CN113913391A - 一株可跨种裂解的大肠埃希氏菌噬菌体rdp-ec-20128及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一株可跨种裂解的大肠埃希氏菌噬菌体RDP‑EC‑20128，保藏编号为CGMCC No.22482，对全基因进行测序后发现，不具有毒力基因和溶原性基因；本发明得到的噬菌体对大肠杆菌的裂解能力相对较强，裂解谱较宽，对大肠杆菌库的裂解率高达58％；而且对沙门氏菌也具有一定的裂解能力，具有跨种裂解性，此特性显示这株噬菌体具有很重要的研究价值，如全基因组测序统计分析，以研究相关裂解基因，对噬菌体裂解能力相关的分子改造具有重要的意义。

Description

一株可跨种裂解的大肠埃希氏菌噬菌体RDP-EC-20128及其 应用

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一株可跨种裂解的大肠埃希氏菌噬菌体RDP-EC-20128及其应用。

背景技术

禽大肠杆菌病是由某些致病性或条件致病性大肠杆菌引起，是危害养禽业最为严重的细菌性疾病之一，在疾病预防和治疗过程中最易产生耐药性，导致抗生素用量增加和禽类产品药物残留等一系列问题。该病一年四季均可发生，但以冬春季节和气温多变时期多发，给养禽业带来严重的经济损失。禽大肠杆菌病在临床上主要通过抗生素防治，但由于抗生素的盲目添加或过量使用，导致大肠杆菌的耐药菌株不断增多、耐药谱不断扩大，进而导致治疗效果下降，养殖效益降低，同时对食品安全构成威胁。在细菌耐药性日益突出的当下，全球养殖业已经全面掀起“禁抗”的热潮，2019年7月10日，农业农村部发布公告，自2020年1月1日起，退出除中药外的所有促生长类药物饲料添加剂品种，加快了我国进入“无抗时代”的脚步。

与传统抗生素相比，噬菌体疗法具有许多优势。噬菌体是能够抵抗革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌的天然抗菌物质。噬菌体由于其无处不在并且在环境含量丰富的性质而可以快速分离，与抗生素相比降低了开发成本，在含有某种病原体的环境中，存在特定噬菌体的可能性很高。不同于抗生素，噬菌体可以在体内增殖，同时这种增殖又受到宿主细菌的存在与否及宿主细菌数量的限制。噬菌体的作用仅限于感染部位，而对周围的细胞(如真核细胞)没有影响。最近的一项研究发现，噬菌体杀死病原性大肠杆菌的速度比β-内酰胺类抗生素快，同时噬菌体治疗释放的内毒素更少。

抗生素与噬菌体共同使用，可显著提高抗生素敏感性，降低抗生素的使用量，并且可以有效降低大肠杆菌的耐药性。大量临床实验证明，噬菌体和抗生素同时使用可以有效治疗禽类大肠杆菌病，且维持时间长，避免大肠杆菌病的反复发生，在实际生产过程中，抗生素与噬菌体同时使用，可以在保证治疗效果的前提下，降低抗生素的使用量，符合国家减抗替抗的要求，提高养殖效益，保证食品健康安全。

本发明在于响应国家全面禁抗的号令，解决细菌耐药性，抗生素滥用的问题，提供一株治疗大肠杆菌的且可降低抗生素耐药性的大肠杆菌噬菌体，扩充了噬菌体储备库为开发治疗大肠杆菌的抗生素替代品奠定了基础。

发明内容

本发明的目的在于提供一株可跨种裂解的大肠埃希氏菌噬菌体RDP-EC-20128及其应用，旨在解决养殖场禽类因感染大肠埃希氏菌，发病急而治疗不及时，且因致病菌耐药性而导致用药无效等问题。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一株可跨种裂解的大肠埃希氏菌噬菌体RDP-EC-20128，透过电镜观察，透过电镜观察，该大肠埃希氏菌噬菌体(Escherichia coli phage)RDP-EC-20128头部为多面体立体对称，包裹着核酸，直径65nm，有一个长117nm的尾，有尾鞘，颈部连着头部和尾部，为有尾病毒目肌尾病毒科。经基因测序发现，不具有毒力基因和溶原基因。该噬菌体于2021年06月03日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号CGMCC No.22482。

进一步地，该噬菌体具有较广谱的杀灭大肠埃希氏菌的能力，同时对沙门氏菌也有一定的裂解能力。

本发明的第二个目的是提供该大肠埃希氏菌噬菌体RDP-EC-20128在制备预防和或治疗大肠杆菌引起的疾病的药物中的用途。

本发明的第三个目的是提供大肠埃希氏菌噬菌体RDP-EC-20128在制备预防和或治疗沙门氏菌引起的疾病的药物中的用途。

本发明的第四个目的是提供大肠埃希氏菌噬菌体RDP-EC-20128在制备预防和或治疗大肠杆菌引起的疾病的饲料中的用途。

本发明的第五个目的是提供一种用于防治大肠埃希氏菌的杀菌组合物，包括有效量的大肠埃希氏菌噬菌体RDP-EC-20128。

本发明的第六个目的是提供一种用于防治大肠埃希氏菌的杀菌组合物，还包括用于大肠埃希氏菌的抗生素。

本发明的第七个目的是提供一种预防和或治疗大肠埃希氏菌引起的疾病的添加剂，其有效成分包括大肠埃希氏菌噬菌体RDP-EC-20128。

本发明的第八个目的是提供一种清洁剂或消毒剂，其成分包括大肠埃希氏菌噬菌体RDP-EC-20128。

本发明的有益效果体现在：

(1)本发明发现并分离了一株禽大肠埃希氏菌，并以该大肠埃希氏菌为宿主分离得到了噬菌体RDP-EC-20128，该噬菌体RDP-EC-20128对养殖环境中禽大肠埃希氏菌具有强裂解效用，为工业化生产噬菌体用于养殖环境中禽大肠埃希氏菌的防治提供了良好的噬菌体来源；

(2)在本发明中，噬菌体RDP-EC-20128在pH为7.0时，噬菌体效价最高；噬菌体RDP-EC-20128在pH5.0-10.0范围能维持较好的活性，噬菌体滴度没有明显变化，可见噬菌体RDP-EC-20128能耐受弱酸和弱碱条件，具有良好的酸碱耐受性；

(3)本发明得到的噬菌体在30-60℃效价基本不变，可高效感染宿主菌禽大肠杆菌BE-20127，具有较宽的温度耐受性，其最佳感染复数为0.1；

(4)本发明得到的噬菌体对大肠杆菌的裂解能力相对较强，裂解谱较宽，对大肠杆菌库的裂解率高达58％；而且噬菌体RDP-EC-20128对其中5株沙门氏菌具有裂解能力，具有跨中裂解性，此特性显示这株噬菌体具有很重要的研究价值，如全基因组测序统计分析，以研究相关裂解基因，对噬菌体裂解能力相关的分子改造具有重要的意义；

(5)本发明大肠埃希氏菌噬菌体RDP-EC-20128可作为应用于环境消毒的各种产品的有效成分，例如包括但不限于以液体浸泡、喷洒、与含水性载体联合使用等形式对配水系统、医疗设施、养殖业设施、公共及私人设施或其他环境表面进行消毒去污，可有效控制目标细菌的生长及活性。所述液体浸泡、喷洒形式包括但不限于洗涤剂、消毒剂、去污剂等；所述含水性载体包括但不限于磷酸盐缓冲液、LB培养基、氯游离水等。

(6)本发明的大肠埃希氏菌噬菌体RDP-EC-20128(Escherichia coli phage RDP-EC-20128)，可以有效杀灭鸡肉表面的大肠埃希氏菌并防治鸡肉在保存过程中大肠埃希氏菌的污染，可作为食品防护的各种产品的有效成分。本发明包括但不限于以液体浸泡、喷洒、与合成组分联合使用等形式对由大肠埃希氏菌侵染所导致的食品腐坏进行预防，尤其适用于熟食或不宜灭菌的食品；所述液体浸泡、喷洒形式包括但不限于食品除菌剂、食品消毒剂、食品防腐剂等；本发明中合成组分包括但不限于苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸、山梨酸钾、丙酸钙等。

(7)本发明的大肠埃希氏菌噬菌体RDP-EC-20128(Escherichia coli phage RDP-EC-20128)，可用于制备组合物，试剂，或试剂盒；可应用于大肠埃希氏菌的快速检测，其包括但不限于以试纸、试剂盒等形式对目标样本中的大肠埃希氏菌进行检测，或对临床样本中的目标致病菌进行筛选，可有效确保检测的灵敏度；

(8)本发明的大肠埃希氏菌噬菌体RDP-EC-20128可以单独或混合使用，用作为生物杀菌剂，饲料添加剂，或因大肠埃希氏菌引起的细菌感染的治疗药物、保健品及医疗器械；大肠埃希氏菌噬菌体RDP-EC-20128可应用于治疗或预防由大肠埃希氏菌引起的感染性疾病；可被大肠埃希氏菌感染的寄主包括人类、家畜(猪、牛、羊等)、家禽(鸡、鸭、鹅等)，以及各种兽类、鱼类、鼠类等；

(9)本发明的大肠埃希氏菌噬菌体RDP-EC-20128可以应用于工业生产，可由宿主菌特异性扩增，可应用标准病毒纯化方法高度纯化，具有极好的推广前景。本领域技术人员可以根据本发明的记载及本领域常识将本发明所述大肠埃希氏菌噬菌体RDP-EC-20128或其组合物制备成应用于医疗，检测，消毒及食品防护等方面的各种产品加以工业应用。产品形式可包括但不限于以载体携带、浓缩注射或药剂浸泡等形式施用于被防治的寄主体表、口部、直肠、胸膜内部等部位；作为实施方案之一，所述载体携带形式包括但不限于口服含水性载体、口服无水性载体、乳膏制剂等；浓缩注射形式包括但不限于疫苗注射、胸膜腔注射、经脉注射等；药剂浸泡形式包括但不限于气雾剂、漂洗剂等。

