CN113727992A - 重组腺相关病毒载体 - Google Patents

Abstract

描述了包含氨基酸序列中的修饰的AAV衣壳蛋白和包含所述被修饰的AAV衣壳蛋白的病毒载体。还描述了以体内方式向细胞或向受试者施用所述病毒载体和所述病毒衣壳的方法。

Description

重组腺相关病毒载体

相关申请的交叉引用

本申请要求于2019年3月21日提交的美国临时申请第62/821,710号的权益，所述美国临时申请通过引用整体并入本文。

有关以电子方式提交的文本文件的说明

在此以电子方式提交的文本文件的内容通过引用整体并入本文：序列表的计算机可读格式拷贝(文件名：STRD_013_01WO_SeqList_ST25.txt，记录日期：2020年3月20日，文件大小～350千字节)。

技术领域

本申请涉及包含重组衣壳蛋白的腺相关病毒(AAV)载体。在一些实施方案中，重组AAV载体可逃避中和抗体但不会降低转导效率。

背景技术

在天然遭遇AAV或重组AAV载体后产生的宿主来源的预先存在抗体首次预防以及重复施用AAV载体作为疫苗和/或用于基因疗法。血清学研究揭示抗体在全世界人群中的高发生率，其中约67％的人具有针对AAV1的抗体，72％具有针对AAV2的抗体，以及约40％具有针对AAV5至AAV9的抗体。

在基因疗法中，涉及基因静默或组织变性的某些临床情形可能需要多次AAV载体施用以维持转基因长期表达。因此，本领域需要逃避抗体识别的重组AAV载体。此类载体将帮助a)扩大适合于基于AAV的基因疗法的符合条件的受试者组以及b)允许多次重复施用基于AAV的基因疗法载体。

发明内容

本文提供了重组AAV载体，所述重组AAV载体逃避抗体识别和/或选择性地靶向CNS的组织。

在一些实施方案中，腺相关病毒(AAV)载体包含(i)重组衣壳蛋白和(ii)被所述衣壳蛋白包裹的货物核酸，其中所述衣壳蛋白包含具有SEQ ID NO：12-20中的任一者的序列的肽。

在一些实施方案中，腺相关病毒(AAV)载体包含(i)突变型AAV9衣壳蛋白和(ii)被所述衣壳蛋白包裹的货物核酸，其中所述衣壳蛋白包含在原生AAV9衣壳蛋白序列的氨基酸451-458处具有序列X¹-X²-X³-X⁴-X⁵-X⁶-X⁷-X⁸(SEQ ID NO：158)的肽，其中所述肽不存在于原生AAV9衣壳蛋白序列中。

在一些实施方案中，腺相关病毒(AAV)载体包含(i)突变型AAV9衣壳蛋白和(ii)由所述衣壳蛋白包裹的货物核酸，其中所述衣壳蛋白包含在原生AAV9衣壳蛋白序列的氨基酸587-594处具有序列X¹-X²-X³-X⁴-X⁵-X⁶-X⁷-X⁸(SEQ ID NO：158)的肽，其中所述肽不存在于原生AAV9衣壳蛋白序列中。

在一些实施方案中，腺相关病毒(AAV)载体包含(i)重组衣壳蛋白和(ii)被所述衣壳蛋白包裹的货物核酸，其中所述衣壳蛋白包含与SEQ ID NO：165-187中的任一者至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的氨基酸序列。

本文还提供了编码重组衣壳蛋白的核酸序列和包含其的表达载体。

还提供了细胞，所述细胞包含本文所描述的核酸、表达载体、AAV载体或AAV衣壳。

还提供了药物组合物，所述药物组合物包含本文所描述的核酸、表达载体、AAV载体、AAV衣壳或细胞。

还提供了用于治疗有需要的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的本文所描述的AAV载体。

还提供了将核酸分子引入至细胞中的体外方法，所述方法包括使所述细胞与本文所描述的AAV载体接触。

还提供了本文所描述的AAV载体，所述AAV载体用作药剂。

还提供了本文所描述的AAV载体，所述AAV载体用于治疗有需要的受试者的方法中。

还提供了本文所描述的AAV载体，所述AAV载体用于治疗或预防有需要的受试者的CNS疾病或病症的方法中。

下文更详细地描述这些和其他实施方案。

附图说明

图1A-1C.显示文库多样性、定向进化和新颖抗原足迹的增浓的分析的气泡图。使用Illumina MiSeq平台，使亲本(图1A)文库和来自第一轮(图1B)和第二轮(图1C)进化的进化文库经受高通量测序。在自定义Perl脚本分析之后，绘制增浓的氨基酸序列。每个气泡表示不同的衣壳氨基酸序列，其中气泡的半径与所述变体在相应文库中的读段数成比例。y轴表示来自测序操作的总读段的百分比。数据沿x轴散布以易于观测。独特克隆的百分比降低(96.5％)直接表明，在第一轮和第二轮进化之后去除众多“不合适(un-fit)”序列。选择优势分离株用于进一步分析。

图2.相较于野生型AAV9，包含AAV衣壳变体STRD.101和STRD.102的AAV载体的体积产量。条柱表示平均值+/-95％置信区间。

图3.使用标准TCID50测定法所确定的AAV-STRD.101和野生型AAV9的感染力值。数据以生成感染单位所需粒子数的自然对数形式(P∶I比率)绘制。误差条表示标准偏差。

图4A-4D.相较于类似地包装荧光素酶序列的野生型AAV9载体，利用包含STRD.101衣壳并包装荧光素酶转基因的重组AAV载体对U87细胞(图4A)、N2A细胞(图4B)、Sy5Y细胞(图4C)和U2OS细胞(图4D)进行的转导。误差条表示标准误差。

图5.显示用4％PFA固定24小时后冠状面振动切片机切片中的tdTomato表达的代表性荧光显微镜图像。每个切片为25μm厚。上图显示使用4X物镜获得的具有天然tdTomato荧光的图像。下图显示使用10X物镜获得的具有天然tdTomato荧光的图像。

图6.显示用4％PFA固定24小时后冠状面振动切片机切片中的tdTomato表达的代表性免疫组织化学图像。每个切片为25μm厚。

图7.显示用4％PFA固定24小时后振动切片机肝切片中的TdTomato表达的代表性荧光显微镜图像。每个切片为25μm厚。图显示用DAPI复染色的天然tdTomato荧光。

图8.显示用4％PFA固定24小时后振动切片机心脏切片中的TdTomato表达的代表性荧光显微镜图像。每个切片为50μm厚。图显示用DAPI复染色的天然tdTomato荧光。

图9.非人类灵长类动物中的重组AAV的生物分布。水平线显示检测极限。

具体实施方式

除非另外定义，否则本文所用的所有技术和科学术语都具有与本公开所属领域的一般技术人员通常所理解相同的含义。本文具体实施方式中所用的术语仅出于描述特定实施方案的目的，而不旨在具限制性。

本文中所提及的所有公开、专利申请、专利、GenBank或其他登录号和其他参考文献都出于所有目的通过引用整体并入。

本公开内容和所附权利要求中的AAV衣壳蛋白中的氨基酸位置的命名是关于VP1衣壳亚基编号的。本领域技术人员应理解，当将本文所描述的修饰插入到AAV cap基因中时，可导致VP1、VP2和/或VP3衣壳亚基中的修饰。或者，可独立地表达衣壳亚基以实现仅在衣壳亚基(VP1、VP2、VP3、VP1+VP2、VP1+VP3或VP2+VP3)中的一个或两个中的修饰。

定义

以下术语用于本文的描述和所附权利要求中。

除非上下文另外明确指示，否则单数形式“一(a/an)”和“所述(the)”也旨在包括复数形式。

此外，当提及可测量值，例如多核苷酸或多肽序列的长度、剂量、时间、温度等的量时，如本文所用的术语“约”意在涵盖指定量的±20％、±10％、±5％、±1％、±0.5％或甚至±0.1％的变化。

此外如本文所用，“和/或”是指并涵盖相关的所列项目中的一者或多者的任何和所有可能组合，以及在替代方案(“或”)中解释时组合的缺乏。

除非上下文另外指示，否则明确预期本文所描述的各种特征可以任何组合使用。此外，在一些实施方案中，可排除或省略本文所阐述的任何特征或特征的组合。为了进一步说明，例如在说明书指示特定氨基酸可选自A、G、I、L和/或V时，此措辞还指示氨基酸可选自这些氨基酸的任何子集，例如A、G、I或L；A、G、I或V；A或G；仅L等，如同每个此类子组合明确地在本文中所阐述一样。此外，此措辞还指示可放弃指定氨基酸中的一者或多者。例如，在一些实施方案中，氨基酸不是A、G或I；不是A；不是G或V等，如同每个此类可能放弃明确地在本文中所阐述一样。

如本文所用，术语“降低(reduce/reduces/reduction)”和类似术语意指降低至少约10％、约15％、约20％、约25％、约35％、约50％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约97％或更多。

如本文所用，术语“增加(increase)”、“提高(improve)”、“增强(enhance/enhances/enhancement)”和类似术语指示增加至少约10％、约15％、约20％、约25％、约50％、约75％、约100％、约150％、约200％、约300％、约400％、约500％或更多。

如本文所用，术语“小病毒(parvovirus)”涵盖小病毒科，包括自主复制性小病毒和依赖病毒。自主小病毒包括原始小病毒(Protoparvovirus)属、赤小病毒(Erythroparvovirus)属、博卡小病毒(Bocaparvovirus)属和浓核病毒(Densovirus)属亚科的成员。示例性自主小病毒包括(但不限于)小鼠细小病毒、牛小病毒、犬小病毒、鸡小病毒、猫泛白血球减少症病毒、猫小病毒、鹅小病毒、H1小病毒、番鸭小病毒、B19病毒和目前已知或后续发现的任何其他自主小病毒。其他自主小病毒是本领域技术人员已知的。参见例如BERNARDN.FIELDS等人，VIROLOGY，第2卷，第69章(第4版，Lippincott-RavenPublishers；Cotmore等人，Archives of Virology DOI 10.1007/s00705-013-1914-I)。

如本文所用，术语“腺相关病毒”(AAV)包括(但不限于)AAV 1型、AAV 2型、AAV 3型(包括3A和3B型)、AAV 4型、AAV 5型、AAV 6型、AAV 7型、AAV 8型、AAV 9型、AAV 10型、AAV11型、AAV 12型、AAV 13型、AAV rh32.33型、AAV rh8型、AAV rh10型、AAV rh74型、AAVhu.68型、禽类AAV、牛AAV、犬AAV、马AAV、绵羊AAV、蛇AAV、鬃狮蜥AAV、AAV2i8、AAV2g9、AAV-LK03、AAV7m8、AAV Anc80、AAV PHP.B和目前已知或后续发现的任何其他AAV。参见例如BERNARD N.FIELDS等人，VIROLOGY，第2卷，第69章(第4版，Lippincott-RavenPublishers)。已鉴定多种AAV血清型和进化枝(参见例如Gao等人，(2004)J.Virology 78：6381-6388；Moris等人，(2004)Virology 33-：375-383；和表2)。AAV1-9、AAVrh.10和AAV11的示例性AAV衣壳序列以SEQ ID NO：1-11提供。

如本文所用，术语“嵌合AAV”是指包含具有来源于两种或更多种不同AAV血清型的区域、结构域、个别氨基酸的衣壳蛋白的AAV。在一些实施方案中，嵌合AAV包含含来源于第一AAV血清型的第一区域和来源于第二AAV血清型的第二区域的衣壳蛋白。在一些实施方案中，嵌合AAV包含含来源于第一AAV血清型的第一区域、来源于第二AAV血清型的第二区域和来源于第三AAV血清型的第三区域的衣壳蛋白。在一些实施方案中，嵌合AAV可包含来源于AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11和/或AAV12的区域、结构域、个别氨基酸。例如，嵌合AAV可包括来自如下文(表1)所示的第一和第二AAV血清型的区域、结构域和/或个别氨基酸，其中AAVX+Y指示包括来源于AAVX和AAVY的序列的嵌合AAV：

通过在一种衣壳蛋白中包括来自多个AAV血清型的个别氨基酸或区域，可获得具有分别来源于多个AAV血清型的多个所需特性的衣壳蛋白。

各种AAV血清型和自主小病毒的基因组序列，以及原生末端重复(TR)的序列、Rep蛋白和衣壳亚基的序列是本领域已知的。此类序列可发现于文献中或例如GenBank的公共数据库中。参见例如GenBank登录号NC_002077、NC_001401、NC_001729、NC_001863、NC_001829、NC_001862、NC_000883、NC_001701、NC_001510、NC_006152、NC_006261、AF063497、U89790、AF043303、AF028705、AF028704、J02275、J01901、J02275、X01457、AF288061、AH009962、AY028226、AY028223、NC_001358、NC_001540、AF513851、AF513852、AY530579；其公开内容出于教导小病毒和AAV核酸和氨基酸序列的目的通过引用并入本文。还参见例如Srivistava等人，(1983)J.Virology 45：555；Chiorini等人，(1998)J Virology 71：6823；Chiorini等人，(1999)J.Virology 73：1309；Bantel-Schaal等人，(1999)J Virology 73：939；Xiao等人，(1999)J Virology 73：3994；Muramatsu等人，(1996)Virology 221：208；Shade等人，(1986)J.Virol.58：921；Gao等人，(2002)Proc.Nat.Acad.Sci.USA 99：11854；Moris等人，(2004)Virology 33：375-383；国际专利公开WO 00/28061、WO 99/61601、WO98/11244；以及美国专利第6,156,303号；其公开内容出于教导小病毒和AAV核酸和氨基酸序列的目的通过引用并入本文。还参见表2。自主小病毒和AAV的衣壳结构更详细地描述于BERNARD N.FIELDS等人，VIROLOGY，第2卷，第69章和第70章(第4版，Lippincott-RavenPublishers)中。还参见AAV2(Xie等人，(2002)Proc.Nat.Acad.Sci.99：10405-10)、AAV9(DiMattia等人，(2012)J.Virol.86：6947-6958)、AAV8(Nam等人，(2007)J.Virol.81：12260-12271)、AAV6(Ng等人，(2010)J.Virol.84：12945-12957)、AAV5(Govindasamy等人，(2013)J.Virol.87，11187-11199)、AAV4(Govindasamy等人，(2006)J.Virol.80：11556-11570)、AAV3B(Lerch等人，(2010)Virology 403：26-36)、BPV(Kailasan等人，(2015)J.Virol.89：2603-2614)和CPV(Xie等人，(1996)J.Mol.Biol.6：497-520和Tsao等人，(1991)Science 251：1456-64)的晶体结构的描述。

表2：AAV血清型和进化枝

术语“自身互补AAV”或“scAAV”是指形成自发退火的二聚反向重复DNA分子，从而产生相较于常规单链(ss)AAV基因组更早并且更稳固转基因表达的重组AAV载体。参见例如McCarty，D.M.等人，Gene Therapy 8，1248-1254(2001)。不同于常规ssAAV，scAAV可绕过第二链合成，所述第二链合成是基因表达的速率限制步骤。此外，双链scAAV在病毒转导后不易发生DNA降解，从而增加稳定游离基因体的拷贝数。值得注意的是，scAAV可通常仅保留常规AAV载体的一半大小，约2.4kb的基因组。在一些实施方案中，本文所描述的AAV载体是自身互补型AAV。

如本文所用，术语“肽”是指短氨基酸序列。术语肽可用于指AAV衣壳氨基酸序列的部分或区域。肽可为天然存在于原生AAV衣壳中的肽或不天然存在于原生AAV衣壳中的肽。AAV衣壳中的天然存在的AAV肽可被非天然存在的肽取代。例如，非天然存在的肽可被取代进入AAV衣壳中以得到被修饰的衣壳，使得天然存在的肽被非天然存在的肽代替。

如本文所用，术语“向性”是指病毒优先进入至某些细胞或组织中，任选地随后在细胞中表达(例如转录和任选地翻译)病毒基因组所携载的序列，例如对于重组病毒而言，表达目标转基因。

如此处所用，“全身性向性”和“全身性转导”(和等效术语)指示，如本文所描述的病毒衣壳或病毒载体分别展现整个身体组织(例如大脑、肺、骨骼肌、心脏、肝脏、肾脏和/或胰腺)向性或转导整个身体组织。在一些实施方案中，实现肌肉组织(例如骨骼肌、隔膜和心肌)的全身性转导。在一些实施方案中，实现骨骼肌组织的全身性转导。例如，在一些实施方案中，转导整个身体中的基本上所有骨架肌(尽管转导效率可根据肌肉类型而变化)。在一些实施方案中，实现肢体肌肉、心肌和隔膜肌的全身性转导。任选地，经由全身性途径(例如全身性途径如静脉内、关节内或淋巴内)施用病毒衣壳或病毒载体。

或者，在一些实施方案中，局部递送衣壳或病毒载体(例如至脚掌，肌肉内、皮内、皮下、局部)。在一些实施方案中，将衣壳或病毒载体局部递送至中枢神经系统(CNS)组织，例如大脑或脊髓。在一些实施方案中，通过鞘内、脑内或脑室内注射施用衣壳或病毒载体。

除非另外指示，否则“有效转导”或“有效向性”或类似术语可参考合适对照来确定(例如分别为对照的转导或向性的至少约50％、约60％、约70％、约80％、约85％、约90％、约95％或更多)。在一些实施方案中，病毒载体(例如AVV载体)有效地转导以下或对其具有有效向性：骨骼肌、心肌、隔膜肌、胰腺(包括β-胰岛细胞)、脾、胃肠道(例如上皮和/或平滑肌)、中枢神经系统细胞、肺、关节细胞和/或肾脏。合适的对照将取决于各种因素(包括所需向性概况)。例如，AAV8和AAV9高效转导骨骼肌、心肌和隔膜肌，但具有也高效率转导肝的缺点。因此，可鉴定证实AAV8或AAV9有效转导骨架、心脏和/或隔膜肌但以低得多的转导效率转导肝的病毒载体。此外，因为目标向性概况可反映针对多种靶组织的向性，因此应了解，合适的载体可代表一些权衡。为了说明，病毒载体可比AAV8或AAV9更低效地转导骨骼肌、心肌和/或隔膜肌，但因为低水平的肝转导，仍可能是极其需要的。

类似地，参考合适的对照，可确定病毒是否“不有效地转导”靶组织或“不具有”靶组织的“有效向性”或类似术语。在一些实施方案中，病毒载体不有效地转导肝脏、肾脏、性腺和/或生殖细胞(即，不具有肝脏、肾脏、性腺和/或生殖细胞的有效向性)。在一些实施方案中，组织(例如肝脏)的非所需转导是所需靶组织(例如骨骼肌、隔膜肌、心肌和/或中枢神经系统细胞)的转导水平的约20％或更小、约10％或更小、约5％或更小、约1％或更小、约0.1％或更小。

如本文结合AAV载体(或衣壳蛋白或其肽)所用，术语“选择性地结合”、“选择性结合”和类似术语是指AAV载体(或衣壳蛋白或其肽)以依赖于特定分子结构的存在的方式与靶标的结合。在一些实施方案中，选择性结合是指AAV占优势地与特定靶标结合而与其他靶标无实质或显著结合。在一些实施方案中，AAV载体(或衣壳蛋白或其肽)与目标细胞或组织中的受体特异性结合，但不展现与其他受体的实质或显著结合。

“多核苷酸”是核苷酸碱基序列，并且可为RNA、DNA或DNA-RNA杂交序列(包括天然存在的核苷酸与非天然存在的核苷酸两者)。在一些实施方案中，多核苷酸是单链或双链DNA序列。

如本文所用，“分离的”多核苷酸(例如“分离的DNA”或“分离的RNA”)意指至少部分地与天然存在的生物体或病毒的至少一些其他组分(例如细胞或病毒结构组分或通常发现与多核苷酸结合的其他多肽或核酸)分离的多核苷酸。在一些实施方案中，与起始材料相比，“分离的”核苷酸增浓至少约10倍、约100倍、约1000倍、约10,000倍或更多。

同样，“分离的”多肽意指至少部分地与天然存在的生物体或病毒的至少一些其他组分(例如细胞或病毒结构组分或通常发现与多肽结合的其他多肽或核酸)分离的多肽。在一些实施方案中，与起始材料相比，“分离的”多肽增浓至少约10倍、约100倍、约1000倍、约10,000倍或更多。

如本文所用，“分离”或“纯化”(或文法等效者)病毒载体，其意指病毒载体至少部分地与起始材料中的至少一些其他组分分离。在一些实施方案中，与起始材料相比，“分离的”或“纯化的”病毒载体增浓至少约10倍、约100倍、约1000倍、约10,000倍或更多。

“治疗性”多肽或蛋白质是可减轻、减少、预防、延迟和/或使由在细胞或受试者中不存在或缺乏蛋白质引起的症状稳定的多肽或蛋白质，和/或另外赋予受试者益处(例如抗癌效果或移植存活率提高)的多肽。

术语“治疗(treat/treating/treatment of)”(和其文法变化形式)，其意指受试者疾患的严重程度降低，至少部分地改善或稳定，和/或实现至少一个临床症状的一些缓解、缓和、减少或稳定，和/或延迟疾病或病症的进展。

术语“预防(prevent/preventing/prevention)”(和其文法变化形式)是指预防和/或延迟受试者疾病、病症和/或临床症状发作，和/或相对于在不存在本文所描述的组合物和/或方法下将发生的疾病、病症和/或临床症状发作的严重程度降低其严重程度。预防可为完全的，例如完全不存在疾病、病症和/或临床症状。预防还可为部分的，使得受试者疾病、病症和/或临床症状的发生和/或发作严重程度小于在不存在本文所描述的组合物和/或方法下将发生的。

如本文所用，“治疗有效量”是指当向受试者施用以治疗疾病或至少一个疾病临床症状时足以实现对疾病或其症状的此类治疗的量。“治疗有效量”可根据例如疾病和/或疾病的症状、疾病和/或疾病或病症的症状的严重程度、所治疗的患者的年龄、体重和/或健康状况和处方医师的判断而变化。任何既定情况下的适当量可由本领域技术人员确定或能够通过常规实验确定。

如本文所用，术语“病毒载体(virus vector)”、“载体(vector)”或“基因递送载体”是指充当核酸递送媒介物的病毒(例如AAV)粒子，并且其包含包装于病毒粒子内的载体基因组(例如病毒DNA[vDNA])。或者，在一些情形下，术语“载体”可用于指单独载体基因组/vDNA。在一些实施方案中，载体基因组(例如AAV载体基因组)可包含于“货物核酸”中。在一些实施方案中，载体基因组是自身互补型(即，双链)。在一些实施方案中，载体基因组不是自身互补型(即，单链)。

“rAAV载体基因组”或“rAAV基因组”是包含一个或多个异源核酸序列的AAV基因组(即，vDNA)。rAAV载体一般仅需要顺式反向末端重复序列(ITR)来产生病毒。所有其他病毒序列是非必需的并且可以反式形式供应((Muzyczka，(1992)Curr.TopicsMicrobiol.Immunol.158：97)。通常，rAAV载体基因组将仅保留一个或两个ITR序列，以便使可由载体有效包装的转基因的大小达到最大。结构和非结构蛋白编码序列可以反式形式提供(例如来自载体，例如质粒，或通过将序列稳定地整合至包装细胞中)。在一些实施方案中，rAAV载体基因组包含至少一个ITR序列(例如AAV ITR序列)，任选地两个ITR(例如两个AAV ITR)，其通常将在载体基因组的5′和3′端处(即，5′ITR和3′ITR)，并且侧接异源核酸，但不一定与其相邻。

术语“反向末端重复序列”或“ITR”包括形成发夹结构并用作反向末端重复序列(即，介导所需功能，例如复制、病毒包装、整合和/或原病毒解救等)的任何病毒末端重复或合成序列。ITR可为AAV ITR或非AAV ITR。例如，非AAV ITR序列，例如其他小病毒(例如犬小病毒(CPV)、小鼠小病毒(MVM)、人类小病毒B-19)的那些序列或任何其他合适的病毒序列(例如充当SV40复制的起点的SV40发夹)可用作ITR，其可进一步通过截短、取代、缺失、插入和/或添加进行修饰。此外，ITR可为部分或完全合成的，例如如美国专利第5,478,745号中所描述的“双D序列”。

“AAV反向末端重复序列”或“AAV ITR”可来自任何AAV，包括(但不限于)血清型1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或目前已知或后续发现的任何其他AAV(参见例如表2)。AAV反向末端重复序列不一定具有原生末端重复序列(例如可通过插入、缺失、截短和/或错义突变改变原生AAV ITR序列)，只要末端重复介导所需功能，例如复制、病毒包装、整合和/或原病毒解救等即可。

本文所描述的病毒载体可进一步为如国际专利公开WO00/28004和Chao等人，(2000)Molecular Therapy 2：619中所描述的“靶向(targeted)”病毒载体(例如具有定向向性)和/或“杂交”病毒载体(即，其中病毒ITR和病毒衣壳来自不同病毒)。在一些实施方案中，病毒载体靶向CNS的细胞和/或组织。

本文所描述的病毒载体可进一步为如国际专利公开WO 01/92551(其公开内容通过引用整体并入本文)中所描述的双螺旋病毒粒子。因此，在一些实施方案中，可将双链(双螺旋)基因组包装至本文所描述的病毒衣壳中。此外，病毒衣壳或基因组元件可含有其他修饰，包括插入、缺失和/或取代。

如本文所用，术语“氨基酸”涵盖任何天然存在的氨基酸、其修饰形式和合成氨基酸。天然存在的左旋(L-)氨基酸显示于表3中。

表3：氨基酸残基和缩写.

