CN112646785B - 一株耐高温烈性变形杆菌噬菌体rdp-sa-20018及其应用 - Google Patents

一株耐高温烈性变形杆菌噬菌体rdp-sa-20018及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一株耐高温烈性变形杆菌噬菌体RDP‑SA‑20018，保藏编号为CGMCC No.21405，基因全长42626bp，对全基因进行测序后发现，不具有毒力基因和溶原性基因，本发明提供的变形杆菌噬菌体RDP‑SA‑20018具有较高的温度耐受性和较宽的酸碱耐受范围，有利于工业化的生产制备；通过裂解率实验和RTD实验发现，该噬菌体的裂解率98％，对病原菌仍有较好的裂解效果。该噬菌体具有性能优异、安全的特点。该噬菌体可以应用在制备预防和或治疗变形杆菌引起的疾病的药物中。

Description

一株耐高温烈性变形杆菌噬菌体RDP-SA-20018及其应用
技术领域
本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一株耐高温烈性变形杆菌噬菌体RDP-SA-20018及其在禽类动物致病性变形杆菌感染中的应用。
背景技术
变形杆菌是一种常见条件致病菌，自然界分布广泛，可感染人类和多种畜禽，并引起机体死亡。近年来，变形杆菌流行趋势不断扩大，并且随着抗生素的不规范使用，该菌的耐药性不断增强，给人类和畜牧业发展带来巨大的经济损失。
噬菌体是一种细菌病毒，在自然界中具有较高的丰度，具有宿主专一性强，不会破坏微生态环境。噬菌体侵染宿主菌后，裂解时会释放出新的噬菌体，而少量的噬菌体就能起到很好的防治效果。
发明内容
本发明的目的在于提供一株耐高温烈性变形杆菌噬菌体(Proteus speciesphage)RDP-SA-20018，旨在解决养殖场禽类因感染变形杆菌发病急而治疗不及时，且因致病菌耐药性而导致用药无效等问题。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一株耐高温烈性变形杆菌噬菌体(Proteus species phage)RDP-SA-20018，透过电镜观察，该噬菌体头部呈正六边形，头部直径约为52nm，尾部长度为110nm，为长尾科噬菌体；基因组 全长42626bp，不具有毒力基因和溶原基因，该噬菌体于2020年12月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号CGMCC No.21405。
进一步地，该噬菌体在pH在5-9范围内作用6小时，其效价在1×108pfu/mL之上，适宜生长在中性环境中；在pH＝12以及pH＝4时，仍有噬菌体存活，该噬菌体的酸碱耐受范围宽。
进一步地，该噬菌体在30-70℃的温度范围内，效价稳定，保持在1011pfu/mL以上，在80℃高温条件下作用30min，依然具有生物活性，对温度有较好的耐受性。
进一步地，该噬菌体RDP-SA-20018高效感染变形杆菌，其最佳感染复数为1。
本发明还提供了变形杆菌噬菌体(Proteus species phage)RDP-SA-20018在制备预防和或治疗变形杆菌引起的疾病的药物中的用途。
本发明还提供了变形杆菌噬菌体(Proteus species phage)RDP-SA-20018在制备预防和或治疗变形杆菌引起的疾病的饲料中的用途。
本发明还提供了一种用于防治变形杆菌的杀菌组合物，包括有效量的变形杆菌噬菌体RDP-SA-20018。
进一步地，还包括用于抗变形杆菌的抗生素。
本发明还提供了一种预防和或治疗变形杆菌引起的疾病的添加剂，其有效成分包括权利要求1所述的变形杆菌噬菌体RDP-SA-20018。
本发明还提供了一种清洁剂或消毒剂，包括变形杆菌噬菌体RDP-SA-20018。
本发明的有益效果体现在：
(1)本发明从辽宁省某养殖场病死鸡体内分离得到变形杆菌BS-20013，并通过实验确定了BS-20013 的致病性和耐药性，以BS-20013为宿主，从环境中分离得到一株裂解性变形杆菌噬菌体，该噬菌体 RDP-SA-20018对禽类养殖环境中致病性变形杆菌BS-20013具有强裂解效用，为工业化生产噬菌体用于禽类养殖环境中致病性变形杆菌BS-20013的防治提供了噬菌体来源；
(2)本发明所提供的变形杆菌噬菌体RDP-SA-20018在治疗变形杆菌感染疾病具有很好的优势，裂解谱广，而且不会对益生菌造成伤害，效价较高，防治效果好。
(3)本发明所提供的变形杆菌噬菌体RDP-SA-20018对高温具有耐受性，有利于工业化的生产制备；
(4)本发明所提供的变形杆菌噬菌体RDP-SA-20018在防控禽类致病性变形杆菌中具有良好的应用前景。
附图说明
本发明上述的以及其他的特征、性质和优势将通过下面结合附图和实施例的描述而变的更加明显：
图1为本发明噬菌体RDP-SA-20018的电镜图；
图2为本发明变形杆菌BS-20013的毒力基因检测图；
图3为本发明噬菌体RDP-SA-20018一步生产曲线的示意图；
图4为本发明噬菌体RDP-SA-20018酸碱稳定性实验的示意图；
图5为本发明噬菌体RDP-SA-20018热稳定性实验的示意图；
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。
本发明使用从辽宁省某养殖场病死鸡体内分离得到变形杆菌BS-20013，并通过实验确定了BS-20013 的致病性和耐药性，以BS-20013为宿主，从环境中分离得到一株裂解性变形杆菌噬菌体，并通过全基因组序列确定了RDP-SA-20018的基因型。
实施例1致病性变形杆菌BS-20013的分离纯化、耐药性及毒力基因鉴定
(1)变形杆菌的分离鉴定
从辽宁省某养殖场病死鸡的内脏中取样，采用无菌操作的方法，在SS培养基上划线，37℃培养18-24h 后，在SS琼脂平板上呈现中心黑色边缘白色整齐菌落，直径约2～3mm；挑取典型菌落在LB琼脂上平板划线，37℃培养10-24h后，在LB琼脂平板上呈现扩散生长，挑取典型菌落继续划线纯化3次，然后挑取单菌落接种于5mL的LB液体培养基中，37℃，200rpm振荡培养8h，得到均匀浑浊的细菌悬浮液。再通过16sRNA分子鉴定，确定为变形杆菌，将其中一株命名为BS-20013。
(2)耐药性实验
将分离得到的变形杆菌进行14种药物的体外药敏试验(按照CLSI标准，采用圆纸片扩散法进行)，所选药物及耐药性结果如表1所示：
表1
抗菌药物 抑菌圈直径/mm 判定结果