附图说明

本发明上述的以及其它的特征、性质和优势将通过下面结合附图和实施例的描述而变的更加明显：

图1为电镜观察本发明分离得到的噬菌体的示意图；

图2为本发明噬菌体一步生长曲线实验的示意图；

图3为本发明噬菌体pH稳定性实验的示意图；

图4为本发明噬菌体热稳定性实验的示意图；

图5为本发明噬菌体对宿主裂解实验的示意图；

图6为本发明噬菌体稳定性遗传实验的示意图。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。

本发明使用从青岛一养殖场病禽肝脏中分离得到的大肠杆菌BE-20127，并通过实验确定了菌BE-20127的致病性和耐药性，以BE-20127为宿主，从环境中分离得到一株沙门氏菌噬菌体RDP-EC-20128，并通过全基因组序列确定了RDP-EC-20128的基因型。

实施例1致病性大肠杆菌BE-20127的分离及其鉴定

从发病养殖场采样，无菌操作取病禽肝脏，在大肠显色选择性培养基上划线，37℃培养18-24h后，在培养基上形成圆形、扁平、边缘整齐、表面光滑湿润的蓝色菌落，挑取典型菌落继续划线纯化3-5次，然后挑取单菌落接种于5mL LB液体中，于37℃、200rpm振荡培养4-6h，得到均匀浑浊的细菌悬浮液。再通过16S rRNA分子鉴定和血清型鉴定，确定为致病性大肠杆菌，将其命名为BE-20127，于-80℃冰箱中保存。

实施例2噬菌体RDP-EC-20128的分离及纯化

(1)粪便处理：从养殖场采取粪便，称取5g鸡粪便加入10mL无菌水中浸泡过夜，然后将过夜后的浸出液10000rpm离心5min，取上清液过0.22μm滤器，将滤出液备用。

(2)制备混合菌悬液：取0.2mL菌悬液和0.1mL滤出液加入5mL LB肉汤中，37℃，200rpm振荡培养过夜，然后10000rpm离心5min，取上清液过0.22μm滤器，将滤出液备用。

(3)噬菌体分离：采用双平板法进行噬菌体的分离，取宿主大肠杆菌菌悬液0.1mL与0.7％的软琼脂混合均匀铺在LB平板上，待软琼脂凝固后将滤除液0.1mL点到平板上，静放至混合液吸收，放于37℃培养箱培养6-8h后，用接种环挑取透明斑于2mL SM缓冲液中，4℃保存过夜，让噬菌体完全释放，即得噬菌体。

(4)噬菌体纯化：采用双平板法进行噬菌体的分离，取混合菌悬液滤出液0.1mL和宿主大肠杆菌菌悬液0.2mL混合均匀，加入冷却至50℃左右的软琼脂混合均匀，然后铺双平板，放于37℃培养箱培养6-8h后，挑取边缘光滑的单个透明斑于1mLSM缓冲液中，4℃过夜保存。取0.1mL过夜保存的浸出液和0.1mL菌悬液混合，加入冷却至50℃左右的软琼脂混合均匀，铺双平板，37℃培养箱培养4-6h纯化，照此步骤纯化至噬菌斑为大小均一、边缘光滑的噬菌斑，即得纯化好的噬菌体。

噬菌体RDP-EC-20128的保藏方式：将噬菌体菌悬液与60％的甘油+LB按照1：1的比例混合后，于液氮中保存。

实施例3噬菌体的形态观察

取20μL含噬菌体粗制颗粒的液体滴于铜网上，自然沉淀15min，并用滤纸从侧面吸去多余液体，加一滴2％的磷钨酸(PTA)于铜网上对噬菌体染色10min，然后用滤纸从侧面吸去染色液，待样品干燥后用电子显微镜观察噬菌体形态，如图1所示。

由图1可知，噬菌体RDP-EC-20128有一个多面体立体对称的头部，包裹着核酸，直径约65nm，有一个长约117nm的尾，有尾鞘，颈部连着头部和尾部。根据国际病毒分类学组织病毒分类第九次报告，该噬菌体归类为有尾病毒目肌尾病毒科。

实施例4噬菌体基因组测序

通过对单株噬菌体的富集培养后，在4℃条件下8000g离心15分钟，加入10％PEG8000和0.5M NaCl静置过夜，再加入等量氯仿混匀，静置分层后5000g下离心10min，去处氯仿层和PEG层后，加入限制性核酸内切酶消化处理，并采用梯度密度氯化铯条件下悬浮噬菌体，后期采用TM缓冲液透析3次，每次30min，一部分送华大基因生物测序公司进行全基因组测序。测序方法如下：

采用Illumina TruSeq^TMNano DNA Sample Prep Kit方法构建文库；具体步骤为：

1)以1μg DNA起始量建库；

2)Covaris M220超声打断DNA到300-500bp；

3)补平3’端加A、连接index接头(TruSeq^TMNano DNA Sample Prep Kit)；

4)文库富集，PCR扩增8个cycles；

5)2％琼脂糖胶回收目的条带(Certified Low Range Ultra Agarose)；

6)TBS380(Picogreen)定量，按数据比例混合上机；

7)cBot固相载体上进行桥式PCR扩增，生成clusters；

8)Illumina Hiseq测序平台，进行2×150bp测序。

实施例5最佳感染复数的测定

按照感染复数为100、10、1、0.1、0.01的比例将噬菌体增殖液和宿主加入LB肉汤中，并且确保培养体系的总体积相同。于37℃200rpm振荡培养8h后，常温下12000r/min离心5min，取上清液铺双平板测定其效价。具体参见表1。

表1最佳感染复数的测定结果

由表1数据显示，当感染复数为0.1时，培养8h后，增殖液较为清澈，效价最高，说明RDP-EC-20128的最佳感染复数为0.1左右。

实施例6噬菌体生长曲线的测定：

取对数生长期的大肠杆菌悬液，按照最佳感染复数的比例接种大肠杆菌BE-20127和噬菌体RDP-EC-20128，在37℃的条件下，水浴10min，然后常温下12000rpm/min离心5min，弃上清液，除去未吸附在宿主上的游离噬菌体，如此用LB液体培养基洗涤两次。再将沉淀重悬于37℃的LB肉汤培养基中，迅速置于37℃200r/min的摇床中振荡培养并计时。前30min每隔5min取样计数，30-60min每隔20min计数，60-300min每隔30min计数，以时间为横坐标，噬菌体效价对数值为纵坐标，绘制生长曲线，得出噬菌体的潜伏期、裂解期，并计算出平均裂解量。其中，平均裂解量＝暴发末期噬菌体滴度/感染初期宿主菌浓度。结果如图2所示。

由图2可知，噬菌体感染宿主菌后的30min内效价没有明显变化，表明其潜伏期约30min，感染后40-120min内噬菌体的滴度明显上升，之后趋于稳定，表明噬菌体裂解期约为60min。通过计算，噬菌体裂解量约为165PFU/感染细胞，表明噬菌体具有极强的裂解和复制能力。

实施例7噬菌体pH稳定性的测定

用稀盐酸和稀NaOH溶液调节生理盐水的酸碱度，配成PH值为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12的缓冲液，再用配置好的缓冲溶液将噬菌体稀释成1×10¹⁰pfu/mL，将稀释液在37℃下，水浴1h，用生理盐水10倍比稀释后铺双平板，37℃倒置培养4-6h后计数。结果如图3所示。

由图3可知，噬菌体RDP-EC-20128在pH5.0-10.0范围能维持较好的活性，噬菌体滴度没有明显变化，而且在pH为7.0时，噬菌体效价最高；且在弱酸弱碱的条件下仍能保持较高的效价水平，仅在强酸强碱条件下，噬菌体的滴度会下降明显。表明噬菌体RDP-EC-20128能耐受弱酸和弱碱条件，具有良好的酸碱耐受性。

实施例8噬菌体热稳定性试验：

将噬菌体原液分装到EP管中，分别在30℃、35℃、40℃、45℃、50℃、55℃、60℃、65℃、70℃的条件下孵育30min和60min，然后用SM缓冲液10倍比例稀释后，铺双平板测定其效价。结果如图4所示。

由图4可知，噬菌体RDP-EC-20128具有较好的温度耐受性，温度达到60℃噬菌体效价均保持在较高水平。60℃以后，随着温度的升高和时间的延长，噬菌体的活性才降低。噬菌体RDP-EC-20128在较高温度下也具有一定的稳定性，对生产和储存具有重要的意义。

实施例9噬菌体对宿主的裂解试验：

将培养6h的宿主菌悬液以1:100的比例接种到100mL LB培养基中，37℃、200rpm振荡培养2h(OD约0.15，约5.0×10⁸cfu/mL)将菌悬液分装在4个灭菌的锥形瓶中，以最佳感染复数，向其中2个加入噬菌体增殖液0.2mL(约2.5×10⁹pfu/mL，经0.22μm膜过滤)，同时以不加噬菌体的作为对照，取其平均值。在细菌液中加入噬菌体，由于噬菌体对宿主的裂解作用，导致OD600的值产生变化，由此得到噬菌体对宿主的裂解曲线。结果如图5所示。

由图5可知，没有加入噬菌体的宿主菌BE-20127，在增殖过程中，OD600在60min内逐渐增加，90min-210min内呈指数形式增加，240min以后趋于稳定。

大肠杆菌噬菌体RDP-EC-20128加入到宿主菌BE-20127菌悬液中，宿主大肠杆菌的OD600变化如下：在前60min，噬菌体处于对宿主的吸附、侵染阶段，OD600有所增加，随着宿主菌指数级增加，噬菌体的增长也呈现指数式，随着噬菌体裂解宿主，噬菌体裂解率达到顶峰，未被裂解的宿主菌继续繁殖，但由于营养物质的限制，使宿主菌的OD趋于平稳，整体OD600低于没有噬菌体的样品。

实施例10噬菌体的稳定性遗传实验

将噬菌体RDP-EC-20128连续传代29次，每代培养基中加入等量的RDP-EC-20128和BE-20127，每代培养时间6h，然后铺双平板，将RDP-EC-20128连续传29代后，测定其效价。结果如图6所示。