或者，氨基酸可为修饰的氨基酸残基(非限制性实例显示于表4中)，和/或可为通过翻译后修饰(例如乙酰化、酰胺化、甲酰化、羟基化、甲基化、磷酸化或硫酸酯化)进行修饰的氨基酸。化学修饰氨基酸的方法是本领域已知的(参见例如Greg T.Hermanson，Bioconjugate Techniques，第1版，Academic Press，1996)。

表4：修饰的氨基酸残基

此外，非天然存在的氨基酸可为“非天然”氨基酸(如Wang等人，Annu Rev BiophysBiomol Struct.35：225-49(2006)所描述)。这些非天然氨基酸可宜用于将目标分子与AAV衣壳蛋白化学连接。

修饰的AAV衣壳蛋白和包含其的AAV载体

AAV载体

本文另外提供腺相关病毒(AAV)载体，其包含(i)重组衣壳蛋白和(ii)由所述衣壳蛋白包裹的货物核酸。在一些实施方案中，重组衣壳蛋白(VP1、VP2和/或VP3)可在其氨基酸序列中包含不存在于任何原生AAV衣壳序列中的肽。本发明人已证实，包含本文所描述的肽的衣壳蛋白可赋予病毒载体一个或多个所需特性，包括(但不限于)逃避中和抗体的能力。因此，本文所描述的AAV载体解决与常规AAV载体相关的限制。

因此，在一些实施方案中，本发明提供腺相关病毒(AAV)载体，其包含(i)重组衣壳蛋白和(ii)由所述衣壳蛋白包裹的货物核酸；其中衣壳蛋白包含具有SEQ ID NO：12-20中的任一者的序列的肽。在一些实施方案中，货物核酸包含5′和3′AAV反向末端重复序列。在一些实施方案中，货物核酸包含转基因。在一些实施方案中，货物核酸是双链的。在一些实施方案中，货物核酸是单链的。在一些实施方案中，转基因编码治疗蛋白或RNA。在一些实施方案中，重组衣壳蛋白与AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12、AAVrh.8、AAVrh.10、AAVrh32.33、AAVrh74、牛AAV或禽类AAV衣壳的原生序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性。在一些实施方案中，重组衣壳蛋白与AAV9衣壳的原生序列具有至少90％序列同一性。

在一些实施方案中，肽位于对应于原生AAV9衣壳的氨基酸451-458或AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV10、AAV11、AAV12、AAVrh.8、AAVrh.10、AAVrh32.33、AAVrh74、牛AAV或禽类AAV中的等效氨基酸残基的氨基酸位置处，并且所述肽选自SEQ IDNO：12-18中的任一者。在一些实施方案中，肽位于对应于原生AAV9衣壳的氨基酸587-594或AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV10、AAV11、AAV12、AAVrh.8、AAVrh.10、AAVrh32.33、AAVrh74、牛AAV或禽类AAV中的等效氨基酸残基的氨基酸位置处，并且所述肽选自SEQ ID NO：19或20。

在一些实施方案中，重组衣壳蛋白包含a)第一肽，其具有SEQ ID NO：12-18中的任一者的序列；和b)第二肽，其具有SEQ ID NO：19-20中的任一者的序列。在一些实施方案中，第一肽是在氨基酸位置451-458处，并且第二肽是在氨基酸587-594处，其中氨基酸编号是基于原生AAV9衣壳或AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV10、AAV11、AAV12、AAVrh.8、AAVrh.10、AAVrh32.33、AAVrh74、牛AAV或禽类AAV中的等效氨基酸残基。

在一些实施方案中，肽抑制至少一种抗体与衣壳蛋白的结合。在一些实施方案中，肽抑制AAV载体的感染力被抗体中和。

在一些实施方案中，肽选择性地与表达于中枢神经系统(CNS)中的细胞表面上的受体结合。在一些实施方案中，细胞是在前运动皮层、丘脑、小脑皮层、齿状核、脊髓或背根神经节中。在一些实施方案中，肽选择性地与表达于心脏中的细胞表面上的受体结合。

在一些实施方案中，腺相关病毒(AAV)载体包含(i)突变型AAV9衣壳蛋白和(ii)被所述衣壳蛋白包裹的货物核酸，其中所述衣壳蛋白包含在原生AAV9衣壳蛋白序列的氨基酸451-458处具有序列X¹-X²-X³-X⁴-X⁵-X⁶-X⁷-X⁸(SEQ ID NO：158)的肽，其中所述肽不存在于原生AAV9衣壳蛋白序列中。在一些实施方案中，X¹不是I，X²不是N，X³不是G，X⁴不是S，X⁵不是G，X⁶不是Q，X⁷不是N，并且/或X⁸不是Q。在一些实施方案中，X¹是S、F、Q、G、K或R。在一些实施方案中，X²是C、G、R、D、T或Q。在一些实施方案中，X³是Q、V、G、Y、R、F或D。在一些实施方案中，X4是P、Q、A或R。在一些实施方案中，X⁵是T、N、A、P或I。在一些实施方案中，X⁶是V、Q、A或I。在一些实施方案中，X⁷是M、P、R、Q或N。在一些实施方案中，X⁸是N、L、F、E、H或A。在一些实施方案中，X¹是S，X²是C，X³是Q，X⁴是P，X⁵是T，X⁶是V，X⁷是M，并且X⁸是N。在一些实施方案中，X¹是F，X²是G，X³是V，X⁴是P，X⁵是N，X⁶是Q，X⁷是P，并且X⁸是L。在一些实施方案中，X¹是Q，X²是R，X³是G，X⁴是Q，X⁵是A，X⁶是A，X⁷是P，并且X⁸是F。在一些实施方案中，X¹是G，X²是D，X³是Y，X⁴是A，X⁵是P，X⁶是I，X⁷是R，并且X⁸是E。在一些实施方案中，X¹是K，X²是T，X³是R，X⁴是R，X⁵是I，X⁶是V，X⁷是Q，并且X⁸是H。在一些实施方案中，X¹是F，X²是G，X³是F，X⁴是P，X⁵是N，X⁶是Q，X⁷是P，并且X⁸是L。在一些实施方案中，X¹是R，X²是Q，X³是D，X⁴是Q，X⁵是P，X⁶是I，X7是N，并且X⁸是A。

在一些实施方案中，腺相关病毒(AAV)载体包含(i)突变型AAV9衣壳蛋白和(ii)由所述衣壳蛋白包裹的货物核酸，其中所述衣壳蛋白包含在原生AAV9衣壳蛋白序列的氨基酸587-594处具有序列X¹-X²-X³-X⁴-X⁵-X⁶-X⁷-X⁸(SEQ ID NO：158)的肽，其中所述肽不存在于原生AAV9衣壳蛋白序列中。在一些实施方案中，X¹不是A，X²不是Q，X³不是A，X⁴不是Q，X⁵不是A，X⁶不是Q，X⁷不是T，并且/或X⁸不是G。在一些实施方案中，X¹是S。在一些实施方案中，X²是K或T。在一些实施方案中，X³是V。在一些实施方案中，X⁴是E或D。在一些实施方案中，X⁵是S。在一些实施方案中，X⁶是W或I。在一些实施方案中，X⁷是T或A。在一些实施方案中，X⁸是E或I。在一些实施方案中，X¹是S，X²是K，X³是V，X⁴是E，X⁵是S，X⁶是W，X⁷是T，并且X⁸是E。在一些实施方案中，X¹是S，X²是T，X³是V，X⁴是D，X⁵是S，X⁶是I，X⁷是A，并且X⁸是I。

在一些实施方案中，腺相关病毒(AAV)载体包含(i)重组衣壳蛋白和(ii)被所述衣壳蛋白包裹的货物核酸，其中所述衣壳蛋白包含与SEQ ID NO：165-187中的任一者至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，衣壳蛋白包含SEQ ID NO：165-187中的任一者的氨基酸序列。在一些实施方案中，衣壳蛋白包含SEQ ID NO：175的氨基酸序列。在一些实施方案中，衣壳蛋白包含SEQ ID NO：180的氨基酸序列。

在一些实施方案中，AAV载体将货物核酸选择性地递送至中枢神经系统细胞或组织。在一些实施方案中，中枢神经系统组织是前运动皮层、丘脑、小脑皮层、齿状核、脊髓或背根神经节。在一些实施方案中，AAV载体将货物核酸递送至大脑，但不将AAV载体递送至心脏。在一些实施方案中，AAV载体将货物核酸递送至大脑和递送至心脏。在一些实施方案中，货物核酸递送至大脑的递送比至心脏的递送更高。在一些实施方案中，货物核酸的递送在大脑中与心脏中大致相同。

AAV衣壳蛋白

在一些实施方案中，本发明提供一种腺相关病毒(AAV)衣壳蛋白，其相较于原生AAV衣壳蛋白包含一个或多个氨基酸修饰(例如取代和/或缺失)，其中所述一个或多个修饰改变AAV衣壳蛋白上的一个或多个抗原位点。一个或多个抗原位点的修饰引起对抗体与一个或多个抗原位点的结合的抑制和/或对包含AAV衣壳蛋白的病毒粒子的感染力中和的抑制。一个或多个氨基酸修饰(例如取代和/或缺失)可在通过含有AAV衣壳蛋白的AAV-抗体复合物的肽表位定位和/或低温电子显微镜研究鉴定的一个或多个抗原足迹中。在一些实施方案中，一个或多个抗原位点是如WO 2017/058892中所描述的常用抗原基序或CAM，所述文献通过引用整体并入本文。在一些实施方案中，抗原位点是在AAV衣壳蛋白的可变区(VR)中，例如VR-I、VR-II、VR-III、VR-IV、VR-V、VR-VI、VR-VII、VR-VIII、VR-IX。在一些实施方案中，一个或多个抗原位点是在AAV衣壳蛋白的HI环中。

在一些实施方案中，AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAVrh8、AAVrh10、AAV10、AAV11、AAV12、AAVrh32.22、牛AAV或禽类AAV衣壳蛋白在下表5中所鉴定的一个或多个区域中包含氨基酸修饰(例如取代或缺失)。

在一些实施方案中，氨基酸取代代替来自以下血清型中的任一者的AAV衣壳蛋白中的任何八个氨基酸：AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAVrh8、AAVrh10、AAV10、AAV11、AAV12、AAVrh32.22、牛AAV或禽类AAV。例如，氨基酸取代可代替以下氨基酸(VP1编号)：以上所列举的AAV血清型中的任一者中的355-362、363-370、371-378、379-386、387-394、395-402、403-410、411-418、419-426、427-434、435-442、443-450、451-458、459-466、467-474、475-482、483-490、491-498、499-506、507-514、515-522、523-530、531-538、539-546、547-554、555-562、563-570、571-578、579-586、587-594、595-602、603-610、611-618、619-626、627-634、635-642、643-650、651-658、659-666、667-674、675-682、683-690、691-698、699-706、707-714、715-722。

在一些实施方案中，氨基酸取代选自SEQ ID NO：19-20中的任一者。在一些实施方案中，氨基酸取代与SEQ ID NO：12-18中的任一者具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同源性。在一些实施方案中，取代是在对应于野生型AAV9衣壳的氨基酸587-594的氨基酸处。在一些实施方案中，取代是在对应于野生型AAV1衣壳的氨基酸587-594的氨基酸处。在一些实施方案中，取代是在对应于野生型AAV6衣壳的氨基酸587-594的氨基酸处。在一些实施方案中，取代是在对应于野生型AAV8衣壳的氨基酸589-596的氨基酸处。在一些实施方案中，取代是在对应于野生型AAVrh8衣壳的氨基酸587-594的氨基酸处。在一些实施方案中，取代是在对应于野生型AAVrh10衣壳的氨基酸589-596的氨基酸处。

在一些实施方案中，氨基酸取代选自SEQ ID NO：18-20中的任一者。在一些实施方案中，氨基酸取代与SEQ ID NO：18-20中的任一者具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同源性。在一些实施方案中，取代是在对应于野生型AAV9衣壳的氨基酸451-458的氨基酸处。

在一些实施方案中，氨基酸缺失包含相较于野生型衣壳缺失至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个、至少六个、至少七个、至少八个、至少九个或至少十个氨基酸。

在一些实施方案中，AAV衣壳包含一个或多个氨基酸取代和一个或多个氨基酸缺失。在一些实施方案中，衣壳包含至少一个氨基酸取代和至少一个氨基酸缺失。在一些实施方案中，衣壳包含至少一个氨基酸取代和至少一个氨基酸缺失，其中至少一个氨基酸取代和至少一个氨基酸缺失在衣壳氨基酸序列中彼此紧邻。

在一些实施方案中，衣壳蛋白经修饰以产生当存在于AAV病毒粒子或AAV病毒载体中时具有选择性地靶向CNS(例如大脑、脊髓)的表型的AAV衣壳。在一些实施方案中，衣壳蛋白经修饰以产生当存在于AAV病毒粒子或AAV病毒载体中时具有逃避中和抗体的表型的AAV衣壳。除逃避中和抗体和/或靶向CNS的表型以外，AAV病毒粒子或载体还可具有增强或维持转导效率的表型。

在一些实施方案中，一个或多个取代可将来自第一AAV血清型的衣壳蛋白的一个或多个序列引入至不同于第一AAV血清型的第二AAV血清型的衣壳蛋白中。

向其添加修饰的基础AAV衣壳蛋白可为选自以下的AAV血清型的衣壳蛋白：AAV1、AAV2、AAV3、AAV3B、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12、AAVrh.8、AAVrh.10、AAVrh.32.33、AAVrh74、牛AAV、禽类AAV或目前已知或后续鉴定的任何其他AAV。在一些实施方案中，基础AAV衣壳蛋白具有AAV9血清型。在一些实施方案中，基础AAV衣壳蛋白是嵌合型。在一些实施方案中，基础AAV衣壳蛋白是AAV8/9嵌合体。

本文提供修饰的AAV衣壳蛋白的若干实例。在以下实例中，衣壳蛋白可包含所描述的特定取代，并且在一些实施方案中，可包含比所描述的那些更少或更多的取代。如本文所用，“取代”可指代单一氨基酸取代或多于一个连续氨基酸的取代。例如，在一些实施方案中，衣壳蛋白可包含至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个等单氨基酸取代。在一些实施方案中，衣壳蛋白可包含多个连续氨基酸的一个或多个取代，例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个连续氨基酸的一个或多个取代。

此外，在本文所描述的其中氨基酸残基被除存在于野生型或原生氨基酸序列中的氨基酸残基以外的任何氨基酸残基取代的一些实施方案中，所述任何其他氨基酸残基可为本领域已知的任何天然或非天然氨基酸残基(参见例如表2和表3)。在一些实施方案中，取代可为保守性取代，并且在一些实施方案中，取代可为非保守性取代。在一些实施方案中，AAV衣壳蛋白包含一个或多个氨基酸取代，其中氨基酸取代各自单独地选自如表6.1中所示的SEQ ID NO：12-18。

表6.1：氨基酸取代

氨基酸取代	SEQ ID NO.
		SCQPTVMN	12
FGVPNQPL	13
		QRGQAAPF	14
GDYAPIRE	15
		KTRRIVQH	16
FGFPNQPL	17
		RQDQPINA	18

在一些实施方案中，AAV衣壳蛋白包含一个或多个氨基酸取代，其中氨基酸取代各自独立地选自如表6.2中所示的SEQ ID NO：19-20。

表6.2：氨基酸取代

氨基酸取代	SEQ ID NO.
		SKVESWTE	19
STVDSIAI	20

在一些实施方案中，AAV衣壳蛋白可包含选自表6.1中所列举的序列的第一取代和选自表6.2中所列举的序列的第二取代。在一些实施方案中，AAV衣壳蛋白可包含如表6.3和6.4中所示的第一取代、第二取代。

表6.3：氨基酸取代的组合

表6.4氨基酸取代的组合

在一些实施方案中，AAV衣壳蛋白包含氨基酸修饰(例如取代和/或缺失)，其中所述氨基酸修饰改变AAV衣壳蛋白上的一个或多个表面暴露区，例如抗原区。

在一些实施方案中，AAV衣壳蛋白包含一个或多个氨基酸取代，其中氨基酸取代中的至少一者包含SEQ ID NO：19-20中的一者。在一些实施方案中，取代代替对应于野生型AAV9衣壳的氨基酸587-594的氨基酸。

在一些实施方案中，AAV衣壳蛋白包含一个或多个氨基酸取代，其中氨基酸取代中的至少一者包含SEQ ID NO：12-18中的一者。在一些实施方案中，取代代替对应于野生型AAV9衣壳的氨基酸451-458的氨基酸。

在一些实施方案中，AAV衣壳蛋白包含取代，所述取代包含不存在于原生衣壳蛋白序列中的八个氨基酸的序列(X¹-X²-X³-X⁴-X⁵-X⁶-X⁷-X⁸)(SEQ ID NO：158)。在一些实施方案中，X¹不是I，X²不是N，X³不是G，X⁴不是S，X⁵不是G，X⁶不是Q，X⁷不是N，并且/或X⁸不是Q。在一些实施方案中，X¹是S、F、Q、G、K或R。在一些实施方案中，X²是C、G、R、D、T或Q。在一些实施方案中，X³是Q、V、G、Y、R、F或D。在一些实施方案中，X⁴是P、Q、A或R。在一些实施方案中，X⁵是T、N、A、P或I。在一些实施方案中，X⁶是V、Q、A或I。在一些实施方案中，X⁷是M、P、R、Q或N。在一些实施方案中，X⁸是N、L、F、E、H或A。在一些实施方案中，X¹是S，X²是C，X³是Q，X⁴是P，X⁵是T，X⁶是V，X⁷是M，并且X⁸是N。在一些实施方案中，X¹是F，X²是G，X³是V，X⁴是P，X⁵是N，X⁶是Q，X⁷是P，并且X⁸是L。在一些实施方案中，X¹是Q，X²是R，X³是G，X⁴是Q，X⁵是A，X⁶是A，X⁷是P，并且X⁸是F。在一些实施方案中，X¹是G，X²是D，X³是Y，X⁴是A，X⁵是P，X⁶是I，X⁷是R，并且X⁸是E。在一些实施方案中，X¹是K，X²是T，X³是R，X⁴是R，X⁵是I，X⁶是V，X⁷是Q，并且X⁸是H。在一些实施方案中，X¹是F，X²是G，X³是F，X⁴是P，X⁵是N，X⁶是Q，X⁷是P，并且X⁸是L。在一些实施方案中，X¹是R，X²是Q，X³是D，X⁴是Q，X⁵是P，X⁶是I，X⁷是N，并且X⁸是A。

在一些实施方案中，X¹不是A，X²不是Q，X³不是A，X⁴不是Q，X⁵不是A，X⁶不是Q，X⁷不是T，并且/或X⁸不是G。在一些实施方案中，X¹是S。在一些实施方案中，X²是K或T。在一些实施方案中，X³是V。在一些实施方案中，X⁴是E或D。在一些实施方案中，X⁵是S。在一些实施方案中，X⁶是W或I。在一些实施方案中，X⁷是T或A。在一些实施方案中，X⁸是E或I。在一些实施方案中，X¹是S，X²是K，X³是V，X⁴是E，X⁵是S，X⁶是W，X⁷是T，并且X⁸是E。在一些实施方案中，X¹是S，X²是T，X³是V，X⁴是D，X⁵是S，X⁶是I，X⁷是A，并且X⁸是I。

在一些实施方案中，相较于野生型AAV衣壳，AAV衣壳蛋白包含一个或多个氨基酸缺失，其中氨基酸缺失包含至少六个或至少八个氨基酸的缺失。在一些实施方案中，相较于原生衣壳蛋白序列，AAV衣壳蛋白包含八个连续氨基酸的缺失。在一些实施方案中，相较于原生衣壳蛋白序列，AAV衣壳蛋白包含六个连续氨基酸的缺失。

在一些实施方案中，AAV衣壳蛋白包含序列LSKTQTLK(SEQ ID NO：1374)或序列LSKTDPQTLK(SEQ ID NO：1375)。在一些实施方案中，包含SEQ ID NO：1374或1375的AAV衣壳蛋白具有选自以下的血清型：AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12、AAVrh8、AAVrh10、AAVrh32.33、AAVrh74、禽类AAV和牛AAV。

在一些实施方案中，AAV衣壳蛋白包含：第一取代，其包含选自SEQ ID NO：12-18的序列；和第二取代，其包含选自SEQ ID NO：19-20的序列。

在一些实施方案中，AAV衣壳蛋白包含氨基酸缺失和取代，其中取代包含选自SEQID NO：12-20的序列。

在一些实施方案中，重组衣壳蛋白具有与SEQ ID NO：9(AAV9)至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一的序列，并且包含以下氨基酸取代中的一者或多者：I451S、I451F、I451Q、I451G、I451K、I451R、N452C、N452G，N452R，N452D，N452T、N452Q、G453Q、G453V、G453Y、G453R、G453F、G453D、S454P、S454Q、S454A、S454R、G455T、G455N、G455A、G455P、G455I、Q456V、Q456A、Q456I、N457M、N457P、N457R、N457Q、Q458N、Q458L、Q458F、Q458E、Q458H、Q458A、A587S、Q588K、Q588T、A589V、Q590E、Q590D、A591S、Q592W、Q592I、T593A、G594E、G594I。

本文所描述的AAV衣壳中的任一者可在HI环中进一步包含修饰(例如取代或缺失)。HI环是在AAV衣壳表面上的β链βH与βI之间，从与邻近五倍病毒蛋白质(VP)重叠的每个VP亚基延伸的重要结构域。在一些实施方案中，AAV衣壳在HI环中包含一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个或八个氨基酸取代。在一些实施方案中，AAV衣壳在HI环中包含以下取代中的一者或多者：P661R、T662S、Q666G、S667D，其中编号对应于野生型AAV8衣壳(SEQ IDNO：8)。在一些实施方案中，AAV衣壳在HI环中包含以下取代中的一者或多者：P659R、T660S、A661T、K664G，其中编号对应于野生型AAV9衣壳(SEQ ID NO：9)。

在一些实施方案中，AAV衣壳蛋白包含一、二、三或四个氨基酸取代，其中每个取代改变AAV衣壳蛋白上的不同抗原位点，并且其中氨基酸取代中的至少一者改变衣壳蛋白的HI环。

在一些实施方案中，AAV衣壳蛋白包含第一、第二、第三和第四氨基酸取代。在一些实施方案中，取代中的至少一者改变衣壳蛋白的HI环。在一些实施方案中，AAV衣壳在HI环中包含以下取代中的一者或多者：P661R、T662S、Q666G、S667D，其中编号对应于野生型AAV8衣壳(SEQ ID NO：8)；或P659R、T660S、A661T、K664G，其中编号对应于野生型AAV9衣壳(SEQID NO：9)。在一些实施方案中，AAV衣壳蛋白包含SEQ ID NO：185-187中的任一者的氨基酸序列。在一些实施方案中，AAV衣壳蛋白包含与SEQ ID NO：165-187中的任一者共有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的氨基酸序列。

本文还提供了编码本文所描述的AAV衣壳蛋白中的一者或多者的核苷酸序列，包含所述核苷酸序列的表达载体。核苷酸序列可为DNA序列或RNA序列。在一些实施方案中，细胞包含一个或多个本文所描述的核苷酸序列或表达载体。

在一些实施方案中，AAV衣壳包含如本文所描述的AAV衣壳蛋白。本文进一步提供包含AAV衣壳的病毒载体以及在药学上可接受的载体中包含AAV衣壳蛋白、AAV衣壳和/或病毒载体的组合物。

在一些实施方案中，一个或多个抗原位点的修饰引起对抗体与一个或多个抗原位点的结合的抑制。在一些实施方案中，一个或多个抗原位点的修饰引起对包含AAV衣壳蛋白的病毒粒子的感染力中和的抑制。

如本文中所描述，来自多种AAV的衣壳蛋白的核酸和氨基酸序列是本领域已知的。因此，对于任何其他AAV来说，“对应”于原生AAV衣壳蛋白的氨基酸位置的氨基酸可容易地进行测定(例如通过使用序列比对)。

修饰的衣壳蛋白可通过修饰目前已知或后续发现的任何AAV的衣壳蛋白来产生。此外，有待进行修饰的基础AAV衣壳蛋白可为天然存在的AAV衣壳蛋白(例如AAV2、AAV3a或AAV3b、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10或AAV11衣壳蛋白，或表2中显示的AAV中的任一者)但不限于此。本领域技术人员应理解，对于AAV衣壳蛋白的各种操纵是本领域已知的，并且本公开不限于天然存在的AAV衣壳蛋白的修饰。例如，与天然存在的AAV(例如其来源于天然存在的AAV衣壳蛋白，例如AAV2、AAV3a、AAV3b、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12或目前已知或后续发现的任何其他AAV)相比，有待进行修饰的衣壳蛋白可能已经具有变化。在一些实施方案中，衣壳蛋白可为嵌合衣壳蛋白。在一些实施方案中，衣壳蛋白可为工程化AAV，例如AAV2i8、AAV2g9、AAV-LK03、AAV7m8、AAV Anc80、AAVPHP.B。

因此，在一些实施方案中，有待进行修饰的AAV衣壳蛋白可来源于天然存在的AAV，但还包含插入到和/或取代进入衣壳蛋白中并且/或已通过缺失一个或多个氨基酸改变的一个或多个外来序列(例如对于原生病毒是外源性的)。

因此，当本文中提及特定AAV衣壳蛋白(例如AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10或AAV11衣壳蛋白，或来自显示于表2中的AAV中的任一者的衣壳蛋白等)时，预期涵盖原生衣壳蛋白以及具有除本文所描述的修饰以外的变化的衣壳蛋白。此类变化包括取代、插入和/或缺失。在一些实施方案中，与原生AAV衣壳蛋白序列相比，衣壳蛋白包含插入其中的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20、小于20、小于30、小于40、小于50、小于60或小于70个氨基酸(除本文所描述的插入以外)。在一些实施方案中，与原生AAV衣壳蛋白序列相比，衣壳蛋白包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20、小于20、小于30、小于40、小于50、小于60或小于70个氨基酸取代(除本文所描述的氨基酸取代以外)；在一些实施方案中，与原生AAV衣壳蛋白序列相比，衣壳蛋白包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20、小于20、小于30、小于40、小于50、小于60或小于70个氨基酸的缺失。

在一些实施方案中，AAV衣壳蛋白具有与原生AAV衣壳蛋白序列至少约90％、约95％、约97％、约98％或约99％相似或同一的氨基酸序列。

确定两个或更多个氨基酸序列之间的序列相似性或同一性的方法是本领域已知的。可使用标准技术来确定序列相似性或同一性，所述标准技术包括(但不限于)Smith和Waterman，Adv.Appl.Math.2，482(1981)的局部序列同一性算法；Needleman和Wunsch，JMol.Biol.48，443(1970)的序列同一性比对算法；Pearson和Lipman，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85，2444(1988)的相似性方法的检索；这些算法的计算机化实现方式(Wisconsin Genetics软件包，Genetics Computer Group，575Science Drive，Madison，WI中的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA)；由Devereux等人，Nucl.Acid Res.12，387-395(1984)所描述的最佳拟合序列程序；或通过检查(inspection)。

另一种合适的算法是Altschul等人，J Mol.Biol.215，403-410，(1990)和Karlin等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90，5873-5787(1993)中所描述的BLAST算法。特别适用的BLAST程序是WU-BLAST-2程序，其获自Altschul等人，Methods in Enzymology，266，460-480(1996)；http：//blast.wustl/edu/blast/README.html。WU-BLAST-2使用若干检索参数，其任选地设定为默认值。参数是动态值并且通过本身程序根据特定序列的组成和目标序列检索的特定数据库的组成而确立；然而可调整所述值以增加敏感性。

此外，额外适用算法是如Altschul等人，(1997)Nucleic Acids Res.25，3389-3402报道的间隙式BLAST。

在一些实施方案中，病毒衣壳包含如本文所描述的修饰的AAV衣壳蛋白。在一些实施方案中，病毒衣壳是小病毒衣壳，其可进一步为自主小病毒衣壳或依赖病毒衣壳。任选地，病毒衣壳是AAV衣壳。在一些实施方案中，AAV衣壳是AAV1、AAV2、AAV3a、AAV3b、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12、AAVrh8、AAVrh10、AAVrh32.33、牛AAV衣壳、禽类AAV衣壳或目前已知或后续鉴定的任何其他AAV。AAV血清型的非限制性列表显示于表2中。AAV衣壳可为表2中所列举的任何AAV血清型，或通过一个或多个插入、取代和/或缺失衍生自前述中的任一者。可由修饰的病毒衣壳包装并转移至细胞中的分子包括货物核酸(例如异源DNA或RNA)、多肽、有机小分子、金属或其组合。

异源分子定义为不天然存在于AAV感染中的那些，例如不由野生型AAV基因组编码的那些。此外，治疗适用分子可与嵌合病毒衣壳的外部缔合以将所述分子转移至宿主靶细胞中。此类缔合分子可包括DNA、RNA、有机小分子、金属、碳水化合物、脂质和/或多肽。在一些实施方案中，治疗适用分子与衣壳蛋白共价连接(即，缀合或化学偶联)。共价连接分子的方法是本领域技术人员已知的。

修饰的病毒衣壳还可用于产生针对新颖衣壳结构的抗体。作为另一种替代方案，可将外源性氨基酸序列插入到用于抗原呈递至细胞的修饰的病毒衣壳中，以例如用于向受试者施用以产生对于外源性氨基酸序列的免疫反应。

在一些实施方案中，可在施用递送编码多肽的核酸或目标功能性RNA的病毒载体之前和/或与其并行(例如彼此的数分钟或数小时内)，施用病毒衣壳以阻断某些细胞位点。例如，可递送本发明的衣壳以阻断肝细胞上的细胞受体，并且可随后或并行施用递送载体，所述递送载体可降低肝细胞的转导并增强其他靶标(例如骨骼肌、心肌和/或隔膜肌)的转导。

根据一些实施方案，可在如本文所描述的被修饰的病毒载体之前和/或与其并行，向受试者施用被修饰的病毒衣壳。此外，本公开提供组合物和药物制剂，其包含本发明的被修饰的病毒衣壳；任选地，所述组合物还包含如本文所描述的被修饰的病毒载体。

在一些实施方案中，核酸(任选地，分离的核酸)编码本文所描述的被修饰的病毒衣壳和衣壳蛋白。进一步提供包含核酸的载体和包含本文所描述的核酸和/或载体的细胞(体内或在培养物中)。作为一个实例，病毒载体可包含：(a)如本文所描述的被修饰的AAV衣壳；和(b)包含至少一个末端重复序列的核酸，其中核酸由AAV衣壳包裹。

