CN111175099A - 一种用于检查膀胱癌的体液细胞的提取和制片方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及细胞病理检测领域，具体涉及一种用于检查膀胱癌的体液细胞的提取和制片方法。所述提取方法包括：取样过程和处理过程。本发明用于检测膀胱癌体液细胞的提取方法，破碎化解尿沉渣，并且没有任何损伤，解决了尿液离开人体2个小时就自溶导致的尿细胞不能长时间保存问题，细胞量少的难题，尿标本可以保存7‑10天，彻底解决送检周转时间不够的困境，让这种无创检测能够真正惠及大众；本发明采用诊断信息最丰富、尿沉渣最多的首次晨尿，能将脱落细胞从尿沉渣中完好无损的解离出来，确保能从首次晨尿中采集超过5000个细胞，及大地提高了采样数量、质量和检测成功率。

Description

一种用于检查膀胱癌的体液细胞的提取和制片方法
技术领域
本发明涉及细胞病理检测领域，具体涉及一种用于检查膀胱癌的体液细胞的提取和制片方法。
背景技术
膀胱癌是指发生在膀胱黏膜上的恶性肿瘤。是泌尿系统最常见的恶性肿瘤，也是全身十大常见肿瘤之一。占我国泌尿生殖系肿瘤发病率的第一位，而在西方其发病率仅次于前列腺癌，居第2位。2012年全国肿瘤登记地区膀胱癌的发病率为6.61/10万，列恶性肿瘤发病率的第9位。膀胱癌可发生于任何年龄，甚至于儿童。其发病率随年龄增长而增加，高发年龄50-70岁。男性膀胱癌发病率为女性的3-4倍。大约有90％以上的膀胱癌患者最初的临床表现是血尿，尿检是膀胱癌早期无创筛查的重要措施。
检查膀胱癌所取尿液样本，里面含有丰富的细胞，由于尿液里的细胞易自溶，还由于被尿沉渣包裹，细胞无法完好分离出来，导致细胞量很少，无法诊断。解离尿细胞，临床实践中，将脱落细胞从尿沉渣中分离出来既是必须的也是非常困难的。尿液中，尿沉渣将脱落细胞包裹，很难解离，特别是病人取样前没注意饮食，造成沉渣更多，细胞基本被其全覆盖，做出的细胞片几乎是白片。
目前临床上均实行采集三天尿样，连续检测三次，检出率低，且尿样中脱落细胞数量少，难以诊断，制片满意度低，尿液细胞保存时间短，送检周转时间不够，不能够真正惠及大众。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明第一个方面提供了一种用于检查膀胱癌的体液细胞的提取方法，所述提取方法包括：取样过程和处理过程。
作为一种优选的实施方式，所述取样过程的步骤包括取10-800mL尿液，沉淀0.1-120分钟，除去0.05-670mL上层清液，取9.9-100mL中层尿液倒入标本收集瓶中，得尿液收集液。
作为一种优选的实施方式，所述标本收集瓶含有保护细胞的尿液标本液；所述保护细胞的尿液标本液，按重量份计，包括醇30-100份、杀菌剂1-50份、防腐剂1-30份、去离子水10-50份。
作为一种优选的实施方式，所述防腐剂选自咪唑烷基脲类防腐剂、咪唑啉盐酸盐、苯并三唑盐、酚类防腐剂、脱氢乙酸盐、丙酸盐、山梨酸盐及其各种衍生物的至少一种或混合物。
作为一种优选的实施方式，所述咪唑烷基脲类防腐剂选自重氮咪唑烷基脲、咪唑烷基脲、1,3-二甲羟甲基二甲基乙内酰脲中的一种或多种。
作为一种优选的实施方式，所述杀菌剂选自异噻唑啉酮类杀菌剂、甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂、吡咯类杀菌剂、三唑类杀菌剂、季铵盐、吡唑酰胺类杀菌剂、抗生素类杀菌剂、甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂、二硫代氨基甲酸酯类杀菌剂中的一种或多种。
作为一种优选的实施方式，所述处理过程的步骤包括将取样过程所得的尿液收集液离心去上清液，加入0.2-200mL尿沉渣处理液。
作为一种优选的实施方式，所述尿沉渣处理液，按重量份计，包括水50-100份、蛋白质0.01-10份、糖1-40份、盐0.5-10份、聚乙二醇0.1-20份。
作为另一种实施方式，所述提取方法包括：取样过程和处理过程；所述取样过程为取10-800mL尿液；所述处理过程为加入0.2-100mL尿沉渣处理液，保存。
本发明第二个方面提供了一种用于检查膀胱癌的体液细胞的制片方法，对上述提取方法提取的体液细胞进行制片，所述制片方法包括制片过程和染色过程。
有益效果：本发明提供了一套完整的膀胱癌体液细胞的提取和制片方法，取足量的尿液收集液，用保护细胞的尿液标本液保存，离心去上清，加尿沉渣处理液破碎化解尿沉渣，将分离出的尿液上皮细胞，再制片和染色；本发明的膀胱癌体液细胞的提取方法，破碎化解尿沉渣，并且没有任何损伤，解决了尿液离开人体2个小时就自溶导致的尿细胞不能长时间保存问题，细胞量少的难题，制出的细胞片提高到5000个左右，实现近二个数量级的跃升，彻底解决细胞量少，制片满意度低，难以诊断的问题，开创了一种无创简单有效的膀胱癌诊断新方法，加入保护细胞的尿液标本液，尿标本可以保存7-10天，彻底解决送检周转时间不够的困境，让这种无创检测能够真正惠及大众；本发明采用诊断信息最丰富、尿沉渣最多的首次晨尿，能将脱落细胞从尿沉渣中完好无损的解离出来，确保能从首次晨尿中采集超过5000个细胞，及大地提高了采样数量、质量和检测阳性率。
附图说明
