CN113101419A - 一种具有聚多巴胺涂层的水凝胶支架及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种具有聚多巴胺涂层的水凝胶支架的制备方法，包括以下步骤，将无水氯化钙与光引发剂溶解于去离子水中，之后加入改性明胶和海藻酸钠，超声混合均匀，得到混合浆料；将混合浆料通过三维打印得到预交联复合支架；将预交联复合支架在紫外光下交联，之后浸泡在无水氯化钙溶液中进行二次交联得到交联复合支架；将交联复合支架置入于多巴胺溶液，反应后取出并用去离子水冲洗，超声之后得到具有聚多巴胺涂层的改性明胶/海藻酸钠复合支架。通过该方法提高了干细胞在复合支架上的黏附和成骨分化能力，促进骨髓间充质干细胞细胞的增殖和成骨分化，扩宽了三维打印支架在骨软骨领域内的应用。本发明还涉及一种具有聚多巴胺涂层的水凝胶支架。

Description

一种具有聚多巴胺涂层的水凝胶支架及其制备方法
技术领域
本发明涉及骨软骨修复技术领域，特别是涉及一种具有聚多巴胺涂层的水凝胶支架及其制备方法。
背景技术
三维打印技术制备多孔支架在生物医学领域内的应用已相当广泛。然而在骨软骨修复领域内，利用三维支架对骨软骨进行修复时，会面临细胞数量不足的问题。在体外条件下培养细胞时，种植细胞数量较少，细胞则难以黏附在支架上，第一这是由于三维支架本身的特点所决定的，因为支架本身具有较大的贯穿孔结构，所以细胞往往会从孔隙间落下，最终落到孔板的上面，真正在支架上生长的细胞较少；第二则是因为材料缺少生物活性，没有有利于细胞黏附的因素，因此细胞难以在支架的线条上黏附。
为了解决这一问题，传统方法需要移植大量的细胞，才能保证支架表面黏附到足够数量的细胞，但是这种方法会浪费大量的细胞，即使移植到体内，支架上的细胞也难以在支架表面生长；或者改变三维支架的结构，形成错孔结构，使得细胞难以掉落，但是这样就减弱了三维打印的优势，复杂的支架结构反而不利于细胞的迁移，也不利于营养物质，气体和排泄产物的交换。
在利用内源性干细胞对骨软骨损伤部位进行修复时，往往面临内源性细胞不足的问题。特别是在手术的早期，刺穿软骨下骨之后，骨髓间充质干细胞随着骨髓液一起流出，如果对此时流出的干细胞不加以利用则很容易流失到周围环境中，缺少细胞则难以对骨软骨损伤进行有效的修复。
发明内容
针对现有技术中存在的技术问题，本发明的目的之一是：提供一种具有聚多巴胺涂层的水凝胶支架的制备方法，通过该方法提高了干细胞在复合支架上的黏附和成骨分化能力，促进骨髓间充质干细胞细胞的增殖和成骨分化，扩宽了三维打印支架在骨软骨领域内的应用。
针对现有技术中存在的技术问题，本发明的目的之二是：提供一种具有聚多巴胺涂层的水凝胶支架，能够提高干细胞在复合支架上的黏附和成骨分化能力，促进骨髓间充质干细胞细胞的增殖和成骨分化。
为了达到上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种具有聚多巴胺涂层的水凝胶支架的制备方法，包括以下步骤，
将无水氯化钙与光引发剂2-羟基-2-甲基-1-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]-1-丙酮(I2959)溶解于去离子水中，之后加入改性明胶和海藻酸钠，超声混合均匀，得到混合浆料；优选地，光引发剂2-羟基-2-甲基-1-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]-1-丙酮的质量分数为0.5-1％，超声时间为30-60min，温度为40-50℃。
