했다.
이 때의 ELISA법은 대체로 이하의 방법으로 실시했다. 96웰 마이크로타이터 플레이트(Nunc사)의 각 웰에, 염소 항인간 IgG 폴리클로날 항체 용액을 0.05M 탄산수소염 완충액(pH 9.6)으로 4μg/mL로 희석한 것을 100μL씩 가하고, 실온에서 적어도 1시간 정치하여 항체를 플레이트에 흡착시켰다. 그 다음에, 인산 완충 생리 식염수(pH 7.4)에 0.05% Tween20을 첨가한 것(PBS-T)으로 각 웰을 3회 세정 후, Starting Block(PBS) Blocking Buffer(Thermo Fisher Scientific사)를 각 웰에 200μL씩 가하고 플레이트를 실온에서 30분 정치했다. 각 웰을 PBS-T로 3회 세정한 후, PBS에 0.5% BSA 및 0.05% Tween20을 첨가한 것(PBS-BT)으로 적당한 농도로 희석한 배양 상청 또는 인간 IgG 표준품을, 각 웰에 100μL씩 가하고 플레이트를 실온에서 적어도 1시간 정치했다. 플레이트를 PBS-T로 3회 세정한 후, PBS-BT로 희석한 HRP 표지 항인간 IgG 폴리클로날 항체 용액을, 각 웰에 100μL씩 가하고 플레이트를 실온에서 적어도 1시간 정치했다. PBS-T로 각 웰을 3회 세정 후, 인산-시트르산 완충액(pH 5.0)을 포함하는 0.4mg/mL o-페닐렌다이아민을 100μL씩 각 웰에 가하고 실온에서 8∼20분간 정치했다. 그 다음에, 1mol/L 황산을 100μL씩 각 웰에 가하여 반응을 정지시키고, 96웰 플레이트 리더를 이용하여, 각 웰의 490nm에 있어서의 흡광도를 측정했다. 높은 측정치를 나타낸 웰에 대응하는 세포를, 인간화 항hTfR 항체 번호 1의 고발현 세포주로 했다. 이것을 항체 번호 1 발현주로 했다.
마찬가지로 하여, 실시예 11에서 구축한 경쇄 발현용 벡터 pE-hygr(LC2) 및 중쇄 발현용 벡터 pE-neo(HC2)를 이용하여 CHO 세포를 형질 전환시켜, 인간화 항hTfR 항체 번호 2의 고발현 세포주를 얻었다. 이것을 항체 번호 2 발현주로 했다.
더욱이 마찬가지로 하여, 실시예 11에서 구축한 경쇄 발현용 벡터 pE-hygr(LC3) 및 중쇄 발현용 벡터 pE-neo(HC3)를 이용하여 CHO 세포를 형질 전환시켜, 인간화 항hTfR 항체 번호 3의 고발현 세포주를 얻었다. 이것을 항체 번호 3 발현주로 했다.
더욱이 마찬가지로 하여, 실시예 11에서 구축한 경쇄 발현용 벡터 pE-hygr(LC3-2) 및 중쇄 발현용 벡터 pE-neo(HC3)를 이용하여 CHO 세포를 형질 전환시켜, 인간화 항hTfR 항체 번호 3-2의 고발현 세포주를 얻었다. 이것을 항체 번호 3-2 발현주로 했다.
더욱이 마찬가지로 하여, 실시예 11에서 구축한 경쇄 발현용 벡터 pE-hygr(LC3-3) 및 중쇄 발현용 벡터 pE-neo(HC3)를 이용하여 CHO 세포를 형질 전환시켜, 인간화 항hTfR 항체 번호 3-3의 고발현 세포주를 얻었다. 이것을 항체 번호 3-3 발현주로 했다.
더욱이 마찬가지로 하여, 실시예 11에서 구축한 경쇄 발현용 벡터 pE-hygr(LC3-4) 및 중쇄 발현용 벡터 pE-neo(HC3)를 이용하여 CHO 세포를 형질 전환시켜, 인간화 항hTfR 항체 번호 3-4의 고발현 세포주를 얻었다. 이것을 항체 번호 3-4 발현주로 했다.
더욱이 마찬가지로 하여, 실시예 11에서 구축한 경쇄 발현용 벡터 pE-hygr(LC3) 및 중쇄 발현용 벡터 pE-neo(HC3-IgG4)를 이용하여 CHO 세포를 형질 전환시켜, 인간화 항hTfR 항체 번호 3(IgG4)의 고발현 세포주를 얻었다. 이것을 항체 번호 3(IgG4) 발현주로 했다.
더욱이 마찬가지로 하여, 실시예 11에서 구축한 경쇄 발현용 벡터 pE-hygr(LC3-2) 및 중쇄 발현용 벡터 pE-neo(HC3-IgG4)를 이용하여 CHO 세포를 형질 전환시켜, 인간화 항hTfR 항체 번호 3-2(IgG4)의 고발현 세포주를 얻었다. 이것을 항체 번호 3-2(IgG4) 발현주로 했다.
〔실시예 13〕 인간화 항hTfR 항체의 정제
실시예 12에서 얻어진 항체 번호 1 발현주, 항체 번호 2 발현주, 항체 번호 3 발현주, 항체 번호 3-2 발현주, 항체 번호 3-3 발현주 및 항체 번호 3-4 발현주를, 각각 세포 농도가 약 2X105개/mL가 되도록, CD OptiCHOTM 배지로 희석하고, 1L의 삼각 플라스크에 200mL의 세포 현탁액을 가하고, 37℃에서, 5% CO2와 95% 공기로 이루어지는 습윤 환경에서 약 70rpm의 교반 속도로 6∼7일간 배양했다. 배양 상청을 원심 조작에 의해 회수하고, 0.22μm 필터(Millipore사)로 여과하여, 배양 상청으로 했다. 회수한 배양 상청에, 150mM NaCl을 포함하는 5배용의 20mM Tris 완충액(pH 8.0)을 첨가하고, 미리 150mM NaCl을 포함하는 컬럼 체적 3배용의 20mM Tris 완충액(pH 8.0)으로 평형화해 둔 Protein A 컬럼(컬럼 체적: 1mL, Bio-Rad사)에 부하했다. 그 다음에, 컬럼 체적의 5배용의 동 완충액에 의해 컬럼을 세정한 후, 150mM NaCl을 포함하는 컬럼 체적의 4배용의 50mM 글리신 완충액(pH 2.8)으로, 흡착한 인간화 항체를 용출시켜, 용출 획분을 채취했다. 용출 획분에 1M Tris 완충액(pH 8.0)을 첨가하여 중화시켜, 이것을 항체의 정제품으로 했다.
여기에서, 항체 번호 1 발현주의 배양 상청으로부터 정제된 항체를, 인간화 항hTfR 항체 번호 1로 했다. 항체 번호 2 발현주의 배양 상청으로부터 정제된 항체는, 인간화 항hTfR 항체 번호 2로 했다. 항체 번호 3 발현주의 배양 상청으로부터 정제된 항체는, 인간화 항hTfR 항체 번호 3으로 했다. 항체 번호 3-2 발현주의 배양 상청으로부터 정제된 항체는, 인간화 항hTfR 항체 번호 3-2로 했다. 항체 번호 3-3 발현주의 배양 상청으로부터 정제된 항체는, 인간화 항hTfR 항체 번호 3-3으로 했다. 또한, 항체 번호 3-4 발현주의 배양 상청으로부터 정제된 항체는, 인간화 항hTfR 항체 번호 3-4로 했다.
또한, 실시예 12에서 얻어진 항체 번호 3(IgG4) 발현주, 및 항체 번호 3-2(IgG4) 발현주에 대해서도 상기와 마찬가지로 배양하고, 그 배양 상청으로부터, 각각 정제된 인간화 항hTfR 항체 번호 3(IgG4) 및 인간화 항hTfR 항체 번호 3-2(IgG4)를 얻었다. 이들 2종의 항체는, 실시예 15에 기재된 원숭이를 이용한 약물 동태 해석에 이용했다.
〔실시예 14〕 인간화 항hTfR 항체의 인간 TfR 및 원숭이 TfR에의 친화성의 측정
실시예 13에서 얻은 인간화 항hTfR 항체의 인간 TfR 및 원숭이 TfR에의 친화성을, 실시예 7에 기재된 방법으로 측정했다. 표 7에 인간화 항hTfR 항체 번호 1∼3-4(표 중, No. 1∼3-4에 각각 대응)의 인간 TfR에 대한 회합 속도 상수(kon) 및 해리 속도 상수(koff)의 측정 결과, 및 해리 상수(kD)를 나타낸다.
Figure pct00008
표 8에 인간화 항hTfR 항체 번호 1∼3-4(표 중, 항체 번호 1∼3-4에 각각 대응)의 원숭이 TfR에 대한 회합 속도 상수(kon) 및 해리 속도 상수(koff)의 측정 결과, 및 해리 상수(kD)를 나타낸다.
Figure pct00009
인간화 항hTfR 항체 번호 1∼3-4의 인간 TfR에의 친화성의 측정의 결과, 인간화 항hTfR 항체 번호 1, 2, 3, 및 3-4 항체에서, 인간 TfR과의 해리 상수는 1×10-12M 미만이었다(표 7). 또한, 인간화 항hTfR 항체 번호 3-2 및 3-3의 인간 TfR과의 해리 상수는, 각각 2.39×10-11M과 2.09×10-11M이었다. 한편, 이들 항체에 대응하는 인간화 전의 항hTfR 항체의 인간 TfR과의 해리 상수는, 항체 번호 1에 대해서는 5.09×10-12M이고, 항체 번호 2에 대해서는 1.12×10-11M이며, 항체 번호 3에 대해서는 1×10-12M 미만이었다(표 4). 이들 결과는, 항hTfR 항체의 인간 TfR에의 높은 친화성이, 항체를 인간화하기 전후에서 유지됨을 나타내는 것이고, 항hTfR 항체 번호 4∼14에 대해서도, 항체를 인간화한 후도, 인간 TfR에의 친화성이 유지될 수 있음을 나타내는 것이다.
그 다음에, 인간화 항hTfR 항체의 원숭이 TfR에의 친화성의 측정의 결과를 보면, 인간화 항hTfR 항체 번호 1은, 항체를 인간화하기 전후에서 해리 상수는 1×10-12M 미만으로 친화성이 유지되고, 인간화 항hTfR 항체 번호 2도, 인간화 전의 해리 상수가 4.18×10-11M인 것이, 인간화 후의 해리 상수는 7.55×10-11M로 친화성이 유지되었다(표 5, 표 8). 한편, 인간화 항hTfR 항체 번호 3∼3-4는, 인간화 전의 이들 항체에 대응하는 항hTfR 항체 번호 3의 원숭이 TfR과의 해리 상수가 1×10-12M 미만인 것이, 인간화 후는 2.60×10-10M∼1.91×10-9M로 원숭이 TfR에의 친화성의 저하가 관찰되었다. 인간화 항hTfR 항체 번호 3에서는, 원숭이 TfR에의 친화성의 저하가 관찰되었지만, 이들 결과는, 항hTfR 항체의 원숭이 TfR에의 높은 친화성은, 항체를 인간화하기 전후에서 상실되지 않고 대체로 유지됨을 나타내는 것이고, 항hTfR 항체 번호 4∼14에 대해서도, 항체를 인간화한 후도, 원숭이 TfR에의 친화성이 유지될 수 있음을 나타내는 것이다.
〔실시예 15〕 인간화 항hTfR 항체의 원숭이를 이용한 약물 동태 해석
인간화 항hTfR 항체 번호 3, 인간화 항hTfR 항체 번호 3-2, 인간화 항hTfR 항체 번호 3(IgG4) 및 인간화 항hTfR 항체 번호 3-2(IgG4)의 4종의 항체를 이용하여, 원숭이를 이용한 약물 동태 해석을 행했다. 한편, 인간화 항hTfR 항체 번호 3은 중쇄가 IgG1이며, 인간화 항hTfR 항체 번호 3(IgG4)은 인간화 항hTfR 항체 번호 3의 중쇄를 가변 영역은 그대로 하여 IgG4로 한 것이다. 또한, 인간화 항hTfR 항체 번호 3-2는 중쇄가 IgG1이며, 인간화 항hTfR 항체 번호 3-2(IgG4)는 인간화 항hTfR 항체 번호 3-2의 중쇄를 가변 영역은 그대로 하여 IgG4로 한 것이다. 이들 4종의 항체를, 각각, 5.0mg/kg의 용량으로 각각 웅성 필리핀원숭이에 단회 정맥내 투여하고, 투여 전, 투여 후 2분, 30분, 2시간, 4시간 및 8시간 후에 말초혈을 채취하고, 채혈 후에 전신 관류를 실시했다. 또한, 음성 대조로서, HER2 단백에 대한 인간화 항체인 트라스투주맙(허셉틴TM, 추가이제약)을, 마찬가지로 하여 1마리의 개체에 투여하고, 투여 전, 투여 후 2분, 30분, 2시간, 4시간 및 8시간 후에 말초혈을 채취하고, 채혈 후에 전신 관류를 실시했다. 관류 후, 연수를 포함하는 뇌조직, 척수 조직 및 그 외의 조직(간장, 심장, 비장 및 골수를 포함한다)을 적출했다. 이 뇌조직, 척수 조직 및 그 외의 조직을 이용하여, 이하의 인간화 항hTfR 항체의 농도 측정 및 면역조직화학 염색을 실시했다.
조직 중 및 말초혈 중의 인간화 항hTfR 항체의 농도 측정은, 대체로 이하의 수순으로 행했다. 한편, 뇌에 대해서는 채취한 조직을, 대뇌피질, 소뇌, 해마 및 연수로 나누고 나서 인간화 항hTfR 항체의 농도 측정을 행했다. 채취한 조직을, 각각 Protease Inhibitor Cocktail(Sigma-Aldrich사)을 포함하는 RIPA Buffer(와코준야쿠공업주식회사)로 호모지네이트하고 원심하여 상청을 회수했다. 말초혈에 대해서는 혈청을 분리했다. Affinipure Goat Anti mouse IgG Fcγ pAb(Jackson ImmunoResearch사)를 High Bind Plate(Meso Scale Diagnostics사)의 각 웰에 10μL씩 첨가하고, 1시간 정치하여 고상화했다. 그 다음에, 각 웰에 SuperBlock blocking buffer in PBS(Thermo Fisher Scientific사)를 150μL씩 첨가하고, 1시간 진탕하여, 플레이트를 블로킹했다. 그 다음에, 각 웰에 호모지네이트 상청 또는 혈청을 25μL씩 첨가하고, 1시간 진탕했다. 그 다음에, 각 웰에 Affinipure Goat Anti mouse IgG Fab-Biotin(Jackson ImmunoResearch사)을 25μL씩 첨가하고, 1시간 진탕했다. 그 다음에, 각 웰에 SULFO-Tag-Streptavidin(Meso Scale Diagnostics사)을 25μL씩 첨가하고, 0.5시간 진탕했다. 각 웰에 Read buffer T(Meso Scale Diagnostics사)를 150μL씩 첨가하고, SectorTM Imager 6000 reader를 이용하여 각 웰로부터의 발광량을 측정했다. 농도 기지의 항hTfR 항체의 표준 시료의 측정치로부터 검량선을 작성하고, 이것에 각 검체의 측정치를 내삽하는 것에 의해, 각 조직 중 및 말초혈 중에 포함되는 항체의 양을 산출했다. 농도의 측정은 각 샘플에 대해 3회 반복하여 행했다.
뇌조직 및 척수 조직 중의 인간화 항hTfR 항체의 농도 측정의 결과를 표 9에 나타낸다.
Figure pct00010
인간화 항hTfR 항체 번호 3, 인간화 항hTfR 항체 번호 3-2, 인간화 항hTfR 항체 번호 3(IgG4) 및 인간화 항hTfR 항체 번호 3-2(IgG4)의 항체 모두, 대뇌피질, 소뇌, 해마, 연수 및 척수에서의 축적이 확인되었다(표 9). 그 양은, 인간화 항hTfR 항체 번호 3에서는, 음성 대조의 트라스투주맙(허셉틴TM)과 비교하여, 대뇌피질에서 약 82배, 소뇌에서 약 68배, 해마에서 약 92배, 연수에서 약 54배, 척수에서 약 3.1배이고, 인간화 항hTfR 항체 번호 3-2에서는, 음성 대조의 트라스투주맙과 비교하여, 대뇌피질에서 약 128배, 소뇌에서 약 80배, 해마에서 약 136배, 연수에서 약 63배, 척수에서 약 3.1배이며, 인간화 항hTfR 항체 번호 3(IgG4)에서는, 음성 대조의 트라스투주맙과 비교하여, 대뇌피질에서 약 79배, 소뇌에서 약 66배, 해마에서 약 106배, 연수에서 약 54배, 척수에서 약 3.1배이고, 인간화 항hTfR 항체 번호 3-2(IgG4)에서는, 음성 대조의 트라스투주맙과 비교하여, 대뇌피질에서 약 93배, 소뇌에서 약 63배, 해마에서 약 117배, 연수에서 약 66배, 척수에서 약 3.2배였다(표 10). 이들 결과는, 이들 4종의 인간화 항hTfR 항체가, 혈액뇌관문을 통과하여 뇌조직에 축적하는 성질을 가짐을 나타내는 것이고, 뇌조직 내에서 기능시켜야 할 약제를 이들 항체와 결합시키는 것에 의해, 그 약제를 효율 좋게 뇌조직에 축적시킬 수 있음을 나타내는 것이다.
Figure pct00011
그 다음에, 간장, 심장, 비장 및 골수의 각 조직 중의 인간화 항hTfR 항체의 농도 측정의 결과를 도 4에 나타낸다. 간장, 및 비장에서는, 4종류의 인간화 항hTfR 항체 및 음성 대조의 트라스투주맙의 어느 것에 있어서도 축적이 확인되었지만, 그 양은 인간화 항hTfR 항체와 트라스투주맙에서 동등했다. 심장에서는, 인간화 항hTfR 항체가 음성 대조의 트라스투주맙과 비교하여, 축적량이 많은 경향이 있었지만, 그 양은 음성 대조의 1.5배∼2.8배 정도에 머물렀다. 골수에서는, 인간화 항hTfR 항체가, 음성 대조의 트라스투주맙과 비교하여, 현저하게 축적량이 많은 경향이 있고, 그 양은 음성 대조의 3.5∼16배였다. 골수로의 인간화 항hTfR 항체의 축적은, 조혈 기관인 골수에서는 TfR의 발현량이 많아, TfR과 결합하는 것에 의해 많은 인간화 항hTfR 항체가 음성 대조와 비교해 축적되었기 때문이라고 생각된다. 이들 데이터는, 이들 4종의 인간화 항hTfR 항체가, 중추 신경계인 대뇌, 소뇌, 해마 및 연수에 특이적으로 축적하는 성질을 가짐을 나타내는 것이고, 뇌조직 내에서 기능시켜야 할 약제를 이들 항체와 결합시키는 것에 의해, 그 약제를 효율 좋게 뇌조직에 축적시킬 수 있음을 나타내는 것이다.
그 다음에, 인간화 항hTfR 항체의 혈중 동태의 측정 결과를 표 11에 나타낸다. 4종류의 인간화 항hTfR 항체는, 음성 대조의 트라스투주맙과 마찬가지로, 투여 후 8시간에 있어서도 혈중 농도가 60μg/mL 이상의 고가를 나타내어, 혈중에서 안정됨이 나타났다.
Figure pct00012
뇌조직 중의 인간화 항hTfR 항체의 면역조직화학 염색은, 대체로 이하의 수순으로 행했다. 티슈테크크라이오 3DM(사쿠라파인테크주식회사)를 이용하여, 채취한 조직을 -80℃로까지 급속 냉동하고, 동결 블록을 4μm로 박절 후, MAS 코트 슬라이드 글라스(마쓰나미유리주식회사)에 첩부했다. 조직 박편에 4% 파라폼알데하이드(와코준야쿠공업주식회사)를 4℃에서 5분간 반응시켜, 조직 박편을 슬라이드 글라스 상에 고정했다. 계속하여, 조직 박편에 0.3% 과산화 수소수를 포함하는 메탄올 용액(와코준야쿠공업주식회사)을 30분간 반응시켜, 내인성 퍼옥시다제를 실활 시켰다. 그 다음에 슬라이드 글라스를 SuperBlock blocking buffer in PBS에 30분간 실온에서 반응시켜 블로킹했다. 그 다음에, 조직 박편에 Mouse IgG-heavy and light chain Antibody(Bethyl Laboratories)를 1시간 실온에서 반응시켰다. 조직 박편을, DAB 기질(3,3'-diaminobenzidine, Vector Laboratories사)로 발색시키고, 마이어 헤마톡실린(Merck사)으로 대비 염색을 행하고, 탈수, 투철한 후에 봉입하고, 광학 현미경으로 관찰했다.
도 5에 대뇌피질의 인간화 항hTfR 항체의 면역조직화학 염색의 결과를 나타낸다. 인간화 항hTfR 항체 번호 3, 인간화 항hTfR 항체 번호 3-2, 인간화 항hTfR 항체 번호 3(IgG4) 및 인간화 항hTfR 항체 번호 3-2(IgG4)를 투여한 원숭이의 대뇌피질에서는, 혈관 및 신경양 세포의 특이적인 염색이 확인되었다(각각 도 5b∼e). 특히, 인간화 항hTfR 항체 번호 3-2를 투여한 원숭이의 대뇌피질(도 5c)에서는, 뇌혈관 외의 뇌실질 영역에도 광범위하게 특이적인 염색이 확인되었다. 한편, 컨트롤로 해둔 허셉틴을 투여한 원숭이의 대뇌피질에서는 염색은 확인되지 않아, 도 5b∼e에서 관찰된 조직 염색이, 인간화 항hTfR 항체에 특이적인 것임이 나타났다(도 5a).
도 6에 해마의 인간화 항hTfR 항체의 면역조직화학 염색의 결과를 나타낸다. 인간화 항hTfR 항체 번호 3, 인간화 항hTfR 항체 번호 3-2, 인간화 항hTfR 항체 번호 3(IgG4) 및 인간화 항hTfR 항체 번호 3-2(IgG4)를 투여한 원숭이의 해마에서는, 혈관 및 신경양 세포의 특이적인 염색이 확인되었다(각각 도 6b∼e). 한편, 컨트롤로 해둔 허셉틴을 투여한 원숭이의 해마에서는 염색은 확인되지 않아, 도 6b∼e에서 관찰된 조직 염색이, 인간화 항hTfR 항체에 특이적인 것임이 나타났다(도 6 a).
도 7에 소뇌의 인간화 항hTfR 항체의 면역조직화학 염색의 결과를 나타낸다. 인간화 항hTfR 항체 번호 3, 인간화 항hTfR 항체 번호 3-2, 인간화 항hTfR 항체 번호 3(IgG4) 및 인간화 항hTfR 항체 번호 3-2(IgG4)를 투여한 원숭이의 소뇌에서는, 혈관 및 푸르킨예 세포의 특이적인 염색이 확인되었다(각각 도 7b∼e). 한편, 컨트롤로 해둔 허셉틴을 투여한 원숭이의 소뇌에서는 염색은 확인되지 않아, 도 7b∼e에서 관찰된 조직 염색이, 인간화 항hTfR 항체에 특이적인 것임이 나타났다(도 7a).
도 8에 연수의 인간화 항hTfR 항체의 면역조직화학 염색의 결과를 나타낸다. 인간화 항hTfR 항체 번호 3, 인간화 항hTfR 항체 번호 3-2, 인간화 항hTfR 항체 번호 3(IgG4) 및 인간화 항hTfR 항체 번호 3-2(IgG4)를 투여한 원숭이의 연수에서는, 혈관 및 신경양 세포의 특이적인 염색이 확인되었다(각각 도 8b∼e). 한편, 컨트롤로 해둔 허셉틴을 투여한 원숭이의 연수에서는 염색은 확인되지 않아, 도 8b∼e에서 관찰된 조직 염색이, 인간화 항hTfR 항체에 특이적인 것임이 나타났다(도 8a).
실시예 8의 대뇌 및 소뇌의 면역조직화학 염색의 결과로부터는, 인간화 전의 마우스 항체인 항hTfR 항체 번호 1은 뇌혈관 내피 표면에 존재하는 hTfR에는 결합할 수 있지만, 뇌실질로의 이행하는 양은 적다고 생각되었다. 한편, 인간화 전의 마우스 항체인 항hTfR 항체 번호 2 및 3은, 뇌혈관 내피 표면에 존재하는 hTfR에는 결합할 수 있고, 또한 hTfR에의 결합 후, 혈액뇌관문을 통과하여 뇌실질 내로 이행하고, 더욱이 해마에 있어서는 뇌실질 내로부터 신경양 세포에까지, 소뇌에 있어서는 푸르킨예 세포에까지, 받아들여짐을 나타내는 것이었다.
이 실시예 15의 대뇌, 해마, 소뇌 및 연수의 면역조직화학 염색의 결과로부터는, 실험에 제공한 항hTfR 항체 번호 3을 인간화하여 얻어진 4종류의 인간화 항hTfR 항체는, 뇌혈관 내피 표면에 존재하는 hTfR에 결합하고, 또한 hTfR에의 결합 후, 혈액뇌관문을 통과하여 뇌실질 내로 이행하고, 더욱이 대뇌피질에 있어서는 신경양 세포에까지, 해마에 있어서는 뇌실질 내로부터 신경양 세포에까지, 소뇌에 있어서는 푸르킨예 세포에까지, 연수에 있어서는 신경양 세포에 받아들여짐을 알 수 있었다.
〔실시예 16〕 hI2S-인간화 항hTfR 항체 융합 단백질 발현용 세포의 제작
pEF/myc/nuc 벡터(인비트로젠사)를, KpnI와 NcoI로 소화하고, EF-1α 프로모터 및 그의 제 1 인트론을 포함하는 영역을 잘라내고, 이것을 T4 DNA 폴리머라제로 평활 말단화 처리했다. pCI-neo(인비트로젠사)를, BglII 및 EcoRI로 소화하고, CMV의 인핸서/프로모터 및 인트론을 포함하는 영역을 절제한 후에, T4 DNA 폴리머라제로 평활 말단화 처리했다. 이것에, 상기의 EF-1α 프로모터 및 그의 제 1 인트론을 포함하는 영역을 삽입하여, pE-neo 벡터를 구축했다. pE-neo 벡터를, SfiI 및 BstXI로 소화하고, 네오마이신 내성 유전자를 포함하는 약 1kbp의 영역을 절제했다. pcDNA3.1/Hygro(+)(인비트로젠사)를 주형으로 하여 프라이머 Hyg-Sfi5'(서열 번호 216) 및 프라이머 Hyg-BstX3'(서열 번호 217)를 이용하여, PCR 반응에 의해 하이그로마이신 유전자를 증폭했다. 증폭한 하이그로마이신 유전자를, SfiI 및 BstXI로 소화하고, 상기의 네오마이신 내성 유전자를 절제한 pE-neo 벡터에 삽입하여, pE-hygr 벡터를 구축했다.
서열 번호 172로 나타나는 아미노산 서열을 가지는 인간화 항hTfR 항체의 중쇄의 C말단측에 링커 서열(Gly Ser)을 개재하여 서열 번호 246으로 나타나는 아미노산 서열을 가지는 hI2S를 결합시킨 단백질을 코딩하는 유전자를 포함하는, 서열 번호 248로 나타나는 염기 서열을 가지는 DNA 단편을 인공적으로 합성했다. 이 DNA 단편은, 서열 번호 247로 나타나는 아미노산 서열을 가지는 인간화 항hTfR 항체의 중쇄에 링커 서열(Gly Ser)을 개재하여 hI2S가 결합한 단백질을 코딩한다. 또한, 이 DNA 단편은, 5'측에는, 5'단으로부터 순차로 MluI 서열과, 분비 시그널로서 기능하는 리더 펩타이드를 코딩하는 서열을 가지고, 3'측에는 NotI 서열을 가진다. 이 DNA 단편을 MluI와 NotI로 소화하고, pE-neo 벡터의 MluI와 NotI 사이에 짜넣어, pE-neo(HC-I2S-1)를 구축했다.
서열 번호 188로 나타나는 아미노산 서열을 가지는 인간화 항hTfR 항체의 중쇄의 C말단측에 링커 서열(Gly Ser)을 개재하여 서열 번호 246으로 나타나는 아미노산 서열을 가지는 hI2S를 결합시킨 단백질을 코딩하는 유전자를 포함하는, 서열 번호 250으로 나타나는 염기 서열을 가지는 DNA 단편을 인공적으로 합성했다. 이 DNA 단편은, 서열 번호 249로 나타나는 아미노산 서열을 가지는 인간화 항hTfR 항체의 중쇄에 링커 서열(Gly Ser)을 개재하여 hI2S가 결합한 단백질을 코딩한다. 또한, 이 DNA 단편은, 5'측에는, 5'단으로부터 순차로 MluI 서열과, 분비 시그널로서 기능하는 리더 펩타이드를 코딩하는 서열을 가지고, 3'측에는 NotI 서열을 가진다. 이 DNA 단편을 MluI와 NotI로 소화하고, pE-neo 벡터의 MluI와 NotI 사이에 짜넣어, pE-neo(HC-I2S-2)를 구축했다.
서열 번호 210으로 나타나는 아미노산 서열을 가지는 인간화 항hTfR 항체의 중쇄의 C말단측에 링커 서열(Gly Ser)을 개재하여 서열 번호 246으로 나타나는 아미노산 서열을 가지는 hI2S를 결합시킨 단백질을 코딩하는 유전자를 포함하는, 서열 번호 252로 나타나는 염기 서열을 가지는 DNA 단편을 인공적으로 합성했다. 이 DNA 단편은, 서열 번호 251로 나타나는 아미노산 서열을 가지는 인간화 항hTfR 항체의 중쇄에 링커 서열(Gly Ser)을 개재하여 hI2S가 결합한 단백질을 코딩한다. 또한, 이 DNA 단편은, 5'측에는, 5'단으로부터 순차로 MluI 서열과, 분비 시그널로서 기능하는 리더 펩타이드를 코딩하는 서열을 가지고, 3'측에는 NotI 서열을 가진다. 이 DNA 단편을 MluI와 NotI로 소화하고, pE-neo 벡터의 MluI와 NotI 사이에 짜넣어, pE-neo(HC-I2S-3)를 구축했다.
CHO 세포(CHO-K1: American Type Culture Collection으로부터 입수)를, 실시예 12에 기재된 방법에 의해, pE-neo(HC-I2S-1)와 실시예 11에서 구축한 pE-hygr(LC1)로 형질 전환하여, hI2S와 인간화 항hTfR 항체의 융합 단백질을 발현하는 세포주를 얻었다. 이 세포주를, hI2S-항hTfR 항체 발현주 1로 했다. 이 세포주가 발현하는 hI2S와 인간화 항hTfR 항체의 융합 단백질을 I2S-항hTfR 항체 1로 했다.
마찬가지로, CHO 세포를, pE-neo(HC-I2S-2)와 실시예 11에서 구축한 pE-hygr(LC2)로 형질 전환하여, hI2S와 인간화 항hTfR 항체의 융합 단백질을 발현하는 세포주를 얻었다. 이 세포주를, hI2S-항hTfR 항체 발현주 2로 했다. 이 세포주가 발현하는 hI2S와 인간화 항hTfR 항체의 융합 단백질을 I2S-항hTfR 항체 2로 했다.
더욱이 마찬가지로, CHO 세포를, pE-neo(HC-I2S-3)와 실시예 11에서 구축한 pE-hygr(LC3)로 형질 전환하여, hI2S와 인간화 항hTfR 항체의 융합 단백질을 발현하는 세포주를 얻었다. 이 세포주를, hI2S-항hTfR 항체 발현주 3으로 했다. 이 세포주가 발현하는 hI2S와 인간화 항hTfR 항체의 융합 단백질을 I2S-항hTfR 항체 3으로 했다.
〔실시예 17〕 I2S-항hTfR 항체의 제조
I2S-항hTfR 항체를, 이하의 방법으로 제조했다. 실시예 16에서 얻은 hI2S-항hTfR 항체 발현주 1, 2, 및 3을, 각각 세포 농도가 약 2X105개/mL가 되도록, CD OptiCHOTM 배지로 희석하고, 1L의 삼각 플라스크에 200mL의 세포 현탁액을 가하고, 37℃에서, 5% CO2와 95% 공기로 이루어지는 습윤 환경에서 약 70rpm의 교반 속도로 6∼7일간 배양했다. 배양 상청을 원심 조작에 의해 회수하고, 0.22μm 필터(Millipore사)로 여과하여, 배양 상청으로 했다. 회수한 배양 상청에, 컬럼 체적의 5배용의 150mL NaCl을 포함하는 20mM Tris 완충액(pH 8.0)을 첨가하고, 컬럼 체적의 3배용의 150mM NaCl을 포함하는 20mM Tris 완충액(pH 8.0)으로 미리 평형화해 둔 Protein A 컬럼(컬럼 체적: 1mL, Bio-Rad사)에 부하했다. 그 다음에, 컬럼 체적의 5배용의 동 완충액을 공급하여 컬럼을 세정한 후, 150mM NaCl을 포함하는 컬럼 체적의 4배용의 50mM 글리신 완충액(pH 2.8)으로, 흡착한 I2S-항hTfR 항체를 용출시켰다. 이 I2S-항hTfR 항체를 포함하는 용출액의 pH를 1M Tris 완충액(pH 8.0)을 첨가하여 pH 7.0으로 조정하고, 그 다음에 아미콘 울트라 30kDa막(Millipore사)을 이용하여 PBS로 버퍼 교환했다. 이것을 I2S-항hTfR 항체의 정제품으로 했다.
이와 같이 하여 제조한 I2S-항hTfR 항체의 인간 TfR 및 원숭이 TfR에의 친화성은, 예를 들어 실시예 7에 기재된 방법에 의해 측정할 수 있다. 또한, 정맥내 투여했을 때의 I2S-항hTfR 항체의 약물 동태 해석은, 예를 들어 실시예 8에 기재된 방법에 의해 측정할 수 있다. 또한, I2S-항hTfR 항체의 약효는, 예를 들어 헌터 증후군의 모델 마우스인 이두론산 2-설파타제 유전자 녹아웃 마우스(I2S-KO 마우스)에, 실시예 7-2에 기재된 hTfR-KI 마우스를 교배하여 얻어지는 I2S-KO/hTfRKI 마우스에, I2S-항hTfR 항체를 정맥 주사하고, 뇌내에 축적한 글리코사미노글리칸의 감소량을 측정하는 것에 의해 평가할 수 있다.
〔실시예 18〕 I2S-항hTfR 항체의 뇌이행 평가 1
실시예 17에서 제조한 I2S-항hTfR 항체 3의 정제품을, 1mg/kg의 용량으로, 실시예 7-2에 기재된 방법으로 제작한 hTfR-KI 마우스에 정맥 주사했다(I2S-항hTfR 항체 투여군). 컨트롤로서 재조합 hI2S(rhI2S)를, 1mg/kg의 용량으로 hTfR-KI 마우스에 정맥 주사했다(컨트롤군). I2S-항hTfR 항체 투여군에 대해 15마리, 컨트롤군에 대해서는 3마리의 hTfR-KI 마우스(웅성, 15∼18주령)에게 투여를 행했다. 여기에서 이용한 rhI2S는, 공지의 수법인 국제 특허 공보(WO2012/102998)에 기재된 방법에 준하여 제조했다. 한편, rhI2S로서 의료용 의약품으로서 판매되고 있는 엘라프라제(등록상표)를 이용할 수도 있다.
I2S-항hTfR 항체 투여군에 대해서는, I2S-항hTfR 항체 3 투여 후, 15분 후, 1시간 후, 4시간 후, 8시간 후, 및 24시간 후에, 각각 3마리의 마우스를 생리 식염액으로 전신 관류 처리하고, 뇌(대뇌 및 소뇌)를 채취했다. 컨트롤군에 대해서는, rhI2S 투여 1시간 후에, 생리 식염액으로 전신 관류 처리하고 나서 뇌(대뇌 및 소뇌)를 채취했다. 적출한 대뇌 및 소뇌의 중량(습중량)을 측정한 후, 대뇌 및 소뇌를, Protease Inhibitor Cocktail(시그마사)를 포함하는 T-PER(Thermo Fisher Scientific사)로 호모지네이트하고, 원심 후 상청을 회수했다. I2S-항hTfR 항체 투여군에 대해서는, 호모지네이트 상청 중에 포함되는 I2S-항hTfR 항체의 양을, 컨트롤군에 대해서는, 호모지네이트 상청 중에 포함되는 rhI2S의 양을 각각 실시예 20 및 실시예 21에 기재된 ECL법에 의해 측정하여, 뇌의 그램중량(g습중량)당에 포함되는, I2S-항hTfR 항체의 양(뇌조직 중의 I2S-항hTfR 항체의 농도) 및 rhI2S의 양(뇌조직 중의 rhI2S의 농도)을 산출했다. 그 결과를 표 12에 나타낸다.