图1为实施例1的细胞片；图2为实施例2的细胞片；图3为实施例3的细胞片；图4为实施例4的细胞片；图5为实施例5的细胞片；图6为实施例6的细胞片；图7为实施例7的细胞片；图8为实施例8的细胞片；图9为实施例9的细胞片；图10为实施例10的细胞片；图11为实施例11的细胞片；图12为实施例12的细胞片；图13为实施例13的细胞片；图14为实施例14的细胞片；图15为实施例15的细胞片；图16中的右侧为实施例4的尿沉渣情况，图16的左测为实施例9的尿沉渣情况。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明提供技术方案中的技术特征作进一步清楚、完整的描述，并非对其保护范围的限制。
在本文中，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者装置不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者装置所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个……”限定的要素，并不排除在包括该要素的过程、方法、物品或者装置中还存在另外的相同要素。
另外，在发明中涉及“第一”、“第二”等等的描述仅描述目的，而不能理解为指示或暗示其相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括至少一个该特征。
为了解决上述问题，本发明第一个方面提供了一种用于检查膀胱癌的体液细胞的提取方法，所述提取方法包括：取样过程和处理过程。
<取样过程>
本发明中，所述取样过程的步骤包括取尿液，沉淀，除去上清液，将中层尿液倒入标本收集瓶中，得尿液收集液。
在一种实施方式中，所述取样过程的步骤包括取10-800mL尿液，沉淀0.1-120分钟，除去0.05-670mL上层清液，取9.9-100mL中层尿液倒入标本收集瓶中，得尿液收集液。
在一种优选的实施方式中，所述取样过程的步骤包括取50-500mL尿液，沉淀10-30分钟，除去5-280mL上层清液，取10-200mL中层尿液倒入标本收集瓶中，得尿液收集液。
在一种更优选的实施方式中，所述取样过程的步骤包括取300mL尿液，沉淀15分钟，除去200mL上层清液，取90mL中层尿液倒入标本收集瓶中，得尿液收集液。
在一种实施方式中，所述中层尿液、尿液的体积比为1：(1.01-8)。
在一种优选的实施方式中，所述中层尿液、尿液的体积比为1：(1.25-3.33)。
在一种更优选的实施方式中，所述中层尿液、尿液的体积比为1：3.33。
本发明攻克了尿样中脱落细胞数量少，难以诊断的难题。通过改变取样方法，加大尿样收集量，获得的细胞数量是其它方法的5倍以上，通过本发明的全套尿液处理技术、让细胞量达到5000个左右，实现近二个数量级的跃升，彻底解决细胞量少，制片满意度低，难以诊断的问题。
在一种优选的实施方式中，所述取样过程的步骤具体包括：
(1)打开包装，取出采集杯，收集50-500mL尿液；
(2)将尿液沉淀10-30分钟，除去5-280mL上层清液，取10-200mL中层尿液倒入标本收集瓶中；
(3)拧紧尿液收集液收集瓶的盖，将底层液体摇荡至混合均匀，并做好标记，得尿液收集液。
在一种更优选的实施方式中，所述取样过程的步骤具体包括：
(1)打开包装，取出采集杯，收集300mL尿液；
(2)将尿液沉淀15分钟，除去200mL上层清液，取90mL中层尿液倒入标本收集瓶中；
(3)拧紧尿液收集液收集瓶的盖，将底层液体摇荡至混合均匀，并做好标记，得尿液收集液；
所述(1)步骤中，所述采集杯为取样尿杯，所述采集杯属方法学内容，可以是瓶、碗、杯等容器，所述采集杯的容量同所取尿液的体积；所述尿液不能从马桶中采集，所述尿液也不能来自经期妇女；
所述(2)步骤中，所述尿液中的细胞沉到底层，确保结果准确需要缓慢倾斜后倒尿液，一次性倒去上层尿液，切勿因反复查看刻度。
在一种优选的实施方式中，所述尿液为晨尿。
所述晨尿可以为首次晨尿、第二次晨尿、第三次晨尿中的任一种。
在一种优选的实施方式中，所述晨尿为首次晨尿。
本发明采用晨尿作为标本尿液，因为晨尿在膀胱中留存时间较长达6-8小时，尿液浓缩，上皮细胞、白细胞、红细胞等能达到检查所需浓度，有较多的诊断信息，只要能顺利取出，结果就会准确。临床实践中，将脱落细胞从尿沉渣中分离出来是非常困难的。尿液中，尿沉渣将脱落细胞包裹，很难解离，特别是病人取样前没注意饮食，造成沉渣更多，细胞基本被其全覆盖，做出的细胞片几乎是白片，本发明采用诊断信息最丰富、尿沉渣最多的首次晨尿，能将脱落细胞从尿沉渣中完好无损的解离出来。本发明不管什么尿样，都能将脱落细胞从尿沉渣中完好无损的解离出来，确保能从首次晨尿中采集超过5000个细胞，极大地提高了采样数量、质量和检测成功率。
本发明采用晨尿采集来检查膀胱癌，由于在目前的现有技术中采集尿量为5-50mL，在放置2h后细胞自溶而无法诊断，本发明中采集尿量为10-800mL，去掉上清液后含有大量的上皮细胞，发现放置4-10h后还是无法诊断，在之后的研究中，发明人发现采集尿量的多少和时段是影响出现尿沉渣的关键，发明人认为可能是当尿量采集过多，细胞沉渣相应增多导致细胞无法完整分离造成无法诊断，且尿量少或尿液不是晨尿时，则含有的上皮细胞诊断信息少，发明人在之后的研究中采用尿量为50-500mL，并沉淀10-30min，再通过本发明的各步骤可实现7-10天细胞不自溶。
在一种实施方式中，所述标本收集瓶含有保护细胞的尿液标本液；所述保护细胞的尿液标本液，按重量份计，包括醇30-100份、杀菌剂1-50份、防腐剂1-30份、去离子水10-50份。
