CN111982620A - 一种高稳定性低脱片率亲水液基粘附载玻片及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于临床医学检验技术领域，公开了一种高稳定性低脱片率亲水液基粘附载玻片及其制备方法。本发明提供的制备方法包括：配置粘附母液，取氨基化改性壳聚糖溶解于蒸馏水制得粘附母液；将表面清洗干净的载玻片浸入上述粘附母液，溶液温度控制为20～70℃，浸泡时间5～60分钟；取出浸泡过的载玻片，用蒸馏水洗去表面残余物质，40～80℃烘干，获得粘附载玻片。该制备方法处理得到的高稳定性低脱片率亲水液基粘附载玻片对液基细胞的粘附效果好，制成的细胞涂片染色效果佳，可大量应用于临床上的脱落细胞学检测。
Description
技术领域
本发明属于临床医学检验技术领域，具体涉及一种高稳定性低脱片率亲水液基粘附载玻片及其制备方法。
背景技术
液基细胞学检查技术，是将脱落细胞保存在细胞保存液中，经分离、离心去除血液、粘液和炎症组织成分后，再在载玻片上将相关脱落细胞涂布为薄薄的一层获得细胞涂片，经过染色后阅片以给出癌前筛查结果的技术。是一种简便易行、较为准确和具有实用价值的癌症(如宫颈癌)筛查方法，已经在临床上广泛应用。
载玻片作为很多细胞粘附基底中的一种，在可见光波长范围内透明，适用于液基细胞学技术中制作涂片。而细胞在未经修饰的载玻片上粘附效果极差、细胞易团聚，出现假阴性诊断结果。所以，液基细胞载玻片是液基制片的核心技术。设计对细胞具有高粘附能力的粘附载玻片具有重要意义。
目前，文献报道和商品化的粘附载玻片，是通过对玻璃基板进行修饰，引入不同的末端基团来粘附组织和细胞，但或多或少存在一些问题。如最初是在玻璃表面涂布蛋白质(鸡蛋清、明胶等)，其缺点是载玻片所获得的粘附功能很容易失去。而硅烷偶联剂(氨基硅烷等)是一种经典的交联剂，它能以共价结合的方式连接载玻片和组织细胞，但处理的载玻片在潮湿环境中难以长期稳定保存，粘附性能亦差强人意。以静电作用为代表的聚赖氨酸涂层材料是一种重要的水溶性阳离子多肽，涂布于载玻片后对细胞有较强的粘附能力，但由于粘附其上的细胞容易团聚，影响后期的读片效果。还有一些已经报道的粘附载玻片处理工艺，如中国专利CN107063812A提供了一种液基培养亲水性低脱片率粘附载玻片的制备方法，该制备方法存在对载玻片清洁要求高，使用有毒性的氢氟酸或有腐蚀性的浓硫酸等；又如中国专利CN205427301U提供了一种新型的液基粘附载玻片，使用到有机溶剂，带来一定的环保问题。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于获得一种制备工艺简单、使用方便、稳定性好、粘附极强的亲水性液基粘附载玻片，以解决上述背景技术中提出的问题。
为解决上述技术问题，本发明提供了一种高稳定性低脱片率亲水液基粘附载玻片，所述粘附载玻片表面涂有氨基化改性壳聚糖。
优选的，所述氨基化改性壳聚糖分子量为5～60万，所述氨基化改性壳聚糖中游离氨基的含量为10～30％。
本发明还提供了一种上述高稳定性低脱片率亲水液基粘附载玻片的制备方法，包括以下步骤：
A.取氨基化改性壳聚糖溶解于蒸馏水，得到粘附母液；
B.在20℃～70℃温度条件下，将表面用蒸馏水清洗干净的载玻片浸入所述粘附母液，浸泡5～60分钟后取出；
C.将步骤B处理得到的载玻片，用蒸馏水洗去表面残余物质，40～80℃烘干，获得高稳定性低脱片率亲水液基粘附载玻片。
优选的，所述粘附母液的质量浓度为0.01～5％。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
(1)本发明采用水为溶剂，不涉及任何有机溶剂，因此具有绿色环保的特点，且节约了成本；
(2)本发明中使用的粘附母液的有效成分为氨基化改性壳聚糖。壳聚糖是一种生物相容性良好的天然的大分子化合物，其本身对细胞就具有很好的粘附作用。经过氨基化改性，引入大量可带正电荷的氨基，进一步加强了它对细胞的吸附，降低了脱片率。
(3)氨基化改性壳聚糖分子中存在的大量氨基、羟基以及一定量的醚键和酰胺键等保证了其良好的亲水性，避免后继染色不均匀的发生。
(4)本发明的粘附载玻片的表面涂层结构稳定，并有一定的抑菌能力，可以常规情况下长时间保存。
本发明的亲水液基粘附载玻片对液基细胞的粘附效果好，制成的细胞涂片染色效果佳，可大量应用于临床上的脱落细胞学检测。
附图说明