투여 1시간 후의 뇌조직 중의 I2S-항hTfR 항체와 rhI2S의 농도는, 각각 0.368±0.019μg/g습중량 및 0.00134±0.00232μg/g습중량이며, I2S-항hTfR 항체의 농도는 rhI2S의 농도의 약 270배에 이르렀다. 이 결과는, 통상은 혈액뇌관문을 거의 통과하지 않아 뇌조직 중으로 이행할리가 없는 rhI2S를, 항hTfR 항체와 결합시키는 것에 의해, 혈액뇌관문을 통과시켜 뇌조직 중으로 이행시킬 수 있음을 나타내는 것이다. 또한, I2S-항hTfR 항체의 뇌조직 중의 농도는, 투여 후 불과 15분에 0.263±0.038μg/g습중량으로 투여 1시간 후의 rhI2S의 뇌조직 중의 농도의 약 200배에 이르렀다. 이 결과는, 항hTfR 항체와 결합시키는 것에 의해, hI2S를 신속하게 뇌조직 중으로 이행시킬 수 있음을 나타내는 것이다.
Figure pct00013
〔실시예 19〕 I2S-항hTfR 항체의 뇌이행 평가 2
실시예 17에서 제조한 I2S-항hTfR 항체 3의 정제품을 5mg/kg의 용량으로 웅성 필리핀원숭이에게 단회 정맥내 투여했다(I2S-항hTfR 항체 투여군). 마찬가지로 하여, rhI2S를 5mg/kg의 용량으로 웅성 필리핀원숭이에게 단회 정맥내 투여했다(rhI2S군). 여기에서 이용한 rhI2S는, 공지의 수법인 국제 특허 공보(WO2012/102998)에 기재된 방법에 준하여 제조했다. 한편, rhI2S로서, 의료용 의약품으로서 판매되고 있는 엘라프라제(등록상표)를 이용할 수도 있다. 각 군 모두 2마리의 원숭이에 투여를 행했다. 투여 8시간 후에 각 군 모두 전신 관류를 실시했다. 관류 후, 경수(頸髓)를 포함하는 뇌조직을 적출했다. 적출한 뇌조직을, 대뇌피질, 소뇌, 해마, 및 경수로 나누고 나서, 각 뇌조직을 Protease Inhibitor Cocktail(시그마사)를 포함하는 T-PER (Thermo Fisher Scientific사)로 호모지네이트하고, 원심 후 상청을 회수했다. I2S-항hTfR 항체 투여군에 대해서는, 호모지네이트 상청 중에 포함되는 I2S-항hTfR 항체의 양을, 컨트롤군에 대해서는, 호모지네이트 상청 중에 포함되는 rhI2S의 양을 각각 실시예 20 및 21에 기재된 ECL법에 의해 측정했다. 측정치로부터, 대뇌피질, 소뇌, 해마, 및 경 골수의 그램중량(g습중량)당에 포함되는, I2S-항hTfR 항체의 양(이들 뇌조직 중의 I2S-항hTfR 항체의 농도) 및 rhI2S의 양(이들 뇌조직 중의 rhI2S의 농도)을 산출했다. 그 결과를 도 9에 나타낸다.
대뇌피질에 있어서의 I2S-항hTfR 항체의 농도는 약 0.22μg/g인데 대해, rhI2S에서는 0.035μg/g이었다. 소뇌에 있어서의 I2S-항hTfR 항체의 농도는 약 0.18μg/g인데 대해, rhI2S에서는 0.02μg/g이었다. 해마에 있어서의 I2S-항hTfR 항체의 농도는 약 0.25μg/g인데 대해, rhI2S에서는 0.017μg/g이었다. 또한, 경수에 있어서의 I2S-항hTfR 항체의 농도는 약 0.15μg/g인데 대해, rhI2S에서는 0.039μg/g이었다. 즉, 대뇌피질, 소뇌, 해마, 및 경수에 있어서, I2S-항hTfR 항체의 농도는, rhI2S의 농도의, 각각, 약 6.3배, 약 9.0배, 약 14.7배, 및 약 3.8배의 값을 나타냈다. 이들 결과는, hI2S를 항hTfR 항체와 결합시키는 것에 의해, 적극적으로 혈액뇌관문을 통과시켜 효율 좋게 뇌내로 hI2S를 도달시킬 수 있음을 나타내는 것이다. 특히, 해마에 있어서의 I2S-항hTfR 항체의 농도가 rhI2S와 비교하여 약 12.5배에 이르는 것은, I2S-항hTfR 항체를 투여하는 것에 의해, 특히 해마에 있어서 I2S 활성을 발휘시킬 수 있음을 나타내는 것이다. 헌터 증후군의 환자의 뇌장애는, 통상의 rhI2S를 이용한 효소 보충 요법에서는, rhI2S가 거의 혈액뇌관문을 통과할 수 없으므로 개선되지 않는다. 한편, I2S-항hTfR 항체는 혈액뇌관문을 통과하므로, I2S-항hTfR 항체를 투여하는 것에 의해 대뇌피질, 해마, 소뇌 등의 뇌조직 중에 I2S 활성을 보충할 수 있다. 따라서, I2S-항hTfR 항체(특히, I2S-항hTfR 항체 3)는, 헌터 증후군의 환자의 뇌내에 I2S 활성을 보충하기 위한 치료약으로서 사용할 수 있다. 따라서, I2S-항hTfR 항체(특히, I2S-항hTfR 항체 3)를 투여하는 것에 의해, 통상의 rhI2S를 이용한 효소 보충 요법에서는 곤란한, 헌터 증후군의 환자의 뇌장애의 예방 및 치료가 가능하다. 특히, 해마에 장애를 가지는 헌터 증후군의 환자에 대한 치료약으로서 유망하다.
〔실시예 20〕 ECL법에 따르는 I2S-항hTfR 항체의 정량
스트렙트아비딘으로 코팅된 플레이트인 Streptavidin Gold Plate 96 well(Meso Scale Diagnostics사)의 각 웰에, 150μL의 SuperBlock blocking buffer in PBS(Thermo Fisher Scientific사)를 첨가하고 1시간 정치하여, 플레이트를 블로킹했다. 비오틴 표지 항체인 Anti-Human Kappa Light Chain Goat IgG Biotin(Monkey Absorbed)(IBL사)을, SuperBlock blocking buffer in PBS에 의해 0.5μg/mL의 농도로 희석했다. SULFO 표지 항인간 I2S 항체를 SuperBlock blocking buffer in PBS에 의해 1.0μg/mL의 농도로 희석했다. 비오틴 표지 항체 및 SULFO 표지 항체의 희석 용액을 각 25μL와, 25μL의 각 검체를 혼합하고, 1시간 인큐베이트하고, 이것을 항체 반응 시료로 했다.
블로킹 후의 플레이트의 각 웰을, 200μL의 PBS-T(시그마사)로 세정한 후, 각 웰에 항체 반응 시료를 25μL씩 첨가하고, 1시간 인큐베이트했다. 인큐베이트 후, 플레이트의 각 웰을 200μL의 PBS-T로 세정하고, 그 다음에, Read buffer T(Meso scale Diagnostics사)를 첨가하고, SectorTM Imager 6000(Meso scale Diagnostics사)을 이용하여 각 웰로부터의 발광량을 측정했다. 농도 기지의 I2S-항hTfR 항체의 표준 시료의 측정치로부터 검량선을 작성하고, 이것에 각 시료의 측정치를 내삽하는 것에 의해 I2S-항hTfR 항체를 정량 했다.
한편, 여기에서 이용한 항인간 I2S 항체는, 공지의 수법인 국제 특허 공보(WO2012/102998)에 기재된 방법에 준하여 제조한 rhI2S를 항원으로 하여 마우스를 면역하여 얻은 모노클로날 항체이다. 모노클로날 항체는 복수의 것을 얻었다. SULFO 표지 항인간 I2S 항체로서, 항인간 I2S 항체를, MSD SULFO-TAG NHS-Ester(Meso scale Diagnostics사)를 이용하여, 첨부의 조작 매뉴얼에 따라 SULFO 표지하여 제작한 것을 사용했다.
〔실시예 21〕 ECL법에 따르는 hI2S의 정량
스트렙트아비딘으로 코팅된 플레이트인 Streptavidin Gold Plate 96 well(Meso scale Diagnostics사)의 각 웰에, 150μL의 SuperBlock blocking buffer in PBS(Thermo Fisher Scientific사)를 첨가하고 1시간 정치하여, 플레이트를 블로킹했다. 비오틴 표지 항인간 I2S 항체를, SuperBlock blocking buffer in PBS에 의해 0.5μg/mL의 농도로 희석했다. SULFO 표지 항인간 I2S 항체를 SuperBlock blocking buffer in PBS에 의해 1.0μg/mL의 농도로 희석했다. 비오틴 표지 항체 및 SULFO 표지 항체의 희석 용액을 각 25μL와, 25μL의 검체를 혼합하고, 1시간 인큐베이트하여, 이것을 항체 반응 시료로 했다.
블로킹 후의 플레이트의 각 웰을, 200μL의 PBS-T(시그마사)로 세정한 후, 각 웰에 항체 반응 시료를 25μL씩 첨가하고, 1시간 인큐베이트했다. 인큐베이트 후, 플레이트의 각 웰을 200μL의 PBS-T로 세정하고, 그 다음에, Read buffer T(Meso scale Diagnostics사)를 첨가하고, SectorTM Imager 6000(Meso scale Diagnostics사)을 이용하여 각 웰로부터의 발광량을 측정했다. 농도 기지의 hI2S의 표준 시료의 측정치로부터 검량선을 작성하고, 이것에 각 시료의 측정치를 내삽하는 것에 의해 rhI2S를 정량했다.
한편, 여기에서 이용한 항인간 I2S 항체는, 공지의 수법인 국제 특허공보(WO2012/102998)에 기재된 방법에 준하여 제조한 rhI2S를 항원으로 하여 마우스를 면역하여 얻은 모노클로날 항체이다. SULFO 표지 항인간 I2S 항체로서, 항인간 I2S 항체를, MSD SULFO-TAG NHS-Ester(Meso scale Diagnostics사)를 이용하여, 첨부의 조작 매뉴얼에 따라 SULFO 표지하여 제작한 것을 사용했다. 또한, 비오틴 표지 항인간 I2S 항체로서, SULFO 표지에 이용한 것과는 별도의 항인간 I2S 항체를, Biotin Labelling Kit-NH2(도진화학연구소)를 이용하여, 첨부의 조작 매뉴얼에 따라 비오틴 표지하여 제작한 것을 사용했다.
〔실시예 22〕 I2S-항hTfR 항체의 약효 평가
hI2S 활성을 유전적으로 결실하고 있는 헌터 증후군의 환자의 장기에 축적되는 것이 알려져 있는 글리코사미노글리칸(GAG)의 농도를 측정하는 것에 의해, I2S-항hTfR 항체의 약효를 평가했다. 실시예 17에서 제조한 I2S-항hTfR 항체 3의 정제품을, 0.5mg/kg, 1.0mg/kg, 및 2.0mg/kg의 용량으로 I2S-KO/hTfR-KI 마우스에 정맥 주사했다(0.5mg/kg 투여군, 1.0mg/kg 투여군, 및 2.0mg/kg 투여군). 투여는 주 1회의 빈도로 4주간 행하고, 초회의 투여로부터 4주째에 마우스를 마취하 방혈에 의해 안락사시키고, 뇌, 간장, 폐 및 심장을 적출했다. 적출한 각 장기를 동결 건조기(EYELA사)로 동결 건조하고 파쇄 후, 건조 중량을 측정했다. 각 장기의 건조품에, 건조 중량 100mg에 대해 1mL의 0.5M Tris 완충액(pH 7.5)을 첨가하고 약 100℃에서 10분간 가열했다. 그 다음에, 50mg/mL의 악티나제 E 용액(가켄제약사)을 건조 중량 50mg에 대해 1mg의 악티나제 E 첨가량이 되도록 첨가하고, 약 60℃에서 16시간 인큐베이트하여 단백질을 분해시킨 후, 약 100℃에서 10분 가열했다. 15,000rpm으로 10분 원심분리를 실시하고, 상청을 회수했다. 상청 중에 포함되는 GAG의 양을 WieslabTM sGAG quantitative kit(EURO-DIAGNOSTICA사)를 이용하여 측정하여, 각 장기의 그램중량(g건조 중량)당에 포함되는, GAG의 양을 산출했다. 한편, 컨트롤군으로서, I2S-항hTfR 항체를 비투여한 I2S-KO/hTfR-KI 마우스를 두었다. 또한 동시에, 야생형 마우스의 각 장기에 있어서의 GAG의 농도를 측정했다. 또한, 이 실험은, 각 측정군에 대해 I2S-KO/hTfR-KI 마우스(암수, 19-25주령)를 3마리씩 이용하여 행했다. 또한, 야생형 마우스에 대해서는, 암수, 19-25주령의 것 3마리를 이용했다.
그 결과를 도 10에 나타낸다. 뇌, 간장, 폐 및 심장 모두, 투여한 I2S-항hTfR 항체의 용량 의존적으로, GAG의 농도가 유의하게 저하되는 것이 관찰되었다(도 10a∼d).
뇌에 대해 보면, 컨트롤군에서는 뇌조직 중의 GAG의 농도는 약 2.66μg/g이었지만, 뇌조직 중의 GAG의 농도는, 0.5mg/kg, 1.0mg/kg, 및 2.0mg/kg 투여군에서, 각각 약 2.23μg/g, 약 2.15μg/g, 약 2.10μg/g으로 용량 의존적으로 저하되었다(도 10a). I2S-KO/hTfR-KI 마우스의 뇌조직 내에 있어서의 이상한 GAG량은, 컨트롤군의 뇌조직 중의 GAG의 농도(약 2.66μg/g)로부터 야생형 마우스의 뇌조직 중의 GAG의 농도(약 1.76μg/g)를 뺀 약 0.90μg/g으로 할 수 있다. 따라서, I2S-항hTfR 항체를 0.5mg/kg, 1.0mg/kg, 및 2.0mg/kg의 용량으로 투여하는 것에 의해, I2S-KO/hTfR-KI 마우스의 뇌조직 중에서 이상하게 축적한 GAG의 각각 약 48%, 약 57%, 및 약 62%가, I2S-항hTfR 항체에 의해 분해되었다고 할 수 있다. 이 결과는, 헌터 증후군의 환자에게 I2S-항hTfR 항체를 투여하는 것에 의해, 환자의 뇌조직 중에 이상하게 축적한 GAG를 분해, 제거할 수 있음을 나타내는 것이고, I2S-항hTfR 항체(특히, I2S-항hTfR 항체 3)가, GAG 혹은 그 단편의 축적 등을 원인으로 하는 헌터 증후군의 환자로 보여지는 뇌의 병변을 예방 및 치료하는 효과를 발휘할 수 있음을 나타내는 것이다.
간장에 대해 보면, 컨트롤군에서는 간장 조직 중의 GAG의 농도는 약 10.3μg/g이었지만, 간장 조직 중의 GAG의 농도는, 0.5mg/kg, 1.0mg/kg, 및 2.0mg/kg 투여군으로, 각각 약 2.2μg/g, 약 2.0μg/g, 약 1.9μg/g으로 용량 의존적으로 저하되었다(도 10b). I2S-KO/hTfR-KI 마우스의 간장 조직 내에 있어서의 이상한 GAG량은, 컨트롤군의 간장 조직 중의 GAG의 농도(약 10.3μg/g)로부터 야생형 마우스의 간장 조직 중의 GAG의 농도(약 0.3μg/g)를 뺀 약 10μg/g으로 할 수 있다. 따라서, I2S-항hTfR 항체를 0.5∼2.0mg/kg의 용량으로 투여하는 것에 의해, I2S-KO/hTfR-KI 마우스의 간장 조직 중에서 이상하게 축적한 GAG의 80% 이상이, I2S-항hTfR 항체에 의해 분해되었다고 할 수 있다.
폐에 대해 보면, 컨트롤군에서는 폐조직 중의 GAG의 농도는 약 10.5μg/g이었지만, 폐조직 중의 GAG의 농도는, 0.5mg/kg, 1.0mg/kg, 및 2.0mg/kg 투여군에서, 각각 약 7.8μg/g, 약 6.7μg/g, 약 5.7μg/g으로 용량 의존적으로 저하되었다(도 10c). I2S-KO/hTfR-KI 마우스의 폐조직 내에 있어서의 이상한 GAG량은, 컨트롤군의 폐조직 중의 GAG의 농도(약 10.5μg/g)로부터 야생형 마우스의 폐조직 중의 GAG의 농도(약 1.5μg/g)를 뺀 약 9.0μg/g으로 할 수 있다. 따라서, I2S-항hTfR 항체를 0.5mg/kg, 1.0mg/kg, 및 2.0mg/kg의 용량으로 투여하는 것에 의해, I2S-KO/hTfR-KI 마우스의 폐조직 중에서 이상하게 축적한 GAG의 각각 약 30%, 약 42%, 및 약 53%가, I2S-항hTfR 항체에 의해 분해되었다고 할 수 있다.
심장에 대해 보면, 컨트롤군에서는 심장 조직 중의 GAG의 농도는 약 4.6μg/g이었지만, 심장 조직 중의 GAG의 농도는, 0.5mg/kg, 1.0mg/kg, 및 2.0mg/kg 투여군에서, 각각 약 2.2μg/g, 약 2.0μg/g, 약 1.5μg/g으로 용량 의존적으로 저하되었다(도 10d). I2S-KO/hTfR-KI 마우스의 심장 조직 중에 있어서의 이상한 GAG량은, 컨트롤군의 심장 조직 중의 GAG의 농도(약 4.6μg/g)로부터 야생형 마우스의 심장 조직 중의 GAG의 농도(약 0.8μg/g)를 뺀 약 3.8μg/g으로 할 수 있다. 따라서, I2S-항hTfR 항체를 0.5mg/kg, 1.0mg/kg, 및 2.0mg/kg의 용량으로 투여하는 것에 의해, I2S-KO/hTfR-KI 마우스의 심장 조직 중에서 이상하게 축적한 GAG의 각각 약 63%, 약 70%, 및 약 81%가, I2S-항hTfR 항체에 의해 분해되었다고 할 수 있다.
상기의 간장, 폐 및 심장에 대한 결과는, I2S-항hTfR 항체가 뇌조직 내의 GAG에 더하여, 그 외의 장기·기관에 축적된 GAG도 분해한다는 것을 나타내는 것이다. 즉, I2S-항hTfR 항체(특히, I2S-항hTfR 항체 3)를 헌터증 환자에 대한 효소 보충 요법의 약제로서 투여했을 때에, 환자의 뇌를 포함하는 전신의 장기·기관에 효소를 보충할 수 있음을 나타내는 것이다. I2S-항hTfR 항체는, 정맥내 투여에 의해, 뇌를 포함하는 전신의 장기·기관에 효소를 보충할 수 있음을 나타내는 것이다.
〔실시예 23〕 GAG의 측정법
GAG의 측정은, WieslabTM sGAG quantitative kit(EURO-DIAGNOSTICA사)를 이용하여, 첨부의 조작 매뉴얼에 따라, 대체로 이하의 방법으로 실시했다. 검체, 또는 표준액(블랭크는 물)을 각 50μL씩 1.5mL 튜브에 채취했다. GuHCl 용액을 50μL씩 각 튜브에 가하고 실온에서 15분간 반응시켰다. SAT 용액을 50μL씩 각 튜브에 가하고 실온에서 15분간 반응시켰다. 물:SAT 용액:Alcian Blue stock solution=9:5:1의 혼합액을 조제하고, 조제한 혼합액을 각 튜브에 750μL씩 가하고 실온에서 15분간 반응시켰다. 이 반응액을 12500g로 15분 원심하고, 상청을 제거했다. DMSO를 각 튜브에 500μL씩 가하고 실온에서 15분간, 진탕하여 혼화시킨 후에, 12500g로 15분 원심분리하고 상청을 제거했다. Gu-Prop 용액을 각 튜브에 500μL씩 가하고 실온에서 15분간, 진탕하여 혼화했다. 이 혼화 후의 용액을, 96웰 플레이트의 각 웰에 200μL씩 분주하고, 플레이트 리더로 각 웰의 600nm에 있어서의 흡광도를 측정했다. 기지 농도의 GAG 용액의 측정치로부터 검량선을 작성하고, 이것에 각 시료의 측정치를 내삽하여 GAG 농도를 정량했다.
〔실시예 24〕 인간화 항hTfR 항체와 각종 생리 활성 펩타이드의 융합 단백질의 제조
이상의 실시예 22까지의 실험에 의해, 인간화 항hTfR 항체와 결합시킨 인간 I2S가 혈액뇌관문을 통과하여 뇌조직 중에 도달하여, I2S 활성을 뇌내에서 발휘한다는 것이 나타났다. 그래서, 인간화 항hTfR 항체와 각종 생리 활성 펩타이드의 융합 단백질을 제작하여, 이들 융합 단백질이 BBB를 통과하여 뇌조직 내에 도달하는지 여부를 검토했다. 여기에서, 생리 활성 펩타이드로서는, 인간 에리트로포이에틴, 인간 아릴설파타제 A, 인간 PPT-1, 인간 TPP-1, 인간 α-L-이두로니다제, 인간 TNFα 수용체, 및 인간 N-sulphoglucosamine sulphohydrolase(헤파란 N-설파타제)를 인간화 항hTfR 항체와 결합시키는 생리 활성 펩타이드로서 선택했다. 인간화 항hTfR 항체와 각각의 생리 활성 펩타이드의 융합 단백질을 발현시키기 위한 발현 벡터, 및 이들 융합 단백질은, 이하의 실시예 25∼31에 기재된 방법으로 조제했다.
〔실시예 25〕 인간화 항hTfR 항체와 인간 에리트로포이에틴의 융합 단백질의 제조법
서열 번호 210으로 나타나는 아미노산 서열을 가지는 인간화 항hTfR 항체의 중쇄의 C말단측에 링커 서열 Gly-Ser을 개재하여, 서열 번호 256으로 나타나는 아미노산 서열을 가지는 인간 에리트로포이에틴(hEPO)을 결합시킨 단백질을 코딩하는 cDNA를 포함하는, 서열 번호 258로 나타나는 염기 서열을 가지는 DNA 단편을 인공적으로 합성했다. 이 DNA 단편은, 서열 번호 257로 나타나는 아미노산 서열을 가지는 인간화 항hTfR 항체의 중쇄의 C말단측에 링커 서열 Gly-Ser을 개재하여 hEPO가 결합한 단백질을 코딩한다. 또한, 이 DNA 단편은, 5'측에는, 5'단으로부터 순차로 MluI 서열과, 분비 시그널로서 기능하는 리더 펩타이드를 코딩하는 서열을 가지고, 3'측에는 NotI 서열을 가진다. 이 DNA 단편을 MluI와 NotI로 소화하고, pE-neo 벡터의 MluI와 NotI 사이에 짜넣어, pE-neo(HC-hEPO)를 구축했다.
CHO 세포를, 실시예 12에 기재된 방법에 의해, pE-neo(HC-hEPO) 및 실시예 11에서 구축한 pE-hygr(LC3)로 형질 전환하여, hEPO와 인간화 항hTfR 항체의 융합 단백질을 발현하는 세포주를 얻었다. 이 세포주를, hEPO-항hTfR 항체 발현주로 했다. 이 세포주가 발현하는 hEPO와 인간화 항hTfR 항체의 융합 단백질을 EPO-항hTfR 항체로 했다.
hEPO-항hTfR 항체 발현주를, 세포 농도가 약 2X105개/mL가 되도록, CD OptiCHOTM 배지로 희석하고, 1L의 삼각 플라스크에 200mL의 세포 현탁액을 가하고, 37℃에서, 5% CO2와 95% 공기로 이루어지는 습윤 환경에서 약 70rpm의 교반 속도로 6∼7일간 배양했다. 배양액을 원심 조작에 의해 회수하고, 0.22μm 필터(Millipore사)로 여과하여, 배양 상청으로 했다. 회수한 배양 상청에, 컬럼 체적의 5배용의 150mL NaCl을 포함하는 20mM Tris 완충액(pH 8.0)을 첨가하고, 컬럼 체적의 3배용의 150mM NaCl을 포함하는 20mM Tris 완충액(pH 8.0)으로 미리 평형화해 둔 Protein A 컬럼(컬럼 체적 1mL: Bio-Rad사)에 부하했다. 그 다음에, 컬럼 체적의 5배용의 동 완충액을 공급하여 컬럼을 세정한 후, 150mM NaCl을 포함하는 컬럼 체적의 4배용의 50mM 글리신 완충액(pH 2.8)으로, 흡착한 EPO-항hTfR을 용출시켰다. 이 EPO-항hTfR 항체를 포함하는 용출액의 pH를, 1M Tris 완충액(pH 8.0)을 첨가하여 pH 7.0으로 조정하고, 그 다음에, 아미콘 울트라 30kDa막(Millipore사)을 이용하여 PBS로 버퍼 교환했다. 이것을 EPO-항hTfR 항체의 정제품으로 했다.
〔실시예 26〕 인간화 항hTfR 항체와 인간 아릴설파타제 A의 융합 단백질의 제조법
서열 번호 210으로 나타나는 아미노산 서열을 가지는 인간화 항hTfR 항체의 중쇄의 C말단측에 링커 서열 Gly-Ser을 개재하여, 서열 번호 259로 나타나는 아미노산 서열을 가지는 인간 아릴설파타제 A(hARSA)를 결합시킨 단백질을 코딩하는 cDNA를 포함하는, 서열 번호 261로 나타나는 염기 서열을 가지는 DNA 단편을 인공적으로 합성했다. 이 DNA 단편은, 서열 번호 260으로 나타나는 아미노산 서열을 가지는 인간화 항hTfR 항체의 중쇄의 C말단측에 링커 서열 Gly-Ser을 개재하여 hARSA가 결합한 단백질을 코딩한다. 또한, 이 DNA 단편은, 5'측에는, 5'단으로부터 순차로 MluI 서열과, 분비 시그널로서 기능하는 리더 펩타이드를 코딩하는 서열을 가지고, 3'측에는 NotI 서열을 가진다. 이 DNA 단편을 MluI와 NotI로 소화하고, pE-neo 벡터의 MluI와 NotI 사이에 짜넣어, pE-neo(HC-hARSA)를 구축했다.
CHO 세포를, 실시예 12에 기재된 방법에 의해, pE-neo(HC-hARSA) 및 실시예 11에서 구축한 pE-hygr(LC3)로 형질 전환하여, hARSA와 인간화 항hTfR 항체의 융합 단백질을 발현하는 세포주를 얻었다. 이 세포주를, hARSA-항hTfR 항체 발현주로 했다. 이 세포주가 발현하는 hARSA와 인간화 항hTfR 항체의 융합 단백질을 ARSA-항hTfR 항체로 했다.
hARSA-항hTfR 항체 발현주를, 세포 농도가 약 2X105개/mL가 되도록, CD OptiCHOTM 배지로 희석하고, 1L의 삼각 플라스크에 200mL의 세포 현탁액을 가하고, 37℃에서, 5% CO2와 95% 공기로 이루어지는 습윤 환경에서 약 70rpm의 교반 속도로 6∼7일간 배양했다. 배양액을 원심 조작에 의해 회수하고, 0.22μm 필터(Millipore사)로 여과하여, 배양 상청으로 했다. 회수한 배양 상청에, 컬럼 체적의 5배용의 150mL NaCl을 포함하는 20mM Tris 완충액(pH 8.0)을 첨가하고, 컬럼 체적의 3배용의 150mM NaCl을 포함하는 20mM Tris 완충액(pH 8.0)으로 미리 평형화해 둔 Protein A 컬럼(컬럼 체적 1mL: Bio-Rad사)에 부하했다. 그 다음에, 컬럼 체적의 5배용의 동 완충액을 공급하여 컬럼을 세정한 후, 150mM NaCl을 포함하는 컬럼 체적의 4배용의 50mM 글리신 완충액(pH 2.8)으로, 흡착한 ARSA-항hTfR을 용출시켰다. 이 ARSA-항hTfR 항체를 포함하는 용출액의 pH를, 1M Tris 완충액(pH 8.0)을 첨가하여 pH 7.0으로 조정하고, 그 다음에, 아미콘 울트라 30kDa막(Millipore사)을 이용하여 PBS로 버퍼 교환했다. 이것을 ARSA-항hTfR 항체의 정제품으로 했다.
〔실시예 27〕 인간화 항hTfR 항체와 인간 PPT-1의 융합 단백질의 제조법
서열 번호 210으로 나타나는 아미노산 서열을 가지는 인간화 항hTfR 항체의 중쇄의 C말단측에 링커 서열 Gly-Ser을 개재하여, 서열 번호 262로 나타나는 아미노산 서열을 가지는 인간 PPT-1(hPPT-1)을 결합시킨 단백질을 코딩하는 cDNA를 포함하는, 서열 번호 264로 나타나는 염기 서열을 가지는 DNA 단편을 인공적으로 합성했다. 이 DNA 단편은, 서열 번호 263으로 나타나는 아미노산 서열을 가지는 인간화 항hTfR 항체의 중쇄의 C말단측에 링커 서열 Gly-Ser을 개재하여 hPPT-1이 결합한 단백질을 코딩한다. 또한, 이 DNA 단편은, 5'측에는, 5'단으로부터 순차로 MluI 서열과, 분비 시그널로서 기능하는 리더 펩타이드를 코딩하는 서열을 가지고, 3'측에는 NotI 서열을 가진다. 이 DNA 단편을 MluI와 NotI로 소화하고, pE-neo 벡터의 MluI와 NotI 사이에 짜넣어, pE-neo(HC-hPPT-1)를 구축했다.
CHO 세포를, 실시예 12에 기재된 방법에 의해, pE-neo(HC-hPPT-1) 및 실시예 11에서 구축한 pE-hygr(LC3)로 형질 전환하여, hPPT-1 인간화 항hTfR 항체의 융합 단백질을 발현하는 세포주를 얻었다. 이 세포주를, hPPT-1-항hTfR 항체 발현주로 했다. 이 세포주가 발현하는 hPPT-1과 인간화 항hTfR 항체의 융합 단백질을 PPT-1-항hTfR 항체로 했다.
hPPT-1-항hTfR 항체 발현주를, 세포 농도가 약 2X105개/mL가 되도록, CD OptiCHOTM 배지로 희석하고, 1L의 삼각 플라스크에 200mL의 세포 현탁액을 가하고, 37℃에서, 5% CO2와 95% 공기로 이루어지는 습윤 환경에서 약 70rpm의 교반 속도로 6∼7일간 배양했다. 배양 상청을 원심 조작에 의해 회수하고, 0.22μm 필터(Millipore사)로 여과하여, 배양 상청으로 했다. 회수한 배양 상청에, 컬럼 체적의 5배용의 150mL NaCl을 포함하는 20mM Tris 완충액(pH 8.0)을 첨가하고, 컬럼 체적의 3배용의 150mM NaCl을 포함하는 20mM Tris 완충액(pH 8.0)으로 미리 평형화해 둔 Protein A 컬럼(컬럼 체적 1mL: Bio-Rad사)에 부하했다. 그 다음에, 컬럼 체적의 5배용의 동 완충액을 공급하여 컬럼을 세정한 후, 150mM NaCl을 포함하는 컬럼 체적의 4배용의 50mM 글리신 완충액(pH 2.8)으로, 흡착한 PPT-1-항hTfR을 용출시켰다. 이 PPT-1-항hTfR 항체를 포함하는 용출액의 pH를, 1M Tris 완충액(pH 8.0)을 첨가하여 pH 7.0으로 조정하고, 그 다음에, 아미콘 울트라 30kDa막(Millipore사)을 이용하여 PBS로 버퍼 교환했다. 이것을 PPT-1-항hTfR 항체의 정제품으로 했다.
〔실시예 28〕 인간화 항hTfR 항체와 인간 TPP-1의 융합 단백질의 제조법
서열 번호 210으로 나타나는 아미노산 서열을 가지는 인간화 항hTfR 항체의 중쇄의 C말단측에 링커 서열 Gly-Ser을 개재하여, 서열 번호 265로 나타나는 아미노산 서열을 가지는 인간 TPP-1(hTPP-1)을 결합시킨 단백질을 코딩하는 cDNA를 포함하는, 서열 번호 267로 나타나는 염기 서열을 가지는 DNA 단편을 인공적으로 합성했다. 이 DNA 단편은, 서열 번호 266으로 나타나는 아미노산 서열을 가지는 인간화 항hTfR 항체의 중쇄의 C말단측에 링커 서열 Gly-Ser을 개재하여 hTPP-1이 결합한 융합 단백질을 코딩한다. 또한, 이 DNA 단편은, 5'측에는, 5'단으로부터 순차로 MluI 서열과, 분비 시그널로서 기능하는 리더 펩타이드를 코딩하는 서열을 가지고, 3'측에는 NotI 서열을 가진다. 이 DNA 단편을 MluI와 NotI로 소화하고, pE-neo 벡터의 MluI와 NotI 사이에 짜넣어, pE-neo(HC-hTPP-1)를 구축했다.
CHO 세포를, 실시예 12에 기재된 방법에 의해, pE-neo(HC-hTPP-1) 및 실시예 11에서 구축한 pE-hygr(LC3)로 형질 전환하여, hTPP-1로 인간화 항hTfR 항체의 융합 단백질을 발현하는 세포주를 얻었다. 이 세포주를, hTPP-1-항hTfR 항체 발현주로 했다. 이 세포주가 발현하는 hTPP-1과 인간화 항hTfR 항체의 융합 단백질을 TPP-1-항hTfR 항체로 했다.
hTPP-1-항hTfR 항체 발현주를, 세포 농도가 약 2X105개/mL가 되도록, CD OptiCHOTM 배지로 희석하고, 1L의 삼각 플라스크에 200mL의 세포 현탁액을 가하고, 37℃에서, 5% CO2와 95% 공기로 이루어지는 습윤 환경에서 약 70rpm의 교반 속도로 6∼7일간 배양했다. 배양액을 원심 조작에 의해 회수하고, 0.22μm 필터(Millipore사)로 여과하여, 배양 상청으로 했다. 회수한 배양 상청에, 컬럼 체적의 5배용의 150mL NaCl을 포함하는 20mM Tris 완충액(pH 8.0)을 첨가하고, 컬럼 체적의 3배용의 150mM NaCl을 포함하는 20mM Tris 완충액(pH 8.0)으로 미리 평형화해 둔 Protein A 컬럼(컬럼 체적 1mL: Bio-Rad사)에 부하했다. 그 다음에, 컬럼 체적의 5배용의 동 완충액을 공급하여 컬럼을 세정한 후, 150mM NaCl을 포함하는 컬럼 체적의 4배용의 50mM 글리신 완충액(pH 2.8)으로, 흡착한 TPP-1-항hTfR을 용출시켰다. 이 TPP-1-항hTfR 항체를 포함하는 용출액의 pH를, 1M Tris 완충액(pH 8.0)을 첨가하여 pH 7.0으로 조정하고, 그 다음에, 아미콘 울트라 30kDa막(Millipore사)을 이용하여 PBS로 버퍼 교환했다. 이것을 TPP-1-항hTfR 항체의 정제품으로 했다.
〔실시예 29〕 인간화 항hTfR 항체와 인간 α-L-이두로니다제의 융합 단백질의 제조법
서열 번호 210으로 나타나는 아미노산 서열을 가지는 인간화 항hTfR 항체의 중쇄의 C말단측에 링커 서열 Gly-Ser을 개재하여, 서열 번호 268로 나타나는 아미노산 서열을 가지는 인간 α-L-이두로니다제(hIDUA)를 결합시킨 단백질을 코딩하는 cDNA를 포함하는, 서열 번호 270으로 나타나는 염기 서열을 가지는 DNA 단편을 인공적으로 합성했다. 이 DNA 단편은, 서열 번호 269로 나타나는 아미노산 서열을 가지는 인간화 항hTfR 항체의 중쇄의 C말단측에 링커 서열 Gly-Ser을 개재하여 hIDUA가 결합한 융합 단백질을 코딩한다. 또한, 이 DNA 단편은, 5'측에는, 5'단으로부터 순차로 MluI 서열과, 분비 시그널로서 기능하는 리더 펩타이드를 코딩하는 서열을 가지고, 3'측에는 NotI 서열을 가진다. 이 DNA 단편을 MluI와 NotI로 소화하고, pE-neo 벡터의 MluI와 NotI 사이에 짜넣어, pE-neo(HC-hIDUA)를 구축했다.
