CN111254121B

CN111254121B - 一种沙门氏菌噬菌体及在防治沙门氏菌感染的疾病的药物中的应用

Info

Publication number: CN111254121B
Application number: CN202010160393.8A
Authority: CN
Inventors: 潘强; 任慧英; 孙虎芝; 刘广芹; 柏停停
Original assignee: Qingdao Phagepharm Bio Tech Co ltd
Current assignee: Qingdao Phagepharm Bio Tech Co ltd
Priority date: 2020-03-10
Filing date: 2020-03-10
Publication date: 2022-03-18
Anticipated expiration: 2040-03-10
Also published as: CN111254121A

Abstract

本发明公开了一种沙门氏菌噬菌体及在防治沙门氏菌感染的疾病的药物中的应用，所述噬菌体被命名为SPP11，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物学中心，保藏日期为2019年11月04日，保藏编号为CGMCC No.18868；该烈性宽裂解谱的噬菌体SPP11对沙门氏菌具有强烈的裂解作用，可以有效防控家禽养殖场沙门氏菌病，降低鸡群鸡白痢抗体阳性，减少肠炎沙门氏菌引起的鸡群腹泻，还可以对饲养环境、饲料、饮水等进行沙门氏菌的消毒，此外，所述噬菌体易于进行工业化生产，由上述噬菌体制备而的药物或消毒剂不仅可降低成本，还具有绿色环保的优点。

Description

一种沙门氏菌噬菌体及在防治沙门氏菌感染的疾病的药物中的应用

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，尤其涉及一种沙门氏菌噬菌体及在防治沙门氏菌感染的疾病的药物中的应用。

背景技术

沙门氏菌(Salmonella)是一种常见的人兽共患病原菌，为人类食物中毒引起胃肠炎的主要病原菌之一，在医学、兽医和公共卫生上均有十分重要的意义。WHO将沙门氏菌列入具有严重危害的食物传播性病原。目前，在我国发生的各类细菌性食物中毒中，由沙门氏菌污染而引起的食物中毒屡居首位。据资料统计，由沙门氏菌引起的食品安全事故占我国细菌性食物中毒的 70％～80％。由此可见，沙门氏菌等微生物污染已对我们的食品安全构成了主要的威胁。

由鸡白痢沙门氏菌造成的家禽病是家禽养殖患病概率最高的疾病之一，在各个年龄阶段均可发生传染，能够引起家禽高发病率和死亡率，对感染2～3 周龄以内的小鸡，引起白色下痢，病死率髙。沙门氏菌通过各种方式进行垂直和水平传播，死亡率范围从0到100％。最大的死亡率通常发生在2至3周龄的鸟类中，在第3周和第4周之间迅速下降。幸存者通常成为慢性携带者，并且可能不会成熟为发育良好的产蛋或繁殖鸟类。蛋鸡的生产性能受到通过生殖道进入卵子的细菌的严重影响，导致产蛋减少，体重减轻，腹泻等。传统的治疗方法是采用抗生素，但是由于抗生素的长期使用，不仅会污染水体，还会导致致病菌产生耐药性，进一步提高治疗难度。因此，研发一种疗效显著、使用安全的新型制剂用于防治鸡沙门氏菌病。

噬菌体是一类感染细菌的病毒，可从污水或粪便等自然环境样本中分离得到。噬菌体具有严格的宿主特异性，沙门氏菌噬菌体只侵袭沙门氏菌，对人和动物细胞、植物细胞没有感染作用，所以噬菌体对人类或动植物没有感染性，也不会污染环境，安全性较高。噬菌体与相应的宿主菌接触后，就会触发噬菌体的吸附及胞内增殖过程，并通过宿主菌的裂解释放更多的噬菌体。噬菌体可通过这种途径在环境中通过杀灭特异的宿主菌得到自身的大量扩增，具有指数增殖特征，产生耐药的速率远远低于抗生素，而且噬菌体的溶菌作用不受细菌耐药性的限制。另外，噬菌体筛选周期短，制备工艺简单，成本低廉，能作为一种具有杀菌作用的生物消毒剂和抗生素替代品。

但是，目前还没有出现有效的沙门氏菌噬菌体，能用于防治鸡沙门氏菌导致的疾病，因此，现有技术有待进一步改进。

发明内容

针对上述问题，本发明提供了一株新沙门氏菌噬菌体SPP11及其应用，上述噬菌体可被用于制备治疗或预防鸡沙门氏菌感染的疾病的药物、饲料添加剂、消毒剂，在解决鸡沙门氏菌感染的同时，避免了由于使用抗生素带来的抗生素残留和病原菌耐药性的问题。

