CN112945671A - 一种粘附载玻片及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物技术领域,具体公开了一种粘附载玻片及其制备方法和应用。在薄层液基细胞学检测方法中,粘附载玻片是决定液基细胞检测效果好坏的一个关键因素。本发明通过简单浸泡、烘干的方法,在载玻片基材表面涂覆聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯亚胺等高分子粘附涂层,获得具有细胞粘附能力的载玻片,其粘附效果良好、且不会对被粘附的细胞有损伤,能较好的观察到细胞的形态学特征,解决了现有粘附载玻片原料昂贵且粘附效果不稳定的问题,便于临床薄层细胞学检测分析不同病变细胞,有效地避免了假阴性结果的出现,具有广阔的市场前景。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域,具体是一种粘附载玻片及其制备方法和应用。
背景技术
癌症严重危害着人们的生命健康。目前,环境污染和不健康的生活习惯导致的癌症发病率急剧升高,其中,宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤,全球每年大约有50万名女性被确诊为宫颈癌。而宫颈癌的发病在近几年呈现逐渐年轻的趋势,并且由于其症状不明显或者基本没有症状而被人们忽视,从而导致病情的恶化甚至危及生命。
目前,临床上最常用的检测宫颈癌的手段是使用宫颈液基细胞学检测技术来筛选宫颈癌,这对宫颈癌的早发现、早治疗具有非常积极的意义。通过(薄层)液基细胞学检测可以有效的提升妇科疾病的检出效率,进而大大降低宫颈癌的发病率。在液基细胞学检测过程中,粘附载玻片是一个关键的医疗耗材。理想的粘附载玻片应该能感受实现对细胞的快速粘附以提升检测效率,并且能够保证细胞的粘附量从而避免假阴性检测结果的产生。目前此类产品主要被国外进口厂家如美国赛默飞、日本松浪等公司垄断,国产产品也有一定的进展,但是其性能距离进口产品还有很大的差距。现有技术中的粘附载玻片的粘附原理可分为正负电荷相吸原理、涂胶粘附等,由于大多数细胞整体显负电荷,当遇到带正电荷的功能涂层时会选择性的吸附在功能涂层表面,如因此粘附载玻片表面多数采用多聚赖氨酸、氨基硅烷等涂层。
现有的粘附载玻片主要存在的问题是:表面粘附涂层成本高,工艺条件要求高,粘附效果不稳定.因此,亟需开发出性能稳定且经济实惠、工艺简单便于大规模生产的产品,从而惠及亿万大众,并在一定程度上推动国产产品替代进口产品的进程。
发明内容
本发明实施例的目的在于提供一种粘附载玻片,以解决上述背景技术中提出的现有粘附载玻片大多存在原料昂贵且粘附效果不稳定的问题。
为实现上述目的,本发明实施例提供如下技术方案:
一种粘附载玻片,具体是一种对细胞具有很强粘附作用的功能载玻片,其包括载玻片基材以及粘附在所述载玻片基材表面的粘附涂层。其中,所述粘附涂层的原料选自聚乙烯亚胺(PEI),或者聚乙二醇(PEG)和聚乙烯亚胺(PEI),或者是聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和聚乙烯亚胺(PEI)。
本发明实施例的另一目的在于提供一种粘附载玻片的制备方法,所述的粘附载玻片的制备方法,包括以下步骤:
1)将聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯亚胺分别进行配置成浓度为0.1-10wt%的水溶液。
