CN113430173A - 一株宽裂解谱、耐高温沙门氏菌噬菌体及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一株宽裂解谱、耐高温沙门氏菌噬菌体，保藏编号为CGMCC No.21995，对全基因进行测序后发现，不具有毒力基因和溶原性基因；该沙门氏菌噬菌体RDP‑SA‑20049在90℃高温条件下作用60min，效价保持在1.0×10⁷pfu/mL以上，具有较高的生物活性，具有良好的耐高温特性；能裂解包括5株鼠伤寒沙门氏菌、4株例鸡白痢沙门氏菌、1株乙型副伤寒沙门氏菌、1株伤寒沙门氏菌、7株肠炎沙门氏菌和沙门氏菌BS‑20036在内的致病菌，并具有裂解率高的特点，裂解率达99％，具有更强的裂解性能，在治疗沙门氏菌感染疾病具有很好的优势，效价高，防治效果好。

Description

一株宽裂解谱、耐高温沙门氏菌噬菌体及其应用

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一株宽裂解谱、耐高温沙门氏菌噬菌体及其在禽类动物致病性沙门氏菌感染中的应用。

背景技术

沙门氏菌病是公共卫生学上具有重要意义的人畜共患病之一,是一种常见的食源性致病菌。鸡是沙门氏菌最重要的宿主，沙门氏菌可引起鸡急性或慢性疾病，感染沙门氏菌的鸡也可通过产出带菌的蛋导致沙门菌的垂直传播，从而形成恶性循环。当鸡群暴发沙门氏菌病时死亡率可达80％，对养禽业造成巨大的经济损失。人一旦摄入了含有大量沙门氏菌的动物性食品，可导致食源性中毒，据统计在世界各国的种类细菌性食物中毒中，沙门氏菌引起的食物中毒常列榜首。抗生素一直以来被作为治疗细菌感染的首选而得到广泛应用。但随着抗生素的广泛使用甚至滥用，目前细菌对抗生素的耐药性问题已十分严重，抗生素耐药性正在对全球健康构成威胁。

噬菌体(Bacteriophage或Phage)是自然界中最丰富的生物之一，在地球上大约蕴藏着10³¹的噬菌体颗粒，也就是平均每1g土壤或水中包含了多达10⁸数量的噬菌体。长期以来，其一直被认为可作为治疗药物和杀菌剂使用。噬菌体对某些细菌菌株具有高度特异性，其取决于噬菌体吸附器官和受体菌表面受体的分子结构和互补性，不会影响生物体或内源性组织的正常运转。另外，即使随着细菌耐药性的发展，噬菌体仍会大量保持。在过去几年中，使用噬菌体来检测和控制食品和环境中致病菌及腐败菌的生长受到越来越多研究者的关注，并且该方法已有许多研究支持。Bmvko LYu等讨论了噬菌体检测致病菌的优缺点，指出利用噬菌体检测食品安全及加工制造过程等方面存在的致病菌具有极大的应用前景。例如在蜜瓜切片、鸡胸肉、白菜、牛奶、鸡皮、豆芽菜等食品中发现使用噬菌体制剂后沙门氏菌菌量显著减少。另外，已从多种食物如碎牛肉、猪肉等肉制品、奶制品、生菜等分离出沙门氏菌噬菌体，因此，噬菌体是食品中的天然微生物。本试验从现代化肉鸡养殖场采集病禽肝脏样品，筛选能裂解多株病原菌的宽噬菌谱沙门氏菌烈性噬菌体，并对其生物学特性进行分析，以期为噬菌体防治沙门氏菌的研究提供理论依据。

发明内容

本发明的目的在于提供一株宽裂解普沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20049，旨在解决养殖场禽类因感染沙门氏菌，发病急而治疗不及时，且因致病菌耐药性而导致用药无效等问题。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一株宽裂解谱、耐高温沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20049，透过电镜观察，头部为二十面体，长径约61nm，横径约67nm，尾长约112nm，直径约10nm；根据国际病毒分类学组织病毒分类第九次报告，可将该噬菌体归类为有尾病毒目肌尾病毒科。经测定，该沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20049不具有毒力基因和溶原基因，该噬菌体于2021年03月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号CGMCC No.21995。

进一步地，该沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20049在90℃高温条件下作用60min，效价保持在1.0×10⁷pfu/mL以上，具有较高的生物活性，具有良好的耐高温特性。

进一步地，该沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20049具有广谱的杀灭沙门氏菌的能力。

本发明的另一目的在于提供该沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20049在制备预防和或治疗沙门氏菌引起的疾病的药物中的用途。

本发明的另一目的在于提供该沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20049在制备预防和或治疗沙门氏菌引起的疾病的饲料中的用途。

本发明还提供了一种用于防治沙门氏菌的杀菌组合物，包括有效量的沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20049。

本发明的另一目的在于提供一种沙门氏菌噬菌体的应用，该目的是通过将沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20049用作为由沙门氏菌引起的细菌感染提供潜在的治疗药物或保健品来实现的。

本发明的另一目的在于提供一种预防和或治疗沙门氏菌引起的疾病的添加剂，该目的是通过其有效成分包括沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20049来实现的。

本发明还提供了一种清洁剂或消毒剂，包括沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20049。

本发明的有益效果体现在：

(1)本发明从河北一发病养殖场病禽的肝脏中取样分离得到了沙门氏菌BS-20036，并通过实验确定了BS-20036的致病性和耐药性，以BS-20036为宿主，从环境中分离得到一株高裂解性沙门氏菌噬菌体，该噬菌体RDP-SA-20049对禽类养殖环境中致病性沙门氏菌BS-20036具有强裂解效用，为工业化生产噬菌体用于禽类养殖环境中致病性沙门氏菌BS-20036的防治提供了噬菌体来源；

(2)本发明所提供的沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20049是从自然界中分离的烈性噬菌体，经毒理实验证明其安全、无任何副作用；供试噬菌体不含毒力基因或不良基因；本发明未对供试噬菌体进行任何遗传修饰；

(3)本发明沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20049在90℃高温条件下作用60min，效价保持在1.0×10⁷pfu/mL以上，具有良好的耐高温特性；

(4)本发明沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20049裂解谱广，能裂解包括5株鼠伤寒沙门氏菌、4株例鸡白痢沙门氏菌、1株乙型副伤寒沙门氏菌、1株伤寒沙门氏菌、7株肠炎沙门氏菌和沙门氏菌BS-20036在内的致病菌，并具有裂解率高的特点，裂解率达99％，具有更强的裂解性能，在治疗沙门氏菌感染疾病具有很好的优势，效价高，防治效果好；

(5)本发明所提供的沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20049可作为应用于环境消毒的各种产品的有效成分，例如包括但不限于以液体浸泡、喷洒、与含水性载体联合使用等形式对配水系统、医疗设施、养殖业设施、公共及私人设施或其他环境表面进行消毒去污，可有效控制目标细菌的生长及活性；所述液体浸泡、喷洒形式包括但不限于洗涤剂、消毒剂、去污剂等；所述含水性载体包括但不限于磷酸盐缓冲液、LB培养基、氯游离水等；