本发明的技术方案具体如下：

一方面，本发明提供了自山东青岛某蛋鸡场的鸡粪中分离得到的一株具有广谱强裂解性的沙门氏菌噬菌体，该噬菌体命名为SPP11，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物学中心，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2019年11月04日，保藏编号为CGMCC No.18868。

另一方面，本申请还提供了上述沙门氏菌噬菌体SPP11在制备治疗或预防沙门氏菌噬菌体感染的疾病的药物中的用途。本文中术语“预防”是指包括通过给予所述组合物来抑制或延迟所述疾病的所有行为。本文中术语“治疗”是指包括通过给予所述组合物而使所述疾病好转或有所改善的所有行为。

优选地，所述沙门氏菌感染的疾病包括鸡群沙门氏菌病，所述沙门氏菌包括鸡源沙门氏菌；优选地，所述鸡源沙门氏菌选自鸡白痢沙门氏菌、鸡伤寒沙门氏菌和鸡肠炎沙门氏菌。

此外，本发明还提供一种噬菌体药物制剂，其有效成分包括上述的沙门氏菌噬菌体SPP11；优选的，所述噬菌体药物制剂还包括其他特定病原菌的噬菌体。

可选地，上述噬菌体药物制剂可以通过外用、口服或肠胃外途径给予本发明的药物组合物。具体而言，可以经由皮肤、口服、经直肠、外用、静脉内、腹膜内、肌内、动脉内、鼻内和吸入途径来给予本发明的组合物。优选地，所述药物制剂形式为灌注。

可选地，所述噬菌体药物制剂中还包含药学上可接受的载体。本文所使用的术语“药学上可接受的载体”指不对生物体造成显著刺激且不消除所给予的活性组分的生物活性和特性的载体或稀释剂。为了将所述药物组合物配制成液体制剂，药学上可接受的载体必须适于无菌和生物相容性。实例包括盐水、无菌水、Ringer’s溶液、缓冲生理盐水、白蛋白输注液、葡萄糖溶液、麦芽糖糊精溶液、甘油和乙醇。它们可以单独使用或以其任意组合使用。如果需要，可以加入其它常规添加剂，例如，抗氧化剂、缓冲剂和抑菌剂等。当还与稀释剂、分散剂、表面活性剂、粘合剂和/或润滑剂组合时，还可以将本发明的组合物制备成注射剂(例如，水性溶液、悬浮液和乳液)，或者丸剂、胶囊、粒剂或片剂。

本申请还提供一种鸡饲料添加剂，其包括如上所述的沙门氏菌噬菌体 SPP11，通过与鸡饲料进行混拌，对鸡群进行饲喂，达到预防或治疗鸡源沙门氏菌病，如鸡白痢沙门氏菌、鸡伤寒沙门氏菌和鸡肠炎沙门氏菌。

此外，本申请还提供一种环境消毒剂，其有效成分包括如上所述的沙门氏菌噬菌体SPP11；优选地，噬菌体的浓度为1×10⁸PFU/ml以上。

可选地，环境消毒剂还包含其他用于环境中病毒、细菌抑制或消灭的活性成分；优选的，可应用环境消毒剂的环境包括饲料、水和养殖环境，所述养殖环境包括料槽、地面、墙壁、粪便和垫料。

此外，本发明还提供一种检测试剂盒，其包括如上所述的沙门氏菌噬菌体SPP11。本领域技术人员可根据本发明公开内容和本领域常识利用上述沙门氏菌噬菌体SPP11制备检测试剂盒，用于检测其特异侵染的沙门氏菌、或用于防控由其宿主沙门氏菌侵染导致的疾病。

最后，本申请还提供上述环境消毒剂在鸡场环境消毒中的应用，具体地，所述环境消毒剂可通过喷雾、浸泡的方式对养殖环境、饲养器具进行沙门氏菌的消毒，所述养殖环境包括料槽、地面、墙壁、粪便和垫料。所述液体浸泡、喷洒形式包括但不限于洗涤剂、消毒剂、去污剂等。

本发明具有以下有益效果：

1、本发明提供一种烈性宽裂解谱的沙门氏菌噬菌体，能够有效防治家禽沙门氏菌病，具有降低鸡群死亡率、降低鸡白痢抗体阳性以及良好的清除鸡肠道内沙门氏菌的作用。该噬菌体可用作消毒剂活性成分，对饲料、环境等也具有良好的沙门氏菌消毒作用。

