CN116609934A - 一种粘附液基细胞用载玻片及其制备工艺 - Google Patents

Abstract

本发明涉及生物技术领域，提出了一种粘附液基细胞用载玻片及其制备工艺。所述一种粘附液基细胞用载玻片，包括载玻片本体和粘附层，所述粘附层的原料包括以下质量份的组分：无机盐30～80份、氢氧化钠5～15份、环氧乙烷环氧丙烷共聚物20～40份、氨基环丙烷羧酸10～20份、粘结剂5～12份、表面活性剂0～3份、络合剂0～7份、消泡剂0～2份、水800～1000份；所述一种粘附液基细胞用载玻片的制备工艺，包括以下步骤：S1、将所述质量份数的组分混合均匀，得到粘附剂；S2、将载玻片浸泡在所述粘附剂中，浸泡完成后，干燥，得到粘附液基细胞用载玻片。通过上述技术方案，解决了现有技术中的粘附载玻片存在成本高、粘附效果差、脱片率高的问题。

Description

一种粘附液基细胞用载玻片及其制备工艺

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体的，涉及一种粘附液基细胞用载玻片及其制备工艺。

背景技术

液基细胞粘附载玻片是一种新型的液基粘附载玻片，包括载玻片、基础涂布层、第二层涂布层、第三层涂布层、面层涂布层，自上而下依次包裹。

目前制作细胞粘附载玻片的方法主要有以下几种：

(1)Vectabond试剂粘附法，其缺点是成本高、配置复杂、粘附效果差；

(2)APES硅化法，其特点是调配简单、现配现用，但存在粘附效果不佳，滑片、脱片的现象；

(3)胶原蛋白涂片法，其缺点是价格贵、成本高、难批量，且有效期短，背景作色、干扰源作色、细胞重叠；

(4)鸡清涂片法，其特点是简洁，适合小量的且不通过抗原修正处置的免疫组化试验，其缺点是涂改好的片子不易保留，经抗原修正处置后轻易掉片，背景容易作色；

(5)铬矾明胶法，成本低，现配现用，但存在效期短，脱片率高，配置复杂，背景容易作色的缺点；

(6)多聚赖氨酸法浸泡法，背景不易作色，现配现用，但其成本高、效期短、脱片率高。

综上，市场上常规的粘附载玻片存在成本高、粘附效果差、脱片率高的问题。

发明内容

本发明提出一种粘附液基细胞用载玻片及其制备工艺，解决了相关技术中的粘附载玻片存在成本高、粘附效果差、脱片率高的问题。

本发明的技术方案如下：

一种粘附液基细胞用载玻片，包括载玻片本体和粘附层，所述粘附层的原料包括以下质量份的组分：无机盐30～80份、氢氧化钠5～15份、环氧乙烷环氧丙烷共聚物20～40份、氨基环丙烷羧酸10～20份、粘结剂5～12份、表面活性剂0～3份、络合剂0～7份、消泡剂0～2份、水800～1000份。