硫酸黏菌素 8 R
阿米卡星 0 R
单硫酸卡那 15 I
阿莫西林 0 R
替米考星 13 R
磷霉素钠 10 R
头孢噻肟钠 0 R
多西环素 12 R
头孢曲松钠 22 S
氟苯尼考 9 R
硫酸安普霉素 18 I
硫酸新霉素 14 R
庆大霉素 5 R
链霉素 10 R
注：R，耐药；I，中介度；S，敏感。
(3)变形杆菌毒力基因鉴定
设计并合成6对毒力基因引物：hpmA、hpmB、rpoA、zapA、mrpA、fliL，提取变形杆菌BS-20013 的DNA模板，然后PCR扩增，扩增完成后，1％琼脂糖凝胶电泳检测。相关毒力基因PCR扩增检测结果 (如图2所示)。
由图2可知，该变形杆菌BS-20013含有hpmA、rpoA、fliL的毒力基因。
实施例2变形杆菌噬菌体RDP-SA-20018的分离鉴定
(1)取样：本发明试验用样品为2020年从辽宁省发病养殖场周边污水中采集，作为噬菌体分离的水样。
取污水10毫升，10000rpm离心5分钟，出去较大杂质及大部分细菌后，再用0.22微米微孔滤膜过滤除菌。取3毫升滤液和3毫升宿主菌菌悬液，一起加入20毫升高压灭菌后的2216E液体培养基中，然后置37℃培养箱中，过夜培养。培养后取5毫升，10000rpm离心5分钟，再用0.22微米微孔滤器过滤除菌，滤液即为拟含有噬菌体的原液。然后，采用双平板法鉴定是否有噬菌体，若有噬菌斑则有噬菌体，反之则需从新筛选。
(2)噬菌体的纯化
在有噬菌斑的双层平板上挑取单个独立、形态均匀、清晰透明的噬菌斑，置1毫升生理盐水中，浸泡 10分钟后，取清液，用0.22微米微孔过滤器过滤，然后将滤液适当稀释(铺双平板时有单个噬菌斑)后，与宿主菌悬液铺双层平板，重复3～4次，待双平板上各噬菌斑大小、形态和清晰度一致时，即得到纯化的噬菌体，命名为RDP-SA-20018。
(3)噬菌体效价的测定
将纯化好的噬菌体铺双层平板，然后取单个噬菌斑，加入LB液体培养基中，同时加入宿主菌悬液，将噬菌体增殖后，再将增殖液10000rpm离心5分钟后再用0.22微米微孔过滤器过滤，将滤液做10倍梯度稀释至108倍，取最后3个稀释度的噬菌体稀释液0.1毫升和宿主菌悬液0.1毫升，铺双层平板，测定噬菌体效价。其中，噬菌体效价(pfu/mL)＝噬菌斑数*稀释倍数÷0.1。结果表明，其噬菌斑形态、大小和清晰度一致，有典型的裂解性噬菌体特征。该噬菌体的效价可达1011pfu/mL以上。
实施例3噬菌体的形态观察
运用磷钨酸负染法：在石蜡片上滴噬菌体液(效价1010pfu/m L)100μL，将铜网有膜的一面置于噬菌体液滴上，10min后取下，在空气中自然干燥2-3min。然后在铜网上滴一滴2％的磷钨酸(PTA)水溶液进行染色，10min后取下，在空气中干燥10～15min，用电子显微镜观察，选取清晰的噬菌体图像进行拍照。
由图1可看出，该噬菌体头部呈正六边形，头部直径约为52nm，尾部长度为110nm，为长尾科噬菌体。
实施例4噬菌体基因组测序
通过对单株噬菌体的富集培养后，在4℃条件下8000g离心15分钟，加入10％PEG8000和0.5M NaCl 静置过夜，再加入等量氯仿混匀，静置分层后5000g下离心10min，去处氯仿层和PEG层后，加入限制性核酸内切酶消化处理，并采用梯度密度氯化铯条件下悬浮噬菌体，后期采用TM缓冲液透析3次，每次 30min，最后将透析好的噬菌体一部分送华大基因生物测序公司进行全基因组测序，测序结果表明该噬菌体基因组全长42626bp。
实施例5最佳感染复数实验
按照感染复数为1：1、1：10、10：1、100：1、1000：1的比例将噬菌体增殖液和宿主加入LB液体培养基中，并且确保培养体系的总体积相同。于37℃200rpm振荡培养6h后，常温下12000r/min离心5min，取上清液铺双平板测定其效价。结果如表2所示。
表2
Figure GDA0003376006890000051
由表2可知，RDP-SA-20018最佳感染复数为1：10。
实施例6：一步生长曲线实验
将培养6h的宿主菌悬液以3％的比例接种到100mL LB液体培养基中，以最佳感染复数，加入噬菌体增殖液，同时以不加噬菌体的作为对照，做3组平行对照，结果取其平均值。如图3所示。
由图3可知，未加入噬菌体的宿主，随着宿主的增值，其OD600逐渐增加，在6h达到平衡，而加入噬菌体的宿主，在前20min，噬菌体处于对宿主的吸附、侵染阶段，OD600有所增加，随着噬菌体的数量的指数增加，在2h后，噬菌体裂解宿主，其OD600没有明显的提升，但随着时间的延长，其OD600逐渐增大。
变形杆菌噬菌体RDP-SA-20018加入到宿主菌BS-20013菌悬液中，作用2h后出现一定的裂解效果，与对照组相比，未加入噬菌体的宿主OD600增加明显，说明该噬菌体对宿主有较强的裂解能力，能够持续的对宿主菌进行裂解。由于前2h，噬菌体处于对宿主菌的吸附、侵染阶段，只有少部分噬菌体开始裂解宿主，因此，其裂解宿主的量远远小于宿主的增长量，因此，OD600在前2h内，依旧保持一定的上升趋势，伴随着噬菌体数量的指数增加，在2h后，其裂解宿主数量大于宿主的增殖速度，所以OD600值开始逐渐降低，混合菌液达最澄清。持续作用8h后，混合菌液出现返浊，原敏感菌被噬菌体裂解，被突变的耐受菌所取代的一种菌群交替。因此，为获得高效价的噬菌体，应控制混合菌液在达到最高清晰度至返浊现象开始之前这一时间范围内，从而避免对噬菌体效价的影响。
实施例7：热稳定性的测定
将噬菌体原液分装到EP管中，分别在30℃、40℃、50℃、60℃、70℃、80℃的条件下孵育30min，然后用生理盐水10倍比稀释后，铺双平板计数。
由图4可知，该噬菌体在30-70℃的温度范围内效价稳定，保持在1011pfu/mL以上，在80℃高温条件下作用30min，依然具有生物活性，表明该噬菌体对温度有较好的耐受性。
实施例8：酸碱稳定性的测定
用稀盐酸和稀NaOH溶液调节生理盐水的酸碱度，配成PH值为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、 12的缓冲液，再将配置好的缓冲溶液将噬菌体稀释成1*1010pfu/mL，将稀释液在37℃下，水浴1h，用生理盐水10倍比稀释后铺双平板。37℃倒置培养4-6h后计数。
由图5可知，噬菌体在pH 5-9范围内作用6小时，其效价在1×108pfu/mL之上，适宜生长在中性环境中；在pH＝12以及pH＝4时，仍有噬菌体存活，表明该噬菌体的酸碱耐受范围宽。
实施例9：裂解率实验