2、本发明涉及的上述噬菌体从自然界中获得，易于进行工业化生产，由上述噬菌体制备而的药物或消毒剂不仅可降低成本，还具有绿色环保的优点。

附图说明

图1为沙门氏菌噬菌体SPP11的噬菌斑图片；

图2为噬菌体SPP11的电镜图片；

图3为噬菌体SPP11的热稳定性测试结果；

图4为噬菌体SPP11的pH值稳定性测试结果；

图5为噬菌体SPP11的一步生长曲线；

图6为各组鸡群糊肛率对比图；

图7为鸡盲肠内容物中沙门噬菌体的数量。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。在本发明中，若非特指，所采用的设备和原料等均可从市场购得或是本领域常用的。下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。

实施例1噬菌体的分离纯化

取适量采自山东青岛某蛋鸡场的鸡粪样品。取少量样品加入肉汤培养基中，并向培养基中加入准备好的10株沙门氏菌菌液，将混合物置于恒温摇床 37℃，170rpm培养约12h，取培养液经0.22μm的无菌微孔滤膜滤过，得到噬菌体增殖液；将噬菌体原液通过10倍比稀释，取噬菌体稀释液分别和10 株沙门氏菌菌液1:1混合均匀，37℃孵育5min后，吸取200μL混合液置于上层琼脂(琼脂浓度为0.7％)中，混匀后迅速倾倒下层琼脂(琼脂浓度为1.5％)平皿上，摇匀平置至培养基凝固，置于37℃培养箱倒置培养4～6h后，获得形成噬菌斑的双层平板。将获得的沙门氏菌噬菌体命名为SPP11。

在形成噬菌斑的双层琼脂培养基挑取单个噬菌斑，并置于1mL的NB肉汤中于恒温摇床37℃，170rpm培养约30min得到噬菌体浸出液。取噬菌体浸出液与对应成斑的沙门氏菌(后面称为宿主菌)增殖液1:1混合均匀(37℃孵育5min)，吸取200μL置于上层琼脂，混匀后迅速倾倒下层琼脂平皿上，摇匀平置至培养基凝固，置于37℃培养箱倒置培养4～6h后，再次获得形成噬菌斑的双层平板。在形成噬菌斑的双层培养基上用灭菌镊子挑取单个噬菌斑置于1mL的LB肉汤中，于恒温摇床37℃，170rpm培养约30min得到噬菌体浸出液。重复以上步骤3次，得到纯化后的噬菌体浸出液，取等量纯化后的噬菌体浸出液与宿主菌增殖液于5mL液体NB培养基中，37℃，170rpm振荡培养，直至液体变清亮，将清亮液体11000rpm离心10min，取上清，使用0.22μm 的无菌微孔滤膜滤过，得到噬菌体增殖液。

如图1所示，沙门氏菌噬菌体SPP11在双层琼脂培养基平板上形成透亮空斑，周围无晕环，边缘清晰可见，直径约1.5mm。

实施例2沙门氏菌噬菌体SPP11的形态学观察

取20μL噬菌体样本滴在带有碳涂布膜的铜网上，待其自然沉淀15min，用滤纸稍吸干后，再用2％(W/V)磷钨酸(PTA)染色1～2min，滤纸稍吸干，待干燥后，采用透射电子显微镜下进行观察拍照。

结果如图2可见噬菌体SPP11头部呈多面体的头部结构和无收缩性的尾部，头部宽61.54nm，长61.54nm，尾部长约134.62nm，根据病毒分类国际委员会(ICTV)的分类方法，本申请的噬菌体形态符合长尾噬菌体科的特征，属于长尾噬菌体。

实施例3噬菌体SPP11的全基因组分析

提取噬菌体SPP11的基因组，进行全基因组测序和序列分析，结果如下：

(1)SPP11基因组全长42kb，G+C含量为49.59％，碱基C、G、A、T 含量依次为24.75％、24.84％、25.21％和25.20％。全基因组RAST在线注释结果显示该基因组含有66个开放阅读框(ORFs)，平均OFR长度为642bp，其中22个ORF功能已知，44个ORF为假想蛋白表达序列。在这66个开放阅读框(ORFs)中，发现结构蛋白有19种，主要包括噬菌体的结构和包装蛋白(头蛋白、尾蛋白、尾纤维蛋白、颈蛋白、衣壳蛋白和末端酶大亚基等)、噬菌体的裂解有关蛋白(裂解酶)、DNA复制和修饰有关的蛋白质(限制性内切核酸酶、DNA结合蛋白、含内含子的DNA聚合酶前体、HNH核酸内切酶、DEAD/DEAH盒解旋酶等)、其他功能性蛋白(重复感染免疫蛋白)。同时在66个ORFs中，有60个起始密码子为ATG，4个起始密码子为GTG， 2个起始密码子为TTG。经软件tRNAscan-SE分析该基因组不含tRNA基因。经在线工具CGE server分析该基因组不含耐药基因及毒力基因。经PHASTER 分析该基因组不含溶原性相关基因。