由图6可知，噬菌体RDP-EC-20128在传代过程中，效价整体处于稳定，说明RDP-EC-20128的遗传稳定性较好，是生产过程的优异选择。

实施例11大肠杆菌噬菌体RDP-EC-20128的裂解谱分析

采用双层平板法，测定本发明噬菌体RDP-EC-20128对实验室保存的部分菌株：大肠杆菌、沙门氏菌、变形杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌的裂解能力。

取100μL过夜培养的待测菌菌液加入到0.7％的半固体LB培养基中混匀，导入平皿中，静置吹干。取10μL噬菌体RDP-EC-20128悬液滴加到平皿上，37℃培养4-6h，观察有无噬菌斑出现。结果如表2所示。

表2大肠杆菌噬菌体RDP-EC-20128的裂解谱分析的统计结果

由表2可知，噬菌体RDP-EC-20128对大肠杆菌的裂解能力相对较强，裂解谱较宽，裂解率58％；而且噬菌体RDP-EC-20128对其中5株沙门氏菌具有裂解能力，说明这株噬菌体具有跨种裂解性，此特性显示这株噬菌体具有很重要的研究价值，如全基因组测序统计分析，以研究相关裂解基因组学对后续噬菌体裂解能力相关的分子改造具有重要的指导意义。

应当指出的是，具体实施方式只是本发明比较由代表性的例子，显然本发明的技术方案不限于上述实施例，还可以有很多变形。本领域的普通技术人员，以本发明所明确公开的或根据文件的书面描述毫无异议的得到的，均应认为是本专利所要保护的范围。

序列表

<110> 瑞科盟（青岛）生物工程有限公司

<120> 一株可跨种裂解的大肠埃希氏菌噬菌体RDP-EC-20128及其应用

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 40152

<212> DNA

<213> 2 Ambystoma laterale x Ambystoma jeffersonianum

<400> 1

ggtggcctct tctggagacc ttcagtttca gacgaccagc cattaatctg ttcagcgccc 60

tgctcgggga accttaagat gtctggctgt tgactgatac cgcctttcag gttcttgacg 120

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gtgctcttcg agttgacttg aggcttcgtt cagttcatct ggaacatcac caacgggttc 2760

