CN113151194B - 一株耐受抗病毒药物的沙门氏菌噬菌体及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一株耐受抗病毒药物的沙门氏菌噬菌体，保藏编号为CGMCC No.21994，对全基因进行测序后发现，不具有毒力基因和溶原性基因；该沙门氏菌噬菌体RDP‑SA‑20032经60℃处理60min，效价仍保持在109pfu/mL，对温度有较好的耐受性；在pH4‑9的范围内，37℃培养1h，效价仍保持在1011pfu/mL，在pH＝12以及pH＝2时，仍有噬菌体存活，该噬菌体的酸碱耐受范围较宽；该沙门氏菌噬菌体与抗病毒药物共存条件下效价稳定性好；噬菌体喷干粉复溶后4℃放置72小时效价仍稳定，可以耐受较高的温度，可以采用常规喷雾干燥塔进行生产，提高生产效率，降低生产成本。

Description

一株耐受抗病毒药物的沙门氏菌噬菌体及其应用
技术领域
本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一株耐受抗病毒药物的沙门氏菌噬菌体及其在禽类动物致病性沙门氏菌感染中的应用。
背景技术
沙门氏菌属(Salmonella)是一类寄生在人和动物肠道内的无芽孢直杆菌，它的血清型超过2500个，其中许多血清型菌可以在动物和人之间交叉感染，大多数血清型具有很强的致病性，对畜禽饲养业和人类造成了巨大的危害。由于抗生素在养禽业的滥用，使沙门菌的耐药性越来越强，多重耐药菌株不断增加，并根据使用抗生素种类的不同，沙门菌的耐药谱也不断发生变化。近年来，耐药性的沙门菌已经成为鸡沙门菌病的主要致病菌，
沙门氏菌可以通过食物污染感染人和动物，可引起胃肠炎、菌血症和肠外感染等疾病，是重要的肠道致病菌禽源沙门氏菌病是严重危害我国禽业的重要传染病，可造成种蛋孵化率、雏鸡存活率和鸡生产性能下降等问题。鸡白痢沙门氏菌是禽源沙门氏菌中的一种，在各种年龄鸡只都可发生。雏鸡发病呈急性败血症经过，而成年鸡发病则以隐形感染为主。
噬菌体广泛存在于自然环境中，种类繁多，特异性强，绿色安全，其对细菌裂解的特异性和高效性再度引起人们对噬菌体的的关注。本试验从现代化肉鸡养殖场采集病禽肝脏样品，筛选出一株沙门氏菌噬菌体，并对其生物学特性进行分析，以期为噬菌体防治沙门氏菌的研究提供理论依据。
发明内容
本发明的目的在于提供一株耐受抗病毒药物的沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20032，旨在解决养殖场禽类因感染沙门氏菌，发病急而治疗不及时，且因致病菌耐药性而导致用药无效等问题。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一株耐受抗病毒药物的沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20032，透过电镜观察，该噬菌体有一个多面体立体对称的头部，包裹着核酸，直径约65-40nm，有一个长约100nm的尾，有尾鞘，颈部连着头部和尾部，可将该噬菌体归类为有尾病毒目长尾病毒科，基因长度42960bp，对全基因进行测序后发现，不具有毒力基因和溶原性基因。该噬菌体于2021年03月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号CGMCC No.21994。
进一步地，该沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20032经65℃处理60min，效价仍保持在109pfu/mL，对温度有较好的耐受性；在pH4-9的范围内，37℃培养1h，效价仍保持在1011pfu/mL，在pH＝12以及pH＝2时，仍有噬菌体存活，该噬菌体的酸碱耐受范围较宽；该沙门氏菌噬菌体与抗病毒药物共存条件下效价稳定性好。
进一步地，该沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20032具有广谱的杀灭沙门氏菌的能力。
本发明的另一目的在于提供该沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20032在制备预防和或治疗沙门氏菌引起的疾病的药物中的用途。
本发明的另一目的在于提供该沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20032在制备预防和或治疗沙门氏菌引起的疾病的饲料中的用途。
本发明还提供了一种用于防治沙门氏菌的杀菌组合物，包括有效量的沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20032。
本发明的另一目的在于提供一种沙门氏菌噬菌体的应用，该目的是通过将沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20032用作为由沙门氏菌引起的细菌感染提供潜在的治疗药物或保健品来实现的。
本发明的另一目的在于提供一种预防和或治疗沙门氏菌引起的疾病的添加剂，该目的是通过其有效成分包括沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20032来实现的。
本发明还提供了一种清洁剂或消毒剂，包括沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20032。
本发明的有益效果体现在：
(1)本发明从山东一养殖场病死鸡体内分离得到了沙门氏菌BS20133，经药敏检测和PCR检测，该病原菌对多种抗生素产生耐药性，同时含有多个毒力基因；以BS20133为宿主，从环境中分离得到一株烈性沙门氏菌噬菌体，该噬菌体RDP-SA-20032对禽类养殖环境中致病性沙门氏菌BS20133具有强裂解效用，为工业化生产噬菌体用于禽类养殖环境中致病性沙门氏菌BS20133的防治提供了噬菌体来源；
(2)本发明所提供的沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20032是从自然界中分离的烈性噬菌体，经毒理实验证明其安全、无任何副作用；供试噬菌体不含毒力基因或不良基因；本发明未对供试噬菌体进行任何遗传修饰；
(3)本发明沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20032经60℃处理60min，效价仍保持在109pfu/mL，对温度有较好的耐受性；在pH4-9的范围内，37℃培养1h，效价仍保持在1011pfu/mL，在pH＝12以及pH＝2时，仍有噬菌体存活，该噬菌体的酸碱耐受范围较宽。
(4)本发明沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20032与部分抗病毒药物共存条件下效价稳定性较好，噬菌体与抗病毒药物配伍使用可以同时达到预防、治疗细菌性、病毒性疾病的作用；
(5)本发明的沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20051可以单独或混合使用，用作为生物杀菌剂，饲料添加剂，或因沙门氏菌引起的细菌感染的治疗药物、保健品及医疗器械；沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20051可应用于治疗或预防由沙门氏菌引起的感染性疾病；可被沙门氏菌感染的寄主包括人类、家畜(猪、牛、羊等)、家禽(鸡、鸭、鹅等)，以及各种兽类、鱼类、鼠类等；
附图说明
本发明上述的以及其他的特征、性质和优势将通过下面结合附图和实施例的描述而变的更加明显：
图1为本发明噬菌体RDP-SA-20032的电镜图；
图2为本发明噬菌体RDP-SA-20032的热稳定性示意图；
图3为本发明噬菌体RDP-SA-20032的酸碱稳定性示意图；
图4为本发明噬菌体RDP-SA-20032的遗传稳定性曲线示意图；
图5为本发明噬菌体RDP-SA-20032的一步生长曲线示意图；
图6为本发明噬菌体RDP-SA-20032对宿主菌BS20133的裂解曲线；
图7为本发明噬菌体RDP-SA-20032有抗病毒药物配伍稳定性示意图；
图8为本发明噬菌体RDP-SA-20032喷干粉复溶稳定性曲线示意图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。
