CN107063812A - 一种液基培养亲水性低脱片率粘附载玻片的制备方法 - Google Patents
一种液基培养亲水性低脱片率粘附载玻片的制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种液基培养亲水性低脱片率粘附载玻片的制备方法，包括如下步骤：1)将载玻片浸泡于清洁液溶液中，浸泡5‑15分钟；用去离子水检测其亲水性，若亲水，则表面洁净，继续后续操作；2)将上述表面洁净的载玻片在20℃—80℃下，浸泡在富含酰胺键与醚键的粘附母液溶液中，浸泡20‑30分钟；3)将上述载玻片取出，去离子水清洗，取出烘干，得到亲水性低脱片率粘附载玻片。本发明中的载玻片表面具有亲水基团酰胺键，与生物大分子相容性好；同时具有醚键，粘附性强，克服了具普通粘附载玻片在检测时经常出现的染色不均匀及细胞脱片的缺点，尤其适合宫颈脱落细胞、胸腹水脱落细胞及痰液脱落细胞等细胞的检测。
Description
技术领域
本发明属于载玻片领域，具体涉及一种液基培养亲水性低脱片率粘附载玻片的制备方法。
背景技术
液基薄层细胞检测技术自上世纪从欧美引入我国，现在已广泛应用于肿瘤预防检查和筛查的医学检测。而液基培养专用载玻片是液基制片的核心技术，制片染色好不好直接与载玻片的粘附性有关，也是制约液基细胞技术的关健所在。如果载玻片质量不过关，则导致细胞量少且染色效果不好，细胞分布不均，甚至无细胞的白片。
为使染色效果显著、细胞分布均匀并紧密与玻片表面结合，必须先对普通载玻片表面进行清洁处理，后进行物理化学修饰。目前载玻片表面清洁方法主要有以下几种：硫酸清洗法(包括浓硫酸-乙醇法和浓硫酸-双氧水法)、重铬酸钾清洗法，这些方法都可达到使载玻片表面清洁的效果。载玻片表面化学修饰方法包括羧基化、氨基硅烷化、炔基化、醛基化、环氧基化等。
目前，国内的普通粘附载玻片部分为疏水性粘附载玻片，这种疏水性粘附载玻片在仪器上使用时经常会出现染色不均匀的缺点。而部分的亲水粘附载玻片也并非液基培养专用载玻片，在液基薄层细胞检测仪器中检测时也存在脱片率高及染色不均匀的缺点。因此，解决普通粘附载玻片在液基薄层细胞检测时的缺陷，具有重要意义。
中国专利【CN 104805590 A】公开了一种羧基修饰的基因芯片基片及其制备方法，以普通玻璃为载体，先后进行甲醇-盐酸溶液和硫酸清洗，通过硅烷化试剂进行硅烷化修饰，后进行羧基修饰。本发明先后选用甲醇-盐酸溶液、硫酸进行表面清洗，存在以下问题：甲醇易挥发，有毒性，若操作人员不慎吸入或接触到皮肤，有害健康；后用浓硫酸清洗，硫酸具有腐蚀性，安全性低。
中国专利【CN 106345544 A】公开了一种微阵列用氨基修饰基片及制备方法。该制备方法主要通过浓硫酸与双氧水的混合溶液浸泡玻璃基片，后在其表面进行氨基硅烷化处理，在获得表面富含氨基的玻璃基片的基础上进行多聚赖氨酸涂层，最终获得活性氨基修饰的玻璃基片。本发明将玻璃基片在浓硫酸双氧水混合液中浸泡13～18h,耗时过长，且配置混合液时，双氧水与浓硫酸反应，剧烈放热甚至会出现爆沸现象，安全性过低。氨基硅烷化处理时玻璃表面的羟基与氨基硅烷脱醇缩合后氨基化，用长疏水链的脂肪酸和氨基反应，最终在玻璃表面形成带有疏水链的一层膜，基片最终呈疏水性，在细胞检测时容易出现脱片现象。