无菌条件下，分别取1mL样品和1mL宿主菌菌液(1×105CFU/mL)，37℃孵育15分钟，混匀后用生理盐水稀释至10-1-10-3个梯度，每个梯度取100μL涂布于2216E琼脂平板上，置于37℃，培养24小时，每个梯度重复两次。同时取1mL生理盐水和1mL宿主菌菌液(1×105CFU/mL)作为空白对照，重复以上步骤。选取30-300个菌落数的平板进行计数。该试验重复3次，取其平均值。噬菌体裂解率＝(1-处理组菌落数/对照组菌落数)×100％。由实验结果可知，RDP-SA-20018的裂解率达98％，对宿主有较好的裂解效果，适合在养殖过程中使用。
应当指出的是，具体实施方式只是本发明比较由代表性的例子，显然本发明的技术方案不限于上述实施例，还可以有很多变形。本领域的普通技术人员，以本发明所明确公开的或根据文件的书面描述毫无异议的得到的，均应认为是本专利所要保护的范围。
序列表
<110> 瑞科盟（青岛）生物工程有限公司
<120> 一株耐高温烈性变形杆菌噬菌体RDP-SA-20018及其应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 42626
<212> DNA
<213> 2 Ambystoma laterale x Ambystoma jeffersonianum
<400> 1
ttggcgctag taatccacta cacacgaaac gaagacggca cgtttgatgt caagcgctac 60
cgcgataatc cgatgaactt cgtcgtgaac catgttccgg acggggttcc ggtacgtgtt 120
ttcattgacg aaatcggaga agataacgac gtaacagaag acttcgaagc actgaaagaa 180
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tattacgacg ccgggcgtgg ttacctcgac atacacccgg atggtataac ggacggggat 540
acccgtgtat cagatataac aggtacgtcg gttgccgtgt acgcaccata tacatcgccc 600
aataacacat ctacaccgca ggtcatggtc ggggacccca tagagcaagg cctatacatt 660
accgtagaat ctaacgaagt tgacggcgtg gttcttaaag caccgaacgg tctgggcatt 720
tctttctctt acatgtccgg gtatccgtct ttgtctggaa acattggcac gatatatgac 780
ccaacaggtg gttcggattt ttctggggtg ttggtgccta atgatacatt ttcgctggtg 840
tcagcgtgga caaatacgga cgtcgaccta tccggcggcg ggtatcaggt gttaagagta 900
tccgaaggga ccgttacctt tatagtgccc ggtggcctca ttggtaggtg gcaagaaata 960
agacccggtt cattttttcg aggtgacgga gaggcgtcgc tgcaaccgga taacacatac 1020
gagaaaacct taaccgattg ggtgtcaata aaccgtaccg aggttgagcg catagttgcc 1080
aatatcgccg ccgccaatgg tatgtataaa gacaacggca aatctaaaac actagcgtcg 1140
gttaccgcgg agatacagta ccagctgctt gatgaaaata gcacccctta tgggccgata 1200
tacactgcac aaggaaccgt gtccgggcga accccagact acaacggtgt cactatttac 1260
gccgacctgc cggttgtgtc gcgggtgcgg gtgcgcgcca gaagggtgac agacctcgac 1320
tttaatttcg aaggctcagt ggtagacgaa ataacctacg ttaacttgta cgggcaaaca 1380
cgcgacaaca ccccgcacta cggcaacagg actaccgtac actcaatgcg taagcagaca 1440
ccacgggctg ccgaagttaa gcaacctcag ttgcgcatga ttgcgaccga aatggtatac 1500
aaataccttg gtaatggcgt ttttgaggat acgatgactc ccaataccca ggccgtgcaa 1560
tctctcatcc gcctggcacg tgacccggat gtggggggtt taaacctgac ggtacgcaac 1620
atggataagt tacttgctgt ccaaaaggaa atagaggatt acttcggcga caaacaggcg 1680
ggggaatttt gctacacgtt tgatgactat aaaaccacta tgcaggacat agttagtact 1740
atagcagacg ccatattctg caccccatat cggcgtgggg cggatattct tctcgatttt 1800
gaacgccccc gcatgggtcc tgagatggtg ttcacccacc gaagcaaggc cggtacttct 1860
gaaaagtgga ccagaacatt taacgattct caggtttttg acagccttaa attctcgtac 1920
atagacccta agacgaacgt caaagagact ataaccatac ccgaaaccgg gggccttaaa 1980
acggagactt acgactcaaa aggaatccgc aactataagc aggctttctg ggcggcaaac 2040
cgtcgtcatc agaaaaacat tttaaagaaa atttcagtgt cgtttaccgc cacggaagag 2100