将混合浆料通过三维打印得到预交联复合支架；优选的，三维打印机为3D-bioplotter，使用350-410μm的针头，打印压力为0.9-1.1bar，打印速度为35-45mm/s，纤维间距为0.7-1.1mm，料筒温度为35-45℃，打印平台的温度为3-5℃。打印出来的支架预交联复合支架为100mm×100mm×3mm。
将预交联复合支架在紫外光下交联，之后浸泡在无水氯化钙溶液中进行二次交联得到交联复合支架(GA)；
将交联复合支架置入于多巴胺溶液，反应后取出并用去离子水冲洗，超声之后得到具有聚多巴胺涂层的改性明胶/海藻酸钠复合支架。
进一步，改性明胶通过以下步骤制备，将明胶溶于PBS缓冲液中，之后加入甲基丙烯酸酐，反应之后加入PBS终止反应，透析之后冷冻产物得到甲基丙烯酰化明胶。优选地，明胶的溶解温度为40-55℃。
进一步，多巴胺溶液通过以下方法制备，将多巴胺加入到三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)溶液中反应后得到多巴胺溶液。
进一步，多巴胺溶液中多巴胺的质量分数为2-6mg/ml。三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)溶液中Tris-HCl的质量分数为1-2g/l。
进一步，多巴胺加入到三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)溶液中的反应时间为12-24h。
进一步，交联复合支架在多巴胺溶液中的反应时间为12-36h。
进一步，改性明胶的取代度不低于70％。优选的，取代度为70-80％。
进一步，改性明胶的质量分数为10-15wt％，优选的，改性明胶的质量分数为8-15％，海藻酸钠的质量分数为4-6wt％。
进一步，光交联的紫外光强度为100w，交联时间为600s-900s，优选为600s。混合浆料中氯化钙的浓度为2-4wt％，二次交联中氯化钙溶液的浓度为0.01-0.03M，二次交联时间为0.5-3h。
一种具有聚多巴胺涂层的水凝胶支架，采用一种具有聚多巴胺涂层的水凝胶支架的制备方法制得。
总的说来，本发明具有如下优点：
1.本发明在改性明胶/海藻酸钠复合支架表面制备涂层的步骤简单且高效，不需要复杂的仪器设备，无需使用有毒的化学试剂，价格低廉，适用范围广泛。
2.本发明在改性明胶/海藻酸钠复合支架表面制备的聚多巴胺涂层有利于细胞黏附，增强了传统三维打印支架的优势，弥补了三维打印支架截留细胞能力差的缺点。
3.本发明在改性明胶/海藻酸钠复合支架表面制备的聚多巴胺涂层不仅仅有利于细胞的黏附，而且可以促进骨髓间充质干细胞细胞的增殖和成骨分化，扩宽了三维打印支架在骨软骨领域内的应用，特别是利用内源性干细胞进行修复的方法。
附图说明
图1中，图1(a)为无多巴胺涂层的普通支架线条表面的扫描电镜图，图1(b)为有聚多巴胺涂层的水凝胶支架的表面形貌；
图2为制备多巴胺涂层前后支架的压缩模量结果图；
图3为不同支架蛋白质吸附能力图；
图4为不同支架的生物相容性表征图；
图5中，图5(a)为细胞在无多巴胺涂层的普通支架的分布的活死图像，图5(b)为细胞在有聚多巴胺涂层的水凝胶支架的分布的活死图像；
图6为不同支架黏附细胞数量的统计图；
图7为细胞在不同支架上的骨架、核以及黏着斑蛋白染色图；
图8中，图8(a)为细胞在无多巴胺涂层的普通支架上黏附形貌的扫描电镜图，图8(b)为细胞在有聚多巴胺涂层的水凝胶支架上黏附形貌的扫描电镜图；
图9为不同支架上细胞碱性磷酸酶的表达能力。
具体实施方式
下面来对本发明做进一步详细的说明。
本发明采用改性明胶/海藻酸钠作为原料，利用3D打印技术，制备出力学性能优异的预交联复合支架。经过光交联和离子交联形成交联复合支架之后，将其浸泡在多巴胺溶液中，从而得到具有聚多巴胺涂层的改性明胶/海藻酸钠复合支架。