2)将载玻片基材放入步骤1)中得到的聚乙二醇水溶液或聚乙烯吡咯烷酮的水溶液的水溶液中进行浸泡,浸泡的时间是5-20分钟;浸泡后取出、进行清洗、干燥。
3)将经过步骤3中操作2)所得的干燥后的载玻片浸入操作1)所配置的聚乙烯亚胺溶液中进行浸泡,浸泡时间是5-20分钟;浸泡后取出、进行清洗、干燥。也可以直接将载玻片基材浸入聚乙烯亚胺溶液浸泡,浸泡时间是5-20分钟;浸泡后取出、进行清洗、干燥。
本发明实施例的另一目的在于提供一种采用上述的粘附载玻片的制备方法制备得到的粘附载玻片。
本发明实施例的另一目的在于提供一种上述的粘附载玻片在液基细胞学检测的中的应用。所述的粘附载玻片在液基细胞学检测的检测中的具有很好的应用前景。
与现有技术相比,本发明的有益效果是:
本发明实施例提供的粘附载玻片包括载玻片基材以及粘附在所述载玻片基材表面的粘附涂层。其优点体现在1)以PEG、PVP、PEI等作为粘附涂层,原料便宜易得,制备的粘附载玻片具有很好的粘附效果、且不会对被粘附的细胞有损伤,能较好的观察到被粘附细胞的形态学特征,解决了现有粘附载玻片原料昂贵、粘附效果不稳定的问题。2)提供的制备方法简单、设备要求低,通过简单浸泡、烘干的方法即可制备具有优异的细胞粘附能力的载玻片,且在临床薄层细胞学检测分析中具有很好的应用前景。
附图说明
图1是本发明一实施例提供的粘附载玻片的制备方法的流程图。
图2是粘附载玻片应用原理示意图。
图3为本发明一实施例提供的粘附载玻片的X射线电子能谱图。
图4为本发明一实施例提供的粘附载玻片的接触角测试图。
图5为本发明一实施例提供的粘附样品在显微镜下的观察图。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步详细地说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明,但不以任何形式限制本发明。应当指出的是,对本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下,还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。
根据本发明包含的信息,对于本领域技术人员来说可以轻而易举地对本发明的精确描述进行各种改变,而不会偏离所附权利要求的精神和范围。应该理解,本发明的范围不局限于所限定的过程、性质或组分,因为这些实施方案以及其他的描述仅仅是为了示意性说明本发明的特定方面。实际上,本领域或相关领域的技术人员明显能够对本发明实施方式作出的各种改变都涵盖在所附权利要求的范围内。
本发明实施例提供的一种粘附载玻片,具体是一种对细胞具有很强粘附能力的功能载玻片,其包括载玻片基材以及粘附在所述载玻片基材表面的粘附涂层。其中,所述粘附涂层的原料选自聚乙烯亚胺(PEI)、聚乙二醇(PEG)和聚乙烯亚胺(PEI),或者是聚乙烯亚胺(PEI)和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。
作为本发明的优选实施例,所述粘附涂层的原料是PEI(聚乙烯亚胺),或者PVP(聚乙烯吡咯烷酮)和PEI(聚乙烯亚胺),又或者,PEG(聚乙二醇)和PEI(聚乙烯亚胺)。
优选的,所述粘附涂层的原料为PEI,起主要作用的也是聚合物PEI,其他两种聚合物PVP与PEG也有增强粘附作用的效果。