aaactcttcg gaaccttctc cgtcaccttc ggagtagtca atgtcttcta cagactcttc 2820

cggttcacca tcagtggaga tacgaatctc agtgcggtct tcgtcctctt caccaaacgg 2880

gtcattacta ccataagggt cgtcattgtg tgctaactca atggagtcat cgccatcacg 2940

ggcagcaaca tcaagttcaa gcattgcctg ttcgtggtca gtcggagtag acccgccaac 3000

aaccgcagag ttcacaccga aagatgcgta aacgtcagca ttagattcac cagccatatt 3060

tgtatctcct ttgataatga aatttagaac tcaaagggag gacgtattgt ctctcccatt 3120

agtgagtcgt attaattggg aaccatacca gcctgttcag cagcagcttg catgttctca 3180

ggacttgcag tagccaatgc accagcacca gcaccagcag acgcagcagc gttctccata 3240

gcagtgcctt gagcggcctc agccatctcc tgttgtttct cttcaggtgt cttaaggata 3300

ccagaagtgt cgatgccgat agcgttcgca atgcgcaact taatggtcgc aatgttgatg 3360

tccgggtcat tctgcatagg agcaagagca gaccacgcag cgatacaacg ttccagctta 3420

tcgaggtctt gaccacgacc caatgcttcc atcccggtac tgatagtagg ctcaacggcc 3480

tctttcggta actcaggaat ctgattggtt gcttgaagtt gtttcagcag gacacgaacc 3540

ataggtaact gaagttcctg tgagagaatc gaatagacac caccaagggt atcttccagt 3600

tccgatgcaa cataacgaat ctcttcggct gtcacacgct caccagtacg ctgtaccgca 3660

gagttcaaca taaaggcata ggaaagtcga ccttcaatct gttcactcac agctttcgct 3720

acagagaagt cagcggcctt ttccaactga aggaacgaga tgtcttctgg acgaccagac 3780

acaaagtcac ctgtctgtgc tttcgttaag cgacgaacct gtgtgatacc agccgggtta 3840

accaagccga taactttagc actaatcatt gacatcttaa cgatagcttc ttggaggttt 3900

tcaagggacc gtaagtcacc taagtattcc tcacagtaag aacgaccata tgactctccg 3960

tcaatacgca ccatgcgaac cgggatatac ggacaagcgt ccaccggata agaagcatct 4020

gtgccatcaa cttcaacgcc atcaatctct tcgtacttga ggtactcacc agattcttcg 4080

tcaagataaa tgtgtgtgta cacatcaatc atttcgtcgc ctttatgttc ctgacctgag 4140

tccatagagt ttcttacgtc ttctggcagt gctgcataag cagtcttatc caaggtcaca 4200

atctgtagta ccgtgccgaa tgcgtctcgt tggacaacat aagaagacaa gcggtatagc 4260

ttcatgggat tgtaagtgcc ttcaggttca ggaatgtaga gcagagcgtt acctgcaacg 4320

accaactgct tgagggtctc aaagagtgtc acacggtatg agttcgactc gatgtagttc 4380

atcaagattc gctcgaccat agagagacct tcttcgacct ttgctagttc ggctggctgt 4440

gcaaccaatt gtttcgcttc gaactcagag atggttagct tcatccacgt ctgcataggg 4500

aacagagcga gcatgagctt agaggccaag ttgttcaagc cacgagcacc aactgcttgc 4560

cacggagtgg tatagtcagt agaggcgttg tcggagtctt tagggaacaa cgaagggatg 4620

gtgtacttcg cacagttttc cgcacgggtc tcataggagt tccggtcgtt cttcaatgcg 4680

tcatacaccg ccttggcacc attctccgcg aagccttcac gtttctgtga gcttgccata 4740

gtgcctcctt atcaaatgtt taggccacca ccagaactac gagcgacact tagagacttc 4800

ttgccaccag cacgggcttt cttcttatct gattcagtct gtgcaccatc ttcggtctct 4860

acgtcaccat ttgtgggtgc ttcgataatc tgtgccggag gtggagcggc ctgttccatt 4920

acctgaacac cagacctctc gccttgaccg agtacaccac ctacagcacc aacagcgcct 4980

ttggcaacct tctctactgg cttagtgatt ttccgaacag tcttcttaac taccttctta 5040

atcttcttac ccatgattat accctcttga atacgtttcg aattgaccca tcgtgttcat 5100

gcacacaacg ggagacccac tggcaacctc tacgagtcgc ctcagctaac acccagcgcc 5160

agacccaagg tgcgtaccct gagcgtggct taatgactat attggttata tccaatatgt 5220

cacccttatg gtgtatgtcg ttgctgatac agagcgctac ataagccaca ggataaccct 5280

tggcattctt aaagtagaac tcttcgtacc cagcgtcatc cataagccca tccacgtagt 5340

cagcgtactc gcttaacgta gtgaaccctt cgggcaaccc taagtgcgcc acagtccaga 5400

caatagctgc cgcacgttct gtgcacttat gtactgttat catttaccga actcctccta 5460

gctatttatt cttaaagaca ctggtacgaa taccagactt ggacttcttc ttggctgcat 5520

catcagcctt cttggatttc tcaacggagt tatccagttc caccttcagg gacttcttgc 5580

cacccggtag tacctcagaa gaggttccgt tatcagtgtc atcatcacca ccaaagagaa 5640

tacctttcgg ttcctcagta agtggtgcag ggtctaccgc acggacttgg tttgtatcca 5700

ctttaggtgt cttaatcttt ggcgaaaagc acataagacc tccttacgaa tctgcctgtt 5760

ccttacggat tgcctccatg tcgtctaagg tttgagacgc atagttgaga cccgcgagga 5820

acccagcgat gtagctttca gaccacccag cctgtttcaa tcggttgata agaccagact 5880

gaatagcata tccagcatta tactgaacct gaaggtactc catagttgca cgaggcacat 5940

taggaatatc ttgtgggttc tccatgtact tcttaatagg ggttaacata attaatgttc 6000

tccttaaagt tagaacttaa agtaggtatc atataggcac ccctctcaat agtgagtcgt 6060

attaatttca ctgtcgagaa gaatgcctag agttacacac tcttagctat aaatgcagcc 6120

cacaccatag agaaggctac ggctgtgaac atcacgagcg caactgttcc ggcgaccata 6180

ggtaaatctc cttgtcgata aagttgtact cttcgaaacg caggatgcga gccatctggc 6240

cctgcttaat gatttcctgc tcggtcatcc cagctttggc accaagtgtc acaatggctt 6300

cccatagggt tcgctcaccc atgtcaacct ttttccattc gagaactgtc tgtcccttac 6360

gagcaccaga cttgaaagtt ttctcaacct gttcaaaggc atacgggttc tccagccact 6420

cagcggtagt ctcgccccag cccggaatgc caccatagcc atctgtcaag tcacctttaa 6480

tggtctgata gatatgccag tagtcagcag tagtctggtc ttgagtcaag atgttaccag 6540

tcgtgcacca caagaagtca caatcaggga tggtcttaaa gtccttatcg caggagacca 6600

gtacagcctt cttgaaacca aaatgtttag caccagaccc gatgattccc attacgtcat 6660

caccctcaag tcggtcctca aggatagacg tccagtcctc acaggcttga acacgctcga 6720

cgaacgcacg gtagcctaca ggcttacggg atgccttacg gttctccttg taggtatggt 6780

ccaccagttc cttacgccag ttcacagagt cagtgaaggc caatatgata ggcgcatcgc 6840

gccaagcctt cttgcgacca gcataggact tgatggagtc taccagaatg ttccacgctt 6900

tcccatgatc acattctaaa ctccaaatgt catcatccca ctgggtctca acctcgcttg 6960

cagccattgc ctgaaagaca agccaatcgc catccatcac caatactccc ttatcggatt 7020

taccttggcg aagttcatag aactccttca gtgtaagagc gctcatacac aacctcccat 7080

cttcttcagg aaacggacac cagaacctgt tacttcccaa gcgccagcat tacgcccatc 7140

gactgatagg caagagatat ggccacgact cgcagcctca gccaccagtg acgcattgtt 7200

gcgcacatag ttagactgaa aggtcttagg gcagcttttg atagccgcca gtacacgtag 7260

ataatcaccc attacttcac ctcacgaata gttgctgggg agaatcgcac gagctttctc 7320

tcggttgaac tcatttcgct gtggccctcc cgaataaaat tgcgaagagc ctgcttgata 7380

cagaatgtgg cagcaccttc tggcccatag gttagaccct gaactagcaa ctcacgttta 7440

aacgggttaa gttcctcacc agtggcagct ttcttagcga tgtctacgag tacatcattc 7500

aggttgttct cagactcgct atcgattaca gcagtaactt cgaatgatac tttaaaacgt 7560

ttagtaatag ccatgatatt tctcctgtta attagtgaca tacagcccaa tttggcccca 7620

tcttaccttc ggtatctaac tgacatctaa agttaaagtg gtcgcctacc cagcgcatag 7680

cctgttgaga tacttcgatt acaactttgg caatctcttc tgtacggcaa gcaagctgtt 7740

gctcatcgtg aatccacccc atgaggcaga agtcaccatc ccagccatgt ttgtagccca 7800

tctcaaggag catctcttct gtcttaacaa tccacagttt acaaatcaga gcaccagcag 7860

actgcaacaa ggtgttcaac gcagcgtgag gactacggac gtgtacttta cgaccatcca 7920

agcctcgaac ccaacggcgt ttccaagtta ctttctgttc accaccaacc cacttggagt 7980

ccttgacgag tgtccctgtg attgcttcac gtaacgcagc gatagccgga gtttgctcaa 8040

ggaagttctt gatgagtcgc ttaccatctt cggcagtgcc accaacaatc tgtccaatct 8100

tcgcagcgcc agcaccatag aggaacccat agataaacgt cttagcgtta tcacgagtag 8160

gcagaccagc agccaattgg ttcttcgtat ggatgtcacc cgttaggata gtctcaacgt 8220

actcaccctc atcataacga tacatgaagt ggcccaagca acgtagctca aggccggacg 8280

catccacacc aacttgaatc caagggtctg gcttaccgtc tttcatgttg tgctcagcac 8340

cgaaagcagc acggcaaggt tcaccatatg cagcacggat tgaaggcacc tgtgccacgt 8400

tagggaagct atgagttgca cgtccagtta ccgcaccgtt cgggttaacg cttccgtgaa 8460

tacgaccatc gtctccaatc atacggagcc agccgttatc accttcagca acctgaccga 8520

tacgcttctg aatcataagg tattctttaa ttaactcaat gcaacgttgt gcatcagggt 8580

cgtctacctt aacgtgctct aagacctcat cgtctacctt tggcgcacca ctaggagtga 8640

actcaacggg cacccagcca gctttggtaa gcacacgggt gatgtggtca cggctagcag 8700

ggttaaacac aacgtgctct acaggcgtat aaggtgcgcc ctccacataa tcacgagtgt 8760

ccagttcaca aggttccaga ccttcacgtt gcttcttgtt cttcggcttc ttaaagatgc 8820

caccctgttt cggatacttc acacgagggt acttagtgag cggctttccg gtacgaggat 8880

gcctgaatgc ttcagtaccg cccttagcgg agtaccatga gccaaacgta ttggttaact 8940

ctacgagtag ctcaccacgg cgaccagcca gttcagcgta gaggttctct aaggacttga 9000

tgtcaatagg aaaaccgtta cgttccatct tagctaacaa ccatgcagca tcatgttcca 9060

gtttgacagc ctcaatgcta ccattccaga aacggtctgc ttctgtgctt ccagcgggtg 9120

tctcgttagg gaaatagaaa gtgttactac acagtttctc aaagagtgcc ttggtgacta 9180

caacgtcttg aacgttatat tccatcatgt cttcgttgaa gaacagccac tccatcccgt 9240

cttcgtattc atcaccagac tcttccagtg acttcttaaa gtcgtccttg tactcaccct 9300

tcatttcacc taagcggtag ccccatgctt ccagagcgtg agagccaaag cgtttacccg 9360

gcagcttacc agaacgcagc agaccagcat cggtgtcttt gatgttagag taaatcaagc 9420

gggacatcac tagggtatcc aagacgttct ctttcgggat gtgaaactct cggttcaact 9480

ggagcttagc cagtttggtc aacacaggga tatcatactt agtgaagttg tgcccgacta 9540

tgagtcctcc ttttgctacc tcatgctcta aggcgtcaag atacttaccg aagtcagcgg 9600

ggcgatatct tatgtactgg tcagttgtgt agtcgtaagt caccgcacag tgaaattgtg 9660

agacattatg taatagaccg tttgcttcta tatctgtgat aagcattaga gtcctcccag 9720

taatgagttg aatagatttc atacaaaagt taatcacgaa ggccaccgtt aagatgacct 9780

ttagtttaac tctttagatt ccagacttcg cagccagaat catgccctct tcgccagcca 9840

ctttggacag caggagttca cgagtcttat cttcacctac agccacagta gcagctacag 9900

caatggaagc cgtcagacga cctgtctgtg tgtcatccaa agttacacgc tgtgtgtgcg 9960

ccttggtgga cttacggtct ttccaacggt agaccagagt taccttgccg ttgcggacgt 10020

tgatgtgaac tcgacgagca tactggtcga tggtgtcgga cagacgtata gtgttaccgg 10080

ggaatttaat agccatgtta tgttactcct tacaggaaga atttgttgag gtcggttgct 10140

ttagctgcaa tcttagcagc agacgttaca ccagcacttg catcttcaga cagtagacgt 10200

gcctgtttag ccaagcgttg tgcctgtgca gcatctttgc gagccttgtc gttcaggcgt 10260