中国专利【CN 101831504 A】公开了一种炔基修饰的基因芯片及制备方法。该制备方法主要先用玻璃、硅片、金、银、铁、锌、铜、壳聚糖、葡聚糖、聚乙烯醇、纤维素、聚丙烯酰胺、聚碳酸酯、聚苯乙烯、聚乳酸制备好基因芯片，再通过分子自组装技术将三乙氧基硅炔组装在羟基化或氨基化的基因基片载体表面，形成一层末端为叁键的单分子自组装膜，从而获得炔基修饰的基因基片。本发明将玻璃基片通过分子的自组装技术进行处理时，存在以下问题，未预先处理玻璃基片表面并不能形成易岑末端为叁键的单分子组装膜，且若先预先处理玻璃基片则存在着成本过高，不利于液基薄层细胞检测的大范围应用，并且操作难度高，对操作人员的操作要求极高。
中国专利【CN 105220237 A】公开了一种微列阵用活性醛基修饰基片及其制备方法，该制备方法主要通过用浓硫酸与纯化水清洗，然后用多聚赖氨酸包被，最后使用戊二醛引入活性醛基基团，从而得到活性醛基修饰基片。该发明制备方法简单，成本低，但是因为多聚赖氨酸包被工艺本身存在的问题，要控制环境的无菌无尘，并且多聚赖氨酸的存储温度要求比较高，所以这种氨基修饰的玻片存在着固定量低同时灵敏度不高的问题。
发明内容
发明目的：本发明的目的在于克服普通粘附载玻片在液基薄层细胞检测时经常出现染色不均匀以及细胞脱片的缺点，提供一种液基培养亲水性低脱片率粘附载玻片的制备方法。
技术方案：一种液基培养亲水性低脱片率粘附载玻片的制备方法，包括如下步骤：
1)将载玻片浸泡于一定质量分数的清洁液溶液中，浸泡5-15分钟；用去离子水检测其亲水性，若亲水，则表面洁净，继续后续操作；
2)将上述表面洁净的载玻片在20℃—80℃下，浸泡在质量分数为0.4‰—4％的粘附母液溶液中，浸泡20-30分钟；其中粘附母液有效成分为质量分数为0.1％-2％的聚酰胺类及0.2％-1％的醚类物质；
3)将上述载玻片取出，去离子水清洗，烘干，得到亲水性低脱片率粘附载玻片。
作为优选方案：所述载玻片为超白玻璃材质，单面单头彩色涂装，大小为76*26，厚度1—1.2mm。
作为优选方案：所述超白玻璃的主要组成为Na20、CaO、SiO2、Al2O3、Mg0、K2O、Fe2O3等中的一种或几种，其中Fe2O3的含量小于5‰。
作为优选方案：清洁液为清洁液溶液、盐酸、硫酸溶液中的一种或多种组合，清洁液质量分数为5％-30％。
作为优选方案：所述聚酰胺类物质为聚酰胺醚、聚酰胺钠、聚酰胺钾中的一种或多种组合。
作为优选方案：所述醚类物质为聚醚多元醇、卤化醚、聚酰胺醚中的一种或多种组合。
作为优选方案：所述的粘附母液溶液温度为40℃-50℃。
作为优选方案：所述的粘附母液溶液的质量分数为0.4‰-4‰。
作为优选方案：所述的烘干温度为40-70℃。
作为优选方案：粘附母液有效成分聚酰胺类物质与醚类物质的一种或多种组合由于酰胺键与醚键，本身具有吸附作用，经清洁的载玻片在粘附母液后，与生物大分子相容性好的酰胺键及粘附作用强的醚键直接吸附在玻片表面。
有益效果：本发明中的液基培养亲水性低脱片率粘附载玻片进行表面处理时，使用的粘附母液的有效成分为聚酰胺醚、聚酰胺钠、聚酰胺钾中的一种或多种聚酰胺类物质的组合以及聚醚多元醇、卤化醚、聚酰胺醚中的一种或多种组合。聚酰胺类物质均含酰胺键，酰胺键为一种带负电性的官能团，与生物大分子相容性好；醚类物质均含醚键，醚键为极性基团，有助于粘附作用。因而使用聚酰胺类物质处理载玻片表面可以使载玻片具有较好的亲水性与粘附性，克服了普通粘附载玻片在液基薄层细胞检测时经常出现的染色不均匀及细胞脱片的缺点。