CHO 세포를, 실시예 12에 기재된 방법에 의해, pE-neo(HC-hIDUA) 및 실시예 11에서 구축한 pE-hygr(LC3)로 형질 전환하여, hIDUA와 인간화 항hTfR 항체의 융합 단백질을 발현하는 세포주를 얻었다. 이 세포주를, hIDUA-항hTfR 항체 발현주로 했다. 이 세포주가 발현하는 hIDUA와 인간화 항hTfR 항체의 융합 단백질을 IDUA-항hTfR 항체로 했다.
hIDUA-항hTfR 항체 발현주를, 세포 농도가 약 2X105개/mL가 되도록, CD OptiCHOTM 배지로 희석하고, 1L의 삼각 플라스크에 200mL의 세포 현탁액을 가하고, 37℃에서, 5% CO2와 95% 공기로 이루어지는 습윤 환경에서 약 70rpm의 교반 속도로 6∼7일간 배양했다. 배양액을 원심 조작에 의해 회수하고, 0.22μm 필터(Millipore사)로 여과하여, 배양 상청으로 했다. 회수한 배양 상청에, 컬럼 체적의 5배용의 150mL NaCl을 포함하는 20mM Tris 완충액(pH 8.0)을 첨가하고, 컬럼 체적의 3배용의 150mM NaCl을 포함하는 20mM Tris 완충액(pH 8.0)으로 미리 평형화해 둔 Protein A 컬럼(컬럼 체적 1mL: Bio-Rad사)에 부하했다. 그 다음에, 컬럼 체적의 5배용의 동 완충액을 공급하여 컬럼을 세정한 후, 150mM NaCl을 포함하는 컬럼 체적의 4배용의 50mM 글리신 완충액(pH 2.8)으로, 흡착한 IDUA-항hTfR을 용출시켰다. 이 IDUA-항hTfR 항체를 포함하는 용출액의 pH를, 1M Tris 완충액(pH 8.0)을 첨가하여 pH 7.0으로 조정하고, 그 다음에, 아미콘 울트라 30kDa막(Millipore사)을 이용하여 PBS로 버퍼 교환했다. 이것을 IDUA-항hTfR 항체의 정제품으로 했다.
〔실시예 30〕 인간화 항hTfR 항체와 인간 TNFα 수용체의 융합 단백질의 제조법
서열 번호 210으로 나타나는 아미노산 서열을 가지는 인간화 항hTfR 항체의 중쇄의 C말단측에 링커 서열 Gly-Ser을 개재하여, 서열 번호 271로 나타나는 아미노산 서열을 가지는 인간 TNFα 수용체(hTNFαR)를 결합시킨 단백질을 코딩하는 cDNA를 포함하는, 서열 번호 273으로 나타나는 염기 서열을 가지는 DNA 단편을 인공적으로 합성했다. 이 DNA 단편은, 서열 번호 272로 나타나는 아미노산 서열을 가지는 인간화 항hTfR 항체의 중쇄의 C말단측에 링커 서열 Gly-Ser을 개재하여 hTNFαR이 결합한 단백질을 코딩한다. 또한, 이 DNA 단편은, 5'측에는, 5'단으로부터 순차로 MluI 서열과, 분비 시그널로서 기능하는 리더 펩타이드를 코딩하는 서열을 가지고, 3'측에는 NotI 서열을 가진다. 이 DNA 단편을 MluI와 NotI로 소화하고, pE-neo 벡터의 MluI와 NotI 사이에 짜넣어, pE-neo(HC-hTNFαR)를 구축했다.
CHO 세포를, 실시예 12에 기재된 방법에 의해, pE-neo(HC-hTNFαR) 및 실시예 11에서 구축한 pE-hygr(LC3)로 형질 전환하여, hTNFαR과 인간화 항hTfR 항체의 융합 단백질을 발현하는 세포주를 얻었다. 이 세포주를, hTNFαR-항hTfR 항체 발현주로 했다. 이 세포주가 발현하는 hTNFαR과 인간화 항hTfR 항체의 융합 단백질을 TNFαR-항hTfR 항체로 했다.
hTNFαR-항hTfR 항체 발현주를, 세포 농도가 약 2X105개/mL가 되도록, CD OptiCHOTM 배지로 희석하고, 1L의 삼각 플라스크에 200mL의 세포 현탁액을 가하고, 37℃에서, 5% CO2와 95% 공기로 이루어지는 습윤 환경에서 약 70rpm의 교반 속도로 6∼7일간 배양했다. 배양액을 원심 조작에 의해 회수하고, 0.22μm 필터(Millipore사)로 여과하여, 배양 상청으로 했다. 회수한 배양 상청에, 컬럼 체적의 5배용의 150mL NaCl을 포함하는 20mM Tris 완충액(pH 8.0)을 첨가하고, 컬럼 체적의 3배용의 150mM NaCl을 포함하는 20mM Tris 완충액(pH 8.0)으로 미리 평형화해 둔 Protein A 컬럼(컬럼 체적 1mL: Bio-Rad사)에 부하했다. 그 다음에, 컬럼 체적의 5배용의 동 완충액을 공급하여 컬럼을 세정한 후, 150mM NaCl을 포함하는 컬럼 체적의 4배용의 50mM 글리신 완충액(pH 2.8)으로, 흡착한 hTNFαR-항hTfR을 용출시켰다. 이 TNFαR-항hTfR 항체를 포함하는 용출액의 pH를, 1M Tris 완충액(pH 8.0)을 첨가하여 pH 7.0으로 조정하고, 그 다음에, 아미콘 울트라 30kDa막(Millipore사)을 이용하여 PBS로 버퍼 교환했다. 이것을 TNFαR-항hTfR 항체의 정제품으로 했다.
〔실시예 31〕 인간화 항hTfR 항체와 인간 헤파란 N-설파타제의 융합 단백질의 제조법
서열 번호 210으로 나타나는 아미노산 서열을 가지는 인간화 항hTfR 항체의 중쇄의 C말단측에 링커 서열 Gly-Ser을 개재하여, 서열 번호 274로 나타나는 아미노산 서열을 가지는 인간 헤파란 N-설파타제(hSGSH)를 결합시킨 단백질을 코딩하는 cDNA를 포함하는, 서열 번호 276으로 나타나는 염기 서열을 가지는 DNA 단편을 인공적으로 합성했다. 이 DNA 단편은, 서열 번호 275로 나타나는 아미노산 서열을 가지는 인간화 항hTfR 항체의 중쇄의 C말단측에 링커 서열 Gly-Ser을 개재하여 hSGSH가 결합한 융합 단백질을 코딩한다. 또한, 이 DNA 단편은, 5'측에는, 5'단으로부터 순차로 MluI 서열과, 분비 시그널로서 기능하는 리더 펩타이드를 코딩하는 서열을 가지고, 3'측에는 NotI 서열을 가진다. 이 DNA 단편을 MluI와 NotI로 소화하고, pE-neo 벡터의 MluI와 NotI 사이에 짜넣어, pE-neo(HC-hSGSH)를 구축했다.
CHO 세포를, 실시예 12에 기재된 방법에 의해, pE-neo(HC-hSGSH) 및 실시예 11에서 구축한 pE-hygr(LC3)로 형질 전환하여, hSGSH와 인간화 항hTfR 항체의 융합 단백질을 발현하는 세포주를 얻었다. 이 세포주를, hSGSH-항hTfR 항체 발현주로 했다. 이 세포주가 발현하는 hSGSH와 인간화 항hTfR 항체의 융합 단백질을 SGSH-항hTfR 항체로 했다.
hSGSH-항hTfR 항체 발현주를, 세포 농도가 약 2X105개/mL가 되도록, CD OptiCHOTM 배지로 희석하고, 1L의 삼각 플라스크에 200mL의 세포 현탁액을 가하고, 37℃에서, 5% CO2와 95% 공기로 이루어지는 습윤 환경에서 약 70rpm의 교반 속도로 6∼7일간 배양했다. 배양액을 원심 조작에 의해 회수하고, 0.22μm 필터(Millipore사)로 여과하여, 배양 상청으로 했다. 회수한 배양 상청에, 컬럼 체적의 5배용의 150mL NaCl을 포함하는 20mM Tris 완충액(pH 8.0)을 첨가하고, 컬럼 체적의 3배용의 150mM NaCl을 포함하는 20mM Tris 완충액(pH 8.0)으로 미리 평형화해 둔 Protein A 컬럼(컬럼 체적 1mL: Bio-Rad사)에 부하했다. 그 다음에, 컬럼 체적의 5배용의 동 완충액을 공급하여 컬럼을 세정한 후, 150mM NaCl을 포함하는 컬럼 체적의 4배용의 50mM 글리신 완충액(pH 2.8)으로, 흡착한 SGSH-항hTfR을 용출시켰다. 이 SGSH-항hTfR을 포함하는 용출액의 pH를, 1M Tris 완충액(pH 8.0)을 첨가하여 pH 7.0으로 조정하고, 그 다음에, 아미콘 울트라 30kDa막(Millipore사)을 이용하여 PBS로 버퍼 교환했다. 이것을 SGSH-항hTfR 항체의 정제품으로 했다.
〔실시예 32〕 인간화 항hTfR 항체와 각종 생리 활성 펩타이드의 융합 단백질의 뇌이행 평가
실시예 25∼실시예 31에서 얻은, EPO-항hTfR 항체, ARSA-항hTfR 항체, PPT-1-항hTfR 항체, TPP-1-항hTfR 항체, IDUA-항hTfR 항체, TNFαR-항hTfR 항체 및 SGSH-항hTfR 항체의 정제품을, 각각 3mg/kg의 용량으로 hTfR-KI 마우스에 단회 정맥내 투여했다. 또한, 컨트롤로서, 인간 이뮤노글로불린 제제(인간 면역글로불린 글로불린 근주 「베네시스」, 다나베미쓰비시제약주식회사)를 3mg/kg의 용량으로 hTfR-KI 마우스(17-28주령)에 단회 정맥 주사했다. 각각의 융합 단백질 및 컨트롤의 투여에 대해, hTfR-KI 마우스(암수, 17-28주령)를 1마리씩 이용했다.
정맥 주사하고 나서 투여 8시간 후에 생리 식염수로 전신 관류를 실시하고, 관류 후, 각 마우스의 뇌조직을 적출했다. 그 다음에 적출한 뇌조직을 Protease Inhibitor Cocktail(시그마사)을 포함하는 T-PER(Thermo Fisher Scientific사)로 호모지네이트하고, 원심 후 상청을 회수했다. 회수한 호모지네이트 상청에 포함되는 융합 단백질의 농도를, 이하에 나타내는 방법으로 측정했다. 한편, 비오틴 표지화 염소 항인간 IgG Fc 폴리클로날 항체는, 염소 항인간 IgG Fc 폴리클로날 항체(Bethyl사)를, Biotin Labelling Kit-NH2(도진화학연구소)를 이용하여, 첨부의 조작 매뉴얼에 따라 비오틴 표지하여 제작한 것을 사용했다. 또한, SULFO 표지화 염소 항인간 IgG Fc 폴리클로날 항체는, 염소 항인간 IgG Fc 폴리클로날 항체(Bethyl사)를, MSD SULFO-TAG NHS-Ester(Meso scale Diagnostics사)를 이용하여, 첨부의 조작 매뉴얼에 따라 SULFO 표지하여 제작한 것을 사용했다.
Streptavidin Gold Plate 96 well(Meso scale Diagnostics사)의 각 웰에, 150μL의 SuperBlock blocking buffer in PBS(Thermo Fisher Scientific사)를 첨가하고 1시간 정치하여, 플레이트를 블로킹했다. 비오틴 표지화 염소 항인간 IgG Fc 폴리클로날 항체를, SuperBlock blocking buffer in PBS에 의해 0.5μg/mL의 농도로 희석했다. SULFO 표지화 염소 항인간 IgG Fc 폴리클로날 항체를, SuperBlock blocking buffer in PBS에 의해 1.0μg/mL의 농도로 희석했다. 비오틴 표지 항체 및 SULFO 표지 항체의 희석 용액을 각 25μL와, 25μL의 각 검체를 혼합하고, 1시간 인큐베이트하여, 이것을 항체 반응 시료로 했다.
블로킹 후의 플레이트의 각 웰을, 200μL의 PBS-T(시그마사)로 세정한 후, 각 웰에 항체 반응 시료를 25μL씩 첨가하고, 1시간 인큐베이트했다. 인큐베이트 후, 플레이트의 각 웰을 200μL의 PBS-T로 세정하고, 그 다음에, Read buffer T(Meso scale Diagnostics사)를 첨가하고, SectorTM Imager 6000(Meso scale Diagnostics사)을 이용하여 각 웰로부터의 발광량을 측정했다. 농도 기지의 표준 시료의 측정치로부터 검량선을 작성하고, 이것에 각 시료의 측정치를 내삽하는 것에 의해, 뇌조직의 그램중량(g습중량)당에 포함되는, 각각의 융합 단백질의 양(뇌조직 중의 각각의 융합 단백질에 대한 농도)을 산출했다. 그 결과를 표 13에 나타낸다.
컨트롤로 해둔 인간 이뮤노글로불린의 뇌조직 중의 농도를 1로 했을 때의, 뇌조직 중에 있어서의 EPO-항hTfR 항체, ARSA-항hTfR 항체, PPT-1-항hTfR 항체, TPP-1-항hTfR 항체, IDUA-항hTfR 항체, TNFαR-항hTfR 항체 및 SGSH-항hTfR 항체의 농도의 상대치는, 각각, 4.33, 3.39, 4.87, 6.48, 5.62, 7.44, 및 2.24이며, 항hTfR 항체와 결합시킨 이들 생리 활성 펩타이드가, 적극적으로 뇌조직 중으로 이행함이 나타났다. 즉, 이들 결과는, 항hTfR 항체와 융합시키는 것에 의해, 통상에서는 혈액뇌관문을 통과할리가 없는 이들 생리 활성 단백질을, 혈액뇌관문을 통과시켜 뇌조직 중에 도달시킬 수 있음을 나타내는 것이다.
즉, EPO-항hTfR 항체는 뇌허혈의 치료제로서, ARSA-항hTfR 항체는 아릴설파타제 A는 이염성 백질 변성증(이염성 백질 디스트로피)에 있어서의 중추 신경 장애 치료제로서, PPT-1-항hTfR 항체는 신경 세로이드리포푸신증 또는 Santavuori-Haltia병에 있어서의 중추 신경 장애 치료제로서, TPP-1-항hTfR 항체는 신경 세로이드리포푸신증 또는 Jansky-Bielschowsky병에 있어서의 중추 신경 장애 치료제로서, IDUA-항hTfR 항체는 헐러 증후군 또는 헐러-샤이에 증후군에 있어서의 중추 신경 장애 치료제로서, SGSH-항hTfR 항체는 산필리포 증후군에 있어서의 중추 신경 장애 치료제로서, IDUA-항hTfR 항체는 헐러 증후군 또는 헐러-샤이에 증후군에 있어서의 중추 신경 장애 치료제로서, TNFαR-항hTfR 항체는 뇌허혈 및 뇌염증성 질환의 치료제로서 각각 사용할 수 있음을 나타내는 것이다. 또한 이들에 한정되지 않고, 항hTfR 항체와 융합시키는 것에 의해, 통상에서는 혈액뇌관문을 통과할리가 없는 원하는 생리 활성 단백질을, 혈액뇌관문을 통과시켜 뇌조직 중에 도달시킬 수 있음을 나타내는 것이다.
Figure pct00014
본 발명의 항hTfR 항체는, 이것과 융합시키는 것에 의해, 원하는 생리 활성 단백질, 저분자 물질 등을 혈액뇌관문을 통과시킬 수 있으므로, 중추 신경계에 있어서 작용시켜야 할 생리 활성 단백질, 저분자 물질 등을 뇌내로 송달하는 수단을 제공하는 것으로서 유용성이 높다.
1 혈관
2 뇌실질
3 신경양 세포
4 푸르킨예 세포
서열 번호 3: 링커예 1의 아미노산 서열
서열 번호 4: 링커예 2의 아미노산 서열
서열 번호 5: 링커예 3의 아미노산 서열
서열 번호 6: 마우스 항hTfR 항체 번호 1의 경쇄 CDR1의 아미노산 서열 1
서열 번호 7: 마우스 항hTfR 항체 번호 1의 경쇄 CDR1의 아미노산 서열 2
서열 번호 8: 마우스 항hTfR 항체 번호 1의 경쇄 CDR2의 아미노산 서열 1
서열 번호 9: 마우스 항hTfR 항체 번호 1의 경쇄 CDR2의 아미노산 서열 2
서열 번호 10: 마우스 항hTfR 항체 번호 1의 경쇄 CDR3의 아미노산 서열
서열 번호 11: 마우스 항hTfR 항체 번호 2의 경쇄 CDR1의 아미노산 서열 1
서열 번호 12: 마우스 항hTfR 항체 번호 2의 경쇄 CDR1의 아미노산 서열 2
서열 번호 13: 마우스 항hTfR 항체 번호 2의 경쇄 CDR2의 아미노산 서열 1
서열 번호 14: 마우스 항hTfR 항체 번호 2의 경쇄 CDR2의 아미노산 서열 2
서열 번호 15: 마우스 항hTfR 항체 번호 2의 경쇄 CDR3의 아미노산 서열
서열 번호 16: 마우스 항hTfR 항체 번호 3의 경쇄 CDR1의 아미노산 서열 1
서열 번호 17: 마우스 항hTfR 항체 번호 3의 경쇄 CDR1의 아미노산 서열 2
서열 번호 18: 마우스 항hTfR 항체 번호 3의 경쇄 CDR2의 아미노산 서열 1
서열 번호 19: 마우스 항hTfR 항체 번호 3의 경쇄 CDR2의 아미노산 서열 2
서열 번호 20: 마우스 항hTfR 항체 번호 3의 경쇄 CDR3의 아미노산 서열
서열 번호 21: 마우스 항hTfR 항체 번호 4의 경쇄 CDR1의 아미노산 서열 1
서열 번호 22: 마우스 항hTfR 항체 번호 4의 경쇄 CDR1의 아미노산 서열 2
서열 번호 23: 마우스 항hTfR 항체 번호 4의 경쇄 CDR2의 아미노산 서열 1
서열 번호 24: 마우스 항hTfR 항체 번호 4의 경쇄 CDR2의 아미노산 서열 2
서열 번호 25: 마우스 항hTfR 항체 번호 4의 경쇄 CDR3의 아미노산 서열
서열 번호 26: 마우스 항hTfR 항체 번호 5의 경쇄 CDR1의 아미노산 서열 1
서열 번호 27: 마우스 항hTfR 항체 번호 5의 경쇄 CDR1의 아미노산 서열 2
서열 번호 28: 마우스 항hTfR 항체 번호 5의 경쇄 CDR2의 아미노산 서열 1
서열 번호 29: 마우스 항hTfR 항체 번호 5의 경쇄 CDR2의 아미노산 서열 2
서열 번호 30: 마우스 항hTfR 항체 번호 5의 경쇄 CDR3의 아미노산 서열
서열 번호 31: 마우스 항hTfR 항체 번호 6의 경쇄 CDR1의 아미노산 서열 1
서열 번호 32: 마우스 항hTfR 항체 번호 6의 경쇄 CDR1의 아미노산 서열 2
서열 번호 33: 마우스 항hTfR 항체 번호 6의 경쇄 CDR2의 아미노산 서열 1
서열 번호 34: 마우스 항hTfR 항체 번호 6의 경쇄 CDR2의 아미노산 서열 2
서열 번호 35: 마우스 항hTfR 항체 번호 6의 경쇄 CDR3의 아미노산 서열
서열 번호 36: 마우스 항hTfR 항체 번호 7의 경쇄 CDR1의 아미노산 서열 1
서열 번호 37: 마우스 항hTfR 항체 번호 7의 경쇄 CDR1의 아미노산 서열 2
서열 번호 38: 마우스 항hTfR 항체 번호 7의 경쇄 CDR2의 아미노산 서열 1
서열 번호 39: 마우스 항hTfR 항체 번호 7의 경쇄 CDR2의 아미노산 서열 2
서열 번호 40: 마우스 항hTfR 항체 번호 7의 경쇄 CDR3의 아미노산 서열
서열 번호 41: 마우스 항hTfR 항체 번호 8의 경쇄 CDR1의 아미노산 서열 1
서열 번호 42: 마우스 항hTfR 항체 번호 8의 경쇄 CDR1의 아미노산 서열 2
서열 번호 43: 마우스 항hTfR 항체 번호 8의 경쇄 CDR2의 아미노산 서열 1
서열 번호 44: 마우스 항hTfR 항체 번호 8의 경쇄 CDR2의 아미노산 서열 2
서열 번호 45: 마우스 항hTfR 항체 번호 8의 경쇄 CDR3의 아미노산 서열
서열 번호 46: 마우스 항hTfR 항체 번호 9의 경쇄 CDR1의 아미노산 서열 1
서열 번호 47: 마우스 항hTfR 항체 번호 9의 경쇄 CDR1의 아미노산 서열 2
서열 번호 48: 마우스 항hTfR 항체 번호 9의 경쇄 CDR2의 아미노산 서열 1
서열 번호 49: 마우스 항hTfR 항체 번호 9의 경쇄 CDR2의 아미노산 서열 2
서열 번호 50: 마우스 항hTfR 항체 번호 9의 경쇄 CDR3의 아미노산 서열
서열 번호 51: 마우스 항hTfR 항체 번호 10의 경쇄 CDR1의 아미노산 서열 1
서열 번호 52: 마우스 항hTfR 항체 번호 10의 경쇄 CDR1의 아미노산 서열 2
서열 번호 53: 마우스 항hTfR 항체 번호 10의 경쇄 CDR2의 아미노산 서열 1
서열 번호 54: 마우스 항hTfR 항체 번호 10의 경쇄 CDR2의 아미노산 서열 2
서열 번호 55: 마우스 항hTfR 항체 번호 10의 경쇄 CDR3의 아미노산 서열
서열 번호 56: 마우스 항hTfR 항체 번호 11의 경쇄 CDR1의 아미노산 서열 1
서열 번호 57: 마우스 항hTfR 항체 번호 11의 경쇄 CDR1의 아미노산 서열 2
서열 번호 58: 마우스 항hTfR 항체 번호 11의 경쇄 CDR2의 아미노산 서열 1
서열 번호 59: 마우스 항hTfR 항체 번호 11의 경쇄 CDR2의 아미노산 서열 2
서열 번호 60: 마우스 항hTfR 항체 번호 11의 경쇄 CDR3의 아미노산 서열
서열 번호 61: 마우스 항hTfR 항체 번호 12의 경쇄 CDR1의 아미노산 서열 1
서열 번호 62: 마우스 항hTfR 항체 번호 12의 경쇄 CDR1의 아미노산 서열 2
서열 번호 63: 마우스 항hTfR 항체 번호 12의 경쇄 CDR2의 아미노산 서열 1
서열 번호 64: 마우스 항hTfR 항체 번호 12의 경쇄 CDR2의 아미노산 서열 2
서열 번호 65: 마우스 항hTfR 항체 번호 12의 경쇄 CDR3의 아미노산 서열
서열 번호 66: 마우스 항hTfR 항체 번호 13의 경쇄 CDR1의 아미노산 서열 1
서열 번호 67: 마우스 항hTfR 항체 번호 13의 경쇄 CDR1의 아미노산 서열 2
서열 번호 68: 마우스 항hTfR 항체 번호 13의 경쇄 CDR2의 아미노산 서열 1
서열 번호 69: 마우스 항hTfR 항체 번호 13의 경쇄 CDR2의 아미노산 서열 2
서열 번호 70: 마우스 항hTfR 항체 번호 13의 경쇄 CDR3의 아미노산 서열
서열 번호 71: 마우스 항hTfR 항체 번호 14의 경쇄 CDR1의 아미노산 서열 1
서열 번호 72: 마우스 항hTfR 항체 번호 14의 경쇄 CDR1의 아미노산 서열 2
서열 번호 73: 마우스 항hTfR 항체 번호 14의 경쇄 CDR2의 아미노산 서열 1
서열 번호 74: 마우스 항hTfR 항체 번호 14의 경쇄 CDR2의 아미노산 서열 2
서열 번호 75: 마우스 항hTfR 항체 번호 14의 경쇄 CDR3의 아미노산 서열
서열 번호 76: 마우스 항hTfR 항체 번호 1의 중쇄 CDR1의 아미노산 서열 1
서열 번호 77: 마우스 항hTfR 항체 번호 1의 중쇄 CDR1의 아미노산 서열 2
서열 번호 78: 마우스 항hTfR 항체 번호 1의 중쇄 CDR2의 아미노산 서열 1
서열 번호 79: 마우스 항hTfR 항체 번호 1의 중쇄 CDR2의 아미노산 서열 2
서열 번호 80: 마우스 항hTfR 항체 번호 1의 중쇄 CDR3의 아미노산 서열 1
서열 번호 81: 마우스 항hTfR 항체 번호 1의 중쇄 CDR3의 아미노산 서열 2
서열 번호 82: 마우스 항hTfR 항체 번호 2의 중쇄 CDR1의 아미노산 서열 1
서열 번호 83: 마우스 항hTfR 항체 번호 2의 중쇄 CDR1의 아미노산 서열 2
서열 번호 84: 마우스 항hTfR 항체 번호 2의 중쇄 CDR2의 아미노산 서열 1
서열 번호 85: 마우스 항hTfR 항체 번호 2의 중쇄 CDR2의 아미노산 서열 2
서열 번호 86: 마우스 항hTfR 항체 번호 2의 중쇄 CDR3의 아미노산 서열 1
서열 번호 87: 마우스 항hTfR 항체 번호 2의 중쇄 CDR3의 아미노산 서열 2
서열 번호 88: 마우스 항hTfR 항체 번호 3의 중쇄 CDR1의 아미노산 서열 1
서열 번호 89: 마우스 항hTfR 항체 번호 3의 중쇄 CDR1의 아미노산 서열 2
서열 번호 90: 마우스 항hTfR 항체 번호 3의 중쇄 CDR2의 아미노산 서열 1
서열 번호 91: 마우스 항hTfR 항체 번호 3의 중쇄 CDR2의 아미노산 서열 2
서열 번호 92: 마우스 항hTfR 항체 번호 3의 중쇄 CDR3의 아미노산 서열 1
서열 번호 93: 마우스 항hTfR 항체 번호 3의 중쇄 CDR3의 아미노산 서열 2
서열 번호 94: 마우스 항hTfR 항체 번호 4의 중쇄 CDR1의 아미노산 서열 1
서열 번호 95: 마우스 항hTfR 항체 번호 4의 중쇄 CDR1의 아미노산 서열 2
서열 번호 96: 마우스 항hTfR 항체 번호 4의 중쇄 CDR2의 아미노산 서열 1
서열 번호 97: 마우스 항hTfR 항체 번호 4의 중쇄 CDR2의 아미노산 서열 2
서열 번호 98: 마우스 항hTfR 항체 번호 4의 중쇄 CDR3의 아미노산 서열 1
서열 번호 99: 마우스 항hTfR 항체 번호 4의 중쇄 CDR3의 아미노산 서열 2
서열 번호 100: 마우스 항hTfR 항체 번호 5의 중쇄 CDR1의 아미노산 서열 1
서열 번호 101: 마우스 항hTfR 항체 번호 5의 중쇄 CDR1의 아미노산 서열 2
서열 번호 102: 마우스 항hTfR 항체 번호 5의 중쇄 CDR2의 아미노산 서열 1
서열 번호 103: 마우스 항hTfR 항체 번호 5의 중쇄 CDR2의 아미노산 서열 2
서열 번호 104: 마우스 항hTfR 항체 번호 5의 중쇄 CDR3의 아미노산 서열 1
서열 번호 105: 마우스 항hTfR 항체 번호 5의 중쇄 CDR3의 아미노산 서열 2
서열 번호 106: 마우스 항hTfR 항체 번호 6의 중쇄 CDR1의 아미노산 서열 1
서열 번호 107: 마우스 항hTfR 항체 번호 6의 중쇄 CDR1의 아미노산 서열 2
서열 번호 108: 마우스 항hTfR 항체 번호 6의 중쇄 CDR2의 아미노산 서열
서열 번호 109: 마우스 항hTfR 항체 번호 6의 중쇄 CDR3의 아미노산 서열 1
서열 번호 110: 마우스 항hTfR 항체 번호 6의 중쇄 CDR3의 아미노산 서열 2
서열 번호 111: 마우스 항hTfR 항체 번호 7의 중쇄 CDR1의 아미노산 서열 1
서열 번호 112: 마우스 항hTfR 항체 번호 7의 중쇄 CDR1의 아미노산 서열 2
서열 번호 113: 마우스 항hTfR 항체 번호 7의 중쇄 CDR2의 아미노산 서열 1
서열 번호 114: 마우스 항hTfR 항체 번호 7의 중쇄 CDR2의 아미노산 서열 2
서열 번호 115: 마우스 항hTfR 항체 번호 7의 중쇄 CDR3의 아미노산 서열 1
서열 번호 116: 마우스 항hTfR 항체 번호 7의 중쇄 CDR3의 아미노산 서열 2
서열 번호 117: 마우스 항hTfR 항체 번호 8의 중쇄 CDR1의 아미노산 서열 1
서열 번호 118: 마우스 항hTfR 항체 번호 8의 중쇄 CDR1의 아미노산 서열 2
서열 번호 119: 마우스 항hTfR 항체 번호 8의 중쇄 CDR2의 아미노산 서열
서열 번호 120: 마우스 항hTfR 항체 번호 8의 중쇄 CDR3의 아미노산 서열 1
서열 번호 121: 마우스 항hTfR 항체 번호 8의 중쇄 CDR3의 아미노산 서열 2
서열 번호 122: 마우스 항hTfR 항체 번호 9의 중쇄 CDR1의 아미노산 서열 1
서열 번호 123: 마우스 항hTfR 항체 번호 9의 중쇄 CDR1의 아미노산 서열 2
서열 번호 124: 마우스 항hTfR 항체 번호 9의 중쇄 CDR2의 아미노산 서열 1
서열 번호 125: 마우스 항hTfR 항체 번호 9의 중쇄 CDR2의 아미노산 서열 2
서열 번호 126: 마우스 항hTfR 항체 번호 9의 중쇄 CDR3의 아미노산 서열 1
서열 번호 127: 마우스 항hTfR 항체 번호 9의 중쇄 CDR3의 아미노산 서열 2
서열 번호 128: 마우스 항hTfR 항체 번호 10의 중쇄 CDR1의 아미노산 서열 1
서열 번호 129: 마우스 항hTfR 항체 번호 10의 중쇄 CDR1의 아미노산 서열 2
서열 번호 130: 마우스 항hTfR 항체 번호 10의 중쇄 CDR2의 아미노산 서열 1
서열 번호 131: 마우스 항hTfR 항체 번호 10의 중쇄 CDR2의 아미노산 서열 2
서열 번호 132: 마우스 항hTfR 항체 번호 10의 중쇄 CDR3의 아미노산 서열 1
서열 번호 133: 마우스 항hTfR 항체 번호 10의 중쇄 CDR3의 아미노산 서열 2
서열 번호 134: 마우스 항hTfR 항체 번호 11의 중쇄 CDR1의 아미노산 서열 1
서열 번호 135: 마우스 항hTfR 항체 번호 11의 중쇄 CDR1의 아미노산 서열 2
서열 번호 136: 마우스 항hTfR 항체 번호 11의 중쇄 CDR2의 아미노산 서열 1
서열 번호 137: 마우스 항hTfR 항체 번호 11의 중쇄 CDR2의 아미노산 서열 2
서열 번호 138: 마우스 항hTfR 항체 번호 11의 중쇄 CDR3의 아미노산 서열 1
서열 번호 139: 마우스 항hTfR 항체 번호 11의 중쇄 CDR3의 아미노산 서열 2
서열 번호 140: 마우스 항hTfR 항체 번호 12의 중쇄 CDR1의 아미노산 서열 1
서열 번호 141: 마우스 항hTfR 항체 번호 12의 중쇄 CDR1의 아미노산 서열 2
서열 번호 142: 마우스 항hTfR 항체 번호 12의 중쇄 CDR2의 아미노산 서열 1
서열 번호 143: 마우스 항hTfR 항체 번호 12의 중쇄 CDR2의 아미노산 서열 2
서열 번호 144: 마우스 항hTfR 항체 번호 12의 중쇄 CDR3의 아미노산 서열 1
서열 번호 145: 마우스 항hTfR 항체 번호 12의 중쇄 CDR3의 아미노산 서열 2
서열 번호 146: 마우스 항hTfR 항체 번호 13의 중쇄 CDR1의 아미노산 서열 1
서열 번호 147: 마우스 항hTfR 항체 번호 13의 중쇄 CDR1의 아미노산 서열 2
서열 번호 148: 마우스 항hTfR 항체 번호 13의 중쇄 CDR2의 아미노산 서열 1
서열 번호 149: 마우스 항hTfR 항체 번호 13의 중쇄 CDR2의 아미노산 서열 2
서열 번호 150: 마우스 항hTfR 항체 번호 13의 중쇄 CDR3의 아미노산 서열 1
서열 번호 151: 마우스 항hTfR 항체 번호 13의 중쇄 CDR3의 아미노산 서열 2
서열 번호 152: 마우스 항hTfR 항체 번호 14의 중쇄 CDR1의 아미노산 서열 1
서열 번호 153: 마우스 항hTfR 항체 번호 14의 중쇄 CDR1의 아미노산 서열 2
서열 번호 154: 마우스 항hTfR 항체 번호 14의 중쇄 CDR2의 아미노산 서열 1
서열 번호 155: 마우스 항hTfR 항체 번호 14의 중쇄 CDR2의 아미노산 서열 2
서열 번호 156: 마우스 항hTfR 항체 번호 14의 중쇄 CDR3의 아미노산 서열 1
서열 번호 157: 마우스 항hTfR 항체 번호 14의 중쇄 CDR3의 아미노산 서열 2
서열 번호 158: 인간화 항hTfR 항체 번호 1의 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 1
서열 번호 159: 인간화 항hTfR 항체 번호 1의 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 2
서열 번호 160: 인간화 항hTfR 항체 번호 1의 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 3
서열 번호 161: 인간화 항hTfR 항체 번호 1의 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 4
서열 번호 162: 인간화 항hTfR 항체 번호 1의 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 5
서열 번호 163: 인간화 항hTfR 항체 번호 1의 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 6
서열 번호 164: 인간화 항hTfR 항체 번호 1의, 가변 영역으로서 아미노산 서열 6을 포함하는 경쇄의 아미노산 서열, 합성 서열
서열 번호 165: 인간화 항hTfR 항체 번호 1의, 가변 영역으로서 아미노산 서열 6을 포함하는 경쇄의 아미노산 서열을 코딩하는 염기 서열, 합성 서열
서열 번호 166: 인간화 항hTfR 항체 번호 1의 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 1
서열 번호 167: 인간화 항hTfR 항체 번호 1의 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 2
서열 번호 168: 인간화 항hTfR 항체 번호 1의 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 3
서열 번호 169: 인간화 항hTfR 항체 번호 1의 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 4
서열 번호 170: 인간화 항hTfR 항체 번호 1의 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 5
서열 번호 171: 인간화 항hTfR 항체 번호 1의 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 6
서열 번호 172: 인간화 항hTfR 항체 번호 1의, 가변 영역으로서 아미노산 서열 6을 포함하는 중쇄의 아미노산 서열
서열 번호 173: 인간화 항hTfR 항체 번호 1의 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 6을 포함하는 중쇄의 아미노산 서열을 코딩하는 염기 서열, 합성 서열
서열 번호 174: 인간화 항hTfR 항체 번호 2의 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 1
서열 번호 175: 인간화 항hTfR 항체 번호 2의 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 2
서열 번호 176: 인간화 항hTfR 항체 번호 2의 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 3
서열 번호 177: 인간화 항hTfR 항체 번호 2의 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 4
서열 번호 178: 인간화 항hTfR 항체 번호 2의 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 5
서열 번호 179: 인간화 항hTfR 항체 번호 2의 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 6
서열 번호 180: 인간화 항hTfR 항체 번호 2의, 가변 영역으로서 아미노산 서열 6을 포함하는 경쇄의 아미노산 서열
서열 번호 181: 인간화 항hTfR 항체 번호 2의, 가변 영역으로서 아미노산 서열 6을 포함하는 경쇄의 아미노산 서열을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 염기 서열, 합성 서열
서열 번호 182: 인간화 항hTfR 항체 번호 2의 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 1
서열 번호 183: 인간화 항hTfR 항체 번호 2의 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 2
서열 번호 184: 인간화 항hTfR 항체 번호 2의 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 3
서열 번호 185: 인간화 항hTfR 항체 번호 2의 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 4
서열 번호 186: 인간화 항hTfR 항체 번호 2의 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 5
서열 번호 187: 인간화 항hTfR 항체 번호 2의 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 6
서열 번호 188: 인간화 항hTfR 항체 번호 2의, 가변 영역으로서 아미노산 서열 6을 포함하는 중쇄의 아미노산 서열
서열 번호 189: 인간화 항hTfR 항체 번호 2의, 가변 영역으로서 아미노산 서열 6을 포함하는 중쇄의 아미노산 서열을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 염기 서열, 합성 서열
서열 번호 190: 인간화 항hTfR 항체 번호 3의 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 1
서열 번호 191: 인간화 항hTfR 항체 번호 3의 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 2
서열 번호 192: 인간화 항hTfR 항체 번호 3의 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 3
서열 번호 193: 인간화 항hTfR 항체 번호 3의 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 4
서열 번호 194: 인간화 항hTfR 항체 번호 3의 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 5
서열 번호 195: 인간화 항hTfR 항체 번호 3의 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 6
서열 번호 196: 인간화 항hTfR 항체 번호 3의, 가변 영역으로서 아미노산 서열 2를 포함하는 경쇄의 아미노산 서열
서열 번호 197: 인간화 항hTfR 항체 번호 3의, 가변 영역으로서 아미노산 서열 2를 포함하는 경쇄의 아미노산 서열을 코딩하는 염기 서열, 합성 서열
서열 번호 198: 인간화 항hTfR 항체 번호 3의, 가변 영역으로서 아미노산 서열 4를 포함하는 경쇄의 아미노산 서열
서열 번호 199: 인간화 항hTfR 항체 번호 3의, 가변 영역으로서 아미노산 서열 4를 포함하는 경쇄의 아미노산 서열을 코딩하는 염기 서열, 합성 서열
서열 번호 200: 인간화 항hTfR 항체 번호 3의 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 5를 포함하는 경쇄의 아미노산 서열
서열 번호 201: 인간화 항hTfR 항체 번호 3의, 가변 영역으로서 아미노산 서열 5를 포함하는 경쇄의 아미노산 서열을 코딩하는 염기 서열, 합성 서열
서열 번호 202: 인간화 항hTfR 항체 번호 3의, 가변 영역으로서 아미노산 서열 6을 포함하는, 가변 영역으로서
서열 번호 203: 인간화 항hTfR 항체 번호 3의, 가변 영역으로서 아미노산 서열 6을 포함하는 경쇄의 아미노산 서열을 코딩하는 염기 서열, 합성 서열
서열 번호 204: 인간화 항hTfR 항체 번호 3의 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 1
서열 번호 205: 인간화 항hTfR 항체 번호 3의 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 2
서열 번호 206: 인간화 항hTfR 항체 번호 3의 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 3
서열 번호 207: 인간화 항hTfR 항체 번호 3의 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 4
서열 번호 208: 인간화 항hTfR 항체 번호 3의 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 5
서열 번호 209: 인간화 항hTfR 항체 번호 3의 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 6
서열 번호 210: 인간화 항hTfR 항체 번호 3의, 가변 영역으로서 아미노산 서열 2를 포함하는 중쇄의 아미노산 서열
서열 번호 211: 인간화 항hTfR 항체 번호 3의, 가변 영역으로서 아미노산 서열 2를 포함하는 중쇄의 아미노산 서열 코딩하는 염기 서열, 합성 서열
서열 번호 212: 인간화 항hTfR 항체 번호 3의, 가변 영역으로서 아미노산 서열 2를 포함하는 중쇄(IgG4)의 아미노산 서열
서열 번호 213: 인간화 항hTfR 항체 번호 3의, 가변 영역으로서 아미노산 서열 2를 포함하는 중쇄(IgG4)의 아미노산 서열을 코딩하는 염기 서열, 합성 서열
서열 번호 214: 프라이머 hTfR5', 합성 서열
서열 번호 215: 프라이머 hTfR3', 합성 서열
서열 번호 216: 프라이머 Hyg-Sfi5', 합성 서열
서열 번호 217: 프라이머 Hyg-BstX3', 합성 서열
서열 번호 218: 마우스 항hTfR 항체 번호 1의 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열
서열 번호 219: 마우스 항hTfR 항체 번호 1의 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열
서열 번호 220: 마우스 항hTfR 항체 번호 2의 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열
서열 번호 221: 마우스 항hTfR 항체 번호 2의 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열
서열 번호 222: 마우스 항hTfR 항체 번호 3의 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열
서열 번호 223: 마우스 항hTfR 항체 번호 3의 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열
서열 번호 224: 마우스 항hTfR 항체 번호 4의 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열
서열 번호 225: 마우스 항hTfR 항체 번호 4의 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열
서열 번호 226: 마우스 항hTfR 항체 번호 5의 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열
서열 번호 227: 마우스 항hTfR 항체 번호 5의 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열
서열 번호 228: 마우스 항hTfR 항체 번호 6의 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열
서열 번호 229: 마우스 항hTfR 항체 번호 6의 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열
서열 번호 230: 마우스 항hTfR 항체 번호 7의 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열
서열 번호 231: 마우스 항hTfR 항체 번호 7의 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열
서열 번호 232: 마우스 항hTfR 항체 번호 8의 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열
서열 번호 233: 마우스 항hTfR 항체 번호 8의 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열
서열 번호 234: 마우스 항hTfR 항체 번호 9의 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열
서열 번호 235: 마우스 항hTfR 항체 번호 9의 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열
서열 번호 236: 마우스 항hTfR 항체 번호 10의 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열
서열 번호 237: 마우스 항hTfR 항체 번호 10의 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열
서열 번호 238: 마우스 항hTfR 항체 번호 11의 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열
서열 번호 239: 마우스 항hTfR 항체 번호 11의 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열
서열 번호 240: 마우스 항hTfR 항체 번호 12의 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열
서열 번호 241: 마우스 항hTfR 항체 번호 12의 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열
서열 번호 242: 마우스 항hTfR 항체 번호 13의 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열
서열 번호 243: 마우스 항hTfR 항체 번호 13의 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열
서열 번호 244: 마우스 항hTfR 항체 번호 14의 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열
서열 번호 245: 마우스 항hTfR 항체 번호 14의 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열
서열 번호 247: 항hTfR 항체 번호 1의 중쇄(인간화 6)와 hI2S의 융합 단백질의 아미노산 서열
서열 번호 248: 항hTfR 항체 번호 1의 중쇄(인간화 6)와 hI2S의 융합 단백질의 아미노산 서열을 코딩하는 염기 서열, 합성 서열
서열 번호 249: 항hTfR 항체 번호 2의 중쇄(인간화 6)와 hI2S의 융합 단백질의 아미노산 서열
서열 번호 250: 항hTfR 항체 번호 2의 중쇄(인간화 6)와 hI2S의 융합 단백질의 아미노산 서열을 코딩하는 염기 서열, 합성 서열
서열 번호 251: 항hTfR 항체 번호 3의 중쇄(인간화 2)와 hI2S의 융합 단백질의 아미노산 서열
서열 번호 252: 항hTfR 항체 번호 3의 중쇄(인간화 2)와 hI2S의 융합 단백질의 아미노산 서열을 코딩하는 염기 서열, 합성 서열
서열 번호 253: 키메라 hTfR을 코딩하는 cDNA의 3'측에 loxP 서열로 끼워넣은 네오마이신 내성 유전자를 배치한 DNA의 염기 서열, 합성 서열
서열 번호 254: 타게팅 벡터의 5'암의 염기 서열, 합성 서열
서열 번호 255: 타게팅 벡터의 3'암의 염기 서열, 합성 서열
서열 번호 257: 항hTfR 항체 번호 3의 중쇄(인간화 2)와 hEPO의 융합 단백질의 아미노산 서열
서열 번호 258: 항hTfR 항체 번호 3의 중쇄(인간화 2)와 hEPO의 융합 단백질의 아미노산 서열을 코딩하는 염기 서열, 합성 서열
서열 번호 260: 항hTfR 항체 번호 3의 중쇄(인간화 2)와 hARSA의 융합 단백질의 아미노산 서열
서열 번호 261: 항hTfR 항체 번호 3의 중쇄(인간화 2)와 hARSA의 융합 단백질의 아미노산 서열을 코딩하는 염기 서열, 합성 서열
서열 번호 263: 항hTfR 항체 번호 3의 중쇄(인간화 2)와 hPPT-1의 융합 단백질의 아미노산 서열
서열 번호 264: 항hTfR 항체 번호 3의 중쇄(인간화 2)와 hPPT-1의 융합 단백질의 아미노산 서열을 코딩하는 염기 서열, 합성 서열
서열 번호 266: 항hTfR 항체 번호 3의 중쇄(인간화 2)와 hTPP-1의 융합 단백질의 아미노산 서열
서열 번호 267: 항hTfR 항체 번호 3의 중쇄(인간화 2)와 hTPP-1의 융합 단백질의 아미노산 서열을 코딩하는 염기 서열, 합성 서열
서열 번호 269: 항hTfR 항체 번호 3의 중쇄(인간화 2)와 hIDUA의 융합 단백질의 아미노산 서열
서열 번호 270: 항hTfR 항체 번호 3의 중쇄(인간화 2)와 hIDUA의 융합 단백질의 아미노산 서열을 코딩하는 염기 서열, 합성 서열
서열 번호 272: 항hTfR 항체 번호 3의 중쇄(인간화 2)와 hTNFαR의 융합 단백질의 아미노산 서열
서열 번호 273: 항hTfRα항체 번호 3의 중쇄(인간화 2)와 hTNFαR의 융합 단백질의 아미노산 서열을 코딩하는 염기 서열, 합성 서열
서열 번호 275: 항hTfR 항체 번호 3의 중쇄(인간화 2)와 hSGSH의 융합 단백질의 아미노산 서열
서열 번호 276: 항hTfR 항체 번호 3의 중쇄(인간화 2)와 hSGSH의 융합 단백질의 아미노산 서열을 코딩하는 염기 서열, 합성 서열
서열 번호 277: 1본쇄 항hTfR 항체의 아미노산 서열
서열 번호 278: 마우스 항hTfR 항체 번호 6의 중쇄 CDR2의 아미노산 서열 2
서열 번호 279: 마우스 항hTfR 항체 번호 8의 중쇄 CDR2의 아미노산 서열 2
SEQUENCE LISTING <110> JCR PHARMACEUTICALS CO., LTD. <120> ANTI-HUMAN TRANSFERRIN RECEPTOR ANTIBODY PERMEATING BLOOD-BRAIN BARRIER <130> FP17-0775-00 <150> P2015-144379 <151> 2015-06-24 <160> 279 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 760 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Met Asp Gln Ala Arg Ser Ala Phe Ser Asn Leu Phe Gly Gly Glu 1 5 10 15 Pro Leu Ser Tyr Thr Arg Phe Ser Leu Ala Arg Gln Val Asp Gly Asp 20 25 30 Asn Ser His Val Glu Met Lys Leu Ala Val Asp Glu Glu Glu Asn Ala 35 40 45 Asp Asn Asn Thr Lys Ala Asn Val Thr Lys Pro Lys Arg Cys Ser Gly 50 55 60 Ser Ile Cys Tyr Gly Thr Ile Ala Val Ile Val Phe Phe Leu Ile Gly 65 70 75 80 Phe Met Ile Gly Tyr Leu Gly Tyr Cys Lys Gly Val Glu Pro Lys Thr 85 90 95 Glu Cys Glu Arg Leu Ala Gly Thr Glu Ser Pro Val Arg Glu Glu Pro 100 105 110 Gly Glu Asp Phe Pro Ala Ala Arg Arg Leu Tyr Trp Asp Asp Leu Lys 115 120 125 Arg Lys Leu Ser Glu Lys Leu Asp Ser Thr Asp Phe Thr Gly Thr Ile 130 135 140 Lys Leu Leu Asn Glu Asn Ser Tyr Val Pro Arg Glu Ala 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<400> 5 Ser Gly Gly Gly Gly 1 5 <210> 6 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 1 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.1 <400> 6 Gln Asp Val Asn Ser Ala 1 5 <210> 7 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 1 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.1 <400> 7 Lys Ala Ser Gln Asp Val Asn Ser Ala Val Ala 1 5 10 <210> 8 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 2 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.1 <400> 8 Trp Thr Ser Thr Arg His 1 5 <210> 9 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 2 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.1 <400> 9 Trp Thr Ser Thr Arg His Thr 1 5 <210> 10 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of CDR 3 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.1 <400> 10 Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Arg Thr 1 5 <210> 11 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 1 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.2 <400> 11 Gln Ser Ile Ser Asn Asn 1 5 <210> 12 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 1 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.2 <400> 12 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Asn Leu Gln 1 5 10 <210> 13 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 2 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.2 <400> 13 Tyr Ala Ser Gln Ser Ile 1 5 <210> 14 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 2 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.2 <400> 14 Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser 1 5 <210> 15 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of CDR 3 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.2 <400> 15 Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Arg Thr 1 5 <210> 16 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 1 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.3 <400> 16 Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr 1 5 10 <210> 17 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 1 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.3 <400> 17 Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His 1 5 10 15 <210> 18 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 2 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.3 <400> 18 Lys Val Ser Asn Arg Phe 1 5 <210> 19 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 2 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.3 <400> 19 Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser 1 5 <210> 20 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of CDR 3 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.3 <400> 20 Ser Gln Ser Thr His Val Pro Trp Thr 1 5 <210> 21 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 1 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.4 <400> 21 Ser Asn Val Asn Tyr 1 5 <210> 22 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 1 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.4 <400> 22 Ser Ala Ser Ser Asn Val Asn Tyr Met His 1 5 10 <210> 23 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 2 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.4 <400> 23 Asp Thr Ser Lys Leu Ala 1 5 <210> 24 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 2 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.4 <400> 24 Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser 1 5 <210> 25 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of CDR 3 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.4 <400> 25 Phe Gln Gly Asn Gly Asn Pro Tyr Thr 1 5 <210> 26 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 1 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.5 <400> 26 Ser Ser Ile Ser Ser 1 5 <210> 27 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 1 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.5 <400> 27 Ser Ala Ser Ser Ser Ile Ser Ser Ile His 1 5 10 <210> 28 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 2 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.5 <400> 28 Asp Thr Ser Thr Leu Ala 1 5 <210> 29 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 2 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.5 <400> 29 Asp Thr Ser Thr Leu Ala Ser 1 5 <210> 30 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of CDR 3 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.5 <400> 30 His Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Thr 1 5 <210> 31 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 1 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.6 <400> 31 Gln Glu Ile Ser Gly Tyr 1 5 <210> 32 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 1 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.6 <400> 32 Arg Ala Ser Gln Glu Ile Ser Gly Tyr Leu Ser 1 5 10 <210> 33 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 2 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.6 <400> 33 Ala Ala Ser Thr Leu Asp 1 5 <210> 34 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 2 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.6 <400> 34 Ala Ala Ser Thr Leu Asp Ser 1 5 <210> 35 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of CDR 3 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.6 <400> 35 Leu Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Arg Thr 1 5 <210> 36 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 1 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.7 <400> 36 Ser Ser Val Asn Tyr 1 5 <210> 37 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 1 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.7 <400> 37 Ser Ala Ser Ser Ser Val Asn Tyr Ile His 1 5 10 <210> 38 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 2 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.7 <400> 38 Gln Thr Ser Asn Leu Ala 1 5 <210> 39 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 2 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.7 <400> 39 Gln Thr Ser Asn Leu Ala Ser 1 5 <210> 40 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of CDR 3 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.7 <400> 40 His Gln Trp Ser Ser Tyr Pro Trp Thr 1 5 <210> 41 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 1 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.8 <400> 41 Ser Ser Val Ser Tyr 1 5 <210> 42 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 1 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.8 <400> 42 Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met His 1 5 10 <210> 43 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 2 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.8 <400> 43 Gly Thr Ser Asn Leu Ala 1 5 <210> 44 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 2 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.8 <400> 44 Gly Thr Ser Asn Leu Ala Ser 1 5 <210> 45 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of CDR 3 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.8 <400> 45 His Gln Trp Ser Ser Tyr Pro Trp Thr 1 5 <210> 46 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 1 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.9 <400> 46 Ser Ser Val Ser Leu 1 5 <210> 47 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 1 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.9 <400> 47 Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Leu Met Phe 1 5 10 <210> 48 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 2 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.9 <400> 48 Phe Thr Ser Tyr Arg Ala 1 5 <210> 49 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 2 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.9 <400> 49 Phe Thr Ser Tyr Arg Ala Ser 1 5 <210> 50 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of CDR 3 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.9 <400> 50 Gln Gln Trp Thr Ser Asp Pro Pro Thr 1 5 <210> 51 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 1 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.10 <400> 51 Gln Glu Ile Ser Gly Tyr 1 5 <210> 52 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 1 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.10 <400> 52 Arg Pro Ser Gln Glu Ile Ser Gly Tyr Leu Ser 1 5 10 <210> 53 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 2 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.10 <400> 53 Ala Ala Ser Thr Leu Asp 1 5 <210> 54 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 2 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.10 <400> 54 Ala Ala Ser Thr Leu Asp Ser 1 5 <210> 55 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of CDR 3 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.10 <400> 55 Leu Gln Tyr Ala Ser Tyr Pro Arg Thr 1 5 <210> 56 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 1 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.11 <400> 56 Gln Ser Ile Arg Asn Tyr 1 5 <210> 57 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 1 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.11 <400> 57 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Arg Asn Tyr Leu His 1 5 10 <210> 58 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 2 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.11 <400> 58 Tyr Ala Ser Gln Ser Ile 1 5 <210> 59 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 2 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.11 <400> 59 Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser 1 5 <210> 60 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of CDR 3 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.11 <400> 60 Gln Gln Thr Asn Ser Trp Pro Tyr Thr 1 5 <210> 61 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 1 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.12 <400> 61 His Asp Val Lys Thr