ttagcttcac ggaagtacat tttaactacc agtctaccaa gggtattgat gaatttaaac 10320

attgtgattc tccttaagcg gattgataag tgggaacaga gtgtctgtcc cattagtgag 10380

ttgtattgat tgctcagaag tcttgaccat cgtcttctgg ttcccagccg ctatctccat 10440

ctccttcatc ttcaggtgat gtagtcggtt cgagccatcc ggtttctctg ttgtatacca 10500

tgtgtccagc cacgccagta acaccattaa aacgacactt gagaacacgc agctggacaa 10560

gattaggatg gtcaccttgc tggtcacgct ccaaggcaat aatggtatcg ctaagttggc 10620

gtagtgcgcc agaaccacgc aggtcagtaa cactaacagg acgcccattc tcatgtgccc 10680

tccctttctc aggattcttg aggtgacaga ttaccaccac gaccacacct ttagtcttcg 10740

caaaggcttt cagcttggtc atcaagcggt caatcgtctt acgctcatca gagttatctt 10800

ccatcccgga gaccacaata gagatatggt ctaacaggat aacgttacag tctaagccat 10860

cgaccatata ggccagcttt gcaaacagac ggtcttcctg tgactccgca aaggaatcat 10920

acaggtggaa catatctgtg ttaaataggg catcgtacca ttcatcgaaa cgaccatcct 10980

ctaagatttt catcttgagt tctttgtctt gacgtaaacg gacgtggttg ttcaagccca 11040

ttaagtcctg aatggtttcc tctacggctt cctccagcat cgccaagcct accttcgcac 11100

cacccttgcc ccacatgagc atctgttggc gaacgaatgt tgacttaccc ataccggaac 11160

cggaagttac catgatgact tcaccaccgc gagcaccaag agtcatatcg ttgagcttcg 11220

gttggcccgt gaatagtaga cctgttgttt catctttgac catagcttta cgcacacggt 11280

ctttaagtga cacagcagag acaacgccat cgggaaccca aggttgcgca ttccaaatct 11340

ggtcggttac tgctttggct tgtccattga gtaaacactc gttggcatcc ttaagaggca 11400

gtacagcgac tctgactttc ccgctaggca ggacaggagc acattcttcg atagccttac 11460

gacccggctc atccatgtcg aacatcagga taatctcatc gaactggtca aagtattcgt 11520

agttagcagc acatgttttc tttgcggctt gagcacccat agggagactc acaacgggat 11580

acttcccttc ttgaagctga gctacagtca agcaatcaat ctcaccttct gtcacaacaa 11640

tcttcttacc accattccat aactgcttac cgaacaatag gtcagctttg agtttcccct 11700

tagcggagaa ctctttgtgc ttgtcgcgca ccttctgacc cacgaggttt ccctcaacgt 11760

catagtagtt tgcaacttgc agcatctcac cgttgacctt cgctacccaa tagccatact 11820

tacggcagat agcttccata aggccacgag ctttgaggtt cgtgtagcga ccatctgaat 11880

ccccaaagtt taaaaggttg gacattgtgt cacctccagt attataagag cgtttccgct 11940

tcttggagag tttctcacgg gtttcctcag tgccacgcac atgattctga catacgtagc 12000

aaaatgtatg cccgtccgag aacatcgagt tcccgtctga cgacccacag ttttcacacg 12060

gcaggtggta taggaacaca ctatcttgtt gctcttccat atccataagt ttctcctatc 12120

ggaaacgagc gaactcaccg tgcaactcac ggcgcattct gaataaccaa catgctacat 12180

ccaagagtga gccttgggag gtgtattgct tgtagttgga cttgattgca ccgcgaaaca 12240

cttgacggga tttattccat gataaaccct tgagaccagt tttattggca ctcgatagct 12300

tggagttaca aatgttttga gctacagtcg ccatccttag attctctata cggttatcat 12360

gaatgtctcc attgatgtgg tcaattacca tcccctttgg aacctttccg ttatgtgctt 12420

cccatacttg gacatgaact cgtggtgctt tgtacttctg ataatatgat tttgccatga 12480

taggactcct acaggaacgg acgcagagcg ccacagacga taatgacgat gaccaagagt 12540

ttcaccggaa gtgcttcacc aaatagctta cgcatagtgg ttactcctta tacaatttta 12600

gcgaacaaag ggagaaacct ttcggtcctc ccatagtgag ttctattaat ccttacgtgt 12660

cagaatgtag accattgcca gcatgaacgc gaggcgataa atcaaatcgt acagacccat 12720

ctcgtggata atcatcataa tattaacccc aatcactagt tactaattca ccagtcttca 12780

gccagcggct caagttgaat gacggacacg ctttaggtgc cacatcgtgg tgcgctttta 12840

cttctgcatc tggatacatg tccagcaggt ctgcaagttt ctctttaaga gagtgcatct 12900

gtgctggcgt aaagttagct tcgaacttac ctttatcatc aatgccacct acgaggcaca 12960

caccgactga cttactgttc cagtccttaa cgtgagaccc aacgacatcg accggacggc 13020

cttcttcgat tgtcccatca cggcgaataa caaagtggta gcctacatca agccaaccga 13080

gttctttatg ccactgacgg atttcacgca gtccaacatt catggacgct ttggttgcgc 13140

tacagtggac aaagattgct tctgtcacag cgcgtggttt gaattgtacc ttactcattt 13200

cttcttcacc tctttaagtt tatcgaatgg aacatcctta gaaggctctt tcagccaatc 13260

aactggaatt aacttgtcag caaacagaat tccatgcttc tcacagaatt cgccatagct 13320

ggtcggagac cctttgtaca gcttggagcg acttgaagag aacacgatgc gaatatcgag 13380

ttcaggatgc tggtcacgaa tcagtaaatg cttcttacgg tcatcactgt cccacagacc 13440

tttggtttcc acaaagattc cattaggtaa caaaaaatct ggacaatagg tgtggttgct 13500

tgcaggaatg atatatggta cacgccaacg ctcatagtcg aacttaatgt tcttcccttc 13560

gagttgctta cttaccttat cctccaagcc agagcgaaag gcacccacac gagtgcctcg 13620

acctgcataa cccttagtca ttagaagtca cctgaatcgt cttcatcgtc ctcttcttct 13680

ggttcttcat tccagccaga gtcgttttgt ggcttgcggg tctgttcttc atcagcttcg 13740

tacccatctt cttcgatttc gtctgaccag tcatcctcac caccaccgaa ctcgaccagc 13800

ttaatcagca tcacggaatc cagttgcagc ttaacggaag cacctgccac agcagaccaa 13860

ccataaggga acagggtgta tttaatcttc agttcagaac caccggagat agccggacgc 13920

tcaccacgaa tgcgcttacc tttggagtcc acaatagcca agtcgatagg tttgttctca 13980

ctagtcttct tgtcagtgta tgagccgtaa cacttaaagt gaaacgtagt ggttccatct 14040

tcgttatcca tgaaaggcat gtcgccaacg tatggcttca gcggtttctt acccttgaca 14100

actttcggcg ggttagcttc atactcttcg agacgtgcag cataatccgt ttcgtgggct 14160

tcgataatct cgtcaatcat tttctgacag cgagggtcat cgttggatac agtcagtgat 14220

actttgtaga caccacgttc gttcttgaag tcaccactac cgaagtctgg tttagccaga 14280

tagcagtaag gttcagcaac accacgagcg gaagtgaata ctttacgttt tgcgaatgcc 14340

ataatgattc tcctttgaag tttctgaaag ttaaaagtgg gaaacgttgt ttctccccaa 14400

tagtgagtcc tattaaacct ttcggtctgg acggatgcgt gtcactgcga agccagccgg 14460

gacatattgc cactcagcta actcgttggc ctcttcgaga gacgtagcga acacagggac 14520

ttcgaacgat tggccttggc cttctaccgt tgcgaagaac ttcttgtcac cgttgaccag 14580

tgaccctttg tttaaattgc tcattgtcct ctccctttcc acaggttgta catttcgagg 14640

tagtcagcgt tgcccgtctt ttcgaacata cgctcacacc attcactagg tttaagcatc 14700

gtcatacacg attacctcgt taactgacag atatacttct tcgtcatgct tgttcatgac 14760

cttatagaac ttaccgtctg ccgttagctc tgcaaagaat atgtcatggc gtttaactag 14820

tgccatcata tcatcttcac ccacatactc gaccttaata atcatagcac ttagtctact 14880

catctgtgca ttcctcatca ctaattccca taagcactgt tagtcgcttg tgagattcac 14940

ctgttactat acgacctacc tgcgccctgc tcaggccata tcgtcctgcc agttggtact 15000

gtgagtaatc tcccgatgca tactctgcaa tcatttggga aaccactaca tcaggtaatg 15060

tgccacaatt gtcatacact ccgtgcaagt gctgcatctc catgttgcaa ttgctaggtc 15120

catacattaa gttgactagg cgattatctt ccttatctcc attaaggtga agaatctgca 15180

tacctagtgg gcgttgtttc ctgaatgcag tcaacactgc ctcatgggca tacataccac 15240

taaacacccc gtcccggtag cgcgccagta tactgtatcc cctcccacca ttagaccact 15300

taactgtcct atggttgtca cttctgcgca ggtttccgaa tgaggatact tcgtaacggt 15360

catctgtagg aaacacagcc caagtctcac gcaacttagg ggccatttct tccagtttat 15420

ttaaatacca ttgtgccttc ttaaggtctt gcagtgaagt tcccttgtga ttacttctcc 15480

acaaatactt aagcacattc cctttaagaa aaccctccaa ctcctctgga gaaagttggg 15540

cctctagtga ctctatgcac tctaagtgtg aggaagtata gtgtgatgga tggtttacca 15600

tgtcagacat tagaacacct ccttgatacg tgcaatgacc agacggactt tagggaaacg 15660

ggtgacgaga accggaatga aaggccggga gccagtggtc gcttctttat ataagccagt 15720

tgtaattaca gcgtgaacac gaggtgctaa ctcaatggta gagccaagca ctttagggat 15780

gactgcgtgt ttctcagagg ccagaaccgt agagcggtca tcaccacgag ccgaaaagat 15840

accattagat ttgttgaagt gaagtcttaa cataattgtg tcctccatat gtgagtcgta 15900

ttagcaatca ggccagcagt tgtcatcaat gataatgaga gcaaaggtgg cagcaatgat 15960

agcgacgatt agaaatagca tgaggttgtt cctccatagt gagtcgtata gaaacgcaaa 16020

aaggccagcc cacgagggac tgaccattga gtttaattta catcttgacc gttgggtctg 16080

actcgacacc acggaagcag gtgaatgagg gatgtctaag agaaccctca agagtttcct 16140

ccatataatt tacttggcac tgccagcctg tgtagaagtt ctcaccatgt tctttaatat 16200

tggtggtgaa ctcatccatc aacgcttggc tgatattgtt agcggagact acgcgacctg 16260

actcaagtag aacctcgaag ccaatcactt taccttcatt agccagacct ttagtacccc 16320

aattgacacc ttggattaca ccatcggctt cacactcagg tttgagtttc caccagccag 16380

acttcttgcc acgcttgtag acttccagcg ggtctttgac gaccagacct tcatgaccat 16440

cggcacgggc tttctcgtag agttcctgaa gttctaccat gtcgtagact tccttggcct 16500

cagagagttc ccaagtgatt tccgggaagt gttcactaag aaccggaatg agggaacgca 16560

catgctcttg catcaggagc gacataacgc catactcttt gccttctatc atatcgtgat 16620

acggcatagc agcatacagt acaaccttaa gtttcttagg gtctaagcgg aagtctactt 16680

tactcccctt gagaggctct actccaccta tatcaaatcc acagtttgtc ttcttgagcc 16740

acttggtacg cagtaggcca gaccctgtgt tgaagtctac gcctttgacc atcagttcac 16800

catccagcat gaatccatca gggaaaatcc agcggtcatc tttgagaaca ttagcccagc 16860

gttggtcgaa cccattaagg tgctcaagcg cggggatggt cttagagaca cgggacagcc 16920

acaggcagtc agccgtattg tcaaccacga tgttaccacg tacaccatca tgcttagtgt 16980

cagcaatcag gtagccagct ttgttgagtg ctttcttaat ggcagactca acgtaggata 17040

cagctttaaa tggtgaagtc ttgaatgtga tttccatggt ggaactccta tatgtgtatt 17100

ggttagtgtt taagcaaaag ttaatcacaa aggccaacct ttcggatgac cttgagttta 17160

cctctcgcaa tagtgagtcg tattacttcc agtgcttcat atcactgtga accttgcgga 17220

gccattcagt ctgtgcatta cagcgaacgt ctgcatcatc ctgttcgaaa cacttagcgg 17280

tcagcattaa gccgttccgt aagaccactc gaagtgtctc tccggcgacc atccgtcgct 17340

gtgcgaagtc ctcatagcga taagtctcaa cgaccacatt tgcatcatgg tcttctttaa 17400

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tgcctccttc cagttgcgtt tctcagagtt gccacgctgt gtcttgtgac gtttcttcat 17520

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ggttggttca aagttggtac gcataatgtt gtttcctctt agagttagaa cttaaagtta 17640