本发明制备出的具有聚多巴胺涂层的改性明胶/海藻酸钠复合支架具有良好的生物活性、细胞黏附能力以及成骨性。以下示例性的说明本发明提供的具有聚多巴胺涂层的改性明胶/海藻酸钠复合支架的制备方法。
将无水氯化钙与光引发剂溶解于去离子水中，之后加入改性明胶和海藻酸钠，超声混合均匀，得到混合浆料；
将混合浆料通过三维打印得到预交联复合支架；
将预交联复合支架在紫外光下交联，之后浸泡在无水氯化钙溶液中进行二次交联得到交联复合支架；
将交联复合支架置入于多巴胺溶液，反应后取出并用去离子水冲洗，超声之后得到具有聚多巴胺涂层的改性明胶/海藻酸钠复合支架。
实施例1
具有聚多巴胺涂层的水凝胶支架的制备。
明胶改性：在50℃下，将10g明胶溶于100mlPBS缓冲液中，之后缓慢滴加4ml甲基丙烯酸酐，在50℃下搅拌反应3h。之后加入4500mlPBS终止反应，将产物装在12000-14000DA的透析袋中，在40℃下透析5-7天，之后将产物在-80℃冰箱中冷冻，冻干机中冻干之后得到白色絮状产物，即为甲基丙烯酰化明胶。
三维打印混合浆料制备：在50℃下，将0.05g光引发剂I2959与0.022g无水氯化钙加入10ml去离子水中，待完全溶解之后，加入1g改性明胶，随后加入0.5g海藻酸钠。使用搅拌器搅拌均匀，之后在45℃下超声30min，得到打印用的混合浆料。
预交联复合支架打印：首先将混合浆料转移至三维打印机上，使用410μm打印针头，设置料筒保温温度为40℃，打印平台温度为3℃，设置打印速度为38mm/s，打印间距为0.9mm/s，打印压力为1.1bar。
预交联复合支架后处理：将使用钙离子预交联的预交联复合支架放在365nm，100w的紫外灯下交联360s之后，再反过来辐照360s，最后置于0.02M无水氯化钙溶液中二次交联30min，得到交联复合支架(GA)。
多巴胺溶液准备：将多巴胺溶解在Tris-HCl溶液中，搅拌至全部溶解，配成溶度为2mg/ml的多巴胺-Tris-HCl溶液。
改性明胶/海藻酸钠复合支架制备：待多巴胺溶液反应12h之后，将交联复合支架(GA)加入溶液中，保持750rpm的转速，反应24h之后，将支架取出，使用去离子水冲洗三次，超声30min之后，在-80℃冰箱中冷冻之后，在真空冷冻干燥机中冷冻干燥三天得到具有聚多巴胺涂层的改性明胶/海藻酸钠复合支架(GA-PDA)。
实施例2
具有聚多巴胺涂层的改性明胶/海藻酸钠复合支架的表面形貌观察。
按实施例1制备具有聚多巴胺涂层的改性明胶/海藻酸钠复合支架。将支架样品粘贴在导电胶带上，喷金60秒后使用钨灯丝扫描电镜观察。如图1(a)所示，没有聚多巴胺涂层的支架的线条较为光滑，不利于细胞黏附，如图1(b)所示，具有聚多巴胺涂层的样品表面形貌由于黏附了许多聚多巴胺微球因此变得不平整，而不平整的表面更有利于细胞的黏附。
实施例3
具有聚多巴胺涂层的改性明胶/海藻酸钠复合支架的力学性能测试。
按实施例1制备具有聚多巴胺涂层的改性明胶/海藻酸钠复合支架。37℃下，将支架样品溶胀在去离子水中，待溶胀平衡后，将支架样品取出，用纱布轻轻拭去表面多余的水分，用动态热机械分析仪对材料的压缩性能进行测试，设置压缩速度为1mm/min。如图2所示，经过聚多巴胺涂层之后，支架的力学性能得到了一定程度的提高，这可能是因为聚多巴胺进入到材料体系的内部，而聚多巴胺本身具有一定的黏附作用，使得支架的压缩模量升高。
实施例4
蛋白质吸附实验。
按实施例1制备具有聚多巴胺涂层的改性明胶/海藻酸钠复合支架。