作为本发明的另一优选实施例,所述载玻片基材可以是现有的普通载玻片产品,具体是用显微镜观察东西时用来放东西的玻璃片或石英片,也可以是亲水性玻璃载玻片,例如中国专利申请号是2014108494387的专利中公开的亲水性载玻片,中国专利申请号是2016100067975的专利中公开的亲水性载玻片,或者,中国专利申请号是2016108232858的专利中公开的亲水性载玻片。
优选的,所述载玻片基材是亲水性玻璃载玻片,例如中国专利申请号是2014108494387的专利中公开的亲水性载玻片,中国专利申请号是2016100067975的专利中公开的亲水性载玻片,或者,中国专利申请号是2016108232858的专利中公开的亲水性载玻片,还可以是其他的亲水性良好的载玻片产品,具体的载玻片类型根据需求进行选择,这里并不作限定,只要可以具有良好的亲水性即可。
作为本发明的另一优选实施例,所述粘附涂层在粘附在所述载玻片基材表面前,是将粘附涂层的原料进行制备成粘附溶液进行备用,具体的,将PEG(聚乙二醇)、PVP(聚乙烯吡咯烷酮)、PEI(聚乙烯亚胺)分别进行配置成一定浓度的水溶液,以便后续进行浸泡所述载玻片基材,进而使所述粘附涂层在粘附在所述载玻片基材表面。
作为本发明的另一优选实施例,所述粘附溶液的浓度是0.1-10wt%。
优选的,所述粘附溶液的浓度是1wt%。即将PEG(聚乙二醇)、PVP(聚乙烯吡咯烷酮)、PEI(聚乙烯亚胺)分别进行配置成质量分数为1%的水溶液进行备用。
本发明实施例克服了现有粘附载玻片价格昂贵、保存困难、生产工艺复杂等问题,提供一种制备简单、保存简便、具有很好粘附作用的粘附载玻片,通过简单浸泡、烘干制备的粘附载玻片适用于薄层液基细胞学检测中,其对细胞具有很好的粘附作用,并且粘附后的细胞形态清晰、分布均匀便于临床中清楚的分析出病变细胞。
本发明实施例还提供一种上述粘附载玻片的制备方法,所述的粘附载玻片的制备方法,包括以下步骤:
1)常温下,将聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯亚胺分别进行配置成浓度为0.1-10wt%的水溶液,备用;
2)将载玻片基材放入步骤1)中得到的聚乙二醇的水溶液和/或聚乙烯吡咯烷酮的水溶液和/或聚乙烯亚胺的水溶液中进行浸泡,并在每一次浸泡后取出进行清洗、干燥,得到所述粘附载玻片。
作为本发明的另一优选实施例,在所述的粘附载玻片的制备方法中,所述聚乙二醇的水溶液、聚乙烯吡咯烷酮的水溶液、聚乙烯亚胺的水溶液的浓度分别是0.5-2.5wt%。
作为本发明的另一优选实施例,在所述的粘附载玻片的制备方法中,所述聚乙二醇的水溶液、聚乙烯吡咯烷酮的水溶液、聚乙烯亚胺的水溶液的浓度分别是0.9-1.1wt%。
优选的,在所述的粘附载玻片的制备方法中,所述聚乙二醇的水溶液、聚乙烯吡咯烷酮的水溶液、聚乙烯亚胺的水溶液的浓度是1wt%。
作为本发明的另一优选实施例,在所述的粘附载玻片的制备方法中,所述浸泡的时间是5-20min。
优选的,在所述的粘附载玻片的制备方法中,所述浸泡的时间是10min。
作为本发明的另一优选实施例,在所述的粘附载玻片的制备方法中,所述清洗是将浸泡后的载玻片基材放入超纯水漂洗2-5min。
优选的,在所述的粘附载玻片的制备方法中,所述清洗是将浸泡后的载玻片基材放入超纯水漂洗3min。
作为本发明的另一优选实施例,在所述的粘附载玻片的制备方法中,所述干燥是在漂洗后取出,滤干,并于65-75℃下烘干10-30min。
优选的,在所述的粘附载玻片的制备方法中,所述干燥是在漂洗后取出,滤干,并放入70℃干燥箱中干燥20min。