其他合适的载体包括(但不限于)病毒载体(例如腺病毒、AAV、疱疹病毒、牛痘、痘病毒、杆状病毒、慢病毒、冠状病毒等)、质粒、噬菌体、YAC、BAC等。此类核酸、载体和细胞可例如用作用于制造如本文所描述的被修饰的病毒衣壳或病毒载体的试剂(例如辅助包装构建体或包装细胞)。

本文所描述的病毒衣壳可使用本领域已知的任何方法，例如通过使用杆状病毒系统(Brown等人，(1994)Virology 198：477-488)来产生。

如本文所描述的对于AAV衣壳蛋白的修饰是“选择性”修饰。这种方法与利用全部亚基或AAV血清型之间的大结构域交换的先前研究相反(参见例如国际专利公开WO 00/28004和Hauck等人，(2003)J.Virology 77：2768-2774)。在一些实施方案中，“选择性”修饰产生小于或等于约20、18、15、12、10、9、8、7、6、5、4或3个连续氨基酸的插入和/或取代和/或缺失。

本文所描述的被修饰的衣壳蛋白和衣壳还可包含目前已知或后续鉴定的任何其他修饰。例如，AAV衣壳蛋白和病毒衣壳可为嵌合型，因为其可包含来自另一病毒，任选地另一小病毒或AAV的衣壳亚基的全部或一部分，例如如国际专利公开WO 00/28004中所描述。

在一些实施方案中，病毒衣壳可为靶向病毒衣壳，其包含引导病毒衣壳与存在于所需靶组织上的细胞表面分子相互作用的靶向序列(例如被取代的或插入于病毒衣壳中)(参见例如国际专利公开WO 00/28004和Hauck等人，(2003)J.Virology 77：2768-2774)；Shi等人，Human Gene Therapy 17：353-361(2006)[描述在AAV衣壳亚基的位置520和/或584处插入整合素受体结合基序RGD]；和美国专利第7,314,912号[描述在AAV2衣壳亚基的氨基酸位置447、534、573和587后插入含有RGD基序的PI肽])。AAV衣壳亚基内容许插入的其他位置是本领域已知的(例如由Grifman等人，Molecular Therapy 3：964-975(2001)所描述的位置449和588)。

例如，如本文所描述的病毒衣壳可具有针对某些目标靶组织(例如肝脏、骨骼肌、心脏、隔膜肌、肾脏、大脑、胃、肠、皮肤、内皮细胞和/或肺)的相对低效向性。可宜将靶向序列并入到这些低转导载体中，从而赋予病毒衣壳所需向性和任选地针对特定组织的选择性向性。包含靶向序列的AAV衣壳蛋白、衣壳和载体描述于例如国际专利公开WO 00/28004中。作为另一个实例，可将如Wang等人，Annu Rev Biophys Biomol Struct.35：225-49(2006))所描述的一个或多个非天然存在的氨基酸并入到如本文所描述的AAV衣壳亚基中的作为再引导低转导载体至所需靶组织的手段的正交位点(orthogonal site)处。可宜使用这些非天然氨基酸来将目标分子与AAV衣壳蛋白化学连接，所述目标分子包括(但不限于)：聚糖(靶向甘露糖-树突状细胞)；用于靶向递送至特定癌细胞类型的RGD、铃蟾素或神经肽；选自靶向特定细胞表面受体(例如生长因子受体、整合素等)的噬菌体呈现的RNA适体或肽。

在一些实施方案中，靶向序列可为引导感染特定细胞类型的病毒衣壳序列(例如自主小病毒衣壳序列、AAV衣壳序列或任何其他病毒衣壳序列)。

作为另一个非限制性实例，可将肝素或硫酸乙酰肝素结合结构域(例如呼吸道合胞病毒肝素结合结构域)插入到或被取代进入通常不结合HS受体的衣壳亚基(例如AAV4、AAV5)中，以赋予肝素和/或硫酸乙酰肝素与所得突变型结合。

使用红细胞糖苷脂作为其受体，B19感染原代红细胞系祖细胞(Brown等人，(1993)Science 262：114)。B19的结构已测定为8A分辨率(Agbandje-McKenna等人，(1994)Virology 203：106)。与红细胞糖苷脂结合的B19衣壳的区域已定位在氨基酸399-406之间(Chapman等人，(1993)Virology 194：419)，一种在β折叠桶结构E与F之间的环形外区域(Chipman等人，(1996)Proc.Nat.Acad.Sci.USA 93：7502)。因此，B19衣壳的红细胞糖苷脂受体结合结构域可被取代进入AAV衣壳蛋白中，以将病毒衣壳或包含其的病毒载体靶向红系细胞。

在一些实施方案中，外源性靶向序列可为编码改变病毒衣壳或包含被修饰的AAV衣壳蛋白的病毒载体的向性的肽的任何氨基酸序列。在一些实施方案中，靶向肽或蛋白质可为天然存在的，或可替代地完全或部分合成的。示例性靶向序列包括与细胞表面受体和糖蛋白结合的配体和其他肽，例如ROD肽序列、缓激肽、激素、肽生长因子(例如表皮生长因子、神经生长因子、成纤维细胞生长因子、血小板衍生生长因子、胰岛素样生长因子I和II等)、细胞因子、黑素细胞刺激激素(例如α、β或γ)、神经肽和内啡肽等，以及其保留将细胞靶向其同源受体的能力的片段。其他说明性肽和蛋白质包括物质P、角质细胞生长因子、神经肽Y、胃泌素释放肽、白细胞介素2、鸡蛋白溶菌酶、红细胞生成素、促性腺素释放素、皮质稳定素、β-内啡肽、leu-脑啡肽、强啡肽B(rimorphin)、α-新脑啡肽、血管紧张素、pneumadin、血管活性肠肽、神经调压素、肠动素及其如上文所描述的片段。作为又另一替代方案，来自毒素(例如破伤风毒素或蛇毒素如α-环蛇毒素等)的结合结构域可被取代进入衣壳蛋白中作为靶向序列。在一些实施方案中，AAV衣壳蛋白可通过将如Cleves(CurrentBiology 7：R318(1997))所描述的“非经典”输入/输出信号肽(例如成纤维细胞生长因子-1和-2、白细胞介素1、HIV-1 Tat蛋白、疱疹病毒VP22蛋白等)取代进入AAV衣壳蛋白中来进行修饰。还涵盖直接由特定细胞吸收的肽基序，例如触发肝细胞吸收的FVFLP(SEQ ID NO：22)肽基序。

可使用噬菌体呈现技术以及本领域已知的其他技术来鉴定识别任何目标细胞类型的肽。

靶向序列可编码靶向细胞表面结合位点(包括受体(例如蛋白质、碳水化合物、糖蛋白或蛋白聚糖))的任何肽。细胞表面结合位点的实例包括(但不限于)硫酸乙酰肝素；硫酸软骨素和其他葡糖胺聚糖；发现于粘蛋白、糖蛋白和神经节苷脂上的唾液酸部分；MHC 1糖蛋白；发现于膜糖蛋白上的碳水化合物组分，包括甘露糖、N-乙酰基-半乳糖胺、N-乙酰基-葡糖胺、岩藻糖、半乳糖；等。

在一些实施方案中，硫酸乙酰肝素(HS)或肝素结合结构域被取代进入病毒衣壳中(例如另外不与HS或肝素结合的AAV衣壳中)。本领域已知，HS/肝素结合是由富含精氨酸和/或赖氨酸的“基础补丁(basic patch)”介导的。在一些实施方案中，可采用在基序BXXB(SEQID NO：23)后的序列，其中“B”是碱性残基并且X是中性和/或疏水性残基。作为一个非限制性实例，BXXB可为RGNR(SEQ ID NO：24)。作为另一个非限制性实例，BXXB取代原生AAV2衣壳蛋白中的氨基酸位置262至265或另一AAV血清型的衣壳蛋白中的对应位置处。

表7显示合适靶向序列的其他非限制性实例。

表7：靶向序列

Y*是磷酸-Tyr

在一些实施方案中，靶向序列可为可用于与靶向进入细胞的另一分子化学偶联的肽(例如可包含可经由其R基团进行化学偶联的精氨酸和/或赖氨酸残基)。

在一些实施方案中，AAV衣壳蛋白或病毒衣壳可包含如WO 2006/066066中所描述的突变。例如，衣壳蛋白可在原生AAV2衣壳蛋白的氨基酸位置263、705、708和/或716处包含选择性氨基酸取代或来自另一AAV血清型的衣壳蛋白中的对应变化。

另外或或者，在一些实施方案中，衣壳蛋白、病毒衣壳或载体包含紧接在AAV2衣壳蛋白的氨基酸位置264后的选择性氨基酸插入或来自其他AAV的衣壳蛋白中的对应变化。“紧接在氨基酸位置X后”是指插入紧跟在所指示氨基酸位置后(例如“在氨基酸位置264后”指示在位置265处的点插入或例如从位置265至268的较大插入等)。

此外，在一些实施方案中，衣壳蛋白、病毒衣壳或载体可包含例如PCT公开第WO2010/093784号(例如2i8)中和/或PCT公开第WO 2014/144229号(例如双聚糖)中所描述的氨基酸修饰。

在一些实施方案中，衣壳蛋白、病毒衣壳或载体可具有相对于衣壳蛋白、病毒衣壳或载体所来源的AAV血清型的转导效率等效或增强的转导效率。在一些实施方案中，衣壳蛋白、病毒衣壳或载体可具有相对于衣壳蛋白、病毒衣壳或载体所来源的AAV血清型的转导效率降低的转导效率。在一些实施方案中，衣壳蛋白、病毒衣壳或载体可具有相对于衣壳蛋白、病毒衣壳或载体所来源的AAV血清型的向性等效或增强的向性。在一些实施方案中，衣壳蛋白、病毒衣壳或载体可具有相对于衣壳蛋白、病毒衣壳或载体所来源的AAV血清型的向性的改变或不同的向性。在一些实施方案中，衣壳蛋白、病毒衣壳或载体可具有脑组织向性或可经工程化以具有脑组织向性。在一些实施方案中，衣壳蛋白、病毒衣壳或载体可具有肝组织向性或可经工程化以具有肝组织向性。

本文所描述的AAV载体可用于将异源核酸递送至细胞或受试者。例如，被修饰的载体可用于治疗溶酶体贮积症，例如粘多糖贮积症(例如斯利综合征(Sly syndrome)[β-葡萄糖醛酸苷酶]、贺勒综合征(Hurler Syndrome)[α-L-艾杜糖醛酸酶]、沙伊综合征(ScheieSyndrome)[α-L-艾杜糖醛酸酶]、贺勒-沙伊综合征(Hurler-Scheie Syndrome)[α-L-艾杜糖醛酸酶]、亨特氏综合征(Hunter′s Syndrome)[艾杜糖醛酸硫酸酯酶]、圣菲利波综合征(Sanfilippo Syndrome)(A[乙酰肝素硫酸酰胺酶]、B[N-乙酰基氨基葡萄糖苷酶]、C[乙酰基-CoA：α-氨基葡糖苷乙酰基转移酶]、D[N-乙酰葡萄糖胺6-硫酸酯酶])、莫奎综合征(Morquio Syndrome)(A[半乳糖-6-硫酸硫酸酯酶]、B[β-半乳糖苷酶])、马洛托-拉米综合征(Maroteaux-Lamy Syndrome)[N-乙酰基半乳糖胺-4-硫酸酯酶]等)、法布里病(Fabrydisease)(a-半乳糖苷酶)、戈谢氏病(Gaucher′s disease)(葡糖脑苷脂酶)或肝糖贮积症(例如庞培氏病(Pompe disease)；溶酶体酸α-葡糖苷酶)，如本文所描述。

本领域技术人员应了解，对于一些AAV衣壳蛋白来说，根据对应氨基酸位置是部分或完全存在于病毒中还是完全不存在，对应修饰将是插入和/或取代。

在一些实施方案中，病毒载体包含本文所描述的被修饰的衣壳蛋白和衣壳。在一些实施方案中，病毒载体是小病毒载体(例如包含小病毒衣壳和/或载体基因组)，例如AAV载体(例如包含AAV衣壳和/或载体基因组)。在一些实施方案中，病毒载体包含含如本文所描述的被修饰的衣壳和载体基因组的被修饰的AAV衣壳。

例如，在一些实施方案中，病毒载体包含：(a)被修饰的病毒衣壳(例如被修饰的AAV衣壳)，其包含本文所描述的被修饰的衣壳蛋白；和(b)核酸，其包含末端重复序列(例如AAV TR)，其中包含末端重复序列的核酸由被修饰的病毒衣壳包裹。核酸可任选地包含两个末端重复序列(例如两个AAV TR)。

在一些实施方案中，病毒载体是包含编码目标多肽或功能性RNA的异源核酸的重组病毒载体。下文更详细地描述重组病毒载体。

在一些实施方案中，病毒载体(i)与无被修饰的衣壳蛋白的病毒载体的转导水平相比，具有降低的肝转导；(ii)与无被修饰的衣壳蛋白的病毒载体所观测到的水平相比，在动物受试者中呈现增强的病毒载体全身性转导；(iii)与无被修饰的衣壳蛋白的病毒载体的移动水平相比，在内皮细胞间呈现增强的移动；和/或(iv)呈现肌肉组织(例如骨骼肌、心肌和/或隔膜肌)转导的选择性增强；(v)呈现肝组织转导的选择性增强；和/或(vi)与无被修饰的衣壳蛋白的病毒载体的转导水平相比，降低的大脑组织(例如神经元)的转导。在一些实施方案中，病毒载体具有针对肝的全身性转导。

本领域技术人员应理解，本文所描述的被修饰的衣壳蛋白、病毒衣壳和病毒载体排除其原生状态(即，不是突变体)在指定位置处具有指示氨基酸的那些衣壳蛋白、衣壳和病毒载体。

制造病毒载体的方法

本文还提供了制造病毒载体的方法。在一些实施方案中，制造逃避中和抗体的AAV载体的方法包括：a)鉴定在AAV衣壳蛋白上形成三维抗原足迹的接触氨基酸残基；b)产生包含在(a)中所鉴定的接触氨基酸残基的氨基酸取代的AAV衣壳蛋白文库；c)制造包含来自(b)的AAV衣壳蛋白文库的衣壳蛋白的AAV粒子；d)使(c)的AAV颗粒与细胞在可由此发生感染和复制的条件下接触；e)选择可完成至少一个感染周期并复制至类似于对照AAV粒子的滴度的AAV粒子：f)使(e)中所选择的AAV粒子与中和抗体和细胞在由此可发生感染和复制的条件下接触；以及g)选择不会被(f)的中和抗体中和的AAV粒子。用于鉴定接触氨基酸残基的方法的非限制性实例包括肽表位定位和/或低温电子显微镜。

解析和鉴定三维抗原足迹内的抗体接触残基允许其随后经由随机、合理和/或简并突变诱发进行的修饰，以产生可经由进一步选择和/或筛选鉴定的抗体逃避性AAV衣壳。

因此，在一些实施方案中，制造逃避中和抗体的AAV载体的方法包括：a)鉴定在AAV衣壳蛋白上形成三维抗原足迹的接触氨基酸残基；b)通过随机、合理和/或简并突变诱发，产生包含(a)中所鉴定的接触氨基酸残基的氨基酸取代的AAV衣壳蛋白；c)制造包含来自(b)的AAV衣壳蛋白的衣壳蛋白的AAV粒子；d)使(c)的AAV粒子与细胞在由此可发生感染和复制的条件下接触；e)选择可完成至少一个感染周期并复制至类似于对照AAV粒子的滴度的AAV粒子；f)使(e)中所选择的AAV粒子与中和抗体和细胞在由此可发生感染和复制的条件下接触；以及g)选择不会被(f)的中和抗体中和的AAV粒子。

用于鉴定接触氨基酸残基的方法的非限制性实例包括肽表位定位和/或低温电子显微镜。通过随机、合理和/或简并突变诱发产生包含接触氨基酸残基的氨基酸取代的AAV衣壳蛋白的方法是本领域已知的。

此综合方法呈现一种可应用于修饰任何AAV衣壳的平台技术。此平台技术的应用得到衍生于原始AAV衣壳模板而未损失转导效率的AAV抗原变体。作为一个优点和益处，该技术的应用将扩大符合用AAV载体进行基因疗法的患者组。

在一些实施方案中，制造病毒载体的方法包括向细胞提供：(a)包含至少一个TR序列(例如AAV TR序列)的核酸模板，和(b)足以复制核酸模板并包裹至AAV衣壳中的AAV序列(例如编码AAV衣壳的AAV rep序列和AAV cap序列)。任选地，核酸模板还包含至少一种异源核酸序列。在一些实施方案中，核酸模板包含两个AAV ITR序列，其位于异源核酸序列(如果存在)的5′和3′端，但它们不一定与其直接相邻。

在使得在细胞中产生包含包装在AAV衣壳内的核酸模板的病毒载体条件下，提供核酸模板和AAV rep和cap序列。所述方法还可包括从细胞采集病毒载体的步骤。可从培养基和/或通过裂解细胞收集病毒载体。

细胞可为容许AAV病毒复制的细胞。可采用本领域已知的任何合适的细胞。在一些实施方案中，细胞是哺乳动物细胞。作为另一选项，细胞可为提供从复制缺陷型辅助病毒缺失的功能的反式互补包装细胞系，例如293细胞或其他E1a反式互补细胞。

可通过本领域已知的任何方法提供AAV复制和衣壳序列。目前方案通常在单一质粒上表达AAV rep/cap基因。AAV复制和包装序列不一定一起提供，尽管一起提供可为适宜的。AAV rep和/或cap序列可由任何病毒或非病毒载体提供。例如，rep/cap序列可由杂合腺病毒或疱疹病毒载体(例如插入到缺陷腺病毒载体的E1a或E3区中)提供。还可采用EBV载体来表达AAV cap和rep基因。这种方法的一个优点在于，EBV载体是游离型，但将在连续细胞分裂期间维持高拷贝数(即，作为染色体外元件稳定地整合到细胞中，称为“基于EBV的核游离基因体”，参见Margolski，(1992)Curr.Top.Microbiol.Immun.158：67)。

作为另一个替代方案，可将rep/cap序列稳定地并入到细胞中。

通常AAV rep/cap序列将不侧接TR，以防止这些序列的解救和/或包装。

可使用本领域已知的任何方法将核酸模板提供至细胞。例如，模板可由非病毒(例如质粒)或病毒载体供应。在一些实施方案中，核酸模板由疱疹病毒或腺病毒载体(例如插入到缺失型腺病毒的E1a或E3区中)供应。作为另一说明，Palombo等人，(1998)J.Virology72：5025描述携带侧接AAV TR的报告基因的杆状病毒载体。还可采用EBV载体来递送模板，如上文关于rep/cap基因所描述。

在一些实施方案中，核酸模板由复制性rAAV病毒提供。在一些实施方案中，包含核酸模板的AAV原病毒稳定地整合到细胞染色体中。

为了增强病毒滴度，可将促进生产性AAV感染的辅助病毒功能(例如腺病毒或疱疹病毒)提供至细胞。AAV复制所必需的辅助病毒序列是本领域已知的。通常，这些序列将由辅助腺病毒或疱疹病毒载体提供。或者，腺病毒或疱疹病毒序列可由另一个非病毒或病毒载体提供，例如作为携带促进有效AAV产生的所有辅助基因的非感染性腺病毒微型质粒，如Ferrari等人，(1997)Nature Med.3：1295和美国专利第6,040,183号与第6,093,570号所描述。

此外，辅助病毒功能可由辅助序列包埋于染色体中或维持为稳定的染色体外元件的包装细胞提供。通常，辅助病毒序列不能包装至例如不侧接TR的AAV病毒粒子中。

本领域技术人员应了解，在单一辅助构建体上提供AAV复制和衣壳序列以及辅助病毒序列(例如腺病毒序列)可为有利的。这种辅助构建体可为非病毒或病毒构建体。作为一个非限制性说明，辅助构建体可为包含AAV rep/cap基因的杂合腺病毒或杂合疱疹病毒。

在一些实施方案中，AAV rep/cap序列和腺病毒辅助序列由单一腺病毒辅助载体供应。这种载体另外还可包含核酸模板。可将AAV rep/cap序列和/或rAAV模板插入到腺病毒的缺失区(例如E1a或E3区)中。

在一些实施方案中，AAV rep/cap序列和腺病毒辅助序列由单一腺病毒辅助载体供应。根据这个实施方案，rAAV模板可以质粒模板形式提供。

在一些实施方案中，AAV rep/cap序列和腺病毒辅助序列由单一腺病毒辅助载体提供，并且将rAAV模板以原病毒形式整合到细胞中。或者，rAAV模板由以染色体外元件形式(例如以基于EBV的核游离基因体形式)维持在细胞内的EBV载体提供。

在一些实施方案中，AAV rep/cap序列和腺病毒辅助序列由单一腺病毒辅助者提供。rAAV模板可以单独复制病毒载体形式提供。例如，rAAV模板可由rAAV粒子或第二重组腺病毒粒子提供。

根据前述方法，杂合腺病毒载体通常包含足以进行腺病毒复制和包装的腺病毒5′和3′顺式序列(即，腺病毒末端重复序列和PAC序列)。AAV rep/cap序列和rAAV模板(如果存在)包埋于腺病毒主链中，并且侧接5′和3′顺式序列，使得这些序列可包装至腺病毒衣壳中。如上文所描述，腺病毒辅助序列和AAV rep/cap序列一般不侧接TR，使得这些序列不被包装至AAV病毒粒子中。Zhang等人，((2001)Gene Ther.18：704-12)描述一种包含腺病毒以及AAV rep和cap基因两者的嵌合辅助者。

在AAV包装方法中还可将疱疹病毒用作辅助病毒。编码AAV Rep蛋白的杂合疱疹病毒可有利地促进可调式AAV载体制造方案。已描述表达AAV-2rep和cap基因的I型杂合单纯疱疹病毒(HSV-1)载体(Conway等人，(1999)Gene Therapy 6：986和WO 00/17377)。

作为另一个替代方案，可使用如例如Urabe等人，(2002)Human Gene Therapy 13：1935-43所描述的递送rep/cap基因和rAAV模板的杆状病毒载体，在昆虫细胞中产生病毒载体。

可通过本领域已知的任何方法得到不含杂质辅助病毒的AAV载体储备液。例如，AAV和辅助病毒可容易地根据大小来区分。还可基于针对肝素底物的亲和力，将AAV与辅助病毒分离(Zolotukhin等人，(1999)Gene Therapy 6：973)。可使用缺失复制缺陷型辅助病毒，使得任何杂质辅助病毒不是复制胜任型。作为另一个替代方案，可采用缺乏晚期基因表达的腺病毒辅助者，因为介导AAV病毒的包装仅需要腺病毒早期基因表达。晚期基因表达缺陷型的腺病毒突变体是本领域已知的(例如ts100K和ts149腺病毒突变体)。

重组病毒载体

本文所描述的病毒载体适用于体外、离体和体内将核酸递送至细胞。特定而言，病毒载体可宜用于将核酸递送或转移至动物(包括哺乳动物)细胞。因此，在一些实施方案中，核酸可由本文所描述的衣壳蛋白包裹。在一些实施方案中，核酸是货物核酸。在一些实施方案中，货物核酸包含载体基因组(例如5′ITR、转基因和3′ITR)。

病毒载体所递送的货物核酸序列可为任何目标异源核酸序列。目标核酸包括编码多肽，包括治疗性(例如用于医学或兽医学用途)或免疫原性(例如用于疫苗)多肽或RNA的核酸。在一些实施方案中，货物核酸包含5′ITR和3′ITR。在一些实施方案中，货物核酸包含5′ITR、转基因和3′ITR。在一些实施方案中，转基因编码治疗蛋白或RNA。

治疗多肽包括(但不限于)囊肿性纤维化跨膜调控蛋白(CFTR)；抗肌萎缩蛋白(包括小型和微型抗肌萎缩蛋白，参见例如Vincent等人，(1993)Nature Genetics 5：130；美国专利公开第2003/017131号；国际公开WO/2008/088895，Wang等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 97：13714-13719(2000)；和Gregorevic等人，Mol.Ther.16：657-64(2008))；肌肉抑制素前肽；卵泡抑素；11型活化素可溶性受体；IGF-1；阿朴脂蛋白，例如apoA(apoA1、apoA2、apoA4、apoA-V)、apoB(apoB100、ApoB48)、apoC(apoCI、apoCII、apoCIII、apoCIV)、apoD、apoE、apoH、apoL、apo(a)；抗炎多肽，例如Ikappa B显性突变型；淀粉样蛋白β；tau；sarcospan；肌营养相关蛋白(Tinsley等人，(1996)Nature 384：349)；小型肌营养相关蛋白；凝血因子(例如因子VIII、因子IX、因子X等)；红细胞生成素；血管生长抑素；内皮生长抑素；过氧化氢酶；酪氨酸羟化酶；超氧化歧化酶；瘦素；LDL受体；脂蛋白脂肪酶；颗粒蛋白前体；鸟氨酸氨基甲酰转移酶；β-珠蛋白；α-珠蛋白；血影蛋白；α-1-抗胰蛋白酶；腺苷脱氨酶；次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶；β-葡糖脑苷脂酶；battenin；神经磷脂酶；溶酶体己糖苷酶A；支链酮酸脱氢酶；共济蛋白(frataxin)；RP65蛋白；细胞因子(例如α-干扰素、β-干扰素、γ-干扰素、白细胞介素-2、白细胞介素-4、α突触核蛋白、帕金蛋白(parkin)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、淋巴毒素等)；肽生长因子；神经营养因子和激素(例如促生长素、胰岛素、胰岛素样生长因子1和2、血小板衍生生长因子、表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、神经生长因子、神经营养因子-3和-4、脑源性神经营养因子、骨形态形成蛋白[包括RANKL和VEGF]、神经胶质衍生生长因子、转化生长因子-α和-β等)；huntingin；溶酶体酸α-葡糖苷酶；艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶；N-磺基葡糖胺磺基水解酶；α-半乳糖苷酶A；受体(例如肿瘤坏死生长因子可溶性受体)；S100A1；泛素蛋白质连接酶E3；小清蛋白(parvalbumin)；6型腺苷酸环化酶；调节钙操纵的分子(例如SERCA_2A、PP1及其片段的抑制剂1[例如WO 2006/029319和WO 2007/100465])；影响2型G蛋白偶联受体激酶敲低的分子，例如截短的组成性活化bARKct；抗炎因子，例如IRAP；抗肌肉抑制素蛋白质；天冬氨酸酰化酶；单克隆抗体(包括单链单克隆抗体；示例性Mab是

Mab)；神经肽及其片段(例如甘丙肽、神经肽Y(参见U.S.7,071,172))；血管生成抑制剂，例如Vasohibin和其他VEGF抑制剂(例如Vasohibin 2[参见WO JP2006/073052])。其他说明性异源核酸序列编码自杀基因产物(例如胸苷激酶、胞嘧啶脱氨酶、白喉毒素和肿瘤坏死因子)；增强或抑制宿主因子(例如与转录增强子或抑制子元件连接的核酸酶死亡Cas9、与转录增强子或抑制子元件连接的锌指蛋白、与转录增强子或抑制子元件连接的转录活化因子样(TAL)效应子)的转录的蛋白质；赋予对癌症疗法中所使用的药物的抗性的蛋白质；肿瘤抑制基因产物(例如p53、Rb、Wt-1)；TRAIL；FAS-配体；以及在有需要的受试者中具有治疗效果的任何其他多肽。还可使用AAV载体来递送单克隆抗体和抗体片段，例如针对肌肉抑制素的抗体或抗体片段(参见例如Fang等人，Nature Biotechnology 23：584-590(2005))。编码多肽的异源核酸序列包括编码报告多肽(例如酶)的那些序列。报告多肽是本领域已知的，并且包括(但不限于)绿色荧光蛋白、β-半乳糖苷酶、碱性磷酸酶、荧光素酶和氯霉素乙酰基转移酶基因。