同时，相对于其他细胞检测方法，液基薄层细胞检测从根本上解决了常规脱落细胞制片假阴性率高、丢失细胞率高(其他检测方法丢失率约为80％)和涂片质量差等技术难题，使宫颈癌的阳性检出率达95％以上，使胸腹水脱落细胞的阳性诊断准确率比传统细胞检测高了近2倍，因此尤其适合宫颈脱落细胞、胸腹水脱落细胞及痰液脱落细胞的检测。而这些技术难题的解决很大程度上依赖于载玻片较好的亲水性与粘附性，本发明所展示的亲水性粘附载玻片为脱落细胞学诊断作出了重大贡献。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细阐述。
具体实施例一：
一种液基培养亲水性低脱片率粘附载玻片的制备方法，包括如下步骤：
1)将载玻片浸泡于质量分数浓度为10％的清洁液溶液中，浸泡5分钟，其中清洗液为氢氟酸、盐酸、硫酸中一种或几种；用去离子水检测其亲水性，若亲水，则表面洁净，继续后续操作；所述载玻片为超白玻璃材质，单面单头彩色涂装，大小为76*26，厚度1mm。所述超白玻璃的主要组成为Na20、CaO、SiO2、Al2O3、Mg0、K2O、Fe2O3等中的一种或几种，其中Fe2O3的含量小于5‰。
2)将上述表面洁净的载玻片在20℃下，浸泡在质量分数为0.4‰的粘附母液溶液中，浸泡20分钟；其中，粘附母液有效成分为质量分数为0.6％的聚酰胺类物质以质量分数为0.4％的醚类物质；所述聚酰胺类物质为聚酰胺醚、聚酰胺钠、聚酰胺钾、聚酰胺中的一种或多种组合，所述醚类物质为聚醚多元醇、卤化醚、聚酰胺醚中的一种或多种组合。
3)将上述载玻片取出，去离子水清洗，在40℃下取出烘干，得到亲水性低脱片率粘附载玻片。
具体实施例二：
一种液基培养亲水性低脱片率粘附载玻片的制备方法，包括如下步骤：
1)将载玻片浸泡于质量分数浓度为15％的清洁液溶液中，浸泡5分钟，其中清洗液为氢氟酸、盐酸、硫酸中一种或几种；用去离子水检测其亲水性，若亲水，则表面洁净，继续后续操作；所述载玻片为超白玻璃材质，单面单头彩色涂装，大小为76*26，厚度1mm。所述超白玻璃的主要组成为Na20、CaO、SiO2、Al2O3、Mg0、K2O、Fe2O3等中的一种或几种，其中Fe2O3的含量小于5‰。
2)将上述表面洁净的载玻片在20℃下，浸泡在质量分数为0.4‰的粘附母液溶液中，浸泡20分钟；其中，粘附母液有效成分为质量分数为0.6％的聚酰胺类物质以质量分数为0.4％的醚类物质；所述聚酰胺类物质为聚酰胺醚、聚酰胺钠、聚酰胺钾、聚酰胺中的一种或多种组合，所述醚类物质为聚醚多元醇、卤化醚、聚酰胺醚中的一种或多种组合。
3)将上述载玻片取出，去离子水清洗，在40℃下取出烘干，得到亲水性低脱片率粘附载玻片。
具体实施例三：
一种液基培养亲水性低脱片率粘附载玻片的制备方法，包括如下步骤：
1)将载玻片浸泡于质量分数浓度为20％的清洁液溶液中，浸泡5分钟，其中清洗液为氢氟酸、盐酸、硫酸中一种或几种；用去离子水检测其亲水性，若亲水，则表面洁净，继续后续操作；所述载玻片为超白玻璃材质，单面单头彩色涂装，大小为76*26，厚度1mm。所述超白玻璃的主要组成为Na20、CaO、SiO2、Al2O3、Mg0、K2O、Fe2O3等中的一种或几种，其中Fe2O3的含量小于5‰。