Ala 1 5 <210> 62 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 1 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.12 <400> 62 Lys Ala Ser His Asp Val Lys Thr Ala Val Ala 1 5 10 <210> 63 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 2 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.12 <400> 63 Trp Ser Ser Thr Arg His 1 5 <210> 64 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 2 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.12 <400> 64 Trp Ser Ser Thr Arg His Thr 1 5 <210> 65 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of CDR 3 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.12 <400> 65 Gln Gln His Phe Ser Thr Pro Leu Thr 1 5 <210> 66 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 1 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.13 <400> 66 Gln Ser Ile Arg Asn Tyr 1 5 <210> 67 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 1 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.13 <400> 67 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Arg Asn Tyr Leu His 1 5 10 <210> 68 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 2 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.13 <400> 68 Tyr Ala Ser Gln Ser Ile 1 5 <210> 69 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 2 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.13 <400> 69 Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser 1 5 <210> 70 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of CDR 3 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.13 <400> 70 Gln Gln Thr Asn Ser Trp Pro Tyr Thr 1 5 <210> 71 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 1 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.14 <400> 71 Ser Asn Ile Asn Ser 1 5 <210> 72 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 1 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.14 <400> 72 Ser Ala Ser Ser Asn Ile Asn Ser Ile His 1 5 10 <210> 73 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 2 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.14 <400> 73 Asp Thr Ser Asn Leu Ala 1 5 <210> 74 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 2 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.14 <400> 74 Asp Thr Ser Asn Leu Ala Ser 1 5 <210> 75 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of CDR 3 in the light chain of mouse anti-hTfR antibody No.14 <400> 75 His Gln Arg Ser Gly Tyr Pro Phe Thr 1 5 <210> 76 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 1 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.1 <400> 76 Asn Tyr Gly Met Ser 1 5 <210> 77 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 1 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.1 <400> 77 Gly Leu Thr Phe Ser Asn Tyr Gly 1 5 <210> 78 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 2 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.1 <400> 78 Ile Asn Thr Asn Gly Gly Ser Thr 1 5 <210> 79 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 2 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.1 <400> 79 Asn Ile Asn Thr Asn Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 80 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 3 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.1 <400> 80 Asn Arg Tyr Asp Glu Asp Tyr 1 5 <210> 81 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 3 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.1 <400> 81 Thr Asn Asn Arg Tyr Asp Glu Asp Tyr 1 5 <210> 82 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 1in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.2 <400> 82 Asp Tyr Val Met His 1 5 <210> 83 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 1 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.2 <400> 83 Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Val 1 5 <210> 84 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 2 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.2 <400> 84 Ile Ser Thr Tyr Tyr Gly His Gly 1 5 <210> 85 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 2 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.2 <400> 85 Val Ile Ser Thr Tyr Tyr Gly His Gly Ser Tyr Asn Gln Arg Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 86 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 3 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.2 <400> 86 Gly Gly Tyr Gly Ser Ser Ser Leu Ala Gly Asn Phe Asp Val 1 5 10 <210> 87 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 3 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.2 <400> 87 Val Arg Gly Gly Tyr Gly Ser Ser Ser Leu Ala Gly Asn Phe Asp Val 1 5 10 15 <210> 88 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 1 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.3 <400> 88 Asn Tyr Trp Leu Gly 1 5 <210> 89 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 1 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.3 <400> 89 Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr Trp 1 5 <210> 90 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 2 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.3 <400> 90 Ile Tyr Pro Gly Gly Asp Tyr Pro 1 5 <210> 91 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 2 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.3 <400> 91 Asp Ile Tyr Pro Gly Gly Asp Tyr Pro Thr Tyr Ser Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Val <210> 92 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 3 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.3 <400> 92 Ser Gly Asn Tyr Asp Glu Val Ala Tyr 1 5 <210> 93 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 3 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.3 <400> 93 Ala Arg Ser Gly Asn Tyr Asp Glu Val Ala Tyr 1 5 10 <210> 94 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 1 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.4 <400> 94 Asn Tyr Leu Ile Glu 1 5 <210> 95 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 1 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.4 <400> 95 Gly Tyr Ala Phe Thr Asn Tyr Leu 1 5 <210> 96 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 2 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.4 <400> 96 Ile Asn Pro Gly Ser Gly Gly Ile 1 5 <210> 97 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 2 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.4 <400> 97 Ile Asn Pro Gly Ser Gly Gly Ile Ile Tyr Asn Glu Lys Phe Thr Asp 1 5 10 15 <210> 98 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 3 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.4 <400> 98 Ser Asn Tyr Tyr Gly Thr Thr Tyr Trp His Phe Asp Val 1 5 10 <210> 99 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 3 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.4 <400> 99 Ala Arg Ser Asn Tyr Tyr Gly Thr Thr Tyr Trp His Phe Asp Val 1 5 10 15 <210> 100 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 1 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.5 <400> 100 Asn Phe Val Ile His 1 5 <210> 101 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 1 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.5 <400> 101 Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Phe Val 1 5 <210> 102 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 2 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.5 <400> 102 Phe Asn Pro His Lys Asn Gly Ala 1 5 <210> 103 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 2 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.5 <400> 103 Phe Asn Pro His Lys Asn Gly Ala Glu Tyr Asn Glu Lys Phe Gln Val 1 5 10 15 <210> 104 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 3 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.5 <400> 104 Ser Phe Tyr Tyr Tyr Ser Met Asp Tyr 1 5 <210> 105 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 3 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.5 <400> 105 Ala Arg Ser Phe Tyr Tyr Tyr Ser Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 106 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 1 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.6 <400> 106 Thr Tyr Gly Val Tyr 1 5 <210> 107 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 1 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.6 <400> 107 Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr Gly 1 5 <210> 108 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of CDR 2 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.6 <400> 108 Ile Trp Gly Asp Gly Ser Thr 1 5 <210> 109 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 3 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.6 <400> 109 Pro Asp Asp Val 1 <210> 110 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 3 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.6 <400> 110 Ala Lys Pro Asp Asp Val 1 5 <210> 111 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 1 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.7 <400> 111 Asn Tyr Phe Met Ser 1 5 <210> 112 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 1 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.7 <400> 112 Gly Ile Thr Phe Arg Asn Tyr Phe 1 5 <210> 113 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 2 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.7 <400> 113 Ile Ser Ser Ala Gly Gly Tyr Thr 1 5 <210> 114 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 2 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.7 <400> 114 Ile Ser Ser Ala Gly Gly Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 1 5 10 15 <210> 115 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 3 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.7 <400> 115 Gln Glu Val Pro Tyr Pro Tyr Ala Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 116 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 3 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.7 <400> 116 Ala Arg Gln Glu Val Pro Tyr Pro Tyr Ala Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 117 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 1 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.8 <400> 117 Thr Tyr Gly Val Ser 1 5 <210> 118 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 1 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.8 <400> 118 Gly Phe Ser Leu Thr Thr Tyr Gly 1 5 <210> 119 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of CDR 2 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.8 <400> 119 Ile Trp Gly Asp Gly Ser Thr 1 5 <210> 120 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 3 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.8 <400> 120 Pro Asp Asp Tyr 1 <210> 121 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 3 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.8 <400> 121 Ala Lys Pro Asp Asp Tyr 1 5 <210> 122 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 1 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.9 <400> 122 Asn Tyr Gly Val Ser 1 5 <210> 123 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 1 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.9 <400> 123 Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Gly 1 5 <210> 124 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 2 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.9 <400> 124 Ile Tyr Thr Phe Thr Gly Glu Ala 1 5 <210> 125 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 2 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.9 <400> 125 Ile Tyr Thr Phe Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Ile Asp Asp Phe Arg Gly 1 5 10 15 <210> 126 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 3 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.9 <400> 126 Arg Asn Gly Ala Trp Phe Glu Asp 1 5 <210> 127 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 3 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.9 <400> 127 Ser Arg Arg Asn Gly Ala Trp Phe Glu Asp 1 5 10 <210> 128 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 1 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.10 <400> 128 Asn Tyr Ala Met Ser 1 5 <210> 129 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 1 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.10 <400> 129 Gly Ile Thr Phe Arg Asn Tyr Ala 1 5 <210> 130 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 2 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.10 <400> 130 Ile Ser Ser Tyr Gly Gly Tyr Thr 1 5 <210> 131 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 2 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.10 <400> 131 Ile Ser Ser Tyr Gly Gly Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 1 5 10 15 <210> 132 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 3 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.10 <400> 132 Gln Glu Val Pro Tyr Pro Tyr Pro Met Asp Asn 1 5 10 <210> 133 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 3 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.10 <400> 133 Ala Arg Gln Glu Val Pro Tyr Pro Tyr Pro Met Asp Asn 1 5 10 <210> 134 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 1 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.11 <400> 134 Ile Tyr Trp Ile Asn 1 5 <210> 135 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 1 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.11 <400> 135 Gly Tyr Ala Phe Ser Ile Tyr Trp 1 5 <210> 136 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 2 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.11 <400> 136 Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr 1 5 <210> 137 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 2 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.11 <400> 137 Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys Gly 1 5 10 15 <210> 138 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 3 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.11 <400> 138 Trp Gly Asp Asp Tyr Ala Met Asp Phe 1 5 <210> 139 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 3 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.11 <400> 139 Gly Arg Trp Gly Asp Asp Tyr Ala Met Asp Phe 1 5 10 <210> 140 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 1 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.12 <400> 140 Asn Tyr Leu Ile Glu 1 5 <210> 141 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 1 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.12 <400> 141 Gly Tyr Val Phe Ile Asn Tyr Leu 1 5 <210> 142 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 2 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.12 <400> 142 Ile His Ser Gly Ser Gly Gly Thr 1 5 <210> 143 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 2 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.12 <400> 143 Ile His Ser Gly Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Asp Asn Phe Lys Asp 1 5 10 15 <210> 144 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 3 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.12 <400> 144 Arg Asn Phe Gly Asn Tyr Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 145 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 3 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.12 <400> 145 Ala Arg Arg Asn Phe Gly Asn Tyr Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 146 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 1 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.13 <400> 146 Ile Tyr Trp Ile Asn 1 5 <210> 147 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 1 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.13 <400> 147 Gly Tyr Ala Phe Ser Ile Tyr Trp 1 5 <210> 148 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 2 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.13 <400> 148 Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr 1 5 <210> 149 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 2 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.13 <400> 149 Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys Gly 1 5 10 15 <210> 150 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 3 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.13 <400> 150 Trp Gly Asp Asp Tyr Ala Met Asp Phe 1 5 <210> 151 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 3 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.13 <400> 151 Gly Arg Trp Gly Asp Asp Tyr Ala Met Asp Phe 1 5 10 <210> 152 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 1 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.14 <400> 152 Gly Tyr Val Ile His 1 5 <210> 153 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 1 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.14 <400> 153 Gly Tyr Ala Phe Thr Gly Tyr Val 1 5 <210> 154 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 2 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.14 <400> 154 Leu Asn Pro His Lys Asp Asp Ser 1 5 <210> 155 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 2 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.14 <400> 155 Leu Asn Pro His Lys Asp Asp Ser Glu Tyr Asn Glu Lys Phe Arg Gly 1 5 10 15 <210> 156 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of CDR 3 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.14 <400> 156 Gly Tyr Tyr Tyr Tyr Ser Met Asp Tyr 1 5 <210> 157 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 3 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No.14 <400> 157 Ala Arg Gly Tyr Tyr Tyr Tyr Ser Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 158 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of the variable region of light chain of humanized anti-hTfR antibody No.1 <400> 158 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Asn Ser Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Trp Thr Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Arg 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 159 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of the variable region of light chain of humanized anti-hTfR antibody No.1 <400> 159 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Asn Ser Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Leu 35 40 45 Tyr Trp Thr Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Arg 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 160 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 3 of the variable region of light chain of humanized anti-hTfR antibody No.1 <400> 160 Asp Ile Gln Val Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Asn Ser Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Trp Thr Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Arg 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 161 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 4 of the variable region of light chain of humanized anti-hTfR antibody No.1 <400> 161 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Asn Ser Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Trp Thr Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Arg 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 162 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 5 of the variable region of light chain of humanized anti-hTfR antibody No.1 <400> 162 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Asn Ser Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Trp Thr Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Arg 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 163 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 6 of the variable region of light chain of humanized anti-hTfR antibody No.1 <400> 163 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Asn Ser Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Trp Thr Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Arg 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 164 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of the light chain of humanized anti-hTfR antibody No.1 containing amino acid sequence 6 as the variable region <400> 164 Asp Ile Gln Val Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Asn Ser Ala 20 25 30 Val Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Trp Thr Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Val Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Arg 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 165 <211> 725 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleotide sequence encoding the amino acid sequence of the light chain of humanized anti-hTfR antibody No.1 containing amino acid sequence 6 as the variable region, synthetic sequence <400> 165 acgcgtgccg ccaccatggg ctggagctgg attctgctgt tcctcctgag cgtgacagca 60 ggagtgcaca gcgacatcca ggtcacacag tcaccaagtt ttctgagcgc aagcgtgggc 120 gacagggtca ctatcacatg caaggcaagc caggacgtga actccgcagt ggcctggttc 180 cagcagaagc cagggaaagc acccaagctg ctgatctatt ggacctctac aaggcacacc 240 ggtgtcccag atcggttctc aggttccggc agcggaacag tgtatactct gaccatttcc 300 agcctgcagc ctgaagactt cgctacttac tattgccagc agcattactc caccccaaga 360 acatttggcg gagggactaa agtggagatc aagaggaccg tggccgctcc ctccgtcttc 420 atttttcccc ctagcgacga acagctgaag agtggcacag cctcagtggt ctgtctgctg 480 aacaatttct accctaggga ggctaaagtg cagtggaagg tcgataacgc actgcagtct 540 ggaaatagtc aggagtcagt gacagaacag gactccaaag atagcactta ttctctgtct 600 agtacactga ctctgagcaa ggccgattac gaaaagcaca aagtgtatgc ttgcgaagtc 660 acccatcagg ggctgtcatc accagtcacc aagtcattca atagaggcga gtgctaagcg 720 gccgc 725 <210> 166 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of the variable region of the heavy chain of humanized anti-hTfR antibody No.1 <400> 166 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Asn Ile Asn Thr Asn Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asn Arg Tyr Asp Glu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 167 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of the variable region of the heavy chain of humanized anti-hTfR antibody No.1 <400> 167 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Asn Ile Asn Thr Asn Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asn Arg Tyr Asp Glu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 168 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 3 of the variable region of the heavy chain of humanized anti-hTfR antibody No.1 <400> 168 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val 35 40 45 Ser Asn Ile Asn Thr Asn Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Lys Asn Arg Tyr Asp Glu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 169 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 4 of the variable region of the heavy chain of humanized anti-hTfR antibody No.1 <400> 169 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Asn Ile Asn Thr Asn Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Arg Tyr Asp Glu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 170 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 5 of the variable region of the heavy chain of humanized anti-hTfR antibody No.1 <400> 170 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val 35 40 45 Ser Asn Ile Asn Thr Asn Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Arg Tyr Asp Glu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 171 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 6 of the variable region of the heavy chain of humanized anti-hTfR antibody No.1 <400> 171 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val 35 40 45 Ala Asn Ile Asn Thr Asn Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Asn Asn Arg Tyr Asp Glu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 172 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of the heavy chain of humanized anti-hTfR antibody No.1 containing amino acid sequence 6 as the variable region <400> 172 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val 35 40 45 Ala Asn Ile Asn Thr Asn Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Asn Asn Arg Tyr Asp Glu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 173 <211> 1421 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleotide sequence encoding the amino acid sequence of the heavy chain of humanized anti-hTfR antibody No.1 containing amino acid sequence 6 as the variable region, synthetic sequence <400> 173 acgcgtgccg ccaccatggg ctggagctgg attctgctgt tcctcctgag cgtgacagca 60 ggagtgcaca gcgaagtgca gctggtcgaa tcaggggggg ggctggtgca gcctggaggc 120 agcctgagac tgtcctgcgc cgcttctggc ttgaccttta gcaactacgg gatgtcctgg 180 gtgcggcagg ctcctggcaa gggactggag ttggtggcca acatcaatac caacggcgga 240 agtacatact atcccgattc agtgaagggc cggttcacca tcagcaggga caacgccaag 300 aacagcctgt atctgcagat gaactctctg agggccgagg atacagccgt gtactattgc 360 actaacaacc ggtacgacga ggactattgg ggccagggca ccctggtgac agtgtctagc 420 gcctctacca agggcccaag cgtgtttcct ctggctccat cctctaaatc cacctctggc 480 ggcacagccg ctctgggctg tctggtgaag gattacttcc cagagcccgt gacagtgtct 540 tggaacagcg gcgccctgac ctccggcgtg cacacatttc ctgctgtgct gcagagctcc 600 ggcctgtaca gcctgtctag cgtggtgacc gtgccatcct ctagcctggg cacccagaca 660 tatatctgca acgtgaatca caagcccagc aatacaaagg tggataagaa ggtggagcca 720 aagtcctgtg acaagaccca cacatgcccc ccttgtcctg ctccagagct gctgggagga 780 ccaagcgtgt tcctgtttcc acccaagccc aaggataccc tgatgatctc tcggacccca 840 gaggtgacat gcgtggtggt ggatgtgagc cacgaggacc ccgaggtgaa gttcaactgg 900 tatgtggacg gcgtggaggt gcacaatgct aagaccaagc ccagggagga gcagtacaac 960 tccacctata gagtggtgtc tgtgctgaca gtgctgcacc aggattggct gaacggcaag 1020 gagtataagt gcaaggtgtc caataaggcc ctgcccgctc ctatcgagaa gaccatctct 1080 aaggccaagg gccagcccag agagcctcag gtgtacacac tgcctccatc ccgggatgag 1140 ctgaccaaga accaggtgtc tctgacatgt ctggtcaagg gcttctatcc ctctgacatc 1200 gccgtggagt gggagagcaa tggccagcct gagaacaatt acaagaccac accccctgtg 1260 ctggattccg acggctcttt ctttctgtat agcaagctga ccgtggacaa gtcccggtgg 1320 cagcagggca acgtgttcag ctgttccgtg atgcacgaag ctctgcataa tcactatact 1380 cagaaatccc tgtcactgtc acctggtaaa taagcggccg c 1421 <210> 174 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of the variable region of the light chain of humanized anti-hTfR antibody No.2 <400> 174 Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Asn 20 25 30 Leu Gln Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Arg 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys 100 105 <210> 175 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of the variable region of the light chain of humanized anti-hTfR antibody No.2 <400> 175 Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Asn 20 25 30 Leu Gln Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Arg 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 176 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 3 of the variable region of the light chain of humanized anti-hTfR antibody No.2 <400> 176 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Asn 20 25 30 Leu Gln Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala 65 70 75 80 Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Arg 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 177 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 4 of the variable region of the light chain of humanized anti-hTfR antibody No.2 <400> 177 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Asn 20 25 30 Leu Gln Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Arg 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 178 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 5 of the variable region of the light chain of humanized anti-hTfR antibody No.2 <400> 178 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Asn 20 25 30 Leu Gln Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Arg 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 179 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 6 of the variable region of the light chain of humanized anti-hTfR antibody No.2 <400> 179 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Asn 20 25 30 Leu Gln Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala 65 70 75 80 Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Leu Cys Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Arg 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 180 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of the light chain of humanized anti-hTfR antibody No.2 containing amino acid sequence 6 as the variable region <400> 180 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Asn 20 25 30 Leu Gln Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala 65 70 75 80 Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Leu Cys Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Arg 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 181 <211> 725 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleotide sequence encoding the amino acid sequence of the light chain of humanized anti-hTfR antibody No.2 containing amino acid sequence 6 as the variable region, synthetic sequence <400> 181 acgcgtgccg ccaccatggg ctggagctgg attctgctgt tcctcctgag cgtgacagca 60 ggagtgcaca gcgaaattgt gctgacccag tctcccgatt tccagtccgt gacccccaag 120 gagaaagtca ccatcacatg cagagcatca cagtccatta gcaacaatct gcagtggtac 180 cagcagaagc cagaccagag ccccaagctg ctgatcaaat atgcctctca gagtatttca 240 ggcatacctt ctaggttctc cggtagcggc tctggaaccg actttactct gaccatcaac 300 agtctggagg ctgaagatgc cgctacatac ttgtgccagc agagtaattc atggcctagg 360 acctttggcc aggggacaaa ggtggagatc aaaaggactg tggcagcccc aagtgtcttc 420 atttttcccc cttcagacga acagctgaag agcggcacag catctgtggt ctgtctgctg 480 aacaatttct acccacggga ggctaaggtg cagtggaaag tcgataacgc actgcagtcc 540 ggaaatagcc aggagtctgt gactgaacag gacagtaagg attcaaccta ttccctgtcc 600 agcacactga ctctgagcaa agccgattac gagaagcaca aagtgtatgc ttgcgaagtc 660 acacatcagg ggctgtctag tcccgtgact aagtctttta ataggggtga atgttaagcg 720 gccgc 725 <210> 182 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of the variable region of the heavy chain of humanized anti-hTfR antibody No.2 <400> 182 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Val Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Val Ile Ser Thr Tyr Tyr Gly His Gly Ser Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Tyr Gly Ser Ser Ser Leu Ala Gly Asn Phe Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 115 120 <210> 183 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of the variable region of the heavy chain of humanized anti-hTfR antibody No.2 <400> 183 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Val Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Val Ile Ser Thr Tyr Tyr Gly His Gly Ser Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Tyr Gly Ser Ser Ser Leu Ala Gly Asn Phe Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 115 120 <210> 184 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 3 of the variable region of the heavy chain of humanized anti-hTfR antibody No.2 <400> 184 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Val Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Val Ile Ser Thr Tyr Tyr Gly His Gly Ser Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Ala Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ser Gly Gly Tyr Gly Ser Ser Ser Leu Ala Gly Asn Phe Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 115 120 <210> 185 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 4 of the variable region of the heavy chain of humanized anti-hTfR antibody No.2 <400> 185 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Val Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Val Ile Ser Thr Tyr Tyr Gly His Gly Ser Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Tyr Gly Ser Ser Ser Leu Ala Gly Asn Phe Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr 115 120 <210> 186 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 5 of the variable region of the heavy chain of humanized anti-hTfR antibody No.2 <400> 186 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Val Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Val Ile Ser Thr Tyr Tyr Gly His Gly Ser Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Tyr Gly Ser Ser Ser Leu Ala Gly Asn Phe Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Val Val Thr 115 120 <210> 187 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 6 of the variable region of the heavy chain of humanized anti-hTfR antibody No.2 <400> 187 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Val Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Val Ile Ser Thr Tyr Tyr Gly His Gly Ser Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Ala Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Val Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Arg Gly Gly Tyr Gly Ser Ser Ser Leu Ala Gly Asn Phe Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr 115 120 <210> 188 <211> 453 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of the heavy chain of humanized anti-hTfR antibody No.2 containing amino acid sequence 6 as the variable region <400> 188 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Val Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Val Ile Ser Thr Tyr Tyr Gly His Gly Ser Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Ala Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Val Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Arg Gly Gly Tyr Gly Ser Ser Ser Leu Ala Gly Asn Phe Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 115 120 125 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly 130 135 140 Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 145 150 155 160 Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 165 170 175 Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 180 185 190 Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val 195 200 205 Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys 210 215 220 Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu 225 230 235 240 Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 245 250 255 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 260 265 270 Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 275 280 285 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 290 295 300 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 305 310 315 320 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala 325 330 335 Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 340 345 350 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln 355 360 365 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 