首先将1g牛血清白蛋白溶于10mlPBS中，制得10wt％的牛血清白蛋白标准溶液。之后将具有聚多巴胺涂层的复合支架和普通的没有聚多巴胺涂层的复合支架分别置入48孔板中，分别加入1ml牛血清白蛋白标准溶液，在37℃，100rpm的摇床中反应20min之后，将复合支架取出，用PBS清洗数次之后再次置入新的孔板中，使用BCA蛋白浓度测定试剂盒分别检测两组支架黏附蛋白的浓度。如图3所示，具有聚多巴胺涂层的复合支架吸附蛋白质的浓度是普通复合支架的三倍多。而细胞接种的早期，细胞主要是通过识别材料表面的某些蛋白完成黏附。具有聚多巴胺涂层的复合支架对蛋白质的吸附能力强，因此会提高细胞黏附能力。
实施例5
不同支架的生物相容性。
明胶改性：在50℃下，将10g明胶溶于100-mlPBS缓冲液中，之后缓慢滴加4ml甲基丙烯酸酐，在50℃下搅拌反应3h。之后加入4500mlPBS终止反应，将产物装在12000-14000DA的透析袋中，在40℃下透析5-7天，之后将产物在-80℃冰箱中冷冻，冻干机中冻干之后得到白色絮状产物，即为甲基丙烯酰化明胶。
三维打印混合浆料制备：在50℃下，将0.05g光引发剂I2959与0.022g无水氯化钙加入10ml去离子水中，待完全溶解之后，加入1g改性明胶，随后加入0.5g海藻酸钠。使用搅拌器搅拌均匀，之后在45℃下超声30min，得到打印用的混合浆料。
预交联复合支架打印：首先将混合浆料转移至三维打印机上，使用410μm打印针头，设置料筒保温温度为40℃，打印平台温度为3℃，设置打印速度为38mm/s，打印间距为0.9mm/s，打印压力为1.1bar。
预交联复合支架后处理：将使用钙离子预交联的预交联复合支架放在365nm，100w的紫外灯下交联360s之后，再反过来辐照360s，最后置于0.02M无水氯化钙溶液中二次交联30min，得到交联复合支架(GA)。
多巴胺溶液准备：将多巴胺溶解在Tris-HCl溶液中，搅拌至全部溶解，配成溶度为2mg/ml的多巴胺-Tris-HCl溶液。
改性明胶/海藻酸钠复合支架制备：分别在多巴胺溶液反应的第0h，6h，12h加入GA，反应24h之后取出，使用去离子水冲洗三次，超声30min之后，在-80℃冰箱中冷冻，最后在真空冷冻干燥机中冷冻干燥三天得到GA-PDA-0h、GA-PDA-6h和GA-PDA-12h三种支架。
用打孔器将GA-PDA-0h、GA-PDA-6h、GA-PDA-12h和普通的没有聚多巴胺涂层的四种支架裁剪成合适大小，置入3块48孔板中，每组4个平行样。加入适量75％乙醇灭菌3h之后，加入适量PBS，浸泡2h，浸泡三次之后种植骨髓间充质干细胞，种植细胞数量为10w。在37℃，95％湿度，5％CO2的培养箱中培养，每两天换一次完全培养基。每1、3、，5天取出一块孔板，移除其中的培养基，用PBS润洗两遍。之后配置CCK-8工作液：取出1体积CCK-8原液，加入9体积完全培养基混合均匀。之后加入CCK-8工作液300μl/孔，在细胞培养箱中培养2h之后取出100μl置入96孔板中，在酶标仪下测得吸光度，得到不同支架上细胞活力值。
GA-PDA-0h支架上的细胞在三个时间点均表现不出任何活力，所以没有在图4中显示；而GA-PDA-6h支架上的细胞在第一天显示出较低的活性值之后，在第三天和第五天显示不出任何活性；但是GA-PDA-12h支架上的细胞显示出的活性大于没有聚多巴胺涂层的支架。这可能是水凝胶材料本身高含水量的特点，即在多巴胺聚合反应的初期，由于多巴胺分期进入到水凝胶材料体系内部，所以反应不完全，表现出细胞毒性。而通过控制多巴胺溶液的反应时间，待多巴胺聚合较为彻底之时加入支架，则可以规避这一问题。且聚合完全的聚多巴胺涂层表现出良好的细胞活性，促进了骨髓间充质干细胞的增殖。
实施例6
细胞在支架上的分布及数量统计。