2)将上述表面洁净的载玻片在20℃下，浸泡在质量分数为0.4‰的粘附母液溶液中，浸泡20分钟；其中，粘附母液有效成分为质量分数为0.6％的聚酰胺类物质以质量分数为0.4％的醚类物质；所述聚酰胺类物质为聚酰胺醚、聚酰胺钠、聚酰胺钾、聚酰胺中的一种或多种组合，所述醚类物质为聚醚多元醇、卤化醚、聚酰胺醚中的一种或多种组合。
3)将上述载玻片取出，去离子水清洗，在40℃下取出烘干，得到亲水性低脱片率粘附载玻片。
具体实施例四：
一种液基培养亲水性低脱片率粘附载玻片的制备方法，包括如下步骤：
1)将载玻片浸泡于质量分数浓度为15％的清洁液溶液中，浸泡10分钟，其中清洗液为氢氟酸、盐酸、硫酸中一种或几种；用去离子水检测其亲水性，若亲水，则表面洁净，继续后续操作；所述载玻片为超白玻璃材质，单面单头彩色涂装，大小为76*26，厚度1mm。所述超白玻璃的主要组成为Na20、CaO、SiO2、Al2O3、Mg0、K2O、Fe2O3等中的一种或几种，其中Fe2O3的含量小于5‰。
2)将上述表面洁净的载玻片在20℃下，浸泡在质量分数为0.4‰的粘附母液溶液中，浸泡20分钟；其中，粘附母液有效成分为质量分数为0.6％的聚酰胺类物质以质量分数为0.4％的醚类物质；所述聚酰胺类物质为聚酰胺醚、聚酰胺钠、聚酰胺钾、聚酰胺中的一种或多种组合，所述醚类物质为聚醚多元醇、卤化醚、聚酰胺醚中的一种或多种组合。
3)将上述载玻片取出，去离子水清洗，在40℃下取出烘干，得到亲水性低脱片率粘附载玻片。
具体实施例五：
一种液基培养亲水性低脱片率粘附载玻片的制备方法，包括如下步骤：
1)将载玻片浸泡于质量分数浓度为15％的清洁液溶液中，浸泡15分钟，其中清洗液为氢氟酸、盐酸、硫酸中一种或几种；用去离子水检测其亲水性，若亲水，则表面洁净，继续后续操作；所述载玻片为超白玻璃材质，单面单头彩色涂装，大小为76*26，厚度1mm。所述超白玻璃的主要组成为Na20、CaO、SiO2、Al2O3、Mg0、K2O、Fe2O3等中的一种或几种，其中Fe2O3的含量小于5‰。
2)将上述表面洁净的载玻片在20℃下，浸泡在质量分数为0.4‰的粘附母液溶液中，浸泡20分钟；其中，粘附母液有效成分为质量分数为0.6％的聚酰胺类物质以质量分数为0.4％的醚类物质；所述聚酰胺类物质为聚酰胺醚、聚酰胺钠、聚酰胺钾、聚酰胺中的一种或多种组合，所述醚类物质为聚醚多元醇、卤化醚、聚酰胺醚中的一种或多种组合。
3)将上述载玻片取出，去离子水清洗，在40℃下取出烘干，得到亲水性低脱片率粘附载玻片。
具体实施例六：
一种液基培养亲水性低脱片率粘附载玻片的制备方法，包括如下步骤：
1)将载玻片浸泡于质量分数浓度为15％的清洁液溶液中，浸泡10分钟，其中清洗液为氢氟酸、盐酸、硫酸中一种或几种；用去离子水检测其亲水性，若亲水，则表面洁净，继续后续操作；所述载玻片为超白玻璃材质，单面单头彩色涂装，大小为76*26，厚度1mm。所述超白玻璃的主要组成为Na20、CaO、SiO2、Al2O3、Mg0、K2O、Fe2O3等中的一种或几种，其中Fe2O3的含量小于5‰。
2)将上述表面洁净的载玻片在20℃下，浸泡在质量分数为2‰的粘附母液溶液中，浸泡20分钟；其中，粘附母液有效成分为质量分数为0.6％的聚酰胺类物质以质量分数为0.4％的醚类物质；所述聚酰胺类物质为聚酰胺醚、聚酰胺钠、聚酰胺钾、聚酰胺中的一种或多种组合，所述醚类物质为聚醚多元醇、卤化醚、聚酰胺醚中的一种或多种组合。