作为本发明的另一优选实施例,在所述的粘附载玻片的制备方法中,还包括:将制得的粘附载玻片利用细胞自然沉降的方法,检测粘附载玻片对细胞的粘附能力。
优选的,所述检测粘附载玻片对细胞的粘附能力,具体是:将医院获得的宫颈细胞,通过细胞洗涤液1000g离心洗涤三次,去除上清液,并将其按一定浓度分散在细胞保存液中,得到细胞悬液,备用。将获得的粘附载玻片用特定的装置固定住,每个玻片样品用移液枪依次添加0.4mL细胞悬液,静置10min,随后,除去水分,并用纯水清洗3次。每个玻片样品添加0.2mL苏木素静置2min,清洗3次,同样的加EA50染色液静置2分钟后,用酒精清洗3次,得到最终的粘附样品,在显微镜下观察。
作为本发明的另一优选实施例,所述水溶液的溶剂是超纯水、纯净水、蒸馏水、去离子水或软水中的任意一种,这里并不作限定,可以根据需要进行选择。优选的,所述水溶液的溶剂是超纯水水。
优选的,所述的粘附载玻片的制备方法,包括以下步骤:
(1)常温下,将聚乙烯吡咯烷酮(PVP)置于超纯水中溶解配置成质量分数为1%的水溶液,类似的将PEG、PEI也配置成1%的水溶液备用;
(2)将步骤(1)获得的第一次聚合物溶液(聚乙二醇的水溶液和/或聚乙烯吡咯烷酮的水溶液和/或聚乙烯亚胺的水溶液)倒入染色缸中,并把亲水性载玻片作为载玻片基材放入其中浸泡10min;
(3)将步骤(2)中浸泡后的亲水性载玻片放入超纯水中清洗3min,取出,滤干,并放入70℃干燥箱中干燥20min;
(4)将步骤(3)中制得的单层的粘附载玻片(即亲水性功能载玻片)烘干后,放入第二次聚合物溶液(聚乙二醇的水溶液和/或聚乙烯吡咯烷酮的水溶液和/或聚乙烯亚胺的水溶液)中重复(2)、(3)步骤得到双层的亲水性功能载玻片;
(5)将制得的粘附载玻片利用细胞自然沉降的方法,检测粘附载玻片对细胞的粘附能力。
本发明实施例还提供一种采用上述的粘附载玻片的制备方法制备得到的粘附载玻片。具体的,包括PEI载玻片、PEG载玻片、PVP载玻片、PEG/PEI载玻片、PVP/PEI载玻片、PEG/PVP/PEI载玻片等。具体根据需求进行选择,这里并不作限定。
作为本发明的另一优选实施例,所述的粘附载玻片对宫颈细胞具有粘附效果。
本发明实施例还提供一种所述的粘附载玻片在液基细胞学检测中的应用。
本发明实施例还提供一种所述的粘附载玻片在筛选宫颈癌中的应用。
本发明实施例还提供一种所述的粘附载玻片在制备用于液基细胞学检测的检测工具中的应用。
作为本发明的另一优选实施例,在所述的粘附载玻片在制备用于液基细胞学检测的检测工具中的应用中,所述的粘附载玻片可以用于液基细胞学检查,其对宫颈细胞具有很好的粘附作用,并且粘附后的宫颈细胞形态清晰、分布均匀,便于临床中清楚的分析出病变细胞。
以下通过列举具体实施例对本发明的粘附载玻片的技术效果做进一步的说明。为了更好地理解本发明而不是限制本发明的范围,在本申请中所用的表示用量、百分比的所有数字、以及其他数值,在所有情况下都应理解为以词语“大约”所修饰。因此,除非特别说明,否则在说明书和所附权利要求书中所列出的数字参数都是近似值,其可能会根据试图获得的理想性质的不同而加以改变。各个数字参数至少应被看作是根据所报告的有效数字和通过常规的四舍五入方法而获得的。
实施例1
一种粘附载玻片的制备方法,包括以下步骤:
(1)将聚乙二醇(PEG),聚乙烯吡咯烷酮(PVP),聚乙烯亚胺(PEI)分别溶解于超纯水中配成1wt%的水溶液,400转搅拌24h,得到不同的粘附涂层溶液(即聚合物溶液)备用。