ggtatctttg ctttaccaaa tcgtgccatt agtgtggtta agggttcacg tatggcgacc 2160
tacgacggct acgtaaccgc ggtaaacggg ctcaccgtag aactgtcaca accagttaag 2220
ttcacctcgg gagatgacca ttctttgatt ctcaagttac gtgacggcgg cgtgcaaagt 2280
gttaatgtag tccctggagc gcacgaccgg caggtaatca tgacgtcagt accgcaagaa 2340
gccatttaca caggtaatag tgctttgaaa actgaatttt cattcggcaa cgaagcaagg 2400
cataatgctc agatgattct tgtttctacg gtagaccctg gcgatgacag aacagtcaaa 2460
ataaccgggt ttaactatga caaggatttc tataagtttg acaacgtgcc tcctttcggt 2520
cgtgcgttct ccagcggatt cgataacggt tttaactaag aggatagcca tatgtccagc 2580
ggttgcggtg atgtattgtc acttaatgat ttacaaatag ctaaaaaaca ccagattttc 2640
gaagccgagg tgatcaccgg taaacaaggc ggtgtagctg gtggtgcgga tatcgactac 2700
gccactaacc aggtaaccgg gcagacgcag aagacgcttc ccgcagtctt acgtgatgct 2760
ggtttctccc cggcatcttt taactttacg accgggggta ctctcggcgt aaacgacgcg 2820
gataaagcgg ttctttggcc gaaagaagat ggcggggacg gtaactatta cgcatggcgt 2880
ggctccctgc cgaaagttat ccctgcggcg tctaccccca taactactgg cggaatttct 2940
gattcggcat gggtggcttt tggggacatt acctttcgtg cagaagcgga taagaaattt 3000
aagtactccg ttaagctgtc cgactttact acgttacaac aattggcaga cgccgccgtt 3060
gatagtgttc ttatcgaccg cgattacact ttcagcaata acgagaccgt taacttcggc 3120
gggaagaccc tgaccatcga ctgtaaagcg aagtttattg gtgatggcat gttaatatgg 3180
gagcaactcg gcgaagggtc tgttgtgaac cagccgcaca tgcagacaca aaccacgccg 3240
tacacggtgt atagattcga cgacaacggt aactgggtga ctaacccatc aacggtgctg 3300
gcgtcggtag cccaaaggat ggataagggg tataaaccca atattaacga tttggatatc 3360
tgggatagcc ttccggatca cataaaaaat caaacagccg gtgcgaccct ccgcgttatg 3420
agcgggtcaa acataacctt aaattctccg gaagctactt tcggcggtta tttattcacc 3480
ctatgcaatc gtatattggt taaaaaccca cgaaatttta ttgcatggga gtcgggtatc 3540
actttcgaaa accatcatac atccgcatgg ggttatggta actgggttat cggcggagag 3600
ataaagtacg gttcagggtc tgccgttttg ttcattcgca acgacggcgg tgatgaccac 3660
gatggagggg taagagacct catatcttat cgtgtcgggg agagcggtgt gaaaacttac 3720
cagaacgaaa tagggggtcg gtccgcccga aactaccgtc tggtgttcga taacattacg 3780
accatacagt gctattacga cgggatagat atcaacgcgg atacaggccc ccaggttgag 3840
cgcgtagatg attacccgct ctcccaatac ccctggttta agttgccgac taaacacatc 3900
atccgcaaca taataacgag ggactgcatg ggtattgggg cctggtggga cggccagaat 3960
aatatcatcg ataatattgt gacgtacgag gcccataaag agggtatttt tgatagaggt 4020
actaacaacg acatcactaa cgtaacggtt ataggtgcaa acaaggattt aactaacctg 4080
aatcagctta catgtgaggg cggcagccgg ctgcggggtg tgttgattca tgcgtatacc 4140
acacaaggat atgccgtata tgcaccacaa tcggaaatat ccgctgtcgc ttgcgcgggg 4200
aacgggacca agaaaatact ttgtacctat gttggcgatg tacaaggcgg caacatcaac 4260
gtccagcata gcgaaaacca gatgaccctt gctatgcgcc cggctatggg tggtactata 4320
aatccatcgc tagtaatgac cgcagattgc caagttgcct tgcctggtgg tgaagctagt 4380
attgttaagc tttcagcaat acagggaggt gtacgagtag gtgagctcca acttaaccgc 4440
