CN111254121A

CN111254121A - 一种沙门氏菌噬菌体及在防治沙门氏菌感染的疾病的药物中的应用

Info

Publication number: CN111254121A
Application number: CN202010160393.8A
Authority: CN
Inventors: 潘强; 任慧英; 孙虎芝; 刘广芹; 白停停
Original assignee: Qingdao No Antibiotics Biotechnology Co ltd
Current assignee: Qingdao No Antibiotics Biotechnology Co ltd
Priority date: 2020-03-10
Filing date: 2020-03-10
Publication date: 2020-06-09
Anticipated expiration: 2040-03-10
Also published as: CN111254121B

Abstract

本发明公开了一种沙门氏菌噬菌体及在防治沙门氏菌感染的疾病的药物中的应用，所述噬菌体被命名为SPP11，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物学中心，保藏日期为2019年11月04日，保藏编号为CGMCC No.18868；该烈性宽裂解谱的噬菌体SPP11对沙门氏菌具有强烈的裂解作用，可以有效防控家禽养殖场沙门氏菌病，降低鸡群鸡白痢抗体阳性，减少肠炎沙门氏菌引起的鸡群腹泻，还可以对饲养环境、饲料、饮水等进行沙门氏菌的消毒，此外，所述噬菌体易于进行工业化生产，由上述噬菌体制备而的药物或消毒剂不仅可降低成本，还具有绿色环保的优点。

Description

一种沙门氏菌噬菌体及在防治沙门氏菌感染的疾病的药物中的应用

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，尤其涉及一种沙门氏菌噬菌体及在防治沙门氏菌感染的疾病的药物中的应用。

背景技术

沙门氏菌(Salmonella)是一种常见的人兽共患病原菌，为人类食物中毒引起胃肠炎的主要病原菌之一，在医学、兽医和公共卫生上均有十分重要的意义。WHO将沙门氏菌列入具有严重危害的食物传播性病原。目前，在我国发生的各类细菌性食物中毒中，由沙门氏菌污染而引起的食物中毒屡居首位。据资料统计，由沙门氏菌引起的食品安全事故占我国细菌性食物中毒的 70％～80％。由此可见，沙门氏菌等微生物污染已对我们的食品安全构成了主要的威胁。

由鸡白痢沙门氏菌造成的家禽病是家禽养殖患病概率最高的疾病之一，在各个年龄阶段均可发生传染，能够引起家禽高发病率和死亡率，对感染2～3 周龄以内的小鸡，引起白色下痢，病死率髙。沙门氏菌通过各种方式进行垂直和水平传播，死亡率范围从0到100％。最大的死亡率通常发生在2至3周龄的鸟类中，在第3周和第4周之间迅速下降。幸存者通常成为慢性携带者，并且可能不会成熟为发育良好的产蛋或繁殖鸟类。蛋鸡的生产性能受到通过生殖道进入卵子的细菌的严重影响，导致产蛋减少，体重减轻，腹泻等。传统的治疗方法是采用抗生素，但是由于抗生素的长期使用，不仅会污染水体，还会导致致病菌产生耐药性，进一步提高治疗难度。因此，研发一种疗效显著、使用安全的新型制剂用于防治鸡沙门氏菌病。

噬菌体是一类感染细菌的病毒，可从污水或粪便等自然环境样本中分离得到。噬菌体具有严格的宿主特异性，沙门氏菌噬菌体只侵袭沙门氏菌，对人和动物细胞、植物细胞没有感染作用，所以噬菌体对人类或动植物没有感染性，也不会污染环境，安全性较高。噬菌体与相应的宿主菌接触后，就会触发噬菌体的吸附及胞内增殖过程，并通过宿主菌的裂解释放更多的噬菌体。噬菌体可通过这种途径在环境中通过杀灭特异的宿主菌得到自身的大量扩增，具有指数增殖特征，产生耐药的速率远远低于抗生素，而且噬菌体的溶菌作用不受细菌耐药性的限制。另外，噬菌体筛选周期短，制备工艺简单，成本低廉，能作为一种具有杀菌作用的生物消毒剂和抗生素替代品。

但是，目前还没有出现有效的沙门氏菌噬菌体，能用于防治鸡沙门氏菌导致的疾病，因此，现有技术有待进一步改进。

发明内容

针对上述问题，本发明提供了一株新沙门氏菌噬菌体SPP11及其应用，上述噬菌体可被用于制备治疗或预防鸡沙门氏菌感染的疾病的药物、饲料添加剂、消毒剂，在解决鸡沙门氏菌感染的同时，避免了由于使用抗生素带来的抗生素残留和病原菌耐药性的问题。

本发明的技术方案具体如下：

一方面，本发明提供了自山东青岛某蛋鸡场的鸡粪中分离得到的一株具有广谱强裂解性的沙门氏菌噬菌体，该噬菌体命名为SPP11，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物学中心，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2019年11月04日，保藏编号为CGMCC No.18868。

另一方面，本申请还提供了上述沙门氏菌噬菌体SPP11在制备治疗或预防沙门氏菌噬菌体感染的疾病的药物中的用途。本文中术语“预防”是指包括通过给予所述组合物来抑制或延迟所述疾病的所有行为。本文中术语“治疗”是指包括通过给予所述组合物而使所述疾病好转或有所改善的所有行为。

优选地，所述沙门氏菌感染的疾病包括鸡群沙门氏菌病，所述沙门氏菌包括鸡源沙门氏菌；优选地，所述鸡源沙门氏菌选自鸡白痢沙门氏菌、鸡伤寒沙门氏菌和鸡肠炎沙门氏菌。

此外，本发明还提供一种噬菌体药物制剂，其有效成分包括上述的沙门氏菌噬菌体SPP11；优选的，所述噬菌体药物制剂还包括其他特定病原菌的噬菌体。

可选地，上述噬菌体药物制剂可以通过外用、口服或肠胃外途径给予本发明的药物组合物。具体而言，可以经由皮肤、口服、经直肠、外用、静脉内、腹膜内、肌内、动脉内、鼻内和吸入途径来给予本发明的组合物。优选地，所述药物制剂形式为灌注。

可选地，所述噬菌体药物制剂中还包含药学上可接受的载体。本文所使用的术语“药学上可接受的载体”指不对生物体造成显著刺激且不消除所给予的活性组分的生物活性和特性的载体或稀释剂。为了将所述药物组合物配制成液体制剂，药学上可接受的载体必须适于无菌和生物相容性。实例包括盐水、无菌水、Ringer’s溶液、缓冲生理盐水、白蛋白输注液、葡萄糖溶液、麦芽糖糊精溶液、甘油和乙醇。它们可以单独使用或以其任意组合使用。如果需要，可以加入其它常规添加剂，例如，抗氧化剂、缓冲剂和抑菌剂等。当还与稀释剂、分散剂、表面活性剂、粘合剂和/或润滑剂组合时，还可以将本发明的组合物制备成注射剂(例如，水性溶液、悬浮液和乳液)，或者丸剂、胶囊、粒剂或片剂。

本申请还提供一种鸡饲料添加剂，其包括如上所述的沙门氏菌噬菌体 SPP11，通过与鸡饲料进行混拌，对鸡群进行饲喂，达到预防或治疗鸡源沙门氏菌病，如鸡白痢沙门氏菌、鸡伤寒沙门氏菌和鸡肠炎沙门氏菌。

此外，本申请还提供一种环境消毒剂，其有效成分包括如上所述的沙门氏菌噬菌体SPP11；优选地，噬菌体的浓度为1×10⁸PFU/ml以上。

可选地，环境消毒剂还包含其他用于环境中病毒、细菌抑制或消灭的活性成分；优选的，可应用环境消毒剂的环境包括饲料、水和养殖环境，所述养殖环境包括料槽、地面、墙壁、粪便和垫料。

此外，本发明还提供一种检测试剂盒，其包括如上所述的沙门氏菌噬菌体SPP11。本领域技术人员可根据本发明公开内容和本领域常识利用上述沙门氏菌噬菌体SPP11制备检测试剂盒，用于检测其特异侵染的沙门氏菌、或用于防控由其宿主沙门氏菌侵染导致的疾病。

最后，本申请还提供上述环境消毒剂在鸡场环境消毒中的应用，具体地，所述环境消毒剂可通过喷雾、浸泡的方式对养殖环境、饲养器具进行沙门氏菌的消毒，所述养殖环境包括料槽、地面、墙壁、粪便和垫料。所述液体浸泡、喷洒形式包括但不限于洗涤剂、消毒剂、去污剂等。

本发明具有以下有益效果：

1、本发明提供一种烈性宽裂解谱的沙门氏菌噬菌体，能够有效防治家禽沙门氏菌病，具有降低鸡群死亡率、降低鸡白痢抗体阳性以及良好的清除鸡肠道内沙门氏菌的作用。该噬菌体可用作消毒剂活性成分，对饲料、环境等也具有良好的沙门氏菌消毒作用。

2、本发明涉及的上述噬菌体从自然界中获得，易于进行工业化生产，由上述噬菌体制备而的药物或消毒剂不仅可降低成本，还具有绿色环保的优点。

附图说明

图1为沙门氏菌噬菌体SPP11的噬菌斑图片；

图2为噬菌体SPP11的电镜图片；

图3为噬菌体SPP11的热稳定性测试结果；

图4为噬菌体SPP11的pH值稳定性测试结果；

图5为噬菌体SPP11的一步生长曲线；

图6为各组鸡群糊肛率对比图；

图7为鸡盲肠内容物中沙门噬菌体的数量。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。在本发明中，若非特指，所采用的设备和原料等均可从市场购得或是本领域常用的。下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。

实施例1噬菌体的分离纯化

取适量采自山东青岛某蛋鸡场的鸡粪样品。取少量样品加入肉汤培养基中，并向培养基中加入准备好的10株沙门氏菌菌液，将混合物置于恒温摇床 37℃，170rpm培养约12h，取培养液经0.22μm的无菌微孔滤膜滤过，得到噬菌体增殖液；将噬菌体原液通过10倍比稀释，取噬菌体稀释液分别和10 株沙门氏菌菌液1:1混合均匀，37℃孵育5min后，吸取200μL混合液置于上层琼脂(琼脂浓度为0.7％)中，混匀后迅速倾倒下层琼脂(琼脂浓度为1.5％)平皿上，摇匀平置至培养基凝固，置于37℃培养箱倒置培养4～6h后，获得形成噬菌斑的双层平板。将获得的沙门氏菌噬菌体命名为SPP11。

在形成噬菌斑的双层琼脂培养基挑取单个噬菌斑，并置于1mL的NB肉汤中于恒温摇床37℃，170rpm培养约30min得到噬菌体浸出液。取噬菌体浸出液与对应成斑的沙门氏菌(后面称为宿主菌)增殖液1:1混合均匀(37℃孵育5min)，吸取200μL置于上层琼脂，混匀后迅速倾倒下层琼脂平皿上，摇匀平置至培养基凝固，置于37℃培养箱倒置培养4～6h后，再次获得形成噬菌斑的双层平板。在形成噬菌斑的双层培养基上用灭菌镊子挑取单个噬菌斑置于1mL的LB肉汤中，于恒温摇床37℃，170rpm培养约30min得到噬菌体浸出液。重复以上步骤3次，得到纯化后的噬菌体浸出液，取等量纯化后的噬菌体浸出液与宿主菌增殖液于5mL液体NB培养基中，37℃，170rpm振荡培养，直至液体变清亮，将清亮液体11000rpm离心10min，取上清，使用0.22μm 的无菌微孔滤膜滤过，得到噬菌体增殖液。

如图1所示，沙门氏菌噬菌体SPP11在双层琼脂培养基平板上形成透亮空斑，周围无晕环，边缘清晰可见，直径约1.5mm。

实施例2沙门氏菌噬菌体SPP11的形态学观察

取20μL噬菌体样本滴在带有碳涂布膜的铜网上，待其自然沉淀15min，用滤纸稍吸干后，再用2％(W/V)磷钨酸(PTA)染色1～2min，滤纸稍吸干，待干燥后，采用透射电子显微镜下进行观察拍照。

结果如图2可见噬菌体SPP11头部呈多面体的头部结构和无收缩性的尾部，头部宽61.54nm，长61.54nm，尾部长约134.62nm，根据病毒分类国际委员会(ICTV)的分类方法，本申请的噬菌体形态符合长尾噬菌体科的特征，属于长尾噬菌体。

实施例3噬菌体SPP11的全基因组分析

提取噬菌体SPP11的基因组，进行全基因组测序和序列分析，结果如下：

(1)SPP11基因组全长42kb，G+C含量为49.59％，碱基C、G、A、T 含量依次为24.75％、24.84％、25.21％和25.20％。全基因组RAST在线注释结果显示该基因组含有66个开放阅读框(ORFs)，平均OFR长度为642bp，其中22个ORF功能已知，44个ORF为假想蛋白表达序列。在这66个开放阅读框(ORFs)中，发现结构蛋白有19种，主要包括噬菌体的结构和包装蛋白(头蛋白、尾蛋白、尾纤维蛋白、颈蛋白、衣壳蛋白和末端酶大亚基等)、噬菌体的裂解有关蛋白(裂解酶)、DNA复制和修饰有关的蛋白质(限制性内切核酸酶、DNA结合蛋白、含内含子的DNA聚合酶前体、HNH核酸内切酶、DEAD/DEAH盒解旋酶等)、其他功能性蛋白(重复感染免疫蛋白)。同时在66个ORFs中，有60个起始密码子为ATG，4个起始密码子为GTG， 2个起始密码子为TTG。经软件tRNAscan-SE分析该基因组不含tRNA基因。经在线工具CGE server分析该基因组不含耐药基因及毒力基因。经PHASTER 分析该基因组不含溶原性相关基因。

(2)噬菌体SPP11的基因组中：与噬菌体宿主识别相关的尾部纤维(tail fibersprotein)蛋白基因序列见序列表序列1，其表达的蛋白见序列表序列2；高度保守的末端酶大亚基(terminase large subunit)蛋白基因的序列见序列表中序列3，其表达的蛋白见序列表序列4；DNA聚合酶(DNApolymerase)基因的序列见序列表中序列5，其表达的蛋白见序列表序列6；与裂解能力相关的裂解酶(lysozyme)基因序列见序列表中序列7，其表达的蛋白见序列表序列8。相关信息具体见下表1。

表1基因序列信息表

	type	location	start	stop	function
						序列1	Peg	SPP11_24887_23616	24887	23616	tail fibers protein
序列3	Peg	SPP11_5566_3008	5566	3008	terminase large subunit
						序列5	Peg	SPP11_37382_40480	37382	40480	DNApolymerase
序列7	peg	SPP11_27866_27378	27866	27378	lysozyme

实施例4沙门氏菌噬菌体SPP11的温度稳定性

将4×1010pfu/mL噬菌体SPP11增殖液分别于40℃、50℃、60℃、70℃、 80℃，每一温度两个平行样，各保温20min、40min和60min后，待作用结束后取样，并立即将样品置于冰浴中冷却，进行10倍比稀释，取合适稀释梯度测定效价。以温度为横坐标，以噬菌体效价的对数值为纵坐标，绘制SPP11 噬菌体热稳定性曲线。

结果如图3可见噬菌体SPP11在40℃、50℃和60℃作用60min后基本上保持原活性，70℃作用60min后，效价仍保持在1×106pfu/mL以上，而在80℃作用20min，噬菌体数量约为1.25×105pfu/mL，仍保持一定的活性。由此可见噬菌体SPP11的热稳定性较高。

实施例5沙门氏菌噬菌体SPP11的pH稳定性

取无菌试管中加入不同pH值(1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、 13)的NB肉汤4.5mL，各三支，然后将试管置于37℃的水浴锅中，待温度稳定之后，各加入500μL的SPP11噬菌体增殖液，混匀37℃水浴作用1h、2 h、3h。作用结束之后，立即向混合液中加入适量的1mol/L的HCl或者NaOH 使混合液的pH值约为7，进行10倍比稀释，取合适稀释梯度测定效价，每个pH值试管设定2个重复。以pH值为横坐标，噬菌体效价的对数值为纵坐标绘制SPP11噬菌体pH值稳定性曲线。

结果如图4可见噬菌体SPP11在pH 5.0～11.0范围内，其效价仍可保持 109pfu/ml，活性较稳定。

实施例6沙门氏菌噬菌体SPP11的一步生长曲线

将感染复数为10的噬菌体增殖液和宿主菌新鲜增殖液各1mL，充分混匀 (此时开始计时)，37℃孵育5min，13000rpm离心30s，用微量移液器尽量吸去上清，再用5mL NB肉汤洗涤1次(13000rpm离心30s)，弃上清。用预热的NB肉汤混悬沉淀(总体积为5mL)并充分混匀，迅速置于37℃摇床中170 rpm振荡培养，在0时刻和每隔5min取出150μL，10000rpm离心1min，用NB肉汤做10倍倍比稀释后采用双层平板法测噬菌体效价，做3个平行，结果取平均值，以感染时间为横坐标，感染体系中噬菌体的滴度为纵坐标，绘制一步生长曲线，得到噬菌体SPP11的潜伏期、爆发期，计算出爆发量。

爆发量＝噬菌体爆发末期的总个数/爆发初期细菌的总个数

通过图5发现，噬菌体SPP11感染宿主菌后，在10min内效价基本不变，效价稳定在106pfu/mL，表明噬菌体SPP11潜伏期约为10min，噬菌体侵染宿主菌后的10～60min内，噬菌体数量逐渐增加，在70min时效价增长开始趋于平稳，此时效价可达2.00×1010pfu/mL，可见噬菌体SPP11的爆发期约为50min，爆发量为85。

实施例7噬菌体裂解谱的测定

准备新鲜的噬菌体增殖液SPP11和临床分离的60株全国不同地区鸡场分离的鸡白痢沙门氏菌、鸡伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌；其中，华北地区分别分离出鸡白痢沙门氏菌10株、鸡伤寒沙门氏菌5株、肠炎沙门氏菌5株；华南地区分离出鸡白痢沙门氏菌5株、鸡伤寒沙门氏菌5株、肠炎沙门氏菌5 株；华中地区分离出鸡白痢沙门氏菌10株、鸡伤寒沙门氏菌5株、肠炎沙门氏菌10株。在96孔板中，试验组每孔中分别加入5μL噬菌体液和5μL细菌菌液，加入190μL灭菌营养肉汤，混匀；对照组中加入5μL细菌菌液，195μL 灭菌营养肉汤，混匀；分别于0h、4h测定各孔中的OD600值；计算噬菌体对不同沙门氏菌OD值下降比例；以OD值下降＞50％表示完全裂解此菌，即混合液是清亮的，统计噬菌体SPP11对60株沙门氏菌的裂解率；

OD值下降比例＝(对照组OD值—试验组OD值)/对照组OD值

根据下表2的结果可知：临床分离的60株鸡致病性沙门氏菌中，噬菌体 SPP11可裂解55株沙门氏菌，总裂解率为91.67％，这一结果说明该噬菌体具有强裂解性、宽裂解谱的特点。具体地，噬菌体SPP11能裂解25株鸡白痢沙门氏菌中的25株、15株鸡伤寒沙门氏菌中的12株、20株肠炎沙门氏菌中的 18株，对三种沙门氏菌的裂解率分别为100％、80％、90％。

表2噬菌体的裂解谱

实施例8噬菌体SPP11对鸡场鸡白痢的净化作用

广西某黄羽肉种鸡场，1日龄铁脚麻鸡，试验组7000羽鸡，对照组6924 羽鸡，试验组每天8～9点通过饲料添加饲喂噬菌体，其他按照鸡场规程正常饲养、用药、免疫；对照组不使用噬菌体，其他按照鸡场规程正常饲养、用药、免疫。连续用药1月，从试验组和对照组随机采集月200只鸡血，检测鸡白痢抗体阳性，每组随机抽取200只鸡，每天观察鸡泄殖腔口粪便黏附情况，若泄殖腔口黏附明显的干或稀湿粪便则判定为腹泻。记录每组腹泻只数。观察鸡群的死淘数、糊肛数和鸡白痢抗体阳性率。检测结果见表3和表4。

结果：对照组死淘数相对试验组多674羽，对照组死淘率比试验组高 10％，使用噬菌体明显降低试验组死淘数；试验组鸡群鸡白痢抗体阳性率 3.86％，对照组为6.76％，试验组抗体阳性率明显低于对照组；试验组鸡群糊肛数一直低于对照组(如图6)。噬菌体能够明显降低鸡群的死淘数，糊肛数以及鸡白痢抗体阳性率，可为鸡沙门氏菌的净化提供一种新型生物制剂或饲料添加剂。

表3鸡群死淘情况表

表4鸡白痢抗体阳性结果

实施例9噬菌体SPP11肠炎沙门氏菌的攻毒治疗试验

2日龄SPF鸡，试验组20只，对照组20只，试验组肌肉注射从临床发病鸡分离鉴定的肠炎沙门氏菌10⁶CFU，对照组注射等量无菌生理盐水，待试验组80％的鸡出现精神不振或糊肛拉稀或死亡发病时，给予口服噬菌体治疗，对照组口服等量无菌生理盐水。用药1周后，记录鸡的死亡情况，以及剖检活鸡观察内脏病死灶，出血点，肠道出血等病变。

结果：试验组鸡死亡率为15％，对照组死亡率为70％。剖检死亡鸡和活鸡观察病变，发现试验组病变率25％，对照组病变率75％。实验发现使用噬菌体能够防治肠炎沙门氏菌病且效果明显。

实施例10噬菌体SPP11对鸡肠道内沙门氏菌的清除作用

将20只SPF鸡，随机分为2组，每组10只，分别为对照组和试验组，其中噬菌体含量约1×10⁷pfu/mL。所有鸡自由饮水采食，在0h口服攻毒含1×10⁷ cfu的鼠伤寒沙门氏菌。攻毒后立即给药，治疗组灌服0.5mL噬菌体悬浮液，对照组灌服0.5mL生理盐水。攻毒后12h、24h、48h，从每组中随机取5 只鸡用CO₂窒息法处死，解剖后取出盲肠内容物，用生理盐水对其进行10倍比稀释，再取100μL稀释液涂于科玛嘉沙门氏菌选择培养基平板上，培养 24～36h后挑选紫色菌落计数。

结果如图7所示，治疗组盲肠中沙门噬菌体浓度低于对照组。治疗组在给药后12h和24h，盲肠中沙门氏菌浓度显著低于对照组(P<0.05)，分别降低了2个数量级和5个数量级，到48h时细菌浓度基本为零。

可以理解的是，对本领域普通技术人员来说，可以根据本发明的技术方案及本发明构思加以等同替换或改变，而所有这些改变或替换都应属于本发明所附的权利要求的保护范围。

序列表

<110> 青岛诺安百特生物技术有限公司

<120> 一种沙门氏菌噬菌体及在防治沙门氏菌感染的疾病的药物中的应用

<160> 8

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 2559

<212> DNA

<213> 沙门氏菌噬菌体SPP11的尾纤维蛋白(tail fibers protein of salmonellaphage SPP11)

<400> 1

ttggcgctag taatccacta cacacgaaac gaagacggca cgtttgatgt caagcgctac 60

cgcgataatc cgatgaactt cgtcgtgaac catgttccgg acggggttcc ggtacgtgtt 120

ttcattgacg aaatcggaga agataacgac gtaacagaag acttcgaagc actgaaagaa 180

aacgcgactt tccacattgt ggaatcagct ggtggtggcg ccattaaagg cgtcatgaag 240

atttttagcg ttatccttaa accgctggcg aaactattat cgccgtccgt gaaaggtgcg 300

tcctcgaacc ttgcgaactc gcaggcggat tccccaaaca acagtctcac tgaccgtaac 360

aacaaggccc gcccatacga gcgcagctac gacatctgtg ggacggtgca aactatcccc 420

aataacctta tgtctactta caaggtgttt aacgctgccg gtaaaatcgt agagtacggc 480

tactacgacg ccgggcgcgg ctacctcgac atccacccgg acggtataac ggacggggat 540

acccgtgtat cggatataac aggcacgtcg gttgccgtgt acgcgccgta tacgtcacca 600

aataatacat ccacgccaca ggtaatggta ggagacccca tagagcaggg cctgtatatc 660

accgtagaat ctaacgaagt cgatggtgtg gttttgaaag cgcccaacgg tcttggcatt 720

tctttctctt acatgtctgg gtatccgtct ttgtcaggaa acattggcac tatatacgac 780

cctacaggcg gctcggattt ttctggagta ctggtgccta atgacacgtt ttcgctggtg 840

tccgcgtgga caaatacaga cgttgacctg tccggcggcg ggtatcaggt agtcagcgtg 900

tccgaaggga ccgttacctt tatagtaccc ggtggtctca ttggtaggtg gcaagaaata 960

agacccggtt cgtttttccg cggtgacgga gaggcctcgc tgcaaccaga caacacgtat 1020

gagaaaacct taaccgattg ggtttcaata aaccgcaccg aggttgagcg catcgtggcc 1080

aatatcgccg ctgcgaacgg catgtataaa gacaacggca agtcaaaaac actggcatcc 1140

gttaccgctg agatacagta ccagctactt gatgaaaata gcgttcctta cgggccgata 1200

tacacggcgc aaggaaccgt gtccgggcgt acaccggact acaacggcgt cactatttac 1260

gccgacctgc cggttgtgtc gcgggtgcgg gtgcgcgcca gaagggtaac agacctcgac 1320

tttaatttcg aggggtctgt ggtcgatgaa gtaacgtacg ttaacttgta cgggcaaaca 1380

cgcgataaca ctccgcacta cggcaacaga actaccgtac actcaatgcg caagcagaca 1440

ccacgcgccg cggaagttaa gcaaccacag ttacgtatga ttgccaccga aatggtacac 1500

aaataccttg gtaacggtgt tttcgaagat acgatgaccc ccaataccca ggccgtgcaa 1560

tctcttatcc gcctggcgcg tgatccggat gtggggggtt taaacctgac ggtacgcaac 1620

atggataagt tacttgccgt gcagaacgag gtcgaagcgt atttcggtga caaacaggct 1680

ggagaatttt gttacacgtt tgatgactat aaaaccacca tgcaggacat agttagtact 1740

atagcagacg ccatattctg caccccatat cggcgtgggg cggatatcct tctcgatttt 1800

gagcgccccc gcatgggtcc tgagatggtg ttcacccacc gaagcaaggc cggtacttct 1860

gaaaagtgga ccagaacatt taacgattct caggtttttg acagccttaa attctcgtac 1920

atagacccta aaacaaacgt taaagaaacc ataacaatac ctgaaaccgg gggccttaaa 1980

acggagactt atgactctaa aggtattcgc aactataagc aggctttctg ggccgctaat 2040

cgccgtcacc agaagaacat tttaaagaag atttcagtgt cgtttaccgc cacggaagag 2100

ggtattttcg cccttccgaa tcgtgccgtt agtgtggtta agggctcgcg tatgtctact 2160

tacgacggct acgtaaccgc agtaaacggg ctcaccgtag aactgtcaca accagttaag 2220

ttcacctcgg gagatgacca ttctttggtt ctcaagttac gcgacggtgg tgtgcaaagt 2280

gttaatgtag ttcctggagc gcacgacagg caggtaatta tgacgtcagt accgcaagaa 2340

gccatttaca caggtaatag cgctttgaaa actgaatttt cattcggcaa cgaagcaagg 2400

cataatgctc agatgattct tgtttctacg gtagaccccg gcgatgacag aacagtcaaa 2460

ataaccgggt ttaactatga caaggatttc tataagttcg acaacgtacc gcctttcggt 2520

cgtgcgttct ctaacggatt cgataacggt tttaactaa 2559

<210> 2

<211> 852

<212> PRT

<400> 2

Met Ala Leu Val Ile His Tyr Thr Arg Asn Glu Asp Gly Thr Phe Asp

1 5 10 15

Val Lys Arg Tyr Arg Asp Asn Pro Met Asn Phe Val Val Asn His Val

20 25 30

Pro Asp Gly Val Pro Val Arg Val Phe Ile Asp Glu Ile Gly Glu Asp

35 40 45

Asn Asp Val Thr Glu Asp Phe Glu Ala Leu Lys Glu Asn Ala Thr Phe

50 55 60

His Ile Val Glu Ser Ala Gly Gly Gly Ala Ile Lys Gly Val Met Lys

65 70 75 80

Ile Phe Ser Val Ile Leu Lys Pro Leu Ala Lys Leu Leu Ser Pro Ser

85 90 95

Val Lys Gly Ala Ser Ser Asn Leu Ala Asn Ser Gln Ala Asp Ser Pro

100 105 110

Asn Asn Ser Leu Thr Asp Arg Asn Asn Lys Ala Arg Pro Tyr Glu Arg

115 120 125

Ser Tyr Asp Ile Cys Gly Thr Val Gln Thr Ile Pro Asn Asn Leu Met

130 135 140

Ser Thr Tyr Lys Val Phe Asn Ala Ala Gly Lys Ile Val Glu Tyr Gly

145 150 155 160

Tyr Tyr Asp Ala Gly Arg Gly Tyr Leu Asp Ile His Pro Asp Gly Ile

165 170 175

Thr Asp Gly Asp Thr Arg Val Ser Asp Ile Thr Gly Thr Ser Val Ala

180 185 190

Val Tyr Ala Pro Tyr Thr Ser Pro Asn Asn Thr Ser Thr Pro Gln Val

195 200 205

Met Val Gly Asp Pro Ile Glu Gln Gly Leu Tyr Ile Thr Val Glu Ser

210 215 220

Asn Glu Val Asp Gly Val Val Leu Lys Ala Pro Asn Gly Leu Gly Ile

225 230 235 240

Ser Phe Ser Tyr Met Ser Gly Tyr Pro Ser Leu Ser Gly Asn Ile Gly

245 250 255

Thr Ile Tyr Asp Pro Thr Gly Gly Ser Asp Phe Ser Gly Val Leu Val

260 265 270

Pro Asn Asp Thr Phe Ser Leu Val Ser Ala Trp Thr Asn Thr Asp Val

275 280 285

Asp Leu Ser Gly Gly Gly Tyr Gln Val Val Ser Val Ser Glu Gly Thr

290 295 300

Val Thr Phe Ile Val Pro Gly Gly Leu Ile Gly Arg Trp Gln Glu Ile

305 310 315 320

Arg Pro Gly Ser Phe Phe Arg Gly Asp Gly Glu Ala Ser Leu Gln Pro

325 330 335

Asp Asn Thr Tyr Glu Lys Thr Leu Thr Asp Trp Val Ser Ile Asn Arg

340 345 350

Thr Glu Val Glu Arg Ile Val Ala Asn Ile Ala Ala Ala Asn Gly Met

355 360 365

Tyr Lys Asp Asn Gly Lys Ser Lys Thr Leu Ala Ser Val Thr Ala Glu

370 375 380

Ile Gln Tyr Gln Leu Leu Asp Glu Asn Ser Val Pro Tyr Gly Pro Ile

385 390 395 400

Tyr Thr Ala Gln Gly Thr Val Ser Gly Arg Thr Pro Asp Tyr Asn Gly

405 410 415

Val Thr Ile Tyr Ala Asp Leu Pro Val Val Ser Arg Val Arg Val Arg

420 425 430

Ala Arg Arg Val Thr Asp Leu Asp Phe Asn Phe Glu Gly Ser Val Val

435 440 445

Asp Glu Val Thr Tyr Val Asn Leu Tyr Gly Gln Thr Arg Asp Asn Thr

450 455 460

Pro His Tyr Gly Asn Arg Thr Thr Val His Ser Met Arg Lys Gln Thr

465 470 475 480

Pro Arg Ala Ala Glu Val Lys Gln Pro Gln Leu Arg Met Ile Ala Thr

485 490 495

Glu Met Val His Lys Tyr Leu Gly Asn Gly Val Phe Glu Asp Thr Met

500 505 510

Thr Pro Asn Thr Gln Ala Val Gln Ser Leu Ile Arg Leu Ala Arg Asp

515 520 525

Pro Asp Val Gly Gly Leu Asn Leu Thr Val Arg Asn Met Asp Lys Leu

530 535 540

Leu Ala Val Gln Asn Glu Val Glu Ala Tyr Phe Gly Asp Lys Gln Ala

545 550 555 560

Gly Glu Phe Cys Tyr Thr Phe Asp Asp Tyr Lys Thr Thr Met Gln Asp

565 570 575

Ile Val Ser Thr Ile Ala Asp Ala Ile Phe Cys Thr Pro Tyr Arg Arg

580 585 590

Gly Ala Asp Ile Leu Leu Asp Phe Glu Arg Pro Arg Met Gly Pro Glu

595 600 605

Met Val Phe Thr His Arg Ser Lys Ala Gly Thr Ser Glu Lys Trp Thr

610 615 620

Arg Thr Phe Asn Asp Ser Gln Val Phe Asp Ser Leu Lys Phe Ser Tyr

625 630 635 640

Ile Asp Pro Lys Thr Asn Val Lys Glu Thr Ile Thr Ile Pro Glu Thr

645 650 655

Gly Gly Leu Lys Thr Glu Thr Tyr Asp Ser Lys Gly Ile Arg Asn Tyr

660 665 670

Lys Gln Ala Phe Trp Ala Ala Asn Arg Arg His Gln Lys Asn Ile Leu

675 680 685

Lys Lys Ile Ser Val Ser Phe Thr Ala Thr Glu Glu Gly Ile Phe Ala

690 695 700

Leu Pro Asn Arg Ala Val Ser Val Val Lys Gly Ser Arg Met Ser Thr

705 710 715 720

Tyr Asp Gly Tyr Val Thr Ala Val Asn Gly Leu Thr Val Glu Leu Ser

725 730 735

Gln Pro Val Lys Phe Thr Ser Gly Asp Asp His Ser Leu Val Leu Lys

740 745 750

Leu Arg Asp Gly Gly Val Gln Ser Val Asn Val Val Pro Gly Ala His

755 760 765

Asp Arg Gln Val Ile Met Thr Ser Val Pro Gln Glu Ala Ile Tyr Thr

770 775 780

Gly Asn Ser Ala Leu Lys Thr Glu Phe Ser Phe Gly Asn Glu Ala Arg

785 790 795 800

His Asn Ala Gln Met Ile Leu Val Ser Thr Val Asp Pro Gly Asp Asp

805 810 815

Arg Thr Val Lys Ile Thr Gly Phe Asn Tyr Asp Lys Asp Phe Tyr Lys

820 825 830

Phe Asp Asn Val Pro Pro Phe Gly Arg Ala Phe Ser Asn Gly Phe Asp

835 840 845

Asn Gly Phe Asn

850

<210> 3

<211> 1272

<212> DNA

<213> 沙门氏菌噬菌体SPP11的末端酶大亚基(terminase large subunit ofsalmonella phage SPP11)

<400> 3

gtgaacgttg atatcacagc tacggaacca cagggcgcgt tccttaatct gcattgtaaa 60

ttcccggcct tcgtcgctgg cttcggcaca ggtaaatcgg aagtcatgtg caactccgcc 120

ctgttagaca gcatggaagg tggtagtgat tcacttatcg ccatgtatga accgacatac 180

gacctggtgc gccttatcct cgccccgcgt atggaagaga agttgtctga ttggggtatt 240

cgttacaagt acaataaatc agacaacata atctatacat catccgggca attcggggat 300

tttgtcctgc gtacattgga taacccggcg cgaatcgtcg gctacgaatc ttttcgcgca 360

aaaatagacg aattggacac gttaaataaa gaccacgccg agcacgcctg gaacaaagtt 420

atcgcccgta accgtcagtt gccgcgtaca tatcgtccga ttaccccgaa gcccgctaat 480

acagtttcgg tatttacgac gccagaaggc ttccgttttg tgcacgacag atgggctgta 540

aaaaagaacc ctggttacga aatgattcag gccccgacta cctccaatcc atttctcccg 600

gaagattatg tgcagtcgtt gcgggatacg tatccaggcc agttaattga tgcctacatc 660

gacggcaaat ttgttaacct gacatctggc agtgtttatt atgcttacga ccgacgtaag 720

aacagcagcc gggagactat acaaccgggt gaaactttgt atattgggca ggactttaac 780

gtcgggcata tggctagcac cgtgtatgtt cagcgtgagt atgtctggca cgcggtagcc 840

gagctggtgg atatgttcga caccccggat gtggtcaggg agattaccga gcggtggaaa 900

cgacacggcc accacattgt tatgtatccg gacgccagtg gtaagaaccg taaatcgact 960

gatgcaagta cctcggatat tgcccaatta cagaacgcgg gtttcgagat acgtgcaaaa 1020

tcggttaacc ctgccgttaa agaccgtgta gcatcggtga ataaagcgct ggagtctggt 1080

agattaatgg tcaacgagca aacctgtccg gttactgctc gctgtcttga gcaacaggca 1140

tacgataaaa acggcatacc ggataagaca agcggcaacg accaccagaa cgatgcgaca 1200

ggatacccta tcgcctacga aatgccgttg gttaaacctg tatcccatat cccggttact 1260

ttcgcacttt aa 1272

<210> 4

<211> 423

<212> PRT

<400> 4

Met Asn Val Asp Ile Thr Ala Thr Glu Pro Gln Gly Ala Phe Leu Asn

1 5 10 15

Leu His Cys Lys Phe Pro Ala Phe Val Ala Gly Phe Gly Thr Gly Lys

20 25 30

Ser Glu Val Met Cys Asn Ser Ala Leu Leu Asp Ser Met Glu Gly Gly

35 40 45

Ser Asp Ser Leu Ile Ala Met Tyr Glu Pro Thr Tyr Asp Leu Val Arg

50 55 60

Leu Ile Leu Ala Pro Arg Met Glu Glu Lys Leu Ser Asp Trp Gly Ile

65 70 75 80

Arg Tyr Lys Tyr Asn Lys Ser Asp Asn Ile Ile Tyr Thr Ser Ser Gly

85 90 95

Gln Phe Gly Asp Phe Val Leu Arg Thr Leu Asp Asn Pro Ala Arg Ile

100 105 110

Val Gly Tyr Glu Ser Phe Arg Ala Lys Ile Asp Glu Leu Asp Thr Leu

115 120 125

Asn Lys Asp His Ala Glu His Ala Trp Asn Lys Val Ile Ala Arg Asn

130 135 140

Arg Gln Leu Pro Arg Thr Tyr Arg Pro Ile Thr Pro Lys Pro Ala Asn

145 150 155 160

Thr Val Ser Val Phe Thr Thr Pro Glu Gly Phe Arg Phe Val His Asp

165 170 175

Arg Trp Ala Val Lys Lys Asn Pro Gly Tyr Glu Met Ile Gln Ala Pro

180 185 190

Thr Thr Ser Asn Pro Phe Leu Pro Glu Asp Tyr Val Gln Ser Leu Arg

195 200 205

Asp Thr Tyr Pro Gly Gln Leu Ile Asp Ala Tyr Ile Asp Gly Lys Phe

210 215 220

Val Asn Leu Thr Ser Gly Ser Val Tyr Tyr Ala Tyr Asp Arg Arg Lys

225 230 235 240

Asn Ser Ser Arg Glu Thr Ile Gln Pro Gly Glu Thr Leu Tyr Ile Gly

245 250 255

Gln Asp Phe Asn Val Gly His Met Ala Ser Thr Val Tyr Val Gln Arg

260 265 270

Glu Tyr Val Trp His Ala Val Ala Glu Leu Val Asp Met Phe Asp Thr

275 280 285

Pro Asp Val Val Arg Glu Ile Thr Glu Arg Trp Lys Arg His Gly His

290 295 300

His Ile Val Met Tyr Pro Asp Ala Ser Gly Lys Asn Arg Lys Ser Thr

305 310 315 320

Asp Ala Ser Thr Ser Asp Ile Ala Gln Leu Gln Asn Ala Gly Phe Glu

325 330 335

Ile Arg Ala Lys Ser Val Asn Pro Ala Val Lys Asp Arg Val Ala Ser

340 345 350

Val Asn Lys Ala Leu Glu Ser Gly Arg Leu Met Val Asn Glu Gln Thr

355 360 365

Cys Pro Val Thr Ala Arg Cys Leu Glu Gln Gln Ala Tyr Asp Lys Asn

370 375 380

Gly Ile Pro Asp Lys Thr Ser Gly Asn Asp His Gln Asn Asp Ala Thr

385 390 395 400

Gly Tyr Pro Ile Ala Tyr Glu Met Pro Leu Val Lys Pro Val Ser His

405 410 415

Ile Pro Val Thr Phe Ala Leu

420

<210> 5

<211> 3099

<212> DNA

<213> 沙门氏菌噬菌体SPP11的DNA聚合酶(DNA polymerase of salmonella phageSPP11)

<400> 5

atgaatctgc tttatctcga tactgaaaca ttctcagaag ccgatttgaa aaaagtcggt 60

tcctatgcct acgctgagca tccaactacc gaaattgtta tttgcaccta cgctttcgat 120

gaaggtcctg tgcaagtatg ggacgccaca gacggcagcg atatgccgcg tgatttgcgt 180

cgggcgatgc tgaagctgca aaaaccagac agcaatctca aactggtagg ccaaaacttc 240

cttatgttcg accgaccagt tattaagcat tgctgggggt tcgaactcct gatagaaaac 300

atcatcgaca ctatgatagt tgcattccgc catgcccttc ctgggtcact agccgcgttg 360

tgcgaggttt taaacattga cgccagcatg gttaaggata aacgtggtaa ggcgcttata 420

cagcgattta gtaagcctac gcctaagaac tataagattc gacgctacac tgccgctacc 480

cacccaaaag agtgggcgga atttattgca tacgcaaaaa gcgacattac atccatgcgt 540

gaagtgtata agaaaatgcc taagtggggg aattctgagt tcgaagaccg cgtgctgtgg 600

ttagaccaag taattaacga ccgcggattt aaggttgacg ttgccctcgc tgaggccgcg 660

attgaagcag tgacgcgcca caaggaagag ctacaggaag aagcccaacg caaatacggc 720

ggttcactaa ccggcaaaga cttcttgcct attttacagg aactggcgcc ggcgcaccgc 780

attcacaacg cacagaagtc aacactaaac gatttgctgg cggatgagga tttaccggat 840

gatgcgcgta ctattattga gatgcgtctc ggtgctgcgt caactgcatc aactaaatac 900

gcaccactac tgttaggacg ttcttccgac gaccgacgtc gtggttgtct gcaatatgga 960

ggggcgaaaa ggaccctgcg gtgggcaggg aaaggttttc agccgcaaaa cctggcgcgc 1020

gggtattatc acgacgatga actggatagg ggtattgccg cgttacttaa aggccgtgca 1080

caccgccgtt ttgatgtggc caagctaaca gcgtctaccg tccgaagctg cattatcccg 1140

gaggccgggc ataagtttgt tgttgcggac tactccaacg ttgaagggcg cggacttgcg 1200

ttcctgtcgg gagaagaaac cgctcttgat acgttccgcg ccgggctgga tatttactgc 1260

gtaaccgcag gtaagatgtt tggcatggag ccggattaca ttaagaaaga acgcaaagac 1320

ttacgccaga ttggtaaagc ctgccttcac cgccataccc aagttttgac cgatggcgga 1380

tttaaggata ttatggtggt cacatcgaca gataaagtat ggagtggcga aaaatgggtg 1440

aatacaaaag gcgcgcacct tatgggatgg aaaccggtga taaatgtgga cggggtgcta 1500

atgaccgaag accacaaaat cttgacgcat tcctggaagc aggcaaagca actcgtttca 1560

aacaaatata tgatggaccg cgccctggag ataggtatgg acgcctggtt atcctgcgcg 1620

agttaccaaa acgacaaggc caaagacagc tactcgtcca atgtgattgc ggagagatgc 1680

cggggcgggt ctattatgac aatgtcaggg caggtaaaac cactcaatgc aaccgttgcg 1740

cccttgaagc aacaaaaaaa tatcgtaaac aatatttctg ctacgaagac gcaatgccgg 1800

acgacgagca cagaacgcga ttactcaacc gattatcagc ggcgatatca cgaacaacaa 1860

tccctggaaa caagagctat aaaaactacg gggccagggg tatcacggta tttgaccagt 1920

ggagggtcga taaaaggtcg tttcttagat atgttcaaac tctggaaggc tgggatgacc 1980

caaacctcga aatggaccga atcgacacag acggtaacta cgaacctgga aacattcggt 2040

ttgtcagccg ttctgaaaac tgccgtaaca gacgtcgaat acctgagctt caacgaaagt 2100

atgatgcagc cgttgcccgc attgctgagc ttgaacggga aattaaccta ctgcgagcca 2160

gtttacgacc tgattgatgt ggaagacggc aaccgttttc ttatagcctc agactcgggc 2220

tttcttgtgg cgcataactg cgaactgggc ctcggctacg agggaggtgt cggagcgttc 2280

gttacgtttg ctaaaaacct gggtcttgac cttattgaga tggcaaaaac aatggacggg 2340

actttccccg accacatctg ggctgctact gcacgtgggt atgagtgggc gcgtattcag 2400

gaagccaaga gaccaccgca tcccggtgaa aaggatgaca ggccgtcgta tattctggac 2460

aagaaggtgt ggcgcacatg tgacgcgatc aagcgtatgt ggcgtgagtc acaccctgaa 2520

acagtagcgt tctggcgcga ccttaaagac ggaattttag ctgctgttcg taatcctggt 2580

cgtgaatttt gggctggggc acacttgcgc cggaatggtg aaagggctat ccgtatatgg 2640

cgtaccgtag aatttgattc gtcgggcagg aaggttcctg gctggtggtt gtgtatggag 2700

ttgccgtcag gccgtatcct atcgtatccg ggaatcggcg ttagtgtgac aaaggaaaca 2760

gacgaagacg gacggataaa caccaatgta agaattaagt accagggtga gaaccagtta 2820

acacggcaat ggaccaccct gtacacacac ggcggaaagg cttgtgaaaa cattgttcag 2880

gcgttgtgcc gtgacttatt ggcctatgcg atgcttaatg tggaagccgg tgggtatcca 2940

atagttcttt ctgttcacga tgaactggta tgcgagactc cggatacatc agattacacg 3000

gtagctgaac tggaaaaact aatgtgtgca ttgccggagt gggctgatgg ttttcctctt 3060

gtagcggaag gtgcggagtt aaaacggtat gctaagtaa 3099

<210> 6

<211> 1032

<212> PRT

<400> 6

Met Asn Leu Leu Tyr Leu Asp Thr Glu Thr Phe Ser Glu Ala Asp Leu

1 5 10 15

Lys Lys Val Gly Ser Tyr Ala Tyr Ala Glu His Pro Thr Thr Glu Ile

20 25 30

Val Ile Cys Thr Tyr Ala Phe Asp Glu Gly Pro Val Gln Val Trp Asp

35 40 45

Ala Thr Asp Gly Ser Asp Met Pro Arg Asp Leu Arg Arg Ala Met Leu

50 55 60

Lys Leu Gln Lys Pro Asp Ser Asn Leu Lys Leu Val Gly Gln Asn Phe

65 70 75 80

Leu Met Phe Asp Arg Pro Val Ile Lys His Cys Trp Gly Phe Glu Leu

85 90 95

Leu Ile Glu Asn Ile Ile Asp Thr Met Ile Val Ala Phe Arg His Ala

100 105 110

Leu Pro Gly Ser Leu Ala Ala Leu Cys Glu Val Leu Asn Ile Asp Ala

115 120 125

Ser Met Val Lys Asp Lys Arg Gly Lys Ala Leu Ile Gln Arg Phe Ser

130 135 140

Lys Pro Thr Pro Lys Asn Tyr Lys Ile Arg Arg Tyr Thr Ala Ala Thr

145 150 155 160

His Pro Lys Glu Trp Ala Glu Phe Ile Ala Tyr Ala Lys Ser Asp Ile

165 170 175

Thr Ser Met Arg Glu Val Tyr Lys Lys Met Pro Lys Trp Gly Asn Ser

180 185 190

Glu Phe Glu Asp Arg Val Leu Trp Leu Asp Gln Val Ile Asn Asp Arg

195 200 205

Gly Phe Lys Val Asp Val Ala Leu Ala Glu Ala Ala Ile Glu Ala Val

210 215 220

Thr Arg His Lys Glu Glu Leu Gln Glu Glu Ala Gln Arg Lys Tyr Gly

225 230 235 240

Gly Ser Leu Thr Gly Lys Asp Phe Leu Pro Ile Leu Gln Glu Leu Ala

245 250 255

Pro Ala His Arg Ile His Asn Ala Gln Lys Ser Thr Leu Asn Asp Leu

260 265 270

Leu Ala Asp Glu Asp Leu Pro Asp Asp Ala Arg Thr Ile Ile Glu Met

275 280 285

Arg Leu Gly Ala Ala Ser Thr Ala Ser Thr Lys Tyr Ala Pro Leu Leu

290 295 300

Leu Gly Arg Ser Ser Asp Asp Arg Arg Arg Gly Cys Leu Gln Tyr Gly

305 310 315 320

Gly Ala Lys Arg Thr Leu Arg Trp Ala Gly Lys Gly Phe Gln Pro Gln

325 330 335

Asn Leu Ala Arg Gly Tyr Tyr His Asp Asp Glu Leu Asp Arg Gly Ile

340 345 350

Ala Ala Leu Leu Lys Gly Arg Ala His Arg Arg Phe Asp Val Ala Lys

355 360 365

Leu Thr Ala Ser Thr Val Arg Ser Cys Ile Ile Pro Glu Ala Gly His

370 375 380

Lys Phe Val Val Ala Asp Tyr Ser Asn Val Glu Gly Arg Gly Leu Ala

385 390 395 400

Phe Leu Ser Gly Glu Glu Thr Ala Leu Asp Thr Phe Arg Ala Gly Leu

405 410 415

Asp Ile Tyr Cys Val Thr Ala Gly Lys Met Phe Gly Met Glu Pro Asp

420 425 430

Tyr Ile Lys Lys Glu Arg Lys Asp Leu Arg Gln Ile Gly Lys Ala Cys

435 440 445

Leu His Arg His Thr Gln Val Leu Thr Asp Gly Gly Phe Lys Asp Ile

450 455 460

Met Val Val Thr Ser Thr Asp Lys Val Trp Ser Gly Glu Lys Trp Val

465 470 475 480

Asn Thr Lys Gly Ala His Leu Met Gly Trp Lys Pro Val Ile Asn Val

485 490 495

Asp Gly Val Leu Met Thr Glu Asp His Lys Ile Leu Thr His Ser Trp

500 505 510

Lys Gln Ala Lys Gln Leu Val Ser Asn Lys Tyr Met Met Asp Arg Ala

515 520 525

Leu Glu Ile Gly Met Asp Ala Trp Leu Ser Cys Ala Ser Tyr Gln Asn

530 535 540

Asp Lys Ala Lys Asp Ser Tyr Ser Ser Asn Val Ile Ala Glu Arg Cys

545 550 555 560

Arg Gly Gly Ser Ile Met Thr Met Ser Gly Gln Val Lys Pro Leu Asn

565 570 575

Ala Thr Val Ala Pro Leu Lys Gln Gln Lys Asn Ile Val Asn Asn Ile

580 585 590

Ser Ala Thr Lys Thr Gln Cys Arg Thr Thr Ser Thr Glu Arg Asp Tyr

595 600 605

Ser Thr Asp Tyr Gln Arg Arg Tyr His Glu Gln Gln Ser Leu Glu Thr

610 615 620

Arg Ala Ile Lys Thr Thr Gly Pro Gly Val Ser Arg Tyr Leu Thr Ser

625 630 635 640

Gly Gly Ser Ile Lys Gly Arg Phe Leu Asp Met Phe Lys Leu Trp Lys

645 650 655

Ala Gly Met Thr Gln Thr Ser Lys Trp Thr Glu Ser Thr Gln Thr Val

660 665 670

Thr Thr Asn Leu Glu Thr Phe Gly Leu Ser Ala Val Leu Lys Thr Ala

675 680 685

Val Thr Asp Val Glu Tyr Leu Ser Phe Asn Glu Ser Met Met Gln Pro

690 695 700

Leu Pro Ala Leu Leu Ser Leu Asn Gly Lys Leu Thr Tyr Cys Glu Pro

705 710 715 720

Val Tyr Asp Leu Ile Asp Val Glu Asp Gly Asn Arg Phe Leu Ile Ala

725 730 735

Ser Asp Ser Gly Phe Leu Val Ala His Asn Cys Glu Leu Gly Leu Gly

740 745 750

Tyr Glu Gly Gly Val Gly Ala Phe Val Thr Phe Ala Lys Asn Leu Gly

755 760 765

Leu Asp Leu Ile Glu Met Ala Lys Thr Met Asp Gly Thr Phe Pro Asp

770 775 780

His Ile Trp Ala Ala Thr Ala Arg Gly Tyr Glu Trp Ala Arg Ile Gln

785 790 795 800

Glu Ala Lys Arg Pro Pro His Pro Gly Glu Lys Asp Asp Arg Pro Ser

805 810 815

Tyr Ile Leu Asp Lys Lys Val Trp Arg Thr Cys Asp Ala Ile Lys Arg

820 825 830

Met Trp Arg Glu Ser His Pro Glu Thr Val Ala Phe Trp Arg Asp Leu

835 840 845

Lys Asp Gly Ile Leu Ala Ala Val Arg Asn Pro Gly Arg Glu Phe Trp

850 855 860

Ala Gly Ala His Leu Arg Arg Asn Gly Glu Arg Ala Ile Arg Ile Trp

865 870 875 880

Arg Thr Val Glu Phe Asp Ser Ser Gly Arg Lys Val Pro Gly Trp Trp

885 890 895

Leu Cys Met Glu Leu Pro Ser Gly Arg Ile Leu Ser Tyr Pro Gly Ile

900 905 910

Gly Val Ser Val Thr Lys Glu Thr Asp Glu Asp Gly Arg Ile Asn Thr

915 920 925

Asn Val Arg Ile Lys Tyr Gln Gly Glu Asn Gln Leu Thr Arg Gln Trp

930 935 940

Thr Thr Leu Tyr Thr His Gly Gly Lys Ala Cys Glu Asn Ile Val Gln

945 950 955 960

Ala Leu Cys Arg Asp Leu Leu Ala Tyr Ala Met Leu Asn Val Glu Ala

965 970 975

Gly Gly Tyr Pro Ile Val Leu Ser Val His Asp Glu Leu Val Cys Glu

980 985 990

Thr Pro Asp Thr Ser Asp Tyr Thr Val Ala Glu Leu Glu Lys Leu Met

995 1000 1005

Cys Ala Leu Pro Glu Trp Ala Asp Gly Phe Pro Leu Val Ala Glu Gly

1010 1015 1020

Ala Glu Leu Lys Arg Tyr Ala Lys

1025 1030

<210> 7

<211> 489

<212> DNA

<213> 沙门氏菌噬菌体SPP11的裂解酶(lysozyme of salmonella phage SPP11)

<400> 7

atgtcaaacc gaaacatcag tgacaacgga ttacacttca ccgccgcgtt cgaggggttc 60

cgaggaaccg cgtacaaggc aacgaagaac gagaagtacc ttactattgg ttatggtcac 120

tatggtgccg atgtgaaaga aggtcagaag attaccgaag gccagggcct cctgcttctg 180

cataaggata tggctaaggc cgtagctgcg gtggacgccg ttgcgcatcc gacgctcaat 240

cagtcacagt tcgatgcgat gtgcgacctg gtgtataacg ctggcgccgg tgtgattgcg 300

gcttctaccg gtacaggtca ggcgctgcga aaaggcgatg catctacact gagaaacaaa 360

ctcagccagt tccattacca gaacggcaaa tcactcctcg gtttgcgacg ccgcgctgct 420

ggtcgtgttg cactgttcga cggtatgttg tggcaacagg ccgaagctgt agggcgcgct 480

gcgaagtag 489

<210> 8

<211> 162

<212> PRT

<400> 8

Met Ser Asn Arg Asn Ile Ser Asp Asn Gly Leu His Phe Thr Ala Ala

1 5 10 15

Phe Glu Gly Phe Arg Gly Thr Ala Tyr Lys Ala Thr Lys Asn Glu Lys

20 25 30

Tyr Leu Thr Ile Gly Tyr Gly His Tyr Gly Ala Asp Val Lys Glu Gly

35 40 45

Gln Lys Ile Thr Glu Gly Gln Gly Leu Leu Leu Leu His Lys Asp Met

50 55 60

Ala Lys Ala Val Ala Ala Val Asp Ala Val Ala His Pro Thr Leu Asn

65 70 75 80

Gln Ser Gln Phe Asp Ala Met Cys Asp Leu Val Tyr Asn Ala Gly Ala

85 90 95

Gly Val Ile Ala Ala Ser Thr Gly Thr Gly Gln Ala Leu Arg Lys Gly

100 105 110

Asp Ala Ser Thr Leu Arg Asn Lys Leu Ser Gln Phe His Tyr Gln Asn

115 120 125

Gly Lys Ser Leu Leu Gly Leu Arg Arg Arg Ala Ala Gly Arg Val Ala

130 135 140

Leu Phe Asp Gly Met Leu Trp Gln Gln Ala Glu Ala Val Gly Arg Ala

145 150 155 160

Ala Lys

Claims

1.一种沙门氏菌噬菌体，其特征在于，被命名为SPP11，其保藏编号为CGMCC No.18868。

2.根据权利要求1所述的沙门氏菌噬菌体在制备治疗或预防沙门氏菌感染的疾病的药物中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述沙门氏菌感染的疾病包括鸡群沙门氏菌病，所述沙门氏菌包括鸡源沙门氏菌；优选地，所述鸡源沙门氏菌选自鸡白痢沙门氏菌、鸡伤寒沙门氏菌和鸡肠炎沙门氏菌。

4.一种噬菌体药物制剂，其有效成分包括如权利要求1所述的沙门氏菌噬菌体SPP11；优选的，所述噬菌体药物制剂还包括其他特定病原菌的噬菌体。

5.根据权利要求4所述的噬菌体药物制剂，其特征在于，所述药物制剂形式为口服给药剂型、外用剂型或肠外给药剂型。

6.根据权利要求5所述的噬菌体药物制剂，所述噬菌体药物制剂中还包含药学上可接受的载体。

7.一种鸡饲料添加剂，其特征在于，包括如权利要求1所述的沙门氏菌噬菌体SPP11。

8.一种环境消毒剂，其特征在于，有效成分包括如权利要求1所述的沙门氏菌噬菌体SPP11；其中还包含其他用于环境中病毒、细菌抑制或消灭的活性成分；优选地，噬菌体的使用浓度为1×10⁸PFU/ml以上。

9.如权利要求8所述的环境消毒剂在鸡场环境消毒中的应用，其特征在于，所述环境消毒剂可通过喷雾、浸泡对养殖环境、饲养器具进行沙门氏菌的消毒，所述养殖环境包括料槽、地面、墙壁、粪便和垫料。

10.一种检测试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1所述的沙门氏菌噬菌体。