任选地，异源核酸编码分泌性多肽(例如其原生状态为分泌性多肽或已例如通过与如本领域已知的分泌信号序列可操作连接而工程化为分泌性的多肽)。

或者，在一些实施方案中，异源核酸可编码反义核酸；核糖核酸酶(例如如美国专利第5,877,022号中所描述)；影响剪接体介导的/ram剪接的RNA(参见Puttaraju等人，(1999)Nature Biotech.17：246；美国专利第6,013,487号；美国专利第6,083,702号)；干扰RNA(RNAi)，包括介导基因静默的siRNA、shRNA或miRNA(参见Sharp等人，(2000)Science287：2431)；和其他非翻译RNA，例如“引导”RNA(Gorman等人，(1998)Proc.Nat.Acad.Sci.USA 95：4929；Yuan等人的美国专利第5,869,248号)；和诸如此类。示例性非翻译RNA包括：针对多种耐药性(MDR)基因产物的RNAi(例如以治疗和/或预防肿瘤和/或用于向心脏施用以预防化学疗法损伤)；针对肌肉抑制素的RNAi(例如用于杜氏肌营养不良(Duchenne muscular dystrophy))；针对VEGF的RNAi(例如以治疗和/或预防肿瘤)；针对受磷蛋白的RNAi(例如以治疗心血管疾病，参见例如Andino等人，J.Gene Med.10：132-142(2008)和Li等人，Acta Pharmacol Sin.26：51-55(2005))；受磷蛋白抑制性或显性阴性分子，例如受磷蛋白S16E(例如以治疗心血管疾病，参见例如Hoshijima等人，Nat.Med.8：864-871(2002))；腺苷激酶的RNAi(例如用于癫痫症)；和针对病原性生物体和病毒的RNAi(例如乙型和/或丙型肝炎病毒、人类免疫缺乏病毒、CMV、单纯疱疹病毒、人类乳头状瘤病毒等)。

此外，可递送引导替代性剪接的核酸序列。例如，与抗肌萎缩蛋白外显子51的5′和/或3′剪接位点互补的反义序列(或其他抑制序列)可与U1或U7小核(sn)RNA启动子结合递送以诱导该外显子的跳跃。例如，包含位于反义/抑制序列的5′端的U1或U7 snRNA启动子的DNA序列可包装并递送于所述被修饰的衣壳中。

在一些实施方案中，可递送引导基因编辑的核酸序列。例如，核酸可编码引导RNA。在一些实施方案中，引导RNA是包含crRNA序列和tracrRNA序列的单引导RNA(sgRNA)。在一些实施方案中，核酸可编码核酸酶。在一些实施方案中，核酸酶是锌指核酸酶、归巢核酸内切酶、TALN(转录活化因子样效应物核酸酶)、NgAgo(agronaute核酸内切酶)、SGN(结构引导的核酸内切酶)或RGN(RNA引导的核酸酶)或其被修饰或截短的变体。在一些实施方案中，RNA引导的核酸酶是Cas9核酸酶、Cas12(a)核酸酶(Cpf1)、Cas12b核酸酶、Cas12c核酸酶、TrpB样核酸酶、Cas13a核酸酶(C2c2)、Cas13b核酸酶或其被修饰或截短的变体。在一些实施方案中，Cas9核酸酶是从化脓性链球菌(S.pyogenes)或金黄色葡萄球菌(S.aureus)分离出的或来源于其。

在一些实施方案中，可递送引导基因敲低的核酸序列。例如，核酸序列可编码siRNA、shRNA、微小RNA或反义核酸。病毒载体还可包含与宿主染色体上的基因座共有同源性并与其重组的异源核酸。例如，可利用这种方法来校正宿主细胞中的基因缺陷。

还提供了表达例如用于疫苗接种的免疫原性多肽的病毒载体。所述核酸可编码本领域已知的任何目标免疫原，包括(但不限于)来自以下的免疫原：人类免疫缺陷病毒(HIV)、猿猴免疫缺陷病毒(SIV)、流感病毒、HIV或SIV gag蛋白、肿瘤抗原、癌症抗原、细菌抗原、病毒抗原等。

小病毒用作疫苗载体是本领域已知的(参见例如Miyamura等人，(1994)Proc.Nat.Acad.Sci USA 91：8507；Young等人的美国专利第5,916,563号、Mazzara等人的美国专利第5,905,040号、美国专利第5,882,652号、Samulski等人的美国专利第5,863,541号)。抗原可存在于小病毒衣壳中。

或者，可从引入至重组型载体基因组中的异源核酸表达抗原。在一些实施方案中，如本文所描述和/或如本领域已知的任何目标免疫原可由本文所描述的病毒载体提供。

免疫原性多肽可为适合于引发免疫反应和/或保护受试者免于感染和/或疾病(包括但不限于微生物、细菌、原虫、寄生虫、真菌和/或病毒性感染和疾病)的任何多肽。例如，免疫原性多肽可为正粘病毒免疫原(例如流感病毒免疫原，例如流感病毒血球凝集素(HA)表面蛋白或流感病毒核蛋白、或马流感病毒免疫原)或慢病毒免疫原(例如马感染性贫血病毒免疫原、猿猴免疫缺陷病毒(SIV)免疫原或人类免疫缺陷病毒(HIV)免疫原，例如HIV或SIV包封GP 160蛋白、HIV或SIV基质/衣壳蛋白、和HIV或SIV gag、pol和env基因产物)。免疫原性多肽还可为沙粒状病毒免疫原(例如拉沙热病毒(Lassa fever virus)免疫原，例如拉沙热病毒核衣壳蛋白和拉沙热病包封糖蛋白)、痘病毒免疫原(例如牛痘病毒免疫原，例如牛痘LI或L8基因产物)、黄病毒免疫原(例如黄热病病毒免疫原或日本脑炎病毒免疫原)、纤丝病毒免疫原(例如埃博拉病毒(Ebola virus)免疫原或马堡病毒(Marburg virus)免疫原，例如NP和GP基因产物)、布尼亚病毒(bunyavirus)免疫原(例如RVFV、CCHF和/或SFS病毒免疫原)或冠状病毒免疫原(例如感染性人类冠状病毒免疫原，例如人类冠状病毒包封糖蛋白、或猪传染性胃肠炎病毒免疫原、或禽类感染性支气管炎病毒免疫原)。免疫原性多肽可进一步为脊髓灰质炎免疫原、疱疹免疫原(例如CMV、EBV、HSV免疫原)、流行性腮腺炎免疫原、麻疹免疫原、风疹免疫原、白喉毒素或其他白喉免疫原、百日咳抗原、肝炎(例如甲型肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎等)免疫原和/或本领域中目前已知或后续鉴定为免疫原的任何其他疫苗免疫原。

或者，免疫原性多肽可为任何肿瘤或癌症细胞抗原。任选地，肿瘤或癌症抗原表达于癌细胞表面上。

示例性癌症和肿瘤细胞抗原描述于S.A.Rosenberg(Immunity 10：281(1991))中。其他说明性癌症和肿瘤抗原包括(但不限于)：BRCA1基因产物、BRCA2基因产物、gp100、酪氨酸酶、GAGE-1/2、BAGE、RAGE、LAGE、NY-ESO-1、CDK-4、β-连环蛋白、MUM-1、半胱天冬酶-8、KIAA0205、HPVE、SART-1、FRAME、p15、黑素瘤肿瘤抗原(Kawakami等人，(1994)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91：3515；Kawakami等人，(1994)J.Exp.Med.，180：347；Kawakami等人，(1994)Cancer Res.54：3124)、MART-1、gp100、MAGE-1、MAGE-2、MAGE-3、CEA、TRP-1、TRP-2、P-15、酪氨酸酶(Brichard等人，(1993)J Exp.Med.178：489)；HER-2/neu基因产物(美国专利第4.968.603号)、CA 125、LK26、FB5(内皮唾酸蛋白)、TAG 72、AFP、CA 19-9、NSE、DU-PAN-2、CA50、SPan-1、CA72-4、HCG、STN(唾液酸基Tn抗原)、c-erbB-2蛋白、PSA、L-CanAg、雌激素受体、乳脂球蛋白、p53肿瘤抑制蛋白(Levine，(1993)Ann.Rev.Biochem.62：623)；粘蛋白抗原(国际专利公开第WO 90/05142号)；端粒酶；核基质蛋白；前列腺酸性磷酸酶；乳头状瘤病毒抗原；和/或目前已知或后续发现与以下癌症相关的抗原：黑素瘤、腺癌瘤、胸腺瘤、淋巴瘤(例如非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin′s lymphoma)、霍奇金淋巴瘤)、肉瘤、肺癌、肝癌、结肠癌、白血病、子宫癌、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、宫颈癌、膀胱癌、肾癌、胰腺癌、脑癌和目前已知或后续鉴定的任何其他癌症或其恶性疾患或癌转移(参见例如Rosenberg，(1996)Ann.Rev.Med.47：481-91)。

作为另一个替代方案，异源核酸可编码理想地在体外、离体或体内细胞中产生的任何多肽。例如，可将病毒载体引入至培养细胞和从其分离的所表达基因产物。

本领域技术人员应理解，目标异源核酸可与适当控制序列可操作地缔合。例如，异源核酸可与表达控制元件可操作地缔合，所述表达控制元件例如转录/翻译控制信号、复制起点、聚腺苷酸化信号、内部核糖体进入位点(IRES)、启动子和/或增强子等。

此外，目标异源核酸的受调控表达可在转录后水平实现，例如通过存在或不存在选择性地阻断特定位点处的剪接活性的寡核苷酸、小分子和/或其他化合物调控不同内含子的选择性剪接(例如如WO 2006/119137中所描述)。

本领域技术人员应了解，根据所需水平和组织特异性表达，可使用各种启动子/增强子元件。根据所需表达模式，启动子/增强子可为组成性或诱导性的。启动子/增强子可为原生或外来的，并且可为天然或合成序列。外来是指转录起始区不存在于将转录起始区引入其中的野生型宿主中。

在一些实施方案中，启动子/增强子元件可为待治疗的靶细胞或受试者原生的。在一些实施方案中，启动子/增强子元件可为异源核酸序列原生的。一般选择启动子/增强子元件，使得其在目标靶细胞中起作用。此外，在一些实施方案中，启动子/增强子元件是哺乳动物启动子/增强子元件。启动子/增强子元件可为组成性或诱导性的。

诱导性表达控制元件通常在其中期望提供调控异源核酸序列所述表达的那些应用中是有利的。用于基因递送的诱导性启动子/增强子元件可为组织特异性或优选的启动子/增强子元件，并且包括肌肉特异性或优选的(包括心脏、骨骼和/或平滑肌特异性或优选的)启动子/增强子元件、神经组织特异性或优选的(包括大脑特异性或优选的)启动子/增强子元件、眼睛特异性或优选的(包括视网膜特异性和角膜特异性)启动子/增强子元件、肝特异性或优选的启动子/增强子元件、骨髓特异性或优选的启动子/增强子元件、胰腺特异性或优选的启动子/增强子元件、脾特异性或优选的启动子/增强子元件和肺特异性或优选的启动子/增强子元件。其他诱导性启动子/增强子元件包括激素诱导性和金属诱导性元件。示例性诱导性启动子/增强子元件包括(但不限于)Tet开/关元件、RU486诱导性启动子、蜕皮激素(ecdysone)诱导性启动子、雷帕霉素(rapamycin)诱导性启动子和金属硫蛋白启动子。

在其中在靶细胞中转录异源核酸序列并且随后进行翻译的一些实施方案中，用于有效翻译所插入的蛋白质编码序列通常包括特异性起始信号。这些外源性翻译控制序列(其可包括ATG起始密码子和相邻序列)可具有各种天然和合成起点。

本文所描述的病毒载体提供一种用于将异源核酸递送至广泛范围的细胞中的手段，包括分裂和非分裂细胞。可使用病毒载体将目标核酸体外递送至细胞，例如以体外产生多肽或产生用于离体基因疗法的多肽。病毒载体另外适用于将核酸递送至有需要的受试者例如以表达免疫原性或治疗性多肽或功能性RNA的方法中。以这种方式，多肽或功能性RNA可在受试者中体内产生。受试者可能需要多肽，因为受试者缺乏多肽。另外，可实践所述方法，因为在受试者中生产多肽或功能性RNA可赋予一些有益效果。

病毒载体还可用于在培养细胞或受试者中产生目标多肽或功能性RNA(例如，如结合筛选方法，使用受试者作为生物反应器以产生多肽或观测功能性RNA对受试者的影响)。

一般来说，本文所描述的病毒载体可用于递送编码多肽或功能性RNA的异源核酸，以治疗和/或预防递送治疗性多肽或功能性RNA对于其为有益的任何疾病状况。说明性疾病状况包括(但不限于)：囊肿性纤维化(囊肿性纤维化跨膜调控蛋白质)和其他肺病、甲型血友病(因子VIII)、乙型血友病(因子IX)、地中海贫血(β-珠蛋白)、贫血(红细胞生成素)和其他血液病症。阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease)(GDF；脑啡肽酶)、多发性硬化(β-干扰素)、帕金森病(Parkinson′s disease)(神经胶质细胞系源性神经营养因子[GDNF])、亨廷顿病(Huntington′s disease)(去除重复序列的RNAi)、卡纳万氏病(Canavan′s disease)、肌萎缩性侧索硬化、癫痫症(甘丙肽、神经营养因子)和其他神经病症、癌症(内皮生长抑素、血管生长抑素、TRAIL、FAS-配体、细胞因子(包括干扰素；RNAi(包括针对VEGF或多种耐药性基因产物的RNAi)、mir-26a[例如对于肝细胞癌])、糖尿病(胰岛素)、肌营养不良(包括杜氏(Duchenne)(抗肌萎缩蛋白、小型抗肌萎缩蛋白、胰岛素样生长因子I、肌聚糖[例如α、β、γ]、针对肌肉抑制性肌肉抑制素前肽的RNAi、卵泡抑素、II型活化素可溶性受体、抗炎多肽(例如Ikappa B显性突变型)、sarcospan、肌营养相关蛋白、小型肌营养相关蛋白、用以诱导外显子跳跃的针对抗肌萎缩蛋白基因中的剪接接合的反义链或RNAi[参见例如WO/2003/095647]、用以诱导外显子跳跃的针对U7 snRNA的反义链[参见例如WO/2006/021724]、和针对肌肉抑制素或肌肉抑制素前肽的抗体或抗体片段)和Becker型营养不良、肌强直性营养不良1或2、面肩肱型肌营养不良(FSHD)、戈谢病(葡糖脑苷脂酶)、贺勒病(Hurler′sdisease)(a-L-艾杜糖醛酸酶)、腺苷脱氨酶缺乏症(腺苷脱氨酶)、肝糖贮积症(例如法布里病[a-半乳糖苷酶]和庞培氏病[溶酶体酸性α-葡糖苷酶])和其他代谢障碍、先天性肺气肿(α-1-抗胰蛋白酶)、莱尼综合征(Lesch-Nyhan Syndrome)(次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶)、尼曼-匹克病(Niemann-Pick disease)(神经磷脂酶)、泰-萨克斯病(Tay-Sachsdisease)(溶酶体己糖苷酶A)、额颞叶型痴呆、枫糖尿病(Maple Syrup Urine Disease)(支链酮酸脱氢酶)、视网膜退行性疾病(和其他眼睛和视网膜疾病；例如对于黄斑变性，PDGF；和/或vasohibin或VEGF的其他抑制剂或其他血管生成抑制剂，以治疗/预防视网膜病症，例如在I型糖尿病中)、实体器官疾病，所述实体器官例如大脑(包括帕金森病[GDNF]、星形细胞瘤[内皮生长抑素、血管生长抑素和/或针对VEGF的RNAi]、神经胶母细胞瘤[内皮生长抑素、血管生长抑素和/或针对VEGF的RNAi])、肝脏、肾脏、心脏(包括充血性心力衰竭或外周动脉疾病(PAD))(例如通过递送蛋白质磷酸酶抑制剂I(I-1)及其片段(例如IlC)、serca2a、调控受磷蛋白基因的锌指蛋白、Barkct、[32-肾上腺素能受体、2-肾上腺素能受体激酶(BARK)、磷酸肌醇-3激酶(PI3激酶)、S100A1、小清蛋白、6型腺苷酸环化酶、影响2型G蛋白偶联受体激酶敲低的分子(例如截短的组成性活化bARKct；calsarcin、针对受磷蛋白的RNAi；受磷蛋白抑制性或显性阴性分子，例如受磷蛋白S16E等)、关节炎(胰岛素样生长因子)、接合障碍(胰岛素样生长因子1和/或2)、内膜增生(例如通过递送enos、inos)、提高心脏移植存活率(超氧化歧化酶)、AIDS(可溶性CD4)、肌肉萎缩(胰岛素样生长因子I)、肾脏缺陷(红细胞生成素)、贫血(红细胞生成素)、关节炎(抗炎因子，例如I RAP和TNFa可溶性受体)、肝炎(a-干扰素)、LDL受体缺乏(LDL受体)、高氨血症(鸟氨酸氨基甲酰转移酶)、克拉伯病(Krabbe′s disease)(半乳糖脑苷脂酶)、巴腾病(Batten′s disease)、脊椎大脑共济失调(包括SCA1、SCA2和SCA3)、苯酮尿症(苯丙氨酸羟化酶)、自身免疫疾病等。本文公开的组合物和方法可进一步在器官移植之后使用，以提高移植成功率和/或减少器官移植或辅助疗法的不良副作用(例如通过施用免疫抑制剂或抑制性核酸以阻断细胞因子产生)。作为另一个实例，骨形态形成蛋白(包括BNP 2、7等，RANKL和/或VEGF)可与同种异体骨移植物一起施用，例如在癌症患者的骨折或手术切除后。

在一些实施方案中，可使用本文所描述的病毒载体来递送编码多肽或功能性RNA的异源核酸，以治疗和/或预防肝疾病或病症。肝疾病或病症可为例如原发性胆汁性肝硬化、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪变性肝炎(NASH)、自身免疫肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎、酒精性肝疾病、纤维化、黄疸、原发性硬化性胆管炎(PSC)、布加综合征(Budd-Chiari syndrome)、血色素沉着症、威尔森氏病(Wilson′s disease)、酒精性纤维化、非酒精性纤维化、肝脂肪变性、吉尔伯特氏综合征(Gilbert′s syndrome)、胆道闭锁、α-1-抗胰蛋白酶缺乏症、艾欧吉勒综合征(alagille syndrome)、进展性家族性肝内胆汁淤积、乙型血友病、遗传性血管性水肿(HAE)、纯合家族性高胆固醇血症(HoFH)、杂合家族性高胆固醇血症(HeFH)、冯吉尔克氏病(Von Gierke′s Disease，GSD I)、甲型血友病、甲基丙二酸酸血症、丙酸酸血症、高胱氨酸尿、苯酮尿症(PKU)、1型酪氨酸血症、精氨酸酶1缺乏症、精氨丁二酸裂解酶缺乏症、氨甲酰基-磷酸合成酶1缺乏症、1型瓜氨酸血症、希特林蛋白(Citrin)缺乏症、1型克里格勒-纳贾尔综合征(Crigler-Najjar Syndrome)、胱氨酸症、法布里病、肝糖贮积症1b、LPL缺乏症、N-乙酰谷氨酸合成酶缺乏症、鸟氨酸氨基甲酰转移酶缺乏症、鸟氨酸移位酶缺乏症、1型原发性高草酸盐尿症或ADA SCID。

本文所描述的组合物和方法还可用于产生诱导性多能干细胞(iPS)。例如，本文所描述的病毒载体可用于将干细胞相关核酸递送至非多能细胞中，所述非多能细胞例如成年成纤维细胞、皮肤细胞、肝细胞、肾细胞、脂肪组织细胞、心脏细胞、神经细胞、上皮细胞、内皮细胞等。

编码与干细胞相关的因子的核酸是本领域已知的。此类与干细胞和多能性相关的因子的非限制性实例包括Oct-3/4、SOX家族(例如SOX 1、SOX2、SOX3和/或SOX 15)、Klf家族(例如Klfl、KHZ Klf4和/或Klf5)、Myc家族(例如C-myc、L-myc和/或N-myc)、NANOG和/或LIN28。

还可实践本文所描述的方法以治疗和/或预防代谢病症，例如糖尿病(例如胰岛素)、血友病(例如因子IX或因子VIII)；溶酶体贮积症，例如粘多糖贮积症(例如斯利综合征[β-葡萄糖醛酸苷酶]、贺勒综合征[α-L-艾杜糖苷]、沙伊综合征[α-L-艾杜糖苷]、贺勒-沙伊综合征[α-L-艾杜糖苷]、亨特氏综合征[艾杜糖醛酸硫酸酯酶]、圣菲利波综合征A[乙酰肝素硫酸酰胺酶]、B[N-乙酰基氨基葡萄糖苷酶]、C[乙酰基-CoA：α-氨基葡糖苷乙酰基转移酶]、D[N-乙酰基葡糖胺6-硫酸酯酶]、莫奎综合征A[半乳糖-硫酸硫酸酯酶]、B[β-半乳糖]、马洛托-拉米综合征[N-乙酰基半乳糖胺-4-硫酸酯酶]等)、法布里病(α-半乳糖苷酶)、戈谢氏病(葡糖脑苷脂酶)或肝糖贮积症(例如庞培氏病；溶酶体酸α-葡糖苷酶)。

基因转移对于了解疾病状况以及为疾病状况提供疗法具有实质性用途。存在其中已知缺陷型基因并且已克隆于其中的多种遗传性疾病。一般来说，以上疾病状况属于两个类别：缺乏状态，通常酶，其一般以隐性方式遗传；和不平衡状态，其可涉及调控或结构蛋白并且其通常以显性方式遗传。对于缺乏状态疾病，可使用基因转移来将正常基因带至受感染组织中以供替换疗法，以及以使用反义突变创建所述疾病的动物模型。对于不平衡疾病状况，可使用基因转移以在模型系统中创建疾病状况，随后可用于抵消疾病状况。因此，如本文所描述的病毒载体容许治疗和/或预防遗传性疾病。

本文所描述的病毒载体还可用于向体外或体内细胞提供功能性RNA。功能性RNA可为例如非编码RNA。在一些实施方案中，细胞中功能性RNA的表达可减轻细胞表达特定靶蛋白。因此，可施用功能性RNA以降低有需要的受试者中的特定蛋白质的表达。在一些实施方案中，细胞中的功能性RNA的表达可增加细胞表达特定靶蛋白。因此，可施用功能性RNA，以增加有需要的受试者中的特定蛋白质的表达。在一些实施方案中，功能性RNA的表达可调控细胞中的特定靶RNA的剪接。因此，可施用功能性RNA以调控有需要的受试者中的剪接特定RNA。在一些实施方案中，细胞中的功能性RNA的表达可调控细胞的特定靶蛋白的功能。因此，可施用功能性RNA以调控有需要的受试者中的特定蛋白质的功能。还可向体外细胞施用功能性RNA，以调控基因表达和/或细胞生理学，例如以优化细胞或组织培养系统或筛选方法中。

另外，如本文所描述的病毒载体可用于诊断性和筛选方法中，由此目标核酸在细胞培养系统或替代地转基因动物模型中短暂或稳定地表达。

病毒载体还可用于多种非治疗目的，包括(但不限于)在如本领域技术人员将显而易见的评估基因靶向、清除、转录、翻译等的方案中使用。病毒载体还可用于评价安全性(扩散、毒性、免疫原性等)的目的。此类数据例如由美国食品与药物管理局(the UnitedStates Food and Drug Administration)视为在评价临床功效前的监管批准方法的一部分。

在一些实施方案中，病毒载体可用于在受试者中产生免疫反应。根据这个实施方案，可向受试者施用包含编码免疫原性多肽的异源核酸序列的病毒载体，并且受试者建立针对免疫原性多肽的自动免疫反应。免疫原性多肽如上文所描述。在一些实施方案中，引起保护性免疫反应。

或者，可向离体细胞施用病毒载体，并且向受试者施用改变的细胞。将包含异源核酸的病毒载体引入至细胞中，并且向受试者施用细胞，其中可表达编码免疫原的异源核酸并且所述异源核酸在受试者中诱导针对免疫原的免疫反应。在一些实施方案中，细胞是抗原呈递细胞(例如树突状细胞)。

“自动免疫反应”或“自动免疫性”的特征在于“在遭遇免疫原之后宿主组织和细胞的参与。其涉及淋巴网组织中的免疫胜任细胞的分化和增殖，此引起抗体的合成或细胞介导的反应性的出现或两者”。Herbert B.Herscowitz，Immunophysiology：Cell Functionand Cellular Interactions in Antibody Formation，IMMUNOLOGY：BASIC PROCESSES117(Joseph A.Bellanti编，1985)。替代地陈述，在通过感染或通过疫苗接种暴露于免疫原之后，宿主建立自动免疫反应。自动免疫性可与被动免疫性形成对比，所述被动免疫性经由将预先形成物质(抗体、转移因子、胸腺移植物、白细胞介素-2)从主动免疫接种宿主转移至非免疫宿主获得。

如本文所用，“保护性”免疫反应或“保护性”免疫性指示免疫反应赋予受试者一些益处，这是因为其预防疾病发生或降低疾病发生率。或者，保护性免疫反应或保护性免疫可适用于治疗和/或预防疾病，特别是癌症或肿瘤(例如通过预防癌症或肿瘤形成，通过引起癌症或肿瘤消退和/或通过预防癌转移和/或通过预防转移性结节的生长)。保护性效果可为完全或部分的，只要治疗益处胜过其任何缺点即可。

在一些实施方案中，可以免疫原性有效量施用包含异源核酸的病毒载体或细胞，如下文所描述。

在一些实施方案中，可通过施用表达一种或多种癌细胞抗原(或免疫学上类似分子)或产生针对癌细胞的免疫反应的任何其他免疫原的病毒载体，施用病毒载体用于癌症免疫疗法。例如，通过施用包含编码癌细胞抗原的异源核酸的病毒载体，可在受试者中产生针对癌细胞抗原的免疫反应，例如以治疗患有癌症的患者和/或以预防在受试者中发展癌症。可在体内或通过使用如本文所描述的离体方法，向受试者施用病毒载体。

或者，癌症抗原可作为病毒衣壳的一部分表达或与病毒衣壳(例如如上文所描述)相缔合。

作为另一个替代方案，可施用本领域已知的任何其他治疗性核酸(例如RNAi)或多肽(例如细胞因子)以治疗和/或预防癌症。

如本文所用，术语“癌症”涵盖肿瘤形成癌症。同样，术语“癌组织”涵盖肿瘤。“癌细胞抗原”涵盖肿瘤抗原。

术语“癌症”具有其本领域中所理解含义，例如具有扩散至身体远距离部位(即，转移)的潜能的不受控制生长的组织。示例性癌症包括(但不限于)黑素瘤、腺癌瘤、胸腺瘤、淋巴瘤(例如非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤)、肉瘤、肺癌、肝癌、结肠癌、白血病、子宫癌、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、宫颈癌、膀胱癌、肾癌、胰腺癌、脑癌和目前已知或后续鉴定的任何其他癌症或恶性疾患。在一些实施方案中，提供治疗和/或预防肿瘤形成癌症的方法。

术语“肿瘤”在本领域中也理解为例如多细胞生物体内的异常未分化细胞块。肿瘤可为恶性或良性的。在一些实施方案中，本文所公开的方法用于预防和治疗恶性肿瘤。

术语“治疗癌症(treating cancer)”、“癌症治疗(treatment of cancer)”和等效术语是指癌症的严重程度减轻或至少部分地消除，和/或疾病进展减缓和/或受到控制，和/或使疾病稳定。在一些实施方案中，这些术语指示预防或降低或至少部分地消除癌症的癌转移，和/或预防或降低或至少部分地消除转移性结节的生长。

术语“癌症预防(prevention of cancer)”或“预防癌症(preventing cancer)”和等效术语是指所述方法至少部分地消除癌症或降低癌症的发生率和/或严重程度和/或延迟癌症发作。替代地陈述，可降低受试者中癌症发作的可能性或机率和/或延迟癌症发作。

在一些实施方案中，可从患有癌症的受试者移出细胞，并且使细胞与如本文所描述的表达癌细胞抗原的病毒载体接触。随后，向受试者施用修饰细胞，由此引起针对癌细胞抗原的免疫反应。不能体内建立足够免疫反应(即，不能产生足够量的增强抗体)的免疫功能不全受试者，可宜采用这种方法。