(6)本发明的沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20049，可用于制备组合物，试剂，或试剂盒；可应用于沙门氏菌的快速检测，其包括但不限于以试纸、试剂盒等形式对目标样本中的沙门氏菌进行检测，或对临床样本中的目标致病菌进行筛选，可有效确保检测的灵敏度；

(7)本发明的沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20049可以单独或混合使用，用作为生物杀菌剂，饲料添加剂，或因沙门氏菌引起的细菌感染的治疗药物、保健品及医疗器械；沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20049可应用于治疗或预防由沙门氏菌引起的感染性疾病；可被沙门氏菌感染的寄主包括人类、家畜(猪、牛、羊等)、家禽(鸡、鸭、鹅等)，以及各种兽类、鱼类、鼠类等；

(8)本发明的沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20049可以应用于工业生产，可由宿主菌特异性扩增，可应用标准病毒纯化方法高度纯化，具有极好的推广前景。本领域技术人员可以根据本发明的记载及本领域常识将本发明所述沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20049或其组合物制备成应用于医疗，检测，消毒及食品防护等方面的各种产品加以工业应用。产品形式可包括但不限于以载体携带、浓缩注射或药剂浸泡等形式施用于被防治的寄主体表、口部、直肠、胸膜内部等部位；作为实施方案之一，所述载体携带形式包括但不限于口服含水性载体、口服无水性载体、乳膏制剂等；浓缩注射形式包括但不限于疫苗注射、胸膜腔注射、经脉注射等；药剂浸泡形式包括但不限于气雾剂、漂洗剂等。

附图说明

本发明上述的以及其他的特征、性质和优势将通过下面结合附图和实施例的描述而变的更加明显：

图1为本发明噬菌体RDP-SA-20049的电镜图；

图2为本发明噬菌体RDP-SA-20049的一步生长曲线示意图；

图3为本发明噬菌体RDP-SA-20049的酸碱稳定性示意图；

图4为本发明噬菌体RDP-SA-20049对宿主菌BS-20036的裂解曲线图；

图5为本发明噬菌体RDP-SA-20049对热稳定性示意图；

图6为本发明噬菌体RDP-SA-20049的遗传稳定性示意图；

图7为本发明噬菌体RDP-SA-20049入血试验示意图。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。

本发明使用从河北一肉鸡养殖场病禽肝脏中分离得到的沙门氏菌BS-20036，并通过实验确定了BS-20036的致病性和耐药性，以BS-20036为宿主，从环境中分离得到一株沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20049，并通过全基因组序列确定了RDP-SA-20049的基因型。

实施例1病原菌及噬菌体的分离及鉴定

(1)致病性沙门氏菌BS-20036的分离及其鉴定

从河北一肉鸡养殖场采样，无菌操作取病禽的肝脏，在选择性培养基(SS琼脂)上划线，37℃培养过夜后，在培养基上形成圆形、扁平、边缘透明整齐、表面光滑湿润的中心有黑点的菌落，挑取典型菌落继续划线纯化3次，使其菌落大小与性状基本一致，然后挑取单菌落接种于5mL LB肉汤中，37℃200rpm振荡培养6h，得到均匀浑浊的细菌悬浮液。再通过16sRNA分子鉴定和血清型鉴定，确定为致病性沙门氏菌，将其中一株命名为BS-20036，保存于-80℃冰箱。

(2)噬菌体分离及鉴定

样品处理：无菌操作剪取适量病禽的肝脏并加入适量无菌水，加入大小钢珠，置于细胞碾磨器中研磨5min，吸取研磨液加入3mL无菌水，于离心机10000rpm,5min离心，吸取离心浸出液，再用0.22μm滤器过滤上清液，收集滤液备用。

制备混合菌悬液：取0.2mL菌悬液和0.1mL滤出液加入5mL LB肉汤中，37℃，200rpm振荡培养过夜，然后10000rpm离心5min，取上清液过0.22μm滤器，收集滤液备用。

噬菌体分离：采用双平板法进行噬菌体的分离，取混合菌悬液滤出液0.1mL和沙门氏菌菌悬液0.1mL混合均匀后，加入加热至37-45℃3mL4％琼脂的肉汤中，然后铺双平板，放于37℃培养箱培养6-8h后，观察结果，如果有噬菌体，那么平板上会有透明的噬菌斑。挑取噬菌斑于1mL生理盐水中浸泡10min后，取0.1mL浸出液和0.1mL菌悬液，加入加热至37-45℃3mL4％琼脂的肉汤中，铺双平板，37℃培养箱培养4-6h纯化，照此步骤纯化2-3次，至噬菌斑大小均匀为止，由此得到一株噬菌体，并将其命名为RDP-SA-20049。RDP-SA-20049在双平板形成的噬菌斑直径在4mm-5mm，圆形透明，无晕圈。

(3)噬菌体的保藏

将噬菌体增殖液与60％的甘油按照1：1的比例混合后，于液氮中保存。

实施例2噬菌体的电镜观察

取20μL含噬菌体粗制颗粒的液体滴于铜网上，自然沉淀15min，并用滤纸从侧面吸去多余液体，加一滴2％的磷钨酸(PTA)于铜网上对噬菌体染色10min，然后用滤纸从侧面吸去染色液，待样品干燥后用电子显微镜观察噬菌体形态。

由图1可知，该噬菌体RDP-SA-20049头部为二十面体，长径约61nm，横径约67nm，尾长约112nm，直径约10nm；根据国际病毒分类学组织病毒分类第九次报告，可将该噬菌体归类为有尾病毒目肌尾病毒科。

实施例3噬菌体生长曲线的绘制

取对数生长期的沙门氏菌悬液，按照最佳感染复数的比例接种沙门氏菌BS-20036和噬菌体RDP-SA-20049，在37℃的条件下，水浴10min，然后常温下12000r/min离心5min，弃上清液，除去未吸附在宿主上的游离噬菌体，如此用LB肉汤培养基洗涤两次。再将沉淀重悬于37℃的LB肉汤培养基中，迅速置于37℃200r/min的摇床中振荡培养并计时。前30min每隔5min取样计数，30-60min每隔20min计数，60-300min每隔30min计数，以时间为横坐标，噬菌体效价对数值为纵坐标，绘制生长曲线，得出噬菌体的潜伏期、裂解期，并计算出平均裂解量。平均裂解量＝暴发末期噬菌体滴度/感染初期宿主菌浓度。

由图2可知，噬菌体感染宿主菌后的30min内效价没有明显变化，表明其潜伏期约30min，感染后30-90min内噬菌体的滴度明显上升，之后趋于稳定，表明噬菌体裂解期约为65min。通过计算，噬菌体裂解量约为193PFU/感染细胞，表明噬菌体具有极强的裂解和复制能力。