(2)噬菌体SPP11的基因组中：与噬菌体宿主识别相关的尾部纤维(tail fibersprotein)蛋白基因序列见序列表序列1，其表达的蛋白见序列表序列2；高度保守的末端酶大亚基(terminase large subunit)蛋白基因的序列见序列表中序列3，其表达的蛋白见序列表序列4；DNA聚合酶(DNApolymerase)基因的序列见序列表中序列5，其表达的蛋白见序列表序列6；与裂解能力相关的裂解酶(lysozyme)基因序列见序列表中序列7，其表达的蛋白见序列表序列8。相关信息具体见下表1。

表1基因序列信息表

	type	location	start	stop	function
						序列1	Peg	SPP11_24887_23616	24887	23616	tail fibers protein
序列3	Peg	SPP11_5566_3008	5566	3008	terminase large subunit
						序列5	Peg	SPP11_37382_40480	37382	40480	DNApolymerase
序列7	peg	SPP11_27866_27378	27866	27378	lysozyme

实施例4沙门氏菌噬菌体SPP11的温度稳定性

将4×1010pfu/mL噬菌体SPP11增殖液分别于40℃、50℃、60℃、70℃、 80℃，每一温度两个平行样，各保温20min、40min和60min后，待作用结束后取样，并立即将样品置于冰浴中冷却，进行10倍比稀释，取合适稀释梯度测定效价。以温度为横坐标，以噬菌体效价的对数值为纵坐标，绘制SPP11 噬菌体热稳定性曲线。

结果如图3可见噬菌体SPP11在40℃、50℃和60℃作用60min后基本上保持原活性，70℃作用60min后，效价仍保持在1×106pfu/mL以上，而在80℃作用20min，噬菌体数量约为1.25×105pfu/mL，仍保持一定的活性。由此可见噬菌体SPP11的热稳定性较高。

实施例5沙门氏菌噬菌体SPP11的pH稳定性

取无菌试管中加入不同pH值(1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、 13)的NB肉汤4.5mL，各三支，然后将试管置于37℃的水浴锅中，待温度稳定之后，各加入500μL的SPP11噬菌体增殖液，混匀37℃水浴作用1h、2 h、3h。作用结束之后，立即向混合液中加入适量的1mol/L的HCl或者NaOH 使混合液的pH值约为7，进行10倍比稀释，取合适稀释梯度测定效价，每个pH值试管设定2个重复。以pH值为横坐标，噬菌体效价的对数值为纵坐标绘制SPP11噬菌体pH值稳定性曲线。

结果如图4可见噬菌体SPP11在pH 5.0～11.0范围内，其效价仍可保持 109pfu/ml，活性较稳定。

实施例6沙门氏菌噬菌体SPP11的一步生长曲线

将感染复数为10的噬菌体增殖液和宿主菌新鲜增殖液各1mL，充分混匀 (此时开始计时)，37℃孵育5min，13000rpm离心30s，用微量移液器尽量吸去上清，再用5mL NB肉汤洗涤1次(13000rpm离心30s)，弃上清。用预热的NB肉汤混悬沉淀(总体积为5mL)并充分混匀，迅速置于37℃摇床中170 rpm振荡培养，在0时刻和每隔5min取出150μL，10000rpm离心1min，用NB肉汤做10倍倍比稀释后采用双层平板法测噬菌体效价，做3个平行，结果取平均值，以感染时间为横坐标，感染体系中噬菌体的滴度为纵坐标，绘制一步生长曲线，得到噬菌体SPP11的潜伏期、爆发期，计算出爆发量。

爆发量＝噬菌体爆发末期的总个数/爆发初期细菌的总个数

通过图5发现，噬菌体SPP11感染宿主菌后，在10min内效价基本不变，效价稳定在106pfu/mL，表明噬菌体SPP11潜伏期约为10min，噬菌体侵染宿主菌后的10～60min内，噬菌体数量逐渐增加，在70min时效价增长开始趋于平稳，此时效价可达2.00×1010pfu/mL，可见噬菌体SPP11的爆发期约为50min，爆发量为85。