本领域已知，免疫反应可通过免疫调节细胞因子(例如α-干扰素、β-干扰素、γ-干扰素、ω-干扰素、τ-干扰素、白细胞介素-1-α、白细胞介素-1β、白细胞介素-2、白细胞介素-3、白细胞介素-4、白细胞介素5、白细胞介素-6、白细胞介素-7、白细胞介素-8、白细胞介素-9、白细胞介素-10、白细胞介素-11、白细胞介素-12、白细胞介素-13、白细胞介素-14、白细胞介素-18、B细胞生长因子、CD40配体、肿瘤坏死因子-α、肿瘤坏死因子-β、单核细胞化学引诱蛋白-1、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和淋巴毒素)增强。因此，可结合病毒载体向受试者施用免疫调节细胞因子(优选地，CTL诱导性细胞因子)。细胞因子可通过本领域已知的任何方法来施用。可向受试者施用外源性细胞因子，或替代地可使用合适载体将编码细胞因子的核酸递送至受试者并且体内产生细胞因子。

受试者、药物制剂和施用模式

如本文所描述的病毒载体和衣壳可用于兽医学和医学应用两者中。合适的受试者包括禽类和哺乳动物两者。如本文所用，术语“禽类”包括(但不限于)鸡、鸭、鹅、鹌鹑、火鸡、野鸡、鹦鹉、长尾鹦鹉等。如本文所用，术语“哺乳动物”包括(但不限于)人类、非人类灵长类动物、牛科动物、绵羊、山羊、马科动物、猫科动物、犬科动物、兔类动物等。人类受试者包括新生儿、婴儿、青少年、成年和老龄受试者。

在一些实施方案中，受试者“需要”本文所描述的方法。

在一些实施方案中，提供一种药物组合物，所述药物组合物包含在药学上可接受的载体中的病毒载体和/或衣壳和/或衣壳蛋白和/或病毒粒子，和任选地，其他药剂、医药剂、稳定剂、缓冲剂、载体、佐剂、稀释剂等。对于注射，载体将通常是液体。对于其他施用方法，载体可为固体或液体。对于吸入施用，载体将是可吸入的，并且任选地可呈固体或液体颗粒形式。

“药学上可接受”意指并非毒性或在其他方面不合需要的材料，即可向受试者施用所述材料而不会引起任何不合需要的生物效应。

本文还提供了体外将核酸转移至细胞的方法。可根据适合于特定靶细胞的标准转导方法，以适当感染倍率将病毒载体引入至细胞中。根据靶细胞类型和数目以及特定病毒载体，施用病毒载体的滴度可变化，并且可在无需过度实验的情况下由本领域技术人员确定。在一些实施方案中，将至少约10³感染单位，任选地至少约10⁵感染单位引入至细胞中。

将病毒载体引入其中的细胞可为任何类型，包括(但不限于)神经细胞(包括外周和中枢神经系统的细胞，特别是，脑细胞如神经元和寡树突神经胶质细胞)、肺细胞、眼睛细胞(包括视网膜细胞、视网膜色素上皮和角膜细胞)、上皮细胞(例如肠道和呼吸道上皮细胞)、肌细胞(例如骨骼肌细胞、心肌细胞、平滑肌细胞和/或隔膜肌细胞)、树突状细胞、胰腺细胞(包括胰岛细胞)、肝细胞、心肌细胞、骨骼细胞(例如骨髓干细胞)、造血干细胞、脾细胞、角质细胞、成纤维细胞、内皮细胞、前列腺细胞、生殖细胞等。在一些实施方案中，细胞可为任何祖细胞。作为另一种可能性，细胞可为干细胞(例如神经干细胞、肝干细胞)。作为又另一个替代方案，细胞可为癌症或肿瘤细胞。此外，细胞可来自任何来源物种，如上文所指示。

出于向受试者施用修饰细胞的目的，可将病毒载体引入至体外细胞中。在一些实施方案中，已从受试者移出细胞，将病毒载体引入其中，并且随后将细胞施用回受试者中。从受试者移出细胞以用于离体操纵，随后引入回受试者中的方法是本领域已知的(参见例如美国专利第5,399,346号)。或者，可将重组病毒载体引入至来自供体受试者的细胞中、引入至培养细胞中或引入至来自任何其他合适来源的细胞中，并且向有需要的受试者(即，“受体”受试者)施用所述细胞。

适合离体核酸递送的细胞如上文所描述。向受试者施用细胞的剂量将根据以下而变化：受试者的年龄、疾患和物种，细胞类型，由细胞所表达的核酸，施用模式等。通常，每剂量将施用含至少约10²至约10⁸个细胞或至少约10³至约10⁶个细胞的药学上可接受的载体。在一些实施方案中，与药物载体组合，以治疗有效量向受试者施用已用病毒载体转导的细胞。

在一些实施方案中，将病毒载体引入至细胞中，并且向受试者施用所述细胞以引起针对所递送多肽(例如表达为转基因或表达于衣壳中)的免疫原性反应。通常，施用与药学上可接受的载体组合的表达免疫原性有效量的多肽的一定量细胞。“免疫原性有效量”是所表达多肽足以在向其施用药物制剂的受试者中诱发针对多肽的自动免疫反应的量。在一些实施方案中，所述剂量足以产生保护性免疫反应(如上文所定义)。所赋予的保护程度不一定是完全或永久性的，只要施用免疫原性多肽的益处胜过其任何缺点即可。

因此，在一些实施方案中，将核酸施用至细胞的方法包括使细胞与如本文所描述的病毒载体、病毒粒子和/或组合物接触。

本文还提供了一种向受试者施用如本文所描述的病毒载体、病毒粒子和/或病毒衣壳的方法。在一些实施方案中，向受试者递送核酸的方法包括向受试者施用如本文所描述的病毒粒子、病毒载体和/或组合物。向有需要的人类受试者或动物施用病毒载体、病毒粒子和/或衣壳可通过本领域已知的任何手段。任选地，以治疗有效剂量递送含病毒载体、病毒粒子和/或衣壳的药学上可接受的载体。在一些实施方案中，递送治疗有效量的病毒载体、病毒粒子和/或衣壳。

可进一步施用本文所描述的病毒载体和/或衣壳，以引起免疫原性反应(例如作为疫苗)。通常，免疫原性组合物包含免疫原性有效量的病毒载体和/或衣壳以及药学上可接受的载体。任选地，剂量足以产生保护性免疫反应(如上文所定义)。所赋予的保护程度不一定是完全或永久性的，只要施用免疫原性多肽的益处胜过其任何缺点即可。受试者和免疫原如上文所描述。

向受试者施用病毒载体和/或衣壳的剂量取决于施用模式、待治疗和/或预防的疾病或疾患、个别受试者的疾患、特定病毒载体或衣壳和所递送的核酸等，并且可以常规方式确定。用于实现治疗效果的示例性剂量是至少约10⁵、约10⁶、约10⁷、约10⁸、约10⁹、约10¹⁰、约10¹¹、约10¹²、约10¹³、约10¹⁴或约10¹⁵转导单位，任选地约10⁸-10¹³转导单位的滴度。在一些实施方案中，AAV的剂量可为约2.0×10¹³vg/kg受试者体重至约4.0×10¹³vg/kg受试者体重，例如约2.0×10¹³vg/kg、约2.1×10¹³vg/kg、约2.2×10¹³vg/kg、约2.3×10¹³vg/kg、约2.4×10¹³vg/kg、约2.5×10¹³vg/kg、约2.6×10¹³vg/kg、约2.7×10¹³vg/kg、约2.8×10¹³vg/kg、约2.9×10¹³vg/kg、约3.0×10¹³vg/kg、约3.1×10¹³vg/kg、约3.2×10¹³vg/kg、约3.3×10¹³vg/kg、约3.4×10¹³vg/kg、约3.5×10¹³vg/kg、约3.6×10¹³vg/kg、约3.7×10¹³vg/kg、约3.8×10¹³vg/kg、约3.9×10¹³vg/kg或约4.0×10¹³vg/kg。在一些实施方案中，AAV的剂量可为约2×10¹³vg至约4.0×10¹³vg，例如约2.0×10¹³vg、约2.1×10¹³vg、约2.2×10¹³vg、约2.3×10¹³vg、约2.4×10¹³vg、约2.5×10¹³vg、约2.6×10¹³vg、约2.7×10¹³vg、约2.8×10¹³vg、约2.9×10¹³vg、约3.0×10¹³vg、约3.1×10¹³vg、约3.2×10¹³vg、约3.3×10¹³vg、约3.4×10¹³vg、约3.5×10¹³vg、约3.6×10¹³vg、约3.7×10¹³vg、约3.8×10¹³vg、约3.9×10¹³vg或约4.0×10¹³vg。

在一些实施方案中，可采用多于一次施用(例如两次、三次、四次或更多次施用)来实现在各种时间间隔(例如每天一次、每周一次、每月一次、每年一次等)时段内所需程度的基因表达。

示例性施用模式包括经口、经直肠、经粘膜、鼻内、吸入(例如经由气雾剂)、经颊(例如舌下)、经阴道、鞘内、眼内、透皮、子宫内(或在卵内)、肠胃外(例如静脉内、皮下、皮内、肌肉内[包括向骨骼、隔膜和/或心肌施用]、皮内、胸膜内、脑内和关节内)、局部(例如至皮肤和粘膜表面，包括气道表面和透皮施用)、淋巴管内等，以及引导组织或器官注入(例如至肝脏、骨胳肌、心肌、隔膜肌或大脑)。还可施用至肿瘤(例如在肿瘤或淋巴结中或附近)。在任何既定情况下，最合适的途径将取决于所治疗和/或预防的疾患的性质和严重程度以及正使用的特定载体的性质。

向骨骼肌的施用包括(但不限于)向肢体(例如上臂、下臂、大腿和/或小腿)、背部、颈部、头部(例如舌)、胸部、腹部、骨盆/会阴和/或趾中的骨骼肌施用。合适的骨骼肌包括(但不限于)小趾外展肌(手中)、小趾外展肌(脚中)、拇趾外展肌、第五趾趾骨外展肌、外展拇短肌、外展拇长肌、内收短肌、内收拇趾肌、内收长肌、内收大肌、内收拇肌、肘肌、前斜角肌、膝关节肌、肱二头肌、股二头肌、肱肌、肱桡肌、颊肌、喙肱肌、皱眉肌、三角肌、降口角肌、降下唇肌、二腹肌、背侧骨间肌(手中)、背侧骨间肌(脚中)、桡侧伸腕短肌、桡侧伸腕长肌、尺侧伸腕肌、伸小趾肌、伸趾肌、伸趾短肌、伸趾长肌、伸拇趾短肌、伸拇趾长肌、伸食指肌、伸拇短肌、伸拇长肌、桡侧腕屈肌、尺侧腕屈肌、屈小趾短肌(手中)、屈小趾短肌(脚中)、屈趾短肌、屈趾长肌、屈趾深肌、屈趾浅肌、屈拇趾短肌、屈拇趾长肌、屈拇短肌、屈拇长肌、额肌、髂肋肌、颏舌骨肌、臀大肌、臀中肌、臀小肌、股薄肌、项髂肋肌、腰髂肋肌、胸髂肋肌、髂肌、孖下肌、下斜肌、下直肌、棘下肌、棘间肌、横突间肌、翼外肌、外直肌、背阔肌、口角提肌、上唇提肌、上唇鼻翼提肌、上睑提肌、肩胛骨提肌、长旋肌、头最长肌、项最长肌、胸最长肌、头长肌、颈长肌、蚓状肌(手中)、蚓状肌(脚中)、嚼肌、翼内肌、内直肌、中斜角肌、多裂肌、下颌舌骨肌、头下斜肌、头上斜肌、闭孔外肌、闭孔内肌、枕肌、肩舌肌、小趾对掌肌、拇对掌肌、眼轮匝肌、口轮匝肌、手掌骨间肌、掌短肌、掌长肌、耻骨肌、胸大肌、胸小肌、腓骨短肌、腓骨长肌、第三腓骨肌、梨状肌、足底骨间肌、跖肌、阔肌、腘肌、后斜角肌、旋前方肌、旋前圆肌、腰大肌、股方肌、足底方肌、头前直肌、头外侧直肌、大头后直肌、小头后直肌、股直肌、大菱形肌、小菱形肌、笑肌、缝匠肌、小斜角肌、半膜肌、头半棘肌、项半棘肌、胸半棘肌、半腱肌、锯前肌、短旋肌、比目鱼肌、头棘肌、项棘肌、胸棘肌、头夹肌、项夹肌、胸锁乳头肌、胸舌肌、胸盾肌、茎突舌骨肌、锁骨下肌、肩胛下肌、孖上肌、上斜肌、上直肌、旋后肌、棘上肌、颞肌、阔筋膜张肌、大圆肌、小圆肌、胸肌(thoracis)、盾舌肌、胫前肌、胫后肌、斜方肌、肱三头肌、股中肌、股外肌、股内肌、大颧肌和小颧肌，以及如本领域已知的任何其他合适的骨骼肌。

病毒载体和/或衣壳可通过静脉内施用、动脉内施用、腹膜内施用、肢体灌注(任选地，腿和/或手臂的肢体隔离灌注；参见例如Arruda等人，(2005)Blood 105：3458-3464)和/或直接肌肉内注射来递送至骨骼肌。在一些实施方案中，通过肢体灌注、任选地肢体隔离灌注(例如通过静脉内或关节内施用)，向受试者(例如患有肌营养不良如杜氏肌营养不良(DMD)或肢带肌营养不良(LGMD)的受试者)的肢体(手臂和/或腿)，施用病毒载体和/或衣壳。在一些实施方案中，可宜在不采用“流体动力学”技术的情况下施用病毒载体和/或衣壳。现有技术载体的组织递送(例如至肌肉)常常通过流体动力学技术(例如以大容量进行的静脉内/静脉内施用)增强，所述流体动力学技术增加血管中的压力并促进载体穿过内皮细胞屏障的能力。在一些实施方案中，可在不存在流体动力学技术下施用病毒载体和/或衣壳，所述流体动力学技术例如高容量输注和/或高血管内压力(例如大于正常收缩压，例如相比于正常收缩压，血管内压力增加小于或等于5％、10％、15％、20％、25％)。此类方法可降低或避免与流体动力学技术相关的副作用，例如水肿、神经损伤和/或区室综合征。向心肌施用包括向左心房、右心房、左心室、右心室和/或隔膜施用。可通过静脉内施用、动脉内施用(例如主动脉内施用)、直接心脏注射(例如至左心房、右心房、左心室、右心室中)和/或冠状动脉灌注，将病毒载体和/或衣壳递送至心肌。

向隔膜肌施用可通过任何合适的方法，包括静脉内施用、动脉内施用和/或腹膜内施用。

还可通过递送包含病毒载体和/或衣壳的储槽来实现递送至靶组织。在一些实施方案中，包含病毒载体和/或衣壳的储槽被植入骨骼肌、心肌和/或隔膜肌组织中，或者可使组织与包含病毒载体和/或衣壳的膜或其他基质接触。此类可植入基质或底物描述于美国专利第7,201,898号中。

在一些实施方案中，向骨骼肌、隔膜肌和/或心肌施用相应病毒载体和/或病毒衣壳(例如以治疗和/或预防肌营养不良、心脏病[例如PAD或充血性心力衰竭])。

在一些实施方案中，使用本文所描述的组合物和方法来治疗和/或预防骨骼肌、心肌和/或隔膜肌的疾病或病症。肌肉的疾病或病症可为例如肌营养不良、肌病变、运动神经元疾病和心肌病变。肌肉的疾病或病症可为例如抗肌萎缩蛋白病、杜氏肌营养不良、Becker型肌营养不良、肌强直性营养不良(例如肌强直性营养不良1和2)、面肩肱型肌营养不良(FDHD)、埃默里-德赖弗斯肌营养不良(Eimery-Dreifuss muscular dystrophy)、肢带疾病、面肩肱型肌营养不良、眼咽肌营养不良、远程肌营养不良、先天性肌营养不良、幼年型黄斑变性、中央核肌病变、中央核心肌病变和包涵体肌炎。

在一些实施方案中，提供了一种治疗和/或预防有需要的受试者的肌营养不良的方法，所述方法包括：向哺乳动物受试者施用治疗或预防有效量的病毒载体，其中所述病毒载体包含编码抗肌萎缩蛋白、小型抗肌萎缩蛋白、微型抗肌萎缩蛋白、肌肉抑制素前肽、卵泡抑素、II型活化素可溶性受体、IGF-1、抗炎多肽(例如Ikappa B显性突变型、sarcospan、肌营养相关蛋白、微型抗肌萎缩蛋白、Iaminin-a2、α-肌聚糖、β-肌聚糖、γ-肌聚糖、δ-肌聚糖、IGF-1、针对肌肉抑制素或肌肉抑制素前肽的抗体或抗体片段、和/或针对肌肉抑制素的RNAi)的异源核酸。在一些实施方案中，可向骨骼肌、隔膜肌和/或心肌施用病毒载体，如本文其他地方所描述。

或者，可实践本文所描述的方法以将核酸递送至骨骼肌、心肌或隔膜肌，所述核酸用作用于生产通常在血液中循环的多肽(例如酶)或功能性RNA(例如RNAi、微小RNA、反义RNA)、或用于全身递送至其他组织以治疗和/或预防病症(例如代谢病症，例如糖尿病[例如胰岛素]、血友病[例如因子IX或因子Vlll]、粘多糖贮积症[例如斯利综合征、贺勒综合征、沙伊综合征、贺勒-沙伊综合征、亨特氏综合征、圣菲利波综合征A、B、C、D、莫奎综合征、马洛托-拉米综合征等]或溶酶体贮积症(例如戈谢氏病[葡糖脑苷脂酶]或法布里病[a-半乳糖苷酶A])或肝糖贮积症(例如庞培氏病[溶酶体酸性α葡萄糖苷酶]))的平台。本文中描述其他适合用于治疗和/或预防代谢障碍的蛋白质。使用肌肉作为表达目标核酸的平台在美国专利公开US 2002/0192189中描述。

在一些实施方案中，治疗和/或预防有需要的受试者的代谢病症的方法包括向受试者的骨骼肌施用治疗或预防有效量的病毒载体，其中病毒载体包含编码多肽的异源核酸，其中代谢病症是多肽缺乏和/或缺陷的结果。在本文中描述说明性代谢障碍和编码多肽的异源核酸。任选地，多肽是分泌性多肽(例如其原生状态是分泌性多肽或已例如通过与如本领域已知的分泌信号序列可操作缔合而被工程化为分泌性的多肽)。不受任何特定理论限制，根据这个实施方案，向骨骼肌施用可引起分泌多肽至全身循环中并递送至靶组织。本文更详细地描述将病毒载体递送至骨骼肌的方法。

还可实践本文所描述的方法以产生用于全身递送的非编码RNA，例如反义RNA、RNAi或其他功能性RNA(例如核糖核酸酶)。

在一些实施方案中，治疗和/或预防有需要的受试者的先天性心力衰竭或PAD的方法包括向哺乳动物受试者施用治疗或预防有效量的病毒载体，其中病毒载体包含编码例如以下的异源核酸：肌质内质网Ca²⁺-ATP酶(SERCA2a)、血管生成因子、磷酸酶抑制剂I(I-1)及其片段(例如I1C)、针对受磷蛋白的RNAi；受磷蛋白抑制性或显性-阴性分子，例如受磷蛋白S16E、调控受磷蛋白基因的锌指蛋白、β-2-肾上腺素能受体、β-2-肾上腺素能受体激酶(BARK)、PI3激酶、calsarcan、β-肾上腺素能受体激酶抑制剂(PARKct)、蛋白质磷酸酶1的抑制剂1及其片段(例如I1C)、S100A1、小清蛋白、6型腺苷酸环化酶、影响2型G蛋白偶联受体激酶敲低的分子(例如截短的组成性活化bARKct)、Pim-1、PGC-Iα、SOD-1、SOD-2、EC-SOD、激肽释放酶、HIF、胸腺素-p4、mir-1、mir-133、mir-206、mir-208和/或mir-26a。

可注射剂可以常规形式制备，呈液体溶液或悬浮液形式，适合于在注射前在液体中形成溶液或悬浮液的固体形式，或呈乳液形式。或者，可局部而非全身性方式，例如以储槽或持续释放制剂形式施用病毒载体和/或病毒衣壳。此外，可粘附于可以手术方式植入的基质来递送病毒载体和/或病毒衣壳(例如如美国专利公开第US-2004-0013645-A1号中所描述)。

可通过任何合适的手段，任选地通过施用包含受试者吸入的病毒载体和/或病毒衣壳的可吸入粒子的气雾剂悬浮液，向受试者的肺施用本文所公开的病毒载体和/或病毒衣壳。可吸入粒子可为液体或固体。包含病毒载体和/或病毒衣壳的液体粒子气雾剂可通过任何合适手段产生，例如用如本领域技术人员已知的压力驱动的气雾剂喷雾器或超声喷雾器。参见例如美国专利第4,501,729号。包含病毒载体和/或衣壳的固体粒子气雾剂可同样用任何固体粒子药剂气雾剂产生器通过制药技术中已知的技术产生。

可向CNS组织(例如大脑、眼睛)施用病毒载体和病毒衣壳，并且可有利地产生比将在不存在本文所描述的组合物和方法下所观测到的更广泛的病毒载体或衣壳分布。

在一些实施方案中，可施用本文所描述的递送载体以治疗CNS疾病，包括遗传病症、神经变性病症、精神病症和肿瘤。说明性CNS疾病包括(但不限于)：肾上腺脊髓神经病(AMN)、阿尔茨海默病、天使综合征(Angelman Syndrome)、额颞叶型痴呆、帕金森病、亨廷顿病、脆性X综合征、卡纳万病、莱氏病(Leigh′s disease)、雷夫苏姆病(Refsum disease)、妥瑞综合征(Tourette syndrome)、原发性侧索硬化、肌萎缩性侧索硬化、进行性肌肉萎缩、匹克病(Pick′s disease)、肌营养不良、多发性硬化、重症肌无力、宾斯万格氏病(Binswanger′s disease)、归因于脊髓或头部损伤的创伤、泰-萨克斯病(GM2神经节苷脂贮积症)、莱尼病(Lesch-Nyhan disease)、MC4R肥胖症、异染性脑白质营养不良(MLD)、MPS I(贺勒/谢氏)、MPS IIIA(圣菲利波A)、尼曼匹克C1、雷特综合征(Rett Syndrome)、脊髓性肌萎缩(SMA)、AADC缺乏症、单基因性肌萎缩性侧索硬化(ALS)、α甘露糖苷贮积症、天冬氨酰葡萄糖胺尿症、德拉韦综合征(Dravet syndrome)、巨轴突神经病、球状细胞脑白质营养不良(克拉伯)、Glut 1缺乏症、GM1神经节苷脂贮积症、幼稚型神经元蜡样质脂褐质沉积(INCL，巴腾)、幼年型神经元蜡样质脂褐质沉积(JNCL，巴腾)、晚期幼稚型神经元蜡样质脂褐质沉积(LINCL，巴腾)、MPS II(亨特)、MPS IIIB(圣菲利波B)、MPS IIIC(圣菲利波C)、MPS IVA(莫奎综合征)、MPS VI(马洛托-拉米)、过氧化体生物发生病症(泽尔韦格综合征谱系)、桑多霍夫病(GM2神经节苷脂贮积症)、癫痫症、大脑梗塞、精神病症(包括情绪障碍(例如抑郁、双向情感障碍、持久性情感障碍、二级情绪障碍)、精神分裂症、药物依赖性(例如酒精中毒和其他物质依赖性)、神经症(例如焦虑、强迫症、类躯体化症精神障碍、分裂症、哀伤、产后抑郁症)、精神病(例如幻觉和妄想)、痴呆、偏狂症、注意力不足症、性心理障碍、睡眠障碍、疼痛障碍、饮食或体重障碍(例如肥胖症、恶病体质、神经性厌食症和易饿症)以及CNS癌症和肿瘤(例如垂体肿瘤)。

CNS病症包括涉及视网膜、后索和视神经的眼科病症(例如色素性视网膜炎、糖尿病性视网膜病变和其他视网膜退行性疾病、葡萄膜炎、年龄相关性黄斑变性、青光眼)。

大部分(如果并非全部)眼科疾病和病症与以下三种类型的适应症中的一者或多者相关：(1)血管生成、(2)发炎和(3)变性。本文所描述的病毒载体可用于递送抗血管生成因子；抗炎因子；推迟细胞变性、促进细胞减量或促进细胞生长的因子；和前述的组合。

例如，糖尿病性视网膜病变的特征在于血管生成。糖尿病性视网膜病变可通过眼内(例如玻璃体中)或眼周(例如Tenon区下)递送一种或多种抗血管生成因子来治疗。还可眼内(例如玻璃体内)或眼周共递送一种或多种神经营养因子。

葡萄膜炎涉及发炎。可通过眼内(例如玻璃体或前部腔室)施用递送载体来施用一种或多种抗炎因子。

通过比较，色素性视网膜炎的特征在于视网膜变性。在一些实施方案中，色素性视网膜炎可通过眼内(例如玻璃体施用)编码一种或多种神经营养因子的递送载体来治疗。

年龄相关性黄斑变性涉及血管生成和视网膜变性两者。这种病症可通过眼内(例如玻璃体)施用本发明的编码一种或多种神经营养因子的递送载体和/或眼内或眼周(例如Tenon区下)施用一种或多种抗血管生成因子来治疗。

青光眼的特征在于眼部压力增加和视网膜神经节细胞缺失。针对青光眼的治疗包括施用保护细胞免于使用本发明的递送载体的激发毒性损伤的一种或多种神经保护剂。此类药剂包括眼内，任选地玻璃体内递送的N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)拮抗剂、细胞因子和神经营养因子。

在一些实施方案中，本文所描述的组合物和方法可用于治疗癫痫，例如以降低癫痫发作、癫痫的发生率或严重程度。癫痫的治疗性治疗的功效可通过行为(例如眼睛或口部的振颤、滴落(ticks))和/或电子图手段(大部分癫痫具有标志性电子图异常)来评估。因此，还可治疗特征为随着时间推移多次发作的癫痫。

在一些实施方案中，治疗有需要的受试者的方法包括向受试者施用包含衣壳蛋白的AAV载体，其中衣壳蛋白包含SEQ ID NO：165-187中的任一者的氨基酸序列。在一些实施方案中，AAV载体包含含SEQ ID NO：175的氨基酸序列或与其至少95％同一的序列的衣壳蛋白。在一些实施方案中，AAV载体包含含SEQ ID NO：175的氨基酸序列或与其至少95％同一的序列的衣壳蛋白。在一些实施方案中，受试者患有德拉韦综合征。在一些实施方案中，受试者患有雷特综合征。在一些实施方案中，受试者患有天使综合征。在一些实施方案中，受试者患有尼曼-匹克病。在一些实施方案中，受试者患有脆性X综合征。在一些实施方案中，受试者患有阿尔茨海默症。在一些实施方案中，受试者患有戈谢氏病。在一些实施方案中，受试者患有亨廷顿病。在一些实施方案中，受试者患有帕金森病。在一些实施方案中，受试者患有弗里德希氏运动失调(Friedrich′s ataxia)。在一些实施方案中，通过脑室内(ICV)注射，向受试者施用AAV载体。在一些实施方案中，通过鞘内(IT)注射，向受试者施用AAV载体。在一些实施方案中，通过静脉内(IV)注射，向受试者施用AAV载体。

在一些实施方案中，治疗有需要的受试者的方法包括向受试者施用包含衣壳蛋白的AAV载体，其中衣壳蛋白包含SEQ ID NO：175或180的氨基酸序列，其中受试者患有德拉韦综合征、雷特综合征、天使综合征、尼曼-匹克疾病或脆性X综合征，并且其中通过ICV或IT注射向受试者施用AAV载体。

在一些实施方案中，治疗有需要的受试者的方法包括向受试者施用包含衣壳蛋白的AAV载体，其中衣壳蛋白包含SEQ ID NO：175或180的氨基酸序列，其中受试者患有戈谢氏病、亨廷顿病、帕金森病或弗里德希氏运动失调，并且其中通过ICV或IT注射向受试者施用AAV载体。