ttaggcttta agcatatgag catacctgtt gcatcttcgc aattaccaga tagtgcttta 4500
gaacataact catctatagg tttcttcttc ggcagtgatg gggtgttgcg aatccttgcc 4560
aagaagccag acgggactta cgtaacctac accttatcct aaatagtaaa ggccccgtaa 4620
ggggccttat tcaaattacg cagctcaaag cgcaaacggt aaaaacaccg gcaataataa 4680
gtcctgctat gaagcatttt gctccggtag tgtatcgcat ttcaggttct ccataataaa 4740
gtcaagttgc gcattagcgg cgtctctttg ttgccgtagt cgtagaacat cttcttcgag 4800
ttccttaata cgtttttgca atgccggaat cggggctatg atgttcattt cttacctcgt 4860
ctcttcatat aattaagtag ttcatcctgt acagaccttt tctcgtctgt acgcgctgcg 4920
acaacttcat caagagtatc tcgggctatt attttataaa tgaatacaga ccgtttgtat 4980
cctgattgca tctgccttac cgggcctata cgctcgataa cctgcaaata atgttccagg 5040
ttccacccct gactcataaa ggccatgtgg tgcccgccgt gctgtaacga cagtccgtgg 5100
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acaatggact ccagcgcgtc cagtttcgta tcgtgcactt tctcccagtc tttcgttgct 5340
tcaccatccg gccccgacac atacacggca ccggaagcaa tctgcaagca cttagccgtt 5400
ttagcggcgg cgttagccgc ttcaacttct ccgctctcca gttccgcgaa taacttctcc 5460
tccatatcga tgtaggcctg acgcgctttc ttcggtaggt caatttcaac cggtacgata 5520
acaggcgcct cacaaccgaa ccactcggcg gcatcaatgg taaggctgat atccttcatc 5580
ttctggtgaa tctcgttatc cgcgcctggg cgagcatggt actcccgcgc catcgcagat 5640
ttgcctttct gtaccgagtt aaaccatcta tcggtaaagg ccgtgtatga agacccaagg 5700
cgttcacctg cgtcgatgaa ccagttctgg ccccacaagt ctttgaggcc gtttggcgat 5760
ggtgtcccgg taaggttaat gaaacgctta accttaccga acgccacttt gctgagggcc 5820
ttcgccctct tgctcccgcc agaacggcta cgaaacgatt taagcttcgt gctttcatcg 5880
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tcagaaccag ttgcatcgac gacacgcaga cacgggaaac cccatttctc ttgttctgcg 6060
ggccacgtac ctgacgcaac acgtaaaggg gccagaatta acactcggtc gtcgtcatta 6120
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acggtgaagt cacctaatag aaaccggtgg tcaccgtcga tggtgaagcc gtaataatca 6240
tctacaccga ccggggttat agattctatc ccgacgttaa gtacgttttt attaatatta 6300
cgcttcggta aattctggtg gcggccgcgc acgaaaggca cctcagaaaa atcgcctgat 6360
accgatacgc ggaagtaatc cccccaaaca tcagtgtttg cgcaacgctt acgagttttc 6420
ttcttgtaag cggcgaaacc aagagaacgg catagatagc aaaaatcatc agcgagtcgc 6480
tcgcttaccg aaatccagtc aaaacctgct ttagacaaat cacaataacc gtcactatca 6540
agaagccccg ccagcaattc taaacgttgt tgccggtcgc cgcatttgta attatgcggt 6600
atatgcttat ggttcaggac ccccgccgac ctcagcgcgt tcgtaagccc gtgcttcctg 6660
ttgcctgtat tgccgtaaga tatgctccat gtaagccctt cttttcgtat ttgcatccca 6720
ttacgtgctg cgtacgattc aagatactcc cttatttcct tttcgttttc ccctgatgtt 6780
atggccccag acgacgaagt gccgtcgccc agccataacc ccataaggta cggtggcaat 6840
aaagcctcgt cctgctcttt ccttggaaaa tcgacaggta cccgccaacc cttaagatac 6900
ccattaggcc cggttacata tttcggcaac ttaagccagt cgcggacgct tatgtcgaaa 6960
acggtattat ctggccatga accttttgct atccctgtag tagttcgcag ggatagtatg 7020
