CN116002987B - 一种多维载玻片及其制备方法和应用 - Google Patents
一种多维载玻片及其制备方法和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116002987B CN116002987B CN202211695609.6A CN202211695609A CN116002987B CN 116002987 B CN116002987 B CN 116002987B CN 202211695609 A CN202211695609 A CN 202211695609A CN 116002987 B CN116002987 B CN 116002987B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- glass slide
- chitosan
- slide
- glass
- polypeptide
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000011521 glass Substances 0.000 title claims abstract description 67
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 6
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 claims abstract description 35
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 25
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 24
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 22
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims abstract description 14
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims abstract description 14
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims abstract description 11
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims abstract description 11
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims abstract description 11
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 claims abstract description 8
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims abstract description 7
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims abstract description 7
- 125000003700 epoxy group Chemical group 0.000 claims abstract description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 15
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 13
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 11
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 claims description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 8
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 7
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims description 6
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 6
- IYMAXBFPHPZYIK-BQBZGAKWSA-N Arg-Gly-Asp Chemical group NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O IYMAXBFPHPZYIK-BQBZGAKWSA-N 0.000 claims description 5
- 108010072041 arginyl-glycyl-aspartic acid Proteins 0.000 claims description 5
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 5
- IWBOPFCKHIJFMS-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol bis(2-aminoethyl) ether Chemical group NCCOCCOCCN IWBOPFCKHIJFMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229910021538 borax Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 235000010339 sodium tetraborate Nutrition 0.000 claims description 3