在一些实施方案中，使用递送载体向大脑施用生长抑素(或其活性片段)，以治疗垂体肿瘤。根据这个实施方案，通过微输注至垂体中，施用编码生长抑素(或其活性片段)的递送载体。同样，此类治疗可用于治疗肢端肥大症(来自垂体的异常生长激素分泌)。生长抑素的核酸(例如GenBank登录号J00306)和氨基酸(例如GenBank登录号P01166；含有经处理的活性肽生长抑素-28和生长抑素-14)序列是本领域已知的。

在一些实施方案中，载体可包含如美国专利第7,071,172号中所描述的分泌信号。

在一些实施方案中，向CNS(例如向大脑或向眼睛)施用病毒载体和/或病毒衣壳。可将病毒载体和/或衣壳引入至以下中：脊髓、脑干(延髓、脑桥)、中脑(下丘脑、丘脑、上丘脑、脑下腺、黑质、松果体腺)、小脑、端脑(纹状体；大脑，包括枕骨、颞叶、腔壁和前叶、皮质、基底神经节、海马区和杏仁核门(portaamygdala))、边缘系统、新皮质、纹状体、大脑和下丘。还可向眼睛的不同区(例如视网膜、角膜和/或视神经)施用病毒载体和/或衣壳。

可将病毒载体和/或衣壳递送至脑脊髓液(例如通过腰椎穿刺)中，以用于更分散施用递送载体。在其中已扰动血脑屏障的情况下(例如脑瘤或大脑梗塞)，可进一步向CNS血管内施用病毒载体和/或衣壳。

可通过本领域已知的任何途径，向CNS的所需区域施用病毒载体和/或衣壳，所述途径包括(但不限于)鞘内、眼内、脑内、心室内、静脉内(例如在糖如甘露糖醇存在下)、鼻内、耳内、眼内(例如玻璃体内、视网膜下、前部腔室)和眼周(例如Tenon区下)递送以及伴随逆行递送至运动神经元的肌肉内递送。在一些实施方案中，通过直接注射(例如立体定向注射)至CNS中的所需区域或区室，以液体制剂形式施用病毒载体和/或衣壳。在一些实施方案中，可通过局部施用至所需区域或通过鼻内施用气雾剂制剂，来提供病毒载体和/或衣壳。可通过局部施用液滴来施用至眼睛。作为另一种替代方案，可施用呈固体缓释制剂形式的病毒载体和/或衣壳(参见例如美国专利第7,201,898号)。

在一些实施方案中，病毒载体可用于逆行转运以治疗和/或预防涉及运动神经元的疾病和病症(例如肌萎缩性侧索硬化(ALS)；脊髓性肌萎缩(SMA)等)。例如，可将病毒载体递送至肌肉组织，病毒载体可从所述肌肉组织迁移至神经元中。

编号实施方案

不管所附权利要求，本公开阐述以下编号实施方案：

1.一种腺相关病毒(AAV)载体，所述腺相关病毒(AAV)载体包含(i)重组衣壳蛋白和(ii)被所述衣壳蛋白包裹的货物核酸，其中所述衣壳蛋白包含具有SEQ ID NO：12-20中的任一者的序列的肽。

2.如实施方案1所述的AAV载体，其中所述货物核酸包含5′和3′AAV反向末端重复序列。

3.如实施方案1或2所述的AAV载体，其中所述货物核酸包含转基因。

4.如实施方案3所述的AAV载体，其中所述转基因编码治疗蛋白或RNA。

5.如实施方案1-4中任一项所述的AAV载体，其中所述重组衣壳蛋白与AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12、AAVrh.8、AAVrh.10、AAVrh32.33、AAVrh74、牛AAV或禽类AAV衣壳的原生序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性。

6.如实施方案5所述的AAV载体，其中所述重组衣壳蛋白与所述AAV9衣壳的原生序列具有至少90％序列同一性。

7.如实施方案1-6中任一项所述的AAV载体，其中所述肽位于对应于所述原生AAV9衣壳的氨基酸451-458或AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV10、AAV11、AAV12、AAVrh.8、AAVrh.10、AAVrh32.33、AAVrh74、牛AAV或禽类AAV中的等效氨基酸残基的氨基酸位置处，并且其中所述肽选自SEQ ID NO：12-18中的任一者。

8.如实施方案1-6中任一项所述的AAV载体，其中所述肽位于对应于所述原生AAV9衣壳的氨基酸587-594或AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV10、AAV11、AAV12、AAVrh.8、AAVrh.10、AAVrh32.33、AAVrh74、牛AAV或禽类AAV中的等效氨基酸残基的氨基酸位置处，并且其中所述肽选自SEQ ID NO：19或20。

9.如实施方案1所述的AAV载体，其中所述重组衣壳蛋白包含：a)第一肽，其具有SEQ ID NO：12-18中的任一者的序列；和b)第二肽，其具有SEQ ID NO：19-20中的任一者的序列。

10.如实施方案9所述的AAV载体，其中所述第一肽是在氨基酸位置451-458处，并且所述第二肽是在氨基酸587-594处，其中氨基酸编号是基于所述原生AAV9衣壳或AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV10、AAV11、AAV12、AAVrh.8、AAVrh.10、AAVrh32.33、AAVrh74、牛AAV或禽类AAV中的等效氨基酸残基。

11.如实施方案1-10中任一项所述的AAV载体，其中所述肽抑制至少一种抗体与所述衣壳蛋白的结合。

12.如实施方案11所述的AAV载体，其中所述肽抑制所述AAV载体的感染力被所述抗体中和。

13.如实施方案1-12中任一项所述的AAV载体，其中所述肽选择性地与表达于中枢神经系统(CNS)中的细胞表面上的受体结合。

14.如实施方案13所述的AAV载体，其中所述细胞是在前运动皮层、丘脑、小脑皮层、齿状核、脊髓或背根神经节中。

15.如实施方案1-14中任一项所述的AAV载体，其中所述肽选择性地与表达于心脏中的细胞表面上的受体结合。

16.如实施方案1-15中任一项所述的AAV载体，其中所述衣壳蛋白还包含改变所述衣壳的HI环的肽。

17.一种腺相关病毒(AAV)载体，所述腺相关病毒(AAV)载体包含(i)突变型AAV9衣壳蛋白和(ii)被所述衣壳蛋白包裹的货物核酸，其中所述衣壳蛋白包含在所述原生AAV9衣壳蛋白序列的氨基酸451-458处具有序列X¹-X²-X³-X⁴-X⁵-X⁶-X⁷-X⁸(SEQ ID NO：158)的肽，其中所述肽不存在于所述原生AAV9衣壳蛋白序列中。

18.如实施方案17所述的AAV载体，其中X¹不是I，X²不是N，X³不是G，X⁴不是S，X⁵不是G，X⁶不是Q，X⁷不是N，并且/或X⁸不是Q。

19.如实施方案18所述的AAV载体，其中X¹是S、F、Q、G、K或R。

20.如实施方案18或19所述的AAV载体，其中X²是C、G、R、D、T或Q。

21.如实施方案18-20中任一项所述的AAV载体，其中X³是Q、V、G、Y、R、F或D。

22.如实施方案18-21中任一项所述的AAV载体，其中X⁴是P、Q、A或R。

23.如实施方案18-22中任一项所述的AAV载体，其中X⁵是T、N、A、P或I。

24.如实施方案18-23中任一项所述的AAV载体，其中X⁶是V、Q、A或I。

25.如实施方案18-24中任一项所述的AAV载体，其中X⁷是M、P、R、Q或N。

26.如实施方案18-25中任一项所述的AAV载体，其中X⁸是N、L、F、E、H或A。

27.如实施方案17所述的AAV载体，其中X¹是S，X²是C，X³是Q，X⁴是P，X⁵是T，X⁶是V，X⁷是M，并且X⁸是N。

28.如实施方案17所述的AAV载体，其中X¹是F，X²是G，X³是V，X⁴是P，X⁵是N，X⁶是Q，X⁷是P，并且X⁸是L。

29.如实施方案17所述的AAV载体，其中X¹是Q，X²是R，X³是G，X⁴是Q，X⁵是A，X⁶是A，X⁷是P，并且X⁸是F。

30.如实施方案17所述的AAV载体，其中X¹是G，X²是D，X³是Y，X⁴是A，X⁵是P，X⁶是I，X⁷是R，并且X⁸是E。

31.如实施方案17所述的AAV载体，其中X¹是K，X²是T，X³是R，X⁴是R，X⁵是I，X⁶是V，X⁷是Q，并且X⁸是H。

32.如实施方案17所述的AAV载体，其中X¹是F，X²是G，X³是F，X⁴是P，X⁵是N，X⁶是Q，X⁷是P，并且X⁸是L。

33.如实施方案17所述的AAV载体，其中X¹是R，X²是Q，X³是D，X⁴是Q，X⁵是P，X⁶是I，X⁷是N，并且X⁸是A。

34.一种腺相关病毒(AAV)载体，所述腺相关病毒(AAV)载体包含(i)突变型AAV9衣壳蛋白和(ii)被所述衣壳蛋白包裹的货物核酸，其中所述衣壳蛋白包含在所述原生AAV9衣壳蛋白序列的氨基酸587-594处具有序列X¹-X²-X³-X⁴-X⁵-X⁶-X⁷-X⁸(SEQ ID NO：158)的肽，其中所述肽不存在于所述原生AAV9衣壳蛋白序列中。

35.如实施方案34所述的AAV载体，其中X¹不是A，X²不是Q、X³不是A，X⁴不是Q，X⁵不是A，X⁶不是Q，X⁷不是T，并且/或X⁸不是G。

36.如实施方案35所述的AAV载体，其中X¹是S。

37.如实施方案35或36所述的AAV载体，其中X²是K或T。

38.如实施方案35-37中任一项所述的AAV载体，其中X³是V。

39.如实施方案35-38中任一项所述的AAV载体，其中X⁴是E或D。

40.如实施方案35-39中任一项所述的AAV载体，其中X⁵是S。

41.如实施方案35-40中任一项所述的AAV载体，其中X⁶是W或I。

42.如实施方案35-41中任一项所述的AAV载体，其中X⁷是T或A。

43.如实施方案35-42中任一项所述的AAV载体，其中X⁸是E或I。

44.如实施方案34所述的AAV载体，其中X¹是S，X²是K，X³是V，X⁴是E，X⁵是S，X⁶是W，X⁷是T，并且X⁸是E。

45.如实施方案34所述的AAV载体，其中X¹是S，X²是T，X³是V，X⁴是D，X⁵是S，X⁶是I，X⁷是A，并且X⁸是I。

46.一种腺相关病毒(AAV)载体，所述腺相关病毒(AAV)载体包含(i)重组衣壳蛋白和(ii)被所述衣壳蛋白包裹的货物核酸，其中所述衣壳蛋白包含与SEQ ID NO：165-187中的任一者至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的氨基酸序列。

47.如实施方案46所述的AAV载体，其中所述衣壳蛋白包含SEQ ID NO：165-187中的任一者的氨基酸序列。

48.如实施方案47所述的AAV载体，其中所述衣壳蛋白包含SEQ ID NO：175的氨基酸序列。

49.如实施方案47所述的AAV载体，其中所述衣壳蛋白包含SEQ ID NO：180的氨基酸序列。

50.如实施方案46-49中任一项所述的AAV载体，其中所述AAV载体将所述货物核酸选择性地递送至所述中枢神经系统的细胞或组织。

51.如实施方案50所述的AAV载体，其中所述中枢神经系统组织是前运动皮层、丘脑、小脑皮层、齿状核、脊髓或背根神经节。

52.如实施方案46-49中任一项所述的AAV载体，其中所述AAV载体将所述货物核酸递送至大脑，但不将所述AAV载体递送至心脏。

53.如实施方案46-49中任一项所述的AAV载体，其中所述AAV载体将所述货物核酸递送至大脑和递送至心脏。

54.如实施方案53所述的AAV载体，其中所述货物核酸至大脑的递送比至心脏的递送更高。

55.如实施方案53所述的AAV载体，其中所述货物核酸的递送在大脑中与心脏中大致相同。

56.一种核酸序列，所述核酸序列编码如实施方案1至55中任一项所述的AAV载体的重组衣壳蛋白。

57.如实施方案56所述的核酸序列，其中所述核酸序列是DNA序列。

58.如实施方案56所述的核酸序列，其中所述核酸序列是RNA序列。

59.一种表达载体，所述表达载体包含实施方案56-58中任一项所述的核酸序列。

60.一种细胞，所述细胞包含实施方案56-58中任一项所述的核酸序列。

61.一种细胞，所述细胞包含实施方案59所述的表达载体。

62.一种药物组合物，所述药物组合物包含实施方案1-55中任一项所述的AAV载体。

63.如实施方案62所述的药物组合物，其中所述组合物还包含药学上可接受的载体。

64.一种药物组合物，所述药物组合物包含实施方案60或61所述的细胞。

65.如实施方案64所述的药物组合物，其中所述组合物还包含药学上可接受的载体。

66.一种治疗有需要的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的实施方案1-55中任一项所述的AAV载体。

67.如实施方案66所述的方法，其中所述受试者患有中枢神经系统疾病或病症。

68.如实施方案67所述的方法，其中所述中枢神经系统疾病或病症是德拉韦综合征。

69.如实施方案67所述的方法，其中所述中枢神经系统疾病或病症是雷特综合征。

70.如实施方案67所述的方法，其中所述中枢神经系统疾病或病症是天使综合征。

71.如实施方案67所述的方法，其中所述中枢神经系统疾病或病症是尼曼-匹克病。

72.如实施方案67所述的方法，其中所述中枢神经系统疾病或病症是脆性X综合征。

73.如实施方案67所述的方法，其中所述中枢神经系统疾病或病症是戈谢氏病。

74.如实施方案67所述的方法，其中所述中枢神经系统疾病或病症是亨廷顿病。

75.如实施方案67所述的方法，其中所述中枢神经系统疾病或病症是帕金森病。

76.如实施方案67所述的方法，其中所述中枢神经系统疾病或病症是弗里德希氏运动失调。

77.如实施方案66-76中任一项所述的方法，其中AAV载体包含衣壳蛋白，其中所述衣壳蛋白包含SEQ ID NO：165-187中的任一者的氨基酸序列。

78.如实施方案66-76中任一项所述的方法，其中AAV载体包含衣壳蛋白，其中所述衣壳蛋白包含SEQ ID NO：175的氨基酸序列。

79.如实施方案66-76中任一项所述的方法，其中AAV载体包含衣壳蛋白，其中所述衣壳蛋白包含SEQ ID NO：180的氨基酸序列。

80.如实施方案66-79中任一项所述的方法，其中所述AAV载体通过脑室内(ICV)注射施用于所述受试者。

81.如实施方案66-79中任一项所述的方法，其中所述AAV载体通过鞘内(IT)注射施用于所述受试者。

82.如实施方案66-79中任一项所述的方法，其中所述AAV载体通过静脉内(IV)注射施用于所述受试者。

83.如实施方案66-82中任一项所述的方法，其中所述受试者是哺乳动物。

84.如实施方案83所述的方法，其中所述受试者是人类。

85.一种将核酸分子引入至细胞中的体外方法，所述方法包括使所述细胞与实施方案1-55中任一项所述的AAV载体接触。

86.如实施方案1-55中任一项所述的AAV载体，所述AAV载体用作药剂。

87.如实施方案1-55中任一项所述的AAV载体，所述AAV载体用于治疗有需要的受试者的方法中。

88.如实施方案1-55中任一项所述的AAV载体，所述AAV载体用于治疗或预防有需要的受试者的CNS疾病或病症的方法中。

实施例

仅出于说明的目的在本文中包括的以下实施例并不旨在具限制性。如本文所用，术语STRD.101和STRD.102用于描述衣壳蛋白序列，并且AAV-STRD.101和AAV-STRD.102用于描述包含所述衣壳蛋白的AAV载体。然而，术语STRD.101和STRD.102可在一些情况下用于描述包含所提及衣壳的AAV载体，如对于本领域技术人员而言将是显而易见的。

实施例1.抗体逃避性AAV载体的组合工程化和选择

用于生成抗体逃避性AAV突变体的方法如下。第一步骤涉及例如使用低温电子显微镜鉴定AAV衣壳表面上的构形3D抗原表位。随后，使用简并引物，使抗原基序内的所选择残基经受突变诱发，其中每个密码子被核苷酸NNK取代并且基因片段通过Gibson组装和/或多步PCR组合在一起。将含有突变型抗原基序简并文库的编码衣壳的基因克隆至野生型AAV基因组中，以置换原始Cap编码DNA序列，得到质粒文库。随后，利用腺病毒辅助质粒，将质粒文库转染至293生产细胞系中，以生成AAV衣壳文库，随后可对所述AAV衣壳文库进行选择。经由DNA测序确认成功生成AAV文库。

为了选择可逃避中和抗体(NAb)和/或靶向中枢神经系统(CNS)的新型AAV株，使AAV文库在非人类灵长类动物中经受多轮感染。在每个阶段，从动物受试者分离目标组织。对从目标组织收获的细胞裂解物进行测序，以鉴定逃避抗体中和的AAV分离株。在非人类灵长类动物中多轮感染之后，将来自每个突变诱发区域的分离序列以所有排列和组合方式组合。

作为一个特定实例，使AAV衣壳蛋白上的常用抗原基序(VP1)经受如上文所描述的突变诱发。随后，使简并文库(图1A)在非人类灵长类动物中经受第一轮感染(静脉内注射)。在感染后第7天收获组织并进行测序，以鉴定单一AAV分离株。

在组织样品中鉴定各种重组AAV分离株，所述组织样品包括脊髓、背根神经节、额叶、颞叶、枕骨叶、壳、苍白球、丘脑、扁桃体、海马区、黑质、脑桥、小脑、髓质。该第一轮进化的结果示于图1B中。

随后，将在第一轮进化期间所分离的重组AAV(图1B)再引入至第二非人类灵长类动物中。在感染后第7天收获组织并进行测序，以鉴定单一AAV分离株。该第二轮进化的结果示于图1C中。

对最高频率的重组AAV进行测序。存在于这些AAV中的取代示于表6.1和表6.2中。这些数据表明，具有包含表6.1和表6.2中所列举的取代的衣壳蛋白的重组AAV病毒粒子在非人类灵长类动物中体内逃避中和抗体并具有针对所需靶组织的向性。

实施例2：重组AAV载体的可制造性

为了确定实施例1中所鉴定的各种重组AAV是否可以大规模系统制造，根据标准方法制造AAV，并且将产量与野生型AAV载体的产量进行比较。

根据标准三重转染方案，在HEK293细胞中生产AAV。简而言之，用以下转染细胞：(i)包含野生型AAV9衣壳序列、STRD.101衣壳变体序列(SEQ ID NO：180)或STRD.102衣壳变体序列(SEQ ID NO：175)的质粒；(ii)包含5′ITR、转基因和3′ITR序列的质粒；和(iii)包含AAV生产必需的辅助基因的质粒。在自身互补型构建体中，将两个不同转基因与每个衣壳一起使用。随后，使细胞裂解，并且使用亲和柱、CsCl密度超速离心和渗析来纯化病毒粒子。随后，使用基于PCR的定量方法来测量每个AAV的产量。

如图2中所示，包含STRD.101和STRD.102衣壳的重组AAV载体具有与野生型AAV9的产量类似的产量。该数据确认，包含重组衣壳蛋白的重组AAV适合于商业制造。

实施例3：使用重组AAV病毒载体进行体外转导

为了确认实施例1的重组AAV载体是否通常具感染性并且能够转导培养中的细胞，根据标准方案制备各种AAV载体。

使用标准TCID50测定法，测试重组AAV的感染力。简而言之，在腺病毒(Ad5)存在下，以跨越5个数量级的剂量，用重组AAV粒子感染HeLaRC32细胞。在72小时后，提取DNA，并通过qPCR量化载体基因组复制。

计算粒子：感染力比率以确定感染力。如图3中所示，相较于野生型AAV9的感染力比率，AAV-STRD.101载体的感染力比率较低。因为较低感染力比率转化为较高效能，所以AAV-STRD.101比野生型AAV9更具感染性。

独立地，还测定在各种细胞系中的感染力。生成包装荧光素酶转基因的重组AAV，并以每个细胞10,000载体基因组(vg)的剂量，使其与培养中的细胞接触。感染48小时后，细胞裂解。使裂解物与生物发光底物接触，并测量相对荧光单位(RFU)。如图4A-4D中所示，AAV-STRD.101载体以与野生型AAV9相当的水平感染U87细胞(人类神经胶母细胞瘤细胞系，图4A)、N2A细胞(小鼠神经脊源性细胞系，图4B)、SY5Y细胞(人类神经母细胞瘤细胞系，图4C)和U2OS细胞(人类骨肉瘤细胞系，图4D)。

因此，该数据表明，实施例1的重组AAV载体可有效地转导培养中的细胞。

实施例4：靶向中枢神经系统的重组AAV的体内表征

选择两种重组衣壳蛋白STRD.101和STRD.102以进行体内表征。生成包含这些衣壳蛋白并包装天然tdTomato荧光转基因的重组AAV。在第0天，通过脑室内注射，向新生小鼠施用重组AAV。在注射三周后，收获大脑组织并固定，以通过目测评估tdTomato荧光来评价表达。图5提供了显示用4％PFA固定24小时后冠状面振动切片机切片中的tdTomato表达的代表性图像。也使用免疫组织化学观测这些相同切片(图6)。如图5和图6的图像中所示，AAV9、AAV-STRD.102和AAV-STRD.101载体在大脑组织中各自具有不同分布，其中最高转基因表达位于注射位点附近。总之，该数据显示，在脑室内注射之后，所测试的重组AAV成功地将转基因体内递送至靶细胞。

也通过静脉内注射，以5.5×10¹³vg/kg的剂量，向四只成年小鼠施用包装tdTomato的AAV-STRD.101和AAV-STRD.102载体。注射三周后，收获肝脏和心脏并固定，以通过目测评估tdTomato荧光来评价表达概况。

在图7中提供了显示在用4％PFA固定24小时后振动切片机肝切片中的TdTomato表达的来自一只小鼠的代表性图像。值得注意的是，相较于野生型AAV9，对于肝脏，AAV-STRD.102和AAV-STRD.101载体脱靶。由于在进化期间未进行肝脏中反筛选，这种理想特性是出人意料的。

在图8中提供了显示在用4％PFA固定24小时后振动切片机心脏切片中的TdTomato表达的来自一只小鼠的代表性图像。值得注意的是，所测试载体具有不同的心脏向性。具体而言，相较于AAV-STRD.101，AAV-STRD.102载体在心脏中具有较低感染性。因为在进化期间未进行心脏筛选，这种差异性转导是完全出人意料的。

总之，该数据指示，AAV-STRD.102和AAV-STRD.101载体可成功地用于体内靶向CNS组织，避免被肝清除，并且是基因疗法的强力工具。鉴于其不同向性(即，在心脏中，AAV-STRD.101比AAV-STRD.102更具感染性)，这些载体将是将基因疗法治疗靶向特定所需组织的强力工具。

实施例5：非人类灵长类动物中的重组AAV的生物分布

向非人类灵长类动物施用重组AAV，以便测定生物分布。通过静脉内(IV)和脑血管内(ICV)注射，施用重组AAV(图9)。通过IV注射以2.9×10¹³vg/kg的剂量，以及通过ICV注射以2.1×10¹³vg的剂量，施用AAV-STRD.101(黑色圆点)。通过IV注射以2.8×10¹³vg/kg的剂量，以及通过ICV注射以3.0×10¹³vg的剂量，施用AAV-STRD.102(白色圆点)。在30天后，处死动物，并通过qPCR来测量各种CNS组织中的病毒载量。

如图9中所示，AAV-STRD.102和AAV-STRD.101两者都感染各种CNS组织。另外，因为AAV显示高水平的转导，该数据表明，这些AAV有可能避免体内中和AAV。

实施例6：用于治疗有需要的受试者的细胞治疗方法

使用AAV载体离体转导细胞。出于一些目的，细胞可为自体(即，来源于待治疗的受试者)或同种异体(即，来源于不同受试者/供体)。在使用AAV转导细胞之后，以及在已验证转基因的表达之后，使用标准临床方法向受试者施用细胞。

可向受试者施用细胞一次，或者可以治疗有效时间间隔多次重复施用。所施用的细胞数目根据例如待治疗的疾病或疾患、受试者疾病/疾患的严重程度以及受试者的身高和体重而变化。

实施例7：用于治疗有需要的受试者的基因治疗方法

向有需要的受试者施用本文所描述的AAV载体(例如包含具有SEQ ID NO：175或180的序列的衣壳的AAV载体)，其中受试者患有CNS疾病或病症。向受试者施用AAV载体一次，或者可以治疗有效时间间隔多次重复施用。施用是通过一种或多种治疗有效途径，例如静脉内(IV)、脑室内(ICV)或鞘内(IT)注射。AAV载体的剂量根据例如待治疗的疾病或疾患、受试者疾病/疾患的严重程度以及受试者的身高和体重而变化。例如，当通过IV注射施用AAV载体时，施用于受试者的AAV的剂量可为2.8×10¹³vg/kg或2.9×10¹³vg/kg。当通过ICV注射施用AAV载体时，剂量可为2.1×10¹³vg或3.0×10¹³vg。在一些方案中，可通过IV和ICV注射两者向受试者施用AAV载体。

前述内容说明本发明，而不应被解释为对其限制。本发明由所附权利要求限定，权利要求的等效内容包括在其中。

序列表

<110> 斯特里迪比奥公司(StrideBio, Inc.)