在一种优选的实施方式中，所述标本收集瓶含有保护细胞的尿液标本液；所述保护细胞的尿液标本液，按重量份计，包括醇50-80份、杀菌剂15-35份、防腐剂5-20份、去离子水20-40份。
在一种更优选的实施方式中，所述保护细胞的尿液标本液，按重量份计，包括醇60份、杀菌剂25份、防腐剂10份、去离子水30份。
醇
本发明中，所述醇是脂肪烃、脂环烃或芳香烃侧链中的氢原子被羟基取代而成的化合物。
在一种实施方式中，所述醇选自一元醇、二元醇、三元醇中的一种或多种。
所述一元醇可以选自但不限于甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇、仲丁醇、叔丁醇、正戊醇中的任一种。
所述二元醇可以选自但不限于乙二醇、1,2-丙二醇、1,3-丙二醇、1,2-丁二醇、1,3-丁二醇、1,4-丁二醇、1,2-戊二醇、1,3-戊二醇中的任一种。
所述三元醇包括但不限于丙三醇。
在一种优选的实施方式中，所述醇为甲醇、乙醇、正丙醇、正丁醇中的一种或多种。
在一种更优选的实施方式中，所述醇为乙醇。
杀菌剂
本发明中，所述杀菌剂又称杀生剂、杀菌灭藻剂、杀微生物剂等，通常是指能有效地控制或杀死水系统中的微生物，如细菌、真菌和藻类的化学制剂。
在一种实施方式中，所述杀菌剂选自异噻唑啉酮类杀菌剂、甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂、吡咯类杀菌剂、三唑类杀菌剂、季铵盐、吡唑酰胺类杀菌剂、抗生素类杀菌剂、甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂、二硫代氨基甲酸酯类杀菌剂中的一种或多种。
所述异噻唑啉酮类杀菌剂可以选自但不限于1,2苯并异噻唑啉酮(BIT)、辛基异噻唑啉酮(OIT)、甲基异噻唑啉酮、甲基氯异噻唑啉酮中的一种或多种。
所述甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂可以选自但不限于烯肟菌胺、苯醚菌酯、醚菌酯、嘧菌酯、啶氧菌酯、肟菌酯、唑菌胺酯中的一种或多种。
所述吡咯类杀菌剂可以选自但不限于咯菌腈B1、拌种咯B2中的一种或多种。
所述三唑类杀菌剂可以选自但不限于叶菌唑、丙硫菌唑、氟环唑、烯唑醇、己唑醇、三唑醇、戊唑醇中的一种或多种。
所述季铵盐可以选自但不限于N-十八烷基-γ-双季铵盐、双十二烷基-γ-双季铵盐中的一种或多种。
所述吡唑酰胺类杀菌剂可以选自但不限于氟唑菌酰胺B1或氟唑菌苯胺B2、联苯吡菌胺B3、氟唑环菌胺B4、苯并烯氟菌唑B5中的一种或多种。
所述抗生素类杀菌剂可以选自但不限于春雷霉素、硫酸链霉素、井冈霉素、多抗霉素、梧宁霉素、灭瘟素、抗菌霉素、宁南霉素、嘧肽霉素、水合霉素中的任一种。
所述甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂可以选自但不限于嘧菌酯、醚菌酯、苯氧菌胺、醚菌胺、氟嘧菌酯、肟醚菌胺、啶氧菌酯、唑菌胺酯、肟菌酯、烯肟菌酯、烯肟菌胺中的一种或多种。
所述二硫代氨基甲酸酯类杀菌剂可以选自但不限于代森锌、代森铵、代森锰、代森联、代森锰锌、甲基代森锌、丙森锌、福美双、福美铁、福美锌等中的一种或多种。
在一种优选的实施方式中，所述杀菌剂为辛基异噻唑啉酮(CAS号为26530-20-1)和甲基氯异噻唑啉酮(CAS号为2682-20-4)的复配物，且两者的质量比为3：1。
防腐剂
本发明中，所述防腐剂是能抑制微生物活动，防止腐败变质的一类添加剂。要使尿液有一定的保藏期，就需要采用一定的措施来防止微生物的感染和繁殖。
在一种实施方式中，所述防腐剂选自咪唑烷基脲类防腐剂、咪唑啉盐酸盐、苯并三唑盐、酚类防腐剂、脱氢乙酸盐、丙酸盐、山梨酸盐及其各种衍生物的至少一种或混合物。
所述咪唑烷基脲类防腐剂可以选自但不限于重氮咪唑烷基脲、咪唑烷基脲、1,3-二甲羟甲基二甲基乙内酰脲中的一种或多种。
所述咪唑啉盐酸盐可以选自但不限于2-(2-苯并呋喃)-2-咪唑啉盐酸盐、2-氯甲基咪唑啉盐酸盐、偶氮二异丁咪唑啉盐酸盐、2-苄基-2-咪唑啉盐酸盐中的任一种。
所述苯并三唑盐可以选自但不限于苯并三氮唑钠盐、四丁基苯并三唑盐、四丁基苯并三唑盐、苯并三唑铜、5-丁基-苯并三唑钠盐中的任一种。
所述酚类防腐剂可以选自但不限于苯酚、间甲苯酚、对甲苯酚、邻甲苯酚、氯甲酚、苄醇中的任一种。
所述脱氢乙酸盐可以选自但不限于脱氢乙酸、脱氢乙酸钠、脱氢乙酸钾中的任一种。
所述丙酸盐可以选自但不限于丙酸、丙酸钠、丙酸钾中的任一种。
所述山梨酸盐可以选自但不限于山梨酸、山梨酸钠、山梨酸钾中的任一种。
在一种优选的实施方式中，所述防腐剂为咪唑烷基脲类防腐剂。
在一种优选的实施方式中，所述咪唑烷基脲类防腐剂选自重氮咪唑烷基脲、咪唑烷基脲、1,3-二甲羟甲基二甲基乙内酰脲中的一种或多种。
在一种更优选的实施方式中，所述防腐剂为重氮咪唑烷基脲(CAS号为78491-02-8)。
本发明人在研究中发现采用异噻唑啉酮类杀菌剂可提高保存时间，但单独采用异噻唑啉酮类杀菌剂仅能使保存时间最多延长3天左右，而发明人意外发现当本发明中采用一定量的防腐剂，尤其是咪唑烷基脲类防腐剂时能使保存时间延长更多，发明人认为可能的原因是，咪唑烷基脲类防腐剂杂环上的活性部分容易与尿液细菌中脲酶蛋白质分子上的碱基形成氢键，并在细菌的细胞上吸附，可能阻止了脲酶分解尿素，减少有机酸钙络合物的形成，从而使络合物无法促进噻唑啉酮类杀菌剂的光降解作用，对比不采用本发明的防腐剂时保存时间仅能维持较短时间。
在一种实施方式中，所述保护细胞的尿液标本液的体积为1-100mL。