作为进一步的技术方案，所述无机盐包括偏硅酸钠和碳酸钠。

作为进一步的技术方案，所述偏硅酸钠和碳酸钠的质量比为20～50:10～30。

作为进一步的技术方案，所述偏硅酸钠和碳酸钠的质量比为35:20。

作为进一步的技术方案，所述环氧乙烷环氧丙烷共聚物和氨基环丙烷羧酸的质量比为25～35:10～20。

作为进一步的技术方案，所述环氧乙烷环氧丙烷共聚物和氨基环丙烷羧酸的质量比为2:1。

作为进一步的技术方案，所述粘结剂包括羟甲基纤维素、羟乙基纤维素中的一种或几种。

作为进一步的技术方案，所述表面活性剂为季铵盐型表面活性剂。

作为进一步的技术方案，所述季铵盐型表面活性剂包括十六烷基三甲基溴化铵、十四烷基三甲基溴化铵中的一种或几种。

作为进一步的技术方案，所述络合剂为柠檬酸钠，所述消泡剂为有机硅消泡剂。

本发明还提出了一种粘附液基细胞用载玻片的制备工艺，包括以下步骤：

S1、将所述质量份的组分混合均匀，得到粘附剂；

S2、将载玻片浸泡在所述粘附剂中，浸泡完成后，干燥，得到粘附液基细胞用载玻片。

作为进一步的技术方案，所述浸泡时间≥15min。

作为进一步的技术方案，所述载玻片经立白洗洁精的水溶液洗涤后，经水冲洗，烘干得到。

作为进一步的技术方案，所述立白洗洁精的水溶液的体积分数为0.4％。

作为进一步的技术方案，所述洗涤采用超声。

作为进一步的技术方案，所述超声功率为300W，温度为40℃，时间为30min。

作为进一步的技术方案，所述烘干温度为80℃

作为进一步的技术方案，所述浸泡完成后取出静置10min。

作为进一步的技术方案，所述干燥温度为70℃。

本发明的工作原理及有益效果为：

本发明提供了一种粘附液基细胞用载玻片，其成本低，且细胞粘附功能超过现有的各种粘附载波片，有超强吸附各种细胞类型和生物组织的粘附和贴壁功能，无细胞毒性，适用于病理组织片、冰冻组织片、各种液基细胞样本，可快速、牢固的吸附组织和细胞。无需干燥，在湿润的条件下，即可耐受固定、染色、脱水、洗涤等处理造成的样本脱落，也适用于处理易飘浮细胞，不仅显著增加吸附细胞数量，还使细胞容易耐受洗涤、换液、药物处理造成的脱落。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都涉及本发明保护的范围。

以下实施例及对比例中环氧乙烷环氧丙烷共聚物的CAS号：9003-11-6，购自河北克拉维尔生物科技有限公司。

实施例1

S1、清洗载玻片：向超声波清洗仪中加入自来水，并加入自来水体积的0.4％的立白洗洁精混匀后，放入载玻片，在300W、40℃下超声清洗30min，取出载玻片用自来水冲洗掉洗洁精后，用蒸馏水冲洗两次，将表面水分甩掉后，在80℃下烘干，备用；

S2、制备粘附剂：将偏硅酸钠35份、碳酸钠20份、氢氧化钠10份、环氧乙烷环氧丙烷共聚物30份、氨基环丙烷羧酸15份、羟甲基纤维素8份、十六烷基三甲基溴化铵2份、柠檬酸钠5份、有机硅消泡剂1份、水900份混合均匀后，得到粘附剂；

S3、制备粘附液基细胞用载玻片：将粘附剂转移至浸泡缸中，放入清洗后的载玻片，上下拌动，浸泡20min后，取出，甩动，置于干净的盘中，放置10min后，继续甩动至底部载玻片不存在粘连的情况，置于70℃恒温干燥箱中干燥，得到粘附液基细胞用载玻片。

实施例2

S1、清洗载玻片：向超声波清洗仪中加入自来水，并加入自来水体积的0.4％的立白洗洁精混匀后，放入载玻片，在300W、40℃下超声清洗30min，取出载玻片用自来水冲洗掉洗洁精后，用蒸馏水冲洗两次，将表面水分甩掉后，在80℃下烘干，备用；

S2、制备粘附剂：将偏硅酸钠35份、碳酸钠20份、氢氧化钠10份、环氧乙烷环氧丙烷共聚物25份、氨基环丙烷羧酸20份、羟甲基纤维素8份、十六烷基三甲基溴化铵2份、柠檬酸钠5份、有机硅消泡剂1份、水900份混合均匀后，得到粘附剂；

S3、制备粘附液基细胞用载玻片：将粘附剂转移至浸泡缸中，放入清洗后的载玻片，上下拌动，浸泡20min后，取出，甩动，置于干净的盘中，放置10min后，继续甩动至底部载玻片不存在粘连的情况，置于70℃恒温干燥箱中干燥，得到粘附液基细胞用载玻片。