按实施例1制备具有聚多巴胺涂层的改性明胶/海藻酸钠复合支架。
不同支架上细胞分布观察：用打孔器分别将无聚多巴胺涂层和有聚多巴胺涂层的支架裁剪成合适大小，置入48孔板中，每组3个平行样。加入适量75％乙醇灭菌3h之后，加入适量PBS，每次浸泡2h，浸泡三次之后种植骨髓间充质干细胞，种植细胞数量为10w。在37℃，95％湿度，5％CO2的培养箱中培养一天之后取出支架，使用去离子水冲洗数次。之后将支架置入新的48孔板中，使用活死染色试剂对支架上的细胞染色，随后在激光共聚焦显微镜下观察细胞活死以及细胞在支架上的空间分布。如图5所示，有聚多巴胺涂层的支架上的细胞数量明显更多，细胞分布也更加均匀。无聚多巴胺涂层的普通支架上，细胞的分布均在支架线条的两侧，而支架的表面则难以观察到细胞，这是由于在种植细胞时，多孔支架的大贯穿孔隙难以截留细胞，黏附细胞的能力较弱，因此细胞落入孔板上，生长在底部，所以只有支架底部线条的边缘两侧存在黏附的细胞，在其他区域则无分布；细胞在有聚多巴胺涂层的支架的线条上均匀分布，不仅仅是分布于支架的两侧，说明了聚多巴胺涂层对细胞的黏附能力，有利于截留细胞，而细胞在支架上的均匀分布也有利于组织的同步修复。
黏附数量统计：用打孔器分别将无聚多巴胺涂层和有聚多巴胺涂层的支架裁剪成合适大小，置入96孔板中，每组5个平行样。加入适量75％乙醇灭菌3h之后，加入适量PBS，浸泡2h，浸泡三次之后种植骨髓间充质干细胞。种植细胞数量为20w。在37℃，95％湿度，5％CO2的培养箱中培养一天之后取出支架，使用去离子水冲洗数次。再将支架置入新的96孔板中，每孔加入100μl胰酶，在培养箱中消化1min，取出之后用移液枪多次吹打支架，将支架上的细胞收集到胰酶当中，使用完全培养基终止消化，之后使用细胞计数板对从支架上消化下来的细胞进行计数。每组样品统计四次，计算得到不同支架黏附细胞数量。如图6所示，在有聚多巴胺涂层的支架黏附细胞的数量是无聚多巴胺涂层的普通支架的3倍多，验证了改性明胶/海藻酸钠复合支架上聚多巴胺对细胞的黏附能力。
在骨软骨修复手术时，刺穿软骨下骨之后，大量骨髓间充质干细胞涌出，此时支架上的聚多巴胺涂层将会对涌出的骨髓间充质干细胞进行截留，使得支架体系内部能够有充足的细胞完成骨软骨修复。
实施例7
细胞黏附的表面形貌观察。
按实施例1制备具有聚多巴胺涂层的改性明胶/海藻酸钠复合支架。
细胞骨架与黏着斑蛋白染色：用打孔器分别将无聚多巴胺涂层和有聚多巴胺涂层的支架裁剪成合适大小，置入48孔板中，每组3个平行样。加入适量75％乙醇灭菌3h之后，加入适量PBS，浸泡2h，浸泡三次之后种植骨髓间充质干细胞，种植细胞数量为10w，400μl。在37℃，95％湿度，5％CO2的培养箱中培养一天之后取出支架，使用细胞骨架染色液和黏着斑蛋白染色液对细胞的骨架和分泌的黏着斑蛋白进行染色。如图7所示，无聚多巴胺涂层的普通支架上的细胞大部分都未铺展开来(图7的上面一排图像)，呈现梭形的形态，基本观察不到黏着斑蛋白的表达，而在具有聚多巴胺涂层的改性明胶/海藻酸钠复合支架上，细胞伸展良好(图7的下面一排图像)，铺展面积明显增大，黏着斑蛋白分泌较多。
细胞形貌观察：用打孔器分别将无聚多巴胺涂层和有聚多巴胺涂层的支架裁剪成合适大小，置入48孔板中，每组3个平行样。加入适量75％乙醇灭菌3h之后，加入适量PBS，浸泡2h，浸泡三次之后种植骨髓间充质干细胞，种植细胞数量为10w。在37℃，95％湿度，5％CO2的培养箱中培养一天之后取出支架，使用去离子水冲洗数次，随后使用4％多聚甲醛固定30min。之后使用PBS润洗两遍，使用体积分数为50，60，70，80，90，100％的乙醇溶液梯度脱水，每个浓度浸泡时间为30min。最后将样品在真空干燥箱中真空干燥48h，取出后黏在导电胶带上，喷金60s之后使用钨灯丝扫描电镜观察。如图8(a)所示，细胞在无聚多巴胺涂层的支架上出现了团聚现象，多个细胞团在一起，不能完全伸展。而在具有聚多巴胺涂层的改性明胶/海藻酸钠复合支架表面，如图8(b)所示，细胞呈现出完全的伸展状态，伪足伸展较长。该现象进一步证明了聚多巴胺对细胞的黏附能力。