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aaacgcgaag tctgacttga ggatttcttg caggtccaga gagcctttag ctggcatctc 17760

aggcatcttg tctaactgtg attcgtgcaa ctggtcagcg aattgctcat agaagtctgc 17820

gagtacatcg ttttcttcgt aagtgttgac catcgtttca cgcactgctt taaacaggtt 17880

gccagcgtca gccgggatag tgccaaagga gtcatgaatc agtgcgaagg attccacacc 17940

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aaagttagga gcaatgcccg actcctgctt acgtgcgtca attccgctat ccttgttggt 18060

gttcacggta ggctgtagac gaatctggcc taagaacatc aggttcaagc gtgtctgtac 18120

tggcttacga tactcctgcc acacagggaa accatcaggt gttacccaat gtactgcgca 18180

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cgcagacttc agccagttca ttgcttcaac cgcagcgacc acagtcactg ttaccgattc 18300

ccaaatcagt ttagccatat agccagccgc ttggttcggt tgagtgaaca tcaagccttt 18360

accatcgtcg atagctggct gaatggtgtc ctctagcact tggtcacgga agccatactc 18420

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tgccaaccat tgacccgcta gttctttagt gcccagcttg agcttctcag tgatttcccc 18540

tgtgtccttg ttggtcacgg tttcgacttc gttgtcggtg ccgttgatta catcttgctt 18600

cagaatctcg ttgacacgtt ccgctacgat gcgatagatg tcttggactt ccttgctcgg 18660

cagtaagtta acagcgcgac caccaatttc atcacgaagc attgcggaga agtgctgaat 18720

accggagcag ctaccatcaa acgccagcgg aagagagcag ttgtagttca tcccgtggtg 18780

ctggactccc gcatactcaa agcagaacgc gaggaagcag aacggagagt cttgttcagc 18840

ccaccaagtg ttagcaatag ggtcagccgc aacgctcatg atgttctcgt ggttgtcctc 18900

aatgaacttg atgcgttctg caaagtccac cttgtccaca ccagcagtgt ttgcaccgtg 18960

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acctttagtc atgtcgttgc cttgcgggtt aaacattggc acagcgtaga cacgaccgcg 19080

ccagtccatg ttcatcggga accagatagc tttaaactgt gcgaacttgt tggcctgacc 19140

taacatgaac tccatgctca tgcggcgaga aactcgtgct ttctctttgc gatagattgc 19200

ggaggccgct ttcttccacg ctttcagagc cgcttcgttc gtgtcgatgt cttcaggttt 19260

gacaggcagt tcaccacgtt cgagagcagg tacatcgtca accgggcaat gcttccagtt 19320

cacaatctca ttgaccactg ccagaacctt cttgttaatc ttccaaggag tattctgtgc 19380

gatgttcacc gccttgtaaa cttcaggcat gtacacgtcg ttgtaacgct caagtccctt 19440

cttggaacca gttcgaacca gagagagagg cttgcgacca gcagcccaat agccgccacc 19500

gaccggactc gtccaaggct taggagggac cacgcaaggt tgatacattg gagcgattgc 19560

agccagtgca ccagcacgct tagataacag gtcaacgtat tgttcggtca gttggatata 19620

ctcgccatcc ttctcaacgt taccagcaaa cggtcggtgt aactcaacga ggccagtaga 19680

cccgatgaga agttccaaca tgcgcacacc aacgtgaata gattcttcag gtgtccatgt 19740

agtccacttg gtttgcagtt gaccagcgtc taacatcttg ccttctacgg cttgcatgaa 19800

tgctttcttg tagacgatac caacgcgctt gttcagtgcc tcctgtacgt gattcttaaa 19860

gtgtttcgct tcttcatcac gaatgcgtcc gaaacgtaac tcatcttcaa tgctacgacc 19920

aatcttagtg gcgaccgatt gcaggttggt aaactcttct ttcgtcaagc aagccagcgt 19980

gaccttcagt gtgatgaaag cagccgcttc aggtgcaacc ttctgtacca gattgtaggc 20040

cactggacgc ttgccacgct tcgcttccac ctcggtgaac caagtgttcc acgcctcgat 20100

aaacttcggt gcgagagatg acaggagcgg tttagccact gcgttatcac cgaactcacc 20160

cgctttgatt tgacgttcca ttgccttaag gaaacgcttc tcgccttcgg tgtgcgcttc 20220

atgttctaac tcaagctgcg tagctgcaag ctgtgcaccg taatggtcag ccagaatgtt 20280

gtatggcatg attgcgttag cgatgtcaga gaagtcgttc tttggtgcgt tgattacgtt 20340

agtcattgtt gcctcacgtt gttaagaaag tttatctata aaggccagca gtcagtgccg 20400

accttgaaga tacaccttat cagcccataa gctgtgcgtc aatcagtttg tcaatcatca 20460

gtggtgcgcc agcttggata gccagaccgt cagccacttg ccacttaagg ccgttcactt 20520

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ccatgagcat ctcagcacgg cgttcgtttc tatcaatggc cctgcgttcg atgcgacctt 20640

taacaaactg tgccatgcct ttgacgtgta acttgcggtt gcgcttacgg cgtttcattg 20700

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cgttgaagaa ctcacgaatc atcttgcatg tctcgatgaa ctcgtagtca cccggtgcaa 21000

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catggtcatc attatcgtcg tcacagcttt ttaagcggtc cagtacgacc gtatagcaac 21120

ctgcatgacg tgctacgtga tagacgttag ggatacccgc tcggccttgg tgcatcctac 21180

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ctgcatcacg catcagtgca cccagtgtgt gccaccagtc ttgatactcc aagccatttg 21360

agccatcagt atcgttgcca tcgcttgtct caccgttcac gatgtcagca gccagtgcaa 21420

ccagaagagg ctggcgcttg tctagttcgc taatcgggag tgacttgatg attgccagac 21480

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gagaattgag gattaaacgc gcttctttac gtgcctttgc cacctttctg gctggtagcc 21600

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gaactttctt agttaaacta tcagtgtgtt gcaacataga agatacctac cttgttagcc 21720

ttaaagcgcc cgttacgttc acggactgtg aatcgtggta gaaagccata ctttaagtgc 21780

gagaagttag ccttgtgtac cttgagaccc tttgtgaagt ccttcaggaa cacgtagaga 21840

accagcaagt agcttgccac gataagcgtt aagaccatat ttgattgcct tgtagagtgt 21900

gattgtgatt aagagtgcta ccactaaacc gagcggtgtc agcccggtca agtgatgtac 21960

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gtcagtagac tcaacactgc catattccat cggtgcattg cgtaagctgt tgactaagcg 22380

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tgtcagtgat tatcaaaaag gctcctcgta tagtgctttc gagtcacctt gagttaatcg 22560

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tctaatctta gagtcaatac ttaaagtaac aaatagtcgt ctttaagtag tctttaagtt 23040

atccctataa ggaagggaat agtaataaga ctataaacaa ccattcccaa tagtgagtcg 23100

tattagctgt atgatcttta aggctggtat aagagtggta acgataggtg tctatagact 23160

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tactctcagt tataccctaa gaggaaacat aaggtgatta cagatagaga caaagagagg 23280

actacatata gtggtcataa ggtctcccca ccaccacatc tagtggtaac acccaaagtt 23340

aacccaatgt ctcacataag gctagcgtag ctagtaagga ttgacattaa gtaagccata 23400

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cttcttacag tgattatagg gaagatgtat atcgaccata atcactaagg gcgcgcacta 23700

agcgccaatg agcagtctaa ggaacacaag tgagtagaga acaaagcaga gtctccagtt 23760

caccgatgtg ttcagcacta gatgcgagac caatggaagc agcaagtaca acgagaaatt 23820

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ctccttatta tacttgatgg ttacactgat agttagggat gtaattacaa ttactatcat 23940

ccctcactgt aagggtctct aagagttagt cactaagtat gcactttgca tatgcatcta 24000

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gaatcattcg acctttagcc ctacagtcct caatgttctc tttctgtgtt ccctcagata 24360

agtgcgctgg gttaacacac gcagggttat cacaggaatg catcaccaca catccttcct 24420

ttaagggacg ctttaggtgg actgacagtg cgtatcgatg tgccatccaa tgaacaccat 24480

caacacgaat cctgccatat ccacctttag tcttacaccc ttggaagatg tggcaaccag 24540

ttatactatc aattgccact ctcattatat acctcctatt atctattacc actcaatgaa 24600

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gatagcatca ccaccaatgg tctgtttctc catgtggtgt tcaaggaact caagggtcat 24720

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gatagtatcg catattcgca tctccttcat gcccttagca cggatttcct ctaaggcaca 25020

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cagaatctta gactgatact cagcggtacg agaagagcac gtatggaacg cgtggatgtc 25320

atcacccttc agaccaacgt taggaagttc ctcattgcgg ttctggcggt tcggcaacca 25380

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agtaggttga ccacgaagta actcaaatcc ctcatcatat tcagccttaa gcatcggagc 25620

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atcaatctga cacttggttg gtttaggtaa gttcagagcc ttccataaga cgaacaagaa 26280

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ccttccagcg ccgcaaggtc ttcttggtat tgtagcgaga ctttgttgac agcagcctgt 26640

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gtgacagtgg tcaacacatg cagtagcctt cgggtggaac gttagttcaa tcccgcatat 27000

tccgcacaca ccaccctgtt ctctaagcat ctcttcaagt tcttcataac gaaccttata 27060

gtttgactca atctgctttc gccttgagta ttcccttcga gcctctttct tctcgcggta 27120

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tcagcgccca ctaggttctg gtactcttcg agtccatctg ccagtccacc aaggatgtta 27300

cggtctggct gtagcttgga gacttggaac ttgtggcgct ctaacagttt cccgatagcg 27360

ttgtacagtt gaggtgtgcg cttatcgtca tcctgaaggt ctttcagcat acgttgagcc 27420

atctcagtgt ccagcatctc aaggaattga atcaaggact tatcgttaga catctttacc 27480

ctccttcttc catttgataa tcacatcgac taccttggca ccaatctgaa ccactgtgta 27540

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taatgaaagc ataaaacctc cagtttaaag cgggtcgtcc ttgacccaaa gttgttacca 27720