3)将上述载玻片取出，去离子水清洗，在40℃下取出烘干，得到亲水性低脱片率粘附载玻片。
具体实施例七：
一种液基培养亲水性低脱片率粘附载玻片的制备方法，包括如下步骤：
1)将载玻片浸泡于质量分数浓度为15％的清洁液溶液中，浸泡10分钟，其中清洗液为氢氟酸、盐酸、硫酸中一种或几种；用去离子水检测其亲水性，若亲水，则表面洁净，继续后续操作；所述载玻片为超白玻璃材质，单面单头彩色涂装，大小为76*26，厚度1mm。所述超白玻璃的主要组成为Na20、CaO、SiO2、Al2O3、Mg0、K2O、Fe2O3等中的一种或几种，其中Fe2O3的含量小于5‰。
2)将上述表面洁净的载玻片在20℃下，浸泡在质量分数为4‰的粘附母液溶液中，浸泡20分钟；其中，粘附母液有效成分为质量分数为0.6％的聚酰胺类物质以质量分数为0.4％的醚类物质；所述聚酰胺类物质为聚酰胺醚、聚酰胺钠、聚酰胺钾、聚酰胺中的一种或多种组合，所述醚类物质为聚醚多元醇、卤化醚、聚酰胺醚中的一种或多种组合。
3)将上述载玻片取出，去离子水清洗，在40℃下取出烘干，得到亲水性低脱片率粘附载玻片。
具体实施例八：
一种液基培养亲水性低脱片率粘附载玻片的制备方法，包括如下步骤：
1)将载玻片浸泡于质量分数浓度为15％的清洁液溶液中，浸泡10分钟，其中清洗液为氢氟酸、盐酸、硫酸中一种或几种；用去离子水检测其亲水性，若亲水，则表面洁净，继续后续操作；所述载玻片为超白玻璃材质，单面单头彩色涂装，大小为76*26，厚度1mm。所述超白玻璃的主要组成为Na20、CaO、SiO2、Al2O3、Mg0、K2O、Fe2O3等中的一种或几种，其中Fe2O3的含量小于5‰。
2)将上述表面洁净的载玻片在20℃下，浸泡在质量分数为4‰的粘附母液溶液中，浸泡20分钟；其中，粘附母液有效成分为质量分数为0.6％的聚酰胺类物质以质量分数为0.4％的醚类物质；所述聚酰胺类物质为聚酰胺醚、聚酰胺钠、聚酰胺钾、聚酰胺中的一种或多种组合，所述醚类物质为聚醚多元醇、卤化醚、聚酰胺醚中的一种或多种组合。
3)将上述载玻片取出，去离子水清洗，在55℃下取出烘干，得到亲水性低脱片率粘附载玻片。
具体实施例九：
一种液基培养亲水性低脱片率粘附载玻片的制备方法，包括如下步骤：
1)将载玻片浸泡于质量分数浓度为15％的清洁液溶液中，浸泡10分钟，其中清洗液为氢氟酸、盐酸、硫酸中一种或几种；用去离子水检测其亲水性，若亲水，则表面洁净，继续后续操作；所述载玻片为超白玻璃材质，单面单头彩色涂装，大小为76*26，厚度1mm。所述超白玻璃的主要组成为Na20、CaO、SiO2、Al2O3、Mg0、K2O、Fe2O3等中的一种或几种，其中Fe2O3的含量小于5‰。
2)将上述表面洁净的载玻片在20℃下，浸泡在质量分数为4‰的粘附母液溶液中，浸泡20分钟；其中，粘附母液有效成分为质量分数为0.6％的聚酰胺类物质以质量分数为0.4％的醚类物质；所述聚酰胺类物质为聚酰胺醚、聚酰胺钠、聚酰胺钾、聚酰胺中的一种或多种组合，所述醚类物质为聚醚多元醇、卤化醚、聚酰胺醚中的一种或多种组合。
3)将上述载玻片取出，去离子水清洗，在70℃下取出烘干，得到亲水性低脱片率粘附载玻片。