- BSVBQGMMJUBVOD-UHFFFAOYSA-N trisodium borate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]B([O-])[O-] BSVBQGMMJUBVOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N sulfuric acid Substances OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- ROAYSRAUMPWBQX-UHFFFAOYSA-N ethanol;sulfuric acid Chemical compound CCO.OS(O)(=O)=O ROAYSRAUMPWBQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- WKEXHTMMGBYMTA-UHFFFAOYSA-N trimethyl propyl silicate Chemical compound CCCO[Si](OC)(OC)OC WKEXHTMMGBYMTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 abstract description 12
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 abstract description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 29
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 17
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 11
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 7
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 6
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 6
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 4
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 3
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 3
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- YUYCVXFAYWRXLS-UHFFFAOYSA-N trimethoxysilane Chemical compound CO[SiH](OC)OC YUYCVXFAYWRXLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000011528 liquid biopsy Methods 0.000 description 2
- 239000003761 preservation solution Substances 0.000 description 2
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 208000005443 Circulating Neoplastic Cells Diseases 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108010008488 Glycylglycine Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 150000001642 boronic acid derivatives Chemical group 0.000 description 1
- 230000006727 cell loss Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000012631 diagnostic technique Methods 0.000 description 1
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 239000003517 fume Substances 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N glycylglycine Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC([O-])=O YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 102000006240 membrane receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明公开了一种多维载玻片及其制备方法，包括如下步骤：步骤1、对载玻片表面进行环氧基团修饰；步骤2、将步骤1处理后的载玻片偶联多肽、壳聚糖、聚乙二醇衍生物，制备所述多维载玻片。本发明通过分子长链对其进行氨基修饰，通过分子短链对其进行多肽和壳聚糖的修饰，氨基增加载玻片的吸附力，壳聚糖增加载玻片的生物亲和性，多肽增加载玻片的粘附力，三者通过长短链多维作用于组织或细胞样本。
Description
技术领域
本发明涉及实验室耗材技术领域，具体涉及一种多维载玻片及其制备方法和应用。
背景技术
近年来，癌症的发病率急剧升高，以宫颈癌为例，作为妇科最常见的恶性肿瘤，全球每年大约有50万名女性被确诊为宫颈癌。随着科技的发展，诊断技术也层出不穷，“液态活检”已经逐渐具有赶超和替代传统活检的趋势。液体活检中，循环肿瘤细胞检测是重要的一个研究方向，应用于乳腺癌、前列腺癌、结直肠癌等方面。除此之外，液基细胞学检查技术是一种较准确和具有临床价值的宫颈癌筛查方法。