370 375 380 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 385 390 395 400 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 405 410 415 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 420 425 430 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 435 440 445 Leu Ser Pro Gly Lys 450 <210> 189 <211> 1442 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleotide sequence encoding the amino acid sequence of the heavy chain of humanized anti-hTfR antibody No.2 containing amino acid sequence 6 as the variable region, synthetic sequence <400> 189 acgcgtgccg ccaccatggg ctggagctgg attctgctgt tcctcctgag cgtgacagca 60 ggagtgcaca gccaggtgca gctggtccag tcaggagccg aagtgaaaaa gcccggagcc 120 tcagtcaaag tgtcttgtaa agcatcaggt tatacattta cagactacgt catgcactgg 180 gtgaggcagg cacctggaca gggtctggaa tggatcggcg tgatctccac ttactatggc 240 catggaagct acaaccagag attcaagggc agggcgacaa tgactgtaga caaatcaatt 300 tccactgctt atatggagct ggtaaggctg cggtccgacg ataccgctgt gtactattgc 360 gtacgaggag gatacggctc cagctctctg gctggtaatt tcgatgtgtg ggggcagggt 420 accacagtca ccgtgagttc agcaagcaca aagggcccat ctgtgtttcc actggccccc 480 tccagcaaaa gcacctctgg gggtacagcc gctctgggat gtctggtgaa ggattatttc 540 ccagagccag tcaccgtgtc ctggaacagc ggagccctga catctggagt ccacactttt 600 ccagctgtgc tgcagtctag tgggctgtac tccctgtcat ccgtggtcac tgtccccagc 660 tctagtctgg gtacccagac atatatctgc aacgtgaatc acaagccatc taataccaaa 720 gtcgacaaga aagtggaacc caagtcctgt gataaaactc atacctgccc cccttgtcct 780 gcaccagagc tgctgggagg accatccgtg ttcctgtttc cacccaagcc taaagacacc 840 ctgatgatta gccgaactcc cgaagtcacc tgcgtggtcg tggacgtgtc tcacgaggac 900 cctgaagtca agtttaactg gtacgtggat ggcgtcgagg tgcataatgc taagacaaaa 960 ccccgagagg aacagtacaa cagtacatat cgtgtcgtgt cagtgctgac cgtcctgcat 1020 caggactggc tgaacgggaa ggaatataag tgcaaagtgt ccaataaggc actgcccgcc 1080 cctatcgaga aaaccattag caaggccaaa ggacagccta gggaaccaca ggtgtacaca 1140 ctgcctccat cccgggacga gctgactaag aaccaggtca gcctgacctg tctggtgaaa 1200 ggcttctatc cttcagatat cgctgtggag tgggaaagta atggacagcc agagaacaat 1260 tacaagacta ccccccctgt gctggactct gatgggagtt tctttctgta ttctaagctg 1320 accgtggata aaagtcggtg gcagcagggt aatgtcttta gttgttcagt gatgcacgaa 1380 gcactgcaca accactacac ccagaaatca ctgtcactgt caccagggaa ataagcggcc 1440 gc 1442 <210> 190 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of the variable region of the light chain of humanized anti-hTfR antibody No.3 <400> 190 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 191 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of the variable region of the light chain of humanized anti-hTfR antibody No.3 <400> 191 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 192 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 3 of the variable region of the light chain of humanized anti-hTfR antibody No.3 <400> 192 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Ser Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Pro 35 40 45 Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 193 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 4 of the variable region of the light chain of humanized anti-hTfR antibody No.3 <400> 193 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 194 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 5 of the variable region of the light chain of humanized anti-hTfR antibody No.3 <400> 194 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 195 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 6 of the variable region of the light chain of humanized anti-hTfR antibody No.3 <400> 195 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Phe Phe Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 196 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of the light chain of humanized anti-hTfR antibody No.3 containing amino acid sequence 2 as the variable region <400> 196 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 197 <211> 740 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleotide sequence encoding the amino acid sequence of the light chain of humanized anti-hTfR antibody No.3 containing amino acid sequence 2 as the variable region, synthetic sequence <400> 197 acgcgtgccg ccaccatggg ctggagctgg attctgctgt tcctcctgag cgtgacagca 60 ggagtgcaca gcgacatcgt gatgacccag actcccctga gcctgagcgt gacacctggc 120 cagcctgcca gcatcagctg cagaagctct cagagcctgg tgcacagcaa cggcaacacc 180 tacctgcact ggtatctgca gaagcccggc cagagccctc agctgctgat ctacaaggtg 240 tccaacagat tcagcggcgt gcccgacaga ttctccggca gcggctctgg caccgacttc 300 accctgaaga tttccagagt ggaagccgag gacgtgggcg tgtactactg cagccagagc 360 acccacgtgc cctggacatt cggccagggc accaaggtgg aaatcaagag aaccgtggcc 420 gctcccagcg tgttcatctt cccacctagc gacgagcagc tgaagtccgg cacagcctct 480 gtcgtgtgcc tgctgaacaa cttctacccc cgcgaggcca aggtgcagtg gaaggtggac 540 aacgccctgc agagcggcaa cagccaggaa agcgtgaccg agcaggactc caaggacagc 600 acctacagcc tgagcagcac cctgaccctg agcaaggccg actacgagaa gcacaaggtg 660 tacgcctgcg aagtgaccca ccagggcctg tctagccccg tgaccaagag cttcaacaga 720 ggcgagtgct aagcggccgc 740 <210> 198 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of the light chain of humanized anti-hTfR antibody No.3 containing amino acid sequence 4 as the variable region <400> 198 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 199 <211> 740 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleotide sequence encoding the amino acid sequence of the light chain of humanized anti-hTfR antibody No.3 containing amino acid sequence 4 as the variable region, synthetic sequence <400> 199 acgcgtgccg ccaccatggg ctggagctgg attctgctgt tcctcctgag cgtgacagca 60 ggagtgcaca gcgacatcgt gatgacccag agccccctga gcctgcctgt gacacctggc 120 gagcctgcca gcatcagctg cagatctagc cagagcctgg tgcacagcaa cggcaacacc 180 tacctgcact ggtatctgca gaagcccggc cagagccctc agctgctgat ctacaaggtg 240 tccaacagat tcagcggcgt gcccgacaga ttctccggca gcggctctgg caccgacttc 300 accctgaaga tctccagagt ggaagccgag gacgtgggcg tgtactactg cagccagagc 360 acccacgtgc cctggacatt cggccagggc accaaggtgg aaatcaagag aaccgtggcc 420 gctcccagcg tgttcatctt cccacctagc gacgagcagc tgaagtccgg cacagcctct 480 gtcgtgtgcc tgctgaacaa cttctacccc cgcgaggcca aggtgcagtg gaaggtggac 540 aacgccctgc agagcggcaa cagccaggaa agcgtgaccg agcaggactc caaggacagc 600 acctacagcc tgagcagcac cctgaccctg agcaaggccg actacgagaa gcacaaggtg 660 tacgcctgcg aagtgaccca ccagggcctg tctagccccg tgaccaagag cttcaacaga 720 ggcgagtgct aagcggccgc 740 <210> 200 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of the light chain of humanized anti-hTfR antibody No.3 containing amino acid sequence 5 as the variable region <400> 200 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 201 <211> 740 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleotide sequence encoding the amino acid sequence of the light chain of humanized anti-hTfR antibody No.3 containing amino acid sequence 5 as the variable region, synthetic sequence <400> 201 acgcgtgccg ccaccatggg ctggagctgg attctgctgt tcctcctgag cgtgacagca 60 ggagtgcaca gcgacatcgt gatgacccag acacccctga gcctgcctgt gacacctggc 120 gagcctgcca gcatcagctg cagatctagc cagagcctgg tgcacagcaa cggcaacacc 180 tacctgcact ggtatctgca gaagcccggc cagagccctc agctgctgat ctacaaggtg 240 tccaacagat tcagcggcgt gcccgacaga ttctccggca gcggctctgg caccgacttc 300 accctgaaga tctccagagt ggaagccgag gacgtgggcg tgtactactg cagccagagc 360 acccacgtgc cctggacatt cggccagggc accaggctgg aaatcaagag aaccgtggcc 420 gctcccagcg tgttcatctt cccacctagc gacgagcagc tgaagtccgg cacagcctct 480 gtcgtgtgcc tgctgaacaa cttctacccc cgcgaggcca aggtgcagtg gaaggtggac 540 aacgccctgc agagcggcaa cagccaggaa agcgtgaccg agcaggactc caaggacagc 600 acctacagcc tgagcagcac cctgaccctg agcaaggccg actacgagaa gcacaaggtg 660 tacgcctgcg aagtgaccca ccagggcctg tctagccccg tgaccaagag cttcaacaga 720 ggcgagtgct aagcggccgc 740 <210> 202 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of the light chain of humanized anti-hTfR antibody No.3 containing amino acid sequence 6 as the variable region <400> 202 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Phe Phe Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 203 <211> 740 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleotide sequence encoding the amino acid sequence of the light chain of humanized anti-hTfR antibody No.3 containing amino acid sequence 6 as the variable region, synthetic sequence <400> 203 acgcgtgccg ccaccatggg ctggagctgg attctgctgt tcctcctgag cgtgacagca 60 ggagtgcaca gcgacatcgt gatgacccag actcccctga gcctgagcgt gacacctggc 120 cagcctgcca gcatcagctg cagatccagc cagagcctgg tgcacagcaa cggcaacacc 180 tacctgcact ggtatctgca gaagcccggc cagagccctc agctgctgat ctacaaggtg 240 tccaacagat tcagcggcgt gcccgacaga ttctccggca gcggctctgg caccgacttc 300 accctgaaga tttccagagt ggaagccgag gacgtgggcg tgttcttctg cagccagagc 360 acccacgtgc cctggacatt cggccagggc accaaggtgg aaatcaagag aaccgtggcc 420 gctcccagcg tgttcatctt cccacctagc gacgagcagc tgaagtccgg cacagcctct 480 gtcgtgtgcc tgctgaacaa cttctacccc cgcgaggcca aggtgcagtg gaaggtggac 540 aacgccctgc agagcggcaa cagccaggaa agcgtgaccg agcaggactc caaggacagc 600 acctacagcc tgagcagcac cctgaccctg agcaaggccg actacgagaa gcacaaggtg 660 tacgcctgcg aagtgaccca ccagggcctg tctagccccg tgaccaagag cttcaacaga 720 ggcgagtgct aagcggccgc 740 <210> 204 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 1 of the variable region of the heavy chain of humanized anti-hTfR antibody No.3 <400> 204 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Trp Leu Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Gly Asp Tyr Pro Thr Tyr Ser Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Val Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Gly Asn Tyr Asp Glu Val Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 205 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of the variable region of the heavy chain of humanized anti-hTfR antibody No.3 <400> 205 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Trp Leu Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Gly Asp Tyr Pro Thr Tyr Ser Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Val Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Gly Asn Tyr Asp Glu Val Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 206 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 3 of the variable region of the heavy chain of humanized anti-hTfR antibody No.3 <400> 206 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Trp Leu Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Gly Asp Tyr Pro Thr Tyr Ser Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Val Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Gly Asn Tyr Asp Glu Val Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 207 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 4 of the variable region of the heavy chain of humanized anti-hTfR antibody No.3 <400> 207 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Trp Leu Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Gly Asp Tyr Pro Thr Tyr Ser Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Val Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Gly Asn Tyr Asp Glu Val Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 208 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 5 of the variable region of the heavy chain of humanized anti-hTfR antibody No.3 <400> 208 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Trp Leu Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Gly Asp Tyr Pro Thr Tyr Ser Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Val Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Gly Asn Tyr Asp Glu Val Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Val Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 209 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 6 of the variable region of the heavy chain of humanized anti-hTfR antibody No.3 <400> 209 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Met Asn Tyr 20 25 30 Trp Leu Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Gly Asp Tyr Pro Thr Tyr Ser Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Val Lys Ala Ile Ile Ser Ala Asp Thr Ser Ile Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Leu Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Gly Asn Tyr Asp Glu Val Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 210 <211> 448 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of the heavy chain of humanized anti-hTfR antibody No.3 containing amino acid sequence 2 as the variable region <400> 210 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Trp Leu Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Gly Asp Tyr Pro Thr Tyr Ser Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Val Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Gly Asn Tyr Asp Glu Val Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 165 170 175 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205 Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 210 215 220 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 211 <211> 1427 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleotide sequence encoding the amino acid sequence of the heavy chain of humanized anti-hTfR antibody No.3 containing amino acid sequence 2 as the variable region, synthetic sequence <400> 211 acgcgtgccg ccaccatggg ctggagctgg attctgctgt tcctcctgag cgtgacagca 60 ggagtgcaca gcgaggtgca actagtgcag tctggagcag aggtgaaaaa gcccggggag 120 tctctgaaga tttcctgtaa gggttctgga tacagcttta ccaactactg gctgggatgg 180 gtgcgccaga tgcccgggaa aggcctggag tggatggggg acatctaccc cggcggagac 240 taccctacat acagcgagaa gttcaaggtc caggtcacca tctcagccga caagtccatc 300 agcaccgcct acctgcagtg gagcagcctg aaggcctcgg acaccgccat gtattactgt 360 gcgagatcag gcaattacga cgaagtggcc tactggggcc aaggaaccct ggtcaccgtc 420 tcctcagcta gcaccaaggg cccatcggtc ttccccctgg caccctcctc caagagcacc 480 tctgggggca cagcggccct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga accggtgacg 540 gtgtcgtgga actcaggcgc cctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccggc tgtcctacag 600 tcctcaggac tctactccct cagcagcgtg gtgaccgtgc cctccagcag cttgggcacc 660 cagacctaca tctgcaacgt gaatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagaaagtt 720 gagcccaaat cttgtgacaa aactcacacg tgcccaccgt gcccagcacc tgaactcctg 780 ggaggtccgt cagtcttcct cttcccccca aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg 840 acccctgagg tcacatgcgt ggtggtggac gtgagccacg aagaccctga ggtcaagttc 900 aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag 960 tacaacagca cgtaccgggt ggtcagcgtc ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaat 1020 ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac aaagccctcc cagcccccat cgagaaaacc 1080 atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg 1140 gatgagctga ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctatcccagc 1200 gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct 1260 cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctacagca agctcaccgt ggacaagagc 1320 aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac 1380 tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg ggtaaataag cggccgc 1427 <210> 212 <211> 445 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of the heavy chain (IgG4) of humanized anti-hTfR antibody No.3 containing amino acid sequence 2 as the variable region <400> 212 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Trp Leu Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Gly Asp Tyr Pro Thr Tyr Ser Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Val Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Gly Asn Tyr Asp Glu Val Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 165 170 175 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser 195 200 205 Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys 210 215 220 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 225 230 235 240 Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu 245 250 255 Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln 260 265 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anti-hTfR antibody No.3 containing amino acid sequence 2 as the variable region, synthetic sequence <400> 213 acgcgtgccg ccaccatggg ctggagctgg attctgctgt tcctcctgag cgtgacagca 60 ggagtgcaca gcgaggtgca actagtgcag tctggagcag aggtgaaaaa gcccggggag 120 tctctgaaga tttcctgtaa gggttctgga tacagcttta ccaactactg gctgggatgg 180 gtgcgccaga tgcccgggaa aggcctggag tggatggggg acatctaccc cggcggagac 240 taccctacat acagcgagaa gttcaaggtc caggtcacca tctcagccga caagtccatc 300 agcaccgcct acctgcagtg gagcagcctg aaggcctcgg acaccgccat gtattactgt 360 gcgagatcag gcaattacga cgaagtggcc tactggggcc aaggaaccct ggtcaccgtc 420 tcctcagcta gcaccaaggg cccatcggtc ttccccctgg cgccctgctc caggagcacc 480 tccgagagca cagccgccct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga accggtgacg 540 gtgtcgtgga actcaggcgc cctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccggc tgtcctacag 600 tcctcaggac tctactccct cagcagcgtg gtgaccgtgc cctccagcag cttgggcacg 660 aagacctaca cctgcaacgt agatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagagagtt 720 gagtccaaat atggtccccc atgcccacca tgcccagcac ctgagttcct ggggggtcca 780 tcagtcttcc tgttcccccc aaaacccaag gacactctca tgatctcccg gacccctgag 840 gtcacgtgcg tggtggtgga cgtgagccag gaagaccccg aggtccagtt caactggtac 900 gtggatggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gttcaacagc 960 acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa cggcaaggag 1020 tacaagtgca aggtctccaa caaaggcctc ccgtcctcca tcgagaaaac catctccaaa 1080 gccaaagggc agccccgaga gccacaggtg tacaccctgc ccccatccca ggaggagatg 1140 accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctaccccag cgacatcgcc 1200 gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg 1260 gactccgacg gctccttctt cctctacagc aggctcaccg tggacaagag caggtggcag 1320 gaggggaatg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacacag 1380 aagagcctct ccctgtctcc gggtaaataa gcggccgc 1418 <210> 214 <211> 43 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer hTfR5', synthetic sequence <400> 214 ccgacgcgtc gccaccatga tggatcaagc tagatcagca ttc 43 <210> 215 <211> 59 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer hTfR3', synthetic sequence <400> 215 ataatgcggc cgcttaatga tgatgatgat gatgaaactc attgtcaatg tcccaaacg 59 <210> 216 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer Hyg-Sfi5', synthetic sequence <400> 216 gaggccgcct cggcctctga 20 <210> 217 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer Hyg-BstX3', synthetic sequence <400> 217 aaccatcgtg atgggtgcta ttcctttgc 29 <210> 218 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of the variable region of the light chain of anti-hTfR antibody No.1 <400> 218 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Ser Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Asn Ser Ala 20 25 30 Val Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Trp Thr Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Val Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Leu Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Arg 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 219 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of the variable region of the heavy chain of anti-hTfR antibody No.1 <400> 219 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Ser Trp Ile Arg Gln Thr Pro Asp Lys Arg Leu Glu Leu Val 35 40 45 Ala Asn Ile Asn Thr Asn Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Asn Asn Arg Tyr Asp Glu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 220 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of the variable region of the light chain of anti-hTfR antibody No.2 <400> 220 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Asp Ser Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Asn 20 25 30 Leu Gln Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Thr 65 70 75 80 Glu Asp Phe Gly Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Arg 85 90 95 Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg 100 105 <210> 221 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of the variable region of the heavy chain of anti-hTfR antibody No.2 <400> 221 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Val 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Val Met His Trp Val Arg Gln Ser His Ala Lys Ser Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Val Ile Ser Thr Tyr Tyr Gly His Gly Ser Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Glu Leu Val Arg Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Arg Gly Gly Tyr Gly Ser Ser Ser Leu Ala Gly Asn Phe Asp Val 100 105 110 Trp Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 222 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of the variable region of the light chain of anti-hTfR antibody No.3 <400> 222 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Thr Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Phe Phe Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 Arg <210> 223 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of the variable region of the heavy chain of anti-hTfR antibody No.3 <400> 223 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Met Asn Tyr 20 25 30 Trp Leu Gly Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Gly Asp Tyr Pro Thr Tyr Ser Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Val Lys Ala Ile Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ser Ser Ser Val Tyr 65 70 75 80 Leu His Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Gly Asn Tyr Asp Glu Val Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Thr 115 <210> 224 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of the variable region of the light chain of anti-hTfR antibody No.4 <400> 224 Asp Ile Val Leu Thr Gln Thr Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Asn Val Asn Tyr Met 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Ser Thr Ser Pro Lys Leu Trp Ile Tyr 35 40 45 Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Gly Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Asn Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu 65 70 75 80 Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly Asn Gly Asn Pro Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 225 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of the variable region of the heavy chain of anti-hTfR antibody No.4 <400> 225 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr 1 5 10 15 Ser Val Arg Val Phe Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Leu Ile Glu Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Leu Ile Asn Pro Gly Ser Gly Gly Ile Ile Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Thr Asp Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Asn Tyr Tyr Gly Thr Thr Tyr Trp His Phe Asp Val Trp 100 105 110 Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 226 <211> 105 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of the variable region of the light chain of anti-hTfR antibody No.5 <400> 226 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Ile Ser Ser Ile 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr 35 40 45 Asp Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu 65 70 75 80 Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Thr Phe 85 90 95 Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 227 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of the variable region of the heavy chain of anti-hTfR antibody No.5 <400> 227 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Phe 20 25 30 Val Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Phe Phe Asn Pro His Lys Asn Gly Ala Glu Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Gln Val Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Phe Tyr Tyr Tyr Ser Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Ser Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 228 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of the variable region of the light chain of anti-hTfR antibody No.6 <400> 228 Asp Ile Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Val Ser Leu Thr Cys Arg Ala Ser Gln Glu Ile Ser Gly Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Leu Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Ile Lys Arg Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Asp Ser Gly Val Pro Lys Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Arg Ser Gly Ser Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Asp Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Arg 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 229 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of the variable region of the heavy chain of anti-hTfR antibody No.6 <400> 229 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Ile Thr Cys Ser Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr 20 25 30 Gly Val Tyr Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Ile Ile Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asn Tyr His Ser Ala Leu Ile 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu 65 70 75 80 Lys Leu Asn Ser Leu Gln Thr Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Lys Pro Asp Asp Val Trp Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 100 105 110 <210> 230 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of the variable region of the light chain of anti-hTfR antibody No.7 <400> 230 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Val Ile Met Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Glu Ile Thr Leu Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Asn Tyr Ile 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Val Leu Ile Tyr 35 40 45 Gln Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Arg Ser Gly Thr Phe Tyr Ser Leu Lys Ile Ser Ser Val Glu Ala Glu 65 70 75 80 Asp Ala Ala Asp Tyr Tyr Cys His Gln Trp Ser Ser Tyr Pro Trp Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 231 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of the variable region of the heavy chain of anti-hTfR antibody No.7 <400> 231 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Ala Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Val Ser Cys Glu Ala Ser Gly Ile Thr Phe Arg Asn Tyr 20 25 30 Phe Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser Ser Ala Gly Gly Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Gly Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Gln Glu Val Pro Tyr Pro Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Ser Val Ile Val Ser Ser 115 120 <210> 232 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of the variable region of the light chain of anti-hTfR antibody No.8 <400> 232 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Glu Ile Thr Leu Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Val Leu Ile Tyr 35 40 45 Gly Thr Ser Asn Leu Ala Ser Glu Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Phe Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu Ala Glu 65 70 75 80 Asp Ala Ala Asp Tyr Tyr Cys His Gln Trp Ser Ser Tyr Pro Trp Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 233 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of the variable region of the heavy chain of anti-hTfR antibody No.8 <400> 233 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Thr Tyr 20 25 30 Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Ile Ile Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Arg Ser Ala Leu Ile 50 55 60 Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val Phe Leu 65 70 75 80 Lys Leu Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Lys Pro Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 100 105 110 <210> 234 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of the variable region of the light chain of anti-hTfR antibody No.9 <400> 234 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Leu Met Ser Ala Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Thr Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Leu Met 20 25 30 Phe Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Arg Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr 35 40 45 Phe Thr Ser Tyr Arg Ala Ser Gly Val Pro Ile Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Ser Phe Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Ala Glu 65 70 75 80 Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Thr Ser Asp Pro Pro Thr 85 90 95 Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Glu 100 105 <210> 235 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of the variable region of the heavy chain of anti-hTfR antibody No.9 <400> 235 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Val Ser Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Asp Leu Lys Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Tyr Thr Phe Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Ile Asp Asp Phe 50 55 60 Arg Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys 85 90 95 Ser Arg Arg Asn Gly Ala Trp Phe Glu Asp Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ala 115 <210> 236 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of the variable region of the light chain of anti-hTfR antibody No.10 <400> 236 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Val Ser Leu Thr Cys Arg Pro Ser Gln Glu Ile Ser Gly Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Leu Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Ile Lys Arg Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Asp Ser Gly Val Pro Lys Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Arg Ser Gly Ser Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Asp Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Ala Ser Tyr Pro Arg 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 237 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of the variable region of the heavy chain of anti-hTfR antibody No.10 <400> 237 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Ile Thr Phe Arg Asn Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser Ser Tyr Gly Gly Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ala Gly Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr His Cys 85 90 95 Ala Arg Gln Glu Val Pro Tyr Pro Tyr Pro Met Asp Asn Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Ser Val Ile Val Ser Ser 115 120 <210> 238 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of the variable region of the light chain of anti-hTfR antibody No.11 <400> 238 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Arg Asn Tyr 20 25 30 Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Thr 65 70 75 80 Glu Asp Phe Gly Met Tyr Phe Cys Gln Gln Thr Asn Ser Trp Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 239 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of the variable region of the heavy chain of anti-hTfR antibody No.11 <400> 239 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ile Tyr 20 25 30 Trp Ile Asn Trp Leu Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Asn Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Arg Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Gly Arg Trp Gly Asp Asp Tyr Ala Met Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Ser Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 240 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of the variable region of the light chain of anti-hTfR antibody No.12 <400> 240 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Val Ile Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser His Asp Val Lys Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Thr 35 40 45 Tyr Trp Ser Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Leu Tyr Tyr Cys Gln Gln His Phe Ser Thr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 <210> 241 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of the variable region of the heavy chain of anti-hTfR antibody No.12 <400> 241 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Thr 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ala Gly Tyr Val Phe Ile Asn Tyr 20 25 30 Leu Ile Glu Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Val Ile His Ser Gly Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Asp Asn Phe 50 55 60 Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Arg Asp Val Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Asn Phe Gly Asn Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 115 <210> 242 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of the variable region of the light chain of anti-hTfR antibody No.13 <400> 242 Asp Ile Val Ile Thr Gln Thr Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Arg Asn Tyr 20 25 30 Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Val Glu Thr 65 70 75 80 Glu Asp Phe Gly Met Tyr Phe Cys Gln Gln Thr Asn Ser Trp Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 243 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of the variable region of the heavy chain of anti-hTfR antibody No.13 <400> 243 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ile Tyr 20 25 30 Trp Ile Asn Trp Leu Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Asn Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Arg Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Gly Arg Trp Gly Asp Asp Tyr Ala Met Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Ser Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 244 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of the variable region of the light chain of anti-hTfR antibody No.14 <400> 244 Asp Ile Val Leu Thr Gln Thr Pro Val Ile Met Ser Ala Tyr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Leu Thr Cys Ser Ala Ser Ser Asn Ile Asn Ser Ile 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr 35 40 45 Asp Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu 65 70 75 80 Asp Ala Ala Ser Tyr Tyr Cys His Gln Arg Ser Gly Tyr Pro Phe Thr 85 90 95 Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 245 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of the variable region of the heavy chain of anti-hTfR antibody No.14 <400> 245 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Glu Leu Leu Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 Val Ile His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Phe Leu Asn Pro His Lys Asp Asp Ser