实施例3

S1、清洗载玻片：向超声波清洗仪中加入自来水，并加入自来水体积的0.4％的立白洗洁精混匀后，放入载玻片，在300W、40℃下超声清洗30min，取出载玻片用自来水冲洗掉洗洁精后，用蒸馏水冲洗两次，将表面水分甩掉后，在80℃下烘干，备用；

S2、制备粘附剂：将偏硅酸钠35份、碳酸钠20份、氢氧化钠10份、环氧乙烷环氧丙烷共聚物35份、氨基环丙烷羧酸10份、羟甲基纤维素8份、十六烷基三甲基溴化铵2份、柠檬酸钠5份、有机硅消泡剂1份、水900份混合均匀后，得到粘附剂；

S3、制备粘附液基细胞用载玻片：将粘附剂转移至浸泡缸中，放入清洗后的载玻片，上下拌动，浸泡20min后，取出，甩动，置于干净的盘中，放置10min后，继续甩动至底部载玻片不存在粘连的情况，置于70℃恒温干燥箱中干燥，得到粘附液基细胞用载玻片。

实施例4

S1、清洗载玻片：向超声波清洗仪中加入自来水，并加入自来水体积的0.4％的立白洗洁精混匀后，放入载玻片，在300W、40℃下超声清洗30min，取出载玻片用自来水冲洗掉洗洁精后，用蒸馏水冲洗两次，将表面水分甩掉后，在80℃下烘干，备用；

S2、制备粘附剂：将偏硅酸钠20份、碳酸钠10份、氢氧化钠5份、环氧乙烷环氧丙烷共聚物20份、氨基环丙烷羧酸15份、羟乙基纤维素5份、水800份混合均匀后，得到粘附剂；

S3、制备粘附液基细胞用载玻片：将粘附剂转移至浸泡缸中，放入清洗后的载玻片，上下拌动，浸泡15min后，取出，甩动，置于干净的盘中，放置10min后，继续甩动至底部载玻片不存在粘连的情况，置于70℃恒温干燥箱中干燥，得到粘附液基细胞用载玻片。

实施例5

S1、清洗载玻片：向超声波清洗仪中加入自来水，并加入自来水体积的0.4％的立白洗洁精混匀后，放入载玻片，在300W、40℃下超声清洗30min，取出载玻片用自来水冲洗掉洗洁精后，用蒸馏水冲洗两次，将表面水分甩掉后，在80℃下烘干，备用；

S2、制备粘附剂：将偏硅酸钠50份、碳酸钠30份、氢氧化钠15份、环氧乙烷环氧丙烷共聚物40份、氨基环丙烷羧酸15份、羟甲基纤维素12份、十四烷基三甲基溴化铵3份、柠檬酸钠7份、有机硅消泡剂2份、水1000份混合均匀后，得到粘附剂；

S3、制备粘附液基细胞用载玻片：将粘附剂转移至浸泡缸中，放入清洗后的载玻片，上下拌动，浸泡25min后，取出，甩动，置于干净的盘中，放置10min后，继续甩动至底部载玻片不存在粘连的情况，置于70℃恒温干燥箱中干燥，得到粘附液基细胞用载玻片。

对比例1

与实施例1的区别仅在于不添加环氧乙烷环氧丙烷共聚物。

对比例2

与实施例1的区别仅在于不添加氨基环丙烷羧酸。

对比例3

与实施例1的区别仅在于不添加环氧乙烷环氧丙烷共聚物和氨基环丙烷羧酸。

在相同条件下，分别将20个普通载玻片(购自北京诺博莱德科技有限公司)、多聚赖氨酸粘附载玻片(购自北京维欣仪奥科技发展有限公司)和本发明实施例1～5及对比例1～3得到的粘附液基细胞用载玻片进行宫颈脱落细胞粘附数量的统计，计算平均细胞粘附数量，并分别按照本发明实施例1～5及对比例1～3的方法处理400张载玻片，进行细胞学制片，采用Feulgen染色，进行细胞脱片率的统计，统计结果记录在表1。