上述方法在检测过程中，粘附载玻片是一个不可或缺的医疗耗材，理想的粘附载玻片应尽可能多的粘附细胞且细胞不会在实验过程中被清洗掉以保证细胞的粘附量从而避免假阴性检测结果的产生。
可见载玻片的粘附力的强弱是检测结果准确性的制约因素，目前市场上的粘附载玻片有很多种，但产品的粘附性能参差不齐，部分载玻片因为粘附力弱、细胞量少而导致了实验的失败。
因此，如何提高载玻片的粘附力是目前本领域技术人员需要解决的技术问题。
发明内容
鉴于此，本发明提供一种多维载玻片及其制备方法和应用。本发明通过分子长链对其载玻片进行氨基修饰，通过分子短链对其载玻片进行多肽和壳聚糖的修饰，氨基增加载玻片的吸附力，壳聚糖增加载玻片的生物亲和性，多肽增加载玻片的粘附力，三者通过长短链多维作用于组织或细胞样本。
本发明的技术方案如下：
本发明提供一种多维载玻片的制备方法，包括如下步骤：
步骤1、对载玻片表面进行环氧基团修饰；
步骤2、将步骤1处理后的载玻片偶联多肽、壳聚糖、聚乙二醇衍生物，制备所述多维载玻片。
步骤1具体为，将载玻片在(3-缩水甘油丙氧基)三甲氧基硅烷溶液中超声浸泡0.5-10min，冲洗干净并干燥；
所述(3-缩水甘油丙氧基)三甲氧基硅烷的质量浓度为2％-3％。
步骤2包括如下步骤：
步骤21、PBS清洗载玻片；
步骤22、硼酸钠缓冲液中加入多肽、壳聚糖、聚乙二醇衍生物，将载玻片放进去孵育2-3h；然后加入0.01-0.02％w/v的牛血清蛋白；孵育48-96小时；
步骤23、加入PBS-BSA-EDTA缓冲液，孵育5-10min，取出载玻片；去离子水清洗；氮气流(0.05-0.1L/h)下干燥。
在对载玻片表面进行修饰之前，需要将载玻片进行清洗，具体为：使用95％酒精100份加入浓盐酸2份，浸泡载玻片数小时(2-8h),再用流水冲洗,让水滴流干,浸入乙醇中贮存备用。
所述多肽为精氨酰-甘氨酰-天冬氨酸；
所述壳聚糖为羧化壳聚糖；
所述聚乙二醇衍生物为Amine-PEG-amine。
所述硼酸盐缓冲液为pH为7.4-8.0、0.1M硼酸盐缓冲液。环氧基团反应在较高的pH下具有更好的反应活性，因此pH为7.6-9.5、0.1M硼酸盐缓冲液是更好的选择，同时具有较高离子强度的缓冲液有助于提高耦合效率。
所述多肽、壳聚糖、聚乙二醇氨基的质量比为：0.1-5：10-90：10-90。
一般来说，孵育温度为18-37℃，孵育时间为16-24小时。温度不稳定的偶联物可以在2-8℃下偶联，但孵育时间需要适度增加。
在偶联溶液中加入一种封闭蛋白，如0.01-0.5％的BSA，可以增加粘附方案中偶联物质的功能。封闭蛋白一般在0.5-5h后加入到偶联溶液中。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
1、本发明通过分子长链对其进行氨基修饰，通过分子短链对其进行多肽和壳聚糖的修饰，氨基增加载玻片的吸附力，壳聚糖增加载玻片的生物亲和性，多肽增加载玻片的粘附力，三者通过长短链多维作用于组织或细胞样本。
2、本发明提供的在载玻片对稀少样本(如TCT或CTC)的染色检测，可大幅减少实验过程中的样本损失，增加了临床结果的准确性。
3、本发明的硅基载玻片表面，细胞粘附物质和生物亲和物质与带正电荷的分子呈阶梯状均匀地分布在载玻片表面上。其与细胞或组织样本的作用是一个多步骤过程，包括第一步的初始吸附(细胞表面负电荷与载玻片表面氨基通过正负电荷吸附)和第二步的细胞粘附(细胞与多肽类的强结合)。带正电荷的分子可能会吸引并引起细胞初始附着到硅基载玻片表面，从而使细胞与细胞粘附物质接近，从而更牢固地结合细胞。
4、本发明中初始吸附为：可以通过非特异性机制介导例如带电官能团与细胞接触。本发明中细胞粘附为：细胞表面受体和细胞粘附蛋白之间存在特异性受体-配体相互作用。合适的细胞粘附物质包括细胞粘附蛋白，细胞粘附蛋白肽片段和合成肽类似物。细胞粘附蛋白主要是那些天然存在且非常大的蛋白质，分子量大于约100,000道尔顿。细胞粘附肽通常是衍生自或功能类似于细胞粘附蛋白的结合结构域的短氨基酸序列。用于本发明的细胞粘附肽在其氨基酸序列中具有约3至约30个氨基酸残基。
附图说明
通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本发明的其它特征、目的和优点将会变得更明显：
图1为MCF-7细胞在实施例1制备的多维载玻片和粘附载玻片的载玻片上的黏附情况图；
图2为MCF-7细胞在对比例1制备载玻片的黏附情况图；
图3为MCF-7细胞在对比例2中制备载玻片的黏附情况图；
图4为MCF-7细胞在对比例3中制备载玻片的黏附情况图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干调整和改进。这些都属于本发明的保护范围。
实施例1多维载玻片的制备
1、载玻片的清洗
涉及物质及来源：
具体方法：
取分析纯乙醇95mL，加入3ml去离子水混匀，再取2mL浓硫酸，缓慢滴加到乙醇溶液中混匀制备成清洗液，室温超声清洗载玻片5h，用去离子水冲洗至中性，让水滴流干,浸入无水乙醇中贮存备用。
本步骤主要的目的是为了清除载玻片表面的杂质，暴露载玻片表面的硅羟基，为下一步的修饰提供良好的反应基础。
2、载玻片的修饰
涉及物质及来源
具体方法：
在通风柜中，以丙酮为溶剂，配制质量浓度为2％的(3--缩水甘油丙氧基)三甲氧基硅烷将步骤1处理后的载玻片表面浸入试剂中30秒，然后用丙酮冲洗表面载玻片表面后，温和的氮气流(0.05L/h)下干燥。
3、多肽、壳聚糖、聚乙二醇氨基的偶联
涉及物质及来源
具体方法
3.1、PBS清洗载玻片3次，每次3mL；
3.2、硼酸钠缓冲液中按照:5:45：50的质量比加入多肽(精氨酰-甘氨酰-天冬氨酸)、壳聚糖(羧化壳聚糖)、聚乙二醇氨基(Amine-PEG-amine)；
3.3、将载玻片放进步骤3.2制备的溶液中孵育2h，然后加入0.01％w/v的BSA(牛血清蛋白)；
3.4、2-8℃的条件下孵育48小时；
3.5、加入1mL PBS-BSA-EDTA缓冲液，混合，孵育5min，取出载玻片弃去；去离子水重复清洗两次；
3.6、温和的氮气流(0.05L/h)下干燥。
4、效果验证
涉及物质及来源：
| 名称 | 货号 | 公司 |