tggctttcgt tgacagtata agactctcct tttcgcggct taacctcgta catcatctcc 7080
cggcctctac cgagagacag tacatttctg ggtgttgaat ccggccccat aagcacgtca 7140
ccgacgataa cgtcttctac tttcttagtc gtaccgtcaa acataataac ttcagtcccg 7200
cgtttcaggc acttgccgct gcccatactt gcccagatat tacagcgagg gtgctgcagc 7260
atgaacgaag tcattagctt ttgataaggt cttctagtga atttactcat ttcatttcac 7320
caccagcacc aattccttcc gcccgaacgc cgtaacgtta ccggttacgt cttcaataac 7380
cagtttaccg tttgactcaa caaatactgt atctacggca acagggctac gtgtcctaac 7440
gttgaaaatc atgtcacccg gtacgatgtc acgtgctggt ttgcggtcat attcgtattt 7500
catttctcaa ttccttattt gtgtttggtg tgaactaaat ataatagtgt tctattaatt 7560
tatcaacctg tttcttagaa ccaacaacaa aaacattcgc accgcgtttg cgcatccgct 7620
cgtgctctcg taactggtgc gggtccggct tcgtgttttc gtctttcttc acctcgacga 7680
accagacgag gccgcctggg aggattacca acaggtcagg agcacccact ctattttcgt 7740
aggacaattt gcgtacgagg ccccccaggg cctcgaatcg ctcttttgcg tatttctgaa 7800
tcttgccctc aggcgtactc atctatgcac ccctcacgtt tcgtgtgctc gatcccgcag 7860
cgcggacaga ttcgacagtc ttcttcccgg aaataataaa taatcagttt acttagcata 7920
ccgttttaac tccgcacctt ccgctacaag aggaaaacca tcagcccact ccggcaatgc 7980
acacattagt ttttccagtt cagctaccgt gtaatctgat gtatccggag tctcgcatac 8040
cagttcatcg tgaacagaaa gaactatagg gtacccgcca gcctcaacat taagcattgc 8100
gtaggccaat aagtcacgac aaaacgcctg aacgatgttc tcacaagcct ttccgccgtg 8160
tgtgtacagg gtagtccact gccgtgttaa ctggttctcg ccctggtact taattcttac 8220
attggtgttt acccgcccgt cttcgtcggt ttcctttgtc acgctgacgc ctattcctgg 8280
atatgatagg attcgccccg acggcagctc catgcatagc caccatcctg ggatgtttct 8340
accggatgaa tcagtttcta ctgttctcca gatacggata gctctttcac cattccggcg 8400
caagtgtgcc ccagcccaaa attcacggcc aggattacga acagcagcta aaattccgtc 8460
tttaaggtcg cgccagaacg ctactgtttc agggtgtgac tcacgccaca tacgcttgat 8520
cgcgtcacat gtgcgccaca ccttcttgtc cagaatatac gacggcctgt catccttttc 8580
accgggatgc ggtggtctct tggcttcctg aatacgcgcc cactcatacc cacgtgcagt 8640
agcagcccag atgtggtcgg ggaaagtccc gtccattgtt tttgccatct caataaggtc 8700
aagacccagg tttttagcaa acgtaacgaa cgctccgaca cctccctcgt agccgaggcc 8760
aagctcacag ttatgcgcca caagaaagcc cgagtctgag gctataagaa aacggttgcc 8820
gtcttccaca tcaatcaggt cgtaaactgg ctcgcagtag gttaatctcc cgttcaagct 8880
cagcaatgcg ggtaacggct gcatcatact ttcgttgaag ctcaggtatt cgacgtctgt 8940
tacggcagtt ttcagaacgg ctgacaaacc gaatgttgcc aggctcgtag ttaccgtctg 9000
tgtcgattcg gtccatttcg aggtttgggt catcccagcc ttccaaagtt tgaacatatc 9060
taagaaacga ccttttatcg gccctccact ggtcaaatac cgtgataccc ctagccccat 9120
agtttttgta actcttgttt ccagggattg ttgttcgtga tatcgccgct gataatcggt 9180
tgagtaatcg cgttctgtgc tcgtcgtccg gcattgcgtc ttcgtagcag aaatattgtt 9240
tacgatattt ttttgttgct tcaagggcgc aacggttgca ttgagtggtt ttacctgccc 9300
tgacattgtc ataatagacc cgccccggca tctctccgca atcacattgg acgagtagct 9360
gtctttggcc ttgtcgtttt ggtaactcgc gcaggataac caggcgtcca tacctatctc 9420