(2)将经过磨边、倒角处理的亲水性良好的载玻片,浸泡不同浓度的聚合物溶液(聚乙二醇的水溶液和/或聚乙烯吡咯烷酮的水溶液和/或聚乙烯亚胺的水溶液)中静置10min,随后放入纯水中静置清洗3min,取出,离心1min,放入70摄氏度烘箱中烘干表面水分,并根据浸泡顺序,依次浸泡不同的聚合物溶液得到不同的粘附载玻片,烘干冷却后,获得最终的粘附载玻片,放入包装盒中备用。
(3)将医院获得的宫颈细胞,通过细胞洗涤液1000g离心洗涤三次,去除上清液,并将其按一定浓度分散在细胞保存液中,得到细胞悬液,备用。将获得的粘附载玻片用特定的装置固定住,每个玻片样品用移液枪依次添加0.4mL细胞悬液,静置10min,随后,除去水分,并用纯水清洗3次。每个玻片样品添加0.2mL苏木素静置2min,清洗3次,同样的加EA50染色液静置2分钟后,用酒精清洗3次,得到最终的粘附样品,在显微镜下观察。
实施例2
一种粘附载玻片的制备方法,参照图1-2所示,图1是粘附载玻片的制备方法的流程图,图2是图1中的粘附载玻片的制备方法的流程图中对应的原理示意图,所述的粘附载玻片的制备方法包括以下步骤:
(1)常温下,将聚乙烯吡咯烷酮(PVP)置于超纯水中溶解配置成质量分数为1wt%的水溶液,类似的将PEG、PEI也配置成1wt%的水溶液备用。
(2)将步骤(1)获得的第一次聚合物溶液(聚乙二醇的水溶液或聚乙烯吡咯烷酮的水溶液)倒入染色缸中,并把亲水性良好的空白载玻片(参照图1中最下方的左侧的图片所示)作为载玻片基材放入其中浸泡10min。
(3)将步骤(2)中浸泡后的亲水性载玻片放入超纯水中清洗3min,取出,滤干,并放入70℃干燥箱中干燥20min。
(4)将步骤(3)中制得的单层的粘附载玻片(即亲水性功能载玻片)烘干后,放入第二次聚合物溶液(聚乙烯亚胺的水溶液)中重复(2)、(3)步骤得到双层的亲水性功能载玻片(即PEG/PEI载玻片,以及PVP/PEI载玻片),参照图1中的中间的图片所示。
(5)将医院获得的宫颈细胞,通过细胞洗涤液1000g离心洗涤三次,去除上清液,并将其按一定浓度分散在细胞保存液中,得到细胞悬液,备用。将获得的粘附载玻片用特定的装置固定住,每个玻片样品用移液枪依次添加0.4mL细胞悬液,静置10min,随后,除去水分,并用纯水清洗3次。每个玻片样品添加0.2mL苏木素静置2min,清洗3次,同样的加EA50染色液静置2分钟后,用酒精清洗3次,得到最终的粘附样品,在显微镜下观察,参照图1中的右侧的图片所示。
在本发明实施例中,参照图2所示,图2中的左侧图对应是图1中的左侧的图片所示的亲水性载玻片的原理图,即玻璃片表面富有羟基,具有良好的亲水性;图2中的中间的图表示粘附涂层与玻璃表面结合,通过形成粘附涂层,可以改善粘附效果;图2中的右侧的图对应是细胞与粘附涂层结合的示意图,亲水性功能载玻片与细胞之间具有良好的粘附效果。
实施例3
与实施例2相比,不同之处是:将空白的亲水性载玻片先在聚乙二醇的水溶液中浸泡10min,浸泡后的亲水性载玻片放入超纯水中清洗3min,取出,滤干,并放入70℃干燥箱中干燥20min,然后在聚乙烯吡咯烷酮的水溶液中浸泡10min,浸泡后的亲水性载玻片放入超纯水中清洗3min,取出,滤干,并放入70℃干燥箱中干燥20min;再在聚乙烯亚胺的水溶液中浸泡10min,浸泡后的亲水性载玻片放入超纯水中清洗3min,取出,滤干,并放入70℃干燥箱中干燥20min,得到的粘附载玻片是PEG/PVP/PEI载玻片。
实施例4
在本实施例中,将实施例3中的聚乙二醇的水溶液、聚乙烯吡咯烷酮的水溶液、聚乙烯亚胺的水溶液的浓度改变为0.5wt%,得到0.5wt%组粘附载玻片;将实施例3中的聚乙二醇的水溶液、聚乙烯吡咯烷酮的水溶液、聚乙烯亚胺的水溶液的浓度改变为1.0wt%,得到1.0wt%组粘附载玻片;将实施例3中的聚乙二醇的水溶液、聚乙烯吡咯烷酮的水溶液、聚乙烯亚胺的水溶液的浓度改变为5wt%,得到5wt%组粘附载玻片;将实施例3中的聚乙二醇的水溶液、聚乙烯吡咯烷酮的水溶液、聚乙烯亚胺的水溶液的浓度改变为10wt%,得到10wt%组粘附载玻片;然后将四组的粘附载玻片分别作为不同类型的载玻片进行裁剪成5×5cm的小方格,进行X射线电子能谱检测,以分析载玻片表面的元素成分,具体的结果如图3所示,其中,图3中曲线从上至下依次是:a是亲水性空白载玻片,b是PEI载玻片,c是PEG/PEI载玻片,d是PVP/PEI载玻片。
实施例5
利用控制变量法,通过观察不同浓度聚合物溶液浸润、烘干的方法制备的亲水性粘附载玻片,根据研究探索不同粘附涂层叠加、不同浓度、不同浸泡时间、不同烘干时间、不同水洗时间对粘附性能的影响。通过固定烘干时间等物理因素,确定聚合物质量分数为1%(M/M)的溶液时,对宫颈细胞的粘附效果最佳,类似的,通过控制不同的实验条件得到:玻片浸泡10分钟,水洗3分钟,70℃烘干20分钟时效果最佳的。
实施例6
在本实施例中,通过亲水性测试观察不同粘附载玻片接触角变化情况,具体的,根据单独聚合物粘附情况分析,只有PEI对宫颈细胞具有较好的粘附能力,逐步采用多涂层粘附的方法,改善粘附效果,随后对不同类型粘附载玻片进行接触角测试。具体的实验步骤是,将亲水性空白载玻片先浸泡在1%的PEG溶液10min,使PEG充分粘附在玻片表面,改善空白玻片整体的亲水性能,随后使用超纯水浸泡粘附载玻片除去未成功粘附的粘附液,改善玻片表面清洁度,并在70℃恒温烘箱中将载玻片烘干备用。然后,依次使用1%PVP、1%PEI重复上述操作,得到不同类型的粘附载玻片。最后使用接触角测试仪,测试PEI载玻片,PEG/PEI载玻片,PVP/PEI载玻片对水的接触角,具体的结果如图4所示。
在图4中,a图是亲水性空白载玻片,b图是PEI载玻片,c图是PEG/PEI载玻片,d图是PVP/PEI载玻片,亲水性空白载玻片的接触角左右角度分别是13.9°与14.3°,PEI载玻片的接触角左右角度分别是71.9°与71.8°,PEG/PEI载玻片的接触角左右角度分别是36.3°与35.9°,PVP/PEI载玻片的接触角左右角度分别是72.9°与72.8°。因此,本发明实施例中的包括载玻片基材以及粘附在所述载玻片基材表面的至少一层的粘附涂层的粘附载玻片,相比于普通的亲水性空白载玻片,具有良好的亲水性。
实施例7
将实施例6中的PEI载玻片,PEG/PEI载玻片,PVP/PEI载玻片,分别进行宫颈细胞粘附实验。利用细胞自动沉降的方法,将宫颈细胞粘附在功能载玻片表面,具体做法是,利用特定的固定装置固定好载玻片,每个玻片样品用移液枪依次添加0.4mL细胞悬液,静置10min,随后,除去水分,并用纯水清洗3次。每个玻片样品添加0.2mL苏木素静置2min,清洗3次,同样的加EA50染色液静置2分钟后,用酒精清洗3次,得到最终的粘附样品,在显微镜下观察,在显微镜下观察的图像如图5所示。