<120> 重组腺相关病毒载体

<130> STRD-013/01WO 331843-2084

<150> US 62/821,710

<151> 2019-03-21

<160> 2760

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 736

<212> PRT

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Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln

675 680 685

Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr Ser Asn

690 695 700

Tyr Tyr Lys Ser Asn Asn Val Glu Phe Ala Val Asn Thr Glu Gly Val

705 710 715 720

Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu

725 730 735

<210> 10

<211> 738

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒rh.10 (Dependovirus adeno-associated virus rh.10)

<400> 10

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro

20 25 30

Lys Ala Asn Gln Gln Lys Gln Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Gln Gln Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Gln Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg

130 135 140

Pro Val Glu Pro Ser Pro Gln Arg Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile

145 150 155 160

Gly Lys Lys Gly Gln Gln Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln

165 170 175

Thr Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Ile Gly Glu Pro

180 185 190

Pro Ala Gly Pro Ser Gly Leu Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly

195 200 205

Gly Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Ser

210 215 220

Ser Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val

225 230 235 240

Ile Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His

245 250 255

Leu Tyr Lys Gln Ile Ser Asn Gly Thr Ser Gly Gly Ser Thr Asn Asp

260 265 270

Asn Thr Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn

275 280 285

Arg Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn

290 295 300

Asn Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn

305 310 315 320

Ile Gln Val Lys Glu Val Thr Gln Asn Glu Gly Thr Lys Thr Ile Ala

325 330 335

Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gln Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gln

340 345 350

Leu Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gln Gly Cys Leu Pro Pro Phe

355 360 365

Pro Ala Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn

370 375 380

Asn Gly Ser Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr

385 390 395 400

Phe Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr

405 410 415

Gln Phe Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser

420 425 430

Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu

435 440 445

Ser Arg Thr Gln Ser Thr Gly Gly Thr Ala Gly Thr Gln Gln Leu Leu

450 455 460

Phe Ser Gln Ala Gly Pro Asn Asn Met Ser Ala Gln Ala Lys Asn Trp

465 470 475 480

Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Thr Thr Leu Ser

485 490 495

Gln Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His

500 505 510

Leu Asn Gly Arg Asp Ser Leu Val Asn Pro Gly Val Ala Met Ala Thr

515 520 525

His Lys Asp Asp Glu Glu Arg Phe Phe Pro Ser Ser Gly Val Leu Met

530 535 540

Phe Gly Lys Gln Gly Ala Gly Lys Asp Asn Val Asp Tyr Ser Ser Val

545 550 555 560

Met Leu Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr

565 570 575

Glu Gln Tyr Gly Val Val Ala Asp Asn Leu Gln Gln Gln Asn Ala Ala

580 585 590

Pro Ile Val Gly Ala Val Asn Ser Gln Gly Ala Leu Pro Gly Met Val

595 600 605

Trp Gln Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile

610 615 620

Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe

625 630 635 640

Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val

645 650 655

Pro Ala Asp Pro Pro Thr Thr Phe Ser Gln Ala Lys Leu Ala Ser Phe

660 665 670

Ile Thr Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu

675 680 685

Leu Gln Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr

690 695 700

Ser Asn Tyr Tyr Lys Ser Thr Asn Val Asp Phe Ala Val Asn Thr Asp

705 710 715 720

Gly Thr Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg

725 730 735

Asn Leu

<210> 11

<211> 733

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒11 (Dependovirus adeno-associated virus 11)

<400> 11

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro

20 25 30

Lys Ala Asn Gln Gln Lys Gln Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Gln Gln Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Gln Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg

130 135 140

Pro Leu Glu Ser Pro Gln Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Ile Gly Lys

145 150 155 160

Lys Gly Lys Gln Pro Ala Arg Lys Arg Leu Asn Phe Glu Glu Asp Thr

165 170 175

Gly Ala Gly Asp Gly Pro Pro Glu Gly Ser Asp Thr Ser Ala Met Ser

180 185 190

Ser Asp Ile Glu Met Arg Ala Ala Pro Gly Gly Asn Ala Val Asp Ala

195 200 205

Gly Gln Gly Ser Asp Gly Val Gly Asn Ala Ser Gly Asp Trp His Cys

210 215 220

Asp Ser Thr Trp Ser Glu Gly Lys Val Thr Thr Thr Ser Thr Arg Thr

225 230 235 240

Trp Val Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu Tyr Leu Arg Leu Gly Thr

245 250 255

Thr Ser Ser Ser Asn Thr Tyr Asn Gly Phe Ser Thr Pro Trp Gly Tyr

260 265 270

Phe Asp Phe Asn Arg Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln

275 280 285

Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Leu Arg Pro Lys Ala Met Arg Val

290 295 300

Lys Ile Phe Asn Ile Gln Val Lys Glu Val Thr Thr Ser Asn Gly Glu

305 310 315 320

Thr Thr Val Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Val Gln Ile Phe Ala Asp

325 330 335

Ser Ser Tyr Glu Leu Pro Tyr Val Met Asp Ala Gly Gln Glu Gly Ser

340 345 350

Leu Pro Pro Phe Pro Asn Asp Val Phe Met Val Pro Gln Tyr Gly Tyr

355 360 365

Cys Gly Ile Val Thr Gly Glu Asn Gln Asn Gln Thr Asp Arg Asn Ala

370 375 380

Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn

385 390 395 400

Asn Phe Glu Met Ala Tyr Asn Phe Glu Lys Val Pro Phe His Ser Met

405 410 415

Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Leu Asp

420 425 430

Gln Tyr Leu Trp His Leu Gln Ser Thr Thr Ser Gly Glu Thr Leu Asn

435 440 445

Gln Gly Asn Ala Ala Thr Thr Phe Gly Lys Ile Arg Ser Gly Asp Phe

450 455 460

Ala Phe Tyr Arg Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro Cys Val Lys Gln Gln

465 470 475 480

Arg Phe Ser Lys Thr Ala Ser Gln Asn Tyr Lys Ile Pro Ala Ser Gly

485 490 495

Gly Asn Ala Leu Leu Lys Tyr Asp Thr His Tyr Thr Leu Asn Asn Arg

500 505 510

Trp Ser Asn Ile Ala Pro Gly Pro Pro Met Ala Thr Ala Gly Pro Ser

515 520 525

Asp Gly Asp Phe Ser Asn Ala Gln Leu Ile Phe Pro Gly Pro Ser Val

530 535 540

Thr Gly Asn Thr Thr Thr Ser Ala Asn Asn Leu Leu Phe Thr Ser Glu

545 550 555 560

Glu Glu Ile Ala Ala Thr Asn Pro Arg Asp Thr Asp Met Phe Gly Gln

565 570 575

Ile Ala Asp Asn Asn Gln Asn Ala Thr Thr Ala Pro Ile Thr Gly Asn

580 585 590

Val Thr Ala Met Gly Val Leu Pro Gly Met Val Trp Gln Asn Arg Asp

595 600 605

Ile Tyr Tyr Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Ala Asp Gly

610 615 620

His Phe His Pro Ser Pro Leu Ile Gly Gly Phe Gly Leu Lys His Pro

625 630 635 640

Pro Pro Gln Ile Phe Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asn Pro Ala

645 650 655

Thr Thr Phe Thr Ala Ala Arg Val Asp Ser Phe Ile Thr Gln Tyr Ser

660 665 670

Thr Gly Gln Val Ala Val Gln Ile Glu Trp Glu Ile Glu Lys Glu Arg

675 680 685

Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Val Gln Phe Thr Ser Asn Tyr Gly Asn

690 695 700

Gln Ser Ser Met Leu Trp Ala Pro Asp Thr Thr Gly Lys Tyr Thr Glu

705 710 715 720

Pro Arg Val Ile Gly Ser Arg Tyr Leu Thr Asn His Leu

725 730

<210> 12

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 氨基酸取代

<400> 12

Ser Cys Gln Pro Thr Val Met Asn

1 5

<210> 13

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 氨基酸取代

<400> 13

Phe Gly Val Pro Asn Gln Pro Leu

1 5

<210> 14

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 氨基酸取代

<400> 14

Gln Arg Gly Gln Ala Ala Pro Phe

1 5

<210> 15

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 氨基酸取代

<400> 15

Gly Asp Tyr Ala Pro Ile Arg Glu

1 5

<210> 16

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 氨基酸取代

<400> 16

Lys Thr Arg Arg Ile Val Gln His

1 5

<210> 17

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 氨基酸取代

<400> 17

Phe Gly Phe Pro Asn Gln Pro Leu

1 5

<210> 18

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 氨基酸取代

<400> 18

Arg Gln Asp Gln Pro Ile Asn Ala

1 5

<210> 19

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 氨基酸取代

<400> 19

Ser Lys Val Glu Ser Trp Thr Glu

1 5

<210> 20

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 氨基酸取代

<400> 20

Ser Thr Val Asp Ser Ile Ala Ile

1 5

<210> 21

<400> 21

000

<210> 22

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 肽基序

<400> 22

Phe Val Phe Leu Pro

1 5

<210> 23

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 肽基序

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa是碱性残基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(3)

<223> Xaa是中性和/或疏水性残基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(4)

<223> Xaa是碱性残基

<400> 23

Xaa Xaa Xaa Xaa

1

<210> 24

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 肽基序

<400> 24

Arg Gly Asn Arg

1

<210> 25

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (7)..(7)

<223> Xaa是Gly或Ser

<400> 25

Asn Ser Val Arg Asp Leu Xaa

1 5

<210> 26

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 26

Pro Arg Ser Val Thr Val Pro

1 5

<210> 27

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (6)..(6)

<223> Xaa是任何氨基酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (7)..(7)

<223> Xaa是Ser或Ala

<400> 27

Asn Ser Val Ser Ser Xaa Xaa

1 5

<210> 28

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 28

Asn Gly Arg Ala His Ala

1 5

<210> 29

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 29

Gln Pro Glu His Ser Ser Thr

1 5

<210> 30

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 30

Val Asn Thr Ala Asn Ser Thr

1 5

<210> 31

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 31

His Gly Pro Met Gln Ser

1 5

<210> 32

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 32

Pro His Lys Pro Pro Leu Ala

1 5

<210> 33

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 33

Ile Lys Asn Asn Glu Met Trp

1 5

<210> 34

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 34

Arg Asn Leu Asp Thr Pro Met

1 5

<210> 35

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 35

Val Asp Ser His Arg Gln Ser

1 5

<210> 36

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 36

Tyr Asp Ser Lys Thr Lys Thr

1 5

<210> 37

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 37

Ser Gln Leu Pro His Gln Lys

1 5

<210> 38

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 38

Ser Thr Met Gln Gln Asn Thr

1 5

<210> 39

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 39

Thr Glu Arg Tyr Met Thr Gln

1 5

<210> 40

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 40

Gln Pro Glu His Ser Ser Thr

1 5

<210> 41

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 41

Asp Ala Ser Leu Ser Thr Ser

1 5

<210> 42

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 42

Asp Leu Pro Asn Lys Thr

1 5

<210> 43

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 43

Asp Leu Thr Ala Ala Arg Leu

1 5

<210> 44

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 44

Glu Pro His Gln Phe Asn Tyr

1 5

<210> 45

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 45

Glu Pro Gln Ser Asn His Thr

1 5

<210> 46

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 46

Met Ser Ser Trp Pro Ser Gln

1 5

<210> 47

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 47

Asn Pro Lys His Asn Ala Thr

1 5

<210> 48

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 48

Pro Asp Gly Met Arg Thr Thr

1 5

<210> 49

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 49

Pro Asn Asn Asn Lys Thr Thr

1 5

<210> 50

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 50

Gln Ser Thr Thr His Asp Ser

1 5

<210> 51

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 51

Thr Gly Ser Lys Gln Lys Gln

1 5

<210> 52

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 52

Ser Leu Lys His Gln Ala Leu

1 5

<210> 53

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 53

Ser Pro Ile Asp Gly Glu Gln

1 5

<210> 54

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 54

Trp Ile Phe Pro Trp Ile Gln Leu

1 5

<210> 55

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 55

Cys Asp Cys Arg Gly Asp Cys Phe Cys

1 5

<210> 56

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 56

Cys Asn Gly Arg Cys

1 5

<210> 57

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 57

Cys Pro Arg Glu Cys Glu Ser

1 5

<210> 58

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 58

Cys Thr Thr His Trp Gly Phe Thr Leu Cys

1 5 10

<210> 59

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 59

Cys Gly Arg Arg Ala Gly Gly Ser Cys

1 5

<210> 60

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 60

Cys Lys Gly Gly Arg Ala Lys Asp Cys

1 5

<210> 61

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 61

Cys Val Pro Glu Leu Gly His Glu Cys

1 5

<210> 62

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 62

Cys Arg Arg Glu Thr Ala Trp Ala Lys

1 5

<210> 63

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 63

Val Ser Trp Phe Ser His Arg Tyr Ser Pro Phe Ala Val Ser

1 5 10

<210> 64

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 64

Gly Tyr Arg Asp Gly Tyr Ala Gly Pro Ile Leu Tyr Asn

1 5 10

<210> 65

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(3)

<223> Xaa是任何氨基酸

<220>

<221> MOD_RES

<222> (4)..(4)

<223> 磷酸化

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (5)..(7)

<223> Xaa是任何氨基酸

<400> 65

Xaa Xaa Xaa Tyr Xaa Xaa Xaa

1 5

<210> 66

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<220>

<221> MOD_RES

<222> (1)..(1)

<223> 磷酸化

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa是Glu或Met

<400> 66

Tyr Xaa Asn Trp

1

<210> 67

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 67

Arg Pro Leu Pro Pro Leu Pro

1 5

<210> 68

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 68

Ala Pro Pro Leu Pro Pro Arg

1 5

<210> 69

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 69

Asp Val Phe Tyr Pro Tyr Pro Tyr Ala Ser Gly Ser

1 5 10

<210> 70

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 70

Met Tyr Trp Tyr Pro Tyr

1 5

<210> 71

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 71

Asp Ile Thr Trp Asp Gln Leu Trp Asp Leu Met Lys

1 5 10

<210> 72

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (5)..(5)

<223> Xaa是Gly或Leu

<400> 72

Cys Trp Asp Asp Xaa Trp Leu Cys

1 5

<210> 73

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 73

Glu Trp Cys Glu Tyr Leu Gly Gly Tyr Leu Arg Cys Tyr Ala

1 5 10

<210> 74

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa是任何氨基酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(5)

<223> Xaa是任何氨基酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (8)..(8)

<223> Xaa是任何氨基酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (11)..(11)

<223> Xaa是任何氨基酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (13)..(13)

<223> Xaa是任何氨基酸

<400> 74

Tyr Xaa Cys Xaa Xaa Gly Pro Xaa Thr Trp Xaa Cys Xaa Pro

1 5 10

<210> 75

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 75

Ile Glu Gly Pro Thr Leu Arg Gln Trp Leu Ala Ala Arg Ala

1 5 10

<210> 76

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (3)..(4)

<223> Xaa是任何氨基酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (5)..(5)

<223> Xaa是Tyr、Trp、Phe或His

<400> 76

Leu Trp Xaa Xaa Xaa

1 5

<210> 77

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa是任何氨基酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (3)..(4)

<223> Xaa是任何氨基酸

<400> 77

Xaa Phe Xaa Xaa Tyr Leu Trp

1 5

<210> 78

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 78

Arg Trp Gly Leu Cys Asp

1 5

<210> 79

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 79

Met Ser Arg Pro Ala Cys Pro Pro Asn Asp Lys Tyr Glu

1 5 10

<210> 80

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 80

Cys Leu Arg Ser Gly Arg Gly Cys

1 5

<210> 81

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 81

Cys His Trp Met Phe Ser Pro Trp Cys

1 5

<210> 82

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(3)

<223> Xaa是任何氨基酸

<400> 82

Trp Xaa Xaa Phe

1

<210> 83

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 83

Cys Ser Ser Arg Leu Asp Ala Cys

1 5

<210> 84

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 84

Cys Leu Pro Val Ala Ser Cys

1 5

<210> 85

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 85

Cys Gly Phe Glu Cys Val Arg Gln Cys Pro Glu Arg Cys

1 5 10

<210> 86

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 86

Cys Val Ala Leu Cys Arg Glu Ala Cys Gly Glu Gly Cys

1 5 10

<210> 87

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 87

Ser Trp Cys Glu Pro Gly Trp Cys Arg

1 5

<210> 88

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 88

Tyr Ser Gly Trp Gly Trp

1 5

<210> 89

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 89

Gly Leu Ser Gly Gly Arg Ser

1 5

<210> 90

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 90

Leu Met Leu Pro Arg Ala Asp

1 5

<210> 91

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 91

Cys Ser Cys Phe Arg Asp Val Cys Cys

1 5

<210> 92

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 92

Cys Arg Asp Val Val Ser Val Ile Cys

1 5

<210> 93

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 93

Cys Asn Gly Arg Cys

1 5

<210> 94

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 94

Met Ala Arg Ser Gly Leu

1 5

<210> 95

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 95

Met Ala Arg Ala Lys Glu

1 5

<210> 96

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 96

Met Ser Arg Thr Met Ser

1 5

<210> 97

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 97

Lys Cys Cys Tyr Ser Leu

1 5

<210> 98

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 98

Met Tyr Trp Gly Asp Ser His Trp Leu Gln Tyr Trp Tyr Glu

1 5 10

<210> 99

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 99

Met Gln Leu Pro Leu Ala Thr

1 5

<210> 100

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 100

Glu Trp Leu Ser

1

<210> 101

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 101

Ser Asn Glu Trp

1

<210> 102

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 102

Thr Asn Tyr Leu

1

<210> 103

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 103

Trp Ile Phe Pro Trp Ile Gln Leu

1 5

<210> 104

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 104

Trp Asp Leu Ala Trp Met Phe Arg Leu Pro Val Gly

1 5 10

<210> 105

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 105

Cys Thr Val Ala Leu Pro Gly Gly Tyr Val Arg Val Cys

1 5 10

<210> 106

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 106

Cys Val Pro Glu Leu Gly His Glu Cys

1 5

<210> 107

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 107

Cys Gly Arg Arg Ala Gly Gly Ser Cys

1 5

<210> 108

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 108

Cys Val Ala Tyr Cys Ile Glu His His Cys Trp Thr Cys

1 5 10

<210> 109

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 109

Cys Val Phe Ala His Asn Tyr Asp Tyr Leu Val Cys

1 5 10

<210> 110

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 110

Cys Val Phe Thr Ser Asn Tyr Ala Phe Cys

1 5 10

<210> 111

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 111

Val His Ser Pro Asn Lys Lys

1 5

<210> 112

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 112

Cys Asp Cys Arg Gly Asp Cys Phe Cys

1 5

<210> 113

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 113

Cys Arg Gly Asp Gly Trp Cys

1 5

<210> 114

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa是任何氨基酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (6)..(6)

<223> Xaa是任何氨基酸

<400> 114

Xaa Arg Gly Cys Asp Xaa

1 5

<210> 115

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(3)

<223> Xaa是任何氨基酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(4)

<223> Xaa是Ser或Thr

<400> 115

Pro Xaa Xaa Xaa

1

<210> 116

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 116

Cys Thr Thr His Trp Gly Phe Thr Leu Cys

1 5 10

<210> 117

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 117

Ser Gly Lys Gly Pro Arg Gln Ile Thr Ala Leu

1 5 10

<210> 118

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa是Ala或Gln

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (3)..(3)

<223> Xaa是Asn或Ala

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(4)

<223> Xaa是Leu或Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (5)..(5)

<223> Xaa是Thr、Val、Met或Arg

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (6)..(6)

<223> Xaa是Arg或Lys

<400> 118

Ala Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa

1 5

<210> 119

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 119

Val Tyr Met Ser Pro Phe

1 5

<210> 120

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 120

Met Gln Leu Pro Leu Ala Thr

1 5

<210> 121

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 121

Ala Thr Trp Leu Pro Pro Arg

1 5

<210> 122

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 122

His Thr Met Tyr Tyr His His Tyr Gln His His Leu

1 5 10

<210> 123

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 123

Ser Glu Val Gly Cys Arg Ala Gly Pro Leu Gln Trp Leu Cys Glu Lys

1 5 10 15

Tyr Phe Gly

<210> 124

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 124

Cys Gly Leu Leu Pro Val Gly Arg Pro Asp Arg Asn Val Trp Arg Trp

1 5 10 15

Leu Cys

<210> 125

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 125

Cys Lys Gly Gln Cys Asp Arg Phe Lys Gly Leu Pro Trp Glu Cys

1 5 10 15

<210> 126

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 126

Ser Gly Arg Ser Ala

1 5

<210> 127

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 127

Trp Gly Phe Pro

1

<210> 128

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (3)..(4)

<223> Xaa是任何氨基酸

<400> 128

Leu Trp Xaa Xaa Ala Arg

1 5

<210> 129

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa是任何氨基酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (3)..(4)

<223> Xaa是任何氨基酸

<400> 129

Xaa Phe Xaa Xaa Tyr Leu Trp

1 5

<210> 130

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 130

Ala Glu Pro Met Pro His Ser Leu Asn Phe Ser Gln Tyr Leu Trp Tyr

1 5 10 15

Thr

<210> 131

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(4)

<223> Xaa是Trp或Phe

<400> 131

Trp Ala Tyr Xaa Ser Pro

1 5

<210> 132

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 132

Ile Glu Leu Leu Gln Ala Arg

1 5

<210> 133

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 133

Asp Ile Thr Trp Asp Gln Leu Trp Asp Leu Met Lys

1 5 10

<210> 134

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 134

Ala Tyr Thr Lys Cys Ser Arg Gln Trp Arg Thr Cys Met Thr Thr His

1 5 10 15

<210> 135

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 135

Pro Gln Asn Ser Lys Ile Pro Gly Pro Thr Phe Leu Asp Pro His

1 5 10 15

<210> 136

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 136

Ser Met Glu Pro Ala Leu Pro Asp Trp Trp Trp Lys Met Phe Lys

1 5 10 15

<210> 137

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 137

Ala Asn Thr Pro Cys Gly Pro Tyr Thr His Asp Cys Pro Val Lys Arg

1 5 10 15

<210> 138

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 138

Thr Ala Cys His Gln His Val Arg Met Val Arg Pro

1 5 10

<210> 139

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 139

Val Pro Trp Met Glu Pro Ala Tyr Gln Arg Phe Leu

1 5 10

<210> 140

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 140

Asp Pro Arg Ala Thr Pro Gly Ser

1 5

<210> 141

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 141

Phe Arg Pro Asn Arg Ala Gln Asp Tyr Asn Thr Asn

1 5 10

<210> 142

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 142

Cys Thr Lys Asn Ser Tyr Leu Met Cys

1 5

<210> 143

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa是Arg或Gln

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (3)..(3)

<223> Xaa是Leu或Arg

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (5)..(5)

<223> Xaa是Gly或Asn

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (6)..(7)

<223> Xaa是任何氨基酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<223> Xaa是Ala或Val

<400> 143

Cys Xaa Xaa Thr Xaa Xaa Xaa Gly Xaa Gly Cys

1 5 10

<210> 144

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 144

Cys Pro Ile Glu Asp Arg Pro Met Cys

1 5

<210> 145

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 145

His Glu Trp Ser Tyr Leu Ala Pro Tyr Pro Trp Phe

1 5 10

<210> 146

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 146

Met Cys Pro Lys His Pro Leu Gly Cys

1 5

<210> 147

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 147

Arg Met Trp Pro Ser Ser Thr Val Asn Leu Ser Ala Gly Arg Arg

1 5 10 15

<210> 148

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 148

Ser Ala Lys Thr Ala Val Ser Gln Arg Val Trp Leu Pro Ser His Arg

1 5 10 15

Gly Gly Glu Pro

20

<210> 149

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 149

Lys Ser Arg Glu His Val Asn Asn Ser Ala Cys Pro Ser Lys Arg Ile

1 5 10 15

Thr Ala Ala Leu

20

<210> 150

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 150

Glu Gly Phe Arg

1

<210> 151

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 151

Ala Gly Leu Gly Val Arg

1 5

<210> 152

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 152

Gly Thr Arg Gln Gly His Thr Met Arg Leu Gly Val Ser Asp Gly

1 5 10 15

<210> 153

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 153

Ile Ala Gly Leu Ala Thr Pro Gly Trp Ser His Trp Leu Ala Leu

1 5 10 15

<210> 154

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 154

Ser Met Ser Ile Ala Arg Leu

1 5

<210> 155

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 155

His Thr Phe Glu Pro Gly Val

1 5

<210> 156

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 156

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<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 靶向序列

<400> 157

Leu Arg Ile Lys Arg Lys Arg Arg Lys Arg Lys Lys Thr Arg Lys

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<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 氨基酸取代

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(8)

<223> Xaa是任何氨基酸

<400> 158

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa

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000

<210> 160

<400> 160

000

<210> 161

<400> 161

000

<210> 162

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000

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000

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<211> 736

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> AAV衣壳变体

<400> 165

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Ala Leu Lys Pro Gly Ala Pro Gln Pro

20 25 30

Lys Ala Asn Gln Gln His Gln Asp Asn Ala Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Gly Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Gln Gln Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Leu Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Ala Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg

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Pro Val Glu Gln Ser Pro Gln Glu Pro Asp Ser Ser Ala Gly Ile Gly

145 150 155 160

Lys Ser Gly Ala Gln Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln Thr

165 170 175

Gly Asp Thr Glu Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Ile Gly Glu Pro Pro

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Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile

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Gln Val Lys Glu Val Thr Asp Asn Asn Gly Val Lys Thr Ile Ala Asn

325 330 335

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340 345 350

Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Glu Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro

355 360 365

Ala Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asp

370 375 380

Gly Ser Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe

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Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Gln Phe Ser Tyr Glu

405 410 415

Phe Glu Asn Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu

420 425 430

Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ser

435 440 445

Lys Thr Ser Cys Gln Pro Thr Val Met Asn Gln Thr Leu Lys Phe Ser

450 455 460

Val Ala Gly Pro Ser Asn Met Ala Val Gln Gly Arg Asn Tyr Ile Pro

465 470 475 480

Gly Pro Ser Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Thr Thr Val Thr Gln Asn

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515 520 525

Glu Gly Glu Asp Arg Phe Phe Pro Leu Ser Gly Ser Leu Ile Phe Gly

530 535 540

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545 550 555 560

Thr Asn Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Ser

565 570 575

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580 585 590

Thr Gly Trp Val Gln Asn Gln Gly Ile Leu Pro Gly Met Val Trp Gln

595 600 605

Asp Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His

610 615 620

Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Met

625 630 635 640

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645 650 655

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660 665 670

Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln

675 680 685

Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr Ser Asn

690 695 700

Tyr Tyr Lys Ser Asn Asn Val Glu Phe Ala Val Asn Thr Glu Gly Val

705 710 715 720

Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu

725 730 735

<210> 166

<211> 736

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> AAV衣壳变体

<400> 166

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Ala Leu Lys Pro Gly Ala Pro Gln Pro

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Lys Ala Asn Gln Gln His Gln Asp Asn Ala Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Gly Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Gln Gln Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Leu Leu Glu Pro

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Leu Gly Leu Val Glu Glu Ala Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg

130 135 140

Pro Val Glu Gln Ser Pro Gln Glu Pro Asp Ser Ser Ala Gly Ile Gly

145 150 155 160

Lys Ser Gly Ala Gln Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln Thr

165 170 175

Gly Asp Thr Glu Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Ile Gly Glu Pro Pro

180 185 190

Ala Ala Pro Ser Gly Val Gly Ser Leu Thr Met Ala Ser Gly Gly Gly

195 200 205

Ala Pro Val Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Ser Ser

210 215 220

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Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu

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Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile

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Gln Val Lys Glu Val Thr Asp Asn Asn Gly Val Lys Thr Ile Ala Asn

325 330 335

Asn Leu Thr Ser Thr Val Gln Val Phe Thr Asp Ser Asp Tyr Gln Leu

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Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Glu Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro

355 360 365

Ala Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asp

370 375 380

Gly Ser Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe

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Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Gln Phe Ser Tyr Glu

405 410 415

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420 425 430

Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ser

435 440 445

Lys Thr Phe Gly Val Pro Asn Gln Pro Leu Gln Thr Leu Lys Phe Ser

450 455 460

Val Ala Gly Pro Ser Asn Met Ala Val Gln Gly Arg Asn Tyr Ile Pro

465 470 475 480

Gly Pro Ser Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Thr Thr Val Thr Gln Asn

485 490 495

Asn Asn Ser Glu Phe Ala Trp Pro Gly Ala Ser Ser Trp Ala Leu Asn

500 505 510

Gly Arg Asn Ser Leu Met Asn Pro Gly Pro Ala Met Ala Ser His Lys

515 520 525

Glu Gly Glu Asp Arg Phe Phe Pro Leu Ser Gly Ser Leu Ile Phe Gly

530 535 540

Lys Gln Gly Thr Gly Arg Asp Asn Val Asp Ala Asp Lys Val Met Ile

545 550 555 560

Thr Asn Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Ser

565 570 575

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580 585 590

Thr Gly Trp Val Gln Asn Gln Gly Ile Leu Pro Gly Met Val Trp Gln

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Asp Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His

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Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Met

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Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln

675 680 685

Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr Ser Asn

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Tyr Tyr Lys Ser Asn Asn Val Glu Phe Ala Val Asn Thr Glu Gly Val

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Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu

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<210> 167

<211> 736

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> AAV衣壳变体

<400> 167

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser

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Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Ala Leu Lys Pro Gly Ala Pro Gln Pro

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Lys Ala Asn Gln Gln His Gln Asp Asn Ala Arg Gly Leu Val Leu Pro

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Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Gly Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

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Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

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Gln Gln Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala

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Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

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Leu Gly Leu Val Glu Glu Ala Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg

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Pro Val Glu Gln Ser Pro Gln Glu Pro Asp Ser Ser Ala Gly Ile Gly

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Lys Ser Gly Ala Gln Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln Thr

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Gly Asp Thr Glu Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Ile Gly Glu Pro Pro

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Ala Ala Pro Ser Gly Val Gly Ser Leu Thr Met Ala Ser Gly Gly Gly

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Ala Pro Val Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Ser Ser

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Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Gln Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile

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Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu

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Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile

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Gln Val Lys Glu Val Thr Asp Asn Asn Gly Val Lys Thr Ile Ala Asn

325 330 335

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Gly Ser Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe

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Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Gln Phe Ser Tyr Glu

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Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ser

435 440 445

Lys Thr Gln Arg Gly Gln Ala Ala Pro Phe Gln Thr Leu Lys Phe Ser

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Gly Pro Ser Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Thr Thr Val Thr Gln Asn

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Asn Asn Ser Glu Phe Ala Trp Pro Gly Ala Ser Ser Trp Ala Leu Asn