本发明中粘附母液有效成分聚酰胺类物质与醚类物质的一种或多种组合，由于酰胺键与醚键，本身具有吸附作用，经清洁的载玻片在粘附母液后，酰胺键及醚键直接通过物理吸附作用吸附在玻片表面。因而，载玻片表面具有亲水基团酰胺键，与生物大分子相容性好；同时具有醚键，粘附性强，克服了具普通粘附载玻片在检测时经常出现的染色不均匀及细胞脱片的缺点，尤其适合宫颈脱落细胞、胸腹水脱落细胞及痰液脱落细胞等细胞的检测。
本发明不局限于上述最佳实施方式，任何人在本发明的启示下都可得出其他各种形式的产品，但不论在其形状或结构上作任何变化，凡是具有与本申请相同或相近似的技术方案，均落在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种液基培养亲水性低脱片率粘附载玻片的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
1)将载玻片浸泡于一定质量分数的清洁液溶液中，浸泡5-15分钟；用去离子水检测其亲水性，若亲水，则表面洁净，继续后续操作；
2)将上述表面洁净的载玻片在20℃—80℃下，浸泡在质量分数为0.4‰—4％的粘附母液溶液中，浸泡20-30分钟；其中粘附母液有效成分为质量分数为0.1％-2％的聚酰胺类及0.2％-1％的醚类物质；
3)将上述载玻片取出，去离子水清洗，烘干，得到亲水性低脱片率粘附载玻片。
2.根据权利要求1所述的液基培养亲水性低脱片率粘附载玻片的制备方法，其特征在于：所述载玻片为超白玻璃材质，单面单头彩色涂装，大小为76*26，厚度1—1.2mm。
3.根据权利要求2所述的液基培养亲水性低脱片率粘附载玻片的制备方法，其特征在于：所述超白玻璃的主要组成为Na20、CaO、SiO2、Al2O3、Mg0、K2O、Fe2O3等中的一种或几种，其中Fe2O3的含量小于5‰。
4.根据权利要求1所述的液基培养亲水性低脱片率粘附载玻片的制备方法，其特征在于：清洁液为清洁液溶液、盐酸、硫酸溶液中的一种或多种组合，清洁液质量分数为5％-30％。
5.根据权利要求1所述的液基培养亲水性低脱片率粘附载玻片的制备方法，其特征在于：所述聚酰胺类物质为聚酰胺醚、聚酰胺钠、聚酰胺钾中的一种或多种组合。
6.根据权利要求1所述的液基培养亲水性低脱片率粘附载玻片的制备方法，其特征在于：所述醚类物质为聚醚多元醇、卤化醚、聚酰胺醚中的一种或多种组合。
7.根据权利要求1所述的液基培养亲水性低脱片率粘附载玻片的制备方法，其特征在于：所述的粘附母液溶液温度为40℃-50℃。
8.根据权利要求1所述的液基培养亲水性低脱片率粘附载玻片的制备方法，其特征在于：所述的粘附母液溶液的质量分数为0.4‰-4‰。
9.根据权利要求1所述的液基培养亲水性低脱片率粘附载玻片的制备方法，其特征在于：所述的烘干温度为40-70℃。
10.根据权利要求1-9任一项所述的液基培养亲水性低脱片率粘附载玻片的制备方法，其特征在于：粘附母液有效成分聚酰胺类物质与醚类物质的一种或多种组合由于酰胺键与醚键，本身具有吸附作用，经清洁的载玻片在粘附母液后，与生物大分子相容性好的酰胺键及粘附作用强的醚键直接吸附在玻片表面。
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Application publication date: 20170818 |