本发明从山东省某养殖场病死鸡肝脏内分离得到沙门氏菌BS20133，并通过实验确定了BS20133的致病性和耐药性，以BS20133为宿主，从环境中分离得到一株沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20032，并通过全基因组序列确定了RDP-SA-20032的基因型，基因长度42960bp，对全基因进行测序后发现，不具有毒力基因和溶原性基因。
实施例1病原菌及噬菌体的分离及鉴定
1、致病性沙门氏菌BS20133的分离及其鉴定
从发病养殖场采样，无菌操作取病禽肝脏，在选择性培养基(SS琼脂)上划线，37℃培养18-24h后，在培养基上形成圆形、扁平、边缘整齐、表面光滑湿润的黑色菌落，挑取典型菌落继续划线纯化3次，然后挑取单菌落接种于5mL LB肉汤中，37℃200rpm振荡培养8h，得到均匀浑浊的细菌悬浮液。再通过16sRNA分子鉴定和血清型鉴定，确定为致病性沙门氏菌，将其中一株命名为BS20133，保存于-80℃冰箱。
2、沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20032的分离及鉴定
(1)粪便处理：从养殖场采取粪便，称取5g鸡粪便加入10mL无菌水中浸泡过夜，然后将过夜后的浸出液10000rpm离心5min，取上清液过0.22μm滤器，将滤出液备用。
(2)制备混合菌悬液：取0.2mL菌悬液和0.1mL滤出液加入5mL LB肉汤中，37℃，200rpm振荡培养过夜，然后10000rpm离心5min，取上清液过0.22μm滤器，将滤出液备用。
(3)噬菌体分离：采用双平板法进行噬菌体的分离，取混合菌悬液滤出液0.1mL和沙门氏菌菌悬液0.2mL混合均匀后，37℃水浴10min，然后铺双平板，放于37℃培养箱培养6-8h后，观察结果。如果有噬菌体，那么平板上有透明斑。挑取透明斑于1mL生理盐水中37℃水浴30min后，取0.1mL浸出液和0.2mL菌悬液37℃水浴10min，铺双平板，37℃培养箱培养4-6h纯化，照此步骤纯化3次，得到一种噬菌体，并将其命名为RDP-SA-20032。
RDP-SA-20032在双平板形成的噬菌斑直径在2mm-4mm。
3、噬菌体的保藏
将噬菌体增殖液与60％的甘油按照1：1的比例混合后，于液氮中保存。
实施例2噬菌体的形态观察
运用磷钨酸负染法：在石蜡片上滴噬菌体液(效价1010pfu/m L)100μL，将铜网有膜的一面置于噬菌体液滴上，10min后取下，在空气中自然干燥2-3min，然后在铜网上滴一滴2％的磷钨酸(PTA)水溶液进行染色，10min后取下，在空气中干燥10～15min，用电子显微镜观察，选取清晰的噬菌体图像进行拍照。由电镜照片图1可看出，该噬菌体有一个多面体立体对称的头部，包裹着核酸，直径约65-40nm，有一个长约100nm的尾，有尾鞘，颈部连着头部和尾部，可将该噬菌体归类为有尾病毒目长尾病毒科。
实施例3噬菌体热稳定性的测定
将噬菌体原液分装到50毫升灭菌锥形瓶中，分别在0℃、30℃、40℃、50℃、60℃、70℃、80℃和90℃的条件下孵育30min和60min，然后用生理盐水10倍梯度稀释后，铺双平板测定其效价；结果如图2所示。
由图2可知，噬菌体RDP-SA-20032在60℃以内效价稳定，保持在1011pfu/mL左右；在60℃条件下处理30min和60min，噬菌体效价仅下降1个数量级；在80℃条件下孵育30min和60min，依然具有活性，说明该噬菌体具有较好的耐高温性能。
实施例4噬菌体pH稳定性的测定
用稀盐酸和稀NaOH溶液调节生理盐水的酸碱度，配成PH值为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12的缓冲液，再用配置好的缓冲溶液将噬菌体稀释成1*1012pfu/mL，将稀释液在37℃下，水浴1h，用生理盐水10倍比稀释后铺双平板测定效价。37℃倒置培养4-6h，结果如图3所示。
由图3可以看出，在pH4-9的条件下，37℃培养1h后，其效价仅下降1个数量级，效价仍保持在1011pfu/mL以上，在pH＝12以及pH＝2时，仍有噬菌体存活，说明噬菌体RDP-SA-20032有较好的耐酸碱性能。
实施例5稳定性遗传实验
将RDP-SA-20133连续传代29次，每代培养基中加入等量的RDP-SA-20032和BS201.33，每代培养时间6h，然后铺双平板，测定其效价。
由图4可以看出，将RDP-SA-20032连续传29代后，测定其效价，其效价稳定在1011pfu/mL以上，说明该噬菌体具有较好的遗传稳定性，适合工业化生产。
实施例6：噬菌体生长曲线的绘制
取对数生长期的沙门氏菌悬液，按照最佳感染复数的比例接种沙门氏菌BS20133和噬菌体RDP-SA-20032，在37℃的条件下，水浴10min，然后常温下12000r/min离心5min，弃上清液，除去未吸附在宿主上的游离噬菌体，如此用LB肉汤培养基洗涤两次。再将沉淀重悬于37℃的LB肉汤培养基中，迅速置于37℃200r/min的摇床中振荡培养并计时。定时取样测定其效价，以时间为横坐标，噬菌体效价对数值为纵坐标，绘制生长曲线，得出噬菌体的潜伏期、裂解期，并计算出平均裂解量。平均裂解量＝暴发末期噬菌体滴度/感染初期宿主菌浓度。
由图5可以看出，噬菌体感染宿主菌后的30min内效价没有明显变化，表明其潜伏期约30min，感染后40-90min内噬菌体的滴度明显上升，之后趋于稳定，表明噬菌体裂解期约为50min。通过计算，噬菌体裂解量约为216PFU/感染细胞，表明噬菌体RDP-SA-20032具有潜伏期短、裂解力强和高复制的特点。
实施例7噬菌体对宿主裂解曲线
将培养6h的宿主菌悬液以1:100的比例接种到100mL LB培养基中，37℃200rpm振荡培养2h(OD约0.15，约5.0*108cfu/mL)将菌悬液分装在4个灭菌的锥形瓶中，以最佳感染复数，向其中3个加入噬菌体增殖液0.2mL(约3.6*1011pfu/mL，经0.22μm膜过滤)，同时以不加噬菌体的作为对照，取其平均值。
由图6可知，沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20032加入到宿主菌BS20133菌悬液中，因为噬菌体对宿主有较强的裂解作用，OD600吸光度增加缓慢，且随着时间的延长，两者OD600的差值越来越大，当390-450min时两者的差值趋于稳定，宿主BS20133组，此时宿主生长进入稳定期，细菌含量变化不大，OD值变化不明显，宿主BS20133和噬菌体RDP-SA-20032组，因为噬菌体对宿主的裂解，OD值增长缓慢，但是随着时间的延长，未被噬菌体裂解的宿主继续繁殖，OD值逐渐升高最后趋于稳定。通过该实验进一步说明噬菌体RDP-SA-20032具有较强的裂解作用，而且对病原菌可以长时间的裂解，有效控制宿主菌的生产繁殖，这在动物治疗疾病中有重要的应用价值。
实施例8RTD实验
在平板上划分区域，将一滴宿主菌(约100μL)滴加到区域中心处，晾干，将不同稀释度的一滴噬菌体液滴加到宿主菌的斑点上，晾干，37℃培养16-24h。根据宿主菌生长状况，凡是不能连片生长的，称为CL浓度。结果可知，RDP-SA-20032在稀释107倍后对宿主菌仍有较好的裂解效果。
实施例9：裂解率实验
无菌条件下，分别取1mL样品和1mL宿主菌菌液(1×105CFU/mL)，37℃孵育15分钟，混匀后用生理盐水稀释至10-1-10-3个梯度，每个梯度取100μL涂布于LB琼脂平板上，置于37℃，培养24小时，每个梯度重复两次。同时取1mL生理盐水和1mL宿主菌菌液(1×105CFU/mL)作为空白对照，重复以上步骤。选取30-300个菌落数的平板进行计数。该试验重复3次，取其平均值。噬菌体裂解率＝(1-处理组菌落数/对照组菌落数)×100％。
经计算得知，RDP-SA-20032的裂解率达99％，对宿主有较好的裂解效果，适合在养殖过程中使用。
实施例10最佳感染复数的测定
按照感染复数为100、10、1、0.1、0.01的比例将噬菌体增殖液和宿主加入LB肉汤中，并且确保培养体系的总体积相同。于37℃200rpm振荡培养8h后，常温下12000r/min离心5min，取上清液铺双平板测定其效价，结果如表1所示。
表1最佳感染复数试验
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由表1可知，当感染复数为0.1时，培养8h后，增殖液较为清澈，效价最高，说明RDP-SA-20032的最佳感染复数为0.1。
实施例11：裂解普实验
选择实验室已鉴定好的30株沙门氏菌(包括10株伤寒沙门氏菌，10株鸡白痢沙门氏菌和10株都柏林沙门氏菌)，进行裂解普实验。结果显示RDP-SA-20032可以裂解其中的26株沙门氏菌。
实施例12：噬菌体与抗病毒药物共存效价稳定
将噬菌体RDP-SA-20032(1×1011pfu/ml)分装到50ml灭菌锥形瓶中，分别加入甘草粉剂0.4％，双黄连口服液0.4％，三味拳参口服液0.4％，在4℃条件下培养，1h、3h、6h、12h、18h、24h、48h、50h、72h，检测噬菌体效价，结果如图7所示。
由图7可以看出，抗病毒药物双黄连口服液和甘草与噬菌体RDP-SA-20032共存72小时，效价下降一个数量级，仍保持在1011pfu/ml，而噬菌体RDP-SA-20032在与抗病毒药物三味拳参口服液复配时效价下降明显在短时间内即失去活性，说明噬菌RDP-SA-20032的优势为与部分抗病毒药物共存条件下稳定性较好，抗病毒药物与噬菌体配伍使用可以同时达到预防、治疗细菌性、病毒性疾病的作用。
实施例13：噬菌体与抗病毒药物复配使用
某肉鸡鸡场，鸡群17周，流感病毒病及沙门氏菌病混合感染，选用双黄连口服液与噬菌体，采用口服给药的方式饲喂，部分鸡只分时间段饲喂，每组2万只鸡，具体分组如表2所示。
表2分组和给药情况
Figure BDA0003071742760000091
噬菌体(2.0×1011)用量：建议每1L噬菌体供应20000只鸡，双黄莲口服液用量每250ml每800只鸡，每次2-3h集中饮水，连续饮用3-5天，每天观察鸡群状态，记录死淘数量。试验结果如表3所示。
表3
分组 鸡群状态 7日内平均死淘率
1组 用药4天后恢复正常 0.0528
2组 发病状态 0.0935
3组 发病状态 0.1047
4组 用药6天后基本恢复正常 0.0544
通过7日后的死淘结果及剖检情况，1组和4组基本恢复正常状态，但是4组恢复时间要明显慢于1组，且鸡群弱鸡明显多于1组，2组和3组仍然处于发病状态，鸡群死淘率不断上升，流感症状、沙门氏菌病症状任然存在，说明噬菌体与中药复配后同时使用并没有降低噬菌体的杀菌效果，且要比分开用药更能快速的达到治疗效果，同时复配后饮用还可以减少鸡群多次用药后产生应激，提高养殖效益。
实施例14噬菌体的工业化生产工艺
该工艺流程简单，可靠有效，有利于工业化生产。生产工艺流程如下图。
具体步骤：
1、种子制备
(1)宿主种子制备：无菌环境下挑取单菌落接种于5mL的LB液体培养基，37℃，200rpm培养4-6h，将培养后的宿主菌以5％的接种量接种于100mL的LB液体培养基，37℃，200rpm培养4-6h，再以5％的接种量接种于1000mL的LB液体培养基，37℃，150rpm培养4-6h，培养好的宿主菌种子置于4℃冰箱备用。
(2)噬菌体种子制备:将保存的噬菌体种子适当稀释后，取200μL与200μL宿主菌置于上层培养基中，倒双层平板，37℃，培8-12h，选取噬菌斑呈现云雾状的平板，用5mL的LB液体培养基洗下上层培养基，然后12000rpm，10min离心，过0.22μm的滤膜，收集清液。
清液与宿主分别以2％的比例接种于5mL的LB培养基，37℃，200rpm培养4-8h(培养至增殖液变澄清或者出现絮状物为止)，将培养好的噬菌体和宿主各以2％的接种量同时接种于100mL的LB液体培养基，37℃，200rpm培养4-8h，再将培养好的噬菌体和宿主各以2％的接种量同时接种于1000mL的LB液体培养基，37℃，200rpm培养4-8h，培养好的噬菌体种子置于4℃冰箱备用。
2、噬菌体增殖：
将制备好的宿主菌以3％的比例接种于种子发酵罐中，培养3-4h后，OD600值在0.7-0.9，将宿主菌通过移种管道接种于发酵罐，接种量为5％，宿主在种子罐中培养3-4h，OD在0.7-0.9时以5％的接种量接入噬菌体，培养6-8h，待溶氧反升，pH趋于稳定，结束增值。
注：发酵罐参数：种子罐200-300rpm，37℃，通气1:0.6-0.8vvm。发酵罐：120-150pm，37℃，通气1：0.6-0.8vvm。
培养基成分：酵母浸粉2.5％，甘油0.3％，氯化钠0.8％，磷酸二氢钾0.2％，磷酸氢二钾0.2％，氯化钙20ppm，氯化镁20ppm。
3、噬菌体后处理工艺
(1)离心：将增殖完成的噬菌体，用管式离心机离心，14000rpm，流速≤30L/H，去除未裂解的宿主和细菌碎片等。
(2)采用400nm的中空纤维膜进一步过滤除菌。
(3)采用100KD的卷式膜进行浓缩。
(4)过滤除菌：浓缩后的噬菌体采用三级过滤(聚丙烯0.45μm，双层聚丙烯0.2μm，聚醚砜0.22μm)除菌。
4、噬菌体低温喷雾干燥
将过滤除菌后的噬菌体液体(效价2.3*1010pfu/ml)加入载体并搅拌均匀，载体：8％多空淀粉，2％聚乙烯吡咯烷酮，1％乳糖，0.5％改性壳聚糖，0.2％维生素C。然后进行温喷雾干燥，参数：进风口温度150℃，出风口温度75℃。
缓冲液溶解后，铺双平板，37℃培养，噬菌体效价可达到1010pfu/g，且，由图8可以看出，噬菌体喷干粉复溶后4℃放置72小时效价仍稳定，表明该噬菌体可以耐受较高的温度，可以采用常规喷雾干燥塔进行生产，提高生产效率，降低生产成本。
应当指出的是，具体实施方式只是本发明比较由代表性的例子，显然本发明的技术方案不限于上述实施例，还可以有很多变形。本领域的普通技术人员，以本发明所明确公开的或根据文件的书面描述毫无异议的得到的，均应认为是本专利所要保护的范围。
序列表
<110> 瑞科盟（青岛）生物工程有限公司
<120> 一株耐受抗病毒药物的沙门氏菌噬菌体及其应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 42324
<212> DNA
<213> 2 Ambystoma laterale x Ambystoma jeffersonianum
<400> 1
cttaatagac gctcaggggg tgtctgatgc gctatgatgg tcatacgcat ttaagagagg 60
attgcatgaa actcaaatta aaacagcctg acgccgaagt agtggccgcc gcgcacgagg 120
aagcggttag tgcaaaccgt cgccgtaaac gtccgcgtgg taaacaaagc ctgtatcagt 180
catccagaca ttccgccgaa ctatgggacc cggactattg cgacgaatta atccggttct 240
tcgaccgcac gtcatgggaa ctcgtaccca cgtctaaagg cgacgaacgc ccgcttatcc 300
aggataaacc gccatcactg gcccgtttcg cactacacat aggcgtaacc gttccgatta 360
tcaagctgtg gctgcgagag gttcctgcct tcgctgaagc atacgaaacg gcgcaggccc 420
tggaagaggc gtatttcact gagaccggtg ctgccgggat atctgctacg ttcgccgcag 480
caaaacttgg gcttaataaa actgttgtgg aagaagcgcg cgacgaacca attagcgaag 540
taactattaa ggtggtgtcc ggtgaacgtt gatatcacag ctacgggacc gcagggcgcg 600
ttccttaatc tgcattgtaa gttcccggcc ttcgtcgctg gcttcggcac aggtaaatcg 660
gaagtcatgt gcaactccgc cctgttagac agcatggaag gtggtagtga ttcacttatt 720
gccatgtatg aaccgacata cgacctggtg cgccttatcc tcgccccgcg tatggaagag 780
aagttgtctg attggggtat tcgttacaag tacaataaat cagacaacat aatctataca 840
tcatccgggc aattcgggga ttttgtcctg cgtacattgg ataacccggc gcgaatcgtc 900
ggttacgaat cttttcgcgc aaaaatagac gaattggaca cgttaaataa agaccacgcc 960
gagcacgcct ggaacaaagt tatcgcccgt aaccgtcagt tgccgcgtac atatcgtccg 1020
attaccccga agcccgctaa tacagtttcg gtatttacga cgccagaagg cttccgtttt 1080
gtgcacgaca gatgggctgt aaaaaagaaa ccaggctatg aaatgattca ggcctcgaca 1140
acatccaatc cctttctacc ggaagattat gtgcagtcgt tgcgggatac gtatccaggc 1200
cagttaattg atgcctacat cgatggtgaa tttgtcaacc tgacatccgg cagcgtgtat 1260
tatgcttacg accgacgcaa gaacagcagt cgagagacta tacaacctgg ggaaacgctg 1320
tatatcggtc aggacttcaa cgtcgggcat atggctagca ccgtatacgt tcagcgtgag 1380
tatgtctggc acgcggtagc cgagctggtg gatatgttcg acaccccgga tgtggtcagg 1440
gagattaccg aacgatggaa gcgtaacggg catcacattg ttatgtatcc ggacgccagt 1500
ggtaagaacc gtaaatcgac tgatgcaagt acctcggata ttgcccaatt acagaacgcg 1560
ggtttcgaga tacgtgcaaa atcggttaac cctgccgtta aagaccgtgt agcatcggtg 1620
aataaagcgc tggagtctgg tagattaatg gtcaacgagc aggcttgccc ggttacagca 1680
cgttgcctgg agcaacaggc ttacgataaa aacggtatac cggataagac aagcggcaac 1740
gaccaccaga acgacgcgac aggataccct atcgcctacg aaatgccgtt ggttaaacct 1800
gtatcccata tcccggttac tttcgcactt taagaggatt gttaaatgtt aacagcaaac 1860
ggccagggtt ctggcgtaaa aaccaagcac cgtgaatggc tgcactacgc accgaaatgg 1920
cagaaggtgc gccatgcgct tgctggggac ctggttggct acttacgcaa cgtcggcctt 1980
aatgaaccag ataaagcata cggcgaagcg cgtcaggcag aatacgaggc gggcggcatc 2040
gtatacaact tcacccggcg aacgctgtcg ggaatggtcg gtagcgtcat gcgcaaagaa 2100
ccagaaatca atattccgaa ggagctggaa tacctgctta aaaatgcaga tgggtctggt 2160
gtaggcctaa tacagcatgc gcaggacacg ctcatggaga ttgactcagt aggtcgtggt 2220
ggtcttcttg ttgacgcccc ggaaacaggc gcagctacgg ctgccgaaca gaacgcgggc 2280
ttgcttaacc ctacaatcgc tttttacacg actgagaaca tcgttaactg gcgactcacg 2340
cgcgtaggtt ctgtaaaccg ggtaactatg gttgtactgc gcgagacatg ggagtacaac 2400
gaaccgggaa acgagttcga aacgaaatac ggcgaacagt atcgcgttct ggacatcgat 2460
agcgacggca actaccgtca acgtcttttt cgtttcgatg ccgaaggtgg tgcgcaggaa 2520
gacgtcgtgg agatttaccc ggacttaggg gaatcattac gaggggtaat tccgtttacc 2580
tttattgggg cgaccaataa cgacgccact atcgacgacg ctccgctact accactcgcg 2640
gaacttaaca tcgggcacta caggaacagc gcggacaacg aagaatccag cttcgttgtt 2700
gggcagccga ccctgtttat ctacccaggc gagaacttaa cacctcaagc attcaaggaa 2760
gcgaacccta acggtatcaa atttggtagt cggcgtgggc ataacctggg gtacggaggt 2820
agcgcacagc ttatccaggc aggcgagaat aacctggccc gccagaatat gctggacaaa 2880
gagcagcagg ctatccagat tggtgcgcag cttatcaccc cgactcagca aatcaccgca 2940
caatctgccc gaatccagcg cggtgccgat acatccgtca tggcgacaat tgcgcgtaac 3000
gtaagccagg catatacaga tgctttacgt tgggtggcgg taatgttggg taaacccgaa 3060
gataccgagg ttgaattccg ccttaatatg gacttcttcc tggaacctat gacagctcaa 3120
gacagggctg catggatggc ggatattaat gcgggattgc tgcctgctac ggcttactat 3180
gcggcattgc gtaaggccgg tgttaccgac tggacagacg ctgatattaa ggacgctatt 3240
gaagatgcac ctttaccgtt gggtgctgtt actcaggtag cgggggagat tccgcaagcg 3300
gcacaacaac aacaggagta aagaaaaagg ccccattacg gggccttagt tttagcggat 3360
attagccgcg catttacgca caacccgcgg tatcgtctct ttcagctcat cccatgagtt 3420
gactgcttcc atatccaaca acgtcaccat agccttttga atatcactcc gtaattgatt 3480
agttttggcg tcctgagagt cccaagtatc aaaaccggtt acttcacgga tatctataga 3540
ctcttttatc gcattcgcca catgtatgaa gtgaccgata cgcccaatcc taccctccgt 3600
acgctcaatc atccggctaa cggcggcatt aagttctaca aaactaacag caccaatgtt 3660
acggagttct acctgccgtt gagttaagaa acggtctata acgaggaaat ggaaataagt 3720
gctgtattgc tcagcaatat ataccgccaa atgaagactt aaccacgttt tcccgttcct 3780
ccctctcgtt gttttcaacg gaacaacgcc agtctcctct tcacaaacac gcatgaagtc 3840
tctgcagtcg tccgttttca gtatctgcgc aagatttctt ggttgaagac cattatcaaa 3900
tctccattgg ttcatttgaa tggttagtgt tgacgcgtca atatactcat cgctggtgaa 3960
ctcaatttca ccgtagggga actctaaagt ctgcgctttc atatcttttt cctcagttaa 4020
ttgcctcact taaattatat tcctaatttc tttgtttatg caaacattaa tacgcaaaat 4080
tatagcaaat tagacttttt ttaggtgttt gtgtaggaat aacctatgcc atgctaagat 4140
gcatcaacaa cgcaaacagg agggatatat gccactactt acatcattaa tcagccatca 4200
aatatggctg caacgcaacg ccagtagcga agtaaaagac ctggcgccat tcatccagca 4260
gatgcgcgat gaggttaagc ggcaggtgtt gttgtttggt gatgacagca gaacggcggc 4320
gagacttacc accatgctgc gggaacttga gcaagcgctg aacgggatta cgtctgggtg 4380
gtatgagaag ctactggccg atgcccgtga gctttcagac tatgaagtta actggaacgt 4440
aaaaaccctg tcgaccaacg ttaacgctaa tttcgtaaca ccggccgccg aacaagtatg 4500
ggccgccact actttcgcac cacttgaact aagcgaaaag ccggttgatt ttgtttcgtt 4560
aatggacgga tggcggcaag ccgaggtgaa tcgcttggtt atgggcgtta agtctggatt 4620
cgtacagggt atgaccacac ggcggatagt taagaacgtt gtcgggcccg gcggactggc 4680
tgatatctcc gagcgtaacg ccgctaccgt tatccgtacc gccctggcgc acgtatccaa 4740
cgaagcgcgg caacaggttt acgctcagaa cgacgacatc attacaaaat acgagtgggt 4800
atcaaccctt gattcccgta cttcggctgt ttgtcgttcg cgagattcta tgcagtacga 4860
aataggcaaa ggtccgctac caccagcgca tccgaactgt cggtcgagta cagcaccggt 4920
aatcagttcc gaattcgact tcctggataa gggtgcaaaa cgagcggcga ggggtgcaga 4980
aggaggccag caggtaagcg cagacaccac ctattacgag ttccttaaac aacaaccggc 5040
gtggttccag gacgaagcgc tcggtcctgt caggggtaag atttttcgta atagtgggat 5100
aaccccggaa gaatttcgtg taatatcggt agacggattc gggcgtccgt taactcttaa 5160
agagatggcg gaactcgata ggcgtgttgc cgattatctg aaagaggaat agagatgggc 5220
tttttcaaag ttaaagatgt gccttcacga cgtgtagttc agtactcccg tgtgtctggt 5280
gcgggtgaag gtgtcgtgta tatcaaagat gaatcggttc tcggtgaatc ggtggacgaa 5340
atgccgtttg cagataagac aggactgacc acaatctcgg acggcgtcct gtacgaagtg 5400
ccgtatctgg acggagcagg tgatgtgtac ttcgatacac agccagcaga tgtagaattg 5460
aaagacggtt ccgcaaaatt aaccgttgtc gtgaaaggtg gcaaagcgcc ctacgatttg 5520
caatggttta aaaatggtaa agaggtgatc aacgtcccgt acgttgaggg tgaactaact 5580
gttaaagacc ccggagaata tttcgtcagg gcggtagatg ctgatggggt atcggtggta 5640
agtaaagcgg ctaaggtctc agaacctgag taacgaaagg ccccgtcaag gggccttaat 5700
tttacacacc attattccag ttattcctta caaatgtaaa ttcaggaata ctttattcaa 5760
aaagtagact tctattattt tttatgttac gctacctacg ctttcagcgt accgcggtgc 5820
ggacgcgtga agcgggcgcc acagcgccct agcgtaaccg cgaacgcatt cggaagggcc 5880
gagctatatt gctttcagta tttatctaag attcgccgta tgatgtttac agatatacga 5940
gtttaacgcc cggcttacgc cgggcttagc gtataaagaa aggggatacc atgaattgga 6000
aagtaaccgc agtaatcacg gcagccggta tcctatcctt gtggttatac ggccagtaca 6060
actacagaag cgggtgggta gaaggccgag agaatcttgt ttcacagcaa caaaagaagg 6120
cacaggccga gttagcgaag aaaacacaac ggcagcagca gaacgatacc aaggccgccg 6180
ccgccgaatc tgaaggtaaa gaaaatgcgg aggctatcac ccgtgaagtt atcaaatacg 6240
ttacccgccc tggccgtgtt gtttgcgagt ttcatcctga acgggtgtca atcaaacgac 6300
gtgccgccga gaatgctaat tccatccccg gatacgacgt tgatgcagcc cccgtgcaaa 6360
atggtgctac caagtagtga tgccgatgaa gacctggccg tcgacgtaca taacgccgag 6420
tgcacacggc aattgcgcct gaaagtattc cggttgcagg agtacataag gaatattctg 6480
gaatagttgc cttagtaagt ggaataattt attcttgtta cagaaacacc gggtggcccg 6540
gtgtcctaaa gtccagggga catattgact atgaatcgtt ttttacgtta cccgcttcat 6600
gaagaagccg gggtggaaga taaatctggt gcgggtgacg caccaaaaat gtacacagcc 6660
gaagaagtgc gggcactgat tgagaaagaa gtggccgggc ttaaggcgaa tcaagaagcg 6720
ctccttaacg agaaaaagga agctgcgcgc cgggctaaag aagccgaaga agaacggcaa 6780
cgcgcccacc aggaagcctt gaaggccgcc ggtaaaatgg acgaatttga aaagacgatt 6840
cgtagtcagt atgaacctgt actgaaagag aaagaagaac gctacgcttc tttagccgcg 6900
cgaattcttg gcagcgaacg taaggctgtt ttaggttctt tcgctggtga ttttatcacc 6960
ccagaagcgg tagaaatcct ggcacctttc gttaagaccg agttcgacgg tgaagacgta 7020
gtgactaaat tcatgggtgc ggacggcaat gttgttacta ccgaccctga gcagttccgc 7080
aaatacctgc gcgaacataa agctttttcg catttgatta aagcaaatgc agcttccggt 7140
ggcggggctt ccgggaataa aggcggcggg gccgcaccag cgtttaaaga tatgagtgaa 7200
agtgagcgat tggctctcta taaatcaaac cctgccgaat ttgaacggca acttaaagcc 7260
ctgaggaaat aaataatggc aatcaccact attggtaaca tcgtaactgg taatatcccc 7320
gtactggcgt cctatatgac ggaagacccg gtagagaaaa ccgcgttttt caactccgga 7380
attttgaccc caactccgta tgctgccgag attgcccgcg gcccgtctaa catcgctaac 7440
ctgccgttct ggaaagctat cgatacttct atcgagccta actactcgaa tgacgtatac 7500
caggacatcg cgaccccgcg cgctattcag accggtgaaa tgatggcccg cgttgcatat 7560
ctgaacgaag gtttcggcca ggcagacctg actgtagaac tgactagcca gaatccgttg 7620
cagtctgtag cctctcgcct ggataacttc tggcagcgcc aggcacagcg tcgtctgatt 7680
gctaccgccc tcggtctgta caacgacaac gtatccgata ctgatgcata tcacaagcag 7740
aacgacatgg tggtcgacgt ttctgcaact tcaggcttcg acgcaggtgc attcatcgat 7800
gctacccaga ctatgggtga tgcattgatg agtaatggtg gcgaggttct cggtgctatc 7860
gcgatgcaca gcttcgtata tgcgcaggcg cgtaaagctc agcttatcga cttcatccgt 7920
gacgctgaga acaacaccat gttcgccacc taccagggct accgtgttat cgtcgatgac 7980
agcatgaccg tagtaggcca gggtgcgcag cgcaagttca tctccgtcat cttcggccag 8040
ggtgctatcg gctatggcga aggcaatccc gagatgccgt tggaatacga gcgtgaagca 8100
tctcgtgcta atggtggtgg tgttgaaacc ctgtggacgc gtaaaacgtg gttgctgcat 8160
ccgttcggct acagcttcac tagcgccgta atcaccggca acggcaccga gactatcgcc 8220
cgttccgcta gctggcagga cctggctaac gccgccaact ggaaccgtgt agtcgaccgc 8280
aagcatgtgc cgattgcgtt cctggtaact ggcgtcggtg cttaatcgta gggtatactc 8340
ttgagggact tcggtccctc ttttcattta tacggagact acataatgtc aaagacaggt 8400
aaagggctgc cccgcagtct ggttaacgcg gaattagata ttcccgccgc caccacaacg 8460
gcaatcggag gggttaaaaa atctgctact gtagctgcac cgccagcgat tagtgccggt 8520
agtggtgcag ccgcagcagc cgctcctacg aaagaagagt ttgacgcgtt ggtgtctaac 8580
tacaataagt tgcgcaccga tgtgacttcc ctgcgcactg ccgttactaa tctgttaact 8640
gcccttaaaa acgctggtac tgtatcctga ggaggataaa aatggttgat gtaattaaac 8700
gtcgtattgt tggggtatct gatgacagcc cgcaggacgg gcaggtagag attgatatgg 8760
aaaacgtgat gccgttgcgt ttctctactg gtctaaatga tactactgcg gtaaccgcag 8820
gtcaggctat caccctgacc gttgtactcg ctgacggaat ggaccccaaa acggttcaat 8880
ggtataagga taataacgca atctccggtg caacagacct tacctacacg aaggctaact 8940
ccgcagccgc ggactcaggt acttacaaag tcgtcgcaca agacgggtac ggcaacatta 9000
tctcggatag cacagtagta accgtaagtt aaatatacgc ggccttcggg ccgctttaag 9060
gattagacat ggcagataat tatgtagtac gggagcaata caaaggcgtg gttgaagttg 9120
atgggcagtt agtcccgatg cgcgaagaag cgaaccagga agcattaatc gaaactcagc 9180
cagcggccga agaaccacat tacaacggag gtggggaacc taagcagcgt cgccgccgta 9240
aaagtgtagg tgatagtaat tgagtattat acagcgcttg ttgtgtcggc atgactttat 9300
aacgattagc attgcctacg gcgatgagat aatcggtaga aactacaagc gttattgcca 9360
aaaatgcgcg aaatgtggcg ctattagata tgttggtggt gataaatgct aattgtagaa 9420
acaggacaag gcttacctaa tgcggattcc tacgtcagcc tggaagacgg acgtgcgcta 9480
gcggctaaat acggcctcga acttccagaa gacgatacta aggctgaggc tgcgctgaga 9540
aatggcgctg tatatgttgg gcttttcgaa tcgcagatgt gcggtcgccg tgtatccgca 9600
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aacgttatcc cgccgttagt tgttcaggcg caggtaatgg ccgcggttga atacggcgct 9720
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gcggtaaccg tgtcctactt taaaaatggc tactcaggca gcacagtaag catcacagca 9840
gccgatgatg cgctacgtcc tcttttatgc ggtagcaata acgcctactc ctttaatgtt 9900