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Gly Arg Asn Ser Leu Met Asn Pro Gly Pro Ala Met Ala Ser His Lys

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Glu Gly Glu Asp Arg Phe Phe Pro Leu Ser Gly Ser Leu Ile Phe Gly

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Lys Gln Gly Thr Gly Arg Asp Asn Val Asp Ala Asp Lys Val Met Ile

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Thr Asn Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Ser

565 570 575

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<210> 168

<211> 736

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> AAV衣壳变体

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Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Ala Leu Lys Pro Gly Ala Pro Gln Pro

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Lys Ala Asn Gln Gln His Gln Asp Asn Ala Arg Gly Leu Val Leu Pro

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Gln Val Lys Glu Val Thr Asp Asn Asn Gly Val Lys Thr Ile Ala Asn

325 330 335

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Asn Asn Ser Glu Phe Ala Trp Pro Gly Ala Ser Ser Trp Ala Leu Asn

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515 520 525

Glu Gly Glu Asp Arg Phe Phe Pro Leu Ser Gly Ser Leu Ile Phe Gly

530 535 540

Lys Gln Gly Thr Gly Arg Asp Asn Val Asp Ala Asp Lys Val Met Ile

545 550 555 560

Thr Asn Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Ser

565 570 575

Tyr Gly Gln Val Ala Thr Asn His Gln Ser Ala Gln Ala Gln Ala Gln

580 585 590

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Lys His Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala

645 650 655

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<210> 169

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<213> 人工序列(Artificial Sequence)

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<223> AAV衣壳变体

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<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> AAV肽序列

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<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

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<212> PRT

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<400> 2594

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<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2595

Lys Thr Asp Asn Asn Asn Ser Asn

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<211> 7

<212> PRT

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<400> 2596

Lys Asp Asp Glu Asp Lys Phe

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<212> PRT

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<400> 2597

Ser Ala Gly Ala Ser Asn

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<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2598

Ser Thr Asp Pro Ala Thr Gly Asp Val His

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<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2599

Ala Asn

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<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2600

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<211> 6

<212> PRT

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<400> 2601

Ser Gln Ser Gly Ala Ser

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<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2602

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<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2603

Thr Pro Ser Gly Thr Thr Thr Gln Ser

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<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2605

Ser Ala Asp Asn Asn Asn Ser Glu

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<212> PRT

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Gly Ser Glu Lys Thr Asn

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<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2608

Asn Arg Gln Ala Ala Thr Ala Asp Val Asn

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<211> 2

<212> PRT

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<400> 2609

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<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2610

Asp Thr Asn Gly Val Tyr Ser

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<211> 6

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2611

Ser Gln Ser Gly Ala Ser

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<211> 10

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2612

Val Phe Met Val Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu

1 5 10

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<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2613

Thr Thr Ser Gly Thr Thr Asn Gln Ser

1 5

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<211> 2

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2614

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<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2615

Ala Asn Asp Asn Asn Asn Ser Asn

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<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2616

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<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2617

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<211> 10

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2618

Asn Thr Ala Pro Thr Thr Gly Thr Val Asn

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<211> 2

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2619

Val Asn

1

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<211> 7

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2620

Asp Thr Asn Gly Val Tyr Ser

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<211> 8

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2621

Arg Leu Gly Glu Ser Leu Gln Ser

1 5

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<211> 10

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2622

Val Phe Met Val Pro Gln Tyr Gly Tyr Cys

1 5 10

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<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2623

Gly Thr Thr Leu Asn Ala Gly Thr Ala

1 5

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<211> 2

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2624

Ser Asn

1

<210> 2625

<211> 12

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2625

Ala Asn Gln Asn Tyr Lys Ile Pro Ala Thr Gly Ser

1 5 10

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<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2626

Gly Pro Ala Asp Ser Lys Phe

1 5

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<211> 6

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2627

Gln Asn Gly Asn Thr Ala

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<211> 10

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2628

Ser Asn Leu Pro Thr Val Asp Arg Leu Thr

1 5 10

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<211> 2

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2629

Asn Ser

1

<210> 2630

<211> 7

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2630

Asp Ala Ala Gly Lys Tyr Thr

1 5

<210> 2631

<211> 10

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2631

Glu Ile Lys Ser Gly Ser Val Asp Gly Ser

1 5 10

<210> 2632

<211> 10

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2632

Val Phe Thr Leu Pro Gln Tyr Gly Tyr Ala

1 5 10

<210> 2633

<211> 9

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2633

Ser Thr Asn Asn Thr Gly Gly Val Gln

1 5

<210> 2634

<211> 2

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2634

Ala Asn

1

<210> 2635

<211> 7

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2635

Ser Gly Val Asn Arg Ala Ser

1 5

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<211> 7

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2636

Leu Gln Gly Ser Asn Thr Tyr

1 5

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<211> 8

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2637

Ala Asn Pro Gly Thr Thr Ala Thr

1 5

<210> 2638

<211> 10

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2638

Thr Thr Ala Pro Ala Thr Gly Thr Tyr Asn

1 5 10

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<211> 2

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2639

Gln Phe

1

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<211> 7

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2640

Asp Ser Thr Gly Glu Tyr Arg

1 5

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<211> 7

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2641

Ser Ala Ser Thr Gly Ala Ser

1 5

<210> 2642

<211> 10

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2642

Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu

1 5 10

<210> 2643

<211> 9

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2643

Asn Gln Ser Gly Ser Ala Gln Asn Lys

1 5

<210> 2644

<211> 2

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2644

Ser Val

1

<210> 2645

<211> 8

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2645

Lys Thr Asp Asn Asn Asn Ser Asn

1 5

<210> 2646

<211> 7

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2646

Lys Asp Asp Lys Asp Lys Phe

1 5

<210> 2647

<211> 6

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2647

Ser Ala Gly Ala Ser Asn

1 5

<210> 2648

<211> 10

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2648

Ser Thr Asp Pro Ala Thr Gly Asp Val His

1 5 10

<210> 2649

<211> 2

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2649

Ala Asn

1

<210> 2650

<211> 7

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2650

Asp Asn Asn Gly Leu Tyr Thr

1 5

<210> 2651

<211> 7

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2651

Ser Glu Thr Ala Gly Ser Thr

1 5

<210> 2652

<211> 10

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2652

Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu

1 5 10

<210> 2653

<211> 9

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2653

Asn Pro Gly Gly Thr Ala Gly Asn Arg

1 5

<210> 2654

<211> 2

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2654

Ala Asn

1

<210> 2655

<211> 8

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2655

Leu Asp Gln Asn Asn Asn Ser Asn

1 5

<210> 2656

<211> 7

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2656

Lys Asp Asp Glu Asp Arg Phe

1 5

<210> 2657

<211> 6

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2657

Gly Ala Thr Asn Lys Thr

1 5

<210> 2658

<211> 10

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2658

Asn Thr Ala Ala Gln Thr Gln Val Val Asn

1 5 10

<210> 2659

<211> 2

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2659

Thr Gly

1

<210> 2660

<211> 7

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2660

Asp Ser Gln Gly Val Tyr Ser

1 5

<210> 2661

<211> 8

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2661

Asn Gly Thr Ser Gly Gly Ala Thr

1 5

<210> 2662

<211> 10

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2662

Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu

1 5 10

<210> 2663

<211> 9

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2663

Thr Thr Gly Gly Thr Ala Asn Thr Gln

1 5

<210> 2664

<211> 2

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2664

Ala Asn

1

<210> 2665

<211> 8

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2665

Thr Gly Gln Asn Asn Asn Ser Asn

1 5

<210> 2666

<211> 7

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2666

Lys Asp Asp Glu Glu Arg Phe

1 5

<210> 2667

<211> 6

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2667

Asn Ala Ala Arg Asp Asn

1 5

<210> 2668

<211> 11

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2668

Asn Thr Ala Pro Gln Ile Gly Thr Val Asn Ser

1 5 10

<210> 2669

<211> 2

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2669

Thr Ser

1

<210> 2670

<211> 7

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2670

Asn Thr Glu Gly Val Tyr Ser

1 5

<210> 2671

<211> 8

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2671

Asn Ser Thr Ser Gly Gly Ser Ser

1 5

<210> 2672

<211> 10

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2672

Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu

1 5 10

<210> 2673

<211> 9

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2673

Ile Asn Gly Ser Gly Gln Asn Gln Gln

1 5

<210> 2674

<211> 2

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2674

Ala Val

1

<210> 2675

<211> 8

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2675

Val Thr Gln Asn Asn Asn Ser Glu

1 5

<210> 2676

<211> 7

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2676

Lys Glu Gly Glu Asp Arg Phe

1 5

<210> 2677

<211> 6

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2677

Gly Thr Gly Arg Asp Asn

1 5

<210> 2678

<211> 10

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2678

Gln Ala Gln Ala Gln Thr Gly Trp Val Gln

1 5 10

<210> 2679

<211> 2

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2679

Asn Asn

1

<210> 2680

<211> 7

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2680

Asn Thr Glu Gly Val Tyr Ser

1 5

<210> 2681

<211> 8

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2681

Asn Gly Thr Ser Gly Gly Ser Thr

1 5

<210> 2682

<211> 10

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2682

Val Phe Met Val Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu

1 5 10

<210> 2683

<211> 9

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2683

Gln Thr Thr Gly Thr Gly Gly Thr Gln

1 5

<210> 2684

<211> 2

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2684

Ala Asn

1

<210> 2685

<211> 8

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2685

Thr Asn Gln Asn Asn Asn Ser Asn

1 5

<210> 2686

<211> 7

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2686

Lys Asp Asp Asp Asp Arg Phe

1 5

<210> 2687

<211> 6

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2687

Gly Ala Gly Asn Asp Gly

1 5

<210> 2688

<211> 10

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2688

Asn Thr Gln Ala Gln Thr Gly Leu Val His

1 5 10

<210> 2689

<211> 2

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2689

Thr Asn

1

<210> 2690

<211> 7

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2690

Asn Thr Glu Gly Val Tyr Ser

1 5

<210> 2691

<211> 8

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2691

Asn Gly Thr Ser Gly Gly Ser Thr

1 5

<210> 2692

<211> 10

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2692

Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu

1 5 10

<210> 2693

<211> 9

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2693

Ser Thr Gly Gly Thr Ala Gly Thr Gln

1 5

<210> 2694

<211> 2

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2694

Ser Ala

1

<210> 2695

<211> 8

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2695

Leu Ser Gln Asn Asn Asn Ser Asn

1 5

<210> 2696

<211> 7

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2696

Lys Asp Asp Glu Glu Arg Phe

1 5

<210> 2697

<211> 6

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2697

Gly Ala Gly Lys Asp Asn

1 5

<210> 2698

<211> 10

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2698

Asn Ala Ala Pro Ile Val Gly Ala Val Asn

1 5 10

<210> 2699

<211> 2

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2699

Thr Asn

1

<210> 2700

<211> 7

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2700

Asn Thr Asp Gly Thr Tyr Ser

1 5

<210> 2701

<211> 8

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2701

Asn Gly Thr Ser Gly Gly Ser Thr

1 5

<210> 2702

<211> 10

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2702

Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu

1 5 10

<210> 2703

<211> 9

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2703

Ser Thr Gly Gly Thr Gln Gly Thr Gln

1 5

<210> 2704

<211> 2

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2704

Ser Ala

1

<210> 2705

<211> 8

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2705

Leu Ser Gln Asn Asn Asn Ser Asn

1 5

<210> 2706

<211> 7

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2706

Lys Asp Asp Glu Glu Arg Phe

1 5

<210> 2707

<211> 6

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2707

Gly Ala Gly Arg Asp Asn

1 5

<210> 2708

<211> 10

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2708

Asn Thr Gly Pro Ile Val Gly Asn Val Asn

1 5 10

<210> 2709

<211> 2

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2709

Thr Asn

1

<210> 2710

<211> 7

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2710

Asn Thr Glu Gly Thr Tyr Ser

1 5

<210> 2711

<211> 8

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2711

Arg Leu Gly Thr Thr Ser Ser Ser

1 5

<210> 2712

<211> 10

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2712

Val Phe Met Val Pro Gln Tyr Gly Tyr Cys

1 5 10

<210> 2713

<211> 9

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2713

Gly Glu Thr Leu Asn Gln Gly Asn Ala

1 5

<210> 2714

<211> 2

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2714

Ala Phe

1

<210> 2715

<211> 12

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2715

Ala Ser Gln Asn Tyr Lys Ile Pro Ala Ser Gly Gly

1 5 10

<210> 2716

<211> 7

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2716

Gly Pro Ser Asp Gly Asp Phe

1 5

<210> 2717

<211> 6

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2717

Val Thr Gly Asn Thr Thr

1 5

<210> 2718

<211> 10

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2718

Thr Thr Ala Pro Ile Thr Gly Asn Val Thr

1 5 10

<210> 2719

<211> 2

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2719

Ser Ser

1

<210> 2720

<211> 7

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2720

Asp Thr Thr Gly Lys Tyr Thr

1 5

<210> 2721

<211> 8

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2721

Arg Ile Gly Thr Thr Ala Asn Ser

1 5

<210> 2722

<211> 10

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2722

Val Phe Met Val Pro Gln Tyr Gly Tyr Cys

1 5 10

<210> 2723

<211> 9

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2723

Gly Asn Ser Leu Asn Gln Gly Thr Ala

1 5

<210> 2724

<211> 2

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2724

Ala Tyr

1

<210> 2725

<211> 12

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2725

Ala Asn Gln Asn Tyr Lys Ile Pro Ala Ser Gly Gly

1 5 10

<210> 2726

<211> 7

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2726

Gly Ala Gly Asp Ser Asp Phe

1 5

<210> 2727

<211> 6

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2727

Pro Ser Gly Asn Thr Thr

1 5

<210> 2728

<211> 10

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2728

Thr Thr Ala Pro His Ile Ala Asn Leu Asp

1 5 10

<210> 2729

<211> 2

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2729

Asn Ser

1

<210> 2730

<211> 7

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2730

Asp Asn Ala Gly Asn Tyr His

1 5

<210> 2731

<211> 8

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2731

Arg Leu Gly Thr Thr Ser Asn Ser

1 5

<210> 2732

<211> 10

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2732

Val Phe Met Val Pro Gln Tyr Gly Tyr Cys

1 5 10

<210> 2733

<211> 9

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2733

Gly Glu Thr Leu Asn Gln Gly Asn Ala

1 5

<210> 2734

<211> 2

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2734

Ala Phe

1

<210> 2735

<211> 12

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2735

Ala Ser Gln Asn Tyr Lys Ile Pro Ala Ser Gly Gly

1 5 10

<210> 2736

<211> 7

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2736

Gly Pro Ser Asp Gly Asp Phe

1 5

<210> 2737

<211> 6

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2737

Val Thr Gly Asn Thr Thr

1 5

<210> 2738

<211> 10

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2738

Thr Thr Ala Pro Ile Thr Gly Asn Val Thr

1 5 10

<210> 2739

<211> 2

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2739

Ser Ser

1

<210> 2740

<211> 7

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2740

Asp Thr Thr Gly Lys Tyr Thr

1 5

<210> 2741

<211> 8

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2741

Arg Leu Gly Ser Ser Asn Ala Ser

1 5

<210> 2742

<211> 10

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2742

Val Phe Met Val Pro Gln Tyr Gly Tyr Cys

1 5 10

<210> 2743

<211> 9

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2743

Gly Gly Thr Leu Asn Gln Gly Asn Ser

1 5

<210> 2744

<211> 2

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2744

Ser Gly

1

<210> 2745

<211> 12

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2745

Ala Ser Gln Asn Tyr Lys Ile Pro Gln Gly Arg Asn

1 5 10

<210> 2746

<211> 7

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2746

Ala Asn Asp Ala Thr Asp Phe

1 5

<210> 2747

<211> 6

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2747

Ile Thr Gly Asn Thr Thr

1 5

<210> 2748

<211> 10

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2748

Thr Thr Val Pro Thr Val Asp Asp Val Asp

1 5 10

<210> 2749

<211> 2

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2749

Asp Ser

1

<210> 2750

<211> 7

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2750

Asp Asn Ala Gly Ala Tyr Lys

1 5

<210> 2751

<211> 8

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2751

Arg Ile Gln Gly Pro Ser Gly Gly

1 5

<210> 2752

<211> 10

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2752

Ile Tyr Thr Ile Pro Gln Tyr Gly Tyr Cys

1 5 10

<210> 2753

<211> 9

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2753

Val Ser Gln Ala Gly Ser Ser Gly Arg

1 5

<210> 2754

<211> 2

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2754

Ala Ala

1

<210> 2755

<211> 12

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2755

Ala Ser Asn Ile Thr Lys Asn Asn Val Phe Ser Val

1 5 10

<210> 2756

<211> 7

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2756

Phe Ser Gly Glu Pro Asp Arg

1 5

<210> 2757

<211> 8

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2757

Val Tyr Asp Gln Thr Thr Ala Thr

1 5

<210> 2758

<211> 10

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2758

Val Thr Pro Gly Thr Arg Ala Ala Val Asn

1 5 10

<210> 2759

<211> 2

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2759

Ala Asp

1

<210> 2760

<211> 7

<212> PRT

<213> 依赖病毒腺相关病毒(Dependovirus adeno-associated virus)

<400> 2760

Ser Asp Thr Gly Ser Tyr Ser

1 5

Claims (73)

1.一种腺相关病毒(AAV)载体，所述腺相关病毒(AAV)载体包含(i)重组衣壳蛋白和(ii)被所述衣壳蛋白包裹的货物核酸，其中所述衣壳蛋白包含具有SEQ ID NO:12-20中的任一者的序列的肽。

2.如权利要求1所述的AAV载体，其中所述货物核酸包含5'和3'AAV反向末端重复序列。

3.如权利要求1或2所述的AAV载体，其中所述货物核酸包含转基因。

4.如权利要求3所述的AAV载体，其中所述转基因编码治疗蛋白或RNA。

5.如权利要求1-4中任一项所述的AAV载体，其中所述重组衣壳蛋白与AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12、AAVrh.8、AAVrh.10、AAVrh32.33、AAVrh74、牛AAV或禽类AAV衣壳的原生序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性。

6.如权利要求5所述的AAV载体，其中所述重组衣壳蛋白与所述AAV9衣壳的原生序列具有至少90％序列同一性。

7.如权利要求1-6中任一项所述的AAV载体，其中所述肽位于对应于所述原生AAV9衣壳的氨基酸451-458或AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV10、AAV11、AAV12、AAVrh.8、AAVrh.10、AAVrh32.33、AAVrh74、牛AAV或禽类AAV中的等效氨基酸残基的氨基酸位置处，并且其中所述肽选自SEQ ID NO:12-18中的任一者。

8.如权利要求1-6中任一项所述的AAV载体，其中所述肽位于对应于所述原生AAV9衣壳的氨基酸587-594或AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV10、AAV11、AAV12、AAVrh.8、AAVrh.10、AAVrh32.33、AAVrh74、牛AAV或禽类AAV中的等效氨基酸残基的氨基酸位置处，并且其中所述肽选自SEQ ID NO:19或20。

9.如权利要求1所述的AAV载体，其中所述重组衣壳蛋白包含:

a)第一肽，其具有SEQ ID NO:12-18中的任一者的序列；和

b)第二肽，其具有SEQ ID NO:19-20中的任一者的序列。

10.如权利要求9所述的AAV载体，其中所述第一肽在氨基酸位置451-458处，并且所述第二肽在氨基酸587-594处，其中氨基酸编号是基于所述原生AAV9衣壳或AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV10、AAV11、AAV12、AAVrh.8、AAVrh.10、AAVrh32.33、AAVrh74、牛AAV或禽类AAV中的等效氨基酸残基。

11.如权利要求1-10中任一项所述的AAV载体，其中所述肽抑制至少一种抗体与所述衣壳蛋白的结合。

12.如权利要求11所述的AAV载体，其中所述肽抑制所述AAV载体的感染力被所述抗体中和。

13.如权利要求1-12中任一项所述的AAV载体，其中所述肽选择性地与表达于中枢神经系统(CNS)中细胞表面上的受体结合。

14.如权利要求13所述的AAV载体，其中所述细胞是在前运动皮层、丘脑、小脑皮层、齿状核、脊髓或背根神经节中。

15.如权利要求1-14中任一项所述的AAV载体，其中所述肽选择性地与表达于心脏中细胞表面上的受体结合。

16.如权利要求1-15中任一项所述的AAV载体，其中所述衣壳蛋白还包含修饰所述衣壳的HI环的肽。

17.一种腺相关病毒(AAV)载体，所述腺相关病毒(AAV)载体包含(i)突变型AAV9衣壳蛋白和(ii)被所述衣壳蛋白包裹的货物核酸，其中所述衣壳蛋白包含在所述原生AAV9衣壳蛋白序列的氨基酸451-458处具有序列X¹-X²-X³-X⁴-X⁵-X⁶-X⁷-X⁸(SEQ ID NO:158)的肽，其中所述肽不存在于所述原生AAV9衣壳蛋白序列中。

18.如权利要求17所述的AAV载体，其中X¹不是I，X²不是N，X³不是G，X⁴不是S，X⁵不是G，X⁶不是Q，X⁷不是N，并且/或X⁸不是Q。

19.如权利要求18所述的AAV载体，其中X¹是S、F、Q、G、K或R。

20.如权利要求18或19所述的AAV载体，其中X²是C、G、R、D、T或Q。

21.如权利要求18-20中任一项所述的AAV载体，其中X³是Q、V、G、Y、R、F或D。

22.如权利要求18-21中任一项所述的AAV载体，其中X⁴是P、Q、A或R。

23.如权利要求18-22中任一项所述的AAV载体，其中X⁵是T、N、A、P或I。

24.如权利要求18-23中任一项所述的AAV载体，其中X⁶是V、Q、A或I。

25.如权利要求18-24中任一项所述的AAV载体，其中X⁷是M、P、R、Q或N。

26.如权利要求18-25中任一项所述的AAV载体，其中X⁸是N、L、F、E、H或A。

27.如权利要求17所述的AAV载体，其中X¹是S，X²是C，X³是Q，X⁴是P，X⁵是T，X⁶是V，X⁷是M，并且X⁸是N。

28.如权利要求17所述的AAV载体，其中X¹是F，X²是G，X³是V，X⁴是P，X⁵是N，X⁶是Q，X⁷是P，并且X⁸是L。

29.如权利要求17所述的AAV载体，其中X¹是Q，X²是R，X³是G，X⁴是Q，X⁵是A，X⁶是A，X⁷是P，并且X⁸是F。

30.如权利要求17所述的AAV载体，其中X¹是G，X²是D，X³是Y，X⁴是A，X⁵是P，X⁶是I，X⁷是R，并且X⁸是E。

31.如权利要求17所述的AAV载体，其中X¹是K，X²是T，X³是R，X⁴是R，X⁵是I，X⁶是V，X⁷是Q，并且X⁸是H。

32.如权利要求17所述的AAV载体，其中X¹是F，X²是G，X³是F，X⁴是P，X⁵是N，X⁶是Q，X⁷是P，并且X⁸是L。

33.如权利要求17所述的AAV载体，其中X¹是R，X²是Q，X³是D，X⁴是Q，X⁵是P，X⁶是I，X⁷是N，并且X⁸是A。

34.一种腺相关病毒(AAV)载体，所述腺相关病毒(AAV)载体包含(i)突变型AAV9衣壳蛋白和(ii)被所述衣壳蛋白包裹的货物核酸，其中所述衣壳蛋白包含在所述原生AAV9衣壳蛋白序列的氨基酸587-594处具有序列X¹-X²-X³-X⁴-X⁵-X⁶-X⁷-X⁸(SEQ ID NO:158)的肽，其中所述肽不存在于所述原生AAV9衣壳蛋白序列中。

35.如权利要求34所述的AAV载体，其中X¹不是A，X²不是Q、X³不是A，X⁴不是Q，X⁵不是A，X⁶不是Q，X⁷不是T，并且/或X⁸不是G。

36.如权利要求35所述的AAV载体，其中X¹是S。

37.如权利要求35或36所述的AAV载体，其中X²是K或T。

38.如权利要求35-37中任一项所述的AAV载体，其中X³是V。

39.如权利要求35-38中任一项所述的AAV载体，其中X⁴是E或D。

40.如权利要求35-39中任一项所述的AAV载体，其中X⁵是S。

41.如权利要求35-40中任一项所述的AAV载体，其中X⁶是W或I。

42.如权利要求35-41中任一项所述的AAV载体，其中X⁷是T或A。

43.如权利要求35-42中任一项所述的AAV载体，其中X⁸是E或I。

44.如权利要求34所述的AAV载体，其中X¹是S，X²是K，X³是V，X⁴是E，X⁵是S，X⁶是W，X⁷是T，并且X⁸是E。

45.如权利要求34所述的AAV载体，其中X¹是S，X²是T，X³是V，X⁴是D，X⁵是S，X⁶是I，X⁷是A，并且X⁸是I。

46.一种腺相关病毒(AAV)载体，所述腺相关病毒(AAV)载体包含(i)重组衣壳蛋白和(ii)被所述衣壳蛋白包裹的货物核酸，其中所述衣壳蛋白包含与SEQ ID NO:165-187中的任一者至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的氨基酸序列。

47.如权利要求46所述的AAV载体，其中所述衣壳蛋白包含SEQ ID NO:165-187中的任一者的氨基酸序列。

48.如权利要求47所述的AAV载体，其中所述衣壳蛋白包含SEQ ID NO:175的氨基酸序列。

49.如权利要求47所述的AAV载体，其中所述衣壳蛋白包含SEQ ID NO:180的氨基酸序列。

50.如权利要求46-49中任一项所述的AAV载体，其中所述AAV载体将所述货物核酸选择性地递送至中枢神经系统的细胞或组织。

51.如权利要求50所述的AAV载体，其中所述中枢神经系统组织是前运动皮层、丘脑、小脑皮层、齿状核、脊髓或背根神经节。

52.如权利要求46-49中任一项所述的AAV载体，其中所述AAV载体将所述货物核酸递送至大脑，但不将所述AAV载体递送至心脏。

53.如权利要求46-49中任一项所述的AAV载体，其中所述AAV载体将所述货物核酸递送至大脑和递送至心脏。

54.如权利要求53所述的AAV载体，其中所述货物核酸至大脑的递送比至心脏的递送更高。

55.如权利要求53所述的AAV载体，其中所述货物核酸的递送在大脑中与心脏中大致相同。

56.一种核酸序列，所述核酸序列编码权利要求1至55中任一项所述的AAV载体的重组衣壳蛋白。

57.如权利要求56所述的核酸序列，其中所述核酸序列是DNA序列。

58.如权利要求56所述的核酸序列，其中所述核酸序列是RNA序列。

59.一种表达载体，所述表达载体包含权利要求56-58中任一项所述的核酸序列。

60.一种细胞，所述细胞包含权利要求56-58中任一项所述的核酸序列。

61.一种细胞，所述细胞包含权利要求59所述的表达载体。

62.一种药物组合物，所述药物组合物包含权利要求1-55中任一项所述的AAV载体。

63.如权利要求62所述的药物组合物，其中所述组合物还包含药学上可接受的载体。

64.一种药物组合物，所述药物组合物包含权利要求60或61所述的细胞。

65.如权利要求64所述的药物组合物，其中所述组合物还包含药学上可接受的载体。

66.一种治疗有需要的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的权利要求1-55中任一项所述的AAV载体。

67.如权利要求66所述的方法，其中所述受试者患有中枢神经系统疾病或病症。

68.如权利要求66或67所述的方法，其中所述受试者是哺乳动物。

69.如权利要求68所述的方法，其中所述受试者是人类。

70.一种将核酸分子引入至细胞中的体外方法，所述方法包括使所述细胞与权利要求1-55中任一项所述的AAV载体接触。

71.如权利要求1-55中任一项所述的AAV载体，所述AAV载体用作药剂。

72.如权利要求1-55中任一项所述的AAV载体，所述AAV载体用于治疗有需要的受试者的方法中。

73.如权利要求1-55中任一项所述的AAV载体，所述AAV载体用于治疗或预防有需要的受试者的CNS疾病或病症的方法中。

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