实施例7噬菌体裂解谱的测定

准备新鲜的噬菌体增殖液SPP11和临床分离的60株全国不同地区鸡场分离的鸡白痢沙门氏菌、鸡伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌；其中，华北地区分别分离出鸡白痢沙门氏菌10株、鸡伤寒沙门氏菌5株、肠炎沙门氏菌5株；华南地区分离出鸡白痢沙门氏菌5株、鸡伤寒沙门氏菌5株、肠炎沙门氏菌5 株；华中地区分离出鸡白痢沙门氏菌10株、鸡伤寒沙门氏菌5株、肠炎沙门氏菌10株。在96孔板中，试验组每孔中分别加入5μL噬菌体液和5μL细菌菌液，加入190μL灭菌营养肉汤，混匀；对照组中加入5μL细菌菌液，195μL 灭菌营养肉汤，混匀；分别于0h、4h测定各孔中的OD600值；计算噬菌体对不同沙门氏菌OD值下降比例；以OD值下降＞50％表示完全裂解此菌，即混合液是清亮的，统计噬菌体SPP11对60株沙门氏菌的裂解率；

OD值下降比例＝(对照组OD值—试验组OD值)/对照组OD值

根据下表2的结果可知：临床分离的60株鸡致病性沙门氏菌中，噬菌体 SPP11可裂解55株沙门氏菌，总裂解率为91.67％，这一结果说明该噬菌体具有强裂解性、宽裂解谱的特点。具体地，噬菌体SPP11能裂解25株鸡白痢沙门氏菌中的25株、15株鸡伤寒沙门氏菌中的12株、20株肠炎沙门氏菌中的 18株，对三种沙门氏菌的裂解率分别为100％、80％、90％。

表2噬菌体的裂解谱

实施例8噬菌体SPP11对鸡场鸡白痢的净化作用

广西某黄羽肉种鸡场，1日龄铁脚麻鸡，试验组7000羽鸡，对照组6924 羽鸡，试验组每天8～9点通过饲料添加饲喂噬菌体，其他按照鸡场规程正常饲养、用药、免疫；对照组不使用噬菌体，其他按照鸡场规程正常饲养、用药、免疫。连续用药1月，从试验组和对照组随机采集月200只鸡血，检测鸡白痢抗体阳性，每组随机抽取200只鸡，每天观察鸡泄殖腔口粪便黏附情况，若泄殖腔口黏附明显的干或稀湿粪便则判定为腹泻。记录每组腹泻只数。观察鸡群的死淘数、糊肛数和鸡白痢抗体阳性率。检测结果见表3和表4。

结果：对照组死淘数相对试验组多674羽，对照组死淘率比试验组高 10％，使用噬菌体明显降低试验组死淘数；试验组鸡群鸡白痢抗体阳性率 3.86％，对照组为6.76％，试验组抗体阳性率明显低于对照组；试验组鸡群糊肛数一直低于对照组(如图6)。噬菌体能够明显降低鸡群的死淘数，糊肛数以及鸡白痢抗体阳性率，可为鸡沙门氏菌的净化提供一种新型生物制剂或饲料添加剂。

表3鸡群死淘情况表

表4鸡白痢抗体阳性结果

实施例9噬菌体SPP11肠炎沙门氏菌的攻毒治疗试验

2日龄SPF鸡，试验组20只，对照组20只，试验组肌肉注射从临床发病鸡分离鉴定的肠炎沙门氏菌10⁶CFU，对照组注射等量无菌生理盐水，待试验组80％的鸡出现精神不振或糊肛拉稀或死亡发病时，给予口服噬菌体治疗，对照组口服等量无菌生理盐水。用药1周后，记录鸡的死亡情况，以及剖检活鸡观察内脏病死灶，出血点，肠道出血等病变。

结果：试验组鸡死亡率为15％，对照组死亡率为70％。剖检死亡鸡和活鸡观察病变，发现试验组病变率25％，对照组病变率75％。实验发现使用噬菌体能够防治肠炎沙门氏菌病且效果明显。

实施例10噬菌体SPP11对鸡肠道内沙门氏菌的清除作用

将20只SPF鸡，随机分为2组，每组10只，分别为对照组和试验组，其中噬菌体含量约1×10⁷pfu/mL。所有鸡自由饮水采食，在0h口服攻毒含1×10⁷ cfu的鼠伤寒沙门氏菌。攻毒后立即给药，治疗组灌服0.5mL噬菌体悬浮液，对照组灌服0.5mL生理盐水。攻毒后12h、24h、48h，从每组中随机取5 只鸡用CO₂窒息法处死，解剖后取出盲肠内容物，用生理盐水对其进行10倍比稀释，再取100μL稀释液涂于科玛嘉沙门氏菌选择培养基平板上，培养 24～36h后挑选紫色菌落计数。

结果如图7所示，治疗组盲肠中沙门噬菌体浓度低于对照组。治疗组在给药后12h和24h，盲肠中沙门氏菌浓度显著低于对照组(P<0.05)，分别降低了2个数量级和5个数量级，到48h时细菌浓度基本为零。