在一种优选的实施方式中，所述保护细胞的尿液标本液的体积为1-35mL。
在一种更优选的实施方式中，所述保护细胞的尿液标本液的体积为10mL。
在一种实施方式中，所述保护细胞的尿液标本液与中层尿液的体积比为1：(1-40)。
在一种优选的实施方式中，所述保护细胞的尿液标本液与中层尿液的体积比为1：(5.7-9.9)。
在一种更优选的实施方式中，所述保护细胞的尿液标本液与中层尿液的体积比为1：9。
<处理过程>
本发明中，所述处理过程的步骤包括将取样过程所得的尿液收集液离心去上清液，加入尿沉渣处理液。
在一种实施方式中，所述处理过程的步骤包括将取样过程所得的尿液收集液离心去上清液，加入0.2-200mL尿沉渣处理液。
在一种优选实施方式中，所述处理过程的步骤包括将取样过程所得的尿液收集液离心去上清液，加入0.5-70mL尿沉渣处理液。
在一种更优选的实施方式中，所述处理过程的步骤包括将取样过程所得的尿液收集液离心去上清液，加入10mL尿沉渣处理液。
在一种优选的实施方式中，所述尿沉渣处理液与保护细胞的尿液标本液的体积比为(0.5-2)：1。
在一种更优选的实施方式中，所述尿沉渣处理液与保护细胞的尿液标本液的体积比为1：1。
在一种优选的实施方式中，所述处理过程的步骤具体包括：
(1)将取样过程所得尿液样本离心，离心速度为500-4500rpm，离心时间为2-30min，倒出全部上清液，留下底部尿沉渣；
(2)加入0.5-70mL尿沉渣处理液到底部尿沉渣中，摇晃直到沉渣消失，使尿细胞从尿沉渣中分离出来，得尿细胞标本；
(3)将步骤(2)所得尿细胞标本全部移至保存瓶中保存。
在一种更优选的实施方式中，所述处理过程的步骤具体包括：
(1)将取样过程所得尿液样本离心，离心速度为2500rpm，离心时间为5min，倒出全部上清液，留下底部尿沉渣；
(2)加入10mL尿沉渣处理液到底部尿沉渣中，摇晃直到沉渣消失，使尿细胞从尿沉渣中分离出来，得尿细胞标本；
(3)将步骤(2)所得尿细胞标本全部移至保存瓶中保存；
所述步骤(2)可以见到底部尿沉渣破碎、化解，且尿细胞没有任何损伤；
所述步骤(3)中所述保存的温度为室温(25℃)。
尿液上皮细胞离开人体后2小时会自溶，本发明所述膀胱癌体液细胞的保存时可以长达一周，能将尿液细胞保存7天不变性，彻底解决送检周转时间不够的困境，让这种无创检测能够真正惠及大众。
在一种实施方式中，所述尿沉渣处理液，按重量份计，包括水50-100份、蛋白质0.01-10份、糖1-40份、盐0.5-10份、聚乙二醇0.1-20份。
在一种优选的实施方式中，所述尿沉渣处理液，按重量份计，包括水60-80份、蛋白质2-7份、糖5-30份、盐3-8份、聚乙二醇5-15份。
在一种更优选的实施方式中，所述尿沉渣处理液，按重量份计，包括水70份、蛋白质5份、糖20份、盐5份、聚乙二醇10份。
水
本发明中，所述水可以是去离子水、纯净水、自来水中的任一种。
在一种实施方式中，所述水为去离子水。
蛋白质
本发明中，所述蛋白质是由氨基酸以“脱水缩合”的方式组成的多肽链经过盘曲折叠形成的具有一定空间结构的物质。
在一种实施方式中，所述蛋白质可以选自但不限于乳清、酪蛋白、牛血清、明胶、胶原、大豆蛋白、亚麻蛋白质、波形蛋白、骨骼肌蛋白、原肌球蛋白、钙调理蛋白、精氨酸琥珀酸合成酶、肌动蛋白、调钙素、血清白蛋白、线粒体苹果酸脱氢酶中的一种或多种。
在一种优选实施方式中，所述蛋白质为牛血清，型号为164210-100，购买自武汉普诺赛生命科技有限公司。
糖
本发明中，所述糖由碳、氢、氧元素构成，在化学式的表现上类似于“碳”与“水”聚合，故又称之为碳水化合物。
在一种实施方式中，所述糖可以选自但不限于单糖、二糖、三糖、寡糖、麦芽糖糊精、抗性麦芽糊精、淀粉、葡萄糖浆、蜂蜜中的一种或多种。
所述单糖可以列举的有：葡萄糖、甘露糖、果糖、半乳糖阿拉伯糖、核糖、木糖、来苏糖、赤藓糖、苏力糖、己糖。
所述二糖可以列举的有：蔗糖、麦芽糖、乳糖、已二糖、纤维二糖。
在一种优选的实施方式中，所述糖为单糖。
在一种优选的实施方式中，所述单糖为葡萄糖。
在一种优选的实施方式中，所述葡萄糖还包括葡萄糖衍生物。
所述葡萄糖衍生物可以列举的有：吡啶葡萄糖衍生物、氨基葡萄糖衍生物、葡萄糖衍生物内酯、吡喃葡萄糖衍生物中的一种或多种。
优选的，所述葡萄糖衍生物为吡啶葡萄糖衍生物。
在一种优选的实施方式中，所述吡啶葡萄糖衍生物为N-吡啶乙酰基-β-D-葡萄糖胺和/或2,3,4,6-四-O-苯酰-D-吡啶葡萄糖。
优选的，所述吡啶葡萄糖衍生物为2,3,4,6-四-O-苯酰-D-吡啶葡萄糖(CAS号为64768-20-3)。
本发明中采用尿沉渣处理液，能够让尿沉渣破碎、化解，让尿上皮细胞从沉渣中分离出来，使细胞数量增多，发明人在尝试采用糖类时，发现在糖类和盐类的作用下能增加细胞通透性，在一定程度上化解尿沉渣，而在后续在对糖类的研究中意外发现若采用吡啶葡萄糖衍生物，尤其是2,3,4,6-四-O-苯酰-D-吡啶葡萄糖时可观察到细胞数量明显增多，且当控制保护细胞的尿液标本液和和尿沉渣处理液的比例不同时，细胞数量呈现不同，发明人推测，保护细胞的尿液标本液中含有的杀菌剂和防腐剂都具有部分双键的性质，而采用上述糖类容易使整体形成大的共轭体系，可能会活化杀菌剂苯环的活性，在保存剂聚乙二醇的作用下吸附在尿沉渣上的活性分子内的环与环之间容易发生电子迁移，破坏了尿沉渣的正常结构，使其更容易破解，而在本发明中保护细胞的尿液标本液和和尿沉渣处理液的比例为1：1时最好。
盐
本发明中，所述盐是酸与碱反应生成的物质。
在一种实施方式中，所述盐可以选自但不限于钠盐、钾盐、钙盐、镁盐、铵盐、铝盐中的一种或多种。
在一种优选的实施方式中，所述盐为钠盐。
所述钠盐可以列举的有：氯化钠、碳酸钠、硫酸钠、亚硫酸钠、碳酸氢钠、亚硫酸氢钠、磷酸钠、次磷酸钠。
在一种优选的实施方式中，所述钠盐为氯化钠。
聚乙二醇
本发明中，所述聚乙二醇具有优良的润滑性、保湿性、分散性，可作为粘接剂、抗静电剂及柔软剂等。
在一种实施方式中，所述聚乙二醇选自聚乙二醇400、聚乙二醇12000、聚乙二醇6000、聚乙二醇2000、聚乙二醇600、聚乙二醇800、聚乙二醇200、聚乙二醇1450、聚乙二醇2250、聚乙二醇1000、聚乙二醇1500、聚乙二醇3000、聚乙二醇4000、聚乙二醇8000中的一种或多种。
在一种优选实施方式中，所述聚乙二醇为聚乙二醇600。
本发明所述用于检查膀胱癌的体液细胞的提取方法不限于上述情况，还包括下述情况。
在另一种实施方式中，所述提取方法包括：取样过程和处理过程；所述取样过程为取10-800mL尿液；所述处理过程为向10-800mL尿液中直接加0.2-100mL尿沉渣处理液，保存。
在另一种优选的实施方式中，所述提取方法包括：取样过程和处理过程；所述取样过程为取50-500mL尿液；所述处理过程为向50-500mL尿液中直接加0.5-70mL尿沉渣处理液，保存。
在另一种更优选的实施方式中，所述提取方法包括：取样过程和处理过程；所述取样过程为取300mL尿液；所述处理过程为向300mL尿液中直接加10mL尿沉渣处理液，室温(25℃)保存。
在另一种实施方式中，所述尿液与尿沉渣处理液的体积比为(7-100)：1。
在另一种优选的实施方式中，所述尿液与尿沉渣处理液的体积比为(8-50)：1。
在另一种更优选的实施方式中，所述尿液与尿沉渣处理液的体积比为30：1。
本发明第二个方面提供了一种用于检查膀胱癌的体液细胞的制片方法，对上述提取方法提取的体液细胞进行制片，所述制片方法包括制片过程和染色过程。
<制片过程>
本发明中，所述制片过程是抽取保存瓶中的膀胱癌体液细胞标本注到载玻片上，形成细胞薄层，去除废液。
在一种实施方式中，所述制片过程选取的方式包括但不限于膜式制片、离心涂片、手工沉降、沉降制片染色、划片、滴片、手工涂抹、模式、离心沉降、自然沉降、液基细胞制片中的任一种。
在一种优选的实施方式中，所述制片过程选取的方式为液基细胞制片。
所述液基细胞制片包括：将膜筒的具有多孔膜的一端浸入液基细胞的样本液中，并使膜筒的腔体内形成负压，提取液基细胞；将膜筒的具有多孔膜的一端按压向载玻片，使膜筒提取到的液基细胞转移到载玻片上，完成制片；其中膜筒包括筒体和多孔膜，多孔膜设置在筒体的一端，膜筒内形成腔体，多孔膜上设置有多个连通至腔体的取样孔。
所述液基细胞制片根据液基细胞学原理，利用了气动与液动原理，将收集的细胞样本进行细胞分散、过滤采集和转移。由旋转机构带动过滤膜筒柔和地混匀细胞样本；计算机控制的气动、流体动力系统用于细胞采集的全过程；采用生化学原理，把收集在过滤膜上的细胞向玻片自然吸附，达到细胞完美转移，单层均匀平铺的目的，便于染色和诊断。
所述液基细胞制片的步骤如下：
(1)现将已采样的细胞保存液瓶编上号码，然后将标准瓶放入振荡器，振荡，使细胞完全脱落到标本瓶保存液中；
(2)取适量离心管编上与标本瓶相对应的号码；
(3)取标本瓶里的液体经过过滤器加入相对应号码的离心管中；
(4)将离心管放入离心机，离心，取出离心管迅速倒掉上清液；
(5)将离心管在振荡器上振荡20秒，使离心管底部聚集的细胞恢复悬浮状态，然后按照编码顺序将离心管放入制片机；
(6)将预处理载玻片固定在制片机载玻板上；
(7)打开仪器电源，根据显示屏上的指示进行充管操作，充管结束后用吸水纸将加样针上挂滴的液体吸干，再根据仪器提示选择样品数，按确认，运行，机器进行自动制片；
(8)仪器结速运行后，去下载玻片，放入玻片架；
(9)将离心管丢弃，根据提示进行排管，结束后，关闭电源，整理好剩余的试剂，清洁仪器表面。
所述液基细胞制片的优点如下：
(1)经过处理液处理后，去除了标本中的黏液、血液等，因而背景较干净；同时，由于制片过程始终处于液态环境，因此保存了细胞的完整性，使得细胞内的核质结构更加清楚；
(2)由于采用了程序化制片，因此可以控制涂片的细胞量，使细胞均匀分布；
(3)液基细胞学涂片的阅片面积小，不易发生视疲劳，减少漏诊，提高阳性率；
(4)采用了自动制片，减少了人工接触标本的机会，减少了污染及人为干扰因素，有利于制片的质量控制，进而提高了诊断的准确性与可靠性；
(5)对于细胞成分少的标本，能够较大程度的收集标本中的细胞成分，以保证涂片中的细胞数量。
所述液基细胞制片可以克服传统制片由于受到标本数量、退变程度、血细胞多少、制片厚薄的影响，造成涂片厚薄不均、细胞重叠、结构不清、细胞形态变异等缺点导致传统涂片的阳性符合率低。
所述液基细胞制片主要有三种方法：自然沉淀法，膜式吸滤法和直接离心法。三种方法制片各有其有缺点。自然沉淀法是利用离心机将样品离心分层，取出有用层液，置于载玻片上，靠重力沉落在载玻片上；膜式吸滤法是利用了微孔膜技术在真空辅助下完成制片；直接离心法则采用了离心机直接利用离心力将样品沉附在载玻片上。其中，膜式吸滤法制片法是主流制片法。现有的膜式吸滤法主要有两类，一种是吸附法，一种是过滤法。吸附法是样品处于膜的下方，当膜接触液体时，在真空作用下，小于膜孔的物质被吸走，大于膜孔的细胞被挡住并附在膜上，将膜移动到载玻片上，在膜的背离载玻片的方向形成正压力气压，将细胞吹到载玻片上。原则上说，有多少膜孔就能吸附多少细胞，若膜孔分布均匀，故细胞分布亦均匀，此时制出的细胞片清晰均匀。这种方法的缺点是涉及气压变化，不仅机构复杂，而且制片速度慢，一般在3分钟一片，此外对样品液的要求也较高，若样品液前期处理不好，会导致大面积的物质吸附在膜孔上，制出的片子会出现空白区。过滤法则是样品处于膜的上方，一般为双模过滤，第一层膜是粗滤，滤除大体积的杂质和粘液，第二层膜细滤，在真空作用下，小于膜孔的物质被吸走，大于膜孔的细胞被挡在膜孔上，机器将留在细滤膜上的细胞转移至载玻片上，完成制片。该方法对样本液也有一定的要求，如果样品液不是过浓，加样量合适，制出的片子一样清晰，但均匀性不如吸附法好，因此此方法需要操作人员根据经验判断加样量多少，否则成片质量不高，此外制片过程中需要拆解膜装置，操作复杂。
在一种更优选的实施方式中，所述制片过程是装载细胞过滤器、玻片，把尿细胞处理液全部倒入细胞过滤器，按液基细胞制片机的启动键开机制片。
<染色过程>
本发明中，所述染色过程是向制片过程完成的细胞片中注入染色所需染液，静置，使细胞着色。
染色是生物显微玻片标本制作中最重要的环节之一。先把破坏细胞膜的选择透过性，再使用染色剂，将生物组织浸入染色剂内，使组织细胞的某一部分染上与其他部分不同的颜色或深度不同的颜色，产生不同的折射率，以便观察。
在一种实施方式中，所述制片过程选取的方式包括但不限于：巴氏染色法、HE染色法、简单染色法、革兰氏染色法、瑞氏吉姆萨染色法、细胞免疫荧光染色法中的任一种。
所述巴氏染色法是脱落细胞染色中最好的染色方法，主要包括固定、核染色、胞浆染色、透明四个步骤；
所述HE染色法为苏木精-伊红染色法，是石蜡切片技术里常用的染色法之一，也是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中最基础、最广泛的技术方法；
所述简单染色法常用碱性染料如美蓝等进行简单染色；
所述革兰氏染色法主要包括结晶紫初染、碘液媒染、乙醇(或丙酮)脱色以及番红复染四个过程；
所述瑞氏吉姆萨染色法中瑞氏吉姆萨染料溶剂主要是由伊红美蓝组成；
所述细胞免疫荧光染色法的主要原理是利用抗原抗体之间的特异性结合。
在一种优选的实施方式中，所述制片过程选取的方式为瑞氏吉姆萨染色法。
在一种更优选的实施方式中，所述瑞氏吉姆萨染色过程的具体步骤为：
(1)将制片过程完成的细胞片晾干，用质量分数为95％的酒精固定5分钟；
(2)用瑞氏吉姆萨的A液染3分钟，水洗；用瑞氏吉姆萨的B液染1秒钟、水洗；用瑞氏吉姆萨的C液染20秒，水洗；
(3)用质量分数为95％酒精的过30秒；
(4)用瑞氏吉姆萨的D液染20秒、水洗；
(5)用质量分数为95％酒精浸1秒钟，无水酒精浸1秒钟；
(6)吹干树胶封片。
所述瑞氏吉姆萨的A液、瑞氏吉姆萨的B液、瑞氏吉姆萨的C液、瑞氏吉姆萨的D液均购买自北京绿源伯德生物科技有限公司。
细胞制片染色过程完成后镜检。
下面通过实施例对本发明进行具体描述。有必要在此指出的是，以下实施例只用于对本发明作进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，该领域的专业技术人员根据上述本发明的内容做出的一些非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。
实施例
实施例1
实施例1提供了一种用于检查膀胱癌的体液细胞的提取方法，所述提取方法包括：取样过程和处理过程；
所述取样过程的步骤具体包括：
(1)打开包装，取出采集杯，收集50mL尿液；
(2)将尿液沉淀30分钟，除去5mL上层清液、取40mL中层尿液倒入标本收集瓶中；
(3)拧紧尿液收集液收集瓶的盖，将底层液体摇荡至混合均匀，并做好标记，得尿液收集液；
所述尿液为首次晨尿；
所述标本收集瓶含有1mL保护细胞的尿液标本液；所述保护细胞的尿液标本液，按重量份计，包括醇50份、杀菌剂15份、防腐剂5份、去离子水20份；
所述醇为乙醇；
所述杀菌剂为辛基异噻唑啉酮(CAS号为26530-20-1)和甲基氯异噻唑啉酮(CAS号为2682-20-4)的复配物，且两者的质量比为3：1；
所述防腐剂为重氮咪唑烷基脲(CAS号为78491-02-8)。
所述处理过程的步骤具体包括：
(1)将取样过程所得尿液样本离心，离心速度为2500rpm，离心时间为5min，倒出全部上清液，留下底部尿沉渣；
(2)加入1mL尿沉渣处理液到底部尿沉渣中，摇晃直到沉渣消失，使尿细胞从尿沉渣中分离出来，得尿细胞标本；
(3)将步骤(2)所得尿细胞标本全部移至保存瓶中，室温(25℃)保存；
所述尿沉渣处理液，按重量份计，包括水60份、蛋白质2份、糖5份、盐3份、聚乙二醇5份；
所述水为去离子水；
所述蛋白质为牛血清，型号为164210-100，购买自武汉普诺赛生命科技有限公司；
所述糖为葡萄糖；
所述盐为氯化钠；
所述聚乙二醇为聚乙二醇600。
一种用于检查膀胱癌的体液细胞的制片方法，对上述提取方法提取的体液细胞进行制片，所述制片方法包括制片过程和染色过程；
所述制片过程是装载细胞过滤器、玻片，把尿细胞处理液全部倒入细胞过滤器，按液基细胞制片机的启动键开机制片；
所述染色过程为瑞士吉姆萨染色，具体步骤为：
(1)将制片过程完成的细胞片晾干，用质量分数为95％的酒精固定5分钟；
(2)用瑞氏吉姆萨的A液染3分钟，水洗；用瑞氏吉姆萨的B液染1秒钟、水洗；用瑞氏吉姆萨的C液染20秒，水洗；
(3)用质量分数为95％酒精的过30秒；
(4)用瑞氏吉姆萨的D液染20秒、水洗；
(5)用质量分数为95％酒精浸1秒钟，无水酒精浸1秒钟；
所述瑞氏吉姆萨的A液、瑞氏吉姆萨的B液、瑞氏吉姆萨的C液、瑞氏吉姆萨的D液均购买自北京绿源伯德生物科技有限公司。
实施例2
实施例2提供了一种用于检查膀胱癌的体液细胞的提取方法，所述提取方法包括：取样过程和处理过程；
所述取样过程的步骤具体包括：
(1)打开包装，取出采集杯，收集500mL尿液；
(2)将尿液沉淀10分钟，除去280mL上层清液，取200mL中层尿液倒入标本收集瓶中；
(3)拧紧尿液收集液收集瓶的盖，将底层液体摇荡至混合均匀，并做好标记，得尿液收集液；
所述尿液为首次晨尿；
所述标本收集瓶含有35mL保护细胞的尿液标本液；所述保护细胞的尿液标本液，按重量份计，包括醇80份、杀菌剂15份、防腐剂5份、去离子水20份；
所述醇为乙醇；
所述杀菌剂同实施例1；
所述防腐剂为重氮咪唑烷基脲(CAS号为78491-02-8)。
所述处理过程的步骤具体包括：
(1)将取样过程所得尿液样本离心，离心速度为2500rpm，离心时间为5min，倒出全部上清液，留下底部尿沉渣；
(2)加入70mL尿沉渣处理液到底部尿沉渣中，摇晃直到沉渣消失，使尿细胞从尿沉渣中分离出来，得尿细胞标本；
(3)将步骤(2)所得尿细胞标本全部移至保存瓶中，室温(25℃)保存；
所述尿沉渣处理液，按重量份计，包括水80份、蛋白质7份、糖30份、盐8份、聚乙二醇15份；
所述水为去离子水；
所述蛋白质同实施例1；
所述糖为葡萄糖；
所述盐为氯化钠；
所述聚乙二醇为聚乙二醇600。
所述用于检查膀胱癌的体液细胞的制片方法同实施例1。
实施例3
实施例3提供了一种用于检查膀胱癌的体液细胞的提取方法，所述提取方法包括：取样过程和处理过程；
所述取样过程的步骤具体包括：
(1)打开包装，取出采集杯，收集300mL尿液；
(2)将尿液沉淀15分钟，除去200mL上层清液，取90mL中层尿液倒入标本收集瓶中；
(3)拧紧尿液收集液收集瓶的盖，将底层液体摇荡至混合均匀，并做好标记，得尿液收集液；
所述尿液为首次晨尿；
所述标本收集瓶含有10mL保护细胞的尿液标本液；所述保护细胞的尿液标本液，按重量份计，包括醇60份、杀菌剂25份、防腐剂10份、去离子水30份；
所述醇为乙醇；
所述杀菌剂同实施例1；
所述防腐剂为重氮咪唑烷基脲(CAS号为78491-02-8)。
所述处理过程的步骤具体包括：
(1)将取样过程所得尿液样本离心，离心速度为2500rpm，离心时间为5min，倒出全部上清液，留下底部尿沉渣；
(2)加入10mL尿沉渣处理液到底部尿沉渣中，摇晃直到沉渣消失，使尿细胞从尿沉渣中分离出来，得尿细胞标本；
(3)将步骤(2)所得尿细胞标本全部移至保存瓶中，室温(25℃)保存；
所述尿沉渣处理液，按重量份计，包括水70份、蛋白质5份、糖20份、盐5份、聚乙二醇10份；
所述水为去离子水；
所述蛋白质同实施例1；
所述糖为葡萄糖；
所述盐为氯化钠；
所述聚乙二醇为聚乙二醇600。
所述用于检查膀胱癌的体液细胞的制片方法同实施例1。
实施例4
实施例4提供了一种用于检查膀胱癌的体液细胞的提取方法，所述提取方法包括：取样过程和处理过程；
所述取样过程的步骤同实施例3；
所述处理过程的步骤同实施例3，不同之处在于所述糖为2,3,4,6-四-O-苯酰-D-吡啶葡萄糖(CAS号为64768-20-3)；
所述用于检查膀胱癌的体液细胞的制片方法同实施例1。
实施例5
实施例5提供了一种用于检查膀胱癌的体液细胞的提取方法，所述提取方法包括：取样过程和处理过程；
所述取样过程的步骤同实施例3；
所述处理过程的步骤同实施例3，不同之处在于所述糖为2,3,4,6-四乙酰氧基-alpha-D-吡喃葡萄糖溴化物(CAS号为572-09-8)；
所述用于检查膀胱癌的体液细胞的制片方法同实施例1。
实施例6
实施例6提供了一种用于检查膀胱癌的体液细胞的提取方法，所述提取方法包括：取样过程和处理过程；
所述取样过程的步骤同实施例3；
所述处理过程的步骤同实施例3，不同之处在于无糖；
所述用于检查膀胱癌的体液细胞的制片方法同实施例1。
实施例7
实施例7提供了一种用于检查膀胱癌的体液细胞的提取方法，所述提取方法包括：取样过程和处理过程；
所述取样过程的步骤同实施例3，不同之处在于将保护细胞的尿液标本液替换为生理盐水；
所述处理过程的步骤同实施例4；
所述用于检查膀胱癌的体液细胞的制片方法同实施例1。
实施例8
实施例8提供了一种用于检查膀胱癌的体液细胞的提取方法，所述提取方法包括：取样过程和处理过程；
所述取样过程的步骤同实施例3；
所述处理过程的步骤同实施例4，不同之处在于加入40mL尿沉渣处理液；
所述用于检查膀胱癌的体液细胞的制片方法同实施例1。
实施例9
实施例9提供了一种用于检查膀胱癌的体液细胞的提取方法，所述提取方法包括：取样过程和处理过程；
所述取样过程的步骤同实施例3；
所述处理过程的步骤同实施例4，不同之处在于将尿沉渣处理液替换为生理盐水；
所述用于检查膀胱癌的体液细胞的制片方法同实施例1。
实施例10
实施例10提供了一种用于检查膀胱癌的体液细胞的提取方法，所述提取方法包括：取样过程和处理过程；
所述取样过程同实施例3，不同之处在于所述防腐剂为苯并三氮唑(CAS号为95-14-7)；
所述处理过程的步骤同实施例4。
所述用于检查膀胱癌的体液细胞的制片方法同实施例1。
实施例11
实施例11提供了一种用于检查膀胱癌的体液细胞的提取方法，所述提取方法包括：取样过程和处理过程；
所述取样过程同实施例3，不同之处在于无防腐剂；
所述处理过程的步骤同实施例4。
所述用于检查膀胱癌的体液细胞的制片方法同实施例1。
实施例12
实施例12提供了一种用于检查膀胱癌的体液细胞的提取方法，所述提取方法包括：取样过程和处理过程；
所述取样过程同实施例3，不同之处在于所述尿液为晚尿；所述晚尿为睡觉前的最后一次尿液；
所述处理过程的步骤同实施例4。
所述用于检查膀胱癌的体液细胞的制片方法同实施例1。
实施例13
实施例13提供了一种用于检查膀胱癌的体液细胞的提取方法，所述提取方法包括：取样过程和处理过程；
所述取样过程的步骤具体包括：
(1)打开包装，取出采集杯，收集800mL尿液；
(2)将尿液沉淀15分钟，除去200mL上层清液，取590mL中层尿液倒入标本收集瓶中；
(3)拧紧尿液收集液收集瓶的盖，将底层液体摇荡至混合均匀，并做好标记，得尿液收集液；
所述尿液为首次晨尿；
所述标本收集瓶含有10mL保护细胞的尿液标本液；所述保护细胞的尿液标本液，按重量份计，包括醇60份、杀菌剂25份、防腐剂10份、去离子水30份；
所述醇为乙醇；
所述杀菌剂同实施例1；
所述防腐剂为重氮咪唑烷基脲(CAS号为78491-02-8)。
所述处理过程的步骤同实施例4。
所述用于检查膀胱癌的体液细胞的制片方法同实施例1。
实施例14
实施例14提供了一种用于检查膀胱癌的体液细胞的提取方法，所述提取方法包括：取样过程和处理过程；
所述取样过程同实施例3，不同之处在于将尿液沉淀60分钟；
所述处理过程的步骤同实施例4。
所述用于检查膀胱癌的体液细胞的制片方法同实施例1。
实施例15
实施例15提供了一种用于检查膀胱癌的体液细胞的提取方法，所述取样过程为取300mL尿液；所述处理过程为向300mL尿液中直接加10mL尿沉渣处理液，室温(25℃)保存。
所述用于检查膀胱癌的体液细胞的制片方法同实施例1。
性能测试
选择年龄为50岁健康男性作为受试志愿者，且连续15天吃同样清淡的食物，每天清晨7：00收集尿液，连续收集15天，对实施例1-15所述膀胱癌的体液细胞的提取和制片方法的尿细胞进行测试。
1.细胞数量、保存时间：分别对实施例1-15用于检查膀胱癌的体液细胞的提取和制片方法得到的染色后尿液晾干树胶封片镜检，置于400倍显微镜(物镜放大40倍，目镜放大10倍)下观察细胞片中间同一区域、一个视野下尿细胞的个数，即为细胞数量；同时记录从收集尿液到制片完成的时间，即为保存时间。
2.尿沉渣：肉眼观察实施例1-15用于检查膀胱癌的体液细胞的提取方法所得尿沉渣是否消失。
表1性能测试结果
Figure BDA0002308770380000231
前述的实例仅是说明性的，用于解释本发明所述方法的一些特征。所附的权利要求旨在要求可以设想的尽可能广的范围，且本文所呈现的实施例仅是根据所有可能的实施例的组合的选择的实施方式的说明。因此，申请人的用意是所附的权利要求不被说明本发明的特征的示例的选择限制。在权利要求中所用的一些数值范围也包括了在其之内的子范围，这些范围中的变化也应在可能的情况下解释为被所附的权利要求覆盖。

Claims (10)

1.一种用于检查膀胱癌的体液细胞的提取方法，其特征在于，所述提取方法包括：取样过程和处理过程。
2.根据权利要求1所述提取方法，其特征在于，所述取样过程的步骤包括取10-800mL尿液，沉淀0.1-120分钟，除去0.05-670mL上层清液，取9.9-100mL中层尿液倒入标本收集瓶中，得尿液收集液。
3.根据权利要求2所述提取方法，其特征在于，所述标本收集瓶含有保护细胞的尿液标本液；所述保护细胞的尿液标本液，按重量份计，包括醇30-100份、杀菌剂1-50份、防腐剂1-30份、去离子水10-50份。
4.根据权利要求3所述提取方法，其特征在于，所述防腐剂选自咪唑烷基脲类防腐剂、咪唑啉盐酸盐、苯并三唑盐、酚类防腐剂、脱氢乙酸盐、丙酸盐、山梨酸盐及其衍生物的至少一种或混合物。
5.根据权利要求4所述提取方法，其特征在于，所述咪唑烷基脲类防腐剂选自重氮咪唑烷基脲、咪唑烷基脲、1,3-二甲羟甲基二甲基乙内酰脲中的一种或多种。
6.根据权利要求3所述提取方法，其特征在于，所述杀菌剂选自异噻唑啉酮类杀菌剂、甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂、吡咯类杀菌剂、三唑类杀菌剂、季铵盐、吡唑酰胺类杀菌剂、抗生素类杀菌剂、甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂、二硫代氨基甲酸酯类杀菌剂中的一种或多种。
7.根据权利要求2-6中任一项所述提取方法，其特征在于，所述处理过程的步骤包括将取样过程所得的尿液收集液离心去上清液，加入0.2-200mL尿沉渣处理液。
8.根据权利要求7所述提取方法，其特征在于，所述尿沉渣处理液，按重量份计，包括水50-100份、蛋白质0.01-10份、糖1-40份、盐0.5-10份、聚乙二醇0.1-20份。
9.根据权利要求1所述提取方法，其特征在于，所述取样过程为取10-800mL尿液；所述处理过程为向10-800mL尿液中直接加0.2-100mL尿沉渣处理液，保存。
10.一种用于检查膀胱癌的体液细胞的制片方法，其特征在于，对权利要求1-9中任一项所述提取方法提取的体液细胞进行制片，所述制片方法包括制片过程和染色过程。
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