实施例4：噬菌体pH稳定性的测定

用稀盐酸和稀NaOH溶液调节生理盐水的酸碱度，配成pH值为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12的缓冲液，再用配置好的缓冲溶液将噬菌体稀释成1×10¹⁰pfu/mL，将稀释液在37℃下，水浴1h，用生理盐水10倍比稀释后铺双平板；37℃倒置培养4-6h后计数。

由图3可知，在不同pH条件下培养1h后，噬菌体RDP-SA-20049在pH6.0-9.0范围能维持较好的活性，噬菌体滴度没有明显变化，而且在pH为8.0时，噬菌体效价最高，达10^11.5pfu/ml。随着pH值的升高或降低，噬菌体的滴度下降明显。但是在pH为2.0以及12.0时都能保持较高的效价，在10⁶pfu/ml以上。上述结果表明，噬菌体RDP-SA-20049能耐受弱酸和弱碱条件，具有良好的酸碱耐受性。

实施例5：最佳感染复数的测定

按照感染复数为10:1、1:1、1:10、1:100、1:1000、1:10000的比例将噬菌体增殖液和宿主加入LB肉汤中，并且确保培养体系的总体积相同。于37℃200rpm振荡培养8h后，常温下12000r/min离心5min，取上清液铺双平板测定其效价。结果如表1所示。

表1

由表1数据可知，当感染复数为1:100时，培养8h后，增殖液较为清澈，效价最高，表明本发明沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20049的最佳感染复数为1:100。

实施例6：噬菌体对宿主裂解曲线

将培养6h的宿主菌悬液以1:100的比例接种到100mL LB培养基中，37℃200rpm振荡培养2h(OD约0.45，约6.0*10⁸cfu/mL)将菌悬液分装在4个灭菌的锥形瓶中，以最佳感染复数，向其中3个加入噬菌体增殖液0.2mL(约4.0*10¹¹pfu/mL，经0.22μm膜过滤)，同时以不加噬菌体的作为对照，取其平均值，结果如图4所示。

由图4可知，沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20049加入到宿主菌BS-20036菌悬液中，作用1h后出现一定的裂解效果，约1h后，OD600值开始下降，持续作用至13h，14h后混合菌液开始变得浑浊，OD值逐渐升高。由于前期，噬菌体处于对宿主菌的吸附、侵染阶段，只有少部分噬菌体开始裂解宿主，因此，其裂解宿主的量远远小于宿主的增长量，因此，OD600在在前1h，依旧保持一定的上升趋势，伴随着噬菌体数量的指数增加，在1h后，其裂解宿主数量大于宿主的增殖速度，所以OD600值开始逐渐降低，混合菌液达最澄清。持续作用13小时后，混合菌液出现返浊，原敏感菌被噬菌体裂解，被突变的耐受菌所取代的一种菌群交替。

实施例7：噬菌体热稳定性的测定

将噬菌体原液分装到EP管中，分别在40℃、50℃、60℃、70℃、80℃和90℃的条件下孵育30min和60min，然后用生理盐水10倍比稀释后，铺双平板测定其效价。结果如图5所示。

由图5可知，噬菌体在30℃～50℃以内活性保持稳定，效价在10¹¹pfu/mL以上；在80℃条件下作用30min和60min后，效价降低2-3个数量级，但仍保持较高的效价；在90℃高温条件下作用60min，效价保持在1.0×10⁷pfu/mL以上，表明该沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20049具有良好的耐高温特性；同时该实验也表明噬菌体RDP-SA-20049可以采用较高的温度进行干燥，同时也方便存储和运输，该特性使得噬菌体RDP-SA-20049具有较高的应用价值和使用价值。

实施例8：稳定性遗传实验

将RDP-SA-20049连续传代29次，每代培养基中加入等量的RDP-SA-20049和BS-20036，每代培养时间6h，然后铺双平板，测定其效价。结果如图6所示。

由图6可知，将RDP-SA-20049连续传29代后，测定其效价，其效价稳定在10¹¹pfu/mL以上，说明该噬菌体具有较好的遗传稳定性，适合工业化生产。

实施例9：裂解率实验

无菌条件下，分别取1mL样品和1mL宿主菌菌液(1×10⁶CFU/mL)，37℃孵育15分钟，混匀后用生理盐水稀释至10^-1-10^-3个梯度，每个梯度取100μL涂布于LB琼脂平板上，置于37℃，培养24小时，每个梯度重复两次。同时取1mL生理盐水和1mL宿主菌菌液(1×10⁶CFU/mL)作为空白对照，重复以上步骤。选取30-300个菌落数的平板进行计数。该试验重复3次，取其平均值。噬菌体裂解率＝(1-处理组菌落数/对照组菌落数)×100％。

经计算，RDP-SA-20049的裂解率达99％，对宿主有较好的裂解效果，适合在养殖过程中使用。

实施例10：RTD实验

在平板上划分区域，在每一区域中心处滴加一滴宿主菌(约10μL)，晾干，将不同稀释度的一滴噬菌体液滴加到宿主菌的斑点上，晾干，37℃培养过夜。根据宿主菌生长状况，凡是不能连片生长的，称为CL浓度(CL浓度是可以完全性裂解环境中宿主菌的浓度，可以用于指导生产实践的稀释方案)，实验表明，RDP-SA-20049在稀释10⁷倍后对宿主菌仍有较好的裂解效果。

实施例11：噬菌体入血实验

在口服6h后，用PCR的方法进行噬菌体的检测。

其中，噬菌体检测方法：

(1)DNA提取：具体方法参照杭州博日科技有限公司Simply P病毒DNA/RNA提取试剂盒说明。

(2)PCR反应体系和反应程序：

表2PCR反应体系

序号	试剂名称	体积(μL)
			1	mix	25
2	上游引物	2.5
			3	下游引物	2.5
4	模板	5
			5	超纯水	15
6	总体积μL	50μL

反应程序：95℃5min→95℃45s，55℃45秒，72℃45秒，35个循环→72℃10min。

结果如图7所示，噬菌体在心、肝、肺、肾、胸腺和血清均能检测到，说明该噬菌体RDP-SA-20049可以通过口服进入血液，通过血液循环到达心、肝、肺、肾和胸腺。

实施例12噬菌体动物实验

选择高致病性沙门氏菌BS-20036，稀释100倍后，注射0.1mL，建立动物模型，初始50只鸡，造模成功后，剩余41只鸡，随机分成5组。选择噬菌体作为实验对象；设定阴性对照与阳性对照，分别记录鸡群生长状况，实验开始时，肉鸡为15日龄。具体分组和治疗方案如表3所示。

表3

编号	分组	治疗方案	实验鸡数
				1	阴性对照组	不治疗，建模后自由生长	8
2	噬菌体组(RDP-SA-20049)	饲喂高活性噬菌体制剂(10<sup>11</sup>pfu/mL)，连续3天	9
				3	阳性对照1(硫酸链霉素)	饲喂抗生素-1，连续3天	8
4	阳性对照2(强力霉素)	饲喂抗生素-2，连续3天	8

给药10天之后，对不同实验组的肉鸡进行解剖。结果发现，阴性对照组包心包肝现象明显，气囊有许多干酪样物；阳性对照组2(强力霉素)经饲喂后气囊清亮，没有浑浊，也没有包心包肝现象，噬菌体组(RDP-SA-20049)、阳性对照组1(硫酸链霉素)包心包肝现象不明显，气囊症状明显减轻，气囊基本明亮，基本无浑浊。通过以上结论可以得出：噬菌体RDP-SA-20049可以用于沙门氏菌BS-20036引起的气囊炎的治疗。

实施例13：裂解谱实验

选择实验室已鉴定好的29株沙门氏菌(5鼠伤寒沙门氏菌、4鸡白痢沙门氏菌、4斯坦利沙门氏菌、1乙型副伤寒沙门氏菌、1伤寒沙门氏菌、7肠炎沙门氏菌、1汤卜逊沙门氏菌、2山夫登堡沙门氏菌、2肯坦基沙门氏菌、1不在A-E群沙门氏菌)和沙门氏菌BS-20036，进行裂解谱实验。结果如表4所示。

表4

由表4可知，本发明噬菌体RDP-SA-20049在5株鼠伤寒沙门氏菌、4株鸡白痢沙门氏菌、1株乙型副伤寒沙门氏菌、1株伤寒沙门氏菌、7株肠炎沙门氏菌和沙门氏菌BS-20036平板上均能形成噬菌斑，说明噬菌体RDP-SA-20049宿主谱较为广泛，对肉鸡养殖中常见的沙门氏菌均能裂解，通过以上动物实验和裂解普实验，充分说明该噬菌体的在肉鸡沙门氏菌病治疗中的价值。

实施例14：噬菌体大规模生产的方法

该工艺流程简便，可靠有效，有利于工业化生产。

具体步骤

1、种子制备

(1)宿主种子制备：无菌条件下，挑取单菌落划线于SS琼脂培养基，37℃培养过夜，

然后挑取培养好的单菌落于5mL LB肉汤中，37℃，180rpm震荡培养6h后，以1％的接种量接种于LB液体培养基中，37℃，180rpm震荡培养6h。做好的种子液至于4℃冰箱保存备用。

(2)噬菌体种子制备:将保存的噬菌体种子适当稀释后，取100μL与100μL宿主菌置于上层培养基中，倒双层平板，37℃，培养4-6h，然后用无菌涂布棒将其刮取，将其在10000rpm，5min离心，然后过0.22μm的滤膜除菌，将收集到的过滤液至于4℃冰箱中保存备用。

噬菌体和宿主分别以1％和5％的比例接种于LB培养基中，37℃，180rpm，培养6-8h，至增殖液澄清出现大量絮状物为止。

2、噬菌体增殖：在种子罐中接种2％的宿主菌，培养2-3h后，OD600在0.6-0.8，再以1％的接种量接种噬菌体种子，培养6-8h，至溶氧反升，pH趋于稳定为止。

在种种罐中接种2％的宿主菌，培养4-5h，待溶氧开始缓慢下降为止。

将准备好的宿主菌以5％的接种量，接种到大发酵罐中，培养2-3h，待溶氧开始缓慢下降，然后再以5％的接种量接入噬菌体种子，将通气量提高至1vvm，转速提高至150rpm，培养8-10h，待溶氧反升，pH升高，结束增殖。

注：发酵罐参数：种子罐200-300rpm，37℃，通气量0.6-1vvm。发酵罐：120-150pm，37℃，通气量0.6-1vvm。

培养基成分：酵母浸粉0.5％，蛋白胨1％，牛肉膏0.1％，甘油0.5％，氯化钠0.5％，磷酸二氢钾0.1％，磷酸氢二钾0.1％，氯化钙20ppm，氯化镁20ppm。

3、噬菌体后处理工艺

(1)过滤：分别采用采用800nm和500nm的陶瓷膜进行过滤，以去除细胞碎片和未裂解的宿主菌，过滤压力小于0.4mpa，减小剪切力对噬菌体的损伤。

(2)浓缩：采用中空纤维膜进行浓缩，以提高噬菌体效价。

(3)稳定剂：加入5％的甘油，海藻糖3％，聚山梨醇酯3％，磷酸二氢钠3％，磷酸钠2％，搅拌至完全溶解。

(4)除菌：采用三级过滤(玻璃纤维0.45μm，玻璃纤维0.2μm，聚醚砜0.22μm)除菌。

(5)将过滤除菌的噬菌体液体置于4℃条件下储存。

应当指出的是，具体实施方式只是本发明比较由代表性的例子，显然本发明的技术方案不限于上述实施例，还可以有很多变形。本领域的普通技术人员，以本发明所明确公开的或根据文件的书面描述毫无异议的得到的，均应认为是本专利所要保护的范围。

序列表

<110> 瑞科盟（青岛）生物工程有限公司

<120> 一株宽裂解谱、耐高温沙门氏菌噬菌体及其应用

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 43924

<212> DNA

<213> 2 Ambystoma laterale x Ambystoma jeffersonianum

<400> 1

cttaatagac gctcaggggg cgtctgatgc gctatgatgg tcatacgcat ttaagagagg 60

attgcatgaa actcaaatta aaacagccgg acgccgaagt agtggccgcc gcgcacgaag 120

aagcggttaa cgcaaaccgt cgccgtaaac gtccgcgtgg taaacaaagc ctgtatcagt 180

catccagaca ttccgccgaa ctatgggacc cggactattg cgacgaatta atccggttct 240

tcgaccgcac gtcatgggaa ctcgtaccca cgtctaaagg cgacgaacgc ccgcttatcc 300

aggacaaacc gccgtcgctg gcccgcttcg cattacacat cggtgtaacc atcccgatta 360

tcaagctatg gctccgagag gttcccgcat tcgccgaagc atatgagacg gcacaagccc 420

tggaagaggc gtatttcacg gagaccggtg ccgccgggat atctgctacg tttgccgcag 480

caaagcttgg gcttaataaa actgttgtgg aagaaacgcg cgacgaacca attagcgaag 540

taactattaa ggtggtgtcc ggtgaacgtt gatataacgg ctacagaacc gcaaggcgcg 600

ttccttaatc tgcattgtaa attcccggcc ttcgtcgctg gcttcggcac aggtaaatca 660

gaggtcatgt gcaactccgc cctactcgac agcatggagg gcggtagcga ttcccttatt 720

gccatgtacg aaccgacgta tgaccttgtg cgtcttatcc tcgcccctcg tatggaagag 780

aagctatccg attggggtat tcgctacaag tacaataaat ccgacaacat catttatacc 840

tcatccgggc aattcgggga ttttgtcctt cgcacattgg ataatccagc acgaattgtt 900

ggctacgaat cgtttcgcgc aaaaatcgac gagttggaca cgttaaataa agaccacgcc 960

gagcacgcct ggaacaaagt tatcgcccgt aaccgtcagt tgccgcgtac atatcgtccg 1020

attaccccga agcctgctaa tacagtttcg gtatttacga caccagaagg cttccgtttt 1080

gtgcacgacc gatgggttgt aaaaaagaat cctggttatg agatgattca agccccgaca 1140

acttccaatc cctttctacc ggaagattat gtgcagtcgt tgcgggatac gtatccaggc 1200

cagttaattg acgcctacat cgacggcgaa tttgtcaacc tgacatccgg cagcgtgtat 1260

tatgcttacg accgacgtaa gaacagcagt cgagagacta tacaacctgg ggaaacgctg 1320

tatatcggtc aggacttcaa cgtcgggcat atggctagca ccgtatacgt tcagcgtgag 1380

tatgtctggc acgcggtagc cgagctggtg gatatgttcg acaccccgga tgtggtcagg 1440

gagattaccg aacgatggaa gcgtaacggg catcacattg ttatgtatcc ggacgccagt 1500

ggtaagaacc gtaaatcgac tgatgcaagt acctcggata ttgcccaatt acagaacgcg 1560

ggtttcgaga tacgtgcaaa atcggttaac cctgccgtta aagaccgtgt agcatcggtg 1620

aataaagcgc tggagtctgg tagattaatg gtcaacgagc aggcttgccc ggttacagca 1680

cgttgcctgg agcaacaggc ttacgataaa aacggtatac cggataagac aagcggcaac 1740

gaccaccaga acgacgcgac aggataccct atcgcctacg aaatgccgtt ggttaaacct 1800

gtatcccata tcccggttac tttcgcactt taagaggatt gttaaatgtt aacagcaaac 1860

ggccagggtt ctggcgtaaa aaccaagcac cgtgaatggc tgcactacgc accgaaatgg 1920

cagaaggtgc gtcatgcgct tgcgggggac ctggttggct acttacgcaa cgtcggcctt 1980

aatgaaccag ataaagcata cggcgaagcg cgtcaggcag aatacgaggc gggcggcatc 2040

gtatacaact tcacccggcg aacgctgtcg ggaatggtcg gtagcgtcat gcgcaaagaa 2100

ccagaaatca atattccgaa ggagctggaa tacctgctta aaaatgcaga tgggtctggt 2160

gtaggcctaa tacagcatgc gcaggacacg ctcatggaga ttgactcagt aggtcgtggt 2220

ggtcttcttg ttgacgcccc ggaaacaggc gcagctacgg ctgccgaaca gaacgcgggc 2280

ttgcttaacc ctacaatcgc tttttacacg actgagaaca tcgttaactg gcgactcacg 2340

cgagtaggtt ctgtaaaccg ggtcactatg gttgtactgc gcgaaatatg ggagtaccac 2400

gaaccgggaa acgagttcga aactaaatac ggcgaacagt atcgcgttct ggacatcgat 2460

agtgacggca actaccgtca acgtcttttt cgtttcgatg ccgaaggtgg tgcgcaggaa 2520

gacgtcgtgg agatttaccc ggacttaggg gaatcattac gaggggtaat tccgtttacc 2580

tttattgggg cgaccaataa cgacgccact atcgacgacg ctccgctact accactcgcg 2640

gaacttaaca tcgggcacta caggaacagc gcggacaacg aagaatccag cttcgttgtt 2700

gggcagccga ccctgtttat ctacccaggc gagaacttaa cacctcaagc attcaaggaa 2760

gcgaacccta acggtatcaa atttggtagt cggcgtgggc ataacctggg gtacggaggt 2820

agcgcacagc ttatccaggc aggcgagaat aacctggccc gccagaatat gctggacaaa 2880

gagcagcagg ctatccagat tggtgcgcag cttatcaccc cgactcagca aatcaccgca 2940

caatctgccc gaatccagcg cggtgccgat acatccgtca tggcgacaat tgcgcgtaac 3000

gtaagccagg catatacaga tgctttacgt tgggtggcgg taatgttggg taaacccgaa 3060

gataccgagg ttgaattccg ccttaatatg gacttcttcc tggaacctat gacagctcaa 3120

gacagggctg cgtggatggc agacattaat gccggattac tgcccgccac tgcttattac 3180

gctgcgttgc gtaaggcggg ggtgactgac tggaccgacg aggatattct gaacgctatt 3240

gaagatgcac ctttgccgtc gggtgctgtt actcaggtag cgggggagat tccgcaagcg 3300

gcacaacaac aacaacagga gtaaagaaaa aggccccatt acggggcctt agttttagcg 3360

gatattagcc gcgcatttac gcacaacccg cggtatcgtc tctttcagct catcccatga 3420

gttgactgct tccatatcca acaacgtcac catagccttt tgaatatcac tccgtaattg 3480

attagttttg gcgtcctgag agtcccaagt atcaaaaccg gttacttcac ggatatctat 3540

agactctttt atcgcattcg ccacatgtat gaagtgaccg atacgcccaa tcctaccctc 3600

cgtacgctca atcatccggc taacggcggc attaagttct acaaaactaa cagcaccaat 3660

gttacggagt tctacctgcc gttgagttaa gaaacggtct ataacgagga aatggaaata 3720

agtgctgtat tgctcagcaa tatataccgc caaatgaaga cttaaccacg ttttcccgtt 3780

cctccctctc gttgttttca acggaacaac gccagtctcc tcttcacaaa cacgcatgaa 3840

gtctctgcag tcgtccgttt tcagtatctg cgcaagattt cttggttgaa gaccattatc 3900

aaatctccat tggttcattt gaatggttag tgttgacgca tcaatatact catcgctggt 3960

gaactcaatt tcaccgtagg ggaactctaa agtctgcgct ttcatatctt tttcctcagt 4020

taattgcctc acttaaatta tattcctaat ttctttgttt atgcaaacat taatacgcaa 4080

aattatagca aattagactt ttttaggtgt ttgtgtagga ataacctatg ccatgctaag 4140

atacatcaac aacgcaaaca ggagggatat atgccactac ttacatcatt aatcagccat 4200

caaatatggc tgcaacgcaa cgccagtagc gaagtaaaag acctggcgcc attcatccag 4260

cagatgcgcg atgaggttaa gcggcaggtg ttgttgtttg gtgatgacag cagaacggcg 4320

gcgagactta ccaccatgct gcgggaactt gagcaagcac tgaacgggat tacgtctggg 4380

tggtatgaga agctactggc tgatgcccgt gagctttcag actatgaagt taactggaac 4440

gtaaaaaccc tgtcgaccaa cgttaacgct aatttcgtaa caccggccgc cgaacaagta 4500

tgggctgcca ctactttcgc accacttgaa ctaagcgaaa agccggttga ttttgtttcg 4560

ttaatgggcg gatggcggca agccgaggtg aatcgcttgg ttatgggcgt taagtctgga 4620

ttcgtacagg gtatgaccac acggcggata gttaagaacg ttgtcgggcc cggcggactg 4680

gctgatatct ccgagcgtaa cgccgctacc gttatccgta ccgccctggc gcacgtatcc 4740

aacgaagcgc ggcaacaggt ttacgctcag aacgacgaca tcattacaaa atacgagtgg 4800

gtatcaaccc ttgattcccg tacttcggct gtttgtcgtt cgcgagattc tatgcagtac 4860

gaaataggca aaggtccgct accaccagcg catccgaact gtcggtcgag tacagcaccg 4920

gtaataagtt ccgaattcga cttcctggat aagggtgcaa aacgagcggc gaggggtgca 4980

gaaggaggcc agcaggtaag cgcagacacc acctattacg agttccttaa acaacaaccg 5040

gcgtggttcc aggacgaagc gctcggtcct gtcaggggta agatttttcg taatagtggg 5100

ataaccccgg aagaatttcg tgtaatatcg gtagacggat tcgggcgtcc gttaactctt 5160

aaagagatgg cggaactcga taggcgtgtt gccgattatc tgaaagagga atagagatgg 5220

gctttttcaa agttaaagat gtgccttcac gacgtgtagt tcagtactcc cgtgtgtctg 5280

gtgcgggtga aggtgtcgtg tatatcaaag atgaatcggt tctcggtgaa tcggtggacg 5340

aaatgccgtt tgcagataag acaggactga ccacaatctc ggacggcgtc ctgtacgaag 5400

tgccgtatct ggacggagca ggtgatgtgt acttcgatac acagccagca gatgtagaat 5460

tgaaagacgg ttccgcaaaa ttaaccgttg tcgtgaaagg tggcaaagcg ccctacgatt 5520

tgcaatggtt taaaaatggt aaagaggtga tcaacgtccc gtacgttgag ggtgaactaa 5580

ctgttaaaga cccgggggag tatttcgtca gggcggtaga tgctgacggg gtatcggtgg 5640

taagtaaagc ggctaaggtc tcagaacctg agtaacgaaa ggccccgtca aggggcctta 5700

attttacaca ccattattcc agttattcct taccaatgta aattcaggaa tactttattc 5760

aaaaagtaga cttctattat tttttatgtt acgctaccta cgctttcagc gtaccgcggt 5820

gcggacgcgt gaagcgggcg ccgcagcgcc ctagcgtaac cgcgaacgca ttcggaaggg 5880

ccgagctata ttgctttcag tatttaacta agattcgccg tataaggttt acagatatac 5940

gagtttaacg cccggcttac gccgggctta gcgtataaag aaaggggata ccatgaattg 6000

gaaagtaacc gcattaacca cggcagccgg catcctttcc ttgtggttat acggccagta 6060

caactacaga agcgggtggg tagaaggccg agagaatctt gtttcacagc aacaaaagaa 6120

ggcacaagct gagctgacga agaaaacaca acggcagcag cagaatgata ctaaggccgc 6180

ctccgccgaa tcggaaggca aagaaaattc ggaggctatc acccatgaag tcatcaaata 6240

tgttacccgt cctggccgta ctgtctgtga gtttcctcct gaacgggtgt caatcaaacg 6300

acgcgccgcc gagaatgcta attccatccc cggatatgac actaatgcaa ccgccgtgca 6360

agcttattcc accgagcagt gacgctgatg aggacctggc cgtcgatgtg cagaacgccg 6420

agtgcacacg gcagttacgt ctgaaagtgt tccggttgca ggagtacata aggaatattc 6480

tggaatagtt gccttagtaa gtggaataat ttattcttgt tacagaaaca ccgggtggcc 6540

cggtgtccta aagtccaggg gacatattga ctatgaatcg ttttttacgt tacccgcttc 6600

atgaagaagc cggggtagaa gataaaccgg gtgcaggtga cgcaccaaaa atgtacaccg 6660

ccgaagaagt gcaggccttg attgagaaag aagtggccgg gctcaaggca aatcaggaag 6720

cgctccttag cgagaaaaag gaagccgcgc gccgggctaa agaagccgaa gaagaacggc 6780

aacgcgccca ccaggaagca ctgaaggctg ccggtaaaat ggacgaattt gaaaagacga 6840

ttcgtagtca gtatgaaccc gtactgaaag agaaagaaga acgctatgct tctttagccg 6900

cgcgaattct tggtagtgaa cgtaaggctg ttttaggttc tttcgctggt gattttatca 6960

ccccagaagc ggtagaaatc ctggcgccgt tcgttaagac cgagtttgaa ggcgaagacg 7020

tagtgactaa attcatgggt gcggacggca atgttgttac taccgaccct gagcagttcc 7080

gcaaatacct gcgcgaacat aaagcttttt cgcatttgat taaagcaaat gcagcttccg 7140

gtggcggggc ttccgggaat aaaggcggcg gggccgcacc agcgtttaaa gatatgagtg 7200

aaagtgagcg attggctctc tataaatcaa accctgccga atttgaacgg caacttaaag 7260

ccctgaggaa ataaataatg gcaatcacca ctattggtaa catcgtaact ggtaatatcc 7320

ccgtactggc gtcctatatg acggaagacc cggtagagaa aaccgcgttt ttcaactccg 7380

gaattttgac cccaactccg tatgctgccg agattgcccg cggcccgtct aacatcgcta 7440

acctgccgtt ctggaaagct atcgatactt ctatcgagcc taactactcg aatgacgtat 7500

accaggacat cgcgaccccg cgcgctattc agaccggtga aatgatggcc cgcgttgcat 7560

atctgaacga aggtttcggc caggcagacc tgactgtaga acttaccagc cagaatccat 7620

tgcagtctgt agcctctcgc ctggataact tctggcagcg tcaggctcag cgtcgtctga 7680

ttgctaccgc cctcggtctg tacaacgaca acgtatccgc tactgatgca tatcacgagc 7740

agaacgacat ggtggtcgat gtttctgcaa cttcaggctt cgacgcaggt gcattcatcg 7800

atgctaccca gactatgggc gatgcattga tgggcaacgg cggtgaggtt ctcggtgcta 7860

tcgcaatgca cagcttcgta tacgcacagg cccgtaaagc tcagcttatc gacttcatcc 7920

gtgacgctga gaacaacacc atgttcgcca cctaccaggg ctaccgtgtt atcgtcgatg 7980

acagcatgac cgtagtaggc cagggtgcgc agcgcaagtt catctccgtc atcttcggcc 8040

agggtgctat cggctatggc gaaggcaatc ccgagatgcc gttggaatac gagcgtgaag 8100

catctcgtgc taatggtggt ggtgttgaaa ccctgtggac gcgtaaaacg tggttgctgc 8160

atccgtttgg ttacagcttc accagcgctg taatcaccgg caacggtacc gagactatcg 8220

cacgttccgc tagctggcag gacctggcta acgccgccaa ctggaaccgt gtagttgacc 8280

gtaagcatgt gccaattgcg ttcctggtaa ctggtgtagg tgcttaatcg tagggtatac 8340

tcttgaggga cttcggtccc tcttttcatt tatacggagg ctacataatg tcaaagacag 8400

gtaaagggct gccccgcagc cttgttaacg cggaattcga tattcccgcg gcgaccacaa 8460

cggcaatcgg aggggttaaa aagtccgcta cggtagcggc accaccggcg attagcgcgg 8520

gtagcggtgc agccgccgcc gccgctgcac ctacgaaaga agagttcgac gcactggtca 8580

ccaactacaa taagttgcgt acggatgtga cttcattgca caccgccgtt actaatctgt 8640

taaccgccct taaaaacgct ggtactgtat cctgaggagg ataaaaatgg ttgatgtaat 8700

taaacgtcgt attgttggtg tatctgatga tagtccgcag gacgggcagg tagagattga 8760

tatggaaaac gtgacgccgt tgcgtttctc taccggtctc aatgatacta cctcggtaac 8820

atctgggcag gctatcaccc tgacggtggt acttgccgac ggaatggacc ctaaaaccgt 8880

tcaatggtat aaggataata acgctatcgc tggtgcaacc gctttgactt acactaaggc 8940

caactccgca gcggcggatt ccggtactta caaagtcgta gcgcacgacg gttacggtaa 9000

tatcatttca gatagtacgg tagttaccgt aagttaaata cacgcggcct ccgggccgct 9060

ttaaggatta gacatgacag ataattacgt agtacgggaa caatacaagg gtgtggtcga 9120

ggttgacggg cagttagtcc cgatgcgcga agaagcgaac ccggaagcat taatcgaaac 9180

tcagccagtg gtcgaagaac cgcattacaa cggtggcgga gagcctaagc agcgtcgtcg 9240

ccgcaaaagc gtagaggaat aatttatgcc gcttatcgtg gaaaccggtc aaggcatccc 9300

gaatgctgac tcttacgtca gcctggaaga cgggcgcgca ctggccgcta agtatggtct 9360

cgaactaccg gaagatgaca ccgcggcgga ggccgctctt cgtaatggcg cggtgtacgt 9420

cggccttttt gagtctcaga tgtgcggacg tcgagtatcc gctagccagg cgctggcgtt 9480

cccgagaacc ggtattactc tacacgggtt ccctcaaccg tccaacgtta tccctccgtt 9540

aattgttcag gctcaggtaa tggctgccgt agagtatggc gcgggtaccg acgttcgagg 9600

gtctacagac gggcgagagg ttcagaccga acgagttgag ggtgcggtaa ccgtgtccta 9660

ctttaaaaat ggctactcag gcagcacagt aagcatcacg gcagccgatg atgcgctacg 9720

tcctctttta tgcggtagca ataacgccta ctcctttaat gttttcaggg gttaatcatg 9780

gctaagacta aatcagaaat attttccctt atcggtgcca acttccctga taaccagtct 9840

ggactaatta cacctgaaaa gttgcgcgaa gttaccactc agatggcgga ttctacgctg 9900

tacggcgtta aggaagtaga ggtacttcgc gcgtcgtcta cggatattca ggcgccaact 9960

accacaggta cagcgttaac cgtatccttt ggtggggcgc agaaaacaag cgctgaccct 10020

gtgatgatta atgcatccgg ggtagttacg ttcaacgccg ctggtaacta cgctatccgt 10080

gttaaattgc aggctgggcg caccggggcg agcggaacat ccatccttct gtcgcgtgtt 10140

ctgctcggcg gcgcccaatt cggttcacca gccgctacta aactggcaag cgcagacgcc 10200

acgattccta ttgaatcgcg tgtggtagtt aacgccgtcg ctgggcaaaa cttcgcggta 10260

gagattatgc gagacgcggc cgggtctaac tttggtggat tgtaccctca aacagcaacg 10320

gttacttcct ggggcgtagc cccatccgca ttgctggtca tctcaagact ggaggccgca 10380

taatgagcac cgctttcagt aaaaggatgc aaggtgtagg aactcgcctg ttaacaaaat 10440

acggcagtac cgtaatcttg attcagaaag gtcaaaaaac atgggatcct gttttaggag 10500

agtacgtttg gggggcggac acgacggtac ctcttaaatc agttccggta cctgttaacg 10560

cggggctggt aaacggaact accattcagg caggagatat ggtggttaag gccgattaca 10620

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ccatcgagaa gaagatggtt aacgatgacg ttgtagcata ctttatccag gtgagaaaat 10740

gagttttgcg cttgatgtgt ccaagttcgt ggaaaaggct aagaagaatc ctgaaaaggt 10800

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cgctaccgat aaagctggca ccacggcgac cagtaatgcc gctaatttcg tgctaaatgc 10980

cgctgactgg cacacgttta ctctaactaa caatttgccg tatgcgcagc gccttgagta 11040

tggttggtcg caacaggcgc ctcaaggctt cgttagggtt aatgtcagca ggttccagca 11100

attattaaat gaagaagcct ctaaggtgaa ataatggcaa catatttcga ggatttaaca 11160

aaagcatttg acacggcact ggtagcattc ggcgttaaca acggtataaa ggttgcgttg 11220

gagaacatcg acgcaccgac gtctacggat gtaccatatt tggcgagtta tatgttgttg 11280

gccgatacgg aacaagctga cctgttctgg accgagcaac gggcaggtat ttatcaggtg 11340

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tcagtaagcc tcggtcctct tattgttgag aatggatggg cgaagaggcc tctctcaatt 11520

aatttcatag catttacagc gaggattaga taatggcgtt acaaccatat aaaggcgcga 11580

tgaccgcgca gttttacgtt cttgagacga cgccgggggt aacacccact aacccggtat 11640

ggcaaccact gcgcaacact gggggtattc ccgccgtaac ccgcgacgcc ctcatctcta 11700

atgaactgga cggcagccgt gaaacatcat ctatccgcac cggtaaccgt caggtaactg 11760

gtgaatatgc tattgaactt agcgcggaaa gccaggatga gttgctggcc ggcgcaatga 11820

ccagttcctg ggtagcaggt tccactaaat cgggaatcag cgttaccgta gacccggtgg 11880

cgaaaacttt cacacgcgca gacggtagct ttgtgacaga cggcgttgaa gtaggcgacc 11940

tggtgcaatt cgatggttta tccggaaata acgacaaagc gttcatggtc acggctgtca 12000

cagctacagt tataaccggt gcgggtatcc agcataccct taccgccgaa tccgacgtcc 12060

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cgcttaaact tatcgacacg ttcaccatta ctaacgacaa cagcgcgtcc gcacagttcg 12420

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acagataatc cacatttcac cttctgcgta gaacatagcc tgcgagtgcc cagtttctgt 12840

ttcacgcata atgccgtaac ctttatcgat gaaccattgc tggaagacac gaccgcgttt 12900

tacggagcga ttgtatacgc caaattgttc aagttgttta ttcatccaca cggcagattg 12960

accaaacttc tgggccacct gcgttgcgtt gtacaagtta tttctgtcga tgatgcggtc 13020

gtagacatca gcttttggtg ccatttcctt gttctcaagc gcaaggcgtt ctttctcctc 13080

ccacaagtcc gcagccaacc ttaaagcctc ccccattgtc tggggcaccg gtaaggatgg 13140

tttgctcgct cgtgactcca gttcctgcca acggcggatg atggcagcgc gcattttgat 13200

gctgtaccct gaaatcagaa ttaacgtttc ctctttatcc aaaagaagca ttttatacgt 13260

gcgccccttg ctgtctttgt aatcggctga cttttcagcc gattgaatct cagacaacat 13320

tttgcggata tcagccagaa catttttatg ctccttacct gtcagttccg caatctcacg 13380

gctggacatg gtttgtgctt cactaacatt cattaattcg ttcatggttt catctcctct 13440

tgttggtatg gttatattta acttcgaaca tgcttatcgt tcaaatcaga ttctttatcg 13500

tgacgataaa aaaaaaggcc cctttcgggg cctttttctc actcatcaat attactacgg 13560

tatttccgta acttctccag actttcaatt gcttccgcta agtcggttcc tgtgtccttg 13620

tgcccccgca agcccataca caacagtttc ttcaacgcat gctgtagtgc cgggtcgcgg 13680

atatcaaatg ccctcagaac gtcgtacaca tcacaggtaa tgctatctcc gtcagtattt 13740

gtcattgtgc gattgtattt gttagtcatc tttatgccct atttatagcc gtttttgtag 13800

ctaaaaacct cactccaatc catcctttca cctacatttt agtatgttga tttggggttt 13860

atgtctcgca gcatttcaac aggtatactt atgcgggaca cctctccata acgtttatgg 13920

tatgtaatca catttgcgct tctacctgaa taataaccgc ctttactaga atactcatct 13980

ttagccgcta atgtctggtg ttgctcaaca attagaagat tagtctcttt aaccgcccgg 14040

tggtggaggt gacccgtatg gacatatgtg aacttacact gcccgtacat ctcccgatac 14100

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tacttcgcgg gatactgacg tcatgaatat taatgactac accggtctgc cgtatgactt 19560

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atctacggca acagggctac gtgtcctaac gttgaaaatc atgtcacccg gtacgatgtc 27960

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cgccgactcg tccctcagca actttaagtt accgtggggg aaataacatg ctcgactcac 41460

caattggcgt catttgcctg gtcgcaatca tcatcacctc gctaattaat atctacgccc 41520

actggattga agacggtctt ttcgggcggc tgctgtatat ggcgtcagta gtgaccgccg 41580

ctggcggcct cgcccatctc tttaccggtg ccattccacc gttcataatt acgactctcg 41640

tcgctatatt cgcgctcaag tcaattcgtc atatttgcgt gaaaggcgcc cgctactaca 41700

aataccggag gatgtatgtc aaaccgaaac atcagtgaca acggattaca cttcaccgcc 41760

gcgttcgagg ggttccgcgg gaccgcctac cgcgcgacac cttcagaaaa atactttact 41820

attggctacg gccactacgg cgcagatgta aaagaaggtc agaagattac cgaaggccag 41880

ggtctcctgc ttctgcataa agatatggct aaggccgtag ctgcggtaga cgccgtcgcg 41940

cacccgtcgc taaatcagtc acagttcgat gccgtgtgtg accttgtgta taacgctggt 42000

gcaggtgtga ttgccgcttc taccggtaca ggtcaggcgc tgcgcaaagg cgatgcatct 42060

acactgcgta ataagttaac tcagttccat tatcagaacg gcaaatcact cctcggattg 42120

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ggtaagtaac cttagcaacc acattcctgc tgacgcgttc tggttcgccg cgatgcagac 42540

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aatgaatcgt gtatgtaaag aaactttacg ccagcgaatt atgtatctgg agtcggtaag 42960

taagttaggt ctgtcaatga gcgaataatt ccatttagaa gcatacaaga tgctgctgga 43020

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cacggcacat tagcggatac gtgccgggag acgggactta atgagatgac attgtccaag 43140

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ttgccgttgt tatatacctg atgtggattt tgtttctttg gccatttgtt gaggcggtaa 43380

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ccatacatag tcgcgggtgg cgatgggaag ccgtaggtaa atggtgggtt tataaagacg 43560

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ccggcatcct gctgtggttt ttcaaatgag attactaatc atcccgaacg cctgggttat 43800

cgccgcagct aacgaccatt acggcggcga tggtagaaga gcactacgac acggcctata 43860

taactgacaa aagcccgctt ctgcgggctt ttctgtacac aggccttcat tcccctgtac 43920

aatc 43924

Claims (10)

1.一株宽裂解谱、耐高温沙门氏菌噬菌体，其特征在于，该噬菌体为沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20049，保藏编号为CGMCC No.21995。

2.根据权利要求1所述的宽裂解谱、耐高温沙门氏菌噬菌体，其特征在于，透过电镜观察，该沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20049头部为二十面体，长径61nm，横径67nm，尾长112nm，直径10nm，为有尾病毒目肌尾病毒科。

3.根据权利要求1所述的宽裂解谱、耐高温沙门氏菌噬菌体，其特征在于，该沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20049在90℃高温条件下作用60min，效价保持在1.0×10⁷pfu/mL以上，具有较高的生物活性，具有良好的耐高温特性。

4.根据权利要求1所述的宽裂解谱、耐高温沙门氏菌噬菌体，其特征在于，该沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20049具有广谱的杀灭沙门氏菌的能力。

5.如权利要求1-4任一所述的沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20049在制备预防和或治疗沙门氏菌引起的疾病的药物中的用途。

6.如权利要求1-4任一所述的沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20049在制备预防和或治疗沙门氏菌引起的疾病的饲料中的用途。

7.一种用于防治沙门氏菌的杀菌组合物，其特征在于，包括有效量的如权利要求1所述的沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20049。

8.一种如权利要求1-4任一所述的沙门氏菌噬菌体的应用，其特征在于，沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20049用作为由沙门氏菌引起的细菌感染提供潜在的治疗药物或保健品。

9.一种预防和或治疗沙门氏菌引起的疾病的添加剂，其有效成分包括权利要求1所述的沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20049。

10.一种清洁剂或消毒剂，其特征在于，包括如权利要求1所述的沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20049。

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