可以理解的是，对本领域普通技术人员来说，可以根据本发明的技术方案及本发明构思加以等同替换或改变，而所有这些改变或替换都应属于本发明所附的权利要求的保护范围。

序列表

<110> 青岛诺安百特生物技术有限公司

<120> 一种沙门氏菌噬菌体及在防治沙门氏菌感染的疾病的药物中的应用

<160> 8

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 2559

<212> DNA

<213> 沙门氏菌噬菌体SPP11的尾纤维蛋白(tail fibers protein of salmonellaphage SPP11)

<400> 1

ttggcgctag taatccacta cacacgaaac gaagacggca cgtttgatgt caagcgctac 60

cgcgataatc cgatgaactt cgtcgtgaac catgttccgg acggggttcc ggtacgtgtt 120

ttcattgacg aaatcggaga agataacgac gtaacagaag acttcgaagc actgaaagaa 180

aacgcgactt tccacattgt ggaatcagct ggtggtggcg ccattaaagg cgtcatgaag 240

atttttagcg ttatccttaa accgctggcg aaactattat cgccgtccgt gaaaggtgcg 300

tcctcgaacc ttgcgaactc gcaggcggat tccccaaaca acagtctcac tgaccgtaac 360

aacaaggccc gcccatacga gcgcagctac gacatctgtg ggacggtgca aactatcccc 420

aataacctta tgtctactta caaggtgttt aacgctgccg gtaaaatcgt agagtacggc 480

tactacgacg ccgggcgcgg ctacctcgac atccacccgg acggtataac ggacggggat 540

acccgtgtat cggatataac aggcacgtcg gttgccgtgt acgcgccgta tacgtcacca 600

aataatacat ccacgccaca ggtaatggta ggagacccca tagagcaggg cctgtatatc 660

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tctttctctt acatgtctgg gtatccgtct ttgtcaggaa acattggcac tatatacgac 780

cctacaggcg gctcggattt ttctggagta ctggtgccta atgacacgtt ttcgctggtg 840

tccgcgtgga caaatacaga cgttgacctg tccggcggcg ggtatcaggt agtcagcgtg 900

tccgaaggga ccgttacctt tatagtaccc ggtggtctca ttggtaggtg gcaagaaata 960

agacccggtt cgtttttccg cggtgacgga gaggcctcgc tgcaaccaga caacacgtat 1020

gagaaaacct taaccgattg ggtttcaata aaccgcaccg aggttgagcg catcgtggcc 1080

aatatcgccg ctgcgaacgg catgtataaa gacaacggca agtcaaaaac actggcatcc 1140

gttaccgctg agatacagta ccagctactt gatgaaaata gcgttcctta cgggccgata 1200

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ggagaatttt gttacacgtt tgatgactat aaaaccacca tgcaggacat agttagtact 1740

atagcagacg ccatattctg caccccatat cggcgtgggg cggatatcct tctcgatttt 1800

gagcgccccc gcatgggtcc tgagatggtg ttcacccacc gaagcaaggc cggtacttct 1860

gaaaagtgga ccagaacatt taacgattct caggtttttg acagccttaa attctcgtac 1920

atagacccta aaacaaacgt taaagaaacc ataacaatac ctgaaaccgg gggccttaaa 1980

acggagactt atgactctaa aggtattcgc aactataagc aggctttctg ggccgctaat 2040

cgccgtcacc agaagaacat tttaaagaag atttcagtgt cgtttaccgc cacggaagag 2100

ggtattttcg cccttccgaa tcgtgccgtt agtgtggtta agggctcgcg tatgtctact 2160

tacgacggct acgtaaccgc agtaaacggg ctcaccgtag aactgtcaca accagttaag 2220

ttcacctcgg gagatgacca ttctttggtt ctcaagttac gcgacggtgg tgtgcaaagt 2280

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Asn Asp Val Thr Glu Asp Phe Glu Ala Leu Lys Glu Asn Ala Thr Phe

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Asn Asn Ser Leu Thr Asp Arg Asn Asn Lys Ala Arg Pro Tyr Glu Arg

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Asn Glu Val Asp Gly Val Val Leu Lys Ala Pro Asn Gly Leu Gly Ile

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Ser Phe Ser Tyr Met Ser Gly Tyr Pro Ser Leu Ser Gly Asn Ile Gly

245 250 255

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<212> DNA

<213> 沙门氏菌噬菌体SPP11的末端酶大亚基(terminase large subunit ofsalmonella phage SPP11)

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<212> PRT

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<212> DNA

<213> 沙门氏菌噬菌体SPP11的DNA聚合酶(DNA polymerase of salmonella phageSPP11)