Glu Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Arg Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Asp Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Tyr Tyr Tyr Tyr Ser Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Ser Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 246 <211> 525 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 246 Ser Glu Thr Gln Ala Asn Ser Thr Thr Asp Ala Leu Asn Val Leu Leu 1 5 10 15 Ile Ile Val Asp Asp Leu Arg Pro Ser Leu Gly Cys Tyr Gly Asp Lys 20 25 30 Leu Val Arg Ser Pro Asn Ile Asp Gln Leu Ala Ser His Ser Leu Leu 35 40 45 Phe Gln Asn Ala Phe Ala Gln Gln Ala Val Cys Ala Pro Ser Arg Val 50 55 60 Ser Phe Leu Thr Gly Arg Arg Pro Asp Thr Thr Arg Leu Tyr Asp Phe 65 70 75 80 Asn Ser Tyr Trp Arg Val His Ala Gly Asn Phe Ser Thr Ile Pro Gln 85 90 95 Tyr Phe Lys Glu Asn Gly Tyr Val Thr Met Ser Val Gly Lys Val Phe 100 105 110 His Pro Gly Ile Ser Ser Asn His Thr Asp Asp Ser Pro Tyr Ser Trp 115 120 125 Ser Phe Pro Pro Tyr His Pro Ser Ser Glu Lys Tyr Glu Asn Thr Lys 130 135 140 Thr Cys Arg Gly Pro Asp Gly Glu Leu His Ala Asn Leu Leu Cys Pro 145 150 155 160 Val Asp Val Leu Asp Val Pro Glu Gly Thr Leu Pro Asp Lys Gln Ser 165 170 175 Thr Glu Gln Ala Ile Gln Leu Leu Glu Lys Met Lys Thr Ser Ala Ser 180 185 190 Pro Phe Phe Leu Ala Val Gly Tyr His Lys Pro His Ile Pro Phe Arg 195 200 205 Tyr Pro Lys Glu Phe Gln Lys Leu Tyr Pro Leu Glu Asn Ile Thr Leu 210 215 220 Ala Pro Asp Pro Glu Val Pro Asp Gly Leu Pro Pro Val Ala Tyr Asn 225 230 235 240 Pro Trp Met Asp Ile Arg Gln Arg Glu Asp Val Gln Ala Leu Asn Ile 245 250 255 Ser Val Pro Tyr Gly Pro Ile Pro Val Asp Phe Gln Arg Lys Ile Arg 260 265 270 Gln Ser Tyr Phe Ala Ser Val Ser Tyr Leu Asp Thr Gln Val Gly Arg 275 280 285 Leu Leu Ser Ala Leu Asp Asp Leu Gln Leu Ala Asn Ser Thr Ile Ile 290 295 300 Ala Phe Thr Ser Asp His Gly Trp Ala Leu Gly Glu His Gly Glu Trp 305 310 315 320 Ala Lys Tyr Ser Asn Phe Asp Val Ala Thr His Val Pro Leu Ile Phe 325 330 335 Tyr Val Pro Gly Arg Thr Ala Ser Leu Pro Glu Ala Gly Glu Lys Leu 340 345 350 Phe Pro Tyr Leu Asp Pro Phe Asp Ser Ala Ser Gln Leu Met Glu Pro 355 360 365 Gly Arg Gln Ser Met Asp Leu Val Glu Leu Val Ser Leu Phe Pro Thr 370 375 380 Leu Ala Gly Leu Ala Gly Leu Gln Val Pro Pro Arg Cys Pro Val Pro 385 390 395 400 Ser Phe His Val Glu Leu Cys Arg Glu Gly Lys Asn Leu Leu Lys His 405 410 415 Phe Arg Phe Arg Asp Leu Glu Glu Asp Pro Tyr Leu Pro Gly Asn Pro 420 425 430 Arg Glu Leu Ile Ala Tyr Ser Gln Tyr Pro Arg Pro Ser Asp Ile Pro 435 440 445 Gln Trp Asn Ser Asp Lys Pro Ser Leu Lys Asp Ile Lys Ile Met Gly 450 455 460 Tyr Ser Ile Arg Thr Ile Asp Tyr Arg Tyr Thr Val Trp Val Gly Phe 465 470 475 480 Asn Pro Asp Glu Phe Leu Ala Asn Phe Ser Asp Ile His Ala Gly Glu 485 490 495 Leu Tyr Phe Val Asp Ser Asp Pro Leu Gln Asp His Asn Met Tyr Asn 500 505 510 Asp Ser Gln Gly Gly Asp Leu Phe Gln Leu Leu Met Pro 515 520 525 <210> 247 <211> 973 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of the fusion protein of heavy chain of anti-hTfR antibody No.1 (humanized 6) and hI2S <400> 247 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val 35 40 45 Ala Asn Ile Asn Thr Asn Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Asn Asn Arg Tyr Asp Glu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 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ctgctgtgct gcagagctcc 600 ggcctgtaca gcctgtctag cgtggtgacc gtgccatcct ctagcctggg cacccagaca 660 tatatctgca acgtgaatca caagcccagc aatacaaagg tggataagaa ggtggagcca 720 aagtcctgtg acaagaccca cacatgcccc ccttgtcctg ctccagagct gctgggagga 780 ccaagcgtgt tcctgtttcc acccaagccc aaggataccc tgatgatctc tcggacccca 840 gaggtgacat gcgtggtggt ggatgtgagc cacgaggacc ccgaggtgaa gttcaactgg 900 tatgtggacg gcgtggaggt gcacaatgct aagaccaagc ccagggagga gcagtacaac 960 tccacctata gagtggtgtc tgtgctgaca gtgctgcacc aggattggct gaacggcaag 1020 gagtataagt gcaaggtgtc caataaggcc ctgcccgctc ctatcgagaa gaccatctct 1080 aaggccaagg gccagcccag agagcctcag gtgtacacac tgcctccatc ccgggatgag 1140 ctgaccaaga accaggtgtc tctgacatgt ctggtcaagg gcttctatcc ctctgacatc 1200 gccgtggagt gggagagcaa tggccagcct gagaacaatt acaagaccac accccctgtg 1260 ctggattccg acggctcttt ctttctgtat agcaagctga ccgtggacaa gtcccggtgg 1320 cagcagggca acgtgttcag ctgttccgtg atgcacgaag ctctgcataa tcactatact 1380 cagaaatccc tgtcactgtc acctggtaaa ggatcttccg aaacgcaggc caactcgacc 1440 acagatgctc tgaacgttct tctcatcatc gtggatgacc tgcgcccctc cctgggctgt 1500 tatggggata agctggtgag gtccccaaat attgaccaac tggcatccca cagcctcctc 1560 ttccagaatg cctttgcgca gcaagcagtg tgcgccccga gccgcgtttc tttcctcact 1620 ggcaggagac ctgacaccac ccgcctgtac gacttcaact cctactggag ggtgcacgct 1680 ggaaacttct ccaccatccc ccagtacttc aaggagaatg gctatgtgac catgtcggtg 1740 ggaaaagtct ttcaccctgg gatatcttct aaccataccg atgattctcc gtatagctgg 1800 tcttttccac cttatcatcc ttcctctgag aagtatgaaa acactaagac atgtcgaggg 1860 ccagatggag aactccatgc caacctgctt tgccctgtgg atgtgctgga tgttcccgag 1920 ggcaccttgc ctgacaaaca gagcactgag caagccatac agttgttgga aaagatgaaa 1980 acgtcagcca gtcctttctt cctggccgtt gggtatcata agccacacat ccccttcaga 2040 taccccaagg aatttcagaa gttgtatccc ttggagaaca tcaccctggc ccccgatccc 2100 gaggtccctg atggcctacc ccctgtggcc tacaacccct ggatggacat caggcaacgg 2160 gaagacgtcc aagccttaaa catcagtgtg ccgtatggtc caattcctgt ggactttcag 2220 cggaaaatcc gccagagcta ctttgcctct gtgtcatatt tggatacaca ggtcggccgc 2280 ctcttgagtg ctttggacga tcttcagctg gccaacagca ccatcattgc atttacctcg 2340 gatcatgggt gggctctagg tgaacatgga gaatgggcca aatacagcaa ttttgatgtt 2400 gctacccatg ttcccctgat attctatgtt cctggaagga cggcttcact tccggaggca 2460 ggcgagaagc ttttccctta cctcgaccct tttgattccg cctcacagtt gatggagcca 2520 ggcaggcaat ccatggacct tgtggaactt gtgtctcttt ttcccacgct ggctggactt 2580 gcaggactgc aggttccacc tcgctgcccc gttccttcat ttcacgttga gctgtgcaga 2640 gaaggcaaga accttctgaa gcattttcga ttccgtgact tggaagaaga tccgtacctc 2700 cctggtaatc cccgtgaact gattgcctat agccagtatc cccggccttc agacatccct 2760 cagtggaatt ctgacaagcc gagtttaaaa gatataaaga tcatgggcta ttccatacgc 2820 accatagact ataggtatac tgtgtgggtt ggcttcaatc ctgatgaatt tctagctaac 2880 ttttctgaca tccatgcagg ggaactgtat tttgtggatt ctgacccatt gcaggatcac 2940 aatatgtata atgattccca aggtggagac cttttccagt tgttgatgcc ttaagcggcc 3000 gc 3002 <210> 249 <211> 980 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of the fusion protein of heavy chain of anti-hTfR antibody No.2 (humanized 6) and hI2S <400> 249 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Val Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Val Ile Ser Thr Tyr Tyr Gly His Gly Ser Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Ala Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Val Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Arg Gly Gly Tyr Gly Ser Ser Ser Leu Ala Gly Asn Phe Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 115 120 125 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly 130 135 140 Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 145 150 155 160 Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 165 170 175 Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 180 185 190 Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr 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ccaccatggg ctggagctgg attctgctgt tcctcctgag cgtgacagca 60 ggagtgcaca gccaggtgca gctggtccag tcaggagccg aagtgaaaaa gcccggagcc 120 tcagtcaaag tgtcttgtaa agcatcaggt tatacattta cagactacgt catgcactgg 180 gtgaggcagg cacctggaca gggtctggaa tggatcggcg tgatctccac ttactatggc 240 catggaagct acaaccagag attcaagggc agggcgacaa tgactgtaga caaatcaatt 300 tccactgctt atatggagct ggtaaggctg cggtccgacg ataccgctgt gtactattgc 360 gtacgaggag gatacggctc cagctctctg gctggtaatt tcgatgtgtg ggggcagggt 420 accacagtca ccgtgagttc agcaagcaca aagggcccat ctgtgtttcc actggccccc 480 tccagcaaaa gcacctctgg gggtacagcc gctctgggat gtctggtgaa ggattatttc 540 ccagagccag tcaccgtgtc ctggaacagc ggagccctga catctggagt ccacactttt 600 ccagctgtgc tgcagtctag tgggctgtac tccctgtcat ccgtggtcac tgtccccagc 660 tctagtctgg gtacccagac atatatctgc aacgtgaatc acaagccatc taataccaaa 720 gtcgacaaga aagtggaacc caagtcctgt gataaaactc atacctgccc cccttgtcct 780 gcaccagagc tgctgggagg accatccgtg ttcctgtttc cacccaagcc taaagacacc 840 ctgatgatta gccgaactcc cgaagtcacc tgcgtggtcg tggacgtgtc tcacgaggac 900 cctgaagtca agtttaactg gtacgtggat ggcgtcgagg tgcataatgc taagacaaaa 960 ccccgagagg aacagtacaa cagtacatat cgtgtcgtgt cagtgctgac cgtcctgcat 1020 caggactggc tgaacgggaa ggaatataag tgcaaagtgt ccaataaggc actgcccgcc 1080 cctatcgaga aaaccattag caaggccaaa ggacagccta gggaaccaca ggtgtacaca 1140 ctgcctccat cccgggacga gctgactaag aaccaggtca gcctgacctg tctggtgaaa 1200 ggcttctatc cttcagatat cgctgtggag tgggaaagta atggacagcc agagaacaat 1260 tacaagacta ccccccctgt gctggactct gatgggagtt tctttctgta ttctaagctg 1320 accgtggata aaagtcggtg gcagcagggt aatgtcttta gttgttcagt gatgcacgaa 1380 gcactgcaca accactacac ccagaaatca ctgtcactgt caccagggaa aggatcttcc 1440 gaaacgcagg ccaactcgac cacagatgct ctgaacgttc ttctcatcat cgtggatgac 1500 ctgcgcccct ccctgggctg ttatggggat aagctggtga ggtccccaaa tattgaccaa 1560 ctggcatccc acagcctcct cttccagaat gcctttgcgc agcaagcagt gtgcgccccg 1620 agccgcgttt ctttcctcac tggcaggaga cctgacacca cccgcctgta cgacttcaac 1680 tcctactgga gggtgcacgc tggaaacttc tccaccatcc cccagtactt caaggagaat 1740 ggctatgtga ccatgtcggt gggaaaagtc tttcaccctg ggatatcttc taaccatacc 1800 gatgattctc cgtatagctg gtcttttcca ccttatcatc cttcctctga gaagtatgaa 1860 aacactaaga catgtcgagg gccagatgga gaactccatg ccaacctgct ttgccctgtg 1920 gatgtgctgg atgttcccga gggcaccttg cctgacaaac agagcactga gcaagccata 1980 cagttgttgg aaaagatgaa aacgtcagcc agtcctttct tcctggccgt tgggtatcat 2040 aagccacaca tccccttcag ataccccaag gaatttcaga agttgtatcc cttggagaac 2100 atcaccctgg cccccgatcc cgaggtccct gatggcctac cccctgtggc ctacaacccc 2160 tggatggaca tcaggcaacg ggaagacgtc caagccttaa acatcagtgt gccgtatggt 2220 ccaattcctg tggactttca gcggaaaatc cgccagagct actttgcctc tgtgtcatat 2280 ttggatacac aggtcggccg cctcttgagt gctttggacg atcttcagct ggccaacagc 2340 accatcattg catttacctc ggatcatggg tgggctctag gtgaacatgg agaatgggcc 2400 aaatacagca attttgatgt tgctacccat gttcccctga tattctatgt tcctggaagg 2460 acggcttcac ttccggaggc aggcgagaag cttttccctt acctcgaccc ttttgattcc 2520 gcctcacagt tgatggagcc aggcaggcaa tccatggacc ttgtggaact tgtgtctctt 2580 tttcccacgc tggctggact tgcaggactg caggttccac ctcgctgccc cgttccttca 2640 tttcacgttg agctgtgcag agaaggcaag aaccttctga agcattttcg attccgtgac 2700 ttggaagaag atccgtacct ccctggtaat ccccgtgaac tgattgccta tagccagtat 2760 ccccggcctt cagacatccc tcagtggaat tctgacaagc cgagtttaaa agatataaag 2820 atcatgggct attccatacg caccatagac tataggtata ctgtgtgggt tggcttcaat 2880 cctgatgaat ttctagctaa cttttctgac atccatgcag gggaactgta ttttgtggat 2940 tctgacccat tgcaggatca caatatgtat aatgattccc aaggtggaga ccttttccag 3000 ttgttgatgc cttaagcggc cgc 3023 <210> 251 <211> 975 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of fusion protein of heavy chain of anti-hTfR antibody No.3 (humanized 2) and hI2S, synthetic sequence <400> 251 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Trp Leu Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Gly Asp Tyr Pro Thr Tyr Ser Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Val Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Gly Asn Tyr Asp Glu Val Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 165 170 175 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205 Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 210 215 220 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 Gly Ser Ser Glu Thr Gln Ala Asn Ser Thr Thr Asp Ala Leu Asn Val 450 455 460 Leu Leu Ile Ile Val Asp 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caagtccatc 300 agcaccgcct acctgcagtg gagcagcctg aaggcctcgg acaccgccat gtattactgt 360 gcgagatcag gcaattacga cgaagtggcc tactggggcc aaggaaccct ggtcaccgtc 420 tcctcagcta gcaccaaggg cccatcggtc ttccccctgg caccctcctc caagagcacc 480 tctgggggca cagcggccct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga accggtgacg 540 gtgtcgtgga actcaggcgc cctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccggc tgtcctacag 600 tcctcaggac tctactccct cagcagcgtg gtgaccgtgc cctccagcag cttgggcacc 660 cagacctaca tctgcaacgt gaatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagaaagtt 720 gagcccaaat cttgtgacaa aactcacacg tgcccaccgt gcccagcacc tgaactcctg 780 ggaggtccgt cagtcttcct cttcccccca aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg 840 acccctgagg tcacatgcgt ggtggtggac gtgagccacg aagaccctga ggtcaagttc 900 aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag 960 tacaacagca cgtaccgggt ggtcagcgtc ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaat 1020 ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac aaagccctcc cagcccccat cgagaaaacc 1080 atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg 1140 gatgagctga ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctatcccagc 1200 gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct 1260 cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctacagca agctcaccgt ggacaagagc 1320 aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac 1380 tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg ggtaaaggat cttccgaaac gcaggccaac 1440 tcgaccacag atgctctgaa cgttcttctc atcatcgtgg atgacctgcg cccctccctg 1500 ggctgttatg gggataagct ggtgaggtcc ccaaatattg accaactggc atcccacagc 1560 ctcctcttcc agaatgcctt tgcgcagcaa gcagtgtgcg ccccgagccg cgtttctttc 1620 ctcactggca ggagacctga caccacccgc ctgtacgact tcaactccta ctggagggtg 1680 cacgctggaa acttctccac catcccccag tacttcaagg agaatggcta tgtgaccatg 1740 tcggtgggaa aagtctttca ccctgggata tcttctaacc ataccgatga ttctccgtat 1800 agctggtctt ttccacctta tcatccttcc tctgagaagt atgaaaacac taagacatgt 1860 cgagggccag atggagaact ccatgccaac ctgctttgcc ctgtggatgt gctggatgtt 1920 cccgagggca ccttgcctga caaacagagc actgagcaag ccatacagtt gttggaaaag 1980 atgaaaacgt cagccagtcc tttcttcctg gccgttgggt atcataagcc acacatcccc 2040 ttcagatacc ccaaggaatt tcagaagttg tatcccttgg agaacatcac cctggccccc 2100 gatcccgagg tccctgatgg cctaccccct gtggcctaca acccctggat ggacatcagg 2160 caacgggaag acgtccaagc cttaaacatc agtgtgccgt atggtccaat tcctgtggac 2220 tttcagcgga aaatccgcca gagctacttt gcctctgtgt catatttgga tacacaggtc 2280 ggccgcctct tgagtgcttt ggacgatctt cagctggcca acagcaccat cattgcattt 2340 acctcggatc atgggtgggc tctaggtgaa catggagaat gggccaaata cagcaatttt 2400 gatgttgcta cccatgttcc cctgatattc tatgttcctg gaaggacggc ttcacttccg 2460 gaggcaggcg agaagctttt cccttacctc gacccttttg attccgcctc acagttgatg 2520 gagccaggca ggcaatccat ggaccttgtg gaacttgtgt ctctttttcc cacgctggct 2580 ggacttgcag gactgcaggt tccacctcgc tgccccgttc cttcatttca cgttgagctg 2640 tgcagagaag gcaagaacct tctgaagcat tttcgattcc gtgacttgga agaagatccg 2700 tacctccctg gtaatccccg tgaactgatt gcctatagcc agtatccccg gccttcagac 2760 atccctcagt ggaattctga caagccgagt ttaaaagata taaagatcat gggctattcc 2820 atacgcacca tagactatag gtatactgtg tgggttggct tcaatcctga tgaatttcta 2880 gctaactttt ctgacatcca tgcaggggaa ctgtattttg tggattctga cccattgcag 2940 gatcacaata tgtataatga ttcccaaggt ggagaccttt tccagttgtt gatgccttaa 3000 taagcggccg c 3011 <210> 253 <211> 4460 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleotide sequence of the DNA formed of a cDNA encoding chimeric hTfR and a loxP-flanked neomycin resistance gene placed on the cDNA's 3' side, synthetic sequence <400> 253 gtttatcctc ccttgtagca gctgagaatg atggatcaag ccagatcagc attctctaac 60 ttgtttggtg gggaaccatt gtcatacacc cggtttagcc ttgctcggca agtagatgga 120 gataacagtc atgtggagat gaaactggct gcagatgaag aagaaaatgc cgacaataac 180 atgaaggcta gtgtcagaaa acccaagagg tttaatggaa gactctgctt tgcagctatt 240 gcactagtca ttttcttctt gattggattc atgagtggct acctgggcta ttgtaaaggg 300 gtagaaccaa aaactgagtg tgagagactg gcaggaaccg agtctccagt gagggaggag 360 ccaggagagg acttccctgc agcacgtcgc ttatattggg atgacctgaa gagaaagttg 420 tcggagaaac tggacagcac agacttcacc ggcaccatca agctgctgaa tgaaaattca 480 tatgtccctc gtgaggctgg atctcaaaaa gatgaaaatc ttgcgttgta tgttgaaaat 540 caatttcgtg aatttaaact cagcaaagtc tggcgtgatc aacattttgt taagattcag 600 gtcaaagaca gcgctcaaaa ctcggtgatc atagttgata agaacggtag acttgtttac 660 ctggtggaga atcctggggg ttatgtggcg tatagtaagg ctgcaacagt tactggtaaa 720 ctggtccatg ctaattttgg tactaaaaaa gattttgagg atttatacac tcctgtgaat 780 ggatctatag tgattgtcag agcagggaaa atcacctttg cagaaaaggt tgcaaatgct 840 gaaagcttaa atgcaattgg tgtgttgata tacatggacc agactaaatt tcccattgtt 900 aacgcagaac tttcattctt tggacatgct catctgggga caggtgaccc ttacacacct 960 ggattccctt ccttcaatca cactcagttt ccaccatctc ggtcatcagg attgcctaat 1020 atacctgtcc agacaatctc cagagctgct gcagaaaagc tgtttgggaa tatggaagga 1080 gactgtccct ctgactggaa aacagactct acatgtagga tggtaacctc agaaagcaag 1140 aatgtgaagc tcactgtgag caatgtgctg aaagagataa aaattcttaa catctttgga 1200 gttattaaag gctttgtaga accagatcac tatgttgtag ttggggccca gagagatgca 1260 tggggccctg gagctgcaaa atccggtgta ggcacagctc tcctattgaa acttgcccag 1320 atgttctcag atatggtctt aaaagatggg tttcagccca gcagaagcat tatctttgcc 1380 agttggagtg ctggagactt tggatcggtt ggtgccactg aatggctaga gggatacctt 1440 tcgtccctgc atttaaaggc tttcacttat attaatctgg ataaagcggt tcttggtacc 1500 agcaacttca aggtttctgc cagcccactg ttgtatacgc ttattgagaa aacaatgcaa 1560 aatgtgaagc atccggttac tgggcaattt ctatatcagg acagcaactg ggccagcaaa 1620 gttgagaaac tcactttaga caatgctgct ttccctttcc ttgcatattc tggaatccca 1680 gcagtttctt tctgtttttg cgaggacaca gattatcctt atttgggtac caccatggac 1740 acctataagg aactgattga gaggattcct gagttgaaca aagtggcacg agcagctgca 1800 gaggtcgctg gtcagttcgt gattaaacta acccatgatg ttgaattgaa cctggactat 1860 gagaggtaca acagccaact gctttcattt gtgagggatc tgaaccaata cagagcagac 1920 ataaaggaaa tgggcctgag tttacagtgg ctgtattctg ctcgtggaga cttcttccgt 1980 gctacttcca gactaacaac agatttcggg aatgctgaga aaacagacag atttgtcatg 2040 aagaaactca atgatcgtgt catgagagtg gagtatcact tcctctctcc ctacgtatct 2100 ccaaaagagt ctcctttccg acatgtcttc tggggctccg gctctcacac gctgccagct 2160 ttactggaga acttgaaact gcgtaaacaa aataacggtg cttttaatga aacgctgttc 2220 agaaaccagt tggctctagc tacttggact attcagggag ctgcaaatgc cctctctggt 2280 gacgtttggg acattgacaa tgagttttaa cgtggctcgc tgatcagcct cgactgtgcc 2340 ttctagttgc cagccatctg ttgtttgccc ctcccccgtg ccttccttga ccctggaagg 2400 tgccactccc actgtccttt cctaataaaa tgaggaaatt gcatcgcatt gtctgagtag 2460 gtgtcattct attctggggg gtggggtggg gcaggacagc aagggggagg attgggaaga 2520 caatagcagg catgctgggg atgcggtggg ctctatggct tctgaggcgg aaagaaccag 2580 ctggggctcg atcctctagt taagcttccc agcggccgct atcgaattcc gatcatattc 2640 aataaccctt aatataactt cgtataatgt atgctatacg aagttattag gtctgaagag 2700 gagtttacgt ccagccaagc taattctacc gggtagggga ggcgcttttc ccaaggcagt 2760 ctggagcatg cgctttagca gccccgctgg gcacttggcg ctacacaagt ggcctctggc 2820 ctcgcacaca ttccacatcc accggtaggc gccaaccggc tccgttcttt ggtggcccct 2880 tcgcgccacc ttctactcct cccctagtca ggaagttccc ccccgccccg cagctcgcgt 2940 cgtgcaggac gtgacaaatg gaagtagcac gtctcactag tctcgtgcag atggacagca 3000 ccgctgagca atggaagcgg gtaggccttt ggggcagcgg ccaatagcag ctttgctcct 3060 tcgctttctg ggctcagagg ctgggaaggg gtgggtccgg gggcgggctc aggggcgggc 3120 tcaggggcgg ggcgggcgcc cgaaggtcct ccggaggccc ggcattctgc acgcttcaaa 3180 agcgcacgtc tgccgcgctg ttctcctctt cctcatctcc gggcctttcg acctgcagcc 3240 aatatgggat cggccattga acaagatgga ttgcacgcag gttctccggc cgcttgggtg 3300 gagaggctat tcggctatga ctgggcacaa cagacaatcg gctgctctga tgccgccgtg 3360 ttccggctgt cagcgcaggg gcgcccggtt ctttttgtca agaccgacct gtccggtgcc 3420 ctgaatgaac tgcaggacga ggcagcgcgg ctatcgtggc tggccacgac gggcgttcct 3480 tgcgcagctg tgctcgacgt tgtcactgaa gcgggaaggg actggctgct attgggcgaa 3540 gtgccggggc aggatctcct gtcatctcac cttgctcctg ccgagaaagt atccatcatg 3600 gctgatgcaa tgcggcggct gcatacgctt gatccggcta cctgcccatt cgaccaccaa 3660 gcgaaacatc gcatcgagcg agcacgtact cggatggaag ccggtcttgt cgatcaggat 3720 gatctggacg aagagcatca ggggctcgcg ccagccgaac tgttcgccag gctcaaggcg 3780 cgcatgcccg acggcgagga tctcgtcgtg acccatggcg atgcctgctt gccgaatatc 3840 atggtggaaa atggccgctt ttctggattc atcgactgtg gccggctggg tgtggcggac 3900 cgctatcagg acatagcgtt ggctacccgt gatattgctg aagagcttgg cggcgaatgg 3960 gctgaccgct tcctcgtgct ttacggtatc gccgctcccg attcgcagcg catcgccttc 4020 tatcgccttc ttgacgagtt cttctgaggg gatccgctgt aagtctgcag aaattgatga 4080 tctattaaac aataaagatg tccactaaaa tggaagtttt tcctgtcata ctttgttaag 4140 aagggtgaga acagagtacc tacattttga atggaaggat tggagctacg ggggtggggg 4200 tggggtggga ttagataaat gcctgctctt tactgaaggc tctttactat tgctttatga 4260 taatgtttca tagttggata tcataattta aacaagcaaa accaaattaa gggccagctc 4320 attcctccca ctcatgatct atagatccct cgatcgagat ccggaaccct taatataact 4380 tcgtataatg tatgctatac gaagttatta ggtccctcga agaggttcac tagttctaga 4440 gcatttaaat acgtgctagc 4460 <210> 254 <211> 5003 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleotide sequence of the 5'-arm of targeting vector <400> 254 aaagacattc ccagggtccc taagggctcc atctgggagc gcgctatctg tagtcctgtt 60 gtggtttaag ataccactct ctttgttatt tgtaaattta ccacaggctg ggcagtaaag 120 tacagatagg aagaaaagag tgtgaacgtt tgcagtttta acagaactcc ttttatttgc 180 tatgcattgc aacaaccctc taaaagcaat aatggcgata aacatgcaag ttaatctaca 240 actttatcac cctagtaaat cattggttcc tatttccctt ccataggctg aacatagtga 300 gcactggtag ctctttgctt ggcttaagcg ctgcttgtta aaatctaaaa aaaaaaaaaa 360 aaaagatttg cagttttgct ttaaagtttt tcctttaaag catctctgag ctgcaaaaac 420 tcgtctttag gatatggttt tggcggagac ctaagcctgc aagtaggaat attttaaaga 480 gtaaaggctg atactttcga acttgcaccg cagggttggg tgtcggtcaa ggttaggcgg 540 agggcgacag gccaactcca aagacacggc gggggagggg tgcggtggag aaagcgagcc 600 gcagccaatc gcacgcgctc tcccgacacc tgccgccttg gcgccttttc taggctactc 660 cgcgcacgca ctggctgcgc gcgcagttcg cctccagcgg tcttggggga gcacctcggt 720 aggtgtacgt gcggaaggaa gtgacgtaga tccagagggc cggccggggg gtggggccga 780 gctataagct ttgggtggga ggcagcgctg ccttcagaag gcgtgcggag cgcgggctgc 840 tgcattgcgg actgtagagg cgcttcctag tgagtgactc ccttgtcagc ggcacggccc 900 atcgtggtcc tcgcgtggcg ggcggaccag agcgagacgc cagggcctgg gtggtgcggg 960 cggggaggcg gaggggtgtc gcggagtccg gggctgagga gcgcgggttg caggtgcagc 1020 gcggtgggtg tggggagccg ctgtaccctg cgcccctcgg gtcctccggg ccttcgcagg 1080 ccagtgctag gccgcgggtt cgagagtcac cacgctgagg cgcaggcttg ttccgccggg 1140 agcacgtggt ggcggctgga ggaagtcgcc ccagggaacg gctgtcgggg tacgtgggtg 1200 accttggggc ccctcgcagg agggcgtcac agctgaaaag gacaaagctg ttttctattc 1260 ggttactagt gtcacggaca tttagagggg cggggggagc ttccaataac tgcacgttgg 1320 aacttcggca ccacctggtc ggtttttttg ccagtctctc cctcttggcc cagcgtgtgg 1380 aatctcattt ttctagggca gaataggtct gaacgctgca ggtaatacta agaacgtctc 1440 tagcatctcc taagatggga gaacgtagaa atacgacctc tttgtacgag ctcttttaga 1500 actagctgta gagaaccagc gtgcaccctg gtgttggaca gctctctaaa atggtgtttg 1560 agggtaagaa aactgcattt gcaaattttt cagttagcac actttgtccc gagcgtaaaa 1620 tgaaatgatc tccttatact taggcagaag actggactgg attgctgttc agtttctgtg 1680 ctattttttt aaaataggat ttaagtggga aatagttgtg ttacagaaat tctcggctat 1740 tctgtgctat ttttttttaa ataggattta agtgggaaat agttgtgtta cagaaattct 1800 cggctacctg atacttttat tctaagatta gatgagttgg ctctgagctg tgaaatatga 1860 cctctttgac aaagacattt aagctgattc aggatgttat ctacaaagaa aacgggattt 1920 agcttgtgtg ggtccacttg catttatttt ctgttaagga ttataataaa ctgctttata 1980 caggaatcca atatcagctg ttttttatat agagagcata atacttttta ctttgagaga 2040 ggatgttgtc aaggaatggt ggctgtgaac ctggcctgtg ttgactggtt agatctgtct 2100 gcctaacccc accctaaggc taagtagtta tatgcttgtg gcaatgtgct tatttataat 2160 agggcaagat tatgggctaa atttgggtta gacaacaatg aaagttaatt aaacgaccct 2220 caggccttgg gtctactatg tgtaagtgat ttccttctct cccagatgag tgctatacaa 2280 aataaacttc agtgacctca agtggttttg accttttggt tgctattcag aaaactatgg 2340 aaatgaaaac ctgctaccta tttcctattg ccttttcaat ttcccaaaga aggtctcccc 2400 tatgaatcca tgggtagcct tgaactcaga tccacctgct tctgtttgga gagtgataag 2460 attaaaggca agtgccacca cacccagcaa agtaggctct taaaactaaa acctttgcag 2520 tcgggcatgg tgccacacac ctttggtccc agcactgggg ggtaaggcag aggcaggtgg 2580 atcactgagt ttgaggtcag ctagtgctga agagtaagag cctgtcttta aaacatctca 2640 acagctgggc agtcgtggtc cattccttta atcccagcac ttgggaggca gaggcaagtg 2700 gatttttgag ttcgaggcca gcctggtcta cagagtgagt tccaggacag ccagggatac 2760 acagagaaac cctgtctcaa aaaaccaaaa tataaataaa taaataaaga ttgggagaga 2820 agtcaaggat ctcataggtg gtcagggagc tacaactgca gtagtaaaga agtaggactt 2880 aaaagaacag ggccggcact aattttgagg atctagatcg ggccctcaat taaggaactt 2940 ccttttgtgt gaactcagaa tttgaaatga aatgtgcttg tcagaaccat tgcatggctt 3000 attttttaat gaaaagtctg gctagtatct gcttatcttc cagcttccag ctcaaagtta 3060 aggtcataga tcaaaagaac tatgtcttta tcttagttgt atcttaattt ttattagaat 3120 tgaatggttt tcctaatgtt tggtaacatc aaaggtgtgt aagtaaaagt gagaaatcaa 3180 gattaacttt ctcttggcaa agattgttga cattggtgac atcttggacc aaatgagaat 3240 tgttttactt ttaaatgtcc catcaacagc tctcagttag gctgttctat ctggtttgtc 3300 ttgccatgct tgcagagtat agatttgaca atttgaaaat tcaaaaagct atataaatag 3360 gtatgttgct atatgtaaga ttttaaatga gtcagttaag acttaaagaa taactgggtt 3420 tattttatct tgtcaggtta tcactgtgta gaccaggttg accttgaaaa caaattctct 3480 gcttcccaag tgctgggatt aaaggcgtgt gtcactagct ctgacactgg ctactttgga 3540 actactatgg tgttcacaaa tgcagagttg agtgttggga ttaaatggaa atttcatgtc 3600 ttttttttta actttccctt ctacacaggg cttctctgtg tagtcctggc tgtccttgta 3660 gctctagact aggctgaatt caaactcaga tccacccacc taagtgctga gattaaaggc 3720 atgtgccacc actgcccagt tctgaattgt tggggttttt tttttgttgt tattcttaat 3780 tttagttcga tgaattaaaa tcgaaataac ttgtttctta gaaaaataag gtgtaattgg 3840 gttataaagc caaatttaga cattaatacc aacagcctgt ttaggctcaa aattgttcaa 3900 tcattttatt agtattatta ttaatcatat caacttgaga cctgtttggg aaagcagaat 3960 attttaggga tagctatttc agacaagcat taatgtgtta gctgtttttt tccccctaga 4020 atatgattaa aattggctca gggtggggcc ttctagttct ggctctagcg attgggtctg 4080 tttctggtga ggtggtagtg ataaactgta acagaaggga caagagattg ggcttctgag 4140 aacatgtatg atctggtatg tgactttaat cattaaagca tggggattca aaaatactaa 4200 tgaataggcc ttagaactag tcctgagtgt tttgtaaaat aacagtctta attctcctag 4260 tttctggatt tttttctttg tctttggata ctaagtttaa gcatttattt ggacagagtg 4320 gtgcccacta gctgttctat tctagtactt gggaggcaag aggcagaacg aacatggcca 4380 gcttggacaa cttaagaaaa ctgaaaggct tgccatccta gtttttcttt tgattaaaca 4440 cacttatatt ctaactagtt ttctctatcc tttgggtttt gttttgtttt ttatttgttt 4500 tgtagctcta gctggctggc ttcggaattg cctgcctccc aagtgctagg attaaaggca 4560 tcacagtcac tacccaattg atatcatgat tcttaattca acttctaaga acaaattatc 4620 acactctgaa tctaacatgg aatagcatta tccatgttca gatatctttg tctcaaggct 4680 caggtttatc ctttgtagct ttctttttgc tatcccacct ctattcagca tccagtcaag 4740 gatcactgag ttggttatca gtaaattaaa cattttaatt aatgtctagg agacaggtta 4800 tggtatagtt ctcagtgctg ggaagttgac atggtaggat ctcagttcat ggccagccag 4860 aactttctgg tgagatcctg gttcaagcac tacagagctt ttctagaaaa gtaactatat 4920 ttaggagtaa gtttgatata atgacaatcc catcgtaagc cttcagtaac ctgatgcatt 4980 ggtctctgtt ttaatatcag gta 5003 <210> 255 <211> 2604 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleotide sequence of the 3'-arm of targeting vector <400> 255 gcattctcta acttggtaag gtactttcat ctatctgaaa aaatgttcag taaaaaacaa 60 aacaaaaaca tgacttcacc cagtgagtac aagatgatac ccccaatttt tttttttttt 120 attatatgta tgtacactgt agctgtcttc agacacacca gaagagggcg tcagatctca 180 tcagatggtt gtgagccacc atgtggttgc tgggacttga acactggacc tttggaaaag 240 cagttgggta ctcttaccca ctgagctatc acaccagccc caatacccca aattttgacc 300 agcctttttt tttttttttt tttttttttt aaatctgaac taatggtatt aaggtgaaac 360 agattgcaca aaagaggtac taggtttttc tttgaggcaa ggtctttcta tattgcctca 420 ggttgacctt aaactccaac ttcctttttt tccccaagtg ctggagattg tagacagata 480 tatacaacac cccaaaacaa atatgtttag tttcgattaa gattcattat gtggggctag 540 agggatgact tagaggttaa gaacactgcc tgctcttcca gaggtcctga gttcaattcc 600 cagcaaccac gtggtggctc acaaccatct gtaatgggat ccgatgccct ctttctggtg 660 tgtttgaaga cagctacagt gtcctcatac ataaaaaaaa taaacaaaca gatcttttaa 720 aaaaaaaggt acagtgtact tatacattat ataaatgaat gattctttaa aaaattaatt 780 atgggaaata cttatgaaga atagggtagc tttggctgtt ttggaaacgt tatataacaa 840 ggtagaacta aaatgtatgc cagtaatccc agaggaatca ttagccagtc agggctagtc 900 tgagcaatgt ggcaagataa acccatctct ttaaaaaaaa aaaaaagtat tataaataga 960 aatgttatag gaaacaggaa atagaaaccc tcgaaaggct gaatgaaaga gtattagtgg 1020 gctggagaga tggttcagcg gttaagagca ctatctcctg agttcagttc ccagtgacca 1080 catggtggct cacagccatc tgtaatgaga tctgacgccc tcttctgggg tgtctgaaga 1140 cagcgacagt gtactcacat aaaataaata cataaagact gttagttagc cttcatctac 1200 catttacaga actgggcaca gaaaggagtt catcagttat aaagggtaac tttccatatg 1260 aatgtttgtc atattattat gcatatagta taatgaccaa actactgtaa tgtcttaata 1320 tttgtatctc ttttctcttt tttaaaaata tcagtttggt ggggaaccat tgtcatacac 1380 ccggtttagc cttgctcggc aagtagatgg agataacagt catgtggaga tgaaactggc 1440 tgcagatgaa gaagaaaatg ccgacaataa catgaaggct agtgtcagaa aacccaagag 1500 gtttaatgga agactctgct ttgcagctat tgcactagtc attttcttct tgattggtaa 1560 gaatgagtgg ccattcagaa ggatttctta tgactaacta gttcttagac tagctagttc 1620 ttagactagc tagttcttgt ttcttttgga tgaggagatg ctttgtactt taaatggcac 1680 tggggctccc tacctgccgg cagattaggt cctgcaagat gggaaacgtt tacattatgg 1740 atgttttatt agagatatgc aggacatttg gaatagtact aagaaaggct tccagtaaga 1800 caaggtgtgc acccatgtct taaacaggtc actgtaaaat atgacttagt tgtggtaatt 1860 taaattccat taaactcagg ttcataattt tctattagat tctcatagtt taattaaaag 1920 ttttcaggga taagttaaaa atgagttctg tgagtttagc tctaaaactt cctgttttta 1980 ggattcatga gtggctacct gggctattgt aagcgtgtag aacaaaaaga ggagtgtgtg 2040 aaactggctg aaacggagga gacagacaag tcagaaacca tggaaacaga ggatgttcct 2100 acatcatctc gcttatattg ggcagacctc aaaacactgt tgtcagagaa gttgaactcc 2160 atagagtttg ctgacaccat caagtaagct caacttccca agttcagtcc tgatggaaac 2220 gtttttgttg ggggggtagg gagacttgaa aggctttcag agggtcctcc tgacaatgtg 2280 gaactatgct gacaggaaat taggacttac ctggagagcc tcatagcctc ctttttcttc 2340 agaatcgttt tatcagttgt agtttagtgt gggatgtcag attttcttct gttctaatat 2400 tccttttaaa aattttttaa aattaaaatt actttttatg tattatgagt atagcctgca 2460 tatatgaatg aatgtgcatt actaattaca cttatctcct agtgcctaca taagccttat 2520 agatggttgt gagccagcat gtgggtgctg gaatccaaaa tggttcttgc aagaccaaat 2580 atgttacatc ccagagccat taca 2604 <210> 256 <211> 166 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 256 Ala Pro Pro Arg Leu Ile Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu 1 5 10 15 Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn Ile Thr Thr Gly Cys Ala Glu His 20 25 30 Cys Ser Leu Asn Glu Asn Ile Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe 35 40 45 Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp 50 55 60 Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu 65 70 75 80 Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp 85 90 95 Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu 100 105 110 Gly Ala Gln Lys Glu Ala Ile Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala 115 120 125 Pro Leu Arg Thr Ile Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val 130 135 140 Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala 145 150 155 160 Cys Arg Thr Gly Asp Arg 165 <210> 257 <211> 616 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of the fusion protein of heavy chain of anti-hTfR antibody No.3 (humanized 2) and hEPO <400> 257 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Trp Leu Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Gly Asp Tyr Pro Thr Tyr Ser Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Val Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Gly Asn Tyr Asp Glu Val Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 165 170 175 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 Ser Leu Gly Thr 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Gly Asp Arg 610 615 <210> 258 <211> 1931 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleotide sequence encoding the amino acid sequence of fusion protein of heavy chain of anti-hTfR antibody No. 3 (humanized 2) and hEPO, synthetic sequence <400> 258 acgcgtgccg ccaccatggg ctggagctgg attctgctgt tcctcctgag cgtgacagca 60 ggagtgcaca gcgaggtgca actagtgcag tctggagcag aggtgaaaaa gcccggggag 120 tctctgaaga tttcctgtaa gggttctgga tacagcttta ccaactactg gctgggatgg 180 gtgcgccaga tgcccgggaa aggcctggag tggatggggg acatctaccc cggcggagac 240 taccctacat acagcgagaa gttcaaggtc caggtcacca tctcagccga caagtccatc 300 agcaccgcct acctgcagtg gagcagcctg aaggcctcgg acaccgccat gtattactgt 360 gcgagatcag gcaattacga cgaagtggcc tactggggcc aaggaaccct ggtcaccgtc 420 tcctcagcta gcaccaaggg cccatcggtc ttccccctgg caccctcctc caagagcacc 480 tctgggggca cagcggccct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga accggtgacg 540 gtgtcgtgga actcaggcgc cctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccggc tgtcctacag 600 tcctcaggac tctactccct cagcagcgtg gtgaccgtgc cctccagcag cttgggcacc 660 cagacctaca tctgcaacgt gaatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagaaagtt 720 gagcccaaat cttgtgacaa aactcacacg tgcccaccgt gcccagcacc tgaactcctg 780 ggaggtccgt cagtcttcct cttcccccca aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg 840 acccctgagg tcacatgcgt ggtggtggac gtgagccacg aagaccctga ggtcaagttc 900 aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag 960 tacaacagca cgtaccgggt ggtcagcgtc ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaat 1020 ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac aaagccctcc cagcccccat cgagaaaacc 1080 atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg 1140 gatgagctga ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctatcccagc 1200 gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct 1260 cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctacagca agctcaccgt ggacaagagc 1320 aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac 1380 tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg ggtaaaggat ctgccccacc acgcctcatc 1440 tgtgacagcc gagtcctgga gaggtacctc ttggaggcca aggaggccga gaatatcacg 1500 acgggctgtg ctgaacactg cagcttgaat gagaatatca ctgtcccaga caccaaagtt 1560 aatttctatg cctggaagag gatggaggtc gggcagcagg ccgtagaagt ctggcagggc 1620 ctggccctgc tgtcggaagc tgtcctgcgg ggccaggccc tgttggtcaa ctcttcccag 1680 ccgtgggagc ccctgcagct gcatgtggat aaagccgtca gtggccttcg cagcctcacc 1740 actctgcttc gggctctggg agcccagaag gaagccatct cccctccaga tgcggcctca 1800 gctgctccac tccgaacaat cactgctgac actttccgca aactcttccg agtctactcc 1860 aatttcctcc ggggaaagct gaagctgtac acaggggagg cctgcaggac aggggacaga 1920 taagcggccg c 1931 <210> 259 <211> 489 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 259 Arg Pro Pro Asn Ile Val Leu Ile Phe Ala