ttcaggggtt aatcatggct aagactaaat cagaaatatt ttcccttatc ggtgccaact 9960
tccctgataa ccagtccggg ttaattacac ctgaaaagtt gcgcgaagtt accactcaga 10020
tggctgactc tatgctatat ggtgtcaagg aagtggaagt acttcgtgca tcgcctgcgg 10080
atatccaggc acctactaca accggcacgg cattaactgt agcctttggt ggtgcgcaga 10140
aaacaagcgc tgaccctgtg atgattaatg catccggggt agttacgttc aacgccgctg 10200
gtaactacgc tatccgtgtt aaattgcagg ctgggcgcac cggggcgagc ggaacatcca 10260
tccttctgtc gcgtgttctt ctcggaggtg cgcaattcgg atcaccagcc gcgactaaac 10320
tggcgagtgc ggaatccaca acccccattg aatctcgtgt tgttgtgaat gccgcagccg 10380
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cgagactgga ggctgcgtaa tgagcaccgc tttcagtaaa aggatgcaag gtgtagggac 10560
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ggaccctgtt ttaggtgagt acgtttgggg ggtggacacg acggtccctc ttaaatccgt 10680
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gatactcaaa ggggtgtggc tgacctgaca cggaaaagtt tccgcgaaca agtagaagct 17400
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tggccctggt tctggttcag catggaccga aattaccgct attgcggggt ccttgcctga 24360
tgccgtgtca ttaaaaataa acaggggcga ttatcgtgct gttgagatac cggtagcggt 24420
gaccgtccta ccagacaacg ctgtcaggga taacggggct atatcactgt atctggaagg 24480
cgatagcctt aaggcgttag ttaagcgggc cgatggaagc tatacaagat taactttggc 24540
ataaatagta aaggccccgt aaggggcctt aatttatgat aacagaacca cagcagcgat 24600
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gcgtggcatg tatcagtatt tgacagttga agaggcgtac cggattacta acgatttagg 37920
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acaaaaacga agtattcgag tacctgattg accagctacg gcagcaggta aataacaacc 38040
catacaagca acagtgtgaa gacctggcgc atgaggtgca gtcacttaag aatctgttat 38100
gtgatgcttc ggagcagatt aaggagctgc ataaagactt ggcacgcgct actggtgacg 38160
tggaggcata caaacttgtg cgcaaaggcg ggcatatttc tgctggtcag cgctacgtag 38220
taggtgagca cggacccgag caatctggct gccgtaaaga ggacgcacag gaatgcgagc 38280
actcctggat tattatgcct gggttgtttc tcagcgaagg caatccgaac aacgttcctg 38340
gtagtgagct ttgctctaaa tgtggtaaac gtgagtggga cgacaaggaa tataaaccga 38400
aaaacgatac tcaggaatgt gagcacgatt ggtactttta cgataaaggc gcgtcgatga 38460
tgtgcaagaa atgcgggatg aagagatgac aagcgtatta ttcatctggg tcttgaccgc 38520
aggccagatg caacttgcgg catcggagac gttctacaca ttagaagctt gtcagtcagc 38580
ggcacgcgcc gccgagaatg cacacttcct gtttcagggc gacaagccaa atgattcaga 38640
agtacgcgct atctgctcgc ctaagcgact tggtaaacag gagaaataat tatgagcctc 38700
gcaaccgata tcctgaaaca cgccggtatt aaccttgcac cgccttcatc ggcggtaaca 38760
aagaaggtta ctcgacctaa ggaagaagac aagcgtaaac gtaaacctaa gccgcgagta 38820
aagccagcta atgagatgcc agatgtgtac ccccgcatac caggtgtaca ccagcctaaa 38880
tattgtgtag gcaaaggtct gtggcgcgcg cactcttacg acggcaagaa agtgataaac 38940
ctcggcgagt tcagtagcca ggcgcgggcg catatggcgg ttaaactgta caaactgtgg 39000
cgtaaacgtg ggtattctga aatcccgcac aaaccatcta ttcgacttta tacgttcagg 39060
taacttatat gactactata gcttttgacg gtgaaacgat ggcctgcgat acatgtgtca 39120
cggggaattt taaatactat acggatacca agatttacga gaacgaccac ttcgttatgg 39180
gtgtatccgg ggacgccggg gtgggtaggc tgttggttgt cgatgccgag atattgacgc 39240
ctaagtacta cgacttcgac ttttcagcgc tggtgtttgt taaagaggat aagcgtattt 39300
tcagggtaga attcttcaag tcatgggatt cgccgttaag ctcagttata ccaattgcgg 39360
gtaacgcagc ggccgttggc tccggtgctc cgtatgcact tacggcgatg tttatgggtg 39420
ccaccgctac tgctgctgtc gagatagcga agcgcttcga ccctaatact gatgggggag 39480
tgataacaca tcgactagga taaatccgaa ttatctgtta ctaaaattgt cgtataaatg 39540
ttaatctccg aaggtaaact aactttcgga gattttttat tgtggacgat aaataccttt 39600
ggcttagtgt ggcgggcctc gccgggggtg ccgtatctca gattaagaag cgcgaggcta 39660
tttcaccgtg gttgagattg tgtcacctgg ttgcctcggc atgttgtgcg gtgtacgcat 39720