cagggcgcgg tccatcatat atttgtttga aacgagttgc tttgcctgct tccaggaatg 9480
cgtcaagatt ttgtggtctt cggtcattag taccccgtcc acatttatca ccggtttcca 9540
ccccataagg tgcgcgcctt ttgtattcac ccatttttca ccactccata ctttatctgc 9600
tgatgtaacc gccataatat ccttaaatcc accatcggtc aaaacttggg tatgacggtg 9660
aaggcaagcc ttacctatct ggcgtaagtc tttacgttct ttcttaatat cgtcggggtc 9720
catgccaaac atcttacccg ccgttacgca gtaaatatcc agcccggcgc ggaacgtatc 9780
aagcgcggtt tcttcgcccg ccagccacgc taaaccacgg ccttctacgt tagagtaatc 9840
ggcaactaca aacttatgtc ctgcttccgg gatgatgcag ctacgcaccg tcgatgccgt 9900
tagtttagct acatcgaagc ggcggtgtgc acggccttta agtaacgcgg caatacccct 9960
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cgcccaccgc aatgttcgct tcgctcctcc gtattgcagg caaccacggc ggcggtcatc 10080
tgaagaacgg cctaacagca acggcgcgta tttcgtcgat gcggtagaag cagccccgag 10140
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tccgcggtcg ttaattactt ggtctaacca cagcacgcgg tcttcgaact cagaattccc 10440
ccacttaggc attttcttat acacttcacg catggatgta atgtcgcttt ttgcgtatgc 10500
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gctggcgtca atgtttaaaa cctcgcacaa cgcagccagt gaaccaggga gcgcgtgtcg 10680
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tggtttttgc agctttagca tcgcccgacg caaatcacgc ggcatatcgc tgccgtctgt 10860
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ttcagtatcg agataaagca gattcattta tttgaccctt atagaaaagg cgaccgaagc 11040
cgccttaatt gaaaagaaaa tatatattaa cggttacgac ggcgttcgcg acgcggtgtt 11100
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aggattaatg gctgttgctt gttctttgcc tggaagtaaa aaccttccgg aaagtcttcg 11400
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gcaaatactg tatcgcggag ttcttcaatt tgcggatgtt ccggcgtaag aataaaagta 11580
ccgttatacg tacctttagt aatggagcca tcgctatttt cacggtcttt agcgcgttcg 11640
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ttctcgcgtt ttagagttta tccgggaagc tgcccggcca gtgattaaga atataataga 11760
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tcggcggtcc cgaacgtctc aacaccttcg tatcctggat gtaatacctc agtaagattg 12660
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tacttgcgca cctgctcaat catgtctgcc gtaatcagta ccgcaccttt catcggctta 12780
attaatgctt taacagcgcc tttaccttcc tccagcacat acgcacctac atcgcgttct 12840
aacggcagtg cggtcccttt gatgtaccgg ttaagataaa tctcggccag tgtgtgcatg 12900
gctgtaccca ataccgcagc tttaccagat gtgttgggta tatctttttc acaggccagc 12960
gatgcactgc acgccagcca ctttttagct cctgacggtg acagaagggc gtgcacgtca 13020
ttattaccgc cgcgttcttt tagaatcatt attcatcctc ctgaaaggcg acccgaaggc 13080
cgcgggataa ttattcttct tcgaaatact tgttcttgat tgctgtcaga cgttccaggt 13140
attcagcaag gtcttcgtct ttaatcgcgg caatcttcat tttcttaccg gtgaactctt 13200
ccagcagttc atcggaatca tcgcacgcag catcactagg gccttcgtta attgcatcgt 13260