细胞脱片率(％)＝细胞脱落数量/细胞粘附数量×100

表1细胞粘附数量和细胞脱片率

	平均细胞粘附数量(n＝20)	细胞脱片率(％)
			普通载玻片	521	--
多聚赖氨酸粘附载玻片	2261	--
			实施例1	4987	0.00
实施例2	4925	2.66
			实施例3	4930	2.09
实施例4	4759	3.24
			实施例5	4912	2.28
对比例1	4059	5.33
			对比例2	4434	3.87
对比例3	3528	8.15

由表1可以看出，本发明提供的粘附液基细胞用载玻片对细胞的粘附数量在4759以上，细胞脱片率在3.24％以下，对细胞具有良好的粘附性能且不易脱片。

实施例1与实施例2～3相比，实施例1中环氧乙烷环氧丙烷共聚物和氨基环丙烷羧酸的质量比为30:15，实施例2中环氧乙烷环氧丙烷共聚物和氨基环丙烷羧酸的质量比为25:20，实施例3中环氧乙烷环氧丙烷共聚物和氨基环丙烷羧酸的质量比为35:10，实施例1得到的粘附液基细胞用载玻片对细胞的粘附好于实施例2～3，且细胞脱片率低于实施例2～3。说明环氧乙烷环氧丙烷共聚物和氨基环丙烷羧酸的质量比为30:15时得到的粘附液基细胞用载玻片对细胞的粘附性能最好且最不易脱片。

对比例1～3与实施例1相比，对比例1中未添加环氧乙烷环氧丙烷共聚物，对比例2中未添加氨基环丙烷羧酸，对比例3中未添加环氧乙烷环氧丙烷共聚物和氨基环丙烷羧酸，实施例1中添加环氧乙烷环氧丙烷共聚物和氨基环丙烷羧酸，实施例1得到的粘附液基细胞用载玻片的性能好于对比例1～3。说明环氧乙烷环氧丙烷共聚物和氨基环丙烷羧酸可以显著提高载玻片对细胞的粘附，并且可以大幅度降低细胞脱片率。

以上仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种粘附液基细胞用载玻片，其特征在于，包括载玻片本体和粘附层，所述粘附层的原料包括以下质量份的组分：无机盐30～80份、氢氧化钠5～15份、环氧乙烷环氧丙烷共聚物20～40份、氨基环丙烷羧酸10～20份、粘结剂5～12份、表面活性剂0～3份、络合剂0～7份、消泡剂0～2份、水800～1000份。

2.根据权利要求1所述的一种粘附液基细胞用载玻片，其特征在于，所述无机盐包括偏硅酸钠和碳酸钠。

3.根据权利要求2所述的一种粘附液基细胞用载玻片，其特征在于，所述偏硅酸钠和碳酸钠的质量比为20～50:10～30。

4.根据权利要求3所述的一种粘附液基细胞用载玻片，其特征在于，所述环氧乙烷环氧丙烷共聚物和氨基环丙烷羧酸的质量比为25～35:10～20。

5.根据权利要求1所述的一种粘附液基细胞用载玻片，其特征在于，所述粘结剂包括羟甲基纤维素、羟乙基纤维素中的一种或几种。

6.根据权利要求1所述的一种粘附液基细胞用载玻片，其特征在于，所述表面活性剂为季铵盐型表面活性剂。

7.根据权利要求6所述的一种粘附液基细胞用载玻片，其特征在于，所述季铵盐型表面活性剂包括十六烷基三甲基溴化铵、十四烷基三甲基溴化铵中的一种或几种。

8.根据权利要求1所述的一种粘附液基细胞用载玻片，其特征在于，所述络合剂为柠檬酸钠，所述消泡剂为有机硅消泡剂。

9.根据权利要求1所述的一种粘附液基细胞用载玻片的制备工艺，其特征在于，包括以下步骤：

S1、将所述质量份的组分混合均匀，得到粘附剂；

S2、将载玻片浸泡在所述粘附剂中，浸泡完成后，干燥，得到粘附液基细胞用载玻片。

10.根据权利要求9所述的一种粘附液基细胞用载玻片的制备工艺，其特征在于，所述浸泡时间≥15min。