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attcacaacg cacagaagtc aacactaaac gatttgctgg cggatgagga tttaccggat 840

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gttacgtttg ctaaaaacct gggtcttgac cttattgaga tggcaaaaac aatggacggg 2340

actttccccg accacatctg ggctgctact gcacgtgggt atgagtgggc gcgtattcag 2400

gaagccaaga gaccaccgca tcccggtgaa aaggatgaca ggccgtcgta tattctggac 2460

aagaaggtgt ggcgcacatg tgacgcgatc aagcgtatgt ggcgtgagtc acaccctgaa 2520

acagtagcgt tctggcgcga ccttaaagac ggaattttag ctgctgttcg taatcctggt 2580

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Ser Met Val Lys Asp Lys Arg Gly Lys Ala Leu Ile Gln Arg Phe Ser

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Lys Pro Thr Pro Lys Asn Tyr Lys Ile Arg Arg Tyr Thr Ala Ala Thr

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His Pro Lys Glu Trp Ala Glu Phe Ile Ala Tyr Ala Lys Ser Asp Ile

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Thr Ser Met Arg Glu Val Tyr Lys Lys Met Pro Lys Trp Gly Asn Ser

180 185 190

Glu Phe Glu Asp Arg Val Leu Trp Leu Asp Gln Val Ile Asn Asp Arg

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Gly Phe Lys Val Asp Val Ala Leu Ala Glu Ala Ala Ile Glu Ala Val

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Thr Arg His Lys Glu Glu Leu Gln Glu Glu Ala Gln Arg Lys Tyr Gly

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Gly Ser Leu Thr Gly Lys Asp Phe Leu Pro Ile Leu Gln Glu Leu Ala

245 250 255

Pro Ala His Arg Ile His Asn Ala Gln Lys Ser Thr Leu Asn Asp Leu

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Leu Ala Asp Glu Asp Leu Pro Asp Asp Ala Arg Thr Ile Ile Glu Met

275 280 285

Arg Leu Gly Ala Ala Ser Thr Ala Ser Thr Lys Tyr Ala Pro Leu Leu

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Leu Gly Arg Ser Ser Asp Asp Arg Arg Arg Gly Cys Leu Gln Tyr Gly

305 310 315 320

Gly Ala Lys Arg Thr Leu Arg Trp Ala Gly Lys Gly Phe Gln Pro Gln

325 330 335

Asn Leu Ala Arg Gly Tyr Tyr His Asp Asp Glu Leu Asp Arg Gly Ile

340 345 350

Ala Ala Leu Leu Lys Gly Arg Ala His Arg Arg Phe Asp Val Ala Lys

355 360 365

Leu Thr Ala Ser Thr Val Arg Ser Cys Ile Ile Pro Glu Ala Gly His

370 375 380

Lys Phe Val Val Ala Asp Tyr Ser Asn Val Glu Gly Arg Gly Leu Ala

385 390 395 400

Phe Leu Ser Gly Glu Glu Thr Ala Leu Asp Thr Phe Arg Ala Gly Leu

405 410 415

Asp Ile Tyr Cys Val Thr Ala Gly Lys Met Phe Gly Met Glu Pro Asp

420 425 430

Tyr Ile Lys Lys Glu Arg Lys Asp Leu Arg Gln Ile Gly Lys Ala Cys

435 440 445

Leu His Arg His Thr Gln Val Leu Thr Asp Gly Gly Phe Lys Asp Ile

450 455 460

Met Val Val Thr Ser Thr Asp Lys Val Trp Ser Gly Glu Lys Trp Val

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Asn Thr Lys Gly Ala His Leu Met Gly Trp Lys Pro Val Ile Asn Val

485 490 495

Asp Gly Val Leu Met Thr Glu Asp His Lys Ile Leu Thr His Ser Trp

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Asp Lys Ala Lys Asp Ser Tyr Ser Ser Asn Val Ile Ala Glu Arg Cys

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Ser Ala Thr Lys Thr Gln Cys Arg Thr Thr Ser Thr Glu Arg Asp Tyr

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Thr Thr Asn Leu Glu Thr Phe Gly Leu Ser Ala Val Leu Lys Thr Ala

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Val Thr Asp Val Glu Tyr Leu Ser Phe Asn Glu Ser Met Met Gln Pro

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Ser Asp Ser Gly Phe Leu Val Ala His Asn Cys Glu Leu Gly Leu Gly

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Tyr Glu Gly Gly Val Gly Ala Phe Val Thr Phe Ala Lys Asn Leu Gly

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Leu Asp Leu Ile Glu Met Ala Lys Thr Met Asp Gly Thr Phe Pro Asp