实施例8
成骨分化能力。
按实施例1制备具有聚多巴胺涂层的改性明胶/海藻酸钠复合支架。
用打孔器分别将无聚多巴胺涂层和有聚多巴胺涂层的支架裁剪成合适大小，置入48孔板中，每组3个平行样。加入适量75％乙醇灭菌3h之后，加入适量PBS，浸泡2h，浸泡三次之后种植骨髓间充质干细胞，种植细胞数量为10w。在37℃，95％湿度，5％CO2的培养箱中培养24小时之后，换成成骨诱导液培养细胞。在第七天和第十四天使用碱性磷酸酶试剂盒检测不同组别中细胞成骨分化能力。如图9所示，在第七天和第十四天具有聚多巴胺涂层的支架上细胞的碱性磷酸酶表达均高于无聚多巴胺涂层的普通支架。说明有聚多巴胺涂层的支架不仅仅能够提高骨髓间充质干细胞的黏附能力，还能增强其成骨分化能力。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种具有聚多巴胺涂层的水凝胶支架的制备方法，其特征在于：包括以下步骤，
将无水氯化钙与光引发剂溶解于去离子水中，之后加入改性明胶和海藻酸钠，超声混合均匀，得到混合浆料；
将混合浆料通过三维打印得到预交联复合支架；
将预交联复合支架在紫外光下交联，之后浸泡在无水氯化钙溶液中进行二次交联得到交联复合支架；
将交联复合支架置入于多巴胺溶液，反应后取出并用去离子水冲洗，超声之后得到具有聚多巴胺涂层的改性明胶/海藻酸钠复合支架。
2.按照权利要求1所述的一种具有聚多巴胺涂层的水凝胶支架的制备方法，其特征在于：改性明胶通过以下步骤制备，将明胶溶于PBS缓冲液中，之后加入甲基丙烯酸酐，反应之后加入PBS终止反应，透析之后冷冻产物得到甲基丙烯酰化明胶。
3.按照权利要求1所述的一种具有聚多巴胺涂层的水凝胶支架的制备方法，其特征在于：多巴胺溶液通过以下方法制备，将多巴胺加入到三羟甲基氨基甲烷盐酸盐溶液中反应后得到多巴胺溶液。
4.按照权利要求3所述的一种具有聚多巴胺涂层的水凝胶支架的制备方法，其特征在于：多巴胺溶液中多巴胺的浓度为2-6wt％，三羟甲基氨基甲烷盐酸盐溶液中Tris-HCl的质量分数为1-2g/l。
5.按照权利要求3所述的一种具有聚多巴胺涂层的水凝胶支架的制备方法，其特征在于：多巴胺加入到三羟甲基氨基甲烷盐酸盐溶液中的反应时间为12-24h。
6.按照权利要求1所述的一种具有聚多巴胺涂层的水凝胶支架的制备方法，其特征在于：交联复合支架在多巴胺溶液中的反应时间为12-36h。
7.按照权利要求1所述的一种具有聚多巴胺涂层的水凝胶支架的制备方法，其特征在于：改性明胶的取代度不低于70％。
8.按照权利要求1所述的一种具有聚多巴胺涂层的水凝胶支架的制备方法，其特征在于：改性明胶的质量分数为10-15wt％，海藻酸钠的质量分数为4-6wt％。
9.按照权利要求1所述的一种具有聚多巴胺涂层的水凝胶支架的制备方法，其特征在于：光交联的紫外光强度为100w，交联时间为600s-900s，混合浆料中氯化钙的浓度为2-4wt％，二次交联中氯化钙溶液的浓度为0.01-0.03M，二次交联时间为0.5-3h。
10.一种具有聚多巴胺涂层的水凝胶支架，其特征在于：采用权利要求1-9任一项所述的一种具有聚多巴胺涂层的水凝胶支架的制备方法制得。
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