在图5的a图中,①图是亲水性空白载玻片,②图是PEI载玻片,③图是PEG/PEI载玻片,④图是PVP/PEI载玻片,对应的,b图是PEI载玻片在显微镜下观察的图像,c图是PEG/PEI载玻片在显微镜下观察的图像,d图是PVP/PEI载玻片在显微镜下观察的图像。
通过将得到的粘附载玻片进行粘附测试,使用自然沉降的方法,将宫颈细胞沉降在粘附玻片表面,经过水洗,染色等观察附着细胞数量和形态变化,同时,本发明方法通过比较PEI,PEG/PEI,PVP/PEI三种载玻片与空白样片对宫颈细胞的粘附效果,利用显微镜观察宫颈细胞的基本形态变化验证制备的粘附载玻片在液基细胞学检测中的作用。并且该方法制备条件简单没有添加任何的有机试剂,最终使用X射线光电子能谱能够很清楚的发现PEI,PEG,PVP成功粘附在玻璃表面,且在室温下能够保持长时间的粘附效果。
实施例8
与实施例3相比,除了只使用聚乙二醇的水溶液外,其他与实施例3相同。
实施例9
与实施例3相比,除了只使用聚乙烯吡咯烷酮的水溶液外,其他与实施例3相同。
实施例10
与实施例3相比,除了只使用聚乙烯亚胺的水溶液外,其他与实施例3相同。
实施例11
与实施例3相比,除了只使用聚乙二醇的水溶液和聚乙烯吡咯烷酮的水溶液外,其他与实施例3相同。
实施例12
与实施例3相比,除了使用聚乙二醇的水溶液、聚乙烯吡咯烷酮的水溶液和聚乙烯亚胺的水溶液,以及聚乙二醇的水溶液、聚乙烯吡咯烷酮的水溶液和聚乙烯亚胺的水溶液的浓度均是0.1wt%外,其他与实施例3相同。
实施例13
与实施例3相比,除了使用聚乙二醇的水溶液、聚乙烯吡咯烷酮的水溶液和聚乙烯亚胺的水溶液,以及聚乙二醇的水溶液、聚乙烯吡咯烷酮的水溶液和聚乙烯亚胺的水溶液的浓度均是2wt%外,其他与实施例3相同。
实施例14
与实施例3相比,除了使用聚乙二醇的水溶液、聚乙烯吡咯烷酮的水溶液和聚乙烯亚胺的水溶液,以及聚乙二醇的水溶液、聚乙烯吡咯烷酮的水溶液和聚乙烯亚胺的水溶液的浓度均是5wt%外,其他与实施例3相同。
实施例15
与实施例3相比,除了使用聚乙二醇的水溶液、聚乙烯吡咯烷酮的水溶液和聚乙烯亚胺的水溶液,以及聚乙二醇的水溶液、聚乙烯吡咯烷酮的水溶液和聚乙烯亚胺的水溶液的浓度均是10wt%外,其他与实施例3相同。
实施例16
与实施例3相比,除了使用聚乙二醇的水溶液、聚乙烯吡咯烷酮的水溶液和聚乙烯亚胺的水溶液,以及聚乙二醇的水溶液、聚乙烯吡咯烷酮的水溶液和聚乙烯亚胺的水溶液的浓度均是0.5wt%外,其他与实施例3相同。
实施例17
与实施例3相比,除了使用聚乙二醇的水溶液、聚乙烯吡咯烷酮的水溶液和聚乙烯亚胺的水溶液,以及聚乙二醇的水溶液、聚乙烯吡咯烷酮的水溶液和聚乙烯亚胺的水溶液的浓度均是2.5wt%外,其他与实施例3相同。
实施例18
与实施例3相比,除了使用聚乙二醇的水溶液、聚乙烯吡咯烷酮的水溶液和聚乙烯亚胺的水溶液,以及聚乙二醇的水溶液、聚乙烯吡咯烷酮的水溶液和聚乙烯亚胺的水溶液的浓度均是0.9wt%外,其他与实施例3相同。
实施例19
与实施例3相比,除了使用聚乙二醇的水溶液、聚乙烯吡咯烷酮的水溶液和聚乙烯亚胺的水溶液,以及聚乙二醇的水溶液、聚乙烯吡咯烷酮的水溶液和聚乙烯亚胺的水溶液的浓度均是1.1wt%外,其他与实施例3相同。
实施例20
与实施例3相比,除了所述浸泡的时间是5min,以及所述清洗是将浸泡后的载玻片基材放入超纯水漂洗2min外,其他与实施例3相同。
实施例21
与实施例3相比,除了所述浸泡的时间是20min,以及所述清洗是将浸泡后的载玻片基材放入超纯水漂洗5min外,其他与实施例3相同。
实施例22
与实施例3相比,除了所述浸泡的时间是10min,以及所述清洗是将浸泡后的载玻片基材放入超纯水漂洗4min外,其他与实施例3相同。
实施例23
与实施例3相比,除了所述干燥是在漂洗后取出,滤干,并于65℃下烘干30min外,其他与实施例3相同。
实施例24
与实施例3相比,除了所述干燥是在漂洗后取出,滤干,并于75℃下烘干10min外,其他与实施例3相同。
本发明的有益效果:1)以PEG、PVP、PEI等作为粘附涂层,原料便宜易得,制备的粘附载玻片具有很好的粘附效果、且不会对被粘附的细胞有损伤,能较好的观察到被粘附细胞的形态学特征,解决了现有粘附载玻片原料昂贵、粘附效果不稳定的问题。2)提供的制备方法简单、设备要求低,通过简单浸泡、烘干的方法即可制备具有优异的细胞粘附能力的载玻片,且在临床薄层细胞学检测分析中具有很好的应用前景。
上面对本发明的较佳实施方式作了详细说明,但是本发明并不限于上述实施方式,在本领域的普通技术人员所具备的知识范围内,还可以在不脱离本发明宗旨的前提下作出各种变化。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引申出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之中。
Claims (6)
1.一种粘附载玻片,其特征在于,所述粘附载玻片包括载玻片基材以及涂覆在载玻片基材表面的粘附涂层。
2.根据权利要求1所述的粘附载玻片,其特征在于,所述粘附涂层的原料是聚乙烯亚胺,或者所述粘附涂层的原料是聚乙烯吡咯烷酮和聚乙烯亚胺,又或者所述粘附涂层的原料是聚乙二醇和聚乙烯亚胺。
3.一种如权利要求1-2任一所述的粘附载玻片的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)将聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯亚胺分别进行配置成浓度为0.1-10wt%的水溶液;
2)将载玻片基材放入步骤1)中得到的聚乙二醇水溶液或聚乙烯吡咯烷酮水溶液中进行浸泡,浸泡的时间是5-20分钟;浸泡后取出、进行清洗、干燥,得到干燥后的载玻片;
3)将经过步骤2)所得的干燥后的载玻片浸入步骤1)所配置的聚乙烯亚胺水溶液中进行浸泡,浸泡时间是5-20分钟,浸泡后取出、进行清洗、干燥;
或者,直接将载玻片基材浸入聚乙烯亚胺水溶液浸泡,浸泡时间是5-20分钟,浸泡后取出、进行清洗、干燥。
4.根据权利要求3所述的粘附载玻片的制备方法,其特征在于,在所述的粘附载玻片的制备方法中,所述清洗是将浸泡后的载玻片基材放入超纯水漂洗2-5分钟。
5.根据权利要求3所述的粘附载玻片的制备方法,其特征在于,在所述的粘附载玻片的制备方法中,所述干燥是在漂洗后取出,滤干,并于65-75℃下烘干10-30分钟。
6.一种如权利要求1或2所述的粘附载玻片在液基细胞学检测中的应用。
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PB01 | Publication | ||
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RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
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