图1为不同载玻片上宫颈脱落细胞的显微镜图片(40倍)，其中A为普通载玻片，B为多聚赖氨酸粘附载玻片，C为实施例1所获得的粘附载玻片。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。
实施例1
A.将分子量为5万，游离氨基的含量为10％的氨基化改性壳聚糖溶于蒸馏水中，配制成质量浓度为3％的粘附母液；
B.在55℃温度条件下，将表面用蒸馏水清洗干净的载玻片在上述粘附母液中浸泡60分钟；
C.取出浸泡过的载玻片，用蒸馏水洗去表面残余物质，80℃烘干，获得粘附载玻片。
实施例2
A.将分子量为5万，游离氨基的含量为20％的氨基化改性壳聚糖溶于蒸馏水中，配制成质量浓度为5％的粘附母液；
B.在20℃温度条件下，将表面用蒸馏水清洗干净的载玻片在上述粘附母液中浸泡40分钟；
C.取出浸泡过的载玻片，用蒸馏水洗去表面残余物质，80℃烘干，获得粘附载玻片。
实施例3
A.将分子量为30万，游离氨基的含量为20％的氨基化改性壳聚糖溶于蒸馏水中，配制成质量浓度为5％的粘附母液；
B.在70℃温度条件下，将表面用蒸馏水清洗干净的载玻片在上述粘附母液中浸泡5分钟；
C.取出浸泡过的载玻片，用蒸馏水洗去表面残余物质，40℃烘干，获得粘附载玻片。
实施例4
A.将分子量为30万，游离氨基的含量为30％的氨基化改性壳聚糖溶于蒸馏水中，配制成质量浓度为0.01％的粘附母液；
B.在55℃温度条件下，将表面用蒸馏水清洗干净的载玻片在上述粘附母液中浸泡60分钟；
C.取出浸泡过的载玻片，用蒸馏水洗去表面残余物质，40℃烘干，获得粘附载玻片。
实施例5
A.将分子量为60万，游离氨基的含量为10％的氨基化改性壳聚糖溶于蒸馏水中，配制成质量浓度为3％的粘附母液；
B.在70℃温度条件下，将表面用蒸馏水清洗干净的载玻片在上述粘附母液中浸泡5分钟；
C.取出浸泡过的载玻片，用蒸馏水洗去表面残余物质，60℃烘干，获得粘附载玻片。
实施例6
A.将分子量为60万，游离氨基的含量为20％的氨基化改性壳聚糖溶于蒸馏水中，配制成质量浓度为0.01％的粘附母液；
B.在55℃温度条件下，将表面用蒸馏水清洗干净的载玻片在上述粘附母液中浸泡5分钟；
C.取出浸泡过的载玻片，用蒸馏水洗去表面残余物质，80℃烘干，获得粘附载玻片。
采用上述方法获得的粘附载玻片，经老化试验测试，其稳定性可达24个月(目前商品化的粘附载玻片有效期为12个月)。
相同条件下，普通载玻片、多聚赖氨酸粘附载玻片和本发明的粘附载玻片进行宫颈脱落细胞粘附数量统计，结果见表1：
表1不同载玻片对宫颈脱落细胞粘附数量
由表1可知，本发明实施例1～6制备得到的粘附载玻片上粘附的脱落细胞的数量远远多于普通载玻片和多聚赖氨酸粘附载玻片。图1为不同载玻片上宫颈脱落细胞的显微镜图片(40倍)，其中A为普通载玻片，B为多聚赖氨酸粘附载玻片，C为实施例1所获得的粘附载玻片。根据图1可知，本发明实施例提供的粘附载玻片可直接捕获细胞，未见细胞堆积现象。
综上，本发明提供的高稳定性低脱片率亲水液基粘附载玻片在实际使用中具有稳定性好，粘附性强，无需预处理的特点，且制成的细胞涂片染色效果好，细胞形态清晰，利于准确诊断。
显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
Claims (4)
1.一种高稳定性低脱片率亲水液基粘附载玻片，其特征在于，所述粘附载玻片表面涂有氨基化改性壳聚糖。
2.根据权利要求1所述的高稳定性低脱片率亲水液基粘附载玻片，其特征在于，所述氨基化改性壳聚糖分子量为5～60万，所述氨基化改性壳聚糖中游离氨基的含量为10～30％。
3.一种权利要求1或2所述的高稳定性低脱片率亲水液基粘附载玻片的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
A.取氨基化改性壳聚糖溶解于蒸馏水，得到粘附母液；
B.在20℃～70℃温度条件下，将表面用蒸馏水清洗干净的载玻片浸入所述粘附母液，浸泡5～60分钟后取出；
C.将步骤B处理得到的载玻片，用蒸馏水洗去表面残余物质，40～80℃烘干，获得高稳定性低脱片率亲水液基粘附载玻片。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述粘附母液的质量浓度为0.01～5％。
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