cccccatcat tataagttac tatgaattat cacagtctga gggtcagtac ctggttcctt 39780
tcggcgtagg tatgttctgg cttaaattat ttgaggccgc cgactcgtcc ctcagcaact 39840
ttaagttacc gtgggggaaa taacatgctc aactcacaaa tcggcgccat ttgcctggtc 39900
gcaatcatca tcacctcgtt aattaatatc tacgcgcact ggattgaaga cggtcttttc 39960
gggcggctgc tgtatatggc gtccgtagtg accgctgctg gcggcctcgc ccatctcttt 40020
accggtgcca ttccaccgtt cataattacg actctcgtcg ctatattcgc gcttaaatcg 40080
gtgcgtcata tttgcgtgaa aggcgcccgc tactacaaat accggaggat gtatgtcaaa 40140
ccgaaacatc agtgacaacg ggttacactt caccgccgcg ttcgaggggt tccgaggaac 40200
cgcgtacaag gcaacgaaga acgagaagta ccttactatt ggttatggtc actatggtgc 40260
cgatgtgaaa gaaggtcaga agattaccga aggccagggc ctcctgcttc tgcataagga 40320
tatggctaag gccgtagctg cggtagacac cgttgcgcat ccgtctctaa atcagtcaca 40380
gttcgacgcc gtgtgtgacc ttgtgtataa cgctggtgca ggtgtgattg ccgcttctac 40440
cggtacaggt caggcgctgc gcaaaggcga tgcatctaca ctgcgtaata agttaactca 40500
gttccattat cagaacggca aatcactcct cggattgcgg cgccgagctg ctggtcgtgt 40560
tgcgctgttc gatggcatgc tgtggcaaca ggccgaagct atcggccgcg gcgcaaagta 40620
ggttgacaca taggaggatt cctaagatac taaacctgct cctgcttatt catccctcta 40680
gctctttatc ccggtaactg accctaccgg gatttttttt tatctgtatc ctgaaataat 40740
agttgactag tagcattaac cctattatat ttagttcatc gacagcgaga acggagtaga 40800
gaagatgaac ttacaaagtg ataaagtttt ttaccattgc aaaccactac tggacaccga 40860
agcattcaaa gacgcacaaa ttatggcgcg cattgcggta agtaacctta gcaaccacat 40920
tcctgctgac gcgttctggt tcgccgcgat gcagacactt aaagcagcat atgcaggaga 40980
gaaggaatga gcgacaacgg acaagtagca gtaacgttta aggtgggcgg taaggtaagt 41040
aacacgccct tcccgacacg cgaggaactg ttaaaacgta acagtttccc tgggccggac 41100
cagaacaagt atctaaatcg catgtgggga aagcgtaaat gatgactgac cgcgactacg 41160
aaaagatgat ggtagaggcc gcaaacggca ggttgaaaat tgaagccatt gacgcgcaga 41220
ttaaggcaca ccaagccgcg cttgattacc ttaacgaaca ccggcgtgag cttattaacc 41280
gctacgacct taacaaatac gtaggtgggg agaataaatg aaacgagtat gtaaagagac 41340
gttgcgccag cgaattatgt atctggaatc agtaagtaat ttaggtctgt cgatgagcga 41400
agaattccag ttagaagcgt ataagatgct actgacccgg cttgagaagg aaagcgagca 41460
aaaatgatta ccagcatccc aaaactaatc gagacacacg gcacattagc ggatacgtgc 41520
cgggagacgg gacttaatga gatgacattg tccaagtacc gccatgacac aaaatgcgag 41580
caacatgtca tctataacaa ccgactgatg acccatacga aaacgtcacc ggtcatctac 41640
acgaaacgtg gattatcgcg caacgaccgt atgaagctgg aggggtgatg gatagttttc 41700
tcatcctcat gggtatagga ttcacaacat tactgcttgc cgttgttata tacctgatgt 41760
ggattttgtt tctttggcca tttgttgagg cggtaagtct tacaaggatg atgagagagt 41820
attggcgcat taatgggtgc aagcgaggtg cctggcgtac gatacgttta ttctttacgt 41880
ggtatgccga aacagtattt ggtcgtaggt tcgaagccat acatagtcgc gggtggcgat 41940
gggaagccgt aggtaaatgg tgggtttata aagaggagag tggagaatga ttgagatttt 42000
gaaggctacc gattccactg gcgacctgat gttttggttt gcctttctca gtgcgctaat 42060
aaaacaaccg actgtgttta acagtcttcc ccgatatctg tggtggccta tgtttttagg 42120
cttgggtgta tcaggagcgg ccggcatcct gctgtggttt ttcaaatgag attactaatc 42180
atcccgaacg cctgggttat cgccgcagct aacgaccatt acggcggcga tggtagaaga 42240
gcactacgac acagcctata taactgacac aagcccgcat atgcgggctt ttctgtacac 42300
aggcctatct ttccctatac aatc 42324

Claims (4)

1.一株耐受抗病毒药物的沙门氏菌噬菌体，其特征在于，该噬菌体为沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20032，保藏编号为CGMCC No. 21994。
2.如权利要求1所述的沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20032在制备预防和/或治疗沙门氏菌引起的疾病的药物中的用途。
3.一种用于防治沙门氏菌的杀菌组合物，其特征在于，包括有效量的如权利要求1所述的沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20032。
4.一种清洁剂或消毒剂，其特征在于，包括如权利要求1所述的沙门氏菌噬菌体RDP-SA-20032。
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