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tcctgtccag agtaatggtg ttaactccgg tgctgataat gtttgcaggt gctccgcagt 29280

atacaatagc ctgaaagtca cggtaagttg ctccaatatt atgctgcttt ataccgtacg 29340

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cgttaggcat acccaaatac gcatacccat ctggcgttgc cgttccagga ggtaatactt 29700

caaacaagca attatcacga tctgttaatc ttaccatccc atacgtacga ttaagctgat 29760

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tccacgcacg ggacgttgtg atttgagtct tagtggtaaa gcgatagtcc tgattaagaa 30420

caagttcctt acggtcttta ccaattagtg ttacttttac gaacttacgt gccagatact 30480

caaaggtaat tgtgaagtcc acggcaccat taagtgggta agtacgcaca gtggaaattt 30540

tgttagccat ctgtagcctc cttagttggt tataataaag ggaagctgtg agagccttcc 30600

caatagtgag tcgtattgtt tacttcttat cagccttaat gtgaacaccg ttggcctcat 30660

agaacttaat gagcatctgt tgagagattg ggtcgttagg aatcaactct cggtgggcat 30720

tcatcaagcc agtcatcata tcacgctcgg tcactttgtt aggagctgta aggacaccat 30780

aagcatttcg accagcagca agagtggcac cagcgaaccc aagagcagga acctgttcac 30840

caatagcgcc cataatggaa tcacccatat cacgagaagt taccgccttg ttccgttctt 30900

tcttattctc tcctttcggt agaatcgtag agcgaaccat aagaccttgg tcgtaacccg 30960

cagcacccat agcgaagtta gcgatactca gaggcgaccc taagtgtgaa cttcgggaag 31020

ccgcagcata ggcaatcatc ttagggtcga gagctttctt caagtaatcc ttctgttgct 31080

ctttaggaag accagcagct ttcaagtgag cctgtgccac gtagtaggaa ccagcaagac 31140

cgccggagat agcataggtc agagccatgt ccatagcgcg atggttctta aaggcttcgt 31200

tgccagagcg gataaactta gagttcatcg acttgatgac aaacgattta aactgaagga 31260

ctaacttagc ggtagcacca aacgcatggg aatcctgtaa ggacacctta tgaggtcgga 31320

gcatcgtctc atcagcaacc ttatcagcta aacgccataa gtccatagca cgagggtcat 31380

tagccagctt acgcttatcc ttgaaggtga acttaccatc ttcaccacga gtcacgttct 31440

ctcggatgag agcctgaatg ccttcccact gttccttaga gatactcgca gacttcagca 31500

tgtcaccttt aatccacttg ttggcaccct tgcctgtaat ggcatgagtt accacatcac 31560

ccatcacgcc ctgccgggcc atgtccagaa ggtagtttga cgtaccattg aggaacttgg 31620

tcagaggtga gcgagccgcc agttcttgag ttgtgtgctt aatagaacca acaaccttag 31680

ctgcaacatc aggtgtatca gttgactcac ggagtcgctg aatgatgtct tgacgagtcg 31740

gtcggattaa ctggtcgaac tctttaccga acaccataga gtggagttct ttgagttcat 31800

taccggagac tggcttgttg cggaacgcta agtcacgcag taccggaatg ccatgaagca 31860

tcgcacgaat gttacccttc gccaacatac cggagatttc agttaggttc tgcaagccca 31920

tatatgcgtt cttcgtaaag aaggacatat cggacagagc gcgaaccata gtgtcaccta 31980

cagtatcctg attacgtcga gcacgaccag tgagaatctt aacggtatcc ttaagtgctt 32040

ccacttcacc tttcatcgtg cccttccctt ctgacttctt atcgagagcc ataatggaat 32100

ccttaagttc agcagtcgtc ttccctgtgc cacccatgat agcaatatcg ccatcaacac 32160

ggcggtcata ggctggcata acgtgtttca tatcgaagtc acgtaagtca ttcacagaga 32220

actgttgtcc gttagggagc gttacaggca tgtcagaatc gaacaggtta cgggcttcaa 32280

ggaacgagtt gttctcaata cccacgagac cctcaatgtt atcgtcaatg acacttgaag 32340

agttgaactc atctgtcttc gcaataccat aagccttatc gctggcatgt ttcatcacca 32400

tctcttcggt tacagccttc gggtcgatgc ccaaggtctc cgctaagtgc tcatctacac 32460

gagccttaac ttctggacgt gaacgataag aggtcagcca gcttgcagcg attgcttcct 32520

gtaaaccatc agagccacca agagcctgtg agtacaactg cttggcttcc cgtgagtaca 32580

catgaggaac gtaagtccct ttgtgacgac tgttagggaa gatggaagtt gccttgttac 32640

cgaacatcga cgggttctcc atcatctcac gcttgaggtc aaagtgttcc ttcatgatgt 32700

ccatcacctt acgctctgcc ttggtcaagt tagcctgaag ttcaggacgc tcgatagcca 32760

cagcagcacg acgatagatt tcttgacggg caccttgagc accactcttg aacataccca 32820

cagaccactc ggggtcagcc atagcttcct tcattgcacc atagaggtca ttgtaggttc 32880

gctggttggt actgtgtagt cgctctttga tgtcagatgc ggtagcaccg aacttaccat 32940

gtgagccaga ctccatccct gtaggtgagc gcactaagtc cttagcgagt ccacggattt 33000

cagagtgttc agaacgtaga gttctcaagc cgatttcact caggccacgc ataggcaatc 33060

cccaagcagc acgttcaggg tttacctcgg caaactctct ggctgtcata gggttcgcta 33120

ggttagtatc actaataatg gaaccatcac gcagcactac agcacccggt tcagtttcca 33180

gtggtgcata ctcaacgcca ttgtgctgcg agaacacccg gtcttcacta ggaggcatac 33240

gacttgcgtc ataaccacca gtgttacgtg cagtctcacg agcctcaaag cgcatctgtg 33300

cagcagcgaa tgggttctca atctgttcag caccagactt acggagacca gcggcaacac 33360

catcagcaac cgcagtcagt ccaccagcta gtaacatccc agcaagggca gcttcagcat 33420

agtgtgcatc accaccagca accgatgtac gcagaccctc agaggcaacg ttaagtgcac 33480

cagcttgagc acccaccatc aatgccttgt tcaccagttt gaatcccttg gctgtactcc 33540

ctgcgagtgg gacgtaggtc aacgggtcca caccagcacc aatcaggcca gcagacagct 33600

tggcaccgag tccagcatca gcagccttag catcagcctc gaagttctcg ttagccattt 33660

tgattagctc gtcaaggttc tcagcggaac caccgagtac aacgttcatg tacgcagggt 33720

tctttacttc agtccgaatc ttctccagtt cttcaggcga ccatatgtgg ctattaaacc 33780

gtgtcggttg aagtacatca gtgagcacat caaaaccatt gtcacgctta ccagcacgga 33840

aggcaacacc caaggttgag ttggagagtt ctgcttcagc agcactaccg aatccgaaga 33900

aggttgaacg ctcattggct tcgtcaagag ttgttccttt tgcttcccaa tagtctttac 33960

cgaacggctg attgggagcg gcctgttctt taccttgaaa ggacatttcg tgagactcag 34020

ggagttcagt tgttaccttt cctttcttcc cgataccact catcgcagca tcgaacggaa 34080

tccctttagc ctttggggtg ataccaccga atgactcaat gtccccactc ttaggtgact 34140

tagcaacatc cagaagtgag cgcaaatagt tacgcccttc atccccaata ccagcaaagt 34200

taccggagtc gtaggcttcc agttgaggct taccattttg gccttcgcct tggttgtacg 34260

caagggcagc tttcagttcg tccccgttgt atttcttaac gaggtctgca aggtaacgag 34320

caccagcatc aatagactta gccgggtcgt tgaagtcctc atcgttctgg agaccgtaag 34380

ccttaccagt tgccttggtg aactgcatga cacctctcgg tcctgttggc gattgagccg 34440

taggcttaaa gcgggattct acccaaccga ccttccgaag aaggccatag gagactccat 34500

gtgtgtcagc agcttgttga aataacgcat catattcatg cggttcgttc gggttatact 34560

tatccacttg gaacctccta tcgtggtctg ttagtcttta ccagtcagcg tatccagaat 34620

acccttgcca ctcacgctat cgtacatgct gccagagcgc ttaggcttct tagcttcacg 34680

ttcacgcttg cggttcatag ctcgtgtatg tagggttcgc ttgttggcat ctttgagtgc 34740

cttgttacgg gcttcctcgt ccagcttcgc ttggttctct tggtacatct tcgagagtaa 34800

ctgcttgtcg taccgaatgt ttacctgtcc ggttgtatcc atcaggtaga tagagtcacc 34860

acgctcgaac acagtgagtt gcttgttagt cacccaagga ttcgtctcag cgagtttctt 34920

agcggcttgg tcgatgatgt ccttaccttg tttccaagag tccgggtcat cggtcacacg 34980

cagagagttt ctcgttaaga caccaatagt atcaccatca acaccatcag cagtgagagt 35040

cgtagtgttc tctttgagat acttatcgac ctgttgcatt gccgaatccg cgttacctgt 35100

acggtactta acggagtcgt aaatcttacg ggcacctgca tcaagtgttg ctggcatacg 35160

ggacagttca ggagactgtg agttgttctt cagagaagcc cacgccttgt catcctcgta 35220

ctgcatctct ttggtaagag actgtcgagc cttgtcagca tctaagagaa tctgcgggtc 35280

aatcccttgg ttgtccatca tgtccatagt gaggaacatc tcagccttat caggatacaa 35340

cgcagcgaat aactcagggt cagcattacg aacacgacgc agggcagtaa gagccacacc 35400