| 细胞保存液 | TFB-01-50 | Cytomark |
| 液基薄层细胞制片机 | TCT4000 | 湖北泰康医疗设备有限公司 |
| 粘附载玻片 | 158105 | 世泰 |
利用培养的MCF-7细胞保存于保存液中，利用真空压片机制成细胞涂片,以商品化的粘附载玻片为对照进行实验。结果如图1所示,MCF-7细胞在多维载玻片和粘附载玻片的载玻片上的黏附数量分别为：1245±50和350±20(n＝3)。本发明制备的多维载玻片与粘附载玻片相比，具有显著性差异(P<0.05)。本发明的多维载玻片对细胞的黏附效果及均匀度均较粘附载玻片好,本发明制备的多维载玻片对于以细胞为对象的样本拥有细胞损失率低、诊断灵敏度高的优点。
实施例2
与实施例1相比，将多肽换成二甘氨酸(默克，PHR2733)，孵育时间为室温18h，其余不变，经功能性验证，发现细胞的粘附数量为1186±50，与实施例1相比，相差不大。
对比例1
本对比例与实施例1的区别在于步骤3中，仅进行多肽、壳聚糖的偶联。
涉及物质及来源：
具体步骤
1)PBS清洗载玻片3次，每次3mL。
2)缓冲液1中按照:5:95的质量比加入多肽(精氨酰-甘氨酰-天冬氨酸)、壳聚糖(羧化壳聚糖)；
3)孵育2h，然后加入0.01％w/v的BSA(牛血清蛋白)。
4)2-8℃的条件下孵育48小时。
5)1mL缓冲液2，混合，孵育5min，弃去。
6)重复清洗两次。
7)温和的氮气流(0.05L/h)下干燥。
效果验证
利用培养的MCF-7细胞进行细胞粘附实验，结果如图2所示，MCF-7细胞在载玻片的黏附数量为：445±20。
对比例2
本对比例与实施例1的区别在于步骤3中，仅进行聚乙二醇氨基、壳聚糖的偶联。
涉及物质及来源：
1)PBS清洗载玻片3次，每次3mL。
2)缓冲液1中按照:50:50的质量比加入聚乙二醇氨基(Amine-PEG-amine)、壳聚糖(羧化壳聚糖)；
3)孵育2h，然后加入0.01％w/v的BSA(牛血清蛋白)。
4)2-8℃的条件下孵育48小时。
5)1mL缓冲液2，混合，孵育5min，弃去。
6)重复清洗两次。
7)温和的氮气流(0.05L/h)下干燥。
效果验证
利用培养的MCF-7细胞进行细胞粘附实验，结果如图3所示，MCF-7细胞在载玻片的黏附数量为：900±20。
对比例3
本对比例与实施例1的区别在于步骤3中,仅进行聚乙二醇氨基、壳聚糖的偶联
1)PBS清洗载玻片3次，每次3mL。
2)缓冲液1中按照:5：95量比加入多肽(精氨酰-甘氨酰-天冬氨酸)、壳聚糖(羧化壳聚糖)。
3)孵育2h，然后加入0.01％w/v的BSA(牛血清蛋白)。
4)2-8℃的条件下孵育48小时。
5)加入1mL缓冲液2，混合，孵育5min，取出载玻片；去离子水重复清洗两次。
6)温和的氮气流(0.05L/h)下干燥。
效果验证
培养的MCF-7细胞进行细胞粘附实验，结果如图4所示，MCF-7细胞在载玻片的黏附数量为：720±20。
对比例4
本对比例与实施1的区别在于，将羧化壳聚糖替换为壳聚糖，其余不变，经功能性验证，发现发现细胞的粘附数量为780±50。
以上对本发明的具体实施例进行了描述。需要理解的是，本发明并不局限于上述特定实施方式，本领域技术人员可以在权利要求的范围内做出各种变形或修改，这并不影响本发明的实质内容。
Claims (6)
1.一种多维载玻片的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1、对载玻片表面进行环氧基团修饰；
步骤2、将步骤1处理后的载玻片偶联多肽、壳聚糖、聚乙二醇衍生物，制备所述多维载玻片；
其中，步骤2包括如下步骤：
步骤21、PBS清洗载玻片；
步骤22、硼酸钠缓冲液中加入多肽、壳聚糖、聚乙二醇衍生物，将载玻片放进去孵育2-3h；然后加入0.01-0.02%w/v的牛血清蛋白；孵育48-96小时；
步骤23、加入PBS-BSA-EDTA缓冲液，孵育5-10min，取出载玻片；去离子水清洗；氮气流0.05-0.1L/h下干燥；
所述壳聚糖为羧化壳聚糖；
所述多肽为精氨酰-甘氨酰-天冬氨酸；
所述聚乙二醇衍生物为Amine-PEG-amine。
2.根据权利要求1所述多维载玻片的制备方法，其特征在于，步骤1具体为：将载玻片在3-缩水甘油丙氧基三甲氧基硅烷溶液中超声浸泡0.5-10min，冲洗干净并干燥。
3.根据权利要求2所述多维载玻片的制备方法，其特征在于，所述3-缩水甘油丙氧基三甲氧基硅烷的质量浓度为2%-3%。
4.根据权利要求1所述多维载玻片的制备方法，其特征在于，所述多肽、壳聚糖、聚乙二醇衍生物的质量比为：0.1-5：10-90：10-90。
5.根据权利要求1所述多维载玻片的制备方法，其特征在于，步骤1中，在对载玻片表面进行环氧基团修饰前，对载玻片进行清洗，所述清洗采用浓硫酸乙醇溶液。
6.一种如权利要求1-5中任一项所述的制备方法制得的多维载玻片。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211695609.6A CN116002987B (zh) | 2022-12-28 | 2022-12-28 | 一种多维载玻片及其制备方法和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211695609.6A CN116002987B (zh) | 2022-12-28 | 2022-12-28 | 一种多维载玻片及其制备方法和应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN116002987A CN116002987A (zh) | 2023-04-25 |
| CN116002987B true CN116002987B (zh) | 2023-11-07 |
Family
ID=86029244
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202211695609.6A Active CN116002987B (zh) | 2022-12-28 | 2022-12-28 | 一种多维载玻片及其制备方法和应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN116002987B (zh) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104142262A (zh) * | 2014-07-22 | 2014-11-12 | 中国矿业大学 | 一种在载玻片表面固定dna碱基的方法 |