Asp Asp Leu Gly Tyr Gly 1 5 10 15 Asp Leu Gly Cys Tyr Gly His Pro Ser Ser Thr Thr Pro Asn Leu Asp 20 25 30 Gln Leu Ala Ala Gly Gly Leu Arg Phe Thr Asp Phe Tyr Val Pro Val 35 40 45 Ser Leu Cys Thr Pro Ser Arg Ala Ala Leu Leu Thr Gly Arg Leu Pro 50 55 60 Val Arg Met Gly Met Tyr Pro Gly Val Leu Val Pro Ser Ser Arg Gly 65 70 75 80 Gly Leu Pro Leu Glu Glu Val Thr Val Ala 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sequence of the fusion protein of heavy chain of anti-hTfR antibody No.3 (humanized 2) and hARSA <400> 260 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Trp Leu Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Gly Asp Tyr Pro Thr Tyr Ser Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Val Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Gly Asn Tyr Asp Glu Val Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 165 170 175 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 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tacagcttta ccaactactg gctgggatgg 180 gtgcgccaga tgcccgggaa aggcctggag tggatggggg acatctaccc cggcggagac 240 taccctacat acagcgagaa gttcaaggtc caggtcacca tctcagccga caagtccatc 300 agcaccgcct acctgcagtg gagcagcctg aaggcctcgg acaccgccat gtattactgt 360 gcgagatcag gcaattacga cgaagtggcc tactggggcc aaggaaccct ggtcaccgtc 420 tcctcagcta gcaccaaggg cccatcggtc ttccccctgg caccctcctc caagagcacc 480 tctgggggca cagcggccct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga accggtgacg 540 gtgtcgtgga actcaggcgc cctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccggc tgtcctacag 600 tcctcaggac tctactccct cagcagcgtg gtgaccgtgc cctccagcag cttgggcacc 660 cagacctaca tctgcaacgt gaatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagaaagtt 720 gagcccaaat cttgtgacaa aactcacacg tgcccaccgt gcccagcacc tgaactcctg 780 ggaggtccgt cagtcttcct cttcccccca aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg 840 acccctgagg tcacatgcgt ggtggtggac gtgagccacg aagaccctga ggtcaagttc 900 aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag 960 tacaacagca cgtaccgggt ggtcagcgtc ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaat 1020 ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac aaagccctcc cagcccccat cgagaaaacc 1080 atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg 1140 gatgagctga ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctatcccagc 1200 gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct 1260 cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctacagca agctcaccgt ggacaagagc 1320 aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac 1380 tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg ggtaaaggat ctcgtccgcc caacatcgtg 1440 ctgatctttg ccgacgacct cggctatggg gacctgggct gctatgggca ccccagctct 1500 accactccca acctggacca gctggcggcg ggagggctgc ggttcacaga cttctacgtg 1560 cctgtgtctc tgtgcacacc ctctagggcc gccctcctga ccggccggct cccggttcgg 1620 atgggcatgt accctggcgt cctggtgccc agctcccggg ggggcctgcc cctggaggag 1680 gtgaccgtgg ccgaagtcct ggctgcccga ggctacctca caggaatggc cggcaagtgg 1740 caccttgggg tggggcctga gggggccttc ctgccccccc atcagggctt ccatcgattt 1800 ctaggcatcc cgtactccca cgaccagggc ccctgccaga acctgacctg cttcccgccg 1860 gccactcctt gcgacggtgg ctgtgaccag ggcctggtcc ccatcccact gttggccaac 1920 ctgtccgtgg aggcgcagcc cccctggctg cccggactag aggcccgcta catggctttc 1980 gcccatgacc tcatggccga cgcccagcgc caggatcgcc ccttcttcct gtactatgcc 2040 tctcaccaca cccactaccc tcagttcagt gggcagagct ttgcagagcg ttcaggccgc 2100 gggccatttg gggactccct gatggagctg gatgcagctg tggggaccct gatgacagcc 2160 ataggggacc tggggctgct tgaagagacg ctggtcatct tcactgcaga caatggacct 2220 gagaccatgc gtatgtcccg aggcggctgc tccggtctct tgcggtgtgg aaagggaacg 2280 acctacgagg gcggtgtccg agagcctgcc ttggccttct ggccaggtca tatcgctccc 2340 ggcgtgaccc acgagctggc cagctccctg gacctgctgc ctaccctggc agccctggct 2400 ggggccccac tgcccaatgt caccttggat ggctttgacc tcagccccct gctgctgggc 2460 acaggcaaga gccctcggca gtctctcttc ttctacccgt cctacccaga cgaggtccgt 2520 ggggtttttg ctgtgcggac tggaaagtac aaggctcact tcttcaccca gggctctgcc 2580 cacagtgata ccactgcaga ccctgcctgc cacgcctcca gctctctgac tgctcatgag 2640 cccccgctgc tctatgacct gtccaaggac cctggtgaga actacaacct gctggggggt 2700 gtggccgggg ccaccccaga ggtgctgcaa gccctgaaac agcttcagct gctcaaggcc 2760 cagttagacg cagctgtgac cttcggcccc agccaggtgg cccggggcga ggaccccgcc 2820 ctgcaaatct gctgtcatcc tggctgcacc ccccgcccag cttgctgcca ttgcccagat 2880 ccccatgcct aagcggccgc 2900 <210> 262 <211> 279 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 262 Asp Pro Pro Ala Pro Leu Pro Leu Val Ile Trp His Gly Met Gly Asp 1 5 10 15 Ser Cys Cys Asn Pro Leu Ser Met Gly Ala Ile Lys Lys Met Val Glu 20 25 30 Lys Lys Ile Pro Gly Ile Tyr Val Leu Ser Leu Glu Ile Gly Lys Thr 35 40 45 Leu Met Glu Asp Val Glu Asn Ser Phe Phe Leu Asn Val Asn Ser Gln 50 55 60 Val Thr Thr Val Cys Gln Ala Leu Ala Lys Asp Pro Lys Leu Gln Gln 65 70 75 80 Gly Tyr Asn Ala Met Gly Phe Ser Gln Gly Gly Gln Phe Leu Arg Ala 85 90 95 Val Ala Gln Arg Cys Pro Ser Pro Pro Met Ile Asn Leu Ile Ser Val 100 105 110 Gly Gly Gln His Gln Gly Val Phe Gly Leu Pro Arg Cys Pro Gly Glu 115 120 125 Ser Ser His Ile Cys Asp Phe Ile Arg Lys Thr Leu Asn Ala Gly Ala 130 135 140 Tyr 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tactggggcc aaggaaccct ggtcaccgtc 420 tcctcagcta gcaccaaggg cccatcggtc ttccccctgg caccctcctc caagagcacc 480 tctgggggca cagcggccct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga accggtgacg 540 gtgtcgtgga actcaggcgc cctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccggc tgtcctacag 600 tcctcaggac tctactccct cagcagcgtg gtgaccgtgc cctccagcag cttgggcacc 660 cagacctaca tctgcaacgt gaatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagaaagtt 720 gagcccaaat cttgtgacaa aactcacacg tgcccaccgt gcccagcacc tgaactcctg 780 ggaggtccgt cagtcttcct cttcccccca aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg 840 acccctgagg tcacatgcgt ggtggtggac gtgagccacg aagaccctga ggtcaagttc 900 aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag 960 tacaacagca cgtaccgggt ggtcagcgtc ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaat 1020 ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac aaagccctcc cagcccccat cgagaaaacc 1080 atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg 1140 gatgagctga ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctatcccagc 1200 gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct 1260 cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctacagca agctcaccgt ggacaagagc 1320 aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac 1380 tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg ggtaaaggat ctgacccgcc ggcgccgctg 1440 ccgttggtga tctggcatgg gatgggagac agctgttgca atcccttaag catgggtgct 1500 attaaaaaaa tggtggagaa gaaaatacct ggaatttacg tcttatcttt agagattggg 1560 aagaccctga tggaggacgt ggagaacagc ttcttcttga atgtcaattc ccaagtaaca 1620 acagtgtgtc aggcacttgc taaagatcct aaattgcagc aaggctacaa tgctatggga 1680 ttctcccagg gaggccaatt tctgagggca gtggctcaga gatgcccttc acctcccatg 1740 atcaatctga tctcggttgg gggacaacat caaggtgttt ttggactccc tcgatgccca 1800 ggagagagct ctcacatctg tgacttcatc cgaaaaacac tgaatgctgg ggcgtactcc 1860 aaagttgttc aggaacgcct cgtgcaagcc gaatactggc atgaccccat aaaggaggat 1920 gtgtatcgca accacagcat cttcttggca gatataaatc aggagcgggg tatcaatgag 1980 tcctacaaga aaaacctgat ggccctgaag aagtttgtga tggtgaaatt cctcaatgat 2040 tccattgtgg accctgtaga ttcggagtgg tttggatttt acagaagtgg ccaagccaag 2100 gaaaccattc ccttacagga gacctccctg tacacacagg accgcctggg gctaaaggaa 2160 atggacaatg caggacagct agtgtttctg gctacagaag gggaccatct tcagttgtct 2220 gaagaatggt tttatgccca catcatacca ttccttggat aagcggccgc 2270 <210> 265 <211> 544 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 265 Ser Tyr Ser Pro Glu Pro Asp Gln Arg Arg Thr Leu Pro Pro Gly Trp 1 5 10 15 Val Ser Leu Gly Arg Ala Asp Pro Glu Glu Glu Leu Ser Leu Thr Phe 20 25 30 Ala Leu Arg Gln Gln Asn Val Glu Arg Leu Ser Glu Leu Val Gln Ala 35 40 45 Val Ser Asp Pro Ser Ser Pro Gln Tyr Gly Lys Tyr Leu Thr Leu Glu 50 55 60 Asn Val Ala Asp Leu Val Arg Pro Ser Pro Leu Thr Leu His Thr Val 65 70 75 80 Gln Lys Trp Leu Leu Ala Ala Gly Ala Gln Lys Cys His Ser Val Ile 85 90 95 Thr Gln Asp Phe Leu Thr Cys Trp Leu Ser Ile Arg Gln Ala Glu Leu 100 105 110 Leu Leu Pro Gly Ala Glu Phe His His Tyr Val Gly Gly Pro Thr Glu 115 120 125 Thr His Val Val Arg Ser Pro His Pro Tyr Gln Leu Pro Gln Ala Leu 130 135 140 Ala Pro His Val Asp Phe Val Gly Gly Leu 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chain of anti-hTfR antibody No.3 (humanized 2) and hTPP-1 <400> 266 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Trp Leu Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Gly Asp Tyr Pro Thr Tyr Ser Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Val Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Gly Asn Tyr Asp Glu Val Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 165 170 175 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr 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No.3 (humanized 2) and hTPP-1, synthetic sequence <400> 267 acgcgtgccg ccaccatggg ctggagctgg attctgctgt tcctcctgag cgtgacagca 60 ggagtgcaca gcgaggtgca actagtgcag tctggagcag aggtgaaaaa gcccggggag 120 tctctgaaga tttcctgtaa gggttctgga tacagcttta ccaactactg gctgggatgg 180 gtgcgccaga tgcccgggaa aggcctggag tggatggggg acatctaccc cggcggagac 240 taccctacat acagcgagaa gttcaaggtc caggtcacca tctcagccga caagtccatc 300 agcaccgcct acctgcagtg gagcagcctg aaggcctcgg acaccgccat gtattactgt 360 gcgagatcag gcaattacga cgaagtggcc tactggggcc aaggaaccct ggtcaccgtc 420 tcctcagcta gcaccaaggg cccatcggtc ttccccctgg caccctcctc caagagcacc 480 tctgggggca cagcggccct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga accggtgacg 540 gtgtcgtgga actcaggcgc cctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccggc tgtcctacag 600 tcctcaggac tctactccct cagcagcgtg gtgaccgtgc cctccagcag cttgggcacc 660 cagacctaca tctgcaacgt gaatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagaaagtt 720 gagcccaaat cttgtgacaa aactcacacg tgcccaccgt gcccagcacc tgaactcctg 780 ggaggtccgt cagtcttcct cttcccccca aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg 840 acccctgagg tcacatgcgt ggtggtggac gtgagccacg aagaccctga ggtcaagttc 900 aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag 960 tacaacagca cgtaccgggt ggtcagcgtc ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaat 1020 ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac aaagccctcc cagcccccat cgagaaaacc 1080 atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg 1140 gatgagctga ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctatcccagc 1200 gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct 1260 cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctacagca agctcaccgt ggacaagagc 1320 aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac 1380 tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg ggtaaaggat ctagttacag cccggagccc 1440 gaccagcgga ggacgctgcc cccaggctgg gtgtccctgg gccgtgcgga ccctgaggaa 1500 gagctgagtc tcacctttgc cctgagacag cagaatgtgg aaagactctc ggagctggtg 1560 caggctgtgt cagatcccag ctctcctcaa tacggaaaat acctgaccct agagaatgtg 1620 gctgatctgg tgaggccatc 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Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Trp Leu Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Gly Asp Tyr Pro Thr Tyr Ser Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Val Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Gly Asn Tyr Asp Glu Val Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 165 170 175 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205 Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 210 215 220 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actcaggcgc cctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccggc tgtcctacag 600 tcctcaggac tctactccct cagcagcgtg gtgaccgtgc cctccagcag cttgggcacc 660 cagacctaca tctgcaacgt gaatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagaaagtt 720 gagcccaaat cttgtgacaa aactcacacg tgcccaccgt gcccagcacc tgaactcctg 780 ggaggtccgt cagtcttcct cttcccccca aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg 840 acccctgagg tcacatgcgt ggtggtggac gtgagccacg aagaccctga ggtcaagttc 900 aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag 960 tacaacagca cgtaccgggt ggtcagcgtc ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaat 1020 ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac aaagccctcc cagcccccat cgagaaaacc 1080 atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg 1140 gatgagctga ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctatcccagc 1200 gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct 1260 cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctacagca agctcaccgt ggacaagagc 1320 aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac 1380 tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg ggtaaaggat ctgccgaggc cccgcacctg 1440 gtgcacgtgg acgcggcccg cgcgctgtgg cccctgcggc gcttctggag gagcacaggc 1500 ttctgccccc cgctgccaca cagccaggct gaccagtacg tcctcagctg ggaccagcag 1560 ctcaacctcg cctatgtggg cgccgtccct caccgcggca tcaagcaggt ccggacccac 1620 tggctgctgg agcttgtcac caccaggggg tccactggac ggggcctgag ctacaacttc 1680 acccacctgg acgggtactt ggaccttctc agggagaacc agctcctccc agggtttgag 1740 ctgatgggca gcgcctcggg ccacttcact gactttgagg acaagcagca ggtgtttgag 1800 tggaaggact tggtctccag cctggccagg agatacatcg gtaggtacgg actggcgcat 1860 gtttccaagt ggaacttcga gacgtggaat gagccagacc accacgactt tgacaacgtc 1920 tccatgacca tgcaaggctt cctgaactac tacgatgcct gctcggaggg tctgcgcgcc 1980 gccagccccg ccctgcggct gggaggcccc ggcgactcct tccacacccc accgcgatcc 2040 ccgctgagct ggggcctcct gcgccactgc cacgacggta ccaacttctt cactggggag 2100 gcgggcgtgc ggctggacta catctccctc cacaggaagg gtgcgcgcag ctccatctcc 2160 atcctggagc aggagaaggt cgtcgcgcag cagatccggc agctcttccc caagttcgcg 2220 gacaccccca tttacaacga cgaggcggac ccgctggtgg gctggtccct gccacagccg 2280 tggagggcgg acgtgaccta cgcggccatg gtggtgaagg tcatcgcgca gcatcagaac 2340 ctgctactgg ccaacaccac ctccgccttc ccctacgcgc tcctgagcaa cgacaatgcc 2400 ttcctgagct accacccgca ccccttcgcg cagcgcacgc tcaccgcgcg cttccaggtc 2460 aacaacaccc gcccgccgca cgtgcagctg ttgcgcaagc cggtgctcac ggccatgggg 2520 ctgctggcgc tgctggatga ggagcagctc tgggccgaag tgtcgcaggc cgggaccgtc 2580 ctggacagca accacacggt gggcgtcctg gccagcgccc accgccccca gggcccggcc 2640 gacgcctggc gcgccgcggt gctgatctac gcgagcgacg acacccgcgc ccaccccaac 2700 cgcagcgtcg cggtgaccct gcggctgcgc ggggtgcccc ccggcccggg cctggtctac 2760 gtcacgcgct acctggacaa cgggctctgc agccccgacg gcgagtggcg gcgcctgggc 2820 cggcccgtct tccccacggc agagcagttc cggcgcatgc gcgcggctga ggacccggtg 2880 gccgcggcgc cccgcccctt acccgccggt ggccgcctga ccctgcgccc cgcgctgcgg 2940 ctgccgtcgc ttttgctggt gcacgtgtgt gcgcgccccg agaagccgcc cgggcaggtc 3000 acgcggctcc gcgccctgcc cctgacccaa gggcagctgg ttctggtctg gtcggatgaa 3060 cacgtgggct ccaagtgcct gtggacatac gagatccagt tctctcagga cggtaaggcg 3120 tacaccccgg tcagcaggaa gccatcgacc ttcaacctct ttgtgttcag cccagacaca 3180 ggtgctgtct ctggctccta ccgagttcga gccctggact actgggcccg accaggcccc 3240 ttctcggacc ctgtgccgta cctggaggtc cctgtgccaa gagggccccc atccccgggc 3300 aatccataag cggccgc 3317 <210> 271 <211> 235 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 271 Leu Pro Ala Gln Val Ala Phe Thr Pro Tyr Ala Pro Glu Pro Gly Ser 1 5 10 15 Thr Cys Arg Leu Arg Glu Tyr Tyr Asp Gln Thr Ala Gln Met Cys Cys 20 25 30 Ser Lys Cys Ser Pro Gly Gln His Ala Lys Val Phe Cys Thr Lys Thr 35 40 45 Ser Asp Thr Val Cys Asp Ser Cys Glu Asp Ser Thr Tyr Thr Gln Leu 50 55 60 Trp Asn Trp Val Pro Glu Cys Leu Ser Cys Gly Ser Arg Cys Ser Ser 65 70 75 80 Asp Gln Val Glu Thr Gln Ala Cys Thr Arg Glu Gln Asn Arg Ile Cys 85 90 95 Thr Cys Arg Pro Gly Trp Tyr Cys Ala Leu Ser Lys Gln Glu Gly Cys 100 105 110 Arg Leu Cys Ala Pro Leu Arg Lys Cys Arg Pro Gly Phe Gly Val Ala 115 120 125 Arg Pro Gly Thr Glu Thr Ser Asp Val Val Cys Lys Pro Cys Ala 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Nucleotide sequence encoding the amino acid sequence of fusion protein of heavy chain of anti-hTfR antibody No.3 (humanized 2) and hTNF-alpha receptor, synthetic sequence <400> 273 acgcgtgccg ccaccatggg ctggagctgg attctgctgt tcctcctgag cgtgacagca 60 ggagtgcaca gcgaggtgca actagtgcag tctggagcag aggtgaaaaa gcccggggag 120 tctctgaaga tttcctgtaa gggttctgga tacagcttta ccaactactg gctgggatgg 180 gtgcgccaga tgcccgggaa aggcctggag tggatggggg acatctaccc cggcggagac 240 taccctacat acagcgagaa gttcaaggtc caggtcacca tctcagccga caagtccatc 300 agcaccgcct acctgcagtg gagcagcctg aaggcctcgg acaccgccat gtattactgt 360 gcgagatcag gcaattacga cgaagtggcc tactggggcc aaggaaccct ggtcaccgtc 420 tcctcagcta gcaccaaggg cccatcggtc ttccccctgg caccctcctc caagagcacc 480 tctgggggca cagcggccct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga accggtgacg 540 gtgtcgtgga actcaggcgc cctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccggc tgtcctacag 600 tcctcaggac tctactccct cagcagcgtg gtgaccgtgc cctccagcag cttgggcacc 660 cagacctaca tctgcaacgt gaatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagaaagtt 720 gagcccaaat cttgtgacaa aactcacacg tgcccaccgt gcccagcacc tgaactcctg 780 ggaggtccgt cagtcttcct cttcccccca aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg 840 acccctgagg tcacatgcgt ggtggtggac gtgagccacg aagaccctga ggtcaagttc 900 aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag 960 tacaacagca cgtaccgggt ggtcagcgtc ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaat 1020 ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac aaagccctcc cagcccccat cgagaaaacc 1080 atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg 1140 gatgagctga ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctatcccagc 1200 gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct 1260 cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctacagca agctcaccgt ggacaagagc 1320 aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac 1380 tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg ggtaaaggat ctttgcccgc ccaggtggca 1440 tttacaccct acgccccgga gcccgggagc acatgccggc tcagagaata ctatgaccag 1500 acagctcaga tgtgctgcag caagtgctcg ccgggccaac atgcaaaagt cttctgtacc 1560 aagacctcgg acaccgtgtg tgactcctgt gaggacagca catacaccca gctctggaac 1620 tgggttcccg agtgcttgag ctgtggctcc cgctgtagct ctgaccaggt ggaaactcaa 1680 gcctgcactc gggaacagaa ccgcatctgc acctgcaggc ccggctggta ctgcgcgctg 1740 agcaagcagg aggggtgccg gctgtgcgcg ccgctgcgca agtgccgccc gggcttcggc 1800 gtggccagac caggaactga aacatcagac gtggtgtgca agccctgtgc cccggggacg 1860 ttctccaaca cgacttcatc cacggatatt tgcaggcccc accaaatctg taacgtggtg 1920 gccatccctg ggaatgcaag catggatgca gtctgcacgt ccacgtcccc cacccggagt 1980 atggccccag gggcagtaca cttaccccag ccagtgtcca cacgatccca acacacgcag 2040 ccaactccag aacccagcac tgctccaagc acctccttcc tgctcccaat gggccccagc 2100 cccccagctg aagggagcac tggcgactaa gcggccgc 2138 <210> 274 <211> 482 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 274 Arg Pro Arg Asn Ala Leu Leu Leu Leu Ala Asp Asp Gly Gly Phe Glu 1 5 10 15 Ser Gly Ala Tyr Asn Asn Ser Ala Ile Ala Thr Pro His Leu Asp Ala 20 25 30 Leu Ala Arg Arg Ser Leu Leu Phe Arg Asn Ala Phe Thr Ser Val Ser 35 40 45 Ser Cys Ser Pro Ser 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ggagtgcaca gcgaggtgca actagtgcag tctggagcag aggtgaaaaa gcccggggag 120 tctctgaaga tttcctgtaa gggttctgga tacagcttta ccaactactg gctgggatgg 180 gtgcgccaga tgcccgggaa aggcctggag tggatggggg acatctaccc cggcggagac 240 taccctacat acagcgagaa gttcaaggtc caggtcacca tctcagccga caagtccatc 300 agcaccgcct acctgcagtg gagcagcctg aaggcctcgg acaccgccat gtattactgt 360 gcgagatcag gcaattacga cgaagtggcc tactggggcc aaggaaccct ggtcaccgtc 420 tcctcagcta gcaccaaggg cccatcggtc ttccccctgg caccctcctc caagagcacc 480 tctgggggca cagcggccct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga accggtgacg 540 gtgtcgtgga actcaggcgc cctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccggc tgtcctacag 600 tcctcaggac tctactccct cagcagcgtg gtgaccgtgc cctccagcag cttgggcacc 660 cagacctaca tctgcaacgt gaatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagaaagtt 720 gagcccaaat cttgtgacaa aactcacacg tgcccaccgt gcccagcacc tgaactcctg 780 ggaggtccgt cagtcttcct cttcccccca aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg 840 acccctgagg tcacatgcgt ggtggtggac gtgagccacg aagaccctga ggtcaagttc 900 aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag 960 tacaacagca cgtaccgggt ggtcagcgtc ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaat 1020 ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac aaagccctcc cagcccccat cgagaaaacc 1080 atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg 1140 gatgagctga ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctatcccagc 1200 gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct 1260 cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctacagca agctcaccgt ggacaagagc 1320 aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac 1380 tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg ggtaaaggat ctcgtccccg gaacgcactg 1440 ctgctcctcg cggatgacgg aggctttgag agtggcgcgt acaacaacag cgccatcgcc 1500 accccgcacc tggacgcctt ggcccgccgc agcctcctct ttcgcaatgc cttcacctcg 1560 gtcagcagct gctctcccag ccgcgccagc ctcctcactg gcctgcccca gcatcagaat 1620 gggatgtacg ggctgcacca ggacgtgcac cacttcaact ccttcgacaa ggtgcggagc 1680 ctgccgctgc tgctcagcca agctggtgtg cgcacaggca tcatcgggaa gaagcacgtg 1740 gggccggaga ccgtgtaccc gtttgacttt gcgtacacgg aggagaatgg ctccgtcctc 1800 caggtggggc ggaacatcac tagaattaag ctgctcgtcc ggaaattcct gcagactcag 1860 gatgaccggc ctttcttcct ctacgtcgcc ttccacgacc cccaccgctg tgggcactcc 1920 cagccccagt acggaacctt ctgtgagaag tttggcaacg gagagagcgg catgggtcgt 1980 atcccagact ggacccccca ggcctacgac ccactggacg tgctggtgcc ttacttcgtc 2040 cccaacaccc cggcagcccg agccgacctg gccgctcagt acaccaccgt cggccgcatg 2100 gaccaaggag ttggactggt gctccaggag ctgcgtgacg ccggtgtcct gaacgacaca 2160 ctggtgatct tcacgtccga caacggtatc cccttcccca gcggcaggac caacctgtac 2220 tggccgggca ctgctgaacc cttactggtg tcatccccgg agcacccaaa acgctggggc 2280 caagtcagcg aggcctacgt gagcctccta gacctcacgc ccaccatctt ggattggttc 2340 tcgatcccgt accccagcta cgccatcttt ggctcgaaga ccatccacct cactggccgg 2400 tccctcctgc cggcgctgga ggccgagccc ctctgggcca ccgtctttgg cagccagagc 2460 caccacgagg tcaccatgtc ctaccccatg cgctccgtgc agcaccggca cttccgcctc 2520 gtgcacaacc tcaacttcaa gatgcccttt cccatcgacc aggacttcta cgtctcaccc 2580 accttccagg acctcctgaa ccgcaccaca gctggtcagc ccacgggctg gtacaaggac 2640 ctccgtcatt actactaccg ggcgcgctgg gagctctacg accggagccg ggacccccac 2700 gagacccaga acctggccac cgacccgcgc tttgctcagc ttctggagat gcttcgggac 2760 cagctggcca agtggcagtg ggagacccac gacccctggg tgtgcgcccc cgacggcgtc 2820 ctggaggaga agctctctcc ccagtgccag cccctccaca atgagctgta agcggccgc 2879 <210> 277 <211> 245 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of anti-hTfR single-chain antibody <400> 277 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Trp Leu Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Gly Asp Tyr Pro Thr Tyr Ser Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Val Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Gly Asn Tyr Asp Glu Val Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 115 120 125 Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu 130 135 140 Ser Val Thr Pro Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln 145 150 155 160 Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln 165 170 175 Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg 180 185 190 Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp 195 200 205 Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr 210 215 220 Tyr Cys Ser Gln Ser Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr 225 230 235 240 Lys Val Glu Ile Lys 245 <210> 278 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 2 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No. 6 <400> 278 Ile Ile Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asn Tyr His Ser Ala Leu Ile Ser 1 5 10 15 <210> 279 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence 2 of CDR 2 in the heavy chain of mouse anti-hTfR antibody No. 8 <400> 279 Ile Ile Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Arg Ser Ala Leu Ile Ser 1 5 10 15

Claims (69)

  1. 항인간 트랜스페린 수용체 항체로서, 해당 항체의 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열이, 이하의 (1)∼(14)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것인, 항체:
    (1) CDR1에 서열 번호 6 또는 서열 번호 7의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 8 또는 서열 번호 9의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Trp-Thr-Ser을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 아미노산 서열;
    (2) CDR1에 서열 번호 11 또는 서열 번호 12의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 13 또는 서열 번호 14의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Tyr-Ala-Ser을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 아미노산 서열;
    (3) CDR1에 서열 번호 16 또는 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 18 또는 서열 번호 19의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Lys-Val-Ser을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 아미노산 서열;
    (4) CDR1에 서열 번호 21 또는 서열 번호 22의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 23 또는 서열 번호 24의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Asp-Thr-Ser을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 아미노산 서열;
    (5) CDR1에 서열 번호 26 또는 서열 번호 27의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 28 또는 서열 번호 29의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Asp-Thr-Ser을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 아미노산 서열;
    (6) CDR1에 서열 번호 31 또는 서열 번호 32의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 33 또는 서열 번호 34의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Ala-Ala-Ser을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 아미노산 서열;
    (7) CDR1에 서열 번호 36 또는 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 38 또는 서열 번호 39의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Gln-Thr-Ser을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 40의 아미노산 서열을 포함하는, 아미노산 서열;
    (8) CDR1에 서열 번호 41 또는 서열 번호 42의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 43 또는 서열 번호 44의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Gly-Thr-Ser을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 45의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 아미노산 서열;
    (9) CDR1에 서열 번호 46 또는 서열 번호 47의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 48 또는 서열 번호 49의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Phe-Thr-Ser을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 아미노산 서열;
    (10) CDR1에 서열 번호 51 또는 서열 번호 52의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 53 또는 서열 번호 54의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Ala-Ala-Ser을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 55의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 아미노산 서열;
    (11) CDR1에 서열 번호 56 또는 서열 번호 57의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 58 또는 서열 번호 59의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Tyr-Ala-Ser을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 60의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 아미노산 서열;
    (12) CDR1에 서열 번호 61 또는 서열 번호 62의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 63 또는 서열 번호 64의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Trp-Ser-Ser을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 아미노산 서열;
    (13) CDR1에 서열 번호 66 또는 서열 번호 67의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 68 또는 서열 번호 69의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Tyr-Ala-Ser을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 70의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 아미노산 서열;
    (14) CDR1에 서열 번호 71 또는 서열 번호 72의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 73 또는 서열 번호 74의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Asp-Thr-Ser을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 75의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 아미노산 서열.
  2. 제 1 항의 항인간 트랜스페린 수용체 항체로서, 해당 항체의 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열이, 이하의 (1)∼(14)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것인, 항체:
    (1) CDR1에 서열 번호 6의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 8의 아미노산 서열을, 또한 CDR3에 서열 번호 10의 아미노산 서열을, 각각 포함하는 것인, 아미노산 서열;
    (2) CDR1에 서열 번호 11의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 13의 아미노산 서열을, 또한 CDR3에 서열 번호 15의 아미노산 서열을, 각각 포함하는 것인, 아미노산 서열;
    (3) CDR1에 서열 번호 16의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 18의 아미노산 서열을, 또한 CDR3에 서열 번호 20의 아미노산 서열을, 각각 포함하는 것인, 아미노산 서열;
    (4) CDR1에 서열 번호 21의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 23의 아미노산 서열을, 또한 CDR3에 서열 번호 25의 아미노산 서열을, 각각 포함하는 것인, 아미노산 서열;
    (5) CDR1에 서열 번호 26의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 28의 아미노산 서열을, 또한 CDR3에 서열 번호 30의 아미노산 서열을, 각각 포함하는 것인, 아미노산 서열;
    (6) CDR1에 서열 번호 31의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 33의 아미노산 서열을, 또한 CDR3에 서열 번호 35의 아미노산 서열을, 각각 포함하는, 아미노산 서열;
    (7) CDR1에 서열 번호 36의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 38의 아미노산 서열을, 또한 CDR3에 서열 번호 40의 아미노산 서열을, 각각 포함하는 것인, 아미노산 서열;
    (8) CDR1에 서열 번호 41의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 43의 아미노산 서열을, 또한 CDR3에 서열 번호 45의 아미노산 서열을, 각각 포함하는 것인, 아미노산 서열;
    (9) CDR1에 서열 번호 46의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 48의 아미노산 서열을, 또한 CDR3에 서열 번호 50의 아미노산 서열을, 각각 포함하는 것인, 아미노산 서열;
    (10) CDR1에 서열 번호 51의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 53의 아미노산 서열을, 또한 CDR3에 서열 번호 55의 아미노산 서열을, 각각 포함하는 것인, 아미노산 서열;
    (11) CDR1에 서열 번호 56의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 58의 아미노산 서열을, 또한 CDR3에 서열 번호 60의 아미노산 서열을, 각각 포함하는 것인, 아미노산 서열;
    (12) CDR1에 서열 번호 61의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 63의 아미노산 서열을, 또한 CDR3에 서열 번호 65의 아미노산 서열을, 각각 포함하는 것인, 아미노산 서열;
    (13) CDR1에 서열 번호 66의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 68의 아미노산 서열을, 또한 CDR3에 서열 번호 70의 아미노산 서열을, 각각 포함하는 것인, 아미노산 서열; 및
    (14) CDR1에 서열 번호 71의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 73의 아미노산 서열을, 또한 CDR3에 서열 번호 75의 아미노산 서열을, 각각 포함하는 것인, 아미노산 서열.
  3. 경쇄의 가변 영역의 CDR1, CDR2 및 CDR3의 각 아미노산 서열이, 제 1 항 또는 제 2 항의 어느 하나의 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3의 각 아미노산 서열과 각각 80% 이상의 상동성을 가지는 것인, 항인간 트랜스페린 수용체 항체.
  4. 경쇄의 가변 영역의 CDR1, CDR2 및 CDR3의 각 아미노산 서열이, 제 1 항 또는 제 2 항의 어느 하나의 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3의 각 아미노산 서열과 각각 90% 이상의 상동성을 가지는 것인, 항인간 트랜스페린 수용체 항체.
  5. 제 1 항 또는 제 2 항의 어느 하나의 경쇄의 CDR 중 적어도 1개에 있어서, 이것을 구성하는 아미노산 서열 중 1∼5개의 아미노산이 치환, 결실 또는 부가된 것인, 항인간 트랜스페린 수용체 항체.
  6. 제 1 항 또는 제 2 항의 어느 하나의 경쇄의 CDR 적어도 1개에 있어서, 이것을 구성하는 아미노산 서열 중 1∼3개의 아미노산이 치환, 결실 또는 부가된 것인, 항인간 트랜스페린 수용체 항체.
  7. 항인간 트랜스페린 수용체 항체로서, 해당 항체의 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열이, 이하의 (1)∼(14)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것인, 항체:
    (1) CDR1에 서열 번호 76 또는 서열 번호 77의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 78 또는 서열 번호 79의 아미노산 서열을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 80 또는 서열 번호 81의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 아미노산 서열;
    (2) CDR1에 서열 번호 82 또는 서열 번호 83의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 84 또는 서열 번호 85의 아미노산 서열을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 86 또는 서열 번호 87의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 아미노산 서열;
    (3) CDR1에 서열 번호 88 또는 서열 번호 89의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 90 또는 서열 번호 91의 아미노산 서열을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 92 또는 서열 번호 93의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 아미노산 서열;
    (4) CDR1에 서열 번호 94 또는 서열 번호 95의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 96 또는 서열 번호 97의 아미노산 서열을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 98 또는 서열 번호 99의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 아미노산 서열;
    (5) CDR1에 서열 번호 100 또는 서열 번호 101의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 102 또는 서열 번호 103의 아미노산 서열을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 104 또는 서열 번호 105의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 아미노산 서열;
    (6) CDR1에 서열 번호 106 또는 서열 번호 107의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 108의 아미노산 서열 또는 서열 번호 278의 아미노산 서열을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 109 또는 서열 번호 110의 아미노산 서열을 포함하는 것인 아미노산 서열;
    (7) CDR1에 서열 번호 111 또는 서열 번호 112의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 113 또는 서열 번호 114의 아미노산 서열을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 115 또는 서열 번호 116의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 아미노산 서열;
    (8) CDR1에 서열 번호 117 또는 서열 번호 118의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 119의 아미노산 서열 또는 서열 번호 279의 아미노산 서열을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 120 또는 서열 번호 121의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 아미노산 서열;
    (9) CDR1에 서열 번호 122 또는 서열 번호 123의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 124 또는 서열 번호 125의 아미노산 서열을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 126 또는 서열 번호 127의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 아미노산 서열;
    (10) CDR1에 서열 번호 128 또는 서열 번호 129의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 130 또는 서열 번호 131의 아미노산 서열을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 132 또는 서열 번호 133의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 아미노산 서열;
    (11) CDR1에 서열 번호 134 또는 서열 번호 135의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 136 또는 서열 번호 137의 아미노산 서열을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 138 또는 서열 번호 139의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 아미노산 서열;
    (12) CDR1에 서열 번호 140 또는 서열 번호 141의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 142 또는 서열 번호 143의 아미노산 서열을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 144 또는 서열 번호 145의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 아미노산 서열;
    (13) CDR1에 서열 번호 146 또는 서열 번호 147의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2에 서열 번호 148 또는 서열 번호 149의 아미노산 서열을 포함하고, 또한 CDR3에 서열 번호 150 또는 서열 번호 151의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 아미노산 서열; 및
    (14) CDR1이 서열 번호 152 또는 서열 번호 153의 아미노산 서열을 포함하고, CDR2가 서열 번호 154 또는 서열 번호 155의 아미노산 서열을 포함하고, 또한 CDR3이 서열 번호 156 또는 서열 번호 157의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 아미노산 서열.
  8. 제 7 항의 항인간 트랜스페린 수용체 항체로서, 해당 항체의 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열이, 이하의 (1)∼(14)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것인, 항체:
    (1) CDR1에 서열 번호 76의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 78의 아미노산 서열을, 및 CDR3에 서열 번호 80의 아미노산 서열을, 각각 포함하는 것인, 아미노산 서열;
    (2) CDR1에 서열 번호 82의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 84의 아미노산 서열을, 및 CDR3에 서열 번호 86의 아미노산 서열, 을 각각 포함하는 것인, 아미노산 서열;
    (3) CDR1에 서열 번호 88의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 90의 아미노산 서열을, 및 CDR3에 서열 번호 92의 아미노산 서열을, 각각 포함하는 것인, 아미노산 서열;
    (4) CDR1에 서열 번호 94의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 96의 아미노산 서열을, 및 CDR3에 서열 번호 98의 아미노산 서열을, 각각 포함하는 것인, 아미노산 서열;
    (5) CDR1에 서열 번호 100의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 102의 아미노산 서열을, 및 CDR3에 서열 번호 104의 아미노산 서열을, 각각 포함하는 것인, 아미노산 서열;
    (6) CDR1에 서열 번호 106의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 108의 아미노산 서열을, 및 CDR3에 서열 번호 109의 아미노산 서열을, 각각 포함하는 것인, 아미노산 서열;
    (7) CDR1에 서열 번호 111의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 113의 아미노산 서열을, 및 CDR3에 서열 번호 115의 아미노산 서열을, 각각 포함하는 것인, 아미노산 서열;
    (8) CDR1에 서열 번호 117의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 119의 아미노산 서열을, 및 CDR3에 서열 번호 120의 아미노산 서열을, 각각 포함하는 것인, 아미노산 서열;
    (9) CDR1에 서열 번호 122의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 124의 아미노산 서열을, 및 CDR3에 서열 번호 126의 아미노산 서열을, 각각 포함하는 것인, 아미노산 서열;
    (10) CDR1에 서열 번호 128의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 130의 아미노산 서열을, 및 CDR3에 서열 번호 132의 아미노산 서열을, 각각 포함하는 것인, 아미노산 서열;
    (11) CDR1에 서열 번호 134의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 136의 아미노산 서열을, 및 CDR3에 서열 번호 138의 아미노산 서열을, 각각 포함하는 것인, 아미노산 서열;
    (12) CDR1에 서열 번호 140의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 142의 아미노산 서열을, 및 CDR3에 서열 번호 144의 아미노산 서열을, 각각 포함하는 것인, 아미노산 서열;
    (13) CDR1에 서열 번호 146의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 148의 아미노산 서열을, 및 CDR3에 서열 번호 150의 아미노산 서열을, 각각 포함하는 것인 아미노산 서열; 및
    (14) CDR1에 서열 번호 152의 아미노산 서열을, CDR2에 서열 번호 154의 아미노산 서열을, 및 CDR3에 서열 번호 156의 아미노산 서열을, 각각 포함하는 것인, 아미노산 서열.
  9. 중쇄의 가변 영역의 CDR1, CDR2 및 CDR3의 각 아미노산 서열이, 제 7 항 또는 제 8 항의 어느 하나의 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3의 각 아미노산 서열과 각각 80% 이상의 상동성을 가지는 것인, 항인간 트랜스페린 수용체 항체.
  10. 중쇄의 가변 영역의 CDR1, CDR2 및 CDR3의 각 아미노산 서열이, 제 7 항 또는 제 8 항의 어느 하나의 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3의 각 아미노산 서열과 각각 90% 이상의 상동성을 가지는 것인, 항인간 트랜스페린 수용체 항체.
  11. 제 7 항 또는 제 8 항의 어느 하나의 중쇄의 CDR 중 적어도 1개에 있어서, 이것을 구성하는 아미노산 서열 중, 1∼5개의 아미노산이 치환, 결실 또는 부가된 것인, 항인간 트랜스페린 수용체 항체.
  12. 제 7 항 또는 제 8 항의 어느 하나의 중쇄의 CDR 중 적어도 1개에 있어서, 이것을 구성하는 아미노산 서열 중, 1∼3개의 아미노산이 치환, 결실 또는 부가된 것인, 항인간 트랜스페린 수용체 항체.
  13. 항인간 트랜스페린 수용체 항체로서, 해당 항체의 경쇄의 가변 영역 및 중쇄의 가변 영역이, 이하의 (1)∼(14)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것인, 항체:
    (1) 경쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 6 또는 서열 번호 7의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 8 또는 서열 번호 9의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Trp-Thr-Ser을, 및 CDR3으로서 서열 번호 10의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 76 또는 서열 번호 77의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 78 또는 서열 번호 79의 아미노산 서열을, 및 CDR3으로서 서열 번호 80 또는 서열 번호 81의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것;
    (2) 경쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 11 또는 서열 번호 12의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 13 또는 서열 번호 14의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Tyr-Ala-Ser을, 및 CDR3으로서 서열 번호 15의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 82 또는 서열 번호 83의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 84 또는 서열 번호 85의 아미노산 서열을, 및 CDR3으로서 서열 번호 86 또는 서열 번호 87의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것;
    (3) 경쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 16 또는 서열 번호 17의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 18 또는 서열 번호 19의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Lys-Val-Ser을, 및 CDR3으로서 서열 번호 20의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 88 또는 서열 번호 89의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 90 또는 서열 번호 91의 아미노산 서열을, 및 CDR3으로서 서열 번호 92 또는 서열 번호 93의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것;
    (4) 경쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 21 또는 서열 번호 22의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 23 또는 서열 번호 24의 아미노산 서열, 또는 Asp-Thr-Ser을, 및 CDR3으로서 서열 번호 25의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 94 또는 서열 번호 95의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 96 또는 서열 번호 97의 아미노산 서열을, 및 CDR3으로서 서열 번호 98 또는 서열 번호 99의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것;
    (5) 경쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 26 또는 서열 번호 27의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 28 또는 서열 번호 29의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Asp-Thr-Ser을, 및 CDR3으로서 서열 번호 30의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 100 또는 서열 번호 101의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 102 또는 서열 번호 103의 아미노산 서열을, 및 CDR3으로서 서열 번호 104 또는 서열 번호 105의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것;
    (6) 경쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 31 또는 서열 번호 32의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 33 또는 서열 번호 34의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Ala-Ala-Ser을, 및 CDR3으로서 서열 번호 35의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 106 또는 서열 번호 107의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 108의 아미노산 서열 또는 서열 번호 278의 아미노산 서열을, 및 CDR3으로서 서열 번호 109 또는 서열 번호 110의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것;
    (7) 경쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 36 또는 서열 번호 37의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 38 또는 서열 번호 39의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Gln-Thr-Ser을, 및 CDR3으로서 서열 번호 40의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 111 또는 서열 번호 112의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 113 또는 서열 번호 114의 아미노산 서열을, 및 CDR3으로서 서열 번호 115 또는 서열 번호 116의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것;
    (8) 경쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 41 또는 서열 번호 42의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 43 또는 서열 번호 44의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Gly-Thr-Ser을, 및 CDR3으로서 서열 번호 45의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이 CDR1로서 서열 번호 117 또는 서열 번호 118의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 119의 아미노산 서열 또는 서열 번호 279의 아미노산 서열을, 및 CDR3으로서 서열 번호 120 또는 서열 번호 121의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것;
    (9) 경쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 46 또는 서열 번호 47의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 48 또는 서열 번호 49의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Phe-Thr-Ser을, 및 CDR3으로서 서열 번호 50의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 122 또는 서열 번호 123의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 124 또는 서열 번호 125의 아미노산 서열을, 및 CDR3으로서 서열 번호 126 또는 서열 번호 127의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것;
    (10) 경쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 51 또는 서열 번호 52의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 53 또는 서열 번호 54의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Ala-Ala-Ser을, 및 CDR3으로서 서열 번호 55의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 128 또는 서열 번호 129의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 130 또는 서열 번호 131의 아미노산 서열을, 및 CDR3으로서 서열 번호 132 또는 서열 번호 133의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것;
    (11) 경쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 56 또는 서열 번호 57의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 58 또는 서열 번호 59의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Tyr-Ala-Ser을, 및 CDR3으로서 서열 번호 60의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 134 또는 서열 번호 135의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 136 또는 서열 번호 137의 아미노산 서열을, 및 CDR3으로서 서열 번호 138 또는 서열 번호 139의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것;
    (12) 경쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 61 또는 서열 번호 62의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 63 또는 서열 번호 64의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Trp-Ser-Ser을, 및 CDR3으로서 서열 번호 65의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 140 또는 서열 번호 141의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 142 또는 서열 번호 143의 아미노산 서열을, 및 CDR3으로서 서열 번호 144 또는 서열 번호 145의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것;
    (13) 경쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 66 또는 서열 번호 67의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 68 또는 서열 번호 69의 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열 Tyr-Ala-Ser을, 및 CDR3으로서 서열 번호 70의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 146 또는 서열 번호 147의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 148 또는 서열 번호 149의 아미노산 서열을, 및 CDR3으로서 서열 번호 150 또는 서열 번호 151의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것; 및
    (14) 경쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 71 또는 서열 번호 72의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 73 또는 서열 번호 74의 아미노산 서열을, 또는 아미노산 서열 Asp-Thr-Ser을, 및 CDR3으로서 서열 번호 75의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1로서 서열 번호 152 또는 서열 번호 153의 아미노산 서열을, CDR2로서 서열 번호 154 또는 서열 번호 155의 아미노산 서열을, 및 CDR3으로서 서열 번호 156 또는 서열 번호 157의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것.
  14. 제 13 항의 항인간 트랜스페린 수용체 항체로서, 해당 항체의 경쇄의 가변 영역 및 중쇄의 가변 영역이, 이하의 (1)∼(14)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것인, 항체:
    (1) 경쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 6, CDR2에 서열 번호 8, 및 CDR3에 서열 번호 10의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 76, CDR2에 서열 번호 78, 및 CDR3에 서열 번호 80의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것;
    (2) 경쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 11, CDR2에 서열 번호 13, 및 CDR3에 서열 번호 15의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 82, CDR2에 서열 번호 84, 및 CDR3에 서열 번호 86의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것;
    (3) 경쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 16, CDR2에 서열 번호 18, 및 CDR3에 서열 번호 20의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 88, CDR2에 서열 번호 90, 및 CDR3에 서열 번호 92의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것;
    (4) 경쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 21, CDR2에 서열 번호 23, 및 CDR3에 서열 번호 25의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 94, CDR2에 서열 번호 96, 및 CDR3에 서열 번호 98의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것;
    (5) 경쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 26, CDR2에 서열 번호 28, 및 CDR3에 서열 번호 30의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 100, CDR2에 서열 번호 102, 및 CDR3에 서열 번호 104의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것;
    (6) 경쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 31, CDR2에 서열 번호 33, 및 CDR3에 서열 번호 35의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 106, CDR2에 서열 번호 108, 및 CDR3에 서열 번호 109의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것;
    (7) 경쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 36, CDR2에 서열 번호 38, 및 CDR3에 서열 번호 40의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 111, CDR2에 서열 번호 113, 및 CDR3에 서열 번호 115의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것;
    (8) 경쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 41, CDR2에 서열 번호 43, 및 CDR3에 서열 번호 45의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 117, CDR2에 서열 번호 119, 및 CDR3에 서열 번호 120의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것;
    (9) 경쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 46, CDR2에 서열 번호 48, 및 CDR3에 서열 번호 50의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 122, CDR2에 서열 번호 124, 및 CDR3에 서열 번호 126의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것;
    (10) 경쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 51, CDR2에 서열 번호 53, 및 CDR3에 서열 번호 55의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 128, CDR2에 서열 번호 130, 및 CDR3에 서열 번호 132의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것;
    (11) 경쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 56, CDR2에 서열 번호 58, 및 CDR3에 서열 번호 60의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 134, CDR2에 서열 번호 136, 및 CDR3에 서열 번호 138의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것;
    (12) 경쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 61, CDR2에 서열 번호 63, 및 CDR3에 서열 번호 65의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 140, CDR2에 서열 번호 142, 및 CDR3에 서열 번호 144의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것;
    (13) 경쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 66, CDR2에 서열 번호 68, 및 CDR3에 서열 번호 70의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 146, CDR2에 서열 번호 148, 및 CDR3에 서열 번호 150의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것; 및
    (14) 경쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 71, CDR2에 서열 번호 73, 및 CDR3에 서열 번호 75의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지고, 또한 중쇄의 가변 영역이, CDR1에 서열 번호 152, CDR2에 서열 번호 154, 및 CDR3에 서열 번호 156의 아미노산 서열을, 각각 포함하여 이루어지는 것.
  15. 경쇄 및 중쇄의 각각에 있어서의 CDR1, CDR2 및 CDR3의 각 아미노산 서열이, 제 13 항 또는 제 14 항의 경쇄와 중쇄의 조합 중 어느 하나에 있어서의 경쇄 및 중쇄의 각각의 CDR1, CDR2 및 CDR3의 각 아미노산 서열과 80% 이상의 상동성을 가지는 것인, 항인간 트랜스페린 수용체 항체.
  16. 경쇄 및 중쇄의 각각에 있어서의 CDR1, CDR2 및 CDR3의 각 아미노산 서열이, 제 13 항 또는 제 14 항의 경쇄와 중쇄의 조합 중 어느 하나에 있어서의 경쇄 및 중쇄의 각각의 CDR1, CDR2 및 CDR3의 각 아미노산 서열과 90% 이상의 상동성을 가지는 것인, 항인간 트랜스페린 수용체 항체.
  17. 제 13 항 또는 제 14 항의 경쇄와 중쇄의 조합 중 어느 하나에 있어서의 경쇄 및 중쇄의 각각에 대해, CDR 중 적어도 1개에 있어서, 이것을 구성하는 아미노산 서열 중 1∼5개가 치환, 결실 또는 부가된 것인, 항인간 트랜스페린 수용체 항체.
  18. 제 13 항 또는 제 14 항의 경쇄와 중쇄의 조합 중 어느 하나에 있어서의 경쇄 및 중쇄의 각각에 대해, CDR 중 적어도 1개에 있어서, 이것을 구성하는 아미노산 서열 중 1∼3개가 치환, 결실 또는 부가된 것인, 항인간 트랜스페린 수용체 항체.
  19. 항인간 트랜스페린 수용체 항체로서, 해당 항체의 경쇄의 가변 영역이, 서열 번호 158, 서열 번호 159, 서열 번호 160, 서열 번호 161, 서열 번호 162, 및 서열 번호 163의 아미노산 서열로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 또한 해당 항체의 중쇄의 가변 영역이, 서열 번호 166, 서열 번호 167, 서열 번호 168, 서열 번호 169, 서열 번호 170, 및 서열 번호 171의 아미노산 서열로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것인, 항체.
  20. 항인간 트랜스페린 수용체 항체로서, 해당 항체의 경쇄의 가변 영역이, 서열 번호 174, 서열 번호 175, 서열 번호 176, 서열 번호 177, 서열 번호 178, 및 서열 번호 179의 아미노산 서열로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 또한 해당 항체의 중쇄의 가변 영역이, 서열 번호 182, 서열 번호 183, 서열 번호 184, 서열 번호 185, 서열 번호 186, 및 서열 번호 187의 아미노산 서열로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것인, 항체.
  21. 항인간 트랜스페린 수용체 항체로서, 해당 항체의 경쇄의 가변 영역이, 서열 번호 190, 서열 번호 191, 서열 번호 192, 서열 번호 193, 서열 번호 194, 및 서열 번호 195의 아미노산 서열로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 또한 해당 항체의 중쇄의 가변 영역이, 서열 번호 204, 서열 번호 205, 서열 번호 206, 서열 번호 207, 서열 번호 208, 및 서열 번호 209의 아미노산 서열로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것인, 항체.
  22. 항인간 트랜스페린 수용체 항체로서, 다음의 (1)∼(6)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것인, 항체.
    (1) 해당 항체의 경쇄의 가변 영역이 서열 번호 163의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 또한 해당 항체의 중쇄의 가변 영역이 서열 번호 171의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것,
    (2) 해당 항체의 경쇄의 가변 영역이 서열 번호 179의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 또한 해당 항체의 중쇄의 가변 영역이 서열 번호 187의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것,
    (3) 해당 항체의 경쇄의 가변 영역이 서열 번호 191의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 또한 해당 항체의 중쇄의 가변 영역이 서열 번호 205의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것,
    (4) 해당 항체의 경쇄의 가변 영역이 서열 번호 193의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 또한 해당 항체의 중쇄의 가변 영역이 서열 번호 205의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것,
    (5) 해당 항체의 경쇄의 가변 영역이 서열 번호 194의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 또한 해당 항체의 중쇄의 가변 영역이 서열 번호 205의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것, 및
    (6) 해당 항체의 경쇄의 가변 영역이 서열 번호 195의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 또한 해당 항체의 중쇄의 가변 영역이 서열 번호 205의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것.
  23. 항인간 트랜스페린 수용체 항체로서, 이하의 (1)∼(10)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것인, 항체.
    (1) 해당 항체의 경쇄가 서열 번호 164의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 또한 해당 항체의 중쇄가 서열 번호 172의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것,
    (2) 해당 항체의 경쇄가 서열 번호 180의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 또한 해당 항체의 중쇄가 서열 번호 188의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것,
    (3) 해당 항체의 경쇄가 서열 번호 196의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 또한 해당 항체의 중쇄가 서열 번호 210의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것,
    (4) 해당 항체의 경쇄가 서열 번호 198의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 또한 해당 항체의 중쇄가 서열 번호 210의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것,
    (5) 해당 항체의 경쇄가 서열 번호 200의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 또한 해당 항체의 중쇄가 서열 번호 210의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것,
    (6) 해당 항체의 경쇄가 서열 번호 202의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 또한 해당 항체의 중쇄가 서열 번호 210의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것,
    (7) 해당 항체의 경쇄가 서열 번호 196의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 또한 해당 항체의 중쇄가 서열 번호 212의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것,
    (8) 해당 항체의 경쇄가 서열 번호 198의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 또한 해당 항체의 중쇄가 서열 번호 212의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것,
    (9) 해당 항체의 경쇄가 서열 번호 200의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 또한 해당 항체의 중쇄가 서열 번호 212의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것, 및
    (10) 해당 항체의 경쇄가 서열 번호 202의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지고, 또한 해당 항체의 중쇄가 서열 번호 212의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것.
  24. 항인간 트랜스페린 수용체 항체로서, 제 19 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항의 항인간 트랜스페린 수용체 항체와의 사이에, 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 및 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열에 관해서, 각각 80% 이상의 상동성을 가지는 것인, 항체.
  25. 항인간 트랜스페린 수용체 항체로서, 제 19 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항의 항인간 트랜스페린 수용체 항체와의 사이에, 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 및 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열에 관해서, 각각 90% 이상의 상동성을 가지는 것인, 항체.
  26. 항인간 트랜스페린 수용체 항체로서, 제 19 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항의 항인간 트랜스페린 수용체 항체의 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열을 구성하는 아미노산 서열 중, 1∼10개의 아미노산이 치환, 결실 또는 부가된 것인, 항체.
  27. 항인간 트랜스페린 수용체 항체로서, 제 19 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항의 항인간 트랜스페린 수용체 항체의 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열을 구성하는 아미노산 서열 중, 1∼3개의 아미노산이 치환, 결실 또는 부가된 것인, 항인간 트랜스페린 수용체 항체.
  28. 항인간 트랜스페린 수용체 항체로서, 제 19 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항의 항인간 트랜스페린 수용체 항체의 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열을 구성하는 아미노산 서열 중, 1∼10개의 아미노산이 치환, 결실 또는 부가된 것인, 항체.
  29. 항인간 트랜스페린 수용체 항체로서, 제 19 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항의 항인간 트랜스페린 수용체 항체의 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열을 구성하는 아미노산 서열 중, 1∼3개의 아미노산이 치환, 결실 또는 부가된 것인, 항체.
  30. 항인간 트랜스페린 수용체 항체로서, 제 19 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항의 항인간 트랜스페린 수용체 항체의 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 및 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열의 각각을 구성하는 아미노산 서열 중, 각각 1∼10개의 아미노산이 치환, 결실 또는 부가된 것인, 항체.
  31. 항인간 트랜스페린 수용체 항체로서, 제 19 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항의 항인간 트랜스페린 수용체 항체의 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 및 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열의 각각을 구성하는 아미노산 서열 중, 각각 1∼3개의 아미노산이 치환, 결실 또는 부가된 것인, 항체.
  32. 제 1 항 내지 제 31 항 중 어느 한 항의 항인간 트랜스페린 수용체 항체로서, 인간 트랜스페린 수용체의 세포외 영역 및 원숭이 트랜스페린 수용체의 세포외 영역의 쌍방에 대해서 친화성을 가지는 것인, 항체.
  33. 제 32 항의 항인간 트랜스페린 수용체 항체로서, 인간 트랜스페린 수용체의 세포외 영역과의 해리 상수가 1×10-8M 이하이며, 원숭이 트랜스페린 수용체의 세포외 영역과의 해리 상수가 5×10-8M 이하인 것인, 항체.
  34. 제 1 항 내지 제 33 항 중 어느 한 항에 있어서,
    Fab 항체, F(ab')2 항체, 또는 F(ab') 항체인, 항인간 트랜스페린 수용체 항체.
  35. 제 1 항 내지 제 33 항 중 어느 한 항에 있어서,
    scFab, scF(ab'), scF(ab')2 및 scFv로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1본쇄 항체인, 항인간 트랜스페린 수용체 항체.
  36. 제 35 항의 항인간 트랜스페린 수용체 항체로서, 그 경쇄와 중쇄가 링커 서열을 개재하여 결합하고 있는 것인, 항체.
  37. 제 35 항의 항인간 트랜스페린 수용체 항체로서, 그 경쇄와 중쇄가, 경쇄의 C말단측에 있어서, 링커 서열을 개재하여 결합하고 있는 것인, 항체.
  38. 제 35 항의 항인간 트랜스페린 수용체 항체로서, 그 중쇄와 경쇄가, 중쇄의 C말단측에 있어서, 링커 서열을 개재하여 결합하고 있는 것인, 항체.
  39. 제 36 항 내지 제 38 항 중 어느 한 항의 항인간 트랜스페린 수용체 항체로서, 해당 링커 서열이, 8∼50개의 아미노산 잔기로 이루어지는 것인, 항체.
  40. 제 39 항의 항인간 트랜스페린 수용체 항체로서, 해당 링커 서열이, 아미노산 서열 Gly-Ser, 아미노산 서열 Gly-Gly-Ser, 아미노산 서열 Gly-Gly-Gly, 서열 번호 3, 서열 번호 4, 및 서열 번호 5의 각 아미노산 서열, 및, 서열 번호 3의 아미노산 서열의 3개가 연속한 것에 상당하는 아미노산 서열로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것인, 항체.
  41. 제 1 항 내지 제 40 항 중 어느 한 항의 항인간 트랜스페린 수용체 항체와, 그 경쇄의 C말단측 또는 N말단측에 결합한 다른 단백질 A의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는, 융합 단백질.
  42. 항인간 트랜스페린 수용체 항체와 다른 단백질 A의 융합 단백질로서,
    해당 항인간 트랜스페린 수용체 항체가, 제 1 항 내지 제 40 항 중 어느 한 항의 항인간 트랜스페린 수용체 항체이고,
    해당 다른 단백질 A가, 해당 항인간 트랜스페린 수용체 항체의 경쇄의 C말단측 또는 N말단측에 결합하고 있는 것인, 융합 단백질.
  43. 제 41 항 또는 제 42 항에 있어서,
    해당 다른 단백질 A가, 해당 경쇄의 C말단측 또는 N말단측에 있어서 링커 서열을 개재하여 결합하고 있는 것인, 융합 단백질.
  44. 제 43 항에 있어서,
    해당 링커 서열이, 1∼50개의 아미노산 잔기로 이루어지는 것인, 융합 단백질.
  45. 제 44 항에 있어서,
    해당 링커 서열이, 1개의 글리신, 1개의 세린, 아미노산 서열 Gly-Ser, 아미노산 서열 Gly-Gly-Ser, 서열 번호 3의 아미노산 서열, 서열 번호 4의 아미노산 서열, 서열 번호 5의 아미노산 서열, 및 이들 아미노산 서열이 1∼10개 연속하여 이루어지는 아미노산 서열로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것인, 융합 단백질.
  46. 제 1 항 내지 제 40 항 중 어느 한 항의 항인간 트랜스페린 수용체 항체와, 그 중쇄의 C말단측 또는 N말단측에 결합한 다른 단백질 A의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는, 융합 단백질.
  47. 항인간 트랜스페린 수용체 항체와 다른 단백질 A의 융합 단백질로서,
    해당 항인간 트랜스페린 수용체 항체가, 제 1 항 내지 제 40 항 중 어느 한 항의 항인간 트랜스페린 수용체 항체이고,
    해당 다른 단백질 A가, 해당 항인간 트랜스페린 수용체 항체의 중쇄의 C말단측 또는 N말단측에 결합하고 있는 것인, 융합 단백질.
  48. 제 46 항 또는 제 47 항에 있어서,
    해당 다른 단백질 A가, 해당 중쇄의 C말단측 또는 N말단측에 있어서 링커 서열을 개재하여 결합하고 있는 것인, 융합 단백질.
  49. 제 48 항에 있어서,
    해당 링커 서열이, 1∼50개의 아미노산 잔기로 이루어지는 것인, 융합 단백질.
  50. 제 48 항에 있어서,
    해당 링커 서열이, 1개의 글리신, 1개의 세린, 아미노산 서열 Gly-Ser, 아미노산 서열 Gly-Gly-Ser, 서열 번호 3의 아미노산 서열, 서열 번호 4의 아미노산 서열, 서열 번호 5의 아미노산 서열, 및 이들 아미노산 서열이 1∼10개 연속하여 이루어지는 아미노산 서열로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는 것인, 융합 단백질.
  51. 제 41 항 내지 제 50 항 중 어느 한 항에 있어서,
    해당 다른 단백질 A가, 인간 유래의 단백질인, 융합 단백질.
  52. 제 41 항 내지 제 51 항 중 어느 한 항에 있어서,
    해당 다른 단백질 A가, 신경 성장 인자(NGF), 리소좀 효소, 모양체 신경 영양 인자(CNTF), 글리아 세포주 신경 영양 인자(GDNF), 뉴로트로핀 3, 뉴로트로핀 4/5, 뉴로트로핀 6, 뉴레글린 1, 에리트로포이에틴, 다르베포에틴, 액티빈, 염기성 섬유아세포 성장 인자(bFGF), 섬유아세포 성장 인자 2(FGF2), 상피 세포 증식 인자(EGF), 혈관 내피 증식 인자(VEGF), 인터페론 α, 인터페론 β, 인터페론 γ, 인터류킨 6, 과립구 매크로파지 콜로니 자극 인자(GM-CSF), 과립구 콜로니 자극 인자(G-CSF), 매크로파지 콜로니 자극 인자(M-CSF), 각종 사이토카인, 종양괴사 인자α 수용체(TNF-α 수용체), PD-1 리간드, 베타아밀로이드를 분해하는 활성을 가지는 효소, 항베타아밀로이드 항체, 항BACE 항체, 항EGFR 항체, 항PD-1 항체, 항PD-L1 항체, 항HER2 항체, 항TNF-α 항체, 및 그 외의 항체 의약으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것인, 융합 단백질.
  53. 제 41 항 내지 제 51 항 중 어느 한 항에 있어서,
    해당 다른 단백질 A가 리소좀 효소이며, 해당 리소좀 효소가, α-L-이두로니다제, 이두론산-2-설파타제, 글루코셀레브로시다제, β-갈락토시다아제, GM2 활성화 단백질, β-헥소사미니다제 A, β-헥소사미니다제 B, N-아세틸글루코사민-1-포스포트랜스퍼라제, α-만노시다제, β-만노시다제, 갈락토실세라미다제, 사포신 C, 아릴설파타제 A, α-L-푸코시다제, 아스파틸글루코사미니다제, α-N-아세틸갈락토사미니다제, 산성 스핑고미엘리나제, α-갈락토시다아제 A, β-글루쿠로니다제, 헤파란 N-설파타제, α-N-아세틸글루코사미니다제, 아세틸 CoAα-글루코사미니드 N-아세틸트랜스퍼라제, N-아세틸글루코사민-6-황산 설파타제, 산성 세라미다제, 아밀로-1,6-글루코시다제, 시알리다제, 팔미토일 단백질 싸이오에스터라제-1, 트라이펩티딜펩티다제-1, 하이아루로니다제-1, CLN1 및 CLN2로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것인, 융합 단백질.
  54. 제 41 항 내지 제 51 항 중 어느 한 항에 있어서,
    해당 다른 단백질 A가, 이두론산-2-설파타제인, 융합 단백질.
  55. 해당 다른 단백질 A가, 인간 이두론산-2-설파타제인 제 50 항의 융합 단백질로서, 이하의 (1)∼(3)으로부터 선택되는 것인 융합 단백질:
    (1) 해당 인간화 항hTfR 항체의 경쇄가 서열 번호 164의 아미노산 서열을 가지는 것이고, 해당 인간화 항hTfR 항체의 중쇄가 그 C말단측에서, 링커 서열 Gly-Ser을 개재하여, 인간 이두론산-2-설파타제와 결합하고 있고, 전체로서 서열 번호 247로 나타나는 아미노산 서열을 가지는 것인, 융합 단백질;
    (2) 해당 인간화 항hTfR 항체의 경쇄가 서열 번호 180의 아미노산 서열을 가지는 것이고, 해당 인간화 항hTfR 항체의 중쇄가 그 C말단측에서, 링커 서열 Gly-Ser을 개재하여, 인간 이두론산-2-설파타제와 결합하고 있고, 전체로서 서열 번호 249로 나타나는 아미노산 서열을 가지는 것인, 융합 단백질; 및
    (3) 해당 인간화 항hTfR 항체의 경쇄가, 서열 번호 196의 아미노산 서열을 가지는 것이고, 해당 인간화 항hTfR 항체의 중쇄가, 그 C말단측에서, 링커 서열 Gly-Ser을 개재하여, 인간 이두론산-2-설파타제와 결합하고 있고, 전체로서 서열 번호 251로 나타나는 아미노산 서열을 가지는 것인, 융합 단백질.
  56. 해당 다른 단백질 A가, 인간 이두론산-2-설파타제인 제 50 항의 융합 단백질로서, 이하의 (1)∼(3)으로부터 선택되는 것인 융합 단백질:
    (1) 서열 번호 164의 아미노산 서열을 가지는 인간화 항hTfR 항체의 경쇄와 서열 번호 172의 아미노산 서열을 가지는 인간화 항hTfR 항체의 중쇄의 C말단측에, 링커 서열 Gly-Ser을 개재하여, 서열 번호 246으로 나타나는 인간 이두론산-2-설파타제가 결합한 것을 포함하는, 융합 단백질;
    (2) 서열 번호 180의 아미노산 서열을 가지는 인간화 항hTfR 항체의 경쇄와 서열 번호 188의 아미노산 서열을 가지는 인간화 항hTfR 항체의 중쇄의 C말단측에, 링커 서열 Gly-Ser을 개재하여, 서열 번호 246으로 나타나는 인간 이두론산-2-설파타제가 결합한 것을 포함하는, 융합 단백질; 및
    (3) 서열 번호 196의 아미노산 서열을 가지는 인간화 항hTfR 항체의 경쇄와 서열 번호 210의 아미노산 서열을 가지는 인간화 항hTfR 항체의 중쇄의 C말단측에, 링커 서열 Gly-Ser을 개재하여, 서열 번호 246으로 나타나는 인간 이두론산-2-설파타제가 결합한 것을 포함하는, 융합 단백질.
  57. 해당 다른 단백질 A가, 인간 이두론산-2-설파타제인 제 50 항의 융합 단백질로서, 이하의 (1)∼(3)으로부터 선택되는 것인 융합 단백질:
    (1) 해당 인간 이두론산-2-설파타제가 링커 서열 Gly-Ser을 개재하여 중쇄의 C말단측에서 결합하여 이루어지는 결합체와 경쇄로 이루어지고, 해당 결합체의 아미노산 서열이 서열 번호 247로 나타나는 것이고, 해당 경쇄의 아미노산 서열이 서열 번호 164로 나타나는 것,
    (2) 해당 인간 이두론산-2-설파타제가 링커 서열 Gly-Ser을 개재하여 중쇄의 C말단측에서 결합하여 이루어지는 결합체와 경쇄로 이루어지고, 해당 결합체의 아미노산 서열이 서열 번호 249로 나타나는 것이고, 해당 경쇄의 아미노산 서열이 서열 번호 180으로 나타나는 것, 및
    (3) 해당 인간 이두론산-2-설파타제가 링커 서열 Gly-Ser을 개재하여 중쇄의 C말단측에서 결합하여 이루어지는 결합체와 경쇄로 이루어지고, 해당 결합체의 아미노산 서열이 서열 번호 251로 나타나는 것이고, 해당 경쇄의 아미노산 서열이 서열 번호 196으로 나타나는 것.
  58. 제 1 항 내지 제 40 항 중 어느 한 항의 항인간 트랜스페린 수용체 항체의 아미노산 서열을 코딩하는, DNA 단편.
  59. 제 41 항 내지 제 57 항 중 어느 한 항의 융합 단백질의 아미노산 서열을 코딩하는, DNA 단편.
  60. 제 58 항 또는 제 59 항의 DNA 단편을 짜넣어 이루어지는, 발현 벡터.
  61. 제 60 항의 발현 벡터로 형질 전환된 포유동물 세포.
  62. 제 1 항 내지 제 40 항 중 어느 한 항의 항인간 트랜스페린 수용체 항체의 경쇄 및/또는 중쇄의 어느 것에 혈액뇌관문을 통과시켜 뇌내에서 기능을 발휘시켜야 할 저분자량의 약리 활성 물질을 결합시킨 것인, 항인간 트랜스페린 수용체 항체-약리 활성 물질 복합체.
  63. 제 62 항에 있어서,
    해당 약리 활성 물질이, 항암제, 알츠하이머병 치료제, 파킨슨병 치료제, 헌팅턴병 치료제, 통합 실조증 치료제, 울증 치료제, 다발성 경화증 치료제, 근위축성 측색경화증 치료제, 뇌종양을 포함하는 중추 신경계의 종양의 치료제, 뇌장애를 수반하는 리소좀병의 치료제, 당원병 치료제, 근 디스트로피 치료제, 뇌허혈 치료제, 프리온병 치료제, 외상성의 중추 신경계 장애의 치료제, 바이러스성 및 세균성의 중추 신경계 질환에 대한 치료제, 뇌외과 수술 후의 회복에 이용하는 약제, 척추 외과 수술 후의 회복에 이용하는 약제, siRNA, 안티센스 DNA, 및 펩타이드로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 것인, 항인간 트랜스페린 수용체 항체.
  64. 다른 단백질 A 또는 저분자량의 약리 활성 물질에 혈액뇌관문을 통과시켜 뇌내에서 기능을 발휘시키기 위한, 제 1 항 내지 제 40 항 중 어느 한 항의 항인간 트랜스페린 수용체 항체의 사용.
  65. 중추 신경계의 질환 상태의 치료를 위한 혈중 투여용 약제의 제조를 위한, 해당 질환 상태에 대한 생리 활성 단백질 또는 약리 활성 저분자 화합물의 분자와 결합시키는 것에 의한 제 1 항 내지 제 40 항 중 어느 한 항의 항인간 트랜스페린 수용체 항체의 사용.
  66. 중추 신경계의 질환의 치료 방법으로서, 해당 질환에 대한 생리 활성 단백질 또는 약리 활성 저분자 화합물의 치료상 유효량을, 제 1 항 내지 제 40 항 중 어느 한 항의 항인간 트랜스페린 수용체 항체 분자와의 결합체의 형태로 당해 질환을 가지는 환자에게 혈중 투여하는 것을 포함하는, 치료 방법.
  67. 인간 이두론산-2-설파타제에 혈액뇌관문을 통과시켜 뇌내에서 기능을 발휘시키기 위한, 제 54 항 내지 제 57 항 중 어느 한 항의 항인간 트랜스페린 수용체 항체의 사용.
  68. 헌터 증후군에 수반하는 중추 신경계의 질환 상태의 치료를 위한 혈중 투여용 약제의 제조를 위한, 제 54 항 내지 제 57 항 중 어느 한 항의 융합 단백질의 사용.
  69. 헌터 증후군에 수반하는 중추 신경계의 질환의 치료 방법으로서, 제 54 항 내지 제 57 항 중 어느 한 항의 융합 단백질의 치료상 유효량을, 당해 질환을 가지는 환자에게 혈중 투여하는 것을 포함하는, 치료 방법.
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