cgatagcctg aatctggtcg cgaagagatt ggtaatcaat ttcttccttc tcttcttgta 13320
ctggttcccc tacttttgcc ttacgcggct tacgttttgg tttctcctct tctgccggtt 13380
tagtgtcgac gatgccctca ccttcgaccg gaatttcttt tgctttctcg acttcttcca 13440
gtgctttagc cagttctttt ttaactgtct cgacaccggc aacggagacg tcaacagtca 13500
tttcgcttac ggatttgtta gacgtctgtt tcgcgctgtt cgcagcaatc agttcgtgag 13560
caactacgaa acgttcaaat aatttaataa attgttctaa cattgtgcat tctcctgttt 13620
agttggtgat aagaactata atcgtactct attatttatg caagcacttt ttcgtaaatt 13680
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ctgagcttgc tttcaaagct ggcgtatccc aaagccttat tacccatctg gcaaccggtc 13860
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ccccttctgt tgcctttatg ttgtcgtttg gttcatacct gttctttggc cgcttgcggt 14040
catctatacc cgtcggcaac ctgtaagtat tcgttacaac ttcaccattc tcatcacaac 14100
caagcatcaa ttcaccctct cgtagcatct tctcgagcac caggtttgtt atgctgtggt 14160
ccccagccct ggcgactatt tgccgttgtg tgaaacctcg tccggtatca tcggcttgct 14220
gtaaatcctc gagagcagac ataaccgatt ctcgtgcgga agcatcttta gaccgtttaa 14280
ctgtatcctt tacgtaatct ttacctttac cgtccagtcc ttcgttgcgc tctttttcct 14340
cgtccgtttc gaacggttgg aagccccacg gcatgagtac aagagcttta tgcggttccg 14400
gcaggtctag gttaacgatt tccccgtatc cctcgccacc aacgaattct acagcctgga 14460
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gatggatttt attaccctgg agatatccca ccctcttctt tcgaagcgct ggttgcttgt 41880
gcgcggggct aacgacttga ccgctactct agagacgggt gaggttgtta cattcgaggg 41940
tacgccgatg gaggccaaga acgccgccaa caataacgat atggaccaga ccgcctcttt 42000
ctctttgccg gatgtgctta atatactgga cgaggaaatg gaccgcatcc cttatgataa 42060
taaggaattg cccaaattca tcttccggcg ttacgtgagc acggacctgt cgtacccatg 42120
cgatgggccg gtggtatatg aattgcaaac actcacgcaa gagaaaggag tgttcacagc 42180
ggaaacaggt acacccatgc ttaaccaacg agctaccgga atcctgatga cgccggaaga 42240
aataccctta ctccgcggga tactgacgtc atgaatatta acgattacac tggcctgccg 42300
tatgacttcc gccgccgtaa ttgttggcac cacgtccgca acgtccgggc tgacgcgggg 42360
ttatcaactc caatgttcga tgtaacaagc ccaacggcaa tagatgcagc tttcgatgac 42420
ggccattcag accctaaagg tcttaggcga gtgcttactc cgcagaattt tgacgccgtt 42480
ctactcggtg tgaaacatag ggggcgaata gtgtggcatg ctggggtata ttacgaagga 42540
atggtaagcc actgtgagct ggcatccaga caagttagac tggatagtct ggaagacctt 42600
aaagatactt attcggagat tgaatt 42626

Claims (6)

1.一株耐高温烈性变形杆菌噬菌体（Proteus species phage）RDP-SA-20018，其特征在于，透过电镜观察，该噬菌体头部呈正六边形，头部直径约为52nm，尾部长度为110nm，为长尾科噬菌体；基因组全长42626bp，不具有毒力基因和溶原基因，保藏编号CGMCCNo.21405。
2.如权利要求1所述的变形杆菌噬菌体RDP-SA-20018在制备预防和/或治疗变形杆菌引起的疾病的药物中的用途。
3.如权利要求1所述的变形杆菌噬菌体RDP-SA-20018在制备预防和/或治疗变形杆菌引起的疾病的饲料中的用途。
4.一种用于防治变形杆菌的杀菌组合物，其特征在于，包括有效量的如权利要求1所述的变形杆菌噬菌体RDP-SA-20018。
5.如权利要求4所述的用于防治变形杆菌的杀菌组合物，其特征在于，还包括用于抗变形杆菌的抗生素。
6.一种清洁剂或消毒剂，其特征在于，包括如权利要求1所述的变形杆菌噬菌体RDP-SA-20018。
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