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Lys Asp Gly Ile Leu Ala Ala Val Arg Asn Pro Gly Arg Glu Phe Trp

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Ala Gly Ala His Leu Arg Arg Asn Gly Glu Arg Ala Ile Arg Ile Trp

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Arg Thr Val Glu Phe Asp Ser Ser Gly Arg Lys Val Pro Gly Trp Trp

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Leu Cys Met Glu Leu Pro Ser Gly Arg Ile Leu Ser Tyr Pro Gly Ile

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Thr Thr Leu Tyr Thr His Gly Gly Lys Ala Cys Glu Asn Ile Val Gln

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Ala Leu Cys Arg Asp Leu Leu Ala Tyr Ala Met Leu Asn Val Glu Ala

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Gly Gly Tyr Pro Ile Val Leu Ser Val His Asp Glu Leu Val Cys Glu

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<212> DNA

<213> 沙门氏菌噬菌体SPP11的裂解酶(lysozyme of salmonella phage SPP11)

<400> 7

atgtcaaacc gaaacatcag tgacaacgga ttacacttca ccgccgcgtt cgaggggttc 60

cgaggaaccg cgtacaaggc aacgaagaac gagaagtacc ttactattgg ttatggtcac 120

tatggtgccg atgtgaaaga aggtcagaag attaccgaag gccagggcct cctgcttctg 180

cataaggata tggctaaggc cgtagctgcg gtggacgccg ttgcgcatcc gacgctcaat 240

cagtcacagt tcgatgcgat gtgcgacctg gtgtataacg ctggcgccgg tgtgattgcg 300

gcttctaccg gtacaggtca ggcgctgcga aaaggcgatg catctacact gagaaacaaa 360

ctcagccagt tccattacca gaacggcaaa tcactcctcg gtttgcgacg ccgcgctgct 420

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Met Ser Asn Arg Asn Ile Ser Asp Asn Gly Leu His Phe Thr Ala Ala

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Tyr Leu Thr Ile Gly Tyr Gly His Tyr Gly Ala Asp Val Lys Glu Gly

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Gln Lys Ile Thr Glu Gly Gln Gly Leu Leu Leu Leu His Lys Asp Met

50 55 60

Ala Lys Ala Val Ala Ala Val Asp Ala Val Ala His Pro Thr Leu Asn

65 70 75 80

Gln Ser Gln Phe Asp Ala Met Cys Asp Leu Val Tyr Asn Ala Gly Ala

85 90 95

Gly Val Ile Ala Ala Ser Thr Gly Thr Gly Gln Ala Leu Arg Lys Gly

100 105 110

Asp Ala Ser Thr Leu Arg Asn Lys Leu Ser Gln Phe His Tyr Gln Asn

115 120 125

Gly Lys Ser Leu Leu Gly Leu Arg Arg Arg Ala Ala Gly Arg Val Ala

130 135 140

Leu Phe Asp Gly Met Leu Trp Gln Gln Ala Glu Ala Val Gly Arg Ala

145 150 155 160

Ala Lys

Claims

1.一种沙门氏菌噬菌体，其特征在于，被命名为SPP11，其保藏编号为CGMCC No.18868。

2.根据权利要求1所述的沙门氏菌噬菌体在制备治疗或预防沙门氏菌感染的疾病的药物中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述沙门氏菌感染的疾病为鸡群沙门氏菌病，所述沙门氏菌包括鸡源沙门氏菌；所述鸡源沙门氏菌选自鸡白痢沙门氏菌、鸡伤寒沙门氏菌和鸡肠炎沙门氏菌。

4.一种噬菌体药物制剂，其有效成分包括如权利要求1所述的沙门氏菌噬菌体SPP11。

5.根据权利要求4所述的噬菌体药物制剂，其特征在于，所述药物制剂形式为口服给药剂型、外用剂型或肠外给药剂型。

6.根据权利要求5所述的噬菌体药物制剂，所述噬菌体药物制剂中还包含药学上可接受的载体。

7.一种鸡饲料添加剂，其特征在于，包括如权利要求1所述的沙门氏菌噬菌体SPP11。

8.一种环境消毒剂，其特征在于，有效成分包括如权利要求1所述的沙门氏菌噬菌体SPP11；其中还包含其他用于环境中病毒、细菌抑制或消灭的活性成分。

9.如权利要求8所述的环境消毒剂在鸡场环境消毒中的应用，其特征在于，所述环境消毒剂可通过喷雾、浸泡对养殖环境、饲养器具进行沙门氏菌的消毒，所述养殖环境包括料槽、地面、墙壁、粪便和垫料。

10.一种检测试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1所述的沙门氏菌噬菌体。