gccatcttcc ggcatcttcc cgttaatcac agcggacgtc cattccttct cagcgtcacc 35460

aatcagttca ccaaccgcag tacggaaagc acccttctcg gagtcagcct tgaggtagtc 35520

cagcttcatt cggtccttct gttcattagg gatgttcata gcatcaatgt cagccagctt 35580

cttgttagca tagttaacca tatcactatg agtgaactca ccagtgttct cgttggttgg 35640

catatcgcca tacgcagtgg acacatactg accattaagt cgcttctgga actgtgcgtc 35700

gatgacgttc atcttgttca tggacttctg ttgcttatcc atttccttgg ctaactcagc 35760

ggtctctcgc ttcatgcggt cctgcatctg cgtctgtgcg ttgattagag cctgacgttc 35820

aggtgtcatc tcttcgcccg gttgcagtgt atctagttct gccttgatgg actgtagttg 35880

ttcccagcca gtgttcacgt tctcttggtt caatgcagag ttcacattaa gttggaacgc 35940

ctcggtcttc ttggcattca actggaactc attatgttga gccttgacca tcaagttgtt 36000

ccactgctcg gtacccatca gttccttgaa ggtagtctcc ttgccatgca gttttacctt 36060

acgattctca atctgttgga ggaactgacc gccaccctca cggttaacca cgtcagagag 36120

accttggcta atcatggtga acgcttggtc atcactaggg atacttcctg tagtcaatcc 36180

agcggtgaag tagttctcaa agaactcacc agcatatggg gaacgcaagg tttctgggtc 36240

gttcaacaca gagttcaact ctacgcgact gttgatgaca gcacccttct tagcttggtc 36300

actaaggaag ttatcgtgag caccatatag ggcgatgtta cgctcggtga tgtcggagtt 36360

gaatcccttc tgatagaact catcagtctc atcgataccg aactgttctg catagttctt 36420

agcggcttct tgcagtcggc tatgacggaa ctcttccaac tcctgacgag tacggaactc 36480

accgttctta accttctgtg ccacttcgtc atctacgaga tatgcagcgt tacgaccagt 36540

cttcacctta agtgcttcca tcgcgtatgg gtcgtcctga tacagcagtg taccgttctc 36600

aatggcctct cgacgttgtt ctggagtcag cttacgaata atctcgttag agcgctcgtc 36660

tgctttatcc ttctgattct ggtcgtactt catgtatgca tcagcaccca tttcagcgag 36720

cttacccaca gtaccaatca gtgcagactt cttggtatag cttgggtctt catagacagt 36780

cgcggccttt acgtccactc gtccagtacc atggagtcgg cttgcagcag gggcacccat 36840

attacctaat gcttgtgcta acttgctcat tatttcttac ctcctttttt ggaactacca 36900

gaagtagcaa catcgaccat cttcgctgag cctaggagta acgggtccat gatttgttcc 36960

agcgcccctt tgagcttagg ttctgacttg ttgatttcgt tgatttgact taccgtgttc 37020

tctcggttgg catatcgctt acctaaaata acactgtagt ctcgttgata gttttcggtg 37080

ataccttggg actctcgaag gaagtcaccc tcggtaacgc gagctacacg ttccatagag 37140

ttaccttcaa gcattccctc accaatagcc gctcggactg tccccatgtt cctcactcgg 37200

ttcatgttgg cttgagtcaa gtcttggaca gtagagtcaa ggaggtcacg agattctaac 37260

ttgaggttag cgtcgttata gttcatctcc tttatcatct gccagctttg acgacgacct 37320

tggtcaatct gtgcagcctt tgcctgatta gcctgaatac ctcccataag catggaagtt 37380

ccttgcagag caatggggat tgcagcaacc cagcacatag ttaacctcct attgtgaata 37440

gttggaattg attactgtcg ccagtaaact cattatggaa caccgcaccg atggacttca 37500

agaacctaat gtgggacttg ttgccgaccc aaacgtagtt ccagataatc ggatactgtt 37560

tgagcatggt atcacgatac tccagaatga gctttcggaa ctctcttcgg gtcttcatac 37620

tcaatttcca cacacgggca gacgttacga accacacttg gtccccacag ttaccaccga 37680

tagccacagg catcccatga agtgacatag tgacacactc agaggctggt ggaaatgaag 37740

gttcaatgcc ataggctttt gcctcagcga tgtcttcagg tgacggcgtg aataacttaa 37800

agtctctttc tgttgtaggt cggataatca tagagtttct ctcctatagt ataacccccc 37860

ttcccaatag tgagtcgtat tgttcactaa atgagtcggg gtgtttacga ttagatacca 37920

gaagaacgac gcaggtaatt tccttcccat ccgcatccaa tcacgttaag tggtgtagtg 37980

tggtcagaga tgatacgcac ctcgttcaac ttggcattgc cggacacagg gaatcggaac 38040

tgaccagtac caacgttgag tccaccagtt cgtaaggcat ttgaacccaa cctagctcct 38100

gccatgtcat agctgaaaag acgtgaggtg ttctcgactt ccacaacgaa cgcaccagaa 38160

tcctcatagt tgacccatgc acgccgaagc tgcaagcgac caatgtcctc ggtagccgtt 38220

gagccatcat ccgctgcctt cttgatgagg aacttagaga acacataccg aaagtcaata 38280

gccaatccaa tgtacacctt ctcaccctct cggttcccat caaggaccaa gcgaggttca 38340

ccattaggcc atccaccatg cggctcatcg aaccatgata ccttaccatc catcgccaca 38400

atgtagaact tacctaaata gttcttcatt ccgtagaatt gacttggata gataacagtc 38460

tcatacgtgt catcatcgta ggagccaccg gggatggtga tttccagctt gttgtctatg 38520

tagattcgat aaggctcatc taggtagtcg atggagttct tcgtgaagtg tgcccgtgcc 38580

atccacgtat gggactggtt gcgtaacaga aggtacatgg tggaaccaat agaatcacaa 38640

gccaatacag ttacgttact ccctagttcc caatgagacc acgcctgttg cacgttttcc 38700

tcattcaagt acagaaattt gtacatgaag attttgcttg gggcgtttgc ggataacacc 38760

gaaacgaagt tctcagtgcc agagcctcga atggagaaca caccattagg aatgtagcta 38820

ggaacgtgag cactcatgtc ctccgcagac ttcacggagc taacatcctg taccgcatag 38880

tatcggttga ttgatgtata ggatgcacga ggtgacgcaa agtagacacc acgcccaatg 38940

ccataaggtc tcgccatgtc tgacacatcg aactcagtcg ttaagttcaa ctcaacggtc 39000

ttcggtgaga ggatgccaga ggcagacagc acgaactgtg cttggtcaga ccataggagt 39060

aactcttcgg agaacggtac agcatattta agcgtactaa ttcggttgtg tgacacagca 39120

acgtcgattg ggtcatcatc ggacaggtta gccactgacg cagggaacaa tgagaaatac 39180

ttggatgtac gagacatcac aatgttttca ccagcaagaa accctaagcg gttcctgaag 39240

aagaacacat cgttaatccg ctggtctacg atagatgggt cggggttagt attcatgtca 39300

ccacacttgc gctcatccca tggcaaggct tccatcttaa aggaaccatc ggcctgtcga 39360

atcaatgcgt gtggcatggt tgcaccattg agtcccttct gtacgcccca cccagctact 39420

tccttccaca ctttacgtgc tgcatcatat tgcacataga atgcgtcaga ggtcttcgag 39480

gtgtccccta cgatttgcac ggagtatcca ttaggagcct cagcgggtaa cttggtgaat 39540

gactggctgg tgtgcattac cgcagacatc aactgtccac cataaccatc ctctacctcg 39600

accttccaga ttggttcatc acctcgtgac actacatgaa tgaacccagc accctcgttg 39660

atagtccacc cccattggtt ggcccctccc tcacgaagta gctgtgccat cttcctaacg 39720

agccattgag catccgtctg ttcgacttca ggggcattgg caccatcagc aatcttatag 39780

gacgcagaga taccattcag tctaatcgta aaggtacgac catactgacc accacggatg 39840

ttaatgagac actcgccgtc ttctcgaata gtgtagatag ggtctttgtt ggcttgaaca 39900

accttagagc ggttcactac gaacgtgtag tctgccactg ttaccatcct taagtcatcc 39960

ctagggttag cacagttagc atatgaagtg tcaccatgta caacatactc acgcccattg 40020

aggtcaaata ctttgatacc gcttccagtg aacacaacgt aatactgttc gacactatcg 40080

cggttaatca ggtggactaa aggtgcgcca ccaaggaacc cagcgtcacc aatagttttc 40140

gtaaagatga aa 40152

Claims (9)

1.一株可跨种裂解的大肠埃希氏菌噬菌体RDP-EC-20128，其特征在于，透过电镜观察，该大肠埃希氏菌噬菌体(Escherichia coli phage)RDP-EC-20128头部为多面体立体对称，包裹着核酸，直径65nm，有一个长117nm的尾，有尾鞘，颈部连着头部和尾部，为有尾病毒目肌尾病毒科，不具有毒力基因和溶原基因，保藏编号CGMCC No.22482。

2.如权利要求1所述的大肠埃希氏菌噬菌体RDP-EC-20128，其特征在于，该噬菌体具有较广谱的杀灭大肠埃希氏菌的能力，同时对沙门氏菌也有一定的裂解能力。

3.如权利要求1所述的大肠埃希氏菌噬菌体RDP-EC-20128在制备预防和或治疗大肠杆菌引起的疾病的药物中的用途。

4.如权利要求1所述的大肠埃希氏菌噬菌体RDP-EC-20128在制备预防和或治疗沙门氏菌引起的疾病的药物中的用途。

5.如权利要求1所述的大肠埃希氏菌噬菌体RDP-EC-20128在制备预防和或治疗大肠杆菌引起的疾病的饲料中的用途。

6.一种用于防治大肠埃希氏菌的杀菌组合物，其特征在于，包括有效量的如权利要求1所述的大肠埃希氏菌噬菌体(Escherichia coli phage)RDP-EC-20128。

7.如权利要求7所述的用于防治大肠埃希氏菌的杀菌组合物，其特征在于，还包括用于抗大肠埃希氏菌的抗生素。

8.一种预防和或治疗大肠埃希氏菌引起的疾病的添加剂，其有效成分包括权利要求1所述的大肠埃希氏菌噬菌体(Escherichia coli phage)RDP-EC-20128。

9.一种清洁剂或消毒剂，其特征在于，包括如权利要求1所述的大肠埃希氏菌噬菌体(Escherichia coli phage)RDP-EC-20128。

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