| CN111982620A (zh) * | 2020-08-03 | 2020-11-24 | 南通大学 | 一种高稳定性低脱片率亲水液基粘附载玻片及其制备方法 |
| CN212693399U (zh) * | 2020-07-31 | 2021-03-12 | 江苏汇达医疗器械有限公司 | 一种加强型液基粘附载玻片 |
| CN112945671A (zh) * | 2021-02-07 | 2021-06-11 | 南昌大学附属口腔医院(江西省口腔医院) | 一种粘附载玻片及其制备方法和应用 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US11674870B2 (en) * | 2019-08-19 | 2023-06-13 | Diagnostic Biosystems | Sample protection method |
-
2022
- 2022-12-28 CN CN202211695609.6A patent/CN116002987B/zh active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104142262A (zh) * | 2014-07-22 | 2014-11-12 | 中国矿业大学 | 一种在载玻片表面固定dna碱基的方法 |
| CN212693399U (zh) * | 2020-07-31 | 2021-03-12 | 江苏汇达医疗器械有限公司 | 一种加强型液基粘附载玻片 |
| CN111982620A (zh) * | 2020-08-03 | 2020-11-24 | 南通大学 | 一种高稳定性低脱片率亲水液基粘附载玻片及其制备方法 |
| CN112945671A (zh) * | 2021-02-07 | 2021-06-11 | 南昌大学附属口腔医院(江西省口腔医院) | 一种粘附载玻片及其制备方法和应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 蒋笃孝等.《东南大学学报（自然科学版）》.2000,145页2.4.2节. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN116002987A (zh) | 2023-04-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Banks et al. | The potential use of laser capture microdissection to selectively obtain distinct populations of cells for proteomic analysis—preliminary findings | |
| CN105424931B (zh) | 幽门螺杆菌尿素酶抗体IgM、IgG联合快速检测装置及其制备方法 | |
| CN104415740B (zh) | 亲水色谱填料及其制备方法与应用 | |
| CN1967196A (zh) | 简易薄层液基细胞学检查方法 | |
| CN1285918A (zh) | 在用于全血的层析装置中对聚阳离子的中和作用 | |
| CN101308141A (zh) | 一种分析糖蛋白的方法 | |
| JPS63500891A (ja) | 病理標本中のヒトの癌腫と関連する抗原の免疫検定を促進および／または加速する方法 | |
| CN104001481A (zh) | 一种用于富集糖基化肽段的亲水磁性纳米材料的制备方法 | |
| CN104820100A (zh) | 基于分子印迹技术的凝集素模拟物的制备方法与应用 | |
| CN106970224B (zh) | 一种应用cd45免疫荧光联合cep探针鉴定循环肿瘤细胞的试剂盒及其应用 | |
| CN103364494A (zh) | 一种对血清糖肽组高选择性富集的方法 | |
| CN110308286A (zh) | 一种基于光热释放信号增强型甲状腺球蛋白电致化学发光免疫传感器 | |
| CN116002987B (zh) | 一种多维载玻片及其制备方法和应用 | |
| CN112945671A (zh) | 一种粘附载玻片及其制备方法和应用 | |
| CN106970225A (zh) | 一种应用cd45免疫荧光联合cep 8探针鉴定循环肿瘤细胞的试剂盒及其应用 | |
| CN110484610B (zh) | 一种促进荧光原位杂交的组合物及杂交液，荧光原位杂交探针工作液、荧光原位杂交方法 | |
| CN113884670B (zh) | 一种免疫学检测的信号放大材料及其制备方法 | |
| CN111982620A (zh) | 一种高稳定性低脱片率亲水液基粘附载玻片及其制备方法 | |
| CN106918633B (zh) | 基于适体和金磁纳米颗粒的细胞因子TNF-α的检测方法 | |
| CN112011435B (zh) | 一种用于精准捕获循环肿瘤细胞的微流控系统及制备方法 | |
| CN109142718A (zh) | 一步法制备氨基胶体碳及其标记抗体的方法 | |
| Lin et al. | Hyphal wall chemistry in Apodachlya | |
| CN104713963A (zh) | 一种基于新型纳米复合材料的蛋白质组样品预处理方法及其应用 | |
| CN103969325B (zh) | 一种聚多巴胺修饰的maldi靶板的合成方法及其应用 | |
| CN1268659C (zh) | 用于自动切胶仪的聚丙烯酰胺凝胶的制备及其应用方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |